KR20210133385A - 식물성 추출물 기반 바이오 활성화 화장품 조성물 및 이의 제조 방법 - Google Patents

Abstract

본 발명은 식물 세포액의 세포 혈청 분획 및 막으로부터 유도되는 생체 활성 식물성 화장품 조성물에 관한 것이다. 본 발명은 또한 이러한 생체 활성 식물성 화장품 조성물의 제조 방법 및 다양한 화장품 제제 내에 및 국소 피부 화장품 용도로서 이러한 조성물의 용도에 관한 것이다.

Description

식물성 추출물 기반 바이오 활성화 화장품 조성물 및 이의 제조 방법{BIOACTIVE BOTANICAL COSMETIC COMPOSITIONS AND PROCESSES FOR THEIR PRODUCTION}

본 발명은 생체 활성 식물성 화장품 조성물 및 그의 제조 방법 및 용도에 관한 것이다.

지난 수십 년에 걸쳐, 화장품 산업은 다양한 화장품 제제 및 제품 내에 식물 및 식물 생산물의 사용을 수용하여 왔다. 이러한 경향이 계속될 것으로 예상되나, 화장품 산업 및 소비자에게 흥미로운 특성들을 일관되게 나타내 는 더 정제되고 더 높은 품질의 식물 성분이 요구되고 있다. 이러한 흥미로운 생체 활성 특성들 중 일부는 소염 및 항산화 활성을 포함한다. 착색, 안전성, 상용성, 및 증가된 유통 기한 또한 식물 성분으로부터 유도되는 화 장품 제제의 가치 있는 특성들이다.

화장품 산업은 전반적으로 현재 산업에 유용한 다수의 단일 및 블렌딩된 식물 성분들을 이용하여 "천연" 화장품 제제를 개발하고 시판하려는 노력에 대한 지지를 증가시켜 왔다. 이러한 접근은 화장품 산업의 일관된 제품 완 전성, 성능 및 원료 성분의 유통 기한을 가지는 화장품 개발을 허용한 합성 성분을 기초로 한 접근과 다르다. 식물 성분의 사용에 대한 주요 제지 중 하나는 특히 생체 활성 식물 성분에 있어서 성분들의 안정성 및 성능의 일관되지 않음이다. 현재 화장품 제제 내 성분으로 사용되는 생체 활성 식물성 화장품 성분들 중 다수는 효능 손실, 냄새 변화, 원치 않는 색상의 흑변 현상, 및 바람직하지 않은 침강을 나타낸다. 이러한 부정적 특성들은 생체 활성 식물 성분으로부터 제조되는 최종 제품에 대한 미생물 오염 및 증식 위험, 불안정성, 및 안전성 염려 를 증가시킨다.

품질, 안전성 및 일관성 보증을 위하여, 화장품 산업은 다양한 표준 작업 절차 및 화장품 제제 내 사용을 위한 모든 새로운 원료에 대한 엄격한 사양 조절을 개발 및 실행하여 왔다. 전부는 아니더라도 대부분의 현재 식물성 추출물은 화장품 산업의 증가하는 조절 및 일관성 파라미터에 부응하지 못한다. 현재 식물 추출 방법은 제품 사 양 파라미터를 제한하여 품질, 성능 및 상용성 변동에 대한 많은 창들을 남긴다. 또한, 현재 추출 방법은 식물 세포 내에 존재하는 활성의 전체 스펙트럼을 전달하지 못한다. 따라서, 생체 활성 식물성 화장품 성분의 추출 방법의 부적절함으로 인하여 식물성 화장품 제제의 완전한 잠재성이 구현되지 않고 있다.

현재 식물로부터 생체 활성 성분을 추출하는 방법들 중 다수는 식물 조직 또는 그 조직 내 함유되는 관심 있는 생체 활성 성분, 또는 이들 모두에 유해한 기술을 수반한다. 나아가, 현재 추출 및 분리 방법들 중 다수는 생체 활성 손실, 세포독성 증가 및 유통 기한 감소를 야기할 수 있는 생물학적 또는 화학적 오염물질을 함유하는 조 식물성 추출물을 생산한다. 나아가, 더 정제된 식물성 추출물을 생산하기 위하여, 현재 추출 방법은 유독한 화학적 용매의 사용을 종종 요구한다.

따라서, 조성물의 생체 활성을 보존하고 일관된 결과를 얻는 생체 활성 식물성 조성물의 추출 방법이 요구된다. 나아가, 유통 기한, 세포독성, 품질 및 성능에 있어서 산업 표준을 충족할 수 있는 식물성 조성물이 화장품 산 업에서 요구된다.

본 발명은 종래 기술의 이러한 결함을 극복하기 위한 것이다.

본 발명은 (1) 신선한 식물 바이오매스로부터 추출된 세포액으로부터 유도되는 막 분획 및 (2) 안정화제를 포함 하는 생체 활성 식물성 화장품 조성물에 관한 것이다. 상기 막 분획은 단백질 분해 억제 활성, 세포 성장 억제 활성, 및/또는 단백질 분해 및 세포 성장 억제 활성 모두를 가진다. 상기 단백질 분해 억제 활성은 적어도 하나 의 단백질 분해 효소의 억제로 인한 것이고, 상기 세포 성장 억제 활성은 적어도 하나의 유형의 세포의 증식 억 제로 인한 것이다.

본 발명은 또한 포유류에 국소 적용하기에 적합한 생체 활성 식물성 화장품 제제에 관한 것이다. 상기 생체 활 성 식물성 화장품 제제는 화장품용으로 허용가능한 담체 및 화장품용으로 효과적인 양의 앞서 기재한 생체 활성 식물성 화장품 조성물을 포함한다.

본 발명은 또한 포유류의 피부 조직 내 소염 활성을 억제하는 방법에 관한 것이다. 상기 방법은 피부 조직에 앞 서 기재한 생체 활성 식물성 화장품 조성물을 상기 피부 조직 내 단백질 분해 억제 활성을 증진시키기에 효과적 인 양으로 적용하는 단계를 수반한다.

본 발명은 또한 포유류의 피부 조직 내 세포 질환의 정상화 방법에 관한 것이다. 상기 방법은 피부 조직에 앞서 기재한 생체 활성 식물성 화장품 조성물을 피부 세포의 원치 않는 과증식을 억제하기에 효과적인 양으로 적용하 는 단계를 포함한다.

본 발명은 또한 신선한 식물 바이오매스로부터 추출된 식물 세포액을 제공하는 단계를 포함하는, 생체 활성 식 물성 화장품 조성물의 제조 방법에 관한 것이다. 그 다음, 상기 식물 세포액을 이를 막 분획 및 세포액 상청액 으로 분리시키기에 효과적인 조건 하에 처리한다. 상기 막 분획은 단백질 분해 억제, 세포 성장 억제 활성, 및/ 또는 단백질 분해 억제 및 세포 성장 억제 활성 모두를 나타내는 안정한 생체 활성 식물성 화장품 조성물을 생 산하기에 효과적인 조건 하에 형질 전환되며, 상기 단백질 분해 억제 활성은 적어도 하나의 단백질 분해 효소의 억제로 인한 것이며, 상기 세포 성장 억제 활성은 적어도 한 유형의 세포의 세포 성장 억제로 인한 것이다.

본 발명은 또한 바로 앞에 기재한 방법에 의하여 제조되는 생체 활성 식물성 화장품 조성물에 관한 것이다.

본 발명은 또한 포유류에 국소 적용하기에 적합한 생체 활성 식물성 화장품 제제에 관한 것이다. 상기 제제는 화장품용으로 허용가능한 담체 및 화장품용으로 효과적인 양의 바로 앞에 기재한 생체 활성 식물성 화장품 조성 물을 포함한다.

본 발명은 또한 피부 조직에 앞서 기재한 생체 활성 식물성 화장품 조성물을 상기 피부 조직 내에서 단백질 분 해 억제 활성을 증진시키기에 효과적인 양으로 적용함으로써, 포유류의 피부 조직 내 소염 활성을 억제하는 방 법에 관한 것이다.

본 발명은 나아가 세포 성장 억제 활성을 가지는 생체 활성 식물성 화장품 조성물을 피부 세포의 원치 않는 과 증식을 억제하기에 효과적인 양으로 피부에 적용하는 단계를 포함하는, 포유류의 피부 조직의 세포 질환의 정상 화 방법에 관한 것이다.

본 발명은 또한 앞서 기재한 방법에 의하여 제조되는 막 분획을 포함하는 생체 활성 식물성 화장품 조성물에 관 한 것이다.

본 발명은 또한 (1) 항산화 활성, 세포 성장 자극 활성, 및/또는 항산화 및 세포 성장 자극 활성 모두를 가지는, 신선한 식물 바이오매스로부터 추출되는 세포액으로부터 유도되는 세포 혈청 분획, 및 (2) 안정화제를 포함하는, 생체 활성 식물성 화장품 조성물에 관한 것이다. 상기 세포 성장 자극 활성은 적어도 하나의 유형의 세포의 증식 자극으로 인한 것이다.

본 발명은 또한 화장품용으로 허용가능한 담체 및 화장품용으로 효과적인 양의 바로 앞에 기재한 생체 활성 식 물성 화장품 조성물을 포함하는, 포유류에 국소 적용하기에 적합한 생체 활성 식물성 화장품 제제에 관한 것이 다.

본 발명은 나아가 포유류의 피부 조직에 앞서 기재한 생체 활성 식물성 화장품 제제를 상기 피부 조직 내 항산 화 활성을 증가시키기에 효과적인 양으로 적용하는 단계를 포함하는, 포유류의 피부 조직의 항산화 활성을 증진 시키는 방법에 관한 것이다.

본 발명은 또한 피부 조직에 앞서 기재한 생체 활성 식물성 화장품 제제를 피부 조직 내 섬유아세포 증식을 자 극하기에 효과적인 양으로 적용하는 단계를 포함하는, 포유류의 피부 조직 내 세포 증식을 자극하는 방법에 관 한 것이다.

본 발명은 또한 신선한 식물 바이오매스로부터 추출된 식물 세포액을 제공하는 단계를 포함하는, 생체 활성 식 물성 화장품 조성물의 제조 방법에 관한 것이다. 그 다음, 상기 식물 세포액을 상기 식물 세포액을 막 분획 및 세포액 상청액으로 분리시키기에 효과적인 조건 하에 처리한다. 상기 세포액 상청액을 상기 세포액 상청액을 세 포질 분획 및 세포 혈청 분획으로 분리시키기에 효과적인 조건 하에 가공한다. 상기 세포 혈청 분획은 세포 혈 청 분획 여과액을 생산하기에 효과적인 조건 하에 정제한다. 상기 세포 혈청 분획 여과액을 항산화 활성, 세포 성장 자극 활성, 또는 항산화 및 세포 성장 자극 활성 모두를 나타내는 안정한 생체 활성 식물성 화장품 조성물 을 생산하기에 효과적인 조건 하에 안정화한다.

본 발명은 또한 바로 앞에 기재한 방법에 의하여 제조되는 안정한 생체 활성 식물성 화장품 조성물에 관한 것이 다.

본 발명은 또한 화장품용으로 허용가능한 담체 및 화장품용으로 효과적인 양의 앞서 기재한 방법에 의하여 제조 되는 생체 활성 식물성 화장품 조성물을 포함하는, 포유류에 국소 적용하기에 적합한 생체 활성 식물성 화장품 제제에 관한 것이다.

본 발명은 또한 포유류의 피부 조직 내 항산화 활성을 증진시키는 방법에 관한 것이다. 상기 방법은 피부 조직 에 앞서 기재한 생체 활성 식물성 화장품 조성물을 피부 조직 내 항산화 활성을 증가시키기에 효과적인 양으로 적용하는 단계를 포함한다.

본 발명은 나아가 포유류의 피부 조직 내 세포 증식을 자극하는 방법에 관한 것이다. 상기 방법은 피부 조직에 앞서 기재한 생체 활성 식물성 화장품 조성물을 피부 조직 내 섬유아세포 증식을 자극하기에 효과적인 양으로 적용하는 단계를 포함한다.

상기 생체 활성 식물성 화장품 조성물의 제조 방법은 식물 세포 내에 함유되어 있는 전체 스펙트럼의 활성을 포 착하는 식물 추출물을 제공한다는 점에서 현재 유용한 방법에 비하여 유리하다. 다음, 이러한 추출물은 각각의 성분 내 함유되는 생체 활성을 여전히 유지하면서 세포 혈청 또는 막 성분으로 분리될 수 있다. 나아가, 본 발 명의 방법에 따라 제조되는 조성물은 전형적인 식물 추출물보다 피부에 더 안전한 것으로 입증되는 세포 독성 프로필을 가진다. 또한,본 발명의 조성물은 화장품 산업의 미생물 요구조건을 충족시킨다. 따라서, 그 일관성, 품질, 안전성, 유통 기한, 및 소염 및 항산화 성능에 있어서 상당한 생체 활성으로 인하여, 본 발명의 생체 활 성 식물성 화장품 조성물은 현재 유용한 식물성 화장품 성분에 대한 현저한 개선이다.

본 발명의 생체 활성 식물성 화장품 조성물은 화장품 산업에 가치 있는 소염 및 항산화 활성을 나타낸다. 나아 가, 상기 생체 활성 식물성 화장품 조성물의 세포독성 프로필은 화장품 성분에 대한 산업 표준 이내이며, 국소 피부 화장품으로서 유리한 수준에서 세포 증식 자극 활성 및 몇몇 세포 성장 억제 활성을 나타낸다. 본 발명의 생체 활성 식물성 화장품 성분의 제조 방법은 다양한 식물에 대하여 이용되어 일관되고 안정한 품질의 생체 활 성 식물성 화장품 조성물을 제공할 수 있다.

본 발명의 생체 활성 식물성 화장품 조성물은 화장품 원료 성분의 미생물 요구 조건에 대한 산업 표준을 충족시 킨다. 상기 산업 표준은 모든 활성 및 불활성 성분들 (즉, 화장품 제제의 모든 부형제)이 화장품 제품의 최종 제제 조성에 기여하지 않은 정도일 것을 요한다. 전형적으로, 이러한 최종 제제 조성은 제품의 완전성에 위험을 야기할 수 있는 미생물 오염을 방지하는 방부제 시스템을 가진다. 방부제 시스템의 보호 강도를 시험하기 위한 산업에서의 일 표준 사용도서, 제품을 28-일 공격 시험에 가하며, 이 기간 동안 미생물을 제품 내로 접종하여 오염되지 않고 이러한 처리를 견디는지를 조사한다. 또한, 화장품 산업에서, 각각의 성분을 그것이 최적으로 보 존되지 않을 경우 미생물 수준이 제품의 후속적인 오염을 초래하거나 제품의 유통 기한에 위험을 야기할 정도로 높지 않음을 보증하도록 면밀히 조사한다.

구체적으로, 산업 표준 통계에 의하면, "화장품 분야에서 활성 성분에 대한 미생물학적 요구 조건은 ml 당 g 당 최대 100 미생물의 총 미생물수를 견딜 수 있음을 기재한다. 나아가 샘플 (10g)은 에스케리치아 콜라이 (Escherichia coli), 캔디다 알비칸스(Candida albicans), 슈도모나스 종(Pseudomonas sp.), 및 스태필로코커 스 아우레우스(Staphylococcus aureus)를 함유하지 않아야 한다" (G. A. Nowak, "Cosmetic Preparations,"Verlag fur Chem. , Augsburg, 1:126 (1985), 상기 문헌의 개시는 본원에 참조로 포함됨). 본 발명의 생체 활성 식물성 화장품 조성물은 상기 요구 조건을 충족하며, 따라서 최종 화장품 제제 조성물에 위험 을 제기하지 않는다.

본 발명의 생체 활성 식물성 화장품 조성물은 예를 들어 소염 및 항산화 활성, 및 세포 증식 자극 특성을 포함 하는 피부에 대한 매우 가치 있는 생체 활성 특성을 가진다. 일반적으로, 신생 및 죽은 피부 세포 사이에 균형 이 있는 것으로 알려져 있다. 피부의 최적 특성은 젊고 건강한 피부에서 발견된다 (즉, 25세 이하의 사람에서 대개 발견됨). 이 연령 전에, 피부 세포는 조절된 상태로 있고 균형이 잘 잡힌 재생 시스템에 있으며; 가장 깊 은 기저층에서 생기고 결국 상부 (즉, 가시적으로 인지되는 층)로 증식한다 (즉, 깊은 피부로부터 상승함). 이 러한 세포가 탈락의 균형은 재생 평형의 일부이다. 이러한 평형은 성인 노화의 결과 손실되며, 새로운 세포가 생긴 후 증식 속도가 늦추어 진다. 이러한 세포 증식 증가 또는 자극 개념은 "더 젊은" 피부에서 발견되는 최적 의 평형 회복에 근거한다. 이는 레티노이드 및 AHA (알파 히드록시산)과 같은 세포 증식 자극제에 대한 관심을 초래하여 왔다. 이러한 성분은 근본적으로 활성의 자극 방식으로 통하여 증식 속도를 증가시켜, 가속화된 세포 증식으로 인하여 더 매끄럽고, 더 젊게 보이는 피부를 초래한다. 본 발명의 생체 활성 식물성 화장품 조성물, 특히 세포 혈청 분획으로부터 유도되는 것들은 세포 증식을 자극할 수 있는 능력을 나타낸다.

더 포괄적인 방식으로, 증가된 피부 증식은 상처 치유 및 피부 증상에 대한 비결이다. 피부 증식이 과증식 상태 인 경향이 있는 몇몇 피부 증상이 있다. 이러한 증상들은 피부에 나타내는 질환 상태와 아주 가깝다. 건선, 습 진 및 비듬과 같은 증상들은 모두 과증식성 증상이다. 그렇다면 피부 세포 성장 억제제는 증식 속도를 낮추어 이를 정상화하기 위한 분명하고 제안된 접근법이다. 다양한 본 발명의 생체 활성 식물성 화장품 조성물, 특히 막 분획으로부터 유도된 것들은 이러한 세포 억제 특성을 나타낸다.

염증은 여러가지 이유로 피부 상에 일어난다. 상처와 대개 연관되어, 현재 전문가들은 미세염증의 연속되는 영 향을 이해하기 시작하고 있다. 피부의 미세염증은 비누 및 세포독성 성분, 최소의 태양광선과 같은 일상적인 UV 광과 같은 자극 성분들로부터, 및 더 극적인 방식으로 햇빛에 강한 노출로부터 초래될 수 있다. 최근, 염증의 피부 노화에 대한 역할이 분명히 이해되었고, 자유 라디칼 형성의 간접적인 경로인 것으로 제안되었으며, 이는 막 지질 산화에서 그 역할을 분명히 암시한다. 따라서, 소염제는 중요한 화장품 성분이나, 규제가 약물로서 그 들의 사용을 제한한다. 그러나, 본 발명의 생체 활성 식물성 화장품 조성물, 특히 막 분획으로부터 유도된 것들 은 소염 특성을 나타낸다.

항산화제의 역할은 영양 및 화장품 제품에 대하여 점점 더 중요해지고 있다. 항산화제는 산화성 분해를 지연시 키고, 이로부터 보호하고, 그 부작용 회복을 보조한다. 식물계에서, 자연은 많은 산화 요인에 대하여 보호하는 천연 항산화제를 공급하여 왔다. 본 발명의 생체 활성 식물성 화장품 조성물, 특히 세포 혈청 분획으로부터 유 도된 것들은 이러한 항산화 활성을 나타낸다.

본 발명의 생체 활성 식물성 화장품 조성물은 화장품 산업에 가치 있는 소염 및 항산화 활성을 나타낸다. 나아 가, 상기 생체 활성 식물성 화장품 조성물의 세포독성 프로필은 화장품 성분에 대한 산업 표준 이내이며, 국소 피부 화장품으로서 유리한 수준에서 세포 증식 자극 활성 및 몇몇 세포 성장 억제 활성을 나타낸다. 본 발명의 생체 활성 식물성 화장품 성분의 제조 방법은 다양한 식물에 대하여 이용되어 일관되고 안정한 품질의 생체 활 성 식물성 화장품 조성물을 제공할 수 있다.

본 발명은 식물의 세포 혈청 분획 또는 막 분획으로부터 유도되는 생체 활성 식물성 화장품 조성물에 관한 것이 다. 본원에 사용되는 용어 "막-유도 화장품 조성물"은 일반적으로 식물의 막 분획으로부터 유도되는 본 발명의 생체 활성 식물성 화장품 조성물을 의미한다. 용어 "혈청-유도 화장품 조성물"은 일반적으로 식물의 세포 혈청 분획으로부터 유도되는 본 발명의 생체 활성 식물성 화장품 조성물을 의미한다.

본 발명은 또한 본 발명의 생체 활성 식물성 화장품 조성물을 제조하는 방법, 및 그러한 조성물을 사용하는 방 법에 관한 것이다.

막-유도 화장품 조성물

본 발명의 막-유도 화장품 조성물은 (1) 신선한 식물 바이오매스로부터 추출되는 세포액으로부터 유도되는 막 분획 및 (2) 안정화제를 포함한다. 상기 막 분획은 단백질 분해 억제 활성, 세포 성장 억제 활성, 및/또는 단백 질 분해 억제 및 세포 성장 억제 활성을 가진다. 상기 단백질 분해 억제 활성은 적어도 하나의 단백질 분해 효 소의 억제로 인한 것이며, 상기 세포 성장 억제 활성은 적어도 한 유형의 세포의 증식 억제로 인한 것이다. 본 발명에 사용하기에 적합한 안정화제의 예는 유화제, 방부제, 항산화제, 폴리머, 및 이의 혼합물을 포함한다.

본 발명의 일 측면에서, 상기 막-유도 화장품 조성물은 세린 단백질 분해 효소 및 기질 금속 단백질 분해 효소 와 같은 단백질 분해 효소 군에 대한 단백질 분해 억제 활성을 가진다. 세린 단백질 분해 효소의 예는 호중구 엘라스타아제 및 트립신 억제제를 포함한다. 기질 금속 단백질 분해 효소의 예는 겔라티나아제 B이다. 본 발명 의 다른 측면에서, 단백질 분해 효소의 억제는 가역적이다. 세린 단백질 분해 효소는 조절된 수준으로 존재시 일부 긍정적인 생리적 역할을 하므로, 가역적 억제제의 사용은 이들 정상적 효소적 기능에 영향을 미치지 않을 것이다. 상기 가역적 억제는 비가역적 억제제의 영향을 받을 수 있는 방어 및 회복 메커니즘에 대한 바람직하지 않은 장기간 변형을 야기하지 않을 것이다.

본 발명의 막-유도 화장품 조성물은 약 0.1 내지 약 25.0 ㎍ 건조 물질/ml의 IC 50 값 범위의 단백질 분해 억제 성능을 가진다. 본원에 사용되는 용어 "IC 50 값"은 단백질 분해 효소의 50% 억제 달성에 요구되는 막 분획 내 함 유되는 건조 물질의 농도를 나타낸다.

본 발명의 막-유도 화장품 조성물은 약 25 내지 500 ㎍ 건조 물질/ml의 NRU 50 값 범위의 세포 성장 억제 활성 성 능을 가진다. 본원에 사용되는 용어 "NRU 50 값"은 세포 유형의 변동성을 50% 감소시키는데 요구되는 막 분획 내 건조 물질의 농도를 나타낸다. 막-유도 화장품 조성물로 인하여 증식 억제되는 세포 유형의 예는 섬유아세포이 다.

본 발명의 막-유도 화장품 조성물은 모든 유형의 식물의 막 분획으로부터 유도될 수 있다. 본 발명에서 신선한 식물 바이오매스의 공급원으로서 사용될 수 있는 적합한 식물의 예는 다음 과(family)로부터의 식물들을 포함한 다: 국화과(Asteraceae), 콩과(Fabaceae), 꿀풀과(Lamiaceae) 및 벼과(Poaceae). 특히, 신선한 식물 바이오매 스 공급원으로서 적절한 것으로 시험되고 발견된 특정 식물들의 예는 제한없이, 트리폴륨 프라텐스(Trifolium pratense), 넬룸보 누시페라(Nelumbo nucifera), 칼렌듈라 오피시날리스(Calendula officinalis), 메디카고 사 티바(Medicago sativa), 라반듈라 앙구스티폴리아(Lavandula angustifolia), 살비아 오피시날리스(Salvia officinalis), 및 호데움 불가레(Hordeum vulgare)를 포함한다. 상기 막-유도 화장품 조성물은 식물의 꽃 조직 (예를 들어, 트리폴륨 프라텐스, 넬룸보 누시페라, 칼렌듈라 오피시날리스) 및/또는 잎 및 줄기 조직 (예를 들 어, 트리폴륨 프라텐스, 넬룸보 누시페라, 살비아 오피시날리스)으로부터 유도될 수 있다.

일 구현예에서, 상기 식물 세포액으로부터 유도되는 막 분획은 막-유도 화장품 조성물의 약 0.5 내지 약 95중량 %를 구성한다.

본 발명의 막-유도 화장품 조성물은 다음 특정 물리-화학적 값을 가질 수 있다: (1) 약 0.1 내지 30%의 비휘발

3

성 잔기 값; (2) 약 0.5 내지 2.0 g/cm 의 비중 값; (3) 약 300 내지 50,000 cps의 점도 값; 및 (4) 약 2.5 내 지 9.5의 pH 값.

본 발명은 인간을 포함하는 포유류에 국소 적용하기에 적합한 생체 활성 식물성 화장품 제제에 관한 것으로, 상 기 제제는 화장품용으로 허용가능한 담체 및 화장품용으로 효과적인 양의 막-유도 화장품 조성물을 포함한다.

본 발명에 사용하기에 적합한 화장품용으로 허용가능한 담체의 예는 친수성 크림 베이스, 친수성 로션 베이스, 친수성 계면활성제 베이스, 소수성 크림 베이스, 소수성 로션 베이스, 및 소수성 계면활성제 베이스를 포함한다. 상기 제제의 일 구현예에서, 상기 막-유도 화장품 조성물은 상기 제제의 총 중량의 약 0.001 % 내지 약 90 % 범위의 양으로 존재한다.

본 발명은 또한 포유류의 피부 조직 내 소염 활성을 억제하는 방법에 관한 것으로, 상기 방법은 피부 조직에 상 기 막-유도 화장품 조성물을 피부 조직 내 단백질 분해 억제 활성을 증진시키기에 효과적인 양으로 적용하는 단 계를 포함한다.

본 발명은 또한 포유류의 피부 조직 내 세포 질환을 정상화하는 방법에 관한 것이다. 상기 방법은 피부 조직에 상기 막-유도 화장품 조성물을 피부 세포의 원치 않는 과증식을 억제하기에 효과적인 양으로 적용하는 단계를 포함한다.

혈청-유도 화장품 조성물

본 발명의 혈청-유도 화장품 조성물은 (1) 항산화 활성, 세포 성장 자극 활성, 및/또는 항산화 및 세포 성장 자 극 활성 모두를 가지는, 신선한 식물 바이오매스로부터 추출되는 세포액으로부터 유도되는 세포 혈청 분획, 및 (2) 안정화제를 포함한다. 상기 세포 성장 자극 활성은 적어도 한 유형의 세포의 증식 자극으로 인한 것이다. 본 발명에 사용하기에 적합한 안정화제의 예는 방부제 및 항산화제이다. 본 발명에 사용하기에 적합한 방부제는 포타슘 소르베이트, 소듐 벤조에이트, 소듐 메틸 파라벤, 및 시트르산을 포함한다. 본 발명에 사용하기에 적합 한 항산화제의 예는 소듐 메타비설파이트이다.

일 구현예에서, 상기 혈청-유도 화장품 조성물의 항산화 활성은 과산화물 소거 활성 및 호중구 호흡 폭발 억제 활성을 포함한다. 상기 혈청-유도 화장품 조성물은 약 50 내지 약 190 ㎍의 건조 물질/ml의 ICR 50 값 범위의 과 산화물 소거능을 가진다. 본원에 사용되는 용어 "ICR 50 값"은 시토크롬 c 환원의 50% 억제를 위하여 요구되는 세 포 혈청 분획 내 함유되는 건조 물질의 농도를 나타낸다. 상기 세포 혈청-유도 화장품 성분은 약 1.0 내지 125 ㎍의 건조 물질/ml 범위의 세포 성장 자극 성능 및 약 110 내지 190%의 NRU 값을 가지며, 상기 "NRU 값"은 세포 생존율을 나타낸다. 상기 혈청-유도 화장품 조성물은 약 1.0 내지 5.0 ㎍ 건조 물질/ml로 호흡 폭발을 억제하고, 약 120 내지 180 ㎍ 건조 물질/ml로 호흡 폭발을 자극한다. 상기 혈청-유도 화장품 조성물은 포르볼 미리스테이트 아세테이트-자극 호중구로부터 호흡 폭발의 2상 조절을 야기할 수 있다.

상기 혈청-유도 화장품 조성물로 인하여 증식 자극되는 세포 유형의 예는 섬유아세포를 포함한다.

본 발명의 혈청-유도 화장품 조성물은 모든 유형의 식물들로부터의 세포 혈청 분획으로부터 유도될 수 있다. 본 발명에서 신선한 식물 바이오매스의 공급원으로서 사용가능한 적합한 식물의 에는 다음 과를 포함한다: 국화과 (Asteraceae), 콩과(Fabaceae), 꿀풀과(Lamiaceae) 및 벼과(Poaceae). 특히, 신선한 식물 바이오매스 공급원으 로서 적절한 것으로 시험되고 발견된 특정 식물들의 예는 제한없이, 트리폴륨 프라텐스(Trifolium pratense), 넬룸보 누시페라(Nelumbo nucifera), 칼렌듈라 오피시날리스(Calendula officinalis), 메디카고 사티바 (Medicago sativa), 라반듈라 앙구스티폴리아(Lavandula angustifolia), 살비아 오피시날리스(Salvia officinalis), 및 호데움 불가레(Hordeum vulgare)를 포함한다. 상기 혈청-유도 화장품 조성물은 식물의 꽃 조 직 (예를 들어, 트리폴륨 프라텐스, 넬룸보 누시페라, 칼렌듈라 오피시날리스) 및/또는 잎 및 줄기 조직 (예를 들어, 트리폴륨 프라텐스, 넬룸보 누시페라, 호데움 불가레, 라반듈라 앙구스티폴리아, 메디카고 사티바, 및 살 비아 오피시날리스)로부터 유도될 수 있다.

일 구현예에서, 상기 식물 세포액으로부터 유도되는 세포 혈청 분획은 상기 혈청-유도 화장품 조성물의 약 1 내 지 10 중량%를 구성한다.

본 발명은 또한 인간을 포함하는 포유류에 국소 적용하기에 적합한 생체 활성 식물성 화장품 제제에 관한 것으 로, 상기 제제는 화장품용으로 허용가능한 담체 및 화장품용으로 효과적인 양의 혈청-유도 화장품 조성물을 포 함한다. 본 발명에 사용하기에 적합한 화장품용으로 허용가능한 담체의 예는 제한없이, 친수성 크림 베이스, 친 수성 로션 베이스, 친수성 계면활성제 베이스, 소수성 크림 베이스, 소수성 로션 베이스, 및 소수성 계면활성제 베이스를 포함한다. 일 구현예에서, 상기 혈청-유도 화장품 조성물은 상기 화장품 제제의 총 중량의 약 0.001 % 내지 약 95 % 범위의 양으로 존재한다.

본 발명은 나아가, 피부 조직에 상기 혈청-유도 화장품 조성물을 피부 조직 내 항산화 활성을 증가시키기에 효 과적인 양으로 적용하는 단계를 포함하는, 포유류의 피부 조직 내 항산화 활성을 증진시키는 방법에 관한 것이다.

본 발명은 또한, 피부 조직에 상기 혈청-유도 화장품 조성물을 피부 조직 내 세포 증식을 자극하기에 효과적인 양으로 적용하는 단계를 포함하는, 포유류의 피부 조직 내 세포 증식을 자극하는 방법에 관한 것이다.

생체 활성 식물성 화장품 조성물의 제조를 위한 전체 공정

예로서, 본 발명의 생체 활성 식물성 화장품 조성물을 제조하기 위한 전체 공정은 도 1을 참조로 하여 이하 기 재된다. 도 1에 도시되는 바와 같이, 신선한 식물을 수확, 수집 및 세척하여(2) 신선한 식물 바이오매스를 생산 한다. 상기 신선한 식물 바이오매스를 분쇄, 침출 및 압착하여(4) 식물 세포액(6) 및 프레스-케이크(8)를 생산 한다. 그 다음, 식물 세포액(6)을 나일론 메쉬를 통하여 여과하여(10) 여과된 식물 세포액을 생산한다(12). 식 물 세포액(12)을 응고시키기 위하여 여과된 식물 세포액(12)을 마이크로웨이브 처리에 노출시킨다(14). 상기 응 고된 식물 세포액을 냉각시킨(16) 다음, 막 분획(20) 및 식물 세포액 상청액(30)을 얻기 위하여 원심분리한다 (18). 막 분획(20)을 사용하여 이하 기재하는 바와 같이 막-유도 생체 활성 식물성 화장품 조성물(28)(즉, 막- 유도 화장품 조성물)을 제조한다. 식물 세포액 상청액(30)을 사용하여 이하 기재하는 바와 같이 세포 혈청-유도 생체 활성 식물성 화장품 조성물(52)(즉, 혈청-유도 화장품 조성물)을 제조한다.

생체 활성 식물성 화장품 조성물(28)을 제조하기 위하여, 막 분획(20)을 폴리머 매트릭스(22) 내로 도입하고 제 조되는 폴리머, 방부제, 및 항산화제(24)로 안정화한다. 다음, 상기 안정화된 막 분획을 중화하여(26) 막-유도 생체 활성 식물성 화장품 조성물(28)을 얻는다.

생체 활성 식물성 화장품 조성물(52)을 제조하기 위하여, 식물 세포액 상청액(30)을 등전 침전(32)에 가하여 세 포질 분획(36) 및 세포 혈청 분획(38)을 함유하는 혼합물을 얻는다. 세포 혈청 분획(38)을 세포질 분획(36)으로 부터 분리하기 위하여, 상기 혼합물을 원심분리한다(34). 다음, 세포 혈청 분획(38)을 마이크로웨이브 처리하여 응고를 야기한다(42). 식물 공급원에 따라, 마이크로웨이브 처리 전에, 세포 혈청 분획(38)을 먼저 pH-조정한다. 응고(42) 후, 상기 혼합물을 냉각시키고(44), 이어서 여과하여(46) 세포 혈청 여과액(48)을 얻는 다. 세포 혈청 여과액(48)을 방부제 및 항산화제로 안정화하여(50) 세포 혈청-유도 생체 활성 식물성 화장품 조 성물(52)을 얻는다.

막-유도 화장품 조성물의 제조 공정

일 구현예에서, 상기 막-유도 화장품 조성물의 제조 공정은 다음과 같다. 상기 방법은 신선한 식물 바이오매스 로부터 추출된 식물 세포액을 제공하는 단계를 포함한다. 상기 식물 세포액은 그 다음, 이를 막 분획 및 세포액 상청액으로 분리시키기에 효과적인 조건 하에 처리된다. 결과 형성되는 막 분획은 단백질 분해 억제 활성, 세포 성장 억제 활성, 또는 단백질 분해 억제 및 세포 성장 억제 활성 모두를 가진다. 다음, 상기 막 분획을 단백질 분해 억제 활성, 세포 성장 억제 활성, 또는 단백질 분해 억제 및 세포 성장 억제 활성 모두를 나타내는 안정한 생체 활성 식물성 화장품 조성물을 제공하기에 효과적인 조건 하에 전환시키며, 상기 단백질 분해 억제 활성은 적어도 하나의 단백질 분해 효소의 억제로 인한 것이며, 상기 세포 성장 억제 활성은 적어도 하나의 유형의 세 포의 세포 성장의 억제로 인한 것이다.

상기 식물 세포액은 모든 유형의 식물들로부터 추출된 것일 수 있다. 본 발명에서 신선한 식물 바이오매스의 공 급원으로서 사용가능한 적합한 식물의 예는 다음 과를 포함한다: 국화과(Asteraceae), 콩과(Fabaceae), 꿀풀과 (Lamiaceae) 및 벼과(Poaceae). 특히, 신선한 식물 바이오매스 공급원으로서 적절한 것으로 시험되고 발견된 특 정 식물들의 예는 제한없이, 트리폴륨 프라텐스(Trifolium pratense), 넬룸보 누시페라(Nelumbo nucifera), 칼 렌듈라 오피시날리스(Calendula officinalis), 메디카고 사티바(Medicago sativa), 라반듈라 앙구스티폴리아 (Lavandula angustifolia), 살비아 오피시날리스(Salvia officinalis), 및 호데움 불가레(Hordeum vulgare)를 포함한다. 다양한 식물 부분들을 사용할 수 있다. 예를 들어, 줄기 및 잎 조직을 많은 유형의 식물에 대하여 사 용할 수 있다. 기타 식물에 대하여, 꽃을 본 발명에 사용하기 위한 식물 세포액의 공급원으로서 사용할 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 일 구현예는 식물 세포액 추출을 위하여 트리폴륨 프라텐스, 넬룸보 누시페라, 또 는 칼렌듈라 오피시날리스의 꽃 조직을 사용한다. 다른 구현예에서, 트리폴륨 프라텐스, 넬룸보 누시페라, 또는 살비아 오피시날리스의 줄기 및 잎 조직이 사용된다.

상기 식물 세포액은 다양한 추출 기술을 이용하여 추출될 수 있다. 그러나, 상기 추출 기술은 식물의 생체 활성 성분을 보존하는 식물 세포액을 제공하여야 한다.

식물 세포액의 추출을 위하여 사용되는 식물 바이오매스의 예시적 제조 방법은 신선한 식물의 수확, 수집 및 세 척을 포함한다. 신선한 식물 바이오매스 제조를 위하여 이어지는 적합한 단계들을, 예를 들어, 다음을 포함한다: (1) 식물 세포의 고유 수분 함량의 보존; (2) 상기 분쇄된 식물 조직의 수확 동안 사용되는 절단 높 이의 최적화; (3) 수확 동안 (예를 들어, 상기 분쇄된 식물 조직의 절단 동안) 식물 완전성 유보; (4) 식물 바 이오매스의 생물학적 분해의 환경적 영향 및 시간 요인의 최소화; 및 (5) 가공 전 (예를 들어, 분쇄 및 침출 전) 식물 바이오매스의 세정. 이들 단계들 각각에 대하여 이하 논의한다.

고유 수분 함량의 보존: 절단은 수분 손실로 인한 시들음을 피하도록 수행되어야 한다. 최적 조건은 자연적 수 분 함량이 유지 및 보존되는 것이다.

절단의 최적 및 바람직한 높이: 수집된 바이오매스 내 토양 및 잔해 양을 제한하기 위하여 식물은 땅 위 적어도 몇 센티미터에서 절단되어야 한다. 예를 들어, 소정의 식물 공급원 (예를 들어, 알팔파, 보리, 라벤더, 또는 세 이지)의 모든 사용가능한 잎 및 줄기 바이오매스를 땅 위 5 센티미터 또는 그 이상의 높이에서 절단할 수 있다. 꽃 조직이 식물 바이오매스 공급원으로 사용되는 경우, 꽃은 식물 세포액 추출 전 전체 식물로부터 분리된다.

수확 중 식물 완전성 보존: 식물 바이오매스의 수확은 상기 식물의 분쇄된 줄기 및 잎 조직을 절단함으로써 이 루어질 수 있다. 상기 절단은 세절, 으깸, 파쇄, 또는 기타 유형의 식물 손상을 피하거나 최소화하는 방식으로 수행된다. 요구되는 장치 유형으로 인하여 세절을 피할 수 없는 대규모 산업적 수확에 있어서, 수집된 식물 내 에 미생물 성장, 수분 손실, 산화 증대, 중합, 이성질화, 및 가수분해 공정 (즉, 원치 않는 이화 공정)을 초래 할 수 있는 손상을 최소화하도록 주의한다. 예를 들어, 본 발명의 일 구현예에서, 라벤더 및 세이지를 전체 식 물로서 손으로 절단하고 수집한다. 다른 구현예에서, 알팔파 및 보리 조직은 수확 장치를 이용하여 절단한다. 이 경우, 각각의 식물에 대한 땅 위 최소 세절 높이는 5 센티미터 이상이다. 나아가, 절단 중 및 절단 후 손상 을 최소화하기 위하여 특별히 주의한다. 다른 구현예에서, 마리골드 전체 식물을 손으로 수집한 다음, 추가적 가공을 위하여 꽃을 분리한다.

분해의 환경적 영향 및 시간 요인의 최소화: 상기한 바와 같은 원치 않는 분해 공정의 영향을 방지하기 위하여 가공 설비로의 절단 식물 재료의 전달 시간 및 태양, 고온 및 기타 부정적 환경적 요인에 바이오매스의 노출이 최소화되어야 한다. 예를 들어, 본 발명의 일 구현예에서, 추가 가공을 위한 알팔파 및 보리에 대한 전달 시간 은 절단시로부터 30 분을 초과하지 않는다. 다른 구현예에서, 장거리 이송되는 식물을 식물 바이오매스를 동결 겔 팩의 백을 함유하는 스티로폼 쿨러 내로 즉시 놓아 가공 설비로 밤새 전달 동안 신선도 및 천연 수분 함량을 유지하는 것을 보조하는 단계를 포함하는 절단후 절차로 처리한다. 이러한 절차는 라벤더, 마리골드 및 세이지 로부터 식물 바이오매스에 대하여 수행되었다. 상기한 결과를 달성하는 기타 절단 후 절차 또한 사용할 수 있다.

분쇄 및 침출 전 세정 단계: 식물 조직이 수확되면, 추가적 가공 전에 토양 입자 및 기타 잔해를 식물로부터 제 거하기 위한 세척 단계를 수행한다. 상기 세척은 바이오매스로부터 세포액의 방출 개시, 손상 야기 또는 가치 있는 성분 제거를 방지하는 조건 하에 단기간 동안 저압 헹굼을 사용하여 달성된다. 예를 들어, 본 발명의 일 구현예에서, 상기 식물 바이오매스의 세척은 1 kg/cm 2 이하의 수압으로 5 분 이하로 달성되었다. 잔류 물 세척 은 녹색 또는 황색 안료를 함유하지 않았으며, 이는 후속적 손상의 부재를 나타낸다. 건조 물질 함량을 자연적 수준에 가깝게 유지하기 위하여 과량의 물을 세척된 바이오매스로부터 제거한다.

식물 조직 바이오매스가 수확된 후, 상기한 바와 같이, 식물 조직 바이오매스의 추가 가공을 수행하여 식물 세 포액을 생산한다. 일 구현예에서, 상기 수확된 식물 조직 바이오매스를 분쇄, 침출, 및 압착하여 세포내 내용물, 즉 세포액을 추출하고, 이를 주로 세포벽을 함유하는 섬유 강화 프레스-케이크로부터 분리한다.

적합한 가공 프로토콜의 예는 이하 기재하는 단계들을 포함한다. 해머 밀을 사용하여 식물을 분쇄하여 단시간에 바이오매스 온도의 상당한 증가없이 작은 크기의 식물 조직 입자를 얻을 수 있다. 일 구현예에서, 변형된 해머 밀을 사용하여 10 초 이하의 처리 시간 동안 0.5 센티미터 이하의 최대 크기의 침출된 식물 입자를 생산하며, 여기서 바이오매스 온도 증가는 5℃ 이하이다.

상기한 바와 같이 원치 않는 이화 과정의 영향을 방지하기 위하여, 분쇄 및 침출된 식물 바이오매스의 노출을 최소화한다. 식물 세포액의 추출 및 프레스 케이크로부터 그의 분리는 식물 바이오매스의 분쇄 및 침출 후 가능 한 한 빨리 개시된다. 사익 식물 바이오매스를 단시간 내에 상당한 온도 증가 없이 가공한다. 일 구현예에서, 분쇄 및 침출 직후, 식물 바이오매스를 수평, 연속 스크류 프레스 (Compact Press "CP-6" Vincent Corporation, FL)를 이용하여 압착한다. 콘에 대한 압력을 24 kg/cm2로 유지하고, 스크류 속도는 12 rpm이고, 온도 증가는 5℃ 이하이다.

최초 세포액은 대개 작은 섬유 입자들을 함유하며, 이는 가치 있는 세포액 성분을 흡수하고 호스 및 펌프를 블로킹할 수 있다. 상기 입자들은 여과 또는 저속 원심분리에 의하여 제거되어야 한다. 예를 들어, 본 발명의 방 법에서 상기 압착 단계 후 생산되는 최초 세포액은 식물 세포액을 이용하기 전에 네 개의 나일론 직물 층을 통 하여 여과된다.

식물 세포액이 추출된 다음, 사익 식물 세포액을 (1) "막 분획 응고 단계"를 수행하여 응고된 세포액 혼합물을 얻는 단계 및 (2) 상기 응고된 세포액 혼합물에 대하여 "막 분획 분리 단계"를 수행하여 막 분획 및 세포액 상 청액을 얻는 단계를 포함하는 공정으로 처리한다. 일 구현예에서, 상기 막 분획 응고 단계는 세포액을 탈안정화 하여 응고된 세포액 혼합물을 얻는 단계를 포함한다. 상기 탈안정화는 예를 들어 온도 처리, 전기-막 처리, 및 화학적 처리를 포함하는 다양한 탈안정화 기술을 이용하여 달성될 수 있다. 본 발명에 사용하기에 적합한 온도 처리는 (1) 세포액 추출물을 막 분획의 응고를 유도하는데 요구되는 처리 온도로 (예를 들어, 약 45 내지 70℃ 사이의 온도로) 가열하는 단계, 및 (2) 상기 세포액을 상기 막 분획을 상기 세포액 상청액으로부터 추가적 정량 적 분리를 허용하기에 효과적인 온도로 (예를 들어, 약 30 내지 45℃ 사이의 온도로) 냉각시키는 단계를 포함할 수 있다. 탈안정화가 달성된 후, 막 분획 분리 단계를 수행한다. 이 단계는, 예를 들어, 여과 및 원심분리를 포 함하는 분리 기술을 이용하여 응고된 세포액 혼합물을 막 분획 및 세포액 상청액으로 분리하는 단계를 포함한다.

"단백질-비타민 농축액"으로 당업계에서 통상적으로 언급되는 새롭게 얻어지는 막 분획은 강렬한 색상 및 식물 원료 공급원에 특이적인 특정 향을 가지는 페이스트이다. 상기 막 분획은 주로 식물의 녹색 부분 내 존재하는 엽록체에 의하여, 또는 대부분 꽃에 존재하는 유색체로 나타내어 진다. 상기 막 분획의 조성은 주로 포스포리피 드, 막 단백질, 클로로필, 및 카로티노이드를 포함한다. 막 분획의 건조는 화장품 성분으로서 막 분획에 요구되 는 많은 가치 있는 특성들의 비가역적 손실을 초래한다. 건조가 없으면, 불안정한 막 분획은 강하고 비-특징적 인 향을 가지는 어두운 색상의 비-분산성 불용성 응집체로 신속히 전환된다. 그 결과, 이러한 물질은 화장품 성 분으로서 사용할 수 없다. 이하 기재되는 절차들은 새롭게 얻어진 막 분획의 안정하고 활성인 화장품 성분으로 의 전환을 허용한다.

일단 막 분획이 세포액 상청액으로부터 분리되면, 상기 막 분획은 그 응집 전에 다음 단계를 포함하는 제제화 공정에 가하여진다: (1) "안정화 단계"를 수행하여 안정화된 막 분획 성분을 얻는 단계; (2) 상기 안정화된 막 분획 성분에 대하여 "폴리머 매트릭스 도입 단계"를 수행하여 막 분획 매트릭스를 얻는 단계, 및 (3) 상기 막 분획 매트릭스에 대하여 "중화 단계"를 수행하여 본 발명의 막-유도 화장품 성분을 얻는 단계.

일 구현예에서, 상기 안정화 단계는 비이온성 유화제 및 적어도 하나의 항산화제를 상기 막 분획과 혼합하여 안 정화된 막 분획 성분을 얻는 단계를 포함한다. 상기 폴리머 매트릭스 도입 단계에서, 상기 안정화된 막 분획 성 분을 폴리머 매트릭스 내로 도입하여 막 분획 매트릭스를 얻는다. 본 발명에 사용하기에 적합한 폴리머는 예를 들어, 적어도 하나의 폴리머 유화제 및 적어도 하나의 방부제를 포함한다. 다음, 상기 막 분획 매트릭스를 중화 단계에 가하며, 이는 막 분획 매트릭스의 pH를 2.5 내지 6.5 범위로 조정하여 본원에 기재되는 막-유도 화장품 조성물을 얻는 단계를 포함한다.

다른 구현예에서, 대략 100 g의 조성물을 얻기 위한 막-유도 화장품 조성물의 안정화가 다음과 같이 수행된다:

(a) 막 분획의 안정화는 비-이온성 유화제 Polysorbate 80 (Tween 80) 및 항산화제 (Tenox 4)와 그의 혼합을 포함한다. 예로서, 20 g의 신선한 막 분획을 3.5 g의 Tween 80 및 0.1 g의 Tenox 4(오일 내 부틸화 히드록시아 니솔 및 부틸화 히드록시톨루엔의 용액)와 혼합 중 통기를 피하면서 균질해질 때까지 왕성하게 혼합한다.

(b) 폴리머 유화제, 아크릴레이트/C10-C30 아크릴레이트 크로스폴리머의 분산액 제조: 예로서, 0.9g의 Pemulen TR-2를 69.2g의 따뜻한 탈이온수 내에 분산시키고, 중간 정도의 교반을 이용하여 통기를 피하면서 균일해질 때 까지 혼합한다. 동시에, 5g의 글리세린 및 1g의 Phenonip (페녹시에탄올 (및) 메틸파라벤 (및) 부틸파라벤 (및) 에틸파라벤 (및) 프로필파라벤의 혼합물)을 별도의 용기 내에서 조합하고 균일해질 때까지 혼합한다. 중간 정도 의 교반 하에, Pemulen 및 Phnonip과 함께 글리세린을 함유하는 상들을 조합하고 균일해질 때까지 혼합한다.

(c) 막 분획의 폴리머 매트릭스 내로의 도입: 예로서, 막 분획, Tween 80 및 Tenox 4를 함유하는 상을 Pemulen, 글리세린 및 Phenonip을 함유하는 상에 첨가하고, 통기를 피하면서 강하게 교반하면서 혼합한다.

(d) 생성물의 중화: 예로서, 막 분획 및 기타 성분들을 함유하는 배치를 수산화나트륨 (NaOH)의 18% 수용액으로 중화하고, 강하게 혼합하여 pH=5.0±0.4를 가지는 균일한 시스템을 생산한다.

결과 생성되는 다상 생성물은 화장품 성분에 대한 모든 요구 조건을 완전히 충족시키는 특성들을 나타내는 불투 명한 겔이다. 다상 화장품 성분 내 방부제 및 항산화제의 최적 조성은 모든 식물 공급원에 대하여 매우 유사하며, 상이한 조합의 Pemulen 및 또한 Carbopol이 효과적으로 사용될 수 있는 것으로 밝혀졌다. 안정성 연구는 상 기 방법을 통하여 막 분획으로부터 생산되는 화장품 성분들은 8℃에서 적어도 4-6 개월 동안 물리-화학적 완전 성 및 활성을 유지하면서 안정함을 보인다.

혈청-유도 화장품 조성물의 제조 공정

본 발명은 또한 항산화 활성, 세포 성장 자극 활성, 또는 항산화 및 세포 성장 자극 활성 모두를 나타내는 혈청 -유도 화장품 조성물의 제조 방법에 관한 것이다. 상기 방법은 막-유도 화장품 조성물에 대하여 앞서 기재한 바 와 같이, 신선한 식물 바이오매스로부터 추출된 식물 세포액을 제공하는 단계를 포함한다. 다음, 상기 식물 세 포액을 이를 막 분획 및 세포액 상청액으로 분리시키기에 효과적인 조건 하에 처리한다. 이러한 단계 또한 막- 유도 화장품 조성물에 대하여 앞서 기재한 바와 같다. 상기 세포액 상청액을 이를 세포질 분획 및 세포 혈청 분 획으로 분리시키기에 효과적인 조건 하에 가공한다. 상기 세포 혈청 분획을 항산화 활성, 세포 성장 자극 활성, 또는 항산화 및 세포 성장 자극 활성 모두를 가지는 세포 혈청 분획 여과액을 얻기에 효과적인 조건 하에 정제 한다. 상기 세포 혈청 분획 여과액을 항산화 활성, 세포 성장 자극 활성, 또는 항산화 및 세포 성장 자극 활성 모두를 나타내는 안정한 생체 활성 식물성 화장품 조성물을 얻기에 효과적인 조건 하에 안정화한다.

상기 식물 세포액은 모든 유형의 식물로부터 추출된 것일 수 있다. 본 발명에서 신선한 식물 바이오매스의 공 급원으로서 사용가능한 적합한 식물의 예는 다음 과를 포함한다: 국화과(Asteraceae), 콩과(Fabaceae), 꿀풀과 (Lamiaceae) 및 벼과(Poaceae). 특히, 신선한 식물 바이오매스 공급원으로서 적절한 것으로 시험되고 발견된 특 정 식물들의 예는 제한없이, 트리폴륨 프라텐스(Trifolium pratense), 넬룸보 누시페라(Nelumbo nucifera), 칼 렌듈라 오피시날리스(Calendula officinalis), 메디카고 사티바(Medicago sativa), 라반듈라 앙구스티폴리아 (Lavandula angustifolia), 살비아 오피시날리스(Salvia officinalis), 및 호데움 불가레(Hordeum vulgare)를 포함한다.

상기한 같이, 일단 식물 세포액이 막 분획 및 세포액 상청액으로 분리되면, 세포액 상청액에 가공 단계를 가한 다. 일 구현예에서, 상기 가공 단계는 (1) "세포질 분획 침전 단계"를 수행하여 세포질 분획 및 세포 혈청 분획 을 포함하는 세포질/세포 혈청 혼합물을 생산하는 단계, 및 (2) "세포 혈청 분리 단계"를 수행하여 세포 혈청 분획으로부터 세포질 분획을 분리하는 단계를 포함한다. 상기 세포질 분획은 주로 백색 가용성 단백질을 포함한 다; C3 식물 내에, 이들 단백질은 효소 리불로오스 비포스페이트 카복실라아제로 주로 구성된다. 상기 세포 혈 청은 저분자량 가용성 성분들을 함유한다.

상기 세포질 분획 침전 단계는 예를 들어 등전 적정 및 전기투석을 포함하는 적합한 침전 기술을 이용하여 세포 액 상청액 내 세포질 분획의 침전을 유도하는 단계를 포함한다. 일 구현예에서, 상기 등전 적정은 세포액 상청 액의 pH를 약 2.5 내지 6.5로 조정하는 단계를 포함한다. 상기 세포질/세포 혈청 혼합물을, 예를 들어 여과 및 원심분리와 같은 적합한 분리 기술을 이용하여 세포질 분획 및 세포 혈청 분획으로 분리되도록 한다. 예로서, 5.0 N 염산 (HCl)에 의하여 pH=4.0으로 적정법에 의하여 침전을 유도하였다.

세포질 분획의 완전한 분리를 평가하는 정량적 기준은 다음의 여과액 또는 상청액 내에 검출가능한 수준의 고분 자량 단백질의 부재 및/또는 리불로스 비포스페이트 카복실라아제의 부재이다. 예로서, 침전된 세포액 상청액을 20분 이상 동안 3,000g 이상으로 냉동 원심분리기 내에서 분리될 수 있으며, pH=4.0을 가지는 세포 혈청 내 10,000 이상의 분자량을 가지는 단백질의 부재가 달성되었다.

세포 혈청은, 처음에는 투명한 용액은 약간 황색 및 약간의 특징적인 향을 가지나, "갈색 즙"으로 통상적으로 언급된다. 수 시간 내에, 불안정한 세포 혈청은 무거운 침전물 및 강한 비-특징적 냄새를 가지는 어두운 갈색 현탁액으로 비가역적으로 전환된다. 그 결과, "갈색 즙"은 화장품 성분으로 사용될 수 없다. 이하 기재하는 절 차들은 세포 혈청 (갈색 즙)의 정제를 허용하여 안정한 활성 화장품 성분을 얻을 수 있도록 한다. 이는 세포 혈 청으로부터 원치 않는 침전물 생성 및 색상 및 냄새 악화를 초래하는 비가역적 전환에 책임 있는 주요 성분들을 제거함으로써 달성된다. 이러한 절차는 pH 조정, 열처리, 냉각, 진공 여과, 및 안정화를 포함한다. 일부 특정 연대 절차는 식물 공급원 세포 혈청에 따라 변화할 수 있다. 이러한 절차는 세포질 분획으로부터 세포 혈청 분 리가 완료된 직후 사용되어야 함을 주목한다.

일단 세포 혈청 분획이 생산되면, 이에 정제 공정을 가한다. 이러한 정제 공정은 (1) "온도 처리 단계"를 수행 하여 응고된 세포 혈청 분획을 생산하는 단계, (2) 정화 단계를 수행하여 세포 혈청 분획 여과액을 생산하는 단 계를 포함한다. 본 발명에 사용하기에 적합한 온도 처리 단계는 (1) 세포 혈청 분획을 상기 세포 혈청 분획 내 응고를 유도하는데 요구되는 가열 온도로 가열하는 단계, 및 (2) 상기 세포 혈청 분획을 상기 세포 혈청 분획여과액의 추가적인 정량적 분리를 허용하기에 효과적인 온도로 즉시 냉각하는 단계를 포함한다. 일 구현예에서, 상기 가열 온도는 약 80 내지 약 95℃이고, 상기 가열된 세포 혈청 분획의 냉각은 적어도 약 15℃의 낮은 온도 로 행해진다. 본 발명에 사용하기에 적합한 정제 단계는 응고된 세포 혈청 분획을 정화하여 세포 혈청 분획 여 과액을 생산하는 단계를 포함하며, 상기 정화는 여과 및 원심분리와 같은 정제 기술을 포함한다. 일 구현예에서, 여과는 응고된 세포 혈청 분획을 진공 여과하여 세포 혈청 분획 여과액을 생산하는 단계를 포함할 수 있다. 다른 구현예에서, 온도 처리 단계 전에, 상기 세포 혈청 분획을 필요에 따라 약 3.0 내지 4.0의 pH로 조정한다.

상기 세포 혈청 여과액이 생산된 후, 이를 상기 언급한 안정화 단계에 가하여 혈청-유도 화장품 조성물을 얻는 다. 일 구현예에서, 상기 안정화 단계는 상기 세포 혈청 분획 여과액을 적어도 하나의 방부제 및 적어도 하나의 항산화제의 혼합물 내에서 인큐베이션하여 안정화된 세포 혈청 분획 여과액을 얻는 단계를 포함한다. 본 발명에 사용하기에 적합한 방부제는 예를 들어 포타슘 소르베이트, 소듐 벤조에이트, 소듐 메틸 파라벤, 및 시트르산을 포함한다. 본 발명에 사용하기에 적합한 항산화제의 예는 소듐 메타비설파이드이다.

일 구현예에서, 세포 혈청의 안정화는 다음과 같이 수행될 수 있다:

(a) 예로서, 5.0N 염산 (HCl)을 이용하여 pH=3.0으로 적정법에 의하여 유도되는 세이지 및 마리골드 꽃으로부터 얻어지는 세포 혈청에 대한 pH 조정을 수행한다. 이러한 조정은 알팔파, 보리 및 라벤더로부터 얻어지는 세포 혈청에 대해서는 필수적이지 않다.

(b) 모든 사용가능한 식물 공급원으로부터 얻어지는 세포 혈청에 대하여 열 처리를 수행한다. 예로서, 세포 혈 청을 온도 프로브 조절 하에 마이크로웨이브 처리에 노출시킨다. 이러한 처리를 온도가 90℃에 도달할때까지 계 속한다. 상기 온도 프로브는 원치 않는 성분의 완전한 응고를 유도하는데 요구되는 지점을 나타낸다. 일단 응고 가 유도되면, 처리된 세포액을 즉시 10℃로 냉각시킨다.

(c) 응고된 세포 혈청을 여과 또는 원심분리에 의하여 정제할 수 있다. 예로서, 응고된 세포 혈청을 Whatman No.2 필터의 이중 층을 통하여 진공 여과할 수 있다. 침전물을 폐기하고, 여과액을 추가 가공을 위하여 사용한 다.

(d) 여과액의 안정화는 특정 방부제 및 항산화제의 첨가를 포함하였으며, 그들이 완전히 가용화될 때까지 혼합 물의 인큐베이션을 수행한다 (대개 30분 이상의 집중적인 혼합이 요구됨).

안정화된 세포 혈청 여과액은 화장품 성분의 모든 요구 조건을 충족시키는 특성들을 나타낸다. 안정성 연구는 이러한 방법을 통하여 세포 혈청으로부터 생산되는 화장품 성분들은 실온에서 적어도 10-12 개월 동안 안정함 (즉, 물리-화학적 완전성 및 활성을 유지함)을 보인다.

실시예

실시예 1

알팔파 (메디카고 사티바) 세포 혈청 분획으로부터 유도되는 식물성 화장품 성분 101의 제조

바이오매스 제조 충분한 양의 신선한 알팔파 (메디카고 사티바) 식물 바이오매스 (즉, 줄기 및 잎 조직)를 수확 하여 대략 100 kg의 건조 물질을 생산하였다. 신선한 알팔파 식물 바이오매스 내 건조 물질 수준은 15.75%인 것 으로 계산되었으며, 이는 100 kg의 건조 물질 생산을 위하여 대략 635 kg의 신선한 알팔파 식물 바이오매스의 수확을 요하였다. 상기 식물 바이오매스의 고유의 수분 함량을 보존하고 수분 손실로 인한 시들음을 피하도록 주의하였다. 상기 식물을 수집된 식물 바이오매스 내 토양 및 기타 잔해 양을 제한하도록 땅 위 적어도 5 센티 미터에서 절단하였다. 상기 절단을 식물의 세절, 으깸 및 파쇄를 피하거나 최소화하는 방식으로 수행하였다. 수 확된 식물들을 절단 후 60분 이하 동안 가공을 위하여 전달하였다. 이는 상기 식물 바이오매스의 햇빛, 고온 및 기타 부정적 환경 요인에 노출을 최소화하도록 수행되었다. 세척 단계를 수행하여 추가 가공 전에 식물로부터

2

토양 입자 및 기타 잔해를 제거하였다. 이러한 세척은 수확된 식물을 5분 이하 동안 1kg/cm 이하의 수압으로 세척함으로써 달성되었다. 잔류 수분 세척은 녹색 안료를 함유하지 않았으며, 이는 적절한 수압 및 세척 기간을 나타내는 것이다. 과량의 물을 세척된 식물 바이오매스로부터 제거하였다.

식물 바이오매스의 분쇄, 침출 및 압착. 식물 바이오매스의 수확, 수집 및 세척 후, 식물을 분쇄, 침출 및 압착 하여 세포내 내용물 (즉, 식물 세포액)을 추출하고 이를 섬유 강화 프레스-케이크로부터 분리하였다. 햄머밀을 사용하여 알팔파 바이오매스를 분쇄하여 단시간 내에 바이오매스 온도의 현저한 증가없이 적절하게 작은 크기의 식물 조직 입자들을 생산하였다. 상기 햄머밀을 10초 이하의 처리 기간 동안 0.5 센티미터 이하의 최대 크기의 침출된 식물 입자를 생산하도록 설정하였다. 이는 5℃ 이하의 바이오매스 온도 증가만을 가져왔다. 수평 연속 스크류 프레스 (Compact Press "CP-6" Vincent Corporation, FL)을 사용하여 식물 바이오매스로부터 식물 세포 액을 추출하였다. 12 rpm의 스크류 속도 및 5℃ 이하의 온도 증가만으로, 스크류 프레스의 원추에 대한 압력을

2

24 kg/cm 수준으로 유지하였다. 이러한 처리는 프레스-케이크 및 식물 세포액을 생산하였다. 최초 식물 세포액 은 작은 섬유 입자들을 함유하였으며, 이들을 4 층의 나일론 직물을 통한 여과에 의하여 또는 저속 원심분리에 의하여 제거하였다.

세포액으로부터 막 분획의 분리. 여과된 식물 세포액을 온도 프로브 조절을 이용하여 마이크로웨이브 처리에 노 출시켰다. 이러한 처리를 세포액 온도가 60℃에 도달할 때까지 계속하였다. 일단 응고가 유도되면, 처리된 세포 액을 즉시 40℃로 냉각시켰다. 응고된 세포액으로부터 막 분획의 분리를 3,000g 이상에서 20 분 이상 동안 원심 분리를 이용하여 달성하였다. 이는 막 분획 (침전물) 및 세포액 상청액을 제공하였으며, 상기 세포액 상청액은 세포질 분획 및 세포 혈청 분획 (즉, 저분자량 가용성 성분들)을 함유하였다. 상기 세포액 상청액을 추가 가공 에 사용하여 식물성 화장품 성분 101을 생산하였다. 상기 막 분획을 대응하는 막-유도 화장품 조성물 제조에 사 용하기 위하여 보존하였다.

세포액 상청액으로부터 세포질 분획의 분리. 세포질 분획을 분리해내기 위하여, 세포액 상청액에 등전 침전을 가하였다. 5.0 N 염산 (HCl)을 사용하여 세포액 상청액의 pH를 4.0이 되도록 하는 적정법을 이용하여 세포질 분 획의 침전을 유도하였다. 침전된 세포질 분획의 세포 혈청으로부터의 분리를 3,000g 이상에서 20 분 이상 동안 원심 분리에 의하여 달성하였다. 이는 추가 정제되어 식물성 화장품 성분 101을 제공할 수 있는 세포 혈청 (상 청액)을 생산하였다.

식물성 화장품 성분 101 생산을 위한 세포 혈청 처리. 세포 혈청의 정제는 다음 단계들을 포함하였다: 열처리, 냉각, 여과 및 안정화. 세포 혈청을 세포질 분획으로부터 분리한 직후 정제를 수행하였다. 상기 세포 혈청을 온 도 프로브 조절을 이용하여 마이크로웨이브 처리에 노출시켰다. 이러한 처리를 세포 혈청이 90℃에 도달할 때까 지 계속하였다. 일단 응고가 유도되면, 처리된 세포 혈청을 10℃로 즉시 냉각하였다. 응고된 세포 혈청을 Whatman No. 2 여과의 이중 층을 통하여 진공 여과하였다. 침전물을 폐기하고, 결과 형성되는 세포 혈청 여과액 을 추가 정제를 위하여 (즉, 안정화) 사용하였다. 방부제 및 항산화제를 첨가하고 완전한 가용화가 달성될 때까 지 혼합물을 인큐베이션함으로써 세포 혈청 여과액의 안정화를 달성하였다. 상기 사용된 방부제 및 항산화제는 다음을 포함하였다: 0.1% 포타슘 소르베이트, 0.1% 소듐 벤조에이트, 0.1% 소듐 메틸 파라벤, 및 0.2% 소듐 메 타비설파이트. 이는 18.1kg의 건조 물질 수율 (대략 340 리터)의 식물성 화장품 성분 101의 생성을 가져왔으며, 이를 그 물리-화학적 및 생체 활성 품질의 규명을 위하여 사용하였다. 식물성 화장품 성분 101에 대한 권장되는 저장 조건은 빛으로부터 보호되는 밀폐 용기 내에서 15 내지 25℃의 온도에서 저장을 포함한다.

실시예 2

알팔파 (메디카고 사티바) 세포 혈청 분획으로부터 유도되는 식물성 화장품 성분 101의 제품 사양

식물성 화장품 성분 101을 실시예 1에 기재된 공정에 따라 제조하였다. 이하 기재하는 바와 같이 식물성 화장품 성분 101의 분석을 수행하여 그 물리-화학적, 미생물학적, 세포독성 및 생체 활성 특성을 결정하였다. 식물성 화장품 성분 101은 투명한 액체이며, 연노란색 및 가벼운 특징적인 향을 가진다. 어떠한 용매도 (즉, 글리콜, 오일 또는 물) 담체 매질에 첨가되지 않았다.

표 1은 식물성 화장품 성분 101의 물리적 및 화학적 데이터를 요약한다.

조절된 임상적 평가에서, 식물성 화장품 성분 101은 0-2,500㎍ 건조 물질/ml 농도 범위에서 3T3 섬유아세포에 의한 뉴트럴 레드 업테이크의 50% 억제(NRU 50 )를 나타내지 않았다. 양성 대조군 (상피 성장 인자)의 NRU 50 > 2,500 ㎍/ml. 식물성 화장품 성분 101은 과산화물 소거능을 나타냈다. 조절된 임상 평가에서, 식물성 화장품 성 분 101은 149 ㎍ 건조 물질/ml의 농도에서 시토크롬 c 환원의 50% 억제(ICR 50 )를 나타냈다. 양성 대조군 (로즈 마리산)의 ICR 50 = 26.5 ㎍/ml. 식물성 화장품 성분 101은 생분해성 제품이다.

실시예 3

보리 (호데움 불가레) 세포 혈청 분획으로부터 유도되는 식물성 화장품 성분 201의 제조

식물성 화장품 성분 201의 제조 공정은 식물성 화장품 성분 101에 대하여 실시예 1에 기재된 것과 동일하였으며, 이하 변화가 주목되었다. 보리 (호데움 불가레)의 신선한 줄기 및 잎 조직을 식물 바이오매스 출 발 물질로서 사용하였다. 상기 신선한 보리 식물 바이오매스 내 건조 물질의 수준은 13.67%인 것으로 계산되었 으며, 따라서 100 kg의 건조 물질을 얻기 위하여 대략 732 kg의 신선한 보리 식물 바이오매스의 수확이 요구되 었다. 15.1 kg의 건조 물질 수율 (대략 433 리터)의 식물성 화장품 성분 201이 제조되었다.

실시예 4

보리 (호데움 불가레) 세포 혈청 분획으로부터 유도되는 식물성 화장품 성분 201의 제품 사양

식물성 화장품 성분 201을 실시예 3에 기재된 공정에 따라 제조하였다. 이하 기재하는 바와 같이, 식물성 화장 품 성분 201의 분석을 수행하여 그 다양한 물리-화학적, 미생물, 세포독성 및 생체 활성 특성을 결정하였다. 식 물성 화장품 성분 201은 투명한 액체이며, 연노란색 및 가벼운 특징적 향을 가진다. 어떠한 용매 (즉, 글리콜, 오일 또는 물)도 담체 매질에 첨가되지 않았다.

표 4는 식물성 화장품 성분 201의 물리적 및 화학적 데이터를 요약한다.

미생물 분석은 식물성 화장품 성분 201이 CFUs 및 병원균 부재에 대한 화장품 성분에 대한 화장품 산업의 요구 조건을 충족시킴을 입증하였다 (방법에 대해서는, 위의 표 3 참조).

식물성 화장품 성분 201은 빛으로부터 보호되는 밀폐 용기 내에서 15 내지 25℃ 온도에서 저장 중에 적어도 12- 18 개월 동안 안정한 (즉, 물리적 및 화학적 완전성) 것으로 결정되었다. 어떠한 독성 효과도 관찰되지 않았다. 조절된 임상 평가에서, 식물성 화장품 성분 201은 0-2,500㎍ 건조 물질/ml 농도 범위에서 3T3 섬유아세포에 의 한 뉴트럴 레드 업테이크의 50% 억제(NRU 50 )를 나타내지 않았다. 양성 대조군 (상피 성장 인자)의 NRU 50 > 2,500 ㎍/ml. 식물성 화장품 성분 201은 과산화물 소거능을 나타냈다. 조절된 임상 평가에서, 식물성 화장품 성분 201 은 160 ㎍ 건조 물질/ml의 농도에서 시토크롬 c 환원의 50% 억제(ICR 50 )를 나타냈다. 양성 대조군 (로즈마리산) 의 ICR 50 = 2.65 ㎍/ml. 식물성 화장품 성분 201은 생분해성 제품이다.

실시예 5

라벤더 (라반듈라 앙구스티폴리아) 세포 혈청 분획으로부터 유도되는 식물성 화장품 성분 301의 제조

식물성 화장품 성분 301의 제조 공정은 식물성 화장품 성분 101에 대하여 실시예 1에 기재된 것과 동일하였으며, 이하 변화를 주목한다. 라벤더 (라반듈라 앙구스티폴리아)의 신선한 줄기 및 잎 조직을 식물 바 이오매스 출발 물질로서 사용하였다. 상기 신선한 라벤더 식물 바이오매스 내 건조 물질 수준은 13.24%였으며, 따라서 100kg의 건조 물질을 얻기 위하여 대략 755kg의 신선한 라벤더 식물 바이오매스의 수확이 요구된다. 또 한, 방부제 및 항산화제 혼합물은 다음을 함유하였다: 0.1% 포타슘 소르베이트, 0.1% 소듐 벤조에이트, 0.1% 소 듐 메틸 파라벤, 0.1% 시트르산, 및 0.2% 소듐 메타비설파이트. 18.5 kg의 건조물질 수율 (또는 대략 444 리 터)의 식물성 화장품 성분 301이 제조되었다.

실시예 6

라벤더 (라반듈라 앙구스티폴리아) 세포 혈청 분획으로부터 유도되는 식물성 화장품 성분 301의 제품 사양

식물성 화장품 성분 301을 실시예 5에 기재된 공정에 따라 제조하였다. 이하 기재하는 바와 같이, 식물성 화장 품 성분 301의 분석을 수행하여 그의 다양한 물리-화학적, 미생물, 세포독성, 및 생체 활성 특성을 결정하였다. 식물성 화장품 성분 301은 투명한 액체이며, 황갈색 및 특징적 냄새를 가진다. 어떠한 용매 (즉, 글리콜, 오일 또는 물)도 담체 매질에 첨가되지 않았다.

표 6은 식물성 화장품 성분 301의 물리적 및 화학적 데이터를 요약한다.

미생물 분석은 식물성 화장품 성분 301이 CFUs 및 병원균 부재에 대한 화장품 성분에 대한 화장품 산업의 요구 조건을 충족시킴을 입증하였다 (방법에 대해서는, 위의 표 3 참조).

식물성 화장품 성분 301은 빛으로부터 보호되는 밀폐 용기 내에서 15 내지 25℃ 온도에서 저장 중에 적어도 12- 18 개월 동안 안정한 (즉, 물리적 및 화학적 완전성) 것으로 결정되었다. 어떠한 독성 효과도 관찰되지 않았다. 조절된 임상 평가에서, 식물성 화장품 성분 301은 0-400㎍ 건조 물질/ml 농도 범위에서 3T3 섬유아세포에 의한 뉴트럴 레드 업테이크의 50% 억제(NRU 50 )를 나타내지 않았다. 양성 대조군 (상피 성장 인자)의 NRU 50 > 2,500 ㎍ /ml. 식물성 화장품 성분 301은 엘라스타아제 억제 활성, 겔라티나아제 B 억제 활성, 및 과산화물 소거능을 나 타냈다.

이하 표 8은 식물성 화장품 성분 301에 대한 생체 활성 결과를 기재한다.

조절된 임상 평가에서, 식물성 화장품 성분 301은 158㎍ 건조 물질/ml의 농도에서 시토크롬 c 환원의 50% 억제 (ICR 50 )를 나타냈다. 양성 대조군 (로스마리산)의 ICR 50 = 26.5 ㎍/ml. 식물성 화장품 성분 301은 생분해성 제품 이다.

실시예 7

마리골드 플라워 (칼렌듈라 오피시날리스) 세포 혈청 분획으로부터 유도되는 식물성 화장품 성분 401의 제조

식물성 화장품 성분 401의 제조 공정은 식물성 화장품 성분 101에 대하여 실시예 1에 기재된 것과 동일하였으며, 이하 변화를 주목한다. 신선한 마리골드 (칼렌듈라 오피시날리스)의 꽃 조직을 식물 바이오매스 출발 물질로서 사용하였다. 신선한 마리골드 플라워 식물 바이오매스 내 건조 물질 수준은 7.80%로 계산되었으 며, 따라서 100 kg의 건조 물질을 얻기 위하여 대략 1,282 kg의 신선한 마리골드 플라워 식물 바이오매스의 수 확이 요구된다. 상기 꽃을 식물 절단 후 세척 전에 전체 식물로부터 분리하였다. 꽃의 가공 (즉, 세척 단계로 시작하여 분쇄 전)은 식물 절단 후 3 내지 4 시간 이내에 시작되었다. 또한, 세포 혈청 분획의 마이크로웨이브 처리 전에, 0.5N 염산 (HCl)을 이용하는 적정법을 사용하여, 세포 혈청의 pH를 먼저 pH 3.0으로 조정하였다. 27.1 kg의 건조 물질 수율 (또는 대략 704 리터)의 식물성 화장품 성분 401이 제조되었다.

실시예 8

마리골드 플라워 (칼렌듈라 오피시날리스) 세포 혈청 분획으로부터 유도되는 식물성 화장품 성분 401의 제품 사 양

식물성 화장품 성분 401을 실시예 7에 기재된 과정에 따라 제조하였다. 이하 기재하는 바와 같이, 식물성 화장 품 성분 401의 분석을 수행하여 그의 다양한 물리-화학적, 미생물, 세포독성, 및 생체 활성 특성을 결정하였다. 식물성 화장품 성분 401은 투명한 액체이며, 연노란색 및 가벼운 특징적 냄새를 가진다. 어떠한 용매 (즉, 글리 콜, 오일 또는 물)도 담체 매질에 첨가되지 않았다.

표 9는 식물성 화장품 성분 401의 물리적 및 화학적 데이터를 기재한다.

미생물 분석은 식물성 화장품 성분 401이 CFUs 및 병원균 부재에 대하여 화장품 성분에 대한 화장품 산업의 요 구 조건을 충족시킴을 입증하였다 (방법에 대해서는 위의 표 3 참조).

식물성 화장품 성분 401은 빛으로부터 보호되는 밀폐 용기 내에서 15 내지 25℃ 온도에서 저장 중에 적어도 12- 18 개월 동안 안정한 (즉, 물리적 및 화학적 완전성) 것으로 결정되었다. 어떠한 독성 효과도 관찰되지 않았다. 조절된 임상 평가에서, 식물성 화장품 성분 401은 0-2,500㎍ 건조 물질/ml 농도 범위에서 3T3 섬유아세포에 의 한 뉴트럴 레드 업테이크의 50% 억제(NRU 50 )를 나타내지 않았다. 양성 대조군 (상피 성장 인자)의 NRU 50 > 2,500 ㎍/ml. 식물성 화장품 성분 401은 세포 증식에 대한 자극 효과 및 과산화물 소거능을 나타냈다. 조절된 임상 평 가에서, 식물성 화장품 성분 401은 3T3 섬유아세포 증식을 자극하였다. 이러한 10-15% 자극이 5 내지 100 ㎍ 건 조 물질/ml 범위에 걸쳐 관찰되었다. 양성 대조군 (상피 성장 인자)에 의한 자극 = 20-30%. 조절된 임상 평가에 서, 식물성 화장품 성분 401은 과산화물 소거능을 나타내며, 153 ㎍ 건조 물질/ml 농도에서 시토크롬 c 환원의 50% 억제(ICR 50 )를 나타냈다. 양성 대조군 (로스마리산)의 ICR 50 = 26.5 ㎍/ml. 식물성 화장품 성분 401은 생분 해성 제품이다.

실시예 9

세이지 (살비아 오피시날리스) 세포 혈청 분획으로부터 유도되는 식물성 화장품 성분 501의 제조

식물성 화장품 성분 501의 제조 공정은 식물성 화장품 성분 101에 대하여 실시예 1에 기재된 것과 동일하였으며, 이하 변화를 주목한다. 세이지 (살비아 오피시날리스)의 신선하 줄기 및 잎 조직을 식물 바이오 매스 출발 물질로서 사용하였다. 신선한 세이지 식물 바이오매스 내 건조 물질 수준은 10.64%로 계산되었으며, 따라서 100 kg의 건조 물질을 얻기 위하여 대략 940 kg의 신선한 세이지 식물 바이오매스의 수확이 요구된다. 세포 혈청 분획의 마이크로웨이브 처리 전에, 0.5 N 염산 (HCl)으로 적정법을 사용하여 세포 혈청의 pH를 먼저 pH 3.0으로 조정하였다. 또한, 상기 방부제 및 항산화제 혼합물은 다음을 함유하였다: 0.1% 포타슘 소르베이트, 0.1% 소듐 벤조에이트, 0.1% 소듐 메틸 파라벤, 0.1% 시트르산, 및 0.2% 소듐 메타비설파이트. 14.9 kg의 건조 물질 수율 (또는 대략 370 리터)의 식물성 화장품 성분 501이 제조되었다.

실시예 10

세이지 (살비아 오피시날리스) 세포 혈청 분획으로부터 유도되는 식물성 화장품 성분 501의 제품 사양

식물성 화장품 성분 501을 실시예 9에 기재된 공정에 따라 제조하였다. 이하 기재하는 바와 같이, 식물성 화장 품 성분 501의 분석을 수행하여 그의 다양한 물리-화학적, 미생물, 세포독성, 및 생체 활성 특성을 결정하였다. 식물성 화장품 성분 501은 투명한 액체이며, 황갈색 및 특징적 냄새를 가진다. 어떠한 용매 (즉, 글리콜, 오일 또는 물)도 담체 매질에 첨가되지 않았다.

표 11는 식물성 화장품 성분 501의 물리적 및 화학적 데이터를 기재한다.

미생물 분석은 식물성 화장품 성분 501이 CFUs 및 병원균 부재에 대하여 화장품 성분에 대한 화장품 산업의 요 구 조건을 충족시킴을 입증하였다 (방법에 대해서는 위의 표 3 참조).

식물성 화장품 성분 501은 빛으로부터 보호되는 밀폐 용기 내에서 15 내지 25℃ 온도에서 저장 중에 적어도 12- 18 개월 동안 안정한 (즉, 물리적 및 화학적 완전성을 유지함) 것으로 결정되었다. 어떠한 독성 효과도 관찰되 지 않았다. 조절된 임상 평가에서, 식물성 화장품 성분 501은 0-2,430㎍ 건조 물질/ml 농도 범위에서 3T3 섬유 아세포에 의한 뉴트럴 레드 업테이크의 50% 억제(NRU 50 )를 나타내지 않았다. 양성 대조군 (상피 성장 인자)의 NRU 50 > 2,500 ㎍/ml. 식물성 화장품 성분 501은 엘라스타아제 억제 활성, 겔라티나아제 B 억제 활성, 및 과산 화물 소거능을 나타냈다 (이하 표 13 참조).

조절된 임상 평가에서, 식물성 화장품 성분 501은 과산화물 소거능을 나타내어, >160㎍ 건조 물질/ml의 농도에 서 시토크롬 c 환원의 50% 억제 (ICR 50 )를 나타냈다. 양성 대조군(로스마리산)의 ICR 50 = 26.5 ㎍/ml. 식물성 화 장품 성분 501은 생분해성 제품이다.

실시예 11

마리골드 플라워 (칼렌듈라 오피시날리스) 막 분획으로부터 유도되는 식물성 화장품 성분 402의 제조

식물성 화장품 성분 402의 제조 공정은 식물성 화장품 성분 401에 대하여 실시예 7에 기재된 것과 동일하였으며, 이하 변화를 주목한다. 일단 막 분획 (침전물)이 여과된 세포액으로부터 분리되면, 실시예 7에 기재된 공정을 더 이상 따르지 않았다. 그 대신, 막 분획을 이하와 같이 처리하여 식물성 화장품 성분 402를 생 산하였다.

식물성 화장품 성분 402 생산을 위한 막 분획의 처리. 상기 막 분획을 안정화하고 폴리머 매트릭스 내로 도입 하였다. 이를 세포액으로부터 막 분획의 분리 직후 수행하였다. 대략 100 g의 식물성 화장품 성분 402의 제조를 위하여, 세포막 분획을 비-이온성 유화제 폴리소르베이트 80 (Tween 80) 및 항산화제 (Tenox 4)와 혼합함으로써 안정화하였다. 구체적으로, 20g의 신선한 막 분획을 혼합 중 통기를 피하면서 3.5 g의 Tween 80 및 0.1 g의 Tenox 4 (오일 내 부틸화 히드록시아니솔 및 부틸화 히드록시톨루엔의 용액)과 균질해질 때까지 강하게 혼합하 였다.

안정화된 후, 막 분획을 폴리머 매트릭스 (즉, 폴리머 유화제, 아크릴레이트/C10-C30 아크릴레이트 크로스 폴리 머의 분삭액) 내로 도입하였다. 상기 폴리머 매트릭스는 통기를 피하면서 0.9g의 Penmulen TR-2를 69.2g의 따뜻 한 탈이온수 내에 분산시키고 중간 정도의 교반을 이용하여 균일하게 될 때까지 혼합함으로써 제조하였다. 동시 에, 5g의 Glycerin 및 1.0g의 Phenonip (페녹시에탄올 (및) 메틸파라벤 (및) 부틸파라벤 (및) 에틸파라벤 (및) 프로필파라벤의 혼합물)을 별도의 용기 내에 조합하고 균일하게 될 때까지 혼합하였다. 중간 정도의 교반으로, Penulen 및 Glycerin과 Phenonip을 함유하는 상들을 조합하고 균일하게 될 때까지 혼합하였다. 막 분획을 폴리 머 매트릭스 내에 도입하기 위하여, 상기 막 분획, Tween 80, 및 Tenox 4를 함유하는 상을 상기 Pemulen, Glycerin, 및 Phenonip을 함유하는 상에 첨가한 다음, 통기를 피하면서 강하게 교반하면서 혼합하였다. 상기 막 분획을 수산화나트륨 (NaOH) 18% 수용액으로 중화함으로써 그의 안정화를 달성하고, 강하게 혼합하여 5.0±0.4 의 pH를 가지는 균일한 시스템을 생산하였다. 100 kg의 신선한 마리골드 플라워 식물 바이오매스 (7.80% 건조 물질을 가지는 대략 1.282 kg의 신선한 마리골드 플라워 바이오매스)로부터 출발하는 제조는 9.5 kg의 건조 물 질 수율 (또는 대략 205 리터)의 식물성 화장품 성분 402의 생산을 가져오며, 이를 그 물리-화학적 및 생체 활 성 품질의 규명에 사용하였다. 식물성 화장품 성분 402에 대한 권장되는 저장 조건은 2 내지 8℃의 온도에서 빛 으로부터 보호되는 폐쇄 용기 내에서 저장을 포함한다.

실시예 12

마리골드 플라워 (칼렌듈라 오피시날리스) 막 분획으로부터 유도되는 식물성 화장품 성분 402의 제품 사양

식물성 화장품 성분 402를 실시예 11에 기재된 공정에 따라 제조하였다. 이하 기재하는 바와 같이, 식물성 화장 품 성분 402의 분석을 수행하여 그 다양한 물리-화학적, 미생물, 세포독성, 및 생체 활성 특성을 결정하였다. 식물성 화장품 성분 402는 불투명한 겔이며, 오렌지색 및 가벼운 특징적 냄새를 가진다. 식물성 화장품 성분 402를 최고 수준의 순도 균일성, 상용가능성, 안정성, 안전성 및 효능을 보증하기 위하여 폴리머로 겔화된 천연 세포액 구성 성분을 이용하여 제제화하였다.

미생물 분석은 식물성 화장품 성분 402가 CFUs 및 병원균 부재에 대하여 화장품 성분에 대한 화장품 산업의 요 구 조건을 충족시킴을 입증하였다 (방법에 대해서는 위의 표 3 참조).

식물성 화장품 성분 402는 빛으로부터 보호되는 밀폐 용기 내에서 2 내지 8℃ 온도에서 저장 중에 적어도 12-18 개월 동안 안정한 (즉, 물리적 및 화학적 완전성을 유지함) 것으로 결정되었다. 식물성 화장품 성분 402는 생분 해성 제품이다. 어떠한 독성 효과도 관찰되지 않았다. 조절된 임상 평가에서, 식물성 화장품 성분 402는 0- 354㎍ 건조 물질/ml 농도 범위에서 3T3 섬유아세포에 의한 뉴트럴 레드 ㅇ업테이크의 50% 억제(NRU 50 )를 나타내 지 않았다. 양성 대조군 (상피 성장 인자)의 NRU 50 > 2,500 ㎍/ml. 식물성 화장품 성분 402는 엘라스타아제 억 제 활성 및 트립신 억제 활성을 나타냈다. 표 16은 식물성 화장품 성분 402에 대한 몇몇 생체 활성 결과를 요약 한다.

Claims (4)

1. 신선한 식물 바이오매스로부터 추출되는 세포액으로부터 유도되는 세포 혈청 분획 여과액, - 상기 세포 혈청 분 획 여과액은 항산화 활성, 세포 성장 자극 활성, 및/또는 항산화 및 세포 성장 자극 활성 모두를 가지고, 상기 신선한 식물 바이오매스는 로투스 (Nelumbo nucifera) 및 레드 클로버 (Trifolium pratense)로 이루어지는 군 으로부터 선택되는 식물 공급원임; 및
   
   안정화제
   
   를 포함하는 생체 활성 식물성 화장품 조성물로서,
   
   상기 세포 성장 자극 활성은 적어도 하나의 유형의 세포의 증식 자극으로 인한 것이고,
   
   상기 세포 혈청 분획 여과액은 다음 단계들에 따라 세포액으로부터 유도되는 것을 특징으로 하는 방법:
   
   상기 신선한 식물 바이오매스로부터 추출된 식물 세포액을 제공하는 단계;
   
   상기 식물 세포액을 막 분획 및 세포액 상청액으로 분리시키기에 효과적인 조건 하에, 상기 식물 세포액을 처리 하는 단계;
   
   상기 세포액 상청액을 세포질 분획 및 세포 혈청 분획으로 분리시키기에 효과적인 조건 하에, 상기 세포액 상청 액을 가공하는 단계; 및
   
   상기 세포 혈청 분획 여과액을 생산하기에 효과적인 조건 하에 상기 세포 혈청 분획을 정제하는 단계로서, 상기 세포 혈청 분획을 온도 처리하여 응고 세포 혈청 분획을 생산하고, 상기 응고 세포 혈청 분획을 정화하여 상기 세포 혈청 분획 여과액을 생산하는 것을 포함하는 단계.
   
2. 제1항에 있어서,
   
   상기 안정화제는 방부제 및 항산화제로 이루어지는 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 생체 활성 식물성 화장품 조성물.
   
3. 제2항에 있어서,
   
   상기 방부제는 포타슘 소르베이트, 소듐 벤조에이트, 소듐 메틸 파라벤, 및 시트르산으로 이루어지는 군으로부 터 선택되는 것을 특징으로 하는 생체 활성 식물성 화장품 조성물.
   
4. 제2항에 있어서,
   
   상기 항산화제는 소듐 메타비설파이트인 것을 특징으로 하는 생체 활성 식물성 화장품 조성물.