KR20210138565A - 키메라 항원 수용체를 발현하는 점막-관련 불변 t(mait) 세포 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 일반적으로 면역치료요법, 특히 암, 감염성 질환 또는 자가면역 질환 치료용 면역치료요법에 관한 것이다. 보다 구체적으로, 본 발명은 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 점막-관련 불변 T(MAIT) 세포에 관한 것이며, 여기서 MAIT 세포는 치료될 대상체와 관련하여 동종이형이다.
Description
발명의 분야
본 발명은 일반적으로 면역치료요법(immunotherapy), 특히 암, 감염성 질환 또는 자가면역 질환 치료용 면역치료요법에 관한 것이다. 보다 구체적으로, 본 발명은 키메라 항원 수용체(Chimeric Antigen Receptor)(CAR)를 발현하는 점막-관련 불변 T(Mucosal-Associated Invariant T)(MAIT) 세포에 관한 것이다.
발명의 배경
키메라 항원 수용체를 발현하는 T 세포(T cell expressing chimeric antigen receptors)(CAR-T)를 사용한 면역치료요법은 백혈병의 치료시 주목할만한 임상 결과를 나타내었으며 암 및 감염 또는 자가면역과 같은 다른 질환을 치료하기 위한 가장 촉망되는 새로운 접근법 중 하나이다. 지금까지 사용된 가장 성공적인 CAR 중에는 CD19를 표적화하는 것이 있으며, 이는 재발된 또는 치료-불응성인 혈액 악성 종양(treatment-refractory hematological malignancies)을 지닌 환자에서 완전한 차도 가능성을 제공한다. CAR-T 세포 치료요법은 이에 의해 림프구가 유전적으로 변형되어 특이적인 항원의 인식을 허용하는 CAR을 발현하는 면역치료요법을 나타낸다. 항원 인식시, 이러한 변형된 T 세포는 이들을 강력한 세포 킬러로 전환시키는 신호전달 도메인(signaling domain)을 통해 활성화된다. 현재의 임상 프로토콜은 성분채집술에 의해 환자로부터 수집되고, 유전적으로 변형되어 CAR을 발현하며, 시험관내(in vitro)내에 배양되어 세포의 수를 증폭시키고 최종적으로 다시 동일한 환자에게 재-주입되는 자가 T 세포를 주로 활용한다. 이러한 접근법은 환자-특이적인 세포 제작을 필요로 하며, 이는 불가피하게 다양한 효능 및 안전성으로, 최종 세포 생성물에서 환자-대-환자 가변성을 야기시킨다. 자가 세포 이전(transfer)을 기반으로 한 이러한 시도는 생산 시간(성분채집과 재-주입 사이에 대략 2개월)과 같은 다른 단점을 갖는다. 이러한 지연은 특정 환자가 생명유지의 긴급상황(vital emergency)에 직면하므로, 중요하다. 또한, 아픈 환자로부터의 면역 세포는 기능이 불량할 수 있거나 수가 매우 적게 존재할 수 있다. 따라서, 환자 자체의 림프구를 사용한 이러한 치료는 비용이 많이 들고, 시간 소모적이며 CAR T 세포의 광범위한 사용에 적절하지 않다.
상기로부터, 제3자(third-party), 동종이형 세포를 미리 제작하고, 상세히 특성화하고, 환자에게 즉시 투여용으로 이용가능하도록 하는 면역치료요법을 개발하는 것이 바람직할 수 있다. 그러나, 동종이형 세포(즉, 동일한 종의 상이한 개체로부터 수득된 세포)의 사용은 몇가지 곤란성을 유발한다. 특히, 동종이형 세포는 숙주 대 이식체 거부(host versus graft rejection)(HvG)로 명명된 공정에서 수용체의 면역 세포에 의해 거부될 가능성이 있으므로, 이의 효능을 제한한다. 보다 중요하게는, 동종이형 세포는 이식체 대 숙주 질환(graft versus host disease)(GvHD)을 촉발(trigger)시킬 수 있다. 실제로, 동종이형 T 세포는 숙주 조직을 외부의 것으로 인식할 수 있는 이의 내인성 T 세포 수용체(TCR)을 유지하여, 심각한 조직 손상 및 사멸을 초래할 수 있는 GVHD를 야기한다. 현재의 접근법은 공통의 CAR-T 세포의 생성으로 이루어지며 여기서 내인성 TCR가 유전적으로 불활성화된다(Qasim et al., Sci Transl Med., 2017 Jan 25, 9(374)). 다른 전략은 동종이식편반응(alloreactivity)하는 경향이 거의 없는 면역 세포 집단, 예를 들면, 내인성 TCR 또는 CAR-NKT 세포를 결여하고 있는 CAR-NK 세포의 사용을 기반으로 한다(Rotolo et al., Cancer Cell. 2018 Oct 8;34(4):596-610). 그러나, 사람 혈액 속에서 NKT 세포의 빈도는 매우 낮다(0.01 내지 0.5%).
따라서, 대안적인 및/또는 개선된 동종이형 CAR-T 세포-기반 면역치료요법이 여전히 요구되고 있다.
발명의 요약
본 발명은 대상체에서 암, 면역 질환 또는 감염성 질환의 치료시 사용하기 위한, 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 점막 관련 불변 T(mucosa associated invariant T)(MAIT) 세포를 제공하며, 여기서 MAIT 세포는 대상체와 관련하여 동종이형이다.
특수한 구현예에서, 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 MAIT 세포는 암의 치료시 사용하기 위한 것이다.
암은 혈액 악성 종양일 수 있다. 다른 특수한 구현예에서, 암은 바람직하게는 유방 암, 전립선 암, 난소 암, 자궁경부 암, 피부 암, 췌장 암, 결장직장 암, 신장 암, 간암, 뇌 암, 및 폐 암으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 고형 종양일 수 있다.
일 양태에서, CAR-MAIT 세포는 면역손상된(immunocompromised) 대상체에게 투여되어야 한다. 특히, CAR-MAIT 세포는 대상체를 면역손상시키는 조건화 치료 후 투여되어야 한다. 조건화 치료는 화학치료요법, 방사선치료요법 및/또는 림프고갈 항체(lymphodepleting antibody)로 이루어질 수 있다.
특수한 구현예에서, 질환은 혈액 악성종양이다. 이러한 구현예에서, CAR-MAIT 세포는 바람직하게는 조혈 줄기 세포(HSC)의 이식 전 또는 조혈 줄기 세포(HSC)의 이식 직후 투여된다.
특수한 구현예에서, 암은 최소 잔존 질병(minimal residual disease)(MRD) 상태의 혈액 악성종양, 예를 들면, 백혈병, 림프종 또는 다발 골수종이다.
바람직하게는, MAIT 세포는 종양-관련 항원(tumor-associated antigen)(TAA)에 특이적으로 결합하는 CAR을 발현한다.
TAA는 종양 세포의 표면에서 발현될 수 있다. 바람직하게는 TAA는 CD19, GD2, EGFR, CD20, CD22, CD33, CD138, CD52, CD30, ROR1, HER2, EpCAM, MUC-1, MUC5AC, BCMA, CD38, SLAMF7/CS1, CD123, IL-13Ra2, HER2, LeY, MUC16 또는 PSMA이다. 보다 바람직하게는 TAA는 CD19, CD20, CD22, CD33, CD138, BCMA, CD38, SLAMF7/CS1, IL-13Ra2 또는 HER2이다.
다른 구현예에서, MAIT 세포는 세포내 종양단백질(oncoprotein) 또는 세포내 종양-관련 항원, 특히, WT-1, NY-ESO-1, MAGE, PRAME, RAS, 메소텔린, c-Met, CEA, CSPG-4, EBNA3C, CA-125 또는 GPA7을 특이적으로 표적화하는 CAR을 발현한다.
도 1: MAIT 세포는 동종이형 말초 혈액 단핵 세포(allogeneic peripheral blood mononuclear cell)(PBMC)에 대한 반응시 시험관내(in vitro)에서 증식하지 않는다.
카복시플루오로레세인 석신이미딜 에스테르(CFSE)-표지된 반응인자 PBMC를 조사된 동종이형 PBMC(1:1 비)와 함께 배양하였다. 반응인자 T 세포는 살아있는 세포를 게이팅(gating)함으로써 6일 배양의 말기에 및 이후에 CD3+ T 세포 상에서 확인되었다. 통상의 CD3 T(Tconv) 및 Vα7.2+ CD161high MAIT 세포의 증식은 CFSE 희석(CFSElow 세포의 %)으로 정량화하였다.
A) 대표적인 CFSE 염색을 동종이형(상부 패널) 또는 자가(하부 패널) PBMC의 존재하에서 6일 배양 후 Tconv(좌측 패널) 및 MAIT 세포(우측 패널)에서 게이팅하였다. 사분면내 숫자는 나타낸 집단 중에서 증식하는(CFSElow) 세포의 퍼센트를 나타낸다.
B) 증식하는(CFSElow) Tconv 및 MAIT 세포의 개개의 값 및 평균 ± SD(n= 상이한 수용체/공여체 쌍을 사용한 6회의 실험). P 값(쌍을 이룬 t 시험)을 나타낸다.
도 2: MAIT 세포는 사람화된 마우스 모델에서 GVHD 유도에 관여하지 않는다.
조사되고(1.3 Gy) 면역약화된 NOD-Scid-IL-2Rγnull(NSG) 마우스(n= 3)에게 3x106개의 사람 PBMC를 주사하고, 모니터링함으로써 GVHD 진행을 평가하고 이들이 >15% 체중 감소(± 45일)를 나타낸 경우 희생시켰다. 그래프는 초기 접종물(huPBMC) 및 질환이 있는 마우스의 말초 혈액(PB), 비장, 골수(BM), 간, 결장, 및 폐내에서 유동 세포분석법에 의해 측정된 사람(CD45+) 백혈구 중 CD3 T 세포 및 MAIT 세포의 비를 나타낸다.
도 3: 시험관내 MAIT 세포 확장
건강한 공여체로부터의 PBMC(106/ml)를 17일 동안 사이토킨 및 합성 MAIT 세포 리간드의 존재하에 배양하였다. MAIT 세포의 퍼센트 및 절대 수를 배양 기간의 전(0일) 및 6일, 10일 및 17일째에 유동 세포분석법으로 정량화하였다.
A) 배양 기간에 걸친 Va7.2+ CD161high MAIT 세포(CD3 T 세포 상에 게이팅됨)의 대표적인 염색. 숫자는 CD3 T 세포 중에서 MAIT 세포의 퍼센트를 나타낸다.
B) 배양 기간에 걸친 MAIT 세포의 확장(배수 변화 절대 수).
도 4: MAIT 세포에서 CAR 발현의 검출
정제된 CD3 T 세포를 시험관내에서 항-CD3/CD28 비드(bead)로 24시간 동안 활성화시키고 CAR 및 형광성 리포터 단백질(BFP)를 암호화하는 렌티바이러스 벡터로 형질도입시켜 CAR+ T 세포의 모니터링을 허용하였다. 형질도입된(상부 패널) 또는 대조군인 비-형질도입된(하부 패널) 세포 중에서 BFP의 표면 발현을 6일 후 통상의 CD3 T 세포 및 MAIT 세포에서 측정하였다. 사분면의 수(수평 바아)는 나타낸 집단 중에서 BFP+ 세포의 퍼센트를 나타낸다.
카복시플루오로레세인 석신이미딜 에스테르(CFSE)-표지된 반응인자 PBMC를 조사된 동종이형 PBMC(1:1 비)와 함께 배양하였다. 반응인자 T 세포는 살아있는 세포를 게이팅(gating)함으로써 6일 배양의 말기에 및 이후에 CD3+ T 세포 상에서 확인되었다. 통상의 CD3 T(Tconv) 및 Vα7.2+ CD161high MAIT 세포의 증식은 CFSE 희석(CFSElow 세포의 %)으로 정량화하였다.
A) 대표적인 CFSE 염색을 동종이형(상부 패널) 또는 자가(하부 패널) PBMC의 존재하에서 6일 배양 후 Tconv(좌측 패널) 및 MAIT 세포(우측 패널)에서 게이팅하였다. 사분면내 숫자는 나타낸 집단 중에서 증식하는(CFSElow) 세포의 퍼센트를 나타낸다.
B) 증식하는(CFSElow) Tconv 및 MAIT 세포의 개개의 값 및 평균 ± SD(n= 상이한 수용체/공여체 쌍을 사용한 6회의 실험). P 값(쌍을 이룬 t 시험)을 나타낸다.
도 2: MAIT 세포는 사람화된 마우스 모델에서 GVHD 유도에 관여하지 않는다.
조사되고(1.3 Gy) 면역약화된 NOD-Scid-IL-2Rγnull(NSG) 마우스(n= 3)에게 3x106개의 사람 PBMC를 주사하고, 모니터링함으로써 GVHD 진행을 평가하고 이들이 >15% 체중 감소(± 45일)를 나타낸 경우 희생시켰다. 그래프는 초기 접종물(huPBMC) 및 질환이 있는 마우스의 말초 혈액(PB), 비장, 골수(BM), 간, 결장, 및 폐내에서 유동 세포분석법에 의해 측정된 사람(CD45+) 백혈구 중 CD3 T 세포 및 MAIT 세포의 비를 나타낸다.
도 3: 시험관내 MAIT 세포 확장
건강한 공여체로부터의 PBMC(106/ml)를 17일 동안 사이토킨 및 합성 MAIT 세포 리간드의 존재하에 배양하였다. MAIT 세포의 퍼센트 및 절대 수를 배양 기간의 전(0일) 및 6일, 10일 및 17일째에 유동 세포분석법으로 정량화하였다.
A) 배양 기간에 걸친 Va7.2+ CD161high MAIT 세포(CD3 T 세포 상에 게이팅됨)의 대표적인 염색. 숫자는 CD3 T 세포 중에서 MAIT 세포의 퍼센트를 나타낸다.
B) 배양 기간에 걸친 MAIT 세포의 확장(배수 변화 절대 수).
도 4: MAIT 세포에서 CAR 발현의 검출
정제된 CD3 T 세포를 시험관내에서 항-CD3/CD28 비드(bead)로 24시간 동안 활성화시키고 CAR 및 형광성 리포터 단백질(BFP)를 암호화하는 렌티바이러스 벡터로 형질도입시켜 CAR+ T 세포의 모니터링을 허용하였다. 형질도입된(상부 패널) 또는 대조군인 비-형질도입된(하부 패널) 세포 중에서 BFP의 표면 발현을 6일 후 통상의 CD3 T 세포 및 MAIT 세포에서 측정하였다. 사분면의 수(수평 바아)는 나타낸 집단 중에서 BFP+ 세포의 퍼센트를 나타낸다.
발명의 상세한 설명
본 발명은 동종이형 입양 면역치료요법(allogeneic adoptive immunotherapy)의 분야에서 사용하기 위한, 본원에서 CAR-MAIT 세포로 불리는 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 점막 관련 불변 T(MAIT) 세포를 제공한다.
CAR-MAIT 세포는 어떠한 동종반응성 잠재능도 나타내지 않으며; 이들은 동종이형 세포에 대한 반응시 시험관내에서 증식하지 않고 이들은 통상의 T 세포와는 달리 이식체 대 숙주 질환(GvHD) 유도에 관여하지 않는다. 본 발명에 따라서, CAR-MAIT 세포는 용이하게 생산되고 시험관내에서 다량으로 확장될 수 있다.
CAR-MAIT 세포는 예컨대, 동결된 단위로 저장할 수 있으며, 수명의 수용체에게 즉각적인 투여를 위해 "사용 준비(ready to use)"된다. 이의 제조는 비용-효과적이고 이들은 대상체 중에서 HLA 차이와 상관없이, 및 GVHD를 유도할 위험이 없이, 공통의 치료를 나타낸다.
정의
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "대상체", "숙주", "개체", 또는 "환자"는 치료요법이 필요한 임의의 연령의 포유동물, 바람직하게는 사람, 남성 또는 여성을 지칭한다.
용어 "종양-관련 항원", "TAA", "종양 항원" 및 "암 세포 항원"은 본원에서 상호교환적으로 사용된다. 각각의 경우에, 용어는 암 세포에 의해 특이적으로(specifically) 또는 우선적으로 발현되는 펩타이드, 단백질, 당단백질 또는 탄수화물을 지칭한다.
용어 "이식체-대-숙주 질환(GVHD)"은 일반적인 및 심각한 합병증을 지칭하며 여기서 이식된 수용체 자체의 조직에 대한 기부된 면역학적으로 약화된 림프구의 반응이 존재한다. GVHD는 관련되거나 관련되지 않은 공여체로부터 조혈 줄기 세포를 사용하거나 함유하는 임의의 이식체의 가능한 합병증이다.
질환 또는 상태를 "치료하는" 또는 이의 치료는 환자의 건강 상태를 완화시키려는 의도의 임의의 행위이다. "치료"는 하나 이상의 증상 또는 상태의 경감 또는 완화, 질환의 정도의 감소, 질환 상태의 안정화(즉, 환자를 차도 상태로 유지), 질환의 방지 또는 질환 확산의 방지, 질환 진행의 지연 또는 늦춤, 질환 상태의 완화 또는 일시적 완화, 질환의 재발 감소, 및 차도(부분적으로 또는 전체적으로)를 지칭한다. 치료는 치유, 경감 또는 예방 효과를 포함할 수 있다. 용어 "예방학적"은 특수한 상태의 중증도 또는 발생을 감소시키는 것으로 고려될 수 있다. "예방학적"은 또한 상태로 이미 진단된 환자에서 특수한 상태의 재발생을 방지함을 포함한다. "치료학적"은 또한 기존의 상태의 중증도를 감소시키거나 지연시킬 수 있다. 목적한 치료 효과는 질환 진행 속도를 감소시키는 것, 질환 상태를 완화시키거나 일시적으로 완화시키는 것, 및 차도 또는 개선된 예후를 포함한다. 경감은 질환 또는 상태의 신호 또는 증상이 나타나기 전 뿐만 아니라 이의 발현 후에도 발생할 수 있다. 따라서, "치료하는" 또는 "치료"는 질환 또는 바람직하지 않은 상태를 "예방하는" 또는 이의 "예방"을 포함할 수 있다. 일 구현예에서, '암을 치료하는'은 암 세포의 성장 또는 증식을 억제하는 것 또는 암 세포를 사멸하는 것을 포함한다. 특수한 구현예에서, 암을 치료하는 것은 전이의 위험 또는 발달을 감소시키는 것을 포함한다. 다른 특수한 구현예에서, 암을 치료하는 것은 재발의 방지를 지칭할 수 있다. 암을 치료하는 것은 또한 대상체를 차도있도록 유지함을 지칭할 수 있다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "장애" 또는 "질환"은 유전적 또는 발달적 오류, 감염, 독소, 영양 결핍 또는 불균형, 독소, 또는 양호하지 않은 환경 인자의 효과로부터 야기되는 신체의 기관, 부분, 구조, 또는 시스템의 부정확한 기능화를 지칭한다. 바람직하게는, 이러한 용어는 건강 장애 또는 질환, 예컨대, 정상의 육체적 또는 정신적 기능을 파괴하는 질병을 지칭한다. 보다 바람직하게는, 용어 장애는 동물 및/또는 사람에게 영향을 미치는 면역 및/또는 염증 질환을 지칭한다. 바람직하게는, 용어 장애 또는 질환은 암, 감염성 질환 또는 면역 질환을 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "암"은 비정상적인 세포의 신속하고 제어되지 않는 성장에 의해 특성화된 질환으로 정의된다. 암 세포는 국소적으로 또는 혈류 및 림프 시스템을 통해 신체의 다른 부분으로 확산될 수 있다.
용어 "감염성 질환"은 유기체, 예를 들면, 세균, 바이러스, 진균 또는 기생충에 의해 야기된 장애를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "면역 질환" 또는 "자가-면역 질환"은 대상체 자체의 세포, 조직 및/또는 기관에 대한 대상체의 면역학적 반응에 의해 유발된 세포, 조직 및/또는 기관 손상에 의해 특징화된 대상체내 상태를 지칭한다.
CAR-MAIT 세포
본 발명의 "CAR-MAIT 세포"는 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 점막 관련된 불변 T(MAIT) 세포를 나타낸다.
점막-관련 불변 T(MAIT) 세포는 비통상적인 T 세포의 서브세트(subset)이다. 사람에서, MAIT 세포는 미생물 활성 및 감염에 대해 방어하는, 혈액, 간, 및 점막에서 발견된다. MAIT 세포는 반-불변(semi-invariant) T 세포 수용체 알파(TCRα) 쇄(사람에서 Vα 7.2-Jα 33/20/12)에 의해 특징화되며, 이는 제한된 수의 가능한 TCRβ 쇄와 조합된다. 이러한 반-불변 TCR은 단일형의, 고도로 보존된, MHC 부류-I 관련된 1(MR1) 분자로 제한된다. 전통적인 MHC-펩타이드 복합체를 인식하는 통상의 T 세포와는 대조적으로, MAIT 세포는 MR1으로 나타낸, 미생물-유래된 리보플라빈 전구체 유도체, 예를 들면, 5-OP-RU 또는 5-OE-RU를 인식한다. 성체 MAIT 세포는 유동 세포분석법에 의해 상응하는 염색을 사용하여 CD3+ CD4- Vα7.2+ CD161high(또는 IL-18ahigh 또는 CD26high)로 용이하게 확인된다. MR1 리간드의 인식시, MAIT 세포는 염증성 사이토킨(IFNγ, TNFα, IL-17)을 방출하고 표적 세포의 페르포린-의존성 세포독성을 매개한다. MAIT 세포는 폐 및 장을 포함하는, 간 및 점막 내에 우선적으로 국재화되며, 성체 말초 혈액 속에서 또한 풍부(1 내지 10%의 T 세포)한 반면 제대혈 속에서는 매우 적다(< 0.1%의 T 세포).
본 발명은 동종이형인 MAIT 세포의 용도에 관한 것인데, 즉, 세포는 세포 치료요법을 받거나 궁극적으로 받는 대상체 이외의 대상체로부터 단리되고/되거나 그렇지 않으면 제조된다. 본원에 사용된 바와 같은, 용어 "동종이형"은 동일한 종의 상이한 개체로부터 수득된 세포 또는 조직을 지칭하며, 여기서 공여체 및 수용체는 유전적으로 동일하지 않다. 일부 구현예에서, 제2의 대상체는 제1의 대상체와 동일한 HLA 유전형을 발현한다. CAR-MAIT는 GVHD와 관련된 숙주 조직 손상을 매개하지 않는 것으로 밝혀져 있다. 강력한 효과기 세포로서, CAR-MAIT는 따라서 동종이형 셋팅에서 입양 면역치료요법에 대한 공통의 도구로서 유용하다.
본 발명의 맥락에서, MAIT 세포는 유전적으로 변형되어 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현한다.
본원에 사용된 바와 같은, "키메라 항원 수용체(CAR)"는 인공 T-세포 수용체, 키메라 T-세포 수용체, 또는 키메라 면역수용체를 지칭하며, 인공 특이성을 특수한 면역 효과기 세포, 즉, MAIT 세포로 이식하는 가공된 수용체를 포함한다.
CAR은 전형적으로 막관통 도메인(taansmembrane domain)에 의해 결합된, 엑토도메인(세포외 도메인) 및 엔도도메인(세포질성 도메인)을 포함한다. 세포의 표면에서 발현된, 엑토도메인은 항원 결합 도메인 또는 수용체 도메인 및 임의로 항원 결합 도메인을 막관통 도메인에 연결시키는 스페이서(힌지) 영역을 포함한다. 막관통 도메인은 전형적으로 세포 막의 지질 이층(lipid bilayer)을 가로질러 걸쳐있는 소수성의 알파 나선이다. CAR의 엔도도메인은 항원 결합시 MAIT 세포 활성화를 유도하는 세포내 신호전달 모듈로 구성된다. 엔도도메인은 하기 설명된 바와 같이, 수개의 신호전달 도메인을 포함할 수 있다.
항원 결합 도메인
CAR의 세포외 도메인은 표적 항원에 특이적으로 결합하거나 인식하는 항원 결합 도메인을 포함한다.
본원에 사용된 바와 같은, "결합하다" 또는 "결합하는"은 항원을 인식하고 접촉하는 펩타이드, 폴리펩타이드, 단백질, 융합 단백질 및 항체(항체 단편 포함)을 지칭한다. 바람직하게는, 이는 항원-항체형 상호작용을 지칭한다. "특이적으로 결합하다"는, CAR의 항원 결합 도메인이 특이적인 항원을 인식하지만, 주어진 샘플에서 다른 분자를 실질적으로 인식하거나 결합하지 않음을 의미한다. "특이적 결합"은 특수한 구조(예컨대, 항원 결정인자 또는 에피토프)의 존재에 의존한다. 본원에 사용된 바와 같은, 용어 "특이적 결합"은 CAR의 항원 결합 도메인과 항원 사이에 적어도 10-6 M의 결합 친화성으로의 접촉을 의미한다. 특정 양태에서, CAR의 항원 결합 도메인은 적어도 약 10-7 M, 및 바람직하게는 10-8 M, 10-9 M, 10-10 M의 친화성으로 결합한다. 결합 친화성은 당해 분야의 기술자에게 이용가능한 어떠한 방법, 특히 표면 플라스몬 공명(surface plasmon resonance)(SPR)으로 측정할 수 있다.
일 양태에서, 이러한 항원 결합 도메인은 항체, 바람직하게는 단일 쇄 항체이다. 바람직하게는, 항체는 사람화된 항체이다. 특히, 이러한 항원 결합 도메인은 단편 항원 결합(Fab) 단편, F(ab')2 단편, Fab' 단편, Fv 단편, 재조합 IgG(rlgG) 단편, 단일쇄 항체 단편, 단일 쇄 가변 단편(scFv), 단일 도메인 항체(예컨대, sdAb, sdFv, 나노바디(nanobody) 단편, 디아바디(diabody), 및 항체 단편으로부터 형성된 다중-특이적인 항체로부터 선택된 항체 단편이다. 특수한 구현예에서, 항체는 가변 중쇄 영역 및/또는 가변 경쇄 영역을 포함하는 단일 쇄 항체 단편, 예를 들면, scFv이다. 특히, 이러한 항원 결합 도메인은 Fab 및 scFv로부터 선택된다.
항원 표적화 도메인이 scFv인 구현예에서, scFv는 굴곡성 링커(flexible 링커)에 의해 연결된 항원-특이적인 mAb의 가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL) 영역으로부터 유래될 수 있다. scFv는 이것이 유래되는 완전한 항체와 동일한 특이성 및 유사한 친화성을 보유한다. scFv VH 및 VL 도메인을 연결시키는 펩타이드 링커는 하나의 가변 영역 도메인의 카복실 말단을 다른 가변 도메인의 아미노 말단에 VH-VL 쌍화 및 항원-결합 부위를 절충하지 않고 결합시킨다. 펩타이드 링커는 길이가 10 내지 30개 아미노산에서 변할 수 있다. 일 구현예에서, scFv 펩타이드 링커는 Gly/Ser 링커이고 아미노산 서열 Gly-Gly-Gly-Ser(서열 번호: 1) 또는 Gly-Gly-Gly-Gly-Ser(서열 번호: 2)의 하나 이상의 반복물(repeat)을 포함한다.
CAR의 세포외 도메인은 하나 이상의 항원 결합 도메인(들)을 포함할 수 있다.
특수한 구현예에서, CAR은 종양-관련 항원(TAA)에 특이적으로 결합한다. 특히, CAR은 종양 세포의 표면에서 발현된 임의의 TAA, 바람직하게는 CD19, GD2, EGFR, CD20, CD22, CD33, CD138, CD52, CD30, ROR1, HER2, EpCAM, MUC-1, MUC5AC, BCMA, CD38, SLAMF7/CS1, CD123, IL-13Ra2, HER2, LeY, MUC16, PSMA, 보다 바람직하게는 TAA는 CD19, CD20, CD22, CD33, CD138, BCMA, CD38, SLAMF7/CS1, IL-13Ra2 또는 HER2에 특이적으로 결합한다.
특수한 구현예에서, CAR은 CD19에 특이적으로 결합한다.
다른 특수한 구현예에서, CAR은 세포내 종양단백질 또는 세포내 종양-관련 항원, 특히 WT-1, NY-ESO-1, MAGE, PRAME, RAS, 메소텔린, c-Met, CEA, CSPG-4, EBNA3C, CA-125, GPA7을 표적화한다. 특히, 상기 세포내 종양단백질 또는 종양-관련 항원은 프로세싱되어 조직적합성(HLA) 분자에 결합된 펩타이드와 같이 세포 표면에서 발현된다.
다른 특수한 구현예에서, CAR-MAIT 세포는 감염성 질환의 치료시 사용하기 위한 것이다. 이러한 구현예에서, CAR은 감염된 세포의 표면에서 발현된 병원체의 구성성분을 표적화할 수 있고, 바람직하게는 CAR은 세포 표면에 발현된 바이러스 단백질을 표적화하고, 보다 바람직하게는 CAR은 HIV 엔벨로프 단백질을 표적화한다.
다른 특수한 구현예에서, CAR-MAIT 세포는 자가면역 질환의 치료시 사용하기 위함이다. 당해 구현예에서, CAR은 바람직하게는 자가면역 B 세포의 표면에서 발현된 자가-반응성 항체를 표적화하는데, 예를 들면, CAR은 심상성 천포창(pemphigus vulgaris)에서 데스모글레인 3에 대해 지시된 자가-반응성 항체를 표적화한다.
스페이서 또는 힌지 도메인
CAR은 막관통 도메인에 항원 결합 도메인을 연결시키는 스페이서 또는 힌지 도메인을 임의로 포함한다.
일부 구현예에서, CAR은 항원 결합 도메인과 막관통 도메인 사이 및/또는 막관통 도메인과 세포질성 도메인 사이의 힌지 서열을 포함한다. 당해 분야의 통상의 기술자는 힌지 서열이 굴곡성을 촉진시키는 아미노산의 짧은 서열임을 인식할 것이다.
특히, 항원 결합 도메인을 막관통 도메인에 연결시키는 스페이서 또는 힌지 도메인은 충분히 굴곡성이도록 설계된으로써 항원 인식을 허용하는 방식으로 항원 결합 도메인이 배향되도록 한다.
힌지는 면역글로불린 Fc 영역, 예를 들면, IgG1 Fc 영역, IgG2 Fc 영역, IgG3 Fc 영역, IgG4 Fc 영역, IgE Fc 영역, IgM Fc 영역, 또는 IgA Fc 영역의 적어도 일부로부터 유래되거나 이를 포함할 수 있다. 특정의 구현예에서, 힌지 도메인은 이의 CH2 및 CH3 도메인 내에 속하는 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgE, IgM, 또는 IgA 면역글로불린 Fc 영역 중 적어도 일부를 포함한다.
예시적인 힌지는 CD8a 힌지, CD28 힌지, IgG1/IgG4(힌지-Fc 부분) 서열, IgG4 힌지 단독, CH2 및 CH3 도메인에 연결된 힌지, 또는 CH3 도메인에 연결된 IgG4 힌지, 문헌: Hudecek et al. (2013) Clin. Cancer Res., 19:3153, 국제 특허원 공보 제WO2014031687호, 미국 특허 제8,822,647호 또는 공개 공보 제US2014/0271635호에 기술된 것을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 힌지 도메인으로서, 본 발명은 CD8a의 잔기 118 내지 178(진뱅크(GenBank) 수탁 번호 제NP_001759.3호), CD8의 잔기 135 내지 195(진뱅크 수탁 번호 제AAA35664호), CD4의 잔기 315 내지 396(진뱅크 수탁 번호 제NP_000607.1호), 또는 CD28의 잔기 137 내지 152(진뱅크 수탁 번호 제NP_006130.1)를 사용할 수 있다. 또한, 스페이서 도메인으로서, 항체 H 쇄 또는 L 쇄의 불변 영역(CHI 영역 또는 CL 영역)의 일부를 사용할 수 있다. 또한, 스페이서 도메인은 인공 합성된 서열일 수 있다.
일부 구현예에서, 예를 들면, 힌지 서열은 CD8 알파 분자 또는 CD28 분자로부터 유래된다.
막관통 도메인
CAR의 막관통 도메인은 세포 표면에서 수용체를 고정(anchor)하도록 작용한다. 막관통 도메인의 선택은 이웃하는 스페이서 및 세포내 서열에 의존할 수 있다.
막관통 도메인은, 일부 구현예에서, 천연 또는 합성원으로부터 유래된다. 공급원이 천연인 경우, 일부 양태에서 도메인은 임의의 막-결합된 또는 막관통 단백질로부터 유래된다. 막관통 영역은 T-세포 수용체의 알파, 베타 또는 제타 쇄, CD28, CD3 제타, CD3 엡실론, CD3 감마, CD3 델타, CD45, CD4, CD5, CD8, CD9, CD16, CD22, CD33, CD37, CD64, CD80, CD86, CD134, CD137, CD154, ICOS/CD278, GITR/CD357, NKG2D, 및 DAP 분자로부터 유래된 것을 포함한다(즉, 적어도 이의 막관통 영역(들)을 포함한다). 대안적으로, 막관통 도메인은, 일부 구현예에서, 합성이다. 일부 양태에서, 합성 막관통 도메인은 주로 소수성 잔기, 예를 들면, 루이신 및 발린을 포함한다. 일부 양태에서, 3중(triplet)의 페닐알라닌, 트립토판 및 발린이 합성 막관통 도메인의 각각의 말단에서 발견될 것이다. 막관통 도메인은 막에서 열역학적으로 안정하다. 이는 단일 알파 나선, 막관통 베타 배럴(transmembrane beta barrel), 그라미시딘 A의 베타-나선, 또는 임의의 다른 구조일 수 있다.
임의로, 바람직하게는 길이가 2 내지 10개 아미노산인 짧은 올리고- 또는 폴리펩타이드 링커는 막관통 도메인과 CAR의 세포내 신호전달 도메인(들) 사이에 연결을 형성할 수 있다. 글리신-세린 이중선(doublet)이 적합한 링커를 제공할 수 있다.
세포내 도메인
용어 "세포내 도메인", "세포질성 도메인" 및 "세포내 신호전달 도메인"은 본원에서 상호교환적으로 사용된다. CAR의 세포내 도메인의 역활은 세포외 도메인이 항원으로 인식되는 한 MAIT 세포에 활성화 신호를 생산하는 것이다. 특히, CAR의 세포내 도메인은 MAIT 세포의 정상적인 효과기 기능 중 적어도 하나의 활성화를 개시하거나 이끌어낸다.
본 발명에서 특수하게 사용되는 세포내 도메인 서열의 예는 림프구 수용체 쇄, TCR/CD3 복합체 단백질, Fc 수용체 소단위, IL-2 수용체 소단위, CD3ζ, FcRγ, FcRβ, CD3γ, CD3δ, CD3ε, CD5, CD22, CD79a, CD79b, CD66d, CD278(ICOS), FcsRI, DAP10, 및 DAP12의 세포내 신호전달 도메인으로부터 유래된 것을 포함한다. CAR내 세포내 도메인이 CD3ζ로부터 유래된 세포질성 신호전달 서열을 포함하는 것이 특히 바람직하다.
CAR의 세포내 도메인은 자체적으로 또는 공자극성 도메인(들)과 조합된 신호전달 도메인(예를 들면, CD3ζ 신호전달 도메인)을 포함하도록 설계될 수 있다. 공자극성 분자는 항원에 대한 림프구의 효과적인 반응에 필요한 세포 표면 분자로서 정의될 수 있다. 이러한 분자의 예는 CD27, CD28, 4-1BB(CD137), OX40(CD134), CD30, CD40, CD244 (2B4), ICOS, 림프구 기능-관련된 항원- 1(LFA-1), CD2, CD7, LIGHT, NKG2C, B7-H3, 및 CD83, CD8, CD4, b2c, CD80, CD86, DAP10, DAP12, MyD88, BTNL3, 및 NKG2D와 특이적으로 결합하는 리간드를 포함한다. 상기 인용된 공-자극성 도메인의 세포내 신호전달 부위는 단독으로 또는 다른 공-자극성 도메인과 함께 사용될 수 있다. 특히, CAR은 CD27, CD28, 4-1BB (CD137), OX40 (CD134), CD30, CD40, CD244 (2B4), ICOS, LFA-1, CD2, CD7, LIGHT, NKG2C, B7-H3, 및 CD83, CD8, CD4, b2c, CD80, CD86, DAP10, DAP12, MyD88, BTNL3, 및 NKG2D과 특이적으로 결합하는 리간드로 이루어진 그룹으로부터 선택된 2개 이상의 공-자극성 도메인의 임의의 조합을 포함할 수 있다.
따라서, 예를 들면, CAR은 신호전달 도메인, 예를 들면, CD3ζ 신호전달 도메인 및, CD28 및 CD40, CD28 및 4-1BB (CD137), CD28 및 OX40 (CD134), 및 CD28 및 LFA-1로부터 선택된 2개의 공-자극성 신호전달 도메인을 포함하도록 설계될 수 있다.
"제1 세대 CAR"은 단일 신호전달 도메인을 포함한다. 하나의 추가의 공자극성 도메인과 함께 신호전달 도메인을 함유하는 CAR은 "제2 세대"로 명명되지만, 2개의 추가의 공자극성 도메인과 함께 신호전달 도메인을 함유하는 것은 "제3 세대"로 나타낸다. 예를 들면, 제1 세대 CAR은 단일 신호전달 도메인으로서 CD3ζ 쇄를 단독으로 함유한다. 제2 및 제3 세대 CAR은 각각 1개 또는 2개의 추가의 공자극성 신호전달 도메인, 예를 들면, CD28, CD27, OX-40(CD134) 및 4-1BB(CD137)로 이루어진다. 예를 들면, 제2 세대 CAR은 CD3ζ 및 CD28 신호전달 도메인을 함유하는 반면, 제3 세대 CAR은 CD3ζ, CD28 및 OX40(CD134) 또는 4-1BB(CD137)를 함유할 수 있다.
본 발명의 CAR은 상술한 바와 같이 제1 세대, 제2 세대, 또는 제3 세대 CAR일 수 있다. 바람직하게는, CAR은 제2 또는 제3 세대 CAR이다.
"TRUCK"은 최근 개발된 '제4 세대' CAR을 나타낸다. TRUCK(공통의 사이토킨 사멸에 대해 재시시된 T 세포)는 비히클(vehicle)로서 사용되어 표적화된 조직내에 축적되는 유전자이식 생성물을 생산하여 방출하는 비히클로서 사용된 CAR-재지시된 T 세포이다. 생성물, 예를 들면 전-염증성 사이토킨은 T 세포가 CAR에 의해 활성화되면 구성적으로 생산 또는 유도될 수 있다. 다른 물질, 예를 들면, 효소 또는 면역조절성 분자를 동일한 방식으로 생산할 수 있으며 표적화된 병변내 CAR-재지시된 T 세포에 의해 침적될 수 있다. 이러한 전략은 예를 들면 (i) CAR 및 (ii) IL-12와 같은 사이토킨에 연결된 세포 활성화 반응성 프로코터를 발현하는 2개의 별개의 전이유전자를 포함한다. 결과적으로, IL-12와 같은 면역 자극성 사이토킨은 CAR 접합(engagement)시 분비된다.
특수한 구현예에서, CAR는 상기 정의된 바와 같은 제4 세대 CAR이다.
특수한 구현예에서, 다중 CAR, 예를 들어, 상이한 항원에 결합하는 CAR은 단일 MAIT-세포에 의해 발현될 수 있다.
CAR-MAIT 세포 생산
MAIT 세포 획득
CAR-MAIT 세포의 생산은 세포 배양물 또는 개개 대상체 또는 혈액 은행으로부터의 혈액 샘플로부터 MAIT 세포를 제공하는 단계를 포함한다. MAIT 세포는 바람직하게는 공여자 대상체, 특히 건강한 공여자 대상체로부터 유래된다.
세포는 혈액 샘플(말초 혈액 및 제대혈 포함) 뿐만 아니라 하나 이상의 공정 단계, 예를 들면, 분리, 원심분리, 유전 가공, 세척, 및/또는 항온처리로부터 생성된 샘플로부터 획득될 수 있다. 특수한 구현예에서, 공여체로부터의 샘플은 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)를 포함한다.
특수한 구현예에서, MAIT 세포는 이들이 대상체내에 잔류하는 임의의 위치, 예를 들면, 그러나 이에 한정되지 않는, 말초 혈액, 말초 혈액 단핵 세포(PBMC), 골수, 제대혈로부터 수집된다.
특수한 구현예에서, MAIT 세포는 성분채집술(apheresis), 특히 백혈구성분채집술(leukapheresis)에 의해 수집된다.
MAIT 세포 단리
당해 분야의 기술자에게 공지된 바와 같이, 다양한 방법이 대상체로부터 면역 세포를 단리하는데 용이하게 이용가능하거나 예를 들면, Life Technologies Dynabeads® 시스템; STEMcell Technologies EasySep™, RoboSep™, RosetteSep™, SepMate™; Miltenyi Biotec MACS™ 세포 분리 키트(kit), 세포 표면 마커 발현 및 다른 시판되는 세포 분리 및 단리 키트(예컨대, 일리노이주 록포드(Rockford) 소재의 Pierce로부터의 ISOCELL)를 사용하여 본 출원에 대해 채택될 수 있다. MAIT 세포는 MAIT 세포 표면 마커에 대해 특이적인 이러한 키트 속에서 이용가능한 비드 또는 다른 결합제의 사용을 통해 단리할 수 있다.
일부 구현예에서, 단리는 친화성- 또는 면역친화성-기반 분리이다, 예를 들면, 일부 양태에서, 단리는 예를 들면, 항체 또는 이러한 마커에 특이적으로 결합하는 결합 파트너와 함께 항온처리하는 단계에 이어서, 일반적으로 세척 단계 및 항체 또는 결합 파트너에 결합하지 않는 세포로부터, 항체 또는 결합 파트너에 결합된 세포의 분리 단계에 의한, 하나 이상의 마커, 전형적으로 세포 표면 마커의 세포 발현 또는 발현 수준을 기반으로 한 MAIT 세포의 분리를 포함한다. 이러한 분리 단계는 양성 선택을 기반으로 할 수 있으며, 여기서 시약에 결합한 MAIT 세포는 추가의 사용, 및/또는 음성 선택(negative selection)을 위해 보유되며, 여기서 항체 또는 결합 파트너에 결합하지 않은 MAIT 세포가 보유된다. 일부 구현예에서, 분리 단계의 다수의 라운드가 수행되며, 여기서 하나의 단계로부터 양성 또는 음성으로 선택된 분획은 다른 분리 단계, 예를 들면, 후속적인 양성 또는 음성 선택에 적용된다.
일부 구현예에서, MAIT 세포 집단은 수집되어 유동 세포분석법을 통해 농축되며, 여기서 다중 세포 표면 마커에 대해 염색된 세포는 유동 스트림 내에서, 예컨대, 유동-세포분석적 검출 시스템과 함께, 형광성-활성화된 세포 분류(fluorescence-activated cell sorting)(FACS), 예를 들면, 제조 규모(FACS) 및/또는 미세전자기계 시스템(microelectromechanical system)(MEMS) 칩에 의해 운반된다. 이러한 방법은 다중 마커를 기반으로 한 양성 및 음성 선택을 동시에 허용한다.
일부 구현예에서, MAIT 세포의 단리는 CD3, CD8, Vα 7.2, CD161 CD26 및/또는 IL-18Ra(CD218a)의 양성 또는 고 표면 발현, 및/또는 CD4의 음성 발현 및/또는 임의로 NKG2D 또는 NKp30 수용체의 존재를 기반으로 한다.
특수한 구현예에서, MAIT 세포는 항체, 특히 항-Vα 7.2 항체 및 항-IL18Rα 또는 항-CD161 또는 항-CD26 항체로 코팅된 비드를 사용하여 양성으로 단리된다.
단리된 MAIT 세포는 직접 사용할 수 있거나, 이들을 동결에 의한 것과 같이, 일정 기간 동안 저장할 수 있다.
MAIT 세포 활성화 및 확장
목적한 CAR을 발현하기 위한 MAIT 세포의 유전적 변형 전 또는 후에, 세포는 활성화시키고/시키거나 확장시킬 수 있다. 일부 구현예에서, MAIT 세포는 자극성조건 또는 자극성 제제의 존재하에서 항온처리한다. 이러한 조건은 MAIT 세포의 증식, 확장, 활성화, 및/또는 생존을 유도하고/하거나, 항원 노출을 모방하고/하거나, 세포를 유전 가공, 예를 들면, 재조합 항원 수용체의 도입을 위해 프라이밍(priming)하도록 설계된 것을 포함한다. 조건은 하나 이상의 특수한 배지, 온도, 산소 함량, 이산화탄소 함량, 시간, 제제, 예컨대, 영양분, 아미노산, 항생제, 이온, 및/도는 공자극성 인자, 예를 들면, 사이토킨, 케모킨, 항원, 결합 파트너, 융합 단백질, 재조합 가용성 수용체 및 MAIT 세포를 활성화시키도록 설계된 임의의 다른 제제를 포함할 수 있다.
예를 들면, MAIT 세포는 항-CD3 항체 및/또는 항-CD28 항체와 함께 세포의 증식을 자극시키는 조건 하에서 항온처리할 수 있다.
일부 구현예에서, 본 발명의 MAIT 세포는 조직 또는 세포와 함께 공-배양함으로써 시험관내에서 확장시킬 수 있다. 일부 구현예에서, MAIT 세포는 공급자 세포(feeder cell), 예를 들면, 비-분열 PBMC와 함께 공-배양함으로써 확장시킨다. 일부 양태에서, 비-분열 공급자 세포는 조사된 PBMC 공급자 세포, 특히 자가 또는 동종이형 조사된 PBMC를 포함할 수 있다.
특수한 구현예에서, MAIT 세포는 시험관내에서 CD3/CD28 자극에 의해 자가 또는 동종이형 조사된 PBMC 및 IL-2, IL7, IL-12, IL-18 및/또는 IL-15 사이토킨의 존재하에 확장된다.
특수한 구현예에서, MAIT 세포는 시험관내에서 MAIT 세포 활성화 리간드, 예를 들면, 5-OP-RU 및/또는 5-OE-RU의 존재하에 확장되고/되거나 활성화된다.
다른 특수한 구현예에서, 방법은 공여체의 세포 샘플, 특히 공여체의 PBMC로부터 시험관내 MAIT 세포 확장 단계를 포함한다. 우선적인 시험관내 MAIT 세포 확장은 공여체로부터의 PBMC를 합성 5-OP-RU의 존재하에서, 및 임의로 사이토킨과 함께 배양함으로써 수행될 수 있다. 특히, 공여체로부터의 PBMC는 5-OP-RU 및 IL-2(예를 들면, rhuIL-2)의 존재하에서 배양된다.
특수한 구현예에서 MAIT 세포는 환자에게 투여하기 전 바람직하게는 적어도 5일 동안, 바람직하게는 약 10일 이상, 보다 바람직하게는 약 15일 이상 및 가장 바람직하게는 약 20일 이상 동안 세포외에서 확장된다.
다른 구현예에서, MAIT 세포는 환자에게 투여하기 전에, 0일째 확장과 비교하여, 적어도 약 100배, 바람직하게는 적어도 약 200배, 및 보다 바람직하게는 적어도 약 400배, 바람직하게는 적어도 약 600배, 보다 바람직하게는 적어도 약 1000배 및 심지어 보다 바람직하게는 적어도 약 1500배 확장된다.
일부 구현예에서, 제조 방법은 단리, 항온처리, 및/또는 가공 전 또는 후에, 세포를 동결, 예컨대, 동결보존(cryopreserving)시키는 단계를 포함한다.
세포 형질도입 및 선택
특정의 구현예에서, MAIT 세포는 하나 이상의 CAR을 발현시키도록 형질도입된다.
CAR을 암호화하는 핵산 작제물이 네이키드(naked) DNA로서 또는 적합한 벡터 속에서 MAIT 세포내로 도입될 수 있다
네이키드 DNA는 일반적으로 발현에 적절한 배향으로 플라스미드 발현 벡터 내에 함유된 키메라 수용체를 암호화하는 DNA를 지칭한다. 핵산 작제물을 숙주 세포 내로 도입시키기 위한 물리적 방법은 인산칼슘 침전, 지질감염, 입자 충격(particle bombardment), 미세주입(microinjection), 전기천공(electroporation) 등을 포함한다. 다른 수단, 예를 들면, 콜로이드성 분산 시스템, 예를 들면, 거대분자 복합체, 나노캡슐, 나노구(nanosphere), 비드, 및 지질-기반 시스템, 예를 들면, 수중유 에멀젼(oil-in-water emulsion), 미셀(micelle), 혼합 미셀, 및 리포좀을 사용할 수 있다.
특수한 구현예에서, CAR을 암호화하는 핵산 작제물은 MAIT 세포내로 바이러스 벡터, 예를 들면, 레트로바이러스, 아데노바이러스, 아데노-관련 바이러스, 헤르페스바이러스 및 렌티바이러스에 의해 도입시킬 수 있다. 특히 벡터는 렌티바이러스 벡터이다.
MAIT 세포내에서 CAR 서열의 존재를 확인하기 위하여, 다양한 검정을 수행할 수 있다. 이러한 검정은 예를 들면, 서던 및 노던 블롯팅(Southern and Northern blotting), RT-PCR 및 정량적 PCR과 같이 잘 공지된 "분자 생물학적" 검정; 특수한 펩타이드의 존재 또는 부재를 검출하는 것과 같은 "생화학적" 검정; 유동 세포분석법에 의해 세포 표면에서 CAR의 발현을 검출하는 것과 같은 "면역학적" 검정을 포함한다.
약제학적 조성물
상기 본원에 기술된 바와 같은 CAR-MAIT 세포를 포함하는 약제학적 또는 수의학적 조성물이 또한 기술되어 있다.
약제학적 조성물은 약제학적으로 허용되는 담체를 추가로 포함할 수 있다. 본언에 지칭된 것으로서 "허용되는 담체"는 당해 분야의 기술자에게 약제학적 또는 수의학적 조성물을 제형화하는데 유용한 것으로 공지된 임의의 공지된 화합물 또는 화합물의 조합이다. 특정 구현예에서, 용어 "약제학적으로 허용되는"은 연방 또는 주 정부의 규제 기관에 의해 승인되거나 미국 또는 유럽 약전 또는 동물, 및 사람에서 사용하기 위한 일반적으로 인지된 다른 약전에 나타난 것을 의미한다.
용어 "담체"는 CAR-MAIT 세포와 함께 투여되는 희석제, 보조제, 부형제, 또는 비히클을 지칭한다. 이러한 약제학적 담체는 멸균 액체, 예를 들면, 물 및 오일, 예를 들면, 석유, 동물, 식물성 또는 합성 기원, 예를 들면, 땅콩 오일, 대두 오일, 광 오일, 참깨 오일 등일 수 있다. 약제학적 조성물이 정맥내 투여되는 경우 물이 바람직한 담체이다. 염 용액 및 수성 덱스트로즈 및 글리세롤 용액은 또한 특히 주사가능한 용액용의 액체 담체일 수 있다. 적합한 약제학적 부형제는 전분, 글루코스, 락토스, 슈크로스, 스테아르산나트륨, 글리세롤 모노스테아레이트, 활석, 염화나트륨, 탈지 우유, 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 물, 에탄올 등을 포함한다. 조성물은, 경우에 따라, 미량의 습윤제 또는 유화제, 또는 pH 완충제를 함유할 수 있다.
추가의 양태에서, 약제학적 또는 수의학적 조성물은 MAIT-세포의 하나 이상의 집단을 포함할 수 있고, 여기서 각각의 집단은 상이한 CAR을 발현한다.
약제학적 또는 수의학적 조성물은 임의의 통상적인 투여 경로, 예를 들면, 비경구, 정맥내, 근육내, 피하 투여 등을 위해 제형화될 수 있다.
비경구적으로 투여되는 경우, 약제학적 또는 수의학적 조성물은 바람직하게는 정맥내 투여 경로로 투여된다.
바람직하게는, CAR-MAIT 세포의 목적한 면역 효능화 효과에 부정적으로 영향을 미치지 않는 약제학적으로 허용되는 형태가 사용된다.
약제학적 또는 수의학적 조성물은 CAR-MAIT 세포를 질환 또는 상태를 치료하거나 방지하는데 효과적인 양, 예를 들면, 치료학적 유효량 또는 예방학적 유효량으로 함유한다. 목적한 양은 조성물의 단일 투여에 의해, 조성물의 다중 투여에 의해, 또는 조성물의 연속 투여에 의해 전달될 수 있다. 투여될 CAR-MAIT 세포의 양은 당해 분야의 통상의 기술자에 의해 잘 공지된 표준 과정에 의해 측정할 수 있다. 환자의 생리학적 데이타(예컨대, 수용체의 연령, 체격, 체중 및 건강 및 체중, 동시 치료의 종류, 존재하는 경우, 치료 빈도 및 목적한 효과의 특성) 및 투여 경로를 고려하여 적절한 투여량을 결정함으로써 치료학적 유효량이 환자에게 투여되도록 하여야 한다.
용도
본 발명은 대상체에서 질환의 치료시 사용하기 위한 CAR-MAIT에 관한 것이며, 여기서 MAIT 세포는 대상체와 관련하여 동종이형이다.
바람직한 구현예에서, 본 발명의 CAR-MAIT 세포는 치료학적 생성물로서, 이상적으로 "규격품(off the shelf)" 생성물로서 사용된다.
일 양태에서, 치료될 질환 또는 장애는 증식성 질환 또는 장애, 바람직하게는 암; 감염성 질환 또는 장애, 바람직하게는 바이러스, 세균 또는 진균 감염; 염증성 질환 또는 장애; 및 면역 질환 또는 장애, 바람직하게는 자가면역성 또는 자가면역 질환으로부터 선택된 상태이다.
특수한 구현예에서, CAR-MAIT 세포 및/또는 약제학적 조성물은 바이러스 감염, 예를 들면, HIV 감염, A, B 또는 C형 바이러스 감염, 헤르페스 바이러스 감염(예컨대, VZV, HSV-1, HSV-6, HSV-II, CMV, 및 EBV) 및 인플루엔자 바이러스 감염의 치료에 적합하다. 비-바이러스 예는 만성 진균 질환, 예를 들면, 아스퍼길러스 증(Aspergillosis), 칸디다증(Candidiasis), 콕시디오이세스진균증(Coccidioidomycosis), 및 크립토코쿠스(Cryptococcus) 및 히스토플라스모시스(Histoplasmosis)와 관련된 질환을 포함할 수 있다. 만성 세균 감염제의 비-제한적 예는 클라미디아 폐렴(Chlamydia pneumoniae), 리스테리아 모노사이토게네스(Listeria monocytogenes), 및 마이코박테리움 결핵(Mycobacterium tuberculosis)일 수 있다. 감염성 질환은 또한 성교 질환(예컨대, 클라미디아(Chlamydia), 임질), 디프테리아 또는 콜레라일 수 있다.
특수한 구현예에서, CAR-MAIT 세포 및/또는 약제학적 조성물은 자가면역 장애의 치료에 적합하다. 자가면역 장애는 대상체내 거의 모든 기관 시스템, 예를 들면, 그러나 이에 한정되지 않는, 신경, 위장, 및 내분비계 뿐만 아니라 피부 및 다른 연결 조직, 눈, 혈액 및 혈관의 질환에 영향을 미칠 수 있다. 자가면역 질환의 예는 심상성 천포창, 하시모토 갑상선염(Hashimoto's thyroiditis), 전신 홍반 루푸스(Systemic lupus erythematosus), 소그렌 증후군(Sjogren's syndrome), 그레이브스 질환(Graves' disease), 피부경화증(Scleroderma), 류마티스 관절염(Rheumatoid arthritis), 다발 경화증(Multiple sclerosis), 중중 근무력증(Myasthenia gravis) 및 당뇨병을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
특수한 구현예에서, CAR-MAIT 세포 및/또는 약제학적 조성물은 암의 치료시 사용하기 위한 것이다. 따라서, 본 발명은 또한 이를 필요로 하는 대상체에서 암의 성장을 억제하고/하거나 암 형성을 방지하고/하거나 이를 필요로 하는 환자에서 암 형성 및/또는 암의 확산을 방지하는 방법에 관한 것이다.
특수한 구현예에서, CAR-MAIT 세포는 암의 재발의 치료시 사용하기 위한 것이다.
특히, 암은 고형 종양 또는 조혈 암이다.
특히, 암은 고형 종양, 예를 들면, 육종 및 암종, 예를 들면, 섬유육종, 점액육종, 지방육종, 연골육종, 골육종, 및 다른 육종, 윤활막종, 중피종, 유윙 종양(Ewing's tumor), 평활근육종, 횡문근육종, 결장 암종, 악성 림프종, 췌장 암, 유방 암,, 폐 암, 난소 암, 전립선 암, 간세포 암종, 평편 세포 암종, 기저 세포 암종, 선암종, 한선 암종(sweat gland carcinoma), 수질 갑상선 암종(medullary thyroid carcinoma), 유두 갑상선 암종, 페오크롬성 피지선 암종(pheochromocytomas sebaceous gland carcinoma), 유두모양 암종(papillary carcinoma), 유두모양 샘암종(papillary adenocarcinoma), 속질암종, 기관지원성 암종, 신장 세포 암종, 간암, 담즙관 암종, 융모막암종, 빌름스 종양(Wilms' tumor), 자궁경부암, 고환 종양, 정상피종, 방광 암종, 흑색종, 및 CNS 종양(예를 들면, 신경교종(예를 들면, 뇌간 신경교종(brainstem glioma) 및 혼합 신경교종), 교아세포종(또한 다형성 교아종(glioblastoma multiforme)), 성상세포종, CNS 림프종, 종자세포종, 수모세포종, 신경집종 두개비인두종(Schwannoma craniopharyogioma), 뇌실막종, 송과체종, 혈관모세포종, 신경집종, 희소돌기아교세포종, 수막종, 신경아세포종, 망막아종 및 뇌 전이)이다.
조혈 암은 혈액 또는 골수의 암이다. 혈액(조혈) 암의 예는 백혈병, 예를 들면, 급성 백혈병(예를 들면, 급성 림프성 백혈병, 급성 골수성 백혈병, 급성 골수성 백혈병 및 골수아구성, 전골수성, 골수단핵구성, 단핵구성 및 적백혈병), 만성 백혈병(예를 들면, 만성 골수구성(과립구성) 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 및 만성 림프성 백혈병), 진성다혈구증, 림프종, 호지킨 질환(Hodgkin's disease), 비-호지킨 림프종(non-Hodgkin's lymphoma)(무통성 및 고 등급 형태), 다발 골수종, 발덴스트롬마크로글로불린혈증(Waldenstrom's macroglobulinemia), 중쇄 질환, 골수이형성 증후군, 모발세포성 백혈병 및 골수형성이상증을 포함한다.
특수한 구현예에서, 질환은 혈액 약성종양, 보다 바람직하게는 백혈병, 림프종 또는 골수종이다.
특수한 구현예에서, MAIT 세포는 면역약화된 대상체에게 투여되어야 한다. 면역약화된 숙주에서, 동종이형 세포는 숙주 면역계에 의해 거부될 수 있다. 따라서, 동종이형 CAR MAIT 세포의 거부를 방지하기 위하여, 숙주 면역계는 바람직하게는 효과적으로 억제 또는 약화된다.
특히, CAR-MAIT 세포는 대상체가 면역약화되도록 하는 조건화 치료 후 투여된다.
특히, 조건화 치료는 골수소멸성(myeloablative) 또는 비-골수소멸성(non-myeloablative) 치료, 또는 림프고갈성(lymphodepleting) 화학치료요법이다.
특히, 조건화 치료는 화학치료요법 및/또는 방사선치료요법 및/또는 림프고갈성 항체로 이루어진다.
면역억제제, 예를 들면, 아자티오프린, 메토트렉세이트, 5-플루오로-우라실, 사이클로포스파미드, 플루다라빈, 펜토스타틴, 로미뎁신(FR901228), 항-CD52(CAMPATH, 알렘투주맙), 항-CD3, 항-CD20(리툭시맙) 항체 또는 다른 항체 치료요법, 사이클로스포린, FK506, 라파마이신, 마이코페놀산, 스테로이드를 조건화 치료 동안 사용될 수 있다.
특수한 구현예에서, 질환은 혈액 악성종양이고, MAIT 세포는 조혈 줄기 세포(HSC)의 이식 전 또는 조혈 줄기 세포(HSC)의 이식 직 후에 투여되어야 한다.
특히, CAR-MAIT 세포는 최소 잔존 질환(MRD)의 단계에서 혈액 악성종양의 치료시 사용하기 위한 것이다.
최소 잔존 질환(MRD)은 치료 후 체내에 남아있고 재발의 주요 원인을 구성하는 암 세포, 특히 백혈 암 세포를 지칭한다. 특히, 용어 최소 잔존 질환(MRD)을 사용하여 통상의 세포형태학에 의해 검출가능하지 않은 저-수준 질환을 기술한다(참고: 예컨대, Bruggemann and Kotrova; Blood Advances 2017 1:2456-2466).
특히, CAR-MAIT 세포를 사용하여 치료 범위(therapeutic window) 동안 잔류 백혈병 또는 산재성 종양 세포를 제거한다. CAR-MAIT 세포는 혈액 악성종양을 지닌 환자에서 이식에 대한 브릿지(bridge)로서, 또는 조혈 줄기 세포 이식 후 최소 잔존 질환(MRD) 또는 재발(또는 고-위험 환자에 대한 보조제 치료요법)의 치료로서 사용될 수 있다.
CAR-MAIT 세포의 투여는 주사, 주입, 착상(implantation) 또는 이식(transplantation)으로 수행될 수 있다. 본원에 기술된 조성물은 환자에게 정맥내 주사 또는 종양내, 근육내, 결절내(intranodally) 또는 복강내로 투여될 수 있다. 일 구현예에서, 세포 조성물은 바람직하게는 정맥내 주사로 투여된다.
실시예
물질 및 방법
유동 세포분석법
건강한 공여체로부터의 말초 혈액 단핵 세포를 피콜 밀도 구배 원심분리(Ficoll density gradient centrifugation)(Eurobio)로 단리하고 즉시 사용하거나 동결시킨다. 다중파라미터(Multiparametric) 10개-색상 유동 세포분석법 분석을 다음의 항체의 조합을 사용하여 15분 동안 4℃에서 수행하였다: 항-CD45 크롬 오렌지(Krome Orange), 항-CD3 ECD, 항-CD8? PE 또는 ECD, 항-TCR V24 PE Cy7(보두 Beckman Coulter로부터); 항-TCR V7.2 FITC 또는 APC(clone 3C10), 항-CD161 PerCP Cy5.5 또는 BV421, 항-CD4 AF700(Biolegend); 항-CD161 APC, 항-CD3 APC Vio770(Miltenyi Biotec); 항-CD4 APC AF750(Invitrogen); 항-CD3 PerCP(BD Biosciences); 산/죽은 좀비 아쿠아(Zombie aqua live/dead)(BioLegend). 데이타를 생 게이트(live gate)내에서 총 적어도 100,000개의 이벤트(event)를 수집하는 Navios 유동 세포분석기(Beckman Coulter)에서 획득하였다. 게이트는 동형 및 형광성 - 하나의 (FMO) 염색을 통해 정의되었다. 게이트 전략은 CD45 대 사이드 스캐터(side scatter)이고 MAIT 세포는 CD3+ CD4- CD161high V7.2+ T 세포로 정의되었다. 절대 세포 수를 동일한 샘플에서 CountBright Absolute Counting Beads(Invitrogen)를 사용하여 계산하였다. 데이타는 FlowJo 소프트웨어를 사용하여 분석하였다.
혼합 림프구 반응
반응인자 PBMC를 1 μM 카복시플루오레세인 석신이미딜 에스테르(CFSE)로 표지하고; 2 ×105 CFSE-표지된 반응인자 세포를 2×105개의 조사된 동종이형 또는 자가(음성 대조군) PBMC와 함께 평편 바닥 96-웰 플레이트 속에서 6일 동안 배양하였다. 반응인자 T 세포를 배양 기간 말기에 살아있는 CD3+ 세포를 게이팅함으로써 확인하였다. 통상의 T(Tconv) 및 MAIT 세포의 증식을 CFSE 희석(CFSElow 세포 %)으로 정량화하였다.
이종 세포의 입양 전달
NSG 마우스(Jackson laboratory, 미주리주 바 하버(Bar Harbor) 소재)를 Institut de Recherche Saint-Louis(파리 소재)의 병원체가 없는 동물 시설에 가두었다. 8 내지 10주령의 암컷 NSG를 3x106개의 사람 PBMC를 꼬리 정맥내로 주사하기 24시간 전에 조사(1.3 Gy)하였다. 마우스를 매일 생존에 대해 평가하고 매주 칭량하였다. 급성 GVHD의 발달은 체중 감소, 자세(구부림) 및 감소된 운동성을 기반으로 모니터링하였다. 체중 감소가 >15%(평균 ± 45일)인 경우 마우스를 희생시켰다. 말초 혈액, 비장, 골수, 간, 폐 및 장을 수거하였다. 조직을 기계적 해리(mechanical dissociation)에 적용시키고, 단일 세포 현탁액을 세포 염색기(70 μm, BD Biosciences)를 통해 여과하였다. 사람(CD45+) 백혈구 중에서 CD3 T 세포 및 MAIT 세포의 비율을 초기 접종물 및 이전 후 45일째에 유동 세포분석법으로 측정하였다.
시험관내 MAIT 세포 확장
건강한 자원자 PBMC(106/ml)를 환저 96-웰 속에 씨딩(seeding)하고 RPMI-10% 사람 혈청 속에서 300 nM 합성 5-OP-RU(Institut Curie에서 5-A-RU(F. Shmidt, 화학부)의 화학적 합성에 이어 메틸글리옥살과 혼합하여 생산함) 및 100 IU/mL IL-2의 존재하에서 배양하였다. 6일 후, 세포를 계수하고 상술한 바와 같이 유동 세포분석법에 의해 생존능 및 MAIT 세포수에 대해 평가하였다. 세포를 100 nM 5-OP-RU 및 100 IU/mL IL-2으로 3 내지 4일마다 17일까지 증식시켰다.
MAIT 세포 형질도입
CD3 T 세포를 PBMC(사람 CD3+ T 세포 단리 키트, Miltenyi Biotec)로부터 면역자기적으로 정제하고, 항-CD3/CD28 비드(1:1 비, Dynabeads Human T-Activator CD3/CD28, ThermoFisher Scientific)로 24시간 동안 활성화시키고, 종양 항원에 대해 지시된 CAR 및 형광성 리포터 단백질(청색 형광성 단백질, BFP)을 암호화하는 렌티바이러스 벡터로 형질도입하여 CAR+ T 세포가 모니터링되도록 하였다. 세포를 5% 사람 혈청 및 100 IU/mL IL-2가 보충된 신선한 X-VIVOTM 15 배지(Lonza) 속에 재현탁시켰다. 형질도입 효능은 6일 후에 유동 세포분석법에 의해 통상의 CD3 T 세포 및 MAIT 세포 중에서 BFP+ 세포의 퍼센트로 측정하였다.
시험관내 CAR-MAIT 세포 효능
CAR에 의해 표적화된 항원을 발현하는 5x104개의 루시퍼라제-발현 종양 세포를 FACS-분류된 CAR-T 세포, CAR-MAIT 세포 또는 모의-형질도입된(mock-transduced) MAIT 세포와 함께 다양한 E/T 비로 96-웰 미세플레이트 속에서 24시간 동안 항온처리하였다. 표적 세포 생존능은 발광성 강도의 측정으로 정량화하였다.
결과
1. MAIT 세포는 혼합된 림프구 반응(MLR)시 시험관내에서 증식하지 않는다.
동종이형 세포를 인식하고 동종면역 반응에 기여하는 MAIT 세포의 시험관내 잠재능을 시험하기 위하여, 본 발명자들은 유동-세포분석법 기반 MLR 방법을 사용하여 3자 동종이형 세포의 존재하에서 MAIT 세포 증식을 정량화하였다. 도 1(A 및 B)에 나타낸 바와 같이, MAIT 세포는 통상의 CD3 T 세포와는 대조적으로, 동종이형 세포에 대한 반응시 비 증식 또는 최소의 증식을 나타내었다.
2. MAIT 세포는 사람화된 마우스 모델에서 GVHD 유도에 참여하지 않는다.
급성 GVHD에 기여하는 MAIT 세포의 생체내 잠재능을 시험하기 위하여, 본 발명자는 조사된 면역약화된 NOD-Scid-IL-2Rγnull(NSG) 마우스에서 사람 PBMC의 이전을 사용하였다(도 2). 당해 모델에서, 이종 및 림프구감소 환경에서 사람 T 림프구의 접종(engraftment), 확장 및 활성화는 다양한 조직에서 사람 세포의 침윤과 함께, 급성 이종-GVHD의 증상을 초래하고(이식 후 ± 45일), 궁극적으로 사멸시켰다.
3.106개의 사람 PBMC를 주사한 조사된(1,3 Gy) NSG 마우스를 모니터링하여 GVHD 진행(체중 감소, 구부린 자세, 헝클어진 털, 감소된 운동성)을 평가하고 체중 감소가 >15%(이전 후 평균 45일)일 때 희생시켰다. 질환이 있는 마우스의 말초 혈액, 비장, 골수, 간, 결장, 및 폐내 사람 CD45+ 백혈구의 유동 세포분석법 분석은 통상의 CD3 T 세포의 거대한 축적과는 대조적으로, MAIT의 존재를 검출하지 못하였다(도 2).
이와 함께, 이러한 결과는 MAIT가 낮은 동종반응성 잠재능을 가지며 공통의 동종이형 CAR-T 세포의 개발을 위한 림프구원으로서 MAIT 세포를 사용하는 방식의 기초를 닦았다.
3. 효율적인 MAIT 세포 확장 및 렌티바이러스 CAR 형질도입
CAR-T 세포의 새로운 공급원으로서 MAIT 세포를 사용하기 위한 전제조건은 MAIT 세포가 시험관내에서 충분한 양으로 확장할 수 있고, 렌티바이러스 벡터에 의해 효율적으로 형질도입될 수 있는 것이다.
본 발명자는 건강한 공여체의 PBMC로부터 시험관내 MAIT 세포 확장에 있어서 선호도에 대한 실험 조건을 확립하였다. 21일의 기간에 걸친 5-OP-RU 및 IL-2의 반복된 투여는 MAIT 세포의 우선적인 농축(21일째에 CD3 T 세포 중에서 80% 이상의 MAIT 세포) 및 배양 기간에 걸쳐 MAIT 세포의 절대 수의 2400-배 확장을 야기하였다(도 3a 및 도 3b).
MAIT 세포 확장 과정과는 독립적으로, 본 발명자는 또한 MAIT 세포의 렌티바이러스 CAR 형질도입이 통상의 CD3 T 세포의 경우와 같이 효율적임을 측정하였다. 도 4에 나타낸 바와 같이, CAR-BFP 렌티바이러스로 형질도입된 항-CD3/CD28-자극된 CD3 T 세포는 CD3 T 세포의 것과 유사한 비율로 GFP+ MAIT 세포를 함유하였다.
4. CAR-MAIT 세포는 CAR-T 세포와 같이 효율적으로 관련 표적 세포를 사멸시킨다.
CAR-MAIT 세포의 시험관내 효능을 입증하기 위하여, 본 발명자는 관련 CAR 표적을 발현하는 종양 세포에 대한 사멸 실험을 수행하였다. 5x104개의 루시퍼라제-발현 표적 세포를 CAR-MAIT, CAR-T 또는 비-형질유도된 MAIT(NT) 효과기 세포와 함께 다양한 효과기/표적(E/T) 비에서 24시간 동안 항온처리하였다. 표적 세포 생존능을 발광성 강도(살아있는 표적 세포)를 측정함으로써 정량화하였다. CAR-MAIT 세포는 낮은 E:T 비에서 통상의 CAR0T 세포와 같이 효율적으로 종양 표적을 사멸시켰지만, 비-형질도입된 MAIT 세포(NT)는 그렇지 않았다.
SEQUENCE LISTING
<110> INSERM (INSTITUT NATIONAL DE LA SANTE ET DE LA RECHERCHE MEDICALE)
UNIVERSITE DE PARIS
ASSISTANCE PUBLIQUE-HOPITAUX DE PARIS (APHP)
INSTITUT CURIE
<120> MUCOSAL-ASSOCIATED INVARIANT T (MAIT) CELLS EXPRESSING CHIMERIC
ANTIGEN RECEPTORS
<130> IP20213994FR
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<210> 1
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<212> PRT
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<220>
<223> Gly / Ser linker
<400> 2
Gly Gly Gly Gly Ser
1 5
Claims (10)
- 대상체 내에서 암, 면역 질환 또는 감염성 질환의 치료시 사용하기 위한, 키메라 항원 수용체(chimeric antigen receptor: CAR)를 발현하는 점막 관련 불변 T(mucosa associated invariant T: MAIT) 세포로서, MAIT 세포가 대상체와 관련하여 동종이형(allogenic)인, MAIT 세포.
- 제1항에 있어서, 암이 혈액 악성 종양인, MAIT 세포.
- 제1항에 있어서, 암이, 바람직하게는 유방 암, 전립선 암, 난소 암, 자궁경부 암, 피부 암, 췌장 암, 결장직장 암, 신장 암, 간 암, 뇌 암, 및 폐 암으로 이루어진 그룹으로부터 선택된, 고형 종양인, MAIT 세포.
- 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, MAIT 세포가 면역약화된 대상체(immunocompromised subject)에게 투여되는 것인, MAIT 세포.
- 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, MAIT 세포가 대상체를 면역약화되도록 하는 조건화 치료(conditioning treatment) 후 투여되는 것인, MAIT 세포.
- 제5항에 있어서, 조건화 치료가 화학치료요법, 방사선치료요법 및/또는 면역림프고갈 항체(lymphodepleting antibody)의 투여로 이루어진, MAIT 세포.
- 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 질환이 혈액 악성종양이고, 바람직하게는 MAIT 세포가 조혈 줄기 세포(HSC)의 이식 전 또는 조혈 줄기 세포(HSC)의 이식 직 후 투여되는, MAIT 세포.
- 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, CAR이 종양-관련 항원(TAA)에 특이적으로 결합하는, MAIT 세포.
- 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, CAR이 종양 세포의 표면에서 발현하는 임의의 TAA, 바람직하게는 CD19, GD2, EGFR, CD20, CD22, CD33, CD138, CD52, CD30, ROR1, HER2, EpCAM, MUC-1, MUC5AC, BCMA, CD38, SLAMF7/CS1, CD123, IL-13Ra2, HER2, LeY, MUC16 또는 PSMA에 특이적으로 결합하고, 보다 바람직하게는 TAA가 CD19, CD20, CD22, CD33, CD138, BCMA, CD38, SLAMF7/CS1, IL-13Ra2 또는 HER2인, MAIT 세포.
- 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, CAR이 세포내 종양단백질(oncoprotein), 항체 단편 또는 세포내 종양-관련 항원, 특히, WT-1, NY-ESO-1, MAGE, PRAME, RAS, 메소텔린, c-Met, CEA, CSPG-4, EBNA3C, CA-125 또는 GPA7을 특이적으로 표적화하는, MAIT 세포.
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