KR20220031735A

KR20220031735A - Sglt2/dpp4 억제제 및 이의 용도

Info

Publication number: KR20220031735A
Application number: KR1020227006283A
Authority: KR
Inventors: 칭후아 마오; 타오 유; 루 간; 이 리; 청더 우; 슈후이 첸
Original assignee: 메드샤인 디스커버리 아이엔씨.
Priority date: 2019-07-26
Filing date: 2020-07-24
Publication date: 2022-03-11
Also published as: CN114026079A; CN114026079B; US20220242898A1; AU2020320890B2; EP4006017A1; AU2020320890A1; MX2022001044A; WO2021018044A1; CA3145678C; JP2022533475A; KR102471055B1; CA3145678A1; EP4006017A4; JP7227427B2

Abstract

본 발명은 SGLT2/DPP4 이중 억제제로서의 일련의 화합물, 및 SGLT2/DPP4 이중 억제제인 약물의 제조를 위한 용도를 개시한다. 구체적으로, 식(I)으로 표시되는 화합물, 이의 이성질체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염에 관한 것이다.

Description

SGLT2/DPP4 억제제 및 이의 용도

본 출원은 하기의 우선권을 주장한다:

CN201910683099.2, 출원일: 2019.07.26;

CN202010119914.5, 출원일: 2020.02.26;

CN202010572226.4, 출원일: 2020.06.22.

본 발명은 SGLT2/DPP4 이중 억제제로서의 일련의 화합물 및 SGLT2/DPP4 이중 억제제인 약물의 제조를 위한 용도에 관한 것이다. 구체적으로, 식(I)으로 표시되는 화합물, 이의 이성질체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염에 관한 것이다.

당뇨병은 고혈당을 특징으로 하는 대사성 질환이다. 고혈당은 인슐린 분비 장애 또는 생물학적 작용 장애 또는 둘 다로 인해 발생한다. 당뇨병의 장기간의 비정상적인 혈당 수치는 심혈관 질환, 만성 신부전, 망막 손상, 신경 손상, 미세혈관 손상 및 비만을 포함한 심각한 합병증을 유발할 수 있다. 당뇨병 치료는 초기 단계에서는 식이 조절 및 운동 요법이 최적의 혈당 조절 방안이다. 이러한 방법으로 혈당 조절이 어려운 경우 인슐린이나 경구 혈당강하제 치료가 필요하다. 현재, 비구아니드, 설포닐우레아, 인슐린 저항성 개선제, 글리니드, α-글루코시다제 억제제, 디펩티딜 펩티다제-IV 억제제 및 나트륨-글루코스 공동수송체(SGLT2) 억제제 등을 비롯한 다양한 혈당강하제가 임상 치료에 사용되어 왔다. 이러한 약물들은 우수한 치료 효과를 가지지만 장기 치료에는 여전히 안전 문제가 존재한다. 예를 들어, 비구아니드는 유산산증을 일으키기 쉽고; 설포닐우레아는 저혈당 증상을 일으킬 수 있고; 인슐린 저항성 개선제는 부종, 심부전, 체중 증가를 유발할 수 있으며; α-글루코시다아제 억제제는 복통, 복부 팽만, 설사와 같은 증상을 일으킬 수 있으며; 나트륨-글루코스 공수송체(SGLT2) 억제제는 비뇨, 생식기 감염 등의 위험을 증가시킨다. 따라서, 당뇨병 치료의 요구를 충족시키기 위해 보다 안전하고 효율적인 새로운 혈당강하제의 개발이 시급하다.

나트륨-글루코스 공동수송체(sodium-glucose cotransporters, SGLTs)는 소장 점막 및 근위 세뇨관에서 발견되는 글루코스 공도수송체의 패밀리이며, 패밀리 멤버는 주로 SGLT-1 단백질과 SGLT2 단백질 두 종류를 포함한다. 그 중에서, SGLT-2는 신장에 고발현되고, 90%의 신장 글루코스 재흡수를 담당하고 있다. SGLT2 억제제는 신장 글루코스의 재흡수 과정을 억제하고, 소변으로부터 글루코스의 체외로의 배출을 촉진하고, 혈당을 낮출 수 있다. 상기 과정은 글루코스의 대사를 수반하지 않기 때문에 저혈당의 부작용의 발생을 피하거나 완화시켰다. 2012년부터 현재까지, 다파글리플로진(Dapagliflozin), 카나글리플로진(Canagliflozin), 루파글리플로진(Luseogliflozin), 이글리플로진(Ipragliflozin), 토파글리플로진(Tofogliflozin) 및 엠파글리플로진(Empagliflozin)등 6개의 약물은 잇따라 시판 허가를 받아 당뇨병 치료에 효과적인 약물이 되었고, 다파글리플로진, 카나글리플로진, 엠파글리플로진은 이미 임상에서 심혈관계의 이점 또는 신장 보호 작용을 갖는 것으로 나타났으며, 따라서 SGLT2는 당뇨병 치료를 위한 이상적인 잠재 표적 중 하나가 되었다. 그러나, SGLT2 약물은 또한 비뇨, 생식계 감염의 위험을 증가시킨다.

디펩티딜 펩티다제-IV(Dipeptidyl peptidase 4)는 세포 표면의 세린 프로테아제이며, 다양한 글루카곤 유사 펩티드-1(glucagon-like peptide-1,GLP-1) 및 글루코스 의존성 인슐린 분비 촉진 폴리펩티드(glucose-dependent insulinotropic polypeptide,GIP）를 비활성화시킬 수 있다. DPP-4 억제제는 DPP-4를 비활성화시켜, GLP-1을 분해하지 않고 GLP-1의 수치를 높임으로써 혈당을 조절하는 역할을 한다. 현재까지 시타글립틴(sitagliptin), 빌다글립틴(vildagliptin), 삭사글립틴(saxagliptin), 알로글립틴(alogliptin), 리나글립틴(lingpin), 게미글립틴(gemigliptin) 및 테네리글립틴(teneligliptin) 등 다양한 DPP-4 억제제가 전 세계적으로 판매되고 있다. 시판되는 DPP4 약물은 혈당 강하 효과가 약하고, 심혈관 이점은 없지만, 장기적인 데이터로부터 안전하고 신뢰할 수 있고, 뚜렷한 부작용이 없다.

따라서, SGLT2/DPP4 이중 억제제는 우수한 개발 전망을 가지고 있다.

본 발명은 식(I)으로 표시되는 화합물, 이의 이성질체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 제공하며,

식중,

R₁은 1, 2 또는 3개의 R_a로 임의로 치환된 C_1-3알킬이며;

R₂ 및 R₃은 각각 독립적으로 H, F, Cl, Br, I, OH, NH₂, C_1-3알킬 및 C_1-3알콕시에서 선택되고, 상기 C_1-3알킬 및 C_1-3알콕시는 1, 2 또는 3개의 R_b에 의해 임의로 치환되고;

R₅는 H, F, Cl, Br, I, OH, NH₂및 C_1-3알킬에서 선택되고, 상기 C_1-3알킬은 1, 2 또는 3개의 R_c에 의해 임의로 치환되고;

R₄는 H, F 또는 Cl이고, R₄가 Cl일 경우, R₂, R₃ 및 R₅은 동시에 H가 아니며;

R_a, R_b 및 R_c는 각각 독립적으로 F, Cl, Br, I, OH 및 NH₂로부터 선택된다.

또한, 본 발명은 식(I)으로 표시되는 화합물, 이의 이성질체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 제공하며,

식중,

R₁은 1, 2 또는 3개의 R_a로 임의로 치환된 C_1-3알킬이며;

R₂ 및 R₃은 각각 독립적으로 H, F, Cl, Br, I, OH, NH₂ 및 C_1-3알킬에서 선택되고, 상기 C_1-3알킬은 1, 2 또는 3개의 R_b에 의해 임의로 치환되고;

R₅는 H, F, Cl, Br, I, OH, NH₂ 및 C_1-3알킬에서 선택되고, 상기 C_1-3알킬은 1, 2 또는 3개의 R_c에 의해 임의로 치환되고;

R₄는 H, F 또는 Cl이고, R₄가 Cl일 경우, R₂, R₃ 및 R₅는 동시에 H가 아니며;

본 발명의 일부 실시형태에 있어서, 상기 R₁은 1, 2 또는 3개의 R_a로 임의로 치환된 -CH₃이고, 기타 변량은 본 발명에 정의된 바와 같다.

본 발명의 일부 실시형태에 있어서, 상기 R₁은 CH₃이며, 기타 변량은 본 발명에 정의된 바와 같다.

본 발명의 일부 실시형태에 있어서, R₂ 및 R₃은 각각 독립적으로 H, F, Cl, Br, I, OH, NH₂, CH₃, Et 및 -OCH₃에서 선택되고, 상기 CH₃, Et 및 -OCH₃은 1, 2 또는 3개의 R_b에 의해 임의로 치환되고, 기타 변량은 본 발명에 정의된 바와 같다.

본 발명의 일부 실시형태에 있어서, 상기 R₂ 및 R₃은 각각 독립적으로 H, F, Cl, Br, I, OH, NH₂, CH₃ 및 Et에서 선택되고, 상기 CH₃및 Et는 1, 2 또는 3개의 R_b에 의해 임의로 치환되고, 기타 변량은 본 발명에 정의된 바와 같다.

본 발명의 일부 실시형태에 있어서, 상기 R₂ 및 R₃은 각각 독립적으로 H, F, Cl, Br, I, OH, NH₂, CH₃, Et 및 -OCH₃에서 선택되고, 기타 변량은 본 발명에 정의된 바와 같다.

본 발명의 일부 실시형태에 있어서, 상기 R₂ 및 R₃은 각각 독립적으로 H, F, Cl, Br, I, OH, NH₂, CH₃ 및 Et에서 선택되고, 기타 변량은 본 발명에 정의된 바와 같다.

본 발명의 일부 실시형태에 있어서, 상기 R₅는 H, F, Cl, Br, I, OH, NH₂, CH₃ 및 Et에서 선택되고, 상기 CH₃및 Et는 1, 2 또는 3개의 R_c에 의해 임의로 치환되고, 기타 변량은 본 발명에 정의된 바와 같다.

본 발명의 일부 실시형태에 있어서, 상기 R₅는 H, F, Cl, Br, I, OH, NH₂, CH₃ 및 Et에서 선택되고, 기타 변량은 본 발명에 정의된 바와 같다.

본 발명의 또 다른 일부 실시형태는 상기 변량을 임의로 조합하여 얻는다.

또한, 본 발명은 하기 화합물, 이의 이성질체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 제공하며,

.

또한, 본 발명은 SGLT2 및 DPP4의 이중 억제제 관련 약물의 제조를 위한 상기 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 용도를 제공한다.

[발명의 효과]

본 발명의 화합물은 인간 SGLT2에 대해 높은 선택성을 나타내었으며 인간 SGLT2 및 rhDPP4에 대해 유의한 체외 억제 활성을 갖고 있다. 본 발명의 화합물은 경구 생체이용률이 우수하고, 혈당강하 효과가 현저하며, 신장 및 간에 대한 보호 역할을 하며, 당뇨병 및 관련 대사 장애 유래 질환의 치료에 사용될 수 있다.

도 1: 혈당 변화치-시간 곡선을 나타낸다.
도 2: 혈당 변화치-시간 곡선하 면적을 나타낸다.
도 3: 당 투여 1시간 후 혈장 인슐린 함량을 나타낸다.
도 4: 당 투여 2시간 후 혈장에서 DPP4 활성을 나타낸다.
도 5: 당 투여 2시간 후 혈장 내 활성GLP-1의 함량을 나타낸다.
도 6: 약물 투여 2주 및 4주 후 혈당 조절 상황을 나타낸다.
도 7: 약물 투여 24일 후 소변 알부민 및 소변 크레아티닌의 변화를 나타낸다.
도 8: 약물 투여 5주 후 간 지방 병변 및 간 비중을 나타낸다.

달리 명시되지 않는 한, 본문에서 사용된 하기 용어와 문구는 다음과 같은 의미를 가진다. 하나의 특정된 용어 또는 문구는 특별히 정의되지 않는 상황에서 확정되지 않거나 명확하지 않은 것으로 간주되어서는 아니되며, 통상적인 의미로 이해되어야 한다. 본문에서 상품 명칭이 나타나면 이는 대응되는 상품 또는 이의 활성 성분을 나타낸다.

여기에서 사용되는 용어 "약학적으로 허용 가능한"은 신뢰 가능한 의학 판단 범위 내에서 그러한 화합물, 재료, 조성물 및/또는 제형은 인간과 동물의 조직과 접촉에 사용하기에 적합하되, 과도한 독성, 자극성, 과민성 반응 또는 기타 문제 또는 합병증이 없으며 합리적인 이익/위험 비율을 의미한다.

용어 "약학적으로 허용 가능한 염"은 본 발명 화합물의 염으로, 본 발명에서 발견된 특정 치환기를 지닌 화합물과 상대적으로 무독의 산 또는 염기로 제조된다. 본 발명의 화합물에 상대적으로 산성인 관능기가 함유될 경우, 순수한 용액 또는 적합한 불활성 용매에서 충족한 양의 염기와 이러한 화합물의 중성 형식으로 접촉시키는 방식으로 염기 부가염을 얻을 수 있다. 약학적으로 허용 가능한 염기 부가염은 나트륨, 칼륨, 칼슘, 암모늄, 유기 아민 또는 마그네슘염 또는 유사한 염을 포함한다. 본 발명의 화합물에 상대적인 염기성 관능기가 함유될 경우, 순수한 용액 또는 적합한 불활성 용매에서 충족한 양의 산과 이러한 화합물의 중성 형식으로 접촉시키는 방식으로 산 부가염을 얻을 수 있다. 약학적으로 허용 가능한 산 부가염의 구현예로, 예를 들어 염산, 브롬화수소산, 질산, 탄산, 중탄산기, 인산, 인산일수소기, 인산이수소기, 황산, 황산수소기, 요오드화수소산, 아인산염 등을 포함하는 무기산염; 및 아세트산, 프로피온산, 이소부티르산, 말레산, 말론산, 벤조산, 숙신산, 수베린산, 푸마르산, 락트산, 만델린산, 프탈산, 벤젠술폰산, p-톨루엔술폰산, 구연산, 타르타르산 및 메탄술폰산과 같은 유사한 산을 포함하는 유기산염을 포함하고, 아미노산(예를 들어 아르기닌 등)의 염, 및 글루쿠론산과 같은 유기산의 염을 더 포함한다. 본 발명의 일부 특정 화합물은 염기성과 산성 관능기를 포함하여 임의의 염기 또는 산 부가염으로 전환될 수 있다.

본 발명의 약학적으로 허용 가능한 염은 산기 또는 염기를 함유한 모체 화합물로 통상적인 화학적 방법으로 합성할 수 있다. 일반적인 경우, 이러한 염의 제조 방법은, 물 또는 유기 용매 또는 양자의 혼합물에서 유리산 또는 염기 형식의 이러한 화합물을 화학적으로 칭량된 적절한 염기 또는 산과 반응시켜 제조한다.

본 발명의 화합물은 특정된 기하적 또는 입체 이성질체 형식으로 존재할 수 있다. 본 발명에서 고려한 이러한 화합물은 거울상이성질체 또는 부분입체이성질체로 농축된 혼합물과 같은 시스 및 트랜스 이성질체, (-)- 및 (+)-거울상 이성질체, (R)- 및 (S)-거울상 이성질체, 부분입체 이성질체, (D)-이성질체, (L)-이성질체, 및 라세미체 혼합물과 기타 혼합물을 포함하는 것으로 구성되고, 모든 이러한 혼합물은 전부 본 발명의 범위에 속한다. 알킬기 등 치환기에는 다른 비대칭 탄소 원자가 존재할 수 있다. 이들 모든 이성질체 및 이들의 혼합물은 모두 본 발명의 범위 내에 속한다.

달리 명시되지 않는 한, 용어 "거울상 이성질체" 또는 "광학 이성질체"는 서로 거울상 관계의 입체 이성질체를 나타낸다.

다른 설명이 없으면, 용어 "시스-트랜스 이성질체" 또는 "기하학적 이성질체"계는 이중 결합 또는 고리 형성 탄소 원자의 단일 결합으로 인해 자유롭게 회전 할 수 없어서 발생한 것이다.

달리 명시되지 않는 한, 용어 "부분입체 이성질체"는 분자가 두 개 또는 여러 개의 카이랄 중심을 가지고 있으며, 분자 사이는 비대칭거울상 관계의 입체 이성질체를 나타낸다.

다른 설명이 없으면, "(+)"는 우선, "(-)"는 좌선, "(±)"는 라세미체를 나타낸다.

달리 명시되지 않는 한, 쐐기형 실선결합（

）과 쐐기형 점선 결합（

）으로 하나의 입체 중심의 절대적 배열을 나타내고, 직형 실선결합（

）과 직형 점선결합（

）으로 입체 중심의 상대적 배열을 나타내고, 물결모양선（

）으로 쐐기형 실선결합（

）또는 쐐기형 점선결합（

）을 나타내고, 또는 물결모양선（

）으로 직형 실선결합（

）과 직형 점선결합（

）을 나타낸다.

달리 명시되지 않는 한, 화합물에 탄소-탄소 이중 결합, 탄소-질소 이중 결합 및 질소-질소 이중 결합과 같이 이중 결합 구조가 있고, 이중 결합의 각 원자에는 두 개의 서로 다른 치환기가 부착되어 있는 경우(질소 원자를 포함하는 이중 결합에서 질소 원자의 한쌍의 고독한 전자는 결합된 하나의 치환기로 간주한다), 이중 결합의 원자와 화합물의 치환기 사이에 물결선(

)을 사용하면 (Z) 이성질체, (E) 이성질체 또는 두 이성질체의 혼합물을 나타낸다. 예컨대, 하기 식 (A)는 화합물이 식 (A-1) 또는 식 (A-2)의 단일 이성질체 또는 식 (A-1) 및 식 (A-2)의 두 이성질체로 존재함을 나타낸다; 하기 화학식 (B)는 화합물이 화학식 (B-1) 또는 화학식 (B-2)의 단일 이성질체의 형태로 존재하거나 화학식 (B-1) 및 화학식 (B-2)의 2개의 이성질체의 혼합물로 존재함을 의미한다. 하기 화학식(C)는 화합물이 화학식 (C-1) 또는 화학식 (C-2)의 단일 이성질체의 형태로 존재하거나 화학식 (C-1) 및 화학식 (C-2)의 2개의 이성질체의 혼합물로 존재함을 의미한다.

달리 명시되지 않는 한, 용어 "호변 이성질체" 또는 "호변 이성질체 형태"는 실온에서 서로 다른 기능성 이성질체는 동적 평형상태에 있으며 서로 빠르게 전화될 수 있음을 나타낸다. 호변 이성질체가 가능할 경우(용액 중에서와 같이), 호변 이성질체의 화학적 평형에 도달할 수 있다. 예컨대, 양성자 호변 이성체(proton tautomer)(양성자 전이 호변 이성질체(prototropic tautomer)로도 알려짐)는 케토-에놀이성질화(Keto-enol isomerization) 및 이민-엔아민이성질화(Imine-enamine isomerization)과 같은 양성자 전달에 의한 상호 전환을 포함한다. 원자가 호변 이성질체(valence tautomer) 는 결합전자의 재 조합으로 상호 전환을 수행한다. 여기서 케토-에놀 호변 이성질체의 구체적인 실시예는 펜탄-2,4-디온(pentane-2,4-dione)과 4-히드록시펜트-3-엔-2-온(4-hydroxypent-3-en-2-one) 두 가지 호변 이성질체 간의 호변이다.

달리 명시되지 않는 한, 용어 "일종의 이성질체가 풍부하게 함유된", "이성질체가 풍부한", "하나의 거울상 이성질체가 풍부하게 함유된" 또는 "거울상 이성질체가 풍부한"은 여기서 일종의 이성질체 또는 거울상 이성질체의 함량이 100%보다 적으며 이 이성질체 또는 거울상 이성질체의 함량이 60%보다 크거나 같으며 또는 70%보다 크거나 같고, 또는 80%보다 크거나 같으며, 90%보다 크거나 같고, 95%보다 크거나 같으며 또는 96%보다 크거나 같고, 또는 97%보다 크거나 같으며, 98%보다 크거나 같고, 99%보다 크거나 같으며 또는 99.5%보다 크거나 같고, 또는 99.6%보다 크거나 같으며, 99.7%보다 크거나 같고, 99.8%보다 크거나 같으며 또는 99.9%보다 크거나 같음을 나타낸다.

달리 명시되지 않는 한, 용어 "이성질체 과량" 또는 "거울상 이성질체 과량"은 두 이성질체 또는 두 거울상 이성질체의 백분율의 차이 값을 나타낸다. 예컨대, 여기서 한 이성질체 또는 거울상 이성질체의 함량이 90%이고 다른 한 이성질체 또는 거울상 이성질체의 함량이 10%이면 이성질체 또는 거울상 이성질체 과량(ee값)은 80%이다.

카이랄합성 또는 카이랄 시약 또는 기타 통상적인 기술을 통해 광학 활성의(R)- 및 (S)-이성질체 및 D 및 L 이성질체를 제조할 수 있다. 본 발명 화합물의 거울상이성질체을 얻으려면, 비대칭 합성 또는 카이랄 보조제를 구비한 유도 작용으로 제조할 수 있으며, 여기서 얻은 부분입체이성질체 혼합물을 분리하고, 보조 라디칼을 절단하여 순수한 필요 되는 거울상이성질체를 제공한다. 또는, 분자에 염기성 관능기(예를 들어 아미노기) 또는 산성 관능기(예를 들어 카르복실기)가 함유될 경우, 적합한 광학 활성의 산 또는 염기와 부분입체이성질체의 염을 형성한 후, 본 분야에 공지된 통상적인 방법으로 부분입체이성질체를 분해한 후, 회수하여 순수한 거울상이성질체를 얻는다. 이 외에, 일반적으로 거울상이성질체와 부분입체이성질체의 분리는 크로마토그래피법으로 완성되고, 상기 크로마토그래피법은 카이랄 고정상을 사용하며 선택적으로 화학적 유도법과 결합한다(예를 들어 아민으로 카바메이트를 생성한다).

본 발명의 화합물은 상기 화합물을 구성하는 하나 또는 다수의 원자 상에 비천연적 비율의 원자 동위원소를 함유할 수 있다. 예를 들어, 트리튬 (³H), 요오드-125(¹²⁵I) 또는 C-14(¹⁴C)와 같은 방사성 동위원소로 화합물을 표기할 수 있다. 다른 예로, 중수소로 수소를 대체하여 중수소화 약물을 형성 할 수 있으며, 중수소와 탄소로 구성된 결합은 일반 수소와 탄소로 구성된 결합보다 강하고, 중수소 되지 않은 약물과 비교하여 중수소화 약물은 부작용을 줄이고 약물 안정성을 증가시키며 약물의 효능을 높이고 약물의 생물학적 반감기를 연장하는 등 우세를 가지고 있다. 본 발명의 화합물의 모든 동위원소로 조성된 변환은 방사성이든 아니든 모두 본 발명의 범위 내에 속한다.

용어 "선택적" 또는 "임의로"는 후술되는 상기 서술에는 상기 사건 또는 상황이 발생된 경우 및 상기 사건 또는 상황이 발생되지 않는 경우를 포함하는 사건 또는 상황이 나타날 수 있지만 무조건 나타나는 것은 아닌 것을 지칭한다.

용어 "치환된"은 특정 원자의 임의의 하나 또는 복수개의 수소 원자가 치환기에 의해 치환되는 것을 지칭하고, 특정 원자의 원자가가 정상이고 치환 후의 화합물이 안정한 중수소 및 수소의 변이체를 포함할 수 있다. 치환기가 산소(즉, =O)일 경우, 두 개의 수소 원자가 치환되는 것을 의미한다. 산소 치환은 방향기에서 발생하지 않는다. 용어 "선택적으로 치환된"은 치환될 수 있거나, 치환되지 않을 수 있고, 달리 명시되지 않는 한, 치환기의 종류 및 개수는 화학적으로 구현될 수 있는 기초 상에서 임의적일 수 있다.

화합물의 조성 또는 구조에서 임의의 변량(예를 들어 R)이 한번 이상 나타날 경우, 이의 각각의 경우에서의 정의는 모두 독립적이다. 따라서, 예를 들어, 만약 하나의 라디칼이 0 내지 2 개의 R에 의해 치환되면, 상기 라디칼은 선택적으로 두 개 이하의 R에 의해 치환 될 수 있고, 각각의 경우에서의 R은 모두 독립적인 선택항이다. 이 외에, 치환기 및/또는 이의 변이체의 조합은 이러한 조합이 안정적인 화합물을 생성하는 경우에서만 허용된다.

-(CRR)₀-와 같이 하나의 연결기의 개수가 0일 경우, 상기 연결기는 단일 결합을 나타낸다.

그중의 하나의 변량이 단일결합에서 선택되는 경우, 상기 두개의 기가 직접 연결됨을 나타내며, 예를 들어 A-L-Z에서 L이 단일결합인 경우 상기 구조는 실제적으로 A-Z임을 나타낸다.

하나의 치환기가 비어 있을 경우, 상기 치환기는 존재하지 않는 것을 나타내는 바, 예를 들어 A-X에서 X가 비어 있을 경우 상기 구조는 실제로 A임을 나타낸다. 나열된 치환기에서 이가 어느 원자를 통해 치환된 라디칼에 연결된 것을 나타내지 않는 경우, 이러한 치환기는 임의의 원자를 통해 결합될 수 있고, 예를 들어, 피리딜기는 치환기로서 피리딘 고리 중 임의의 하나의 탄소 원자를 통해 치환된 라디칼에 연결될 수 있다.

나열된 연결 라디칼의 결합 방향을 명시하지 않은 경우 결합방향은 임의적이며, 예를 들어

에서 연결된 라디칼 L은 -M-W-이고, 이 때, -M-W-는 고리 A와 고리 B를 왼쪽에서 오른쪽으로 읽기 순서와 같은 방향으로 연결하여

를 형성할 수 있고, 고리 A와 고리 B를 왼쪽에서 오른쪽으로 읽기 순서와 반대 방향으로 연결하여

를 형성할 수 있다. 상기 연결기, 치환기 및/또는 이의 변이체는 조합은 이러한 조합이 안정적인 화합물을 생성할 경우에만 허용된다.

달리 명시되지 않는 한, 어느 하나의 라디칼에 하나 또는 복수개의 연결 가능한 사이트가 있을 경우, 상기 라디칼의 임의의 하나 또는 복수개의 사이트는 화학 결합을 통해 다른 라디칼에 연결될 수 있다. 상기 라디칼과 다른 라디칼 사이의 화학 결합은 직선 실선 결합(

), 직선 점선 결합(

), 또는 물결선(

)으로 나타낼 수 있다. 예를 들어, -OCH₃의 직선 실선 결합은 상기 라디칼의 산소 원자를 통해 다른 라디칼에 연결되는 것을 나타내고;

의 직선 점선 결합은 상기 라디칼의 질소 원자의 양단을 통해 다른 라디칼에 연결되는 것을 나타내며;

의 물결선은 상기 페닐기 라디칼의 1개 사이트 및 2개 사이트의 탄소 원자를 통해 다른 라디칼에 연결되는 것을 나타낸다.

달리 명시되지 않는 한, 용어 "C_1-3알킬"은 직쇄 또는 분지쇄의 1 내지 3개의 탄소원자로 구성된 포화 탄화수소기를 나타낸다. 상기 C_1-3알킬은 C_1-2 및 C_2-3알킬 등을 포함하며; 1가(예를 들어 메틸기), 2가(예를 들어 메틸렌기) 또는 다가(예를 들어 메틴기)일 수 있다. C_1-3알킬의 예로는 메틸기(Me), 에틸기(Et), 프로필기(예를 들어, n-프로필기 및 이소프로필기)등을 포함하나 이에 한정되지 않는다.

다른 설명이 없으면, C_n-n+m 또는 C_n-C_n+m은 n 내지 n+m개의 탄소의 임의의 하나의 구체적인 형태를 포함하며, 예를 들어 C_1-12는 C₁, C₂, C₃, C₄, C₅, C₆, C₇, C₈, C₉, C₁₀, C₁₁ 및 C₁₂를 포함하며, 또한 n 내지 n+m 중 임의의 하나의 범위도 포함하며, 예를 들어 C_1-12는 C_1-3, C_1-6, C_1-9, C_3-6, C_3-9, C_3-12, C_6-9, C_6-12 및 C_9-12 등을 포함하며; 마찬가지로 n원 내지 n+m원은 고리의 원자 수가 n 내지 n+m개임을 나타내며, 예를 들어 3 내지 12원 고리는 3원 고리, 4원 고리, 5원 고리, 6원 고리, 7원 고리, 8원 고리, 9원 고리, 10원 고리, 11원 고리 및 12원 고리를 포함하며, n 내지 n+m 중 임의의 한 범위도 포함하며, 예를 들어 3 내지 12원 고리는 3 내지 6원 고리, 3 내지 9원 고리, 5 내지 6원 고리, 5 내지 7원 고리, 6 내지 7원고리, 6 내지 8원 고리 및 6 내지 10원 고리 등을 포함한다.

달리 명시되지 않는 한, 용어 "C_1-3알콕시"는 하나의 산소에 의해 분자의 다른 부분에 연결되는 1 내지 3개의 탄소원자를 포함하는 알킬 그룹을 나타낸다. 상기 C_1-3알콕시는 C_1-2, C_2-3, C₃ 및 C₂알콕시 등을 포함한다. C_1-3알콕시의 예로는 메톡시, 에톡시, 프로폭시(n-프로폭시 및 이소프로폭시를 포함)등을 포함하나 이에 한정되지 않는다.

용어 "이탈기"는 다른 관능기 또는 원자에 의하여 치환 반응(예를 들어 친핵성 치환 반응)을 통하여 치환된 관능기 또는 원자를 지칭한다. 예를 들어, 대표적인 이탈기로 트리플루오로메탄설포네이트; 염소, 브롬, 요오드; 메탄술포네이트, 토실레이트, p-브로모벤젠술포네이트, p-톨루엔술포네이트과 같은 술포네이트기; 아세톡시기, 트리플루오로아세톡시기와 같은 아실옥시기 등을 포함한다

용어 "보호기"는 "아미노 보호기", "히드록실 보호기" 또는 "메르캅토 보호기"를 포함하지만 이에 한정되지 않는다. 용어 "아미노 보호기"는 아미노기 질소 위치에서 부반응을 방지하는데 적합한 보호기를 지칭한다. 대표적인 아미노 보호기로 포르밀기; 예하면 알카노일기 (예를 들어 아세틸기, 트리클로로아세틸기 또는 트리플푸오로아세틸기)와 같은 아실기; tert-부톡시카보닐기(Boc)와 같은 알콕시카보닐기; 벤질옥시카보닐기(Cbz) 및 9-플루오레닐메톡시카보닐기(Fmoc)와 같은 아릴메톡시카보닐기; 벤질기(Bn), 트리페닐메틸기(Tr), 1,1-비스-(4'-메톡시페닐)메틸기와 같은 아릴메틸기; 트리메틸실릴기(TMS) 및 tert-부틸디메틸실릴기(TBS)와 같은 실릴기 등을 포함하지만 이에 한정되지 않는다. 용어 "히드록실 보호기"는 히드록실기 부반응을 억제하는데 적합한 보호기를 지칭한다. 대표적인 히드록실기 보호기로는 메틸기, 에틸기 및 tert-부틸기와 같은 알킬; 알카노일기(예를 들어 아세틸기)와 같은 아실기; 벤질기(Bn), p-메톡시벤질기(PMB), 9-플루오레닐메틸기(Fm) 및 디페닐메틸기(디페닐메틸기, DPM)와 같은 아릴기메틸기; 트리메틸실릴기(TMS) 및 tert-부틸디메틸실릴기(TBS)와 같은 실릴기 등을 포함하지만 이에 한정되지 않는다.

본 발명의 화합물은 본 기술분야의 기술자들에게 공지된 다양한 합성 방법으로 제조될 수 있고, 하기에서 예를 든 구체적인 실시형태, 이를 기타 화학 합성 방법과 결합하여 형성한 실시형태 및 본 기술분야의 기술자들에게 공지된 등가 교체 방식을 포함하며, 바람직한 실시형태로 본 발명의 실시예 를 포함하지만 이에 한정되지 않는다.

본 발명에서 사용된 모든 용매는 시판되는 것이다. 본 발명은 하기와 같은 약칭을 사용한다: aq는 물을 나타내며; HATU는 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄헥사플루오로포스페이트를 나타내며; EDC는 N-(3-디메틸아미노프로필)-N'-에틸카르보디이미드 염산염을 나타내며; m-CPBA는 3-클로로퍼옥시벤조산을 나타내며; eq는 당량, 등량을 나타내며; CDI는 카르보닐디이미다졸을 나타내며; DCM은 디클로로메탄을 나타내며; PE는 석유에테르를 나타내며; DIAD는 디이소프로필 아조디카르복실레이트를 나타내며; DMF는 N,N-디메틸포름아미드를 나타내며; DMSO는 디메틸설폭시드를 나타내며; EtOAc는 아세트산에틸을 나타내며; EtOH는 에탄올을 나타내며; MeOH는 메탄올을 나타내며; CBz는 벤질옥시카보닐기를 니타내며, 아민의 보호기이며; BOC는 tert-부톡시카르보닐기를 나타내며 아민의 보호기이며; HOAc는 아세트산을 나타내며; NaCNBH₃은 시아노수소화붕소나트륨을 나타내며; r.t.는 실온을 나타내며; O/N은 하룻밤을 나타내며; THF는 테트라하이드로푸란을 나타내며; Boc₂O는 디-tert-부틸디카보네이트를 나타내며; TFA는 트리풀루오로아세트산을 나타내며; DIPEA는 디이소프로필에틸아민을 니타내며; SOCl₂는 염화티오닐을 니타내며; CS₂는 이황화탄소를 나타내며; TsOH는 p-톨루엔술폰산을 나타내며; NFSI는 N-플루오로-N-(벤젠술포닐)벤젠술폰아미드를 나타내며; n-Bu₄NF는 테트라부틸암모늄 플루오라이드를 나타내며; iPrOH는 2-프로판올을 나타내며; mp는 용점을 나타내며; LDA는 리튬 디이소프로필아미드를 나타내며; Et는 에틸을 나타낸다.

화합물은 당업계의 통상적인 명명원칙 또는 ChemDraw®소프트를 사용하여 명명되며, 시판되는 화합물은 공급업체의 목록명칭을 사용한다.

아래, 실시예를 통하여 본 발명을 상세하게 설명하지만, 본 발명은 어떠한 불리한 제한도 받지 않는다. 본문에서 본 발명을 상세히 설명하였고, 이의 구체적인 실시형태도 개시하였음으로, 본 기술분야의 통상의 기술자라면 본 발명의 요지와 범위를 벗어나지 않는 범위에서 본 발명의 구체적인 실시형태를 다양하게 변화 및 개선하는 것은 명백할 것이다.

참조예1: 단편 A-1

합성경로:

단계 1: 화합물A-1-2의 합성.

화합물A-1-1(20g, 91.32mmol)을 무수 테트라하이드로푸란(100mL)이 들어있는 반응 플라스크에 가하고, 질소 가스의 보호하에 보란테트라하이드로푸란 용액(1M, 120mL)을 적가한 다음, 15℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 완료 후, 질소 가스의 보호하에 메탄올(70mL)을 천천히 적가하여 퀀칭시켰다. 반응 용액을 감압농축 한 후 화합물A-1-2 조질의 생성물을 얻고, 직접 다음 단계의 반응에 사용하였다. MSm/z: 229.7 [M+23]⁺.

단계2: 화합물A-1-3의 합성.

화합물A-1-2(19g, 92.31mmol)（조질의 생성물）를 무수 N,N-디메틸포름아미드(100mL)가 들어있는 반응 플라스크에 가하고, 0℃로 냉각시킨 다음 수소화나트륨(7.00g, 174.88mmol)을 가하여 0.5시간 동안 교반하고, 반응을 천천히 15℃로 승온시킨 다음 알릴 브로마이드(34g, 281.04mmol)를 가하고 계속하여 18시간 동안 교반하였다. 반응 완료 후, 반응 용액에 포화 염화암모늄 수용액(50mL)을 적가하여 퀀칭시킨 다음 감압농축하여, 황색 점조물을 얻었으며, 디클로로메탄(200mL) 및 물(200mL)을 가하여 교반한 다음 분층시키고, 유기상을 물(100mL×2)로 세척하고 감압농축하여, 조질의 생성물을 얻었다; 조질의 생성물을 컬럼 크로마토그래피（석유 에테르 100% 반응계）로 정제하여 화합물A-1-3을 얻었다.

단계3: 화합물A-1-5의 합성.

화합물A-1-3(15.00g, 61.20mmol)을 무수 테트라하이드로푸란(150mL)에 용해시키고, 질소 가스의 보호하에 -70℃로 온도를 낮춰, n-부틸리튬의 n-헥산 용액(2.5M, 33.00mL)을 적가하고, 적가 완료 후, 반응계를 -70℃에서 0.5시간 동안 교반하고, 반응계A를 제조하였다. 화합물A-1-4(16.73g, 61.20mmol)를 무수 테트라하이드로푸란(150mL)에 용해시키고, 질소 가스의 보호하에 0℃로 온도를 낮춰, tert-부틸 염화마그네슘의 테트라하이드로푸란 용액(1.7M, 69.00mL)을 적가하고, 반응을 0℃에서 0.5시간 동안 교반한 다음, 반응을 상기 반응계A에 적가하였다. 적가 완료 후, 반응을 -70℃에서 0.5시간 동안 교반하고, 천천히 20℃로 승온시키고, 계속하여 2시간 동안 교반하였다. 반응 종료 후, 포화 염화암모늄(100mL)을 적가하여 퀀칭시키고, 농축하여 유기 용매를 제거하고, 잔여물을 에틸 아세테이트로 추출하고(100mL*3), 유기상을 합병하고, 유기상을 포화 식염수 용액(100mL)으로 세척하고, 무수황산나트륨으로 건조하고, 여과하고, 여액을 농축하여 조질의 생성물을 얻었다. 조질의 생성물을 컬럼 크로마토그래피（석유 에테르/에틸 아세테이트=10:1 내지 1:1）로 정제하여 화합물A-1-5을 얻었다. ¹H NMR (400MHz, CHCl₃-d) δ ppm 1.37 (s, 3 H), 1.58 (s, 3 H), 3.07 (d, J=4.27 Hz, 1 H), 4.06 - 4.11 (m, 2 H), 4.59 - 4.68 (m, 4 H), 5.24 (dd, J=10.42, 1.38 Hz, 1 H), 5.30 - 5.33 (m, 1 H), 5.35 (dd, J=17.32, 1.51 Hz, 1 H), 5.90 - 6.03 (m, 1 H), 6.10 (d, J=3.51 Hz, 1 H), 7.15 (t, J=9.03 Hz, 1 H), 8.05 (ddd, J=8.22, 5.33, 2.26 Hz, 1 H), 8.20 (dd, J=6.90, 2.13 Hz, 1 H).

단계4: 화합물A-1-6의 합성.

화합물A-1-5(6.20g, 13.72mmol), 삼염화세륨 칠수화물(6.20g, 16.64mmol, 1.58mL), 무수 메탄올(100mL)을 반응 플라스크에 가하고, 0℃에서, 천천히 수소화붕소나트륨(1.20g, 31.72mmol)을 배치로 가하고, 반응계를 20℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 종료 후, 포화 염화암모늄 용액(100mL)을 적가하여 퀀칭시키고, 농축하여 유기 용매를 제거하고, 용액이 현탁해진 후, 구연산을 가하여 용액이 투명해질 때까지 조정하고, 에틸 아세테이트로 추출하였으며(100mL×3), 유기상을 합병하고, 유기상을 포화 식염수 용액(100mL)으로 세척하고, 무수황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 여액을 농축하여 화합물A-1-6의 조질의 생성물을 얻었으며, 직접 다음 단계의 반응에 사용하였다. MSm/z: 372.0 [M+18]⁺.

단계5: 화합물A-1-7의 합성.

화합물A-1-6(8.00g, 17.60mmol), 아세트산(42.00g, 699.42mmol, 40mL), 물(40mL)을 반응 플라스크에 가하고, 100℃에서 6시간 동안 교반하였다. 반응 종료 후, 농축하여 조질의 생성물의 황색 고체를 얻었으며, 톨루엔(30mL)을 가하고 다시 농축하여, 2회 반복하였으며, 화합물A-1-7의 조질의 생성물을 얻어, 직접 다음 단계의 반응에 사용하였다. MSm/z: 331.9 [M+18]⁺.

단계6: 화합물A-1-8의 합성.

화합물A-1-7(8.00g, 17.94mmol), 트리에틸아민(13.81g, 136.51mmol, 19.0mL), 아세토니트릴(100mL)을 반응 플라스크에 가한 다음, 무수 아세트산(16.35g, 160.16mmol, 15.0mL), 4-디메틸아미노피리딘(35mg, 286.49μmol)을 배치로 가하고, 반응계를 20℃에서 8시간 동안 교반하였다. 반응 완료 후, 포화 황산수소나트륨 수용액（10mL）을 적가하여 퀀칭시키고, 물(100mL), 에틸 아세테이트(100mL)를 가하여, 균일하게 교반하고 분층시켰으며, 수상을 에틸 아세테이트(100mL)로 2회 추출하고, 유기상을 합병하고, 유기상을 포화 식염수 용액(100mL)으로 세척하고, 무수황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 여액을 농축하여 조질의 생성물을 얻었다. 조질의 생성물을 컬럼 크로마토그래피（석유 에테르/에틸 아세테이트=10:1 내지 2:1）로 정제하여 화합물A-1-8을 얻었다. MSm/z: 500.1 [M+18]⁺.

단계7: 화합물A-1-9의 합성.

화합물A-1-8(4.00g, 6.50mmol), 티오우레아(1.28g, 16.82mmol), 무수 디옥산(50mL)을 반응 플라스크에 가하고, 질소 가스의 보호하에 트리실릴트리플루오로메탄설폰산(4.92g, 22.14mmol, 4.00mL)을 가하여, 반응을 80℃에서 2시간 동안 교반하였다. 중간체의 생성이 검출된 다음, 반응을 20℃로 온도를 낮춰, 요오도메탄(3.60g, 25.36mmol, 1.58mL), 디이소프로필에틸아민(4.20g, 32.48mmol, 5.66mL)을 가하고, 반응을 20℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응에 메탄올(10mL)을 가하여 퀀칭시키고, 감압농축하고, 잔여물에 물(50mL)을 가한 다음, 에틸 아세테이트로 추출하고(50mL×3), 유기상을 합병하고, 유기상을 포화 식염수(50mL)로 세척하고, 무수황산나트륨으로 건조하고, 여과하고, 여액을 감압농축하여 조질의 생성물을 얻었다. 조질의 생성물을 컬럼 크로마토그래피（석유 에테르/에틸 아세테이트=10:1 내지 3:1）로 정제하여 화합물A-1-9를 얻었다. MSm/z: 493.0 [M+23]⁺.

단계8: 화합물A-1-10의 합성.

화합물A-1-9(3.20g, 5.80mmol), 바르비투르산 이수화물(1.50g, 11.68mmol, 2.01eq), 무수 에탄올(40mL)을 반응 플라스크에 가하고, 질소 가스의 보호하에 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐(0.32g, 276.92μmol, 5%mol당량)을 가하고, 반응을 40℃에서 14시간 동안 교반하였다. 반응 완료 후 냉각하여 여과하고, 여액을 감압농축하고, 잔여물에 물(50mL)을 가하고, 에틸 아세테이트로 추출하고(50mL×3), 유기상을 합병하고, 유기상을 포화 식염수(50mL)로 세척하고, 무수황산나트륨으로 건조하고, 여과하고, 여액을 감압농축하여 조질의 생성물을 얻었다. 조질의 생성물을 컬럼 크로마토그래피（석유 에테르/에틸 아세테이트=10:1 내지 1: 1）로 정제하여 화합물A-1-10을 얻었다. 1H NMR (400MHz, CDCl₃) δ ppm 7.46 (dd, J=7.03, 2.01 Hz, 1 H), 7.23 - 7.27 (m, 1 H), 6.97 - 7.11 (m, 1 H), 5.32 - 5.43 (m, 1 H), 5.17 - 5.28 (m, 1 H), 5.12 (t, J=9.66 Hz, 1 H), 4.76 (br d, J=5.27 Hz, 2 H), 4.55 (d, J=9.79 Hz, 1 H), 4.45 (d, J=9.79 Hz, 1 H), 2.20 (s, 3 H), 2.10 (s, 3 H), 2.02 (s, 3 H), 1.83 (s, 3 H), 1.80 - 1.86 (m, 1 H).

단계9: 화합물A-1의 합성.

질소 가스의 보호하에, 0℃의 조건하에, 삼브롬화인(34.59mg, 127.78μmol, 12.14μL)을 화합물A-1-10(0.11g, 255.55μmol)의 무수 테트라하이드로푸란(2mL)에 적가하였다. 반응을 16시간 동안 교반하고, 그 사이 0℃에서 20℃로 자연스럽게 승온시켰다. 반응 완료 후, 반응에 2M의 탄산 칼륨 수용액(5.5mL)을 천천히 가하고, 10분간 교반하여 퀀칭시켰다. 반응 용액을 정지하여 분층시키고, 수상을 에틸 아세테이트(10mL×2)로 추출하고, 유기상을 합병하고, 유기상을 물(20mL) 및 포화 식염수(10mL)로 순차적으로 세척하고, 무수황산나트륨으로 건조시킨 다음 감압농축하여 조질의 생성물을 얻었다. 조질의 생성물을 n-헥산(10mL)으로 상온에서 1시간 동안 교반한 다음, 여과하고 고체를 수거하고 n-헥산(2mL×3)으로 세척하고, 케이크를 감압농축하여, 잔여 용매를 제거한 다음 화합물A-1을 얻었다. ¹H NMR（400MHz, CDCl₃）δ 7.39-7.30（m, 2 H）, 7.09-7.03（m, 1 H）, 5.36（t, J=9.6 Hz, 1 H）, 5.22（t, J=9.6 Hz, 1 H）, 5.07（t, J=9.6 Hz, 1 H）, 4.58-4.52（m, 2 H）, 4.48-4.41（m, 2 H）, 2.21（s, 3 H）, 2.11（s, 3 H）, 2.02（s, 3 H）, 1.86（s, 3 H）.

참조예 1의 단계1 내지 9의 합성 방법을 참조하여, 표 1중의 각 단편A-2, A-3, A-4, A-5를 합성하였다 .

[표 1]

참조예6: 단편A-6

합성경로:

단계1: 화합물A-6-2의 합성

화합물A-6-1(25g, 133.67mmol, 1eq)을 테트라하이드로푸란(250mL)에 용해시키고, 0℃에서 수소화나트륨(10.69g, 267.33mmol, 2eq)을 가하고, 반응을 25℃로 승온시키고 0.5시간 동안 교반한 다음, 천천히 알릴 브로마이드(48.51g, 401.00mmol, 34.65mL, 3eq)를 가하고, 25℃에서 계속하여 1.5시간 동안 반응시켰다. 반응 완료 후, 0℃에서 포화 염화암모늄 수용액(100mL)을 가하여 퀀칭시키고, 반응 용액을 에틸 아세테이트로 추출하였다(250mL×2). 유기상을 합병하고, 감압농축 한 후 조질의 생성물을 얻었으며, 조질의 생성물을 컬럼 크로마토그래피（석유 에테르）로 정제하여 표적 화합물A-6-2을 얻었다, ¹H NMR (400MHz, CD₃OD) δ ppm 4.04 (dt, J = 5.5, 1.4 Hz, 2H), 4.45-4.52 (m, 2H), 5.17-5.34 (m, 2H), 5.95 (ddt, J = 17.2, 10.7, 5.5, 5.5 Hz, 1H), 7.22-7.32 (m, 2H), 7.43 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.51 (s, 1H).

단계2: 화합물A-6-4의 합성

질소 가스의 보호하에, -78℃의 조건하에, n-부틸리튬(2.5M, 27.12mL, 1.1eq)을 화합물A-6-2(14g, 61.65mmol, 1eq)의 무수 테트라하이드로푸란(140mL)용액에 적가하였다. 적가 완료 후, 반응을 -78℃에서 0.5시간 동안 교반하고, 반응계A를 얻었다. 동시에 질소 가스의 보호하에, 0℃의 조건하에, tert-부틸 염화마그네슘(1.7M, 47.14mL, 1.3eq)을 화합물A-1-4(18.53g, 67.81mmol, 1.1eq)의 무수 테트라하이드로푸란(180mL)에 적가하고, 적가 완료 후, 0℃에서 0.5시간 동안 반응시키고, 반응계B를 제조하였다. 질소 가스의 보호하에, -78℃에서 반응계B를 반응계A에 천천히 가하였다. 반응을 -78℃에서 0.5시간 동안 반응시킨 다음, 25℃로 승온시킨 다음 계속하여 15.5시간 동안 반응시켰다. 반응 완료 후, 0℃에서 반응 용액에 염화 암모늄 용액(100mL)을 가하여 퀀칭시키고, 에틸 아세테이트(200mL)를 가하고 희석하여 분층시키고, 유기상을 물(50mL×2)로 세척한 다음, 포화 식염수(50mL×2)로 세척하고, 무수황산나트륨으로 건조한 다음 감압농축하고, 잔여물을 컬럼 크로마토그래피（석유 에테르: 에틸 아세테이트=4:1）로 정제하여 표적 화합물A-6-4을 얻고, 생성물을 LCMS로 확인하였다, LC-MS (m/z) 357 [M+Na]⁺.

단계3: 화합물A-6-5의 합성

화합물A-6-4(13g, 38.88mmol, 1eq)를 메탄올(130mL)에 용해시키고, 0℃로 온도를 낮추고, 삼염화세륨(9.58g, 38.88mmol, 2.44mL, 1eq), 수소화붕소나트륨(2.94g, 77.76mmol, 2eq)을 순차적으로 가하고, 반응을 25℃로 승온시키고, 16시간 동안 반응시켰다. 반응 완료 후, 포화 염화암모늄 수용액(30mL)을 가하여 퀀칭시켰다. 반응 용액을 감압농축하여 건조시키고, 잔여물에 에틸 아세테이트(100mL)를 가한 다음, 물(50mL×2)로 세척한 다음, 포화 식염수(50mL×2)로 세척하고, 무수황산나트륨으로 건조하고, 여과한 다음 감압농축하여 표적 화합물A-6-5를 얻고, 생성물을 LCMS로 확인하였다, LC-MS (m/z) 359 [M+Na]⁺.

단계4: 화합물A-6-6의 합성

화합물A-6-5(10.8g, 32.11mmol, 1eq)를 물(50mL) 및 빙초산(50mL)의 혼합용매에 용해시키고, 100℃에서 16시간 동안 반응시켰다. 반응 완료 후, 감압농축하고, 잔여물에 톨루엔(150mL)을 가하고, 감압농축 한 후 화합물A-6-6을 얻었으며, 생성물을 LCMS로 확인하였다, LC-MS (m/z) 319 [M+Na]⁺.

단계5: 화합물A-6-7의 합성

화합물A-6-6(9.2g, 31.05mmol, 1eq)을 1,4-디옥산（100mL）에 용해시키고, 무수 아세트산(25.36g, 248.38mmol, 23.26mL, 8eq), 피리딘(24.56g, 310.48mmol, 25.06mL, 10eq), 4-디메틸아미노피리딘(1.90g, 15.52mmol, 0.5eq)을 가하고, 80℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 완료 후, 감압농축하여 용매를 제거하고, 잔여물을 에틸 아세테이트(100mL)로 희석한 다음 1M희석 염산(100mL×4）, 물(50mL×2), 포화 식염수(50mL×2)로 순차적으로 세척하였다. 유기상을 무수황산나트륨으로 건조하고, 여과한 다음 감압농축하였다. 잔여물을 컬럼 크로마토그래피（석유 에테르: 에틸 아세테이트=3:1）로 정제하여, 표적 화합물A-6-7을 얻고, 생성물을 LCMS로 확인하였다, LC-MS (m/z) 487 [M+Na]⁺.

단계6: A-6-8의 합성

화합물A-6-7(6.2g, 13.35mmol, 1eq)을 1,4-디옥산(62mL)에 용해시키고, 티오우레아(3.56g, 46.72mmol, 3.5eq)를 가하고, 질소 가스의 보호하에, 25℃의 조건하에, 트리메틸실릴트리플루오로메탄술포네이트(11.87g, 53.40mmol, 4eq)를 가하고, 반응을 60℃로 승온시키고 1시간 동안 반응시키고, 25℃로 온도를 낮추고, 차례로 요오도메탄(9.47g, 66.74mmol, 5eq), 디이소프로필에틸아민(17.25g, 133.49mmol, 10eq)을 가하고, 반응을 25℃에서 계속하여 15시간 동안 교반하였다. 반응 완료 후, 물(60mL)을 가하여 퀀칭시키고, 에틸 아세테이트(60mL×3)로 추출하고, 유기상을 합병하고, 포화 식염수(50mL)로 세척하고, 무수황산나트륨으로 건조시킨 다음 감압농축하였다. 잔여물을 컬럼 크로마토그래피（석유 에테르: 에틸 아세테이트=4:1）로 정제하여, 표적 화합물A-6-8을 얻었으며, 생성물을 LCMS로 확인하였다, LC-MS (m/z) 475 [M+Na]⁺.

단계7: A-6-9의 합성

반응 플라스크에 A-6-8(4.4g, 9.72mmol, 1eq), 바르비투르산(2.49g, 19.45mmol, 2eq), 에탄올(44mL)을 가하고, 질소 가스의 보호하에, 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐(516.80mg, 486.17μmol, 0.05eq)을 가하고, 반응을 65℃에서 16시간 동안 교반하였다.반응 완료 후, 포화 탄산수소나트륨수용액을 가하여 pH를 7 내지 8로 조정하고, 여과하고, 여액을 에틸 아세테이트(40mL×2)로 추출하고, 유기상을 합병하고 포화 식염수(20mL)로 세척하고, 무수황산나트륨으로 건조한 다음 감압농축하여 조질의 생성물을 얻었다. 조질의 생성물을 컬럼 크로마토그래피（석유 에테르: 에틸 아세테이트=3:2）로 정제하여, 표적 화합물A-6-9을 얻고, 생성물을 LCMS로 확인하였다, LC-MS (m/z) 435 [M+Na]⁺.

단계8: A-6의 합성

질소 가스의 보호하에, 0℃에서 삼브롬화인(98.44mg, 363.68μmol, 34.18μL, 0.5eq)을 화합물A-6-9(300mg, 727.36μmol, 1eq)의 무수 테트라하이드로푸란(3mL) 용액에 가하고, 반응을 0℃에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 완료 후, 반응 용액을 1N탄산 칼륨 수용액으로 세척하여 분층시키고, 수상을 디클로로메탄(2mL)으로 추출하였다. 유기상을 합병하고, 감압농축하였다. 조질의 생성물을 컬럼 크로마토그래피（석유 에테르: 에틸 아세테이트=4:1）로 분리하고 정제하여, 표적 화합물A-6을 얻었다. 1H NMR (400MHz, CDCl₃) δ ppm 1.83-1.86 (m, 3H), 2.02 (s, 3H), 2.10-2.13 (m, 3H), 2.20-2.22 (m, 3H), 4.46-4.49 (m, 2H), 4.54-4.58 (m, 1H), 5.10 (t, J = 9.7 Hz, 1H), 5.20-5.27 (m, 1H), 5.31 (s, 1H), 5.34-5.40 (m, 1H), 7.30-7.38 (m, 4H).

참조예7: 단편A-7

합성경로:

단계1: 화합물A-7-2의 합성

반응 플라스크를 질소 가스로 치환한 다음, 0℃에서 수소화붕소나트륨(7.28g, 192.43mmol, 3.04eq)을 분할하여 A-7-1(14g, 63.35mmol, 1eq)의 메탄올(60mL)용액에 가하였다. 반응을 0℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 완료 후, 0℃의 조건하에, 천천히 포화 염화암모늄 용액(20mL)을 가하여 퀀칭시키고, 퀀칭시킨 다음, 반응을 계속하여 30분간 교반한 다음 감압농축하였다. 잔여물에 에틸 아세테이트(300mL) 및 포화 염화나트륨 수용액(100mL)을 가하고, 교반한 다음 분층시키고, 유기상을 수거하였다. 유기상을 무수황산나트륨으로 건조시킨 다음 감압농축하였다. 조질의 생성물을 컬럼 크로마토그래피（석유 에테르:에틸 아세테이트=1:0 내지 10:1）로 정제하여, 화합물A-7-2를 얻었다.

단계2: 화합물A-7-3의 합성

0℃에서 수산화 나트륨(20.86g, 521.45mmol, 5eq)을 물(60mL)에 가하여 교반하고 용해시킨 다음, 톨루엔(180mL), 화합물A-7-2(24.4g, 104.29mmol, 1eq) 및 테트라부틸암모늄 브로마이드(TBAB)(3.36g, 10.43mmol, 0.1eq)를 순차적으로 가하였다. 반응을 25℃에서 0.5시간 동안 교반한 다음 알릴 브로마이드(18.92g, 156.43mmol, 13.52mL, 1.5eq)를 가하였다. 반응을 50℃로 승온시키고 10.5시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 정지 분층시키고, 수상을 에틸 아세테이트(80mL×2)로 추출하였다. 유기상을 합병하고, 염수(80mL×2)로 세척한 다음 무수황산나트륨으로 건조시키고, 감압농축하여 황색 오일상을 얻고, 톨루엔(50mL)을 가한 다음 감압농축하여 화합물A-7-3을 얻었으며, 정제하지 않고 직접 다음 단계에 사용하였다.

단계3: 화합물A-7-5의 합성

질소 가스의 보호하에, 0℃에서 tert-부틸 염화마그네슘(1.7M, 37.56mL, 1.6eq)을 화합물A-1-4(10.91g, 39.91mmol, 1eq)의 무수 테트라하이드로푸란(200mL)용액에 적가하였다. 적가 종료 후, 반응을 0 내지 5℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. 질소 가스의 보호하에, 반응에 화합물A-7-3(10.5g, 39.91mmol, 1eq)을 가하고, -70℃로 온도를 낮춰, n-부틸리튬(2.5M, 20.75mL, 1.3eq)을 적가하였다. 적가 완료 후 -70℃에서 0.5시간 동안 교반한 다음, 25℃로 승온시키고 2시간 동안 교반하여 반응시켰다. 반응 완료 후, 0 내지 10℃에서, 포화 염화암모늄 용액(50mL)을 적가하여 퀀칭시키고, 에틸 아세테이트(80mL×2)로 추출하였다. 유기상을 합병한 다음, 무수황산나트륨으로 건조시킨 다음 감압농축하여 조질의 생성물을 얻었다. 조질의 생성물을 컬럼 크로마토그래피（석유 에테르: 에틸 아세테이트=10:1 내지 2:1）로 분리하여 화합물A-7-5을 얻었으며, 생성물을 LCMS로 확인하였다, LC-MS (m/z) 393.2 [M+Na]⁺.

단계4: 화합물A-7-6의 합성

반응 플라스크에 화합물A-7-5(6.5g, 15.51mmol, 1eq), 삼염화세륨(4.59g, 18.61mmol, 1.17mL, 1.2eq) 및 메탄올(80mL)을 가하였다. 수소화붕소나트륨(469.29mg, 12.41mmol, 0.8eq)을 수산화 나트륨(1M, 4.65mL, 0.3eq) 수용액에 용해시킨 다음 반응에 가하였다. 반응을 25℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. 반응 완료 후, 포화 염화암모늄 수용액(30mL)을 가하여 퀀칭시키고, 감압농축하여 용매를 제거한 다음, 에틸 아세테이트(150mL) 및 무수 황산마그네슘(20g)을 가하였다. 혼합물을 규조토로 여과하고, 에틸 아세테이트(30mL×3)로 케이크를 세척하였다. 여액을 합병하고 감압농축하여 화합물A-7-6을 얻었으며, 생성물을 LCMS로 확인하였다, LC-MS (m/z) 390.2 [M+H₂O]⁺.

단계5: 화합물A-7-7의 합성

화합물A-7-6(8g, 21.48mmol, 1eq)을 아세트산(80mL) 및 H₂O(80mL)의 혼합용매에 혼합시키고, 100℃로 승온시키고 16시간 동안 교반하였다. 반응 완료 후, 반응을 직접 감압농축 한 후 톨루엔(50mL×2)으로 공비하고 감압농축하여, 화합물A-7-7을 얻었으며, 생성물을 LCMS로 확인하였다, LC-MS (m/z) 350.1 [M+H₂O]⁺.

단계6: 화합물A-7-8의 합성

반응 플라스크에 차례로 화합물A-7-7(8g, 24.07mmol, 1eq), 트리에틸아민 (19.49g, 192.60mmol, 26.81mL, 8eq), 4-디메틸아미노피리딘(294.12mg, 2.41mmol, 0.1eq) 및 아세토니트릴(100mL)을 가한 다음, 무수 아세트산(14.75g, 144.45mmol, 13.53mL, 6eq)을 가하여, 25℃에서 16 시간 동안 교반하였다. 반응 완료 후, 감압농축하고, 잔여물에 에틸 아세테이트(100mL）를 가하여 희석하고, 포화KHSO₄용액(80mL×5)으로 세척한 다음, 무수황산나트륨으로 건조시킨 다음 감압농축하였다. 잔여물을 컬럼 크로마토그래피（석유 에테르: 에틸 아세테이트=8:1 내지 2:1）로 분리하여 황색 오일상을 얻었다. 황색 오일상에 에틸 아세테이트(100mL)를 가하여 용해시킨 다음, 차례로 1N염산 수용액(80mL×4) 및 포화 식염수(80mL)로 세척하였다. 유기상을 무수황산나트륨으로 건조시킨 다음 농축하고, 잔여물을 톨루엔(50mL)으로 공비하고 2회 감압농축하여 화합물A-7-8을 얻었으며, 생성물을 LCMS로 확인하였다, LC-MS (m/z) 523.1 [M+Na]⁺.

단계7: 화합물A-7-9의 합성

질소 가스의 보호하에, 트리메틸실릴트리플루오로메탄술폰산(12.44g, 55.95mmol, 10.11mL, 4eq)을 화합물A-7-8(7g, 13.99mmol, 1eq) 및 티오우레아(3.73g, 48.96mmol, 3.5eq)의 무수 디옥산(100mL)의 혼합 용액에 가하였다. 반응을 80℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. 반응을 10℃로 온도를 낮추고, 차례로 요오도메탄(5.96g, 41.96mmol, 2.61mL, 3eq) 및 디이소프로필에틸아민(9.04g, 69.94mmol, 12.18mL, 5eq)에 가한 다음, 25℃로 승온시켜 10시간 동안 교반하였다. 반응에 물(80mL)을 가하여 퀀칭시키고, 에틸 아세테이트(100mL×3)로 추출하였다. 유기상을 합병한 다음 포화 식염수(150mL)로 세척하고, 감압농축하여 조질의 생성물을 얻었다. 조질의 생성물을 컬럼 크로마토그래피（석유 에테르: 에틸 아세테이트=10:1 내지 3:1）로 분리하여 화합물A-7-9을 얻었으며, 생성물을 ¹H NMR 및 LCMS로 확인하였다, ¹H NMR (400MHz, CDCl₃) δ 1.86 (s, 3H), 2.04 (s, 3H), 2.12 (s, 3H), 2.21 (s, 3H), 4.00-4.09 (m, 2H), 4.50-4.61 (m, 3H), 4.76-4.83 (m, 1H), 5.18-5.46 (m, 5H), 5.89-6.03 (m, 1H), 6.80 (t, J = 9.79 Hz, 1H), 7.49-7.57 (m, 1H), LC-MS (m/z) 534.4 [M+2Na]⁺.

단계8: 화합물A-7-10의 합성

질소 가스의 보호하에, 화합물A-7-9(2.5g, 5.12mmol, 1eq), 바르비투르산(1.31g, 10.24mmol, 2eq) 및 Pd(PPh₃)₄(887.08mg, 767.66μmol, 0.15eq)를 에탄올(60mL)의 혼합용액을 50℃에서 20시간 동안 교반하여 반응시켰다. 반응 용액을 온도를 낮춰 감압농축하였다. 잔여물을 컬럼 크로마토그래피（석유 에테르: 에틸 아세테이트=6:1 내지 2:1）로 정제하여, 화합물A-7-10을 얻었으며, 생성물을 LCMS로 확인하였다, LC-MS (m/z) 471.2 [M+Na]⁺.

단계9: 화합물A-7의 합성

0℃에서, 삼브롬화인(271.64mg, 1.00mmol, 94.32μL, 1.5eq)을 화합물A-7-10(300mg, 668.99μmol, 1eq)의 무수 테트라하이드로푸란(5mL) 용액에 가하였다. 반응을 20℃에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 완료 후, 반응 용액을 0℃의 1N 탄산 칼륨 수용액(20mL)에 부어 넣고 퀀칭시키고, 에틸 아세테이트(20mL×2)로 추출하였다. 유기상을 합병하고, 무수황산나트륨으로 건조한 다음, 감압농축하여 조질의 생성물을 얻었다. 조질의 생성물을 컬럼 크로마토그래피（석유 에테르: 에틸 아세테이트=10:1 내지 3:1）로 정제하여, 화합물A-7을 얻었다. ¹H NMR (400MHz, CDCl₃) δ ppm 1.78 (s, 3H), 1.95 (s, 3H), 2.03 (s, 3H), 2.14 (s, 3H), 4.32-4.44 (m, 2H), 4.49 (d, J = 10.01 Hz, 1H), 4.68 (d, J = 10.01 Hz, 1H), 5.14 (t, J = 9.69 Hz, 2H), 5.26-5.33 (m, 1H), 6.74 (t, J = 9.69 Hz, 1H), 7.40 (t, J = 7.88 Hz, 1H).

참조예7의 단계1 내지 9의 합성 방법을 참조하여, 표 2 중의 단편A-8을 합성하였다.

[표 2]

참조예9: 단편B-1

합성경로:

단계1: 화합물B-1-2의 합성.

트리에틸아민(27.02g, 267.04mmol, 37.17mL, 2eq)을 화합물B-1-1(25g, 133.52mmol, 1eq)의 디클로로메탄(110mL) 용액에 가하고, 0℃로 온도를 낮춰, 메탄설포닐클로라이드(15.30g, 133.52mmol, 10.33mL, 1eq)를 적가하였다. 적가 완료 후, 반응을 0℃에서 15℃로 승온시키고, 3시간 동안 교반하여 반응시켰다. 반응 완료 후 0℃로 온도를 낮춰, 0℃에서 천천히 물(100mL)을 가하여 퀀칭시켰다. 혼합물을 디클로로메탄(100mL×2)으로 추출하고, 유기상을 합병하고 포화 식염수(100mL)로 세척하고, 무수황산나트륨으로 건조한 다음 감압농축하여 화합물B-1-2를 얻었으며, 직접 다음 단계의 반응에 사용하였다.

단계2: 화합물B-1-4의 합성.

화합물B-1-2(6.00g, 22.61mmol, 1.00eq)을 N,N-디메틸포름아미드(10.00mL)에 용해시키고, 차례로 탄산세슘(14.73g, 45.22mmol, 2.00eq） 및 화합물B-1-3(3.91g, 22.61mmol, 1.00eq)을 가하고, 혼합물을 80℃에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 완료 후, 물(50mL)을 가하여 퀀칭시키고, 에틸 아세테이트(30mL×3)로 추출하였다. 유기상을 합병한 다음, 물(30mL×3) 및 포화 식염수(30mL)로 순차적으로 세척하고, 무수황산나트륨으로 건조한 다음 감압농축하여 조질의 생성물을 얻었다. 조질의 생성물을 컬럼 크로마토그래피（석유 에테르: 에틸 아세테이트=1:0 내지 2:1）로 정제하여, 화합물B-1-4를 얻었다. ¹H NMR（400MHz, CD₃OD）δ 7.41-7.34（m, 2H）, 6.78-6.74（m, 2H）, 4.15-4.12（m, 1H）, 3.64-3.52（m, 4H）, 2.18-2.07（m, 2H）, 1.157（s, 9H）.

단계3: 화합물B-1-5의 합성.

화합물B-1-4(3.00g, 8.77mmol, 1.00eq)를 염화수소의 에틸 아세테이트 용액(10mL, 4M)에 가하고, 반응을 20℃에서 1시간 동안 반응시켰다. 반응 완료 후, 물(30mL)을 가하여 퀀칭시키고, 혼합물을 에틸 아세테이트(20mL)로 세척한 다음, 수상을 포화 탄산수소나트륨 수용액으로 pH=7로 조정하고, 에틸 아세테이트(30mL)로 추출하였다. 유기상을 포화 염화나트륨 수용액(20mL)으로 세척하고 무수황산나트륨으로 건조하고, 감압농축하여 화합물B-1-5의 조질의 생성물을 얻었다. 상기 조질의 생성물을 정제하지 않고 직접 다음 단계의 반응에 사용하였다. ¹H NMR（400MHz, MeOD-d ₄）δ 7.39-7.35（m, 2H）, 6.76-6.74（m, 2H）, 5.30（m, 1H）, 3.31-3.13（m, 4H）, 2.15-2.05（m, 2H）.

단계4: 화합물B-1-7의 합성.

질소 가스의 보호하에, 화합물B-1-6(24.67g, 75.38mmol, 1.05eq)을 무수디클로로메탄(200mL) 및 무수 N,N-디메틸포름아미드(200mL)의 혼합 용액에 용해시키고, 20℃에서 화합물B-1-5(20g, 71.79mmol, 1eq, HCl)를 가하여 1시간 동안 반응시키고, 반응을 -70℃로 냉각시킨 다음 계속하여 0.5시간 동안 교반하고, -70℃이하에서, 30분 동안 천천히 아세트산수소화붕소나트륨(30.43g, 143.60mmol, 2eq)을 가하고, 첨가 과정에서 반응 온도를 -60℃이하로 제어하였다. 반응을 -70℃에서 17.5시간 동안 교반하였다. 반응 완료 후, 반응을 직접 감압농축하고, 잔여물에 천천히 물(600mL)을 가하여 희석하고 대량의 백색 플록고체를 적출하고, 1시간 동안 교반한 다음 여과하고, 케이크를 물(100mL×3)로 세척하였다. 케이크에 에탄올(500mL)을 가한 다음 12h 동안 교반하고, 여과한 다음 케이크를 수거하고, 에탄올(100mL)로 세척하고, 고체를 감압건조하여 화합물B-1-7을 얻었다. ¹H NMR（CDCl₃-d）δ 7.74（d, J=8.5 Hz, 2 H）, 7.21（br s, 1 H）, 7.02-6.90（m, 2 H）, 6.85-6.82（m, 1 H）, 6.89-6.82（m, 2 H）, 4.88（br dd, J=7.2, 3.1 Hz, 1 H）, 4.47（br d, J=9.5 Hz, 1 H）, 4.27（br d, J=10.0 Hz, 1 H）, 4.23-4.18（m, 1 H）, 3.81-3.68（m, 1 H）, 3.38（br t, J=10.7 Hz, 1 H）, 3.02-2.89（m, 3 H）, 2.64-2.51（m, 2 H）, 2.45（br d, J=11.0 Hz, 1 H）, 2.39-2.26（m, 1 H）, 2.07-1.95（m, 1 H）, 1.51（q, J=11.8 Hz, 1 H）, 1.33（s, 12 H）, 1.26（br s, 9 H）.

단계5: 화합물B-1의 합성.

질소 가스의 보호하에, 비스(피나콜라토)디보론(4.88g, 19.20mmol, 1.25eq), 칼륨 아세테이트(4.52g, 46.08mmol, 3eq) 및 Pd(dppf)Cl₂.DCM(3.76g, 4.61mmol, 0.3eq)을 순차적으로 화합물B-1-7(8.5g, 15.36mmol, 1eq)의 무수 디옥산(170mL)용액에 가하였다. 반응을 100℃로 승온시키고, 7시간 동안 교반하여 반응시켰다. 반응 용액을 감압농축 한 후 디클로로메탄(500mL)으로 희석하였다. 유기상을 물(200mL×3)로 세척하였다. 유기상을 무수황산나트륨으로 건조하고, 고체를 여과하여 제거하고, 감압농축하여 조질의 생성물을 얻었다. 조질의 생성물을 컬럼 크로마토그래피（석유 에테르: 에틸 아세테이트=5:1 내지 0:1）로 정제하여 화합물B-1을 얻었다. ¹H NMR（CDCl₃）δ 7.74 (d, J=8.8 Hz, 2 H), 7.25-7.15 (m, 1 H), 7.00-6.87 (m, 2 H), 6.84 (d, J=8.8 Hz, 2 H), 4.92-4.82 (m, 1 H), 4.48 (br d, J=8 Hz, 1 H), 4.27 (br d, J=9.8 Hz, 1 H), 4.24 - 4.18 (m, 1 H), 3.78 - 3.66 (m, 1 H), 3.38 (br t, J=10.8 Hz, 1 H), 3.07 - 2.84 (m, 3 H), 2.65 - 2.50 (m, 2 H), 2.49 - 2.39 (m, 1 H), 2.37-2.27 (br d, J=7.5 Hz, 1 H), 2.04 - 1.98 (m, 1 H), 1.69 (s, 3 H), 1.52 (q, J=12 Hz, 1 H), 1.33 (s, 12 H), 1.26 (s, 9 H).

실시예1: WX001

합성경로:

단계1: 화합물WX001-1의 합성

질소 가스의 보호하에, B-1(126.59mg, 210.81μmol)과 A-1(0.104g, 210.81μmol) 및 탄산나트륨(44.69mg, 421.62μmol)과 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐(48.72mg, 42.16μmol)을 톨루엔(2.4mL)과 에탄올(0.6mL) 및 물(0.6mL)의 혼합용매에 현탁시켰다. 반응을 50℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 완료 후, 반응 용액을 감압농축 한 후, 잔여물을 디클로로메탄(30mL)으로 희석한 다음 물(20mL×2)로 세척하였다. 유기상을 무수황산나트륨으로 건조시킨 다음 감압농축하여 조질의 생성물을 얻었다. 조질의 생성물에 에탄올(9.50mL)을 가하여 3시간 동안 교반한 다음 여과하였다. 고체를 에탄올(2mL×3)로 세척한 다음 감압건조하여 화합물WX001-1을 얻었다. MSm/z: 887.5 [M+1]⁺

단계2: 화합물WX001-2의 합성

화합물WX001-1(0.128g, 144.31μmol)을 에틸 아세테이트(2.5mL)에 용해시킨 다음, 염화수소 에틸 아세테이트 용액(4M, 2.5mL)을 가하였다. 반응을 20℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 완료 후, 감압농축하고, 화합물WX001-2의 조질의 생성물을 얻었다. 조질의 생성물을 정제하지 않고 직접 다음 단계의 반응에 사용하였다.

단계3: 화합물WX001의 합성

탄산 칼륨(108.28mg, 783.42μmol)을 화합물WX001-2(0.129g, 156.68μmol) 조질의 생성물의 메탄올(5mL)용액에 가하였다. 반응을 25℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 완료 후 여과하고, 여액을 감압농축 한 후 디클로로메탄(20mL)으로 희석하였다. 유기상을 물(15mL×3)로 세척하였다. 수상을 합병한 다음 디클로로메탄(10mL×2)으로 추출하였다. 모든 유기상을 합병하고, 무수황산나트륨으로 건조시킨 다음, 감압농축하여 조질의 생성물을 얻었다. 조질의 생성물을 고성능 액체 크로마토그래피（아세토니트릴/물/탄산암모늄/암모니아수계）로 분리하고 정제하여, 표적 화합물WX001를 얻었다. 1H NMR（400MHz, CDCl₃）δ 7.25-7.17（m, 1 H）, 7.17-7.06（m, 4 H）, 7.06-6.92（m, 3 H）, 6.77（br d, J=7.6 Hz, 2 H）, 4.79（br s, 1 H）, 4.34（br d, J=8.8 Hz, 1 H）, 4.24-4.02（m, 3 H）, 4.01-3.77（m, 2 H）, 3.66-3.52（m, 1 H）, 3.52-3.29（m, 3 H）, 3.14-3.01（m, 1 H）, 2.91-2.82（m, 1 H）, 2.79-2.70（m, 2 H）, 2.62-2.55（m, 2 H）, 2.44-2.30（m, 2 H）, 2.27-2.21（m, 1 H）, 2.16（br s, 3 H）, 2.07-1.89（m, 1 H）, 1.49-1.37（m, 1 H）.

실시예2: WX002

합성경로

단계1: WX002-1의 합성

질소 가스의 보호하에, 화합물A-2와 화합물B-1(309.52mg, 515.44μmol, 1eq) 및 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐(59.56mg, 51.54μmol, 0.1eq)과 탄산 칼륨(142.47mg, 1.03mmol, 2eq)을 디옥산(4mL) 및 물(1mL)의 혼합용액에 현탁시키고, 반응을 50℃에서 5시간 동안 교반하였다. 조질의 생성물을 컬럼 크로마토그래피（디클로로메탄: 메탄올= 1:0 내지 4:1）로 정제하여 WX002-1을 얻었으며, 생성물LC-MS (m/z) 917.8 [M+H]⁺이다.

단계2: WX002-2의 합성

WX002-1(190mg, 207.10μmol, 1eq)을 디클로로메탄(2.5mL)에 용해시키고, 트리플루오로아세트산(770.00mg, 6.75mmol, 0.5mL, 32.61eq)을 적가하고, 반응을 25℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 완료 후, 반응 용액을 감압농축하고, 잔여물에 포화 탄산수소나트륨(10mL) 및 디클로로메탄(10mL)을 가하여 교반한 다음 분층시키고, 유기상을 수거하고 감압농축하여 WX002-2를 얻었으며, 생성물LC-MS (m/z) 817.2 [M+H]⁺이다.

단계3: WX002의 합성

25℃에서, 탄산 칼륨(135.28mg, 978.79μmol, 5eq)을 WX002-2(160mg, 195.76μmol, 1eq)의 메탄올(2mL) 용액에 가하고, 2시간 동안 교반하였다. 반응 완료 후, 반응 용액을 여과하고, 여액을 감압농축하여 조질의 생성물을 얻었다. 조질의 생성물을 분취용 크로마토그래피로 정제하여 WX002를 얻었으며, 생성물을 LCMS로 확인하였다, LC-MS (m/z) 691.1 [M+H]⁺, ¹H NMR (400MHz, CD₃OD) δ ppm 1.64 (q, J = 11.54 Hz, 1H), 1.95-2.04 (m, 1H), 2.14 (s, 3H), 2.28-2.36 (m, 1H), 2.38 (s, 3H), 2.50 (br d, J = 14.31 Hz, 1H), 2.62-2.75 (m, 2H), 2.91-3.09 (m, 3H), 3.21-3.30 (m, 1H), 3.35-3.53 (m, 4H), 3.94-4.07 (m, 2H), 4.21-4.31 (m, 1H), 4.42 (d, J = 9.54 Hz, 1H), 4.47 (d, J = 9.03 Hz, 2H), 4.59 (br s, 1H), 6.82 (d, J = 8.78 Hz, 2H), 7.07-7.38 (m, 6H), 8.47 (s, 1H).

실시예2의 단계1 내지 3의 합성 방법을 참조하여, 단편 A-2를 대신하여 단편 A-3, A-4, A-6를 사용하여 하기 표 3 중의 실시예3 내지 5를 합성하였다.

[표 3]

실시예6: WX006

합성경로

단계1: WX006-1의 합성

질소 가스의 보호하에, 화합물A-7(170mg, 332.47μmol, 1eq), 화합물B-1 (199.65mg, 332.47μmol, 1eq), 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐(38.42mg, 33.25μmol, 0.1eq) 및 탄산나트륨(105.71mg, 997.40μmol, 3eq)을 디옥산(4mL) 및 물(1mL)의 혼합물에 50℃에서 7시간 동안 교반하였다. 반응 완료 후 감압농축하여 WX006-1조질의 생성물을 얻었으며, 생성물을 LCMS로 확인하였다, LC-MS (m/z) 906.5 [M+H]⁺.

단계2: WX006-2의 합성

나트륨메톡사이드(23.88mg, 442.01μmol, 2eq)를 WX006-1(200mg, 221.00μmol, 1eq) 조질의 생성물 및 메탄올(5mL)의 혼합물에 가하였다. 반응을 25℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 완료 후 감압농축하고, 잔여물을 실리카겔 분취 플레이트로 분리하고 2회 정제하여（전개제 비율은 순차적으로 디클로로메탄: 메탄올=15:1, 디클로로메탄: 메탄올=10:1）, WX006-2를 얻었으며, 생성물을 LCMS로 확인하였다, LC-MS (m/z) 779.3 [M+H]⁺.

단계3: WX006의 합성

트리플루오로아세트산(770.00mg, 6.75mmol, 0.5mL, 58.44eq)을 WX006-2(90mg, 115.56μmol, 1eq)의 디클로로메탄(3mL) 용액에 가하였다. 반응을 20℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. 반응 완료 후 감압농축하였다. 잔여물에 예를 들어 디클로로메탄(20mL)을 가하여 용해시킨 다음 1N 탄산 칼륨 수용액(15mL)으로 세척하였다. 유기상을 감압농축 한 후 조질의 생성물을 얻었다. 조질의 생성물을 실리카겔 분취 플레이트로 분리하고（디클로로메탄: 메탄올=8:1, Rf=0.2）, 초임계 키랄 분취 분리（컬럼 타입: DAICEL CHIRALPAK AS(250mmХ30mm, 10μm), 이동상 A 초임계 이산화탄소, B상:0.1%암모니아수-에탄올 용액; 비율B%: 35%-35%）로 분리하고 정제하여 WX006를 얻었으며, 생성물을 LCMS로 확인하였다, LC-MS (m/z) 679.4 [M+H]⁺, ¹H NMR (400MHz, CD₃OD) δ ppm 1.45-1.56 (m, 1H), 1.93-2.01 (m, 1H), 2.14 (s, 3H), 2.28-2.38 (m, 1H), 2.39-2.47 (m, 1H), 2.57-2.66 (m, 2H), 2.89-2.97 (m, 2H), 2.97-3.05 (m, 2H), 3.34-3.42 (m, 3H), 3.45-3.52 (m, 2H), 3.93 (s, 2H), 4.18-4.24 (m, 1H), 4.30 (d, J = 9.54 Hz, 1H), 4.41 (d, J = 9.54 Hz, 1H), 4.46-4.53 (m, 1H), 6.83 (d, J = 8.53 Hz, 2H), 6.92 (t, J = 10.04 Hz, 1H), 7.06-7.18 (m, 4H), 7.18-7.24 (m, 1H), 7.33 (t, J = 8.03 Hz, 1H)

실시예6의 단계1 내지 3의 합성 방법을 참조하여,단편 A-7를 대신하여 단편 A-5를 사용하여 하기 표 4 중의 실시예7을 합성하였다.

[표 4]

실시예8: WX008

합성경로

단계1: WX008-1의 합성

질소 가스의 보호하에, A-8(227mg, 447.41μmol, 1eq), B-1(322.40mg, 536.89μmol, 1.2eq), 탄산 칼륨(123.67mg, 894.82μmol, 2eq) 및 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(40.97mg, 44.74μmol, 0.1eq)을 물(1.5mL) 및 디옥산(5mL)의 혼합 용액에서, 50℃에서 7시간 동안 교반하였다. 반응 완료 후, 반응 용액을 감압농축하여 WX008-1조질의 생성물을 얻었으며, 생성물을 LCMS로 확인하였다, LC-MS (m/z) 901.3 [M+H]⁺.

단계2: WX008-2의 합성

나트륨메톡사이드(53.36mg, 987.80μmol, 2eq)을 WX008-1(445mg, 493.90μmol, 1eq) 및 메탄올 (3mL)의 혼합물에 가하고, 반응을 25℃에서 2 시간 동안 교반하였다. 반응 완료 후, 반응 용액을 감압농축하여 조질의 생성물 얻었다. 조질의 생성물을 실리카겔 분취 플레이트 (디클로로메탄:메탄올=10:1, Rf=0.12)로 분리하고 정제하여 WX008-2를 얻었으며, 생성물을 LCMS로 확인하였다, LC-MS (m/z) 775.3 [M+H]⁺.

단계3: WX008의 합성

트리플루오로아세트산(1.26g, 11.02mmol, 815.72μL, 40.08eq)을 WX008-2(213mg, 274.88μmol, 1eq)의 디클로로메탄(3mL) 용액에 가하고, 반응을 25℃에서 1 시간 동안 교반하였다. 반응 완료 후, 반응 용액을 감압농축하여 조질의 생성물을 얻었다. 조질의 생성물을 분취용 고성능 액체 크로마토그래피(컬럼 크로마토그래피: Welch Xtimate C18 150×25mm×5μm; 이동상: [H₂O(0.2%FA)-ACN]; B(ACN)%: 10%-40%,6min)로 분리하고 정제하여 WX008포메이트를 얻었으며, 생성물을 LCMS로 확인하였다, LC-MS (m/z) 675.3 [M+H]⁺, ¹H NMR (400MHz, CD₃OD) δ ppm 1.29 - 1.34 (m, 1 H), 1.59 (q, J=11.67 Hz, 1 H), 1.97 (br dd, J=9.51, 6.63 Hz, 1 H), 2.12 (s, 3 H), 2.25 - 2.35 (m, 1 H), 2.36 (s, 3 H), 2.43 - 2.50 (m, 1 H), 2.59 - 2.71 (m, 2 H), 2.90 - 2.96 (m, 1 H), 2.97 - 3.05 (m, 2 H), 3.10 - 3.22 (m, 1 H), 3.34 - 3.43 (m, 2 H), 3.45 - 3.54 (m, 2 H), 3.89 (s, 2 H), 4.19 - 4.28 (m, 1 H), 4.37 - 4.46 (m, 3 H), 6.79 (d, J=8.75 Hz, 2 H), 6.87 (d, J=11.01 Hz, 1 H), 7.09 - 7.21 (m, 4 H), 7.23-7.26 (m, 2 H), 8.49 (s, 1 H).

각 실시예의 양성자 스펙트럼과 질량 스펙트럼의 데이터는 표 5에 나타낸 바와 같다.

[표 5] 각 실시예의 양성자 스펙트럼과 질량 스펙트럼 데이터

실험예1, 체외 세포 활성 시험:

실험 단계 및 방법:

생물학적 활성 실험 1: SGLT1글루코스 수송 시험

1. 실험목적:

고발현 Human-SGLT1（인간-SGLT1）세포 내로 들어가는 [¹⁴C] 표지된 글루코스의 양을 측정함으로써, SGLT1수송체의 글루코스 수송 활성에 대한 화합물의 영향을 시험하기 위함이다.

2. 실험방법

2.1. 세포준비

실험에 사용된 Human-SGLT1을 안정적으로 발현하는 세포는 WuXi AppTec Shanghai에 의해 구축되었다. SGLT1 세포를 Cytostar-T(PerkinElmer) 96웰 세포 배양 플레이트에 플레이팅하고 5% CO₂, 37℃에서 밤새 배양하였다.

2.2. SGLT1 글루코스 수송 시험

실험용 완충액: 10mM의 4-히드록시에틸피페라진에탄술폰산(HEPES), 1.2mM의 염화마그네슘(MgCl₂), 4.7mM의 염화칼륨(KCl), 2.2mM의 염화칼슘(CaCl₂) 및 120mM의 염화나트륨(NaCl).

화합물을 1mM의 개시 농도에서 100% 디메틸 설폭사이드(DMSO)로 희석하고, 8개 포인트의 농도로 5배 연속 구배 희석하였다.

실험용 완충액으로 3μM [¹⁴C] 표지된 메틸 α-D-글루코피라노사이드（Methyl α-D-glucopyranosid）를 제조하였다.

49μL의 실험용 완충액, 1μL의 구배 희석된 화합물 및 50μL의 3μM [¹⁴C] 동위원소 표지된 글루코스 용액으로, 37℃에서 세포에 2시간 동안 작용하였다.

동위원소 검출기로（Micro beta Reader） 판독값을 읽었다.

데이터는 GraphPad Prism 5.0소프트의 계산식: log(inhibitor) vs. response -- Variable slope로 시험 화합물의 IC₅₀ 값을 얻었고, 실험 결과는 표 5에 나타내었다.

생물 활성 시험2: SGLT2의 글루코스 수송 시험

1. 실험목적:

고발현 Human-SGLT2 세포 내로 들어가는 [¹⁴C] 표지 된 글루코스의 양을 측정함으로써 SGLT2 수송체의 글루코스 수송 활성에 대한 화합물의 영향을 시험하기 위함이다.

2. 실험방법

2.1. 세포준비

실험에 사용된 Human-SGLT2를 안정적으로 발현하는 세포는 WuXi AppTec Shanghai에 의해 구축되었다. SGLT2 세포를 96웰 세포 배양 플레이트(Greiner)에 플레이팅하고 5% CO₂, 37℃에서 밤새 배양하였다.

2.2. SGLT2 글루코스 수송 시험

정지 완충액: 10mM의 4-히드록시에틸피페라진에탄술폰산(HEPES), 1.2mM의 염화마그네슘(MgCl₂), 4.7mM의 염화칼륨(KCl), 2.2mM의 염화칼슘(CaCl₂), 120mM의 염화나트륨(NaCl) 및 1μM의 LX4211.

화합물을 10uM의 개시 농도에서 100% 디메틸 설폭사이드(DMSO)로 희석하고, 8개 포인트의 농도로 5배 연속 구배 희석하였다.

실험용 완충액으로 6μM [¹⁴C] 표지된 메틸 α-D-글루코피라노사이드（Methyl α-D-glucopyranosid）를 제조하였다.

49μL의 실험용 완충액, 1μL의 구배 희석된 화합물 및 50μL의 6μM [¹⁴C] 동위원소 표지된 글루코스 용액으로, 37℃에서 세포에 2시간 동안 작용하였다.

웰 내의 액체를 흡인하고, 정지 완충액으로 세포를 3회 세척하였다.

10% 수산화나트륨 용액 50μL로 세포를 용해시키고, 세포 용해물을 신틸레이션 튜브에 흡인하고, 2mL의 신틸레이션 용액을 가하였다.

동위원소 검출기로（Micro beta Reader） 판독값을 읽었다.

생물 활성 시험3: rhDPP4 억제제 스크리닝 실험

1. 실험목적:

화합물의 반수 억제 농도（IC₅₀） 값을 측정함으로써, 재조합 인간 디펩티딜 펩티다제 4(rhDPP4)에 대한 화합물의 억제 활성을 평가하였다. 본 실험에서 rhDPP4를 기질로 사용하여 발광 전구체인 글리신-프롤린-아미노루시페린(Gly-Pro-아미노루시페린)인 루시페린의 생성을 촉매하고, 루시페라제와 반응하여 광 신호를 생성하고, 광 신호는 효소 활성에 정비례한다.

2. 실험방법

1)구배 희석한 화합물（4배 희석, 10개의 검출 농도）을 비접촉 나노 음향 피펫팅 시스템（ECHO）으로 250nl을 384웰 플레이트（PerkingElmer-6007299）로 옮기고, 최종 반응계의 디메틸설폭사이드（DMSO） 농도는 0.5%였다. 공백 대조군 웰（DMSO, 기질 및 10mM트리스-하이드록시메틸아미노메탄-염산염 완충액（Tris-HCl） 및 양성 대조군 웰（DMSO, 기질 및 rhDPP4）을 제공하였다.

2)미리 냉동된 루시페라아제가 분주되어 포함된 완충액을 꺼내 상온으로 회복시킨 후, 기질을 가하여 기질 농도가 20μM인 작업액을 제조하였다. rhDPP4는 10mM Tris-HCl(pH 8.0) 수용액을 사용하여 0.2ng/mL의 작업액으로 제조하였다.

3)화합물을 가한 384웰 플레이트에, 20μM기질을 포함하는 작업액 25μl 및 0.2ng/ml rhDPP4를 포함하는 작업액 25μl를 각각 가하고, 1000rpm으로 30s 원심분리하고, 알루미늄 밀봉 필름으로 밀봉하고 실온에서 1시간 인큐베이션하였다.

4)다기능 효소 라벨 검출기 EnVision로 광 신호의 강도를 검출하였다. 원시 데이터를 사용하여 화합물의 rhDPP4를 억제하는 활성을 계산하였다.

억제 활성% = 100 -（화합물 웰 신호 값-공백 대조 웰 신호 값）/（양성 대조 웰 신호 값 - 공백 대조 웰 신호 값）× 100

억제율을 GraphPad Prism 소프트웨어에 도입하여 데이터 처리하여 상응하는 투여량-효과 곡선을 얻어 측정 화합물의 IC₅₀ 값을 얻었다. 실험 결과는 표 6에 나타내었다.

[표 6] 체외 세포 활성 시험 결과

주: "--"는 해당 측정을 하지 않았음을 나타낸다.

결론: 본 발명의 화합물은 인간-SGLT2에 대해 높은 선택성을 나타내고; 인간-SGLT2 및 rhDPP4에 대해 현저한 체외 억제 활성을 갖고 있다.

실험예2, 체내 DMPK연구:

실험목적: 수컷 C57마우스를 시험 동물로 사용하고, 1회 투여 후 화합물의 혈중 농도를 측정하여 약동학적 행동을 평가한다.

실험 작업: 건강한 성체 수컷 C57마우스 6마리를 선택하고, 3마리는 정맥주사 군이고, 3마리는 경구투여 군으로 하였다. 시험 화합물을 적정량의 정맥주사 군 용매（20% 폴리에틸렌글리콜-400（PEG400）/10% 폴리에틸렌글리콜-15하이드록시스테아레이트（solutol）/70% H₂O）와 혼합하고, 볼텍싱하고 초음파 처리하여, 1mg/mL의 투명 용액을 얻었으며, 미세 다공성 막으로 여과하여 준비하였다; 경구투여 군 용매는 20% 폴리에틸렌글리콜-400（PEG400）/10% 폴리에틸렌글리콜-15하이드록시스테아레이트（solutol）/70% H₂O이고, 시험 화합물은 용매와 혼합한 다음, 볼텍싱하고 초음파 처리하여, 1mg/mL의 투명 용액을 얻었다. 마우스에 1mg/kg 정맥내투여 또는 10mg/kg 경구투여 후, 일정시간의 전혈을 수거하고, 혈장을 제조하여, LC-MS/MS법으로 약물 농도를 분석하였으며, Phoenix WinNonlin 소프트웨어(미국 Pharsight사)를 사용하여 약동학적 매개변수를 계산하였다.

실험 결과는 표 7에 나타내었다:

[표 7] 화합물 PK시험 결과

주: C_max는 최대농도; F%는 경구 생체이용률; 경구 단위 노출량은 Oral DNAUC = AUC_PO/Dose, AUC_PO는 경구 노출량, Dose는 약물 투여량; Vd_ss는 분포 용적; Cl는 제거률; T_1/2는 반감기를 나타내었다.

결론: 본 발명의 화합물은 마우스에서 일정한 경구 노출량 및 생체이용률을 갖는 것으로 나타났다.

실험예3, 랫트의 경구 글루코스 내성（OGTT）에 대한 체내 약효 연구:

실험 요약:

1. 동물:

2. 실험 군 :

실험 경과:

1. 동물의 적응 및 준비:

실험동물은 시설에 도착한 후 동물실에서 1주일간 환경에 적응할 필요가 있다.

2. 금식 및 투여

동물을 대사 케이지에서 16시간 금식시키고 상기 표에 따라 약물 또는 용매(5mL/kg)를 투여한 다음 50%의 글루코스 용액(2g/kg, 4mL/kg)을 투여하였다.

3. 요당 및 혈당 측정

동물에게 글루코스를 투여한 후 1시간 후, 섭식을 재개하고, 혈당의 측정을 위해 0min, 20min, 40min, 60min, 90min, 120min의 시점에서 샘플을 수집하고, 0 내지 24h의 시점의 소변을 각각 요당(mg/200g)과 요 체적 측정에 사용하였다.

4. 데이터 분석:

모든 수치는 평균값으로 표시하였다. 통계학 분석은 Graphpad Prism 6 일원 배치 분산 분석 Tukey's 다중 비교 테스트에 의해 평가되었다. 0.05 미만의 p값은 통계적으로 유의한 것으로 간주되었다.

실험 결과는 표 8에 나타내었다:

[표 8] 랫트의 내당 성능 시험 결과

*는p<0.5, **는 p<0.01, ***는 p<0.001, ****는 p<0.0001vs.용매 대조군을 나타내었다.

주: 200g BW는 200g평균 체중이다.

결론: 용매 대조군에 비해, 본 발명의 화합물은 동물의 2시간 이내의 혈당 AUC 수준을 유의하게 감소시키고, 동물의 24시간의 요당 배설 수준은 양성 화합물보다 낮다.

실험예4, dbdb마우스 경구 글루코스 내성（OGTT）에 대한 체내 약효 연구:

실험 요약:

동물:

실험 군:

실험 경과:

1. 동물의 적응 및 준비:

실험동물은 시설에 도착한 후 동물실에서 1주일간 환경에 적응시킬 필요가 있고, 혈당 및 체중에 근거하여 군을 나누었다.

2. 금식 및 투여

동물을 6시간 금식시킨 후 혈당을 측정하고, 상기 표에 따라 약물 또는 용매를 투여한 다음 30분 후에 50%의 글루코스 용액(2g/kg, 0.4g/mL)을 투여하였다.

3. 측정

혈당의 측정을 위해 글루코스를 투여 한 -30min, 0min, 15min, 30min, 60min, 90min, 120min의 시점에서 샘플을 수집하였다. 글루코스를 투여한 1h 후, 채혈하여 인슐린 분비를 검출하고, 글루코스를 2h 투여한 후, 동물을 안락사시키고, 채혈하고, DPP4 활성과 active GLP-1을 검출하였다.

4. 데이터 분석:

통계 분석은 Graphpad Prism 8 unpaired T-test를 사용하여 비교되었으며, 0.05 미만의 p값은 통계적으로 유의하다고 여겨진다.

데이터는 평균 ± 표준 오차,n = 4 내지 5로 표시된다. 실험 결과를 도 1, 2, 3, 4 및 도 5에 나타내었다. 도면에서 *는 p<0.5, **는 p<0.01, ***는 p<0.001, ***는 p<0.0001vs.용매 대조군을 나타낸다.

결론: 용매 대조군에 비해, 본 발명의 화합물은 동물의 2시간 이내의 혈당 AUC 수준을 유의하게 감소시키고, 인슐린 및 활성 GLP-1 수준을 유의하게 증가시키고, DPP4 활성을 감소시킨다.

실험예5, 고당 및 고지방 식이BKS-db 마우스의 경구투여 글루코스 내성（OGTT）에 대한 체내 약효 연구:

1. 실험 요약:

동물:

2. 실험 군:

3. 실험 경과:

7주령 BKS 및 BKS-db 마우스의 적응성 사육 후, 6h 금식시키고 채혈하고, 공복 혈당 및 HbA1c를 검출하였다. 마우스의 6h 금식 HbA1c에 의해 군을 나누어(주요 참조 지표), 및 공복혈당, 체중에 의해 군을 나누었다(다음으로 중요한 참조 지표).

투여 2주차에 6hr 동안 금식시키고, 공복 혈당을 측정하고, 섭식을 재개한 1hr후에 식후 혈당을 측정하였다. 투여 4주차에 6hr 동안 금식시키고, 공복 혈당을 측정하고, 섭식을 재개한 1hr 후에 식후 혈당 및 HbA1c를 측정하였다. 각 군의 마우스의 요액을 수집하였다. 동물을 안락사시킨 다음 간을 채취하고 오일 레드 염색과 지방 변성 점수를 평가하였다.

4. 데이터 분석:

통계 분석은 Graphpad Prism 8, One Way ANOVA 또는 unpaired T test를 사용하여 비교되었으며, 0.05 미만의 p 값은 통계적으로 유의하다고 여겨진다.

데이터는 평균 값±표준 오차, n = 3 내지 8로 표시된다. 실험 결과를 도 6, 7 및 8에 나타내었다. 도면에서 "##"은 p<0.01, "###"은 p<0.001 vs 정상대조 군을 나타내고; "*"는 p<0.5, "**"는 p<0.01, "***"는 p<0.001, "****"는 p<0.0001 vs 용매대조 군을 나타낸다.

결론: 도 6은, 본 발명의 화합물은 유의한 혈당 강하 효과를 갖는것을 나타내었고; 도 7 및 8은, 본 발명의 화합물은 신장 보호 작용이 있음을 나타내었다.

Claims

식(I)으로 표시되는 화합물, 이의 이성질체 또는 약학적으로 허용 가능한 염:

식중,
R₁은 1, 2 또는 3개의 R_a로 임의로 치환된 C_1-3알킬이며;
R₂ 및 R₃은 각각 독립적으로 H, F, Cl, Br, I, OH, NH₂, C_1-3알킬 및 C_1-3알콕시에서 선택되고, 상기 C_1-3알킬 및 C_1-3알콕시는 1, 2 또는 3개의 R_b에 의해 임의로 치환되고;
R₅는 H, F, Cl, Br, I, OH, NH₂ 및 C_1-3알킬에서 선택되고, 상기 C_1-3알킬은 1, 2 또는 3개의 R_c에 의해 임의로 치환되고;
R₄는 H, F 또는 Cl이고, R₄가 Cl일 경우, R₂, R₃ 및 R₅는 동시에 H가 아니며;
R_a, R_b 및 R_c는 각각 독립적으로 F, Cl, Br, I, OH 및 NH₂로부터 선택된다.
제1항에 있어서,
R₁은 1, 2 또는 3개의 R_a로 임의로 치환된 -CH₃인 화합물, 이의 이성질체 또는 약학적으로 허용 가능한 염.
제2항에 있어서,
R₁은 CH₃에서 선택되는 화합물, 이의 이성질체 또는 약학적으로 허용 가능한 염.
제1항에 있어서,
R₂ 및 R₃은 각각 독립적으로 H, F, Cl, Br, I, OH, NH₂, CH₃, Et 및 -OCH₃에서 선택되고, 상기 CH₃, Et 및 -OCH₃은 1, 2 또는 3개의 R_b에 의해 임의로 치환되는 화합물, 이의 이성질체 또는 약학적으로 허용 가능한 염.
제4항에 있어서,
R₂ 및 R₃은 각각 독립적으로 H, F, Cl, Br, I, OH, NH₂, CH₃, Et 및 -OCH₃에서 선택되는 화합물, 이의 이성질체 또는 약학적으로 허용 가능한 염.
제1항에 있어서,
R₅는 H, F, Cl, Br, I, OH, NH₂, CH₃ 및 Et에서 선택되고, 상기 CH₃ 및 Et는 1, 2 또는 3개의 R_c에 의해 임의로 치환되는 화합물, 이의 이성질체 또는 약학적으로 허용 가능한 염.
제6항에 있어서,
R₅는 H, F, Cl, Br, I, OH, NH₂, CH₃ 및 Et에서 선택되는 화합물, 이의 이성질체 또는 약학적으로 허용 가능한 염.
하기 화합물, 이의 이성질체 또는 약학적으로 허용 가능한 염:

.
SGLT2 및 DPP4의 이중 억제제인 약물의 제조를 위한 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 따른 상기 화합물 또는 약학적으로 허용 가능한 염의 용도.