KR20210143901A

KR20210143901A - 신규 화합물 및 그 이용

Info

Publication number: KR20210143901A
Application number: KR1020217035105A
Authority: KR
Inventors: 완자오 장; 쿠니오 코사카; 게이스케 마쓰야마; 마미 다나카; 마사히로 소타
Original assignee: 나가세 상교오 가부시키가이샤; 각코우호우징 기타사토켄큐쇼
Priority date: 2019-03-29
Filing date: 2020-02-07
Publication date: 2021-11-29
Also published as: TW202102199A; JPWO2020202790A1; EP3950697A4; US20220177507A1; BR112021019566A2; CN113631562B; EP3950697A1; CN113631562A; TWI827814B; WO2020202790A1; CA3134882A1

Abstract

본 발명의 목적은 항산화 작용을 갖는 신규 화합물 및 그 이용 기술을 제공하는 것이다. 하기 식 (1)로 나타낸 화합물을 제공함으로써 상기 과제를 해결한다.

[식에서, R¹~R³ 중 어느 하나는 수소, 아세틸기, 2-부테노일기 또는 2-메틸-2-펜테노일기이고, 나머지 둘은 수소이고, 또한 R⁴~R⁶ 중 어느 하나는 2-메틸-2-부테노일기이고, 나머지 둘은 수소임]

Description

신규 화합물 및 그 이용

본 발명은 신규 화합물 및 그 이용에 관한 것이다. 보다 구체적으로는, 본 발명은 신규 화합물, 상기 신규 화합물을 포함하는 조성물, 상기 신규 화합물을 포함하는 화장품 조성물 또는 항산화제 등에 관한 것이다.

미생물에 의해 생산되는 대사 산물은 사람에게 유용한 물질인 경우도 많아 예전부터 의약, 화장품 등의 유효 성분으로서 이용되어 왔다.

예를 들어 항균 활성을 갖는 페니실린이 푸른곰팡이로부터 단리된 것 등은 유명한 이야기이다. 또한 최근의 사례로서는 특허문헌 1 및 2에 기재되어 있는 바와 같이, 막지질 장애 억제 작용, 항균 활성, 항산화 작용 등의 기능을 갖는 트레한젤린(trehangelin)이라는 물질이 방선균으로부터 얻어진 것이 보고되었다.

이와 같이 미생물로부터 유용 물질을 얻는 예를 모두 열거할 수는 없고, 미생물을 이용한 신규 유용 물질의 탐색은 더욱 많은 가능성을 내포하고 있다.

WO

2014034147

A1

JP

2015024985

A

이러한 상황하에 본 발명의 일 양태는 항산화 작용을 갖는 신규 화합물 및 그 이용 기술을 제공하는 것을 목적으로 한다.

본 발명자들은 상기 과제를 해결하기 위해 면밀히 검토를 거듭한 결과, 특정 미생물, 보다 구체적으로는 방선균 Streptomyces lividans 1326주로부터 항산화 작용을 갖는 신규 화합물의 동정에 성공하여 본 발명을 완성하기에 이르렀다. 즉, 본 발명의 일 양태는 하기 식 (1)로 나타낸 화합물이다.

[식 1]

본 발명의 일 양태에 의하면 항산화 작용을 갖는 신규 화합물을 제공할 수 있다.

도 1은 본 발명의 일 양태에서의 화합물의 항산화 작용을 평가한 결과를 나타낸 도면이다.

본 발명의 실시의 일 형태에 대해 이하에 상세히 설명한다.

아울러 본 명세서에서 특별히 기재하지 않는 한, 수치 범위를 나타내는 "A~B"는 "A 이상, B 이하"를 의미한다. 또한 본 명세서의 구조식에서 입체 구조 등이 특별히 나타나지 않은 경우, 본 명세서의 구조식으로 나타낸 화합물에는, 호변 이성질체, 기하 이성질체, 광학 이성질체 등의 각종 입체 이성질체 및 그들의 혼합물(라세미체를 포함)이 포함된다.

[1. 화합물]

본 발명자들은 항산화 작용을 갖는 신규 화합물을 탐색하기 위해 다양한 미생물에 대해 상세한 검토를 수행하였다. 그 중에서, 특정 화합물의 합성 경로에 관여하는 유전자를 도입한 방선균 스트렙토마이세스 리비단스(Streptomyces lividans) 1326주로부터 항산화 작용을 갖는 신규 화합물을 동정하는 것에 성공했다.

본 발명의 일 실시형태에 따른 화합물(이하, "본 화합물"이라 함)은 상기 식 (1)로 나타낸 화합물이다. 본 화합물은 후술하는 실시예에 나타내는 바와 같이 우수한 항산화 작용을 갖는다. 이러한 화합물의 구체적인 예에 대해 이하에 설명한다. 아울러 본 발명에 따른 화합물은 용매화물, 예를 들어 수화물의 형태일 수도 있고, 그러한 용매화물도 또한 본 화합물의 범위에 포함된다. 또한 본 명세서에서 "2-부테노일"은 크로토닐 및 이소크로토닐과 동일한 의미로 사용되고, "2-메틸-2-부테노일"은 안젤로일과 동일한 의미로 사용된다.

본 발명의 실시의 일 형태에서, 본 화합물은 바람직하게는, 상기 식 (1)에서 R²는 수소, 아세틸기, 2-부테노일기 또는 2-메틸-2-펜테노일기이고, R⁵는 2-메틸-2-부테노일기이고, R¹, R³, R⁴ 및 R⁶은 수소이다.

상기 바람직한 양태에서, 상기 식 (1)의 R²가 "수소(H)"인 화합물은 3-O-안젤로일트레할로스(3-O-angeloyltrehalose)이고, 하기 식 (2)로 나타난다.

[식 2]

본 명세서에서 3-O-안젤로일트레할로스는 이하의 물성을 갖는 화합물이다.

(1) 성상: 백색 분말

(2) 분자량: 424

(3) 분자식: C₁₇H₂₈O₁₂

(4) 융점: 117~120℃

(5) 고분해능 질량분석에 의한 [M＋NH₄]^＋이론값(m/z): 442.1925, 실측값(m/z): 442.1901

(6) 자외부 흡수 극대(메탄올 내): 220nm

(7) ¹H-NMRδ ppm:1.86(3H, dd, J₁=1.5Hz, J₂=1.5Hz), 1.93(3H, dd, J₁=7.2Hz, J₂=1.5Hz), 3.15(1H, ddd, J₁=9.5Hz, J₂=9.1Hz, J₃=5.7Hz), 3.2~3.7(9H, m), 3.78(1H, ddd, J₁=10.0Hz, J₂=4.0Hz, J₃=2.3Hz), 4.37(1H, t, J=5.9Hz), 4.48(1H, t, J=5.9Hz), 4.72(1H, d, J=6.4Hz), 4.77(1H, d, J=5.6Hz), 4.84(1H, d, J=5.7Hz), 4.84(1H, d, J=6.7Hz), 4.91(1H, d, J=3.6Hz), 4.95(1H, d, J=3.6Hz), 5.02(1H, d, J=7.0Hz), 5.21(1H, t, J=9.5Hz), 6.04(1H, dq, J₁=7.2Hz, J₂=1.5Hz)

(8) 용제에 대한 용해성: 메탄올에 쉽게 녹지 않음

상기 바람직한 양태에서, 상기 식 (1)의 R²가 "아세틸기((CO)CH₃)"인 화합물은 3-O-아세틸-3'-O-안젤로일트레할로스(3-O-acetyl-3'-O-angeloyltrehalose)이고, 하기 식 (3)으로 나타난다.

[식 3]

본 명세서에서 3-O-아세틸-3'-O-안젤로일트레할로스는 이하의 물성을 갖는 화합물이다.

(1) 성상: 백색 분말

(2) 분자량: 466

(3) 분자식: C₁₉H₃₀O₁₃

(4) 융점: 160~161℃

(5) 고분해능 질량분석에 의한 [M＋NH₄]^＋ 이론값(m/z): 484.2030, 실측값(m/z): 484.2001

(6) 자외부 흡수 극대(메탄올 내): 219nm

(7) ¹H-NMRδ ppm:1.87(3H, dd, J₁=1.4Hz, J₂=1.4Hz), 1.93(3H, dd, J₁=7.1Hz, J₂=1.4Hz), 2.05(3H, s), 3.2~3.5(2H, m), 3.4~3.7(6H, m), 3.7~3.8(2H, m), 4.45(1H, t, J=5.6Hz), 4.48(1H, t, J=5.6Hz), 4.94(1H, d, J=7.3Hz), 4.95(1H, d, J=6.7Hz), 4.97(2H, d, J=3.7Hz), 5.02(1H, d, J=6.2Hz), 5.03(1H, d, J=7.0Hz), 5.14(1H, t, J=9.5Hz), 5.24(1H, t, J=9.5Hz), 6.05(1H, dq, J₁=7.1Hz, J₂=1.4Hz)

(8) 용제에 대한 용해성: 메탄올에 쉽게 녹지 않음

상기 바람직한 양태에서, 상기 식 (1)의 R²가 "이소크로토닐기((CO)HC=CHCH₃)"인 화합물은, 3-O-안젤로일-3'-O-이소크로토닐트레할로스(3-O-angeloyl-3'-O-isocrotonyltrehalose)이고, 하기 식 (4)로 나타난다.

[식 4]

본 명세서에서 3-O-안젤로일-3'-O-이소크로토닐트레할로스는 이하의 물성을 갖는 화합물이다.

(1) 성상: 백색 분말

(2) 분자량: 492

(3) 분자식: C₂₁H₃₂O₁₃

(4) 융점: 155~158℃

(5) 고분해능 질량분석에 의한 [M＋NH₄]^＋이론값(m/z): 510.2187, 실측값(m/z): 510.2225

(6) 자외부 흡수 극대(메탄올 내): 227nm

(7) ¹H-NMRδ ppm:1.87(3H, dd, J₁=1.4Hz, J₂=1.4Hz), 1.94(3H, dd, J₁=7.1Hz, J₂=1.4Hz), 2.10(3H, dd, J₁=7.2Hz, J₂=1.7Hz), 3.2~3.5(2H, m), 3.4~3.7(6H, m), 3.7~3.8(2H, m), 4.46(1H, t, J=5.9Hz), 4.48(1H, t, J=5.9Hz), 4.92(1H, d, J=7.2Hz), 4.93(1H, d, J=7.2Hz), 4.97(1H, d, J=3.1Hz), 4.98(1H, d, J=3.1Hz), 5.01(1H, d, J=7.3Hz), 5.02(1H, d, J=7.4Hz), 5.23(1H, t, J=9.5Hz), 5.26(1H, t, J=9.5Hz), 5.85(1H, dd, J₁=11.5Hz, J₂=1.7Hz), 6.05(1H, dq, J₁=7.1Hz, J₂=1.4Hz), 6.39(1H, dq, J₁=11.5Hz, J₂=7.2Hz)

(8) 용제에 대한 용해성: 메탄올에 쉽게 녹지 않음

상기 바람직한 양태에서, 상기 식 (1)의 R²가 "2-메틸-2-펜테노일기((CO)C(CH₃)=CHCH₂CH₃)"인 화합물은 3-O-(2-메틸-2-부테노일)-3'-O-(2-메틸-2-펜테노일)트레할로스(3-O-(2-methyl-2-butenoyl)-3'-O-(2-methyl-2-pentenoyl)trehalose)이고, 하기 식 (5)로 나타난다.

[식 5]

본 명세서에서 3-O-(2-메틸-2-부테노일)-3'-O-(2-메틸-2-펜테노일)트레할로스는 상기 식(5)로 나타낸 구조를 가짐과 아울러 이하의 물성을 갖는 화합물이다.

(1) 성상: 백색 분말

(2) 분자량: 520

(3) 분자식: C₂₃H₃₆O₁₃

(4) 융점: 176~180℃

(5) 고분해능 질량분석에 의한 [M＋NH₄]^＋ 이론값(m/z): 538.2500, 실측값(m/z): 538.2495

(6) 자외부 흡수 극대(메탄올 내): 227nm

(7) ^１H-NMRδ ppm:0.98(3H, t, J=7.5Hz), 1.8~1.9(6H, m), 1.94(3H, dd, J₁=7.2Hz, J₂=1.5Hz), 2.41(2H, ddq, J₁=7.5Hz, J₂=7.5Hz, J₃=1.1Hz), 3.2~3.5(2H, m), 3.4~3.7(6H, m), 3.7~3.8(2H, m), 4.48(2H, t, J=5.6Hz), 4.917(1H, d, J=7.3Hz), 4.925(1H, d, J=7.3Hz), 4.98(2H, d, J=3.7Hz), 5.01(2H, d, J=7.4Hz), 5.26(1H, t, J=9.6Hz), 5.27(1H, t, J=9.5Hz), 5.93(1H, dt, J₁=7.5Hz, J₂=1.4Hz), 6.05(1H, dq, J₁=7.2Hz, J₂=1.5Hz)

(8) 용제에 대한 용해성: 메탄올에 쉽게 녹지 않음

[2. 조성물]

본 발명의 일 실시형태에 따른 조성물(이하, "본 조성물"이라 함)은 상기 식 (1)~(5)로 나타낸 본 화합물의 적어도 하나를 포함하는 것이다.

또한 다른 일 실시형태에서 본 조성물은 하기 식 (6)~(8)로 나타낸 화합물의 적어도 하나를 더 포함하는 것인 것이 바람직하다.

[식 6]

[식 7]

[식 8]

상기 식 (6)~(8)로 나타낸 화합물은 각각 "트레한젤린 A", "트레한젤린 B" 및 "트레한젤린 C"로도 불린다. 또한 본 명세서에서 상기 식 (6)~(8)로 나타낸 화합물을 총칭하여 "트레한젤린"이라 부른다.

본 조성물에 포함되는 본 화합물은 항산화 작용을 가지므로, 항산화 물질이 요구되는 다양한 분야, 예를 들어 화장품, 의약, 식품, 음료품, 향료, 안료, 합성 수지, 접착제, 연료 등의 분야에서 유용하다. 또한 상기 식 (6)~(8)로 나타낸 화합물은 막지질 장애 억제 작용, 항균 활성, 항산화 작용 등의 기능을 가지므로, 본 조성물이 그것들의 화합물을 포함함으로써 보다 넓은 효능, 항산화 작용에서의 상승 효과 등을 기대할 수 있다.

본 조성물에 포함되는 본 화합물의 배합량으로서는 0.00001중량%~5중량% 정도를 바람직한 예로 들 수 있으나, 사용하는 제형, 사용 대상 등의 다양한 조건에 따라 그 배합량을 적절히 설정할 수 있다. 그 중에서 본 조성물에 포함되는 본 화합물의 배합량은 0.00001중량%~0.5중량%가 바람직하고, 0.0001중량%~0.05중량%가 보다 바람직하다.

또한 본 조성물에 포함되는 상기 식 (6)~(8)로 나타낸 화합물의 배합량으로서는 0.0001중량%~10중량% 정도를 바람직한 예로 들 수 있으나, 이용하는 제형, 사용 대상 등의 다양한 조건에 따라 그 배합량을 적절히 설정할 수 있다. 그 중에서도 본 조성물에 포함되는 상기 화합물의 배합량은 0.0001중량%~1중량%가 바람직하고, 0.001중량%~0.1중량%가 보다 바람직하다.

본 조성물에서 본 발명의 식 (1)로 나타낸 화합물과 트레한젤린의 배합비는 예를 들어 0.01:1~10:1이고, 바람직하게는 0.4:1이다.

본 조성물에서 본 발명의 식 (2)로 나타낸 화합물과 트레한젤린의 배합비는 예를 들어 0.01:1~10:1이고, 바람직하게는 0.2:1이다.

본 조성물에서 본 발명의 식 (3)으로 나타낸 화합물과 트레한젤린의 배합비는 예를 들어 0.01:1~10:1이고, 바람직하게는 0.04:1이다.

본 조성물에서 본 발명의 식 (4)로 나타낸 화합물과 트레한젤린의 배합비는 예를 들어 0.01:1~10:1이고, 바람직하게는 0.05:1이다.

본 조성물에서 본 발명의 식 (5)로 나타낸 화합물과 트레한젤린의 배합비는 예를 들어 0.01:1~10:1이고, 바람직하게는 0.05:1이다.

본 조성물에서 식 (2)~(5)로 나타낸 본 화합물과 트레한젤린의 배합비는 예를 들어 0.01:1~10:1이고, 바람직하게는 0.34:1이다.

본 조성물은 트레한젤린 외에도 다양한 물질을 포함하고 있을 수도 있다.

이하, 본 조성물의 일례로서 "화장품 조성물" 및 "항산화제"에 대해 설명한다.

[3. 화장품 조성물]

본 발명의 일 실시형태에서 본 조성물은 화장품 조성물(이하, "본 화장품 조성물"이라 함)인 것이 바람직하다.

본 화장품 조성물은 상기 식 (1)~(5) 중 적어도 한 화합물을 포함하는 것이 바람직하고, 추가로 상기 식 (6)~(8)로 나타낸 화합물 중 어느 한 화합물을 포함하는 것이 보다 바람직하다.

본 화장품 조성물은 상기 화합물 외에, 식물유와 같은 유지류, 고급 지방산, 고급 알콜, 실리콘, 음이온 계면활성제, 양이온 계면활성제, 양성 계면활성제, 비이온 계면활성제, 방부제, 당류, 금속 이온 봉쇄제, 수용성 고분자와 같은 고분자, 증점제, 분체 성분, 자외선 흡수제, 자외선 차단제, 히알루론산과 같은 보습제, 향료, pH 조정제, 건조제 등을 포함하고 있을 수도 있다. 또한 본 화장품 조성물은 비타민류, 피부 부활제, 혈행 촉진제, 상재균 컨트롤제, 활성 산소 소거제, 항염증제, 항암제, 미백제, 살균제 등의 다른 약효 성분, 생리 활성 성분 등을 포함하고 있을 수도 있다.

유지류로서는 예를 들어 동백유, 달맞이꽃유, 마카다미아너트유, 올리브유, 유채씨유, 옥수수유, 참기름, 호호바유, 배아유, 밀배아유, 트리글리세린, 트리옥탄산글리세린 등의 액체 유지, 카카오지, 야자유, 경화 야자유, 팜유, 팜핵유, 목랍, 목랍핵유, 경화유, 경화 피마자유 등의 고체 유지, 밀랍, 칸데릴라랍, 면랍, 쌀겨랍, 라놀린, 아세트산 라놀린, 액상 라놀린, 사탕수수랍 등의 랍류, 유동 파라핀, 스쿠알렌, 스쿠알란, 마이크로크리스탈린 왁스 등을 들 수 있다.

고급 지방산으로서는 예를 들어 라우르산, 미리스트산, 팔미트산, 스테아르산, 올레산, 리놀레산, 리놀렌산, 도코사헥사엔산(DHA), 에이코사펜타엔산(EPA) 등을 들 수 있다.

고급 알콜로서는 예를 들어 라우릴알콜, 스테아릴알콜, 세틸알콜, 세토스테아릴알콜 등의 직쇄 알콜, 모노스테아릴글리세린에테르, 라놀린알콜, 콜레스테롤, 피토스테롤, 옥틸도데칸올 등의 분지쇄 알콜 등을 들 수 있다.

실리콘으로서는 예를 들어 쇄형 폴리실록산인 디메틸폴리실록산, 메틸페닐폴리실록산등, 환형 폴리실록산인 데카메틸폴리실록산 등을 들 수 있다.

음이온 계면활성제로서는 예를 들어 라우르산나트륨 등의 지방산염, 라우릴황산나트륨 등의 고급 알킬황산에스테르염, POE라우릴황산트리에탄올아민 등의 알킬에테르황산에스테르염, N-아실살코신산, 설포숙신산염, N-아실아미노산염 등을 들 수 있다.

양이온 계면활성제로서는 예를 들어 염화스테아릴트리메틸암모늄 등의 알킬트리메틸암모늄염, 염화벤잘코늄, 염화벤제토늄 등을 들 수 있다.

양성 계면활성제로서는 예를 들어 알킬베타인, 아미드베타인 등의 베타인계 계면활성제 등을 들 수 있다.

비이온 계면활성제로서는 예를 들어 소르비탄 모노올레이트 등의 소르비탄 지방산 에스테르류, 경화 피마자유 유도체를 들 수 있다.

방부제로서는 예를 들어 메틸파라벤, 에틸파라벤 등을 들 수 있다.

금속 이온 봉쇄제로서는 예를 들어 에데트산, 에데트산나트륨염 등을 들 수 있다.

고분자로서는 예를 들어 아라비아 검, 트라가칸트 검, 갈락탄, 구아 검, 카라기난, 펙틴, 한천, 퀸스시드, 덱스트란, 풀루란, 카복시메틸 전분, 콜라겐, 카제인, 젤라틴, 메틸셀룰로오스, 메틸히드록시프로필셀룰로오스, 히드록시에틸셀룰로오스, 카복시메틸셀룰로오스나트륨(CMC), 알긴산나트륨, 카복시비닐폴리머(CARBOPOL 등) 등의 비닐계 고분자, 벤토나이트 등을 들 수 있다.

증점제로서는 예를 들어 카라기난, 트라가칸트 검, 퀸스시드, 카제인, 덱스트린, 젤라틴, CMC, 히드록시에틸셀룰로오스, 히드록시프로필셀룰로오스, 카복시비닐폴리머, 구아 검, 잔탄 검 등을 들 수 있다.

분말 성분으로서는 예를 들어 탈크, 카올린, 운모, 실리카, 제올라이트, 폴리에틸렌 분말, 폴리스틸렌 분말, 셀룰로오스 분말, 무기 백색 안료, 무기 적색계 안료, 산화티탄 코티드 마이카, 산화티탄 코티드 탈크, 착색 산화티탄 코티드 마이카 등의 펄 안료, 적색 201호, 적색 202호 등의 유기 안료 등을 들 수 있다.

자외선 흡수제로서는 예를 들어 파라아미노벤조산, 살리실산페닐, 파라메톡시계피산이소프로필, 파라메톡시계피산옥틸, 2,4-디히드록시벤조페논 등을 들 수 있다.

자외선 차단제로서는, 예를 들어 산화티탄, 탈크, 카민, 벤토나이트, 카올린, 산화아연 등을 들 수 있다.

보습제로서는 예를 들어 폴리에틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 디프로필렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜, 글리세린, 디글리세린, 폴리글리세린, 자일리톨, 말티톨, 말토스, 소르비톨, 포도당, 과당, 콘드로이틴황산나트륨, 히알루론산나트륨, 젖산나트륨, 피롤리돈카본산, 시클로덱스트린 등을 들 수 있다.

약효 성분으로서는 예를 들어 비타민A유, 레티놀 등의 비타민A류, 리보플라빈 등의 비타민B2류, 피리독신염산염 등의 B6류, L-아스코르브산, L-아스코르브산인산에스테르, L-아스코르브산모노팔미트산에스테르, L-아스코르브산디팔미트산에스테르, L-아스코르브산-2-글리코시드 등의 비타민C류, 판토텐산칼슘 등의 판토텐산류, 비타민D2, 콜레칼시페롤 등의 비타민D류；α-토코페롤, 아세트산 토코페롤, 니코틴산 DL-α-토코페롤 등의 비타민E류 등의 비타민류 등을 들 수 있다.

본 화장품 조성물에 함유시킬 수 있는 물질로서 그 외에, 태반 추출물, 글루타치온, 바위취 추출물 등의 미백제, 로얄젤리, 너도밤나무 추출물 등의 피부 부활제, 캡사이신, 진제론, 칸타리스 팅크(cantharides tincture), 익타몰, 카페인, 탄닌산γ-오리자놀 등의 혈행 촉진제, 글리시리진 유도체, 그리시레틴산 유도체, 아줄렌 등의 소염제, 아르기닌, 세린, 로이신, 트립토판 등의 아미노산류, 말토스 자당 축합물 등의 상재균 컨트롤제, 염화리소자임을 들 수 있다.

나아가 본 화장품 조성물에 함유시킬 수 있는 물질로서 카모마일 엑기스, 파슬리 엑기스, 너도밤나무 엑기스, 와인 효모 엑기스, 그레이프 후르츠 엑기스, 인동덩굴 엑기스, 쌀 엑기스, 포도 엑기스, 홉 엑기스, 쌀겨 엑기스, 비파나무 엑기스, 황벽나무 엑기스, 의이인 엑기스, 쓴풀 엑기스, 멜리랏 엑기스, 자작나무 엑기스, 감초 엑기스, 작약 엑기스, 비누풀 엑기스, 수세미 엑기스, 고추 엑기스, 레몬 엑기스, 겐티아나 엑기스, 차조기 엑기스, 알로에 엑기스, 로즈마리 엑기스, 세이지 엑기스, 타임 엑기스, 차 엑기스, 해조 엑기스, 큐컴버 엑기스, 정향나무 엑기스, 당근 엑기스, 마로니에 엑기스, 하마멜리스 엑기스, 뽕 엑기스 등의 각종 추출물 등을 들 수 있다.

본 화장품 조성물은 예를 들어 수용액, 유제(油劑), 유액(乳液), 현탁액 등의 액제, 겔, 크림 등의 반고형제, 분말, 과립, 캅셀, 마이크로캅셀, 고형 등의 고형제의 형태로 적용 가능하다. 종래부터 공지의 방법으로 이러한 형태로 조제하여 로션제, 유제, 겔제, 크림제, 연고, 경고(硬膏), 찜질제, 에어로졸제, 좌제, 주사제, 분말제, 과립제, 정제, 환제, 시럽제, 트로키제 등의 다양한 제형으로 할 수 있다. 이것들을 신체에 도포, 접착, 분무, 음용 등에 의해 적용할 수 있다. 특히 이 제형들 중에서 로션제, 유제, 크림제, 연고제, 경고제, 찜질제, 에어로졸제 등이 피부 외용제로 적합하다.

본 화장품 조성물은 화장수, 유액, 크림, 팩 등의 피부 화장료, 메이크업 베이스 로션, 메이크업 크림, 유액형 또는 크림형 혹은 연고형의 파운데이션, 루즈, 아이컬러, 치크컬러와 같은 메이크업 화장료, 핸드크림, 레그크림, 바디로션 등의 신체용 화장료 등, 입욕제, 구강 화장료, 모발 화장료 등으로 할 수 있다.

[4. 항산화제]

본 발명의 일 실시형태에서 본 조성물은 항산화제(이하, "본 항산화제"라 함)인 것이 바람직하다.

본 항산화제는 통상의 약학적으로 허용되는 담체를 이용하여 통상의 방법에 의해 제재화할 수 있다.

경구용 고형 제재를 조제하는 경우에는, 주약(主藥)에, 부형제, 추가로 필요에 따라 결합제, 붕괴제, 활택제 등을 부가한 후 통상의 방법에 의해 용제, 과립제, 산제, 캅셀제 등으로 한다.

주사제를 조제하는 경우에는 주약에 필요에 따라 Ph 조정제, 완충제, 안정화제, 가용화제 등을 첨가하고, 통상의 방법에 의해 피하 또는 정맥내용 주사제로 할 수 있다.

피부 외용제를 조제하는 경우에는 전술한 본 화장품 조성물에 준해 조제할 수 있다. 예를 들어 상기 식 (1)~(5)로 나타낸 본 화합물을 용해시키는 지방산 에스테르류, 고급 알콜류 및 탄산프로필렌으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 혹은 2종 이상의 혼합물인 소수성·무수성의 용제와, 백색 바셀린, 황색 바셀린, 유동 파라핀 및 유동 파라핀의 폴리에틸렌 겔 중에서 선택되는 1종 혹은 2종 이상의 혼합물인 친유성 기제로 이루어지는 연고제로 할 수 있다.

또한 크림제로서는 본 화합물과, 5~20 중량부의 백색 바셀린 및 5~15 중량부의 고급 알콜류로 이루어지는 고형유분과 3~10 중량부의 스쿠알렌으로 이루어지는 액상유분으로 이루어지는 유상 성분과, 수상 성분과, 2.5~7.5 중량부의 2종 이상으로 이루어지는 계면활성제, 를 포함하는 크림제로 할 수 있다. 크림제의 유상 성분에는 상기한 백색 바셀린, 고급 알콜류, 스쿠알렌 외에 다른 고형유분, 액상유분을 첨가할 수도 있다.

주약에 필요에 따라 pH 조정제, 완충제, 안정화제, 가용화제 등을 첨가하고, 통상의 방법에 의해 연고·크림 등의 반고형제, 로션 등의 액제, 또는 테이프제와 같은 외용제로 할 수 있다.

본 항산화제는 전신적 또는 국소적으로 투여할 수 있다.

전신적으로 투여하는 경우에는 주사제, 경구제, 경비제 등으로 하여, 혈관내, 조직내, 위장관, 점막 등으로 수성 주사제, 유성 주사제, 정제, 과립제, 액제, 캅셀제, 소프트 캅셀제, 경비액제, 경비분제 등의 제형으로 투여된다. 투여량은 증상의 정도, 연령, 질환의 종류 등에 따라 다르나, 일반적으로 성인 1일 당 50~500mg를 1일 1회~수회로 나누어 투여한다.

또한 국소적으로 투여하는 경우에는 외용제로 하여, 연고·크림 등의 반고형제, 로션 등의 액제, 또는 테이프제의 제형으로 피부의 질환 부위에 직접 투여된다. 투여량은 증상의 정도, 연령, 질환의 종류 등에 따라 다르나, 통상의 항염증용 피부 외용제의 적용 방법에 준할 수 있다. 예를 들어 외용제의 적당량을 증상에 맞게 1일 1회~수회 도포할 수 있고, 증상에 맞게 몇번이든 도포할 수 있다.

[5. 본 화합물의 제조 방법]

본 발명의 일 실시형태에 따른 본 화합물의 제조 방법(이하, "본 제조 방법"이라 함)은 (A)상기 식 (1)~(5)로 나타낸 본 화합물을 생산하는 능력을 갖는 미생물을 배지내에서 배양하는 공정, 및 (B)상기 배양물로부터 상기 식 (1)~(5)로 나타낸 본 화합물을 채취하는 공정을 포함한다.

본 화합물은 본 화합물을 생산하는 능력을 갖는 미생물을 배지내에서 배양하고, 배양물내에 본 화합물을 축적시키고, 이 배양물로부터 본 화합물을 채취(분리·추출·정제)함으로써 제조할 수 있다.

본 제조 방법에서 "본 화합물을 생산하는 능력을 갖는 미생물"은 본 화합물을 생산하는 능력을 갖는 미생물이면 특별히 한정되지 않는다. 또한 이들의 변이주를 비롯하여 유전자 재조합주, 동정되지 않은 미지의 야생주 등의 본 화합물을 생산하는 능력을 갖는 균 모두가 본 제조 방법에 사용할 수 있는 균주에 포함된다.

미생물이 "본 화합물을 생산하는 능력을 갖는 미생물"인지의 여부는 피험대상이 되는 미생물이 적당히 증식할 수 있는 조건하(배양 온도, pH, 배지 성분 등)에서 배양을 수행하여 배양물내의 본 화합물의 유무를 조사함으로써 수행할 수 있다. 상기 배양물내에 본 화합물이 존재하면 상기 미생물은 본 화합물을 생산하는 능력을 갖는 미생물이라고 결정할 수 있다. 아울러 상기한 피험대상이 되는 미생물이 적당히 증식할 수 있는 조건은 배양하는 미생물에 따라 적절히 설정 가능하다.

본 명세서에서 "변이주"는 인공적 또는 자연계에서의 변이 유발 자극에 의해 본 화합물을 생산하는 능력을 갖는 미생물과는 다른 균학적 성상 또는 유전자를 갖는 균주이고, 이러한 변이주에는 본 화합물을 생산하는 능력을 갖는 미생물로부터 파생한 균주의 외에도, 본 화합물을 생산하는 능력을 갖는 미생물을 파생시킨 원래의 균주도 포함된다. 본 명세서에서 변이주는 실제 파생의 흔적의 유무를 묻는 것이 아니고, 예를 들어 본 화합물을 생산하는 능력을 갖는 미생물의 유전자(예를 들어 16S rRNA 유전자)와 높은 상동성(예를 들어 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상 등)을 갖는 유전자를 갖는 균주도 또한 변이주에 포함된다. 또한 이러한 변이주는 본 화합물의 산생능을 유지하고 있는 한 인공적으로 제작한 것이어도, 천연에서 채취한 것이어도 무방하다.

본 명세서에서 "유전자 재조합주"는 미생물의 야생주에 외부로부터 인공적으로 유전자를 도입한 균주을 의미한다. 유전자 재조합주는 본 화합물을 생산하는 능력을 갖는 한 특별히 한정되지 않는다. 유전자 재조합주는 또한 형질 전환체로도 불린다.

유전자 재조합주의 숙주로서는 특별히 한정되지 않으나 예를 들어 게놈 상에 본 화합물의 합성 유전자를 갖지 않는 미생물을 사용할 수 있다. 이 경우, 상기 미생물에 본 화합물의 합성 유전자를 도입함으로써 본 화합물의 제조가 가능해진다.

또한 다른 실시형태에서 게놈 상에 본 화합물의 합성 유전자를 갖는 미생물을 숙주로서 사용할 수 있다. 그러한 미생물은 유전자를 도입하지 않아도 본 화합물을 제조하는 능력을 가지나, 그러한 미생물에 본 화합물의 합성 유전자를 도입한 경우에는 본 화합물의 제조량이 증가하는 등의 이점을 갖는다. 이러한 미생물로서 예를 들어 폴리모포스포라 루브라(Polymorphospora rubra) K07-0510주(수탁번호 NITE BP-01411) 등을 들 수 있다. 아울러 포리모포스포라 루브라(Polymorphospora rubra) K07-0510주는 상술한 바와 같이 그 단체(單體)로 본 화합물을 제조할 수 있으므로, 유전자를 도입하지 않는 경우에도 "본 화합물을 생산하는 능력을 갖는 미생물"에 포함된다.

유전자 재조합주의 숙주로서는 예를 들어 Escherichia속, Corynebacterium속, Brevibacterium속, Bacillus속, Microbacterium속, Serratia속, PSEudomonas속, Agrobacterium속, Alicyclobacillus속, Anabaena속, Anacystis속, Arthrobacter속, Azobacter속, Chromatium속, Erwinia속, Methylobacterium속, Phormidium속, Rhodobacter속, RhodopSEudomonas속, Rhodospirillum속, Scenedesmun속, Streptomyces속, Synnecoccus속, Zymomonas속에 속하는 미생물 등을 들 수 있다. 바람직하게는 Escherichia속, Corynebacterium속, Brevibacterium속, Bacillus속, PSEudomonas속, Agrobacterium속, Alicyclobacillus속, Anabaena속, Anacystis속, Arthrobacter속, Azobacter속, Chromatium속, Erwinia속, Methylobacterium속, Phormidium속, Rhodobacter속, RhodopSEudomonas속, Rhodospirillum속, Scenedesmun속, Streptomyces속, Synnecoccus속, Zymomonas속에 속하는 미생물 등이다. 방선균으로서는 예를 들어 Streptomyces albus, Streptomyces lividans, Streptomyces chromofuscus, Streptomyces exfoliatus, Streptomyces argenteorus 등을 들 수 있다.

유전자 재조합주의 숙주는 외부로부터 원하는 유전자를 인공적으로 도입했을 때 본 화합물을 생산하는 능력을 갖는 것이면 특별히 한정되지 않으나, 방선균이 바람직하고, Streptomyces속의 방선균이 보다 바람직하고, Streptomyces lividans가 특별히 바람직하다.

유전자 재조합주의 제작은 예를 들어 특개2017-158546호 공보에 기재된 방법에 의해 수행된다. 간결하게는, 특개2017-158546호 공보의 기재에 기초하여, 트레한젤린의 합성에 관여하는 효소군(에노일-CoA 하이드라타제, 3-케토아실-CoA 신타제, 아실 트랜스퍼라제 및 3-케토아실-CoA 리덕타제)을 코딩하는 유전자를 취득하고, 동 문헌의 기재에 기초하여, 취득한 유전자를 벡터에 조합하여 숙주에 도입함으로써, "본 화합물을 생산하는 능력을 갖는 미생물"에 포함되는 유전자 재조합주(형질 전환체)를 얻을 수 있다.

즉, 본 발명의 다른 일 실시형태에서 본 화합물의 제조 방법은 (C)트레한젤린의 합성에 관여하는 효소를 코딩하는 유전자를 도입한 형질 전환체(예를 들어 방선균)를 배지내에서 배양하는 공정, 및 (D)상기 배양물로부터 상기 식 (1)~(5)로 나타낸 본 화합물을 채취하는 공정을 포함한다.

본 실시형태에서 본 화합물은 트레한젤린의 합성에 관여하는 효소군을 조합한 형질 전환체(예를 들어 방선균)를 배지내에서 배양하고, 배양물내에 본 화합물을 축적시키고, 이 배양물로부터 본 화합물을 채취(분리·추출·정제)함으로써 제조할 수 있다.

본 화합물을 생산하는 능력을 갖는 미생물을 배양하기 위한 배지는 미생물의 영양원으로서 사용할 수 있는 것이면 된다. 예를 들어 시판의 펩톤, 고기 엑기스, 콘 스티프 리커, 면실분, 땅콩분, 대두분, 효모 엑기스, NZ-아민, 카제인의 수화물, 질산소다, 질산암모늄, 황산암모늄 등의 질소원, 글리세린, 스타치, 글루코오스, 갈락토오스, 만노스 등의 탄수화물, 또는 지방 등의 탄소원, 및 식염, 인산염, 탄산칼슘, 황산마그네슘 등의 무기염을 단독으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 그 외, 필요에 따라 미량의 금속염, 소포제로서 동물유, 식물유, 광물유 등을 첨가할 수도 있다. 이것들은 생산균을 이용하여 본 화합물의 생산에 도움이 되는 것이면 되고, 공지의 미생물의 배양 재료는 모두 이용할 수 있다.

또한 본 화합물을 생산하는 능력을 갖는 미생물의 배양은 생산균이 발육하고, 또한 본 화합물을 생산할 수 있는 온도 범위(예를 들어 10~40℃, 바람직하게는 25~30℃)에서 수일~2주간 진탕 배양함으로써 수행할 수 있다. 배양 조건은 본 명세서의 기재를 참조하면서, 사용하는 본 화합물의 생산균의 성질에 따라 적절히 선택하여 수행할 수 있다.

본 화합물의 채취는 배양액보다 아세트산에틸 등의 수불혼화성의 유기용매를 이용하여 추출함으로써 수행할 수 있다. 본 추출법뿐 아니라, 지용성 물질의 채취에 이용되는 공지의 방법, 예를 들어 흡착 크로마토그래피, 분배 크로마토그래피, 겔 여과 크로마토그래피, 박층 크로마토그래피를 통한 채취, 원심향류 분배 크로마토그래피, 고속 액체 크로마토그래피 등을 적절히 조합하거나 혹은 반복함으로써 순수해질 때까지 정제할 수 있다.

본 화합물의 채취는 예를 들어 실시예에 기재한 방법에 의해 수행할 수 있다.

본 발명의 일 실시형태는 이하의 구성을 포함한다.

<1> 하기 식 (1)로 나타낸 화합물.

[식 9]

<2> 상기 식 (1)에서, R²는 수소, 아세틸기, 2-부테노일기 또는 2-메틸-2-펜테노일기이고, R⁵는 2-메틸-2-부테노일기이고, R¹, R³, R⁴ 및 R⁶은 수소인, <1>에 기재된 화합물.

<3> <1> 또는 <2>에 기재된 화합물을 포함하는 조성물.

<4> 추가로 하기 식 (6)~(8)로 나타낸 화합물의 적어도 하나를 포함하는, <3>에 기재된 조성물.

[식 10]

[식 11]

[식 12]

<5> 상기 조성물이 화장품 조성물 또는 항산화제인, <3> 또는 <4>에 기재된 조성물.

<6> <1> 또는 <2>에 기재된 화합물의 제조 방법으로서,

(A) <1> 또는 <2>에 기재된 화합물을 생산하는 능력을 갖는 미생물을 배지내에서 배양하는 공정, 및

(B) 상기 배양물로부터 <1> 또는 <2>에 기재된 화합물을 채취하는 공정을 포함하는 방법.

본 발명은 상술한 각 실시형태로 한정되는 것은 아니고, 청구항에 나타낸 범위에서 다양한 변경이 가능하고, 다른 실시형태에 각각 개시된 기술적 수단을 적절히 조합하여 얻을 수 있는 실시형태에 대해서도 본 발명의 기술적 범위에 포함된다.

실시예

이하에 실시예에 의해 본 발명을 더욱 상세히 설명하나, 본 발명은 이러한 실시예에 한정되는 것은 아니다.

[1. 생산 균주의 제작]

방선균 Polymorphospora rubra K07-0510주를, 효모 엑기스 1% 및 글루코오스 1%를 포함하는 YD 배지에서, 적당한 온도(예를 들어 27℃)에서 수일간 배양했다. 배양 후, 얻어진 배양액으로부터 원심분리에 의해 균체를 취득했다. 이어서, 얻어진 균체로부터 통상의 방법(모레큘러 클로닝 제2판)에 따라 염색체 DNA를 단리 정제했다.

서열 번호 1의 4개의 오픈 리딩 프레임(orf)을 편의 상, 염기 서열 번호가 적은 것부터 orfA, orfB, orfC, orfD로 명명했다. orfA~D의 서열 번호 1에서의 위치와 기능은 이하와 같다.

·orfA(서열 번호 2: 서열 번호 1의 염기 번호 1-828, 에노일-CoA 하이드라타제를 코딩)

·orfB(서열 번호 3: 서열 번호 1의 염기 번호 875-1900, 3-케토아실-CoA 신타제를 코딩)

·orfC(서열 번호 4: 서열 번호 1의 염기 번호 1905-2684, 아실 트랜스퍼라제를 코딩)

·orfD(서열 번호 5: 서열 번호 1의 염기 번호 2681-3475, 3-케토아실-CoA 리덕타제를 코딩)

상기 4개의 유전자를 충분히 발현시킬 수 있는 재조합체 플라스미드를 PCR법[Science, 230, 1350(1985)]을 이용하여 하기 방법에 의해 구축했다.

방선균 Polymorphospora rubra K07-0510주의 염색체 DNA를 주형으로 하고, 서열 번호 6에 나타낸 5'말단에 PstI 제한 효소 사이트 및 리보솜 결합 서열을 갖는 센스 프라이머, 서열 번호 7에 나타낸 5'말단에 StuI 제한 효소 사이트를 갖는 안티센스 프라이머 및 Taq DNA polymerase(로슈라이프사이언스사)를 이용하여 DNA Thermal Cycler(어플라이드바이오시스템즈사)로 PCR를 수행함으로써 orfA, orfB, orfC 및 orfD(이하, "orfABCD"라 함)를 발현시키는 DNA를 증폭했다. PCR은 95℃에서 30초간, 68℃에서 30초간, 72℃에서 4분간으로 이루어지는 반응 공정을 1사이클과 30사이클 수행한 후, 72℃에서 10분간 반응시키는 조건으로 수행하였다. 증폭된 DNA 단편을 아가로스 겔 전기영동에 의해 정제하고 제한 효소 PstI과 StuI로 소화시킴으로써, PstI 및 StuI 처리 orfABCD를 발현시키는 DNA를 함유하는 DNA 단편(이하, "orfABCD 함유 DNA 단편"이라 함)을 취득했다.

pOSV556t[Nat. Chem., 3, 338, (2011)]를 제한 효소 PstI과 StuI로 소화시켜 PstI 및 StuI 처리 pOSV556t 단편을 취득했다. 상기에서 취득된 PstI 및 StuI 처리 orfABCD 함유 DNA 단편을 PstI 및 StuI 처리 pOSV556t 단편과 혼합한 후, 라이게이션 반응을 수행함으로써 재조합체 DNA를 취득했다.

이 재조합체 DNA를 이용하여 E. coli Top10주를 통상의 방법에 따라 형질전환 후, 이 형질 전환체를 암피실린 100μg/ml를 포함하는 LB 한천 배지에 도포하여 37℃에서 하룻밤 배양했다. 이 형질 전환체로부터 정법에 따라 재조합 DNA를 포함하는 플라스미드를 단리했다. 이 재조합체 DNA가 orfABCD인 것을, DNA 서열을 결정함으로써 확인하고, 이 플라스미드를 pOSV556-orfABCD로 명명했다.

pOSV556-orfABCD를 통상의 방법에 의해 E. coli ET12567/pUZ8002주[Practical Streptomyces Genetics(2000)]에 도입하여, 카나마이신 50μg/ml, 클로람페니콜 25μg/ml, 암피실린 100μg/ml에 내성을 나타내는 E. coli ET12567/pUZ8002/pOSV556-orfABCD주를 얻었다. 나아가 pOSV556-orfABCD를 통상의 방법에 의해 E. coli ET12567/pUZ8002주로부터 방선균 Streptomyces lividans 1326주(독립행정법인 제품평가기술기반기구 바이오테크놀로지 본부 생물유전자원부문(NBRC): NBRC 번호 15675)에 접합 전달시킴으로써, 하이그로마이신 50μg/ml에 내성을 나타내는 Streptomyces lividans/pOSV556-orfABCD를 얻었다.

[2. 신규 화합물의 단리 및 동정]

상기에서 얻어진 Streptomyces lividans/pOSV556-orfABCD를, 효모 엑기스 1% 및 글루코오스 1%를 포함하는 액체 배지 500ml 내, 27℃에서 1일간 진탕 배양했다. 이어서, 20% 트레할로스 수용액 50ml를 첨가한 후 다시 27℃에서 4일간 진탕 배양했다. 얻어진 배양액에 에탄올 500ml를 가하고 1시간 교반했다. 이어서, 그 추출액내의 에탄올을 감압 제거하고, 얻어진 수용액에 250ml의 아세트산에틸을 가하여 잘 교반한 후 아세트산에틸층을 회수했다. 그 후, 고체로 건조시켜 0.1% 포름산 100mL에 용해시켰다.

상기에서 얻어진 500mL의 배양액 유래 농축 건조 고체 샘플을 사용하여 신규 화합물의 정제를 수행하였다. 정제에는 이하의 컬럼 및 용출 용매를 사용했다.

<1번째 정제>

·컬럼: ULTRA PACK ODS-SM-50B φ26Х300mm(야마젠사)

·용출 용매: 물/아세트니트릴/포름산(850/150/1)

<2번째 정제>

·컬럼: 오픈 컬럼으로서, Silica PSQ-100B 10g을 사용

·용출 용매: 아세트산에틸

정제 도중 획분의 순도 확인은 HPLC로 수행하였다. LC 순도 95% 이상의 샘플을 회수하여 동결건조시켜 정제했다. 아울러 HPLC 및 LC/MS는 이하의 분석 조건에 의해 수행하였다.

·장치: Prominence UFLC시스템(시마츠사)

·컬럼: YMC-Pack ODS-AQ(주식회사 와이에무시)

·이동상: 물/아세트니트릴/포름산(850/150/1)

·유속: 1mL/분

·검출: 220nm

·장치: Agilent Technologies 6224 TOF LC/MS(아지렌트테크놀로지사)

·컬럼: YMC-Pack ODS-AQ(주식회사 와이에무시)

·이동상: 물/아세트니트릴/포름산(850/150/1)

·유속: 0.5mL/분

이에 의해, 신규 화합물 A(25mg), 신규 화합물 B(12mg), 신규 화합물 C(15mg), 및 신규 화합물 D(20mg)이 얻어졌다. 이 화합물들에 대해 이하의 융점 및 NMR 분석을 수행하였다.

(융점 및 NMR 분석 결과)

상기 신규 화합물 A, B, C 및 D에 대해 이하의 분석 조건에 의해 융점 및 NMR를 측정했다.

<융점 측정 조건>

·장치: BUCHI Melting Point B-545(BUCHI사)

·장치: BRUKER AMX 400(Bruker사)

·용매: DMSO-d6

· 내부 표준: TMS

그 결과, 신규 화합물 A, B, C 및 D는 각각 3-O-안젤로일트레할로스, 3-O-아세틸-3'-O-안젤로일트레할로스, 3-O-안젤로일-3'-O-이소크로토닐트레할로스 및 3-O-(2-메틸-2-부테노일)-3'-O-(2-메틸-2-펜테노일)트레할로스인 것이 동정되었다.

[3. 생리 기능 평가]

상기에서 얻어진 화합물에 대해 생리 기능의 평가를 수행하였다. 생리 기능의 평가는 Carnosic acid, a catechol-type electrophilic compound, protects neurons both in vitro and in vivo through activation of the Keap1/Nrf2 pathway via S-alkylation of targeted cysteines on Keap1. Takumi Satoh et al., Journal of Neurochemistry. Vol. 104, pp. 1116-1131, (2008)에 기재된 툴을 이용하여 수행하였다.

간결하게는, 10% FBS-DMEM/F12 배지(GIBCO사)를 이용하여 ARPE-19 세포를 50% 포화(confluent)가 되도록 24 웰 플레이트에 파종했다. 24시간 후, 1웰 당, (1)0.5μg의 pGL3-GSTYaARE-Luciferase 벡터와, 0.5μg의 pSV-betaGAL 벡터와, 50μL의 Opti-MEM I(GIBCO사)와의 혼합 용액(벡터의 용액), 및 (2)2μL의 lipofectamine 2000(Thermo Fisher사)과 50μL의 Opti-MEM I(GIBCO사)와의 혼합 용액(lipofectamine 2000의 용액)을 조제하여 실온에서 5분간 방치했다. 이 벡터의 용액과 상기 lipofectamine 2000의 용액을 혼합하여 실온에서 20분간 방치했다. 그 혼합액을 배양 세포(ARPE-19 세포)에 첨가하고(1웰 당 100μL), CO₂ 인큐베이터에서 6시간 배양했다. 이어서, 배지를 새로운 10% FBS-DMEM/F12 배지(0.5mL/웰)로 교환하고, 18시간 배양했다. 그 후, 배지를 새로운 10% FBS-DMEM/F12 배지(0.3mL/웰) 또는 각종 트레한젤린 유도체를 20mg/mL 포함하는 10% FBS-DMEM/F12 배지(0.3mL/웰)로 교환하고, 24시간 배양했다. 배지를 제거한 후, PassiveLysisBuffer(프로메가사) 150μL를 가하여 세포 용해액을 조제했다.

세포 용해액을 100μL씩 96웰 플레이트에 취하고, βGAL 어세이 키트 용액(프로메가사) 100μL를 가하여 37℃에서 3시간 인큐베이트했다. 그 후, 405nm의 흡광도를 측정함으로써 βGAL 활성을 확인했다.

상기와는 별도의 96웰 플레이트에 세포 용해액을 20μL씩 넣고 루시페라제 어세이 키트액(프로메가사)을 100μL씩 첨가했다. 그 후, 발광을 측정함으로써 루시페라제 활성을 측정했다. 얻어진 루시페라제 활성의 결과를 βGAL 활성의 결과로 나눔으로써 보정하여 antioxidant responsive element 전사 활성을 산출했다. 결과를 도 1에 나타냈다.

(결과)

도 1로부터, 3-O-안젤로일트레할로스, 3-O-아세틸-3'-O-안젤로일트레할로스, 3-O-안젤로일-3'-O-이소크로토닐트레할로스 및 3-O-(2-메틸-2-부테노일)-3'-O-(2-메틸-2-펜테노일)트레할로스는 모두 대조와 비교하여 1.24~2.09배의 루시페라제 활성을 나타냈다. 이를 통해, 3-O-안젤로일트레할로스, 3-O-아세틸-3'-O-안젤로일트레할로스, 3-O-안젤로일-3'-O-이소크로토닐트레할로스 및 3-O-(2-메틸-2-부테노일)-3'-O-(2-메틸-2-펜테노일)트레할로스는 항산화 작용을 가짐을 알았다.

또한 공지 물질인 트레한젤린 A와의 비교에서, 3-O-안젤로일트레할로스는 트레한젤린 A와 동일한 정도의, 3-O-안젤로일-3'-O-이소크로토닐트레할로스 및 3-O-(2-메틸-2-부테노일)-3'-O-(2-메틸-2-펜테노일)트레할로스는 트레한젤린 A보다 높은, 항산화 작용을 가짐을 알았다.

[4. 처방예]

(화장수)

본 발명의 일 실시형태에 따른 화합물을 포함하는 화장료로서, 하기의 조성으로 화장수를 제조했다. 실온하에서 하기의 성분 (11)에 성분 (1)~(10)를 가하여 교반했다. 그 후, 성분 (12)를 가하여 균일하게 용해시켜 로션을 얻었다(단위는 중량%).

(1) 글리세린 9.5

(2) 1,3-부틸렌글리콜 4.5

(3) 포도당 1.5

(4) 에탄올 5.0

(5) 카복시비닐폴리머 0.02

(6) 글리시리진디칼륨 0.1

(7) 히알루론산나트륨 0.1

(8) 본 발명의 일 실시형태에 따른 화합물 0.1

(9) 시트르산 0.05

(10) 시트르산나트륨 0.1

(11) 이온 교환수 잔여

(12) 수산화칼륨 0.01

산업상의 이용 가능성

본 발명은 항산화 작용을 갖는 신규 화합물이므로 화장품, 의약 등의 분야에서 이용할 수 있다.

SEQUENCE LISTING <110> NAGASE & CO., LTD. THE KITASATO INSTITUTE <120> Novel compound and use thereof <130> NGS19461 <150> JP 2019-068164 <151> 2019-03-29 <160> 7 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 3475 <212> DNA <213> Polymorphospora rubra <400> 1 gtgacccgac cggacgcccc gggcccaccg gtcgccgccc cggacccggc cgacgccgtc 60 gtgacggccg tcgagccgta cgtggtccgg gcgacgatca accgaccggc ccgccgcaac 120 gccatcgacc tcgccgtgat cgagggcctc gaacgcgcca tcgacctcgc cgaggcgacc 180 ggcgcccggg tcctggtgct gcgcggcgcc ggcggcacct tctgctccgg cgccgacctg 240 cgcgtcctgg aggagatgag cgtcgacccg caccgggtgg agacgttcat ggtgcggctc 300 gccctcgtgc tgcgccggct ggagaccgcc cggttcgtct cggtcgcggt cgtcgagggg 360 cacgccgtcg cgggcggctg cgagatcctg ctcgcctgcg acgtctcggt cgccgccacc 420 gacgcccgca tcggcgaccg ccatctcgag tacgggctgg tccccgccgc cggcggctcg 480 gtacggctgg cccgcaccct gcccaaggcc cggggcaact acctgctgct cgccgccgac 540 ctgctcaccg gggagcaggc ggcgcagtgg ggactggtca gcgtcgcggt gccgccaacc 600 gacctggaac cccgggtgga cgccctggtc gggcggctcg tcggccacag cgccgacgcg 660 ctcgccgtgg tcaagaagat ggtctggacc gccgaccacg aaccccggcc ggacgccatg 720 tcctgggaac gccggctctt cctgcgccac ctcggctccg aagacgtgtc cgaggggctg 780 cgcgccttcc gcgagcggcg ccggccggcg ttccgcgccg atgactgact ccgtacggcc 840 gcccgaccgg acggcccgac cgcaaggaga ccacatgtcg acctcgacgg tgatcggaac 900 aggttcgtac ctaccccgcc gcgtcctcag cagcggcgaa ctggcccgcc gggtcggtgt 960 ggcggagaac tggatcgtgg agaagaccgg gatccgggaa cgccgggtgg ccgccgacga 1020 ggaggccacc tccgacctgg ccacccgggc cgcgcgccgg gcgctgcgga ccgcccggct 1080 ggacccggcc gacgtcgacc tgatcgtgct ggcgacctcc acaccggacc ggccgatgcc 1140 ggccaccgcc agcaccgtgc aggccaacct cggcgcccgc caggcggtcg cgttcgacgt 1200 cgacgcggtg tgcagcggct tcgtgtacgc cctcgtcgtc gcccactcga tgctgaacag 1260 cgagggctgg gcccgtaccg cgctggtgat cggcgccgac acgtactcgc gggtcctgga 1320 ctacaccgac cggcgtaccg cggtgctctt cggcgacggt gccggcgcgg tcgtcctcgg 1380 ccgggagacc ggcggcggga gcggaatccg ggccaccacc ctgggcaccg acggcaccct 1440 cgccgacctc gtccagatcc cggccggcgg cagccgccgg ccggcgagcg cgcagacggt 1500 cgaggccggc gaccactact tcgcgatgcg cggcggcgac gtccgcaggc tggccaacca 1560 ggtcttcccg gcactggtcg ggcaactgct caaggcggcc tcgctcgacc tggaccaggt 1620 cgacctgatc gccgcccacc aggccaacgg cacgatgctc accgactggt cgcgggacct 1680 cggcctgcgc ccgggggtgc tgcaccgcac cgtcgagcgg tacggcaaca ccggtgccgc 1740 ctcggtcccg gtcaccctcg acgacgccgt acgcaccggg cggctcggtg ccgccgccac 1800 cctgctgatg gtcgccttcg gcggcgggat gacctggggc ggcgtcgccc tggactggtc 1860 cgccgacccg tcggttcccc gctccaactg cgtgaggtga agtgatgacc acgtccgcac 1920 tcggcgccga accgggcgcc accgatccgc cggccgcccc gccggtctcc tacgccccgt 1980 ccggccggat gccccggacg atcaaccgct ggccgcgccc gttcgcgccg cgcaacatcc 2040 tcggcgtgct gcgggcccgg ctgcgcggcg ccacgatcag cctcaaccag gtcaagttcg 2100 acgagtccac cgcggagcgc aacgcgctgg tgatggaaca cgcgctgctg cggcacagcc 2160 acgtcgcccg gtacgcgatc gtcggcccgt tcacctcgct gttcaaggtc cgggtcggcc 2220 cgtacgccgg gatcgccgag aaggtgaccg tcggtgccct gccgcactgg ccggaactgc 2280 cgaccagtca cgtcttcccg gtcaacgccg agttcggctt ctgcgcgggg gagtggccgg 2340 aggtgcccgg caccgaggtc ggcgccgacg cgtggatcgg cgccggcgcg gtggtccggg 2400 ccggcgtccg gatcgggcac ggcgcgatcg tcgcggccgg cgcggtcgtc acccgcgacg 2460 tcgccgacta cgagatcgtg gccggggtgc cggcccgccg gctgcggtcc cggttccccg 2520 acgacctggc cgaacggctg gtcgcgctgg cctggtggga ctggccgccg gggttcatca 2580 aggccaacat cgacctgttc cagcggccgc tgaccgccga caccctggcc gcgctggagg 2640 agcgggcccg cgccctgccc acacccccgg gtggtgccgc gtgaccgccg gtacgggcca 2700 gccggtcgtc gccgcgcccg gcagggcgct cgccgaccgg gtggtggtgg tgaccggcgc 2760 cagccgcggt gtcggccgcg acctcgcccg ggtgttcgcc gaccacggcg cccgcctcgg 2820 cctgctggcc cgcagccggg acgcgctcga cgacctcggc ggcacgctca ccgccgccgg 2880 tgccgacgtc ctcgccgtgc cgtgcgacgt cggcgaaccg gactcgctgg ccggcgcggt 2940 cgacgccgtc gccgggcact tcggagggat cgactcggtc gtcgtcaacg ccggcatctc 3000 gcccgtcgcc cgtcgggcgc accacctgcc gatcgacgcc tggcacgacg tgctggcgac 3060 caacctgacc ggcgggttcg tcacggcgcg ggcggcgtat ccgcacctgg cccgctcggg 3120 gcgtggccgg ctggtgttca ccacctcggt catggccgcc accccgcggc gcgggctgag 3180 cgcgtacgcg gcgtcgaagg ccggcctgga ggggctcacc cgggccctgg ccgctgactg 3240 ggcgggggac ggaatcctgg tcaacgcggt cgcgccgggg ttcttcgaca ccgggctcgg 3300 cgccgccttc cacacctcgc agcgcctgca cgagcaggtc gtcggtcgta cgccggtggc 3360 ccggttcggc cgcgccgacg agttggccgc cgcgttcgtc ttcctggccg gtgacgcctg 3420 cggttacctg accggtcagg tgctcgccgt cgacggcggc tacggcctgg gctga 3475 <210> 2 <211> 828 <212> DNA <213> Polymorphospora rubra <400> 2 gtgacccgac cggacgcccc gggcccaccg gtcgccgccc cggacccggc cgacgccgtc 60 gtgacggccg tcgagccgta cgtggtccgg gcgacgatca accgaccggc ccgccgcaac 120 gccatcgacc tcgccgtgat cgagggcctc gaacgcgcca tcgacctcgc cgaggcgacc 180 ggcgcccggg tcctggtgct gcgcggcgcc ggcggcacct tctgctccgg cgccgacctg 240 cgcgtcctgg aggagatgag cgtcgacccg caccgggtgg agacgttcat ggtgcggctc 300 gccctcgtgc tgcgccggct ggagaccgcc cggttcgtct cggtcgcggt cgtcgagggg 360 cacgccgtcg cgggcggctg cgagatcctg ctcgcctgcg acgtctcggt cgccgccacc 420 gacgcccgca tcggcgaccg ccatctcgag tacgggctgg tccccgccgc cggcggctcg 480 gtacggctgg cccgcaccct gcccaaggcc cggggcaact acctgctgct cgccgccgac 540 ctgctcaccg gggagcaggc ggcgcagtgg ggactggtca gcgtcgcggt gccgccaacc 600 gacctggaac cccgggtgga cgccctggtc gggcggctcg tcggccacag cgccgacgcg 660 ctcgccgtgg tcaagaagat ggtctggacc gccgaccacg aaccccggcc ggacgccatg 720 tcctgggaac gccggctctt cctgcgccac ctcggctccg aagacgtgtc cgaggggctg 780 cgcgccttcc gcgagcggcg ccggccggcg ttccgcgccg atgactga 828 <210> 3 <211> 1026 <212> DNA <213> Polymorphospora rubra <400> 3 atgtcgacct cgacggtgat cggaacaggt tcgtacctac cccgccgcgt cctcagcagc 60 ggcgaactgg cccgccgggt cggtgtggcg gagaactgga tcgtggagaa gaccgggatc 120 cgggaacgcc gggtggccgc cgacgaggag gccacctccg acctggccac ccgggccgcg 180 cgccgggcgc tgcggaccgc ccggctggac ccggccgacg tcgacctgat cgtgctggcg 240 acctccacac cggaccggcc gatgccggcc accgccagca ccgtgcaggc caacctcggc 300 gcccgccagg cggtcgcgtt cgacgtcgac gcggtgtgca gcggcttcgt gtacgccctc 360 gtcgtcgccc actcgatgct gaacagcgag ggctgggccc gtaccgcgct ggtgatcggc 420 gccgacacgt actcgcgggt cctggactac accgaccggc gtaccgcggt gctcttcggc 480 gacggtgccg gcgcggtcgt cctcggccgg gagaccggcg gcgggagcgg aatccgggcc 540 accaccctgg gcaccgacgg caccctcgcc gacctcgtcc agatcccggc cggcggcagc 600 cgccggccgg cgagcgcgca gacggtcgag gccggcgacc actacttcgc gatgcgcggc 660 ggcgacgtcc gcaggctggc caaccaggtc ttcccggcac tggtcgggca actgctcaag 720 gcggcctcgc tcgacctgga ccaggtcgac ctgatcgccg cccaccaggc caacggcacg 780 atgctcaccg actggtcgcg ggacctcggc ctgcgcccgg gggtgctgca ccgcaccgtc 840 gagcggtacg gcaacaccgg tgccgcctcg gtcccggtca ccctcgacga cgccgtacgc 900 accgggcggc tcggtgccgc cgccaccctg ctgatggtcg ccttcggcgg cgggatgacc 960 tggggcggcg tcgccctgga ctggtccgcc gacccgtcgg ttccccgctc caactgcgtg 1020 aggtga 1026 <210> 4 <211> 780 <212> DNA <213> Polymorphospora rubra <400> 4 atgaccacgt ccgcactcgg cgccgaaccg ggcgccaccg atccgccggc cgccccgccg 60 gtctcctacg ccccgtccgg ccggatgccc cggacgatca accgctggcc gcgcccgttc 120 gcgccgcgca acatcctcgg cgtgctgcgg gcccggctgc gcggcgccac gatcagcctc 180 aaccaggtca agttcgacga gtccaccgcg gagcgcaacg cgctggtgat ggaacacgcg 240 ctgctgcggc acagccacgt cgcccggtac gcgatcgtcg gcccgttcac ctcgctgttc 300 aaggtccggg tcggcccgta cgccgggatc gccgagaagg tgaccgtcgg tgccctgccg 360 cactggccgg aactgccgac cagtcacgtc ttcccggtca acgccgagtt cggcttctgc 420 gcgggggagt ggccggaggt gcccggcacc gaggtcggcg ccgacgcgtg gatcggcgcc 480 ggcgcggtgg tccgggccgg cgtccggatc gggcacggcg cgatcgtcgc ggccggcgcg 540 gtcgtcaccc gcgacgtcgc cgactacgag atcgtggccg gggtgccggc ccgccggctg 600 cggtcccggt tccccgacga cctggccgaa cggctggtcg cgctggcctg gtgggactgg 660 ccgccggggt tcatcaaggc caacatcgac ctgttccagc ggccgctgac cgccgacacc 720 ctggccgcgc tggaggagcg ggcccgcgcc ctgcccacac ccccgggtgg tgccgcgtga 780 <210> 5 <211> 795 <212> DNA <213> Polymorphospora rubra <400> 5 gtgaccgccg gtacgggcca gccggtcgtc gccgcgcccg gcagggcgct cgccgaccgg 60 gtggtggtgg tgaccggcgc cagccgcggt gtcggccgcg acctcgcccg ggtgttcgcc 120 gaccacggcg cccgcctcgg cctgctggcc cgcagccggg acgcgctcga cgacctcggc 180 ggcacgctca ccgccgccgg tgccgacgtc ctcgccgtgc cgtgcgacgt cggcgaaccg 240 gactcgctgg ccggcgcggt cgacgccgtc gccgggcact tcggagggat cgactcggtc 300 gtcgtcaacg ccggcatctc gcccgtcgcc cgtcgggcgc accacctgcc gatcgacgcc 360 tggcacgacg tgctggcgac caacctgacc ggcgggttcg tcacggcgcg ggcggcgtat 420 ccgcacctgg cccgctcggg gcgtggccgg ctggtgttca ccacctcggt catggccgcc 480 accccgcggc gcgggctgag cgcgtacgcg gcgtcgaagg ccggcctgga ggggctcacc 540 cgggccctgg ccgctgactg ggcgggggac ggaatcctgg tcaacgcggt cgcgccgggg 600 ttcttcgaca ccgggctcgg cgccgccttc cacacctcgc agcgcctgca cgagcaggtc 660 gtcggtcgta cgccggtggc ccggttcggc cgcgccgacg agttggccgc cgcgttcgtc 720 ttcctggccg gtgacgcctg cggttacctg accggtcagg tgctcgccgt cgacggcggc 780 tacggcctgg gctga 795 <210> 6 <211> 37 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer <400> 6 aaagggctgc agaggaggcg taccgtgacc cgaccgg 37 <210> 7 <211> 30 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer <400> 7 aaagggaggc ctgctcagcc caggccgtag 30

Claims

하기 식 (1)로 나타낸 화합물:
[식 1]

[식에서, R¹~R³ 중 어느 하나는 수소, 아세틸기, 2-부테노일기 또는 2-메틸-2-펜테노일기이고, 나머지 둘은 수소이고, 또한 R⁴~R⁶ 중 어느 하나는 2-메틸-2-부테노일기이고, 나머지 둘은 수소임].
제1항에 있어서,
상기 식 (1)에서, R²는 수소, 아세틸기, 2-부테노일기 또는 2-메틸-2-펜테노일기이고, R⁵는 2-메틸-2-부테노일기이고, R¹, R³, R⁴ 및 R⁶은 수소인 화합물.
제1항 또는 제2항에 기재된 화합물을 포함하는 조성물.
제3항에 있어서,
추가로 하기 식 (6)~(8)로 나타낸 화합물 중 적어도 하나를 포함하는 조성물.
[식 2]

[식 3]

[식 4]
제3항 또는 제4항에 있어서,
상기 조성물이 화장품 조성물 또는 항산화제인 조성물.
제1항 또는 제2항에 기재된 화합물의 제조 방법으로서,
(A) 제1항 또는 제2항에 기재된 화합물을 생산하는 능력을 갖는 미생물을 배지내에서 배양하는 공정, 및
(B) 상기 배양물로부터 제1항 또는 제2항에 기재된 화합물을 채취하는 공정을 포함하는 방법.