KR20210132002A - 변형된 오르토폭스 바이러스 벡터 - Google Patents
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Abstract
본 명세서는 변형된 오르토폭스 바이러스 벡터, 뿐만 아니라 다양한 암 치료를 위해 상기 동일한 바이러스 벡터를 이용하는 방법에 관한 것이다. 본 명세서에서는 강화된 종양용해성 활성, 감염의 확산, 면역 회피, 종양 지속성, 외인성 DNA 서열 통합 능력, 대규모 제조를 위한 편의성, 그리고 안정성을 비롯한 다양한 유익한 치료요법적 활성을 나타내는 변형된 오르토폭스 바이러스 벡터를 제공한다.
Description
관련 출원에 대한 상호 참조
본 출원은 2019년 11월 4일자로 제출된 U.S. 가특허 출원 번호 62/930,524, 2019년 7월 10일자로 제출된 U.S. 가특허 출원 번호62/872,699, 그리고 2018년 12월 21일자로 제출된 U.S. 가특허 출원 번호 62/784,372를 우선권으로 주장하며, 이의 각 내용은 이의 전문이 본 명세서의 참고자료에 편입된다.
서열 목록
본 출원은 14596-050-228_SL.txt의 제목으로 된, 2019년 12월 18일자로 생성되었으며, 1,252,729 바이트 크기의 ASCII 텍스트 파일로 된 서열 목록을 본 출원과 함께 제출하며, 이는 참고자료에 편입된다.
1.
분야
본 발명은 예를 들면, 세포 증식 장애, 이를 테면, 암 치료를 위한 면역요법 분야에 관계한다. 구체적으로, 본 발명은 유전적으로 변형된 오르토폭스바이러스, 뿐만 아니라 이를 만들고 이용하는 방법에 관한 것이다.
2.
배경
면역계는 자극을 받아 종양 세포들을 식별하고, 이들을 파괴시키기 위해 이들을 표적으로 할 수 있다. 종양용해성(oncolytic) 오르토폭스바이러스를 이용하는 면역요법은 암 연구에서 빠르게 진화하는 분야다. 효율성과 안전성을 극대화하기 위해, 종양용해성 바이러스에 대한 종양-선택성을 조작하고 및/또는 향상시키기 위한 새로운 접근 방식이 필요하다. 잠재적인 독성 치료요법적 제제 또는 유전자들이 바이러스에 추가될 때, 이러한 선택성이 특히 중요하다.
오르토폭스바이러스가 임상적 종양용해성 벡터로 사용되는 것은 암 치료에 유망한 패러다임이지만, 독성, 이를 테면, 환자에서 수두 병변, 그리고 면역억제성 부작용으로 인하여, 현재 대부분의 임상의 후보물질들은 대단하지 않은 임상적 성공을 보여주었다. 더 강력한 바이러스 복제, 암 세포 사멸, 및 감염 지점으로부터의 확산을 나타내는 오르토폭스바이러스를 조작하는 방법이 여전히 필요하다. 본 발명은 변형된 오르토폭스바이러스를 이용함으로써, 선택성 및 안정성의 한계에 대한 해결책을 제공함으로써, 이 문제를 해결한다.
3.
요약
본 명세서는 오르토폭스바이러스를 이용하여 암 치료를 기술한다. 특히, 본 명세서는 오르토폭스바이러스가 다음 유전자들중 하나 또는 그 이상, 또는 모두에서 결손을 갖도록 유전적으로 변형되도록 조작될 때, 강화된 종양용해성 활성, 감염의 확산, 및 안정성을 초래한다는 결과에 일부 근거한다: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자. 유전적으로 변형된 오르토폭스바이러스, 이를 테면, 이들 유전자들중 하나 또는 그 이상, 또는 모두에서 돌연변이를 나타내는 백시니아 바이러스 (예를 들면, Copenhagen, Western Reserve, Wyeth, Lister, EM63, ACAM2000, LC16m8, CV-1, 변형된 백시니아 Ankara (MVA), Dairen I, GLV-1h68, IHD-J, L-IVP, LC16mO, Tashkent, Tian Tan, 및 WAU86/88-1 바이러스)는 유익한 속성, 이를 테면, 개선된 종양용해 능력, 종양에서 복제, 감염성, 면역 회피, 종양 지속성, 외인성 DNA 서열 통합 능력, 및/또는 대규모 제조를 위한 편의성을 나타낼 수 있다. 본 명세서는 B8R 유전자에 결손이 함유되도록 추가적으로 유전적으로 변형된 오로토폭스 바이러스를 기술한다. 다양한 구체예들에서, 상기 변형된 오르토폭스바이러스는 다음 세 가지 형질전환유전자들(transgenes)중 적어도 하나를 발현시킨다: 막경유 도메인을 함유하는 인터루킨 12 (IL-12-TM), FMS-유사 티로신 키나제 3 리간드 (FLT3-L) 그리고 항-세포독성 T-림프구 연합된 단백질 4 (CTLA-4) 항체.
한 측면에서, 다음 유전자들에서 결손을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에서 제공된다: (a) 다음 유전자들: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B8R, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서 결손; (b) 3'역전된 말단 반복 (ITR)에서 다음 유전자들에 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R; 그리고 (c) 세포독성 T-림프구 연합된 단백질 4 (CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자; 이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 상기 결손은 부분 결손이다.
특정 구체예들에서, 상기 핵산은 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터, pS 프로모터, 또는 LEO 프로모터다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터다.
일부 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다.
특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 211에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는 아미노산 서열을 인코드한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시된다.
또다른 측면에서, 다음 유전자들에서 결손을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에서 제공된다: (a) 다음 유전자들 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서 결손, 그리고 B8R 유전자에서 임의선택적으로 결손; (b) 3'ITR의 다음 유전자에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R; (c) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자; 그리고 (d) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터, pS 프로모터, 또는 LEO 프로모터이며; 이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이다. 특정 구체예에서, 상기 핵산은 B8R 유전자내 결손을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함한다.
특정 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터다.
일부 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다.
특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 211에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는 아미노산 서열을 인코드한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시된다.
또다른 측면에서, 다음 유전자들에서 결손을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에서 제공된다: (a) 다음 유전자들 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B8R, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서 결손; (b) 3'ITR의 다음 유전자에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R; 그리고 (c) 인터루킨 12 (IL-12) 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자; 이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이다.
특정 구체예들에서, 상기 핵산은 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 후기(late) 프로모터다. 추가적인 특이적 구체예에서, 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열, F17R 프로모터, 또는 D13L 프로모터를 포함한다. 또다른 추가적인 특이적 구체예에서, 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 또다른 구체예에서, F17R 프로모터는 서열 식별 번호: 563의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 여전히 또다른 구체예에서, D13L 프로모터는 서열 식별 번호: 562의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
일부 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다.
특이적 구체예들에서, IL-12 폴리펩티드는 막-결합된다. 특이적 구체예들에서, IL-12 폴리펩티드는 IL-12 p35 또는 IL-12 p70을 포함한다. 특이적 구체예들에서, IL-12 폴리펩티드는 서열 식별 번호: 212에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시된다.
또다른 측면에서, 다음 유전자들에서 결손을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에서 제공된다: (a) 다음 유전자들 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서 결손, 그리고 B8R 유전자에서 임의선택적으로 결손; (b) 3'ITR의 다음 유전자에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R; (c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자; 그리고 (d) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 후기 프로모터이며; 이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이다. 특정 구체예에서, 상기 핵산은 B8R 유전자내 결손을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함한다.
특정 구체예들에서, 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열, F17R 프로모터, 또는 D13L 프로모터를 포함한다. 특이적 구체예에서, 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 또다른 구체예에서, F17R 프로모터는 서열 식별 번호: 563의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 여전히 또다른 구체예에서, D13L 프로모터는 서열 식별 번호: 562의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
일부 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다.
특이적 구체예들에서, IL-12 폴리펩티드는 막-결합된다. 특이적 구체예들에서, IL-12 폴리펩티드는 IL-12 p35 또는 IL-12 p70을 포함한다. 특이적 구체예들에서, IL-12 폴리펩티드는 서열 식별 번호: 212에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시된다.
또다른 측면에서, 다음 유전자들에서 결손을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에서 제공된다: (a) 다음 유전자들 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B8R, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서 결손; (b) 3'ITR의 다음 유전자에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R; 그리고 (c) FMS-유사 티로신 키나제 3 리간드 (FLT3L)를 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자; 이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이다.
특정 구체예들에서, 상기 핵산은 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터, B19R 프로모터, E3L 프로모터, F11L 프로모터, 또는 B2R 프로모터다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B19R 프로모터다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다. 특정 구체예에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, E3L 프로모터는 서열 식별 번호: 567의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, F11L 프로모터는 서열 식별 번호: 568의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, B2R 프로모터는 서열 식별 번호: 569의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
일부 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다.
특이적 구체예들에서, FLT3L는 서열 식별 번호: 213의 아미노산 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시된다.
또다른 측면에서, 다음 유전자들에서 결손을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에서 제공된다: (a) 다음 유전자들 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서 결손, 그리고 B8R 유전자에서 임의선택적으로 결손; (b) 3'ITR의 다음 유전자에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R; (c) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자; 그리고 (d) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터, B19R 프로모터, E3L 프로모터, F11L 프로모터, 또는 B2R 프로모터이며; 이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이다. 특정 구체예에서, 상기 핵산은 B8R 유전자내 결손을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함한다. 특정 구체예에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, E3L 프로모터는 서열 식별 번호: 567의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, F11L 프로모터는 서열 식별 번호: 568의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, B2R 프로모터는 서열 식별 번호: 569의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
특정 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터다. 특정 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B19R 프로모터다. 특정 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다. 특정 구체예에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
일부 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다.
특이적 구체예들에서, FLT3L는 서열 식별 번호: 213의 아미노산 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시된다.
또다른 측면에서, 다음 유전자들에서 결손을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에서 제공된다: (a) 다음 유전자들 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B8R, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R들에서 결손; (b) 3'ITR의 다음 유전자에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R; (c) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자; 그리고 (d) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자; 이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이다.
특정 구체예들에서, 상기 핵산은 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터, pS 프로모터, 또는 LEO 프로모터다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터다.
특정 구체예들에서, 상기 핵산은 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 후기(late) 프로모터다. 추가적인 특이적 구체예에서, 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열, F17R 프로모터, 또는 D13L 프로모터를 포함한다. 또다른 추가적인 특이적 구체예에서, 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 또다른 구체예에서, F17R 프로모터는 서열 식별 번호: 563의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 여전히 또다른 구체예에서, D13L 프로모터는 서열 식별 번호: 562의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
일부 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재하고, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다.
특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 211에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는 아미노산 서열을 인코드한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시된다.
특이적 구체예들에서, IL-12 폴리펩티드는 막-결합된다. 특이적 구체예들에서, IL-12 폴리펩티드는 IL-12 p35 또는 IL-12 p70을 포함한다. 특이적 구체예들에서, IL-12 폴리펩티드는 서열 식별 번호: 212에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시된다.
또다른 측면에서, 다음 유전자들에서 결손을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에서 제공된다: (a) 다음 유전자들 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서 결손, 그리고 B8R 유전자에서 임의선택적으로 결손; (b) 3'ITR의 다음 유전자에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R; (c) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자; 그리고 (d) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자; 이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이며; 그리고 이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다: (i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터, pS 프로모터, 또는 LEO 프로모터이며; 및/또는 (ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 후기 프로모터다. 특정 구체예에서, 상기 핵산은 B8R 유전자내 결손을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함한다.
특정 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터다.
특정 구체예들에서, 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열, F17R 프로모터, 또는 D13L 프로모터를 포함한다. 특이적 구체예에서, 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 또다른 구체예에서, F17R 프로모터는 서열 식별 번호: 563의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 여전히 또다른 구체예에서, D13L 프로모터는 서열 식별 번호: 562의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
일부 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재하고, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다.
특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 211에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는 아미노산 서열을 인코드한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시된다.
특이적 구체예들에서, IL-12 폴리펩티드는 막-결합된다. 특이적 구체예들에서, IL-12 폴리펩티드는 IL-12 p35 또는 IL-12 p70을 포함한다. 특이적 구체예들에서, IL-12 폴리펩티드는 서열 식별 번호: 212에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시된다.
또다른 측면에서, 다음 유전자들에서 결손을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에서 제공된다: (a) 다음 유전자들 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B8R, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R; (b) 3'ITR의 다음 유전자에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R; (c) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자; 그리고 (d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자; 이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이다.
특정 구체예들에서, 상기 핵산은 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터, pS 프로모터, 또는 LEO 프로모터다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터다.
특정 구체예들에서, 상기 핵산은 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터, B19R 프로모터, E3L 프로모터, F11L 프로모터, 또는 B2R 프로모터다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B19R 프로모터다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다. 특정 구체예에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
일부 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재하고, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다.
특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 211에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는 아미노산 서열을 인코드한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시된다.
특이적 구체예들에서, FLT3L는 서열 식별 번호: 213의 아미노산 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시된다.
또다른 측면에서, 다음 유전자들에서 결손을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에서 제공된다: (a) 다음 유전자들 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서 결손, 그리고 B8R 유전자에서 임의선택적으로 결손; (b) 3'ITR의 다음 유전자에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R; (c) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자; 그리고 (d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자; 이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이며; 그리고 이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다: (i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터, pS 프로모터, 또는 LEO 프로모터이며; 및/또는 (ii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터, B19R 프로모터, E3L 프로모터, F11L 프로모터, 또는 B2R 프로모터다. 특정 구체예에서, 상기 핵산은 B8R 유전자내 결손을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함한다. 특정 구체예에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, E3L 프로모터는 서열 식별 번호: 567의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, F11L 프로모터는 서열 식별 번호: 568의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, B2R 프로모터는 서열 식별 번호: 569의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
특정 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터다.
특정 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터다. 특정 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B19R 프로모터다. 특정 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다. 특정 구체예에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
일부 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재하고, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다.
특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 211에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는 아미노산 서열을 인코드한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시된다.
특이적 구체예들에서, FLT3L는 서열 식별 번호: 213의 아미노산 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시된다.
또다른 측면에서, 다음 유전자들에서 결손을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에서 제공된다: (a) 다음 유전자들 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B8R, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서 결손; (b) 3'ITR의 다음 유전자에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R; (c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자; 그리고 (d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자; 이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이다.
특정 구체예들에서, 상기 핵산은 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 후기(late) 프로모터다. 추가적인 특이적 구체예에서, 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열, F17R 프로모터, 또는 D13L 프로모터를 포함한다. 또다른 추가적인 특이적 구체예에서, 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 또다른 구체예에서, F17R 프로모터는 서열 식별 번호: 563의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 여전히 또다른 구체예에서, D13L 프로모터는 서열 식별 번호: 562의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
특정 구체예들에서, 상기 핵산은 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터, B19R 프로모터, E3L 프로모터, F11L 프로모터, 또는 B2R 프로모터다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B19R 프로모터다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다. 특정 구체예에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, E3L 프로모터는 서열 식별 번호: 567의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, F11L 프로모터는 서열 식별 번호: 568의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, B2R 프로모터는 서열 식별 번호: 569의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
일부 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재하고, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다.
특이적 구체예들에서, IL-12 폴리펩티드는 막-결합된다. 특이적 구체예들에서, IL-12 폴리펩티드는 IL-12 p35 또는 IL-12 p70을 포함한다. 특이적 구체예들에서, IL-12 폴리펩티드는 서열 식별 번호: 212에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시된다.
특이적 구체예들에서, FLT3L는 서열 식별 번호: 213의 아미노산 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시된다.
또다른 측면에서, 다음 유전자들에서 결손을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에서 제공된다: (a) 다음 유전자들 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서 결손, 그리고 B8R 유전자에서 임의선택적으로 결손; (b) 3'ITR의 다음 유전자에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R; (c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자; 그리고 (d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자; 이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이며; 그리고 이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다: (i) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 후기 프로모터이며; 및/또는 (ii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터, B19R 프로모터, E3L 프로모터, F11L 프로모터, 또는 B2R 프로모터다. 특정 구체예에서, 상기 핵산은 B8R 유전자내 결손을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함한다. 특정 구체예에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, E3L 프로모터는 서열 식별 번호: 567의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, F11L 프로모터는 서열 식별 번호: 568의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, B2R 프로모터는 서열 식별 번호: 569의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
특정 구체예들에서, 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열, F17R 프로모터, 또는 D13L 프로모터를 포함한다. 특이적 구체예에서, 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 또다른 구체예에서, F17R 프로모터는 서열 식별 번호: 563의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 여전히 또다른 구체예에서, D13L 프로모터는 서열 식별 번호: 562의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
특정 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터다. 특정 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B19R 프로모터다. 특정 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다. 특정 구체예에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
일부 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재하고, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다.
특이적 구체예들에서, IL-12 폴리펩티드는 막-결합된다. 특이적 구체예들에서, IL-12 폴리펩티드는 IL-12 p35 또는 IL-12 p70을 포함한다. 특이적 구체예들에서, IL-12 폴리펩티드는 서열 식별 번호: 212에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시된다.
특이적 구체예들에서, FLT3L는 서열 식별 번호: 213의 아미노산 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시된다.
또다른 측면에서, 다음 유전자들에서 결손을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에서 제공된다: (a) 다음 유전자들 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B8R, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서 결손; (b) 3'ITR의 다음 유전자에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R; (c) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자; (d) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자; 그리고 (e) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자; 이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이다.
특정 구체예들에서, 상기 핵산은 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터, pS 프로모터, 또는 LEO 프로모터다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터다.
특정 구체예들에서, 상기 핵산은 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 후기(late) 프로모터다. 추가적인 특이적 구체예에서, 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열, F17R 프로모터, 또는 D13L 프로모터를 포함한다. 또다른 추가적인 특이적 구체예에서, 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 또다른 구체예에서, F17R 프로모터는 서열 식별 번호: 563의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 여전히 또다른 구체예에서, D13L 프로모터는 서열 식별 번호: 562의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
특정 구체예들에서, 상기 핵산은 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터, B19R 프로모터, E3L 프로모터, F11L 프로모터, 또는 B2R 프로모터다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B19R 프로모터다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다. 특정 구체예에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, E3L 프로모터는 서열 식별 번호: 567의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, F11L 프로모터는 서열 식별 번호: 568의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, B2R 프로모터는 서열 식별 번호: 569의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
일부 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재하고, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재하고, 그리고 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다.
특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 211에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는 아미노산 서열을 인코드한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시된다.
특이적 구체예들에서, IL-12 폴리펩티드는 막-결합된다. 특이적 구체예들에서, IL-12 폴리펩티드는 IL-12 p35 또는 IL-12 p70을 포함한다. 특이적 구체예들에서, IL-12 폴리펩티드는 서열 식별 번호: 212에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시된다.
특이적 구체예들에서, FLT3L는 서열 식별 번호: 213의 아미노산 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시된다.
또다른 측면에서, 다음 유전자들에서 결손을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에서 제공된다: (a) 다음 유전자들 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서 결손, 그리고 B8R 유전자에서 임의선택적으로 결손; (b) 3'ITR의 다음 유전자에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R; (c) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자; (d) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자; 그리고 (e) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자; 이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이며; 그리고 이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다: (i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터, pS 프로모터, 또는 LEO 프로모터이고; (ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 후기 프로모터이고; 및/또는 (iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터, B19R 프로모터, E3L 프로모터, F11L 프로모터, 또는 B2R 프로모터이다. 특정 구체예에서, 상기 핵산은 B8R 유전자내 결손을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함한다. 특정 구체예에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, E3L 프로모터는 서열 식별 번호: 567의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, F11L 프로모터는 서열 식별 번호: 568의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, B2R 프로모터는 서열 식별 번호: 569의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
특정 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터다.
특정 구체예들에서, 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열, F17R 프로모터, 또는 D13L 프로모터를 포함한다. 특이적 구체예에서, 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 또다른 구체예에서, F17R 프로모터는 서열 식별 번호: 563의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 여전히 또다른 구체예에서, D13L 프로모터는 서열 식별 번호: 562의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
특정 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터다. 특정 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B19R 프로모터다. 특정 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다. 특정 구체예에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
일부 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재하고, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재하고, 그리고 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다.
특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 211에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는 아미노산 서열을 인코드한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시된다.
특이적 구체예들에서, IL-12 폴리펩티드는 막-결합된다. 특이적 구체예들에서, IL-12 폴리펩티드는 IL-12 p35 또는 IL-12 p70을 포함한다. 특이적 구체예들에서, IL-12 폴리펩티드는 서열 식별 번호: 212에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시된다.
특이적 구체예들에서, FLT3L는 서열 식별 번호: 213의 아미노산 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시된다.
특이적 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되며 (즉, 부분적 C2L과 F3L 유전자 사이에 존재하고), 그리고 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌(locus)로 삽입된다 (즉, B8R 유전자내 결손 좌에 존재한다). 특이적 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 남아있는 C2L 백시니아 유전자의 일부분과 남아있는 F3L 백시니아 유전자의 일부분 사이에 삽입되고(즉, 남아있는 C2L 백시니아 유전자의 일부분과 남아있는 F3L 백시니아 유전자의 일부분 사이에 존재하고), 그리고 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다 (즉, B8R 유전자내 결손 좌에 존재한다). 추가적인 특이적 구체예에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 상류(upstream)에 있다.
본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 일부 구체예들에서, B8R 유전자내 결손은 B8R 유전자 서열의 적어도 50% 결손이다. 다른 구체예들에서, B8R 유전자내 결손은 B8R 유전자 서열의 적어도 60% 결손이다. 다른 구체예들에서, B8R 유전자내 결손은 B8R 유전자 서열의 적어도 70% 결손이다. 다른 구체예들에서, B8R 유전자내 결손은 B8R 유전자 서열의 적어도 80% 결손이다. 특이적 구체예에서, B8R 유전자내 결손은 B8R 유전자 서열의 약 75% 결손이다. 또다른 특이적 구체예에서, B8R 유전자내 결손은 B8R 유전자 서열의 약 80% 결손이다.
본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 특정 구체예들에서, 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈은 Copenhagen 균주 백시니아 바이러스의 게놈으로부터 유래된다.
본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 특정 구체예들에서, 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈은 서열 식별 번호: 210의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
또다른 측면에서, 다음 유전자들에서 결손을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에서 제공된다: (a) 다음 유전자들 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서 결손, 그리고 B8R 유전자에서 임의선택적으로 결손; (b) 3'ITR의 다음 유전자에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R; (c) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자; (d) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자; 그리고 (e) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자; 이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이며; 그리고 이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다: (i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터이고; (ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 후기 프로모터이고; 그리고 (iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재하고, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재하고, 그리고 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다.
특이적 구체예들에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 남아있는 B14R 백시니아 유전자의 일부분과 남아있는 B29R 백시니아 유전자의 일부분 사이에 삽입되고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 상류에 있다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 하류(downstream)에 있다. 특정 구체예에서, 상기 핵산은 B8R 유전자내 결손을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함한다. 특정 구체예에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
또다른 측면에서, 다음 유전자들에서 결손을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에서 제공된다: (a) 다음 유전자들 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서 결손, 그리고 B8R 유전자에서 임의선택적으로 결손; (b) 3'ITR의 다음 유전자에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R; (c) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 이때 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고; (d) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 이때 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며; 그리고 (e) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 상류에 있고; 이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이며; 그리고 이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다: (i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터이고; (ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 후기 프로모터이고; 그리고 (iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터이다. 특정 구체예에서, 상기 핵산은 B8R 유전자내 결손을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함한다. 특정 구체예에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
또다른 측면에서, 다음 유전자들에서 결손을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에서 제공된다: (a) 다음 유전자들 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서 결손, 그리고 B8R 유전자에서 임의선택적으로 결손; (b) 3'ITR의 다음 유전자에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R; (c) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 이때 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고; (d) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 이때 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며; 그리고 (e) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자; 이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이고, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 하류에 있고; 그리고 이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다: (i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터이고; (ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 후기 프로모터이고; 그리고 (iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터이다. 특정 구체예에서, 상기 핵산은 B8R 유전자내 결손을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함한다. 특정 구체예에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
특이적 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자중 임의의 하나, 둘 또는 셋은 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입된다 (즉, 부분적 C2L과 F3L 유전자 사이에 존재한다). 특이적 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자중 임의의 하나, 둘 또는 셋은 남아있는 C2L 백시니아 유전자의 일부분과 남아있는 F3L 백시니아 유전자의 일부분 사이에 삽입된다.
특이적 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자중 임의의 하나, 둘 또는 셋은 B8R 유전자내 결손 좌에 삽입된다 (즉, B8R 유전자의 좌에 존재한다).
특이적 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자중 임의의 하나, 둘 또는 셋은부분적 B13R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다 (즉, 부분적 B13R과 B29R 유전자 사이에 존재한다). 특이적 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자중 임의의 하나, 둘 또는 셋은 남아있는 B13R 백시니아 유전자의 일부분과 남아있는 B29R 백시니아 유전자의 일부분 사이에 삽입된다.
특이적 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고 (즉, 부분적 C2L과 F3L 유전자 사이에 존재한다), 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되고 (즉, B8R 유전자내 결손 좌에 존재한다), 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다 (즉, 부분적 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다). 특이적 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 남아있는 C2L 백시니아 유전자의 일부분과 남아있는 F3L 백시니아 유전자의 일부분 사이에 삽입되고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되고, 상기 제 3 형질전환유전자는 남아있는 B14R 백시니아 유전자의 일부분과 남아있는 B29R 백시니아 유전자의 일부분 사이에 삽입된다.
특이적 구체예에서, 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고 (즉, 부분적 C2L과 F3L 유전자 사이에 존재한다), 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되고 (즉, B8R 유전자내 결손 좌에 존재한다), 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다 (즉, 부분적 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다). 특이적 구체예에서, 상기 제 2 형질전환유전자는 남아있는 C2L 백시니아 유전자의 일부분과 남아있는 F3L 백시니아 유전자의 일부분 사이에 삽입되고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되고, 상기 제 1 형질전환유전자는 남아있는 B14R 백시니아 유전자의 일부분과 남아있는 B29R 백시니아 유전자의 일부분 사이에 삽입된다.
특이적 구체예에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고 (즉, 부분적 C2L과 F3L 유전자 사이에 존재한다), 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되고 (즉, B8R 유전자내 결손 좌에 존재한다) 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다 (즉, 부분적 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다). 특이적 구체예에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 남아있는 C2L 백시니아 유전자의 일부분과 남아있는 F3L 백시니아 유전자의 일부분 사이에 삽입되고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되고, 상기 제 1 형질전환유전자는 남아있는 B14R 백시니아 유전자의 일부분과 남아있는 B29R 백시니아 유전자의 일부분 사이에 삽입된다.
특이적 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고 (즉, 부분적 C2L과 F3L 유전자 사이에 존재한다), 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다 (즉, B8R 유전자내 결손 좌에 존재한다). 특이적 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 남아있는 C2L 백시니아 유전자의 일부분과 남아있는 F3L 백시니아 유전자의 일부분 사이에 삽입되고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다.
특이적 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고 (즉, 부분적 C2L과 F3L 유전자 사이에 존재하고), 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다 (즉, 부분적 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다). 특이적 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 남아있는 C2L 백시니아 유전자의 일부분과 남아있는 F3L 백시니아 유전자의 일부분 사이에 삽입되고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 남아있는 B14R 백시니아 유전자의 일부분과 남아있는 B29R 백시니아 유전자의 일부분 사이에 삽입된다.
특이적 구체예에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고 (즉, 부분적 C2L과 F3L 유전자 사이에 존재한다), 그리고 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다 (즉, B8R 유전자내 결손 좌에 존재한다). 특이적 구체예에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 남아있는 C2L 백시니아 유전자의 일부분과 남아있는 F3L 백시니아 유전자의 일부분 사이에 삽입되고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다.
특이적 구체예에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고 (즉, 부분적 C2L과 F3L 유전자 사이에 존재한다), 그리고 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다 (즉, 부분적 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다). 특이적 구체예에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 남아있는 C2L 백시니아 유전자의 일부분과 남아있는 F3L 백시니아 유전자의 일부분 사이에 삽입되고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 남아있는 B14R 백시니아 유전자의 일부분과 남아있는 B29R 백시니아 유전자의 일부분 사이에 삽입된다.
특이적 구체예에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다 (즉, B8R 유전자내 결손 좌에 존재한다) 그리고 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 B13R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다 (즉, 부분적 B13R과 B29R 유전자 사이에 존재한다). 특이적 구체예에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되고, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 남아있는 B13R 백시니아 유전자의 일부분과 남아있는 B29R 백시니아 유전자의 일부분 사이에 삽입된다.
특이적 구체예에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 B13R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입되고 (즉, 부분적 B13R과 B29R 유전자 사이에 존재한다) 그리고 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다 (즉, B8R 유전자내 결손 좌에 존재한다). 특이적 구체예에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 남아있는 B13R 백시니아 유전자의 일부분과 남아있는 B29R 백시니아 유전자의 일부분 사이에 삽입되고, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다.
특이적 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입된다 (즉, 부분적 C2L과 F3L 유전자 사이에 존재한다). 특이적 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 남아있는 C2L 백시니아 유전자의 일부분과 남아있는 F3L 백시니아 유전자의 일부분 사이에 삽입된다.
특이적 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다 (즉, B8R 유전자의 좌에 존재한다).
특이적 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다 (즉, 부분적 B14R과 B29R 유전자 사이에 존재한다). 특이적 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 남아있는 B14R 백시니아 유전자의 일부분과 남아있는 B29R 백시니아 유전자의 일부분 사이에 삽입된다.
또다른 측면에서, 다음 유전자들에서 결손을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에서 제공된다: (a) 다음 유전자들 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서 결손, 그리고 B8R 유전자에서 임의선택적으로 결손; (b) 3'ITR의 다음 유전자에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R; (c) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 이때 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입되고; (d) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 이때 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며; 그리고 (e) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자; 이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이고, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 상류에 있고; 그리고 이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다: (i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터이고; (ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 후기 프로모터이고; 그리고 (iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터이다. 특정 구체예에서, 상기 핵산은 B8R 유전자내 결손을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함한다. 특정 구체예에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
또다른 측면에서, 다음 유전자들에서 결손을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에서 제공된다: (a) 다음 유전자들 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서 결손, 그리고 B8R 유전자에서 임의선택적으로 결손; (b) 3'ITR의 다음 유전자에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R; (c) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 이때 상기 제 1 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입되고; (d) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 이때 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며; 그리고 (e) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자; 이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이고, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 하류에 있고; 그리고 이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다: (i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터이며; (ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 후기 프로모터이며; 그리고 (iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다. 특정 구체예에서, 상기 핵산은 B8R 유전자내 결손을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함한다. 특정 구체예에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
또다른 측면에서, 다음을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에 제공된다: (a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며; (b)세포독성 T-림프구 연합된 단백질 4 (CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며; (c) 인터루킨 12 (IL-12) 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며; 그리고 (d) FMS-유사 티로신 키나제 3 리간드 (FLT3L)를 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시된다.
일부 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재하고, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재하고, 그리고 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다.
특정 구체예들에서, 상기 핵산은 항-CTLA-4 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함한다. 특이적 구체예에서, 항-CTLA-4 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터, pS 프로모터, 또는 LEO 프로모터다. 또다른 특이적 구체예에서, 항-CTLA-4 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터다.
특정 구체예들에서, 상기 핵산은 IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함한다. 특이적 구체예에서, IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 후기 프로모터다. 추가적인 특이적 구체예에서, 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열, F17R 프로모터, 또는 D13L 프로모터를 포함한다. 또다른 추가적인 특이적 구체예에서, 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 또다른 구체예에서, F17R 프로모터는 서열 식별 번호: 563의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 여전히 또다른 구체예에서, D13L 프로모터는 서열 식별 번호: 562의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
특정 구체예들에서, 상기 핵산은 FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함한다. 특이적 구체예에서, 상기 FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터, B19R 프로모터, E3L 프로모터, F11L 프로모터, 또는 B2R 프로모터다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B19R 프로모터다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다. 특정 구체예에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, E3L 프로모터는 서열 식별 번호: 567의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, F11L 프로모터는 서열 식별 번호: 568의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, B2R 프로모터는 서열 식별 번호: 569의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
또다른 측면에서, 다음을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에 제공된다: (a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며; (b) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며; (c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며; 그리고 (d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며; 이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다: (i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터이며; (ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 후기 프로모터이며; 그리고 (iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터이다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재하고, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재하고, 그리고 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 상류에 있다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 하류에 있다.
또다른 측면에서, 다음을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에 제공된다: (a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며; (b) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고; (c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며; 그리고 (d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 상류에 있고; 이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다: (i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터이며; (ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 후기 프로모터이며; 그리고 (iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 또는 B19R 프로모터이다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다. 특이적 구체예들에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기(early) 프로모터 또는 H5R 후기 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 및 H5R 후기 프로모터다. 특이적 구체예들에서, H5R 조기 프로모터는 서열 식별 번호: 553의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, H5R 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 554의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
또다른 측면에서, 다음을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에 제공된다: (a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며; (b) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고; (c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며; 그리고 (d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 하류에 있고; 이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다: (i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터이며; (ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 후기 프로모터이며; 그리고 (iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 또는 B19R 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다. 특이적 구체예들에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 또는 H5R 후기 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 및 H5R 후기 프로모터다. 특이적 구체예들에서, H5R 조기 프로모터는 서열 식별 번호: 553의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, H5R 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 554의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
또다른 측면에서, 다음을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에 제공된다: (a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며; (b) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에 있는 부분적 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입되고; (c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며; 그리고 (d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 상류에 있고; 이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다: (i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터이며; (ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 후기 프로모터이며; 그리고 (iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 또는 B19R 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다. 특이적 구체예들에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 또는 H5R 후기 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 및 H5R 후기 프로모터다. 특이적 구체예들에서, H5R 조기 프로모터는 서열 식별 번호: 553의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, H5R 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 554의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
또다른 측면에서, 다음을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에 제공된다: (a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며; (b) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에 있는 부분적 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입되고; (c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며; 그리고 (d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 하류에 있고; 이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다: (i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터이며; (ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 후기 프로모터이며; 그리고 (iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 또는 B19R 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다. 특이적 구체예들에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 또는 H5R 후기 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 및 H5R 후기 프로모터다. 특이적 구체예들에서, H5R 조기 프로모터는 서열 식별 번호: 553의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, H5R 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 554의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
또다른 측면에서, 다음을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에 제공된다: (a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며; (b) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고; (c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며; 그리고 (d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 상류에 있고; 이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다: (i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 pS 프로모터이며; (ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 후기 프로모터이며; 그리고 (iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 또는 B19R 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다. 특이적 구체예들에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, pS의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 555, 서열 식별 번호: 556, 또는 서열 식별 번호: 557의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
또다른 측면에서, 다음을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에 제공된다: (a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며; (b) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고; (c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며; 그리고 (d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 하류에 있고; 이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다: (i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 pS 프로모터이며; (ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 후기 프로모터이며; 그리고 (iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 또는 B19R 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다. 특이적 구체예들에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, pS의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 555, 서열 식별 번호: 556, 또는 서열 식별 번호: 557의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
또다른 측면에서, 다음을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에 제공된다: (a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며; (b) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에 있는 부분적 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입되고; (c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며; 그리고 (d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 상류에 있고; 이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다: (i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 pS 프로모터이며; (ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 후기 프로모터이며; 그리고 (iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 또는 B19R 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다. 특이적 구체예들에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, pS의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 555, 서열 식별 번호: 556, 또는 서열 식별 번호: 557의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
또다른 측면에서, 다음을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에 제공된다: (a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며; (b) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에 있는 부분적 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입되고; (c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며; 그리고 (d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 하류에 있고; 이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다: (i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 pS 프로모터이며; (ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 후기 프로모터이며; 그리고 (iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 또는 B19R 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다. 특이적 구체예들에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, pS의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 555, 서열 식별 번호: 556, 또는 서열 식별 번호: 557의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
또다른 측면에서, 다음을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에 제공된다: (a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며; (b) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고; (c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며; 그리고 (d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 상류에 있고; 이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다: (i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터이며; (ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 F17R 프로모터이며; 그리고 (iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 또는 B19R 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다. 특이적 구체예들에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 또는 H5R 후기 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 및 H5R 후기 프로모터다. 특이적 구체예들에서, H5R 조기 프로모터는 서열 식별 번호: 553의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, H5R 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 554의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, F17R 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 563의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
또다른 측면에서, 다음을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에 제공된다: (a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며; (b) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고; (c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며; 그리고 (d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 하류에 있고; 이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다: (i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터이며; (ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 F17R 프로모터이며; 그리고 (iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 또는 B19R 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다. 특이적 구체예들에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 또는 H5R 후기 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 및 H5R 후기 프로모터다. 특이적 구체예들에서, H5R 조기 프로모터는 서열 식별 번호: 553의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, H5R 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 554의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, F17R 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 563의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
또다른 측면에서, 다음을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에 제공된다: (a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며; (b) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입되고; (c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며; 그리고 (d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 상류에 있고; 이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다: (i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터이며; (ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 F17R 프로모터이며; 그리고 (iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 또는 B19R 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다. 특이적 구체예들에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 또는 H5R 후기 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 및 H5R 후기 프로모터다. 특이적 구체예들에서, H5R 조기 프로모터는 서열 식별 번호: 553의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, H5R 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 554의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, F17R 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 563의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
또다른 측면에서, 다음을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에 제공된다: (a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며; (b) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입되고; (c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며; 그리고 (d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 하류에 있고; 이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다: (i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터이며; (ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 F17R 프로모터이며; 그리고 (iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다. 특이적 구체예들에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 또는 H5R 후기 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 및 H5R 후기 프로모터다. 특이적 구체예들에서, H5R 조기 프로모터는 서열 식별 번호: 553의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, H5R 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 554의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, F17R 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 563의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
또다른 측면에서, 다음을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에 제공된다: (a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며; (b) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고; (c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며; 그리고 (d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 상류에 있고; 이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다: (i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 pS 프로모터이며; (ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 후기 프로모터이며; 그리고 (iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 E3L 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 또는 H5R 후기 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 및 H5R 후기 프로모터다. 특이적 구체예들에서, H5R 조기 프로모터는 서열 식별 번호: 553의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, H5R 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 554의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, E3L 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 567의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
또다른 측면에서, 다음을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에 제공된다: (a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며; (b) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에 있는 부분적 C2L 및 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고; (c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며; 그리고 (d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 하류에 있고; 이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다: (i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터이며; (ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 후기 프로모터이며; 그리고 (iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 E3L 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 또는 H5R 후기 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 및 H5R 후기 프로모터다. 특이적 구체예들에서, H5R 조기 프로모터는 서열 식별 번호: 553의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, H5R 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 554의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, E3L 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 567의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
또다른 측면에서, 다음을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에 제공된다: (a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며; (b) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에 있는 부분적 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입되고; (c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며; 그리고 (d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 상류에 있고; 이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다: (i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터이며; (ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 후기 프로모터이며; 그리고 (iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 E3L 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 또는 H5R 후기 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 및 H5R 후기 프로모터다. 특이적 구체예들에서, H5R 조기 프로모터는 서열 식별 번호: 553의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, H5R 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 554의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, E3L 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 567의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
또다른 측면에서, 다음을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에 제공된다: (a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며; (b) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에 있는 부분적 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입되고; (c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며; 그리고 (d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 하류에 있고; 이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다: (i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터이며; (ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 후기 프로모터이며; 그리고 (iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 E3L 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 또는 H5R 후기 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 및 H5R 후기 프로모터다. 특이적 구체예들에서, H5R 조기 프로모터는 서열 식별 번호: 553의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, H5R 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 554의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, E3L 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 567의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
또다른 측면에서, 다음을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에 제공된다: (a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며; (b) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고; (c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며; 그리고 (d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 상류에 있고; 이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다: (i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 pS 프로모터이며; (ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 F17R 프로모터이며; 그리고 (iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 E3L 프로모터다. 특이적 구체예들에서, pS 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 555, 서열 식별 번호: 556, 또는 서열 식별 번호: 557의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, F17R 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 563의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, E3L 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 567의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
또다른 측면에서, 다음을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에 제공된다: (a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며; (b) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고; (c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며; 그리고 (d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 하류에 있고; 이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다: (i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 pS 프로모터이며; (ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 F17R 프로모터이며; 그리고 (iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 E3L 프로모터다. 특이적 구체예들에서, pS 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 555, 서열 식별 번호: 556, 또는 서열 식별 번호: 557의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, F17R 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 563의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, E3L 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 567의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
또다른 측면에서, 다음을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에 제공된다: (a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며; (b) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에 있는 부분적 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입되고; (c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며; 그리고 (d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 상류에 있고; 이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다: (i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 pS 프로모터이며; (ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 F17R 프로모터이며; 그리고 (iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 E3L 프로모터다. 특이적 구체예들에서, pS 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 555, 서열 식별 번호: 556, 또는 서열 식별 번호: 557의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, F17R 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 563의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, E3L 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 567의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
또다른 측면에서, 다음을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에 제공된다: (a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며; (b) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에 있는 부분적 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입되고; (c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며; 그리고 (d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 하류에 있고; 이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다: (i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터이며; (ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 F17R 프로모터이며; 그리고 (iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 E3L 프로모터다. 특이적 구체예들에서, pS 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 555, 서열 식별 번호: 556, 또는 서열 식별 번호: 557의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, F17R 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 563의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, E3L 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 567의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 일부 구체예들에서 이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자를 포함하고, 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 본원에 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 본원에 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다.
본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 일부 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 2 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 2 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 2 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 2 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다.
본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 일부 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다.
본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 일부 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다.
본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 일부 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 본원에 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 본원에 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다.
본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 일부 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다.
본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 일부 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 일부 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 일부 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 일부 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 일부 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 일부 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다.
본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 일부 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 본원에 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 본원에 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 본원에 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 본원에 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 본원에 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다.
본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 일부 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다.
본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 일부 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 본원에 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다.
본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이 안에 삽입되며, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다.
본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다.
본원에서 기술된 다양한 구체예들 및 측면들(이때 상기 핵산은 서열 식별 번호: 210의 뉴클레오티드 서열을 포함)에서, 상기 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자는 서열 식별 번호: 210의 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자이다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들 및 측면들(이때 상기 핵산은 서열 식별 번호: 210의 뉴클레오티드 서열을 포함)에서, 상기 부분적 B14R과 B29R 백시니아 유전자는 서열 식별 번호: 210의 부분적 B14R과 B29R 백시니아 유전자이다.
한 측면에서, 본원에서 기술된 핵산을 포함하는 바이러스가 본원에서 제공된다.
한 측면에서, 본원에서 기술된 핵산 또는 바이러스를 포함하는 패키징 세포주가 본원에서 제공된다.
한 측면에서, 본원에서 기술된 바이러스와 생리학적으로 수용가능한 담체를 포함하는 약제학적 조성물이 본원에서 제공된다.
한 측면에서, 포유류 환자의 암을 치료하는 방법이 제공되는데, 전술한 방법은 본원에서 기술된 치료요법적으로 유효량의 바이러스를 전술한 환자에게 투여하는 것을 포함한다. 또다른 측면에서, 포유류 환자의 암을 치료하는 방법이 제공되는데, 전술한 방법은 본원에서 기술된 치료요법적으로 유효량의 약제학적 조성물을 전술한 환자에게 투여하는 것을 포함한다. 일부 구체예들에서, 상기 포유류 환자는 인간 환자다.
일부 구체예들에서, 상기 바이러스는 프라임:부스트 치료에서 프라임으로 이용된다. 일부 구체예들에서, 상기 바이러스는 프라임:부스트 치료에서 부스트로 이용된다.
일부 구체예들에서, 상기 포유류 환자는 암을 가지고 있다. 예를 들면, 일부 구체예들에서, 상기 암은 백혈병, 림프종, 간암, 뼈암, 폐암, 뇌암, 방광암, 위장암, 유방암, 심장암, 자궁경부암, 자궁암, 두경부암, 담낭암, 후두암, 입술 및 구강암, 안구암, 흑색종, 췌장암, 전립선암, 결장직장암, 고환암, 그리고 인후암으로 구성된 군에서 선택된다.
일부 구체예들에서, 상기 암은 급성 림프모구성 백혈병 (ALL), 급성 골수성 백혈병 (AML), 만성 림프구성 백혈병 (CLL), 만성 골수성 백혈병 (CML), 부신피질 암종, AIDS-관련 림프종, 원발성 CNS 림프종, 항문암, 충수암, 성상세포종, 비정형 기형/횡문근암, 기저 세포 암종, 담관암, 간외 암, 유잉(Ewing) 육종 가족, 골육종 및 악성 섬유성 조직구종, 중추 신경계 배아 종양, 중추 신경계 생식 세포 종양, 두개 인두종, 외피종, 기관지 종양, 버킷(Burkitt) 림프종, 카르시노이드 종양, 원발성 림프종, 척색종, 만성 골수증식성 신생물, 결장암, 간외 담관암, 관 상피내 암종 (DCIS), 자궁내막암, 외피종, 식도암, 심부유로모세포종, 두개외 생식 세포종, 성선외 생식 세포 종양, 나팔관암, 뼈의 섬유성 조직구종, 위장 카르시노이드 종양, 위장관 기질 종양 (GIST), 고환 생식 세포 종양, 임신 영양모세포 질환, 신경교종, 소아 뇌간 신경 교종, 털이 많은 세포 백혈병, 간세포암, 랑게르한스 세포 조직구증, 호지킨 림프종, 하인두암, 섬(islet) 세포 종양, 췌장 신경내분비 종양, 윌름(Wilms) 종양 및 기타 소아 신장 종양, 랑게르한스 세포 조직구증, 소(small) 세포 폐암, 피부 T 세포 림프종, 안구내 흑색종, 메르켈 세포 암종, 중피종, 전이성 편평 경부암, 정중선 암종, 다발성 내분비 신생물 증후군, 다발성 골수종/혈장 세포 신생물, 골수이형성 증후군, 비강 및 부비동암, 비인두암, 신경모세포종, 비-호지킨 림프종(NHL), 비-소 세포 폐암 (NSCLC), 상피 난소암, 생식 세포 난소암, 악성 가능성이 낮은 난소암, 췌장 신경내분비 종양, 유두종증, 부신경절종, 부비동 및 비강암, 부갑상선암, 음경암, 인두암, 갈색세포종, 뇌하수체 종양, 흉막폐 모세포종, 원발성 복막암, 직장암, 망막모세포종, 횡문근육종, 타액선암, 카포시(Kaposi) 육종, 횡문근 육종, 세자리() 증후군, 소장암, 연조직 육종, 인후암, 흉선종 및 흉선 암종, 갑상선암, 신장 골반 및 요관의 이행 세포 암, 요도 암, 자궁 내막 자궁암, 자궁 육종, 질암, 외음부암, 그리고 발덴스트륌() 거대 글로불린 혈증으로 구성된 군에서 선택된다.
일부 구체예들에서, 제공된 방법은 전술한 환자에게 면역 체크포인트 억제제를 투여하는 것을 더 포함한다. 일부 구체예들에서, 상기 면역 체크포인트 억제제는 OX40 리간드, ICOS 리간드, 항-CD47 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-CD40/CD40L 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-Lag3 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-PD-L1 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-PD1 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 그리고 항-Tim-3 항체 또는 이의 항원-결합 단편으로 구성된 군에서 선택된다. 일부 구체예들에서, 상기 면역 체크포인트 억제제는 항-PD1 항체 또는 이의 항원-결합 단편 또는 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다. 일부 구체예들에서, 상기 면역 체크포인트 억제제는 항-PD1 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다. 일부 구체예들에서, 상기 면역 체크포인트 억제제는 항-PD-L1 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다. 일부 구체예들에서, 상기 면역 체크포인트 억제제는 항-PD1 또는 항-PD-L1 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다. 일부 구체예들에서, 상기 면역 체크포인트 억제제는 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다.
일부 구체예들에서, 제공된 방법은 전술한 환자에게 인터루킨을 투여하는 것을 더 포함한다.
일부 구체예들에서, 전술한 인터루킨은 IL-1 알파, IL-1 베타, IL-2, IL-4, IL-7, IL-10, IL-12 p35, IL-12 p40, IL-12 p70, IL-15, IL-18, IL-21, 그리고 IL-23로 구성된 군에서 선택된다. 일부 구체예들에서, 상기 인터루킨은 IL-12 p35, IL-12 p40, 그리고 IL-12 p70으로 구성된 군에서 선택된다. 일부 구체예들에서, 상기 인터루킨은 막-결합된다.
일부 구체예들에서, 상기 방법은 전술한 환자에게 인터페론을 투여하는 것을 더 포함한다. 일부 구체예들에서, 상기 인터페론은 IFN-알파, IFN-베타, IFN-델타, IFN-입실론, IFN-타우, IFN-오메가, IFN-제타, 그리고 IFN-감마로 구성된 군에서 선택된다.
일부 구체예들에서, 제공된 방법은 전술한 환자에게 사이토킨을 투여하는 것을 더 포함한다. 일부 구체예들에서, 상기 사이토킨은 TNF 수퍼패밀리 구성원 단백질이다. 일부 구체예들에서, TNF 수퍼패밀리 구성원 단백질은 TRAIL, Fas 리간드, LIGHT (TNFSF-14), TNF-알파, 그리고 4-1BB 리간드로 구성된 군에서 선택된다. 일부 구체예들에서, 상기 사이토킨은 GM-CSF, Flt3 리간드, CD40 리간드, TGF-베타, VEGF-R2, 그리고 cKit로 구성된 군에서 선택된다. 일부 구체예들에서, 상기 사이토킨은 Flt3 리간드이다.
한 측면에서, 본원에서 기술된 핵산 또는 바이러스, 그리고 해당 핵산 또는 전술한 바이러스를 숙주 세포에서 발현시키기 위해 전술한 키트의 사용자에게 지침을 주는 포장 삽입물을 포함하는 키트가 제공된다.
한 측면에서, 본원에서 기술된 바이러스, 그리고 치료요법적으로 유효량의 전술한 바이러스를 포유류 암 환자에게 투여하고, 이로 인하여 전술한 암을 치료하기 위해 사용자에게 지침을 주는 포장 삽입물을 포함하는 키트가 제공된다. 일부 구체예들에서, 상기 포유류 환자는 인간 환자다.
3.1. 정의
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "약(about)"은 설명되는 값보다 10 % 이상 높거나 또는 낮은 값을 지칭한다. 예를 들면, 용어 "약 5 nM"는 4.5 nM ~ 5.5 nM 범위를 나타낸다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "항체" (Ab)는 특정 항원에 특이적으로 결합하거나, 또는 이와 면역학적으로 반응하는 면역글로불린 분자를 말하며, 그리고 다중클론성, 단일클론성, 유전적으로 공작된 항체, 그리고 그렇지 않으면 항체의 변형된 형태, 키메라 항체, 인간화된 항체, 헤테로콘쥬게이트 항체 (예를 들면, 바이-, 트리-, 및 쿼드-특이적 항체, 디아바디, 트리아바디, 그리고 테트라바디를 비롯) 그리고 항체의 항원-결합 단편들, 예를 들면, Fab', F(ab')2, Fab, Fv, rIgG, 그리고 scFv 단편들이 내포되나, 이에 국한되지 않는다. 더욱이, 달리 명시되지 않는 한, 용어 "단일클론성 항체" (mAb)에는 무손상(intact) 분자, 뿐만 아니라, 항체 단편들 (이를 테면, 예를 들면, 표적 단백질에 특이적으로 결합할 수 있는 항체 단편들 (이를 테면, 예를 들면, Fab 및 F(ab')2 단편들) 모두가 내포된다. Fab 단편 및 F(ab')2 단편은 무손상 항체의 Fc 단편이 없고, 동물의 순환계로부터 더 빨리 제거되고, 온전한 항체보다 비-특이적 조직 결합이 적을 수 있다 (Wahl et al., J. Nucl. Med. 24:31 6, 1 983 참고; 본원에 참고자료로 편입됨).
용어 "항원-결합 단편"은 본원에서 사용된 바와 같이, 표적 항원에 특이적으로 결합하는 능력이 유지된 항체의 하나 또는 그 이상의 단편들을 지칭한다. 상기 항체의 항원-결합 기능은 전장 항체의 특정 단편들에 의해 실행될 수 있다. 상기 항체 단편들은 Fab, F(ab')2, scFv, SMIP, 디아바디, 트리아바디, 아피바디(affibody), 나노바디(nanobody), 압타머(aptamer), 또는 도메인 항체일 수 있다. 항체의 용어 "항원-결합 단편"에 포괄된 결합 단편들의 예로는 다음이 내포되나, 이에 국한되지 않는다: (i) Fab 단편, 단가 단편은 VL, VH, CL 및 CH1 도메인으로 구성됨; (ii) F(ab')2 단편, 이가(bivalent) 단편은 힌지 영역에서 이황화다리에 의해 연결된 두 개의 Fab 단편을 포함; (iii) Fd 단편, VH 및 CH1 도메인으로 구성됨; (iv) Fv 단편, 항체의 단일 아암의 VL 도메인과 VH 도메인으로 구성됨, (v) VH 도메인 및 VL 도메인이 내포된 dAb; (vi) dAb 단편 (Ward et al., Nature 341 :544-546, 1 989), 이는 VH 도메인으로 구성됨; (vii) VH 도메인 또는 VL 도메인으로 구성된 dAb; (viii) 단리된 상보성 결정 영역 (CDR); 그리고 (ix) 합성 링커에 의해 임의선택적으로 연결될 수 있는 두 개 또는 그 이상의 단리된 CDRs의 조합. 더욱이, Fv 단편의 두 개 도메인, VL 도메인과 VH 도메인은 별개 유전자에 의해 인코드되며, 이들은 예를 들면, 재조합 방법을 이용하여 이들을 단일 단백질 쇄로 만들 수 있는 링커에 의해 연결될 수 있고, 이때 VL 영역 및 VH 영역은 짝을 이뤄 단가(monovalent) 분자들 (단일 쇄 Fv (scFv))을 만든다. (단일-쇄 Fv (scFv)로 공지됨; 예를 들면, Bird et al., Science 242:423-426, 1988, 그리고 Huston et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883, 1988). 이들 항체 단편은 당업자에게 공지된 통상적 기술을 사용하여 수득되고, 상기 단편들은 무손상 항체와 동일한 방식으로 유용성에 대해 스크리닝된다. 항원-결합 단편들은 재조합 DNA 기술, 무손상 면역글로불린의 효소적 또는 화학적 절단, 또는 일부 구체예들에서 당업계에 공지된 화학적 펩티드 합성 절차에 의해 생성될 수 있다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "이중특이적 항체"란 적어도 2가지 상이한 항원에 대한 결합 특이성을 가지는 단일클론성, 대개 인간 또는 인간화된 항체를 지칭한다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "세포", "세포주", 및 "세포 배양물"은 호환될 수 있다. 이 모든 용어에는 모든 후속 세대인 자손도 포함된다. 고의적이거나 또는 우연한 돌연변이로 인해 모든 자손이 동일하지 않을 수 있음을 인지해야 한다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "키메라" 항체란 하나의 공급원 유기체, 이를 테면, 렛(rat) 또는 마우스의 면역글로불린으로부터 유래된 가변 서열, 그리고 상이한 유기체 (예를 들면, 인간)의 면역글로불린으로부터 유래된 불변 영역을 갖는 항체를 지칭한다. 키메라 항체를 만드는 방법은 당분야에 공지되어 있다. 예를 들면, Morrison, 1985, Science 229(4719): 1202-7; Oi et al., 1986, BioTechniques 4:214-221; Gillies et al., 1985, J. Immunol. Methods 125:191 -202; U.S. 특허 번호 5,807,715; 4,816,567; 그리고 4,816,397 참고(본원에 참고자료로 편입됨).
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "상보성 결정 영역" (CDR)이란 경쇄 가변 도메인과 중쇄 가변 도메인 모두에서 발견되는 초가변 영역을 의미한다. 가변 도메인의 더욱 더 보존된 부분들은 프레임워크 영역 (FRs)이라고 불린다. 당업계에서 인지되는 바와 같이, 항체의 초가변 영역을 나타내는 아미노산 위치는 문맥 및 당업계에 공지된 다양한 정의에 따라 달라질 수 있다. 가변 도메인 내의 일부 위치는 하이브리드 초가변 위치로 볼 수 있는데, 이때 이러한 위치가 한 세트의 기준 하에서 초가변 영역 내에 있는 것으로 간주되지만, 다른 기준 세트 하에서 초가변 영역 외부에 있는 것으로 간주될 수 있다. 이들 위치중 하나 또는 그 이상은 연장된 초가변 영역에서 또한 볼 수 있다. 고유의 중쇄 및 경쇄의 가변 도메인 각각은 β-시트 형태를 주로 채택한 4 개의 프레임워크 영역, 이에 연결된 3 개의 CDRs, 이때, 이들은 루프 연결되며, 그리고 일부 경우에는 β-시트 구조의 일부를 형성한다. 각 쇄에서 CDRs은 FR 영역에 근접하게 유지되어, FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4의 순서가 되며, 다른 항체 쇄의 CDRs과 함께 항체의 표적 결합 부위 형성에 기여한다(Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest (National Institute of Health,, Bethesda, Md. 1987; 본원에 참고자료로 편입됨).
본원에서 사용된 바와 같이, 달리 명시되지 않는 한, 면역글로불린 아미노산 잔기의 번호매김은 Kabat et al.,의 면역글로불린 아미노산 잔기 번호매김 체계에 따라 진행된다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "보존적 돌연변이", "보존적 치환", 또는 "보존적 아미노산 치환"이란 하나 또는 그 이상 아미노산이 유사한 물리화학적 속성, 이를 테면, 극성, 정전기적 전하, 그리고 입체 볼륨을 나타내는 하나 또는 그 이상 상이한 아미노산으로 치환되는 것을 지칭한다. 이러한 속성은 아래 표 1에서 20 개의 자연-발생적 아미노산 각각에 대해 요약되어 있다. 이 표에서 보존적 아미노산 패밀리에는 (i) G, A, V, L 및 I; (ii) D 및 E; (iii) C, S 및 T; (iv) H, K 및 R; (v) N 및 Q; 그리고 (vi) F, Y 및 W가 내포된다. 보존적 돌연변이 또는 치환은 하나의 아미노산을 동일한 아미노산 패밀리의 구성원으로 치환을 말한다(예를 들면, Thr을 Ser으로 치환 또는 Arg를 Lys으로 치환).
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "결손되다", "결손", 및 이와 유사한 것은 유전자 또는 이와 연합된 조절 요소 또는 이에 작동가능하도록 연계된 조절 요소 (예를 들면, 전사 인자-결합 부위, 이를 테면, 프로모터 또는 인헨서 요소)에 변형을 가하여, 해당 유전자를 제거하거나, 또는 그렇지 않으면, 해당 유전자를 기능을 하지 못하게 만드는 것을 지칭한다. 본원에 기재된 바와 같은 예시적인 결손은 표적 유전자의 시작 코돈에서 중지 코돈에 이르는 관심대상 유전자를 인코딩하는 핵산 전체의 제거가 내포된다. 본원에서 기술된 결손의 다른 예로는 표적 유전자를 인코딩하는 핵산의 일부분 (예를 들면, 하나 또는 그 이상 코돈, 또는 이의 일부분, 이를 테면, 단일 뉴클레오티드 결손)의 제거가 내포되고, 이로써 이러한 부분적으로-결손된 표적 유전자의 발현 시, 해당 산물 (예를 들면, RNA 전사체, 단백질 산물, 또는 조절 RNA)은 기능을 하지 못하거나, 또는 당해 표적 유전자의 야생형보다 기능이 떨어지게 된다. 본원에서 기술된 결손의 다른 예로는 관심대상의 유전자와 연합된 조절 요소(들) 모두 또는 일부의 제거, 이를 테면, 당해 표적 유전자의 발현을 조절하는 프로모터 및/또는 인헨서 핵산의 전부 또는 일부의 제거가 내포된다.
특이적 구체예들에서, 본 명세서에서 기술된 재조합 백시니아 바이러스 게놈은 다음 유전자들중 하나 또는 그 이상에서 결손을 포함한다: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B8R, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, B20R, B21R (3'ITR에서), B22R (3'ITR에서), B23R (3'ITR에서), B24R (3'ITR에서), B25R (3'ITR에서), B26R (3'ITR에서), B27R (3'ITR에서), B28R (3'ITR에서), 그리고 B29R (3'ITR에서). 특이적 구체예들에서, 본 명세서에서 기술된 재조합 백시니아 바이러스 게놈은 다음 유전자들 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B8R, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서 결손, 그리고 다음 유전자들에서 3'ITR에서 결손을 포함한다: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R. 특이적 구체예들에서, 본 명세서에서 기술된 재조합 백시니아 바이러스 게놈은 다음 유전자들중 하나 또는 그 이상에서 결손을 포함한다: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, B20R, B20R, B21R (3'ITR에서), B22R (3'ITR에서), B23R (3'ITR에서), B24R (3'ITR에서), B25R (3'ITR에서), B26R (3'ITR에서), B27R (3'ITR에서), B28R (3'ITR에서), 그리고 B29R (3'ITR에서), 그리고 또한 B8R 유전자내 결손을 또한 포함한다.
일부 구체예들에서, 유전자 결손은 당해 유전자 전체 서열을 제거한다. 다른 구체예들에서, 유전자 결손은 부분 결손, 즉, 당해 유전자의 서열 일부를 제거한다. 한 구체예에서, 유전자 결손은 당해 유전자 서열의 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90% 또는 적어도 95%를 제거하는 부분 결손이다. 한 구체예에서, 유전자 결손은 당해 유전자의 단백질 코딩 서열의 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 또는 적어도 90%를 제거하는 부분 결손이다. 다른 구체예들에서, 유전자 결손은 해당 유전자 서열의 100%를 제거한다. 여전히 다른 구체예들에서, 유전자 결손는 해당 유전자의 단백질 코딩 서열의 100%를 제거한다. 한 구체예에서, 유전자 결손은 해당 유전자 서열의 적어도 50개, 적어도 100개, 적어도 200개, 적어도 300개, 적어도 400개, 적어도 500개, 적어도 600개, 적어도 700개, 적어도 800개, 적어도 900개, 또는 적어도 1000개 뉴클레오티드를 제거한다. 또다른 구체예에서, 유전자 결손은 해당 유전자 서열의 적어도 50개, 적어도 100개, 적어도 200개, 적어도 300개, 적어도 400개, 적어도 500개, 적어도 600개, 적어도 700개, 적어도 800개, 적어도 900개, 또는 적어도 1000개 뉴클레오티드를 제거하는 부분 결손이다. 특이적 구체예에서, 유전자의 부분 결손으로 부분 유전자가 된다. 본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "유도화된(derivatized) 항체"란 단리된 항체에 잔기를 절단하거나, 또는 이에 고유하지 않은 화학적 모이어티를 추가하기 위해 화학적 반응에 의해 변형된 항체를 지칭한다. 유도화된 항체는 당화, 아세틸화, 페길화, 포스포릴화, 아미드화, 공지의 화학적 보호기/차단기에 의한 유도체화, 단백질분해 절단, 세포 리간드 또는 다른 단백질에 연계 등에 의해 획득될 수 있다. 다양한 화학적 변형 중 임의의 것을 임의의 특정 화학적 절단, 아세틸화, 포일화, 튜니카마이신의 대사 합성 등을 포함하는 공지된 기술에 의해 수행할 수 있지만, 이에 국한되지 않는다. 추가적으로, 유도체는 하나 또는 그 이상의 비-천연 아미노산을 함유할 수 있는데, 예를 들면, 앰버 억제 기술 사용을 사용한다 (예를 들면, US 특허 번호 6,964,859; 본원에 참고자료로 편입됨).
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "디아바디(diabodies)"란 두 개 폴리펩티드 쇄를 포함하는 이가 항체를 지칭하는데, 이때 각 폴리펩티드 쇄에는 VH 도메인과 VL 도메인이 내포되며, 이들 도메인은 동일한 펩티드 쇄 상에 VH 도메인과 VL 도메인의 분자내 연합을 허용하기엔 너무 짧은 링커 (예를 들면, 5개 아미노산으로 구성된 링커)에 의해 연결된다. 이 구성은 각 도메인이 다른 폴리펩티드 쇄의 상보적 도메인과 쌍을 이루어 동종이량체 구조를 형성하도록 한다. 따라서, 용어 "트리아바디(triabodies)"란 3개 펩티드 쇄를 포함하는 삼가 항체를 지칭하며, 각 쇄는 하나의 VH 도메인과 하나의 VL 도메인, 이들 도메인은 동일한 펩티드 쇄 상에 VH 도메인과 VL 도메인의 분자내 연합을 허용하기엔 극도로 짧은 링커 (예를 들면, 1-2개 아미노산으로 구성된 링커)에 의해 연결된다. 고유한 구조로 폴드되기 위해, 이러한 방식으로 구성된 펩티드는 일반적으로 적절한 폴딩을 허용하기 위해, 인접한 펩티드 사슬의 VH 도메인과 VL 도메인을 서로 공간적으로 인접하게 배치되어, 삼량체화된다 (Holliger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:6444-48, 1993 참고; 본원에 참고자료로 편입됨).
본원에서 사용된 바와 같이, "듀얼 가변 도메인 면역글로불린" ("DVD-Ig")이란 사가(tetravalent), 듀얼-표적화 단일 제제를 만들기 위해, 링커를 통하여 2개의 단일클론성 항체의 표적-결합 가변 도메인을 복합시키는 항체를 지칭한다. (Gu et al., Meth. Enzymol., 502:25-41, 2012; 본원에 참고자료로 편입됨).
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "내생적(endogenous)"이란 특정 유기체 (예를 들면, 인간)에서 자연적으로 발견되거나, 또는 유기체의 특정 위치 (예를 들면, 장기, 조직, 또는 세포, 이를 테면, 인간 세포)에서 자연적으로 발견되는 분자 (예를 들면, 폴리펩티드, 핵산, 또는 공-인자)를 설명한다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "외생적(exogenous)"이란 특정 유기체 (예를 들면, 인간)에서 자연적으로 발견되거나, 또는 유기체의 특정 위치 (예를 들면, 장기, 조직, 또는 세포, 이를 테면, 인간 세포)에서 자연적으로 발견되는 분자 (예를 들면, 폴리펩티드, 핵산, 또는 공-인자)를 설명한다. 외인성 물질에는 외부 공급원에서 유기체로 제공되는 물질이나 또는 그로부터 추출된 배양물질이 내포된다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "프레임워크 영역" 또는 "FW 영역"에는 CDRs에 인접해 있는 아미노산 잔기들이 내포된다. FW 영역 잔기는 그 중에서도, 예를 들면, 인간 항체, 설치류-유래된 항체 (예를 들면, 뮤린 항체), 인간화된 항체, 영장류화된 항체, 키메라 항체, 항체 단편들 (예를 들면, Fab 단편들), 단일-쇄 항체 단편들 (예를 들면, scFv 단편들), 항체 도메인, 그리고 이중특이적 항체에 존재할 수 있다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "이형(hetero)특이적 항체"란 적어도 2가지 상이한 항원에 대한 결합 특이성을 가지는 단일클론성, 바람직하게는 인간 또는 인간화된 항체를 지칭한다. 전형적으로, 이형특이적 항체의 재조합적 생산은 면역글로불린 두 개 중쇄-경쇄 쌍의 공동-발현에 기반을 두고, 여기에서 두 중쇄는 상이한 특이성을 갖는다 (Milstein et al., Nature 305:537, 1 983). 유사한 과정들이 예를 들면, WO 93/08829, U.S. 특허 번호 6,210,668; 6,193,967; 6,132,992; 6,106,833; 6,060,285; 6,037,453; 6,010,902; 5,989,530; 5,959,084; 5,959,083; 5,932,448; 5,833,985; 5,821,333; 5,807,706; 5,643,759, 5,601 ,819; 5,582,996, 5,496,549, 4,676,980, WO 91 /00360, WO 92/00373, EP 03089, Traunecker et al., EMBO J. 10:3655 (1991), Suresh et al., Methods in Enzymology 121 :210 (1986)에 기술된다(본원에 참고자료로 편입됨). 이형특이적 항체에는 Klein et al., mAbs 4(6):653-663, 2012(본원에 참고자료로 편입됨)에 기술된 바와 같이, 다중-특이적 항체에서 정확한 쇄 연합을 강제하는 Fc 돌연변이가 내포될 수 있다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "인간 항체"란 해당 단백질의 실질적인 모든 부분 (예를 들면, CDR, 프레임워크, CL, CH 도메인 (예를 들면, CH1, CH2, CH3), 힌지, (VL, VH))은 인간에서 오로지 미미한 서열 변화 또는 변이만을 갖고, 실질적인 비-면역원성인 항체를 지칭한다. 인간 항체는 인간 세포 (예를 들면, 재조합 발현)에서 생산되거나, 또는 기능적으로 재배열된 인간 면역글로불린 (예를 들면, 중쇄 및/또는 경쇄) 유전자를 발현시킬 수 있는 비-인간 동물 또는 원핵성 세포 또는 진핵성 세포에서 생산될 수 있다. 더욱이, 인간 항체가 단일-쇄 항체일 때, 원래 인간 항체에서 볼 수 없는 링커 펩테드가 이러한 항체에 내포될 수 있다. 예를 들면, Fv는 링커 펩티드, 이를 테면, 2 내지 약 8개의 글리신 또는 다른 아미노산 잔기를 포함할 수 있고, 이러한 링커 펩티드는 중쇄의 가변 영역과 경쇄의 가변 영역을 연결한다. 이러한 링커 펩티드는 인간 기원의 것으로 간주된다. 인간 항체는 인간 면역글로불린 서열로부터 유래된 항체 라이브러리를 이용한 디스플레이 방법을 비롯하여 당분야에 공지된 다양한 방법에 의해 만들어질 수 있다. U.S. 특허 번호 4,444,887 및 4,716,111; 그리고 PCT 공개 WO 1998/46645; WO 1998/50433; WO 1998/24893; WO 1998/16654; WO 1996/34096; WO 1996/33735; 그리고 WO 1991/10741 참고(본원에 참고자료로 편입됨). 인간 항체는 기능성 내생적 면역글로불린을 발현시킬 수는 없지만, 그러나 인간 면역글로불린 유전자를 발현시킬 수 있는 트랜스제닉(transgenic) 마우스를 이용하여 또한 만들 수 있다. 예를 들면, PCT 공개 WO 98/24893; WO 92/01047; WO 96/34096; WO 96/33735; U.S. 특허 번호 5,413,923; 5,625, 126; 5,633,425; 5,569,825; 5,661,016; 5,545,806; 5,814,318; 5,885,793; 5,916,771; 그리고 5,939,598 참고(본원에 참고자료로 편입됨).
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "인간화된" 항체란 비-인간 면역글로불린으로부터 유래된 최소 서열을 함유하는, 비-인간 (예를 들면, 뮤린) 항체 형태를 지칭하는데, 키메라 면역글로불린, 면역글로불린 쇄 또는 이의 단편들 (이를 테면, Fv, Fab, Fab', F(ab')2 또는 항체의 다른 표적-결합 하위도메인)이다. 일반적으로, 인간화된 항체는 실질적으로 최소한 하나의, 그리고 전형적으로 2개의 가변 도메인을 모두 포함할 수 있는데, 이때 CDR 영역의 모든 또는 실질적으로 모든 것은 비-인간 면역글로블린에 대응한다. 모든 FR 영역 또는 실질적으로 모두는 인간 면역글로불린 서열의 것일 수도 있다. 인간화된 항체는 면역글로불린 불변 영역 (Fc), 전형적으로 인간 면역글로불린 콘센수스 서열의 적어도 일부분을 또한 포함할 수 있다. 항체 인간화 방법은 당업계에 알려져 있다. 예를 들면, Riechmann et al., Nature 332:323-7, 1988; U.S. 특허 번호: 5,530,101; 5,585,089; 5,693,761; 5,693,762; 그리고 6,180,370(Queen et al); EP239400; PCT 공개 WO 91/09967; U.S. 특허 번호. 5,225,539; EP592106; 그리고 EP519596 참고(본원에 참고자료로 편입됨).
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "단일클론성 항체"란 임의의 진핵세포, 원핵세포, 또는 파아지 클론을 비롯한 클론 또는 단일 카피로부터 유도되는 항체를 지칭하며, 그리고 이를 생산하는 방법은 아니다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "다중-특이적 항체"란 하나 이상의 표적 항원에 대한 친화력을 나타내는 항체를 지칭한다. 다중-특이적 항체는 온전한 면역글로불린 분자와 유사한 구조를 가질 수 있고, Fc 영역, 예를 들면, IgG Fc 영역이 내포된다. 이러한 구조에는 IgG-Fv, IgG-(scFv)2, DVD-Ig, (scFv)2-(scFv)2-Fc 및 (scFv)2-Fc-(scFv)2이 내포되나, 이에 국한되지 않는다. IgG-(scFv)2의 경우, scFv는 중쇄 또는 경쇄의 N-말단 또는 C-말단에 부착될 수 있다. 예시적인 다중-특이적 분자는 Kontermann, 2012, mAbs 4(2):182-197, Yazaki et al., 2013, Protein Engineering, Design & Selection 26(3):1 87-1 93, 그리고 Grote et al., 2012, in Proetzel & Ebersbach (eds.), Antibody Methods and Protocols, Methods in Molecular Biology vol. 901, chapter 16:247-263에 의해 검토되었다(본원에 참고자료로 편입됨). Fc 영역이 결여되어 있고, 항체 또는 항체 단편들이 통합될 수 있는 예시적인 다중-특이적 분자에는 scFv 이량체 (디아바디), 삼량체(트라이바디) 그리고 사량체 (테트라바디), Fab 이량체 (접착성 폴리펩티드 또는 단백질 도메인에 의한 콘쥬게이트) 그리고 Fab 삼량체 (화학적으로 콘쥬게이트된)는 Hudson and Souriau, 2003, Nature Medicine 9:129-134(본원에 참고자료로 편입됨)에 의해 기술된다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "서열 동일성 백분율(%)"이란 참조 서열 및 후보 서열 정렬시키고, 서열 최대 동일성 백분율을 얻기 위해 갭을 도입 한 후(필요한 경우) (예를 들면, 최적의 정렬을 위해 후보 서열과 참조 서열 중 하나 또는 둘 모두에 갭이 도입될 수 있으며, 비교 목적으로 비-상동성 서열은 무시될 수 있다), 참조 서열의 아미노산 (또는 핵산) 잔기와 동일한 후보 서열의 아미노산 (또는 핵산) 잔기의 백분율을 지칭한다. 동일성 백분율을 결정하기 위한 정렬은 예를 들어 BLAST, ALIGN 또는 Megalign (ONASTAR) 소프트웨어와 같은 공개적으로 이용가능한 컴퓨터 소프트웨어를 사용하여 당업계의 기술 범위 내에 있는 다양한 방법으로 성취될 수 있다. 당업자는 비교되는 서열의 전체 길이에 대해 최대 정렬을 달성하는데 필요한 임의의 알고리즘을 포함하여, 정렬을 측정하기 위한 적절한 매개변수를 결정할 수 있다. 예를 들면, 후보 서열과 비교용으로 정렬된 참조 서열은 해당 후보 서열의 전체 길이에 걸쳐 또는 해당 후보 서열의 선택된 연접 아미노산 (또는 핵산) 잔기 부분에 걸쳐 50%~100% 서열 동일성을 나타낸다. 비교 목적으로 정렬된 후보 서열의 길이는 참조 서열 길이의 예를 들면, 적어도 30%, (예를 들면, 30%, 40, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 100%)일 수 있다. 후보 서열의 한 위치를 참조 서열의 대응 위치에 있는 동일한 아미노산 잔기가 차지하는 경우, 이들 분자는 해당 위치에서 동일하다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "영장류화된 항체"란 영장류-유래된 항체로부터 프레임워크 영역, 그리고 다른 영역, 이를 테면, 비-영장류 공급원 항체로부터 CDRs와 불변 영역을 포함하는 항체를 지칭한다. 영장류화된 항체를 만드는 방법은 당업계에 알려져 있다. 예를 들면, U.S. 특허 번호 5,658,570; 5,681,722; 그리고 5,693,780(본원에 참고자료로 편입됨) 참고.
본원에서 사용된 바와 같이, 폴리뉴클레오티드 단편 맥락에서 용어 "작동가능하도록 연계된(operatively linked)"이란 두 개 폴리뉴클레오티드 단편들이 연결되어, 이들 두 폴리뉴클레오티드 단편에 의해 인코드된 아미노산 서열이 프레임-안(in-frame)에 유지된다는 것을 의미한다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "조절 요소" 및 이와 유사한 것들은 항체 쇄 유전자의 전사 또는 해독을 제어하는 프로모터, 인헨서, 그리고 다른 발현 제어 요소들 (예를 들면, 폴리아데닐화 신호)을 지칭한다. 이러한 조절 서열은 예를 들면, Goeddel, Gene Expression Technology: Methods in Enzymology 185 (Academic Press, San Diego, CA, 1990)(본원에 참고자료로 편입됨)에서 기술된다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "대상체" 및 "환자"는 본원에서 기술된 특정 질환 또는 병태 (이를 테면, 암 또는 감염성 질환)에 대한 치료를 제공받는 유기체를 지칭한다. 대상체 및 환자의 예시에는 포유류, 이를 테면, 질환 또는 병태, 예를 들면, 세포 증식 장애, 이를 테면, 암에 대한 치료를 제공받는 인간이 내포된다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "scFv"란 단일-쇄 Fv 항체로써, 항체의 중쇄 및 경쇄의 가변 도메인이 연결되어 하나의 쇄를 형성한다. scFv 단편들은 항체 경쇄 (VL)의 가변 영역 (예를 들면, CDR-L1, CDR-L2, 및/또는 CDR-L3) 그리고 항체 중쇄 (VH) (예를 들면, CDR-H1, CDR-H2, 및/또는 CDR-H3)의 가변 영역이 링커에 의해 구별되는 하나의 폴리펩티드 쇄를 함유한다. scFv 단편의 VL 영역과 VH 영역을 연결시키는 링커는 단백질성 아미노산으로 구성된 펩티드 링커일 수 있다. 대체 링커들이 이용될 수 있는데, 가령 scFv 단편이 단백질용해성 분해에 대한 저항성을 증가시키기 위해 (예를 들면, D-아미노산을 함유하는 링커), scFv 단편의 용해도를 강화시키기 위해 (예를 들면, 친수성 링커 이를 테면, 폴리에틸렌 글리콜-함유하는 링커 또는 반복되는 글리신과 세린 잔기를 함유하는 폴리펩티드), 분자의 생물물리적 안정성을 개선시키기 위해 (예를 들면, 분자-내 또는 분자-간 이황화물 결합을 형성하도록 시스테인 잔기를 함유하는 링커), 또는 scFv 단편의 면역원성을 감쇠시키기 위해 (예를 들면, 당화 부위를 함유하는 링커), 이용될 수 있다 scFv 분자 당업계에 알려져 있고, 예를 들면, US 특허 5,892,019, Flo et al., (Gene 77:51, 1989); Bird et al., (Science 242:423, 1988); Pantoliano et al., (Biochemistry 30:10117, 1991); Milenic et al., (Cancer Research 51:6363, 1991); 그리고 Takkinen et al., (Protein Engineering 4:837, 1991)에 기술되어 있다. scFv 분자의 VL 도메인과 VH 도메인은 하나 또는 그 이상 항체 분자로부터 유래될 수 있다. 본 발명의 scFv 분자의 가변 영역은 이들이 유래된 항체 분자의 아미노산 서열에서 가변적이 되도록 변형될 수 있음은 당업자들이 인지할 것이다. 예를 들면, 일부 구체예들에서, 아미노산 잔기 (예를 들면, CDR 및/또는 프레임워크 잔기에서)에서 보존적 치환 또는 변화를 유도하는 뉴클레오티드 치환 또는 아미노산 치환이 만들어질 수 있다. 대안으로 또는 부가적으로, 당분야의 인지 기술을 이용하여 CDR 아미노산 잔기에 돌연변이를 만들어 항원 결합을 최적화시킨다. scFv 단편들은 예를 들면, WO 2011/084714(본원에 참고자료로 편입됨)에 기술된다.
본원에서 사용된 바와 같이, "특이적으로 결합한다"란 예를 들어 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 의해 특이적으로 인지되는 단백질 및 기타 생물학적 분자의 이형성 집단에서 항원의 존재를 결정하는 결합 반응을 지칭한다. 항원에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 100 nM 미만의 KD로 항원에 결합할 수 있다. 예를 들면, 항원에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 최대 100 nM (예를 들면, 1 pM ~ 100 nM)의 KD로 항원에 결합할 수 있다. 특정 항원 또는 이의 에피토프에 대한 특이적 결합을 나타내지 않는 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 해당 특정 항원 또는 이의 에피토프에 대해 100 nM (예를 들면, 500 nm 이상, 1 μΜ, 100 μΜ, 500 μΜ, 또는 1 mM)이상의 KD를 나타낼 수 있다. 다양한 면역검정법 포멧을 이용하여 특정 단백질 또는 탄수화물과의 특이적 면역반응성을 갖는 항체를 선별할 수 있다. 예를 들면, 고형-상(phase) ELISA 면역검정법은 단백질 또는 탄수화물과의 특이적 면역반응성을 갖는 항체를 선별하는데 이용된다 (특이적 면역반응성을 결정하는데 이용되는 면역검정법 포멧 및 조건에 대해 설명하는 이를 테면, Harlow & Lane, Antibodies, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press, New York (1988) 및 Harlow & Lane, Using Antibodies, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press, New York (1999) 참고).
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "형질감염"이란 외생성 DNA를 원핵성 또는 진핵성 숙주 세포로 도입시키기 위해 흔히 이용되는 다양한 기술, 예를 들면, 전기천공, 리포펙션, 칼슘-인산염 침전, DEAE-덱스트란 형질감염 및 이와 유사한 것들중 임의의 것을 지칭한다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "치료하다" 또는 "치료"란 암과 같은 세포 증식 장애의 진행과 같은 원치 않는 생리 학적 변화 또는 장애를 예방하거나 또는 지연(경감)시키는 것이 목적의 치료요법적 처치를 지칭한다. 유익한 또는 바람직한 임상 결과는 탐지가능하거나, 또는 증상의 개선, 질병의 정도의 감소, 질병 상태의 안정화 (즉, 악화되지 않음), 질병의 진행 지연 또는 둔화, 질병 상태의 개선 또는 완화, 그리고 차도(부분적으로 또는 전체적으로)를 포함할 수 있지만, 이에 국한되지는 않는다. 치료를 필요로 하는 사람들은 이미 질병, 상태 또는 장애가 있거나, 해당 상태 또는 장애에 걸릴 경향이 있는 자, 또는 상태 또는 장애를 예방해야 하는 자들을 포함한다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "벡터"란 핵산 벡터, 예를 들면, DNA 벡터, 이를 테면, 플라스미드, RNA 벡터, 바이러스 또는 다른 적합한 레플리콘 (예를 들면, 바이러스 벡터)를 지칭한다. 코딩 외생성 단백질을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 원핵성 세포 또는 진핵성 세포로 전달하기 위해 다양한 벡터들이 개발되었다. 이러한 발현 벡터들의 예들이 예를 들면, WO 1994/11026(본원에 참고자료로 편입됨)에 기술되어 있다. 본 발명의 발현 벡터는 단백질의 발현 및/또는 이들 폴리뉴클레오티드 서열을 숙주 세포, 이를 테면, 포유류 세포 (예를 들면, 인간 세포)의 게놈에 통합시키기 위해 이용되는 하나 또는 그 이상의 추가 서열 요소들을 함유할 수 있다. 본원에 기술된 항체 및 항체 단편들의 발현에 이용될 수 있는 예시적인 벡터에는 유전사의 전사를 지시하는 조절 서열, 이를 테면, 프로모터 및 인헨서 영역을 함유하는 플라스미드가 내포된다. 벡터는 표적 유전자의 해독율을 조절하는, 또는 유전자 전사로 인한 mRNA의 안정성 또는 이의 핵 이출(export)을 개선시키는 핵산을 함유할 수 있다. 이들 서열 요소에는 해당 발현 벡터가 휴대하는 유전자의 효과적인 전사를 지시하기 위해 예를 들면, 5'및 3'미해독 영역, 내부 리보좀 진입 부위 (IRES), 그리고 폴리아데닐화 신호생성 부위가 내포될 수 있다. 본원에 기술된 벡터는 이러한 벡터를 함유하는 세포의 선별용 마커를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 또한 함유할 수 있다. 적합한 마커의 예로는 항생제, 이를 테면, 암피실린, 클로람페니콜, 카나마이신, 또는 나우르세오트리친(nourseothricin)에 대한 내성을 인코드하는 유전자들이 내포된다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "VH"는 Fv, scFv, 또는 Fab의 중쇄를 비롯한 항체의 면역글로불린 중쇄의 가변 영역을 지칭한다. "VL"에 대한 언급은 Fv, scFv, dsFv 또는 Fab의 경쇄를 비롯한 면역글로불린 경쇄의 가변 영역을 지칭한다. 항체들 (Abs) 그리고 면역글로불린 (Igs)은 동일한 구조적 특징을 갖는 당단백질이다. 특이적 표적에 대한 결합 특이성을 나타내며, 면역글로불린에는 항체 및 표적 특이성이 결여된 항체 및 기타 항체-유사 분자들이 모두 내포된다. 고유 항체들과 면역글로불린은 통상 약 150,000 달톤의 이종사량체 당단백질로써, 2개의 동일한 경쇄 (L)와 2개의 동일한 중쇄(H)로 구성된다. 고유 항체의 각 중쇄는 아미노 말단에 가변 도메인 (VH)과 이어서 몇 개의 불변 도메인을 갖는다. 고유 항체의 각 경쇄는 아미노 말단에 가변 도메인 (VL)과 카르복시 말단에 불변 도메인을 갖는다.
3.2. 유전자 정의
본원에서 사용된 바와 같이, "B8R"는 오르토폭스바이러스 (예를 들면, 백시니아, 예를 들면, Copenhagen) 유전자, 이를 테면, 감마 인터페론 (IFN-γ) 수용체에 상동성인 분비된 단백질을 인코드하는 유전자를 지칭한다. 백시니아 바이러스의 Copenhagen 균주에서 예시적인 B8R 유전자(UniProtKB 데이터베이스 항목 P21004로 부여됨)에 의해 인코드된 단백질 서열의 비-제한적 예들이 하기에서 재현된다: MRYIIILAVLFINSIHAKITSYKFESVNFDSKIEWTGDGLYNISLKNYGIKTWQTMYTNVPEGTYDISAFPKNDFVSFWVKFEQGDYKVEEYCTGLCVEVKIGPPTVTLTEYDDHINLYIEHPYATRGSKKIPIYKRGDMCDIYLLYTANFTFGDSEEPVTYDIDDYDCTSTGCSIDFATTEKVCVTAQGATEGFLEKITPWSSEVCLTPKKNVYTCAIRSKEDVPNFKDKMARVIKRKFNKQSQSYLTKFLGSTSNDVTTFLSMLNLTKYS (서열 식별 번호: 1).
용어 "B8R"에는 상기 열거된 단백질의 단편들 또는 변이체들, 또는 또다른 백시니아 바이러스 균주의 상동성 유전자들이 내포될 수도 있다. 변이체들에는 본원에서 기술된 서열에 대해 85% 또는 그 이상의 동일성을 갖는 서열들이 내포되나, 이에 국한되지 않는다.
본원에서 사용된 바와 같이, "B14R" 이란 오르토폭스바이러스 (예를 들면, 백시니아, 예를 들면, Copenhagen) 유전자를 지칭한다. 백시니아 바이러스의 Copenhagen 균주에서 예시적인 B14R 유전자(UniProtKB 데이터베이스 항목 P20842로 부여됨)에 의해 인코드된 단백질 서열의 예들이 하기에서 재현된다:
MNHCLLAISAVYFKAKWLTPFEKEFTSDYPFYVSPTEMVDVSMMSMYGELFNHASVKESFGNFSIIELPYVGDTSMMVILPDKIDGLESIEQNLTDTNFKKWCNSLDAMFIDVHIPKFKVTGSYNLVDTLVKSGLTEVFGSTGDYSNMCNLDVSVDAMIHKTYIDVNEEYTEAAAATCALVSDCASTITNEFCVDHPFIYVIRHVDGKILFVGRYCSPTTNC (서열 식별 번호: 2).
본원에서 사용된 바와 같이, "B15R"은 오르토폭스바이러스 (예를 들면, 백시니아, 예를 들면, Copenhagen) 유전자를 지칭한다. 백시니아 바이러스의 Copenhagen 균주에서 예시적인 B15R 유전자(UniProtKB 데이터베이스 항목 P21089로 부여됨)에 의해 인코드된 단백질 서열의 예들이 하기에서 재현된다:
MTANFSTHVFSPQHCGCDRLTSIDDVKQCLTEYIYWSSYAYRNRQCAGQLYSTLLSFRDDAELVFIDIRELVKNMPWDDVKDCTEIIRCYIPDEQKTIREISAIIGLCAYAATYWGGEDHPTSNSLNALFVMLEMLNYVDYNIIFRRMN (서열 식별 번호: 3).
본원에서 사용된 바와 같이, "B16R"은 오르토폭스바이러스 (예를 들면, 백시니아, 예를 들면, Copenhagen) 유전자, 이를 테면, IL-1-베타 억제제를 인코드하는 유전자를 지칭한다. 백시니아 바이러스의 Copenhagen 균주에서 예시적인 B16R 유전자(UniProtKB 데이터베이스 항목 P21116으로 부여됨)에 의해 인코드된 단백질 서열의 예들이 하기에서 재현된다:
MSILPVIFLP IFFYSSFVQT FNASECIDKG (서열 식별 번호: 4).
본원에서 사용된 바와 같이, "B17L"은 오르토폭스바이러스 (예를 들면, 백시니아, 예를 들면, Copenhagen) 유전자를 지칭한다. 백시니아 바이러스의 Copenhagen 균주에서 예시적인 B17L 유전자(UniProtKB 데이터베이스 항목 P21075로 부여됨)에 의해 인코드된 단백질 서열의 예들이 하기에서 재현된다:
MSRKFMQVYEYDREQYLDEFIEDRYNDSFITSPEYYSAEKYMCRYTTLNHNCVNVRRCALDSKLLHDIITNCKIYNNIELVRATKFVYYLDLIKCNWVSKVGDSVLYPVIFITHTSTRNLDKVSVKTYKGVKVKKLNRCADHAIVINPFVKFKLTLPNKTSHAKVLVTFCKLRTDITPVEAPLPGNVLVYTFPDINKRIPGYIHVNIEGCIDGMIYINSSKFACVLKLHRSMYRIPPFPIDICSCCSQYTNDDIEIPIHDLIKDVAIFKNKETVYYLKLNNKTIARFTYFNNIDTAITQEHEYVKIALGIVCKLMINNMHSIVGVNHSNTFVNCLLEDNV (서열 식별 번호: 5).
본원에서 사용된 바와 같이, "B18R"은 오르토폭스바이러스 (예를 들면, 백시니아, 예를 들면, Copenhagen) 유전자, 이를 테면, Ankyrin 반복 단백질을 인코드하는 유전자를 지칭한다. 백시니아 바이러스의 Copenhagen 균주에서 예시적인 B18R 유전자(UniProtKB 데이터베이스 항목 P21076으로 부여됨)에 의해 인코드된 단백질 서열의 예들이 하기에서 재현된다:
MSRRLIYVLNINRKSTHKIQENEIYTYFSHCNIDHTSTELDFVVKNYDLNRRQHVTGYTALHCYLYNNYFTNDVLKILLNHDVNVTMKTSSGRMPVYILLTRCCNISHDVVIDMIDKDKNHLSHRDYSNLLLEYIKSRYMLLKEEDIDENIVSTLLDKGIDPNFKQDGYTALHYYYLCLAHVYKPGECRKPITIKKAKRIISLFIQHGANLNALDNCGNTPFHLYLSIEMCNNIHMTKMLLTFNPNFKICNNHGLTPILCYITSDYIQHDILVMLIHHYETNVGEMPIDERRMIVFEFIKTYSTRPADSITYLMNRFKNINIYTRYEGKTLLHVACEYNNTQVIDYLIRINGDINALTDNNKHATQLIIDNKENSPYTINCLLYILRYIVDKNVIRSLVDQLPSLPIFDIKSFEKFISYCILLDDTFYDRHVKNRDSKTYRYAFSKYMSFDKYDGIITKCHDETMLLKLSTVLDTTLYAVLRCHNSRKLRRYLTELKKYNNDKSFKIYSNIMNERYLNVYYKDMYVSKVYDKLFPVFTDKNCLLTLLPSEIIYEILYMLTINDLYNISYPPTKV (서열 식별 번호: 6).
본원에서 사용된 바와 같이, "B19R"은 오르토폭스바이러스 (예를 들면, 백시니아, 예를 들면, Copenhagen) 유전자, 이를 테면, IFN-알파-베타-수용체-유사 분비된 당단백질을 인코드하는 유전자를 지칭한다. 백시니아 바이러스의 Copenhagen 균주에서 예시적인 B19R 유전자(UniProtKB 데이터베이스 항목 P21077로 부여됨)에 의해 인코드된 단백질 서열의 예들이 하기에서 재현된다:
MTMKMMVHIYFVSLSLLLLLFHSYAIDIENEITEFFNKMRDTLPAKDSKWLNPACMFGGTMNDMATLGEPFSAKCPPIEDSLLSHRYKDYVVKWERLEKNRRRQVSNKRVKHGDLWIANYTSKFSNRRYLCTVTTKNGDCVQGIVRSHIKKPPSCIPKTYELGTHDKYGIDLYCGILYAKHYNNITWYKDNKEINIDDIKYSQTGKELIIHNPELEDSGRYDCYVHYDDVRIKNDIVVSRCKILTVIPSQDHRFKLILDPKINVTIGEPANITCTAVSTSLLIDDVLIEWENPSGWLIGFDFDVYSVLTSRGGITEATLYFENVTEEYIGNTYKCRGHNYYFEKTLTTTVVLE (서열 식별 번호: 7).
본원에서 사용된 바와 같이, "B20R"은 오르토폭스바이러스 (예를 들면, 백시니아, 예를 들면, Copenhagen) 유전자, 이를 테면, Ankyrin 반복 단백질을 인코드하는 유전자를 지칭한다. 백시니아 바이러스의 Copenhagen 균주에서 예시적인 B20R 유전자(UniProtKB 데이터베이스 항목 P21078로 부여됨)에 의해 인코드된 단백질 서열의 예들이 하기에서 재현된다: MDEDTRLSRYLYLTDREHINVDSIKQLCKISDPNACYRCGCTALHEYFYNYRSVNGKYKYRYNGYYQYYSSSDYENYNEYYYDDYDRTGMNSESDSESDNISIKTEYENEYEFYDETQDQSTQHNDL (서열 식별 번호: 8).
본원에서 사용된 바와 같이, "C1L"은 오르토폭스바이러스 (예를 들면, 백시니아, 예를 들면, Copenhagen) 유전자를 지칭한다. 백시니아 바이러스의 Copenhagen 균주에서 예시적인 C1L 유전자(UniProtKB 데이터베이스 항목 P21036으로 부여됨)에 의해 인코드된 단백질 서열의 예들이 하기에서 재현된다:
MVKNNKISNSCRMIMSTNPNNILMRHLKNLTDDEFKCIIHRSSDFLYLSDSDYTSITKET
LVSEIVEEYPDDCNKILAIIFLVLDKDIDVDIETKLKPKPAVRFAILDKMTEDIKLTDLV
RHYFRYIEQDIPLGPLFKKIDSYRTRAINKYSKELGLATEYFNKYGHLMFYTLPIPYNRF
FCRNSIGFLAVLSPTIGHVKAFYKFIEYVSIDDRRKFKKELMSK (서열 식별 번호: 9).
본원에서 사용된 바와 같이, "C2L"는 오르토폭스바이러스 (예를 들면, 백시니아, 예를 들면, Copenhagen) 유전자, 이를 테면, 세포외 매트릭스에 대한 칼슘-독립성 흡착에 영향을 주는 kelch-유사 단백질을 인코드하는 유전자를 지칭한다. 백시니아 바이러스의 Copenhagen 균주에서 예시적인 C2L 유전자(UniProtKB 데이터베이스 항목 P21037로 부여됨)에 의해 인코드된 단백질 서열의 예들이 하기에서 재현된다:
MESVIFSINGEIIQVNKEIITASPYNFFKRIQDHHLKDEAIILNGINYHAFESLLDYMRWKKINITINNVEMILVAAVIIDVPPVVDLCVKTMIHNINSTNCIRMFNFSKRYGIKKLYNASMSEIINNITAVTSDPEFGKLSKDELTTILSHEDVNVNHEDVTAMILLKWIHKNPNDVDIINILHPKFMTNTMRNAISLLGLTISKSTKPVTRNGIKHNIVVIKNSDYISTITHYSPRTEYWTIVGNTDRQFYNANVLHNCLYIIGGMINNRHVYSVSRVDLETKKWKTVTNMSSLKSEVSTCVNDGKLYVIGGLEFSISTGVAEYLKHGTSKWIRLPNLITPRYSGASVFVNDDIYVMGGVYTTYEKYVVLNDVECFTKNRWIKKSPMPRHHSIVYAVEYDGDIYVITGITHETRNYLYKYIVKEDKWIELYMYFNHVGKMFVCSCGDYILIIADAKYEYYPKSNTWNLFDMSTRNIEYYDMFTKDETPKCNVTHKSLPSFLSNCEKQFLQ (서열 식별 번호: 10).
본원에서 사용된 바와 같이, "F1L"은 오르토폭스바이러스 (예를 들면, 백시니아, 예를 들면, Copenhagen) 유전자, 이를 테면, 카스파제-9 억제제를 인코드하는 유전자를 지칭한다. 백시니아 바이러스의 Copenhagen 균주에서 예시적인 F1L 유전자(UniProtKB 데이터베이스 항목 P68450으로 부여됨)에 의해 인코드된 단백질 서열의 예들이 하기에서 재현된다:
MLSMFMCNNIVDYVDDIDNGIVQDIEDEASNNVDHDYVYPLPENMVYRFDKSTNILDYLSTERDHVMMAVRYYMSKQRLDDLYRQLPTKTRSYIDIINIYCDKVSNDYNRDMNIMYDMASTKSFTVYDINNEVNTILMDNKGLGVRLATISFITELGRRCMNPVKTIKMFTLLSHTICDDCFVDYITDISPPDNTIPNTSTREYLKLIGITAIMFATYKTLKYMIG (서열 식별 번호: 11).
본원에서 사용된 바와 같이, "F2L"은 오르토폭스바이러스 (예를 들면, 백시니아, 예를 들면, Copenhagen) 유전자, 이를 테면, 데옥시우리딘 트리포스파타제 (dUTPase)를 인코드하는 유전자를 지칭한다. 백시니아 바이러스의 Copenhagen 균주에서 예시적인 F2L 유전자(UniProtKB 데이터베이스 항목 P68634로 부여됨)에 의해 인코드된 단백질 서열의 예들이 하기에서 재현된다:
MFNMNINSPVRFVKETNRAKSPTRQSPGAAGYDLYSAYDYTIPPGERQLIKTDISMSMPKICYGRIAPRSGLSLKGIDIGGGVIDEDYRGNIGVILINNGKCTFNVNTGDRIAQLIYQRIYYPELEEVQSLDSTNRGDQGFGSTGLR (서열 식별 번호: 12).
본원에서 사용된 바와 같이, "F3L"은 오르토폭스바이러스 (예를 들면, 백시니아, 예를 들면, Copenhagen) 유전자, 이를 테면, 선천적 면역 반응 개질제이며, 독성(virulence) 인자인 kelch-유사 단백질을 인코드하는 유전자를 지칭한다. 백시니아 바이러스의 Copenhagen 균주에서 예시적인 F3L 유전자(UniProtKB 데이터베이스 항목 P21013으로 부여됨)에 의해 인코드된 단백질 서열의 예들이 하기에서 재현된다:
MPIFVNTVYCKNILALSMTKKFKTIIDAIGGNIIVNSTILKKLSPYFRTHLRQKYTKNKDPVTRVCLDLDIHSLTSIVIYSYTGKVYIDSHNVVNLLRASILTSVEFIIYTCINFILRDFRKEYCVECYMMGIEYGLSNLLCHTKNFIAKHFLELEDDIIDNFDYLSMKLILESDELNVPDEDYVVDFVIKWYIKRRNKLGNLLLLIKNVIRSNYLSPRGINNVKWILDCTKIFHCDKQPRKSYKYPFIEYPMNMDQIIDIFHMCTSTHVGEVVYLIGGWMNNEIHNNAIAVNYISNNWIPIPPMNSPRLYATGIPANNKLYVVGGLPNPTSVERWFHGDAAWVNMPSLLKPRCNPAVASINNVIYVMGGHSETDTTTEYLLPNHDQWQFGPSTYYPHYKSCALVFGRRLFLVGRNAEFYCESSNTWTLIDDPIYPRDNPELIIVDNKLLLIGGFYRGSYIDTIEVYNHHTYSWNIWDGK (서열 식별 번호: 13).
본원에서 사용된 바와 같이, "K1L"은 오르토폭스바이러스 (예를 들면, 백시니아, 예를 들면, Copenhagen) 유전자, 이를 테면, NF-κB 억제제를 인코드하는 유전자를 지칭한다. 백시니아 바이러스의 Copenhagen 균주에서 예시적인 K1L 유전자(UniProtKB 데이터베이스 항목 P20632로 부여됨)에 의해 인코드된 단백질 서열의 예들이 하기에서 재현된다:
MDLSRINTWKSKQLKSFLSSKDTFKADVHGHSALYYAIADNNVRLVCTLLNAGALKNLLENEFPLHQAATLEDTKIVKILLFSGMDDSQFDDKGNTALYYAVDSGNMQTVKLFVKKNWRLMFYGKTGWKTSFYHAVMLNDVSIVSYFLSEIPSTFDLAILLSCIHTTIKNGHVDMMILLLDYMTSTNTNNSLLFIPDIKLAIDNKDIEMLQALFKYDINIYSVNLENVLLDDAEITKMIIEKHVEYKSDSYTKDLDIVKNNKLDEIISKNKELRLMYVNCVKKN (서열 식별 번호: 14).
본원에서 사용된 바와 같이, "K2L"은 오르토폭스바이러스 (예를 들면, 백시니아, 예를 들면, Copenhagen) 유전자, 이를 테면, 세포 융합을 방해하는 세린 프로테아제 억제제를 인코드하는 유전자를 지칭한다. 백시니아 바이러스의 Copenhagen 균주에서 예시적인 K2L 유전자(UniProtKB 데이터베이스 항목 P20532로 부여됨)에 의해 인코드된 단백질 서열의 예들이 하기에서 재현된다:
MIALLILSLTCSVSTYRLQGFTNAGIVAYKNIQDDNIVFSPFGYSFSMFMSLLPASGNTRIELLKTMDLRKRDLGPAFTELISGLAKLKTSKYTYTDLTYQSFVDNTVCIKPLYYQQYHRFGLYRLNFRRDAVNKINSIVERRSGMSNVVDSNMLDNNTLWAIINTIYFKGTWQYPFDITKTRNASFTNKYGTKTVPMMNVVTKLQGNTITIDDEEYDMVRLPYKDANISMYLAIGDNMTHFTDSITAAKLDYWSFQLGNKVYNLKLPKFSIENKRDIKSIAEMMAPSMFNPDNASFKHMTRDPLYIYKMFQNAKIDVDEQGTVAEASTIMVATARSSPEKLEFNTPFVFIIRHDITGFILFMGKVESP (서열 식별 번호: 15).
본원에서 사용된 바와 같이, "K3L"은 오르토폭스바이러스 (예를 들면, 백시니아, 예를 들면, Copenhagen) 유전자, 이를 테면, PKR 억제제를 인코드하는 유전자를 지칭한다. 백시니아 바이러스의 Copenhagen 균주에서 예시적인 K3L 유전자(UniProtKB 데이터베이스 항목 P20639로 부여됨)에 의해 인코드된 단백질 서열의 예들이 하기에서 재현된다:
MLAFCYSLPNAGDVIKGRVYEKDYALYIYLFDYPHSEAILAESVKMHMDRYVEYRDKLVGKTVKVKVIRVDYTKGYIDVNYKRMCRHQ (서열 식별 번호: 16).
본원에서 사용된 바와 같이, "K4L"은 오르토폭스바이러스 (예를 들면, 백시니아, 예를 들면, Copenhagen) 유전자, 이를 테면, DNA 변형 뉴클레아제 (예를 들면, DNA 니킹(nicking) 효소)를 인코드하는 유전자를 지칭한다. 백시니아 바이러스의 Copenhagen 균주에서 예시적인 K4L 유전자(UniProtKB 데이터베이스 항목 P20537로 부여됨)에 의해 인코드된 단백질 서열의 예들이 하기에서 재현된다:
MNPDNTIAVITETIPIGMQFDKVYLSTFNMWREILSNTTKTLDISSFYWSLSDEVGTNFGTIILNEIVQLPKRGVRVRVAVNKSNKPLKDVERLQMAGVEVRYIDITNILGGVLHTKFWISDNTHIYLGSANMDWRSLTQVKELGIAIFNNRNLAADLTQIFEVYWYLGVNNLPYNWKNFYPSYYNTDHPLSINVSGVPHSVFIASAPQQLCTMERTNDLTALLSCIRNASKFVYVSVMNFIPIIYSKAGKILFWPYIEDELRR전술한RQVSVKLLISCWQRSSFIMRNFLRSIAMLKSKNIDIEVKLFIVPDADPPIPYSRVNHAKYMVTDKTAYIGTSNWTGNYFTDTCGASINITPDDGLGLRQQLEDIFMRDWNSKYSYELYDTSPTKRCKLLKNMKQCTNDIYCDEIQPEKEIPEYSLE (서열 식별 번호: 17).
본원에서 사용된 바와 같이, "K5L"은 오르토폭스바이러스 (예를 들면, 백시니아, 예를 들면, Copenhagen) 유전자, 이를 테면, 모노글리세리드 리파제를 인코드하는 추정(putative) 유전자를 지칭한다. 백시니아 바이러스의 Copenhagen 균주에서 예시적인 K5L 유전자(UniProtKB 데이터베이스 항목 P21084로 부여됨)에 의해 인코드된 단백질 서열의 예들이 하기에서 재현된다:
MGATISILASYDNPNLFTAMILMSPLVNADAVSRLNLLAAKLMGTITPNAPVGKLCPESVSRDMDKVYKYQYDPLINHEKIKAGFASQVLKATNKVRKIISKINTPRLSYSREQTMRLVMFQVHIISCNMQIVIEK (서열 식별 번호: 18).
본원에서 사용된 바와 같이, "K6L"은 오르토폭스바이러스 (예를 들면, 백시니아, 예를 들면, Copenhagen) 유전자, 이를 테면, 모노글리세리드 리파제를 인코드하는 추정(putative) 유전자를 지칭한다. 백시니아 바이러스의 Copenhagen 균주에서 예시적인 K6L 유전자(UniProtKB 데이터베이스 항목 P68465로 부여됨)에 의해 인코드된 단백질 서열의 예들이 하기에서 재현된다:
MSANCMFNLDNDYIYWKPITYPKALVFISHGAGKHSGRYDELAENISSLGILVFSHDHIGHGRSNGEKMMIDDFGTARGNY (서열 식별 번호: 19).
본원에서 사용된 바와 같이, "K7R"은 오르토폭스바이러스 (예를 들면, 백시니아, 예를 들면, Copenhagen) 유전자, 이를 테면, NF-κB 및 IRF3의 억제제를 인코드하는 유전자를 지칭한다. 백시니아 바이러스의 Copenhagen 균주에서 예시적인 K7R 유전자(UniProtKB 데이터베이스 항목 P68467로 부여됨)에 의해 인코드된 단백질 서열의 예들이 하기에서 재현된다:
MATKLDYEDAVFYFVDDDKICSRDSIIDLIDEYITWRNHVIVFNKDITSCGRLYKELMKFDDVAIRYYGIDKINEIVEAMSEGDHYINFTKVHDQESLFATIGICAKITEHWGYKKISESRFQSLGNITDLMTDDNINILILFLEKKLN (서열 식별 번호: 20).
본원에서 사용된 바와 같이, "M1L"은 오르토폭스바이러스 (예를 들면, 백시니아, 예를 들면, Copenhagen) 유전자, 이를 테면, Ankyrin 반복 단백질.반복 단백질을 인코드하는 유전자를 지칭한다. 백시니아 바이러스의 Copenhagen 균주에서 예시적인 M1L 유전자(UniProtKB 데이터베이스 항목 P20640으로 부여됨)에 의해 인코드된 단백질 서열의 예들이 하기에서 재현된다:
MIFVIESKLLQIYRNRNRNINFYTTMDNIMSAEYYLSLYAKYNSKNLDVFRNMLQAIEPSGNNYHILHAYCGIKGLDERFVEELLHRGYSPNETDDDGNYPLHIASKINNNRIVAMLLTHGADPNACDKHNKTPLYYLSGTDDEVIERINLLVQYGAKINNSVDEEGCGPLLACTDPSERVFKKIMSIGFEARIVDKFGKNHIHRHLMSDNPKASTISWMMKLGISPSKPDHDGNTPLHIVCSKTVKNVDIIDLLLPSTDVNKQNKFGDSPLTLLIKTLSPAHLINKLLSTSNVITDQTVNICIFYDRDDVLEIINDKGKQYDSTDFKMAVEVGSIRCVKYLLDNDIICEDAMYYAVLSEYETMVDYLLFNHFSVDSVVNGHTCMSECVRLNNPVILSKLMLHNPTSETMYLTMKAIEKDKLDKSIIIPFIAYFVLMHPDFCKNRRYFTSYKRFVTDYVHEGVSYEVFDDYF (서열 식별 번호: 21).
본원에서 사용된 바와 같이, "M2L"은 오르토폭스바이러스 (예를 들면, 백시니아, 예를 들면, Copenhagen) 유전자, 이를 테면, NF-κB 및 아팝토시스의 억제제를 인코드하는 유전자를 지칭한다. 백시니아 바이러스의 Copenhagen 균주에서 예시적인 M2L 유전자(UniProtKB 데이터베이스 항목 Q1PJ18로 부여됨)에 의해 인코드된 단백질 서열의 예들이 하기에서 재현된다:
MVYKLVLLFCIASLGYSVEYKNTICPPRQDYRYWYFAAELTIGVNYDINSTIIGECHMSESYIDRNANIVLTGYGLEINMTIMDTDQRFVAAAEGVGKDNKLSVLLFTTQRLDKVHHNISVTITCMEMNCGTTKYDSDLPESIHKSSSCDITINGSCVTCVNLETDPTKINPHYLHPKDKYLYHNSEYGMRGSYGVTFIDELNQCLLDIKELSYDICYRE (서열 식별 번호: 22).
본원에서 사용된 바와 같이, "N1L"은 오르토폭스바이러스 (예를 들면, 백시니아, 예를 들면, Copenhagen) 유전자, 이를 테면, NF-κB 및 아팝토시스를 억제하는 BCL-2-유사 단백질을 인코드하는 유전자를 지칭한다. 백시니아 바이러스의 Copenhagen 균주에서 예시적인 N1L 유전자(UniProtKB 데이터베이스 항목 P21054로 부여됨)에 의해 인코드된 단백질 서열의 예들이 하기에서 재현된다:
MRTLLIRYILWRNDNDQTYYNDDFKKLMLLDELVDDGDVCTLIKNMRMTLSDGPLLDRLNQPVNNIEDAKRMIAISAKVARDIGERSEIRWEESFTILFRMIETYFDDLMIDLYGEK (서열 식별 번호: 23).
본원에서 사용된 바와 같이, "N2L"은 오르토폭스바이러스 (예를 들면, 백시니아, 예를 들면, Copenhagen) 유전자, 이를 테면, IRF3의 억제제를 인코드하는 유전자를 지칭한다. 백시니아 바이러스의 Copenhagen 균주에서 예시적인 N2L 유전자(UniProtKB 데이터베이스 항목 P20641로 부여됨)에 의해 인코드된 단백질 서열의 예들이 하기에서 재현된다:
MTSSAMDNNEPKVLEMVYDATILPEGSSMDPNIMDCINRHINMCIQRTYSSSIIAILNRFLTMNKDELNNTQCHIIKEFMTYEQMAIDHYGEYVNAILYQIRKRPNQHHTIDLFKKIKRTPYDTFKVDPVEFVKKVIGFVSILNKYKPVYSYVLYENVLYDEFKCFINYVETKYF (서열 식별 번호: 26).
본원에서 기술된 유전자의 코딩 서열 (CDSs)의 예시적인 Copenhagen 균주 뉴클레오티드 서열은 하기 표 42에서 제시된다. 예시적인 야생형 Copenhagen 균주 백시니아 바이러스 게놈의 뉴클레오티드 서열 또한 하기 표 42에서 제시된다. 또다른 예시적인 야생형 Copenhagen 균주 백시니아 바이러스 게놈은 표 46에서 식별된 뉴클레오티드의 다형성(polymorphisms)중 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개, 20개, 또는 모두를 갖는, 서열 식별 번호: 590 (표 42에서 제시됨)이다. 특정 구체예들에서, 본원에서 기술된 유전자들의 CDS는 표 42에서 제시된 뉴클레오티드 서열과 동일하지만, 표 46에서 식별된 1, 2, 3개, 또는 그 이상의 뉴클레오티드 다형성을 갖는다.
4. 도면의 간단한 설명
도 1에서는 오르토폭스바이러스 바이러스 균주들을 비롯한 59가지 수두바이러스 균주의 계통발생학적 분석을 보여준다.
도 2는 상이한 종양 유형의 5 가지 백시니아 바이러스의 계대 후 상이한 바이러스 균주의 풍성도(abundances)를 보여준다.
도 3은 다양한 상이한 환자 종양 코어에서 복제하는 백시니아 야생형 균주의 능력을 나타낸다.
도 4는 상이한 백시니아 야생형 균주들의 플라크(plaque) 크기 측정을 나타낸다.
도 5는 5p 결손 (CopMD5p) 그리고 3p 결손 (CopMD3p)의 게놈 구조를 보여준다. CopMD5p 및 CopMD3p를 교배하여 CopMD5p3p를 만들었다.
도 6은 다양한 투여량(doses)으로 Copenhagen 또는 CopMD5p3p의 감염 후, 암 세포 사멸을 보여주는 히트맵(heatmap)을 나타낸다.
도 7은 4가지 상이한 암 세포주에서 Copenhagen 및 CopMD5p3p 복제의 성장 곡선을 나타낸다.
도 8은 환자 생체외(ex vivo) 샘플에서 적정에 의해 나타낸, Copenhagen 및 CopMD5p3p의 복제 능력을 나타낸다.
도 9에서는 상기 변형된 CopMD5p3p 바이러스들은 부모계 바이러스와 상이한 플라크를 형성함을 보여준다. CopMD5p3p 플라크는 눈에 보이는 합포체 (세포 융합)와 함께, 중앙이 훨씬 더 투명하다.
도 10에서는 CopMD5p3p가 786-O 세포에서 합포체 (세포 융합)를 유도함을 보여준다.
도 11에서는 CopMD5p3p는 Copenhagen 야생형과 유사하게 종양 성장을 제어할 수 있지만, 체중 감소를 야기하지 않음을 보여준다.
도 12에서는 CopMD5p3p는 티미딘 키나제의 종양용해성 녹-아웃(knockout)을 숨기고 있는 다른 두 가지 백시니아 균주 (Copenhagen 및 Wyeth)와 비교하였을 때, 수두 병변 형성을 일으키지 않음을 보여준다.
도 13은 누드 CD-1 마우스에 전신 투여 후, 백시니아의 IVIS 생체-분포를 보여준다. 루시퍼라제 인코딩 CopMD5p3p (TK KO)은 종양 특이적이며, 표적-외 조직에서는 복제되지 않는다.
도 14는 전신 투여 후, 백시니아의 생체-분포를 보여준다. CopMD5p3p는 다른 종양용해성 백시니아와 유사하게 종양에서는 복제되지만, 표적-외 조직/장기에서는 복제가 덜 된다.
도 15에서는 인간 PBMCs에서 백시니아의 면역원성을 보여준다. 인간 선천적 면역 세포를 활성화시키는 CopMD5p3p의 능력은 야생형 Copenhagen의 능력보다 더 강력하다.
도 16에서는 마우스 비장세포에서 백시니아의 면역원성을 보여준다. 마우스 선천적 면역 세포를 활성화시키는 CopMD5p3p의 능력은 Copenhagen의 능력보다 더 강력하다.
도 17은 인간 세포에서 백시니아의 면역원성을 보여준다. NF-kB 면역 전사 인자를 활성화시키는 CopMD5p3p의 능력은 Copenhagen 또는 VVdd보다는 더 강력하지만, 그러나 MG-1의 능력과는 유사하다.
도 18은 공격적 흑색종 모델 (C57BL6 마우스에서 B16-F10 동계성(syngeneic) 흑색종 모델)에서 면역 체크포인트 억제제 항-CTLA-4 항체와의 시너지 효과를 나타낸다. 백시니아 및 면역 체크포인트 억제제 항-CTLA-4 항체로 처치된 면역 컴피턴트(competent) 뮤린 모델에서 생존에 의해 측정된 생체내 효능.
도 19는 면역 체크포인트 억제제 항-CTLA-4 항체와의 시너지 효과를 나타낸다. 백시니아 및 면역 체크포인트 억제제 항-CTLA-4 항체로 처치된 면역 컴피턴트 뮤린 모델에서 종양 성장 (상부 열) 그리고 생존 (하부 열)의해 측정된 생체내 효능. CopMD5p3p (좌측 컬럼)은 종양용해성 Copenhagen TK KO (우측 컬럼)과 비교된다.
도 20은 면역 체크포인트 억제제 항-PD1 항체와의 시너지 효과를 나타낸다. 백시니아 및 면역 체크포인트 억제제 항-PD1 항체로 처치된 면역 컴피턴트 뮤린 모델에서 종양 성장 (상부 열) 그리고 생존 (하부 열)의해 측정된 생체내 효능. CopMD5p3p (좌측 컬럼)은 종양용해성 Copenhagen TK KO (우측 컬럼)과 비교된다.
도 21은 면역 체크포인트 억제제 항-PD1 항체 및 항-CTLA-4 항체와의 시너지 효과를 나타낸다. 백시니아 및 면역 체크포인트 억제제 항-PD1 항체와 항-CTLA-4 항체로 처치된 면역 컴피턴트 뮤린 모델에서 종양 성장 (상부 열) 그리고 생존 (하부 열)의해 측정된 생체내 효능. CopMD5p3p (좌측 컬럼)은 종양용해성 Copenhagen TK KO (우측 컬럼)과 비교된다.
도 22는 이를 테면, 5'("5p") 주요 결손 유전자좌 (좌) 그리고 3'("3p") 주요 결손 유전자좌 (우)를 품고 있는 변형된 Copenhagen 백시니아 바이러스 벡터)변형된 수두바이러스 벡터 (예를 들면, 변형된 백시니아 바이러스 벡터) 생산을 위한 계획을 나타낸다. 5p 표적화 구조체는 C2L에 대해 1 kb의 상동성 영역, 이어서 형질전환유전자를 발현시키는 eGFP, 그리고 F3L에 대해 1 kb의 상동성 영역으로 구성된다. 3p 표적화 구조체는 B14R에 대해 729bp의 상동성 영역, 이어서 형질전환유전자를 발현시키는 mCherry, 그리고 B29R에 대해 415bp의 상동성 영역으로 구성된다.
도 23에서는 야생형 Copenhagen 백시니아 바이러스와 몇 가지 변형된 Copenhagen 백시니아 비리온의 다양한 세포주들에서 증식되는 능력을 보여준다.
도 24에서는 크리스탈 바이올렛 (상부 패널) 그리고 알라마르 블루(Alamar Blue) 검증 (하부 패널)에 의해 평가하였을 때, 다양한 세포주들에서 야생형 Copenhagen 백시니아 바이러스와 몇 가지 변형된 Copenhagen 백시니아 비리온의 세포독성 효과를 보여준다. 하단 패널에 나타낸 차트의 x 축을 따라 각 세포주에 대해 나열된 균주의 순서는 다음과 같다: 좌측에서 우측 방향으로, CopMD5p, CopMD5p3p, CopMD3p, 그리고 CopWT (야생형 Copenhagen 백시니아 균주).
도 25는 마우스에게 투여될 때, 야생형 Copenhagen 백시니아 바이러스와 몇 가지 변형된 Copenhagen 백시니아 비리온의 분포를 나타낸다.
도 26은 자연 킬러 (NK) 세포를 활성화시키고, 항-종양 면역력을 촉진시키는 야생형 Copenhagen 백시니아 바이러스와 몇 가지 변형된 Copenhagen 백시니아 비리온의 능력을 나타낸다.
도 27은 HT29 세포에 대항하는 NK 세포-매개된 과립소실을 강화시키고, NK 세포 활성의 측정 및 항-종양 면역력을 강화시키는 야생형 Copenhagen 백시니아 바이러스와 몇 가지 변형된 Copenhagen 백시니아 비리온의 능력을 나타낸다.
도 28은 T-세포를 발화시켜 항-종양 면역 반응을 개시하도록 하는 야생형 Copenhagen 백시니아 바이러스와 몇 가지 변형된 Copenhagen 백시니아 비리온의 능력을 나타낸다.
도 29는 감염의 시작점으로부터 멀리있는 위치로 확산되는 야생형 Copenhagen 백시니아 바이러스와 몇 가지 변형된 Copenhagen 백시니아 비리온의 능력을 나타낸다.
도 30은 바이러스 증식의 척도인 플라크를 형성하는 야생형 Copenhagen 백시니아 바이러스와 몇 가지 변형된 Copenhagen 백시니아 비리온의 능력을 나타낸다.
도 31은 U2OS 세포에서 플라크를 형성하는 야생형 Copenhagen 백시니아 바이러스와 몇 가지 변형된 Copenhagen 백시니아 비리온의 능력을 나타낸다.
도 32는 786-O 세포에서 플라크를 형성하는 야생형 Copenhagen 백시니아 바이러스와 몇 가지 변형된 Copenhagen 백시니아 비리온의 능력을 나타낸다.
도 33은 다양한 수두바이러스 게놈에서 CopMD5p3p에서 결손된 유전자의 백분율을 나타낸다.
도 34는 정상 세포주 대비 암 세포주에서 SKV-B8R+ 바이러스의 감염을 나타낸다.
도 35에서는 SKV-B8R+는 인터페론 신호생성을 손상시키지 않음을 보여준다.
도 36은 FLt3-LG 및 IL-12-TM 형질전환유전자에 대한 B8R 재조합 표적화 전략을 나타낸다.
도 37에서는 SKV (CopMD5p3p-B8R-)가 SKV-B8R+과 비교하여, 종양 대조군에서 유사한 효능을 가짐을 보여준다.
도 38은 기본 야생형 Copenhagen 백시니아 바이러스 게놈과 비교하여, SKV-123v2 종양용해성 플랫폼의 게놈 조직화(organization)를 나타내는 선형 데생 계략도를 보여준다. FRT는 Flippase 효소의 인지 부위다.
도 39는 2가지 면역치료요법적 형질전환유전자와 항체를 발현시키도록 공작된 SKV를 나타낸다.
도 40은 2가지 면역치료요법적 형질전환유전자와 항체를 발현시키도록 공작된 SKV를 나타낸다.
도 41은 형질전환유전자를 발현시키는 다양한 SKV 바이러스에 대해 정량화된 hIL-12 생산을 나타낸다.
도 42는 SKV-123, SKV-3 및 대조군 SKV-eGFP 바이러스 (감염-후 24 hrs MOI 0.1)로 감염된 생 Vero 세포 상에서 IL-12p35 (IL-12) 세포 표면 면역착색을 나타낸다.
도 43은 막 결합된 뮤린 IL-12 p35를 발현시키는 SKV는 뮤린 종양 제어에 더 큰 효능을 갖는다는 것을 보여준다.
도 44에서는 다양한 백시니아 균주에서 공작된 주요 이중 결손은 시험관내에서 암 세포 사멸을 강화시킨다는 것을 보여준다.
도 45는 다양한 백시니아 균주로 감염된 HeLa 세포의 표현형 특징을 보여준다.
도 46에서는 5p3p 백시니아 균주는 야생형 균주와 비교하여 체중 감소를 유도하지 않음을 보여준다. 마우스 체질량 측정을 보여준다. CD-1 누드 마우스는 꼬리정맥내 주사를 통하여 1 x 107 pfu (입자 형성 단위)로 처치받았고, 표시된 시점에서 측정되었다.
도 47에서는 5p3p 백시니아 균주는 야생형 균주와 비교하여 수두 병변을 유도하지 않음을 보여준다. 수두 병변의 존재 측정을 보여준다. CD-1 누드 마우스는 꼬리정맥내 주사를 통하여 1 x 107 pfu의 표시된 백시니아 바이러스 균주로 처치받았다. 주사-후 6일차 수두 병변에 대해 마우스를 검사하였다.
도 48A-48H는 0.05 ml의 SKV (백시니아 바이러스) (투여량: 1e7 pfu)로 처리받은 8 마리 이종이식편 마우스 모델의 시간 경과에 따른 종양 용적 및 생존 곡선을 나타낸다. 도 48A는 MiaPaca-2 이종이식편 마우스 모델에서 얻은 결과를 보여준다. 도 48B는 PC-3 이종이식편 마우스 모델에서 얻은 결과를 보여준다. 도 48C는 U87MG 이종이식편 모델에서 얻은 결과를 보여준다. 도 49D는 UACC-62 이종이식편 모델에서 얻은 결과를 보여준다. 도 48E는 UM-UC-3 이종이식편 마우스 모델에서 얻은 결과를 보여준다. 도 48F는 COLO-205 이종이식편 마우스 모델에서 얻은 결과를 보여준다. 도 48G는 NCI-H460 이종이식편 마우스 모델에서 얻은 결과를 보여준다. 도 48H는 HT29 이종이식편 모델에서 얻은 결과를 보여준다.
도 49는 인간 CTLA-4를 발현시키는 트랜스제닉 C57/BL6 마우스 모델의 시간 경과에 따른 평균 종양 용적 및 생존 곡선을 나타내고, MC-38 종양은 활성 형질전환유전자를 인코딩하는 SKV로 처치받았다. 그 다음 동물들을 5개 치료군으로 무작위화시키고, PBS, PBS + 이필리무맙(Ipilimumab), SKV, 항-PD-1 항체, SKV-12m3v2-eGFP 또는 SKV-12m3v2-eGFP + 항-PD-1 항체로 처치하였다. SKV-12m3v2-eGFP는 인간 항-CTLA-4 항체, 인간 Flt3 리간드 및 마우스 IL-12 TM p35를 발현시키는 SKV이다.
도 50은 도 49에서 나타낸 실험의 개별 종양 용적을 보여준다.
도 51은 막-결합된 마우스 IL-12 p35 또는 막-결합된 마우스 IL-12 p70으로 처치된 MC-38 마우스 모델에서 시간 경과에 따른 종양 용적을 나타낸다.
도 52는 바이러스 (SKVB8R+TK- 인코딩 OVA 항원)를 이용한 이형성(heterologous) 프라임:부스트 종양용해성 백신 요법(regimen) 결과를 나타낸다.
도 53A-53F는 CT26 종양 세포들이 생착된 BALB/c 마우스에게 SKV-123v2를 IT 또는 IV로 투여하고 혈청 및 조직에서 FLT3-L 및 항-CTLA-4 항체의 생체분포를 보여준다.
도 54A-54D는 CT26 종양 세포들이 생착된 BALB/c 마우스에게 SKV-123v2를 IT 또는 IV로 투여하고 혈청 및 조직에서 IL-12-TM의 생체분포를 보여준다.
도 55는 SKV-123v2로 처치된 또는 처치되지 않은 NGS 마우스에서 종양 용적을 보여준다.
도 56은 SKV-123v2 바이러스-감염된 암 세포 (상부 패널) 그리고 정상 세포 (하부 패널)의 알라마르 블루 생존 동력학을 보여준다.
도 57은 SKV-123v2 바이러스-감염된 암 세포 (786-O, HeLa) 그리고 정상 세포 (PBMC, PrEC)에서 바이러스 복제 성장 곡선을 보여준다.
도 58은 SKV-123v2 바이러스-감염된 암 세포 (786-O, HeLa) 그리고 정상 세포 (PBMC, PrEC)의 항-CTLA-4 항체 발현 수준을 보여준다.
도 59는 SKV-123v2 바이러스-감염된 암 세포 (786-O, HeLa) 그리고 정상 세포 (PBMC, PrEC)에서 FLT3L 발현 수준을 보여준다.
도 60은 형질전환유전자를 백시니아 바이러스 게놈 안으로 삽입시키기 위한 표적화 구조체의 고안을 나타낸다. 구조체는 PCR 증폭 산물이거나 또는 박테리아 플라스미드의 일부분일 수 있다. 형질전환유전자 숫자 뿐만 아니라 이들의 방향 또한 가변성있다. 형질전환유전자와 형광 마커의 순서도 가변성있다.
도 1에서는 오르토폭스바이러스 바이러스 균주들을 비롯한 59가지 수두바이러스 균주의 계통발생학적 분석을 보여준다.
도 2는 상이한 종양 유형의 5 가지 백시니아 바이러스의 계대 후 상이한 바이러스 균주의 풍성도(abundances)를 보여준다.
도 3은 다양한 상이한 환자 종양 코어에서 복제하는 백시니아 야생형 균주의 능력을 나타낸다.
도 4는 상이한 백시니아 야생형 균주들의 플라크(plaque) 크기 측정을 나타낸다.
도 5는 5p 결손 (CopMD5p) 그리고 3p 결손 (CopMD3p)의 게놈 구조를 보여준다. CopMD5p 및 CopMD3p를 교배하여 CopMD5p3p를 만들었다.
도 6은 다양한 투여량(doses)으로 Copenhagen 또는 CopMD5p3p의 감염 후, 암 세포 사멸을 보여주는 히트맵(heatmap)을 나타낸다.
도 7은 4가지 상이한 암 세포주에서 Copenhagen 및 CopMD5p3p 복제의 성장 곡선을 나타낸다.
도 8은 환자 생체외(ex vivo) 샘플에서 적정에 의해 나타낸, Copenhagen 및 CopMD5p3p의 복제 능력을 나타낸다.
도 9에서는 상기 변형된 CopMD5p3p 바이러스들은 부모계 바이러스와 상이한 플라크를 형성함을 보여준다. CopMD5p3p 플라크는 눈에 보이는 합포체 (세포 융합)와 함께, 중앙이 훨씬 더 투명하다.
도 10에서는 CopMD5p3p가 786-O 세포에서 합포체 (세포 융합)를 유도함을 보여준다.
도 11에서는 CopMD5p3p는 Copenhagen 야생형과 유사하게 종양 성장을 제어할 수 있지만, 체중 감소를 야기하지 않음을 보여준다.
도 12에서는 CopMD5p3p는 티미딘 키나제의 종양용해성 녹-아웃(knockout)을 숨기고 있는 다른 두 가지 백시니아 균주 (Copenhagen 및 Wyeth)와 비교하였을 때, 수두 병변 형성을 일으키지 않음을 보여준다.
도 13은 누드 CD-1 마우스에 전신 투여 후, 백시니아의 IVIS 생체-분포를 보여준다. 루시퍼라제 인코딩 CopMD5p3p (TK KO)은 종양 특이적이며, 표적-외 조직에서는 복제되지 않는다.
도 14는 전신 투여 후, 백시니아의 생체-분포를 보여준다. CopMD5p3p는 다른 종양용해성 백시니아와 유사하게 종양에서는 복제되지만, 표적-외 조직/장기에서는 복제가 덜 된다.
도 15에서는 인간 PBMCs에서 백시니아의 면역원성을 보여준다. 인간 선천적 면역 세포를 활성화시키는 CopMD5p3p의 능력은 야생형 Copenhagen의 능력보다 더 강력하다.
도 16에서는 마우스 비장세포에서 백시니아의 면역원성을 보여준다. 마우스 선천적 면역 세포를 활성화시키는 CopMD5p3p의 능력은 Copenhagen의 능력보다 더 강력하다.
도 17은 인간 세포에서 백시니아의 면역원성을 보여준다. NF-kB 면역 전사 인자를 활성화시키는 CopMD5p3p의 능력은 Copenhagen 또는 VVdd보다는 더 강력하지만, 그러나 MG-1의 능력과는 유사하다.
도 18은 공격적 흑색종 모델 (C57BL6 마우스에서 B16-F10 동계성(syngeneic) 흑색종 모델)에서 면역 체크포인트 억제제 항-CTLA-4 항체와의 시너지 효과를 나타낸다. 백시니아 및 면역 체크포인트 억제제 항-CTLA-4 항체로 처치된 면역 컴피턴트(competent) 뮤린 모델에서 생존에 의해 측정된 생체내 효능.
도 19는 면역 체크포인트 억제제 항-CTLA-4 항체와의 시너지 효과를 나타낸다. 백시니아 및 면역 체크포인트 억제제 항-CTLA-4 항체로 처치된 면역 컴피턴트 뮤린 모델에서 종양 성장 (상부 열) 그리고 생존 (하부 열)의해 측정된 생체내 효능. CopMD5p3p (좌측 컬럼)은 종양용해성 Copenhagen TK KO (우측 컬럼)과 비교된다.
도 20은 면역 체크포인트 억제제 항-PD1 항체와의 시너지 효과를 나타낸다. 백시니아 및 면역 체크포인트 억제제 항-PD1 항체로 처치된 면역 컴피턴트 뮤린 모델에서 종양 성장 (상부 열) 그리고 생존 (하부 열)의해 측정된 생체내 효능. CopMD5p3p (좌측 컬럼)은 종양용해성 Copenhagen TK KO (우측 컬럼)과 비교된다.
도 21은 면역 체크포인트 억제제 항-PD1 항체 및 항-CTLA-4 항체와의 시너지 효과를 나타낸다. 백시니아 및 면역 체크포인트 억제제 항-PD1 항체와 항-CTLA-4 항체로 처치된 면역 컴피턴트 뮤린 모델에서 종양 성장 (상부 열) 그리고 생존 (하부 열)의해 측정된 생체내 효능. CopMD5p3p (좌측 컬럼)은 종양용해성 Copenhagen TK KO (우측 컬럼)과 비교된다.
도 22는 이를 테면, 5'("5p") 주요 결손 유전자좌 (좌) 그리고 3'("3p") 주요 결손 유전자좌 (우)를 품고 있는 변형된 Copenhagen 백시니아 바이러스 벡터)변형된 수두바이러스 벡터 (예를 들면, 변형된 백시니아 바이러스 벡터) 생산을 위한 계획을 나타낸다. 5p 표적화 구조체는 C2L에 대해 1 kb의 상동성 영역, 이어서 형질전환유전자를 발현시키는 eGFP, 그리고 F3L에 대해 1 kb의 상동성 영역으로 구성된다. 3p 표적화 구조체는 B14R에 대해 729bp의 상동성 영역, 이어서 형질전환유전자를 발현시키는 mCherry, 그리고 B29R에 대해 415bp의 상동성 영역으로 구성된다.
도 23에서는 야생형 Copenhagen 백시니아 바이러스와 몇 가지 변형된 Copenhagen 백시니아 비리온의 다양한 세포주들에서 증식되는 능력을 보여준다.
도 24에서는 크리스탈 바이올렛 (상부 패널) 그리고 알라마르 블루(Alamar Blue) 검증 (하부 패널)에 의해 평가하였을 때, 다양한 세포주들에서 야생형 Copenhagen 백시니아 바이러스와 몇 가지 변형된 Copenhagen 백시니아 비리온의 세포독성 효과를 보여준다. 하단 패널에 나타낸 차트의 x 축을 따라 각 세포주에 대해 나열된 균주의 순서는 다음과 같다: 좌측에서 우측 방향으로, CopMD5p, CopMD5p3p, CopMD3p, 그리고 CopWT (야생형 Copenhagen 백시니아 균주).
도 25는 마우스에게 투여될 때, 야생형 Copenhagen 백시니아 바이러스와 몇 가지 변형된 Copenhagen 백시니아 비리온의 분포를 나타낸다.
도 26은 자연 킬러 (NK) 세포를 활성화시키고, 항-종양 면역력을 촉진시키는 야생형 Copenhagen 백시니아 바이러스와 몇 가지 변형된 Copenhagen 백시니아 비리온의 능력을 나타낸다.
도 27은 HT29 세포에 대항하는 NK 세포-매개된 과립소실을 강화시키고, NK 세포 활성의 측정 및 항-종양 면역력을 강화시키는 야생형 Copenhagen 백시니아 바이러스와 몇 가지 변형된 Copenhagen 백시니아 비리온의 능력을 나타낸다.
도 28은 T-세포를 발화시켜 항-종양 면역 반응을 개시하도록 하는 야생형 Copenhagen 백시니아 바이러스와 몇 가지 변형된 Copenhagen 백시니아 비리온의 능력을 나타낸다.
도 29는 감염의 시작점으로부터 멀리있는 위치로 확산되는 야생형 Copenhagen 백시니아 바이러스와 몇 가지 변형된 Copenhagen 백시니아 비리온의 능력을 나타낸다.
도 30은 바이러스 증식의 척도인 플라크를 형성하는 야생형 Copenhagen 백시니아 바이러스와 몇 가지 변형된 Copenhagen 백시니아 비리온의 능력을 나타낸다.
도 31은 U2OS 세포에서 플라크를 형성하는 야생형 Copenhagen 백시니아 바이러스와 몇 가지 변형된 Copenhagen 백시니아 비리온의 능력을 나타낸다.
도 32는 786-O 세포에서 플라크를 형성하는 야생형 Copenhagen 백시니아 바이러스와 몇 가지 변형된 Copenhagen 백시니아 비리온의 능력을 나타낸다.
도 33은 다양한 수두바이러스 게놈에서 CopMD5p3p에서 결손된 유전자의 백분율을 나타낸다.
도 34는 정상 세포주 대비 암 세포주에서 SKV-B8R+ 바이러스의 감염을 나타낸다.
도 35에서는 SKV-B8R+는 인터페론 신호생성을 손상시키지 않음을 보여준다.
도 36은 FLt3-LG 및 IL-12-TM 형질전환유전자에 대한 B8R 재조합 표적화 전략을 나타낸다.
도 37에서는 SKV (CopMD5p3p-B8R-)가 SKV-B8R+과 비교하여, 종양 대조군에서 유사한 효능을 가짐을 보여준다.
도 38은 기본 야생형 Copenhagen 백시니아 바이러스 게놈과 비교하여, SKV-123v2 종양용해성 플랫폼의 게놈 조직화(organization)를 나타내는 선형 데생 계략도를 보여준다. FRT는 Flippase 효소의 인지 부위다.
도 39는 2가지 면역치료요법적 형질전환유전자와 항체를 발현시키도록 공작된 SKV를 나타낸다.
도 40은 2가지 면역치료요법적 형질전환유전자와 항체를 발현시키도록 공작된 SKV를 나타낸다.
도 41은 형질전환유전자를 발현시키는 다양한 SKV 바이러스에 대해 정량화된 hIL-12 생산을 나타낸다.
도 42는 SKV-123, SKV-3 및 대조군 SKV-eGFP 바이러스 (감염-후 24 hrs MOI 0.1)로 감염된 생 Vero 세포 상에서 IL-12p35 (IL-12) 세포 표면 면역착색을 나타낸다.
도 43은 막 결합된 뮤린 IL-12 p35를 발현시키는 SKV는 뮤린 종양 제어에 더 큰 효능을 갖는다는 것을 보여준다.
도 44에서는 다양한 백시니아 균주에서 공작된 주요 이중 결손은 시험관내에서 암 세포 사멸을 강화시킨다는 것을 보여준다.
도 45는 다양한 백시니아 균주로 감염된 HeLa 세포의 표현형 특징을 보여준다.
도 46에서는 5p3p 백시니아 균주는 야생형 균주와 비교하여 체중 감소를 유도하지 않음을 보여준다. 마우스 체질량 측정을 보여준다. CD-1 누드 마우스는 꼬리정맥내 주사를 통하여 1 x 107 pfu (입자 형성 단위)로 처치받았고, 표시된 시점에서 측정되었다.
도 47에서는 5p3p 백시니아 균주는 야생형 균주와 비교하여 수두 병변을 유도하지 않음을 보여준다. 수두 병변의 존재 측정을 보여준다. CD-1 누드 마우스는 꼬리정맥내 주사를 통하여 1 x 107 pfu의 표시된 백시니아 바이러스 균주로 처치받았다. 주사-후 6일차 수두 병변에 대해 마우스를 검사하였다.
도 48A-48H는 0.05 ml의 SKV (백시니아 바이러스) (투여량: 1e7 pfu)로 처리받은 8 마리 이종이식편 마우스 모델의 시간 경과에 따른 종양 용적 및 생존 곡선을 나타낸다. 도 48A는 MiaPaca-2 이종이식편 마우스 모델에서 얻은 결과를 보여준다. 도 48B는 PC-3 이종이식편 마우스 모델에서 얻은 결과를 보여준다. 도 48C는 U87MG 이종이식편 모델에서 얻은 결과를 보여준다. 도 49D는 UACC-62 이종이식편 모델에서 얻은 결과를 보여준다. 도 48E는 UM-UC-3 이종이식편 마우스 모델에서 얻은 결과를 보여준다. 도 48F는 COLO-205 이종이식편 마우스 모델에서 얻은 결과를 보여준다. 도 48G는 NCI-H460 이종이식편 마우스 모델에서 얻은 결과를 보여준다. 도 48H는 HT29 이종이식편 모델에서 얻은 결과를 보여준다.
도 49는 인간 CTLA-4를 발현시키는 트랜스제닉 C57/BL6 마우스 모델의 시간 경과에 따른 평균 종양 용적 및 생존 곡선을 나타내고, MC-38 종양은 활성 형질전환유전자를 인코딩하는 SKV로 처치받았다. 그 다음 동물들을 5개 치료군으로 무작위화시키고, PBS, PBS + 이필리무맙(Ipilimumab), SKV, 항-PD-1 항체, SKV-12m3v2-eGFP 또는 SKV-12m3v2-eGFP + 항-PD-1 항체로 처치하였다. SKV-12m3v2-eGFP는 인간 항-CTLA-4 항체, 인간 Flt3 리간드 및 마우스 IL-12 TM p35를 발현시키는 SKV이다.
도 50은 도 49에서 나타낸 실험의 개별 종양 용적을 보여준다.
도 51은 막-결합된 마우스 IL-12 p35 또는 막-결합된 마우스 IL-12 p70으로 처치된 MC-38 마우스 모델에서 시간 경과에 따른 종양 용적을 나타낸다.
도 52는 바이러스 (SKVB8R+TK- 인코딩 OVA 항원)를 이용한 이형성(heterologous) 프라임:부스트 종양용해성 백신 요법(regimen) 결과를 나타낸다.
도 53A-53F는 CT26 종양 세포들이 생착된 BALB/c 마우스에게 SKV-123v2를 IT 또는 IV로 투여하고 혈청 및 조직에서 FLT3-L 및 항-CTLA-4 항체의 생체분포를 보여준다.
도 54A-54D는 CT26 종양 세포들이 생착된 BALB/c 마우스에게 SKV-123v2를 IT 또는 IV로 투여하고 혈청 및 조직에서 IL-12-TM의 생체분포를 보여준다.
도 55는 SKV-123v2로 처치된 또는 처치되지 않은 NGS 마우스에서 종양 용적을 보여준다.
도 56은 SKV-123v2 바이러스-감염된 암 세포 (상부 패널) 그리고 정상 세포 (하부 패널)의 알라마르 블루 생존 동력학을 보여준다.
도 57은 SKV-123v2 바이러스-감염된 암 세포 (786-O, HeLa) 그리고 정상 세포 (PBMC, PrEC)에서 바이러스 복제 성장 곡선을 보여준다.
도 58은 SKV-123v2 바이러스-감염된 암 세포 (786-O, HeLa) 그리고 정상 세포 (PBMC, PrEC)의 항-CTLA-4 항체 발현 수준을 보여준다.
도 59는 SKV-123v2 바이러스-감염된 암 세포 (786-O, HeLa) 그리고 정상 세포 (PBMC, PrEC)에서 FLT3L 발현 수준을 보여준다.
도 60은 형질전환유전자를 백시니아 바이러스 게놈 안으로 삽입시키기 위한 표적화 구조체의 고안을 나타낸다. 구조체는 PCR 증폭 산물이거나 또는 박테리아 플라스미드의 일부분일 수 있다. 형질전환유전자 숫자 뿐만 아니라 이들의 방향 또한 가변성있다. 형질전환유전자와 형광 마커의 순서도 가변성있다.
5.
상세한 설명
본 발명은 유전적으로 변형된 오르토폭스바이러스, 이를 테면, 백시니아 바이러스 (예를 들면, Copenhagen, Western Reserve, Wyeth, Lister, EM63, ACAM2000, LC16m8, CV-1, 변형된 백시니아 Ankara (MVA), Dairen I, GLV-1h68, IHD-J, L-IVP, LC16m8, LC16mO, Tashkent, Tian Tan, 그리고 WAU86/88-1 바이러스), 뿐만 아니라 다양한 암의 치료용으로 상기 동일한 것들의 용도를 특징으로 한다. 본 발명은 오르토폭스바이러스, 이를 테면, Copenhagen, Western Reserve, Wyeth, Lister, EM63, ACAM2000, LC16m8, CV-1, 변형된 백시니아 Ankara (MVA), Dairen I, GLV-1h68, IHD-J, L-IVP, LC16m8, LC16mO, Tashkent, Tian Tan, 그리고 WAU86/88-1 바이러스들은 이들 바이러스가 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, B20R, K ORF A, K ORF B, B ORF E, B ORF F, 그리고 B ORF G 유전자와 B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R ITRs의 복사본(copies)중 하나 또는 그 이상, 또는 이들 모두에서 결손이 함유되도록 공작될 때, 상당히 개선된 종양용해성 활성, 종양에서 복제, 감염성, 면역 회피, 종양 지속성, 외인성 DNA 서열 통합 능력, 그리고 대규모 제조를 위한 편의성을 나타낸다는 발견에 일부 기초한다. 본 발명의 다양한 구체예들에서, 상기 변형된 오르토폭스바이러스는 B8R 유전자의 결손을 함유한다. 마우스에서 비활성이지만, B8R 유전자는 인간 IFN-γ의 항바이러스 활성을 중화시킨다. 다양한 구체예들에서, 적어도 하나의 형질전환유전자는 B8R 유전자의 좌 (현재 결손된)로 상동성 재조합 표적화 전략을 통하여 후속적으로 삽입된다. 다양한 구체예들에서, 상기 변형된 오르토폭스바이러스는 다음 세 가지 형질전환유전자들중 적어도 하나를 발현시킨다: IL-12-TM, FLT3-L 및 항-CLTA4 항체. 본원에서 사용된 바와 같이, FLT3L, Flt-3 리간드, FLT3LG, FLT3-LG, FLT3-L은 동의어로써, 모두 FMS-유사 티로신 키나제 3 리간드를 지칭한다.
본원에 기재된 오르토폭스바이러스는 광범위의 암을 비롯한 다양한 다양한 세포 증식 장애를 치료하기 위해 환자에게, 이를 테면, 포유류 환자 (예를 들면, 인간 환자)에게 투여될 수 있다. 오르토폭스바이러스와 이에 대한 유전적 변형, 뿐만 아니라 유전적으로 변형된 오르토폭스바이러스를 생산하고, 증식시키는 방법, 그리고 이를 환자에게 투여하는 기술에 대해 이어지는 섹션에서 기술된다.
5.1. 수두바이러스
일반적으로, 수두바이러스 바이러스성 입자는 타원형 또는 벽돌 모양으로, 일부 길이는 200-400 nm로 측정된다. 외부 표면은 병렬로 이랑을 이루고 있으며, 때로는 나선형으로 배열된다. 이러한 입자들은 상당히 복합적이며, 100개 이상의 별개 단백질을 함유한다. 세포외 형태는 두 개 막 (EEV: 세포외 외피로 싸인 비리온)을 함유하는 반면, 세포내 입자들은 오로지 내측 막 (IMV: 세포내 성숙 비리온)만을 갖는다. 외측 표면은 단단히 압축된 핵 단백질로 구성된 코어를 둘러싸는 지질과 단백질로 구성된다. 항원적으로 수두바이러스는 또한 매우 복잡하여, 특이적 항체 및 교차-반응 항체를 모두 유도한다. 상기 입자에는 적어도 10 개의 효소가 존재하며, 주로 핵산 대사/게놈 복제와 관련된다.
야생형 수두바이러스의 게놈은 선형의, 이중-스트랜드의 DNA(130-300 Kbp)이다. 상기 게놈의 단부들은 몇 가지 텐덤(tandem) 반복 서열과 함께, 말단 헤어핀 루프를 갖는다. 몇 가지 수두바이러스 게놈이 서열화되었고, 대부분의 필수 유전자들은 해당 게놈의 중앙 부분에 위치하며, 한편 비-필수 유전자들은 단부들에 위치한다. 상기 수두바이러스 게놈에는 약 250개 유전자가 있다. 상기 바이러스는 게놈 복제에 필요한 모든 기능을 획득하기에 충분한 복잡성을 가지기 때문에, 복제는 세포질에서 일어난다. 세포에 의해 약간의 기여가 있지만, 이러한 기여의 속성은 명확하지 않다. 그러나, 비록 수두바이러스 유전자 발현 및 게놈 복제는 제핵된(enucleated) 세포에서 발생되지만, 성숙이 차단되며, 이는 세포에 의한 일부 역할을 나타낸다.
일단 세포의 세포질 안으로 진입되면, 코어에 연합된 바이러스 효소들에 의해 유전자 발현이 실행된다. 발현은 2 단계로 나뉘는데: 게놈의 약 50 %를 차지하고 게놈 복제 전에 발현되는 조기(early) 유전자와 게놈 복제 후에 발현되는 후기(late) 유전자. 발현의 시간적 제어는 후기 프로모터에 의해 제공되며, 이는 DNA 복제 활성에 의존적이다. 게놈 복제는 자가-촉발(self-priming)이 관여하는 것으로 보이며, 고-분자량 콘카타머(concatemers) 형성으로 이어지는데, 이것은 후속적으로 절단되고, 복구되어 바리어스 게놈을 만든다. 바이러스 어셈블리는 세포골격내에서 일어나며, 아마도 세포골격성 단백질 (예를 들면, 액틴-결합 단백질)과의 상호작용이 관여할 것이다. 바이러스 입자들로 성숙되는 합포체는 세포질 안에서 형성된다. 세포 간 확산은 감염 확산을 위한 대체 기전을 제공할 수 있다. 전반적으로, 이러한 크고 복잡한 바이러스의 복제는 다소 빠르며, 평균 12 시간이 소요된다. 적어도 9가지 상이한 수두바이러스가 인간에서 질환을 일으키지만, 바리올라르(variola) 바이러스와 백시니아가 가장 잘 알려져 있다. 바리올라르 균주는 바리올라르 메이져 (사망자수의 25-30%)와 바리올라르 마이너 (동일한 증상이지만, 사망률은 1% 미만)로 나뉜다. 두 바이러스에 대한 감염은 호흡 경로에 의해 자연적으로 발생하며, 전신적이며 다양한 증상을 나타내지만, 특히 바리올라르의 특징적인 농포와 피부 반흔이 가장 특징적이다.
5.2. 오르토폭스바이러스
5.2.1. 백시니아 바이러스
백시니아 바이러스는 수두바이러스 또는 폭스비리데(Poxviridae) 패밀리, 코르도폭시리네(Chordopoxyirinae) 하위패밀리, 그리고 오르토폭스바이러스 속(genus)의 구성원이다. 오르토폭스바이러스는 코르도폭시리네(Chordopoxyirinae) 하위패밀리의 다른 구성원보다는 상대적으로 더 동질성이며, 뚜렷하게 다른, 그러나 밀접하게 관련된 11가지 종들이 내포되며, 여기에는 백시니아 바이러스, 바리올라르 바이러스 (천연두(smallpox)의 원인균), 우두 바이러스, 버팔로수두 바이러스, 원숭이수두 바이러스, 마우스수두 바이러스와 말수두 바이러스 종 뿐만 아니라 기타 다른 종이 내포된다(Moss, 1996 참고).
백시니아 바이러스는 크고, 복잡한 외피로 싸인 바이러스로써 선형 이중-스트랜드의 DNA 게놈(약 190 kb, 대략적으로 250개 유전자 유전자를 인코딩)을 갖는다. 백시니아는 천연두를 근절하는 백신으로서의 역할로 잘-알려져 있다. 천연두 근절-후, 과학자들은 유전자를 생물학적 조직에 전달하기 위한 도구(유전자 치료요법 및 유전 공학)로 백시니아를 사용하는 방법을 연구해왔다. 백시니아 바이러스는 숙주 세포의 세포질에서만 복제되므로, DNA 바이러스 중에서 독특하다. 따라서, 바이러스 DNA 복제에 필요한 다양한 효소 및 단백질을 인코드하기 위해 큰 게놈이 필요하다. 복제 동안, 백시니아는 이들의 외측 막과는 상이한 몇 가지 감염성 형태를 만든다: 세포내 성숙 비리온 (IMV), 세포내 외피로 싸인 비리온 (IEV), 세포-연합된 외피로 싸인 비리온 (CEV), 그리고 세포외 외피로 싸인 비리온 (EEV). IMV는 가장 풍부한 전염성 형태이며, 숙주-간의 확산을 담당하는 것으로 생각된다. 다른 한편으로, CEV는 세포-간 확산에 중요한 역할을 하는 것으로 생각되며, EEV는 숙주 유기체 내에서 원거리 전파에 중요한 역할을 한다고 생각된다.
백시니아 바이러스는 우두의 원인이 되는 바이러스와 밀접하게 관련된다. 백시니아의 정확한 기원은 알려져 있지 않지만, 그러나 가장 일반적인 견해는 백시니아 바이러스, 우두 바이러스, 그리고 바리올라르 바이러스 (천연두의 원인 물질)는 모두 공통적인 조상 바이러스로부터 유래되었다는 것이다. 백시니아 바이러스가 말에서 원래 단리되었다는 추측 또한 있다. 백시니아 바이러스 감염은 건강한 개체에서는 경미하고, 일반적으로 무증상이지만, 그러나 경미한 발진 및 발열을 야기할 수 있고, 치사율은 극히 낮다. 백시니아 바이러스 감염에 대항하여 생성된 면역 반응은 치명적 천연두 감염으로부터 해당 사람을 보호한다. 이러한 이유로, 백시니아 바이러스를 천연두에 대항하는 생-바이러스 백신으로 이용하였다. 백시니아 바이러스 백신은 천연두 바이러스를 함유하지 있지 않기 때문에 안전하지만, 때로는 특정 합병증 및/또는 백신 부작용이 발생할 수 있는데, 특히 백신이 면역저하된 경우, 발생할 수 있다.
백시니아 바이러스의 예시적인 균주에는 Copenhagen, Western Reserve, Wyeth, Lister, EM63, ACAM2000, LC16m8, CV-1, 변형된 백시니아 Ankara (MVA), Dairen I, GLV-1h68, IHD-J, L-IVP, LC16m8, LC16mO, Tashkent, Tian Tan, 그리고 WAU86/88-1가 내포되지만, 이에 국한되지 않는다.
5.2.2. 티미딘 키나제 돌연변이체 및 헤마글루티닌 돌연변이체
현재 몇 가지 임상 연구는 바이러스 티미딘 키나제 (TK) 유전자에 결손을 품고 있는 종양용해성 바이러스로써 백시니아 바이러스를 테스트한다. 이러한 결손은 해당 바이러스를 감쇠시켜, 해당 바이러스가 DNA 복제를 위한 세포성 티미딘 키나제 활성에 의존하게 되고, 따라서 바이러스 증식된다. 세포성 티미딘 키나제는 대부분의 정상 조직에서 낮은 수준으로 발현되며, 많은 암 세포에서는 상승된 수준으로 발현된다. 대사 표적화를 통해, TK-바이러스는 대사율이 높은 세포 (예를 들면, 건강한 세포 또는 종양 세포)에서 성장할 수 있으며, 티미딘 키나제 수치가 낮은 세포에서는 잘 성장하지 않을 것이다. 진행이 중단된(quiescent) 종양 세포들 (예를 들면, 암 줄기 세포)이 존재하기 때문에, TK-바이러스는 화학치료요법이 대체로 효과가 없는 것과 같이, 이들 암세포 집단을 죽이는 능력이 손상될 가능성이 있다. 일부 구체예들에서, 본 명세서에서 기술된 변형된 바이러스 벡터는 바이러스 합성 기전 (TK를 비롯한)을 유지하며, 진행이 중단된 암 세포에서 증식될 수 있다. 이러한 구체예들에서, 본 명세서의 바이러스 변형으로 해당 바이러스가 TK 또는 다른 DNA 신진대사 효소들 (예를 들면, 리보뉴클레오티드 환원효소)의 결손 없이 매우 선택성이 되는 것을 허용할 수 있고, 그리고 대사율이 낮은 종양에서 더 효과적일 수 있다. 일부 구체예들에서, 본 명세서에서 기술된 변형된 바이러스 벡터는 기능성 TK 유전자 (예를 들면, 야생형 TK 유전자)를 포함한다. 다른 구체예들에서, 본 명세서에서 기술된 변형된 바이러스 벡터는 TK 유전자에 결손(들) 또는 기능-소실 돌연변이(들)을 포함한다.
유사하게, 상기 백시니아 바이러스의 헤마글루티닌 (HA) 유전자의 비활성화는 해당 바이러스의 감쇠를 초래할 수 있다. 일부 구체예들에서, 본 명세서에서 기술된 변형된 바이러스 벡터는 기능성 HA 유전자 (예를 들면, 야생형 HA 유전자)를 포함한다. 다른 구체예들에서, 본 명세서에서 기술된 변형된 바이러스 벡터는 HA 유전자에 결손(들) 또는 기능-소실 돌연변이(들)을 포함한다.
특이적 구체예에서, 본 명세서에서 기술된 변형된 바이러스 벡터는 기능성 TK 유전자 (예를 들면, 야생형 TK 유전자) 그리고 기능성 HA 유전자 (예를 들면, 야생형 HA 유전자)를 포함한다. 또다른 특이적 구체예에서, 본 명세서에서 기술된 변형된 바이러스 벡터는 기능성 TK 유전자 (예를 들면, 야생형 TK 유전자) 그리고 HA 유전자에 결손(들) 또는 기능-소실 돌연변이(들)를 포함한다. 또다른 특이적 구체예에서, 본 명세서에서 기술된 변형된 바이러스 벡터는 TK 유전자에 결손(들) 또는 기능-소실 돌연변이(들)과 기능성 HA 유전자 (예를 들면, 야생형 HA 유전자)를 포함한다. 또다른 특이적 구체예에서, 본 명세서에서 기술된 변형된 바이러스 벡터는 TK 유전자에 결손(들) 또는 기능-소실 돌연변이(들)과 HA 유전자에 결손(들) 또는 기능-소실 돌연변이(들)를 포함한다.
5.2.3. 재조합 오르토폭스바이러스 게놈
한 측면에서, 다음 유전자들에서 결손을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에서 제공된다: (a) 다음 유전자들: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B8R, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서 결손; (b) 3'역전된 말단 반복 (ITR)에서 다음 유전자들에 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R; 그리고 (c) 세포독성 T-림프구 연합된 단백질 4 (CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자; 이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 상기 결손은 부분 결손이다.
특정 구체예들에서, 상기 핵산은 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터, pS 프로모터, 또는 LEO 프로모터다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터 (예를 들면, 조기 H5R 프로모터, 후기 H5R 프로모터, 또는 조기 H5R 프로모터 및 후기 H5R 프로모터).
일부 구체예들에서, 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 동일한 방향을 갖는 경우, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 동일한 방향을 갖는 경우, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자에 대해 역 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 반대 방향을 갖는 경우, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈의 5'단부에 더 근접해 있는 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 반대 방향을 갖는 경우, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈의 3'단부에 더 근접해 있는 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 특이적 구체예에서, 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 C2L 유전자 및 F3L 유전자다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 C3L 유전자 및 F4L 유전자다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 B14R 유전자 및 B29R 유전자다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 B13R 유전자 및 B29R 유전자다. 여전히 또다른 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 인접한 내생적 백시니아 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 인접한 내생적 백시니아 유전자는 B13R 유전자다.
바람직한 구체예들에서, 본 명세서에서 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 유전자 (즉, 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 유전자)는 해당 뉴클레오티드 서열에 가장 근접한 두 개의 내생적 유전자다(해당 뉴클레오티드 서열의 상류 하나와 다른 하류). 상기 내생적 유전자는 부분 유전자 또는 전장 유전자일 수 있다.
특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 이필리무맙의 6개 상보성-결정 영역 (CDRs)을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 211에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는 아미노산 서열을 인코드한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시된다.
또다른 측면에서, 다음 유전자들에서 결손을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에서 제공된다: (a) 다음 유전자들 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서 결손; (b) 3'ITR의 다음 유전자에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R; (c) CTLA-4 (예를 들면, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자; 그리고 (d) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터, pS 프로모터, 또는 LEO 프로모터이며; 이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이다. 특이적 구체예들에서, 상기 핵산은 B8R 유전자내 결손을 더 포함한다.
특정 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터 (예를 들면, 조기 H5R 프로모터, 후기 H5R 프로모터, 또는 조기 H5R 프로모터 및 후기 H5R 프로모터)이다.
일부 구체예들에서, 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 동일한 방향을 갖는 경우, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 동일한 방향을 갖는 경우, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자에 대해 역 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 반대 방향을 갖는 경우, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈의 5'단부에 더 근접해 있는 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 반대 방향을 갖는 경우, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈의 3'단부에 더 근접해 있는 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 특이적 구체예에서, 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 C2L 유전자 및 F3L 유전자다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 C3L 유전자 및 F4L 유전자다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 B14R 유전자 및 B29R 유전자다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 B13R 유전자 및 B29R 유전자다. 여전히 또다른 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 인접한 내생적 백시니아 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 인접한 내생적 백시니아 유전자는 B13R 유전자다.
특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 이필리무맙의 6개 상보성-결정 영역 (CDRs)을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 211에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는 아미노산 서열을 인코드한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시된다.
또다른 측면에서, 다음 유전자들에서 결손을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에서 제공된다: (a) 다음 유전자들 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B8R, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서 결손; (b) 3'ITR의 다음 유전자에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R; 그리고 (c) 인터루킨 12 (IL-12) 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자; 이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이다.
특정 구체예들에서, 상기 핵산은 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 후기(late) 프로모터다. 추가적인 특이적 구체예에서, 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열, F17R 프로모터, 또는 D13L 프로모터를 포함한다. 또다른 추가적인 특이적 구체예에서, 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 또다른 구체예에서, F17R 프로모터는 서열 식별 번호: 563의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 여전히 또다른 구체예에서, D13L 프로모터는 서열 식별 번호: 562의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
일부 구체예들에서, 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 동일한 방향을 갖는 경우, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 동일한 방향을 갖는 경우, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자에 대해 역 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 반대 방향을 갖는 경우, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈의 5'단부에 더 근접해 있는 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 반대 방향을 갖는 경우, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈의 3'단부에 더 근접해 있는 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 특이적 구체예에서, 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 C2L 유전자 및 F3L 유전자다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 C3L 유전자 및 F4L 유전자다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 B14R 유전자 및 B29R 유전자다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 B13R 유전자 및 B29R 유전자다. 여전히 또다른 구체예에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 인접한 내생적 백시니아 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 인접한 내생적 백시니아 유전자는 B13R 유전자다.
특이적 구체예들에서, IL-12 폴리펩티드는 막-결합된다. 특이적 구체예들에서, IL-12 폴리펩티드는 IL-12 p35 (예를 들면, 인간 IL-12 p35), IL-12 p40 (예를 들면, 인간 IL-12 p40) 또는 IL-12 p70 (예를 들면, 인간 IL-12 p70)을 포함한다. 특이적 구체예들에서, IL-12 폴리펩티드는 막-결합되며, IL-12 p35 (예를 들면, 인간 IL-12 p35), 또는 IL-12 p70 (예를 들면, 인간 IL-12 p70), 그리고 막경유 도메인과 세포질 도메인 (예를 들면, B7-1, TNFα, 또는 FLT3L의 막경유 도메인과 세포질 도메인)을 포함한다. 특이적 구체예들에서, IL-12 폴리펩티드는 서열 식별 번호: 212에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시된다.
또다른 측면에서, 다음 유전자들에서 결손을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에서 제공된다: (a) 다음 유전자들 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서 결손; (b) 3'ITR의 다음 유전자에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R; (c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자; 그리고 (d) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 후기 프로모터이며; 이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이다. 특이적 구체예들에서, 상기 핵산은 B8R 유전자내 결손을 더 포함한다.
특정 구체예들에서, 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열, F17R 프로모터, 또는 D13L 프로모터를 포함한다. 특이적 구체예에서, 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 또다른 구체예에서, F17R 프로모터는 서열 식별 번호: 563의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 여전히 또다른 구체예에서, D13L 프로모터는 서열 식별 번호: 562의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
일부 구체예들에서, 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 동일한 방향을 갖는 경우, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 동일한 방향을 갖는 경우, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자에 대해 역 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 반대 방향을 갖는 경우, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈의 5'단부에 더 근접해 있는 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 반대 방향을 갖는 경우, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈의 3'단부에 더 근접해 있는 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 특이적 구체예에서, 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 C2L 유전자 및 F3L 유전자다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 C3L 유전자 및 F4L 유전자다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 B14R 유전자 및 B29R 유전자다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 B13R 유전자 및 B29R 유전자다. 여전히 또다른 구체예에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 인접한 내생적 백시니아 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 인접한 내생적 백시니아 유전자는 B13R 유전자다.
특이적 구체예들에서, IL-12 폴리펩티드는 막-결합된다. 특이적 구체예들에서, IL-12 폴리펩티드는 IL-12 p35 (예를 들면, 인간 IL-12 p35), IL-12 p40 (예를 들면, 인간 IL-12 p40) 또는 IL-12 p70 (예를 들면, 인간 IL-12 p70)을 포함한다. 특이적 구체예들에서, IL-12 폴리펩티드는 막-결합되며, IL-12 p35 (예를 들면, 인간 IL-12 p35), 또는 IL-12 p70 (예를 들면, 인간 IL-12 p70), 그리고 막경유 도메인과 세포질 도메인 (예를 들면, B7-1, TNFα, 또는 FLT3L의 막경유 도메인과 세포질 도메인)을 포함한다. 특이적 구체예들에서, IL-12 폴리펩티드는 서열 식별 번호: 212에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시된다.
또다른 측면에서, 다음 유전자들에서 결손을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에서 제공된다: (a) 다음 유전자들 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B8R, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서 결손; (b) 3'ITR의 다음 유전자에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R; 그리고 (c) FMS-유사 티로신 키나제 3 리간드 (FLT3L)를 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자; 이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이다.
특정 구체예들에서, 상기 핵산은 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터, B19R 프로모터, E3L 프로모터, F11L 프로모터, 및/또는 B2R 프로모터다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B19R 프로모터다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다. 특정 구체예에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, E3L 프로모터는 서열 식별 번호: 567의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, F11L 프로모터는 서열 식별 번호: 568의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, B2R 프로모터는 서열 식별 번호: 569의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
일부 구체예들에서, 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 동일한 방향을 갖는 경우, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 동일한 방향을 갖는 경우, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자에 대해 역 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 반대 방향을 갖는 경우, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈의 5'단부에 더 근접해 있는 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 반대 방향을 갖는 경우, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈의 3'단부에 더 근접해 있는 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 특이적 구체예에서, 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 C2L 유전자 및 F3L 유전자다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 C3L 유전자 및 F4L 유전자다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 B14R 유전자 및 B29R 유전자다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 B13R 유전자 및 B29R 유전자다. 여전히 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 인접한 내생적 백시니아 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 인접한 내생적 백시니아 유전자는 B13R 유전자다.
특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L은 FLT3L의 가용성 형태다. 특정 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L은 인간 FLT3L의 가용성 형태다. 특정 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L은 GenBank 수탁 번호. U03858.1에서 제시된 인간 FLT3L의 가용성 형태다. 예를 들면, 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L은 전체 FLT3L 막경유 (예를 들면, GenBank 수탁 번호. U03858.1에서 제시된 인간 FLT3L의 막경유 도메인)이 결여된다. 다른 실시예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인 (예를 들면, GenBank 수탁 번호. U03858.1에서 제시된 인간 FLT3L의 막경유 도메인)의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%가 결여된다. 한 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인과 전체 FLT3L 세포질 도메인이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인과 전체 FLT3L 세포질 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%가 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L은 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 그리고 FLT3L 세포질 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%가 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인과 FLT3L 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기중 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개가 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인과 FLT3L 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기 1개, 2개, 3개, 또는 4개가 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유 도메인과 세포질 도메인은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인과 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인과 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인과 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유 도메인과 세포외 도메인은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%와 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%과 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%과 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유 도메인과 세포외 도메인은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 전체 세포질 도메인, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 전체 세포질 도메인, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 전체 세포질 도메인, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유, 세포질 및 세포외 도메인들은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 전체 세포질 도메인, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 전체 세포질 도메인, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 전체 세포질 도메인, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유, 세포질 및 세포외 도메인들은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 세포질 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 세포질 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 세포질 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유, 세포질 및 세포외 도메인들은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 세포질 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 세포질 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 세포질 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유, 세포질 및 세포외 도메인들은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유, 세포질 및 세포외 도메인들은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유, 세포질 및 세포외 도메인들은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L은 X7 아이소폼(isoform)이며, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에는 Lyman et al., 1994, Blood 83:2795-2801에 기술된 바와 같이, 179개-뉴클레오티드 서열이 결여된다. 특이적 구체예들에서, FLT3L는 서열 식별 번호: 213의 아미노산 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시된다.
또다른 측면에서, 다음 유전자들에서 결손을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에서 제공된다: (a) 다음 유전자들 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서 결손; (b) 3'ITR의 다음 유전자에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R; (c) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자; 그리고 (d) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터, B19R 프로모터, E3L 프로모터, F11L 프로모터, 및/또는 B2R 프로모터이며; 이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이다. 특이적 구체예들에서, 상기 핵산은 B8R 유전자내 결손을 더 포함한다. 특정 구체예에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, E3L 프로모터는 서열 식별 번호: 567의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, F11L 프로모터는 서열 식별 번호: 568의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, B2R 프로모터는 서열 식별 번호: 569의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
특정 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터다. 특정 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B19R 프로모터다. 특정 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다. 특정 구체예에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
일부 구체예들에서, 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 동일한 방향을 갖는 경우, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 동일한 방향을 갖는 경우, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자에 대해 역 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 반대 방향을 갖는 경우, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈의 5'단부에 더 근접해 있는 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 반대 방향을 갖는 경우, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈의 3'단부에 더 근접해 있는 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 특이적 구체예에서, 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 C2L 유전자 및 F3L 유전자다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 C3L 유전자 및 F4L 유전자다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 B14R 유전자 및 B29R 유전자다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 B13R 유전자 및 B29R 유전자다. 여전히 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 인접한 내생적 백시니아 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 인접한 내생적 백시니아 유전자는 B13R 유전자다.
특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L은 FLT3L의 가용성 형태다. 특정 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L은 인간 FLT3L의 가용성 형태다. 특정 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L은 GenBank 수탁 번호. U03858.1에서 제시된 인간 FLT3L의 가용성 형태다. 예를 들면, 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L은 전체 FLT3L 막경유 도메인(예를 들면, GenBank 수탁 번호. U03858.1에서 제시된 인간 FLT3L의 막경유 도메인)이 결여된다. 다른 실시예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인 (예를 들면, GenBank 수탁 번호. U03858.1에서 제시된 인간 FLT3L의 막경유 도메인)의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%가 결여된다. 한 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인과 전체 FLT3L 세포질 도메인이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인과 전체 FLT3L 세포질 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%가 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 그리고 FLT3L 세포질 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%가 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인과 FLT3L 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기중 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개가 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인과 FLT3L 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기 1개, 2개, 3개, 또는 4개가 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유 도메인과 세포질 도메인은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인과 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인과 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인과 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유 도메인과 세포외 도메인은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%와 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%과 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%과 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유 도메인과 세포외 도메인은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 전체 세포질 도메인, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 전체 세포질 도메인, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 전체 세포질 도메인, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유, 세포질 및 세포외 도메인들은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 전체 세포질 도메인, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 전체 세포질 도메인, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 전체 세포질 도메인, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유, 세포질 및 세포외 도메인들은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 세포질 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 세포질 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 세포질 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유, 세포질 및 세포외 도메인들은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 세포질 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 세포질 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 세포질 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유, 세포질 및 세포외 도메인들은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유, 세포질 및 세포외 도메인들은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유, 세포질 및 세포외 도메인들은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L은 X7 아이소폼(isoform)이며, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에는 Lyman et al., 1994, Blood 83:2795-2801에 기술된 바와 같이, 179개-뉴클레오티드 서열이 결여된다. 특이적 구체예들에서, FLT3L는 서열 식별 번호: 213의 아미노산 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시된다.
또다른 측면에서, 다음 유전자들에서 결손을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에서 제공된다: (a) 다음 유전자들 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B8R, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서 결손; (b) 3'ITR의 다음 유전자에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R; (c) CTLA-4(예를 들면, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자; 그리고 (d) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자; 이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이다.
특정 구체예들에서, 상기 핵산은 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터, pS 프로모터, 또는 LEO 프로모터다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터 (예를 들면, 조기 H5R 프로모터, 후기 H5R 프로모터, 또는 조기 H5R 프로모터 및 후기 H5R 프로모터)이다.
특정 구체예들에서, 상기 핵산은 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 후기(late) 프로모터다. 추가적인 특이적 구체예에서, 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열, F17R 프로모터, 또는 D13L 프로모터를 포함한다. 또다른 추가적인 특이적 구체예에서, 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 또다른 구체예에서, F17R 프로모터는 서열 식별 번호: 563의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 여전히 또다른 구체예에서, D13L 프로모터는 서열 식별 번호: 562의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
일부 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 동일한 방향을 갖는 경우, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 동일한 방향을 갖는 경우, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자에 대해 역 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 반대 방향을 갖는 경우, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈의 5'단부에 더 근접해 있는 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 반대 방향을 갖는 경우, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈의 3'단부에 더 근접해 있는 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 C2L 유전자 및 F3L 유전자다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 C3L 유전자 및 F4L 유전자다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 B14R 유전자 및 B29R 유전자다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 B13R 유전자 및 B29R 유전자다. 여전히 또다른 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 인접한 내생적 백시니아 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 인접한 내생적 백시니아 유전자는 B13R 유전자다. 일부 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 동일한 방향을 갖는 경우, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 동일한 방향을 갖는 경우, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자에 대해 역 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 반대 방향을 갖는 경우, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈의 5'단부에 더 근접해 있는 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 반대 방향을 갖는 경우, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈의 3'단부에 더 근접해 있는 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 C2L 유전자 및 F3L 유전자다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 C3L 유전자 및 F4L 유전자다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 B14R 유전자 및 B29R 유전자다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 B13R 유전자 및 B29R 유전자다. 여전히 또다른 구체예에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 인접한 내생적 백시니아 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 인접한 내생적 백시니아 유전자는 B13R 유전자다.
특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 이필리무맙의 6개 상보성-결정 영역 (CDRs)을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 211에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는 아미노산 서열을 인코드한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시된다.
특이적 구체예들에서, IL-12 폴리펩티드는 막-결합된다. 특이적 구체예들에서, IL-12 폴리펩티드는 IL-12 p35 (예를 들면, 인간 IL-12 p35), IL-12 p40 (예를 들면, 인간 IL-12 p40) 또는 IL-12 p70 (예를 들면, 인간 IL-12 p70)을 포함한다. 특이적 구체예들에서, IL-12 폴리펩티드는 막-결합되며, IL-12 p35 (예를 들면, 인간 IL-12 p35), 또는 IL-12 p70 (예를 들면, 인간 IL-12 p70), 그리고 막경유 도메인과 세포질 도메인 (예를 들면, B7-1, TNFα, 또는 FLT3L의 막경유 도메인과 세포질 도메인)을 포함한다. 특이적 구체예들에서, IL-12 폴리펩티드는 서열 식별 번호: 212에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시된다.
또다른 측면에서, 다음 유전자들에서 결손을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에서 제공된다: (a) 다음 유전자들 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서 결손; (b) 3'ITR의 다음 유전자에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R; (c) CTLA-4 (예를 들면, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자; 그리고 (d) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자; 이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이며; 그리고 이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다: (i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터, pS 프로모터, 또는 LEO 프로모터이며; 및/또는 (ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 후기 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 상기 핵산은 B8R 유전자내 결손을 더 포함한다.
특정 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터 (예를 들면, 조기 H5R 프로모터, 후기 H5R 프로모터, 또는 조기 H5R 프로모터 및 후기 H5R 프로모터)이다.
특정 구체예들에서, 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열, F17R 프로모터, 또는 D13L 프로모터를 포함한다. 특이적 구체예에서, 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 또다른 구체예에서, F17R 프로모터는 서열 식별 번호: 563의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 여전히 또다른 구체예에서, D13L 프로모터는 서열 식별 번호: 562의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
일부 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 동일한 방향을 갖는 경우, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 동일한 방향을 갖는 경우, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자에 대해 역 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 반대 방향을 갖는 경우, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈의 5'단부에 더 근접해 있는 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 반대 방향을 갖는 경우, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈의 3'단부에 더 근접해 있는 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 C2L 유전자 및 F3L 유전자다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 C3L 유전자 및 F4L 유전자다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 B14R 유전자 및 B29R 유전자다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 B13R 유전자 및 B29R 유전자다. 여전히 또다른 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 인접한 내생적 백시니아 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 인접한 내생적 백시니아 유전자는 B13R 유전자다. 일부 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 동일한 방향을 갖는 경우, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 동일한 방향을 갖는 경우, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자에 대해 역 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 반대 방향을 갖는 경우, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈의 5'단부에 더 근접해 있는 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 반대 방향을 갖는 경우, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈의 3'단부에 더 근접해 있는 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 C2L 유전자 및 F3L 유전자다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 C3L 유전자 및 F4L 유전자다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 B14R 유전자 및 B29R 유전자다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 B13R 유전자 및 B29R 유전자다. 여전히 또다른 구체예에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 인접한 내생적 백시니아 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 인접한 내생적 백시니아 유전자는 B13R 유전자다.
특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 이필리무맙의 6개 상보성-결정 영역 (CDRs)을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 211에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는 아미노산 서열을 인코드한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시된다.
특이적 구체예들에서, IL-12 폴리펩티드는 막-결합된다. 특이적 구체예들에서, IL-12 폴리펩티드는 IL-12 p35 (예를 들면, 인간 IL-12 p35), IL-12 p40 (예를 들면, 인간 IL-12 p40) 또는 IL-12 p70 (예를 들면, 인간 IL-12 p70)을 포함한다. 특이적 구체예들에서, IL-12 폴리펩티드는 막-결합되며, IL-12 p35 (예를 들면, 인간 IL-12 p35), 또는 IL-12 p70 (예를 들면, 인간 IL-12 p70), 그리고 막경유 도메인과 세포질 도메인 (예를 들면, B7-1, TNFα, 또는 FLT3L의 막경유 도메인과 세포질 도메인)을 포함한다. 특이적 구체예들에서, IL-12 폴리펩티드는 서열 식별 번호: 212에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시된다.
또다른 측면에서, 다음 유전자들에서 결손을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에서 제공된다: (a) 다음 유전자들 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B8R, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서 결손; (b) 3'ITR의 다음 유전자에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R; (c) CTLA-4 (예를 들면, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자; 그리고 (d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자; 이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이다.
특정 구체예들에서, 상기 핵산은 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터, pS 프로모터, 또는 LEO 프로모터다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터 (예를 들면, 조기 H5R 프로모터, 후기 H5R 프로모터, 또는 조기 H5R 프로모터 및 후기 H5R 프로모터)이다.
특정 구체예들에서, 상기 핵산은 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터, B19R 프로모터, E3L 프로모터, F11L 프로모터, 및/또는 B2R 프로모터다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B19R 프로모터다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다. 특정 구체예에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, E3L 프로모터는 서열 식별 번호: 567의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, F11L 프로모터는 서열 식별 번호: 568의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, B2R 프로모터는 서열 식별 번호: 569의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
일부 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 동일한 방향을 갖는 경우, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 동일한 방향을 갖는 경우, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자에 대해 역 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 반대 방향을 갖는 경우, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈의 5'단부에 더 근접해 있는 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 반대 방향을 갖는 경우, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈의 3'단부에 더 근접해 있는 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 C2L 유전자 및 F3L 유전자다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 C3L 유전자 및 F4L 유전자다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 B14R 유전자 및 B29R 유전자다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 B13R 유전자 및 B29R 유전자다. 여전히 또다른 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 인접한 내생적 백시니아 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 인접한 내생적 백시니아 유전자는 B13R 유전자다. 일부 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 동일한 방향을 갖는 경우, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 동일한 방향을 갖는 경우, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자에 대해 역 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 반대 방향을 갖는 경우, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈의 5'단부에 더 근접해 있는 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 반대 방향을 갖는 경우, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈의 3'단부에 더 근접해 있는 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 C2L 유전자 및 F3L 유전자이다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 C3L 유전자 및 F4L 유전자이다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 B14R 유전자 및 B29R 유전자이다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 B13R 유전자 및 B29R 유전자이다. 여전히 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 인접한 내생적 백시니아 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 인접한 내생적 백시니아 유전자는 B13R 유전자다.
특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 이필리무맙의 6개 상보성-결정 영역 (CDRs)을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 211에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는 아미노산 서열을 인코드한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시된다.
특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L은 FLT3L의 가용성 형태다. 특정 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L은 인간 FLT3L의 가용성 형태다. 특정 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L은 GenBank 수탁 번호. U03858.1에서 제시된 인간 FLT3L의 가용성 형태다. 예를 들면, 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L은 전체 FLT3L 막경유 (예를 들면, GenBank 수탁 번호. U03858.1에서 제시된 인간 FLT3L의 막경유 도메인)이 결여된다. 다른 실시예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인 (예를 들면, GenBank 수탁 번호. U03858.1에서 제시된 인간 FLT3L의 막경유 도메인)의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%가 결여된다. 한 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인과 전체 FLT3L 세포질 도메인이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인과 전체 FLT3L 세포질 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%가 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 그리고 FLT3L 세포질 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%가 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인과 FLT3L 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기중 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개가 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인과 FLT3L 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기 1개, 2개, 3개, 또는 4개가 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유 도메인과 세포질 도메인은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인과 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인과 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인과 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유 도메인과 세포외 도메인은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%와 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%과 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%과 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유 도메인과 세포외 도메인은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 전체 세포질 도메인, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 전체 세포질 도메인, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 전체 세포질 도메인, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유, 세포질 및 세포외 도메인들은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 전체 세포질 도메인, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 전체 세포질 도메인, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 전체 세포질 도메인, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유, 세포질 및 세포외 도메인들은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 세포질 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 세포질 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 세포질 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유, 세포질 및 세포외 도메인들은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 세포질 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 세포질 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 세포질 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유, 세포질 및 세포외 도메인들은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유, 세포질 및 세포외 도메인들은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유, 세포질 및 세포외 도메인들은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L은 X7 아이소폼(isoform)이며, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에는 Lyman et al., 1994, Blood 83:2795-2801에 기술된 바와 같이, 179개-뉴클레오티드 서열이 결여된다. 특이적 구체예들에서, FLT3L는 서열 식별 번호: 213의 아미노산 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시된다.
또다른 측면에서, 다음 유전자들에서 결손을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에서 제공된다: (a) 다음 유전자들 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서 결손; (b) 3'ITR의 다음 유전자에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R; (c) CTLA-4 (예를 들면, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자; 그리고 (d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자; 이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이며; 그리고 이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다: (i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터, pS 프로모터, 또는 LEO 프로모터이며; 및/또는 (ii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터, B19R 프로모터, E3L 프로모터, F11L 프로모터, 및/또는 B2R 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 상기 핵산은 B8R 유전자내 결손을 더 포함한다. 특정 구체예에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, E3L 프로모터는 서열 식별 번호: 567의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, F11L 프로모터는 서열 식별 번호: 568의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, B2R 프로모터는 서열 식별 번호: 569의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
특정 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터 (예를 들면, 조기 H5R 프로모터, 후기 H5R 프로모터, 또는 조기 H5R 프로모터 및 후기 H5R 프로모터)이다.
특정 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터다. 특정 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B19R 프로모터다. 특정 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다. 특정 구체예에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
일부 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 동일한 방향을 갖는 경우, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 동일한 방향을 갖는 경우, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자에 대해 역 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 반대 방향을 갖는 경우, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈의 5'단부에 더 근접해 있는 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 반대 방향을 갖는 경우, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈의 3'단부에 더 근접해 있는 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 C2L 유전자 및 F3L 유전자다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 C3L 유전자 및 F4L 유전자다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 B14R 유전자 및 B29R 유전자다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 B13R 유전자 및 B29R 유전자다. 여전히 또다른 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 인접한 내생적 백시니아 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 인접한 내생적 백시니아 유전자는 B13R 유전자다. 일부 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 동일한 방향을 갖는 경우, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 동일한 방향을 갖는 경우, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자에 대해 역 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 반대 방향을 갖는 경우, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈의 5'단부에 더 근접해 있는 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 반대 방향을 갖는 경우, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈의 3'단부에 더 근접해 있는 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 C2L 유전자 및 F3L 유전자이다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 C3L 유전자 및 F4L 유전자이다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 B14R 유전자 및 B29R 유전자이다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 B13R 유전자 및 B29R 유전자이다. 여전히 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 인접한 내생적 백시니아 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 인접한 내생적 백시니아 유전자는 B13R 유전자다.
특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 이필리무맙의 6개 상보성-결정 영역 (CDRs)을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 211에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는 아미노산 서열을 인코드한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시된다.
특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L은 FLT3L의 가용성 형태다. 특정 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L은 인간 FLT3L의 가용성 형태다. 특정 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L은 GenBank 수탁 번호. U03858.1에서 제시된 인간 FLT3L의 가용성 형태다. 예를 들면, 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L은 전체 FLT3L 막경유 (예를 들면, GenBank 수탁 번호. U03858.1에서 제시된 인간 FLT3L의 막경유 도메인)이 결여된다. 다른 실시예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인 (예를 들면, GenBank 수탁 번호. U03858.1에서 제시된 인간 FLT3L의 막경유 도메인)의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%가 결여된다. 한 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인과 전체 FLT3L 세포질 도메인이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인과 전체 FLT3L 세포질 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%가 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 그리고 FLT3L 세포질 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%가 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인과 FLT3L 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기중 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개가 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인과 FLT3L 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기 1개, 2개, 3개, 또는 4개가 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유 도메인과 세포질 도메인은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인과 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인과 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인과 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유 도메인과 세포외 도메인은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%와 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%과 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%과 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유 도메인과 세포외 도메인은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 전체 세포질 도메인, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 전체 세포질 도메인, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 전체 세포질 도메인, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유, 세포질 및 세포외 도메인들은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 전체 세포질 도메인, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 전체 세포질 도메인, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 전체 세포질 도메인, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유, 세포질 및 세포외 도메인들은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 세포질 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 세포질 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 세포질 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유, 세포질 및 세포외 도메인들은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 세포질 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 세포질 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 세포질 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유, 세포질 및 세포외 도메인들은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유, 세포질 및 세포외 도메인들은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유, 세포질 및 세포외 도메인들은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L은 X7 아이소폼(isoform)이며, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에는 Lyman et al., 1994, Blood 83:2795-2801에 기술된 바와 같이, 179개-뉴클레오티드 서열이 결여된다. 특이적 구체예들에서, FLT3L는 서열 식별 번호: 213의 아미노산 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시된다.
또다른 측면에서, 다음 유전자들에서 결손을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에서 제공된다: (a) 다음 유전자들 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B8R, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서 결손; (b) 3'ITR의 다음 유전자에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R; (c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자; 그리고 (d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자; 이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이다.
특정 구체예들에서, 상기 핵산은 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 후기(late) 프로모터다. 추가적인 특이적 구체예에서, 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열, F17R 프로모터, 또는 D13L 프로모터를 포함한다. 또다른 추가적인 특이적 구체예에서, 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 또다른 구체예에서, F17R 프로모터는 서열 식별 번호: 563의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 여전히 또다른 구체예에서, D13L 프로모터는 서열 식별 번호: 562의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
특정 구체예들에서, 상기 핵산은 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터, B19R 프로모터, E3L 프로모터, F11L 프로모터, 및/또는 B2R 프로모터다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B19R 프로모터다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다. 특정 구체예에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, E3L 프로모터는 서열 식별 번호: 567의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, F11L 프로모터는 서열 식별 번호: 568의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, B2R 프로모터는 서열 식별 번호: 569의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
일부 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 동일한 방향을 갖는 경우, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 동일한 방향을 갖는 경우, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자에 대해 역 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 반대 방향을 갖는 경우, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈의 5'단부에 더 근접해 있는 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 반대 방향을 갖는 경우, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈의 3'단부에 더 근접해 있는 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 C2L 유전자 및 F3L 유전자다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 C3L 유전자 및 F4L 유전자다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 B14R 유전자 및 B29R 유전자다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 B13R 유전자 및 B29R 유전자다. 여전히 또다른 구체예에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 인접한 내생적 백시니아 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 인접한 내생적 백시니아 유전자는 B13R 유전자다. 일부 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 동일한 방향을 갖는 경우, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 동일한 방향을 갖는 경우, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자에 대해 역 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 반대 방향을 갖는 경우, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈의 5'단부에 더 근접해 있는 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 반대 방향을 갖는 경우, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈의 3'단부에 더 근접해 있는 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 C2L 유전자 및 F3L 유전자이다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 C3L 유전자 및 F4L 유전자이다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 B14R 유전자 및 B29R 유전자이다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 B13R 유전자 및 B29R 유전자이다. 여전히 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 인접한 내생적 백시니아 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 인접한 내생적 백시니아 유전자는 B13R 유전자다.
특이적 구체예들에서, IL-12 폴리펩티드는 막-결합된다. 특이적 구체예들에서, IL-12 폴리펩티드는 IL-12 p35 (예를 들면, 인간 IL-12 p35), IL-12 p40 (예를 들면, 인간 IL-12 p40) 또는 IL-12 p70 (예를 들면, 인간 IL-12 p70)을 포함한다. 특이적 구체예들에서, IL-12 폴리펩티드는 막-결합되며, IL-12 p35 (예를 들면, 인간 IL-12 p35), 또는 IL-12 p70 (예를 들면, 인간 IL-12 p70), 그리고 막경유 도메인과 세포질 도메인 (예를 들면, B7-1, TNFα, 또는 FLT3L의 막경유 도메인과 세포질 도메인)을 포함한다. 특이적 구체예들에서, IL-12 폴리펩티드는 서열 식별 번호: 212에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시된다.
특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L은 FLT3L의 가용성 형태다. 특정 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L은 인간 FLT3L의 가용성 형태다. 특정 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L은 GenBank 수탁 번호. U03858.1에서 제시된 인간 FLT3L의 가용성 형태다. 예를 들면, 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L은 전체 FLT3L 막경유 (예를 들면, GenBank 수탁 번호. U03858.1에서 제시된 인간 FLT3L의 막경유 도메인)이 결여된다. 다른 실시예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인 (예를 들면, GenBank 수탁 번호. U03858.1에서 제시된 인간 FLT3L의 막경유 도메인)의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%가 결여된다. 한 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인과 전체 FLT3L 세포질 도메인이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인과 전체 FLT3L 세포질 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%가 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 그리고 FLT3L 세포질 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%가 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인과 FLT3L 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기중 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개가 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인과 FLT3L 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기 1개, 2개, 3개, 또는 4개가 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유 도메인과 세포질 도메인은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인과 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인과 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인과 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유 도메인과 세포외 도메인은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%와 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%과 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%과 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유 도메인과 세포외 도메인은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 전체 세포질 도메인, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 전체 세포질 도메인, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 전체 세포질 도메인, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유, 세포질 및 세포외 도메인들은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 전체 세포질 도메인, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 전체 세포질 도메인, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 전체 세포질 도메인, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유, 세포질 및 세포외 도메인들은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 세포질 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 세포질 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 세포질 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유, 세포질 및 세포외 도메인들은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 세포질 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 세포질 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 세포질 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유, 세포질 및 세포외 도메인들은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유, 세포질 및 세포외 도메인들은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유, 세포질 및 세포외 도메인들은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L은 X7 아이소폼(isoform)이며, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에는 Lyman et al., 1994, Blood 83:2795-2801에 기술된 바와 같이, 179개-뉴클레오티드 서열이 결여된다. 특이적 구체예들에서, FLT3L는 서열 식별 번호: 213의 아미노산 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시된다.
또다른 측면에서, 다음 유전자들에서 결손을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에서 제공된다: (a) 다음 유전자들 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서 결손; (b) 3'ITR의 다음 유전자에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R; (c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자; 그리고 (d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자; 이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이며; 그리고 이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다: (i) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 후기 프로모터이며; 및/또는 (ii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터, B19R 프로모터, E3L 프로모터, F11L 프로모터, 및/또는 B2R 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 상기 핵산은 B8R 유전자내 결손을 더 포함한다. 특정 구체예에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, E3L 프로모터는 서열 식별 번호: 567의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, F11L 프로모터는 서열 식별 번호: 568의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, B2R 프로모터는 서열 식별 번호: 569의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
특정 구체예들에서, 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열, F17R 프로모터, 또는 D13L 프로모터를 포함한다. 특이적 구체예에서, 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 또다른 구체예에서, F17R 프로모터는 서열 식별 번호: 563의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 여전히 또다른 구체예에서, D13L 프로모터는 서열 식별 번호: 562의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
특정 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터다. 특정 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B19R 프로모터다. 특정 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다. 특정 구체예에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
일부 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 동일한 방향을 갖는 경우, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 동일한 방향을 갖는 경우, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자에 대해 역 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 반대 방향을 갖는 경우, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈의 5'단부에 더 근접해 있는 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 반대 방향을 갖는 경우, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈의 3'단부에 더 근접해 있는 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 C2L 유전자 및 F3L 유전자다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 C3L 유전자 및 F4L 유전자다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 B14R 유전자 및 B29R 유전자다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 B13R 유전자 및 B29R 유전자다. 여전히 또다른 구체예에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 인접한 내생적 백시니아 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 인접한 내생적 백시니아 유전자는 B13R 유전자다. 일부 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 동일한 방향을 갖는 경우, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 동일한 방향을 갖는 경우, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자에 대해 역 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 반대 방향을 갖는 경우, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈의 5'단부에 더 근접해 있는 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 반대 방향을 갖는 경우, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈의 3'단부에 더 근접해 있는 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 C2L 유전자 및 F3L 유전자이다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 C3L 유전자 및 F4L 유전자이다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 B14R 유전자 및 B29R 유전자이다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 B13R 유전자 및 B29R 유전자이다. 여전히 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 인접한 내생적 백시니아 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 인접한 내생적 백시니아 유전자는 B13R 유전자다. 특이적 구체예들에서, IL-12 폴리펩티드는 막-결합된다. 특이적 구체예들에서, IL-12 폴리펩티드는 IL-12 p35 (예를 들면, 인간 IL-12 p35), IL-12 p40 (예를 들면, 인간 IL-12 p40) 또는 IL-12 p70 (예를 들면, 인간 IL-12 p70)을 포함한다. 특이적 구체예들에서, IL-12 폴리펩티드는 막-결합되며, IL-12 p35 (예를 들면, 인간 IL-12 p35), 또는 IL-12 p70 (예를 들면, 인간 IL-12 p70), 그리고 막경유 도메인과 세포질 도메인 (예를 들면, B7-1, TNFα, 또는 FLT3L의 막경유 도메인과 세포질 도메인)을 포함한다. 특이적 구체예들에서, IL-12 폴리펩티드는 서열 식별 번호: 212에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시된다.
특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L은 FLT3L의 가용성 형태다. 특정 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L은 인간 FLT3L의 가용성 형태다. 특정 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L은 GenBank 수탁 번호. U03858.1에서 제시된 인간 FLT3L의 가용성 형태다. 예를 들면, 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L은 전체 FLT3L 막경유 (예를 들면, GenBank 수탁 번호. U03858.1에서 제시된 인간 FLT3L의 막경유 도메인)이 결여된다. 다른 실시예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인 (예를 들면, GenBank 수탁 번호. U03858.1에서 제시된 인간 FLT3L의 막경유 도메인)의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%가 결여된다. 한 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인과 전체 FLT3L 세포질 도메인이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인과 전체 FLT3L 세포질 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%가 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 그리고 FLT3L 세포질 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%가 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인과 FLT3L 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기중 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개가 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인과 FLT3L 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기 1개, 2개, 3개, 또는 4개가 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유 도메인과 세포질 도메인은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인과 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인과 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인과 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유 도메인과 세포외 도메인은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%와 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%과 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%과 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유 도메인과 세포외 도메인은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 전체 세포질 도메인, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 전체 세포질 도메인, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 전체 세포질 도메인, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유, 세포질 및 세포외 도메인들은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 전체 세포질 도메인, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 전체 세포질 도메인, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 전체 세포질 도메인, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유, 세포질 및 세포외 도메인들은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 세포질 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 세포질 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 세포질 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유, 세포질 및 세포외 도메인들은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 세포질 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 세포질 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 세포질 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유, 세포질 및 세포외 도메인들은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유, 세포질 및 세포외 도메인들은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유, 세포질 및 세포외 도메인들은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L은 X7 아이소폼(isoform)이며, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에는 Lyman et al., 1994, Blood 83:2795-2801에 기술된 바와 같이, 179개-뉴클레오티드 서열이 결여된다. 특이적 구체예들에서, FLT3L는 서열 식별 번호: 213의 아미노산 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시된다.
또다른 측면에서, 다음 유전자들에서 결손을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에서 제공된다: (a) 다음 유전자들 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B8R, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서 결손; (b) 3'ITR의 다음 유전자에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R; (c) CTLA-4 (예를 들면, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자; (d) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자; 그리고 (e) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자; 이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이다.
특정 구체예들에서, 상기 핵산은 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터, pS 프로모터, 또는 LEO 프로모터다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터 (예를 들면, 조기 H5R 프로모터, 후기 H5R 프로모터, 또는 조기 H5R 프로모터 및 후기 H5R 프로모터)이다.
특정 구체예들에서, 상기 핵산은 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 후기(late) 프로모터다. 추가적인 특이적 구체예에서, 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열, F17R 프로모터, 또는 D13L 프로모터를 포함한다. 또다른 추가적인 특이적 구체예에서, 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 또다른 구체예에서, F17R 프로모터는 서열 식별 번호: 563의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 여전히 또다른 구체예에서, D13L 프로모터는 서열 식별 번호: 562의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
특정 구체예들에서, 상기 핵산은 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터, B19R 프로모터, E3L 프로모터, F11L 프로모터, 및/또는 B2R 프로모터다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B19R 프로모터다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다. 특정 구체예에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, E3L 프로모터는 서열 식별 번호: 567의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, F11L 프로모터는 서열 식별 번호: 568의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, B2R 프로모터는 서열 식별 번호: 569의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
일부 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 동일한 방향을 갖는 경우, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 동일한 방향을 갖는 경우, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자에 대해 역 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 반대 방향을 갖는 경우, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈의 5'단부에 더 근접해 있는 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 반대 방향을 갖는 경우, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈의 3'단부에 더 근접해 있는 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 C2L 유전자 및 F3L 유전자다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 C3L 유전자 및 F4L 유전자다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 B14R 유전자 및 B29R 유전자다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 B13R 유전자 및 B29R 유전자다. 여전히 또다른 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 인접한 내생적 백시니아 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 인접한 내생적 백시니아 유전자는 B13R 유전자다. 일부 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 동일한 방향을 갖는 경우, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 동일한 방향을 갖는 경우, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자에 대해 역 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 반대 방향을 갖는 경우, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈의 5'단부에 더 근접해 있는 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 반대 방향을 갖는 경우, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈의 3'단부에 더 근접해 있는 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 C2L 유전자 및 F3L 유전자다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 C3L 유전자 및 F4L 유전자다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 B14R 유전자 및 B29R 유전자다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 B13R 유전자 및 B29R 유전자다. 여전히 또다른 구체예에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 인접한 내생적 백시니아 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 인접한 내생적 백시니아 유전자는 B13R 유전자다. 일부 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 동일한 방향을 갖는 경우, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 동일한 방향을 갖는 경우, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자에 대해 역 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 반대 방향을 갖는 경우, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈의 5'단부에 더 근접해 있는 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 반대 방향을 갖는 경우, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈의 3'단부에 더 근접해 있는 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 C2L 유전자 및 F3L 유전자이다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 C3L 유전자 및 F4L 유전자이다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 B14R 유전자 및 B29R 유전자이다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 B13R 유전자 및 B29R 유전자이다. 여전히 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 인접한 내생적 백시니아 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 인접한 내생적 백시니아 유전자는 B13R 유전자다.
특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 이필리무맙의 6개 상보성-결정 영역 (CDRs)을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 211에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는 아미노산 서열을 인코드한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시된다.
특이적 구체예들에서, IL-12 폴리펩티드는 막-결합된다. 특이적 구체예들에서, IL-12 폴리펩티드는 IL-12 p35 (예를 들면, 인간 IL-12 p35), IL-12 p40 (예를 들면, 인간 IL-12 p40) 또는 IL-12 p70 (예를 들면, 인간 IL-12 p70)을 포함한다. 특이적 구체예들에서, IL-12 폴리펩티드는 막-결합되며, IL-12 p35 (예를 들면, 인간 IL-12 p35), 또는 IL-12 p70 (예를 들면, 인간 IL-12 p70), 그리고 막경유 도메인과 세포질 도메인 (예를 들면, B7-1, TNFα, 또는 FLT3L의 막경유 도메인과 세포질 도메인)을 포함한다. 특이적 구체예들에서, IL-12 폴리펩티드는 서열 식별 번호: 212에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시된다.
특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L은 FLT3L의 가용성 형태다. 특정 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L은 인간 FLT3L의 가용성 형태다. 특정 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L은 GenBank 수탁 번호. U03858.1에서 제시된 인간 FLT3L의 가용성 형태다. 예를 들면, 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L은 전체 FLT3L 막경유 (예를 들면, GenBank 수탁 번호. U03858.1에서 제시된 인간 FLT3L의 막경유 도메인)이 결여된다. 다른 실시예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인 (예를 들면, GenBank 수탁 번호. U03858.1에서 제시된 인간 FLT3L의 막경유 도메인)의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%가 결여된다. 한 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인과 전체 FLT3L 세포질 도메인이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인과 전체 FLT3L 세포질 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%가 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 그리고 FLT3L 세포질 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%가 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인과 FLT3L 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기중 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개가 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인과 FLT3L 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기 1개, 2개, 3개, 또는 4개가 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유 도메인과 세포질 도메인은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인과 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인과 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인과 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유 도메인과 세포외 도메인은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%와 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%과 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%과 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유 도메인과 세포외 도메인은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 전체 세포질 도메인, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 전체 세포질 도메인, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 전체 세포질 도메인, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유, 세포질 및 세포외 도메인들은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 전체 세포질 도메인, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 전체 세포질 도메인, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 전체 세포질 도메인, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유, 세포질 및 세포외 도메인들은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 세포질 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 세포질 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 세포질 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유, 세포질 및 세포외 도메인들은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 세포질 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 세포질 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 세포질 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유, 세포질 및 세포외 도메인들은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유, 세포질 및 세포외 도메인들은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유, 세포질 및 세포외 도메인들은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L은 X7 아이소폼(isoform)이며, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에는 Lyman et al., 1994, Blood 83:2795-2801에 기술된 바와 같이, 179개-뉴클레오티드 서열이 결여된다. 특이적 구체예들에서, FLT3L는 서열 식별 번호: 213의 아미노산 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시된다.
또다른 측면에서, 다음 유전자들에서 결손을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에서 제공된다: (a) 다음 유전자들 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서 결손; (b) 3'ITR의 다음 유전자에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R; (c) CTLA-4 (예를 들면, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자; (d) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자; 그리고 (e) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자; 이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이며; 그리고 이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다: (i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터, pS 프로모터, 또는 LEO 프로모터이며; (ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 후기 프로모터이며; 및/또는 (iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터, B19R 프로모터, E3L 프로모터, F11L 프로모터, 및/또는 B2R 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 상기 핵산은 B8R 유전자내 결손을 더 포함한다. 특정 구체예에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, E3L 프로모터는 서열 식별 번호: 567의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, F11L 프로모터는 서열 식별 번호: 568의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, B2R 프로모터는 서열 식별 번호: 569의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
특정 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터 (예를 들면, 조기 H5R 프로모터, 후기 H5R 프로모터, 또는 조기 H5R 프로모터 및 후기 H5R 프로모터)이다.
특정 구체예들에서, 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열, F17R 프로모터, 또는 D13L 프로모터를 포함한다. 특이적 구체예에서, 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 또다른 구체예에서, F17R 프로모터는 서열 식별 번호: 563의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 여전히 또다른 구체예에서, D13L 프로모터는 서열 식별 번호: 562의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
특정 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터다. 특정 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B19R 프로모터다. 특정 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다. 특정 구체예에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
일부 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 동일한 방향을 갖는 경우, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 동일한 방향을 갖는 경우, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자에 대해 역 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 반대 방향을 갖는 경우, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈의 5'단부에 더 근접해 있는 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 반대 방향을 갖는 경우, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈의 3'단부에 더 근접해 있는 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 C2L 유전자 및 F3L 유전자다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 C3L 유전자 및 F4L 유전자다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 B14R 유전자 및 B29R 유전자다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 B13R 유전자 및 B29R 유전자다. 여전히 또다른 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 인접한 내생적 백시니아 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 인접한 내생적 백시니아 유전자는 B13R 유전자다. 일부 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 동일한 방향을 갖는 경우, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 동일한 방향을 갖는 경우, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자에 대해 역 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 반대 방향을 갖는 경우, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈의 5'단부에 더 근접해 있는 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 반대 방향을 갖는 경우, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈의 3'단부에 더 근접해 있는 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 C2L 유전자 및 F3L 유전자다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 C3L 유전자 및 F4L 유전자다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 B14R 유전자 및 B29R 유전자다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 B13R 유전자 및 B29R 유전자다. 여전히 또다른 구체예에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 인접한 내생적 백시니아 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 인접한 내생적 백시니아 유전자는 B13R 유전자다. 일부 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 동일한 방향을 갖는 경우, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 동일한 방향을 갖는 경우, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자에 대해 역 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 반대 방향을 갖는 경우, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈의 5'단부에 더 근접해 있는 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 반대 방향을 갖는 경우, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈의 3'단부에 더 근접해 있는 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 C2L 유전자 및 F3L 유전자이다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 C3L 유전자 및 F4L 유전자이다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 B14R 유전자 및 B29R 유전자이다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 B13R 유전자 및 B29R 유전자이다. 여전히 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 인접한 내생적 백시니아 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 인접한 내생적 백시니아 유전자는 B13R 유전자다.
특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 이필리무맙의 6개 상보성-결정 영역 (CDRs)을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 211에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는 아미노산 서열을 인코드한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시된다.
특이적 구체예들에서, IL-12 폴리펩티드는 막-결합된다. 특이적 구체예들에서, IL-12 폴리펩티드는 IL-12 p35 (예를 들면, 인간 IL-12 p35), IL-12 p40 (예를 들면, 인간 IL-12 p40) 또는 IL-12 p70 (예를 들면, 인간 IL-12 p70)을 포함한다. 특이적 구체예들에서, IL-12 폴리펩티드는 막-결합되며, IL-12 p35 (예를 들면, 인간 IL-12 p35), 또는 IL-12 p70 (예를 들면, 인간 IL-12 p70)0, 그리고 막경유 도메인과 세포질 도메인 (예를 들면, B7-1, TNFα, 또는 FLT3L의 막경유 도메인과 세포질 도메인)을 포함한다. 특이적 구체예들에서, IL-12 폴리펩티드는 서열 식별 번호: 212에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시된다.
특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L은 FLT3L의 가용성 형태다. 특정 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L은 인간 FLT3L의 가용성 형태다. 특정 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L은 GenBank 수탁 번호. U03858.1에서 제시된 인간 FLT3L의 가용성 형태다. 예를 들면, 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L은 전체 FLT3L 막경유 (예를 들면, GenBank 수탁 번호. U03858.1에서 제시된 인간 FLT3L의 막경유 도메인)이 결여된다. 다른 실시예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인 (예를 들면, GenBank 수탁 번호. U03858.1에서 제시된 인간 FLT3L의 막경유 도메인)의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%가 결여된다. 한 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인과 전체 FLT3L 세포질 도메인이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인과 전체 FLT3L 세포질 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%가 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 그리고 FLT3L 세포질 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%가 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인과 FLT3L 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기중 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개가 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인과 FLT3L 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기 1개, 2개, 3개, 또는 4개가 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유 도메인과 세포질 도메인은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인과 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인과 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인과 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유 도메인과 세포외 도메인은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%와 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%과 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%과 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유 도메인과 세포외 도메인은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 전체 세포질 도메인, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 전체 세포질 도메인, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 전체 세포질 도메인, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유, 세포질 및 세포외 도메인들은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 전체 세포질 도메인, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 전체 세포질 도메인, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 전체 세포질 도메인, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유, 세포질 및 세포외 도메인들은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 세포질 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 세포질 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 세포질 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유, 세포질 및 세포외 도메인들은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 세포질 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 세포질 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 세포질 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유, 세포질 및 세포외 도메인들은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유, 세포질 및 세포외 도메인들은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유, 세포질 및 세포외 도메인들은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L은 X7 아이소폼(isoform)이며, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에는 Lyman et al., 1994, Blood 83:2795-2801에 기술된 바와 같이, 179개-뉴클레오티드 서열이 결여된다. 특이적 구체예들에서, FLT3L는 서열 식별 번호: 213의 아미노산 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시된다.
특이적 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 추가적인 특이적 구체예에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 상류(upstream)에 있다.
본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 일부 구체예들에서, B8R 유전자내 결손은 B8R 유전자 서열의 적어도 30% 결손이다. 다른 구체예들에서, B8R 유전자내 결손은 B8R 유전자 서열의 적어도 40% 결손이다. 다른 구체예들에서, B8R 유전자내 결손은 B8R 유전자 서열의 적어도 50% 결손이다. 다른 구체예들에서, B8R 유전자내 결손은 B8R 유전자 서열의 적어도 60% 결손이다. 다른 구체예들에서, B8R 유전자내 결손은 B8R 유전자 서열의 적어도 70% 결손이다. 다른 구체예들에서, B8R 유전자내 결손은 B8R 유전자 서열의 적어도 80% 결손이다. 다른 구체예들에서, B8R 유전자내 결손은 B8R 유전자 서열의 30% -90%, 30%-85%, 40%-90%, 40%-85%, 50%-90%, 50%-85%, 60%-90%, 60%-85%, 70%-90%, 70%-85%, 75%-90%, 75%-85%, 또는 80%-85% 결손이다. 특이적 구체예에서, B8R 유전자내 결손은 B8R 유전자 서열의 약 75% 결손이다. 또다른 특이적 구체예에서, B8R 유전자내 결손은 B8R 유전자 서열의 약 80% 결손이다. 또다른 특이적 구체예에서, B8R 유전자내 결손은 B8R 유전자 서열의 약 82% 결손이다.
예를 들면, 일부 구체예들에서, B8R 유전자내 결손은 서열 식별 번호: 591의 뉴클레오티드 서열의 적어도 30% 결손이다. 다른 구체예들에서, B8R 유전자내 결손은 서열 식별 번호: 591의 뉴클레오티드 서열의 적어도 40% 결손이다. 다른 구체예들에서, B8R 유전자내 결손은 서열 식별 번호: 591의 뉴클레오티드 서열의 적어도 50% 결손이다. 다른 구체예들에서, B8R 유전자내 결손은 서열 식별 번호: 591의 뉴클레오티드 서열의 적어도 60% 결손이다. 다른 구체예들에서, B8R 유전자내 결손은 서열 식별 번호: 591의 뉴클레오티드 서열의 적어도 70% 결손이다. 다른 구체예들에서, B8R 유전자내 결손은 서열 식별 번호: 591의 뉴클레오티드 서열의 적어도 80% 결손이다. 다른 구체예들에서, B8R 유전자내 결손은 서열 식별 번호: 591의 뉴클레오티드 서열의 30% -90%, 30%-85%, 40%-90%, 40%-85%, 50%-90%, 50%-85%, 60%-90%, 60%-85%, 70%-90%, 70%-85%, 75%-90%, 75%-85%, 또는 80%-85% 결손이다. 특이적 구체예에서, B8R 유전자내 결손은 서열 식별 번호: 591의 뉴클레오티드 서열의 약 75% 결손이다. 또다른 특이적 구체예에서, B8R 유전자내 결손은 서열 식별 번호: 591의 뉴클레오티드 서열의 약 80% 결손이다. 또다른 특이적 구체예에서, B8R 유전자내 결손은 서열 식별 번호: 591의 뉴클레오티드 서열의 약 82% 결손이다.
또다른 실시예에서, 일부 구체예들에서, B8R 유전자내 결손은 다음 의 뉴클레오티드 서열의 적어도 30% 결손이다: ACAACACCATGAGATATATTATA ATTCTCGCAGTTTTGTTCATTAATAGTATACACGCTAAAATAACTAGTTATAAGTTTGAATCCGTCAATTTTGATTCCAAAATTGAATGGACTGGGGATGGTCTATACAATATATCCCTTAAAAATTATGGCATCAAGACGTGGCAAACAATGTATACAAATGTACCAGAAGGAACATACGACATATCCGCATTTCCAAAGAATGATTTCGTATCTTTCTGGGTTAAATTTGAACAAGGCGATTATAAAGTGGAAGAGTATTGTACGGGACTATGCGTCGAAGTAAAAATTGGACCACCGACTGTAACATTGACTGAATACGACGACCATATCAATTTGTACATCGAGCATCCGTATGCTACTAGAGGTAGCAAAAAGATTCCTATTTACAAACGCGGTGACATGTGTGATATCTACTTGTTGTATACGGCTAACTTCACATTCGGAGATTCTGAAGAACCAGTAACATATGATATCGATGACTACGATTGCACGTCTACAGGTTGCAGCATAGACTTTGCCACAACAGAAAAAGTGTGCGTGACAGCACAGGGAGCCACAGAAGGGTTTCTCGAAAAAATTACTCCATGGAGTTCGGAAGTATGTCTGACACCTAAAAAGAATGTATATACATGTGCAATTAGATCCAAAGAAGATGTTCCCAATTTCAAGGACAAAATGGCCAGAGTTATCAAGAGAAAATTTAATAAACAGTCTCAATCTTATTTAACTAAATTTCTCGGTAGCACATCAAATGATGTTACCACTTTTCTTAGCATGCTTAACTTGACTAAATATTCATAA (서열 식별 번호: 550. 다른 구체예들에서, B8R 유전자내 결손은 서열 식별 번호: 550의 뉴클레오티드 서열의 적어도 40% 결손이다. 다른 구체예들에서, B8R 유전자내 결손은 서열 식별 번호: 550의 뉴클레오티드 서열의 적어도 50% 결손이다. 다른 구체예들에서, B8R 유전자내 결손은 서열 식별 번호: 550의 뉴클레오티드 서열의 적어도 60% 결손이다. 다른 구체예들에서, B8R 유전자내 결손은 서열 식별 번호: 550의 뉴클레오티드 서열의 적어도 70% 결손이다. 다른 구체예들에서, B8R 유전자내 결손은 서열 식별 번호: 550의 뉴클레오티드 서열의 적어도 80% 결손이다. 다른 구체예들에서, B8R 유전자내 결손은 서열 식별 번호: 550의 뉴클레오티드 서열의 30% -90%, 30%-85%, 40%-90%, 40%-85%, 50%-90%, 50%-85%, 60%-90%, 60%-85%, 70%-90%, 70%-85%, 75%-90%, 75%-85%, 또는 80%-85% 결손이다. 특이적 구체예에서, B8R 유전자내 결손은 서열 식별 번호: 550의 뉴클레오티드 서열의 약 75% 결손이다. 또다른 특이적 구체예에서, B8R 유전자내 결손은 서열 식별 번호: 550의 뉴클레오티드 서열의 약 80% 결손이다. 또다른 특이적 구체예에서, B8R 유전자내 결손은 서열 식별 번호: 550의 뉴클레오티드 서열의 약 82% 결손이다.
특정 구체예들에서, B8R 유전자내 결손으로 상기 백시니아 게놈의 B9R 유전자의 기능이 방해받지 않는다. 특정 구체예들에서, B8R 유전자내 결손으로 B9R 유전자의 발현이 방해받지 않는다. 특정 구체예들에서, B8R 유전자내 결손은 B9R 유전자의 프로모터(들)을 제거하지 않는다. 특정 구체예들에서, B8R 유전자내 결손은 B9R 유전자의 전사 조절 서열을 제거하지 않는다. 특이적 구체예에서, 결손 후 남아있는 B8R 유전자의 유일한 서열은 적절한 B9R 기능 및/또는 발현에 필수적인 서열이다. 특이적 구체예에서, B8R 유전자내 결손은 AAAATTTAATAAACA (서열 식별 번호: 551)을 포함하는 뉴클레오티드 서열을 제거하지 않는다. 또다른 특이적 구체예에서, B8R 유전자내 결손은 뉴클레오티드 서열 AAAATTTAATAAACA (서열 식별 번호: 551)을 제거하지 않는다. 특이적 구체예에서, 남아있는 B8R 유전자의 유일한 서열은 뉴클레오티드 서열 GATGTTCCCAATTTCAAGGACAAAATGGCCAGAGTTATCAAGAGAAAATTTAATAAACAGTCTCAATCTTATTTAACTAAATTTCTCGGTAGCACATCAAATGATGTTACCACTTTTCTTAGCATGCTTAACTTGACTAAATATTCATAA (서열 식별 번호: 552)이다.
본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 특정 구체예들에서, 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈은 Copenhagen 균주 백시니아 바이러스의 게놈으로부터 유래된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 특정 구체예들에서, 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈은 GenBank 수탁 번호. M35027.1 (서열 식별 번호: 590)의 뉴클레오티드 서열에서 유래된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 특정 구체예들에서, 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈은 GenBank 수탁 번호. M35027.1 (서열 식별 번호: 590)의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
본원에서 제공된 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈은 GenBank 수탁 번호. M35027.1 (서열 식별 번호: 590)의 뉴클레오티드 서열과 동일하나, 단 해당 뉴클레오티드 서열은 표 46에서 식별된 뉴클레오티드 다형성중 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개를 포함하는 것이 상이하다. 본원에서 제공된 구체예들 및 측면들의 일부 구체예들에서, 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈은 GenBank 수탁 번호. M35027.1 (서열 식별 번호: 590)의 뉴클레오티드 서열과 동일하나, 단 해당 뉴클레오티드 서열은 표 46에서 식별된 뉴클레오티드 다형성중 1-3개, 1-5개, 2-4개, 2-5개, 1-9개, 2-8개, 4-8개, 6-8개, 1-9개, 2-9개, 4-9개, 6-9개, 7-9개, 1-10개, 2-10개, 5-10개, 또는 8-10개를 포함하는 것이 상이하다. 본원에서 제공된 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈은 GenBank 수탁 번호. M35027.1 (서열 식별 번호: 590)의 뉴클레오티드 서열과 동일하나 단, 해당 뉴클레오티드 서열은 표 46에서 식별된 뉴클레오티드 다형성중 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개를 포함하는 것이 상이하다. 본원에서 제공된 구체예들 및 측면들의 일부 구체예들에서, 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈은 GenBank 수탁 번호. M35027.1 (서열 식별 번호: 590)의 뉴클레오티드 서열과 동일하나 단, 해당 뉴클레오티드 서열은 표 46에서 식별된 뉴클레오티드 다형성중 11-20개, 12-15개, 15-20개, 또는 18-20개를 포함하는 것이 상이하다. 본원에서 제공된 구체예들 및 측면들의 특정 구체예들에서, 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈은 GenBank 수탁 번호. M35027.1 (서열 식별 번호: 590)의 뉴클레오티드 서열과 동일하나 단, 해당 뉴클레오티드 서열은 표 46에서 식별된 뉴클레오티드 다형성중 1-20, 1-15, 5-20, 또는 10-20개를 포함하는 것이 상이하다. 본원에서 제공된 구체예들 및 측면들의 일부에서, 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈은 GenBank 수탁 번호. M35027.1 (서열 식별 번호: 590)의 뉴클레오티드 서열과 동일하나 단, 해당 뉴클레오티드 서열은 표 46에서 식별된 뉴클레오티드 다형성을 모두 포함하는 것이 상이하다. 이러한 특정 구체예들에서, 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈은 본원에서 확인된 백시니아 바이러스 유전자들 (예를 들면, C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B8R, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, B20R, B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R)의 결손중 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 또는 10개, 그리고 본원에서 기술된 형질전환유전자(들)중 하나, 둘 또는 세 개의 삽입을 포함하도록 공작될 수 있다. 이러한 구체예들의 일부에 있어서, 상기 재조합 바이러스 게놈은 본원에서 확인된 백시니아 바이러스 유전자들 (예를 들면, C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B8R, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 그리고 B20R, B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R)의 결손중 10개, 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개, 또는 20개, 그리고 본원에서 기술된 형질전환유전자(들)중 하나, 둘 또는 세 개의 삽입을 포함하도록 공작될 수 있다. 이러한 특정 구체예들에서, 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈은 본원에서 확인된 백시니아 바이러스 유전자들 (예를 들면, C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B8R, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 그리고 B20R, B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R)의 결손중 21개, 22개, 23개, 24개, 25개, 26개, 27개, 28개, 29개, 30개, 31개, 또는 32개, 그리고 본원에서 기술된 형질전환유전자(들)중 하나, 둘 또는 세 개의 삽입을 포함하도록 공작될 수 있다. 이러한 구체예들의 일부에 있어서, 상기 재조합 바이러스 게놈은 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B8R, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R에서 결손, 그리고 3'역전된 말단 반복 (ITR)에서 다음 유전자들의 결손: B19R, 및 B20R, B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R, 그리고 본원에서 기술된 형질전환유전자(들)중 하나, 둘 또는 세 개의 삽입을 포함하도록 공작될 수 있다.
본원에서 제공된 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈은 GenBank 수탁 번호. M35027.1 (서열 식별 번호: 590)의 뉴클레오티드 서열과 동일하나 단, 해당 뉴클레오티드 서열은 아주 밀접한(synonymous) 변이체들인 표 46에서 식별된 뉴클레오티드 다형성중 1개, 2개, 3개, 또는 4개를 포함하는 것이 상이하다. 본원에서 제공된 구체예들 및 측면들의 일부 구체예들에서, 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈은 GenBank 수탁 번호. M35027.1 (서열 식별 번호: 590)의 뉴클레오티드 서열과 동일하나 단, 해당 뉴클레오티드 서열은 단백질 코딩 영역에 있지 않는 표 46에서 식별된 뉴클레오티드 다형성중 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개 또는 7개를 포함하는 것이 상이하다. 본원에서 제공된 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈은 GenBank 수탁 번호. M35027.1 (서열 식별 번호: 590)의 뉴클레오티드 서열과 동일하나 단, 해당 뉴클레오티드 서열은 아미노산 서열의 변화를 초래하는 표 46에서 식별된 뉴클레오티드 다형성중 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개 또는 7개를 포함하는 것이 상이하다. 본원에서 제공된 구체예들 및 측면들의 일부 구체예들에서, 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈은 GenBank 수탁 번호. M35027.1 (서열 식별 번호: 590)의 뉴클레오티드 서열과 동일하나 단, 해당 뉴클레오티드 서열은 프레임시프트(frameshift)를 초래하는 표 46에서 식별된 뉴클레오티드 다형성중 1 또는 2개를 포함하는 것이 상이하다. 이러한 특정 구체예들에서, 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈은 본원에서 확인된 백시니아 바이러스 유전자들 (예를 들면, C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B8R, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, B20R, B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R)의 결손중 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 또는 10개, 그리고 본원에서 기술된 형질전환유전자(들)중 하나, 둘 또는 세 개의 삽입을 포함하도록 공작될 수 있다. 이러한 구체예들의 일부에 있어서, 상기 재조합 바이러스 게놈은 본원에서 확인된 백시니아 바이러스 유전자들 (예를 들면, C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B8R, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 그리고 B20R, B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R)의 결손중 10개, 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개, 또는 20개, 그리고 본원에서 기술된 형질전환유전자(들)중 하나, 둘 또는 세 개의 삽입을 포함하도록 공작될 수 있다. 이러한 특정 구체예들에서, 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈은 본원에서 확인된 백시니아 바이러스 유전자들 (예를 들면, C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B8R, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 그리고 B20R, B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R)의 결손중 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 또는 32개, 그리고 본원에서 기술된 형질전환유전자(들)중 하나, 둘 또는 세 개의 삽입을 포함하도록 공작될 수 있다. 이러한 구체예들의 일부에 있어서, 상기 재조합 바이러스 게놈은 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B8R, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R에서 결손, 그리고 3'역전된 말단 반복 (ITR)에서 다음 유전자들의 결손: B19R, 및 B20R, B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R, 그리고 본원에서 기술된 형질전환유전자(들)중 하나, 둘 또는 세 개의 삽입을 포함하도록 공작될 수 있다.
본원에서 제공된 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈은 GenBank 수탁 번호. M35027.1 (서열 식별 번호: 590)의 뉴클레오티드 서열과 동일하나 단, 해당 뉴클레오티드 서열은 표 46에서 식별된 유전자들중 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개 또는 7개에서 발견된 뉴클레오티드 다형성을 포함하는 것이 상이하다. 본원에서 제공된 구체예들 및 측면들의 일부에서, 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈은 GenBank 수탁 번호. M35027.1 (서열 식별 번호: 590)의 뉴클레오티드 서열과 동일하나 단, 해당 뉴클레오티드 서열은 표 46에서 식별된 유전자들중 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 12개 또는 13개에서 발견된 뉴클레오티드 다형성을 포함하는 것이 상이하다. 본원에서 제공된 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈은 GenBank 수탁 번호. M35027.1 (서열 식별 번호: 590)의 뉴클레오티드 서열과 동일하나 단, 해당 뉴클레오티드 서열은 표 46에서 식별된 유전자들 모두에서 발견된 뉴클레오티드 다형성 뉴클레오티드 다형성을 포함하는 것이 상이하다. 본원에서 제공된 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈은 GenBank 수탁 번호. M35027.1 (서열 식별 번호: 590)의 뉴클레오티드 서열과 동일하나 단, 해당 뉴클레오티드 서열은 표 46에서 식별된 유전자들중 1-5개, 5-10개, 1-13개, 5-13개, 또는 10-13개에서 발견된 뉴클레오티드 다형성을 포함하는 것이 상이하다. 이러한 특정 구체예들에서, 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈은 본원에서 확인된 백시니아 바이러스 유전자들 (예를 들면, C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B8R, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, B20R, B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R)의 결손중 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 또는 10개, 그리고 본원에서 기술된 형질전환유전자(들)중 하나, 둘 또는 세 개의 삽입을 포함하도록 공작될 수 있다. 이러한 구체예들의 일부에 있어서, 상기 재조합 바이러스 게놈은 본원에서 확인된 백시니아 바이러스 유전자들 (예를 들면, C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B8R, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 그리고 B20R, B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R)의 결손중 10개, 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개, 또는 20개, 그리고 본원에서 기술된 형질전환유전자(들)중 하나, 둘 또는 세 개의 삽입을 포함하도록 공작될 수 있다. 이러한 특정 구체예들에서, 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈은 본원에서 확인된 백시니아 바이러스 유전자들 (예를 들면, C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B8R, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 그리고 B20R, B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R)의 결손중 21개, 22개, 23개, 24개, 25개, 26개, 27개, 28개, 29개, 30개, 31개, 또는 32개, 그리고 본원에서 기술된 형질전환유전자(들)중 하나, 둘 또는 세 개의 삽입을 포함하도록 공작될 수 있다. 이러한 구체예들의 일부에 있어서, 상기 재조합 바이러스 게놈은 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B8R, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R에서 결손, 그리고 3'역전된 말단 반복 (ITR)에서 다음 유전자들의 결손: B19R, 및 B20R, B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R, 그리고 본원에서 기술된 형질전환유전자(들)중 하나, 둘 또는 세 개의 삽입을 포함하도록 공작될 수 있다.
본원에서 제공된 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈은 GenBank 수탁 번호. M35027.1 (서열 식별 번호: 590)의 뉴클레오티드 서열과 동일하나 단, 해당 뉴클레오티드 서열은 백시니아 유전자 C14L, C2L, C1L, N2L, F3L, F13L, F16L, G7L, L3L, J3R, D6R, A41L, 또는 A46R에 대해 표 46에서 식별된 뉴클레오티드 다형성을 포함하는 것이 상이하다. 본원에서 제공된 구체예들 및 측면들의 일부에서, 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈은 GenBank 수탁 번호. M35027.1 (서열 식별 번호: 590)의 뉴클레오티드 서열과 동일하나 단, 해당 뉴클레오티드 서열은 백시니아 유전자 C14L, C2L, C1L, N2L, F3L, F13L, F16L, G7L, L3L, J3R, D6R, A41L, 그리고 A46R에 대해 표 46에서 식별된 뉴클레오티드 다형성을 포함하는 것이 상이하다. 본원에서 제공된 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈은 GenBank 수탁 번호. M35027.1 (서열 식별 번호: 590)의 뉴클레오티드 서열과 동일하나,단, 해당 뉴클레오티드 서열은 다음 백시니아 유전자들중 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 또는 7개 유전자에 대해 표 46에서 식별된 뉴클레오티드 다형성을 포함하는 것이 상이하다: C14L, C2L, C1L, N2L, F3L, F13L, F16L, G7L, L3L, J3R, D6R, A41L, 그리고 A46R. 본원에서 제공된 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈은 GenBank 수탁 번호. M35027.1 (서열 식별 번호: 590)의 뉴클레오티드 서열과 동일하나 단, 해당 뉴클레오티드 서열은 다음의 백시니아 유전자들중 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 또는 13개 유전자에 대해 표 46에서 식별된 뉴클레오티드 다형성을 포함하는 것이 상이하다: C14L, C2L, C1L, N2L, F3L, F13L, F16L, G7L, L3L, J3R, D6R, A41L, 그리고 A46R. 이러한 특정 구체예들에서, 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈은 본원에서 확인된 백시니아 바이러스 유전자들 (예를 들면, C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B8R, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, B20R, B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R)의 결손중 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 또는 10개, 그리고 본원에서 기술된 형질전환유전자(들)중 하나, 둘 또는 세 개의 삽입을 포함하도록 공작될 수 있다. 이러한 구체예들의 일부에 있어서, 상기 재조합 바이러스 게놈은 본원에서 확인된 백시니아 바이러스 유전자들 (예를 들면, C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B8R, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 그리고 B20R, B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R)의 결손중 10개, 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개, 그리고 본원에서 기술된 형질전환유전자(들)중 하나, 둘 또는 세 개의 삽입을 포함하도록 공작될 수 있다. 이러한 특정 구체예들에서, 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈은 본원에서 확인된 백시니아 바이러스 유전자들 (예를 들면, C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B8R, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 그리고 B20R, B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R)의 결손중 21개, 22개, 23개, 24개, 25개, 26개, 27개, 28개, 29개, 30개, 31개 또는 32개, 그리고 본원에서 기술된 형질전환유전자(들)중 하나, 둘 또는 세 개의 삽입을 포함하도록 공작될 수 있다. 이러한 구체예들의 일부에 있어서, 상기 재조합 바이러스 게놈은 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B8R, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R에서 결손, 그리고 3'역전된 말단 반복 (ITR)에서 다음 유전자들의 결손: B19R, 및 B20R, B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R, 그리고 본원에서 기술된 형질전환유전자(들)중 하나, 둘 또는 세 개의 삽입을 포함하도록 공작될 수 있다.
본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 특정 구체예들에서, 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈은 서열 식별 번호: 210의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 특정 구체예들에서, 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈은 서열 식별 번호: 210의 뉴클레오티드 서열과 동일하나, 단 표 46에서 식별된 뉴클레오티드 다형성중 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개, 또는 20개를 갖는 뉴클레오티드 서열이다.
특정 구체예들에서, 다음을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에 제공된다: (a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열; 그리고 (b) 다음중 하나, 둘 또는 셋: (i) CTLA-4 (예를 들면, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자(예를 들면, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214의 뉴클레오티드 서열을 포함하고); (ii) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자 (예를 들면, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215의 뉴클레오티드 서열을 포함하고); 그리고 (iii) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자 (예를 들면, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216의 뉴클레오티드 서열을 포함한다).
특정 구체예들에서, 다음을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에 제공된다: (a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열; 그리고 (b) 다음중 둘 또는 셋: (i) CTLA-4 (예를 들면, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자 (예를 들면, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214의 뉴클레오티드 서열을 포함하고); (ii) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자 (예를 들면, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215의 뉴클레오티드 서열을 포함하고); 그리고 (iii) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자 (예를 들면, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216의 뉴클레오티드 서열을 포함한다).
특정 구체예들에서, 다음을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에 제공된다: (a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열; 그리고 (b): (i) CTLA-4 (예를 들면, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자 (예를 들면, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214의 뉴클레오티드 서열을 포함하고); (ii) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자 (예를 들면, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215의 뉴클레오티드 서열을 포함하고); 그리고 (iii) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자 (예를 들면, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216의 뉴클레오티드 서열을 포함한다).
상기 핵산이 상기 제 1 형질전환유전자를 포함하는 상기 특이적 구체예들에서, 상기 핵산은 항-CTLA-4 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 H5R 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함한다. 상기 핵산이 상기 제 2 형질전환유전자를 포함하는 상기 특이적 구체예들에서, 상기 핵산은 IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 후기 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함하고, 이때 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 상기 핵산이 상기 제 3 형질전환유전자를 포함하는 상기 특이적 구체예들에서, 상기 핵산은 FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 B8R 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함한다. 상기 핵산이 상기 제 3 형질전환유전자를 포함하는 상기 특이적 구체예들에서, 상기 핵산은 FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 B19R 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함한다. 상기 핵산이 상기 제 3 형질전환유전자를 포함하는 상기 특이적 구체예들에서, 상기 핵산은 FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함한다. 상기 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 동일한 방향을 갖고, 해당 제 1 뉴클레오티드 서열은 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 상기 특이적 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 동일한 방향을 갖고, 해당 제 2 뉴클레오티드 서열은 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 상기 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 동일한 방향을 갖고, 해당 제 3 뉴클레오티드 서열은 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 상기 특이적 구체예들에서, 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자를 포함하고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 특정 구체예에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 특정 구체예들에서, 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈은 서열 식별 번호: 624의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 특정 구체예들에서, 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈은 서열 식별 번호: 624의 뉴클레오티드 서열과 동일하나, 단 표 46에서 식별된 뉴클레오티드 다형성중 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개, 또는 20개를 갖는 뉴클레오티드 서열이다.
특정 구체예들에서, 다음을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에 제공된다: (a) 서열 식별 번호: 624의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열; 그리고 (b) 다음중 하나, 둘 또는 셋: (i) CTLA-4 (예를 들면, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자 (예를 들면, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214의 뉴클레오티드 서열을 포함하고); (ii) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자 (예를 들면, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215의 뉴클레오티드 서열을 포함하고); 그리고 (iii) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자 (예를 들면, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216의 뉴클레오티드 서열을 포함한다). 특이적 구체예들에서, 상기 핵산은 이를 테면, 본원에서 기술된 프로모터, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 프로모터, 이를 테면, 본원에서 기술된 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된, 또는 이를 테면, 본원에서 기술된 프로모터, 상기 제 3 프로모터에 작동가능하도록 연계된 프로모터를 더 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 핵산은 이를 테면, 본원에서 기술된 프로모터, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 프로모터, 이를 테면, 본원에서 기술된 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된, 그리고 이를 테면, 본원에서 기술된 프로모터, 상기 제 3 프로모터에 작동가능하도록 연계된 프로모터를 더 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 형질전환유전자, 제 2 형질전환유전자 및/또는 제 3 형질전환유전자는 본원에서 기술된 유전자좌 또는 유전자좌들에 삽입된다.
특정 구체예들에서, 다음을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에 제공된다: (a) 서열 식별 번호: 624의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열; 그리고 (b) 다음중 둘 또는 셋: (i) CTLA-4 (예를 들면, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자 (예를 들면, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214의 뉴클레오티드 서열을 포함하고); (ii) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자 (예를 들면, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215의 뉴클레오티드 서열을 포함하고); 그리고 (iii) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자 (예를 들면, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216의 뉴클레오티드 서열을 포함한다). 특이적 구체예들에서, 상기 핵산은 이를 테면, 본원에서 기술된 프로모터, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 프로모터, 이를 테면, 본원에서 기술된 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된, 또는 이를 테면, 본원에서 기술된 프로모터, 상기 제 3 프로모터에 작동가능하도록 연계된 프로모터를 더 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 두 개 또는 세 개 형질전환유전자는 본원에서 기술된 유전자좌 또는 유전자좌들에 삽입된다.
특정 구체예들에서, 다음을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에 제공된다: (a) 서열 식별 번호: 624의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열; 그리고 (b): (i) CTLA-4 (예를 들면, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자 (예를 들면, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214의 뉴클레오티드 서열을 포함하고); (ii) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자 (예를 들면, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215의 뉴클레오티드 서열을 포함하고); 그리고 (iii) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자 (예를 들면, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216의 뉴클레오티드 서열을 포함한다). 특이적 구체예들에서, 상기 핵산은 이를 테면, 본원에서 기술된 프로모터, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 프로모터, 이를 테면, 본원에서 기술된 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된, 또는 이를 테면, 본원에서 기술된 프로모터, 상기 제 3 프로모터에 작동가능하도록 연계된 프로모터를 더 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 핵산은 이를 테면, 본원에서 기술된 프로모터, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 프로모터, 이를 테면, 본원에서 기술된 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된, 그리고 이를 테면, 본원에서 기술된 프로모터, 상기 제 3 프로모터에 작동가능하도록 연계된 프로모터를 더 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 형질전환유전자, 제 2 형질전환유전자와 제 3 형질전환유전자는 본원에서 기술된 유전자좌 또는 유전자좌들에 삽입된다.
상기 핵산이 상기 제 1 형질전환유전자를 포함하는 상기 특이적 구체예들에서, 상기 핵산은 항-CTLA-4 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 H5R 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함한다. 상기 핵산이 상기 제 2 형질전환유전자를 포함하는 상기 특이적 구체예들에서, 상기 핵산은 IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 후기 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함하고, 이때 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 상기 핵산이 상기 제 3 형질전환유전자를 포함하는 상기 특이적 구체예들에서, 상기 핵산은 FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 B8R 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함한다. 상기 핵산이 상기 제 3 형질전환유전자를 포함하는 상기 특이적 구체예들에서, 상기 핵산은 FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 B19R 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함한다. 상기 핵산이 상기 제 3 형질전환유전자를 포함하는 상기 특이적 구체예들에서, 상기 핵산은 FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함한다. 상기 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 동일한 방향을 갖고, 해당 제 1 뉴클레오티드 서열은 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 상기 특이적 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 동일한 방향을 갖고, 해당 제 2 뉴클레오티드 서열은 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 상기 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 동일한 방향을 갖고, 해당 제 3 뉴클레오티드 서열은 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 특이적 구체예들에서, 상기 핵산은 B8R 유전자내 결손을 더 포함한다. 상기 특이적 구체예들에서, 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자를 포함하고, 그리고 더욱이 B8R 유전자내 결손을 더 포함하며, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 특정 구체예에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
또다른 측면에서, 다음 유전자들에서 결손을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에서 제공된다: (a) 다음 유전자들 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서 결손, 그리고 B8R 유전자에서 임의선택적으로 결손; (b) 3'ITR의 다음 유전자에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R; (c) CTLA-4 (예를 들면, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자; (d) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자; 그리고 (e) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자; 이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이며; 그리고 이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다: (i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터이며; (ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 후기 프로모터이며; 그리고 (iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재하고, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재하고, 그리고 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 상류에 있다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 하류에 있다. 특정 구체예에서, 상기 핵산은 B8R 유전자내 결손을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함한다. 특정 구체예에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
또다른 측면에서, 다음 유전자들에서 결손을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에서 제공된다: (a) 다음 유전자들 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서 결손, 그리고 B8R 유전자에서 임의선택적으로 결손; (b) 3'ITR의 다음 유전자에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R; (c) CTLA-4 (예를 들면, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 이때 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고; (d) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 이때 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며; 그리고 (e) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 상류에 있고; 이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이며; 그리고 이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다: (i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터이며; (ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 후기 프로모터이며; 그리고 (iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다. 특정 구체예에서, 상기 핵산은 B8R 유전자내 결손을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함한다. 특정 구체예에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
또다른 측면에서, 다음 유전자들에서 결손을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에서 제공된다: (a) 다음 유전자들 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서 결손, 그리고 B8R 유전자에서 임의선택적으로 결손; (b) 3'ITR의 다음 유전자에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R; (c) CTLA-4 (예를 들면, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 이때 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고; (d) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 이때 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며; 그리고 (e) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자; 이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이고, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 하류에 있고; 그리고 이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다: (i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터이며; (ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 후기 프로모터이며; 그리고 (iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다. 특정 구체예에서, 상기 핵산은 B8R 유전자내 결손을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함한다. 특정 구체예에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
또다른 측면에서, 다음 유전자들에서 결손을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에서 제공된다: (a) 다음 유전자들 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서 결손, 그리고 B8R 유전자에서 임의선택적으로 결손; (b) 3'ITR의 다음 유전자에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R; (c) CTLA-4 (예를 들면, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 이때 상기 제 1 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입되고; (d) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 이때 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며; 그리고 (e) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자; 이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이고, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 상류에 있고; 그리고 이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다: (i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터이며; (ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 후기 프로모터이며; 그리고 (iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다. 특정 구체예에서, 상기 핵산은 B8R 유전자내 결손을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함한다. 특정 구체예에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
또다른 측면에서, 다음 유전자들에서 결손을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에서 제공된다: (a) 다음 유전자들 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서 결손, 그리고 B8R 유전자에서 임의선택적으로 결손; (b) 3'ITR의 다음 유전자에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R; (c) CTLA-4 (예를 들면, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 이때 상기 제 1 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입되고; (d) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 이때 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며; 그리고 (e) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자; 이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이고, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 하류에 있고; 그리고 이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다: (i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터이며; (ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 후기 프로모터이며; 그리고 (iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다. 특정 구체예에서, 상기 핵산은 B8R 유전자내 결손을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함한다. 특정 구체예에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
또다른 측면에서, 다음을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에 제공된다: (a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며; (b)세포독성 T-림프구 연합된 단백질 4 (CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며; (c) 인터루킨 12 (IL-12) 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며; 그리고 (d) FMS-유사 티로신 키나제 3 리간드 (FLT3L)를 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시된다.
일부 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 동일한 방향을 갖는 경우, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 동일한 방향을 갖는 경우, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자에 대해 역 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 반대 방향을 갖는 경우, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈의 5'단부에 더 근접해 있는 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 반대 방향을 갖는 경우, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈의 3'단부에 더 근접해 있는 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 C2L 유전자 및 F3L 유전자다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 C3L 유전자 및 F4L 유전자다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 B14R 유전자 및 B29R 유전자다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 B13R 유전자 및 B29R 유전자다. 여전히 또다른 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 인접한 내생적 백시니아 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 인접한 내생적 백시니아 유전자는 B13R 유전자다. 일부 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 동일한 방향을 갖는 경우, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 동일한 방향을 갖는 경우, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자에 대해 역 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 반대 방향을 갖는 경우, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈의 5'단부에 더 근접해 있는 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 반대 방향을 갖는 경우, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈의 3'단부에 더 근접해 있는 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 C2L 유전자 및 F3L 유전자다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 C3L 유전자 및 F4L 유전자다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 B14R 유전자 및 B29R 유전자다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 B13R 유전자 및 B29R 유전자다. 여전히 또다른 구체예에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 인접한 내생적 백시니아 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 인접한 내생적 백시니아 유전자는 B13R 유전자다. 일부 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 동일한 방향을 갖는 경우, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 동일한 방향을 갖는 경우, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자에 대해 역 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 반대 방향을 갖는 경우, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈의 5'단부에 더 근접해 있는 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 반대 방향을 갖는 경우, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈의 3'단부에 더 근접해 있는 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 C2L 유전자 및 F3L 유전자이다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 C3L 유전자 및 F4L 유전자이다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 B14R 유전자 및 B29R 유전자이다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 B13R 유전자 및 B29R 유전자이다. 여전히 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 인접한 내생적 백시니아 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 인접한 내생적 백시니아 유전자는 B13R 유전자다. 특정 구체예들에서, 상기 핵산은 항-CTLA-4 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함한다. 특이적 구체예에서, 항-CTLA-4 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터, pS 프로모터, 또는 LEO 프로모터다. 또다른 특이적 구체예에서, 항-CTLA-4 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터 (예를 들면, 조기 H5R 프로모터, 후기 H5R 프로모터, 또는 조기 H5R 프로모터 및 후기 H5R 프로모터)이다.
특정 구체예들에서, 상기 핵산은 IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함한다. 특이적 구체예에서, IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 후기 프로모터다. 추가적인 특이적 구체예에서, 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열, F17R 프로모터, 또는 D13L 프로모터를 포함한다. 또다른 추가적인 특이적 구체예에서, 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 또다른 구체예에서, F17R 프로모터는 서열 식별 번호: 563의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 여전히 또다른 구체예에서, D13L 프로모터는 서열 식별 번호: 562의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
특정 구체예들에서, 상기 핵산은 FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함한다. 특이적 구체예에서, 상기 FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터, B19R 프로모터, E3L 프로모터, F11L 프로모터, 및/또는 B2R 프로모터다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B19R 프로모터다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다. 특정 구체예에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, E3L 프로모터는 서열 식별 번호: 567의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, F11L 프로모터는 서열 식별 번호: 568의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, B2R 프로모터는 서열 식별 번호: 569의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
또다른 측면에서, 다음을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에 제공된다: (a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며; (b) CTLA-4 (예를 들면, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며;; (c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며; 그리고 (d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며; 이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다: (i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터이며; (ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 후기 프로모터이며; 그리고 (iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재하고, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재하고, 그리고 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 상류에 있다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 하류에 있다. 특정 구체예에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
또다른 측면에서, 다음을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에 제공된다: (a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며; (b) CTLA-4 (예를 들면, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고; (c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며; 그리고 (d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 상류에 있고; 이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다: (i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터이며; (ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 후기 프로모터이며; 그리고 (iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 또는 B19R 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다. 특이적 구체예들에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 또는 H5R 후기 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 및 H5R 후기 프로모터다. 특이적 구체예들에서, H5R 조기 프로모터는 서열 식별 번호: 553의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, H5R 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 554의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
또다른 측면에서, 다음을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에 제공된다: (a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며; (b) CTLA-4 (예를 들면, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되고, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고; (c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되고, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며; 그리고 (d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되고, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 하류에 있고; 이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다: (i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터이며; (ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 후기 프로모터이며; 그리고 (iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 또는 B19R 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다. 특이적 구체예들에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 또는 H5R 후기 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 및 H5R 후기 프로모터다. 특이적 구체예들에서, H5R 조기 프로모터는 서열 식별 번호: 553의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, H5R 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 554의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
또다른 측면에서, 다음을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에 제공된다: (a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며; (b) CTLA-4 (예를 들면, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되고, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에 있는 부분적 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입되고; (c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되고, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며; 그리고 (d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되고, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 상류에 있고; 이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다: (i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터이며; (ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 후기 프로모터이며; 그리고 (iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 또는 B19R 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다. 특이적 구체예들에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 또는 H5R 후기 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 및 H5R 후기 프로모터다. 특이적 구체예들에서, H5R 조기 프로모터는 서열 식별 번호: 553의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, H5R 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 554의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
또다른 측면에서, 다음을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에 제공된다: (a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며; (b) CTLA-4 (예를 들면, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되고, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에 있는 부분적 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입되고; (c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며; 그리고 (d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 하류에 있고; 이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다: (i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터이며; (ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 후기 프로모터이며; 그리고 (iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 또는 B19R 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다. 특이적 구체예들에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 또는 H5R 후기 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 및 H5R 후기 프로모터다. 특이적 구체예들에서, H5R 조기 프로모터는 서열 식별 번호: 553의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, H5R 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 554의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
또다른 측면에서, 다음을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에 제공된다: (a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며; (b) CTLA-4 (예를 들면, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되고, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고; (c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며; 그리고 (d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 상류에 있고; 이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다: (i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 pS 프로모터이며; (ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 후기 프로모터이며; 그리고 (iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 또는 B19R 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다. 특이적 구체예들에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, pS의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 555, 서열 식별 번호: 556, 또는 서열 식별 번호: 557의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
또다른 측면에서, 다음을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에 제공된다: (a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며; (b) CTLA-4 (예를 들면, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되고, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고; (c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되고, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며; 그리고 (d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되고, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 하류에 있고; 이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다: (i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 pS 프로모터이며; (ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 후기 프로모터이며; 그리고 (iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 또는 B19R 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다. 특이적 구체예들에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, pS의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 555, 서열 식별 번호: 556, 또는 서열 식별 번호: 557의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
또다른 측면에서, 다음을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에 제공된다: (a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며; (b) CTLA-4 (예를 들면, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되고, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에 있는 부분적 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입되고; (c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며; 그리고 (d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 상류에 있고; 이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다: (i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 pS 프로모터이며; (ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 후기 프로모터이며; 그리고 (iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 또는 B19R 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다. 특이적 구체예들에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, pS의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 555, 서열 식별 번호: 556, 또는 서열 식별 번호: 557의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
또다른 측면에서, 다음을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에 제공된다: (a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며; (b) CTLA-4 (예를 들면, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되고, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에 있는 부분적 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입되고; (c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며; 그리고 (d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 하류에 있고; 이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다: (i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 pS 프로모터이며; (ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 후기 프로모터이며; 그리고 (iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 또는 B19R 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다. 특이적 구체예들에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, pS의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 555, 서열 식별 번호: 556, 또는 서열 식별 번호: 557의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
또다른 측면에서, 다음을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에 제공된다: (a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며; (b) CTLA-4 (예를 들면, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되고, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고; (c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며; 그리고 (d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 상류에 있고; 이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다: (i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터이며; (ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 F17R 프로모터이며; 그리고 (iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 또는 B19R 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다. 특이적 구체예들에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 또는 H5R 후기 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 및 H5R 후기 프로모터다. 특이적 구체예들에서, H5R 조기 프로모터는 서열 식별 번호: 553의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, H5R 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 554의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, F17R 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 563의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
또다른 측면에서, 다음을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에 제공된다: (a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며; (b) CTLA-4 (예를 들면, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되고, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고; (c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며; 그리고 (d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 하류에 있고; 이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다: (i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터이며; (ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 F17R 프로모터이며; 그리고 (iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 또는 B19R 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다. 특이적 구체예들에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 또는 H5R 후기 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 및 H5R 후기 프로모터다. 특이적 구체예들에서, H5R 조기 프로모터는 서열 식별 번호: 553의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, H5R 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 554의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, F17R 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 563의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
또다른 측면에서, 다음을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에 제공된다: (a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며; (b) CTLA-4 (예를 들면, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에 있는 부분적 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입되고; (c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며; 그리고 (d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 상류에 있고; 이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다: (i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터이며; (ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 F17R 프로모터이며; 그리고 (iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 또는 B19R 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다. 특이적 구체예들에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 또는 H5R 후기 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 및 H5R 후기 프로모터다. 특이적 구체예들에서, H5R 조기 프로모터는 서열 식별 번호: 553의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, H5R 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 554의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, F17R 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 563의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
또다른 측면에서, 다음을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에 제공된다: (a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며; (b) CTLA-4 (예를 들면, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에 있는 부분적 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입되고; (c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며; 그리고 (d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 하류에 있고; 이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다: (i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터이며; (ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 F17R 프로모터이며; 그리고 (iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다. 특이적 구체예들에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 또는 H5R 후기 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 및 H5R 후기 프로모터다. 특이적 구체예들에서, H5R 조기 프로모터는 서열 식별 번호: 553의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, H5R 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 554의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, F17R 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 563의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
또다른 측면에서, 다음을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에 제공된다: (a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며; (b) CTLA-4 (예를 들면, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고; (c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며; 그리고 (d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 상류에 있고; 이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다: (i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터이며; (ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 후기 프로모터이며; 그리고 (iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 E3L 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 또는 H5R 후기 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 및 H5R 후기 프로모터다. 특이적 구체예들에서, H5R 조기 프로모터는 서열 식별 번호: 553의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, H5R 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 554의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, E3L 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 567의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
또다른 측면에서, 다음을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에 제공된다: (a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며; (b) CTLA-4 (예를 들면, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고; (c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며; 그리고 (d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 하류에 있고; 이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다: (i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터이며; (ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 후기 프로모터이며; 그리고 (iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 E3L 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 또는 H5R 후기 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 및 H5R 후기 프로모터다. 특이적 구체예들에서, H5R 조기 프로모터는 서열 식별 번호: 553의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, H5R 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 554의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, E3L 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 567의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
또다른 측면에서, 다음을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에 제공된다: (a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며; (b) CTLA-4 (예를 들면, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에 있는 부분적 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입되고; (c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며; 그리고 (d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 상류에 있고; 이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다: (i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터이며; (ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 후기 프로모터이며; 그리고 (iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 E3L 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 또는 H5R 후기 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 및 H5R 후기 프로모터다. 특이적 구체예들에서, H5R 조기 프로모터는 서열 식별 번호: 553의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, H5R 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 554의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, E3L 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 567의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
또다른 측면에서, 다음을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에 제공된다: (a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며; (b) CTLA-4 (예를 들면, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에 있는 부분적 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입되고; (c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며; 그리고 (d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 하류에 있고; 이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다: (i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터이며; (ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 후기 프로모터이며; 그리고 (iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 E3L 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 또는 H5R 후기 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 및 H5R 후기 프로모터다. 특이적 구체예들에서, H5R 조기 프로모터는 서열 식별 번호: 553의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, H5R 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 554의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, E3L 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 567의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
또다른 측면에서, 다음을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에 제공된다: (a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며; (b) CTLA-4 (예를 들면, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고; (c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며; 그리고 (d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 상류에 있고; 이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다: (i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 pS 프로모터이며; (ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 F17R 프로모터이며; 그리고 (iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 E3L 프로모터다. 특이적 구체예들에서, pS 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 555, 서열 식별 번호: 556, 또는 서열 식별 번호: 557의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, F17R 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 563의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, E3L 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 567의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
또다른 측면에서, 다음을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에 제공된다: (a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며; (b) CTLA-4 (예를 들면, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고; (c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며; 그리고 (d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 하류에 있고; 이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다: (i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 pS 프로모터이며; (ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 F17R 프로모터이며; 그리고 (iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 E3L 프로모터다. 특이적 구체예들에서, pS 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 555, 서열 식별 번호: 556, 또는 서열 식별 번호: 557의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, F17R 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 563의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, E3L 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 567의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
또다른 측면에서, 다음을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에 제공된다: (a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며; (b) CTLA-4 (예를 들면, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에 있는 부분적 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입되고; (c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며; 그리고 (d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 상류에 있고; 이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다: (i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 pS 프로모터이며; (ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 F17R 프로모터이며; 그리고 (iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 E3L 프로모터다. 특이적 구체예들에서, pS 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 555, 서열 식별 번호: 556, 또는 서열 식별 번호: 557의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, F17R 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 563의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, E3L 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 567의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
또다른 측면에서, 다음을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에 제공된다: (a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며; (b) CTLA-4 (예를 들면, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에 있는 부분적 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입되고; (c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며; 그리고 (d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 하류에 있고; 이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다: (i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 pS 프로모터이며; (ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 F17R 프로모터이며; 그리고 (iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 E3L 프로모터다. 특이적 구체예들에서, pS 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 555, 서열 식별 번호: 556, 또는 서열 식별 번호: 557의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, F17R 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 563의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, E3L 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 567의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 일부 구체예들에서 이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자를 포함하고, 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 C2L 유전자에 인접하게 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 F3L 유전자에 인접하게 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 백시니아 유전자 C3L과 F4L 사이에 삽입된다. 본원에 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 본원에 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 B14R 유전자에 인접하게 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 B29R 유전자에 인접하게 삽입된다. 특정 구체예들에서 이때 B14R 유전자에서 부터 B29R까지의 유전자는 결손되며, 상기 제 1 형질전환유전자는 B13R 유전자에 인접하게 삽입된다.
본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 일부 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 2 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 C2L 유전자에 인접하게 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 F3L 유전자에 인접하게 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 2 형질전환유전자는 백시니아 유전자 C3L과 F4L 사이에 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 2 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 2 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 2 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 B14R 유전자에 인접하게 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 B29R 유전자에 인접하게 삽입된다. 특정 구체예들에서 이때 B14R 유전자에서 부터 B29R까지의 유전자는 결손되며, 상기 제 2 형질전환유전자는 B13R 유전자에 인접하게 삽입된다.
본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 일부 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 C2L 유전자에 인접하게 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 F3L 유전자에 인접하게 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 백시니아 유전자 C3L과 F4L 사이에 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 B14R 유전자에 인접하게 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 B29R 유전자에 인접하게 삽입된다. 특정 구체예들에서 이때 B14R 유전자에서 부터 B29R까지의 유전자는 결손되며, 상기 제 3 형질전환유전자는 B13R 유전자에 인접하게 삽입된다.
본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 일부 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 C2L 유전자에 인접하게 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 F3L 유전자에 인접하게 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 백시니아 유전자 C3L과 F4L 사이에 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 B14R 유전자에 인접하게 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 B29R 유전자에 인접하게 삽입된다. 특정 구체예들에서 이때 B14R 유전자에서 부터 B29R까지의 유전자는 결손되며, 상기 제 1 형질전환유전자와 제 2 형질전환유전자는 B13R 유전자에 인접하게 삽입된다.
본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 일부 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 C2L 유전자에 인접하게 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 F3L 유전자에 인접하게 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 백시니아 유전자 C3L과 F4L 사이에 삽입된다. 본원에 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 본원에 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 B14R 유전자에 인접하게 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 B29R 유전자에 인접하게 삽입된다. 특정 구체예들에서 이때 B14R 유전자에서 부터 B29R까지의 유전자는 결손되며, 상기 제 1 형질전환유전자와 제 3 형질전환유전자는 B13R 유전자에 인접하게 삽입된다.
본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 일부 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 C2L 유전자에 인접하게 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 F3L 유전자에 인접하게 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 백시니아 유전자 C3L과 F4L 사이에 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 B14R 유전자에 인접하게 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 B29R 유전자에 인접하게 삽입된다. 특정 구체예들에서 이때 B14R 유전자에서 부터 B29R까지의 유전자는 결손되며, 상기 제 2 형질전환유전자와 제 3 형질전환유전자는 B13R 유전자에 인접하게 삽입된다.
본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 일부 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 C2L 유전자에 인접하게 삽입되고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 F3L 유전자에 인접하게 삽입되고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 백시니아 유전자 C3L과 F4L 사이에 삽입되고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 일부 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 C2L 유전자에 인접하게 삽입되고, 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 F3L 유전자에 인접하게 삽입되고, 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 2 형질전환유전자는 백시니아 유전자 C3L과 F4L 사이에 삽입되고, 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 일부 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 C2L 유전자에 인접하게 삽입되고, 상기 부분 백시니아 F3L 유전자에 인접하게 삽입되고, 또는 백시니아 유전자 C3L과 F4L 사이에 삽입되고, 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 B14R 유전자에 인접하게 삽입되고, 상기 부분 백시니아 B29R 유전자에 인접하게 삽입되고, 또는 B14R 유전자에서부터 B29R까지의 유전자들이 결손될 때, B13R 유전자에 인접하게 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 일부 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 상기 제 1 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 C2L 유전자에 인접하게 삽입되고, 상기 부분 백시니아 F3L 유전자에 인접하게 삽입되고, 또는 백시니아 유전자 C3L과 F4L 사이에 삽입되고, 상기 제 1 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 B14R 유전자에 인접하게 삽입되고, 상기 부분 백시니아 B29R 유전자에 인접하게 삽입되고, 또는 B14R 유전자에서부터 B29R까지의 유전자들이 결손될 때, B13R 유전자에 인접하게 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 일부 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 B14R 유전자에 인접하게 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 B29R 유전자에 인접하게 삽입된다. B14R 유전자에서부터 B29R까지의 유전자들이B14R 유전자에서부터 B29R까지의 유전자들이 결손되는 특정 구체예들에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 B13R 유전자에 인접하게 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 일부 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 B14R 유전자에 인접하게 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 B29R 유전자에 인접하게 삽입된다. B14R 유전자에서부터 B29R까지의 유전자들이B14R 유전자에서부터 B29R까지의 유전자들이 결손되는 특정 구체예들에서, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 B13R 유전자에 인접하게 삽입된다.
본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 일부 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 C2L 유전자에 인접하게 삽입되고, 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 F3L 유전자에 인접하게 삽입되고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 백시니아 유전자 C3L과 F4L 사이에 삽입되고, 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 본원에 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 C2L 유전자에 인접하게 삽입되고, 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 F3L 유전자에 인접하게 삽입되고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 백시니아 유전자 C3L과 F4L 사이에 삽입되고, 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 본원에 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 C2L 유전자에 인접하게 삽입되고, 상기 부분 백시니아 F3L 유전자에 인접하게 삽입되고, 또는 백시니아 유전자 C3L과 F4L 사이에 삽입되고, 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 B14R 유전자에 인접하게 삽입되고, 상기 부분 백시니아 B29R 유전자에 인접하게 삽입되고, 또는 B14R 유전자에서부터 B29R까지의 유전자들이 결손될 때, B13R 유전자에 인접하게 삽입된다. 본원에 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 C2L 유전자에 인접하게 삽입되고, 상기 부분 백시니아 F3L 유전자에 인접하게 삽입되고, 또는 백시니아 유전자 C3L과 F4L 사이에 삽입되고, 상기 제 1 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 B14R 유전자에 인접하게 삽입되고, 상기 부분 백시니아 B29R 유전자에 인접하게 삽입되고, 또는 B14R 유전자에서부터 B29R까지의 유전자들이 결손될 때, B13R 유전자에 인접하게 삽입된다. 본원에 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 B14R 유전자에 인접하게 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 B29R 유전자에 인접하게 삽입된다. B14R 유전자에서부터 B29R까지의 유전자들이B14R 유전자에서부터 B29R까지의 유전자들이 결손되는 특정 구체예들에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B13R 유전자에 인접하게 삽입된다. 본원에 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 B14R 유전자에 인접하게 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 B29R 유전자에 인접하게 삽입된다. B14R 유전자에서부터 B29R까지의 유전자들이B14R 유전자에서부터 B29R까지의 유전자들이 결손되는 특정 구체예들에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 B13R 유전자에 인접하게 삽입된다.
본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 일부 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 C2L 유전자에 인접하게 삽입되고, 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 F3L 유전자에 인접하게 삽입되고, 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 2 형질전환유전자는 백시니아 유전자 C3L과 F4L 사이에 삽입되고, 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 C2L 유전자에 인접하게 삽입되고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 F3L 유전자에 인접하게 삽입되고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 백시니아 유전자 C3L과 F4L 사이에 삽입되고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 C2L 유전자에 인접하게 삽입되고, 상기 부분 백시니아 F3L 유전자에 인접하게 삽입되고, 또는 백시니아 유전자 C3L과 F4L 사이에 삽입되고, 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 B14R 유전자에 인접하게 삽입되고, 상기 부분 백시니아 B29R 유전자에 인접하게 삽입되고, 또는 B14R 유전자에서부터 B29R까지의 유전자들이 결손될 때, B13R 유전자에 인접하게 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 C2L 유전자에 인접하게 삽입되고, 상기 부분 백시니아 F3L 유전자에 인접하게 삽입되고, 또는 백시니아 유전자 C3L과 F4L 사이에 삽입되고, 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 B14R 유전자에 인접하게 삽입되고, 상기 부분 백시니아 B29R 유전자에 인접하게 삽입되고, 또는 B14R 유전자에서부터 B29R까지의 유전자들이 결손될 때, B13R 유전자에 인접하게 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 B14R 유전자에 인접하게 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 B29R 유전자에 인접하게 삽입된다. B14R 유전자에서부터 B29R까지의 유전자들이B14R 유전자에서부터 B29R까지의 유전자들이 결손되는 특정 구체예들에서, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B13R 유전자에 인접하게 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 B14R 유전자에 인접하게 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 B29R 유전자에 인접하게 삽입된다. B14R 유전자에서부터 B29R까지의 유전자들이B14R 유전자에서부터 B29R까지의 유전자들이 결손되는 특정 구체예들에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 B13R 유전자에 인접하게 삽입된다.
본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 일부 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 C2L 유전자에 인접하게 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 F3L 유전자에 인접하게 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 백시니아 유전자 C3L과 F4L 사이에 삽입된다. 본원에 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 B14R 유전자에 인접하게 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 B29R 유전자에 인접하게 삽입된다. B14R 유전자에서부터 B29R까지의 유전자들이B14R 유전자에서부터 B29R까지의 유전자들이 결손되는 특정 구체예들에서, 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B13R 유전자에 인접하게 삽입된다.
본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 C2L 유전자에 인접하게 삽입되고, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 F3L 유전자에 인접하게 삽입되고, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 백시니아 유전자 C3L과 F4L 사이에 삽입되고, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 C2L 유전자에 인접하게 삽입되고, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 F3L 유전자에 인접하게 삽입되고, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 2 형질전환유전자는 백시니아 유전자 C3L과 F4L 사이에 삽입되고, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 C2L 유전자에 인접하게 삽입되고, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 F3L 유전자에 인접하게 삽입되고, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 백시니아 유전자 C3L과 F4L 사이에 삽입되고, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 C2L 유전자에 인접하게 삽입되고, 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 F3L 유전자에 인접하게 삽입되고, 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 백시니아 유전자 C3L과 F4L 사이에 삽입되고, 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 C2L 유전자에 인접하게 삽입되고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 F3L 유전자에 인접하게 삽입되고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 백시니아 유전자 C3L과 F4L 사이에 삽입되고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 C2L 유전자에 인접하게 삽입되고, 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 F3L 유전자에 인접하게 삽입되고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 백시니아 유전자 C3L과 F4L 사이에 삽입되고, 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이 안에 삽입되며, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 C2L 유전자에 인접하게 삽입되고, 상기 부분 백시니아 F3L 유전자에 인접하게 삽입되고, 또는 백시니아 유전자 C3L과 F4L 사이에 삽입되고, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 B14R 유전자에 인접하게 삽입되고, 상기 부분 백시니아 B29R 유전자에 인접하게 삽입되고, 또는 B14R 유전자에서부터 B29R까지의 유전자들이 결손될 때, B13R 유전자에 인접하게 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 C2L 유전자에 인접하게 삽입되고, 상기 부분 백시니아 F3L 유전자에 인접하게 삽입되고, 또는 백시니아 유전자 C3L과 F4L 사이에 삽입되고, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 B14R 유전자에 인접하게 삽입되고, 상기 부분 백시니아 B29R 유전자에 인접하게 삽입되고, 또는 B14R 유전자에서부터 B29R까지의 유전자들이 결손될 때, B13R 유전자에 인접하게 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 C2L 유전자에 인접하게 삽입되고, 상기 부분 백시니아 F3L 유전자에 인접하게 삽입되고, 또는 백시니아 유전자 C3L과 F4L 사이에 삽입되고, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 B14R 유전자에 인접하게 삽입되고, 상기 부분 백시니아 B29R 유전자에 인접하게 삽입되고, 또는 B14R 유전자에서부터 B29R까지의 유전자들이 결손될 때, B13R 유전자에 인접하게 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 C2L 유전자에 인접하게 삽입되고, 상기 부분 백시니아 F3L 유전자에 인접하게 삽입되고, 또는 백시니아 유전자 C3L과 F4L 사이에 삽입되고, 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 B14R 유전자에 인접하게 삽입되고, 상기 부분 백시니아 B29R 유전자에 인접하게 삽입되고, 또는 B14R 유전자에서부터 B29R까지의 유전자들이 결손될 때, B13R 유전자에 인접하게 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 C2L 유전자에 인접하게 삽입되고, 상기 부분 백시니아 F3L 유전자에 인접하게 삽입되고, 또는 백시니아 유전자 C3L과 F4L 사이에 삽입되고, 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 B14R 유전자에 인접하게 삽입되고, 상기 부분 백시니아 B29R 유전자에 인접하게 삽입되고, 또는 B14R 유전자에서부터 B29R까지의 유전자들이 결손될 때, B13R 유전자에 인접하게 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 C2L 유전자에 인접하게 삽입되고, 상기 부분 백시니아 F3L 유전자에 인접하게 삽입되고, 또는 백시니아 유전자 C3L과 F4L 사이에 삽입되고, 상기 제 1 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 B14R 유전자에 인접하게 삽입되고, 상기 부분 백시니아 B29R 유전자에 인접하게 삽입되고, 또는 B14R 유전자에서부터 B29R까지의 유전자들이 결손될 때, B13R 유전자에 인접하게 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 B14R 유전자에 인접하게 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 B29R 유전자에 인접하게 삽입된다. B14R 유전자에서부터 B29R까지의 유전자들이B14R 유전자에서부터 B29R까지의 유전자들이 결손되는 특정 구체예들에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B13R 유전자에 인접하게 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 B14R 유전자에 인접하게 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 B29R 유전자에 인접하게 삽입된다. B14R 유전자에서부터 B29R까지의 유전자들이B14R 유전자에서부터 B29R까지의 유전자들이 결손되는 특정 구체예들에서, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B13R 유전자에 인접하게 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 B14R 유전자에 인접하게 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 B29R 유전자에 인접하게 삽입된다. B14R 유전자에서부터 B29R까지의 유전자들이B14R 유전자에서부터 B29R까지의 유전자들이 결손되는 특정 구체예들에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 B13R 유전자에 인접하게 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 B14R 유전자에 인접하게 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 B29R 유전자에 인접하게 삽입된다. B14R 유전자에서부터 B29R까지의 유전자들이B14R 유전자에서부터 B29R까지의 유전자들이 결손되는 특정 구체예들에서, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B13R 유전자에 인접하게 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 B14R 유전자에 인접하게 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 B29R 유전자에 인접하게 삽입된다. B14R 유전자에서부터 B29R까지의 유전자들이B14R 유전자에서부터 B29R까지의 유전자들이 결손되는 특정 구체예들에서, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 B13R 유전자에 인접하게 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 B14R 유전자에 인접하게 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 B29R 유전자에 인접하게 삽입된다. B14R 유전자에서부터 B29R까지의 유전자들이B14R 유전자에서부터 B29R까지의 유전자들이 결손되는 특정 구체예들에서, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 B13R 유전자에 인접하게 삽입된다.
본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 C2L 유전자에 인접하게 삽입되고, 상기 부분 백시니아 F3L 유전자에 인접하게 삽입되고, 또는 백시니아 유전자 C3L과 F4L 사이에 삽입되고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 B14R 유전자에 인접하게 삽입되고, 상기 부분 백시니아 B29R 유전자에 인접하게 삽입되고, 또는 B14R 유전자에서부터 B29R까지의 유전자들이 결손될 때, B13R 유전자에 인접하게 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 C2L 유전자에 인접하게 삽입되고, 상기 부분 백시니아 F3L 유전자에 인접하게 삽입되고, 또는 백시니아 유전자 C3L과 F4L 사이에 삽입되고, 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 B14R 유전자에 인접하게 삽입되고, 상기 부분 백시니아 B29R 유전자에 인접하게 삽입되고, 또는 B14R 유전자에서부터 B29R까지의 유전자들이 결손될 때, B13R 유전자에 인접하게 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 C2L 유전자에 인접하게 삽입되고, 상기 부분 백시니아 F3L 유전자에 인접하게 삽입되고, 또는 백시니아 유전자 C3L과 F4L 사이에 삽입되고, 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 B14R 유전자에 인접하게 삽입되고, 상기 부분 백시니아 B29R 유전자에 인접하게 삽입되고, 또는 B14R 유전자에서부터 B29R까지의 유전자들이 결손될 때, B13R 유전자에 인접하게 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 C2L 유전자에 인접하게 삽입되고, 상기 부분 백시니아 F3L 유전자에 인접하게 삽입되고, 또는 백시니아 유전자 C3L과 F4L 사이에 삽입되고, 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 B14R 유전자에 인접하게 삽입되고, 상기 부분 백시니아 B29R 유전자에 인접하게 삽입되고, 또는 B14R 유전자에서부터 B29R까지의 유전자들이 결손될 때, B13R 유전자에 인접하게 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 C2L 유전자에 인접하게 삽입되고, 상기 부분 백시니아 F3L 유전자에 인접하게 삽입되고, 또는 백시니아 유전자 C3L과 F4L 사이에 삽입되고, 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 B14R 유전자에 인접하게 삽입되고, 상기 부분 백시니아 B29R 유전자에 인접하게 삽입되고, 또는 B14R 유전자에서부터 B29R까지의 유전자들이 결손될 때, B13R 유전자에 인접하게 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 C2L 유전자에 인접하게 삽입되고, 상기 부분 백시니아 F3L 유전자에 인접하게 삽입되고, 또는 백시니아 유전자 C3L과 F4L 사이에 삽입되고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 B14R 유전자에 인접하게 삽입되고, 상기 부분 백시니아 B29R 유전자에 인접하게 삽입되고, 또는 B14R 유전자에서부터 B29R까지의 유전자들이 결손될 때, B13R 유전자에 인접하게 삽입된다.
본원에서 기술된 다양한 구체예들 및 측면들(이때 상기 핵산은 서열 식별 번호: 210의 뉴클레오티드 서열을 포함)에서, 상기 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자는 서열 식별 번호: 210의 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자이다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들 및 측면들(이때 상기 핵산은 서열 식별 번호: 210의 뉴클레오티드 서열을 포함)에서, 상기 부분적 B14R과 B29R 백시니아 유전자는 서열 식별 번호: 210의 부분적 B14R과 B29R 백시니아 유전자이다.
본원에서 기술된 다양한 구체예들 및 측면들(이때 상기 핵산은 서열 식별 번호: 624의 뉴클레오티드 서열을 포함)에서, 상기 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자는 서열 식별 번호: 624의 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자이다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들 및 측면들(이때 상기 핵산은 서열 식별 번호: 624의 뉴클레오티드 서열을 포함)에서, 상기 부분적 B14R과 B29R 백시니아 유전자는 서열 식별 번호: 624의 부분적 B14R과 B29R 백시니아 유전자이다.
본원에서 기술된 다양한 구체예들 및 측면들의 특이적 구체예에서, 상기 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자로의 삽입은 해당 재조합 백시니아 바이러스 게놈 안에 존재하는 5p 결손의 경계 내 삽입이다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들 및 측면들의 특이적 구체예에서, 상기 부분적 B14R과 B29R 백시니아 유전자로의 삽입은 해당 재조합 백시니아 바이러스 게놈 안에 존재하는 3p 결손의 경계 내 삽입이다.
본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 일부 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편 전장 항체 (예를 들면, 전장 인간 항체, 전장 인간화된 항체, 또는 전장 마우스 항체)다. 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 분할(cleavage) 펩티드, 예를 들면, 자가-분할 펩티드, 이를 테면, 2A 자가-분할 펩티드 (예를 들면, T2A 펩티드)에 의해 연계된 이필리무맙의 중쇄와 경쇄를 포함하는 폴리펩티드를 인코드한다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 분할 펩티드, 예를 들면, 자가-분할 펩티드, 이를 테면, 2A 자가-분할 펩티드 (예를 들면, T2A 펩티드)에 의해 연계된 이필리무맙의 중쇄 신호 펩티드와 중쇄, 그리고 경쇄 신호 펩티드와 경쇄를 포함하는 폴리펩티드를 인코드한다. 본원에 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 단일 쇄 항체 (예를 들면, 단일 쇄 인간 항체, 단일 쇄 인간화된 항체, 또는 단일 쇄 마우스 항체, 이를 테면, 예를 들면, 9D9)이다.
본원에서 기술된 다양한 구체예들 및 측면들의 특이적 구체예에서, 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터다. 또다른 본원에서 기술된 다양한 구체예들 및 측면들의 특이적 구체예에서, 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터다. 특정 구체예에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 일부 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 IL-12 펩티드는 해당 사이토킨의 막-결합된 형태(version)이다. 특이적 구체예들에서, IL-12 폴리펩티드는 IL-12 p35 (예를 들면, 인간 IL-12 p35) 그리고 막경유 도메인을 포함한다. 특이적 구체예에서, IL-12 폴리펩티드는 IL-12 p35 (예를 들면, 인간 IL-12 p35) 그리고 막경유 도메인 (IL12-TMp35)으로 구성된다. 특이적 구체예들에서, IL-12 폴리펩티드는 IL-12 p35 (예를 들면, 인간 IL-12 p35), 막경유 도메인과 세포질 도메인을 포함한다. 특이적 구체예에서, IL-12 폴리펩티드는 IL-12 p35 (예를 들면, 인간 IL-12 p35), 막경유 도메인과 세포질 도메인으로 구성된다. 상기 막경유 도메인은 임의의 막-결합된 단백질 (예를 들면, B7-1, 막-결합된 TNFα, 또는 막-결합된 FLT3L)로 부터 유래될 수 있다. 상기 세포질 도메인은 세포질 도메인 (예를 들면, B7-1, TNFα, 또는 FLT3L)을 함유하는 임의의 단백질로부터 유래될 수 있다. 특이적 구체예에서, IL-12 폴리펩티드는 IL-12 p35 (예를 들면, 인간 IL-12 p35) 그리고 B7 세포질 및 포유류 표면 디스플레이를 위해 공통적으로 이용되는 요소인 B7-1 항원의 막 도메인을 포함한다. 특이적 구체예에서, IL-12 폴리펩티드는 IL-12 p35 (예를 들면, 인간 IL-12 p35) 그리고 B7 세포질 및 B7-1 항원의 막 도메인으로 구성된다. 특이적 구체예들에서, IL-12 폴리펩티드는 IL-12 p70 (예를 들면, 인간 IL-12 p70)을 포함하는데, 이것은 p40 하위단위 (예를 들면, 인간 IL-12 p40) 그리고 p35 하위단위 (예를 들면, 인간 IL-12 p35), 그리고 막경유 도메인을 포함한다. 특이적 구체예에서, IL-12 폴리펩티드는 IL-12 p70 (예를 들면, 인간 IL-12 p70)로 구성되며, 이것은 p40 하위단위 (예를 들면, 인간 IL-12 p40) 그리고 p35 하위단위 (예를 들면, 인간 IL-12 p35), 그리고 막경유 도메인 (IL12-TMp70, 또는 p40-p35-TM)으로 구성된다. 특이적 구체예들에서, IL-12 폴리펩티드는 IL-12 p70 (예를 들면, 인간 IL-12 p70)을 포함하며, 이것은 p40 하위단위 (예를 들면, 인간 IL-12 p40) 그리고 p35 하위단위 (예를 들면, 인간 IL-12 p35), 그리고 막경유 도메인과 세포질 도메인을 포함한다. 특이적 구체예에서, IL-12 폴리펩티드는 IL-12 p70 (예를 들면, 인간 IL-12 p70)을 포함하며, 이것은 p40 하위단위 (예를 들면, 인간 IL-12 p40) 그리고 p35 하위단위 (예를 들면, 인간 IL-12 p35), 그리고 막경유 도메인과 세포질 도메인을 포함한다. 상기 막경유 도메인은 임의의 막-결합된 단백질 (예를 들면, B7-1, 막-결합된 TNFα, 또는 막-결합된 FLT3L)로 부터 유래될 수 있다. 상기 세포질 도메인은 세포질 도메인 (예를 들면, B7-1, TNFα, 또는 FLT3L)을 함유하는 임의의 단백질로부터 유래될 수 있다. 특이적 구체예에서, IL-12 폴리펩티드는 IL-12 p70 (예를 들면, 인간 IL-12 p70)을 포함하며, 이것은 p40 하위단위 (예를 들면, 인간 IL-12 p40) 그리고 p35 하위단위 (예를 들면, 인간 IL-12 p35), 그리고 B7 세포질 및 B7-1 항원의 막 도메인을 포함한다. 특이적 구체예에서, IL-12 폴리펩티드는 IL-12 p70 (예를 들면, 인간 IL-12 p70)로 구성되며, 이것은 p40 하위단위 (예를 들면, 인간 IL-12 p40) 그리고 p35 하위단위 (예를 들면, 인간 IL-12 p35), 그리고 B7 세포질 및 B7-1 항원의 막 도메인을 포함한다. 특정 구체예들에서, IL-12 폴리펩티드는 인간 IL-12 폴리펩티드 (예를 들면, 인간 IL12-TMp35 또는 인간 IL12-TMp70)이다. 특정 구체예들에서, IL-12 폴리펩티드는 마우스 IL-12 폴리펩티드 (예를 들면, 마우스 IL12-TMp35 또는 마우스 IL12-TMp70)이다.
본원에서 기술된 다양한 구체예들 및 측면들의 특이적 구체예에서, IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 갖는 후기 프로모터다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들 및 측면들의 특이적 구체예에서, IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들 및 측면들의 특이적 구체예에서, IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 갖는 후기 프로모터 및 B8R 프로모터다. 특정 구체예에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L은 FLT3L의 가용성 형태다. 특정 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L은 인간 FLT3L의 가용성 형태다. 특정 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L은 GenBank 수탁 번호. U03858.1에서 제시된 인간 FLT3L의 가용성 형태다. 예를 들면, 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L은 전체 FLT3L 막경유 (예를 들면, GenBank 수탁 번호. U03858.1에서 제시된 인간 FLT3L의 막경유 도메인)이 결여된다. 다른 실시예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인 (예를 들면, GenBank 수탁 번호. U03858.1에서 제시된 인간 FLT3L의 막경유 도메인)의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%가 결여된다. 한 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인과 전체 FLT3L 세포질 도메인이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인과 전체 FLT3L 세포질 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%가 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 그리고 FLT3L 세포질 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%가 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인과 FLT3L 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기중 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개가 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인과 FLT3L 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기 1개, 2개, 3개, 또는 4개가 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유 도메인과 세포질 도메인은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인과 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인과 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인과 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유 도메인과 세포외 도메인은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%와 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%과 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%과 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유 도메인과 세포외 도메인은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 전체 세포질 도메인, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 전체 세포질 도메인, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 전체 세포질 도메인, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유, 세포질 및 세포외 도메인들은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 전체 세포질 도메인, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 전체 세포질 도메인, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 전체 세포질 도메인, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유, 세포질 및 세포외 도메인들은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 세포질 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 세포질 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 세포질 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유, 세포질 및 세포외 도메인들은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 세포질 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 세포질 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 세포질 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유, 세포질 및 세포외 도메인들은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유, 세포질 및 세포외 도메인들은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유, 세포질 및 세포외 도메인들은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L은 X7 아이소폼(isoform)이며, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에는 Lyman et al., 1994, Blood 83:2795-2801에 기술된 바와 같이, 179개-뉴클레오티드 서열이 결여된다. 특이적 구체예들에서, FLT3L는 서열 식별 번호: 213의 아미노산 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시된다.
본원에서 기술된 다양한 구체예들 및 측면들의 특이적 구체예에서, 상기 FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들 및 측면들의 특이적 구체예에서, 상기 상기 FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B19R 프로모터다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들 및 측면들의 특이적 구체예에서, 상기 상기 FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다. 특정 구체예에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
본 발명은 탐지가능한 마커, 예를 들면, 형광 마커 (예를 들면, 녹색 형광 단백질 (GFP) 이를 테면, 강화된 GFP (eGFP))를 인코딩하는 제 4 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 4 형질전환유전자를 더 포함하는, 본원에서 기술된 핵산을 또한 고려한다. 특정 구체예들에서, 상기 핵산은 상기 형광 마커를 인코드하는 제 4 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함한다. 특정 구체예들에서, 상기 형광 마커를 인코드하는 제 4 뉴클레오티드 서열은 상기 제 1 뉴클레오티드 서열, 제 2 뉴클레오티드 서열, 그리고 제 3 뉴클레오티드 서열중 하나의 하류에 연계된다.
특이적 구체예에서, 상기 상기 형광 마커를 인코드하는 제 4 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 E3L 프로모터다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 상기 형광 마커를 인코드하는 제 4 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 p7.5 프로모터다.
특이적 구체예들에서, 표 45에서 확인된 형질전환유전자(들), 표 45에서 확인된 유전자좌 (loci)로 삽입된 형질전환유전자(들), 그리고 표 45에서 확인된 프로모터(들)에 작동가능하도록 연계 형질전환유전자(들)을 갖는, 서열 식별 번호: 210 또는 서열 식별 번호: 624의 뉴클레오티드 서열을 갖는 벡터가 본원에서 제공된다. 특이적 구체예들에서, 표 45에서 기재된 바와 같은 벡터가 본원에서 제공된다.
상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자, 상기 제 3 형질전환유전자, 및/또는 상기 제 4 형질전환유전자가 TK 유전자 유전자좌로 삽입될 수 있음이 또한 고려된다. (존재한다면) 다른 형질전환유전자는 다른 유전자좌, 예를 들면, 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이, B8R 유전자내 결손 좌, 상기 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이, 및/또는 HA 유전자 유전자좌로 삽입될 수 있다. 일부 구체예들에서, 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈은 TK 유전자 내 결손을 포함한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자, 상기 제 3 형질전환유전자, 및/또는 상기 제 4 형질전환유전자는 TK 유전자 내 결손 유전자좌로 삽입된다. 다른 구체예들에서, TK 유전자는 결손되지 않지만, 그러나, 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자, 상기 제 3 형질전환유전자, 및/또는 상기 제 4 형질전환유전자는 TK 유전자로 삽입되고, TK 유전자 기능을 방해한다.
다른 구체예들에서, 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈은 기능을 하는, 예를 들면, 야생형, TK 유전자를 포함하며, 상기 형질전환유전자(들)중 어느 것도 TK 유전자로 유전자좌로 삽입되지 않는다. 야생형 TK 유전자에는 백시니아 바이러스 게놈에서 자연적으로 발견되는 TK 유전자가 내포된다.
상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자, 상기 제 3 형질전환유전자, 및/또는 상기 제 4 형질전환유전자가 HA 유전자 유전자좌로 삽입될 수 있음이 또한 고려된다. 다른 형질전환유전자 (존재한다면)는 다른 유전자좌, 예를 들면, 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이, B8R 유전자내 결손 좌, 상기 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이, 및/또는 TK 유전자 유전자좌로 삽입될 수 있다. 일부 구체예들에서, 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈은 HA 유전자 내 결손을 포함한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자, 상기 제 3 형질전환유전자, 및/또는 상기 제 4 형질전환유전자는 HA 유전자 내 결손 유전자좌로 삽입된다. 다른 구체예들에서, HA 유전자는 결손되지 않지만, 그러나, 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자, 상기 제 3 형질전환유전자, 및/또는 상기 제 4 형질전환유전자는 HA 유전자로 삽입되고, HA 유전자 기능을 방해한다.
다른 구체예들에서, 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈은 기능을 하는, 예를 들면, 야생형, HA 유전자를 포함하며, 상기 형질전환유전자(들)중 어느 것도 HA 유전자로 유전자좌로 삽입되지 않는다. 야생형 HA 유전자에는 백시니아 바이러스 게놈에서 자연적으로 발견되는 HA 유전자가 내포된다.
본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 특정 구체예들에서, 적어도 하나의 프로모터는 상기 제 1 뉴클레오티드 서열, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열 및/또는 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계되고, 이때 상기 적어도 하나의 프로모터는 조기 프로모터, 후기 프로모터, 또는 조기/후기 프로모터다. 특정 구체예들에서, 상기 적어도 하나의 프로모터는 조기 프로모터 및 후기 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 후기 프로모터는 TAAAT 뉴클레오티드 서열 (서열 식별 번호: 631)을 포함할 수 있다.
본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 특정 구체예들에서, 항-CTLA-4 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 조기 프로모터, 후기 프로모터, 또는 조기/후기 프로모터다. 특정 구체예들에서, 상기 적어도 하나의 프로모터는 조기 프로모터 및 후기 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 후기 프로모터는 TAAAT 뉴클레오티드 서열 (서열 식별 번호: 631)을 포함할 수 있다. 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터이다 (예를 들면, AAAAATGAAAATAAA (서열 식별 번호: 630) 또는 TAAAAAATGAAAATAAATACAAAGGTTCTT (서열 식별 번호: 553의 뉴클레오티드 서열을 포함하며, 해당 서열의 상류 및/또는 하류에 임의선택적으로 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 또는 그 이상의 뉴클레오티드를 갖는다). 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 후기 프로모터 (예를 들면, TAAAT (서열 식별 번호: 631), TCTTGAGGGTTGTGTTAAATTGAAAGCGAGAAATAATCATAAAT (서열 식별 번호: 632), 또는 AAATTGAAAGCGAGAAATAATCATAAAT (서열 식별 번호: 554)의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 해당 서열의 상류 및/또는 하류에 임의선택적으로 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 또는 그 이상의 뉴클레오티드를 갖는다)이다. 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 (예를 들면, AAAAATGAAAATAAA (서열 식별 번호: 630) 또는 TAAAAAATGAAAATAAATACAAAGGTTCTT (서열 식별 번호: 553)을 포함하고, 해당 서열의 상류 및/또는 하류에 임의선택적으로 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 또는 그 이상의 뉴클레오티드를 갖는다) 그리고 H5R 후기 프로모터 (예를 들면, TAAAT (서열 식별 번호: 631), TCTTGAGGGTTGTGTTAAATTGAAAGCGAGAAATAATCATAAAT (서열 식별 번호: 632), 또는 AAATTGAAAGCGAGAAATAATCATAAAT (서열 식별 번호: 554)의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 해당 서열의 상류 및/또는 하류에 임의선택적으로 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 또는 그 이상의 뉴클레오티드를 갖는다)이다. H5R 후기 프로모터가 TAAAT (서열 식별 번호: 631)의 뉴클레오티드 서열을 포함할 때, 한 구체예에서, 상기 핵산은 TAAAT와 ATG 해독 개시 코돈 사이에 개재(intervening) 서열 (예를 들면, 개재 서열의 길이는 약 10개, 20개, 30개, 또는 40개-뉴클레오티드 길이이다)을 포함하며; 또다른 구체예에서, TAAAT와 ATG 해독 개시 코돈 사이에 개재 서열이 없다 (예를 들면, TAAAT의 마지막 두 개 뉴클레오티드는 상기 ATG 해독 개시 코돈의 처음 두 개 뉴클레오티드다). 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 pS 조기 프로모터 (예를 들면, AAAATTGAAATTTTA (서열 식별 번호: 555)의 뉴클레오티드 서열을 포함)이다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 pS 후기 프로모터 (예를 들면, TTTTATTTTTTTTTTTTGGAATATAAATA (서열 식별 번호: 556)의 뉴클레오티드 서열을 포함)이다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 pS 조기/후기 프로모터 (예를 들면, AAAATTGAAATTTTATTTTTTTTTTTTGGAATATAAATA (서열 식별 번호: 557)의 뉴클레오티드 서열을 포함)이다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 LEO 조기 프로모터 (예를 들면, TTTTATTTTTTTTTTTTGGAATATAAATA (서열 식별 번호: 556)의 뉴클레오티드 서열을 포함)이다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 LEO 후기 프로모터 (예를 들면, AAAATTGAAAAAATA (서열 식별 번호: 558)의 뉴클레오티드 서열을 포함)이다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 LEO 조기/후기 프로모터 (예를 들면, TTTTATTTTTTTTTTTTGGAATATAAATATCCGGTAAAATTGAAAAAATA (서열 식별 번호: 559)의 뉴클레오티드 서열을 포함)이다.
본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 특정 구체예들에서, IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 후기 프로모터다. 특이적 구체예에서, 상기 후기 프로모터는 TTNTTTTTTNTTTTTTTNNNNTATAAAT (서열 식별 번호: 560, 이때 N은 임의의 뉴클레오티드이다)의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 후기 프로모터는 TTGTATTTTCTTTTGTTGGCATATAAAT (서열 식별 번호: 561)의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 후기 프로모터는 D13L 프로모터 (예를 들면, TTTATTGTAAGCTTTTTCCATTTTAAAT (서열 식별 번호: 562)의 뉴클레오티드 서열을 포함)이다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 후기 프로모터는 F17R 프로모터 (예를 들면, TCATTTTGTTTTTTTCTATGCTATAAAT (서열 식별 번호: 563)의 뉴클레오티드 서열을 포함)이다.
본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 특정 구체예들에서, 상기 상기 FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 조기 프로모터, 후기 프로모터, 또는 조기/후기 프로모터다. 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 (예를 들면, TAAAAATTTAAAATATATTATCACTTCAGT (서열 식별 번호: 564)의 뉴클레오티드 서열을 포함)이다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B19R 프로모터 (예를 들면, AAAAAACTGATATTATATAAATATTTTAGT (서열 식별 번호: 565)의 뉴클레오티드 서열을 포함)이다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 NNAAAANTGAAAANATANNNNNNNNNNNNN (서열 식별 번호: 566, 이때 N은 임의의 뉴클레오티드이다)의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 E3L 프로모터 (예를 들면, AAAAAAATGATAAAGTAGGTTCAGTTTTAT (서열 식별 번호: 567)의 뉴클레오티드 서열을 포함)이다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 F11L 프로모터 (예를 들면, TAAAAAGTGAAAAACAATATTATTTTTATC (서열 식별 번호: 568)의 뉴클레오티드 서열을 포함)이다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B2R 프로모터 (예를 들면, AAAATTAAAAAATAACTTAATTTATTATTG (서열 식별 번호: 569)의 뉴클레오티드 서열을 포함)이다.
본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 특정 구체예들에서, 상기 프로모터 서열은 해당 프로모터가 작동가능하도록 연계된 형질전환유전자의 해독 개시 코돈의 약 100개 뉴클레오티드와 중첩되거나, 또는 이 안에 있다. 특이적 구체예에서, 상기 프로모터 서열은 해당 프로모터가 작동가능하도록 연계된 형질전환유전자의 해독 개시 코돈의 약 80개 뉴클레오티드 안에 있다. 특이적 구체예에서, 상기 프로모터 서열은 해당 프로모터가 작동가능하도록 연계된 형질전환유전자의 해독 개시 코돈의 약 70개 뉴클레오티드 안에 있다. 특이적 구체예에서, 상기 프로모터 서열은 해당 프로모터가 작동가능하도록 연계된 형질전환유전자의 해독 개시 코돈의 약 60개 뉴클레오티드 안에 있다. 특이적 구체예에서, 상기 프로모터 서열은 해당 프로모터가 작동가능하도록 연계된 형질전환유전자의 해독 개시 코돈의 약 50개 뉴클레오티드 안에 있다. 특이적 구체예에서, 상기 프로모터 서열은 해당 프로모터가 작동가능하도록 연계된 형질전환유전자의 해독 개시 코돈의 약 40개 뉴클레오티드 안에 있다. 특이적 구체예에서, 상기 프로모터 서열은 해당 프로모터가 작동가능하도록 연계된 형질전환유전자의 해독 개시 코돈의 약 30개 뉴클레오티드 안에 있다. 특이적 구체예에서, 상기 프로모터 서열은 해당 프로모터가 작동가능하도록 연계된 형질전환유전자의 해독 개시 코돈의 약 20개 뉴클레오티드 안에 있다. 특이적 구체예에서, 상기 프로모터 서열은 해당 프로모터가 작동가능하도록 연계된 형질전환유전자의 해독 개시 코돈의 약 10개 뉴클레오티드 안에 있다. 특이적 구체예에서, 상기 프로모터 서열은 해당 프로모터가 작동가능하도록 연계된 형질전환유전자의 해독 개시 코돈의 약 5개 뉴클레오티드 안에 있다. 특이적 구체예에서, 상기 프로모터 서열은 해당 프로모터가 작동가능하도록 연계된 형질전환유전자의 해독 개시 코돈의 2개 뉴클레오티드 안에 있다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 프로모터 서열은 해당 프로모터가 작동가능하도록 연계된 형질전환유전자의 해독 개시 코돈과 중첩된다.
핵산이 형질전환유전자를 포함하는 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 특정 구체예들에서, 상기 핵산은 미해독 영역 (UTR), 예를 들면, H5R UTR 또는 이의 일부분, 예를 들면, 해당 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 H5R UTR의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함할 수 있다. 특이적 구체예에서, H5R UTR 또는 이의 일부분은 H5R 조기 프로모터(예를 들면, AAAAATGAAAATAAA (서열 식별 번호: 630) 또는 TAAAAAATGAAAATAAATACAAAGGTTCTT (서열 식별 번호: 553의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 그리고 해당 서열의 상류 및/또는 하류에 임의선택적으로 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 또는 그 이상의 뉴클레오티드를 갖는다)를 포함한다. 또다른 특이적 구체예에서, H5R UTR 또는 이의 일부분은 H5R 후기 프로모터 (예를 들면, TAAAT (서열 식별 번호: 631), TCTTGAGGGTTGTGTTAAATTGAAAGCGAGAAATAATCATAAAT (서열 식별 번호: 632), 또는 AAATTGAAAGCGAGAAATAATCATAAAT (서열 식별 번호: 554)의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 해당 서열의 상류 및/또는 하류에 임의선택적으로 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 또는 그 이상의 뉴클레오티드를 갖는다)를 포함한다. 또다른 특이적 구체예에서, H5R UTR 또는 이의 일부분은 H5R 조기 프로모터 (예를 들면, AAAAATGAAAATAAA (서열 식별 번호: 630) 또는 TAAAAAATGAAAATAAATACAAAGGTTCTT (서열 식별 번호: 553)의 뉴클레오티드를 포함하고, 해당 서열의 상류 및/또는 하류에 임의선택적으로 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 또는 그 이상의 뉴클레오티드를 갖는다) 및 H5R 후기 프로모터 (예를 들면, TAAAT (서열 식별 번호: 631), TCTTGAGGGTTGTGTTAAATTGAAAGCGAGAAATAATCATAAAT (서열 식별 번호: 632), 또는 AAATTGAAAGCGAGAAATAATCATAAAT (서열 식별 번호: 554)의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 해당 서열의 상류 및/또는 하류에 임의선택적으로 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 또는 그 이상의 뉴클레오티드를 갖는다)를 포함한다. 또다른 특이적 구체예에서, H5R UTR은 TTAAAGTTACAAACAACTAGGAAATTGGTTTATGATGTATAATTTTTTTAGTTTTTATAGATTCTTTATTCTATACTTAAAAAATGAAAATAAATACAAAGGTTCTTGAGGGTTGTGTTAAATTGAAAGCGAGAAATAATCATAAATTATTTCATTATCGCGATATCCGTTAAGTTTGTATCGTA (서열 식별 번호: 626)의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
본원에 기술된 다양한 구체예들 및 측면의 특이적 구체예들에서(이때 상기 핵산은 CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자를 포함하는), 상기 핵산은 미해독 영역 (UTR)을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함할 수 있다. 예를 들면, 상기 UTR은 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 H5R UTR 또는 이의 일부분 (예를 들면, H5R UTR의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%)을 포함할 수 있다. 특이적 구체예에서, H5R UTR은 H5R 조기 프로모터(예를 들면, AAAAATGAAAATAAA (서열 식별 번호: 630) 또는 TAAAAAATGAAAATAAATACAAAGGTTCTT (서열 식별 번호: 553의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 그리고 해당 서열의 상류 및/또는 하류에 임의선택적으로 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 또는 그 이상의 뉴클레오티드를 갖는다)를 포함한다. 또다른 특이적 구체예에서, H5R UTR은 H5R 후기 프로모터 (예를 들면, TAAAT (서열 식별 번호: 631), TCTTGAGGGTTGTGTTAAATTGAAAGCGAGAAATAATCATAAAT (서열 식별 번호: 632), 또는 AAATTGAAAGCGAGAAATAATCATAAAT (서열 식별 번호: 554)의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 해당 서열의 상류 및/또는 하류에 임의선택적으로 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 또는 그 이상의 뉴클레오티드를 갖는다)를 포함한다. 또다른 특이적 구체예에서, H5R UTR은 H5R 조기 프로모터 (예를 들면, AAAAATGAAAATAAA (서열 식별 번호: 630) 또는 TAAAAAATGAAAATAAATACAAAGGTTCTT (서열 식별 번호: 553)의 뉴클레오티드를 포함하고, 해당 서열의 상류 및/또는 하류에 임의선택적으로 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 또는 그 이상의 뉴클레오티드를 갖는다) 및 H5R 후기 프로모터 (예를 들면, TAAAT (서열 식별 번호: 631), TCTTGAGGGTTGTGTTAAATTGAAAGCGAGAAATAATCATAAAT (서열 식별 번호: 632), 또는 AAATTGAAAGCGAGAAATAATCATAAAT (서열 식별 번호: 554)의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 해당 서열의 상류 및/또는 하류에 임의선택적으로 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 또는 그 이상의 뉴클레오티드를 갖는다)를 포함한다. 또다른 특이적 구체예에서, H5R UTR은 TTAAAGTTACAAACAACTAGGAAATTGGTTTATGATGTATAATTTTTTTAGTTTTTATAGATTCTTTATTCTATACTTAAAAAATGAAAATAAATACAAAGGTTCTTGAGGGTTGTGTTAAATTGAAAGCGAGAAATAATCATAAATTATTTCATTATCGCGATATCCGTTAAGTTTGTATCGTA (서열 식별 번호: 626)의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 특정 구체예들에서, 다음 유전자들중 적어도 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 20개, 30개, 40개, 50개, 60개, 70개, 80개, 90개, 또는 100개, 또는 이들 모두는 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈으로부터 결손되지 않는다: C3L, C4L, C5L, C6L, C7L, C8L, C9L, C10L, C11R, C12L, C13L, C14L, C15L (5'ITR에서), C16L (5'ITR에서), C17L (5'ITR에서), C18L (5'ITR에서), C19L (5'ITR에서), C20L (5'ITR에서), C21L (5'ITR에서), C22L (5'ITR에서), C23L (5'ITR에서), F4L, F5L, F6L, F7L, F8L, F9L, F10L, F11L, F12L, F13L, F14L, F15L, F16L, F17R, E1L, E2L, E3L, E4L, E5R, E6R, E7R, E8R, E9L, E10R, E11L, O1L, O2L, I1L, I2L, I3L, I4L, I5L, I6L, I7L, I8R, G1L, G2R, G3L, G4L, G5R, G6R, G7L, G8R, G9R, L1R, L2R, L3L, L4R, L5R, J1R, J2R, J3R, J4R, J5L, J6R, H1L, H2R, H3L, H4L, H5R, H6R, H7R, D1R, D2L, D3R, D4R, D5R, D6R, D7R, D8L, D9R, D10R, D11L, D12L, D13L, A1L, A2L, A3L, A4L, A5R, A6L, A7L, A8R, A9L, A10L, A11R, A12L, A13L, A14L, A15L, A16L, A17L, A18R, A19L, A20R, A21L, A22R, A23R, A24R, A25L, A26L, A27L, A28L, A29L, A30L, A31R, A32L, A33R, A34R, A35R, A36R, A37R, A38L, A39R, A40R, A41L, A42R, A43R, A44L, A45R, A46R, A47L, A48R, A49R, A50R, A51R, A52R, A53R, A54L, A55R, A56R, A57R, B1R, B2R, B3R, B4R, B5R, B6R, B7R, B8R, B9R, B10R, B11R, B12R, 및 B13R (예를 들면, 유전자 설명을 위해 Goebel et al., 1990, Virology 179(1):247-266 참고, 이는 이러한 설명에 대해 본원에 참고자료로 편입됨).
또다른 측면에서, 표 43에서 기술된 핵산 서열을 포함하는 핵산이 본원에서 제공된다.
또다른 측면에서, 섹션 6의 실시예에서 기술된 핵산이 본원에서 제공된다.
한 측면에서, 재조합 오르토폭스바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 제공되며, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된 적어도 2개 유전자 결손을 포함한다.
일부 구체예들에서, 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 3개 유전자 결손을 포함하며, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
일부 구체예들에서, 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 4개 유전자 결손을 포함하며, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
일부 구체예들에서, 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 5개 유전자 결손을 포함하며, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
일부 구체예들에서, 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 6개 유전자 결손을 포함하며, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
일부 구체예들에서, 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 7개 유전자 결손을 포함하며, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
일부 구체예들에서, 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 8개 유전자 결손을 포함하며, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
일부 구체예들에서, 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 9개 유전자 결손을 포함하며, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
일부 구체예들에서, 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 10개 유전자 결손을 포함하며, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
일부 구체예들에서, 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 11개 유전자 결손을 포함하며, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
일부 구체예들에서, 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 12개 유전자 결손을 포함하며, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
일부 구체예들에서, 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 13개 유전자 결손을 포함하며, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
일부 구체예들에서, 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 14개 유전자 결손을 포함하며, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
일부 구체예들에서, 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 15개 유전자 결손을 포함하며, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
일부 구체예들에서, 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 16개 유전자 결손을 포함하며, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
일부 구체예들에서, 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 17개 유전자 결손을 포함하며, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
일부 구체예들에서, 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 18개 유전자 결손을 포함하며, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
일부 구체예들에서, 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 19개 유전자 결손을 포함하며, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
일부 구체예들에서, 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 20개 유전자 결손을 포함하며, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
일부 구체예들에서, 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 21개 유전자 결손을 포함하며, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
일부 구체예들에서, 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 22개 유전자 결손을 포함하며, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
일부 구체예들에서, 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자 각각의 결손을 포함한다.
한 측면에서, 재조합 오르토폭스바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 제공되며, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된 적어도 1개 유전자 결손을 포함한다.
일부 구체예들에서, 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 2개 유전자 결손을 포함하며, 각 유전자는 B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
일부 구체예들에서, 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 3개 유전자 결손을 포함하며, 각 유전자는 B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
일부 구체예들에서, 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 4개 유전자 결손을 포함하며, 각 유전자는 B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
일부 구체예들에서, 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 5개 유전자 결손을 포함하며, 각 유전자는 B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
일부 구체예들에서, 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 6개 유전자 결손을 포함하며, 각 유전자는 B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
일부 구체예들에서, 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자 각각의 결손을 포함한다.
한 측면에서, 재조합 오르토폭스바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 제공되며, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, 그리고 F3L 유전자로 구성된 군에서 선택된 적어도 1개 유전자 결손을 포함한다.
일부 구체예들에서, 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 2개 유전자 결손을 포함하며, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, 그리고 F3L 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
일부 구체예들에서, 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 3개 유전자 결손을 포함하며, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, 그리고 F3L 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
일부 구체예들에서, 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 4개 유전자 결손을 포함하며, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, 그리고 F3L 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
일부 구체예들에서, 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 5개 유전자 결손을 포함하며, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, 그리고 F3L 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
일부 구체예들에서, 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 6개 유전자 결손을 포함하며, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, 그리고 F3L 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
일부 구체예들에서, 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 7개 유전자 결손을 포함하며, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, 그리고 F3L 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
일부 구체예들에서, 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 8개 유전자 결손을 포함하며, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, 그리고 F3L 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
일부 구체예들에서, 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 9개 유전자 결손을 포함하며, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, 그리고 F3L 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
일부 구체예들에서, 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 10개 유전자 결손을 포함하며, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, 그리고 F3L 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
일부 구체예들에서, 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 11개 유전자 결손을 포함하며, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, 그리고 F3L 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
일부 구체예들에서, 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 12개 유전자 결손을 포함하며, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, 그리고 F3L 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
일부 구체예들에서, 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 13개 유전자 결손을 포함하며, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, 그리고 F3L 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
일부 구체예들에서, 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 14개 유전자 결손을 포함하며, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, 그리고 F3L 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
일부 구체예들에서, 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 15개 유전자 결손을 포함하며, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, 그리고 F3L 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
일부 구체예들에서, 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, 그리고 F3L 유전자 각각의 결손을 포함한다.
일부 구체예들에서, 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 숙주 상호작용에 연루된 단백질을 인코드하는 적어도 1개 유전자 결손을 포함한다. 예를 들면, 일부 구체예들에서, 전술한 단백질은 세포외 매트릭스에 대한 칼슘-독립성 흡착에 영향을 준다. 일부 구체예들에서, 전술한 단백질은 NF-kB 억제제, 예를 들면, C2L, N1L, M2L, K1L, 그리고 K7R 유전자로 구성된 군에서 선택된 유전제에 의해 인코드된 NF-kB 억제제다. 일부 구체예들에서, 전술한 단백질은 아팝토시스 억제제, 예를 들면, 카스파제-9 억제제 (이를 테면, F1L 유전자에 의해 인코드된 것), BCL-2-유사 단백질 (이를 테면, N1L에 의해 인코드된 단백질)이다. 일부 구체예들에서, 전술한 단백질은 인터페론 조절 인자 3 (IRF3) 억제제 (이를 테면, N2L 또는 K7R에 의해 인코드된 것), 세린 프로테아제 억제제, 세포 융합을 억제시키는 단백질 (이를 테면, K2L에 의해 인코드된 단백질), RNA-활성화된 단백질 키나제 (PKR) 억제제 (이를 테면, K1L 또는 K3L에 의해 인코드된 것), 독성 인자 (이를 테면, F3L에 의해 인코드된 것), IL-1-베타 억제제 (이를 테면, B16R에 의해 인코드된 것), 또는 분비된 IFNα 격리자(sequestor) (이를 테면, B19R에 의해 인코드된 것)이다.
일부 구체예들에서, 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 DNA 복제에 연루된 단백질을 인코딩하는 적어도 1개 유전자 결손을 포함한다. 예를 들면, 일부 구체예들에서, 전술한 단백질은 DNA 변형 뉴클레아제 (예를 들면, K4L에 의해 인코드된 단백질) 또는 데옥시우리딘 트리포스파타제 (dUTPase) (예를 들면, F2L에 의해 인코드된 단백질)이다.
일부 구체예들에서, 적어도 하나의 결손된 유전자의 전체 뉴클레오티드 서열이 결손된다. 일부 구체예들에서, 적어도 하나의 결손된 유전자는 단지 부분적으로 결손되며, 그리고 해당 부분 결손으로 전술한 부분적으로 결손된 유전자가 숙주 세포 안으로 도입될 때 비기능성이 되도록 하는데 충분하다.
일부 구체예들에서, 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 역전된 말단 반복 (ITRs)의 적어도 두 개 복사본을 포함한다.
일부 구체예들에서, 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈에는 ITRs의 임의의 복사본이 결여되어 있다.
일부 구체예들에서, 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 B21R-ITR, B22R-ITR, B23R-ITR, B24R-ITR, B25R-ITR, B26R-ITR, B27R-ITR, B28R-ITR, 및 B29R-ITR로 구성된 군에서 선택된 ITR중 적어도 하나의 복사본에 결손을 포함한다.
일부 구체예들에서, 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 ITRs의 다음 복사본중 적어도 모두에서 결손을 포함한다: B21R-ITR, B22R-ITR, B23R-ITR, B24R-ITR, B25R-ITR, B26R-ITR, B27R-ITR, B28R-ITR, 및 B29R-ITR.
일부 구체예들에서, 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 B8R 유전자내 결손을 포함한다.
일부 구체예들에서, 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 무손상 B8R 유전자를 포함한다.
한 측면에서, 재조합 오르토폭스바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 제공되며, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 (i) C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, B20R, 및 B8R 유전자 각각의 결손, 그리고 (ii) 다음 ITRs에서 각 복사본에서 결손을 포함한다: B21R-ITR, B22R-ITR, B23R-ITR, B24R-ITR, B25R-ITR, B26R-ITR, B27R-ITR, B28R-ITR, 및 B29R-ITR.
한 측면에서, 재조합 오르토폭스바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 제공되며, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 (i) C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자 각각의 결손; 그리고 (ii) 다음 ITRs에서 각 복사본에서 결손을 포함한다: B21R-ITR, B22R-ITR, B23R-ITR, B24R-ITR, B25R-ITR, B26R-ITR, B27R-ITR, B28R-ITR, 및 B29R-ITR, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 무손상 B8R 유전자를 포함한다.
일부 구체예들에서, 제공된 핵산은 면역 체크포인트 억제제를 인코딩하는 형질전환유전자, 인터루킨 (IL)을 인코딩하는 형질전환유전자, 그리고 사이토킨을 인코딩하는 형질전환유전자으로 구성된 군에서 선택된 적어도 하나의 형질전환유전자를 더 포함한다. 일부 구체예들에서, 제공된 핵산은 면역 체크포인트 억제제를 인코딩하는 형질전환유전자, 인터루킨 (IL)을 인코딩하는 형질전환유전자, 그리고 사이토킨을 인코딩하는 형질전환유전자으로 구성된 군에서 선택된 적어도 두 개의 형질전환유전자를 더 포함한다. 일부 구체예들에서, 제공된 핵산은 면역 체크포인트 억제제를 인코딩하는 형질전환유전자, 인터루킨 (IL)을 인코딩하는 형질전환유전자, 그리고 사이토킨을 인코딩하는 형질전환유전자를 더 포함한다.
예를 들면, 일부 구체예들에서, 제공된 핵산은 면역 체크포인트 억제제를 인코딩하는 형질전환유전자를 포함한다. 일부 구체예들에서, 전술한 면역 체크포인트 억제제는 OX40 리간드, ICOS 리간드, 항-CD47 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-CD40/CD40L 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-Lag3 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-PD-L1 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-PD1 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 그리고 항-Tim-3 항체 또는 이의 항원-결합 단편으로 구성된 군에서 선택된다. 일부 구체예들에서, 전술한 면역 체크포인트 억제제는 항-PD-L1 항체 또는 이의 항원-결합 단편 또는 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다. 일부 구체예들에서, 전술한 면역 체크포인트 억제제는 항-PD1 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다. 일부 구체예들에서, 전술한 면역 체크포인트 억제제는 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다.
예를 들면, 일부 구체예들에서, 제공된 핵산은 인터루킨 (IL)을 인코딩하는 형질전환유전자를 포함한다. 일부 구체예들에서, 전술한 인터루킨은 IL-1 알파, IL-1 베타, IL-2, IL-4, IL-7, IL-10, IL-12 p35, IL-12 p40, IL-12 p70, IL-15, IL-18, IL-21, 그리고 IL-23로 구성된 군에서 선택된다. 일부 구체예들에서, 전술한 인터루킨은 IL-12 p35, IL-12 p40, 그리고 IL-12 p70으로 구성된 군에서 선택된다. 일부 구체예들에서, 전술한 인터루킨은 막-결합된다. 일부 구체예들에서, 전술한 인터루킨은 막-결합된 IL-12 p70이다. 일부 구체예들에서, 전술한 인터루킨은 막-결합된 IL-12 p35이다.
예를 들면, 일부 구체예들에서, 제공된 핵산은 사이토킨을 인코딩하는 형질전환유전자를 포함한다. 일부 구체예들에서, 전술한 사이토킨은 인터페론 (IFN)이다. 일부 구체예들에서, 상기 인터페론은 IFN-알파, IFN-베타, IFN-델타, IFN-입실론, IFN-타우, IFN-오메가, IFN-제타, 그리고 IFN-감마로 구성된 군에서 선택된다.
일부 구체예들에서, 상기 사이토킨은 TNF 수퍼패밀리 구성원 단백질이다. 일부 구체예들에서, TNF 수퍼패밀리 구성원 단백질은 TRAIL, Fas 리간드, LIGHT (TNFSF-14), TNF-알파, 그리고 4-1BB 리간드로 구성된 군에서 선택된다.
일부 구체예들에서, 상기 사이토킨은 GM-CSF, Flt3 리간드, CD40 리간드, TGF-베타, VEGF-R2, 그리고 c-kit로 구성된 군에서 선택된다. 일부 구체예들에서, 상기 사이토킨은 Flt3 리간드이다.
일부 구체예들에서, 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈 B8R 유전자내 결손을 포함하고, 적어도 하나의 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손에 삽입된다. 일부 구체예들에서, 적어도 2 개의 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손에 삽입된다. 일부 구체예들에서, 적어도 3 개의 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손에 삽입된다. 일부 구체예들에서, 적어도 하나의 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손이 아닌 유전자 좌, 예를 들면, 오르토폭스바이러스 게놈의 5'단부에서 결손 경계에 있는 유전자좌 또는 오르토폭스바이러스 게놈의 3'단부에서 결손 경계에 있는 유전자좌에 삽입된다.
한 측면에서, 재조합 오르토폭스바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 제공되며, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 (i) C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, B20R, 및 B8R 유전자 각각의 결손; (ii) 다음 ITRs에서 각 복사본에서 결손을 포함한다: B21R-ITR, B22R-ITR, B23R-ITR, B24R-ITR, B25R-ITR, B26R-ITR, B27R-ITR, B28R-ITR, 및 B29R-ITR; (iii) B8R 유전자내 결손으로 삽입된 IL-12-TM 형질전환유전자; (iv) B8R 유전자내 결손으로 삽입된 Flt3 리간드 형질전환유전자; 그리고 (v) 다음중 하나: (a) 단일 쇄 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 형질전환유전자, 또는 (b) (i) 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 중쇄를 인코드하는 형질전환유전자, 그리고 (ii) 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 경쇄를 인코드하는 형질전환유전자, 이때 상기 (v)의 형질전환유전자(들)은 상기 재조합 오르토폭스바이러스 게놈에 존재하는 5p 결손의 경계 안에 삽입되며, 이때 상기 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 CTLA-4에 결합할 수 있다.
일부 구체예들에서, 상기 오르토폭스바이러스 게놈은 서열 식별 번호: 210의 서열로부터 유래되며, 이때 (a) 전술한 유래된 서열은 B8R 유전자 결손, 그리고 IL-12-TM 형질전환유전자, Flt3 리간드 형질전환유전자, 그리고 단일쇄 또는 이중-쇄 항-CTLA-4 항체를 인코딩하는 형질전환유전자(들)을 포함하며; (b) IL-12-TM 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 212의 아미노산 서열을 포함하는 단백질을 인코드하며; (c) Flt3 리간드 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 213의 아미노산 서열을 포함하는 단백질을 인코드하고; 그리고 (d) 상기 항-CTLA-4 항체는 서열 식별 번호: 211의 아미노산 서열을 포함한다.
제공된 핵산의 일부 구체예들에서, 상기 핵산은 종양-연합된 항원을 인코딩하는 형질전환유전자, 예를 들면, 표 3-30중 임의의 하나에 열거된 종양-연합된 항원을 더 포함한다. 일부 구체예들에서, 상기 종양-연합된 항원은 CD19, CD33, EpCAM, CEA, PSMA, EGFRvIII, CD133, EGFR, CDH19, ENPP3, DLL3, MSLN, ROR1, HER2, HLAA2, EpHA2, EpHA3, MCSP, CSPG4, NG2, RON, FLT3, BCMA, CD20, FAPα, FRα, CA-9, PDGFRα, PDGFRβ, FSP1, S100A4, ADAM12m, RET, MET, FGFR, INSR, 및 NTRK로 구성된 군에서 선택된 종양-연합된 항원이다.
일부 구체예들에서, 상기 종양-연합된 항원은 MAGE-A3, 또는 이의 하나 또는 그 이상 단편들을 포함한다.
일부 구체예들에서, 상기 종양-연합된 항원은 NY-ESO-1, 또는 이의 하나 또는 그 이상 단편들을 포함한다.
일부 구체예들에서, 상기 종양-연합된 항원은 하나 또는 그 이상의 인간 유두종바이러스 (HPV) 단백질, 또는 이의 단편들을 포함한다. 일부 구체예들에서, HPV 단백질 또는 이의단편들은 (i) HPV16의 E6 및 E7 단백질, 또는 이의 단편들, 그리고 (ii) HPV18의 E6 및 E7 단백질, 또는 이의 단편들중 하나 또는 그 이상을 포함한다. 일부 구체예들에서, 전술한 HPV 단백질 또는 단편들의 서열은국제 특허 공개 WO/2014/127478(이의 내용은 본원에 참고자료로 편입됨)에 기재된다.
일부 구체예들에서, 상기 종양-연합된 항원은 단미증(brachyury) 또는 이의 하나 또는 그 이상 단편들을 포함한다.
일부 구체예들에서, 상기 종양-연합된 항원은 전립선산 포스파타제(prostatic acid phosphatase), 또는 이의 하나 또는 그 이상 단편들을 포함한다.
본원에서 기술된 하나 이상의 형질전환유전자들이 재조합 오르토폭스바이러스 게놈 (예를 들면, 재조합 백시니아 바이러스 게놈)으로 삽입될 때, 해당 형질전환유전자는 하나의 유전자좌 또는 다수의 유전자좌 (예를 들면, 두 개의 유전자좌 또는 세 개의 유전자좌)로 삽입될 수 있다. 상기에서 기술된 두 개 또는 그 이상의 형질전환유전자가 동일한 유전자좌로 삽입될 때, 해당 형질전환유전자는 상기 측면 내생적 오르토폭스바이러스 유전자 (예를 들면, 백시니아 바이러스 유전자)중 하나 또는 이 둘 모두에 대해 그리고 또한 서로에 대해 동일한 방향으로 삽입될 수 있거나, 또는 상이한 방향으로 삽입될 수 있다. 두 개 또는 그 이상의 형질전환유전자는 동일한 유전자좌로 삽입될 때, 재조합 오르토폭스바이러스 게놈 (예를 들면, 재조합 백시니아 바이러스 게놈)의 동일한 좌로 삽입된 형질전환유전자들의 순서는 상이할 수 있다.
본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 특정 구체예들에서, CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열은 해당 항-CTLA-4 항체 (예를 들면, 이필리무맙)의 중쇄와 경쇄를 인코드하며, 이들 두 쇄는 분할 펩티드, 예를 들면 자가-분할 펩티드, 예를 들면, 2A 자가-분할 펩티드에 의해 분리되어 있다. 특이적 구체예에서, 2A 자가-분할 펩티드는 T2A 펩티드이다. 특정 구체예에서, T2A 펩티드는 아미노산 서열 GSGEGRGSLLTCGDVEENPGP (서열 식별 번호: 570)을 포함한다. 특정 구체예에서, T2A 펩티드는 아미노산 서열, PRGSGEGRGSLLTCGDVEENPGP (서열 식별 번호: 571)을 포함한다. 또다른 특정 구체예에서, T2A 펩티드는 아미노산 서열, EGRGSLLTCGDVEENPGP (서열 식별 번호: 572)을 포함한다. 또다른 특이적 구체예에서, 2A 자가-분할 펩티드는 P2A 펩티드이다. 특정 구체예에서, P2A 펩티드는 아미노산 서열, GSGATNFSLLKQAGDVEENPGP (서열 식별 번호: 573)을 포함한다. 또다른 특정 구체예에서, P2A 펩티드는 아미노산 서열, ATNFSLLKQAGDVEENPGP (서열 식별 번호: 574)을 포함한다. 또다른 특이적 구체예에서, 2A 자가-분할 펩티드는 E2A 펩티드이다. 특정 구체예에서, E2A 펩티드는 아미노산 서열, GSGQCTNYALLKLAGDVESNPGP (서열 식별 번호: 575)을 포함한다. 또다른 특정 구체예에서, E2A 펩티드는 아미노산 서열, QCTNYALLKLAGDVESNPGP (서열 식별 번호: 576)을 포함한다. 또다른 특이적 구체예에서, 2A 자가-분할 펩티드는 F2A 펩티드이다. 특정 구체예에서, F2A 펩티드는 아미노산 서열, GSGVKQTLNFDLLKLAGDVESNPGP (서열 식별 번호: 577)을 포함한다. 또다른 특정 구체예에서, F2A 펩티드는 아미노산 서열, VKQTLNFDLLKLAGDVESNPGP (서열 식별 번호: 578)을 포함한다. 2A 자가-분할 펩티드에 의한 항체의 중쇄와 경쇄의 연계로 상기 항체 형질전환유전자가 하나의 개방 판독 프레임에서 해독되며, 자가-분할이 동시 해독되어, 공동-발현된 중쇄와 경쇄이 동량이 되도록 한다. 특이적 구체예에서, 본원에서 기술된 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 항-CTLA-4 항체는 서열 식별 번호: 211의 아미노산 서열을 포함한다.
다양한 구체예들에서, 본원에서 제공된 핵산은 재조합 핵산이다.
5.2.4. 변형된 오르토폭스바이러스
한 측면에서, 섹션 5.2.3에서 기술된 핵산을 포함하는 바이러스가 본원에서 제공된다. 특이적 구체예에서, 섹션 5.2.3에서 기술된 핵산을 포함하는 바이러스가 본원에서 제공되며, 이때 상기 핵산은 막-결합된 IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자를 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함한다.
또다른 측면에서, 섹션 6의 실시예에서 기술된 바이러스가 본원에서 제공된다.
또다른 측면에서, 본원에서 기술된 재조합 오르토폭스바이러스 게놈을 포함하는 핵산을 포함하는 바이러스가 제공된다. 일부 구체예들에서, a) 상기 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된 적어도 2개 유전자 결손을 포함하고; b) 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된 적어도 1개 유전자 결손을 포함하고; 또는 c) 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, 그리고 F3L 유전자로 구성된 군에서 선택된 적어도 1개 유전자 결손을 포함한다.
일부 구체예들에서, 전술한 바이러스는 백시니아 바이러스로부터 유래된다. 일부 구체예들에서, 전술한 백시니아 바이러스는 Copenhagen, Western Reserve, Wyeth, Lister, EM63, ACAM2000, LC16m8, CV-1, 변형된 백시니아 Ankara (MVA), Dairen I, GLV-1h68, IHD-J, L-IVP, LC16mO, Tashkent, Tian Tan, 그리고 WAU86/88-1로 구성된 군에서 선택된 균주로부터 유래된다. 일부 구체예들에서, 전술한 백시니아 바이러스는 Copenhagen, Western Reserve, Tian Tan, Wyeth, 그리고 Lister로 구성된 군에서 선택된 균주로부터 유래된다. 일부 구체예들에서, 전술한 백시니아 바이러스는 Copenhagen 균주 백시니아 바이러스로부터 유래된다.
일부 구체예들에서, 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 티미딘 키나제 (TK) 유전자를 더 포함한다. 일부 구체예들에서, 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 리보뉴클레오티드 환원효소 유전자를 더 포함한다.
제공된 바이러스의 일부 구체예들에서, 세포 (예를 들면, 포유류 세포)에 전술한 바이러스를 접촉시킬 때, 해당 세포 (예를 들면, 포유류 세포) 집단은 전술한 결손을 포함하지 않는 형태의 바이러스와 접촉된 동일한 유형의 세포 (예를 들면, 포유류 세포) 집단과 비교하여, 합포체 형성이 증가되는 것으로 나타난다.
제공된 바이러스의 일부 구체예들에서, 세포 (예를 들면, 포유류 세포)에 전술한 바이러스를 접촉시킬 때, 해당 세포 (예를 들면, 포유류 세포) 집단은 전술한 결손을 포함하지 않는 형태의 바이러스와 접촉된 동일한 유형의 세포 (예를 들면, 포유류 세포) 집단과 비교하여, 해당 바이러스의 확산이 증가되는 것으로 나타난다.
제공된 바이러스의 일부 구체예들에서, 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 벡터는 전술한 결손을 포함하지 않는 형태의 바이러스의 것과 비교하여, 해당 세포 (예를 들면, 포유류 세포)에서 증가된 세포독성 효과를 발휘한다.
일부 구체예들에서, 전술한 포유류 세포는 인간 세포다.
일부 구체예들에서, 전술한 인간 세포는 암 세포다.
일부 구체예들에서, 전술한 포유류 세포는 U2OS, 293, 293T, Vero, HeLa, A549, BHK, BSC40, CHO, OVCAR-8, 786-0, NCI-H23, U251, SF-295, T-47D, SKMEL2, BT-549, SK-MEL-28, MDA-MB-231, SK-OV-3, MCF7, M14, SF-268, CAKI-1, HPAV, OVCAR-4, HCT15, K-562, 그리고 HCT-116으로 구성된 군에서 선택된 세포주의 세포다.
제공된 바이러스의 일부 구체예들에서, 상기 바이러스는 종양-연합된 항원, 예를 들면, 표 3-30중 임의의 하나에 열거된 종양-연합된 항원을 인코딩하는 형질전환유전자를 더 포함한다. 일부 구체예들에서, 상기 종양-연합된 항원은 CD19, CD33, EpCAM, CEA, PSMA, EGFRvIII, CD133, EGFR, CDH19, ENPP3, DLL3, MSLN, ROR1, HER2, HLAA2, EpHA2, EpHA3, MCSP, CSPG4, NG2, RON, FLT3, BCMA, CD20, FAPα, FRα, CA-9, PDGFRα, PDGFRβ, FSP1, S100A4, ADAM12m, RET, MET, FGFR, INSR, 및 NTRK로 구성된 군에서 선택된 종양-연합된 항원이다.
일부 구체예들에서, 상기 종양-연합된 항원은 MAGE-A3, 또는 이의 하나 또는 그 이상 단편들을 포함한다.
일부 구체예들에서, 상기 종양-연합된 항원은 NY-ESO-1, 또는 이의 하나 또는 그 이상 단편들을 포함한다.
일부 구체예들에서, 상기 종양-연합된 항원은 하나 또는 그 이상의 인간 유두종바이러스 (HPV) 단백질, 또는 이의 단편들을 포함한다. 일부 구체예들에서, HPV 단백질 또는 이의단편들은 (i) HPV16의 E6 및 E7 단백질, 또는 이의 단편들, 그리고 (ii) HPV18의 E6 및 E7 단백질, 또는 이의 단편들중 하나 또는 그 이상을 포함한다. 일부 구체예들에서, 전술한 HPV 단백질 또는 단편들의 서열은국제 특허 공개 WO/2014/127478(이의 내용은 본원에 참고자료로 편입됨)에 기재된다.
일부 구체예들에서, 상기 종양-연합된 항원은 단미증(brachyury) 또는 이의 하나 또는 그 이상 단편들을 포함한다.
일부 구체예들에서, 상기 종양-연합된 항원은 전립선산 포스파타제, 또는 이의 하나 또는 그 이상 단편들을 포함한다.
특정 구체예들에서, 본원에서 제공된 바이러스는 단리된 바이러스다. 특정 구체예들에서, 본원에서 제공된 바이러스는 정제된 바이러스다.
다양한 구체예들에서, 본원에서 제공된 바이러스는 재조합 바이러스다.
특정 구체예들에서, 본원에서 제공된 바이러스는 환자 (예를 들면, 포유류 환자)에게 투여될 때, 수두 병변 형성을 야기하지 않는다. 특정 구체예들에서, 본원에서 제공된 바이러스는 시험관내에서 복제될 수 있고, 및/또는 환자 (예를 들면, 포유류 환자)에게 투여될 때, 복제될 수 있다. 특정 구체예들에서, 본원에서 제공된 바이러스는 시험관내에서 및/또는 환자 (예를 들면, 포유류 환자)에게 투여될 때, 본원에서 기술된 형질전환유전자(들)을 발현시킬 수 있다. 특정 구체예들에서, 본원에서 제공된 바이러스는 시험관내에서 및/또는 환자 (예를 들면, 포유류 환자)에게 투여될 때, 표적 종양 세포들을 사멸시킬 수 있다 (예를 들면, 암 세포독성을 나타냄). 수두 병변 형성, 복제, 형질전환유전자 발현, 또는 표적 종양 세포들 (예를 들면, 암 세포독성)의 사멸을 결정하기 위해 이용될 수 있는 예시적인 검증에 대해 섹션 6의 실시예들을 참고한다.
5.2.5. 바이러스 특징들을 측정하기 위한 검증법
특정 구체예들에서, 복제/확산 능력, 생존력, 형질전환유전자를 발현시키는 능력, 및/또는 표적 종양 세포들 (예를 들면, 암 세포독성)을 사멸시키는 본원에서 기술된 상기 바이러스의 능력은 당분야에 공지된 방법을 이용하여 테스트되었다. 복제/확산, 생존력, 형질전환유전자 발현, 또는 표적 종양 세포들을 사멸 (예를 들면, 암 세포독성)을 결정하는데 이용될 수 있는 예시적인 검증에 대해 섹션 6의 실시예들을 참고한다.
바이러스의 종양 확산 및 독성을 측정하는 당분야에 공지된 검증에는 플라크 크기, 합포체 형성을 측정, 및/또는 comet 검증 (EEVs)이 내포되나, 이에 국한되지 않는다. 바이러스의 면역자극 활성을 측정하는 당분야에 공지된 검증에는 NK 활성화 (CD69 발현%로 측정됨), NK 과립소실 (CD107a의 배수 증가로 측정됨), 및/또는 T-세포 프라이밍(priming) 검정이 내포되나, 이에 국한되지 않는다. 바이러스의 선택성을 측정하는 당분야에 공지된 검증에는 꼬리 수두 병변(tail pox lesions), 생체분포, 및/또는 체질량 측정이 내포되나, 이에 국한되지 않는다.
5.2.6. 세포, 세포주 및 패키징(Packaging) 세포주
한 측면에서, 섹션 5.2.3에서 기술된 핵산을 포함하는 세포가 본원에서 제공된다. 또다른 측면에서, 섹션 5.2.4에서 기술된 바이러스를 포함하는 세포가 본원에서 제공된다. 특정 구체예들에서, 본원에서 제공된 세포는 포유류 세포 (예를 들면, 인간 세포)다. 특정 구체예들에서, 본원에서 제공된 세포는 숙주 세포 (예를 들면, 섹션 5.4에서 기술된 숙주 세포)다.
한 측면에서, 섹션 5.2.3에서 기술된 핵산을 포함하는 세포주이 본원에서 제공된다. 또다른 측면에서, 섹션 5.2.4에서 기술된 바이러스를 포함하는 세포주이 본원에서 제공된다. 특정 구체예들에서, 본원에서 제공된 세포계통은 포유류 세포주(예를 들면, 인간 세포주)이다.
한 측면에서, 섹션 5.2.3에서 기술된 핵산을 포함하는 패키징 세포주이 본원에서 제공된다. 또다른 측면에서, 섹션 5.2.4에서 기술된 바이러스를 포함하는 패키징 세포주이 본원에서 제공된다. 상기 패키징 세포주는 오르토폭스바이러스 바이러스 (예를 들면, 백시니아 바이러스)를 패키징하기에 적합한 임의의 세포주일 수 있다. 특정 구체예들에서, 본원에서 제공된 패키징 세포주는 포유류 패키징 세포주 (예를 들면, 인간 패키징 세포주)이다.
본원에서 기술된 바이러스를 배양하는데 이용될 수 있는 예시적인 세포에는 예를 들면, HeLa 세포, U2OS 세포, 293T 세포, NIH3T3 세포, Jurkat 세포, 293 세포, COS 세포, CHO 세포, Saos 세포, PC12 세포, 그리고 닭 배아 섬유아세포 (CEF)들이 내포된다. 본원에서 기술된 바이러스를 패키지하는데 이용될 수 있는 예시적인 패키징 세포주에는 예를 들면, HeLa 세포주, U2-OS 세포주, HEK293T 세포주, 786-O 세포주, A549 세포주 또는 흡착성 인간 암 세포주들이 내포된다. 특정 구체예들에서, 상기 세포들은 백시니아 바이러스의 복제 및/또는 패키징에 필요한 하나 또는 그 이상 인자를 또한 발현하거나, 또는 이를 발현시키도록 공작된다.
특정 구체예들에서, 본원에서 제공된 세포, 세포주, 또는 패키징 세포주는 섹션 6의 실시예에서 기술된 세포, 세포주 또는 패키징 세포주들이다.
5.2.7. 오르토폭스바이러스 유전자에 의해 인코드된 단백질의 예시
본원에서 기재된 오르토폭스바이러스 유전자에 의해 인코드된 예시적인 단백질은 하기 표 31-40에서 재현된다. 하기에서 사용된, 용어 "위치"란 본원에 기술된 예시적인 오르토폭스바이러스 벡터에서 결손된 핵산에 대한 유전자의 위치를 지칭한다. 다양한 유전자들의 경우, 아미노산 서열 정보 및 단백질 수납 ID 번호가 제공된다.
5.3. 유전적 변형 방법
표적 게놈에 핵산의 삽입 또는 이로부터 핵산을 결손시키는 방법에는 본원에서 기술된 방법 및 당분야에 공지된 방법들이 내포된다. 본 발명의 조성물의 발현에 영향을 주는 핵산 전달 방법에는 핵산 (예를 들면, DNA, 바이러스와 비-바이러스 벡터를 비롯하여)을 세포기관(organelle), 세포, 조직 또는 유기체내로 도입시킬 수 있는 사실상 모든 방법(본원에서 기술된 또는 당업자에게 공지된 것 같은)이 내포되는 것으로 간주된다. 이러한 방법들에는 DNA의 직접 전달, 이를 테면, 주사 (U.S. 특허 번호 5,994,624, 5,981,274, 5,945,100, 5,780,448, 5,736,524, 5,702,932, 5,656,610, 5,589,466 및 5,580,859, 이들 각각 본원에 참고자료로 편입됨), 마이크로주사 (Harland and Weintraub, 1985; U.S. 특허 번호 5,789,215, 본원에 참고자료로 편입됨)를 비롯한 주사에 의해; 전기천공에 의해 (U.S. 특허 번호 5,384,253, 본원에 참고자료로 편입됨); 인산 칼슘염 침전에 의해 (Graham and Van Der Eb, 1973; Chen and Okayama, 1987; Rippe et al., 1990); DEAE-덱스트란에 이어 폴리에틸렌 글리콜을 사용함으로써(Gopal, 1985); 직접적인 소닉 로딩(sonic loading)에 의해 (Fechheimer et al., 1987); 리포좀 매개된 형질감염에 의해(Nicolau and Sene, 1982; Fraley et al., 1979; Nicolau et al., 1987; Wong et al., 1980; Kaneda et al., 1989; Kato et al., 1991); 미세발사체 투하(microprojectile bombardment) (PCT 출원 번호 WO 94/09699 및 95/06128; U.S. 특허 번호 5,610,042; 5,322,783, 5,563,055, 5,550,318, 5,538,877 및 5,538,880, 그리고 이들 각각 본원에 참고자료로 편입됨); 실리콘 카바이드 섬유를 이용한 교반에 의해 (Kaeppler et al., 1990; U.S. 특허 번호 5,302,523 및 5,464,765, 이들 각각 본원에 참고자료로 편입됨); 아그로박테리움(Agrobacterium)-매개된 형질전환 (U.S. 특허 번호 5,591,616 및 5,563,055, 이들 각각 본원에 참고자료로 편입됨); 또는 원형질체(protoplasts)의 PEG-매개된 형질전환에 의해 (Omirulleh et al., 1993; U.S. 특허 번호 4,684,611 및 4,952,500, 이들 각각 본원에 참고자료로 편입됨); 탈수/억제-매개된 DNA 취입에 의해 (Potrykus et al., 1985) 전달이 내포되나, 이에 국한되지 않는다. 이를 테면, 이들 기술의 적용을 통하여 세포기관(들), 세포(들), 조직(들) 또는 유기체(들)은 안정적으로 또는 일과적으로 형질전환될 수 있다.
CopMD5p, CopMD3p, 그리고 CopMD5p3p 바이러스에서 결손된 유전자 클러스터 및 이의 기능에 대해 하기에서 기술된다. ITR 유전자들 (표 2에서 "-ITR" 및 "*"로 표시됨)은 해당 게놈의 우측 ITR인 하나의 복사본에서 결손된다. 그러나, 이들 유전자는 왼쪽 ITR에 두번째 복사본을 가지며, 이들은 이들 바이러스에서 무손상 상태로 유지된다. 전체 게놈 시퀸싱에 의해 결손들이 확인되었다. 결손된 유전자의 대부분은 바이러스 감염에 대한 숙주 반응을 차단시키는데 연루되거나, 또는 알려지지 않은 기능을 갖는다.
다양한 구체예들에서, 상기 오르토폭스 바이러스는 B8R 유전자내 결손을 함유하도록 유전적으로 더 변형된다. 상기 백시니아 바이러스 B8R 유전자는 감마 인터페론 수용체 (IFN-γ)에 상동성인 분비 단백질을 인코드한다. 시험관내, B8R 단백질은 인간 및 렛(rat) 감마 인터페론을 비롯한 몇 가지 종의 감마 인터페론에 결합하고, 이의 항바이러스 활성을 중화한다; 그러나, 이것은 뮤린 IFN-γ에 유의적으로 결합하지 않는다. B8R 유전자 결손으로 인간의 IFN-γ 손상을 방지한다. 다양한 구체예들에서, 하나, 둘 또는 세 개 형질전환유전자들이 상기 결손된 B8R 유전자의 유전자좌로 삽입된다. 일부 균주들에서, B8R 결손 부위에 존재하는 형질전환유전자(들)에 추가적으로, 해당 균주는 상기 오르토폭스 바이러스 상에서 상기 결손된 B8R 유전자의 유전자좌가 아닌 추가적인 유전자좌로 삽입된 적어도 하나의 형질전환유전자를 또한 갖는다. 다양한 구체예들에서, 적어도 하나의 형질전환유전자는 5p 결손의 경계로 삽입되며, 적어도 하나의 형질전환유전자는 3p 결손의 경계로 삽입되거나, 또는 이 둘 모두에 삽입된다. 다양한 구체예들에서, 적어도 3개, 4개, 5개 또는 그 이상의 형질전환유전자들이 상기 변형된 오르토폭스 바이러스 게놈으로 삽입된다.
다양한 구체예들에서, 상기 변형된 오르토폭스바이러스 벡터의 서열은 하기 표 43에서 서열 식별 번호: 210으로 나타낸 서열이다. 일부 구체예들에서, 상기 변형된 오르토폭스바이러스 벡터의 서열은 서열 식별 번호: 210의 파생 서열이다. 예를 들면, 본원에서 명시된대로, 상기 변형된 오르토폭스바이러스 벡터는 본원에서 논의된 하나 또는 그 이상 형질전환유전자들을 발현시키도록 변형될 수 있다.
다양한 구체예들에서, 상기 변형된 오르토폭스바이러스 벡터의 서열은 하기 표 43에서 서열 식별 번호: 624로 나타낸 서열이다. 일부 구체예들에서, 상기 변형된 오르토폭스바이러스 벡터의 서열은 서열 식별 번호: 624의 파생 서열이다. 예를 들면, 본원에서 명시된대로, 상기 변형된 오르토폭스바이러스 벡터는 B8R 서열의 결손을 함유할 수 있거나, 및/또는 본원에서 논의된 하나 또는 그 이상 형질전환유전자들을 발현시키도록 변형될 수 있다.
다양한 구체예들에서, 상기 변형된 오르토폭스바이러스는 다음 세 가지 형질전환유전자들중 적어도 하나를 발현시킨다: IL-12-TM, FLT3-L 및 항-CLTA4 항체. 이들 형질전환유전자의 서열의 비-제한적인 예시 및/또는 이들을 인코드하는 아미노산 서열의 비-제한적 예시들이 하기에서 제시된다:
재조합 백시니아 본원에서 기술된 바이러스를 만드는 예시적인 방법들은 섹션 6.32의 실시예 32 참고.
5.4. 바이러스 증식
본 발명은 야생형과 비교하였을 때 하나 또는 그 이상 유전자 결손을 갖도록 구축된 것들을 비롯한 재조합 오르토폭스바이러스를 특징으로 하며, 이러한 바이러스는 암이 아닌 세포에는 독성이 적거나 또는 비-독성이면서, 암 세포에 대항하여 사용되는 원하는 속성을 나타낸다. 이 섹션은 재조합 DNA 기술의 사용을 통해 돌연변이된 바이러스를 생성하는 방법과 같은, 본원에 기술된 재조합 오르토폭스바이러스를 생산하기 위한 다양한 프로토콜을 실시예를 통하여 요약한다.
예를 들면, 상기 오르토폭스바이러스 게놈에서 돌연변이를 만들기 위해, 고유한 폴리펩티드와 변형된 폴리펩티드는 벡터 안에 포함된 핵산 분자들에 의해 인코드될 수 있다. 벡터에는 예를 들면, 플라스미드, 코스미드, 바이러스 (박테리오파아지, 동물 바이러스, 그리고 식물 바이러스), 그리고 인공 염색체 (예를 들면, YACs)들이 내포될 수 있다. 당업자는 표준 재조합 기술을 통해 벡터를 구축할 수있는 장비를 갖추고 있을 것이며, Sambrook et al., (1989) 그리고 Ausubel et al., 1994에서 기술되고, 이둘 모두는 전문이 본원에 참고자료로 편입된다. 변형된 폴리펩티드를 인코딩하는 것에 추가적으로, 벡터는 비-변형된 폴리펩티드 서열, 이를 테면, 테그(tag) 또는 표적화 분자를 인코드할 수 있다.
숙주 세포에서 벡터를 증식시키기 위해, 벡터는 복제 부위의 하나 또는 그 이상의 원점 (흔히 "ori"로 지칭됨)을 함유할 수 있으며, 이 원점은 복제가 개시되는 특이적 핵산 서열이다. 대안으로, 상기 숙주 세포가 효모라면, 자체적으로 복제되는 서열 (ARS)이 이용될 수 있다.
이형성 핵산 서열을 표현하는 문맥에서, "숙주 세포"란 원핵성 세포 또는 진핵성 세포를 지칭하며, 그리고 이 세포에는 벡터를 복제할 수 있거나 및/또는 벡터에 의해 인코드된 이형성 유전자를 발현시킬 수 있는 형질변환가능한 임의 유기체가 내포된다. 숙주 세포는 벡터 또는 바이러스 (이들이 외생성 폴리펩티드를 발현시킬 때, 벡터로 적격임)의 수령자로 이용될 수 있고, 이용되어 왔었다. 숙주 세포는 외생성 핵산, 이를 테면, 변형된 단백질-인코딩 서열이 숙주 세포로 전달되거나, 또는 도입되는 과정에 의해 "형질감염되거나(transfected)" 또는 "형질변환(transformed)"될 수 있다. 형질변환된 세포에는 일차(primary) 대상체 세포와 이의 후손이 내포된다. 숙주 세포는 원하는 결과가 벡터의 복제인지 또는 벡터-인코딩된 핵산 서열의 일부 또는 전부의 발현인지에 따라, 효모 세포, 곤충 세포, 그리고 포유류 세포들을 비롯한, 원핵생물 또는 진핵생물로부터 유래될 수 있다. 숙주 세포로 사용할 수 있는 수많은 세포주 및 배양물이 있으며, American Type Culture Collection(ATCC)를 통해 얻을 수 있고, 이곳은 살아있는 배양물과 유전적 물질에 대한 보관소 역할을 하는 조직이다(www.atcc.org). 적합한 숙주는 벡터 백본(backbone) 및 원하는 결과에 기초하여 당업자에 의해 결정될 수 있다. 플라스미드 또는 코스미드(예를 들면)는 많은 벡터를 복제하기 위해 원핵생물 숙주 세포로 도입될 수 있다. 벡터 복제 및/또는 발현을 위해 숙주 세포로 이용되는 박테리아 세포에는 DH5α, JM109, 그리고 KCB, 뿐만 아니라 다수의 시판되는 이용가능한 박테리아 숙주, 이를 테면, SURE® Competent Cells 및 SOLOPACK™ Gold Cells (STRATAGENEㄾ, La Jolla, Calif.)이 내포된다. 대안으로, 박테리아 세포 이를 테면, 대장균(E. coli) LE392는 파아지 바이러스를 위한 숙주 세포로 이용될 수 있다. 적합한 효모 세포에는 사카로미세스 세레비시에(Saccharomyces cerevisiae), 사카로미세스 폼베(Saccharomyces pombe), 그리고 피치아 파스토리스(Pichia pastoris)가 내포된다. 벡터의 복제 및/또는 발현을 위한 진핵성 숙주 세포의 예시로는 HeLa, NIH3T3, Jurkat, 293, COS, CHO, Saos, 그리고 PC12가 내포된다. 다양한 세포 유형 및 유기체들로부터 많은 숙주 세포들이 이용가능하며, 이들은 당업자게에 공지일 것이다. 유사하게, 바이러스 벡터는 진핵성 숙주 세포 또는 원핵성 숙주 세포, 특히, 벡터의 복제 또는 발현을 허용하는 것들과 병용될 수 있다. 일부 벡터는 원핵성 세포와 진핵성 세포 모두에서 벡터의 복제 및/또는 발현을 허용하는 제어 서열을 이용하 수 있다. 당업자는 전술한 모든 숙주 세포를 배양하여 이들을 유지하고 벡터의 복제를 허용하는 조건을 추가로 이해할 것이다. 또한, 벡터 대규모 생산, 뿐만 아니라, 벡터에 의해 인코드된 핵산 산물 및 이들의 동족(cognate) 폴리펩티드, 단백질 또는 펩티드 생산을 허용하는 기술 및 조건이 이해되고, 알려져 있다.
섹션 5.2.6 및 5.4에서 기술된 세포, 세포주, 또는 패키징 세포주를 이용하여 섹션 5.2.4에서 기술된 바이러스를 증식시키는 방법이 또한 본원에서 제공된다. 한 측면에서, 바이러스를 증식시키는 방법이 본원에서 제공되는데, 이 방법은 본원에서 기술된 바이러스에 의해 감염된 세포, 세포주, 또는 패키징 세포주를 배양하는 것을 포함한다. 일부 구체예들에서, 상기 바이러스는 증식 후, 단리되거나 또는 정제된다. 바이러스 증식을 위한 예시적인 방법 및 기술들에 대해 섹션 6의 실시예들 참고.
5.5. 치료 방법
5.5.1. 약제학적 조성물, 투여, 그리고 용량(Doses)
섹션 5.2.4에서 기술된 바이러스 및 생리학적으로 수용가능한 담체를 포함하는 약제학적 조성물이 본원에서 제공된다. 특정 구체예들에서, 본원에서 제공된 약제학적 조성물은 치료요법적으로 유효량의 상기 바이러스를 포함한다. 특정 구체예들에서, 본원에서 제공된 약제학적 조성물은 본원에서 기술된 치료 방법에 이용된다.
당분야에 공지된 방법을 이용하여 본 발명의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터를 함유하는 치료요법적 조성물이 준비될 수 있다. 예를 들면, 이러한 조성물은 예를 들면, 생리학적으로 수용가능한 담체, 부형제 또는 안정화제를 이용하고 (Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980); 본원에 참고자료로 편입됨), 그리고 바람직한 형태, 예를 들면, 동결건조된 제형 또는 수성 용액 형태로 준비될 수 있다.
본 발명의 방법들과 조성물을 이용하여 종양용해(oncolysis)를 유도하고, 세포를 사멸시키고, 성장을 저해하고, 전이를 저해하고, 종양 크기를 감소시키고, 그렇지 않으면 종양 세포들의 악성 표현형을 역전시키거나 또는 감소시키기 위해, 종양에 상기 변형된 오르토폭스바이러스를 접촉시킬 수 있는데, 예를 들면, 해당 오르토폭스바이러스를 암 환자에게 예를 들면, 본원에서 기술된 하나 또는 그 이상 투여 경로를 통하여 투여함으로써 접촉시킬 수 있다. 투여 경로는 암의 위치 및 성질에 따라 가변적일 수 있고, 그리고 예를 들면, 피내, 경피, 비경구, 정맥내, 근육내, 비강내, 피하, 국소 (예를 들어, 종양 근처, 특히 종양의 혈관계 또는 인접 혈관계), 경피적(percutaneous), 기관내, 복강내, 동맥내, 방광내, 종양내, 흡입, 관류(perfusion), 세척(lavage), 경구 투여 및 제형이 내포될 수 있다. 특이적 구체예들에서, 본원에서 제공된 약제학적 조성물은 이용되는 투여 경로에 적합하도록 제형화된다.
용어 "혈관내(intravascular)"란 환자의 혈관 내로의 전달을 의미하는 것으로 이해되며, 이는 환자의 혈관으로, 혈관안에, 또는 혈관 또는 혈관들 내를 의미한다. 특정 구체예들에서, 상기 투여는 정맥 (정맥내)으로 간주되는 혈관에 투여되는 반면, 다른 투여에서는 동맥으로 간주되는 혈관에 투여된다. 정맥에는 내부 경정맥, 말초 정맥, 관상 정맥, 간 정맥, 문맥, 대복 재정맥, 폐정맥, 상대정맥(superior vena cava), 하대정맥(inferior vena cava), 위 정맥, 비장 정맥, 하장간막 정맥(inferior mesenteric vein), 상장간막정맥(superior mesenteric vein), 두부 정맥 및/또는 대퇴 정맥이 내포되나, 이에 국한되지 않는다. 동맥에는 관상 동맥, 폐동맥, 상완 동맥, 내 경동맥, 대동맥 궁(aortic arch), 대퇴 동맥, 말초 동맥 및/또는 섬모 동맥이 내포되나, 이에 국한되지 않는다. 전달은 세동맥 또는 모세관을 통해, 또는 세동맥 또는 모세관으로 전달될 수 있음도 고려된다.
종양내 주사, 또는 종양 혈관계로의 직접 주사는 이산된( discrete) 고형의 접근가능한 종양에 대해 특히 고려된다. 국소 투여, 지역적 투여 또는 전신 투여 또한 적합할 수 있다. 바이러스 입자는 유리하게는 예를 들어, 대략 1cm 간격으로 이격된 종양에 다수의 주사를 투여함으로써 접촉될 수 있다. 외과적 개입의 경우, 본 발명은 수술불가능한 종양을 절제할 수 있도록, 수술 전에 사용될 수 있다. 적절한 경우, 예를 들어, 종양 또는 종양 혈관계에 카테터를 이식함으로써 연속 투여가 또한 적용될 수 있다. 이러한 연속 관류(perfusion)는 예를 들어, 치료 시작 후 약 1-2 시간, 약 2-6 시간, 약 6-12 시간, 또는 약 12-24 시간 동안 발생할 수 있다. 일반적으로, 연속 관류를 통한 치료요법적 조성물의 용량(dose)은 관류가 발생하는 기간에 걸쳐 조정된 단일 주사 또는 다수 주사에 의해 제공된 용량에 등가일 수 있다. 특히 흑색종 및 육종의 치료에서 본 발명의 치료요법적 조성물을 투여하기 위해 사지 관류가 사용될 수 있음이 추가로 고려된다.
치료 요법은 가변적이며, 종양 유형, 종양 위치, 질환 진행, 그리고 해당 환자의 건강 및 연령에 따라 대개 달라질 수 있다. 특정 유형의 종양은 더 공격적인 치료가 필요한 반면, 동시에 특정 환자는 아주 힘든 프로토콜을 견딜 수 없다. 임상의는 치료요법적 제형의 알려진 효능 및 독성 (만일 존재한다면)을 기반으로 이러한 결정을 적합하게 내릴 수 있다. 특정 구체예들에서, 치료되는 종양은 적어도 초기에는 절제불가능 할 수 있다. 본 명세서의 치료제를 사용한 치료는 가장자리의 수축 또는 구체적으로 침습성인 특정 부분의 제거로 인해, 종양의 절제성을 증가시킬 수 있다. 치료 후, 절제가 가능할 수 있다. 절제 후 추가 치료는 종양 부위의 미세한 잔류 질병을 제거하는 데 도움이 될 것이다.
해당 치료에는 다양한 "단위 용량(unit doses)"이 내포될 수 있다. 단위 용량은 미리 결정된 양의 치료 조성물을 포함하는 것으로 정의된다. 투여되는 양, 특정 경로 및 제형은 임상 분야의 기술 범위 내에 있다. 단위 용량은 단일 주사로 투여할 필요는 없지만, 설정된 시간 동안 연속 주입을 포함할 수 있다. 본 발명의 단위 용량은 편의상 바이러스 구조체에 대한 플라크 형성 단위 (pfu)로 기술될 수 있다. 단위 용량의 범위는 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 1010, 1011, 1012 에서 1013 pfu 까지 그리고 이보다 더 높은 범위일 수 있다. 추가적으로 또는 대안으로, 바이러스 종류 및 이들의 도달가능한 역가에 따라, 1 ~ 100, 10 ~ 50, 100~1000, 또는 최대 약 또는 적어도 약 1ㅧ104, 1ㅧ105, 1ㅧ106, 1ㅧ107, 1ㅧ108, 1ㅧ109, 1ㅧ1010, 1ㅧ1011, 1ㅧ1012, 1ㅧ1013, 1ㅧ1014, 또는 1ㅧ1015 또는 이보다 더 높은 (이 사이의 모든 값과 범위가 내포됨) 감염성 바이러스 입자(vp)들을 상기 종양 또는 종양 부위로 전달할 수 있다.
본원에 기술된 재조합 오르토폭스바이러스 게놈을 암 세포 또는 종양 세포들로 전달하는 또다른 방법은 종양내 주사를 통하여 전달할 수 있다. 그러나, 본원에 기술된 약제학적 조성물은 대안으로 비경 구, 정맥내, 피내, 근육내, 경피 또는 복강내 투여로 투여될 수 있다(U.S. 특허 번호 5,543,158; U.S. 특허 번호 5,641,515 및 U.S. 특허 번호 5,399,363 (각각은 이의 전문이 본원에 참고자료로 편입됨). 핵산 구조체의 주사는 발현 구조체가 주사에 필요한 특정 바늘 게이지를 통과할 수 있는 한, 주사기 또는 용액 주입에 사용되는 다른 방법에 의해 전달될 수 있다. 재조합 오르토폭스본원에서 기술된 바이러스의 투여에 이용할 수 있는 예시적인 바늘없는 주사시스템이 U.S. 특허 번호 5,846,233에서 구체화된다. 이 시스템은 용액을 보관하기 위한 앰플 챔버를 특정하는 노즐과 노즐로부터 용액을 전달 부위로 밀어내는 에너지 장치를 특징으로 한다. 또다른 예시적인 주사기 시스템은 어떤 깊이에서도 미리 정해진 양의 용액을 여러 번 주사 할 수있는 시스템이다(U.S. 특허 번호 5,846,225).
본원에서 기술된 바이러스 입자들 또는 핵산은 하나 또는 그 이상 부형제, 담체, 또는 희석제와 적합하게 혼합된 물에서 준비될 수 있다. 분산액은 글리세롤, 액체 폴리에틸렌 글리콜 및 이들의 혼합물 및 오일로 또한 제조될 수 있다. 일반적인 보관 및 사용 조건에서 이러한 제제에는 미생물 성장을 방지하기 위해 보존제를 함유할 수 있다. 주사용으로 사용에 적합한 약제학적 형태에는 멸균 수성 용액 또는 분산액과 멸균 주사용 용액 또는 분산의 임기 조제용 멸균 분말이 내포된다 (U.S. 특허 번호 5,466,468, 구체적으로 이의 전문이 본원에 참고자료로 편입됨). 모든 경우에, 상기 형태는 멸균될 수 있고, 용이한 주사가능성이 있을 정도로 유동적일 수 있다. 이는 제조 및 저장 조건 하에서 안정적일 수 있고, 박테리아 및 곰팡이와 같은 미생물의 오염 작용에 대항하여 보존되어야 한다. 상기 운반체는 예를 들면, 물, 에탄올, 폴리올 (가령, 글리세롤, 프로필렌 글리콜 및 액체 폴리에틸렌 글리콜 및 이와 유사한 것들), 그리고 이들의 적합한 혼합물들 및/또는 식물성 오일이 포함된 용매 또는 분산액 매질이 될 수 있다. 예를 들면, 피복제, 이를 테면 레시틴의 이용에 의해, 분산액의 경우 요구되는 입자 크기의 유지에 의해, 그리고 계면활성제의 이용에 의해 적절한 유동성이 유지될 수 있다. 미생물의 작용의 예방은 예를 들면, 파라벤, 클로로부탄올, 페놀 소르브산, 티메로졸 및 이와 유사한 것들과 같은 다양한 항박테리아 및 항진균제를 포함시킴으로써 확보된다. 많은 경우에, 등장성 제제, 예를 들어, 당 또는 염화 나트륨을 포함하는 것이 바람직할 것이다. 흡수를 지연시키는 물질, 이를 테면, 알루미늄 모노스테아레이트 및 젤라틴과 같은 물질을 이 조성물에 사용함으로써 주사가능한 조성물의 연장된 흡수를 가져올 수 있다.
예를 들어, 수용액에서의 비경구 투여를 위해, 용액은 필요하다면 적절하게 완충될 수 있고, 액체 희석제는 충분한 식염수 또는 포도당을 이용하여 먼저 등장성이 되도록 한다. 이들 특정 수성 용액은 특히 정맥내, 근육내, 피하, 종양내 및 복강내 투여에 적합하다. 이와 관련하여, 사용될 수 있는 멸균 수성 매질은 본 개시 내용에 비추어 당업자가 알고 있을 것이다. 예를 들면, 1 회 투여량(dosage)을 1ml의 등장성 NaCl 용액에 용해시키고, 1000ml의 피하주입 유체에 첨가하거나 또는 제안된 주입 부위에 주사할 수 있다. 투여 량의 약간의 변화는 치료받는 대상의 상태에 따라 필연적으로 발생할 것이다. 투여 책임자는 임의의 경우에서 개별 대상체에 대한 적절한 용량을 결정할 것이다. 더욱이, 인체 투여를 위해, 조제물(preparations)은 FDA Office of Biologics 표준에서 요구하는 무균, 발열성, 일반 안전 및 순도 표준을 충족해야 한다.
본원에서 사용된 바와 같이, "담체"에는 용매, 분산 매질, 비히클, 코팅, 희석제, 항박테리아제 및 항진균제, 등장성 및 흡수 지연제, 완충제, 담체 용액, 현탁액, 콜로이드 및 이와 유사한 것 등이 내포된다. 약학적으로 활성인 물질용 이러한 매질 및 물질의 이용은 당업계에 공지되어 있다. 상기 활성 성분과 양립할 수 없는 임의의 통상적인 매질 또는 물질을 제외하고, 상기 치료요법적 조성물에 사용이 고려된다. 보충 활성 성분 또한 상기 조성물에 혼합될 수 있다. "약제학적으로 허용되는" 또는 "약리학적으로-허용되는"이라는 어구는 인간에게 투여될 때 알레르기 또는 유사한 비정상적인 반응을 일으키지 않는 분자 엔터티(entities) 및 조성물을 의미한다. 활성 성분으로 단백질을 함유하는 수성 조성물 조제물은 당업자에게 잘 알려져 있다. 전형적으로, 이러한 조성물은 액체 용액 또는 현탁액 중에서 어느 한 가지로서 주사가능물질로서 준비된다; 주사에 앞서 액체에서 용해, 또는 액체에서 현탁에 적합한 고체 형태 또한 제조될 수 있다.
5.5.2. 치료 방법
세포 증식 장애, 이를 테면, 환자 (예를 들면, 포유류 환자, 이를 테면, 인간 환자)의 암을 치료하는 방법이 또한 본원에서 제공된다.
한 측면에서, 세포 증식 장애, 이를 테면, 환자 (예를 들면, 포유류 환자, 이를 테면, 인간 환자)의 암을 치료하는 방법이 본원에서 제공되며, 상기 방법은 해당 환자 (예를 들면, 포유류 환자, 이를 테면, 인간 환자)에게 섹션 5.2.4에서 기술된 치료요법적으로 유효량의 바이러스를 투여하는 것을 포함한다.
또다른 측면에서, 세포 증식 장애, 이를 테면, 환자 (예를 들면, 포유류 환자, 이를 테면, 인간 환자)의 암을 치료하는 방법이 본원에서 제공되며, 상기 방법은 해당 환자 (예를 들면, 포유류 환자, 이를 테면, 인간 환자)에게 섹션 5.5.1.에서 기술된 치료요법적으로 유효량의 제약학적 조성물을 투여하는 것을 포함한다.
본원에서 기술된 치료 방법의 특이적 구체예에서, 상기 포유류 환자는 인간 환자다.
본원에서 기술된 치료 방법의 특정 구체예들에서, 상기 암은 백혈병, 림프종, 간암, 뼈암, 폐암, 뇌암, 방광암, 위장암, 유방암, 심장암, 자궁경부암, 자궁암, 두경부암, 담낭암, 후두암, 입술 및 구강암, 안구암, 흑색종, 췌장암, 전립선암, 결장직장암, 고환암, 그리고 인후암으로 구성된 군에서 선택된다.
본원에서 기술된 치료 방법의 특정 구체예들에서, 상기 암 일부 구체예들에서, 상기 암은 급성 림프모구성 백혈병 (ALL), 급성 골수성 백혈병 (AML), 만성 림프구성 백혈병 (CLL), 만성 골수성 백혈병 (CML), 부신피질 암종, AIDS-관련 림프종, 원발성 CNS 림프종, 항문암, 충수암, 성상세포종, 비정형 기형/횡문근암, 기저 세포 암종, 담관암, 간외 암, 유잉(Ewing) 육종 가족, 골육종 및 악성 섬유성 조직구종, 중추 신경계 배아 종양, 중추 신경계 생식 세포 종양, 두개 인두종, 외피종, 기관지 종양, 버킷(Burkitt) 림프종, 카르시노이드 종양, 원발성 림프종, 척색종, 만성 골수증식성 신생물, 결장암, 간외 담관암, 관 상피내 암종 (DCIS), 자궁내막암, 외피종, 식도암, 심부유로모세포종, 두개외 생식 세포종, 성선외 생식 세포 종양, 나팔관암, 뼈의 섬유성 조직구종, 위장 카르시노이드 종양, 위장관 기질 종양 (GIST), 고환 생식 세포 종양, 임신 영양모세포 질환, 신경교종, 소아 뇌간 신경 교종, 털이 많은 세포 백혈병, 간세포암, 랑게르한스 세포 조직구증, 호지킨 림프종, 하인두암, 섬(islet) 세포 종양, 췌장 신경내분비 종양, 윌름(Wilms) 종양 및 기타 소아 신장 종양, 랑게르한스 세포 조직구증, 소(small) 세포 폐암, 피부 T 세포 림프종, 안구내 흑색종, 메르켈 세포 암종, 중피종, 전이성 편평 경부암, 정중선 암종, 다발성 내분비 신생물 증후군, 다발성 골수종/혈장 세포 신생물, 골수이형성 증후군, 비강 및 부비동암, 비인두암, 신경모세포종, 비-호지킨 림프종(NHL), 비-소 세포 폐암 (NSCLC), 상피 난소암, 생식 세포 난소암, 악성 가능성이 낮은 난소암, 췌장 신경내분비 종양, 유두종증, 부신경절종, 부비동 및 비강암, 부갑상선암, 음경암, 인두암, 갈색세포종, 뇌하수체 종양, 흉막폐 모세포종, 원발성 복막암, 직장암, 망막모세포종, 횡문근육종, 타액선암, 카포시(Kaposi) 육종, 횡문근 육종, 세자리() 증후군, 소장암, 연조직 육종, 인후암, 흉선종 및 흉선 암종, 갑상선암, 신장 골반 및 요관의 이행 세포 암, 요도 암, 자궁 내막 자궁암, 자궁 육종, 질암, 외음부암, 그리고 발덴스트륌() 거대 글로불린 혈증으로 구성된 군에서 선택된다.
본원에서 기술된 치료 방법의 일부 구체예들에서, 상기 바이러스와 약제학적 조성물은 세포 증식 장애 (이를 테면, 암) 치료를 위한 또다른 제제와 조합하여 투여되지 않는다.
본원에서 기술된 치료 방법의 다른 구체예들에서, 상기 바이러스 또는 약제학적 조성물은 세포 증식 장애 (이를 테면, 암)를 치료하기 위한 하나 또는 그 이상의 추가 제제, 예를 들면, 섹션 5.5.3에서 기술된 하나 또는 그 이상의 추가 제제와 조합하여 투여된다.
상기 재조합 오르토폭스바이러스와 본원에 기술된 약제학적 조성물은 예를 들면, 종양용해에 의해 암 세포를 직접적으로 사멸시키기 위해 및/또는 표적 암 세포에 대항하여 적응성(adaptive) 면역 반응의 효과를 강화시키기 위해, 대상체, 예를 들면, 포유류 대상체, 이를 테면, 세포 증식 장애, 이를 테면, 암을 앓고 있는 인간에게 투여될 수 있다. 일부 구체예들에서, 세포 증식 장애는 암, 이를 테면, 백혈병, 림프종, 간암, 뼈암, 폐암, 뇌암, 방광암, 위장암, 유방암, 심장암, 자궁경부암, 자궁암, 두경부암, 담낭암, 후두암, 입술 및 구강암, 안구암, 흑색종, 췌장암, 전립선암, 결장직장암, 고환암, 그리고 인후암이다. 특정 경우들에서, 세포 증식 장애는 급성 림프모구성 백혈병 (ALL), 급성 골수성 백혈병 (AML), 만성 림프구성 백혈병 (CLL), 만성 골수성 백혈병 (CML), 부신피질 암종, AIDS-관련 림프종, 원발성 CNS 림프종, 항문암, 충수암, 성상세포종, 비정형 기형/횡문근암, 기저 세포 암종, 담관암, 간외 암, 유잉(Ewing) 육종 가족, 골육종 및 악성 섬유성 조직구종, 중추 신경계 배아 종양, 중추 신경계 생식 세포 종양, 두개 인두종, 외피종, 기관지 종양, 버킷(Burkitt) 림프종, 카르시노이드 종양, 원발성 림프종, 척색종, 만성 골수증식성 신생물, 결장암, 간외 담관암, 관 상피내 암종 (DCIS), 자궁내막암, 외피종, 식도암, 심부유로모세포종, 두개외 생식 세포종, 성선외 생식 세포 종양, 나팔관암, 뼈의 섬유성 조직구종, 위장 카르시노이드 종양, 위장관 기질 종양 (GIST), 고환 생식 세포 종양, 임신 영양모세포 질환, 신경교종, 소아 뇌간 신경 교종, 털이 많은 세포 백혈병, 간세포암, 랑게르한스 세포 조직구증, 호지킨 림프종, 하인두암, 섬(islet) 세포 종양, 췌장 신경내분비 종양, 윌름(Wilms) 종양 및 기타 소아 신장 종양, 랑게르한스 세포 조직구증, 소(small) 세포 폐암, 피부 T 세포 림프종, 안구내 흑색종, 메르켈 세포 암종, 중피종, 전이성 편평 경부암, 정중선 암종, 다발성 내분비 신생물 증후군, 다발성 골수종/혈장 세포 신생물, 골수이형성 증후군, 비강 및 부비동암, 비인두암, 신경모세포종, 비-호지킨 림프종(NHL), 비-소 세포 폐암 (NSCLC), 상피 난소암, 생식 세포 난소암, 악성 가능성이 낮은 난소암, 췌장 신경내분비 종양, 유두종증, 부신경절종, 부비동 및 비강암, 부갑상선암, 음경암, 인두암, 갈색세포종, 뇌하수체 종양, 흉막폐 모세포종, 원발성 복막암, 직장암, 망막모세포종, 횡문근육종, 타액선암, 카포시(Kaposi) 육종, 횡문근 육종, 세자리() 증후군, 소장암, 연조직 육종, 인후암, 흉선종 및 흉선 암종, 갑상선암, 신장 골반 및 요관의 이행 세포 암, 요도 암, 자궁 내막 자궁암, 자궁 육종, 질암, 외음부암, 그리고 발덴스트륌() 거대 글로불린 혈증이다.
당해 분야의 숙련가를 갖는 의사는 이를 필요로 하는 대상체, 예를 들면, 포유류 대상체 (예를 들면, 인간)에게 투여를 위한 재조합 오르토폭스바이러스 벡터의 효과량을 용이하게 결정할 수 있다. 예를 들면, 의사는 원하는 치료 효과를 달성하고, 원하는 효과가 달성될 때까지 점차적으로 복용량을 증가시키기 위해 필요한 것보다 더 낮은 수준에서 재조합 오르토폭스바이러스 벡터의 처방 투여량을 시작할 수 있다. 대안으로, 의사는 재조합 오르토폭스바이러스 벡터의 용량을 투여하고, 치료요법적 효과(예를 들면, 하나 또는 그 이상 종양의 용적 감소)를 얻을 때 까지 후속적으로 점진적으로 더 낮은 투여량을 투여함으로써 치료 요법을 시작할 수 있다. 일반적으로, 본 발명의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터의 적합한 일일 용량은 치료요법적 효과를 얻는데 효과적인 최저 용량인 재조합 오르토폭스바이러스 벡터의 양일 것이다. 본 발명의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터의 치료요법적 조성물의 일일 용량은 단일 용량으로 투여되거나, 또는 임의선택적으로 단위 투여형태로, 일일, 주, 달 또는 일년에 걸쳐 적절한 간격을 두고 별도 투여되는 2, 3, 4, 5, 6회 또는 그 이상의 투여량으로 투여될 수 있다. 단독으로 본 발명의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터를 투여하는 것이 가능할 수 있지만, 부형제, 담체, 그리고 임의선택적으로, 추가 치료요법적 제제와 병용하여 약제학적 제형으로 또한 투여될 수 있다.
당분야에 공지된 임의의 다양한 방법에 의해, 본 발명의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터가 세포 증식 질환, 이를 테면, 암의 진행을 감쇠시키는 능력에 대해 모니터될 수 있다. 예를 들면, 의사는 하나 또는 그 이상의 종양의 용적을 분석함으로써, 본 발명의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터로 치료하기 위해, 대상체, 예를 들면, 포유류 대상체 (예를 들면, 인간) 환자에서 반응을 모니터할 수 있다. 대안으로, 의사는 특정 대상체의 림프에서 T-reg 세포 집단을 분석함으로써 본 발명의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터로 치료하기 위해 대상체 (예를 들면, 인간)의 반응을 모니터할 수 있다. 예를 들면, 의사는 대상체, 예를 들면, 포유류 대상체 (예를 들면, 인간)로부터 샘플을 취하고, 그리고 확립된 절차, 이를 테면, 형광 활성화된 세포 소팅(sorting)을 이용하여 암 세포의 양 또는 밀도를 결정할 수 있다. 상기 재조합 오르토폭스바이러스가 투여되기 전, 해당 대상체에서 취한 샘플 안에 있는 암 세포의 양과 비교하여 해당 샘플에서 암 세포의 양이 감소되었다 (예를 들면, 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 그 이상으로 감소)는 발견은 상기 오르토폭스바이러스 투여가 해당 암을 치료하는데 효과적임을 나타낼 수 있다.
5.5.3. 병용 치료요법
본원에 기술된 재조합 오르토폭스바이러스 벡터는 하나 또는 그 이상 추가 제제, 이를 테면, 면역 체크포인트 억제제와 함께 투여될 수 있다. 예를 들면, 상기 재조합 오르토폭스바이러스 벡터는 면역 체크포인트 억제제와 동시에, 면역 체크포인트 억제제와 혼합하여, 또는 면역 체크포인트 억제제와 별도로 투여될 수 있다. 본 발명의 조성물 및 방법과 병용하여 사용하기 위한 예시적인 면역 체크포인트 억제제에는 OX40 리간드, ICOS 리간드, 항-CD47 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-CD40/CD40L 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-Lag3 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-PD-L1 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-PD1 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 그리고 항-Tim-3 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 내포되나, 이에 국한되지 않는다. 추가적으로 또는 대안으로, 본 발명의 벡터는 인터루킨 (IL)과 동시에, 이와 혼합하여, 또는 이와 별도로 투여될 수 있다. 예를 들면, 상기 재조합 오르토폭스바이러스 벡터는 인터루킨과 동시에, 이와 혼합하여, 또는 이와 별도로 투여될 수 있다. 본 발명의 조성물 및 방법과 병용하여 사용하기 위한 예시적인 인터루킨에는 IL-1 알파, IL-1 베타, IL-2, IL-4, IL-7, IL-10, IL-12 p35, IL-12 p40, IL-12 p70, IL-15, IL-18, IL-21, 그리고 IL-23이 내포되나, 이에 국한되지 않는다. 추가적으로 또는 대안으로, 본 발명의 벡터는 인터페론과 동시에, 이와 혼합하여, 또는 이와 별도로 투여될 수 있다. 예를 들면, 상기 재조합 오르토폭스바이러스 벡터는 인터페론과 동시에, 이와 혼합하여, 또는 이와 별도로 투여될 수 있다. 본 발명의 조성물 및 방법과 병용하여 사용하기 위한 예시적인 인터페론에는 IFN-알파, IFN-베타, IFN-델타, IFN-입실론, IFN-타우, IFN-오메가, IFN-제타, 그리고 IFN-감마가 내포되나, 이에 국한되지 않는다. 추가적으로 또는 대안으로, 본 발명의 벡터는 TNF 수퍼패밀리 구성원 단백질과 동시에, 이와 혼합하여, 또는 이와 별도로 투여될 수 있다. 예를 들면, 상기 재조합 오르토폭스바이러스 벡터는 TNF 수퍼패밀리 구성원 단백질과 동시에, 이와 혼합하여, 또는 이와 별도로 투여될 수 있다. 본 발명의 조성물 및 방법과 병용하여 사용하기 위한 예시적인 TNF 수퍼패밀리 구성원 단백질에는 TRAIL, Fas 리간드, LIGHT (TNFSF-14), TNF-알파, 그리고 4-1BB 리간드가 내포되나, 이에 국한되지 않는다. 추가적으로 또는 대안으로, 본 발명의 벡터는 사이토킨과 동시에, 이와 혼합하여, 또는 이와 별도로 투여될 수 있다. 예를 들면, 상기 재조합 오르토폭스바이러스 벡터는 사이토킨과 동시에, 이와 혼합하여, 또는 이와 별도로 투여될 수 있다. 본 발명의 조성물 및 방법과 병용하여 사용하기 위한 예시적인 사이토킨에는 GM-CSF, Flt3 리간드, CD40 리간드, 항-TGF-베타, 항-VEGF-R2, 그리고 cGAS (구아닐 아데닐레이트 사이클라제)가 내포되나, 이에 국한되지 않는다.
추가적으로 또는 대안으로, 면역 체크포인트 억제제는 상기 오르토폭스바이러스 자체에서 발현될 수 있다. 예를 들면, 상기 재조합 오르토폭스바이러스 벡터에는 면역 체크포인트 억제제를 인코딩하는 형질전환유전자가 내포될 수 있다. 본 발명의 조성물 및 방법의 오르토폭스바이러스에 의한 발현을 위한 예시적인 면역 체크포인트 억제제에는 OX40 리간드, ICOS 리간드, 항-CD47 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-CD40/CD40L 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-Lag3 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-PD-L1 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-PD1 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 그리고 항-Tim-3 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 내포되나, 이에 국한되지 않는다. 추가적으로 또는 대안으로, 인터루킨은 상기 오르토폭스바이러스 자체에서 발현될 수 있다. 예를 들면, 상기 재조합 오르토폭스바이러스 벡터에는 인터루킨을 인코딩하는 형질전환유전자가 내포될 수 있다. 본 발명의 조성물 및 방법의 오르토폭스바이러스에 의한 발현용 예시적인 면역 체크포인트 억제제에는 IL-1 알파, IL-1 베타, IL-2, IL-4, IL-7, IL-10, IL-12 p35, IL-12 p40, IL-12 p70, IL-15, IL-18, IL-21, 그리고 IL-23이 내포되나, 이에 국한되지 않는다. 추가적으로 또는 대안으로, 인터페론은 상기 오르토폭스바이러스 자체에서 발현될 수 있다. 예를 들면, 상기 재조합 오르토폭스바이러스 벡터에는 인터페론을 인코딩하는 형질전환유전자가 내포될 수 있다. 본 발명의 조성물 및 방법의 오르토폭스바이러스에 의한 발현용 예시적인 인터페론에는 IFN-알파, IFN-베타, IFN-델타, IFN-입실론, IFN-타우, IFN-오메가, IFN-제타, 그리고 IFN-감마가 내포되나, 이에 국한되지 않는다. 추가적으로 또는 대안으로, TNF 수퍼패밀리 구성원 단백질은 상기 오르토폭스바이러스 자체에서 발현될 수 있다. 예를 들면, 상기 재조합 오르토폭스바이러스 벡터에는 TNF 수퍼패밀리 구성원 단백질을 인터페론을 인코딩하는 형질전환유전자가 내포될 수 있다. 본 발명의 조성물 및 방법의 오르토폭스바이러스에 의한 발현용 예시적인 TNF 수퍼패밀리 구성원 단백질에는 TRAIL, Fas 리간드, LIGHT (TNFSF-14), TNF-알파, 그리고 4-1BB 리간드가 내포되나, 이에 국한되지 않는다. 추가적으로 또는 대안으로, 사이토킨은 상기 오르토폭스바이러스 자체에서 발현될 수 있다. 예를 들면, 상기 재조합 오르토폭스바이러스 벡터에는 사이토킨을 인코딩하는 형질전환유전자가 내포될 수 있다. 본 발명의 조성물 및 방법의 오르토폭스바이러스에 의한 발현용 예시적인 사이토킨에는 GM-CSF, fms-관련된 티로신 키나제 3 (Flt3) 리간드, CD40 리간드, TGF-베타, VEGF-R2, 그리고 c-KIT가 내포되나, 이에 국한되지 않는다.
추가적으로 또는 대안으로, 종양-연합된 항원은 상기 오르토폭스바이러스 자체에서 발현될 수 있다. 예를 들면, 상기 재조합 오르토폭스바이러스 벡터에는 종양-연합된 항원을 인코딩하는 형질전환유전자가 내포될 수 있다. 본 발명의 조성물 및 방법의 오르토폭스바이러스에 의한 발현용 예시적인 종양-연합된 항원에는 CD19, CD33, EpCAM, CEA, PSMA, EGFRvIII, CD133, EGFR, CDH19, ENPP3, DLL3, MSLN, ROR1, HER2, HLAA2, EpHA2, EpHA3, MCSP, CSPG4, NG2, RON, FLT3, BCMA, CD20, FAPα, FRα, CA-9, PDGFRα, PDGFRβ, FSP1, S100A4, ADAM12m, RET, MET, FGFR, INSR, NTRK, MAGE-A3, NY-ESO-1, 하나 또는 그 이상의 인간 유두종바이러스 (HPV) 단백질, HPV16의 E6 및 E7 단백질, HPV18의 E6 및 E7 단백질, 단미증(brachyury), 또는 전립선산 포스파타제, 또는 이의 하나 또는 그 이상 단편들이 내포되나, 이에 국한되지 않는다. 본원에서 기술된 조성물 및 방법과 병용하여 사용하기 위한 종양-연합된 항원의 추가 예시들에는 표 3-30에 열거된 것들이 내포되나, 이에 국한되지 않는다.
본원에서 기술된 치료 방법의 특정 구체예들에서, 상기 방법은 해당 환자 (예를 들면, 포유류 환자, 이를 테면, 인간 환자)에게 면역 체크포인트 억제제를 투여하는 것을 더 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 면역 체크포인트 억제제는 OX40 리간드, ICOS 리간드, 항-CD47 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-CD40/CD40L 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-Lag3 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-PD-L1 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-PD1 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 그리고 항-Tim-3 항체 또는 이의 항원-결합 단편으로 구성된 군에서 선택된다. 특이적 구체예에서, 상기 면역 체크포인트 억제제는 항-PD1 항체 또는 이의 항원-결합 단편 또는 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 면역 체크포인트 억제제는 항-PD1 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 면역 체크포인트 억제제는 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 면역 체크포인트 억제제는 항-PD-L1 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다. 특이적 구체예에서, 상기 면역 체크포인트 억제제는 이필리무맙이다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 면역 체크포인트 억제제는 트레멜리무맙(tremelimumab)이다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 면역 체크포인트 억제제는 니볼루맙(nivolumab)이다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 면역 체크포인트 억제제는 펨브로리주맙(pembrolizumab)이다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 면역 체크포인트 억제제는 쎄미플리맙(cemiplimab)이다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 면역 체크포인트 억제제는 아테졸리주맙(atezolizumab)이다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 면역 체크포인트 억제제는 아벨루맙(avelumab)이다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 면역 체크포인트 억제제는 두르발루맙(durvalumab)이다.
본원에서 기술된 치료 방법의 특정 구체예들에서, 상기 방법은 해당 환자 (예를 들면, 포유류 환자, 이를 테면, 인간 환자)에게 인터루킨을 투여하는 것을 더 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 인터루킨은 IL-1 알파, IL-1 베타, IL-2, IL-4, IL-7, IL-10, IL-12 p35, IL-12 p40, IL-12 p70, IL-15, IL-18, IL-21, 그리고 IL-23으로 구성된 군에서 선택된다. 특이적 구체예들에서, 상기 인터루킨은 IL-12 p35, IL-12 p40, 그리고 IL-12 p70으로 구성된 군에서 선택된다. 특이적 구체예들에서, 상기 인터루킨은 막-결합된다.
본원에서 기술된 치료 방법의 특정 구체예들에서, 상기 방법은 해당 환자 (예를 들면, 포유류 환자, 이를 테면, 인간 환자)에게 인터페론을 투여하는 것을 더 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 인터페론은 IFN-알파, IFN-베타, IFN-델타, IFN-입실론, IFN-타우, IFN-오메가, IFN-제타, 그리고 IFN-감마로 구성된 군에서 선택된다.
본원에서 기술된 치료 방법의 특정 구체예들에서, 상기 방법은 해당 환자 (예를 들면, 포유류 환자, 이를 테면, 인간 환자)에게 사이토킨을 투여하는 것을 더 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 사이토킨은 TNF 수퍼패밀리 구성원 단백질이다. 특이적 구체예에서, TNF 수퍼패밀리 구성원 단백질은 TRAIL, Fas 리간드, LIGHT (TNFSF-14), TNF-알파, 그리고 4-1BB 리간드로 구성된 군에서 선택된다. 특이적 구체예들에서, 상기 사이토킨은 GM-CSF, Flt3 리간드, CD40 리간드, TGF-베타, VEGF-R2, 그리고 cKit로 구성된 군에서 선택된다. 특이적 구체예에서, 상기 사이토킨은 Flt3 리간드이다.
5.6. 키트
본 발명에 따라 이용될 수 있는 키트가 또한 본원에서 제공된다.
한 측면에서, 섹션 5.2.3에서 기술된 핵산, 그리고 숙주 세포에서 해당 핵산을 발현시키기 위해 키트의 사용자에게 지침을 주는 포장 삽입물을 포함하는 키트가 본원에서 제공된다.
또다른 측면에서, 섹션 5.2.4에서 기술된 바이러스, 그리고 숙주 세포에서 해당 바이러스를 발현시키기 위해 키트의 사용자에게 지침을 주는 포장 삽입물을 포함하는 키트가 본원에서 제공된다.
또다른 측면에서, 섹션 5.2.4에서 기술된 바이러스, 그리고 치료요법적으로 유효량의 상기 바이러스를 암 환자에게 (예를 들면, 포유류 환자, 이를 테면, 인간 환자)에게 투여하고, 이로 인하여 해당 암을 치료하기 위한 사용자에게 지침을 주는 포장 삽입물을 포함하는 키트가 본원에서 제공된다. 특정 구체예들에서, 상기 포유류 환자는 인간 환자다. 치료되는 암은 섹션 5.5에서 기술된 암일 수 있다.
바람직한 구체예들에서, 상기 핵산 또는 바이러스는 해당 핵산 또는 바이러스를 보관하는데 적합한 하나 또는 그 이상의 용기에 보관된다. 특정 구체예들에서, 본원에서 제공된 키트는 의도된 용도에 적합한 제어(controls)를 더 포함한다.
5.7. 예시적인 구체예들
5.7.1. 세트 1
1.
재조합 오르토폭스바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 2개 유전자 결손을 포함하고, 이들 각각은 F1L, N1L, B14R, M2L, K1L, K7R, C2L, N2L, M1L, K2L, K3L, F3L, B16R, B19R, K4L, K5L, K6L, F2L, B15R, B17L, B18R, 및 B20R로 구성된 군에서 독립적으로 선택된다.
2.
구체예 1의 핵산, 이때 전술한 결손은 적어도 3개 유전자를 포함하고, 이들 각각은 F1L, N1L, B14R, M2L, K1L, K7R, C2L, N2L, M1L, K2L, K3L, F3L, B16R, B19R, K4L, K5L, K6L, F2L, B15R, B17L, B18R, 및 B20R로 구성된 군에서 독립적으로 선택된다.
3.
구체예 2의 핵산, 이때 전술한 결손은 적어도 4개 유전자를 포함하고, 이들 각각은 F1L, N1L, B14R, M2L, K1L, K7R, C2L, N2L, M1L, K2L, K3L, F3L, B16R, B19R, K4L, K5L, K6L, F2L, B15R, B17L, B18R, 및 B20R로 구성된 군에서 독립적으로 선택된다.
4.
구체예 3의 핵산, 이때 전술한 결손은 적어도 5개 유전자를 포함하고, 이들 각 유전자는 F1L, N1L, B14R, M2L, K1L, K7R, C2L, N2L, M1L, K2L, K3L, F3L, B16R, B19R, K4L, K5L, K6L, F2L, B15R, B17L, B18R, 및 B20R로 구성된 군에서 독립적으로 선택된다.
5.
구체예 4의 핵산, 이때 전술한 결손은 적어도 6개 유전자를 포함하고, 이들 각 유전자는 F1L, N1L, B14R, M2L, K1L, K7R, C2L, N2L, M1L, K2L, K3L, F3L, B16R, B19R, K4L, K5L, K6L, F2L, B15R, B17L, B18R, 및 B20R로 구성된 군에서 독립적으로 선택된다.
6.
구체예 5의 핵산, 이때 전술한 결손은 적어도 7개 유전자를 포함하고, 이들 각 유전자는 F1L, N1L, B14R, M2L, K1L, K7R, C2L, N2L, M1L, K2L, K3L, F3L, B16R, B19R, K4L, K5L, K6L, F2L, B15R, B17L, B18R, 및 B20R로 구성된 군에서 독립적으로 선택된다.
7.
구체예 6의 핵산, 이때 전술한 결손은 적어도 8개 유전자를 포함하고, 이들 각 유전자는 F1L, N1L, B14R, M2L, K1L, K7R, C2L, N2L, M1L, K2L, K3L, F3L, B16R, B19R, K4L, K5L, K6L, F2L, B15R, B17L, B18R, 및 B20R로 구성된 군에서 독립적으로 선택된다.
8.
구체예 7의 핵산, 이때 전술한 결손은 적어도 9개 유전자를 포함하고, 이들 각 유전자는 F1L, N1L, B14R, M2L, K1L, K7R, C2L, N2L, M1L, K2L, K3L, F3L, B16R, B19R, K4L, K5L, K6L, F2L, B15R, B17L, B18R, 및 B20R로 구성된 군에서 독립적으로 선택된다.
9.
구체예 8의 핵산, 이때 전술한 결손은 적어도 10개 유전자를 포함하고, 이들 각 유전자는 F1L, N1L, B14R, M2L, K1L, K7R, C2L, N2L, M1L, K2L, K3L, F3L, B16R, B19R, K4L, K5L, K6L, F2L, B15R, B17L, B18R, 및 B20R로 구성된 군에서 독립적으로 선택된다.
10.
구체예 9의 핵산, 이때 전술한 결손은 적어도 11개 유전자를 포함하고, 이들 각 유전자는 F1L, N1L, B14R, M2L, K1L, K7R, C2L, N2L, M1L, K2L, K3L, F3L, B16R, B19R, K4L, K5L, K6L, F2L, B15R, B17L, B18R, 및 B20R로 구성된 군에서 독립적으로 선택된다.
11.
구체예 10의 핵산, 이때 전술한 결손은 적어도 12개 유전자를 포함하고, 이들 각 유전자는 F1L, N1L, B14R, M2L, K1L, K7R, C2L, N2L, M1L, K2L, K3L, F3L, B16R, B19R, K4L, K5L, K6L, F2L, B15R, B17L, B18R, 및 B20R로 구성된 군에서 독립적으로 선택된다.
12.
구체예 11의 핵산, 이때 전술한 결손은 적어도 13개 유전자를 포함하고, 이들 각 유전자는 F1L, N1L, B14R, M2L, K1L, K7R, C2L, N2L, M1L, K2L, K3L, F3L, B16R, B19R, K4L, K5L, K6L, F2L, B15R, B17L, B18R, 및 B20R로 구성된 군에서 독립적으로 선택된다.
13.
구체예 12의 핵산, 이때 전술한 결손은 적어도 14개 유전자를 포함하고, 이들 각 유전자는 F1L, N1L, B14R, M2L, K1L, K7R, C2L, N2L, M1L, K2L, K3L, F3L, B16R, B19R, K4L, K5L, K6L, F2L, B15R, B17L, B18R, 및 B20R로 구성된 군에서 독립적으로 선택된다.
14.
구체예 13의 핵산, 이때 전술한 결손은 적어도 15개 유전자를 포함하고, 이들 각 유전자는 F1L, N1L, B14R, M2L, K1L, K7R, C2L, N2L, M1L, K2L, K3L, F3L, B16R, B19R, K4L, K5L, K6L, F2L, B15R, B17L, B18R, 및 B20R로 구성된 군에서 독립적으로 선택된다.
15.
구체예 14의 핵산, 이때 전술한 결손은 적어도 16개 유전자를 포함하고, 이들 각 유전자는 F1L, N1L, B14R, M2L, K1L, K7R, C2L, N2L, M1L, K2L, K3L, F3L, B16R, B19R, K4L, K5L, K6L, F2L, B15R, B17L, B18R, 및 B20R로 구성된 군에서 독립적으로 선택된다.
16.
구체예 15의 핵산, 이때 전술한 결손은 적어도 17개 유전자를 포함하고, 이들 각 유전자는 F1L, N1L, B14R, M2L, K1L, K7R, C2L, N2L, M1L, K2L, K3L, F3L, B16R, B19R, K4L, K5L, K6L, F2L, B15R, B17L, B18R, 및 B20R로 구성된 군에서 독립적으로 선택된다.
17.
구체예 16의 핵산, 이때 전술한 결손은 적어도 18개 유전자를 포함하고, 이들 각 유전자는 F1L, N1L, B14R, M2L, K1L, K7R, C2L, N2L, M1L, K2L, K3L, F3L, B16R, B19R, K4L, K5L, K6L, F2L, B15R, B17L, B18R, 및 B20R로 구성된 군에서 독립적으로 선택된다.
18.
구체예 17의 핵산, 이때 전술한 결손은 적어도 19개 유전자를 포함하고, 이들 각 유전자는 F1L, N1L, B14R, M2L, K1L, K7R, C2L, N2L, M1L, K2L, K3L, F3L, B16R, B19R, K4L, K5L, K6L, F2L, B15R, B17L, B18R, 및 B20R로 구성된 군에서 독립적으로 선택된다.
19.
구체예 18의 핵산, 이때 전술한 결손은 적어도 20개 유전자를 포함하고, 이들 각 유전자는 F1L, N1L, B14R, M2L, K1L, K7R, C2L, N2L, M1L, K2L, K3L, F3L, B16R, B19R, K4L, K5L, K6L, F2L, B15R, B17L, B18R, 및 B20R로 구성된 군에서 독립적으로 선택된다.
20.
구체예 19의 핵산, 이때 전술한 결손은 적어도 21개 유전자를 포함하고, 이들 각 유전자는 F1L, N1L, B14R, M2L, K1L, K7R, C2L, N2L, M1L, K2L, K3L, F3L, B16R, B19R, K4L, K5L, K6L, F2L, B15R, B17L, B18R, 및 B20R로 구성된 군에서 독립적으로 선택된다.
21.
구체예 20의 핵산, 이때 전술한 결손은 F1L, N1L, B14R, M2L, K1L, K7R, C2L, N2L, M1L, K2L, K3L, F3L, B16R, B19R, K4L, K5L, K6L, F2L, B15R, B17L, B18R, 및 B20R의 전술한 각 유전자를 포함한다.
22.
재조합 오르토폭스바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 B14R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R로 구성된 군에서 선택된 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
23.
구체예 1-22중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 B14R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R로 구성된 군에서 선택된 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
24.
구체예 23의 핵산, 이때 전술한 결손은 적어도 2개 유전자를 포함하며, 이들 각 유전자는 독립적으로 B14R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R로 구성된 군에서 선택된다.
25.
구체예 24의 핵산, 이때 전술한 결손은 적어도 3개 유전자를 포함하며, 이들 각 유전자는 독립적으로 B14R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R로 구성된 군에서 선택된다.
26.
구체예 25의 핵산, 이때 전술한 결손은 적어도 4개 유전자를 포함하며, 이들 각 유전자는 독립적으로 B14R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R로 구성된 군에서 선택된다.
27.
구체예 26의 핵산, 이때 전술한 결손은 적어도 5개 유전자를 포함하며, 이들 각 유전자는 독립적으로 B14R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R로 구성된 군에서 선택된다.
28.
구체예 27의 핵산, 이때 전술한 결손은 전술한 B14R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자 각각을 포함한다.
29.
재조합 오르토폭스바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, K1L, K2L, K3L, K4L, K7R, 및 F2L로 구성된 군에서 선택된 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
30.
구체예 1-29중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, K1L, K2L, K3L, K4L, K7R, 및 F2L로 구성된 군에서 선택된 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
31.
구체예 30의 핵산, 이때 전술한 결손은 적어도 2개 유전자를 포함하며, 이들 각 유전자는 독립적으로 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, K1L, K2L, K3L, K4L, K7R, 및 F2L로 구성된 군에서 선택된다.
32.
구체예 31의 핵산, 이때 전술한 결손은 적어도 3개 유전자를 포함하며, 이들 각 유전자는 독립적으로 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, K1L, K2L, K3L, K4L, K7R, 및 F2L로 구성된 군에서 선택된다.
33.
구체예 32의 핵산, 이때 전술한 결손은 적어도 4개 유전자를 포함하며, 이들 각 유전자는 독립적으로 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, K1L, K2L, K3L, K4L, K7R, 및 F2L로 구성된 군에서 선택된다.
34.
구체예 33의 핵산, 이때 전술한 결손은 적어도 5개 유전자를 포함하며, 이들 각 유전자는 독립적으로 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, K1L, K2L, K3L, K4L, K7R, 및 F2L로 구성된 군에서 선택된다.
35.
구체예 34의 핵산, 이때 전술한 결손은 적어도 6개 유전자를 포함하며, 이들 각 유전자는 독립적으로 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, K1L, K2L, K3L, K4L, K7R, 및 F2L로 구성된 군에서 선택된다.
36.
구체예 35의 핵산, 이때 전술한 결손은 적어도 7개 유전자를 포함하며, 이들 각 유전자는 독립적으로 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, K1L, K2L, K3L, K4L, K7R, 및 F2L로 구성된 군에서 선택된다.
37.
구체예 36의 핵산, 이때 전술한 결손은 적어도 8개 유전자를 포함하며, 이들 각 유전자는 독립적으로 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, K1L, K2L, K3L, K4L, K7R, 및 F2L로 구성된 군에서 선택된다.
38.
구체예 37의 핵산, 이때 전술한 결손은 적어도 9개 유전자를 포함하며, 이들 각 유전자는 독립적으로 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, K1L, K2L, K3L, K4L, K7R, 및 F2L로 구성된 군에서 선택된다.
39.
구체예 38의 핵산, 이때 전술한 결손은 적어도 10개 유전자를 포함하며, 이들 각 유전자는 독립적으로 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, K1L, K2L, K3L, K4L, K7R, 및 F2L로 구성된 군에서 선택된다.
40.
구체예 39의 핵산, 이때 전술한 결손은 전술한 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, K1L, K2L, K3L, K4L, K7R, 및 F2L 각각을 포함한다.
41.
재조합 오르토폭스바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈음 카스파제-9 억제제를 인코드하는 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
42.
구체예 1-41중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 1 카스파제-9 억제제를 인코드하는 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
43.
구체예 41 또는 42의 핵산, 이때 전술한 카스파제-9 억제제를 인코드하는 유전자는 F1L이다.
44.
재조합 오르토폭스바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 BCL-2 억제제를 인코드하는 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
45.
구체예 1-44중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 BCL-2 억제제를 인코드하는 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
46.
구체예 44 또는 45의 핵산, 이때 BCL-2 억제제를 인코드하는 전술한 유전자는 N1L이다.
47.
재조합 오르토폭스바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 dUTPase를 인코드하는 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
48.
구체예 1-47중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 dUTPase를 인코드하는 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
49.
구체예 46 또는 47의 핵산, 이때 dUTPase를 인코드하는 전술한 유전자는 F2L이다.
50.
재조합 오르토폭스바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 IFN-알파/베타-수용체-유사 분비된 당단백질을 인코드하는 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
51.
구체예 1-50중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 IFN-알파/베타-수용체-유사 분비된 당단백질을 인코드하는 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
52.
구체예 50 또는 51의 핵산, 이때 IFN-알파/베타-수용체-유사 분비된 당단백질을 인코드하는 전술한 유전자는 B19R이다.
53.
재조합 오르토폭스바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 IL-1-베타-억제제를 인코드하는 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
54.
구체예 1-53중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 IL-1-베타-억제제를 인코드하는 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
55.
구체예 53 또는 54의 핵산, 이때 IL-1-베타-억제제를 인코드하는 전술한 유전자는 B16R이다.
56.
재조합 오르토폭스바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 포스포리파제-D를 인코드하는 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
57.
구체예 1-56중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 포스포리파제-D를 인코드하는 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
58.
구체예 56 또는 57의 핵산, 이때 포스포리파제-D를 인코드하는 전술한 유전자는 K4L이다.
59.
재조합 오르토폭스바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 PKR 억제제를 인코드하는 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
60.
구체예 1-59중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 PKR 억제제를 인코드하는 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
61.
구체예 59 또는 60의 핵산, 이때 PKR 억제제를 인코드하는 전술한 유전자는 K3L이다.
62.
재조합 오르토폭스바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 세린 프로테아제 억제제를 인코드하는 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
63.
구체예 1-62중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 세린 프로테아제 억제제를 인코드하는 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
64.
구체예 62 또는 63의 핵산, 이때 세린 프로테아제 억제제를 인코드하는 전술한 유전자는 K2L이다.
65.
재조합 오르토폭스바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 TLR 신호생성 억제제를 인코드하는 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
66.
구체예 1-65중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 TLR 신호생성 억제제를 인코드하는 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
67.
구체예 65 또는 66의 핵산, 이때 TLR 신호생성 억제제를 인코드하는 전술한 유전자는 N2L이다.
68.
재조합 오르토폭스바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 kelch-유사 단백질을 인코드하는 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
69.
구체예 1-68중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 kelch-유사 단백질을 인코드하는 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
70.
구체예 69의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 2개 유전자의 결손을 포함하며, 이들 각각은 kelch-유사 단백질을 인코드한다.
71.
구체예 68-70중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 kelch-유사 단백질을 인코드하는 전술한 유전자는 F3L 및 C2L로 구성된 군에서 독립적으로 선택된다.
72.
재조합 오르토폭스바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 모노글리세리드 리파제를 인코드하는 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
73.
구체예 1-72중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 모노글리세리드 리파제를 인코드하는 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
74.
구체예 73의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 2개 유전자의 결손을 포함하고, 이들 각각은 모노글리세리드 리파제를 인코드한다.
75.
구체예 72-74중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 모노글리세리드 리파제를 인코드하는 전술한 유전자는 K5L 및 K6L로 구성된 군에서 독립적으로 선택된다.
76.
재조합 오르토폭스바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 NF-κB 억제제를 인코드하는 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
77.
구체예 1-76중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 NF-κB 억제제를 인코드하는 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
78.
구체예 77의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 2개 유전자의 결손을 포함하고, 이들 각각은 NF-κB 억제제를 인코드한다.
79.
구체예 78의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 3개 유전자의 결손을 포함하고, 이들 각각은 NF-κB 억제제를 인코드한다.
80.
구체예 76-79중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 NF-κB 억제제를 인코드하는 전술한 유전자는 K7R, K1L, 및 M2L로 구성된 군에서 독립적으로 선택된다.
81.
재조합 오르토폭스바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 Ankyrin 반복 단백질을 인코드하는 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
82.
구체예 1-81중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 Ankyrin 반복 단백질을 인코드하는 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
83.
구체예 82의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 2개 유전자의 결손을 포함하는데, 이들 각 유전자는 Ankyrin 반복 단백질을 인코드한다.
84.
구체예 83의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 3개 유전자의 결손을 포함하는데, 이들 각 유전자는 Ankyrin 반복 단백질을 인코드한다.
85.
구체예 81-84중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 Ankyrin 반복 단백질을 인코드하는 전술한 유전자는 B18R, B20R, 및 M1L로 구성된 군에서 독립적으로 선택된다.
86.
재조합 오르토폭스바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 B15R, B17R, 및 B14R로 구성된 군에서 선택된 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
87.
구체예 1-86중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 B15R, B17R, 및 B14R로 구성된 군에서 선택된 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
88.
구체예 87의 핵산, 이때 전술한 결손은 적어도 2개 유전자를 포함하며, 이들 각각은 B15R, B17R, 및 B14R로 구성된 군에서 독립적으로 선택된다.
89.
구체예 88의 핵산, 이때 전술한 결손은 전술한 B15R, B17R, 및 B14R 유전자 각각을 포함한다.
90.
구체예 1-89중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R구성된 ITR 유전자 군에서 선택된 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
91.
구체예 90의 핵산, 이때 전술한 결손은 적어도 2개 유전자 결손을 포함하고, 이들 각 유전자는 B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R로 구성된 ITR 유전자의 전술한 군에서 독립적으로 선택된다.
92.
구체예 91의 핵산, 이때 전술한 결손은 적어도 3개 유전자 결손을 포함하고, 이들 각 유전자는 B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R로 구성된 ITR 유전자의 전술한 군에서 독립적으로 선택된다.
93.
구체예 92의 핵산이때 전술한 결손은 적어도 4개 유전자 결손을 포함하고, 이들 각 유전자는 B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R로 구성된 ITR 유전자의 전술한 군에서 독립적으로 선택된다.
94.
구체예 93의 핵산, 이때 전술한 결손은 적어도 5개 유전자 결손을 포함하고, 이들 각 유전자는 B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R로 구성된 ITR 유전자의 전술한 군에서 독립적으로 선택된다.
95.
구체예 94의 핵산, 이때 전술한 결손은 적어도 6개 유전자 결손을 포함하고, 이들 각 유전자는 B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R로 구성된 ITR 유전자의 전술한 군에서 독립적으로 선택된다.
96.
구체예 95의 핵산, 이때 전술한 결손은 적어도 7개 유전자 결손을 포함하고, 이들 각 유전자는 B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R로 구성된 ITR 유전자의 전술한 군에서 독립적으로 선택된다.
97.
구체예 96의 핵산, 이때 전술한 결손은 적어도 8개 유전자 결손을 포함하고, 이들 각 유전자는 B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R로 구성된 ITR 유전자의 전술한 군에서 독립적으로 선택된다.
98.
구체예 97의 핵산, 이때 전술한 결손은 전술한 B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R 유전자 각각을 포함한다.
99.
100.
102.
구체예 101의 핵산, 이때 전술한 백시니아 바이러스는 Copenhagen, Western Reserve, Wyeth, Lister, EM63, ACAM2000, LC16m8, CV-1, 변형된 백시니아 Ankara (MVA), Dairen I, GLV-1h68, IHD-J, L-IVP, LC16m8, LC16mO, Tashkent, Tian Tan, 그리고 WAU86/88-1로 구성된 균에서 선택된 균주다.
103.
구체예 101의 핵산, 이때 전술한 백시니아 바이러스는 Copenhagen, Western Reserve, Tian Tan, Wyeth, 그리고 Lister로 구성된 군에서 선택된 균주다.
104.
구체예 101의 핵산, 이때 전술한 백시니아 바이러스는 Copenhagen 균주 백시니아 바이러스다.
105.
구체예 1-104중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 전술한 각 결손은 대응하는 유전자를 인코딩하는 전체 폴리뉴클레오티드의 결손이다.
106.
구체예 1-104중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 전술한 각 결손은 대응하는 유전자를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드의 일부분 결손이며, 그리고 이때 전술한 결손은 숙주 세포 안으로 도입될 때, 전술한 유전자가 비-기능성이 되도록 만드는데 충분하다.
107.
구체예 1-106중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 전술한 핵산은 종양-연합된 항원을 인코딩하는 형질전환유전자를 더 포함한다.
108.
구체예 107의 핵산, 이때 전술한 종양-연합된 항원은 표 3-30중 임의의 하나에 열거된 종양-연합된 항원이다.
109.
구체예 107의 핵산, 이때 전술한 종양-연합된 항원은 CD19, CD33, EpCAM, CEA, PSMA, EGFRvIII, CD133, EGFR, CDH19, ENPP3, DLL3, MSLN, ROR1, HER2, HLAA2, EpHA2, EpHA3, MCSP, CSPG4, NG2, RON, FLT3, BCMA, CD20, FAPα, FRα, CA-9, PDGFRα, PDGFRβ, FSP1, S100A4, ADAM12m, RET, MET, FGFR, INSR, 및 NTRK로 구성된 군에서 선택된 종양-연합된 항원이다.
110.
구체예 107의 핵산, 이때 전술한 종양-연합된 항원은 MAGE-A3, 또는 이의 하나 또는 그 이상 단편들을 포함한다.
111.
구체예 107의 핵산, 이때 전술한 종양-연합된 항원은 NY-ESO-1, 또는 이의 하나 또는 그 이상 단편들을 포함한다.
112.
구체예 107의 핵산, 이때 전술한 종양-연합된 항원은 하나 또는 그 이상의 인간 유두종바이러스 (HPV) 단백질, 또는 이의 단편들을 포함한다.
113.
구체예 107의 핵산, 이때 전술한 종양-연합된 항원은 (i) HPV16의 E6 및 E7 단백질, 또는 이의 단편들, 그리고 (ii) HPV18의 E6 및 E7 단백질, 또는 이의 단편들을 포함한다.
114.
구체예 107의 핵산, 이때 전술한 종양-연합된 항원은 단미증(brachyury) 또는 이의 하나 또는 그 이상 단편들을 포함한다.
115.
구체예 107의 핵산, 이때 전술한 종양-연합된 항원은 전립선산 포스파타제, 또는 이의 하나 또는 그 이상 단편들을 포함한다.
116.
구체예 107-115중 임의의 하나의 구체예의 핵산을 만드는 방법, 전술한 방법은 다음을 포함한다:
a.
트랜스포존 삽입 부위를 구체예 1-106중 임의의 하나의 구체예의 핵산에 도입시키고;
b.
(a)에서 형성된 핵산에 전술한 종양-연합된 항원을 인코딩하는 유전자를 포함하는 운반가능한 요소를 접촉시키고, 이로 인하여 전술한 유전자가 전술한 핵산으로 도입되며; 그리고
c.
(b)에서 형성된 핵산을 회수한다.
117.
구체예 1-115중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 전술한 핵산은 면역 체크포인트 억제제를 인코딩하는 형질전환유전자를 더 포함한다.
118.
구체예 117의 핵산, 이때 전술한 면역 체크포인트 억제제는 OX40 리간드, ICOS 리간드, 항-CD47 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-CD40/CD40L 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-Lag3 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-PD-L1 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-PD1 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 그리고 항-Tim-3 항체 또는 이의 항원-결합 단편으로 구성된 군에서 선택된다.
119.
구체예 117의 핵산, 이때 전술한 면역 체크포인트 억제제는 항-PD-L1 항체 또는 이의 항원-결합 단편 또는 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다.
120.
구체예 117의 핵산, 이때 전술한 면역 체크포인트 억제제는 항-PD1 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다.
121.
구체예 117의 핵산, 이때 전술한 면역 체크포인트 억제제는 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다.
122.
구체예 117-121중 임의의 하나의 구체예의 핵산을 만드는 방법, 전술한 방법은 다음을 포함한다:
a.
트랜스포존 삽입 부위를 구체예 1-116중 임의의 하나의 구체예의 핵산에 도입시키고;
b.
(a)에서 형성된 핵산에 전술한 면역 체크포인트 억제제를 인코딩하는 유전자를 포함하는 운반가능한 요소를 접촉시키고, 이로 인하여 전술한 유전자가 전술한 핵산으로 도입되며; 그리고
c.
(b)에서 형성된 핵산을 회수한다.
123.
구체예 1-115 및 117-121중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 전술한 핵산은 인터루킨 (IL)을 인코딩하는 형질전환유전자를 더 포함한다.
124.
구체예 123의 핵산, 이때 전술한 인터루킨은
IL-1 알파, IL-1 베타, IL-2, IL-4, IL-7, IL-10, IL-12 p35, IL-12 p40, IL-12 p70, IL-15, IL-18, IL-21, 그리고 IL-23으로 구성된 군에서 선택된다.
125.
구체예 123의 핵산, 이때 전술한 인터루킨은 IL-12 p35, IL-12 p40, 그리고 IL-12 p70으로 구성된 군에서 선택된다.
126.
구체예 125의 핵산, 이때 전술한 인터루킨은 막-결합된다.
127.
구체예 123-126중 하나의 구체예의 핵산을 만드는 방법, 전술한 방법은 다음을 포함한다:
a.
트랜스포존 삽입 부위를 구체예 1-115 및 117-121중 임의의 하나의 구체예의 핵산에 도입시키고;
b.
(a)에서 형성된 핵산에 인터루킨을 인코딩하는 유전자를 포함하는 운반가능한 요소를 접촉시키고, 이로 인하여 전술한 유전자가 전술한 핵산으로 도입되며; 그리고
c.
(b)에서 형성된 핵산을 회수한다.
128.
구체예 1-115, 117-121, 그리고 123-126중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 전술한 핵산은 인터페론 (IFN)을 인코딩하는 형질전환유전자를 더 포함한다.
129.
구체예 128의 핵산, 이때 전술한 인터페론은 IFN-알파, IFN-베타, IFN-델타, IFN-입실론, IFN-타우, IFN-오메가, IFN-제타, 그리고 IFN-감마로 구성된 군에서 선택된다.
130.
구체예 128 또는 129의 핵산을 만드는 방법, 전술한 방법은 다음을 포함한다:
a.
트랜스포존 삽입 부위를 구체예 1-115, 117-121, 그리고 123-126중 임의의 하나의 구체예의 핵산에 도입시키고;
b.
(a)에서 형성된 핵산에 인터페론을 인코딩하는 유전자를 포함하는 운반가능한 요소를 접촉시키고, 이로 인하여 전술한 유전자가 전술한 핵산으로 도입되며; 그리고
c.
(b)에서 형성된 핵산을 회수한다.
131.
구체예 1-115, 117-121, 123-126, 128, 및 129중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 전술한 핵산은 TNF 수퍼패밀리 구성원 단백질을 인코딩하는 형질전환유전자를 더 포함한다.
132.
구체예 131의 핵산, 이때 전술한 TNF 수퍼패밀리 구성원 단백질은 TRAIL, Fas 리간드, LIGHT (TNFSF-14), TNF-알파, 그리고 4-1BB 리간드로 구성된 군에서 선택된다.
133.
구체예 131 또는 132의 핵산을 만드는 방법, 전술한 방법은 다음을 포함한다:
a.
트랜스포존 삽입 부위를 구체예 1-115, 117-121, 123-126, 128, 및 129중 임의의 하나의 구체예의 핵산에 도입시키고;
b.
(a)에서 형성된 핵산에 TNF 수퍼패밀리 구성원 단백질을 인코딩하는 유전자를 포함하는 운반가능한 요소를 접촉시키고, 이로 인하여 전술한 유전자가 전술한 핵산으로 도입되며; 그리고
c.
(b)에서 형성된 핵산을 회수한다.
134.
구체예 1-115, 117-121, 123-126, 128, 129, 131, 및 132중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 전술한 핵산은 사이토킨을 인코딩하는 형질전환유전자를 더 포함한다.
135.
구체예 134의 핵산, 이때 전술한 사이토킨은 GM-CSF, Flt3 리간드, CD40 리간드, 항-TGF-베타, 항-VEGF-R2, 그리고 cGAS (구아닐 아데닐레이트 사이클라제)로 구성된 군에서 선택된다.
136.
구체예 134의 핵산, 이때 전술한 사이토킨은 Flt3 리간드다.
137.
구체예 135 또는 136의 핵산을 만드는 방법, 전술한 방법은 다음을 포함한다:
a.
트랜스포존 삽입 부위를 구체예 1-115, 117-121, 123-126, 128, 129, 131, 및 132중 임의의 하나의 구체예의 핵산에 도입시키고;
b.
(a)에서 형성된 핵산에 사이토킨을 인코딩하는 유전자를 포함하는 운반가능한 요소를 접촉시키고, 이로 인하여 전술한 유전자가 전술한 핵산으로 도입되며; 그리고
c.
(b)에서 형성된 핵산을 회수한다.
138.
구체예 1-115, 117-121, 123-126, 128, 129, 131, 132, 및 134-136중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 전술한 핵산은 microRNA (miRNA)을 인코딩하는 형질전환유전자를 더 포함한다.
139.
구체예 138의 핵산, 이때 전술한 miRNA는 mir-6이다.
140.
구체예 138 또는 139의 핵산을 만드는 방법, 전술한 방법은 다음을 포함한다:
a.
트랜스포존 삽입 부위를 체예 1-115, 117-121, 123-126, 128, 129, 131, 132, 및 134-136중 임의의 하나의 구체예의 핵산에 도입시키고;
b.
(a)에서 형성된 핵산에 miRNA를 인코딩하는 유전자를 포함하는 운반가능한 요소를 접촉시키고, 이로 인하여 전술한 유전자가 전술한 핵산으로 도입되며; 그리고
c.
(b)에서 형성된 핵산을 회수한다.
141.
적어도 2개 유전자의 결손을 포함하는 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 상기 각 유전자는 F1L, N1L, B14R, M2L, K1L, K7R, C2L, N2L, M1L, K2L, K3L, F3L, B16R, B19R, K4L, K5L, K6L, F2L, B15R, B17L, B18R, 및 B20R로 구성된 군에서 독립적으로 선택된다.
142.
구체예 141의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 결손은 적어도 3개 유전자를 포함하고, 각 유전자는 F1L, N1L, B14R, M2L, K1L, K7R, C2L, N2L, M1L, K2L, K3L, F3L, B16R, B19R, K4L, K5L, K6L, F2L, B15R, B17L, B18R, 및 B20R로 구성된 군에서 독립적으로 선택된다.
143.
구체예 142의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 결손은 적어도 4개 유전자를 포함하고, 각 유전자는 F1L, N1L, B14R, M2L, K1L, K7R, C2L, N2L, M1L, K2L, K3L, F3L, B16R, B19R, K4L, K5L, K6L, F2L, B15R, B17L, B18R, 및 B20R로 구성된 군에서 독립적으로 선택된다.
144.
구체예 143의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 결손은 적어도 5개 유전자를 포함하고, 각 유전자는 F1L, N1L, B14R, M2L, K1L, K7R, C2L, N2L, M1L, K2L, K3L, F3L, B16R, B19R, K4L, K5L, K6L, F2L, B15R, B17L, B18R, 및 B20R로 구성된 군에서 독립적으로 선택된다.
145.
구체예 144의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 결손은 적어도 6개 유전자를 포함하고, 각 유전자는 F1L, N1L, B14R, M2L, K1L, K7R, C2L, N2L, M1L, K2L, K3L, F3L, B16R, B19R, K4L, K5L, K6L, F2L, B15R, B17L, B18R, 및 B20R로 구성된 군에서 독립적으로 선택된다.
146.
구체예 145의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 결손은 적어도 7개 유전자를 포함하고, 각 유전자는 F1L, N1L, B14R, M2L, K1L, K7R, C2L, N2L, M1L, K2L, K3L, F3L, B16R, B19R, K4L, K5L, K6L, F2L, B15R, B17L, B18R, 및 B20R로 구성된 군에서 독립적으로 선택된다.
147.
구체예 146의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 결손은 적어도 8개 유전자를 포함하고, 각 유전자는 F1L, N1L, B14R, M2L, K1L, K7R, C2L, N2L, M1L, K2L, K3L, F3L, B16R, B19R, K4L, K5L, K6L, F2L, B15R, B17L, B18R, 및 B20R로 구성된 군에서 독립적으로 선택된다.
148.
구체예 147의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 결손은 적어도 9개 유전자를 포함하고, 각 유전자는 F1L, N1L, B14R, M2L, K1L, K7R, C2L, N2L, M1L, K2L, K3L, F3L, B16R, B19R, K4L, K5L, K6L, F2L, B15R, B17L, B18R, 및 B20R로 구성된 군에서 독립적으로 선택된다.
149.
구체예 148의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 결손은 적어도 10개 유전자를 포함하고, 각 유전자는 F1L, N1L, B14R, M2L, K1L, K7R, C2L, N2L, M1L, K2L, K3L, F3L, B16R, B19R, K4L, K5L, K6L, F2L, B15R, B17L, B18R, 및 B20R로 구성된 군에서 독립적으로 선택된다.
150.
구체예 149의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 결손은 적어도 11개 유전자를 포함하고, 각 유전자는 F1L, N1L, B14R, M2L, K1L, K7R, C2L, N2L, M1L, K2L, K3L, F3L, B16R, B19R, K4L, K5L, K6L, F2L, B15R, B17L, B18R, 및 B20R로 구성된 군에서 독립적으로 선택된다.
151.
구체예 150의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 결손은 적어도 12개 유전자를 포함하고, 각 유전자는 F1L, N1L, B14R, M2L, K1L, K7R, C2L, N2L, M1L, K2L, K3L, F3L, B16R, B19R, K4L, K5L, K6L, F2L, B15R, B17L, B18R, 및 B20R로 구성된 군에서 독립적으로 선택된다.
152.
구체예 151의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 결손은 적어도 13개 유전자를 포함하고, 각 유전자는 F1L, N1L, B14R, M2L, K1L, K7R, C2L, N2L, M1L, K2L, K3L, F3L, B16R, B19R, K4L, K5L, K6L, F2L, B15R, B17L, B18R, 및 B20R로 구성된 군에서 독립적으로 선택된다.
153.
구체예 152의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 결손은 적어도 14개 유전자를 포함하고, 각 유전자는 F1L, N1L, B14R, M2L, K1L, K7R, C2L, N2L, M1L, K2L, K3L, F3L, B16R, B19R, K4L, K5L, K6L, F2L, B15R, B17L, B18R, 및 B20R로 구성된 군에서 독립적으로 선택된다.
154.
구체예 153의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 결손은 적어도 15개 유전자를 포함하고, 각 유전자는 F1L, N1L, B14R, M2L, K1L, K7R, C2L, N2L, M1L, K2L, K3L, F3L, B16R, B19R, K4L, K5L, K6L, F2L, B15R, B17L, B18R, 및 B20R로 구성된 군에서 독립적으로 선택된다.
155.
구체예 154의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 결손은 적어도 16개 유전자를 포함하고, 각 유전자는 F1L, N1L, B14R, M2L, K1L, K7R, C2L, N2L, M1L, K2L, K3L, F3L, B16R, B19R, K4L, K5L, K6L, F2L, B15R, B17L, B18R, 및 B20R로 구성된 군에서 독립적으로 선택된다.
156.
구체예 155의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 결손은 적어도 17개 유전자를 포함하고, 각 유전자는 F1L, N1L, B14R, M2L, K1L, K7R, C2L, N2L, M1L, K2L, K3L, F3L, B16R, B19R, K4L, K5L, K6L, F2L, B15R, B17L, B18R, 및 B20R로 구성된 군에서 독립적으로 선택된다.
157.
구체예 156의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 결손은 적어도 18개 유전자를 포함하고, 각 유전자는 F1L, N1L, B14R, M2L, K1L, K7R, C2L, N2L, M1L, K2L, K3L, F3L, B16R, B19R, K4L, K5L, K6L, F2L, B15R, B17L, B18R, 및 B20R로 구성된 군에서 독립적으로 선택된다.
158.
구체예 157의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 결손은 적어도 19개 유전자를 포함하고, 각 유전자는 F1L, N1L, B14R, M2L, K1L, K7R, C2L, N2L, M1L, K2L, K3L, F3L, B16R, B19R, K4L, K5L, K6L, F2L, B15R, B17L, B18R, 및 B20R로 구성된 군에서 독립적으로 선택된다.
159.
구체예 158의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 결손은 적어도 20개 유전자를 포함하고, 각 유전자는 F1L, N1L, B14R, M2L, K1L, K7R, C2L, N2L, M1L, K2L, K3L, F3L, B16R, B19R, K4L, K5L, K6L, F2L, B15R, B17L, B18R, 및 B20R로 구성된 군에서 독립적으로 선택된다.
160.
구체예 159의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 결손은 적어도 21개 유전자를 포함하고, 각 유전자는 F1L, N1L, B14R, M2L, K1L, K7R, C2L, N2L, M1L, K2L, K3L, F3L, B16R, B19R, K4L, K5L, K6L, F2L, B15R, B17L, B18R, 및 B20R로 구성된 군에서 독립적으로 선택된다.
161.
구체예 160의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 결손은 F1L, N1L, B14R, M2L, K1L, K7R, C2L, N2L, M1L, K2L, K3L, F3L, B16R, B19R, K4L, K5L, K6L, F2L, B15R, B17L, B18R, 및 B20R의 전술한 각 유전자를 포함한다.
162.
B14R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R로 구성된 군에서 선택된 적어도 1개 유전자의 결손을 포함하는 재조합 오르토폭스바이러스 벡터.
163.
구체예 141-162중 임의의 하나의 구체예의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 벡터는 B14R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R로 구성된 군에서 선택된 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
164.
구체예 163의 벡터, 이때 전술한 결손은 적어도 2개 유전자를 포함하며, 각 유전자는 독립적으로 B14R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R로 구성된 군에서 선택된다.
165.
구체예 164의 벡터, 이때 전술한 결손은 적어도 3개 유전자를 포함하며, 각 유전자는 독립적으로 B14R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R로 구성된 군에서 선택된다.
166.
구체예 165의 벡터, 이때 전술한 결손은 적어도 4개 유전자를 포함하며, 각 유전자는 독립적으로 B14R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R로 구성된 군에서 선택된다.
167.
구체예 166의 벡터, 이때 전술한 결손은 적어도 5개 유전자를 포함하며, 각 유전자는 독립적으로 B14R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R로 구성된 군에서 선택된다.
168.
구체예 167의 벡터, 이때 전술한 결손은 B14R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 각각을 포함한다.
169.
C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, K1L, K2L, K3L, K4L, K7R, 및 F2L로 구성된 군에서 선택된 적어도 1개 유전자의 결손을 포함하는 재조합 오르토폭스바이러스 벡터.
170.
구체예 141-169중 임의의 하나의 구체예의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 벡터는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, K1L, K2L, K3L, K4L, K7R, 및 F2L로 구성된 군에서 선택된 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
171.
구체예 170의 벡터, 이때 전술한 결손은 적어도 2개 유전자를 포함하며, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, K1L, K2L, K3L, K4L, K7R, 및 F2L로 구성된 군에서 독립적으로 선택된다.
172.
구체예 171의 벡터, 이때 전술한 결손은 적어도 3개 유전자를 포함하며, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, K1L, K2L, K3L, K4L, K7R, 및 F2L로 구성된 군에서 독립적으로 선택된다.
173.
구체예 172의 벡터, 이때 전술한 결손은 적어도 4개 유전자를 포함하며, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, K1L, K2L, K3L, K4L, K7R, 및 F2L로 구성된 군에서 독립적으로 선택된다.
174.
구체예 173의 벡터, 이때 전술한 결손은 적어도 5개 유전자를 포함하며, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, K1L, K2L, K3L, K4L, K7R, 및 F2L로 구성된 군에서 독립적으로 선택된다.
175.
구체예 174의 벡터, 이때 전술한 결손은 적어도 6개 유전자를 포함하며, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, K1L, K2L, K3L, K4L, K7R, 및 F2L로 구성된 군에서 독립적으로 선택된다.
176.
구체예 175의 벡터, 이때 전술한 결손은 적어도 7개 유전자를 포함하며, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, K1L, K2L, K3L, K4L, K7R, 및 F2L로 구성된 군에서 독립적으로 선택된다.
177.
구체예 176의 벡터, 이때 전술한 결손은 적어도 8개 유전자를 포함하며, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, K1L, K2L, K3L, K4L, K7R, 및 F2L로 구성된 군에서 독립적으로 선택된다.
178.
구체예 177의 벡터, 이때 전술한 결손은 적어도 9개 유전자를 포함하며, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, K1L, K2L, K3L, K4L, K7R, 및 F2L로 구성된 군에서 독립적으로 선택된다.
179.
구체예 178의 벡터, 이때 전술한 결손은 적어도 10개 유전자를 포함하며, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, K1L, K2L, K3L, K4L, K7R, 및 F2L로 구성된 군에서 독립적으로 선택된다.
180.
구체예 179의 벡터, 이때 전술한 결손은 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, K1L, K2L, K3L, K4L, K7R, 및 F2L 각각을 포함한다.
181.
카스파제-9 억제제를 인코드하는 적어도 1개 유전자의 결손을 포함하는 재조합 오르토폭스바이러스 벡터.
182.
구체예 141-181중 임의의 하나의 구체예의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 벡터는 카스파제-9 억제제를 인코드하는 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
183.
구체예 181 또는 182의 벡터, 이때 전술한 카스파제-9 억제제를 인코드하는 유전자는 F1L이다.
184.
재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 벡터는 BCL-2 억제제를 인코드하는 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
185.
구체예 141-184중 임의의 하나의 구체예의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 벡터는 BCL-2 억제제를 인코드하는 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
186.
구체예 184 또는 185의 벡터, 이때 BCL-2 억제제를 인코드하는 전술한 유전자는 N1L이다.
187.
재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 벡터는 dUTPase를 인코드하는 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
188.
구체예 141-187중 임의의 하나의 구체예의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 벡터는 dUTPase를 인코드하는 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
189.
구체예 187 또는 188의 벡터, 이때 dUTPase를 인코드하는 전술한 유전자는 F2L이다.
190.
재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 벡터는 IFN-알파/베타-수용체-유사 분비된 당단백질을 인코드하는 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
191.
구체예 141-190중 임의의 하나의 구체예의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 벡터는 IFN-알파/베타-수용체-유사 분비된 당단백질을 인코드하는 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
192.
구체예 190 또는 191의 벡터, 이때 IFN-알파/베타-수용체-유사 분비된 당단백질을 인코드하는 전술한 유전자는 B19R이다.
193.
재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 벡터는 IL-1-베타-억제제를 인코드하는 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
194.
구체예 141-193중 임의의 하나의 구체예의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 벡터는 IL-1-베타-억제제를 인코드하는 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
195.
구체예 193 또는 194의 벡터, 이때 IL-1-베타-억제제를 인코드하는 전술한 유전자는 B16R이다.
196.
재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 벡터는 포스포리파제-D를 인코드하는 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
197.
구체예 141-196중 임의의 하나의 구체예의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 벡터는 포스포리파제-D를 인코드하는 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
198.
구체예 196 또는 197의 벡터, 이때 포스포리파제-D를 인코드하는 전술한 유전자는 K4L이다.
199.
재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 벡터는 PKR 억제제를 인코드하는 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
200.
구체예 141-199중 임의의 하나의 구체예의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 벡터는 PKR 억제제를 인코드하는 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
201.
구체예 199 또는 200의 벡터, 이때 PKR 억제제를 인코드하는 전술한 유전자는 K3L이다.
202.
재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 벡터는 세린 프로테아제 억제제를 인코드하는 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
203.
구체예 141-202중 임의의 하나의 구체예의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 벡터는 세린 프로테아제 억제제를 인코드하는 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
204.
구체예 202 또는 203의 벡터, 이때 세린 프로테아제 억제제를 인코드하는 전술한 유전자는 K2L이다.
205.
재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 벡터는 TLR 신호생성 억제제를 인코드하는 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
206.
구체예 141-205중 임의의 하나의 구체예의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 벡터는 TLR 신호생성 억제제를 인코드하는 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
207.
구체예 205 또는 206의 벡터, 이때 TLR 신호생성 억제제를 인코드하는 전술한 유전자는 N2L이다.
208.
재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 벡터는 kelch-유사 단백질을 인코드하는 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
209.
구체예 141-208중 임의의 하나의 구체예의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 벡터는 kelch-유사 단백질을 인코드하는 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
210.
구체예 209의 벡터, 이때 전술한 벡터는 적어도 2개 유전자의 결손을 포함하고, 이들 각 유전자는 kelch-유사 단백질을 인코드한다.
211.
구체예 208-210중 임의의 하나의 구체예의 벡터, 이때 kelch-유사 단백질을 인코드하는 전술한 유전자는 F3L 및 C2L로 구성된 군에서 독립적으로 선택된다.
212.
재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 벡터는 모노글리세리드 리파제를 인코드하는 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
213.
구체예 141-212중 임의의 하나의 구체예의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 벡터는 모노글리세리드 리파제를 인코드하는 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
214.
구체예 213의 벡터, 이때 전술한 벡터는 적어도 2개 유전자의 결손을 포함하고, 이들 각 유전자는 모노글리세리드 리파제를 인코드한다.
215.
구체예 212-214중 임의의 하나의 구체예의 벡터, 이때 모노글리세리드 리파제를 인코드하는 전술한 유전자는 K5L 및 K6L으로 구성된 군에서 독립적으로 선택된다.
216.
재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 벡터는 NF-κB 억제제를 인코드하는 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
217.
구체예 141-216중 임의의 하나의 구체예의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 벡터는 NF-κB 억제제를 인코드하는 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
218.
구체예 217의 벡터, 이때 전술한 결손은 적어도 2개 유전자의 결손을 포함하고, 이들 각 유전자는 NF-κB 억제제를 인코드한다.
219.
구체예 218의 벡터, 이때 전술한 결손은 적어도 3개 유전자의 결손을 포함하고, 이들 각 유전자는 NF-κB 억제제를 인코드한다.
220.
구체예 216-219중 임의의 하나의 구체예의 벡터, 이때 NF-κB 억제제를 인코드하는 전술한 유전자는 K7R, K1L, 및 M2L로 구성된 군에서 독립적으로 선택된다.
221.
재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 벡터는 Ankyrin 반복 단백질을 인코드하는 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
222.
구체예 141-221중 임의의 하나의 구체예의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 벡터는 Ankyrin 반복 단백질을 인코드하는 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
223.
구체예 222의 벡터, 이때 전술한 결손은 적어도 2개 유전자의 결손을 포함하고, 이들 각 유전자는 Ankyrin 반복 단백질을 인코드한다.
224.
구체예 223의 벡터, 이때 전술한 결손은 적어도 3개 유전자의 결손을 포함하고, 이들 각 유전자는 Ankyrin 반복 단백질을 인코드한다.
225.
구체예 221-224중 임의의 하나의 구체예의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 Ankyrin 반복 단백질을 인코드하는 전술한 유전자는 B18R, B20R, 및 M1L로 구성된 군에서 독립적으로 선택된다.
226.
재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 벡터는 B15R, B17R, 및 B14R로 구성된 군에서 선택된 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
227.
구체예 1-226중 임의의 하나의 구체예의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 벡터는 B15R, B17R, 및 B14R로 구성된 군에서 선택된 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
228.
구체예 227의 벡터, 이때 전술한 결손은 적어도 2개 유전자를 포함하고, 이들 각 유전자는 B15R, B17R, 및 B14R로 구성된 군에서 독립적으로 선택된다.
229.
구체예 228의 벡터, 이때 전술한 결손은 전술한 B15R, B17R, 및 B14R 유전자 각각을 포함한다.
230.
구체예 141-229중 임의의 하나의 구체예의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 벡터는 B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R로 구성된 ITR 유전자 군에서 선택된 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
231.
구체예 230의 벡터, 이때 전술한 결손은 적어도 2개 유전자 결손을 포함하고, 이들 각 유전자는 B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R로 구성된 ITR 유전자의 전술한 군에서 독립적으로 선택된다.
232.
구체예 231의 벡터, 이때 전술한 결손은 적어도 3개 유전자 결손을 포함하고, 이들 각 유전자는 B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R로 구성된 ITR 유전자의 전술한 군에서 독립적으로 선택된다.
233.
구체예 232의 벡터, 이때 전술한 결손은 적어도 4개 유전자 결손을 포함하고, 이들 각 유전자는 B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R로 구성된 ITR 유전자의 전술한 군에서 독립적으로 선택된다.
234.
구체예 233의 벡터, 이때 전술한 결손은 적어도 5개 유전자 결손을 포함하고, 이들 각 유전자는 B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R로 구성된 ITR 유전자의 전술한 군에서 독립적으로 선택된다.
235.
구체예 234의 벡터, 이때 전술한 결손은 적어도 6개 유전자 결손을 포함하고, 이들 각 유전자는 B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R로 구성된 ITR 유전자의 전술한 군에서 독립적으로 선택된다.
236.
구체예 235의 벡터, 이때 전술한 결손은 적어도 7개 유전자 결손을 포함하고, 이들 각 유전자는 B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R로 구성된 ITR 유전자의 전술한 군에서 독립적으로 선택된다.
237.
구체예 236의 벡터, 이때 전술한 결손은 적어도 8개 유전자 결손을 포함하고, 이들 각 유전자는 B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R로 구성된 ITR 유전자의 전술한 군에서 독립적으로 선택된다.
238.
구체예 237의 벡터, 이때 전술한 결손은 B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R 각각을 포함한다.
239.
242.
구체예 241의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 백시니아 바이러스는 Copenhagen, Western Reserve, Wyeth, Lister, EM63, ACAM2000, LC16m8, CV-1, 변형된 백시니아 Ankara (MVA), Dairen I, GLV-1h68, IHD-J, L-IVP, LC16m8, LC16mO, Tashkent, Tian Tan, 그리고 WAU86/88-1로 구성된 군에서 선택된 균주다.
243.
구체예 241의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 백시니아 바이러스는 Copenhagen, Western Reserve, Tian Tan, Wyeth, 그리고 Lister로 구성된 군에서 선택된 균주다.
244.
구체예 241의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 백시니아 바이러스는 Copenhagen 균주 백시니아 바이러스다.
245.
구체예 141-244중 임의의 하나의 구체예의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 결손은 전체 대응하는 유전자를 인코딩하는 전체 폴리뉴클레오티드의 결손이다.
246.
구체예 141-244중 임의의 하나의 구체예의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 각 결손은 대응하는 유전자를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드의 일부분 결손이며, 그리고 이때 전술한 결손은 숙주 세포 안으로 도입될 때, 전술한 유전자가 비-기능성이 되도록 만드는데 충분하다.
247.
구체예 14141-246중 임의의 하나의 구체예의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 벡터는 종양-연합된 항원을 인코딩하는 형질전환유전자를 더 포함한다.
248.
구체예 141-247중 임의의 하나의 구체예의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 벡터는 종양-연합된 항원을 인코딩하는 형질전환유전자를 더 포함한다.
249.
구체예 248의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 종양-연합된 항원은 표 3-30중 임의의 하나에 열거된 종양-연합된 항원이다.
250.
구체예 248의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 종양-연합된 항원은 CD19, CD33, EpCAM, CEA, PSMA, EGFRvIII, CD274, EGFR, CDH19, ENPP3, DLL3, MSLN, ROR1, HER2, HLAA2, EpHA2, EpHA3, MCSP, CSPG4, NG2, RON, FLT3, BCMA, CD20, FAPα, FRα, CA-9, PDGFRα, PDGFRβ, FSP1, S100A4, ADAM12m, RET, MET, FGFR, INSR, 및 NTRK로 구성된 군에서 선택된 종양-연합된 항원이다.
251.
구체예 248의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 종양-연합된 항원은 MAGE-A3, 또는 이의 하나 또는 그 이상 단편들을 포함한다.
252.
구체예 248의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 종양-연합된 항원은 NY-ESO-1, 또는 이의 하나 또는 그 이상 단편들을 포함한다.
253.
구체예 248의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 종양-연합된 항원은 하나 또는 그 이상의 인간 유두종바이러스 (HPV) 단백질, 또는 이의 단편들을 포함한다.
254.
구체예 248의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 종양-연합된 항원은 (i) HPV16의 E6 및 E7 단백질, 또는 이의 단편들, 그리고 (ii) HPV18의 E6 및 E7 단백질, 또는 이의 단편들을 포함한다.
255.
구체예 248의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 종양-연합된 항원은 단미증(brachyury) 또는 이의 하나 또는 그 이상 단편들을 포함한다.
256.
구체예 248의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 종양-연합된 항원은 전립선산 포스파타제, 또는 이의 하나 또는 그 이상 단편들을 포함한다.
257.
구체예 248-256중 임의의 하나의 구체예의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터를 만드는 방법, 전술한 방법은 다음을 포함한다:
d.
트랜스포존 삽입 부위를 구체예 141-247중 임의의 하나의 구체예의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터에 도입시키고;
e.
(a)에서 형성된 재조합 오르토폭스바이러스 벡터에 전술한 종양-연합된 항원을 인코딩하는 유전자를 포함하는 운반가능한 요소를 접촉시키고, 이로 인하여 전술한 유전자가 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 벡터로 도입되며; 그리고
f.
(b)에서 형성된 재조합 오르토폭스바이러스 벡터를 회수한다.
258.
구체예 141-256중 임의의 하나의 구체예의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 벡터는 면역 체크포인트 억제제를 인코딩하는 형질전환유전자를 더 포함한다.
259.
구체예 258의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 면역 체크포인트 억제제는 OX40 리간드, ICOS 리간드, 항-CD47 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-CD40/CD40L 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-Lag3 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-PD-L1 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-PD1 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 그리고 항-Tim-3 항체 또는 이의 항원-결합 단편으로 구성된 군에서 선택된다.
260.
구체예 258의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 면역 체크포인트 억제제는 항-PD-L1 항체 또는 이의 항원-결합 단편 또는 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다.
261.
구체예 258의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 면역 체크포인트 억제제는 항-PD1 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다.
262.
구체예 258의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 면역 체크포인트 억제제는 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다.
263.
구체예 258-262중 임의의 하나의 구체예의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터를 만드는 방법, 전술한 방법은 다음을 포함한다:
d.
트랜스포존 삽입 부위를 구체예 141-257중 임의의 하나의 구체예의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터에 도입시키고;
e.
(a)에서 형성된 재조합 오르토폭스바이러스 벡터에 전술한 면역 체크포인트 억제제를 인코딩하는 유전자를 포함하는 운반가능한 요소를 접촉시키고, 이로 인하여 전술한 유전자가 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 벡터로 도입되며; 그리고
f.
(b)에서 형성된 재조합 오르토폭스바이러스 벡터를 회수한다.
264.
구체예 141-256 및 258-262중 임의의 하나의 구체예의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 벡터는 인터루킨 (IL)을 인코딩하는 형질전환유전자를 더 포함한다.
265.
구체예 264의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 인터루킨은 IL-1 알파, IL-1 베타, IL-2, IL-4, IL-7, IL-10, IL-12 p35, IL-12 p40, IL-12 p70, IL-15, IL-18, IL-21, 그리고 IL-23로 구성된 군에서 선택된다.
266.
구체예 264의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 인터루킨은 IL-12 p35, IL-12 p40, 그리고 IL-12 p70으로 구성된 군에서 선택된다.
267.
구체예 266의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 인터루킨은 막-결합된다.
268.
구체예 264-267중 하나의 구체예의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터를 만드는 방법, 전술한 방법은 다음을 포함한다:
d.
트랜스포존 삽입 부위를 구체예 구체예 141-256 및 258-262중 임의의 하나의 구체예의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터에 도입시키고;
e.
(a)에서 형성된 재조합 오르토폭스바이러스 벡터에 전술한 인터루킨을 인코딩하는 유전자를 포함하는 운반가능한 요소를 접촉시키고, 이로 인하여 전술한 유전자가 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 벡터로 도입되며; 그리고
f.
(b)에서 형성된 재조합 오르토폭스바이러스 벡터를 회수한다.
269.
구체예 141-256, 258-262, 및 264-267중 임의의 하나의 구체예의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 벡터는 인터페론 (IFN)을 인코딩하는 형질전환유전자를 더 포함한다.
270.
구체예 269의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 인터페론은 IFN-알파, IFN-베타, IFN-델타, IFN-입실론, IFN-타우, IFN-오메가, IFN-제타, 그리고 IFN-감마로 구성된 군에서 선택된다.
271.
구체예 269 또는 270의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터를 만드는 방법, 전술한 방법은 다음을 포함한다:
d.
트랜스포존 삽입 부위를 구체예 구체예 141-256, 258-262, 및 264-267중 임의의 하나의 구체예의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터에 도입시키고;
e.
(a)에서 형성된 재조합 오르토폭스바이러스 벡터에 전술한 인터페론을 인코딩하는 유전자를 포함하는 운반가능한 요소를 접촉시키고, 이로 인하여 전술한 유전자가 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 벡터로 도입되며; 그리고
f.
(b)에서 형성된 재조합 오르토폭스바이러스 벡터를 회수한다.
272.
구체예 141-256, 258-262, 264-267, 269, 및 270중 임의의 하나의 구체예의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 벡터는 TNF 수퍼패밀리 구성원 단백질을 인코딩하는 형질전환유전자를 더 포함한다.
273.
구체예 272의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 TNF 수퍼패밀리 구성원 단백질은 TRAIL, Fas 리간드, LIGHT (TNFSF-14), TNF-알파, 그리고 4-1BB 리간드로 구성된 군에서 선택된다.
274.
구체예 272 또는 273의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터를 만드는 방법, 전술한 방법은 다음을 포함한다:
d.
트랜스포존 삽입 부위를 구체예 141-256, 258-262, 264-267, 269, 및 270중 임의의 하나의 구체예의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터에 도입시키고;
e.
(a)에서 형성된 재조합 오르토폭스바이러스 벡터에 전술한 TNF 수퍼패밀리 구성원 단백질을 인코딩하는 유전자를 포함하는 운반가능한 요소를 접촉시키고, 이로 인하여 전술한 유전자가 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 벡터로 도입되며; 그리고
f.
(b)에서 형성된 재조합 오르토폭스바이러스 벡터를 회수한다.
275.
구체예 141-256, 258-262, 264-267, 269, 270, 272, 및 273중 임의의 하나의 구체예의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 벡터는 사이토킨을 인코딩하는 형질전환유전자를 더 포함한다.
276.
구체예 275의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 사이토킨은 GM-CSF, Flt3 리간드, CD40 리간드, 항-TGF-베타, 항-VEGF-R2, 그리고 cGAS (구아닐 아데닐레이트 사이클라제)로 구성된 군에서 선택된다.
277.
구체예 275의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 사이토킨은 Flt3 리간드이다.
278.
구체예 276 또는 277의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터를 만드는 방법, 전술한 방법은 다음을 포함한다:
d.
트랜스포존 부위를 구체예 141-256, 258-262, 264-267, 269, 270, 272, 및 273중 임의의 하나의 구체예의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터에 도입시키고;
e.
(a)에서 형성된 재조합 오르토폭스바이러스 벡터에 전술한 사이토킨을 인코딩하는 유전자를 포함하는 운반가능한 요소를 접촉시키고, 이로 인하여 전술한 유전자가 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 벡터로 도입되며; 그리고
f.
(b)에서 형성된 재조합 오르토폭스바이러스 벡터를 회수한다.
279.
구체예 141-256, 258-262, 264-267, 269, 270, 272, 273, 및 275-277중 임의의 하나의 구체예의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 벡터는 microRNA (miRNA)을 인코딩하는 형질전환유전자를 더 포함한다.
280.
구체예 279의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 miRNA는 mir-6이다.
281.
구체예 279 또는 280의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터를 만드는 방법, 전술한 방법은 다음을 포함한다:
d.
트랜스포존 부위를 구체예 141-256, 258-262, 264-267, 269, 270, 272, 273, 및 275-277중 임의의 하나의 구체예의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터에 도입시키고;
e.
(a)에서 형성된 재조합 오르토폭스바이러스 벡터에 전술한 miRNA를 인코딩하는 유전자를 포함하는 운반가능한 요소를 접촉시키고, 이로 인하여 전술한 유전자가 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 벡터로 도입되며; 그리고
f.
(b)에서 형성된 재조합 오르토폭스바이러스 벡터를 회수한다.
282.
구체예 1-115, 117-121, 123-126, 128, 129, 131, 132, 134-136, 138, 및 139중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 또는 구체예 141-256, 258-262, 264-267, 269, 270, 272, 273, 275-277, 279, 및 280중 임의의 하나의 구체예의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 핵산 또는 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 벡터는 티미딘 키나제 (TK) 유전자를 포함한다.
283.
구체예 1-115, 117-121, 123-126, 128, 129, 131, 132, 134-136, 138, 139, 및 282중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 또는 구체예 141-256, 258-262, 264-267, 269, 270, 272, 273, 275-277, 279, 280, 및 282중 임의의 하나의 구체예의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 핵산 또는 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 벡터는 리보뉴클레오티드 환원효소 유전자를 포함한다.
284.
구체예 1-115, 117-121, 123-126, 128, 129, 131, 132, 134-136, 138, 139, 282, 및 283중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 또는 구체예 141-256, 258-262, 264-267, 269, 270, 272, 273, 275-277, 279, 280, 282, 및 283중 임의의 하나의 구체예의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 포유류 세포 집단에 전술한 핵산 또는 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 벡터를 접촉시킬 때, 세포는 전술한 결손을 포함하지 않는 오르토폭스바이러스 벡터 형태와 접촉된 동일한 유형의 포유류 세포 집단과 비교하여 증가된 합포체 형성을 나타낸다.
285.
구체예 1-115, 117-121, 123-126, 128, 129, 131, 132, 134-136, 138, 139, 및 282-284중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 또는 구체예 141-256, 258-262, 264-267, 269, 270, 272, 273, 275-277, 279, 280, 및 282-284중 임의의 하나의 구체예의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 포유류 세포 집단에 전술한 핵산 또는 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 벡터를 접촉시킬 때, 세포는 전술한 결손을 포함하지 않는 오르토폭스바이러스 벡터 형태와 접촉된 동일한 유형의 포유류 세포 집단과 비교하여, 상기 오르토폭스바이러스 벡터의 확산 증가를 나타낸다.
286.
구체예 1-115, 117-121, 123-126, 128, 129, 131, 132, 134-136, 138, 139, 및 282-285중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 또는 구체예 141-256, 258-262, 264-267, 269, 270, 272, 273, 275-277, 279, 280, 및 282-285중 임의의 하나의 구체예의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 핵산 또는 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 벡터는 전술한 결손을 포함하지 않는 오르토폭스바이러스 벡터 형태와 비교하여, 포유류 세포 집단에 증가된 세포독성 효과를 발휘한다.
287.
구체예 284-286중 임의의 하나의 구체예의 핵산 또는 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 포유류 세포는 인간 세포다.
288.
구체예 287의 핵산 또는 상기 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 인간 세포는 암 세포다.
289.
구체예 284-286중 임의의 하나의 핵산 또는 상기 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 포유류 세포는 U2OS, 293, 293T, Vero, HeLa, A549, BHK, BSC40, CHO, OVCAR-8, 786-0, NCI-H23, U251, SF-295, T-47D, SKMEL2, BT-549, SK-MEL-28, MDA-MB-231, SK-OV-3, MCF7, M14, SF-268, CAKI-1, HPAV, OVCAR-4, HCT15, K-562, 그리고 HCT-116으로 구성된 군에서 선택된 세포주로부터 유래된다.
290.
구체예 1-115, 117-121, 123-126, 128, 129, 131, 132, 134-136, 138, 139, 및 282-289중 임의의 하나의 구체예의 핵산 또는 구체예 141-256, 258-262, 264-267, 269, 270, 272, 273, 275-277, 279, 280, 및 282-289중 임의의 하나의 구체예의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터를 포함하는 패키징 세포주.
291.
포유류 환자의 암을 치료하는 방법, 전술한 방법은 구체예 1-115, 117-121, 123-126, 128, 129, 131, 132, 134-136, 138, 139, 및 282-289중 임의의 하나의 구체예의 핵산의 치료요법적으로 유효량, 또는 구체예 141-256, 258-262, 264-267, 269, 270, 272, 273, 275-277, 279, 280, 및 282-289중 중 임의의 하나의 구체예의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터의 치료요법적으로 유효량을 전술한 환자에게 투여하는 것을 포함한다.
292.
구체예 291의 방법, 이때 전술한 포유류 환자는 인간 환자다.
293.
구체예 291 또는 292의 방법, 이때 전술한 암은 백혈병, 림프종, 간암, 뼈암, 폐암, 뇌암, 방광암, 위장암, 유방암, 심장암, 자궁경부암, 자궁암, 두경부암, 담낭암, 후두암, 입술 및 구강암, 안구암, 흑색종, 췌장암, 전립선암, 결장직장암, 고환암, 그리고 인후암으로 구성된 군에서 선택된다.
294.
구체예 291 또는 292의 방법, 이때 전술한 암은 급성 림프모구성 백혈병 (ALL), 급성 골수성 백혈병 (AML), 만성 림프구성 백혈병 (CLL), 만성 골수성 백혈병 (CML), 부신피질 암종, AIDS-관련 림프종, 원발성 CNS 림프종, 항문암, 충수암, 성상세포종, 비정형 기형/횡문근암, 기저 세포 암종, 담관암, 간외 암, 유잉 육종 가족, 골육종 및 악성 섬유성 조직구종, 중추 신경계 배아 종양, 중추 신경계 생식 세포 종양, 두개 인두종, 외피종, 기관지 종양, 버킷 림프종, 카르시노이드 종양, 원발성 림프종, 척색종, 만성 골수증식성 신생물, 결장암, 간외 담관암, 관 상피내 암종 (DCIS), 자궁내막암, 외피종, 식도암, 심부유로모세포종, 두개외 생식 세포종, 성선외 생식 세포 종양, 나팔관암, 뼈의 섬유성 조직구종, 위장 카르시노이드 종양, 위장관 기질 종양 (GIST), 고환 생식 세포 종양, 임신 영양모세포 질환, 신경교종, 소아 뇌간 신경 교종, 털이 많은 세포 백혈병, 간세포암, 랑게르한스 세포 조직구증, 호지킨 림프종, 하인두암, 섬 세포 종양, 췌장 신경내분비 종양, 윌름 종양 및 기타 소아 신장 종양, 랑게르한스 세포 조직구증, 소 세포 폐암, 피부 T 세포 림프종, 안구내 흑색종, 메르켈 세포 암종, 중피종, 전이성 편평 경부암, 정중선 암종, 다발성 내분비 신생물 증후군, 다발성 골수종/혈장 세포 신생물, 골수이형성 증후군, 비강 및 부비동암, 비인두암, 신경모세포종, 비-호지킨 림프종(NHL), 비-소 세포 폐암 (NSCLC), 상피 난소암, 생식 세포 난소암, 악성 가능성이 낮은 난소암, 췌장 신경내분비 종양, 유두종증, 부신경절종, 부비동 및 비강암, 부갑상선암, 음경암, 인두암, 갈색세포종, 뇌하수체 종양, 흉막폐 모세포종, 원발성 복막암, 직장암, 망막모세포종, 횡문근육종, 타액선암, 카포시 육종, 횡문근 육종, 세자리 증후군, 소장암, 연조직 육종, 인후암, 흉선종 및 흉선 암종, 갑상선암, 신장 골반 및 요관의 이행 세포 암, 요도 암, 자궁 내막 자궁암, 자궁 육종, 질암, 외음부암, 그리고 발덴스트륌 거대 글로불린 혈증으로 구성된 군에서 선택된다.
295.
구체예 291-294중 임의의 하나의 구체예의 방법, 이때 전술한 방법은 전술한 환자에게 면역 체크포인트 억제제를 투여하는 것을 더 포함한다.
296.
구체예 295의 방법, 이때 전술한 면역 체크포인트 억제제는 OX40 리간드, ICOS 리간드, 항-CD47 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-CD40/CD40L 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-Lag3 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-PD-L1 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-PD1 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 그리고 항-Tim-3 항체 또는 이의 항원-결합 단편으로 구성된 군에서 선택된다.
297.
구체예 295의 방법, 이때 전술한 면역 체크포인트 억제제는 항-PD1 항체 또는 이의 항원-결합 단편 또는 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다.
298.
구체예 295의 방법, 이때 전술한 면역 체크포인트 억제제는 항-PD1 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다.
299.
구체예 295의 방법, 이때 전술한 면역 체크포인트 억제제는 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다.
300.
구체예 291-299중 임의의 하나의 구체예의 방법, 이때 전술한 방법은 전술한 환자에게 인터루킨을 투여하는 것을 더 포함한다.
301.
구체예 300의 방법, 이때 전술한 인터루킨은 IL-1 알파, IL-1 베타, IL-2, IL-4, IL-7, IL-10, IL-12 p35, IL-12 p40, IL-12 p70, IL-15, IL-18, IL-21, 그리고 IL-23으로 구성된 군에서 선택된다.
302.
구체예 300의 방법, 이때 전술한 인터루킨은 IL-12 p35, IL-12 p40, 그리고 IL-12 p70으로 구성된 군에서 선택된다.
303.
구체예 301 또는 302의 방법, 이때 전술한 인터루킨은 막-결합된다.
304.
구체예 291-303중 임의의 하나의 구체예의 방법, 이때 전술한 방법은 전술한 환자에게 인터페론을 투여하는 것을 더 포함한다.
305.
구체예 304의 방법, 이때 전술한 인터페론은 IFN-알파, IFN-베타, IFN-델타, IFN-입실론, IFN-타우, IFN-오메가, IFN-제타, 그리고 IFN-감마로 구성된 군에서 선택된다.
306.
구체예 291-305중 임의의 하나의 구체예의 방법, 이때 전술한 방법은 전술한 환자에게 TNF 수퍼패밀리 구성원 단백질을 투여하는 것을 더 포함한다.
307.
구체예 306의 방법, 이때 전술한 TNF 수퍼패밀리 구성원 단백질은 TRAIL, Fas 리간드, LIGHT (TNFSF-14), TNF-알파, 그리고 4-1BB 리간드로 구성된 군에서 선택된다.
308.
구체예 291-307중 임의의 하나의 구체예의 방법, 이때 전술한 방법은 전술한 환자에게 사이토킨을 투여하는 것을 더 포함한다.
309. 구체예 308의 방법, 이때 전술한 사이토킨은 GM-CSF, Flt3 리간드, CD40 리간드, 항-TGF-베타, 항-VEGF-R2, 그리고 cGAS (구아닐 아데닐레이트 사이클라제)로 구성된 군에서 선택된다.
310.
구체예 308의 방법, 이때 전술한 사이토킨은 Flt3 리간드이다.
311.
구체예 291-310중 임의의 하나의 구체예의 방법, 이때 전술한 방법은 전술한 환자에게 miRNA를 투여하는 것을 더 포함한다.
312.
구체예 311의 방법, 이때 전술한 miRNA는 mir-6이다.
313.
구체예 1-115, 117-121, 123-126, 128, 129, 131, 132, 134-136, 138, 139, 및 282-289중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 또는 구체예 141-256, 258-262, 264-267, 269, 270, 272, 273, 275-277, 279, 280, 및 282-289중 임의의 하나의 구체예의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 그리고 전술한 핵산 또는 전술한 벡터를 숙주 세포에서 발현시키기 위해 전술한 키트의 사용자에게 지침을 주는 포장 삽입물을 포함하는 키트.
314.
구체예 1-115, 117-121, 123-126, 128, 129, 131, 132, 134-136, 138, 139, 및 282-289중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 또는 구체예 141-256, 258-262, 264-267, 269, 270, 272, 273, 275-277, 279, 280, 및 282-289중 임의의 하나의 구체예의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 그리고 치료요법적으로 유효량의 전술한 핵산 또는 재조합 오르토폭스바이러스 벡터를 암이 있는 포유류 환자에게 투여하고, 이로 인하여 전술한 암을 치료하기 위하여 사용자에게 지침을 주는 포장 삽입물을 포함하는 키트.
315.
구체예 314의 키트, 이때 전술한 포유류 환자는 인간 환자이다.
316. 전술한 구체예들중 임의의 구체예의 오르토폭스 바이러스, 이때 B8R 유전자는 결손된다.
317. 구체예 316의 오르토폭스 바이러스, 이때 적어도 하나의 형질전환유전자는 결손된 B8R 유전자의 유전자좌로 삽입된다.
318.
구체예 317의 오르토폭스 바이러스, 이때 적어도 두 개의형질전환유전자는 결손된 B8R 유전자의 유전자좌로 삽입된다.
319. 구체예 318의 오르토폭스 바이러스, 이때 적어도 3개의 형질전환유전자는 결손된 B8R 유전자의 유전자좌로 삽입된다.
320. 구체예 316-319중 임의의 하나의 구체예의 오르토폭스 바이러스, 이때 적어도 하나의 추가적인 형질전환유전자는 B8R 유전자의 좌가 아닌 유전자좌로 삽입된다.
321. 구체예 320의 오르토폭스 바이러스, 이때 상기 유전자좌는 5p 결손의 경계에 있다.
322. 구체예 321의 오르토폭스 바이러스, 이때 상기 유전자좌는 3p 결손의 경계에 있다.
323. 구체예 316-322의 오르토폭스 바이러스, 이때 다음 형질전환유전자들중 적어도 하나가 삽입된다: IL-12TM, FLT3-L 또는 항-CLTA-4 항체.
324. 구체예 323의 오르토폭스 바이러스, 이때 IL-12-TM 유전자 및 FLT3-L 유전자는 결손된 B8R 유전자의 유전자좌로 삽입된다.
325. 구체예 323-324의 적어도 하나의 구체예의 오르토폭스 바이러스, 이때 상기 항-CLTA-4 항체는 5p 결손의 경계 내에 삽입된다.
326. 구체예 323-325의 적어도 하나의 구체예의 오르토폭스 바이러스, 이때 상기 바이러스는 서열 식별 번호: 210의 서열을 포함한다.
326. 구체예 323-325의 적어도 하나의 구체예의 오르토폭스 바이러스, 이때 상기 항-CLTA 항체는 서열 식별 번호: 211이다.
327. 구체예 323-326적어도 하나의 구체예의 오르토폭스 바이러스, 이때 IL-12-TM은 서열 식별 번호: 212이다.
328. 구체예 323-327의 적어도 하나의 구체예의 오르토폭스 바이러스, 이때 FLT3-L은 서열 식별 번호: 213이다.
329. 핵산 서열을 포함하는 오르토폭스 바이러스, 이때 상기 핵산 서열은 서열 식별 번호: 210의 파생 서열이며,
이때 전술한 파생서열은 서열 식별 번호: 210의 B8R 유전자 결손을 포함하고,
이때, IL-12-TM 및 FLT3-L 형질전환유전자는 전술한 결손된 B8R 유전자의 유전자좌로 삽입되며,
이때, 항-CLTA-4 항체의 중쇄 및 경쇄를 인코드하는 유전자는 서열 식별 번호: 210에 존재하는 5p 결손 경계 내에 삽입되며;
이때 IL-12-TM은 서열 식별 번호: 212이며;
이때 FLT3-L은 서열 식별 번호: 213이며; 그리고
이때 상기 항-CLTA4 항체는 서열 식별 번호: 211에 의해 인코드된다.
5.7.2. 세트 2
1.
재조합 오르토폭스바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된 적어도 2개 유전자 결손을 포함한다.
2.
구체예 1의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 3개 유전자의 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
3.
구체예 2의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 4개 유전자의 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
4.
구체예 3의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 5개 유전자의 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
5.
구체예 4의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 6개 유전자의 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
6.
구체예 5의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 7개 유전자의 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
7.
구체예 6의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 8개 유전자의 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
8.
구체예 7의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 9개 유전자의 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
9.
구체예 8의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 10개 유전자의 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
10.
구체예 9의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 11개 유전자의 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
11.
구체예 10의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 12개 유전자의 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
12.
구체예 11의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 13개 유전자의 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
13.
구체예 12의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 14개 유전자의 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
14.
구체예 13의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 15개 유전자의 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
15.
구체예 14의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 16개 유전자의 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
16.
구체예 15의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 17개 유전자의 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
17.
구체예 16의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 18개 유전자의 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
18.
구체예 17의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 19개 유전자의 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
19.
구체예 18의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 20개 유전자의 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
20.
구체예 19의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 21개 유전자의 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
21.
구체예 20의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 22개 유전자의 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
22.
구체예 21의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자 각각의 결손을 포함한다.
23.
재조합 오르토폭스바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
24.
구체예 23의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 2개 유전자의 결손을 포함하고, 각 유전자는 B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
25.
구체예 24의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 3개 유전자의 결손을 포함하고, 각 유전자는 B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
26.
구체예 25의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 4개 유전자의 결손을 포함하고, 각 유전자는 B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
27.
구체예 26의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 5개 유전자의 결손을 포함하고, 각 유전자는 B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
28.
구체예 27의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 6개 유전자의 결손을 포함하고, 각 유전자는 B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
29.
구체예 28의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자 각각의 결손을 포함한다.
30.
재조합 오르토폭스바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, 그리고 F3L 유전자로 구성된 군에서 선택된 적어도 1개 유전자 결손을 포함한다.
31.
구체예 30의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 2개 유전자 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, 그리고 F3L 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
32.
구체예 31의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 3개 유전자 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, 그리고 F3L 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
33.
구체예 32의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 4개 유전자 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, 그리고 F3L 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
34.
구체예 33의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 5개 유전자 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, 그리고 F3L 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
35.
구체예 34의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 6개 유전자 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, 그리고 F3L 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
36.
구체예 35의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 7개 유전자 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, 그리고 F3L 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
37.
구체예 36의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 8개 유전자 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, 그리고 F3L 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
38.
구체예 37의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 9개 유전자 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, 그리고 F3L 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
39.
구체예 38의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 10개 유전자 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, 그리고 F3L 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
40.
구체예 39의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 11개 유전자 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, 그리고 F3L 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
41. 구체예 40의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 12개 유전자 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, 그리고 F3L 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
42. 구체예 41의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 13개 유전자 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, 그리고 F3L 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
43. 구체예 42의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 14개 유전자 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, 그리고 F3L 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
44. 구체예 43의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 15개 유전자 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, 그리고 F3L 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
45.
구체예 44의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, 그리고 F3L 유전자 각각의 결손을 포함한다.
46.
구체예 1-45중 임의의 하나의 구체예의 재조합 오르토폭스바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 숙주 상호작용에 연루된 단백질을 인코드하는 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
47.
구체예 46의 핵산, 이때 전술한 단백질은 세포외 매트릭스에 대한 칼슘-독립성 흡착에 영향을 준다.
48.
구체예 46의 핵산, 이때 전술한 단백질은 NF-kB 억제제다.
49.
구체예 48의 핵산, 이때 전술한 단백질은 C2L, N1L, M2L, K1L, 그리고 K7R 유전자로 구성된 군에서 선택된 유전자에 의해 인코드된다.
50.
구체예 46의 핵산, 이때 전술한 단백질은 아팝토시스 억제제다.
51.
구체예 47의 핵산, 이때 전술한 아팝토시스 억제제는 카스파제-9 억제제다.
52.
구체예 51의 핵산, 이때 전술한 카스파제-9 억제제는 F1L 유전자에 의해 인코드된다.
53.
구체예 50의 핵산, 이때 전술한 아팝토시스 억제제는 BCL-2-유사 단백질이다.
54.
구체예 53의 핵산, 이때 전술한 BCL-2-유사 단백질은 N1L에 의해 인코드된다.
55.
구체예 46의 핵산, 이때 전술한 단백질은 인터페론 조절 인자 3 (IRF3) 억제제다.
56.
구체예 55의 핵산, 이때 전술한 IRF3 억제제는 N2L 또는 K7R에 의해 인코드된다.
57.
구체예 46의 핵산, 이때 전술한 단백질은 세린 프로테아제 억제제다.
58.
구체예 46의 핵산, 이때 전술한 단백질은 세포 융합을 방해한다.
59.
구체예 58의 핵산, 이때 전술한 단백질은 K2L에 의해 인코드된다.
60.
구체예 46의 핵산, 이때 전술한 단백질은 RNA-활성화된 단백질 키나제 (PKR) 억제제다.
61.
구체예 60의 핵산, 이때 전술한 단백질은 K1L 또는 K3L에 의해 인코드된다.
62.
구체예 46의 핵산, 이때 전술한 단백질은 독성 인자다.
63.
구체예 63의 핵산, 이때 전술한 단백질은 F3L에 의해 인코드된다.
64.
구체예 46의 핵산, 이때 전술한 단백질은 IL-1-베타 억제제다.
65.
구체예 64의 핵산, 이때 전술한 단백질은 B16R에 의해 인코드된다.
66.
구체예 46의 핵산, 이때 전술한 단백질은 분비된 IFNα 격리자다.
67.
구체예 67의 핵산, 이때 전술한 단백질은 B19R에 의해 인코드된다.
68.
구체예 1-67중 임의의 하나의 구체예의 재조합 오르토폭스바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 DNA 복제에 연루된 단백질을 인코딩하는 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
69.
구체예 68의 핵산, 이때 전술한 단백질은 DNA 변형 뉴클레아제다.
70.
구체예 69의 핵산, 이때 전술한 단백질은 K4L에 의해 인코드된다.
71.
구체예 70의 핵산, 이때 전술한 단백질은 데옥시우리딘 트리포스파타제 (dUTPase)이다.
72.
구체예 71의 핵산, 이때 dUTPase는 F2L에 의해 인코드된다.
73.
구체예 1-72중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 적어도 하나의 결손된 유전자의 전체 뉴클레오티드 서열은 결손된다.
74.
구체예 1-72중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 적어도 하나의 결손된 유전자는 단지 부분적으로 결손되며, 그리고 해당 부분 결손으로 전술한 부분적으로 결손된 유전자가 숙주 세포 안으로 도입될 때 비기능성이 되도록 하는데 충분하다.
75.
구체예 1-74중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 역전된 말단 반복 (ITRs)의 적어도 2개 복사본을 포함한다.
76.
구체예 1-74중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 ITRs의 임의의 복사본이 결여되어 있다.
77.
구체예 1-74중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 B21R-ITR, B22R-ITR, B23R-ITR, B24R-ITR, B25R-ITR, B26R-ITR, B27R-ITR, B28R-ITR, 및 B29R-ITR로 구성된 군에서 선택된 ITR중 적어도 하나의 복사본에 결손을 포함한다.
78.
구체예 1-74중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 ITRs의 다음의 복사본중 적어도 모두에서 결손을 포함한다: B21R-ITR, B22R-ITR, B23R-ITR, B24R-ITR, B25R-ITR, B26R-ITR, B27R-ITR, B28R-ITR, 및 B29R-ITR.
79.
구체예 1-78중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈 B8R 유전자내 결손을 포함한다.
80.
구체예 1-78중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 무손상 B8R 유전자를 포함한다.
81.
재조합 오르토폭스바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 다음을 포함한다:
(i) C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, B20R, 및 B8R 유전자 각각의 결손; 그리고
(ii) 다음 ITRs에서 각 복사본에서 결손: B21R-ITR, B22R-ITR, B23R-ITR, B24R-ITR, B25R-ITR, B26R-ITR, B27R-ITR, B28R-ITR, 및 B29R-ITR.
82.
재조합 오르토폭스바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 다음을 포함한다:
(i) C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자 각각의 결손; 그리고
(ii) 다음 ITRs에서 각 복사본에서 결손: B21R-ITR, B22R-ITR, B23R-ITR, B24R-ITR, B25R-ITR, B26R-ITR, B27R-ITR, B28R-ITR, 및 B29R-ITR,
이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 무손상 B8R 유전자를 포함한다.
83.
구체예 1-82중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 면역 체크포인트 억제제를 인코딩하는 형질전환유전자, 인터루킨 (IL)을 인코딩하는 형질전환유전자, 그리고 사이토킨을 인코딩하는 형질전환유전자로 구성된 군에서 선택된 적어도 하나의 형질전환유전자를 더 포함한다.
84.
구체예 83의 핵산, 이때 상기 핵산은 면역 체크포인트 억제제를 인코딩하는 형질전환유전자, 인터루킨 (IL)을 인코딩하는 형질전환유전자, 그리고 사이토킨을 인코딩하는 형질전환유전자로 구성된 군에서 선택된 적어도 두 개의 형질전환유전자를 포함한다.
85.
구체예 84의 핵산, 이때 상기 핵산은 면역 체크포인트 억제제를 인코딩하는 형질전환유전자, 인터루킨 (IL)을 인코딩하는 형질전환유전자, 그리고 사이토킨을 인코딩하는 형질전환유전자를 포함한다.
86.
구체예 83 또는 84의 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 전술한 핵산은 면역 체크포인트 억제제를 인코딩하는 형질전환유전자를 포함한다.
87.
구체예 85 또는 86의 핵산, 이때 전술한 면역 체크포인트 억제제는 OX40 리간드, ICOS 리간드, 항-CD47 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-CD40/CD40L 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-Lag3 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-PD-L1 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-PD1 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 그리고 항-Tim-3 항체 또는 이의 항원-결합 단편으로 구성된 군에서 선택된다.
88.
구체예 87의 핵산, 이때 전술한 면역 체크포인트 억제제는 항-PD-L1 항체 또는 이의 항원-결합 단편 또는 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다.
89.
구체예 88의 핵산, 이때 전술한 면역 체크포인트 억제제는 항-PD1 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다.
90.
구체예 88의 핵산, 이때 전술한 면역 체크포인트 억제제는 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다.
91.
구체예 83 또는 84의 핵산, 이때 전술한 핵산은 인터루킨 (IL)을 인코딩하는 형질전환유전자를 포함한다.
92.
구체예 85 또는 91의 핵산, 이때 전술한 인터루킨은 IL-1 알파, IL-1 베타, IL-2, IL-4, IL-7, IL-10, IL-12 p35, IL-12 p40, IL-12 p70, IL-15, IL-18, IL-21, 그리고 IL-23으로 구성된 군에서 선택된다.
93.
구체예 92의 핵산, 이때 전술한 인터루킨은 IL-12 p35, IL-12 p40, 그리고 IL-12 p70으로 구성된 군에서 선택된다.
94.
구체예 93의 핵산, 이때 전술한 인터루킨은 막-결합된다.
95.
구체예 94의 핵산, 이때 전술한 인터루킨은 막-결합된 IL-12 p70이다.
96.
구체예 83 또는 84의 핵산, 이때 전술한 핵산은 사이토킨을 인코딩하는 형질전환유전자를 포함한다.
97.
구체예 96의 핵산, 이때 전술한 사이토킨은 인터페론 (IFN)이다.
98.
구체예 97의 핵산, 이때 전술한 인터페론은 IFN-알파, IFN-베타, IFN-델타, IFN-입실론, IFN-타우, IFN-오메가, IFN-제타, 그리고 IFN-IFN-감마로 구성된 군에서 선택된다.
99.
구체예 96의 핵산, 이때 전술한 사이토킨은 TNF 수퍼패밀리 구성원 단백질이다.
100.
구체예 99의 핵산, 이때 전술한 TNF 수퍼패밀리 구성원 단백질은 TRAIL, Fas 리간드, LIGHT (TNFSF-14), TNF-알파, 그리고 4-1BB 리간드로 구성된 군에서 선택된다.
101.
구체예 96의 핵산, 이때 전술한 사이토킨은 GM-CSF, Flt3 리간드, CD40 리간드, TGF-베타, VEGF-R2, 그리고 c-kit로 구성된 군에서 선택된다.
102.
구체예 101의 핵산, 이때 전술한 사이토킨은 Flt3 리간드다.
103.
구체예 83-102의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 B8R 유전자내 결손을 포함하고, 적어도 하나의 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손에 삽입된다.
104.
구체예 103의 핵산, 이때 적어도 두 개의 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손에 삽입된다.
105.
구체예 104의 핵산, 이때 적어도 3개의 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손에 삽입된다.
106.
구체예 103-105중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 적어도 하나의 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손이 아닌 유전자좌에 삽입된다.
107.
구체예 106의 핵산, 이때 상기 유전자좌는 상기 오르토폭스바이러스 게놈의 5'단부의 결손 경계에 있다.
108.
구체예 106의 핵산, 이때 상기 유전자좌는 상기 오르토폭스바이러스 게놈의 3'단부의 결손 경계에 있다.
109.
재조합 오르토폭스바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 다음을 포함한다:
(i) C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, B20R, 및 B8R 유전자 각각의 결손;
(ii) 다음 ITRs에서 각 복사본에서 결손: B21R-ITR, B22R-ITR, B23R-ITR, B24R-ITR, B25R-ITR, B26R-ITR, B27R-ITR, B28R-ITR, 및 B29R-ITR;
(iii) B8R 유전자내 결손에 삽입된 IL-12-TM 형질전환유전자;
(iv) B8R 유전자내 결손에 삽입된 Flt3 리간드 형질전환유전자; 그리고
(v) 다음중 하나:
(a) 단일 쇄 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 형질전환유전자
또는
(b)
(i) 단일 쇄 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 중쇄를 인코딩하는 형질전환유전자, 그리고
(ii) 단일 쇄 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 경쇄를 인코딩하는 형질전환유전자,
이때 (v)의 형질전환유전자(들)은 상기 재조합 오르토폭스바이러스 게놈에 존재하는 5p 결손의 경계 내로 삽입되며, 그리고
이때 상기 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 CTLA-4에 결합할 수 있다.
110.
구체예 109의 핵산, 이때 상기 오르토폭스바이러스 게놈은 서열 식별 번호: 210의 서열로부터 유래되며, 이때
(a) 전술한 유래된 서열은 B8R 유전자 결손, 그리고 IL-12-TM 형질전환유전자, Flt3 리간드 형질전환유전자, 그리고 단일쇄 또는 이중-쇄 항-CTLA-4 항체를 인코딩하는 형질전환유전자(들)을 포함하고;
(b) IL-12-TM 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 212의 아미노산 서열을 포함하는 단백질을 인코드하고;
(c) Flt3 리간드 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 213의 아미노산 서열을 포함하는 단백질을 인코드하고; 그리고
(d) 상기 항-CTLA-4 항체는 서열 식별 번호: 211의 아미노산 서열을 포함한다.
111.
구체예 1-110중 임의의 하나의 구체예의 재조합 오르토폭스바이러스 게놈을 포함하는 핵산을 포함하는 바이러스.
112.
구체예 111의 바이러스, 이때
a) 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된 적어도 2개 유전자 결손을 포함하고;
b) 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된 적어도 1개 유전자 결손을 포함하고; 또는
c) 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, 그리고 F3L 유전자로 구성된 군에서 선택된 적어도 1개 유전자 결손을 포함한다.
113.
구체예 111 또는 112의 바이러스, 이때 전술한 바이러스는 백시니아 바이러스로부터 유래된다.
114.
구체예 113의 바이러스, 이때 전술한 백시니아 바이러스는 Copenhagen, Western Reserve, Wyeth, Lister, EM63, ACAM2000, LC16m8, CV-1, 변형된 백시니아 Ankara (MVA), Dairen I, GLV-1h68, IHD-J, L-IVP, LC16mO, Tashkent, Tian Tan, 그리고 WAU86/88-1로 구성된 균에서 선택된 균주다.
115.
구체예 114의 바이러스, 이때 전술한 백시니아 바이러스는 Copenhagen, Western Reserve, Tian Tan, Wyeth, 그리고 Lister로 구성된 군에서 선택된 균주다.
116.
구체예 115의 바이러스, 이때 전술한 백시니아 바이러스는 Copenhagen 균주 백시니아 바이러스로부터 유래된다.
117.
구체예 111-116중 임의의 하나의 구체예의 바이러스, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 티미딘 키나제 (TK) 유전자를 더 포함한다.
118.
구체예 111-117중 임의의 하나의 구체예의 바이러스, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 리보뉴클레오티드 환원효소 유전자를 더 포함한다.
119.
구체예 111-118중 임의의 하나의 구체예의 바이러스, 이때 포유류 세포 집단에 전술한 바이러스를 접촉시킬 때, 이 포유류 세포 집단은 바이러스 형과 접촉된 동일한 유형의 포유류 세포 집단과 비교하여, 합포체 형성 증가되는 것으로 나타난다.
120.
구체예 111-119중 임의의 하나의 구체예의 바이러스, 이때 포유류 세포 집단에 전술한 바이러스를 접촉시킬 때, 이 포유류 세포 집단은 바이러스 형과 접촉된 동일한 유형의 포유류 세포 집단과 비교하여, 해당 바이러스의 확산이 증가되는 것으로 나타난다.
121.
구체예 111-120중 임의의 하나의 구체예의 바이러스, 이때 전술한 바이러스는 전술한 결손을 포함하지 않는 형태의 바이러스의 것과 비교하여, 포유류 세포 집단에서 증가된 세포독성 효과를 발휘한다.
122.
구체예 119-121중 임의의 하나의 구체예의 바이러스, 이때 전술한 포유류 세포는 인간 세포다.
123.
구체예 122의 바이러스, 이때 전술한 인간 세포는 암 세포다.
124.
구체예 119-121중 임의의 하나의 구체예의 바이러스, 이때 전술한 포유류 세포는 U2OS, 293, 293T, Vero, HeLa, A549, BHK, BSC40, CHO, OVCAR-8, 786-0, NCI-H23, U251, SF-295, T-47D, SKMEL2, BT-549, SK-MEL-28, MDA-MB-231, SK-OV-3, MCF7, M14, SF-268, CAKI-1, HPAV, OVCAR-4, HCT15, K-562, 및 HCT-116으로 구성된 군에서 선택된 세포주다.
125.
구체예 1-110중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 또는 구체예 111-124중 임의의 하나의 구체예의 바이러스, 이때 전술한 핵산 또는 전술한 바이러스는 종양-연합된 항원을 인코딩하는 형질전환유전자를 더 포함한다.
126.
구체예 125의 핵산 또는 바이러스, 이때 전술한 종양-연합된 항원은 표 3-30중 임의의 하나에 열거된 종양-연합된 항원이다.
127.
구체예 126의 핵산 또는 바이러스, 이때 전술한 종양-연합된 항원은 CD19, CD33, EpCAM, CEA, PSMA, EGFRvIII, CD133, EGFR, CDH19, ENPP3, DLL3, MSLN, ROR1, HER2, HLAA2, EpHA2, EpHA3, MCSP, CSPG4, NG2, RON, FLT3, BCMA, CD20, FAPα, FRα, CA-9, PDGFRα, PDGFRβ, FSP1, S100A4, ADAM12m, RET, MET, FGFR, INSR, 및 NTRK로 구성된 군에서 선택된 종양-연합된 항원이다.
128.
구체예 125의 핵산 또는 바이러스, 이때 전술한 종양-연합된 항원은 MAGE-A3, 또는 이의 하나 또는 그 이상 단편들을 포함한다.
129.
구체예 125의 핵산 또는 바이러스, 이때 전술한 종양-연합된 항원은 NY-ESO-1, 또는 이의 하나 또는 그 이상 단편들을 포함한다.
130.
구체예 125의 핵산 또는 바이러스, 이때 전술한 종양-연합된 항원은 하나 또는 그 이상의 인간 유두종바이러스 (HPV) 단백질, 또는 이의 단편들을 포함한다.
131.
구체예 125의 핵산 또는 바이러스, 이때 전술한 HPV 단백질 또는 이의단편들은 (i) HPV16의 E6 및 E7 단백질, 또는 이의 단편들, 그리고 (ii) HPV18의 E6 및 E7 단백질, 또는 이의 단편들중 하나 또는 그 이상을 포함한다.
132.
구체예 131의 핵산 또는 바이러스, 이때 전술한 HPV 단백질 또는 단편들의 서열은 국제 특허 공개 WO/2014/127478(이의 내용은 본원에 참고자료로 편입됨)에 기술된다.
133.
구체예 125의 핵산 또는 바이러스, 이때 전술한 종양-연합된 항원은 단미증(brachyury) 또는 이의 하나 또는 그 이상 단편들을 포함한다.
134.
구체예 125의 핵산 또는 바이러스, 이때 전술한 종양-연합된 항원은 전립선산 포스파타제, 또는 이의 하나 또는 그 이상 단편들을 포함한다.
135.
구체예 1-110중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 또는 구체예 111-124중 임의의 하나의 구체예의 바이러스를 포함하는 패키징 세포주.
136.
포유류 환자에서 암을 치료하는 방법, 전술한 방법은 구체예 111-134중 임의의 하나의 구체예의 바이러스의 치료요법적으로 유효량을 전술한 환자에게 투여하는 것을 포함한다.
137.
구체예 136의 방법, 이때 전술한 포유류 환자는 인간 환자다.
138.
구체예 136 또는 137의 방법, 이때 상기 바이러스는 프라임:부스트(prime:boost) 치료에서 프라임으로 이용된다.
139.
구체예 136 또는 137의 방법, 이때 상기 바이러스는 프라임:부스트 치료에서 부스트로 이용된다.
140.
구체예 136-139중 임의의 하나의 구체예의 방법에서, 이때 전술한 포유류 환자는 암을 가지고 있다.
141.
구체예 140의 방법, 이때 전술한 암은 백혈병, 림프종, 간암, 뼈암, 폐암, 뇌암, 방광암, 위장암, 유방암, 심장암, 자궁경부암, 자궁암, 두경부암, 담낭암, 후두암, 입술 및 구강암, 안구암, 흑색종, 췌장암, 전립선암, 결장직장암, 고환암, 그리고 인후암으로 구성된 군에서 선택된다.
142.
구체예 140의 방법, 이때 전술한 암은 급성 림프모구성 백혈병 (ALL), 급성 골수성 백혈병 (AML), 만성 림프구성 백혈병 (CLL), 만성 골수성 백혈병 (CML), 부신피질 암종, AIDS-관련 림프종, 원발성 CNS 림프종, 항문암, 충수암, 성상세포종, 비정형 기형/횡문근암, 기저 세포 암종, 담관암, 간외 암, 유잉 육종 가족, 골육종 및 악성 섬유성 조직구종, 중추 신경계 배아 종양, 중추 신경계 생식 세포 종양, 두개 인두종, 외피종, 기관지 종양, 버킷 림프종, 카르시노이드 종양, 원발성 림프종, 척색종, 만성 골수증식성 신생물, 결장암, 간외 담관암, 관 상피내 암종 (DCIS), 자궁내막암, 외피종, 식도암, 심부유로모세포종, 두개외 생식 세포종, 성선외 생식 세포 종양, 나팔관암, 뼈의 섬유성 조직구종, 위장 카르시노이드 종양, 위장관 기질 종양 (GIST), 고환 생식 세포 종양, 임신 영양모세포 질환, 신경교종, 소아 뇌간 신경 교종, 털이 많은 세포 백혈병, 간세포암, 랑게르한스 세포 조직구증, 호지킨 림프종, 하인두암, 섬 세포 종양, 췌장 신경내분비 종양, 윌름 종양 및 기타 소아 신장 종양, 랑게르한스 세포 조직구증, 소 세포 폐암, 피부 T 세포 림프종, 안구내 흑색종, 메르켈 세포 암종, 중피종, 전이성 편평 경부암, 정중선 암종, 다발성 내분비 신생물 증후군, 다발성 골수종/혈장 세포 신생물, 골수이형성 증후군, 비강 및 부비동암, 비인두암, 신경모세포종, 비-호지킨 림프종(NHL), 비-소 세포 폐암 (NSCLC), 상피 난소암, 생식 세포 난소암, 악성 가능성이 낮은 난소암, 췌장 신경내분비 종양, 유두종증, 부신경절종, 부비동 및 비강암, 부갑상선암, 음경암, 인두암, 갈색세포종, 뇌하수체 종양, 흉막폐 모세포종, 원발성 복막암, 직장암, 망막모세포종, 횡문근육종, 타액선암, 카포시 육종, 횡문근 육종, 세자리 증후군, 소장암, 연조직 육종, 인후암, 흉선종 및 흉선 암종, 갑상선암, 신장 골반 및 요관의 이행 세포 암, 요도 암, 자궁 내막 자궁암, 자궁 육종, 질암, 외음부암, 그리고 발덴스트륌 거대 글로불린 혈증으로 구성된 군에서 선택된다.
143.
구체예 136-142중 임의의 하나의 구체예의 방법, 이때 전술한 방법은 전술한 환자에게 면역 체크포인트 억제제를 투여하는 것을 더 포함한다.
144.
구체예 143의 방법, 이때 전술한 면역 체크포인트 억제제는 OX40 리간드, ICOS 리간드, 항-CD47 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-CD40/CD40L 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-Lag3 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-PD-L1 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-PD1 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 그리고 항-Tim-3 항체 또는 이의 항원-결합 단편으로 구성된 군에서 선택된다.
145.
구체예 144의 방법, 이때 전술한 면역 체크포인트 억제제는 항-PD1 항체 또는 이의 항원-결합 단편 또는 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다.
146.
구체예 145의 방법, 이때 전술한 면역 체크포인트 억제제는 항-PD1 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다.
147.
구체예 145의 방법, 이때 전술한 면역 체크포인트 억제제는 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다.
148.
구체예 136-147중 임의의 하나의 구체예의 방법, 이때 전술한 방법은 전술한 환자에게 인터루킨을 투여하는 것을 더 포함한다.
149.
구체예 148의 방법, 이때 전술한 인터루킨은 IL-1 알파, IL-1 베타, IL-2, IL-4, IL-7, IL-10, IL-12 p35, IL-12 p40, IL-12 p70, IL-15, IL-18, IL-21, 그리고 IL-23으로 구성된 군에서 선택된다.
150.
구체예 149의 방법, 이때 전술한 인터루킨은 IL-12 p35, IL-12 p40, 그리고 IL-12 p70으로 구성된 군에서 선택된다.
151.
구체예 149 또는 150의 방법, 이때 전술한 인터루킨은 막-결합된다.
152.
구체예 136-151중 임의의 하나의 구체예의 방법, 이때 전술한 방법은 전술한 환자에게 인터페론을 투여하는 것을 더 포함한다.
153.
구체예 152의 방법 이때 전술한 인터페론은 IFN-알파, IFN-베타, IFN-델타, IFN-입실론, IFN-타우, IFN-오메가, IFN-제타, 그리고 IFN-감마로 구성된 군에서 선택된다.
154.
구체예 136-153중 임의의 하나의 구체예의 방법, 이때 전술한 방법은 전술한 환자에게 사이토킨을 투여하는 것을 더 포함한다.
155.
구체예 154의 방법, 이때 전술한 사이토킨은 TNF 수퍼패밀리 구성원 단백질이다.
156.
구체예 155의 방법, 이때 전술한 TNF 수퍼패밀리 구성원 단백질은 TRAIL, Fas 리간드, LIGHT (TNFSF-14), TNF-알파, 및 4-1BB 리간드로 구성된 군에서 선택된다.
157. 구체예 154의 방법, 이때 전술한 사이토킨은 GM-CSF, Flt3 리간드, CD40 리간드, TGF-베타, VEGF-R2, 및 cKit로 구성된 군에서 선택된다.
158.
구체예 157의 방법, 이때 전술한 사이토킨은 Flt3 리간드이다.
159.
구체예 1-110중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 또는 구체예 111-134중 임의의 하나의 구체예의 바이러스, 그리고 전술한 핵산 또는 전술한 바이러스를 숙주 세포에서 발현시키기 위해 전술한 키트의 사용자에게 지침을 주는 포장 삽입물을 포함하는 키트.
160.
구체예 111-134중 임의의 하나의 구체예의 바이러스, 그리고 치료요법적으로 유효량의 전술한 바이러스를 포유류 암 환자에게 투여하고, 이로 인하여 전술한 암을 치료하기 위해 사용자에게 지침을 주는 포장 삽입물을 포함하는 키트.
161.
구체예 160의 키트, 이때 전술한 포유류 환자는 인간 환자이다.
162.
구체예 94의 핵산, 이때 전술한 인터루킨은 막-결합된 IL-12 p35이다.
5.7.3. 세트 3
1.
재조합 오르토폭스바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된 적어도 2개 유전자 결손을 포함한다.
2.
구체예 1의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 3개 유전자의 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
3.
구체예 2의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 4개 유전자의 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
4.
구체예 3의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 5개 유전자의 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
5.
구체예 4의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 6개 유전자의 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
6.
구체예 5의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 7개 유전자의 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
7.
구체예 6의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 8개 유전자의 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
8.
구체예 7의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 9개 유전자의 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
9.
구체예 8의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 10개 유전자의 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
10.
구체예 9의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 11개 유전자의 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
11.
구체예 10의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 12개 유전자의 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
12.
구체예 11의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 13개 유전자의 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
13.
구체예 12의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 14개 유전자의 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
14.
구체예 13의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 15개 유전자의 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
15.
구체예 14의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 16개 유전자의 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
16.
구체예 15의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 17개 유전자의 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
17.
구체예 16의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 18개 유전자의 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
18.
구체예 17의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 19개 유전자의 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
19.
구체예 18의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 20개 유전자의 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
20.
구체예 19의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 21개 유전자의 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
21.
구체예 20의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 22개 유전자의 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
22.
구체예 21의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자 각각의 결손을 포함한다.
23.
재조합 오르토폭스바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
24.
구체예 23의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 2개 유전자의 결손을 포함하고, 각 유전자는 B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
25.
구체예 24의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 3개 유전자의 결손을 포함하고, 각 유전자는 B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
26.
구체예 25의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 4개 유전자의 결손을 포함하고, 각 유전자는 B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
27.
구체예 26의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 5개 유전자의 결손을 포함하고, 각 유전자는 B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
28.
구체예 27의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 6개 유전자의 결손을 포함하고, 각 유전자는 B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
29.
구체예 28의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자 각각의 결손을 포함한다.
30.
재조합 오르토폭스바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, 그리고 F3L 유전자로 구성된 군에서 선택된 적어도 1개 유전자 결손을 포함한다.
31.
구체예 30의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 2개 유전자 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, 그리고 F3L 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
32.
구체예 31의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 3개 유전자 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, 그리고 F3L 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
33.
구체예 32의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 4개 유전자 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, 그리고 F3L 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
34.
구체예 33의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 5개 유전자 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, 그리고 F3L 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
35.
구체예 34의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 6개 유전자 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, 그리고 F3L 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
36.
구체예 35의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 7개 유전자 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, 그리고 F3L 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
37.
구체예 36의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 8개 유전자 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, 그리고 F3L 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
38.
구체예 37의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 9개 유전자 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, 그리고 F3L 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
39.
구체예 38의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 10개 유전자 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, 그리고 F3L 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
40.
구체예 39의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 11개 유전자 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, 그리고 F3L 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
41. 구체예 40의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 12개 유전자 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, 그리고 F3L 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
42. 구체예 41의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 13개 유전자 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, 그리고 F3L 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
43. 구체예 42의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 14개 유전자 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, 그리고 F3L 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
44. 구체예 43의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 15개 유전자 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, 그리고 F3L 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
45.
구체예 44의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, 그리고 F3L 유전자 각각의 결손을 포함한다.
46.
구체예 1-45중 임의의 하나의 구체예의 재조합 오르토폭스바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 숙주 상호작용에 연루된 단백질을 인코드하는 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
47.
구체예 46의 핵산, 이때 전술한 단백질은 세포외 매트릭스에 대한 칼슘-독립성 흡착에 영향을 준다.
48.
구체예 46의 핵산, 이때 전술한 단백질은 NF-kB 억제제다.
49.
구체예 48의 핵산, 이때 전술한 단백질은 C2L, N1L, M2L, K1L, 그리고 K7R 유전자로 구성된 군에서 선택된 유전자에 의해 인코드된다.
50.
구체예 46의 핵산, 이때 전술한 단백질은 아팝토시스 억제제다.
51.
구체예 47의 핵산, 이때 전술한 아팝토시스 억제제는 카스파제-9 억제제다.
52.
구체예 51의 핵산, 이때 전술한 카스파제-9 억제제는 F1L 유전자에 의해 인코드된다.
53.
구체예 50의 핵산, 이때 전술한 아팝토시스 억제제는 BCL-2-유사 단백질이다.
54.
구체예 53의 핵산, 이때 전술한 BCL-2-유사 단백질은 N1L에 의해 인코드된다.
55.
구체예 46의 핵산, 이때 전술한 단백질은 인터페론 조절 인자 3 (IRF3) 억제제다.
56.
구체예 55의 핵산, 이때 전술한 IRF3 억제제는 N2L 또는 K7R에 의해 인코드된다.
57.
구체예 46의 핵산, 이때 전술한 단백질은 세린 프로테아제 억제제다.
58.
구체예 46의 핵산, 이때 전술한 단백질은 세포 융합을 방해한다.
59.
구체예 58의 핵산, 이때 전술한 단백질은 K2L에 의해 인코드된다.
60.
구체예 46의 핵산, 이때 전술한 단백질은 RNA-활성화된 단백질 키나제 (PKR) 억제제다.
61.
구체예 60의 핵산, 이때 전술한 단백질은 K1L 또는 K3L에 의해 인코드된다.
62.
구체예 46의 핵산, 이때 전술한 단백질은 독성 인자다.
63.
구체예 63의 핵산, 이때 전술한 단백질은 F3L에 의해 인코드된다.
64.
구체예 46의 핵산, 이때 전술한 단백질은 IL-1-베타 억제제다.
65.
구체예 64의 핵산, 이때 전술한 단백질은 B16R에 의해 인코드된다.
66.
구체예 46의 핵산, 이때 전술한 단백질은 분비된 IFNα 격리자다.
67.
구체예 67의 핵산, 이때 전술한 단백질은 B19R에 의해 인코드된다.
68.
구체예 1-67중 임의의 하나의 구체예의 재조합 오르토폭스바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 DNA 복제에 연루된 단백질을 인코딩하는 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
69.
구체예 68의 핵산, 이때 전술한 단백질은 DNA 변형 뉴클레아제다.
70.
구체예 69의 핵산, 이때 전술한 단백질은 K4L에 의해 인코드된다.
71.
구체예 70의 핵산, 이때 전술한 단백질은 데옥시우리딘 트리포스파타제 (dUTPase)이다.
72.
구체예 71의 핵산, 이때 dUTPase는 F2L에 의해 인코드된다.
73.
구체예 1-72중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 적어도 하나의 결손된 유전자의 전체 뉴클레오티드 서열은 결손된다.
74.
구체예 1-72중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 적어도 하나의 결손된 유전자는 단지 부분적으로 결손되며, 그리고 해당 부분 결손으로 전술한 부분적으로 결손된 유전자가 숙주 세포 안으로 도입될 때 비기능성이 되도록 하는데 충분하다.
75.
구체예 1-74중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 역전된 말단 반복 (ITRs)의 적어도 2개 복사본을 포함한다.
76.
구체예 1-74중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 ITRs의 임의의 복사본이 결여되어 있다.
77.
구체예 1-74중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 B21R-ITR, B22R-ITR, B23R-ITR, B24R-ITR, B25R-ITR, B26R-ITR, B27R-ITR, B28R-ITR, 및 B29R-ITR로 구성된 군에서 선택된 ITR중 적어도 하나의 복사본에 결손을 포함한다.
78.
구체예 1-74중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 ITRs의 다음의 복사본중 적어도 모두에서 결손을 포함한다: B21R-ITR, B22R-ITR, B23R-ITR, B24R-ITR, B25R-ITR, B26R-ITR, B27R-ITR, B28R-ITR, 및 B29R-ITR.
79.
구체예 1-78중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈 B8R 유전자내 결손을 포함한다.
80.
구체예 1-78중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 무손상 B8R 유전자를 포함한다.
81.
재조합 오르토폭스바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 다음을 포함한다:
(i) C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, B20R, 및 B8R 유전자 각각의 결손; 그리고
(ii) 다음 ITRs에서 각 복사본에서 결손: B21R-ITR, B22R-ITR, B23R-ITR, B24R-ITR, B25R-ITR, B26R-ITR, B27R-ITR, B28R-ITR, 및 B29R-ITR.
82.
재조합 오르토폭스바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 다음을 포함한다:
(i) C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자 각각의 결손; 그리고
(ii) 다음 ITRs에서 각 복사본에서 결손: B21R-ITR, B22R-ITR, B23R-ITR, B24R-ITR, B25R-ITR, B26R-ITR, B27R-ITR, B28R-ITR, 및 B29R-ITR,
이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 무손상 B8R 유전자를 포함한다.
83.
구체예 1-82중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 면역 체크포인트 억제제를 인코딩하는 형질전환유전자, 인터루킨 (IL)을 인코딩하는 형질전환유전자, 그리고 사이토킨을 인코딩하는 형질전환유전자로 구성된 군에서 선택된 적어도 하나의 형질전환유전자를 더 포함한다.
84.
구체예 83의 핵산, 이때 상기 핵산은 면역 체크포인트 억제제를 인코딩하는 형질전환유전자, 인터루킨 (IL)을 인코딩하는 형질전환유전자, 그리고 사이토킨을 인코딩하는 형질전환유전자로 구성된 군에서 선택된 적어도 두 개의 형질전환유전자를 포함한다.
85.
구체예 84의 핵산, 이때 상기 핵산은 면역 체크포인트 억제제를 인코딩하는 형질전환유전자, 인터루킨 (IL)을 인코딩하는 형질전환유전자, 그리고 사이토킨을 인코딩하는 형질전환유전자를 포함한다.
86.
구체예 83 또는 84의 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 전술한 핵산은 면역 체크포인트 억제제를 인코딩하는 형질전환유전자를 포함한다.
87.
구체예 85 또는 86의 핵산, 이때 전술한 면역 체크포인트 억제제는 OX40 리간드, ICOS 리간드, 항-CD47 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-CD40/CD40L 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-Lag3 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-PD-L1 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-PD1 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 그리고 항-Tim-3 항체 또는 이의 항원-결합 단편으로 구성된 군에서 선택된다.
88.
구체예 87의 핵산, 이때 전술한 면역 체크포인트 억제제는 항-PD-L1 항체 또는 이의 항원-결합 단편 또는 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다.
89.
구체예 88의 핵산, 이때 전술한 면역 체크포인트 억제제는 항-PD1 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다.
90.
구체예 88의 핵산, 이때 전술한 면역 체크포인트 억제제는 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다.
91.
구체예 83 또는 84의 핵산, 이때 전술한 핵산은 인터루킨 (IL)을 인코딩하는 형질전환유전자를 포함한다.
92.
구체예 85 또는 91의 핵산, 이때 전술한 인터루킨은 IL-1 알파, IL-1 베타, IL-2, IL-4, IL-7, IL-10, IL-12 p35, IL-12 p40, IL-12 p70, IL-15, IL-18, IL-21, 그리고 IL-23으로 구성된 군에서 선택된다.
93.
구체예 92의 핵산, 이때 전술한 인터루킨은 IL-12 p35, IL-12 p40, 그리고 IL-12 p70으로 구성된 군에서 선택된다.
94.
구체예 93의 핵산, 이때 전술한 인터루킨은 막-결합된다.
95.
구체예 94의 핵산, 이때 전술한 인터루킨은 막-결합된 IL-12 p70이다.
96.
구체예 83 또는 84의 핵산, 이때 전술한 핵산은 사이토킨을 인코딩하는 형질전환유전자를 포함한다.
97.
구체예 96의 핵산, 이때 전술한 사이토킨은 인터페론 (IFN)이다.
98.
구체예 97의 핵산, 이때 전술한 인터페론은 IFN-알파, IFN-베타, IFN-델타, IFN-입실론, IFN-타우, IFN-오메가, IFN-제타, 그리고 IFN-IFN-감마로 구성된 군에서 선택된다.
99.
구체예 96의 핵산, 이때 전술한 사이토킨은 TNF 수퍼패밀리 구성원 단백질이다.
100.
구체예 99의 핵산, 이때 전술한 TNF 수퍼패밀리 구성원 단백질은 TRAIL, Fas 리간드, LIGHT (TNFSF-14), TNF-알파, 그리고 4-1BB 리간드로 구성된 군에서 선택된다.
101.
구체예 96의 핵산, 이때 전술한 사이토킨은 GM-CSF, Flt3 리간드, CD40 리간드, TGF-베타, VEGF-R2, 그리고 c-kit로 구성된 군에서 선택된다.
102.
구체예 101의 핵산, 이때 전술한 사이토킨은 Flt3 리간드다.
103.
구체예 83-102의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 B8R 유전자내 결손을 포함하고, 적어도 하나의 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손에 삽입된다.
104.
구체예 103의 핵산, 이때 적어도 두 개의 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손에 삽입된다.
105.
구체예 104의 핵산, 이때 적어도 3개의 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손에 삽입된다.
106.
구체예 103-105중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 적어도 하나의 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손이 아닌 유전자좌에 삽입된다.
107.
구체예 106의 핵산, 이때 상기 유전자좌는 상기 오르토폭스바이러스 게놈의 5'단부의 결손 경계에 있다.
108.
구체예 106의 핵산, 이때 상기 유전자좌는 상기 오르토폭스바이러스 게놈의 3'단부의 결손 경계에 있다.
109.
재조합 오르토폭스바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 다음을 포함한다:
(i) C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, B20R, 및 B8R 유전자 각각의 결손;
(ii) 다음 ITRs에서 각 복사본에서 결손: B21R-ITR, B22R-ITR, B23R-ITR, B24R-ITR, B25R-ITR, B26R-ITR, B27R-ITR, B28R-ITR, 및 B29R-ITR;
(iii) B8R 유전자내 결손에 삽입된 IL-12-TM 형질전환유전자;
(iv) B8R 유전자내 결손에 삽입된 Flt3 리간드 형질전환유전자; 그리고
(v) 다음중 하나:
(a) 단일 쇄 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 형질전환유전자
또는
(b)
(i) 단일 쇄 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 중쇄를 인코딩하는 형질전환유전자, 그리고
(ii) 단일 쇄 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 경쇄를 인코딩하는 형질전환유전자,
이때 (v)의 형질전환유전자(들)은 상기 재조합 오르토폭스바이러스 게놈에 존재하는 5p 결손의 경계 내로 삽입되며, 그리고
이때 상기 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 CTLA-4에 결합할 수 있다.
110.
구체예 109의 핵산, 이때 상기 오르토폭스바이러스 게놈은 서열 식별 번호: 210의 서열로부터 유래되며, 이때
(a) 전술한 유래된 서열은 B8R 유전자 결손, 그리고 IL-12-TM 형질전환유전자, Flt3 리간드 형질전환유전자, 그리고 단일쇄 또는 이중-쇄 항-CTLA-4 항체를 인코딩하는 형질전환유전자(들)을 포함하고;
(b) IL-12-TM 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 212의 아미노산 서열을 포함하는 단백질을 인코드하고;
(c) Flt3 리간드 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 213의 아미노산 서열을 포함하는 단백질을 인코드하고; 그리고
(d) 상기 항-CTLA-4 항체는 서열 식별 번호: 211의 아미노산 서열을 포함한다.
111.
구체예 1-110중 임의의 하나의 구체예의 재조합 오르토폭스바이러스 게놈을 포함하는 핵산을 포함하는 바이러스.
112.
구체예 111의 바이러스, 이때
a) 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된 적어도 2개 유전자 결손을 포함하고;
b) 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된 적어도 1개 유전자 결손을 포함하고; 또는
c) 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, 그리고 F3L 유전자로 구성된 군에서 선택된 적어도 1개 유전자 결손을 포함한다.
113.
구체예 111 또는 112의 바이러스, 이때 전술한 바이러스는 백시니아 바이러스로부터 유래된다.
114.
구체예 113의 바이러스, 이때 전술한 백시니아 바이러스는 Copenhagen, Western Reserve, Wyeth, Lister, EM63, ACAM2000, LC16m8, CV-1, 변형된 백시니아 Ankara (MVA), Dairen I, GLV-1h68, IHD-J, L-IVP, LC16mO, Tashkent, Tian Tan, 그리고 WAU86/88-1로 구성된 균에서 선택된 균주다.
115.
구체예 114의 바이러스, 이때 전술한 백시니아 바이러스는 Copenhagen, Western Reserve, Tian Tan, Wyeth, 그리고 Lister로 구성된 군에서 선택된 균주다.
116.
구체예 115의 바이러스, 이때 전술한 백시니아 바이러스는 Copenhagen 균주 백시니아 바이러스로부터 유래된다.
117.
구체예 111-116중 임의의 하나의 구체예의 바이러스, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 티미딘 키나제 (TK) 유전자를 더 포함한다.
118.
구체예 111-117중 임의의 하나의 구체예의 바이러스, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 리보뉴클레오티드 환원효소 유전자를 더 포함한다.
119.
구체예 111-118중 임의의 하나의 구체예의 바이러스, 이때 포유류 세포 집단에 전술한 바이러스를 접촉시킬 때, 이 포유류 세포 집단은 바이러스 형과 접촉된 동일한 유형의 포유류 세포 집단과 비교하여, 합포체 형성 증가되는 것으로 나타난다.
120.
구체예 111-119중 임의의 하나의 구체예의 바이러스, 이때 포유류 세포 집단에 전술한 바이러스를 접촉시킬 때, 이 포유류 세포 집단은 바이러스 형과 접촉된 동일한 유형의 포유류 세포 집단과 비교하여, 해당 바이러스의 확산이 증가되는 것으로 나타난다.
121.
구체예 111-120중 임의의 하나의 구체예의 바이러스, 이때 전술한 바이러스는 전술한 결손을 포함하지 않는 형태의 바이러스의 것과 비교하여, 포유류 세포 집단에서 증가된 세포독성 효과를 발휘한다.
122.
구체예 119-121중 임의의 하나의 구체예의 바이러스, 이때 전술한 포유류 세포는 인간 세포다.
123.
구체예 122의 바이러스, 이때 전술한 인간 세포는 암 세포다.
124.
구체예 119-121중 임의의 하나의 구체예의 바이러스, 이때 전술한 포유류 세포는 U2OS, 293, 293T, Vero, HeLa, A549, BHK, BSC40, CHO, OVCAR-8, 786-0, NCI-H23, U251, SF-295, T-47D, SKMEL2, BT-549, SK-MEL-28, MDA-MB-231, SK-OV-3, MCF7, M14, SF-268, CAKI-1, HPAV, OVCAR-4, HCT15, K-562, 및 HCT-116으로 구성된 군에서 선택된 세포주다.
125.
구체예 1-110중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 또는 구체예 111-124중 임의의 하나의 구체예의 바이러스, 이때 전술한 핵산 또는 전술한 바이러스는 종양-연합된 항원을 인코딩하는 형질전환유전자를 더 포함한다.
126.
구체예 125의 핵산 또는 바이러스, 이때 전술한 종양-연합된 항원은 표 3-30중 임의의 하나에 열거된 종양-연합된 항원이다.
127.
구체예 126의 핵산 또는 바이러스, 이때 전술한 종양-연합된 항원은 CD19, CD33, EpCAM, CEA, PSMA, EGFRvIII, CD133, EGFR, CDH19, ENPP3, DLL3, MSLN, ROR1, HER2, HLAA2, EpHA2, EpHA3, MCSP, CSPG4, NG2, RON, FLT3, BCMA, CD20, FAPα, FRα, CA-9, PDGFRα, PDGFRβ, FSP1, S100A4, ADAM12m, RET, MET, FGFR, INSR, 및 NTRK로 구성된 군에서 선택된 종양-연합된 항원이다.
128.
구체예 125의 핵산 또는 바이러스, 이때 전술한 종양-연합된 항원은 MAGE-A3, 또는 이의 하나 또는 그 이상 단편들을 포함한다.
129.
구체예 125의 핵산 또는 바이러스, 이때 전술한 종양-연합된 항원은 NY-ESO-1, 또는 이의 하나 또는 그 이상 단편들을 포함한다.
130.
구체예 125의 핵산 또는 바이러스, 이때 전술한 종양-연합된 항원은 하나 또는 그 이상의 인간 유두종바이러스 (HPV) 단백질, 또는 이의 단편들을 포함한다.
131.
구체예 125의 핵산 또는 바이러스, 이때 전술한 HPV 단백질 또는 이의단편들은 (i) HPV16의 E6 및 E7 단백질, 또는 이의 단편들, 그리고 (ii) HPV18의 E6 및 E7 단백질, 또는 이의 단편들중 하나 또는 그 이상을 포함한다.
132.
구체예 131의 핵산 또는 바이러스, 이때 전술한 HPV 단백질 또는 단편들의 서열은 국제 특허 공개 WO/2014/127478(이의 내용은 본원에 참고자료로 편입됨)에 기술된다.
133.
구체예 125의 핵산 또는 바이러스, 이때 전술한 종양-연합된 항원은 단미증(brachyury) 또는 이의 하나 또는 그 이상 단편들을 포함한다.
134.
구체예 125의 핵산 또는 바이러스, 이때 전술한 종양-연합된 항원은 전립선산 포스파타제, 또는 이의 하나 또는 그 이상 단편들을 포함한다.
135.
구체예 1-110중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 또는 구체예 111-124중 임의의 하나의 구체예의 바이러스를 포함하는 패키징 세포주.
136.
포유류 환자에서 암을 치료하는 방법, 전술한 방법은 구체예 111-134중 임의의 하나의 구체예의 바이러스의 치료요법적으로 유효량을 전술한 환자에게 투여하는 것을 포함한다.
137.
구체예 136의 방법, 이때 전술한 포유류 환자는 인간 환자다.
138.
구체예 136 또는 137의 방법, 이때 상기 바이러스는 프라임:부스트(prime:boost) 치료에서 프라임으로 이용된다.
139.
구체예 136 또는 137의 방법, 이때 상기 바이러스는 프라임:부스트 치료에서 부스트로 이용된다.
140.
구체예 136-139중 임의의 하나의 구체예의 방법에서, 이때 전술한 포유류 환자는 암을 가지고 있다.
141.
구체예 140의 방법, 이때 전술한 암은 백혈병, 림프종, 간암, 뼈암, 폐암, 뇌암, 방광암, 위장암, 유방암, 심장암, 자궁경부암, 자궁암, 두경부암, 담낭암, 후두암, 입술 및 구강암, 안구암, 흑색종, 췌장암, 전립선암, 결장직장암, 고환암, 그리고 인후암으로 구성된 군에서 선택된다.
142.
구체예 140의 방법, 이때 전술한 암은 급성 림프모구성 백혈병 (ALL), 급성 골수성 백혈병 (AML), 만성 림프구성 백혈병 (CLL), 만성 골수성 백혈병 (CML), 부신피질 암종, AIDS-관련 림프종, 원발성 CNS 림프종, 항문암, 충수암, 성상세포종, 비정형 기형/횡문근암, 기저 세포 암종, 담관암, 간외 암, 유잉 육종 가족, 골육종 및 악성 섬유성 조직구종, 중추 신경계 배아 종양, 중추 신경계 생식 세포 종양, 두개 인두종, 외피종, 기관지 종양, 버킷 림프종, 카르시노이드 종양, 원발성 림프종, 척색종, 만성 골수증식성 신생물, 결장암, 간외 담관암, 관 상피내 암종 (DCIS), 자궁내막암, 외피종, 식도암, 심부유로모세포종, 두개외 생식 세포종, 성선외 생식 세포 종양, 나팔관암, 뼈의 섬유성 조직구종, 위장 카르시노이드 종양, 위장관 기질 종양 (GIST), 고환 생식 세포 종양, 임신 영양모세포 질환, 신경교종, 소아 뇌간 신경 교종, 털이 많은 세포 백혈병, 간세포암, 랑게르한스 세포 조직구증, 호지킨 림프종, 하인두암, 섬 세포 종양, 췌장 신경내분비 종양, 윌름 종양 및 기타 소아 신장 종양, 랑게르한스 세포 조직구증, 소 세포 폐암, 피부 T 세포 림프종, 안구내 흑색종, 메르켈 세포 암종, 중피종, 전이성 편평 경부암, 정중선 암종, 다발성 내분비 신생물 증후군, 다발성 골수종/혈장 세포 신생물, 골수이형성 증후군, 비강 및 부비동암, 비인두암, 신경모세포종, 비-호지킨 림프종(NHL), 비-소 세포 폐암 (NSCLC), 상피 난소암, 생식 세포 난소암, 악성 가능성이 낮은 난소암, 췌장 신경내분비 종양, 유두종증, 부신경절종, 부비동 및 비강암, 부갑상선암, 음경암, 인두암, 갈색세포종, 뇌하수체 종양, 흉막폐 모세포종, 원발성 복막암, 직장암, 망막모세포종, 횡문근육종, 타액선암, 카포시 육종, 횡문근 육종, 세자리 증후군, 소장암, 연조직 육종, 인후암, 흉선종 및 흉선 암종, 갑상선암, 신장 골반 및 요관의 이행 세포 암, 요도 암, 자궁 내막 자궁암, 자궁 육종, 질암, 외음부암, 그리고 발덴스트륌 거대 글로불린 혈증으로 구성된 군에서 선택된다.
143.
구체예 136-142중 임의의 하나의 구체예의 방법, 이때 전술한 방법은 전술한 환자에게 면역 체크포인트 억제제를 투여하는 것을 더 포함한다.
144.
구체예 143의 방법, 이때 전술한 면역 체크포인트 억제제는 OX40 리간드, ICOS 리간드, 항-CD47 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-CD40/CD40L 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-Lag3 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-PD-L1 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-PD1 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 그리고 항-Tim-3 항체 또는 이의 항원-결합 단편으로 구성된 군에서 선택된다.
145.
구체예 144의 방법, 이때 전술한 면역 체크포인트 억제제는 항-PD1 항체 또는 이의 항원-결합 단편 또는 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다.
146.
구체예 145의 방법, 이때 전술한 면역 체크포인트 억제제는 항-PD1 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다.
147.
구체예 145의 방법, 이때 전술한 면역 체크포인트 억제제는 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다.
148.
구체예 136-147중 임의의 하나의 구체예의 방법, 이때 전술한 방법은 전술한 환자에게 인터루킨을 투여하는 것을 더 포함한다.
149.
구체예 148의 방법, 이때 전술한 인터루킨은 IL-1 알파, IL-1 베타, IL-2, IL-4, IL-7, IL-10, IL-12 p35, IL-12 p40, IL-12 p70, IL-15, IL-18, IL-21, 그리고 IL-23으로 구성된 군에서 선택된다.
150.
구체예 149의 방법, 이때 전술한 인터루킨은 IL-12 p35, IL-12 p40, 그리고 IL-12 p70으로 구성된 군에서 선택된다.
151.
구체예 149 또는 150의 방법, 이때 전술한 인터루킨은 막-결합된다.
152.
구체예 136-151중 임의의 하나의 구체예의 방법, 이때 전술한 방법은 전술한 환자에게 인터페론을 투여하는 것을 더 포함한다.
153.
구체예 152의 방법, 이때 전술한 인터페론은
IFN-알파, IFN-베타, IFN-델타, IFN-입실론, IFN-타우, IFN-오메가, IFN-제타, 그리고 IFN-감마로 구성된 군에서 선택된다.
154.
구체예 136-153중 임의의 하나의 구체예의 방법, 이때 전술한 방법은 전술한 환자에게 사이토킨을 투여하는 것을 더 포함한다.
155.
구체예 154의 방법, 이때 전술한 사이토킨은 TNF 수퍼패밀리 구성원 단백질이다.
156.
구체예 155의 방법, 이때 전술한 TNF 수퍼패밀리 구성원 단백질은 TRAIL, Fas 리간드, LIGHT (TNFSF-14), TNF-알파, 및 4-1BB 리간드로 구성된 군에서 선택된다.
157. 구체예 154의 방법, 이때 전술한 사이토킨은 GM-CSF, Flt3 리간드, CD40 리간드, TGF-베타, VEGF-R2, 및 cKit로 구성된 군에서 선택된다.
158.
구체예 157의 방법, 이때 전술한 사이토킨은 Flt3 리간드이다.
159.
구체예 1-110중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 또는 구체예 111-134중 임의의 하나의 구체예의 바이러스, 그리고 전술한 핵산 또는 전술한 바이러스를 숙주 세포에서 발현시키기 위해 전술한 키트의 사용자에게 지침을 주는 포장 삽입물을 포함하는 키트.
160.
구체예 111-134중 임의의 하나의 구체예의 바이러스, 그리고 치료요법적으로 유효량의 전술한 바이러스를 포유류 암 환자에게 투여하고, 이로 인하여 전술한 암을 치료하기 위해 사용자에게 지침을 주는 포장 삽입물을 포함하는 키트.
161.
구체예 160의 키트, 이때 전술한 포유류 환자는 인간 환자이다.
162.
구체예 94의 핵산, 이때 전술한 인터루킨은 막-결합된 IL-12 p35이다.
5.7.4. 세트 4
1.
재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이 핵산은 다음을 포함한다:
(a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며;
(b)세포독성 T-림프구 연합된 단백질 4 (CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며;
(c) 인터루킨 12 (IL-12) 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며; 그리고
(d) FMS-유사 티로신 키나제 3 리간드 (FLT3L)를 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시된다.
2.
구체예 1의 핵산, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있다.
3.
구체예 1 또는 2의 핵산, 항-CTLA-4 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함한다.
4.
구체예 3의 핵산, 이때 항-CTLA-4 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터, pS 프로모터, 또는 LEO 프로모터다.
5.
구체예 3의 핵산, 이때 항-CTLA-4 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터다.
6.
구체예 1-5중 임의의 하나의 구체예의 핵산, IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함한다.
7.
구체예 6의 핵산, 이때 IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 후기 프로모터다.
8.
구체예 7의 핵산, 이때 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열, F17R 프로모터, 또는 D13L 프로모터를 포함한다.
9.
구체예 7의 핵산, 이때 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
10.
구체예 1-9중 임의의 하나의 구체예의 핵산, FLT3L를 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함한다.
11.
구체예 10의 핵산, 이때 상기 상기 FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터, B19R 프로모터, E3L 프로모터, F11L 프로모터, 또는 B2R 프로모터다.
12.
구체예 10의 핵산, 이때 상기 상기 FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터다.
13.
구체예 10의 핵산, 이때 상기 상기 FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B19R 프로모터다.
14.
구체예 10의 핵산, 이때 상기 상기 FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다.
15.
구체예 1-14중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
16.
구체예 1-14중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 2 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
17.
구체예 1-14중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
18.
구체예 1-14중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재한다.
19.
구체예 1-14중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재한다.
20.
구체예 1-14중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재한다.
21.
구체예 1-14중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 상기 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
22.
구체예 1-14중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 2 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
23.
구체예 1-14중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
24.
구체예 1-14중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
25.
구체예 1-14중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재한다.
26.
구체예 1-14중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
27.
구체예 1-14중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
28.
구체예 1-14중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재한다.
29.
구체예 1-14중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
30.
구체예 1-14중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
31.
구체예 1-14중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재한다.
32.
구체예 1-14중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
33.
구체예 1-14중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재한다.
34.
구체예 1-14중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 2 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재한다.
35.
구체예 1-14중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재한다.
36.
구체예 1-14중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재한다.
37.
구체예 1-14중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 2 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재한다.
38.
구체예 1-14중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재한다.
39.
구체예 1-14중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
40.
구체예 1-14중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 2 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
41.
구체예 1-14중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
42.
구체예 1-14중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
43.
구체예 1-14중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 2 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
44.
구체예 1-14중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
45.
구체예 1-14중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
46.
구체예 1-14중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
47.
구체예 1-14중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
48.
구체예 1-14중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
49.
구체예 1-14중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
50.
구체예 1-14중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
51.
구체예 1-14중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
52.
구체예 1-14중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재한다.
53.
구체예 1-14중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
54.
구체예 1-14중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재한다.
55.
구체예 1-14중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 2 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재한다.
56.
구체예 1-14중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재한다.
57.
구체예 1-14중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재한다.
58.
구체예 1-14중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재한다.
59.
구체예 1-14중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재한다.
60.
구체예 1-14중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
61.
구체예 1-14중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 2 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
62.
구체예 1-14중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
63.
구체예 1-14중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
64.
구체예 1-14중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
65.
구체예 1-14중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
66.
구체예 1-14중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
67.
구체예 1-14중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
68.
구체예 1-14중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
69.
구체예 1-14중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
70.
구체예 1-14중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
71.
구체예 1-14중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
72.
구체예 1-14중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
73.
구체예 1-14중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
74.
구체예 1-14중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 2 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
75.
구체예 1-14중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 2 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
76.
구체예 1-14중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
77.
구체예 1-14중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
78.
재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이 핵산은 다음을 포함한다:
(a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며;
(b) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며;
(c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며; 그리고
(d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며;
이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다:
(i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터이며;
(ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 후기 프로모터이며; 그리고
(iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다.
79.
구체예 78의 핵산, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있다.
80.
구체예 78 또는 79의 핵산, 이때 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재한다.
81.
구체예 78 또는 79의 핵산, 이때 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재한다.
82.
구체예 80 또는 81의 핵산, 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 상류에 있다.
83.
구체예 80 또는 81의 핵산, 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 하류에 있다.
84.
재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이 핵산은 다음을 포함한다:
(a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며;
(b) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 있고;
(c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 B8R 유전자내 결손 좌에 있고; 그리고
(d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 상류에 있고;
이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다:
(i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터이며;
(ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 후기 프로모터이며; 그리고
(iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 또는 B19R 프로모터다.
85.
구체예 84의 핵산, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다.
86.
구체예 85의 핵산, 이때 B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
87.
구체예 84-86중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 또는 H5R 후기 프로모터다.
88.
구체예 87의 핵산, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 및 H5R 후기 프로모터다.
89.
구체예 88의 핵산, 이때 H5R 조기 프로모터는 서열 식별 번호: 553의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, H5R 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 554의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
90.
재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이 핵산은 다음을 포함한다:
(a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며;
(b) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 있고;
(c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 B8R 유전자내 결손 좌에 있고; 그리고
(d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 하류에 있고;
이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다:
(i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터이며;
(ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 후기 프로모터이며; 그리고
(iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 또는 B19R 프로모터다.
91.
구체예 90의 핵산, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다.
92.
구체예 91의 핵산, 이때 B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
93.
구체예 90-92중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 또는 H5R 후기 프로모터다.
94.
구체예 93의 핵산, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 및 H5R 후기 프로모터다.
95.
구체예 94의 핵산, 이때 H5R 조기 프로모터는 서열 식별 번호: 553의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, H5R 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 554의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
96.
재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이 핵산은 다음을 포함한다:
(a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며;
(b) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 있고;
(c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 B8R 유전자내 결손 좌에 있고; 그리고
(d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 상류에 있고;
이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다:
(i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터이며;
(ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 후기 프로모터이며; 그리고
(iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 또는 B19R 프로모터다.
97.
구체예 96의 핵산, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다.
98.
구체예 97의 핵산, 이때 B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
99.
구체예 96-98중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 또는 H5R 후기 프로모터다.
100.
구체예 99의 핵산, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 및 H5R 후기 프로모터다.
101.
구체예 100의 핵산, 이때 H5R 조기 프로모터는 서열 식별 번호: 553의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, H5R 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 554의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
102.
재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이 핵산은 다음을 포함한다:
(a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며;
(b) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 있고;
(c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 B8R 유전자내 결손 좌에 있고; 그리고
(d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 하류에 있고;
이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다:
(i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터이며;
(ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 후기 프로모터이며; 그리고
(iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 또는 B19R 프로모터다.
103.
구체예 102의 핵산, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다.
104.
구체예 103의 핵산, 이때 B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
105.
구체예 102-104중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 또는 H5R 후기 프로모터다.
106.
구체예 105의 핵산, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 및 H5R 후기 프로모터다.
107.
구체예 106의 핵산, 이때 H5R 조기 프로모터는 서열 식별 번호: 553의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, H5R 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 554의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
108.
재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이 핵산은 다음을 포함한다:
(a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며;
(b) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 있고;
(c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 B8R 유전자내 결손 좌에 있고; 그리고
(d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 상류에 있고;
이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다:
(i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 pS 프로모터이며;
(ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 후기 프로모터이며; 그리고
(iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 또는 B19R 프로모터다.
109.
구체예 108의 핵산, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다.
110.
구체예 109의 핵산, 이때 B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
111.
구체예 108-110중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 pS의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 555, 서열 식별 번호: 556, 또는 서열 식별 번호: 557의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
112.
재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이 핵산은 다음을 포함한다:
(a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며;
(b) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 있고;
(c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 B8R 유전자내 결손 좌에 있고; 그리고
(d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 하류에 있고;
이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다:
(i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 pS 프로모터이며;
(ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 후기 프로모터이며; 그리고
(iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 또는 B19R 프로모터다.
113.
구체예 112의 핵산, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다.
114.
구체예 113의 핵산, 이때 B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
115.
구체예 112-114중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 pS의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 555, 서열 식별 번호: 556, 또는 서열 식별 번호: 557의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
116.
재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이 핵산은 다음을 포함한다:
(a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며;
(b) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 있고;
(c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 B8R 유전자내 결손 좌에 있고; 그리고
(d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 상류에 있고;
이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다:
(i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 pS 프로모터이며;
(ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 후기 프로모터이며; 그리고
(iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 또는 B19R 프로모터다.
117.
구체예 116의 핵산, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다.
118.
구체예 117의 핵산, 이때 B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
119.
구체예 116-118중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 pS의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 555, 서열 식별 번호: 556, 또는 서열 식별 번호: 557의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
120.
재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이 핵산은 다음을 포함한다:
(a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며;
(b) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 있고;
(c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 B8R 유전자내 결손 좌에 있고; 그리고
(d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 하류에 있고;
이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다:
(i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 pS 프로모터이며;
(ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 후기 프로모터이며; 그리고
(iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 또는 B19R 프로모터다.
121.
구체예 120의 핵산, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다.
122.
구체예 121의 핵산, 이때 B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
123.
구체예 120-122중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 pS의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 555, 서열 식별 번호: 556, 또는 서열 식별 번호: 557의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
124.
재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이 핵산은 다음을 포함한다:
(a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며;
(b) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 있고;
(c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 B8R 유전자내 결손 좌에 있고; 그리고
(d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 상류에 있고;
이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다:
(i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터이며;
(ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 F17R 프로모터이며; 그리고
(iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 또는 B19R 프로모터다.
125.
구체예 124의 핵산, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다.
126.
구체예 125의 핵산, 이때 B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
127.
구체예 124-126중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 또는 H5R 후기 프로모터다.
128.
구체예 127의 핵산, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 및 H5R 후기 프로모터다.
129.
구체예 128의 핵산, 이때 H5R 조기 프로모터는 서열 식별 번호: 553의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, H5R 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 554의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
130.
구체예 124-129중 임의의 하나의 구체예의 핵산, F17R 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 563의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
131.
재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이 핵산은 다음을 포함한다:
(a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며;
(b) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 있고;
(c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 B8R 유전자내 결손 좌에 있고; 그리고
(d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 하류에 있고;
이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다:
(i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터이며;
(ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 F17R 프로모터이며; 그리고
(iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 또는 B19R 프로모터다.
132.
구체예 131의 핵산, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다.
133.
구체예 132의 핵산, 이때 B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
134.
구체예 131-133중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 또는 H5R 후기 프로모터다.
135.
구체예 134의 핵산, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 및 H5R 후기 프로모터다.
136.
구체예 135의 핵산, 이때 H5R 조기 프로모터는 서열 식별 번호: 553의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, H5R 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 554의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
137.
구체예 131-136중 임의의 하나의 구체예의 핵산, F17R 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 563의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
138.
재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이 핵산은 다음을 포함한다:
(a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며;
(b) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 있고;
(c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 B8R 유전자내 결손 좌에 있고; 그리고
(d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 상류에 있고;
이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다:
(i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터이며;
(ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 F17R 프로모터이며; 그리고
(iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 또는 B19R 프로모터다.
139.
구체예 138의 핵산, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다.
140.
구체예 139의 핵산, 이때 B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
141.
구체예 138-140중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 또는 H5R 후기 프로모터다.
142.
구체예 141의 핵산, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 및 H5R 후기 프로모터다.
143.
구체예 142의 핵산, 이때 H5R 조기 프로모터는 서열 식별 번호: 553의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, H5R 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 554의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
144.
구체예 138-143중 임의의 하나의 구체예의 핵산, F17R 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 563의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
145.
재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이 핵산은 다음을 포함한다:
(a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며;
(b) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 있고;
(c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 B8R 유전자내 결손 좌에 있고; 그리고
(d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 하류에 있고;
이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다:
(i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터이며;
(ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 F17R 프로모터이며; 그리고
(iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다.
146.
구체예 145의 핵산, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다.
147.
구체예 146의 핵산, 이때 B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
148.
구체예 145-147중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 또는 H5R 후기 프로모터다.
149.
구체예 148의 핵산, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 및 H5R 후기 프로모터다.
150.
구체예 149의 핵산, 이때 H5R 조기 프로모터는 서열 식별 번호: 553의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, H5R 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 554의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
151.
구체예 145-150중 임의의 하나의 구체예의 핵산, F17R 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 563의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
152.
재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이 핵산은 다음을 포함한다:
(a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며;
(b) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 있고;
(c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 B8R 유전자내 결손 좌에 있고; 그리고
(d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 상류에 있고;
이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다:
(i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터이며;
(ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 후기 프로모터이며; 그리고
(iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 E3L 프로모터다.
153.
구체예 152의 핵산, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 또는 H5R 후기 프로모터다.
154.
구체예 153의 핵산, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 및 H5R 후기 프로모터다.
155.
구체예 154의 핵산, 이때 H5R 조기 프로모터는 서열 식별 번호: 553의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, H5R 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 554의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
156.
구체예 152-155중 임의의 하나의 구체예의 핵산, E3L 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 567의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
157.
재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이 핵산은 다음을 포함한다:
(a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며;
(b) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 있고;
(c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 B8R 유전자내 결손 좌에 있고; 그리고
(d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 하류에 있고;
이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다:
(i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터이며;
(ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 후기 프로모터이며; 그리고
(iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 E3L 프로모터다.
158.
구체예 157의 핵산, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 또는 H5R 후기 프로모터다.
159.
구체예 158의 핵산, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 및 H5R 후기 프로모터다.
160.
구체예 159의 핵산, 이때 H5R 조기 프로모터는 서열 식별 번호: 553의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, H5R 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 554의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
161.
구체예 157-160중 임의의 하나의 구체예의 핵산, E3L 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 567의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
162.
재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이 핵산은 다음을 포함한다:
(a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며;
(b) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 있고;
(c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 B8R 유전자내 결손 좌에 있고; 그리고
(d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 상류에 있고;
이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다:
(i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터이며;
(ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 후기 프로모터이며; 그리고
(iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 E3L 프로모터다.
163.
구체예 162의 핵산, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 또는 H5R 후기 프로모터다.
164.
구체예 163의 핵산, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 및 H5R 후기 프로모터다.
165.
구체예 164의 핵산, 이때 H5R 조기 프로모터는 서열 식별 번호: 553의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, H5R 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 554의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
166.
구체예 162-165중 임의의 하나의 구체예의 핵산, E3L 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 567의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
167.
재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이 핵산은 다음을 포함한다:
(a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며;
(b) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 있고;
(c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 B8R 유전자내 결손 좌에 있고; 그리고
(d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 하류에 있고;
이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다:
(i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터이며;
(ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 후기 프로모터이며; 그리고
(iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 E3L 프로모터다.
168.
구체예 167의 핵산, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 또는 H5R 후기 프로모터다.
169.
구체예 168의 핵산, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 및 H5R 후기 프로모터다.
170.
구체예 169의 핵산, 이때 H5R 조기 프로모터는 서열 식별 번호: 553의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, H5R 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 554의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
171.
구체예 167-170중 임의의 하나의 구체예의 핵산, E3L 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 567의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
172.
재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이 핵산은 다음을 포함한다:
(a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며;
(b) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 있고;
(c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 B8R 유전자내 결손 좌에 있고; 그리고
(d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 상류에 있고;
이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다:
(i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 pS 프로모터이며;
(ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 F17R 프로모터이며; 그리고
(iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 E3L 프로모터다.
173.
구체예 172의 핵산, 이때 pS의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 555, 서열 식별 번호: 556, 또는 서열 식별 번호: 557의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
174.
구체예 172 또는 173의 핵산, 이때 F17R 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 563의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
175.
구체예 172-174중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 E3L 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 567의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
176.
재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이 핵산은 다음을 포함한다:
(a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며;
(b) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 있고;
(c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 B8R 유전자내 결손 좌에 있고; 그리고
(d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 하류에 있고;
이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다:
(i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 pS 프로모터이며;
(ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 F17R 프로모터이며; 그리고
(iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 E3L 프로모터다.
177.
구체예 176의 핵산, 이때 pS의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 555, 서열 식별 번호: 556, 또는 서열 식별 번호: 557의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
178.
구체예 176 또는 177의 핵산, 이때 F17R 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 식별 번호: 563의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
179.
구체예 176-178중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 E3L 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 식별 번호: 567의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
180.
재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이 핵산은 다음을 포함한다:
(a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며;
(b) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 있고;
(c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 B8R 유전자내 결손 좌에 있고; 그리고
(d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 상류에 있고;
이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다:
(i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 pS 프로모터이며;
(ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 F17R 프로모터이며; 그리고
(iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 E3L 프로모터다.
181.
구체예 180의 핵산, 이때 pS의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 555, 서열 식별 번호: 556, 또는 서열 식별 번호: 557의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
182.
구체예 170 또는 181의 핵산, 이때 F17R 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 식별 번호: 563의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
183.
구체예 180-182중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 E3L 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 식별 번호: 567의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
184.
재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이 핵산은 다음을 포함한다:
(a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며;
(b) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 있고;
(c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 B8R 유전자내 결손 좌에 있고; 그리고
(d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 하류에 있고;
이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다:
(i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 pS 프로모터이며;
(ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 F17R 프로모터이며; 그리고
(iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 E3L 프로모터다.
185.
구체예 184의 핵산, 이때 pS의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 555, 서열 식별 번호: 556, 또는 서열 식별 번호: 557의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
186.
구체예 174 또는 185의 핵산, 이때 F17R 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 식별 번호: 563의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
187.
구체예 184-186중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 E3L 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 식별 번호: 567의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
188.
구체예 1-187중 임의의 하나의 구체예의 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산을 포함하는 바이러스.
189.
구체예 1-187중 임의의 하나의 구체예의 핵산을 포함하는 패키징 세포주.
190.
구체예 188의 바이러스를 포함하는 패키징 세포주.
191.
구체예 188의 바이러스와 생리학적으로 수용가능한 담체를 포함하는 약제학적 조성물.
192.
구체예 1-187중 임의의 하나의 구체예의 핵산과, 이 핵산을 숙주 세포에서 발현시키기 위해 전술한 키트의 사용자에게 지침을 주는 포장 삽입물을 포함하는 키트.
193.
구체예 188의 바이러스와, 이 바이러스를 숙주 세포에서 발현시키기 위해 전술한 키트의 사용자에게 지침을 주는 포장 삽입물을 포함하는 키트.
194.
구체예 188의 바이러스, 그리고 치료요법적으로 유효량의 이 바이러스를 포유류 암 환자에게 투여하고, 이로 인하여 전술한 암을 치료하기 위해 사용자에게 지침을 주는 포장 삽입물을 포함하는 키트.
195.
구체예 194의 키트, 이때 상기 포유류 환자는 인간 환자이다.
196.
포유류 환자에서 암을 치료하는 방법, 상기 방법은 이 포유류 환자에게 구체예 188의 바이러스의 치료요법적으로 유효량을 투여하는 것을 포함한다.
197.
포유류 환자에서 암을 치료하는 방법, 상기 방법은 이 포유류 환자에게 구체예 191의 약제학적 조성물의 치료요법적으로 유효량을 투여하는 것을 포함한다.
198.
구체예 196 또는 197의 방법, 이때 상기 포유류 환자는 인간 환자다.
199.
구체예 196-198중 임의의 하나의 구체예의 방법, 이때 암은 백혈병, 림프종, 간암, 뼈암, 폐암, 뇌암, 방광암, 위장암, 유방암, 심장암, 자궁경부암, 자궁암, 두경부암, 담낭암, 후두암, 입술 및 구강암, 안구암, 흑색종, 췌장암, 전립선암, 결장직장암, 고환암, 그리고 인후암으로 구성된 군에서 선택된다.
200.
구체예 199의 방법, 이때 상기 방법은 상기 포유류 환자에게 항-PD1 항체 또는 항-PD-L1 항체를 투여하는 것을 더 포함한다.
5.7.5. 세트 5
1.
재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이 핵산은 다음을 포함한다:
(a) 다음 유전자들에서 결손: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B8R, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R;
(b) 3'역전된 말단 반복 (ITR)에서 다음 유전자들에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R; 그리고
(c)세포독성 T-림프구 연합된 단백질 4 (CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자;
이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이다.
2.
구체예 1의 핵산, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함한다.
3.
구체예 2의 핵산, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터, pS 프로모터, 또는 LEO 프로모터다.
4.
구체예 2의 핵산, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터다.
5.
재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이 핵산은 다음을 포함한다:
(a) 다음 유전자들 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서 결손, 그리고 B8R 유전자에서 임의선택적으로 결손;
(b) 3'ITR의 다음 유전자에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R;
(c) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자; 그리고
(d) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터, pS 프로모터, 또는 LEO 프로모터이며;
이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이다.
6.
구체예 5의 핵산, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터다.
7.
구체예 1-6중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있다.
8.
구체예 1-7중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 211에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는 아미노산 서열을 인코드한다
9.
구체예 1-8중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시된 서열을 포함한다.
10.
구체예 1-8중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시된다.
11.
재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이 핵산은 다음을 포함한다:
(a) 다음 유전자들에서 결손: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B8R, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R;
(b) 3'ITR의 다음 유전자에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R; 그리고
(c) 인터루킨 12 (IL-12) 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자;
이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이다.
12.
구체예 11의 핵산, 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함한다.
13.
구체예 12의 핵산, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 후기 프로모터다.
14.
구체예 13의 핵산, 이때 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열, F17R 프로모터, 또는 D13L 프로모터를 포함한다.
15.
구체예 13의 핵산, 이때 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
16.
재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이 핵산은 다음을 포함한다:
(a) 다음 유전자들 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서 결손, 그리고 B8R 유전자에서 임의선택적으로 결손;
(b) 3'ITR의 다음 유전자에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R;
(c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자; 그리고
(d) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 후기 프로모터이며;
이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이다.
17.
구체예 16의 핵산, 이때 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열, F17R 프로모터, 또는 D13L 프로모터를 포함한다.
18.
구체예 16의 핵산, 이때 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
19.
구체예 11-18중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있다.
20.
구체예 11-19중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 IL-12 폴리펩티드는 막-결합된다.
21.
구체예 11-20중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 IL-12 폴리펩티드는 IL-12 p35 또는 IL-12 p70을 포함한다.
22.
구체예 11-21중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 IL-12 폴리펩티드는 서열 식별 번호: 212로 제시된 아미노산 서열을 포함한다.
23.
구체예 11-22중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시된 서열을 포함한다.
24.
구체예 11-22중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시된다.
25.
재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이 핵산은 다음을 포함한다:
(a) 다음 유전자들 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B8R, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서 결손;
(b) 3'ITR의 다음 유전자에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R; 그리고
(c) FMS-유사 티로신 키나제 3 리간드 (FLT3L)를 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자;
이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이다.
26.
구체예 25의 핵산, 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함한다.
27.
구체예 26의 핵산, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터, B19R 프로모터, E3L 프로모터, F11L 프로모터, 또는 B2R 프로모터다.
28.
구체예 26의 핵산, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터다.
29.
구체예 26의 핵산, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B19R 프로모터다.
30.
구체예 26의 핵산, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다.
31.
재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이 핵산은 다음을 포함한다:
(a) 다음 유전자들 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서 결손, 그리고 B8R 유전자에서 임의선택적으로 결손;
(b) 3'ITR의 다음 유전자에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R;
(c) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자; 그리고
(d) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터, B19R 프로모터, E3L 프로모터, F11L 프로모터, 또는 B2R 프로모터이며;
이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이다.
32.
구체예 31의 핵산, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터다.
33.
구체예 31의 핵산, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B19R 프로모터다.
34.
구체예 31의 핵산, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다.
35.
구체예 25-34중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있다.
36.
구체예 25-35중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 FLT3L은 서열 식별 번호: 213으로 제시된 아미노산 서열을 포함한다.
37.
구체예 25-36중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시된 서열을 포함한다.
38.
구체예 25-36중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시된다.
39.
재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이 핵산은 다음을 포함한다:
(a) 다음 유전자들 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B8R, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서 결손;
(b) 3'ITR의 다음 유전자에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R;
(c) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자; 그리고
(d) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자;
이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이다.
40.
구체예 39의 핵산, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함한다.
41.
구체예 40의 핵산, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터, pS 프로모터, 또는 LEO 프로모터다.
42.
구체예 40의 핵산, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터다.
43.
구체예 39-42중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함한다.
44.
구체예 43의 핵산, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 후기 프로모터다.
45.
구체예 44의 핵산, 이때 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열, F17R 프로모터, 또는 D13L 프로모터를 포함한다.
46.
구체예 44의 핵산, 이때 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
47.
재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이 핵산은 다음을 포함한다:
(a) 다음 유전자들 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서 결손, 그리고 B8R 유전자에서 임의선택적으로 결손;
(b) 3'ITR의 다음 유전자에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R;
(c) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자; 그리고
(d) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자;
이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이고; 그리고
이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다:
(i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터, pS 프로모터, 또는 LEO 프로모터이며; 및/또는
(ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 후기 프로모터다.
48.
구체예 47을 포함하는 핵산, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터다.
49.
구체예 47 또는 48을 포함하는 핵산, 이때 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열, F17R 프로모터, 또는 D13L 프로모터를 포함한다.
50.
구체예 47 또는 48의 핵산, 이때 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
51.
구체예 39-50중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있다.
52.
구체예 39-51중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 IL-12 폴리펩티드는막-결합된다.
53.
구체예 39-52중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 IL-12 폴리펩티드는 IL-12 p35 또는 IL-12 p70을 포함한다.
54.
구체예 39-53중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 211으로 제시된 아미노산 서열을 포함하는 아미노산 서열을 인코드한다.
55.
구체예 39-54중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시된 서열을 포함한다.
56.
구체예 39-54중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시된다.
57.
구체예 39-56중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 IL-12 폴리펩티드는 서열 식별 번호: 212로 제시된 아미노산 서열을 포함한다.
58.
구체예 39-57중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시된 서열을 포함한다.
59.
구체예 39-57중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시된다.
60.
재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이 핵산은 다음을 포함한다:
(a) 다음 유전자들 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B8R, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서 결손;
(b) 3'ITR에서 다음 유전자에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R;
(c) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자; 그리고
(d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자;
이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이다.
61.
구체예 60의 핵산, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함한다.
62.
구체예 61의 핵산, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터, pS 프로모터, 또는 LEO 프로모터다.
63.
구체예 61의 핵산, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터다.
64.
구체예 60-63중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함한다.
65.
구체예 64의 핵산, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터, B19R 프로모터, E3L 프로모터, F11L 프로모터, 또는 B2R 프로모터다.
66.
구체예 64의 핵산, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터다.
67.
구체예 64의 핵산, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B19R 프로모터다.
68.
구체예 64의 핵산, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다.
69.
재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이 핵산은 다음을 포함한다:
(a) 다음 유전자들 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서 결손, 그리고 B8R 유전자에서 임의선택적으로 결손;
(b) 3'ITR에서 다음 유전자에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R;
(c) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자; 그리고
(d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자;
이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이고; 그리고
이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다:
(i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터, pS 프로모터, 또는 LEO 프로모터이며; 및/또는
(ii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터, B19R 프로모터, E3L 프로모터, F11L 프로모터, 또는 B2R 프로모터다.
70.
구체예 69의 핵산, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터다.
71.
구체예 69 또는 70의 핵산, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터다.
72.
구체예 69 또는 70의 핵산, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B19R 프로모터다.
73.
구체예 69 또는 70의 핵산, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다.
74.
구체예 60-73중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있다.
75.
구체예 60-74중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 211으로 제시된 아미노산 서열을 포함하는 아미노산 서열을 인코드한다.
76.
구체예 60-75중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시된 서열을 포함한다.
77.
구체예 60-75중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시된다.
78.
구체예 60-77중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 FLT3L은 서열 식별 번호: 213으로 제시된 아미노산 서열을 포함한다.
79.
구체예 60-78중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시된 서열을 포함한다.
80.
구체예 60-78중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시된다.
81.
재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이 핵산은 다음을 포함한다:
(a) 다음 유전자들 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B8R, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서 결손;
(b) 3'ITR에서 다음 유전자에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R;
(c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자; 그리고
(d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자;
이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이다.
82.
구체예 81의 핵산, 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함한다.
83.
구체예 82의 핵산, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 후기 프로모터다.
84.
구체예 83의 핵산, 이때 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열, F17R 프로모터, 또는 D13L 프로모터를 포함한다.
85.
구체예 83의 핵산, 이때 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
86.
구체예 81-85중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함한다.
87.
구체예 86의 핵산, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터, B19R 프로모터, E3L 프로모터, F11L 프로모터, 또는 B2R 프로모터다.
88.
구체예 86의 핵산, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터다.
89.
구체예 86의 핵산, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B19R 프로모터다.
90.
구체예 86의 핵산, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다.
91.
재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이 핵산은 다음을 포함한다:
(a) 다음 유전자들 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서 결손, 그리고 B8R 유전자에서 임의선택적으로 결손;
(b) 3'ITR에서 다음 유전자에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R;
(c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자; 그리고
(d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자;
이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이고; 그리고
이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다:
(i) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 후기 프로모터이며; 및/또는
(ii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터, B19R 프로모터, E3L 프로모터, F11L 프로모터, 또는 B2R 프로모터다.
92.
구체예 91의 핵산, 이때 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열, F17R 프로모터, 또는 D13L 프로모터를 포함한다.
93.
구체예 91의 핵산, 이때 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
94.
구체예 91-93중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터다.
95.
구체예 91-93중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B19R 프로모터다.
96.
구체예 91-93중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다.
97.
구체예 81-96중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 유전자와 동일한 방향으로 있다.
98.
구체예 81-97중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 IL-12 폴리펩티드는 막-결합된다.
99.
구체예 81-98중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 IL-12 폴리펩티드는 IL-12 p35 또는 IL-12 p70을 포함한다.
100.
구체예 81-99중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 IL-12 폴리펩티드는 서열 식별 번호: 212로 제시된 아미노산 서열을 포함한다.
101.
구체예 81-100중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시된 서열을 포함한다.
102.
구체예 81-100중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시된다.
103.
구체예 81-102중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 FLT3L은 서열 식별 번호: 213으로 제시된 아미노산 서열을 포함한다.
104.
구체예 81-103중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시된 서열을 포함한다.
105.
구체예 81-103중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시된다.
106.
재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이 핵산은 다음을 포함한다:
(a) 다음 유전자들 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B8R, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서 결손;
(b) 3'ITR에서 다음 유전자에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R;
(c) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자;
(d) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자; 그리고
(e) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자;
이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이다.
107.
구체예 106의 핵산, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함한다.
108.
구체예 107의 핵산, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터, pS 프로모터, 또는 LEO 프로모터다.
109.
구체예 107의 핵산, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터다.
110.
구체예 106-109중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함한다.
111.
구체예 110의 핵산, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 후기 프로모터다.
112.
구체예 111의 핵산, 이때 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열, F17R 프로모터, 또는 D13L 프로모터를 포함한다.
113.
구체예 111의 핵산, 이때 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
114.
구체예 106-113중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함한다.
115.
구체예 114의 핵산, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터, B19R 프로모터, E3L 프로모터, F11L 프로모터, 또는 B2R 프로모터다.
116.
구체예 114의 핵산, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터다.
117.
구체예 114의 핵산, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B19R 프로모터다.
118.
구체예 114의 핵산, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다.
119.
재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이 핵산은 다음을 포함한다:
(a) 다음 유전자들 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서 결손, 그리고 B8R 유전자에서 임의선택적으로 결손;
(b) 3'ITR에서 다음 유전자에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R;
(c) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자;
(d) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자; 그리고
(e) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자;
이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이고; 그리고
이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다:
(i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터, pS 프로모터, 또는 LEO 프로모터이며;
(ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 후기 프로모터이며; 및/또는
(iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터, B19R 프로모터, E3L 프로모터, F11L 프로모터, 또는 B2R 프로모터다.
120.
구체예 119의 핵산, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터다.
121.
구체예 119 또는 120의 핵산, 이때 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열, F17R 프로모터, 또는 D13L 프로모터를 포함한다.
122.
구체예 119 또는 120의 핵산, 이때 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열를 포함한다.
123.
구체예 119-122중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터다.
124.
구체예 119-122중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B19R 프로모터다.
125.
구체예 119-122중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다.
126.
구체예 106-125중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있다.
127.
구체예 106-126중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 IL-12 폴리펩티드는 막-결합된다.
128.
구체예 106-127중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 IL-12 폴리펩티드는 IL-12 p35 또는 IL-12 p70을 포함한다.
129.
구체예 106-128중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 211으로 제시된 아미노산 서열을 포함하는 아미노산 서열을 인코드한다.
130.
구체예 106-129중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시된 서열을 포함한다.
131.
구체예 106-129중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시된다.
132.
구체예 106-131중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 IL-12 폴리펩티드는 서열 식별 번호: 212로 제시된 아미노산 서열을 포함한다.
133.
구체예 106-132중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시된 서열을 포함한다.
134.
구체예 106-132중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시된다.
135.
구체예 106-134중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 FLT3L은 서열 식별 번호: 213으로 제시된 아미노산 서열을 포함한다.
136.
구체예 106-135중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시된 서열을 포함한다.
137.
구체예 106-135중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시된다.
138.
구체예 106-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재한다.
139.
구체예 138의 핵산, 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 상류에 있다.
140.
구체예 1-10, 39-80, 그리고 106-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
141.
구체예 11-24, 39-59, 그리고 81-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
142.
구체예 25-38 및 60-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
143.
구체예 1-10, 39-80, 그리고 106-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재한다.
144.
구체예 11-24, 39-59, 그리고 81-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재한다.
145.
구체예 25-38 및 60-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재한다.
146.
구체예 1-10, 39-80, 그리고 106-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
147.
구체예 11-24, 39-59, 그리고 81-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
148.
구체예 25-38 및 60-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
149.
구체예 39-59 및 106-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
150.
구체예 39-59 및 106-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재한다.
151.
구체예 39-59 및 106-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
152.
구체예 60-80 및 106-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
153.
구체예 60-80 및 106-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재한다.
154.
구체예 60-80 및 106-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
155.
구체예 81-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
156.
구체예 81-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재한다.
157.
구체예 81-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
158.
구체예 39-59 및 106-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재한다.
159.
구체예 39-59 및 106-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재한다.
160.
구체예 60-80 및 106-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재한다.
161.
구체예 60-80 및 106-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재한다.
162.
구체예 81-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재한다.
163.
구체예 81-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재한다.
164.
구체예 39-59 및 106-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
165.
구체예 39-59 및 106-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
166.
구체예 60-80 및 106-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
167.
구체예 60-80 및 106-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
168.
구체예 81-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
169.
구체예 81-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
170.
구체예 39-59 및 106-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
171.
구체예 39-59 및 106-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
172.
구체예 60-80 및 106-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
173.
구체예 60-80 및 106-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
174.
구체예 81-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
175.
구체예 81-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
176.
구체예 106-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
177.
구체예 106-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재한다.
178.
구체예 106-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
179.
구체예 106-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재한다.
180.
구체예 106-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재한다.
181.
구체예 106-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재한다.
182.
구체예 106-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재한다.
183.
구체예 106-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재한다.
184.
구체예 106-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재한다.
185.
구체예 106-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
186.
구체예 106-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
187.
구체예 106-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
188.
구체예 106-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
189.
구체예 106-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
190.
구체예 106-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
191.
구체예 106-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
192.
구체예 106-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
193.
구체예 106-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
194.
구체예 106-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
195.
구체예 106-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
196.
구체예 106-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
197.
구체예 106-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
198.
구체예 106-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
199.
구체예 106-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
200.
구체예 106-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
201.
구체예 106-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
202.
구체예 106-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
203.
구체예 1-202중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 B8R 유전자내 결손은 B8R 유전자 결손 서열의 적어도 50%의 결손이다.
204.
구체예 1-202중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 B8R 유전자내 결손은 B8R 유전자 결손 서열의 적어도 60%의 결손이다.
205.
구체예 1-202중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 B8R 유전자내 결손은 B8R 유전자 결손 서열의 적어도 70%의 결손이다.
206.
구체예 1-202중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 B8R 유전자내 결손은 B8R 유전자 결손 서열의 적어도 80%의 결손이다.
207.
구체예 1-202중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 B8R 유전자내 결손은 B8R 유전자 결손 서열의 약 75%의 결손이다.
208.
구체예 1-202중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 B8R 유전자내 결손은 B8R 유전자 결손 서열의 약 80%의 결손이다.
209.
구체예 1-208중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈은 Copenhagen 균주 백시니아 바이러스의 게놈으로부터 유래된다.
210.
재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이 핵산은 다음을 포함한다:
(a) 다음 유전자들 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서 결손, 그리고 B8R 유전자에서 임의선택적으로 결손;
(b) 3'ITR에서 다음 유전자에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R;
(c) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자;
(d) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자; 그리고
(e) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자;
이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이고; 그리고
이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다:
(i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터이며;
(ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 후기 프로모터이며; 그리고
(iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다.
211.
구체예 210의 핵산, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있다.
212.
구체예 210 또는 211의 핵산, 이때 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재한다.
213.
구체예 210 또는 211의 핵산, 이때 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재한다.
214.
구체예 212 또는 213의 핵산, 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 상류에 있다.
215.
구체예 212 또는 213의 핵산, 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 하류에 있다.
216.
재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이 핵산은 다음을 포함한다:
(a) 다음 유전자들 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서 결손, 그리고 B8R 유전자에서 임의선택적으로 결손;
(b) 3'ITR에서 다음 유전자에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R;
(c) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 이때 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고;
(d) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 이때 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고; 그리고
(e) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 상류에 있고;
이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이고; 그리고
이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다:
(i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터이며;
(ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 후기 프로모터이며; 그리고
(iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다.
217.
재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이 핵산은 다음을 포함한다:
(a) 다음 유전자들 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서 결손, 그리고 B8R 유전자에서 임의선택적으로 결손;
(b) 3'ITR에서 다음 유전자에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R;
(c) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 이때 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고;
(d) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 이때 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고; 그리고
(e) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자;
이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이고, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 하류에 있고; 그리고
이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다:
(i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터이며;
(ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 후기 프로모터이며; 그리고
(iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다.
218.
재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이 핵산은 다음을 포함한다:
(a) 다음 유전자들 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서 결손, 그리고 B8R 유전자에서 임의선택적으로 결손;
(b) 3'ITR에서 다음 유전자에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R;
(c) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 이때 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재하고;
(d) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 이때 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고; 그리고
(e) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자;
이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이고, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 상류에 있고; 그리고
이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다:
(i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터이며;
(ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 후기 프로모터이며; 그리고
(iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다.
219.
재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이 핵산은 다음을 포함한다:
(a) 다음 유전자들 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서 결손, 그리고 B8R 유전자에서 임의선택적으로 결손;
(b) 3'ITR에서 다음 유전자에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R;
(c) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 이때 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재하고;
(d) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 이때 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고; 그리고
(e) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자;
이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이고, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 하류에 있고; 그리고
이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다:
(i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터이며;
(ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 후기 프로모터이며; 그리고
(iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다.
220.
구체예 1-219중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈은 서열 식별 번호: 624의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
221.
구체예 1-105중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈은 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
222.
구체예 1-221중 임의의 하나의 구체예의 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산을 포함하는 바이러스.
223.
구체예 1-221중 임의의 하나의 구체예의 핵산을 포함하는 패키징 세포주.
224.
구체예 222의 바이러스를 포함하는 패키징 세포주.
225.
구체예 222의 바이러스와 생리학적으로 수용가능한 담체를 포함하는 약제학적 조성물.
226.
구체예 1-221중 임의의 하나의 구체예의 핵산과, 이 핵산을 숙주 세포에서 발현시키기 위해 전술한 키트의 사용자에게 지침을 주는 포장 삽입물을 포함하는 키트.
227.
구체예 222의 바이러스와, 이 바이러스를 숙주 세포에서 발현시키기 위해 전술한 키트의 사용자에게 지침을 주는 포장 삽입물을 포함하는 키트.
228.
구체예 222의 바이러스, 그리고 치료요법적으로 유효량의 이 바이러스를 포유류 암 환자에게 투여하고, 이로 인하여 전술한 암을 치료하기 위해 사용자에게 지침을 주는 포장 삽입물을 포함하는 키트.
229.
구체예 228의 키트, 이때 상기 포유류 환자는 인간 환자이다.
230.
포유류 환자에서 암을 치료하는 방법, 상기 방법은 이 포유류 환자에게 구체예 222의 바이러스의 치료요법적으로 유효량을 투여하는 것을 포함한다.
231.
포유류 환자에서 암을 치료하는 방법, 상기 방법은 이 포유류 환자에게 구체예 225의 약제학적 조성물의 치료요법적으로 유효량을 투여하는 것을 포함한다.
232.
구체예 230 또는 231의 방법, 이때 상기 포유류 환자는 인간 환자다.
233.
구체예 230-232중 임의의 하나의 구체예의 방법, 이때 암은 백혈병, 림프종, 간암, 뼈암, 폐암, 뇌암, 방광암, 위장암, 유방암, 심장암, 자궁경부암, 자궁암, 두경부암, 담낭암, 후두암, 입술 및 구강암, 안구암, 흑색종, 췌장암, 전립선암, 결장직장암, 고환암, 그리고 인후암으로 구성된 군에서 선택된다.
234.
구체예 230-233의 방법, 이때 상기 방법은 상기 포유류 환자에게 면역 체크포인트 억제제를 투여하는 것을 더 포함한다.
235.
구체예 234의 방법, 이때 상기 면역 체크포인트 억제제는 OX40 리간드, ICOS 리간드, 항-CD47 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-CD40/CD40L 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-Lag3 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-PD-L1 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-PD1 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 그리고 항-Tim-3 항체 또는 이의 항원-결합 단편으로 구성된 군에서 선택된다.
236.
구체예 234의 방법, 이때 상기 면역 체크포인트 억제제는 항-PD1 항체 또는 이의 항원-결합 단편 또는 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다.
237.
구체예 234의 방법, 이때 상기 면역 체크포인트 억제제는 항-PD1 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다.
238.
구체예 234의 방법, 이때 상기 면역 체크포인트 억제제는 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다.
239.
구체예 234의 방법, 이때 상기 면역 체크포인트 억제제는 항-PD-L1 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다.
240.
구체예 219-228중 임의의 구체예의 방법, 이때 상기 방법은 상기 포유류 환자에게 인터루킨을 투여하는 것을 더 포함한다.
241.
구체예 240의 방법, 이때 상기 인터루킨은 IL-1 알파, IL-1 베타, IL-2, IL-4, IL-7, IL-10, IL-12 p35, IL-12 p40, IL-12 p70, IL-15, IL-18, IL-21, 그리고 IL-23으로 구성된 군에서 선택된다.
242.
구체예 240의 방법, 이때 상기 인터루킨은 IL-12 p35, IL-12 p40, 그리고 IL-12 p70으로 구성된 군에서 선택된다.
243.
구체예 240-242중 임의의 구체예의 방법, 이때 상기 인터루킨은 막-결합된다.
244.
구체예 230-243중 임의의 구체예의 방법, 이때 상기 방법은 상기 포유류 환자에게 인터페론을 투여하는 것을 더 포함한다.
245.
구체예 244의 방법, 이때 상기 인터페론은 IFN-알파, IFN-베타, IFN-델타, IFN-입실론, IFN-타우, IFN-오메가, IFN-제타, 그리고 IFN-감마로 구성된 군에서 선택된다.
246.
구체예 230-245중 임의의 구체예의 방법, 이때 상기 방법은 상기 포유류 환자에게 사이토킨을 투여하는 것을 더 포함한다.
247.
구체예 246의 방법, 이때 상기 사이토킨은 TNF 수퍼패밀리 구성원 단백질이다.
248.
구체예 247의 방법, 이때 TNF 수퍼패밀리 구성원 단백질은 TRAIL, Fas 리간드, LIGHT (TNFSF-14), TNF-알파, 그리고 4-1BB 리간드로 구성된 군에서 선택된다.
249.
구체예 246의 방법, 이때 상기 사이토킨은 GM-CSF, Flt3 리간드, CD40 리간드, TGF-베타, VEGF-R2, 그리고 cKit로 구성된 군에서 선택된다.
250.
구체예 246의 방법, 이때 상기 사이토킨은 Flt3 리간드이다.
5.8. 본 출원에서 참조된 표 3-45
표 41. 유전자 정렬
선택 오르토폭스바이러스 유전자의 예시적인 정렬은 하기에서 보여준다. 5가지 백시니아 바이러스 균주, Copenhagen ("cop"), Western Reserver ("WR"), Tian Tan ("Tian"), Wyeth, 그리고 Lister의 다양한 유전자들은 다음과 같이 정렬된다:
6.
실시예
다음의 실시예들은 본 명세서에서 청구된 조성물 및 방법이 어떻게 수행되고, 제조되고, 평가되는 지에 대한 설명을 당업자에게 제공하기 위해 제시되며, 순전히 본 발명의 예시로써 의도된 것이며, 발명자들이 자신의 발명으로 간주하는 범위를 제한하고자 함은 아니다.
6.1. 실시예 1 - OncoVac의 발견
59가지 수두바이러스 균주의 개방 판독 프레임 (ORFs)을 오르소로스(orthologs)로 클러스터화시키고, 아미노산 수준에서 정렬했다 (계통발생학적 분석을 위해 도 1 참고). Bayesian 분석을 수행하여 모든 균주의 관련성을 결정했다. 수두바이러스는 유전자 함량과 숙주 범위가 매우 다양하다. 서로 상이한 몇 가지 자연 발생적 백시니아 야생형 균주들이 있다.
도 33은 다양한 수두바이러스 게놈에서 CopMD5p3p에서 결손된 유전자의 백분율을 나타낸다(표 2). 그래프의 각 점은 하나의 수두바이러스 게놈 게놈을 나타낸다. 상동성 검색은 Copenhagen 게놈의 표 2 유전자의 아미노산 서열로 다른 분기군(clades)의 수두바이러스에 대한 의문을 제기하는데 이용된다. 다른 수두 바이러스에 존재하는 결손된 유전자의 양은 이들의 개산(divergence)이 증가함에 따라 감소된다.
백시니아 야생형형 균주들을 동일한 플라크 형성 단위 수로 혼합하고, NGS (투입 풀)로 시퀀싱했다. 생성된 혼합물을 상이한 암 세포주에서 3 회 계대시켰다. 최종 모집단은 Illumina NGS 시퀀싱으로 시퀀싱되었다. 리드(Reads: 짧은 DNA 단편)은 서열 동일성을 기반으로 다양한 균주에 할당되었으며, 최종 집단에서 각 균주의 백분율을 계산하는 데 사용되었다. 상이한 종양 유형에서 5 가지 백시니아 바이러스를 계대한 후, 상이한 바이러스 균주의 풍성도는 도 2에 나타낸다. Copenhagen 균주는 다른 균주보다 더 자라고, 따라서 빨리 복제한다.
상이한 백시니아 야생형 균주 또한 낮은 PFU (1 x 104)로 다양한 환자 종양 코어를 감염시키는데 이용되었다. 각 균주는 평균 4 개의 리플리케이트(replicates)로 감염되며, 각 리플리케이트에는 2 x 2 mm 종양 코어 3개가 함유되어 있다. 복제는 바이러스 역가를 통해 평가되었고, 도 3에 나타낸 바와 같이 플라크 형성 단위 (PFU)로 표현된다. Copenhagen 균주코펜하겐 균주는 다른 균주보다 더 높은 역가로 성장하고, 따라서 환자의 생체-외 샘플에서 더 빠르게 자기복제된다. 환자의 생체-외 코어는 환자의 3D 종양의 우수한 모방체다.
그 다음, 백시니아 야생형 균주는 3% CMC 오버레이(overlay)된 U2-OS 세포 상에서 플라크 검정을 받았다. 감염-후 2일 차, 각 균주에 대해 20-30개 플라크의 크기를 측정하였다. Copenhagen, Western Reserve, Wyeth, Lister, 그리고 Tian Tan에 대한 플라크 크기 측정은 도 4에 나타낸다. 플라크 형성은 상기 바이러스가 복제, 확산 및 사멸 능력에 의해 영향을 받는다. Copenhagen 균주에 대해 관찰된 더 큰 플라크 크기는 이 균주가 종양용해성 바이러스의 발달에 중요한 이러한 능력에서 우월함을 시사한다.
마지막으로, 도 1의 59가지 모든 수두바이러스 게놈을 사용하여 ORF를 찾고, 오르소로그(orthologous) 그룹으로 클러스터링했다. Groups 함유하는 Copenhagen 유전자를 포함하는 그룹은 Copenhagen 게놈에서 유전자의 위치 (x 축) 및 그룹의 크기 (y 축)를 기반으로 플롯되었다. 59 종 모두 동일한 유전자를 공유할 때, 보존은 100%로 간주된다. 주요 결손 CopMD5p 및 CopMD3p의 일부인 유전자는 이들의 결손이 적합도(fitness)에 영향을 미치지 않기 때문에, 바이러스 복제에 덜 중요한 것으로 밝혀졌다.
기존에 특성화되지 않은 A47L 유전자를 삭제시킴으로써, 새로운 표현형이 발견되었다. A47L을 삭제하면 Copenhagen 바이러스가 더 큰 플라크를 생성하게 된다.
Illumina NGS 딥 시퀀싱(deep sequencing)으로 플라크 정제 과정에서 주요 결손의 존재가 드러났다. CopMD5p 및 CopMD3p는 정제된 플라크이었으며, 주요 게놈 결손을 품고 있는 것으로 밝혀진 클론을 나타낸다. 이들 2 개의 클론은 재조합을 유도하기 위해, 높은 MOI (MOI 10)에서 HeLa 세포의 단층을 공동-감염시키는 데 사용되었다. 무작위로 플라크를 찍어내기(picking)하고, PCR에 의해 이들 두 게놈 결손을 모두 포함하는 이중 결손된 CopMD5p3p의 존재가 드러났다 (도 5 참조). 따라서, 야생형 Copenhagen 집단에서 자연적으로 발생하는 두 개의 결손이 발견되었다. 이들 2개 결손이 복합되어, 정제되면 본원에서 "CopMD5p3p"로 지칭되는 복제되는 바이러스가 제공되며, 이들은 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자에서 결손, 뿐만 아니라 ITRs의 각 B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R 복사본에서 결손을 나타낸다. 본원에서 사용된 바와 같이, "CopWT"는 야생형 Copenhagen 백시니아 바이러스를 지칭하며, "CopMD5p"는 대표적인 5'유전자 (C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, 및 F3L)에 결손을 품고 있는 Copenhagen 백시니아 바이러스를 지칭하며, 그리고 "CopMD3p"는 대표적인 3'유전자 (B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R)에 결손을 품고 있으며, 뿐만 아니라 ITRs의 각 B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R 복사본에서 결손을 가지는 Copenhagen 백시니아 바이러스를 지칭한다.
6.2. 실시예 2 - 암 세포 사멸
암 세포를 24-웰 플레이트에서 4개 리플리케이트로 MOI (1 ~ 0.01) 범위에서 CopMD5p3p로 감염시켰다. 바이러스로 감염-후 2일차 시점에서 플레이트를 크리스탈 바이올렛로 착색시켰다. 크리스탈 바이올렛 착색은 SDS에 용해시키고, 분광광도법에 의해 판독되었다. 데이터는 감염되지 않은 세포의 흡광도 백분율로 표시된다 (도 6 참고). 이 데이터는 대부분의 암 세포주가 CopMD5p3p 바이러스에 노출되었을 때 더 빨리 죽는다는 것을 보여준다.
야생형 Copenhagen 백시니아 바이러스와 몇 가지 변형된 Copenhagen 백시니아 비리온이 다양한 암 세포주들에서 항-종양 면역 반응을 유도하고, 증식하는 능력을 또한 도 23, 24 및 26-32에서 나타낸다.
6.3. 실시예 3 - 암 세포에서 성장
4 개의 암 세포주를 24-웰 플레이트에서 낮은 MOI (0.001)로 3 중으로 CopMD5p3p로 감염시켰고, 서로 다른 시점에서 바이러스를 수집하고, 적정하였다. 시간 0h은 투입을 나타낸다. HeLa, 786-O, HT-29, 그리고 MCF7의 성장 곡선은 도 7에 나타낸다. 이 데이터는 변형된 CopMD5p3p 바이러스는 시험관 내에서 이들의 성장하는 능력이 손상되지 않음을 보여준다. 이것은 상기 바이러스가 인터페론 반응이 존재할 때 조차도 복제 컴피턴트임을 의미한다. 포유류 세포주에서 복제하는 능력은 또다른 중요한 장점을 제공한다. 이러한 바이러스들이 향상된 속도와 효율성으로 제조될 수 있다.
6.4. 실시예 4 - 환자 종양 샘플에서 성장
환자 종양 샘플은 수술 직후 채취하여, 2mm x 2mm 코어로 절단했다. 3 개의 코어는 야생형 Copenhagen 또는 CopMD5p3p의 소량의 바이러스 (1 x 10 4 PFU)로 감염되었다. 72h 후, 바이러스 생산량은 플라크 분석에 의해 평가되었고, 최종 바이러스 역가는 PFU로 표현되었다(도 8 참고). 이 데이터는 변형된 CopMD5p3p 바이러스가 새로운 환자 종양 샘플에서 복제할 수 있음을 보여준다. 환자 종양 샘플에서 복제는 환자 3D 종양에서 복제에 대한 우수한 모델이다.
6.5. 실시예 5 - U2-OS 세포에서 합포체
U2-OS 세포의 단층은 Copenhagen 야생형 또는 CopMD5p3p 바이러스로 감염되었다. 2h 후, 배지는 플라크 분석에서 수행된 바와 같이, 오버레이 배지로 변경되었다. 감염-후 48h 시점에서, 플라크 표현형을 평가하기 위해 EVOS로 사진을 찍었다 (도 9 참고). 합포체라고도 알려진 세포 융합은 감염되지 않은 세포가 감염된 세포와 합쳐지기 때문에, 바이러스 확산을 지원하는 것으로 생각된다. 추가적으로, 융합된 세포는 면역원성으로 밝혀졌고, 암세포의 경우 항-종양 면역 반응 시작에 도움이 될 수 있다.
6.6. 실시예 6 - 786-O 세포에서 합포체
786-O 세포의 단층은 Copenhagen 야생형 또는 CopMD5p3p 바이러스로 감염되었다. 24h 후, EVOS로 10X 확대로 사진 촬영했다(도 10 참고). 이것은 합포체 발생에 대한 추가 증거다. 도 9에서 플라크 표현형을 나타낸다. 현재 실험에서는 세포의 단층이 오버레이없이 감염되었다. CopMD5p3p 바이러스에 감염된 대부분의 세포는 융합되었다.
6.7. 실시예 7 - 마우스 모델에서 종양 제어 및 체중 감소
누드(Nude) CD-1 마우스에게 HT-29 인간 결장 암 이종이식편을 씨딩하였다. 피하 종양이 대략 5mm x 5mm 크기를 확립하면, 마우스를 정맥 내로 1 x 107 PFU의 백시니아 바이러스로 24h 간격으로 세 번 (점선) 처리했다. 마우스에서 종양 크기 및 체중 감소에 대해 거의 격일로 측정했다(도 11 참고). 이 실험은 CopMD5p3p가 면역력이 저하된 누드 마우스에서 체중 감소 또는 기타 질병 징후를 일으키지 않기 때문에 훨씬 더 안전한 바이러스임을 보여준다. 이 실험은 또한 CopMD5p3p가 부모계 Copenhagen 야생형 바이러스와 유사하게 종양 성장을 제어할 수 있음을 보여준다.
6.8. 실시예 8 - 수두 병변 형성
누드 CD-1 마우스를 1 x 107 PFU의 백시니아 바이러스로 정맥으로 1회 처리하였고, 각 그룹은 마우스가 6마리다. 치료-후 2주 시점에서, 마우스를 희생시키고, 꼬리 사진을 찍었다. 꼬리의 수두 병변은 모든 마우스 꼬리에서 수작업으로 계수되었다. 대표 사진은 도 12에 나타낸다. 이 실험은 CopMD5p3p가 면역력이 저하된 누드 마우스에서 수두 병변을 야기하지 않기 때문에 훨씬 더 안전한 바이러스임을 보여준다. 이는 이전의 종양용해성 백시니아 임상 데이터에서 치료시 수두 병변이 발생하는 환자를 보여주기 때문에 중요하다. 티미딘 키나제 (TK)의 녹아웃은 OV (종양용해성 바이러스)의 안전성을 높이는 인기 있는 방법으로, 현재 임상 III 상 종양용해성 백시니아와 FDA 승인된 종양용해성 T-Vec에 존재한다. 데이터는 TK의 결손이 이 분석에서 중요한 역할을 하지 않는다는 것을 보여주는데, 여기서 마우스는 TK가 결손된 바이러스에 감염되었을 때 수두 병변이 발생하지만, 그러나 무손상 TK를 보유한 CopMD5p3p에 의해서는 수두 병변이 발생되지 않는다는 것을 보여준다.
6.9. 실시예 9 - 전신 투여 후 백시니아의 IVIS 생체-분포
TK를 Fluc로 대체시킨 pSEM1 플라스미드에 의해 감염된 세포의 형질감염을 통하여 반딧불이 루시퍼라제(Fluc)를 발현시키도록, 백시니아 바이러스 야생형 Wyeth, 야생형 Copenhagen, 그리고 CopMD5p3p들이 공작되었다. 바이러스들은 플라크 정제되었고, 확장되었다. 모든 바이러스는 TK 녹-아웃이며, 이들의 TK 유전자좌에 기능성 Fluc가 인코드되어 있다.
그 다음 누드 CD-1 마우스에게 HT-29 인간 결장 암 이종이식편을 씨딩하였다. 피하 종양이 대략 5mm x 5mm 크기를 확립하면, 마우스를 정맥 내로 1e7 PFU의 백시니아 Fluc를 인코딩하는 바이러스로 처리했고, 그룹당 마우스는 4마리다. 치료-후 4 일 시점, 마우스에게 i.p.(복강 내) 루시페린을 주사하고, 바이러스의 존재 여부를 IVIS로 영상화하였다 (도 13 참고). 이 실험은 CopMD5p3p가 해당 종양에 더 특이적이기 때문에, 훨씬 더 안전한 바이러스임을 보여준다. 다른 바이러스는 꼬리, 근육, 발 및 비강-내에서 표적-외 복제를 보여준다. CopMD5p3p는 유일하게 상기 종양에 국소화된다. 기존 도 12 및 도 13에 나타낸 것과 같이, 다른 균주들과 비교하여, 꼬리에서 CopMD5p3p가 덜 검출된다. 도 14는 CopMD5p3p가 다른 종양용해성 백시 니아와 비교할 때 다른 장기 기관에서 더 낮은 역가를 갖는다는 것을 보여준다. CopMD5p3p는 종양의 다른 바이러스와 동일한 수준으로 복제되지만, 표적-외 조직에서는 덜 복제되므로, CopMD5p3p는 종양용해성 바이러스의 프로필에 더 적합하다.
야생형 Copenhagen 백시니아 바이러스와 몇 가지 변형된 Copenhagen 백시니아 비리온을 비롯한 다양한 백시니아 바이러스 벡터의 생체분포에 대한 추가 실시예는 도 25에 나타낸다.
6.10. 실시예 10 - 인간 PBMCs에서 백시니아의 면역원성
PBMCs는 건강한 인간 공여자(n = 2)의 혈액에서 단리되었다. PBMCs를 백시니아와 함께 24h 동안 배양하고, 유동세포분석(Flow Cytometry)을 사용하여 조기 활성화 마커를 확인했다(도 15 참고). 이 실험은 CopMD5p3p가 면역원성이 더 높고, 면역 세포에 의해 더 쉽게 검출된다는 것을 보여준다. 종양 조직에서 복제되는 OVs는 성공적인 항-종양 면역 반응을 위해 면역 세포를 활성화시켜야 하기 때문에, 이것이 바람직한 속성이라고 우리는 믿는다.
6.11. 실시예 11 - 마우스 비장세포에서 백시니아의 면역원성
면역 컴피턴트 Balb/C 마우에게 1e7 백시니아 PFU 백시니아 바이러스를 정맥으로 주사하였다. 1 ~ 2 일 후, 마우스를 희생시키고, 비장을 수거하고, 유동세포 분석을 사용하여 면역 활성화를 분석했다 (도 16 참고). 이 실험은 CopMD5p3p가 면역원성이 더 높고, 마우스 면역 세포에 의해 더 쉽게 검출된다는 것을 보여준다. 이 데이터는 대부분의 생체 내 실험이 마우스에서 수행되기 때문에 이전의 기존 도 15를 훌륭하게 보완한다.
6.12. 실시예 12 - 인간 세포에서 백시니아의 면역원성
인간 암 세포 786-O에 MOI 0.01에서 바이러스를 감염시켰다. 다음날, 세포를 수거하고, 세포 분획화(fractionation)을 통해 핵과 세포질을 분리하였다. 각 분획으로부터 단백질을 추출하고, NF-kB 하위단위 p65 및 p50에 대해 블롯팅했다 (도 17 참고). NF-kB 면역 전사 인자는 이의 하위단위 p65 및 p50이 핵으로 전좌되면 면역 반응을 시작했다. 일부 바이러스는 면역억제성이며, 이러한 전좌를 차단시켜, 면역 반응을 막는다. NF-kB 기능을 억제하는 것은 면역치료요법적 접근법과 함께 종양용해성 바이러스를 사용하려는 목표에 반-직관적(intuitive)이다. 따라서, CopMD5p3p는 MG-1과 유사하게 거동하기 때문에, 더 유리한 바이러스다.
6.13. 실시예 13 - 공격적 흑색종 모델에서 면역 체크포인트 억제제 항-CTLA-4 항체와의 시너지 효과
면역 컴피턴트 C57BL/6 마우스에게 B16-F10 흑색종 종양을 피하로 씨딩하였다(5x105 세포). 치료는 피하 종양이 대략 5mm x 5mm 크기를 형성하면 시작되었다. CopMD5p3p 바이러스로 처리된 마우스는 하루 간격으로 1e7 PFU 용량을 3회 종양 (종양-내)에 투여했다. 항 -CTLA-4로 처리된 마우스는 하루 간격으로 5 회의 100ug 용량의 항체를 i.p.로 제공받았다. 치료가 시작되면, 격일로 생존을 기록했다(도 18 참고). 이 실험에서 우리는 CopMD5p3p 바이러스의 종양용해 효과가 매우 공격적인 흑색종 뮤린 모델에서 잘-알려진 체크포인트 억제제 CTLA-4와 시너지 효과를 낼 수 있는지 테스트했다. 바이러스와 체크 포인트로 처리된 마우스의 중앙 생존율은 임의의 다른 그룹보다 높았다. 이것은 CopMD5p3p가 체크포인트 차단 면역요법과 시너지 효과를 내는 몇 가지 자극 속성을 가지고 있음을 시사한다.
6.14. 실시예 14 - 면역 체크포인트 억제제 항-CTLA-4 항체와의 시너지 효과
면역 컴피턴트 Balb/C 마우스에게 피하로 CT26-LacZ 종양을 씨딩했다(5 x 105 세포). 치료는 피하 종양이 대략 5mm x 5mm 크기를 형성하면 시작되었다. 백시니아 바이러스로 처리된 마우스에게 상기 종양 안으로(종양-내) 1e7 PFU 투여량을 3회 투여했다 (24h 간격, 첫 3개 점선). 항-CTLA-4로 처리된 마우스는 100ug 용량의 항체를 i.p로 5 회 (24h 간격, 점선) 제공받았다. 치료가 시작되면 격일로 종양 크기 및 생존을 기록하였다 (도 19 참고). 데이터는 TK 녹-아웃 백시니아 바이러스가 CopMD5p3p처럼 항-CTLA-4와 잘 협업하지 않음을 보여준다. 이것은 CopMD5p3p가 면역원성이 더 높고, 항-종양 면역 반응을 더 많이 생성할 수 있음을 시사한다.
6.15. 실시예 15 - 면역 체크포인트 억제제 항-PD1 항체와의 시너지 효과
면역 컴피턴트 Balb/C 마우스에게 피하로 CT26-LacZ 종양을 씨딩했다(5 x 105 세포). 치료는 피하 종양이 대략 5mm x 5mm 크기를 형성하면 시작되었다. 백시니아 바이러스로 처리된 마우스에게 상기 종양 안으로(종양-내) 1e7 PFU 투여량을 3회 투여했다 (24h 간격, 첫 3개 점선). 항-PD1로 처리된 마우스는 백시니아 바이러스의 최종 용량을 제공받은 후 24h 시점에 100 ug 투여량의 항체를 i.p.로 5 회 (24h 간격, 점선) 제공받았다. 치료가 시작되면, 종양 크기와 생존을 격일로 기록했다(도 20 참고). 데이터는 TK 녹-아웃 백시니아 바이러스가 CopMD5p3p처럼 항-PD1과 잘 협업하지 않음을 보여준다. 이것은 CopMD5p3p가 면역원성이 더 높고, 항-종양 면역 반응을 더 많이 생성할 수 있음을 시사한다.
6.16. 실시예 16 - 면역 체크포인트 억제제 항-PD1 항체 및 항-CTLA-4 항체와의 시너지 효과
면역 컴피턴트 Balb/C 마우스에게 피하로 CT26-LacZ 종양을 씨딩했다(5 x 105 세포). 치료는 피하 종양이 대략 5mm x 5mm 크기를 형성하면 시작되었다. 백시니아 바이러스로 처리된 마우스에게 상기 종양 안으로(종양-내) 1e7 PFU 투여량을 3회 투여했다 (24h 간격, 첫 3개 점선). 항-CTLA-4로 처리된 마우스는 100 ug 투여량의 항체로 i.p.로 5 회 (24h 간격, 첫 5개 점선) 제공받았다. 항-PD1로 처리된 마우스는 백시니아 바이러스의 최종 용량을 제공받은 후 24h 시점에 100 ㅅg 투여량의 항체를 i.p.로 5 회 (24h 간격, 점선) 제공받았다. 치료가 시작되면, 종양 크기와 생존을 격일로 기록했다(도 21 참고). 이 실험에서 우리는 두 체크포인트를 동시에 차단할 경우, 더 낮은 용량 (100μg 대신 25μg)의 체크포인트 억제제 항체가 작용할 수 있는지 테스트했다. CopMD5p3p는 더 낮은 용량 (총 50 μg)의 체크포인트로 이 뮤린 모델에서 여전히 치료를 달성했다. 체크포인트 억제제는 용량 의존적 독성을 가지고 있기 때문에, 매우 적은 투여량의 체크포인트 차단제로도 여전히 관찰가능한 표현형을 얻을 수 있다는 것이 유리하다. 다른 실험에서와 같이, CopMD5p3p 바이러스는 확립된 종양을 치료할 수 있으며, 이 효과는 CopMD5p3p의 해당 결손이 없는 야생형 바이러스에서는 관찰되지 않는다.
6.17. 실시예 17 - 대상체 치료를 위한 투여
본원에서 기술된 방법을 이용하여, 당분야의 임상의는 대상체 (예를 들면, 환자)에게 암 또는 종양 세포들을 치료하기 위해 본원에 기술된 재조합 오르토폭스바이러스 벡터를 함유하는 약제학적 조성물을 투여할 수 있다. 상기 암은 예를 들면, 그 중에서도 백혈병, 림프종, 간암, 뼈암, 폐암, 뇌암, 방광암, 위장암, 유방암, 심장암, 자궁경부암, 자궁암, 두경부암, 담낭암, 후두암, 입술 및 구강암, 안구암, 흑색종, 췌장암, 전립선암, 결장직장암, 고환암, 그리고 인후암일 수 있다.
예를 들면, 당업자는 환자가 암 또는 종양을 앓고 있음을 평가할 수 있고, 본원에서 개시된 재조합 오르토폭스 바이러스 벡터를 함유하는 약제학적 조성물의 치료요법적 유효량 (예를 들어, 종양의 크기를 감소시키기에 충분한 양)을 환자에게 투여할 수 있다. 상기 약제학적 조성물은 해당 대상체에게 명시된 시격으로(예를 들면, 매주, 매일, 또는 매 시간) 하나 또는 그 이상 투여량 (예를 들면, 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 15개, 20개, 25개, 또는 그 이상의)으로 투여될 수 있다. 치료 효과를 모니터링하고, 환자의 반응에 따라 투여량을 늘리거나 또는 줄이기 위해 투여 사이에 해당 환자를 평가할 수 있다. 상기 약제학적 조성물은 해당 환자에게 경구, 비경구 (예를 들어, 국소), 정맥 내, 근육 내, 피하 또는 비강 내로 투여될 수 있다. 이 치료는 약제학적 조성물의 단일 투여와 관련될 수 있다. 이 치료는 약제학적 조성물의 지속적인 투여 (예를 들어, 수일, 수주, 수개월 또는 수년)와 관련될 수 있다. 이 치료는 또다른 치료요법적 제제 (예를 들면, 면역 체크포인트 억제제, 이를 테면, 그중에서도 항-PD-1 또는 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편, IL-12, 또는 Flt3 리간드)의 사용과 더 관련될 수 있다.
6.18. 실시예 18 - 몇 가지 백시니아 균주에서 CopMD5p 및 CopMD3p의 표적화된 결손
변형된 백시니아 바이러스 벡터를 만들기 위한 다음 프로토콜은 예를 들면, Rintoul et al. PLoS One. 6(9): e24643 (2011)(이의 명세서는 본원에 참고자료로 편입됨)에 기술된 기술을 이용한다.
간략하게 설명하자면, CopMD5p (5'유전자: (C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, 및 F3L 유전자)에 결손을 품고 있는 Copenhagen 백시니아 바이러스) 그리고 CopMd3p (3'유전자: B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자에 결손을 품고 있는 Copenhagen 백시니아 바이러스) 표적화 재조합 구조체들은 g-Block technology (IDT, Coralville Iowa)에 의해 합성되었다. U2OS 세포에 1.5 시간 동안 무혈청 DMEM에서 MOI 0.01로 야생형 백시니아 바이러스 (Wyeth, Western Reserve, Tian Tan, Lister)로 감염시켰다. 바이러스 상청액을 흡출하고, U2OS 세포를 OptiMEM (Gibco)에서 Lipofectamine 2000 (Invitrogen)에 의해 g-Blocks을 표적으로 하는 PCR 증폭된 CopMD5p 또는 CopMD3p로 형질 감염시켰다. 10 % FBS가 보충된 DMEM을 형질감염-후 30 분 시점에 세포에 첨가하고, 밤새도록 방치하였다. 다음날, 형질 감염 배지를 흡출하고, 신선한 DMEM 10 % FBS 배지를 세포에 첨가하였다. 감염 형질감염 후 48시간 시점에서, U2OS 세포를 수거하고, 단일 동결 해동 주기로 용해시켰다. 연속 희석된 용해물을 U2OS 세포의 합류 단층에 플레이 팅하고, eGFP 양성 (CopMD5p 표적화) 또는 mCherry 양성 (CopMD3p 표적화) 플라크를 분리하고, 5 회 플라크 정제를 통해 정제했다.
이중 주요 결손된 백시니아 바이러스는 U2OS 세포에서 CopMD5p 및 CopMD3p 결손된 백시니아 바이러스를 각 바이러스에 대해 MOI 5에서 공동-감염에 의해 생성되었다. 다음날 세포를 수확하고, 1 라운드의 동결 해동으로 용해시켰다. 용해물을 연속 희석하고, U2OS 세포의 합류 단층에 플레이 팅하고, 이중 양성 플라크 (eGFP + mCherry)를 선택했다. 플라크는 5 라운드의 플라크 정제에 의해 정제되었다.
본 명세서의 변형된 오르토폭스 바이러스 벡터 (예를 들면, 변형된 백시니아 바이러스 벡터, 이를 테면, 변형된 Copenhagen 백시니아 바이러스 벡터) 생성에 대한 예시적인 계획은 도 22에 나타낸다.
6.19. 실시예 19 - SKV (CopMD5p3p-B8R-)는 SKV-B8R+과 비교하였을 때 종양 제어에 있어서 유사한 효능을 갖는다
상기 백시니아 바이러스 (VV) B8R 유전자는 감마 인터페론 수용체 (IFN-γ)에 대해 상동성을 갖는 분비된 단백질을 인코드한다. 시험관내, B8R 단백질은 인간 및 렛(rat) 감마 인터페론을 비롯한 몇 가지 종의 감마 인터페론에 결합하고, 이의 항바이러스 활성을 중화한다; 그러나, 이것은 뮤린 IFN-γ에 유의적으로 결합하지 않는다. 여기에서 우리는 B8R 유전자가 결여된 재조합 VVs의 구성 및 특성을 기술한다. 표적화 구조체와 B8R 유전자좌 사이의 상동성 재조합은 B8R 유전자의 75 %를 2 개의 loxP 부위 측면에 있는 eGFP 이식 유전자로 대체했다 (SKV-GFP).
B8R- 바이러스는 B8R+ 바이러스와 유사한 효능을 나타내었다. 도 37. SKV 또는 SKV-GFP로 처리된 마우스의 생존이 평가되었다. 5 x 105 CT26-LacZ 세포를 0일차 피하로 씨딩했다. 14 일, 16 일 및 18 일차에 종양을 107 pfu의 용량으로 SKV 또는 SKV-GFP의 종양 내 주사로 처리했다. 주사된 바이러스가 B8R 유전자좌의 결손을 가졌을 때, 효능의 현저한 감소는 보이지 않았다.
6.20. 실시예 20 - 정상 세포주 대비 암 세포주에서 SKV-B8R+ 바이러스의 감염
일차 건강 세포 생존력은 암 세포의 것과 비교되었다. 합류 정상 세포 또는 암 세포를 MOI (pfu/세포) 범위에서 48 시간 동안 감염시킨 후 생존력을 정량화했다. 도 34에서 나타낸 것과 같이, SKV-B8R+ 바이러스는 선호적으로 암 세포를 감염시킨다.
6.21. 실시예 21-SKV-B8R+는 인터페론 신호생성을 손상시키지 않는다.
인터페론 신호생성은 다양한 정상 세포주와 하나의 암 세포주 (786-O)에서 인터페론 경로에서 상향조절된(발현 유도됨) 또는 하향조절된(발현 억제됨) 유전자 수를 결정함으로써, 평가되었다. 도 35. 1 백만개 세포의 합류 단층에 SKV-B8R+ (CopMD5p3p) 또는 TK 유전자가 기능을 하지 못하는 부모계 Copenhagen 바이러스로 18h 동안 MOI 3 (3e6 PFU)으로 감염시켰다. RNA는 RNA-seq를 이용하여 서열화시키고, 인터페론 유전자의 유전자 발현은 판독 맵핑 및 발현 정상화 후 결정되었다. SKV-B8R+ (CopMD5p3p) 바이러스는 대부분 인터페론 경로의 유전자를 유도하지만, 부모계 Copenhagen는 유전자를 억제시킨다. 이것으로 SKV-B8R+ (CopMD5p3p)는 정상 세포에서 바이러스 청소에 결정적인 유형 I 인터페론 신호생성을 유도할 수 있음이 암시된다.
6.22. 실시예 22 - Flt3L, IL-12 TM 및 항-hCTLA-4를 발현시키도록 공작된 B8R 네가티브 백시니아 바이러스
상기에서 기술된 바와 같이, 변형된 백시니아 바이러스 함유하는 CopMD5p3p 및 B8R 결손은 면역치료요법적 형질전환유전자, Flt3L 및 IL-12-TM, 뿐만 아니라 hCTLA-4에 대한 항체를 발현시키도록 추가 공작되었다(도 38에 나타남). Flt3L, IL-12 TM 및 eGFP 형질전환유전자들은 Copenhagen 백시니아 바이러스 게놈 상에서 B8R 유전자좌로 삽입되었다. 도 36 참고. 표적화 구조체와 B8R 유전자좌 사이의 상동성 재조합은 B8R 유전자의 75 %를 Flt3-LG, IL-12-TM 및 eGFP 형질전환유전자로 대체했다 (SKV-23). 이 전략으로 B8R를 대신하여 형질전환유전자들이 삽입된 B8R 녹-아웃 바이러스가 생성되었다. 상기 항-CTLA-4 IgG는 T2A 단백체 모티프에 의해 분리된 인간 항-CTLA-4 항체의 중쇄와 경쇄를 삽입시키기 위해 5p 결손의 경계를 표적으로 함으로써 SKV-23 백본으로 삽입되었다 (SKV-123v2; 도 38 참고).
막 결합된 IL-12 형질전환유전자를 발현시키는 이들 공작된 바이러스의 능력이 평가되었다. 세포는 SKV-1sc23, SKV-3 또는 SKV-GFP 공작된 백시니아 유전자로 감염되었다. 도 42에 나타낸 바와 같이, Vero 세포는 IL-12p35 특이적 항체로 착색되었다. Vero 세포는 세포 막 특이적 착색화된 패턴을 시각화시키기 위해 카운터착색으로 맥아 응집소 (WGA) 콘쥬게이트된 형광단으로 공동-라벨시켰다. 웨스턴 블랏 정량화를 통하여 형질전환유전자를 발현시키는 다양한 SKV 바이러스의 hIL-12 생성에 대해 추가 정량화되었다. 도 41 참고. 1 x106 HeLa 세포의 단층에 세 가지 형질전환유전자 (항-hCTLA-4, FTL3L, IL-12)의 상이한 조합을 발현시키는 다양한 백시니아 SKV를 MOI 0.1 (1x105 pfu)에서 감염시켰다. 감염-후 48h 후, 상청액과 용해물(lysate)을 수거하여, IL-12 p35 하위단위의 발현에 대해 프로브하였다. SKV-123 및 SKV-3은 모두 막경유 도메인을 갖는 IL-12 p35 하위단위를 발현시키도록 공작된 바이러스로써, 이들은 용해물 분획 상에 해당 단백질만을 발현시키고, 이는 IL-12는 상청액으로 분비되지 않음을 암시한다
항-hCTLA-4 및 hFLT3L의 ELISA 프로토콜을 이용하여 측정하였다. 1e6 HeLa 세포의 단층에 이들 세 가지 형질전환유전자를 모두 발현시키는 SKV-123를 MOI 0.1 (1 x 105 pfu)로 감염시켰다. 감염-후 48시간 시점에서, 상청액을 수거하였고, 인간 항-CTLA-4 항체 및 Flt3 리간드의 발현에 대해 ELISA를 통하여 검정하였다. 도 40에 나타낸 것과 같이, SKV-123 바이러스는 Flt3 리간드 가용성 단백질보다는 CTLA-4에 대항하는 항체를 더 많이 생산할 수 있었다.
이들 세 가지 형질전환유전자를 모두 발현시키는 SKV-123 바이러스는 시간 경과에 따른 형질전환유전자 발현 역동학에서 평가되었다 (도 39). 786-O 인간 선암종 세포주의 합류 단층에 SKV-123 바이러스를 MOI 3 (3 x106 pfu)으로 감염시켰다. RNA는 RNA-seq를 이용하여 서열화시키고, 삽입된 형질전환유전자들의 유전자 발현은 판독 맵핑 및 발현 정상화 후 결정되었다. 이 데이터에서 세포 감염이 발생한 후 3-4hr 시점에서 형질전환유전자 발현이 정점이라는 것이 시사된다.
별개 실험에서, SKV-123v2 바이러스로부터 3개 형질전환유전자 발현은 다른 3가지 암 세포주에서 추가 평가되었다. HeLa 인간 자궁경부암 세포 (American Type Culture Collection (ATCC) Cat. #: CCL-2), HT-29 인간 결장직장 암 세포 (ATCC Cat. #: HTB-38), 그리고 CT26.WT 뮤린 결장직장 암 세포 (ATCC Cat. #: CRL-2638). SKV-123 바이러스 감염(MOIs 0.1 또는 1.0)으로 상기 각 HeLa, HT-29, 그리고 CT26.WT 암 세포에서 CTLA-4 항체, FLT3L, 그리고 IL-12 형질전환유전자 산물이 생성되었다(도 56-59).
6.23. 실시예 23 막 결합된 뮤린 IL-12 p35를 발현시키는 SKV는 뮤린 종양 제어에 더 큰 효능을 갖는다.
SKV 또는 SKV-3 바이러스 (막 결합된 뮤린 p35 IL-12를 발현시키는)로 처리된 마우스의 생존이 평가되었다. 5e6 CT26-LacZ 세포들을 0일차 피하로 씨딩했다. 14 일, 16 일 및 18 일차에 종양을 107 pfu의 용량으로 SKV 또는 SKV-3SKV을 종양 내 주사로 처리했다. SKV 바이러스는 CT26 결장 종양을 품고 있는 마우스 생존을 연장시켰고, SKV-3의 IL-12 발현은 지속적인 치료로 이어지는 완화를 유도할 수 있다. 도 43 참고.
6.24. 실시예 24 - 다양한 백시니아 균주에서 공작된 주요 이중 결손은 시험관내에서 암 세포 사멸을 강화시킨다.
HeLa 세포에 다음 균주의 공작된 백시니아 바이러스를 MOI 0.1로 감염시켰다: (1) 부모계 야생형 바이러스 (wt); (2) 주요 결손된 5 프라임 (5p), (3) 주요 결손된 3 프라임(3p), 그리고 (4) 주요 이중 결손된 5 프라임과 3 프라임의 조합(5p3p). 세포 생존력은 감염-후 72 시간 시점에 알라마르 블루(alamar blue) 검정에 의해 정량화되었다. 5p 및 5p3p 주요 이중 결손된 백시니아 균주는 이들의 부모계 야생형 및 3p 주요 결손된 균주와 비교하였을 때, HeLa 세포에서 세포독성이 더 크다. 도 44-47 참고.
6.25. 실시예 25 - 8가지 상이한
이종이식편 마우스 모델에서 종양 용적 및 생존 이점에서 SKV의 효능
이들 효능 연구의 목적은 Mia PaCa-2 인간 췌장 종양 세포들, PC-3 인간 전립선 종양 세포들, U87MG 인간 신경아교종 세포, UACC-62 인간 흑색종 세포, UM-UC-3 인간 방광 종양 세포들, COLO-205 인간 결장 종양 세포들, NCI-H460 인간 폐 종양 세포들 또는 HT29 인간 결장 선암종 세포를 피하(SC)로 이식받은 무흉선 누드 마우스에 정맥(IV) 및/또는 종양내(IT)로 주사된 CopMD5p3p 결손과 B8R 결손을 모두 포함하는 변형된 백시니아 바이러스 (SKV)의 항-암 활성을 결정하는 것이었다.
세포를 배양하고, 필요한 수의 세포를 얻었을 때 총 45 마리의 암컷(6-8 주령) 무흉선 누드 마우스에 종양 세포를 접종하였다 (0 일차 시점). 각 마우스의 우측 옆구리에 SC로 0.2 mL의 1:1 Matrigel™ 안에 천만개 세포 (1 x 107 세포)를 주사하였다. 25 마리의 마우스가 약 100 ~ 200mg (표적 집단 평균 종양 무게는 대략적으로 200mg)의 종양을 가졌을 때, 백시니아 바이러스 치료가 시작되었다.
이 마우스들에게 0.05 ml SKV (용량 1e7 pfu)를 IT (10마리 마우스)로 및/또는 IV (10마리 마우스)로 투여하였다. 대조군 (5 마리 마우스)에게 0.05 ml PBS를 투여하였다. IT 주사의 경우, 멸균 주사기에 부착된 31G ㅍ" 바늘을 이용하여 각 종양으로 주사하였다. 만일 종양이 크거나 또는 불규칙한 모양일 경우에는 매일 다른 부위에서 종양에 주사하였다. 사망률과 사망률에 대해 매일 두 번 마우스를 관찰하였다. 치료 첫날부터 일주일에 두 번 종양을 측정하였다. 종양 부피 (mm3)는 타원체 구 (l x w 2)/2 = mm3 식을 사용하여 계산되었으며, 여기서 l 및 w는 각 측정에서 수집 된 더 큰 치수와 더 작은 치수를 나타낸다.
종양 이식 후 60 일 또는 그 이전에, 체중이 과도하게 감소한 동물 (치료 첫날 체중의 >30% 감소) 또는 총 종양 부하가 4,000mg에 도달하였고, 궤양이 생겼거나, 또는 탈피된 동물들은 연구에서 제외시켰다.
이러한 효능 연구는 Mia PaCa-2, PC-3, U87MG, UACC-62 및 UM-UC-3 이종 이식 모델에서 1e7 pfu SKV의 용량이 IV 또는 IT로 투여되었을 때(도 48A-48E에 나타낸 것과 같이), 뿐만 아니라 COLO-205, H460 및 HT29 이종이식편 모델에서 1e7 pfu SKV의 용량이 IT 투여되었을 때(도 48F-48H에 도시된 바와 같이), 종양 부피의 측정 가능한 감소를 보여주었다. 이들 효능 연구는 도 48A-48H에 도시된 바와 같이, PBS 단독으로 처리된 대조군 마우스와 비교하여, SKV IV 및/또는 IT로 투여될 때, 8 가지의 이종이식편 모델 모두에서 생존율에서 유의적인 증가 (p <0.0001)를 또한 보여주었다.
6.26. 실시예 26 - 동계성 마우스 모델에서 종양 용적 및 생존 이점에서 다양한 SKV 벡터 효능
다수의 SKV 벡터를 만들었다 (상기 표 44 및 표 45 참고). 이 연구의 목적은 모든 인코드된 형질전환유전자들이 활성인 동계성 마우스 모델에서 SKV-12m3v2-eGFP, 이필리무맙 및 SKV의 효능을 비교하는 것이다. MC38 결장직장 암 세포 (5 x 105)를 Matrigel의 1:1 혼합물 100μl에 재현탁하고, 무혈청 DMEM 배지를 인간 CTLA-4를 발현시키는 트랜스제닉 C57BL/6 마우스의 오른쪽 옆구리에 SC로 주입했다. 그 다음 동물들을 5개 치료군으로 무작위화시키고, PBS, PBS + 이필리무맙, SKV, 항-PD-1 항체, SKV-12m3v2-eGFP 또는 SKV-12m3v2-eGFP + 항-PD-1 항체로 처치하였다. SKV-12m3v2-eGFP는 인간 항-CTLA-4 항체, 인간 Flt3 리간드 및 마우스 IL-12 TM p35를 발현시키는 SKV이다. 마우스당 1 x 108 PFU를 전달하기 위해 50μl에 바이러스를 PBS로 희석시키고, 그 다음 총 부피를 종양 중앙으로 주입하여 단일 바늘 트랙을 생성시켰다. 항체 (100μl에 이필리무맙 20μg 및 100μl에 항-PD-1 항체 250μg)를 멸균 PBS에 적절한 용량으로 희석시키고, ip 주사에 의해 전달되었다. SC MC38 종양을 품고 있는 마우스를 a) 이필리무맙, 1 mg/kg, b) SKV, 1 x 108 PFU 또는 c) SKV-12m3v2-eGFP, 1 x 108 PFU를 3회 투여량으로 처리하였다. 종양을 측정하고, 부피를 기록하고, 치료 전, 그리고 연구 과정 (21 일 기간) 동안 기본 건강 상태를 평가했다. 연구 결과는 도 49 (평균 종양 부피 및 생존 곡선) 및 도 50 (개별 종양 부피)에 제시되어 있다. 이필리무맙 단독의 경우 종양 성장 지연 및 1 치료 (10 %); SKV 단독의 경우 효능 및 2 치료 (20 %)를 나타내었고; 3 개의 형질전환유전자를 발현하는 SKV는 종양 조절을 현저하게 개선하고, 생존을 증가시켰고, 3 치료 (30 %); PD-1 항체의 추가는 치료율을 두 배로 높였고 (30-60 %); 그리고 PD-1 항체 단독으로는 효과가 없었다 (데이터는 제시되지 않음).
연구에서 첫 번째 인도적 평가 변수 시점에 PBS-처리 그룹과 비교하여, 이필리무맙 (P< 0.05), SKV (P< 0.05), SKV-12m3v2-eGFP (P< 0.05), 그리고 SKV-12m3v2-eGFP + 항-PD-1 항체 (P<0.05) 처리에 대해 종양 제어를 관찰하였다. 상이한 바이러스 간에, 또는 항-PD-1 항체의 추가로 인한 종양 제어 간에 통계적으로 유의적인 차이가 없었다. 모든 통계 테스트는 GraphPad Prism 8.2를 사용한 다중 t- 테스트를 사용하여 수행되었다.
PBS-처리 군과 비교하여(정중 생존 19일), SKV (P< 0.005, 정중 생존 20=5 일, 이필리무맙 (P< 0.001, 정중 생존 30 일), SKV-12m3v2-eGFP (P< 0.001, 정중 생존 33 일), 그리고 SKV-12m3v2-eGFP + 항-PD-1 항체 (P< 0.001)의 치료에서 생존 시간의 증가가 관찰되었다. 다음 처리 군에서 완전한 종양 퇴행이 관찰되었다: 이필리무맙 (n=1), SKV (n=2), SKV-12m3v2-eGFP (n=3) 그리고 SKV-12m3v2-eGFP (n=6). SKV 단독 치료와 비교하였을 때, SKV-12m3v2-eGFP + 항-PD-1 항체를 이용한 치료에서 생존 증가의 이점이 나타났고 (P<0.05); 그러나, SKV-12m3v2-eGFP + 항-PD-1 항체와 SKV-12m3v2-eGFP 단독을 비교하였을 때, 생존에서 통계학적으로 유의적인 차이는 없었다. 모든 통계 테스트는 GraphPad Prism 8.2를 사용한 로그-순위 (Mantel-Cox) 테스트를 사용하여 수행되었다.
SKV-12m3v2-eGFP + 항-PD-1 항체 그룹에서 초기 종양이 완전히 퇴행한 6 마리의 마우스의 반대쪽 옆구리에 5 ㅧ 105 개의 MC38 세포로 재-공격했을 때, 2 마리의 마우스에서 종양 성장이 나타났고, 4 마리의 마우스는 종양에 대항하는 저항성을 유지했다.
6.27. 실시예 27 - MC-38 마우스 모델의 종양 용적에서 막 결합된 IL-12p35-TM 하위단위 대비(versus) IL12p70-TM 하위단위를 발현시키는 SKV 효능 비교
이 연구의 목적은 MC38 종양 모델에서 SKV-mIL12p35와 SKV-mIL12p70 및 SKV의 효능을 비교하여, 2 개의 IL12 하위단위의 면역 자극 잠재력과 관련된 종양 제어 및 생존에 있어서 차이가 있는 지를 평가하는 것이다. MC38 결장직장 암 세포 (5 x 105)를 Matrigel의 1:1 혼합물 100μl에 재현탁하고, 무혈청 DMEM 배지를 C57BL/6 마우스의 오른쪽 옆구리에 SC로 주입했다. 종양은 대략 3x3mm가 될 때까지 7 일 동안 성장하도록 두었다. 그 다음 동물들을 4개 치료군으로 무작위화시키고, PBS, SKV, SKV-mIL12p35 또는 SKV-mIL12p70으로 처치하였다. 마우스당 1 x 107 PFU를 전달하기 위해 100μl에 바이러스를 PBS로 희석시키고, 그 다음 총 부피를 종양 중앙으로 주입하여 단일 바늘 트랙을 생성시켰다. 도 51에 결과를 나타낸다. 대조군 PBS 처리된 마우스와 비교하여, SKV, SKV-mIL12p35 및 SKV-mIL12p70 처리된 마우스 모두 종양 부피 감소를 나타냈다. SKV-mIL12p35 및 SKV-mIL12p70 처리는 모두 SKV 단독 처리보다 더 효과적이었다. SKV-mIL12p35 및 SKV-mIL12p70 처리된 마우스는 종양 부피에서 유사한 감소를 나타냈다.
6.28. 실시예 28 - 이형성 프라임-부스트 종양용해성 백신 요법에서 SKV
예비 결과에서 SKV는 이형성 백신에서 면역 반응을 촉발시키거나 또는 부스트시키는데 사용될 수 있음을 보여주었다. 오브알부민 (OVA)을 이형성 프라임-부스트 조합에서 외부 항원으로 이용하였다. 동물을 1 일에 프라이밍하고, 8-10 일에 평가한 다음, 14 일에 부스팅하고, 부스트-후 21-24 일에 시점에서 다시 평가했다. 건강한 C57 블랙 마우스는 프라임 또는 부스트로써 PBS (대조군), OVA를 발현하는 아데노바이러스, OVA를 발현하는 야생형 Copenhagen 균주 OVA 또는 CopMD5p3p (SKV 백본)를 발현시키는 우두 바이러스로 처리되었다. 사량체 분석은 21 일차에 OVA 특이적 반응을 평가하여 수행되었다. 마우스를 10 일에 평가한 결과, CopMD5p3p 또는 SKV 백본 (Copenhagen 바이러스는 아님)은 1 일차에 프라임을 투여하고, 그 다음 14 일차에 면역 부스트된 C57BL/6 마우스에서 프라임 및 부스터 설정 모두에서 면역 반응이 유도되었음을 보여주었다(도 52에 나타냄). CopMD5p3p (SKV 백본)은 촉발시킬 수 있고(prime), 그리고 프라임 반응은 Maraba MG1 종양용해성 라도바이러스에 의해 부스트될 수 있다. CopMD5p3p (SKV 백본)는 아데노바이러스 프라임 반응을 촉발시킬 수 있다. CopMD5p3p (SKV 백본)는 외부 항원에 대한 면역 반응을 촉발시키고,부스팅하는 면에서 부모계 Copenhagen 바이러스를 능가했다.
6.29. 실시예 29 - IT 투여 대비(vs) IV 투여의 경우 SKV-123 형질전환유전자의 생체분포
SKV-123으로 처리한 결과로 발현된 형질전환유전자 (항-CTLA-4 항체, FLT3L 및 IL-12-TM)의 생체 분포에 대한 다양한 투여 경로 (IV 대비 IT)의 효과를 연구했다. 암컷 BALB/c 마우스에게 CT26-LacZ 종양 세포들 (3 x 105 세포)을 생착시키고, 후속적으로 2주 후 SKV-123를 제공한다 (용량 1 x 108 PFU): 연구 1일차, 3일차 및 5일차 IV 주사, 또는 연구 1일차 및 3일차 IT 주사. 혈액 및 조직은 종양-보유 그룹에서 2일, 4일, 6일, 8일 및 22 일차에 수거하였다. 종양 비-보유 그룹에서 28 일차 및 43 일차에 비장을 수거하였다. 혈액 샘플 (심장 천자를 통하여 수거)에서 혈청을 분리하고, 조직을 FLT3L 및 항-CTLA-4 항체 발현에 대한 ELISA를 수행하기 위해 균질화했다. ELISA는 PCR에 의해 바이러스 게놈에 대해 양성으로 테스트된 샘플에서만 수행되었다. IL-12-TM 생체 분포의 경우, 조직을 2일, 4일, 8일, 22일, 28일 및 43 일차에 수거했다. IL-12-TM 형질전환유전자 발현의 웨스턴 블랏 분석을 위해 조직을 균질화했다. 웨스턴 블랏팅은 PCR에 의해 바이러스 게놈에 대해 양성으로 테스트된 샘플에서만 수행되었다. 항-투블린은 로딩 대조군으로 이용되었다. 투블린은 비장 및 꼬리 샘플에서 검출될 수 없었지만, 그러나 단백질의 존재는 이동 후 블랏의 Ponceau 착색으로 확인되었다. 1 일 및 3 일에 IV 주사에 의해 투여된 SKV-123은 혈청에서 항 -CTLA-4 항체 및 FLT3L의 검출 가능한 수준 (도 53A, 53B) 그리고 2 일차에 마우스 종양에서 더 낮은 농도로 검출되었다 (도 53C, 53D). FLT3L은 비장 및 꼬리에서 2 일차에, IV 처리 후 4 일차에 또한 검출될 수도 있다 (도 53C, 53D). 항-CTLA-4 항체는 IV 또는 IT 처리와 무관하게 4일차 혈청에서 여전히 검출가능하였다 (도 53A). SKV-123의 IT 처리는 4 일차에 종양에서 FLT3L 농도를 초래한 반면 (도 53F), 항-CTLA-4 항체 농도는 낮지만 검출 가능했 (도 53E). 종양-선택적 형질전환유전자 발현은 뮤린 종양 모델에서 입증되었는데, 이때 치료요법적 페이로드 농도는 해당 종양에서 취득했고 (예를 들면, >7.5ng/ml FLT3L), 전신 순환계에서는 임의의 탐지가능한 형질전환유전자 산물은 없었다.
IL-12-TM에 대한 웨스턴 블랏팅은 간에서 오로지 비-특이적 밴드 만을 보였으며 (도 54A), IL-12-TM은 동물의 종양, 비장, 폐 또는 꼬리에서 검출되지 않았다 (도 54A-54D). 면역컴피턴트 종양-보유 마우스에서 SKV-123의 생체분포는 IT 처리된 동물의 경우 해당 종양에 국한되며, 그리고 IV-처리 후 처음 며칠 동안 매우 낮은 수준으로 종양 및 제한된 수의 다른 조직으로 국한되었다.
바이러스 게놈은 평가된 어느 시점에서도 뇌, 심장, 신장, 난소, 사타구니 림프절, 골수 또는 혈청에서 검출되지 않았다. 바이러스 게놈은 9 일차 시점에 한 가지 샘플을 제외하고는, 오로지 4 일차 시점에 종양 샘플에서만 검출되었다. 게놈은 주로 2 일차 및 4 일차 시점에 일부 꼬리, 폐, 비장 및 간 샘플에서 검출되었다. 23 일차 수거 그룹의 어떤 샘플에서도 게놈이 검출되지 않았다.
SKV-123 바이러스에 대한 바이러스 역가는 IV 주사에 의한 치료-후 2 일차 꼬리에서 가장 높았으며, 비장, 폐 및 간에서 검출가능한 낮은 수준을 보였다. 4 일차, 역가는 오로지 IV 주사 그룹의 꼬리에서만 검출되었다. 이들 두가지 투여 경로에 있어서, 종양에서 바이러스 역가가 검출되었으며, IV 주입에 비교하여, IT 주입-후 역가는 더 높게 나타났다. 바이러스는 폐에서 두 가지 투여 경로에 대해 유사한 수준으로 또한 검출되었다.
이 연구에서 조사된 환경으로의 배출 샘플 (혈청, 소변, 타액)에는 검출가능한 바이러스 게놈이나 또는 복제되는 바이러스는 함유되어 있지 않았다.
6.30. 실시예 30 - 인간화된 마우스 모델에서 종양 용적에서의 SKV-123v2 효능
인간화된 마우스 모델에서 종양 성장에 있어서 SKV-123v2 효능을 연구하였다. NOD scid 감마 (NSG) 마우스는 인간과 유사한 면역 체계를 발달시키기 때문에 인간 PBMCs로 치료할 수 있는 면역결핍 실험실 마우스 브랜드다. 암컷 NSG 마우스에 인간 PBMCs를 이식한 다음, 2 주 후에 1 x 107 UM-UC-3 이종이식편 인간 방광 종양 세포를 피하에 생착시켰다. 종양 부피 (mm3)는 타원체 구 (l x w 2)/2 = mm3 식을 사용하여 계산되었으며, 여기서 l 및 w는 각 측정에서 수집 된 더 큰 치수와 더 작은 치수를 나타낸다. 종양이 최소 100mm3 일 때, 마우스에게 1x108 PFU의 SKV-123v2 또는 염수 대조군을 3 주 동안 격일로 IV 주사로 처리했다. 마우스 기본 건강 상태를 평가하고, 연구 과정 동안 종양 부피를 측정했다. 종양은 이식 4 일째부터 시작하여, 치료 첫날부터 일주일에 두 번 측정되었다. 21 일째에 SKV-123v2 처리된 동물은 164 mm3의 평균 종양 부피를 가졌으며, 이는 비히클 처리된 대조군과 비교하여, -8.4 %의 차이에 상응하는 것이며, 32 일차에 관찰된 효과가 관찰되었으며, 이는 대조군과 비교하여 -53.2 %의 차이에 상응한다 (도 55).
6.31. 실시예 31 - 종양 세포와 정상 세포에서 SKV-123v2의
시험관내
감염성 비교
인간 정상 세포(PBMC, PrEC) 그리고 암 세포(786-O, HeLa) 의 SKV-123v2 바이러스 감염 후, 바이러스 복제, 세포독성, 형질전환유전자 발현 및 사이토킨 생성에 대해 시험관내에서 특징화되었다. 인간 말초 혈액 단핵 세포 (PBMCs)는 Lonza (Cat#: CC-2702)에서 구입하였다. 인간 전립선 상피 세포 (PrEC)는 Lonza (Cat. #: CC-2555)에서 구입하였다. 786-O 인간 신장 선암종 세포는 ATCC (Cat. #:CRL-1932)에서 구입하였다. HeLa 인간 자궁경부암 세포는 ATCC (Cat. #: CCL-2)에서 구입하였다.
24-웰플레이트 상에 세포를 씨딩하였다. 다음 4가지 시점에서 세포 생존력 및 사이토킨 발현이 평가되었다: 감염-후 6 hr, 24 hr, 48 hr 및 72 hrs. 생존 세포 수/mL 및 각 세포 현탁액의 생존율 퍼센트를 결정하기 위해, 세포 현탁액을 각각 0.6mL의 ViCell 컵에 넣고, 샘플을 기기에 기록했다. 희석액이 준비되었다. 단일 층의 합류가 > 80%일 때 (세포 씨딩 후 24hrs), 세포를 감염시켰다. 감염 당일, 바이러스는 아래 표 47에 요약된 바와 같이, 적절한 투여량으로 희석되었다. 감염은 24-웰 플레이트 상에서 실행되었다.
사이토킨 프로파일링은 표시된 시점에서 수행되었다. 감염된 세포 상청액을 분취하여, -20 ℃에 보관하고, IL-18 (HD42)과 함께 Human Cytokine Array/Chemokine Array 42-Plex를 사용하여 분석을 위해 Eve Technologies로 보냈다. FLT3L 및 이필리무맙 발현은 ELISA 검정을 이용하여 평가되었다. 알라마르 블루(Alamar Blue)를 사용하여 각 수확 시점에서 세포 생존율을 수행하고, Fluoroskan에서 판독하여 처리되지 않은 대조군 웰과 비교하여, 처리된 웰의 생존력 %를 결정했다. 상이한 세포주 간의 복제 역동학을 평가하기 위해 바이러스 역가를 결정하였다.
정상 세포는 감염시 세포 생존력을 최대화하기 위해, 혈청 성장 인자의 존재 하에서, 그리고 접촉 저해 없는 상태에서 배양되었다. 테스트 조건 및 SKV-123v2 감염 실험에 사용된 등가 세포 밀도에서 PrEC (전립선 상피 세포)는 거의 HeLa 암 세포만큼 높은 증식률을 보여주었다. 이러한 조건 하에서 배양될 때 테스트된 정상 세포주의 표현형을 더 잘 특정하기 위해, 동반 연구에서 PrEC 세포 및 PBMCs에 대해 BrdU 통합을 측정하는 증식 분석을 수행했다. 암 세포주 및 PBMCs와 비교하여, PrEC에서 SKV-123v2의 중간 복제는 시험관내 감염 조건에서 관찰된 정상 세포주의 상대적 증식 속도와 상관 관계가 있다.
상기 결과는 786-O 세포주 및 HeLa 암 세포주가 용량 의존적, 그리고 시간 의존적 방식으로 세포 생존력의 감소에 의해 입증된 바와 같이, SKV-123v2 바이러스 감염에 민감하다는 것을 보여준다 (도 56). 786-O 세포 생존력은 테스트된 모든 MOI에서 시간 경과에 따라 감소한 반면, HeLa 세포 생존력은 MOI 1 및 0.1에서 SKV-123v2 바이러스 감염시 감소했다. 정상 인간 PBMCs는 MOIs 1, 0.1, 그리고 0.01으로 SKV-123v2 바이러스 감염 후 높은 세포 생존력에 의해 증명된 바와 같이, 감염에 저항성이 있었다 (도 56). 정상 인간 PrECs는 암 세포주와 비교할 때, SKV-123v2 바이러스 감염에 덜 민감했다. 감염-후 최대 48 시간까지, 임의의 MOI (1, 0.1 및 0.01)에서 세포 생존력의 감소는 관찰되지 않았다. 감염-후 72 hr 시점에서, MOI 1 및 0.1의 SKV-123v2 바이러스 감염 시 세포 생존력이 감소되었다 (도 56).
SKV-123v2 바이러스는 인간의 정상 PrECs와 비교할 때, 더 높은 비율로 암 세포주에서 감염되고 복제되었다 (도 57). 그들은 786-O 세포주 및 HeLa 암 세포주에 감염되었고, 인간의 정상 PrECs와 비교할 때, 10 배 이상의 수준으로 복제되었다. SKV-123v2 바이러스는 MOIs 1, 0.1, 그리고 0.01에서 인간의 정상 PBMCs 에서 복제되지 않았다 (도 59).
항-CTLA-4 항체 및 FLT3L (SKV-123v2 바이러스-감염된 세포에 의해 만들어진 두 가지 형질전환유전자 산물) 생성을 각 MOI 및 시점에서 세포 상청액에서 모니터링하였다. SKV-123v2 바이러스 감염으로 정상 세포 (PrEC 세포 또는 PBMCs)와 비교하였을 때, 암 세포에서 항-CTLA-4 항체 및 FLT3L이 더 많이 생성되었다(도 58 및 도 59). PBMC 세포 상청액에서는 항-CTLA-4 항체 또는 FLT3L이 검출되지 않을 수 있다. FLT3L 및 항-CTLA-4 항체 형질전환유전자 산물 농도는 SKV-123v2 감염에 대한 세포 민감성과 관련되어 있었다.
상기 사이토킨 프로파일링 실험에서 SKV-123v2 바이러스-감염된 암 세포에서 정상 세포보다 더 높은 수준의 세포 독성이 관찰되었다.
세포주 PrEC는 특히 바이러스 감염에 반응하여, EGF, G-CSF, IL-1a, IL-1RA, IL-4, 그리고 IL-18을 생성시키고, 이들 사이토킨의 농도가 낮거나 또는 무시할 수준인 경우에만 HeLa, 786-0, 그리고 PBMCs에서 검출가능하다. PrEC 및 786-0는 감염에 반응하여 IL-8, TGF-α, 그리고 TNFα를 생산하는 유일한 세포주들이며, 한편 유일하게 PrEC 및 PBMC만 IP-10을 생산하였다. PrEC는 EGF의 용량-의존적 생산을 보였으며, 더 높은 MOI에서 바이러스 감염으로 생산은 증가했다. EGF 농도는 24 시간에서 72 시간 사이에 동일한 투여 그룹 내에서 일관되게 유지되었으며, 바이러스의 MOI 1에 감염된 세포의 경우, 72 시간 시점에서 약간 증가했다. PrEC 세포의 경우, IL-1a 생성은 감염-후 48시간 동안 기선으로 대부분 일관되게 유지되었으며, 그 다음 72 시간 시점에서 증가되었고, MOI 1에서 최대 농도가 관찰되었다. 마찬가지로, PrEC에 의한 IL-1RA 및 IL-18 생산은 감염-후 72 시간에 농도가 극적으로 증가한 것으로 나타났으며 (더 높은 MOI 0.1 및 1 감염에서 24 시간 시점에서 약간의 IL-1RA 증가) 또는 이 시점 이전에는 무시할 수 있었다. IL-1RA의 생산은 72 시간 시점에서 용량-의존적인 것처럼 보였지만, MOI 1에서 바이러스의 경우 MOI 0.1과 비교하여 IL-18 생산은 감소되었다. PrEC는 처리되지 않은 대조군과 비교하여, 모든 투여 그룹에서 감염-후 6 시간 시점에 IL-4 생산이 감소되었다. 그러나, IL-4 생산은 24 시간 시점에서 기선 이상으로 증가했으며, 감염-후 72 시간 시점까지 높게 유지되었다.
대안으로, PrEC를 제외한 모든 세포주들이 MCP-1을 만들었다. HeLa 세포와 786-0 세포에서, 기선에서 고 농도의 MCP-1이 생산되었으며, 바이러스 감염에 의한 영향은 없었다. PBMCs에서, MCP-1은 높은 투여량의 바이러스에 의해 기선 이상으로 유도되었다: 24 시간 시점에서 MOI 1의 바이러스, 감염-후 72시간 시점에서 MOI 0.1 및 1의 바이러스.
몇 가지 사이토킨은 감염-후 24 시간 및 72 시간 시점에서 기선 이상으로 증가되었지만, 그러나 48 시간 시점에서는 증가되지 않았다(또는 단지 미미하게). HeLa 세포에서, 이들 사이토킨은 FGF-2 (MOI 1에서, 한편 더 낮은 투여량에서는 72 시간 시점에서만 생산을 유도할 수 있었다) 그리고 IL-6 (오직 MOI 0.01 및 0.1에서; MOI 1 농도는 시간 경과에 걸쳐 일정하였다)이었다. PrEC 세포에서, 이들 사이토킨은 G-CSF (오직 MOI 0.01 및 0.1에서; MOI 1 농도는 시간 경과에 걸쳐 일정하였다), TGF-α (오직 MOI 0.01 및 0.1에서; MOI 1 농도는 시간 경과에 걸쳐 일정하였다), TNFα (오직 MOI 0.01 및 0.1에서; MOI 1은 시간 경과에 따라 증가되었다), 그리고 IP-10 (오직 MOI 0.1 및 0.1에서; MOI 1은 낮은 농도를 만들었다)이었다. 786-0 세포에서, 이들 사이토킨은 FGF-2 (오직 MOI 0.1 및 1에서; 최저 용량 MOI 0.01은 72시간 시점에서만 생산을 유도하였다), IL-8 (오직 MOI 0.01 및 0.1에서; MOI 1 농도는 시간 경과에 걸쳐 일정하였다) 그리고 TGF-α (오직 MOI 0.01 및 0.1에서), TNFα (오직 MOI 0.01 및 0.1에서; MOI 농도는 시간 경과에 기선 수준이었다)이었다. PBMCs에서, 상기 사이토킨은 IP-10이었다 (오직 MOI 1에서만).
HeLa 세포 및 786-0 세포에서 IFNα2 생산은 감염-후 24 시간 시점에서 정점을 찍은 후, 시간-경과에 따라 감소한 반면, PrEC 세포에서는 IFNα2 생산은 72 시간 시점에서 가장 높았다. 이들 세 가지 세포주 모두에서 MOI 0.1 또는 1에서 더 높은 투여량은 투여군 중에서 가장 낮은 사이토킨 생산을 나타냈다.
IFNγ 생산은 모든 세포주에서 낮았으며, 786-0 세포에서 24 시간 시점에서 정점 생산을 보인 후, 그 다음 시간 경과에 따라 감소했다.
6.32. 실시예 32 - 재조합 백시니아 바이러스의 생성
이 실시예에서 설명된 방법 및 기술을 사용하여 표 45에 설명된 벡터를 만들었다. 표 45에 요약된 바와 같이, 각각의 벡터는 복제-컴피턴트이고, 해당 벡터에 함유된 형질전환유전자(들)를 발현시키고, 표시된 바와 같이 암 세포주들에서 세포 독성을 나타내는 것으로 입증되었다. 하기 설명된 검증을 사용하여 표 45에 요약된 데이터를 만들었다.
재조합
거의 합류된 (80-90 %) U2OS 세포의 단층들은 변형될 우두 바이러스 (예를 들면, SKV 바이러스)로 2 시간 동안 먼저 감염된다. 감염 후, 표적화 DNA (도 60)는 감염된 세포로 형질감염된다. 다음 날 (형질감염-후 12-18 hrs), 형질감염 배지를 제거하고, 새로운 배지를 세포에 추가한다. 둘 째날 (형질감염-후 ~48 hrs) 세포를 냉동시키고, 해동시켜, 플라크 정제한다.
플라크 정제 및 증폭
재조합 백시니아 바이러스를 식별해내기 위해, 형광 마커를 이용하여 플라크들을 스크리닝한다. 이전 단계의 감염/형질 감염 혼합물의 연속 희석액 (1:10)을 U2OS 세포의 합류 단층에 2 hr 동안 첨가한 후, 배지를 오버레이 배지로 교체하여 플라크가 형성되도록 한다. 이틀 후, 형광 플라크를 골라서 연속 희석하고, U2OS 세포의 새로운 단층에 추가한 다음 오버레이 배지를 추가한다. 이러한 플라크 정제 과정은 모든 플라크가 형광이 될 때까지 반복된다. 형광 마커를 제거하기 위해 적절한 재조합 효소를 위의 단계 (즉, 재조합)에서 설명한 바와 같이, 형광 바이러스로 형질감염시킨다. 비-형광 플라크를 선별하기 위해, 플라크 정제 과정을 지속한다.
그 다음, 순수한 재조합 바이러스의 플라크는 확장을 위해 다른 세포주 (예를 들면, HeLa 세포)의 단층 감염에 사용되며, 이 단계에서는 오버레이가 추가되지 않는다. 감염된 세포에 가시적인 세포 변성 효과가 일단 보이면, 세포 용해물을 수거하고, 바이러스 역가적정(tittering)에 의해 재조합 바이러스 농도가 결정된다.
형질전환유전자 발현
재조합 바이러스를 다양한 농도(예를 들면, MOI 0.01, 0.1 또는 1)에서, 다양한 시간 (예를 들면, 감염-후 6 hrs, 24 hrs, 48 hrs 및 72 hrs) 동안 다양한 암 세포 (예를 들면, HeLa, U2OS, 786-O, 등등)를 감염시키는데 이용한다. 형질전환유전자 생성과 관련된 검증을 위해 세포 용해물 (웨스턴 블랏용) 그리고 세포 상청액 (ELISA용)을 냉동시키고, -80 oC에 보관한다. 가용성 단백질 (예를 들면, FLT3L, 항-CTLA-4 항체)을 인코딩하는 형질전환유전자의 경우 ELISA 키트를 이용하여 형질전환유전자 생성을 정량화시킨다. 세포 제한된 (예를 들면, 세포 내부 또는 막 결합된) 단백질 산물 (예를 들면, 막 결합된 IL-12)을 인코딩하는 형질전환유전자의 경우, 세포 용해물의 웨스턴 블랏을 이용하여 형질전환유전자 생성을 정량화시킨다.
암 세포 계통 세포독성
암 세포주 세포독성은 감염된 세포에 대한 광학 현미경으로 보이는 가시적 세포 병리 효과에 의해 결정된다. 세포 용해물을 수거하고, 바이러스 역가적정(tittering)에 의해 재조합 바이러스 농도가 결정될 수 있다.
일부 구체예들
본 명세서에 언급된 모든 간행물 및 특허 출원은 각각의 독립적 공개, 또는 특허 출원이 구체적으로 및 개별적으로 참조로 포함되도록 지시된 것과 동일한 정도로 본 명세서에 참조 문헌으로 인용된다.
본 발명은 본 명세서의 특정 구체예들과 연계되어 설명되지만, 추가 변형이 가능하며, 본 출원은 일반적으로 본 발명의 원리에 따라 발명의 임의의 변형, 사용 또는 채택을 포괄하도록 의도되며, 본 발명으로부터 이러한 벗어남은 본 발명이 속하는 분야내 공지의 또는 관습적 실행 범위 안에 있고, 그리고 본 발명에서 앞서 제공된, 그리고 다음의 청구범위 안에 있는 필수 특징에 적용될 수 있기 때문에 이러한 것들을 포함하는 것으로 의도된다. 일부 구체예들은 청구 범위 내에 있다.
SEQUENCE LISTING
<110> OTTAWA HOSPITAL RESEARCH INSTITUTE
TURNSTONE BIOLOGICS CORP
<120> MODIFIED ORTHOPOXVIRUS VECTORS
<130> 14596-050-228
<140>
<141>
<150> 62/930,524
<151> 2019-11-04
<150> 62/872,699
<151> 2019-07-10
<150> 62/784,372
<151> 2018-12-21
<160> 632
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 272
<212> PRT
<213> Vaccinia virus
<400> 1
Met Arg Tyr Ile Ile Ile Leu Ala Val Leu Phe Ile Asn Ser Ile His
1 5 10 15
Ala Lys Ile Thr Ser Tyr Lys Phe Glu Ser Val Asn Phe Asp Ser Lys
20 25 30
Ile Glu Trp Thr Gly Asp Gly Leu Tyr Asn Ile Ser Leu Lys Asn Tyr
35 40 45
Gly Ile Lys Thr Trp Gln Thr Met Tyr Thr Asn Val Pro Glu Gly Thr
50 55 60
Tyr Asp Ile Ser Ala Phe Pro Lys Asn Asp Phe Val Ser Phe Trp Val
65 70 75 80
Lys Phe Glu Gln Gly Asp Tyr Lys Val Glu Glu Tyr Cys Thr Gly Leu
85 90 95
Cys Val Glu Val Lys Ile Gly Pro Pro Thr Val Thr Leu Thr Glu Tyr
100 105 110
Asp Asp His Ile Asn Leu Tyr Ile Glu His Pro Tyr Ala Thr Arg Gly
115 120 125
Ser Lys Lys Ile Pro Ile Tyr Lys Arg Gly Asp Met Cys Asp Ile Tyr
130 135 140
Leu Leu Tyr Thr Ala Asn Phe Thr Phe Gly Asp Ser Glu Glu Pro Val
145 150 155 160
Thr Tyr Asp Ile Asp Asp Tyr Asp Cys Thr Ser Thr Gly Cys Ser Ile
165 170 175
Asp Phe Ala Thr Thr Glu Lys Val Cys Val Thr Ala Gln Gly Ala Thr
180 185 190
Glu Gly Phe Leu Glu Lys Ile Thr Pro Trp Ser Ser Glu Val Cys Leu
195 200 205
Thr Pro Lys Lys Asn Val Tyr Thr Cys Ala Ile Arg Ser Lys Glu Asp
210 215 220
Val Pro Asn Phe Lys Asp Lys Met Ala Arg Val Ile Lys Arg Lys Phe
225 230 235 240
Asn Lys Gln Ser Gln Ser Tyr Leu Thr Lys Phe Leu Gly Ser Thr Ser
245 250 255
Asn Asp Val Thr Thr Phe Leu Ser Met Leu Asn Leu Thr Lys Tyr Ser
260 265 270
<210> 2
<211> 222
<212> PRT
<213> Vaccinia virus
<400> 2
Met Asn His Cys Leu Leu Ala Ile Ser Ala Val Tyr Phe Lys Ala Lys
1 5 10 15
Trp Leu Thr Pro Phe Glu Lys Glu Phe Thr Ser Asp Tyr Pro Phe Tyr
20 25 30
Val Ser Pro Thr Glu Met Val Asp Val Ser Met Met Ser Met Tyr Gly
35 40 45
Glu Leu Phe Asn His Ala Ser Val Lys Glu Ser Phe Gly Asn Phe Ser
50 55 60
Ile Ile Glu Leu Pro Tyr Val Gly Asp Thr Ser Met Met Val Ile Leu
65 70 75 80
Pro Asp Lys Ile Asp Gly Leu Glu Ser Ile Glu Gln Asn Leu Thr Asp
85 90 95
Thr Asn Phe Lys Lys Trp Cys Asn Ser Leu Asp Ala Met Phe Ile Asp
100 105 110
Val His Ile Pro Lys Phe Lys Val Thr Gly Ser Tyr Asn Leu Val Asp
115 120 125
Thr Leu Val Lys Ser Gly Leu Thr Glu Val Phe Gly Ser Thr Gly Asp
130 135 140
Tyr Ser Asn Met Cys Asn Leu Asp Val Ser Val Asp Ala Met Ile His
145 150 155 160
Lys Thr Tyr Ile Asp Val Asn Glu Glu Tyr Thr Glu Ala Ala Ala Ala
165 170 175
Thr Cys Ala Leu Val Ser Asp Cys Ala Ser Thr Ile Thr Asn Glu Phe
180 185 190
Cys Val Asp His Pro Phe Ile Tyr Val Ile Arg His Val Asp Gly Lys
195 200 205
Ile Leu Phe Val Gly Arg Tyr Cys Ser Pro Thr Thr Asn Cys
210 215 220
<210> 3
<211> 149
<212> PRT
<213> Vaccinia virus
<400> 3
Met Thr Ala Asn Phe Ser Thr His Val Phe Ser Pro Gln His Cys Gly
1 5 10 15
Cys Asp Arg Leu Thr Ser Ile Asp Asp Val Lys Gln Cys Leu Thr Glu
20 25 30
Tyr Ile Tyr Trp Ser Ser Tyr Ala Tyr Arg Asn Arg Gln Cys Ala Gly
35 40 45
Gln Leu Tyr Ser Thr Leu Leu Ser Phe Arg Asp Asp Ala Glu Leu Val
50 55 60
Phe Ile Asp Ile Arg Glu Leu Val Lys Asn Met Pro Trp Asp Asp Val
65 70 75 80
Lys Asp Cys Thr Glu Ile Ile Arg Cys Tyr Ile Pro Asp Glu Gln Lys
85 90 95
Thr Ile Arg Glu Ile Ser Ala Ile Ile Gly Leu Cys Ala Tyr Ala Ala
100 105 110
Thr Tyr Trp Gly Gly Glu Asp His Pro Thr Ser Asn Ser Leu Asn Ala
115 120 125
Leu Phe Val Met Leu Glu Met Leu Asn Tyr Val Asp Tyr Asn Ile Ile
130 135 140
Phe Arg Arg Met Asn
145
<210> 4
<211> 30
<212> PRT
<213> Vaccinia virus
<400> 4
Met Ser Ile Leu Pro Val Ile Phe Leu Pro Ile Phe Phe Tyr Ser Ser
1 5 10 15
Phe Val Gln Thr Phe Asn Ala Ser Glu Cys Ile Asp Lys Gly
20 25 30
<210> 5
<211> 340
<212> PRT
<213> Vaccinia virus
<400> 5
Met Ser Arg Lys Phe Met Gln Val Tyr Glu Tyr Asp Arg Glu Gln Tyr
1 5 10 15
Leu Asp Glu Phe Ile Glu Asp Arg Tyr Asn Asp Ser Phe Ile Thr Ser
20 25 30
Pro Glu Tyr Tyr Ser Ala Glu Lys Tyr Met Cys Arg Tyr Thr Thr Leu
35 40 45
Asn His Asn Cys Val Asn Val Arg Arg Cys Ala Leu Asp Ser Lys Leu
50 55 60
Leu His Asp Ile Ile Thr Asn Cys Lys Ile Tyr Asn Asn Ile Glu Leu
65 70 75 80
Val Arg Ala Thr Lys Phe Val Tyr Tyr Leu Asp Leu Ile Lys Cys Asn
85 90 95
Trp Val Ser Lys Val Gly Asp Ser Val Leu Tyr Pro Val Ile Phe Ile
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Thr His Thr Ser Thr Arg Asn Leu Asp Lys Val Ser Val Lys Thr Tyr
115 120 125
Lys Gly Val Lys Val Lys Lys Leu Asn Arg Cys Ala Asp His Ala Ile
130 135 140
Val Ile Asn Pro Phe Val Lys Phe Lys Leu Thr Leu Pro Asn Lys Thr
145 150 155 160
Ser His Ala Lys Val Leu Val Thr Phe Cys Lys Leu Arg Thr Asp Ile
165 170 175
Thr Pro Val Glu Ala Pro Leu Pro Gly Asn Val Leu Val Tyr Thr Phe
180 185 190
Pro Asp Ile Asn Lys Arg Ile Pro Gly Tyr Ile His Val Asn Ile Glu
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Gly Cys Ile Asp Gly Met Ile Tyr Ile Asn Ser Ser Lys Phe Ala Cys
210 215 220
Val Leu Lys Leu His Arg Ser Met Tyr Arg Ile Pro Pro Phe Pro Ile
225 230 235 240
Asp Ile Cys Ser Cys Cys Ser Gln Tyr Thr Asn Asp Asp Ile Glu Ile
245 250 255
Pro Ile His Asp Leu Ile Lys Asp Val Ala Ile Phe Lys Asn Lys Glu
260 265 270
Thr Val Tyr Tyr Leu Lys Leu Asn Asn Lys Thr Ile Ala Arg Phe Thr
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Ser Ile Val Gly Val Asn His Ser Asn Thr Phe Val Asn Cys Leu Leu
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<212> PRT
<213> Vaccinia virus
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Leu Tyr Asn Asn Tyr Phe Thr Asn Asp Val Leu Lys Ile Leu Leu Asn
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Leu Cys Leu Ala His Val Tyr Lys Pro Gly Glu Cys Arg Lys Pro Ile
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<213> Vaccinia virus
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<213> Vaccinia virus
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Pro
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100 105 110
Val Leu His Thr Lys Phe Trp Ile Ser Asp Asn Thr His Ile Tyr Leu
115 120 125
Gly Ser Ala Asn Met Asp Trp Arg Ser Leu Thr Gln Val Lys Glu Leu
130 135 140
Gly Ile Ala Ile Phe Asn Asn Arg Asn Leu Ala Ala Asp Leu Thr Gln
145 150 155 160
Ile Phe Glu Val Tyr Trp Tyr Leu Gly Val Asn Asn Leu Pro Tyr Asn
165 170 175
Trp Lys Asn Phe Tyr Pro Ser Tyr Tyr Asn Thr Asp His Pro Leu Ser
180 185 190
Ile Asn Val Ser Gly Val Pro His Ser Val Phe Ile Ala Ser Ala Pro
195 200 205
Gln Gln Leu Cys Thr Met Glu Arg Thr Asn Asp Leu Thr Ala Leu Leu
210 215 220
Ser Cys Ile Arg Asn Ala Ser Lys Phe Val Tyr Val Ser Val Met Asn
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Phe Ile Pro Ile Ile Tyr Ser Lys Ala Gly Lys Ile Leu Phe Trp Pro
245 250 255
Tyr Ile Glu Asp Glu Leu Arg Arg Ser Ala Ile Asp Arg Gln Val Ser
260 265 270
Val Lys Leu Leu Ile Ser Cys Trp Gln Arg Ser Ser Phe Ile Met Arg
275 280 285
Asn Phe Leu Arg Ser Ile Ala Met Leu Lys Ser Lys Asn Ile Asp Ile
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Glu Val Lys Leu Phe Ile Val Pro Asp Ala Asp Pro Pro Ile Pro Tyr
305 310 315 320
Ser Arg Val Asn His Ala Lys Tyr Met Val Thr Asp Lys Thr Ala Tyr
325 330 335
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340 345 350
Ala Ser Ile Asn Ile Thr Pro Asp Asp Gly Leu Gly Leu Arg Gln Gln
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<212> PRT
<213> Vaccinia virus
<400> 18
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Asn Ala Pro Val Gly Lys Leu Cys Pro Glu Ser Val Ser Arg Asp Met
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Asn Met Gln Ile Val Ile Glu Lys
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<213> Vaccinia virus
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Met Ser Ala Asn Cys Met Phe Asn Leu Asp Asn Asp Tyr Ile Tyr Trp
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Tyr
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<213> Vaccinia virus
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Met Ala Thr Lys Leu Asp Tyr Glu Asp Ala Val Phe Tyr Phe Val Asp
1 5 10 15
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<212> PRT
<213> Vaccinia virus
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Thr Leu Leu Ile Lys Thr Leu Ser Pro Ala His Leu Ile Asn Lys Leu
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<213> Vaccinia virus
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355 360 365
Pro
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<212> PRT
<213> Vaccinia virus
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Pro
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<212> PRT
<213> Vaccinia virus
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<213> Vaccinia virus
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<212> PRT
<213> Vaccinia virus
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Val Leu His Thr Lys Phe Trp Ile Ser Asp Asn Thr His Ile Tyr Leu
115 120 125
Gly Ser Ala Asn Met Asp Trp Arg Ser Leu Thr Gln Val Lys Glu Leu
130 135 140
Gly Ile Ala Ile Phe Asn Asn Arg Asn Leu Ala Ala Asp Leu Thr Gln
145 150 155 160
Ile Phe Glu Val Tyr Trp Tyr Leu Gly Val Asn Asn Leu Pro Tyr Asn
165 170 175
Trp Lys Asn Phe Tyr Pro Ser Tyr Tyr Asn Thr Asp His Pro Leu Ser
180 185 190
Ile Asn Val Ser Gly Val Pro His Ser Val Phe Ile Ala Ser Ala Pro
195 200 205
Gln Gln Leu Cys Thr Met Glu Arg Thr Asn Asp Leu Thr Ala Leu Leu
210 215 220
Ser Cys Ile Arg Asn Ala Ser Lys Phe Val Tyr Val Ser Val Met Asn
225 230 235 240
Phe Ile Pro Ile Ile Tyr Ser Lys Ala Gly Lys Ile Leu Phe Trp Pro
245 250 255
Tyr Ile Glu Asp Glu Leu Arg Arg Ser Ala Ile Asp Arg Gln Val Ser
260 265 270
Val Lys Leu Leu Ile Ser Cys Trp Gln Arg Ser Ser Phe Ile Met Arg
275 280 285
Asn Phe Leu Arg Ser Ile Ala Met Leu Lys Ser Lys Asn Ile Asp Ile
290 295 300
Glu Val Lys Leu Phe Ile Val Pro Asp Ala Asp Pro Pro Ile Pro Tyr
305 310 315 320
Ser Arg Val Asn His Ala Lys Tyr Met Val Thr Asp Lys Thr Ala Tyr
325 330 335
Ile Gly Thr Ser Asn Trp Thr Gly Asn Tyr Phe Thr Asp Thr Cys Gly
340 345 350
Ala Ser Ile Asn Ile Thr Pro Asp Asp Gly Leu Gly Leu Arg Gln Gln
355 360 365
Leu Glu Asp Ile Phe Met Arg Asp Trp Asn Ser Lys Tyr Ser Tyr Glu
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Leu Tyr Asp Thr Ser Pro Thr Lys Arg Cys Lys Leu Leu Lys Asn Met
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Lys Gln Cys Thr Asn Asp Ile Tyr Cys Asp Glu Ile Gln Pro Glu Lys
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Glu Ile Pro Glu Tyr Ser Leu Glu
420
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<212> PRT
<213> Vaccinia virus
<400> 35
Met Gly Ala Thr Ile Ser Ile Leu Ala Ser Tyr Asp Asn Pro Asn Leu
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Phe Thr Ala Met Ile Leu Met Ser Pro Leu Val Asn Ala Asp Ala Val
20 25 30
Ser Arg Leu Asn Leu Leu Ala Ala Lys Leu Met Gly Thr Ile Thr Pro
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Asn Ala Pro Val Gly Lys Leu Cys Pro Glu Ser Val Ser Arg Asp Met
50 55 60
Asp Lys Val Tyr Lys Tyr Gln Tyr Asp Pro Leu Ile Asn His Glu Lys
65 70 75 80
Ile Lys Ala Gly Phe Ala Ser Gln Val Leu Lys Ala Thr Asn Lys Val
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Arg Lys Ile Ile Ser Lys Ile Asn Thr Pro Arg Leu Ser Tyr Ser Arg
100 105 110
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115 120 125
Asn Met Gln Ile Val Ile Glu
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<212> PRT
<213> Vaccinia virus
<400> 36
Met Ser Ala Asn Cys Met Phe Asn Leu Asp Asn Asp Tyr Ile Tyr Trp
1 5 10 15
Lys Pro Ile Thr Tyr Pro Lys Ala Leu Val Phe Ile Ser His Gly Ala
20 25 30
Gly Lys His Ser Gly Arg Tyr Asp Glu Leu Ala Glu Asn Ile Ser Ser
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Leu Gly Ile Leu Val Phe Ser His Asp His Ile Gly His Gly Arg Ser
50 55 60
Asn Gly Glu Lys Met Met Ile Asp Asp Phe Gly Thr Ala Arg Gly Asn
65 70 75 80
Tyr
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<212> PRT
<213> Vaccinia virus
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Met Ala Thr Lys Leu Asp Tyr Glu Asp Ala Val Phe Tyr Phe Val Asp
1 5 10 15
Asp Asp Lys Ile Cys Ser Arg Asp Ser Ile Ile Asp Leu Ile Asp Glu
20 25 30
Tyr Ile Thr Trp Arg Asn His Val Ile Val Phe Asn Lys Asp Ile Thr
35 40 45
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50 55 60
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65 70 75 80
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<213> Vaccinia virus
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Ile Asp Asn Gly Ile Val Gln Asp Ile Glu Asp Glu Ala Ser Asn Asn
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115 120 125
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Gly Leu Arg
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<213> Vaccinia virus
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Thr Val Thr Asn Met Ser Ser Leu Lys Ser Glu Val Ser Thr Cys Val
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Thr Gly Val Ala Glu Tyr Leu Lys His Gly Thr Ser Lys Trp Ile Arg
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340 345 350
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Met Arg Thr Leu Leu Ile Arg Tyr Ile Leu Trp Arg Asn Asp Asn Asp
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<212> PRT
<213> Vaccinia virus
<400> 45
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<400> 46
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<211> 369
<212> PRT
<213> Vaccinia virus
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Met Ile Ala Leu Leu Ile Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Ser Thr Tyr
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Lys Asp Ala Asn Ile Ser Met Tyr Leu Ala Ile Gly Asp Asn Met Thr
225 230 235 240
His Phe Thr Asp Ser Ile Thr Ala Ala Lys Leu Asp Tyr Trp Ser Phe
245 250 255
Gln Leu Gly Asn Lys Val Tyr Asn Leu Lys Leu Pro Lys Phe Ser Ile
260 265 270
Glu Asn Lys Arg Asp Ile Lys Ser Ile Ala Glu Met Met Ala Pro Ser
275 280 285
Met Phe Asn Pro Asp Asn Ala Ser Phe Lys His Met Thr Arg Asp Pro
290 295 300
Leu Tyr Ile Tyr Lys Met Phe Gln Asn Ala Lys Ile Asp Val Asp Glu
305 310 315 320
Gln Gly Thr Val Ala Glu Ala Ser Thr Ile Met Val Ala Thr Ala Arg
325 330 335
Ser Ser Pro Glu Lys Leu Glu Phe Asn Thr Pro Phe Val Phe Ile Ile
340 345 350
Arg His Asp Ile Thr Gly Phe Ile Leu Phe Met Gly Lys Val Glu Ser
355 360 365
Pro
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<213> Vaccinia virus
<400> 49
Met Leu Ala Phe Cys Tyr Ser Leu Pro Asn Ala Gly Asp Val Ile Lys
1 5 10 15
Gly Arg Val Tyr Glu Lys Asp Tyr Ala Leu Tyr Ile Tyr Leu Phe Asp
20 25 30
Tyr Pro His Phe Glu Ala Ile Leu Ala Glu Ser Val Lys Met His Met
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Asp Arg Tyr Val Glu Tyr Arg Asp Lys Leu Val Gly Lys Thr Val Lys
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<212> PRT
<213> Vaccinia virus
<400> 50
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1 5 10 15
Gly Met Gln Phe Asp Lys Val Tyr Leu Ser Thr Phe Asn Met Trp Arg
20 25 30
Glu Ile Leu Ser Asn Thr Thr Lys Thr Leu Asp Ile Ser Ser Phe Tyr
35 40 45
Trp Ser Leu Ser Asp Glu Val Gly Thr Asn Phe Gly Thr Ile Ile Leu
50 55 60
Asn Lys Ile Val Gln Leu Pro Lys Arg Gly Val Arg Val Arg Val Ala
65 70 75 80
Val Asn Lys Ser Asn Lys Pro Leu Lys Asp Val Glu Arg Leu Gln Met
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Gly Ile Ala Ile Phe Asn Asn Arg Asn Leu Ala Ala Asp Leu Thr Gln
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165 170 175
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180 185 190
Ile Asn Val Ser Gly Val Pro His Ser Val Phe Ile Ala Ser Ala Pro
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Ser Cys Ile Arg Asn Ala Ser Lys Phe Val Tyr Val Ser Val Met Asn
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245 250 255
Tyr Ile Glu Asp Glu Leu Arg Arg Ala Ala Ile Asp Arg Gln Val Ser
260 265 270
Val Lys Leu Leu Ile Ser Cys Trp Gln Arg Ser Ser Phe Ile Met Arg
275 280 285
Asn Phe Leu Arg Ser Ile Ala Met Leu Lys Ser Lys Asn Ile Asn Ile
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305 310 315 320
Ser Arg Val Asn His Ala Lys Tyr Met Val Thr Asp Lys Thr Ala Tyr
325 330 335
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340 345 350
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Leu Tyr Asp Thr Ser Pro Thr Lys Arg Cys Arg Leu Leu Lys Asn Met
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<400> 51
Met Gln His Ala Asn Cys Asn Arg Glu Ile Lys Ile Tyr Glu Gly Ala
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Met Thr Leu Val Gln His Val Val Thr Ile Lys Ser Thr Tyr Trp Val
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Ile Pro Trp Glu Leu Ala Ser Tyr Asp Asn Pro Asn Leu Phe Thr Ala
20 25 30
Met Ile Leu Met Ser Pro Leu Val Asn Ala Asp Ala Val Ser Lys Leu
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Ile Arg Leu Ala Met Phe
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Met Ser Ala Asn Cys Met Phe Asn Leu Asp Asn Asp Tyr Ile Tyr Trp
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Tyr
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Met Ala Thr Lys Leu Asp Tyr Glu Asp Ala Val Phe Tyr Phe Val Asp
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Leu Leu Leu Ile Gly Gly Phe Tyr Arg Glu Ser Tyr Ile Asp Thr Ile
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305 310 315 320
Thr Gly Val Ala Glu Tyr Leu Lys His Gly Thr Ser Lys Trp Ile Arg
325 330 335
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340 345 350
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115 120 125
Lys Thr Ser Phe Tyr His Ala Val Met Leu Asn Asp Val Ser Ile Val
130 135 140
Ser Tyr Phe Leu Ser Glu Ile Pro Ser Thr Phe Asp Leu Ala Ile Leu
145 150 155 160
Leu Ser Cys Ile His Ile Thr Ile Lys Asn Gly His Val Asp Met Met
165 170 175
Ile Leu Leu Leu Asp Tyr Met Thr Val Asp Lys His Gln
180 185
<210> 66
<211> 368
<212> PRT
<213> Vaccinia virus
<400> 66
Met Ile Ala Leu Leu Ile Leu Ser Leu Ala Cys Ser Ala Ser Ala Tyr
1 5 10 15
Arg Leu Gln Gly Phe Thr Asn Ala Gly Ile Val Ala Tyr Lys Asn Ile
20 25 30
Gln Asp Asp Asn Ile Val Phe Ser Pro Phe Gly Tyr Ser Phe Ser Met
35 40 45
Phe Met Ser Leu Leu Pro Ala Ser Gly Asn Thr Arg Ile Glu Leu Leu
50 55 60
Lys Thr Met Asp Leu Arg Lys Arg Asp Leu Gly Pro Ala Phe Thr Glu
65 70 75 80
Leu Ile Ser Gly Leu Ala Lys Leu Lys Thr Ser Lys Tyr Thr Tyr Thr
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Asp Leu Thr Tyr Gln Ser Phe Val Asp Asn Thr Val Cys Ile Lys Pro
100 105 110
Ser Tyr Tyr Gln Gln Tyr His Arg Phe Gly Leu Tyr Arg Leu Asn Phe
115 120 125
Arg Arg Asp Ala Val Asn Lys Ile Asn Ser Ile Val Glu Arg Arg Ser
130 135 140
Gly Met Ser Asn Val Val Asp Ser Asn Met Leu Asp Asn Asn Thr Leu
145 150 155 160
Trp Ala Ile Ile Asn Thr Ile Tyr Phe Lys Gly Thr Trp Gln Tyr Pro
165 170 175
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180 185 190
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245 250 255
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260 265 270
Asn Lys Arg Asp Ile Lys Ser Ile Ala Glu Met Met Ala Pro Ser Met
275 280 285
Phe Asn Pro Asp Asn Ala Ser Phe Lys His Met Thr Arg Asp Pro Leu
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305 310 315 320
Gly Thr Val Ala Glu Ala Ser Thr Ile Met Val Ala Thr Ala Arg Ser
325 330 335
Ser Pro Glu Glu Leu Glu Phe Asn Thr Pro Phe Val Phe Ile Ile Arg
340 345 350
His Asp Ile Thr Gly Phe Ile Leu Phe Met Gly Lys Val Glu Ser Pro
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<212> PRT
<213> Vaccinia virus
<400> 67
Met Gly His Ile Ile Thr Tyr Cys Gln Val His Thr Asn Ile Ser Ile
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Leu Ile Arg Lys Ala Tyr His Ile Ile Phe Phe Val Ile Asp Cys Asp
20 25 30
Cys Ile Ser Leu Gln Phe Ser Asn Tyr Val His His Gly Asn Arg Phe
35 40 45
Arg Thr Val Leu Ile Ser Lys Thr Ser Ile Ala Cys Phe Ser Asp Ile
50 55 60
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Pro
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<213> Vaccinia virus
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1 5 10 15
Gly Arg Val Tyr Glu Lys Asp Tyr Ala Leu Tyr Ile Tyr Leu Phe Asp
20 25 30
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<213> Vaccinia virus
<400> 69
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20 25 30
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35 40 45
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Met Ala Thr Lys Leu Asp Tyr Glu Asp Ala Val Phe Tyr Phe Val Asp
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<212> PRT
<213> Vaccinia virus
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Met Leu Ser Met Phe Met Cys Asn Asn Ile Val Asp Tyr Val Asp Asp
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225
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<212> PRT
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Met Phe Asn Met Asn Ile Asn Ser Pro Val Arg Phe Val Lys Glu Thr
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Asn Arg Ala Lys Ser Pro Thr Arg Gln Ser Pro Gly Ala Ala Gly Tyr
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<212> PRT
<213> Vaccinia virus
<400> 73
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Thr Val Thr Asn Met Ser Ser Leu Lys Ser Glu Val Ser Thr Cys Val
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Asn Asn Gly Lys Leu Tyr Val Ile Gly Gly Leu Glu Phe Ser Ile Ser
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Thr Gly Val Ala Glu Tyr Leu Lys His Gly Thr Ser Lys Trp Ile Arg
325 330 335
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340 345 350
Asn Asp Asp Ile Tyr Val Met Gly Gly Val Tyr Thr Thr Tyr Glu Lys
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<212> PRT
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Thr Asn Pro Asn Asn Ile Leu Met Arg His Leu Lys Asn Leu Thr Asp
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Met Arg Thr Leu Leu Ile Arg Tyr Ile Leu Trp Arg Asn Asp Asn Asp
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<213> Vaccinia virus
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Asn
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<211> 284
<212> PRT
<213> Vaccinia virus
<400> 82
Met Asp Leu Ser Arg Ile Asn Thr Trp Lys Ser Lys Gln Leu Lys Ser
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275 280
<210> 83
<211> 364
<212> PRT
<213> Vaccinia virus
<400> 83
Met Ile Ala Leu Leu Ile Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Ser Thr Tyr
1 5 10 15
Arg Leu Gln Gly Phe Thr Asn Ala Gly Ile Val Ala Tyr Lys Asn Ile
20 25 30
Gln Asp Asp Asn Ile Val Phe Ser Pro Phe Gly Tyr Ser Phe Ser Met
35 40 45
Phe Met Ser Leu Leu Pro Ala Ser Gly Asn Thr Arg Ile Glu Leu Leu
50 55 60
Lys Thr Met Asp Leu Arg Lys Arg Asp Leu Gly Pro Ala Phe Thr Glu
65 70 75 80
Leu Ile Ser Gly Leu Ala Lys Leu Lys Thr Ser Lys Tyr Thr Tyr Thr
85 90 95
Asp Leu Thr Tyr Gln Ser Phe Val Asp Asn Thr Val Cys Ile Lys Pro
100 105 110
Ser Tyr Tyr Gln Gln Tyr His Arg Leu Asn Phe Arg Arg Asp Ala Val
115 120 125
Asn Lys Ile Asn Ser Ile Val Glu Arg Arg Ser Gly Met Ser Asn Val
130 135 140
Val Asp Ser Asn Met Leu Asp Asn Asn Thr Leu Trp Ala Ile Ile Asn
145 150 155 160
Thr Ile Tyr Phe Lys Gly Ile Trp Gln Tyr Pro Phe Asp Ile Thr Lys
165 170 175
Thr Arg Asn Ala Ser Phe Thr Asn Lys Tyr Gly Thr Lys Thr Val Pro
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Met Met Asn Val Val Thr Lys Leu Gln Gly Asn Thr Ile Thr Ile Asp
195 200 205
Asp Lys Glu Tyr Asp Met Val Arg Leu Pro Tyr Lys Asp Ala Asn Ile
210 215 220
Ser Met Tyr Leu Ala Ile Gly Asp Asn Met Thr His Phe Thr Asp Ser
225 230 235 240
Ile Thr Ala Ala Lys Leu Asp Tyr Trp Ser Phe Gln Leu Gly Asn Lys
245 250 255
Val Tyr Asn Leu Lys Leu Pro Lys Phe Ser Ile Glu Asn Lys Arg Asp
260 265 270
Ile Lys Ser Ile Ala Glu Met Met Ala Pro Ser Met Phe Asn Pro Asp
275 280 285
Asn Ala Ser Phe Lys His Met Thr Arg Asp Pro Leu Tyr Ile Tyr Lys
290 295 300
Met Phe Gln Asn Ala Lys Ile Asp Val Asp Glu Gln Gly Thr Val Ala
305 310 315 320
Glu Ala Ser Thr Ile Met Val Ala Thr Ala Arg Ser Ser Pro Glu Lys
325 330 335
Leu Glu Phe Asn Thr Pro Phe Val Phe Ile Ile Arg His Asp Ile Thr
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Gly Phe Ile Leu Phe Met Gly Lys Val Glu Ser Pro
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<212> PRT
<213> Vaccinia virus
<400> 84
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1 5 10 15
Gly Arg Val Tyr Glu Asn Asp Tyr Ala Leu Tyr Ile Tyr Leu Phe Asp
20 25 30
Tyr Pro His Phe Glu Ala Ile Leu Ala Glu Ser Val Lys Met His Met
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Asp Arg Tyr Val Glu Tyr Arg Asp Lys Leu Val Gly Lys Thr Val Lys
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Tyr Lys Arg Met Cys Arg His Gln
85
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<212> PRT
<213> Vaccinia virus
<400> 85
Met Asn Pro Asp Asn Thr Ile Ala Val Ile Thr Glu Thr Ile Pro Ile
1 5 10 15
Gly Met Gln Phe Asp Lys Val Tyr Leu Ser Thr Phe Asn Met Trp Arg
20 25 30
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65 70 75 80
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245 250 255
Tyr Ile Glu Asp Glu Leu Arg Arg Ser Ala Ile Asp Arg Gln Val Ser
260 265 270
Val Lys Leu Leu Ile Ser Cys Trp Gln Arg Ser Ser Phe Ile Met Arg
275 280 285
Asn Phe Leu Arg Ser Ile Ala Met Leu Lys Ser Lys Asn Ile Asn Ile
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Glu Val Lys Leu Phe Ile Val Pro Asp Ala Asp Pro Pro Ile Pro Tyr
305 310 315 320
Ser Arg Val Asn His Ala Lys Tyr Met Val Thr Asp Lys Thr Ala Tyr
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340 345 350
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Leu Tyr Asp Thr Ser Pro Thr Lys Arg Cys Lys Leu Leu Lys Asn Met
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<400> 86
Met Gly Ala Thr Ile Ser Ile Leu Ala Ser Tyr Asp Asn Pro Asn Leu
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Ser Lys Leu Asn Leu Leu Ala Ala Lys Leu Met Gly Thr Ile Thr Pro
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Asn Ala Pro Val Gly Lys Leu Cys Pro Glu Ser Val Ser Arg Asp Met
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Arg Lys Ile Ile Ser Lys Ile Asn Thr Pro Pro Thr Leu Ile Leu Gln
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<400> 87
Met Ser Ala Asn Cys Met Phe Asn Leu Asp Asn Asp Tyr Ile Tyr Trp
1 5 10 15
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Tyr
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<212> PRT
<213> Vaccinia virus
<400> 88
Met Ala Thr Lys Leu Asp Tyr Glu Asp Ala Val Phe Tyr Phe Val Asp
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<400> 89
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225
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Met Phe Asn Met Asn Ile Asn Ser Pro Val Arg Phe Val Lys Glu Thr
1 5 10 15
Asn Arg Ala Lys Ser Pro Thr Arg Gln Ser Pro Gly Ala Ala Gly Tyr
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Asp Leu Tyr Ser Ala Tyr Asp Tyr Thr Ile Pro Pro Gly Glu Arg Gln
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65 70 75 80
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Gly Leu Arg
145
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<212> PRT
<213> Vaccinia virus
<400> 91
Met Pro Ile Phe Val Asn Thr Val Tyr Cys Lys Asn Ile Leu Ala Leu
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Ser Met Thr Lys Lys Phe Lys Thr Ile Ile Asp Ala Ile Gly Gly Asn
20 25 30
Ile Ile Val Asn Ser Thr Ile Leu Lys Lys Leu Ser Pro Tyr Phe Arg
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Thr His Leu Arg Gln Lys Tyr Thr Lys Asn Lys Asp Pro Val Thr Arg
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Leu Arg Ala Ser Ile Leu Thr Ser Val Glu Phe Ile Ile Tyr Thr Cys
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130 135 140
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Leu Asn Val Pro Asp Glu Asp Tyr Val Val Asp Phe Val Ile Lys Trp
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Tyr Ile Lys Arg Arg Asn Lys Leu Gly Asn Leu Leu Leu Leu Ile Lys
195 200 205
Asn Val Ile Arg Ser Asn Tyr Leu Ser Pro Arg Gly Ile Asn Asn Val
210 215 220
Lys Trp Ile Leu Asp Cys Thr Lys Ile Phe His Cys Asp Lys Gln Pro
225 230 235 240
Arg Lys Ser Tyr Lys Tyr Pro Phe Ile Glu Tyr Pro Met Asn Met Asp
245 250 255
Gln Ile Ile Asp Ile Phe His Met Cys Thr Ser Thr His Val Gly Glu
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Val Val Tyr Leu Ile Gly Gly Trp Met Asn Asn Glu Ile His Asn Asn
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305 310 315 320
Leu Tyr Val Val Gly Gly Leu Pro Asn Pro Thr Ser Val Glu Arg Trp
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Phe His Gly Asp Ala Ala Trp Val Asn Met Pro Ser Leu Leu Lys Pro
340 345 350
Arg Cys Asn Pro Ala Val Ala Ser Ile Asn Asn Val Ile Tyr Val Met
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Ala Glu Phe Tyr Cys Glu Ser Ser Asn Thr Trp Thr Leu Ile Asp Asp
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Pro Ile Tyr Pro Arg Asp Asn Pro Glu Leu Ile Ile Val Asp Asn Lys
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Leu Leu Leu Ile Gly Gly Phe Tyr Arg Glu Ser Tyr Ile Asp Thr Ile
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Glu Val Tyr Asn His His Thr Tyr Ser Trp Asn Ile Trp Asp Gly Lys
465 470 475 480
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<212> PRT
<213> Vaccinia virus
<400> 92
Met Glu Ser Val Ile Phe Ser Ile Asn Gly Glu Ile Ile Gln Val Asn
1 5 10 15
Lys Glu Ile Ile Thr Ala Ser Pro Tyr Asn Phe Phe Lys Arg Ile Gln
20 25 30
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50 55 60
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65 70 75 80
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Gly Ile Lys Lys Leu Tyr Asn Ala Ser Met Ser Glu Ile Ile Asn Asn
115 120 125
Ile Thr Ala Val Thr Ser Asp Pro Glu Phe Gly Lys Leu Ser Lys Asp
130 135 140
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245 250 255
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260 265 270
His Val Tyr Ser Val Ser Arg Val Asp Leu Lys Thr Lys Lys Trp Lys
275 280 285
Thr Val Thr Asn Met Ser Ser Leu Lys Ser Glu Val Ser Thr Cys Val
290 295 300
Asn Asp Gly Lys Leu Tyr Val Ile Gly Gly Leu Glu Phe Ser Ile Ser
305 310 315 320
Thr Gly Val Ala Glu Tyr Leu Lys His Gly Thr Ser Lys Trp Ile Arg
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Leu Pro Asn Leu Ile Thr Pro Arg Tyr Ser Gly Ala Ser Val Phe Val
340 345 350
Asn Asp Asp Ile Tyr Val Met Gly Gly Val Tyr Thr Thr Tyr Glu Lys
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Tyr Val Val Leu Asn Asp Val Glu Cys Phe Thr Lys Asn Arg Trp Ile
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Lys Lys Ser Pro Met Pro Arg His His Ser Ile Val Tyr Ala Val Glu
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Tyr Asp Gly Asp Ile Tyr Val Ile Thr Gly Ile Thr His Glu Thr Arg
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Asn Tyr Leu Tyr Lys Tyr Ile Val Lys Glu Asp Lys Trp Ile Glu Leu
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Tyr Met Tyr Phe Asn His Val Gly Lys Met Phe Val Cys Ser Cys Gly
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Asp Tyr Ile Leu Ile Ile Ala Asp Ala Lys Tyr Glu Tyr Tyr Pro Lys
450 455 460
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Tyr Asp Met Phe Thr Lys Asp Glu Thr Pro Lys Cys Asn Val Thr His
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<212> PRT
<213> Vaccinia virus
<400> 93
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Thr Asn Pro Asn Asn Ile Leu Met Arg His Leu Lys Asn Leu Thr Asp
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Gln Asp Ile Pro Leu Gly Pro Leu Phe Lys Lys Ile Asp Ser Tyr Arg
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Met Arg Thr Leu Leu Ile Arg Tyr Ile Leu Trp Arg Asn Asp Asn Asp
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<212> PRT
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<210> 96
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<212> PRT
<213> Vaccinia virus
<400> 96
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Glu Arg Val Phe Lys Lys Ile Met Ser Ile Gly Phe Glu Ala Arg Ile
180 185 190
Val Asp Lys Phe Gly Lys Asn His Ile His Arg His Leu Met Ser Asp
195 200 205
Asn Pro Lys Ala Ser Thr Ile Ser Trp Met Met Lys Leu Gly Ile Ser
210 215 220
Pro Ser Lys Pro Asp His Asp Gly Asn Thr Pro Leu His Ile Val Cys
225 230 235 240
Ser Lys Thr Val Lys Asn Val Asp Ile Ile Asp Leu Leu Leu Pro Ser
245 250 255
Thr Asp Val Asn Lys Gln Asn Lys Phe Gly Asp Ser Pro Leu Thr Leu
260 265 270
Leu Ile Lys Thr Leu Ser Pro Ala His Leu Ile Asn Lys Leu Leu Ser
275 280 285
Thr Ser Asn Val Ile Thr Asp Gln Thr Val Asn Ile Cys Ile Phe Tyr
290 295 300
Asp Arg Asp Asp Val Leu Glu Ile Ile Asn Asp Lys Gly Lys Gln Tyr
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325 330 335
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340 345 350
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355 360 365
Asn His Phe Ser Val Asp Ser Val Val Asn Gly His Thr Cys Met Ser
370 375 380
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<212> PRT
<213> Vaccinia virus
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Met Val Tyr Lys Leu Val Leu Leu Phe Cys Ile Ala Ser Leu Gly Tyr
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Asn Cys Gly Thr Thr Lys Tyr Asp Ser Asp Leu Pro Glu Ser Ile His
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Lys Ser Ser Ser Cys Asp Ile Thr Ile Asn Gly Ser Cys Val Thr Cys
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Val Asn Leu Glu Thr Asp Pro Thr Lys Ile Asn Pro His Tyr Leu His
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Pro Lys Asp Lys Tyr Leu Tyr His Asn Ser Glu Tyr Gly Met Arg Gly
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Ser Tyr Gly Val Thr Phe Ile Asp Glu Leu Asn Gln Cys Leu Leu Asp
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Ile Lys Glu Leu Ser Tyr Asp Ile Cys Tyr Arg Glu
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<213> Vaccinia virus
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Ala Leu Tyr Tyr Ala Ile Ala Asp Asn Asn Val Arg Leu Val Cys Thr
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325 330 335
Glu Tyr Asn Asn Thr Gln Val Ile Asp Tyr Leu Ile Arg Ile Asn Gly
340 345 350
Asp Ile Asn Ala Leu Thr Asp Asn Asn Lys His Ala Thr Gln Leu Ile
355 360 365
Ile Asp Asn Lys Glu Asn Ser Pro Tyr Thr Ile Asn Cys Leu Leu Tyr
370 375 380
Ile Leu Arg Tyr Ile Val Asp Lys Asn Val Ile Arg Ser Leu Val Asp
385 390 395 400
Gln Leu Pro Ser Leu Pro Ile Phe Asp Ile Lys Ser Phe Glu Lys Phe
405 410 415
Ile Ser Tyr Cys Ile Leu Leu Asp Asp Thr Phe Tyr Asp Arg His Val
420 425 430
Lys Asn Arg Asp Ser Lys Thr Tyr Arg Tyr Ala Phe Ser Lys Tyr Met
435 440 445
Ser Phe Asp Lys Tyr Asp Gly Ile Ile Thr Lys Cys His Asp Glu Thr
450 455 460
Met Leu Leu Lys Leu Ser Thr Val Leu Asp Thr Thr Leu Tyr Ala Val
465 470 475 480
Leu Arg Cys His Asn Ser Arg Lys Leu Arg Arg Tyr Leu Thr Glu Leu
485 490 495
Lys Lys Tyr Asn Asn Asp Lys Ser Phe Lys Ile Tyr Ser Asn Ile Met
500 505 510
Asn Glu Arg Tyr Leu Asn Val Tyr Tyr Lys Asp Met Tyr Val Ser Lys
515 520 525
Val Tyr Asp Lys Leu Phe Pro Val Phe Thr Asp Lys Asn Cys Leu Leu
530 535 540
Thr Leu Leu Pro Ser Glu Ile Ile Tyr Glu Ile Leu Tyr Met Leu Thr
545 550 555 560
Ile Asn Asp Leu Tyr Asn Ile Ser Tyr Pro Pro Thr Lys Val
565 570
<210> 115
<211> 353
<212> PRT
<213> Vaccinia virus
<400> 115
Met Thr Met Lys Met Met Val His Ile Tyr Phe Val Ser Leu Ser Leu
1 5 10 15
Leu Leu Leu Leu Phe His Ser Tyr Ala Ile Asp Ile Glu Asn Glu Ile
20 25 30
Thr Glu Phe Phe Asn Lys Met Arg Asp Thr Leu Pro Ala Lys Asp Ser
35 40 45
Lys Trp Leu Asn Pro Ala Cys Met Phe Gly Gly Thr Met Asn Asp Met
50 55 60
Ala Thr Leu Gly Glu Pro Phe Ser Ala Lys Cys Pro Pro Ile Glu Asp
65 70 75 80
Ser Leu Leu Ser His Arg Tyr Lys Asp Tyr Val Val Lys Trp Glu Arg
85 90 95
Leu Glu Lys Asn Arg Arg Arg Gln Val Ser Asn Lys Arg Val Lys His
100 105 110
Gly Asp Leu Trp Ile Ala Asn Tyr Thr Ser Lys Phe Ser Asn Arg Arg
115 120 125
Tyr Leu Cys Thr Val Thr Thr Lys Asn Gly Asp Cys Val Gln Gly Ile
130 135 140
Val Arg Ser His Ile Lys Lys Pro Pro Ser Cys Ile Pro Lys Thr Tyr
145 150 155 160
Glu Leu Gly Thr His Asp Lys Tyr Gly Ile Asp Leu Tyr Cys Gly Ile
165 170 175
Leu Tyr Ala Lys His Tyr Asn Asn Ile Thr Trp Tyr Lys Asp Asn Lys
180 185 190
Glu Ile Asn Ile Asp Asp Ile Lys Tyr Ser Gln Thr Gly Lys Glu Leu
195 200 205
Ile Ile His Asn Pro Glu Leu Glu Asp Ser Gly Arg Tyr Asp Cys Tyr
210 215 220
Val His Tyr Asp Asp Val Arg Ile Lys Asn Asp Ile Val Val Ser Arg
225 230 235 240
Cys Lys Ile Leu Thr Val Ile Pro Ser Gln Asp His Arg Phe Lys Leu
245 250 255
Ile Leu Asp Pro Lys Ile Asn Val Thr Ile Gly Glu Pro Ala Asn Ile
260 265 270
Thr Cys Thr Ala Val Ser Thr Ser Leu Leu Ile Asp Asp Val Leu Ile
275 280 285
Glu Trp Glu Asn Pro Ser Gly Trp Leu Ile Gly Phe Asp Phe Asp Val
290 295 300
Tyr Ser Val Leu Thr Ser Arg Gly Gly Ile Thr Glu Ala Thr Leu Tyr
305 310 315 320
Phe Glu Asn Val Thr Glu Glu Tyr Ile Gly Asn Thr Tyr Lys Cys Arg
325 330 335
Gly His Asn Tyr Tyr Phe Glu Lys Thr Leu Thr Thr Thr Val Val Leu
340 345 350
Glu
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<212> PRT
<213> Vaccinia virus
<400> 116
Met Asp Glu Asp Thr Arg Leu Ser Arg Tyr Leu Tyr Leu Thr Asp Arg
1 5 10 15
Glu His Ile Asn Val Asp Ser Ile Lys Gln Leu Cys Lys Ile Ser Asp
20 25 30
Pro Asn Ala Cys Tyr Arg Cys Gly Cys Thr Ala Leu His Glu Tyr Phe
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Tyr Asn Tyr Arg Ser Val Asn Gly Lys Tyr Lys Tyr Arg Tyr Asn Gly
50 55 60
Tyr Tyr Gln Tyr Tyr Ser Ser Ser Asp Tyr Glu Asn Tyr Asn Glu Tyr
65 70 75 80
Tyr Tyr Asp Asp Tyr Asp Arg Thr Gly Met Asn Ser Glu Ser Asp Ser
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Glu Ser Asp Asn Ile Ser Ile Lys Thr Glu Tyr Glu Asn Glu Tyr Glu
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Phe Tyr Asp Glu Thr Gln Asp Gln Ser Thr Gln His Asn Asp Leu
115 120 125
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<212> PRT
<213> Vaccinia virus
<400> 117
Met Ser Leu Glu Ser Phe Ile Ile Thr Thr Phe Asn Asn Asn Ser Ser
1 5 10 15
Thr Asn Ile Asp Asn Met Cys His Leu Tyr Val Lys Val Cys Pro Ser
20 25 30
Ser Leu Leu Phe Arg Leu Phe Val Glu Cys Cys Asp Ile Asn Lys Leu
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Phe Asn Val His Asp Ile His Tyr Thr Asn Ile
85 90
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<212> PRT
<213> Vaccinia virus
<400> 118
Met Ile Ser Leu Ser Phe Leu Ile His Asn Pro Leu Lys Lys Trp Lys
1 5 10 15
Leu Lys Pro Ser Ile Ser Ile Asn Gly Tyr Arg Ser Thr Phe Thr Met
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35 40 45
Asp Ser Leu Asn Thr Val Ala Asp Val Arg His Cys Leu Thr Glu Tyr
50 55 60
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65 70 75 80
Leu Tyr Arg Leu Leu Ile Ser Phe Arg Thr Asp Ala Thr Glu Leu Phe
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Glu Glu Leu Arg Ala Ile Ile Gly Leu Cys Thr Gln Ser Ala Ile Val
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Ser Gly Arg Val Phe Asn Asp Lys Tyr Ile Asp Ile Leu Leu Met Leu
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Arg Lys Ile Leu Asn Glu Asn Asp Tyr Leu Thr Leu Leu Asp His Ile
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Arg Thr Ala Lys Tyr
180
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<212> PRT
<213> Vaccinia virus
<400> 119
Met Ile Ala Phe Ile Ile Phe Arg Glu Ile Gly Ile Ile Ser Thr Arg
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Ile Ala Met Asp Tyr Cys Gly Arg Glu Cys Thr Ile Leu Cys Arg Leu
20 25 30
Leu Asp Glu Asp Val Thr Tyr Lys Lys Ile Lys Leu Glu Ile Glu Thr
35 40 45
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50 55 60
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65 70 75 80
Leu Leu Leu Ser Arg Gly Val Glu Arg Leu Cys Arg Asn Asn Glu Gly
85 90 95
Leu Thr Pro Leu Gly Ala Tyr Ser Lys His Arg Tyr Val Lys Ser Gln
100 105 110
Ile Val His Leu Leu Ile Ser Ser Tyr Ser Asn Ser Ser Asn Glu Leu
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Lys Ser Asn Ile Asn Asp Phe Asp Leu Ser Ser Asp Asn Ile Asp Leu
130 135 140
Arg Leu Leu Lys Tyr Leu Ile Val Asp Lys Arg Ile Arg Pro Ser Lys
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245 250 255
Tyr Trp Ser Phe Ser Thr Ile Asp Ile Glu Ile Val Lys Leu Leu Leu
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Ile Lys Asp Val Asp Thr Cys Arg Val Tyr Asp Val Ser Pro Ile Leu
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Glu Ala Tyr Tyr Leu Asn Lys Arg Phe Arg Val Thr Pro Tyr Asn Val
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Asp Met Glu Ile Val Asn Leu Leu Ile Glu Arg Arg His Thr Leu Val
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Asp Val Met Arg Ser Ile Thr Ser Tyr Asp Ser Arg Glu Tyr Asn His
325 330 335
Tyr Ile Ile Asp Asn Ile Leu Lys Arg Phe Arg Gln Gln Asp Glu Ser
340 345 350
Ile Val Gln Ala Met Leu Ile Asn Tyr Leu His Tyr Gly Asp Met Val
355 360 365
Val Arg Cys Met Leu Asp Asn Gly Gln Gln Leu Ser Ser Ala Arg Leu
370 375 380
Leu Cys
385
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<212> PRT
<213> Vaccinia virus
<400> 120
Met Tyr Gly Leu Ile Leu Ser Arg Phe Asn Asn Cys Gly Tyr His Cys
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Tyr Glu Thr Ile Leu Ile Asp Val Phe Asp Ile Leu Ser Lys Tyr Met
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Asp Asp Ile Asp Met Ile Asp Asn Glu Asn Lys Thr Leu Leu Tyr Tyr
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Ala Val Asp Val Asn Asn Ile Gln Phe Ala Lys Arg Leu Leu Glu Tyr
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Ala Leu Ile Leu Asp Asp Asp Phe Pro Ser Lys Val Ser Met Ile Ser
130 135 140
Pro Val Ile Ile Arg Asn
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<212> PRT
<213> Vaccinia virus
<400> 121
Met Arg Arg Cys Ile His Ile Lys Glu Arg Lys Ile His Met Thr Asn
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Val Arg Tyr Val Pro His Thr Val Ala Asn Asp Ala His Asn Leu Val
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His Leu Ala His Leu Ile His Phe Ile Ile Tyr Phe Phe Ile Ile Arg
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<212> PRT
<213> Vaccinia virus
<400> 122
Met Ser Arg Ile Asn Ile Thr Lys Lys Ile Tyr Cys Ser Val Phe Leu
1 5 10 15
Phe Leu Phe Leu Phe Leu Ser Tyr Ile Ser Asn Tyr Glu Lys Val Asn
20 25 30
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35 40 45
Arg Asp Ser Met Trp Tyr Ile Pro Asn Val Phe Met Asp Asp Gly Lys
50 55 60
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65 70 75 80
Phe Phe Asp Val Asp Thr Ser Ser His Leu Phe Lys Leu Val Ile Lys
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100 105 110
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Gly Met Arg Asn Phe Asp Ser Lys Asp Glu Lys Gly His His Tyr Leu
130 135 140
Ile His Ser Leu Ser Ile Asp Asn Lys Ile Phe Asp Ile Leu Thr Asp
145 150 155 160
Thr Ile Asp Asp Phe Ser Lys Ser Ser Asp Leu Leu Leu Cys Tyr Leu
165 170 175
Arg Tyr Lys Phe Asn Gly Ser Leu Asn Tyr Tyr Val Leu Tyr Lys Gly
180 185 190
Ser Asp Pro Asn Cys Ala Asp Glu Asp Glu Leu Thr Ser Leu His Tyr
195 200 205
Tyr Cys Lys His Ile Ser Thr Phe Tyr Lys Ser Asn Tyr Tyr Lys Leu
210 215 220
Ser His Thr Lys Met Arg Ala Glu Lys Arg Phe Ile Tyr Ala Ile Ile
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Asp Tyr Gly Ala Asn Ile Asn Ala Val Thr His Leu Pro Ser Thr Val
245 250 255
Tyr Gln Thr
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<212> PRT
<213> Vaccinia virus
<400> 123
Met Glu Gln Thr Leu Thr Arg Leu His Thr Tyr Leu Gln Gln Tyr Thr
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Ile Leu Arg Tyr Leu Leu Asp Arg Phe Asp Ile Gln Lys Asp Glu Tyr
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100
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<212> PRT
<213> Vaccinia virus
<400> 124
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1 5 10 15
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Thr
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<212> PRT
<213> Vaccinia virus
<400> 125
Met Lys Ser Val Leu Tyr Ser Tyr Ile Leu Phe Leu Ser Cys Ile Ile
1 5 10 15
Ile Asn Gly Arg Asp Ile Ala Pro His Ala Pro Ser Asp Gly Lys Cys
20 25 30
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35 40 45
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65 70 75 80
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100 105 110
Arg His Val Phe Pro Lys Gln Asn Val Glu
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<212> PRT
<213> Vaccinia virus
<400> 126
Met His Val Pro Ala Ser Leu Gln Gln Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser
1 5 10 15
Cys Thr Glu Glu Glu Asn Lys His His Met Gly Ile Asp Val Ile Ile
20 25 30
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35 40 45
Ser Val Thr Glu Ile Thr Glu Ser Glu Ser Asp Pro Asp Pro Glu Val
50 55 60
Glu Ser Glu Asp Asp Ser Thr Ser Val Glu Asp Val Asp Pro Pro Thr
65 70 75 80
Thr Tyr Tyr Ser Ile Ile Gly Gly Gly Leu Arg Met Asn Phe Gly Phe
85 90 95
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100 105 110
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115 120 125
Ser Pro Ala Ile Thr Arg Glu Glu Ala Leu Ala Met Ile Lys Asp Cys
130 135 140
Glu Val Ser Ile Asp Ile Arg Cys Ser Glu Glu Glu Lys Asp Ser Asp
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Ile Lys Thr His Pro Val Leu Gly Ser Asn Ile Ser His Lys Lys Val
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Ser Tyr Glu Asp Ile Ile Gly Ser Thr Ile Val Asp Thr Lys Cys Val
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Lys Asn Leu Glu Phe Ser Val Arg Ile Gly Asp Met Cys Lys Glu Ser
195 200 205
Ser Glu Leu Glu Val Lys Asp Gly Phe Lys Tyr Val Asp Gly Ser Ala
210 215 220
Ser Glu Gly Ala Thr Asp Asp Thr Ser Leu Ile Asp Ser Thr Lys Leu
225 230 235 240
Lys Ala Cys Val
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<212> PRT
<213> Vaccinia virus
<400> 127
Met Asp Ile Phe Arg Glu Ile Ala Ser Ser Met Lys Gly Glu Asn Val
1 5 10 15
Phe Ile Ser Pro Ala Ser Ile Ser Ser Val Leu Thr Ile Leu Tyr Tyr
20 25 30
Gly Ala Asn Gly Ser Thr Ala Glu Gln Leu Ser Lys Tyr Val Glu Lys
35 40 45
Glu Glu Asn Met Asp Lys Val Ser Ala Gln Asn Ile Ser Phe Lys Ser
50 55 60
Ile Asn Lys Val Tyr Gly Arg Tyr Ser Ala Val Phe Lys Asp Ser Phe
65 70 75 80
Leu Arg Lys Ile Gly Asp Lys Phe Gln Thr Val Asp Phe Thr Asp Cys
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Arg Thr Ile Asp Ala Ile Asn Lys Cys Val Asp Ile Phe Thr Glu Gly
100 105 110
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Leu Ala Ile Ser Ala Val Tyr Phe Lys Ala Lys Trp Leu Thr Pro Phe
130 135 140
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Met Val Asp Val Ser Met Met Ser Met Tyr Gly Lys Ala Phe Asn His
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Ala Ser Val Lys Glu Ser Phe Gly Asn Phe Ser Ile Ile Glu Leu Pro
180 185 190
Tyr Val Gly Asp Thr Ser Met Met Val Ile Leu Pro Asp Lys Ile Asp
195 200 205
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Phe Lys Val Thr Gly Ser Tyr Asn Leu Val Asp Thr Leu Val Lys Ser
245 250 255
Gly Leu Thr Glu Val Phe Gly Ser Thr Gly Asp Tyr Ser Asn Met Cys
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Asn Ser Asp Val Ser Val Asp Ala Met Ile His Lys Thr Tyr Ile Asp
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Phe Ile Tyr Val Ile Arg His Val Asp Gly Lys Ile Leu Phe Val Gly
325 330 335
Arg Tyr Cys Ser Pro Thr Thr Asn Cys
340 345
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<211> 149
<212> PRT
<213> Vaccinia virus
<400> 128
Met Thr Ala Asn Phe Ser Thr His Val Phe Ser Pro Gln His Cys Gly
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Tyr Ile Tyr Trp Ser Ser Tyr Ala Tyr Arg Asn Arg Gln Cys Ala Gly
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Gln Leu Tyr Ser Thr Leu Leu Ser Phe Arg Asp Asp Ala Glu Leu Val
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Thr Ile Arg Glu Ile Ser Ala Ile Ile Gly Leu Cys Ala Tyr Ala Ala
100 105 110
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Phe Arg Arg Met Asn
145
<210> 129
<211> 326
<212> PRT
<213> Vaccinia virus
<400> 129
Met Ser Ile Leu Pro Val Ile Phe Leu Ser Ile Phe Phe Tyr Ser Ser
1 5 10 15
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<212> PRT
<213> Vaccinia virus
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165 170 175
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180 185 190
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195 200 205
Gly Cys Ile Asp Gly Met Ile Tyr Ile Asn Ser Ser Lys Phe Ala Cys
210 215 220
Val Leu Lys Leu His Arg Ser Met Tyr Arg Ile Pro Pro Phe Pro Ile
225 230 235 240
Asp Ile Cys Ser Cys Cys Ser Gln Tyr Ile Asn Tyr Asp Ile Glu Ile
245 250 255
Pro Ile His Asp Leu Ile Lys Asp Val Ala Ile Phe Lys Asn Lys Glu
260 265 270
Thr Val Tyr Tyr Leu Lys Leu Asn Asn Lys Thr Ile Ala Arg Phe Thr
275 280 285
Tyr Phe Asn Asn Ile Asp Thr Ala Ile Thr Gln Glu His Glu Tyr Val
290 295 300
Lys Ile Ala Leu Gly Ile Val Cys Lys Leu Met Ile Asn Asn Met His
305 310 315 320
Ser Ile Val Gly Val Asn His Ser Asn Thr Phe Val Asn Cys Leu Leu
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Glu Asp Asn Val
340
<210> 131
<211> 574
<212> PRT
<213> Vaccinia virus
<400> 131
Met Ser Arg Arg Leu Ile Tyr Val Leu Asn Ile Asn Arg Glu Ser Thr
1 5 10 15
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35 40 45
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50 55 60
Leu Tyr Asn Asn Tyr Phe Thr Asn Asp Val Leu Lys Ile Leu Leu Asn
65 70 75 80
His Gly Val Asp Val Thr Met Lys Thr Ser Ser Gly Arg Met Pro Val
85 90 95
Tyr Ile Leu Leu Thr Arg Cys Cys Asn Ile Ser His Asp Val Val Ile
100 105 110
Asp Met Ile Asp Lys Asp Lys Asn His Leu Leu His Arg Asp Tyr Ser
115 120 125
Asn Leu Leu Leu Glu Tyr Ile Lys Ser Arg Tyr Met Leu Leu Lys Glu
130 135 140
Glu Asp Ile Asp Glu Asn Ile Val Ser Thr Leu Leu Asp Lys Gly Ile
145 150 155 160
Asp Pro Asn Phe Lys Gln Asp Gly Tyr Thr Ala Leu His Tyr Tyr Tyr
165 170 175
Leu Cys Leu Ala His Val Tyr Lys Pro Gly Glu Cys Arg Lys Pro Ile
180 185 190
Thr Ile Lys Lys Ala Lys Arg Ile Ile Ser Leu Phe Ile Gln His Gly
195 200 205
Ala Asn Leu Asn Ala Leu Asp Asn Cys Gly Asn Thr Pro Phe His Leu
210 215 220
Tyr Leu Ser Ile Glu Met Cys Asn Asn Ile His Met Thr Lys Met Leu
225 230 235 240
Leu Thr Phe Asn Pro Asn Phe Glu Ile Cys Asn Asn His Gly Leu Thr
245 250 255
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Val Met Leu Ile His His Tyr Glu Thr Asn Val Gly Glu Met Pro Ile
275 280 285
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Arg Pro Ala Asp Ser Ile Thr Tyr Leu Met Asn Arg Phe Lys Asn Ile
305 310 315 320
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485 490 495
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Leu Leu Phe His Ser Tyr Ala Ile Asp Ile Glu Asn Glu Ile Thr Glu
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Leu Asn Pro Ala Cys Met Phe Gly Gly Thr Met Asn Asp Ile Ala Ala
50 55 60
Leu Gly Glu Pro Phe Ser Ala Lys Cys Pro Pro Ile Glu Asp Ser Leu
65 70 75 80
Leu Ser His Arg Tyr Lys Asp Tyr Val Val Lys Trp Glu Arg Leu Glu
85 90 95
Lys Asn Arg Arg Arg Gln Val Ser Asn Lys Arg Val Lys His Gly Asp
100 105 110
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130 135 140
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195 200 205
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Tyr Asp Asp Val Arg Ile Lys Asn Asp Ile Val Val Ser Arg Cys Lys
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245 250 255
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260 265 270
Thr Ala Val Ser Thr Ser Leu Leu Ile Asp Asp Val Leu Ile Glu Trp
275 280 285
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290 295 300
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340 345 350
Gln
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Tyr Tyr Val Leu Thr Gly Asp Thr Glu Pro Pro Thr Val Phe Ile Phe
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Met Ser Met Lys Tyr Leu Met Leu Leu Phe Ala Ala Met Ile Ile Arg
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<400> 146
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<213> Vaccinia virus
<400> 147
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<213> Vaccinia virus
<400> 148
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<212> PRT
<213> Vaccinia virus
<400> 149
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<212> PRT
<213> Vaccinia virus
<400> 150
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<213> Vaccinia virus
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Tyr Ser Asn Met Cys Asn Leu Asp Val Ser Val Asp Ala Met Ile His
145 150 155 160
Lys Thr Tyr Ile Asp Val Asn Glu Glu Tyr Thr Glu Ala Ala Ala Ala
165 170 175
Thr Cys Ala Leu Val Ser Asp Cys Ala Ser Thr Ile Thr Asn Glu Phe
180 185 190
Cys Val Asp His Pro Phe Ile Tyr Val Ile Arg His Val Asp Gly Lys
195 200 205
Ile Leu Phe Val Gly Arg Tyr Cys Ser Pro Thr Thr Asn Cys
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<210> 152
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<212> PRT
<213> Vaccinia virus
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Met Thr Ala Asn Phe Ser Thr His Val Phe Ser Pro Gln His Cys Gly
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Cys Asp Arg Leu Thr Ser Ile Asp Asp Val Lys Gln Cys Leu Thr Glu
20 25 30
Tyr Ile Tyr Trp Ser Ser Tyr Ala Tyr Arg Asn Arg Gln Cys Ala Gly
35 40 45
Gln Leu Tyr Ser Thr Leu Leu Ser Phe Arg Asp Asp Ala Glu Leu Val
50 55 60
Phe Ile Asp Ile Arg Glu Leu Val Lys Asn Met Pro Trp Asp Asp Val
65 70 75 80
Lys Asp Cys Thr Glu Ile Ile Arg Cys Tyr Ile Pro Asp Glu Gln Lys
85 90 95
Thr Ile Arg Glu Ile Ser Ala Ile Ile Gly Leu Cys Ala Tyr Ala Ala
100 105 110
Thr Tyr Trp Gly Gly Glu Asp His Pro Thr Ser Asn Ser Leu Asn Ala
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Leu Phe Val Met Leu Glu Met Leu Asn Tyr Val Asp Tyr Asn Ile Ile
130 135 140
Phe Arg Arg Met Asn
145
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<213> Vaccinia virus
<400> 153
Met Tyr Asn Ser Ser Ile His Thr Pro Glu Tyr Asp Val Ile Ile His
1 5 10 15
Val Ile Glu His Leu Lys His His Lys Gln Cys Val Gln Thr Val Thr
20 25 30
Ser Gly Met Val Phe Thr Ser Pro Val Ser Ser Ser Ile Cys Thr Lys
35 40 45
Ser Asp Asp Gly Arg Asn Leu Ser Asp Gly Phe Leu Leu Ile Arg Tyr
50 55 60
Ile Thr Thr Asp Asp Phe Cys Thr Ile Phe Asp Ile Ile Pro Arg His
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<213> Vaccinia virus
<400> 154
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Gly Ala Asp Asn Asp Arg Ile Ile Pro Ile Asp Asn Gly Ser Asn Met
35 40 45
Leu Ile Leu Asn Pro Thr Gln Ser Asp Ser Gly Ile Tyr Ile Cys Ile
50 55 60
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275 280 285
Ile Thr
290
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<212> PRT
<213> Vaccinia virus
<400> 155
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<212> PRT
<213> Vaccinia virus
<400> 156
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Val Leu Lys Leu His Arg Ser Met Tyr Arg Ile Pro Pro Phe Pro Ile
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Asp Ile Cys Ser Cys Cys Ser Gln Tyr Thr Asn Gly Asp Ile Glu Ile
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Pro Ile His Asp Leu Ile Lys Asp Val Ala Ile Phe Lys Asn Lys Glu
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<213> Vaccinia virus
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<213> Vaccinia virus
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<212> PRT
<213> Vaccinia virus
<400> 165
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Gly Arg Ile Ser Val Ala Asn Lys Ile Tyr Met Thr Asp Lys Arg Arg
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65 70 75 80
His Gly Val Asp Val Thr Met Lys Thr Ser Ser Gly Arg Met Pro Val
85 90 95
Tyr Ile Leu Leu Thr Arg Cys Cys Asn Ile Ser His Asp Val Val Ile
100 105 110
Asp Met Ile Asp Lys Asp Lys Asn His Leu Ser His Arg Asp Tyr Ser
115 120 125
Asn Leu Leu Leu Glu Tyr Ile Lys Ser Arg Tyr Met Leu Leu Lys Glu
130 135 140
Glu Asp Ile Asp Glu Asn Ile Val Ser Thr Leu Leu Asp Lys Gly Ile
145 150 155 160
Asp Pro Asn Phe Lys Gln Asp Gly Tyr Thr Ala Leu His Tyr Tyr Tyr
165 170 175
Leu Cys Leu Ala His Val Tyr Lys Pro Gly Glu Cys Arg Lys Pro Ile
180 185 190
Thr Ile Lys Lys Ala Lys Arg Ile Ile Ser Leu Phe Ile Gln His Gly
195 200 205
Ala Asn Leu Asn Ala Leu Asp Asn Cys Gly Asn Thr Pro Phe His Leu
210 215 220
Tyr Leu Ser Ile Glu Met Cys Asn Asn Ile His Met Thr Lys Met Leu
225 230 235 240
Leu Thr Phe Asn Pro Asn Phe Lys Ile Cys Asn Asn His Gly Leu Thr
245 250 255
Pro Ile Leu Cys Tyr Ile Thr Ser Asp Tyr Ile Gln His Asp Ile Leu
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Val Met Leu Ile His His Tyr Glu Thr Asn Val Gly Glu Met Pro Ile
275 280 285
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Arg Pro Ala Asp Ser Ile Thr Tyr Leu Met Asn Arg Phe Lys Asn Ile
305 310 315 320
Asn Ile Tyr Thr Arg Tyr Glu Gly Lys Thr Leu Leu His Val Ala Cys
325 330 335
Glu Tyr Asn Asn Thr His Val Ile Asp Tyr Leu Ile Arg Ile Asn Gly
340 345 350
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Ile Asp Asn Lys Glu Asn Ser Pro Tyr Thr Ile Asp Cys Leu Leu Tyr
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Ile Leu Arg Tyr Ile Val Asp Lys Asn Val Ile Arg Ser Leu Val Asp
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Leu Arg Cys His Asn Ser Lys Lys Leu Arg Arg Tyr Leu Asn Glu Leu
485 490 495
Lys Lys Tyr Asn Asn Asp Lys Ser Phe Lys Ile Tyr Ser Asn Ile Met
500 505 510
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<212> PRT
<213> Vaccinia virus
<400> 168
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Leu Leu Leu Leu Phe His Ser Tyr Ala Ile Asp Ile Glu Asn Glu Ile
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50 55 60
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65 70 75 80
Ser Leu Leu Ser His Arg Tyr Lys Asp Tyr Val Val Lys Trp Glu Arg
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100 105 110
Gly Asp Leu Trp Ile Ala Asn Tyr Thr Ser Lys Phe Ser Asn Arg Arg
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Val Arg Ser His Ile Arg Lys Pro Pro Ser Cys Ile Pro Lys Thr Tyr
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195 200 205
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<213> Vaccinia virus
<400> 169
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Met Ser Ser Lys Gly Gly Ser Gly Gly Met Trp Ser Val Phe Ile His
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35 40 45
Lys Ser Gly Thr Gly Lys Ile
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Met Phe Asp Tyr Leu Glu Asn Glu Glu Val Ala Leu Asp Glu Leu Lys
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Met Leu Lys Leu Lys Asp Ile Ala Met Ala Leu Leu Glu Ala Thr Gly
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50 55 60
Thr Ile
65
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<213> Vaccinia virus
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50 55 60
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Asn Arg Ser Gly Lys Cys Leu Leu Val Asn Asn His Leu Gly Ile Gly
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Met Leu Ile Asn Tyr Leu Met Leu Leu Phe Ala Ala Met Ile Ile Arg
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Arg Thr Asn Lys Leu Pro Leu Gln Asp Met Val Val Pro
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<212> PRT
<213> Vaccinia virus
<400> 181
Met Asp Ile Phe Lys Glu Leu Ile Val Lys His Pro Asp Glu Asn Val
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Met Leu Ser Thr Lys Ser Ile Asp Leu Tyr Met Pro Lys Phe Lys Val
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<212> PRT
<213> Vaccinia virus
<400> 182
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<213> Vaccinia virus
<400> 183
Met Asn Leu Gln Lys Leu Ser Leu Ala Ile Tyr Leu Thr Ala Thr Cys
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50
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<213> Vaccinia virus
<400> 184
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<213> Vaccinia virus
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180
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<212> PRT
<213> Vaccinia virus
<400> 186
Met Ile Ala Phe Ile Ile Phe Arg Glu Ile Gly Ile Ile Ser Thr Arg
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Ile Ala Met Asp Cys Thr Cys Ile Leu Cys Arg Leu Leu Asp Glu Asp
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195 200 205
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210 215 220
Ser Lys Asp Val Ile Lys Cys Leu Ile Asn Asn Asn Val Ser Ile His
225 230 235 240
Gly Arg Asp Glu Gly Gly Ser Leu Pro Ile Gln Tyr Tyr Trp Ser Phe
245 250 255
Ser Thr Ile Asp Ile Glu Ile Val Lys Leu Leu Leu Ile Lys Asp Val
260 265 270
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275 280 285
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370 375 380
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<213> Vaccinia virus
<400> 187
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Met Lys Asn Ala Tyr Ile Ser Gly Val Ser Met Phe Asp Ile Leu Phe
165 170 175
Lys Arg Ser Lys Arg His Arg Leu Arg Tyr Ala Lys Asn Pro Thr Ser
180 185 190
Asn Gly Thr Lys Lys Asn
195
<210> 188
<211> 147
<212> PRT
<213> Vaccinia virus
<400> 188
Met Ser Arg Ile Asn Ile Thr Lys Lys Ile Tyr Cys Ser Val Phe Leu
1 5 10 15
Phe Leu Phe Leu Ser Tyr Ile Ser Asn Tyr Glu Lys Val Asn Asp Glu
20 25 30
Met Tyr Glu Met Gly Glu Met Asp Glu Ile Val Ser Ile Val Arg Asp
35 40 45
Ser Met Trp Tyr Ile Pro Asn Val Phe Met Asp Asp Gly Lys Asn Glu
50 55 60
Gly His Val Ser Val Asn Asn Val Cys His Met Tyr Phe Thr Phe Phe
65 70 75 80
Asp Val Asp Thr Ser Ser His Leu Phe Lys Leu Val Ile Lys His Cys
85 90 95
Asp Leu Asn Lys Arg Gly Asn Ser Pro Leu His Cys Tyr Thr Met Asn
100 105 110
Thr Arg Phe Asn Pro Ser Val Leu Lys Ile Leu Leu His His Gly Met
115 120 125
Arg Asn Phe Asp Ser Lys Asp Asp His Tyr Gln Ser Ile Thr Arg Ser
130 135 140
Leu Ile Tyr
145
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<212> PRT
<213> Vaccinia virus
<400> 189
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1 5 10 15
Lys His Ser Pro Arg Val Val Tyr Ala Leu Leu Ser Arg Gly Tyr Val
20 25 30
Ile Ile Leu Ile Val His Pro Ser Trp Asn Asp Cys Ala Thr Gly His
35 40 45
Ile Leu Ile Met Leu Leu Asn Trp His Glu Gln Lys Glu Glu Gly Gln
50 55 60
His Leu Leu Tyr Leu Phe Ile Lys His Asn Gln Gly Tyr Thr Leu Asn
65 70 75 80
Ile Leu Arg Tyr Leu Leu Asp Arg Phe Asp Ile Gln Lys Asp Glu Tyr
85 90 95
Tyr Asn Thr Ala Phe Gln Asn Cys Asn Asn Asn Val Ala Ser Tyr Ile
100 105 110
Gly Tyr Asp Ile Asn Leu Pro Thr Lys Asp Gly Ile Arg Leu Gly Val
115 120 125
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<212> PRT
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<400> 190
Met Leu Pro His Thr Ser Asp Thr Thr Ser Thr Phe Arg Leu Lys Thr
1 5 10 15
Val Phe Asp Leu Val Phe Glu Asn Arg Asn Ile Ile Tyr Lys Ala Asp
20 25 30
Val Val Asn Asp Ile Ile His His Arg Leu Lys Val Pro Met Ile Lys
35 40 45
Ser Leu Phe Tyr Lys Met Ser Glu Phe Ser Pro Tyr Asp Asp Tyr Tyr
50 55 60
Val Lys Lys Ile Leu Ala Tyr Cys Leu Leu Arg Asp Glu Ser Phe Ala
65 70 75 80
Glu Leu His Ser Lys Phe Cys Leu Asn Glu Asp Tyr Lys Ser Val Phe
85 90 95
Met Lys Asn Ile Ser Phe Asp Lys Ile Asp Ser Ile Ile Val Thr
100 105 110
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<400> 191
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1 5 10 15
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20 25 30
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35 40 45
Ala Cys Leu Ser Cys Asn Gly Arg Arg Asp Arg Val Thr Leu Leu Thr
50 55 60
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65 70 75 80
His Pro Asp Ala Arg His Val Phe Pro Lys Gln Asn Val Glu
85 90
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<212> PRT
<213> Vaccinia virus
<400> 192
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1 5 10 15
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20 25 30
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35 40 45
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50 55 60
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65 70 75 80
Ser Ile Ile Gly Gly Gly Leu Arg Met Asn Phe Gly Phe Thr Lys Cys
85 90 95
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100 105 110
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115 120 125
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130 135 140
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145 150 155 160
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165 170 175
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180 185 190
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195 200 205
Glu Val Lys Asp Gly Phe Lys Tyr Val Asp Gly Ser Ala Ser Glu Gly
210 215 220
Ala Thr Asp Asp Thr Ser Leu Ile Asp Ser Thr Lys Leu Lys Ala Cys
225 230 235 240
Val
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<212> PRT
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<400> 193
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<212> PRT
<213> Vaccinia virus
<400> 194
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1 5 10 15
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Tyr Met Thr Asn Leu Ser Lys Asp Thr Gly Ile Gln Gln Ser Lys Leu
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Tyr Val Thr Val Lys Lys Ile Glu Thr Tyr Met Val Tyr Ile Tyr Thr
50 55 60
Thr Ile
65
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<212> PRT
<213> Vaccinia virus
<400> 195
Met Asp Ile Tyr Asp Asp Lys Gly Leu Gln Thr Ile Lys Leu Phe Asn
1 5 10 15
Asn Glu Phe Asp Cys Ile Arg Asn Asp Ile Arg Glu Leu Phe Lys His
20 25 30
Val Thr Asp Ser Asp Ser Ile Gln Leu Pro Met Glu Asp Asn Ser Asp
35 40 45
Ile Ile Glu Asn Ile Arg Lys Ile Leu Tyr Arg Arg Leu Lys Asn Val
50 55 60
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65 70 75 80
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115 120 125
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145 150 155 160
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165 170 175
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180 185 190
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195 200 205
Asn Arg Ser Gly Lys Cys Leu Leu Val Asn Asn His Leu Gly Ile Gly
210 215 220
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225 230 235 240
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245 250 255
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<211> 241
<212> PRT
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<400> 198
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210 215 220
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225 230 235 240
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<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 199
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<210> 200
<211> 149
<212> PRT
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<400> 200
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50 55 60
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65 70 75 80
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<212> PRT
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<400> 201
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260 265 270
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275 280 285
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305 310 315 320
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325
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<212> PRT
<213> Vaccinia virus
<400> 202
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20 25 30
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165 170 175
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180 185 190
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Gly Cys Ile Asp Gly Met Ile Tyr Ile Asn Ser Ser Lys Phe Ala Cys
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Val Leu Lys Leu His Arg Ser Met Tyr Arg Ile Pro Pro Phe Pro Ile
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Asp Ile Cys Ser Cys Cys Ser Gln Tyr Thr Asn Asp Asp Ile Glu Ile
245 250 255
Pro Ile His Asp Leu Ile Lys Asp Val Ala Ile Phe Lys Asn Lys Glu
260 265 270
Thr Val Tyr Tyr Leu Lys Leu Asn Asn Lys Thr Ile Ala Arg Phe Thr
275 280 285
Tyr Phe Asn Asn Ile Asp Thr Ala Ile Thr Gln Glu His Glu Tyr Val
290 295 300
Lys Ile Ala Leu Gly Ile Val Cys Lys Leu Met Ile Asn Asn Met His
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325 330 335
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<213> Vaccinia virus
<400> 203
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<213> Vaccinia virus
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<400> 206
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<210> 207
<211> 64
<212> PRT
<213> Vaccinia virus
<400> 207
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<213> Vaccinia virus
<400> 208
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1 5 10 15
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130 135 140
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145 150 155 160
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195 200 205
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Gly Ala Thr Asp Asp Thr Ser Leu Ile Asp Ser Thr Lys Leu Lys Ala
245 250 255
Cys Val
<210> 209
<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 209
Leu Leu Ala Asn Gly Arg Met Pro Thr Val Leu Gln Cys Val Asn
1 5 10 15
<210> 210
<211> 156904
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<220>
<221> misc_feature
<222> (18348)..(19490)
<223> remaining portion of the C2L gene
<220>
<221> misc_feature
<222> (19491)..(19849)
<223> remaining portion of the F3L gene
<220>
<221> misc_feature
<222> (153421)..(153469)
<223> sequence that replaces a portion of the B8R gene sequence
<220>
<221> misc_feature
<222> (153430)..(153463)
<223> loxP site
<220>
<221> misc_feature
<222> (153470)..(153619)
<223> remaining portion of the B8R gene
<220>
<221> misc_feature
<222> (153514)..(153528)
<223> potential transcription regulatory sequences of the B9R gene
<220>
<221> misc_feature
<222> (153638)..(153667)
<223> potential transcription regulatory sequences of the B9R gene
<220>
<221> misc_feature
<222> (156094)..(156489)
<223> remaining portion of the B14R gene
<220>
<221> misc_feature
<222> (156490)..(156904)
<223> remaining portion of the B29R (ITR) gene
<400> 210
tcagacacac gctttgagtt ttgttgaatc gatgagtgaa gtatcatcgg ttgcaccttc 60
agatgccgat ccgtcgacat acttgaatcc atccttgacc tcaagttcag atgattcctt 120
gcacatgtct ccgatacgaa cgctaaactc tagattcttg acacattttg tatcgacgat 180
cgttgaaccg atgatatctt cgtaactcac tttcttatga gagatgttag acccgagtac 240
tggatgggtc ttgatgtcgc tgtctttctc ttcttcgcta catctgatgt cgatagacac 300
ctcacagtct ttgatcatag ccagagcttc ttcacgagtg atcgcgggag agtccttacc 360
ttgtcctggg gacacgctgg acaatctagc attcactgtg tttccatcag cggattctga 420
gatggattta atctgaggac atttggtgaa tccaaagttc attctcagac ctccaccgat 480
gatggagtaa taagtggtag gaggatctac atcctcgact gatgtggaat catcttctga 540
ttccacctcg ggatctggat ctgactcgga ctctgtaatt tccgttacgg attggcaaat 600
cttatcattg gtcggtgttt ggtcttgctt tgtgactttg ataataacat cgattcccat 660
atgatgtttg ttttcttctt ccgtacacga ggaggaggat gaggatgatt gctgaagact 720
ggcaggcaca tgcatgccag gacgatatat tgtttcataa ttgctattga ttgagtactg 780
ttctttatga ttctacttcc ttaccatgca ataaattaga atatattttc tacttttacg 840
agaaattaat tattgtattt attatttatg ggtgaaaaac ttactataaa aagcgggtgg 900
gtttggaatt agtgatcagt ttatgtatat cgcaactacc gggcatatgg ctatcgacat 960
cgagaacatt acccacatga taagagattg tatcagtttc gtagtcttga gtattggtat 1020
tactatatag tatatagatg tcgacgctag atatacagtc tccgaatgcg gcatgatacc 1080
gtcatcattc tttgctttcg ttaactgttt ggaggaagaa tctttgttat tgcatttaat 1140
ctcgaaattc agagtgcaca cctttctcct gtaaagaatc ctgaagtcgc taccttatta 1200
agaacggaga agtatccatc acgaaatacg ggattacagt ctttatgatt catagtaata 1260
gttagttccg acgttgagat ggattcactg agaccggtag tggtcgtccg agtacacgac 1320
gtgtcgttga cgggatacag attaatttcc acatcgatat agttaaaggt atttctgggt 1380
acgggttcgc atttatctgc ggaagagacg gtgtgagaat atgttccgag accacacgga 1440
gaacagatga cgtctccgga tactccgtat cctattccac attttgtttg ggaaacacat 1500
gccttgcatc cggatgatcc tttgagaaga caataatatc cgggagagca ttcacagatt 1560
ctattgtgag tagtgttaca cgatcgcgtc ttccgttaca acttagacaa gcgggtaaat 1620
gattattgcg agatgtgaag gtacccgaac cacacggcgt acattgtgtg ttagtcttgc 1680
tatcgcataa tctggaagcg tatgttcccg gacacaaatt atggcgtttg tattcgttgt 1740
ctttacactt tccatcggat ggtgcatgcg gtgctatatc tcttccgttt attattatac 1800
atgagagaaa caatatatac gagtataata cggacttcat aatttaataa tgtagtaatc 1860
gttgtcgtgt tcctgtttcc tacttctcca atcatataga tattttcttt ctatcatgga 1920
taatatttgt aatggttctt tccgtacaac atactgttta gatgatattg cgcataattt 1980
ccggaggcaa atacgatagt ctagattgac cgatggtaga ctctaattta ttgagtgctt 2040
tgtcgacgag tttactttta cgctccatcg atagatggca ctgttctatg agatcgtcgt 2100
acatgggaaa tgaaatgtgt ctgtccgaat gtatggcttc aagatagctg tgataccgta 2160
tacaggtcgg tgtcggagat tcgaatctct ttgaggcgac ttatgtcacg atgatggaat 2220
ctatcttatc gaatgatata tttttcataa atacactttt atagtcctcg tttaaacaga 2280
atttactatg tagttccgcg aatgactcgt cccttaatag gcagtaggct agtatctttt 2340
ttacgtagta atcgtcgtag ggagagaatt ctgacatctt gtagaacaac gatttaatca 2400
taggtagaga tactttcagt ctgtggtgga tgatgtcatt cacaacatcc gccttgtata 2460
tgatgtttct gttttcaaac accaagtcga ataccgtctt tagtcggaag gttgatgtcg 2520
tatccgatgt atgaggcaac attgttgtta caattttgaa aggcggtatt atagtattcg 2580
tctttctgaa tgtcgaacct atctagtaga taccgtagta tattgagagt gtatccttga 2640
ttatgtttta tgaatagata aagtagatgt tgtccttctt ccttttgttc gtgccaattg 2700
agtaacatta tgagaatatg acctgttgca caatcgttcc atgatgggtg tacaatcaag 2760
attattacgt atcctcgaga taaaagagca tacaccacac gaggactatg tttggtatac 2820
tgttgaaggt aagtgtgtaa ccgcgttaat gtttgctcca taatctatta tcgcgtagat 2880
gaatcgcttc tcggctcgca tcttagtgtg acttaacttg taataattgc ttttgtagaa 2940
cgtggatatg tgtttacagt agtaatgaag agaagtgagt tcatcctcgt cggcgcaatt 3000
agggtcggat cctttgtaca gaacgtagta gtttaagctc ccattgaatt tatatctaag 3060
ataacacagc aatagatcgg atgatttact aaagtcatca atggtgtccg ttagtatatc 3120
aaagatcttg ttatcgattg atagtgaatg aatcagatag tggtgtcctt tttcatcctt 3180
gctatcaaag ttacgcatgc cgtggtgtaa caatatcttt aatacagatg gattaaatcg 3240
tgtattcatc gtatagcaat gtaatggaga gttacctcgt ttattcagat cgcagtgttt 3300
aataactagc ttaaacagat gagacgatgt atccacatca aagaacgtaa aatacatatg 3360
acaaacattg ttgacagaaa cgtgaccttc attcttaccg tcgtccataa atacgttagg 3420
tatgtaccac atactgtcgc gaacgatgct cacaatctcg tccatctcgc ccatctcata 3480
catttcatca tttacttttt cataattaga gatgtacgaa agaaaaagaa aaagaaaaag 3540
aaaaacagaa caatatattt ttttagtaat gtttatgcga gacatataaa ataaactccg 3600
tgtttatgat gccggtaaat gtttttatca tcttggacgg aatcgatttt gtaatatgtc 3660
atggaaacaa atgaaacagg acattatcac tccatgataa attatttaat ggagtaataa 3720
agtatctcca tgggtaattt cgaaatcaag ttatcgtctg tattaatgtt gtccactatg 3780
gagtcgatcc tctcactgtt ctttacagtt tctgtaatga tggacgttag ttcttttttg 3840
taccatttga tgtcggattc tttgcgtatc tcagtctgtg gcgtttgctt cgtttaaata 3900
atatatcaaa catggagacg cctgatatgt aggcattctt cattctatta atgtctactc 3960
tatagcgctt tagttcctta tgatgaccgg cgatatcata cttactttag aaggaaaatc 4020
atcatctagg attaaggcgt atctgataca ggcgaataat ggttcaggat atagatagcg 4080
tatatctcta ttaaatgcgt caatcatagt ctctagagtg ggatggtagc taagtaataa 4140
atcaactatc ctcgttttgt tttctctttg gtaactgctt ttctggatgg ccgtattgat 4200
tatcgagcgt gatgttgtaa cactcgctcc atattccaat aaccgctttg caaattgtat 4260
attattgaca tcgaccgcgt aatatagtag agttttattc tcattatcga tcatatctat 4320
atcatccatg tacttgctta gtatatcaaa tacatctatt agtatggttt cataacagtg 4380
atacccgcaa ttattaaatc tcgataatat cagaccgtac atacatagac ggccattgtt 4440
agatatgtga tttacagccg cgtgtccata ttttccacga taaaccttac gacgtttaca 4500
tcgacgagat tattattaac aaagtagtcg tgcagaggat agttgttgtc cgttatctaa 4560
catgcatcga acgaccatat cgccgtaatg taagtagttt atcaacatgg cttgtacgat 4620
ggattcatcc tgttgtctaa atctctttag aatgttatcg atgatgtagt ggttatattc 4680
tctggaatcg tacgaagtaa tactacgcat tacgtcgaca agagtatgac gtctctcaat 4740
aagaagatta acgatttcca tgtctacatt atatggggtt actctaaatc gcttgtttag 4800
ataatacgcc tctaatatag ggctgacgtc gtatactcta cacgtgtcca catcctttat 4860
taataataat ttaacaatct ctatatctat ggttgagaaa gaccagtagt attggatggg 4920
taaagatcct ccttcgtctc tgccatggat ggaaacattg ttattgatca aacatttaat 4980
tacatccttg gatagagatt gagattctct atgagacgat atatagtaat gaagagagtt 5040
cttacacata tcactgttgt acatacaggt acgaaatacg taaccggtgc tgtaacattc 5100
tgatttaaga agccatagca atacttctgg tctcggatta ggcgtcgtta cgtatatatc 5160
caccaatccg agaccattga ttgcataatt cgtattcttg gacggacgta tccgtttatc 5220
cacaattagg tattttagca gacgtaagtc gatattatcc gaagacagat cgaaatcatt 5280
tatattcgac ttgagttcgt tagaggaatt cgaatagctg gatatcagta gatgcacaat 5340
ctgagatttt acgtatctat gcttactgta tgctcctagc ggagttaatc cttcgttgtt 5400
tctacaaagt ctctcgactc cgcgagagag taacagtcga acaatcttaa tgtctgtatc 5460
gcatttattg gagacgtaac aatgtagcgc attgtttcct cgtctatcta tatgttttga 5520
taagttgtga cacgtttcaa tctctagttt tatttttttg tacgtcacat cttcatccag 5580
tagacgacat agaatagtgc actctctacc acaataatcc atagctattc tggtgctaat 5640
tattcctatt tcacgaaaaa tgatgaaggc aatcattcct cataagatga taaaaagtgt 5700
agtgagagag catgaaggag atttagtatt tagcagtgcg gatatgatcc aagagggtga 5760
gatagtcgtt ctcgttcaga atctttcgca gcataagtag tatgtcgata tacttatcgt 5820
tgaagactct tccagagacg atagctgatt gagtacaaag tccaatgatt gcacgaagtt 5880
cttcggcggt tttcatggag tcatttctga tgaaacattt aatgatctcc acgcaattgt 5940
cgatattgtc ccacggaagt gaatccttca actcaccacc aaagagctcc gttgcatcag 6000
ttctgaaaga gatgagaagc ctgtagagag accctgcgct ttctctatgg gtccatctat 6060
gagaaaccca caggatgtat tcagtcagac aatgtctgac gtcggccacg gtattcaggg 6120
agtccttagt agcgtggcaa tgacagggtc tgaactgggc acaaggaaag gccattgtaa 6180
aggtagacct gtagccgttt atgctaatag agggctttaa tttccatttt tttaatgggt 6240
tgtggatgag gaatgagagt gatatcatat tgagatacgt agttatgtag aggtgtattt 6300
cctatattat ttactttcgg tttcatattt taccaactct ttaataaatt tcttttcacg 6360
atgcatctta ttgaatgacg ttttctcata agtggacata tagatgcaga agtaatgaag 6420
aaaagtatta cctctatcat ctacataatt agggtctgct ccttttttta acaacttata 6480
cagtacgtag tagtagttta tcggttttaa atcaagtcta gaatatatag tggattaata 6540
tatttttata ttagctaaag ctatctatac tatcagaaag catatcattc tcaacttcat 6600
catgagttaa atatttgtgt aatggatgtc atgaacatta aacgtattca tgacatactc 6660
ctttaatagg ttttttaaaa cagatgattc aaatccttca ttcattagat aacagtgtaa 6720
cggagtcgta ccttctacta gtttgtttat atcacagcat tctacaaaca gtctaaacaa 6780
tagagaagac ggacagactt taacgtataa atgacacatg ttatcgatat tcgttgatga 6840
attattatta aacgtagtta tgataaatga ttctaacgac atctctcgct agagataaaa 6900
tctagtatcg tatcattaaa catctttgca tcatactcgc atagcatagt ttttcataat 6960
taatacaata tttaaaagac ttattcggaa agtattttaa tacatgtatc atcgatggag 7020
atccatatga ggagtcactt gtagttcttc agtagtaata acagtgctat catcgatagt 7080
ataattatat gtagaaggtt catatgttgt tgtaattgga gtaactgttg gtagttcttc 7140
cgtggaatca ataattatac taacagcaat agtataatta tataaatatg ttccgttgat 7200
atcacatatt ttaatgaact catttctaac accctcagct atatctgtcc aattaaatgt 7260
agccaacaat ctactacgtt ctctttgatt gactacttgt acggtagcga cgctacacta 7320
tctttattgt cttctacatg ctccaattga atgtcatgat acaacgcagt ttttcttatg 7380
catgtttcat aacaccacga acatgtcgca gtaagatata tagccagaga taatttctgt 7440
aaattcatga ttgccggtca taaacaagcc cgtcaataat tgtggctata tattcagttt 7500
atagagcaaa ataattaagc acaatagcgc ttaatctcaa aatatgttat gtttattttt 7560
ttcatattaa acatactggt taaaatcctc taaaggctga tcttcatcta taaatcaaga 7620
tcataattac atttagacag tggtttcatg tttataaaaa tgttcttttt gtgtgaataa 7680
ggaatatact aatcaataat caaccatcga ccccattacg atagtatgca ggcaaccccc 7740
cattagagag gtacgtgtaa tcagtctctc cagttttagt atttttataa gtcattgtta 7800
cataaacggc ttttaaacag tctcctcgat aataagccat atctggaaat ttattaaata 7860
ctcgagtcat tttacgcacg gtcaaaaaag taagtaatgt cgacgacttc ttacattcta 7920
tagaaacacc tagaatactc attttctttt ggaaaatatc ctcagactct gatttgaaca 7980
atgcacgacc tatagtaaac cgtgaccaat aagttatatt agtcaatggt atatccaaac 8040
catcaggtgt ggatagtcca gtctttggta tcgatagtgt agttattgaa ctgagaagtt 8100
accgtatagt ctttttggtc atctctaaac aaggaaacta atacctctac actattgaac 8160
gatttatctt ccgtaatggg tggactagcg atggatgaag tcacgaatat aagacacgct 8220
attaatccgt atatcatcat tttgatatta cttataataa cgatttgttt aatttttagt 8280
ttatactatt aattgtaaat gatattatta tttttttaag tattatcagc tttagtttat 8340
actattacta tttgtaatat ttagacatag ataaacgtga taaaagtcta tttgtttata 8400
tttattgcgg atagcagtat ttccctataa aaagtatacg tcctgtggtg tctttaatca 8460
tgtacatgaa tggatggttt atgtagacct tcgtacgata taccatcgaa aagttaatcg 8520
taaatactcc tgtaacggcc gatgcttctg tatactcctc attaacatct ataaacgtcg 8580
tatgtagaaa tttttctaca gtgatagttt cattacacat cttgctaaaa tctgcataat 8640
atccgaatat attagtaagt cctaaatttt ctaaaatcgg taccagatta tacggttctg 8700
tcatttccac tttaaacttt ggcatataca agtctatact tttagtagat aacataccac 8760
accatttttt aaatttttca tctgttatat ttttttctat gttatatata ccttctatgt 8820
cgtccggtag tataatcacc atactagagt ttccctcgta tggaatatcg ataatagaga 8880
atcctccgaa taattcatta atatgtacat attgcaagtt attctcggta cccaccatca 8940
tatcaacact ggtaactata ttcttagaaa tataaaactt gtctgtatat gtaagatgtt 9000
tagaaaatgg atatttccac attgctttaa aatggacggc gctaacaact gtcatacgag 9060
tattaatgga tagcggacta gtcaataagg aattaatttt accatttgtc attgtcttaa 9120
cccattcgtt gattagttcc tttgtttggt tagcattatt aaagtttaca gtttgaaaat 9180
cgtcttttat tttttgtagg aaggaggcgt ggaactcgat actatcgcta ccgtatattt 9240
tatttgcggt agctagtgtc gcacaatacg gaatatctac gtccatgtca ttattgtcat 9300
cgggtgtatt ctcattcata ttctctatat attttgatag ttgttcagct gtagaaccag 9360
ctgctccatg atttagaata gataaagtag ataaaataga aactggagaa atcaaaacat 9420
tttcatcagg gtgttttacg attagttctt taaagatatc catggtatag accaaacaat 9480
aacgataacg atatatatca taaataaata atgttaaatt tcagtttatg tttgtacccc 9540
gtattcatac ttaacaaatt ggtattgcgt acacaatcaa tcatattaca taccattaat 9600
aatgcaagca taaaaaatcg ttagtagatg tttctaaata taggttccgt aagcaaagaa 9660
tataagaatg aagcggtaat gataaaatca atcgttatct aaaatgatca tactcattta 9720
ttttattcta ttatattaac acatacattt ttaacagcaa cacattcaat attgtattgt 9780
tatttttata ttatttacac aattaacaat atattattag tttatattac tgaattaata 9840
atataaaatt cccaatcttg ttataaacac acactgagaa acagcataaa cacagaatcc 9900
atcaaaaatg tcgatgaaat atctgatgtt gttgttcgct gctatgataa tcagatcatt 9960
cgccgatagt ggtaacgcta tcgaaacgac attgccagaa attacaaacg ctacaacaga 10020
tattccagct atcagattat gcggtccaga gggagatgga tattgtttac acggtgactg 10080
tatccacgct agagatatcg acggtatgta ttgtagatgc tctcatggtt atacaggcat 10140
tagatgtcag catgtagtat tagtagacta tcaacgttca gaaaacccaa acactacaac 10200
gtcatatatc ccatctcccg gtattatgct tgtattagta ggcattatta ttattattac 10260
gtgttgtcta ttatctgttt ataggttcac tcgaagaact aataaactac ctctacaaga 10320
tatggttgtg ccataatttt tataaatttt ttttatgagt atttttacaa aaatgtataa 10380
agtgtatgtc ttatgtatat ttataaaaat gctaaatatg cgatgtatct atgttatttg 10440
tatttatcta aacaatacct ctacctctag atattataca aaaatttttt atttcagcat 10500
attaaagtaa aatctagtta ccttgaaaat gaatacagtg ggtggttccg tatcaccagt 10560
aagaacataa tagtcgaata cagtatccga ttgagatttt gcatacaata ctagtctaga 10620
aagaaatttg taatcatctt ctgtgacggg agtccatata tctgtatcat cgtctagttt 10680
atcagtgtcc catgctatat tcctgttatc atcattagtt aatgaaaata actctcgtgc 10740
ttcagaaaag tcaaatattg tatccataca tacatctcca aaactatcgc ttatacgttt 10800
atctttaacg atacctatac ctagatggtt atttactaac agacattttc cagatctatt 10860
gactataact cctatagttt ccacatcaac caagtaatga tcatctattg ttatataaca 10920
ataacataac tcttttccgt ttttatcagt atgtatatct atattaacgt cgtcgttgta 10980
gtgaatagta gttattgatc tattatatga aacggatatg tctagaacgg caattgtttt 11040
acgtccagtt aacactttct ttgatttaaa gtctagagtc tttgcaaaca taatatcctt 11100
atccgacttt atatttcctg tagggtggta taattttatt ttgcctccac atatcggtgt 11160
ttccaaatat attactagac aatattccat atagttatta gttaagggta cccaattaga 11220
acacgtacgc ttattatcat catttggatc gtatttcata aaagttattg tactatcgat 11280
gtcaacacat tctacatttt ttaatcgtct atatagtatt tttctgatat tttctataat 11340
atcagaattg tcttccatcg gaagttgtat actatcagaa tcagttacat gtttaaataa 11400
ttctctgatg tcattcctta tacaatcaaa ttcattatta aacagtttaa tagtctgtag 11460
acctttatcg tcgtaaatat ccattgtctt attagttacg cttattttta tgtgttttta 11520
cgttgcttta ttatatttta taagaatgat tgtttgacga atcacgagaa ctattaagac 11580
atatattatt agaggtatat attataaaaa agtttttgat tacgatgtta taagaggaaa 11640
gaggacacat taacatcata catcaattaa ctacattctt ataacatcgt aatcaaaaga 11700
attgcaattt tgatgtataa caactgtcaa tgggttatgg aattgtatat tacatattat 11760
acggtatgtt ggtaacgaca aataccgatc ggtaattgtc tgccggtgta atagaattat 11820
atatatctat ctattacacc ggctgagtac ctacactatt atatgattat agtttctatt 11880
tttacagtac cttaactaaa gtctctagtc acaagagcaa tactaccaac ctacactatt 11940
atatgattat agtttctatt tttataggaa cgcgtacgag aaaatcaaat gtctaatttc 12000
taacggtagt gttgataaac gattatcgtc aatggatacc tcctctatca tgtcgtctat 12060
tttcttactt tgttctatta acttattagc attatatatt atttgattat aaaacttata 12120
ttgcttatta gcccaatctg taaatatcgg attattaaca tatcgtttct ttgtaggttt 12180
atttaacatg tacatcactg taagcatgtc cgtaccattt attttaattt gacgcatatc 12240
cgcaatttct ttttcgcagt cggttataaa ttctatatat gatggataca tgctacatgt 12300
gtacttataa tcgactaata tgaagtactt gatacatatt ttcagtaacg atttattatt 12360
accacctatg aataagtacc tgtgatcgtc taggtaatca actgttttct taatacattc 12420
gatggttggt aatttactca gaataatttc caatatctta atatataatt ctgctatttc 12480
tggaatatat ttatctgcca gtataacaca aatagtaata catgtaaacc catattttgt 12540
tattatatta atgtctgcgc cattatctat taaccattct actaggctga cactatgcga 12600
cttaatacaa tgataaagta tactacatcc atgtttatct attttgttta tatcatcaat 12660
atacggctta caaagtttta gtatcgataa cacatccaac tcacgcatag agaaggtagg 12720
gaataatggc ataatattta ttaggttatc atcattgtca ttatctacaa ctaagtttcc 12780
attttttaaa atatactcga caactttagg atctctattg ccaaattttt gaaaatattt 12840
atttatatgc ttaaatctat ataatgtagc tccttcatca atcatacatt taataacatt 12900
gatgtatact gtatgataag atacatattc taacaataga tcttgtatag aaactgtata 12960
tcttttaaga attgtggata ttaggatatt attacgtaaa ctattacaca attctaaaat 13020
ataaaacgta tcacggtcga ataatagttg atcaactata taattatcga ttttgtgatt 13080
tttcttccta aactgtttac gtaaatagtt agatagaata ttcattagtt catgaccact 13140
atagttacta tcgaataacg cgtcaaatat ttcccgttta atatcgcatt tgtcaagata 13200
ataatagagt gtggtatgtt cacgataagt ataataacgc atctcttttt tgtgtgaaat 13260
taaatagttt attacgtcca aagatgtagc ataaccatct tgtgacctag taataatata 13320
ataatagaga actgttttac ccattctatc atcataatca gtggtgtagt cgtaatcgta 13380
atcgtctaat tcatcatccc aattataata ttcaccagca cgtctaatct gttctatttt 13440
gatcttgtat ccatactgta tgttgctaca tgtaggtatt cctttatcca ataatagttt 13500
aaacacatct acattgggat ttgatgttgt agcgtatttc tctacaatat taataccatt 13560
tttgatacta tttatttcta tacctttcga aattagtaat ttcaataagt ctatatcgat 13620
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tattacccta tagttttatt gcttactact aacatggata cagatacaga tacagataca 154500
gatacagata cagatacaga tacagataca gatgttacaa atgtagaaga tatcataaat 154560
gaaatagata gagagaaaga agaaatacta aaaaatgtag aaattgaaaa taataaaaac 154620
attaacaaga atcatccaag tggatatatt agagaagcac tcgttattaa tacaagtagt 154680
aatagtgatt ccattgataa agaagttata gaatgtatca gtcacgatgt aggaatatag 154740
atcatatcta ctaattttta taatcaatac aaaacataaa aaacaactcg ttattacata 154800
gcaggcatgg aatccttcaa gtattgtttt gataacgatg gcaagaaatg gattatcgga 154860
aatactttat attctggtaa ttcaatactc tataaggtca gaaaaaattt cactagttcg 154920
ttctacaatt acgtaatgaa gatagatcac aaatcacaca agccattgtt gtctgaaata 154980
cgattctata tatctgtatt ggatcctttg actatcgaca actggacacg ggaacgtggt 155040
ataaagtatt tggctattcc agatctgtat ggaattggag aaaccgatga ttatatgttc 155100
ttcgttataa agaatttggg aagagtattc gccccaaagg atactgaatc agtcttcgaa 155160
gcatgtgtca ctatgataaa cacgttagag tttatacact ctcgaggatt tacccatgga 155220
aaaatagaac cgaggaatat actgattaga aataaacgtc tttcactaat tgactattct 155280
agaactaaca aactatacaa gagtggaaac tcacatatag attacaacga ggacatgata 155340
acttcaggaa atatcaatta tatgtgtgta gacaatcatc ttggagcaac agtttcaaga 155400
cgaggagatt tagaaatgtt gggatattgc atgatagaat ggttcggtgg caaacttcca 155460
tggaaaaacg aaagtagtat aaaagtaata aaacaaaaaa aagaatataa aaaatttata 155520
gctactttct ttgaggactg ttttcctgaa ggaaatgaac ctctggaatt agttagatat 155580
atagaattag tatacacgtt agattattct caaactccta attatgacag actacgtaga 155640
ctgtttatac aagattgaaa ttatattctt tttttataga gtgtggtagt gttacggata 155700
tctaatatta atattagact atctctatcg cgctacacga ccaatatcga ttactatgaa 155760
tatcttctat gaaaggagag aatgtattca tttctccagc gtcaatctcg tcagtattga 155820
caatactgta ttatggagct aatggatcca ctgctgaaca gctatcaaaa tatgtagaaa 155880
cggaggagaa cacggataag gttagcgctc agaatatctc attcaaatcc ataaataaag 155940
tatatgggcg atattctgcc gtgtttaaag atttcttttt gggaaaaatt ggcgataagt 156000
ttcaaactgt tgacttcact gattgtcgca ctatagatgc aatcaacaag tgtgtagata 156060
tctttactga ggggaaaatc aatccactat tggatgaacc attgtctcct agcaattagt 156120
gccgtatact ttaaagcaaa atggttgacg ccattcgaaa aggaatttac cagtgattat 156180
cccttttacg tatcaccaac ggaaatggta gatgtaagta tgatgtctat gtacggcgag 156240
ctatttaatc acgcatctgt aaaggaatca ttcggcaact tttcaatcat agaactgcca 156300
tatgttggag atactagtat gatggtcatt cttccagaca agattgatgg attagaatcc 156360
atagaacaaa atctaacaga tacaaatttt aagaaatggt gtaactctct ggatgctatg 156420
tttatagatg ttcacattcc caagtttaag gtaacaggct cgtataatct ggtggatact 156480
ctagtaaaga tccgctgatg gaaacacagt gaatgctaga ttgtccagcg tgtccccagg 156540
acaaggtaag gactctcccg cgatcactcg tgaagaagct ctggctatga tcaaagactg 156600
tgaggtgtct atcgacatca gatgtagcga agaagagaaa gacagcgaca tcaagaccca 156660
tccagtactc gggtctaaca tctctcataa gaaagtgagt tacgaagata tcatcggttc 156720
aacgatcgtc gatacaaaat gtgtcaagaa tctagagttt agcgttcgta tcggagacat 156780
gtgcaaggaa tcatctgaac ttgaggtcaa ggatggattc aagtatgtcg acggatcggc 156840
atctgaaggt gcaaccgatg atacttcact catcgattca acaaaactca aagcgtgtgt 156900
ctga 156904
<210> 211
<211> 727
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(20)
<223> Signal peptide sequence
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (21)..(490)
<223> heavy chain sequence
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (469)..(491)
<223> T2A sequence
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (491)..(512)
<223> Signal peptide sequence
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (513)..(727)
<223> light chain sequence
<400> 211
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val
20 25 30
Gln Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr
35 40 45
Phe Ser Ser Tyr Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly
50 55 60
Leu Glu Trp Val Thr Phe Ile Ser Tyr Asp Gly Asn Asn Lys Tyr Tyr
65 70 75 80
Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys
85 90 95
Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala
100 105 110
Ile Tyr Tyr Cys Ala Arg Thr Gly Trp Leu Gly Pro Phe Asp Tyr Trp
115 120 125
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro
130 135 140
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr
145 150 155 160
Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
165 170 175
Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
180 185 190
Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr
195 200 205
Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn
210 215 220
His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser
225 230 235 240
Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu
245 250 255
Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
260 265 270
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
275 280 285
His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
290 295 300
Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr
305 310 315 320
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
325 330 335
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro
340 345 350
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
355 360 365
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val
370 375 380
Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
385 390 395 400
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
405 410 415
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr
420 425 430
Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
435 440 445
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
450 455 460
Ser Pro Gly Lys Pro Arg Gly Ser Gly Glu Gly Arg Gly Ser Leu Leu
465 470 475 480
Thr Cys Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro Lys Leu Met Ala Trp
485 490 495
Thr Pro Gly Ile Phe Met Val Leu Ser Tyr Leu Thr Gly Ser Phe Ser
500 505 510
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
515 520 525
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Gly Ser Ser
530 535 540
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
545 550 555 560
Ile Tyr Gly Ala Phe Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
565 570 575
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
580 585 590
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro
595 600 605
Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala
610 615 620
Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser
625 630 635 640
Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu
645 650 655
Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser
660 665 670
Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu
675 680 685
Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val
690 695 700
Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys
705 710 715 720
Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
725
<210> 212
<211> 260
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (235)..(255)
<223> B7-1 transmembrane domain
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (235)..(260)
<223> B7-1 cytoplasmic domain
<400> 212
Met Cys Pro Ala Arg Ser Leu Leu Leu Val Ala Thr Leu Val Leu Leu
1 5 10 15
Asp His Leu Ser Leu Ala Arg Asn Leu Pro Val Ala Thr Pro Asp Pro
20 25 30
Gly Met Phe Pro Cys Leu His His Ser Gln Asn Leu Leu Arg Ala Val
35 40 45
Ser Asn Met Leu Gln Lys Ala Arg Gln Thr Leu Glu Phe Tyr Pro Cys
50 55 60
Thr Ser Glu Glu Ile Asp His Glu Asp Ile Thr Lys Asp Lys Thr Ser
65 70 75 80
Thr Val Glu Ala Cys Leu Pro Leu Glu Leu Thr Lys Asn Glu Ser Cys
85 90 95
Leu Asn Ser Arg Glu Thr Ser Phe Ile Thr Asn Gly Ser Cys Leu Ala
100 105 110
Ser Arg Lys Thr Ser Phe Met Met Ala Leu Cys Leu Ser Ser Ile Tyr
115 120 125
Glu Asp Leu Lys Met Tyr Gln Val Glu Phe Lys Thr Met Asn Ala Lys
130 135 140
Leu Leu Met Asp Pro Lys Arg Gln Ile Phe Leu Asp Gln Asn Met Leu
145 150 155 160
Ala Val Ile Asp Glu Leu Met Gln Ala Leu Asn Phe Asn Ser Glu Thr
165 170 175
Val Pro Gln Lys Ser Ser Leu Glu Glu Pro Asp Phe Tyr Lys Thr Lys
180 185 190
Ile Lys Leu Cys Ile Leu Leu His Ala Phe Arg Ile Arg Ala Val Thr
195 200 205
Ile Asp Arg Val Met Ser Tyr Leu Asn Ala Ser Gly Gly Gly Gly Ser
210 215 220
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Leu Leu Pro Ser Trp Ala
225 230 235 240
Ile Thr Leu Ile Ser Val Asn Gly Ile Phe Val Ile Cys Cys Leu Thr
245 250 255
Tyr Cys Phe Ala
260
<210> 213
<211> 186
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 213
Met Thr Val Leu Ala Pro Ala Trp Ser Pro Thr Thr Tyr Leu Leu Leu
1 5 10 15
Leu Leu Leu Leu Ser Ser Gly Leu Ser Gly Thr Gln Asp Cys Ser Phe
20 25 30
Gln His Ser Pro Ile Ser Ser Asp Phe Ala Val Lys Ile Arg Glu Leu
35 40 45
Ser Asp Tyr Leu Leu Gln Asp Tyr Pro Val Thr Val Ala Ser Asn Leu
50 55 60
Gln Asp Glu Glu Leu Cys Gly Gly Leu Trp Arg Leu Val Leu Ala Gln
65 70 75 80
Arg Trp Met Glu Arg Leu Lys Thr Val Ala Gly Ser Lys Met Gln Gly
85 90 95
Leu Leu Glu Arg Val Asn Thr Glu Ile His Phe Val Thr Lys Cys Ala
100 105 110
Phe Gln Pro Pro Pro Ser Cys Leu Arg Phe Val Gln Thr Asn Ile Ser
115 120 125
Arg Leu Leu Gln Glu Thr Ser Glu Gln Leu Val Ala Leu Lys Pro Trp
130 135 140
Ile Thr Arg Gln Asn Phe Ser Arg Cys Leu Glu Leu Gln Cys Gln Pro
145 150 155 160
Gly Ala Pro Arg Pro Gln Ser Pro Gly Pro Ala Ala Cys Gly Ala Leu
165 170 175
Thr Trp Pro Arg Pro His Pro Ala Glu Pro
180 185
<210> 214
<211> 2184
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<400> 214
atggaaacag acaccctatt attatgggtt ttgcttctat gggtgccagg atctacgggt 60
caggttcagc tagtcgaatc gggtggagga gtcgtgcagc cgggacgttc cttacgttta 120
tcttgcgcag cgtctggttt tactttctcg tcctacacta tgcattgggt tcgtcaggct 180
ccgggaaagg gattggagtg ggtaacattt ataagttacg acggtaataa taaatactat 240
gcagacagtg tgaagggacg tttcactata tctcgagata atagtaagaa cactttgtat 300
ttgcagatga attcattgag agcggaagat acagcaattt actactgcgc cagaaccgga 360
tggttgggtc cctttgacta ttggggacag ggtactcttg ttacggtgtc ttctgcttca 420
acaaagggtc cctctgtctt cccgcttgcg ccctcatcaa aatcgacgtc gggtggaacc 480
gctgccttgg gatgcttggt taaggactat ttccccgaac ctgtcaccgt gtcttggaat 540
tccggtgctc taacgtctgg tgtgcacact ttccctgccg ttttacaaag ttccggacta 600
tattcacttt cgtccgtagt aactgttcca agttcgtccc ttggaacaca gacctatata 660
tgcaacgtaa accacaaacc ctccaatacc aaagtcgata aaagagttga gcctaaatcc 720
tgcgacaaaa cacacacctg cccaccttgc ccggcccctg aacttcttgg aggaccatct 780
gtattccttt tcccaccgaa gcctaaggac accttgatga tatccagaac tcccgaagtc 840
acgtgcgtag tagtcgatgt gagtcacgaa gatccggaag tcaagtttaa ctggtatgta 900
gacggagtag aggttcataa cgccaagacc aagccaagag aagaacaata taactcgact 960
tacagagtcg tgtctgtatt aaccgtcttg catcaggact ggttaaacgg taaagagtac 1020
aagtgcaagg tctccaataa agccctacct gcccccatcg aaaaaaccat atccaaggct 1080
aagggtcagc ctagagaacc tcaagtttac acattaccgc ccagtagaga tgaacttacg 1140
aagaatcaag tgagtctaac ctgccttgtt aaaggattct accccagtga catagcggtg 1200
gagtgggagt ccaacggtca acccgagaac aattataaga cgacaccgcc cgttcttgac 1260
agtgacggat cgttctttct atactctaag ttgactgtgg ataaatcccg atggcagcag 1320
ggaaacgtat tctcttgctc agtgatgcat gaggcgttgc acaatcatta cacccaaaag 1380
tctttgtcgc taagtccagg taaaccgcgg ggcagcggag agggcagagg aagcctgctg 1440
acttgtggcg atgtggaaga gaaccctggc cctaagctta tggcttggac accaggaatc 1500
ttcatggtac ttagttactt gacaggatct ttctcggaaa tagtcttaac tcagtcaccg 1560
ggtacacttt ccctttcgcc cggagagcgt gcgaccctat cgtgtcgagc ttcccagtcg 1620
gttggttctt cgtatcttgc ttggtatcag cagaagcccg gacaagctcc tcgtcttttg 1680
atctacggtg cgttttcgag agcgactggt atcccggata gattttctgg atcgggttct 1740
ggtactgatt tcactttaac gatttcgaga ctagagcccg aagattttgc tgtgtattat 1800
tgccagcaat atggatctag tccgtggacg ttcggtcagg gtaccaaggt cgagataaaa 1860
agaactgtgg ccgcaccctc cgtgtttatc tttccccctt ccgacgaaca gctaaagtcg 1920
ggtactgcat cggtggtatg tttacttaac aacttttacc cacgagaggc caaggtacaa 1980
tggaaggtgg ataacgcctt acaatcagga aactcacaag agtccgtcac cgagcaagat 2040
tccaaggaca gtacatactc gttatcctcg acattaacat tgagtaaggc ggattatgag 2100
aagcataagg tttacgcatg cgaagtgacg caccaaggac tttcatcccc cgtcaccaag 2160
tctttcaatc gtggtgagtg ctga 2184
<210> 215
<211> 783
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<220>
<221> misc_feature
<222> (703)..(765)
<223> B7-1 transmembrane domain
<220>
<221> misc_feature
<222> (703)..(780)
<223> B7-1 cytoplasmic domain
<400> 215
atgtgtcccg cgcgatcgtt attgttagtt gcgacgttgg tcctacttga ccatctatca 60
ctagcgcgta atttgcccgt tgccacacca gatcccggaa tgtttccttg cttacatcat 120
agtcagaact tacttcgtgc agtctccaac atgttacaga aagcccgaca gaccttagag 180
ttctatccct gtacttccga agagatagat cacgaggaca taacgaaaga caaaacatcg 240
accgttgaag cgtgcttacc cttagaacta accaaaaatg aaagttgtct aaactctaga 300
gaaacgagtt ttatcaccaa tggaagttgc ttggcgtcta gaaaaacatc atttatgatg 360
gccttgtgtc tttcctccat atacgaggac ttgaagatgt atcaggtcga gttcaagaca 420
atgaacgcga aattgcttat ggaccccaaa cgacagatat ttttggacca aaacatgtta 480
gctgttatag acgaattgat gcaggcgcta aacttcaatt cggaaactgt gccacagaag 540
tcatccttag aggagcccga tttttacaag acaaaaatca agttatgcat tcttcttcac 600
gcgtttagaa ttcgtgccgt tacgattgat agagtaatgt cgtacttgaa tgcgtcgggt 660
ggaggaggtt ccggaggagg aggatccgga ggaggtggat ccttacttcc ttcgtgggct 720
ataacattaa tctccgttaa tggtatcttc gtgatttgct gtctaacata ctgctttgca 780
tga 783
<210> 216
<211> 561
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<400> 216
atgacagtct tagcgccagc ttggagtcct accacatatt tactactatt attgctttta 60
tctagtggtt tatcaggaac gcaagactgc tcattccaac attcaccgat cagttccgac 120
tttgcagtta agattcgaga actatcagac tacctattgc aagactatcc ggtgacggta 180
gcatcgaatc ttcaagacga agagctttgt ggtggactat ggcgtcttgt acttgcccaa 240
agatggatgg agcgactaaa aaccgttgcc ggttcaaaga tgcagggttt actagagcgt 300
gtgaatacgg aaattcattt tgttacgaaa tgtgcgttcc aacccccacc cagttgcttg 360
cgtttcgtgc agactaatat ctctcgttta ctacaagaaa catccgagca actagtggcg 420
ctaaagccct ggataacacg tcaaaacttt agtcgttgct tggagttaca gtgccaaccc 480
ggtgccccac gacctcaaag tcctggtcca gcggcttgcg gagcccttac ctggcctcga 540
ccgcatccgg ccgaaccatg a 561
<210> 217
<211> 470
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 217
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Thr Phe Ile Ser Tyr Asp Gly Asn Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Thr Gly Trp Leu Gly Pro Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro
115 120 125
Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly
130 135 140
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
145 150 155 160
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln
165 170 175
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser
180 185 190
Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser
195 200 205
Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr
210 215 220
His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser
225 230 235 240
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
245 250 255
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro
260 265 270
Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
275 280 285
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val
290 295 300
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
305 310 315 320
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr
325 330 335
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
340 345 350
Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys
355 360 365
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
370 375 380
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
385 390 395 400
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser
405 410 415
Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
420 425 430
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
Pro Arg Gly Ser Gly Glu Gly Arg Gly Ser Leu Leu Thr Cys Gly Asp
450 455 460
Val Glu Glu Asn Pro Gly
465 470
<210> 218
<211> 215
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 218
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Gly Ser Ser
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Gly Ala Phe Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro
85 90 95
Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala
100 105 110
Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser
115 120 125
Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu
130 135 140
Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser
145 150 155 160
Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu
165 170 175
Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val
180 185 190
Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys
195 200 205
Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 219
<211> 512
<212> PRT
<213> Vaccinia virus
<400> 219
Met Glu Ser Val Ile Phe Ser Ile Asn Gly Glu Ile Ile Gln Val Asn
1 5 10 15
Lys Glu Ile Ile Thr Ala Ser Pro Tyr Asn Phe Phe Lys Arg Ile Gln
20 25 30
Asp His His Leu Lys Asp Glu Ala Ile Ile Leu Asn Gly Ile Asn Tyr
35 40 45
His Ala Phe Glu Ser Leu Leu Asp Tyr Ile Arg Trp Lys Lys Ile Asn
50 55 60
Ile Thr Ile Asn Asn Val Glu Met Ile Leu Val Ala Ala Ile Ile Ile
65 70 75 80
Asp Val Pro Pro Val Val Asp Leu Cys Val Lys Thr Met Ile His Asn
85 90 95
Ile Asn Ser Thr Asn Cys Ile Arg Met Phe Asn Phe Ser Lys Arg Tyr
100 105 110
Gly Ile Lys Lys Leu Tyr Asn Ala Ser Met Ser Glu Ile Ile Asn Asn
115 120 125
Ile Thr Ala Val Thr Ser Asp Pro Glu Phe Gly Lys Leu Ser Lys Asp
130 135 140
Glu Leu Thr Thr Ile Leu Ser His Glu Asn Val Asn Val Asn His Glu
145 150 155 160
Asp Val Thr Ala Met Ile Leu Leu Lys Trp Ile His Lys Asn Pro Asn
165 170 175
Asp Val Asp Ile Ile Asn Ile Leu His Pro Lys Phe Met Thr Asn Thr
180 185 190
Met Arg Asn Ala Ile Ser Leu Leu Gly Leu Thr Ile Ser Lys Ser Thr
195 200 205
Lys Pro Val Thr Arg Asn Gly Ile Lys His Asn Ile Val Val Ile Lys
210 215 220
Asn Ser Asp Tyr Ile Ser Thr Ile Thr His Tyr Ser Pro Arg Thr Glu
225 230 235 240
Tyr Trp Thr Ile Val Gly Asn Thr Asp Arg Gln Phe Tyr Asn Ala Asn
245 250 255
Val Leu His Asn Cys Leu Tyr Ile Ile Gly Gly Met Ile Asn Asn Arg
260 265 270
His Val Tyr Ser Val Ser Arg Val Asp Leu Glu Thr Lys Lys Trp Lys
275 280 285
Thr Val Thr Asn Met Ser Ser Leu Lys Ser Glu Val Ser Thr Cys Val
290 295 300
Asn Asp Gly Lys Leu Tyr Val Ile Gly Gly Leu Glu Phe Ser Ile Ser
305 310 315 320
Thr Gly Val Ala Glu Tyr Leu Lys His Gly Thr Ser Lys Trp Ile Arg
325 330 335
Leu Pro Asn Leu Ile Thr Pro Arg Tyr Ser Gly Ala Ser Val Phe Val
340 345 350
Asn Asp Asp Ile Tyr Val Met Gly Gly Val Tyr Thr Thr Tyr Glu Lys
355 360 365
Tyr Val Val Leu Asn Asp Val Glu Cys Phe Thr Lys Asn Arg Trp Ile
370 375 380
Lys Lys Ser Pro Met Pro Arg His His Ser Ile Val Tyr Ala Val Glu
385 390 395 400
Tyr Asp Gly Asp Ile Tyr Val Ile Thr Gly Ile Thr His Glu Thr Arg
405 410 415
Asn Tyr Leu Tyr Lys Tyr Ile Val Lys Glu Asp Lys Trp Ile Glu Leu
420 425 430
Tyr Met Tyr Phe Asn His Val Gly Lys Met Phe Val Cys Ser Cys Gly
435 440 445
Asp Tyr Ile Leu Ile Ile Ala Asp Ala Lys Tyr Glu Tyr Tyr Pro Lys
450 455 460
Ser Asn Thr Trp Asn Leu Phe Asp Met Ser Thr Arg Asn Ile Glu Tyr
465 470 475 480
Tyr Asp Met Phe Thr Lys Asp Glu Thr Pro Lys Cys Asn Val Thr His
485 490 495
Lys Ser Leu Pro Ser Phe Leu Ser Asn Cys Glu Lys Gln Phe Leu Gln
500 505 510
<210> 220
<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 220
Arg Met Pro Thr Val Leu Gln Cys Val Asn Val Ser Val Val Ser
1 5 10 15
<210> 221
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 221
Cys Thr Ala Cys Arg Trp Lys Lys Ala Cys Gln Arg
1 5 10
<210> 222
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 222
Val Leu Asp Gly Leu Asp Val Leu Leu
1 5
<210> 223
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 223
Ser Leu Tyr Ser Phe Pro Glu Pro Glu Ala
1 5 10
<210> 224
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 224
Ala Leu Tyr Val Asp Ser Leu Phe Phe Leu
1 5 10
<210> 225
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 225
Ser Leu Leu Gln His Leu Ile Gly Leu
1 5
<210> 226
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 226
Leu Tyr Val Asp Ser Leu Phe Phe Leu
1 5
<210> 227
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 227
Thr Ser Glu Lys Arg Pro Phe Met Cys Ala Tyr
1 5 10
<210> 228
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 228
Cys Met Thr Trp Asn Gln Met Asn Leu
1 5
<210> 229
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 229
Leu Ser His Leu Gln Met His Ser Arg Lys His
1 5 10
<210> 230
<211> 16
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 230
Lys Arg Tyr Phe Lys Leu Ser His Leu Gln Met His Ser Arg Lys His
1 5 10 15
<210> 231
<211> 8
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<213> Artificial Sequence
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<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 231
Cys Tyr Met Glu Ala Val Ala Leu
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<211> 9
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<213> Artificial Sequence
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<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 232
Ser Leu Leu Phe Leu Leu Phe Ser Leu
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<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
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<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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<400> 233
Val Leu Pro Leu Thr Val Ala Glu Val
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<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 234
Ala Leu Gln Gly Gly Gly Pro Pro Tyr
1 5
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<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
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<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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<400> 235
Leu Tyr Pro Lys Ala Arg Leu Ala Phe
1 5
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<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
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<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 236
Ala Phe Leu Pro Trp His Arg Leu Phe
1 5
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<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
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<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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<400> 237
Ser Leu Leu Met Trp Ile Thr Gln Cys
1 5
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<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
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<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 238
Leu Ala Met Pro Phe Ala Thr Pro Met
1 5
<210> 239
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 239
Ala Arg Gly Pro Glu Ser Arg Leu Leu
1 5
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<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 240
Met Leu Met Ala Gln Glu Ala Leu Ala Phe Leu
1 5 10
<210> 241
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 241
Tyr Leu Ala Met Pro Phe Ala Thr Pro Met Glu
1 5 10
<210> 242
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 242
Ala Ser Gly Pro Gly Gly Gly Ala Pro Arg
1 5 10
<210> 243
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 243
Leu Ala Ala Gln Glu Arg Arg Val Pro Arg
1 5 10
<210> 244
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 244
Thr Val Ser Gly Asn Ile Leu Thr Ile Arg
1 5 10
<210> 245
<211> 13
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 245
Ala Pro Arg Gly Pro His Gly Gly Ala Ala Ser Gly Leu
1 5 10
<210> 246
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 246
Met Pro Phe Ala Thr Pro Met Glu Ala Glu Leu
1 5 10
<210> 247
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 247
Lys Glu Phe Thr Val Ser Gly Asn Ile Leu Thr Ile
1 5 10
<210> 248
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 248
Met Pro Phe Ala Thr Pro Met Glu Ala
1 5
<210> 249
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 249
Phe Ala Thr Pro Met Glu Ala Glu Leu
1 5
<210> 250
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 250
Phe Ala Thr Pro Met Glu Ala Glu Leu Ala Arg
1 5 10
<210> 251
<211> 14
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 251
Ser Leu Leu Met Trp Ile Thr Gln Cys Phe Leu Pro Val Phe
1 5 10
<210> 252
<211> 25
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 252
Leu Leu Glu Phe Tyr Leu Ala Met Pro Phe Ala Thr Pro Met Glu Ala
1 5 10 15
Glu Leu Ala Arg Arg Ser Leu Ala Gln
20 25
<210> 253
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 253
Glu Phe Tyr Leu Ala Met Pro Phe Ala Thr Pro Met
1 5 10
<210> 254
<211> 25
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 254
Pro Gly Val Leu Leu Lys Glu Phe Thr Val Ser Gly Asn Ile Leu Thr
1 5 10 15
Ile Arg Leu Thr Ala Ala Asp His Arg
20 25
<210> 255
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 255
Arg Leu Leu Glu Phe Tyr Leu Ala Met Pro Phe Ala
1 5 10
<210> 256
<211> 20
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 256
Gln Gly Ala Met Leu Ala Ala Gln Glu Arg Arg Val Pro Arg Ala Ala
1 5 10 15
Glu Val Pro Arg
20
<210> 257
<211> 13
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 257
Pro Phe Ala Thr Pro Met Glu Ala Glu Leu Ala Arg Arg
1 5 10
<210> 258
<211> 20
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 258
Pro Gly Val Leu Leu Lys Glu Phe Thr Val Ser Gly Asn Ile Leu Thr
1 5 10 15
Ile Arg Leu Thr
20
<210> 259
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
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<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 259
Val Leu Leu Lys Glu Phe Thr Val Ser Gly
1 5 10
<210> 260
<211> 18
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 260
Ala Ala Asp His Arg Gln Leu Gln Leu Ser Ile Ser Ser Cys Leu Gln
1 5 10 15
Gln Leu
<210> 261
<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 261
Leu Lys Glu Phe Thr Val Ser Gly Asn Ile Leu Thr Ile Arg Leu
1 5 10 15
<210> 262
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 262
Lys Glu Phe Thr Val Ser Gly Asn Ile Leu Thr
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<210> 263
<211> 14
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
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<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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<400> 263
Leu Leu Glu Phe Tyr Leu Ala Met Pro Phe Ala Thr Pro Met
1 5 10
<210> 264
<211> 14
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 264
Ala Gly Ala Thr Gly Gly Arg Gly Pro Arg Gly Ala Gly Ala
1 5 10
<210> 265
<211> 13
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 265
Thr Tyr Tyr Arg Pro Gly Val Asn Leu Ser Leu Ser Cys
1 5 10
<210> 266
<211> 13
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 266
Glu Ile Ile Tyr Pro Asn Ala Ser Leu Leu Ile Gln Asn
1 5 10
<210> 267
<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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<400> 267
Tyr Ala Cys Phe Val Ser Asn Leu Ala Thr Gly Arg Asn Asn Ser
1 5 10 15
<210> 268
<211> 13
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 268
Leu Trp Trp Val Asn Asn Gln Ser Leu Pro Val Ser Pro
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<211> 13
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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<400> 269
Asn Ser Ile Val Lys Ser Ile Thr Val Ser Ala Ser Gly
1 5 10
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<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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<400> 270
Lys Thr Trp Gly Gln Tyr Trp Gln Val
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<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 271
Ala Met Leu Gly Thr His Thr Met Glu Val
1 5 10
<210> 272
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 272
Ile Thr Asp Gln Val Pro Phe Ser Val
1 5
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<211> 9
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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Tyr Leu Glu Pro Gly Pro Val Thr Ala
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<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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<400> 274
Leu Leu Asp Gly Thr Ala Thr Leu Arg Leu
1 5 10
<210> 275
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 275
Val Leu Tyr Arg Tyr Gly Ser Phe Ser Val
1 5 10
<210> 276
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 276
Ser Leu Ala Asp Thr Asn Ser Leu Ala Val
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<211> 9
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<213> Artificial Sequence
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<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 277
Arg Leu Met Lys Gln Asp Phe Ser Val
1 5
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<211> 9
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<213> Artificial Sequence
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<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 278
Arg Leu Pro Arg Ile Phe Cys Ser Cys
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<211> 9
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<213> Artificial Sequence
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<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 279
Leu Ile Tyr Arg Arg Arg Leu Met Lys
1 5
<210> 280
<211> 9
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<213> Artificial Sequence
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<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 280
Ala Leu Leu Ala Val Gly Ala Thr Lys
1 5
<210> 281
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 281
Ile Ala Leu Asn Phe Pro Gly Ser Gln Lys
1 5 10
<210> 282
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 282
Arg Ser Tyr Val Pro Leu Ala His Arg
1 5
<210> 283
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 283
Val Val Pro Cys Glu Pro Pro Glu Val
1 5
<210> 284
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 284
His Leu Tyr Gln Gly Cys Gln Val Val
1 5
<210> 285
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 285
Tyr Leu Val Pro Gln Gln Gly Phe Phe Cys
1 5 10
<210> 286
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 286
Pro Leu Gln Pro Glu Gln Leu Gln Val
1 5
<210> 287
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 287
Thr Leu Glu Glu Ile Thr Gly Tyr Leu
1 5
<210> 288
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 288
Ala Leu Ile His His Asn Thr His Leu
1 5
<210> 289
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 289
Pro Leu Thr Ser Ile Ile Ser Ala Val
1 5
<210> 290
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 290
Val Leu Arg Glu Asn Thr Ser Pro Lys
1 5
<210> 291
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 291
Thr Tyr Leu Pro Thr Asn Ala Ser Leu
1 5
<210> 292
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 292
Arg Tyr Gln Leu Asp Pro Lys Phe Ile
1 5
<210> 293
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 293
Ile Leu Phe Thr Ile Asn Phe Thr Ile
1 5
<210> 294
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 294
Val Leu Phe Thr Ile Asn Phe Thr Ile
1 5
<210> 295
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 295
Thr Leu Asn Phe Thr Ile Thr Asn Leu
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<210> 296
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 296
Val Leu Gln Gly Leu Leu Lys Pro Leu
1 5
<210> 297
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 297
Val Leu Gln Gly Leu Leu Arg Pro Val
1 5
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<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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Arg Leu Asp Pro Lys Ser Pro Gly Val
1 5
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
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<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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<400> 299
Gln Leu Tyr Trp Glu Leu Ser Lys Leu
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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<400> 300
Lys Leu Thr Arg Gly Ile Val Glu Leu
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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<400> 301
Gln Leu Thr Asn Gly Ile Thr Glu Leu
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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Gln Leu Thr His Asn Ile Thr Glu Leu
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<213> Artificial Sequence
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<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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Thr Leu Asp Arg Asn Ser Leu Tyr Val
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<213> Artificial Sequence
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<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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Phe Leu Leu Ser Leu Ala Leu Met Leu
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<213> Artificial Sequence
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<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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<213> Artificial Sequence
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<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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<213> Artificial Sequence
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<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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Leu Leu Leu Leu Thr Val Leu Thr Val
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<213> Artificial Sequence
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<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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Pro Gly Ser Thr Ala Pro Pro Ala His Gly Val Thr
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Ala Pro Arg Gly Val Arg Met Ala Val
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<213> Artificial Sequence
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<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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<400> 329
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<213> Artificial Sequence
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<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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<400> 330
Tyr Phe Ser Lys Lys Glu Trp Glu Lys Met Lys Ser Ser Glu Lys Ile
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Val Tyr Val Tyr
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<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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Leu Pro Pro Phe
20
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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Lys His Ala Trp Thr His Arg Leu Arg Glu Arg Lys Gln Leu Val Val
1 5 10 15
Tyr Glu Glu Ile
20
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<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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1 5 10 15
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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<400> 334
Lys Ser Ser Glu Lys Ile Val Tyr Val Tyr Met Lys Leu Asn Tyr Glu
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20
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<213> Artificial Sequence
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<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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Leu Ser Arg Leu Ser Asn Arg Leu Leu
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<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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Thr Met Asn Gly Ser Lys Ser Pro Val
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<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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Pro Leu Leu Glu Asn Val Ile Ser Lys
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<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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<213> Artificial Sequence
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<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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<213> Artificial Sequence
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<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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Lys Val Leu Glu Tyr Val Ile Lys Val
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<213> Artificial Sequence
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<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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<213> Artificial Sequence
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<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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Arg Val Arg Phe Phe Phe Pro Ser Leu
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<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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<213> Artificial Sequence
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<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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<213> Artificial Sequence
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<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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<400> 348
Asp Pro Ala Arg Tyr Glu Phe Leu Trp
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<213> Artificial Sequence
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<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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Ile Thr Lys Lys Val Ala Asp Leu Val Gly Phe
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<213> Artificial Sequence
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Thr Ser Cys Ile Leu Glu Ser Leu Phe Arg Ala Val Ile Thr Lys
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Pro Arg Ala Leu Ala Glu Thr Ser Tyr Val Lys Val Leu Glu Tyr
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Phe Leu Leu Leu Lys Tyr Arg Ala Arg Glu Pro Val Thr Lys Ala Glu
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<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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<213> Artificial Sequence
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<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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Tyr Leu Gln Leu Val Phe Gly Ile Glu Val
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<213> Artificial Sequence
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<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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Glu Tyr Leu Gln Leu Val Phe Gly Ile
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<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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<213> Artificial Sequence
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<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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<400> 360
Lys Ala Ser Glu Lys Ile Phe Tyr Val
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<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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Glu Lys Ile Gln Lys Ala Phe Asp Asp Ile Ala Lys Tyr Phe Ser Lys
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Phe Gly Arg Leu Gln Gly Ile Ser Pro Lys Ile
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<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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<400> 363
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<213> Artificial Sequence
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<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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<400> 364
Lys Ile Phe Tyr Val Tyr Met Lys Arg Lys Tyr Glu Ala Met Thr
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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<400> 365
Lys Ile Phe Tyr Val Tyr Met Lys Arg Lys Tyr Glu Ala Met
1 5 10
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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<400> 366
Cys Glu Phe His Ala Cys Trp Pro Ala Phe Thr Val Leu Gly Glu
1 5 10 15
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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<400> 367
Lys Phe Leu Asp Ala Leu Ile Ser Leu
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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<400> 368
Ala Leu Gly Gly His Pro Leu Leu Gly Val
1 5 10
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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<400> 369
Leu Pro Arg Trp Pro Pro Pro Gln Leu
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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<400> 370
Ile Leu Ala Lys Phe Leu His Trp Leu
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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<400> 371
Arg Leu Val Asp Asp Phe Leu Leu Val
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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<400> 372
Arg Pro Gly Leu Leu Gly Ala Ser Val Leu Gly Leu Asp Asp Ile
1 5 10 15
<210> 373
<211> 15
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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<400> 373
Leu Thr Asp Leu Gln Pro Tyr Met Arg Gln Phe Val Ala His Leu
1 5 10 15
<210> 374
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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<400> 374
Val Val Val Gly Ala Val Gly Val Gly
1 5
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<211> 9
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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<400> 375
His Leu Ser Thr Ala Phe Ala Arg Val
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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<400> 376
Lys Ile Phe Gly Ser Leu Ala Phe Leu
1 5
<210> 377
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 377
Ile Ile Ser Ala Val Val Gly Ile Leu
1 5
<210> 378
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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<400> 378
Ala Leu Cys Arg Trp Gly Leu Leu Leu
1 5
<210> 379
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 379
Ile Leu His Asn Gly Ala Tyr Ser Leu
1 5
<210> 380
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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<400> 380
Arg Leu Leu Gln Glu Thr Glu Leu Val
1 5
<210> 381
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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<400> 381
Val Val Lys Gly Val Val Phe Gly Ile
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<210> 382
<211> 10
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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<400> 382
Tyr Met Ile Met Val Lys Cys Trp Met Ile
1 5 10
<210> 383
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<213> Artificial Sequence
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<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 383
Ser Leu Leu Ser Gly Asp Trp Val Leu
1 5
<210> 384
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 384
Gly Leu Gln Leu Gly Val Gln Ala Val
1 5
<210> 385
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 385
Pro Leu Thr Glu Tyr Ile Gln Pro Val
1 5
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
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Ser Pro Arg Trp Trp Pro Thr Cys Leu
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<213> Artificial Sequence
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<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 387
Gly Val Ala Leu Gln Thr Met Lys Gln
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 388
Phe Met Asn Lys Phe Ile Tyr Glu Ile
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<211> 10
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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Gln Leu Ala Val Ser Val Ile Leu Arg Val
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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Leu Pro Ala Val Val Gly Leu Ser Pro Gly Glu Gln Glu Tyr
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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Asn Tyr Ala Arg Thr Glu Asp Phe Phe
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<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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Phe Leu Ile Ile Trp Gln Asn Thr Met
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<213> Artificial Sequence
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<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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Thr Leu Tyr Gln Asp Asp Thr Leu Thr Leu Gln Ala Ala Gly
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<213> Artificial Sequence
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<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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Ser Leu Tyr Lys Phe Ser Pro Phe Pro Leu
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<213> Artificial Sequence
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<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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Leu Leu Asn Ala Phe Thr Val Thr Val
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<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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<213> Artificial Sequence
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Phe Leu Asp Glu Phe Met Glu Gly Val
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<213> Artificial Sequence
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<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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Gln Gln Ile Thr Lys Thr Glu Val
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Tyr Arg Pro Arg Pro Arg Arg Tyr
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Ala Leu Lys Asp Val Glu Glu Arg Val
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Ile Ser Gly Gly Pro Arg Ile Ser Tyr
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<213> Artificial Sequence
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Arg Gln Lys Lys Ile Arg Ile Gln Leu
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<213> Artificial Sequence
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Cys Ala Thr Trp Lys Val Ile Cys Lys Ser Cys Ile Ser Gln Thr Pro
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Gly
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Met Ile Ala Val Phe Leu Pro Ile Val
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Phe Leu Thr Pro Lys Lys Leu Gln Cys Val
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Val Ile Ser Asn Asp Val Cys Ala Gln Val
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Tyr Tyr Trp Pro Arg Pro Arg Arg Tyr
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Asn Thr Tyr Ala Ser Pro Arg Phe Lys
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Ser Leu Phe Glu Gly Ile Asp Ile Tyr Thr
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Gly Leu Gln Leu Gly Val Gln Ala
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Tyr Ser Val Tyr Phe Asn Leu Pro Ala Asp Thr Ile Tyr Thr Asn
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<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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<400> 424
Glu Asp Leu Thr Val Lys Ile Gly Asp Phe Gly Leu Ala Thr Glu Lys
1 5 10 15
Ser Arg Trp Ser Gly Ser His Gln Phe Glu Gln Leu Ser
20 25
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<213> Artificial Sequence
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Ser Tyr Leu Asp Ser Gly Ile His Phe
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<213> Artificial Sequence
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<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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Cys Ile Leu Gly Lys Leu Phe Thr Lys
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Ala Val Cys Pro Trp Thr Trp Leu Arg
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<213> Artificial Sequence
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<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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Gly Leu Phe Gly Asp Ile Tyr Leu Ala
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<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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<400> 432
Met Ile Phe Glu Lys His Gly Phe Arg Arg Thr Thr Pro Pro
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<213> Artificial Sequence
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Ser Leu Ala Asp Glu Ala Glu Val Tyr Leu
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Ile Leu Asn Ala Met Ile Ala Lys Ile
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<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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Trp Arg Arg Ala Pro Ala Pro Gly Ala
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<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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Pro Val Thr Trp Arg Arg Ala Pro Ala
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<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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Phe Leu Glu Gly Asn Glu Val Gly Lys Thr Tyr
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Lys Thr Leu Thr Ser Val Phe Gln Lys
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<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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Glu Glu Lys Leu Ile Val Val Leu Phe
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Phe Arg Ser Gly Leu Asp Ser Tyr Val
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Glu Ala Phe Ile Gln Pro Ile Thr Arg
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<213> Artificial Sequence
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<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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Arg Val Ile Lys Asn Ser Ile Arg Leu Thr Leu
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<213> Artificial Sequence
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<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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<400> 445
Lys Ile Asn Lys Asn Pro Lys Tyr Lys
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<213> Artificial Sequence
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<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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Tyr Thr Asp Phe His Cys Gln Tyr Val
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<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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Leu Leu Leu Asp Asp Leu Leu Val Ser Ile
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<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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<400> 448
Pro Tyr Tyr Phe Ala Ala Glu Leu Pro Pro Arg Asn Leu Pro Glu Pro
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<213> Artificial Sequence
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<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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<400> 449
Ile Leu Asp Thr Ala Gly Arg Glu Glu Tyr
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Arg Pro His Val Pro Glu Ser Ala Phe
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<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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Lys Ile Phe Ser Glu Val Thr Leu Lys
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<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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<400> 452
Ser His Glu Thr Val Ile Ile Glu Leu
1 5
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<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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<400> 453
Gly Glu Leu Ile Gly Ile Leu Asn Ala Ala Lys Val Pro Ala Asp
1 5 10 15
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<213> Artificial Sequence
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<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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<400> 454
Leu Tyr Ser Ala Cys Phe Trp Trp Leu
1 5
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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<400> 455
Val Leu His Trp Asp Pro Glu Thr Val
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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<400> 456
Met Ser Leu Gln Arg Gln Phe Leu Arg
1 5
<210> 457
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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<400> 457
Ile Ser Pro Asn Ser Val Phe Ser Gln Trp Arg Val Val Cys Asp Ser
1 5 10 15
Leu Glu Asp Tyr
20
<210> 458
<211> 10
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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<400> 458
Ser Leu Pro Tyr Trp Asn Phe Ala Thr Gly
1 5 10
<210> 459
<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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<400> 459
Ser Gln Trp Arg Val Val Cys Asp Ser Leu Glu Asp Tyr Asp Thr
1 5 10 15
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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<400> 460
Ser Val Tyr Asp Phe Phe Val Trp Leu
1 5
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<211> 9
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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<400> 461
Thr Leu Asp Ser Gln Val Met Ser Leu
1 5
<210> 462
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 462
Leu Leu Gly Pro Gly Arg Pro Tyr Arg
1 5
<210> 463
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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<400> 463
Ala Asn Asp Pro Ile Phe Val Val Leu
1 5
<210> 464
<211> 15
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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<400> 464
Gln Cys Thr Glu Val Arg Ala Asp Thr Arg Pro Trp Ser Gly Pro
1 5 10 15
<210> 465
<211> 10
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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<400> 465
Ala Leu Pro Tyr Trp Asn Phe Ala Thr Gly
1 5 10
<210> 466
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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<400> 466
Lys Cys Asp Ile Cys Thr Asp Glu Tyr
1 5
<210> 467
<211> 11
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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<400> 467
Ser Ser Asp Tyr Val Ile Pro Ile Gly Thr Tyr
1 5 10
<210> 468
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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<400> 468
Met Leu Leu Ala Val Leu Tyr Cys Leu
1 5
<210> 469
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 469
Cys Leu Leu Trp Ser Phe Gln Thr Ser Ala
1 5 10
<210> 470
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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<400> 470
Tyr Met Asp Gly Thr Met Ser Gln Val
1 5
<210> 471
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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<400> 471
Ile Tyr Met Asp Gly Thr Ala Asp Phe Ser Phe
1 5 10
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<213> Artificial Sequence
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Gln Cys Ser Gly Asn Phe Met Gly Phe
1 5
<210> 473
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 473
Thr Pro Arg Leu Pro Ser Ser Ala Asp Val Glu Phe
1 5 10
<210> 474
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 474
Leu Pro Ser Ser Ala Asp Val Glu Phe
1 5
<210> 475
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 475
Leu His His Ala Phe Val Asp Ser Ile Phe
1 5 10
<210> 476
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 476
Ser Glu Ile Trp Arg Asp Ile Asp Phe
1 5
<210> 477
<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 477
Gln Asn Ile Leu Leu Ser Asn Ala Pro Leu Gly Pro Gln Phe Pro
1 5 10 15
<210> 478
<211> 13
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 478
Ser Tyr Leu Gln Asp Ser Asp Pro Asp Ser Phe Gln Asp
1 5 10
<210> 479
<211> 21
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 479
Phe Leu Leu His His Ala Phe Val Asp Ser Ile Phe Glu Gln Trp Leu
1 5 10 15
Gln Arg His Arg Pro
20
<210> 480
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 480
Tyr Thr Thr Ala Glu Glu Ala Ala Gly Ile Gly Ile Leu Thr Val Ile
1 5 10 15
Leu Gly Val Leu Leu Leu Ile Gly Cys Trp Tyr Cys Arg Arg
20 25 30
<210> 481
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 481
Ala Leu Asn Phe Pro Gly Ser Gln Lys
1 5
<210> 482
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 482
Val Tyr Phe Phe Leu Pro Asp His Leu
1 5
<210> 483
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 483
Arg Thr Lys Gln Leu Tyr Pro Glu Trp
1 5
<210> 484
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 484
His Thr Met Glu Val Thr Val Tyr His Arg
1 5 10
<210> 485
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 485
Ser Ser Pro Gly Cys Gln Pro Pro Ala
1 5
<210> 486
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 486
Val Pro Leu Asp Cys Val Leu Tyr Arg Tyr
1 5 10
<210> 487
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 487
Leu Pro His Ser Ser Ser His Trp Leu
1 5
<210> 488
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 488
Ser Asn Asp Gly Pro Thr Leu Ile
1 5
<210> 489
<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 489
Gly Arg Ala Met Leu Gly Thr His Thr Met Glu Val Thr Val Tyr
1 5 10 15
<210> 490
<211> 16
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 490
Trp Asn Arg Gln Leu Tyr Pro Glu Trp Thr Glu Ala Gln Arg Leu Asp
1 5 10 15
<210> 491
<211> 18
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 491
Thr Thr Glu Trp Val Glu Thr Thr Ala Arg Glu Leu Pro Ile Pro Glu
1 5 10 15
Pro Glu
<210> 492
<211> 17
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 492
Thr Gly Arg Ala Met Leu Gly Thr His Thr Met Glu Val Thr Val Tyr
1 5 10 15
His
<210> 493
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 493
Val Leu Pro Asp Val Phe Ile Arg Cys Val
1 5 10
<210> 494
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 494
Arg Tyr Cys Asn Leu Glu Gly Pro Pro Ile
1 5 10
<210> 495
<211> 24
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 495
Lys Trp Thr Glu Pro Tyr Cys Val Ile Ala Ala Val Lys Ile Phe Pro
1 5 10 15
Arg Phe Phe Met Val Ala Lys Gln
20
<210> 496
<211> 20
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 496
Lys Cys Cys Lys Ile Arg Tyr Cys Asn Leu Glu Gly Pro Pro Ile Asn
1 5 10 15
Ser Ser Val Phe
20
<210> 497
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 497
Gly Leu Tyr Asp Gly Met Glu His Leu
1 5
<210> 498
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 498
Phe Leu Trp Gly Pro Arg Ala Leu Val
1 5
<210> 499
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 499
Val Arg Ile Gly His Leu Tyr Ile Leu
1 5
<210> 500
<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 500
Arg Glu Pro Phe Thr Lys Ala Glu Met Leu Gly Ser Val Ile Arg
1 5 10 15
<210> 501
<211> 14
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 501
Ala Glu Leu Val His Phe Leu Leu Leu Lys Tyr Arg Ala Arg
1 5 10
<210> 502
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 502
Leu Leu Phe Gly Leu Ala Leu Ile Glu Val
1 5 10
<210> 503
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 503
Ser Glu Ser Ile Lys Lys Lys Val Leu
1 5
<210> 504
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 504
Ala Ser Ser Thr Leu Tyr Leu Val Phe
1 5
<210> 505
<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 505
Ser Ser Thr Leu Tyr Leu Val Phe Ser Pro Ser Ser Phe Ser Thr
1 5 10 15
<210> 506
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 506
Gln Gly Gln His Phe Leu Gln Lys Val
1 5
<210> 507
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 507
Glu Val Ile Ser Cys Lys Leu Ile Lys Arg
1 5 10
<210> 508
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 508
Phe Pro Ser Asp Ser Trp Cys Tyr Phe
1 5
<210> 509
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 509
Leu Tyr Ala Thr Val Ile His Asp Ile
1 5
<210> 510
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 510
Ser Ser Lys Ala Leu Gln Arg Pro Val
1 5
<210> 511
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 511
Gly Phe Lys Gln Ser Ser Lys Ala Leu
1 5
<210> 512
<211> 17
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 512
Ala Thr Gly Phe Lys Gln Ser Ser Lys Ala Leu Gln Arg Pro Val Ala
1 5 10 15
Ser
<210> 513
<211> 16
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 513
Thr Met Lys Gln Ile Cys Lys Lys Glu Ile Arg Arg Leu His Gln Tyr
1 5 10 15
<210> 514
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 514
Lys Ile Leu Asp Ala Val Val Ala Gln Lys
1 5 10
<210> 515
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 515
Arg Ile Ala Glu Cys Ile Leu Gly Met
1 5
<210> 516
<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 516
Ile Gly Arg Ile Ala Glu Cys Ile Leu Gly Met Asn Pro Ser Arg
1 5 10 15
<210> 517
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 517
Tyr Val Asp Phe Arg Glu Tyr Glu Tyr Tyr
1 5 10
<210> 518
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 518
Phe Leu Asp Arg Phe Leu Ser Cys Met
1 5
<210> 519
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 519
Ser Leu Ile Ala Ala Ala Ala Phe Cys Leu Ala
1 5 10
<210> 520
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 520
Val Val Met Ser Trp Ala Pro Pro Val
1 5
<210> 521
<211> 25
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 521
Asn Ser Asn His Val Ala Ser Gly Ala Gly Glu Ala Ala Ile Glu Thr
1 5 10 15
Gln Ser Ser Ser Ser Glu Glu Ile Val
20 25
<210> 522
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 522
Ile Leu Phe Gly Ile Ser Leu Arg Glu Val
1 5 10
<210> 523
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 523
Lys Val Val Glu Phe Leu Ala Met Leu
1 5
<210> 524
<211> 13
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 524
Ser Ser Ala Leu Leu Ser Ile Phe Gln Ser Ser Pro Glu
1 5 10
<210> 525
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 525
Ser Phe Ser Tyr Thr Leu Leu Ser Leu
1 5
<210> 526
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 526
Val Ser Ser Phe Phe Ser Tyr Thr Leu
1 5
<210> 527
<211> 93
<212> PRT
<213> Vaccinia virus
<400> 527
Met His His Pro Met Glu Ser Val Lys Thr Thr Asn Thr Asn Ala Ile
1 5 10 15
Ile Cys Val Arg Glu His Thr Leu Pro Asp Tyr Ala Asn Thr Gln Cys
20 25 30
Thr Pro Cys Gly Ser Gly Thr Phe Thr Ser Arg Asn Asn His Leu Pro
35 40 45
Ala Cys Leu Ser Cys Asn Gly Arg Arg Asp Arg Val Thr Leu Leu Thr
50 55 60
Ile Glu Ser Val Asn Ala Leu Pro Asp Ile Ile Val Phe Ser Lys Asp
65 70 75 80
His Pro Asp Ala Arg His Val Phe Pro Lys Gln Asn Val
85 90
<210> 528
<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 528
Lys Pro Leu Phe Arg Arg Met Ser Ser Leu Glu Leu Val Ile Ala
1 5 10 15
<210> 529
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 529
Met Val Lys Ile Ser Gly Gly Pro Arg
1 5
<210> 530
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 530
Glu Val Asp Pro Ile Gly His Val Tyr
1 5
<210> 531
<211> 244
<212> PRT
<213> Vaccinia virus
<400> 531
Met His Val Pro Ala Ser Leu Gln Gln Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser
1 5 10 15
Cys Thr Glu Glu Glu Asn Lys His His Met Gly Ile Asp Val Ile Ile
20 25 30
Lys Val Thr Lys Gln Asp Gln Thr Pro Thr Asn Asp Lys Ile Cys Gln
35 40 45
Ser Val Thr Glu Ile Thr Glu Ser Glu Ser Asp Pro Asp Pro Glu Val
50 55 60
Glu Ser Glu Asp Asp Ser Thr Ser Val Glu Asp Val Asp Pro Pro Thr
65 70 75 80
Thr Tyr Tyr Ser Ile Ile Gly Gly Gly Leu Arg Met Asn Phe Gly Phe
85 90 95
Thr Lys Cys Pro Gln Ile Lys Ser Ile Ser Glu Ser Ala Asp Gly Asn
100 105 110
Thr Val Asn Ala Arg Leu Ser Ser Val Ser Pro Gly Gln Gly Lys Asp
115 120 125
Ser Pro Ala Ile Thr His Glu Glu Ala Leu Ala Met Ile Lys Asp Cys
130 135 140
Glu Val Ser Ile Asp Ile Arg Cys Ser Glu Glu Glu Lys Asp Ser Asp
145 150 155 160
Ile Lys Thr His Pro Val Leu Gly Ser Asn Ile Ser His Lys Lys Val
165 170 175
Ser Tyr Glu Asp Ile Ile Gly Ser Thr Ile Val Asp Thr Lys Cys Val
180 185 190
Lys Asn Leu Glu Phe Ser Val Arg Ile Gly Asp Met Cys Lys Glu Ser
195 200 205
Ser Glu Leu Glu Val Lys Asp Gly Phe Lys Tyr Val Asp Gly Ser Ala
210 215 220
Ser Glu Gly Ala Thr Asp Asp Thr Ser Leu Ile Asp Ser Thr Lys Leu
225 230 235 240
Lys Ala Cys Val
<210> 532
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 532
Glu Val Asp Pro Ile Gly His Leu Tyr
1 5
<210> 533
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 533
Lys Val Ala Glu Leu Val His Phe Leu
1 5
<210> 534
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 534
Thr Phe Pro Asp Leu Glu Ser Glu Phe
1 5
<210> 535
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 535
Val Ala Glu Leu Val His Phe Leu Leu
1 5
<210> 536
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 536
Met Glu Val Asp Pro Ile Gly His Leu Tyr
1 5 10
<210> 537
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 537
Ala Glu Leu Val His Phe Leu Leu Leu
1 5
<210> 538
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 538
Trp Gln Tyr Phe Phe Pro Val Ile Phe
1 5
<210> 539
<211> 16
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 539
Lys Lys Leu Leu Thr Gln His Phe Val Gln Glu Asn Tyr Leu Glu Tyr
1 5 10 15
<210> 540
<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 540
Arg Lys Val Ala Glu Leu Val His Phe Leu Leu Leu Lys Tyr Arg
1 5 10 15
<210> 541
<211> 16
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 541
Ala Cys Tyr Glu Phe Leu Trp Gly Pro Arg Ala Leu Val Glu Thr Ser
1 5 10 15
<210> 542
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 542
Val Ile Phe Ser Lys Ala Ser Ser Ser Leu Gln Leu
1 5 10
<210> 543
<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 543
Val Phe Gly Ile Glu Leu Met Glu Val Asp Pro Ile Gly His Leu
1 5 10 15
<210> 544
<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 544
Gly Asp Asn Gln Ile Met Pro Lys Ala Gly Leu Leu Ile Ile Val
1 5 10 15
<210> 545
<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 545
Thr Ser Tyr Val Lys Val Leu His His Met Val Lys Ile Ser Gly
1 5 10 15
<210> 546
<211> 16
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 546
Arg Lys Val Ala Glu Leu Val His Phe Leu Leu Leu Lys Tyr Arg Ala
1 5 10 15
<210> 547
<211> 309
<212> PRT
<213> Vaccinia virus
<400> 547
Ile Glu Leu Leu Lys Thr Met Asp Leu Arg Lys Arg Asp Leu Gly Pro
1 5 10 15
Ala Phe Thr Glu Leu Ile Ser Gly Leu Ala Lys Leu Lys Thr Ser Lys
20 25 30
Tyr Thr Tyr Thr Asp Leu Thr Tyr Gln Ser Phe Val Asp Asn Thr Val
35 40 45
Cys Ile Lys Pro Ser Tyr Tyr Gln Gln Tyr His Arg Phe Gly Leu Tyr
50 55 60
Arg Leu Asn Phe Arg Arg Asp Ala Val Asn Lys Ile Asn Ser Ile Val
65 70 75 80
Glu Arg Arg Ser Gly Met Ser Asn Val Val Asp Ser Asn Met Leu Asp
85 90 95
Asn Asn Thr Leu Trp Ala Ile Ile Asn Thr Ile Tyr Phe Lys Gly Ile
100 105 110
Trp Gln Tyr Pro Phe Asp Ile Thr Lys Thr Arg Asn Ala Ser Phe Thr
115 120 125
Asn Lys Tyr Gly Thr Lys Thr Val Pro Met Met Asn Val Val Thr Lys
130 135 140
Leu Gln Gly Asn Thr Ile Thr Ile Asp Asp Glu Glu Tyr Asp Met Val
145 150 155 160
Arg Leu Pro Tyr Lys Asp Ala Asn Ile Ser Met Tyr Leu Ala Ile Gly
165 170 175
Asp Asn Met Thr His Phe Thr Asp Ser Ile Thr Ala Ala Lys Leu Asp
180 185 190
Tyr Trp Ser Ser Gln Leu Gly Asn Lys Val Tyr Asn Leu Lys Leu Pro
195 200 205
Lys Phe Ser Ile Glu Asn Lys Arg Asp Ile Lys Ser Ile Ala Glu Met
210 215 220
Met Ala Pro Ser Met Phe Asn Pro Asp Asn Ala Ser Phe Lys His Met
225 230 235 240
Thr Arg Asp Pro Leu Tyr Ile Tyr Lys Met Phe Gln Asn Ala Lys Ile
245 250 255
Asp Val Asp Glu Gln Gly Thr Val Ala Glu Ala Ser Thr Ile Met Val
260 265 270
Ala Thr Ala Arg Ser Ser Pro Glu Lys Leu Glu Phe Asn Thr Pro Phe
275 280 285
Val Phe Ile Ile Arg His Asp Ile Thr Gly Phe Ile Leu Phe Met Gly
290 295 300
Lys Val Glu Ser Pro
305
<210> 548
<211> 222
<212> PRT
<213> Vaccinia virus
<400> 548
Met Asn His Cys Leu Leu Ala Ile Ser Ala Val Tyr Phe Lys Ala Lys
1 5 10 15
Trp Leu Thr Pro Phe Glu Lys Glu Phe Thr Ser Asp Tyr Pro Phe Tyr
20 25 30
Val Ser Pro Thr Glu Met Val Asp Val Ser Met Met Ser Met Tyr Gly
35 40 45
Lys Ala Phe Asn His Ala Ser Val Lys Glu Ser Phe Gly Asn Phe Ser
50 55 60
Ile Ile Glu Leu Pro Tyr Val Gly Asp Thr Ser Met Met Val Ile Leu
65 70 75 80
Pro Asp Lys Ile Asp Gly Leu Glu Ser Ile Glu Gln Asn Leu Thr Asp
85 90 95
Thr Asn Phe Lys Lys Trp Cys Asp Phe Met Asp Ala Met Phe Ile Asp
100 105 110
Val His Ile Pro Lys Phe Lys Val Thr Gly Ser Tyr Asn Leu Val Asp
115 120 125
Thr Leu Val Lys Ser Gly Leu Thr Glu Val Phe Gly Ser Thr Gly Asp
130 135 140
Tyr Ser Asn Met Cys Asn Leu Asp Val Ser Val Asp Ala Met Ile His
145 150 155 160
Lys Thr Tyr Ile Asp Val Asn Glu Glu Tyr Thr Glu Ala Ala Ala Ala
165 170 175
Thr Cys Ala Leu Val Ser Asp Cys Ala Ser Thr Val Thr Asn Glu Phe
180 185 190
Cys Ala Asp His Pro Phe Ile Tyr Val Ile Arg His Val Asp Gly Lys
195 200 205
Ile Leu Phe Val Gly Arg Tyr Cys Ser Pro Thr Thr Asn Cys
210 215 220
<210> 549
<211> 289
<212> PRT
<213> Vaccinia virus
<400> 549
Met Glu Leu Glu Asn Glu Pro Val Ile Leu Pro Cys Pro Gln Ile Asn
1 5 10 15
Thr Leu Ser Ser Gly Tyr Asn Ile Leu Asp Ile Leu Trp Glu Lys Arg
20 25 30
Gly Ala Asp Asn Asp Arg Ile Ile Pro Ile Asp Asn Gly Ser Asn Met
35 40 45
Leu Ile Leu Asn Pro Thr Gln Ser Asp Ser Gly Ile Tyr Ile Cys Ile
50 55 60
Thr Thr Asn Glu Thr Tyr Cys Asp Met Met Ser Leu Asn Leu Thr Ile
65 70 75 80
Val Ser Val Leu Glu Ser Asn Ile Asp Leu Ile Ser Tyr Pro Gln Ile
85 90 95
Val Asn Glu Arg Ser Thr Gly Glu Met Val Cys Pro Asn Ile Asn Ala
100 105 110
Phe Ile Ala Ser Asn Val Asn Ala Asp Ile Ile Trp Ser Gly His Arg
115 120 125
Arg Leu Arg Asn Lys Arg Leu Lys Gln Arg Thr Pro Gly Ile Ile Thr
130 135 140
Ile Glu Asp Val Arg Lys Asn Asp Ala Gly Tyr Tyr Thr Cys Val Leu
145 150 155 160
Glu Tyr Ile Tyr Arg Gly Lys Thr Tyr Asn Val Thr Arg Ile Val Lys
165 170 175
Leu Glu Val Arg Asp Lys Ile Ile Pro Ser Thr Met Gln Leu Pro Asp
180 185 190
Gly Ile Val Thr Ser Ile Gly Ser Asn Leu Thr Ile Ala Cys Arg Val
195 200 205
Ser Leu Arg Pro Pro Thr Thr Asp Ala Asp Val Phe Trp Ile Ser Asn
210 215 220
Gly Met Tyr Tyr Glu Glu Asp Asp Gly Asp Gly Asn Gly Arg Ile Ser
225 230 235 240
Val Ala Asn Lys Ile Tyr Met Thr Asp Lys Arg Arg Val Ile Thr Ser
245 250 255
Arg Leu Asn Ile Asn Pro Val Lys Glu Glu Asp Ala Thr Thr Phe Thr
260 265 270
Cys Met Ala Phe Thr Ile Pro Ser Ile Ser Lys Thr Val Thr Val Ser
275 280 285
Ile
<210> 550
<211> 827
<212> DNA
<213> Vaccinia virus
<400> 550
acaacaccat gagatatatt ataattctcg cagttttgtt cattaatagt atacacgcta 60
aaataactag ttataagttt gaatccgtca attttgattc caaaattgaa tggactgggg 120
atggtctata caatatatcc cttaaaaatt atggcatcaa gacgtggcaa acaatgtata 180
caaatgtacc agaaggaaca tacgacatat ccgcatttcc aaagaatgat ttcgtatctt 240
tctgggttaa atttgaacaa ggcgattata aagtggaaga gtattgtacg ggactatgcg 300
tcgaagtaaa aattggacca ccgactgtaa cattgactga atacgacgac catatcaatt 360
tgtacatcga gcatccgtat gctactagag gtagcaaaaa gattcctatt tacaaacgcg 420
gtgacatgtg tgatatctac ttgttgtata cggctaactt cacattcgga gattctgaag 480
aaccagtaac atatgatatc gatgactacg attgcacgtc tacaggttgc agcatagact 540
ttgccacaac agaaaaagtg tgcgtgacag cacagggagc cacagaaggg tttctcgaaa 600
aaattactcc atggagttcg gaagtatgtc tgacacctaa aaagaatgta tatacatgtg 660
caattagatc caaagaagat gttcccaatt tcaaggacaa aatggccaga gttatcaaga 720
gaaaatttaa taaacagtct caatcttatt taactaaatt tctcggtagc acatcaaatg 780
atgttaccac ttttcttagc atgcttaact tgactaaata ttcataa 827
<210> 551
<211> 15
<212> DNA
<213> Vaccinia virus
<400> 551
aaaatttaat aaaca 15
<210> 552
<211> 150
<212> DNA
<213> Vaccinia virus
<400> 552
gatgttccca atttcaagga caaaatggcc agagttatca agagaaaatt taataaacag 60
tctcaatctt atttaactaa atttctcggt agcacatcaa atgatgttac cacttttctt 120
agcatgctta acttgactaa atattcataa 150
<210> 553
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<400> 553
taaaaaatga aaataaatac aaaggttctt 30
<210> 554
<211> 28
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<400> 554
aaattgaaag cgagaaataa tcataaat 28
<210> 555
<211> 15
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<400> 555
aaaattgaaa tttta 15
<210> 556
<211> 29
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<400> 556
ttttattttt tttttttgga atataaata 29
<210> 557
<211> 39
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<400> 557
aaaattgaaa ttttattttt tttttttgga atataaata 39
<210> 558
<211> 15
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<400> 558
aaaattgaaa aaata 15
<210> 559
<211> 50
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<400> 559
ttttattttt tttttttgga atataaatat ccggtaaaat tgaaaaaata 50
<210> 560
<211> 28
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<221> modified_base
<222> (3)..(3)
<223> a, c, t, g, unknown or other
<220>
<221> modified_base
<222> (10)..(10)
<223> a, c, t, g, unknown or other
<220>
<221> modified_base
<222> (18)..(21)
<223> a, c, t, g, unknown or other
<400> 560
ttnttttttn tttttttnnn ntataaat 28
<210> 561
<211> 28
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<400> 561
ttgtattttc ttttgttggc atataaat 28
<210> 562
<211> 28
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<400> 562
tttattgtaa gctttttcca ttttaaat 28
<210> 563
<211> 28
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<400> 563
tcattttgtt tttttctatg ctataaat 28
<210> 564
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<400> 564
taaaaattta aaatatatta tcacttcagt 30
<210> 565
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<400> 565
aaaaaactga tattatataa atattttagt 30
<210> 566
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<221> modified_base
<222> (1)..(2)
<223> a, c, t, g, unknown or other
<220>
<221> modified_base
<222> (7)..(7)
<223> a, c, t, g, unknown or other
<220>
<221> modified_base
<222> (14)..(14)
<223> a, c, t, g, unknown or other
<220>
<221> modified_base
<222> (18)..(30)
<223> a, c, t, g, unknown or other
<400> 566
nnaaaantga aaanatannn nnnnnnnnnn 30
<210> 567
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<400> 567
aaaaaaatga taaagtaggt tcagttttat 30
<210> 568
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<400> 568
taaaaagtga aaaacaatat tatttttatc 30
<210> 569
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<400> 569
aaaattaaaa aataacttaa tttattattg 30
<210> 570
<211> 21
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 570
Gly Ser Gly Glu Gly Arg Gly Ser Leu Leu Thr Cys Gly Asp Val Glu
1 5 10 15
Glu Asn Pro Gly Pro
20
<210> 571
<211> 23
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 571
Pro Arg Gly Ser Gly Glu Gly Arg Gly Ser Leu Leu Thr Cys Gly Asp
1 5 10 15
Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro
20
<210> 572
<211> 18
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 572
Glu Gly Arg Gly Ser Leu Leu Thr Cys Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro
1 5 10 15
Gly Pro
<210> 573
<211> 22
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 573
Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val
1 5 10 15
Glu Glu Asn Pro Gly Pro
20
<210> 574
<211> 19
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 574
Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val Glu Glu Asn
1 5 10 15
Pro Gly Pro
<210> 575
<211> 23
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 575
Gly Ser Gly Gln Cys Thr Asn Tyr Ala Leu Leu Lys Leu Ala Gly Asp
1 5 10 15
Val Glu Ser Asn Pro Gly Pro
20
<210> 576
<211> 20
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 576
Gln Cys Thr Asn Tyr Ala Leu Leu Lys Leu Ala Gly Asp Val Glu Ser
1 5 10 15
Asn Pro Gly Pro
20
<210> 577
<211> 25
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 577
Gly Ser Gly Val Lys Gln Thr Leu Asn Phe Asp Leu Leu Lys Leu Ala
1 5 10 15
Gly Asp Val Glu Ser Asn Pro Gly Pro
20 25
<210> 578
<211> 22
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 578
Val Lys Gln Thr Leu Asn Phe Asp Leu Leu Lys Leu Ala Gly Asp Val
1 5 10 15
Glu Ser Asn Pro Gly Pro
20
<210> 579
<211> 846
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<400> 579
atggagacag atactctatt gctatgggtt ttgttattat gggtgccggg ttccacggga 60
attcgtcgtg ctgacattgt tttaacacag tctccaggta ccctatcatt gtcccctggt 120
gagcgtgcca cgcttagttg cagagcctct cagtctgtgg gatcaagtta tttagcttgg 180
tatcaacaaa aacctggaca agcacctcgt ttgttaatat atggtgcatt cagtagagca 240
actggaattc ctgatcgatt ctcaggatct ggatctggaa cagacttcac acttaccatc 300
tcacgtcttg aacccgagga ctttgcggtc tactactgcc agcagtatgg ttcgtcgcct 360
tggactttcg gacaaggaac caaagttgaa atcaagcgag gaggaggtgg atcgggtggt 420
ggaggatccg gtggaggtgg aagtgaagcg aagctagtcg aatctggagg tggtgtagtg 480
cagcctggac gttcgcttcg actatcctgt gctgcttcag gatttacctt ttcatcttac 540
acgatgcact gggtgcgtca agcgcctggt aaaggactag agtgggtcac gtttatctca 600
tacgacggta ataacaagta ttatgctgat tccgtaaagg gacgtttcac catatcgcgt 660
gacaattcta agaatacctt gtatcttcaa atgaatagtc ttagagctga agacactgcc 720
atttactatt gtgcacgaac gggatggctt ggaccttttg attattgggg tcagggtact 780
ttggtcaccg tctccacagc gaagacaaca cctccctcag tctatccact tgctccgcgt 840
agttaa 846
<210> 580
<211> 281
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 580
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Ile Arg Arg Ala Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro
20 25 30
Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg
35 40 45
Ala Ser Gln Ser Val Gly Ser Ser Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys
50 55 60
Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Phe Ser Arg Ala
65 70 75 80
Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe
85 90 95
Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr
100 105 110
Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys
115 120 125
Val Glu Ile Lys Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
130 135 140
Gly Gly Gly Ser Glu Ala Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val
145 150 155 160
Gln Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr
165 170 175
Phe Ser Ser Tyr Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly
180 185 190
Leu Glu Trp Val Thr Phe Ile Ser Tyr Asp Gly Asn Asn Lys Tyr Tyr
195 200 205
Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys
210 215 220
Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala
225 230 235 240
Ile Tyr Tyr Cys Ala Arg Thr Gly Trp Leu Gly Pro Phe Asp Tyr Trp
245 250 255
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Thr Ala Lys Thr Thr Pro Pro
260 265 270
Ser Val Tyr Pro Leu Ala Pro Arg Ser
275 280
<210> 581
<211> 855
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<400> 581
atggaaaccg atactttgct tctatgggtc cttttgctat gggtgcccgg atcaaccgga 60
ataagacgtg ctgatatcgt tatgacccag accacgctat cattaccagt tagtctaggt 120
gaccaggcca gtatcagttg ccgttcatct cagtccattg tacactcaaa cggaaacacc 180
tacttggagt ggtatcttca gaaacctggt caatctccca agcttctaat ttacaaagtg 240
tctaaccgat tttctggtgt gccggatcga ttttcgggtt ctggtagtgg aacggatttc 300
acgctaaaaa tatcccgagt cgaagctgaa gacctaggag tatattattg ctttcaagga 360
tctcacgtcc cgtacacctt tggtggagga accaagcttg aaataaagcg aggaggtgga 420
ggatcaggag gaggtggttc gggtggtggt ggttccgagg cgaagttaca ggagtcggga 480
cccgtattag tgaagcctgg tgcgagtgtc aaaatgagtt gcaaagccag tggttacacc 540
ttcacagact attacatgaa ctgggtgaag cagtctcacg gaaaatcttt agagtggata 600
ggagtaatta acccgtacaa tggtgatacg agttacaacc agaagttcaa aggtaaggcg 660
accttgacgg tcgataaatc ctctagtact gcgtacatgg aactaaactc tttaacctct 720
gaggattctg ccgtatatta ttgtgccaga tattatggtt cgtggttcgc atattgggga 780
cagggaactt taattacggt ctcgacagcc aaaacgactc ccccctcagt ttatcccctt 840
gctcctagaa gttaa 855
<210> 582
<211> 284
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 582
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Ile Arg Arg Ala Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Thr
20 25 30
Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg
35 40 45
Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp
50 55 60
Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val
65 70 75 80
Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser
85 90 95
Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu
100 105 110
Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly Ser His Val Pro Tyr Thr Phe Gly
115 120 125
Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
130 135 140
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Ala Lys Leu Gln Glu Ser Gly
145 150 155 160
Pro Val Leu Val Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala
165 170 175
Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr Tyr Met Asn Trp Val Lys Gln Ser
180 185 190
His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile Gly Val Ile Asn Pro Tyr Asn Gly
195 200 205
Asp Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val
210 215 220
Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Asn Ser Leu Thr Ser
225 230 235 240
Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Tyr Tyr Gly Ser Trp Phe
245 250 255
Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Ile Thr Val Ser Thr Ala Lys Thr
260 265 270
Thr Pro Pro Ser Val Tyr Pro Leu Ala Pro Arg Ser
275 280
<210> 583
<211> 1734
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<220>
<221> misc_feature
<222> (1654)..(1716)
<223> B7-1 transmembrane domain
<220>
<221> misc_feature
<222> (1654)..(1731)
<223> B7-1 cytoplasmic domain
<400> 583
atgtgtcacc agcagttggt catctcttgg ttttccctgg tttttctggc atctcccctc 60
gtggccatat gggaactgaa gaaagatgtt tatgtcgtag aattggattg gtatccggat 120
gcccctggag aaatggtggt cctcacctgt gacacccctg aagaagatgg tatcacctgg 180
accttggacc agagcagtga ggtcttaggc tctggcaaaa ccctgaccat ccaagtcaaa 240
gagtttggag atgctggcca gtacacctgt cacaaaggag gcgaggttct aagccattcg 300
ctcctgctgc ttcacaaaaa ggaagatgga atttggtcca ctgatatttt aaaggaccag 360
aaagaaccca aaaataagac ctttctaaga tgcgaggcca agaattattc tggacgtttc 420
acctgctggt ggctgacgac aatcagtact gatttgacat tcagtgtcaa aagcagcaga 480
ggctcttctg acccccaagg ggtgacgtgc ggagctgcta cactctctgc agagagagtc 540
agaggggaca acaaggagta tgagtactca gtggagtgcc aggaggacag tgcctgccca 600
gctgctgagg agagtctgcc cattgaggtc atggtggatg ccgttcacaa gctcaagtat 660
gaaaactaca ccagcagctt cttcatcagg gacatcatca aacctgaccc acccaagaac 720
ttgcagctga agccattaaa gaattctcgg caggtggagg tcagctggga gtaccctgac 780
acctggagta ctccacattc ctacttctcc ctgacattct gcgttcaggt ccagggcaag 840
agcaagagag aaaagaaaga tagagtcttc acggacaaga cctcagccac ggtcatctgc 900
cgcaaaaatg ccagcattag cgtgcgggcc caggaccgct actatagctc atcttggagc 960
gaatgggcat ctgtgccctg cagtgttcct ggagtagggg tacctggggt gggcgccaga 1020
aacctccccg tggccactcc agacccagga atgttcccat gccttcacca ctcccaaaac 1080
ctgctgaggg ccgtcagcaa catgctccag aaggccagac aaactctaga attttaccct 1140
tgcacttctg aagagattga tcatgaagat atcacaaaag ataaaaccag cacagtggag 1200
gcctgtttac cattggaatt aaccaagaat gagagttgcc taaattccag agagacctct 1260
ttcataacta atgggagttg cctggcctcc agaaagacct cttttatgat ggccctgtgc 1320
cttagtagta tttatgaaga cttgaagatg taccaggtgg agttcaagac catgaatgca 1380
aagctgctga tggaccctaa gaggcagatc tttctagatc aaaacatgct ggcagttatt 1440
gatgagctga tgcaggccct gaatttcaac agtgagactg tgccacaaaa atcctccctt 1500
gaagaaccgg atttttataa aactaaaatc aagctctgca tacttcttca tgctttcaga 1560
attcgggcag tgactattga tagagtgatg agctatctga atgcttccgg aggaggtgga 1620
tcgggtggtg gaggatctgg tggaggtgga agtctgctcc catcctgggc cattacctta 1680
atctcagtaa atggaatttt tgtgatatgc tgcctgacct actgctttgc ctaa 1734
<210> 584
<211> 577
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (552)..(572)
<223> B7-1 transmembrane domain
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (552)..(577)
<223> B7-1 cytoplasmic domain
<400> 584
Met Cys His Gln Gln Leu Val Ile Ser Trp Phe Ser Leu Val Phe Leu
1 5 10 15
Ala Ser Pro Leu Val Ala Ile Trp Glu Leu Lys Lys Asp Val Tyr Val
20 25 30
Val Glu Leu Asp Trp Tyr Pro Asp Ala Pro Gly Glu Met Val Val Leu
35 40 45
Thr Cys Asp Thr Pro Glu Glu Asp Gly Ile Thr Trp Thr Leu Asp Gln
50 55 60
Ser Ser Glu Val Leu Gly Ser Gly Lys Thr Leu Thr Ile Gln Val Lys
65 70 75 80
Glu Phe Gly Asp Ala Gly Gln Tyr Thr Cys His Lys Gly Gly Glu Val
85 90 95
Leu Ser His Ser Leu Leu Leu Leu His Lys Lys Glu Asp Gly Ile Trp
100 105 110
Ser Thr Asp Ile Leu Lys Asp Gln Lys Glu Pro Lys Asn Lys Thr Phe
115 120 125
Leu Arg Cys Glu Ala Lys Asn Tyr Ser Gly Arg Phe Thr Cys Trp Trp
130 135 140
Leu Thr Thr Ile Ser Thr Asp Leu Thr Phe Ser Val Lys Ser Ser Arg
145 150 155 160
Gly Ser Ser Asp Pro Gln Gly Val Thr Cys Gly Ala Ala Thr Leu Ser
165 170 175
Ala Glu Arg Val Arg Gly Asp Asn Lys Glu Tyr Glu Tyr Ser Val Glu
180 185 190
Cys Gln Glu Asp Ser Ala Cys Pro Ala Ala Glu Glu Ser Leu Pro Ile
195 200 205
Glu Val Met Val Asp Ala Val His Lys Leu Lys Tyr Glu Asn Tyr Thr
210 215 220
Ser Ser Phe Phe Ile Arg Asp Ile Ile Lys Pro Asp Pro Pro Lys Asn
225 230 235 240
Leu Gln Leu Lys Pro Leu Lys Asn Ser Arg Gln Val Glu Val Ser Trp
245 250 255
Glu Tyr Pro Asp Thr Trp Ser Thr Pro His Ser Tyr Phe Ser Leu Thr
260 265 270
Phe Cys Val Gln Val Gln Gly Lys Ser Lys Arg Glu Lys Lys Asp Arg
275 280 285
Val Phe Thr Asp Lys Thr Ser Ala Thr Val Ile Cys Arg Lys Asn Ala
290 295 300
Ser Ile Ser Val Arg Ala Gln Asp Arg Tyr Tyr Ser Ser Ser Trp Ser
305 310 315 320
Glu Trp Ala Ser Val Pro Cys Ser Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly
325 330 335
Val Gly Ala Arg Asn Leu Pro Val Ala Thr Pro Asp Pro Gly Met Phe
340 345 350
Pro Cys Leu His His Ser Gln Asn Leu Leu Arg Ala Val Ser Asn Met
355 360 365
Leu Gln Lys Ala Arg Gln Thr Leu Glu Phe Tyr Pro Cys Thr Ser Glu
370 375 380
Glu Ile Asp His Glu Asp Ile Thr Lys Asp Lys Thr Ser Thr Val Glu
385 390 395 400
Ala Cys Leu Pro Leu Glu Leu Thr Lys Asn Glu Ser Cys Leu Asn Ser
405 410 415
Arg Glu Thr Ser Phe Ile Thr Asn Gly Ser Cys Leu Ala Ser Arg Lys
420 425 430
Thr Ser Phe Met Met Ala Leu Cys Leu Ser Ser Ile Tyr Glu Asp Leu
435 440 445
Lys Met Tyr Gln Val Glu Phe Lys Thr Met Asn Ala Lys Leu Leu Met
450 455 460
Asp Pro Lys Arg Gln Ile Phe Leu Asp Gln Asn Met Leu Ala Val Ile
465 470 475 480
Asp Glu Leu Met Gln Ala Leu Asn Phe Asn Ser Glu Thr Val Pro Gln
485 490 495
Lys Ser Ser Leu Glu Glu Pro Asp Phe Tyr Lys Thr Lys Ile Lys Leu
500 505 510
Cys Ile Leu Leu His Ala Phe Arg Ile Arg Ala Val Thr Ile Asp Arg
515 520 525
Val Met Ser Tyr Leu Asn Ala Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
530 535 540
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Leu Leu Pro Ser Trp Ala Ile Thr Leu
545 550 555 560
Ile Ser Val Asn Gly Ile Phe Val Ile Cys Cys Leu Thr Tyr Cys Phe
565 570 575
Ala
<210> 585
<211> 774
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<220>
<221> misc_feature
<222> (691)..(771)
<223> transmembrane and cytoplasmic domain
<400> 585
atgtgtcagt ctcgatacct tcttttccta gcaaccttag cgttattgaa tcatctttca 60
ttagcgcgtg tcattccggt ctccggtccc gcccgttgcc tttcgcaaag tcgtaacttg 120
cttaagacta cggatgatat ggtcaaaact gctagagaaa agttaaaaca ctactcgtgt 180
acggctgaag acatagacca cgaagacatc acgcgagatc aaacaagtac cctaaagact 240
tgcttaccgc tagagcttca taaaaacgag agttgcctag cgacccgaga gacatcttca 300
acaaccagag gatcttgtct accccctcag aagacttctc taatgatgac cttgtgcctt 360
ggtagtatat atgaagattt aaagatgtac cagactgaat ttcaggcaat caatgcggca 420
ttacaaaacc acaaccatca gcagataata ttagataaag gaatgcttgt agccattgac 480
gaacttatgc agtctctaaa ccacaacggt gagacacttc gtcagaaacc tccggttggt 540
gaggcagatc cttaccgtgt gaaaatgaag ttgtgcattc tattgcatgc attttcgacg 600
cgtgtggtca ccatcaacag agtcatgggt tatctaagtt ctgctggtgg aggtggaagt 660
ggaggtggag gaagtggtgg aggaggaagt accttagtgt tgtttggagc aggtttcggt 720
gcagtcataa cggttgtcgt tatcgtggtg atcataaaat gtttctgcaa gtga 774
<210> 586
<211> 257
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (231)..(257)
<223> transmembrane and cytoplasmic domain
<400> 586
Met Cys Gln Ser Arg Tyr Leu Leu Phe Leu Ala Thr Leu Ala Leu Leu
1 5 10 15
Asn His Leu Ser Leu Ala Arg Val Ile Pro Val Ser Gly Pro Ala Arg
20 25 30
Cys Leu Ser Gln Ser Arg Asn Leu Leu Lys Thr Thr Asp Asp Met Val
35 40 45
Lys Thr Ala Arg Glu Lys Leu Lys His Tyr Ser Cys Thr Ala Glu Asp
50 55 60
Ile Asp His Glu Asp Ile Thr Arg Asp Gln Thr Ser Thr Leu Lys Thr
65 70 75 80
Cys Leu Pro Leu Glu Leu His Lys Asn Glu Ser Cys Leu Ala Thr Arg
85 90 95
Glu Thr Ser Ser Thr Thr Arg Gly Ser Cys Leu Pro Pro Gln Lys Thr
100 105 110
Ser Leu Met Met Thr Leu Cys Leu Gly Ser Ile Tyr Glu Asp Leu Lys
115 120 125
Met Tyr Gln Thr Glu Phe Gln Ala Ile Asn Ala Ala Leu Gln Asn His
130 135 140
Asn His Gln Gln Ile Ile Leu Asp Lys Gly Met Leu Val Ala Ile Asp
145 150 155 160
Glu Leu Met Gln Ser Leu Asn His Asn Gly Glu Thr Leu Arg Gln Lys
165 170 175
Pro Pro Val Gly Glu Ala Asp Pro Tyr Arg Val Lys Met Lys Leu Cys
180 185 190
Ile Leu Leu His Ala Phe Ser Thr Arg Val Val Thr Ile Asn Arg Val
195 200 205
Met Gly Tyr Leu Ser Ser Ala Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
210 215 220
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Thr Leu Val Leu Phe Gly Ala Gly Phe Gly
225 230 235 240
Ala Val Ile Thr Val Val Val Ile Val Val Ile Ile Lys Cys Phe Cys
245 250 255
Lys
<210> 587
<211> 1743
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<220>
<221> misc_feature
<222> (1660)..(1740)
<223> transmembrane and cytoplasmic domain
<400> 587
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cagcgagatt atgagaaata ttccgtttcc tgccaggagg acgtaacttg tccgactgcc 600
gaggagactt tgccgataga gcttgcctta gaggcccgac agcagaataa gtacgagaat 660
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atgaaagaaa cggaagaagg ttgcaaccag aaaggagcat ttctagttga aaagacctct 900
acggaagtcc agtgtaaagg tggaaatgtg tgtgtgcaag cccaggaccg atattacaac 960
agttcgtgtt cgaagtgggc ttgcgtgccg tgtcgtgtcc gatctgtacc aggagtcgga 1020
gttcctggag taggtcgtgt aataccggta tccggaccag ctcgttgctt atctcaatcg 1080
cgaaacctac ttaaaacaac cgatgacatg gtgaagacag cgagagaaaa gcttaaacat 1140
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cttaagacat gcttgccact agaacttcat aaaaatgagt cttgcttagc aacgcgagaa 1260
acgtcgtcta cgacgcgtgg ttcatgtttg ccgccccaaa agacatcctt gatgatgacg 1320
ttgtgtcttg gatccatcta tgaggattta aaaatgtacc agacagaatt tcaggctatc 1380
aatgcagctc tacagaatca taatcaccag cagattatct tagacaaggg aatgttagta 1440
gcaatcgatg agcttatgca atccttgaat cataacggag aaacattacg acaaaagcct 1500
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taa 1743
<210> 588
<211> 580
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (554)..(580)
<223> transmembrane and cytoplasmic domain
<400> 588
Met Cys Pro Gln Lys Leu Thr Ile Ser Trp Phe Ala Ile Val Leu Leu
1 5 10 15
Val Ser Pro Leu Met Ala Met Trp Glu Leu Glu Lys Asp Val Tyr Val
20 25 30
Val Glu Val Asp Trp Thr Pro Asp Ala Pro Gly Glu Thr Val Asn Leu
35 40 45
Thr Cys Asp Thr Pro Glu Glu Asp Asp Ile Thr Trp Thr Ser Asp Gln
50 55 60
Arg His Gly Val Ile Gly Ser Gly Lys Thr Leu Thr Ile Thr Val Lys
65 70 75 80
Glu Phe Leu Asp Ala Gly Gln Tyr Thr Cys His Lys Gly Gly Glu Thr
85 90 95
Leu Ser His Ser His Leu Leu Leu His Lys Lys Glu Asn Gly Ile Trp
100 105 110
Ser Thr Glu Ile Leu Lys Asn Phe Lys Asn Lys Thr Phe Leu Lys Cys
115 120 125
Glu Ala Pro Asn Tyr Ser Gly Arg Phe Thr Cys Ser Trp Leu Val Gln
130 135 140
Arg Asn Met Asp Leu Lys Phe Asn Ile Lys Ser Ser Ser Ser Ser Pro
145 150 155 160
Asp Ser Arg Ala Val Thr Cys Gly Met Ala Ser Leu Ser Ala Glu Lys
165 170 175
Val Thr Leu Asp Gln Arg Asp Tyr Glu Lys Tyr Ser Val Ser Cys Gln
180 185 190
Glu Asp Val Thr Cys Pro Thr Ala Glu Glu Thr Leu Pro Ile Glu Leu
195 200 205
Ala Leu Glu Ala Arg Gln Gln Asn Lys Tyr Glu Asn Tyr Ser Thr Ser
210 215 220
Phe Phe Ile Arg Asp Ile Ile Lys Pro Asp Pro Pro Lys Asn Leu Gln
225 230 235 240
Met Lys Pro Leu Lys Asn Ser Gln Val Glu Val Ser Trp Glu Tyr Pro
245 250 255
Asp Ser Trp Ser Thr Pro His Ser Tyr Phe Ser Leu Lys Phe Phe Val
260 265 270
Arg Ile Gln Arg Lys Lys Glu Lys Met Lys Glu Thr Glu Glu Gly Cys
275 280 285
Asn Gln Lys Gly Ala Phe Leu Val Glu Lys Thr Ser Thr Glu Val Gln
290 295 300
Cys Lys Gly Gly Asn Val Cys Val Gln Ala Gln Asp Arg Tyr Tyr Asn
305 310 315 320
Ser Ser Cys Ser Lys Trp Ala Cys Val Pro Cys Arg Val Arg Ser Val
325 330 335
Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Arg Val Ile Pro Val Ser Gly
340 345 350
Pro Ala Arg Cys Leu Ser Gln Ser Arg Asn Leu Leu Lys Thr Thr Asp
355 360 365
Asp Met Val Lys Thr Ala Arg Glu Lys Leu Lys His Tyr Ser Cys Thr
370 375 380
Ala Glu Asp Ile Asp His Glu Asp Ile Thr Arg Asp Gln Thr Ser Thr
385 390 395 400
Leu Lys Thr Cys Leu Pro Leu Glu Leu His Lys Asn Glu Ser Cys Leu
405 410 415
Ala Thr Arg Glu Thr Ser Ser Thr Thr Arg Gly Ser Cys Leu Pro Pro
420 425 430
Gln Lys Thr Ser Leu Met Met Thr Leu Cys Leu Gly Ser Ile Tyr Glu
435 440 445
Asp Leu Lys Met Tyr Gln Thr Glu Phe Gln Ala Ile Asn Ala Ala Leu
450 455 460
Gln Asn His Asn His Gln Gln Ile Ile Leu Asp Lys Gly Met Leu Val
465 470 475 480
Ala Ile Asp Glu Leu Met Gln Ser Leu Asn His Asn Gly Glu Thr Leu
485 490 495
Arg Gln Lys Pro Pro Val Gly Glu Ala Asp Pro Tyr Arg Val Lys Met
500 505 510
Lys Leu Cys Ile Leu Leu His Ala Phe Ser Thr Arg Val Val Thr Ile
515 520 525
Asn Arg Val Met Gly Tyr Leu Ser Ser Ala Gly Gly Gly Gly Ser Gly
530 535 540
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Thr Leu Val Leu Phe Gly Ala
545 550 555 560
Gly Phe Gly Ala Val Ile Thr Val Val Val Ile Val Val Ile Ile Lys
565 570 575
Cys Phe Cys Lys
580
<210> 589
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 589
Pro Arg Gly Ser Gly
1 5
<210> 590
<211> 191737
<212> DNA
<213> Vaccinia virus
<400> 590
gtaaaattaa attaattata aaattatgta tatgatttac taactttagt tagataagtt 60
agtaatacat aaattttagt atattaatat tatattttaa atatttattt agtgtctaga 120
aaaaaatgtg tgaccaacga ccgtaggaaa ctctagaggg taagaaaaat caatcgcttt 180
atagagacca tcagaaagag gtttaatatt tttgtgagac catcgaagga gaaagagata 240
aaactttttt acgactccat cagaaagagg tttaatattt ttgtgagacc atcgaaggag 300
aaagagataa aactttttta cgactccatc agaaagaggt ttaatatttt tgtgagacca 360
tcgaaggaga aagagataaa acttttttac gactccatca gaaagaggtt taatattttt 420
gtgagaaagg agaaagagat aaaacttttt tacgactcca tcagaaagag gtttaatatt 480
tttgtgagac catcgaagga gaaagagata aaactttttt acgactccat cagaaagagg 540
tttaatattt ttgtgagacc atcgaaggag aaagagataa aactttttta cgactccatc 600
agaaagaggt ttaatatttt tgtgagacca tcgaaggaga aagagataaa acttttttac 660
gactccatca gaaagaggtt taatattttt gtgagaccat cgaaggagac tccatcagaa 720
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gaaagaggtt taatattttt gtgagaaagg agaaagagat aaaacttttt tacgactcca 840
tcagaaagag gtttaatatt tttgtgagac catcgaagga gaaagagata aaactttttt 900
acgactccat cagaaagagg tttaatattt ttgtgagacc atcgaaggag aaagagataa 960
aactttttta cgactccatc agaaagaggt ttaatatttt tgtgagacca tcgaagagag 1020
aaagagataa aactttttta cgactccatc agaaagaggt ttaatatttt tgtgagacca 1080
tcgaagagag aaagagataa aactttttta cgactccatc agaaagaggt ttaatatttt 1140
tgtgagacca tcgaagagag aaagagataa aactttttta cgactccatc agaaagaggt 1200
ttaatatttt tgtgagacca tcgaagagag aaagagataa aactttttta cgactactcc 1260
atcagaaaga ggtttaatat ttttgtgaga ccatcgaaga gagaaagaga taaaactttt 1320
ttacgactcc atcagaaaga ggtttaatat ttttgtgaga ccatcgaaga gagaaagaga 1380
taaaactttt ttacgactcc atcagaaaga ggtttaatat ttttgtgaga ccatcgaaga 1440
gagaaagaga taaaactttt ttacgactcc atcagaaaga ggtttaatat ttttgtgaga 1500
ccatcgaaga gagaaagaga taaaactttt ttacgactcc atcagaaaga ggtttaatat 1560
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taaaactttt ttacgactcc atcagaaaga ggtttaatat ttttgtgaga ccatcgaaga 1860
gagaaagaga taaaactttt ttacgactcc atcagaaaga ggtttaatat ttttgtgaga 1920
ccatcgaaga gagaaagaga taaaactttt ttacgactcc atcagaaaga ggtttaatat 1980
ttttgtgaga ccatcgaaga gagaaagaga taaaactttt ttacgactcc atcagaaaga 2040
ggtttaatat ttttgtgaga ccatcgaaga gagaaagaga taaaactttt ttacgactcc 2100
atcagaaaga ggtttaatat ttttgtgaga ccatcgaaga gagaaagaga taaaactttt 2160
ttacgactcc atcagaaaga ggtttaatat ttttgtgaga ccatcgaaga gagaaagaga 2220
taaaactttt ttacgactcc atcagaaaga ggtttaatat ttttgtgaga ccatcgaaga 2280
gagaaagaga taaaactttt ttacgactcc atcagaaaga ggtttaatat ttttgtgaga 2340
ccatcgaaga gagaaagaga taaaactttt ttacgactcc atcagaaaga ggtttaatat 2400
ttttgtgaga ccatcgaaga gagaaagaga taaaactttt ttacgactcc atcagaaaga 2460
ggtttaatat ttttgtgaga ccatcgaaga gagaaagaga taaaactttt ttacgactcc 2520
atcagaaaga ggtttaatat ttttgtgaga ccatcgaaga gagaaagaga taaaactttt 2580
ttacgactcc atcagaaaga ggtttaatat ttttgtgaga ccatcgaaga gagaaagata 2640
aaactttttt acgactccat cagaaagagg tttaatattt ttgtgagacc atcgaagaga 2700
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atcgaagaga gaaagagata aaactttttt acgactccat cagaaagagg tttaatattt 2820
ttgtgagacc atcgaagaga gaaagagaaa gagatagtta gtctagatat ttttcttagt 2880
acaaaagtca atgttttaaa atatatggac aagaatttgt ctgtataaaa acttgtgtga 2940
aattttgtac caaagaaaaa atgtgagcag tatcccctac atggatttta ctagatcatt 3000
tatataccaa aaaatattat acgatctacg ttttattata tgattttaac gtgtaaatta 3060
taaacattat tttatgatat acaattgtct ggtaacctag atgggcatag gggatgttga 3120
taagctcgac gagtatatgt tgttggacgt tattgtttaa gaaatagttg atgcatcaga 3180
aagagaataa aaaatatttt agtgagacca tcgaagagag aaagagataa aactttttta 3240
cgactccatc agaaagaggt ttaatatttt tgtgagacca tcgaagagag aaagagaata 3300
aaaatatttt atgactccat tgaagagaga aagagaaaat gagaatgaga ataaaaatat 3360
tttagtgaca ccatcagaaa gaggtttaat atttttgtga gaccatcgaa gagagaaaga 3420
gaataaaaat attttatgac tccattgaag agagaaagag aaaatgagaa tgagaataaa 3480
aatattttag tgacaccatc agaaagaggt ttaatatttt ttatgagacc atcaaagaga 3540
gaaagagaat aaaaatattt ttgtaaaact ttttttatga gaccatcaaa gagagaaaga 3600
gaataaaaat atttttgtaa aacttttttt gtgagaccat cgaagagaga aagagaataa 3660
aaatattttt gtaaaacttt ttttatgaga ccatcaaaga gagaaagaga ataaaaatat 3720
ttttgtaaaa ctttttttat gagaccatca aagagagaaa gagaataaaa atatttttgt 3780
aaaacttttt ttatgagacc atcaaagaga gaaagagaat aaaaatattt ttgtaaaact 3840
ttttttatga gaccatcaaa gagagaaaga gaataaaaat atttttgtaa aacttttttt 3900
atgagaccat caaagagaga aagagaataa aaatattttt gtaaaacttt ttttatgaga 3960
ccatcaaaga gagaaagaga ataaaaatat ttttgtaaaa ctttttttat gagaccatca 4020
gaaagaggtt taatattttt gtgataccct gaaaggaaat aggaatagga ataggaatag 4080
tgtcataatc gtatcacact attgagacag aaaaagaaga agtaacgaga ggtaactttt 4140
tgtgaatgta gttaagaaca tttttgtttt gcaaaccgga atatagtgtc cggtacactt 4200
ttttaattcg tggtgtgcct gaatcgttcg attaacccta ctcatccaat ttcagatgaa 4260
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cggttgcacc ttcagatgcc gatccgtcga catacttgaa tccatccttg acctcaagtt 4380
cagatgattc cttgcacatg tctccgatac gaacgctaaa ctctagattc ttgacacatt 4440
ttgtatcgac gatcgttgaa ccgatgatat cttcgtaact cactttctta tgagagatgt 4500
tagacccgag tactggatgg gtcttgatgt cgctgtcttt ctcttcttcg ctacatctga 4560
tgtcgataga cacctcacag tctttgatca tagccagagc ttcttcacga gtgatcgcgg 4620
gagagtcctt accttgtcct ggggacacgc tggacaatct agcattcact gtgtttccat 4680
cagcggattc tgagatggat ttaatctgag gacatttggt gaatccaaag ttcattctca 4740
gacctccacc gatgatggag taataagtgg taggaggatc tacatcctcg actgatgtgg 4800
aatcatcttc tgattccacc tcgggatctg gatctgactc ggactctgta atttccgtta 4860
cggattggca aatcttatca ttggtcggtg tttggtcttg ctttgtgact ttgataataa 4920
catcgattcc catatgatgt ttgttttctt cttccgtaca cgaggaggag gatgaggatg 4980
attgctgaag actggcaggc acatgcatgc caggacgata tattgtttca taattgctat 5040
tgattgagta ctgttcttta tgattctact tccttaccat gcaataaatt agaatatatt 5100
ttctactttt acgagaaatt aattattgta tttattattt atgggtgaaa aacttactat 5160
aaaaagcggg tgggtttgga attagtgatc agtttatgta tatcgcaact accgggcata 5220
tggctatcga catcgagaac attacccaca tgataagaga ttgtatcagt ttcgtagtct 5280
tgagtattgg tattactata tagtatatag atgtcgacgc tagatataca gtctccgaat 5340
gcggcatgat accgtcatca ttctttgctt tcgttaactg tttggaggaa gaatctttgt 5400
tattgcattt aatctcgaaa ttcagagtgc acacctttct cctgtaaaga atcctgaagt 5460
cgctacctta ttaagaacgg agaagtatcc atcacgaaat acgggattac agtctttatg 5520
attcatagta atagttagtt ccgacgttga gatggattca ctgagaccgg tagtggtcgt 5580
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caccactatc tgattcattc actatcaatc gataacaaga tctttgatat actaacggac 480
accattgatg actttagtaa atcatccgat ctattgctgt gttatcttag atataaattc 540
aatgggagct taaactacta cgttctgtac aaaggatccg accctaattg cgccgacgag 600
gatgaactca cttctcttca ttactactgt aaacacatat ccacgttcta caaaagcaat 660
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<213> Vaccinia virus
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<212> DNA
<213> Vaccinia virus
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<212> DNA
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<212> DNA
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<400> 607
atgcatgtgc ctgccagtct tcagcaatca tcctcatcct cctcctcgtg tacggaagaa 60
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<212> DNA
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<400> 609
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<212> DNA
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accatcatgg atacggatca gagatttgtg gcagcggctg agggtgttgg taaagataat 300
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gtgacaataa catgtatgga aatgaattgt ggaaccacaa aatacgatag cgatcttccg 420
gaatcaattc ataaatcatc atcgtgtgat ataactataa atggatcatg tgtgacatgt 480
gttaacttag agactgatcc aacaaagatt aatccccatt acctacaccc caaggataaa 540
tatctttatc ataattctga gtatggcatg cgtggtagtt atggcgtgac atttatagat 600
gaactaaacc agtgccttct tgacataaaa gaactaagtt atgatatttg ttatagagag 660
taa 663
<210> 622
<211> 354
<212> DNA
<213> Vaccinia virus
<400> 622
atgaggactc tacttattag atatattctt tggagaaatg acaacgatca aacctattat 60
aatgatgatt ttaaaaagct tatgttgttg gatgaattgg tagatgacgg cgatgtatgt 120
acattgatta agaacatgag aatgacgctg tccgacggtc cattgctaga tagattgaat 180
caaccagtta ataatataga agacgctaag cgaatgatcg ctattagtgc caaagtggct 240
agagacattg gtgaacgttc agaaattaga tgggaagagt cattcaccat actctttagg 300
atgattgaaa catattttga tgatctaatg attgatctat atggtgaaaa ataa 354
<210> 623
<211> 528
<212> DNA
<213> Vaccinia virus
<400> 623
atgacgtcct ctgcaatgga taacaatgaa cctaaagtac tagaaatggt atatgatgct 60
acaattttac ccgaaggtag tagcatggat ccaaatatca tggattgtat aaacagacac 120
atcaatatgt gtatacaacg cacctatagt tctagtataa ttgccatttt gaatagattc 180
ctaacaatga acaaggatga actaaacaat acacagtgtc atataattaa agaatttatg 240
acatacgaac aaatggcgat tgaccattat ggagaatatg taaacgctat tctatatcaa 300
attcgtaaaa gacctaatca acatcacacc attgatctgt ttaaaaaaat aaaaagaacc 360
ccgtatgaca cttttaaagt ggatcccgta gaattcgtaa aaaaagttat cggatttgta 420
tctatcttga acaaatataa accggtttat agttacgtcc tgtacgagaa cgtcctgtac 480
gatgagttca aatgtttcat taactacgtg gaaactaagt atttctaa 528
<210> 624
<211> 157529
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<220>
<221> misc_feature
<222> (18347)..(19489)
<223> remaining portion of the C2L gene
<220>
<221> misc_feature
<222> (19490)..(19848)
<223> remaining portion of the F3L gene
<220>
<221> misc_feature
<222> (153418)..(154094)
<223> sequence that is deleted and replaced in SEQ ID NO: 210
<220>
<221> misc_feature
<222> (154095)..(154244)
<223> portion of the B8R gene that remains in SEQ ID NO: 210
<220>
<221> misc_feature
<222> (154139)..(154153)
<223> sequence that is deleted and replaced in SEQ ID NO: 210
<220>
<221> misc_feature
<222> (154139)..(154153)
<223> potential transcription regulatory sequences of the B9R gene
<220>
<221> misc_feature
<222> (154263)..(154292)
<223> potential transcription regulatory sequences of the B9R gene
<220>
<221> misc_feature
<222> (156719)..(157114)
<223> remaining portion of the B14R gene
<220>
<221> misc_feature
<222> (157115)..(157529)
<223> remaining portion of the B29R (ITR) gene
<400> 624
tcagacacac gctttgagtt ttgttgaatc gatgagtgaa gtatcatcgg ttgcaccttc 60
agatgccgat ccgtcgacat acttgaatcc atccttgacc tcaagttcag atgattcctt 120
gcacatgtct ccgatacgaa cgctaaactc tagattcttg acacattttg tatcgacgat 180
cgttgaaccg atgatatctt cgtaactcac tttcttatga gagatgttag acccgagtac 240
tggatgggtc ttgatgtcgc tgtctttctc ttcttcgcta catctgatgt cgatagacac 300
ctcacagtct ttgatcatag ccagagcttc ttcacgagtg atcgcgggag agtccttacc 360
ttgtcctggg gacacgctgg acaatctagc attcactgtg tttccatcag cggattctga 420
gatggattta atctgaggac atttggtgaa tccaaagttc attctcagac ctccaccgat 480
gatggagtaa taagtggtag gaggatctac atcctcgact gatgtggaat catcttctga 540
ttccacctcg ggatctggat ctgactcgga ctctgtaatt tccgttacgg attggcaaat 600
cttatcattg gtcggtgttt ggtcttgctt tgtgactttg ataataacat cgattcccat 660
atgatgtttg ttttcttctt ccgtacacga ggaggaggat gaggatgatt gctgaagact 720
ggcaggcaca tgcatgccag gacgatatat tgtttcataa ttgctattga ttgagtactg 780
ttctttatga ttctacttcc ttaccatgca ataaattaga atatattttc tacttttacg 840
agaaattaat tattgtattt attatttatg ggtgaaaaac ttactataaa aagcgggtgg 900
gtttggaatt agtgatcagt ttatgtatat cgcaactacc gggcatatgg ctatcgacat 960
cgagaacatt acccacatga taagagattg tatcagtttc gtagtcttga gtattggtat 1020
tactatatag tatatagatg tcgacgctag atatacagtc tccgaatgcg gcatgatacc 1080
gtcatcattc tttgctttcg ttaactgttt ggaggaagaa tctttgttat tgcatttaat 1140
ctcgaaattc agagtgcaca cctttctcct gtaaagaatc ctgaagtcgc taccttatta 1200
agaacggaga agtatccatc acgaaatacg ggattacagt ctttatgatt catagtaata 1260
gttagttccg acgttgagat ggattcactg agaccggtag tggtcgtccg agtacacgac 1320
gtgtcgttga cgggatacag attaatttcc acatcgatat agttaaaggt atttctgggt 1380
acgggttcgc atttatctgc ggaagagacg gtgtgagaat atgttccgag accacacgga 1440
gaacagatga cgtctccgga tactccgtat cctattccac attttgtttg ggaaacacat 1500
gccttgcatc cggatgatcc tttgagaaga caataatatc cgggagagca ttcacagatt 1560
ctattgtgag tagtgttaca cgatcgcgtc ttccgttaca acttagacaa gcgggtaaat 1620
gattattgcg agatgtgaag gtacccgaac cacacggcgt acattgtgtg ttagtcttgc 1680
tatcgcataa tctggaagcg tatgttcccg gacacaaatt atggcgtttg tattcgttgt 1740
ctttacactt tccatcggat ggtgcatgcg gtgctatatc tcttccgttt attattatac 1800
atgagagaaa caatatatac gagtataata cggacttcat aatttaataa tgtagtaatc 1860
gttgtcgtgt tcctgtttcc tacttctcca atcatataga tattttcttt ctatcatgga 1920
taatatttgt aatggttctt tccgtacaac atactgttta gatgatattg cgcataattt 1980
ccggaggcaa atacgatagt ctagattgac cgatggtaga ctctaattta ttgagtgctt 2040
tgtcgacgag tttactttta cgctccatcg atagatggca ctgttctatg agatcgtcgt 2100
acatgggaaa tgaaatgtgt ctgtccgaat gtatggcttc aagatagctg tgataccgta 2160
tacaggtcgg tgtcggagat tcgaatctct ttgaggcgac ttatgtcacg atgatggaat 2220
ctatcttatc gaatgatata tttttcataa atacactttt atagtcctcg tttaaacaga 2280
atttactatg tagttccgcg aatgactcgt cccttaatag gcagtaggct agtatctttt 2340
ttacgtagta atcgtcgtag ggagagaatt ctgacatctt gtagaacaac gatttaatca 2400
taggtagaga tactttcagt ctgtggtgga tgatgtcatt cacaacatcc gccttgtata 2460
tgatgtttct gttttcaaac accaagtcga ataccgtctt tagtcggaag gttgatgtcg 2520
tatccgatgt atgaggcaac attgttgtta caattttgaa aggcggtatt atagtattcg 2580
tctttctgaa tgtcgaacct atctagtaga taccgtagta tattgagagt gtatccttga 2640
ttatgtttta tgaatagata aagtagatgt tgtccttctt ccttttgttc gtgccaattg 2700
agtaacatta tgagaatatg acctgttgca caatcgttcc atgatgggtg tacaatcaag 2760
attattacgt atcctcgaga taaaagagca tacaccacac gaggactatg tttggtatac 2820
tgttgaaggt aagtgtgtaa ccgcgttaat gtttgctcca taatctatta tcgcgtagat 2880
gaatcgcttc tcggctcgca tcttagtgtg acttaacttg taataattgc ttttgtagaa 2940
cgtggatatg tgtttacagt agtaatgaag agaagtgagt tcatcctcgt cggcgcaatt 3000
agggtcggat cctttgtaca gaacgtagta gtttaagctc ccattgaatt tatatctaag 3060
ataacacagc aatagatcgg atgatttact aaagtcatca atggtgtccg ttagtatatc 3120
aaagatcttg ttatcgattg atagtgaatg aatcagatag tggtgtcctt tttcatcctt 3180
gctatcaaag ttacgcatgc cgtggtgtaa caatatcttt aatacagatg gattaaatcg 3240
tgtattcatc gtatagcaat gtaatggaga gttacctcgt ttattcagat cgcagtgttt 3300
aataactagc ttaaacagat gagacgatgt atccacatca aagaacgtaa aatacatatg 3360
acaaacattg ttgacagaaa cgtgaccttc attcttaccg tcgtccataa atacgttagg 3420
tatgtaccac atactgtcgc gaacgatgct cacaatctcg tccatctcgc ccatctcata 3480
catttcatca tttacttttt cataattaga gatgtacgaa agaaaaagaa aaagaaaaag 3540
aaaaacagaa caatatattt ttttagtaat gtttatgcga gacatataaa ataaactccg 3600
tgtttatgat gccggtaaat gtttttatca tcttggacgg aatcgatttt gtaatatgtc 3660
atggaaacaa atgaaacagg acattatcac tccatgataa attatttaat ggagtaataa 3720
agtatctcca tgggtaattt cgaaatcaag ttatcgtctg tattaatgtt gtccactatg 3780
gagtcgatcc tctcactgtt ctttacagtt tctgtaatga tggacgttag ttcttttttg 3840
taccatttga tgtcggattc tttgcgtatc tcagtctgtg gcgtttgctt cgtttaaata 3900
atatatcaaa catggagacg cctgatatgt aggcattctt cattctatta atgtctactc 3960
tatagcgctt tagttcctta tgatgaccgg cgatatcata cttactttag aaggaaaatc 4020
atcatctagg attaaggcgt atctgataca ggcgaataat ggttcaggat atagatagcg 4080
tatatctcta ttaaatgcgt caatcatagt ctctagagtg ggatggtagc taagtaataa 4140
atcaactatc ctcgttttgt tttctctttg gtaactgctt ttctggatgg ccgtattgat 4200
tatcgagcgt gatgttgtaa cactcgctcc atattccaat aaccgctttg caaattgtat 4260
attattgaca tcgaccgcgt aatatagtag agttttattc tcattatcga tcatatctat 4320
atcatccatg tacttgctta gtatatcaaa tacatctatt agtatggttt cataacagtg 4380
atacccgcaa ttattaaatc tcgataatat cagaccgtac atacatagac ggccattgtt 4440
agatatgtga tttacagccg cgtgtccata ttttccacga taaaccttac gacgtttaca 4500
tcgacgagat tattattaac aaagtagtcg tgcagaggat agttgttgtc cgttatctaa 4560
catgcatcga acgaccatat cgccgtaatg taagtagttt atcaacatgg cttgtacgat 4620
ggattcatcc tgttgtctaa atctctttag aatgttatcg atgatgtagt ggttatattc 4680
tctggaatcg tacgaagtaa tactacgcat tacgtcgaca agagtatgac gtctctcaat 4740
aagaagatta acgatttcca tgtctacatt atatggggtt actctaaatc gcttgtttag 4800
ataatacgcc tctaatatag ggctgacgtc gtatactcta cacgtgtcca catcctttat 4860
taataataat ttaacaatct ctatatctat ggttgagaaa gaccagtagt attggatggg 4920
taaagatcct ccttcgtctc tgccatggat ggaaacattg ttattgatca aacatttaat 4980
tacatccttg gatagagatt gagattctct atgagacgat atatagtaat gaagagagtt 5040
cttacacata tcactgttgt acatacaggt acgaaatacg taaccggtgc tgtaacattc 5100
tgatttaaga agccatagca atacttctgg tctcggatta ggcgtcgtta cgtatatatc 5160
caccaatccg agaccattga ttgcataatt cgtattcttg gacggacgta tccgtttatc 5220
cacaattagg tattttagca gacgtaagtc gatattatcc gaagacagat cgaaatcatt 5280
tatattcgac ttgagttcgt tagaggaatt cgaatagctg gatatcagta gatgcacaat 5340
ctgagatttt acgtatctat gcttactgta tgctcctagc ggagttaatc cttcgttgtt 5400
tctacaaagt ctctcgactc cgcgagagag taacagtcga acaatcttaa tgtctgtatc 5460
gcatttattg gagacgtaac aatgtagcgc attgtttcct cgtctatcta tatgttttga 5520
taagttgtga cacgtttcaa tctctagttt tatttttttg tacgtcacat cttcatccag 5580
tagacgacat agaatagtgc actctctacc acaataatcc atagctattc tggtgctaat 5640
tattcctatt tcacgaaaaa tgatgaaggc aatcattcct cataagatga taaaaagtgt 5700
agtgagagag catgaaggag atttagtatt tagcagtgcg gatatgatcc aagagggtga 5760
gatagtcgtt ctcgttcaga atctttcgca gcataagtag tatgtcgata tacttatcgt 5820
tgaagactct tccagagacg atagctgatt gagtacaaag tccaatgatt gcacgaagtt 5880
cttcggcggt tttcatggag tcatttctga tgaaacattt aatgatctcc acgcaattgt 5940
cgatattgtc ccacggaagt gaatccttca actcaccacc aaagagctcc gttgcatcag 6000
ttctgaaaga gatgagaagc ctgtagagag accctgcgct ttctctatgg gtccatctat 6060
gagaaaccca caggatgtat tcagtcagac aatgtctgac gtcggccacg gtattcaggg 6120
agtccttagt agcgtggcaa tgacagggtc tgaactgggc acaaggaaag gccattgtaa 6180
aggtagacct gtagccgttt atgctaatag agggctttaa tttccatttt tttaatgggt 6240
tgtggatgag gaatgagagt gatatcatat tgagatacgt agttatgtag aggtgtattt 6300
cctatattat ttactttcgg tttcatattt taccaactct ttaataaatt tcttttcacg 6360
atgcatctta ttgaatgacg ttttctcata agtggacata tagatgcaga agtaatgaag 6420
aaaagtatta cctctatcat ctacataatt agggtctgct ccttttttta acaacttata 6480
cagtacgtag tagtagttta tcggttttaa atcaagtcta gaatatatag tggattaata 6540
tatttttata ttagctaaag ctatctatac tatcagaaag catatcattc tcaacttcat 6600
catgagttaa atatttgtgt aatggatgtc atgaacatta aacgtattca tgacatactc 6660
ctttaatagg ttttttaaaa cagatgattc aaatccttca ttcattagat aacagtgtaa 6720
cggagtcgta ccttctacta gtttgtttat atcacagcat tctacaaaca gtctaaacaa 6780
tagagaagac ggacagactt taacgtataa atgacacatg ttatcgatat tcgttgatga 6840
attattatta aacgtagtta tgataaatga ttctaacgac atctctcgct agagataaaa 6900
tctagtatcg tatcattaaa catctttgca tcatactcgc atagcatagt ttttcataat 6960
taatacaata tttaaaagac ttattcggaa agtattttaa tacatgtatc atcgatggag 7020
atccatatga ggagtcactt gtagttcttc agtagtaata acagtgctat catcgatagt 7080
ataattatat gtagaaggtt catatgttgt tgtaattgga gtaactgttg gtagttcttc 7140
cgtggaatca ataattatac taacagcaat agtataatta tataaatatg ttccgttgat 7200
atcacatatt ttaatgaact catttctaac accctcagct atatctgtcc aattaaatgt 7260
agccaacaat ctactacgtt ctctttgatt gactacttgt acggtagcga cgctacacta 7320
tctttattgt cttctacatg ctccaattga atgtcatgat acaacgcagt ttttcttatg 7380
catgtttcat aacaccacga acatgtcgca gtaagatata tagccagaga taatttctgt 7440
aaattcatga ttgccggtca taaacaagcc cgtcaataat tgtggctata tattcagttt 7500
atagagcaaa ataattaagc acaatagcgc ttaatctcaa aatatgttat gtttattttt 7560
ttcatattaa acatactggt taaaatcctc taaaggctga tcttcatcta taaatcaaga 7620
tcataattac atttagacag tggtttcatg tttataaaaa tgttcttttt gtgtgaataa 7680
ggaatatact aatcaataat caaccatcga ccccattacg atagtatgca ggcaaccccc 7740
attagagagg tacgtgtaat cagtctctcc agttttagta tttttataag tcattgttac 7800
ataaacggct tttaaacagt ctcctcgata ataagccata tctggaaatt tattaaatac 7860
tcgagtcatt ttacgcacgg tcaaaaaagt aagtaatgtc gacgacttct tacattctat 7920
agaaacacct agaatactca ttttcttttg gaaaatatcc tcagactctg atttgaacaa 7980
tgcacgacct atagtaaacc gtgaccaata agttatatta gtcaatggta tatccaaacc 8040
atcaggtgtg gatagtccag tctttggtat cgatagtgta gttattgaac tgagaagtta 8100
ccgtatagtc tttttggtca tctctaaaca aggaaactaa tacctctaca ctattgaacg 8160
atttatcttc cgtaatgggt ggactagcga tggatgaagt cacgaatata agacacgcta 8220
ttaatccgta tatcatcatt ttgatattac ttataataac gatttgttta atttttagtt 8280
tatactatta attgtaaatg atattattat ttttttaagt attatcagct ttagtttata 8340
ctattactat ttgtaatatt tagacataga taaacgtgat aaaagtctat ttgtttatat 8400
ttattgcgga tagcagtatt tccctataaa aagtatacgt cctgtggtgt ctttaatcat 8460
gtacatgaat ggatggttta tgtagacctt cgtacgatat accatcgaaa agttaatcgt 8520
aaatactcct gtaacggccg atgcttctgt atactcctca ttaacatcta taaacgtcgt 8580
atgtagaaat ttttctacag tgatagtttc attacacatc ttgctaaaat ctgcataata 8640
tccgaatata ttagtaagtc ctaaattttc taaaatcggt accagattat acggttctgt 8700
catttccact ttaaactttg gcatatacaa gtctatactt ttagtagata acataccaca 8760
ccatttttta aatttttcat ctgttatatt tttttctatg ttatatatac cttctatgtc 8820
gtccggtagt ataatcacca tactagagtt tccctcgtat ggaatatcga taatagagaa 8880
tcctccgaat aattcattaa tatgtacata ttgcaagtta ttctcggtac ccaccatcat 8940
atcaacactg gtaactatat tcttagaaat ataaaacttg tctgtatatg taagatgttt 9000
agaaaatgga tatttccaca ttgctttaaa atggacggcg ctaacaactg tcatacgagt 9060
attaatggat agcggactag tcaataagga attaatttta ccatttgtca ttgtcttaac 9120
ccattcgttg attagttcct ttgtttggtt agcattatta aagtttacag tttgaaaatc 9180
gtcttttatt ttttgtagga aggaggcgtg gaactcgata ctatcgctac cgtatatttt 9240
atttgcggta gctagtgtcg cacaatacgg aatatctacg tccatgtcat tattgtcatc 9300
gggtgtattc tcattcatat tctctatata ttttgatagt tgttcagctg tagaaccagc 9360
tgctccatga tttagaatag ataaagtaga taaaatagaa actggagaaa tcaaaacatt 9420
ttcatcaggg tgttttacga ttagttcttt aaagatatcc atggtataga ccaaacaata 9480
acgataacga tatatatcat aaataaataa tgttaaattt cagtttatgt ttgtaccccg 9540
tattcatact taacaaattg gtattgcgta cacaatcaat catattacat accattaata 9600
atgcaagcat aaaaaatcgt tagtagatgt ttctaaatat aggttccgta agcaaagaat 9660
ataagaatga agcggtaatg ataaaatcaa tcgttatcta aaatgatcat actcatttat 9720
tttattctat tatattaaca catacatttt taacagcaac acattcaata ttgtattgtt 9780
atttttatat tatttacaca attaacaata tattattagt ttatattact gaattaataa 9840
tataaaattc ccaatcttgt tataaacaca cactgagaaa cagcataaac acagaatcca 9900
tcaaaaatgt cgatgaaata tctgatgttg ttgttcgctg ctatgataat cagatcattc 9960
gccgatagtg gtaacgctat cgaaacgaca ttgccagaaa ttacaaacgc tacaacagat 10020
attccagcta tcagattatg cggtccagag ggagatggat attgtttaca cggtgactgt 10080
atccacgcta gagatatcga cggtatgtat tgtagatgct ctcatggtta tacaggcatt 10140
agatgtcagc atgtagtatt agtagactat caacgttcag aaaacccaaa cactacaacg 10200
tcatatatcc catctcccgg tattatgctt gtattagtag gcattattat tattattacg 10260
tgttgtctat tatctgttta taggttcact cgaagaacta ataaactacc tctacaagat 10320
atggttgtgc cataattttt ataaattttt tttatgagta tttttacaaa aatgtataaa 10380
gtgtatgtct tatgtatatt tataaaaatg ctaaatatgc gatgtatcta tgttatttgt 10440
atttatctaa acaatacctc tacctctaga tattatacaa aaatttttta tttcagcata 10500
ttaaagtaaa atctagttac cttgaaaatg aatacagtgg gtggttccgt atcaccagta 10560
agaacataat agtcgaatac agtatccgat tgagattttg catacaatac tagtctagaa 10620
agaaatttgt aatcatcttc tgtgacggga gtccatatat ctgtatcatc gtctagttta 10680
tcagtgtccc atgctatatt cctgttatca tcattagtta atgaaaataa ctctcgtgct 10740
tcagaaaagt caaatattgt atccatacat acatctccaa aactatcgct tatacgttta 10800
tctttaacga tacctatacc tagatggtta tttactaaca gacattttcc agatctattg 10860
actataactc ctatagtttc cacatcaacc aagtaatgat catctattgt tatataacaa 10920
taacataact cttttccgtt tttatcagta tgtatatcta tattaacgtc gtcgttgtag 10980
tgaatagtag ttattgatct attatatgaa acggatatgt ctagaacggc aattgtttta 11040
cgtccagtta acactttctt tgatttaaag tctagagtct ttgcaaacat aatatcctta 11100
tccgacttta tatttcctgt agggtggtat aattttattt tgcctccaca tatcggtgtt 11160
tccaaatata ttactagaca atattccata tagttattag ttaagggtac ccaattagaa 11220
cacgtacgct tattatcatc atttggatcg tatttcataa aagttattgt actatcgatg 11280
tcaacacatt ctacattttt taatcgtcta tatagtattt ttctgatatt ttctataata 11340
tcagaattgt cttccatcgg aagttgtata ctatcagaat cagttacatg tttaaataat 11400
tctctgatgt cattccttat acaatcaaat tcattattaa acagtttaat agtctgtaga 11460
cctttatcgt cgtaaatatc cattgtctta ttagttacgc ttatttttat gtgtttttac 11520
gttgctttat tatattttat aagaatgatt gtttgacgaa tcacgagaac tattaagaca 11580
tatattatta gaggtatata ttataaaaaa gtttttgatt acgatgttat aagaggaaag 11640
aggacacatt aacatcatac atcaattaac tacattctta taacatcgta atcaaaagaa 11700
ttgcaatttt gatgtataac aactgtcaat gggttatgga attgtatatt acatattata 11760
cggtatgttg gtaacgacaa ataccgatcg gtaattgtct gccggtgtaa tagaattata 11820
tatatctatc tattacaccg gctgagtacc tacactatta tatgattata gtttctattt 11880
ttacagtacc ttaactaaag tctctagtca caagagcaat actaccaacc tacactatta 11940
tatgattata gtttctattt ttataggaac gcgtacgaga aaatcaaatg tctaatttct 12000
aacggtagtg ttgataaacg attatcgtca atggatacct cctctatcat gtcgtctatt 12060
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gcatctagtt agtttgtata aataattatt tcaatatact agttaaaatt ttaagatttt 152820
aaatgtataa aaaactaata acgtttttat ttgtaatagg tgcattagca tcctattcga 152880
ataatgagta cactccgttt aataaactga gtgtaaaact ctatatagat ggagtagata 152940
atatagaaaa ttcatatact gatgataata atgaattggt gttaaatttt aaagagtaca 153000
caatttctat tattacagag tcatgcgacg tcggatttga ttccatagat atagatgtta 153060
taaacgacta taaaattatt gatatgtata ccattgactc gtctactatt caacgcagag 153120
gtcacacgtg tagaatatct accaaattat catgccatta tgataagtac ccttatattc 153180
acaaatatga tggtgatgag cgacaatatt ctattactgc agagggaaaa tgctataaag 153240
gaataaaata tgaaataagt atgatcaacg atgatactct attgagaaaa catactctta 153300
aaattggatc tacttatata tttgatcgtc atggacatag taatacatat tattcaaaat 153360
atgattttta aaaatttaaa atatattatc acttcagtga cagtagtcaa ataacaaaca 153420
acaccatgag atatattata attctcgcag ttttgttcat taatagtata cacgctaaaa 153480
taactagtta taagtttgaa tccgtcaatt ttgattccaa aattgaatgg actggggatg 153540
gtctatacaa tatatccctt aaaaattatg gcatcaagac gtggcaaaca atgtatacaa 153600
atgtaccaga aggaacatac gacatatccg catttccaaa gaatgatttc gtatctttct 153660
gggttaaatt tgaacaaggc gattataaag tggaagagta ttgtacggga ctatgcgtcg 153720
aagtaaaaat tggaccaccg actgtaacat tgactgaata cgacgaccat atcaatttgt 153780
acatcgagca tccgtatgct actagaggta gcaaaaagat tcctatttac aaacgcggtg 153840
acatgtgtga tatctacttg ttgtatacgg ctaacttcac attcggagat tctgaagaac 153900
cagtaacata tgatatcgat gactacgatt gcacgtctac aggttgcagc atagactttg 153960
ccacaacaga aaaagtgtgc gtgacagcac agggagccac agaagggttt ctcgaaaaaa 154020
ttactccatg gagttcggaa gtatgtctga cacctaaaaa gaatgtatat acatgtgcaa 154080
ttagatccaa agaagatgtt cccaatttca aggacaaaat ggccagagtt atcaagagaa 154140
aatttaataa acagtctcaa tcttatttaa ctaaatttct cggtagcaca tcaaatgatg 154200
ttaccacttt tcttagcatg cttaacttga ctaaatattc ataactaatt tttattaatg 154260
atacaaaaac gaaataaaac tgcatattat acactggtta acgcccttat aggctctaac 154320
cattttcaag atgaggtccc tgattatagt ccttctgttc ccctctatca tctactccat 154380
gtctattaga cgatgtgaga agactgaaga ggaaacatgg ggattgaaaa tagggttgtg 154440
tataattgcc aaagatttct atcccgaaag aactgattgc agtgttcatc tcccaactgc 154500
aagtgaagga ttgataactg aaggcaatgg attcagggat atacgaaaca ccgataaatt 154560
ataaaaaaag caatgtgtcc gctgtttccg ttaataatac tattttcgta actggcggat 154620
tattcataaa taactctaat agcacgatcg tggttaacaa tatggaaaaa cttgacattt 154680
ataaagacaa acaatggtcg attatagaaa tgcctatggc tagggtatat cacggcatcg 154740
actcgacatt tggaatgtta tattttgccg gaggtctatc cgttaccgaa caatatggta 154800
atttagagaa aaacaacgag atatcttgtt acaatcctag aacgaataag tggtttgata 154860
tttcatatac tatttataag atatccatat catcattgtg taaactaaat aacgtcttct 154920
atgtatttag taaggacatt ggatatgtgg aaaagtatga tggtgcatgg aagttagtac 154980
atgatcgtct ccccgctata aaggcattat caacttctcc ttattgattg aaaatgaaaa 155040
tataaatagt ttttatgtat agcagtatta ccctatagtt ttattgctta ctactaacat 155100
ggatacagat acagatacag atacagatac agatacagat acagatacag atacagatgt 155160
tacaaatgta gaagatatca taaatgaaat agatagagag aaagaagaaa tactaaaaaa 155220
tgtagaaatt gaaaataata aaaacattaa caagaatcat ccaagtggat atattagaga 155280
agcactcgtt attaatacaa gtagtaatag tgattccatt gataaagaag ttatagaatg 155340
tatcagtcac gatgtaggaa tatagatcat atctactaat ttttataatc aatacaaaac 155400
ataaaaaaca actcgttatt acatagcagg catggaatcc ttcaagtatt gttttgataa 155460
cgatggcaag aaatggatta tcggaaatac tttatattct ggtaattcaa tactctataa 155520
ggtcagaaaa aatttcacta gttcgttcta caattacgta atgaagatag atcacaaatc 155580
acacaagcca ttgttgtctg aaatacgatt ctatatatct gtattggatc ctttgactat 155640
cgacaactgg acacgggaac gtggtataaa gtatttggct attccagatc tgtatggaat 155700
tggagaaacc gatgattata tgttcttcgt tataaagaat ttgggaagag tattcgcccc 155760
aaaggatact gaatcagtct tcgaagcatg tgtcactatg ataaacacgt tagagtttat 155820
acactctcga ggatttaccc atggaaaaat agaaccgagg aatatactga ttagaaataa 155880
acgtctttca ctaattgact attctagaac taacaaacta tacaagagtg gaaactcaca 155940
tatagattac aacgaggaca tgataacttc aggaaatatc aattatatgt gtgtagacaa 156000
tcatcttgga gcaacagttt caagacgagg agatttagaa atgttgggat attgcatgat 156060
agaatggttc ggtggcaaac ttccatggaa aaacgaaagt agtataaaag taataaaaca 156120
aaaaaaagaa tataaaaaat ttatagctac tttctttgag gactgttttc ctgaaggaaa 156180
tgaacctctg gaattagtta gatatataga attagtatac acgttagatt attctcaaac 156240
tcctaattat gacagactac gtagactgtt tatacaagat tgaaattata ttcttttttt 156300
atagagtgtg gtagtgttac ggatatctaa tattaatatt agactatctc tatcgcgcta 156360
cacgaccaat atcgattact atgaatatct tctatgaaag gagagaatgt attcatttct 156420
ccagcgtcaa tctcgtcagt attgacaata ctgtattatg gagctaatgg atccactgct 156480
gaacagctat caaaatatgt agaaacggag gagaacacgg ataaggttag cgctcagaat 156540
atctcattca aatccataaa taaagtatat gggcgatatt ctgccgtgtt taaagatttc 156600
tttttgggaa aaattggcga taagtttcaa actgttgact tcactgattg tcgcactata 156660
gatgcaatca acaagtgtgt agatatcttt actgagggga aaatcaatcc actattggat 156720
gaaccattgt ctcctagcaa ttagtgccgt atactttaaa gcaaaatggt tgacgccatt 156780
cgaaaaggaa tttaccagtg attatccctt ttacgtatca ccaacggaaa tggtagatgt 156840
aagtatgatg tctatgtacg gcgagctatt taatcacgca tctgtaaagg aatcattcgg 156900
caacttttca atcatagaac tgccatatgt tggagatact agtatgatgg tcattcttcc 156960
agacaagatt gatggattag aatccataga acaaaatcta acagatacaa attttaagaa 157020
atggtgtaac tctctggatg ctatgtttat agatgttcac attcccaagt ttaaggtaac 157080
aggctcgtat aatctggtgg atactctagt aaagatccgc tgatggaaac acagtgaatg 157140
ctagattgtc cagcgtgtcc ccaggacaag gtaaggactc tcccgcgatc actcgtgaag 157200
aagctctggc tatgatcaaa gactgtgagg tgtctatcga catcagatgt agcgaagaag 157260
agaaagacag cgacatcaag acccatccag tactcgggtc taacatctct cataagaaag 157320
tgagttacga agatatcatc ggttcaacga tcgtcgatac aaaatgtgtc aagaatctag 157380
agtttagcgt tcgtatcgga gacatgtgca aggaatcatc tgaacttgag gtcaaggatg 157440
gattcaagta tgtcgacgga tcggcatctg aaggtgcaac cgatgatact tcactcatcg 157500
attcaacaaa actcaaagcg tgtgtctga 157529
<210> 625
<211> 295
<212> PRT
<213> Vaccinia virus
<400> 625
Tyr Phe Ala Ser Phe Met Glu Leu Glu Asn Glu Pro Val Ile Leu Pro
1 5 10 15
Cys Pro Gln Ile Asn Thr Leu Ser Ser Gly Tyr Asn Ile Leu Asp Ile
20 25 30
Leu Trp Glu Lys Arg Gly Ala Asp Asn Asp Arg Ile Ile Pro Ile Asp
35 40 45
Asn Gly Ser Asn Met Leu Ile Leu Asn Pro Thr Gln Ser Asp Ser Gly
50 55 60
Ile Tyr Ile Cys Ile Thr Thr Asn Glu Thr Tyr Cys Asp Met Met Ser
65 70 75 80
Leu Asn Leu Thr Ile Val Ser Val Ser Glu Ser Asn Ile Asp Phe Ile
85 90 95
Ser Tyr Pro Gln Ile Val Asn Glu Arg Ser Thr Gly Glu Met Val Cys
100 105 110
Pro Asn Ile Asn Ala Phe Ile Ala Ser Asn Val Asn Ala Asp Ile Ile
115 120 125
Trp Ser Gly His Arg Arg Leu Arg Asn Lys Arg Leu Lys Gln Arg Thr
130 135 140
Pro Gly Ile Ile Thr Ile Glu Asp Val Arg Lys Asn Asp Ala Gly Tyr
145 150 155 160
Tyr Thr Cys Val Leu Glu Tyr Ile Tyr Gly Gly Lys Thr Tyr Asn Val
165 170 175
Thr Arg Ile Val Lys Leu Glu Val Arg Asp Lys Ile Ile His Pro Thr
180 185 190
Met Gln Leu Pro Glu Gly Val Val Thr Ser Ile Gly Ser Asn Leu Thr
195 200 205
Ile Ala Cys Arg Val Ser Leu Arg Pro Pro Thr Thr Asp Ala Asp Val
210 215 220
Phe Trp Ile Ser Asn Gly Met Tyr Tyr Glu Glu Asp Asp Gly Asp Gly
225 230 235 240
Asp Gly Arg Ile Ser Val Ala Asn Lys Ile Tyr Met Thr Asp Lys Arg
245 250 255
Arg Val Ile Thr Ser Arg Leu Asn Ile Asn Pro Val Lys Glu Glu Asp
260 265 270
Ala Thr Thr Phe Thr Cys Met Ala Phe Thr Ile Pro Ser Ile Ser Lys
275 280 285
Thr Val Thr Val Ser Ile Thr
290 295
<210> 626
<211> 185
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide
<400> 626
ttaaagttac aaacaactag gaaattggtt tatgatgtat aattttttta gtttttatag 60
attctttatt ctatacttaa aaaatgaaaa taaatacaaa ggttcttgag ggttgtgtta 120
aattgaaagc gagaaataat cataaattat ttcattatcg cgatatccgt taagtttgta 180
tcgta 185
<210> 627
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 627
Met Leu Gly Thr His Thr Met Glu Val
1 5
<210> 628
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 628
Val Leu Pro Asp Val Phe Ile Arg Cys
1 5
<210> 629
<211> 37
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 629
Met Leu Asn Phe Ser Leu Cys Leu Tyr Pro Val Phe Ile Leu Asn Lys
1 5 10 15
Leu Val Leu Arg Thr Gln Ser Ile Ile Leu His Thr Ile Asn Asn Ala
20 25 30
Ser Ile Lys Asn Arg
35
<210> 630
<211> 15
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide
<400> 630
aaaaatgaaa ataaa 15
<210> 631
<211> 5
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide
<400> 631
taaat 5
<210> 632
<211> 44
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide
<400> 632
tcttgagggt tgtgttaaat tgaaagcgag aaataatcat aaat 44
Claims (200)
- 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이 핵산은 다음을 포함한다:
(a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며;
(b)세포독성 T-림프구 연합된 단백질 4 (CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며;
(c) 인터루킨 12 (IL-12) 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며; 그리고
(d) FMS-유사 티로신 키나제 3 리간드 (FLT3L)를 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시된다. - 청구항 1에 있어서, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있는, 핵산.
- 청구항 1 또는 2에 있어서, 항-CTLA-4 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함하는, 핵산.
- 청구항 3에 있어서, 이때 항-CTLA-4 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터, pS 프로모터, 또는 LEO 프로모터인, 핵산.
- 청구항 3에 있어서, 이때 항-CTLA-4 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터인, 핵산.
- 청구항 1-5중 임의의 한 항에 있어서, IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함하는, 핵산.
- 청구항 6에 있어서, 이때 IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 후기 프로모터인, 핵산.
- 청구항 7에 있어서, 이때 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열, F17R 프로모터, 또는 D13L 프로모터를 포함하는, 핵산.
- 청구항 7에 있어서, 이때 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는, 핵산.
- 청구항 1-9중 임의의 한 항에 있어서, FLT3L를 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함하는, 핵산.
- 청구항 10에 있어서, 이때 상기 상기 FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터, B19R 프로모터, E3L 프로모터, F11L 프로모터, 또는 B2R 프로모터인, 핵산.
- 청구항 10에 있어서, 이때 상기 상기 FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터인, 핵산.
- 청구항 10에 있어서, 이때 상기 상기 FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B19R 프로모터인, 핵산.
- 청구항 10에 있어서, 이때 상기 상기 FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터인, 핵산.
- 청구항 1-14중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 상기 부분적 C2L 백시니아 유전자와 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하는, 핵산.
- 청구항 1-14중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 2 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 상기 부분적 C2L 백시니아 유전자와 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하는, 핵산.
- 청구항 1-14중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 상기 부분적 C2L 백시니아 유전자와 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하는, 핵산.
- 청구항 1-14중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하는, 핵산.
- 청구항 1-14중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하는, 핵산.
- 청구항 1-14중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하는, 핵산.
- 청구항 1-14중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재하는, 핵산.
- 청구항 1-14중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 2 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재하는, 핵산.
- 청구항 1-14중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재하는, 핵산.
- 청구항 1-14중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하는, 핵산.
- 청구항 1-14중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하는, 핵산.
- 청구항 1-14중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재하는, 핵산.
- 청구항 1-14중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하는, 핵산.
- 청구항 1-14중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하는, 핵산.
- 청구항 1-14중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재하는, 핵산.
- 청구항 1-14중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하는, 핵산.
- 청구항 1-14중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하는, 핵산.
- 청구항 1-14중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재하는, 핵산.
- 청구항 1-14중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하는, 핵산.
- 청구항 1-14중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 2 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하는, 핵산.
- 청구항 1-14중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하는, 핵산.
- 청구항 1-14중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하는, 핵산.
- 청구항 1-14중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 2 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하는, 핵산.
- 청구항 1-14중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하는, 핵산.
- 청구항 1-14중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재하는, 핵산.
- 청구항 1-14중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 2 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재하는, 핵산.
- 청구항 1-14중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재하는, 핵산.
- 청구항 1-14중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재하는, 핵산.
- 청구항 1-14중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 2 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재하는, 핵산.
- 청구항 1-14중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재하는, 핵산.
- 청구항 1-14중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재하는, 핵산.
- 청구항 1-14중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재하는, 핵산.
- 청구항 1-14중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재하는, 핵산.
- 청구항 1-14중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재하는, 핵산.
- 청구항 1-14중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재하는, 핵산.
- 청구항 1-14중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재하는, 핵산.
- 청구항 1-14중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하는, 핵산.
- 청구항 1-14중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하는, 핵산.
- 청구항 1-14중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재하는, 핵산.
- 청구항 1-14중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하는, 핵산.
- 청구항 1-14중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 2 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하는, 핵산.
- 청구항 1-14중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하는, 핵산.
- 청구항 1-14중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하는, 핵산.
- 청구항 1-14중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하는, 핵산.
- 청구항 1-14중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하는, 핵산.
- 청구항 1-14중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재하는, 핵산.
- 청구항 1-14중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 2 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재하는, 핵산.
- 청구항 1-14중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재하는, 핵산.
- 청구항 1-14중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재하는, 핵산.
- 청구항 1-14중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재하는, 핵산.
- 청구항 1-14중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재하는, 핵산.
- 청구항 1-14중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재하는, 핵산.
- 청구항 1-14중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재하는, 핵산.
- 청구항 1-14중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재하는, 핵산.
- 청구항 1-14중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재하는, 핵산.
- 청구항 1-14중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재하는, 핵산.
- 청구항 1-14중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재하는, 핵산.
- 청구항 1-14중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재하는, 핵산.
- 핵산.청구항 1-14중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재하는, 핵산.
- 청구항 1-14중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 2 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재하는, 핵산.
- 청구항 1-14중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 2 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재하는, 핵산.
- 청구항 1-14중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재하는, 핵산.
- 청구항 1-14중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재하는, 핵산.
- 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이 핵산은 다음을 포함한다:
(a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며;
(b) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며;
(c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며; 그리고
(d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며;
이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다:
(i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터이며;
(ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 후기 프로모터이며; 그리고
(iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다. - 청구항 78에 있어서, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있는, 핵산.
- 청구항 78 또는 79에 있어서, 이때 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하는, 핵산.
- 청구항 78 또는 79에 있어서, 이때 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하는, 핵산.
- 청구항 80 또는 81에 있어서, 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 상류에 있는, 핵산.
- 청구항 80 또는 81에 있어서, 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 하류에 있는, 핵산.
- 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이 핵산은 다음을 포함한다:
(a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며;
(b) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 있고;
(c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 B8R 유전자내 결손 좌에 있고; 그리고
(d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 상류에 있고;
이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다:
(i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터이며;
(ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 후기 프로모터이며; 그리고
(iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 또는 B19R 프로모터다. - 청구항 84에 있어서, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터인, 핵산.
- 청구항 85에 있어서, 이때 B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함하는, 핵산.
- 청구항 84-86중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 또는 H5R 후기 프로모터인, 핵산.
- 청구항 87에 있어서, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 및 H5R 후기 프로모터인, 핵산.
- 청구항 88에 있어서, 이때 H5R 조기 프로모터는 서열 식별 번호: 553의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 그리고 H5R 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 554의 뉴클레오티드 서열을 포함하는, 핵산.
- 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이 핵산은 다음을 포함한다:
(a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며;
(b) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 있고;
(c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 B8R 유전자내 결손 좌에 있고; 그리고
(d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 하류에 있고;
이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다:
(i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터이며;
(ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 후기 프로모터이며; 그리고
(iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 또는 B19R 프로모터다. - 청구항 90에 있어서, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터인, 핵산.
- 청구항 91에 있어서, 이때 B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 그리고 B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함하는, 핵산.
- 청구항 90-92중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 또는 H5R 후기 프로모터인, 핵산.
- 청구항 93에 있어서, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 및 H5R 후기 프로모터인, 핵산.
- 청구항 94에 있어서, 이때 H5R 조기 프로모터는 서열 식별 번호: 553의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 그리고 H5R 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 554의 뉴클레오티드 서열을 포함하는, 핵산.
- 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이 핵산은 다음을 포함한다:
(a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며;
(b) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 있고;
(c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 B8R 유전자내 결손 좌에 있고; 그리고
(d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 상류에 있고;
이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다:
(i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터이며;
(ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 후기 프로모터이며; 그리고
(iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 또는 B19R 프로모터다. - 청구항 96에 있어서, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터인, 핵산.
- 청구항 97에 있어서, 이때 B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 그리고 B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함하는, 핵산.
- 청구항 96-98중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 또는 H5R 후기 프로모터인, 핵산.
- 청구항 99에 있어서, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 및 H5R 후기 프로모터인, 핵산.
- 청구항 100에 있어서, 이때 H5R 조기 프로모터는 서열 식별 번호: 553의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 그리고 H5R 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 554의 뉴클레오티드 서열을 포함하는, 핵산.
- 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이 핵산은 다음을 포함한다:
(a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며;
(b) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 있고;
(c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 B8R 유전자내 결손 좌에 있고; 그리고
(d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 하류에 있고;
이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다:
(i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터이며;
(ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 후기 프로모터이며; 그리고
(iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 또는 B19R 프로모터다. - 청구항 102에 있어서, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터인, 핵산.
- 청구항 103에 있어서, 이때 B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 그리고 B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함하는, 핵산.
- 청구항 102-104중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 또는 H5R 후기 프로모터인, 핵산.
- 청구항 105에 있어서, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 및 H5R 후기 프로모터인, 핵산.
- 청구항 106에 있어서, 이때 H5R 조기 프로모터는 서열 식별 번호: 553의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 그리고 H5R 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 554의 뉴클레오티드 서열을 포함하는, 핵산.
- 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이 핵산은 다음을 포함한다:
(a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며;
(b) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 있고;
(c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 B8R 유전자내 결손 좌에 있고; 그리고
(d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 상류에 있고;
이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다:
(i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 pS 프로모터이며;
(ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 후기 프로모터이며; 그리고
(iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 또는 B19R 프로모터다. - 청구항 108에 있어서, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터인, 핵산.
- 청구항 109에 있어서, 이때 B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 그리고 B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함하는, 핵산.
- 청구항 108-110중 임의의 한 항에 있어서, 이때 pS의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 555, 서열 식별 번호: 556, 또는 서열 식별 번호: 557의 뉴클레오티드 서열을 포함하는, 핵산.
- 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이 핵산은 다음을 포함한다:
(a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며;
(b) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 있고;
(c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 B8R 유전자내 결손 좌에 있고; 그리고
(d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 하류에 있고;
이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다:
(i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 pS 프로모터이며;
(ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 후기 프로모터이며; 그리고
(iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 또는 B19R 프로모터다. - 청구항 112에 있어서, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터인, 핵산.
- 청구항 113에 있어서, 이때 B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 그리고 B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함하는, 핵산.
- 청구항 112-114중 임의의 한 항에 있어서, 이때 pS의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 555, 서열 식별 번호: 556, 또는 서열 식별 번호: 557의 뉴클레오티드 서열을 포함하는, 핵산.
- 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이 핵산은 다음을 포함한다:
(a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며;
(b) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 있고;
(c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 B8R 유전자내 결손 좌에 있고; 그리고
(d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 상류에 있고;
이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다:
(i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 pS 프로모터이며;
(ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 후기 프로모터이며; 그리고
(iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 또는 B19R 프로모터다. - 청구항 116에 있어서, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터인, 핵산.
- 청구항 117에 있어서, 이때 B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 그리고 B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함하는, 핵산.
- 청구항 116-118중 임의의 한 항에 있어서, 이때 pS의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 555, 서열 식별 번호: 556, 또는 서열 식별 번호: 557의 뉴클레오티드 서열을 포함하는, 핵산.
- 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이 핵산은 다음을 포함한다:
(a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며;
(b) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 있고;
(c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 B8R 유전자내 결손 좌에 있고; 그리고
(d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 하류에 있고;
이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다:
(i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 pS 프로모터이며;
(ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 후기 프로모터이며; 그리고
(iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 또는 B19R 프로모터다. - 청구항 120에 있어서, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터인, 핵산.
- 청구항 121에 있어서, 이때 B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 그리고 B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함하는, 핵산.
- 청구항 120-122중 임의의 한 항에 있어서, 이때 pS의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 555, 서열 식별 번호: 556, 또는 서열 식별 번호: 557의 뉴클레오티드 서열을 포함하는, 핵산.
- 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이 핵산은 다음을 포함한다:
(a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며;
(b) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 있고;
(c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 B8R 유전자내 결손 좌에 있고; 그리고
(d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 상류에 있고;
이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다:
(i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터이며;
(ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 F17R 프로모터이며; 그리고
(iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 또는 B19R 프로모터다. - 청구항 124에 있어서, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터인, 핵산.
- 청구항 125에 있어서, 이때 B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 그리고 B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함하는, 핵산.
- 청구항 124-126중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 또는 H5R 후기 프로모터인, 핵산.
- 청구항 127에 있어서, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 및 H5R 후기 프로모터인, 핵산.
- 청구항 128에 있어서, 이때 H5R 조기 프로모터는 서열 식별 번호: 553의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 그리고 H5R 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 554의 뉴클레오티드 서열을 포함하는, 핵산.
- 청구항 124-129중 임의의 한 항에 있어서, F17R 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 식별 번호: 563의 뉴클레오티드 서열을 포함하는, 핵산.
- 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이 핵산은 다음을 포함한다:
(a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며;
(b) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 있고;
(c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 B8R 유전자내 결손 좌에 있고; 그리고
(d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 하류에 있고;
이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다:
(i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터이며;
(ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 F17R 프로모터이며; 그리고
(iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 또는 B19R 프로모터다. - 청구항 131에 있어서, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터인, 핵산.
- 청구항 132에 있어서, 이때 B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 그리고 B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함하는, 핵산.
- 청구항 131-133중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 또는 H5R 후기 프로모터인, 핵산.
- 청구항 134에 있어서, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 및 H5R 후기 프로모터인, 핵산.
- 청구항 135에 있어서, 이때 H5R 조기 프로모터는 서열 식별 번호: 553의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 그리고 H5R 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 554의 뉴클레오티드 서열을 포함하는, 핵산.
- 청구항 131-136중 임의의 한 항에 있어서, F17R 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 식별 번호: 563의 뉴클레오티드 서열을 포함하는, 핵산.
- 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이 핵산은 다음을 포함한다:
(a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며;
(b) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 있고;
(c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 B8R 유전자내 결손 좌에 있고; 그리고
(d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 상류에 있고;
이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다:
(i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터이며;
(ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 F17R 프로모터이며; 그리고
(iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 또는 B19R 프로모터다. - 청구항 138에 있어서, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터인, 핵산.
- 청구항 139에 있어서, 이때 B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 그리고 B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함하는, 핵산.
- 청구항 138-140중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 또는 H5R 후기 프로모터인, 핵산.
- 청구항 141에 있어서, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 및 H5R 후기 프로모터인, 핵산.
- 청구항 142에 있어서, 이때 H5R 조기 프로모터는 서열 식별 번호: 553의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 그리고 H5R 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 554의 뉴클레오티드 서열을 포함하는, 핵산.
- 청구항 138-143중 임의의 한 항에 있어서, F17R 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 식별 번호: 563의 뉴클레오티드 서열을 포함하는, 핵산.
- 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이 핵산은 다음을 포함한다:
(a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며;
(b) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 있고;
(c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 B8R 유전자내 결손 좌에 있고; 그리고
(d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 하류에 있고;
이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다:
(i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터이며;
(ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 F17R 프로모터이며; 그리고
(iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다. - 청구항 145에 있어서, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터인, 핵산.
- 청구항 146에 있어서, 이때 B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 그리고 B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함하는, 핵산.
- 청구항 145-147중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 또는 H5R 후기 프로모터인, 핵산.
- 청구항 148에 있어서, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 및 H5R 후기 프로모터인, 핵산.
- 청구항 149에 있어서, 이때 H5R 조기 프로모터는 서열 식별 번호: 553의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 그리고 H5R 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 554의 뉴클레오티드 서열을 포함하는, 핵산.
- 청구항 145-150중 임의의 한 항에 있어서, F17R 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 식별 번호: 563의 뉴클레오티드 서열을 포함하는, 핵산.
- 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이 핵산은 다음을 포함한다:
(a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며;
(b) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 있고;
(c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 B8R 유전자내 결손 좌에 있고; 그리고
(d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 상류에 있고;
이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다:
(i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터이며;
(ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 후기 프로모터이며; 그리고
(iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 E3L 프로모터다. - 청구항 152에 있어서, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 또는 H5R 후기 프로모터인, 핵산.
- 청구항 153에 있어서, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 및 H5R 후기 프로모터인, 핵산.
- 청구항 154에 있어서, 이때 H5R 조기 프로모터는 서열 식별 번호: 553의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 그리고 H5R 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 554의 뉴클레오티드 서열을 포함하는, 핵산.
- 청구항 152-155중 임의의 한 항에 있어서, E3L 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 식별 번호: 567의 뉴클레오티드 서열을 포함하는, 핵산.
- 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이 핵산은 다음을 포함한다:
(a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며;
(b) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 있고;
(c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 B8R 유전자내 결손 좌에 있고; 그리고
(d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 하류에 있고;
이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다:
(i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터이며;
(ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 후기 프로모터이며; 그리고
(iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 E3L 프로모터다. - 청구항 157에 있어서, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 또는 H5R 후기 프로모터인, 핵산.
- 청구항 158에 있어서, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 및 H5R 후기 프로모터인, 핵산.
- 청구항 159에 있어서, 이때 H5R 조기 프로모터는 서열 식별 번호: 553의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 그리고 H5R 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 554의 뉴클레오티드 서열을 포함하는, 핵산.
- 청구항 157-160중 임의의 한 항에 있어서, E3L 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 식별 번호: 567의 뉴클레오티드 서열을 포함하는, 핵산.
- 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이 핵산은 다음을 포함한다:
(a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며;
(b) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 있고;
(c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 B8R 유전자내 결손 좌에 있고; 그리고
(d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 상류에 있고;
이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다:
(i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터이며;
(ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 후기 프로모터이며; 그리고
(iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 E3L 프로모터다. - 청구항 162에 있어서, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 또는 H5R 후기 프로모터인, 핵산.
- 청구항 163에 있어서, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 및 H5R 후기 프로모터인, 핵산.
- 청구항 164에 있어서, 이때 H5R 조기 프로모터는 서열 식별 번호: 553의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 그리고 H5R 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 554의 뉴클레오티드 서열을 포함하는, 핵산.
- 청구항 162-165중 임의의 한 항에 있어서, E3L 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 식별 번호: 567의 뉴클레오티드 서열을 포함하는, 핵산.
- 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이 핵산은 다음을 포함한다:
(a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며;
(b) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 있고;
(c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 B8R 유전자내 결손 좌에 있고; 그리고
(d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 하류에 있고;
이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다:
(i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터이며;
(ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 후기 프로모터이며; 그리고
(iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 E3L 프로모터다. - 청구항 167에 있어서, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 또는 H5R 후기 프로모터인, 핵산.
- 청구항 168에 있어서, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 및 H5R 후기 프로모터인, 핵산.
- 청구항 169에 있어서, 이때 H5R 조기 프로모터는 서열 식별 번호: 553의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 그리고 H5R 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 554의 뉴클레오티드 서열을 포함하는, 핵산.
- 청구항 167-170중 임의의 한 항에 있어서, E3L 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 식별 번호: 567의 뉴클레오티드 서열을 포함하는, 핵산.
- 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이 핵산은 다음을 포함한다:
(a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며;
(b) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 있고;
(c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 B8R 유전자내 결손 좌에 있고; 그리고
(d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 상류에 있고;
이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다:
(i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 pS 프로모터이며;
(ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 F17R 프로모터이며; 그리고
(iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 E3L 프로모터다. - 청구항 172에 있어서, 이때 pS 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 555, 서열 식별 번호: 556, 또는 서열 식별 번호: 557의 뉴클레오티드 서열을 포함하는, 핵산.
- 청구항 172 또는 173에 있어서, 이때 F17R 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 식별 번호: 563의 뉴클레오티드 서열을 포함하는, 핵산.
- 청구항 172-174중 임의의 한 항에 있어서, 이때 E3L 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 식별 번호: 567의 뉴클레오티드 서열을 포함하는, 핵산.
- 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이 핵산은 다음을 포함한다:
(a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며;
(b) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 있고;
(c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 B8R 유전자내 결손 좌에 있고; 그리고
(d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 하류에 있고;
이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다:
(i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 pS 프로모터이며;
(ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 F17R 프로모터이며; 그리고
(iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 E3L 프로모터다. - 청구항 176에 있어서, 이때 pS 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 555, 서열 식별 번호: 556, 또는 서열 식별 번호: 557의 뉴클레오티드 서열을 포함하는, 핵산.
- 청구항 176 또는 177에 있어서, 이때 F17R 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 식별 번호: 563의 뉴클레오티드 서열을 포함하는, 핵산.
- 청구항 176-178중 임의의 한 항에 있어서, 이때 E3L 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 식별 번호: 567의 뉴클레오티드 서열을 포함하는, 핵산.
- 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이 핵산은 다음을 포함한다:
(a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며;
(b) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 있고;
(c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 B8R 유전자내 결손 좌에 있고; 그리고
(d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 상류에 있고;
이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다:
(i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 pS 프로모터이며;
(ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 F17R 프로모터이며; 그리고
(iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 E3L 프로모터다. - 청구항 180에 있어서, 이때 pS 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 555, 서열 식별 번호: 556, 또는 서열 식별 번호: 557의 뉴클레오티드 서열을 포함하는, 핵산.
- 청구항 170 또는 181에 있어서, 이때 F17R 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 식별 번호: 563의 뉴클레오티드 서열을 포함하는, 핵산.
- 청구항 180-182중 임의의 한 항에 있어서, 이때 E3L 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 식별 번호: 567의 뉴클레오티드 서열을 포함하는, 핵산.
- 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이 핵산은 다음을 포함한다:
(a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며;
(b) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 있고;
(c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 B8R 유전자내 결손 좌에 있고; 그리고
(d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 하류에 있고;
이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다:
(i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 pS 프로모터이며;
(ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 F17R 프로모터이며; 그리고
(iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 E3L 프로모터다. - 청구항 184에 있어서, 이때 pS 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 555, 서열 식별 번호: 556, 또는 서열 식별 번호: 557의 뉴클레오티드 서열을 포함하는, 핵산.
- 청구항 174 또는 185에 있어서, 이때 F17R 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 식별 번호: 563의 뉴클레오티드 서열을 포함하는, 핵산.
- 청구항 184-186중 임의의 한 항에 있어서, 이때 E3L 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 식별 번호: 567의 뉴클레오티드 서열을 포함하는, 핵산.
- 청구항 1-187중 임의의 한 항에 따른 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산을 포함하는 바이러스.
- 청구항 1-187중 임의의 한 항에 따른 핵산을 포함하는 패키징 세포주.
- 청구항 188의 바이러스를 포함하는 패키징 세포주.
- 청구항 188의 바이러스와 생리학적으로 수용가능한 담체를 포함하는 약제학적 조성물.
- 청구항 1-187중 임의의 한 항에 따른 핵산과 이 핵산을 숙주 세포에서 발현시키기 위해 전술한 키트의 사용자에게 지침을 주는 포장 삽입물을 포함하는 키트.
- 청구항 188의 바이러스와, 이 바이러스를 숙주 세포에서 발현시키기 위해 전술한 키트의 사용자에게 지침을 주는 포장 삽입물을 포함하는 키트.
- 청구항 188의 바이러스, 그리고 치료요법적으로 유효량의 이 바이러스를 포유류 암 환자에게 투여하고, 이로 인하여 전술한 암을 치료하기 위해 사용자에게 지침을 주는 포장 삽입물을 포함하는 키트.
- 청구항 194에 있어서, 이때 상기 포유류 환자는 인간 환자인, 키트.
- 포유류 환자에서 암을 치료하는 방법에 있어서, 상기 방법은 이 포유류 환자에게 청구항 188의 바이러스의 치료요법적으로 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 방법.
- 포유류 환자에서 암을 치료하는 방법에 있어서, 상기 방법은 이 포유류 환자에게 청구항 191의 약제학적 조성물의 치료요법적으로 유효량을 투여하는 것을 포함한다.
- 청구항 196 또는 197에 있어서, 이때 상기 포유류 환자는 인간 환자인, 방법.
- 청구항 196-198중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 암은 백혈병, 림프종, 간암, 뼈암, 폐암, 뇌암, 방광암, 위장암, 유방암, 심장암, 자궁경부암, 자궁암, 두경부암, 담낭암, 후두암, 입술 및 구강암, 안구암, 흑색종, 췌장암, 전립선암, 결장직장암, 고환암, 그리고 인후암으로 구성된 군에서 선택되는, 방법.
- 청구항 199에 있어서, 이때 상기 방법은 상기 포유류 환자에게 항-PD1 항체 또는 항-PD-L1 항체를 투여하는 것을 더 포함하는, 방법.
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