KR20210156925A

KR20210156925A - 유기산-올리고펩타이드 복합체를 유효성분으로 포함하는 피부 노화 및 주름 개선용 조성물

Info

Publication number: KR20210156925A
Application number: KR1020200074465A
Authority: KR
Inventors: 강성진; 박문영; 김다은
Original assignee: 애니젠 주식회사
Priority date: 2020-06-18
Filing date: 2020-06-18
Publication date: 2021-12-28
Also published as: KR102507392B1

Abstract

본 발명은 유기산-올리고펩타이드 복합체를 유효성분으로 포함하는 피부 노화 및 주름 개선용 화장료 조성물에 관한 것으로, 본 발명의 유기산-올리고펩타이드 복합체는 세포 독성이 없어 장기간 사용하여도 부작용이 없고 항산화 활성 및 피부 주름 개선 효과가 우수하므로, 피부 노화 방지 및 주름 개선을 위한 화장료, 식품 및 피부외용제의 원료로 유용하게 사용될 수 있을 것이다.

Description

유기산-올리고펩타이드 복합체를 유효성분으로 포함하는 피부 노화 및 주름 개선용 조성물{Composition for improving skin aging and wrinkle comprising organic acid-oligopeptide complex as effective component}

본 발명은 유기산-올리고펩타이드 복합체를 유효성분으로 포함하는 피부 주름 개선용 및 피부 노화 방지용 조성물에 관한 것이다.

피부는 주로 외부의 물리적 손상 및 화학물질로부터 인체를 보호하고, 세균, 곰팡이, 바이러스 등이 피부로 침범하는 것을 방지하며, 수분 손실을 막는 보호장벽 역할을 한다. 피부의 구조를 보면 표피, 진피, 피하지방과 같은 3개 층으로 구성되고 표피는 이중 가장 얇은 층으로 피부의 보습 및 보호를 담당하는 중요한 기능을 한다.

최근 들어, 기후 변화 또는 환경 오염 등으로 인해 강한 자외선에 노출되는 경우가 많아짐에 따라 피부의 수분 손실 및 피부 노화가 가속화되고 있다. 피부 노화는 연령이 증가함에 따라 생체의 생리적인 기능이 저하되어 자연적으로 유발되는 내인성 생리적 노화와 장기간 자외선 노출에 의해 진행되는 외인성 광노화(photoaging)로 구분될 수 있다. 내인성 피부 노화의 임상적 특징은 피부가 얇아지고 탄력성이 감소하는 것이고, 조직학적 소견으로는 표피 및 진피의 두께가 얇아지고 혈관이 감소되며 진피 내 섬유아세포의 수가 감소하게 되는 것이다. 또한, 외인성 피부 노화인 광노화의 임상적 특징은 피부가 거칠고 탄력성이 없어지며 불규칙한 색소 침착이 발생되고 깊은 주름살이 증가되는 것이다.

주름의 생성 원인으로는 여러 가지가 보고되고 있는데, 우선 피부가 과다한 자외선에 노출되면 피부 구성 성분인 콜라겐 분해가 촉진되어 피부가 탄력을 잃고 주름이 생성될 수 있다. 또한, 과도한 온도 변화, 습도 저하 또는 바람 등에 의해 피부가 지나치게 건조해지면 외부에 대한 방어벽으로서의 피부 기능이 저하되어 주름이 생기기도 한다. 그리고 피부가 활성 산소종이나 자유라디칼에 노출되면 산화 작용에 의해 과산화 지질이 생성되고, 그로 인해 콜라겐 등의 피부 구성 단백질이 변형 또는 감소되어 주름이 생성될 수 있다. 이러한 외부적 요인과 내부적 요인에 의한 주름 발생을 억제하고자 다양한 화장품 조성물이 연구되고 있다.

한편, 한국등록특허 제2091587호에는 '감마올리고펩타이드 또는 그 염을 함유하는 주름개선용 화장료 조성물'이 개시되어 있고, 한국등록특허 제1472476호에는 아미노산 서열 YIGSR로 구성되는 '콜라겐 합성능이 있는 신규 펩타이드 유도체 및 그의 용도'가 개시되어 있으나, 본 발명의 '유기산-올리고펩타이드 복합체를 유효성분으로 포함하는 피부 주름 개선용 및 피부 노화 방지용 조성물'에 대해서는 기재된 바가 없다.

본 발명은 상기와 같은 요구에 의해 도출된 것으로서, 본 발명자들은 올리고펩타이드의 N-말단에 유기산인 로즈마린산(rosmarinic acid), 페룰산(ferulic acid) 또는 아젤라산(azelaic acid)을 결합시켜 유기산-올리고펩타이드 복합체를 제조한 후 상기 제조된 복합체가 올리고펩타이드 단독 또는 유기산 단독에 비해 자유라디칼 소거 활성 및 콜라겐 합성을 증가시키고, 세포 내 콜라게나아제(collagenase) 및 엘라스타아제(elastase) 활성을 억제시킬 수 있음을 확인함으로써, 본 발명을 완성하였다.

상기 과제를 해결하기 위해, 본 발명은 서열번호 1 내지 12의 아미노산 서열로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나의 올리고펩타이드의 아미노 말단에 로즈마린산(rosmarinic acid), 페룰산(ferulic acid) 및 아젤라산(azelaic acid)으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나의 유기산이 결합된 유기산-올리고펩타이드 복합체를 제공한다.

또한, 본 발명은 상기 유기산-올리고펩타이드 복합체를 유효성분으로 포함하는 피부 주름 개선 및 항노화용 화장료 조성물, 건강기능식품 조성물 및 피부 외용제를 제공한다.

본 발명의 유기산-올리고펩타이드 복합체는 세포 독성이 없어 장기간 사용하여도 부작용이 없고 항산화 활성 및 피부 주름 개선 효과가 우수하므로, 피부 노화 방지 및 주름 개선을 위한 화장료, 식품 및 피부외용제의 원료로 유용하게 활용될 수 있을 것으로 기대된다.

도 1은 올리고펩타이드의 N-말단에 로즈마린산(rosmarinic acid) 또는 페룰산이 결합되고, C-말단에 카복시기(COOH) 또는 아미노기(CONH₂)가 결합된 유기산-올리고펩타이드 복합체를 대상으로 HPLC(high-performance liquid chromatography; A, C, E) 및 MALDI-TOF(Matrix-assisted laser desorption ionization time of flight mass spectrometry; B, D, F) 분석을 수행한 결과이다. A 및 B: 로즈마린산-RADA-OH 복합체, C 및 D: 페룰산-YYRAD-OH 복합체, E 및 F: 로즈마린산-RADA-NH₂ 복합체.
도 2 내지 도 6은 서열번호 1 내지 12의 아미노산으로 이루어진 올리고펩타이드의 N-말단에 유기산인 로즈마린산, 페룰산(ferulic acid) 또는 아젤라산(azelaic acid)이 결합된 유기산-올리고펩타이드 복합체의 화학 구조식이다. 구조식에서 Y 부분은 올리고펩타이드의 C-말단 영역으로 카복시기(-OH) 또는 아미노기(-NH₂)가 결합될 수 있다.
도 7 내지 도 12는 올리고펩타이드의 N-말단에 로즈마린산, 페룰산 또는 아젤라산이 결합되고 올리고펩타이드의 C-말단에 카복시기(-OH) 또는 아미노기(-NH₂)가 결합된, 유기산-올리고펩타이드-OH 복합체 또는 유기산-올리고펩타이드-NH₂ 복합체를 대상으로 HPLC를 수행한 결과이다.

본 발명의 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 서열번호 1 내지 12의 아미노산 서열로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나의 올리고펩타이드의 아미노 말단에 로즈마린산(rosmarinic acid), 페룰산(ferulic acid) 및 아젤라산(azelaic acid)으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나의 유기산이 결합된 유기산-올리고펩타이드 복합체 및 상기 유기산-올리고펩타이드 복합체를 유효성분으로 포함하는 피부 주름 개선 및 항노화용 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명의 유기산-올리고펩타이드 복합체는 AP(서열번호 1), DA(서열번호 2), AAP(서열번호 3), YRA(서열번호 4), YYR(서열번호 5), LDA(서열번호 6), ADA(서열번호 7), YYRA(서열번호 8), DLDA(서열번호 9), RADA(서열번호 10), YYRAD(서열번호 11) 및 YRADA(서열번호 12)로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나의 올리고펩타이드의 N-말단에 로즈마린산, 페룰산 및 아젤라산으로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나의 유기산이 결합된 것일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 또한, 올리고펩타이드의 C-말단에 카복실기(-COOH) 또는 아미노기(-CONH₂)가 결합된 유기산-올리고펩타이드-OH; 또는 유기산-올리고펩타이드-NH₂ 형태일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명의 유기산-올리고펩타이드 복합체는 정상 세포에서 독성이 없고 올리고펩타이드 또는 유기산 단독에 비해 자유라디칼 소거 활성이 우수하며, 세포 내에서 콜라겐 합성을 증가시키고 콜라게나아제(collagenase) 활성 및 엘라스타아제(elastase) 활성을 저해시킬 수 있으므로 피부 주름 개선 및 항노화에 효과가 있다.

본 발명의 화장료 조성물은 유기산과 올리고펩타이드가 결합된 복합체를 유효성분으로 포함하며, 상기 유기산-올리고펩타이드 복합체는 서열번호 1 내지 12의 아미노산 서열로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나의 올리고펩타이드의 N-말단에 로즈마린산, 페룰산 및 아젤라산으로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나의 유기산의 카복실기(-COOH)가 결합된 것일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

구체적으로는, 본 발명의 복합체는 올리고펩타이드의 N-말단에 유기산의 카복실기(-COOH)가 결합된 형태로, 로즈마린산-올리고펩타이드는 하기 화학식 1로 표시되는 로즈마린산의 X 위치에 서열번호 1 내지 12의 아미노산으로 이루어진 올리고펩타이드 중 어느 하나가 결합된 것일 수 있고; 페룰산-올리고펩타이드는 하기 화학식 2로 표시되는 페룰산의 X 위치에 서열번호 1 내지 12의 아미노산으로 이루어진 올리고펩타이드 중 어느 하나가 결합된 것일 수 있으며; 아젤라산-올리고펩타이드는 하기 화학식 3으로 표시되는 아젤라산의 X 위치에 서열번호 1 내지 12의 아미노산으로 이루어진 올리고펩타이드 중 어느 하나가 결합된 형태일 수 있다.

또한, 본 발명의 화장료 조성물에 있어서, 상기 유기산-올리고펩타이드 복합체는 올리고펩타이드의 C-말단에 카복실기(-COOH) 또는 아미노기(-CONH₂)가 결합된 형태일 수 있고, 바람직하게는 유기산-올리고펩타이드-OH; 또는 유기산-올리고펩타이드-NH₂ 형태일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명의 화장료 조성물에 있어서, 상기 유기산-올리고펩타이드 복합체는 피부 주름에 영향을 미치는 콜라게나아제(collagenase) 및 엘라스타제(elastase)의 활성 부위와 결합하여 작용하는 올리고펩타이드 서열 YYRAD, PDLDA 또는 AAPV를 단축하거나 순서 변경 및 유사 아미노산으로 대체한 올리고펩타이드를 적용한 것으로, 정상 세포에 독성이 없고, 올리고펩타이드 또는 유기산 단독에 비해 자유라디칼 소거 활성이 우수하며, 세포 내 콜라게나아제 활성 및 엘라스타아제 활성을 저해시켜 피부 주름 개선 및 항노화에 효과가 있다.

본 발명의 화장료 조성물은 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 중에서 선택된 어느 하나의 제형인 것이 바람직하며, 더 바람직하게는 피부외용 연고, 크림, 유연화장수, 영양화장수, 팩, 에센스, 헤어토닉, 샴푸, 린스, 헤어 컨디셔너, 헤어 트리트먼트, 젤, 스킨 로션, 스킨소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스처 로션, 영양로션, 마사지 크림, 영양크림, 아이크림, 모이스처 크림, 핸드 크림, 파운데이션, 영양에센스, 선스크린, 비누, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디 로션 및 바디 클렌저로 이루어지는 군으로부터 선택된 어느 하나의 제형을 가질 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 이들 각 제형의 조성물은 그 제형의 제제화에 필요하고 적절한 각종의 기제와 첨가물을 함유할 수 있으며, 이들 성분의 종류와 양은 당업자에 의해 용이하게 선정될 수 있다.

본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물섬유, 식물섬유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산아연 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액의 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용매화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.

본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클렌징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유지, 리놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

본 발명은 또한, 로즈마린산, 페룰산 및 아젤라산으로 이루어진 군으로 선택된 어느 하나의 유기산; 및 올리고펩타이드;가 결합된 복합체를 유효성분으로 포함하는 피부 주름 개선 및 항노화용 건강기능식품 조성물을 제공한다.

본 발명의 건강기능식품 조성물에서, 유기산-올리고펩타이드 복합체는 상기 전술한 것과 같다.

본 발명의 건강기능식품 조성물은, 세포 독성이 없으면서 올리고펩타이드 또는 유기산 단독에 비해 자유라디칼 소거 활성 및 콜라겐 합성을 증가시키는 효과와 세포 내 콜라게나아제(collagenase) 활성 및 엘라스타아제(elastase) 활성을 저해시키는 효과가 우수한 유기산-올리고펩타이드 복합체를 유효성분으로 포함하고 있어, 피부의 주름 개선 및 항노화에 효과가 있다.

본 발명의 건강기능식품 조성물은 이너뷰티(inner beauty) 푸드 형태로 섭취함으로써 더욱 우수한 효과를 갖는 장점을 가진다. 상기 이너뷰티(inner beauty)는 '먹는 화장품 또는 뷰티 푸드'로 일컬어지는 푸드로, 피부에 좋은 여러 가지 성분을 몸속으로 흡수시켜 피부 체질을 건강하게 바꾸는 식품을 지칭하며, 피부 타입에 맞는 화장품을 고르듯 피부 컨디션과 라이프스타일을 고려해 개개인에게 맞는 이너뷰티 푸드를 선택하여 섭취할 수 있다. 보다 바람직하게는 상기 화장료 조성물을 포함하는 화장품과 상기 추출물을 포함하는 이너뷰티 푸드를 혼용할 경우, 화장품만 사용하는 것에 비해 피부 주름 개선 및 노화 방지 효과가 월등히 높아져 더욱 효과적인 피부 주름 개선 및 노화 방지 효과를 볼 수 있는 장점을 가진다.

본 발명의 유기산-올리고펩타이드 복합체를 식품첨가물로 사용하는 경우, 상기 유기산-올리고펩타이드 복합체를 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효성분은 그의 사용 목적(예방 또는 개선)에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 일반적으로, 식품 또는 음료의 제조시에 본 발명의 유기산-올리고펩타이드 복합체는 원료에 대하여 15 중량부 이하, 바람직하게는 10 중량부 이하의 양의로 첨가된다. 그러나 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 안전성 면에서 아무런 문제가 없는 범위의 양으로 사용될 수 있다.

상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 건강기능식품 조성물을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소시지, 빵, 초콜릿, 캔디류, 스낵류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차 드링크제, 알콜 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강식품을 모두 포함한다. 상기 음료는 탄산음료, 기능성이온음료, 쥬스(예를 들어, 사과, 배, 포도, 알로에, 감귤, 복숭아, 당근, 토마토쥬스 등), 식혜 등을 포함한다.

본 발명의 기능성 식품은 식품 제조 시에 통상적으로 첨가되는 성분을 포함하며, 예를 들어, 단백질, 탄수화물, 지방, 영양소 및 조미제를 포함한다. 예컨대, 드링크제로 제조되는 경우에는 유효성분 이외에 천연 탄수화물 또는 향미제를 추가 성분으로서 포함시킬 수 있다. 상기 천연 탄수화물은 모노사카라이드(예컨대, 글루코오스, 프럭토오스 등), 디사카라이드(예컨대, 말토스, 수크로오스 등), 올리고당, 폴리사카라이드(예컨대, 덱스트린, 시클로덱스트린 등) 또는 당알코올(예컨대, 자일리톨, 소르비톨, 에리쓰리톨 등)인 것이 바람직하다. 상기 향미제는 천연 향미제(예컨대, 타우마틴, 스테비아 추출물 등)와 합성 향미제(예컨대, 사카린, 아스파르탐 등)를 이용할 수 있다. 상기 건강기능식품 조성물 외에 여러가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 더 함유할 수 있다.

상기 건강기능식품 조성물 이외에 여러 가지 영양제, 비타민, 저해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 더 함유할 수 있다. 이러한 상기 첨가되는 성분의 비율은 크게 중요하진 않지만 본 발명의 건강기능식품 조성물 100 중량부에 대하여, 0.01 내지 0.1 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.

본 발명은 또한, 로즈마린산, 페룰산 및 아젤라산으로 이루어진 군으로 선택된 어느 하나의 유기산; 및 올리고펩타이드;가 결합된 복합체를 유효성분으로 포함하는 피부 주름 개선 및 항노화용 피부 외용제를 제공한다.

본 발명의 피부 외용제는 당업계의 공지기술을 참조하여 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있다. 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 유연 화장수, 영양 화장수, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 에센스, 에멀전, 팩, 세안제, 겔, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클린싱, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니며, 보다 상세하게는, 유연 화장수, 영양 화장수, 영양크림, 마사지크림, 에센스, 아이크림, 클렌징크림, 클렌징폼, 클렌징워터, 마스크팩, 스프레이 또는 파우더의 제형으로 제조될 수 있다.

상기 유기산-올리고펩타이드 복합체를 피부 외용제로 이용하기 위하여 추가로 지방 물질, 유기 용매, 용해제, 농축제 및 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온봉쇄제 및 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 또는 피부용 외용제에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 피부 과학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다. 또한, 상기 성분들은 피부 과학 분야에서 일반적으로 사용되는 양으로 도입될 수 있다.

이하, 본 발명을 실시예에 의해 상세히 설명한다. 단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다.

제조예 1. 유기산-올리고펩타이드 복합체의 제조

Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Asp(OtBu)-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Leu-OH 등의 아미노산 원료, HOBT 및 DIC의 합성 원료 및 아마이드 레진(Rink Amide-MBHA Resin)은 GL Biochem(중국)에서 구매하였고, 트리틸 레진(2-chloro trithylchloride resin)은 Bead Tech에서 구매하였다. 페룰산 및 아젤라산 등의 유기산은 TCI(TOKYO CHEMICAl INDUSTRY CO., LTD.)에서 그리고 로즈마린산은 TRC(캐나다)에서 구매하였으며, AcOH과 DIEA는 각각 J.T Banker, Alfa aesar 제품을 구입하였다. 나머지 일반 원료(DMF, DIEA, DCM, pip, TFA)는 대정화금에서, 정제에 사용된 EtOH은 MERCK에서 구매하여 사용하였다. 본 발명에서 사용된 원료의 명칭과 약어는 표 1과 같다.

본 발명에서 사용된 원료 정보

표준명	영문명	약어
1-하이드록시벤조트리아졸	1-Hydroxybenzotriazole hydrate	HOBT
아세트산	Acetic acid	AcOH
디클로로메탄	DCM	DCM
정제수	Distilled water	D.W.
에탄올	Ethanol	EtOH
플루오레닐메틸옥시카르보닐 보호기	Fluorenylmethyloxycarbonyl protecting group	Fmoc
N,N-다이아이소프로필카보다이이미드	N,N-diisopropylcarbodiimide	DIC
N,N-다이아이소프로필에틸아민	N,N-diisopropylethylamine	DIEA
N,N-다이메틸포름아마이드	N,N-Dimethylformamide	DMF
피페리딘	Piperidine	Pip
트리플루오로아세트산	Trifluoroacetic acid	TFA

1-1. rosmarinic acid-RADA-OH 제조

여과막이 장착된 고상(Solid-phase) 합성반응기에 트리틸 레진 1.04 g(1 mmol, 치환율: 0.96 mmol/g)을 반응기에 가하고, DCM 용매로 약 2회 세척한 후 실온에서 30분간 팽윤시켰다. 팽윤시킨 레진을 감압 하에서 여과막을 통해 용매를 제거하고 상기 레진에 Fmoc-Ala-OH(0.62 g, 1 mmol, 2당량)을 DMF로 녹인 후 DCM을 레진에 첨가하였고, 밀도를 고려한 DIEA(0.75 ㎖, 1 mmol, 4당량)를 첨가한 후 반응기를 이용하여 실온에서 4시간 이상 반응시켰다.

레진 Fmoc 탈보호 과정은 감압 하에서 여과막을 통하여 용매를 제거하고 DCM 용매로 5분간 2회 세척하였다. 감압 하에서 여과하여 반응액을 제거한 후, 20% Pip이 포함된 DMF 용액으로 실온에서 15분간 거쳐서 Fmoc 제거 반응을 2회 실시하고 용액을 제거한 다음 DMF 용액으로 3분간 6회 세척하였다. 반응기에 Fmoc-Asp(OtBu)-OH(1.23 g, 1 mmol, 3당량)을 DMF로 녹인 후 2M HOBT 1.5 ㎖(1 mmol, 3당량)과 함께 레진에 첨가하여 섞어주고 2M DIC 1.5 ㎖(1 mmol, 3당량)을 넣어 실온에서 4시간 이상 반응시켰다. 이어서 Fmoc-Asp(OtBu)-OH(1.23 g, 1 mmol, 3당량), Fmoc-Arg(Pbf)-OH(1.95 g, 1 mmol, 3당량) 및 로즈마린산(rosmarinic acid, 1.08 g, 1 mmol, 3당량)을 같은 방법으로 레진에 도입하였다.

반응이 종료되면 감압하에서 여과막을 통하여 용매를 제거하여 DMF 용액으로 3분 2회 세척하고 DCM 용액으로 3분 3회 세척한 후 용매를 거의 벤트시켜 제거하였다. 상기에서 얻은 레진에 TFA:DCM:D.W.(70:29:1) 혼합액을 넣은 후 실온에서 4시간 교반시킨 분리(Cleavage)액을 얻었다. 분리가 완료된 용매를 공기를 이용해 반 정도 제거하고, 에틸에테르(Ethyl ether)를 넣어 결정화시켜 생성된 고체를 여과하여 정제 전의 조(Crude)제품을 얻었다. 상기 조제품을 25% EtOH/D.W. 혼합액에 용해시키고 0.22 μm 필터로 여과하여, 하기와 같은 구배(gradient) 조건하에서 HPLC로 정제 후 동결 건조하여 로즈마린산-RADA-OH 복합체를 수득하였다(표 2).

최종 생성물에 대한 HPLC(high-performance liquid chromatography) 분석과 MALDI-TOF(Matrix-assisted laser desorption ionization time of flight mass spectrometry) 분석을 수행한 결과는 도 1A 및 1B에 나타내었다.

A. 기기: Shimadzu 6A B. 컬럼: Shim-pack PREP-ODS(H) KIT semi prep(Shimadzu, 20 mm×250 mm, Particle size: 5 μm, Pore size: 100 Å, Stationary Phase: Daisogel ODS-AP) C. 용매의 조성: 용매 A : 1% AcOH/ D.W. , 용매 B : 1% AcOH/ EtOH D. 구배(Gradient): 안정화 10 분 E. 유속(Flow rate) : 12 ㎖/min F. 흡광도: UV 230 nm G. 온도: 35℃
HPLC 조건
시간(분)	용매 A(%)	용매 B(%)
0-15	78→63	22→37
15-16	63→5	37→95
16-24	5	95

1-2. ferulic acid-YYRAD-OH 제조

여과막이 장착된 고상 합성반응기에 트리틸 레진 1.04 g(1 mmol, 치환율: 0.96 mmol/g)을 반응기에 가하고 DCM 용매로 약 2회 세척한 후 실온에서 30분 팽윤시켰다. 팽윤시킨 레진을 감압 하에서 여과막을 통해 용매를 제거하고, 상기 레진에 Fmoc-Asp(OtBu)-OH(0.82 g, 1 mmol, 2당량)을 DMF로 녹인 후 DCM을 레진에 첨가하였고, 밀도를 고려한 DIEA(0.75 ㎖, 1 mmol, 4당량)를 첨가한 다음 반응기를 이용하여 실온에서 4시간 이상 반응시켰다.

레진 Fmoc 탈보호 과정은 감압 하에서 여과막을 통하여 용매를 제거하고 DCM 용매로 5분간 2회 세척하였다. 감압 하에서 여과하여 반응액을 제거한 후 20% Pip이 포함된 DMF 용액으로 실온에서 15분간 거쳐서 Fmoc 제거 반응을 2회 실시하고 용액을 제거한 다음 DMF 용액으로 3분간 6회 세척하였다. 반응기에 Fmoc-Ala-OH(0.93 g, 1 mmol, 3당량)을 DMF로 녹이고 2M HOBT 1.5 ㎖(1mmol, 3당량)과 함께 레진에 첨가하여 섞어준 후 2M DIC 1.5 ㎖(1mmol, 3당량)을 넣고 실온에서 4시간 이상 반응시켰다. 이어서 Fmoc-Arg(Pbf)-OH(1.95 g, 1 mmol, 3당량), Fmoc-Tyr(tBu)-OH(1.37 g, 1 mmol, 3당량), Fmoc-Tyr(tBu)-OH(1.37 g, 1 mmol, 3당량) 및 페룰산(ferulic acid, 0.58 g, 1 mmol, 3당량)을 상기와 같은 방법으로 레진에 도입하였다.

반응이 종료되면 감압하에서 여과막을 통하여 용매를 제거하고 DMF 용액으로 3분 2회 세척, DCM 용액으로 3분 3회 세척한 다음 용매를 거의 벤트시켜 제거하였다. 상기에서 얻은 레진에 TFA:DCM:D.W.(70:29:1) 혼합액을 넣은 후 실온에서 4시간 교반시킨 분리액을 얻었다. 분리가 완료된 용매를 공기를 이용하여 반 정도 제거한 후 에틸에테르를 넣어 결정화시켜 생성된 고체를 여과하여 정제 전의 조제품을 얻었다. 상기 조제품을 30% EtOH/D.W. 혼합액에 용해시키고 0.22 μm 필터로 여과하여, 하기와 같은 구배 조건하에서 HPLC로 정제 후 동결 건조하여 페룰산-YYRAD-OH 복합체를 수득하였다(표 3).

최종 생성물에 대한 HPLC 분석과 MALDI-TOF 분석을 수행한 결과는 도 1C 및 1D에 나타내었다.

A. 기기: Shimadzu 6A B. 컬럼: Shim-pack PREP-ODS(H) KIT semi prep (Shimadzu, 20 mm×250 mm, Particle size: 5 μm, Pore size: 100 Å, Stationary Phase: Daisogel ODS-AP) C. 용매의 조성: 용매 A : 1% AcOH/ D.W. , 용매 B : 1% AcOH/ EtOH D. 구배(Gradient): 안정화 10 분 E. 유속(Flow rate) : 12 ㎖/min F. 흡광도: UV 230 nm G. 온도: 35℃
HPLC 조건
시간(분)	용매 A(%)	용매 B(%)
0-15	77→62	23→38
15-16	62→5	38→95
16-24	5	95

1-3. rosmarinic acid-RADA-NH ₂ 제조

여과막이 장착된 고상 합성반응기에 아마이드 레진(Rink Amide-MBHA Resin) 1.28 g(1 mmol, 치환율: 0.78 mmol/g)을 반응기에 가하고 DCM 용매로 약 2회 세척한 후 실온에서 30분 팽윤시켰다.

레진 Fmoc 탈보호 과정은 감압 하에서 여과막을 통하여 용매를 제거하고 DCM 용매로 5분간 2회 세척하였고, 감압 하에서 여과하여 반응액을 제거한 후 20% Pip이 포함된 DMF 용액으로 실온에서 15분간 거쳐서 Fmoc 제거 반응을 2회 실시하고 용액을 제거한 다음 DMF 용액으로 3분간 6회 세척하였다. 반응기에 Fmoc-Ala-OH(0.93 g, 1 mmol, 3당량)을 DMF로 녹이고, 2M HOBT 1.5 ㎖(1mmol, 3당량)과 함께 레진에 첨가하여 섞어준 후 2M DIC 1.5 ㎖(1mmol, 3당량)을 넣고 실온에서 4시간 이상 반응시켰다. 이어서 Fmoc-Asp(OtBu)-OH(1.23 g, 1 mmol, 3당량), Fmoc-Ala-OH(0.93 g, 1 mmol, 3당량), Fmoc-Arg(Pbf)-OH(1.95 g, 1 mmol, 3당량) 및 로즈마린산(rosmarinic acid, 1.08 g, 1 mmol, 3당량)을 상기와 같은 방법으로 레진에 도입하였다.

반응이 종료되면 감압하에서 여과막을 통하여 용매를 제거하고 DMF 용액으로 3분 2회 세척, DCM 용액으로 3분 3회 세척한 후 용매를 거의 벤트시켜 제거하였다. 상기에서 얻은 레진에 TFA:DCM:D.W.(70:29:1) 혼합액을 넣은 후 실온에서 4시간 교반시킨 분리액을 얻었다. 분리가 완료된 용매를 공기를 이용해 반 정도 제거한 후 에틸에테르를 넣어 결정화시켜 생성된 고체를 여과하여 정제 전의 조제품을 얻었다. 상기 조제품을 정제하는 과정과 로즈마린산-RADA-NH₂ 복합체의 HPLC 분석 및 MALDI-TOF 분석 방법은 상기 실시예 1-1과 같으며, 최종 생성물에 대한 HPLC 분석과 MALDI-TOF 분석을 수행한 결과는 도 1E 및 1F에 나타내었다.

서열번호 1 내지 12의 아미노산 서열로 이루어진 올리고펩타이드의 N-말단에 유기산의 카복실기가 결합되어 형성된 rosmarinic acid-올리고펩타이드 복합체, ferulic acid-올리고펩타이드 복합체 및 azelaic acid-올리고펩타이드 복합체의 화학 구조식은 도 2 내지 도 6에 나타내었으며, 화학 구조식에서 올리고펩타이드의 C-말단에 해당하는 Y 부분에 -OH 또는 -NH₂가 결합될 수 있다.

또한, 올리고펩타이드의 C-말단에 카복실기 또는 아미노기가 결합된 rosmarinic acid-올리고펩타이드-OH, rosmarinic acid-올리고펩타이드-NH₂, ferulic acid-올리고펩타이드-OH, ferulic acid-올리고펩타이드-NH₂, azelaic acid-올리고펩타이드-OH 및 azelaic acid-올리고펩타이드-NH₂ 복합체를 대상으로 HPLC를 수행한 결과는 도 7 내지 도 12와 같다.

실시예 1. DPPH assay를 이용한 항산화 시험

본 발명의 유기산-올리고펩타이드 복합체의 항산화 활성을 분석하기 위해 DPPH assay를 수행하였다. 구체적으로 에탄올 0.4 ㎖에 0.1 mM의 DPPH 용액(1,1-Diphenyl-2-picryhydrazyl, Sigma D9132-1G) 0.5 ㎖과 각 농도별(0, 6.25, 12.5, 25, 50, 100, 200 μM;) 시료 0.1 ㎖를 첨가하고, 10초간 강하게 볼텍싱한 후 냉암소에서 30분간 반응시켰다. 자유라디칼(free radical)의 양은 분광광도계(spectrophotometer)를 이용하여 517 nm 파장에서 흡광도를 측정하여 구하였다. 양성 대조군으로는 vitamin C(Ascorbic acid, DAE JUNG)를 사용하였으며, 자유라디칼 소거능 계산식은 다음과 같다.

DPPH 자유라디칼 소거능(%)={1-시료 흡광도/Blank의 흡광도)×100}.

자유라디칼 소거능 측정 결과는 하기 표 4 및 표 5에 나타내었으며, SC₅₀은 자유라디칼을 50% 정도 소거할 때의 시료 농도를 의미한다.

항산화 작용이 우수한 것으로 알려진 Ascorbic acid를 양성 대조군으로 이용하여 유기산 펩타이드의 항산화 효과를 비교한 결과, 로즈마린산 펩타이드 복합체 처리군에서 양성 대조군과 유사한 항산화 효과가 있음을 확인하였고, 본 발명의 유기산 복합체들의 항산화 효과가 펩타이드 또는 유기산 단독에 비해 우수함을 확인하였다.

실시예 2. 세포 독성 실험

본 발명의 유기산-올리고펩타이드 복합체 처리에 따른 인간피부섬유아세포(CCD-986sk, Human Dermal Fibroblast cell, ATCC) 생존율은 WST-1 분석을 통해 분석되었다. 구체적으로 인간피부섬유아세포를 1×10⁴ cells/㎖이 되도록 I/F배지(1% Antibiotic-Antimycotic, 10% FBS를 함유하는 IMDM 배지)에 희석하고 96-웰 배양용기에 100 ㎕씩 분주한 후 세포가 플레이트 표면에 부착할 때까지 37℃, 5% CO₂ 배양기 내에서 18시간 정도 배양하였다. 배지를 제거하고 12.5, 25, 50 및 100 μM 농도의 유기산-올리고펩타이드 복합체를 녹인 용액을 각각 100 ㎕씩 분주하고, 24시간 동안 37℃, 5% CO₂ 인큐베이터에서 배양한 후 다시 배지를 제거하였다. IMDM 배지에 10배 희석한 WST-1(Cellvia, LF-EZ1001A) 시약을 100 ㎕씩 분주하고 2시간 동안 반응시킨 후 450 nm에서 흡광도를 측정하였다. 음성 대조군은 시료를 첨가하지 않은 반응액을 사용하였고, 각 시료의 처리에 따른 세포 생존율은 다음과 같은 식을 이용하여 계산하였다.

세포생존율(%)=시료의 흡광도/음성대조군의 흡광도×100.

세포생존율은 하기 표 5 및 6에 나타난 바와 같이, 유기산-올리고펩타이드 복합체 처리군에서 대부분 95~105%이었고, 이를 통해 본 발명의 복합체는 피부 세포에 독성이 없으므로 피부에 안전할 것으로 사료되었다.

실시예 3. 세포 내 콜라겐 생성량 측정 시험

본 발명의 유기산-올리고펩타이드 복합체 처리에 따른 인간피부섬유아세포 내 콜라겐 생성량 측정 시험을 수행하였다. 구체적으로 인간피부섬유아세포 세포를 24-웰 배양용기에 5×10⁴ cells/well로 접종하여 세포가 플레이트 표면에 부착할 때까지 24시간 정도 배양하고, 50 μM로 희석한 유기산-올리고펩타이드 복합체를 포함한 배지로 교환하여 24시간 동안 배양하였다. 배양이 끝나고 상층액을 취하여 배지 중 유리된 Procollagen의 양을 Type I C-peptide(PIP) ELIZA 키트(TAKARA)를 이용하여 450 nm에서 흡광도를 측정하였다. 콜라겐 생성 정도는 총 단백질량으로 보정하여 평가하였고, 양성대조군은 TGF-β1(Transforming growth factor beta 1, Sigma)을 이용하여 비교하였다. 단백질량은 표준용액으로 BSA를 사용하였고, 단백질 정량을 위하여 단백질정량 키트(Pierce™ BCA Protein Assay Kit, Thermo scientific)를 이용하였다. BSA를 증류수에 단계적으로 희석하여 0.98 ㎖의 BCA Protein Assay reagent에 각 농도의 BSA 용액을 20 ㎕씩 넣고 반응시킨 후 562 nm에서 흡광도를 측정하여 BSA Standard curve를 구하였다. 동일하게 24-웰 배양용기에서 배양한 세포 용해액의 흡광도를 측정하여 BSA Standard curve에 적용하여 단백질량을 산출하였다. 음성 대조군은 시료를 첨가하지 않은 반응액을 사용하였고, 각 시료에 대한 세포 내 콜라겐 생성량 증가율은 음성 대조군과 비교하여 산출하였다.

세포 내 콜라겐 생성량은 올리고펩타이드 단독 또는 유기산 단독 처리군에 비해 유기산-올리고펩타이드 복합체 처리군에서 증가하였으며(표 7), 이를 통해 본 발명의 복합체는 콜라겐 생성을 촉진하여 피부 주름 개선에 효과가 있을 것으로 사료되었다.

실시예 4. 세포 내 콜라게나제 활성 억제 시험

본 발명의 유기산-올리고펩타이드 복합체 처리에 따른 인간피부섬유아세포 내 콜라게나제(Collagenase; MMP-1) 활성을 분석하였다. 구체적으로 인간피부섬유아세포를 24-웰 배양용기에 5×10⁴ cells/well로 접종하여 세포가 플레이트 표면에 부착할 때까지 24시간 정도 배양하고, 50 μM로 희석한 유기산-올리고펩타이드 복합체를 포함한 배지로 교환하여 24시간 동안 배양하였다. 배양이 끝난 후 MMP1 Human ELISA 키트(abcam, 일본)를 사용하여 ELISA 방법으로 콜라게나제의 활성을 측정하였다. MMP-1 활성은 총 단백질량으로 보정하여 평가하였고, 양성대조군은 EGCG((-)-Epigallocatechin Gallate, 10 μM)를 이용하여 비교하였다. 단백질량은 표준용액으로 BSA를 사용하였고, 단백질 정량을 위하여 단밸질정량 키트(Pierce™ BCA Protein Assay Kit, Thermo scientific)를 이용하였다. 음성 대조군은 시료를 첨가하지 않은 반응액을 사용하였고, 각 시료에 대한 세포 내 MMP-1 활성은 음성 대조군과 비교하여 산출하였다.

MMP-1의 활성은 올리고펩타이드 단독 또는 유기산 단독 처리군에 비해 유기산-올리고펩타이드 복합체 처리군에서 감소하였고(표 8), 이를 통해 본 발명의 복합체는 MMP-1의 활성을 효과적으로 억제하여 피부 주름 개선에 효과가 있을 것으로 사료되었다.

실시예 5. 엘라스타제 활성 억제 시험

본 발명의 유기산-올리고펩타이드 복합체 처리에 따른 인간피부섬유아세포 내 엘라스타제(Elastase) 활성을 분석하였다. 구체적으로 인간피부섬유아세포를 100 mm 배양 접시에 접종하여 배양한 후 배양된 세포를 PBS(phosphate-buffered saline)로 세척하고 0.1% triton X-100ㆍ0.2M Tris 액(pH 8.0, 염산) 용액을 넣어 녹인다.

상기 용액을 액체 질소에서 냉동 및 해동을 3회 반복하거나 초음파 분쇄하여 세포를 균질화(homogenization)한 다음, 4℃에서 12,000 rpm으로 20분간 원심분리하고 상층액을 취하여 섬유아세포 엘라스타제를 포함하는 효소액을 첨가하였다. 엘라스타제 용액을 Bradford법에 의하여 정량하여 각 웰 당 100 ug의 단백질을 함유하는 양을 96웰에 각각 넣고 0.2 M Tris-HCl 완충액(pH 8.0)을 넣어 88 ㎕가 되도록 하였으며, 검액 10 ㎕씩도 각 웰에 넣어주었다. 엘라스타제의 기질인 STANA(N-succinyl-tri-alanyl-p-nitroanilide, 50 mM) 용액을 2 ㎕씩 각 웰에 넣어주고 37℃에서 배양하였다. 배양 90분 후 405 nm에서 ELISA Reader로 측정하였다. 양성 대조군은 phosphoramidon(10 μM)을 이용하여 비교하였고, 음성 대조군은 시료를 첨가하지 않은 반응액을 사용하였다. 각 시료에 대한 세포 내 엘라스타제 활성은 음성 대조군과 비교하여 산출하였다.

엘라스타제 활성은 올리고펩타이드 단독 또는 유기산 단독에 비해 유기산-올리고펩타이드 처리군에서 감소하였고(표 9), 이를 통해 본 발명의 복합체는 엘라스타제의 활성을 효과적으로 억제하여 피부 주름 개선에 효과가 있을 것으로 사료되었다.

실시예 6. 피부자극시험

본 발명의 유기산-올리고펩타이드 복합체의 인체 피부에 대한 자극 유무를 확인하기 위해 외부임상시험 전문기관인 더마프로에 의뢰하여 하기 표 10의 조성으로 기초 에센스 조성물을 제조한 후 피부첩포시험(Human patch test)을 수행하였다. 피부첩포시험은 20~60세(42.06±8.37세) 피부질환이 없는 건강한 여성 31명을 대상으로 실시하였다. 로즈마린산-RADA-OH 복합체 또는 페룰산-YYRAD-OH 복합체가 0.01% 또는 0.1%로 함유된 기초 에센스 용액을 반 데르 벤드(Van der Bend)를 이용하여 등 부위에 도포하고 24시간이 지난 후 에센스 용액을 제거하였다. 제거 20분 후와 24분 후에 PCPC(Personal Care Products Council quideline 2014)에 따라 평가하였다. 평가 기준과 자극지수의 계산법은 각각 하기 표 11 및 표 12에 나타내었다.

본 발명의 유기산-올리고펩타이드가 함유된 에센스 조성

번호	원료	함량 (중량%)
1	펩타이드 복합체	적량 (0.1% or 0.01%)
2	글리세린	5.0
3	다이프로필렌글라이콜	5.0
4	베타-글루칸	3.0
5	사이클로메티콘	3.0
6	다이메티콘	1.0
7	잔탄검	0.24
8	카보머	0.1
9	산화방지제	적량
10	향료	적량
11	방부제	적량
12	정제수	적량

평가기준

Grade	평가기준의 설명
+1	Slight erythema (약간의 홍반)
+2	Moderate erythema, possibly with barely perceptible edema at the margin, papules may be present(보통의 홍반, 가장자리에 약간의 부종 또는 구진)
+3	Moderate erythema, with generalized edema (보통의 홍반, 전체적 부종)
+4	Severe erythema with severe edema, with or without vesicles (소포 유무에 상관없이, 심한 부종과 심한 홍반)
+5	Severe reaction spread beyond the area of the patch (패치 부착 부위를 넘어서는 심각한 반응)

본 발명의 유기산-올리고펩타이드 복합체가 함유된 에센스를 피부에 도포한 결과 피부의 반응도(Response) 값이 0인 것을 확인하였고(표 13), 이를 통해 본 발명의 복합체는 저자극 범주의 물질로써 인체 사용 시 자극이 없을 것으로 사료되었다.

실시예 7. 피부 주름개선 효과 측정

본 발명의 로즈마린산-RADA-OH 복합체 또는 페룰산-YYRAD-OH 복합체 사용 시 인체의 피부 주름개선 효과를 알아보기 위하여 외부임상시험 전문기관인 더마프로에 의뢰하여 주름이 있는 30대 이상 여성을 대상으로 인체적용시험을 실시하였다. 그룹 당 20명씩으로 하여 상기 표 11의 에센스를 사용법에 따라 얼굴의 좌측 또는 우측 시험부위에 사용하도록 하였고, 평가는 제품 사용 전과 사용 4주 후 시점에 진행하였다. 피부 주름은 3차원 피부 측정 장치인 PRIMOS^®(GFMesstechnik GmbH, 독일)를 이용하여 좌측 또는 우측의 눈꼬리 주름, 눈 밑 부위의 주름 및 팔자 부위의 주름을 측정하였고, 각 평가 시점마다 촬영된 영상 이미지는 매칭(matching) 기능을 이용하여 동일한 부위를 측정 및 비교하였고, 주름 파라미터(wrinkle analysis)를 이용하여 피부 주름의 변화를 분석하였다.

주름 파라미터를 이용한 분석은 1: Average depth of wrinkles(주름의 평균 깊이), 2: Mean depth biggest wrinkle(가장 큰 주름의 평균 깊이), 3: Max. depth biggest wrinkle(가장 큰 주름의 최대 깊이), 4: Total wrinkle area(전체 주름의 면적), 5: Total wrinkle volume(전체 주름의 부피), 6: Total length of wrinkles(전체 주름의 길이), 7: Ra(산술 평균 거칠기), 8: Ry(최대 높이-산 높이와 골 깊이의 합)을 통해 수행되었다. 모든 데이터는 SPSS Package Program을 이용하여 통계적 유의성을 검증하였고, 통계학적 유의수준은 p 값 0.05 미만으로 정하였다.

로즈마린산-RADA-OH 복합체 또는 페룰산-YYRAD-OH 복합체가 함유된 에센스를 사용한 후 대표적인 주름에 해당하는 눈가, 눈 밑, 파라 주름에 대한 주름 파라미터를 에센스 사용 전과 비교한 결과, 본 발명의 유기산-올리고펩타이드 복합체가 함유된 에센스를 실제 피부에 사용한 경우 주름 파라미터가 유의하게 감소(P <0.05)한 것을 확인하였다(표 14). 이를 통해, 본 발명의 복합체를 인체에 직접 사용할 경우 피부 주름을 효과적으로 개선할 수 있음을 알 수 있었다.

Claims

서열번호 1 내지 12의 아미노산 서열로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나의 올리고펩타이드의 아미노 말단에 로즈마린산(rosmarinic acid), 페룰산(ferulic acid) 및 아젤라산(azelaic acid)으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나의 유기산이 결합된 유기산-올리고펩타이드 복합체.
제1항의 유기산-올리고펩타이드 복합체를 유효성분으로 포함하는 피부 주름 개선 및 항노화용 화장료 조성물.
제2항에 있어서, 상기 복합체는 콜라겐 합성 및 항산화 활성을 증가시키고, 세포 내 콜라게나아제(collagenase) 및 엘라스타아제(elastase) 활성을 억제하는 것을 특징으로 하는 피부 주름 개선 및 항노화용 화장료 조성물.
제1항의 유기산-올리고펩타이드 복합체를 유효성분으로 포함하는 피부 주름 개선 및 항노화용 건강기능식품 조성물.
제4항에 있어서, 상기 조성물은 이너뷰티(inner beauty) 식품인 것을 특징으로 하는 피부 주름 개선 및 항노화용 건강기능식품 조성물.
제1항의 유기산-올리고펩타이드 복합체를 유효성분으로 포함하는 피부 주름 개선 및 항노화용 피부 외용제.