KR20220044757A

KR20220044757A - 이식가능한 작제물 및 이의 용도

Info

Publication number: KR20220044757A
Application number: KR1020227005962A
Authority: KR
Inventors: 오미드 베이세; 아만다 나쉬; 마리아 이사벨 자비스-루오코; 수딥 무케르지; 마이클 데이비드 되르퍼트; 사미라 아그라라-포토밧; 데이비드 유 장
Original assignee: 윌리엄 마쉬 라이스 유니버시티
Priority date: 2019-08-08
Filing date: 2020-08-07
Publication date: 2022-04-11
Also published as: IL290279A; CN114269390A; JP2022543842A; US20220313599A1; WO2021026484A1; EP4010032A1; EP4010032A4; AU2020327034A1

Abstract

본 개시내용은 숙주 면역 반응으로부터 보호를 제공하면서 대상체에게 항원성 치료 시약을 전달하도록 설계된 이식가능한 작제물에 관한 것이다. 특정 양상에서, 작제물은 시간 경과에 따라서 또는 특정 신호에 따라 분해되도록 설계되어, 치료제가 대상체에게 전달되는 시간 길이의 제어를 제공한다.

Description

이식가능한 작제물 및 이의 용도

우선권

본 출원은 2019년 8월 8일 및 2020년 4월 20일자로 각각 출원된 미국 가출원 일련 번호 제62/884,397호 및 제63/012,693호에 대한 이익 또는 우선권을 주장하며, 각 출원의 전체 내용은 본 명세서에 참조에 의해 원용된다.

연방 기금 연구에 관한 진술

본 발명은 국립 보건원에서 수여한 허가 번호 R01DK120459에 따른 정부 지원으로 이루어졌다. 정부는 본 발명에 대한 특정 권리를 갖는다.

기술분야

본 개시내용은 생물학, 의학, 생명공학 및 의료 디바이스 분야에 관한 것이다. 보다 구체적으로, 본 개시내용은 대상체에게 항원성 치료 시약을 전달하고 이를 숙주에 의해 생성된 면역 반응으로부터 보호하도록 설계된 이식가능한 작제물의 개발 및 사용에 관한 것이다. 특히, 작제물은 시간 경과에 따라서 또는 특정 신호에 대해 분해되도록 설계되어, 치료제가 대상체에게 전달되는 시간의 길이를 제어할 수 있다

생물의학 연구의 발전은 암과 같은 질환을 치료하기 위한 치료법의 국소화 및 표적화 방법을 초래했다. 하지만, 많은 경우에 이러한 접근 방식에 반응성인 환자의 비율은 그다지 많지는 않다(Park et al., Sci. Transl. Med. 10(433) 2018).

한 가지 접근 방식은 치료제를 전달하는 이식가능한 디바이스의 사용을 수반한다. 성공적인 디바이스 기반 치료법의 근본적인 장벽은 생체적합성 이식 디바이스의 부족이다. 이식된 생체물질은 이종 신체 반응(foreign body response: FBR)을 초래하고, 이는 섬유증(벽형성) 및 후속되는 이식 부전을 초래하는 염증 이벤트 및 상처-치유 과정의 캐스케이드(cascade)이다. 이 반응은 천연 발생의 중합체에서부터 합성 물질에 이르기까지 많은 물질에 대해 기술된 바 있다. 즉, 생체물질 이식과 연관된 FBR을 제거하는 이러한 주요 공격을 극복하는 생체물질을 개발해야 하는 중대한 의학적 요구가 존재한다. 또한, 일정 기간 후에는 치료법을 제어(즉, 하향 조절 또는 중단)할 필요가 있다. 현재, FBR의 이중 목표와 치료제의 제어 전달을 달성하기 위한 기술은 부족하다.

따라서, 치료제의 전달, 분포 및/또는 효능을 향상시키기 위한 새로운 조성물 및 방법을 식별할 필요가 있다.

본 발명의 개발은 부분적으로 보조금 번호 RR160047 하에 텍사스 암 예방 연구소의 자금 지원을 받았다.

본 개시내용은, 예를 들어, 항원성 작용제(antigenic agent) 또는 치료제(therapeutic agent)의 전달 및/또는 효능을 향상시킴으로써, 대상체의 질환을 치료하는데 유용한 항원성 작용제 및/또는 치료제를 포함하는 이식가능한 작제물을 적어도 부분적으로 제공한다. 이식가능한 작제물은 숙주 이펙터(effector) 분자로부터 항원성 작용제 및/또는 치료제의 접촉을 방지하는 구역(예를 들어, 층)을 포함하여, 숙주 면역 반응으로부터 하나 또는 둘 모두를 차폐한다.

이론에 얽매임이 없이, 본 명세서에 개시된 이식가능한 작제물은 대상체에서 치료제의 효능을 개선시킬 수 있다. 일 실시형태에서, 이식가능한 작제물은 (i) 이식가능한 작제물로부터 치료제의 제어되고 지속적인 방출을 제공하는 것; (ii) 치료제의 국소 전달이 전신 결과를 산출하도록 하는 것; 및 (iii) 제2 숙주 세포(예를 들어, 숙주 T 조절 세포)의 팽창을 유도하거나 활성화함이 없이, 제1 숙주 세포(예를 들어, 숙주 이펙터 T 세포 또는 숙주 NK 세포)의 활성화 및/또는 프로그래밍을 조정하는 것 중 하나 이상을 초래한다.

본 명세서에 기재된 특정 실시형태는 장애의 치료 또는 예방 방법을 제공한다. 일 실시형태에서, 장애는 암과 같은 증식성 장애이다. 이들 실시형태는 질환의 치료를 위해, 예를 들어, 항원성 작용제 및/또는 치료제를 포함하는, 본 명세서에 기재된 이식가능한 작제물을 대상체에게 투여하는 것을 포함한다. 본 명세서에 개시된 방법은 표적 부위(예를 들어, 복강내 공간)에서 치료제의 지속 방출을 초래할 수 있는 반면, 다른 비표적 부위에서는 거의 또는 전혀 효과를 갖지 않아 전신 전달의 필요성을 피할 수 있다.

청구범위 및/또는 명세서에서 "포함하는"이라는 용어와 함께 사용되는 "a" 또는 "an"이라는 단어의 사용은 "하나"를 의미할 수 있지만, "하나 이상, " "적어도 하나" 및 "하나 또는 하나 초과"의 의미와도 일치한다. "약"이라는 단어는 명시된 숫자의 플러스 또는 마이너스 5%를 의미한다.

본 명세서에 기재된 임의의 방법 또는 조성물은 본 명세서에 기재된 임의의 다른 방법 또는 조성물과 관련하여 구현될 수 있는 것으로 고려된다. 본 개시내용의 다른 목적, 특징 및 이점은 다음의 상세한 설명으로부터 명백해질 것이다. 하지만, 이러한 상세한 설명으로부터 본 기술분야의 기술자에게는 본 개시내용의 사상과 범위 내에서 다양한 변화 및 수정이 명백해질 것이므로, 상세한 설명 및 특정 실시예는 본 개시내용의 특정 실시형태를 나타내지만, 단지 예시적으로 제공되는 것으로 이해되어야 한다.

다음 도면은 본 명세서의 일부를 형성하며 본 개시내용의 특정 양상을 추가로 입증하기 위해 포함된다. 본 개시내용은 본 명세서에 제시된 특정 실시형태의 상세한 설명과 조합으로 이들 도면 중 하나 이상을 참조함으로써 더 잘 이해될 수 있다.
도 1a 내지 도 1c는 녹색 형광 단백질(GFP)을 단독으로 또는 ㎚ IL-2와 조합으로 발현하도록 형질감염된 망막 색소 상피(retinal pigment epithelial: RPE) 세포를 포함하는 예시적인 이식된 캡슐(capsule)을 도시한 이미지이다. 도 1a 및 도 1b는 마우스 모델에 이식하기 직전에 GFP(도 1A)만을 발현하거나 또는 GFP 및 IL-2(도 1B)를 발현하는 RPE 세포를 포함하는 이식된 캡슐을 보여준다. 도 1c는 이식 24일 후 마우스 모델로부터 제거 시 GFP 및 IL-2를 모두 발현하는 이식된 캡슐을 도시한 것이다. 세포는 사세포(dead)와 비교하여 생세포(live)를 보여주는 이미지이며, 두 이미지가 병합된(merged) 것이다.
도 2는 시험관내에서 캡슐화된 RPE 세포로부터 분비된 IL-2가 T-세포 증식 및 CD25 활성화 둘 모두를 초래한다는 것을 나타내는 그래프이다.
도 3a 내지 도 3b는 건강한 마우스에 이식한 지 24일 후에 이식된 캡슐로부터 분비된 복강내(IP) 유체 또는 혈액에서 측정된 마우스 모델의 IL-2(pg/㎖)의 농도를 보여준다.
도 4는 IL-2를 발현하는 RPE 세포를 포함하는 예시적인 캡슐이 마우스 흑색종 종양 모델에 이식될 때 종양 크기의 감소를 보여주는 그래프이다.
도 5는 IL-2를 발현하는 캡슐화된 세포(청색 막대)가 이식된 마우스 종양 모델의 IP 유체 또는 종양 조직에서 유세포 분석에 의해 측정된 활성화된 T 세포(CD45+, CD3+, NK1.1 및 CD25+)의 증가 퍼센트를 대조군(오렌지색 막대)에 대비하여 도시한 그래프이다.
도 6은 건강한 마우스에서 수행된 시간 경과에 따른 연구이다. 이 그래프는 시간 경과에 따른 IP 유체 중 IL-2 농도의 변화를 보여준다. 이 그래프에서 볼 수 있듯이, 2주 동안 IL-2 농도는 증가하고, 이어서 IL-2가 2주와 4주 시점 사이일 때 농도가 급격히 감소한다.
도 7a 내지 도 7b는 종양 부하된 마우스의 코호트에 IL-2를 발현하는 캡슐화된 RPE 세포, 캡슐화된 RPE 세포 단독(IL-2 발현 없음), 및 미처리 마우스를 주사한 실험의 결과를 도시한 것이다(도 7a). 종양 세포는 반딧불이 루시페라제를 발현하도록 조작되었고 마우스에게 루시페린 기질을 주입하였기 때문에 발광 이미지는 종양 크기를 반영한다. 이미지는 주사 직후와 최소 65일 동안 매일 캡처했다. 도 8d는 98일까지 연장한 연구에서 이식된 마우스의 전체 종양 성장을 보여주며, 여기서 IL-2를 발현하는 캡슐화된 RPE 세포("eRPE"로 표지됨)가 이식된 마우스는 연구 과정에 걸쳐 종양 성장 및 제거를 나타냈다.
도 8은 도 7a 및 7b에 도시된 실험 데이터 및 데이터를 요약한 생존 곡선이다. 이 그래프는 IL-2를 발현하는 캡슐화된 세포가 주입된 코호트에서만 마우스의 종양 크기가 감소했지만 대조군 코호트에서는 변하지 않았음을 보여준다.
도 9a 내지 도 9d는 예시적인 이식가능한 작제물 및 이의 특성을 도시한 것이다. 도 9a는 다양한 두께의 외부 층 및 내부 층을 모두 포함하는 이식가능한 작제물의 이미지를 도시한 것으로서, 여기서 외부 층은 FITC-덱스트란에 의해 변형된다. 각 층의 평균 두께는, 예를 들어, 캡슐화 과정 동안 물질의 유속에 의해 제어된다. 도 9b는 도 9a에 도시된 각 유속 샘플 그룹에 대한 평균 외부 층 두께를 보여주는 차트이다: 0.02:0.2, 0.05:0.15, 0.1:0.1, 0.15:0.05, 0.2:0.02(p, 0.0001). 도 9c는 콜라게나제(10 ㎎/㎖; 상부 행) 용액 vs. 1xPBS(하부 행)에서 1시간 동안에 걸친 변형된 히알루론산(NorHA) 겔 블록(4 wt% NorHA, 10 mM 펩타이드 가교제, 0.05 wt% Irgacure 2959)의 분해성을 보여준다. 도 9d는 도 9c의 데이터를 플롯팅한 그래프로서, 펩타이드-연결된 NorHA의 분해 거동을 보여준다. 겔 블록은 검정 전에 PBS에서 밤새 팽윤시켰고, 중량 측정 전에 과량의 액체는 제거했다.
도 10a 내지 도 10h는 마우스 MC38 결장직장암 모델에서 예시적인 이식가능한 작제물의 사이토카인 분비 및 재발 보호를 보여준다. 도 10a는 MC38 결장직장 모델에 대한 생체내 작업흐름을 도시한 일반적인 개략도이다. 도 10b는 안락사된 마우스의 i.p. 공간으로부터 수집된 종양 비교이다(그룹 당 n=4, C57ALB). 도 10c는 분석용 저울을 사용하여 수집된 종양의 중량을 비교한 그래프이며 그룹마다 평균 +/- SEM으로서 플롯팅했다. 도 10d는 안락사 시 동물의 체중에 대해 정규화된 종양 중량을 나타내는 그래프이다. 도 10e는 초기 주사 후 35일째에 발생하는 재공격을 도시한 피하 재공격 연구에 대한 개략도이다. 도 10f는 제1(n=3, C57ALB) 모의 생존 코호트가 인도적인 종말점에 도달한 후 7일째에 발생하는 재공격의 결과를 보여주는 그래프이다. 도 10g는 i.p. 생존 연구에서 개략된 연구(도 10f)의 모의 코호트 및 대조군 코호트의 종양 부담에 대한 가시적 차이를 비교한 사진이다. 도 10h는 i.p. 생존 연구(도 10f)의 C57ALB 마우스(n=5)를 MC38로 피하로 재공격한 재공격 연구의 결과를 보여주는 그래프이다. 미경험 대조군(n=5)에게도 주사했고, 두 그룹 모두 시간 경과에 따라 추적했고 캘리퍼스 측정을 통해 종양 부피를 측정했다.
도 11a 내지 도 11b는 마우스 췌장암 모델에서 예시적인 이식가능한 작제물에서의 사이토카인 분비 및 종양 크기의 감소를 보여준다. 도 11a는 마우스 모델의 검증이다. 도 11b는 6일 후 이식가능한 작제물의 존재 또는 부재 하에, 암에 걸린 알비노 마우스의 시간 경과에 따른 이미지이다. 무지개색 스케일 막대 최소 1.55e6, 최대 5e8 p/sec/cm².

본 개시내용은 항원 표적(예를 들어, 세포 및/또는 치료제)을 제어 방출 방식으로 대상체에게 전달하기 위한 이식가능한 작제물, 및 관련된 이의 사용 방법을 특징으로 한다. 본 명세서에 기재된 이식가능한 작제물은 항원 표적을 캡슐화하는 구역(예를 들어, 내부 구역 또는 내부 층)을 포함하여, 항원 표적과 숙주 면역 이펙터 세포의 접촉을 방지하여 면역반응성을 감소시킨다. 일 실시형태에서, 구역은 분해가능하여, 캡슐화된 치료법-생성 세포의 경우 면역계에 대한 보호가 점차 제거되도록 하거나, 항원 표적 자체가 전달하기 위한 것인 경우에는 주위 조직 또는 세포로 항원 표적이 점차 방출되도록 한다. 본 명세서에 개시된 이식가능한 작제물은 단일 구역 또는 복수의 구역을 포함할 수 있고, 상이한 형태(예를 들어, 구형, 막대, 튜브)로 제형화될 수 있고, 다양한 재료를 사용하여 제조될 수 있다. 이들 각각의 실시형태는 이하에 보다 상세하게 설명될 것이다.

I. 정의

본 명세서에 사용된 "항원성 작용제"는, 예를 들어, 대상체에서, 면역 반응을 유도, 활성화 또는 유발하는 물질이다.

본 명세서에 사용된 "세포"는 개별 세포를 지칭한다. 일 실시형태에서, 세포는 일차 세포이거나 세포 배양물로부터 유래된다. 일 실시형태에서, 세포는 줄기 세포이거나 줄기 세포로부터 유래된다. 세포는 이종, 자가유래 또는 동종이계일 수 있다. 일 실시형태에서, 세포는 조작될 수 있거나(예를 들어, 유전자 조작됨) 또는 조작되지 않는다(예를 들어, 유전자 조작되지 않음).

본 명세서에 사용된 "분해성"은 조정 시, 예를 들어, 절단 시, 이식가능한 작제물의 구역(예를 들어, 내부 구역 및/또는 외부 구역)이, 이 구역(예를 들어, 내부 구역 및/또는 외부 구역)과 또는 이 구역 내에 배치된 성분과 숙주 면역 이펙터의 접촉을 방해하는 능력이 감소되는 구조를 지칭한다. 예를 들어, 분해성 실체(degradable entity)는 효소, 예를 들어, 내인성 숙주 효소, 또는 투여된 효소에 의해 절단될 수 있는 부위를 포함할 수 있다. 전형적으로, 분해성 실체는 구역, 예를 들어, 내부 구역 또는 외부 구역의 물리적 특성, 예를 들어, 숙주 작용제(예를 들어, 숙주 면역 성분, 예를 들어, 숙주 면역 세포)의 통과를 방해하는, 두께, 가교도 또는 투과성을 매개한다.

본 명세서에 사용된 "예방", "예방하다" 및 "예방하는"은 치료법을 투여하거나 적용하는 것, 예를 들어, 질환 또는 상태의 신체적 발현을 배제하기 위해 상기 질환 또는 상태의 발병 전에 치료제(예를 들어, 본 명세서에 기재된 치료제)를 포함하는 이식가능한 작제물(예를 들어, 본 명세서에 기재된 것)을 투여하는 것을 포함하는 치료를 지칭한다. 일부 실시형태에서, "예방", "예방하다" 및 "예방하는"은 질환 또는 상태의 징후 또는 증상이 아직 발달하지 않았거나 아직 관찰되지 않은 것을 요구한다. 일부 실시형태에서, 치료는 예방을 포함하고 다른 실시형태에서는 그렇지 않다.

본 명세서에 사용된 "대상체"는 본 명세서에 기재된 이식가능한 작제물의 수용체를 지칭한다. 대상체는 인간 및/또는 다른 비인간 동물, 예를 들어, 포유동물(예를 들어, 영장류(예를 들어, 사이노몰구스 원숭이, 리서스 원숭이); 상업적 관련 포유동물, 예컨대, 소, 돼지, 말, 양, 염소, 고양이, 및/또는 개) 및 조류(예를 들어, 상업적 관련 조류, 예컨대, 닭, 오리, 거위 및/또는 칠면조)를 포함할 수 있다. 특정 실시형태에서, 동물은 포유동물이다. 동물은 수컷 또는 암컷일 수 있고, 임의의 발달 단계(예를 들어, 임의의 연령 그룹의 수컷 또는 암컷, 예를 들어, 소아 대상체(예를 들어, 유아, 어린이, 청소년)이거나 또는 성인 대상체(예를 들어, 성년 초반, 중년, 또는 노인)일 수 있다. 비인간 동물은 트랜스제닉(transgenic) 동물일 수 있다.

본 명세서에 사용된 "치료", "치료하다" 및 "치료하는"은, 예를 들어, 치료법을 투여하거나 적용하여, 예를 들어, 치료제(예를 들어, 본 명세서에 기재된 치료제)를 포함하는 이식가능한 작제물을 투여함으로써, 질환 또는 상태(예를 들어, 본 명세서에 기재된 것)의 증상, 표현 또는 근본적인 원인 중 하나 이상을 역전시키거나, 완화시키거나, 발병을 지연시키거나, 또는 진행을 저해하는 것을 지칭한다. 일 실시형태에서, 치료는 질환, 장애 또는 상태의 증상을 감소, 역전, 완화시키거나, 발병을 지연시키거나, 또는 진행을 저해하는 것을 포함한다. 일 실시형태에서, 치료는 질환 또는 상태의 발현을 감소, 역전, 완화시키거나, 발병을 지연시키거나, 또는 진행을 저해하는 것을 포함한다. 일 실시형태에서, 치료는 질환 또는 상태의 근본적인 원인을 감소, 역전, 완화, 감소시키거나, 또는 발병을 지연시키는 것을 포함한다. 일부 실시형태에서, "치료", "치료하다" 및 "치료하는"은 질환 또는 상태의 징후 또는 증상이 발생했거나 관찰되었던 것을 요구한다. 다른 실시형태에서, 치료는 질환 또는 상태의 징후 또는 증상의 부재 하에, 예를 들어, 예방적 치료로 투여될 수 있다. 예를 들어, 치료는 증상의 발병 전에(예를 들어, 증상의 이력에 비추어 및/또는 유전 요인 또는 다른 민감성 요인에 비추어), 민감한 개체에게 투여될 수 있다. 치료는 또한, 예를 들어, 재발을 지연시키거나 예방하기 위해 증상이 해결된 후에도 계속될 수 있다. 치료는 또한, 예를 들어, 재발을 지연시키거나 예방하기 위해 증상이 해결된 후에도 계속될 수 있다. 일부 실시형태에서, 치료는 예방을 포함하고 다른 실시형태에서는 그렇지 않다.

A. 이식가능한 작제물

본 명세서에 기재된 이식가능한 작제물은 내부에 배치된 항원성 작용제 또는 치료제에 의한 또는 그에 대한 반응(예를 들어, 면역조정 반응)을 감소시키거나 저해하는 물질을 포함한다. 예를 들어, 이식가능한 작제물은 숙주 조직, 숙주 세포 또는 숙주 세포 생성물과 같은 주변 환경에 대한 노출로부터 항원성 작용제를 차폐하는 구역 또는 층을 포함한다. 일 실시형태에서, 이식가능한 작제물은, 예를 들어, 이식가능한 작제물 내에 배치되지 않은 유사한 항원성 작용제와 비교했을 때, 내부에 배치된 항원성 작용제 또는 치료제가 유도한 숙주 반응(예를 들어, 면역 반응)의 효과를 최소화한다.

이식가능한 작제물은 이식가능한 작제물의 안팎으로 용액의 흐름을 제어하기 위해 투과성, 반투과성 또는 불투과성 물질을 포함할 수 있다. 예를 들어, 물질은 작제물의 안팎으로 영양소 및 폐 산물(waste product)과 같은 소분자가 자유롭게 통과하도록 투과성 또는 반투과성일 수 있다. 또한, 물질은 이식가능한 작제물로부터 항원성 작용제 또는 치료제가 수송되도록 하는 투과성 또는 반투과성일 수 있다. 예시적인 물질은 중합체, 금속, 세라믹, 및 이들의 조합을 포함한다.

일 실시형태에서, 이식가능한 작제물은 중합체(예를 들어, 천연 발생 중합체 또는 합성 중합체)를 포함한다. 예를 들어, 중합체는 폴리스티렌, 폴리에스테르, 폴리카보네이트, 폴리에틸렌, 폴리프로필렌, 폴리플루오로카본, 나일론, 폴리아세틸렌, 폴리비닐클로라이드(PVC), 폴리올레핀, 폴리우레탄, 폴리아크릴레이트, 폴리메타크릴레이트, 폴리아크릴아마이드, 폴리메타크릴아마이드, 폴리메틸 메타크릴레이트, 폴리(2-하이드록시에틸 메타크릴레이트), 폴리실록산, 폴리다이메틸실록산(PDMS), 폴리하이드록시알카노에이트, PEEK®, 폴리테트라플루오로에틸렌, 폴리에틸렌 글리콜, 폴리설폰, 폴리아크릴로니트릴, 콜라겐, 셀룰로스, 셀룰로스 중합체, 다당류, 폴리글리콜산, 폴리(L-락트산)(PLLA), 폴리(락트산글리콜산)(PLGA), 폴리다이옥사논(PDA), 폴리(락트산), 히알루론산, 아가로스, 알기네이트, 키토산, 또는 이들의 블렌드 또는 공중합체를 포함할 수 있다. 일 실시형태에서, 이식가능한 작제물은 다당류(예를 들어, 알기네이트, 셀룰로스, 히알루론산, 또는 키토산)를 포함한다. 일 실시형태에서, 이식가능한 작제물은 히알루론산을 포함한다. 일 실시형태에서, 이식가능한 작제물은 알기네이트를 포함한다. 일부 실시형태에서, 중합체의 평균 분자량은 약 2 kDa 내지 약 500 kDa(예를 들어, 약 2.5 kDa 내지 약 175 kDa, 약 5 kDa 내지 약 150 kDa, 약 10 kDa 내지 약 125 kDa, 약 12.5 kDa 내지 약 100 kDa, 약 15 kDa 내지 약 90 kDa, 약 17.5 kDa 내지 약 80 kDa, 약 20 kDa 내지 약 70 kDa, 약 22.5 kDa 내지 약 60 kDa, 또는 약 25 kDa 내지 약 50kDa)이다. 이식가능한 작제물은 적어도 0.5%, 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 7.5%, 10%, 15%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80% 또는 그 이상의 중합체, 예를 들어, 본 명세서에 기재된 중합체를 포함할 수 있다.

일 실시형태에서, 이식가능한 작제물은 다당류, 예를 들어, 히알루론산 또는 알기네이트를 포함한다. 알기네이트는 β-(1-4)-연결된 만누론산 및 굴루론산 잔기를 포함하는 천연 발생의 중합체이며, 음하전된 카복실레이트의 고밀도의 결과로서 특정 양이온과 가교되어 더 큰 구조, 예컨대, 하이드로겔을 형성할 수 있다. 본 명세서에 기재된 알기네이트 중합체는 약 2 kDa 내지 약 500 kDa(예를 들어, 약 2.5 kDa 내지 약 175 kDa, 약 5 kDa 내지 약 150 kDa, 약 10 kDa 내지 약 125 kDa, 약 12.5 kDa 내지 약 100 kDa, 약 15 kDa 내지 약 90 kDa, 약 17.5 kDa 내지 약 80 kDa, 약 20 kDa 내지 약 70 kDa, 약 22.5 kDa 내지 약 60 kDa, 또는 약 25 kDa 내지 약 50 kDa)의 평균분자량을 가질 수 있다. 일 실시형태에서, 이식가능한 작제물은 적어도 0.5%, 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 7.5%, 10%, 15%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80% 또는 그 이상의 알기네이트 중합체를 포함한다. 일 실시형태에서, 알기네이트는 초순수 알기네이트(예를 들어, SLG20 알기네이트)이다.

일 실시형태에서, 이식가능한 작제물은 금속 또는 금속 합금을 포함한다. 예시적인 금속 또는 금속 합금은 티타늄(예를 들어, 니티놀, 니켈 티타늄 합금, 열-기억 합금 재료), 백금, 백금족 합금, 스테인리스강, 탄탈, 팔라듐, 지르코늄, 니오븀, 몰리브덴, 니켈-크롬, 코발트, 탄탈, 크롬 몰리브덴 합금, 니켈-티타늄 합금 및 코발트 크롬 합금을 포함한다. 일 실시형태에서, 이식가능한 작제물은 스테인리스강 등급을 포함한다. 이식가능한 작제물은 적어도 0.5%, 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 7.5%, 10%, 15%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80% 이상의 금속 또는 금속 합금, 예를 들어, 본 명세서에 기재된 금속 또는 금속 합금을 포함할 수 있다.

일 실시형태에서, 이식가능한 작제물은 세라믹을 포함한다. 예시적인 세라믹은 탄화물, 질화물, 실리카, 또는 산화물 물질(예를 들어, 티타늄 산화물, 하프늄 산화물, 이리듐 산화물, 크롬 산화물, 알루미늄 산화물, 및 지르코늄 산화물)를 포함한다. 이식가능한 작제물은 적어도 0.5%, 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 7.5%, 10%, 15%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80% 또는 그 이상의 세라믹, 예를 들어, 본 명세서에 기재된 세라믹을 포함할 수 있다.

일 실시형태에서, 이식가능한 작제물은 유리를 포함할 수 있다. 이식가능한 작제물은 적어도 0.5%, 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 7.5%, 10%, 15%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80% 이상의 유리를 포함할 수 있다.

이식가능한 작제물 내의 물질은, 예를 들어, 화학적 변형에 의해 추가로 변형될 수 있다. 예를 들어, 물질은 면역조정(i㎜unomodulatory) 또는 항섬유화(antifibrotic) 특징과 같은 특정 특징을 제공하는 화학적 변형으로 코팅되거나 유도체화될 수 있다. 예시적인 화학적 변형은 소분자, 펩타이드, 단백질, 핵산, 지질 또는 올리고당을 포함한다. 이식가능한 작제물은 적어도 0.5%, 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 7.5%, 10%, 15%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80% 또는 그 이상의 화학적으로 변형된 물질, 예를 들어, 본 명세서에 기재된 화학적 변형을 갖는 물질을 포함할 수 있다.

일부 실시형태에서, 물질은 변형의 특정 밀도로 화학적으로 변형된다. 화학적 변형의 특정 밀도는 주어진 면적당 부착된 화학적 변형의 평균 수로서 기재될 수 있다. 예를 들어, 본 명세서에 기재된 이식가능한 작제물에, 작제물 상에 또는 작제물 내에 존재하는 물질에 대한 화학적 변형의 밀도는 제곱㎛ 또는 제곱㎜당 0.01, 0.1, 0.5, 1, 5, 10, 15, 20, 50, 75, 100, 200, 400, 500, 750, 1,000, 2,500 또는 5,000개의 화학적 변형일 수 있다.

일 실시형태에서, 물질의 화학적 변형은 링커 또는 다른 부착 모이어티를 포함할 수 있다. 이러한 링커는 가교제, 아민 함유 링커, 에스테르 함유 링커, 광불안정성 링커, 펩타이드 함유 링커, 이황화물 함유 링커, 아마이드 함유 링커, 포스포릴 함유 링커, 또는 이들의 조합을 포함할 수 있다. 링커는 불안정성(예를 들어, 가수분해성)일 수 있다. 예시적인 링커 또는 다른 부착 모이어티는 전체내용이 본 명세서에 참조에 의해 원용되는 문헌[Bioconjugate Techniques(3^rd ed, Greg T. Hermanson, Waltham, MA: Elsevier, Inc, 2013]에 요약되어 있다.

B. 세포

본 명세서에 기재된 이식가능한 작제물은 세포, 예를 들어, 조작된 세포를 함유할 수 있다. 세포는 뇌, 신경, 신경절, 척추, 눈, 심장, 간, 신장, 폐, 비장, 뼈, 흉선, 림프계, 피부, 근육, 췌장, 위, 장, 혈액, 난소, 자궁 또는 고환을 비롯한 임의의 포유동물 기관 또는 조직에서 유래될 수 있다.

세포는 공여자 유래(예를 들어, 동종이계 세포), 대상체 유래(예를 들어, 자가 세포), 또는 다른 종 유래(예를 들어, 이종 세포)일 수 있다. 일 실시형태에서, 세포는 세포 배양물에서 성장될 수 있거나, 확립된 세포 배양주로부터 제조될 수 있거나, 또는 공여자(예를 들어, 살아있는 공여자 또는 사체)로부터 유래될 수 있다. 일 실시형태에서, 세포는 유전자 조작된다. 다른 실시형태에서, 세포는 유전자 조작되지 않는다. 세포는 줄기 세포, 예컨대, 재프로그래밍된 줄기 세포, 또는 유도된 다능성 세포를 포함할 수 있다. 예시적인 세포는 중간엽 줄기 세포(MSC), 섬유아세포(예를 들어, 1차 섬유아세포), HEK 세포(예를 들어, HEK293T), Jurkat 세포, HeLa 세포, 망막 색소 상피(RPE) 세포, HUVEC 세포, NIH3T3 세포, CHO-K1 세포, COS-1 세포, COS-7 세포, PC-3 세포, HCT 116 세포, A549MCF-7 세포, HuH-7 세포, U-2 OS 세포, HepG2 세포, Neuro-2a 세포 및 SF9 세포를 포함한다. 일 실시형태에서, 이식가능한 작제물에 사용하기 위한 세포는 RPE 세포이다.

이식가능한 작제물에 포함된 세포는 치료제를 생산하거나 분비할 수 있다. 일 실시형태에서, 이식가능한 작제물에 포함된 세포는 단일 유형의 치료제 또는 복수의 치료제를 생산하거나 분비할 수 있다. 일 실시형태에서, 이식가능한 작제물은 치료제의 발현 서열을 포함하는 핵산(예를 들어, 벡터)으로 형질도입되거나 형질감염된 세포를 포함할 수 있다. 예를 들어, 세포는 렌티바이러스로 형질도입되거나 형질감염될 수 있다. 세포 내로 도입된 핵산(예를 들어, 형질도입 또는 형질감염에 의해)은 플라스미드와 같은 핵산 전달 시스템에 혼입될 수 있거나, 또는 직접 전달될 수 있다. 일 실시형태에서, 세포 내로 도입된 (예를 들어, 플라스미드의 일부로서의) 핵산은 치료제의 발현을 향상시키고/시키거나 표적화 또는 분비를 유도하는 영역, 예를 들어, 프로모터 서열, 활성제 서열, 또는 세포 신호전달 펩타이드, 또는 세포 수출 펩타이드를 포함할 수 있다. 예시적인 프로모터는 EF-1a, CMV, Ubc, hPGK, VMD2 및 CAG를 포함한다. 예시적인 활성제는 TET1 촉매 도메인, P300 코어, VPR, rTETR, Cas9(예를 들어, S. 피오게네스(S. pyogenes) 또는 S. 아우레우스(S. aureus) 유래), 및 Cpf1(예를 들어, L. 박테리움(L. bacterium) 유래)을 포함한다.

본 명세서에 기재된 이식가능한 작제물은 세포 또는 복수의 세포를 포함할 수 있다. 복수의 세포인 경우에는 세포 유형, 이식 위치, 및 이식가능한 작제물의 예상 수명과 같은 다수의 요인에 따라 농도 및 총 세포수가 달라질 수 있다. 일 실시양태에서, 이식가능한 작제물에 포함된 세포의 총 수는 약 2, 4, 6, 8, 10, 20, 30, 40, 50, 75, 100, 200, 250, 500, 750, 1000, 1500, 2000, 5000, 10000개 또는 그 이상보다 많다. 일 실시형태에서, 이식가능한 작제물에 포함된 세포의 총 수는 약 1.0×10², 1.0×10³, 1.0×10⁴, 1.0×10⁵, 1.0×10⁶, 1.0×10⁷, 1.0×10⁸, 1.0×10⁹, 1.0×10¹⁰ 또는 그 이상보다 많다. 일 실시형태에서, 이식가능한 작제물에 포함된 세포의 총 수는 약 10000, 5000, 2500, 2000, 1500, 1000, 750, 500, 250, 200, 100, 75, 50, 40, 30, 20, 10, 8, 6, 4, 2개 이하보다 적다. 일 실시형태에서, 이식가능한 작제물에 포함된 세포의 총 수는 약 1.0×10¹⁰, 1.0×10⁹, 1.0×10⁸, 1.0×10⁷, 1.0×10⁶, 1.0×10⁵, 1.0×10⁴, 1.0×10³, 1.0×10² 이하보다 적다. 일 실시형태에서, 복수의 세포는 응집체로서 존재한다. 일 실시형태에서, 복수의 세포는 세포 분산액으로서 존재한다.

이식가능한 작제물 내에 함유된 세포의 특이적인 특징은, 예를 들어, 이식가능한 작제물에 혼입되기 전 및/또는 후에 결정될 수 있다. 예를 들어, 세포 생존력, 세포 밀도 또는 세포 발현 수준이 평가될 수 있다. 일 실시형태에서, 세포 생존력, 세포 밀도 및 세포 발현 수준은 세포 현미경법, 형광 현미경법, 조직학 또는 생화학적 검정과 같은 표준 기술을 사용하여 결정할 수 있다.

C. 치료제

본 명세서에 기재된 이식가능한 작제물은 치료제, 예를 들어, 세포에 의해 생산되거나 분비되는 치료제를 함유할 수 있다. 치료제는 핵산(예를 들어, RNA, DNA, 또는 올리고뉴클레오타이드), 단백질(예를 들어, 항체, 효소, 사이토카인, 호르몬, 수용체), 지질, 소분자, 대사 작용제, 올리고당, 펩타이드, 아미노산, 항원을 포함할 수 있다. 일 실시형태에서, 이식가능한 작제물은 치료제를 생산하거나 분비하도록 유전자 조작된 세포 또는 복수의 세포를 포함한다.

일 실시형태에서, 이식가능한 작제물은 단백질을 생산하거나 분비하는 세포를 포함한다. 단백질은 임의의 크기, 예를 들어, 약 100Da, 200Da, 250Da, 500Da, 750Da, 1KDa, 1.5kDa, 2kDa, 2.5kDa, 3kDa, 4kDa, 5kDa, 6kDa, 7kDa, 8kDa, 9kDa, 10kDa, 15kDa, 20kDa, 25kDa, 30kDa, 35kDa, 40kDa, 45kDa, 50kDa, 55kDa, 60kDa, 65kDa, 70kDa, 75kDa, 80kDa, 85kDa, 90kDa, 95kDa, 100kDa, 125kDa, 150kDa, 200kDa, 200kDa, 250kDa, 300kDa, 400kDa, 500kDa, 600kDa, 700kDa, 800kDa, 900kDa 이상보다 클 수 있다. 일 실시형태에서, 단백질은 단일 서브유닛 또는 다중 서브유닛(예를 들어, 이량체, 삼량체, 사량체 등)으로 구성된다. 세포에 의해 생산되거나 분비되는 단백질은, 예를 들어, 글리코실화, 메틸화, 또는 다른 공지된 천연 또는 합성 단백질 변형에 의해 변형될 수 있다. 단백질은 전구단백질(pre-protein) 또는 비활성 형태로 생산 또는 분비될 수 있으며 활성 형태로 전환하기 위해 추가 변형을 필요로 할 수 있다.

세포에 의해 생산 또는 분비되는 단백질은 항체 또는 항체 단편, 예를 들어, 항체의 Fc 영역 또는 가변 영역을 포함할 수 있다. 예시적인 항체는 항-PD-1, 항-PD-L1, 항-CTLA4, 항-TNFα, 및 항-VEGF 항체를 포함한다. 항체는 단클론 또는 다클론일 수 있다. 다른 예시적인 단백질은 지단백질, 접착 단백질, 혈액 응고 인자(예를 들어, 인자 VII, 인자 VIII, 인자 IX, GCG, 또는 VWF), 헤모글로빈, 효소, 프로엔케팔린, 성장 인자(예를 들어, EGF, IGF-1, VEGF 알파, HGF, TGF 베타, bFGF) 또는 사이토카인을 포함한다.

세포에 의해 생산되거나 분비되는 단백질로는 호르몬을 포함할 수 있다. 예시적인 호르몬은 성장 호르몬, 성장 호르몬 방출 호르몬, 프로락틴, 황체형성 호르몬(LH), 항이뇨 호르몬(ADH), 옥시토신, 갑상선 자극 호르몬(TSH), 타이로트로핀-방출 호르몬(TRH), 부신피질자극 호르몬(ACTH), 난포 자극 호르몬(FSH), 티록신, 칼시토닌, 부갑상선 호르몬, 알도스테론, 코티솔, 에피네프린, 글루카곤, 인슐린, 에스트로겐, 프로게스테론 및 테스토스테론을 포함한다.

세포에 의해 생산되거나 분비되는 단백질은 사이토카인을 포함할 수 있다. 사이토카인은 염증촉진성 사이토카인 또는 항염증성 사이토카인일 수 있다. 사이토카인의 예로는 IL-1, IL-1α, IL-1β, IL-1RA, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-11, IL-12, IL-12a, IL-12b, IL-13, IL-14, IL-16, IL-17, G-CSF, GM-CSF, IL-20, IFN-α, IFN-β, IFN-γ, CD154, LT-β, CD70, CD153, CD178, TRAIL, TNF-α, TNF-β, SCF, M-CSF, MSP, 4-1BBL, LIF, OSM 및 다른 것들을 포함한다. 예를 들어, 사이토카인은 전체내용이 본 명세서에 참조에 의해 원용되는 문헌[M.J. Cameron and D.J. Kelvin, Cytokines, Chemokines, and Their Receptors (2013), Landes Biosciences]에 기재된 임의의 사이토카인을 포함할 수 있다.

이식가능한 작제물은 1종의 치료제, 예를 들어, 단일 단백질 또는 핵산을 발현하는 세포를 포함할 수 있거나, 또는 1종보다 많은 치료제, 예를 들어, 복수의 단백질 또는 핵산을 발현할 수 있다. 일 실시형태에서, 이식가능한 작제물은 2종의 치료제(예를 들어, 2종의 단백질 또는 핵산)를 발현하는 세포를 포함한다. 일 실시형태에서, 이식가능한 작제물은 3종의 치료제(예를 들어, 3종의 단백질 또는 핵산)를 발현하는 세포를 포함한다. 일 실시형태에서, 이식가능한 작제물은 4종의 치료제(예를 들어, 4종의 단백질 또는 핵산)를 발현하는 세포를 포함한다.

일 실시형태에서, 이식가능한 작제물은 1종의 핵산(예를 들어, DNA 또는 RNA)을 발현하는 세포를 포함하거나, 또는 1종보다 많은 핵산, 예를 들어, 복수의 핵산(예를 들어, DNA 또는 RNA)을 발현할 수 있다. 일 실시형태에서, 이식가능한 작제물은 2종의 핵산(예를 들어, DNA 또는 RNA)을 발현하는 세포를 포함한다. 일 실시형태에서, 이식가능한 작제물은 3종의 핵산(예를 들어, DNA 또는 RNA)을 발현하는 세포를 포함한다. 일 실시형태에서, 이식가능한 작제물은 4종의 핵산(예를 들어, DNA 또는 RNA)을 발현하는 세포를 포함한다.

일 실시형태에서, 이식가능한 작제물은 1종의 단백질을 발현하는 세포를 포함하거나, 1종 보다 많은 단백질, 예를 들어, 복수의 단백질을 발현할 수 있다. 일 실시형태에서, 이식가능한 작제물은 2종의 단백질을 발현하는 세포를 포함한다. 일 실시형태에서, 이식가능한 작제물은 3종의 단백질을 발현하는 세포를 포함한다. 일 실시형태에서, 이식가능한 작제물은 4종의 단백질을 발현하는 세포를 포함한다.

일 실시형태에서, 이식가능한 작제물은 1종의 효소를 발현하는 세포를 포함하거나, 1종 보다 많은 효소, 예를 들어, 복수의 효소를 발현할 수 있다. 일 실시형태에서, 이식가능한 작제물은 2종의 효소를 발현하는 세포를 포함한다. 일 실시형태에서, 이식가능한 작제물은 3종의 효소를 발현하는 세포를 포함한다. 일 실시형태에서, 이식가능한 작제물은 4종의 효소를 발현하는 세포를 포함한다.

일 실시형태에서, 이식가능한 작제물은 1종의 항체 또는 항체 단편을 발현하는 세포를 포함하거나, 또는 1종보다 많은 항체 또는 항체 단편, 예를 들어, 복수의 항체 또는 항체 단편을 발현할 수 있다. 일 실시형태에서, 이식가능한 작제물은 2종의 항체 또는 항체 단편을 발현하는 세포를 포함한다. 일 실시형태에서, 이식가능한 작제물은 3종의 항체 또는 항체 단편을 발현하는 세포를 포함한다. 일 실시형태에서, 이식가능한 작제물은 4종의 항체 또는 항체 단편을 발현하는 세포를 포함한다.

일 실시형태에서, 이식가능한 작제물은 1종의 호르몬을 발현하는 세포를 포함하거나, 1종보다 많은 호르몬, 예를 들어, 복수의 호르몬을 발현할 수 있다. 일 실시형태에서, 이식가능한 작제물은 2종의 호르몬을 발현하는 세포를 포함한다. 일 실시형태에서, 이식가능한 작제물은 3종의 호르몬을 발현하는 세포를 포함한다. 일 실시형태에서, 이식가능한 작제물은 4종의 호르몬을 발현하는 세포를 포함한다.

일 실시형태에서, 이식가능한 작제물은 1종의 효소를 발현하는 세포를 포함하거나, 또는 1종보다 많은 효소, 예를 들어, 복수의 효소를 발현할 수 있다. 일 실시형태에서, 이식가능한 작제물은 2종의 효소를 발현하는 세포를 포함한다. 일 실시형태에서, 이식가능한 작제물은 3종의 효소를 발현하는 세포를 포함한다. 일 실시형태에서, 이식가능한 작제물은 4종의 효소를 발현하는 세포를 포함한다.

일 실시형태에서, 이식가능한 작제물은 1종의 사이토카인을 발현하는 세포를 포함하거나 또는 1종보다 많은 사이토카인, 예를 들어, 복수의 사이토카인을 발현할 수 있다. 일 실시형태에서, 이식가능한 작제물은 2종의 사이토카인을 발현하는 세포를 포함한다. 일 실시형태에서, 이식가능한 작제물은 3종의 사이토카인을 발현하는 세포를 포함한다. 일 실시형태에서, 이식가능한 작제물은 4종의 사이토카인을 발현하는 세포를 포함한다.

D. 이식가능한 작제물의 특징

본 명세서에 기재된 이식가능한 작제물은 임의의 적합한 형상 또는 형태를 취할 수 있다. 예를 들어, 이식가능한 작제물은 구체, 회전 타원체, 튜브, 코드, 끈, 타원체, 디스크, 실린더, 시트, 원환체, 정육면체, 스타디움형, 원뿔, 피라미드, 삼각형, 직사각형, 정사각형 또는 막대형일 수 있다. 이식가능한 작제물은 곡선 또는 평평한 구간을 포함할 수 있다. 일 실시형태에서, 이식가능한 작제물은 주형의 사용을 통해 제조되어, 결과적으로 맞춤형 형상을 초래할 수 있다.

이식가능한 작제물은, 예를 들어, 이식의 용도 또는 부위에 따라 크기가 다양할 수 있다. 예를 들어, 이식가능한 작제물은 0.1㎜ 초과, 예를 들어, 0.25㎜, 0.5㎜, 0.75, 1㎜, 1.5㎜, 2㎜, 3㎜, 4㎜, 5㎜, 6㎜, 7㎜, 8㎜, 9㎜, 10㎜, 20㎜, 30㎜, 40㎜, 50㎜ 또는 그 이상보다 큰 평균 직경 또는 크기를 가질 수 있다. 일 실시형태에서, 이식가능한 작제물은 0.1㎜ 초과, 예를 들어, 0.25㎜, 0.5㎜, 0.75, 1㎜, 1.5㎜, 2㎜, 3㎜, 4㎜, 5㎜, 6㎜, 7㎜, 8㎜, 9㎜, 10㎜, 20㎜, 30㎜, 40㎜, 50㎜ 이상보다 큰 평균 직경 또는 크기를 갖는 구간 또는 영역을 가질 수 있다. 일 실시형태에서, 이식가능한 작제물은 1cm 미만, 예를 들어, 50㎜ 미만, 40㎜, 30㎜, 20㎜, 10㎜, 7.5㎜, 5㎜, 2.5㎜, 1㎜, 0.5㎜ 이하보다 작은 평균 직경 또는 크기를 가질 수 있다. 일 실시형태에서, 이식가능한 작제물은 1cm 미만, 예를 들어, 50㎜ 미만, 40㎜, 30㎜, 20㎜, 10㎜, 7.5㎜, 5㎜, 2.5㎜, 1㎜, 0.5㎜ 이하보다 작은 평균 직경 또는 크기를 갖는 구간 또는 영역을 가질 수 있다.

이식가능한 작제물은 외부 환경, 예를 들어, 숙주 이펙터 세포 또는 조직으로부터 봉입된 항원성 작용제 또는 치료제의 노출을 방지할 수 있는 적어도 하나의 구역을 포함한다. 일 실시형태에서, 이식가능한 작제물은 내부 구역(inner zone, IZ)을 포함한다. 일 실시형태에서, 이식가능한 작제물은 외부 구역(outer zone, OZ)을 포함한다. 일 실시형태에서, 내부 구역(IZ) 또는 외부 구역(OZ)은 침식성 또는 분해성일 수 있다. 일 실시형태에서, 내부 구역(IZ)은 침식성 또는 분해성일 수 있다. 일 실시형태에서, 외부 구역(OZ)은 침식성이거나 분해성일 수 있다. 일 실시형태에서, 이식가능한 작제물은 내부 구역(IZ) 및 외부 구역(OZ) 둘 모두를 포함하며, 이들 중 어느 하나는 침식성 또는 분해성일 수 있다. 일 실시형태에서, 이식가능한 작제물은 내부 구역(IZ) 및 외부 구역(OZ) 둘 모두를 포함하며, 여기서 외부 구역은 침식성 또는 분해성이다. 일 실시형태에서, 이식가능한 작제물은 내부 구역(IZ) 및 외부 구역(OZ) 둘 모두를 포함하며, 여기서 내부 구역은 침식성 또는 분해성이다. 구역 중 어느 하나, 예를 들어, 내부 구역 또는 외부 구역의 두께는 캡슐화된 항원성 작용제 또는 치료제가 외부 환경, 예를 들어, 숙주 이펙터 세포 또는 조직으로부터 보호되거나 차폐되는 "차폐된" 상의 길이 또는 기간과 상관성이 있을 수 있다.

이식가능한 작제물의 구역(예를 들어, 내부 구역 또는 외부 구역)은 분해성 실체, 예를 들어, 분해될 수 있는 실체를 포함할 수 있다. 분해성 실체는 효소 절단 부위, 광불안정 부위, pH 민감 부위, 또는 시간 경과에 따라서 침식되거나 포함될 수 있는 다른 불안정 영역을 포함할 수 있다. 일 실시형태에서, 분해성 실체는 제2 조건(예를 들어, 제2 환경, 예를 들어, 제2 pH 또는 제2 효소에 노출)에 비해 제1 조건(예를 들어, 제1 환경, 예를 들어, 제1 pH 또는 제1 효소에 노출)에 노출 시 우선적으로 분해된다. 일 실시형태에서, 분해성 실체는 제2 조건에 비해 제1 조건에 노출 시 적어도 2, 5, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80 또는 100배 더 빠르게 분해된다. 일 실시형태에서, 분해성 실체는 효소 절단 부위, 예를 들어, 단백분해 부위이다. 일 실시형태에서, 분해성 실체는 중합체(예를 들어, 합성 중합체 또는 천연 발생 중합체, 예를 들어, 펩타이드 또는 다당류)이다. 일 실시형태에서, 분해성 실체는 내인성 숙주 성분, 예를 들어, 분해 효소, 예를 들어, 리모델링 효소, 예를 들어, 콜라게나제 또는 메탈로프로테아제에 대한 기질이다. 일 실시형태에서, 분해성 실체는 중합체에 매립된 절단성 링커 또는 절단성 분절을 포함한다.

일 실시형태에서, 이식가능한 작제물은 소분자(예를 들어, 영양소 또는 폐 산물), 단백질, 또는 핵산과 같은 물체의 통과를 허용하는 기공(pore) 또는 개구(opening)를 포함한다. 예를 들어, 이식가능한 작제물 내 또는 상의 기공은 0.1㎚ 초과 내지 10㎛ 미만일 수 있다. 일 실시형태에서, 이식가능한 작제물은 0.1㎛ 내지 10㎛, 0.1㎛ 내지 9㎛, 0.1㎛ 내지 8㎛, 0.1㎛ 내지 7㎛, 0.1㎛ 내지 6㎛, 0.1㎛ 내지 5㎛, 0.1㎛ 내지 4㎛, 0.1㎛ 내지 3㎛, 0.1㎛ 내지 2㎛의 크기 범위를 갖는 기공 또는 개구를 포함한다.

본 명세서에 기재된 이식가능한 작제물은 임의의 봉입된 물질 내 또는 상에 화학적 변형을 포함할 수 있다. 예시적인 화학적 변형은 소분자, 펩타이드, 단백질, 핵산, 지질 또는 올리고당을 포함한다. 이식가능한 작제물은 적어도 0.5%, 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 7.5%, 10%, 15%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80% 또는 그 이상의 화학적 변형된 물질, 예를 들어, 본 명세서에 기재된 화학적 변형을 갖는 물질을 포함할 수 있다. 이식가능한 작제물은 화학적 변형에 의해 부분적으로 코팅될 수 있고, 예를 들어, 화학적 변형에 의해 적어도 약 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 99% 또는 99.9%가 코팅될 수 있다.

일 실시형태에서, 이식가능한 작제물은 항원성 작용제 및/또는 치료제의 방출 기간이 조율가능하도록 제형화된다. 예를 들어, 이식가능한 작제물은 시간 경과에 따라서 특정 양의 항원성 작용제 또는 치료제를 방출하는 특정 방식으로, 예를 들어, 지속적인 또는 제어된 방식으로 구성될 수 있다. 일 실시형태에서, 이식가능한 작제물은 분해성인 구역(예를 들어, 내부 구역 또는 외부 구역)을 포함하고, 이는 캡슐화된 세포의 면역보호를 점진적으로 중단하거나 항원성 작용제의 점진적인 방출을 유발함으로써 작제물로부터 치료제 방출 기간을 제어한다. 일 실시형태에서, 이식가능한 작제물은 항원성 작용제 또는 치료제의 방출 수준이 숙주 이펙터 세포, 예를 들어, 숙주 T 세포의 비율을 조정하기에 충분하도록 구성된다. 일 실시형태에서, 이식가능한 작제물은 항원성 작용제 또는 치료제의 방출 수준이 숙주 세포(예를 들어, 숙주 T 이펙터 세포 또는 숙주 NK 세포)를 활성화하거나 특정 숙주 세포(예를 들어, 숙주 T 이펙터 세포 또는 숙주 NK 세포)의 수준을 증가시키기에 충분하도록 구성된다. 일 실시형태에서, 이식가능한 작제물은 항원성 작용제 또는 치료제의 방출 수준이 숙주 조절 세포(예를 들어, 숙주 T 조절 세포)를 활성화하거나 숙주 조절 세포(예를 들어, 숙주 T 조절 세포)의 수준을 증가시키기에 충분하지 않도록 구성된다.

일부 실시형태에서, 이식가능한 작제물은, 예를 들어, 일정 기간 동안, 숙주 또는 대상체의 자연적인 이물 반응(foreign body response, FBR)에 의해 표적화되는 구역을 포함한다. 일 실시형태에서, 이식가능한 작제물은, 예를 들어, 일정 기간에 걸쳐, 대상체에 투여시 섬유성 과성장(fibrotic overgrowth)에 의해 코팅된다. 이식가능한 작제물 표면 상에서 섬유성 과성장은 이식가능한 작제물의 기능을 감소시킬 수 있다. 예를 들어, 기능의 감소는 시간 경과에 따른 항원성 작용제 또는 치료제의 방출 감소, 기공 크기의 감소, 또는 캡슐화된 세포로 산소 및 다른 주요 영양소의 확산 속도 감소를 포함할 수 있으며, 이는 세포 사멸을 야기할 수 있다. 일 실시형태에서, 섬유성 과성장의 속도는 투약 요법을 설계하기 위해 조율될 수 있다. 예를 들어, 이식가능한 작제물의 표면에 섬유성 과성장은 대상체에게 투여(예를 들어, 주사 또는 이식) 후 약 6시간, 12시간, 18시간, 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 7일, 8일, 9일, 10일, 11일, 12일, 13일, 2주, 2.5주, 3주, 4주, 또는 6주 후에 이식가능한 작제물의 기능을 감소시킬 수 있다.

일부 실시형태에서, 이식가능한 작제물은 변형의 특정 밀도로 화학적 변형된다. 화학적 변형의 특정 밀도는 주어진 면적당 부착된 화학적 변형의 평균 수로서 설명될 수 있다. 예를 들어, 이식가능한 작제물 상 또는 내의 화학적 변형의 밀도는 제곱㎛ 또는 제곱㎜당 0.01, 0.1, 0.5, 1, 5, 10, 15, 20, 50, 75, 100, 200, 400, 500, 750, 1,000, 2,500, 또는 5,000개의 화학적 변형일 수 있다.

이식가능한 작제물은 대상체의 임의의 기관, 조직, 세포 또는 부분에 이식하기 위해 제형화되거나 구성될 수 있다. 예를 들어, 이식가능한 작제물은 대상체의 복강내 공간에 이식되거나 배치될 수 있다. 이식가능한 작제물은 대상체의 종양 또는 다른 성장에 이식 또는 배치될 수 있거나, 또는 대상체의 종양 또는 다른 성장으로부터 약 0.1㎜, 0.5㎜, 1㎜, 0.25㎜, 0.5㎜, 0.75, 1㎜, 1.5㎜, 2㎜, 3㎜, 4㎜, 5㎜, 6㎜, 7㎜, 8㎜, 9㎜, 10㎜, 20㎜, 30㎜, 40㎜, 50㎜, 1㎝, 5㎝, 10㎝, 또는 그 이상에 이식되거나 배치될 수 있다. 이식가능한 작제물은 이식을 위해 구성될 수 있거나, 또는 피부, 점막 표면, 체강, 중추 신경계(예를 들어, 뇌 또는 척수), 장기(예를 들어, 심장, 눈, 간, 신장, 비장, 폐, 난소, 유방, 자궁), 림프계, 혈관계, 구강, 비강, 위장관, 뼈, 근육, 지방 조직, 피부 또는 다른 부위 상 또는 내에 이식되거나 배치될 수 있다.

이식가능한 작제물은 임의의 기간 동안 사용하기 위해 제형화될 수 있다. 예를 들어, 이식가능한 작제물은 1시간, 2시간, 4시간, 6시간, 12시간, 1일, 36시간, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 1주, 2주, 3주, 4주, 5주, 6주, 2개월, 3개월, 4개월, 5개월, 6개월, 1년 또는 그 이상 동안 사용될 수 있다. 이식가능한 작제물은 제한된 노출(예를 들어, 2일 미만, 예를 들어, 2일 미만, 1일, 24시간, 20시간, 16시간, 12시간, 10시간, 8시간, 6시간, 5시간, 4시간, 3시간, 2시간, 1시간 이하)을 위해 구성될 수 있다. 이식가능한 작제물은 장기간 노출(예를 들어, 적어도 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 7일, 1주, 2주, 3주, 4주, 5주, 1개월, 2개월, 3개월, 4개월, 5개월, 6개월, 7개월, 8개월, 9개월, 10개월, 11개월, 12개월, 13개월, 14개월, 15개월, 16개월, 17개월, 18개월 , 19개월, 20개월, 21개월, 22개월, 23개월, 24개월, 1년, 1.5년, 2년, 2.5년, 3년, 3.5년, 4년 이상)용으로 구성될 수 있다. 이식가능한 작제물은 영구 노출(예를 들어, 적어도 6개월, 7개월, 8개월, 9개월, 10개월, 11개월, 12개월, 13개월, 14개월, 15개월, 16개월, 17개월, 18개월, 19개월, 20개월, 21개월, 22개월, 23개월, 24개월, 1년, 1.5년, 2년, 2.5년, 3년, 3.5년, 4년 이상)용으로 구성될 수 있다.

E. 치료 방법

본 명세서에는 항원성 작용제 또는 치료제를 캡슐화하는 구역(예를 들어, 층)을 포함하는 이식가능한 작제물, 및 관련된 이의 사용 방법이 기재된다. 일 실시형태에서, 이식가능한 작제물은, 예를 들어, 본 명세서에 기재된 바와 같은 질환을 치료하는데 사용된다.

일부 실시형태에서, 질환은 증식성 질환이다. 일 실시형태에서, 증식성 질환은 암이다. 암은 상피, 중간엽 또는 혈액 악성 종양일 수 있다. 암은 일차 악성 세포 또는 종양(예를 들어, 세포가 원래 악성 또는 종양의 부위 이외에 다른 대상체 신체 부위로 이동하지 않은 것) 및 이차 악성 세포 또는 종양(예를 들어, 원래의 종양 부위와 다른 제2 부위로 악성 세포 또는 종양 세포의 이동인 전이로부터 발생하는 것)을 포함한다. 일 실시형태에서, 암은 고형 종양(예를 들어, 유암종, 암종 또는 육종), 연조직 종양(예를 들어, 혈액암), 또는 전이성 병변, 예를 들어, 본 명세서에 개시된 임의의 암의 전이성 병변이다. 일 실시형태에서, 암은 섬유성 또는 결합조직형성 고형암이다.

예시적인 암으로는 암종, 림프종, 모세포종, 육종, 및 백혈병 또는 림프구성 악성종양을 포함한다. 일 실시형태에서, 암은 신체의 계통, 예를 들어, 신경계(예를 들어, 말초신경계(PNS) 또는 중추신경계(CNS)), 혈관계, 골격계, 호흡기계, 내분비계, 림프계, 생식계 또는 위장관에 영향을 미친다. 일부 실시형태에서, 암은 신체의 일부, 예를 들어, 혈액, 눈, 뇌, 피부, 폐, 위, 입, 귀, 다리, 발, 손, 간, 심장, 신장, 뼈, 췌장, 비장, 대장, 소장, 척수, 근육, 난소, 자궁, 질 또는 음경에 영향을 미친다. 이러한 암의 보다 특별한 예로는 편평 세포암(예를 들어, 상피 편평 세포암), 소세포 폐암, 비소세포 폐암, 폐의 선암종 및 폐의 편평세포암종을 포함하는 폐암, 복막암, 간세포암, 위장암을 포함하는 위암(gastric cancer) 또는 위암(stomach cancer), 췌장암, 교모세포종, 자궁경부암, 난소암, 간암, 방광암, 간세포암, 유방암, 결장암, 직장암, 결장직장암, 자궁내막암 또는 자궁암종, 침샘암종, 신장암(kidney cancer) 또는 신장암(renal cancer), 전립선암, 외음부암, 갑상선암, 간암종, 항문암, 음경암종, 뿐만 아니라 두경부암을 포함한다.

암의 다른 예로는 급성 소아 림프구성 백혈병, 급성 림프구성 백혈병, 급성 림프구성 백혈병, 급성 골수성 백혈병, 부신피질 암종, 성인(원발성) 간세포암, 성인(원발성) 간암, 성인 급성 림프구성 백혈병, 성인 급성 골수성 백혈병, 성인 호지킨병, 성인 호지킨 림프종, 성인 림프구성 백혈병, 성인 비호지킨 림프종, 성인 원발성 간암, 성인 연조직 육종, AIDS 관련 림프종, AIDS 관련 악성종양, 항문암, 성상세포종, 담즙관암, 방광암, 골암, 뇌간 신경교종, 뇌종양, 유방암, 신우 및 요관암, 중추신경계(원발성) 림프종, 중추신경계 림프종, 소뇌 성상세포종, 대뇌 성상세포종, 자궁경부암, 소아(원발성) 간세포암, 소아(원발성) 간암, 소아 급성림프모구백혈병, 소아 급성골수성백혈병, 소아 뇌간 신경교종, 소아 소뇌 성상세포종, 소아 대뇌 성상세포종, 소아 두개외 생식세포 종양, 소아 호지킨병, 소아 호지킨 림프종, 소아 시상하부 및 시각 경로 신경교종, 소아 림프모구성 백혈병, 소아 수모세포종, 소아 송과체 및 천막상 원시 신경외배엽 종양, 소아 원발성 간암, 소아 횡문근육종, 소아 연조직 육종, 소아 시각 경로 및 시상하부 신경교종, 만성 림프구성 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 결장암, 피부 T 세포 림프종, 내분비 췌장섬 세포 암종, 자궁내막암, 뇌실종, 상피암, 식도암, 유잉 육종 및 관련 종양, 외분비 췌장암, 두개외 생식세포종양, 생식선외 생식세포종양, 간외담관암, 안암, 여성 유방암, 고셔병, 담낭암, 위암, 위장관 유암 종양, 위장관 종양, 생식세포 종양, 임신성 융모성 종양, 털세포 백혈병, 두경부암, 간세포암, 호지킨병, 호지킨 림프종, 고감마글로불린혈증, 하인두암, 창자암, 안내 흑색종, 섬세포 암종, 섬세포 췌장암, 카포시 육종, 신장암, 후두암, 입술 및 구강암, 간암, 폐암, 림프증식성 장애, 거대글로불린혈증, 남성 유방암, 악성 중피종, 악성 흉선종, 수모세포종, 흑색종, 중피종, 전이성 잠복 원발성 편평 경부암, 전이성 원발성 편평 경부암, 전이성 편평 경부암, 다발성 골수종, 다발성 골수종/형질세포 신생물, 골수이형성 증후군, 골수원성 백혈병, 골수성 백혈병, 골수증식성 장애, 비강 및 부비동암, 비인두암, 신경모세포종, 임신중 비호지킨 림프종, 비흑색종 피부암, 비소세포폐암, 잠복 원발성 전이성 편평경부암, 구강인두암, 골/악성 섬유성 육종, 골육종/악성 섬유성 조직구종, 골육종/골의 악성 섬유성 조직구종, 난소 상피세포암, 난소 생식세포암, 난소 저악성 잠재 종양, 췌장암, 부단백혈증, 자반병, 부갑상선암, 음경암, 크롬친화세포종, 뇌하수체종양, 형질세포 신생물/다발성 골수종, 원발성 중추신경계 림프종, 원발성 간암, 전립선암, 직장 암, 신세포암, 신우 및 요관암, 망막모세포종, 횡문근육종, 침샘암, 사르코이드증 육종, 세자리 증후군, 피부암, 소세포폐암, 소장암, 연조직육종, 편평경부암, 위암, 천막위 원시 신경외배엽 및 송과체 종양, T-세포 림프종, 고환암, 흉선종, 갑상선암, 신우 및 요관의 이행세포암, 이행 신우 및 요관암, 영양막 종양, 요관 및 신우 세포암, 요도암, 자궁암, 자궁 육종, 질암, 시각 경로 및 시상하부 신경교종, 외음부암, 발덴스트롬(Waldenstrom)의 거대글로불린혈증, 빌름스(Wilms) 종양 및 위에 나열된 기관계에 위치한 신생물 이외의 임의의 다른 과증식성 질환을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.

일 실시형태에서, 이식가능한 작제물은 대상체의 신경퇴행성 질환, 자가면역 질환(예를 들어, 당뇨병, 다발성 경화증, 루푸스, 폐색, 피막 수축), 또는 간 질환(예를 들어, B형 간염 감염, C형 간염 감염, 간경변증, 또는 간암)을 치료하는데 사용된다. 일부 실시형태에서, 질환은 당뇨병(예를 들어, 제1형 당뇨병 또는 제2형 당뇨병)이다. 일부 실시형태에서, 상태는 섬유증이다. 일부 실시형태에서, 상태는 염증이다.

본 명세서에 기재된 이식가능한 작제물은 대상체에서 면역 반응을 조정(예를 들어, 상향조절)하는 방법에 사용될 수 있다. 예를 들어, 대상체에 투여시, 이식가능한 작제물(또는 이 안에 배치된 항원성 작용제 및/또는 치료제)은 대상체에서 면역계 성분의 수준을 조정(예를 들어, 상향조절)할 수 있다(예를 들어, 면역계 성분의 수준을 증가시키거나 감소시킬 수 있음). 본 명세서에 기재된 이식가능한 작제물 또는 관련 방법에 의해 조정될 수 있는 예시적인 면역계 성분으로는 줄기 세포(조혈 줄기 세포), NK 세포, T 세포(예를 들어, 적응 T 세포(예를 들어, 헬퍼 T 세포, 세포독성 T 세포, 기억 T 세포 또는 조절 T 세포), 또는 선천적-유사 T 세포(예를 들어, 천연 살해 T 세포, 점막 연관 불변 T 세포, 또는 감마 델타 T 세포), B 세포, 항체 또는 이의 단편, 또는 기타 또 다른 성분을 포함한다. 일 실시형태에서, 조정은 T 세포 또는 기타 면역계 성분의 활성화를 증가시키거나 감소시키는 것을 포함한다(예를 들어, 대조군에 비해 약 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%. 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 99% 이상).

본 명세서에 기재된 이식가능한 작제물은 특정 기간 동안 대상체에서 면역 반응을 조정하기 위해 사용될 수 있다. 예를 들어, 이식가능한 작제물(또는 내부에 배치된 항원성 작용제 및/또는 치료제)의 투여는 대상체의 면역 반응을 적어도 1시간, 2시간, 3시간, 4시간, 6시간, 8시간, 10시간, 12시간, 16시간, 20시간, 1일, 1.5일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 1주, 1.5 주, 2주, 3주, 4주, 5주, 6주, 2개월, 2.5개월, 3개월, 4개월, 5개월, 6개월 또는 그 이상 동안 (예를 들어, 면역계 성분의 수준을 증가시킴으로써) 활성화시킬 수 있다. 일 실시형태에서, 이식가능한 작제물의 투여는 대상체의 면역 반응을 1시간 내지 1개월, 1시간 내지 3주, 1시간 내지 2주, 1시간 내지 1주, 6시간 내지 1주, 또는 6시간 내지 3일 사이로 활성화(예를 들어, 면역계 성분의 수준을 증가시킴으로써)시킬 수 있다. 일 실시형태에서, 이식가능한 작제물(예를 들어, 본 명세서에 기재된 이식가능한 작제물)의 이식은 적어도 1일 동안, 예를 들어, 혈액 검사에 의해 측정되는 바와 같이, 대상체의 T 세포를 상향조절한다.

본 명세서에 기재된 이식가능한 작제물은, 예를 들어, 조합 요법에 사용하기 위한, 추가 약제, 예컨대, 항증식제, 항암제, 항염증제, 면역조정제, 또는 진통제를 더 포함할 수 있다. 추가 약제는 이식가능한 작제물 내에 또는 상에 배치될 수 있거나, 또는 이식가능한 작제물 내에 또는 상에 배치된 세포에 의해 생성될 수 있다. 일 실시형태에서, 추가 약제는 소분자, 단백질, 펩타이드, 핵산, 올리고당, 또는 기타 작용제이다.

일 실시형태에서, 추가 약제는 항암제이다. 일부 실시형태에서, 항암제는 소분자, 키나제 저해제, 알킬화제, 혈관 차단제(vascular disrupting agent), 미세소관 표적화제, 유사분열 저해제, 토포아이소머라제 저해제, 항혈관형성제, 또는 항- 대사산물이다. 일 실시형태에서, 항암제는 탁산(예를 들어, 파클리탁셀, 도세탁셀, 라로탁셀 또는 카바지탁셀)이다. 일 실시형태에서, 항암제는 안트라사이클린(예를 들어, 독소루비신)이다. 일부 실시형태에서, 항암제는 백금계 작용제(예를 들어, 시스플라틴 또는 옥살리플라틴)이다. 일부 실시형태에서, 항암제는 피리미딘 유사체(예를 들어, 젬시타빈)이다. 일부 실시형태에서, 항암제는 캄프토테신, 이리노테칸, 라파마이신, FK506, 5-FU, 류코보린, 또는 이들의 조합으로부터 선택된다. 다른 실시형태에서, 항암제는 단백질 생물학적제제(예를 들어, 항체 분자), 또는 핵산 요법(예를 들어, 안티센스 또는 저해성 이중 가닥 RNA 분자)이다.

일 실시형태에서, 추가 약제는 면역조정제, 예를 들어, 공동자극 분자의 활성화제, 면역 관문 분자의 저해제, 또는 항염증제 중 하나 이상이다. 일 실시형태에서, 면역조정제는 면역 관문 분자의 저해제(예를 들어, PD-1, PD-L1, LAG-3, TIM-3 또는 CTLA4의 저해제, 또는 이들의 임의의 조합)이다. 일부 실시형태에서, 면역조정제는 암 백신이다.

일부 실시형태에서, 면역조정제는 PD-1, PD-L1, PD-L2, CTLA4, TIM3, LAG3, VISTA, BTLA, TIGIT, LAIR1, CD73, CD160, 2B4 및/또는 TGFR 베타의 저해제이다. 일 실시형태에서, 면역 관문 분자의 저해제는 PD-1, PD-L1, LAG-3, TIM-3 또는 CTLA4, 또는 이의 임의의 조합을 저해한다. 저해 분자의 저해는 DNA, RNA 또는 단백질 수준에서 수행될 수 있다. 일부 실시형태에서, 저해 핵산(예를 들어, dsRNA, siRNA 또는 shRNA)은 저해 분자의 발현을 저해하는데 사용될 수 있다. 다른 실시형태에서, 저해 신호의 저해제는 저해 분자에 결합하는 폴리펩타이드, 예를 들어, 가용성 리간드(예를 들어, PD-1-Ig 또는 CTLA-4 Ig), 또는 항체 또는 이의 항원 결합 단편이다; 예를 들어, PD-1, PD-L1, PD-L2, CTLA4, TIM3, LAG3, VISTA, BTLA, TIGIT, LAIR1, CD73, CD160, 2B4 및/또는 TGFR 베타에 결합하는 항체 또는 이의 단편, 또는 이의 조합. 일부 실시형태에서, 면역조정제는 항염증제, 예를 들어, 본 명세서에 기재된 바와 같은 항염증제이다. 일 실시형태에서, 항염증제는 염증 신호전달 경로로부터의 염증 또는 신호전달을 차단, 저해 또는 감소시키는 작용제이다. 일 실시형태에서, 항염증제는 대상체의 하기 면역 성분 중 임의의 하나 이상의 활성을 저해하거나 감소시킨다. 일 실시형태에서, 항염증제는 IL-1 또는 IL-1 수용체 길항제, 예컨대, 아나킨라, 릴로나셉트 또는 카나키누맙이다. 일 실시형태에서, 항염증제는 IL-6 또는 IL-6 수용체 길항제, 예를 들어, 항-IL-6 항체 또는 항-IL-6 수용체 항체, 예를 들어, 토실리주맙(ACTEMRA®), 올로키주맙, 클라자키주맙, 사릴루맙, 시루쿠맙, 실툭시맙 또는 ALX-0061이다. 일 실시형태에서, 항염증제는 TNF-α 길항제, 예를 들어, 항-TNF-α 항체, 예컨대, 인플릭시맙(REMICADE®), 골리무맙(SIMPONI®), 아달리무맙(HUMIRA®), 세르톨리주맙 페골(CIMZIA®) 또는 에타너셉트이다. 일 실시형태에서, 항염증제는, 예를 들어, 본 명세서에 기재된 바와 같은, 코르티코스테로이드이다.

F. 이식가능한 작제물의 조성물 및 투여

본 개시내용은 구역(예를 들어, 내부 구역 및 선택적으로 외부 구역, 둘 모두 분해될 수 있음), 및 항원성 작용제 및/또는 치료제를 포함하는 이식가능한 작제물, 및 선택적으로 약제학적 허용성 부형제를 포함하는 약제학적 조성물을 특징으로 한다. 일부 실시형태에서, 이식가능한 작제물은 약제학적 조성물에 유효량으로 제공된다. 일부 실시형태에서, 유효량은 치료적 유효량이다. 일부 실시형태에서, 유효량은 예방적 유효량이다.

본 명세서에 기재된 약제학적 조성물은 약리학 기술분야에 공지된 임의의 방법에 의해 제조될 수 있다. 일반적으로, 이러한 제조 방법은 이식가능한 작제물을 담체 및/또는 하나 이상의 다른 보조 성분과 연관시키는 단계, 및 그 다음 필요하거나 및/또는 바람직하다면 생성물을 원하는 단일 용량 단위 또는 다중 용량 단위로 성형 및/또는 포장하는 단계를 포함한다.

약제학적 조성물은 단일 단위 용량 및/또는 복수의 단일 단위 용량으로서 대량으로 제조, 포장 및/또는 판매될 수 있다. 본 명세서에 사용된 "단위 용량"은 미리 결정된 양의 활성 성분을 포함하는 약제학적 조성물의 별개의 양이다. 이식가능한 작제물의 양은 일반적으로 대상체에게 투여될 항원성 작용제 및/또는 치료제의 투여량 및/또는 이러한 투여량의 편리한 분획, 예를 들어, 이러한 투여량의 1/2 또는 1/3과 동일할 수 있다.

본 발명의 약제학적 조성물에서 이식가능한 작제물, 약제학적 허용성 부형제, 및/또는 임의의 추가 성분의 상대적인 양은 치료되는 대상체의 정체, 크기 및/또는 상태에 따라, 그리고 추가로 조성물이 투여되어야 하는 경로에 따라 달라질 것이다. 예시적으로, 조성물은 0.1% 내지 100%(w/w)의 임의의 성분을 포함할 수 있다.

이식가능한 작제물 및 이의 약제학적 조성물은 경구, 비경구(피하, 근육내, 정맥내 및 피내 포함), 흡입 스프레이에 의해, 국소적으로, 직장으로, 비강으로, 협측으로, 질로 또는 이식된 저장소를 통해 투여 또는 이식될 수 있다. 일부 실시형태에서, 제공된 화합물 또는 조성물은 정맥내 및/또는 경구로 투여 가능하다. 일 실시형태에서, 이식가능한 작제물은 피하로 주사된다. 일 실시형태에서, 이식가능한 작제물은 복강내 공간으로 주사된다. 일 실시형태에서, 이식가능한 작제물은 복강내 공간으로 주사된다. 일 실시형태에서, 이식가능한 작제물은 디바이스, 예를 들어, 캐뉼러 또는 카테터를 사용하여 대상체에게 전달된다.

본 명세서에 사용된 용어 "비경구"는 피하, 정맥내, 근육내, 안내, 유리체내, 관절내, 활액내, 흉골내, 척추강내, 간내, 복강내 병변내 및 두개내 주사 또는 주입 기술을 포함한다. 바람직하게는, 조성물은 경구, 피하, 복강내 또는 정맥내 투여된다. 본 발명의 조성물의 멸균 주사가능한 형태는 수성 또는 유성 현탁액일 수 있다. 이들 현탁액은 적합한 분산제 또는 습윤제 및 현탁제를 사용하여 본 기술분야에 공지된 기술에 따라 제형화될 수 있다. 멸균 주사용 제제는 또한 무독성 비경구적 허용성 희석제 또는 용매 중의 멸균 주사용 용액 또는 현탁액, 예를 들어, 1,3-부탄다이올 중의 용액일 수 있다. 사용될 수 있는 허용성 비히클 및 용매 중에는 물, 링거 용액 및 등장성 염화나트륨 용액이 있다. 또한, 멸균 고정 오일은 용매 또는 현탁 매질로서 통상적으로 사용된다.

안과용인 경우, 제공된 화합물, 조성물 및 디바이스는 미크론화된 현탁액으로 또는 바셀린과 같은 연고로 제형화될 수 있다.

일 실시형태에서, 항원성 작용제, 치료제 또는 추가 약제학적 작용제의 방출은 지속적인 방식으로 방출된다. 특정 작용제의 효과를 연장시키기 위해서는 주사액으로부터 작용제의 흡수를 지연시키는 것이 종종 바람직하다. 이는 수용성이 불량한 결정형 또는 무정형 물질의 액체 현탁액을 사용하여 달성할 수 있다. 작용제의 흡수 속도는 용해 속도에 따라 달라지며, 이는 결국 결정 크기 및 결정 형태에 따라 달라질 수 있다. 대안적으로, 비경구 투여된 약물 형태의 지연된 흡수는 약물을 오일 비히클에 용해 또는 현탁시킴으로써 달성된다.

본 명세서에 제공된 약제학적 조성물의 설명은 주로 인간에게 투여하기에 적합한 약제학적 조성물에 관한 것이지만, 이러한 조성물은 일반적으로 동물의 모든 부류에게 투여하기에 적합한 것임을 본 기술분야의 기술자라면 이해할 것이다. 조성물이 다양한 동물에게 투여하기에 적합하도록 하기 위한 인간 투여용 적합한 약제학적 조성물의 변형은 잘 이해되어 있고, 통상의 숙련된 수의학 약리학자는 통상적인 실험으로 그러한 변형을 설계 및/또는 수행할 수 있다.

본 명세서에서 제공되는 이식가능한 작제물은 투여 용이성 및 투여량의 균일성을 위해, 전형적으로 투여 단위 형태, 예를 들어, 단일 단위 투여 형태로 제형화된다. 그러나, 본 발명의 조성물의 총 일일 사용량은 건전한 의학적 판단의 범위 내에서 주치의에 의해 결정될 것임을 이해할 것이다. 임의의 특정 대상체 또는 유기체에 대한 특정 치료 유효 용량 수준은 치료 중인 질환 및 장애의 중증도; 사용된 특정 활성 성분의 활성; 사용된 특정 조성물; 대상체의 연령, 체중, 일반적인 건강, 성별 및 식단; 사용된 특정 활성 성분의 투여 시간, 투여 경로 및 배출 속도; 치료 기간; 사용된 특정 치료제와 함께 또는 동시에 사용되는 약물; 및 의학 분야에 잘 알려진 유사 요인을 포함하는 다양한 인자에 따라 달라질 것이다.

유효량을 달성하는 데 필요한 화합물의 정확한 양은, 예를 들어, 대상체의 종, 연령 및 일반적인 상태, 부작용 또는 장애의 중증도, 특정 화합물(들)의 정체, 투여 방식 등에 따라 대상체마다 달라질 것이다. 바람직한 투여량은 1일 3회, 1일 2회, 1일 1회, 격일, 3일마다, 매주, 2주마다, 3주마다, 또는 4주마다 전달될 수 있다. 특정 실시형태에서, 바람직한 투여량은 다중 투여(예를 들어, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 또는 그 이상의 투여)를 사용하여 전달될 수 있다.

이식가능한 작제물로부터 방출된 치료제의 유효량은 단위 투여 형태(예를 들어, 이식가능한 작제물)당 약 0.0001㎎ 내지 약 3000㎎, 약 0.0001㎎ 내지 약 2000㎎, 약 0.0001㎎ 내지 약 1000㎎, 약 0.001㎎ 내지 약 1000㎎, 약 0.01㎎ 내지 약 1000㎎, 약 0.1㎎ 내지 약 1000㎎, 약 1㎎ 내지 약 1000㎎, 약 1㎎ 내지 약 100㎎, 약 10㎎ 내지 약 1000㎎, 또는 약 100㎎ 내지 약 1000㎎의 치료제를 포함할 수 있다.

투여되는 치료제는 원하는 치료 효과를 얻기 위해 1일 1회 이상으로 1일당 대상체 체중을 기준으로, 약 0.001 ㎎/kg 내지 약 100 ㎎/kg, 약 0.01 ㎎/kg 내지 약 50 ㎎/kg, 바람직하게는 약 0.1 ㎎/kg 내지 약 40 ㎎/kg, 바람직하게는 약 0.5 ㎎/kg 내지 약 30 ㎎/kg, 약 0.01 ㎎/kg 내지 약 10 ㎎/kg, 약 0.1 ㎎/kg 내지 약 10 ㎎/kg, 보다 바람직하게는 약 1 ㎎/kg 내지 약 25 ㎎/kg을 전달하기에 충분한 투여량 수준일 수 있다.

본 명세서에 기재된 용량 범위는 제공된 약제학적 조성물을 성인에게 투여하기 위한 지침을 제공한다는 것이 이해될 것이다. 예를 들어, 소아 또는 청소년에게 투여되는 양은 의료 종사자 또는 본 기술분야의 기술자에 의해 결정될 수 있고 성인에게 투여되는 양보다 더 낮거나 동일할 수 있다.

G. 실시예

하기 실시예는 바람직한 실시형태를 입증하기 위해 포함된 것이다. 하기 실시예에 개시된 기술은 본 발명자에 의해 발견된 기술이 실시형태의 실시에 잘 기능하는 것을 나타내고, 따라서 그 실시에 바람직한 방식을 구성하는 것으로 간주될 수 있음이 본 기술분야의 기술자라면 이해할 것이다. 그러나, 본 기술분야의 기술자는 본 개시에 비추어 개시된 특정 실시양태에 많은 변화가 이루어질 수 있고 본 개시내용의 사상 및 범위를 벗어남이 없이 여전히 같거나 유사한 결과가 수득될 수 있음을 이해할 것이다.

실시예 1: 세포 조작 및 세포 배양

시약. 세포 배양 배지 및 관련 시약, 예컨대, 형질감염 배지는 Fisher Scientific을 통해 구입했다. 리포펙션 시약(Lipofectamine 3000®) 및 선택 배지(퓨로마이신)는 Invitrogen에서 구입했다. 발현 벡터 및 헬퍼 플라스미드는 개발되었고 그 후에 VectorBuilder에서 구입했다. CellTiter-Glo®는 Promega에서 구입했다. TrypanBlue® 및 Live Dead® 염색약은 Fisher Scientific에서 구입했다. 알기네이트 화합물은 PRONOVA에서 구입했다. 사용된 캡슐화 디바이스는 Harvard Apparatus의 주사기 펌프 및 Rame-Hart의 동축 노즐을 함유한다. 모든 동물은 Jackson Labs에서 구입했다. 알기네이트 화합물은 PRONOVA를 통해 구입했다.

세포 배양물. ID8/MOSEC 세포는 EMD Millipore, Sigma에서 상업적으로 입수했다. PAN02 또는 PANC02 마우스 세포는 국립 암 연구소의 암 치료 및 진단과(DCTD)에서 입수했다. 인간 ARPE-19 세포는 ATCC로부터 입수했다. ARPE-19 세포는 10% 비-열불활성화된 소 태아 혈청(FBS) 및 1% 항생제-항진균제(AA)를 갖는 둘베코의 변형 이글 배지(Dulbecco's Modified Eagle Medium)(DMEM/F-12)을 사용하여 배양했다. 세포가 70 내지 90% 융합도(confluency)에 도달하면 배양 배지는 버리고 세포는 5㎖ DPBS로 간단하게 세척했다. 세척 용액을 흡인하고 5㎖ TrypLE로 세포층을 분산시켰다. 세포를 3분 동안 인큐베이션시킨 다음, 현미경으로 관찰하여 분리를 확인했다. 7㎖의 완전 성장 배지를 플라스크에 첨가하여 TrypLE 반응을 중지시켰다. 세포 현탁액을 15㎖ 공초점 튜브로 옮기고 250×g에서 5분 동안 원심분리하였다. 상청액을 흡인하고, 펠릿을 1㎖의 완전 배지에 재현탁시키고 멸균 T-75 플라스크에 원하는 농도로 재분배시켰다. 13㎖의 완전 배지를 플라스크에 첨가하고 세포를 5% CO2 가습 분위기 하에 37℃에서 인큐베이션시켰다. B16-F10에 사용된 배지는 DME/F-12, 10% FBS, 1% 항생제-항진균제(AA)였다. ID8에 사용된 배지는 DMEM High Glucose, 4% FBS, 1% AA 및 1% ITS였다. 배지는 주 3회 변경했다. 세포를 형질감염에 사용하기 전에 4회 계대배양했다. Pan02 및 ID8 세포를 동일한 방법으로 배양했다.

사용된 모든 세포의 렌티바이러스 형질도입 및 리포펙타민 형질감염을 위한 플라스미드는 DNA MaxiPrep 형태로 VectorBuilder에서 설계 및 구입했다. ARPE-19 세포는 마우스 IL2 및 반딧불이 루시페라제를 발현하도록 조작했다. ID8/MOSEC 세포는 반딧불이 루시페라제를 발현하도록 조작되었다. 조작된 세포를 IVIS 이미징을 사용하여 루시퍼라제 발현과 세포 수 사이의 선형성에 대해 검정했다. ARPE 사이토카인 발현 세포주는 전통적인 세포 계대배양 방법 및 트립판 블루 기반 대비염색 방법을 사용하여 형질감염/형질도입 후 배가 시간의 변화 및 세포 생존력에 대해 검정했다.

세포 형질감염/리포펙션. 천연 마우스 IL-2의 형질감염을 위해, 4회 계대배양된 세포를 3㎖ 완전 배지를 사용하여 웰당 400,000개 세포의 농도로 6웰 플레이트에 파종했다. 플레이트를 5% CO2 가습 대기 하에 37℃에서 밤새 인큐베이션시켰다. 파종 24시간 후, 배양 배지를 흡인하고, 각 웰을 2㎖ Opti-MEM 무혈청 배지로 프라이밍하였다. 에펜도르프(Eppendorf) 튜브에서 6㎕의 P3000과 함께 125㎕의 Opti-MEM에 2:1 비율의 발현 벡터 대 헬퍼 플라스미드를 첨가했다. 이 용액을 실온에서 5분 동안 인큐베이션시켰다. 새로운 에펜도르프 튜브에서 Opti-MEM 125㎕를 리포펙타민3000 3.75㎕와 혼합했다. 값은 웰의 수에 따라 조정되었다. 리포펙타민3000을 함유하는 에펜도르프 튜브를 DNA 복합체와 조합하고 실온에서 15분 동안 인큐베이션시켰다. 웰을 프라이밍하는 데 사용된 Opti-MEM은 버리고 2.5㎖의 신선한 Opti-MEM을 각 웰에 첨가했다. 그 다음, DNA-지질 복합체를 6개 중 5개의 웰에 첨가하고(웰당 250㎕), 마지막 웰은 대조군으로 남겨 두었다. 37℃에서 4시간 동안 인큐베이션시킨 후, 형질감염 배지를 10% FBS 및 1% 스트렙토마이신 항생제를 함유하는 신선한 배양 배지로 교체했다. 형질감염 4일 후, 배양 배지를 흡인하고, 세포를 10% FBS, 1% SP 및 50㎕/500㎖ 퓨로마이신을 갖는 15㎖ DMEM을 이용하여 T-75 플라스크로 옮겼다. 4일째에, 세포를 1주일 동안 퓨로마이신으로 발현에 대해 선택한 후, 정상 세포 배양 기술을 사용하여 유지시켰다. 이 절차는 다음과 같은 사이토카인 각각의 형질감염에 사용했다: IL2, IL7, 1L10, 1L12 및 1L15.

세포 생존력/배가 시간 분석. ARPE-19 세포는 마우스 IL2, 마우스 IL7, 마우스 IL12, 마우스 IL15, 반딧불이 루시퍼라제 및 메트리디아 루시페라제와 같은 다양한 단백질을 발현하도록 조작했다. PAN02 및 ID8/MOSEC 세포는 반딧불이 루시페라제를 발현하도록 조작했다. 이들 단백질 각각의 서열은 표 1에 제공된다. PAN02, ID8/MOSEC, ARPE-19 f-Luc & met-Luc 세포는 IVIS 이미지화를 사용하여 루시페라제 발현과 세포 수 사이의 선형성에 대해 검정했다(이하에 기재된 작은 동물 이미지화를 따르는 방법). 조작된 ARPE 세포는 전통적인 세포 계대배양 방법 및 트립판 블루 기반 대비염색 방법을 사용하여 형질감염/형질도입 후 배가 시간의 변화 및 세포 생존력에 대해 검정했다.

세포 형질도입. 표준 3세대 렌티바이러스 프로토콜을 사용하여 세포를 형질도입시켰다. 렌티바이러스는 HEK293T 세포에서 발현 벡터와 함께 3개의 패키징 플라스미드(pMLg/PRRE, pRSV-Rev 및 pMD2.g)의 형질감염에 의해 생산되었다. 형질감염 6 내지 8시간 후, 세포 배지를 새로운 배지로 교체하고 36 내지 48시간 동안 세포를 배양했다. 렌티바이러스를 농축하고 폴리브렌과 함께 사용하여 전날 플레이팅되어 70 내지 80% 융합도(confluency)인 Pan02 또는 ID8/MOSEC 세포를 형질도입시켰다. 바이러스와 24시간 인큐베이션 후, 배지를 교체하고 3일 동안 세포를 배양했다. 4일째에, 1주일 동안 퓨로마이신으로 발현을 위해 세포를 선택한 후, 정상 세포 배양 기술을 사용하여 유지시켰다.

실시예 2: ELISA에 의한 생산 정량

각 그룹의 세포를 10% FBS, 1% Penstrep 및 0.5㎕/500㎖ 퓨로마이신을 갖는 DMEM 배지가 담긴 T-150 플라스크에서 성장시켰다. 융합도에서 배양 배지를 흡인하고 10㎖ TrypLE를 첨가했다. 세포를 5% CO₂ 가습 대기 하에 37℃에서 3분 동안 인큐베이션시켰다. 세포층이 분산되면 10㎖의 완전 배지를 첨가하여 반응을 중지시켰다. 세포 현탁액을 50㎖ 원뿔형 튜브로 옮기고 250G에서 5분 동안 원심분리하였다. 상청액을 흡인하고 세포를 1㎖의 완전 배지에 재현탁시켰다. Countess™ 혈구계를 사용하여 세포 농도를 계수했다. 200㎕에 10,000개의 세포 농도를 달성하는 데 필요한 부피는 샘플 중 생세포의 농도를 기반으로 하여 계산했다. 나머지 세포 현탁액 부피 중 100만개의 세포를 1㎖의 알기네이트에 재현탁하여 코어 셸 캡슐로 합성시켰다. 모든 그룹은 5% CO₂ 가습 대기 하에 37℃에서 24시간 동안 인큐베이션시켰다. 세포 상청액을 각 웰에서 수집하고 24시간 기간에 2㎖ 마이크로튜브로 옮겼다. 모든 샘플을 1000G에서 20분 동안 원심분리했다. 샘플을 원심분리한 후, 배지를 각 2㎖ 튜브에서 96웰 플레이트로 다시 옮겼다. 샘플은 400㎕의 총 부피로 완전 배지에 1:2로 희석했다. 마우스 IL7 Quantikine ELISA 키트(CAT M7000), 인간 IL7 ELISA 키트(CAT AB185984), M IL15 ELISA 키트(CAT RAB0206-1KT), 인간 IL15 ELISA 키트(CAT AB218266), LEGEND MAX 인간 IL10 ELISA 키트, ELISA MAX Deluxe 세트 마우스 IL10(CAT 431414), (CAT 430608), LEGEND MAX 마우스 IL2 ELISA 키트(CAT 431007), LEGEND MAX Human IL2 ELISA 키트(CAT 431808). 회사에서 제공한 프로토콜에 따라 검정을 실행했다. 모든 샘플은 3반복으로 실행했다.

실시예 3: T 세포 증식 검정

EasySep T 세포 단리 키트(StemCell Technologies) 및 관련 시약 및 디바이스를 사용하여 C57BL6 마우스 비장(Jackson Labs)으로부터 T 세포를 단리했다. 세포를 100ul RPMI 1640에서 10,000개 세포/웰로 96웰 플레이트에 플레이팅했다. 세포에, 이 세포가 생산한 천연 IL2를 .1, 1, 5 또는 10 ng/㎖로 보충하거나, 또는 재조합 IL-2(Miltenyi)를 1 또는 10 ng/㎖로 보충했다. 37℃에서 24시간 또는 72시간 동안 인큐베이션시킨 후, 세포 증식(및 생존력)을 CellTiter-Glo Luminescent Cell Viability Assay(Promega)를 사용하여 측정했다.

실시예 4: 세포의 캡슐화

알기네이트 하이드로겔 구체는 맞춤형 2종 유체 동축 정전기 분무기를 사용하여 합성했다. 이 기기는 동축 바늘 끝에 부착되고 1:4 염화바륨:만니톨 가교 조(bath)에 접지된 전압 발생기로 구성되었다. 동축 바늘은 0.9% 식염수에 희석된 1.4% 알기네이트 용액이 담긴 2개의 개별 주사기에 의해 공급을 받았다. 알기네이트에 세포를 현탁시키기 위해 70 내지 90% 융합도에 도달한 세포에서 상청액을 제거하고 5㎖의 DPBS로 세척했다. 세척액을 흡인한 후 5㎖의 TrypLE로 후속 처리하여 세포층을 분산시켰다. 세포를 3분 동안 인큐베이션시킨 다음, 현미경으로 관찰하여 분리를 확인했다. TrypLE 반응을 중지하기 위해 7㎖의 완전 성장 배지를 플라스크에 첨가했다. 세포 현탁액을 50㎖ 원뿔형 튜브로 옮기고 250G에서 5분 동안 원심분리하였다. 상청액을 흡인했고 팔레트를 파괴했다. 원하는 부피의 SLG20 알기네이트를 세포에 첨가하고 5㎖ 루어 락 주사기(Luer lock syringe)로 끌어올렸다. 2개의 상이한 알기네이트(SLG20 및 RZA15-변성 알기네이트)를 함유하는 주사기를 2개의 개별 주사기 펌프에 배치하고 동축 노즐로 공급한 뒤, 150㎖의 가교 조 상에 현탁시켰다; RZA15 알기네이트는 셸을 만드는 노즐의 수평 축 내로 공급되었고 SLG20은 코어를 만드는 노즐의 수직 축 내로 공급되었다. 각 주사기의 유속은 5㎖/hr의 비율로 조정했다. 캡슐의 크기는 발전기의 전압을 조정하여 유지했다; 약 5.30의 전압이 1.5㎜ 직경의 캡슐을 가장 일관되게 생산했다. 가교 조로부터 분리하기 위해 캡슐을 경사분리했다. 이후에 HEPES 완충액으로 3회 세척하고 완전 세포 배지로 3회 세척했다. 마지막으로, 캡슐화된 세포를 6㎖의 완전 배지를 함유하는 T-25 플라스크로 옮기고 플레이팅된 세포처럼 유지시켰다; 배지는 2 내지 3일마다 교환한다. 캡슐화 후 세포를 5㎖ DPBS로 세척하고 DPBS 중 약 2μM 칼세인 AM 1.25㎕ 및 4μM EthD-1 20㎕의 스톡을 사용하여 염색했다. 샘플을 20분 동안 인큐베이션하고 형광 현미경을 사용하여 이미지화했다. 캡슐화된 세포의 각 샘플 그룹으로부터 20개의 캡슐을 이미지화하고 생세포와 사세포를 조사했다; GFP 필터를 사용하여 생세포를 포획하고 텍사스 레드 필터를 사용하여 사세포를 포획했다.

실시예 5: 종양 이식 프로토콜

이식가능한 작제물은 이하에 기술된 프로토콜에 따라 생체내 효과에 대해 조사했다.

종양 이식물. 이식을 위해 다음 마우스 종양 모델을 준비했고(흑색종, Pan02 및 ID8), 종양 크기의 추적을 생체내에서 수행했다. C57BL6/J 블랙 마우스를 모든 생체내 종양 퇴행 연구에 사용했다. 이러한 연구를 수행하기 위해 C57BL6/J 블랙 수컷 및 암컷 마우스(6 내지 8주령 및 각각 약 18 내지 25gm)를 Jackson Laboratories에서 조달했다. 모든 동물 연구는 IACUC 승인을 기반으로 수행했다.

종양 주사. 흑색종 및 Pan02의 피하 모델의 경우, C57BL6/J 마우스에 100만개 세포(B16F10 또는 Pan02)를 피하 주사하였다. 세포를 식염수에 현탁시키고 인슐린 주사기를 사용하여 주사했다. ID8 및 Pan02에 대한 IP 종양 모델의 경우, 5⁶개 세포(식염수에 현탁됨)를 C57BL6/J 마우스의 오른쪽 아래 복부로 복강내 주사했다.

피하 종양. SubQ 흑색종 및 췌장 종양 모델 흑색종의 경우, 종양 부피는 공식 (0.5×ab 2)을 사용하여 측정했고, 여기서 'a'는 종양의 가장 긴 치수를 나타내고 'b'는 가장 짧은 치수를 나타낸다. 또한, 희생 후 종양의 무게와 사진을 촬영했다.

복강내 종양. PAN02 또는 ID8 암 세포주가 주입된 동물은 이식 수술, 모의 수술 또는 미처리 대조 그룹으로 선택하기 전에 7 내지 10일 동안 격일로 추적했다. 수술 후, 작은 동물 IVIS 이미지화(이하에 방법 설명됨)를 사용하여 동물의 종양 성장 또는 감소를 추적했다.

동물 수술. 마취 및 진통: 모든 절차는 마취하에 수행했고, 이후 진통제로 처리했다. 연구에 사용된 마우스는 탱크 유도에 의한 설치류 마취기를 사용하여 아이소플루란(1 내지 4%) 및 산소(1 내지 2ℓ)로 마취시키고, 이어서 노즈콘으로 유지시켰다. 임의의 침습적 절차를 시작하기 전에 가스 마취에 대한 마취 깊이를 평가하기 위해 페달 철회 반사를 사용했으며 충분한 마취를 보장하기 위해 호흡을 지속적으로 모니터링했다. 체온은 물 순환 가열 패드를 사용하여 마취 및 회복 동안 조절했다. 중요한 것으로서, 마취 깊이는 수술 내내 지속적으로 모니터링했다.

외과의사: 외과의사는 수술용 마스크와 깨끗한 실험실 가운을 착용해야 했다. 멸균 외과의사 장갑을 사용했다. 멸균 장갑을 착용할 때 장갑의 외부 멸균 표면이 오염되지 않도록 주의를 기울였다. 장갑을 낀 후에는 멸균 수술장과 장비만 만지도록 주의를 기울였다. 임상 감염 위험이 높은 수술 사례가 있는 경우에는 모자와 멸균 가운과 같은 추가 외과 의사 준비 예방 조치를 사용했다.

캡슐의 복강내(IP) 외과적 이식: 동물의 체중을 모두 측정하고, 귀 펀치를 확인하고, 수술 전 관리의 일부로서 수술 전에 복부를 따라 면도했다. 그 다음, 아이소프로필 알코올로 1차 스크럽한 다음, 베타딘 외과 스크럽(7.5% 포비돈-요오드, Patterson Vet)으로 2차 스크럽을 수행했다. 이러한 방부 스크럽 단계를 3회 반복했다. 그 다음 날카로운 수술용 칼(15T; Sklar)을 사용하여 복부에 피부와 백선을 통해 0.5-0.75cm의 정중선 절개를 절단했다. 외과의사는 0.75cm가 가능한 가장 큰 절개 크기로서, 가능한 작게 절개를 유지했다. 캡슐 이식물은 복강에 도입시켰다. 복근은 5-0 Ethicon black PDS 흡수성 봉합사 또는 기타 5.0-6.0 모노필라멘트 흡수성 봉합사로 봉합하여 닫았다. 외부 피부층은 이전에 설명한 대로 PDS 봉합사로 닫았다. 멸균수 또는 식염수를 사용하여 절차 사이에 수술 기구로부터 혈액 및 조직 파편을 제거하고 뜨거운 비드 멸균기를 사용하여 동물 사이에(최대 5회 절차) 기구를 재멸균했다. 수술 후 동물은 다시 케이지에 넣어 가열 패드 상에서 회복시키고 보행할 때까지 모니터링했다.

수술 후 관리: 사육 및 회복 중인 동물로부터 근육 봉합사 파열 또는 탈장을 제한하기 위해 수술 후 48시간 동안 음식을 케이지 바닥에 두었다. 동물을 수술 후 4일 동안 체중, 일반적인 그루밍, 사교성, 열개 징후, 탈수, 감염 또는 봉합 부위 또는 대변으로의 혈액 손실을 매일 모니터링하였다. 장기 탈출이나 심각한 출혈 없이 봉합 부위가 열린 것으로 확인되면, 동물을 유도 탱크에서 마취(1 내지 4%의 아이소플루란, 1 내지 2 ℓ/분의 O2)하고 상처 접착제(VetBond 3M, Patterson Vet)를 사용하여 상처 봉합을 하기 위해 노즈콘으로 이동했다.

인도적 종말점 및 안락사. 수술 중 임의의 부작용이 발생한 경우, 동물은 호흡의 징후가 더 이상 분명하지 않을 때까지 1 내지 4%의 아이소플루란 및 1 내지 2 ℓ/분의 O₂에 이어 2 ℓ/분 CO₂로 마취하여 안락사시켰다. 이 시점에서 동물은 사망하도록 경추 탈구시켰다. 수술 후 기간 동안 인도적 종말점이 식별되면(그루밍 부족, 발가락 걷기, 구부린 자세, 사회적 고립, 털이 섬, 심한 열개, 상당한 출혈), 동물을 안락사시켰다. 모든 안락사는 Rice University에서 승인받은 승인된 IACUC 프로토콜 및 동물 안락사에 대한 AVMA 지침에 따른다.

실시예 6: 종양 퇴행 연구의 정량

FACS. 항체 칵테일: 항-마우스 CD19, CD25, CD44, CD161, CD62L, CD4, FoxP3, CD3e, CD8, PD-1, Ly6G, F4/80, CD11b, CD11c 및 CD45는 상업적으로 입수하고 Perm/Wash 완충액에 각 항체당 공급자 권장 희석율(1:50, 1:100, 1:200, 1:400)로 재현탁시켰다. 모든 항체 칵테일은 염색 당일 제조했고 암실에서 4℃ 또는 얼음에서 유지시켰다.

샘플 수집 및 동물 취급. 동물을 유도 챔버에서 아이소플루란(1 내지 4%, 1.5 O2 ℓ/분)으로 마취시키고 노즈콘으로 이동했다. 페달 반사를 확인한 후, 심장 천자를 수행하고 혈액을 수집하고 하류 프로세싱을 위해 4℃에 보관된 0.5M EDTA 코팅 튜브에서 유지시켰다. 그 다음, 동물은 사망하도록 2차 방법으로서 경추 탈구시켰다. 그 다음, 동물을 피부와 근육층 모두를 통해 정중선을 따라 자르고, 10㎖의 0.2 미크론 여과 멸균 식염수로 그 다음 복강내 공간을 플러싱하여 IP 유체 및 세포를 수집했다. IP 유체는 그 후 4℃ 또는 얼음에서 유지시켰다. 비장 및 간은 그 다음 즉시 수확했다. 비장을 하류 프로세싱을 위해 얼음 상에 보관하고 간은 조직학 카세트(ThermoFisher)에 놓고 즉시 포르말린으로 고정시키고 실온에서 유지시켰다(10% v/v, Thermo Scientific, Richard-Allen Scientific). 모든 동물 취급 절차는 Rice University에서 승인된 IACUC 프로토콜을 따르며, Rice University에서 수행된다.

샘플 프로세싱. 모든 샘플은 이하의 프로세싱 및 염색 절차 전반에 걸쳐 얼음 상에서 유지하거나, 또는 4℃에서 유지한다.

비장: 비장은 스트레이너에 대해 막자를 사용하여 으깼다. 그 다음, 비장 조직 샘플을 RPMI 배지(Gibco)를 사용하여 3회 세척하고 스핀다운(2000rpm, 3분, RT)시킨 다음, RBC 용해 완충액(Sigma) 3㎖에 재현탁하고 실온에서 10분 동안 인큐베이션시켰다. 인큐베이션 후, 10㎖의 RPMI 배지를 비장 용액에 첨가하고, 샘플을 혼합한 다음 스핀다운(2000rpm, 3분, RT)시키고, 그 다음 FACS 완충액(PBS, 2% 송아지 혈청, 1mM EDTA, 0.1% 아자이드화나트륨)에 재현탁시키고, 트립판 블루(ThermoFisher)를 사용하여 세포 농도에 대해 대비염색하였다.

IP 유체: 수집된 IP 유체(10㎖)를 70 미크론 스트레이너를 통해 여과하고 스핀다운(2000rpm, 3분, RT)시킨 후, RBC 용해 완충액 3㎖에 재현탁하고, 실온에서 10분 동안 인큐베이션시켰다.

혈액 샘플: RBC 용해 완충액(2부)을 혈액 샘플(1부)에 첨가한 다음 볼텍싱했다. 샘플을 실온에서 3분 동안 인큐베이션시켰다. 그 다음, 샘플을 스핀다운(15,000rpm, 5분, RT)시킨 다음, 300uL의 FACS 완충액에 재현탁시켰으며, 이 세척 단계를 한 번 더 반복한 다음, 70 미크론 스트레이너를 통해 최종 여과 단계를 수행했다.

샘플 염색. 샘플을 대략 250만 세포/웰의 밀도로 깊은 96웰 플레이트에 플레이팅했다. 플레이트를 스핀다운(500g, 5분, RT)시키고, FACS 완충액에 재현탁시켰다.

세포외 염색: 플레이트를 스핀다운시키고(500g, 5분, RT), 50㎕의 Fc 차단 완충액에 재현탁시켰다(50㎕ FACS 완충액에 백만 세포당 0.25㎍의 CD16/CD32를 첨가함). 그 다음, 플레이트를 암실에서 10분 동안 얼음 위에서 인큐베이션시켰다. 150㎕의 차가운 FACS 완충액을 첨가하고 Fc 차단 용액의 현탁액과 혼합했다. 그 다음, 샘플을 반으로 나누고 제2의 깊은 96웰 플레이트에 분취했다. 100㎕의 차가운 FACS 완충액을 깊은 96웰 플레이트 양쪽 모두의 각 웰에 첨가한 후, 원심분리 단계(400g, 5분, 4℃)를 수행했다. 두 플레이트에서 상청액을 제거하고 펠릿을 50㎕의 항체 칵테일에 재현탁했다. 그 다음, 샘플을 4℃ 암실에서 30분 동안 염색했다. 그 다음, 플레이트를 스핀다운(500g, 5분, 4℃)시키고 100㎕의 차가운 FACS 완충액에 재현탁시켰고, 이 세척 단계를 한 번 더 반복했다.

세포내 염색: 세포외 염색 직후, 세포내 염색이 일어났다. 두 플레이트의 세포 펠릿을 200㎕의 고정/투과 용액(BD Biosciences)에 재현탁한 다음, 4℃에서 30분 동안 인큐베이션시켰다. 샘플을 스핀다운(500g, 5분, 4℃)시키고 200㎕의 Perm/Wash 완충액(BD Biosciences)에 재현탁시켰으며, 이를 한 번 더 반복했다. 그 다음, 샘플을 스핀다운(500g, 5분, 4℃)하고 Perm/Wash 완충액 중 항체 칵테일 50㎕에 재현탁하고 암실의 실온에서 30분 동안 인큐베이션시켰다. 그 다음, 200㎕의 Perm/Wash 완충액을 첨가하고 두 플레이트를 스핀다운(500g, 5분, 4℃)시키고, 200㎕의 Perm/Wash 완충액에 재현탁했다. 그 다음, 최종 원심분리 단계(500g, 5분, 4℃)를 수행했고, 그 후 샘플을 200㎕의 FACS 완충액에 재현탁시켰다.

IVIS 이미지화. 동물을 아이소플루란(O₂ 1.5 ℓ/분)을 사용하여 유도 챔버에서 마취하고 D-루시페린(300 ug/㎖, 200 uL; PerkinElmer)을 복강내 주사했다. 그 다음, 동물을 IVIS 매니폴드(IVIS Lumina K Series III, PerkinElmer)로 옮겨 아이소플루란 마취(0.25 ℓ/분) 하에 유지시키고, 가열된 스테이지에서 따뜻하게 유지시켰다. 동물은 XFOV-24 렌즈(FOV-E, 12.5㎜)로 이미지화했다. Live Imaging 소프트웨어(PerkinElmer)에서 Imaging Wizard 기능을 사용하여 사진(입력값 세팅) 및 발광 이미지(세팅)를 획득했다. 비닝(binning)을 중간으로 설정하고 여기(excitation)를 차단으로 설정하고 EM 이득(gain)을 끄기(off)로 설정하고, 높이를 마우스 조정 높이로 설정하고 획득(aquisition) 사이에 0초 지연을 두고, 1, 5 및 15초로 발광 노출을 설정했다. 동물은 D-루시페린 주사 후 5분 및 10분에 이미지화했다.

캡슐 외식편 테스트. 각 그룹의 5개의 외식된 캡슐(n=5)을 96-웰 플레이트의 개별 웰에 첨가했다. 200ul의 각 세포 배지를 각 웰에 첨가하고 24시간 인큐베이션 후 웰에서 수집한 상청액에 대해 각각 발현된 사이토카인당 ELISA를 실행했다. 모든 샘플은 3반복으로 실행했다.

통계. 통계 분석은 IVIS 이미지화 데이터 분석을 위한 다중 비교 방법인 Prism7 이원 ANOVA를 사용하여 수행했다. ELISA 데이터 반복물은 쌍을 이룬 스투던트 t-테스트 방법을 사용하여 분석했다. 반복물의 이상치는 Grubb의 테스트를 사용하여 식별했고 포함된 경우 표준 오차 평균 또는 표준 편차로 간주했다.

실시예 7: 결장직장암 마우스 모델에서의 생체내 효능

결장직장암의 마우스 모델에서 예시적인 이식가능한 작제물의 효능을 테스트하기 위해, 수컷 및 암컷 혼합 B6 마우스에 MC38 세포(도 10a)를 1×10⁶/마우스의 세포 밀도로 IP 공간에 주사했다. IP 주사 6일 후, 동물을 무작위로 그룹으로 나누고 RPE-IL2 캡슐을 외과적으로 이식하거나, 재조합 IL-2를 3일 동안 250,000IU/일의 용량으로 IP 주사한 다음 7일 동안 모니터링했다. 처리 1주 후, 마우스를 희생시키고 종양을 이미지화하고(도 10b), 분석 저울을 사용하여 무게를 쟀다. 3그룹 각각에서 마우스의 평균 체중은 비슷했지만, 마우스에서 추출된 종양의 무게에는 상당한 차이가 있었다. (도 10c)에서 볼 수 있듯이, 비처리군 뿐만 아니라 모의 수술군에서 종양의 무게는 각각 평균 3.1g 및 2.9g이었다. 이와 대조적으로, RPE-IL2 캡슐 그룹에서 추출한 조직은 다른 그룹과 색상이나 혈관분포가 유사한 것으로 보이지 않으며 다른 종양보다 10배 넘게 더 가볍다(도 10b, 도 10d). RPE-IL2 캡슐이 제공하는 항종양 효과의 지속 기간을 연구하기 위한 생존 연구도 수행했다. 수컷 및 암컷 B6 혼합 마우스에게 MC38 세포를 1×10⁶/마우스의 세포 밀도로 IP 공간에 주사했다. 전술한 바와 같이, IP 주사 6일 후, 동물을 무작위로 2개의 그룹으로 분류하고 코어 셸 캡슐을 외과적으로 이식하거나 모의 수술을 받게 했다. 마지막 모의 마우스가 인도적 종말점 35에 도달하고 8일 후(도 10c) 및 REP-IL2 캡슐 및 모의 그룹의 경우에는 각각 주사 후 27일째(도 10f)에 생존 연구를 종결했다. 35일째, 모든 RPE-IL2 MC38 주사된 마우스에서는 종양이 없었다.

이들 마우스를 재공격하기 위해, 8마리의 미경험 마우스 및 전부 5마리의 MC38 종양 없는 RPE-IL2 마우스에게 5×10⁵ MC38 세포를 피하 주사하고, 미경험 마우스가 임계 종양 부피(15㎜ 직경)에 도달하여 안락사되어야 할 때까지 모니터링했다. 거의 2주 후, 5마리의 RPE-IL2 마우스 중 피하 종양이 발병한 마우스는 없었지만, 8마리의 미경험 마우스 중 5마리는 종양 주사 4일만에 가시적인 종양이 발병했다(도 10h). 이러한 결과는 CD8+ T 세포의 활성화 및 증식을 증가시키는 것 외에도, RPE-IL2 치료가 이차 종양의 발달을 방지하는 기억 T 세포의 발달에 도움을 준다는 것을 시사한다.

실시예 8: 췌장암 마우스 모델에서의 생체내 효능

췌장암에서 예시적인 이식가능한 작제물의 효능을 테스트하기 위해, 알비노 B6 마우스(Jackson Labs)에게 Pan02-F Luc 세포를 주사했다. 5e6 Pan02-F Luc 세포(식염수에 현탁)를 마우스의 오른쪽 아래 복부에 복강내 주사했다. 천연 IL-2를 발현하는 이식가능한 작제물을 주사하기 전에 동물의 체중을 모두 측정하고, 귀 펀치로 식별하고 복부를 따라 면도했다. 복부는 70% 아이소프로필 알코올을 사용하여 3회 세척한 후, 베타딘 외과 스크럽(7.5% 포비돈-요오드; Patterson Vet)을 사용하여 세척했다. 수술용 칼(15T; Sklar)을 사용하여 복부내 피부 및 백선을 통해 0.5-0.75cm의 정중선 절개를 절단했다. 1.5㎜ 이식가능한 작제물을 복강 내에 도입시켰다. 복근은 5-0 Ethicon 블랙 PDS 흡수성 봉합사로 봉합하여 닫았다. 외부 피부층은 전술한 바와 같이 PDS 봉합사로 닫았다. 수술 후 동물을 다시 케이지에 넣어 가열 패드에서 회복시키고, 보행할 때까지 모니터링했다. 작은 동물 IVIS 이미지화를 1x/주로 사용하여 종양 성장 또는 감소에 대해 동물을 추적했다. 결과는 본 명세서에 기재된 이식가능한 작제물을 통해 국소적으로 전달된 천연 IL-12가 단 6일 만에 췌장암 종양 부담을 감소시킬 수 있음을 나타낸다(도 11a 내지 도 11b).

본 명세서에 개시되고 청구된 모든 조성물 및 방법은 본 개시내용에 비추어 과도한 실험 없이 제조 및 실행될 수 있다. 본 개시내용의 조성물 및 방법은 바람직한 실시형태에 의거하여 설명되었지만, 본 개시내용의 개념, 사상 및 범위를 벗어나지 않고 본 명세서에 기재된 조성물 및 방법 및 방법의 단계 또는 단계의 순서에 변형이 적용될 수 있음이 본 기술분야의 기술자에게는 명백할 것이다. 보다 구체적으로, 화학적으로 및 생리학적으로 모두 관련된 특정 작용제가 동일하거나 유사한 결과가 달성된다면 본 명세서에 기재된 작용제를 대체할 수 있음은 명백할 것이다. 본 기술분야의 기술자에게 명백한 그러한 모든 유사한 대체 및 수정은 첨부된 청구범위에 의해 정의된 개시내용의 사상, 범위 및 개념 내에 있는 것으로 간주된다.

SEQUENCE LISTING <110> WILLIAM MARSH RICE UNIVERSITY <120> IMPLANTABLE CONSTRUCTS AND USES THEREOF <130> RICE.P0068WO <140> Unknown <141> 2020-08-07 <150> US 62/884,397 <151> 2019-08-08 <150> US 63/012,693 <151> 2020-04-20 <160> 12 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 510 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 1 atgtacagca tgcagctcgc atcctgtgtc acattgacac ttgtgctcct tgtcaacagc 60 gcacccactt caagctccac ttcaagctct acagcggaag cacagcagca gcagcagcag 120 cagcagcagc agcagcagca cctggagcag ctgttgatgg acctacagga gctcctgagc 180 aggatggaga attacaggaa cctgaaactc cccaggatgc tcaccttcaa attttacttg 240 cccaagcagg ccacagaatt gaaagatctt cagtgcctag aagatgaact tggacctctg 300 cggcatgttc tggatttgac tcaaagcaaa agctttcaat tggaagatgc tgagaatttc 360 atcagcaata tcagagtaac tgttgtaaaa ctaaagggct ctgacaacac atttgagtgc 420 caattcgatg atgagtcagc aactgtggtg gactttctga ggagatggat agccttctgt 480 caaagcatca tctcaacaag ccctcaataa 510 <210> 2 <211> 462 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 2 atgtacagga tgcaactcct gtcttgcatt gcactaagtc ttgcacttgt cacaaacagt 60 gcacctactt caagttctac aaagaaaaca cagctacaac tggagcattt actgctggat 120 ttacagatga ttttgaatgg aattaataat tacaagaatc ccaaactcac caggatgctc 180 acatttaagt tttacatgcc caagaaggcc acagaactga aacatcttca gtgtctagaa 240 gaagaactca aacctctgga ggaagtgcta aatttagctc aaagcaaaaa ctttcactta 300 agacccaggg acttaatcag caatatcaac gtaatagttc tggaactaaa gggatctgaa 360 acaacattca tgtgtgaata tgctgatgag acagcaacca ttgtagaatt tctgaacaga 420 tggattacct tttgtcaaag catcatctca acactgactt ga 462 <210> 3 <211> 465 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 3 atgttccatg tttcttttag atatatcttt ggaattcctc cactgatcct tgttctgctg 60 cctgtcacat catctgagtg ccacattaaa gacaaagaag gtaaagcata tgagagtgta 120 ctgatgatca gcatcgatga attggacaaa atgacaggaa ctgatagtaa ttgcccgaat 180 aatgaaccaa acttttttag aaaacatgta tgtgatgata caaaggaagc tgcttttcta 240 aatcgtgctg ctcgcaagtt 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atggtggatg ccgttcacaa gctcaagtat 660 gaaaactaca ccagcagctt cttcatcagg gacatcatca aacctgaccc acccaagaac 720 ttgcagctga agccattaaa gaattctcgg caggtggagg tcagctggga gtaccctgac 780 acctggagta ctccacattc ctacttctcc ctgacattct gcgttcaggt ccagggcaag 840 agcaagagag aaaagaaaga tagagtcttc acggacaaga cctcagccac ggtcatctgc 900 cgcaaaaatg ccagcattag cgtgcgggcc caggaccgct actatagctc atcttggagc 960 gaatgggcat ctgtgccctg cagttag 987 <210> 9 <211> 489 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 9 atgaaaattt tgaaaccata tatgaggaat acatccatct cgtgctactt gtgtttcctt 60 ctaaacagtc actttttaac tgaggctggc attcatgtct tcattttggg ctgtgtcagt 120 gtaggtctcc ctaaaacaga ggccaactgg atagatgtaa gatatgacct ggagaaaatt 180 gaaagcctta ttcaatctat tcatattgac accactttat acactgacag tgactttcat 240 cccagttgca aagttactgc aatgaactgc tttctcctgg aattgcaggt tattttacat 300 gagtacagta acatgactct taatgaaaca gtaagaaacg tgctctacct tgcaaacagc 360 actctgtctt ctaacaagaa tgtagcagaa tctggctgca aggaatgtga 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gagttcgacc ccaacatcga catcgtgggc ctggaaggca agttcggcat caccaacctg 120 gaaaccgacc tgttcaccat ctgggagacc atggaagtga tgatcaaggc cgacatcgcc 180 gacaccgacc gggccagcaa cttcgtggcc accgagaccg acgccaaccg gggcaagatg 240 cccggcaaga agctgcccct ggccgtcatc atggaaatgg aagccaacgc cttcaaggcc 300 ggctgcaccc ggggctgcct gatctgcctg agcaagatca agtgcaccgc caagatgaag 360 gtgtacatcc ccggcaggtg ccacgactac ggcggcgaca agaaaaccgg ccaggccggc 420 atcgtgggcg ccatcgtgga catccccgag atcagcggct tcaaagaaat ggcccccatg 480 gaacagttca tcgcccaggt ggacagatgc gccagctgca ccaccggctg cctgaagggc 540 ctggccaacg tgaagtgcag cgagctgctg aagaagtggc tgcccgaccg ctgcgccagc 600 ttcgccgaca agatccagaa agaggtgcac aacatcaagg gcatggccgg cgacaggtga 660

Claims

이식가능한 작제물로서,
구역, 예를 들어, 항원성 작용제를 포함하는 내부 구역(IZ), 및
선택적으로 외부 구역, 예를 들어, 외부 침식성/분해성 구역(OZ)
를 포함하되; 상기 OZ는, 존재하는 경우, 초기 또는 차폐된 이식 상(phase) 동안 숙주 면역 이펙터 분자 또는 세포와 상기 항원성 작용제의 접촉을 방해하도록 구성되지만, 후속 또는 비차폐된 이식 상에서는 상기 항원성 작용제와 숙주 면역 이펙터 분자 또는 세포의 접촉을 허용하도록 구성되는, 이식가능한 작제물.
제1항에 있어서, OZ(예를 들어, 침식성/분해성 OZ) 및 IZ를 둘 다 포함하는, 이식가능한 작제물.
제1항에 있어서, 상기 이식가능한 작제물이 OZ 또는 침식성-분해성 OZ를 포함하지 않는, 이식가능한 작제물.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 OZ는 분해되므로, 시간 경과에 따라서 상기 항원성 작용제가 상기 OZ로 유입되는, 이식가능한 작제물.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 OZ 내의 항원성 작용제의 농도는 상기 IZ 내의 항원성 작용제의 농도보다 낮고, 예를 들어, 상기 OZ에는 상기 항원성 작용제가 실질적으로 없는, 이식가능한 작제물.
제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 OZ가 분해성 실체(degradable entity)를 포함하는, 이식가능한 작제물.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 차폐된 상이 1시간, 12시간, 1일, 2일, 3일, 6일, 12일 이하, 0.5일 내지 30일 사이, 1일 내지 14일 사이, 또는 1일 내지 7일 사이로 지속되는, 이식가능한 작제물.
제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 OZ의 두께가 상기 차폐된 상의 길이/지속기간과 상관관계가 있는, 이식가능한 작제물.
제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 OZ의 두께가 상기 차폐된 상의 과정 동안 감소되는, 이식가능한 작제물.
제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 OZ의 두께가 상기 OZ 성분의 가교 정도와 상관관계가 있는, 이식가능한 작제물.
제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 OZ의 침식이 상기 항원성 작용제와 숙주 면역 이펙터 세포 또는 분자를 접촉시키는 것인, 이식가능한 작제물.
제5항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 OZ가 효소 절단 부위, 예를 들어, 단백분해 부위를 포함하는 분해성 실체를 포함하는, 이식가능한 작제물.
제12항에 있어서, 상기 분해성 실체가 중합체(예를 들어, 합성 중합체 또는 천연 발생 중합체, 예를 들어, 펩타이드 또는 다당류)인, 이식가능한 작제물.
제5항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 분해성 실체가 내인성 숙주 성분, 예를 들어, 분해 효소, 예를 들어, 리모델링 효소, 예를 들어, 콜라게나제에 대한 기질인, 이식가능한 작제물.
제5항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 분해성 실체가 중합체에 매립된 절단가능한 링커 또는 절단가능한 분절을 포함하는, 이식가능한 작제물.
제5항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 분해가능한 실체가 중합체의 성분을 포함하는, 이식가능한 작제물.
제5항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 분해성 실체가 펩타이드 연결을 포함하고, 예를 들어, 상기 분해성 실체가 펩타이드 사슬, 예를 들어, 폴리펩타이드를 포함하는, 이식가능한 작제물.
제5항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 분해성 실체가 프로테아제에 대한 절단 부위를 포함하는, 이식가능한 작제물.
제5항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 분해성 실체가 핵산을 포함하고, 예를 들어, 상기 분해성 실체가 DNA, RNA 또는 올리고뉴클레오타이드를 포함하는, 이식가능한 작제물.
제5항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 분해성 실체가 뉴클레아제에 대한 절단 부위를 포함하는, 이식가능한 작제물.
제5항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 분해성 실체가 당류를 포함하고, 예를 들어, 상기 분해성 실체가 올리고당을 포함하는, 이식가능한 작제물.
제5항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 분해성 실체가 글리코시다아제에 대한 절단 부위를 포함하는, 이식가능한 작제물.
제5항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 분해성 실체가 콜라게나제 또는 메탈로프로테아제에 대한 절단 부위를 포함하는, 이식가능한 작제물.
제5항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 분해가능한 실체가 내인성 숙주 성분에 의해 절단되는, 이식가능한 작제물.
제5항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 분해가능한 실체가 바탕질(matrix) 성분, 예를 들어, 중합체와 연관된 것인, 이식가능한 작제물.
제5항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 분해성 실체가 바탕질 성분, 예를 들어, 중합체에 결합, 예를 들어, 공유 결합된 것인, 이식가능한 작제물.
제5항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 분해성 실체의 절단 시, 상기 OZ의 온전성이 손상되는, 이식가능한 작제물.
제5항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 OZ 두께의 감소가 분해성 실체의 변형, 예를 들어, 절단에 의해 매개되는, 이식가능한 작제물.
제5항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 OZ 성분의 가교 정도의 감소가 분해성 실체의 변형, 예를 들어, 절단에 의해 매개되는 것인, 이식가능한 작제물.
제5항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 분해성 실체가 외인성 물질의 투여와 같은 외인적으로 적용된 처리, 열 또는 빛과 같은 에너지의 적용에 의한 처리에 의해 조정되고, 예를 들어, 유지 화합물의 조정이 온도 또는 빛에 의해 매개되는, 이식가능한 작제물.
제1항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항원성 작용제가 상기 IZ에 배치된 세포의 성분(예를 들어, 세포의 내인성 성분, 세포의 외인성 성분)인, 이식가능한 작제물.
제1항 내지 제31항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항원성 작용제가 상기 IZ에 배치된 세포의 내인성 성분인, 이식가능한 작제물.
제1항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항원성 작용제가 상기 IZ에 배치된 세포의 외인성 성분이고, 예를 들어, 상기 세포가 상기 항원성 작용제를 발현하도록 유전자 조작된 것인, 이식가능한 작제물.
제32항 또는 제33항에 있어서, 상기 외인성 성분이 오브알부민을 포함하는 것인, 이식가능한 작제물.
제1항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서, 전달가능한 물질, 예를 들어, 치료제의 공급원을 포함하는, 이식가능한 작제물.
제35항에 있어서, 상기 치료제가 상기 숙주 면역계의 조정인자(modulator)인, 이식가능한 작제물.
제35항 또는 제36항에 있어서, 상기 치료제가 상기 숙주 면역계를 활성화시키는 것인, 이식가능한 작제물.
제35항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 치료제가 사이토카인을 포함하는, 이식가능한 작제물.
제38항에 있어서, 상기 치료제가 IL-1, IL-1α, IL-1β, IL-1RA, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-11, IL-12, IL-12a, IL-12b, IL-13, IL-14, IL-16, IL-17, G-CSF, GM-CSF, IL-20, IFN-α, IFN-β, IFN-γ, CD154, LT-β, CD70, CD153, CD178, TRAIL, TNF-α, TNF-β, SCF, M-CSF, MSP, 4-1BBL, LIF 및 OSM으로부터 선택되는 사이토카인을 포함하는, 이식가능한 작제물.
제39항에 있어서, 상기 사이토카인이 IL-2, IL-4, IL-7, IL-10, IL-12a, IL-12b, 및 IL-17로부터 선택되는 것인, 이식가능한 작제물.
제39항 또는 제40항에 있어서, 상기 사이토카인이 IL-2를 포함하는 것인, 이식가능한 작제물.
제38항에 있어서, 상기 사이토카인의 서열이 표 1에 제시된 것인, 이식가능한 작제물.
제35항 내지 제40항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 치료제가 변형, 예를 들어, 올리고당을 포함하는 것인, 이식가능한 작제물.
제1항 내지 제43항 중 어느 한 항에 있어서, 세포, 예를 들어, IZ에 배치된 세포를 포함하는, 이식가능한 작제물.
제2항에 있어서, 치료제, 예를 들어, 사이토카인을 방출하는 상기 IZ에 배치된 세포를 포함하는, 이식가능한 작제물.
제1항 내지 제45항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 치료제, 예를 들어, 사이토카인을 방출하는 세포를 포함하는, 이식가능한 작제물.
제44항 내지 제46항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세포가 상기 치료제, 예를 들어, 사이토카인을 방출하도록 유전자 조작된 것인, 이식가능한 작제물.
제44항 내지 제47항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세포가 이의 면역원성을 증가시키도록 유전자 조작된 것인, 이식가능한 작제물.
제44항 내지 제48항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세포가 상기 치료제, 예를 들어, 사이토카인을 암호화하는 서열을 포함하는 것인, 이식가능한 작제물.
제35항 내지 제49항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 치료제의 지속적인 방출을 제공하는, 이식가능한 작제물.
제35항 내지 제49항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 치료제의 실질적으로 비-박동성 방출을 제공하는, 이식가능한 작제물.
제35항 내지 제51항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 1일(예를 들어, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 7일, 8일, 9일, 10일, 12일, 14일, 16일, 18일 또는 20일 초과) 동안 상기 치료제의 방출을 제공하는, 이식가능한 작제물.
제35항 내지 제51항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 5일(예를 들어, 6일, 7일, 8일, 9일, 10일, 12일, 14일, 16일, 18일 또는 20일 초과) 동안 상기 치료제의 방출을 제공하는, 이식가능한 작제물.
제35항 내지 제53항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체 내로 도입시, 상기 치료제의 유효 농도(예를 들어, 상기 치료제의 치료적 유효 농도)의 방출을 제공하는, 이식가능한 작제물.
제35항 내지 제54항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체 내로 도입시, 상기 이식가능한 작제물의 도입 부위로부터 적어도 약 1㎝, 5㎝, 10㎝, 50㎝, 100㎝, 또는 200㎝의 위치가 상기 치료제의 유효 농도(예를 들어, 상기 치료제의 치료적 유효 농도)를 수용하는, 이식가능한 작제물.
제35항 내지 제55항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체 내로 도입시, 도입 부위로부터 약 1㎝, 5㎝, 10㎝, 50㎝, 100㎝ 또는 200㎝ 이내의 위치에서 상기 이식가능한 작제물에 의해 제공된 상기 치료제의 농도가 약 250cm, 300cm, 500cm, 750cm 또는 그 이상보다 먼 위치에 있는 치료제의 농도보다 약 2배, 3배, 4배, 5배, 7.5배, 10배, 15배, 20배, 25배, 30배, 35배, 40배, 50배, 75배, 100배 이상인 것인, 이식가능한 작제물.
제35항 내지 제56항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체의 복강내(IP) 공간으로 도입시, 상기 IP 공간에서 상기 이식가능한 작제물에 의해 제공된 상기 치료제의 농도가 혈액(예를 들어, 혈장) 내의 상기 치료제의 농도보다 약 2배, 3배, 4배, 5배, 7.5배, 10배, 15배, 20배, 25배, 30배, 35배, 40배, 50배, 75배, 100배 이상인, 이식가능한 작제물.
제57항에 있어서, 상기 IP 공간 중의 상기 치료제의 농도가 적어도 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 7일, 8일, 9일, 10일, 12일, 15일 이상 동안 상기 혈액(예를 들어, 혈장) 중의 상기 치료제의 농도보다 적어도 2배, 3배, 4배, 5배, 7.5배, 10배, 15배, 20배, 25배, 30배, 35배, 40배, 50배, 75배, 또는 100배 이상 더 높게 유지되는 것인, 이식가능한 작제물.
제35항 내지 제58항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 치료제의 방출 속도가 실질적으로 일정한 제1 방출 상(release phase)을 제공하는, 이식가능한 작제물.
제59항에 있어서, 상기 치료제의 방출 수준이 실질적으로 감소하는 제2 방출 상을 제공하는, 이식가능한 작제물.
제59항에 있어서, 상기 제1 방출 상이 초기 상 내에 있는, 이식가능한 작제물.
제60항에 있어서, 상기 제2 방출 상이 상기 차폐된 상 내에 있는 것인, 이식가능한 작제물.
제59항 내지 제62항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제1 방출 상이 적어도 1시간 내지 30일의 지속기간을 갖는, 이식가능한 작제물.
제59항 내지 제63항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제2 방출 상이 적어도 1시간 내지 30일의 지속기간을 갖는, 이식가능한 작제물.
제1항 내지 제64항 중 어느 한 항에 있어서, 암에 대한 면역 이펙터 세포-매개의 공격을 촉진시키기에 충분하지만, 예를 들어, 암에서, Treg 수준을 촉진시키기에 충분하게 크지는 않은 수준으로 전달성 물질, 예를 들어, 사이토카인, 예를 들어, IL-2를 방출하도록 구성되는, 이식가능한 작제물.
제65항에 있어서, 상기 암이 복막-근접 조직의 암(예를 들어, 난소암, 췌장암, 또는 결장직장암)을 포함하는, 이식가능한 작제물.
제1항 내지 제66항 중 어느 한 항에 있어서, 중합체성 하이드로겔을 더 포함하는, 이식가능한 작제물.
제1항 내지 제67항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 OZ가 중합체성 하이드로겔을 포함하는, 이식가능한 작제물.
제1항 내지 제68항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 IZ 구역이 중합체성 하이드로겔을 포함하는, 이식가능한 작제물.
제69항에 있어서, 상기 IZ 및 OZ가 동일한 중합체성 하이드로겔을 포함하는, 이식가능한 작제물.
제69항 또는 제70항에 있어서, 상기 IZ가 제1 중합체성 하이드로겔을 포함하고, 상기 OZ가 제2 중합체성 하이드로겔을 포함하는, 이식가능한 작제물.
제1항 내지 제71항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 OZ가 중합체성 하이드로겔 및 분해성 실체를 포함하는, 이식가능한 작제물.
제67항 내지 제72항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 중합체성 하이드로겔이 키토산, 셀룰로스, 히알루론산, 또는 알기네이트를 포함하는 것인, 이식가능한 작제물.
제67항 내지 제73항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 이식가능한 디바이스가 적어도 2층의 중합체성 하이드로겔, 예를 들어, 외부 층, 예를 들어, 상기 숙주와 접촉하는 층을 포함하는, 이식가능한 작제물.
제74항에 있어서, 상기 이식가능한 디바이스가 (i) 항원성 작용제가 배치되는 바탕질을 포함하는 내부 층(예를 들어, 내부 중합체성 하이드로겔 층), 및 (ii) 상기 IZ 주위의 층으로서 구성되는 상기 OZ를 포함하는, 이식가능한 작제물.
제1항 내지 제75항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 OZ가 상기 내부 층과 외인성 폴리펩타이드 기반의 면역 이펙터 사이의 접촉을 방해하는, 이식가능한 작제물.
제1항 내지 제76항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체에 상기 이식가능한 작제물의 이식 이후, 상기 OZ가 분해되어 상기 IZ 구역과 폴리펩타이드 기반의 면역 이펙터가 충분히 접촉하게 하여 상기 IZ 내의 세포가 비활성화(예를 들어, 전달성 물질의 전달이 감소됨)되도록 하는, 이식가능한 작제물.
제1항 내지 제77항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체에 이식 후, 상기 이식가능한 작제물이
(i) 상기 셸 층이 상기 코어 층 내로 폴리펩타이드 기반의 면역 이펙터의 진입을 방해하는 제1(면역보호) 방식, 및
(ii) 상기 셸 층이 상기 코어 층 내로 폴리펩타이드 기반의 면역 이펙터의 진입을 허용하는 제2(비-면역보호) 방식
을 나타내고, 상기 디바이스가 상기 차폐된 상과 상기 비차폐된 상 사이의 전환이,
a) 상기 대상체의 내인성 환경에 대해 소정의 노출 기간 후에 발생하도록; 또는
b) 유발 실체 또는 자극(활성화가능한 분해)에 대한 노출에 의해 시작되도록
구성되는, 이식가능한 작제물.
제1항 내지 제78항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 이식가능한 작제물은 1종의 전달성 물질(예를 들어, IL-2)을 생산하는 세포를 포함하는, 이식가능한 작제물.
제1항 내지 제79항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 이식가능한 작제물은 복수의 전달성 물질(예를 들어, 복수의 사이토카인, 예를 들어, IL-2 및 IL-7)을 생산하는 세포를 포함하는, 이식가능한 작제물.
제1항 내지 제80항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 이식가능한 작제물은 상이한 유형의 전달성 물질(예를 들어, 2종의 상이한 사이토카인, 예를 들어, IL-2 및 IL-7)을 각각 독립적으로 생산하는 제1 세포 및 제2 세포를 포함하는, 이식가능한 작제물.
제81항에 있어서, 상기 제1 세포가 IL-2를 생산하고 상기 제2 세포가 IL-7을 생산하는, 이식가능한 작제물.
제35항 내지 제44항 및 제46항 내지 제82항 중 어느 한 항에 있어서, 이식가능한 작제물은 추가 치료제(예를 들어, 항암제 또는 면역조정제)를 더 포함하는, 이식가능한 작제물.
제83항에 있어서, 상기 추가 치료제가 화학요법제(예를 들어, 젬시타빈)인, 이식가능한 작제물.
제83항에 있어서, 상기 추가 치료제가 면역조정제인, 이식가능한 작제물.
이식가능한 작제물로서,
알기네이트를 포함하는 외부 침식성/분해성 구역(OZ);
IL-2를 발현하는 세포를 포함하는 내부 구역(IZ)
을 포함하되;
상기 OZ는 초기 또는 차폐된 이식 상 동안에는 세포의 접촉을 방해하지만, 후속 또는 비차폐된 이식 상에서는 세포의 접촉을 허용하도록 구성되는, 이식가능한 작제물.
이식가능한 작제물로서,
알기네이트를 포함하는 외부 침식성/분해성 구역(OZ);
IL-7을 발현하는 세포를 포함하는 내부 구역(IZ)
을 포함하되;
상기 OZ는 초기 또는 차폐된 이식 상 동안에는 세포의 접촉을 방해하지만, 후속 또는 비차폐된 이식 상에서는 세포의 접촉을 허용하도록 구성되는, 이식가능한 작제물.
제86항 또는 제87항에 있어서, 상기 알기네이트가 변형된(예를 들어, 화학적으로 변형된) 것인, 이식가능한 작제물.
제86항 내지 제88항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 알기네이트가 변형되지 않은 것인, 이식가능한 작제물.
이식가능한 작제물의 제제로서, 상기 이식가능한 작제물이 각각
외부 침식성/분해성 영역(OZ)
항원성 작용제를 포함하는 내부 구역(IZ)
을 포함하되,
상기 EZ는 초기 또는 차폐된 이식 상 동안 상기 항원성 작용제와 숙주 면역 이펙터 분자 또는 세포의 접촉을 방해하지만, 후속 또는 비차폐된 이식 상에서는 상기 항원성 작용제와 숙주 면역 이펙터 분자 또는 세포의 접촉을 허용하도록 구성되는, 이식가능한 작제물의 제제.
제81항에 있어서, 상기 이식가능한 작제물이 제1항 내지 제89항 중 어느 한 항에 따른 이식가능한 작제물을 포함하는 것인 이식가능한 작제물의 제제.
제81항에 있어서, 상기 제제가 약제학적 허용성 제제인 이식가능한 작제물의 제제.
대상체에게 이식가능한 작제물을 제공하는 방법으로서,
이식가능한 작제물을 상기 대상체 내로 이식하거나, 또는 상기 대상체에게 제공하는 단계를 포함하되, 상기 이식가능한 작제물은
외부 침식성/분해성 영역(OZ)
항원성 작용제를 포함하는 내부 구역(IZ)
을 포함하고,
상기 EZ는 초기 또는 차폐된 이식 상 동안에는 상기 항원성 작용제와 숙주 면역 이펙터 분자 또는 세포가 접촉하는 것을 방해하지만, 후속 또는 비차폐된 이식 상에서는 상기 항원성 작용제와 숙주 면역 이펙터 분자 또는 세포의 접촉을 허용하도록 구성되는, 방법.
제93항에 있어서, 상기 이식가능한 작제물이 제1항 내지 제89항 중 어느 한 항에 따른 이식가능한 작제물을 포함하는, 방법.
제93항 또는 제94항에 있어서, 이식가능한 작제물의 제제를 상기 대상체 내로 이식하거나, 또는 상기 대상체에게 제공하는 단계를 포함하는, 방법.
제93항 내지 제95항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체는 원치 않는 세포 증식을 포함하는 장애, 예를 들어, 암에 대해 치료되는, 방법.
제96항에 있어서, 상기 암 조직이 복막에 위치하는, 방법.
제96항 또는 제97항에 있어서, 상기 암 조직이 복막 외부에 위치하는, 방법.
제96항 내지 제98항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 암 조직이 전이성인 것인 방법.
제93항 내지 제99항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 선택된 기간의 차폐된 상을 부여하는 외부 구역을 갖는 이식가능한 작제물을 선택하는 단계를 포함하는, 방법.
대상체의 복막-근접 조직의 암을 치료하는 방법으로서, 제1항 내지 제80항 중 어느 한 항의 사이토카인-방출성 이식가능한 작제물을 대상체의 복강내 공간으로 도입시키는 단계로서,
상기 사이토카인 방출성 이식가능한 디바이스는 상기 암에 대한 면역 이펙터 세포 매개의 공격을 촉진시키기에 충분하지만, 상기 암에서 Treg 수준을 촉진시키기에 충분할 정도로 크지는 않은 수준으로 사이토카인을 방출하도록 구성되는 단계,
이로써 상기 복막-근접 조직의 암을 치료하는 단계
를 포함하는, 방법.
제101항에 있어서, 상기 이식가능한 작제물이 제1항 내지 제89항 중 어느 한 항에 따른 이식가능한 작제물을 포함하는, 방법.
제101항 또는 제102항에 있어서, 상기 이식가능한 작제물의 제제를 상기 대상체 내로 이식하거나, 또는 상기 대상체에게 제공하는 단계를 포함하는, 방법.
대상체의 암을 치료 또는 예방하기 위해 상기 대상체의 면역계를 프로그래밍하는 방법으로서, 제1항 내지 제89항 중 어느 한 항의 사이토카인 방출성 이식가능한 작제물을 상기 대상체의 복강내 공간으로 도입시키는 단계를 포함하는, 방법.
제1항 내지 제89항 중 어느 한 항의 이식가능한 작제물을 제조 또는 제작하는 방법으로서,
외부 구역 성분을 내부 구역 성분과 접촉시키는 단계,
이로써 상기 이식가능한 작제물을 제조되거나 제작하는 단계
를 포함하는, 방법.
제1항 내지 제89항 중 어느 한 항의 이식가능한 작제물을 제조 또는 제작하는 방법으로서,
이식가능한 작제물 후보를 제공하고, 예를 들어, 이식가능한 작제물의 매개변수, 예를 들어, 직경, 세포 생존력, 전달성 물질의 방출, 침식에 대한 저항성, 지속기간과 같은 선택된 성질의 차폐된 상의 보유에 대한 값을 테스트하여 결정하는 단계;
이로써 이식가능한 작제물을 제조 또는 제작하는 단계
를 포함하는, 방법.