KR20220008307A - Gly101val 돌연변이를 수반하는 bcl-2 매개 암의 치료에 사용하기 위한 bcl-2 억제제 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 돌연변이 (i) Gly101Val; (ii) Asp103Tyr; (iii) Asp103Val; (iv) Asp103Glu; (v) Arg129Leu 및 (vi) Ala113Gly 중 적어도 1, 2, 3, 4, 5개 또는 모두를 수반하는 Bcl-2 매개 암의 치료에 사용하기 위한 Bcl-2 억제제에 관한 것이며, 여기서 Bcl-2 억제제는 N-(4-하이드록시페닐)-3-{6-[((3S)-3-(4-모르폴리닐메틸)-3,4-디하이드로-2(1H)-이소퀴놀리닐)카르보닐]-1,3-벤조디옥솔-5-일}-N-페닐-5,6,7,8-테트라하이드로-1-인돌리진 카르복사미드(화합물 A) 또는 5-(5-클로로-2-{[(3S)-3-(모르폴린-4-일메틸)-3,4-디하이드로이소퀴놀린-2(1H)-일]카르보닐}페닐)-N-(5-시아노-1,2-디메틸-1H-피롤-3-일)-N-(4-하이드록시페닐)-1,2-디메틸-1H-피롤-3-카르복사미드(화합물 B), 또는 이의 약학적으로 허용되는 염이다.

Description

GLY101VAL 돌연변이를 수반하는 BCL-2 매개 암의 치료에 사용하기 위한 BCL-2 억제제
발명의 분야
본 발명은 하기 돌연변이 (i) Gly101Val; (ii) Asp103Tyr; (iii) Asp103Val; (iv) Asp103Glu; (v) Arg129Leu 및 (vi) Ala113Gly 중 적어도 1, 2, 3, 4, 5개 또는 모두를 수반하는 Bcl-2 매개 암의 치료에 사용하기 위한 Bcl-2 억제제에 관한 것이며; 여기서 Bcl-2 억제제는 N-(4-하이드록시페닐)-3-{6-[((3S)-3-(4-모르폴리닐메틸)-3,4-디하이드로-2(1H)-이소퀴놀리닐)카르보닐]-1,3-벤조디옥솔-5-일}-N-페닐-5,6,7,8-테트라하이드로-1-인돌리진 카르복사미드(화합물 A, S55746 또는 BCL201로도 공지됨) 또는 5-(5-클로로-2-{[(3S)-3-(모르폴린-4-일메틸)-3,4-디하이드로이소퀴놀린-2(1H)-일]카르보닐}페닐)-N-(5-시아노-1,2-디메틸-1H-피롤-3-일)-N-(4-하이드록시페닐)-1,2-디메틸-1H-피롤-3-카르복사미드(화합물 B), 또는 이의 약학적으로 허용되는 염이다. 본 발명은 또한 하기 돌연변이 (i) Gly101Val; (ii) Asp103Tyr; (iii) Asp103Val; (iv) Asp103Glu; (v) Arg129Leu 및 (vi) Ala113Gly 중 적어도 1, 2, 3, 4, 5개 또는 모두를 수반하는 Bcl-2 매개 암의 치료에 사용하기 위한 화합물 A 또는 화합물 B를 포함하는 약학적 조성물에 관한 것이다. 추가의 구체예에서, 하기 돌연변이 (i) Gly101Val; (ii) Asp103Tyr; (iii) Asp103Val; (iv) Asp103Glu; (v) Arg129Leu 및 (vi) Ala113Gly 중 적어도 1, 2, 3, 4, 5개 또는 모두를 수반하는 Bcl-2 매개 암은 만성 림프구성 백혈병(CLL)이다.
발명의 배경
아폽토시스 또는 프로그램된 세포 사멸은 배아 발달 및 조직 항상성의 유지에 중요한 생리학적 과정이다. 아폽토시스형 세포사는 핵의 응축, DNA 단편화와 같은 형태학적 변화 및 또한, 세포의 주요 구조 구성요소에 손상을 일으키는 카스파제 활성화와 같은 생화학적 현상을 포함하여 분해 및 사멸을 유도한다. 아폽토시스 과정의 조절은 복잡하고, 여러 세포내 신호전달 경로의 활성화 또는 억제를 포함한다(Cory S. et al., Nature Review Cancer, 2002, 2, 647-656).
아폽토시스의 탈조절은 특정 병리와 관련이 있다. 증가된 아폽토시스는 신경퇴행성 질환, 예컨대 파킨슨병, 알츠하이머병 및 허혈과 관련이 있다. 역으로, 아폽토시스 구현의 결함은 자가면역 질환, 염증 질환 및 바이러스 감염에서 암 및 이들의 내화학성 발병에 중요한 역할을 한다. 따라서, 아폽토시스의 부재는 암의 표현형 특징 중 하나이다(Hanahan D. et al., Cell 2000, 100, 57-70). Bcl-2 계열의 항-아폽토시스 단백질은 수많은 병리와 관련이 있다. Bcl-2 계열의 단백질의 관여는 결장암, 유방암, 소세포 폐암, 비소세포 폐암, 방광암, 난소암, 전립선암, 만성 림프성 백혈병, 여포성 림프종, 골수종 및 전립선 암과 같은 다양한 유형의 암에서 설명된다. Bcl-2 계열의 항-아폽토시스 단백질의 과발현은 종양 형성, 화학 요법에 대한 내성 및 암에 걸린 환자의 임상 예후와 관련이 있다. 따라서, Bcl-2 패밀리의 단백질의 항-아폽토시스 활성을 억제하는 화합물에 대한 치료적 필요가 있다.
베네토클락스(Venetoclax)(ABT-199라고도 알려져 있음)는 Bcl-2와 BH3-전용 단백질의 상호작용을 방해하여 아폽토시스를 유도하는 선택적 Bcl-2 억제제이다. 베네토클락스는 이전에 적어도 한 번 치료를 받은 적은 있는 (i) 17p 결실이 있거나 없는 만성 림프구성 백혈병(CLL) 또는 소림프구성 림프종(SLL)이 있는 성인을 치료하기 위해 및 (ii) 아자시티딘, 또는 데시타빈, 또는 저용량의 시타라빈과 조합되어 75세가 넘거나 표준 화학 요법을 사용할 수 없는 기타 의학적 질환을 갖는 새로 진단된 급성 골수성 백혈병(AML)이 있는 성인을 치료하기 위해 승인되었다. 그러나, CLL에서 상당한 수의 재발이 관찰되며, 이는 내성의 획득 메커니즘을 시사한다. 다른 고친화성 표적 요법에서, 표적의 특정 돌연변이가 내성을 일으키는 것으로 입증되었다(Garraway & Janne, Cancer Discovery 2012, 2, 214-226). 다른 베네토클락스 내성 유래 백혈병 및 림프종 세포주에서, 소수성 그루브에 영향을 미치는 Bcl-2 돌연변이가 확인되었다(Fresquet et al., Blood 2014, 123, 4111-4119; Tahir et al., BMC Cancer, 17:399). Bcl-2의 한 돌연변이(위치 101에서 글리신이 발린으로 치환됨: Gly101Val)는 베네토클락스에 내성이 있는 환자의 CLL 샘플에서 확인된 이후 임상적으로 관련이 있는 것으로 최근에 입증되었다. 이 Gly101Val 돌연변이는 Bcl-2의 소수성 그루브에 대한 감소된 베네토클락스 결합 및 베네토클락스에 대한 내성과 관련이 있었다(Blombery et al., Cancer Discovery 2019, 9, 342-353). Gly101Val 돌연변이는 또한 임상 재발을 방해하기 위한 잠재적인 바이오마커를 제공할 수 있다. 이러한 임상 데이터를 바탕으로 Gly101Val 돌연변이를 수반하는 암 환자, 및 특히 불응성 및 재발성 환자를 치료하는 데 사용될 수 있는 새로운 치료제를 식별할 필요가 있다. 더욱 최근에는 Asp103Tyr(위치 103에서 아스파르트산이 티로신으로 치환됨, 또한 D103Y로 불림), Asp103Val(위치 103에서 아스파르트산이 발린으로 치환됨, 또한 D103V로 불림), Asp103Glu(위치 103에서 아스파르트산이 글루탐산으로 치환됨, 또한 D103E로 불림), Ala113Gly(위치 113에서 알라닌이 글리신으로 치환됨, 또한 A113G로 불림), Arg129Leu(위치 129에서 아르기닌이 류신으로 치환됨, 또한 R129L로 불림) 및 Val156Asp(위치 156에서 발린이 아스파르트산으로 치환됨, 또한 V156D로 불림)은 나이브 CLL 환자에는 부재하나 베네토클락스로 처리한 CLL 환자에서 확인되었다(Tausch et al., Hematologica 2019, 9, e434-e437; Blombery et al., Blood 2020, 135 (10), 773-777). 참고로, 게놈 분석은 한 CLL 환자가 다른 Bcl-2 돌연변이(즉, G101V 및 D103Y 포함)를 보유할 수 있음을 입증한다. 모든 돌연변이는 NGS(차세대 시퀀싱) 데이터에서 상이한 판독값으로 존재하는 것으로 관찰되었으며, 이는 서로 다른 백혈병 세포(이형접합성을 가정함)에서 이들의 존재 및 돌연변이의 상호 배타성과 일치한다(Blombery et al., Blood 2020, 135(10), 773-777).
화합물 A 및 화합물 B를 포함하는 2세대 Bcl-2-특이적 억제제가 있으며, 이는 베네토클락스와 비교하여 부분적으로 중복되지만 구별되는 Bcl-2 소수성 그루브 결합 방식을 갖는다.
화합물 A(또한 S55746 또는 BCL201로 알려짐)의 화학 구조는 하기와 같다:
Figure pct00001
화합물 A의 제조 및 여러 암 모델에서 이의 약리학적 효과는 문헌에 설명되어 있다(Casara et al., Oncotarget 2018, Vol.9, No.28, 20075-20088 and corresponding Supplementary Information). 더욱이, 화합물 A 및 구조적으로 가까운 유사체, 암 치료를 위한 Bcl-2 억제제로서의 이들의 용도 및 이의 약학적 제형이 또한 그 내용이 인용으로 포함된 WO 2013/110890에 기재되어 있다. 화합물 A의 제조는 하이드로클로라이드 염 형태로 해당 문헌의 실시예 1에 구체적으로 개시되어 있다.
화합물 A는 베네토클락스 유사체와 달리 일반적으로 S1/2/3으로 지칭되는 영역을 차지하며(Souers et al., Nature Medicine 2013, 19, 202-208), 이는 S2/3/4/5를 포함하는 단백질 표면적의 더 많은 부분을 차지한다. 화합물 A는 S2에 깊숙이 묻혀 있는 잔기 A149의 백본 카르보닐에 단일 수소 결합을 형성한다. Bcl-2에 대한 화합물 A 결합에 있어서 크기-독립적 엔탈피 효율(0.83)은 최적 극성 및 반 데르 발스 상호작용을 시사하며, 이는 고도로 특이적인 결합을 나타낸다(Casara et al., Oncotarget 2018, 9, 20075-20088).
화합물 B의 구조는 다음과 같다:
Figure pct00002
5-(5-클로로-2-{[(3S)-3-(모르폴린-4-일메틸)-3,4-디하이드로이소퀴놀린-2(1H)-일]카르보닐}페닐)-N-(5-시아노-1,2-디메틸-1H-피롤-3-일)-N-(4-하이드록시페닐)-1,2-디메틸-1H-피롤-3-카르복사미드.
화합물 B의 제조, 암 치료를 위한 Bcl-2 억제제로서의 이의 용도 및 이의 약학적 제형은 그 내용이 인용으로서 포함되는 WO 2015/011400에 기재되어 있다. 화합물 B는 하이드로클로라이드 염의 형태로 WO 2015/011400의 실시예 386에 구체적으로 개시되어 있다. 이것은 Bcl-2 특이적 BH3-모방체의 모든 특징을 나타내며, 혈소판을 보존하면서 Bcl-2 의존성 림프 종양 이종이식 모델에서 강력한 항종양 활성을 나타낸다.
한 가지 가정은 한편으로는 베네토클락스 및 다른 한편으로는 화합물 A 또는 화합물 B가 다른 결합 방식을 나타낸다는 것이다. 이러한 구조적 가설은 두 야생형 Bcl-2 단백질, Gly101Val, Asp103Tyr, Asp103Val, Asp103Glu, Arg129Leu 및 Ala113Gly 돌연변이 Bcl-2 단백질에서 세 가지 화합물의 상이한 결합 매개변수를 결정함으로써 확인되었다. 이와 같이, Bcl-2 단백질의 돌연변이는 베네토클락스에 대한 내성을 유발할 수 있지만 화합물 A 또는 화합물 B에는 그렇지 않을 수 있다. 더욱 구체적으로, Gly101Val 돌연변이는 베네토클락스와 대조적으로 두 화합물 A 및 화합물 B 모두의 결합 부위에서 떨어져 위치하였다. 또한, Asp103Tyr 돌연변이는 Bcl-2와 ABT-199 사이의 핵심 수소 결합을 제거하여 Asp103Tyr 돌연변이를 보유하고 있는 Bcl-2에 대한 ABT-199의 친화도를 실질적으로 감소시킨다. 화합물 B는 D103과 어떠한 직접적인 상호작용을 하지 않으며, D103에서 적어도 9 옹스트롬 떨어져 결합하며, 따라서, Asp103Tyr 돌연변이를 보유하는 Bcl-2에 대한 친화력은 단지 약간만 영향을 받는다.
본 발명에 따른 Bcl-2 억제제는 아폽토시스의 결함을 포함하는 병리학에서 예를 들어, 암 및 면역 및 자가면역 질환의 치료에서 및 더욱 구체적으로 소수성 그루브에 영향을 미치는 Bcl-2 돌연변이로 인해 베네토클락스에 내성이 있는 환자에서 이들을 사용하는 것을 가능하게 하는 아폽토시스 촉진 특성을 갖는다.
개요
본 발명은 하기 돌연변이 (i) Gly101Val; (ii) Asp103Tyr; (iii) Asp103Val; (iv) Asp103Glu; (v) Arg129Leu 및 (vi) Ala113Gly 중 적어도 1, 2, 3, 4, 5개 또는 모두를 수반하는 Bcl-2 매개 암의 치료에 사용하기 위한 Bcl-2 억제제를 제공하며; 여기서 Bcl-2 억제제는 화합물 A, 화합물 B 또는 이의 약학적으로 허용되는 염이다. 특히, 본 발명에 따른 Bcl-2 억제제는 Bcl-2 Gly101Val 돌연변이에 대해 강한 활성을 갖는 것으로 밝혀졌다. 야생형 Bcl-2 단백질과 Gly101Val 돌연변이 사이에서 관찰된 활성의 약간의 손실은 본 발명에 따른 Bcl-2 억제제의 투여가 Gly101Val 돌연변이를 수반하는 환자에서 임상적으로 관련된 반응을 유도할 수 있음을 시사한다. 추가 세포 연구는 단지 화합물 B가 Bcl-2 야생형 단백질을 발현하는 세포주와 비교하여 Bcl-2 Gly101Val 돌연변이를 보유하는 세포주에서 약간의 효능 손실(9 내지 7배)을 나타내었다는 것을 추가로 확인시켜주었다. 더욱 일반적으로, 본원에 개시된 생화학적 프로파일을 고려하면, 화합물 B는 ABT-199와 비교하여 상기 논의된 돌연변이 세트에서 더 나은 온-타겟(on-target) 활성을 나타내는 것으로 밝혀졌다. 생화학적 데이터에 추가하여, 세포 연구는 Bcl-2 Asp103Tyr을 과발현하는 KMS-12-PE 세포주를 사용하는 세포 검정에서 ABT-199와 화합물 B 사이의 22배의 효능 이동을 추가로 입증하였다. 본 개시내용은 전체적으로 본 발명에 따른 Bcl-2 억제제, 보다 특히 화합물 B가 하기 돌연변이 (i) Gly101Val; (ii) Asp103Tyr; (iii) Asp103Val; (iv) Asp103Glu; (v) Arg129Leu 및 (vi) Ala113Gly 중 적어도 1, 2, 3, 4, 5개 또는 모두를 보유하는 환자에서 유익한 효과를 가질 수 있음을 시사한다. 특정 양태에서, 베네토클락스 처리에 대해 추가로 이전 돌연변이 중 하나를 획득한 CLL 환자를 표적으로 한다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 하기 돌연변이 (i) Gly101Val; (ii) Asp103Tyr; (iii) Asp103Val; (iv) Asp103Glu; (v) Arg129Leu 및 (vi) Ala113Gly 중 적어도 1, 2, 3, 4, 5개 또는 모두를 수반하는 Bcl-2 매개 암에 걸린 환자를 민감화시키기 위한 방법에 관한 것이며, 상기 환자는 (i) 적어도 하나의 항암제에 불응성이거나, (ii) 항암제 치료 후 재발한 경우이거나, (i) 및 (ii) 둘 모두이며, 상기 방법은 치료학적 유효량의 Bcl-2 억제제를 상기 환자에게 투여하는 것을 포함한다.
전반적으로, 본원에 기재된 발명은 베네토클락스 내성 환자를 포함하여 하기 돌연변이 (i) Gly101Val; (ii) Asp103Tyr; (iii) Asp103Val; (iv) Asp103Glu; (v) Arg129Leu 및 (vi) Ala113Gly 중 적어도 1, 2, 3, 4, 5개 또는 모두를 수반하는 불응성 또는 재발성 암 환자에게 화합물 A 또는 화합물 B를 포함하는 조성물을 치료학적으로 유효량으로 투여하는 것을 가능하게 할 수 있다.
발명의 상세한 설명
'화합물 A'는 N-(4-하이드록시페닐)-3-{6-[((3S)-3-(4-모르폴리닐메틸)-3,4-디하이드로-2(1H)-이소퀴놀리닐)카르보닐]-1,3-벤조디옥솔-5-일}-N-페닐-5,6,7,8-테트라하이드로-1-인돌리진 카르복사미드를 의미한다.
'화합물 A, HCl'은 하이드로클로라이드 염 형태의 N-(4-하이드록시페닐)-3-{6-[((3S)-3-(4-모르폴리닐메틸)-3,4-디하이드로-2(1H)-이소퀴놀리닐)카르보닐]-1,3-벤조디옥솔-5-일}-N-페닐-5,6,7,8-테트라하이드로-1-인돌리진 카르복사미드를 의미한다.
'화합물 B'는 5-(5-클로로-2-{[(3S)-3-(모르폴린-4-일메틸)-3,4-디하이드로이소퀴놀린-2(1H)-일]카르보닐}페닐)-N-(5-시아노-1,2-디메틸-1H-피롤-3-일)-N-(4-하이드록시페닐)-1,2-디메틸-1H-피롤-3-카르복사미드를 의미한다.
'화합물 B, HCl'은 5-(5-클로로-2-{[(3S)-3-(모르폴린-4-일메틸)-3,4-디하이드로이소퀴놀린-2(1H)-일]카르보닐}페닐)-N-(5-시아노-1,2-디메틸-1H-피롤-3-일)-N-(4-하이드록시페닐)-1,2-디메틸-1H-피롤-3-카르복사미드가 하이드로클로라이드 염의 형태로 존재함을 의미한다.
'화합물 B, H2SO4'은 5-(5-클로로-2-{[(3S)-3-(모르폴린-4-일메틸)-3,4-디하이드로이소퀴놀린-2(1H)-일]카르보닐}페닐)-N-(5-시아노-1,2-디메틸-1H-피롤-3-일)-N-(4-하이드록시페닐)-1,2-디메틸-1H-피롤-3-카르복사미드가 하이드로겐 설페이트 염의 형태로 존재함을 의미한다.
'자유 분자' 및 '자유 염기'는 본원에서 상호교환적으로 사용되며 염 형태가 아닌 경우의 화합물 A 또는 화합물 B를 지칭한다.
"암"은 세포 군이 제어되지 않는 성장을 나타내는 질병의 종류를 의미한다. 암 유형은 혈액암(림프종 및 백혈병) 및 암종, 육종 또는 모세포종을 포함한 고형 종양을 포함한다. 특히, "암"은 백혈병, 림프종 또는 다발성 골수종, 및 더욱 특히 만성 림프구성 백혈병, 비호지킨 림프종(여포성 림프종 포함) 또는 급성 골수성 백혈병을 지칭한다.
'Bcl-2 매개 암'은 Bcl-2 단백질이 아폽토시스에 대한 장벽으로 작용하여 종양의 발달과 암 치료에 대한 내성을 촉진할 수 있는 암을 의미한다. 특히, 'Bcl-2 매개 암'은 Bcl-2 단백질 발현의 조절장애를 특징으로 하는 암을 포함한다.
'HP-β-사이클로덱스트린'은 또한 '하이드록시프로필-β-사이클로덱스트린' 또는 '2-하이드록시프로필-β-사이클로덱스트린' 또는 '하이드록시프로필베타덱스'라고도 한다. 특히, HP-β-사이클로덱스트린은 하기 제품명으로 판매된다: Cavitron™ W7HP7(전형적인 치환도: 6.0-8.0, 대략적인 분자량: 1520), Cavitron™ W7HP5(전형적인 치환도: 4.1-5.1; 대략적인 분자량: 1410), Kleptose™ HPB 또는 Kleptose™ HP.
본원에 사용된 바와 같이 용어 '포함하는(comprising)'은 '포함하는(including)'을 의미하고, 문맥이 달리 시사하지 않는 한, 예를 들어 구성요소의 합이 100%인 경우를 제외하고는 임의의 추가 구성요소의 존재를 배제하는 것으로 의도되지 않는다.
본원에 사용된 바와 같이 임의의 질병 또는 장애의 용어 '치료하다', '치료하는' 또는 '치료'는 일 구체예에서 질병 또는 장애를 개선(즉, 질병 또는 이의 임상 증상 중 적어도 하나의 발병을 감속 또는 저지 또는 감소)하는 것을 나타낸다. 또 다른 구체예에서, '치료하다', '치료하는' 또는 '치료'는 환자가 식별할 수 없는 것을 포함하는 적어도 하나의 물리적 매개변수를 경감 또는 개선하는 것을 나타낸다. 추가의 또 다른 구체예에서, '치료하다', '치료하는' 또는 '치료'는 질병 또는 장애를 물리적으로(예를 들어, 식별가능한 증상의 안정화), 생리학적으로(예를 들어, 물리적 매개변수의 안정화) 또는 이 둘 모두로 조절하는 것을 나타낸다.
본원에 사용된 바와 같은 "치료학적 유효량의 조성물"은 환자의 치료학적 이점을 유도하기 위해 유효량의 활성 성분을 함유하는 본 발명에 따른 조성물의 유효량을 의미한다. 화합물 A에 있어서, 유용한 투여량은 유리 염기로서 표현될 경우 하루 50 mg 내지 1500 mg 범위이다. 본 발명에 따라 투여되는 화합물 B의 용량은 자유 염기로 표현하는 경우 5 mg 내지 1000 mg이다.
본원에 사용된 바와 같은 "민감화 방법"은 재발 또는 불응성 환자에서 질병 또는 장애를 개선(즉, 질병 또는 이의 임상 증상 중 적어도 하나의 발생을 감속 또는 저지 또는 감소)할 수 있는 치료 방법을 의미한다. 특정 구체예에서, "민감화 방법"은 기존 요법에 내성이 있는 환자에서 임상 반응의 회복을 의미한다.
본원에 사용된 바와 같은 "표적 요법"은 (전통적인 화학요법과 같이) 빠르게 분열하는 모든 세포를 단순히 방해하는 것이 아니라 발암 및 종양 성장에 필요한 특정 표적 분자를 방해하여 암 세포의 성장을 차단하는 요법을 의미한다.
구체예
본 발명의 다수의 구체예가 하기에 기술된다.
E1. 하기 돌연변이 (i) Gly101Val; (ii) Asp103Tyr; (iii) Asp103Val; (iv) Asp103Glu; (v) Arg129Leu 및 (vi) Ala113Gly 중 적어도 1, 2, 3, 4, 5개 또는 모두를 보유하는 Bcl-2 매개 암의 치료에 사용하기 위한 Bcl-2억제제로서,
여기서 Bcl-2 억제제는 N-(4-하이드록시페닐)-3-{6-[((3S)-3-(4-모르폴리닐메틸)-3,4-디하이드로-2(1H)-이소퀴놀리닐)카르보닐]-1,3-벤조디옥솔-5-일}-N-페닐-5,6,7,8-테트라하이드로-1-인돌리진 카르복사미드(화합물 A) 및 5-(5-클로로-2-{[(3S)-3-(모르폴린-4-일메틸)-3,4-디하이드로이소퀴놀린-2(1H)-일]카르보닐}페닐)-N-(5-시아노-1,2-디메틸-1H-피롤-3-일)-N-(4-하이드록시페닐)-1,2-디메틸-1H-피롤-3-카르복사미드(화합물 B), 또는 이의 약학적으로 허용되는 염으로 구성된 군으로부터 선택되는, Bcl-2 매개 암의 치료에 사용하기 위한 Bcl-2 억제제.
E2. E1에 있어서, 암이 Gly101Val 돌연변이를 수반하는, Bcl-2 매개 암의 치료에 사용하기 위한 Bcl-2 억제제.
E3. E1에 있어서, 암이 Asp103Tyr 돌연변이를 수반하는, Bcl-2 매개 암의 치료에 사용하기 위한 Bcl-2 억제제.
E4. E1에 있어서, 암이 Asp103Val 돌연변이를 수반하는, Bcl-2 매개 암의 치료에 사용하기 위한 Bcl-2 억제제.
E5. E1에 있어서, 암이 Asp103Glu 돌연변이를 수반하는, Bcl-2 매개 암의 치료에 사용하기 위한 Bcl-2 억제제.
E6. E1에 있어서, 암이 Arg129Leu 돌연변이를 수반하는, Bcl-2 매개 암의 치료에 사용하기 위한 Bcl-2 억제제.
E7. E1에 있어서, 암이 Ala113Gly 돌연변이를 수반하는, Bcl-2 매개 암의 치료에 사용하기 위한 Bcl-2 억제제.
E8. E1 내지 E7 중 어느 하나에 있어서, Bcl-2 매개 암이 만성 림프구성 백혈병(CLL)인, Bcl-2 억제제. 대안적으로, Bcl-2 매개 암은 급성 골수성 백혈병(AML), 다발성 골수종 또는 비호지킨 림프종이다.
E9. E1 내지 E7 중 어느 하나에 있어서, 화합물 A가 하이드로클로라이드 염의 형태로 존재하는, Bcl-2 억제제.
E10. E1 내지 E7 중 어느 하나에 있어서, 화합물 B가 하이드로겐 설페이트 염의 형태로 존재하는, Bcl-2 억제제.
E11. E1 내지 E7 중 어느 하나에 있어서, 화합물 B가 하이드로클로라이드 염의 형태로 존재하는, Bcl-2 억제제.
E12. E1 내지 E7 중 어느 하나에 있어서, 화합물 B가 정맥내 투여되는, Bcl-2 억제제.
E13. 하기 돌연변이 (i) Gly101Val; (ii) Asp103Tyr; (iii) Asp103Val; (iv) Asp103Glu; (v) Arg129Leu 및 (vi) Ala113Gly 중 적어도 1, 2, 3, 4, 5개 또는 모두를 보유하는 Bcl-2 매개 암의 치료에 사용하기 위한 E1 내지 E12 중 어느 하나에 따른 Bcl-2 억제제를 포함하는 약학적 조성물.
E14. E13에 있어서, Gly101Val 돌연변이를 수반하는 Bcl-2 매개 암의 치료에 사용하기 위한, Bcl-2 억제제를 포함하는 약학적 조성물.
E15. E13에 있어서, Asp103Tyr 돌연변이를 수반하는 Bcl-2 매개 암의 치료에 사용하기 위한, Bcl-2 억제제를 포함하는 약학적 조성물.
E16. E13에 있어서, Asp103Val 돌연변이를 수반하는 Bcl-2 매개 암의 치료에 사용하기 위한, Bcl-2 억제제를 포함하는 약학적 조성물.
E17. E13에 있어서, Asp103Glu 돌연변이를 수반하는 Bcl-2 매개 암의 치료에 사용하기 위한, Bcl-2 억제제를 포함하는 약학적 조성물.
E18. E13에 있어서, Arg129Leu 돌연변이를 수반하는 Bcl-2 매개 암의 치료에 사용하기 위한, Bcl-2 억제제를 포함하는 약학적 조성물.
E19. E13에 있어서, Ala113Gly 돌연변이를 수반하는 Bcl-2 매개 암의 치료에 사용하기 위한, Bcl-2 억제제를 포함하는 약학적 조성물.
E20. 하기 돌연변이 (i) Gly101Val; (ii) Asp103Tyr; (iii) Asp103Val; (iv) Asp103Glu; (v) Arg129Leu 및 (vi) Ala113Gly 중 적어도 1, 2, 3, 4, 5개 또는 모두를 수반하는 Bcl-2 매개 암에 걸린 환자를 민감화시키기 위한 방법으로서,
상기 환자는 (a) 적어도 하나의 항암제에 불응성이거나, (b) 항암제 치료 후 재발한 경우이거나, (a) 및 (b) 둘 모두이며, 상기 방법은 E1 내지 E12 중 어느 하나에 따른 Bcl-2 억제제를 치료학적 유효량으로 상기 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 방법.
E21. Gly101Val 돌연변이를 수반하는 Bcl-2 매개 암에 걸린 환자를 민감화시키기 위한 방법으로서, 상기 환자는 (i) 적어도 하나의 항암제에 불응성이거나, (ii) 항암제 치료 후 재발한 경우이거나, (i) 및 (ii) 둘 모두이며, 상기 방법은 E1 내지 E12 중 어느 하나에 따른 Bcl-2 억제제를 치료학적 유효량으로 상기 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 방법.
E22. Asp103Tyr 돌연변이를 수반하는 Bcl-2 매개 암에 걸린 환자를 민감화시키기 위한 방법으로서, 상기 환자는 (i) 적어도 하나의 항암제에 불응성이거나, (ii) 항암제 치료 후 재발한 경우이거나, (i) 및 (ii) 둘 모두이며, 상기 방법은 E1 내지 E12 중 어느 하나에 따른 Bcl-2 억제제를 치료학적 유효량으로 상기 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 방법.
E23. Asp103Val 돌연변이를 수반하는 Bcl-2 매개 암에 걸린 환자를 민감화시키기 위한 방법으로서, 상기 환자는 (i) 적어도 하나의 항암제에 불응성이거나, (ii) 항암제 치료 후 재발한 경우이거나, (i) 및 (ii) 둘 모두이며, 상기 방법은 E1 내지 E12 중 어느 하나에 따른 Bcl-2 억제제를 치료학적 유효량으로 상기 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 방법.
E24. Asp103Glu 돌연변이를 수반하는 Bcl-2 매개 암에 걸린 환자를 민감화시키기 위한 방법으로서, 상기 환자는 (i) 적어도 하나의 항암제에 불응성이거나, (ii) 항암제 치료 후 재발한 경우이거나, (i) 및 (ii) 둘 모두이며, 상기 방법은 E1 내지 E12 중 어느 하나에 따른 Bcl-2 억제제를 치료학적 유효량으로 상기 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 방법.
E25. Arg129Leu 돌연변이를 수반하는 Bcl-2 매개 암에 걸린 환자를 민감화시키기 위한 방법으로서, 상기 환자는 (i) 적어도 하나의 항암제에 불응성이거나, (ii) 항암제 치료 후 재발한 경우이거나, (i) 및 (ii) 둘 모두이며, 상기 방법은 E1 내지 E12 중 어느 하나에 따른 Bcl-2 억제제를 치료학적 유효량으로 상기 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 방법.
E26. Ala113Gly 돌연변이를 수반하는 Bcl-2 매개 암에 걸린 환자를 민감화시키기 위한 방법으로서, 상기 환자는 (i) 적어도 하나의 항암제에 불응성이거나, (ii) 항암제 치료 후 재발한 경우이거나, (i) 및 (ii) 둘 모두이며, 상기 방법은 E1 내지 E12 중 어느 하나에 따른 Bcl-2 억제제를 치료학적 유효량으로 상기 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 방법.
E27. E20 내지 E26중 어느 하나에 있어서, 항암제가 표적 요법인, 방법.
E28. E27에 있어서, 암이 만성 림프구성 백혈병(CLL)인, 방법.
E29. E27 또는 E28에 있어서, 표적 요법이 베네토클락스(ABT-199)인, 방법.
E30. 환자에서 Bcl-2 매개 암을 치료하는 방법으로서,
(a) 상기 환자로부터 생물학적 샘플을 수득하고, 생물학적 샘플이 하기 돌연변이 (i) Gly101Val; (ii) Asp103Tyr; (iii) Asp103Val; (iv) Asp103Glu; (v) Arg129Leu 및 (vi) Ala113Gly 중 적어도 1, 2, 3, 4, 5개 또는 모두를 포함하는 지의 여부를 검출하는 단계;
(b) 상기 환자를 베네토클락스에 대한 감소된 반응 가능성을 갖는 환자로서 식별하는 단계;
(c) 이렇게 검출된 돌연변이의 존재에 기초하여 E1 내지 E12 중 어느 하나에 따른 Bcl-2 억제제를 치료학적 유효량으로 상기 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
E31. 환자에서 Bcl-2 매개 암을 치료하는 방법으로서,
(a) 상기 환자로부터 생물학적 샘플을 수득하고, 생물학적 샘플이 Gly101Val 돌연변이를 포함하는 지의 여부를 검출하는 단계;
(b) 상기 환자를 베네토클락스에 대한 감소된 반응 가능성을 갖는 환자로서 식별하는 단계;
(c) Gly101Val 돌연변이의 존재에 기초하여 E1 내지 E12 중 어느 하나에 따른 Bcl-2 억제제를 치료학적 유효량으로 상기 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
E32. 환자에서 Bcl-2 매개 암을 치료하는 방법으로서,
(a) 상기 환자로부터 생물학적 샘플을 수득하고, 생물학적 샘플이 Asp103Tyr 돌연변이를 포함하는 지의 여부를 검출하는 단계;
(b) 상기 환자를 베네토클락스에 대한 감소된 반응 가능성을 갖는 환자로서 식별하는 단계;
(c) Asp103Tyr 돌연변이의 존재에 기초하여 E1 내지 E12 중 어느 하나에 따른 Bcl-2 억제제를 치료학적 유효량으로 상기 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
E33. 환자에서 Bcl-2 매개 암을 치료하는 방법으로서,
(a) 상기 환자로부터 생물학적 샘플을 수득하고, 생물학적 샘플이 Asp103Val 돌연변이를 포함하는 지의 여부를 검출하는 단계;
(b) 상기 환자를 베네토클락스에 대한 감소된 반응 가능성을 갖는 환자로서 식별하는 단계;
(c) Asp103Val 돌연변이의 존재에 기초하여 E1 내지 E12 중 어느 하나에 따른 Bcl-2 억제제를 치료학적 유효량으로 상기 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
E34. 환자에서 Bcl-2 매개 암을 치료하는 방법으로서,
(a) 상기 환자로부터 생물학적 샘플을 수득하고, 생물학적 샘플이 Asp103Glu 돌연변이를 포함하는 지의 여부를 검출하는 단계;
(b) 상기 환자를 베네토클락스에 대한 감소된 반응 가능성을 갖는 환자로서 식별하는 단계;
(c) Asp103Glu 돌연변이의 존재에 기초하여 E1 내지 E12 중 어느 하나에 따른 Bcl-2 억제제를 치료학적 유효량으로 상기 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
E35. 환자에서 Bcl-2 매개 암을 치료하는 방법으로서,
(a) 상기 환자로부터 생물학적 샘플을 수득하고, 생물학적 샘플이 Arg129Leu 돌연변이를 포함하는 지의 여부를 검출하는 단계;
(b) 상기 환자를 베네토클락스에 대한 감소된 반응 가능성을 갖는 환자로서 식별하는 단계;
(c) Arg129Leu 돌연변이의 존재에 기초하여 E1 내지 E12 중 어느 하나에 따른 Bcl-2 억제제를 치료학적 유효량으로 상기 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
E36. 환자에서 Bcl-2 매개 암을 치료하는 방법으로서,
(a) 상기 환자로부터 생물학적 샘플을 수득하고, 생물학적 샘플이 Ala113Gly 돌연변이를 포함하는 지의 여부를 검출하는 단계;
(b) 상기 환자를 베네토클락스에 대한 감소된 반응 가능성을 갖는 환자로서 식별하는 단계;
(c) Ala113Gly 돌연변이의 존재에 기초하여 E1 내지 E12 중 어느 하나에 따른 Bcl-2 억제제를 치료학적 유효량으로 상기 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
실시예 1: Bcl-2 야생형 및 Bcl-2 Gly101Val 돌연변이에 대한 화합물 A 및 화합물 B의 친화성 데이터
형광 소광 검정은
아미노산 X'에 C-말단에서 연결된 아미노산 서열(SEQ ID: 01): [QWAREIGAQLRRMADDLNAQY]를 갖는 PUMA(UniProtKB® 일차 수탁 번호 Q9BXH1)로부터 유래된 C-말단 표지된 펩티드의 결합 시 (여기서 X'는 AAT Bioquest 카탈로그 번호 2079의 TQ5WS로 황에 표지된 시스테인임),
(i) 하기 정의된 바와 같은 시스테인에 상응하는 아미노산 X에 C-말단에서 연결된 아미노산 서열 아미노(SEQ ID: 02): [MGHHHHHHHHSAGLVPRGSMAHAGRTGYDNREIVMKYIHYKLSQRGYEWDAGDVGAAPPGAAPAPGIFSSQPGHTPHPAASRDPVARTSPLQTPAAPGAAAGPALSPVPPVVHLTLRQAGDDFSRRYRRDFAEMSSQLHLTPFTARGRFATVVEELFRDGVNWGRIVAFFEFGGVMCVESVNREMSPLVDNIALWMTEYLNRHLHTWIQDNGGWDAFVELY]을 갖는 C-말단 Cy5-표지된 Bcl-2 야생형 단백질 (UniProtKB® 일차 수탁 번호 P10415):
또는
(ii) 하기 정의된 바와 같은 시스테인에 상응하는 아미노산 X에 C-말단에서 연결된 아미노산 서열(SEQ ID: 03): [MGHHHHHHHHSAGLVPRGSMAHAGRTGYDNREIVMKYIHYKLSQRGYEWDAGDVGAAPPGAAPAPGIFSSQPGHTPHPAASRDPVARTSPLQTPAAPGAAAGPALSPVPPVVHLTLRQAVDDFSRRYRRDFAEMSSQLHLTPFTARGRFATVVEELFRDGVNWGRIVAFFEFGGVMCVESVNREMSPLVDNIALWMTEYLNRHLHTWIQDNGGWDAFVELY]을 갖는 Bcl-2 Gly101Val 돌연변이의 형광 강도 변화를 측정한다 (상기에서 X = Lumiprobe GmbH 카탈로그 번호 13380의 설포-시아닌5로 황에 표지된 시스테인).
펩티드와 동일한 부위에 경쟁적으로 결합하는 화합물을 추가하면 형광 소광제의 대체로 인해 단백질의 형광 강도가 증가할 것이다.
각 화합물의 11-포인트 연속 희석액은 DMSO로 제조하였으며, 최종 완충액 조건은 10 mM 4-(2-하이드록시에틸)-1-피페라진에탄설폰산[HEPES], 150 mM NaCl, 0.05% Tween 20, pH 7.4 및 5% DMSO였다. 검정에서 최종 단백질 농도는 1 nM이었으며, 펩티드는 50 nM (Bcl-2 야생형) 또는 100 nM (Bcl-2 Gly101Val)로 존재하였다. Biotek SynergyNeo 플레이트 판독기(여기 620 nm, 방출 680 nm)에서 형광 강도를 측정하기 전에 실험을 실온에서 2시간 동안 인큐베이션하였다. 용량 반응 곡선은 4-매개변수 로지스틱 모델(S자형 용량 반응 모델)을 사용하여 XL-Fit 소프트웨어로 플롯팅하고, 형광 강도가 50% 증가하는 억제 농도를 결정하였다(IC50). KI 값은 문헌 [Cer et al., Nucleic Acids Res, 2009, Jul 1;37(WebServer issue): W441-W445]에 따라 IC50 값으로부터 결정되었다.
Figure pct00003
데이터는 Bcl-2 야생형 단백질과 비교하여 Bcl-2 Gly101Val 돌연변이에 대한 ABT-199의 활성의 상당한 손실을 입증하는 반면, 화합물 A 및 화합물 B의 친화성은 돌연변이에 의해 약간 영향을 받는다. 또한, 화합물 B는 Bcl-2 Gly101Val 돌연변이에 대해 ABT-199보다 75배 더 강력하다.
실시예 2: Bcl-2 야생형 또는 Bcl-2 Gly101Val 돌연변이를 발현하는 변형된 세포에서 화합물 A 및 화합물 B의 시험관내 세포독성
재료 및 방법
세포주는 공급업체가 권장하는 배지에서 5% CO2로 가습된 대기에서 37℃에서 성장시켰다. RS4;11(ATCC® CRL1873™)은 아메리칸 타입 컬쳐 콜렉션(ATCC)에서 구입하였으며, KMS-12-PE(ACC 606)는 Leibniz-Institute DSMZ(Braunschweig, Germany)에서 구입하였다. Bcl-2 야생형(또한 'Bcl-2 WT'라고도 함) 및 G101V에서 변이된 Bcl-2(또한 'Bcl-2 G101V'라고도 함)를 함유하는 렌티바이러스 입자를 pcLV-CMV-DEST-IRES-TagRFP에 클로닝하였다. 렌티바이러스 입자(1 x 106)를 8 μg/ml의 폴리브렌과 혼합하고, 32℃에서 1시간 동안 회전 접종하여 형질도입하고, 밤새 인큐베이션하였다. KMS-12-PE의 경우 8일 후 및 RS4;11의 경우 21일 후, TagRFP 양성 세포를 FACS에 의해 분류하였다. BCL2 발현은 항-Flag 및 항-BCL2 항체를 사용하는 면역블롯팅으로 모니터링하였다. 세포를 96-웰 플레이트에 시딩하고, 화합물의 1:3.16 연속 희석액(9개의 상이한 농도)으로 처리하였다. 72시간 동안 ABT-199, 화합물 A 및 화합물 B로 처리한 후 CellTiter-Glo® 시약을 사용하여 세포 생존력을 평가하였다. 결과는 화합물 부재하의 세포 생존력으로 정규화하였다(대조군 웰). C50 값은 XCell 소프트웨어의 비선형 회귀 알고리즘을 사용하여 계산하였다.
결과
Figure pct00004
결론
이들 결과는 2개의 상이한 세포주를 사용한 세포 검정에서 ABT-199와 화합물 B 사이의 효능의 이동을 입증하였다. 실제로, Bcl-2 야생형 단백질을 과발현하는 세포주와 비교하여 Bcl-2 G101V 돌연변이를 과발현하는 세포주에서 ABT-199의 상당한 효능 손실이 관찰되었다(세포주에 따라 41 내지 12배 차이). 대조적으로, 화합물 B는 G101V Bcl-2 단백질 또는 야생형 단백질을 과발현하는 세포주 사이에 단지 9 내지 7배의 차이를 나타내었다. 화합물 B와 ABT-199 둘 모두는 야생형 Bcl-2를 과발현하는 두 세포주 모두에서 유사한 효능을 나타내는 반면, 화합물 B는 Bcl-2 G101V 돌연변이를 과발현하는 세포주에서 ABT-199보다 5 내지 2배 더 높은 효능을 나타내었다.
실시예 3: 임상 시험 프로토콜
재발성 또는 불응성 급성 골수성 백혈병, 비호지킨 림프종, 다발성 골수종 또는 만성 림프구성 백혈병(CLL) 환자에서 정맥내 투여된 화합물 B를 평가하기 위해 I 상의 공개 라벨, 비무작위, 무비교, 다기관 연구를 설정하였다. 특히, 이 연구에 포함된 CLL 환자는 iwCLL 가이드라인(Hallek M. et al, Blood, 2018, Vol. 131, 25, 2745-2760)에 따라 정의된 바와 같이 베네토클락스 치료로부터 재발하였거나 불응성이며(치료 실패, 예를 들어, 안정한 질환, 무반응성, 진행성 질환, 임의의 원인으로 인한 치사 제외), 확립된 대체 요법이 없다. 약 60명의 환자가 연구에 등록될 것이다. 이 연구는 두 부분으로 설계된다: 첫 번째 부분은 용량 증량, 두 번째 부분은 용량 확장이다.
주요 목표:
급성 골수성 백혈병(AML), 비호지킨 림프종(NHL), 다발성 골수종(MM) 또는 만성 림프구성 백혈병(CLL) 환자에서 화합물 B의 안전성 프로파일(용량 제한 독성(DLT) 및 최대 허용 용량(MTD(들) 포함) 및 안전성, PK 및 예비 효능 결과에 따른 권고된 II 상 용량(RP2D(들))을 결정한다.
이차 목표:
­혈장 및 소변에서 화합물 B의 약동학(PK) 프로파일을 결정하기 위해.
­평가된 각 집단(AML, NHL, MM, CLL)에 대한 적절한 반응 기준을 사용하여 화합물 B의 예비 항종양 활성을 평가하기 위해.
돌연변이가 있는 CLL 환자와 관련된 탐색 목표:
­이전에 베네토클락스를 투여 받은 AML 또는 CLL로 고통받는 환자의 치료 전 및 치료 중 골수 흡인물 및 혈액 샘플을 비교함으로써 Gly101Val 돌연변이 및 Asp103Tyr 돌연변이를 포함하는 Bcl-2 돌연변이(들)를 보유하는 세포에 대한 화합물 B의 효능을 평가하기 위해. 돌연변이는 Droplet Digital PCR 기술을 사용하여 환자 샘플을 분석함으로써 검출한다(Vogelstein and Kinzler, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1999 96 Genetics; Olmedillas-
Figure pct00005
S et al, Mol Diagn Ther. 2017 Oct;21(5):493-510).
시험 약물:
­화합물 B는 중추 또는 말초 정맥 라인을 통한 정맥내 주사를 통해 투여될 것이다.
­주입용 용액은 하기에 기술된 바와 같이 HP-β-사이클로덱스트린과 함께 제형화된 150 mg의 화합물 B(자유 염기로 표현됨)를 함유하는 20 mL 바이알을 사용하여 제조될 것이다.
­예비 안전성 및 PK 데이터를 기반으로 하는 주입 기간은 조정될 수 있다.
20 mL 바이알에서 HP-β-사이클로덱스트린에 용해된 화합물 B의 동결건조물의 제조:
동결건조물은 비경구 경로로 투여할 용액을 재구성할 수 있는 20 mL 바이알에 준비된다. 이들은 20 mg/mL 용량의 화합물 B(자유 염기)를 함유하는 20% Cavitron™ W7HP5 용액의 동결건조에 의해 얻어진다.
절차
5 L 반응기에서 물 1500 g을 측량한다. 자석 교반으로 와류를 발생시킨 다음 Cavitron™ W7HP5 600 g에 붓는다. 사이클로덱스트린이 완전히 용해될 때까지 주위 온도에서 배지를 교반하고, 68.16 g의 '화합물 B, H2SO4'를 첨가하고, 용액을 60℃ 이하로 가열한다. 현탁액을 몇 시간 동안 자석 교반 하에 둔 다음 배지가 30℃ 미만의 온도로 되돌아 오게 한다. 이렇게 얻은 용액의 pH를 측정한 다음 0.5 M NaOH 용액을 천천히 부어 pH 3.0으로 조정한다. 자석 교반을 유지하면서 물을 첨가하여 용액을 3 L의 부피로 만든다.
이렇게 얻은 용액을 0.2 μm 필터를 통해 통과시킨다.
각 바이알에 적어도 150 mg의 화합물 B(자유 염기로 표현)가 함유되도록 20 mL 바이알을 여과된 용액으로 채우고 샘플을 동결건조 단계로 처리한다.
생성된 동결건조물은 비경구 투여용 약학적 조성물의 제조에 사용하고자 한다.
용량 할당 방법:
모든 적응증에 대해 조합되고 과량 투여 제어(EWOC) 방법으로의 단계적 확대에 의해 안내되는 베이지안 계층적 모델(Bayesian Hierarchical Model) (BHM)은 주기 1 동안 DLT의 발생을 기반으로 하여 용량 단계적 확대를 안내하고 MTD(들)를 추정하는 데 사용될 것이다.
대안적으로, 과다용량 제어되는 단계적 용량 확대(EWOC) 방법에 의해 안내되는 적응성 베이지안 로지스틱 회귀 모델(BLRM)은 주기 1 동안 DLT(들)의 발생을 기반으로 용량 권장 사항을 만들고, 단일 제제로서 투여된 화합물 B에 대한 MTD(들)/RP2D(들)을 추정하는데 사용될 것이다.
처리 기간:
계획된 처리 기간은 질병이 진행될 때 까지이다. 환자는 허용불가능한 독성으로 인해 연구 약물로의 치료를 더 일직 중단할 수 있으며/거나 치료는 조사자 또는 환자 재량에 따라 중단된다.
실시예 4: Bcl-2 야생형, Gly101Val 돌연변이, Bcl-2 Asp103Tyr 돌연변이, Asp103Val 돌연변이, Asp103Glu 돌연변이; Arg129Leu 돌연변이 및 Ala113Gly 돌연변이에 대한 화합물 A 및 화합물 B의 친화성 데이터
형광 소광 검정은
아미노산 X'에 C-말단 영역에서 연결된 아미노산 서열(SEQ ID: 01): [QWAREIGAQLRRMADDLNAQY]를 갖는 PUMA(UniProtKB® 일차 수탁 번호 Q9BXH1)로부터 유래된 C-말단 표지된 펩티드의 결합 시 (여기서 X'는 AAT Bioquest 카탈로그 번호 2079의 TQ5WS로 황에 표지된 시스테인임),
(i) 하기 정의된 바와 같은 시스테인에 상응하는 아미노산 X에 C-말단에서 연결된 아미노산 서열 (SEQ ID: 02): [MGHHHHHHHHSAGLVPRGSMAHAGRTGYDNREIVMKYIHYKLSQRGYEWDAGDVGAAPPGAAPAPGIFSSQPGHTPHPAASRDPVARTSPLQTPAAPGAAAGPALSPVPPVVHLTLRQAGDDFSRRYRRDFAEMSSQLHLTPFTARGRFATVVEELFRDGVNWGRIVAFFEFGGVMCVESVNREMSPLVDNIALWMTEYLNRHLHTWIQDNGGWDAFVELY]을 갖는 C-말단 Cy5-표지된 Bcl-2 야생형 단백질 (UniProtKB® 일차 수탁 번호 P10415),
또는
(ii) 하기 정의된 바와 같은 시스테인에 상응하는 아미노산 X에 C-말단에서 연결된 아미노산 서열(SEQ ID: 03): [MGHHHHHHHHSAGLVPRGSMAHAGRTGYDNREIVMKYIHYKLSQRGYEWDAGDVGAAPPGAAPAPGIFSSQPGHTPHPAASRDPVARTSPLQTPAAPGAAAGPALSPVPPVVHLTLRQAVDDFSRRYRRDFAEMSSQLHLTPFTARGRFATVVEELFRDGVNWGRIVAFFEFGGVMCVESVNREMSPLVDNIALWMTEYLNRHLHTWIQDNGGWDAFVELY]을 갖는 Bcl-2 Gly101Val 돌연변이,
또는
(iii) 하기 정의된 바와 같은 시스테인에 상응하는 아미노산 X에 C-말단에서 연결된 아미노산 서열(SEQ ID: 04): [MGHHHHHHHHSAGLVPRGSMAHAGRTGYDNREIVMKYIHYKLSQRGYEWDAGDVGAAPPGAAPAPGIFSSQPGHTPHPAASRDPVARTSPLQTPAAPGAAAGPALSPVPPVVHLTLRQAGDYFSRRYRRDFAEMSSQLHLTPFTARGRFATVVEELFRDGVNWGRIVAFFEFGGVMCVESVNREMSPLVDNIALWMTEYLNRHLHTWIQDNGGWDAFVELY]을 갖는 Bcl-2 Asp103Tyr 돌연변이:
또는
(iv) 하기 정의된 바와 같은 시스테인에 상응하는 아미노산 X에 C-말단에서 연결된 아미노산 서열(SEQ ID: 05): [MGHHHHHHHHSAGLVPRGSMAHAGRTGYDNREIVMKYIHYKLSQRGYEWDAGDVGAAPPGAAPAPGIFSSQPGHTPHPAASRDPVARTSPLQTPAAPGAAAGPALSPVPPVVHLTLRQAGDVFSRRYRRDFAEMSSQLHLTPFTARGRFATVVEELFRDGVNWGRIVAFFEFGGVMCVESVNREMSPLVDNIALWMTEYLNRHLHTWIQDNGGWDAFVELY]을 갖는 Bcl-2 Asp103Val 돌연변이:
또는
(v) 하기 정의된 바와 같은 시스테인에 상응하는 아미노산 X에 C-말단에서 연결된 아미노산 서열(SEQ ID: 06): [MGHHHHHHHHSAGLVPRGSMAHAGRTGYDNREIVMKYIHYKLSQRGYEWDAGDVGAAPPGAAPAPGIFSSQPGHTPHPAASRDPVARTSPLQTPAAPGAAAGPALSPVPPVVHLTLRQAGDEFSRRYRRDFAEMSSQLHLTPFTARGRFATVVEELFRDGVNWGRIVAFFEFGGVMCVESVNREMSPLVDNIALWMTEYLNRHLHTWIQDNGGWDAFVELY]을 갖는 Bcl-2 Asp103Glu 돌연변이:
또는
(vi) 하기 정의된 바와 같은 시스테인에 상응하는 아미노산 X에 C-말단에서 연결된 아미노산 서열(SEQ ID: 07): [MGHHHHHHHHSAGLVPRGSMAHAGRTGYDNREIVMKYIHYKLSQRGYEWDAGDVGAAPPGAAPAPGIFSSQPGHTPHPAASRDPVARTSPLQTPAAPGAAAGPALSPVPPVVHLTLRQAGDDFSRRYRRDFAEMSSQLHLTPFTARGLFATVVEELFRDGVNWGRIVAFFEFGGVMCVESVNREMSPLVDNIALWMTEYLNRHLHTWIQDNGGWDAFVELY]을 갖는 Bcl-2 Arg129Leu 돌연변이:
또는
(vii) 아미노산 X에 C-말단에서 연결된 아미노산 서열(SEQ ID: 08): [MGHHHHHHHHSAGLVPRGSMAHAGRTGYDNREIVMKYIHYKLSQRGYEWDAGDVGAAPPGAAPAPGIFSSQPGHTPHPAASRDPVARTSPLQTPAAPGAAAGPALSPVPPVVHLTLRQAGDDFSRRYRRDFGEMSSQLHLTPFTARGRFATVVEELFRDGVNWGRIVAFFEFGGVMCVESVNREMSPLVDNIALWMTEYLNRHLHTWIQDNGGWDAFVELY]을 갖는 Bcl-2 Ala113Gly 돌연변이의 형광 강도 변화를 측정한다 (상기에서 X = Lumiprobe GmbH 카탈로그 번호 13380의 설포-시아닌5로 황에 표지된 시스테인).
펩티드와 동일한 부위에 경쟁적으로 결합하는 화합물을 추가하면 형광 소광제의 대체로 인해 단백질의 형광 강도가 증가할 것이다.
목적은 형광 강도에 의해 측정된 PUMA 소광 시약 대체를 통해 재조합 Bcl-2 야생형, G101V, D103Y, D103V, D103E, A113G, R129L 돌연변이의 경쟁 결합제로서 ABT-199, 화합물 A 및 화합물 B의 KI를 측정하는 것이었다.
검정 벽, 평평한 바닥, 낮은 결합, 384-웰 플레이트에서 검정을 수행하였다. 100 nM의 펩티드를 사용한 G101V의 경우를 제외하고, 50 nM의 펩티드(프로브) 및 [1 nM Bcl-2 야생형 단백질 또는 1 nM Bcl-2 돌연변이]를 함유하는 완충액 (10 mM 4-(2-하이드록시에틸)-1-피파레진에탄선폴산[HEPES], 150 mM NaCl, 0.05% Tween 20, pH 7.4)에서 화합물(최종 농도 5% DMSO)을 혼합하였다. 검정 플레이트를 18℃에서 약 2시간 동안 인큐베이션하고, Synergy Neo 판독기(Ex. 620nm, Em. 680nm)에서 형광 강도를 측정하였다. 용량 반응 곡선은 4-매개변수 로지스틱 모델(S자형 용량 반응 모델)을 사용하여 XL-Fit 소프트웨어로 플롯팅하고, 형광 강도가 50% 증가하는 억제 농도를 결정하였다(IC50). cKI 값은 문헌 [Cer et al, Nucleic Acids Res, 2009, Jul 1;37(WebServer issue): W441-W445]에 따라 IC50 값으로부터 결정되었다.
Figure pct00006
화합물 A 및 화합물 B의 경우, 데이터는 완전한 결합 억제 곡선(cK I )에서 결정된 억제 상수(K I )인 반면, ABT-199에 대한 데이터는 낮은 활성으로 인해 대부분의 경우 불완전한 결합 억제 곡선(eKi)으로부터 추정된다(c: 완료, e: 추정)
Figure pct00007
NC: 계산되지 않음
데이터는 Bcl-2 야생형 단백질과 비교하여 Bcl-2 Asp103Tyr, Bcl-2 Asp103Val 및 Bcl-2 Asp103Glu 돌연변이에 대한 ABT-199의 활성의 상당한 손실을 입증하는 반면, 화합물 A 및 화합물 B의 친화성은 돌연변이에 의해 영향을 약간 받는다. 화합물 B의 친화성은 Arg129Leu 및 Ala113Gly 돌연변이에 의해 적당히 영향을 받는다. 그럼에도 불구하고, 화합물 B는 Arg129Leu 및 Ala113Gly 돌연변이에 대해 ABT-199보다 각각 12배 및 4배 더 강력하다.
실시예 5: Asp103Tyr 돌연변이를 발현하는 변형된 세포에서 화합물 B 및 ABT-199의 시험관내 세포독성
재료 및 방법
세포주는 공급업체가 권장하는 배지에서 5% CO2를 갖는 가습된 대기에서 37℃에서 성장시켰다. KMS-12-PE(ACC 606)는 Leibniz-Institute DSMZ (Braunschweig, Germany)로부터 입수한다. D103Y에서 변이된 Bcl-2를 함유하는 렌티바이러스 입자를 pcLV-CMV-DEST-IRES-TagRFP에 클로닝하였다. 렌티바이러스 입자(1 x 106)를 8 μg/ml의 폴리브렌과 혼합하고, 32℃에서 1시간 동안 회전 접종하여 형질도입하고, 밤새 인큐베이션하였다. TagRFP 양성-KMS-12-PE 세포는 8일 후 FACS에 의해 분류하였다. Bcl-2 발현은 항-Flag 및 항-Bcl-2 항체를 사용하는 면역블롯팅으로 모니터링하였다. 세포를 96-웰 플레이트에 시딩하고 9개 지점에서 화합물의 1:3.16 연속 희석액으로 처리하였다. 72시간 동안 ABT-199 및 화합물 B로 처리한 후 CellTiter-Glo® 시약을 사용하여 세포 생존력을 평가하였다. 결과는 화합물 부재하의 세포 생존력으로 정규화하였다(대조군 웰). C50 값은 XCell 소프트웨어의 비선형 회귀 알고리즘을 사용하여 계산하였다.
결과
Figure pct00008
결론
이러한 결과는 BCL2 D103Y를 과발현하는 KMS-12-PE 세포주를 사용한 세포 검정에서 ABT-199와 화합물 B 사이의 효능 이동을 입증하였다. 화합물 B는 Bcl-2 D103Y 돌연변이를 과발현하는 세포주에서 ABT-199보다 약 22배 더 높은 효능을 나타내었다.
D103V, D103E, R129L 및 A113G 돌연변이를 포함하는 다른 Bcl-2 임상 돌연변이를 과발현하는 세포주는 현재 상기에서 언급한 화합물을 평가하기 위해 동일한 프로토콜을 사용하여 설정되고 있다.
Bcl-2 돌연변이(실시예 2 및 5에 기술된 변형된 세포주 포함)를 발현하는 변형된 세포로부터 유래된 이종이식 모델에 기반한 추가 생체내 실험은 화합물 B가 Bcl-2 돌연변이, 예컨대 G101V 및/또는 D103Y 및/또는 기타를 수반하는 Bcl-2 매개 암을 치료하기 위한 효과적인 치료법이 될 수 있음을 보여줄 수 있다.
세포 생존력 검정을 사용하여 G101V, D103Y, D103V, D103E, R129L 및 A113G로부터 선택된 Bcl-2 돌연변이 중 적어도 하나를 수반하는 CLL 환자의 생체외 샘플에서 화합물 B의 효능을 시험함으로써 추가 결과를 얻을 수 있다.
SEQUENCE LISTING <110> Les Laboratoires Servier and Novartis AG <120> BCL-2 INHIBITORS FOR USE IN THE TREATMENT OF A BCL-2 MEDIATED CANCER CARRYING THE GLY101VAL MUTATION <130> BCL2 MUTANT <160> 8 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 21 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Gln Trp Ala Arg Glu Ile Gly Ala Gln Leu Arg Arg Met Ala Asp Asp 1 5 10 15 Leu Asn Ala Gln Tyr 20 <210> 2 <211> 221 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2 Met Gly His His His His His His His His Ser Ala Gly Leu Val Pro 1 5 10 15 Arg Gly Ser Met Ala His Ala Gly Arg Thr Gly Tyr Asp Asn Arg Glu 20 25 30 Ile Val Met Lys Tyr Ile His Tyr Lys Leu Ser Gln Arg Gly Tyr Glu 35 40 45 Trp Asp Ala Gly Asp Val Gly Ala Ala Pro Pro Gly Ala Ala Pro Ala 50 55 60 Pro Gly Ile Phe Ser Ser Gln Pro Gly His Thr Pro His Pro Ala Ala 65 70 75 80 Ser Arg Asp Pro Val Ala Arg Thr Ser Pro Leu Gln Thr Pro Ala Ala 85 90 95 Pro Gly Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Ser Pro Val Pro Pro Val Val 100 105 110 His Leu Thr Leu Arg Gln Ala Gly Asp Asp Phe Ser Arg Arg Tyr Arg 115 120 125 Arg Asp Phe Ala Glu Met Ser Ser Gln Leu His Leu Thr Pro Phe Thr 130 135 140 Ala Arg Gly Arg Phe Ala Thr Val Val Glu Glu Leu Phe Arg Asp Gly 145 150 155 160 Val Asn Trp Gly Arg Ile Val Ala Phe Phe Glu Phe Gly Gly Val Met 165 170 175 Cys Val Glu Ser Val Asn Arg Glu Met Ser Pro Leu Val Asp Asn Ile 180 185 190 Ala Leu Trp Met Thr Glu Tyr Leu Asn Arg His Leu His Thr Trp Ile 195 200 205 Gln Asp Asn Gly Gly Trp Asp Ala Phe Val Glu Leu Tyr 210 215 220 <210> 3 <211> 221 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 3 Met Gly His His His His His His His His Ser Ala Gly Leu Val Pro 1 5 10 15 Arg Gly Ser Met Ala His Ala Gly Arg Thr Gly Tyr Asp Asn Arg Glu 20 25 30 Ile Val Met Lys Tyr Ile His Tyr Lys Leu Ser Gln Arg Gly Tyr Glu 35 40 45 Trp Asp Ala Gly Asp Val Gly Ala Ala Pro Pro Gly Ala Ala Pro Ala 50 55 60 Pro Gly Ile Phe Ser Ser Gln Pro Gly His Thr Pro His Pro Ala Ala 65 70 75 80 Ser Arg Asp Pro Val Ala Arg Thr Ser Pro Leu Gln Thr Pro Ala Ala 85 90 95 Pro Gly Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Ser Pro Val Pro Pro Val Val 100 105 110 His Leu Thr Leu Arg Gln Ala Val Asp Asp Phe Ser Arg Arg Tyr Arg 115 120 125 Arg Asp Phe Ala Glu Met Ser Ser Gln Leu His Leu Thr Pro Phe Thr 130 135 140 Ala Arg Gly Arg Phe Ala Thr Val Val Glu Glu Leu Phe Arg Asp Gly 145 150 155 160 Val Asn Trp Gly Arg Ile Val Ala Phe Phe Glu Phe Gly Gly Val Met 165 170 175 Cys Val Glu Ser Val Asn Arg Glu Met Ser Pro Leu Val Asp Asn Ile 180 185 190 Ala Leu Trp Met Thr Glu Tyr Leu Asn Arg His Leu His Thr Trp Ile 195 200 205 Gln Asp Asn Gly Gly Trp Asp Ala Phe Val Glu Leu Tyr 210 215 220 <210> 4 <211> 221 <212> PRT <213> homo sapiens <400> 4 Met Gly His His His His His His His His Ser Ala Gly Leu Val Pro 1 5 10 15 Arg Gly Ser Met Ala His Ala Gly Arg Thr Gly Tyr Asp Asn Arg Glu 20 25 30 Ile Val Met Lys Tyr Ile His Tyr Lys Leu Ser Gln Arg Gly Tyr Glu 35 40 45 Trp Asp Ala Gly Asp Val Gly Ala Ala Pro Pro Gly Ala Ala Pro Ala 50 55 60 Pro Gly Ile Phe Ser Ser Gln Pro Gly His Thr Pro His Pro Ala Ala 65 70 75 80 Ser Arg Asp Pro Val Ala Arg Thr Ser Pro Leu Gln Thr Pro Ala Ala 85 90 95 Pro Gly Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Ser Pro Val Pro Pro Val Val 100 105 110 His Leu Thr Leu Arg Gln Ala Gly Asp Tyr Phe Ser Arg Arg Tyr Arg 115 120 125 Arg Asp Phe Ala Glu Met Ser Ser Gln Leu His Leu Thr Pro Phe Thr 130 135 140 Ala Arg Gly Arg Phe Ala Thr Val Val Glu Glu Leu Phe Arg Asp Gly 145 150 155 160 Val Asn Trp Gly Arg Ile Val Ala Phe Phe Glu Phe Gly Gly Val Met 165 170 175 Cys Val Glu Ser Val Asn Arg Glu Met Ser Pro Leu Val Asp Asn Ile 180 185 190 Ala Leu Trp Met Thr Glu Tyr Leu Asn Arg His Leu His Thr Trp Ile 195 200 205 Gln Asp Asn Gly Gly Trp Asp Ala Phe Val Glu Leu Tyr 210 215 220 <210> 5 <211> 221 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 5 Met Gly His His His His His His His His Ser Ala Gly Leu Val Pro 1 5 10 15 Arg Gly Ser Met Ala His Ala Gly Arg Thr Gly Tyr Asp Asn Arg Glu 20 25 30 Ile Val Met Lys Tyr Ile His Tyr Lys Leu Ser Gln Arg Gly Tyr Glu 35 40 45 Trp Asp Ala Gly Asp Val Gly Ala Ala Pro Pro Gly Ala Ala Pro Ala 50 55 60 Pro Gly Ile Phe Ser Ser Gln Pro Gly His Thr Pro His Pro Ala Ala 65 70 75 80 Ser Arg Asp Pro Val Ala Arg Thr Ser Pro Leu Gln Thr Pro Ala Ala 85 90 95 Pro Gly Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Ser Pro Val Pro Pro Val Val 100 105 110 His Leu Thr Leu Arg Gln Ala Gly Asp Val Phe Ser Arg Arg Tyr Arg 115 120 125 Arg Asp Phe Ala Glu Met Ser Ser Gln Leu His Leu Thr Pro Phe Thr 130 135 140 Ala Arg Gly Arg Phe Ala Thr Val Val Glu Glu Leu Phe Arg Asp Gly 145 150 155 160 Val Asn Trp Gly Arg Ile Val Ala Phe Phe Glu Phe Gly Gly Val Met 165 170 175 Cys Val Glu Ser Val Asn Arg Glu Met Ser Pro Leu Val Asp Asn Ile 180 185 190 Ala Leu Trp Met Thr Glu Tyr Leu Asn Arg His Leu His Thr Trp Ile 195 200 205 Gln Asp Asn Gly Gly Trp Asp Ala Phe Val Glu Leu Tyr 210 215 220 <210> 6 <211> 221 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 6 Met Gly His His His His His His His His Ser Ala Gly Leu Val Pro 1 5 10 15 Arg Gly Ser Met Ala His Ala Gly Arg Thr Gly Tyr Asp Asn Arg Glu 20 25 30 Ile Val Met Lys Tyr Ile His Tyr Lys Leu Ser Gln Arg Gly Tyr Glu 35 40 45 Trp Asp Ala Gly Asp Val Gly Ala Ala Pro Pro Gly Ala Ala Pro Ala 50 55 60 Pro Gly Ile Phe Ser Ser Gln Pro Gly His Thr Pro His Pro Ala Ala 65 70 75 80 Ser Arg Asp Pro Val Ala Arg Thr Ser Pro Leu Gln Thr Pro Ala Ala 85 90 95 Pro Gly Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Ser Pro Val Pro Pro Val Val 100 105 110 His Leu Thr Leu Arg Gln Ala Gly Asp Glu Phe Ser Arg Arg Tyr Arg 115 120 125 Arg Asp Phe Ala Glu Met Ser Ser Gln Leu His Leu Thr Pro Phe Thr 130 135 140 Ala Arg Gly Arg Phe Ala Thr Val Val Glu Glu Leu Phe Arg Asp Gly 145 150 155 160 Val Asn Trp Gly Arg Ile Val Ala Phe Phe Glu Phe Gly Gly Val Met 165 170 175 Cys Val Glu Ser Val Asn Arg Glu Met Ser Pro Leu Val Asp Asn Ile 180 185 190 Ala Leu Trp Met Thr Glu Tyr Leu Asn Arg His Leu His Thr Trp Ile 195 200 205 Gln Asp Asn Gly Gly Trp Asp Ala Phe Val Glu Leu Tyr 210 215 220 <210> 7 <211> 221 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 7 Met Gly His His His His His His His His Ser Ala Gly Leu Val Pro 1 5 10 15 Arg Gly Ser Met Ala His Ala Gly Arg Thr Gly Tyr Asp Asn Arg Glu 20 25 30 Ile Val Met Lys Tyr Ile His Tyr Lys Leu Ser Gln Arg Gly Tyr Glu 35 40 45 Trp Asp Ala Gly Asp Val Gly Ala Ala Pro Pro Gly Ala Ala Pro Ala 50 55 60 Pro Gly Ile Phe Ser Ser Gln Pro Gly His Thr Pro His Pro Ala Ala 65 70 75 80 Ser Arg Asp Pro Val Ala Arg Thr Ser Pro Leu Gln Thr Pro Ala Ala 85 90 95 Pro Gly Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Ser Pro Val Pro Pro Val Val 100 105 110 His Leu Thr Leu Arg Gln Ala Gly Asp Asp Phe Ser Arg Arg Tyr Arg 115 120 125 Arg Asp Phe Ala Glu Met Ser Ser Gln Leu His Leu Thr Pro Phe Thr 130 135 140 Ala Arg Gly Leu Phe Ala Thr Val Val Glu Glu Leu Phe Arg Asp Gly 145 150 155 160 Val Asn Trp Gly Arg Ile Val Ala Phe Phe Glu Phe Gly Gly Val Met 165 170 175 Cys Val Glu Ser Val Asn Arg Glu Met Ser Pro Leu Val Asp Asn Ile 180 185 190 Ala Leu Trp Met Thr Glu Tyr Leu Asn Arg His Leu His Thr Trp Ile 195 200 205 Gln Asp Asn Gly Gly Trp Asp Ala Phe Val Glu Leu Tyr 210 215 220 <210> 8 <211> 221 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 8 Met Gly His His His His His His His His Ser Ala Gly Leu Val Pro 1 5 10 15 Arg Gly Ser Met Ala His Ala Gly Arg Thr Gly Tyr Asp Asn Arg Glu 20 25 30 Ile Val Met Lys Tyr Ile His Tyr Lys Leu Ser Gln Arg Gly Tyr Glu 35 40 45 Trp Asp Ala Gly Asp Val Gly Ala Ala Pro Pro Gly Ala Ala Pro Ala 50 55 60 Pro Gly Ile Phe Ser Ser Gln Pro Gly His Thr Pro His Pro Ala Ala 65 70 75 80 Ser Arg Asp Pro Val Ala Arg Thr Ser Pro Leu Gln Thr Pro Ala Ala 85 90 95 Pro Gly Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Ser Pro Val Pro Pro Val Val 100 105 110 His Leu Thr Leu Arg Gln Ala Gly Asp Asp Phe Ser Arg Arg Tyr Arg 115 120 125 Arg Asp Phe Gly Glu Met Ser Ser Gln Leu His Leu Thr Pro Phe Thr 130 135 140 Ala Arg Gly Arg Phe Ala Thr Val Val Glu Glu Leu Phe Arg Asp Gly 145 150 155 160 Val Asn Trp Gly Arg Ile Val Ala Phe Phe Glu Phe Gly Gly Val Met 165 170 175 Cys Val Glu Ser Val Asn Arg Glu Met Ser Pro Leu Val Asp Asn Ile 180 185 190 Ala Leu Trp Met Thr Glu Tyr Leu Asn Arg His Leu His Thr Trp Ile 195 200 205 Gln Asp Asn Gly Gly Trp Asp Ala Phe Val Glu Leu Tyr 210 215 220

Claims (22)

  1. 돌연변이 (i) Gly101Val; (ii) Asp103Tyr; (iii) Asp103Val; (iv) Asp103Glu; (v) Arg129Leu 및 (vi) Ala113Gly 중 적어도 1, 2, 3, 4, 5개 또는 모두를 수반하는 Bcl-2 매개 암의 치료에 사용하기 위한 Bcl-2억제제로서,
    Bcl-2 억제제는 N-(4-하이드록시페닐)-3-{6-[((3S)-3-(4-모르폴리닐메틸)-3,4-디하이드로-2(1H)-이소퀴놀리닐)카르보닐]-1,3-벤조디옥솔-5-일}-N-페닐-5,6,7,8-테트라하이드로-1-인돌리진 카르복사미드(화합물 A) 및 5-(5-클로로-2-{[(3S)-3-(모르폴린-4-일메틸)-3,4-디하이드로이소퀴놀린-2(1H)-일]카르보닐}페닐)-N-(5-시아노-1,2-디메틸-1H-피롤-3-일)-N-(4-하이드록시페닐)-1,2-디메틸-1H-피롤-3-카르복사미드(화합물 B), 또는 이의 약학적으로 허용되는 염으로 구성된 군으로부터 선택되는, Bcl-2 매개 암의 치료에 사용하기 위한 Bcl-2 억제제.
  2. 제1항에 있어서, 암이 Gly101Val 돌연변이를 수반하는, Bcl-2 매개 암의 치료에 사용하기 위한 Bcl-2 억제제.
  3. 제1항에 있어서, 암이 Asp103Tyr 돌연변이를 수반하는, Bcl-2 매개 암의 치료에 사용하기 위한 Bcl-2 억제제.
  4. 제1항에 있어서, 암이 Asp103Val 돌연변이를 수반하는, Bcl-2 매개 암의 치료에 사용하기 위한 Bcl-2 억제제.
  5. 제1항에 있어서, 암이 Asp103Glu 돌연변이를 수반하는, Bcl-2 매개 암의 치료에 사용하기 위한 Bcl-2 억제제.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, Bcl-2 매개 암이 만성 림프구성 백혈병(CLL)인, Bcl-2 억제제.
  7. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 화합물 A가 하이드로클로라이드 염의 형태로 존재하는, Bcl-2 억제제.
  8. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 화합물 B가 하이드로겐 설페이트 염의 형태로 존재하는, Bcl-2 억제제.
  9. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 화합물 B가 하이드로클로라이드 염의 형태로 존재하는, Bcl-2 억제제.
  10. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 화합물 B가 정맥내 투여되는, Bcl-2 억제제.
  11. 돌연변이 (i) Gly101Val; (ii) Asp103Tyr; (iii) Asp103Val; (iv) Asp103Glu; (v) Arg129Leu 및 (vi) Ala113Gly 중 적어도 1, 2, 3, 4, 5개 또는 모두를 수반하는 Bcl-2 매개 암의 치료에 사용하기 위한 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 따른 Bcl-2 억제제를 포함하는 약학적 조성물.
  12. 제11항에 있어서, Gly101Val 돌연변이를 수반하는 Bcl-2 매개 암의 치료에 사용하기 위한, Bcl-2 억제제를 포함하는 약학적 조성물.
  13. 제11항에 있어서, Asp103Tyr 돌연변이를 수반하는 Bcl-2 매개 암의 치료에 사용하기 위한, Bcl-2 억제제를 포함하는 약학적 조성물.
  14. 제11항에 있어서, Asp103Val 돌연변이를 수반하는 Bcl-2 매개 암의 치료에 사용하기 위한, Bcl-2 억제제를 포함하는 약학적 조성물.
  15. 제11항에 있어서, Asp103Glu 돌연변이를 수반하는 Bcl-2 매개 암의 치료에 사용하기 위한, Bcl-2 억제제를 포함하는 약학적 조성물.
  16. 돌연변이 (i) Gly101Val; (ii) Asp103Tyr; (iii) Asp103Val; (iv) Asp103Glu; (v) Arg129Leu 및 (vi) Ala113Gly 중 적어도 1, 2, 3, 4, 5개 또는 모두를 수반하는 Bcl-2 매개 암에 걸린 환자를 민감화시키기 위한 방법으로서,
    상기 환자는 (a) 적어도 하나의 항암제에 불응성이거나, (b) 항암제 치료 후 재발한 경우이거나, (a) 및 (b) 둘 모두이며, 상기 방법은 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 따른 Bcl-2 억제제를 치료학적 유효량으로 상기 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 방법.
  17. Gly101Val 돌연변이를 수반하는 Bcl-2 매개 암에 걸린 환자를 민감화시키기 위한 방법으로서,
    상기 환자는 (i) 적어도 하나의 항암제에 불응성이거나, (ii) 항암제 치료 후 재발한 경우이거나, (i) 및 (ii) 둘 모두이며, 상기 방법은 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 따른 Bcl-2 억제제를 치료학적 유효량으로 상기 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 방법.
  18. 제16항 또는 제17항에 있어서, 항암제가 표적 요법인, 방법.
  19. 제18항에 있어서, 암이 만성 림프구성 백혈병(CLL)인, 방법.
  20. 제18항 또는 제19항에 있어서, 표적 요법이 베네토클락스(venetoclax)(ABT-199)인, 방법.
  21. 환자에서 Bcl-2 매개 암을 치료하는 방법으로서,
    (a) 상기 환자로부터 생물학적 샘플을 수득하고, 생물학적 샘플이 돌연변이 (i) Gly101Val; (ii) Asp103Tyr; (iii) Asp103Val; (iv) Asp103Glu; (v) Arg129Leu 및 (vi) Ala113Gly 중 적어도 1, 2, 3, 4, 5개 또는 모두를 포함하는 지의 여부를 검출하는 단계;
    (b) 상기 환자를 베네토클락스에 대한 감소된 반응 가능성을 갖는 환자로서 식별하는 단계;
    (c) 이렇게 검출된 돌연변이의 존재에 기초하여 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 따른 Bcl-2 억제제를 치료학적 유효량으로 상기 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
  22. 환자에서 Bcl-2 매개 암을 치료하는 방법으로서,
    (a) 상기 환자로부터 생물학적 샘플을 수득하고, 생물학적 샘플이 Gly101Val 돌연변이를 포함하는지의 여부를 검출하는 단계;
    (b) 상기 환자를 베네토클락스에 대한 감소된 반응 가능성을 갖는 환자로서 식별하는 단계;
    (c) Gly101Val 돌연변이의 존재에 기초하여 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 따른 Bcl-2 억제제를 치료학적 유효량으로 상기 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
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