KR20220036371A - 항-lag-3 항체를 포함하는 제제, 이의 제조방법 및 용도 - Google Patents

Abstract

본 발명은 항-LAG-3 항체를 포함하는 제제, 구체적으로는 LAG-3 분자에 특이적으로 결합하는 항체, 완충액, 안정화제, 계면활성제를 포함하는 약제학적 제제에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 또한 상기 제제의 치료 또는 예방 용도에 관한 것이다.

Description

항-LAG-3 항체를 포함하는 제제, 이의 제조방법 및 용도

본 발명은 항체 제제 분야에 관한 것이다. 특이적으로, 본 발명은 LAG-3에 특이적으로 결합하는 항체(이하 "항-LAG-3 항체"로 지칭)를 포함하는 약제학적 제제, 상기 약제학적 제제의 제조방법 및 상기 약제학적 제제의 치료적 및/또는 예방적 용도에 관한 것이다.

CD223으로도 알려진 림프구-활성화 유전자 3(LAG-3)은 인체에서의 LAG-3 유전자에 의해 암호화된 I형 막관통 단백질을 말한다. LAG-3의 분자 특성 및 생물학적 기능은 잘 특성화되고 기재되어 있다(예를 들어, Sierro 등, "The CD4-like molecule LAG-3, biology and therapeutic applications", Expert Opin Ther Targets, 2011, 15 (1): 91-101 참조). LAG-3은 T 세포(특히 활성화 T 세포), 자연 살해 세포, B 세포 및 형질 세포양 수지상 세포의 표면에서 발현하는 CD4 유사 단백질이다. LAG-3은 억제 수용체인 것으로 밝혀졌다.

LAG-3⁺ 종양 침윤 림프구(TIL)은 흑색종, 결장암, 췌장암, 유방암, 폐암, 조혈세포암 및 두경부암 환자에게서 발견된 것으로 보고되었다(Demeure C.E. 등, T Lymphocytes infiltrating various tumour types express the MHC class II ligand lymphocyte activation gene-3 (LAG-3): role of LAG-3/MHC class II interactions in cell-cell contacts, Eur. J. Cancer, 2001, 37 (13): 1709-1718). 각종 암 마우스 모델에서 항-LAG-3 항체를 사용하여 LAG-3를 차단함으로써 CD8⁺ 주효 T 세포를 복원하고 조절 T 세포 집단을 감소시킬 수 있었다.

LAG-3 차단제로서 LAG-3에 특이적으로 결합하는 항-LAG-3 항체는, 예를 들어, 중국특허출원 제201811561512.X호에 기재되어 있다. 당업계에서는 각종 암, 면역 관련 질환 및 T 세포 기능장애 질환의 치료, 예방 또는 지연에 사용할 수 있는 항-LAG-3 항체를 필요로 한다.

항체 제제는 항체를 대상체에게 투여하기 적합하게 만드는 것은 물론, 저장 및 차후의 사용에서도 안정성을 유지하는 방식으로 제형화해야 한다. 예를 들어, 액체 항제를 적절하게 제형화하지 못하면 용액에서 항체가 분해, 응집, 바람직하지 않은 화학적 변형 등을 일으킬 수 있다. 항체 제제에서의 항체 안정성은 제제에 사용하는 완충액, 안정화제, 계면활성제에 달려 있다.

일부 항-LAG-3 제제가 개시되어 있지만, 안정성이 뛰어나고 대상체에게 투여하기 적합한 항-LAG-3 항체를 포함하는 신규 약제학적 제제는 여전히 당업계에서 해결해야 하는 과제이다. 따라서 질환 치료 또는 예방에 사용하기 적합한 항-LAG-3 항체 제제가 필요로 한다.

본 발명은 전술한 요구를 충족시키기 위해 LAG-3에 특이적으로 결합하는 항체를 포함하는 약제학적 제제를 제공한다.

한 측면에서, 본 발명은 (i) 항-LAG-3 항체, (ii) 완충액, (iii) 안정화제, 및 (iv) 계면활성제를 포함하는 액체 항체 제제를 제공한다.

항-LAG-3 항체는 LAG-3 분자(예를 들어, 인간 LAG-3 분자)에 결합하고 LAG-3의 신호전달을 차단하는 항체라면 별다른 제한은 없으며, 예를 들어, 폴리클로날 항체, 모노클로날 항체, 또는 이들의 조합일 수도 있다. 바람직하게는, 한 실시양태에서, 항-LAG-3 항체는 모노클로날 항체이다. 한 실시양태에서, 항-LAG-3 항체는 중국특허출원 제CN201811561512.X호(2018년 12월 19일 출원)에 개시된 재조합 완전 인간 항림프구-활성화 유전자 3(LAG-3) 모노클로날 항체이며, 이의 내용은 본 출원의 목적을 위해 그 전체가 참고로 본원에 포함된다. 한 실시양태에서, 항-LAG-3 항체는 중쇄 가변 영역(variable region) 및 경쇄 가변 영역을 포함하며, 여기서 중쇄 가변 영역은 서열 번호 7의 서열 또는 이에 대해 적어도 90%의 동일성을 가지는 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열 번호 8의 서열 또는 이에 대해 적어도 90%의 동일성을 가지는 서열을 포함한다:

QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIYSESYYWGWIRQPPGKGLEWIGSIVYSGYTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARVRTWDAAFDIWGQGTMVTVSS(서열 번호 7);

DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQDISNYLNWYQQKPGKAPKLLIYDASNLETGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQVLELPPWTFGGGTKVEIK

(서열 번호 8).

한 실시양태에서, 항-LAG-3 항체는 다음을 포함한다:

-GSIYSESYYWG(서열 번호 1)의 중쇄 VH CDR1;

-SIVYSGYTYYNPSLKS(서열 번호 2)의 중쇄 VH CDR2;

-ARVRTWDAAFDI(서열 번호 3)의 중쇄 VH CDR3;

-QASQDISNYLN(서열 번호 4)의 경쇄 VL CDR1;

-DASNLET(서열 번호 5)의 경쇄 VL CDR2; 및

-QQVLELPPWT(서열 번호 6)의 경쇄 VL CDR3.

한 실시양태에서, 항-LAG-3 항체는 중쇄 및 경쇄를 포함하는 IgG4 항체이며, 중쇄는 서열 번호 9의 서열 또는 이에 대해 적어도 90%의 동일성을 가지는 서열을 포함하고, 경쇄는 서열 번호 10의 서열 또는 이에 대해 적어도 90%의 동일성을 가지는 서열을 포함한다:

QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIYSESYYWGWIRQPPGKGLEWIGSIVYSGYTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARVRTWDAAFDIWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG(서열 번호 9)

DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQDISNYLNWYQQKPGKAPKLLIYDASNLETGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQVLELPPWTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(서열 번호 10).

바람직하게는, 항-LAG-3 항체는 중국특허출원 제CN201811561512.X호(2018년 12월 19일 출원)에 개시된, 서열 번호 9의 중쇄 서열과 서열 번호 10의 경쇄 서열로 구성된 항-LAG-3 모노클로날 항체 ADI-31853이다.

한 실시양태에서, 항-LAG-3 항체는 293 세포 또는 CHO 세포에서 재조합적으로 발현되는 항-LAG-3 항체이다.

한 실시양태에서, 본 명세서에 개시된 액체 항체 제제 중 항-LAG-3 항체의 농도는 약 1~100mg/mL이다. 다른 실시양태에서, 본 명세서에 개시된 액체 항체 제제 중 항-LAG-3 항체의 농도는 약 5~50mg/mL이다. 또 다른 실시양태에서, 본 명세서에 개시된 액체 항체 제제 중 항-LAG-3 항체의 농도는 약 5mg/mL, 약 10mg/mL, 약 15mg/mL, 약 20mg/mL, 약 25mg/mL, 약 30mg/mL, 약 35mg/mL, 약 40mg/mL,약 45mg/mL 또는 약 50mg/mL이다.

한 실시양태에서, 본 명세서에 개시된 액체 항체 제제 중 완충액의 농도는 약 1~10mg/mL이다. 한 실시양태에서, 본 명세서에 개시된 액체 항체 제제 중 완충액의 농도는 약 4~8mg/mL이며, 예를 들어, 약 4mg/mL, 약 4.5mg/mL, 약 5mg/mL, 약 5.5mg/mL, 약 6mg/mL, 약 6.5mg/mL, 약 7mg/mL, 약 7.5mg/mL 또는 약 8mg/mL이다.

한 실시양태에서, 완충액은 시트르산염, 시트르산염 용매화물, 및 이들의 조합으로부터 선택되고, 보다 바람직하게는 시트르산염 또는 시트르산염 수화물이며, 예를 들어, 시트르산나트륨 또는 시트르산나트륨 이수화물이다.

한 실시양태에서, 본 명세서에 개시된 액체 항체 제제 중 안정화제의 농도는 약 10~150mg/mL이다. 한 실시양태에서, 본 명세서에 개시된 액체 항체 제제 중 안정화제의 농도는 약 15~100mg/mL이며, 예를 들어, 약 15mg/mL, 약 20mg/mL, 약 30mg/mL, 약 40mg/mL, 약 50mg/mL, 약 60mg/mL, 약 70mg/mL, 약 80mg/mL, 약 90mg/mL 또는 약 100mg/mL이다.

한 실시양태에서, 안정화제는 수크로스, 트레할로스, 아르기닌, 아르기닌 염산염, 및 이들의 임의 조합으로부터 선택되며, 바람직하게는 수크로스, 아르기닌 및/또는 아르기닌 염산염이다. 다른 실시양태에서, 아르기닌 및/또는 아르기닌 염산염은 약 10~40mg/mL, 바람직하게는 약 15~25mg/mL(예를 들어, 약 15mg/mL, 약 16mg/mL, 약 17mg/mL, 약 18mg/mL, 약 19mg/mL, 약 20mg/mL, 약 21mg/mL, 약 22mg/mL, 약 23mg/mL, 약 24mg/mL 또는 약 25mg/mL)의 양으로 존재한다. 또 다른 실시양태에서, 수크로스는 약 20~100mg/mL, 바람직하게는 약 40~90mg/mL(예를 들어, 약 40mg/mL, 약 50mg/mL, 약 60mg/mL, 약 70mg/mL, 약 80mg/mL 또는 약 90mg/mL)의 양으로 존재한다.

한 실시양태에서, 본 명세서에 개시된 액체 항체 제제 중 계면활성제의 농도는 약 0.1~1mg/mL이다. 한 실시양태에서, 본 명세서에 개시된 액체 항체 제제 중 계면활성제의 농도는 약 0.2~0.8mg/mL이며, 예를 들어, 약 0.2mg/mL, 약 0.3mg/mL, 약 0.4mg/mL, 약 0.5mg/mL, 약 0.6mg/mL, 약 0.7mg/mL 또는 약 0.8mg/mL이다.

한 실시양태에서, 계면활성제는 비이온성 계면활성제이다. 한 실시양태에서, 계면활성제는 폴리소르베이트 계면활성제로부터 선택된다. 한 특정 실시양태에서, 본 명세서에 개시된 액체 항체 제제 중 계면활성제는 폴리소르베이트-80이다.

일부 실시양태에서, 액체 제제는 에데테이트(예를 들어, 에데트산이나트륨) 및/또는 메티오닌을 포함하거나 포함하지 않을 수 있다.

한 실시양태에서, 액체 제제의 pH는 약 5.5~7.5이다. 일부 실시양태에서, 액체 제제의 pH는 약 5.5~7.5이며, 예를 들어 약 5.5, 약 6.0. 약 6.5, 약 7.0 또는 약 7.5이다.

한 실시양태에서, 액체 제제는 약제학적 제제로, 바람직하게는 주사제, 보다 바람직하게는 피하 주사제 또는 정맥 내 주사제이다. 한 실시양태에서, 액체 제제는 정맥 내 주입용 점적액이다.

한 실시양태에서, 본 명세서에 개시된 액체 항체 제제는 다음을 포함한다:

(i) 약 1~100mg/mL의 항-LAG-3 항체;

(ii) 약 1~10mg/mL의 시트르산나트륨 또는 시트르산나트륨 이수화물;

(iii) 약 10~150mg/mL의 수크로스, 아르기닌 및/또는 아르기닌 염산염; 및

(iv) 약 0.1~1mg/mL의 폴리소르베이트-80; 여기서

선택적으로, 상기 액체 제제는 에데테이트(예를 들어, 에데트산이나트륨) 및 메티오닌을 포함하지 않는다;

상기 액체 제제의 pH는 약 5.5~7.5이며, 바람직하게는 약 6.0~7.0, 보다 바람직하게는 6.0±0.3으로, 예를 들어 6.0, 바람직하게는 pH는 무수 시트르산으로 조정된다.

바람직한 한 실시양태에서, 본 명세서에 개시된 액체 항체 제제는 다음을 포함한다:

(i) 약 10~30mg/mL의 항-LAG-3 항체;

(ii) 약 2~8mg/mL의 시트르산나트륨 또는 시트르산나트륨 이수화물;

(iii) 약 10~40mg/mL의 아르기닌 및/또는 아르기닌 염산염, 및/또는 약 40~90mg/mL의 수크로스; 및

(iv) 약 0.2~0.8mg/mL의 폴리소르베이트-80; 여기서

선택적으로, 상기 액체 제제는 에데테이트(예를 들어, 에데트산이나트륨) 및 메티오닌을 포함하지 않는다;

상기 액체 제제의 pH는 약 5.5~7.5이며, 바람직하게는 약 6.0~7.0, 보다 바람직하게는 6.0±0.3으로, 예를 들어 6.0, 바람직하게는 pH는 무수 시트르산으로 조정된다.

바람직한 한 실시양태에서, 본 명세서에 개시된 액체 항체 제제는 다음을 포함한다:

(i) 약 20mg/mL의 항-LAG-3 항체;

(ii) 약 5.88mg/mL의 시트르산나트륨 이수화물;

(iii) 약 80mg/mL의 수크로스; 및

(iv) 약 0.3mg/mL의 폴리소르베이트-80;

상기 액체 제제의 pH는 약 5.5~7.5이며, 바람직하게는 약 6.0~7.0, 보다 바람직하게는 6.0±0.3으로, 예를 들어 6.0, 바람직하게는 pH는 무수 시트르산으로 조정된다.

바람직한 한 실시양태에서, 본 명세서에 개시된 액체 항체 제제는 다음을 포함한다:

(i) 약 20mg/mL의 항-LAG-3 항체;

(ii) 약 5.88mg/mL의 시트르산나트륨 이수화물;

(iii) 약 17.42mg/mL의 아르기닌; 및

(iv) 약 0.3mg/mL의 폴리소르베이트-80;

상기 액체 제제의 pH는 약 5.5~7.5이며, 바람직하게는 약 6.0~7.0, 보다 바람직하게는 6.0±0.3으로, 예를 들어 6.0, 바람직하게는 pH는 무수 시트르산으로 조정된다.

바람직한 한 실시양태에서, 본 명세서에 개시된 액체 항체 제제는 다음을 포함한다:

(i) 약 20mg/mL의 항-LAG-3 항체;

(ii) 약 5.88mg/mL의 시트르산나트륨 이수화물;

(iii) 약 21.07mg/mL의 아르기닌 염산염; 및

(iv) 약 0.7mg/mL의 폴리소르베이트-80;

상기 액체 제제의 pH는 약 5.5~7.5이며, 바람직하게는 약 6.0~7.0, 보다 바람직하게는 6.0±0.3으로, 예를 들어 6.0, 바람직하게는 pH는 무수 시트르산으로 조정된다.

바람직한 한 실시양태에서, 본 명세서에 개시된 액체 항체 제제는 다음을 포함한다:

(i) 약 20mg/mL의 항-LAG-3 항체;

(ii) 약 5.88mg/mL의 시트르산나트륨 이수화물;

(iii) 약 50mg/mL의 수크로스와 약 21.07mg/mL의 아르기닌 염산염; 및

(iv) 약 0.7mg/mL의 폴리소르베이트-80;

상기 액체 제제의 pH는 약 5.5~7.5이며, 바람직하게는 약 6.0~7.0, 보다 바람직하게는 6.0±0.3으로, 예를 들어 6.0, 바람직하게는 pH는 무수 시트르산으로 조정된다.

바람직한 한 실시양태에서, 본 명세서에 개시된 액체 항체 제제는 다음을 포함한다:

(i) 약 20mg/mL의 항-LAG-3 항체;

(ii) 약 5.88mg/mL의 시트르산나트륨 이수화물;

(iii) 약 50mg/mL의 수크로스; 및

(iv) 약 0.7mg/mL의 폴리소르베이트-80;

상기 액체 제제의 pH는 약 5.5~7.5이며, 바람직하게는 약 6.0~7.0, 보다 바람직하게는 6.0±0.3으로, 예를 들어 6.0, 바람직하게는 pH는 무수 시트르산으로 조정된다.

다른 측면에서, 본 발명은 본 명세서에 개시된 액체 항체 제제를 고체화함으로써 얻은 고체 항체 제제를 제공한다. 고체화 처리는, 예를 들어, 결정화, 분무 건조 또는 동결 건조로 구현된다. 바람직한 한 실시양태에서, 고체 항체 제제는, 예를 들어, 주사를 위한 동결 건조 분말의 형태이다. 본 명세서에 개시된 재구성 제제를 제공하기 위해 사용하기에 앞서 적합한 매개체(vehicle)에서 고체 항체 제제를 재구성할 수 있다. 재구성 제제는 또한 본 명세서에 개시된 액체 항체 제제이다. 한 실시양태에서, 적합한 매개체는 주사용수, 주사용 유기 매개체(주사용 오일, 에탄올, 프로필렌 글리콜 등을 포함하되 이에 한정되지 않음), 및 이들의 조합으로부터 선택된다.

본 명세서에 개시된 액체 제제는 장기간, 예를 들어 적어도 24개월 이상 동안 안정적으로 저장할 수 있다. 한 실시양태에서, 본 명세서에 개시된 액체 제제는 약 -80°C 내지 약 45°C, 예를 들어, -80°C, 약 -30°C, 약 -20°C, 약 0°C, 약 5°C, 약 25°C, 약 35°C, 약 38°C, 약 40°C, 약 42°C 또는 약 45°C에서 적어도 10일, 적어도 20일, 적어도 1개월, 적어도 2개월, 적어도 3개월, 적어도 4개월, 적어도 5개월, 적어도 6개월, 적어도 7개월, 적어도 8개월, 적어도 9개월, 적어도 10개월, 적어도 11개월, 적어도 12개월, 적어도 18개월, 적어도 24개월, 적어도 36개월, 또는 그 이상의 기간 동안 저장 후에도 안정성을 유지할 수 있다.

한 실시양태에서, 본 명세서에 개시된 액체 제제는 적어도 24개월 동안 안정적으로 저장할 수 있다. 다른 실시양태에서, 본 명세서에 개시된 액체 제제는 적어도 40°C의 온도에서 안정된 상태이다. 또 다른 실시양태에서, 본 명세서에 개시된 액체 제제는 약 2°C~8°C에서 적어도 12개월, 바람직하게는 적어도 24개월 동안 안정성을 유지한다. 한 실시양태에서, 본 명세서에 개시된 액체 제제는 실온, 또는 예를 들어, 약 25°C에서 적어도 3개월, 바람직하게는 적어도 6개월 동안 안정성을 유지한다. 다른 실시양태에서, 본 명세서에 개시된 액체 제제는 약 40°C에서 적어도 1개월 동안 안정성을 유지한다. 또 다른 실시양태에서, 본 명세서에 개시된 액체 제제는 약 5°C~40°C, 예를 들어 25°C에서, 적어도 1일, 예를 들어 3일 또는 5일 동안 진탕해도 안정성을 유지할 수 있다.

한 실시양태에서, 저장 후 제제의 안정성은 제제의 성상, 가시적 입자, 단백질 함량, 순도 및/또는 전하 변이체의 변화를 검출함으로써 표시될 수 있다. 한 실시양태에서, 본 명세서에 개시된 액체 제제의 안정성을 고온 스트레스 시험으로, 예를 들어 40±2°C에서 적어도 1주, 2주 또는 바람직하게는 1개월 동안 저장한 후에, 또는 25±2°C에서 적어도 1개월 또는 2개월 동안 저장한 후에 검사할 수 있다. 한 실시양태에서, 본 명세서에 개시된 액체 제제의 진탕 안정성은 진탕 시험에 의해 검사된다.

한 실시양태에서, 본 명세서에 개시된 액체 제제의 저장 후 안정성을 육안으로 검사한다. 여기서 본 명세서에 개시된 액체 제제는 외관상 입자가 없는 살짝 유백색, 무색 내지 담황색 액체의 성상을 유지한다. 한 실시양태에서, 투명도 검출기를 이용해 육안 검사를 실시했을 때 제제에 가시적 입자가 존재하지 않는다. 한 실시양태에서, 본 명세서에 개시된 액체 제제의 저장 후 안정성은 단백질 함량의 변화를 확인함으로써 검사되며, 여기서 단백질 함량의 변화율은, 예를 들어 자외선 분광광도(UV)법에 의해 측정했을 때, 저장 0일 차의 초기 값과 비교하여 20% 이하, 바람직하게는 10% 이하(예를 들어, 7%~8%), 바람직하게는 5% 이하이다. 한 실시양태에서, 본 명세서에 개시된 액체 제제의 저장 후 안정성은 본 명세서에 개시된 액체 제제의 탁도 변화율을 확인함으로써 검사되며,여기서 탁도 변화율은, 예를 들어 OD_350mm법에 의해 측정했을 때, 저장 0일 차의 초기 값과 비교하여 0.04 이하, 바람직하게는 0.03 이하, 보다 바람직하게는 0.02 이하이다. 한 실시양태에서, 본 명세서에 개시된 액체 제제의 저장 후 안정성은 본 명세서에 개시된 액체 제제의 순도 변화율을 확인함으로써 검사되며, 여기서 단량체 순도의 변화율은 크기 배제 고성능 액체 크로마토그래피(SEC-HPLC)에 의해 측정했을 때, 저장 0일 차의 초기 값과 비교하여 10% 이하, 예를 들어, 5%, 4% 또는 3% 이하(예를 들어 1~2%), 바람직하게는 1% 이하이다. 한 실시양태에서, 본 명세서에 개시된 액체 제제의 저장 후 안정성은 본 명세서에 개시된 제제의 순도 변화율을 확인함으로써 검사되며, 여기서 단량체 순도의 변화율은 비환원 모세관 전기영동-도데실 황산나트륨(CE-SDS)에 의해 측정했을 때, 10% 이하(예를 들어, 5%, 4% 또는 3% 이하), 바람직하게는 2%, 1%, 0.5% 또는 0.1% 이하로 감소된다. 한 실시양태에서, 본 명세서에 개시된 액체 제제의 저장 후 안정성을 이미지화 모세관 등전점 전기영동(iCIEF)로 검사한다. 항체(주성분, 산성 성분 또는 염기성 성분)의 전하 변이체 변화율은 저장 0일 차의 초기 값과 비교하여 2% 이하이다.

한 실시양태에서, 제제는 예를 들어 2°C~8°C에서 적어도 24개월 동안, 실온에서 적어도 3개월 동안, 또는 40°C±2°C에서 1개월 동안 저장 후에도 안정성을 유지하며, 바람직하게는 하기의 특성 중 하나 이상을 가진다:

(i) 제제의 항-LAG-3 항체의 순도가 SEC-HPLC에 의해 측정했을 때 90%를 초과하며, 바람직하게는 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%를 초과한다;

(ii) 순도가 환원 또는 비환원 CE-SDS에 의해 측정했을 때 90%를 초과하며, 바람직하게는 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%를 초과한다;

(iii) iCIEF에 의해 측정했을 때 저장 0일 차의 초기 값과 비교하여 상기 제제의 항-LAG-3 항체 성분(즉, 주성분, 산성 성분 및 염기성 성분)의 변화율이 2% 이하이다;

(iv) ELISA에 의해 측정했을 때 저장 0일 차의 초기 값과 비교하여 상기 제제의 항-LAG-3 항체의 상대적 결합활성이 70~130%, 예를 들어, 70%, 80%, 90%, 100%, 110%, 120% 또는 130%이다.

한 측면에서, 본 발명은 본 명세서에 개시된 액체 항체 제제 또는 고체 항체 제제를 포함하는 전달 장치를 제공한다. 한 실시양태에서, 본 명세서에 개시된 전달 장치는, 예를 들어 정맥 내, 피하, 피내 또는 근육 내 주사, 또는 정맥 내 주입에 사용하기 위하여, 본 명세서에 개시된 액체 항체 제제 또는 고체 항체 제제를 포함하는 사전 충전형 주사기의 형태로 제공된다.

다른 측면에서, 본 발명은 본 명세서에 개시된 액체 항체 제제 또는 고체 항체 제제를 대상체에 투여하는 것을 포함하는, 대상체(예를 들어, 포유 동물)에 항-LAG-3 항체를 전달하는 방법을 제공하며, 예를 들어 사전 충전형 주사기 형태의 전달 장치를 사용하여 전달할 수 있다.

다른 측면에서, 본 발명은 대상체의 LAG-3 발현 암(특히 전이성 암), 면역 관련 질환 및 T 세포 기능장애 질환의 치료, 예방 또는 지연, 구체적으로는 LAG-3 발현 암(특히 전이성 암), 예를 들어 각종 혈액 종양 및 고체 종양, 예컨대 결정암의 치료, 예방 또는 지연에 사용되는 전달 장치(예를 들어, 사전 충전형 주사기) 또는 약제의 제조에 있어서, 본 명세서에 개시된 액체 항체 제제 또는 고체 항체 제제의 용도를 제공한다.

본 발명의 다른 실시양태는 이하의 상세한 설명을 참조하여 명확해질 것이다.

하기에 상세히 설명된 본 발명의 바람직한 실시양태는 하기 도면과 함께 읽으면 더 잘 이해할 수 있을 것이다. 본 발명을 설명하기 위하여 현재 바람직한 실시양태를 도면에 도시되어 있다. 그러나, 본 발명이 도면이 도시하는 실시양태의 구체적인 배치 및 수단에 한정되지 않음을 이해해야 한다.
도 1은 SEC-HPLC에 의해 측정한 항-LAG-3 항체의 순도에 pH가 미치는 영향을 도시한다.
도 2는 iCIEF에 의해 측정한 항-LAG-3 항체의 전하 변이체에 pH가 미치는 영향을 도시한다.
도 3은 2주간의 고온 스트레스 시험에서 항-LAG-3 항체 제법 1~7의 산성 성분에서의 전하 변이체(iCIEF에 의해 측정)의 변화 추이를 도시한다.
도 4는 2주간의 고온 스트레스 시험에서 항-LAG-3 항체 제법 1~7의 주성분에서의 전하 변이체(iCIEF에 의해 측정)의 변화 추이를 도시한다.
도 5는 2주간의 고온 스트레스 시험에서 항-LAG-3 항체 제법 1~7의 염기성 성분에서의 전하 변이체(iCIEF에 의해 측정)의 변화 추이를 도시한다.
도 6은 고온 스트레스 시험에서 항-LAG-3 항체 제법 8, 9, 10에서의 탁도(OD_350nm 방법에 의해 측정)의 변화 추이를 도시한다.
도 7은 고온 스트레스 시험에서 항-LAG-3 항체 제법 8, 9, 10에서의 순도(SEC-HPLC에 의해 측정)의 변화 추이를 도시한다.
도 8은 고온 스트레스 시험에서 항-LAG-3 항체 제법 8, 9, 10에서의 순도(환원 CE-SDS에 의해 측정)의 변화 추이를 도시한다.
도 9는 1개월간의 고온 스트레스 시험에서 항-LAG-3 항체 제법 8, 9, 10의 산성 성분에서의 전하 변이체(iCIEF에 의해 측정)의 변화 추이를 도시한다.
도 10은 1개월간의 고온 스트레스 시험에서 항-LAG-3 항체 제법 8, 9, 10의 주성분에서의 전하 변이체(iCIEF에 의해 측정)의 변화 추이를 도시한다.
도 11은 1개월간의 고온 스트레스 시험에서 항-LAG-3 항체 제법 8, 9, 10의 염기성 성분에서의 전하 변이체(iCIEF에 의해 측정)의 변화 추이를 도시한다.
도 12는 고온 스트레스 시험 개시 시점과 1개월 경과 시점에서의 항-LAG-3 항체 제법 9의 순도(환원 CE-SDS에 의해 측정) 패턴을 도시한다.
도 13은 고온 스트레스 시험 시작한지 1개월 경과 시점에서의 항-LAG-3 항체 제법 9의 질량 스펙트럼(LC-MS에 의해 측정)을 도시한다.
도 14는 고온 스트레스 시험 개시 시점과 1개월 경과 시점에서의 항-LAG-3 항체 제법 10의 순도(SEC-HPLC에 의해 측정) 크로마토그램을 도시한다.

본 발명을 상세히 기술하기에 앞서, 기술된 특정 방법 및 실험 조건은 달라질 수 있으며, 본 발명은 이러한 방법 또는 조건에 한정되지 않음을 이해해야 한다. 또한 본 명세서에서 사용되는 용어는 특정 실시양태를 설명하기 위한 것으로, 본 발명을 한정하려는 것이 아니다.

정의

별도로 정의하지 않는 한, 본 명세서에 기재된 기술적 및 과학적 용어는 본 발명의 당업자들이 통상적으로 이해하는 의미를 지닌다. 본 발명의 목적을 위하여 하기 용어를 다음과 같이 정의한다.

수치와 함께 사용되는 용어 "약(about)"은 명시된 수치 미만의 하한 5% 및 명시된 수치 이상의 상한 5% 범위의 수치를 망라하는 것으로 간주한다.

용어 "및/또는(and/or)"은 둘 이상의 선택지를 연결하기 위해 사용되는 경우 선택지 중 임의의 하나 또는 둘 이상을 가리키는 것으로 이해해야 한다.

본 명세서에서 사용되는 용어 "포함한다(comprise/comprising)"는 기술한 요소, 정수(integer) 또는 단계를 포함하되, 그 외의 요소, 정수 또는 단계를 배제하지는 않음을 의도한다. 본 명세서에서 사용되는 용어 "포함한다(comprise/comprising)"는, 별도로 표시하지 않는 한 기술한 요소, 정수 또는 단계로 완전히 구성되는 상황 또한 망라한다. 예를 들어, 특정 서열를 "포함하는" 항체 가변 영역이라고 언급할 경우, 특정 서열로 구성된 항체 가변 영역도 망라하는 것으로 의도된다.

본 명세서에서 사용되는 용어 "항체"는 항원을 특이적으로 인식하고 이에 결합하는 면역글로불린의 경쇄 및 중쇄 가변 영역을 포함하는 폴리펩티드를 가리킨다. 바람직하게는, 본 명세서에 개시된 항체는 2개의 중쇄 및 2개의 경쇄로 이루어진 전장 항체이며, 각각의 중쇄는 중쇄 가변 영역(본 명세서에서 VH로 약칭) 및 중쇄 불변(constant) 영역으로 이루어지고, 각각의 경쇄는 경쇄 가변 영역(본 명세서에서 VL로 약칭) 및 경쇄 불변 영역으로 이루어진다. 일부 실시양태에서, 본 명세서에 개시된 항체는 항체의 항원 결합 단편으로도 가리킬 수 있다.

용어 "항체 제제"는 활성 성분으로서 항체의 생물학적 활성이 효과적으로 발휘되는 것을 허용하는 형태로 존재하는 제제를 가리키며, 제제를 투여하는 대상체에 허용할 수 없는 독성을 가지는 그 외 성분을 함유하지 않는다. 이러한 항체 제제는 일반적으로 멸균 상태이다. 일반적으로, 항체 제제는 약제학적으로 허용 가능한 부형제를 포함한다. "약제학적으로 허용 가능한" 부형제는 제제에 사용되는 활성 성분의 유효량을 대상체에 전달할 수 있도록 포유동물 대상체에 합리적으로 투여할 수 있는 제제이다. 부형제의 농도는 투여 방식에 맞게 조정하며, 예를 들어, 주사에 허용 가능한 농도일 수 있다.

본 명세서에서 "본 명세서에 개시된 항체 제제"라고도 지칭되는 용어 "항-LAG-3 항체 제제"는 활성 성분으로서 항-LAG-3 항체 및 약제학적으로 허용 가능한 부형제를 포함하는 제제를 가리킨다. 항-LAG-3 항체가 약제학적으로 허용 가능한 부형제와 조합된 후, 활성 성분으로서의 항-LAG-3 항체는 인간 또는 비인간 동물에 대한 치료 또는 예방을 목적으로 투여하는 데 적합하다. 본 명세서에 개시된 항체 제제는, 예를 들어, 즉시 사용 가능한 사전 충전형 주사기에 들어 있는 수성 액체 제제로, 또는 사용 직전에 생리학적으로 허용 가능한 용액에서 용해 및/또는 현탁하여 재구성(즉, 재용해)되는 동결 건조 제제로 제조될 수 있다. 일부 실시양태에서, 항-LAG-3 항체 제제는 액체 제제의 형태이다.

"안정적인" 항체 제제는 항체가 특정 조건 하에서 저장했을 때 항체가 물리적 및/또는 화학적 안정성을 허용 가능한 수준으로 유지되는 제제를 말한다. 항체 제제의 항체는 특정 기간 동안 저장했을 때 이의 화학적 구조를 100% 유지하지 못할 수 있지만, 항체가 특정 기간 동안 저장 후 전형적으로 약 90%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98% 또는 약 99%의 구조 또는 기능을 유지한다면, 상기 항체 제제는 "안정적"인 것으로 간주될 수 있다. 일부 특정 실시양태에서, 항체 응집, 분해, 또는 화학적 변형은 제조, 제형화, 운송, 및 장기 저장 후에도 본 명세서에 개시된 항-LAG-3 항체 제제에서는 거의 검출되지 않아, 결과적으로 항-LAG-3 항체의 생물학적 활성이 거의, 또는 전혀 손실되지 않고, 높은 안정성을 나타낸다. 일부 실시양태에서, 본 명세서에 개시된 항-LAG-3 항체 제제는 저장 후에도 물리적 및 화학적 안정성을 대체적으로 유지한다. 바람직하게는, 본 명세서에 개시된 액체 제제는 실온에서 또는 40°C에서 적어도 1개월 동안, 및/또는 2°C~8°C에서 적어도 24개월 동안 안정성을 유지할 수 있다.

단백질의 안정성을 확인하기 위한 각종 분석 기술은 당업계에서 공지되어 있다(예를 들어, 문헌 [Peptide and Protein Drug Delivery, 247- 301, Vincent Lee Ed., Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., Pubs (1991)] 및 문헌 [Jones, A. Adv. Drug Delivery Rev. 10: 29-90 (1993)] 참조). 안정성은 선택한 온도에서 선택한 저장 시간 동안 확인될 수 있다. 예를 들어, 저장 시간은 제제의 예상 유효기한에 기반하여 선택될 수 있다. 대안적으로, 가속 안정성 시험이 채택될 수 있다. 일부 실시양태에서, 항체 제제에 대한 다양한 스트레스 시험을 실시함으로써 안정성 시험이 수행된다. 이러한 시험은 제제화된 항체 제제가 제조, 저장 또는 운송 중 발생할 수 있는 극한 조건을 나타낼 수 있으며, 또한 비제조, 저장 또는 운송 중 항체 제제에서 항체의 불안정성을 가속화시킬 수 있는 조건을 나타낼 수도 있다. 예를 들어, 제형화된 항-LAG-3 항체 제제는 항체의 진탕/전단 안정성을 검사하기 위해 진탕 스트레스에 적합한 용적의 유리 바이알에 채워 넣을 수 있으며; 대안적으로, 제형화된 항-LAG-3 항체 제제는 고온 스트레스 하에서 항체의 안정성을 검사하기 위해 유리 바이알에 채워 넣을 수 있다.

제제가 응집, 침전, 탁도 및/또는 변성을 나타내지 않거나 일정 기간 동안 저장한 후에 응집, 침전, 탁도 및/또는 변성의 수준이 매우 낮으면, 항체가 제제에서 "그의 물리적 안정성을 유지"하는 것으로 간주될 수 있다. 제제 내 항체의 응집으로 인해 발생하는 안정성 문제는 잠재적으로 환자의 면역 반응 증가로 이어질 수 있다. 따라서, 제제 내 항체의 응집을 최소화하거나 방지해야 한다. 광 산란법을 사용하여 제제 내의 가시적인 응집체를 확인할 수 있다. SEC를 사용하여 제제 내의 가용성 응집체를 확인할 수 있다. 또한, 제제의 안정성은 제제의 성상, 색상 및/또는 투명도를 육안으로 검사하거나, OD_350nm 방법으로 제제의 탁도를 검출하거나, 또는 비환원 CE-SDS 방법으로 제제의 순도를 확인하여 표시될 수 있다. 한 실시양태에서, 제제의 안정성은 특정 기간 동안 특정 온도에서 저장한 후 제제 중 항체 단량체의 백분율을 확인함으로써 측정되며, 제제 중 항체 단량체의 백분율이 높을수록 제제의 안정성도 높아지는 것이다.

"허용 가능한 수준"의 물리적 안정성은, 특정 기간 동안 특정 온도에서 저장한 후에 제제에서 항-LAG-3 항체 단량체의 적어도 약 92%가 검출된 것을 나타낼 수 있다. 일부 실시양태에서, 허용 가능한 수준의 물리적 안정성은 적어도 2주, 적어도 28일, 적어도 1개월, 적어도 2개월, 적어도 3개월, 적어도 4개월, 적어도 5개월, 적어도 6개월, 적어도 7개월, 적어도 8개월, 적어도 9개월, 적어도 10개월, 적어도 11개월, 적어도 12개월, 적어도 18개월, 적어도 24개월, 또는 그 이상의 기간 동안 특정 온도에서 저장 후에도 항-LAG-3 단량체의 적어도 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98% 또는 약 99%가 검출된 것으로 나타낸다. 물리적 안정성을 평가할 때, 약제학적 제제를 저장하는 특정 온도는 약 -80°C 내지 약 45°C 범위에 속하는 임의의 온도, 예를 들어 약 -80°C, 약 -30°C, 약 -20°C, 약 0°C, 약 4°C~8°C, 약 5°C, 약 25°C, 약 35°C, 약 37°C, 약 40°C, 약 42°C 또는 약 45°C일 수 있다. 예를 들어, 약제학적 제제를 1개월. 또는 4주일 동안 약 40±2°C에서 저장 후에도 항-LAG-3 항체 단량체의 적어도 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98% 또는 약 99%가 검출되면, 해당 약제학적 제제는 안정적인 것으로 간주한다. 약 25°C에서 2개월 동안 저장 후에도 항-LAG-3 항체 단량체의 적어도 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98% 또는 약 99%가 검출되면, 상기 약제학적 제제는 안정적인 것으로 간주된다. 약 5°C에서 9개월 동안 저장 후에도 항-LAG-3 항체 단량체의 적어도 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98% 또는 약 99%가 검출되면, 상기 약제학적 제제는 안정적인 것으로 간주된다.

제제의 항체가 일정 기간 동안 저장 후에도 유의미한 화학적 변화가 나타나지 않으면 상기 항체는 "그의 화학적 안정성을 유지"하는 것으로 간주될 수 있다. 대부분의 화학적 불안정성은 항체의 공유적 변형 형태(예를 들어, 항체의 전하 변이체) 형성으로 인해 발생한다. 염기성 변이체는 예를 들어 아스파르트산 이성질체화 및 N-말단과 C-말단 변형에 의해 형성될 수 있으며, 산성 변이체는 탈아미드화, 시알릴화 및 당화에 의해 생성될 수 있다. 항체의 화학적 변화 형태를 검출 및/또는 정량화하여 화학적 안정성을 평가할 수 있다. 예를 들어, 제제에서 항체의 전하 변이체는 양이온 교환 크로마토그래피(CEX) 또는 이미지화 모세관 등전점 전기영동(iCIEF)에 의해 검출될 수 있다. 한 실시양태에서, 특정 기간 동안 특정 온도에서 저장한 후 제제 중 항체의 전하 변이체의 백분율 변화를 확인함으로써 제제의 안정성을 측정되며, 여기서 변화율이 작을수록 제제의 안정성도 높아지는 것이다.

"허용 가능한 수준"의 화학적 안정성은 특정 기간 동안 특정 온도에서 저장 후에도 제제에서 전하 변이체(예를 들어, 주성분, 산성 성분, 또는 염기성 성분)의 변화율(%)이 30% 이하, 예를 들어 20% 이하인 것을 나타낼 수 있다. 일부 실시양태에서, 허용 가능한 수준의 화학적 안정성은, 적어도 2주, 적어도 28일, 적어도 1개월, 적어도 2개월, 적어도 3개월, 적어도 4개월, 적어도 5개월, 적어도 6개월, 적어도 7개월, 적어도 8개월, 적어도 9개월, 적어도 10개월, 적어도 11개월, 적어도 12개월, 적어도 18개월, 적어도 24개월, 또는 그 이상의 기간 동안 특정 온도에서 저장 후에도 전하 변이체(산성 성분)의 변화율이 약 25%, 약 20%, 약 15%, 약 10%, 약 5%, 약 4%, 약 3%, 약 2% 또는 약 1% 이하인 것을 나타낼 수 있다. 화학적 안정성을 평가할 때, 약제학적 제제를 저장하는 특정 온도는 약 -80°C 내지 약 45°C 범위에 속하는 임의의 온도, 예를 들어 약 -80°C, 약 -30°C, 약 -20°C, 약 0°C, 약 4°C~8°C, 약 5°C, 약 25°C, 또는 약 45°C일 수 있다. 예를 들어, 5°C에서 24개월 동안 저장 후에도 산성 성분의 전하 변이체 변화율이 약 25%, 약 24%, 약 23%, 약 22%, 약 21%, 약 20%, 약 19%, 약 18%, 약 17%, 약 16%, 약 15%, 약 14%, 약 13%, 약 12%, 약 10%, 약 9%, 약 8%, 약 7%, 약 6%, 약 5%, 약 4%, 약 3%, 약 2%, 약 1%, 약 0.5% 또는 약 0.1% 미만이면, 상기 약제학적 제제는 안정적인 것으로 간주될 수 있다. 25°C에서 2개월 동안 저장 후에도 산성 성분의 전하 변이체 변화율이 약 20%, 약 19%, 약 18%, 약 17%, 약 16%, 약 15%, 약 14%, 약 13%, 약 12%, 약 10%, 약 9%, 약 8%, 약 7%, 약 6%, 약 5%, 약 4%, 약 3%, 약 2%, 약 1%, 약 0.5% 또는 약 0.1% 미만이면, 상기 약제학적 제제는 안정적인 것으로 간주될 수 있다. 40°C에서 1개월 동안 저장 후에도 산성 성분의 전하 변이체 변화율이 약 25%, 약 24%, 약 23%, 약 22%, 약 21%, 약 20%, 약 19%, 약 18%, 약 17%, 약 16%, 약 15%, 약 14%, 약 13%, 약 12%, 약 10%, 약 9%, 약 8%, 약 7%, 약 6%, 약 5%, 약 4%, 약 3%, 약 2%, 약 1%, 약 0.5% 또는 약 0.1% 미만이면, 상기 약제학적 제제는 안정적인 것으로 간주될 수 있다.

용어 "동결 건조 제제"는 액체 제제의 동결 건조 공정에 의해 얻거나 얻기 가능한 조성물을 가리킨다. 바람직하게는, 상기 동결 건조 제제는 수분 함량이 5% 미만, 바람직하게는 3% 미만인 고체 조성물이다.

용어 "재구성 제제"는 생리학적으로 허용 가능한 용액에서 고체 제제(예를 들어, 동결 건조 제제)를 용해 및/또는 현탁하여 얻은 액체 제제를 가리킨다.

본 명세서에서 사용되는 용어 "실온"은 15°C 내지 30°C, 바람직하게는 20°C 내지 27°C, 보다 바람직하게는 25°C의 온도를 가리킨다.

"스트레스 조건"은 화학적 및/또는 물리적으로 항체 단백질에 악영향을 미치고 허용 불가한 수준의 항체 단백질의 불안정화를 초래할 수 있는 환경을 가리킨다. "고온 스트레스"는 항체 제제를 일정 기간 동안 실온 또는 그 이상의 온도(예를 들어, 40±2°C)에서 저장하는 것을 가리킨다. 항체 제제의 안정성은 고온 스트레스 가속 시험에 의해 검사될 수 있다.

본 명세서에서 사용되는 용어 "비경구 투여"는 전형적으로 주사 또는 주입에 의한 장내 및 국소 투여 이외의 투여 방식을 가리키며, 정맥 내, 근육 내, 동맥 내, 척수강 내, 피막 내, 안와 내, 심장 내, 피부 내, 복강 내, 기관 내, 피하, 표피하, 관절 내, 피막하, 지주막하, 척수 내, 경막 외 및 흉골 내의 주사 및 주입을 포함하나 이에 한정되지 않는다. 일부 실시양태에서, 본 명세서에 개시된 안정적인 항-LAG-3 항체 제제는 대상체에 비경구적으로 투여된다. 한 실시양태에서, 본 명세서에 개시된 항-LAG-3 항체 제제는 피하, 피막 내, 근육 내, 또는 정맥 내 주사에 의해 대상체에 투여된다.

I. 항체 제제

본 발명은 (i) 재조합 완전 인간 항-LAG-3 모노클로날 항체, (ii) 완충액, (iii) 안정화제, 및 (iv) 계면활성제를 포함하는 안정적인 액체 항체 제제를 제공하며, 여기서 항체 제제의 pH는 약 5.5~7.5이다. 바람직한 한 실시양태에서, 본 명세서에 개시된 액체 항체 제제는 주사제의 형태이다.

(i) 항-LAG-3 항체

"항-LAG-3 항체"는 항체가 LAG-3 분자를 표적으로 하는 치료제 및/또는 예방제로서 사용될 수 있도록 LAG-3 분자에 높은 친화도로 결합할 수 있는 항체를 가리킨다.

본 명세서에 개시된 항체는 재조합 완전 인간 항체이다. 용어 "완전 인간 항체" 및 "인간 항체"는 본 명세서에서 서로 교환하여 사용할 수 있으며, 프레임워크 및 CDR 영역 모두가 인간 생식계열 면역글로불린 서열로부터 유래된 가변 영역을 포함하는 항체를 지칭하고, 항체가 불변 영역을 포함하는 경우, 이 불변 영역도 인간 생식계열 면역글로불린 서열로부터 유래된다. 본 명세서에 개시된 인간 항체는 인간 생식계열 면역글로불린 서열로 암호화되지 않는 아미노산(예를 들어, 시험관내 무작위 또는 부위 유도성 돌연변이 유발 또는 생체 내 체세포 돌연변이에 의해 도입된 돌연변이)을 포함할 수 있다. 그러나, 본 명세서에서 사용되는 용어 "인간 항체" 그 외 포유동물 종(예를 들어, 마우스)의 생식계열로부터 유래된 CDR 서열이 인간 프레임워크 서열에 이식된 항체를 포함하는 것으로 의도되지 않는다. 본 명세서에서 사용되는 용어 "재조합 인간 항체"는 재조합 수단에 의해 제조, 발현, 생산 또는 단리된 모든 인간 항체를 포함한다. 이들 재조합 인간 항체는 프레임워크 영역 및 CDR 영역 모두 인간 생식 세포계 면역글로불린 서열로부터 유래된 가변 영역을 가진다. 그러나 특정 실시양태에서, 재조합 인간 항체는 시험관 내 돌연변이 유발(또는 인간 Ig 서열을 사용하는 형질전환 동물의 경우 생체 네 체세포 돌연변이 유발)에 적용할 수 있으며, 생성된 재조합 항체의 VH 및 VL 영역의 아미노산 서열은 인간 생식계열 VH 및 VH 서열로부터 유래되고 그와 관련이 있되 인간 항체 생식계열 레퍼토리에서 자연적으로 발생하지는 않는다.

일부 실시양태에서, 항-LAG-3 항체는 고친화도, 예를 들어, 생물학적 광학 간섭법에 의해 측정했을 때 10^-7M 미만, 바람직하게는 10^-9M 내지 10^-10M의 K_D로 인간 LAG-3에 특이적으로 결합할 수 있으므로, 그의 리간드에 대한 LAG-3 결합의 효율적인 차단을 매개한다.

일부 실시양태에서, 본 명세서에 개시된 LAG-3 항체는 서열 번호 7의 중쇄 가변 영역(VH) 또는 그에 대해 적어도 90%의 동일성을 가지는 VH, 및 서열 번호 8의 경쇄 가변 영역(VL) 또는 그에 대해 적어도 90%의 동일성을 가지는 VL을 포함한다. "가변 영역" 또는 "가변 도메인"은 항체의 항원에 대한 항체의 결합과 관련되는 항체의 중쇄 또는 경쇄의 도메인이다. 일반적으로, 중쇄 가변 영역(VH) 및 경쇄 가변 영역(VL)은 더 보존적인 영역(즉, 프레임워크 영역(FR))이 그 사이에 삽입된 초가변 영역(HVR, 상보성 결정 영역(CDR)으로도 알려짐)으로 더 세분화할 수 있다. 각 VH 및 VL은 3개의 CDR 및 4개의 FR로 구성되며, 아미노-말단에서부터 카르복실-말단을 향해 FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3 및 FR4의 순서대로 배열된다.

일부 실시양태에서, 본 명세서에 개시된 항-LAG-3 항체는 서열 번호 7의 중쇄 가변 영역의 VH CDR1, VH CDR2 및 VH CDR3 서열과, 서열 번호 8의 경쇄 가변 영역의 VL CDR1, VL CDR2 및 VL CDR3 서열을 포함한다. "상보성 결정 영역", "CDR 영역" 또는 "CDR"(본 명세서에서는 초가변 영역(HVR)과 서로 교환해서 사용 가능)은 항원의 에피토프에 대한 결합을 주로 담당하는 항체의 가변 영역 내 아미노산 영역이다. 중쇄 및 경쇄의 CDR은 일반적으로 CDR1, CDR2, CDR3으로 지칭하고, N-말단으로부터 순차적으로 번호를 매긴다. 항체 중쇄의 가변 도메인에 위치한 CDR은 VH CDR1, VH CDR2 및 VH CDR3으로 지칭하고, 항체 경쇄의 가변 도메인에 위치한 CDR은 VL CDR1, VL CDR2 및 VL CDR3으로 지칭한다. 주어진 VH 또는 VL 아미노산 서열의 CDR 서열을 결정하기 위한 각종 방법은 당업계에서 이미 공지되어 있다. 예를 들어, Kabat 상보성 결정 영역(CDR)은 서열 가변성에 기반하여 결정하며, 가장 널리 사용되는 방식이다(Kabat 등, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)). Chothia 방법은 구조적 루프의 위치에 기반한다(Chothia 및 Lesk, J. mol. biol. 196:901- 917 (1987)). AbM HVR은 Kabat HVR과 Chothia 구조적 루프를 절충한 방법으로서, Oxford Molecular's AbM 항체 모델링 소프트웨어에 의해 사용된다. "접촉" HVR은 이용가능한 복합 결정 구조의 분석에 기반한다. 아울러 HVR은 참조 CDR 서열(예를 들어, 본 명세서에 개시된 예시적인 CDR)과 동일한 Kabat 넘버링 위치를 기반으로 결정될 수 있다. 한 실시양태에서, 본 명세서에 개시된 항-LAG-3 항체는 서열 번호 1의 VH CDR1, 서열 번호 2의 VH CDR2, 서열 번호 3의 VH CDR3, 서열 번호 4의 VL CDR1, 서열 번호 5의 VL CDR2 및 서열 번호 6의 VL CDR3을 포함한다.

일부 실시양태에서, 본 명세서에 개시된 항-LAG-3 항체는 서열 번호 7과 적어도 90%, 95% , 98% 또는 99% 또는 그 이상의 동일성을 가지는 중쇄 가변 영역(VH) 및/또는 서열 번호 8과 적어도 90%, 95%, 98% 또는 99% 또는 그 이상의 동일성을 가지는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함할 수 있다. 본 명세서에서 사용되는 용어"서열 동일성은 서열이 비교 창(comparison window)에서 뉴클레오티드 단위 또는 아미노산 단위 기준으로 동일한 수준"을 가리킨다. "서열 동일성(%)"은, 비교 창에서 최적으로 정렬된 서열 2개를 비교하는 단계; 핵산 염기(예를 들어, A, T, C, G 및 I) 또는 아미노산 잔기(예를 들어, Ala, Pro, Ser, Thr, Gly, Val, Leu, Ile, Phe, Tyr, Trp, Lys, Arg, His, Asp, Glu, Asn, Gln, Cys 및 Met)가 2개의 서열에서 동일한 위치의 수를 확인하여 매칭된 위치의 수를 제공하는 단계; 매칭된 위치의 수를 비교 창 내 위치의 총 수(즉 창 크기)로 나누는 단계; 및 그 결과를 100으로 곱하여 확대시키는 단계;를 통해 산출될 수 있다. 서열 동일성을 확인하기 위한 최적의 정렬은 당업계에 공지되어 있는 각종 방식으로, 예를 들어, BLAST, BLAST-2, ALIGN, 또는 Megalign(DNASTAR) 소프트웨어와 같은 공개적으로 이용 가능한 컴퓨터 소프트웨어를 사용하여 달성될 수 있다. 당업자는, 비교 대상인 전장 서열 범위 또는 표적 서열 영역 내에서 최적의 정렬을 실현하는 데 필요한 임의의 알고리즘을 포함하여, 서열 정렬에 적합한 파라미터를 결정할 수 있다.

일부 실시양태에서, 본 명세서에 개시된 항체의 VH 서열은 서열 번호 7과 비교하여 상이한 잔기가 10개 이하, 바람직하게는 5개, 4개 또는 3개 이하이며, 여기서 바람직하게는 상기 상이한 잔기는 보존적 아미노산 치환이다. 일부 실시양태에서, 본 명세서에 개시된 항체의 VL 서열은 서열 번호 8와 비교하여 상이한 잔기가 10개 이하, 바람직하게는 5, 4 또는 3개 이하이며, 여기서 바람직하게는 상기 상이한 잔기는 보존적 아미노산 치환이다. "보존적 치환"은 아미노산을 화학적으로 유사한 아미노산으로 대체하는 아미노산 변경을 가리킨다. 기능적으로 유사한 아미노산을 제공하는 보존적 치환표는 당업계에서 공지되어 있다. 본 명세서에 개시된 임의의 실시양태에서, 바람직한 한 측면에 따르면, 보존적 치환 잔기는 하기 보존적 치환표 A, 바람직하게는 표 A에 제시된 바람직한 치환 잔기로부터 온 것이다.

표 A

일부 실시양태에서, 본 명세서에 개시된 항체는 IgG4 형태의 항체이다. "IgG 형태의 항체"는 IgG 형태에 속하는 항체의 중쇄 불변 영역을 가리킨다. 동일한 유형의 항체의 중쇄 불변 영역은 동일하고, 상이한 유형의 항체의 중쇄 불변 영역은 상이하다. 예를 들어, IgG4 형태의 항체는 IgG4의 Ig 도메인인 중쇄 불변 영역의 Ig 도메인을 가리킨다.바람직한 한 실시양태에서, 본 명세서에 개시된 항-LAG-3 항체는 중국특허출원 제CN201811561512.X호(2018년 12월 19일 출원)에 개시된, 서열 번호 9의 중쇄 서열과 서열 번호 10의 경쇄 서열을 포함하는 항-LAG-3 모노클로날 항체 ADI-31853이다. 한 실시양태에서, 항-LAG-3 항체는 293 세포 또는 CHO 세포에서 재조합적 발현에 의해 생성된 정제화된 IgG4 항체이다. 바람직하게는, 본 명세서에 개시된 액체 제제의 항체는 유의미한 항종양 활성을 나타낸다. 예를 들어, 마우스 결장암 세포 CT26(ATCC# CRL-2638) 또는 인간 피부암 세포 A375(ATCC# CRL-1619)를 보유하는 마우스 종양 모델에서, 본 명세서에 개시된 항체 제제를 투여하면 약 50% 이상, 예를 들어 100%의 종양 성장 억제, 및/또는 최대 60% 이상의 종양 퇴행율을 야기할 수 있다.본 명세서에 개시된 항체 제제의 항체 또는 그 항원 결합 단편의 양은 제제의 특정한 필요한 특성, 특정 환경 및 제제를 사용하는 특정 목적에 따라 달라질 수 있다. 일부 실시양태에서, 항체 제제는 액체 제제이며, 약 1~100mg/mL, 바람직하게는 약 5~50mg/mL, 예를 들어 약 5mg/mL, 약 10mg/mL, 약 15mg/mL, 약 20mg/mL, 약 25mg/mL, 약 30mg/mL, 약 35mg/mL, 약 40mg/mL, 약 45mg/mL 또는 약 50mg/mL의 항-LAG-3 항체를 포함할 수 있다.

(ii) 완충액

완충액은 허용 가능한 범위 내에서 용액의 pH를 제어할 수 있는 시약이다. 일부 실시양태에서, 본 명세서에 개시된 제제의 완충액은 본 명세서에 개시된 제제의 pH를 약 5.5~7.5, 예를 들어 약 6.0~7.0, 바람직하게는 6.0±0.3으로 제어할 수 있다. 특정 한 실시양태에서, 본 명세서에 개시된 항체 제제의 pH는 약 5.5, 약 6.0, 약 6.5, 약 7.0 또는 약 7.5, 바람직하게는 약 6.0이다.

일부 실시양태에서, 본 명세서에 개시된 제제의 완충액은 시트르산염, 시트르산염 용매화물(예를 들어, 시트르산염 수화물), 및 이들의 조합으로부터 선택되며, 예를 들어 시트르산나트륨, 시트르산나트륨 이수화물 및 이들의 조합; 바람직하게는 완충액의 농도가 약 1~10mg/mL, 바람직하게는 약 4~8mg/mL이며, 예를 들어 약 4mg/mL, 약 4.5mg/mL, 약 5mg/mL, 약 5.5mg/mL, 약 6mg/mL, 약 6.5mg/mL, 약 7mg/mL, 약 7.5mg/mL 또는 약 8mg/mL이다.

일부 실시양태에서, 본 명세서에 개시된 제제의 완충액은 약 1~10mg/mL의 시트르산나트륨 또는 시트르산나트륨 이수화물, 예를 들어 약 2~8mg/mL의 시트르산나트륨 또는 시트르산나트륨 이수화물이다.

(iii) 안정화제

본 발명에 사용하기에 적합한 안정화제는 당류, 폴리올 및 아미노산, 및 이들의 조합으로부터 선택할 수 있다. 안정화제로 사용되는 당류에는 수크로스 및 트레할로스가 포함되나 이에 한정되지는 않는다. 안정화제로 사용되는 폴리올에는 소르비톨이 포함되나 이에 한정되지는 않는다. 안정화제로 사용되는 아미노산에는 아르기닌 및 아르기닌 염산염이 포함되나 이에 한정되지는 않는다. 일부 실시양태에서, 안정화제는 본 명세서에 개시된 액체 제제에 약 10~150mg/mL, 바람직하게는 약 15~100mg/mL, 예를 들어, 약 15mg/mL, 약 20mg/mL, 약 30mg/mL, 약 40mg/mL, 약 50mg/mL, 약 60mg/mL, 약 70mg/mL, 약 80mg/mL, 약 90mg/mL 또는 약 100mg/mL의 양으로 나타난다.

한 실시양태에서, 본 명세서에 개시된 액체 제제는 안정화제로서 수크로스를 포함한다. 본 명세서에 개시된 액체 제제에서 수크로스의 양은 약 20~100mg/mL, 바람직하게는 40~90mg/mL(예를 들어, 40mg/mL, 50mg/mL, 60mg/mL, 70mg/mL, 80mg/mL 또는 90mg/mL)일 수 있다.

한 실시양태에서, 본 명세서에 개시된 액체 제제는 안정화제로서의 아르기닌 및/또는 아르기닌 염산염을 포함한다. 본 명세서에 개시된 액체 제제에서 아르기닌 및/또는 아르기닌 염산염의 양은 약 10~40mg/mL, 바람직하게는 15~25mg/mL(예를 들어, 약 15mg/mL, 약 16mg/mL, 약 17mg/mL, 약 18mg/mL, 약 19mg/mL, 약 20mg/mL, 약 21mg/mL, 약 22mg/mL, 약 23mg/mL, 약 24mg/mL 또는 약 25mg/mL)일 수 있다.

한 실시양태에서, 본 명세서에 개시된 액체 제제는 안정화제로서의 수크로스, 아르기닌 및/또는 아르기닌 염산염의 조합을 포함한다. 아러한 조합에서, 수크로스는 약 20~100mg/mL, 바람직하게는 약 40~90mg/mL(예를 들어, 약 40mg/mL, 약 50mg/mL, 약 60mg/mL, 약 70mg/mL, 약 80mg/mL 또는 약 90mg/mL)의 양으로 나타날 수 있다. 이러한 조합에서, 아르기닌 및/또는 아르기닌 염산염은 약 10~40mg/mL, 바람직하게는 약 15~25mg/mL(예를 들어, 약 15mg/mL, 약 16mg/mL, 약 17mg/mL, 약 18mg/mL, 약 19mg/mL, 약 20mg/mL, 약 21mg/mL, 약 22mg/mL, 약 23mg/mL, 약 24mg/mL 또는 약 25mg/mL)의 양으로 나타날 수 있다.

(iv) 계면활성제

본 명세서에서 사용되는 용어 "계면활성제"는 양친매성 구조를 가지는 유기 물질을 가리키며; 즉, 상기 구조는 용해도 경향이 반대인 기, 전형적으로 지용성 탄화수소 사슬 및 수용성 이온성 기로 이루어진다.

한 실시양태에서, 본 명세서에 개시된 액체 제제의 계면활성제는 비이온성 계면활성제, 예를 들어, 알킬 폴리(에틸렌 옥사이드)이다. 본 명세서에 개시된 제제에 포함될 수 있는 특정 비이온성 계면활성제는, 예를 들어 폴리소르베이트, 예를 들어 폴리소르베이트-20, 폴리소르베이트-80, 폴리소르베이트-60 또는 폴리소르베이트-40, 플루로닉 등을 포함한다. 바람직한 한 실시양태에서, 본 명세서에 개시된 액체 제제는 계면활성제로서의 폴리소르베이트-80을 포함한다.

본 명세서에 개시된 항체 제제의 계면활성제의 양은 제제의 특정 제제의 특정한 필요한 특성, 특정 환경 및 제제를 사용하는 특정 목적에 따라 달라질 수 있다. 일부 바람직한 실시양태에서, 상기 제제는 약 0.1~1mg/mL, 바람직하게는 약 0.2~0.8mg/mL이며, 예를 들어 약 0.2mg/mL, 0.3mg/mL, 0.4mg/mL, 0.5mg/mL, 0.6mg/mL, 0.7mg/mL 또는 0.8mg/mL의 폴리소르베이트 계면활성제(예를 들어, 폴리소르베이트-80)를 포함할 수 있다.

(v) 기타 부형제

본 명세서에 개시된 액체 항체 제제는 기타 부형제를 포함하고 또는 포함하지 않을 수 있다.

일부 실시양태에서, 본 명세서에 개시된 액체 항체 제제는 에데테이트(예를 들어, 에데트산이나트륨) 및/또는 메티오닌을 포함하고 또는 포함하지 않을 수 있다.

한 실시양태에서, 본 명세서에 개시된 액체 항체 제제는 에데테이트(예를 들어, 에데트산이나트륨)을 포함하고 또는 포함하지 않을 수 있다.

한 실시양태에서, 본 명세서에 개시된 액체 항체 제제는 메티오닌을 포함하고 또는 포함하지 않을 수 있다.

한 실시양태에서, 본 명세서에 개시된 액체 항체 제제는 에데테이트(예를 들어, 에데트산이나트륨) 및/또는 메티오닌을 포함하지 않지만, 에데테이트(예를 들어, 에데트산이나트륨) 및/또는 메티오닌을 첨가한 상응 제제에 비해 유사한 안정성을 가진다.

그 밖의 사항을 고려하여 기타 부형제를 본 명세서에 개시된 제제에 사용할 수 있다. 이러한 부형제에는, 예를 들어 향미제, 항균제, 감미료, 대전방지제, 항산화제, 젤라틴 등이 포함된다. 본 명세서에 개시된 제제에 사용하기에 적합한 전문에 기술하거나 기타 이미 잘 알려진 제약 부형제 및/또는 첨가제로는 당업계에 공지되어 있는 것이며, 예를 들어, The Handbook of Pharmaceutical Excipients, 제4판, Rowe 등 편집, American Pharmaceuticals Association (2003); 및 Remington: the Science and Practice of Pharmacy, 제21판, Gennaro 편집, Lippincott Williams & Wilkins (2005)에 열거된 바와 같다.

II. 제제의 제조

본 발명은 항체를 포함하는 안정적인 제제를 제공한다. 본 명세서에 개시된 제제에 사용된 항체는 항체 생산에 대해 당업계에 공지되어 있는 기술을 사용하여 제조할 수 있다. 예를 들어, 항체는 재조합적으로 제조될 수 있다. 바람직한 실시양태에서, 본 명세서에 개시된 항체는 293 세포 또는 CHO 세포에서 재조합적으로 제조된다.

약물의 활성 성분으로서 항체를 사용하는 것은 이제 매우 보편적인 방식이다. 약제학적 등급으로 치료 항체를 정제하는 기술 또한 당업계에서 공지되어 있는 사실이다. 예를 들어, Tugcu 등(문헌[Maximizing productivity of chromatography steps for purification of monoclonal antibodies, Biotechnology and Bioengineering 99 (2008) 599- 613)]은 단백질 A를 포획한 후에 이온 교환 크로마토그래피(음이온 IEX 및/또는 양이온 CEX 크로마토그래피)가 사용되는 모노클로날 항체 3 컬럼 정제법을 기재한다. Kelley 등(문헌[Weak partitioning chromatography for anion exchange purification of monoclonal antibodies, Biotechnology and Bioengineering 101 (2008) 553- 566)]은 단백질 A 친화 크로마토그래피 후에 약한 분배 음이온 교환 수지를 사용하는 2 컬럼 정제법을 기재한다.

일반적으로, 재조합으로 생성한 모노클로날 항체를 통상적인 정제 방법을 사용해 정제하여 항체 제제를 제제화할 수 있도록 충분한 재현성과 적당한 순도를 가지는 약물을 제공한다. 예를 들어, 항체가 재조합 발현 세포로부터 배양 배지로 분비된 후, 발현 시스템의 상청액은 시판 단백질 농축 필터(예를 들어, Amicon 한외여과 장치)를 사용하여 농축될 수 있다. 이어서, 크로마토그래피, 투석 및 친화성 정제와 같은 방법으로 항체를 정제할 수 있다. 단백질 A는 IgG1, IgG2 및 IgG4 항체의 정제를 위한 친화성 리간드로서 적합하다. 이온 교환 크로마토그래피와 같은 기타 항체 정제법도 사용할 수 있다. 충분한 순도의 항체를 얻은 후, 항체를 포함하는 제제가 당업계에 공지된 방법에 따라 제조될 수 있다.

예를 들어, 제조는 하기 단계에 의해 수행될 수 있다: (1) 발효 후 발효액을 원심분리하고 정제하여 세포와 같은 불순물을 제거함으로써 상청액을 얻는 단계; (2) 친화성 크로마토그래피(예를 들어, IgG1, IgG2 및 IgG4 항체에 대한 특이적 친화성을 가지는 단백질 A 컬럼)를 사용하여 항체를 포획하는 단계; (3) 바이러스를 비활성화하는 단계; (4) 단백질의 불순물을 제거하기 위해 정제하는(일반적으로 CEX 양이온 교환 크로마토그래피를 채택함) 단계; (5) (예를 들어 4 log10 이상만큼 바이러스 역가를 감소시키기 위해) 바이러스를 여과하는 단계; 및 (6) 한외여과/정용여과를 수행하는 단계(단백질이 안정성을 촉진하고 주사에 적합한 농도로 농축하기에 유리한 제제 완충액으로 전환하도록 하는 데 사용할 수 있음). 예를 들어, 문헌[B. Minow, P. Rogge, K. Thompson, BioProcess International, Vol. 10, No. 6, 2012, pp. 48-57]을 참조한다.

III. 제제의 분석 방법

항체 제제를 저장하는 동안 항체가 응집, 분해 또는 화학적 변형되어 항체 이질성(크기 이질성 및 전하 이질성 포함), 응집체 및 단편 등을 야기할 수 있으며, 이는 항체 제제의 품질에 영향을 미칠 수 있다. 따라서, 항체 제제의 안정성을 모니터링할 필요가 있다.

항체 제제의 안정성을 검사하기 위한 각종 방법이 당업계에 공지되어 있다. 예를 들어, 항체 제제의 순도를 분석할 수 있으며, 항체의 응집 정도를 비환원 CE-SDS 및 SEC-HPLC와 같은 방법에 의해 평가할 수 있고, 항체 제제의 전하 변이체를 모세관 등전점 전기영동(cIEF), 이미지화 모세관 등전점 전기영동(iCIEF), 이온 교환 크로마토그래피(IEX) 등에 의해 분석할 수 있다. 또한, 제제의 성상을 육안으로 검사함으로써 제제의 안정성을 빠르게 확인할 수 있다. 제제의 탁도 변화는 가용성 및 불용성 응집체의 양에 대한 정보를 제공하는 OD_350nm 방법으로도 검출할 수 있다. 또한, 제제 내 단백질 함량의 변화는 자외선 분광광도법(UV 방법)으로 검출할 수 있다.

비환원 CE-SDS법은 모세관을 분리 채널로 사용하여 모노클로날 항체의 순도를 확인하는 방법이다. CE-SDS에서, 단백질 이동은 단백질의 분자량에 비례하는 SDS 결합으로 인한 표면 전하에 의해 유도된다. 모든 SDS-단백질 복합체는 유사한 질량 대 전하 비율을 가지므로 분자의 크기 또는 유체역학적 반경에 기반한 전기영동 분리가 모세관의 분자체(molecular sieve) 겔 매트릭스에서 이루어질 수 있다. 이러한 방법은 변성된 무손상 항체의 순도를 모니터링하는 데 널리 사용되고 있다. 일반적으로, 비환원 CE-SDS에서는 시험 샘플은 SDS 샘플 완충액 및 요오도아세트아미드와 혼합된다. 이어서 혼합물을 68°C~72°C에서 약 10~15분 동안 인큐베이션하고 실온으로 냉각한 다음, 분석을 위해 상청액을 원심분리할 수 있다. 단백질 이동은 자외선 검출기를 사용하여 검출됨으로써 전기영동 패턴을 얻는다. 항체 제제의 순도는 모든 피크 면적의 합에 대한 IgG 주요 피크 면적의 백분율로 산출될 수 있다. CE-SDS에 대한 추가 설명은, 예를 들어 문헌[Richard R. 등 Application of CE SDS gel in development of biopharmaceutical antibody-based products, Electrophoresis, 2008, 29, 3612-3620]을 참조한다.

크기 배제 고성능 액체 크로마토그래피(SEC-HPLC법)는 모노클로날 항체의 표준화 및 품질 관리를 위한 또 다른 중요한 방법이다. 이 방법은 주로 분자의 크기 또는 유체역학적 반경의 차이에 기반하여 분자를 분리시킨다. 항체는 SEC-HPLC에 의해 고분자량 종(HMMS), 주요 피크(주로 항체 단량체) 및 저분자량 종(LMMS)의 세 가지 주요 형태로 분리될 수 있다. 항체의 순도는 크로마토그램의 모든 피크 면적의 합에 대한 주요 피크 면적의 백분율로 산출될 수 있다. 제제 중 항체 단량체의 백분율은 가용성 응집체 및 스플라이스의 함량에 대한 정보를 제공하는 SEC-HPLC에 의해 측정할 수 있다. SEC-HPLC에 대한 추가 설명은 문헌[J. Pharm. Scien., 83:1645-1650, (1994); Pharm. Res., 11:485 (1994); J. Pharm. Bio. Anal., 15:1928 (1997); J. Pharm. Bio. Anal., 14:1133-1140 (1986)]을 참조한다. 또한, 예를 들어 문헌[R. Yang 등 High resolution separation of recombinant monoclonal antibodies by size exclusion ultra-high performance liquid chromatography (SE-UHPLC), Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis (2015)], http://dx.doi.org/10.1016/j.jpba.2015.02.032 및 문헌[Alexandre Goyon 등 Protocols for the analytical characterization of therapeutic monoclonal antibodies, I-Non-denaturing chromatographic techniques, Journal of Chromatography], http://dx.doi.org/10.1016/j.jchromb.2017.05.010을 참조한다.

이미지화 모세관 등전점 전기영동(iCIEF)을 사용하여 모노클로날 항체의 전하 이질성을 분석할 수 있다. 상기 방법으로 전하 변이체의 정량적 분포를 제공할 수 있다. iCIEF는 pH 구배(겉보기 pI값)의 전하 차이에 기반하여 분자를 분리한다. iCIEF에서 분리 컬럼은 전형적으로 짧은 모세관(예를 들어, 실리카 모세관, 길이 5cm, 내경 100μm)이며, 단백질은 고전압 하의 모세관 컬럼에 집속하고, 초점은 280nM에서 작동하는 전체 컬럼 이미징 검출 시스템에 의해 실시간 온라인으로 모니터링된다. 상기 기술의 한 장점은 항체 샘플의 각종 전하 변이체를 전체 컬럼 검출 시스템에 의해 동시에 기록할 수 있다는 것이다. 일반적으로 iCIEF에서, 샘플은 요소 및 메틸셀룰로오스, pI 분자 표준물질(pI molecular weight standard) 및 양쪽성 전해질을 함유하는 iCIEF 완충액과 혼합된다. 이어서 샘플을 일정 시간 집속한 후, iCIEF 분석기(예컨대, iCE280 분석기(단백질 샘플, Santa Clara, CA.))의 iCIEF 컬럼(예컨대 ProtionSimple에서 소재의 iCIEF 컬럼)을 사용하여 280nm에서의 흡광도를 측정함으로써 집속한 mAb 전하 변이체의 스펙트럼을 얻을 수 있다. iCEIF 스펙트럼에서, 주요 피크(즉, 주성분) 이전에 용리된 단백질 관련 피크는 산성 성분으로 분류되고, 주요 피크 이후에 용리된 단백질 관련 피크는 염기성 성분으로 분류된다. 주성분, 산성 성분 및 염기성 성분의 상대량은 전체 피크 면적에 대한 백분율로 나타낼 수 있다. iCIEF에 대한 추가의 설명은 문헌[Salas-Solano O 등 Robustness of iCIEF methodology for the analysis of monoclonal antibodies: an interlaboratory study, J Sep Sci. 2012 Nov; 35(22):3124- 9. doi: 10.1002/jssc.201200633. Epub 2012 Oct 15] 및 [Dada OO 등 Characterization of acidic and basic variants of IgG1 therapeutic monoclonal antibodies based on non-denaturing IEF fractionation, Electrophoresis. 2015 Nov; 36(21- 22):2695- 2702. doi: 10.1002/elps.201500219. Epub 2015 Sep 18 문헌]을 참조한다.

항체 제제 중 항체의 전하 변이체는 양이온 교환 고성능 액체 크로마토그래피(CEX-HPLC)에 의해 확인할 수도 있다. 상기 방법에서, CEX-HPLC 컬럼에서 메인 피크의 체류 시간보다 먼저 용리된 피크를 "산성 피크"로, 메인 피크의 체류 시간보다 늦게 CEX-HPLC 컬럼에서 용리된 피크는 "염기성 피크"로 표시한다.

가속 안정성 연구를 사용하여 제품의 안정성을 확인할 수 있으며, 이는 안정적인 약제학적 제제의 스크리닝을 용이하게 한다. 예를 들어, 가속 안정성 연구를 위해 제제 샘플을 제고된 온도(예를 들어, 약 40±2°C 또는 25±2°C)에 배치할 수 있다. 시험 지표에는 성상, 가시적 입자, 단백질 함량, 탁도, 순도(SEC-HPLC, 비환원 CE-SDS) 및 전하 변이체(iCIEF)가 포함될 수 있다.

제제의 진탕/전단 안정성을 조사하기 위해 진탕 시험을 수행할 수 있다. 예를 들어, 제제 샘플을 바이알에 분취하여 마개를 닫고 캡을 씌운 다음, 진탕 시험(예를 들어, 3일~5일 동안 650r/min의 속도로 진탕)을 설정하여, 제제의 성상, 단백질 함량, 탁도 및 순도를 확인한다.

또한, 항체의 효능 또는 생물학적 활성을 검출할 수 있다. 예를 들어, 제제에서의 항체의 항원에 결합하는 능력을 검사할 수 있다. 항원에 대한 항체의 특이적 결합을 정량화하기 위한 면역분석 검정과 같은 각종 방법, 예를 들어 ELISA가 당업자에게 공지되어 있다.

본 명세서에 개시된 항-LAG-3 항체 제제는 안정적이다. 한 실시양태에서, 본 명세서에 개시된 항체 제제에서 항-LAG-3 항체의 순도는 크기 배제 크로마토그래피 또는 비환원 CE-SDS에 의해 측정했을 때, 약 25°C, 약 37°C, 약 40°C 또는 약 45°C에서 적어도 1개월 또는 2개월 동안, 예를 들어, 40±2°C에서 1개월 동안 저장 후에도 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상이다. 한 실시양태에서, 본 명세서에 개시된 항체 제제에서 항ALG-3 항체의 적어도 50%, 바람직하게는 적어도 55%는 이미지화 모세관 포커싱(imaging capillary focusing)에 의해 측정했을 때, 약 25°C, 약 37°C, 약 40°C 또는 약 45°C에서 적어도 1개월 또는 2개월 동안, 예를 들어, 40±2°C에서 1개월 동안 저장 후에도 비염기성 및 비산성 형태(즉 주요 피크 또는 주요 전하 형태)로 존재한다.

IV. 제제의 용도

본 명세서에 개시된 항-LAG-3 항체를 포함하는 항체 제제는 각종 LAG-3 관련 질환 또는 질병을 치료, 개선 또는 예방하는 데 유용하다. 본 명세서에서 사용되는 "LAG -3 관련 질환 또는 장애"는 본 명세서에 개시된 항-LAG-3 항체를 사용하여 치료(예를 들어, 개선) 또는 예방이 가능한 질환 또는 잘병을 가리킨다. 본 명세서에 개시된 항체를 사용하여 치료의 효과를 볼 수 있는 임의의 질환 또는 질병은 본 발명을 적용하기에 적합하다.

한 측면에서, 본 명세서에 개시된 항-LAG-3 항체를 포함하는 제제는 대상체의 면역 반응을 조절하는 것, 특히 대상체의 면역 반응을 회복, 강화, 자극 또는 증가시키는 데 사용할 수 있다. 일부 실시양태에서, 본 명세서에 개시된 항-LAG-3 항체 분자는 대상체에서 항원 특이성 T 세포 반응, 예를 들어 항원 특이성 T 세포 반의 인터류킨-2(IL-2) 또는 인터페론-감마(IFN-감마) 생산을 복원, 강화 또는 자극한다.

다른 측면에서, 본 명세서에 개시된 항-LAG-3 항체를 포함하는 제제는 대상체의 종양, 예컨대 고체 종양, 혈액암(예를 들어, 백혈병, 림프종, 또는 골수종), 그 전이성 병변을 포함하되 이에 한정되지 않는 암을 예방 또는 치료하는 데 사용될 수 있다. 한 실시양태에서, 상기 암은 고체 종양이다. 고체 종양의 예로는, 악성 종양, 예를 들어 각종 기관계에서의 육종 및 암종(예를 들어 폐, 유방, 림프, 소화기관 또는 결장직장, 생식기, 비뇨생식기(예를 들어, 신장 세포 또는 방광 세포), 인두, CNS(예를 들어, 뇌세포, 신경세포 또는 신경교 세포), 피부(예를 들어, 흑색종), 두경부(예를 들어, 두경부 편평 세포 암종(HNCC)), 췌장)의 암종(선암종)으로, 흑색종, 결장암, 위암, 직장암, 신세포 암종, 유방암(예를 들어, 하나 이상의 에스트로겐 수용체를 발현하지 않는 유방암, 프로게스테론 수용체 또는 Her2/neu, 예를 들어 삼중 음성 유방암), 간암, 폐암(예를 들어, 비소세포폐암(NSCLC), 예를 들어 편평 및/또는 비편평 조직을 가지는는 NSCLC, 또는 소세포 간암), 전립선암, 두경부암(예를 들어, HPV+ 편평세포암), 소장암 및 식도암을 꼽을 수 있다. 혈액암의 예로는 백혈병(예를 들어, 골수성 백혈병, 림프성 백혈병, 또는 만성 림프구성 백혈병(CLL)), 림프종(예를 들어, 호지킨 림프종(HL), 비호지킨 림프종(NHL), 미만성 거대 B세포 림프종(DLBCL), T 세포 임파종, 또는 맨틀 세포 임파계(MCL)) 및 골수종(예를 들어 다발성 골수종)을 포함하나 이에 한정되지는 않는다. 암은 초기, 중기 또는 말기 단계 암일 수 있으며, 또는 전이성 암일 수 있다. 한 실시양태에서, 상기 종양은 위장 신생물, 예컨대, 결장암이다.

다른 측면에서, 본 명세서에 개시된 항-LAG-3 항체를 포함하는 제제는 대상체의 감영성 질환을 예방 또는 치료하는 데 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 감염성 질환은, 예를 들어 박테리아, 바이러스, 진균 및 원생생물로부터 선택된 병원체가 유발한 만성 감염이다.

다른 측면에서, 본 명세서에 개시된 항-LAG-3 항체를 포함하는 제제는 대상체의 항체 의존성 세포 매개 세포독성을 유도하는 데 사용될 수 있다.

본 발명은 항-LAG-3 항체를 포유동물에게 전달하거나, 상기에 기술한 질환 및 질병 중 하나 이상을 치료, 예방 또는 개선하기 위한 약제의 제조에 있어서의 본 명세서에 개시된 제제의 용도를 제공한다. 바람직하게는, 상기 포유 동물은 인간이다.

본 명세서에 개시된 항체 제제는 각종 경로로 대상체 또는 환자에게 투여될 수 있다. 예를 들어, 투여는 주입에 의해 또는 주사기에 의해 수행될 수 있다. 따라서, 한 측면에서, 본 발명은 본 명세서에 개시된 항체 제제(예를 들어, 사전 충전형 주사기)를 포함하는 전달 장치(예를 들어, 주사기)를 제공한다. 환자는 1차 활성 성분으로서 항-LAG-3 항체의 유효량, 즉 관심의 질환 또는 질병을 치료, 개선 또는 예방하기에 충분한 양을 투여받을 것이다.

치료 효과에는 생리학적 증상의 감소가 포함될 수 있다. 특정 대상체에 대한 항체의 최적 유효량 및 농도는 환자의 나이, 체중, 건강 상태 및/또는 성별, 질환의 성질 및 정도, 특정 항체의 활성, 신체에 의한 항체의 배출을 포함하는 각종 요인과, 상기 항체 제제와 함께 조합하여 투여하는 기타 가능한 치료제에 따라 달라질 것이다. 특정 경우에는, 전달되는 유효량은 임상의의 판단 하에 확인될 수 있다. 치료할 적응증에 따라, 유효 용량은 약 0.005mg/kg 체중 내지 약 50mg/kg 체중 또는 약 0.1mg/kg 체중 내지 약 20mg/kg 체중 범위일 수 있다. 상기 측면에서, 이미 공지되어 있는 항체 기반 약물의 사용은 몇 가지 지침을 제공할 수 있다. 상기 투여량은 단회량 용법 또는 다회량 용법일 수 있다.

하기 실시예는 본 발명의 이해를 돕기 위해 설명된 것이다. 실시예는 본 발명의 청구범위를 제한하지 않으며, 어떠한 경우에도 청구범위를 제한하는 것으로 해석되어서는 안 된다.

약어

CE-SDS: 모세관 전기영동-도데실 황산나트륨

ELISA: 효소결합면역흡착검사

FLD: 형광 검출기

HPLC: 고성능 액체 크로마토그래피

iCIEF: 이미지화 모세관 등전점 전기영동

SEC-HPLC: 크기 배제 고성능 액체 크로마토그래피

실시예

장기간 안정적으로 보관할 수 있는 재조합 완전 인간 모노클로날 항림프구-활성화 유전자 3(LAG-3) 항체 주사제 제법을 개발하고, 제품의 품질은 유효기간(적어도 24개월) 내 제어할 수 있도록 보장하기 위하여, 제법 스크리닝 시험을 설계하고 LAG-3 항체 제제의 안정성에 각종 상이한 부형제가 미치는 영향을 조사하였다. 시험에 사용된 재료 및 방법은 다음과 같다:

재료 및 방법

1.1. 재료

비고: N/A는 "적용 불가"를 의미함.

1.2. 기구 및 장비

1.3. 제제 안정성 관련 시험 항목 및 방법

상기 항체 제제를 가지고 하기 항목을 대상으로 검사하였다: (1) 가시적 입자의 성상 및 존재; (2) 자외선법(UV 방법)에 의해 확인한 제제의 단백질 함량; (3) OD_350nm 방법에 의해 확인한 제제의 탁도; (4) 크기 배제 고성능 액체 크로마토그래피(SEC-HPLC)에 의해 확인하고 피크 면적의 전체의 합에 대한 주요 피크 면적의 백분율로 표시된 항체 제제의 순도; (5) 환원 모세관 전기영동-도데실 황산나트륨(환원 CE-SDS) 및/또는 비환원 모세관 전기영동-도데실 황산나트륨(비환원 CE-SDS)에 의해 확인하고 피크 면적의 전체의 합에 대한 주요 피크 면적의 백분율로 표시된 항체 제제의 순도; (6) 이미지화 모세관 등전점 전기영동(iCIEF)에 의해 확인하고 주성분, 산성 성분 및 염기성 성분의 백분율로 표시된 항체 제제의 전하 변이체; 및 (7) 면역분석(예를 들어 직접 ELISA)에 의해 확인한 항체 체제의 항-LAG-3 항체의 상대적 결합활성.

가시적 입자의 검출

샘플에서 가시적 입자는 문헌[the National Pharmacopoeia Committee, the Pharmacopoeia of the People's Republic of China (2015년 판, volume IV General Rules 0904 "Test for Visible Particles"), Beijing, China Medical Science Press, 2015]에 기재된 방법에 따라 투명도 검출기(모델 번호 YB-2, Tianda Tianfa, 텐진)를 사용하여 검출되었다.

단백질 함량의 확인

샘플의 단백질 함량은 자외선 분광광도계(모델번호 UV-1800, Shimadzu, 일본)를 사용하여 확인되었다.

탁도 확인

샘플의 탁도를 자외선 분광광도계(모델번호 UV-1800, Shimadzu, 일본)를 사용하여 350nm에서 흡광도를 측정함으로써 확인하였다.

순도(SEC-HPLC)

인산염 완충액(인산이수소나트륨 이수화물 3.12g, 염화나트륨 8.77g 및 아르기닌 34.84g을 초순수에 녹이고, 염산을 첨가하여 pH를 6.8로 조정하고, 용적이 1000mL로 됨)을 이동상으로 사용하는 SEC 컬럼으로 분리를 수행하였다. 크로마토그래피 컬럼 보호 용액은 0.05%(w/v) NaN₃이며, 샘플 주입 용적은 50μL, 유속은 0.5mL/min, 채취 시간은 30분, 컬럼 온도는 25°C, 검출 파장은 280nm였다. 샘플 용액으로 사용하기 위해 샘플을 초순수로 2mg/mL로 희석하였다. 상기에 기술한 바와 동일한 방법으로 제제 완충액을 희석하여 바탕 용액(blank solution)을 제조하였다. 측정을 위해 바탕 용액과 샘플 용액은 각각 50μL의 양으로 액체 크로마토그래피 컬럼에 넣어두었다.

순도(환원 CE-SDS)

모세관 겔 전기영동에 의해 확인되었다. 모세관은 내경 50μm, 전체 길이 30.2cm, 유효 길이 20.2cm의 무코팅 모세관이었다. 전기영동에 앞서 모세관 컬럼은 수산화나트륨 0.1mol/L, 염산 0.1mol/L, 초순수 및 70psi에서의 전기영동 겔로로 세척되었다. 샘플은 적절한 양의 초순수로 2.0mg/mL로 희석되었다. 희석된 샘플 50μL를 1.5mL의 원심분리 튜브에 옮겨 pH 6.5에서 샘플 완충액 45μL(시트르산 일수화물 0.32g 및 인산이나트륨 12수화물 2.45g을 초순수 45mL에 녹인 다음 용적이 50mL로 됨으로써 시트르산-인산염 완충액을 제조하며; 상기 완충액 200μL에 10% (w/v)의 도데실 황산나트륨 용액 80μL를 첨가하고, 물을 가한 총 용적이 1 mL로 된 다음, 상기 혼합물을 잘 혼합하여 샘플 완충액을 얻음), 내부 표준 1μL(10kDa 단백질, 5mg/mL; Beckman Coulter, 카탈로그 번호 제390953호) 및 β-메르캅토에탄올 5μL를 첨가하였다. 혼합물을 잘 혼합하고, 70±2°C에서 10±2분 동안 가열하고 실온으로 냉각한 다음 나중에 샘플용액으로 사용하기 위한 샘플 병으로 옮겼다. 상기와 동일한 방법으로, 샘플과 동일한 용적의 제제 완충액을 처리하여 바탕 용액을 제조하였다. 샘플 주입조건: 20초간 5kV; 분리 전압: 35분간 15kV. 모세관 컬럼 온도를 25°C로 제어하였고, 검출 파장은 220nm였다.

순도(비환원 CE-SDS)

모세관 겔 전기영동에 의해 확인되었다. 모세관은 내경 50μm, 전체 길이 30.2cm, 유효 길이 20.2cm의 무코팅 모세관이었다. 전기영동에 앞서 모세관 컬럼은 수산화나트륨 0.1mol/L, 염산 0.1mol/L, 초순수 및 70psi에서의 전기영동 겔로로 세척되었다. 샘플은 적절한 양의 초순수로 2.0mg/mL로 희석되었다. 희석된 샘플 50μL를 1.5mL 원심분리 튜브에 옮겨 pH 6.5에서 샘플 완충액 45μL(시트르산 일수화물 0.32g 및 인산이나트륨 12수화물 2.45g을 초순수 45mL에 녹인 다음 용적이 50mL로 됨으로써 시트르산-인산염 완충액을 제조하며; 완충액 200μL에 10% (w/v)의 도데실 황산나트륨 용액 80 μL를 첨가하고, 물을 가한 총 용적이 1 mL로 된 다음 상기 혼합물을 잘 혼합하여 샘플 완충액을 얻음), 내부 표준 1μL(10kDa 단백질, 5mg/mL; Beckman Coulter, 카탈로그 번호 제390953호)및 250mmol/L의 NEM 용액(초순수 2mL에 녹인 N-에틸말레이미드 62mg) 5μL를 첨가하였다. 혼합물을 잘 혼합하고, 70±2°C에서 10±2분 동안 가열하고 실온으로 냉각한 다음 나중에 샘플용액으로 사용하기 위한 샘플 병으로 옮겼다. 상기와 동일한 방법으로, 샘플과 동일한 용적의 제제 완충액을 처리하여 바탕 용액을 제조하였다. 샘플 주입조건: 20초간 5kV; 분리 전압: 35분간 15kV. 모세관 컬럼 온도를 25°C로 제어하였고, 검출 파장은 220nm였다.

전하 변이체(iCIEF)

이미지화 모세관 등전점 포커싱(icIEF)에 의해 확인되었다. 모세관의 내경은 100μm, 전체 길이는 5cm였다. 모세관 컬럼은 전기영동에 앞서 0.5% 메틸셀룰로오스 용액(이하 MC 용액으로 약칭) 및 초순수로 세척되었다. 샘플을 55초 동안 진공에서 주입하고 1.5kV에서 1분 동안 사전 포커싱을 실행하고, 포커싱은 3kV에서 8분, 샘플 주입 시간은 55초, 샘플 트레이의 온도는 10°C였고, 모세관 컬럼 온도는 실온이었고, 검출 파장은 280 nm였다. 음극성 안정화제는 500mmol/L의 아르기닌이며, 양극성 안정화제는 200mmol/L의 이미노디아세트산이었다. 3mol/L의 요소를 첨가하여 단백질 용해도를 높이고, 0.5% MC 용액을 첨가하여 단백질과 모세관 사이의 접착력을 감소시켰다. 상기 샘플을 물로 0.5mg/mL로 희석하고, 사전 혼합 용액 83μL에 상기 희석된 시험 샘플 20μL를 첨가한 다음, 상기 혼합물을 잘 혼합하여 샘플 용액을 제조하였다. 제제 완충액을 사용하여 동일한 절차를 수행하여 바탕 용액을 조제하였다.

상대적 결합활성(직접 ELISA)

스트렙타비딘(Thermo, 카탈로그 번호 제21125호)을 1X PBS로 1μg/mL로 희석하고, 37℃에서 100μL/웰의 양으로 96웰 마이크로플레이트에 2시간 동안 고정화시켰다. 플레이트를 세척한 후 차단 용액(5% FBS, 300μL/웰)을 첨가하여 37°C에서 2시간 동안 차단시켰다. 비오틴화 LAG-3(Sinobiotic, 카탈로그 번호 제16498-HNAH-B호)를 1X PBS로 0.5μg/mL로 희석하고 37℃에서 100μL/웰의 양으로 96웰 마이크로플레이트에 0.5시간 동안 고정화시켰다. 항-LAG-3 항체를 2% FBS로 40μg/mL로 희석하고, 100μL/웰의 용적물로 옮긴 후, 농도가 제12 농도(0.01~10000ng/mL)가 되도록 4배 연속 희석하였다. 연속 희석 샘플을 세척한 플레이트에 100μL/웰로 첨가하고, 자동 온도 인큐베이터에 넣어 37℃에서 30분 동안 인큐베이션하였다. 플레이트를 세척한 후 2% FBS로 희석된 HRP 결합 염소 항인간 IgG-Fc 단편(BETHYL, 미국, 카탈로그 번호 제A80-104P호)을 2차 항체로 첨가하였다(30000배 희석, 100μL/웰). 이어서 상기 플레이트를 37℃에서 20분 동안 인큐베이션하였다. 플레이트를 세척한 후 TMB 100μL를 첨가하고 10분 동안 발색 반응을 일으킨 후 각 웰에 1mol/L의 H₂SO₄ 100μL를 첨가하여 반응을 종결시켰다. 450nm에서의 OD 값은 620nm를 기준 파장으로 하여 측정하였다. 연속 희석된 샘플의 농도 대 OD_450nm-OD_620nm의 곡선을 플로팅하고, LAG-3에 대한 항-LAG-3 항체의 결합 활성을 나타내는 EC₅₀은 Prism 4-파라미터 피팅에 의해 산출되었다.

실시예 1. 항-LAG-3 항체의 제조 및 정제

LAG-3에 특이적으로 결합하는 신규 항-LAG-3 항체 ADI-31853은 CN201811561512.X에 기재된 바와 같이 제조 및 정제되었으며, 상기 항체는 서열 번호 9의 중쇄 서열과 서열 번호 10의 경쇄 서열로 구성되는 IgG4 항체이다. 간단히 말해서, 항-LAG-3 항체 ADI-31853를 293 세포 또는 CHO 세포에서 재조합적으로 발현시켜서 정제하였다. 제제 스크리닝 시험에 사용된 샘플을 CEX(양이온 교환 크로마토그래피)로 정제하여 단백질 함량이 약 11.5mg/mL 내지 약 25.0mg/mL로 만들게 한다.

실시예 2. 제제의 안정성에 pH가 미치는 영향을 검증한 시험

이 실시예에서는 pH 5.0~8.0에서의 항-LAG-3을 포함하는 제제의 안정성을 조사하였다.

2.1. 절차:

표 1에 상세히 기재한 바와 같이 총 7가지의 pH값이 설계되었다. 제법의 완충액을 제조하고 항-LAG-3 항제의 용매는 한외여과를 통해 완충액으로 대체되었다. 완충액 교환 후 제제의 단백질 함량은 약 20mg/mL로 조정되고 폴리소르베이트-80을 첨가하였다. 상기 용액을 여과하고 바이알에 채웠다. 바이알을 마개로 봉하고 캡을 씌운 후 고온 스트레스 안정성 시험을 실시하였다. 여기서 항-LAG-3 항체의 순도는 SEC-HPLC에 의해 측정되고 전하 변이체는 iCIEF에 의해 측정되었다.

표 1. 제법

자세한 시험 조건 및 샘플링 일정을 표 2에 기재되어 있다.

표 2. 시험 조건 및 샘플링 일정

2.2. 기준

표 3에 상세히 기재한 바와 같이, 제품에 대한 지식과 기기 및 방법의 정밀도에 따라 초기 값 대비 샘플 시험 지표의 변화 여부를 확인하는 기준을 설정하여 샘플의 변화 여부를 확인한다.

표 3. 품질 변화 유무의 기준

2.3. 결과

제제의 안정성에 pH가 미치는 영향을 검증한 시험의 결과는 표 4에 개시되어 있다. SEC-HPLC에 의해 측정한 항-LAG-3 항체의 순도 변화 추이를 도 1에 도시되어 있으며, iCIEF에 의해 측정한 항-LAG-3 항체의 전하 변이체의 변화 추이는 도 2에 도시되어 있다. 표 4, 도 1 및 도 2에서 보일 수 있듯이, 제제를 40±2°C에서 1개월간 방치한 결과, 항-LAG-3 항체는 pH 5.5, pH 6.0, pH 6.5, pH 7.0 및 pH 7.5의 용액에서 안정성을 유지하였다. 다시 말해 pH 5.5~7.5의 범위에서 제형화를 수행할 수 있다는 것이다. 따라서 후속 연구에서는 LAG-3 항체 제제를 pH 6.0에서 제형화하였다.

표 4. 제제의 안정성에 pH가 미치는 영향을 검증한 시험의 결과(40±2°C)

비고: N/A는 계획된 조사가 없음을 의미함.

실시예 3. 제법 스크리닝 시험(I)

3.1. 절차

표 5에 상세히 기재한 바와 같이 총 7가지의 제법이 설계되었다. 제법의 완충액은 표 5와 같이 제조되었다. 항체의 용매는 한외여과를 통해 제제 용액으로 대체되었다. 완충액 교환 후 제법의 단백질 함량을 약 20mg/mL로 희석하고 폴리소르베이트-80을 첨가하였다. 상기 용액을 여과하고 바이알에 채웠다. 바이알을 마개로 봉하고 캡을 씌운 다음, 안정성 시험을 실시하였다. 안전성 시험은 고온 스트레스 시험, 진탕 시험, 동결융해 시험 및 조명 시험을 포함하는 방법을 사용했다. 지표는 성상, 가시적 입자, 단백질 함량(UV 방법), 탁도(OD_350nm 방법), 순도(SEC-HPLC 및 비환원 CE-SDS), 전하 변이체(iCIEF), 상대적 결합활성(직접 ELISA)을 포함하였다.

표 5. 스크리닝 시험 (I)의 제법

자세한 시험 조건 및 샘플링 일정을 표 6에 개시되어 있다.

표 6. 시험 조건 및 샘플링 일정

3.2. 기준

섹션 2.2와 표 3 참조.

3.3. 결과

(1) 고온 스트레스 시험

제법 스크리닝을 위한 고온 스트레스 시험의 결과는 표 7 및 도 3~5에 상세하게 개시되어 있다.

40±2°C에 2주간 방치한 후, 제법 3에서만 횐색 침전물이 관찰되었다. 상기 표 3의 기준에 따라, 성상과 가시적 입자 측면에서 볼 때 제법 1, 2, 4, 5, 6 및 7은 모두 합격점을 받았으며; 단백질 함량(UV 방법) 및 순도(SEC-HPLC 및 비환원 CE-SDS)는 변하지 않았다; 전하 변이체의 경우 산성 성분(iCIEF)은 증가하고 염기성 성분(iCIEF)은 감소하였으며; 여기서 제법 5, 6 및 7의 산성 성분은 제법 1, 2 및 4의 산성 성분에 비하여 덜 큰 변화가 나타나며; 제법 5 및 7의 주성분(iCIEF)은 변화가 보이지 않았다.

표 7. 제법 스크리닝을 위한 고온 스트레스 시험의 결과(40±2°C)

비고: N/A는 계획된 조사가 없음을 의미함.

(2) 진탕 시험

제법 스크리닝을 위한 진탕 시험의 결과는 표 8에 상세하게 개시되어 있다. 650rpm에서 5일간 진탕한 결과에 따르면, 성상과 가시적 입자 측면에서 볼 때 제법 1, 2 및 4는 합격점을 받았으며, 단백질 함량(UV 방법), 탁도(OD_350nm 방법), 순도(SEC-HPLC 및 비환원 CE-SDS), 전하 변이체(iCIEF), 상대적 결합활성(직접 ELISA)은 모두 변화가 보이지 않았다.

표 8. 제법 스크리닝을 위한 진탕 시험의 결과

비고: N/A는 계획된 조사가 없음을 의미함.

(3) 동결융해 시험

제법 스크리닝을 위한 동결융해 시험의 결과는 표 9에 상세하게 개시되어 있다. 동결융해 사이클을 6번 거친 후, 제법 1, 2, 4는 성상과 가시적 입자에서 합격점을 받았으며, 단백질 함량(UV 방법), 탁도(OD_350nm 방법), 순도(SEC-HPLC 및 비환원 CE-SDS), 전하 변이체(iCIEF), 상대적 결합활성(직접 ELISA)은 모두 변화가 보이지 않았다.

표 9. 제법 스크리닝을 위한 동결융해 시험의 결과

비고: N/A는 계획된 조사가 없음을 의미함.

(4) 조명 시험

제법 스크리닝을 위한 조명 시험의 결과는 표 10에 상세하게 개시되어 있다. 600±50Lux의 빛을 5일간 조사한 후, 제법 1, 2 및 4는 성상과 가시적 입자에서 합격점을 받았으며, 단백질 함량(UV 방법), 탁도(OD_350nm 방법), 순도(SEC-HPLC 및 비환원 CE-SDS), 전하 변이체(iCIEF), 상대적 결합활성(직접 ELISA)은 모두 변화가 보이지 않았다.

표 10. 제법 스크리닝을 위한 조명 시험의 결과

비고: N/A는 계획된 조사가 없음을 의미함.

결론

제법 1~7에서 고온 스트레스 시험의 결과에 따르면, 부형제 수크로스, 아르기닌, 트레할로스 및 소르비톨을 항-LAG-3 항체의 안정화제로 사용할 수 있다는 것으로 보였으며, 여기서 부형제 수크로스와 아르기닌은 트레할로스와 소르비톨보다 우수하고, 산성 성분의 증가와 주성분의 감소를 효과적으로 억제할 수 있다.

제법 1, 2 및 4에서 수행된 진탕 시험, 동결융해 시험, 조명 시험의 결과에 따르면, 이 3가지 제법이 모두 좋은 안정성을 나타내며 상호 간에 큰 차이가 없음을 보여주었다. 이처럼, 에데트산이나트륨 또는 메티오닌의 첨가는 제품의 안정성에 거의 영향을 미치지 않는다. 편리함과 안전을 위하여, 에데트산이나트륨 또는 메티오닌은 제제에 첨가하지 않을 것이다.

실시예 4. 제법 스크리닝 시험 (II)

4.1 절차

표 11에 상세히 기재한 바와 같이 총 3가지 제법이 설계되었다. 제법의 완충액을 제조하고, 항-LAG-3 항체 ADI-31853의 용매는 한외여과를 통해 완충액으로 대체되었다. 완충액 교환 후 제법의 단백질 함량을 약 20mg/mL로 희석하고 폴리소르베이트-80을 첨가하였다. 상기 용액을 여과하고 바이알에 채웠다. 바이알을 마개로 봉하고 캡을 씌운 다음, 안정성 시험을 실시하였다. 안정성 시험에는 고온 스트레스 시험, 진탕 시험 및 동결융해 시험이 포함되어 있다. 지표는 성상, 가시적 입자, 단백질 함량(UV 방법), 탁도(OD_350nm 방법), 순도(SEC-HPLC, 비환원 CE-SDS 및 환원 CE-SDS), 전하 변이체(iCIEF), 상대적 결합활성(직접 ELISA)을 포함하였다.

표 11. 스크리닝 시험(II)의 제법

자세한 시험 조건 및 샘플링 일정을 표 12에 개시되어 있다.

표 12. 시험 조건 및 샘플링 일정

4.2. 기준

섹션 2.2와 표 3 참조.

4.3. 결과

(1) 고온 스트레스 시험

고온 스트레스 시험의 결과는 표 13 및 도 6~14에 상세하게 개시되어 있다. 40±2°C에서 1주일간 방치한 후에, 제법 8, 9 및 10의 산성 성분(iCIEF)은 증가하지만 염기성 성분은 감소하였다. 40±2°C에서 2주일간 방치한 후, 제법 9와 10의 순도(환원 CE-SDS)가 감소하였다. 질량분석법에 따르면 원인은 당화인 것으로 보인다. 아울러 제법 10에서는 주성분이 감소된 것으로 나타났다. 40±2°C에서 1개월간 방치한 후, 성상과 가시적 입자 측면에서 볼 때 상기 제법은 모두합격점을 받았으며; 단백질 함량(UV 방법), 순도(비환원 CE-SDS), 상대적 결합활성(직접 ELISA)은 상기 기준에 만족하였고; 제법 8의 순도(환원 CE-SDS 및 SEC-HPLC)와 제법 9의 순도(SEC-HPLC)는 변화가 보이지 않았으며; 제법 8, 9 및 10의 탁도는 증가하였고; 제법 8, 9 및 10의 주성분은 감소했으나, 여기서 제법 8의 감소량은 상대적으로 적었다; 제법 10의 순도(SEC-HPLC)는 감소되어서 응집체의 증가가 주된 원인이었다.

표 13. 제법 스크리닝(II)를 위한 고온 스트레스 시험의 결과(40±2°C)

(2) 진탕 시험

제법 스크리닝(II)를 위한 진탕 시험의 결과는 표 14에 상세하게 개시되어 있다. 650rpm에서 3일간 진탕한 후, 성상과 가시적 입자 측면에서 볼 때 제법 8, 9 및 10은 합격점을 받았으며; 단백질 함량(UV 방법), 탁도(OD_350nm 방법), 순도(비환원 CE-SDS, 환원 CE-SDS 및 SEC-HPLC), 전하 변이체(iCIEF), 상대적 결합활성(직접 ELISA)은 모두 변화가 보이지 않았다.

표 14. 제법 스크리닝(II)를 위한 진탕 시험의 결과

비고: N/A는 계획된 조사가 없음을 의미함.

(3) 동결융해 시험

제법 스크리닝(II)를 위한 동결융해 시험의 결과는 표 15에 상세하게 개시되어 있다. 동결융해 사이클을 6번 거친 후, 제법 8, 9 및 10은 성상과 가시적 입자에서 합격점을 받았으며; 단백질 함량(UV 방법), 탁도(OD_350nm 방법), 순도(비환원 CE-SDS, 환원 CE-SDS, SEC-HPLC), 전하 변이체(iCIEF), 상대적 결합활성(직접 ELISA)은 모두 변화가 보이지 않았다.

표 15. 제법 스크리닝(II)을 위한 동결융해 시험의 결과

비고: N/A는 계획된 조사가 없음을 의미함.

결론

고온 스트레스 시험의 결과에 따르면, 전하 변이체(iCIEF)의 경우, 제법 8에서 산성 성분의 증가량과 주성분의 감소량은 상대적으로 적었다; 순도(SEC-HPLC)의 경우, 제법 8과 9는 더 우수한 결과를 보였으며 40°C의 고온에서 단백질 응집체의 증가를 효과적으로 억제할 수 있었다; 순도(환원 CE-SDS)의 경우, 제법 8은 더 우수한 결과를 보였는데, 40°C의 고온에서 당화가 관측되지 않았기 때문이었다. 따라서, 가장 바람직한 제법은: 약 20mg/mL의 재조합 완전 인간 모노클로날 항림프구-활성화 유전자 3(LAG-3) 항체, 약 5.88mg/mL의 시트르산나트륨(이수화물), 약 21.07mg/mL의 아르기닌 염산염, 약 0.70mg/mL의 폴리소르베이트-80, pH 6.0인 것으로 확인되었다.

본 발명의 예시적인 실시양태가 상기에 기술되어 있다. 이러한 내용은 예시에 불과하며, 본 발명의 범주 내에서 다양한 다른 대체, 개조 및 수정이 이루어질 수 있음을 당업자는 이해해야 한다. 따라서, 본 발명은 본 명세서에 열거된 특정 실시양태에 한정되지 않는다.

SEQUENCE LISTING <110> Innovent Biologics(Suzhou) Co., Ltd. <120> 항-LAG-3 항체를 포함하는 제제, 이의 제조방법 및 용도 <130> <160> 10 <170> PatentIn 버전33 <210> 1 <211> 11 <212> PRT <213> 인공 서열 <220> <223> 항-LAG-3 항체의 VH CDR1 <400> 1 Gly Ser Ile Tyr Ser Glu Ser Tyr Tyr Trp Gly 1 5 10 <210> 2 <211> 16 <212> PRT <213> 인공 서열 <220> <223> 항-LAG-3 항체의 VH CDR2 <400> 2 Ser Ile Val Tyr Ser Gly Tyr Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser 1 5 10 15 <210> 3 <211> 12 <212> PRT <213> 인공 서열 <220> <223> 항-LAG-3 항체의 VH CDR3 <400> 3 Ala Arg Val Arg Thr Trp Asp Ala Ala Phe Asp Ile 1 5 10 <210> 4 <211> 11 <212> PRT <213> 인공 서열 <220> <223> 항-LAG-3 항체의 VL CDR1 <400> 4 Gln Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr Leu Asn 1 5 10 <210> 5 <211> 7 <212> PRT <213> 인공 서열 <220> <223> 항-LAG-3 항체의 VL CDR2 <400> 5 Asp Ala Ser Asn Leu Glu Thr 1 5 <210> 6 <211> 10 <212> PRT <213> 인공 서열 <220> <223> 항-LAG-3 항체의 VL CDR3 <400> 6 Gln Gln Val Leu Glu Leu Pro Pro Trp Thr 1 5 10 <210> 7 <211> 120 <212> PRT <213> 인공 서열 <220> <223> 항-LAG-3 항체의 중쇄 가변 영역 <400> 7 Gln Leu Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Tyr Ser Glu 20 25 30 Ser Tyr Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu 35 40 45 Trp Ile Gly Ser Ile Val Tyr Ser Gly Tyr Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser 50 55 60 Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe 65 70 75 80 Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 85 90 95 Cys Ala Arg Val Arg Thr Trp Asp Ala Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 8 <211> 108 <212> PRT <213> 인공 서열 <220> <223> 항-LAG-3 항체의 경쇄 가변 영역 <400> 8 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Val Leu Glu Leu Pro Pro 85 90 95 Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 9 <211> 446 <212> PRT <213> 인공 서열 <220> <223> 항-LAG-3 항체의 중쇄 <400> 9 Gln Leu Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Tyr Ser Glu 20 25 30 Ser Tyr Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu 35 40 45 Trp Ile Gly Ser Ile Val Tyr Ser Gly Tyr Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser 50 55 60 Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe 65 70 75 80 Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 85 90 95 Cys Ala Arg Val Arg Thr Trp Asp Ala Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 115 120 125 Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala 130 135 140 Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 145 150 155 160 Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 165 170 175 Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 180 185 190 Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys 195 200 205 Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro 210 215 220 Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val 225 230 235 240 Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr 245 250 255 Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu 260 265 270 Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 275 280 285 Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser 290 295 300 Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 305 310 315 320 Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile 325 330 335 Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro 340 345 350 Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu 355 360 365 Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 370 375 380 Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser 385 390 395 400 Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 405 410 415 Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 420 425 430 His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly 435 440 445 <210> 10 <211> 215 <212> PRT <213> 인공 서열 <220> <223> 항-LAG-3 항체의 경쇄 <400> 10 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Val Leu Glu Leu Pro Pro 85 90 95 Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala 100 105 110 Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser 115 120 125 Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu 130 135 140 Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser 145 150 155 160 Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu 165 170 175 Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val 180 185 190 Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys 195 200 205 Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215

Claims (18)

1. 약 pH 5.5~7.5, 예를 들어 약 pH6.0에서의 액체 항체 제제로서,
   (i) 항-LAG-3 항체;
   (ii) 완충액,
   (iii) 안정화제 및
   (iv) 계면활성제를 포함하며,
   상기 항-LAG-3 항체는,
   -GSIYSESYYWG(서열 번호 1)의 중쇄 VH CDR1;
   -SIVYSGYTYYNPSLKS(서열 번호 2)의 중쇄 VH CDR2;
   -ARVRTWDAAFDI(서열 번호 3)의 중쇄 VH CDR3;
   -QASQDISNYLN(서열 번호 4)의 경쇄 VL CDR1;
   -DASNLET(서열 번호 5)의 경쇄 VL CDR2; 및
   -QQVLELPPWT(서열 번호 6)의 경쇄 VL CDR3을 포함하는, 액체 항체 제제.
2. 제1항에 있어서,
   상기 액체 항체 제제의 상기 항-LAG-3 항체의 농도가 약 1~100mg/mL, 바람직하게는 약 5~50mg/mL, 예를 들어 약 5mg/mL, 약 10mg/mL, 약 15mg/mL, 약 20mg/mL, 약 25mg/mL, 약 30mg/mL, 약 35mg/mL, 약 40mg/mL, 약 45mg/mL 또는 약 50mg/mL인, 액체 항체 제제.
3. 제1항 또는 제2항에 있어서,
   상기 액체 항체 제제의 상기 완충액은 시트르산염, 시트르산염 용매화물(예를 들어, 시트르산염 수화물), 및 이들의 조합으로부터 선택되며, 예를 들어 시트르산나트륨, 시트르산나트륨 이수화물, 및 이들의 조합으로부터 선택되며, 바람직하게는 상기 완충액의 농도가 약 1~10mg/mL, 바람직하게는 약 4~8mg/mL, 예를 들어 약 4mg/mL, 약 4.5mg/mL, 약 5mg/mL, 약 5.5mg/mL, 약 6mg/mL, 약 6.5mg/mL, 약 7mg/mL, 약 7.5mg/mL 또는 약 8mg/mL인, 액체 항체 제제.
4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,
   상기 안정화제는 소르비톨, 수크로스, 트레할로스, 아르기닌, 아르기닌 염산염, 및 이들의 조합으로부터 선택되며, 바람직하게는 수크로스, 아르기닌 및/또는 아르기닌 염산염이며, 상기 안정화제의 농도는 바람직하게는 약 10~150mg/mL이고, 보다 바람직하게는 15~100mg/mL, 예를 들어 약 15mg/mL, 약 20mg/mL, 약 30mg/mL, 약 40mg/mL, 약 50mg/mL, 약 60mg/mL, 약 70mg/mL, 약 80mg/mL, 약 90mg/mL 또는 약 100mg/mL인, 액체 항체 제제.
5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서,
   상기 액체 항체 제제는 아르기닌 및/또는 아르기닌 염산염을 상기 안정화제로서 포함하고, 바람직하게는 아르기닌 및/또는 아르기닌 염산염이 약 10~40mg/mL, 바람직하게는 약 15~25mg/mL(예를 들어, 약 15mg/mL, 약 16mg/mL, 약 17mg/mL, 약 18mg/mL, 약 19mg/mL, 약 20mg/mL, 약 21mg/mL, 약 22mg/mL, 약 23mg/mL, 약 24mg/mL 또는 약 25mg/mL)의 양으로 존재하며, 및/또는 상기 액체 항체 제제는 수크로스를 상기 안정화제로서 포함하고, 바람직하게는 수크로스는 약 20~100mg/mL, 바람직하게는 약 40~90mg/mL(예를 들어, 약 40mg/mL, 약 50mg/mL, 약 60mg/mL, 약 70mg/mL, 약 80mg/mL 또는 약 90mg/mL)의 양으로 존재하는, 액체 항체 제제.
6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서,
   상기 액체 항체 제제의 상기 계면활성제는 폴리소르베이트 계면활성제로부터 선택되며, 바람직하게는 폴리소르베이트-80인, 액체 항체 제제.
7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서,
   상기 계면활성제의 농도가 약 0.1~1mg/mL, 바람직하게는 약 0.2~0.8mg/mL이며, 예를 들어 약 0.2mg/mL, 약 0.3mg/mL, 약 0.4mg/mL, 약 0.5mg/mL, 약 0.6mg/mL, 약 0.7mg/mL 또는 약 0.8mg/mL인, 액체 항체 제제.
8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 액체 제제는 에데테이트(예를 들어, 에데트산이나트륨) 및/또는 메티오닌을 포함할 수 있고 또는 포함하지 않을 수 있는, 액체 항체 제제.
9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서,
   상기 항-LAG-3 항체는 중쇄 가변 영역 VH 및 경쇄 가변 영역 VL을 포함하며, 상기 중쇄 가변 영역은 서열 번호 7의 서열 또는 이에 대해 적어도 90%, 95%, 98% 또는 99%의 동일성을 가지는 서열을 포함하고, 상기 경쇄 가변 영역은 서열 번호 8의 서열 또는 이에 대해 적어도 90%, 95%, 98% 또는 99%의 동일성을 가지는 서열을 포함하는, 액체 항체 제제.
10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 항-LAG-3 항체는 IgG4 항체이며, 바람직하게는 서열 번호 9의 중쇄 서열 또는 이에 대해 적어도 90%, 95%, 98% 또는 99%의 동일성을 가지는 서열, 및 서열 번호 10의 경쇄 서열 또는 이에 대해 적어도 90%, 95%, 98% 또는 99%의 동일성을 가지는 서열을 포함하는, 액체 항체 제제.
11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 항-LAG-3 항체가 293 세포 또는 CHO 세포에서 재조합적으로 발현되는, 액체 항체 제제.
12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 액체 체제는 주사제, 바람직하게는 피하 주사 또는 정맥 내 주사에 사용하기 위한 주사제; 또는주입액, 예를 들어, 정맥 내 주입에 사용하기 위한 주입액인, 액체 항체 제제.
13. 제1항에 있어서,
    상기 액체 항체 제제는,
    (i) 약 1~100mg/mL의 항-LAG-3 항체;
    (ii) 약 1~10mg/mL의 시트르산나트륨 또는 시트르산나트륨 이수화물;
    (iii) 약 10~150mg/mL의 수크로스, 아르기닌 및/또는 아르기닌 염산염; 및
    (iv) 약 0.1~1mg/mL의 폴리소르베이트-80을 포함하며;
    선택적으로, 상기 액체 제제는 에데테이트(예를 들어, 에데트산이나트륨) 및 메티오닌을 포함하지 않으며;
    상기 액체 제제의 상기 pH는 약 5.5~7.5이며, 바람직하게는 약 6.0~7.0, 보다 바람직하게는 6.0±0.3, 예를 들어 6.0이고, 바람직하게는 상기 pH는 무수 시트르산에 의해 조정되고; 또는
    예를 들어, 상기 액체 항체 제제는,
    (i) 약 10~30mg/mL의 상기 항-LAG-3 항체;
    (ii) 약 2~8mg/mL의 시트르산나트륨 또는 시트르산나트륨 이수화물;
    (iii) 약 10~40mg/mL의 아르기닌 및/또는 아르기닌 염산염, 및/또는 약 40~90mg/mL의 수크로스; 및
    (iv) 약 0.2~0.8mg/mL의 폴리소르베이트-80을 포함하며;
    선택적으로, 상기 액체 제제는 에데테이트(예를 들어, 에데트산이나트륨) 및 메티오닌을 포함하지 않으며;
    상기 액체 제제의 상기 pH는 약 5.5~7.5이며, 바람직하게는 약 6.0~7.0, 보다 바람직하게는 6.0±0.3, 예를 들어 6.0이고, 바람직하게는 상기 pH는 무수 시트르산에 의해 조정되고; 또는
    상기 액체 항체 제제는,
    (i) 약 20mg/mL의 상기 항-LAG-3 항체;
    (ii) 약 5.88mg/mL의 시트르산나트륨 이수화물;
    (iii) 약 80mg/mL의 수크로스; 및
    (iv) 약 0.3mg/mL의 폴리소르베이트-80을 포함하며;
    상기 액체 제제의 상기 pH는 약 5.5~7.5이며, 바람직하게는 약 6.0~7.0, 보다 바람직하게는 6.0±0.3, 예를 들어 6.0이고, 바람직하게는 상기 pH는 무수 시트르산에 의해 조정되고; 또는
    상기 액체 항체 제제는,
    (i) 약 20mg/mL의 상기 항-LAG-3 항체;
    (ii) 약 5.88mg/mL의 시트르산나트륨 이수화물;
    (iii) 약 17.42mg/mL의 아르기닌; 및
    (iv) 약 0.3mg/mL의 폴리소르베이트-80을 포함하며;
    상기 액체 제제의 상기 pH는 약 5.5~7.5이며, 바람직하게는 약 6.0~7.0, 보다 바람직하게는 6.0±0.3, 예를 들어 6.0이고, 바람직하게는 상기 pH는 무수 시트르산에 의해 조정되고; 또는
    상기 액체 항체 제제는,
    (i) 약 20mg/mL의 상기 항-LAG-3 항체;
    (ii) 약 5.88mg/mL의 시트르산나트륨 이수화물;
    (iii) 약 21.07mg/mL의 아르기닌 염산염; 및
    (iv) 약 0.7mg/mL의 폴리소르베이트-80을 포함하며;
    상기 액체 제제의 상기 pH는 약 5.5~7.5이며, 바람직하게는 약 6.0~7.0, 보다 바람직하게는 6.0±0.3, 예를 들어 6.0이고, 바람직하게는 상기 pH는 무수 시트르산에 의해 조정되고; 또는
    상기 액체 항체 제제는,
    (i) 약 20mg/mL의 상기 항-LAG-3 항체;
    (ii) 약 5.88mg/mL의 시트르산나트륨 이수화물;
    (iii) 약 50mg/mL의 수크로스와 약 21.07mg/mL의 아르기닌 염산염; 및
    (iv) 약 0.7mg/mL의 폴리소르베이트-80을 포함하며;
    상기 액체 제제의 상기 pH는 약 5.5~7.5이며, 바람직하게는 약 6.0~7.0, 보다 바람직하게는 6.0±0.3, 예를 들어 6.0이고, 바람직하게는 상기 pH는 무수 시트르산에 의해 조정되고; 또는
    상기 액체 항체 제제는,
    (i) 약 20mg/mL의 상기 항-LAG-3 항체;
    (ii) 약 5.88mg/mL의 시트르산나트륨 이수화물;
    (iii) 약 50mg/mL의 수크로스; 및
    (iv) 약 0.7mg/mL의 폴리소르베이트-80, 을 포함하며;
    상기 액체 제제의 상기 pH는 약 5.5~7.5이며, 바람직하게는 약 6.0~7.0, 보다 바람직하게는 6.0±0.3 예를 들어 6.0이고, 바람직하게는 상기 pH는 무수 시트르산에 의해 조정되는, 액체 항체 제제.
14. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 제제는, 예를 들어 2°C~8°C에서 적어도 24개월 동안, 실온에서 적어도 3개월 동안, 또는 40°C±2°C에서 1개월 동안 저장 후에도 안정성을 유지하며, 바람직하게는,
    (i) 순도가 SEC-HPLC에 의해 측정했을 때 90%를 초과하며, 바람직하게는 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%를 초과하고;
    (ii) 순도가 환원 또는 비환원 CE-SDS에 의해 측정했을 때 90%를 초과하며, 바람직하게는 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%를 초과하고;
    (iii) iCIEF에 의해 측정했을 때 저장 0일 차의 초기 값과 비교하여 상기 제제의 상기 항-LAG-3 항체 성분(즉, 주성분, 산성 성분 및 염기성 성분)의 변화율이 2% 이하이고; 및
    (iv) ELISA에 의해 측정했을 때 저장 0일 차의 초기 값과 비교하여 상기 제제의 상기 항-LAG-3 항체의 상대적 결합활성이 70~130%, 예를 들어, 70%, 80%, 90%, 100%, 110%, 120% 또는 130%인, 특성 중 하나 이상을 가지는, 액체 항체 제제.
15. 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 따른 상기 액체 항체 제제를 고체화하여 얻은 고체 항체 제제로서, 상기 고체 제제는, 예를 들어 주사용 동결 건조 분말의 형태인, 고체 항체 제제.
16. 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 따른 상기 액체 항체 제제 또는 제15항에 따른 상기 고체 항체 제제를 포함하는 전달 장치.
17. 정맥 내 또는 근육 내 주사에 사용하기 위한, 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 따른 상기 액체 항체 제제 또는 제15항에 따른 상기 고체 항체 제제를 포함하는 사전 충전형 주사기.
18. LAG-3 발현 암(특히 전이성 암), 면역 관련 질환 및 T 세포 기능장애 질환의 치료, 예방 또는 지연에 사용되는 약제의 제조에 있어서의, 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 따른 상기 액체 항체 제제 또는 제15항에 따른 상기 고체 항체 제제의 용도.