KR20210151708A

KR20210151708A - 다중 우물 장치 및 그 사용 방법

Info

Publication number: KR20210151708A
Application number: KR1020210072715A
Authority: KR
Inventors: 제임스 조지 틸; 제프리 토마; 윌리엄 스콧 고든; 바라스 쿠마 라가반; 다니엘 달레시오
Original assignee: 폴 코포레이션
Priority date: 2020-06-05
Filing date: 2021-06-04
Publication date: 2021-12-14
Also published as: JP7242985B2; JP2022008088A; CA3121069A1; AU2021203009B2; US11504716B2; CA3121069C; KR102546795B1; US20210379583A1; AU2021203009A1; EP3919173A1; CN113751085A

Abstract

다중 우물 장치, 및 상기 다중 우물 장치를 사용한 여과 방법이 개시된다.

Description

다중 우물 장치 및 그 사용 방법 {MULTIWELL DEVICE AND METHOD OF USE}

다중 우물 장치 및 그 사용 방법

세포들을 성장시킨 후, 관심 대상 단백질을 얻기 위한 일부 절차들은, 원심 분리 튜브에서 세포 샘플을 원심 분리하는 단계, 상층액을 흡인하는 단계, 및 시린지 필터를 사용하여 잔류 유체 내의 다른 재료로부터 단백질을 분리하는 단계를 포함한다.

관심 대상 단백질을 얻기 위한 개선된 장치 및 방법이 요구되고 있다.

본 발명은 종래 기술의 단점들 중 적어도 일부에 대한 개선을 제공한다. 본 발명의 이러한 이점 및 다른 이점은 아래에 기재된 설명으로부터 명백해질 것이다.

본 발명의 일 구현예 따라 유체 샘플 처리용 다중 우물 장치(multiwell device)가 제공되며, 이때, 상기 다중 우물 장치는 상부 수용판(upper receiving plate), 중간 여과판(middle filtration plate), 및 하부 수집판(lower collection plate)을 포함하며; (a) 상기 상부 수용판은 세포들을 포함하는 유체 샘플들을 수용하기 위한 복수의 우물들을 포함하고, 상기 상부 수용판의 상기 복수의 우물들 각각은, 내부 표면을 갖는 측벽, 하향 돌출 칼라(downwardly projecting collar)를 포함하는 바닥 단부, 및 바닥 유체 흐름 포트를 포함하고, 상기 상부 수용판은 두 쌍의 대향 측벽들을 포함하고, 상기 상부 수용판의 상기 두 쌍의 대향 측벽들 중 적어도 하나의 쌍의 대향 측벽들 각각은, 상기 중간 여과판 상의 대응 측벽들에 있는 대응 우물들의 측벽들을 수용하기 위한 하부 개구부를 갖는 홈을 포함하며; (b) 상기 중간 여과판은 복수의 우물들을 포함하고, 상기 중간 여과판의 상기 복수의 우물들 각각은 상기 상부 수용판의 대응 우물의 상기 바닥 유체 흐름 포트를 통과하는 상기 유체 샘플을 여과하기 위한 필터를 포함하며; 상기 필터 각각은: 약 1 마이크로미터 내지 약 20 마이크로미터 범위의 평균 기공 크기, 상류 표면, 및 하류 표면를 갖는 상부 심층 필터 층(upper depth filter layer)으로서, 상기 상부 심층 필터 층의 상기 상류 표면은 상기 필터의 상류 표면을 제공하는, 상부 심층 필터 층; 약 0.4 마이크로미터 내지 약 0.8 마이크로미터 범위의 평균 기공 크기를 갖는 마이크로다공성 멤브레인을 포함하는 중간층; 및 상류 표면 및 하류 표면을 갖는 바닥층으로서, 상기 바닥층은 약 0.2 마이크로미터의 평균 기공 크기를 갖는 마이크로다공성 멤브레인을 포함하고, 약 0.2 마이크로미터의 평균 기공 크기를 갖는 상기 마이크로다공성 멤브레인의 상기 하류 표면은 상기 필터의 하류 표면을 제공하는, 바닥층;을 포함하며; 상기 중간 여과판의 상기 복수의 우물들 각각은, 내부 표면을 갖는 측벽으로서 상기 필터의 상기 하류 표면 아래에 위치된 측벽, 유체 흐름 포트를 포함하는 바닥 벽, 및 상기 바닥 벽으로부터 상향으로 돌출하는 리브 배열체(rib arrangement)를 포함하고, 상기 리브 배열체는 상기 측벽의 상기 내부 표면으로부터 이격된 상단 표면(top surface)을 갖고, 상기 필터는 상기 상부 수용판의 상기 하향 돌출 칼라의 단부와 상기 중간 여과판의 상기 리브 배열체의 상기 상단 표면 사이의 압착에 의해 상기 우물에서 밀봉되며; 상기 중간 여과판의 상기 복수의 우물들 각각의 상기 바닥 벽은 또한 상기 유체 흐름 포트를 둘러싸는 하향 돌출 칼라를 포함하고, 인접한 중간 여과판 우물들의 하향 돌출 칼라들 사이의 공간들은 상기 하부 수집판의 대응 우물들의 상단 단부들(top ends)을 수용하기 위한 하부 개구부들을 갖는 홈들을 형성하며; 상기 중간 여과판의 상기 유체 흐름 포트는, 여과된 유체 샘플을 상기 중간 여과판의 우물로부터 상기 하부 수집판의 대응 우물로 전달하도록, 배열되며; 상기 중간 여과판의 측벽들에 있는 우물들의 측벽들은 상기 상부 수용판의 상기 대응 대향 측벽들의 대응 홈들에 수용가능하며; (c) 상기 하부 수집판은, 상기 중간 여과판의 상기 대응 우물들에 있는 상기 유체 흐름 포트들을 통과하는 상기 여과된 유체 샘플을 수용하도록 배열된 복수의 우물들을 포함하고, 상기 복수의 우물들 각각은 상단 단부(top end) 및 바닥 단부(bottom end)를 갖고, 상기 하부 수집판의 상기 복수의 우물들 각각의 상기 상단 단부는 상기 중간 여과판의 대응 우물의 상기 하향 돌출 칼라를 둘러싸는 홈에 수용가능하다.

또한, 다중 우물 장치의 구현예들을 사용한 여과 방법도 제공된다.

도 1a는 본 발명의 구현예에 따른 조립된 다중 우물 장치의 평면도이다; 도 1b는, 도 1a의 A-A 선을 따른, 조립된 다중 우물 장치의 단면도이며, 상부 수용판, 중간 여과판, 및 하부 수집판를 보여준다; 도 1c는 상부 수용판의 우물의 바닥에 수용된 여과판의 우물을 보여주는 확대 단면도로서, 또한 상부 수용판에 있는 칼라의 하부 단부와 중간 여과판에 있는 리브 배열체의 상부 표면 사이에 밀봉된 필터를 보여주며, 여기서, 칼라의 하부 단부 및 리브 배열체의 상부 표면은 필터의 둘레를 압착한다(compress).
도 2a 내지 2d는 상부 수용판의 다양한 모습을 보여준다. 도 2a는 상부 사시도를 보여주며, 또한 대략적으로 정사각형인 형상을 갖는 보어(bore)를 갖는 우물들의 상부 부분을 보여준다; 도 2b는 평면도를 보여준다; 도 2c는 저면도로서, 또한 대략적으로 원환형인 형상을 갖는 보어를 갖는 우물들의 하부 부분을 보여준다; 도 2d는 도 2b의 AA-AA 선을 따른 단면도를 보여주며, 또한 각각의 우물의 측벽의 내부 표면 및 각각의 우물의 하향 경사 측벽을 보여주는데, 여기서, 보어는 대략적으로 정사각형인 형상으로부터 대략적으로 원환형인 형상으로 변하고, 각각의 우물은 바닥 유체 흐름 포트를 제공하는 하향 돌출 칼라를 포함하고, 칼라는 내부 표면 및 외부 표면을 갖고, 측벽의 내부 표면은 칼라의 내부 표면과 연속적이고, 인접한 칼라들의 외부 표면들 사이의 공간은 중간 여과판의 우물들의 상부 단부들을 수용하기 위한 하부 개구부를 갖는 홈을 형성하며, 상부 수용판의 대향 측벽들 각각은 여과판의 대응 측벽들에 있는 대응 우물들의 측벽들을 수용하기 위한 하부 개구부를 갖는 홈을 형성한다.
도 3a 내지 3e는 필터가 존재하지 않는 중간 여과판의 다양한 모습을 보여준다. 도 3a는 상부 사시도를 보여주며, 또한 중간 여과판 우물들의 바닥 벽들로부터 상향 돌출하는 방사상 구성을 갖는 리브 배열체, 및 유체 흐름 포트를 보여준다; 도 3b는 평면도를 보여준다; 도 3c는 저면도를 보여준다; 도 3d는 도 3a의 A-A 선을 따른 중간 여과판의 단면도를 보여주고, 중간 여과판 우물들의 바닥 벽의 하부 표면으로부터 하향 돌출된 칼라들 및 각각의 유체 흐름 포트와 유체연통하는 하향 돌출 스파우트들(spout)을 보여주는데, 여기서, 각각의 칼라는 중앙에 배치된 스파우트로부터 이격되고, 인접한 칼라들의 외부 표면들 사이의 공간은 하부 수집판의 우물들의 상부 단부들을 수용하기 위한 하부 개구부를 갖는 홈을 형성하며, 우물들의 상부 단부들은 상부 수용판의 대응 우물들의 하향 돌출 칼라들 사이의 홈들에 수용되도록 배열된다; 도 3e는 도 3a의 B-B 선을 따른 우물의 단면도를 보여주고, 측벽의 내부 표면으로부터 이격된 상단 표면을 갖는 리브 배열체를 갖는 바닥 벽을 보여주는데, 바닥 벽은 유체 흐름 포트를 향해 하향 경사져 있고, 하향 스파우트(downwardly facing spout)는 유체 흐름 포트와 연통한다.
도 4a 내지 4c는 하부 수집판의 다양한 모습을 보여준다. 도 4a는 평면도를 보여준다; 도 4b는 저면도를 보여준다; 도 4c는 도 4a의 A-A 선을 따른 단면도를 보여주고, 또한 중간 여과판의 대응 홈들에 맞는 하부 수집판의 우물들의 상부 단부들을 보여준다.
도 5는 조립된 장치 내의 3개의 판들 중 각각의 판에 있는 우물들의 도식적인 단면도로서, 세포 함유 유체 샘플을 첨가하기 전의 우물들을 보여주고(왼쪽), 또한, 상부 수용판의 세포 함유 우물, 및 하부 수집판의 여과액 함유 우물을 보여준다(오른쪽).

바람직하게는, 상부 수용판의 하향 돌출 칼라들 각각은 내부 표면 및 외부 표면을 가지며, 상부 수용판의 인접한 하향 돌출 칼라들의 외부 표면들 사이의 공간은 중간 여과판의 대응 우물들의 테이퍼된 상단 단부들을 수용하기 위한 하부 개구부들을 갖는 홈들을 형성한다.

또한, 다중 우물 장치의 구현예들을 사용한 여과 방법이 제공된다.

일 구현예에서, 세포 함유 유체로부터 단백질을 얻는 방법이 제공되며, 이 방법은 다음 단계들을 포함한다: 세포 함유 유체의 샘플들을, 본 발명의 다중 우물 장치의 일 구현예의 상기 상부 수용판의 우물들에 배치하는 단계; 상기 샘플들을 여과하는 단계; 및 상기 하부 수집판의 우물들에서 단백질 함유 유체를 얻는 단계.

유리하게는, 단백질은 덜 노동 집약적인 방식으로 더 짧은 시간에 얻어질 수 있다. 또한, 다수의 원심 분리 튜브, 피펫 팁, 멸균 필터, 및 시린지 대신에 다중 우물 장치를 사용하는 것이 더욱 환경 친화적이다. 더욱이, 상부 정사각형 또는 대략적 정사각형 보어를 갖는 상부 수용판, 및 하부 원환형 또는 대략적 원환형 보어의 사용은 더 큰 부피의 샘플의 여과를 가능하게 하면서도 여전히 필터를 우물에서 밀봉하는 것을 가능하게 한다.

각각의 판(이는 전형적으로, 대략적으로 직사각형으로 배열됨)은 복수의 우물들을 포함하는데, 예시된 구현예에서는 24개의 우물들을 포함하지만, 판들은 더 많은 수의 우물들, 예를 들어, 94개의 우물들, 또는 384개의 우물들, 또는 384개 초과의 우물들, 또는 24개 미만의 우물들을 포함할 수 있다. 전형적으로, 우물들은 2차원 구성으로 배열된다. 상부 수용판에 있는 우물들의 상부 부분들을 제외하면, 우물들은 전형적으로 원통형이고, 우물들은 유체 불투과성 벽을 가지며, 샘플링될 유체의 원하는 용도 및 양을 위한 깊이 및 폭을 갖는다.

여과판의 우물들 각각은 3개의 층들 또는 3개의 필터 요소들을 포함하는 필터를 포함하고, 일부 구현예에서, 필터는 3개의 층들 또는 3개의 필터 요소들로 이루어진다. 필터는 우물의 바닥에 배치된다. 아래에서 더 상세히 설명되는 바와 같이, 상부 수용판 및 여과판은, 필터가 유체 우회(fluid bypassing)없이 우물에서 밀봉되도록, 필터의 각각의 상단 표면 및 바닥 표면의 부분들과 접촉하는 구조를 포함한다.

본 발명의 구성요소들 각각은 이하에서 더 상세히 설명될 것이며, 동일한 구성요소는 동일한 지시 번호를 갖는다.

특히 도 1b 및 5에 도시된 예시적 구현예에 따르면, 다중 우물 장치(1000)는 다음을 포함한다: 복수의 우물들(101)을 포함하는 상부 수용판(100); 각각 필터(250)를 포함하는 복수의 우물들(201)을 포함하는 중간 여과판(200); 및 복수의 우물들(301)을 포함하는 하부 수집판(300).

상부 수용판(100)의 예시적 구현예는 도 1a 내지 1c, 2a 내지 2d에서 더 상세히 도시된다. 예시된 상부 수용판은 상부 부분(100A) 및 하부 부분(100B), 두 쌍의 대향 측벽들(110 및 120), 및 세포를 포함하는 유체 샘플들을 수용하기 위한 복수의 우물들(101)을 갖는다. 우물들(101)은, 내부 표면들(102A)을 갖는 측벽(102), 상단 단부(130A), 바닥 단부(130B), 바닥 벽(103), 수용판 바닥 유체 흐름 포트(105)를 갖는 하향 돌출 칼라(104)를 갖는다. 우물들 각각은 보어(125)를 갖는다. 하향 돌출 칼라(104)는, 내부 표면(102A)과 연속되는 내부 표면(104A), 외부 표면(104B), 및 단부(104C)을 갖는다(도 1c 참조). 아래에서 더 상세히 논의되는 바와 같이, 칼라 단부(104C)는, 우물 내의 필터를 밀봉하는 것을 돕기 위해, 중간 여과판의 우물 내의 필터의 상부 표면을 압착한다.

바람직하게는, 수용판의 인접 하향 돌출 칼라들(104)의 외부 표면들(104B) 사이의 공간은, 중간 여과판(200)의 대응 우물들(201)의 상단 단부들(230A)을 수용하기 위한 하부 개구부들을 갖는 홈들(109')을 형성한다(도 1b 및 1c 참조). 참고로 도 1c를 사용하면, 바람직하게는, 홈들(109')에 수용된 상단 단부들(230A)은 테이퍼되며, 일부 구현예들에서, 외부 표면들(104B)의 하부 부분들은 만입되고(indented), 테이퍼된 상단 단부들(230A)은 인접한 외부 표면들을 밀어서 이격시키며, 또한, 테이퍼된 상단 단부들(230A)은, 상부 수용판에 수용되면, 만입부 너머로 도달한다.

바람직하게는, 특히 도 2a에 도시된 바와 같이, 우물들의 상부 보어(125A)는 정사각형 구성을 갖고, 하부 보어(125B)는 원환형 구성을 갖는다.

적어도 한 쌍의 대향 측벽들(대향 측벽들(110)로서 예시됨)은, 중간 여과판(200) 상의 대응 측벽들(210)에 있는 대응 우물들의 측벽들(202)을 수용하기 위한 하부 개구부를 갖는 홈(109)을, 하부 부분(100B)에서 포함한다(도 1b 및 1c 참조).

도 2c 및 도 2d에 도시된 바와 같이, 수용판의 하부 부분은 복수의 강화 리브들(strengthening ribs)(180)을 포함할 수 있다.

중간 여과판(200)의 예시적 구현예가 도 1b, 1c, 및 3a 내지 3e에서 더 상세히 도시된다. 예시된 중간 여과판은 두 쌍의 대향하는 측벽들(210 및 220), 및 상부 수용판 우물들(101)로부터 전달되는 세포 함유 유체 샘플을 수용하기 위한 복수의 우물들(201)을 포함한다. 우물들(201)은 다음을 갖는다: 내부 표면들(202A)을 갖는 측벽들(202); 상단 단부(230A)(도 1c에 도시된 바와 같이 홈(109')에 끼워지는 단부들의 경우에는 테이퍼됨); 바닥 단부(230B); 바닥 벽(203)으로서, 상기 바닥 벽(203)은 상기 바닥 벽(203)으로부터 상향 돌출하는 리브 배열체(215)를 갖고, 상기 리브 배열체(215)는 측벽의 내부 표면으로부터 이격된 상단 표면들(215A)을 갖는, 바닥 벽(203)(도 1c 및 3e 참조); 스파우트(207)와 연통하는 여과판 유체 흐름 포트(205); 및 하향 돌출 칼라(204)로서, 상기 하향 돌출 칼라(204)는 스파우트(207)를 둘러싸되 스파우트(207)로부터 이격되고, 또한 상기 하향 돌출 칼라(204)는 내부 표면(204A) 및 외부 표면(204B)을 갖는, 하향 돌출 칼라(204). 도 3e는 유체 흐름 포트를 향해 하향 경사진 바닥 벽을 보여준다. 인접한 중간 여과판 우물들의 하향 돌출 칼라들의 외부 표면들 사이의 공간은, 하부 수집판(300)의 대응 우물들(301)의 상단 단부들(330A)를 수용하기 위한 하부 개구부들을 갖는 홈들(209)을 형성한다(도 1b 참조).

예시된 리브 배열체(215)는 측벽들 근처에서 원환형의 상향 돌출 외부 리브를 갖고, 또한, 더욱 중앙에 배치된, 복수의 방사상으로 배열된 상향 돌출 리브들을 갖는다. 바람직하게는, 예시된 바와 같이, 리브들의 상부 표면들은 평평하지 않으며, 예를 들어, 둥글다. 복수의 방사상으로 배열된 상향 돌출 리브들은 우물을 위한 배출 그리드(drainage grid)를 제공할 수 있다.

도 3c에 도시된 바와 같이, 중간 여과판의 하부 부분은 복수의 강화 리브들(280)을 포함할 수 있다.

도 1b 및 1c에 도시된 바와 같이, 중간 여과판(200)의 우물들(201)은 필터들(250)를 포함하며, 필터들(250)의 각각은 심층 필터(depth filter)(251)를 포함하는 상부층, 마이크로다공성 멤브레인(252)을 포함하는 중간층, 및 마이크로다공성 멤브레인(253)을 포함하는 바닥층을 포함한다. 각각의 층은 상류 표면 및 하류 표면을 가지며, 상부층의 상류 표면은 필터의 상류 표면(251A)을 포함하고, 바닥층의 하류 표면은 필터의 하류 표면(253A)을 포함한다.

도 1c에 도시된 바와 같이, 상부 수용판(100)의 칼라 단부(104C)는 중간 여과판의 우물 내의 필터의 상류 표면을 압착하고, 리브 배열체(215)의 상부 표면(215A)(특히, 측벽 근처의 원환형 외부 리브의 상부 표면)은 필터의 하류 표면을 압착하며, 그 결과, 우물 내의 필터를 밀봉하게 되며, 그에 따라, 우회(bypassing)를 허용하지 않게 된다.

필터 층은, 예를 들어 다음과 같은, 임의의 적합한 기공 구조를 가질 수 있다: 기공 크기(예를 들어, 버블 포인트(bubble point)에 의해 입증되거나, 예를 들어 미국 특허 4,340,479에 설명된, K_L 에 의해 입증되거나, 또는 모세관 응축 흐름 기공측정기에 의해 입증됨); 기공 등급; 기공 직경(예를 들어, 예를 들어 미국 특허 4,925,572에 설명된, 변형된 OSU F2 시험을 사용하여 특성분석되는 경우); 또는, 유체가 필터 층을 통과할 때 하나 이상의 관심대상 재료의 통과를 감소시키거나 허용하는 제거 등급.

전형적으로, 심층 필터 층은 약 1 마이크로미터 내지 약 20 마이크로미터 범위, 바람직하게는 약 6 마이크로미터 내지 약 15 마이크로미터 범위의 평균 기공 크기를 갖는다. 전형적으로, 중간층 멤브레인은 약 0.4 마이크로미터 내지 약 0.8 마이크로미터 범위의 평균 기공 크기를 가지며, 일부 구현예들에서는, 약 0.65 마이크로미터의 평균 기공 크기를 갖는다. 바닥층 멤브레인은 바람직하게는 멸균 여과를 제공하기 위한 등급을 가지며, 예를 들어, 약 0.2 마이크로미터의 평균 기공 등급을 갖는다.

다양한 적합한 필터 층들이 상업적으로 입수가능하다.

필터 층은 임의의 원하는 임계 젖음 표면 장력(CWST, 예를 들어, 미국 특허 4,925,572에 정의됨)을 가질 수 있다. CWST는, 예를 들어 미국 특허 5,152,905, 5,443,743, 5,472,621, 및 6,074,869에 추가적으로 개시된 바와 같이, 당해 기술분야에 공지된 바와 같이 선택될 수 있다.

하부 수집판(300)의 예시적 구현예가 도 1b 및 4a 내지 4c에 더 자세히 도시되어 있다. 예시된 하부 수집판은 두 쌍의 대향 측벽들(310 및 320), 및 중간 여과판 우물들(201)로부터 전달되는 여과된 유체 샘플들을 수용하기 위한 복수의 우물들(301)을 포함한다. 우물들(301)은 내부 표면들(302A)을 갖는 측벽(302), 상단 단부(330A), 바닥 단부(330B), 및 바닥 벽(303)을 갖는다. 도 1b에 도시된 바와 같이, 하부 수집판(300)에 있는 우물들의 상단 단부들(330A)은 중간 여과판(200)에 있는 대응 우물들(201)의 하향 돌출 칼라(204)를 둘러싸는 홈들(209)에 수용될 수 있다.

상기 판들은, 처리되는 유체와 양립가능한 임의의 불침투성 열가소성 재료를 포함하는, 임의의 적합한 강성(rigid) 불침투성 재료로 제작될 수 있다. 예를 들어, 상기 판들은 스테인리스 스틸과 같은 금속, 또는 폴리머로 제작될 수 있다. 바람직한 구현예에서, 상기 판들은 아크릴, 폴리프로필렌, 폴리스티렌, 또는 폴리카보네이트 수지와 같은 폴리머로 제작된다.

다음의 실시예는 본 발명을 추가적으로 예시하며, 물론, 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 해석되어서는 안된다.

<실시예>

이 실시예는 포유류(중국비단털쥐난소(Chinese Hamster Ovary: CHO)) 세포 함유 유체 샘플로부터 단백질을 분리하는 것을 예시한다. 샘플들은 ≥ 2,500만 세포/ml의 밀도를 갖는 5 ml의 CHO 세포 배양물이며, 더 많은 양의 평가 대상 단백질을 갖도록 감마 글로불린(IgG 함유)이 첨가되었다(총 단백질 약 10 mg, 및 IgG 약 3 mg).

다중 우물 장치는 대략적으로 도면에 표시된 대로 조립된다. 필터는 세 개의 층을 함유한다. 가장 상류에 있는 층은 심층 필터 시트(SEITZ K Cellulose 700P; Pall Corporation; Port Washington, NY)이고, 중간층은 0.65 μm 비대칭 폴리에테르술폰 멤브레인이고, 바닥층은 0.2 μm 대칭 폴리에테르술폰 멤브레인이다(바닥층과 결합된 중간층은 SUPOR EKV 필터(Pall Corporation, Port Washington, NY)로서 상업적으로 입수가능하다).

한 세트의 샘플들은 진공 매니폴드 장치(Pall Corporation Multi-Well Plate Vacuum Manifold)를 사용하여 여과하고, 다른 세트의 샘플들은 원심분리기(Eppendorf 5810 원심분리기)를 사용하여 여과한다.

그 결과는 하기 표 1과 같다.

5 ml 샘플 농축된 CHO 세포 샘플	상류	하류 여과물 (15 in Hg 진공)	하류 여과물 (1,000 x g 원심분리)
필터 통과 시간(분)	-	20.2 + 6.3	15
유지 부피 (Hold-up volume) (μL)		300-450	400-450
pH	7.2	7.3	6.8
전도도 (μS/cm)	대략 10,100	대략 9,200	대략 9,800
탁도 (NTU)	대략 1,900-2,600	대략 1.8	대략 2.4
600 nm에서의 광학 밀도	대략 18-19	0	0
총 단백질 회수율(%)		98.3 + 8.2 (14개 판으로부터의 78개 우물)	95.4 + 11.4 (14개 판으로부터의 79개 우물)
IG 단백질 회수율(%)		91.3 + 11 (14개 판으로부터의 77개 우물)	85.0 + 6.9 (14개 판으로부터의 34개 우물)

이 결과는 대략적으로, 진공 및 원심 분리를 둘 다 사용한 여과의 경우와 유사하다.

이 실시예는, 이 장치가 흡수성 및 탁도에 영향을 미치는 세포들을 제거하고, 단백질의 회수를 제공한다는 것을 보여 주었다.

본 명세서에서 인용된 간행물, 특허출원, 및 특허를 포함한 모든 참고문헌은, 마치 각 참고문헌이 인용에 의해 본 명세서에 통합되는 것으로 개별적으로 그리고 명시적으로 표시되고 그 전체가 본 명세서에 기재된 것과 동일한 정도로, 인용에 의해 본 명세서에 통합된다.

본 발명을 설명하는 맥락에서(특히 하기 청구범위의 맥락에서), 단수 지시어 및 "적어도 하나" 및 유사한 지시어의 사용은, 본 명세서에서 달리 표시되거나 문맥 상 명백히 모순되지 않는 한, 단수 및 복수 둘 다를 포함하는 것으로 해석된다. 하나 이상의 항목들의 목록 다음에 "적어도 하나"라는 용어를 사용하는 것(예를 들어, "A 및 B 중 적어도 하나")은, 본 명세서에서 달리 표시되거나 문맥 상 명백히 모순되지 않는 한, 나열된 항목들로부터 선택된 하나의 항목(A 또는 B), 또는 나열된 항목들 중 둘 이상의 조합(A 및 B)을 의미하는 것으로 해석되어야 한다. 용어 "포함하는(comprising)", "갖는(having)", "포함하는(including)" 및 "함유하는(containing)"은 달리 언급하지 않는 한 개방형 용어(즉, "포함하지만 이에 제한되지 않는"을 의미함)로서 해석되어야 한다. 본 명세서에서의 값들의 범위들의 기재는, 본 명세서에서 달리 지시되지 않는 한, 그 범위 내에 속하는 각각의 개별 값을 개별적으로 언급하는 것의 약식 방법으로서의 역할을 하는 것으로 의도되고, 각각의 개별 값은 마치 본 명세서에서 개별적으로 기재된 것처럼 본 명세서에 통합된다. 본 명세서에 설명된 모든 방법은 본 명세서에서 달리 지시되거나 문맥 상 명백히 모순되지 않는 한 임의의 적합한 순서로 수행될 수 있다. 본 명세서에 제공된 임의의 모든 예, 또는 예시적 표현(예를 들어, "~와 같은")의 사용은 단지 본 발명을 더 잘 설명하기 위한 것이며 달리 청구되지 않는 한 본 발명의 범위를 제한하지 않는다. 본 명세서의 어떤 표현도, 임의의 비청구된 요소를 본 발명의 실시에 필수적인 것으로 표시하는 것으로 해석되어서는 안된다.

본 발명을 수행하기 위해 본 발명자들에게 알려진 최상의 모드를 포함하여 본 발명의 바람직한 구현예들이 본 명세서에 기술되었다. 이러한 바람직한 구현예들의 변형은 앞에 기재된 설명을 읽을 때 통상의 기술자에게 명백해질 수 있다. 본 발명자들은 통상의 기술자가 이러한 변형들을 적절히 사용할 것으로 기대하고, 본 발명자들은 본 발명이 본 명세서에 명시적으로 설명된 것과 다르게 실시되는 것을 의도한다. 따라서, 본 발명은, 적용 가능한 법률에 의해 허용되는 바와 같이, 본 명세서에 첨부된 청구범위에 기재된 주제의 모든 변형 및 균등물을 포함한다. 더욱이, 모든 가능한 변형들에서 앞에서 설명된 요소들의 임의의 조합은, 본 명세서에서 달리 표시되거나 문맥에 의해 달리 명백히 모순되지 않는 한, 본 발명에 포함된다.

Claims

유체 샘플 처리용 다중 우물 장치(multiwell device)로서,
상기 다중 우물 장치는 상부 수용판(upper receiving plate), 중간 여과판(middle filtration plate), 및 하부 수집판(lower collection plate)을 포함하며;
(a) 상기 상부 수용판은 세포들을 포함하는 유체 샘플들을 수용하기 위한 복수의 우물들을 포함하고, 상기 상부 수용판의 상기 복수의 우물들 각각은, 내부 표면을 갖는 측벽, 하향 돌출 칼라(downwardly projecting collar)를 포함하는 바닥 단부, 및 바닥 유체 흐름 포트를 포함하고, 상기 상부 수용판은 두 쌍의 대향 측벽들을 포함하고, 상기 상부 수용판의 상기 두 쌍의 대향 측벽들 중 적어도 하나의 쌍의 대향 측벽들 각각은, 상기 중간 여과판 상의 대응 측벽들에 있는 대응 우물들의 측벽들을 수용하기 위한 하부 개구부를 갖는 홈을 포함하며;
(b) 상기 중간 여과판은 복수의 우물들을 포함하고, 상기 중간 여과판의 상기 복수의 우물들 각각은 상기 상부 수용판의 대응 우물의 상기 바닥 유체 흐름 포트를 통과하는 상기 유체 샘플을 여과하기 위한 필터를 포함하며;
상기 필터 각각은: 약 1 마이크로미터 내지 약 20 마이크로미터 범위의 평균 기공 크기, 상류 표면, 및 하류 표면를 갖는 상부 심층 필터 층(upper depth filter layer)으로서, 상기 상부 심층 필터 층의 상기 상류 표면은 상기 필터의 상류 표면을 제공하는, 상부 심층 필터 층; 약 0.4 마이크로미터 내지 약 0.8 마이크로미터 범위의 평균 기공 크기를 갖는 마이크로다공성 멤브레인을 포함하는 중간층; 및 상류 표면 및 하류 표면을 갖는 바닥층으로서, 상기 바닥층은 약 0.2 마이크로미터의 평균 기공 크기를 갖는 마이크로다공성 멤브레인을 포함하고, 약 0.2 마이크로미터의 평균 기공 크기를 갖는 상기 마이크로다공성 멤브레인의 상기 하류 표면은 상기 필터의 하류 표면을 제공하는, 바닥층;을 포함하며;
상기 중간 여과판의 상기 복수의 우물들 각각은, 내부 표면을 갖는 측벽으로서 상기 필터의 상기 하류 표면 아래에 위치된 측벽, 유체 흐름 포트를 포함하는 바닥 벽, 및 상기 바닥 벽으로부터 상향으로 돌출하는 리브 배열체(rib arrangement)를 포함하고, 상기 리브 배열체는 상기 측벽의 상기 내부 표면으로부터 이격된 상단 표면(top surface)을 갖고, 상기 필터는 상기 상부 수용판의 상기 하향 돌출 칼라의 단부와 상기 중간 여과판의 상기 리브 배열체의 상기 상단 표면 사이의 압착에 의해 상기 우물에서 밀봉되며;
상기 중간 여과판의 상기 복수의 우물들 각각의 상기 바닥 벽은 또한 상기 유체 흐름 포트를 둘러싸는 하향 돌출 칼라를 포함하고, 인접한 중간 여과판 우물들의 하향 돌출 칼라들 사이의 공간들은 상기 하부 수집판의 대응 우물들의 상단 단부들(top ends)을 수용하기 위한 하부 개구부들을 갖는 홈들을 형성하며;
상기 중간 여과판의 상기 유체 흐름 포트는, 여과된 유체 샘플을 상기 중간 여과판의 우물로부터 상기 하부 수집판의 대응 우물로 전달하도록, 배열되며;
상기 중간 여과판의 측벽들에 있는 우물들의 측벽들은 상기 상부 수용판의 상기 대응 대향 측벽들의 대응 홈들에 수용가능하며;
(c) 상기 하부 수집판은, 상기 중간 여과판의 상기 대응 우물들에 있는 상기 유체 흐름 포트들을 통과하는 상기 여과된 유체 샘플을 수용하도록 배열된 복수의 우물들을 포함하고, 상기 복수의 우물들 각각은 상단 단부(top end) 및 바닥 단부(bottom end)를 갖고,
상기 하부 수집판의 상기 복수의 우물들 각각의 상기 상단 단부는 상기 중간 여과판의 대응 우물의 상기 하향 돌출 칼라를 둘러싸는 홈에 수용가능한;
다중 우물 장치.
제 1 항에 있어서, 상기 상부 수용판의 상기 하향 돌출 칼라들 각각은 내부 표면 및 외부 표면을 갖고, 상기 상부 수용판의 인접 하향 돌출 칼라들의 상기 외부 표면들 사이의 공간은, 상기 중간 여과판의 대응 우물들의 테이퍼된 상단 단부들을 수용하기 위한 하부 개구부들을 갖는 홈들을 형성하는, 다중 우물 장치.
세포 함유 유체로부터 단백질을 얻는 방법으로서, 다음 단계들을 포함하는 방법:
세포 함유 유체의 샘플들을, 제 1 항 또는 제 2 항에 따른 다중 우물 장치의 상기 상부 수용판의 우물들에 배치하는 단계;
상기 샘플들을 여과하는 단계; 및,
상기 하부 수집판의 우물들에서 단백질 함유 유체를 얻는 단계.