KR20210138394A - 산나물 추출물을 유효성분으로 하는 피부 미백용 조성물 - Google Patents

산나물 추출물을 유효성분으로 하는 피부 미백용 조성물 Download PDF

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김현재
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Abstract

본 발명은 멸가치(Adenocaulon himalaicum Edgew.) 또는 섬초롱꽃(Campanula takesimana Nakai) 유효성분으로 포함하는 피부 미백용 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 조성물은 멜라닌 생성 억제 및 티로시나아제 활성 억제 효과가 우수하다. 또한 MITF, 티로시나아제 및 티로시나아제 관련 단백질 1의 발현양을 감소시켜 피부 미백을 위한 조성물로서 유용하게 사용될 수 있다. 특히, 본 발명의 조성물은 천연물질로 식용이 가능하므로 이로부터 유래한 추출물 및 화합물을 포함하는 본 발명의 피부 미백용 조성물은 장기간 사용에도 안전한 이점을 가진다. 또한, 피부 미백용 화장료 조성물로서 피부 외용제에 유용하게 적용될 수 있다.

Description

산나물 추출물을 유효성분으로 하는 피부 미백용 조성물 {Compositions for skin whitening comprising an extract of wild edible greens as an active ingredient}
본 발명은 피부 미백용 조성물에 관한 것으로, 산나물 추출물 (extract of wild edible greens) 더욱 자세하게는 멸가치 (Adenocaulon himalaicum Edgew.) 또는 섬초롱꽃 (Campanula takesimana Nakai) 추출물 중 적어도 하나 이상을 유효성분으로 포함하여 피부미백 효과를 갖는 조성물에 관한 것이다.
사람의 피부색은 멜라닌, 카로틴 및 헤모글로빈의 양에 따라 결정되는데 이중 멜라닌이 가장 결정적인 요소이다. 멜라닌은 피부 내 기저층에 존재하는 멜라노사이트(melanocyte)에서 합성되며 주변 각질세포(Keratinocyte)로 전이되어 사람의 피부색을 나타낸다. 멜라닌은 자외선으로부터 신체를 보호하는 중요한 기능을 가지고 있지만, 과잉 생산되는 경우에는 기미, 주근깨 등을 형성할 뿐 아니라 피부노화를 촉진하고 피부암 유발에도 중요한 역할을 하는 것으로 알려져 있다.
멜라닌은 멜라노사이트 세포에서 티로신(Tyrosine)의 효소 및 비효소적 산화반응을 거쳐 생성되는데 멜라닌 합성에 관여하는 효소로는 티로시나아제(tyrosinase), 티로시나아제 관련 단백질 1(tyrosinase related protein 1, TRP-1)과 티로시나아제 관련 단백질 2(tyrosinase related protein 2, TRP-2)가 알려져 있다. 또한 주요한 세포 내 신호전달 경로는 cyclic monophosphate/protein kinase A(cAMP/PKA) 경로로서, cAMP는 PKA, cAMP resposive element binding protein 1(CREB1)을 경유하여 Microphthalmia-associated transcription factor(MITF)의 발현을 촉진한다. MITF는 멜라닌 합성 과정에서 중요한 전사 조절 인자로 티로시나아제, 티로시나아제 관련 단백질1과 티로시나아제 관련 단백질 2의 전사를 촉진하는 것으로 알려져 있다.
일광 노출 후 피부의 색소침착은 자외선에 의한 사이토카인(cytokine)의 분비와 함께 alpha-melanocyte stimulating hormone(α-MSH)의 영향이 중요한데, α-MSH는 세포막 수용체인 melanocortin-1-receptor(MC1R)를 통해 cyclic AMP(cAMP), protein kinase A(PKA)를 증가시키고 활성화된 MITF에 의해 티로시나아제의 발현을 조절함으로써 멜라닌세포의 증식과 색소증가에 관여한다.
식물유래 소재는 안전성 측면에서 우수하여 오랫동안 이용되었으며, 특히 국내의 경우 민간에서 이용되거나 혹은 한방에서 이용되는 식물 및 생약성분을 주로 한 기능성 소재 개발이 활발히 이루어지고 있다.
멸가치 (Adenocaulon himalaicum Edgew.)는 국화과(Compositae)의 다년생 초본으로, 식약처에서 고시한 식품원재료에 잎 부위가 식용가능부위로 명시되어 있다. 키는 약 50 ~ 100 cm 가량이고 음지이며 습한 지역에서 자란다.
섬초롱꽃 (Campanula takesimana Nakai)은 초롱꽃과(Campanulaceae)의 국내 울릉도 특산종이다. 식약처에서 고시한 식품원재료에 잎 부위가 식용가능부위로 명시되어 있다. 30 ~ 100cm까지 자라며, 흰색 바탕에 짙은 반점이 있는 흰섬초롱꽃과 짙은 자줏빛의 자주섬초롱꽃이 있다.
그러나, 상기 산나물들의 추출물을 유효성분으로 하는 피부미백용 조성물에 대한 연구가 아직 이루어지지 않은 실정이다. 따라서 본 발명자들은 상기 물질들이 가지는 효능에 대한 직접적인 연구를 수행하였다.
한국등록특허 KP10-1245813 한국등록특허 KP10-1600957 한국등록특허 KP10-2065173
일 양상은 멸가치(Adenocaulon himalaicum Edgew.) 또는 섬초롱꽃(Campanula takesimana Nakai) 추출물 중 적어도 하나 이상을 유효성분으로 포함하는 피부 미백용 건강기능식품 조성물을 제공하는 것이다.
다른 양상은 멸가치(Adenocaulon himalaicum Edgew.) 또는 섬초롱꽃(Campanula takesimana Nakai) 추출물 중 적어도 하나 이상을 유효성분으로 포함하는 피부 미백용 화장료 조성물을 제공하는 것이다.
또 다른 양상은 멸가치(Adenocaulon himalaicum Edgew.) 또는 섬초롱꽃(Campanula takesimana Nakai) 추출물 중 적어도 하나 이상을 유효성분으로 포함하는 멜라닌 색소 침착증의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.
또 다른 양상은 멸가치(Adenocaulon himalaicum Edgew.) 또는 섬초롱꽃(Campanula takesimana Nakai) 추출물 중 적어도 하나 이상을 유효성분으로 포함하는 멜라닌 색소 침착증의 예방 또는 개선용 피부 외용제 조성물을 제공하는 것이다.
일 양상은 멸가치(Adenocaulon himalaicum Edgew.) 또는 섬초롱꽃(Campanula takesimana Nakai) 추출물 중 적어도 하나 이상을 유효성분으로 포함하는 피부 미백용 건강기능식품 조성물을 제공한다.
상기 멸가치(Adenocaulon himalaicum Edgew.) 또는 섬초롱꽃(Campanula takesimana Nakai)은 전체, 뿌리, 줄기, 가지, 잎, 종자 또는 열매로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상일 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 멸가치(Adenocaulon himalaicum Edgew.) 또는 섬초롱꽃(Campanula takesimana Nakai)은 추출물은 종래에 천연식물을 추출하기 위하여 이용된 열수추출, 용매추출, 증류추출, 초임계 추출 등 어떠한 추출방법으로도 추출될 수 있으며, 바람직하게는 정제수, 유기용매 또는 이들의 혼합용매로 추출되는 것을 특징으로 하고, 일 구체예에 있어서 에탄올 혹은 메탄올 용매분획한 후 재결정하여 수득한 것을 특징으로 하는 것일 수 있다.
상기 추출물은 물, 알콜, 예를 들면, C1-C6 알콜, 예를 들면, C1-C4 알콜 또는 이들의 혼합물을 용매로 하여 추출된 것일 수 있다. 상기 C1-C6 알콜은 메탄올, 에탄올, 프로판올, 이소프로판올, 1,3-프로판디올, 부탄올, 펜탄올, 헥산올 등일 수 있다. 상기 용매는 예를 들면, 물과 알콜의 혼합물 즉 알콜 수용액일 수 있다. 알콜 수용액의 알콜 농도는 1 내지 99.5 (v/v)%, 예를 들면, 10 내지 99.5 (v/v)%, 1 내지 70(v/v)%, 1 내지 40(v/v)%, 5 내지 25(v/v)%, 7 내지 20(v/v)%, 5 내지 25(v/v)%, 또는 10 내지 20(v/v)%일 수 있다. 상기 알콜 수용액은 에탄올 수용액일 수 있다.
상기 멸가치(Adenocaulon himalaicum Edgew.) 또는 섬초롱꽃(Campanula takesimana Nakai)에 대하여 상기 추출 용매를 3 내지 10 (부피/중량)배, 예를 들면, 3 내지 7 (부피/중량)배, 3 내지 5 (부피/중량)배, 5 내지 10 (부피/중량)배, 또는 4 내지 10배 첨가하는 것을 포함할 수 있다. 예를 들면, 상기 멸가치 또는 섬초롱꽃으로부터 유래된 재료 1kg에 대하여 상기 추출 용매를 3 내지 10 L 첨가하는 것을 포함할 수 있다.
상기 추출은 가온된 액체 추출, 가압된 액체 추출 (pressurized liquid extraction: PLE), 초음파 도움을 받은 추출 (microwave assisted extraction: MAE), 아임계 추출 (subcritical extraction: SE), 또는 이들의 조합에 의하여 수행될 수 있다. 상기 아임계 추출은 아임계 수추출 (subcritical water extraction: SWE)일 수 있다. 아임계 수추출은 초가열된 수추출 (superheated water extraction) 또는 가압된 열수 추출 (pressurized hot water extraction: PHWE)라고도 한다. 상기 가온된 액체 추출은 환류 추출일 수 있다.
상기 추출은 4 내지 70, 예를 들면, 4 내지 50, 4
Figure pat00001
내지 40, 4
Figure pat00002
내지 30, 10
Figure pat00003
내지 70, 15
Figure pat00004
내지 70, 20
Figure pat00005
내지 70, 4
Figure pat00006
내지 50, 10
Figure pat00007
내지 50, 4
Figure pat00008
내지 40, 4
Figure pat00009
내지 30, 10
Figure pat00010
내지 40, 10
Figure pat00011
내지 35, 또는 10 내지 30에서 수행하는 것일 수 있다. 상기 추출 시간은 선택된 온도에 따라 달라질 수 있는데 1 시간 내지 2개월, 예를 들면, 1 시간 내지 1개월, 1 시간 내지 15일, 1 시간 내지 10일, 1 시간 내지 5일, 1 시간 내지 3일, 1 시간 내지 2일, 1 시간 내지 1일, 5 시간 내지 1개월, 5 시간 내지 15일, 5 시간 내지 10일, 5 시간 내지 5일, 5 시간 내지 3일, 5 시간 내지 2일, 5 시간 내지 1일, 10 시간 내지 1개월, 10 시간 내지 15일, 10 시간 내지 10일, 10 시간 내지 5일, 10 시간 내지 3일, 또는 10 시간 내지 2일일 수 있다. 상기 추출은 상기 용매 중에 멸가치, 섬초롱꽃 전체, 그 일부분, 또는 이들로부터 유래된 재료를 혼합하고 일정 시간 동안 방치하는 것을 포함할 수 있다. 상기 방치는 적당한 교반을 포함할 수 있다. 상기 추출은 1회 이상, 예를 들면, 1 내지 5회 반복될 수 있다.
상기 추출은 식물체 잔사 및 추출액을 여과 등의 알려진 방법에 의하여 분리할 수 있다. 상기 추출은 또한 얻어진 추출액으로부터 감압 농축과 같은 알려진 방법에 의하여 용매를 제거하는 것을 포함할 수 있다. 상기 추출은 또한 얻어진 추출물을 동결건조와 같은 건조에 의하여 건조 추출물을 제조하는 것을 포함할 수 있다.
상기 추출물은 조성물 총 중량에 대하여 0.0001 중량% 내지 99.0 중량%, 예를 들면, 0.01 중량% 내지 60 중량%, 0.01 중량% 내지 40 중량%, 0.01 중량% 내지 30 중량%, 0.01 중량% 내지 20 중량%, 0.01 중량% 내지 10 중량%, 0.01 중량% 내지 5 중량%, 0.05 중량% 내지 60 중량%, 0.05 중량% 내지 40 중량%, 0.05 중량% 내지 30 중량%, 0.05 중량% 내지 20 중량%, 0.05 중량% 내지 10 중량%, 0.05 중량% 내지 5 중량%, 0.1 중량% 내지 60 중량%, 0.1 중량% 내지 40 중량%, 0.1 중량% 내지 30 중량%, 0.1 중량% 내지 20 중량%, 0.1 중량% 내지 10 중량%, 또는 0.1 중량% 내지 5 중량%로 포함될 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 용어, "미백"은 멜라닌 등의 색소의 과다로 인하여 명도가 감소된 피부의 명도를 증가시키거나 또는 피부의 명도를 일정 수준으로 유지하는 방법, 상기 방법으로 형성된 명도가 증가된 피부 등을 포괄하여 의미하는 것으로서, 구체적으로는 피부 미백을 의미할 수 있다.
일 구체예에 있어서, 상기 멸가치(Adenocaulon himalaicum Edgew.) 또는 섬초롱꽃(Campanula takesimana Nakai) 추출물은 멜라닌 생성을 억제 또는 티로시나아제 (Tyrosinase) 활성을 억제하는 것일 수 있고, 이를 통해 피부 미백효과를 가질 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 용어, 멜라닌(Melanin)은 피부, 머리카락, 눈동자 등 생물체에 널리 분포되어 있는 색소 성분으로 인체 표피층의 멜라닌 세포(Melanocyte) 내의 멜라노좀(Melanosome)에서 합성되는데, 티로시나아제(Tyrosinase) 효소에 의해 티로신(Tyrosine)을 시발 물질로 하여 멜라닌이 생합성된다. 생합성된 멜라닌은 자외선과 같은 피부자극에 대해 저항력을 높여 주지만, 과도한 멜라닌 합성은 기미, 주근깨, 검버섯과 같은 색소 침착을 일으키기 때문에 티로시나아제 활성 억제 측정은 피부 미백 효과를 나타내는 하나의 중요한 지표로 받아들여지고 있다.
또한, 일 구체예에 있어서, 상기 멸가치(Adenocaulon himalaicum Edgew.) 또는 섬초롱꽃(Campanula takesimana Nakai) 추출물은 MITF (microphthalmia-associated transcription factor), 티로시나아제 및 티로시나아제 관련 단백질 1 (Tyrosinase-related protein 1)으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 발현을 억제시키는 것일 수 있다. 상기MITF, 티로시나아제 및 티로시나아제 관련 단백질 1의 유전자 발현 또는 단백질 발현을 억제시킴으로써, 피부 미백효과를 가질 수 있다.
상기 건강 기능성 식품은 일상 식사에서 결핍되기 쉬운 영양소나 인체에 유용한 기능을 가진 원료나 성분 (이하, '기능성 원료')을 사용하여 제조한 식품으로, 건강을 유지하거나 소정의 질병 또는 증상을 예방 및/또는 개선하는데 도움을 주는 모든 식품을 의미하며, 최종 제품 형태에는 특별한 제한이 없다. 예컨대, 상기 건강기능식품은 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 환제, 겔, 젤리, 현탁액, 에멀젼, 시럽제, 티백제, 침출차, 또는 건강 음료로 이루어진 군으로부터 선택되는 제형을 갖는 것일 수 있다.
상기 건강 기능성 식품에 함유된 유효성분 (즉, 섬초롱꽃 또는 멸가치 추출물)의 함량은 식품의 형태, 소망하는 용도 등에 따라 적절하게 특별한 제한이 없으며, 예컨대, 전체 식품 중량의 0.0001 내지 99 중량%, 0.0001 내지 95 중량%, 0.0001 내지 90 중량%, 0.0001 내지 80 중량%, 0.0001 내지 50 중량%, 0.001 내지 99 중량%, 0.001 내지 95 중량%, 0.001 내지 90 중량%, 0.001 내지 80 중량%, 0.001 내지 50 중량%, 0.01 내지 99 중량%, 0.01 내지 95 중량%, 0.01 내지 90 중량%, 0.01 내지 80 중량%, 0.01 내지 50 중량%, 0.1 내지 99 중량%, 0.1 내지 95 중량%, 0.1 내지 90 중량%, 0.1 내지 80 중량%, 0.1 내지 50 중량%, 0.1 내지 30 중량%, 0.1 내지 10 중량%, 1 내지 99 중량%, 1 내지 95 중량%, 1 내지 90 중량%, 1 내지 80 중량%, 1 내지 50 중량%, 1 내지 30 중량%, 1 내지 10 중량%, 10 내지 99 중량%, 10 내지 95 중량%, 10 내지 90 중량%, 10 내지 80 중량%, 10 내지 50 중량%, 10 내지 30 중량%, 25 내지 99 중량%, 25 내지 95 중량%, 25 내지 90 중량%, 25 내지 80 중량%, 25 내지 50 중량%, 25 내지 30 중량%, 40 내지 99 중량%, 40 내지 95 중량%, 40 내지 90 중량%, 40 내지 80 중량%, 40 내지 50 중량%, 50 내지 99 중량%, 50 내지 95 중량%, 50 내지 90 중량%, 50 내지 80 중량%, 60 내지 99 중량%, 60 내지 95 중량%, 60 내지 90 중량%, 또는 60 내지 80 중량%일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
상기 건강 기능성 식품은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물 (전해질), 합성 풍미제 또는 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제, 중진제 (치즈, 초콜릿등), 펙트산 또는 그의 염, 알긴산 또는 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상을 추가로 함유할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 전체 건강 기능성 식품 100 중량부 당 0.001 내지 약 20 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이나, 이에 제한되는 것은 아니다.
다른 양상은 멸가치(Adenocaulon himalaicum Edgew.) 또는 섬초롱꽃(Campanula takesimana Nakai) 추출물 중 적어도 하나 이상을 유효성분으로 포함하는 피부 미백용 화장료 조성물을 제공한다.
상기 화장용 조성물은 유연화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 수분 크림, 마사지크림, 에센스, 앰플, 젤, 아이크림, 클렌징크림, 클렌징폼, 클렌징워터, 팩, 스프레이, 파우더, 젤, 로션 및 연고로 구성된 군으로부터 선택되는 제형을 갖는 것일 수 있다. 상기 화장용 조성물은 일반 피부 화장료에 배합되는 화장품학적으로 허용 가능한 담체를 1종 이상 추가로 포함할 수 있으며, 통상의 성분으로 예를 들면 유분, 물, 계면 활성제, 보습제, 저급 알코올, 증점제, 킬레이트제, 색소, 방부제, 향료 등을 적절히 배합할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
또 다른 양상은 멸가치(Adenocaulon himalaicum Edgew.) 또는 섬초롱꽃(Campanula takesimana Nakai) 추출물 중 적어도 하나 이상을 유효성분으로 포함하는 멜라닌 색소 침착증의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
상기 멜라닌 색소 침착증은 기미, 주근깨, 검버섯, 간반, 오타모반, 일광흑자, 및 외상 또는 염증 후 색소침착 중에서 선택된 어느 하나 이상인 것일 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 용어, "약학적 조성물"은, 대상체로의 투여 시에 몇몇 유리한 효과를 부여하는 분자 또는 화합물을 지칭할 수 있다. 유리한 효과는 진단적 결정을 가능하게 하는 것; 질병, 증상, 장애 또는 병태의 개선; 질병, 증상, 장애 또는 질환의 발병의 감소 또는 예방; 및 일반적으로 질병, 증상, 장애 또는 병태의 대응을 포함할 수 있다.
상기 약학적 조성물은 임상투여시 비경구로 투여가 가능하며 일반적인 의약품 제제의 형태로 사용될 수 있다. 비경구 투여는 직장, 정맥, 복막, 근육, 동맥, 경피, 비강(Nasal), 흡입, 안구 및 피하와 같은 경구 이외의 투여경로를 통한 투여를 의미할 수 있다. 본 발명의 상기 약학적 조성물을 의약품으로 사용하는 경우, 추가로 동일 또는 유사한 기능을 나타내는 유효성분을 1종 이상 함유할 수 있다.
상기 약학적 조성물은 수성 또는 유성 매질중의 용액, 현탁액, 시럽제 또는 유화액 형태이거나, 산제, 분말제, 과립제, 정제 또는 캅셀제 등의 형태로 제제화될 수 있으며, 제제화를 위하여 분산제 또는 안정화제를 추가적으로 포함할 수 있다. 상기 약학적 조성물을 제제화할 경우에 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제될 수 있다. 비경구투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제가 포함될 수 있다. 비수성용제, 현탁용제로는 프로필렌글리콜(Propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(Witepsol), 마크로골, 트윈(Tween) 61, 카카오지, 리우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.
상기 약학적 조성물은 생리식염수 또는 유기용매와 같이 약제로 허용된 여러 전달체(Carrier)와 혼합하여 사용될 수 있고, 안정성이나 흡수성을 증가시키기 위하여 글루코스, 수크로스 또는 덱스트란과 같은 탄수화물, 아스코르브산(Ascorbic acid) 또는 글루타치온(Glutathione)과 같은 항산화제(Antioxidants), 킬레이트화제(Chelating agents), 저분자 단백질 또는 다른 안정화제(Stabilizers)들이 약제로 사용될 수 있다.
또한, 상기 약학적 조성물의 약학적 유효량, 유효 투여량은 약학적 조성물의 제제화 방법, 투여 방식, 투여시간 및/또는 투여 경로 등에 의해 다양할 수 있다. 또한, 상기 약학 조성물의 투여로 달성하고자 하는 반응의 종류와 정도, 투여 대상이 되는 개체의 종류, 연령, 체중, 일반적인 건강 상태, 질병의 증세나 정도, 성별, 식이, 배설, 해당 개체에 동시 또는 이시에 함께 사용되는 약물 기타 조성물의 성분 등을 비롯한 여러 인자 및 의약 분야에서 잘 알려진 유사 인자에 따라 다양해질 수 있다. 당해 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자는 목적하는 치료에 효과적인 투여량을 용이하게 결정하고 처방할 수 있다. 본 발명에 따른 약학 조성물의 투여는 하루에 1회 투여될 수 있고, 수회에 나누어 투여될 수 있다. 따라서 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다. 약학적 조성물의 투여량은 1일 1 ug/kg/일 내지 1,OOO mg/kg/일일 수 있다.
상기 개체는 포유동물, 예를 들면, 사람, 소, 말, 돼지, 개, 양, 염소, 또는 고양이일 수 있다. 상기 개체는 아토피 피부염의 치유를 필요로 하는 개체일 수 있다.
또 다른 양상은 멸가치(Adenocaulon himalaicum Edgew.) 또는 섬초롱꽃(Campanula takesimana Nakai) 추출물 중 적어도 하나 이상을 유효성분으로 포함하는 멜라닌 색소 침착증의 예방 또는 개선용 피부 외용제 조성물을 제공한다.
본 명세서에서 사용되는 용어, "외용제"는 외용으로 제공되는 제제이고, 외용산제, 외용정제, 외용액제, 연고제, 경고제, 좌제 등이 있으며, 본 발명의 피부 외용제는 특히 피부 외용에 작용하는 제제는 제한없이 포함한다.
본 발명에 따른 피부 외용제는 상용되는 무기 또는 유기의 담체, 부형제 및 희석제를 가하여 고체, 반고체 또는 액상의 형태로 제제화된 비경구 투여제일 수 있다. 상기 비경구 투여를 위한 제재로는 크림, 겔, 연고, 피부 유화제, 피부 현탁액, 경피전달성 패치, 약물 함유 붕대, 로션, 또는 그 조합인 경피 투여형 제형일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
상기 피부 외용제는 통상 화장품이나 의약품 등의 피부외용제에 사용되는 성분, 예를 들면 수성성분, 유성성분, 분말성분, 알코올류, 보습제, 증점제, 자외선흡수제, 미백제, 방부제, 산화방지제, 계면활성제, 향료, 색제, 각종 피부 영양제등을 필요에 따라서 적절하게 배합할 수 있다.
상기 피부외용제는, 에데트산이나트륨, 에데트산삼나트륨, 시트르산나트륨, 폴리인산나트륨, 메타인산나트륨, 글루콘산 등의 금속봉쇄제, 카페인, 탄닌, 벨라파밀, 감초추출물, 글라블리딘, 칼린의 과실의 열수추출물, 각종생약, 아세트산토코페롤, 글리틸리틴산, 트라넥삼산 및 그 유도체 또는 그 염등의 약제, 비타민 C, 아스코르브산인산마그네슘, 아스코르브산글루코시드, 알부틴, 코지산, 글루코스, 프룩토스, 트레할로스 등의 당류등도 적절하게 배합할 수 있다.
상기 발명에 대해 기술한 용어 및 방법 등은 각 발명들 간에 동일하게 적용된다.
본 발명의 멸가치(Adenocaulon himalaicum Edgew.) 또는 섬초롱꽃(Campanula takesimana Nakai) 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물은 멜라닌 생성 억제 및 티로시나아제 활성 억제 효과가 우수하다. 또한 MITF, 티로시나아제 및 티로시나아제 관련 단백질 1의 발현양을 감소시켜 피부 미백을 위한 조성물로서 유용하게 사용될 수 있다. 특히, 멸가치(Adenocaulon himalaicum Edgew.) 또는 섬초롱꽃(Campanula takesimana Nakai)은 천연물질로 식용이 가능하므로 이로부터 유래한 추출물 및 화합물을 포함하는 본 발명의 피부 미백용 조성물은 장기간 사용에도 안전한 이점을 가진다. 또한, 피부 미백용 화장료 조성물로서 피부 외용제에 유용하게 적용될 수 있다.
도 1은 멸가치 추출물의 농도에 따른 멜라닌색소의 양을 나타내는 그래프이다.
도 2은 섬초롱꽃 추출물의 농도에 따른 멜라닌색소의 양을 나타내는 그래프이다
도 3은 멸가치 추출물의 농도에 따른 티로시나아제 활성을 나타내는 그래프이다.
도 4은 섬초롱꽃 추출물의 농도에 따른 티로시나아제 활성을 나타내는 그래프이다
도 5은 멸가치 추출물의 농도에 따른 MITF, 티로시나아제, 티로시나아제 관련 단백질1 유전자의 발현양 변화를 나타내는 그래프이다.
도 6은 섬초롱꽃 추출물의 농도에 따른 MITF, 티로시나아제, 티로시나아제 관련 단백질1 유전자의 발현양 변화를 나타내는 그래프이다.
이하 실시예를 통하여 보다 상세하게 설명한다. 그러나, 이들 실시예는 하나 이상의 구체예를 예시적으로 설명하기 위한 것으로 본 발명의 범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.
실시예 1: 멸가치 및 섬초롱꽃 추출물의 제조
본 발명의 조성물 중 멸가치 추출은 다음과 같은 과정에 의해 제조된다. 우선, 건조한 멸가치(Adenocaulon himalaicum Edgew.) 잎 원재료 2 kg과 30% 주정50kg을 추출탱크에 넣고 60 ℃로 5시간 동안 환류 추출하였다. 추출된 시료는 백필터 (10 ㎛)로 여과 후 감압 농축을 진행하였고, 감압 건조를 통하여 황갈색 분말을 수득하였다.
본 발명의 조성물 중 섬초롱꽃 추출물은 다음과 같은 과정에 의해 제조된다. 우선, 건조한 섬초롱꽃 (Campanula takesimana Nakai) 잎 2 kg와 정제수 40 kg을 추출탱크에 넣고 98 ℃로 5시간 동안 환류 추출하였다. 추출된 시료는 백필터 (55 ㎛)로 여과 후 감압 박막 농축을 진행하였고, 동결 건조를 통하여 수용성 분말을 수득하였다.
실험예 1: 멸가치( Adenocaulon himalaicum Edgew.) 또는 섬초롱꽃( Campanula takesimana Nakai) 추출물의 멜라닌 생합성 저해 효과
상기 실시예 1의 추출물이 멜라닌 생합성에 미치는 영향을 알아보기 위하여 B16F10 세포에 멸가치(Adenocaulon himalaicum Edgew.) 또는 섬초롱꽃(Campanula takesimana Nakai)추출물을 농도별로 처리하고 세포 내 멜라닌 함량을 측정하였다. 자세하게는, B16F10세포를 6-웰 플레이트에 웰 당 1x105 cells로 분주한 후 24시간 뒤 200nM α-MSH와 실시예 1의 추출물을 농도별로 처리하였다. 48시간 배양한 후 배양액을 제거하여 PBS로 세척하였고, 이것을 트립신(Trypsin)-EDTA로 처리하여 세포 펠렛(pellet)을 회수하였다. 세포 펠렛은 10% DMSO가 함유된 1N NaOH 100 μL를 넣어 65 ℃에서 1시간동안 가열하여 세포 내의 멜라닌을 녹인 뒤 96-웰 플레이트에 넣어 ELISA reader (Epoch, USA)로 405nm에서 흡광도를 측정하여 멜라닌 양을 구하였다.
도1에서 볼 수 있듯이 시료를 처리하지 않은 대조군 (α-MSH만 처리군)과 비교하였을 때 양성대조군인 에피갈로카테킨 갈레이트 (Epigallocatechin gallate, EGCG)는 100μM에서 멜라닌 합성 저해능이 34.3% 유의하게 감소하였다(***p<0.001). 멸가치 추출물 처리군 (AHE)은 10, 100 μM 농도에서 각각 16.43, 19.74% 멜라닌 생합성을 저해시켰다 (*p<0.05, **p<0.01). 또한, 도 2에서 볼 수 있듯이 시료를 처리하지 않은 대조군 (α-MSH만 처리군)과 비교하였을 때 양성대조군인 EGCG는 100μM에서 멜라닌 합성 저해능이 47.47% 유의하게 감소하였다(***p<0.001). 섬초롱꽃 열수 추출물 처리군은 10, 100 μM 농도에서 각각 29.32, 47.96% 멜라닌 생합성을 저해시켰고, (*p<0.05, ***p<0.001) 섬초롱꽃 주정 추출물 처리군은 처리군은 10, 100 μM 농도에서 각각 11.92, 21.58% 멜라닌 생합성을 저해시켰다 (*p<0.05. **p<0.01).
실험예 2: 멸가치( Adenocaulon himalaicum Edgew.) 또는 섬초롱꽃( Campanula takesimana Nakai) 추출물의 티로시나아제 활성 저해 평가
상기 실시예 1추출물이 멜라닌 생성에 중요한 효소인 티로시나아제 활성을 저해하는지 확인하였다. 자세하게는, B16F10세포를 6-웰 플레이트에 웰 당 1x105 cells로 분주한 후 24시간 뒤 200nM α-MSH와 실시예 1의 추출물을 농도별로 처리하였다. 48시간 배양한 후 배양액을 제거하여 PBS로 세척하였고, 이것을 트립신(Trypsin)-EDTA로 처리하여 세포 펠렛(pellet)을 회수하였다. 세포 펠렛은 파쇄버퍼인 RIPA 버퍼(150 mM NaCl, 1% Nonidet P-40, 0.5% Sodium deoxycholate, 0.1% SDS, 25 mM Tris(pH 7.4)) 100 μL 중에서 파쇄한 다음, 세포 파쇄물 각 20 μL에 2 mM L-Dopa를 첨가하여 37 ℃에서 2시간동안 반응시켰다. 반응액은 ELISA reader를 이용해 475 nm에서 흡광도를 측정해 티로시나아제 효소의 활성 저해능을 확인하였다.
도 3에서 볼 수 있듯이 B16F10 세포에 멸가치 추출물을 처리하였을 때 농도의존적으로 티로시나아제 활성이 저해되는 것을 확인할 수 있었으며, 특히 멸가치 추출물 100μg/ml 처리군에서 통계적으로 유의성있게 티로시나아제 활성이 저해되는 효과를 보였다 (**p<0.05). 또한, 도 4에서 나타낸 바와 샅이 섬초롱꽃 열수 및 주정 추출물을 처리군은 10, 100μg/mL 모두에서 농도의존적이고 통계적으로 유의성있게 티로시나아제의 활성을 저해하는 것을 확인하였다 (*p<0.05, **p<0.01).
실험예 3: 멸가치( Adenocaulon himalaicum Edgew.) 또는 섬초롱꽃( Campanula takesimana Nakai) 추출물의 농도에 따른 MITF, 티로시나아제 및 티로시나아제 관련 단백질1 유전자의 발현양 변화 평가
상기 실시예 1에서 얻은 추출물에 대하여 멜라닌 생합성에 관여하는 효소의 유전자 발현양 변화를 확인하였다. 자세하게는, B16F10세포를 6-웰 플레이트에 웰 당 1x105 cells로 분주한 후 24시간 뒤 200nM α-MSH와 실시예 2의 화합물을 농도별로 처리하였다. 48시간 배양한 후 배양액을 제거하여 PBS로 세척하였고, 이것을 트립신(Trypsin)-EDTA로 처리하여 세포 펠렛(pellet)을 회수하였다. 그 후 얻어진 세포로부터 Trizol시약을 이용하여 RNA를 추출하고, cDNA synthesis kit(Bio-Rad)를 사용하여 얻어진 RNA로부터 cDNA를 합성하고, 합성된 cDNA를 주형으로 하여 정량적 실시간-PCR (quantitative real time-PCR, qRT-PCR)을 실시하였다 (LightCycler 96, Roche, Switzerland). RT-PCR 반응은 95 ℃ 600초 pre-incubation 후 95 ℃ 10초, 60 ℃ 10초, 72℃ 10초로 반복되는 40 사이클의 조건으로 수행하였다. 유전자의 발현량은 GAPDH 유전자에 대한 보정을 통해 최종적으로 분석하였다.
유전자 프라이머 방향 프라이머 서열 (5'→ 3') 서열번호
MITF Forward AGGACCTTGAAAACCGACAG 1
Reverse GGTGGATGGGATAAGGGAAAG 2
티로시나아제
(TYR)		 Forward CTAACTTACTCAGCCCAGCATC 3
Reverse GGGTTTTGGCTTTGTCATGG 4
티로시나아제 관련 단백질 1
(TYRP1)		 Forward AGCCCCAACTCTGTCTTTTC 5
Reverse GGTCTCCCTACATTTCCAGC 6
GAPDH Forward AACTTTGGCATTGTGGAAGG 7
Reverse GGATGCAGGGATGATGTTCT 8
qRT-PCR은 상기 표1에 나타낸 올리고머를 프라이머로 사용하여 수행하였다. 상기 프라이머 세트는 MITF, 티로시나아제(TYR) 및 티로시나아제 관련 단백질1(TYRP1) 유전자에 특이적인 것으로서, 이들은 멜라닌 생합성 관련 유전자이다.
도 5에 도시된 것과 같이 멸가치 추출물은 MITF, 티로시나아제, 티로시나아제 관련 단백질1의 유전자 발현양을 농도의존적으로 저해시켰다. MITF와 티로시나아제 유전자의 경우 멸가치 추출물 10, 100μg/mL에서 각각 통계적으로 유의하게 감소하는 것을 확인할 수 있었고 (*p<0.05, **p<0.01), 티로시나아제 관련 단백질1(TYRP1) 유전자 발현양 또한 멸가치 추출물 100μg/mL처리시 유의적으로 감소하였다(*p<0.05).
또한 도 6에 도시된 것과 같이 섬초롱꽃 추출물 (CTE)은 MITF, 티로시나아제의 유전자 발현양을 농도의존적으로 저해시켰다. MITF의 경우 섬초롱꽃 추출물 10, 100μg/mL에서 각각 통계적으로 유의하게 감소하는 것을 확인할 수 있었고 (*p<0.05, **p<0.01), 티로시나아제의 유전자발현양 또한 섬초롱꽃 100μg/mL처리시 유의적으로 감소하였다(*p<0.05). 섬초롱꽃 추출물은 TYRP1을 유의적으로 감소시키지는 않았지만, 100μg/mL 처리시 감소하는 경향을 확인할 수 있었다.
이상의 결과로, 상기 실시예 1 의 추출물은 멜라닌 생합성에 관여하는 MITF, 티로시나아제, 티로시나아제 관련 단백질1 유전자의 발현양 및 티로시나아제 활성을 저해시킴으로써 최종적으로 멜라닌의 합성을 저해하는 것을 알 수 있었다. 이를 통해 실시예 1 의 추출물은 피부 미백용 조성물로 유용하게 적용될 수 있다.
제형예 1: 정제의 제조
상기 실시예 1에 대하여 통상의 정제 제조방법에 따라서 하기 표 2의 성분을 혼합하고 타정하여 정제를 제조하였다.
원료명 단위 중량 (mg) 단위 중량 (mg)
실시예 1 300.0006 -
실시예 2 - 10.0006
이산화규소 15.3000 15.3000
스테아린산마그네슘 10.8000 10.8000
결정셀룰로오스 509.4945 799.4945
히드록시프로필메틸셀룰로오스 29.0700 29.0700
카르복시메틸셀룰로오스칼슘 27.0000 27.0000
글리세린지방산에스테르 0.6930 0.6930
이산화티타늄 1.4697 1.4697
홍국적색소 4.4082 4.4082
분말카라멜색소 1.7640 1.7640
제형예 2: 캡슐제의 제조
상기 실시예 1에 대하여 통상의 캡슐제 제조방법에 따라서 하기 표 3의 성분을 혼합하고 젤라틴 캡슐에 충전하여 연질캡슐제를 제조하였다.
원료명 단위 중량 (mg) 단위 중량 (mg)
실시예 1 50 -
실시예 2 - 2
비타민 E 2.25 2.25
비타민 C 2.25 2.25
팜유 0.5 0.5
식물성 경화유 2 2
황납 1 1
레시틴 2.25 2.25
연질캡슐 충진액 387.75 387.75
제형예 3: 액제의 제조
상기 실시예 1에 대하여 기호에 적합한 음료 제조방법에 따라서 하기 표 4의 성분을 혼합하고 과병 또는 파우치에 충전하여 액제를 제조하였다.
원료명 단위중량 (g) 단위중량 (g)
실시예 1 2.5050 -
실시예 2 - 0.1000
산탄검 0.0075 0.0075
프락토올리고당액 0.7500 0.7500
코코넛꽃진액분말 1.0500 1.0500
쌍화농축액 1.5000 1.5000
홍삼향 0.0450 0.0450
정제수 9.1425 9.1425
제형예 4: 젤리의 제조
상기 실시예 1에 대하여 기호에 적합한 젤리 제조방법에 따라서 하기 표 5의 성분을 혼합하고 삼면포에 충전하여 젤리를 제조하였다.
원료명 단위중량 (g) 단위중량 (g)
실시예 1 2.0000 -
실시예 2 - 0.1000
푸드겔 0.3600 0.3600
카라기난 0.0600 0.0600
젖산칼슘 0.1000 0.1000
구연산나트륨 0.0600 0.0600
복합황금추출물 0.0200 0.0200
효소처리스테비아 0.0440 0.0440
프락토올리고당액 5.0000 5.0000
적포도농축액 2.4000 2.4000
정제수 13.9560 13.9560
제형예 5: 영양크림의 제조
상기 실시예 1에 대하여 영양크림을 통상의 방법에 따라서 하기 표 6의 조성으로 제조하였다.
원 료 함 량 (%) 함 량 (%)
실시예 1 1.0 -
실시예 2 - 0.05
시토 스테롤 4.0 4.0
폴리글리세릴 2-올레이트 3.0 3.0 3.0
세테아레스-4 2.0 2.0
콜레스테롤 3.0 3.0
디세틸포스페이트 0.4 0.4
농글리세린 5.0 5.0
선플라우어오일 22.0 22.0
카르복시비닐폴리머 0.5 0.5
트리에탄올아민 0.5 0.5
방부제 미량 미량
향료 미량 미량
정제수 잔량 잔량
상기의 조성비는 일반적으로 적합한 성분을 혼합하여 제형예로 조성하였지만, 필요에 따라서 그 배합비 및 원료를 임의로 변경 실시하여도 무방하다.
본 발명의 추출물은 모든 제형예 시험 조건에서 안정하므로 제형의 안정성에는 문제가 없었다.

Claims (8)

  1. 멸가치(Adenocaulon himalaicum Edgew.) 또는 섬초롱꽃(Campanula takesimana Nakai) 추출물 중 적어도 하나 이상을 유효성분으로 포함하는 피부 미백용 건강기능식품 조성물.
  2. 청구항 1에 있어서, 상기 멸가치(Adenocaulon himalaicum Edgew.) 또는 섬초롱꽃(Campanula takesimana Nakai) 추출물은 에탄올 혹은 메탄올 용매분획 한 후 재결정하여 수득한 것을 특징으로 하는 피부 미백용 건강기능식품 조성물.
  3. 청구항 1에 있어서, 상기 멸가치(Adenocaulon himalaicum Edgew.) 또는 섬초롱꽃(Campanula takesimana Nakai) 추출물은 멜라닌 생성을 억제 또는 티로시나아제 (Tyrosinase) 활성을 억제하는 것인 피부 미백용 건강기능식품 조성물.
  4. 청구항 1에 있어서, 상기 멸가치(Adenocaulon himalaicum Edgew.) 또는 섬초롱꽃(Campanula takesimana Nakai) 추출물은 MITF (microphthalmia-associated transcription factor), 티로시나아제 및 티로시나아제 관련 단백질 1 (Tyrosinase-related protein 1)으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 발현을 억제시키는 것인 피부 미백용 건강기능식품 조성물.
  5. 청구항 1에 있어서, 상기 건강기능식품은 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 환제, 겔, 젤리, 현탁액, 에멀젼, 시럽제, 티백제, 침출차, 또는 건강 음료로 이루어진 군으로부터 선택되는 제형을 갖는 것인 건강기능식품 조성물.
  6. 멸가치(Adenocaulon himalaicum Edgew.) 또는 섬초롱꽃(Campanula takesimana Nakai) 추출물 중 적어도 하나 이상을 유효성분으로 포함하는 피부 미백용 화장료 조성물.
  7. 멸가치(Adenocaulon himalaicum Edgew.) 또는 섬초롱꽃(Campanula takesimana Nakai) 추출물 중 적어도 하나 이상을 유효성분으로 포함하는 멜라닌 색소 침착증의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  8. 멸가치(Adenocaulon himalaicum Edgew.) 또는 섬초롱꽃(Campanula takesimana Nakai) 추출물 중 적어도 하나 이상을 유효성분으로 포함하는 멜라닌 색소 침착증의 예방 또는 개선용 피부 외용제 조성물.
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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KR101245813B1 (ko) 2006-11-03 2013-03-20 주식회사 엘지생활건강 구기자 추출물 및 고양이발톱 추출물을 함유하는 피부미백용 화장료 조성물
KR101600957B1 (ko) 2008-11-25 2016-03-09 (주)아모레퍼시픽 백화사설초, 대황, 닥나무 추출물을 함유하는 미백용 피부외용제 조성물
KR102065173B1 (ko) 2018-04-23 2020-01-10 주식회사 웰스킨 까실쑥부쟁이, 미나리냉이 및 섬초롱꽃 추출물을 유효 성분으로 포함하는 모발성장 화장료 조성물

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