KR20220035150A - 특정 환자에서 암의 치료를 위한 항체 조합물 - Google Patents

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Abstract

중간 또는 높은 PD-1 발현을 갖는 종양 침윤 T 림프구를 갖는 환자에서 암의 치료에서, Fab 영역을 통해 FcγRIIb에 특이적으로 결합하며 Fc 영역을 통해 Fcγ 수용체에 결합하는 제1 항체 분자와 PD-1에 특이적으로 결합하며 Fc 영역을 통해 적어도 하나의 Fcγ 수용체에 결합하는 제2 항체 분자의 조합 사용, 이들 두 항체 분자를 포함하는 약제학적 조성물 및 키트, 및 이들 두 항체를 사용하여 암을 치료하는 방법이 기재된다. 또한 본 명세서에 기재된 치료로부터 이득을 볼 환자를 확인하기 위한 진단 시험이 기재된다.

Description

특정 환자에서 암의 치료를 위한 항체 조합물
본 발명은 CD3 양성 종양-침윤 림프구(TIL)에서 PD-1의 중간 또는 높은 발현을 갖는 환자에서 암의 치료에서, 1) Fab 영역을 통해서 FcγRIIb에 특이적으로 결합하며 Fc 영역을 통해서 Fcγ 수용체에 결합하는 제1 항체 분자와 2) PD-1에 특이적으로 결합하며 Fc 영역을 통해서 적어도 하나의 Fcγ 수용체에 결합하는 제2 항체 분자의 조합 사용에 관한 것이다.
면역 저해성 면역관문 수용체, 예를 들어, CTLA-4 또는 PD-1(PD1이라고도 지칭됨)은 이의 리간드 수용체, 예를 들어, B7 패밀리 구성원인 CD80 및 CD86, 및 PD-L1 각각의 결합 시 세포 내부로 저해성 신호를 전달하여, 세포 활성화 및 증식을 제한하고, 과도한 염증을 예방하고, 자기 관용(self-tolerance)의 유지에 기여하는 세포 표면 수용체이다. 이러한 저해성 면역 면역관문이 유전적으로 결핍된 동물은 악화된 염증 반응과 연관되어, 자기 관용을 발달시키거나 유지하지 못하여 자가면역 질환을 초래한다. 면역 면역관문 수용체 CTLA-4 및 PD-1/PD-L1에 대한 항체는 다양한 암, 특히 예를 들어, 흑색종, 폐암, 방광암 및 두경부암을 비롯한 다양한 고형암 유형을 갖는 환자의 전체 생존을 증가시키며, 이러한 항체는 미국 식품 의약국(U.S. Food and Drug Administration)에 의해서 승인되어 있다(문헌[Pardoll, D. M. (2012) Nat Rev Cancer 12(4): 252-264]; 문헌[Topalian, S. L. et al (2015) Cancer Cell 27(4): 450-461]; 문헌[Sharma, P. et al (2017) Cell 168(4): 707-723]).
면역 저해성 면역관문 축 PD-1/PD-L1에 대한 항체는 암 면역요법에 특히 효과적이어서, 환자의 약 20%에서 객관적인 반응, 즉 표준 치료(standard of care)에 비해서 상당한 개선을 유도한다고 증명되어 있다(문헌[Carretero-Gonzalez, A. et al (2018) Oncotarget 9(9): 8706-8715]). 그런, 반응률에 의해서 입증된 바와 같이, 현재 사용 가능한 항-PD-1/PD-L1 항체는 단지 소수의 환자에서 활성이다. 추가로, 초기 반응 환자의 일부는 결국 내성이 발달하여, 치료에서 더 이상 이득을 볼 수 없다. 이와 같이, PD-1/PD-L1 항체에 대한 무반응 및 내성 기전은 임상적으로 중요한 문제이다. PD-1/PD-L1 항체에 대한 내성 기전의 확인 및 극복은 이러한 임상적으로 중요한 약물 부류에 대한 암 환자 생존을 개선시키기 위한 중요한 도전 및 기회이다.
추가로, 항-PD-1/PD-L1 면역관문 차단에 가장 잘 반응할 가능성이 있는 환자를 식별하기 위한 예측 바이오마커가 요법에 반응할 가능성이 있는 환자를 식별하기 위한 중요한 전략이라는 것이 일반적으로 받아들여지고 있다. 이에 반해서, 심각하고, 때로는 치명적인 내약성 문제와 빈번하게 연관된 이러한 약물을 사용하여 환자를 불필요하게 치료하는 것을 방지하는 것이 동등하게 중요하다. 이의 높은 비용으로 인해서, 이러한 요법은 소비자 및 의료 시스템에 또한 상당한 부담이 된다. 항-PD-1/PD-L1 항체 요법에 대한 임상적 유의성의 기존의 예측 바이오마커의 예는 Micro Satellite Instability(MSI)(문헌[Le, D. T. et al (2015) N Engl J Med 372(26): 2509-2520]; 문헌[Le, D. T. et al (2017) Science 357(6349): 409-413]), 종양 돌연변이 부담(tumor mutational burden)(문헌[Gubin, M. M. et al (2014) Nature 515(7528): 577-581]; 문헌[Snyder, A., et al (2014) N Engl J Med 371(23): 2189-2199]; 문헌[Tran, E. et al (2014) Science 344(6184): 641-645], 문헌[Tran, E. et al (2015) Science 350(6266): 1387-1390]) 및 종양 PD-L1 발현(문헌[Gibney, Weiner et al. 2016, Topalian, Taube et al. 2016]), 종양 돌연변이 부담 및 종양 PD-L1 발현이다.
Fc 감마 수용체(FcγR)는 단핵구, 대식세포, 수지상 세포, 중성구, 비만 세포, 호염기구, 호산구 및 자연 살해 세포 및 B 림프구를 비롯한 면역 효과기 세포의 세포 표면 상에서 발견되는 막 단백질이다. 이 명칭은 항체의 Fc 영역에 대한 이들의 결합 특이성으로부터 유래된다. Fc 수용체는 표적 세포 막에서 발견되고 ― 달리는 원형질막 또는 세포질막이라고 공지된다. FcγR은 활성화(activating) FcγR 및 저해성(inhibitory) FcγR로 세분될 수 있는데, 이것은 각각 클러스터링된 면역글로불린 G Fc의 결합 및 세포내 ITAM 또는 ITIM 모티프를 통해서 활성화 또는 저해성 신호의 세포로의 전달을 통해서 세포 활성화를 공동 조절한다고 공지되어 있다. 클러스터링된 면역글로불린 또는 면역 복합체의 FcγR 결합은 세포 내로의 항체 내재화를 매개할 수 있고, 항체-매개된 포식작용, 항체-의존적 세포-매개 세포독성 또는 항원 제시 또는 교차-제시를 초래할 수 있다. FcγR은 또한 항체-결합된 세포 표면 수용체의 가교를 매개하거나 향상시킨다고 공지되어 있다. 이러한 가교 연결은 표적화된 세포에서 신호전달을 활성화하는 항체 능력 모두에는 아니지만(문헌[Richman, L. P. et al (2014) Oncoimmunology 3: e28610]) 일부(문헌[Li, F. et al (2011) Science 333(6045): 1030-1034]; 문헌[White, A. L. et al (2011) J Immunol 187(4): 1754-1763])에 요구된다고 공지되어 있고, 치료 효과를 달성하는 데 필요하거나 필요하지 않을 수 있다.
인간에서, FcγRIIb(CD32b)는 저해성 Fcγ 수용체인 반면, FcγRI(CD64), FcγRIIa(CD32a), FcγRIIc(CD32c) 및 FcγRIIIa(CD16a)는 활성화 Fcγ 수용체이다. FcγgRIIIb는 호중구에서 발현되는 GPI-연결 수용체이며, ITAM 모티프가 결여되어 있고, 활성화 FcγR 신호전달에 균형을 잡아주는 디코이 수용체로서 작용한다고 생각된다(문헌[Treffers, L. W. et al (2018) Front Immunol 9: 3124]). 마우스에서, 활성화 수용체는 FcγRI, FcγRIII 및 FcγRIV이다.
항체가 Fcγ 수용체와의 상호작용을 통해 면역 세포 활성을 조정할 수 있다는 것은 널리 공지되어 있다. 구체적으로, 항체 면역 복합체가 면역 세포 활성화를 조정하는 방법은 활성화 및 저해성 Fcγ 수용체의 이들의 상대적 연계에 의해 결정된다. 상이한 항체 이소타입이 활성화 및 저해성 Fcγ 수용체에 대한 상이한 친화성으로 결합되어, 상이한 A:I 비(활성화:저해 비)를 야기한다(문헌[Nimmerjahn et al; Science. 2005 Dec 2;310(5753):1510-2]).
Fc 도메인을 통해서 저해성 Fcγ 수용체에 결합함으로써, 항체는 효과기 세포 기능을 억제, 차단 및/또는 하향조정할 수 있다. Fc 도메인을 통한 저해성 FcγR에 대한 결합에 의해서, 항체는 표적 세포 상의 항체-표적화 신호전달 수용체의 응집을 통해서 세포 활성화를 자극할 수 있다(문헌[Li, F. et al (2011) Science 333(6045): 1030-1034]; 문헌[White, A. L. et al (2011) J Immunol 187(4): 1754-1763]; 문헌[White, A. L. et al (2011) J Immunol 187(4): 1754-1763] 문헌[White, A. L. et al (2014) J Immunol 193(4): 1828-1835]).
활성화 Fcγ 수용체에 결합함으로써, 항체는 효과기 세포 기능을 활성화시킬 수 있고, 이로써 항체-의존적 세포 세포독성(ADCC), 항체 의존적 세포 포식작용(ADCP), 사이토카인 방출, 및/또는 항체 의존적 세포내이입뿐 아니라, 호중구의 경우 NETosis(즉, NET, 호중구 세포외 트랩(Neutrophil extracellular trap)의 활성화 및 방출)와 같은 기전을 유발할 수 있다. 활성화 Fcγ 수용체에 결합하는 항체는 또한 CD40, MHCII, CD38, CD80 및/또는 CD86과 같은 특정 활성화 마커의 증가로 이어질 수 있다.
활성화 Fcγ 수용체 및 저해성 Fcγ 수용체에 의한 항체-유도 효과기 세포 반응의 공동 조절과 일관되게, 활성화 Fcγ 수용체는 종양 세포 고갈 및 종양-직접-표적화 항체의 치료 활성을 촉진하는 것으로 나타났다. 전임상 연구 및 임상 연구는, 종양 직접-표적화 항체, 즉, 치료 활성이 직접 결합 및 종양 세포의 사멸에 관련되는 항체, 예를 들어, 항-CD20, 항-Her2 및 항-EGFR의 항종양 활성이 저해성 Fcγ 수용체에 비해서 활성화 Fcγ 수용체에 대한 더 높은 친화성 대립유전자를 보유하는 환자(문헌[Cartron, G. et al (2002) Blood 99(3): 754-758]; 문헌[Musolino, A., et al (2008) J Clin Oncol 26(11): 1789-1796]; 문헌[Zhang, W. et al (2007) J Clin Oncol 25(24): 3712-3718]) 및 활성화 Fcγ 수용체에 더 강한 결합(높은 A:I 비율)을 나타내는 항체 이소타입 및 형식을 갖는 환자(문헌[Goede, V. et al (2014) N Engl J Med 370(12): 1101-1110])에서 향상된다는 것을 입증하였다. 이에 반해서, 종양-직접 표적화 항체의 치료 활성은 저해성 FcγRIIB가 결여된 동물에서 향상되거나(문헌[Clynes, R. A. et al (2000) Nat Med 6(4): 443-446]), 본 발명자 중 일부에 의해서 최근에 입증된 바와 같이, 저해성 FcγRIIB가 길항작용성 항-FcγRIIB 항체에 의해서 차단되는 경우 향상된다(문헌[Roghanian, A. et al (2015) Cancer Cell 27(4): 473-488]).
최근 전입상 및 임상 데이터는, Fcγ 수용체가 CTLA-4, PD-1/PD-L1을 표적화하는 면역 면역관문 저해성 항체를 비롯한 면역 조절 항체의 효능을 또한 제어한다는 것을 입증한다. 인간 및 마우스에서, 항-CTLA-4 항체의 치료 활성은 활성화 Fcγ 수용체의 맞물림에 의해서 활성화된다는 증거가 존재하고; FcγRIIIa 유전자의 높은 친화성 대립유전자를 보유하는 흑색종 환자는 더 낮은 친화성 FcγRIIIa 대립유전자를 발현하는 환자에 비해서 이필리무맙에 응답하여 개선된 생존을 나타내었다. 더욱이, 활성화 수용체 및 저해성 수용체에 대한 인간화된 마우스에서, 치료 효능은 FcγR-의존성이라고 나타나 있고, 높은 A:I 비율을 갖는 항체 이소타입으로 향상되었다(문헌[Arce Vargas, F. et al (2018) 암 Cell 33(4): 649-663 e644]).
이러한 발견으로 본 발명자들은 항-CTLA-4 항체의 활성을 향상시키는 FcγRIIB-차단 항체의 능력을 조사하게 되었다. FcγRIIB-차단 항체의 2가지 상이한 유형; 활성화 및 저해성 인간 FcγR 둘 다에 대한 결합이 능숙한 인간 IgG1, 및 Fc 도메인을 통해 FcγR에 대한 상당히 손상된 결합을 나타내는 Fc-조작된 변이체가 이미 생성되어 있고, 본 발명자들 중 일부에 의해서 개시되어 있다(문헌[Roghanian, A., et al (2015) Cancer Cell 27(4): 473-488]). 이들 2가지 상이한 유형의 항-FcγRIIB 항체는 B 세포에서 CD20 내재화 및 FcγRIIB 신호전달을 차단하는 데 동등하게 길항적인 것으로 나타났으며, 둘 다 인간 FcγRIIB 및 인간 CD20을 발현하는 동물 트랜스제닉 동물에서 항-CD20 mAb 매개 B 세포 고갈을 개선시켰다.
국제 특허 출원 제PCT/EP2019/050566호에서, 본 발명자들은 Fc 영역이 결여되어 있거나 Fc 영역이 FcγR에 대한 결합이 감소되거나 손상된 것으로 나타난 항-FcγRIIB 항체만 항-CTLA-4 항체의 치료 활성의 치료 활성을 향상시킬 수 있음을 입증하였다. 고형암의 상이한 마우스 실험 모델에서, Fc:FcγR-결합 능숙 항-FcγRIIB가 아닌 Fc:FcγR-결합-손상 항FcγRIIB 항체와의 공동 치료는 항-CTLA-4의 치료 활성을 향상시켰고, 인간화 PBMC 생체내 모델에서는 임상적으로 관련된 항-CTLA-4 항체 이필리무맙의 부스팅된 Treg 고갈을 입증하였다. IL-2R(CD25) 및 PD-L1에 특이적인 항체의 고갈 및/또는 치료 효능에 대한 유사한 향상 효과가 Fc:FcγR-결합 손상된 항-FcγRIIB 항체와의 병용 치료 후에 관찰되었는데, 이는 부스팅 효과가 특정 표적 또는 세포 유형에 제한되지 않았음을 입증한다.
항-PD-1/PD-L1 항체의 치료 활성 제어에서의 Fcγ 수용체에 대한 역할은 전임상 연구에 의해 제시되었지만, 활성화 및 저해성 Fcγ 수용체의 개별 역할은 명확하지 않았다. Dahan 등은 PD-L1에 대한 마우스 항체는 항종양 활성의 경우 FcγR-맞물림에서 이득을 보지만, 이에 반해서 항-PD-1 항체의 활성은 FcγR-맞물림에 의해서 손상된다고 보고하였다(문헌[Dahan, R. et al (2015) Cancer Cell 28(3): 285-295]). 특히, 높은 A:I 비율을 갖는, 즉, 저해성 Fcγ 수용체와 비교하여 활성화 Fcγ 수용체의 강한 맞물림을 전달하는 항-PD-1 항체 이소타입(mIgG2a)은 더 낮은 A:I 비율을 갖는, 즉, Fc:FcγR-결합에 결함이 있는 항-PD-1 변이체 항체와 비교하여 저해성 Fcγ 수용체의 비교적 더 강한 맞물림을 갖는 mIgG1 이소타입과 비교하여 더 낮은 치료활성을 나타내었다.
임상적으로 관련된 인간 항-PD-1 IgG4 항체인 니볼루맙 및 유사한 Fcγ 수용체 결합 프로파일을 갖는다고 알려진 대용 래트 IgG2a 항체를 사용하여, Arlaukas 및 동료들은 Fc:FcγR-결합 손상된(탈글리코실화된) 항-PD-1 변이체 항체가 이의 Fc:FcγR-능숙 야생형 인간 IgG4 및 래트 IgG2a 항-PD-1 카운터파트에 비해서 개선된 치료 활성을 가졌다는 것을 유사하게 밝혀냈다(문헌[Arlauckas, S. P. et al (2017) Sci Transl Med 9(389)]). 그런, Dahan 등과 상반되게, 개별 Fcγ 수용체에 대한 항체의 차단을 사용하여, 저자들은 감소된 항-PD-1 항체 효능의 기반으로서 활성화 마우스 Fcγ 수용체 III 및 저해성 마우스 Fcγ 수용체 II를 식별하였다. 결론적으로, 항-PD-1 항체의 감소된 효능에 근본적인 (개별) 활성화 Fcγ 수용체 및 저해성 Fcγ 수용체의 상대적인 중요성 및 이것이 임상적으로 관련된 인간 항-PD-1 항체의 효능을 제한하는 방법 또는 어느 활성화 또는 저해성 FcγR이 항-PD-1 항체를 개선시키기 위해서 차단되어야 하는 지는 선행 기술로부터 명확하지 않다.
본 명세서에는
중간 또는 높은 PD-1 발현을 갖는 종양 침윤 T 림프구를 갖는 환자에서 암의 치료에 사용하기 위한 조합물로서,
Fab 영역을 통해 FcγRIIb에 특이적으로 결합하며 Fc 영역을 통해 Fcγ 수용체에 결합하는 제1 항체 분자 및
PD-1에 특이적으로 결합하며 Fc 영역을 통해 적어도 하나의 Fcγ 수용체에 결합하는 제2 항체 분자의 조합물이 개시된다.
본 명세서에는
중간 또는 높은 PD-1 발현을 갖는 종양 침윤 T 림프구를 갖는 환자에서 암의 치료에 사용하기 위한 약제학적 조성물로서,
(i) Fab 영역을 통해 FcγRIIb에 특이적으로 결합하며 Fc 영역을 통해 Fcγ 수용체에 결합하는 제1 항체 분자 및
(ii) PD-1에 특이적으로 결합하며 Fc 영역을 통해 적어도 하나의 Fcγ 수용체에 결합하는 제2 항체 분자의 약제학적 조성물이 또한 개시된다.
본 명세서에는 중간 또는 높은 PD-1 발현을 갖는 종양 침윤 T 림프구를 갖는 환자에서 암의 치료에 사용하기 위한 키트로서,
(i) Fab 영역을 통해 FcγRIIb에 특이적으로 결합하며 Fc 영역을 통해 Fcγ 수용체에 결합하는 제1 항체 분자 및
(ii) PD-1에 특이적으로 결합하며 Fc 영역을 통해 적어도 하나의 Fcγ 수용체에 결합하는 제2 항체 분자를 포함하는 키트가 추가로 개시된다.
본 명세서에는 중간 또는 높은 PD-1 발현을 갖는 종양 침윤 T 림프구를 갖는 환자에서 암의 치료에 사용하기 위한 의약의 제조에서의,
(i) Fab 영역을 통해 FcγRIIb에 특이적으로 결합하며 Fc 영역을 통해 Fcγ 수용체에 결합하는 제1 항체 분자, 및
(ii) PD-1에 특이적으로 결합하며 Fc 영역을 통해 적어도 하나의 Fcγ 수용체에 결합하는 제2 항체 분자의 용도가 추가로 개시된다.
본 명세서에는 중간 또는 높은 PD-1 발현을 갖는 종양 침윤 T 림프구를 갖는 환자에서 암을 치료하는 방법이 개시되며, 이 방법은
(i) Fab 영역을 통해 FcγRIIb에 특이적으로 결합하며 Fc 영역을 통해 Fcγ 수용체에 결합하는 제1 항체 분자, 및
(ii) PD-1에 특이적으로 결합하며 Fc 영역을 통해 적어도 하나의 Fcγ 수용체에 결합하는 제2 항체 분자를 투여하는 단계를 포함한다.
본 명세서에는 환자가
(i) Fab 영역을 통해 FcγRIIb에 특이적으로 결합하며 Fc 영역을 통해 Fcγ 수용체에 결합하는 제1 항체 분자, 및
(ii) PD-1에 특이적으로 결합하며 Fc 영역을 통해 적어도 하나의 Fcγ 수용체에 결합하는 제2 항체 분자를 사용한 병용 치료로부터 이득을 볼 것인지를 결정하기 위한 진단 시험이 추가로 개시되며,
이 시험은 환자의 종양 침윤 T 림프구에서 PD-1 발현을 결정하는 단계를 포함하고, 중간 또는 높은 PD-1 발현은 환자가 병용 치료로부터 이득을 볼 것이라는 것을 나타낸다. 상응하게, T 림프구 상에서의 중간 또는 높은 PD-1 발현의 결여 및 낮은 PD-1 발현은, 환자가 병용 치료에서 이득을 보지 않을 것이라는 것을 나타낸다.
하기 실시예에서, 다음 도면이 참조된다:
도 1은 PD-1이 형질주입된 인간 Jurkat T 세포에서 PD-1 발현을 도시한다. PD-1 형질주입된 Jurkat 세포를 낮은, 중간 및 높은 PD-1 발현 세포로 분류하였다. 확장 후, PD-1 발현을 3개의 상이한 하위세트로 정량하고, PD-1 분자/세포의 수를 도 1a(low), 도 1b(중간) 및 도 1c(높은)로 나타낸다.
도 2는 BI-1206(6G11 WT)이 낮은 발현 세포가 아닌 중간 및 높은 발현 세포의 PD-1 매개된 식세포작용을 저해한다는 것을 도시한다. 도 2a는 식세포작용을 하는 Jurkat 세포를 도시한 예를 도시한다. y축의 FL4는 CD14+ 대식세포를 도시하고, x축의 FL1은 CFSE 표지된 Jurkat 세포를 도시한다. 따라서 원 안의 상단 우측 사분면은 식세포작용을 하는 Jurkat 세포인 이중 양성 CD14+ CFSE+ 세포를 도시한다. 예는 PD-1 높은 발현 Jurkat 세포의 식세포작용을 도시한다. 도 2b는 PD-1 중간-발현 Jurkat 세포의 식세포작용을 도시하고, 도 2c는 높은 발현 Jurkat 세포를 도시한다. 값을 이소타입 옵소닌화(opsonization)(0%로 설정) 및 항 CD3 옵소닌화(OKT3 hIgG1, 100%로 설정)에 대해서 정규화한다. 도면은 BI-1206(도면에 6G11 WT로 나타냄)이 모든 농도에서 이의 니볼루맙 매개된 식세포작용을 저해한다는 것을 나타낸다. 추가로, 도면은 6G11 항체가 식세포작용을 저해하기 위해서 무손상 Fc-부분을 필요로 한다는 것을 나타내는데, 이는 아미노산 아스파라긴(N)에서 아미노산 글루타민(Q)으로의 위치 297에서의 돌연변이(즉, 본 명세서에서 항체는 6G11NQ로 나타냄)를 유도함으로써 야기된 FcγR 결합의 파괴가 니볼루맙 매개된 식세포작용을 저해하는 능력을 감소시키기 때문이다. 도면은 중간-발현 세포에 대해서 2개의 실험 및 높은 발현 세포에 대해서 3개의 실험을 도시한다. 도 2d는 낮은-발현 세포에서 니볼루맙 매개된 식세포작용이 존재하지 않음을 나타낸다.
도 3은 Fc:FcγR-결합 손상 항-FcγRIIB(AT-130-2 mIgG1 NA)가 아닌 Fc:FcγR-결합 능숙 항-FcγRIIB(AT-130-2 mIgG2a 및 mIgG1)가 생체내에서 항-PD-1 항체 치료 효능 및 생존을 향상시킨다는 것을 나타낸다. CT26(도 a 및 도 b) 또는 MC38(도 3c 및 도 3d) 종양-보유 마우스를 200 μg의 항-PD-1(클론 29F.1A12; Bioxcell) 항체 단독으로 또는 200 μg의 제시된 항-FcγRIIB 항체 변이체 또는 이소타입 대조군(WR17)과 조합하여 3회(100 μl PBS 중의 5x105개의 종양 세포의 S.C.에 의한 접종 후 제8일, 제12일 및 제15일) 처리하였다. 제1 처리의 경우 AT130-2를 항-PD1 항체 6시간 전에 투여하였다. 후속 처리의 경우 두 항체를 함께 제공하였다. 모든 주사는 200 μl PBS 중의 I.P.였다. 종양은 CT26의 경우 400 mm2 또는 MC38의 경우 225 mm2 면적에 도달했을 때 종결로 간주되었다. 그래프는 종양 성장(도 3a 및 도 3c) 및 동물의 생존(도 3b 및 도 3d)을 도시한다(**P<0.01; Log-Rank 시험). 실험을 8 내지 14주령의 암컷 마우스에서 수행하였다.
도 4는 종양-보유 마우스에서 면역 세포 상의 PD-1 발현을 도시한다. 마우스 종양으로부터의 면역 세포를 PD-1 발현에 대해서 정량하였다. 마우스에게 MC38 세포를 주입하고, 약 20일 후에 종양을 수집하였다. 세포를 상이한 T 세포 하위세트로 염색하고, CD8+ T 세포 상에서 PD-1 발현을 FACS로 분석하였다. 세포에 대한 PD-1의 평균 형광 강도 값을 동일한 항 PD-1 항체로 염색된 Quant-tum™ Simply Cellular® 비드로부터의 값과 상관시켜 세포당 수용체 수를 결정하였다.
도 5는 PD-1의 상이한 수준을 발현하는, 즉 PD-1 낮은, PD-1 중간(중간) 및 PD-1 높은 Jurkat 세포를 도시한다. PD-1 발현은 Alexa Fluor 647 인간 항-인간 PD-1(펨브롤리주맙)의 포화 농도를 사용하여 정의되었다.
도 6은 "Jurkat PD-1 중간 세포"에 대한 PD-1 발현을 도시한다. 게이트는 종양 샘플에서 PD-1 "중간-높은" 발현의 하단을 정의하는 데 사용되는 전체 너비/절반 높이 게이트를 도시한다.
도 7은 인간 종양 샘플에서 PD-1 발현을 정의하는 데 사용되는 게이팅 전략을 도시한다. 먼저 CD45+ 이벤트를 정의하고(A), 그 다음 살아있는 세포(B)를 정의하고, 이어서 CD3+(C) 또는 CD3+CD8+(D)를 정의하였다. PD-1 높은 게이트를 CD3+(E) 및 CD3+CD8+ 집단(F)에 각각 설정하였다. PD-1 "높은" 게이트를 PD-1 형질주입된 Jurkat 세포를 기반으로 정의하였고, 하단은 PD-1 중간 Jurkat 세포의 전체 너비/절반 높이 게이트의 하단에 따라 설정되었다. (G) 및 (H)는 각각 CD3+ 및 CD3+CD8+ 집단에서 Alexa Fluor 647 인간 항-인간 PD-1(펨브롤리주맙)에 대한 FMO를 도시한다.
도 8은 PD-1 발현 및 예측된 반응을 비롯한 환자 특성을 포함하여 종양 샘플이 얻어진 각각의 환자에 대한 데이터를 요약한 표를 도시한다.
도 9는 CD3+ 및 CD3+CD8+ 림프구를 발현하는 PD-1 중간-높은의 백분율을 도시한다. 점선은 10%를 정의한다. 문자(F, G, H 등)는 도 8의 표의 환자 ID에 해당한다.
본 명세서에서 본 발명자들은 Fc:FcγR-결합 손상된 항-FcγRIIB가 아닌 Fc:FcγR-결합에 능숙한 항-FcγRIIB 항체만 생체내에서 항-PD-1 항체의 치료 효능을 향상시키고, 시험관내에서 PD-1 높은-발현 T 세포의 임상적으로 관련된 인간 항-PD-1 항체에 의해서 유도된 식세포작용을 예방한다는 것을 입증한다. 이러한 발견은 신규하며, 예상치 못한 것인데, 그 이유는 항-PD-1 요법에서 FcγR의 역할에 대한 상기 문헌 연구가 기초가 되는 손상된 항-PD-1 항체 활성으로서, 저해성 FcγR(문헌[Dahan, R. et al (2015) Cancer Cell 28(3): 285-295]), 또는 개별 활성화(FcγRIII) 및 저해성 FcγRIIB(문헌[Arlauckas, S. P. et al (2017) Sci Transl Med 9(389)])에 비해서 활성화 FcγR에 대해서 넓은 역할을 나타내었기 때문이다.
본 발명은, Fc:FcγR-결합 능숙한 항-FcγRIIB 항체가 아닌 Fc:FcγR-결합 손상된 항-FcγRIIB 항체만 치료 활성을 향상시킨다는, 특히 항-CTLA-4를 포함하는 다른 면역 면역관문에 대한 항체와 관련된 본 발명자들의 이전 발견 중 일부에 비추어 추가로 놀라운 것이다.
따라서, 본 발명은 중간 또는 높은 PD-1 발현을 갖는 종양 침윤 T 림프구를 갖는 환자에서 암의 치료에서,
(i) Fab 영역을 통해 FcγRIIb에 특이적으로 결합하며 Fc 영역을 통해 Fcγ 수용체에 결합하는 항체 분자(본 명세서에서 제1 항체 분자라고 지칭), 및
(ii) PD-1에 특이적으로 결합하며 Fc 영역을 통해 적어도 하나의 Fcγ 수용체에 결합하는 항체 분자(본 명세서에서 제2 항체라고 지칭)의 조합 사용에 관한 것이다.
이러한 조합물은 FcγRIIB를 포함하는 FcγR에 대한 감소된 결합을 통해서, PD-1에 특이적으로 결합하는 항체 분자, 즉, 항-PD-1 항체의 치료 효능을 개선시킬 목적으로, 환자에서 암, 예컨대, 고형암의 치료에 사용되도록 의도된다.
FcγRIIb에 특이적으로 결합하는 본 발명에 따른 항체 분자, 즉 제1 항체는 그 항체의 Fab 영역을 통해, 즉 중쇄 및 경쇄 각각의 하나의 불변 및 하나의 가변 도메인으로 이루어진 항원에 결합하는 항체 상 항원-결합 영역을 통해, 이 Fcγ 수용체에 결합 또는 이와 상호작용한다. 특히, 이것은 면역 효과기 세포, 예를 들어, 대식세포에 존재하는 FcγRIIb에 결합하고, 특히 면역 효과기 세포의 표면에 존재하는 FcγRIIb에 결합한다.
상기에 더하여, FcγRIIb에 특이적으로 결합하는 본 발명에 따른 항체 분자, 즉, 제1 항체 분자는 또한 공지된 바와 같이 그리고 인간 IgG1 이소타입의 항체에 대해 광범위하게 특징규명되어 있는 바와 같이 Fc 영역과 Fc 수용체 간의 상호작용을 통해서 활성화 Fcγ 수용체에 결합한다(문헌[Bruhns, P. et al (2009) Blood 113(16): 3716-3725]).
이는 적어도 하기 치료적으로 중요한 결과를 갖는다: 활성화 Fcγ 수용체 및 저해성 Fcγ 수용체 둘 다는 항-FcγRIIB 항체-의존적(Fab- 및 Fc-) 방식으로 차단되어, 대식세포 식세포작용 또는 항-PD-1 항체 코팅된 항-종양 T 세포(이 맥락에서 코팅된 것은 항-PD-1 항체가 세포에 결합되어 있다는 것을 의미함)의 다른 Fcγ 수용체 발현 면역 효과기 세포의 항-PD-1-항체-매개 제거를 방지한다. 이러한 기전은 이미 기재된 바와 같이(문헌[Arlauckas, S. P. et al (2017) Sci Transl Med 9(389)]), T 세포로부터의 PD-1 항체의 FcγR-발현 효과기 세포, 예를 들어, 대식세포로의 대식세포 FcγR-의존적 전달의 저해를 추가로 포함할 수 있다.
Fc 감마 수용체 발현 면역 효과기 세포는 본 명세서에서 주로 선천적 효과기 세포를 지칭하며, 구체적으로는 대식세포, 호중구, 단핵구, 자연 살해(NK) 세포, 호염기구, 호산구, 비만 세포 및 혈소판을 포함한다. 세포독성 T 세포 및 기억 T 세포는 전형적으로 FcγR을 발현하지 않지만, 특정 상황에서는 그렇게 할 수 있다. 일부 실시형태에서, 면역 효과기 세포는 선천적 면역 효과기 세포이다. 일부 실시형태에서, 면역 효과기 세포는 대식세포이다.
PD-1에 특이적으로 결합하거나 이와 상호작용하는 항체 분자, 즉, 제2 항체 분자는 항-PD-1 항체 코팅된 항종양 T 세포의 항체-PD-1 항체 의존적 FcγR 효과기 세포 의존적 제거를 허용하는 활성화 Fcγ 수용체에 결합하거나 이와 상호작용하는 Fc 영역을 갖는다. 항-PD-1 항체 분자가 결합하는 면역 세포는 중요한 항종양 활성을 부여하는 면역 세포, 예컨대, CD8+ 또는 CD4+ T 세포이다.
결론적으로, Fc 영역이 PD-1 발현 항종양 T 세포의 FcγR 발현 효과기 세포 제거를 초래하는 정도로 활성화 Fcγ 수용체에 결합하거나 이와 상호작용하는 인간 IgG4, IgG1, IgG2 및 IgG3 이소타입의 것을 포함하는 임의의 항-PD-1 변이체 항체는 Fc:FcγR-결합 능숙 항-FcγRIIB 항체, 즉, Fab 영역을 통해서 FcγRIIb에 특이적으로 결합하고, Fc 영역을 통해서 Fcγ 수용체에 결합하는 항체 분자와 조합될 수 있다.
제2 항체는 항-PD-1 항체이다. CD279라고도 공지된 PD-1(세포 예정사 단백질 1)은 면역 세포 상의 면역 면역관문, 즉, 면역관문 단백질이다. 그것은 림프절에서 항원-특이적-T-세포의 세포자멸사를 촉진시키고, 조절 T 세포에서 세포자멸사를 감소시킨다. PD-1 저해제, 예컨대, 니볼루맙(OPDIVO®), 펨브롤리주맙(KEYTRUDA®) 및 세미플리맙(LIBTAYO®)이 면역 시스템을 활성화시켜 종양을 공격하기 위해서 암 치료에 사용된다. PD-1 또는 PD-L1을 표적으로 하는 단클론성 항체는 PD-L1에 대한 PD-1의 결합을 차단할 수 있고, 이는 암 세포에 대한 면역 반응을 부스팅할 수 있다.
항-PD-1 항체는 종양내 T 세포 상에서 발현되는 PD-1에 결합한다.
본 발명에 따른 치료에서 이득을 볼 환자는 승인된 항-PD-1 항체 함유 요법에 대한 표준 기준에 따라서 항-PD-1 요법에 대해서 적격하고, 또한 중간 또는 높은 PD-1 발현을 갖는 종양 침윤 T 림프구(즉, 종양 침윤 CD3+ 림프구)를 갖는 환자이다. 항-PD-1 요법에 적격한 환자는 근치 수술 또는 근치 방사선에 대한 후보자가 아닌 환자에서 흑색종; 폐암, 예컨대, 소세포 폐암(SCLC) 및 비소세포 폐암(NSCLC)(비편평 NSCLC 및 편평 NSCLC 및 전이성 NSCLC 포함); 두경부암, 예컨대, 두경부 편평 세포 암종(HNSCC); 호지킨 림프종; 원발성 종격동 B-세포 림프종(PMBCL); 방광암, 예컨대, 진행성 요로상피 암종; 직장결장암, 예컨대, 불안정성이 높고(MSI-H)/높거나 미스매치 수선 결핍(dMMR) 암 포함; 위암, 예컨대, 진행성 위암 및 위 또는 위식도 접합부(GEJ) 선암종; 자궁경부암; 간암, 예컨대, 간세포 암종; 머켈 세포 암종(MCC); 신장암, 예컨대, 신장 세포 암종(RCC) 및 피부 편평 세포 암종(CSCC), 예컨대, 국소 진행성 CSCC를 앓고 있는 환자이다. 치료될 수 있는 적응증의 수는 당업자에게 공지될 바와 같이 새로운 임상, 새로운 항-PD-1 항체 및 새로운 조합물로 신속하게 확대되고 있다.
본 발명으로 이어진 연구에서, 항-PD-1 항체가 PD-1의 중간 또는 높은 발현을 갖는 T-세포에 투여되는 경우, 이것은 항-PD-1 항체 코팅된 T-세포 및 특히 CD8 양성 T-세포의 식세포작용으로 이어질 수 있다는 것을 발견하였다. 본 발명으로 이어진 연구에서, 항-PD-1 항체와 함께, Fab 영역을 통해 FcγRIIb에 특이적으로 결합하고 Fc 영역을 통해 Fcγ 수용체에 결합하는 항체 분자를 투여함으로써, 이러한 식세포작용은 PD-1의 중간 또는 높은 발현을 갖는 T 세포에 대해서 차단될 수 있다는 것을 추가로 발견하였다. 하기 실시예에 추가로 설명된 상기 발견에 대해서 사용된 시험관내 검정의 생체내 관련성이 면역 적격 마우스를 포함하는 2가지 상이한 고형암 실험 모델에서 확인되었는데, 여기서 항-PD-1을 사용한 단일 작용제 치료에 비해서 Fc:FcγR-결합 능숙 항-FcγRIIB 항체와 항-PD-1 항체를 사용한 병용 치료의 상당히 향상된 생존이 관찰되었다. 이것은 또한 하기 실시예에 보다 상세하게 제시되어 있다. 시험관내 검정의 생체내 관련성을 추가로 뒷받침하여, 종양내 생체내 T 세포 PD-1 발현 수준은 2가지 설정에서 매우 유사하였는데; 생체내 종양내 T 세포 PD-1 발현은 세포당 약 20,000 내지 80,000개 PD-1 분자의 범위였고, 이는 PD-1 중간 발현 인간 T 세포(15,500 내지 78,000개 PD-1 분자) 및 높은 발현 인간 T 세포(세포당 65,000 내지 391,000개 PD-1 분자)의 시험관내 발현 수준에 걸쳐 있으며, 이들 둘 다 인간 항-PD-1-매개 식세포작용의 Fc:FcγR-결합 능숙 항-FcγRIIB 차단에 감응성이었다.
따라서, 본 발명의 맥락에서, 본 명세서에 기재된 치료에서 이득을 볼 수 있는 환자는 PD-1의 중간 또는 높은 발현을 갖는 종양 침윤 T 림프구를 적어도 10% 갖는 환자이다.
본 명세서에서, 중간 또는 높은 발현은 종양 침윤 T 림프구 중 적어도 10%가 세포당 15,500개 이상의 PD-1 분자의 발현을 지칭한다. 하기에 추가로 설명된 바와 같이, PD-1 발현의 절대 수치는 PD-1 발현을 측정하는데 사용된 항-PD-1 항체 및/또는 방법에 따라서 달라질 수 있다. 따라서, 본 명세서에서 사용된 바와 같이 세포당 15,500개 또는 그 초과의 PD-1 분자의 중간 또는 높은 발현은 본 명세서에 기재된 방법에 따라서 그리고/또는 항-인간 PD-1 항체 EH12.2H7(BioLegend로부터 입수 가능)를 사용하여 측정된다.
생체내 설정과 유사하게, 개별 환자의 종양내 T 세포는 이종 PD-1 발현을 나타낼 것이다. 개별 환자는 PD-1의 상이한 발현을 갖는 상이한 세포 집단, 예컨대, 낮은 발현을 갖는 하나의 집단 및 중간 또는 높은 발현을 갖는 하나의 집단을 가질 수 있다. 일부 실시형태에서, 환자의 종양 침윤 CD3+ T 림프구 중 적어도 15%가 중간 또는 높은 PD-1 발현을 갖는다. 일부 실시형태에서, 환자의 종양 침윤 CD3+ T 림프구 중 적어도 20%가 중간 또는 높은 PD-1 발현을 갖는다. 일부 실시형태에서, 환자의 종양 침윤 CD3+ T 림프구 중 적어도 25%가 중간 또는 높은 PD-1 발현을 갖는다. 일부 실시형태에서, 환자의 종양 침윤 CD3+ T 림프구 중 적어도 30%가 중간 또는 높은 PD-1 발현을 갖는다. 일부 실시형태에서, 환자의 종양 침윤 CD3+ T 림프구 중 적어도 35%가 중간 또는 높은 PD-1 발현을 갖는다. 일부 실시형태에서, 환자의 종양 침윤 CD3+ T 림프구 중 적어도 40%가 중간 또는 높은 PD-1 발현을 갖는다. 일부 실시형태에서, 환자의 종양 침윤 CD3+ T 림프구 중 적어도 45%가 중간 또는 높은 PD-1 발현을 갖는다. 일부 실시형태에서, 환자의 종양 침윤 CD3+ T 림프구 중 적어도 50%가 중간 또는 높은 PD-1 발현을 갖는다. 일부 실시형태에서, 환자의 종양 침윤 CD3+ T 림프구 중 적어도 55%가 중간 또는 높은 PD-1 발현을 갖는다. 일부 실시형태에서, 환자의 종양 침윤 CD3+ T 림프구 중 적어도 60%가 중간 또는 높은 PD-1 발현을 갖는다. 일부 실시형태에서, 환자의 종양 침윤 CD3+ T 림프구 중 적어도 65%가 중간 또는 높은 PD-1 발현을 갖는다. 일부 실시형태에서, 환자의 종양 침윤 CD3+ T 림프구 중 적어도 70%가 중간 또는 높은 PD-1 발현을 갖는다. 일부 실시형태에서, 환자의 종양 침윤 CD3+ T 림프구 중 적어도 75%가 중간 또는 높은 PD-1 발현을 갖는다. 일부 실시형태에서, 환자의 종양 침윤 CD3+ T 림프구 중 적어도 80%가 중간 또는 높은 PD-1 발현을 갖는다. 일부 실시형태에서, 환자의 종양 침윤 CD3+ T 림프구 중 적어도 85%가 중간 또는 높은 PD-1 발현을 갖는다. 일부 실시형태에서, 환자의 종양 침윤 CD3+ T 림프구 중 적어도 90%가 중간 또는 높은 PD-1 발현을 갖는다.
일부 실시형태에서, 그것은 중간 또는 높은 PD-1 발현을 갖는 환자의 종양 침윤 CD3 양성 및 CD8 양성(CD3+CD8+) T 림프구이다.
일부 실시형태에서, 환자의 종양 침윤 CD3+CD8+ T 림프구 중 적어도 10%가 중간 또는 높은 PD-1 발현을 갖는다. 일부 실시형태에서, 환자의 종양 침윤 CD3+CD8+ T 림프구 중 적어도 15%가 중간 또는 높은 PD-1 발현을 갖는다. 일부 실시형태에서, 환자의 종양 침윤 CD3+CD8+ T 림프구 중 적어도 20%가 중간 또는 높은 PD-1 발현을 갖는다. 일부 실시형태에서, 환자의 종양 침윤 CD3+CD8+ T 림프구 중 적어도 25%가 중간 또는 높은 PD-1 발현을 갖는다. 일부 실시형태에서, 환자의 종양 침윤 CD3+CD8+ T 림프구 중 적어도 30%가 중간 또는 높은 PD-1 발현을 갖는다. 일부 실시형태에서, 환자의 종양 침윤 CD3+CD8+ T 림프구 중 적어도 35%가 중간 또는 높은 PD-1 발현을 갖는다. 일부 실시형태에서, 환자의 종양 침윤 CD3+CD8+ T 림프구 중 적어도 40%가 중간 또는 높은 PD-1 발현을 갖는다. 일부 실시형태에서, 환자의 종양 침윤 CD3+CD8+ T 림프구 중 적어도 45%가 중간 또는 높은 PD-1 발현을 갖는다. 일부 실시형태에서, 환자의 종양 침윤 CD3+CD8+ T 림프구 중 적어도 50%가 중간 또는 높은 PD-1 발현을 갖는다. 일부 실시형태에서, 환자의 종양 침윤 CD3+CD8+ T 림프구 중 적어도 55%가 중간 또는 높은 PD-1 발현을 갖는다. 일부 실시형태에서, 환자의 종양 침윤 CD3+CD8+ T 림프구 중 적어도 60%가 중간 또는 높은 PD-1 발현을 갖는다. 일부 실시형태에서, 환자의 종양 침윤 CD3+CD8+ T 림프구 중 적어도 65%가 중간 또는 높은 PD-1 발현을 갖는다. 일부 실시형태에서, 환자의 종양 침윤 CD3+CD8+ T 림프구 중 적어도 70%가 중간 또는 높은 PD-1 발현을 갖는다. 일부 실시형태에서, 환자의 종양 침윤 CD3+CD8+ T 림프구 중 적어도 75%가 중간 또는 높은 PD-1 발현을 갖는다. 일부 실시형태에서, 환자의 종양 침윤 CD3+CD8+ T 림프구 중 적어도 80%가 중간 또는 높은 PD-1 발현을 갖는다. 일부 실시형태에서, 환자의 종양 침윤 CD3+CD8+ T 림프구 중 적어도 85%가 중간 또는 높은 PD-1 발현을 갖는다. 일부 실시형태에서, 환자의 종양 침윤 CD3+CD8+ T 림프구 중 적어도 90%가 중간 또는 높은 PD-1 발현을 갖는다.
개별 환자의 종양 세포 상에서의 PD-1의 발현은 종양 생검-유래 세포 또는 조직을 사용하여 측정될 수 있다. 보다 구체적으로, 절대 T 세포 발현 수준은 본 명세서에 기재된 또는 동등한 유세포 분석법 및 비드-기반 항체 및 세포 에피토프 정량화 키트(들)를 사용하여 정량될 수 있다. 대안적으로, 반정량적 분석을 종양 조직 생검을 사용한 면역조직 화학에 의해서 수행할 수 있는데, 환자 생검의 항-PD-1 염색을 조직 또는 세포방사 세포의 염색과 비교하고, 항-PD-1 항체 활성의 항-FcγRIIB-매개 부스팅에 대한 민감성(세포당 15,500개 이상의 PD-1 분자) 또는 민감성 없음(세포당 15,500개 미만의 PD-1 분자)과 연관된 정의되고 결정된 PD-1 수준을 표현한다. 중요하게는, 인간 T 세포 PD-1 발현을 결정하기 위한 방법이 본 명세서에 기재된 정량 방법과 상이하거나, 상이한 항-PD-1 항체 클론 또는 형광 표지를 사용하는 경우, 검정은 예를 들어, 도 1을 참고로, 하기 실시예, 특히 실시예 1에 상세하게 기재된 방법과 비교되거나 이에 대해서 검증될 필요가 있다. 일반적으로, 도 1을 참고하여, 실시예 1에 예시된 바와 같이 PD-1 발현을 정량하는 하나의 방식은 정의된 비율로 형광색소로 표지된 항체, 예를 들어, 그리고 바람직하게는 일부 실시형태에서 1:1 비율로 피코에리트린(PE)으로 표지된 항체를 사용하는 것이다. 이에 의해서, 정의된 수의 형광색소(예를 들어, PE) 분자를 갖는 비드를 사용하여 표준 곡선을 생성하기 위해서, 세포에 결합된 항체의 분자의 수를 결정할 수 있다. 시험될 세포를 표지된 항-PD1 항체(예컨대, BioLegend로부터의 항-인간 PD-1 항체 EH12.2H7)와 함께 인큐베이션시키고, 비드와 세포가 동일한 설정으로 전개될 수 있는 그러한 방식으로 FACs 기계 설정을 사용하여 분석하였다. 예를 들어, Log 비드당 분자 대 Log 형광을 플로팅함으로써 표준 곡선을 생성하고, 그 다음 형광 색소 표지된 항-PD1 항체 염색 세포를 전개시키고, Log 평균 형광 강도(MFI)를 사용하여 결합된 항체의 수를 계산한다.
상기에 언급된 바와 같이, 절대 수치는 측정을 위해서 사용되는 항-PD1 항체에 따라서 달라질 수 있다.
면역 세포 상의 PD-1에 특이적으로 결합하는 것에 더하여, 제2 항체 분자는 Fc 영역을 통해서 적어도 하나의 Fcγ 수용체에 결합한다. 일부 실시형태에서, 제2 항체 분자는 Fc 영역을 통해서 적어도 하나의 활성화 Fcγ 수용체에 결합한다. 제2 항체는 이의 Fc 영역을 통해서 활성화 Fcγ 수용체, 예컨대, 면역 효과기 세포에 존재하는 활성화 Fcγ 수용체에 결합할 수 있다. 활성화 Fcγ 수용체에 결합할 수 있기 위해, 제2 항체의 Fc 영역은 적어도 일부 실시형태에서 위치 297에서 글리코실화될 수 있다. 이 위치에서 탄수화물 잔기는 Fcγ 수용체에 대한 결합을 돕는다. 일부 실시형태에서, 이들 잔기는 말단 갈락토스 잔기 및 시알산과 GlnNAc, 만노스를 함유하는 바이안테너리(biantennary) 탄수화물이다. 이것은 Fc 분자의 CH2 부분을 함유해야 한다.
본 발명은 추가로 본 명세서에 기재된 치료, 즉, (i) Fab 영역을 통해 FcγRIIb에 특이적으로 결합하며 Fc 영역을 통해 Fcγ 수용체에 결합하는 제1 항체 분자와 (ii) PD-1에 특이적으로 결합하며 Fc 영역을 통해 적어도 하나의 Fcγ 수용체에 결합하는 제2 항체 분자를 사용한 병용 치료로부터 이득을 볼 환자를 식별하는 데 사용될 수 있는 진단 시험에 관한 것이다. 항-FcγRIIB-매개된 향상된 항-PD-1 항체 효능과 연관된 생체내 PD-1 발현 수준 및 치료적으로 관련된 인간 항-PD-1 항체 및 인간 T 세포 및 대식세포를 혼입한 시험관내 식세포작용 검정에 기초하여, 본 발명자들은 특정 T 세포 PD-1 수용체 발현 수준이 항-PD-1 요법 효능의 항-FcγRIIB-매개된 부스팅과 연관되고, 이를 위해 필요하다고 결정하였다. 본 발명에 따른 진단 시험은 이러한 발견에 기초하며, 따라서 환자로부터 얻은 샘플, 예컨대, 종양 생검-유래 세포 또는 조직에서 종양 세포에 대한 PD-1의 발현을 측정하는 것을 포함한다. T 세포 상의 PD-1 발현 수준의 절대적 또는 반정량적 분석을 상기에 기재된 바와 같이 사용할 수 있다. 일부 실시형태에서, 진단 시험은 PD-1 발현의 측정의 경우 항-PD1 항체 EH12.2H7의 사용에 기초하며; T 림프구당 적어도 15,500개의 PD-1 분자의 발현은, 상기 및 실시예 1에 추가로 기재된 바와 같이 환자가 본 발명에 따른 병용 치료에서 이득을 볼 수 있다고 예측한다.
항체는 면역학 및 분자 생물학 분야의 당업자에게 널리 공지되어 있다. 전형적으로, 항체는 2개의 중쇄(H) 및 2개의 경쇄(L)를 포함한다. 본 명세서에서, 때때로 이 완전한 항체 분자를 전체-크기(full-size) 또는 전장 항체라고 지칭한다. 항체의 중쇄는 1개의 가변 도메인(VH) 및 3개의 불변 도메인(CH1, CH2, 및 CH3)를 포함하고, 항체의 분자 경쇄는 1개의 가변 도메인(VL) 및 1개의 불변 도메인(CL)을 포함한다. 가변 도메인(때때로 집합적으로 FV 영역으로서 지칭됨)은 항체의 표적, 또는 항원에 결합한다. 각 가변 도메인은 표적 결합을 담당하는 상보적 결정 영역(CDR)으로서 지칭되는 3개의 루프를 포함한다. 불변 도메인은 항체를 항원에 결합시키는데 직접적으로 관여하지 않으나, 다양한 효과기 기능을 나타낸다. 항체 또는 면역글로불린은 이들의 중쇄의 불변 영역의 아미노산 서열에 따라 상이한 부류로 할당될 수 있다. 면역글로불린의 5가지의 주요 부류인 IgA, IgD, IgE, IgG 및 IgM가 존재하고, 인간에서 이들 중 몇 가지는 하부부류(이소타입)로 추가로 나뉜다: 예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, 및 IgG4; IgA1 및 IgA2.
항체의 또 다른 부분은 Fc 영역(달리, 단편 결정화 도메인으로서 공지됨)으로, 이는 항체의 각 중쇄의 2개의 불변 도메인을 포함한다. 상기 언급된 바와 같이, Fc 영역은 항체와 Fc 수용체 사이의 상호작용을 담당한다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같은 용어 항체 분자는 전장 또는 전체-크기 항체뿐 아니라 전장 항체의 기능성 단편 및 이러한 항체 분자의 유도체를 포함한다.
전체-크기 항체의 기능성 단편은 상응하는 전체-크기 항체와 동일한 항원 결합 특징을 갖고, 동일한 가변 도메인(즉, VH 및 VL 서열) 및/또는 상응하는 전체-크기 항체와 동일한 CDR 서열을 포함한다. 기능성 단편은 상응하는 전체-크기 항체와 동일한 항원 결합 특징을 갖는다는 것은 이것이 전체-크기 항체와 동일한 표적 상의 에피토프에 결합한다는 것을 의미한다. 이러한 기능성 단편은 전체-크기 항체의 Fv 부분에 상응할 수 있다. 대안적으로, 이러한 단편은 Fc 부분을 함유하지 않는 1가 항원-결합 단편인, F(ab)로도 나타내는 Fab, 또는 디설파이드 결합에 의해 함께 연결된 2개의 항원-결합 Fab 부분을 함유하는 2가 항원-결합 단편인 F(ab')2, 또는 F(ab')2의 1가-변이체인 F(ab')일 수 있다. 이러한 단편은 또한 단일 쇄 가변 단편(scFv)일 수도 있다.
기능성 단편은 항상 상응하는 전체-크기 항체의 6개 모두의 CDR을 함유하는 것은 아니다. 3개 이하의 CDR 영역(일부 경우에, 심지어 단일의 CDR 또는 그의 일부)을 함유하는 분자는 CDR(들)이 유래된 항체의 항원-결합 활성을 보유할 수 있는 것으로 인지된다. 예를 들어, 문헌[Gao et al., 1994, J. Biol. Chem., 269: 32389-93]에서는, 전체 VL 사슬(3개의 모든 CDR)이 그의 기질에 대한 높은 친화성을 갖는 것으로 기재되어 있다.
2개의 CDR 영역을 함유하는 분자가 예를 들어 문헌[Vaughan & Sollazzo 2001, Combinatorial Chemistry & High Throughput Screening, 4: 417-430]에 기재되어 있다. 418 페이지(오른쪽 열 ― 3 우리의 설계 전략)에서, 프레임 영역 내 산재된 H1 및 H2 CDR 고가변 영역만을 포함하는 미니바디(minibody)가 기재되어 있다. 미니바디는 표적에 결합할 수 있는 것으로서 기재되어 있다. 문헌[Pessi et al., 1993, Nature, 362: 367-9] 및 문헌[Bianchi et al., 1994, J. Mol. Biol., 236: 649-59]은 Vaughan & Sollazzo에 의해 참조되며, H1 및 H2 미니바디 및 이것의 특성을 보다 자세히 설명한다. 문헌[Qiu et al., 2007, Nature Biotechnology, 25:921-9]에서, 2개의 연결된 CDR로 이루어진 분자가 항원을 결합할 수 있음이 입증되었다. 문헌[Quiocho 1993, Nature, 362: 293-4]은 "미니바디"기술의 요약을 제공한다. 문헌[Ladner 2007, Nature Biotechnology, 25:875-7]은 2개의 CDR을 함유하는 분자가 항원-결합 활성을 보유할 수 있다는 점을 언급했다.
단일 CDR 영역을 함유하는 항체 분자는 예를 들어, 문헌[Laune et al., 1997, JBC, 272: 30937-44]에 기재되어 있는데, 여기서 CDR로부터 유래된 다양한 헥사펩티드가 항원-결합 활성을 보이는 것이 입증되었고, 완전한, 단일 CDR의 합성 펩티드는 강한 결합 활성을 나타내는 것이 주목된다. 문헌[Monnet et al., 1999, JBC, 274: 3789-96]에서, 다양한 12-머 펩티드 및 연관된 프레임워크 영역이 항원-결합 활성을 갖는 것을 나타내며, CDR3-유사 펩티드 단독이 항원을 결합할 수 있다고 언급되어 있다. 문헌[Heap et al., 2005, J. Gen. Virol., 86: 1791-1800]에서는, "마이크로-항체"(단일의 CDR을 함유하는 분자)가 항원을 결합할 수 있다고 보고되어 있고, 항-HIV 항체로부터의 시클릭 펩티드가 항원-결합 활성 및 기능을 갖는 것으로 나타내어져 있다. 문헌[Nicaise et al., 2004, Protein Science, 13:1882-91]에서는, 단일의 CDR이 항원-결합 활성 및 이것의 리소자임 항원에 대한 친화성을 부여할 수 있는 것으로 제시되어 있다.
따라서, 5개, 4개, 3개 또는 그보다 적은 개수의 CDR을 가진 항체 분자는 이들이 유래된 전장-항체의 항원 결합 특성을 보유할 수 있다.
항체 분자는 또한 전장 항체의 유도체 또는 이러한 항체의 단편일 수도 있다. 유도체가 사용되는 경우, 이것이 전장 항체와 동일한 표적 상 에피토프에 결합한다는 의미에서 상응하는 전장 항체와 동일한 항원 결합 특성을 가져야 한다.
따라서, 본 명세서에서 사용된 바와 같은 용어 "항체 분자"에, 본 발명자들은 하기를 포함하는 모든 유형의 항체 분자 및 이의 기능성 단편 및 이의 유도체를 포함한다: 단클론성 항체, 다클론성 항체, 합성 항체, 재조합적으로 생성된 항체, 다중특이적 항체, 이중특이적 항체, 인간 항체, 인간 기원의 항체, 인간화 항체, 키메라 항체, 단쇄 항체, 단쇄 Fv(scFv), Fab 단편, F(ab')2 단편, F(ab') 단편, 디설파이드-연결 Fv(sdFv), 항체 중쇄, 항체 경쇄, 항체 중쇄의 호모-다이머, 항체 경쇄의 호모-다이머, 항체 중쇄의 헤테로다이머, 항체 경쇄의 헤테로다이머, 이러한 호모- 및 헤테로다이머의 항원 결합 기능성 단편.
나아가, 본 명세서에서 이용되는 바와 같이 용어 "항체 분자"는 달리 특별히 언급되지 않는 한, IgG, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA, IgM, IgD, 및 IgE를 포함하는, 모든 부류의 항체 분자 및 기능성 단편을 포함한다.
일부 실시형태에서, 제1 항체는 인간 IgG1이다. 당업자는 마우스 IgG2a 및 인간 IgG1이 맞물려서 활성 Fc 감마 수용체를 차단함으로써, 면역 효과기 세포 상에서 활성화 Fc 감마 수용체의 항-PD-1 항체 매개된 맞물림 및 예를 들어, ADCP 또는 ADCC에 의한 항-PD-1 항체 코팅된 효과기 T 세포의 후속 제거를 방지할 수 있다는 것을 인지할 것이다. 이와 같이, 마우스 IgG2a가 마우스에서 결실에 바람직한 이소타입인 실시형태에서, 인간 IgG1이 그러한 실시형태에서 인간에서 결실에 바람직한 이소타입이다.
일부 실시형태에서, 제1 항체는 인간 IgG1이다. 다른 실시형태에서, 제1 항체는 인간 IgG4, IgG3 또는 IgG2이다. 다른 실시형태에서, 제1 항체는 Fc 감마 수용체에 대한 향상된 결합을 위해서 Fc-조작된 인간 IgG 항체이다. 일부 실시형태에서 인간 IgG 항체는 하나 또는 몇몇 활성화 Fcγ 수용체에 개선된 결합을 위해서 Fc-조작되고/되거나 저해성 Fcγ 수용체보다 활성 Fcγ 수용체에 대해서 개선된 상대 결합을 위해서 조작된다. 일부 실시형태에서, 항-FcγRIIB 항체는 Fc-조작된 인간 IgG 항체이다. 이러한 조작된 항체 변이체의 예는 FcγRIIIA에 대해 선택적인 개선된 항체 결합을 갖는 비푸코실화된 항체 및 지향된, 돌연변이성 또는 다른 수단, 저해성 FcγRIIB에 비해서 하나 또는 몇몇 활성화 Fcγ 수용체에 대한 개선된 결합을 유발하는 아미노산 치환에 의해서 조작된 항체를 포함한다(문헌[Richards et al. 2008. 'Optimization of antibody binding to FcgammaRIIa enhances macrophage phagocytosis of tumor cells', Mol Cancer Ther, 7: 2517-27]; 문헌[Lazar et al. 2006. 'Engineered antibody Fc variants with enhanced effector function', Proc Natl Acad Sci U S A, 103: 4005-10]). 일부 실시형태에서, 활성화 Fc 감마 수용체에 대한 개선된 결합을 위해서 조작된 인간 IgG 항체는 Fc 부분 내에 2개의 돌연변이 S239D 및 I332E 또는 3개의 돌연변이 S239D, I332E 및 A330L 및/또는 G236A 돌연변이를 보유하는 인간 IgG 항체일 수 있다. 일부 실시형태에서, 활성화 Fc 감마 수용체에 대한 개선된 결합을 위해서 조작된 인간 IgG 항체는 비푸코실화된 인간 IgG 항체일 수 있다.
일부 실시형태에서, 제2 항체는 FDA에 의해서 현재 승인된 항-PD-1 항체 니볼루맙, 펨브롤리주맙 및 세플리주맙의 이소타입인 인간 IgG4이다. 당업자는 몇몇 뮤린 항체 이소타입이 활성화 Fc 감마 수용체 및 저해성 Fc 감마 수용체 둘 다에 결합할 수 있다는 것을 인지할 것이다. 중요하게는, 당업자는 마우스 활성화 Fc 감마 수용체 및 저해성 Fc 감마 수용체에 결합하는 래트 IgG2a 이소타입이 인간 활성화 Fc 감마 수용체 및 저해성 Fc 감마 수용체에 결합하는 인간 IgG4 이소타입을 유사하게 모방한다고 알려져 있다는 알고 있을 것이다(문헌[Arlauckas, S. P. et al (2017) Sci Transl Med 9(389)]). 당업자는 인간 이소타입 IgG1 및 IgG4 이외에, 인간 IgG3 및 IgG2 항체는 인간 FcγR와 생산적으로 맞물릴 수 있고(문헌[Sanders, L. A. et al (1995) Infect Immun 63(1): 73-81]), 예를 들어, 활성화 Fc 감마 수용체 보유 면역 세포의 활성화 후 ADCP 및 ADCC를 통해서 항체-의존성 T 세포 고갈을 매개할 수 있다(문헌[Arce Vargas, F. et al (2018) Cancer Cell 33(4): 649-663 e644]). 결과적으로, 일부 실시형태에서 제2 항체는 인간 IgG1 또는 IgG2 또는 IgG3 항체일 수 있다.
상기에 개략된 바와 같이, 항체 분자의 상이한 유형 및 형태가 본 발명에 포함되며, 면역학 분야의 당업자에게 공지될 것이다. 치료적 목적으로 사용되는 항체는 종종 항체 분자의 특성을 변형시키는 추가적인 성분으로 변형된다는 것이 널리 공지되어 있다.
그러므로, 본 발명자들은 본 발명의 항체 분자 또는 본 발명에 따라 사용된 항체 분자(예를 들어, 단클론성 항체 분자 및/또는 다클론성 항체 분자 및/또는 이중특이적 항체 분자)가 검출 가능한 모이어티(moiety) 및/또는 세포독성 모이어티를 포함한다는 것을 포함한다.
"검출 가능한 모이어티"에, 본 발명자들은 효소; 방사성 원자; 형광 모이어티; 화학발광 모이어티; 생물발광 모이어티를 포함하는 군으로부터 하나 이상을 포함한다. 검출 가능한 모이어티는 항체 분자가 시험관내 및/또는 생체내 및/또는 생체외에서 시각화될 수 있게 한다.
"세포독성 모이어티"에, 본 발명자들은 방사성 모이어티, 및/또는 효소(이때, 효소는 카스파제) 및/또는 독소(이때, 독소는 박테리아 독소 또는 독물임)을 포함하며; 세포독성 모이어티는 세포 용해를 유도할 수 있다.
본 발명자들은 항체 분자가 단리된 형태 및/또는 정제된 형태일 수 있고/있거나 PEG화될 수 있음을 추가로 포함한다. PEG화는 폴리에틸렌 글리콜 중합체가 항체 분자 또는 유도체와 같은 분자에 첨가되어 그 거동을 변형하는, 예를 들어 이것의 유체역학적 크기를 증가시키는 것에 의해 반감기를 연장시키고, 신장 클리어런스를 방지하는 방법이다.
상기 논의된 바와 같이, 항체의 CDR은 항체 표적에 결합한다. 본 명세서에서 기재된 각 CDR에 아미노산을 할당하는 것은 문헌[Kabat EA et al. 1991, In "서열s of Proteins of Immunological Interest" Fifth Edition, NIH Publication No. 91-3242, pp xv- xvii]에 따른 정의에 따른다.
당업자가 인식하고 있는 바와 같이, 아미노산을 각 CDR에 할당하기 위한 다른 방법이 또한 존재한다. 예를 들어, International ImMunoGeneTics information system(IMGT(R))(http://www.imgt.org/ and Lefranc and Lefranc "The Immunoglobulin FactsBook" published by Academic Press, 2001).
추가 실시형태에서, 본 발명의 또는 본 발명에 따라 사용된 항체 분자는 본 명세서에서 제공된 특정 항체 분자, 예를 들어 특정 표적에 결합하기 위한 예를 들어 SEQ ID NO: 1-194에서 나타낸 아미노산 서열 중 임의의 것을 포함하는 항체 분자와 경쟁할 수 있는 항체 분자이다.
"경쟁할 수 있는"이란, 경쟁 항체가 본 명세서에서 정의된 바와 같은 항체 분자의 특정 표적의 결합을 적어도 부분적으로 저해하거나 그렇지 않으면 방해할 수 있다는 것을 의미한다.
예를 들어, 이러한 경쟁 항체 분자는 약 10% 이상; 예를 들어 약 20% 이상, 또는 약 30% 이상, 약 40% 이상, 약 50% 이상, 약 60% 이상, 약 70% 이상, 약 80% 이상, 약 90% 이상, 약 95% 이상, 약 100% 본 명세서에서 기재된 항체 분자의 결합을 저해할 수 있고/있거나 본 명세서에서 기재된 항체의 특정 표적에 대한 결합을 방지 또는 감소시키는 능력을 약 10% 이상; 예를 들어 약 20% 이상, 약 30% 이상, 약 40% 이상, 약 50% 이상, 약 60% 이상, 약 70% 이상, 약 80% 이상, 약 90% 이상, 약 95% 이상, 또는 약 100% 저해할 수 있다.
경쟁적 결합은 효소-결합 면역흡착 검정(ELISA)과 같은 당업자에게 익히 공지된 방법에 의해 결정될 수 있다.
ELISA 검정은 에피토프-변형 또는 차단 항체를 평가하는데 사용될 수 있다. 경쟁 항체를 동정하기에 적합한 추가적인 방법은 본 명세서에서 참조로 통합되어 있는 문헌[Antibodies: A Laboratory Manual, Harlow & Lane (예를 들어, 페이지 567 내지 569, 574 내지 576, 583 및 590 내지 612, 1988, CSHL, NY, ISBN 0-87969-314-2 참조)]에 개시되어 있다.
항체는 정의된 표적 분자 또는 항원에 특이적으로 결합하거나 이와 상호작용한다 것이 널리 공지되어 있고, 즉, 이것은 항체가 우세하게 그리고 선택적으로 표적이 아닌 분자가 아니라 이의 표적과 결합한다는 것을 의미한다.
본 발명에 따른 항체 또는 본 발명에 따라서 사용되는 항체의 표적은 세포의 표면에서 발현되고, 즉, 이것은 세포 표면 항원이며, 항체에 대한 에피토프(이러한 맥락에서 달리는 세포 표면 에피토프로서 알려짐)를 포함할 것이다. 세포 표면 항원 및 에피토프는 면역학 또는 세포 생물학의 당업자에 의해 용이하게 이해될 수 있는 용어이다.
"세포 표면 항원"에, 본 발명자들은 세포 표면 항원이 세포막의 세포외 측면 상에 노출되지만 세포막의 세포외 측면 상에 단지 일시적으로 노출될 수 있다는 것을 포함한다. "일시적으로 노출된"에, 본 발명자들은 세포 표면 항원이 세포 내로 내재화될 수 있거나, 세포막의 세포외 측면으로부터 세포외 공간으로 방출될 수 있는 것을 포함한다. 세포 표면 항원은 프로테아제에 의해 매개될 수 있는 절단에 의해 세포막의 세포외 측면으로부터 방출될 수 있다.
본 발명자들은 또한 세포 표면 항원이 세포막에 연결될 수 있지만, 단지 세포막과 일시적으로 회합될 수 있다는 것을 포함한다. "일시적으로 연관된"에, 본 발명자들은 세포 표면 항원이 세포막의 세포외 측면으로부터 세포외 공간으로 방출될 수 있음을 포함한다. 세포 표면 항원은 프로테아제에 의해 매개될 수 있는 절단에 의해 세포막의 세포외 측면으로부터 방출될 수 있다.
본 발명자들은 세포 표면 항원이 펩티드, 또는 폴리펩티드 또는 탄수화물, 또는 올리고당 사슬 또는 지질; 및/또는 단백질 또는 당단백질 또는 지단백질 상 존재하는 에피토프일 수 있다는 것을 추가로 포함한다.
단백질 결합 평가 방법은 생화학 또는 면역학의 당업자에게 공지되어 있다. 당업자는 이 방법이 항체의 표적과의 결합 및/또는 항체의 Fc 영역의 Fc 수용체와의 결합뿐만 아니라 이들 상호작용의 상대적 강도, 또는 특이성, 또는 저해, 또는 방지 또는 감소를 평가하는데 사용될 수 있다는 점을 인지할 것이다. 단백질 결합을 평가하는데 사용될 수 있는 방법의 예는 예를 들어 면역검정, BIAcore, 웨스턴 블롯, 방사면역검정(RIA: radioimmunoassay) 및 효소-결합 면역흡착 검정(ELISA: enzyme-linked immunosorbent assay)이다(항체 특이성에 대한 논의를 위해, 문헌[Fundamental Immunology Second Edition, Raven Press, New York at pages 332-336 (1989)]을 참조).
따라서, "특이적으로 결합하는 항체 분자" 또는 "표적 특이적 항체 분자"에, 본 발명자들은 항체 분자가 표적에 특이적으로 결합하지만 비표적에는 결합하지 않거나, 표적보다 비표적에 보다 약하게(더 낮은 친화성으로) 결합하는 것을 포함한다.
본 발명자들은 또한 항체가 표적에 비표적보다 적어도 2배 더 강하게, 적어도 5배 더 강하게, 또는 적어도 10배 더 강하게, 또는 적어도 20배 더 강하게, 또는 적어도 50배 더 강하게, 또는 적어도 100배 더 강하게, 또는 적어도 200배 더 강하게, 또는 적어도 500배 더 강하게, 또는 적어도 약 1000배 더 강하게 특이적으로 결합하는 것을 의미하는 것을 포함한다.
추가로, 본 발명자들은 항체가 표적에 적어도 약 적어도 약 10-1 Kd, 또는 적어도 약 10-2 Kd, 또는 적어도 약 10-3 Kd, 또는 적어도 약 10-4 Kd, 또는 적어도 약 10-5 Kd, 또는 적어도 약 10-6 Kd, 또는 적어도 약 10-7 Kd, 또는 적어도 약 10-8 Kd, 또는 적어도 약 10-9 Kd, 또는 적어도 약 10-10 Kd, 또는 적어도 약 10-11 Kd, 또는 적어도 약 10-12 Kd, 또는 적어도 약 10-13 Kd, 또는 적어도 약 10-14 Kd, 또는 적어도 약 10-15 Kd의 Kd 로 표적에 결합하는 경우 이것이 표적에 특이적으로 결합한다는 의미를 포함한다.
일부 실시형태에서, FcγRIIb에 특이적으로 결합하는 항체 분자는 인간 항체이다.
일부 실시형태에서, FcγRIIb에 특이적으로 결합하는 항체 분자는 인간 기원의 항체, 즉 본 명세서에서 기재된 바와 같이 변형되어진 본래 인간 항체이다.
일부 실시형태에서, FcγRIIb에 특이적으로 결합하는 항체 분자는 인간화 항체, 즉 인간 항체와의 유사성을 증가시키도록 변형된 본래 비인간 항체이다. 인간화 항체는 예를 들어 뮤린 항체 또는 라마 항체일 수 있다.
일부 실시형태에서, FcγRIIb에 특이적으로 결합하는 항체 분자는 하기의 불변 영역(CH 및 CL)을 포함한다:
IgG1-CH [서열번호 1]
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
IgG1-CL [서열번호 2]
QPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
일부 실시형태에서, FcγRIIb에 특이적으로 결합하는 항체 분자는 하기 클론의 하나 이상의 서열을 포함한다:
항체 클론: 1A01
1A01-VH [서열번호 3]
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDYYMNWIRQTPGKGLEWVSLIGWDGGSTYYADSVKGRFTISRDNSENTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARAYSGYELDYWGQGTLVTVSS
1A01-VL [서열번호 27]
QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGNNAVNWYQQLPGTAPKLLIYDNNNRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDSLNASIFGGGTKLTVLG
CDR 영역
CDRH1: DYYMN [서열번호 51]
CDRH2: LIGWDGGSTYYADSVKG [서열번호 52]
CDRH3: AYSGYELDY [서열번호 53]
CDRL1: SGSSSNIGNNAVN [서열번호 54]
CDRL2: DNNNRPS [서열번호 55]
CDRL3: AAWDDSLNASI [서열번호 56]
항체 클론: 1B07
1B07-VH [서열번호 4]
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAFTRYDGSNKYYADSVRGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARENIDAFDVWGQGTLVTVSS
1B07-VL [서열번호 28]
QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGNNAVNWYQQLPGTAPKLLIYDNQQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCEAWDDRLFGPVFGGGTKLTVLG
CDR 영역
CDRH1: SYGMH [서열번호 57]
CDRH2: FTRYDGSNKYYADSVRG [서열번호 58]
CDRH3: ENIDAFDV [서열번호 59]
CDRL1: SGSSSNIGNNAVN [서열번호 60]
CDRL2: DNQQRPS [서열번호 61]
CDRL3: WDDRLFGPV [서열번호 62]
항체 클론: 1C04
1C04-VH [서열번호 5]
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSSISDSGAGRYYADSVEGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARTHDSGELLDAFDIWGQGTLVTVSS
1C04-VL [서열번호 29]
QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNHVLWYQQLPGTAPKLLIYGNSNRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDSLNGWVFGGGTKLTVLG
CDR 영역
CDRH1: SYAMS [서열번호 63]
CDRH2: SISDSGAGRYYADSVEG [서열번호 64]
CDRH3: THDSGELLDAFDI [서열번호 65]
CDRL1: SGSSSNIGSNHVL [서열번호 66]
CDRL2: GNSNRPS [서열번호 67]
CDRL3: AAWDDSLNGWV [서열번호 68]
항체 클론: 1E05
1E05-VH [서열번호 6]
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSTYAMNWVRQVPGKGLEWVAVISYDGSNKNYVDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARNFDNSGYAIPDAFDIWGQGTLVTVSS
1E05-VL [서열번호 30]
QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGTAPKLLIYDNNSRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDSLGGPVFGGGTKLTVLG
CDR 영역
CDRH1: TYAMN [서열번호 69]
CDRH2: VISYDGSNKNYVDSVKG [서열번호 70]
CDRH3: NFDNSGYAIPDAFDI [서열번호 71]
CDRL1: TGSSSNIGAGYDVH [서열번호 72]
CDRL2: DNNSRPS [서열번호 73]
CDRL3: AAWDDSLGGPV [서열번호 74]
항체 클론: 2A09
2A09-VH [서열번호 7]
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNAWMSWVRQAPGKGLEWVAYISRDADITHYPASVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTTGFDYAGDDAFDIWGQGTLVTVSS
2A09-VL [서열번호 31]
QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNAVNWYQQLPGTAPKLLIYGNSDRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDSLNGRWVFGGGTKLTVLG
CDR 영역
CDRH1: NAWMS [서열번호 75]
CDRH2: YISRDADITHYPASVKG [서열번호 76]
CDRH3: GFDYAGDDAFDI [서열번호 77]
CDRL1: SGSSSNIGSNAVN [서열번호 78]
CDRL2: GNSDRPS [서열번호 79]
CDRL3: AAWDDSLNGRWV [서열번호 80]
항체 클론: 2B08
2B08-VH [서열번호 8]
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDYYMSWVRQAPGKGLEWVALIGHDGNNKYYLDSLEGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARATDSGYDLLYWGQGTLVTVSS
2B08-VL [서열번호 32]
QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGNNAVNWYQQLPGTAPKLLIYYDDLLPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCTTWDDSLSGVVFGGGTKLTVLG
CDR 영역
CDRH1: DYYMS [서열번호 81]
CDRH2: LIGHDGNNKYYLDSLEG [서열번호 82]
CDRH3: ATDSGYDLLY [서열번호 83]
CDRL1: SGSSSNIGNNAVN [서열번호 84]
CDRL2: YDDLLPS [서열번호 85]
CDRL3: TTWDDSLSGVV [서열번호 86]
항체 클론: 2E8-VH
2E8-VH [서열번호 9]
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDYYMSWIRQAPGKGLEWVSAIGFSDDNTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAGGDGSGWSFWGQGTLVTVSS
2E8-VL [서열번호 33]
QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGNNAVNWYQQLPGTAPKLLIYDNNKRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCATWDDSLRGWVFGGGTKLTVLG
CDR 영역
CDRH1: DYYMS [서열번호 87]
CDRH2: AIGFSDDNTYYADSVKG [서열번호 88]
CDRH3: GDGSGWSF [서열번호 89]
CDRL1: SGSSSNIGNNAVN [서열번호 90]
CDRL2: DNNKRPS [서열번호 91]
CDRL3: ATWDDSLRGWV [서열번호 92]
항체 클론: 5C04
5C04-VH [서열번호 10]
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYGMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAREWRDAFDIWGQGTLVTVSS
5C04-VL [서열번호 34]
QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGTAPKLLIYSDNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDSLSGSWVFGGGTKLTVLG
CDR 영역
CDRH1: NYGMH [서열번호 93]
CDRH2: VISYDGSNKYYADSVKG [서열번호 94]
CDRH3: WRDAFDI [서열번호 95]
CDRL1: TGSSSNIGAGYDVH [서열번호 96]
CDRL2: SDNQRPS [서열번호 97]
CDRL3: AAWDDSLSGSWV [서열번호 98]
항체 클론: 5C05
5C05-VH [서열번호 11]
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSTYGMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARENFDAFDVWGQGTLVTVSS
5C05-VL [서열번호 35]
QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGTAPKLLIYSNSQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDSLNGQVVFGGGTKLTVLG
CDR 영역
CDRH1: TYGMH [서열번호 99]
CDRH2: VISYDGSNKYYADSVKG [서열번호 100]
CDRH3: ENFDAFDV [서열번호 101]
CDRL1: TGSSSNIGAGYDVH [서열번호 102]
CDRL2: SNSQRPS [서열번호 103]
CDRL3: AAWDDSLNGQVV [서열번호 104]
항체 클론: 5D07
5D07-VH [서열번호 12]
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSTYGMHWVRQAPGKGLEWVAVIAYDGSKKDYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAREYRDAFDIWGQGTLVTVSS
5D07-VL [서열번호 36]
QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGTAPKLLIYGNSNRPSGVPDRFSGSKSGTTASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDSVSGWMFGGGTKLTVLG
CDR 영역
CDRH1: TYGMH [서열번호 105]
CDRH2: VIAYDGSKKDYADSVKG [서열번호 106]
CDRH3: EYRDAFDI [서열번호 107]
CDRL1: TGSSSNIGAGYDVH [서열번호 108]
CDRL2: GNSNRPS [서열번호 109]
CDRL3: AAWDDSVSGWM [서열번호 110]
항체 클론: 5E12
5E12-VH [서열번호 13]
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGINKDYADSMKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARERKDAFDIWGQGTLVTVSS
5E12-VL [서열번호 37]
QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGTAPKLLIYSNNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCATWDDSLNGLVFGGGTKLTVLG
CDR 영역
CDRH1: SYGMH [서열번호 111]
CDRH2: VISYDGINKDYADSMKG [서열번호 112]
CDRH3: ERKDAFDI [서열번호 113]
CDRL1: TGSSSNIGAGYDVH [서열번호 114]
CDRL2: SNNQRPS [서열번호 115]
CDRL3: ATWDDSLNGLV [서열번호 116]
항체 클론: 5G08
5G08-VH [서열번호 14]
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFNNYGMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSNRYYADSVKGRFTMSRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRWNGMDVWGQGTLVTVSS
5G08-VL [서열번호 38]
QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGTAPKLLIYANNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDSLNGPWVFGGGTKLTVLG
CDR 영역
CDRH1: NYGMH [서열번호 117]
CDRH2: VISYDGSNRYYADSVKG [서열번호 118]
CDRH3: DRWNGMDV [서열번호 119]
CDRL1: SGSSSNIGAGYDVH [서열번호 120]
CDRL2: ANNQRPS [서열번호 121]
CDRL3: AAWDDSLNGPWV [서열번호 122]
항체 클론: 5H06
5H06-VH [서열번호 15]
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSDTAYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDHSVIGAFDIWGQGTLVTVSS
5H06-VL [서열번호 39]
QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNTVNWYQQLPGTAPKLLIYDNNKRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCSSYAGSNNVVFGGGTKLTVLG
CDR 영역
CDRH1: SYGMH [서열번호 123]
CDRH2: VISYDGSDTAYADSVKG [서열번호 124]
CDRH3: DHSVIGAFDI [서열번호 125]
CDRL1: SGSSSNIGSNTVN [서열번호 126]
CDRL2: DNNKRPS [서열번호 127]
CDRL3: SSYAGSNNVV [서열번호 128]
항체 클론: 6A09
6A09-VH [서열번호 16]
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVTSYDGNTKYYANSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAREDCGGDCFDYWGQGTLVTVSS
6A09-VL [서열번호 40]
QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGTAPKLLIYGNSNRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDSLNEGVFGGGTKLTVLG
CDR 영역
CDRH1: SYGMH [서열번호 129]
CDRH2: VTSYDGNTKYYANSVKG [서열번호 130]
CDRH3: EDCGGDCFDY [서열번호 131]
CDRL1: TGSSSNIGAGYDVH [서열번호 132]
CDRL2: GNSNRPS [서열번호 133]
CDRL3: AAWDDSLNEGV [서열번호 134]
항체 클론: 6B01
6B01-VH [서열번호 17]
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYGMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDQLGEAFDIWGQGTLVTVSS
6B01-VL [서열번호 41]
QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGTAPKLLIYDNNKRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCATWDDSLSGPVFGGGTKLTVLG
CDR 영역
CDRH1: NYGMH [서열번호 135]
CDRH2: VISYDGSNKYYADSVKG [서열번호 136]
CDRH3: DQLGEAFDI [서열번호 137]
CDRL1: TGSSSNIGAGYDVH [서열번호 138]
CDRL2: DNNKRPS [서열번호 139]
CDRL3: ATWDDSLSGPV [서열번호 140]
항체 클론: 6C11
6C11-VH [서열번호 18]
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFDDYGMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGSSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAGGDIDYFDYWGQGTLsVTVSS
6C11-VL [서열번호 42]
QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCTGSSSNFGAGYDVHWYQQLPGTAPKLLIYENNKRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDSLNGPVFGGGTKLTVLG
CDR 영역
CDRH1: DYGMS [서열번호 141]
CDRH2: AISGSGSSTYYADSVKG [서열번호 142]
CDRH3: GDIDYFDY [서열번호 143]
CDRL1: TGSSSNFGAGYDVH [서열번호 144]
CDRL2: ENNKRPS [서열번호 145]
CDRL3: AAWDDSLNGPV [서열번호 146]
항체 클론: 6C12
6C12-VH [서열번호 19]
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARERRDAFDIWGQGTLVTVSS
6C12-VL [서열번호 43]
QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGTAPKLLIYSDNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCATWDSDTPVFGGGTKLTVLG
CDR 영역
CDRH1: SYGMH [서열번호 147]
CDRH2: VISYDGSNKYYADSVKG [서열번호 148]
CDRH3: ERRDAFDI [서열번호 149]
CDRL1: TGSSSNIGAGYDVH [서열번호 150]
CDRL2: SDNQRPS [서열번호 151]
CDRL3: ATWDSDTPV [서열번호 152]
항체 클론: 6D01
6D01-VH [서열번호 20]
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAMYYCARDHSAAGYFDYWGQGTLVTVSS
6D01-VL [서열번호 44]
QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNTVNWYQQLPGTAPKLLIYGNSIRPSGGPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCASWDDSLSSPVFGGGTKLTVLG
CDR 영역
CDRH1: SYGMH [서열번호 153]
CDRH2: VISYDGSNKYYADSVKG [서열번호 154]
CDRH3: DHSAAGYFDY [서열번호 155]
CDRL1: SGSSSNIGSNTVN [서열번호 156]
CDRL2: GNSIRPS [서열번호 157]
CDRL3: ASWDDSLSSPV [서열번호 158]
항체 클론: 6G03
6G03-VH [서열번호 21]
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFGSYGMHWVRQAPGKGLEWVSGISWDSAIIDYAGSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDEAAAGAFDIWGQGTLVTVSS
6G03-VL [서열번호 45]
QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGTAPKLLIYGNTDRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDSLSGPVVFGGGTKLTVLG
CDR 영역
CDRH1: SYGMH [서열번호 159]
CDRH2: GISWDSAIIDYAGSVKG [서열번호 160]
CDRH3: DEAAAGAFDI [서열번호 161]
CDRL1: TGSSSNIGAGYDVH [서열번호 162]
CDRL2: GNTDRPS [서열번호 163]
CDRL3: AAWDDSLSGPVV [서열번호 164]
항체 클론: 6G08
6G08-VH [서열번호 22]
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTLSSYGISWVRQAPGKGLEWVSGISGSGGNTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCASSVGAYANDAFDIWGQGTLVTVSS
6G08-VL [서열번호 46]
QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGTAPKLLIYGDTNRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDSLNGPVFGGGTKLTVLG
CDR 영역
CDRH1: SYGIS [서열번호 165]
CDRH2: GISGSGGNTYYADSVKG [서열번호 166]
CDRH3: SVGAYANDAFDI [서열번호 167]
CDRL1: TGSSSNIGAGYDVH [서열번호 168]
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항체 클론: 6G11
6G11-VH [서열번호 23]
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7C07-VH [서열번호 25]
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종종 바람직한 실시형태인 일부 실시형태에서, FcγRIIb에 특이적으로 결합하는 항체 분자는 하기의 CDR 영역을 포함한다: SEQ ID NO: 171(CDRH1), SEQ ID NO: 172(CDRH2), SEQ ID NO: 173(CDRH3), SEQ ID NO: 174(CDRL1), SEQ ID NO: 175(CDRL2) 및 SEQ ID NO: 176(CDRL3), 즉, 클론 6G11의 CDR 영역.
종종 바람직한 실시형태인 일부 실시형태에서, FcγRIIb에 특이적으로 결합하는 항체 분자는 하기의 불변 영역: SEQ ID NO: 1(CH) 및 SEQ ID NO: 2(CL) 및 하기의 가변 영역: SEQ ID NO: 23(VL) 및 SEQ ID NO: 47(VH), 즉 클론 6G11의 불변 및 가변 영역을 포함한다.
일부 실시형태에서, 항-PD-1 항체 분자는 인간 항체 분자 또는 인간 기원의 항체 분자이다. 일부 그러한 실시형태에서, 인간 항체 분자 또는 인간 기원의 항체 분자는 IgG 항체이다. 일부 그러한 실시형태에서, 인간 항체 분자 또는 인간 기원의 항체 분자는 IgG4이다.
항-PD-1 항체 분자는 PD-1에 특이적으로 결합하는 항체 분자이다.
일부 실시형태에서, 항-PD-1 항체 분자는 PD-1에 대한 PD-L1 및/또는 PD-L2의 결합을 차단하고, 그러면 PD-1 길항제로서 간주될 수 있다.
일부 실시형태에서, 항-PD-1 항체 분자는 인간화된 항체 분자이다.
일부 실시형태에서 항-PD-1 항체 분자는 키메라 항체이다.
상기에 언급된 바와 같이, 항-PD-1 항체는 FcγR과 맞물리는 능력을 가져야 한다.
일부 실시형태에서, 항-PD-1 항체 분자는 니볼루맙(OPDIVO®), 펨브롤리주맙(KEYTRUDA®) 및 세미플리맙(LIBTAYO®)으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 실시형태에서, FcγRIIb에 특이적으로 결합하는 항체 분자 및 항-PD-1 항체 분자는 환자에 동시에 투여되는데, 이는 이들이 한번에 함께 또는 개별적으로 서로 매우 가까운 시간 내에 투여된다는 것을 의미한다.
일부 실시형태에서, FcγRIIb에 특이적으로 결합하는 항체 분자는 항-PD-1 항체 분자의 투여 이전에 환자에 투여된다. 이러한 순차적 투여는 두 항체의 일시적 분리에 의해 달성될 수 있다. 대안적으로, 또는 제1 옵션과 조합하여, 순차적 투여는 FcγRIIb에 특이적으로 결합하는 항체 분자를 종양내와 같이 이것이 항-PD-1 항체 분자 이전에 암에 도달하도록 투여한 다음, 면역 세포 고갈 항체 분자를 전신투여와 같이 FcγRIIb에 특이적으로 결합하는 항체 분자 후 이것이 암에 도달하도록 투여함으로써 2개의 항체 분자의 공간적 분리로써 달성될 수 있다.
일부 실시형태에서 항-PD-1 항체 분자는 FcγRIIb에 특이적으로 결합하는 항체 분자의 투여 전에 환자에게 투여된다. 상기에 기재된 것과 유사하게, 이러한 순차적 투여는 두 항체의 일시적 분리에 의해 그리고/또는 두 항체 분자의 공간적 분리에 의해 달성될 수 있다. 공간적 분리의 경우, 항-PD-1 항체 분자는, 종양내와 같이 이것이 FcγRIIb에 특이적으로 결합하는 항체 분자 전에 암에 도달하는 방식으로 투여되고, 그 다음 이것은 전신으로와 같이 이것이 PD-1 항체 분자 후에 암에 도달하는 방식으로 투여된다.
약물은 예를 들어 이것이 신체에 의해 흡수되는 속도를 변경하도록 상이한 첨가제로 변형될 수 있고; 예를 들어 신체로의 특정 투여 경로를 허용하도록 상이한 형태로 변형될 수 있다는 점이 당업자에게 공지되어 있을 것이다.
따라서, 본 발명자들은 본 발명의 조성물, 및/또는 항체, 및/또는 약제가 부형제 및/또는 약학적으로 허용가능한 담체 및/또는 약학적으로 허용가능한 희석제 및/또는 아주반트(adjuvant)와 조합될 수 있음을 포함한다.
또한, 본 발명자들은 본 발명의 조성물 및/또는 항체 및/또는 약제가 항산화제 및/또는 완충제 및/또는 정균제, 및/또는 제형을 의도된 수용자의 혈액과 등장성이 되게 하는 용질을 함유할 수 있는 수용성 및/또는 비수용성 멸균 주사 용액; 및/또는 현탁화제 및/또는 증점제를 포함할 수 있는 수성 및/또는 비수성 멸균 현탁액을 포함하는 비경구 투여에 적합할 수 있음을 포함한다. 본 발명의 조성물 및/또는 항체 및/또는 작용제 및/또는 약제는 단위-용량 또는 다중-용량 용기, 예를 들어 밀봉된 앰플 및 바이알에 제공될 수 있으며, 사용 직전에 멸균 액체 담체, 예를 들어 주입용 물의 첨가를 요구하는 냉동-건조된(즉, 동결건조된) 조건으로 저장될 수 있다.
즉석의 주입 용액 및 현탁액은 멸균 분말 및/또는 과립 및/또는 전술한 종류의 정제로부터 제조될 수 있다.
인간 환자에 대한 비경구 투여의 경우, FcγRIIb에 특이적으로 결합하는 항체 분자 및/또는 항-PD-1 항체 분자의 일일 투여량 수준은 일반적으로 환자의 체중 1 kg당 1 mg 내지 20 mg/kg일 것이거나, 또는 일부 경우에서는 단일 투여 또는 분할 투여로 심지어 100 mg/kg까지 투여될 수 있다. 더 낮은 투여량이 특별한 상황에서, 예를 들면 장기간 투여와 병용될 때 이용될 수 있다. 어떤 경우에서도 의사는 개별 환자에게 가장 적합할 실제 투여량을 결정할 것이며, 이것은 특정 환자의 연령, 체중 및 반응에 따라 가변적일 것이다. 상기 투여량은 평균 경우의 예시이다. 물론, 더 높거나 더 낮은 투여량 범위가 장점이 되는 개별 사례가 존재할 수 있으며, 이는 본 발명의 범위 내에 있다.
전형적으로, 본 발명의 조성물 및/또는 의약은 FcγRIIb에 특이적으로 결합하는 항체 분자 및/또는 항-PD-1 항체 분자를 약 2 mg/ml 내지 150 mg/ml, 또는 약 2 mg/ml 내지 200 mg/ml의 농도로 함유할 것이다. 바람직한 실시형태에서, 본 발명의 약제 및/또는 조성물은 FcγRIIb에 특이적으로 결합하는 항체 분자 및/또는 항-PD-1 항체 분자를 10 mg/ml의 농도로 함유할 것이다.
일반적으로, 인간에서, 본 발명의 조성물 및/또는 항체, 및/또는 작용제 및/또는 약제의 경구 또는 비경구 투여가 바람직한 경로이며, 이는 가장 편리하다. 수의용으로, 본 발명의 조성물 및/또는 항체 및/또는 작용제 및/또는 약제는 정상적인 수의학 실무에 따라 적합하게 허용가능한 제형물로서 투여되고, 수의사 외과의는 특정 동물에 가장 적합할 투약 요법 및 투여 경로를 결정할 것이다. 따라서, 본 발명은 (상기 기재되고 추가로 하기에 기재된 바와 같이) 다양한 병태를 치료하는데 유효한 양의 본 발명의 항체 및/또는 작용제를 포함하는 약학적 제형물을 제공한다. 바람직하게, 조성물 및/또는 항체 및/또는 작용제 및/또는 약제는 하기를 포함하는 군으로부터 선택된 경로에 의한 전달에 적합하다: 정맥내(IV); 피하(SC), 근육내(IM) 또는 종양내.
본 발명은 또한 본 발명의 폴리펩티드 결합 모이어티의 약학적으로 허용가능한 산 또는 염기 부가염을 포함하는 조성물 및/또는 항체 및/또는 작용제 및/또는 약제를 포함한다. 본 발명에서 유용한 상술된 염기 화합물의 약제학적으로 허용 가능한 산 부가염을 제조하는데 사용된 산은 무독성 산 부가염, 즉 약리학적으로 허용 가능한 음이온을 함유하는 염, 예컨대 그중에서도 히드로클로라이드, 히드로브로마이드, 히드로아이오다이드, 니트레이트, 설페이트, 바이설페이트, 포스페이트, 산 포스페이트, 아세테이트, 락테이트, 시트레이트, 산 시트레이트, 타르트레이트, 바이타르트레이트, 석시네이트, 말레에이트, 푸마레이트, 글루코네이트, 사카레이트, 벤조에이트, 메탄설포네이트, 에탄설포네이트, 벤젠설포네이트, p-톨루엔설포네이트 및 파모에이트 [즉, 1,1'-메틸렌-비스-(2-히드록시-3 나프토에이트)]염을 형성하는 것이다. 약제학적으로 허용 가능한 염기 부가염이 또한 본 발명에 따른 작용제의 약제학적으로 허용 가능한 염 형태를 생성하는데 사용될 수도 있다. 본질적으로 산성인 본 작용제의 약제학적으로 허용 가능한 염기 염을 제조하는데 시약으로서 사용될 수 있는 화학 염기는 이러한 화합물과 무독성 염기 염을 형성하는 것이다. 이러한 무독성 염기염은 이에 제한되는 것은 아니나, 특히 이러한 약리학적으로 허용 가능한 양이온, 예컨대 알칼리 금속 양이온(예를 들어, 칼륨 및 나트륨) 및 알칼리토금속 양이온(예를 들어, 칼슘 및 마그네슘)으로부터 유래된 것, 암모늄 또는 수용성 아민 부가염, 예컨대, N-메틸글루카민-(메글루민), 및 저급 알칸올암모늄 및 약제학적으로 허용가능한 유기 아민의 다른 염기염을 포함한다. 본 발명의 작용제 및/또는 폴리펩티드 결합 모이어티는 저장을 위해 동결건조될 수 있고, 이용 전에 적합한 담체에 재구성될 수 있다. 임의의 적합한 동결건조 방법(예를 들어, 분무 건조, 케이크 건조) 및/또는 재구성 기술을 이용할 수 있다. 동결건조 및 재구성은 다양한 정도의 항체 활성 손실(예를 들어, 통상적인 면역글로불린, IgM 항체는 IgG 항체보다 더 큰 활성 손실을 갖는 경향이 있음)을 야기할 수 있다는 점 및 이용 수준이 보상하기 위해 상향 조절되어야 할 수 있음을 당업자는 인식할 것이다. 일 실시형태에서, 동결건조된(냉동 건조된) 폴리펩티드 결합 모이어티는 재수화될 때 이것의 활성(동결건조 이전)의 약 20% 이하, 또는 약 25% 이하, 또는 약 30% 이하, 또는 약 35% 이하, 또는 약 40% 이하, 또는 약 45% 이하, 또는 약 50% 이하를 손실시킨다.
FcγRIIb에 특이적으로 결합하는 항체 분자 및 항-PD-1 항체 분자의 조합은 암 치료에 사용될 수 있다.
본 명세서에서 사용된 용어 "환자"는 FcγRIIb 음성 암이 있거나 FcγRIIb 음성 암인 것으로 고려되고/되거나 그러한 암의 증상을 보이는 암이 있다고 진단받은 인간을 비롯한 동물을 지칭한다.
본 발명자들은 환자가 포유동물 또는 비(non)-포유동물일 수 있다는 것을 포함한다. 바람직하게, 환자는 인간이거나 포유동물, 예컨대 말 또는 소, 또는 양, 또는 돼지 또는 낙타 또는 개 또는 고양이이다. 가장 바람직하게, 포유동물 환자는 인간이다.
"나타낸다"에, 본 발명자들은 대상체가 암 증상 및/또는 암 진단 마커를 나타내고/내거나 암 증상 및/또는 암 진단 마커는 측정 및/또는 평가 및/또는 정량될 수 있음을 포함한다.
암 증상 및 암 진단 마커가 무엇인지, 암 증상의 중증도의 감소 또는 증가, 또는 암 진단 마커의 감소 또는 증가 여부를 측정 및/또는 평가 및/또는 정량하는 방법뿐 아니라 이들 암 증상 및/또는 암 진단 마커가 암에 대한 예후를 형성하는데 이용될 수 있는 방법은 의학 분야의 당업자에게 손쉽게 명백해질 것이다.
암 치료는 종종 치료 과정으로서 투여되는데, 즉 치료제가 일정 기간에 걸쳐 투여된다. 치료 과정의 시간은 다수의 인자에 따라 달라질 수 있으며, 여기에는 투여되는 치료제의 유형, 치료되는 암의 유형, 치료되는 암의 중증도 및 환자의 연령 및 건강 상태, 그중에서도 이유가 포함될 것이다.
"치료 중"에, 환자는 현재 치료 과정을 수여받는 중이고/거나 치료제를 수여받는 중이고/거나 치료제 과정을 수여 중인 것이 포함된다.
본 발명에 따라서 치료될 환자는 PD-1 양성 종양을 특징으로 하는 암을 갖는다.
일부 실시형태에서 치료될 암은 고형암이다.
일부 실시형태에서 치료될 고형암은, 치료가 항-PD-1 항체를 사용한 면역요법으로 일반적으로 이루어지거나 이를 포함하는 암이다.
일부 실시형태에서, 치료될 암은 근치 수술 또는 근치 방사선에 대한 후보자가 아닌 환자에서 흑색종; 폐암, 예컨대, 소세포 폐암(SCLC) 및 비소세포 폐암(NSCLC)(비편평 NSCLC 및 편평 NSCLC 및 전이성 NSCLC 포함); 두경부암, 예컨대, 두경부 편평 세포 암종(HNSCC); 호지킨 림프종; 원발성 종격동 B-세포 림프종(PMBCL); 방광암, 예컨대, 진행성 요로상피 암종; 직장결장암, 예컨대, 불안정성이 높고(MSI-H)/높거나 미스매치 수선 결핍(dMMR) 암 포함; 위암, 예컨대, 진행성 위암 및 위 또는 위식도 접합부(GEJ) 선암종; 자궁경부암; 간암, 예컨대, 간세포 암종; 머켈 세포 암종(MCC); 신장암, 예컨대, 신장 세포 암종(RCC) 및 피부 편평 세포 암종(CSCC), 예컨대, 국소 진행성 CSCC로 이루어진 군으로부터 선택된다. 당업자는 항-PD-1 면역요법에 관련된 적응증의 수 및 유형이 신속하게 확장되고 있음을 알고 있을 것이다.
일부 실시형태에서 암은 불응성 암이다. 일부 이러한 실시형태에서, 불응성 암은 암의 시작 시에 이미 항-PD-1 항체로의 치료에 내성인 것으로 발견된 암이다. 이러한 내성은 치료에도 불구하고 암의 일부 진행에 의해서 또는 치료에 대해서 결국 반응하지 않는 환자에 의해서 증명될 수 있다. 일부 실시형태에서 불응성 암은 그 항체로의 치료 동안 항-PD-1 항체에 내성이 되는 암인데, 이는 환자가 치료에 대한 반응을 멈추거나 치료에 대해서 감소된 반응을 나타낸다는 것을 의미한다. 일부 실시형태에서 불응성 암은 항-PD-1 항체로의 성공적인 치료 후 또는 성공적인 치료의 마지막 단계에 내성인데, 이는 항-PD-1 항체가 암이 재발하는 경우 효과가 없거나 감소된 효과를 가질 것이라는 것을 의미한다.
각각의 상기 기술된 암들은 익히 공지되어 있으며, 이들 암을 치료하는데 사용된 치료제와 마찬가지로 증상 및 암 진단 마커가 잘 설명되어 있다. 따라서, 상기 언급된 암 유형을 치료하는데 사용된 치료제, 암 진단 마커 및 증상은 의학 분야의 당업자에게 공지되어 있을 것이다.
다수의 암의 진단, 예후 및 진행에 대한 임상적 정의는 병기결정(staging)으로서 공지된 특정한 분류에 좌우된다. 이들 병기결정 시스템은 암의 진단 및/또는 예후 및/또는 진행의 요약을 제공하기 위해 다수의 상이한 암 진단 마커 및 암 증상을 수집 분석하는 작용을 한다. 종양학의 당업자는 병기결정 시스템을 이용하여 암의 진단 및/또는 예후 및/또는 진행을 평가하는 방법 및 이를 위해 어떤 암 진단 마커 및 암 증상이 이용되어야 하는지 알고 있을 것이다.
"암 병기결정"에, 단계 0, 단계 I, 단계 II, 단계 III 및 단계 IV를 포함하는 Rai 병기결정, 및/또는 단계 A, 단계 B, 및 단계 C를 포함하는 Binet 병기결정, 및/또는 단계 I, 단계 II, 단계 III 및 단계 IV를 포함하는, Ann Arbour 병기결정이 포함된다.
암은 세포의 형태에 이상을 야기시킬 수 있다는 것이 공지되어 있다. 이러한 이상은 종종 특정 암에서 재현 가능하게 발생하는데, 이는 이러한 형태 변화를 검사하는 것이 (다르게는, 조직학적 검사로서 공지됨) 암의 진단 또는 예후에 사용될 수 있다는 것을 의미한다. 세포의 형태를 검사하기 위해 샘플을 시각화하고 시각화를 위한 샘플을 준비하는 기술, 예를 들어 광학 현미경 또는 공초점 현미경이 당업계에 널리 공지되어 있다.
"조직학적 검사"에, 본 발명자들은 작고, 성숙한 림프구의 존재, 및/또는 세포질의 좁은 경계를 가진 작고 성숙한 림프구의 존재, 식별가능한 핵이 부족한 치밀한 핵을 가진 작고 성숙한 림프구의 존재, 및/또는 세포질의 좁은 경계를 갖고 식별가능한 핵이 부족한 치밀한 핵을 가진 작고 성숙한 림프구의 존재, 및/또는 비정형 세포 및/또는 절단된 세포 및/또는 전림프구의 존재를 포함한다.
암이 세포의 DNA에서의 돌연변이 결과로서, 세포 사멸을 피하거나, 제어할 수 없이 증식하는 세포를 초래할 수 있다는 점은 익히 공지되어 있다. 따라서, 이들 돌연변이를 검사하는 것(또한 세포유전학적 검사로도 공지됨)은 암의 진단 및/또는 예후를 평가하는데 유용한 도구가 될 수 있다. 이것의 예는 만성 림프구 백혈병의 특징인 염색체 위치 13q14.1의 결실이다. 세포에서 돌연변이를 검사하는 기술; 예를 들어, 형광 동소 혼성화(fluorescence in situ hybridization: FISH)가 당업계에 익히 공지되어 있다.
"세포유전학적 검사"에, 세포, 특히 염색체에서의 DNA의 검사가 포함된다. 세포유전학적 검사는 불응성 암 및/또는 재발된 암의 존재와 연관될 수 있는 DNA에서의 변화를 확인하는데 사용될 수 있다. 이는 하기를 포함한다: 염색체 13의 긴 아암에서 결실 및/또는 염색체 위치 13q14.1의 결실 및/또는 염색체 12의 세염색체증(trisomy), 및/또는 염색체 12의 긴 아암에서의 결실, 및/또는 염색체 11의 긴 아암에서의 결실, 및/또는 11q의 결실 및/또는 염색체 6의 긴 아암에서의 결실 및/또는 6q의 결실, 및/또는 염색체 17의 짧은 아암에서의 결실 및/또는 17p의 결실, 및/또는 t(11:14) 전위, 및/또는 (q13:q32) 전위, 및/또는 항원 유전자 수용체 재배열, 및/또는 BCL2 재배열, 및/또는 BCL6 재배열, 및/또는 t(14:18) 전위, 및/또는 t(11:14) 전위, 및/또는 (q13:q32) 전위, 및/또는 (3:v) 전위, 및/또는 (8:14) 전위, 및/또는 (8:v) 전위, 및/또는 t(11:14) 및 (q13:q32) 전위.
암 환자는 종종 신체의 암의 부담 결과인 특정한 신체적 증상을 나타낸다고 알려져 있다. 이들 증상은 종종 동일한 암에서 재발하고, 따라서 질병의 진단 및/또는 예후 및/또는 진행의 특징일 수 있다. 의학 전문가는 어떤 신체적 증상이 어떤 암과 연관이 있는지, 및 이들 신체적 증상을 어떻게 평가하는 것이 질병의 진단 및/또는 예후 및/또는 진행과 상관 관계에 있을 수 있는지 이해할 것이다. "신체적 증상"에, 간비대 및/또는 비장비대가 포함된다.
실시예
본 발명의 특정 관점을 구현하는 특정한 비제한적인 실시예를 이제 기술할 것이다. 이들 실시예를 상기에 제공된 도면의 간단한 설명과 함께 읽어야 한다.
실시예 1
Jurkat 세포의 형질주입
Jurkat 세포의 형질주입을 위해, 세포를 10% 소태아 혈청, FCS(Sigma), L-글루타민(Life Technologies), 피루브산나트륨(Life Technologies) 및 Pen-Strep(Life Technologies)를 함유하는 RPMI-1640 배지에서 배양하였다. 형질주입 전날, 세포를 0.5x106개/ml로 분할하고, 밤새 배양하였다. 세포를 형질주입시키기 위해서, 1x106개 세포를 90xG에서 10분 동안 원심분리한 후 2 μg DNA(pcDNA3 중의 hPD-1)가 첨가된 100 μl 뉴클레오펙터 용액(Amaxa® Cell Line Nucleofector® Kit V, Lonza)에 재현탁하였다. 그 다음 혼합물을 뉴클레오펙터 큐벳으로 옮겼다. 큐벳을 뉴클레오펙터 II 기계에 넣고, 프로그램 X-005로 뉴클레오펙션하였다. 실온(대략 18 내지 22℃)에서 10분 동안 인큐베이션한 후, 500 ml 배지를 큐벳에 첨가하고, 1 ml 배지를 함유하는 12웰 플레이트로 옮겼다. 형질주입된 세포를 선택하기 위해서, 형질주입 48시간 후에 제네티신을 1 mg/ml로 첨가하였다. 10 내지 14일 후, 양성 세포를 FACSAria II 기계에서 FACS 분류에 의해 낮은, 중간, 높은 PD-1 발현자로 정제하였다. 그 후, 형질주입된 세포를 1 mg/ml 제네티신을 함유하는 배지에서 유지하였다.
PD-1의 정량화
이 비드 세트를 사용한 정량화의 기본 원리는 피토에리트린(PE)이 1:1 비율로 항체를 표지한다는 사실에 기초한다. 따라서, 정의된 수의 PE 분자를 갖는 비드를 사용하여 표준 곡선을 생성하기 위해서, 세포에 결합된 항체의 분자의 수를 결정할 수 있다.
Jurkat 세포를 PE 표지된 항-PD1 항체(EH12.2H7, BioLegend) 또는 FACS 완충액(2% FCS를 함유하는 PBS)에서 이소타입 대조군으로 4℃에서 30분 동안 염색한 후 FACS 완충액으로 세척하였다. Quantibrite™ 비드(PE 피코에리트린 정량 키트, BD bioscience(카탈로그 번호 340495))의 하나의 튜브를 500 μl PBS에 재현탁하였다.
그 후 FAC 기계를 Quantibrite™ 비드와 Jurkat 세포가 동일한 설정에서 전개될 수 있는 방식으로 설정하였다. 비드를 10000개의 이벤트가 수집될 때까지 전개시키고, 즉, 전달된 QuantibriteTM 비드의 4개 집단에 대해서 Log 비드당 분자(키트에서 로트 특정 정보) 대 MFI(형광 강도)를 플로팅함으로써, 이로부터 PE 피코에리트린 형광 정량 키트에 대해 BD Bio-sciences에 기재된 바와 같이 표준 곡선을 생성하였다. 그 다음 이 표준 곡선을 사용하여 MFI를 분자의 수로 변환하여 세포주의 분자 수를 계산하였다. 항체가 포화 농도에서 사용되고 세포당 항체 대 PD-1 분자의 1:1 결합이 존재한다는 것을 고려할 때, 세포당 결합된 항체의 수는 세포당 존재하는 PD-1 분자의 수에 상응한다.
그 후, PD1-PE 염색된 Jurkat 세포를 FACS에서 전개시키고, 관심 샘플에 대한 Log 평균 형광 강도(MFI)를 사용하여 결합된 항체 수를 계산하였다.
그 결과를 도 1에 나타낸다.
도 1로부터, 낮은 발현을 갖는 세포 집단이 중간 발현을 갖는 일부 세포(대략 2%)를 포함한다는 것이 명백하지만; 이것은 집단의 무시할 수 있는 부분이며, 하기에 표시된(그리고 도 2에 입증된) 식세포작용 실험에서 이 작은 부분이 식세포작용에 영향을 미치지 않는다는 것이 명백하다. 유사하게, 중간 발현을 갖는 세포 집단이 낮은 발현을 갖는 일부 세포를 포함하는 것이 명백하지만, 다시 이러한 작은 세포 분획은 하기에 나타낸 바와 같이 식세포작용 결과에 영향을 미치지 않는다.
낮은 발현 하위세트(도 1a)는 평균 3,249개 PD-1 분자/세포를 가지며, 하위 5% 컷오프는 1,253개 PD-1 분자/세포 및 상위 5% 컷오프는 10,643개 PD-1 분자/세포이다. 중간 발현 하위세트(도 1b)는 평균 32,951개 PD-1 분자/세포를 가지며, 하위 5% 컷오프는 15,498개 PD-1 분자/세포 및 상위 5% 컷오프는 77,822개 PD-1 분자/세포이다. 높은 발현 하위세트(도 1c)는 평균 165,968개 PD-1 분자/세포를 가지며, 하위 5% 컷오프는 65,406개 PD-1 분자/세포 및 상위 5% 컷오프는 390,946개 PD-1 분자/세포이다. 상위 및 하위 5% 컷오프 값은 서로 상이한 하위세트 간의 중복을 줄이기 위해 제공된다. 15,498개의 하위 5% 컷오프 값, 즉 사기에서 측정된 대략 15,500개 PD-1 분자/세포가 중간 또는 높은 발현의 하한을 정의하기 위해 본 명세서에서 사용된다.
식세포작용
Southampton의 National Blood Service에서 얻은 백혈구 콘(leukocyte cones)으로부터 단리된 인간 PBMC를 글루타민, 피루베이트, PenStrep 및 Sigma Heat으로부터의 1% 열 불활성화 인간 혈청을 함유하는 RPMI 배지(Life Technologies)를 갖는 플레이트에서 2시간 동안 인큐베이션하여 단핵구가 부착되도록 하였다. 그 다음 배지를 글루타민, 피루베이트, PenStrep 및 +10% FCS(Sigma)를 함유하는 RPMI 배지로 교체하였다. 24시간 후 MCSF(University of Southampton에서 제조)를 첨가하였다. 대식세포를 7일에 걸쳐 2개의 배지 변경(MCSF 포함)으로 유래시켰다. 그 후, 배지를 제거하고, PBS 2 ml를 첨가하고, 얼음 위에 15분 동안 둔 후 가볍게 긁어서 대식세포를 수거하였다. 그 다음 대식세포를 96웰 플레이트에 2시간 동안 다시 플레이팅하였다. 대식세포를 2x 최종 농도에서 45분 동안 항-hFcγRIIb mAb(6G11 WT 또는 6G11 NQ)로 전처리한 후, Jurkats를 CFSE(분자 프로브)로 표지하고, 15분 동안 2x 최종 농도에서 니볼루맙(hIgG4)으로 옵소닌화하고, 첨가하였다. 세포를 37℃에서 1시간 동안 공배양한 후 4℃에서 FACS-완충액에서 30분 동안 인큐베이션한 후 세척함으로써 항-CD14(BD-Bioscience)로 염색하고, FACS 기계에서 판독하였다.
그 결과를 도 2에 나타낸다.
실시예 2 - 종양-보유 마우스로부터의 면역 세포 상에서의 PD-1 정량
Quantum™ Simply Cellular® 비드(Bangs Laboratories, Inc.)를 사용하여 마우스 종양으로부터의 면역 세포 상의 PD-1 수용체 수를 결정하였다. 약술하자면, 비드를 래트 항 PD-1 항체(클론 29F.1A12, BioLegend)로 염색하여 표준 곡선을 생성하였다. 그 다음 세포 샘플을 발현 측정을 위해 곡선에 대해 판독하였다.
종양-보유 마우스로부터의 세포에 대해 정량을 수행하였다. 마우스를 홈 오피스 지침에 따라 현지 시설에서 사육 및 유지시켰다. 6 내지 8주령의 암컷 C57/BL6 마우스를 Taconic(덴마크 봄홀트 소재)에서 공급되었고, 지역 동물 시설에서 유지시켰다. MC38 세포(ATCC)를 10% FBS가 보충된 글루타맥스 완충 RPMI에서 성장시켰다. 세포가 세미 컨플루언트일 때, 이것을 트립신으로 탈착하고, 멸균 PBS 중에 10x106개 세포/ml로 재현탁하였다. 마우스에게 1x106개 세포/마우스에 상응하는 100 μl 세포 현탁액을 s.c.로 주사하였다. 종양을 약 20일 동안 성장시킨 후 수집하였다. CD8+ T 세포 하위세트를 CD45, CD3, CD4 및 CD8 마커(모두 BD Biosciences 제품)를 사용하여 FACS에 의해서 식별하였다. 상이한 T 세포 하위세트 상의 PD-1 발현을 상응하는 이소타입 대조군(BioLegend)과 함께 상업적 래트 항 PD-1 항체(클론 29F.1A12)를 사용하여 정량하였다. 그 결과를 도 4에 나타낸다.
실시예 3 - 생체내에서 항 PD-1과의 조합 효과
마우스 세포 상의 PD-1 발현은 형질주입된 Jurkat 세포의 '중간 및 높은' 사이의 발현 수준에 상응한다(실시예 1, 도 1). 식세포작용 검정에서 BI-1206은 이러한 '중간 및 높은' PD-1 발현 세포에 대한 식세포작용 수준을 상당히 감소시키는 것으로 나타났다(실시예 1, 도 2). 생체내 MC38 모델(도 3)에서 항 PD-1과 항-FcγRIIb(BI-1206 마우스 대용)를 조합하는 경우 관찰되는 개선된 치료적 항종양 효과와 조합하여 이 데이터는, 중간 또는 높은 PD-1 발현, 즉 15,500개의 PD-1 분자/세포 이상의 PD-1 발현을 갖는 환자에서 BI-1206과 조합된 항 PD-1의 개선된 치료 효과를 시사한다.
실시예 4 - 인간 T 세포 상에서의 PD-1 발현의 정량
해리되고, 생존 가능한 동결된 종양 샘플(도 8의 표 참조)를 Discovery Life Sciences에서 구매하였다. 세포를 해동하고, 인산염 완충 식염수(PBS)에서 세척한 후, 다음 항체의 혼합물로 염색하였다: Alexa Fluor 700 마우스 항-인간 CD45(클론 HI30, BD 560566), BV605 마우스 항-인간 CD8(클론 SK1, BD 564116), PerCP-Cy5.5 마우스 항-인간 CD3(클론 UCHT1, BD 560835), Alexa Fluor 647 인간 항-인간 PD-1(펨브롤리주맙(KEYTRUDA), 임상 등급, 로트 번호 8SNL80406, Merck Sharp & Dohme Limited). Fixable Viability Dye eFluor 780를 또한 항체 염색 혼합물(Invitrogen, 65-0865-14)에 포함시켰다. 염색을 BD Horizon Brilliant Stain Buffer(BD 563794)에서 수행하였다. 항-인간 PD-1은 Alexa Fluor 647과 인-하우스에서 접합하였고, 사전 적정 실험에 의해 나타난 바와 같은 수용체 포화 농도(5.5 μg/ml)로 사용하였다. 나머지 항체는 제조업체에서 권장하는 농도로 사용되었다. 세포를 항체와 함께 20분 동안 인큐베이션한 다음, BD FACSAria II를 사용하여 획득하기 전에 PBS에 세척하고 재현탁하였다. 분석은 FlowJo 소프트웨어를 사용하여 수행하였다. PD-1 형질주입된 Jurkat 세포에 대한 PD-1 발현 분석은 염색 혼합물에 Alexa Fluor 647 인간 항-인간 PD-1 및 Fixable Viability Dye eFluor 780만 포함하는 것을 제외하고 유사한 방식으로 수행하였다. 그 결과를 도 5에 나타낸다. 종양 샘플에서 PD-1 발현을 CD3+ 및 CD3+CD8+ 집단 내에서 각각 정의하였고, 살아있는 CD45+ 세포에 대해서 사전 게이팅하였다(도. 7). PD-1 "높은" 게이트를 PD-1 형질주입된 Jurkat 세포를 기반으로 정의하였고, 하단은 PD-1 중간 Jurkat 세포의 전체 너비/절반 높이 게이트의 하단에 따라 설정되었다(도 6).
도 9는 각각 상이한 환자로부터 얻은 개별 종양 샘플에서 PD-1 중간-높은 발현 CD3+ 림프구 및 CD3+CD8+ 림프구의 백분율을 도시한다. PD-1을 중간 수준 또는 높은 수준으로 발현하는 T 세포 10%를 갖는 환자는 항-PD-1과 조합된 항-FcγRIIb에서 이득을 볼 것이라고 예상되며, 따라서 10% 발현에서 점선을 포함시켰다.
SEQUENCE LISTING <110> BioInvent International AB University of Southampton <120> Antibody combinations for treatment of cancer in specific patients <130> BI87 PCT <150> EP19186840.5 <151> 2019-07-17 <160> 194 <170> BiSSAP 1.2 <210> 1 <211> 330 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> IgG constant region heavy (CH) <400> 1 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 1 5 10 15 Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 100 105 110 Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 115 120 125 Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 130 135 140 Val 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Claims (29)

  1. 중간 또는 높은 PD-1 발현을 갖는 종양 침윤 T 림프구를 갖는 환자에서 암의 치료에 사용하기 위한 조합물로서,
    Fab 영역을 통해 FcγRIIb에 특이적으로 결합하며 Fc 영역을 통해 Fcγ 수용체에 결합하는 제1 항체 분자 및
    PD-1에 특이적으로 결합하며 Fc 영역을 통해 적어도 하나의 Fcγ 수용체에 결합하는 제2 항체 분자의 조합물.
  2. 중간 또는 높은 PD-1 발현을 갖는 종양 침윤 T 림프구를 갖는 환자에서 암의 치료에 사용하기 위한 약제학적 조성물로서,
    (i) Fab 영역을 통해 FcγRIIb에 특이적으로 결합하며 Fc 영역을 통해 Fcγ 수용체에 결합하는 제1 항체 분자 및
    (ii) PD-1에 특이적으로 결합하며 Fc 영역을 통해 적어도 하나의 Fcγ 수용체에 결합하는 제2 항체 분자의 약제학적 조성물.
  3. 중간 또는 높은 PD-1 발현을 갖는 종양 침윤 T 림프구를 갖는 환자에서 암의 치료에 사용하기 위한 키트로서,
    (i) Fab 영역을 통해 FcγRIIb에 특이적으로 결합하며 Fc 영역을 통해 Fcγ 수용체에 결합하는 제1 항체 분자 및
    (ii) PD-1에 특이적으로 결합하며 Fc 영역을 통해 적어도 하나의 Fcγ 수용체에 결합하는 제2 항체 분자를 포함하는, 키트.
  4. 중간 또는 높은 PD-1 발현을 갖는 종양 침윤 T 림프구를 갖는 환자에서 암의 치료에 사용하기 위한 의약의 제조에서의 용도로서,
    (i) Fab 영역을 통해 FcγRIIb에 특이적으로 결합하며 Fc 영역을 통해 Fcγ 수용체에 결합하는 제1 항체 분자, 및
    (ii) PD-1에 특이적으로 결합하며 Fc 영역을 통해 적어도 하나의 Fcγ 수용체에 결합하는 제2 항체 분자의 용도.
  5. 중간 또는 높은 PD-1 발현을 갖는 종양 침윤 T 림프구를 갖는 환자에서의 암의 치료 방법으로서,
    (i) Fab 영역을 통해 FcγRIIb에 특이적으로 결합하며 Fc 영역을 통해 Fcγ 수용체에 결합하는 제1 항체 분자, 및
    (ii) PD-1에 특이적으로 결합하며 Fc 영역을 통해 적어도 하나의 Fcγ 수용체에 결합하는 제2 항체 분자를 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
  6. 진단 시험으로서, 환자가
    (i) Fab 영역을 통해 FcγRIIb에 특이적으로 결합하며 Fc 영역을 통해 Fcγ 수용체에 결합하는 제1 항체 분자, 및
    (ii) PD-1에 특이적으로 결합하며 Fc 영역을 통해 적어도 하나의 Fcγ 수용체에 결합하는 제2 항체 분자를 사용한 병용 치료로부터 이득을 볼 것인지를 결정하기 위한 것이되,
    시험은 환자의 종양 침윤 T 림프구에서 PD-1 발현을 결정하는 단계를 포함하고, 중간 또는 높은 PD-1 발현은 환자가 병용 치료로부터 이득을 볼 것이라는 것을 나타내는, 진단 시험.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 환자의 종양 침윤 CD3 양성 T 림프구가 중간 또는 높은 PD-1 발현을 갖는, 제1항에 따른 사용을 위한 조합물, 제2항에 따른 사용을 위한 약제학적 조성물, 제3항에 따른 키트, 제4항에 따른 용도, 제5항에 따른 방법 또는 제6항에 따른 진단 시험.
  8. 제7항에 있어서, 환자의 종양 침윤 CD3 양성 T 림프구 중 적어도 10%가 중간 또는 높은 PD-1 발현을 갖는, 조합물, 약제학적 조성물, 키트, 용도, 방법 또는 진단 시험.
  9. 제7항 또는 제8항에 있어서, 환자의 종양 침윤 CD3 양성, CD8 양성 T 림프구가 중간 또는 높은 PD-1 발현을 갖는, 조합물, 약제학적 조성물, 키트, 용도, 방법 또는 진단 시험.
  10. 제9항에 있어서, 환자의 종양 침윤 CD3 양성, CD8 양성 T 림프구 중 적어도 10%가 중간 또는 높은 PD-1 발현을 갖는, 조합물, 약제학적 조성물, 키트, 용도, 방법 또는 진단 시험.
  11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 중간 또는 높은 PD-1 발현은 환자로부터의 샘플에서 종양 침윤 T 림프구의 적어도 10%가 T 림프구당 적어도 15,500개의 PD-1 분자의 발현을 갖는 것으로서 정의되는, 조합물, 약제학적 조성물, 키트, 용도, 방법 또는 진단 시험.
  12. 제11항에 있어서, 중간 또는 높은 PD-1 발현은 항-PD1 항체 EH12.2H7을 사용하여 측정되는, 조합물, 약제학적 조성물, 키트, 용도, 방법 또는 진단 시험.
  13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 암은 고형암인, 조합물, 약제학적 조성물, 키트, 용도, 방법 또는 진단 시험.
  14. 제13항에 있어서, 고형암은 흑색종, 폐암, 두경부암, 호지킨 림프종, 원발성 종격동 B-세포 림프종(primary mediastinal B-cell lymphoma: PMBCL), 방광암, 직장결장암, 위암, 자궁경부암, 간암, 머켈 세포 암종(Merkel cell carcinoma), 신장암 및 피부 편평 세포 암종으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 조합물, 약제학적 조성물, 키트, 용도, 방법 또는 진단 시험.
  15. 제13항 또는 제14항에 있어서, 암은 불응성인, 조합물, 약제학적 조성물, 키트, 용도, 방법 또는 진단 시험.
  16. 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 항체 분자 및/또는 제2 항체 분자는 인간 항체 분자, 인간화 항체 분자 및 인간 기원의 항체 분자로 이루어진 군으로부터 선택되는, 조합물, 약제학적 조성물, 키트, 용도, 방법 또는 진단 시험.
  17. 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 항체 분자 및/또는 제2 항체 분자는 단클론성 항체 분자 또는 단클론성 기원의 항체 분자인, 조합물, 약제학적 조성물, 키트, 용도, 방법 또는 진단 시험.
  18. 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 항체 분자 및/또는 제2 항체 분자는 이의 Fc 영역을 통해서 Fc 수용체에 결합하는 능력을 보유하는 전체-크기(full-size) 항체, 키메라 항체, 단일 쇄 항체 및 이의 항원-결합 단편으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 조합물, 약제학적 조성물, 키트, 용도, 방법 또는 진단 시험.
  19. 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 항체 분자 및/또는 제2 항체 분자는 인간 IgG 항체, 인간화 IgG 항체 분자 또는 인간 기원의 IgG 항체 분자인, 조합물, 약제학적 조성물, 키트, 용도, 방법 또는 진단 시험.
  20. 제19항에 있어서, 제1 항체 분자는 IgG1 항체 분자인, 조합물, 약제학적 조성물, 키트, 용도, 방법 또는 진단 시험.
  21. 제19항 또는 제20항에 있어서, 제2 항체 분자는 IgG4 항체 분자인, 조합물, 약제학적 조성물, 키트, 용도, 방법 또는 진단 시험.
  22. 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 항체 분자 및/또는 제2 항체 분자는 활성화 Fc 감마 수용체에 대한 개선된 결합을 위해서 조작된, 조합물, 약제학적 조성물, 키트, 용도, 방법 또는 진단 시험.
  23. 제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 항체 분자는 하기 CDR을 포함하는 가변 중쇄(VH)를 포함하는, 조합물, 약제학적 조성물, 키트, 용도, 방법 또는 진단 시험:
    (i) 서열번호 51 및 서열번호 52 및 서열번호 53; 또는
    (ii) 서열번호 57 및 서열번호 58 및 서열번호 59; 또는
    (iii) 서열번호 63 및 서열번호 64 및 서열번호 65; 또는
    (iv) 서열번호 69 및 서열번호 70 및 서열번호 71; 또는
    (v) 서열번호 75 및 서열번호 76 및 서열번호 77; 또는
    (vi) 서열번호 81 및 서열번호 82 및 서열번호 83; 또는
    (vii) 서열번호 87 및 서열번호 88 및 서열번호 89; 또는
    (viii) 서열번호 93 및 서열번호 94 및 서열번호 95; 또는
    (ix) 서열번호 99 및 서열번호 100 및 서열번호 101; 또는
    (x) 서열번호 105 및 서열번호 106 및 서열번호 107; 또는
    (xi) 서열번호 111 및 서열번호 112 및 서열번호 113; 또는
    (xii) 서열번호 117 및 서열번호 118 및 서열번호 119; 또는
    (xiii) 서열번호 123 및 서열번호 124 및 서열번호 125; 또는
    (xiv) 서열번호 129 및 서열번호 130 및 서열번호 131; 또는
    (xv) 서열번호 135 및 서열번호 136 및 서열번호 137; 또는
    (xvi) 서열번호 141 및 서열번호 142 및 서열번호 143; 또는
    (xvii) 서열번호 147 및 서열번호 148 및 서열번호 149; 또는
    (xviii) 서열번호 153 및 서열번호 154 및 서열번호 155; 또는
    (xix) 서열번호 159 및 서열번호 160 및 서열번호 161; 또는
    (xx) 서열번호 165 및 서열번호 166 및 서열번호 167; 또는
    (xxi) 서열번호 171 및 서열번호 172 및 서열번호 173; 또는
    (xxii) 서열번호 177 및 서열번호 178 및 서열번호 179; 또는
    (xxiii) 서열번호 183 및 서열번호 184 및 서열번호 185; 또는
    (xxiv) 서열번호 189 및 서열번호 190 및 서열번호 191.
  24. 제1항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 항체 분자는 하기 CDR을 포함하는 가변 경쇄(VL)를 포함하는, 조합물, 약제학적 조성물, 키트, 용도, 방법 또는 진단 시험:
    (i) 서열번호 54 및 서열번호 55 및 서열번호 56; 또는
    (ii) 서열번호 60 및 서열번호 61 및 서열번호 62; 또는
    (iii) 서열번호 66 및 서열번호 67 및 서열번호 68; 또는
    (iv) 서열번호 72 및 서열번호 73 및 서열번호 74; 또는
    (v) 서열번호 78 및 서열번호 79 및 서열번호 80; 또는
    (vi) 서열번호 84 및 서열번호 85 및 서열번호 86; 또는
    (vii) 서열번호 90 및 서열번호 91 및 서열번호 92; 또는
    (viii) 서열번호 96 및 서열번호 97 및 서열번호 98; 또는
    (ix) 서열번호 102 및 서열번호 103 및 서열번호 104; 또는
    (x) 서열번호 108 및 서열번호 109 및 서열번호 110; 또는
    (xi) 서열번호 114 및 서열번호 115 및 서열번호 116; 또는
    (xii) 서열번호 120 및 서열번호 121 및 서열번호 122; 또는
    (xiii) 서열번호 126 및 서열번호 127 및 서열번호 128; 또는
    (xiv) 서열번호 132 및 서열번호 133 및 서열번호 134; 또는
    (xv) 서열번호 138 및 서열번호 139 및 서열번호 140; 또는
    (xvi) 서열번호 144 및 서열번호 145 및 서열번호 146; 또는
    (xvii) 서열번호 150 및 서열번호 151 및 서열번호 152; 또는
    (xviii) 서열번호 156 및 서열번호 157 및 서열번호 158; 또는
    (xix) 서열번호 162 및 서열번호 163 및 서열번호 164; 또는
    (xx) 서열번호 168 및 서열번호 169 및 서열번호 170; 또는
    (xxi) 서열번호 174 및 서열번호 175 및 서열번호 176; 또는
    (xxii) 서열번호 180 및 서열번호 181 및 서열번호 182; 또는
    (xxiii) 서열번호 186 및 서열번호 187 및 서열번호 188; 또는
    (xxiv) 서열번호 192 및 서열번호 193 및 서열번호 194.
  25. 제1항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 항체 분자는 서열번호 3; 서열번호 4; 서열번호 5; 서열번호 6; 서열번호 7; 서열번호 8; 서열번호 9; 서열번호 10; 서열번호 11; 서열번호 12; 서열번호 13; 서열번호 14; 서열번호 15; 서열번호 16; 서열번호 17; 서열번호 18; 서열번호 19; 서열번호 20; 서열번호 21; 서열번호 22; 서열번호 23; 서열번호 24; 서열번호 25; 및 서열번호 26으로 이루어진 군으로부터 선택된 가변 중쇄(VH) 아미노산 서열을 포함하는, 조합물, 약제학적 조성물, 키트, 용도, 방법 또는 진단 시험.
  26. 제1항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 항체 분자는 서열번호 27; 서열번호 28; 서열번호 29; 서열번호 30; 서열번호 31; 서열번호 32; 서열번호 33; 서열번호 34; 서열번호 35; 서열번호 36; 서열번호 37; 서열번호 38; 서열번호 39; 서열번호 40; 서열번호 41; 서열번호 42; 서열번호 43; 서열번호 44; 서열번호 45; 서열번호 46; 서열번호 47; 서열번호 48; 서열번호 49; 및 서열번호 50으로 이루어진 군으로부터 선택된 가변 경쇄(VL) 아미노산 서열을 포함하는, 조합물, 약제학적 조성물, 키트, 용도, 방법 또는 진단 시험.
  27. 제1항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 항체 분자는 하기 CDR 아미노산 서열을 포함하는, 조합물, 약제학적 조성물, 키트, 용도, 방법 또는 진단 시험:
    (i) 서열번호 51 및 서열번호 52 및 서열번호 53 및 서열번호 54 및 서열번호 55 및 서열번호 56; 또는
    (ii) 서열번호 57 및 서열번호 58 및 서열번호 59 및 서열번호 60 및 서열번호 61 및 서열번호 62; 또는
    (iii) 서열번호 63 및 서열번호 64 및 서열번호 65 및 서열번호 66 및 서열번호 67 및 서열번호 68; 또는
    (iv) 서열번호 69 및 서열번호 70 및 서열번호 71 및 서열번호 72 및 서열번호 73 및 서열번호 74; 또는
    (v) 서열번호 75 및 서열번호 76 및 서열번호 77 및 서열번호 78 및 서열번호 79 및 서열번호 80; 또는
    (vi) 서열번호 81 및 서열번호 82 및 서열번호 83 및 서열번호 84 및 서열번호 85 및 서열번호 86; 또는
    (vii) 서열번호 87 및 서열번호 88 및 서열번호 89 및 서열번호 90 및 서열번호 91 및 서열번호 92; 또는
    (viii) 서열번호 93 및 서열번호 94 및 서열번호 95 및 서열번호 96 및 서열번호 97 및 서열번호 98; 또는
    (ix) 서열번호 99 및 서열번호 100 및 서열번호 101 및 서열번호 102 및 서열번호 103 및 서열번호 104; 또는
    (x) 서열번호 105 및 서열번호 106 및 서열번호 107 및 서열번호 108 및 서열번호 109 및 서열번호 110; 또는
    (xi) 서열번호 111 및 서열번호 112 및 서열번호 113 및 서열번호 114 및 서열번호 115 및 서열번호 116; 또는
    (xii) 서열번호 117 및 서열번호 118 및 서열번호 119 및 서열번호 120 및 서열번호 121 및 서열번호 122; 또는
    (xiii) 서열번호 123 및 서열번호 124 및 서열번호 125 및 서열번호 126 및 서열번호 127 및 서열번호 128; 또는
    (xiv) 서열번호 129 및 서열번호 130 및 서열번호 131 및 서열번호 132 및 서열번호 133 및 서열번호 134; 또는
    (xv) 서열번호 135 및 서열번호 136 및 서열번호 137 및 서열번호 138 및 서열번호 139 및 서열번호 140; 또는
    (xvi) 서열번호 141 및 서열번호 142 및 서열번호 143 및 서열번호 144 및 서열번호 145 및 서열번호 146; 또는
    (xvii) 서열번호 147 및 서열번호 148 및 서열번호 149 및 서열번호 150 및 서열번호 151 및 서열번호 152; 또는
    (xviii) 서열번호 153 및 서열번호 154 및 서열번호 155 및 서열번호 156 및 서열번호 157 및 서열번호 158; 또는
    (xix) 서열번호 159 및 서열번호 160 및 서열번호 161 및 서열번호 162 및 서열번호 163 및 서열번호 164; 또는
    (xx) 서열번호 165 및 서열번호 166 및 서열번호 167 및 서열번호 168 및 서열번호 169 및 서열번호 170; 또는
    (xxi) 서열번호 171 및 서열번호 172 및 서열번호 173 및 서열번호 174 및 서열번호 175 및 서열번호 176; 또는
    (xxii) 서열번호 177 및 서열번호 178 및 서열번호 179 및 서열번호 180 및 서열번호 181 및 서열번호 182; 또는
    (xxiii) 서열번호 183 및 서열번호 184 및 서열번호 185 및 서열번호 186 및 서열번호 187 및 서열번호 188; 또는
    (xxiv) 서열번호 189 및 서열번호 190 및 서열번호 191 및 서열번호 192 및 서열번호 193 및 서열번호 194.
  28. 제1항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 항체 분자는 하기 아미노산 서열을 포함하는, 조합물, 약제학적 조성물, 키트, 용도, 방법 또는 진단 시험:
    (i) 서열번호 3 및 서열번호 27; 또는
    (ii) 서열번호 4 및 서열번호 28; 또는
    (iii) 서열번호 5 및 서열번호 29; 또는
    (iv) 서열번호 6 및 서열번호 30; 또는
    (v) 서열번호 7 및 서열번호 31; 또는
    (vi) 서열번호 8 및 서열번호 32; 또는
    (vii) 서열번호 9 및 서열번호 33; 또는
    (viii) 서열번호 10 및 서열번호 34; 또는
    (ix) 서열번호 11 및 서열번호 35; 또는
    (x) 서열번호 12 및 서열번호 36; 또는
    (xi) 서열번호 13 및 서열번호 37; 또는
    (xii) 서열번호 14 및 서열번호 38; 또는
    (xiii) 서열번호 15 및 서열번호 39; 또는
    (xiv) 서열번호 16 및 서열번호 40; 또는
    (xv) 서열번호 17 및 서열번호 41; 또는
    (xvi) 서열번호 18 및 서열번호 42; 또는
    (xvii) 서열번호 19 및 서열번호 43; 또는
    (xviii) 서열번호 20 및 서열번호 44; 또는
    (xix) 서열번호 21 및 서열번호 45; 또는
    (xx) 서열번호 22 및 서열번호 46; 또는
    (xxi) 서열번호 23 및 서열번호 47; 또는
    (xxii) 서열번호 24 및 서열번호 48; 또는
    (xxiii) 서열번호 25 및 서열번호 49; 또는
    (xxiv) 서열번호 26 및 서열번호 50.
  29. 제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 항체 분자는 FcyRIIb에 대한 결합에 대해서 제23항 내지 제28항 중 어느 한 항에 정의된 바와 같은 항체 분자와 경쟁할 수 있는 항체 분자인, 조합물, 약제학적 조성물, 키트, 용도, 방법 또는 진단 시험.
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