BR112021011730A2 - Vetores de ortopoxvírus modificados - Google Patents

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John C. Bell
Michael S. HUH
Matthew Y. TANG
Adrian PELIN
Caroline J. BREITBACH
Michael F. BURGESS
Steven H. BERNSTEIN
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Ottawa Hospital Research Institute
Turnstone Biologics Corp.
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Abstract

vetores de ortopoxvírus modificados. a divulgação se refere a vetores de ortopoxvírus modificados, assim como métodos para usar o mesmo para o tratamento de vários cânceres. a divulgação fornece vetores de ortopoxvírus modificados que exibem várias atividades terapêuticas benéficas, incluindo atividade oncolítica intensificada, espalhamento de infecção, evasão imune, persistência de tumor, capacidade para incorporação de sequências de dna exógeno, amenidade para fabricação em larga escala e segurança.

Description

“VETORES DE ORTOPOXVÍRUS MODIFICADOS” REFERÊNCIA CRUZADA A PEDIDOS RELACIONADOS
[001] Este pedido reivindica o benefício de prioridade do Pedido de Patente Provisório US nº 62/930.524, depositado em 4 de novembro de 2019, Pedido de Patente Provisório US nº 62/872.699, depositado em 10 de julho de 2019, e Pedido de Patente Provisório US nº 62/784.372, depositado em 21 de dezembro de 2018, cuja divulgação de cada um é incorporada a título de referência ao presente documento, em sua totalidade.
LISTAGEM DE SEQUÊNCIAS
[002] Este pedido incorpora a título de referência uma Listagem de Sequências enviada com esse pedido como um arquivo de texto ASCII, intitulado 14596-050-228_SL.txt, criado em 18 de dezembro de 2019, e que tem um tamanho de 1252729 bytes.
1. CAMPO
[003] A invenção refere-se ao campo de imunoterapia, por exemplo, para o tratamento de distúrbios de proliferação celular, como cânceres. Particularmente, a invenção se refere a ortopoxvírus geneticamente modificados, assim como métodos para produzir e usar os mesmos.
2. FUNDAMENTOS
[004] O sistema imune pode ser estimulado para identificar células tumorais e alvejar as mesmas para destruição. A imunoterapia que emprega ortopoxvírus oncolíticos é uma área em evolução rápida na pesquisa de câncer. Novas abordagens são necessárias para manipular e/ou intensificar seletividade de tumor para vírus oncolítico a fim de maximizar a eficácia e a segurança. Essa seletividade é especialmente importante quando agentes terapêuticos potencialmente tóxicos ou genes são adicionados ao vírus.
[005] Embora o uso de ortopoxvírus como vetores oncolíticos clínicos seja um paradigma promissor para o tratamento de câncer, devido à toxicidade, como lesões de varíola em pacientes, e efeitos colaterais imunossupressores, a maioria dos candidatos clínicos atuais demonstrou apenas sucesso clínico modesto. Há uma necessidade por métodos para manipular o ortopoxvírus que exibe replicação de vírus mais robusta, extermínio de célula cancerígena e espalhamento do ponto de infecção. A presente invenção aborda essa necessidade e fornece uma solução para limitações de segurança e seletividade empregando-se um ortopoxvírus modificado.
3. SUMÁRIO
[006] A presente divulgação descreve o uso de ortopoxvírus para o tratamento de câncer. Em particular, a divulgação tem base em parte da atividade oncolítica intensificada, espalhamento de infecção e resultados de segurança engendrados quando um ortopoxvírus é geneticamente modificado para conter deleções em um ou mais, ou todos, os seguintes genes: os genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R. Ortopoxvírus geneticamente modificados, como vírus vaccinia (por exemplo, vírus Copenhagen, Western Reserve, Wyeth, Lister, EM63, ACAM2000, LC16m8, CV-1, vaccinia modificado Ankara (MVA), Dairen I, GLV-1h68, IHD-J, L-IVP, LC16mO, Tashkent, Tian Tan e WAU86/88-1) que exibem mutações em um ou mais, ou todos, desses genes podem exibir um arranjo de recursos benéficos, como capacidade oncolítica melhorada, replicação em tumores, infectividade, evasão imune, persistência de tumor, capacidade para incorporação de sequências de DNA exógenas e/ou amenabilidade para fabricação em larga escala. A presente divulgação descreve ortopoxvírus adicionalmente geneticamente modificados para conter deleções no gene B8R. Em várias modalidades, o ortopoxvírus modificado expressa pelo menos um dos três transgenes: Interleucina 12 que contém um domínio transmembranar (IL-12-TM), ligante de tirosina quinase 3 de tipo FMS (FLT3-L) e anticorpo de Proteína 4 Associada a Linfócito T anti-Citotóxico (CTLA-4).
[007] Em um aspecto, é fornecido no presente documento um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende: (a) deleções nos seguintes genes: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B8R, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R; (b) deleções nos seguintes genes na repetição terminal invertida 3' (ITR): B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, e B29R; e (c) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que se liga especificamente à Proteína 4 Associada a Linfócito T Citotóxico (CTLA-4); em que as deleções nos genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R são deleções parciais.
[008] Em certas modalidades, o ácido nucleico compreende adicionalmente uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos. Em uma modalidade específica, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor H5R, um promotor pS ou um promotor LEO. Em outra modalidade específica, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor H5R.
[009] Em algumas modalidades, a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueia a primeira sequência de nucleotídeos.
[010] Em modalidades específicas, a primeira sequência de nucleotídeos codifica uma sequência de aminoácidos que compreende a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 211. Em modalidades específicas, a primeira sequência de nucleotídeos compreende a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 214. Em modalidades específicas, a primeira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 214.
[011] Em outro aspecto, é fornecido no presente documento um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende: (a) deleções nos seguintes genes: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R, e opcionalmente uma deleção no gene B8R; (b) deleções nos seguintes genes na ITR 3’: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, e B29R; (c) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que se liga especificamente a CTLA-4; e (d) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor H5R, um promotor pS ou um promotor LEO; em que as deleções nos genes vaccinia
C2L, F3L, B14R e B29R são deleções parciais. Em uma modalidade particular, o ácido nucleico compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende uma deleção no gene B8R.
[012] Em certas modalidades, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor H5R.
[013] Em algumas modalidades, a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueia a primeira sequência de nucleotídeos.
[014] Em modalidades específicas, a primeira sequência de nucleotídeos codifica uma sequência de aminoácidos que compreende a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 211. Em modalidades específicas, a primeira sequência de nucleotídeos compreende a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 214. Em modalidades específicas, a primeira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 214.
[015] Em outro aspecto, é fornecido no presente documento um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende: (a) deleções nos seguintes genes: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B8R, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R; (b) deleções nos seguintes genes na ITR 3’: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, e B29R; e (c) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de Interleucina 12 (IL-12); em que as deleções nos genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R são deleções parciais.
[016] Em certas modalidades, o ácido nucleico compreende adicionalmente uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos. Em uma modalidade específica, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos é um promotor tardio. Em uma modalidade específica adicional, o promotor tardio compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561, um promotor F17R ou um promotor D13L. Em outra modalidade específica adicional, o promotor tardio compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561. Em outra modalidade, o promotor F17R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO:563. Em ainda outra modalidade, o promotor D13L compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO:562.
[017] Em algumas modalidades, a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueia a segunda sequência de nucleotídeos.
[018] Em modalidades específicas, o polipeptídeo de IL-12 é ligado à membrana. Em modalidades específicas, o polipeptídeo de IL-12 compreende p35 de IL-12 ou p70 de IL-12. Em modalidades específicas, o polipeptídeo de IL-12 compreende a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 212. Em modalidades específicas, a segunda sequência de nucleotídeos compreende a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 215. Em modalidades específicas, a segunda sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 215.
[019] Em outro aspecto, é fornecido no presente documento um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende: (a) deleções nos seguintes genes: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R, e opcionalmente uma deleção no gene B8R; (b) deleções nos seguintes genes na ITR 3’: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R e B29R; (c) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12; e (d) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos é um promotor tardio; em que as deleções nos genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R são deleções parciais. Em uma modalidade particular, o ácido nucleico compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende uma deleção no gene B8R.
[020] Em certas modalidades, o promotor tardio compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561, um promotor F17R ou um promotor D13L. Em uma modalidade específica, o promotor tardio compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561. Em outra modalidade, o promotor F17R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO:563. Em ainda outra modalidade, o promotor D13L compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO:562.
[021] Em algumas modalidades, a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueia a segunda sequência de nucleotídeos.
[022] Em modalidades específicas, o polipeptídeo de IL-12 é ligado à membrana. Em modalidades específicas, o polipeptídeo de IL-12 compreende p35 de IL-12 ou p70 de IL-12. Em modalidades específicas, o polipeptídeo de IL-12 compreende a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 212. Em modalidades específicas, a segunda sequência de nucleotídeos compreende a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 215. Em modalidades específicas, a segunda sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 215.
[023] Em outro aspecto, é fornecido no presente documento um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende: (a) deleções nos seguintes genes: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B8R, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R; (b) deleções nos seguintes genes na ITR 3’: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R e B29R; e (c) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica o ligante de tirosina quinase 3 de tipo FMS (FLT3L); em que as deleções nos genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R são deleções parciais.
[024] Em certas modalidades, o ácido nucleico compreende adicionalmente uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos. Em uma modalidade específica, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R, um promotor B19R, um promotor E3L, um promotor F11L ou um promotor B2R. Em outra modalidade específica, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R. Em outra modalidade específica, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B19R. Em outra modalidade específica, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R e um promotor B19R. Em uma modalidade particular, o promotor B8R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 564. Em uma modalidade particular, o promotor B19R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 565. Em uma modalidade particular, o promotor E3L compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 567. Em uma modalidade particular, o promotor F11L compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 568. Em uma modalidade particular, o promotor B2R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 569.
[025] Em algumas modalidades, a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueia a terceira sequência de nucleotídeos.
[026] Em modalidades específicas, o FLT3L compreende a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 213. Em modalidades específicas, a terceira sequência de nucleotídeos compreende a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 216. Em modalidades específicas, a terceira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 216.
[027] Em outro aspecto, é fornecido no presente documento um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende: (a) deleções nos seguintes genes: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R, e opcionalmente uma deleção no gene B8R; (b) deleções nos seguintes genes na ITR 3’: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R e B29R; (c) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L; e (d) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R, um promotor B19R, um promotor E3L, um promotor F11L, ou um promotor B2R; em que as deleções nos genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R são deleções parciais. Em uma modalidade particular, o ácido nucleico compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende uma deleção no gene B8R. Em uma modalidade particular, o promotor B8R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 564. Em uma modalidade particular, o promotor B19R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 565. Em uma modalidade particular, o promotor E3L compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 567. Em uma modalidade particular, o promotor F11L compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 568. Em uma modalidade particular, o promotor B2R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 569.
[028] Em certas modalidades, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R. Em certas modalidades, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B19R. Em certas modalidades, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R e um promotor B19R. Em uma modalidade particular, o promotor B8R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 564. Em uma modalidade particular, o promotor B19R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 565.
[029] Em algumas modalidades, a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueia a terceira sequência de nucleotídeos.
[030] Em modalidades específicas, o FLT3L compreende a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 213. Em modalidades específicas, a terceira sequência de nucleotídeos compreende a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 216. Em modalidades específicas, a terceira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 216.
[031] Em outro aspecto, é fornecido no presente documento um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende: (a) deleções nos seguintes genes: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B8R, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R; (b) deleções nos seguintes genes na ITR 3’: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, e B29R; (c) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que se liga especificamente a CTLA-4; e (d) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12; em que as deleções nos genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R são deleções parciais.
[032] Em certas modalidades, o ácido nucleico compreende adicionalmente uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos. Em uma modalidade específica, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor H5R, um promotor pS ou um promotor LEO. Em outra modalidade específica, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor H5R.
[033] Em certas modalidades, o ácido nucleico compreende adicionalmente uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos. Em uma modalidade específica, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos é um promotor tardio. Em uma modalidade específica adicional, o promotor tardio compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561, um promotor F17R ou um promotor D13L. Em outra modalidade específica adicional, o promotor tardio compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561. Em outra modalidade, o promotor F17R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO:563. Em ainda outra modalidade, o promotor D13L compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO:562.
[034] Em algumas modalidades, a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a primeira sequência de nucleotídeos, e a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a segunda sequência de nucleotídeos.
[035] Em modalidades específicas, a primeira sequência de nucleotídeos codifica uma sequência de aminoácidos que compreende a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 211. Em modalidades específicas, a primeira sequência de nucleotídeos compreende a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 214. Em modalidades específicas, a primeira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 214.
[036] Em modalidades específicas, o polipeptídeo de IL-12 é ligado à membrana. Em modalidades específicas, o polipeptídeo de IL-12 compreende p35 de IL-12 ou p70 de IL-12. Em modalidades específicas, o polipeptídeo de IL-12 compreende a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 212. Em modalidades específicas, a segunda sequência de nucleotídeos compreende a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 215. Em modalidades específicas, a segunda sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 215.
[037] Em outro aspecto, é fornecido no presente documento um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende: (a) deleções nos seguintes genes: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R, e opcionalmente uma deleção no gene B8R; (b) deleções nos seguintes genes na ITR 3’: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, e B29R; (c) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que se liga especificamente a CTLA-4; e (d) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12; em que as deleções nos genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R são deleções parciais; e em que o ácido nucleico compreende adicionalmente: (i) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor H5R, um promotor pS, ou um promotor LEO; e/ou (ii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos é um promotor tardio. Em uma modalidade particular, o ácido nucleico compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende uma deleção no gene B8R.
[038] Em certas modalidades, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor H5R.
[039] Em certas modalidades, o promotor tardio compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561, um promotor F17R ou um promotor D13L. Em uma modalidade específica, o promotor tardio compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561. Em outra modalidade, o promotor F17R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO:563. Em ainda outra modalidade, o promotor D13L compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO:562.
[040] Em algumas modalidades, a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a primeira sequência de nucleotídeos, e a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a segunda sequência de nucleotídeos.
[041] Em modalidades específicas, a primeira sequência de nucleotídeos codifica uma sequência de aminoácidos que compreende a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 211. Em modalidades específicas, a primeira sequência de nucleotídeos compreende a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 214. Em modalidades específicas, a primeira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 214.
[042] Em modalidades específicas, o polipeptídeo de IL-12 é ligado à membrana. Em modalidades específicas, o polipeptídeo de IL-12 compreende p35 de IL-12 ou p70 de IL-12. Em modalidades específicas, o polipeptídeo de IL-12 compreende a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 212. Em modalidades específicas, a segunda sequência de nucleotídeos compreende a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 215. Em modalidades específicas, a segunda sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 215.
[043] Em outro aspecto, é fornecido no presente documento um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende: (a) deleções nos seguintes genes: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B8R, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R; (b) deleções nos seguintes genes na ITR 3’: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, e B29R; (c) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que se liga especificamente a CTLA-4; e (d) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L; em que as deleções nos genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R são deleções parciais.
[044] Em certas modalidades, o ácido nucleico compreende adicionalmente uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos. Em uma modalidade específica, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor H5R, um promotor pS ou um promotor LEO. Em outra modalidade específica, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor H5R.
[045] Em certas modalidades, o ácido nucleico compreende adicionalmente uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos. Em uma modalidade específica, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R, um promotor B19R, um promotor E3L, um promotor F11L ou um promotor B2R. Em outra modalidade específica, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R. Em outra modalidade específica, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B19R. Em outra modalidade específica, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R e um promotor B19R. Em uma modalidade particular, o promotor B8R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 564. Em uma modalidade particular, o promotor B19R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 565.
[046] Em algumas modalidades, a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a primeira sequência de nucleotídeos, e a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a terceira sequência de nucleotídeos.
[047] Em modalidades específicas, a primeira sequência de nucleotídeos codifica uma sequência de aminoácidos que compreende a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 211. Em modalidades específicas, a primeira sequência de nucleotídeos compreende a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 214. Em modalidades específicas, a primeira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 214.
[048] Em modalidades específicas, o FLT3L compreende a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 213. Em modalidades específicas, a terceira sequência de nucleotídeos compreende a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 216. Em modalidades específicas, a terceira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 216.
[049] Em outro aspecto, é fornecido no presente documento um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende: (a) deleções nos seguintes genes: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R, e opcionalmente uma deleção no gene B8R; (b) deleções nos seguintes genes na ITR 3’: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, e B29R; (c) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que se liga especificamente a CTLA-4; e (d) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L; em que as deleções nos genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R são deleções parciais; e em que o ácido nucleico compreende adicionalmente: (i) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor H5R, um promotor pS, ou um promotor LEO; e/ou (ii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R, um promotor B19R, um promotor E3L, um promotor F11L ou um promotor B2R. Em uma modalidade particular, o ácido nucleico compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende uma deleção no gene B8R. Em uma modalidade particular, o promotor B8R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID
NO: 564. Em uma modalidade particular, o promotor B19R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 565. Em uma modalidade particular, o promotor E3L compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 567. Em uma modalidade particular, o promotor F11L compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 568. Em uma modalidade particular, o promotor B2R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 569.
[050] Em certas modalidades, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor H5R.
[051] Em certas modalidades, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R. Em certas modalidades, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B19R. Em certas modalidades, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R e um promotor B19R. Em uma modalidade particular, o promotor B8R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 564. Em uma modalidade particular, o promotor B19R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 565.
[052] Em algumas modalidades, a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a primeira sequência de nucleotídeos, e a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a terceira sequência de nucleotídeos.
[053] Em modalidades específicas, a primeira sequência de nucleotídeos codifica uma sequência de aminoácidos que compreende a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 211. Em modalidades específicas, a primeira sequência de nucleotídeos compreende a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 214. Em modalidades específicas, a primeira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 214.
[054] Em modalidades específicas, o FLT3L compreende a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 213. Em modalidades específicas, a terceira sequência de nucleotídeos compreende a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 216. Em modalidades específicas, a terceira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 216.
[055] Em outro aspecto, é fornecido no presente documento um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende: (a) deleções nos seguintes genes: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B8R, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R; (b) deleções nos seguintes genes na ITR 3’: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R e B29R; (c) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12; e (d) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L; em que os deleções nos genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R são deleções parciais.
[056] Em certas modalidades, o ácido nucleico compreende adicionalmente uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos. Em uma modalidade específica, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos é um promotor tardio. Em uma modalidade específica adicional, o promotor tardio compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561, um promotor F17R ou um promotor D13L. Em outra modalidade específica adicional, o promotor tardio compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561. Em outra modalidade, o promotor F17R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO:563. Em ainda outra modalidade, o promotor D13L compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO:562.
[057] Em certas modalidades, o ácido nucleico compreende adicionalmente uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos. Em uma modalidade específica, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R, um promotor B19R, um promotor E3L, um promotor F11L ou um promotor B2R. Em outra modalidade específica, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R. Em outra modalidade específica, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B19R. Em outra modalidade específica, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R e um promotor B19R. Em uma modalidade particular, o promotor B8R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 564. Em uma modalidade particular, o promotor B19R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 565. Em uma modalidade particular, o promotor E3L compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 567. Em uma modalidade particular, o promotor F11L compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 568. Em uma modalidade particular, o promotor B2R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 569.
[058] Em algumas modalidades, a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a segunda sequência de nucleotídeos, e a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a terceira sequência de nucleotídeos.
[059] Em modalidades específicas, o polipeptídeo de IL-12 é ligado à membrana. Em modalidades específicas, o polipeptídeo de IL-12 compreende p35 de IL-12 ou p70 de IL-12. Em modalidades específicas, o polipeptídeo de IL-12 compreende a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 212. Em modalidades específicas, a segunda sequência de nucleotídeos compreende a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 215. Em modalidades específicas, a segunda sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 215.
[060] Em modalidades específicas, o FLT3L compreende a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 213. Em modalidades específicas, a terceira sequência de nucleotídeos compreende a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 216. Em modalidades específicas, a terceira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 216.
[061] Em outro aspecto, é fornecido aqui um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende: (a) deleções nos seguintes genes: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R, e opcionalmente uma deleção no gene B8R; (b) deleções nos seguintes genes na ITR 3’: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R e B29R; (c) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12; e (d) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L; em que os deleções nos genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R são deleções parciais; e em que o ácido nucleico compreende adicionalmente: (i) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos é um promotor tardio; e/ou (ii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R, um promotor B19R, um promotor E3L, um promotor F11L ou um promotor B2R. Em uma modalidade particular, o ácido nucleico compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende uma deleção no gene B8R. Em uma modalidade particular, o promotor B8R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 564. Em uma modalidade particular, o promotor B19R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 565. Em uma modalidade particular, o promotor E3L compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 567. Em uma modalidade particular, o promotor F11L compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 568. Em uma modalidade particular, o promotor B2R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 569.
[062] Em certas modalidades, o promotor tardio compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561, um promotor F17R ou um promotor D13L. Em uma modalidade específica, o promotor tardio compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561. Em outra modalidade, o promotor F17R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO:563. Em ainda outra modalidade, o promotor D13L compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO:562.
[063] Em certas modalidades, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R. Em certas modalidades, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B19R. Em certas modalidades, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R e um promotor B19R. Em uma modalidade particular, o promotor B8R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 564. Em uma modalidade particular, o promotor B19R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 565.
[064] Em algumas modalidades, a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a segunda sequência de nucleotídeos, e a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a terceira sequência de nucleotídeos.
[065] Em modalidades específicas, o polipeptídeo de IL-12 é ligado à membrana. Em modalidades específicas, o polipeptídeo de IL-12 compreende p35 de IL-12 ou p70 de IL-12. Em modalidades específicas, o polipeptídeo de IL-12 compreende a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 212. Em modalidades específicas, a segunda sequência de nucleotídeos compreende a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 215. Em modalidades específicas, a segunda sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 215.
[066] Em modalidades específicas, o FLT3L compreende a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 213. Em modalidades específicas, a terceira sequência de nucleotídeos compreende a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 216. Em modalidades específicas, a terceira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 216.
[067] Em outro aspecto, é fornecido no presente documento um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende: (a) deleções nos seguintes genes: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B8R, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R; (b) deleções nos seguintes genes na ITR 3’: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, e B29R; (c) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que se liga especificamente a CTLA-4; (d) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12; e (e) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L; em que as deleções nos genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R são deleções parciais.
[068] Em certas modalidades, o ácido nucleico compreende adicionalmente uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos. Em uma modalidade específica, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor H5R, um promotor pS ou um promotor LEO. Em outra modalidade específica, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor H5R.
[069] Em certas modalidades, o ácido nucleico compreende adicionalmente uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos. Em uma modalidade específica, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos é um promotor tardio. Em uma modalidade específica adicional, o promotor tardio compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561, um promotor F17R ou um promotor D13L. Em outra modalidade específica adicional, o promotor tardio compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561. Em outra modalidade, o promotor F17R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO:563. Em ainda outra modalidade, o promotor D13L compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO:562.
[070] Em certas modalidades, o ácido nucleico compreende adicionalmente uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos. Em uma modalidade específica, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R, um promotor B19R, um promotor E3L, um promotor F11L ou um promotor B2R. Em outra modalidade específica, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R. Em outra modalidade específica, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B19R. Em outra modalidade específica, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R e um promotor B19R. Em uma modalidade particular, o promotor B8R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 564. Em uma modalidade particular, o promotor B19R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 565. Em uma modalidade particular, o promotor E3L compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 567. Em uma modalidade particular, o promotor F11L compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 568. Em uma modalidade particular, o promotor B2R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 569.
[071] Em algumas modalidades, a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a primeira sequência de nucleotídeos, a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a segunda sequência de nucleotídeos, e a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a terceira sequência de nucleotídeos.
[072] Em modalidades específicas, a primeira sequência de nucleotídeos codifica uma sequência de aminoácidos que compreende a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 211. Em modalidades específicas, a primeira sequência de nucleotídeos compreende a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 214. Em modalidades específicas, a primeira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 214.
[073] Em modalidades específicas, o polipeptídeo de IL-12 é ligado à membrana. Em modalidades específicas, o polipeptídeo de IL-12 compreende p35 de IL-12 ou p70 de IL-12. Em modalidades específicas, o polipeptídeo de IL-12 compreende a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 212. Em modalidades específicas, a segunda sequência de nucleotídeos compreende a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 215. Em modalidades específicas, a segunda sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 215.
[074] Em modalidades específicas, o FLT3L compreende a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 213. Em modalidades específicas, a terceira sequência de nucleotídeos compreende a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 216. Em modalidades específicas, a terceira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 216.
[075] Em outro aspecto, é fornecido no presente documento um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende: (a) deleções nos seguintes genes: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R, e opcionalmente uma deleção no gene B8R; (b) deleções nos seguintes genes na ITR 3’: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R e B29R; (c) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que se liga especificamente a CTLA-4; (d) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12; e (e) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L; em que as deleções nos genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R são deleções parciais; e em que o ácido nucleico compreende adicionalmente: (i) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor H5R, um promotor pS ou um promotor LEO; (ii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos é um promotor tardio; e/ou (iii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R, um promotor B19R, um promotor E3L, um promotor F11L ou um promotor B2R. Em uma modalidade particular, o ácido nucleico compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende uma deleção no gene B8R. Em uma modalidade particular, o promotor B8R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 564. Em uma modalidade particular, o promotor B19R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 565. Em uma modalidade particular, o promotor E3L compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 567. Em uma modalidade particular, o promotor F11L compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 568. Em uma modalidade particular, o promotor B2R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 569.
[076] Em certas modalidades, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor H5R.
[077] Em certas modalidades, o promotor tardio compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561, um promotor F17R ou um promotor D13L. Em uma modalidade específica, o promotor tardio compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561. Em outra modalidade, o promotor F17R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO:563. Em ainda outra modalidade, o promotor D13L compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO:562.
[078] Em certas modalidades, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R. Em certas modalidades, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B19R. Em certas modalidades, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R e um promotor B19R. Em uma modalidade particular, o promotor B8R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 564. Em uma modalidade particular, o promotor B19R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 565.
[079] Em algumas modalidades, a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a primeira sequência de nucleotídeos, a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a segunda sequência de nucleotídeos, e a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a terceira sequência de nucleotídeos.
[080] Em modalidades específicas, a primeira sequência de nucleotídeos codifica uma sequência de aminoácidos que compreende a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 211. Em modalidades específicas, a primeira sequência de nucleotídeos compreende a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 214. Em modalidades específicas, a primeira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 214.
[081] Em modalidades específicas, o polipeptídeo de IL-12 é ligado à membrana. Em modalidades específicas, o polipeptídeo de IL-12 compreende p35 de IL-12 ou p70 de IL-12. Em modalidades específicas, o polipeptídeo de IL-12 compreende a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 212. Em modalidades específicas, a segunda sequência de nucleotídeos compreende a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 215. Em modalidades específicas, a segunda sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 215.
[082] Em modalidades específicas, o FLT3L compreende a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 213. Em modalidades específicas, a terceira sequência de nucleotídeos compreende a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 216. Em modalidades específicas, a terceira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 216.
[083] Em uma modalidade específica, o primeiro transgene é inserido entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais (isto é, está presente entre os genes C2L e F3L parciais), e o segundo transgene e o terceiro transgene são inseridos no lócus da deleção no gene B8R (isto é, estão presentes no lócus da deleção no gene B8R). Em uma modalidade específica, o primeiro transgene é inserido entre a porção do gene vaccinia C2L que permanece e a porção do gene vaccinia F3L que permanece (isto é, está presente entre a porção do gene vaccinia C2L que permanece e a porção do gene vaccinia F3L que permanece), e o segundo transgene e o terceiro transgene são inseridos no lócus da deleção no gene B8R (isto é, estão presentes no lócus da deleção no gene B8R). Em uma modalidade específica adicional, o terceiro transgene está a montante do segundo transgene.
[084] Em algumas modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento, a deleção no gene B8R é uma deleção de pelo menos 50% da sequência de genes B8R. Em outras modalidades, a deleção no gene B8R é uma deleção de pelo menos 60% da sequência de genes B8R. Em outras modalidades, a deleção no gene B8R é uma deleção de pelo menos 70% da sequência de genes B8R. Em outras modalidades, a deleção no gene B8R é uma deleção de pelo menos 80% da sequência de genes B8R. Em uma modalidade específica, a deleção no gene B8R é uma deleção de cerca de 75% da sequência de genes B8R. Em outra modalidade específica, a deleção no gene B8R é uma deleção de cerca de 80% da sequência de genes B8R.
[085] Em certas modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento, o genoma de vírus vaccinia recombinante é derivado do genoma de um vírus vaccinia de cepa Copenhagen.
[086] Em certas modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento, o genoma de vírus vaccinia recombinante compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 210.
[087] Em outro aspecto, é fornecido no presente documento um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende: (a) deleções nos seguintes genes: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R, e opcionalmente uma deleção no gene B8R; (b) deleções nos seguintes genes na ITR 3’: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R e B29R; (c) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que se liga especificamente a CTLA-4; (d) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12; e (e) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L; em que as deleções nos genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R são deleções parciais; e em que o ácido nucleico compreende adicionalmente: (i) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor H5R; (ii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos é um promotor tardio que compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561; e (iii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R e um promotor B19R. Em modalidades específicas, a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a primeira sequência de nucleotídeos, a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a segunda sequência de nucleotídeos, e a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a terceira sequência de nucleotídeos.
[088] Em modalidades específicas, o primeiro transgene é inserido entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais, e o segundo transgene e o terceiro transgene são inseridos no lócus da deleção no gene B8R. Em modalidades específicas, o primeiro transgene é inserido entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais, e o segundo transgene e o terceiro transgene são inseridos no lócus da deleção no gene B8R. Em modalidades específicas, o primeiro transgene é inserido entre a porção do gene vaccinia B14R que permanece e a porção do gene vaccinia B29R que permanece, e o segundo transgene e o terceiro transgene são inseridos no lócus da deleção no gene B8R. Em modalidades específicas, o terceiro transgene está a montante do segundo transgene. Em modalidades específicas, o terceiro transgene está a jusante do segundo transgene. Em uma modalidade particular, o ácido nucleico compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende uma deleção no gene B8R. Em uma modalidade particular, o promotor B8R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 564.
[089] Em outro aspecto, é fornecido no presente documento um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende: (a) deleções nos seguintes genes: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R, e opcionalmente uma deleção no gene B8R; (b) deleções nos seguintes genes na ITR 3’: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R e B29R; (c) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que se liga especificamente a CTLA-4, em que a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a primeira sequência de nucleotídeos, e em que o primeiro transgene é inserido entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais; (d) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12, em que a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a segunda sequência de nucleotídeos, e em que o segundo transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R; e (e) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L, em que a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a terceira sequência de nucleotídeos, em que o terceiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R, e em que o terceiro transgene está a montante do segundo transgene; em que as deleções nos genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R são deleções parciais; e em que o ácido nucleico compreende adicionalmente: (i) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor H5R; (ii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos é um promotor tardio que compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561; e (iii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R e um promotor B19R.
Em uma modalidade particular, o ácido nucleico compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende uma deleção no gene B8R.
Em uma modalidade particular, o promotor B8R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 564. Em uma modalidade particular, o promotor B19R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 565
[090] Em outro aspecto, é fornecido no presente documento um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende: (a) deleções nos seguintes genes: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R, e opcionalmente uma deleção no gene B8R; (b) deleções nos seguintes genes na ITR 3’: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R e B29R; (c) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que se liga especificamente a CTLA-4, em que a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a primeira sequência de nucleotídeos, e em que o primeiro transgene é inserido entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais; (d) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12, em que a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a segunda sequência de nucleotídeos, e em que o segundo transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R; e (e) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L; em que as deleções nos genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R são deleções parciais, em que a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a terceira sequência de nucleotídeos, em que o terceiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R, e em que o terceiro transgene está a jusante do segundo transgene; e em que o ácido nucleico compreende adicionalmente: (i) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor H5R; (ii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos é um promotor tardio que compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561; e (iii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R e um promotor B19R. Em uma modalidade particular, o ácido nucleico compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende uma deleção no gene B8R. Em uma modalidade particular, o promotor B8R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 564. Em uma modalidade particular, o promotor B19R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 565.
[091] Em uma modalidade específica, quaisquer um, dois ou três dentre o primeiro transgene, o segundo transgene e o terceiro transgene é/são inseridos entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais (isto é, está/estão presentes entre os genes C2L e F3L parciais). Em uma modalidade específica, quaisquer um, dois ou três dentre o primeiro transgene, o segundo transgene e o terceiro transgene está/estão inseridos entre a porção do gene vaccinia C2L que permanece e a porção do gene vaccinia F3L que permanece.
[092] Em uma modalidade específica, quaisquer um, dois ou três dentre o primeiro transgene, o segundo transgene e o terceiro transgene é/são inseridos no lócus da deleção no gene B8R (isto é, está/estão presentes no lócus do gene B8R).
[093] Em uma modalidade específica, quaisquer um, dois ou três dentre o primeiro transgene, o segundo transgene e o terceiro transgene é/são inseridos entre os genes vaccinia B13R e B29R parciais (isto é, está/estão presentes entre os genes B13R e B29R parciais). Em uma modalidade específica, quaisquer um, dois ou três dentre o primeiro transgene, o segundo transgene e o terceiro transgene é/são inseridos entre a porção do gene vaccinia B13R que permanece e a porção do gene vaccinia B29R que permanece.
[094] Em uma modalidade específica, o primeiro transgene é inserido entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais (isto é, está presente entre os genes C2L e F3L parciais), o segundo transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R (isto é, está presente no lócus da deleção no gene B8R) e o terceiro transgene é inserido entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais (isto é, está presente entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais). Em uma modalidade específica, o primeiro transgene é inserido entre a porção do gene vaccinia C2L que permanece e a porção do gene vaccinia F3L que permanece, o segundo transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R e o terceiro transgene é inserido entre a porção do gene vaccinia B14R que permanece e a porção do gene vaccinia B29R que permanece.
[095] Em uma modalidade específica, o segundo transgene é inserido entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais (isto é, está presente entre os genes C2L e F3L parciais), o terceiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R (isto é, está presente no lócus da deleção no gene B8R) e o primeiro transgene é inserido entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais (isto é, está presente entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais). Em uma modalidade específica, o segundo transgene é inserido entre a porção do gene vaccinia C2L que permanece e a porção do gene vaccinia F3L que permanece, o segundo transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R e o primeiro transgene é inserido entre a porção do gene vaccinia B14R que permanece e a porção do gene vaccinia B29R que permanece.
[096] Em uma modalidade específica, o terceiro transgene é inserido entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais (isto é, está presente entre os genes C2L e F3L parciais), o segundo transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R (isto é, está presente no lócus da deleção no gene B8R) e o primeiro transgene é inserido entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais (isto é, está presente entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais). Em uma modalidade específica, o terceiro transgene é inserido entre a porção do gene vaccinia C2L que permanece e a porção do gene vaccinia F3L que permanece, o segundo transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R e o primeiro transgene é inserido entre a porção do gene vaccinia B14R que permanece e a porção do gene vaccinia B29R que permanece.
[097] Em uma modalidade específica, o primeiro transgene e o segundo transgene são inseridos entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais (isto é, estão presentes entre os genes C2L e F3L parciais) e o terceiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R (isto é, está presente no lócus da deleção no gene B8R). Em uma modalidade específica, o primeiro transgene e o segundo transgene são inseridos entre a porção do gene vaccinia C2L que permanece e a porção do gene vaccinia F3L que permanece, e o terceiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R.
[098] Em uma modalidade específica, o primeiro transgene e o segundo transgene são inseridos entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais (isto é, estão presentes entre os genes C2L e F3L parciais), e o terceiro transgene é inserido entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais (isto é, está presente entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais). Em uma modalidade específica, o primeiro transgene e o segundo transgene são inseridos entre a porção do gene vaccinia C2L que permanece e a porção do gene vaccinia F3L que permanece, e o terceiro transgene é inserido entre a porção do gene vaccinia B14R que permanece e a porção do gene vaccinia B29R que permanece.
[099] Em uma modalidade específica, o terceiro transgene é inserido entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais (isto é, está presente entre os genes C2L e F3L parciais), e o primeiro transgene e o segundo transgene são inseridos no lócus da deleção no gene B8R (isto é, estão presentes no lócus da deleção no gene B8R). Em uma modalidade específica, o terceiro transgene é inserido entre a porção do gene vaccinia C2L que permanece e a porção do gene vaccinia F3L que permanece, e o primeiro transgene e o segundo transgene são inseridos no lócus da deleção no gene B8R
[100] Em uma modalidade específica, o terceiro transgene é inserido entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais (isto é, está presente entre os genes C2L e F3L parciais), e o primeiro transgene e o segundo transgene são inseridos entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais (isto é, estão presentes entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais). Em uma modalidade específica, o terceiro transgene é inserido entre a porção do gene vaccinia C2L que permanece e a porção do gene vaccinia F3L que permanece, e o primeiro transgene e o segundo transgene são inseridos entre a porção do gene vaccinia B14R que permanece e a porção do gene vaccinia B29R que permanece.
[101] Em uma modalidade específica, o terceiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R (isto é, está presente no lócus da deleção no gene B8R) e o primeiro transgene e o segundo transgene são inseridos entre os genes vaccinia B13R e B29R parciais (isto é, estão presentes entre os genes B13R e
B29R parciais). Em uma modalidade específica, o terceiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R e o primeiro transgene e o segundo transgene são inseridos entre a porção do gene vaccinia B13R que permanece e a porção do gene vaccinia B29R que permanece.
[102] Em uma modalidade específica, o terceiro transgene é inserido entre os genes vaccinia B13R e B29R parciais (isto é, está presente entre os genes B13R e B29R parciais), e o primeiro transgene e o segundo transgene são inseridos no lócus da deleção no gene B8R (isto é, estão presentes no lócus da deleção no gene B8R). Em uma modalidade específica, o terceiro transgene é inserido entre a porção do gene vaccinia B13R que permanece e a porção do gene vaccinia B29R que permanece e o primeiro transgene e o segundo transgene são inseridos no lócus da deleção no gene B8R.
[103] Em uma modalidade específica, o primeiro transgene, o segundo transgene e o terceiro transgene são inseridos entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais (isto é, estão presentes entre os genes C2L e F3L parciais). Em uma modalidade específica, o primeiro transgene, o segundo transgene e o terceiro transgene são inseridos entre a porção do gene vaccinia C2L que permanece e a porção do gene vaccinia F3L que permanece.
[104] Em uma modalidade específica, o primeiro transgene, o segundo transgene e o terceiro transgene são inseridos no lócus da deleção no gene B8R (isto é, estão presentes no lócus do gene B8R).
[105] Em uma modalidade específica, o primeiro transgene, o segundo transgene e o terceiro transgene são inseridos entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais (isto é, estão presentes entre os genes B14R e B29R parciais). Em uma modalidade específica, o primeiro transgene, o segundo transgene e o terceiro transgene são inseridos entre a porção do gene vaccinia B14R que permanece e a porção do gene vaccinia B29R que permanece.
[106] Em outro aspecto, é fornecido no presente documento um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende: (a) deleções nos seguintes genes: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R, e opcionalmente uma deleção no gene B8R; (b) deleções nos seguintes genes na ITR 3’: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R e B29R; (c) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que se liga especificamente a CTLA-4, em que a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a primeira sequência de nucleotídeos, e em que o primeiro transgene é inserido entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais; (d) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12, em que a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a segunda sequência de nucleotídeos, e em que o segundo transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R; e (e) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L; em que as deleções nos genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R são deleções parciais, em que a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a terceira sequência de nucleotídeos, em que o terceiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R, e em que o terceiro transgene está a montante do segundo transgene; e em que o ácido nucleico compreende adicionalmente: (i) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor H5R; (ii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos é um promotor tardio que compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561; e (iii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R e um promotor B19R.
Em uma modalidade particular, o ácido nucleico compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende uma deleção no gene B8R.
Em uma modalidade particular, o promotor B8R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 564.
[107] Em outro aspecto, é fornecido no presente documento um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende: (a) deleções nos seguintes genes: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R, e opcionalmente uma deleção no gene B8R; (b) deleções nos seguintes genes na ITR 3’: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R e B29R; (c) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que se liga especificamente a CTLA-4, em que a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a primeira sequência de nucleotídeos, e em que o primeiro transgene é inserido entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais; (d) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12, em que a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a segunda sequência de nucleotídeos, e em que o segundo transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R; e (e) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L; em que as deleções nos genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R são deleções parciais, em que a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a terceira sequência de nucleotídeos, em que o terceiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R, e em que o terceiro transgene está a jusante do segundo transgene; e em que o ácido nucleico compreende adicionalmente: (i) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor H5R; (ii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos é um promotor tardio que compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561; e (iii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R e um promotor B19R. Em uma modalidade particular, o ácido nucleico compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende uma deleção no gene B8R. Em uma modalidade particular, o promotor B8R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 564.
[108] Em outro aspecto, é fornecido no presente documento um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende: (a) uma sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210, que compreende genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R parciais e que compreende uma deleção no gene B8R; (b) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo que se liga especificamente à Proteína 4 Associada a Linfócito T Citotóxico (CTLA- 4), em que a primeira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 214; (c) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de Interleucina 12 (IL-12), em que a segunda sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 215; e (d) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica o ligante de tirosina quinase 3 de tipo FMS (FLT3L), em que a terceira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 216.
[109] Em algumas modalidades, a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a primeira sequência de nucleotídeos, a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a segunda sequência de nucleotídeos, e a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a terceira sequência de nucleotídeos.
[110] Em certas modalidades, o ácido nucleico compreende adicionalmente uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos que codifica o anticorpo anti-CTLA-4. Em uma modalidade específica, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos que codifica o anticorpo anti-CTLA-4 é um promotor H5R, um promotor pS ou um promotor LEO. Em outra modalidade específica, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos que codifica o anticorpo anti-CTLA-4 é um promotor H5R.
[111] Em certas modalidades, o ácido nucleico compreende adicionalmente uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos que codifica o polipeptídeo de IL-12. Em uma modalidade específica, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos que codifica o polipeptídeo de IL-12 é um promotor tardio. Em uma modalidade específica adicional, o promotor tardio compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561, um promotor F17R ou um promotor D13L. Em outra modalidade específica adicional, o promotor tardio compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561. Em outra modalidade, o promotor F17R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO:563. Em ainda outra modalidade, o promotor D13L compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO:562.
[112] Em certas modalidades, o ácido nucleico compreende adicionalmente uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L. Em uma modalidade específica, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L é um promotor B8R, um promotor B19R, um promotor E3L, um promotor F11L ou um promotor B2R. Em outra modalidade específica, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L é um promotor B8R. Em outra modalidade específica, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L é um promotor B19R. Em outra modalidade específica, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L é um promotor B8R e um promotor B19R. Em uma modalidade particular, o promotor B8R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 564. Em uma modalidade particular, o promotor B19R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 565. Em uma modalidade particular, o promotor E3L compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 567. Em uma modalidade particular, o promotor F11L compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 568. Em uma modalidade particular, o promotor B2R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 569.
[113] Em outro aspecto, é fornecido no presente documento um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende: (a) uma sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210, que compreende genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R parciais e que compreende uma deleção no gene B8R; (b) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo que se liga especificamente a CTLA-4, em que a primeira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 214; (c) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12, em que a segunda sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 215; e (d) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L, em que a terceira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 216; em que o ácido nucleico compreende adicionalmente: (i) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor H5R; (ii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos é um promotor tardio que compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561; e (iii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R e um promotor B19R. Em modalidades específicas, a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a primeira sequência de nucleotídeos, a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a segunda sequência de nucleotídeos, e a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a terceira sequência de nucleotídeos. Em modalidades específicas, o primeiro transgene é inserido entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais na SEQ ID NO: 210, e o segundo transgene e o terceiro transgene são inseridos no lócus da deleção no gene B8R. Em modalidades específicas, o primeiro transgene é inserido entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais na SEQ ID NO: 210, e o segundo transgene e o terceiro transgene são inseridos no lócus da deleção no gene B8R. Em modalidades específicas, o terceiro transgene está a montante do segundo transgene. Em modalidades específicas, o terceiro transgene está a jusante do segundo transgene.
[114] Em outro aspecto, é fornecido no presente documento um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende: (a) uma sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210, que compreende genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R parciais e que compreende uma deleção no gene B8R; (b) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo que se liga especificamente a CTLA-4, em que a primeira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 214, e em que a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a primeira sequência de nucleotídeos e o primeiro transgene é inserido entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais na SEQ ID NO: 210; (c) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12, em que a segunda sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 215, e em que a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a segunda sequência de nucleotídeos e o segundo transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R; e (d) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L, em que a terceira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 216, em que a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a terceira sequência de nucleotídeos e o terceiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R, e em que o terceiro transgene está a montante do segundo transgene; em que o ácido nucleico compreende adicionalmente: (i) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor H5R; (ii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos é um promotor tardio que compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561; e (iii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R ou um promotor B19R. Em modalidades específicas, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R e um promotor B19R. Em modalidades específicas, o promotor B8R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 564 e o promotor B19R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 565. Em modalidades específicas, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor inicial H5R ou um promotor tardio H5R. Em modalidades específicas, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor inicial H5R e um promotor tardio H5R. Em modalidades específicas, o promotor inicial H5R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 553 e o promotor tardio H5R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 554.
[115] Em outro aspecto, é fornecido no presente documento um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende: (a) uma sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210, que compreende genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R parciais e que compreende uma deleção no gene B8R; (b) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo que se liga especificamente a CTLA-4, em que a primeira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 214, e em que a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a primeira sequência de nucleotídeos e o primeiro transgene é inserido entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais na SEQ ID NO: 210; (c) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12, em que a segunda sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 215, e em que a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a segunda sequência de nucleotídeos e o segundo transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R; e (d) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L, em que a terceira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 216, em que a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a terceira sequência de nucleotídeos e o terceiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R, e em que o terceiro transgene está a jusante do segundo transgene; em que o ácido nucleico compreende adicionalmente: (i) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor H5R; (ii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos é um promotor tardio que compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561; e (iii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R ou um promotor B19R.
Em modalidades específicas, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R e um promotor B19R.
Em modalidades específicas, o promotor B8R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 564 e o promotor
B19R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 565. Em modalidades específicas, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor inicial H5R ou um promotor tardio H5R. Em modalidades específicas, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor inicial H5R e um promotor tardio H5R. Em modalidades específicas, o promotor inicial H5R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 553 e o promotor tardio H5R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 554.
[116] Em outro aspecto, é fornecido no presente documento um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende: (a) uma sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210, que compreende genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R parciais e que compreende uma deleção no gene B8R; (b) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo que se liga especificamente a CTLA-4, em que a primeira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 214, e em que a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a primeira sequência de nucleotídeos e o primeiro transgene é inserido entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais na SEQ ID NO: 210; (c) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12, em que a segunda sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 215, e em que a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a segunda sequência de nucleotídeos e o segundo transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R; e (d) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L, em que a terceira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 216, em que a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a terceira sequência de nucleotídeos e o terceiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R, e em que o terceiro transgene está a montante do segundo transgene; em que o ácido nucleico compreende adicionalmente: (i) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor H5R; (ii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos é um promotor tardio que compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561; e (iii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R ou um promotor B19R. Em modalidades específicas, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R e um promotor B19R. Em modalidades específicas, o promotor B8R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 564 e o promotor B19R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 565. Em modalidades específicas, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor inicial H5R ou um promotor tardio H5R. Em modalidades específicas, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor inicial H5R e um promotor tardio H5R. Em modalidades específicas, o promotor inicial H5R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 553 e o promotor tardio H5R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 554.
[117] Em outro aspecto, é fornecido no presente documento um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende: (a) uma sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210, que compreende genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R parciais e que compreende uma deleção no gene B8R; (b) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo que se liga especificamente a CTLA-4, em que a primeira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 214, e em que a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a primeira sequência de nucleotídeos e o primeiro transgene é inserido entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais na SEQ ID NO: 210; (c) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12, em que a segunda sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 215, e em que a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a segunda sequência de nucleotídeos e o segundo transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R; e (d) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L, em que a terceira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 216, em que a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a terceira sequência de nucleotídeos e o terceiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R, e em que o terceiro transgene está a jusante do segundo transgene; em que o ácido nucleico compreende adicionalmente: (i) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor H5R; (ii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos é um promotor tardio que compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561; e (iii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R ou um promotor B19R.
Em modalidades específicas, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R e um promotor B19R.
Em modalidades específicas, o promotor B8R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 564 e o promotor B19R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 565. Em modalidades específicas, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor inicial H5R ou um promotor tardio H5R.
Em modalidades específicas, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor inicial H5R e um promotor tardio H5R. Em modalidades específicas, o promotor inicial H5R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 553 e o promotor tardio H5R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 554.
[118] Em outro aspecto, é fornecido no presente documento um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende: (a) uma sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210, que compreende genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R parciais e que compreende uma deleção no gene B8R; (b) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo que se liga especificamente a CTLA-4, em que a primeira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 214, e em que a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a primeira sequência de nucleotídeos e o primeiro transgene é inserido entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais na SEQ ID NO: 210; (c) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12, em que a segunda sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 215, e em que a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a segunda sequência de nucleotídeos e o segundo transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R; e (d) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L, em que a terceira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 216, em que a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a terceira sequência de nucleotídeos e o terceiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R, e em que o terceiro transgene está a montante do segundo transgene; em que o ácido nucleico compreende adicionalmente: (i) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor pS; (ii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos é um promotor tardio que compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561; e (iii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R ou um promotor B19R. Em modalidades específicas, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R e um promotor B19R. Em modalidades específicas, o promotor B8R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 564 e o promotor B19R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 565. Em modalidades específicas, a sequência de nucleotídeos do pS compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 555, SEQ ID NO: 556 ou SEQ ID NO:
557.
[119] Em outro aspecto, é fornecido no presente documento um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende: (a) uma sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210, que compreende genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R parciais e que compreende uma deleção no gene B8R; (b) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo que se liga especificamente a CTLA-4, em que a primeira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 214, e em que a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a primeira sequência de nucleotídeos e o primeiro transgene é inserido entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais na SEQ ID NO: 210; (c) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12, em que a segunda sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 215, e em que a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a segunda sequência de nucleotídeos e o segundo transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R; e (d) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L, em que a terceira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 216, em que a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a terceira sequência de nucleotídeos e o terceiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R, e em que o terceiro transgene está a jusante do segundo transgene; em que o ácido nucleico compreende adicionalmente: (i) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor pS; (ii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos é um promotor tardio que compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561; e (iii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R ou um promotor B19R. Em modalidades específicas, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R e um promotor B19R. Em modalidades específicas, o promotor B8R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 564 e o promotor B19R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 565. Em modalidades específicas, a sequência de nucleotídeos do pS compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 555, SEQ ID NO: 556 ou SEQ ID NO:
557.
[120] Em outro aspecto, é fornecido no presente documento um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende: (a) uma sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210, que compreende genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R parciais e que compreende uma deleção no gene B8R; (b) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo que se liga especificamente a CTLA-4, em que a primeira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 214, e em que a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a primeira sequência de nucleotídeos e o primeiro transgene é inserido entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais na SEQ ID NO: 210; (c) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12, em que a segunda sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 215, e em que a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a segunda sequência de nucleotídeos e o segundo transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R; e (d) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L, em que a terceira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 216, em que a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a terceira sequência de nucleotídeos e o terceiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R, e em que o terceiro transgene está a montante do segundo transgene; em que o ácido nucleico compreende adicionalmente: (i) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor pS; (ii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos é um promotor tardio que compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561; e (iii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R ou um promotor B19R.
Em modalidades específicas, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R e um promotor B19R.
Em modalidades específicas, o promotor B8R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 564 e o promotor B19R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 565. Em modalidades específicas, a sequência de nucleotídeos do pS compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 555, SEQ ID NO: 556 ou SEQ ID NO:
557.
[121] Em outro aspecto, é fornecido no presente documento um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende: (a) uma sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210, que compreende genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R parciais e que compreende uma deleção no gene B8R; (b) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo que se liga especificamente a CTLA-4, em que a primeira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 214, e em que a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a primeira sequência de nucleotídeos e o primeiro transgene é inserido entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais na SEQ ID NO: 210; (c) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12, em que a segunda sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 215, e em que a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a segunda sequência de nucleotídeos e o segundo transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R; e (d) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L, em que a terceira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 216, em que a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a terceira sequência de nucleotídeos e o terceiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R, e em que o terceiro transgene está a jusante do segundo transgene; em que o ácido nucleico compreende adicionalmente: (i) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor pS; (ii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos é um promotor tardio que compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561; e (iii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R ou um promotor B19R. Em modalidades específicas, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R e um promotor B19R. Em modalidades específicas, o promotor B8R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 564 e o promotor B19R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 565. Em modalidades específicas, a sequência de nucleotídeos do pS compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 555, SEQ ID NO: 556 ou SEQ ID NO:
557.
[122] Em outro aspecto, é fornecido no presente documento um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende: (a) uma sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210, que compreende genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R parciais e que compreende uma deleção no gene B8R; (b) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo que se liga especificamente a CTLA-4, em que a primeira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 214, e em que a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a primeira sequência de nucleotídeos e o primeiro transgene é inserido entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais na SEQ ID NO: 210; (c) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12, em que a segunda sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 215, e em que a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a segunda sequência de nucleotídeos e o segundo transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R; e (d) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L, em que a terceira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 216, em que a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a terceira sequência de nucleotídeos e o terceiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R, e em que o terceiro transgene está a montante do segundo transgene; em que o ácido nucleico compreende adicionalmente: (i) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor H5R; (ii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos é um F17R promotor; e (iii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R ou um promotor B19R. Em modalidades específicas, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R e um promotor B19R. Em modalidades específicas, o promotor B8R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 564 e o promotor B19R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 565. Em modalidades específicas, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor inicial H5R ou um promotor tardio H5R. Em modalidades específicas, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor inicial H5R e um promotor tardio H5R. Em modalidades específicas, o promotor inicial H5R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 553 e o promotor tardio H5R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 554. Em modalidades específicas, a sequência de nucleotídeos do promotor F17R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 563.
[123] Em outro aspecto, é fornecido no presente documento um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende: (a) uma sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210, que compreende genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R parciais e que compreende uma deleção no gene B8R; (b) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo que se liga especificamente a CTLA-4, em que a primeira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 214, e em que a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a primeira sequência de nucleotídeos e o primeiro transgene é inserido entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais na SEQ ID NO: 210; (c) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12, em que a segunda sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 215, e em que a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a segunda sequência de nucleotídeos e o segundo transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R; e (d) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L, em que a terceira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 216, em que a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a terceira sequência de nucleotídeos e o terceiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R, e em que o terceiro transgene está a jusante do segundo transgene; em que o ácido nucleico compreende adicionalmente: (i) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor H5R; (ii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos é um F17R promotor; e (iii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R ou um promotor B19R.
Em modalidades específicas, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R e um promotor B19R.
Em modalidades específicas, o promotor B8R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 564 e o promotor B19R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 565. Em modalidades específicas, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor inicial H5R ou um promotor tardio H5R. Em modalidades específicas, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor inicial H5R e um promotor tardio H5R. Em modalidades específicas, o promotor inicial H5R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 553 e o promotor tardio H5R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 554. Em modalidades específicas, a sequência de nucleotídeos do promotor F17R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 563.
[124] Em outro aspecto, é fornecido no presente documento um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende: (a) uma sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210, que compreende genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R parciais e que compreende uma deleção no gene B8R; (b) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo que se liga especificamente a CTLA-4, em que a primeira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 214, e em que a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a primeira sequência de nucleotídeos e o primeiro transgene é inserido entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais na SEQ ID NO: 210; (c) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12, em que a segunda sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 215, e em que a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a segunda sequência de nucleotídeos e o segundo transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R; e (d) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L, em que a terceira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 216, em que a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a terceira sequência de nucleotídeos e o terceiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R, e em que o terceiro transgene está a montante do segundo transgene; em que o ácido nucleico compreende adicionalmente: (i) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor H5R; (ii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos é um F17R promotor; e (iii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R ou um promotor B19R. Em modalidades específicas, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R e um promotor B19R. Em modalidades específicas, o promotor B8R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 564 e o promotor B19R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 565. Em modalidades específicas, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor inicial H5R ou um promotor tardio H5R. Em modalidades específicas, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor inicial H5R e um promotor tardio H5R. Em modalidades específicas, o promotor inicial H5R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 553 e o promotor tardio H5R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 554. Em modalidades específicas, a sequência de nucleotídeos do promotor F17R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 563.
[125] Em outro aspecto, é fornecido no presente documento um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende: (a) uma sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210, que compreende genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R parciais e que compreende uma deleção no gene B8R; (b) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo que se liga especificamente a CTLA-4, em que a primeira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 214, e em que a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a primeira sequência de nucleotídeos e o primeiro transgene é inserido entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais na SEQ ID NO: 210; (c) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12, em que a segunda sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 215, e em que a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a segunda sequência de nucleotídeos e o segundo transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R; e (d) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L, em que a terceira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 216, em que a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a terceira sequência de nucleotídeos e o terceiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R, e em que o terceiro transgene está a jusante do segundo transgene; em que o ácido nucleico compreende adicionalmente: (i) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor H5R; (ii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos é um F17R promotor; e (iii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R e um promotor B19R.
Em modalidades específicas, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R e um promotor B19R.
Em modalidades específicas, o promotor B8R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 564 e o promotor B19R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 565. Em modalidades específicas, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor inicial H5R ou um promotor tardio H5R. Em modalidades específicas, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor inicial H5R e um promotor tardio H5R. Em modalidades específicas, o promotor inicial H5R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 553 e o promotor tardio H5R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 554. Em modalidades específicas, a sequência de nucleotídeos do promotor F17R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 563.
[126] Em outro aspecto, é fornecido no presente documento um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende: (a) uma sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210, que compreende genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R parciais e que compreende uma deleção no gene B8R; (b) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo que se liga especificamente a CTLA-4, em que a primeira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 214, e em que a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a primeira sequência de nucleotídeos e o primeiro transgene é inserido entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais na SEQ ID NO: 210; (c) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12, em que a segunda sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 215, e em que a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a segunda sequência de nucleotídeos e o segundo transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R; e (d) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L, em que a terceira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 216, em que a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a terceira sequência de nucleotídeos e o terceiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R, e em que o terceiro transgene está a montante do segundo transgene; em que o ácido nucleico compreende adicionalmente: (i) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor H5R; (ii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos é um promotor tardio que compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561; e (iii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor E3L. Em modalidades específicas, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor inicial H5R ou um promotor tardio H5R. Em modalidades específicas, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor inicial H5R e um promotor tardio H5R. Em modalidades específicas, o promotor inicial H5R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 553 e o promotor tardio H5R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO:
554. Em modalidades específicas, a sequência de nucleotídeos do promotor E3L compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 567.
[127] Em outro aspecto, é fornecido no presente documento um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende: (a) uma sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210, que compreende genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R parciais e que compreende uma deleção no gene B8R; (b) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo que se liga especificamente a CTLA-4, em que a primeira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 214, e em que a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a primeira sequência de nucleotídeos e o primeiro transgene é inserido entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais na SEQ ID NO: 210; (c) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12, em que a segunda sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 215, e em que a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a segunda sequência de nucleotídeos e o segundo transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R; e (d) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L, em que a terceira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 216, em que a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a terceira sequência de nucleotídeos e o terceiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R, e em que o terceiro transgene está a jusante do segundo transgene; em que o ácido nucleico compreende adicionalmente: (i) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor H5R; (ii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos é um promotor tardio que compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561; e (iii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor E3L. Em modalidades específicas, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor inicial H5R ou um promotor tardio H5R. Em modalidades específicas, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor inicial H5R e um promotor tardio H5R. Em modalidades específicas, o promotor inicial H5R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 553 e o promotor tardio H5R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO:
554. Em modalidades específicas, a sequência de nucleotídeos do promotor E3L compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 567.
[128] Em outro aspecto, é fornecido no presente documento um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende: (a) uma sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210, que compreende genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R parciais e que compreende uma deleção no gene B8R; (b) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo que se liga especificamente a CTLA-4, em que a primeira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 214, e em que a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a primeira sequência de nucleotídeos e o primeiro transgene é inserido entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais na SEQ ID NO: 210; (c) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12, em que a segunda sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 215, e em que a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a segunda sequência de nucleotídeos e o segundo transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R; e (d) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L, em que a terceira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 216, em que a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a terceira sequência de nucleotídeos e o terceiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R, e em que o terceiro transgene está a montante do segundo transgene; em que o ácido nucleico compreende adicionalmente: (i) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor H5R; (ii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos é um promotor tardio que compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561; e (iii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor E3L. Em modalidades específicas, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor inicial H5R ou um promotor tardio H5R. Em modalidades específicas, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor inicial H5R e um promotor tardio H5R. Em modalidades específicas, o promotor inicial H5R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 553 e o promotor tardio H5R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO:
554. Em modalidades específicas, a sequência de nucleotídeos do promotor E3L compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 567.
[129] Em outro aspecto, é fornecido no presente documento um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende: (a) uma sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210, que compreende genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R parciais e que compreende uma deleção no gene B8R; (b) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo que se liga especificamente a CTLA-4, em que a primeira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 214, e em que a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a primeira sequência de nucleotídeos e o primeiro transgene é inserido entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais na SEQ ID NO: 210; (c) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12, em que a segunda sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 215, e em que a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a segunda sequência de nucleotídeos e o segundo transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R; e (d) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L, em que a terceira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 216, em que a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a terceira sequência de nucleotídeos e o terceiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R, e em que o terceiro transgene está a jusante do segundo transgene; em que o ácido nucleico compreende adicionalmente: (i) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor H5R; (ii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos é um promotor tardio que compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561; e (iii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor E3L. Em modalidades específicas, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor inicial H5R ou um promotor tardio H5R. Em modalidades específicas, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor inicial H5R e um promotor tardio H5R. Em modalidades específicas, o promotor inicial H5R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 553 e o promotor tardio H5R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO:
554. Em modalidades específicas, a sequência de nucleotídeos do promotor E3L compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 567.
[130] Em outro aspecto, é fornecido no presente documento um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende: (a) uma sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210, que compreende genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R parciais e que compreende uma deleção no gene B8R; (b) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo que se liga especificamente a CTLA-4, em que a primeira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 214, e em que a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a primeira sequência de nucleotídeos e o primeiro transgene é inserido entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais na SEQ ID NO: 210; (c) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12, em que a segunda sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 215, e em que a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a segunda sequência de nucleotídeos e o segundo transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R; e (d) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L, em que a terceira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 216, em que a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a terceira sequência de nucleotídeos e o terceiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R, e em que o terceiro transgene está a montante do segundo transgene; em que o ácido nucleico compreende adicionalmente: (i) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor pS; (ii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos é um F17R promotor; e (iii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor E3L. Em modalidades específicas, a sequência de nucleotídeos do promotor pS compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 555, SEQ ID NO: 556 ou SEQ ID NO: 557. Em modalidades específicas, a sequência de nucleotídeos do promotor F17R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 563. Em modalidades específicas, a sequência de nucleotídeos do promotor E3L compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 567.
[131] Em outro aspecto, é fornecido no presente documento um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende: (a) uma sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210, que compreende genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R parciais e que compreende uma deleção no gene B8R; (b) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo que se liga especificamente a CTLA-4, em que a primeira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 214, e em que a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a primeira sequência de nucleotídeos e o primeiro transgene é inserido entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais na SEQ ID NO: 210; (c) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12, em que a segunda sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 215, e em que a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a segunda sequência de nucleotídeos e o segundo transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R; e (d) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L, em que a terceira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 216, em que a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a terceira sequência de nucleotídeos e o terceiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R, e em que o terceiro transgene está a jusante do segundo transgene; em que o ácido nucleico compreende adicionalmente: (i) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor pS; (ii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos é um F17R promotor; e (iii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor E3L.
Em modalidades específicas, a sequência de nucleotídeos do promotor pS compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 555, SEQ ID NO: 556 ou SEQ ID NO: 557. Em modalidades específicas, a sequência de nucleotídeos do promotor F17R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 563. Em modalidades específicas, a sequência de nucleotídeos do promotor E3L compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 567.
[132] Em outro aspecto, é fornecido no presente documento um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende: (a) uma sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210, que compreende genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R parciais e que compreende uma deleção no gene B8R; (b) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo que se liga especificamente a CTLA-4, em que a primeira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 214, e em que a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a primeira sequência de nucleotídeos e o primeiro transgene é inserido entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais na SEQ ID NO: 210; (c) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12, em que a segunda sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 215, e em que a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a segunda sequência de nucleotídeos e o segundo transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R; e (d) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L, em que a terceira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 216, em que a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a terceira sequência de nucleotídeos e o terceiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R, e em que o terceiro transgene está a montante do segundo transgene; em que o ácido nucleico compreende adicionalmente: (i) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor pS; (ii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos é um F17R promotor; e (iii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor E3L. Em modalidades específicas, a sequência de nucleotídeos do promotor pS compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 555, SEQ ID NO: 556 ou SEQ ID NO: 557. Em modalidades específicas, a sequência de nucleotídeos do promotor F17R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 563. Em modalidades específicas, a sequência de nucleotídeos do promotor E3L compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 567.
[133] Em outro aspecto, é fornecido no presente documento um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende: (a) uma sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210, que compreende genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R parciais e que compreende uma deleção no gene B8R; (b) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo que se liga especificamente a CTLA-4, em que a primeira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 214, e em que a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a primeira sequência de nucleotídeos e o primeiro transgene é inserido entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais na SEQ ID NO: 210; (c) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12, em que a segunda sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 215, e em que a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a segunda sequência de nucleotídeos e o segundo transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R; e (d) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L, em que a terceira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 216, em que a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a terceira sequência de nucleotídeos e o terceiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R, e em que o terceiro transgene está a jusante do segundo transgene; em que o ácido nucleico compreende adicionalmente: (i) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor pS; (ii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos é um F17R promotor; e (iii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor E3L. Em modalidades específicas, a sequência de nucleotídeos do promotor pS compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 555, SEQ ID NO: 556 ou SEQ ID NO: 557. Em modalidades específicas, a sequência de nucleotídeos do promotor F17R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 563. Em modalidades específicas, a sequência de nucleotídeos do promotor E3L compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 567.
[134] Em algumas modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende o primeiro transgene, o primeiro transgene é inserido entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais. Em outras modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende o primeiro transgene, o primeiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R. Em outras modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende o primeiro transgene, o primeiro transgene é inserido entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais.
[135] Em algumas modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende o segundo transgene, o segundo transgene é inserido entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais. Em outras modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende o segundo transgene, o segundo transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R. Em outras modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende o segundo transgene, o segundo transgene é inserido entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais.
[136] Em algumas modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende o terceiro transgene, o terceiro transgene é inserido entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais. Em outras modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende o terceiro transgene, o terceiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R. Em outras modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende o terceiro transgene, o terceiro transgene é inserido entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais.
[137] Em algumas modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende o primeiro transgene e o segundo transgene, o primeiro transgene e o segundo transgene são inseridos entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais. Em outras modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende o primeiro transgene e o segundo transgene, o primeiro transgene e o segundo transgene são inseridos no lócus da deleção no gene B8R. Em outras modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende o primeiro transgene e o segundo transgene, o primeiro transgene e o segundo transgene são inseridos entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais.
[138] Em algumas modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende o primeiro transgene e o terceiro transgene, o primeiro transgene e o terceiro transgene são inseridos entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais. Em outras modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende o primeiro transgene e o terceiro transgene, o primeiro transgene e o terceiro transgene são inseridos no lócus da deleção no gene B8R. Em outras modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende o primeiro transgene e o terceiro transgene, o primeiro transgene e o terceiro transgene são inseridos entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais.
[139] Em algumas modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende o segundo transgene e o terceiro transgene, o segundo transgene e o terceiro transgene são inseridos entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais. Em outras modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende o segundo transgene e o terceiro transgene, o segundo transgene e o terceiro transgene são inseridos no lócus da deleção no gene B8R. Em outras modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende o segundo transgene e o terceiro transgene, o segundo transgene e o terceiro transgene são inseridos entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais.
[140] Em algumas modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende o primeiro transgene e o segundo transgene, o primeiro transgene é inserido entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais, e o segundo transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R. Em outras modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende o primeiro transgene e o segundo transgene, o segundo transgene é inserido entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais, e o primeiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R. Em outras modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende o primeiro transgene e o segundo transgene, o primeiro transgene é inserido entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais, e o segundo transgene é inserido entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais. Em outras modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende o primeiro transgene e o segundo transgene, o segundo transgene é inserido entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais, e o primeiro transgene é inserido entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais. Em outras modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende o primeiro transgene e o segundo transgene, o primeiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R, e o segundo transgene é inserido entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais. Em outras modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende o primeiro transgene e o segundo transgene, o segundo transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R e o primeiro transgene é inserido entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais.
[141] Em algumas modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende o primeiro transgene e o terceiro transgene, o primeiro transgene é inserido entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais e o terceiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R. Em outras modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende o primeiro transgene e o terceiro transgene, o terceiro transgene é inserido entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais e o primeiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R. Em outras modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende o primeiro transgene e o terceiro transgene, o primeiro transgene é inserido entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais e o terceiro transgene é inserido entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais. Em outras modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende o primeiro transgene e o terceiro transgene, o terceiro transgene é inserido entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais, e o primeiro transgene é inserido entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais. Em outras modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende o primeiro transgene e o terceiro transgene, o primeiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R, e o terceiro transgene é inserido entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais. Em outras modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende o primeiro transgene e o terceiro transgene, o terceiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R, e o primeiro transgene é inserido entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais.
[142] Em algumas modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende o segundo transgene e o terceiro transgene, o segundo transgene é inserido entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais, e o terceiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R. Em outras modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende o segundo transgene e o terceiro transgene, o terceiro transgene é inserido entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais, e o segundo transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R. Em outras modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende o segundo transgene e o terceiro transgene, o segundo transgene é inserido entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais, e o terceiro transgene é inserido entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais. Em outras modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende o segundo transgene e o terceiro transgene, o terceiro transgene é inserido entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais, e o segundo transgene é inserido entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais. Em outras modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende o segundo transgene e o terceiro transgene, o segundo transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R, e o terceiro transgene é inserido entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais. Em outras modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende o segundo transgene e o terceiro transgene, o terceiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R, e o segundo transgene é inserido entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais.
[143] Em algumas modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende o primeiro transgene, o segundo transgene e o terceiro transgene, o primeiro transgene, o segundo transgene e o terceiro transgene são inseridos entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais. Em outras modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende o primeiro transgene, o segundo transgene e o terceiro transgene, o primeiro transgene, o segundo transgene e o terceiro transgene são inseridos no lócus da deleção no gene B8R. Em outras modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende o primeiro transgene, o segundo transgene e o terceiro transgene, o primeiro transgene, o segundo transgene e o terceiro transgene são inseridos entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais.
[144] Em outras modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende o primeiro transgene, o segundo transgene e o terceiro transgene, o primeiro transgene é inserido entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais, e o segundo transgene e o terceiro transgene são inseridos no lócus da deleção no gene B8R. Em outras modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende o primeiro transgene, o segundo transgene e o terceiro transgene, o segundo transgene é inserido entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais, e o primeiro transgene e o terceiro transgene são inseridos no lócus da deleção no gene B8R. Em outras modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende o primeiro transgene, o segundo transgene e o terceiro transgene, o terceiro transgene é inserido entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais, e o primeiro transgene e o segundo transgene são inseridos no lócus da deleção no gene B8R. Em outras modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende o primeiro transgene, o segundo transgene e o terceiro transgene, o primeiro transgene e o segundo transgene são inseridos entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais, e o terceiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R. Em outras modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende o primeiro transgene, o segundo transgene e o terceiro transgene, o primeiro transgene e o terceiro transgene são inseridos entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais, e o segundo transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R. Em outras modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende o primeiro transgene, o segundo transgene e o terceiro transgene, o segundo transgene e o terceiro transgene são inseridos entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais, e o primeiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R.
Em outras modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende o primeiro transgene, o segundo transgene e o terceiro transgene, o primeiro transgene é inserido entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais, e o segundo transgene e o terceiro transgene são inseridos entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais.
Em outras modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende o primeiro transgene, o segundo transgene e o terceiro transgene, o segundo transgene é inserido entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais, e o primeiro transgene e o terceiro transgene são inseridos entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais.
Em outras modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende o primeiro transgene, o segundo transgene e o terceiro transgene, o terceiro transgene é inserido entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais, e o primeiro transgene e o segundo transgene são inseridos entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais.
Em outras modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende o primeiro transgene, o segundo transgene e o terceiro transgene, o primeiro transgene e o segundo transgene são inseridos entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais e o terceiro transgene é inserido entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais.
Em outras modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende o primeiro transgene, o segundo transgene e o terceiro transgene, o primeiro transgene e o terceiro transgene são inseridos entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais, e o segundo transgene é inserido entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais.
Em outras modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende o primeiro transgene, o segundo transgene e o terceiro transgene, o segundo transgene e o terceiro transgene são inseridos entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais, e o primeiro transgene é inserido entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais.
Em outras modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende o primeiro transgene, o segundo transgene e o terceiro transgene, o primeiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R, e o segundo transgene e o terceiro transgene são inseridos entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais. Em outras modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende o primeiro transgene, o segundo transgene e o terceiro transgene, o segundo transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R e o primeiro transgene e o terceiro transgene são inseridos entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais. Em outras modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende o primeiro transgene, o segundo transgene e o terceiro transgene, o terceiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R, e o primeiro transgene e o segundo transgene são inseridos entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais. Em outras modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende o primeiro transgene, o segundo transgene e o terceiro transgene, o primeiro transgene e o segundo transgene são inseridos no lócus da deleção no gene B8R e o terceiro transgene é inserido entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais. Em outras modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende o primeiro transgene, o segundo transgene e o terceiro transgene, o primeiro transgene e o terceiro transgene são inseridos no lócus da deleção no gene B8R e o segundo transgene é inserido entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais. Em outras modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende o primeiro transgene, o segundo transgene e o terceiro transgene, o segundo transgene e o terceiro transgene são inseridos no lócus da deleção no gene B8R e o primeiro transgene é inserido entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais.
[145] Em outras modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende o primeiro transgene, o segundo transgene e o terceiro transgene, o primeiro transgene é inserido entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais, o segundo transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R e o terceiro transgene é inserido entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais. Em outras modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende o primeiro transgene, o segundo transgene e o terceiro transgene, o primeiro transgene é inserido entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais, o terceiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R e o segundo transgene é inserido entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais. Em outras modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende o primeiro transgene, o segundo transgene e o terceiro transgene, o segundo transgene é inserido entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais, o primeiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R e o terceiro transgene é inserido entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais. Em outras modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende o primeiro transgene, o segundo transgene e o terceiro transgene, o segundo transgene é inserido entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais, o terceiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R e o primeiro transgene é inserido entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais. Em outras modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende o primeiro transgene, o segundo transgene e o terceiro transgene, o terceiro transgene é inserido entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais, o primeiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R e o segundo transgene é inserido entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais. Em outras modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende o primeiro transgene, o segundo transgene e o terceiro transgene, o terceiro transgene é inserido entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais, o segundo transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R e o primeiro transgene é inserido entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais.
[146] Em várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 210, os genes vaccinia C2L e F3L parciais são genes vaccinia C2L e F3L parciais na SEQ ID NO: 210. Em várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 210, os genes vaccinia B14R e B29R parciais são genes vaccinia B14R e B29R parciais na SEQ ID NO: 210.
[147] Em um aspecto, é fornecido no presente documento um vírus que compreende o ácido nucleico descrito no presente documento.
[148] Em um aspecto, são fornecidas linhagens celulares empacotadoras que compreendem ácidos nucleicos ou vírus divulgados no presente documento.
[149] Em um aspecto, são fornecidas no presente documento composições farmacêuticas que compreendem um vírus divulgado no presente documento e um carreador fisiologicamente aceitável.
[150] Em um aspecto, são fornecidos métodos para tratar câncer em um paciente mamífero, em que o dito método compreende administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz de um vírus conforme divulgado no presente documento ao dito paciente. Em outro aspecto, são fornecidos métodos para tratar câncer em um paciente mamífero, em que o dito método compreende administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma composição farmacêutica conforme divulgado no presente documento ao dito paciente. Em algumas modalidades, o paciente mamífero é um paciente humano.
[151] Em algumas modalidades, o vírus é usado como um iniciador em um tratamento de iniciador:reforço. Em algumas modalidades, o vírus é usado como um reforço em um tratamento de iniciador:reforço.
[152] Em algumas modalidades, o paciente mamífero tem câncer. Por exemplo, em algumas modalidades, o câncer é selecionado do grupo que consiste em leucemia, linfoma, câncer de fígado, câncer ósseo, câncer de pulmão, câncer de cérebro, câncer de bexiga, câncer gastrointestinal, câncer de mama, câncer cardíaco, câncer cervical, câncer uterino, câncer de cabeça e pescoço, câncer de vesícula biliar, câncer laríngeo, câncer de lábio e cavidade oral, câncer ocular, melanoma, câncer pancreático, câncer de próstata, câncer colorretal, câncer testicular e câncer de garganta.
[153] Em algumas modalidades, o câncer é selecionado do grupo que consiste em leucemia linfoblástica aguda (ALL), leucemia mieloide aguda (AML), leucemia linfocítica crônica (CLL), leucemia mieloide crônica (CML), carcinoma adrenocortical, linfoma relacionado a AIDS, linfoma primário de SNC, câncer anal, câncer de apêndice, astrocitoma, tumor teratoide/rabdoide atípico, carcinoma de célula basal, câncer de ducto biliar, câncer extra-hepático, família de sarcoma de Ewing, osteossarcoma e histiocitoma fibroso maligno, tumores embrionários de sistema nervoso central, tumores de célula germinativa de sistema nervoso central, craniofaringioma, ependimoma, tumores brônquicos, linfoma de Burkitt, tumor carcinoide, linfoma primário, cordoma, neoplasmas mieloproliferativos crônicos, câncer de cólon, câncer de ducto biliar extra-hepático, carcinoma ductal in situ (DCIS), câncer de endométrio, ependimoma, câncer esofágico, estesioneuroblastoma, tumor de célula germinativa extracrania, tumor de célula germinativa extragonadal, câncer de trompa de falópio, histiocitoma fibroso de osso, tumor carcinoide gastrointestinal, tumores estromais gastrointestinais (GIST), tumor de célula germinativa testicular, doença trofoblástica gestacional, glioma, glioma de tronco encefálico infantil, leucemia de células pilosas, câncer hepatocelular, histiocitose de células de Langerhans, linfoma de Hodgkin, câncer hipofaríngeo, tumores de célula de ilhota, tumores neuroendócrinos pancreáticos, tumor de Wilms e outros tumores renais infantis, histiocitose de células de Langerhans, câncer de pulmão de células pequenas, linfoma cutâneo de células T, melanoma intraocular, carcinoma de células de Merkel, mesotelioma, câncer metastático de pescoço de células escamosas, carcinoma de trato intermediário, síndromes de neoplasia endócrina múltipla, mieloma múltiplo/neoplasma de célula plasmática, síndromes mielodisplásicas, câncer de cavidade nasal e seio paranasal, câncer de nasofaringe, neuroblastoma, linfoma não Hodgkin (NHL), câncer de pulmão de células não pequenas (NSCLC), câncer de ovário epitelial, câncer de ovário de célula germinativa, câncer de ovário de baixo potencial maligno, tumores neuroendócrinos pancreáticos, papilomatose, paraganglioma, seio paranasal e câncer de cavidade nasal, câncer de paratireoide, câncer de pênis, câncer faríngeo, feocromocitoma, tumor pituitário, blastoma pleuropulmonar, câncer peritoneal primário, câncer retal, retinoblastoma, rabdomiossarcoma, câncer de glândula salivar, sarcoma de Kaposi, rabdomiossarcoma, síndrome de Sézary, câncer de intestino delgado, sarcoma de tecido mole, câncer de garganta, carcinoma timoma e tímico, câncer de tireoide, câncer de célula transitória da pelve renal e ureter, câncer de uretra, câncer uterino de endométrio, sarcoma uterino, câncer vaginal, câncer vulvar e macroglobulinemia de Waldenström.
[154] Em algumas modalidades, os métodos fornecidos compreendem adicionalmente administrar ao dito paciente um inibidor de ponto de verificação imune. Em algumas modalidades, o inibidor de ponto de verificação imune é selecionado do grupo que consiste em ligante OX40, ligante ICOS, anticorpo anti- CD47 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, anticorpo anti-CD40/CD40L ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, anticorpo anti-Lag3 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, anticorpo anti-CTLA-4 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, anticorpo anti-PD-L1 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, anticorpo anti-PD1 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, e anticorpo anti-Tim-3 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo. Em algumas modalidades, o inibidor de ponto de verificação imune é um anticorpo anti-PD1 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo ou um anticorpo anti-CTLA-4 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo. Em algumas modalidades, o inibidor de ponto de verificação imune é um anticorpo anti-PD1 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo. Em algumas modalidades, o inibidor de ponto de verificação imune é um anticorpo anti-PD-L1 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo. Em algumas modalidades, o inibidor de ponto de verificação imune é um anticorpo anti-PD1 ou anti-PD-L1 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo. Em algumas modalidades, o inibidor de ponto de verificação imune é um anticorpo anti- CTLA-4 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo.
[155] Em algumas modalidades, os métodos fornecidos compreendem administrar ao dito paciente uma interleucina.
[156] Em algumas modalidades, a dita interleucina é selecionada do grupo que consiste em IL-1 alfa, IL-1 beta, IL-2, IL-4, IL-7, IL-10, p35 de IL-12, p40 de IL- 12, p70 de IL-12, IL-15, IL-18, IL-21 e IL-23. Em algumas modalidades, a interleucina é selecionada do grupo que consiste em p35 de IL-12, p40 de IL-12 e p70 de IL-12. Em algumas modalidades, a interleucina é ligada à membrana.
[157] Em algumas modalidades, o método compreende adicionalmente administrar ao dito paciente um interferon. Em algumas modalidades, o interferon é selecionado do grupo que consiste em IFN-alfa, IFN-beta, IFN-delta, IFN-épsilon,
IFN-tau, IFN-ômega, IFN-zeta e IFN-gama.
[158] Em algumas modalidades, são fornecidos métodos compreendem adicionalmente administrar ao dito paciente uma citocina. Em algumas modalidades, a citocina é uma proteína de membro de superfamília de TNF. Em algumas modalidades, a proteína de membro de superfamília de TNF é selecionada do grupo que consiste em TRAIL, ligante Fas, LIGHT (TNFSF-14), TNF-alfa e ligante 4-1BB. Em algumas modalidades, a citocina é selecionada do grupo que consiste em GM-CSF, ligante Flt3, ligante CD40, TGF-beta, VEGF-R2 e cKit. Em algumas modalidades, a citocina é ligante Flt3.
[159] Em um aspecto, são fornecidos kits que compreendem um ácido nucleico ou vírus conforme divulgado no presente documento e um inserto de pacote que instrui um usuário do dito kit a expressar o dito ácido nucleico ou o dito vírus em uma célula hospedeira.
[160] Em um aspecto, são fornecidos kits que compreendem um vírus conforme divulgado no presente documento e um inserto de pacote que instrui um usuário para administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz do dito vírus a um paciente mamífero que tem câncer, assim tratando o dito câncer. Em algumas modalidades, o paciente mamífero é um paciente humano.
3.1. DEFINIÇÕES
[161] Conforme usado no presente documento, o termo “cerca de” se refere a um valor que está no máximo 10% acima ou abaixo do valor sendo descrito. Por exemplo, o termo “cerca de 5 nM” indica uma faixa de 4,5 nM a 5,5 nM.
[162] Conforme usado no presente documento, o termo “anticorpo” (Ab) se refere a uma molécula de imunoglobulina que se liga especificamente a, ou é imunologicamente reativa com, um antígeno particular, e inclui formas policlonais, monoclonais, geneticamente manipuladas e formas modificadas de outro modo de anticorpos, incluindo, mas sem anticorpos quiméricos, anticorpos humanizados, anticorpos heteroconjugados (por exemplo, anticorpos bi, tri e quad-específicos, diacorpos, triacorpos e tetracorpos), e fragmentos de ligação ao antígeno de anticorpos, incluindo, por exemplo, fragmentos Fab’, F(ab’)2, Fab, Fv, rIgG e scFv. Além disso, a menos que indicado de outro modo, o termo “anticorpo monoclonal” (mAb) é destinado a incluir ambas as moléculas intactas, assim como, fragmentos de anticorpo (como, por exemplo, fragmentos Fab e F(ab’)2) que têm capacidade para se ligar especificamente a uma proteína alvo. Os fragmentos Fab e F(ab’)2 não têm o fragmento Fc de um anticorpo intacto, são limpos mais rapidamente da circulação do animal, e podem ter menos ligação de tecido não específica do que um anticorpo intacto (consultar Wahl et al., J. Nucl. Med. 24:31 6, 1 983; incorporado ao presente documento a título de referência).
[163] O termo “fragmento de ligação ao antígeno”, conforme usado no presente documento, se refere a um ou mais fragmentos de um anticorpo que retém a capacidade de se ligar especificamente a um antígeno alvo. A função de ligação ao antígeno de um anticorpo pode ser realizada por fragmentos de um anticorpo de comprimento completo. Os fragmentos de anticorpo podem ser um Fab, F(ab’)2, scFv, SMIP, diacorpo, um triacorpo, um aficorpo, um nanocorpo, um aptâmero, ou um anticorpo de domínio. Exemplos de fragmentos de ligação abrangidos do termo “fragmento de ligação ao antígeno” de um anticorpo incluem, mas sem limitação: (i) um fragmento Fab, um fragmento monovalente que consiste nos domínios VL, VH, CL e CH1; (ii) um fragmento F(ab’)2, um fragmento bivalente que compreende dois fragmentos Fab ligados por uma ponte de dissulfeto na região de articulação; (iii) um fragmento Fd que consiste nos domínios VH e CH1; (iv) um fragmento Fv que consiste nos domínios VL e VH de um braço único de um anticorpo, (v) um dAb incluindo domínios VH e VL; (vi) um fragmento dAb (Ward et al., Nature 341 :544- 546, 1 989), que consiste em um domínio VH; (vii) um dAb que consiste em um domínio VH ou VL; (viii) uma região determinante de complementariedade (CDR) isolada; e (ix) uma combinação de duas ou mais CDRs isoladas que podem ser opcionalmente unidas por um ligante sintético. Adicionalmente, embora os dois domínios do fragmento Fv, VL e VH, sejam codificados por genes separados, os mesmos podem ser unidos, usando métodos recombinantes, por um ligante que possibilita que os mesmos sejam produzidos como uma cadeia de proteína única na qual as regiões VL e VH se pareiam para formar moléculas monovalentes (conhecidas como Fv de cadeia única (scFv); consultar, por exemplo, Bird et al., Science 242:423-426, 1988, e Huston et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879- 5883, 1988). Esses fragmentos de anticorpo podem ser obtidos com o uso de técnicas convencionais conhecidas por aqueles versados na técnica, e os fragmentos podem ser triados por utilidade da mesma maneira que os anticorpos intactos. Os fragmentos de ligação ao antígeno podem ser produzidos por técnicas de DNA recombinantes, clivagem enzimática ou química de imunoglobulinas intactas, ou, em algumas modalidades, por procedimentos de síntese de peptídeo químico conhecidos na técnica.
[164] Conforme usado no presente documento, o termo “anticorpos biespecíficos” se refere anticorpos monoclonais, frequentemente humanos ou humanizados que têm especificidades de ligação por pelo menos dois antígenos diferentes.
[165] Conforme usado no presente documento, os termos “célula,” “linhagem celular” e “cultura de célula” podem ser usados intercambiavelmente. Todos esses termos incluem sua progênie, que é quaisquer e todas as gerações subsequentes. É entendido que toda progênie pode não ser idêntica devido às mutações deliberadas ou inadvertidas.
[166] Conforme usado no presente documento, o termo anticorpo “quimérico” se refere a um anticorpo que tem sequências variáveis derivadas de uma imunoglobulina de um organismo de fonte, como rato ou camundongo, e regiões constantes derivadas de uma imunoglobulina de um organismo diferente (por exemplo, um ser humano). Métodos para produzir anticorpos quiméricos são conhecidos na técnica. Consultar, por exemplo, Morrison, 1985, Science 229(4719): 1202-7; Oi et al., 1986, BioTechniques 4:214-221; Gillies et al., 1985, J. Immunol. Methods 125:191-202; Patentes US nº 5.807.715; 4.816.567; e
4.816.397; incorporados ao presente documento a título de referência.
[167] Conforme usado no presente documento, o termo “região determinante de complementariedade” (CDR) se refere a uma região hipervariável encontrada tanto nos domínios variáveis de cadeia leve quanto na cadeia pesada. As porções mais altamente conservadas de domínios variáveis são chamadas regiões de estrutura (FRs). Conforme observado na técnica, as posições de aminoácido que delineiam uma região hipervariável de um anticorpo podem variar, dependendo do contexto e das várias definições conhecidas na técnica. Algumas posições em um domínio variável podem ser vistas como posições hipervariáveis híbridas, visto que é possível considerar que essas posições estejam dentro de uma região hipervariável sob um conjunto de critérios, enquanto são consideradas fora de uma região hipervariável sob um conjunto de critérios diferente. Uma ou mais dessas posições também podem ser encontradas em regiões hipervariáveis estendidas. Os domínios variáveis de cadeias pesada e leve nativas compreendem, cada um, quatro regiões de estrutura que adotam primariamente uma configuração de lâmina β, conectadas por três CDRs, que formam alças que conectam e, em alguns casos, formam parte de, a estrutura de lâmina β. As CDRs em cada cadeia são mantidas juntas em proximidade pelas regiões FR na ordem FR1-CDR1-FR2- CDR2-FR3-CDR3-FR4 e, com as CDRs das outras cadeias de anticorpo, contribuem para a formação do sítio de ligação alvo de anticorpos (consultar Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest (National Institute of Health, Bethesda, Md. 1987; incorporado ao presente documento, a título de referência).
[168] Conforme usado no presente documento, a numeração de resíduos de aminoácido da imunoglobulina é feita de acordo com o sistema de numeração de resíduo de aminoácido da imunoglobulina de Kabat et al., a menos que indicado de outro modo.
[169] Conforme usado no presente documento, os termos “mutação conservativa,” “substituição conservativa,” ou “substituição de aminoácido conservativa” se referem a uma substituição de um ou mais aminoácidos para um ou mais aminoácidos diferentes que exibem propriedades físico-químicas similares, como polaridade, carga eletrostática e volume estérico. Essas propriedades são resumidas para cada um dos vinte aminoácidos de ocorrência natural na Tabela 1 abaixo. A partir dessa tabela, é observado que as famílias de aminoácidos conservativas incluem (i) G, A, V, L e I; (ii) D e E; (iii) C, S e T; (iv) H, K e R; (v) N e Q; e (vi) F, Y e W. Uma mutação ou substituição conservativa é, portanto, uma que substitui um aminoácido por um membro da mesma família de aminoácidos (por exemplo, uma substituição de Ser por Thr ou Lys por Arg). TABELA 1. PROPRIEDADES FÍSICO-QUÍMICAS REPRESENTATIVAS DE
AMINOÁCIDOS DE OCORRÊNCIA NATURAL
Polaridad Caráter Códig Códig e de eletrostático em Volume Aminoácido o de 3 o de 1 Cadeia pH fisiológico Estérico† Letras Letra Lateral (7,4) Alanina Ala A não polar neutro pequeno Arginina Arg R polar catiônico grande intermediári Asparagina Asn N polar neutro o intermediári Ácido aspártico Asp D polar aniônico o intermediári Cisteína Cys C não polar neutro o intermediári Ácido glutâmico Glu E polar aniônico o intermediári Glutamina Gln Q polar neutro o Glicina Gly G não polar neutro pequeno Ambas as formas neutra e catiônica Histidina His H polar grande em equilíbrio em pH 7,4 Isoleucina Ile I não polar neutro grande Leucina Leu L não polar neutro grande Lisina Lys K polar catiônico grande Metionina Met M não polar neutro grande Fenilalanina Phe F não polar neutro grande intermediári Prolina Pro P não polar neutro o Serina Ser S polar neutro pequeno intermediári Treonina Thr T polar neutro o Triptofano Trp W não polar neutro volumoso Tirosina Tyr Y polar neutro grande intermediári Valina Val V não polar neutro o †com base no volume em A3: 50-100 é pequeno, 100-150 é intermediário, 150-200 é grande, e >200 é volumoso
[170] Conforme usado no presente documento, os termos “deletar”, “deleção” e semelhantes se referem às modificações a um gene ou um elemento regulador associado ao mesmo ou operacionalmente ligado ao mesmo (por exemplo, um sítio de ligação de fator de transcrição, como um elemento promotor ou intensificador) que remove o gene ou torna o gene não funcional de outro modo. As deleções exemplificativas, conforme descrito no presente documento, incluem a remoção da totalidade de um ácido nucleico que codifica um gene de interesse, do códon inicial ao códon de terminação do gene alvo. Outros exemplos de deleções, conforme descrito no presente documento, incluem a remoção de uma porção do ácido nucleico que codifica o gene alvo (por exemplo, um ou mais códons, ou uma porção do mesmo, como uma deleção de nucleotídeo única) de modo que, mediante expressão do gene alvo parcialmente deletado, o produto (por exemplo, transcrição de RNA, produto de proteína ou RNA regulador) seja não funcional ou menos funcional do que uma forma de tipo selvagem do gene alvo. As deleções exemplificativas conforme descrito no presente documento incluem a remoção de todos ou uma porção do elemento regulador (ou elementos reguladores) associado a um gene de interesse, como todos ou uma porção dos ácidos nucleicos promotores e/ou intensificadores que regulam a expressão do gene alvo.
[171] Em modalidades específicas, o genoma de vírus vaccinia recombinante descrito nessa divulgação compreende deleções em um ou mais dos seguintes genes: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B8R, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, B20R, B21R (em ITR 3’), B22R (em ITR 3’), B23R (em ITR 3’), B24R (em ITR 3’), B25R (em ITR 3’), B26R (em ITR 3’), B27R (em ITR 3’), B28R (em ITR 3’) e B29R (em ITR 3’). Em uma modalidade específica, o genoma de vírus vaccinia recombinante descrito nessa divulgação compreende deleções nos seguintes genes: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B8R, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, e B20R; e deleções nos seguintes genes na ITR 3’: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R e B29R. Em modalidades específicas, o genoma de vírus vaccinia recombinante descrito nessa divulgação compreende deleções em um ou mais do seguintes genes: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R,
B17L, B18R, B19R, B20R, B20R, B21R (em ITR 3’), B22R (em ITR 3’), B23R (em ITR 3’), B24R (em ITR 3’), B25R (em ITR 3’), B26R (em ITR 3’), B27R (em ITR 3’), B28R (em ITR 3’) e B29R (em ITR 3’), e também compreende uma deleção no gene B8R.
[172] Em algumas modalidades, uma deleção de gene remove a sequência inteira do gene. Em outras modalidades, uma deleção de gene é uma deleção parcial, isto é, uma que remove parte da sequência do gene. Em uma modalidade, uma deleção de gene é uma deleção parcial que remove pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 90% ou pelo menos 95% da sequência do gene. Em uma modalidade, uma deleção de gene é uma deleção parcial que remove pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, ou pelo menos 90% da sequência de codificação de proteína do gene. Em outras modalidades, uma deleção de gene remove 100% da sequência do gene. Em ainda outras modalidades, uma deleção de gene remove 100% da sequência de codificação de proteína do gene. Em uma modalidade, uma deleção de gene remove pelo menos 50, pelo menos 100, pelo menos 200, pelo menos 300, pelo menos 400, pelo menos 500, pelo menos 600, pelo menos 700, pelo menos 800, pelo menos 900 ou pelo menos 1000 nucleotídeos da sequência do gene. Em outra modalidade, uma deleção de gene é uma deleção parcial que remove pelo menos 50, pelo menos 100, pelo menos 200, pelo menos 300, pelo menos 400, pelo menos 500, pelo menos 600, pelo menos 700, pelo menos 800, pelo menos 900, ou pelo menos 1000 nucleotídeos da sequência do gene. Em uma modalidade específica, uma deleção parcial em um gene resulta em um gene parcial.
[173] Conforme usado no presente documento, o termo “anticorpos derivados” se refere a anticorpos que são modificados por uma reação química de modo a clivar resíduos ou adicionar porções químicas não nativas a um anticorpo isolado. Anticorpos derivados podem ser obtidos por glicosilação, acetilação, peguilação, fosforilação, amidação, derivação por adição de grupos de proteção/bloqueio químicos conhecidos, clivagem proteolítica, ligação a um ligante celular ou outra proteína. Qualquer outro dentre uma variedade de modificações químicas pode ser executado por técnicas conhecidas, incluindo, sem limitação,
clivagem química específica, acetilação, formilação, síntese metabólica de tunicamicina, etc. com o uso de procedimentos estabelecidos. Adicionalmente, o derivado pode conter um ou mais aminoácidos não naturais, por exemplo, com o uso de tecnologia de supressão âmbar (consultar, por exemplo, Patente US nº
6.964.859; incorporado ao presente documento a título de referência).
[174] Conforme usado no presente documento, o termo “diacorpos” se refere a anticorpos bivalentes que compreendem duas cadeias polipeptídicas, em que cada cadeia polipeptídica inclui domínios VH e VL unidas por um ligante que é muito curto (por exemplo, um ligante composto de cinco aminoácidos) para permitir a associação intramolecular de domínios VH e VL na mesma cadeia peptídica. Essa configuração força cada domínio para parear com um domínio complementar em outra cadeia polipeptídica de modo a formar uma estrutura homodimérica. Consequentemente, o termo “triacorpos” se refere a anticorpos trivalentes que compreendem três cadeias peptídicas, cada um dos quais contêm um domínio VH e um domínio VL unido por um ligante que é excessivamente curto (por exemplo, um ligante composto de 1-2 aminoácidos) para permitir a associação intramolecular de domínios VH e VL na mesma cadeia peptídica. A fim de dobrar em sua estrutura nativa, peptídeos configurados dessa maneira trimerizam tipicamente de modo a posicionar os domínios VH e VL de cadeias peptídicas vizinhas espacialmente proximais entre si para permitir a dobra apropriada (consultar Holliger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:6444-48, 1993; incorporado ao presente documento a título de referência).
[175] Conforme usado no presente documento, uma “imunoglobulina de domínio variável duplo” (“DVD-Ig”) se refere a um anticorpo que combina os domínios variáveis de ligação alvo de dois anticorpos monoclonais por meio de ligantes para criar um agente único de alvejamento duplo tetravalente. (Gu et al., Meth. Enzymol., 502:25-41, 2012; incorporado a título de referência ao presente documento).
[176] Conforme usado no presente documento, o termo “endógeno” descreve uma molécula (por exemplo, um polipeptídeo, ácido nucleico ou cofator) que é encontrada naturalmente em um organismo particular (por exemplo, um ser humano) ou em uma localização particular em um organismo (por exemplo, um órgão, um tecido, ou uma célula, como uma célula humana).
[177] Conforme usado no presente documento, o termo “exógeno” descreve uma molécula (por exemplo, um polipeptídeo, ácido nucleico ou cofator) que não é encontrada naturalmente em um organismo particular (por exemplo, um ser humano) ou em uma localização particular em um organismo (por exemplo, um órgão, um tecido, ou uma célula, como uma célula humana). Os materiais exógenos incluem aqueles que são fornecidos de uma fonte externa a um organismo ou à matéria cultivada extraída dos mesmos.
[178] Conforme usado no presente documento, o termo “região de estrutura” ou “região FW” inclui resíduos de aminoácido que são adjacentes às CDRs. Os resíduos de região FW podem estar presentes em, por exemplo, anticorpos humanos, anticorpos derivados de roedor (por exemplo, anticorpos murinos), anticorpos humanizados, anticorpos primatizados, anticorpos quiméricos, fragmentos de anticorpo (por exemplo, fragmentos Fab), fragmentos de anticorpo de cadeia única (por exemplo, fragmentos scFv), domínios de anticorpo, e anticorpos biespecíficos, entre outros.
[179] Conforme usado no presente documento, o termo “anticorpos heteroespecífico” se refere anticorpos monoclonais, preferencialmente humanos ou humanizados que têm especificidades de ligação por pelo menos dois antígenos diferentes. Tradicionalmente, a produção recombinante de anticorpos heteroespecíficos tem base na coexpressão de dois pares de cadeia pesada-cadeia leve de imunoglobulina, em que as duas cadeias pesadas têm especificidades diferentes (Milstein et al., Nature 305:537, 1983). Procedimentos similares são divulgados, por exemplo, no documento nº WO 93/08829, Patentes US nº
6.210.668; 6.193.967; 6.132.992; 6.106.833; 6.060.285; 6.037.453; 6.010.902;
5.989.530; 5.959.084; 5.959.083; 5.932.448; 5.833.985; 5.821.333; 5.807.706;
5.643.759, 5.601.819; 5.582.996, 5.496.549, 4.676.980, documentos nº WO 91 /00360, WO 92/00373, EP 03089, Traunecker et al., EMBO J. 10:3655 (1991), Suresh et al., Methods in Enzymology 121 :210 (1986); incorporados ao presente documento a título de referência. Os anticorpos heteroespecíficos podem incluir mutações Fc que forçam a associação de cadeia correta em anticorpos multiespecíficos, conforme descrito por Klein et al., mAbs 4(6):653-663, 2012;
incorporado ao presente documento a título de referência.
[180] Conforme usado no presente documento, o termo “anticorpo humano” se refere a um anticorpo em que substancialmente toda parte da proteína (por exemplo, CDR, estrutura, domínios CL, CH (por exemplo, CH1, CH2, CH3), articulação, (VL, VH)) é substancialmente não imunogênica em seres humanos, apenas com mudanças de sequência ou variações menores. Um anticorpo humano pode ser produzido em uma célula humana (por exemplo, por expressão recombinante), ou por um animal não humano ou uma célula procariótica ou eucariótica que tem capacidade para expressar genes de imunoglobulina humana funcionalmente redisposta (por exemplo, cadeia pesada e/ou cadeia leve). Adicionalmente, quando um anticorpo humano é um anticorpo de cadeia única, o mesmo pode incluir um peptídeo ligante que não é encontrado em anticorpos humanos nativos. Por exemplo, um Fv pode compreender um peptídeo ligante, como dois a cerca de oito resíduos de glicina ou outro aminoácido, que conecta a região variável da cadeia pesada e a região variável da cadeia leve. Tais peptídeos ligantes são considerados como de origem humana. Os anticorpos humanos podem ser produzidos por uma variedade de métodos conhecidos na técnica incluindo métodos de exibição de fago com o uso de bibliotecas de anticorpo derivadas de sequências de imunoglobulina humana. Consultar as Patentes US nº
4.444.887 e 4.716.111; e publicações PCT nº WO 1998/46645; WO 1998/50433; WO 1998/24893; WO 1998/16654; WO 1996/34096; WO 1996/33735; e WO 1991/10741; incorporados ao presente documento a título de referência. Os anticorpos humanos também podem ser produzidos com o uso de camundongos transgênicos que não têm capacidade para expressar imunoglobulinas endógenas funcionais, mas que podem expressar genes de imunoglobulina humana. Consultar, por exemplo, publicações PCT nº WO 98/24893; WO 92/01047; WO 96/34096; WO 96/33735; Patentes US nº 5.413.923; 5.625. 126; 5.633.425;
5.569.825; 5.661.016; 5.545.806; 5.814.318; 5.885.793; 5.916.771; e 5.939.598; incorporados a título de referência ao presente documento.
[181] Conforme usado no presente documento, o termo anticorpos “humanizados” se refere a formas de anticorpos não humanos (por exemplo, murinos) que são imunoglobulinas quiméricas, cadeias de imunoglobulina ou fragmentos da mesma (como Fv, Fab, Fab’, F(ab’)2 ou outros subdomínios de ligação alvo de anticorpos) que contêm sequências mínimas derivadas de imunoglobulina não humana. Em geral, o anticorpo humanizado compreenderá substancialmente todos de pelo menos um, e tipicamente dois, domínios variáveis, em que todas ou substancialmente todas as regiões de CDR correspondem àquelas de uma imunoglobulina não humana. Todas ou substancialmente todas as regiões FR também podem ser aquelas de uma sequência de imunoglobulina humana. O anticorpo humanizado também pode compreender pelo menos uma porção de uma região constante de imunoglobulina (Fc), tipicamente aquela de uma sequência consenso de imunoglobulina humana. Métodos de humanização de anticorpo são conhecidos na técnica. Consultar, por exemplo, Riechmann et al., Nature 332:323-7, 1988; Patentes US nº: 5.530.101; 5.585.089; 5.693.761;
5.693.762; e 6.180.370 de Queen et al; documento nº EP239400; publicação PCT nº WO 91/09967; Patentes US nº 5.225.539; EP592106; e EP519596; incorporados ao presente documento a título de referência.
[182] Conforme usado no presente documento, o termo “anticorpo monoclonal” se refere a um anticorpo que é derivado de um clone único, incluindo qualquer clone eucariótico, procariótico ou clone de fago, e não o método pelo qual é produzido.
[183] Conforme usado no presente documento, o termo “anticorpos multiespecíficos” se referem a anticorpos que exibem afinidade por mais do que um antígeno alvo. Anticorpos multiespecíficos podem ter estruturas similares a moléculas de imunoglobulina completas e incluem regiões Fc, por exemplo, regiões Fc de IgG. Tais estruturas pode incluir, mas sem limitação, IgG-Fv, IgG-(scFv)2, DVD-Ig, (scFv)2-(scFv)2-Fc e (scFv)2-Fc-(scFv)2. No caso de IgG-(scFv)2, o scFv pode ser fixo à extremidade N-terminal ou C-terminal da cadeia pesada ou da cadeia leve. As moléculas multiespecíficas exemplificativas foram revisadas por Kontermann, 2012, mAbs 4(2):182-197, Yazaki et al., 2013, Protein Engineering, Design & Selection 26(3):1 87-193, e Grote et al., 2012, em Proetzel & Ebersbach (eds.), Antibody Methods and Protocols, Methods in Molecular Biology vol. 901, capítulo 16:247-263; incorporados ao presente documento a título de referência. Moléculas multiespecíficas exemplificativas quer não têm regiões Fc e nas quais anticorpos ou fragmentos de anticorpo podem ser incorporados incluem dímeros de scFv (diacorpos), trímeros (triacorpos) e tetrâmeros (tetracorpos), dímeros Fab (conjugados por polipeptídeo adesivo ou domínios de proteína) e trímeros de Fab (quimicamente conjugados), são descritas por Hudson e Souriau, 2003, Nature Medicine 9:129-134; incorporado ao presente documento a título de referência.
[184] Conforme usado no presente documento, o termo “porcentagem (%) de identidade de sequência” se refere à porcentagem de resíduos de aminoácido (ou ácido nucleico) de uma sequência candidata que são idênticos aos resíduos de aminoácido (ou ácido nucleico) de uma sequência de referência após alinhar as sequências e introduzir os vãos, se necessário, para alcançar a porcentagem máxima de identidade de sequência (por exemplo, vãos podem ser introduzidos em uma ou em ambas as sequências candidata e de referência para alinhamento otimizado e sequências não homólogas podem ser desconsideradas com propósitos de comparação). O alinhamento com propósitos de determinar a porcentagem de identidade de sequência pode ser alcançado de várias maneiras que estão dentro da habilidade na técnica, por exemplo, com o uso de software de computador publicamente disponível, como software BLAST, ALIGN ou Megalign (ONASTAR). Os versados na técnica conseguem determinar parâmetros apropriados para medição do alinhamento, incluindo quaisquer algoritmos necessários para alcançar alinhamento máximo ao longo de todo o comprimento das sequências sendo comparadas. Por exemplo, uma sequência de referência alinhada para comparação com uma sequência candidata pode mostrar que a sequência candidata exibe de 50% a 100% de identidade de sequência através do comprimento completo da sequência candidata ou uma porção selecionada de resíduos de aminoácido contíguo (ou ácido nucleico) da sequência candidata. O comprimento da sequência candidata alinhado com propósitos de comparação pode ser, por exemplo, pelo menos 30%, (por exemplo, 30%, 40, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% ou 100%) do comprimento da sequência de referência. Quando uma posição na sequência candidata é ocupada pelo mesmo resíduo de aminoácido que a posição correspondente na sequência de referência, então, as moléculas são idênticas nessa posição.
[185] Conforme usado no presente documento, o termo “anticorpo primatizado” se refere a um anticorpo que compreende regiões de estrutura de anticorpos derivados de primata e outras regiões, como CDRs e regiões constantes, de anticorpos de uma fonte não primata. Métodos para produzir anticorpos primatizados são conhecidos na técnica. Consultar, por exemplo, Patentes US nº 5.658.570; 5.681.722; e 5.693.780; incorporadas ao presente documento a título de referência.
[186] Conforme usado no presente documento, o termo “operacionalmente ligado” no contexto de um fragmento de polinucleotídeo é destinado a significar que os dois fragmentos de polinucleotídeo são unidos de modo que as sequências de aminoácidos codificadas pelos dois fragmentos de polinucleotídeo permaneçam em quadro.
[187] Conforme usado no presente documento, os termos “elemento regulador” e semelhantes se referem a promotores, intensificadores e outros elementos de controle de expressão (por exemplo, sinais de poliadenilação) que controlam a transcrição ou tradução dos genes de cadeia de anticorpo. Tais sequências reguladoras são descritas, por exemplo, em Goeddel, Gene Expression Technology: Methods in Enzymology 185 (Academic Press, San Diego, CA, 1990); incorporado ao presente documento a título de referência.
[188] Conforme usado no presente documento, os termos “indivíduo” e “paciente” se referem a um organismo que recebe o tratamento para uma doença ou afecção particular conforme descrito no presente documento (como câncer ou uma doença infecciosa). Exemplos de indivíduos e pacientes incluem mamíferos, como seres humanos, que recebem tratamento para doenças ou afecções, por exemplo, distúrbios de proliferação de célula, como câncer.
[189] Conforme usado no presente documento, o termo “scFv” se refere a um anticorpo Fv de cadeia única em que os domínios variáveis da cadeia pesada e a cadeia leve de um anticorpo foram unidas para formar uma cadeia. Os fragmentos scFv contêm uma cadeia de polipeptídeo única que inclui a região variável de uma cadeia leve de anticorpo (VL) (por exemplo, CDR-L1, CDR-L2 e/ou CDR-L3) e a região variável de um anticorpo cadeia pesada (VH) (por exemplo, CDR-H1, CDR-H2 e/ou CDR-H3) separada por um ligante. O ligante que une as regiões VL e VH de um fragmento scFv podem ser um ligante peptídico composto de aminoácidos proteinogênicos. Os ligantes alternativos podem ser usados de modo a aumentar a resistência do fragmento scFv para degradação proteolítica (por exemplo, ligantes que contêm aminoácidos D), a fim de intensificar a solubilidade do fragmento scFv (por exemplo, ligantes hidrofílicos, como ligantes que contêm polietileno glicol ou polipeptídeos que contêm resíduos de glicina e serina de repetição), para melhorar a estabilidade biofísica da molécula (por exemplo, um ligante que contém resíduos cisteína que formam ligações dissulfeto intramoleculares ou intermoleculares), ou para atenuar a imunogenicidade do fragmento scFv (por exemplo, ligantes que contêm sítios de glicosilação). Moléculas scFv são conhecidas na técnica e são descritas, por exemplo, na patente US nº 5.892.019, Flo et al., (Gene 77:51, 1989); Bird et al., (Science 242:423, 1988); Pantoliano et al., (Biochemistry 30:10117, 1991); Milenic et al., (Cancer Research 51:6363, 1991); e Takkinen et al., (Protein Engineering 4:837, 1991). Os domínios VL e VH de uma molécula scFv podem ser derivados de uma ou mais moléculas de anticorpo. Também será entendido por um indivíduo de habilidade comum na técnica que as regiões variáveis das moléculas scFv da invenção podem ser modificadas de modo que variem em sequência de aminoácidos da molécula de anticorpo das quais foram derivadas. Por exemplo, em algumas modalidades, as substituições de nucleotídeo ou aminoácido que levam a substituições conservativas ou mudanças em resíduos de aminoácido podem ser feitas (por exemplo, em CDR e/ou resíduos de estrutura). Alternativamente ou além disso, as mutações são feitas aos resíduos de aminoácido de CDR para otimizar a ligação de antígeno com o uso de técnicas reconhecidas pela arte. Os fragmentos scFv são descritos, por exemplo, no documento nº WO 2011/084714; incorporado ao presente documento a título de referência.
[190] Conforme usado no presente documento, a expressão “se liga especificamente” se refere a uma reação de ligação que é determinante da presença de um antígeno em uma população heterogênea de proteínas e outras moléculas biológicas que que é reconhecida, por exemplo, por um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, com particularidade. Um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que se liga especificamente a um antígeno pode se ligar ao antígeno com um KD de menos do que 100 nM. Por exemplo, um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que se liga especificamente a um antígeno pode se ligar ao antígeno com um K D de até 100 nM (por exemplo, entre 1 pM e 100 nM). Um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que não exibe ligação específica a um antígeno particular ou epítopo do mesmo pode exibir um KD maior do que 100 nM (por exemplo, maior do que 500 nm, 1 μΜ, 100 μΜ, 500 μΜ ou 1 mM) para esse antígeno particular ou epítopo do mesmo. Uma variedade de formatos de imunoensaio podem ser usados para selecionar anticorpos especificamente imunorreativos com uma proteína ou carboidrato particular. Por exemplo, imunoensaios de ELISA de fase sólida são rotineiramente usados para selecionar anticorpos especificamente imunorreativos com uma proteína ou carboidrato. Consultar Harlow & Lane, Antibodies, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press, Nova Iorque (1988) e Harlow & Lane, Using Antibodies, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press, Nova Iorque (1999), para uma descrição de formatos de imunoensaio e afecções que podem ser usados para determinar imunorreatividade específica.
[191] Conforme usado no presente documento, o termo “transfecção” se refere a qualquer um dentre uma ampla variedade de técnicas comumente usadas para a introdução de DNA exógeno em uma célula hospedeira procariótica ou eucariótica, por exemplo, eletroporação, lipofecção, precipitação de fosfato de cálcio, transfecção de DEAE-dextrano e semelhantes.
[192] Conforme usado no presente documento, os termos “tratar” ou “tratamento” se referem ao tratamento terapêutico, em que o objetivo é impedir ou atrasar (reduzir) uma mudança fisiológica indesejável ou distúrbio, como a progressão de um distúrbio de proliferação de célula, como câncer. Resultados clínicos benéficos ou desejáveis incluem, mas sem limitação, alívio de sintomas, diminuição de grau de doença, estado estabilizado (isto é, sem piora) de doença, retardo ou atraso de progresso de doença, melhora ou paliação do estado de doença, e remissão (parcial ou total), detectável ou indetectável. Aqueles que necessitam de tratamento incluem aqueles já com a afecção ou distúrbio, assim como aqueles propensos a ter a afecção ou distúrbio ou aqueles nos quais a afecção ou distúrbio deve ser prevenido.
[193] Conforme usado no presente documento, o termo “vetor” se refere a um vetor de ácido nucleico, por exemplo, um vetor de DNA, como um plasmídeo, um vetor de RNA, vírus ou outro replicon adequado (por exemplo, vetor viral). Uma variedade de vetores foi desenvolvida para a distribuição de polinucleotídeos que codificam proteínas exógenas em uma célula procariótica ou eucariótica. Exemplos de tais vetores de expressão são divulgados, por exemplo, no documento nº WO 1994/1 1026; incorporado ao presente documento a título de referência. Os vetores de expressão da invenção podem conter um ou mais elementos de sequência adicionais usados para a expressão de proteínas e/ou a integração dessas sequências de polinucleotídeos no genoma de uma célula hospedeira, como uma célula de mamífero (por exemplo, uma célula humana). Os vetores exemplificativos que podem ser usados para a expressão de anticorpos e fragmentos de anticorpo descritos no presente documento incluem plasmídeos que contêm sequências reguladoras, como regiões promotoras e intensificadoras, as quais direcionam a transcrição de gene. Os vetores podem conter ácidos nucleicos que modulam a taxa de tradução de um gene alvo ou que melhoram a estabilidade ou exportação nuclear do mRNA que resulta da transcrição de gene. Esses elementos de sequência podem incluir, por exemplo, regiões não traduzidas 5’ e 3’, um sítio de entrada ribossômica interno (IRES), e sítio de sinal de poliadenilação a fim de direcionar a transcrição eficaz do gene portado no vetor de expressão. Os vetores descritos no presente documento também podem conter um polinucleotídeo que codifica um marcador para seleção de células que contêm tal vetor. Exemplos de tal marcador adequado incluem genes que codificam a resistência a antibióticos, como ampicilina, cloramfenicol, canamicina ou nourseotricina.
[194] Conforme usado no presente documento, o termo “VH” se refere à região variável de um cadeia pesada de imunoglobulina de um anticorpo, incluindo a cadeia pesada de um Fv, scFv ou Fab. Referências a “VL” se referem à região variável de uma cadeia leve de imunoglobulina, incluindo a cadeia leve de um Fv, scFv, dsFv ou Fab. Anticorpos (Abs) e imunoglobulinas (Igs) são glicoproteínas que têm as mesmas características estruturais. Embora anticorpos exibam especificidade de ligação para um alvo específico, imunoglobulinas incluem tanto anticorpos como outras moléculas semelhantes a anticorpo que carecem de especificidade de alvo. Os anticorpos e imunoglobulinas nativos são usualmente glicoproteínas heterotetraméricas de cerca de 150000 Daltons, compostas de duas cadeias leves (L) idênticas e duas cadeias pesadas (H) idênticas. Cada cadeia pesada de um anticorpo nativo tem no terminal amino um domínio variável (VH) seguido por vários domínios constantes. Cada cadeia leve de um anticorpo nativo tem um domínio variável no terminal amino (VL) e um domínio constante no terminal carbóxi.
3.2. Definições de Gene
[195] Conforme usado no presente documento, “B8R” se refere a um gene de ortopoxvírus (por exemplo, vaccinia, por exemplo, Copenhagen), como um gene que codifica uma proteína secretada com homologia ao receptor de interferon gama (IFN-γ). Um exemplo não limitante de uma sequência de proteína codificada por um gene B8R exemplificativo em uma cepa Copenhagen do vírus vaccinia é dado na entrada P21004 de banco de dados UniProtKB e é reproduzido abaixo:
MRYIIILAVLFINSIHAKITSYKFESVNFDSKIEWTGDGLYNISLKNYGIKTWQTMYT NVPEGTYDISAFPKNDFVSFWVKFEQGDYKVEEYCTGLCVEVKIGPPTVTLTEYD DHINLYIEHPYATRGSKKIPIYKRGDMCDIYLLYTANFTFGDSEEPVTYDIDDYDCT
STGCSIDFATTEKVCVTAQGATEGFLEKITPWSSEVCLTPKKNVYTCAIRSKEDVP NFKDKMARVIKRKFNKQSQSYLTKFLGSTSNDVTTFLSMLNLTKYS (SEQ ID NO: 1).
[196] O termo “B8R” também pode incluir fragmentos ou variantes da proteína listada acima, ou de genes homólogos de outra cepa de vírus vaccinia. Variantes incluem, sem limitação, aquelas sequências que têm 85 por cento ou mais identidade com as sequências divulgadas no presente documento.
[197] Conforme usado no presente documento, “B14R” se refere a um gene de ortopoxvírus (por exemplo, vaccinia, por exemplo, Copenhagen). Um exemplo de uma sequência de proteína codificada por um gene B14R exemplificativo em uma cepa Copenhagen do vírus vaccinia é dado na entrada P20842 de banco de dados UniProtKB e é reproduzido abaixo:
MNHCLLAISAVYFKAKWLTPFEKEFTSDYPFYVSPTEMVDVSMMSMYGEL FNHASVKESFGNFSIIELPYVGDTSMMVILPDKIDGLESIEQNLTDTNFKKWCNSL DAMFIDVHIPKFKVTGSYNLVDTLVKSGLTEVFGSTGDYSNMCNLDVSVDAMIHK TYIDVNEEYTEAAAATCALVSDCASTITNEFCVDHPFIYVIRHVDGKILFVGRYCSP
TTNC (SEQ ID NO: 2).
[198] Conforme usado no presente documento, “B15R” se refere a um gene de ortopoxvírus (por exemplo, vaccinia, por exemplo, Copenhagen). Um exemplo de uma sequência de proteína codificada por um gene B15R exemplificativo em uma cepa Copenhagen do vírus vaccinia é dado na entrada P21089 de banco de dados UniProtKB e é reproduzido abaixo:
MTANFSTHVFSPQHCGCDRLTSIDDVKQCLTEYIYWSSYAYRNRQCAGQL
YSTLLSFRDDAELVFIDIRELVKNMPWDDVKDCTEIIRCYIPDEQKTIREISAIIGLCA YAATYWGGEDHPTSNSLNALFVMLEMLNYVDYNIIFRRMN (SEQ ID NO: 3).
[199] Conforme usado no presente documento, “B16R” se refere a um gene de ortopoxvírus (por exemplo, vaccinia, por exemplo, Copenhagen), como um gene que codifica um inibidor de IL-1-beta. Um exemplo de uma sequência de proteína codificada por um gene B16R exemplificativo em uma cepa Copenhagen do vírus vaccinia é dado na entrada P21116 de banco de dados UniProtKB e é reproduzido abaixo: MSILPVIFLP IFFYSSFVQT FNASECIDKG (SEQ ID NO: 4).
[200] Conforme usado no presente documento, “B17L” se refere a um gene de ortopoxvírus (por exemplo, vaccinia, por exemplo, Copenhagen). Um exemplo de uma sequência de proteína codificada por um gene B17L exemplificativo em uma cepa Copenhagen do vírus vaccinia é dado na entrada P21075 de banco de dados UniProtKB e é reproduzido abaixo:
MSRKFMQVYEYDREQYLDEFIEDRYNDSFITSPEYYSAEKYMCRYTTLNH NCVNVRRCALDSKLLHDIITNCKIYNNIELVRATKFVYYLDLIKCNWVSKVGDSVLY PVIFITHTSTRNLDKVSVKTYKGVKVKKLNRCADHAIVINPFVKFKLTLPNKTSHAK VLVTFCKLRTDITPVEAPLPGNVLVYTFPDINKRIPGYIHVNIEGCIDGMIYINSSKFA CVLKLHRSMYRIPPFPIDICSCCSQYTNDDIEIPIHDLIKDVAIFKNKETVYYLKLNNK
TIARFTYFNNIDTAITQEHEYVKIALGIVCKLMINNMHSIVGVNHSNTFVNCLLEDNV (SEQ ID NO: 5).
[201] Conforme usado no presente documento, “B18R” se refere a um gene de ortopoxvírus (por exemplo, vaccinia, por exemplo, Copenhagen), como um gene que codifica uma proteína de repetição de anquirina. Um exemplo de uma sequência de proteína codificada por um gene B18R exemplificativo em uma cepa
Copenhagen do vírus vaccinia é dado na entrada P21076 de banco de dados UniProtKB e é reproduzido abaixo:
MSRRLIYVLNINRKSTHKIQENEIYTYFSHCNIDHTSTELDFVVKNYDLNRR QHVTGYTALHCYLYNNYFTNDVLKILLNHDVNVTMKTSSGRMPVYILLTRCCNISH DVVIDMIDKDKNHLSHRDYSNLLLEYIKSRYMLLKEEDIDENIVSTLLDKGIDPNFK QDGYTALHYYYLCLAHVYKPGECRKPITIKKAKRIISLFIQHGANLNALDNCGNTPF HLYLSIEMCNNIHMTKMLLTFNPNFKICNNHGLTPILCYITSDYIQHDILVMLIHHYET NVGEMPIDERRMIVFEFIKTYSTRPADSITYLMNRFKNINIYTRYEGKTLLHVACEY NNTQVIDYLIRINGDINALTDNNKHATQLIIDNKENSPYTINCLLYILRYIVDKNVIRSL VDQLPSLPIFDIKSFEKFISYCILLDDTFYDRHVKNRDSKTYRYAFSKYMSFDKYD GIITKCHDETMLLKLSTVLDTTLYAVLRCHNSRKLRRYLTELKKYNNDKSFKIYSNI
MNERYLNVYYKDMYVSKVYDKLFPVFTDKNCLLTLLPSEIIYEILYMLTINDLYNISY PPTKV (SEQ ID NO: 6).
[202] Conforme usado no presente documento, “B19R” se refere a um gene de ortopoxvírus (por exemplo, vaccinia, por exemplo, Copenhagen), como um gene que codifica uma glicoproteína secretada do tipo IFN-alfa-receptor beta. Um exemplo de uma sequência de proteína codificada por um gene B19R exemplificativo em uma cepa Copenhagen do vírus vaccinia é dado na entrada P21077 de banco de dados UniProtKB e é reproduzido abaixo:
MTMKMMVHIYFVSLSLLLLLFHSYAIDIENEITEFFNKMRDTLPAKDSKWLN PACMFGGTMNDMATLGEPFSAKCPPIEDSLLSHRYKDYVVKWERLEKNRRRQV SNKRVKHGDLWIANYTSKFSNRRYLCTVTTKNGDCVQGIVRSHIKKPPSCIPKTY ELGTHDKYGIDLYCGILYAKHYNNITWYKDNKEINIDDIKYSQTGKELIIHNPELEDS GRYDCYVHYDDVRIKNDIVVSRCKILTVIPSQDHRFKLILDPKINVTIGEPANITCTA
VSTSLLIDDVLIEWENPSGWLIGFDFDVYSVLTSRGGITEATLYFENVTEEYIGNTY KCRGHNYYFEKTLTTTVVLE (SEQ ID NO: 7).
[203] Conforme usado no presente documento, “B20R” se refere a um gene de ortopoxvírus (por exemplo, vaccinia, por exemplo, Copenhagen), como um gene que codifica uma proteína de repetição de anquirina. Um exemplo de uma sequência de proteína codificada por um gene B20R exemplificativo em uma cepa Copenhagen do vírus vaccinia é dado na entrada P21078 de banco de dados UniProtKB e é reproduzido abaixo:
MDEDTRLSRYLYLTDREHINVDSIKQLCKISDPNACYRCGCTALHEYFYNYRSVN
GKYKYRYNGYYQYYSSSDYENYNEYYYDDYDRTGMNSESDSESDNISIKTEYEN EYEFYDETQDQSTQHNDL (SEQ ID NO: 8).
[204] Conforme usado no presente documento, “C1L” se refere a um gene de ortopoxvírus (por exemplo, vaccinia, por exemplo, Copenhagen). Um exemplo de uma sequência de proteína codificada por um gene C1L exemplificativo em uma cepa Copenhagen do vírus vaccinia é dado na entrada P21036 de banco de dados UniProtKB e é reproduzido abaixo:
MVKNNKISNSCRMIMSTNPNNILMRHLKNLTDDEFKCIIHRSSDFLYLSDSD YTSITKET LVSEIVEEYPDDCNKILAIIFLVLDKDIDVDIETKLKPKPAVRFAILDKMTEDIKL TDLV RHYFRYIEQDIPLGPLFKKIDSYRTRAINKYSKELGLATEYFNKYGHLMFYT
LPIPYNRF FCRNSIGFLAVLSPTIGHVKAFYKFIEYVSIDDRRKFKKELMSK (SEQ ID NO: 9).
[205] Conforme usado no presente documento, “C2L” se refere a um gene de ortopoxvírus (por exemplo, vaccinia, por exemplo, Copenhagen), como um gene que codifica uma proteína do tipo Kelch que afeta a adesão independente de cálcio à matriz extracelular. Um exemplo de uma sequência de proteína codificada por um gene C2L exemplificativo em uma cepa Copenhagen do vírus vaccinia é dado na entrada P21037 de banco de dados UniProtKB e é reproduzido abaixo:
MESVIFSINGEIIQVNKEIITASPYNFFKRIQDHHLKDEAIILNGINYHAFESLL DYMRWKKINITINNVEMILVAAVIIDVPPVVDLCVKTMIHNINSTNCIRMFNFSKRYG IKKLYNASMSEIINNITAVTSDPEFGKLSKDELTTILSHEDVNVNHEDVTAMILLKWI HKNPNDVDIINILHPKFMTNTMRNAISLLGLTISKSTKPVTRNGIKHNIVVIKNSDYIS TITHYSPRTEYWTIVGNTDRQFYNANVLHNCLYIIGGMINNRHVYSVSRVDLETKK WKTVTNMSSLKSEVSTCVNDGKLYVIGGLEFSISTGVAEYLKHGTSKWIRLPNLIT PRYSGASVFVNDDIYVMGGVYTTYEKYVVLNDVECFTKNRWIKKSPMPRHHSIV YAVEYDGDIYVITGITHETRNYLYKYIVKEDKWIELYMYFNHVGKMFVCSCGDYILII
ADAKYEYYPKSNTWNLFDMSTRNIEYYDMFTKDETPKCNVTHKSLPSFLSNCEK QFLQ (SEQ ID NO: 10).
[206] Conforme usado no presente documento, “F1L” se refere a um gene de ortopoxvírus (por exemplo, vaccinia, por exemplo, Copenhagen), como um gene que codifica um inibidor de caspase 9. Um exemplo de uma sequência de proteína codificada por um gene F1L exemplificativo em uma cepa Copenhagen do vírus vaccinia é dado na entrada P68450 de banco de dados UniProtKB e é reproduzido abaixo:
MLSMFMCNNIVDYVDDIDNGIVQDIEDEASNNVDHDYVYPLPENMVYRFD KSTNILDYLSTERDHVMMAVRYYMSKQRLDDLYRQLPTKTRSYIDIINIYCDKVSN DYNRDMNIMYDMASTKSFTVYDINNEVNTILMDNKGLGVRLATISFITELGRRCMN
PVKTIKMFTLLSHTICDDCFVDYITDISPPDNTIPNTSTREYLKLIGITAIMFATYKTLK YMIG (SEQ ID NO: 11).
[207] Conforme usado no presente documento, “F2L” se refere a um gene de ortopoxvírus (por exemplo, vaccinia, por exemplo, Copenhagen), como um gene que codifica uma desoxiuridina trifosfatase (dUTPase). Um exemplo de uma sequência de proteína codificada por um gene F2L exemplificativo em uma cepa Copenhagen do vírus vaccinia é dado na entrada P68634 de banco de dados UniProtKB e é reproduzido abaixo:
MFNMNINSPVRFVKETNRAKSPTRQSPGAAGYDLYSAYDYTIPPGERQLIK
TDISMSMPKICYGRIAPRSGLSLKGIDIGGGVIDEDYRGNIGVILINNGKCTFNVNT GDRIAQLIYQRIYYPELEEVQSLDSTNRGDQGFGSTGLR (SEQ ID NO: 12).
[208] Conforme usado no presente documento, “F3L” se refere a um gene de ortopoxvírus (por exemplo, vaccinia, por exemplo, Copenhagen), como um gene que codifica uma proteína do tipo Kelch que é um modificador de resposta imune e um fator de virulência. Um exemplo de uma sequência de proteína codificada por um gene F3L exemplificativo em uma cepa Copenhagen do vírus vaccinia é dado na entrada P21013 de banco de dados UniProtKB e é reproduzido abaixo:
MPIFVNTVYCKNILALSMTKKFKTIIDAIGGNIIVNSTILKKLSPYFRTHLRQK YTKNKDPVTRVCLDLDIHSLTSIVIYSYTGKVYIDSHNVVNLLRASILTSVEFIIYTCIN FILRDFRKEYCVECYMMGIEYGLSNLLCHTKNFIAKHFLELEDDIIDNFDYLSMKLIL ESDELNVPDEDYVVDFVIKWYIKRRNKLGNLLLLIKNVIRSNYLSPRGINNVKWILD CTKIFHCDKQPRKSYKYPFIEYPMNMDQIIDIFHMCTSTHVGEVVYLIGGWMNNEI HNNAIAVNYISNNWIPIPPMNSPRLYATGIPANNKLYVVGGLPNPTSVERWFHGDA AWVNMPSLLKPRCNPAVASINNVIYVMGGHSETDTTTEYLLPNHDQWQFGPSTY
YPHYKSCALVFGRRLFLVGRNAEFYCESSNTWTLIDDPIYPRDNPELIIVDNKLLLI GGFYRGSYIDTIEVYNHHTYSWNIWDGK (SEQ ID NO: 13).
[209] Conforme usado no presente documento, “K1L” se refere a um gene de ortopoxvírus (por exemplo, vaccinia, por exemplo, Copenhagen), como um gene que codifica um inibidor de NF-κB. Um exemplo de uma sequência de proteína codificada por um gene K1L exemplificativo em uma cepa Copenhagen do vírus vaccinia é dado na entrada P20632 de banco de dados UniProtKB e é reproduzido abaixo:
MDLSRINTWKSKQLKSFLSSKDTFKADVHGHSALYYAIADNNVRLVCTLLN AGALKNLLENEFPLHQAATLEDTKIVKILLFSGMDDSQFDDKGNTALYYAVDSGNM QTVKLFVKKNWRLMFYGKTGWKTSFYHAVMLNDVSIVSYFLSEIPSTFDLAILLSC IHTTIKNGHVDMMILLLDYMTSTNTNNSLLFIPDIKLAIDNKDIEMLQALFKYDINIYS
VNLENVLLDDAEITKMIIEKHVEYKSDSYTKDLDIVKNNKLDEIISKNKELRLMYVN CVKKN (SEQ ID NO: 14).
[210] Conforme usado no presente documento, “K2L” se refere a um gene de ortopoxvírus (por exemplo, vaccinia, por exemplo, Copenhagen), como um gene que codifica um inibidor de serina protease que impede a fusão de células. Um exemplo de uma sequência de proteína codificada por um gene K2L exemplificativo em uma cepa Copenhagen do vírus vaccinia é dado na entrada P20532 de banco de dados UniProtKB e é reproduzido abaixo:
MIALLILSLTCSVSTYRLQGFTNAGIVAYKNIQDDNIVFSPFGYSFSMFMSLL PASGNTRIELLKTMDLRKRDLGPAFTELISGLAKLKTSKYTYTDLTYQSFVDNTVCI KPLYYQQYHRFGLYRLNFRRDAVNKINSIVERRSGMSNVVDSNMLDNNTLWAIIN TIYFKGTWQYPFDITKTRNASFTNKYGTKTVPMMNVVTKLQGNTITIDDEEYDMV RLPYKDANISMYLAIGDNMTHFTDSITAAKLDYWSFQLGNKVYNLKLPKFSIENKR
DIKSIAEMMAPSMFNPDNASFKHMTRDPLYIYKMFQNAKIDVDEQGTVAEASTIM VATARSSPEKLEFNTPFVFIIRHDITGFILFMGKVESP (SEQ ID NO: 15).
[211] Conforme usado no presente documento, “K3L” se refere a um gene de ortopoxvírus (por exemplo, vaccinia, por exemplo, Copenhagen), como um gene que codifica um inibidor de PKR. Um exemplo de uma sequência de proteína codificada por um gene K3L exemplificativo em uma cepa Copenhagen do vírus vaccinia é dado na entrada P20639 de banco de dados UniProtKB e é reproduzido abaixo:
MLAFCYSLPNAGDVIKGRVYEKDYALYIYLFDYPHSEAILAESVKMHMDRY VEYRDKLVGKTVKVKVIRVDYTKGYIDVNYKRMCRHQ (SEQ ID NO: 16).
[212] Conforme usado no presente documento, “K4L” se refere a um gene de ortopoxvírus (por exemplo, vaccinia, por exemplo, Copenhagen), como um gene que codifica uma nuclease de modificação de DNA (por exemplo, enzima entalhadora de DNA). Um exemplo de uma sequência de proteína codificada por um gene K4L exemplificativo em uma cepa Copenhagen do vírus vaccinia é dado na entrada P20537 de banco de dados UniProtKB e é reproduzido abaixo:
MNPDNTIAVITETIPIGMQFDKVYLSTFNMWREILSNTTKTLDISSFYWSLS DEVGTNFGTIILNEIVQLPKRGVRVRVAVNKSNKPLKDVERLQMAGVEVRYIDITNI LGGVLHTKFWISDNTHIYLGSANMDWRSLTQVKELGIAIFNNRNLAADLTQIFEVY WYLGVNNLPYNWKNFYPSYYNTDHPLSINVSGVPHSVFIASAPQQLCTMERTND LTALLSCIRNASKFVYVSVMNFIPIIYSKAGKILFWPYIEDELRRSAIDRQVSVKLLIS CWQRSSFIMRNFLRSIAMLKSKNIDIEVKLFIVPDADPPIPYSRVNHAKYMVTDKTA
YIGTSNWTGNYFTDTCGASINITPDDGLGLRQQLEDIFMRDWNSKYSYELYDTSP TKRCKLLKNMKQCTNDIYCDEIQPEKEIPEYSLE (SEQ ID NO: 17).
[213] Conforme usado no presente documento, “K5L” se refere a um gene de ortopoxvírus (por exemplo, vaccinia, por exemplo, Copenhagen), como um gene que codifica uma monoglicerídeo lipase putativa. Um exemplo de uma sequência de proteína codificada por um gene K5L exemplificativo em uma cepa Copenhagen do vírus vaccinia é dado na entrada P21084 de banco de dados UniProtKB e é reproduzido abaixo:
MGATISILASYDNPNLFTAMILMSPLVNADAVSRLNLLAAKLMGTITPNAPV
GKLCPESVSRDMDKVYKYQYDPLINHEKIKAGFASQVLKATNKVRKIISKINTPRLS YSREQTMRLVMFQVHIISCNMQIVIEK (SEQ ID NO: 18).
[214] Conforme usado no presente documento, “K6L” se refere a um gene de ortopoxvírus (por exemplo, vaccinia, por exemplo, Copenhagen), como um gene que codifica uma monoglicerídeo lipase putativa. Um exemplo de uma sequência de proteína codificada por um gene K6L exemplificativo em uma cepa Copenhagen do vírus vaccinia é dado na entrada P68465 de banco de dados UniProtKB e é reproduzido abaixo:
MSANCMFNLDNDYIYWKPITYPKALVFISHGAGKHSGRYDELAENISSLGIL VFSHDHIGHGRSNGEKMMIDDFGTARGNY (SEQ ID NO: 19).
[215] Conforme usado no presente documento, “K7R” se refere a um gene de ortopoxvírus (por exemplo, vaccinia, por exemplo, Copenhagen), como um gene que codifica um inibidor de NF-κB e IRF3. Um exemplo de uma sequência de proteína codificada por um gene K7R exemplificativo em uma cepa Copenhagen do vírus vaccinia é dado na entrada P68467 de banco de dados UniProtKB e é reproduzido abaixo:
MATKLDYEDAVFYFVDDDKICSRDSIIDLIDEYITWRNHVIVFNKDITSCGRL
YKELMKFDDVAIRYYGIDKINEIVEAMSEGDHYINFTKVHDQESLFATIGICAKITEH WGYKKISESRFQSLGNITDLMTDDNINILILFLEKKLN (SEQ ID NO: 20).
[216] Conforme usado no presente documento, “M1L” se refere a um gene de ortopoxvírus (por exemplo, vaccinia, por exemplo, Copenhagen), como um gene que codifica uma proteína de repetição de anquirina. Um exemplo de uma sequência de proteína codificada por um gene M1L exemplificativo em uma cepa Copenhagen do vírus vaccinia é dado na entrada P20640 de banco de dados UniProtKB e é reproduzido abaixo:
MIFVIESKLLQIYRNRNRNINFYTTMDNIMSAEYYLSLYAKYNSKNLDVFRN MLQAIEPSGNNYHILHAYCGIKGLDERFVEELLHRGYSPNETDDDGNYPLHIASKI NNNRIVAMLLTHGADPNACDKHNKTPLYYLSGTDDEVIERINLLVQYGAKINNSVD EEGCGPLLACTDPSERVFKKIMSIGFEARIVDKFGKNHIHRHLMSDNPKASTISW MMKLGISPSKPDHDGNTPLHIVCSKTVKNVDIIDLLLPSTDVNKQNKFGDSPLTLLI KTLSPAHLINKLLSTSNVITDQTVNICIFYDRDDVLEIINDKGKQYDSTDFKMAVEV GSIRCVKYLLDNDIICEDAMYYAVLSEYETMVDYLLFNHFSVDSVVNGHTCMSEC
VRLNNPVILSKLMLHNPTSETMYLTMKAIEKDKLDKSIIIPFIAYFVLMHPDFCKNRR YFTSYKRFVTDYVHEGVSYEVFDDYF (SEQ ID NO: 21).
[217] Conforme usado no presente documento, “M2L” se refere a um gene de ortopoxvírus (por exemplo, vaccinia, por exemplo, Copenhagen), como um gene que codifica um inibidor de NF-κB e apoptose. Um exemplo de uma sequência de proteína codificada por um gene M2L exemplificativo em uma cepa Copenhagen do vírus vaccinia é dado na entrada Q1PJ18 de banco de dados UniProtKB e é reproduzido abaixo:
MVYKLVLLFCIASLGYSVEYKNTICPPRQDYRYWYFAAELTIGVNYDINSTII GECHMSESYIDRNANIVLTGYGLEINMTIMDTDQRFVAAAEGVGKDNKLSVLLFTT QRLDKVHHNISVTITCMEMNCGTTKYDSDLPESIHKSSSCDITINGSCVTCVNLET
DPTKINPHYLHPKDKYLYHNSEYGMRGSYGVTFIDELNQCLLDIKELSYDICYRE (SEQ ID NO: 22).
[218] Conforme usado no presente documento, “N1L” se refere a um gene de ortopoxvírus (por exemplo, vaccinia, por exemplo, Copenhagen), como um gene que codifica a proteína de tipo BCL-2 que inibe NF-κB e apoptose. Um exemplo de uma sequência de proteína codificada por um gene N1L exemplificativo em uma cepa Copenhagen do vírus vaccinia é dado na entrada P21054 de banco de dados UniProtKB e é reproduzido abaixo:
MRTLLIRYILWRNDNDQTYYNDDFKKLMLLDELVDDGDVCTLIKNMRMTLS
DGPLLDRLNQPVNNIEDAKRMIAISAKVARDIGERSEIRWEESFTILFRMIETYFDD LMIDLYGEK (SEQ ID NO: 23).
[219] Conforme usado no presente documento, “N2L” se refere a um gene de ortopoxvírus (por exemplo, vaccinia, por exemplo, Copenhagen), como um gene que codifica um inibidor de IRF3. Um exemplo de uma sequência de proteína codificada por um gene N2L exemplificativo em uma cepa Copenhagen do vírus vaccinia é dado na entrada P20641 de banco de dados UniProtKB e é reproduzido abaixo:
MTSSAMDNNEPKVLEMVYDATILPEGSSMDPNIMDCINRHINMCIQRTYSS SIIAILNRFLTMNKDELNNTQCHIIKEFMTYEQMAIDHYGEYVNAILYQIRKRPNQH
HTIDLFKKIKRTPYDTFKVDPVEFVKKVIGFVSILNKYKPVYSYVLYENVLYDEFKC FINYVETKYF (SEQ ID NO: 26).
[220] As sequências de nucleotídeo de cepa Copenhagen exemplificativas das sequências de codificação (CDSs) dos genes descritos no presente documento são fornecidas na Tabela 42 abaixo. A sequência de nucleotídeos de um genoma de vírus vaccinia de cepa Copenhagen do tipo selvagem exemplificativo também é fornecida na Tabela 42 abaixo. Outro genoma de vírus vaccinia de cepa Copenhagen do tipo selvagem exemplificativo é a SEQ ID NO: 590 (conforme fornecido na Tabela 42), mas com 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16,
17, 18, 19, 20 ou todos os polimorfismos de nucleotídeo identificados na Tabela 46. Em certas modalidades, o CDS dos genes descritos no presente documento tem sequências de nucleotídeos que são idênticas às sequências de nucleotídeos fornecidas na Tabela 42 exceto por 1, 2, 3 ou mais dos polimorfismos de nucleotídeo identificados na Tabela 46.
4. BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS
[221] A Figura 1 mostra uma análise filogenética de 59 cepas de poxvírus, incluindo as cepas de vírus Ortopoxvírus.
[222] A Figura 2 mostra as abundâncias de cepas virais diferentes após passar 5 vírus Vaccinia em tipos de tumor diferentes.
[223] A Figura 3 mostra as capacidades de cepas de tipo selvagem Vaccinia para replicar em vários núcleos de tumor de paciente diferentes.
[224] A Figura 4 mostra medições de tamanho de placa de cepas de tipo selvagem Vaccinia diferentes.
[225] A Figura 5 mostra a estrutura genômica de uma deleção 5p (CopMD5p) e uma deleção 3p (CopMD3p). Tanto CopMD5p quanto CopMD3p foi cruzado para gerar CopMD5p3p.
[226] A Figura 6 mostra um mapa de calor que mostra a morte de célula cancerígena que segue a infecção com Copenhagen ou CopMD5p3p em várias doses.
[227] A Figura 7 mostra as curvas de crescimento de replicação de Copenhagen e CopMD5p3p em 4 linhagens celulares de câncer diferentes.
[228] A Figura 8 mostra a capacidade de Copenhagen e CopMD5p3p para replicar em amostras ex vivo de paciente conforme mostrado pela titulação.
[229] A Figura 9 mostra que o vírus CopMD5p3p modificado forma placas diferentes em relação ao vírus parental. As placas CopMD5p3p são muito mais claras no meio, com sincítios visíveis (fusão de célula).
[230] A Figura 10 mostra que CopMD5p3p induz sincítios (fusão de célula) em células 786-O.
[231] A Figura 11 mostra que CopMD5p3p pode controlar o crescimento de tumor de modo similar a tipo selvagem de Copenhagen, mas não causa a perda de peso.
[232] A Figura 12 mostra que CopMD5p3p não causa formação de lesão de varíola quando em comparação com duas outras cepas Vaccinia (Copenhagen e Wyeth) que portam knockout oncolítico de timidina quinase.
[233] A Figura 13 mostra a biodistribuição IVIS de Vaccinia após administração sistêmica em camundongos CD-1 atímicos. Luciferase que codifica CopMD5p3p (TK KO) é específica de tumor e não replica em tecidos fora de alvo.
[234] A Figura 14 mostra a biodistribuição de Vaccinia após administração sistêmica. CopMD5p3p replica de modo similar a outros Vaccinia oncolíticos no tumor, mas replica menos em tecidos/órgãos fora de alvo.
[235] A Figura 15 mostra a imunogenicidade de Vaccinia em PBMCs Humanas. A capacidade de CopMD5p3p para induzir ativação de célula imune inata humana é mais forte do que aquela de Copenhagen de tipo selvagem.
[236] A Figura 16 mostra a imunogenicidade de Vaccinia em Esplenócitos de Camundongo. A capacidade de CopMD5p3p para induzir ativação de célula imune inata de camundongo é mais forte do que aquela de Copenhagen.
[237] A Figura 17 mostra a imunogenicidade de Vaccinia em células humanas. A capacidade de CopMD5p3p para ativar o fator de transcrição imune de NF-kB é mais forte do que aquela de Copenhagen ou VVdd, mas similar àquela de MG-1.
[238] A Figura 18 mostra a sinergia com anticorpo Anti-CTLA-4 de inibidor de ponto de verificação imune em um modelo de melanoma agressivo (modelo de melanoma sinérgico B16-F10 em camundongos C57BL6). A eficácia in vivo medida por sobrevivência em um modelo murino competente imune tratado com Vaccinia e anticorpo Anti-CTLA-4 de Inibidores de Ponto de Verificação Imune.
[239] A Figura 19 mostra a sinergia com o anticorpo Anti-CTLA-4 de inibidor de ponto de verificação imune. A eficácia in vivo medida por crescimento de tumor (fileira superior) e sobrevivência (fileira de fundo) em um modelo murino competente imune tratado com Vaccinia e anticorpo Anti-CTLA-4 de Inibidor de Ponto de Verificação Imune. CopMD5p3p (coluna esquerda) está em comparação com TK KO Copenhagen oncolítico (coluna direita).
[240] A Figura 20 mostra a sinergia com o anticorpo Anti-PD1 de inibidor de ponto de verificação imune. A eficácia in vivo medida por crescimento de tumor
(fileira superior) e sobrevivência (fileira de fundo) em um modelo murino competente imune tratado com Vaccinia e anticorpo Anti-PD1 de Inibidor de Ponto de Verificação Imune. CopMD5p3p (coluna esquerda) está em comparação com TK KO Copenhagen oncolítico (coluna direita).
[241] A Figura 21 mostra a sinergia com anticorpo Anti-PD1 de inibidor de ponto de verificação imune e anticorpo Anti-CTLA-4. A eficácia in vivo medida por crescimento de tumor (fileira superior) e sobrevivência (fileira de fundo) em um modelo murino competente imune tratado com Vaccinia e anticorpo Anti-PD1 de Inibidores de Ponto de Verificação Imune e anticorpo Anti-CTLA-4. CopMD5p3p (coluna esquerda) está em comparação com TK KO Copenhagen oncolítico (coluna direita).
[242] A Figura 22 mostra um esquema para a produção de vetores de poxvírus modificados (por exemplo, vetores de vírus vaccinia modificados, como vetores de vírus vaccinia Copenhagen modificados) que portam lócus (esquerdo) de deleção principal 5’ (“5p”) e um lócus (direito) de deleção principal 3’ (“3p”). O construto de alvejamento 5p é composto de região homóloga de 1 kb a C2L, seguida por uma eGFP que expressa transgene, e região homóloga de 1 kb a F3L. O construto de alvejamento 3p é composto de região homóloga de 729 bp a B14R, seguida por um mCherry que expressa transgene, e uma região homóloga de 415 bp a B29R.
[243] A Figura 23 mostra a capacidade de vírus vaccinia Copenhagen vírus do tipo selvagem e diversos vírions vaccinia Copenhagen modificados para proliferar em várias linhagens celulares.
[244] A Figura 24 mostra os efeitos citotóxicos de vírus vaccinia Copenhagen do tipo selvagem e diversos vírions vaccinia Copenhagen modificados em várias linhagens celulares, conforme avaliado por violeta cristal (painéis superiores) e um ensaio Alamar Blue (painel inferior). A ordem de cepas listadas para cada linhagem celular ao longo do eixo geométrico x do gráfico mostrado no painel inferior é conforme o seguinte: da esquerda para a direita, CopMD5p, CopMD5p3p, CopMD3p e CopWT (cepa vaccinia Copenhagen do tipo selvagem).
[245] A Figura 25 mostra a distribuição de vírus vaccinia Copenhagen de tipo selvagem e diversos vírions vaccinia Copenhagen modificados mediante administração a camundongos.
[246] A Figura 26 mostra a capacidade de vírus vaccinia Copenhagen do tipo selvagem e diversos vírions vaccinia Copenhagen modificados para ativar células Exterminadoras Naturais (NK) e promover imunidade antitumoral.
[247] A Figura 27 mostra a capacidade de vírus vaccinia Copenhagen do tipo selvagem e diversos vírions vaccinia Copenhagen modificados para intensificar degranulação mediada por célula NK contra HT29 células, uma medida de atividade de célula NK e imunidade antitumoral.
[248] A Figura 28 mostra a capacidade de vírus vaccinia Copenhagen do tipo selvagem e diversos vírions vaccinia Copenhagen modificados para iniciador T-células para iniciar uma resposta imune antitumoral.
[249] A Figura 29 mostra a capacidade de vírus vaccinia Copenhagen do tipo selvagem e diversos vírions vaccinia Copenhagen modificados para espalhar para localizações distantes do ponto inicial de infecção.
[250] A Figura 30 mostra a capacidade de vírus vaccinia Copenhagen do tipo selvagem e diversos vírions vaccinia Copenhagen modificados para formar placas, uma medida de proliferação viral.
[251] A Figura 31 mostra a capacidade de vírus vaccinia Copenhagen do tipo selvagem e diversos vírions vaccinia Copenhagen modificados para formar placas em células U2OS.
[252] A Figura 32 mostra a capacidade de vírus vaccinia Copenhagen do tipo selvagem e diversos vírions vaccinia Copenhagen modificados para formar placas em células 786-O.
[253] A Figura 33 mostra a porcentagem de genes deletados em CopMD5p3p em vários genomas de poxvírus.
[254] A Figura 34 mostra a infecção de linhagens celulares normais versus cancerígenas de vírus SKV-B8R+.
[255] A Figura 35 mostra que SKV-B8R+ não prejudica a sinalização de interferon.
[256] A Figura 36 mostra a estratégia de alvejamento de recombinação de B8R para transgenes FLt3-LG e IL-12-TM.
[257] A Figura 37 mostra SKV (CopMD5p3p-B8R-) tem eficácia similar em controle de tumor em comparação com SKV-B8R+.
[258] A Figura 38 mostra um desenho linear esquemático que representa a organização genômica da plataforma oncolítica SKV-123v2 em comparação com o genoma de vírus vaccinia Copenhagen do tipo selvagem base. FRT é um sítio de reconhecimento para a enzima Flipase.
[259] A Figura 39 mostra SKV manipulado para expressar 2 transgenes imunoterapêuticos e um anticorpo.
[260] A Figura 40 mostra SKV manipulado para expressar 2 transgenes imunoterapêuticos e um anticorpo.
[261] A Figura 41 mostra a produção de hIL-12 quantificada para vários vírus SKV que expressam transgenes.
[262] A Figura 42 mostra a imunocoloração de superfície de célula IL- 12p35 (IL-12) em células Vero vivas infectadas com SKV-123, SKV-3 e vírus SKV- eGFP de controle (MOI 0,1, 24 h pós-infecção).
[263] A Figura 43 mostra membrana p35 de IL-12 murina que expressa SKV tem eficácia maior no controle de tumores murinos.
[264] A Figura 44 mostra que deleções duplas principais manipuladas em várias cepas vaccinia intensificam o extermínio de célula de câncer in vitro.
[265] A Figura 45 mostra a caracterização fenotípica de células HeLa infectadas com várias cepas vaccinia.
[266] A Figura 46 mostra que cepas de vaccinia 5p3p não induzem perda de peso em comparação com cepas de tipo selvagem. Medições de massa corporal de camundongo são mostradas. Camundongos atímicos CD-1 foram tratados com 1 x 107 pfu (unidades formadoras de partícula) por meio de injeção de veia de cauda intravenosa e medidos nos pontos no tempo indicados.
[267] A Figura 47 mostra que cepas vaccinia 5p3p do não induzem lesões de varíola em comparação com cepas de tipo selvagem. A avaliação da presença de lesões de varíola é mostrada. Camundongos atímicos CD-1 foram tratados com 1 x 107 pfu com cepas de vírus vaccinia indicadas por meio de injeção de veia de cauda intravenosa. Camundongos foram examinados por lesões de varíola 6 dias pós-injeção.
[268] As Figuras 48A-48H mostram o volume de tumor ao longo do tempo e curvas de sobrevivência em oito modelos de camundongo de xenoenxerto tratados com 0,05 ml de SKV (vírus vaccinia) (dose: 1e7 pfu). A Figura 48A mostra resultados do modelo de camundongo de xenoenxerto MiaPaca-2. A Figura 48B mostra resultados do modelo de camundongo de xenoenxerto PC-3. A Figura 48C mostra resultados do modelo de xenoenxerto U87MG. A Figura 49D mostra resultados do modelo de xenoenxerto UACC-62. A Figura 48E mostra resultados do modelo de camundongo de xenoenxerto UM-UC-3. A Figura 48F mostra resultados do modelo de camundongo de xenoenxerto COLO-205. A Figura 48G mostra resultados do modelo de camundongo de xenoenxerto NCI-H460. A Figura 48H mostra resultados do modelo de xenoenxerto HT29.
[269] A Figura 49 mostra volumes tumorais médios ao longo do tempo e curvas de sobrevivência em um modelo de camundongo C57/BL6 transgênico que expressa CTLA-4 humano, com tumores MC-38 tratados com SKV que codifica transgenes ativos. Os animais foram, então, aleatorizados em 5 grupos de tratamento e, então, tratados com PBS, PBS mais Ipilimumab, SKV, anticorpo anti- PD-1, SKV-12m3v2-eGFP ou SKV-12m3v2-eGFP mais anticorpo anti-PD-1. SKV- 12m3v2-eGFP é SKV que expressa o anticorpo anti-CTLA-4 humano, ligante Flt3 humano e p35 de IL-12 TM de camundongo.
[270] A Figura 50 mostra volumes tumorais individuais do experimento mostrado na Figura 49.
[271] A Figura 51 mostra volumes tumorais médios ao longo do tempo em modelos de camundongo MC-38 tratados com p35 de IL-12 de camundongo ligado à membrana ou p70 de IL-12 de camundongo ligado à membrana.
[272] A Figura 52 mostra resultados de um regime de vacina oncolítica de iniciador:reforço heterólogo com o uso de um vírus (SKVB 8R+TK- que codifica antígeno OVA).
[273] As Figuras 53A-53F mostram a biodistribuição de FLT3-L e Anticorpo Anti-CTLA-4 em soro e tecido de camundongos BALB/c enxertados com células de tumor CT26 e administrado SKV-123v2 seja IT ou IV.
[274] As Figuras 54A-54D mostram a biodistribuição de IL-12-TM em soro e tecido de camundongos BALB/c enxertados com células de tumor CT26 e administrado SKV-123v2 seja IT ou IV.
[275] A Figura 55 mostra o volume tumoral em camundongos NGS não tratados ou tratados com SKV-123v2.
[276] A Figura 56 mostra cinética de viabilidade Alamar Blue de células cancerígenas infectadas com vírus SKV-123v2 (painéis superiores) e células normais (painéis inferiores).
[277] A Figura 57 mostra curvas de crescimento de replicação de vírus em células cancerígenas infectadas com vírus SKV-123v2 (786-O, HeLa) e células normais (PBMC, PrEC).
[278] A Figura 58 mostra níveis de expressão de anticorpo anti-CTLA-4 em células cancerígenas infectadas com vírus SKV-123v2 (786-O, HeLa) e células normais (PBMC, PrEC).
[279] A Figura 59 mostra níveis de expressão de FLT3L em células cancerígenas infectadas com vírus SKV-123v2 (786-O, HeLa) e células normais (PBMC, PrEC).
[280] A Figura 60 mostra o projeto de um construto de alvejamento para inserção de um transgene em genoma de vírus vaccinia. O construto pode ser um produto de PCR de amplificação ou parte de um plasmídeo bacteriano. Vários transgenes, assim como sua orientação, são flexíveis. A ordem de transgenes e marcador fluorescente é flexível.
5. DESCRIÇÃO DETALHADA
[281] A presente invenção apresenta ortopoxvírus geneticamente modificados, como vírus vaccinia (por exemplo, vírus Copenhagen, Western Reserve, Wyeth, Lister, EM63, ACAM2000, LC16m8, CV-1, vaccinia modificado Ankara (MVA), Dairen I, GLV-1h68, IHD-J, L-IVP, LC16m8, LC16mO, Tashkent, Tian Tan e WAU86/88-1), assim como o uso dos mesmos para o tratamento de vários cânceres. A invenção tem base em parte na constatação de que ortopoxvírus, como vírus Copenhagen, Western Reserve, Wyeth, Lister, EM63, ACAM2000, LC16m8, CV-1, vaccinia modificado Ankara (MVA), Dairen I, GLV- 1h68, IHD-J, L-IVP, LC16m8, LC16mO, Tashkent, Tian Tan e WAU86/88-1, exibem atividade oncolítica notavelmente melhorada, replicação em tumores, infectividade, evasão imune, persistência de tumor, capacidade para incorporação de sequências de DNA exógeno e amenabilidade para fabricação de grande escala quando os vírus são manipulados para conter deleções em um ou mais, ou todos, dos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, B20R, K ORF A, K ORF B, B ORF E, B ORF F e B ORF G e cópias das ITRs de B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R e B29R. Em várias modalidades da invenção, os ortopoxvírus modificados contêm uma deleção do gene B8R. Embora inativo em camundongos, o gene B8R neutraliza a atividade antiviral de IFN-γ humano. Em várias modalidades, pelo menos um transgene é subsequentemente inserido no lócus do gene B8R (agora deletado) através de uma estratégia de alvejamento de recombinação homóloga. Em várias modalidades, o ortopoxvírus modificado expressa pelo menos um dos três transgenes: IL-12-TM, FLT3-L e anticorpo anti- CLTA4. Conforme usado no presente documento, FLT3L, ligante Flt-3, FLT3LG, FLT3-LG, FLT3-L são sinônimos e todos se referem ao ligante de tirosina quinase 3 de tipo FMS.
[282] Os ortopoxvírus descritos no presente documento podem ser administrados a um paciente, como um paciente mamífero (por exemplo, um paciente humano) para tratar uma variedade de distúrbios de proliferação de célula, incluindo uma ampla gama de cânceres. As seções a seguir descrevem ortopoxvírus e modificações genéticas no mesmo, assim como métodos para produzir e propagar geneticamente ortopoxvírus modificados e técnicas para administrar o mesmo a um paciente.
5.1. POXVÍRUS
[283] Em geral, uma partícula viral de poxvírus é oval ou tem formato de tijolo, tendo de 200-400 nm de comprimento. A superfície externa é sulcada em fileiras paralelas, algumas vezes disposta de modo helicoidal. Tais partículas são extremamente complexas, contendo mais do que 100 proteínas distintas. As formas extracelulares contêm duas membranas (EEV: vírions envelopados extracelulares), enquanto partículas intracelulares têm apenas uma membrana interna (IMV: vírions maduros intracelulares). A superfície externa é composta de lipídio e proteína que circundam o núcleo, que é composto de uma nucleoproteína firmemente comprimida. De modo antigênico, poxvírus também são muito complexos, induzindo tanto anticorpos de reação cruzada quanto específica. Há pelo menos dez enzimas presentes na partícula, principalmente em relação ao metabolismo de ácido nucleico/replicação de genoma.
[284] O genoma do poxvírus do tipo selvagem é DNA de fita dupla linear de 130-300 Kbp. As extremidades do genoma têm uma alça em formato de grampo terminal com diversas sequências de repetição em tandem. Diversos genomas de poxvírus foram sequenciados, com a maioria dos genes essenciais estando localizada na parte central do genoma, enquanto genes não essenciais estão localizados nas extremidades. Há cerca de 250 genes no genoma de poxvírus. A replicação ocorre no citoplasma, visto que o vírus é suficientemente complexo para ter adquirido todas as funções necessárias para a replicação de genoma. Há alguma contribuição pela célula, mas a natureza dessa contribuição não é clara. Entretanto, mesmo que a expressão de gene poxvírus e a replicação de genoma ocorram em células enucleadas, a maturação é bloqueada, indicando alguma função pela célula.
[285] Uma vez no citoplasma de célula, a expressão de gene é executada por enzimas virais associadas ao núcleo. A expressão é dividida em 2 fases: genes iniciais, que representam cerca de 50% de genoma, e são expressas antes da replicação de genoma, e genes posteriores, que são expressas após a replicação de genoma. O controle temporal de expressão é fornecido pelos promotores tardios, que são dependentes da replicação de DNA para atividade. Acredita-se que a replicação de genoma envolve autoiniciação, levando à formação de concatêmeros de alto peso molecular, que são subsequentemente clivados e reparados para produzir genomas de vírus. A montagem viral ocorre no citoesqueleto e envolve provavelmente as interações com as proteínas citoesqueléticas (por exemplo, proteínas de ligação de actina). As inclusões se formam no citoplasma que se desenvolvem para partículas de vírus. O espalhamento de célula a célula pode fornecer um mecanismo alternativo para o espalhamento de infecção. Em geral, a replicação desse vírus complexo grande é relativamente rápido, levando apenas 12 horas em média. Pelo menos nove poxvírus diferentes causam a doença em seres humanos, mas o vírus de varíola e vaccinia são os mais bem conhecidos. As cepas de varíola são divididas em varíola maior (25-30% de fatalidades) e varíola menor (mesmos sintomas, mas menos do que 1% de taxa de mortalidade). A infecção com ambos os vírus ocorre naturalmente pela via respiratória e é sistêmica, produzindo uma variedade de sintomas, mas mais notavelmente com pústulas características de varíola e cicatrização da pele.
5.2. ORTOPOXVÍRUS
5.2.1. VÍRUS VACCINIA
[286] O vírus Vaccinia é um membro do poxvírus ou família Poxviridae, a subfamília Chordopoxyirinae e o gênero Ortopoxvírus. Ortopoxvírus é relativamente mais homogêneo do que outros membros da Chordopoxyirinae subfamília e includes 11 espécies distintas, mas proximamente relacionadas, que incluem espécies de vírus vaccinia, vírus de varíola (agente causativo de smallpox), vírus de varíola bovina, vírus de varíola de búfalo, vírus de varíola de macaco, vírus de varíola de camundongo e vírus de varíola equina, assim como outros (consultar Moss, 1996).
[287] O vírus vaccinia é um vírus envelopado complexo grande que tem um genoma de DNA de fita dupla linear de cerca de 190 kb e que codifica aproximadamente 250 genes. Vaccinia é bem conhecido por sua função como uma vacina que erradicou smallpox. Após a erradicação de smallpox, os cientistas exploraram o uso de vaccinia como uma ferramenta para distribuir genes em tecidos biológicos (terapia gênica e manipulação genética). O vírus vaccinia é único entre vírus de DNA, visto que replica apenas no citoplasma da célula hospedeira. Portanto, um grande genoma é necessário para codificar várias enzimas e proteínas necessárias para replicação de DNA viral. Durante a replicação, vaccinia produz diversas formas infecciosas, que diferem em suas membranas externas: o vírion maduro intracelular (IMV), o vírion envelopado intracelular (IEV), o vírion envelopado associado à célula (CEV) e o vírion envelopado extracelular (EEV). IMV é a forma infecciosa mais abundante e é considerada como responsável por espalhamento entre hospedeiros. Por outro lado, acredita-se que o CEV tenha uma função em espalhamento de célula a célula, e o EEV é considerado como importante para disseminação de longo alcance dentro do organismo hospedeiro.
[288] O vírus vaccinia é proximamente relacionado ao vírus que causa varíola bovina. A origem precisa de vaccinia é desconhecida, mas a vista mais comum é que o vírus vaccinia, o vírus de varíola bovina e o vírus de varíola (o agente causador de smallpox) foram todos derivados de um vírus ancestral comum. Também há especulação que o vírus vaccinia foi originalmente isolado de cavalos. Uma infecção de vírus vaccinia é amena e tipicamente assintomática em indivíduos saudáveis, mas pode causar uma erupção cutânea amena e febre, com uma taxa extremamente baixa de fatalidade. Uma resposta imune gerada contra uma infecção de vírus vaccinia protege essa pessoa contra uma infecção de smallpox letal. Por essa razão, vírus vaccinia foi usado como uma vacina de vírus vivo contra smallpox. Uma vacina de vírus vaccinia é segura devido ao fato de não conter o vírus smallpox, mas ocasionalmente, certas complicações e/ou efeitos adversos de vacina podem surgir, especialmente se a vacina é imunocomprometida.
[289] As cepas exemplificativas do vírus vaccinia incluem, mas sem limitação, Copenhagen, Western Reserve, Wyeth, Lister, EM63, ACAM2000, LC16m8, CV-1, vaccinia Ankara modificado (MVA), Dairen I, GLV-1h68, IHD-J, L- IVP, LC16m8, LC16mO, Tashkent, Tian Tan e WAU86/88-1.
5.2.2. MUTANTES DE TIMIDINA QUINASE E MUTANTES DE
HEMAGLUTININA
[290] Diversos estudos clínicos atuais que testam vírus vaccinia como um vírus oncolítico portam deleções no gene Timidina Quinase (TK) viral. Essa deleção atenua o vírus, o que torna o vírus dependente mediante atividade de timidina quinase celular para replicação de DNA e, desse modo, propagação viral. A timidina quinase celular é expressa em um baixo nível na maioria de tecidos normais e em níveis elevados em muitas células cancerígenas. Através de alvejamento metabólico, o vírus TK pode crescer em células que têm uma alta taxa metabólica (por exemplo, células saudáveis ou células tumorais) e não crescerá bem em células que têm baixos níveis de timidina quinase. Visto que existem células tumorais quiescentes (por exemplo, células-tronco cancerígenas), o vírus TK é provavelmente comprometido em sua capacidade para exterminar essa população de células cancerígenas, assim como a quimioterapia é grandemente ineficaz. Em algumas modalidades, os vetores virais modificados descritos nessa divulgação retêm o mecanismo sintético de vírus (incluindo TK) e podem se propagar em células cancerígenas quiescentes. Em tais modalidades, as modificações virais dessa divulgação podem permitir que o vírus seja altamente seletivo sem deletar TK ou outras enzimas de metabolização de DNA (por exemplo, ribonucleotídeo redutase) e podem ser mais eficazes em tumores com uma baixa taxa metabólica. Em algumas modalidades, os vetores virais modificados descritos nessa divulgação compreendem um gene TK funcional (por exemplo, um gene TK do tipo selvagem). Em outras modalidades, os vetores virais modificados descritos nessa divulgação compreendem uma deleção (ou deleções) ou mutação de perda de função (ou mutações de perda de função) no gene TK.
[291] De modo similar, a inativação do gene hemaglutinina (HA) do vírus vaccinia pode resultar na atenuação do vírus. Em algumas modalidades, os vetores virais modificados descritos nessa divulgação compreendem um gene HA funcional (por exemplo, um gene HA do tipo selvagem). Em outras modalidades, os vetores virais modificados descritos nessa divulgação compreendem uma deleção (ou deleções) ou mutação de perda de função (ou mutações de perda de função) no gene HA.
[292] Em uma modalidade específica, os vetores virais modificados descritos nessa divulgação compreendem um gene TK funcional (por exemplo, um gene TK de tipo selvagem) e um gene HA funcional (por exemplo, um gene HA de tipo selvagem). Em outra modalidade específica, os vetores virais modificados descritos nessa divulgação compreendem um gene TK funcional (por exemplo, um gene TK de tipo selvagem) e uma deleção (ou deleções) ou mutação de perda de função (ou mutações de perda de função) no gene HA. Em outra modalidade específica, os vetores virais modificados descritos nessa divulgação compreendem uma deleção (ou deleções) ou mutação de perda de função (ou mutações de perda de função) no gene TK e um gene HA funcional (por exemplo, um gene HA de tipo selvagem). Em outra modalidade específica, os vetores virais modificados descritos nessa divulgação compreendem uma deleção (ou deleções) ou mutação de perda de função (ou mutações de perda de função) no gene TK e uma deleção (ou deleções) ou mutação de perda de função (mutações de perda de função) no gene HA.
5.2.3. GENOMA DE ORTOPOXVÍRUS RECOMBINANTE
[293] Em um aspecto, é fornecido no presente documento um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende: (a) deleções nos seguintes genes: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B8R, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R; (b) deleções nos seguintes genes na repetição terminal invertida 3' (ITR): B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, e B29R; e (c) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que se liga especificamente à Proteína 4 Associada a Linfócito T Citotóxico (CTLA-4); em que as deleções nos genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R são deleções parciais.
[294] Em certas modalidades, o ácido nucleico compreende adicionalmente uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos. Em uma modalidade específica, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor H5R, um promotor pS ou um promotor LEO. Em outra modalidade específica, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor H5R (por exemplo, um promotor inicial H5R, um promotor tardio H5R, ou um promotor inicial H5R e um promotor tardio H5R).
[295] Em algumas modalidades, quando os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento têm a mesma orientação, a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento. Em outras modalidades, quando os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento têm a mesma orientação, a primeira sequência de nucleotídeos está na orientação reversa em relação aos genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento. Em outras modalidades, quando os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento têm as orientações opostas, a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que o gene de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento que está mais próximo da extremidade 5’ do genoma de vírus vaccinia recombinante. Em outras modalidades, quando os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento têm as orientações opostas, a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que o gene de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento que está mais próximo da extremidade 3’ do genoma de vírus vaccinia recombinante. Em uma modalidade específica, os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento são os genes C2L e F3L. Em outra modalidade específica, os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento são os genes C3L e F4L. Em outra modalidade específica, os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento são os genes B14R e B29R. Em outra modalidade específica, os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento são os genes B13R e B29R. Em ainda outra modalidade, a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que um gene vaccinia endógeno adjacente à primeira sequência de nucleotídeos. Em uma modalidade específica, o gene vaccinia endógeno adjacente à primeira sequência de nucleotídeos é o gene B13R.
[296] Em modalidades preferenciais, os genes endógenos que flanqueiam uma sequência de nucleotídeos (isto é, os genes endógenos de flanqueamento de uma sequência de nucleotídeos) nessa divulgação são dois genes endógenos mais próximos da sequência de nucleotídeos (com um a montante e o outro a jusante da sequência de nucleotídeos). Os genes endógenos podem ser genes parciais ou genes de comprimento completo.
[297] Em modalidades específicas, o anticorpo anti-CTLA-4 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo codificado pela primeira sequência de nucleotídeos compreende as 6 regiões determinantes de complementariedade (CDRs) de ipilimumab. Em modalidades específicas, a primeira sequência de nucleotídeos codifica uma sequência de aminoácidos que compreende a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 211. Em modalidades específicas, a primeira sequência de nucleotídeos compreende a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 214. Em modalidades específicas, a primeira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 214.
[298] Em outro aspecto, é fornecido no presente documento um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende: (a) deleções nos seguintes genes: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, e B20R; (b) deleções nos seguintes genes na ITR 3’: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R e B29R; (c) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que se liga especificamente a CTLA- 4 (por exemplo, CTLA-4 humano); e (d) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor H5R, um promotor pS, ou um promotor LEO; em que as deleções nos genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R são deleções parciais. Em modalidades específicas, o ácido nucleico compreende adicionalmente uma deleção no gene B8R.
[299] Em certas modalidades, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor H5R (por exemplo, um promotor inicial H5R, um promotor tardio H5R, ou um promotor inicial H5R e um promotor tardio H5R).
[300] Em algumas modalidades, quando os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento têm a mesma orientação, a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento. Em outras modalidades, quando os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento têm a mesma orientação, a primeira sequência de nucleotídeos está na orientação reversa em relação aos genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento. Em outras modalidades, quando os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento têm as orientações opostas, a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que o gene de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento que está mais próximo da extremidade 5’ do genoma de vírus vaccinia recombinante. Em outras modalidades, quando os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento têm as orientações opostas, a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que o gene de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento que está mais próximo da extremidade 3’ do genoma de vírus vaccinia recombinante. Em uma modalidade específica, os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento são os genes C2L e F3L. Em outra modalidade específica, os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento são os genes C3L e F4L. Em outra modalidade específica, os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento são os genes B14R e B29R. Em outra modalidade específica, os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento são os genes B13R e B29R. Em ainda outra modalidade, a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que um gene vaccinia endógeno adjacente à primeira sequência de nucleotídeos. Em uma modalidade específica, o gene vaccinia endógeno adjacente à primeira sequência de nucleotídeos é o gene B13R.
[301] Em modalidades específicas, o anticorpo anti-CTLA-4 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo codificado pela primeira sequência de nucleotídeos compreende as 6 regiões determinantes de complementariedade (CDRs) de ipilimumab. Em modalidades específicas, a primeira sequência de nucleotídeos codifica uma sequência de aminoácidos que compreende a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 211. Em modalidades específicas, a primeira sequência de nucleotídeos compreende a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 214. Em modalidades específicas, a primeira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 214.
[302] Em outro aspecto, é fornecido no presente documento um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende: (a) deleções nos seguintes genes: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B8R, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R; (b) deleções nos seguintes genes na ITR 3’: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, e B29R; e (c) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de Interleucina 12 (IL-12); em que as deleções nos genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R são deleções parciais.
[303] Em certas modalidades, o ácido nucleico compreende adicionalmente uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos. Em uma modalidade específica, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos é um promotor tardio. Em uma modalidade específica adicional, o promotor tardio compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561, um promotor F17R ou um promotor D13L. Em outra modalidade específica adicional, o promotor tardio compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561. Em outra modalidade, o promotor F17R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO:563. Em ainda outra modalidade, o promotor D13L compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO:562.
[304] Em algumas modalidades, quando os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento têm a mesma orientação, a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento. Em outras modalidades, quando os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento têm a mesma orientação, a segunda sequência de nucleotídeos está na orientação reversa em relação aos genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento. Em outras modalidades, quando os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento têm as orientações opostas, a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que o gene de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento que está mais próximo da extremidade 5’ do genoma de vírus vaccinia recombinante. Em outras modalidades, quando os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento têm as orientações opostas, a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que o gene de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento que está mais próximo da extremidade 3’ do genoma de vírus vaccinia recombinante. Em uma modalidade específica, os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento são os genes C2L e F3L. Em outra modalidade específica, os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento são os genes C3L e F4L. Em outra modalidade específica, os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento são os genes B14R e B29R. Em outra modalidade específica, os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento são os genes B13R e B29R. Em ainda outra modalidade, a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que um gene vaccinia endógeno adjacente à segunda sequência de nucleotídeos. Em uma modalidade específica, o gene vaccinia endógeno adjacente à segunda sequência de nucleotídeos é o gene B13R.
[305] Em modalidades específicas, o polipeptídeo de IL-12 é ligado à membrana. Em modalidades específicas, o polipeptídeo de IL-12 compreende p35 de IL-12 (por exemplo, p35 de IL-12 humana), p40 de IL-12 (por exemplo, p40 de IL-12 humana) ou p70 de IL-12 (por exemplo, p70 de IL-12 humana). Em modalidades específicas, o polipeptídeo de IL-12 é ligado à membrana e compreende p35 de IL-12 (por exemplo, p35 de IL-12 humana), ou p70 de IL-12 (por exemplo, p70 de IL-12 humana), e um domínio transmembranar e um domínio citoplásmico (por exemplo, domínios transmembranares e citoplásmicos de B7-1, TNFα ou FLT3L). Em modalidades específicas, o polipeptídeo de IL-12 compreende a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 212. Em modalidades específicas, a segunda sequência de nucleotídeos compreende a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 215. Em modalidades específicas, a segunda sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 215.
[306] Em outro aspecto, é fornecido no presente documento um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende: (a) deleções nos seguintes genes: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, e B20R; (b) deleções nos seguintes genes na ITR 3’: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R e B29R; (c) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12; e (d) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos é um promotor tardio; em que as deleções nos genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R são deleções parciais. Em modalidades específicas, o ácido nucleico compreende adicionalmente uma deleção no gene B8R.
[307] Em certas modalidades, o promotor tardio compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561, um promotor F17R ou um promotor D13L. Em uma modalidade específica, o promotor tardio compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561. Em outra modalidade, o promotor F17R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO:563. Em ainda outra modalidade, o promotor D13L compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO:562.
[308] Em algumas modalidades, quando os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento têm a mesma orientação, a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento. Em outras modalidades, quando os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento têm a mesma orientação, a segunda sequência de nucleotídeos está na orientação reversa em relação aos genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento. Em outras modalidades, quando os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento têm as orientações opostas, a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que o gene de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento que está mais próximo da extremidade 5’ do genoma de vírus vaccinia recombinante. Em outras modalidades, quando os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento têm as orientações opostas, a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que o gene de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento que está mais próximo da extremidade 3’ do genoma de vírus vaccinia recombinante. Em uma modalidade específica, os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento são os genes C2L e F3L. Em outra modalidade específica, os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento são os genes C3L e F4L. Em outra modalidade específica, os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento são os genes B14R e B29R. Em outra modalidade específica, os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento são os genes B13R e B29R. Em ainda outra modalidade, a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que um gene vaccinia endógeno adjacente à segunda sequência de nucleotídeos. Em uma modalidade específica, o gene vaccinia endógeno adjacente à segunda sequência de nucleotídeos é o gene B13R.
[309] Em modalidades específicas, o polipeptídeo de IL-12 é ligado à membrana. Em modalidades específicas, o polipeptídeo de IL-12 compreende p35 de IL-12 (por exemplo, p35 de IL-12 humana), p40 de IL-12 (por exemplo, p40 de IL-12 humana) ou p70 de IL-12 (por exemplo, p70 de IL-12 humana). Em modalidades específicas, o polipeptídeo de IL-12 é ligado à membrana e compreende p35 de IL-12 (por exemplo, p35 de IL-12 humana), ou p70 de IL-12 (por exemplo, p70 de IL-12 humana), e um domínio transmembranar e um domínio citoplásmico (por exemplo, domínios transmembranares e citoplásmicos de B7-1, TNFα ou FLT3L). Em modalidades específicas, o polipeptídeo de IL-12 compreende a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 212. Em modalidades específicas, a segunda sequência de nucleotídeos compreende a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 215. Em modalidades específicas, a segunda sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 215.
[310] Em outro aspecto, é fornecido no presente documento um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende: (a) deleções nos seguintes genes: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B8R, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R; (b) deleções nos seguintes genes na ITR 3’: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R e B29R; e (c) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica o ligante de tirosina quinase 3 de tipo FMS (FLT3L); em que as deleções nos genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R são deleções parciais.
[311] Em certas modalidades, o ácido nucleico compreende adicionalmente uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos. Em uma modalidade específica, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R, um promotor B19R, um promotor E3L, um promotor F11L e/ou um promotor B2R. Em outra modalidade específica, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R. Em outra modalidade específica, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B19R. Em outra modalidade específica, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R e um promotor B19R. Em uma modalidade particular, o promotor B8R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 564. Em uma modalidade particular, o promotor B19R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 565. Em uma modalidade particular, o promotor E3L compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 567. Em uma modalidade particular, o promotor F11L compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 568. Em uma modalidade particular, o promotor B2R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 569.
[312] Em algumas modalidades, quando os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento têm a mesma orientação, a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento. Em outras modalidades, quando os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento têm a mesma orientação, a terceira sequência de nucleotídeos está na orientação reversa em relação aos genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento. Em outras modalidades, quando os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento têm as orientações opostas, a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que o gene de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento que está mais próximo da extremidade 5’ do genoma de vírus vaccinia recombinante. Em outras modalidades, quando os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento têm as orientações opostas, a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que o gene de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento que está mais próximo da extremidade 3’ do genoma de vírus vaccinia recombinante. Em uma modalidade específica, os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento são os genes C2L e F3L. Em outra modalidade específica, os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento são os genes C3L e F4L. Em outra modalidade específica, os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento são os genes B14R e B29R. Em outra modalidade específica, os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento são os genes B13R e B29R. Em ainda outra modalidade, a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que um gene vaccinia endógeno adjacente à terceira sequência de nucleotídeos. Em uma modalidade específica, o gene vaccinia endógeno adjacente à terceira sequência de nucleotídeos é o gene B13R.
[313] Em modalidades específicas, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos é uma forma solúvel de FLT3L. Em particular modalidades, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos é uma forma solúvel de FLT3L humano. Em certas modalidades, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos é uma forma solúvel do FLT3L humano estabelecido no nº de Acesso GenBank U03858.1. Por exemplo, em modalidades específicas, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o FLT3L transmembranar inteiro (por exemplo, o domínio transmembranar do FLT3L humano estabelecido em nº de acesso GenBank U03858.1). Em outros exemplos, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L (por exemplo, o domínio transmembranar do FLT3L humano estabelecido no nº de Acesso GenBank U03858.1). Em uma modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro e o domínio citoplásmico de FLT3L inteiro. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L e do domínio citoplásmico de FLT3L inteiro. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L e pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio citoplásmico FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro e 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 13, 14 ou 15 dos resíduos de aminoácido N-terminal do domínio citoplásmico de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro e 1, 2, 3 ou 4 dos resíduos de aminoácido N-terminal do domínio citoplásmico de FLT3L. Em certas modalidades e aspectos, os domínios transmembranares e citoplásmicos são da sequência FLT3L estabelecida no nº de Acesso GenBank U03858.1.
[314] Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro e 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro e 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro e 1-5, 1-10, 5-10, 10-20, 15- 20, 1-20, 5-20 ou 10-20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em certas modalidades e aspectos, os domínios transmembranares e extracelulares são da sequência FLT3L estabelecida no nº de Acesso GenBank
U03858.1.
[315] Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L e 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L e 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L e 1-5, 1-10, 5-10, 10-20, 15-20, 1-20, 5-20 ou 10-20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em certas modalidades e aspectos, os domínios transmembranares e extracelulares são da sequência FLT3L estabelecida no nº de Acesso GenBank U03858.1.
[316] Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro, o domínio citoplásmico inteiro, e 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro, o domínio citoplásmico inteiro, e 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro, o domínio citoplásmico inteiro, e 1-5, 1- 10, 5-10, 10-20, 15-20, 1-20, 5-20 ou 10-20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em certas modalidades e aspectos, os domínios transmembranares, citoplásmicos e extracelulares são da sequência FLT3L estabelecida no nº de Acesso GenBank U03858.1.
[317] Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L,
do domínio citoplásmico inteiro, e 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L, do domínio citoplásmico inteiro, e 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L, do domínio citoplásmico inteiro, e 1-5, 1-10, 5-10, 10-20, 15-20, 1-20, 5-20 ou 10- 20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em certas modalidades e aspectos, os domínios transmembranares, citoplásmicos e extracelulares são da sequência FLT3L estabelecida no nº de Acesso GenBank U03858.1.
[318] Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio citoplásmico, e 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio citoplásmico, e 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio citoplásmico, e 1-5, 1-10, 5-10, 10-20, 15-20, 1-20, 5-
20 ou 10-20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em certas modalidades e aspectos, os domínios transmembranares, citoplásmicos e extracelulares são da sequência FLT3L estabelecida no nº de Acesso GenBank U03858.1.
[319] Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio citoplásmico, e 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio citoplásmico, e 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio citoplásmico, e 1-5, 1-10, 5-10, 10-20, 15-20, 1-20, 5-20 ou 10-20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em certas modalidades e aspectos, os domínios transmembranares, citoplásmicos e extracelulares são da sequência FLT3L estabelecida no nº de Acesso GenBank U03858.1.
[320] Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 13, 14 ou 15 dos resíduos de aminoácido N-terminal do domínio citoplásmico, e 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 13, 14 ou 15 dos resíduos de aminoácido N- terminal do domínio citoplásmico, e 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 13, 14 ou 15 dos resíduos de aminoácido N-terminal do domínio citoplásmico, e 1-5, 1-10, 5- 10, 10-20, 15-20, 1-20, 5-20 ou 10-20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em certas modalidades e aspectos, os domínios transmembranares, citoplásmicos e extracelulares são da sequência FLT3L estabelecida no nº de Acesso GenBank U03858.1.
[321] Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 13, 14, ou 15 dos resíduos de aminoácido N-terminal do domínio citoplásmico, e 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 13, 14, ou 15 dos resíduos de aminoácido N-terminal do domínio citoplásmico, e 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 13, 14, ou 15 dos resíduos de aminoácido N-terminal do domínio citoplásmico, e 1-5, 1-10, 5-10, 10-20, 15-20, 1-20, 5-20 ou 10-20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em certas modalidades e aspectos, os domínios transmembranares, citoplásmicos e extracelulares são da sequência FLT3L estabelecida no nº de Acesso GenBank U03858.1.
[322] Em uma modalidade específica, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos é uma isoforma X7 e a terceira sequência de nucleotídeos não tem uma sequência de 179 nucleotídeos conforme descrito em Lyman et al., 1994, Blood 83:2795-2801. Em modalidades específicas, o FLT3L compreende a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 213. Em modalidades específicas, a terceira sequência de nucleotídeos compreende a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 216. Em modalidades específicas, a terceira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 216.
[323] Em outro aspecto, é fornecido no presente documento um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende: (a) deleções nos seguintes genes: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, e B20R; (b) deleções nos seguintes genes na ITR 3’: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R e B29R; (c) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L; e (d) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R, um promotor B19R, um promotor E3L, um promotor F11L, e/ou um promotor B2R; em que as deleções nos genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R são deleções parciais. Em modalidades específicas, o ácido nucleico compreende adicionalmente uma deleção no gene B8R. Em uma modalidade particular, o promotor B8R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 564. Em uma modalidade particular, o promotor B19R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 565. Em uma modalidade particular, o promotor E3L compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 567. Em uma modalidade particular, o promotor F11L compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 568. Em uma modalidade particular, o promotor B2R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 569.
[324] Em certas modalidades, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R. Em certas modalidades, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B19R. Em certas modalidades, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R e um promotor B19R. Em uma modalidade particular, o promotor B8R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 564. Em uma modalidade particular, o promotor B19R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 565.
[325] Em algumas modalidades, quando os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento têm a mesma orientação, a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento. Em outras modalidades, quando os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento têm a mesma orientação, a terceira sequência de nucleotídeos está na orientação reversa em relação aos genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento. Em outras modalidades, quando os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento têm as orientações opostas, a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que o gene de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento que está mais próximo da extremidade 5’ do genoma de vírus vaccinia recombinante. Em outras modalidades, quando os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento têm as orientações opostas, a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que o gene de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento que está mais próximo da extremidade 3’ do genoma de vírus vaccinia recombinante. Em uma modalidade específica, os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento são os genes C2L e F3L. Em outra modalidade específica, os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento são os genes C3L e F4L. Em outra modalidade específica, os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento são os genes B14R e B29R. Em outra modalidade específica, os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento são os genes B13R e B29R. Em ainda outra modalidade, a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que um gene vaccinia endógeno adjacente à terceira sequência de nucleotídeos. Em uma modalidade específica, o gene vaccinia endógeno adjacente à terceira sequência de nucleotídeos é o gene B13R.
[326] Em modalidades específicas, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos é uma forma solúvel de FLT3L. Em particular modalidades, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos é uma forma solúvel de FLT3L humano. Em certas modalidades, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos é uma forma solúvel do FLT3L humano estabelecido no nº de Acesso GenBank U03858.1. Por exemplo, em modalidades específicas, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o FLT3L transmembranar inteiro (por exemplo, o domínio transmembranar do FLT3L humano estabelecido em nº de acesso GenBank U03858.1). Em outros exemplos, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L (por exemplo, o domínio transmembranar do FLT3L humano estabelecido no nº de Acesso GenBank U03858.1). Em uma modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro e o domínio citoplásmico de FLT3L inteiro. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L e do domínio citoplásmico de FLT3L inteiro. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L e pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio citoplásmico FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro e 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 13, 14 ou 15 dos resíduos de aminoácido N-terminal do domínio citoplásmico de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro e 1, 2, 3 ou 4 dos resíduos de aminoácido N-terminal do domínio citoplásmico de FLT3L. Em certas modalidades e aspectos, os domínios transmembranares e citoplásmicos são da sequência FLT3L estabelecida no nº de Acesso GenBank U03858.1.
[327] Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro e 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro e 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L.
Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro e 1-5, 1-10, 5-10, 10-20, 15- 20, 1-20, 5-20 ou 10-20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em certas modalidades e aspectos, os domínios transmembranares e extracelulares são da sequência FLT3L estabelecida no nº de Acesso GenBank U03858.1.
[328] Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L e 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L e 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L e 1-5, 1-10, 5-10, 10-20, 15-20, 1-20, 5-20 ou 10-20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em certas modalidades e aspectos, os domínios transmembranares e extracelulares são da sequência FLT3L estabelecida no nº de Acesso GenBank U03858.1.
[329] Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro, o domínio citoplásmico inteiro, e 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro, o domínio citoplásmico inteiro, e 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro, o domínio citoplásmico inteiro, e 1-5, 1- 10, 5-10, 10-20, 15-20, 1-20, 5-20 ou 10-20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em certas modalidades e aspectos, os domínios transmembranares, citoplásmicos e extracelulares são da sequência FLT3L estabelecida no nº de Acesso GenBank U03858.1.
[330] Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L, do domínio citoplásmico inteiro, e 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L, do domínio citoplásmico inteiro, e 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L, do domínio citoplásmico inteiro, e 1-5, 1-10, 5-10, 10-20, 15-20, 1-20, 5-20 ou 10- 20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em certas modalidades e aspectos, os domínios transmembranares, citoplásmicos e extracelulares são da sequência FLT3L estabelecida no nº de Acesso GenBank U03858.1.
[331] Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio citoplásmico, e 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio citoplásmico, e 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio citoplásmico, e 1-5, 1-10, 5-10, 10-20, 15-20, 1-20, 5- 20 ou 10-20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em certas modalidades e aspectos, os domínios transmembranares, citoplásmicos e extracelulares são da sequência FLT3L estabelecida no nº de Acesso GenBank U03858.1.
[332] Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio citoplásmico, e 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio citoplásmico, e 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio citoplásmico, e 1-5, 1-10, 5-10, 10-20, 15-20, 1-20, 5-20 ou 10-20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em certas modalidades e aspectos, os domínios transmembranares, citoplásmicos e extracelulares são da sequência FLT3L estabelecida no nº de Acesso GenBank U03858.1.
[333] Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 13, 14 ou 15 dos resíduos de aminoácido N-terminal do domínio citoplásmico, e 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 13, 14 ou 15 dos resíduos de aminoácido N- terminal do domínio citoplásmico, e 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 13, 14 ou 15 dos resíduos de aminoácido N-terminal do domínio citoplásmico, e 1-5, 1-10, 5- 10, 10-20, 15-20, 1-20, 5-20 ou 10-20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em certas modalidades e aspectos, os domínios transmembranares, citoplásmicos e extracelulares são da sequência FLT3L estabelecida no nº de Acesso GenBank U03858.1.
[334] Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 13, 14, ou 15 dos resíduos de aminoácido N-terminal do domínio citoplásmico, e 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 13, 14, ou 15 dos resíduos de aminoácido N-terminal do domínio citoplásmico, e 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 13, 14, ou 15 dos resíduos de aminoácido N-terminal do domínio citoplásmico, e 1-5, 1-10, 5-10, 10-20, 15-20, 1-20, 5-20 ou 10-20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em certas modalidades e aspectos, os domínios transmembranares, citoplásmicos e extracelulares são da sequência FLT3L estabelecida no nº de Acesso GenBank U03858.1.
[335] Em uma modalidade específica, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos é uma isoforma X7 e a terceira sequência de nucleotídeos não tem uma sequência de 179 nucleotídeos conforme descrito em Lyman et al., 1994, Blood 83:2795-2801. Em modalidades específicas, o FLT3L compreende a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 213. Em modalidades específicas, a terceira sequência de nucleotídeos compreende a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 216. Em modalidades específicas, a terceira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 216.
[336] Em outro aspecto, é fornecido no presente documento um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende: (a) deleções nos seguintes genes: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B8R, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R; (b) deleções nos seguintes genes na ITR 3’: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, e B29R; (c) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que se liga especificamente a CTLA-4 (por exemplo, CTLA-4 humano); e (d) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12; em que as deleções nos genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R são deleções parciais.
[337] Em certas modalidades, o ácido nucleico compreende adicionalmente uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos. Em uma modalidade específica, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor H5R, um promotor pS ou um promotor LEO. Em outra modalidade específica, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor H5R (por exemplo, um promotor inicial H5R, um promotor tardio H5R, ou um promotor inicial H5R e um promotor tardio H5R).
[338] Em certas modalidades, o ácido nucleico compreende adicionalmente uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos. Em uma modalidade específica, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos é um promotor tardio. Em uma modalidade específica adicional, o promotor tardio compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561, um promotor F17R ou um promotor D13L. Em outra modalidade específica adicional, o promotor tardio compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561. Em outra modalidade, o promotor F17R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO:563. Em ainda outra modalidade, o promotor D13L compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO:562.
[339] Em algumas modalidades, quando os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da primeira sequência de nucleotídeos têm a mesma orientação, a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento. Em outras modalidades, quando os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da primeira sequência de nucleotídeos têm a mesma orientação, a primeira sequência de nucleotídeos está na orientação reversa em relação aos genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento. Em outras modalidades, quando os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da primeira sequência de nucleotídeos têm as orientações opostas, a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que o gene de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento que está mais próximo da extremidade 5’ do genoma de vírus vaccinia recombinante. Em outras modalidades, quando os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da primeira sequência de nucleotídeos têm as orientações opostas, a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que o gene de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento que está mais próximo da extremidade 3’ do genoma de vírus vaccinia recombinante. Em uma modalidade específica, os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da primeira sequência de nucleotídeos são os genes C2L e F3L. Em outra modalidade específica, os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da primeira sequência de nucleotídeos são os genes C3L e F4L. Em outra modalidade específica, os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da primeira sequência de nucleotídeos são os genes B14R e
B29R.
Em outra modalidade específica, os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da primeira sequência de nucleotídeos são os genes B13R e B29R.
Em ainda outra modalidade, a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que um gene vaccinia endógeno adjacente à primeira sequência de nucleotídeos.
Em uma modalidade específica, o gene vaccinia endógeno adjacente à primeira sequência de nucleotídeos é o gene B13R.
Em algumas modalidades, quando os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da segunda sequência de nucleotídeos têm a mesma orientação, a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento.
Em outras modalidades, quando os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da segunda sequência de nucleotídeos têm a mesma orientação, a segunda sequência de nucleotídeos está na orientação reversa em relação aos genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento.
Em outras modalidades, quando os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da segunda sequência de nucleotídeos têm as orientações opostas, a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que o gene de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento que está mais próximo da extremidade 5’ do genoma de vírus vaccinia recombinante.
Em outras modalidades, quando os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da segunda sequência de nucleotídeos têm as orientações opostas, a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que o gene de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento que está mais próximo da extremidade 3’ do genoma de vírus vaccinia recombinante.
Em uma modalidade específica, os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da segunda sequência de nucleotídeos são os genes C2L e F3L.
Em outra modalidade específica, os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da segunda sequência de nucleotídeos são os genes C3L e F4L.
Em outra modalidade específica, os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da segunda sequência de nucleotídeos são os genes B14R e B29R.
Em outra modalidade específica, os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da segunda sequência de nucleotídeos são os genes B13R e B29R.
Em ainda outra modalidade, a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que um gene vaccinia endógeno adjacente à segunda sequência de nucleotídeos.
Em uma modalidade específica, o gene vaccinia endógeno adjacente à segunda sequência de nucleotídeos é o gene B13R.
[340] Em modalidades específicas, o anticorpo anti-CTLA-4 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo codificado pela primeira sequência de nucleotídeos compreende as 6 regiões determinantes de complementariedade (CDRs) de ipilimumab. Em modalidades específicas, a primeira sequência de nucleotídeos codifica uma sequência de aminoácidos que compreende a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 211. Em modalidades específicas, a primeira sequência de nucleotídeos compreende a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 214. Em modalidades específicas, a primeira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 214.
[341] Em modalidades específicas, o polipeptídeo de IL-12 é ligado à membrana. Em modalidades específicas, o polipeptídeo de IL-12 compreende p35 de IL-12 (por exemplo, p35 de IL-12 humana), p40 de IL-12 (por exemplo, p40 de IL-12 humana) ou p70 de IL-12 (por exemplo, p70 de IL-12 humana). Em modalidades específicas, o polipeptídeo de IL-12 é ligado à membrana e compreende p35 de IL-12 (por exemplo, p35 de IL-12 humana), ou p70 de IL-12 (por exemplo, p70 de IL-12 humana), e um domínio transmembranar e um domínio citoplásmico (por exemplo, domínios transmembranares e citoplásmicos de B7-1, TNFα ou FLT3L). Em modalidades específicas, o polipeptídeo de IL-12 compreende a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 212. Em modalidades específicas, a segunda sequência de nucleotídeos compreende a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 215. Em modalidades específicas, a segunda sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 215.
[342] Em outro aspecto, é fornecido no presente documento um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende: (a) deleções nos seguintes genes: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, e B20R; (b) deleções nos seguintes genes na ITR 3’: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, e B29R; (c) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que se liga especificamente a CTLA-
4 (por exemplo, CTLA-4 humano); e (d) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12; em que as deleções nos genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R são deleções parciais; e em que o ácido nucleico compreende adicionalmente: (i) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor H5R, um promotor pS, ou um promotor LEO; e/ou (ii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos é um promotor tardio. Em modalidades específicas, o ácido nucleico compreende adicionalmente uma deleção no gene B8R.
[343] Em certas modalidades, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor H5R (por exemplo, um promotor inicial H5R, um promotor tardio H5R, ou um promotor inicial H5R e um promotor tardio H5R).
[344] Em certas modalidades, o promotor tardio compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561, um promotor F17R ou um promotor D13L. Em uma modalidade específica, o promotor tardio compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561. Em outra modalidade, o promotor F17R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO:563. Em ainda outra modalidade, o promotor D13L compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO:562.
[345] Em algumas modalidades, quando os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da primeira sequência de nucleotídeos têm a mesma orientação, a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento. Em outras modalidades, quando os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da primeira sequência de nucleotídeos têm a mesma orientação, a primeira sequência de nucleotídeos está na orientação reversa em relação aos genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento. Em outras modalidades, quando os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da primeira sequência de nucleotídeos têm as orientações opostas, a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que o gene de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento que está mais próximo da extremidade 5’ do genoma de vírus vaccinia recombinante.
Em outras modalidades, quando os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da primeira sequência de nucleotídeos têm as orientações opostas, a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que o gene de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento que está mais próximo da extremidade 3’ do genoma de vírus vaccinia recombinante.
Em uma modalidade específica, os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da primeira sequência de nucleotídeos são os genes C2L e F3L.
Em outra modalidade específica, os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da primeira sequência de nucleotídeos são os genes C3L e F4L.
Em outra modalidade específica, os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da primeira sequência de nucleotídeos são os genes B14R e B29R.
Em outra modalidade específica, os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da primeira sequência de nucleotídeos são os genes B13R e B29R.
Em ainda outra modalidade, a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que um gene vaccinia endógeno adjacente à primeira sequência de nucleotídeos.
Em uma modalidade específica, o gene vaccinia endógeno adjacente à primeira sequência de nucleotídeos é o gene B13R.
Em algumas modalidades, quando os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da segunda sequência de nucleotídeos têm a mesma orientação, a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento.
Em outras modalidades, quando os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da segunda sequência de nucleotídeos têm a mesma orientação, a segunda sequência de nucleotídeos está na orientação reversa em relação aos genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento.
Em outras modalidades, quando os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da segunda sequência de nucleotídeos têm as orientações opostas, a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que o gene de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento que está mais próximo da extremidade 5’ do genoma de vírus vaccinia recombinante.
Em outras modalidades, quando os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da segunda sequência de nucleotídeos têm as orientações opostas, a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que o gene de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento que está mais próximo da extremidade 3’ do genoma de vírus vaccinia recombinante. Em uma modalidade específica, os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da segunda sequência de nucleotídeos são os genes C2L e F3L. Em outra modalidade específica, os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da segunda sequência de nucleotídeos são os genes C3L e F4L. Em outra modalidade específica, os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da segunda sequência de nucleotídeos são os genes B14R e B29R. Em outra modalidade específica, os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da segunda sequência de nucleotídeos são os genes B13R e B29R. Em ainda outra modalidade, a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que um gene vaccinia endógeno adjacente à segunda sequência de nucleotídeos. Em uma modalidade específica, o gene vaccinia endógeno adjacente à segunda sequência de nucleotídeos é o gene B13R.
[346] Em modalidades específicas, o anticorpo anti-CTLA-4 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo codificado pela primeira sequência de nucleotídeos compreende as 6 regiões determinantes de complementariedade (CDRs) de ipilimumab. Em modalidades específicas, a primeira sequência de nucleotídeos codifica uma sequência de aminoácidos que compreende a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 211. Em modalidades específicas, a primeira sequência de nucleotídeos compreende a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 214. Em modalidades específicas, a primeira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 214.
[347] Em modalidades específicas, o polipeptídeo de IL-12 é ligado à membrana. Em modalidades específicas, o polipeptídeo de IL-12 compreende p35 de IL-12 (por exemplo, p35 de IL-12 humana), p40 de IL-12 (por exemplo, p40 de IL-12 humana) ou p70 de IL-12 (por exemplo, p70 de IL-12 humana). Em modalidades específicas, o polipeptídeo de IL-12 é ligado à membrana e compreende p35 de IL-12 (por exemplo, p35 de IL-12 humana), ou p70 de IL-12 (por exemplo, p70 de IL-12 humana), e um domínio transmembranar e um domínio citoplásmico (por exemplo, domínios transmembranares e citoplásmicos de B7-1, TNFα ou FLT3L). Em modalidades específicas, o polipeptídeo de IL-12 compreende a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 212. Em modalidades específicas, a segunda sequência de nucleotídeos compreende a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 215. Em modalidades específicas, a segunda sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 215.
[348] Em outro aspecto, é fornecido no presente documento um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende: (a) deleções nos seguintes genes: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B8R, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R; (b) deleções nos seguintes genes na ITR 3’: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R e B29R; (c) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que se liga especificamente a CTLA-4 (por exemplo, CTLA-4 humano); e (d) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L; em que as deleções nos genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R são deleções parciais.
[349] Em certas modalidades, o ácido nucleico compreende adicionalmente uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos. Em uma modalidade específica, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor H5R, um promotor pS ou um promotor LEO. Em outra modalidade específica, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor H5R (por exemplo, um promotor inicial H5R, um promotor tardio H5R, ou um promotor inicial H5R e um promotor tardio H5R).
[350] Em certas modalidades, o ácido nucleico compreende adicionalmente uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos. Em uma modalidade específica, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R, um promotor B19R, um promotor E3L, um promotor F11L e/ou um promotor B2R. Em outra modalidade específica, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R. Em outra modalidade específica, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B19R. Em outra modalidade específica, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R e um promotor B19R. Em uma modalidade particular, o promotor B8R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 564. Em uma modalidade particular, o promotor B19R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 565. Em uma modalidade particular, o promotor E3L compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 567. Em uma modalidade particular, o promotor F11L compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 568. Em uma modalidade particular, o promotor B2R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 569.
[351] Em algumas modalidades, quando os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da primeira sequência de nucleotídeos têm a mesma orientação, a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento. Em outras modalidades, quando os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da primeira sequência de nucleotídeos têm a mesma orientação, a primeira sequência de nucleotídeos está na orientação reversa em relação aos genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento. Em outras modalidades, quando os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da primeira sequência de nucleotídeos têm as orientações opostas, a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que o gene de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento que está mais próximo da extremidade 5’ do genoma de vírus vaccinia recombinante. Em outras modalidades, quando os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da primeira sequência de nucleotídeos têm as orientações opostas, a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que o gene de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento que está mais próximo da extremidade 3’ do genoma de vírus vaccinia recombinante. Em uma modalidade específica, os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da primeira sequência de nucleotídeos são os genes C2L e F3L.
Em outra modalidade específica, os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da primeira sequência de nucleotídeos são os genes C3L e F4L.
Em outra modalidade específica, os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da primeira sequência de nucleotídeos são os genes B14R e B29R.
Em outra modalidade específica, os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da primeira sequência de nucleotídeos são os genes B13R e B29R.
Em ainda outra modalidade, a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que um gene vaccinia endógeno adjacente à primeira sequência de nucleotídeos.
Em uma modalidade específica, o gene vaccinia endógeno adjacente à primeira sequência de nucleotídeos é o gene B13R.
Em algumas modalidades, quando os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da terceira sequência de nucleotídeos têm a mesma orientação, a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento.
Em outras modalidades, quando os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da terceira sequência de nucleotídeos têm a mesma orientação, a terceira sequência de nucleotídeos está na orientação reversa em relação aos genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento.
Em outras modalidades, quando os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da terceira sequência de nucleotídeos têm as orientações opostas, a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que o gene de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento que está mais próximo da extremidade 5’ do genoma de vírus vaccinia recombinante.
Em outras modalidades, quando os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da terceira sequência de nucleotídeos têm as orientações opostas, a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que o gene de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento que está mais próximo da extremidade 3’ do genoma de vírus vaccinia recombinante.
Em uma modalidade específica, os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da terceira sequência de nucleotídeos são os genes C2L e F3L.
Em outra modalidade específica, os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da terceira sequência de nucleotídeos são os genes C3L e F4L.
Em outra modalidade específica, os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da terceira sequência de nucleotídeos são os genes B14R e B29R.
Em outra modalidade específica, os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da terceira sequência de nucleotídeos são os genes B13R e B29R. Em ainda outra modalidade, a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que um gene vaccinia endógeno adjacente à terceira sequência de nucleotídeos. Em uma modalidade específica, o gene vaccinia endógeno adjacente à terceira sequência de nucleotídeos é o gene B13R.
[352] Em modalidades específicas, o anticorpo anti-CTLA-4 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo codificado pela primeira sequência de nucleotídeos compreende as 6 regiões determinantes de complementariedade (CDRs) de ipilimumab. Em modalidades específicas, a primeira sequência de nucleotídeos codifica uma sequência de aminoácidos que compreende a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 211. Em modalidades específicas, a primeira sequência de nucleotídeos compreende a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 214. Em modalidades específicas, a primeira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 214.
[353] Em modalidades específicas, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos é uma forma solúvel de FLT3L. Em particular modalidades, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos é uma forma solúvel de FLT3L humano. Em certas modalidades, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos é uma forma solúvel do FLT3L humano estabelecido no nº de Acesso GenBank U03858.1. Por exemplo, em modalidades específicas, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o FLT3L transmembranar inteiro (por exemplo, o domínio transmembranar do FLT3L humano estabelecido em nº de acesso GenBank U03858.1). Em outros exemplos, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L (por exemplo, o domínio transmembranar do FLT3L humano estabelecido no nº de Acesso GenBank U03858.1). Em uma modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro e o domínio citoplásmico de FLT3L inteiro. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L e do domínio citoplásmico de FLT3L inteiro. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L e pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio citoplásmico FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro e 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 13, 14 ou 15 dos resíduos de aminoácido N-terminal do domínio citoplásmico de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro e 1, 2, 3 ou 4 dos resíduos de aminoácido N-terminal do domínio citoplásmico de FLT3L. Em certas modalidades e aspectos, os domínios transmembranares e citoplásmicos são da sequência FLT3L estabelecida no nº de Acesso GenBank U03858.1.
[354] Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro e 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro e 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro e 1-5, 1-10, 5-10, 10-20, 15- 20, 1-20, 5-20 ou 10-20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em certas modalidades e aspectos, os domínios transmembranares e extracelulares são da sequência FLT3L estabelecida no nº de Acesso GenBank U03858.1.
[355] Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L e 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L e 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L e 1-5, 1-10, 5-10, 10-20, 15-20, 1-20, 5-20 ou 10-20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em certas modalidades e aspectos, os domínios transmembranares e extracelulares são da sequência FLT3L estabelecida no nº de Acesso GenBank U03858.1.
[356] Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro, o domínio citoplásmico inteiro, e 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro, o domínio citoplásmico inteiro, e 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro, o domínio citoplásmico inteiro, e 1-5, 1- 10, 5-10, 10-20, 15-20, 1-20, 5-20 ou 10-20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em certas modalidades e aspectos, os domínios transmembranares, citoplásmicos e extracelulares são da sequência FLT3L estabelecida no nº de Acesso GenBank U03858.1.
[357] Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L, do domínio citoplásmico inteiro, e 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L, do domínio citoplásmico inteiro, e 11, 12, 13,
14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L, do domínio citoplásmico inteiro, e 1-5, 1-10, 5-10, 10-20, 15-20, 1-20, 5-20 ou 10- 20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em certas modalidades e aspectos, os domínios transmembranares, citoplásmicos e extracelulares são da sequência FLT3L estabelecida no nº de Acesso GenBank U03858.1.
[358] Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio citoplásmico, e 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio citoplásmico, e 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio citoplásmico, e 1-5, 1-10, 5-10, 10-20, 15-20, 1-20, 5- 20 ou 10-20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em certas modalidades e aspectos, os domínios transmembranares, citoplásmicos e extracelulares são da sequência FLT3L estabelecida no nº de Acesso GenBank U03858.1.
[359] Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio citoplásmico, e 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio citoplásmico, e 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio citoplásmico, e 1-5, 1-10, 5-10, 10-20, 15-20, 1-20, 5-20 ou 10-20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em certas modalidades e aspectos, os domínios transmembranares, citoplásmicos e extracelulares são da sequência FLT3L estabelecida no nº de Acesso GenBank U03858.1.
[360] Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 13, 14 ou 15 dos resíduos de aminoácido N-terminal do domínio citoplásmico, e 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 13, 14 ou 15 dos resíduos de aminoácido N- terminal do domínio citoplásmico, e 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 13, 14 ou 15 dos resíduos de aminoácido N-terminal do domínio citoplásmico, e 1-5, 1-10, 5-
10, 10-20, 15-20, 1-20, 5-20 ou 10-20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em certas modalidades e aspectos, os domínios transmembranares, citoplásmicos e extracelulares são da sequência FLT3L estabelecida no nº de Acesso GenBank U03858.1.
[361] Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 13, 14, ou 15 dos resíduos de aminoácido N-terminal do domínio citoplásmico, e 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 13, 14, ou 15 dos resíduos de aminoácido N-terminal do domínio citoplásmico, e 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 13, 14, ou 15 dos resíduos de aminoácido N-terminal do domínio citoplásmico, e 1-5, 1-10, 5-10, 10-20, 15-20, 1-20, 5-20 ou 10-20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em certas modalidades e aspectos, os domínios transmembranares, citoplásmicos e extracelulares são da sequência FLT3L estabelecida no nº de Acesso GenBank U03858.1.
[362] Em uma modalidade específica, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos é uma isoforma X7 e a terceira sequência de nucleotídeos não tem uma sequência de 179 nucleotídeos conforme descrito em Lyman et al., 1994, Blood 83:2795-2801. Em modalidades específicas, o FLT3L compreende a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 213. Em modalidades específicas, a terceira sequência de nucleotídeos compreende a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 216. Em modalidades específicas, a terceira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 216.
[363] Em outro aspecto, é fornecido no presente documento um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende: (a) deleções nos seguintes genes: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, e B20R; (b) deleções nos seguintes genes na ITR 3’: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R e B29R; (c) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que se liga especificamente a CTLA- 4 (por exemplo, CTLA-4 humano); e (d) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L; em que as deleções nos genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R são deleções parciais; e em que o ácido nucleico compreende adicionalmente: (i) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor H5R, um promotor pS, ou um promotor LEO; e/ou (ii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R, um promotor B19R, um promotor E3L, um promotor F11L e/ou um promotor B2R. Em modalidades específicas, o ácido nucleico compreende adicionalmente uma deleção no gene B8R. Em uma modalidade particular, o promotor B8R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 564. Em uma modalidade particular, o promotor B19R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 565. Em uma modalidade particular, o promotor E3L compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 567. Em uma modalidade particular, o promotor F11L compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 568. Em uma modalidade particular, o promotor B2R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 569.
[364] Em certas modalidades, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor H5R (por exemplo, um promotor inicial H5R, um promotor tardio H5R, ou um promotor inicial H5R e um promotor tardio H5R).
[365] Em certas modalidades, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R. Em certas modalidades, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B19R. Em certas modalidades, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R e um promotor B19R. Em uma modalidade particular, o promotor B8R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 564. Em uma modalidade particular, o promotor B19R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 565.
[366] Em algumas modalidades, quando os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da primeira sequência de nucleotídeos têm a mesma orientação, a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento. Em outras modalidades, quando os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da primeira sequência de nucleotídeos têm a mesma orientação, a primeira sequência de nucleotídeos está na orientação reversa em relação aos genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento. Em outras modalidades, quando os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da primeira sequência de nucleotídeos têm as orientações opostas, a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que o gene de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento que está mais próximo da extremidade 5’ do genoma de vírus vaccinia recombinante. Em outras modalidades, quando os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da primeira sequência de nucleotídeos têm as orientações opostas, a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que o gene de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento que está mais próximo da extremidade 3’ do genoma de vírus vaccinia recombinante. Em uma modalidade específica, os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da primeira sequência de nucleotídeos são os genes C2L e F3L. Em outra modalidade específica, os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da primeira sequência de nucleotídeos são os genes C3L e F4L. Em outra modalidade específica, os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da primeira sequência de nucleotídeos são os genes B14R e B29R. Em outra modalidade específica, os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da primeira sequência de nucleotídeos são os genes B13R e B29R. Em ainda outra modalidade, a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que um gene vaccinia endógeno adjacente à primeira sequência de nucleotídeos. Em uma modalidade específica, o gene vaccinia endógeno adjacente à primeira sequência de nucleotídeos é o gene B13R. Em algumas modalidades, quando os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da terceira sequência de nucleotídeos têm a mesma orientação, a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento. Em outras modalidades, quando os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da terceira sequência de nucleotídeos têm a mesma orientação, a terceira sequência de nucleotídeos está na orientação reversa em relação aos genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento. Em outras modalidades, quando os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da terceira sequência de nucleotídeos têm as orientações opostas, a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que o gene de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento que está mais próximo da extremidade 5’ do genoma de vírus vaccinia recombinante. Em outras modalidades, quando os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da terceira sequência de nucleotídeos têm as orientações opostas, a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que o gene de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento que está mais próximo da extremidade 3’ do genoma de vírus vaccinia recombinante. Em uma modalidade específica, os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da terceira sequência de nucleotídeos são os genes C2L e F3L. Em outra modalidade específica, os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da terceira sequência de nucleotídeos são os genes C3L e F4L. Em outra modalidade específica, os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da terceira sequência de nucleotídeos são os genes B14R e B29R. Em outra modalidade específica, os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da terceira sequência de nucleotídeos são os genes B13R e B29R. Em ainda outra modalidade, a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que um gene vaccinia endógeno adjacente à terceira sequência de nucleotídeos. Em uma modalidade específica, o gene vaccinia endógeno adjacente à terceira sequência de nucleotídeos é o gene B13R.
[367] Em modalidades específicas, o anticorpo anti-CTLA-4 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo codificado pela primeira sequência de nucleotídeos compreende as 6 regiões determinantes de complementariedade (CDRs) de ipilimumab. Em modalidades específicas, a primeira sequência de nucleotídeos codifica uma sequência de aminoácidos que compreende a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 211. Em modalidades específicas, a primeira sequência de nucleotídeos compreende a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 214. Em modalidades específicas, a primeira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 214.
[368] Em modalidades específicas, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos é uma forma solúvel de FLT3L. Em particular modalidades, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos é uma forma solúvel de FLT3L humano. Em certas modalidades, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos é uma forma solúvel do FLT3L humano estabelecido no nº de Acesso GenBank U03858.1. Por exemplo, em modalidades específicas, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o FLT3L transmembranar inteiro (por exemplo, o domínio transmembranar do FLT3L humano estabelecido em nº de acesso GenBank U03858.1). Em outros exemplos, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L (por exemplo, o domínio transmembranar do FLT3L humano estabelecido no nº de Acesso GenBank U03858.1). Em uma modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro e o domínio citoplásmico de FLT3L inteiro. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L e do domínio citoplásmico de FLT3L inteiro. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L e pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio citoplásmico FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro e 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 13, 14 ou 15 dos resíduos de aminoácido N-terminal do domínio citoplásmico de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro e 1, 2, 3 ou 4 dos resíduos de aminoácido N-terminal do domínio citoplásmico de FLT3L. Em certas modalidades e aspectos, os domínios transmembranares e citoplásmicos são da sequência FLT3L estabelecida no nº de Acesso GenBank U03858.1.
[369] Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro e 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro e 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro e 1-5, 1-10, 5-10, 10-20, 15- 20, 1-20, 5-20 ou 10-20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em certas modalidades e aspectos, os domínios transmembranares e extracelulares são da sequência FLT3L estabelecida no nº de Acesso GenBank U03858.1.
[370] Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L e 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L e 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L e 1-5, 1-10, 5-10, 10-20, 15-20, 1-20, 5-20 ou 10-20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em certas modalidades e aspectos, os domínios transmembranares e extracelulares são da sequência FLT3L estabelecida no nº de Acesso GenBank U03858.1.
[371] Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro, o domínio citoplásmico inteiro, e 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro, o domínio citoplásmico inteiro, e 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro, o domínio citoplásmico inteiro, e 1-5, 1- 10, 5-10, 10-20, 15-20, 1-20, 5-20 ou 10-20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em certas modalidades e aspectos, os domínios transmembranares, citoplásmicos e extracelulares são da sequência FLT3L estabelecida no nº de Acesso GenBank U03858.1.
[372] Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L, do domínio citoplásmico inteiro, e 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L, do domínio citoplásmico inteiro, e 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L, do domínio citoplásmico inteiro, e 1-5, 1-10, 5-10, 10-20, 15-20, 1-20, 5-20 ou 10- 20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em certas modalidades e aspectos, os domínios transmembranares, citoplásmicos e extracelulares são da sequência FLT3L estabelecida no nº de Acesso GenBank U03858.1.
[373] Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio citoplásmico, e 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio citoplásmico, e 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio citoplásmico, e 1-5, 1-10, 5-10, 10-20, 15-20, 1-20, 5- 20 ou 10-20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em certas modalidades e aspectos, os domínios transmembranares, citoplásmicos e extracelulares são da sequência FLT3L estabelecida no nº de Acesso GenBank U03858.1.
[374] Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio citoplásmico, e 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio citoplásmico, e 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio citoplásmico, e 1-5, 1-10, 5-10, 10-20, 15-20, 1-20, 5-20 ou 10-20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em certas modalidades e aspectos, os domínios transmembranares, citoplásmicos e extracelulares são da sequência FLT3L estabelecida no nº de Acesso GenBank U03858.1.
[375] Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 13, 14 ou 15 dos resíduos de aminoácido N-terminal do domínio citoplásmico, e 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 13, 14 ou 15 dos resíduos de aminoácido N- terminal do domínio citoplásmico, e 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 13, 14 ou 15 dos resíduos de aminoácido N-terminal do domínio citoplásmico, e 1-5, 1-10, 5- 10, 10-20, 15-20, 1-20, 5-20 ou 10-20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em certas modalidades e aspectos, os domínios transmembranares, citoplásmicos e extracelulares são da sequência FLT3L estabelecida no nº de Acesso GenBank U03858.1.
[376] Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12,
13, 14, ou 15 dos resíduos de aminoácido N-terminal do domínio citoplásmico, e 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 13, 14, ou 15 dos resíduos de aminoácido N-terminal do domínio citoplásmico, e 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 13, 14, ou 15 dos resíduos de aminoácido N-terminal do domínio citoplásmico, e 1-5, 1-10, 5-10, 10-20, 15-20, 1-20, 5-20 ou 10-20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em certas modalidades e aspectos, os domínios transmembranares, citoplásmicos e extracelulares são da sequência FLT3L estabelecida no nº de Acesso GenBank U03858.1.
[377] Em uma modalidade específica, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos é uma isoforma X7 e a terceira sequência de nucleotídeos não tem uma sequência de 179 nucleotídeos conforme descrito em Lyman et al., 1994, Blood 83:2795-2801. Em modalidades específicas, o FLT3L compreende a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 213. Em modalidades específicas, a terceira sequência de nucleotídeos compreende a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 216. Em modalidades específicas, a terceira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 216.
[378] Em outro aspecto, é fornecido no presente documento um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende: (a) deleções nos seguintes genes: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B8R, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R; (b) deleções nos seguintes genes na ITR 3’: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R e B29R; (c) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12; e (d) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L; em que os deleções nos genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R são deleções parciais.
[379] Em certas modalidades, o ácido nucleico compreende adicionalmente uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos. Em uma modalidade específica, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos é um promotor tardio. Em uma modalidade específica adicional, o promotor tardio compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561, um promotor F17R ou um promotor D13L. Em outra modalidade específica adicional, o promotor tardio compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561. Em outra modalidade, o promotor F17R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO:563. Em ainda outra modalidade, o promotor D13L compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO:562.
[380] Em certas modalidades, o ácido nucleico compreende adicionalmente uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos. Em uma modalidade específica, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R, um promotor B19R, um promotor E3L, um promotor F11L e/ou um promotor B2R. Em outra modalidade específica, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R. Em outra modalidade específica, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B19R. Em outra modalidade específica, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R e um promotor B19R. Em uma modalidade particular, o promotor B8R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 564. Em uma modalidade particular, o promotor B19R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 565. Em uma modalidade particular, o promotor E3L compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 567. Em uma modalidade particular, o promotor F11L compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 568. Em uma modalidade particular, o promotor B2R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 569.
[381] Em algumas modalidades, quando os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da segunda sequência de nucleotídeos têm a mesma orientação, a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento.
Em outras modalidades, quando os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da segunda sequência de nucleotídeos têm a mesma orientação, a segunda sequência de nucleotídeos está na orientação reversa em relação aos genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento.
Em outras modalidades, quando os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da segunda sequência de nucleotídeos têm as orientações opostas, a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que o gene de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento que está mais próximo da extremidade 5’ do genoma de vírus vaccinia recombinante.
Em outras modalidades, quando os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da segunda sequência de nucleotídeos têm as orientações opostas, a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que o gene de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento que está mais próximo da extremidade 3’ do genoma de vírus vaccinia recombinante.
Em uma modalidade específica, os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da segunda sequência de nucleotídeos são os genes C2L e F3L.
Em outra modalidade específica, os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da segunda sequência de nucleotídeos são os genes C3L e F4L.
Em outra modalidade específica, os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da segunda sequência de nucleotídeos são os genes B14R e B29R.
Em outra modalidade específica, os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da segunda sequência de nucleotídeos são os genes B13R e B29R.
Em ainda outra modalidade, a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que um gene vaccinia endógeno adjacente à segunda sequência de nucleotídeos.
Em uma modalidade específica, o gene vaccinia endógeno adjacente à segunda sequência de nucleotídeos é o gene B13R.
Em algumas modalidades, quando os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da terceira sequência de nucleotídeos têm a mesma orientação, a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento.
Em outras modalidades, quando os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da terceira sequência de nucleotídeos têm a mesma orientação, a terceira sequência de nucleotídeos está na orientação reversa em relação aos genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento. Em outras modalidades, quando os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da terceira sequência de nucleotídeos têm as orientações opostas, a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que o gene de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento que está mais próximo da extremidade 5’ do genoma de vírus vaccinia recombinante. Em outras modalidades, quando os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da terceira sequência de nucleotídeos têm as orientações opostas, a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que o gene de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento que está mais próximo da extremidade 3’ do genoma de vírus vaccinia recombinante. Em uma modalidade específica, os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da terceira sequência de nucleotídeos são os genes C2L e F3L. Em outra modalidade específica, os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da terceira sequência de nucleotídeos são os genes C3L e F4L. Em outra modalidade específica, os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da terceira sequência de nucleotídeos são os genes B14R e B29R. Em outra modalidade específica, os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da terceira sequência de nucleotídeos são os genes B13R e B29R. Em ainda outra modalidade, a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que um gene vaccinia endógeno adjacente à terceira sequência de nucleotídeos. Em uma modalidade específica, o gene vaccinia endógeno adjacente à terceira sequência de nucleotídeos é o gene B13R.
[382] Em modalidades específicas, o polipeptídeo de IL-12 é ligado à membrana. Em modalidades específicas, o polipeptídeo de IL-12 compreende p35 de IL-12 (por exemplo, p35 de IL-12 humana), p40 de IL-12 (por exemplo, p40 de IL-12 humana) ou p70 de IL-12 (por exemplo, p70 de IL-12 humana). Em modalidades específicas, o polipeptídeo de IL-12 é ligado à membrana e compreende p35 de IL-12 (por exemplo, p35 de IL-12 humana), ou p70 de IL-12 (por exemplo, p70 de IL-12 humana), e um domínio transmembranar e um domínio citoplásmico (por exemplo, domínios transmembranares e citoplásmicos de B7-1,
TNFα ou FLT3L). Em modalidades específicas, o polipeptídeo de IL-12 compreende a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 212. Em modalidades específicas, a segunda sequência de nucleotídeos compreende a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 215. Em modalidades específicas, a segunda sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 215.
[383] Em modalidades específicas, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos é uma forma solúvel de FLT3L. Em particular modalidades, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos é uma forma solúvel de FLT3L humano. Em certas modalidades, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos é uma forma solúvel do FLT3L humano estabelecido no nº de Acesso GenBank U03858.1. Por exemplo, em modalidades específicas, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o FLT3L transmembranar inteiro (por exemplo, o domínio transmembranar do FLT3L humano estabelecido em nº de acesso GenBank U03858.1). Em outros exemplos, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L (por exemplo, o domínio transmembranar do FLT3L humano estabelecido no nº de Acesso GenBank U03858.1). Em uma modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro e o domínio citoplásmico de FLT3L inteiro. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L e do domínio citoplásmico de FLT3L inteiro. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L e pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio citoplásmico FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro e 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 13, 14 ou 15 dos resíduos de aminoácido N-terminal do domínio citoplásmico de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro e 1, 2, 3 ou 4 dos resíduos de aminoácido N-terminal do domínio citoplásmico de FLT3L. Em certas modalidades e aspectos, os domínios transmembranares e citoplásmicos são da sequência FLT3L estabelecida no nº de Acesso GenBank U03858.1.
[384] Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro e 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro e 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro e 1-5, 1-10, 5-10, 10-20, 15- 20, 1-20, 5-20 ou 10-20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em certas modalidades e aspectos, os domínios transmembranares e extracelulares são da sequência FLT3L estabelecida no nº de Acesso GenBank U03858.1.
[385] Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L e 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L e 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L e 1-5, 1-10, 5-10, 10-20, 15-20, 1-20, 5-20 ou 10-20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em certas modalidades e aspectos, os domínios transmembranares e extracelulares são da sequência FLT3L estabelecida no nº de Acesso GenBank U03858.1.
[386] Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro, o domínio citoplásmico inteiro, e 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro, o domínio citoplásmico inteiro, e 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro, o domínio citoplásmico inteiro, e 1-5, 1- 10, 5-10, 10-20, 15-20, 1-20, 5-20 ou 10-20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em certas modalidades e aspectos, os domínios transmembranares, citoplásmicos e extracelulares são da sequência FLT3L estabelecida no nº de Acesso GenBank U03858.1.
[387] Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L, do domínio citoplásmico inteiro, e 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L, do domínio citoplásmico inteiro, e 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L, do domínio citoplásmico inteiro, e 1-5, 1-10, 5-10, 10-20, 15-20, 1-20, 5-20 ou 10- 20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em certas modalidades e aspectos, os domínios transmembranares, citoplásmicos e extracelulares são da sequência FLT3L estabelecida no nº de Acesso GenBank U03858.1.
[388] Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio citoplásmico, e 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio citoplásmico, e 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio citoplásmico, e 1-5, 1-10, 5-10, 10-20, 15-20, 1-20, 5- 20 ou 10-20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em certas modalidades e aspectos, os domínios transmembranares, citoplásmicos e extracelulares são da sequência FLT3L estabelecida no nº de Acesso GenBank U03858.1.
[389] Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio citoplásmico, e 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio citoplásmico, e 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio citoplásmico, e 1-5, 1-10, 5-10, 10-20, 15-20, 1-20, 5-20 ou 10-20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em certas modalidades e aspectos, os domínios transmembranares, citoplásmicos e extracelulares são da sequência FLT3L estabelecida no nº de Acesso GenBank U03858.1.
[390] Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 13, 14 ou 15 dos resíduos de aminoácido N-terminal do domínio citoplásmico, e 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 13, 14 ou 15 dos resíduos de aminoácido N- terminal do domínio citoplásmico, e 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 13, 14 ou 15 dos resíduos de aminoácido N-terminal do domínio citoplásmico, e 1-5, 1-10, 5- 10, 10-20, 15-20, 1-20, 5-20 ou 10-20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em certas modalidades e aspectos, os domínios transmembranares, citoplásmicos e extracelulares são da sequência FLT3L estabelecida no nº de Acesso GenBank U03858.1.
[391] Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 13, 14, ou 15 dos resíduos de aminoácido N-terminal do domínio citoplásmico, e 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 13, 14, ou 15 dos resíduos de aminoácido N-terminal do domínio citoplásmico, e 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 13, 14, ou 15 dos resíduos de aminoácido N-terminal do domínio citoplásmico, e 1-5, 1-10, 5-10, 10-20, 15-20, 1-20, 5-20 ou 10-20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em certas modalidades e aspectos, os domínios transmembranares, citoplásmicos e extracelulares são da sequência FLT3L estabelecida no nº de Acesso GenBank U03858.1.
[392] Em uma modalidade específica, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos é uma isoforma X7 e a terceira sequência de nucleotídeos não tem uma sequência de 179 nucleotídeos conforme descrito em Lyman et al., 1994, Blood 83:2795-2801. Em modalidades específicas, o FLT3L compreende a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 213. Em modalidades específicas, a terceira sequência de nucleotídeos compreende a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 216. Em modalidades específicas, a terceira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 216.
[393] Em outro aspecto, é fornecido aqui um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende: (a) deleções nos seguintes genes: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, e B20R; (b) deleções nos seguintes genes na ITR 3’: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R e B29R; (c) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12; e (d) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L; em que os deleções nos genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R são deleções parciais; e em que o ácido nucleico compreende adicionalmente: (i) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos é um promotor tardio; e/ou (ii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R, um promotor B19R, um promotor E3L, um promotor F11L e/ou um promotor B2R. Em modalidades específicas, o ácido nucleico compreende adicionalmente uma deleção no gene B8R. Em uma modalidade particular, o promotor B8R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 564. Em uma modalidade particular, o promotor B19R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 565. Em uma modalidade particular, o promotor E3L compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 567. Em uma modalidade particular, o promotor F11L compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 568. Em uma modalidade particular, o promotor B2R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 569.
[394] Em certas modalidades, o promotor tardio compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561, um promotor F17R ou um promotor D13L. Em uma modalidade específica, o promotor tardio compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561. Em outra modalidade, o promotor F17R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO:563. Em ainda outra modalidade, o promotor D13L compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO:562.
[395] Em certas modalidades, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R. Em certas modalidades, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B19R. Em certas modalidades, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R e um promotor B19R. Em uma modalidade particular, o promotor B8R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 564. Em uma modalidade particular, o promotor B19R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 565.
[396] Em algumas modalidades, quando os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da segunda sequência de nucleotídeos têm a mesma orientação, a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento.
Em outras modalidades, quando os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da segunda sequência de nucleotídeos têm a mesma orientação, a segunda sequência de nucleotídeos está na orientação reversa em relação aos genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento.
Em outras modalidades, quando os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da segunda sequência de nucleotídeos têm as orientações opostas, a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que o gene de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento que está mais próximo da extremidade 5’ do genoma de vírus vaccinia recombinante.
Em outras modalidades, quando os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da segunda sequência de nucleotídeos têm as orientações opostas, a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que o gene de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento que está mais próximo da extremidade 3’ do genoma de vírus vaccinia recombinante.
Em uma modalidade específica, os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da segunda sequência de nucleotídeos são os genes C2L e F3L.
Em outra modalidade específica, os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da segunda sequência de nucleotídeos são os genes C3L e F4L.
Em outra modalidade específica, os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da segunda sequência de nucleotídeos são os genes B14R e B29R.
Em outra modalidade específica, os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da segunda sequência de nucleotídeos são os genes B13R e B29R.
Em ainda outra modalidade, a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que um gene vaccinia endógeno adjacente à segunda sequência de nucleotídeos.
Em uma modalidade específica, o gene vaccinia endógeno adjacente à segunda sequência de nucleotídeos é o gene B13R.
Em algumas modalidades, quando os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da terceira sequência de nucleotídeos têm a mesma orientação, a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento.
Em outras modalidades, quando os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da terceira sequência de nucleotídeos têm a mesma orientação, a terceira sequência de nucleotídeos está na orientação reversa em relação aos genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento.
Em outras modalidades, quando os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da terceira sequência de nucleotídeos têm as orientações opostas, a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que o gene de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento que está mais próximo da extremidade 5’ do genoma de vírus vaccinia recombinante.
Em outras modalidades, quando os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da terceira sequência de nucleotídeos têm as orientações opostas, a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que o gene de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento que está mais próximo da extremidade 3’ do genoma de vírus vaccinia recombinante.
Em uma modalidade específica, os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da terceira sequência de nucleotídeos são os genes C2L e F3L.
Em outra modalidade específica, os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da terceira sequência de nucleotídeos são os genes C3L e F4L.
Em outra modalidade específica, os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da terceira sequência de nucleotídeos são os genes B14R e B29R.
Em outra modalidade específica, os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da terceira sequência de nucleotídeos são os genes B13R e B29R.
Em ainda outra modalidade, a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que um gene vaccinia endógeno adjacente à terceira sequência de nucleotídeos.
Em uma modalidade específica, o gene vaccinia endógeno adjacente à terceira sequência de nucleotídeos é o gene B13R.
Em modalidades específicas, o polipeptídeo de IL-12 é ligado à membrana.
Em modalidades específicas, o polipeptídeo de IL-12 compreende p35 de IL-12 (por exemplo, p35 de IL-12 humana), p40 de IL-12 (por exemplo, p40 de IL-12 humana) ou p70 de IL-12 (por exemplo, p70 de IL-12 humana). Em modalidades específicas, o polipeptídeo de IL-12 é ligado à membrana e compreende p35 de IL-12 (por exemplo, p35 de IL-12 humana), ou p70 de IL-12 (por exemplo, p70 de IL-12 humana), e um domínio transmembranar e um domínio citoplásmico (por exemplo, domínios transmembranares e citoplásmicos de B7-1, TNFα ou FLT3L). Em modalidades específicas, o polipeptídeo de IL-12 compreende a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 212. Em modalidades específicas, a segunda sequência de nucleotídeos compreende a sequência estabelecida na SEQ ID NO:
215. Em modalidades específicas, a segunda sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 215.
[397] Em modalidades específicas, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos é uma forma solúvel de FLT3L. Em particular modalidades, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos é uma forma solúvel de FLT3L humano. Em certas modalidades, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos é uma forma solúvel do FLT3L humano estabelecido no nº de Acesso GenBank U03858.1. Por exemplo, em modalidades específicas, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o FLT3L transmembranar inteiro (por exemplo, o domínio transmembranar do FLT3L humano estabelecido em nº de acesso GenBank U03858.1). Em outros exemplos, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L (por exemplo, o domínio transmembranar do FLT3L humano estabelecido no nº de Acesso GenBank U03858.1). Em uma modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro e o domínio citoplásmico de FLT3L inteiro. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L e do domínio citoplásmico de FLT3L inteiro. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L e pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio citoplásmico FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro e 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 13, 14 ou 15 dos resíduos de aminoácido N-terminal do domínio citoplásmico de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro e
1, 2, 3 ou 4 dos resíduos de aminoácido N-terminal do domínio citoplásmico de FLT3L. Em certas modalidades e aspectos, os domínios transmembranares e citoplásmicos são da sequência FLT3L estabelecida no nº de Acesso GenBank U03858.1.
[398] Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro e 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro e 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro e 1-5, 1-10, 5-10, 10-20, 15- 20, 1-20, 5-20 ou 10-20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em certas modalidades e aspectos, os domínios transmembranares e extracelulares são da sequência FLT3L estabelecida no nº de Acesso GenBank U03858.1.
[399] Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L e 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L e 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L e 1-5, 1-10, 5-10, 10-20, 15-20, 1-20, 5-20 ou 10-20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em certas modalidades e aspectos, os domínios transmembranares e extracelulares são da sequência FLT3L estabelecida no nº de Acesso GenBank U03858.1.
[400] Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro, o domínio citoplásmico inteiro, e 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro, o domínio citoplásmico inteiro, e 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro, o domínio citoplásmico inteiro, e 1-5, 1- 10, 5-10, 10-20, 15-20, 1-20, 5-20 ou 10-20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em certas modalidades e aspectos, os domínios transmembranares, citoplásmicos e extracelulares são da sequência FLT3L estabelecida no nº de Acesso GenBank U03858.1.
[401] Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L, do domínio citoplásmico inteiro, e 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L, do domínio citoplásmico inteiro, e 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L, do domínio citoplásmico inteiro, e 1-5, 1-10, 5-10, 10-20, 15-20, 1-20, 5-20 ou 10- 20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em certas modalidades e aspectos, os domínios transmembranares, citoplásmicos e extracelulares são da sequência FLT3L estabelecida no nº de Acesso GenBank U03858.1.
[402] Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio citoplásmico, e 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio citoplásmico, e 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio citoplásmico, e 1-5, 1-10, 5-10, 10-20, 15-20, 1-20, 5- 20 ou 10-20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em certas modalidades e aspectos, os domínios transmembranares, citoplásmicos e extracelulares são da sequência FLT3L estabelecida no nº de Acesso GenBank U03858.1.
[403] Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio citoplásmico, e 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio citoplásmico, e 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio citoplásmico, e 1-5, 1-10, 5-10, 10-20, 15-20, 1-20, 5-20 ou 10-20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em certas modalidades e aspectos, os domínios transmembranares, citoplásmicos e extracelulares são da sequência FLT3L estabelecida no nº de Acesso GenBank U03858.1.
[404] Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 13, 14 ou 15 dos resíduos de aminoácido N-terminal do domínio citoplásmico, e 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 13, 14 ou 15 dos resíduos de aminoácido N- terminal do domínio citoplásmico, e 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 13, 14 ou 15 dos resíduos de aminoácido N-terminal do domínio citoplásmico, e 1-5, 1-10, 5- 10, 10-20, 15-20, 1-20, 5-20 ou 10-20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em certas modalidades e aspectos, os domínios transmembranares, citoplásmicos e extracelulares são da sequência FLT3L estabelecida no nº de Acesso GenBank U03858.1.
[405] Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 13, 14, ou 15 dos resíduos de aminoácido N-terminal do domínio citoplásmico, e 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 13, 14, ou 15 dos resíduos de aminoácido N-terminal do domínio citoplásmico, e 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 13, 14, ou 15 dos resíduos de aminoácido N-terminal do domínio citoplásmico, e 1-5, 1-10, 5-10, 10-20, 15-20, 1-20, 5-20 ou 10-20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em certas modalidades e aspectos, os domínios transmembranares, citoplásmicos e extracelulares são da sequência FLT3L estabelecida no nº de Acesso GenBank U03858.1.
[406] Em uma modalidade específica, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos é uma isoforma X7 e a terceira sequência de nucleotídeos não tem uma sequência de 179 nucleotídeos conforme descrito em Lyman et al., 1994, Blood 83:2795-2801. Em modalidades específicas, o FLT3L compreende a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 213. Em modalidades específicas, a terceira sequência de nucleotídeos compreende a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 216. Em modalidades específicas, a terceira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 216.
[407] Em outro aspecto, é fornecido no presente documento um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende: (a) deleções nos seguintes genes: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B8R, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R; (b) deleções nos seguintes genes na ITR 3’: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, e B29R; (c) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que se liga especificamente a CTLA-4 (por exemplo, CTLA-4 humano); (d) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12; e (e) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L; em que as deleções nos genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R são deleções parciais.
[408] Em certas modalidades, o ácido nucleico compreende adicionalmente uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos. Em uma modalidade específica, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor H5R, um promotor pS ou um promotor LEO. Em outra modalidade específica, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor H5R (por exemplo, um promotor inicial H5R, um promotor tardio H5R, ou um promotor inicial H5R e um promotor tardio H5R).
[409] Em certas modalidades, o ácido nucleico compreende adicionalmente uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos. Em uma modalidade específica, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos é um promotor tardio. Em uma modalidade específica adicional, o promotor tardio compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561, um promotor F17R ou um promotor D13L. Em outra modalidade específica adicional, o promotor tardio compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561. Em outra modalidade, o promotor F17R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO:563. Em ainda outra modalidade, o promotor D13L compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO:562.
[410] Em certas modalidades, o ácido nucleico compreende adicionalmente uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos. Em uma modalidade específica, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R, um promotor B19R, um promotor E3L, um promotor F11L e/ou um promotor B2R. Em outra modalidade específica, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R. Em outra modalidade específica, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B19R. Em outra modalidade específica, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R e um promotor B19R. Em uma modalidade particular, o promotor B8R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 564. Em uma modalidade particular, o promotor B19R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 565. Em uma modalidade particular, o promotor E3L compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 567. Em uma modalidade particular, o promotor F11L compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 568. Em uma modalidade particular, o promotor B2R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 569.
[411] Em algumas modalidades, quando os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da primeira sequência de nucleotídeos têm a mesma orientação, a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento. Em outras modalidades, quando os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da primeira sequência de nucleotídeos têm a mesma orientação, a primeira sequência de nucleotídeos está na orientação reversa em relação aos genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento. Em outras modalidades, quando os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da primeira sequência de nucleotídeos têm as orientações opostas, a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que o gene de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento que está mais próximo da extremidade 5’ do genoma de vírus vaccinia recombinante. Em outras modalidades, quando os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da primeira sequência de nucleotídeos têm as orientações opostas, a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que o gene de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento que está mais próximo da extremidade 3’ do genoma de vírus vaccinia recombinante. Em uma modalidade específica, os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da primeira sequência de nucleotídeos são os genes C2L e F3L. Em outra modalidade específica, os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da primeira sequência de nucleotídeos são os genes C3L e F4L. Em outra modalidade específica, os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da primeira sequência de nucleotídeos são os genes B14R e B29R. Em outra modalidade específica, os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da primeira sequência de nucleotídeos são os genes B13R e B29R.
Em ainda outra modalidade, a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que um gene vaccinia endógeno adjacente à primeira sequência de nucleotídeos.
Em uma modalidade específica, o gene vaccinia endógeno adjacente à primeira sequência de nucleotídeos é o gene B13R.
Em algumas modalidades, quando os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da segunda sequência de nucleotídeos têm a mesma orientação, a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento.
Em outras modalidades, quando os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da segunda sequência de nucleotídeos têm a mesma orientação, a segunda sequência de nucleotídeos está na orientação reversa em relação aos genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento.
Em outras modalidades, quando os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da segunda sequência de nucleotídeos têm as orientações opostas, a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que o gene de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento que está mais próximo da extremidade 5’ do genoma de vírus vaccinia recombinante.
Em outras modalidades, quando os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da segunda sequência de nucleotídeos têm as orientações opostas, a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que o gene de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento que está mais próximo da extremidade 3’ do genoma de vírus vaccinia recombinante.
Em uma modalidade específica, os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da segunda sequência de nucleotídeos são os genes C2L e F3L.
Em outra modalidade específica, os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da segunda sequência de nucleotídeos são os genes C3L e F4L.
Em outra modalidade específica, os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da segunda sequência de nucleotídeos são os genes B14R e B29R.
Em outra modalidade específica, os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da segunda sequência de nucleotídeos são os genes B13R e B29R.
Em ainda outra modalidade, a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que um gene vaccinia endógeno adjacente à segunda sequência de nucleotídeos.
Em uma modalidade específica, o gene vaccinia endógeno adjacente à segunda sequência de nucleotídeos é o gene B13R.
Em algumas modalidades, quando os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da terceira sequência de nucleotídeos têm a mesma orientação, a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento. Em outras modalidades, quando os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da terceira sequência de nucleotídeos têm a mesma orientação, a terceira sequência de nucleotídeos está na orientação reversa em relação aos genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento. Em outras modalidades, quando os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da terceira sequência de nucleotídeos têm as orientações opostas, a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que o gene de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento que está mais próximo da extremidade 5’ do genoma de vírus vaccinia recombinante. Em outras modalidades, quando os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da terceira sequência de nucleotídeos têm as orientações opostas, a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que o gene de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento que está mais próximo da extremidade 3’ do genoma de vírus vaccinia recombinante. Em uma modalidade específica, os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da terceira sequência de nucleotídeos são os genes C2L e F3L. Em outra modalidade específica, os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da terceira sequência de nucleotídeos são os genes C3L e F4L. Em outra modalidade específica, os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da terceira sequência de nucleotídeos são os genes B14R e B29R. Em outra modalidade específica, os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da terceira sequência de nucleotídeos são os genes B13R e B29R. Em ainda outra modalidade, a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que um gene vaccinia endógeno adjacente à terceira sequência de nucleotídeos. Em uma modalidade específica, o gene vaccinia endógeno adjacente à terceira sequência de nucleotídeos é o gene B13R.
[412] Em modalidades específicas, o anticorpo anti-CTLA-4 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo codificado pela primeira sequência de nucleotídeos compreende as 6 regiões determinantes de complementariedade (CDRs) de ipilimumab. Em modalidades específicas, a primeira sequência de nucleotídeos codifica uma sequência de aminoácidos que compreende a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 211. Em modalidades específicas, a primeira sequência de nucleotídeos compreende a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 214. Em modalidades específicas, a primeira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 214.
[413] Em modalidades específicas, o polipeptídeo de IL-12 é ligado à membrana. Em modalidades específicas, o polipeptídeo de IL-12 compreende p35 de IL-12 (por exemplo, p35 de IL-12 humana), p40 de IL-12 (por exemplo, p40 de IL-12 humana) ou p70 de IL-12 (por exemplo, p70 de IL-12 humana). Em modalidades específicas, o polipeptídeo de IL-12 é ligado à membrana e compreende p35 de IL-12 (por exemplo, p35 de IL-12 humana), ou p70 de IL-12 (por exemplo, p70 de IL-12 humana), e um domínio transmembranar e um domínio citoplásmico (por exemplo, domínios transmembranares e citoplásmicos de B7-1, TNFα ou FLT3L). Em modalidades específicas, o polipeptídeo de IL-12 compreende a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 212. Em modalidades específicas, a segunda sequência de nucleotídeos compreende a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 215. Em modalidades específicas, a segunda sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 215.
[414] Em modalidades específicas, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos é uma forma solúvel de FLT3L. Em particular modalidades, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos é uma forma solúvel de FLT3L humano. Em certas modalidades, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos é uma forma solúvel do FLT3L humano estabelecido no nº de Acesso GenBank U03858.1. Por exemplo, em modalidades específicas, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o FLT3L transmembranar inteiro (por exemplo, o domínio transmembranar do FLT3L humano estabelecido em nº de acesso GenBank U03858.1). Em outros exemplos, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L (por exemplo, o domínio transmembranar do FLT3L humano estabelecido no nº de Acesso GenBank U03858.1). Em uma modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro e o domínio citoplásmico de FLT3L inteiro. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L e do domínio citoplásmico de FLT3L inteiro. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L e pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio citoplásmico FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro e 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 13, 14 ou 15 dos resíduos de aminoácido N-terminal do domínio citoplásmico de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro e 1, 2, 3 ou 4 dos resíduos de aminoácido N-terminal do domínio citoplásmico de FLT3L. Em certas modalidades e aspectos, os domínios transmembranares e citoplásmicos são da sequência FLT3L estabelecida no nº de Acesso GenBank U03858.1.
[415] Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro e 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro e 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro e 1-5, 1-10, 5-10, 10-20, 15- 20, 1-20, 5-20 ou 10-20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em certas modalidades e aspectos, os domínios transmembranares e extracelulares são da sequência FLT3L estabelecida no nº de Acesso GenBank U03858.1.
[416] Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L e 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L e 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L e 1-5, 1-10, 5-10, 10-20, 15-20, 1-20, 5-20 ou 10-20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em certas modalidades e aspectos, os domínios transmembranares e extracelulares são da sequência FLT3L estabelecida no nº de Acesso GenBank U03858.1.
[417] Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro, o domínio citoplásmico inteiro, e 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro, o domínio citoplásmico inteiro, e 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro, o domínio citoplásmico inteiro, e 1-5, 1- 10, 5-10, 10-20, 15-20, 1-20, 5-20 ou 10-20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em certas modalidades e aspectos, os domínios transmembranares, citoplásmicos e extracelulares são da sequência FLT3L estabelecida no nº de Acesso GenBank U03858.1.
[418] Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L, do domínio citoplásmico inteiro, e 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L, do domínio citoplásmico inteiro, e 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L, do domínio citoplásmico inteiro, e 1-5, 1-10, 5-10, 10-20, 15-20, 1-20, 5-20 ou 10- 20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em certas modalidades e aspectos, os domínios transmembranares, citoplásmicos e extracelulares são da sequência FLT3L estabelecida no nº de Acesso GenBank U03858.1.
[419] Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio citoplásmico, e 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio citoplásmico, e 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio citoplásmico, e 1-5, 1-10, 5-10, 10-20, 15-20, 1-20, 5- 20 ou 10-20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em certas modalidades e aspectos, os domínios transmembranares, citoplásmicos e extracelulares são da sequência FLT3L estabelecida no nº de Acesso GenBank
U03858.1.
[420] Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio citoplásmico, e 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio citoplásmico, e 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio citoplásmico, e 1-5, 1-10, 5-10, 10-20, 15-20, 1-20, 5-20 ou 10-20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em certas modalidades e aspectos, os domínios transmembranares, citoplásmicos e extracelulares são da sequência FLT3L estabelecida no nº de Acesso GenBank U03858.1.
[421] Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 13, 14 ou 15 dos resíduos de aminoácido N-terminal do domínio citoplásmico, e 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 13, 14 ou 15 dos resíduos de aminoácido N- terminal do domínio citoplásmico, e 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 13, 14 ou 15 dos resíduos de aminoácido N-terminal do domínio citoplásmico, e 1-5, 1-10, 5- 10, 10-20, 15-20, 1-20, 5-20 ou 10-20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em certas modalidades e aspectos, os domínios transmembranares, citoplásmicos e extracelulares são da sequência FLT3L estabelecida no nº de Acesso GenBank U03858.1.
[422] Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 13, 14, ou 15 dos resíduos de aminoácido N-terminal do domínio citoplásmico, e 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 13, 14, ou 15 dos resíduos de aminoácido N-terminal do domínio citoplásmico, e 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 13, 14, ou 15 dos resíduos de aminoácido N-terminal do domínio citoplásmico, e 1-5, 1-10, 5-10, 10-20, 15-20, 1-20, 5-20 ou 10-20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em certas modalidades e aspectos, os domínios transmembranares, citoplásmicos e extracelulares são da sequência FLT3L estabelecida no nº de Acesso GenBank U03858.1.
[423] Em uma modalidade específica, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos é uma isoforma X7 e a terceira sequência de nucleotídeos não tem uma sequência de 179 nucleotídeos conforme descrito em Lyman et al., 1994, Blood 83:2795-2801. Em modalidades específicas, o FLT3L compreende a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 213. Em modalidades específicas, a terceira sequência de nucleotídeos compreende a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 216. Em modalidades específicas, a terceira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 216.
[424] Em outro aspecto, é fornecido no presente documento um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende: (a) deleções nos seguintes genes: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, e B20R; (b) deleções nos seguintes genes na ITR 3’: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R e B29R; (c) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que se liga especificamente se liga a CTLA-4 (por exemplo, CTLA-4 humano); (d) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12; e (e) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L; em que as deleções nos genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R são deleções parciais; e em que o ácido nucleico compreende adicionalmente: (i) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor H5R, um promotor pS ou um promotor LEO; (ii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos é um promotor tardio; e/ou (iii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R, um promotor B19R, um promotor E3L, um promotor F11L e/ou um promotor B2R. Em modalidades específicas, o ácido nucleico compreende adicionalmente uma deleção no gene B8R. Em uma modalidade particular, o promotor B8R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 564. Em uma modalidade particular, o promotor B19R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 565. Em uma modalidade particular, o promotor E3L compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 567. Em uma modalidade particular, o promotor F11L compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 568. Em uma modalidade particular, o promotor B2R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 569.
[425] Em certas modalidades, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor H5R (por exemplo, um promotor inicial H5R, um promotor tardio H5R, ou um promotor inicial H5R e um promotor tardio H5R).
[426] Em certas modalidades, o promotor tardio compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561, um promotor F17R ou um promotor D13L. Em uma modalidade específica, o promotor tardio compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561. Em outra modalidade, o promotor F17R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO:563. Em ainda outra modalidade, o promotor D13L compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO:562.
[427] Em certas modalidades, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R. Em certas modalidades, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B19R. Em certas modalidades, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R e um promotor B19R. Em uma modalidade particular, o promotor B8R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 564. Em uma modalidade particular, o promotor B19R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 565
[428] Em algumas modalidades, quando os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da primeira sequência de nucleotídeos têm a mesma orientação, a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento. Em outras modalidades, quando os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da primeira sequência de nucleotídeos têm a mesma orientação, a primeira sequência de nucleotídeos está na orientação reversa em relação aos genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento. Em outras modalidades, quando os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da primeira sequência de nucleotídeos têm as orientações opostas, a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que o gene de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento que está mais próximo da extremidade 5’ do genoma de vírus vaccinia recombinante.
Em outras modalidades, quando os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da primeira sequência de nucleotídeos têm as orientações opostas, a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que o gene de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento que está mais próximo da extremidade 3’ do genoma de vírus vaccinia recombinante.
Em uma modalidade específica, os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da primeira sequência de nucleotídeos são os genes C2L e F3L.
Em outra modalidade específica, os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da primeira sequência de nucleotídeos são os genes C3L e F4L.
Em outra modalidade específica, os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da primeira sequência de nucleotídeos são os genes B14R e B29R.
Em outra modalidade específica, os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da primeira sequência de nucleotídeos são os genes B13R e B29R.
Em ainda outra modalidade, a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que um gene vaccinia endógeno adjacente à primeira sequência de nucleotídeos.
Em uma modalidade específica, o gene vaccinia endógeno adjacente à primeira sequência de nucleotídeos é o gene B13R.
Em algumas modalidades, quando os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da segunda sequência de nucleotídeos têm a mesma orientação, a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento.
Em outras modalidades, quando os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da segunda sequência de nucleotídeos têm a mesma orientação, a segunda sequência de nucleotídeos está na orientação reversa em relação aos genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento.
Em outras modalidades, quando os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da segunda sequência de nucleotídeos têm as orientações opostas, a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que o gene de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento que está mais próximo da extremidade 5’ do genoma de vírus vaccinia recombinante.
Em outras modalidades, quando os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da segunda sequência de nucleotídeos têm as orientações opostas, a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que o gene de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento que está mais próximo da extremidade 3’ do genoma de vírus vaccinia recombinante.
Em uma modalidade específica, os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da segunda sequência de nucleotídeos são os genes C2L e F3L.
Em outra modalidade específica, os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da segunda sequência de nucleotídeos são os genes C3L e F4L.
Em outra modalidade específica, os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da segunda sequência de nucleotídeos são os genes B14R e B29R.
Em outra modalidade específica, os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da segunda sequência de nucleotídeos são os genes B13R e B29R.
Em ainda outra modalidade, a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que um gene vaccinia endógeno adjacente à segunda sequência de nucleotídeos.
Em uma modalidade específica, o gene vaccinia endógeno adjacente à segunda sequência de nucleotídeos é o gene B13R.
Em algumas modalidades, quando os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da terceira sequência de nucleotídeos têm a mesma orientação, a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento.
Em outras modalidades, quando os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da terceira sequência de nucleotídeos têm a mesma orientação, a terceira sequência de nucleotídeos está na orientação reversa em relação aos genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento.
Em outras modalidades, quando os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da terceira sequência de nucleotídeos têm as orientações opostas, a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que o gene de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento que está mais próximo da extremidade 5’ do genoma de vírus vaccinia recombinante.
Em outras modalidades, quando os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da terceira sequência de nucleotídeos têm as orientações opostas, a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que o gene de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento que está mais próximo da extremidade 3’ do genoma de vírus vaccinia recombinante.
Em uma modalidade específica, os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da terceira sequência de nucleotídeos são os genes C2L e F3L. Em outra modalidade específica, os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da terceira sequência de nucleotídeos são os genes C3L e F4L. Em outra modalidade específica, os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da terceira sequência de nucleotídeos são os genes B14R e B29R. Em outra modalidade específica, os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da terceira sequência de nucleotídeos são os genes B13R e B29R. Em ainda outra modalidade, a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que um gene vaccinia endógeno adjacente à terceira sequência de nucleotídeos. Em uma modalidade específica, o gene vaccinia endógeno adjacente à terceira sequência de nucleotídeos é o gene B13R.
[429] Em modalidades específicas, o anticorpo anti-CTLA-4 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo codificado pela primeira sequência de nucleotídeos compreende as 6 regiões determinantes de complementariedade (CDRs) de ipilimumab. Em modalidades específicas, a primeira sequência de nucleotídeos codifica uma sequência de aminoácidos que compreende a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 211. Em modalidades específicas, a primeira sequência de nucleotídeos compreende a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 214. Em modalidades específicas, a primeira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 214.
[430] Em modalidades específicas, o polipeptídeo de IL-12 é ligado à membrana. Em modalidades específicas, o polipeptídeo de IL-12 compreende p35 de IL-12 (por exemplo, p35 de IL-12 humana), p40 de IL-12 (por exemplo, p40 de IL-12 humana) ou p70 de IL-12 (por exemplo, p70 de IL-12 humana). Em modalidades específicas, o polipeptídeo de IL-12 é ligado à membrana e compreende p35 de IL-12 (por exemplo, p35 de IL-12 humana), ou p70 de IL-12 (por exemplo, p70 de IL-12 humana), e um domínio transmembranar e um domínio citoplásmico (por exemplo, domínios transmembranares e citoplásmicos de B7-1, TNFα ou FLT3L). Em modalidades específicas, o polipeptídeo de IL-12 compreende a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 212. Em modalidades específicas, a segunda sequência de nucleotídeos compreende a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 215. Em modalidades específicas, a segunda sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 215.
[431] Em modalidades específicas, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos é uma forma solúvel de FLT3L. Em particular modalidades, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos é uma forma solúvel de FLT3L humano. Em certas modalidades, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos é uma forma solúvel do FLT3L humano estabelecido no nº de Acesso GenBank U03858.1. Por exemplo, em modalidades específicas, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o FLT3L transmembranar inteiro (por exemplo, o domínio transmembranar do FLT3L humano estabelecido em nº de acesso GenBank U03858.1). Em outros exemplos, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L (por exemplo, o domínio transmembranar do FLT3L humano estabelecido no nº de Acesso GenBank U03858.1). Em uma modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro e o domínio citoplásmico de FLT3L inteiro. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L e do domínio citoplásmico de FLT3L inteiro. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L e pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio citoplásmico FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro e 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 13, 14 ou 15 dos resíduos de aminoácido N-terminal do domínio citoplásmico de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro e 1, 2, 3 ou 4 dos resíduos de aminoácido N-terminal do domínio citoplásmico de FLT3L. Em certas modalidades e aspectos, os domínios transmembranares e citoplásmicos são da sequência FLT3L estabelecida no nº de Acesso GenBank
U03858.1.
[432] Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro e 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro e 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro e 1-5, 1-10, 5-10, 10-20, 15- 20, 1-20, 5-20 ou 10-20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em certas modalidades e aspectos, os domínios transmembranares e extracelulares são da sequência FLT3L estabelecida no nº de Acesso GenBank U03858.1.
[433] Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L e 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L e 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L e 1-5, 1-10, 5-10, 10-20, 15-20, 1-20, 5-20 ou 10-20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em certas modalidades e aspectos, os domínios transmembranares e extracelulares são da sequência FLT3L estabelecida no nº de Acesso GenBank U03858.1.
[434] Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro, o domínio citoplásmico inteiro, e 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro, o domínio citoplásmico inteiro, e 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro, o domínio citoplásmico inteiro, e 1-5, 1- 10, 5-10, 10-20, 15-20, 1-20, 5-20 ou 10-20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em certas modalidades e aspectos, os domínios transmembranares, citoplásmicos e extracelulares são da sequência FLT3L estabelecida no nº de Acesso GenBank U03858.1.
[435] Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L, do domínio citoplásmico inteiro, e 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L, do domínio citoplásmico inteiro, e 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L, do domínio citoplásmico inteiro, e 1-5, 1-10, 5-10, 10-20, 15-20, 1-20, 5-20 ou 10- 20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em certas modalidades e aspectos, os domínios transmembranares, citoplásmicos e extracelulares são da sequência FLT3L estabelecida no nº de Acesso GenBank U03858.1.
[436] Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos
95% do domínio citoplásmico, e 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio citoplásmico, e 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio citoplásmico, e 1-5, 1-10, 5-10, 10-20, 15-20, 1-20, 5- 20 ou 10-20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em certas modalidades e aspectos, os domínios transmembranares, citoplásmicos e extracelulares são da sequência FLT3L estabelecida no nº de Acesso GenBank U03858.1.
[437] Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio citoplásmico, e 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio citoplásmico, e 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio citoplásmico, e 1-5, 1-10, 5-10, 10-20, 15-20, 1-20, 5-20 ou 10-20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em certas modalidades e aspectos, os domínios transmembranares, citoplásmicos e extracelulares são da sequência FLT3L estabelecida no nº de Acesso GenBank U03858.1.
[438] Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 13, 14 ou 15 dos resíduos de aminoácido N-terminal do domínio citoplásmico, e 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 13, 14 ou 15 dos resíduos de aminoácido N- terminal do domínio citoplásmico, e 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 13, 14 ou 15 dos resíduos de aminoácido N-terminal do domínio citoplásmico, e 1-5, 1-10, 5- 10, 10-20, 15-20, 1-20, 5-20 ou 10-20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em certas modalidades e aspectos, os domínios transmembranares, citoplásmicos e extracelulares são da sequência FLT3L estabelecida no nº de Acesso GenBank U03858.1.
[439] Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 13, 14, ou 15 dos resíduos de aminoácido N-terminal do domínio citoplásmico, e 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 13, 14, ou 15 dos resíduos de aminoácido N-terminal do domínio citoplásmico, e 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 13, 14, ou 15 dos resíduos de aminoácido N-terminal do domínio citoplásmico, e 1-5, 1-10, 5-10, 10-20, 15-20, 1-20, 5-20 ou 10-20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em certas modalidades e aspectos, os domínios transmembranares, citoplásmicos e extracelulares são da sequência FLT3L estabelecida no nº de Acesso GenBank U03858.1.
[440] Em uma modalidade específica, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos é uma isoforma X7 e a terceira sequência de nucleotídeos não tem uma sequência de 179 nucleotídeos conforme descrito em Lyman et al., 1994, Blood 83:2795-2801. Em modalidades específicas, o FLT3L compreende a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 213. Em modalidades específicas, a terceira sequência de nucleotídeos compreende a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 216. Em modalidades específicas, a terceira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 216.
[441] Em uma modalidade específica, o primeiro transgene é inserido entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais, e o segundo transgene e o terceiro transgene são inseridos no lócus da deleção no gene B8R. Em uma modalidade específica adicional, o terceiro transgene está a montante do segundo transgene.
[442] Em algumas modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento, a deleção no gene B8R é uma deleção de pelo menos 30% da sequência de genes B8R. Em outras modalidades, a deleção no gene B8R é uma deleção de pelo menos 40% da sequência de genes B8R. Em outras modalidades, a deleção no gene B8R é uma deleção de pelo menos 50% da sequência de genes B8R. Em outras modalidades, a deleção no gene B8R é uma deleção de pelo menos 60% da sequência de genes B8R. Em outras modalidades, a deleção no gene B8R é uma deleção de pelo menos 70% da sequência de genes B8R. Em outras modalidades, a deleção no gene B8R é uma deleção de pelo menos 80% da sequência de genes B8R. Em outras modalidades, a deleção no gene B8R é uma deleção de 30%-90%, 30%-85%, 40%-90%, 40%-85%, 50%-90%, 50%-85%, 60%-90%, 60%-85%, 70%-90%, 70%-85%, 75%-90%, 75%-85% ou
80%-85% da sequência de genes B8R. Em uma modalidade específica, a deleção no gene B8R é uma deleção de cerca de 75% da sequência de genes B8R. Em outra modalidade específica, a deleção no gene B8R é uma deleção de cerca de 80% da sequência de genes B8R. Em outra modalidade específica, a deleção no gene B8R é uma deleção de cerca de 82% da sequência de genes B8R.
[443] Por exemplo, em algumas modalidades, a deleção no gene B8R é uma deleção de pelo menos 30% da sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO:
591. Em outras modalidades, a deleção no gene B8R é uma deleção de pelo menos 40% da sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 591. Em outras modalidades, a deleção no gene B8R é uma deleção de pelo menos 50% da sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 591. Em outras modalidades, a deleção no gene B8R é uma deleção de pelo menos 60% da sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO:
591. Em outras modalidades, a deleção no gene B8R é uma deleção de pelo menos 70% da sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 591. Em outras modalidades, a deleção no gene B8R é uma deleção de pelo menos 80% da sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 591. Em outras modalidades, a deleção no gene B8R é uma deleção de 30%-90%, 30%-85%, 40%-90%, 40%-85%, 50%-90%, 50%- 85%, 60%-90%, 60%-85%, 70%-90%, 70%-85%, 75%-90%, 75%-85% ou 80%- 85% da sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 591. Em uma modalidade específica, a deleção no gene B8R é uma deleção de cerca de 75% da sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 591. Em outra modalidade específica, a deleção no gene B8R é uma deleção de cerca de 80% da sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 591. Em outra modalidade específica, a deleção no gene B8R é uma deleção de cerca de 82% da sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 591.
[444] Em outro exemplo, em algumas modalidades, a deleção no gene B8R é uma deleção de pelo menos 30% da sequência de nucleotídeos de
ACAACACCATGAGATATATTATA ATTCTCGCAGTTTTGTTCATTAATAGTATACACGCTAAAATAACTAGTTATAAG TTTGAATCCGTCAATTTTGATTCCAAAATTGAATGGACTGGGGATGGTCTATA CAATATATCCCTTAAAAATTATGGCATCAAGACGTGGCAAACAATGTATACAAA TGTACCAGAAGGAACATACGACATATCCGCATTTCCAAAGAATGATTTCGTAT CTTTCTGGGTTAAATTTGAACAAGGCGATTATAAAGTGGAAGAGTATTGTACG GGACTATGCGTCGAAGTAAAAATTGGACCACCGACTGTAACATTGACTGAATA CGACGACCATATCAATTTGTACATCGAGCATCCGTATGCTACTAGAGGTAGCA AAAAGATTCCTATTTACAAACGCGGTGACATGTGTGATATCTACTTGTTGTATA CGGCTAACTTCACATTCGGAGATTCTGAAGAACCAGTAACATATGATATCGAT GACTACGATTGCACGTCTACAGGTTGCAGCATAGACTTTGCCACAACAGAAA AAGTGTGCGTGACAGCACAGGGAGCCACAGAAGGGTTTCTCGAAAAAATTAC TCCATGGAGTTCGGAAGTATGTCTGACACCTAAAAAGAATGTATATACATGTG CAATTAGATCCAAAGAAGATGTTCCCAATTTCAAGGACAAAATGGCCAGAGTT ATCAAGAGAAAATTTAATAAACAGTCTCAATCTTATTTAACTAAATTTCTCGGTA
GCACATCAAATGATGTTACCACTTTTCTTAGCATGCTTAACTTGACTAAATATT CATAA (SEQ ID NO: 550. Em outras modalidades, a deleção no gene B8R é uma deleção de pelo menos 40% da sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 550. Em outras modalidades, a deleção no gene B8R é uma deleção de pelo menos 50% da sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 550. Em outras modalidades, a deleção no gene B8R é uma deleção de pelo menos 60% da sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 550. Em outras modalidades, a deleção no gene B8R é uma deleção de pelo menos 70% da sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO:
550. Em outras modalidades, a deleção no gene B8R é uma deleção de pelo menos 80% da sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 550. Em outras modalidades, a deleção no gene B8R é uma deleção de 30%-90%, 30%-85%, 40%-90%, 40%- 85%, 50%-90%, 50%-85%, 60%-90%, 60%-85%, 70%-90%, 70%-85%, 75%-90%, 75%-85% ou 80%-85% da sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 550. Em uma modalidade específica, a deleção no gene B8R é uma deleção de cerca de 75% da sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 550. Em outra modalidade específica, a deleção no gene B8R é uma deleção de cerca de 80% da sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 550. Em outra modalidade específica, a deleção no gene B8R é uma deleção de cerca de 82% da sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 550.
[445] Em certas modalidades, a deleção no gene B8R não perturba a função do gene B9R do genoma vaccinia. Em certas modalidades, a deleção no gene B8R não perturba a expressão do gene B9R. Em certas modalidades, a deleção no gene B8R não remove o promotor (ou promotores) do gene B9R. Em certas modalidades, a deleção no gene B8R não remove as sequências reguladoras transcricionais do gene B9R. Em uma modalidade específica, a única sequência do gene B8R que permanece após a deleção é a sequência necessária para função e/ou expressão de B9R. Em uma modalidade específica, a deleção no gene B8R não remove uma sequência de nucleotídeos que compreende AAAATTTAATAAACA (SEQ ID NO: 551). Em outra modalidade específica, a deleção no gene B8R não remove a sequência de nucleotídeos AAAATTTAATAAACA (SEQ ID NO: 551). Em uma modalidade específica, a única sequência do gene B8R que permanece é a sequência de nucleotídeos de
GATGTTCCCAATTTCAAGGACAAAATGGCCAGAGTTATCAAGAGAAAATTTAA
TAAACAGTCTCAATCTTATTTAACTAAATTTCTCGGTAGCACATCAAATGATGT TACCACTTTTCTTAGCATGCTTAACTTGACTAAATATTCATAA (SEQ ID NO: 552).
[446] Em certas modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento, o genoma de vírus vaccinia recombinante é derivado do genoma de um vírus vaccinia de cepa Copenhagen. Em certas modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento, o genoma de vírus vaccinia recombinante é derivado da sequência de nucleotídeos de nº de Acesso GenBank M35027.1 (SEQ ID NO: 590). Em certas modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento, o genoma de vírus vaccinia recombinante compreende a sequência de nucleotídeos de nº de Acesso GenBank M35027.1 (SEQ ID NO: 590).
[447] Em certas modalidades e aspectos fornecidos no presente documento, o genoma de vírus vaccinia recombinante compreende uma sequência de nucleotídeos idêntica à sequência de nucleotídeos de nº de Acesso GenBank M35027.1 (SEQ ID NO: 590) exceto por a sequência de nucleotídeos compreender 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 dos polimorfismos de nucleotídeo identificados na Tabela
46. Em algumas modalidades das modalidades e aspectos fornecidos no presente documento, o genoma de vírus vaccinia recombinante compreende uma sequência de nucleotídeos idêntica à sequência de nucleotídeos de nº de Acesso GenBank M35027.1 (SEQ ID NO: 590) exceto por a sequência de nucleotídeos compreender 1-3, 1-5, 2-4, 2-5, 1-9, 2-8, 4-8, 6-8, 1-9, 2-9, 4-9, 6-9, 7-9, 1-10, 2-10, 5-10 ou 8-10 dos polimorfismos de nucleotídeo identificados na Tabela 46. Em certas modalidades e aspectos fornecidos no presente documento, o genoma de vírus vaccinia recombinante compreende uma sequência de nucleotídeos idêntica à sequência de nucleotídeos de nº de Acesso GenBank M35027.1 (SEQ ID NO: 590) exceto por a sequência de nucleotídeos compreender 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20 dos polimorfismos de nucleotídeo identificados na Tabela 46. Em algumas modalidades das modalidades e aspectos fornecidos no presente documento, o genoma de vírus vaccinia recombinante compreende uma sequência de nucleotídeos idêntica à sequência de nucleotídeos de nº de Acesso GenBank M35027.1 (SEQ ID NO: 590) exceto por a sequência de nucleotídeos compreender 11-20, 12-15, 15-20, ou 18-20 dos polimorfismos de nucleotídeo identificados na Tabela 46. Em certas modalidades das modalidades e aspectos fornecidos no presente documento, o genoma de vírus vaccinia recombinante compreende uma sequência de nucleotídeos idêntica à sequência de nucleotídeos de nº de Acesso GenBank M35027.1 (SEQ ID NO: 590) exceto por a sequência de nucleotídeos compreender 1-20, 1-15, 5-20, ou 10-20 dos polimorfismos de nucleotídeo identificados na Tabela 46. Em algumas das modalidades e aspectos fornecidos no presente documento, o genoma de vírus vaccinia recombinante compreende uma sequência de nucleotídeos idêntica à sequência de nucleotídeos de nº de Acesso GenBank M35027.1 (SEQ ID NO: 590) exceto por a sequência de nucleotídeos compreender todos os polimorfismos de nucleotídeo identificados na Tabela 46. Em certas de tais modalidades, o genoma de vírus vaccinia recombinante pode ser manipulado para compreender 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 das deleções nos genes de vírus vaccinia identificados no presente documento (por exemplo, C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B8R, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, B20R, B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R e B29R), e inserções de um, dois ou três dos transgenes descritos no presente documento.
Em algumas de tais modalidades, o genoma de vírus recombinante pode ser manipulado para compreender 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20 das deleções nos genes de vírus vaccinia identificados no presente documento (por exemplo, C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B8R, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R,
e B20R, B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R e B29R), e inserções de um, dois ou três dos transgenes descritos no presente documento. Em certas de tais modalidades, o genoma de vírus vaccinia recombinante pode ser manipulado para compreender 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31 ou 32 das deleções nos genes de vírus vaccinia identificados no presente documento (por exemplo, C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B8R, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, e B20R, B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R e B29R), e inserções de um, dois ou três dos transgenes descritos no presente documento. Em algumas de tais modalidades, o genoma de vírus recombinante pode ser manipulado para compreender deleções em C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B8R, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, e os seguintes genes na repetição terminal invertida 3' (ITR): B19R, e B20R, B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R e B29R, e inserções de um, dois ou três do transgene (ou transgenes) descrito no presente documento.
[448] Em certas modalidades e aspectos fornecidos no presente documento, o genoma de vírus vaccinia recombinante compreende uma sequência de nucleotídeos idêntica à sequência de nucleotídeos de nº de Acesso GenBank M35027.1 (SEQ ID NO: 590) exceto por a sequência de nucleotídeos compreender 1, 2, 3 ou 4 dos polimorfismos de nucleotídeo identificados na Tabela 46 que são variantes sinônimas. Em algumas modalidades das modalidades e aspectos fornecidos no presente documento, o genoma de vírus vaccinia recombinante compreende uma sequência de nucleotídeos idêntica à sequência de nucleotídeos de nº de Acesso GenBank M35027.1 (SEQ ID NO: 590) exceto por a sequência de nucleotídeos compreender 1, 2, 3, 4, 5, 6 ou 7 dos polimorfismos de nucleotídeo identificados na Tabela 46 que não estão em uma região de codificação de proteína. Em certas modalidades e aspectos fornecidos no presente documento, o genoma de vírus vaccinia recombinante compreende uma sequência de nucleotídeos idêntica à sequência de nucleotídeos de nº de Acesso GenBank M35027.1 (SEQ ID NO: 590) exceto por a sequência de nucleotídeos compreender 1, 2, 3, 4, 5, 6 ou 7 dos polimorfismos de nucleotídeo identificados na Tabela 46 que resultam em mudança na sequência de aminoácidos. Em algumas modalidades das modalidades e aspectos fornecidos no presente documento, o genoma de vírus vaccinia recombinante compreende uma sequência de nucleotídeos idêntica à sequência de nucleotídeos de nº de Acesso GenBank M35027.1 (SEQ ID NO: 590) exceto por a sequência de nucleotídeos compreender 1 ou 2 dos polimorfismos de nucleotídeo identificados na Tabela 46 que resultam em um deslocamento de quadro. Em certas de tais modalidades, o genoma de vírus vaccinia recombinante pode ser manipulado para compreender 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 das deleções nos genes de vírus vaccinia identificados no presente documento (por exemplo, C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B8R, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, B20R, B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R e B29R), e inserções de um, dois ou três dos transgenes descritos no presente documento. Em algumas de tais modalidades, o genoma de vírus recombinante pode ser manipulado para compreender 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20 das deleções nos genes de vírus vaccinia identificados no presente documento (por exemplo, C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B8R, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, e B20R, B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R e B29R), e inserções de um, dois ou três dos transgenes descritos no presente documento. Em certas de tais modalidades, o genoma de vírus vaccinia recombinante pode ser manipulado para compreender 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31 ou 32 das deleções nos genes de vírus vaccinia identificados no presente documento (por exemplo, C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B8R, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, e B20R, B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R e B29R), e inserções de um, dois ou três dos transgenes descritos no presente documento. Em algumas de tais modalidades, o genoma de vírus recombinante pode ser manipulado para compreender deleções em C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B8R, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, e os seguintes genes na repetição terminal invertida 3' (ITR): B19R, e B20R, B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R e B29R, e inserções de um, dois ou três do transgene (ou transgenes) descrito no presente documento.
[449] Em certas modalidades e aspectos fornecidos no presente documento, o genoma de vírus vaccinia recombinante compreende uma sequência de nucleotídeos idêntica à sequência de nucleotídeos de nº de Acesso GenBank M35027.1 (SEQ ID NO: 590) exceto por a sequência de nucleotídeos compreender os polimorfismos de nucleotídeo encontrados em 1, 2, 3, 4, 5, 6 ou 7 dos genes identificados na Tabela 46. Em algumas das modalidades e aspectos fornecidos no presente documento, o genoma de vírus vaccinia recombinante compreende uma sequência de nucleotídeos idêntica à sequência de nucleotídeos de nº de Acesso GenBank M35027.1 (SEQ ID NO: 590) exceto por a sequência de nucleotídeos compreender dos polimorfismos de nucleotídeo encontrados em 8, 9, 10, 11, 12, 12 ou 13 dos genes identificados na Tabela 46. Em certas modalidades e aspectos fornecidos no presente documento, o genoma de vírus vaccinia recombinante compreende uma sequência de nucleotídeos idêntica à sequência de nucleotídeos de nº de Acesso GenBank M35027.1 (SEQ ID NO: 590) exceto por uma sequência de nucleotídeos compreender os polimorfismos de nucleotídeo polimorfismos de nucleotídeo encontrados em todos os genes identificados na Tabela 46. Em certas modalidades e aspectos fornecidos no presente documento, o genoma de vírus vaccinia recombinante compreende uma sequência de nucleotídeos idêntica à sequência de nucleotídeos de nº de Acesso GenBank M35027.1 (SEQ ID NO: 590) exceto por a sequência de nucleotídeos compreender os polimorfismos de nucleotídeo encontrados em 1-5, 5-10, 1-13, 5-13 ou 10-13 dos genes identificados na Tabela 46. Em certas de tais modalidades, o genoma de vírus vaccinia recombinante pode ser manipulado para compreender 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 das deleções nos genes de vírus vaccinia identificados no presente documento (por exemplo, C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B8R, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, B20R, B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R e B29R), e inserções de um, dois ou três dos transgenes descritos no presente documento.
Em algumas de tais modalidades, o genoma de vírus recombinante pode ser manipulado para compreender 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20 das deleções nos genes de vírus vaccinia identificados no presente documento (por exemplo, C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B8R, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, e B20R, B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R e B29R), e inserções de um, dois ou três dos transgenes descritos no presente documento. Em certas de tais modalidades, o genoma de vírus vaccinia recombinante pode ser manipulado para compreender 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31 ou 32 das deleções nos genes de vírus vaccinia identificados no presente documento (por exemplo, C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B8R, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, e B20R, B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R e B29R), e inserções de um, dois ou três dos transgenes descritos no presente documento. Em algumas de tais modalidades, o genoma de vírus recombinante pode ser manipulado para compreender deleções em C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B8R, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, e os seguintes genes na repetição terminal invertida 3' (ITR): B19R, e B20R, B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R e B29R, e inserções de um, dois ou três do transgene (ou transgenes) descrito no presente documento.
[450] Em certas modalidades e aspectos fornecidos no presente documento, o genoma de vírus vaccinia recombinante compreende uma sequência de nucleotídeos idêntica à sequência de nucleotídeos de nº de Acesso GenBank M35027.1 (SEQ ID NO: 590) exceto por a sequência de nucleotídeos compreender o polimorfismo de nucleotídeo (ou polimorfismos de nucleotídeo) identificado na Tabela 46 para gene vaccinia C14L, C2L, C1L, N2L, F3L, F13L, F16L, G7L, L3L, J3R, D6R, A41L ou A46R. Em algumas das modalidades e aspectos fornecidos no presente documento, o genoma de vírus vaccinia recombinante compreende uma sequência de nucleotídeos idêntica à sequência de nucleotídeos de nº de Acesso GenBank M35027.1 (SEQ ID NO: 590) exceto por a sequência de nucleotídeos compreender dos polimorfismos de nucleotídeo identificados na Tabela 46 para gene vaccinia C14L, C2L, C1L, N2L, F3L, F13L, F16L, G7L, L3L, J3R, D6R, A41L e A46R. Em certas modalidades e aspectos fornecidos no presente documento, o genoma de vírus vaccinia recombinante compreende uma sequência de nucleotídeos idêntica à sequência de nucleotídeos de nº de Acesso GenBank M35027.1 (SEQ ID NO: 590),exceto por a sequência de nucleotídeos compreender os polimorfismos de nucleotídeo identificados na Tabela 46 para 1, 2, 3, 4, 5, 6, ou 7 dos seguintes genes vaccinia: C14L, C2L, C1L, N2L, F3L, F13L, F16L, G7L, L3L,
J3R, D6R, A41L e A46R.
Em certas modalidades e aspectos fornecidos no presente documento, o genoma de vírus vaccinia recombinante compreende uma sequência de nucleotídeos idêntica à sequência de nucleotídeos de nº de Acesso GenBank M35027.1 (SEQ ID NO: 590) exceto por a sequência de nucleotídeos compreender os polimorfismos de nucleotídeo identificados na Tabela 46 para 8, 9, 10, 11, 12, ou 13 dos seguintes genes vaccinia: C14L, C2L, C1L, N2L, F3L, F13L, F16L, G7L, L3L, J3R, D6R, A41L e A46R.
Em certas de tais modalidades, o genoma de vírus vaccinia recombinante pode ser manipulado para compreender 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 das deleções nos genes de vírus vaccinia identificados no presente documento (por exemplo, C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B8R, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, B20R, B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R e B29R), e inserções de um, dois ou três dos transgenes descritos no presente documento.
Em algumas de tais modalidades, o genoma de vírus recombinante pode ser manipulado para compreender 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20 das deleções nos genes de vírus vaccinia identificados no presente documento (por exemplo, C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B8R, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, e B20R, B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R e B29R), e inserções de um, dois ou três dos transgenes descritos no presente documento.
Em certas de tais modalidades, o genoma de vírus vaccinia recombinante pode ser manipulado para compreender 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31 ou 32 das deleções nos genes de vírus vaccinia identificados no presente documento (por exemplo, C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B8R, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, e B20R, B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R e B29R), e inserções de um, dois ou três dos transgenes descritos no presente documento.
Em algumas de tais modalidades, o genoma de vírus recombinante pode ser manipulado para compreender deleções em C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B8R, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, e os seguintes genes na repetição terminal invertida 3' (ITR): B19R, e B20R, B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R e B29R, e inserções de um, dois ou três do transgene (ou transgenes) descrito no presente documento.
[451] Em certas modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento, o genoma de vírus vaccinia recombinante compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 210. Em certas modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento, o genoma de vírus vaccinia recombinante compreende uma sequência de nucleotídeos que é idêntica à sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 210 exceto por 1, 2, 3, 4, 5, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20 dos polimorfismos de nucleotídeo identificados na Tabela 46.
[452] Em certas modalidades, é fornecido no presente documento um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante, que compreende: (a) uma sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210; e (b) um, dois ou três dos seguintes: (i) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que se liga especificamente a CTLA- 4 (por exemplo, CTLA-4 humano) (por exemplo, em que a primeira sequência de nucleotídeos compreende a sequência de nucleotídeos estabelecida na SEQ ID NO: 214); (ii) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12 (por exemplo, em que a segunda sequência de nucleotídeos compreende a sequência de nucleotídeos estabelecida na SEQ ID NO: 215); e (iii) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L (por exemplo, em que a terceira sequência de nucleotídeos compreende a sequência de nucleotídeos estabelecida na SEQ ID NO: 216).
[453] Em certas modalidades, é fornecido no presente documento um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante, que compreende: (a) uma sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210; e (b) dois ou três dos seguintes: (i) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que se liga especificamente a CTLA-4 (por exemplo, CTLA-4 humano) (por exemplo, em que a primeira sequência de nucleotídeos compreende a sequência de nucleotídeos estabelecida na SEQ ID NO: 214); (ii) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12 (por exemplo, em que a segunda sequência de nucleotídeos compreende a sequência de nucleotídeos estabelecida na SEQ ID NO: 215); e (iii) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L (por exemplo, em que a terceira sequência de nucleotídeos compreende a sequência de nucleotídeos estabelecida na SEQ ID NO: 216).
[454] Em certas modalidades, é fornecido no presente documento um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante, que compreende: (a) uma sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210; e (b): (i) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que se liga especificamente a CTLA-4 (por exemplo, CTLA-4 humano) (por exemplo, em que a primeira sequência de nucleotídeos compreende a sequência de nucleotídeos estabelecida na SEQ ID NO: 214); (ii) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12 (por exemplo, em que a segunda sequência de nucleotídeos compreende a sequência de nucleotídeos estabelecida na SEQ ID NO: 215); e (iii) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L (por exemplo, em que a terceira sequência de nucleotídeos compreende a sequência de nucleotídeos estabelecida na SEQ ID NO: 216)
[455] Em modalidades específicas do supracitado em que o ácido nucleico compreende o primeiro transgene, o ácido nucleico compreende adicionalmente uma sequência de nucleotídeos que compreende um promotor H5R operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos que codifica o anticorpo anti-CTLA-4. Em modalidades específicas do supracitado, em que o ácido nucleico compreende o segundo transgene, o ácido nucleico compreende adicionalmente uma sequência de nucleotídeos que compreende um promotor tardio operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos que codifica o polipeptídeo de IL-12, em que o promotor tardio compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561. Em modalidades específicas do supracitado em que o ácido nucleico compreende o terceiro transgene, o ácido nucleico compreende adicionalmente uma sequência de nucleotídeos que compreende um promotor B8R operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L. Em modalidades específicas do supracitado em que o ácido nucleico compreende o terceiro transgene, o ácido nucleico compreende adicionalmente uma sequência de nucleotídeos que compreende um promotor B19R operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L. Em modalidades específicas do supracitado em que o ácido nucleico compreende o terceiro transgene, o ácido nucleico compreende adicionalmente uma sequência de nucleotídeos que compreende um promotor B8R e um promotor B19R operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L. Em modalidades específicas do supracitado, os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a primeira sequência de nucleotídeos têm a mesma orientação, e a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a primeira sequência de nucleotídeos. Em modalidades específicas do supracitado, os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a segunda sequência de nucleotídeos têm a mesma orientação, e a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a segunda sequência de nucleotídeos. Em modalidades específicas do supracitado, os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a terceira sequência de nucleotídeos têm a mesma orientação e a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a terceira sequência de nucleotídeos. Em uma modalidade específica do supracitado, o ácido nucleico compreende o primeiro transgene, o segundo transgene e o terceiro transgene, e o primeiro transgene é inserido entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais, e o segundo transgene e o terceiro transgene são inseridos no lócus da deleção no gene B8R. Em uma modalidade particular, o promotor B8R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 564. Em uma modalidade particular, o promotor B19R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 565.
[456] Em certas modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento, o genoma de vírus vaccinia recombinante compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 624. Em certas modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento, o genoma de vírus vaccinia recombinante compreende uma sequência de nucleotídeos que é idêntica à sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 624 exceto por 1, 2, 3, 4, 5, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20 dos polimorfismos de nucleotídeo identificados na Tabela 46.
[457] Em certas modalidades, é fornecido no presente documento um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante, que compreende: (a) uma sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 624; e (b) um, dois ou três dos seguintes: (i) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que se liga especificamente a CTLA- 4 (por exemplo, CTLA-4 humano) (por exemplo, em que a primeira sequência de nucleotídeos compreende a sequência de nucleotídeos estabelecida na SEQ ID NO: 214); (ii) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12 (por exemplo, em que a segunda sequência de nucleotídeos compreende a sequência de nucleotídeos estabelecida na SEQ ID NO: 215); e (iii) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L (por exemplo, em que a terceira sequência de nucleotídeos compreende a sequência de nucleotídeos estabelecida na SEQ ID NO: 216). Em modalidades específicas, o ácido nucleico compreende adicionalmente um promotor, como descrito no presente documento, operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos, a promotor, como descrito no presente documento, operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos, ou um promotor, como descrito no presente documento, operacionalmente ligado ao terceiro promotor. Em modalidades específicas, o ácido nucleico compreende adicionalmente a promotor, como descrito no presente documento, operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos, um promotor, como descrito no presente documento, operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos, e um promotor, como descrito no presente documento, operacionalmente ligado ao terceiro promotor. Em modalidades específicas, o primeiro transgene, segundo transgene e/ou terceiro transgene são inseridos em um lócus ou loci descritos no presente documento.
[458] Em certas modalidades, é fornecido no presente documento um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante, que compreende: (a) uma sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 624; e (b) dois ou três dos seguintes: (i) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que se liga especificamente a CTLA-4 (por exemplo, CTLA-4 humano) (por exemplo, em que a primeira sequência de nucleotídeos compreende a sequência de nucleotídeos estabelecida na SEQ ID NO: 214); (ii) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12 (por exemplo, em que a segunda sequência de nucleotídeos compreende a sequência de nucleotídeos estabelecida na SEQ ID NO: 215); e (iii) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L (por exemplo, em que a terceira sequência de nucleotídeos compreende a sequência de nucleotídeos estabelecida na SEQ ID NO: 216). Em modalidades específicas, o ácido nucleico compreende adicionalmente um promotor, como descrito no presente documento, operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos, a promotor, como descrito no presente documento, operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos, ou um promotor, como descrito no presente documento, operacionalmente ligado ao terceiro promotor. Em modalidades específicas, os dois ou três transgenes são inseridos em um lócus ou loci descritos no presente documento.
[459] Em certas modalidades, é fornecido no presente documento um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante, que compreende: (a) uma sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 624; e (b): (i) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que se liga especificamente a CTLA-4 (por exemplo, CTLA-4 humano) (por exemplo, em que a primeira sequência de nucleotídeos compreende a sequência de nucleotídeos estabelecida na SEQ ID NO: 214); (ii) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12 (por exemplo, em que a segunda sequência de nucleotídeos compreende a sequência de nucleotídeos estabelecida na SEQ ID NO: 215); e (iii) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L (por exemplo, em que a terceira sequência de nucleotídeos compreende a sequência de nucleotídeos estabelecida na SEQ ID NO: 216). Em modalidades específicas, o ácido nucleico compreende adicionalmente um promotor, como descrito no presente documento, operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos, a promotor, como descrito no presente documento, operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos, ou um promotor, como descrito no presente documento, operacionalmente ligado ao terceiro promotor. Em modalidades específicas, o ácido nucleico compreende adicionalmente a promotor, como descrito no presente documento, operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos, um promotor, como descrito no presente documento, operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos, e um promotor, como descrito no presente documento, operacionalmente ligado ao terceiro promotor. Em modalidades específicas, o primeiro transgene, segundo transgene e terceiro transgene são inseridos em um lócus ou loci descritos no presente documento.
[460] Em modalidades específicas do supracitado em que o ácido nucleico compreende o primeiro transgene, o ácido nucleico compreende adicionalmente uma sequência de nucleotídeos que compreende um promotor H5R operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos que codifica o anticorpo anti-CTLA-4. Em modalidades específicas do supracitado, em que o ácido nucleico compreende o segundo transgene, o ácido nucleico compreende adicionalmente uma sequência de nucleotídeos que compreende um promotor tardio operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos que codifica o polipeptídeo de IL-12, em que o promotor tardio compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561. Em modalidades específicas do supracitado em que o ácido nucleico compreende o terceiro transgene, o ácido nucleico compreende adicionalmente uma sequência de nucleotídeos que compreende um promotor B8R operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L. Em modalidades específicas do supracitado em que o ácido nucleico compreende o terceiro transgene, o ácido nucleico compreende adicionalmente uma sequência de nucleotídeos que compreende um promotor
B19R operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L. Em modalidades específicas do supracitado em que o ácido nucleico compreende o terceiro transgene, o ácido nucleico compreende adicionalmente uma sequência de nucleotídeos que compreende um promotor B8R e um promotor B19R operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L. Em modalidades específicas do supracitado, os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a primeira sequência de nucleotídeos têm a mesma orientação, e a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a primeira sequência de nucleotídeos. Em modalidades específicas do supracitado, os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a segunda sequência de nucleotídeos têm a mesma orientação, e a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a segunda sequência de nucleotídeos. Em modalidades específicas do supracitado, os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a terceira sequência de nucleotídeos têm a mesma orientação e a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a terceira sequência de nucleotídeos. Em modalidades específicas, o ácido nucleico compreende adicionalmente uma deleção no gene B8R. Em uma modalidade específica do supracitado, o ácido nucleico compreende o primeiro transgene, o segundo transgene e o terceiro transgene, e compreende adicionalmente uma deleção no gene B8R, e o primeiro transgene é inserido entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais, e o segundo transgene e o terceiro transgene são inseridos no lócus da deleção no gene B8R. Em uma modalidade particular, o promotor B8R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 564. Em uma modalidade particular, o promotor B19R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 565.
[461] Em outro aspecto, é fornecido no presente documento um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende: (a) deleções nos seguintes genes: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R, e opcionalmente uma deleção no gene B8R; (b) deleções nos seguintes genes na ITR 3’: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R e B29R; (c) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que se liga especificamente se liga a CTLA-4 (por exemplo, CTLA-4 humano); (d) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12; e (e) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L; em que as deleções nos genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R são deleções parciais; e em que o ácido nucleico compreende adicionalmente: (i) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor H5R; (ii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos é um promotor tardio que compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561; e (iii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R e um promotor B19R.
Em modalidades específicas, a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a primeira sequência de nucleotídeos, a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a segunda sequência de nucleotídeos, e a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a terceira sequência de nucleotídeos.
Em modalidades específicas, o primeiro transgene é inserido entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais, e o segundo transgene e o terceiro transgene são inseridos no lócus da deleção no gene B8R.
Em modalidades específicas, o primeiro transgene é inserido entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais, e o segundo transgene e o terceiro transgene são inseridos no lócus da deleção no gene B8R.
Em modalidades específicas, o terceiro transgene está a montante do segundo transgene. Em modalidades específicas, o terceiro transgene está a jusante do segundo transgene. Em uma modalidade particular, o ácido nucleico compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende uma deleção no gene B8R. Em uma modalidade particular, o promotor B8R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 564. Em uma modalidade particular, o promotor B19R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 565.
[462] Em outro aspecto, é fornecido no presente documento um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende: (a) deleções nos seguintes genes: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R, e opcionalmente uma deleção no gene B8R; (b) deleções nos seguintes genes na ITR 3’: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, e B29R; (c) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que se liga especificamente a CTLA-4 (por exemplo, CTLA-4 humano), em que a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a primeira sequência de nucleotídeos, e em que o primeiro transgene é inserido entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais; (d) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12, em que a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a segunda sequência de nucleotídeos, e em que o segundo transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R; e (e) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L, em que a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam A terceira sequência de nucleotídeos, em que o terceiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R, e em que o terceiro transgene está a montante do segundo transgene; em que as deleções nos genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R são deleções parciais; e em que o ácido nucleico compreende adicionalmente: (i) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor H5R; (ii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos é um promotor tardio que compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561; e (iii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R e um promotor B19R. Em uma modalidade particular, o ácido nucleico compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende uma deleção no gene B8R. Em uma modalidade particular, o promotor B8R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 564. Em uma modalidade particular, o promotor B19R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 565. .
[463] Em outro aspecto, é fornecido no presente documento um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende: (a) deleções nos seguintes genes: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R, e opcionalmente uma deleção no gene B8R; (b) deleções nos seguintes genes na ITR 3’: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, e B29R; (c) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que se liga especificamente a CTLA-4 (por exemplo, CTLA-4 humano), em que a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a primeira sequência de nucleotídeos, e em que o primeiro transgene é inserido entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais; (d) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12, em que a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a segunda sequência de nucleotídeos, e em que o segundo transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R; e (e) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica
FLT3L; em que as deleções nos genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R são deleções parciais, em que a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a terceira sequência de nucleotídeos, em que o terceiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R, e em que o terceiro transgene está a jusante do segundo transgene; e em que o ácido nucleico compreende adicionalmente: (i) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor H5R; (ii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos é um promotor tardio que compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561; e (iii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R e um promotor B19R. Em uma modalidade particular, o ácido nucleico compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende uma deleção no gene B8R. Em uma modalidade particular, o promotor B8R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 564. Em uma modalidade particular, o promotor B19R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 565
[464] Em outro aspecto, é fornecido no presente documento um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende: (a) deleções nos seguintes genes: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R, e opcionalmente uma deleção no gene B8R; (b) deleções nos seguintes genes na ITR 3’: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R e B29R; (c) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que se liga especificamente a CTLA-4 (por exemplo, CTLA-4 humano), em que a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a primeira sequência de nucleotídeos, e em que o primeiro transgene é inserido entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais; (d) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12, em que a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a segunda sequência de nucleotídeos, e em que o segundo transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R; e (e) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L; em que as deleções nos genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R são deleções parciais, em que a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a terceira sequência de nucleotídeos, em que o terceiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R, e em que o terceiro transgene está a montante do segundo transgene; e em que o ácido nucleico compreende adicionalmente: (i) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor H5R; (ii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos é um promotor tardio que compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561; e (iii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R e um promotor B19R. Em uma modalidade particular, o ácido nucleico compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende uma deleção no gene B8R. Em uma modalidade particular, o promotor B8R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 564. Em uma modalidade particular, o promotor B19R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 565.
[465] Em outro aspecto, é fornecido no presente documento um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende: (a) deleções nos seguintes genes: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R, e opcionalmente uma deleção no gene B8R; (b) deleções nos seguintes genes na ITR 3’: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R e B29R; (c) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que se liga especificamente a CTLA-4 (por exemplo, CTLA-4 humano), em que a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a primeira sequência de nucleotídeos, e em que o primeiro transgene é inserido entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais; (d) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12, em que a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a segunda sequência de nucleotídeos, e em que o segundo transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R; e (e) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L; em que as deleções nos genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R são deleções parciais, em que a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a terceira sequência de nucleotídeos, em que o terceiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R, e em que o terceiro transgene está a jusante do segundo transgene; e em que o ácido nucleico compreende adicionalmente: (i) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor H5R; (ii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos é um promotor tardio que compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561; e (iii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R e um promotor B19R. Em uma modalidade particular, o ácido nucleico compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende uma deleção no gene B8R. Em uma modalidade particular, o promotor B8R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 564. Em uma modalidade particular, o promotor B19R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 565.
[466] Em outro aspecto, é fornecido no presente documento um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende: (a) uma sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210, que compreende genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R parciais e que compreende uma deleção no gene B8R; (b) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo que se liga especificamente à Proteína 4 Associada a Linfócito T Citotóxico (CTLA- 4), em que a primeira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 214; (c) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de Interleucina 12 (IL-12), em que a segunda sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 215; e (d) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica o ligante de tirosina quinase 3 de tipo FMS (FLT3L), em que a terceira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 216.
[467] Em algumas modalidades, quando os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da primeira sequência de nucleotídeos têm a mesma orientação, a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento. Em outras modalidades, quando os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da primeira sequência de nucleotídeos têm a mesma orientação, a primeira sequência de nucleotídeos está na orientação reversa em relação aos genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento. Em outras modalidades, quando os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da primeira sequência de nucleotídeos têm as orientações opostas, a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que o gene de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento que está mais próximo da extremidade 5’ do genoma de vírus vaccinia recombinante. Em outras modalidades, quando os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da primeira sequência de nucleotídeos têm as orientações opostas, a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que o gene de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento que está mais próximo da extremidade 3’ do genoma de vírus vaccinia recombinante.
Em uma modalidade específica, os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da primeira sequência de nucleotídeos são os genes C2L e F3L.
Em outra modalidade específica, os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da primeira sequência de nucleotídeos são os genes C3L e F4L.
Em outra modalidade específica, os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da primeira sequência de nucleotídeos são os genes B14R e B29R.
Em outra modalidade específica, os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da primeira sequência de nucleotídeos são os genes B13R e B29R.
Em ainda outra modalidade, a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que um gene vaccinia endógeno adjacente à primeira sequência de nucleotídeos.
Em uma modalidade específica, o gene vaccinia endógeno adjacente à primeira sequência de nucleotídeos é o gene B13R.
Em algumas modalidades, quando os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da segunda sequência de nucleotídeos têm a mesma orientação, a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento.
Em outras modalidades, quando os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da segunda sequência de nucleotídeos têm a mesma orientação, a segunda sequência de nucleotídeos está na orientação reversa em relação aos genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento.
Em outras modalidades, quando os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da segunda sequência de nucleotídeos têm as orientações opostas, a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que o gene de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento que está mais próximo da extremidade 5’ do genoma de vírus vaccinia recombinante.
Em outras modalidades, quando os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da segunda sequência de nucleotídeos têm as orientações opostas, a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que o gene de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento que está mais próximo da extremidade 3’ do genoma de vírus vaccinia recombinante.
Em uma modalidade específica, os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da segunda sequência de nucleotídeos são os genes C2L e F3L.
Em outra modalidade específica, os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da segunda sequência de nucleotídeos são os genes C3L e F4L.
Em outra modalidade específica, os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da segunda sequência de nucleotídeos são os genes B14R e B29R.
Em outra modalidade específica, os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da segunda sequência de nucleotídeos são os genes B13R e B29R.
Em ainda outra modalidade, a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que um gene vaccinia endógeno adjacente à segunda sequência de nucleotídeos.
Em uma modalidade específica, o gene vaccinia endógeno adjacente à segunda sequência de nucleotídeos é o gene B13R.
Em algumas modalidades, quando os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da terceira sequência de nucleotídeos têm a mesma orientação, a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento.
Em outras modalidades, quando os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da terceira sequência de nucleotídeos têm a mesma orientação, a terceira sequência de nucleotídeos está na orientação reversa em relação aos genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento.
Em outras modalidades, quando os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da terceira sequência de nucleotídeos têm as orientações opostas, a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que o gene de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento que está mais próximo da extremidade 5’ do genoma de vírus vaccinia recombinante.
Em outras modalidades, quando os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da terceira sequência de nucleotídeos têm as orientações opostas, a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que o gene de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento que está mais próximo da extremidade 3’ do genoma de vírus vaccinia recombinante.
Em uma modalidade específica, os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da terceira sequência de nucleotídeos são os genes C2L e F3L.
Em outra modalidade específica, os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da terceira sequência de nucleotídeos são os genes C3L e F4L.
Em outra modalidade específica, os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da terceira sequência de nucleotídeos são os genes B14R e B29R. Em outra modalidade específica, os genes de vírus vaccinia endógeno de flanqueamento da terceira sequência de nucleotídeos são os genes B13R e B29R. Em ainda outra modalidade, a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que um gene vaccinia endógeno adjacente à terceira sequência de nucleotídeos. Em uma modalidade específica, o gene vaccinia endógeno adjacente à terceira sequência de nucleotídeos é o gene B13R. Em certas modalidades, o ácido nucleico compreende adicionalmente uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos que codifica o anticorpo anti-CTLA-4. Em uma modalidade específica, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos que codifica o anticorpo anti-CTLA-4 é um promotor H5R, um promotor pS ou um promotor LEO. Em outra modalidade específica, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos que codifica o anticorpo anti-CTLA-4 é um promotor H5R (por exemplo, um promotor inicial H5R, um promotor tardio H5R, ou um promotor inicial H5R e um promotor tardio H5R).
[468] Em certas modalidades, o ácido nucleico compreende adicionalmente uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos que codifica o polipeptídeo de IL-12. Em uma modalidade específica, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos que codifica o polipeptídeo de IL-12 é um promotor tardio. Em uma modalidade específica adicional, o promotor tardio compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561, um promotor F17R ou um promotor D13L. Em outra modalidade específica adicional, o promotor tardio compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561. Em outra modalidade, o promotor F17R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO:563. Em ainda outra modalidade, o promotor D13L compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO:562.
[469] Em certas modalidades, o ácido nucleico compreende adicionalmente uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L. Em uma modalidade específica, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L é um promotor B8R, um promotor B19R, um promotor E3L, um promotor F11L e/ou um promotor B2R. Em outra modalidade específica, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L é um promotor B8R. Em outra modalidade específica, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L é um promotor B19R. Em outra modalidade específica, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L é um promotor B8R e um promotor B19R. Em uma modalidade particular, o promotor B8R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 564. Em uma modalidade particular, o promotor B19R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 565. Em uma modalidade particular, o promotor E3L compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 567. Em uma modalidade particular, o promotor F11L compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 568. Em uma modalidade particular, o promotor B2R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 569.
[470] Em outro aspecto, é fornecido no presente documento um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende: (a) uma sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210, que compreende genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R parciais e que compreende uma deleção no gene B8R; (b) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo que se liga especificamente a CTLA-4 (por exemplo, CTLA-4 humano), em que a primeira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 214; (c) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12, em que a segunda sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 215; e (d) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L, em que a terceira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 216; em que o ácido nucleico compreende adicionalmente: (i) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor H5R; (ii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos é um promotor tardio que compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561; e (iii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R e um promotor B19R. Em modalidades específicas, a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a primeira sequência de nucleotídeos, a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a segunda sequência de nucleotídeos, e a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a terceira sequência de nucleotídeos. Em modalidades específicas, o primeiro transgene é inserido entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais na SEQ ID NO: 210, e o segundo transgene e o terceiro transgene são inseridos no lócus da deleção no gene B8R. Em modalidades específicas, o primeiro transgene é inserido entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais na SEQ ID NO: 210, e o segundo transgene e o terceiro transgene são inseridos no lócus da deleção no gene B8R. Em modalidades específicas, o terceiro transgene está a montante do segundo transgene. Em modalidades específicas, o terceiro transgene está a jusante do segundo transgene. Em uma modalidade particular, o promotor B8R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 564. Em uma modalidade particular, o promotor B19R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 565.
[471] Em outro aspecto, é fornecido no presente documento um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende: (a) uma sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210, que compreende genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R parciais e que compreende uma deleção no gene B8R; (b) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo que se liga especificamente a CTLA-4 (por exemplo, CTLA-4 humano), em que a primeira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 214, e em que a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a primeira sequência de nucleotídeos e o primeiro transgene é inserido entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais na SEQ ID NO: 210; (c) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12, em que a segunda sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 215, e em que a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a segunda sequência de nucleotídeos e o segundo transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R; e (d) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L, em que a terceira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 216, em que a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a terceira sequência de nucleotídeos e o terceiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R, e em que o terceiro transgene está a montante do segundo transgene; em que o ácido nucleico compreende adicionalmente: (i) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor H5R; (ii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos é um promotor tardio que compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561; e (iii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R ou um promotor B19R.
Em modalidades específicas, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R e um promotor B19R. Em modalidades específicas, o promotor B8R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 564 e o promotor B19R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 565. Em modalidades específicas, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor inicial H5R ou um promotor tardio H5R. Em modalidades específicas, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor inicial H5R e um promotor tardio H5R. Em modalidades específicas, o promotor inicial H5R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 553 e o promotor tardio H5R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 554.
[472] Em outro aspecto, é fornecido no presente documento um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende: (a) uma sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210, que compreende genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R parciais e que compreende uma deleção no gene B8R; (b) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo que se liga especificamente a CTLA-4 (por exemplo, CTLA-4 humano), em que a primeira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 214, e em que a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a primeira sequência de nucleotídeos e o primeiro transgene é inserido entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais na SEQ ID NO: 210; (c) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12, em que a segunda sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 215, e em que a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a segunda sequência de nucleotídeos e o segundo transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R; e (d) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L, em que a terceira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 216, em que a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a terceira sequência de nucleotídeos e o terceiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R, e em que o terceiro transgene está a jusante do segundo transgene; em que o ácido nucleico compreende adicionalmente: (i) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor H5R; (ii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos é um promotor tardio que compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561; e (iii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R ou um promotor B19R. Em modalidades específicas, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R e um promotor B19R. Em modalidades específicas, o promotor B8R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 564 e o promotor B19R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 565. Em modalidades específicas, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor inicial H5R ou um promotor tardio H5R. Em modalidades específicas, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor inicial H5R e um promotor tardio H5R. Em modalidades específicas, o promotor inicial H5R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 553 e o promotor tardio H5R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 554.
[473] Em outro aspecto, é fornecido no presente documento um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende: (a) uma sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210, que compreende genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R parciais e que compreende uma deleção no gene B8R; (b) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo que se liga especificamente a CTLA-4 (por exemplo, CTLA-4 humano), em que a primeira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 214, e em que a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a primeira sequência de nucleotídeos e o primeiro transgene é inserido entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais na SEQ ID NO: 210; (c) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12, em que a segunda sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 215, e em que a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a segunda sequência de nucleotídeos e o segundo transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R; e (d) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L, em que a terceira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 216, em que a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a terceira sequência de nucleotídeos e o terceiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R, e em que o terceiro transgene está a montante do segundo transgene; em que o ácido nucleico compreende adicionalmente: (i) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor H5R; (ii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos é um promotor tardio que compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561; e (iii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R ou um promotor B19R.
Em modalidades específicas, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R e um promotor B19R.
Em modalidades específicas, o promotor B8R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 564 e o promotor B19R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 565. Em modalidades específicas, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor inicial H5R ou um promotor tardio H5R. Em modalidades específicas, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor inicial H5R e um promotor tardio H5R. Em modalidades específicas, o promotor inicial H5R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 553 e o promotor tardio H5R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 554.
[474] Em outro aspecto, é fornecido no presente documento um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende: (a) uma sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210, que compreende genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R parciais e que compreende uma deleção no gene B8R; (b) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo que se liga especificamente a CTLA-4 (por exemplo, CTLA-4 humano), em que a primeira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 214, e em que a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a primeira sequência de nucleotídeos e o primeiro transgene é inserido entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais na SEQ ID NO: 210; (c) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12, em que a segunda sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 215, e em que a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a segunda sequência de nucleotídeos e o segundo transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R; e (d) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L, em que a terceira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 216, em que a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a terceira sequência de nucleotídeos e o terceiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R, e em que o terceiro transgene está a jusante do segundo transgene; em que o ácido nucleico compreende adicionalmente: (i) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor H5R; (ii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos é um promotor tardio que compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561; e (iii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R ou um promotor B19R. Em modalidades específicas, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R e um promotor B19R. Em modalidades específicas, o promotor B8R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 564 e o promotor B19R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 565. Em modalidades específicas, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor inicial H5R ou um promotor tardio H5R. Em modalidades específicas, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor inicial H5R e um promotor tardio H5R. Em modalidades específicas, o promotor inicial H5R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 553 e o promotor tardio H5R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 554.
[475] Em outro aspecto, é fornecido no presente documento um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende: (a) uma sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210, que compreende genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R parciais e que compreende uma deleção no gene B8R; (b) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo que se liga especificamente a CTLA-4 (por exemplo, CTLA-4 humano), em que a primeira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 214, e em que a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a primeira sequência de nucleotídeos e o primeiro transgene é inserido entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais na SEQ ID NO: 210; (c) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12, em que a segunda sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 215, e em que a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a segunda sequência de nucleotídeos e o segundo transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R; e (d) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L, em que a terceira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 216, em que a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a terceira sequência de nucleotídeos e o terceiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R, e em que o terceiro transgene está a montante do segundo transgene; em que o ácido nucleico compreende adicionalmente: (i) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor pS; (ii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos é um promotor tardio que compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561; e (iii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R ou um promotor B19R. Em modalidades específicas, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R e um promotor B19R. Em modalidades específicas, o promotor B8R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 564 e o promotor B19R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 565. Em modalidades específicas, a sequência de nucleotídeos do pS compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 555, SEQ ID NO: 556 ou SEQ ID NO:
557.
[476] Em outro aspecto, é fornecido no presente documento um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende: (a) uma sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210, que compreende genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R parciais e que compreende uma deleção no gene B8R; (b) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo que se liga especificamente a CTLA-4 (por exemplo, CTLA-4 humano), em que a primeira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 214, e em que a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a primeira sequência de nucleotídeos e o primeiro transgene é inserido entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais na SEQ ID NO: 210; (c) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12, em que a segunda sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 215, e em que a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a segunda sequência de nucleotídeos e o segundo transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R; e (d) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L, em que a terceira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 216, em que a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a terceira sequência de nucleotídeos e o terceiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R, e em que o terceiro transgene está a jusante do segundo transgene; em que o ácido nucleico compreende adicionalmente: (i) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor pS; (ii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos é um promotor tardio que compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561; e (iii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R ou um promotor B19R. Em modalidades específicas, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R e um promotor B19R. Em modalidades específicas, o promotor B8R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 564 e o promotor B19R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 565. Em modalidades específicas, a sequência de nucleotídeos do pS compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 555, SEQ ID NO: 556 ou SEQ ID NO:
557.
[477] Em outro aspecto, é fornecido no presente documento um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende: (a) uma sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210, que compreende genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R parciais e que compreende uma deleção no gene B8R; (b) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo que se liga especificamente a CTLA-4 (por exemplo, CTLA-4 humano), em que a primeira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 214, e em que a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a primeira sequência de nucleotídeos e o primeiro transgene é inserido entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais na SEQ ID NO: 210; (c) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12, em que a segunda sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 215, e em que a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a segunda sequência de nucleotídeos e o segundo transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R; e (d) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L, em que a terceira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 216, em que a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a terceira sequência de nucleotídeos e o terceiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R, e em que o terceiro transgene está a montante do segundo transgene; em que o ácido nucleico compreende adicionalmente: (i) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor pS; (ii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos é um promotor tardio que compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561; e (iii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R ou um promotor B19R. Em modalidades específicas, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R e um promotor B19R. Em modalidades específicas, o promotor B8R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 564 e o promotor B19R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 565. Em modalidades específicas, a sequência de nucleotídeos do pS compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 555, SEQ ID NO: 556 ou SEQ ID NO:
557.
[478] Em outro aspecto, é fornecido no presente documento um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende: (a) uma sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210, que compreende genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R parciais e que compreende uma deleção no gene B8R; (b) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo que se liga especificamente a CTLA-4 (por exemplo, CTLA-4 humano), em que a primeira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 214, e em que a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a primeira sequência de nucleotídeos e o primeiro transgene é inserido entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais na SEQ ID NO: 210; (c) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12, em que a segunda sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 215, e em que a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a segunda sequência de nucleotídeos e o segundo transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R; e (d) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L, em que a terceira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 216, em que a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a terceira sequência de nucleotídeos e o terceiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R, e em que o terceiro transgene está a jusante do segundo transgene; em que o ácido nucleico compreende adicionalmente: (i) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor pS; (ii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos é um promotor tardio que compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561; e (iii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R ou um promotor B19R. Em modalidades específicas, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R e um promotor B19R. Em modalidades específicas, o promotor B8R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 564 e o promotor B19R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 565. Em modalidades específicas, a sequência de nucleotídeos do pS compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 555, SEQ ID NO: 556 ou SEQ ID NO:
557.
[479] Em outro aspecto, é fornecido no presente documento um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende: (a) uma sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210, que compreende genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R parciais e que compreende uma deleção no gene B8R; (b) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo que se liga especificamente a CTLA-4 (por exemplo, CTLA-4 humano), em que a primeira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 214, e em que a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a primeira sequência de nucleotídeos e o primeiro transgene é inserido entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais na SEQ ID NO: 210; (c) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12, em que a segunda sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 215, e em que a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a segunda sequência de nucleotídeos e o segundo transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R; e (d) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L, em que a terceira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 216, em que a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a terceira sequência de nucleotídeos e o terceiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R, e em que o terceiro transgene está a montante do segundo transgene; em que o ácido nucleico compreende adicionalmente: (i) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor H5R; (ii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos é um F17R promotor; e (iii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R ou um promotor B19R.
Em modalidades específicas, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R e um promotor B19R.
Em modalidades específicas, o promotor B8R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 564 e o promotor B19R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 565. Em modalidades específicas, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor inicial H5R ou um promotor tardio H5R. Em modalidades específicas, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor inicial H5R e um promotor tardio H5R. Em modalidades específicas, o promotor inicial H5R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 553 e o promotor tardio H5R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 554. Em modalidades específicas, a sequência de nucleotídeos do promotor F17R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 563.
[480] Em outro aspecto, é fornecido no presente documento um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende: (a) uma sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210, que compreende genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R parciais e que compreende uma deleção no gene B8R; (b) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo que se liga especificamente a CTLA-4 (por exemplo, CTLA-4 humano), em que a primeira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 214, e em que a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a primeira sequência de nucleotídeos e o primeiro transgene é inserido entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais na SEQ ID NO: 210; (c) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12, em que a segunda sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 215, e em que a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a segunda sequência de nucleotídeos e o segundo transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R; e (d) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L, em que a terceira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 216, em que a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a terceira sequência de nucleotídeos e o terceiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R, e em que o terceiro transgene está a jusante do segundo transgene; em que o ácido nucleico compreende adicionalmente: (i) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor H5R; (ii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos é um F17R promotor; e (iii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R ou um promotor B19R. Em modalidades específicas, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R e um promotor B19R. Em modalidades específicas, o promotor B8R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 564 e o promotor B19R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 565. Em modalidades específicas, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor inicial H5R ou um promotor tardio H5R. Em modalidades específicas, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor inicial H5R e um promotor tardio H5R. Em modalidades específicas, o promotor inicial H5R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 553 e o promotor tardio H5R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 554. Em modalidades específicas, a sequência de nucleotídeos do promotor F17R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 563.
[481] Em outro aspecto, é fornecido no presente documento um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende: (a) uma sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210, que compreende genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R parciais e que compreende uma deleção no gene B8R; (b) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo que se liga especificamente a CTLA-4 (por exemplo, CTLA-4 humano), em que a primeira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 214, e em que a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a primeira sequência de nucleotídeos e o primeiro transgene é inserido entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais na SEQ ID NO: 210; (c) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12, em que a segunda sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 215, e em que a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a segunda sequência de nucleotídeos e o segundo transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R; e (d) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L, em que a terceira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 216, em que a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a terceira sequência de nucleotídeos e o terceiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R, e em que o terceiro transgene está a montante do segundo transgene; em que o ácido nucleico compreende adicionalmente: (i) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor H5R; (ii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos é um F17R promotor; e (iii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R ou um promotor B19R.
Em modalidades específicas, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R e um promotor B19R.
Em modalidades específicas, o promotor B8R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 564 e o promotor B19R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 565. Em modalidades específicas, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor inicial H5R ou um promotor tardio H5R. Em modalidades específicas, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor inicial H5R e um promotor tardio H5R. Em modalidades específicas, o promotor inicial H5R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 553 e o promotor tardio H5R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 554. Em modalidades específicas, a sequência de nucleotídeos do promotor F17R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 563.
[482] Em outro aspecto, é fornecido no presente documento um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende: (a) uma sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210, que compreende genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R parciais e que compreende uma deleção no gene B8R; (b) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo que se liga especificamente a CTLA-4 (por exemplo, CTLA-4 humano), em que a primeira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 214, e em que a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a primeira sequência de nucleotídeos e o primeiro transgene é inserido entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais na SEQ ID NO: 210; (c) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12, em que a segunda sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 215, e em que a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a segunda sequência de nucleotídeos e o segundo transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R; e (d) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L, em que a terceira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 216, em que a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a terceira sequência de nucleotídeos e o terceiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R, e em que o terceiro transgene está a jusante do segundo transgene; em que o ácido nucleico compreende adicionalmente: (i) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor H5R; (ii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos é um F17R promotor; e (iii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R e um promotor B19R. Em modalidades específicas, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R e um promotor B19R. Em modalidades específicas, o promotor B8R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 564 e o promotor B19R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 565. Em modalidades específicas, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor inicial H5R ou um promotor tardio H5R. Em modalidades específicas, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor inicial H5R e um promotor tardio H5R. Em modalidades específicas, o promotor inicial H5R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 553 e o promotor tardio H5R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 554. Em modalidades específicas, a sequência de nucleotídeos do promotor F17R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 563.
[483] Em outro aspecto, é fornecido no presente documento um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende: (a) uma sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210, que compreende genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R parciais e que compreende uma deleção no gene B8R; (b) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo que se liga especificamente a CTLA-4 (por exemplo, CTLA-4 humano), em que a primeira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 214, e em que a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a primeira sequência de nucleotídeos e o primeiro transgene é inserido entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais na SEQ ID NO: 210; (c) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12, em que a segunda sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 215, e em que a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a segunda sequência de nucleotídeos e o segundo transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R; e (d) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L, em que a terceira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 216, em que a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a terceira sequência de nucleotídeos e o terceiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R, e em que o terceiro transgene está a montante do segundo transgene; em que o ácido nucleico compreende adicionalmente: (i) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor H5R; (ii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos é um promotor tardio que compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561; e (iii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor E3L.
Em modalidades específicas, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor inicial H5R ou um promotor tardio H5R.
Em modalidades específicas, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor inicial H5R e um promotor tardio H5R.
Em modalidades específicas, o promotor inicial H5R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 553 e o promotor tardio H5R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO:
554. Em modalidades específicas, a sequência de nucleotídeos do promotor E3L compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 567.
[484] Em outro aspecto, é fornecido no presente documento um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende: (a) uma sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210, que compreende genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R parciais e que compreende uma deleção no gene B8R; (b) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo que se liga especificamente a CTLA-4 (por exemplo, CTLA-4 humano), em que a primeira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 214, e em que a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a primeira sequência de nucleotídeos e o primeiro transgene é inserido entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais na SEQ ID NO: 210; (c) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12, em que a segunda sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 215, e em que a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a segunda sequência de nucleotídeos e o segundo transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R; e (d) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L, em que a terceira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 216, em que a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a terceira sequência de nucleotídeos e o terceiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R, e em que o terceiro transgene está a jusante do segundo transgene; em que o ácido nucleico compreende adicionalmente: (i) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor H5R; (ii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos é um promotor tardio que compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561; e (iii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor E3L. Em modalidades específicas, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor inicial H5R ou um promotor tardio H5R. Em modalidades específicas, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor inicial H5R e um promotor tardio H5R. Em modalidades específicas, o promotor inicial H5R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 553 e o promotor tardio H5R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO:
554. Em modalidades específicas, a sequência de nucleotídeos do promotor E3L compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 567.
[485] Em outro aspecto, é fornecido no presente documento um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende: (a) uma sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210, que compreende genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R parciais e que compreende uma deleção no gene B8R; (b) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo que se liga especificamente a CTLA-4 (por exemplo, CTLA-4 humano), em que a primeira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 214, e em que a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a primeira sequência de nucleotídeos e o primeiro transgene é inserido entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais na SEQ ID NO: 210; (c) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12, em que a segunda sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 215, e em que a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a segunda sequência de nucleotídeos e o segundo transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R; e (d) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica
FLT3L, em que a terceira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 216, em que a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a terceira sequência de nucleotídeos e o terceiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R, e em que o terceiro transgene está a montante do segundo transgene; em que o ácido nucleico compreende adicionalmente: (i) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor H5R; (ii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos é um promotor tardio que compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561; e (iii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor E3L. Em modalidades específicas, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor inicial H5R ou um promotor tardio H5R. Em modalidades específicas, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor inicial H5R e um promotor tardio H5R. Em modalidades específicas, o promotor inicial H5R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 553 e o promotor tardio H5R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO:
554. Em modalidades específicas, a sequência de nucleotídeos do promotor E3L compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 567.
[486] Em outro aspecto, é fornecido no presente documento um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende: (a) uma sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210, que compreende genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R parciais e que compreende uma deleção no gene B8R; (b) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo que se liga especificamente a CTLA-4 (por exemplo, CTLA-4 humano), em que a primeira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 214, e em que a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a primeira sequência de nucleotídeos e o primeiro transgene é inserido entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais na SEQ ID NO: 210; (c) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12, em que a segunda sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 215, e em que a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a segunda sequência de nucleotídeos e o segundo transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R; e (d) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L, em que a terceira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 216, em que a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a terceira sequência de nucleotídeos e o terceiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R, e em que o terceiro transgene está a jusante do segundo transgene; em que o ácido nucleico compreende adicionalmente: (i) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor H5R; (ii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos é um promotor tardio que compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561; e (iii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor E3L.
Em modalidades específicas, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor inicial H5R ou um promotor tardio H5R.
Em modalidades específicas, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor inicial H5R e um promotor tardio H5R.
Em modalidades específicas, o promotor inicial H5R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 553 e o promotor tardio H5R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO:
554. Em modalidades específicas, a sequência de nucleotídeos do promotor E3L compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 567.
[487] Em outro aspecto, é fornecido no presente documento um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende: (a) uma sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210, que compreende genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R parciais e que compreende uma deleção no gene B8R; (b) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo que se liga especificamente a CTLA-4 (por exemplo, CTLA-4 humano), em que a primeira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 214, e em que a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a primeira sequência de nucleotídeos e o primeiro transgene é inserido entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais na SEQ ID NO: 210; (c) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12, em que a segunda sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 215, e em que a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a segunda sequência de nucleotídeos e o segundo transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R; e (d) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L, em que a terceira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 216, em que a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a terceira sequência de nucleotídeos e o terceiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R, e em que o terceiro transgene está a montante do segundo transgene; em que o ácido nucleico compreende adicionalmente: (i) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor pS; (ii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos é um F17R promotor; e (iii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor E3L. Em modalidades específicas, a sequência de nucleotídeos do promotor pS compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 555, SEQ ID NO: 556 ou SEQ ID NO: 557. Em modalidades específicas, a sequência de nucleotídeos do promotor F17R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 563. Em modalidades específicas, a sequência de nucleotídeos do promotor E3L compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 567.
[488] Em outro aspecto, é fornecido no presente documento um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende: (a) uma sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210, que compreende genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R parciais e que compreende uma deleção no gene B8R; (b) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo que se liga especificamente a CTLA-4 (por exemplo, CTLA-4 humano), em que a primeira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 214, e em que a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a primeira sequência de nucleotídeos e o primeiro transgene é inserido entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais na SEQ ID NO: 210; (c) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12, em que a segunda sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 215, e em que a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a segunda sequência de nucleotídeos e o segundo transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R; e (d) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L, em que a terceira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 216, em que a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a terceira sequência de nucleotídeos e o terceiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R, e em que o terceiro transgene está a jusante do segundo transgene; em que o ácido nucleico compreende adicionalmente: (i) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor pS; (ii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos é um F17R promotor; e (iii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor E3L. Em modalidades específicas, a sequência de nucleotídeos do promotor pS compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 555, SEQ ID NO: 556 ou SEQ ID NO: 557. Em modalidades específicas, a sequência de nucleotídeos do promotor F17R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 563. Em modalidades específicas, a sequência de nucleotídeos do promotor E3L compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 567.
[489] Em outro aspecto, é fornecido no presente documento um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende: (a) uma sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210, que compreende genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R parciais e que compreende uma deleção no gene B8R; (b) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo que se liga especificamente a CTLA-4 (por exemplo, CTLA-4 humano), em que a primeira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 214, e em que a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a primeira sequência de nucleotídeos e o primeiro transgene é inserido entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais na SEQ ID NO: 210; (c) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12, em que a segunda sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 215, e em que a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a segunda sequência de nucleotídeos e o segundo transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R; e (d) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L, em que a terceira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 216, em que a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a terceira sequência de nucleotídeos e o terceiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R, e em que o terceiro transgene está a montante do segundo transgene; em que o ácido nucleico compreende adicionalmente: (i) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor pS; (ii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos é um F17R promotor; e (iii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor E3L. Em modalidades específicas, a sequência de nucleotídeos do promotor pS compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 555, SEQ ID NO: 556 ou SEQ ID NO: 557. Em modalidades específicas, a sequência de nucleotídeos do promotor F17R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 563. Em modalidades específicas, a sequência de nucleotídeos do promotor E3L compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 567.
[490] Em outro aspecto, é fornecido no presente documento um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende: (a) uma sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210, que compreende genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R parciais e que compreende uma deleção no gene B8R; (b) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo que se liga especificamente a CTLA-4 (por exemplo, CTLA-4 humano), em que a primeira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 214, e em que a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a primeira sequência de nucleotídeos e o primeiro transgene é inserido entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais na SEQ ID NO: 210; (c) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12, em que a segunda sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 215, e em que a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a segunda sequência de nucleotídeos e o segundo transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R; e (d) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L, em que a terceira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 216, em que a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a terceira sequência de nucleotídeos e o terceiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R, e em que o terceiro transgene está a jusante do segundo transgene; em que o ácido nucleico compreende adicionalmente: (i) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor pS; (ii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos é um F17R promotor; e (iii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor E3L.
Em modalidades específicas, a sequência de nucleotídeos do promotor pS compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 555, SEQ ID NO: 556 ou SEQ ID NO: 557. Em modalidades específicas, a sequência de nucleotídeos do promotor F17R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 563. Em modalidades específicas, a sequência de nucleotídeos do promotor E3L compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 567.
[491] Em algumas modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende o primeiro transgene, o primeiro transgene é inserido entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais. Em outra modalidade, o primeiro transgene é inserido adjacente ao gene C2L vaccinia parcial. Em outra modalidade, o primeiro transgene é inserido adjacente ao gene F3L vaccinia parcial. Em outra modalidade, o primeiro transgene é inserido entre os genes vaccinia C3L e F4L. Em outras modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende o primeiro transgene, o primeiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R. Em outras modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende o primeiro transgene, o primeiro transgene é inserido entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais. Em outra modalidade, o primeiro transgene é inserido adjacente ao gene B14R vaccinia parcial. Em outra modalidade, o primeiro transgene é inserido adjacente ao gene B29R vaccinia parcial. Em modalidades particulares em que os genes B14R a B29R são deletados, o primeiro transgene é inserido adjacente ao gene B13R.
[492] Em algumas modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende o segundo transgene, o segundo transgene é inserido entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais. Em outra modalidade, o segundo transgene é inserido adjacente ao gene C2L vaccinia parcial. Em outra modalidade, o segundo transgene é inserido adjacente ao gene F3L vaccinia parcial. Em outra modalidade, o segundo transgene é inserido entre os genes vaccinia C3L e F4L. Em outras modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende o segundo transgene, o segundo transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R. Em outras modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende o segundo transgene, o segundo transgene é inserido entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais. Em outra modalidade, o segundo transgene é inserido adjacente ao gene B14R vaccinia parcial. Em outra modalidade, o segundo transgene é inserido adjacente ao gene B29R vaccinia parcial. Em modalidades particulares em que os genes B14R a B29R são deletados, o segundo transgene é inserido adjacente ao gene B13R.
[493] Em algumas modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende o terceiro transgene, o terceiro transgene é inserido entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais. Em outra modalidade, o terceiro transgene é inserido adjacente ao gene C2L vaccinia parcial. Em outra modalidade, o terceiro transgene é inserido adjacente ao gene F3L vaccinia parcial. Em outra modalidade, o terceiro transgene é inserido entre genes vaccinia C3L e F4L. Em outras modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende o terceiro transgene, o terceiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R. Em outras modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende o terceiro transgene, o terceiro transgene é inserido entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais. Em outra modalidade, o terceiro transgene é inserido adjacente ao gene B14R vaccinia parcial. Em outra modalidade, o terceiro transgene é inserido adjacente ao gene B29R vaccinia parcial. Em modalidades particulares em que os genes B14R a B29R são deletados, o terceiro transgene é inserido adjacente ao gene B13R.
[494] Em algumas modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende o primeiro transgene e o segundo transgene, o primeiro transgene e o segundo transgene são inseridos entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais. Em outra modalidade, o primeiro transgene e o segundo transgene são inseridos adjacente ao gene C2L vaccinia parcial. Em outra modalidade, o primeiro transgene e o segundo transgene são inseridos adjacente ao gene F3L vaccinia parcial. Em outra modalidade, o primeiro transgene e o segundo transgene são inseridos entre os genes vaccinia C3L e F4L. Em outras modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende o primeiro transgene e o segundo transgene, o primeiro transgene e o segundo transgene são inseridos no lócus da deleção no gene B8R. Em outras modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende o primeiro transgene e o segundo transgene, o primeiro transgene e o segundo transgene são inseridos entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais. Em outra modalidade, o primeiro transgene e o segundo transgene são inseridos adjacente ao gene B14R vaccinia parcial. Em outra modalidade, o primeiro transgene e o segundo transgene são inseridos adjacente ao gene B29R vaccinia parcial. Em modalidades particulares em que os genes B14R a B29R são deletados, o primeiro transgene e o segundo transgene são inseridos adjacente ao gene B13R.
[495] Em algumas modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende o primeiro transgene e o terceiro transgene, o primeiro transgene e o terceiro transgene são inseridos entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais. Em outra modalidade, o primeiro transgene e o terceiro transgene são inseridos adjacente ao gene C2L vaccinia parcial. Em outra modalidade, o primeiro transgene e o terceiro transgene são inseridos adjacente ao gene F3L vaccinia parcial. Em outra modalidade, o primeiro transgene e o terceiro transgene são inseridos entre os genes vaccinia C3L e F4L. Em outras modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende o primeiro transgene e o terceiro transgene, o primeiro transgene e o terceiro transgene são inseridos no lócus da deleção no gene B8R. Em outras modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende o primeiro transgene e o terceiro transgene, o primeiro transgene e o terceiro transgene são inseridos entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais. Em outra modalidade, o primeiro transgene e o terceiro transgene são inseridos adjacente ao gene B14R vaccinia parcial. Em outra modalidade, o primeiro transgene e o terceiro transgene são inseridos adjacente ao gene B29R vaccinia parcial. Em modalidades particulares em que os genes B14R a B29R são deletados, o primeiro transgene e o terceiro transgene são inseridos adjacente ao gene B13R.
[496] Em algumas modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende o segundo transgene e o terceiro transgene, o segundo transgene e o terceiro transgene são inseridos entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais. Em outra modalidade, o segundo transgene e o terceiro transgene são inseridos adjacente ao gene C2L vaccinia parcial. Em outra modalidade, o segundo transgene e o terceiro transgene são inseridos adjacente ao gene F3L vaccinia parcial. Em outra modalidade, o segundo transgene e o terceiro transgene são inseridos entre os genes vaccinia C3L e F4L. Em outras modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende o segundo transgene e o terceiro transgene, o segundo transgene e o terceiro transgene são inseridos no lócus da deleção no gene B8R. Em outras modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende o segundo transgene e o terceiro transgene, o segundo transgene e o terceiro transgene são inseridos entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais. Em outra modalidade, o segundo transgene e o terceiro transgene são inseridos adjacente ao gene B14R vaccinia parcial. Em outra modalidade, o segundo transgene e o terceiro transgene são inseridos adjacente ao gene B29R vaccinia parcial. Em modalidades particulares em que os genes B14R a B29R são deletados, o segundo transgene e o terceiro transgene são inseridos adjacente ao gene B13R.
[497] Em algumas modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende o primeiro transgene e o segundo transgene, o primeiro transgene é inserido entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais, e o segundo transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R. Em outra modalidade, o primeiro transgene é inserido adjacente ao gene C2L vaccinia parcial, e o segundo transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R. Em outra modalidade, o primeiro transgene é inserido adjacente ao gene F3L vaccinia parcial, e o segundo transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R. Em outra modalidade, o primeiro transgene é inserido entre os genes vaccinia C3L e F4L, e o segundo transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R. Em outras modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende o primeiro transgene e o segundo transgene, o segundo transgene é inserido entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais, e o primeiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R.
Em outra modalidade, o segundo transgene é inserido adjacente ao gene C2L vaccinia parcial, e o primeiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R.
Em outra modalidade, o segundo transgene é inserido adjacente ao gene F3L vaccinia parcial, e o primeiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R.
Em outra modalidade, o segundo transgene é inserido entre os genes vaccinia C3L e F4L, e o primeiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R.
Em outras modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende o primeiro transgene e o segundo transgene, o primeiro transgene é inserido entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais, e o segundo transgene é inserido entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais.
Em outra modalidade, o primeiro transgene é inserido adjacente ao gene C2L vaccinia parcial, inserido adjacente ao gene F3L vaccinia parcial, ou inserido entre os genes vaccinia C3L e F4L, e o segundo transgene é inserido adjacente ao gene B14R vaccinia parcial, inserido adjacente ao gene B29R vaccinia parcial, ou, quando os genes B14R a B29R são deletados, inseridos adjacente ao gene B13R.
Em outras modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende o primeiro transgene e o segundo transgene, o segundo transgene é inserido entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais, e o primeiro transgene é inserido entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais.
Em outra modalidade, o segundo transgene é inserido adjacente ao gene C2L vaccinia parcial, inserido adjacente ao gene F3L vaccinia parcial, ou inserido entre os genes vaccinia C3L e F4L, e o primeiro transgene é inserido adjacente ao gene B14R vaccinia parcial, inserido adjacente ao gene B29R vaccinia parcial, ou, quando os genes B14R a B29R são deletados, inseridos adjacente ao gene B13R.
Em outras modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende o primeiro transgene e o segundo transgene, o primeiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R, e o segundo transgene é inserido entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais.
Em outra modalidade, o primeiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R, e o segundo transgene é inserido adjacente ao gene B14R vaccinia parcial.
Em outra modalidade, o primeiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene
B8R, e o segundo transgene é inserido adjacente ao gene B29R vaccinia parcial. Em modalidades particulares em que os genes B14R a B29R são deletados, o primeiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R, e o segundo transgene é inserido adjacente ao gene B13R. Em outras modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende o primeiro transgene e o segundo transgene, o segundo transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R e o primeiro transgene é inserido entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais. Em outra modalidade, o segundo transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R, e o primeiro transgene é inserido adjacente ao gene B14R vaccinia parcial. Em outra modalidade, o segundo transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R, e o primeiro transgene é inserido adjacente ao gene B29R vaccinia parcial. Em modalidades particulares em que os genes B14R a B29R são deletados, o segundo transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R, e o primeiro transgene é inserido adjacente ao gene B13R.
[498] Em algumas modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende o primeiro transgene e o terceiro transgene, o primeiro transgene é inserido entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais e o terceiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R. Em outra modalidade, o primeiro transgene é inserido adjacente ao gene C2L vaccinia parcial, e o terceiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R. Em outra modalidade, o primeiro transgene é inserido adjacente ao gene F3L vaccinia parcial, e o terceiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R. Em outra modalidade, o primeiro transgene é inserido entre os genes vaccinia C3L e F4L, e o terceiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R. Em outras modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende o primeiro transgene e o terceiro transgene, o terceiro transgene é inserido entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais e o primeiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R. Em outra modalidade, o terceiro transgene é inserido adjacente ao gene C2L vaccinia parcial, e o primeiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R. Em outra modalidade, o terceiro transgene é inserido adjacente ao gene F3L vaccinia parcial, e o primeiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R.
Em outra modalidade, o terceiro transgene é inserido entre os genes vaccinia C3L e F4L, e o primeiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R.
Em outras modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende o primeiro transgene e o terceiro transgene, o primeiro transgene é inserido entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais e o terceiro transgene é inserido entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais.
Em outra modalidade, o primeiro transgene é inserido adjacente ao gene C2L vaccinia parcial, inserido adjacente ao gene F3L vaccinia parcial, ou inserido entre os genes vaccinia C3L e F4L, e o terceiro transgene é inserido adjacente ao gene B14R vaccinia parcial, inserido adjacente ao gene B29R vaccinia parcial, ou, quando os genes B14R a B29R são deletados, inseridos adjacente ao gene B13R.
Em outras modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende o primeiro transgene e o terceiro transgene, o terceiro transgene é inserido entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais, e o primeiro transgene é inserido entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais.
Em outra modalidade, o terceiro transgene é inserido adjacente ao gene C2L vaccinia parcial, inserido adjacente ao gene F3L vaccinia parcial, ou inserido entre os genes vaccinia C3L e F4L, e o primeiro transgene é inserido adjacente ao gene B14R vaccinia parcial, inserido adjacente ao gene B29R vaccinia parcial, ou, quando os genes B14R a B29R são deletados, inseridos adjacente ao gene B13R.
Em outras modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende o primeiro transgene e o terceiro transgene, o primeiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R, e o terceiro transgene é inserido entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais.
Em outra modalidade, o primeiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R, e o terceiro transgene é inserido adjacente ao gene B14R vaccinia parcial.
Em outra modalidade, o primeiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R, e o terceiro transgene é inserido adjacente ao gene B29R vaccinia parcial.
Em modalidades particulares em que os genes B14R a B29R são deletados, o primeiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R, e o terceiro transgene é inserido adjacente ao gene B13R.
Em outras modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende o primeiro transgene e o terceiro transgene, o terceiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R, e o primeiro transgene é inserido entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais. Em outra modalidade, o terceiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R, e o primeiro transgene é inserido adjacente ao gene B14R vaccinia parcial. Em outra modalidade, o terceiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R, e o primeiro transgene é inserido adjacente ao gene B29R vaccinia parcial. Em modalidades particulares em que os genes B14R a B29R são deletados, o terceiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R, e o primeiro transgene é inserido adjacente ao gene B13R.
[499] Em algumas modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende o segundo transgene e o terceiro transgene, o segundo transgene é inserido entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais, e o terceiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R. Em outra modalidade, o segundo transgene é inserido adjacente ao gene C2L vaccinia parcial, e o terceiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R. Em outra modalidade, o segundo transgene é inserido adjacente ao gene F3L vaccinia parcial, e o terceiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R. Em outra modalidade, o segundo transgene é inserido entre os genes vaccinia C3L e F4L, e o terceiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R. Em outras modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende o segundo transgene e o terceiro transgene, o terceiro transgene é inserido entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais, e o segundo transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R. Em outra modalidade, o terceiro transgene é inserido adjacente ao gene C2L vaccinia parcial, e o segundo transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R. Em outra modalidade, o terceiro transgene é inserido adjacente ao gene F3L vaccinia parcial, e o segundo transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R. Em outra modalidade, o terceiro transgene é inserido entre os genes vaccinia C3L e F4L, e o segundo transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R. Em outras modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende o segundo transgene e o terceiro transgene, o segundo transgene é inserido entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais, e o terceiro transgene é inserido entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais.
Em outra modalidade, o segundo transgene é inserido adjacente ao gene C2L vaccinia parcial, inserido adjacente ao gene F3L vaccinia parcial, ou inserido entre os genes vaccinia C3L e F4L, e o terceiro transgene é inserido adjacente ao gene B14R vaccinia parcial, inserido adjacente ao gene B29R vaccinia parcial, ou, quando os genes B14R a B29R são deletados, inseridos adjacente ao gene B13R.
Em outras modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende o segundo transgene e o terceiro transgene, o terceiro transgene é inserido entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais, e o segundo transgene é inserido entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais.
Em outra modalidade, o terceiro transgene é inserido adjacente ao gene C2L vaccinia parcial, inserido adjacente ao gene F3L vaccinia parcial, ou inserido entre os genes vaccinia C3L e F4L, e o segundo transgene é inserido adjacente ao gene B14R vaccinia parcial, inserido adjacente ao gene B29R vaccinia parcial, ou, quando os genes B14R a B29R são deletados, inseridos adjacente ao gene B13R.
Em outras modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende o segundo transgene e o terceiro transgene, o segundo transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R, e o terceiro transgene é inserido entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais.
Em outra modalidade, o segundo transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R, e o terceiro transgene é inserido adjacente ao gene B14R vaccinia parcial.
Em outra modalidade, o segundo transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R, e o terceiro transgene é inserido adjacente no gene B29R vaccinia parcial.
Em modalidades particulares em que os genes B14R a B29R são deletados, o segundo transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R, e o terceiro transgene é inserido adjacente ao gene B13R.
Em outras modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende o segundo transgene e o terceiro transgene, o terceiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R, e o segundo transgene é inserido entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais.
Em outra modalidade, o terceiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R, e o segundo transgene é inserido adjacente ao gene B14R vaccinia parcial. Em outra modalidade, o terceiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R, e o segundo transgene é inserido adjacente ao gene B29R vaccinia parcial. Em modalidades particulares em que os genes B14R a B29R são deletados, o terceiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R, e o segundo transgene é inserido adjacente ao gene B13R.
[500] Em algumas modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende o primeiro transgene, o segundo transgene e o terceiro transgene, o primeiro transgene, o segundo transgene e o terceiro transgene são inseridos entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais. Em outra modalidade, o primeiro transgene, o segundo transgene e o terceiro transgene são inseridos adjacente ao gene C2L vaccinia parcial. Em outra modalidade, o primeiro transgene, o segundo transgene e o terceiro transgene são inseridos adjacente ao gene F3L vaccinia parcial. Em outra modalidade, o primeiro transgene, o segundo transgene e o terceiro transgene são inseridos entre os genes vaccinia C3L e F4L. Em outras modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende o primeiro transgene, o segundo transgene e o terceiro transgene, o primeiro transgene, o segundo transgene e o terceiro transgene são inseridos no lócus da deleção no gene B8R. Em outras modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende o primeiro transgene, o segundo transgene e o terceiro transgene, o primeiro transgene, o segundo transgene e o terceiro transgene são inseridos entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais. Em outra modalidade, o primeiro transgene, o segundo transgene e o terceiro transgene são inseridos adjacente ao gene B14R vaccinia parcial. Em outra modalidade, o primeiro transgene, o segundo transgene e o terceiro transgene são inseridos adjacente ao gene B29R vaccinia parcial. Em modalidades particulares em que os genes B14R a B29R são deletados, o primeiro transgene, o segundo transgene e o terceiro transgene são inseridos adjacente ao gene B13R.
[501] Em outras modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende o primeiro transgene,
o segundo transgene e o terceiro transgene, o primeiro transgene é inserido entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais, e o segundo transgene e o terceiro transgene são inseridos no lócus da deleção no gene B8R.
Em outra modalidade, o primeiro transgene é inserido adjacente ao gene C2L vaccinia parcial, e o segundo transgene e o terceiro transgene são inseridos no lócus da deleção no gene B8R.
Em outra modalidade, o primeiro transgene é inserido adjacente ao gene F3L vaccinia parcial, e o segundo transgene e o terceiro transgene são inseridos no lócus da deleção no gene B8R.
Em outra modalidade, o primeiro transgene é inserido entre genes vaccinia C3L e F4L, e o segundo transgene e o terceiro transgene são inseridos no lócus da deleção no gene B8R.
Em outras modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende o primeiro transgene, o segundo transgene e o terceiro transgene, o segundo transgene é inserido entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais, e o primeiro transgene e o terceiro transgene são inseridos no lócus da deleção no gene B8R.
Em outra modalidade, o segundo transgene é inserido adjacente ao gene C2L vaccinia parcial, e o primeiro transgene e o terceiro transgene são inseridos no lócus da deleção no gene B8R.
Em outra modalidade, o segundo transgene é inserido adjacente ao gene F3L vaccinia parcial, e o primeiro transgene e o terceiro transgene são inseridos no lócus da deleção no gene B8R.
Em outra modalidade, o segundo transgene é inserido entre os genes vaccinia C3L e F4L, e o primeiro transgene e o terceiro transgene são inseridos no lócus da deleção no gene B8R.
Em outras modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende o primeiro transgene, o segundo transgene e o terceiro transgene, o terceiro transgene é inserido entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais, e o primeiro transgene e o segundo transgene são inseridos no lócus da deleção no gene B8R.
Em outra modalidade, o terceiro transgene é inserido adjacente ao gene C2L vaccinia parcial, e o primeiro transgene e o segundo transgene são inseridos no lócus da deleção no gene B8R.
Em outra modalidade, o terceiro transgene é inserido adjacente ao gene F3L vaccinia parcial, e o primeiro transgene e o segundo transgene são inseridos no lócus da deleção no gene B8R.
Em outra modalidade, o terceiro transgene é inserido entre os genes vaccinia C3L e F4L, e o primeiro transgene e o segundo transgene são inseridos no lócus da deleção no gene B8R.
Em outras modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende o primeiro transgene, o segundo transgene e o terceiro transgene, o primeiro transgene e o segundo transgene são inseridos entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais, e o terceiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R.
Em outra modalidade, o primeiro transgene e o segundo transgene são inseridos adjacente ao gene C2L vaccinia parcial, e o terceiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R.
Em outra modalidade, o primeiro transgene e o segundo transgene são inseridos adjacente ao gene F3L vaccinia parcial, e o terceiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R.
Em outra modalidade, o primeiro transgene e o segundo transgene são inseridos entre genes vaccinia C3L e F4L, e o terceiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R.
Em outras modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende o primeiro transgene, o segundo transgene e o terceiro transgene, o primeiro transgene e o terceiro transgene são inseridos entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais, e o segundo transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R.
Em outra modalidade, o primeiro transgene e o terceiro transgene são inseridos adjacente ao gene C2L vaccinia parcial, e o segundo transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R.
Em outra modalidade, o primeiro transgene e o terceiro transgene são inseridos adjacente ao gene F3L vaccinia parcial, e o segundo transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R.
Em outra modalidade, o primeiro transgene e o terceiro transgene são inseridos entre os genes vaccinia C3L e F4L, e o segundo transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R.
Em outras modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende o primeiro transgene, o segundo transgene e o terceiro transgene, o segundo transgene e o terceiro transgene são inseridos entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais, e o primeiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R.
Em outra modalidade, o segundo transgene e o terceiro transgene são inseridos adjacente ao gene C2L vaccinia parcial, e o primeiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R.
Em outra modalidade, o segundo transgene e o terceiro transgene são inseridos adjacente ao gene F3L vaccinia parcial, e o primeiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R.
Em outra modalidade, o segundo transgene e o terceiro transgene são inseridos entre genes vaccinia C3L e F4L e o primeiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R.
Em outras modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende o primeiro transgene, o segundo transgene e o terceiro transgene, o primeiro transgene é inserido entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais, e o segundo transgene e o terceiro transgene são inseridos entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais.
Em outra modalidade, o primeiro transgene é inserido adjacente ao gene C2L vaccinia parcial, inserido adjacente ao gene F3L vaccinia parcial, ou inserido entre os genes vaccinia C3L e F4L; e o segundo transgene e o terceiro transgene são inseridos adjacente ao gene B14R vaccinia parcial, inseridos adjacente ao gene B29R vaccinia parcial, ou, quando os genes B14R a B29R são deletados, inseridos adjacente ao gene B13R.
Em outras modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende o primeiro transgene, o segundo transgene e o terceiro transgene, o segundo transgene é inserido entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais, e o primeiro transgene e o terceiro transgene são inseridos entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais.
Em outra modalidade, o segundo transgene é inserido adjacente ao gene C2L vaccinia parcial, inserido adjacente ao gene F3L vaccinia parcial, ou inserido entre os genes vaccinia C3L e F4L; e o primeiro transgene e o terceiro transgene são inseridos adjacente ao gene B14R vaccinia parcial, inseridos adjacente ao gene B29R vaccinia parcial, ou, quando os genes B14R a B29R são deletados, inseridos adjacente ao gene B13R.
Em outras modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende o primeiro transgene, o segundo transgene e o terceiro transgene, o terceiro transgene é inserido entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais, e o primeiro transgene e o segundo transgene são inseridos entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais.
Em outra modalidade, o terceiro transgene é inserido adjacente ao gene C2L vaccinia parcial, inserido adjacente ao gene F3L vaccinia parcial, ou inserido entre os genes vaccinia C3L e F4L; e o primeiro transgene e o segundo transgene são inseridos adjacente ao gene B14R vaccinia parcial,
inseridos adjacente ao gene B29R vaccinia parcial, ou, quando os genes B14R a B29R são deletados, inseridos adjacente ao gene B13R.
Em outras modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende o primeiro transgene, o segundo transgene e o terceiro transgene, o primeiro transgene e o segundo transgene são inseridos entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais e o terceiro transgene é inserido entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais.
Em outra modalidade, o primeiro transgene e o segundo transgene são inseridos adjacente ao gene C2L vaccinia parcial, inserido adjacente ao gene F3L vaccinia parcial, ou inserido entre genes vaccinia C3L e F4L; e o terceiro transgene é inserido adjacente ao gene B14R vaccinia parcial, inserido adjacente ao gene B29R vaccinia parcial, ou, quando os genes B14R a B29R são deletados, inseridos adjacente ao gene B13R.
Em outras modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende o primeiro transgene, o segundo transgene e o terceiro transgene, o primeiro transgene e o terceiro transgene são inseridos entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais, e o segundo transgene é inserido entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais.
Em outra modalidade, o primeiro transgene e o terceiro transgene são inseridos adjacente ao gene C2L vaccinia parcial, inseridos adjacente ao gene F3L vaccinia parcial ou inseridos entre genes vaccinia C3L e F4L; e o segundo transgene é inserido adjacente ao gene B14R vaccinia parcial, inserido adjacente ao gene B29R vaccinia parcial, ou, quando os genes B14R a B29R são deletados, inseridos adjacente ao gene B13R.
Em outras modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende o primeiro transgene, o segundo transgene e o terceiro transgene, o segundo transgene e o terceiro transgene são inseridos entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais, e o primeiro transgene é inserido entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais.
Em outra modalidade, o segundo transgene e o terceiro transgene são inseridos adjacente ao gene C2L vaccinia parcial, inseridos adjacente ao gene F3L vaccinia parcial ou inseridos entre genes vaccinia C3L e F4L; e o primeiro transgene é inserido adjacente ao gene B14R vaccinia parcial, inserido adjacente ao gene B29R vaccinia parcial, ou, quando os genes B14R a B29R são deletados, inseridos adjacente ao gene B13R.
Em outras modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende o primeiro transgene, o segundo transgene e o terceiro transgene, o primeiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R, e o segundo transgene e o terceiro transgene são inseridos entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais.
Em outra modalidade, o primeiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R, e o segundo transgene e o terceiro transgene são inseridos adjacente ao gene B14R vaccinia parcial.
Em outra modalidade, o primeiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R, e o segundo transgene e o terceiro transgene são inseridos adjacente ao gene B29R vaccinia parcial.
Em modalidades particulares em que os genes B14R a B29R são deletados, o primeiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R e o segundo transgene e o terceiro transgene são inseridos adjacente ao gene B13R.
Em outras modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende o primeiro transgene, o segundo transgene e o terceiro transgene, o segundo transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R e o primeiro transgene e o terceiro transgene são inseridos entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais.
Em outra modalidade, o segundo transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R, e o primeiro transgene e o terceiro transgene são inseridos adjacente ao gene B14R vaccinia parcial.
Em outra modalidade, o segundo transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R, e o primeiro transgene e o terceiro transgene são inseridos adjacente ao gene B29R vaccinia parcial.
Em modalidades particulares em que os genes B14R a B29R são deletados, o segundo transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R, e o primeiro transgene e o terceiro transgene são inseridos adjacente ao gene B13R.
Em outras modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende o primeiro transgene, o segundo transgene e o terceiro transgene, o terceiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R, e o primeiro transgene e o segundo transgene são inseridos entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais.
Em outra modalidade, o terceiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R, e o primeiro transgene e o segundo transgene são inseridos adjacente ao gene B14R vaccinia parcial.
Em outra modalidade, o terceiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R,
e o primeiro transgene e o segundo transgene são inseridos adjacente ao gene B29R vaccinia parcial.
Em modalidades particulares em que os genes B14R a B29R são deletados, o terceiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R, e o primeiro transgene e o segundo transgene são inseridos adjacente ao gene B13R.
Em outras modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende o primeiro transgene, o segundo transgene e o terceiro transgene, o primeiro transgene e o segundo transgene são inseridos no lócus da deleção no gene B8R e o terceiro transgene é inserido entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais.
Em outra modalidade, o primeiro transgene e o segundo transgene são inseridos no lócus da deleção no gene B8R, e o terceiro transgene é inserido adjacente ao gene B14R vaccinia parcial.
Em outra modalidade, o primeiro transgene e o segundo transgene são inseridos no lócus da deleção no gene B8R e o terceiro transgene é inserido adjacente ao gene B29R vaccinia parcial.
Em modalidades particulares em que os genes B14R a B29R são deletados, o primeiro transgene e o segundo transgene são inseridos no lócus da deleção no gene B8R, e o terceiro transgene é inserido adjacente ao gene B13R.
Em outras modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende o primeiro transgene, o segundo transgene e o terceiro transgene, o primeiro transgene e o terceiro transgene são inseridos no lócus da deleção no gene B8R e o segundo transgene é inserido entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais.
Em outra modalidade, o primeiro transgene e o terceiro transgene são inseridos no lócus da deleção no gene B8R, e o segundo transgene é inserido adjacente ao gene B14R vaccinia parcial.
Em outra modalidade, o primeiro transgene e o terceiro transgene são inseridos no lócus da deleção no gene B8R e o segundo transgene é inserido adjacente ao gene B29R vaccinia parcial.
Em modalidades particulares em que os genes B14R a B29R são deletados, o primeiro transgene e o terceiro transgene são inseridos no lócus da deleção no gene B8R, e o segundo transgene é inserido adjacente ao gene B13R.
Em outras modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende o primeiro transgene, o segundo transgene e o terceiro transgene, o segundo transgene e o terceiro transgene são inseridos no lócus da deleção no gene B8R e o primeiro transgene é inserido entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais. Em outra modalidade, o segundo transgene e o terceiro transgene são inseridos no lócus da deleção no gene B8R, e o primeiro transgene é inserido adjacente ao gene B14R vaccinia parcial. Em outra modalidade, o segundo transgene e o terceiro transgene são inseridos no lócus da deleção no gene B8R e o primeiro transgene é inserido adjacente ao gene B29R vaccinia parcial. Em modalidades particulares em que os genes B14R a B29R são deletados, o segundo transgene e o terceiro transgene são inseridos no lócus da deleção no gene B8R, e o primeiro transgene é inserido adjacente ao gene B13R.
[502] Em outras modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende o primeiro transgene, o segundo transgene e o terceiro transgene, o primeiro transgene é inserido entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais, o segundo transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R e o terceiro transgene é inserido entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais. Em outra modalidade, o primeiro transgene é inserido adjacente ao gene C2L vaccinia parcial, inserido adjacente ao gene F3L vaccinia parcial, ou inserido entre os genes vaccinia C3L e F4L, o segundo transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R, e o terceiro transgene é inserido adjacente ao gene B14R vaccinia parcial, inserido adjacente ao gene B29R vaccinia parcial, ou, quando os genes B14R a B29R são deletados, inserido adjacente ao gene B13R. Em outras modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende o primeiro transgene, o segundo transgene e o terceiro transgene, o primeiro transgene é inserido entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais, o terceiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R e o segundo transgene é inserido entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais. Em outra modalidade, o primeiro transgene é inserido adjacente ao gene C2L vaccinia parcial, inserido adjacente ao gene F3L vaccinia parcial, ou inserido entre os genes vaccinia C3L e F4L, o terceiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R, e o segundo transgene é inserido adjacente ao gene B14R vaccinia parcial, inserido adjacente ao gene B29R vaccinia parcial, ou, quando os genes B14R a B29R são deletados, inserido adjacente ao gene B13R. Em outras modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende o primeiro transgene, o segundo transgene e o terceiro transgene, o segundo transgene é inserido entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais, o primeiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R e o terceiro transgene é inserido entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais.
Em outra modalidade, o segundo transgene é inserido adjacente ao gene C2L vaccinia parcial, inserido adjacente ao gene F3L vaccinia parcial, ou inserido entre os genes vaccinia C3L e F4L, o primeiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R, e o terceiro transgene é inserido adjacente ao gene B14R vaccinia parcial, inserido adjacente ao gene B29R vaccinia parcial, ou, quando os genes B14R a B29R são deletados, inserido adjacente ao gene B13R.
Em outras modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende o primeiro transgene, o segundo transgene e o terceiro transgene, o segundo transgene é inserido entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais, o terceiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R e o primeiro transgene é inserido entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais.
Em outra modalidade, o segundo transgene é inserido adjacente ao gene C2L vaccinia parcial, inserido adjacente ao gene F3L vaccinia parcial, ou inserido entre os genes vaccinia C3L e F4L, o terceiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R, e o primeiro transgene é inserido adjacente ao gene B14R vaccinia parcial, inserido adjacente ao gene B29R vaccinia parcial, ou, quando os genes B14R a B29R são deletados, inserido adjacente ao gene B13R.
Em outras modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende o primeiro transgene, o segundo transgene e o terceiro transgene, o terceiro transgene é inserido entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais, o primeiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R e o segundo transgene é inserido entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais.
Em outra modalidade, o terceiro transgene é inserido adjacente ao gene C2L vaccinia parcial, inserido adjacente ao gene F3L vaccinia parcial, ou inserido entre os genes vaccinia C3L e F4L, o primeiro transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R, e o segundo transgene é inserido adjacente ao gene B14R vaccinia parcial, inserido adjacente ao gene B29R vaccinia parcial, ou, quando os genes B14R a B29R são deletados, inserido adjacente ao gene B13R. Em outras modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende o primeiro transgene, o segundo transgene e o terceiro transgene, o terceiro transgene é inserido entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais, o segundo transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R e o primeiro transgene é inserido entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais. Em outra modalidade, o terceiro transgene é inserido adjacente ao gene C2L vaccinia parcial, inserido adjacente ao gene F3L vaccinia parcial, ou inserido entre os genes vaccinia C3L e F4L, o segundo transgene é inserido no lócus da deleção no gene B8R, e o primeiro transgene é inserido adjacente ao gene B14R vaccinia parcial, inserido adjacente ao gene B29R vaccinia parcial, ou, quando os genes B14R a B29R são deletados, inserido adjacente ao gene B13R.
[503] Em várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 210, os genes vaccinia C2L e F3L parciais são genes vaccinia C2L e F3L parciais na SEQ ID NO: 210. Em várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 210, os genes vaccinia B14R e B29R parciais são genes vaccinia B14R e B29R parciais na SEQ ID NO: 210.
[504] Em várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 624, os genes vaccinia C2L e F3L parciais são genes vaccinia C2L e F3L parciais na SEQ ID NO: 624. Em várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 624, os genes vaccinia B14R e B29R parciais são genes vaccinia B14R e B29R parciais na SEQ ID NO: 624.
[505] Em uma modalidade específica das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento, a inserção nos genes vaccinia C2L e F3L parciais é a inserção nas delimitações de uma deleção 5p presente no genoma de vírus vaccinia recombinante. Em uma modalidade específica das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento, inserção entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais é a inserção nas delimitações de uma deleção 3p presente no genoma de vírus vaccinia recombinante.
[506] Em algumas modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento, o anticorpo anti-CTLA-4 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo codificado pela primeira sequência de nucleotídeos é um anticorpo de comprimento completo (por exemplo, um anticorpo humano de comprimento completo, um anticorpo humanizado de comprimento completo, ou um anticorpo de camundongo de comprimento completo). Em uma modalidade específica, a primeira sequência de nucleotídeos codifica um polipeptídeo que compreende uma cadeia pesada e cadeias leves de ipilimumab ligadas por um peptídeo de clivagem, por exemplo, um peptídeo de autoclivagem, como um peptídeo de autoclivagem 2A (por exemplo, um peptídeo T2A). Em outra modalidade específica, a primeira sequência de nucleotídeos codifica um polipeptídeo que compreende o peptídeo sinal de cadeia pesada e cadeia pesada, e peptídeo sinal de cadeia leve e cadeia leve de ipilimumab, ligado por um peptídeo de clivagem, por exemplo, um peptídeo de autoclivagem, como um peptídeo de autoclivagem 2A (por exemplo, um peptídeo T2A). Em outras modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento, o anticorpo anti- CTLA-4 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo codificado pela primeira sequência de nucleotídeos é um anticorpo de cadeia única (por exemplo, um anticorpo humano de cadeia única, anticorpo humanizado de cadeia única ou um anticorpo de camundongo de cadeia única, como, por exemplo, 9D9).
[507] Em uma modalidade específica das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos que codifica o anticorpo anti-CTLA-4 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo é um promotor B8R. Em outra modalidade específica das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos que codifica o anticorpo anti-CTLA-4 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo é um promotor H5R. Em uma modalidade particular, o promotor B8R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 564.
[508] Em algumas modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento, o peptídeo de IL-12 codificado pela segunda sequência de nucleotídeos é uma versão ligada à membrana da citocina.
Em modalidades específicas, o polipeptídeo de IL-12 compreende p35 de IL-12 (por exemplo, p35 de IL-12 humana) e um domínio transmembranar.
Em uma modalidade específica, o polipeptídeo de IL-12 consiste em p35 de IL-12 (por exemplo, p35 de IL-12 humana) e um domínio transmembranar (p35 de IL12-TM). Em modalidades específicas, o polipeptídeo de IL-12 compreende p35 de IL-12 (por exemplo, p35 de IL-12 humana), um domínio transmembranar e um domínio citoplásmico.
Em uma modalidade específica, o polipeptídeo de IL-12 consiste em p35 de IL-12 (por exemplo, p35 de IL-12 humana), um domínio transmembranar e um domínio citoplásmico.
O domínio transmembranar pode ser derivado de qualquer proteína ligada à membrana (por exemplo, B7-1, TNFα ligado à membrana, ou FLT3L ligado à membrana). O domínio citoplásmico pode ser derivado de qualquer proteína que contém um domínio citoplásmico (por exemplo, B7-1, TNFα ou FLT3L). Em uma modalidade específica, o polipeptídeo de IL-12 compreende p35 de IL-12 (por exemplo, p35 de IL-12 humana) e um domínio de membrana e citoplásmico B7 do antígeno B7-1, um elemento comumente usado para exibição de superfície de mamífero.
Em uma modalidade específica, o polipeptídeo de IL-12 consiste em p35 de IL-12 (por exemplo, p35 de IL-12 humana) e um domínio de membrana e citoplásmico B7 do antígeno B7-1. Em modalidades específicas, o polipeptídeo de IL-12 compreende p70 de IL-12 (por exemplo, p70 de IL-12 humana), que compreende uma subunidade de p40 (por exemplo, p40 de IL-12 humana) e uma subunidade de p35 (por exemplo, p35 de IL-12 humana), e um domínio transmembranar.
Em uma modalidade específica, o polipeptídeo de IL- 12 consiste em p70 de IL-12 (por exemplo, p70 de IL-12 humana), que compreende uma subunidade de p40 (por exemplo, p40 de IL-12 humana) e uma subunidade de p35 (por exemplo, p35 de IL-12 humana) e um domínio transmembranar (IL12- TMp70 ou p40-p35-TM). Em modalidades específicas, o polipeptídeo de IL-12 compreende p70 de IL-12 (por exemplo, p70 de IL-12 humana), que compreende uma subunidade de p40 (por exemplo, p40 de IL-12 humana) e uma subunidade de p35 (por exemplo, p35 de IL-12 humana), e um domínio transmembranar e um domínio citoplásmico.
Em uma modalidade específica, o polipeptídeo de IL-12 compreende p70 de IL-12 (por exemplo, p70 de IL-12 humana), que compreende uma subunidade de p40 (por exemplo, p40 de IL-12 humana) e uma subunidade de p35 (por exemplo, p35 de IL-12 humana), e um domínio transmembranar e um domínio citoplásmico. O domínio transmembranar pode ser derivado de qualquer proteína ligada à membrana (por exemplo, B7-1, TNFα ligado à membrana, ou FLT3L ligado à membrana). O domínio citoplásmico pode ser derivado de qualquer proteína que contém um domínio citoplásmico (por exemplo, B7-1, TNFα ou FLT3L). Em uma modalidade específica, o polipeptídeo de IL-12 compreende p70 de IL-12 (por exemplo, p70 de IL-12 humana), que compreende uma subunidade de p40 (por exemplo, p40 de IL-12 humana) e uma subunidade de p35 (por exemplo, p35 de IL-12 humana), e um domínio membranar e citoplásmico B7 do antígeno B7-1. Em uma modalidade específica, o polipeptídeo de IL-12 consiste em p70 de IL-12 (por exemplo, p70 de IL-12 humana), que compreende uma subunidade de p40 (por exemplo, p40 de IL-12 humana) e uma subunidade de p35 (por exemplo, p35 de IL-12 humana), e um domínio membranar e citoplásmico B7 do antígeno B7-1. Em certas modalidades, o polipeptídeo de IL-12 é um polipeptídeo de IL-12 humana (por exemplo, IL12-TMp35 humano ou IL12-TMp70 humano). Em certas modalidades, o polipeptídeo de IL-12 é um polipeptídeo de IL- 12 de camundongo (por exemplo, IL12-TMp35 de camundongo ou IL12-TMp70 de camundongo).
[509] Em uma modalidade específica das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos que codifica o polipeptídeo de IL-12 é um promotor tardio que tem a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561. Em uma modalidade específica das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos que codifica o polipeptídeo de IL-12 é um promotor B8R. Em uma modalidade específica das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos que codifica o polipeptídeo de IL-12 é um promotor tardio que tem a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561 e um promotor B8R. Em uma modalidade particular, o promotor B8R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 564.
[510] Em modalidades específicas, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos é uma forma solúvel de FLT3L.
Em particular modalidades, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos é uma forma solúvel de FLT3L humano.
Em certas modalidades, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos é uma forma solúvel do FLT3L humano estabelecido no nº de Acesso GenBank U03858.1. Por exemplo, em modalidades específicas, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o FLT3L transmembranar inteiro (por exemplo, o domínio transmembranar do FLT3L humano estabelecido em nº de acesso GenBank U03858.1). Em outros exemplos, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L (por exemplo, o domínio transmembranar do FLT3L humano estabelecido no nº de Acesso GenBank U03858.1). Em uma modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro e o domínio citoplásmico de FLT3L inteiro.
Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L e do domínio citoplásmico de FLT3L inteiro.
Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L e pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio citoplásmico FLT3L.
Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro e 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 13, 14 ou 15 dos resíduos de aminoácido N-terminal do domínio citoplásmico de FLT3L.
Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro e 1, 2, 3 ou 4 dos resíduos de aminoácido N-terminal do domínio citoplásmico de FLT3L.
Em certas modalidades e aspectos, os domínios transmembranares e citoplásmicos são da sequência FLT3L estabelecida no nº de Acesso GenBank U03858.1.
[511] Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro e 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro e 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro e 1-5, 1-10, 5-10, 10-20, 15- 20, 1-20, 5-20 ou 10-20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em certas modalidades e aspectos, os domínios transmembranares e extracelulares são da sequência FLT3L estabelecida no nº de Acesso GenBank U03858.1.
[512] Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L e 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L e 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L e 1-5, 1-10, 5-10, 10-20, 15-20, 1-20, 5-20 ou 10-20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em certas modalidades e aspectos, os domínios transmembranares e extracelulares são da sequência FLT3L estabelecida no nº de Acesso GenBank U03858.1.
[513] Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro, o domínio citoplásmico inteiro, e 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro, o domínio citoplásmico inteiro, e 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro, o domínio citoplásmico inteiro, e 1-5, 1- 10, 5-10, 10-20, 15-20, 1-20, 5-20 ou 10-20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em certas modalidades e aspectos, os domínios transmembranares, citoplásmicos e extracelulares são da sequência FLT3L estabelecida no nº de Acesso GenBank U03858.1.
[514] Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L, do domínio citoplásmico inteiro, e 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L, do domínio citoplásmico inteiro, e 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L, do domínio citoplásmico inteiro, e 1-5, 1-10, 5-10, 10-20, 15-20, 1-20, 5-20 ou 10- 20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em certas modalidades e aspectos, os domínios transmembranares, citoplásmicos e extracelulares são da sequência FLT3L estabelecida no nº de Acesso GenBank U03858.1.
[515] Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio citoplásmico, e 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio citoplásmico, e 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio citoplásmico, e 1-5, 1-10, 5-10, 10-20, 15-20, 1-20, 5- 20 ou 10-20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em certas modalidades e aspectos, os domínios transmembranares, citoplásmicos e extracelulares são da sequência FLT3L estabelecida no nº de Acesso GenBank U03858.1.
[516] Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio citoplásmico, e 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio citoplásmico, e 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos
80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio citoplásmico, e 1-5, 1-10, 5-10, 10-20, 15-20, 1-20, 5-20 ou 10-20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em certas modalidades e aspectos, os domínios transmembranares, citoplásmicos e extracelulares são da sequência FLT3L estabelecida no nº de Acesso GenBank U03858.1.
[517] Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 13, 14 ou 15 dos resíduos de aminoácido N-terminal do domínio citoplásmico, e 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 13, 14 ou 15 dos resíduos de aminoácido N- terminal do domínio citoplásmico, e 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem o domínio transmembranar de FLT3L inteiro, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 13, 14 ou 15 dos resíduos de aminoácido N-terminal do domínio citoplásmico, e 1-5, 1-10, 5- 10, 10-20, 15-20, 1-20, 5-20 ou 10-20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em certas modalidades e aspectos, os domínios transmembranares, citoplásmicos e extracelulares são da sequência FLT3L estabelecida no nº de Acesso GenBank U03858.1.
[518] Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 13, 14, ou 15 dos resíduos de aminoácido N-terminal do domínio citoplásmico, e 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 13, 14, ou 15 dos resíduos de aminoácido N-terminal do domínio citoplásmico, e 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em outra modalidade, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos não tem pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% do domínio transmembranar de FLT3L, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 13, 14, ou 15 dos resíduos de aminoácido N-terminal do domínio citoplásmico, e 1-5, 1-10, 5-10, 10-20, 15-20, 1-20, 5-20 ou 10-20 aminoácidos do terminal carbóxi do domínio extracelular de FLT3L. Em certas modalidades e aspectos, os domínios transmembranares, citoplásmicos e extracelulares são da sequência FLT3L estabelecida no nº de Acesso GenBank U03858.1.
[519] Em uma modalidade específica, o FLT3L codificado pela terceira sequência de nucleotídeos é uma isoforma X7 e a terceira sequência de nucleotídeos não tem uma sequência de 179 nucleotídeos conforme descrito em Lyman et al., 1994, Blood 83:2795-2801. Em modalidades específicas, o FLT3L compreende a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 213. Em modalidades específicas, a terceira sequência de nucleotídeos compreende a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 216. Em modalidades específicas, a terceira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 216.
[520] Em uma modalidade específica das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L é um promotor B8R. Em uma modalidade específica das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L é um promotor B19R. Em uma modalidade específica das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L é um promotor B8R e um promotor B19R. Em uma modalidade particular, o promotor B8R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 564. Em uma modalidade particular, o promotor B19R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 565.
[521] A invenção também contempla ácidos nucleicos conforme descrito no presente documento que compreendem adicionalmente um quarto transgene que compreende uma quarta sequência de nucleotídeos que codifica um marcador detectável, por exemplo, um marcador fluorescente (por exemplo, uma proteína fluorescente verde (GFP), como uma GFP intensificada (eGFP)). Em certas modalidades, o ácido nucleico compreende adicionalmente uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à quarta sequência de nucleotídeos que codifica o marcador fluorescente. Em certas modalidades, a quarta sequência de nucleotídeos que codifica o marcador fluorescente é ligado e a jusante de uma entre a primeira, segunda e terceira sequências de nucleotídeos.
[522] Em uma modalidade específica, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à quarta sequência de nucleotídeos que codifica o marcador fluorescente é um promotor E3L. Em outra modalidade específica, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à quarta sequência de nucleotídeos que codifica o marcador fluorescente é um promotor p7.5.
[523] Em modalidades específicas, é fornecido no presente documento um vetor que compreende uma sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 210 ou SEQ ID NO: 624 com transgene (ou transgenes) identificado na Tabela 45, inserido no lócus (loci) identificado na Tabela 45, e operacionalmente ligado ao promotor (ou promotores) identificado na Tabela 45. Em modalidades específicas, é fornecido no presente documento um vetor conforme descrito na Tabela 45.
[524] Também é contemplado que o primeiro transgene, o segundo transgene, o terceiro transgene e/ou o quarto transgene pode ser inserido no lócus de gene TK. Os outros transgenes (se houver) podem ser inseridos em outros loci, por exemplo, entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais, o lócus da deleção no gene B8R, entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais, e/ou o lócus de gene HA. Em algumas modalidades, o genoma de vírus vaccinia recombinante compreende uma deleção no gene TK. Em uma modalidade específica, o primeiro transgene, o segundo transgene, o terceiro transgene e/ou o quarto transgene é inserido no lócus da deleção no gene TK. Em outras modalidades, o gene TK não é deletado, mas o primeiro transgene, o segundo transgene, o terceiro transgene e/ou o quarto transgene é inserido no gene TK e rompe uma função do gene TK.
[525] Em outras modalidades, o genoma de vírus vaccinia recombinante compreende um gene TK funcional, por exemplo, de tipo selvagem, e nenhum dos transgenes é inserido no lócus de gene TK. Um gene TK de tipo selvagem inclui um gene TK naturalmente encontrado em um genoma de vírus vaccinia.
[526] Também é contemplado que o primeiro transgene, o segundo transgene, o terceiro transgene e/ou o quarto transgene pode ser inserido no lócus de gene HA. Os outros transgenes (se houver) podem ser inseridos em outros loci, por exemplo, entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais, o lócus da deleção no gene B8R, entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais, e/ou o lócus de gene TK. Em algumas modalidades, o genoma de vírus vaccinia recombinante compreende uma deleção no gene HA. Em uma modalidade específica, o primeiro transgene, o segundo transgene, o terceiro transgene e/ou o quarto transgene é inserido no lócus da deleção no gene HA. Em outras modalidades, o gene HA não é deletado, mas o primeiro transgene, o segundo transgene, o terceiro transgene e/ou o quarto transgene é inserido no gene HA e rompe uma função do gene HA.
[527] Em outras modalidades, o genoma de vírus vaccinia recombinante compreende um gene HA funcional, por exemplo, de tipo selvagem, e nenhum dos transgenes é inserido no lócus de gene HA. Um gene HA de tipo selvagem inclui um gene HA naturalmente encontrado em um genoma de vírus vaccinia.
[528] Em certas modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento, pelo menos um promotor é operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos, a segunda sequência de nucleotídeos e/ou a terceira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor é um promotor inicial, um promotor tardio ou um promotor inicial/tardio. Em modalidades particulares, o pelo menos um promotor é um promotor inicial e um promotor tardio. Em modalidades específicas, um promotor tardio pode compreender uma sequência de nucleotídeos TAAAT (SEQ ID NO. 631).
[529] Em certas modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos que codifica o anticorpo anti-CTLA-4 é um promotor inicial, um promotor tardio ou um promotor inicial/tardio. Em modalidades particulares, o pelo menos um promotor é um promotor inicial e um promotor tardio. Em modalidades específicas, um promotor tardio pode compreender uma sequência de nucleotídeos TAAAT (SEQ ID NO. 631). Em uma modalidade específica, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor inicial H5R (por exemplo, que compreende a sequência de nucleotídeos de AAAAATGAAAATAAA (SEQ ID NO. 630) ou TAAAAAATGAAAATAAATACAAAGGTTCTT (SEQ ID NO. 553), opcionalmente com um, dois, três, quatro, cinco ou mais nucleotídeos a montante e/ou a jusante da sequência). Em outra modalidade específica, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor tardio H5R (por exemplo, que compreende a sequência de nucleotídeos de TAAAT (SEQ ID NO. 631), TCTTGAGGGTTGTGTTAAATTGAAAGCGAGAAATAATCATAAAT (SEQ ID NO. 632), ou AAATTGAAAGCGAGAAATAATCATAAAT (SEQ ID NO. 554), opcionalmente com um, dois, três, quatro, cinco ou mais nucleotídeos a montante e/ou a jusante da sequência). Em uma modalidade específica, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor inicial H5R (por exemplo, que compreende a sequência de nucleotídeos de AAAAATGAAAATAAA (SEQ ID NO. 630) ou TAAAAAATGAAAATAAATACAAAGGTTCTT (SEQ ID NO. 553), opcionalmente com um, dois, três, quatro, cinco ou mais nucleotídeos a montante e/ou a jusante da sequência) e um promotor tardio H5R (por exemplo, que compreende a sequência de nucleotídeos de TAAAT (SEQ ID NO. 631), TCTTGAGGGTTGTGTTAAATTGAAAGCGAGAAATAATCATAAAT (SEQ ID NO. 632), ou AAATTGAAAGCGAGAAATAATCATAAAT (SEQ ID NO. 554), opcionalmente com um, dois, três, quatro, cinco ou mais nucleotídeos a montante e/ou a jusante da sequência). Quando o promotor tardio H5R compreende asequência de nucleotídeos de TAAAT (SEQ ID NO. 631), em uma modalidade, o ácido nucleico compreende uma sequência interveniente entre TAAAT e o códon de iniciação de tradução ATG (por exemplo, uma sequência interveniente que tem cerca de 10, 20, 30 ou 40 nucleotídeos em comprimento); em outra modalidade, não há sequência interveniente entre TAAAT e o códon de iniciação de tradução ATG (por exemplo, os últimos dois nucleotídeos de TAAAT são os primeiros dois nucleotídeos do códon de iniciação de tradução ATG). Em outra modalidade específica, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor inicial pS (por exemplo, que compreende a sequência de nucleotídeos de AAAATTGAAATTTTA (SEQ ID NO. 555)). Em outra modalidade específica, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor tardio pS (por exemplo, que compreende a sequência de nucleotídeos de TTTTATTTTTTTTTTTTGGAATATAAATA (SEQ ID NO. 556)). Em outra modalidade específica, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor inicial/tardio pS (por exemplo, que compreende a sequência de nucleotídeos de AAAATTGAAATTTTATTTTTTTTTTTTGGAATATAAATA (SEQ ID NO. 557)). Em outra modalidade específica, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor inicial LEO (por exemplo, que compreende a sequência de nucleotídeos de TTTTATTTTTTTTTTTTGGAATATAAATA (SEQ ID NO. 556)). Em outra modalidade específica, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor tardio LEO (por exemplo, que compreende a sequência de nucleotídeos de AAAATTGAAAAAATA (SEQ ID NO. 558)). Em outra modalidade específica, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor inicial/tardio LEO (por exemplo, que compreende a sequência de nucleotídeos de TTTTATTTTTTTTTTTTGGAATATAAATATCCGGTAAAATTGAAAAAATA (SEQ ID NO. 559)).
[530] Em certas modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos que codifica o polipeptídeo de IL-12 é um promotor tardio. Em uma modalidade específica, o promotor tardio compreende a sequência de nucleotídeos de TTNTTTTTTNTTTTTTTNNNNTATAAAT (SEQ ID NO: 560, em que N é qualquer nucleotídeo). Em outra modalidade específica, o promotor tardio compreende a sequência de nucleotídeos de TTGTATTTTCTTTTGTTGGCATATAAAT (SEQ ID NO: 561). Em outra modalidade específica, o promotor tardio é um promotor D13L (por exemplo, que compreende a sequência de nucleotídeos de TTTATTGTAAGCTTTTTCCATTTTAAAT (SEQ ID NO. 562)). Em outra modalidade específica, o promotor tardio é um promotor F17R (por exemplo, que compreende a sequência de nucleotídeos de
TCATTTTGTTTTTTTCTATGCTATAAAT (SEQ ID NO. 563)).
[531] Em certas modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L é um promotor inicial, um promotor tardio ou um promotor inicial/tardio. Em uma modalidade específica, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é o promotor B8R (por exemplo, que compreende a sequência de nucleotídeos de TAAAAATTTAAAATATATTATCACTTCAGT (SEQ ID NO. 564)). Em outra modalidade específica, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é o promotor B19R (por exemplo, que compreende a sequência de nucleotídeos de AAAAAACTGATATTATATAAATATTTTAGT (SEQ ID NO. 565)). Em outra modalidade específica, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos compreende a sequência de nucleotídeos de NNAAAANTGAAAANATANNNNNNNNNNNNN (SEQ ID NO. 566, em que N é qualquer nucleotídeo). Em outra modalidade específica, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é o promotor E3L (por exemplo, que compreende a sequência de nucleotídeos de AAAAAAATGATAAAGTAGGTTCAGTTTTAT (SEQ ID NO. 567)). Em outra modalidade específica, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é o promotor F11L (por exemplo, que compreende a sequência de nucleotídeos de TAAAAAGTGAAAAACAATATTATTTTTATC (SEQ ID NO. 568)). Em outra modalidade específica, o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é o promotor B2R (por exemplo, que compreende a sequência de nucleotídeos de AAAATTAAAAAATAACTTAATTTATTATTG (SEQ ID NO. 569)).
[532] Em certas modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento, a sequência promotora sobrepõe ou está dentro dos 100 nucleotídeos do códon de iniciação de tradução de transgene ao qual o promotor está operacionalmente ligado. Em uma modalidade específica, a sequência promotora está dentro de cerca de 80 nucleotídeos do códon de iniciação de tradução do transgene ao qual o promotor está operacionalmente ligado. Em uma modalidade específica, a sequência promotora está dentro de cerca de 70 nucleotídeos do códon de iniciação de tradução do transgene ao qual o promotor está operacionalmente ligado. Em uma modalidade específica, a sequência promotora está dentro de cerca de 60 nucleotídeos do códon de iniciação de tradução do transgene ao qual o promotor está operacionalmente ligado. Em uma modalidade específica, a sequência promotora está dentro de cerca de 50 nucleotídeos do códon de iniciação de tradução do transgene ao qual o promotor está operacionalmente ligado. Em outra modalidade específica, a sequência promotora está dentro de cerca de 40 nucleotídeos do códon de iniciação de tradução do transgene ao qual o promotor está operacionalmente ligado. Em outra modalidade específica, a sequência promotora está dentro de cerca de 30 nucleotídeos do códon de iniciação de tradução do transgene ao qual o promotor está operacionalmente ligado. Em outra modalidade específica, a sequência promotora está dentro de cerca de 20 nucleotídeos do códon de iniciação de tradução do transgene ao qual o promotor está operacionalmente ligado. Em outra modalidade específica, a sequência promotora está dentro de cerca de 10 nucleotídeos do códon de iniciação de tradução do transgene ao qual o promotor está operacionalmente ligado. Em outra modalidade específica, a sequência promotora está dentro de cerca de 5 nucleotídeos do códon de iniciação de tradução do transgene ao qual o promotor está operacionalmente ligado. Em outra modalidade específica, a sequência promotora está dentro de 2 nucleotídeos do códon de iniciação de tradução do transgene ao qual o promotor está operacionalmente ligado. Em outra modalidade específica, a sequência promotora sobrepõe o códon de iniciação de tradução do transgene ao qual o promotor está operacionalmente ligado.
[533] Em certas modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende um transgene que compreende uma sequência de nucleotídeos o ácido nucleico pode compreende adicionalmente uma sequência de nucleotídeos que compreende uma região não traduzida (UTR), por exemplo, uma UTR H5R ou uma porção da mesma, por exemplo, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95%
da UTR H5R, operacionalmente ligada à sequência de nucleotídeos. Em uma modalidade específica, a UTR H5R ou uma porção da mesma compreende um promotor inicial H5R (por exemplo, que compreende a sequência de nucleotídeos de AAAAATGAAAATAAA (SEQ ID NO. 630) ou TAAAAAATGAAAATAAATACAAAGGTTCTT (SEQ ID NO. 553), opcionalmente com um, dois, três, quatro, cinco ou mais nucleotídeos a montante e/ou a jusante da sequência). Em outra modalidade específica, a UTR H5R ou uma porção da mesma compreende um promotor tardio H5R (por exemplo, que compreende a sequência de nucleotídeos de TAAAT (SEQ ID NO. 631), TCTTGAGGGTTGTGTTAAATTGAAAGCGAGAAATAATCATAAAT (SEQ ID NO. 632), ou AAATTGAAAGCGAGAAATAATCATAAAT (SEQ ID NO. 554), opcionalmente com um, dois, três, quatro, cinco ou mais nucleotídeos a montante e/ou a jusante da sequência). Em outra modalidade específica, a UTR H5R ou uma porção da mesma compreende o promotor inicial H5R (por exemplo, que compreende a sequência de nucleotídeos de AAAAATGAAAATAAA (SEQ ID NO. 630) ou TAAAAAATGAAAATAAATACAAAGGTTCTT (SEQ ID NO. 553), opcionalmente com um, dois, três, quatro, cinco ou mais nucleotídeos a montante e/ou a jusante da sequência) e o promotor tardio H5R (por exemplo, que compreende a sequência de nucleotídeos de TAAAT (SEQ ID NO. 631), TCTTGAGGGTTGTGTTAAATTGAAAGCGAGAAATAATCATAAAT (SEQ ID NO. 632), ou AAATTGAAAGCGAGAAATAATCATAAAT (SEQ ID NO. 554), opcionalmente com um, dois, três, quatro, cinco ou mais nucleotídeos a montante e/ou a jusante da sequência). Em outra modalidade específica, a UTR H5R compreende a sequência de nucleotídeos de
TTAAAGTTACAAACAACTAGGAAATTGGTTTATGATGTATAATTTTTTTAGTTTT TATAGATTCTTTATTCTATACTTAAAAAATGAAAATAAATACAAAGGTTCTTGAG
GGTTGTGTTAAATTGAAAGCGAGAAATAATCATAAATTATTTCATTATCGCGAT ATCCGTTAAGTTTGTATCGTA (SEQ ID NO. 626).
[534] Em modalidades específicas das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento em que o ácido nucleico compreende um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que se liga especificamente à CTLA-4, o ácido nucleico pode compreender adicionalmente uma sequência de nucleotídeos que codifica uma região não traduzida (UTR). Por exemplo, a UTR pode compreender uma UTR H5R ou uma porção da mesma (por exemplo, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% da UTR H5R) operacionalmente ligada à primeira sequência de nucleotídeos. Em uma modalidade específica, a UTR H5R compreende um promotor inicial H5R (por exemplo, que compreende a sequência de nucleotídeos de AAAAATGAAAATAAA (SEQ ID NO. 630) ou TAAAAAATGAAAATAAATACAAAGGTTCTT (SEQ ID NO. 553), opcionalmente com um, dois, três, quatro, cinco ou mais nucleotídeos a montante e/ou a jusante da sequência). Em outra modalidade específica, a UTR H5R compreende um promotor tardio H5R (por exemplo, que compreende a sequência de nucleotídeos de TAAAT (SEQ ID NO. 631), TCTTGAGGGTTGTGTTAAATTGAAAGCGAGAAATAATCATAAAT (SEQ ID NO. 632), ou AAATTGAAAGCGAGAAATAATCATAAAT (SEQ ID NO. 554), opcionalmente com um, dois, três, quatro, cinco ou mais nucleotídeos a montante e/ou a jusante da sequência). Em outra modalidade específica, a UTR H5R compreende um promotor inicial H5R (por exemplo, que compreende a sequência de nucleotídeos de AAAAATGAAAATAAA (SEQ ID NO. 630) ou TAAAAAATGAAAATAAATACAAAGGTTCTT (SEQ ID NO. 553), opcionalmente com um, dois, três, quatro, cinco ou mais nucleotídeos a montante e/ou a jusante da sequência) e um promotor tardio H5R (por exemplo, que compreende a sequência de nucleotídeos de TAAAT (SEQ ID NO. 631), TCTTGAGGGTTGTGTTAAATTGAAAGCGAGAAATAATCATAAAT (SEQ ID NO. 632), ou AAATTGAAAGCGAGAAATAATCATAAAT (SEQ ID NO. 554), opcionalmente com um, dois, três, quatro, cinco ou mais nucleotídeos a montante e/ou a jusante da sequência). Em outra modalidade específica, a UTR H5R compreende a sequência de nucleotídeos de
TTAAAGTTACAAACAACTAGGAAATTGGTTTATGATGTATAATTTTTTTAGTTTT TATAGATTCTTTATTCTATACTTAAAAAATGAAAATAAATACAAAGGTTCTTGAG
GGTTGTGTTAAATTGAAAGCGAGAAATAATCATAAATTATTTCATTATCGCGAT ATCCGTTAAGTTTGTATCGTA (SEQ ID NO. 626).
[535] Em certas modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento, pelo menos um, dois, três, quatro, cinco, seis, sete, oito, nove, dez, vinte, trinta, quarenta, cinquenta, sessenta, setenta, oitenta, noventa, ou uma centena de, ou todos os seguintes genes não são deletados do genoma de vírus vaccinia recombinante: C3L, C4L, C5L, C6L, C7L, C8L, C9L, C10L, C11R, C12L, C13L, C14L, C15L (na ITR 5’), C16L (na ITR 5’), C17L (na ITR 5’), C18L (na ITR 5’), C19L (na ITR 5’), C20L (na ITR 5’), C21L (na ITR 5’), C22L (na ITR 5’), C23L (na ITR 5’), F4L, F5L, F6L, F7L, F8L, F9L, F10L, F11L, F12L, F13L, F14L, F15L, F16L, F17R, E1L, E2L, E3L, E4L, E5R, E6R, E7R, E8R, E9L, E10R, E11L, O1L, O2L, I1L, I2L, I3L, I4L, I5L, I6L, I7L, I8R, G1L, G2R, G3L, G4L, G5R, G6R, G7L, G8R, G9R, L1R, L2R, L3L, L4R, L5R, J1R, J2R, J3R, J4R, J5L, J6R, H1L, H2R, H3L, H4L, H5R, H6R, H7R, D1R, D2L, D3R, D4R, D5R, D6R, D7R, D8L, D9R, D10R, D11L, D12L, D13L, A1L, A2L, A3L, A4L, A5R, A6L, A7L, A8R, A9L, A10L, A11R, A12L, A13L, A14L, A15L, A16L, A17L, A18R, A19L, A20R, A21L, A22R, A23R, A24R, A25L, A26L, A27L, A28L, A29L, A30L, A31R, A32L, A33R, A34R, A35R, A36R, A37R, A38L, A39R, A40R, A41L, A42R, A43R, A44L, A45R, A46R, A47L, A48R, A49R, A50R, A51R, A52R, A53R, A54L, A55R, A56R, A57R, B1R, B2R, B3R, B4R, B5R, B6R, B7R, B8R, B9R, B10R, B11R, B12R, e B13R (consultar, por exemplo, Goebel et al., 1990, Virology 179(1):247-266 para uma descrição dos genes, que é incorporado ao presente documento a título de referência para tal descrição).
[536] Em outro aspecto, é fornecido no presente documento um ácido nucleico que compreende a sequência de ácidos nucleicos descrita na Tabela 43.
[537] Em outro aspecto, é fornecido no presente documento um ácido nucleico descrito em um exemplo na Seção 6.
[538] Em um aspecto, são fornecidos ácidos nucleicos que compreendem um genoma de ortopoxvírus recombinante, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 2 genes selecionados do grupo que consiste nos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R.
[539] Em algumas modalidades, o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 3 genes, cada gene selecionado do grupo que consiste nos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L,
K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R.
[540] Em algumas modalidades, o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 4 genes, cada gene selecionado do grupo que consiste nos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R.
[541] Em algumas modalidades, o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 5 genes, cada gene selecionado do grupo que consiste nos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R.
[542] Em algumas modalidades, o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 6 genes, cada gene selecionado do grupo que consiste nos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R.
[543] Em algumas modalidades, o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 7 genes, cada gene selecionado do grupo que consiste nos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R.
[544] Em algumas modalidades, o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 8 genes, cada gene selecionado do grupo que consiste nos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R.
[545] Em algumas modalidades, o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 9 genes, cada gene selecionado do grupo que consiste nos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R.
[546] Em algumas modalidades, o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 10 genes, cada gene selecionado do grupo que consiste nos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R.
[547] Em algumas modalidades, o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 11 genes, cada gene selecionado do grupo que consiste nos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R.
[548] Em algumas modalidades, o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 12 genes, cada gene selecionado do grupo que consiste nos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R.
[549] Em algumas modalidades, o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 13 genes, cada gene selecionado do grupo que consiste nos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R.
[550] Em algumas modalidades, o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 14 genes, cada gene selecionado do grupo que consiste nos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R.
[551] Em algumas modalidades, o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 15 genes, cada gene selecionado do grupo que consiste nos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R.
[552] Em algumas modalidades, o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 16 genes, cada gene selecionado do grupo que consiste nos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R.
[553] Em algumas modalidades, o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 17 genes, cada gene selecionado do grupo que consiste nos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R.
[554] Em algumas modalidades, o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 18 genes, cada gene selecionado do grupo que consiste nos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R.
[555] Em algumas modalidades, o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 19 genes, cada gene selecionado do grupo que consiste nos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R.
[556] Em algumas modalidades, o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 20 genes, cada gene selecionado do grupo que consiste nos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R.
[557] Em algumas modalidades, o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 21 genes, cada gene selecionado do grupo que consiste nos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R.
[558] Em algumas modalidades, o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 22 genes, cada gene selecionado do grupo que consiste nos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R,
B19R e B20R.
[559] Em algumas modalidades, o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de cada um dos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R.
[560] Em um aspecto, são fornecidos ácidos nucleicos que compreendem um genoma de ortopoxvírus recombinante, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 1 gene selecionado do grupo que consiste nos genes B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R.
[561] Em algumas modalidades, o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 2 genes, cada gene selecionado do grupo que consiste nos genes B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R.
[562] Em algumas modalidades, o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 3 genes, cada gene selecionado do grupo que consiste nos genes B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R.
[563] Em algumas modalidades, o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 4 genes, cada gene selecionado do grupo que consiste nos genes B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R.
[564] Em algumas modalidades, o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 5 genes, cada gene selecionado do grupo que consiste nos genes B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R.
[565] Em algumas modalidades, o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 6 genes, cada gene selecionado do grupo que consiste nos genes B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R.
[566] Em algumas modalidades, o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de cada um dos genes B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R.
[567] Em um aspecto, são fornecidos ácidos nucleicos que compreendem um genoma de ortopoxvírus recombinante, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 1 gene selecionados do grupo que consiste nos genes, C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L e F3L.
[568] Em algumas modalidades, o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 2 genes, cada gene selecionado do grupo que consiste nos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L e F3L.
[569] Em algumas modalidades, o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 3 genes, cada gene selecionado do grupo que consiste nos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L e F3L.
[570] Em algumas modalidades, o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 4 genes, cada gene selecionado do grupo que consiste nos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L e F3L.
[571] Em algumas modalidades, o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 5 genes, cada gene selecionado do grupo que consiste nos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L e F3L.
[572] Em algumas modalidades, o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 6 genes, cada gene selecionado do grupo que consiste nos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L e F3L.
[573] Em algumas modalidades, o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 7 genes, cada gene selecionado do grupo que consiste nos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L e F3L.
[574] Em algumas modalidades, o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 8 genes, cada gene selecionado do grupo que consiste nos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L,
K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L e F3L.
[575] Em algumas modalidades, o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 9 genes, cada gene selecionado do grupo que consiste nos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L e F3L.
[576] Em algumas modalidades, o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 10 genes, cada gene selecionado do grupo que consiste nos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L e F3L.
[577] Em algumas modalidades, o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 11 genes, cada gene selecionado do grupo que consiste nos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L e F3L.
[578] Em algumas modalidades, o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 12 genes, cada gene selecionado do grupo que consiste nos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L e F3L.
[579] Em algumas modalidades, o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 13 genes, cada gene selecionado do grupo que consiste nos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L e F3L.
[580] Em algumas modalidades, o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 14 genes, cada gene selecionado do grupo que consiste nos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L e F3L.
[581] Em algumas modalidades, o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 15 genes, cada gene selecionado do grupo que consiste nos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L e F3L.
[582] Em algumas modalidades, o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de cada um dos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L e F3L.
[583] Em algumas modalidades, o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 1 gene que codifica uma proteína envolvida em interação de hospedeiro. Por exemplo, em algumas modalidades, a dita proteína afeta a adesão independente de cálcio à matriz extracelular. Em algumas modalidades, a dita proteína é um inibidor de NF-B, por exemplo, um inibidor de NF-B codificado por um gene selecionado do grupo que consiste nos genes C2L, N1L, M2L, K1L e K7R. Em algumas modalidades, a dita proteína é um inibidor de apoptose, por exemplo, um inibidor de caspase 9 (como um codificado pelo gene F1L), uma proteína de tipo BCL-2 (como uma codificada por N1L). Em algumas modalidades, a dita proteína é um inibidor de fator regulador de interferon 3 (IRF3) (como um codificado por N2L ou K7R), um inibidor de serina protease, uma proteína que impede a fusão de célula (como uma codificada por K2L), um inibidor de proteína quinase ativada por RNA (PKR) (como um codificado por K1L ou K3L), um fator de virulência (como um codificado por F3L), um inibidor de IL-1-beta (como um codificado por B16R), ou um sequestrante de IFNα secretado (como um codificado por B19R).
[584] Em algumas modalidades, o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 1 gene que codifica uma proteína envolvida em replicação de DNA. Por exemplo, em algumas modalidades, a dita proteína é uma nuclease de modificação de DNA (por exemplo, uma proteína codificada por K4L) ou uma desoxiuridina trifosfatase (dUTPase) (por exemplo, uma proteína codificada por F2L).
[585] Em algumas modalidades, pelo menos uma sequência de nucleotídeos inteira do gene deletado é deletada. Em algumas modalidades, pelo menos um gene deletado é apenas parcialmente deletado, e a deleção parcial é suficiente para tornar o dito gene parcialmente deletado não funcional mediante introdução em uma célula hospedeira.
[586] Em algumas modalidades, o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende pelo menos duas cópias de repetições terminais invertidas (ITRs).
[587] Em algumas modalidades, o dito genoma de ortopoxvírus recombinante não tem quaisquer cópias de ITRs.
[588] Em algumas modalidades, o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção em pelo menos uma cópia de uma ITR selecionada do grupo que consiste em B21R-ITR, B22R-ITR, B23R-ITR, B24R-ITR, B25R-ITR, B26R-ITR, B27R-ITR, B28R-ITR e B29R-ITR.
[589] Em algumas modalidades, o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção em pelo menos todas as seguintes cópias de ITRs: B21R-ITR, B22R-ITR, B23R-ITR, B24R-ITR, B25R-ITR, B26R-ITR, B27R- ITR, B28R-ITR e B29R-ITR.
[590] Em algumas modalidades, o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção no gene B8R.
[591] Em algumas modalidades, o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende um gene B8R intacto.
[592] Em um aspecto, são fornecidos ácidos nucleicos que compreendem um genoma de ortopoxvírus recombinante, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende (i) uma deleção de cada um dos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, B20R e B8R; e (ii) uma deleção em cada cópia das seguintes ITRs: B21R-ITR, B22R-ITR, B23R-ITR, B24R-ITR, B25R-ITR, B26R-ITR, B27R-ITR, B28R-ITR e B29R-ITR.
[593] Em um aspecto, são fornecidos ácidos nucleicos que compreendem um genoma de ortopoxvírus recombinante, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende (i) uma deleção de cada um dos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R; e (ii) uma deleção em cada cópia das seguintes ITRs: B21R-ITR, B22R-ITR, B23R-ITR, B24R-ITR, B25R-ITR, B26R-ITR, B27R- ITR, B28R-ITR e B29R-ITR, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende um gene B8R intacto.
[594] Em algumas modalidades, os ácidos nucleicos fornecidos compreendem adicionalmente pelo menos um transgene selecionado do grupo que consiste em um transgene que codifica um inibidor de ponto de verificação imune, um transgene que codifica uma interleucina (IL) e um transgene que codifica uma citocina. Em algumas modalidades, os ácidos nucleicos fornecidos compreendem adicionalmente pelo menos dois transgenes selecionados do grupo que consiste em um transgene que codifica um inibidor de ponto de verificação imune, um transgene que codifica uma interleucina (IL) e um transgene que codifica uma citocina. Em algumas modalidades, os ácidos nucleicos fornecidos compreendem adicionalmente um transgene que codifica um inibidor de ponto de verificação imune, um transgene que codifica uma interleucina (IL) e um transgene que codifica uma citocina.
[595] Por exemplo, em algumas modalidades, os ácidos nucleicos fornecidos compreendem um transgene que codifica um inibidor de ponto de verificação imune. Em algumas modalidades, o dito inibidor de ponto de verificação imune é selecionado do grupo que consiste em ligante OX40, ligante ICOS, anticorpo anti-CD47 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, anticorpo anti- CD40/CD40L ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, anticorpo anti-Lag3 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, anticorpo anti-CTLA-4 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, anticorpo anti-PD-L1 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, anticorpo anti-PD1 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, e anticorpo anti-Tim-3 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo. Em algumas modalidades, o dito inibidor de ponto de verificação imune é um anticorpo anti-PD-L1 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo ou um anticorpo anti-CTLA-4 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo. Em algumas modalidades, o dito inibidor de ponto de verificação imune é um anticorpo anti-PD1 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo. Em algumas modalidades, o dito inibidor de ponto de verificação imune é um anticorpo anti- CTLA-4 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo.
[596] Por exemplo, em algumas modalidades, os ácidos nucleicos fornecidos compreendem um transgene que codifica uma interleucina (IL). Em algumas modalidades, a dita interleucina é selecionada do grupo que consiste em IL-1 alfa, IL-1 beta, IL-2, IL-4, IL-7, IL-10, p35 de IL-12, p40 de IL-12, p70 de IL-12, IL-15, IL-18, IL-21 e IL-23. Em algumas modalidades, a dita interleucina é selecionada do grupo que consiste em p35 de IL-12, p40 de IL-12 e p70 de IL-12. Em algumas modalidades, a dita interleucina é ligada à membrana. Em algumas modalidades, a dita interleucina é ligada à membrana p70 de IL-12. Em algumas modalidades, a dita interleucina é ligada à membrana p35 de IL-12.
[597] Por exemplo, em algumas modalidades, os ácidos nucleicos fornecidos compreendem um transgene que codifica uma citocina. Em algumas modalidades, a dita citocina é um interferon (IFN). Em algumas modalidades, o interferon é selecionado do grupo que consiste em IFN-alfa, IFN-beta, IFN-delta, IFN-épsilon, IFN-tau, IFN-ômega, IFN-zeta e IFN-gama.
[598] Em algumas modalidades, a citocina é uma proteína de membro de superfamília de TNF. Em algumas modalidades, a proteína de membro de superfamília de TNF é selecionada do grupo que consiste em TRAIL, ligante Fas, LIGHT (TNFSF-14), TNF-alfa e ligante 4-1BB.
[599] Em algumas modalidades, a citocina é selecionada do grupo que consiste em GM-CSF, ligante Flt3, ligante CD40, TGF-beta, VEGF-R2 e c-kit. Em algumas modalidades, a citocina é ligante Flt3.
[600] Em algumas modalidades, o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção no gene B8R e pelo menos um transgene é inserido na deleção no gene B8R. Em algumas modalidades, pelo menos dois transgenes são inseridos na deleção no gene B8R. Em algumas modalidades, pelo menos três transgenes são inseridas na deleção no gene B8R. Em algumas modalidades, pelo menos um transgene é inserido em um lócus que não está na deleção no gene B8R, por exemplo, um lócus na delimitação de uma deleção na extremidade 5’ do genoma de ortopoxvírus ou em um lócus na delimitação de uma deleção na extremidade 3’ do genoma de ortopoxvírus.
[601] Em um aspecto, são fornecidos ácidos nucleicos que compreendem um genoma de ortopoxvírus recombinante, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende (i) uma deleção de cada um dos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, B20R e B8R; (ii) uma deleção em cada cópia das seguintes ITRs: B21R-ITR, B22R-ITR, B23R-ITR, B24R-ITR, B25R-ITR, B26R-ITR, B27R-ITR, B28R-ITR e B29R-ITR; (iii) um transgene IL-12-TM inserido na deleção no gene B8R; (iv) um transgene ligante Flt3 inserido na deleção no gene B8R; e (v) um de: (a) um transgene que codifica uma cadeia anticorpo anti-CTLA-4 única ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, ou (b) (i) um transgene que codifica uma cadeia pesada de um anticorpo anti-CTLA-4 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo e (ii) um transgene que codifica uma cadeia leve de um anticorpo anti-CTLA-4 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, em que o transgene (ou transgenes) na parte (v) é/são inseridos nas delimitações de uma deleção 5p presente no genoma de ortopoxvírus recombinante, em que o anticorpo anti-CTLA-4 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo tem capacidade para se ligar a CTLA-4.
[602] Em algumas modalidades, o genoma de ortopoxvírus é derivado de uma sequência da SEQ ID NO: 210, em que (a) a dita sequência derivada compreende uma deleção do gene B8R, e o transgene IL-12-TM, o transgene ligante Flt3, e o transgene (ou transgenes) que codifica o anticorpo anti-CTLA-4 de cadeia única ou dupla; (b) o transgene IL-12-TM codifica uma proteína que compreende uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 212; (c) o transgene ligante Flt3 codifica uma proteína que compreende uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 213; e (d) o anticorpo anti-CTLA-4 compreende uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 211.
[603] Em algumas modalidades dos ácidos nucleicos fornecidos, o ácido nucleico compreende adicionalmente um transgene que codifica um antígeno associado a tumor, por exemplo, um antígeno associado a tumor listado em qualquer uma das Tabelas 3-30. Em algumas modalidades, o antígeno associado a tumor é um antígeno associado a tumor selecionado do grupo que consiste em CD19, CD33, EpCAM, CEA, PSMA, EGFRvIII, CD133, EGFR, CDH19, ENPP3, DLL3, MSLN, ROR1, HER2, HLAA2, EpHA2, EpHA3, MCSP, CSPG4, NG2, RON, FLT3, BCMA, CD20, FAPα, FRα, CA-9, PDGFRα, PDGFRβ, FSP1, S100A4, ADAM12m, RET, MET, FGFR, INSR e NTRK.
[604] Em algumas modalidades, o antígeno associado a tumor compreende MAGE-A3, ou um ou mais fragmentos do mesmo.
[605] Em algumas modalidades, o antígeno associado a tumor compreende NY-ESO-1, ou um ou mais fragmentos do mesmo.
[606] Em algumas modalidades, o antígeno associado a tumor compreende uma ou mais proteínas de papilomavírus humano (HPV) ou fragmentos das mesmas. Em algumas modalidades, as proteínas de HPV ou fragmentos das mesmas compreendem um ou mais de (i) proteínas E6 e E7, ou fragmentos das mesmas, de HPV16 e (ii) proteínas E6 e E7, ou fragmentos das mesmas, de HPV18. Em algumas modalidades, as sequências das ditas proteínas de HPV ou fragmentos são divulgados na Publicação de Patente Internacional nº WO/2014/127478, cujo conteúdo é incorporado ao presente documento a título de referência.
[607] Em algumas modalidades, o antígeno associado a tumor compreende brachyury ou um ou mais fragmentos do mesmo.
[608] Em algumas modalidades, o antígeno associado a tumor compreende fosfatase de ácido prostático, ou um ou mais fragmentos da mesma.
[609] Quando mais do que um transgene descrito no presente documento é inserido em um genoma de ortopoxvírus recombinante (por exemplo, um genoma de vírus vaccinia recombinante), os transgenes podem ser inseridos em um lócus ou múltiplos loci (por exemplo, dois loci ou três loci). Quando dois ou mais transgenes descritos acima são inseridos nos mesmos loci, os transgenes podem ser inseridos com a mesma orientação ou orientações diferentes em relação a um ou ambos os genes de ortopoxvírus endógeno de flanqueamento (por exemplo, genes de vírus vaccinia), e também um em relação ao outro. Também é contemplado que, quando dois ou mais transgenes são inseridos no mesmo lócus, a ordem dos transgenes inseridos no mesmo lócus do genoma de ortopoxvírus recombinante (por exemplo, um genoma de vírus vaccinia recombinante) pode ser diferente.
[610] Em certas modalidades das várias modalidades e aspectos descritos no presente documento, a sequência de nucleotídeos que codifica o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que se liga especificamente a CTLA- 4 codifica as cadeias pesada e leve do anticorpo anti-CTLA-4 (por exemplo, ipilimumab) separado por peptídeo de clivagem, por exemplo, um peptídeo de autoclivagem, por exemplo, um peptídeo de autoclivagem 2A. Em uma modalidade específica, o peptídeo de autoclivagem 2A é um peptídeo T2A. Em uma modalidade particular, o peptídeo T2A compreende a sequência de aminoácidos de GSGEGRGSLLTCGDVEENPGP (SEQ ID NO: 570). Em uma modalidade particular, o peptídeo T2A compreende a sequência de aminoácidos de
PRGSGEGRGSLLTCGDVEENPGP (SEQ ID NO: 571). Em outra modalidade particular, o peptídeo T2A compreende a sequência de aminoácidos de EGRGSLLTCGDVEENPGP (SEQ ID NO: 572). Em outra modalidade específica, o peptídeo de autoclivagem 2A é um peptídeo P2A. Em uma modalidade particular, o peptídeo P2A compreende a sequência de aminoácidos de GSGATNFSLLKQAGDVEENPGP (SEQ ID NO: 573). Em outra modalidade particular, o peptídeo P2A compreende a sequência de aminoácidos de ATNFSLLKQAGDVEENPGP (SEQ ID NO: 574). Em outra modalidade específica, o peptídeo de autoclivagem 2A é um peptídeo E2A. Em uma modalidade particular, o peptídeo E2A compreende a sequência de aminoácidos de GSGQCTNYALLKLAGDVESNPGP (SEQ ID NO: 575). Em outra modalidade particular, o peptídeo E2A compreende a sequência de aminoácidos de QCTNYALLKLAGDVESNPGP (SEQ ID NO: 576). Em outra modalidade específica, o peptídeo de autoclivagem 2A é um peptídeo F2A. Em uma modalidade particular, o peptídeo F2A compreende a sequência de aminoácidos de GSGVKQTLNFDLLKLAGDVESNPGP (SEQ ID NO: 577). Em outra modalidade particular, o peptídeo F2A compreende a sequência de aminoácidos de VKQTLNFDLLKLAGDVESNPGP (SEQ ID NO: 578). A ligação das cadeias pesadas e leves do anticorpo por um peptídeo de autoclivagem 2A possibilita que o transgene de anticorpo seja traduzido em um quadro de leitura aberta e que a autoclivagem ocorra de modo cotranslacional, resultando em quantidades iguais das cadeias pesadas e leves coexpressas. Em uma modalidade específica, o anticorpo anti-CTLA-4 codificado por uma sequência de nucleotídeos descrita no presente documento compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 211.
[611] Em várias modalidades, o ácido nucleico fornecido no presente documento é um ácido nucleico recombinante.
5.2.4. ORTOPOXVÍRUS MODIFICADOS
[612] Em um aspecto, é fornecido no presente documento um vírus que compreende o ácido nucleico descrito na Seção 5.2.3. Em uma modalidade específica, é fornecido no presente documento um vírus que compreende o ácido nucleico descrito na Seção 5.2.3, em que o ácido nucleico compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12 ligado à membrana.
[613] Em outro aspecto, é fornecido no presente documento um vírus descrito em um exemplo na Seção 6.
[614] Em outro aspecto, são fornecidos vírus que compreendem o ácido nucleico que compreende o genoma de ortopoxvírus recombinante descrito no presente documento. Em algumas modalidades, a) o genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 2 genes selecionados do grupo que consiste nos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R; b) o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 1 gene selecionado do grupo que consiste nos genes B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R; ou c) o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 1 gene selecionado do grupo que consiste nos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L e F3L.
[615] Em algumas modalidades, o dito vírus é derivado de um vírus vaccinia. Em algumas modalidades, o dito vírus vaccinia é derivado de uma cepa selecionada do grupo que consiste em Copenhagen, Western Reserve, Wyeth, Lister, EM63, ACAM2000, LC16m8, CV-1, vaccinia Ankara modificado (MVA), Dairen I, GLV-1h68, IHD-J, L-IVP, LC16mO, Tashkent, Tian Tan e WAU86/88-1. Em algumas modalidades, o dito vírus vaccinia é derivado de uma cepa selecionada do grupo que consiste em Copenhagen, Western Reserve, Tian Tan, Wyeth e Lister. Em algumas modalidades, o dito vírus vaccinia é derivado de um vírus vaccinia de cepa Copenhagen.
[616] Em algumas modalidades, o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende adicionalmente um gene de Timidina Quinase (TK). Em algumas modalidades, o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende adicionalmente um gene de ribonucleotídeo redutase.
[617] Em algumas modalidades do vírus fornecido, mediante contato com uma população de células (por exemplo, células de mamíferos) com o dito vírus, a população de células (por exemplo, células de mamíferos) exibe formação de sincítios aumentada em relação a uma população de células (por exemplo, células de mamíferos) do mesmo tipo em contato com uma forma do vírus que não compreende a dita deleção.
[618] Em algumas modalidades de vírus fornecido, mediante contato com uma população de células (por exemplo, células de mamíferos) com o dito vírus, a população de células (por exemplo, células de mamíferos) exibe espalhamento aumentado do vírus em relação a uma população de células (por exemplo, células de mamíferos) do mesmo tipo em contato com uma forma do vírus que não compreende a dita deleção.
[619] Em algumas modalidades do vírus fornecido, o dito vetor de ortopoxvírus recombinante exerce um efeito citotóxico aumentado em uma população de células (por exemplo, células de mamíferos) em relação àquela de uma forma do vírus que não compreende a dita deleção.
[620] Em algumas modalidades, as ditas células de mamíferos são células humanas.
[621] Em algumas modalidades, as ditas células humanas são células cancerígenas.
[622] Em algumas modalidades, as ditas células de mamíferos são de uma linhagem celular selecionada do grupo que consiste em U2OS, 293, 293T, Vero, HeLa, A549, BHK, BSC40, CHO, OVCAR-8, 786-0, NCI-H23, U251, SF-295, T- 47D, SKMEL2, BT-549, SK-MEL-28, MDA-MB-231, SK-OV-3, MCF7, M14, SF-268, CAKI-1, HPAV, OVCAR-4, HCT15, K-562 e HCT-116.
[623] Em algumas modalidades do vírus fornecido, o vírus compreende adicionalmente um transgene que codifica um antígeno associado a tumor, por exemplo, um antígeno associado a tumor listado em qualquer uma das Tabelas 3-
30. Em algumas modalidades, o antígeno associado a tumor é um antígeno associado a tumor selecionado do grupo que consiste em CD19, CD33, EpCAM, CEA, PSMA, EGFRvIII, CD133, EGFR, CDH19, ENPP3, DLL3, MSLN, ROR1, HER2, HLAA2, EpHA2, EpHA3, MCSP, CSPG4, NG2, RON, FLT3, BCMA, CD20, FAPα, FRα, CA-9, PDGFRα, PDGFRβ, FSP1, S100A4, ADAM12m, RET, MET, FGFR, INSR e NTRK.
[624] Em algumas modalidades, o antígeno associado a tumor compreende
MAGE-A3, ou um ou mais fragmentos do mesmo.
[625] Em algumas modalidades, o antígeno associado a tumor compreende NY-ESO-1, ou um ou mais fragmentos do mesmo.
[626] Em algumas modalidades, o antígeno associado a tumor compreende uma ou mais proteínas de papilomavírus humano (HPV) ou fragmentos das mesmas. Em algumas modalidades, as proteínas de HPV ou fragmentos das mesmas compreendem um ou mais de (i) proteínas E6 e E7, ou fragmentos das mesmas, de HPV16 e (ii) proteínas E6 e E7, ou fragmentos das mesmas, de HPV18. Em algumas modalidades, as sequências das ditas proteínas de HPV ou fragmentos são divulgados na Publicação de Patente Internacional nº WO/2014/127478, cujo conteúdo é incorporado ao presente documento a título de referência.
[627] Em algumas modalidades, o antígeno associado a tumor compreende brachyury ou um ou mais fragmentos do mesmo.
[628] Em algumas modalidades, o antígeno associado a tumor compreende fosfatase de ácido prostático, ou um ou mais fragmentos da mesma.
[629] Em certas modalidades, o vírus fornecido no presente documento é isolado. Em certas modalidades, o vírus fornecido no presente documento é purificado.
[630] Em várias modalidades, o vírus fornecido no presente documento é um vírus recombinante.
[631] Em certas modalidades, o vírus fornecido no presente documento não causa formação de lesão de varíola quando administrado a um paciente (por exemplo, um paciente mamífero). Em certas modalidades, o vírus fornecido no presente documento pode se replicar in vitro e/ou quando administrado a um paciente (por exemplo, um paciente mamífero). Em certas modalidades, o vírus fornecido no presente documento pode expressar o transgene (ou transgenes) descrito no presente documento in vitro e/ou quando administrado a um paciente (por exemplo, um paciente mamífero). Em certas modalidades, o vírus fornecido no presente documento pode exterminar as células de tumor alvo (por exemplo, exibe citotoxicidade de câncer) in vitro e/ou quando administrado a um paciente (por exemplo, um paciente mamífero). Consultar os exemplos na Seção 6 para ensaios exemplificativos que podem ser usados para determinar a formação de lesão de varíola, replicação, expressão de transgene ou extermínio de células tumorais alvo (por exemplo, citotoxicidade cancerígena).
5.2.5. ENSAIOS PARA MEDIR CARATERÍSTICAS DE VÍRUS
[632] Em certas modalidades, o vírus descrito no presente documento foi testado por sua capacidade de se replicar/espalhar, viabilidade, expressão de transgene e/ou capacidade para exterminar células de tumor alvo (por exemplo, citotoxicidade de câncer), com o uso de um método conhecido na técnica. Consultar os exemplos na Seção 6 para ensaios exemplificativos que podem ser usados para determinar a replicação/espalhamento, viabilidade, expressão de transgene, ou extermínio de células tumorais alvo (por exemplo, citotoxicidade de câncer).
[633] Ensaios conhecidos na técnica para medir o espalhamento de tumor e virulência de um vírus inclui, mas sem limitação, medir tamanho de placa, formação de sincítios e/ou ensaios de cometa (EEVs). Ensaios conhecidos na técnica para medir a atividade imunoestimulante de um vírus incluem, mas sem limitação, a ativação de NK (medida em % de expressão de CD69), degranulação de NK (medida em vezes de aumento de CD107a), e/ou ensaios de iniciação de célula T. Os ensaios conhecidos na técnica por medir a seletividade de um vírus incluem, mas sem limitação, lesões de varíola caudal, biodistribuição, e/ou medições de massa corporal.
5.2.6. CÉLULAS, LINHAGENS CELULARES E LINHAGENS CELULARES
EMPACOTADORAS
[634] Em um aspecto, é fornecida no presente documento uma célula que compreende o ácido nucleico descrito na Seção 5.2.3. Em outro aspecto, é fornecida no presente documento uma célula que compreende o vírus descrito na Seção 5.2.4. Em certas modalidades, a célula fornecida no presente documento é uma célula de mamífero (por exemplo, uma célula humana). Em certas modalidades, a célula fornecida no presente documento é uma célula hospedeira (por exemplo, uma célula hospedeira descrita na Seção 5.4).
[635] Em um aspecto, é fornecida no presente documento uma linhagem celular que compreende o ácido nucleico descrito na Seção 5.2.3. Em outro aspecto, é fornecida no presente documento uma linhagem celular que compreende o vírus descrito na Seção 5.2.4. Em certas modalidades, a linhagem celular fornecida no presente documento é uma linhagem celular de mamífero (por exemplo, uma linhagem celular humana).
[636] Em um aspecto, é fornecida no presente documento uma linhagem celular empacotadora que compreende o ácido nucleico descrito na Seção 5.2.3. Em outro aspecto, é fornecida no presente documento uma linhagem celular empacotadora que compreende o vírus descrito na Seção 5.2.4. A linhagem celular empacotadora pode ser qualquer linhagem celular adequada para empacotar vírus ortopoxvírus (por exemplo, vírus vaccinia). Em certas modalidades, a linhagem celular empacotadora fornecida no presente documento é uma linhagem celular empacotadora de mamífero (por exemplo, uma linhagem celular empacotadora humana).
[637] As células exemplificativas que podem ser usadas para cultivar um vírus descrito no presente documento incluem, por exemplo, células HeLa, células U2OS, células 293T, células NIH3T3, células Jurkat, células 293, células COS, células CHO, células Saos, células PC12 e fibroblastos de embrião de galinha (CEF). As linhagens celulares de empacotamento exemplificativas que podem ser usadas para empacotar um vírus descrito no presente documento incluem, por exemplo, a linhagem celular HeLa, a linhagem celular U2-OS, a linhagem celular HEK293T, a linhagem celular 786-O, a linhagem celular A549 ou uma linhagem celular cancerígena aderente. Em certas modalidades, as células também expressam ou são manipuladas para expressar um ou mais fatores necessários para a replicação e/ou empacotamento do vírus vaccinia.
[638] Em certas modalidades, a célula, linhagem celular, ou a linhagem celular empacotadora fornecida no presente documento é uma célula, linhagem celular ou linhagem celular empacotadora descrita em um exemplo na Seção 6.
5.2.7. EXEMPLOS DE PROTEÍNAS CODIFICADAS POR GENES
ORTOPOXVÍRUS
[639] As proteínas exemplificativas codificadas por genes ortopoxvírus descritos nessa divulgação são reproduzidos nas Tabelas 31-40 abaixo. Conforme usado abaixo, o termo “localização” se refere à localização do gene em relação aos ácidos nucleicos deletados em vetores ortopoxvírus exemplificativos descritos no presente documento. Para vários genes, as informações de sequência de aminoácidos e números de ID de acesso de proteína são fornecidas.
5.3. MÉTODOS DE MODIFICAÇÃO GENÉTICA
[640] Métodos para a inserção ou deleção de ácidos nucleicos de um genoma alvo incluem aqueles descritos no presente documento e conhecidos na técnica. Acredita-se que os métodos para distribuição de ácido nucleico para efetuar a expressão de composições da presente invenção incluam virtualmente qualquer método pelo qual um ácido nucleico (por exemplo, DNA, incluindo vetores virais e não virais) pode ser introduzido em uma organela, uma célula, um tecido ou um organismo, conforme descrito no presente documento ou conforme seria conhecido por um indivíduo de habilidade comum na técnica. Tais métodos incluem, mas sem limitação, distribuição direta de DNA, como por injeção (Patentes US nº 5.994.624, 5.981.274, 5.945.100, 5.780.448, 5.736.524, 5.702.932,
5.656.610, 5.589.466 e 5.580.859, cada um incorporado ao presente documento a título de referência), incluindo microinjeção (Harland e Weintraub, 1985; Patente US nº 5.789.215, incorporado ao presente documento a título de referência); por eletroporação (Patente US nº 5.384.253, incorporado ao presente documento a título de referência); por precipitação de fosfato de cálcio (Graham e Van Der Eb, 1973; Chen e Okayama, 1987; Rippe et al., 1990); usando-se DEAE-dextrano seguido por polietileno glicol (Gopal, 1985); por carregamento sônico direto (Fechheimer et al., 1987); por transfecção mediada por lipossomo (Nicolau e Sene, 1982; Fraley et al., 1979; Nicolau et al., 1987; Wong et al., 1980; Kaneda et al., 1989; Kato et al., 1991); por bombardeio de microprojétil (Pedidos PCT nº WO 94/09699 e 95/06128; Patentes US nº 5.610.042; 5.322.783, 5.563.055, 5.550.318,
5.538.877 e 5.538.880, e cada uma incorporada ao presente documento a título de referência); por agitação com fibras de carbeto de silício (Kaeppler et al., 1990; Patentes US nº 5.302.523 e 5.464.765, cada uma incorporada ao presente documento a título de referência); por transformação mediada por Agrobacterium (Patentes US nº 5.591.616 e 5.563.055, cada uma incorporada ao presente documento a título de referência); ou por transformação mediada por PEG de protoplastos (Omirulleh et al., 1993; Patentes US nº 4.684.611 e 4.952.500, cada uma incorporada ao presente documento a título de referência); por absorção de
DNA mediada por dessecação/inibição (Potrykus et al., 1985). Através da aplicação de técnicas como essas, organela (ou orgenelas), célula (ou células), tecido (ou tecidos) ou organismo (ou organismos) podem ser transformados de modo estável ou transiente.
[641] São representados abaixo grupamentos de genes deletados e sua função em vírus CopMD5p, CopMD3p e CopMD5p3p. Os genes de ITR (designados na Tabela 2 por “-ITR” e “*”) são deletados em uma cópia, a ITR direita do genoma. Entretanto, esses genes têm uma segunda cópia na ITR esquerda, que permanece intacta nesse vírus. As deleções foram confirmadas por sequenciamento de genoma inteiro. A maioria dos genes deletados está envolvida no bloqueio de resposta hospedeira à infecção viral ou tem uma função desconhecida. TABELA 2: GENES DELETADOS EM VÍRUS VACCINIA Nome Categoria Função Deleções de Vírus Interação de C2L hospedeiro Inibe NFkB C1L Desconhecido Desconhecido Interação de N1L hospedeiro Inibe NFkB e Apoptose Interação de N2L hospedeiro Inibe IRF3 M1L Desconhecido Desconhecido Interação de M2L hospedeiro Inibe NFkB e Apoptose CopMD5 CopMD5p3 Interação de p p K1L hospedeiro Inibe PKR e NF-kB Interação de K2L hospedeiro Impede fusão de célula Interação de K3L hospedeiro Inibe PKR Replicação de Nuclease de modificação de K4L DNA DNA K5L Pseudogene Pseudogene K6L Pseudogene Pseudogene K7R Interação de Inibe NFkB e IRF3
Nome Categoria Função Deleções de Vírus hospedeiro Interação de F1L hospedeiro Inibe Apoptose Replicação de F2L DNA Deoxiuridina trifosfatase Interação de F3L hospedeiro Fator de virulência B14R Pseudogene Pseudogene B15R Desconhecido Desconhecido Interação de B16R hospedeiro Inibidor de IL-1-beta B17L Desconhecido Desconhecido B18R Desconhecido Tipo anquirina Interação de Sequestrante de IFNα B19R hospedeiro secretado B20R Desconhecido Tipo anquirina B21R- ITR* Desconhecido Desconhecido B22R- ITR* Desconhecido Desconhecido CopMD3 B23R- p ITR* Desconhecido Desconhecido B24R- ITR* Desconhecido Desconhecido B25R- ITR* Desconhecido Desconhecido B26R- ITR* Desconhecido Desconhecido B27R- ITR* Desconhecido Desconhecido B28R- ITR* Pseudogene Receptor de TNF-a B29R- Interação de Sequestrante de CC- ITR* hospedeiro quimiocina secretada
[642] Em várias modalidades, o ortopoxvírus são adicionalmente geneticamente modificados para conter deleções no gene B8R. O gene B8R de vírus vaccinia codifica uma proteína secretada com homologia para receptor de interferon gama (IFN-γ). In vitro, a proteína B8R se liga a e neutraliza a atividade antiviral de diversas espécies de interferon gama incluindo interferon gama humano e de rato; entretanto, não se liga significativamente a IFN-γ murino. Deletar o gene B8R impede o prejuízo de IFN-γ em seres humanos. Em várias modalidades, um, dois ou três transgenes são inseridos no lócus do gene B8R deletado. Em algumas cepas, além do transgene (ou transgenes) presente no sítio da deleção B8R, a cepa também tem, pelo menos um transgene é inserido em um lócus adicional no ortopoxvírus que não é o lócus do gene B8R deletado. Em várias modalidades, pelo menos um transgene é inserido nas delimitações das deleções 5p, pelo menos um transgene é inserido nas delimitações das deleções 3p ou ambos. Em várias modalidades, pelo menos três, quatro, cinco ou mais transgenes são inseridos no genoma de ortopoxvírus modificado.
[643] Em várias modalidades, a sequência do vetor de ortopoxvírus modificado é a sequência representada abaixo na Tabela 43 como a SEQ ID NO:
210. Em algumas modalidades, a sequência do vetor de ortopoxvírus modificado é um derivado da SEQ ID NO: 210. Por exemplo, conforme observado no presente documento, o vetor de ortopoxvírus modificado pode ser modificado para expressar um ou mais transgenes conforme discutido no presente documento.
[644] Em várias modalidades, a sequência do vetor de ortopoxvírus modificado é a sequência representada abaixo na Tabela 43 como a SEQ ID NO:
624. Em algumas modalidades, a sequência do vetor de ortopoxvírus modificado é um derivado da SEQ ID NO: 624. Por exemplo, conforme observado no presente documento, o vetor de ortopoxvírus modificado pode conter uma deleção da sequência B8R e/ou pode ser modificado para expressar um ou mais transgenes conforme discutido no presente documento.
[645] Em várias modalidades, o ortopoxvírus modificado expressa pelo menos um dos três transgenes: IL-12-TM, FLT3-L e anticorpo anti-CLTA4. Exemplos não limitantes de sequências desses transgenes e/ou de sequências de aminoácidos codificados pelos mesmos são descritos abaixo: Anticorpo anti-CTLA-4 humano de comprimento completo (anticorpo de comprimento completo que compreende cadeias pesadas e leves de ipilimumab com T2A interferindo nas cadeias pesadas e leves
Nucleotíd ATGGAAACAGACACCCTATTATTATGGGTTTTGCTTCTATGGGTG eo CCAGGATCTACGGGTCAGGTTCAGCTAGTCGAATCGGGTGGAG
SEQ ID GAGTCGTGCAGCCGGGACGTTCCTTACGTTTATCTTGCGCAGC NO: 214 GTCTGGTTTTACTTTCTCGTCCTACACTATGCATTGGGTTCGTCA
GGCTCCGGGAAAGGGATTGGAGTGGGTAACATTTATAAGTTACG ACGGTAATAATAAATACTATGCAGACAGTGTGAAGGGACGTTTCA CTATATCTCGAGATAATAGTAAGAACACTTTGTATTTGCAGATGAA TTCATTGAGAGCGGAAGATACAGCAATTTACTACTGCGCCAGAA CCGGATGGTTGGGTCCCTTTGACTATTGGGGACAGGGTACTCT TGTTACGGTGTCTTCTGCTTCAACAAAGGGTCCCTCTGTCTTCC CGCTTGCGCCCTCATCAAAATCGACGTCGGGTGGAACCGCTGC CTTGGGATGCTTGGTTAAGGACTATTTCCCCGAACCTGTCACCG TGTCTTGGAATTCCGGTGCTCTAACGTCTGGTGTGCACACTTTC CCTGCCGTTTTACAAAGTTCCGGACTATATTCACTTTCGTCCGTA GTAACTGTTCCAAGTTCGTCCCTTGGAACACAGACCTATATATG CAACGTAAACCACAAACCCTCCAATACCAAAGTCGATAAAAGAG TTGAGCCTAAATCCTGCGACAAAACACACACCTGCCCACCTTG CCCGGCCCCTGAACTTCTTGGAGGACCATCTGTATTCCTTTTCC CACCGAAGCCTAAGGACACCTTGATGATATCCAGAACTCCCGAA GTCACGTGCGTAGTAGTCGATGTGAGTCACGAAGATCCGGAAG TCAAGTTTAACTGGTATGTAGACGGAGTAGAGGTTCATAACGCC AAGACCAAGCCAAGAGAAGAACAATATAACTCGACTTACAGAGT CGTGTCTGTATTAACCGTCTTGCATCAGGACTGGTTAAACGGTA AAGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAATAAAGCCCTACCTGCCCC CATCGAAAAAACCATATCCAAGGCTAAGGGTCAGCCTAGAGAAC CTCAAGTTTACACATTACCGCCCAGTAGAGATGAACTTACGAAG AATCAAGTGAGTCTAACCTGCCTTGTTAAAGGATTCTACCCCAG TGACATAGCGGTGGAGTGGGAGTCCAACGGTCAACCCGAGAA CAATTATAAGACGACACCGCCCGTTCTTGACAGTGACGGATCGT TCTTTCTATACTCTAAGTTGACTGTGGATAAATCCCGATGGCAGC AGGGAAACGTATTCTCTTGCTCAGTGATGCATGAGGCGTTGCA CAATCATTACACCCAAAAGTCTTTGTCGCTAAGTCCAGGTAAAC CGCGGGGCAGCGGAGAGGGCAGAGGAAGCCTGCTGACTTGT GGCGATGTGGAAGAGAACCCTGGCCCTAAGCTTATGGCTTGGA CACCAGGAATCTTCATGGTACTTAGTTACTTGACAGGATCTTTCT CGGAAATAGTCTTAACTCAGTCACCGGGTACACTTTCCCTTTCG CCCGGAGAGCGTGCGACCCTATCGTGTCGAGCTTCCCAGTCG GTTGGTTCTTCGTATCTTGCTTGGTATCAGCAGAAGCCCGGACA AGCTCCTCGTCTTTTGATCTACGGTGCGTTTTCGAGAGCGACTG GTATCCCGGATAGATTTTCTGGATCGGGTTCTGGTACTGATTTCA CTTTAACGATTTCGAGACTAGAGCCCGAAGATTTTGCTGTGTATT ATTGCCAGCAATATGGATCTAGTCCGTGGACGTTCGGTCAGGGT ACCAAGGTCGAGATAAAAAGAACTGTGGCCGCACCCTCCGTGT TTATCTTTCCCCCTTCCGACGAACAGCTAAAGTCGGGTACTGCA TCGGTGGTATGTTTACTTAACAACTTTTACCCACGAGAGGCCAA GGTACAATGGAAGGTGGATAACGCCTTACAATCAGGAAACTCAC AAGAGTCCGTCACCGAGCAAGATTCCAAGGACAGTACATACTC GTTATCCTCGACATTAACATTGAGTAAGGCGGATTATGAGAAGCA TAAGGTTTACGCATGCGAAGTGACGCACCAAGGACTTTCATCCC
CCGTCACCAAGTCTTTCAATCGTGGTGAGTGCTGA Aminoáci METDTLLLWVLLLWVPGSTGQVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAA do SGFTFSSYTMHWVRQAPGKGLEWVTFISYDGNNKYYADSVKGR
SEQ ID FTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAIYYCARTGWLGPFDYWGQG NO: 211 TLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVT
VSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYIC NVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFP PKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAK TKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPI EKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDI AVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQG NVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKPRGSGEGRGSLLTCGD VE ****************** ENPGPKLMAWTPGIFMVLSYLTGSFSEIVLTQSPGTLSLSPGERAT LSCRASQS ***** VGSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGAFSRATGIPDRFSGSGSGTDF TLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPWTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFI FPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQ ESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSP
VTKSFNRGEC (em itálico: sequência de peptídeo sinal; sequência que tem * abaixo das letras: sequência T2A (incluindo um ligante PRGSG (SEQ ID NO: 589)); negrito: cadeia pesada sequência; negrito e sublinhado: sequência de cadeia leve) Cadeia QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYTMHWVRQAPGK pesada GLEWVTFISYDGNNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRA (aminoáci EDTAIYYCARTGWLGPFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSS do) KSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSS (SEQ ID GLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDK NO: 217) THTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSH
EDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQD WLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDE LTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDG SFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
KPRGSGEGRGSLLTCGDVEENPG Cadeia EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVGSSYLAWYQQKPGQAP leve RLLIYGAFSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQY (aminoáci GSSPWTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLN do) (SEQ NFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTL ID NO: SKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 218) Anti-CTLA-4 (cadeia única humana) Nucleotíd ATGGAGACAGATACTCTATTGCTATGGGTTTTGTTATTATGGGTG eo CCGGGTTCCACGGGAATTCGTCGTGCTGACATTGTTTTAACACA
SEQ ID GTCTCCAGGTACCCTATCATTGTCCCCTGGTGAGCGTGCCACG NO: 579 CTTAGTTGCAGAGCCTCTCAGTCTGTGGGATCAAGTTATTTAGC
TTGGTATCAACAAAAACCTGGACAAGCACCTCGTTTGTTAATATA TGGTGCATTCAGTAGAGCAACTGGAATTCCTGATCGATTCTCAG GATCTGGATCTGGAACAGACTTCACACTTACCATCTCACGTCTT GAACCCGAGGACTTTGCGGTCTACTACTGCCAGCAGTATGGTT CGTCGCCTTGGACTTTCGGACAAGGAACCAAAGTTGAAATCAA GCGAGGAGGAGGTGGATCGGGTGGTGGAGGATCCGGTGGAG GTGGAAGTGAAGCGAAGCTAGTCGAATCTGGAGGTGGTGTAGT GCAGCCTGGACGTTCGCTTCGACTATCCTGTGCTGCTTCAGGA TTTACCTTTTCATCTTACACGATGCACTGGGTGCGTCAAGCGCC TGGTAAAGGACTAGAGTGGGTCACGTTTATCTCATACGACGGTA ATAACAAGTATTATGCTGATTCCGTAAAGGGACGTTTCACCATAT CGCGTGACAATTCTAAGAATACCTTGTATCTTCAAATGAATAGTC TTAGAGCTGAAGACACTGCCATTTACTATTGTGCACGAACGGGA TGGCTTGGACCTTTTGATTATTGGGGTCAGGGTACTTTGGTCAC CGTCTCCACAGCGAAGACAACACCTCCCTCAGTCTATCCACTT
GCTCCGCGTAGTTAA Aminoáci METDTLLLWVLLLWVPGSTGIRRADIVLTQSPGTLSLSPGERATLS do CRASQSVGSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGAFSRATGIPDRFSGS
SEQ ID GSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPWTFGQGTKVEIKRGG NO: 580 GGSGGGGSGGGGSEAKLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFS
SYTMHWVRQAPGKGLEWVTFISYDGNNKYYADSVKGRFTISRDN SKNTLYLQMNSLRAEDTAIYYCARTGWLGPFDYWGQGTLVTVSTA
KTTPPSVYPLAPRS Anti-CTLA-4 (cadeia única de camundongo) Nucleotíd ATGGAAACCGATACTTTGCTTCTATGGGTCCTTTTGCTATGGGT eo GCCCGGATCAACCGGAATAAGACGTGCTGATATCGTTATGACCC
SEQ ID AGACCACGCTATCATTACCAGTTAGTCTAGGTGACCAGGCCAGT NO: 581 ATCAGTTGCCGTTCATCTCAGTCCATTGTACACTCAAACGGAAA
CACCTACTTGGAGTGGTATCTTCAGAAACCTGGTCAATCTCCCA AGCTTCTAATTTACAAAGTGTCTAACCGATTTTCTGGTGTGCCG GATCGATTTTCGGGTTCTGGTAGTGGAACGGATTTCACGCTAAA AATATCCCGAGTCGAAGCTGAAGACCTAGGAGTATATTATTGCTT TCAAGGATCTCACGTCCCGTACACCTTTGGTGGAGGAACCAAG CTTGAAATAAAGCGAGGAGGTGGAGGATCAGGAGGAGGTGGTT CGGGTGGTGGTGGTTCCGAGGCGAAGTTACAGGAGTCGGGAC CCGTATTAGTGAAGCCTGGTGCGAGTGTCAAAATGAGTTGCAAA GCCAGTGGTTACACCTTCACAGACTATTACATGAACTGGGTGAA GCAGTCTCACGGAAAATCTTTAGAGTGGATAGGAGTAATTAACC CGTACAATGGTGATACGAGTTACAACCAGAAGTTCAAAGGTAAG GCGACCTTGACGGTCGATAAATCCTCTAGTACTGCGTACATGGA ACTAAACTCTTTAACCTCTGAGGATTCTGCCGTATATTATTGTGC CAGATATTATGGTTCGTGGTTCGCATATTGGGGACAGGGAACTT TAATTACGGTCTCGACAGCCAAAACGACTCCCCCCTCAGTTTAT CCCCTTGCTCCTAGAAGTTAA
Aminoáci METDTLLLWVLLLWVPGSTGIRRADIVMTQTTLSLPVSLGDQASIS do CRSSQSIVHSNGNTYLEWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRF
SEQ ID SGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCFQGSHVPYTFGGGTKLEIK NO: 582 RGGGGSGGGGSGGGGSEAKLQESGPVLVKPGASVKMSCKASG
YTFTDYYMNWVKQSHGKSLEWIGVINPYNGDTSYNQKFKGKATL TVDKSSSTAYMELNSLTSEDSAVYYCARYYGSWFAYWGQGTLIT
VSTAKTTPPSVYPLAPRS p35 de IL-12 TM humano Nucleotíd ATGTGTCCCGCGCGATCGTTATTGTTAGTTGCGACGTTGGTCCT eo ACTTGACCATCTATCACTAGCGCGTAATTTGCCCGTTGCCACAC
SEQ ID CAGATCCCGGAATGTTTCCTTGCTTACATCATAGTCAGAACTTAC NO: 215 TTCGTGCAGTCTCCAACATGTTACAGAAAGCCCGACAGACCTTA
GAGTTCTATCCCTGTACTTCCGAAGAGATAGATCACGAGGACAT AACGAAAGACAAAACATCGACCGTTGAAGCGTGCTTACCCTTAG AACTAACCAAAAATGAAAGTTGTCTAAACTCTAGAGAAACGAGT TTTATCACCAATGGAAGTTGCTTGGCGTCTAGAAAAACATCATTT ATGATGGCCTTGTGTCTTTCCTCCATATACGAGGACTTGAAGAT GTATCAGGTCGAGTTCAAGACAATGAACGCGAAATTGCTTATGG ACCCCAAACGACAGATATTTTTGGACCAAAACATGTTAGCTGTTA TAGACGAATTGATGCAGGCGCTAAACTTCAATTCGGAAACTGTG CCACAGAAGTCATCCTTAGAGGAGCCCGATTTTTACAAGACAAA AATCAAGTTATGCATTCTTCTTCACGCGTTTAGAATTCGTGCCGT TACGATTGATAGAGTAATGTCGTACTTGAATGCGTCGGGTGGAG GAGGTTCCGGAGGAGGAGGATCCGGAGGAGGTGGATCCTTAC TTCCTTCGTGGGCTATAACATTAATCTCCGTTAATGGTATCTTCG
TGATTTGCTGTCTAACATACTGCTTTGCATGA (Sublinhado e negrito: domínio transmembranar B7-1; Negrito: domínio citoplásmico B7-1; Aminoáci MCPARSLLLVATLVLLDHLSLARNLPVATPDPGMFPCLHHSQNLLR do: SEQ AVSNMLQKARQTLEFYPCTSEEIDHEDITKDKTSTVEACLPLELTK ID NO: NESCLNSRETSFITNGSCLASRKTSFMMALCLSSIYEDLKMYQVEF 212 KTMNAKLLMDPKRQIFLDQNMLAVIDELMQALNFNSETVPQKSSL
EEPDFYKTKIKLCILLHAFRIRAVTIDRVMSYLNASGGGGSGGGGS
GGGGSLLPSWAITLISVNGIFVICCLTYCFA (Sublinhado e negrito: domínio transmembranar B7-1; Negrito: domínio citoplásmico B7-1; p70 de IL-12 TM humano Nucleotíd ATGTGTCACCAGCAGTTGGTCATCTCTTGGTTTTCCCTGGTTTT eo TCTGGCATCTCCCCTCGTGGCCATATGGGAACTGAAGAAAGAT
SEQ ID GTTTATGTCGTAGAATTGGATTGGTATCCGGATGCCCCTGGAG NO: 583 AAATGGTGGTCCTCACCTGTGACACCCCTGAAGAAGATGGTAT
CACCTGGACCTTGGACCAGAGCAGTGAGGTCTTAGGCTCTGG CAAAACCCTGACCATCCAAGTCAAAGAGTTTGGAGATGCTGGC CAGTACACCTGTCACAAAGGAGGCGAGGTTCTAAGCCATTCGC TCCTGCTGCTTCACAAAAAGGAAGATGGAATTTGGTCCACTGAT ATTTTAAAGGACCAGAAAGAACCCAAAAATAAGACCTTTCTAAG ATGCGAGGCCAAGAATTATTCTGGACGTTTCACCTGCTGGTGG CTGACGACAATCAGTACTGATTTGACATTCAGTGTCAAAAGCAG CAGAGGCTCTTCTGACCCCCAAGGGGTGACGTGCGGAGCTGC TACACTCTCTGCAGAGAGAGTCAGAGGGGACAACAAGGAGTAT GAGTACTCAGTGGAGTGCCAGGAGGACAGTGCCTGCCCAGCT GCTGAGGAGAGTCTGCCCATTGAGGTCATGGTGGATGCCGTT CACAAGCTCAAGTATGAAAACTACACCAGCAGCTTCTTCATCAG GGACATCATCAAACCTGACCCACCCAAGAACTTGCAGCTGAAG CCATTAAAGAATTCTCGGCAGGTGGAGGTCAGCTGGGAGTACC CTGACACCTGGAGTACTCCACATTCCTACTTCTCCCTGACATTC TGCGTTCAGGTCCAGGGCAAGAGCAAGAGAGAAAAGAAAGATA GAGTCTTCACGGACAAGACCTCAGCCACGGTCATCTGCCGCAA AAATGCCAGCATTAGCGTGCGGGCCCAGGACCGCTACTATAG CTCATCTTGGAGCGAATGGGCATCTGTGCCCTGCAGTGTTCCT GGAGTAGGGGTACCTGGGGTGGGCGCCAGAAACCTCCCCGTG GCCACTCCAGACCCAGGAATGTTCCCATGCCTTCACCACTCCC AAAACCTGCTGAGGGCCGTCAGCAACATGCTCCAGAAGGCCA GACAAACTCTAGAATTTTACCCTTGCACTTCTGAAGAGATTGAT CATGAAGATATCACAAAAGATAAAACCAGCACAGTGGAGGCCT GTTTACCATTGGAATTAACCAAGAATGAGAGTTGCCTAAATTCC AGAGAGACCTCTTTCATAACTAATGGGAGTTGCCTGGCCTCCA GAAAGACCTCTTTTATGATGGCCCTGTGCCTTAGTAGTATTTAT GAAGACTTGAAGATGTACCAGGTGGAGTTCAAGACCATGAATG CAAAGCTGCTGATGGACCCTAAGAGGCAGATCTTTCTAGATCA AAACATGCTGGCAGTTATTGATGAGCTGATGCAGGCCCTGAAT TTCAACAGTGAGACTGTGCCACAAAAATCCTCCCTTGAAGAAC CGGATTTTTATAAAACTAAAATCAAGCTCTGCATACTTCTTCATG CTTTCAGAATTCGGGCAGTGACTATTGATAGAGTGATGAGCTAT CTGAATGCTTCCGGAGGAGGTGGATCGGGTGGTGGAGGATCT GGTGGAGGTGGAAGTCTGCTCCCATCCTGGGCCATTACCTTA ATCTCAGTAAATGGAATTTTTGTGATATGCTGCCTGACCTACT
GCTTTGCCTAA (Sublinhado e negrito: domínio transmembranar B7-1; Negrito: domínio citoplásmico B7-1; Aminoáci MCHQQLVISWFSLVFLASPLVAIWELKKDVYVVELDWYPDAPGEM do: SEQ VVLTCDTPEEDGITWTLDQSSEVLGSGKTLTIQVKEFGDAGQYTC ID NO: HKGGEVLSHSLLLLHKKEDGIWSTDILKDQKEPKNKTFLRCEAKNY 584 SGRFTCWWLTTISTDLTFSVKSSRGSSDPQGVTCGAATLSAERV
RGDNKEYEYSVECQEDSACPAAEESLPIEVMVDAVHKLKYENYTS SFFIRDIIKPDPPKNLQLKPLKNSRQVEVSWEYPDTWSTPHSYFSL TFCVQVQGKSKREKKDRVFTDKTSATVICRKNASISVRAQDRYYS SSWSEWASVPCSVPGVGVPGVGARNLPVATPDPGMFPCLHHSQ NLLRAVSNMLQKARQTLEFYPCTSEEIDHEDITKDKTSTVEACLPL ELTKNESCLNSRETSFITNGSCLASRKTSFMMALCLSSIYEDLKMY QVEFKTMNAKLLMDPKRQIFLDQNMLAVIDELMQALNFNSETVPQ KSSLEEPDFYKTKIKLCILLHAFRIRAVTIDRVMSYLNASGGGGSGG
GGSGGGGSLLPSWAITLISVNGIFVICCLTYCFA (Sublinhado e negrito: domínio transmembranar B7-1; Negrito: domínio citoplásmico B7-1;
p35 de IL-12 TM de camundongo Nucleotíd ATGTGTCAGTCTCGATACCTTCTTTTCCTAGCAACCTTAGCGTTA eo TTGAATCATCTTTCATTAGCGCGTGTCATTCCGGTCTCCGGTCC
SEQ ID CGCCCGTTGCCTTTCGCAAAGTCGTAACTTGCTTAAGACTACGG NO: 585 ATGATATGGTCAAAACTGCTAGAGAAAAGTTAAAACACTACTCGT
GTACGGCTGAAGACATAGACCACGAAGACATCACGCGAGATCA AACAAGTACCCTAAAGACTTGCTTACCGCTAGAGCTTCATAAAAA CGAGAGTTGCCTAGCGACCCGAGAGACATCTTCAACAACCAGA GGATCTTGTCTACCCCCTCAGAAGACTTCTCTAATGATGACCTT GTGCCTTGGTAGTATATATGAAGATTTAAAGATGTACCAGACTGA ATTTCAGGCAATCAATGCGGCATTACAAAACCACAACCATCAGC AGATAATATTAGATAAAGGAATGCTTGTAGCCATTGACGAACTTAT GCAGTCTCTAAACCACAACGGTGAGACACTTCGTCAGAAACCT CCGGTTGGTGAGGCAGATCCTTACCGTGTGAAAATGAAGTTGT GCATTCTATTGCATGCATTTTCGACGCGTGTGGTCACCATCAAC AGAGTCATGGGTTATCTAAGTTCTGCTGGTGGAGGTGGAAGTG GAGGTGGAGGAAGTGGTGGAGGAGGAAGTACCTTAGTGTTGT TTGGAGCAGGTTTCGGTGCAGTCATAACGGTTGTCGTTATCGT
GGTGATCATAAAATGTTTCTGCAAGTGA (Sublinhado e negrito: domínio transmembranar e citoplásmico.) Aminoáci MCQSRYLLFLATLALLNHLSLARVIPVSGPARCLSQSRNLLKTTDD do: SEQ MVKTAREKLKHYSCTAEDIDHEDITRDQTSTLKTCLPLELHKNESC ID NO: LATRETSSTTRGSCLPPQKTSLMMTLCLGSIYEDLKMYQTEFQAIN 586 AALQNHNHQQIILDKGMLVAIDELMQSLNHNGETLRQKPPVGEAD
PYRVKMKLCILLHAFSTRVVTINRVMGYLSSAGGGGSGGGGSGG
GGSTLVLFGAGFGAVITVVVIVVIIKCFCK (Sublinhado e negrito: domínio transmembranar e citoplásmico.) p70 de IL-12 TM de camundongo Nucleotíd ATGTGCCCCCAAAAGTTGACCATCTCATGGTTCGCAATTGTACT eo ACTAGTGAGTCCCTTGATGGCAATGTGGGAGCTTGAAAAGGAC
SEQ ID GTCTATGTGGTGGAGGTTGACTGGACGCCCGATGCGCCAGGA NO: 587 GAAACAGTGAATCTAACTTGCGACACACCTGAAGAGGATGACAT
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HPAEP
[646] Consultar Exemplo 32 na Seção 6.32 para métodos exemplificativos para gerar um vírus vaccinia recombinante descrito no presente documento.
5.4. PROPAGAÇÃO DE VÍRUS
[647] A presente invenção apresenta ortopoxvírus recombinante, incluindo aqueles construídos com uma ou mais deleções de gene em comparação com tipo selvagem, de modo que o vírus exiba propriedades desejáveis para uso contra células cancerígenas, enquanto é menos tóxico ou não tóxico para células não cancerígenas. Essa seção resume vários protocolos, a título de exemplo, para produzir ortopoxvírus recombinantes descritos no presente documento, como métodos para gerar vírus que sofreram mutação através do uso de tecnologia de DNA recombinante.
[648] Por exemplo, para gerar mutações no genoma de ortopoxvírus, polipeptídeos nativos e modificados podem ser codificados por uma molécula de ácido nucleico compreendida em um vetor. Os vetores podem incluir, por exemplo, plasmídeos, cosmídeos, vírus (bacteriófago, vírus animais e vírus vegetais) e cromossomos artificiais (por exemplo, YACs). Um indivíduo versado na técnica seria bem equipado para construir um vetor através de técnicas recombinantes padrão, que são descritas em Sambrook et al., (1989) e Ausubel et al., 1994, ambos incorporados ao presente documento a título de referência em sua totalidade. Além de codificar um polipeptídeo modificado, um vetor pode codificar sequências de polipeptídeos não modificadas, como uma etiqueta ou molécula de alvejamento.
[649] A fim de propagar um vetor em uma célula hospedeira, o mesmo pode conter uma ou mais origens de sítios de replicação (frequentemente denominados “ori”), que é uma sequência de ácidos nucleicos específica na qual a replicação é iniciada. Alternativamente, uma sequência de replicação autônoma (ARS) pode ser empregada se a célula hospedeira é levedura.
[650] No contexto de expressar uma sequência de ácidos nucleicos heteróloga, “célula hospedeira” se refere a uma célula procariótica ou eucariótica, e a mesma inclui qualquer organismo transformável que tem capacidade para replicar um vetor e/ou expressar um gene heterólogo codificado por um vetor.
Uma célula hospedeira pode, e foi, usada como um recipiente para vetores ou vírus (que se qualifica como um vetor se expressam um polipeptídeo exógeno). Uma célula hospedeira pode ser “transfectada” ou “transformada”, a qual se refere a um processo pelo qual o ácido nucleico exógeno, como uma sequência de codificação de proteína modificada, é transferido ou introduzido na célula hospedeira.
Uma célula transformada inclui a presente célula primária e sua progênie.
As células hospedeiras podem ser derivadas de procariotas ou eucariotas, incluindo células de levedura, células de inseto e células de mamíferos, dependendo de o resultado desejável ser a replicação do vetor ou expressão de parte ou todas as sequências de ácido nucleico codificadas por vetor.
As várias linhagens celulares e culturas estão disponíveis para uso como uma célula hospedeira e as mesmas podem ser obtidas através de American Type Culture Collection (ATCC), que é uma organização que serve como um arquivo para culturas vivas e materiais genéticos (www.atcc.org). Um hospedeiro apropriado pode ser determinado por um indivíduo versado na técnica com base na cadeia principal de vetor e no resultado desejável.
Um plasmídeo ou cosmídeo, por exemplo, pode ser introduzido em uma célula hospedeira procariota para replicação de muitos vetores.
As células bacterianas usadas como células hospedeiras para replicação de vetor e/ou expressão incluem DH5α, JM109 e KCB, assim como vários hospedeiros bacterianos comercialmente disponíveis, como SURE® Competent Cells e SOLOPACK™ Gold Cells (STRATAGENE®, La Jolla, Calif.). Alternativamente, células bacterianas como E. coli LE392 podem ser usadas como células hospedeiras para vírus de fago.
As células de levedura incluem Saccharomyces cerevisiae, Saccharomyces pombe e Pichia pastoris.
Exemplos de células hospedeiras eucarióticas para replicação e/ou expressão de um vetor incluem HeLa, NIH3T3, Jurkat, 293, COS, CHO, Saos e PC12. Muitas células hospedeiras de vários tipos de célula e organismos estão disponíveis e seriam conhecidas por um indivíduo versado na técnica.
De modo similar, um vetor viral pode ser usado em combinação com uma célula hospedeira eucariótica ou procariótica, particularmente uma que é permissiva para replicação ou expressão do vetor. Alguns vetores podem empregar sequências de controle que permitem que as mesmas sejam replicadas e/ou expressas tanto em células procarióticas quanto eucarióticas. Um indivíduo versado na técnica entenderia adicionalmente as condições sob as quais incubar todas as células hospedeiras descritas acima para manter as mesmas e permitir a replicação de um vetor. Também são entendidas e conhecidas as técnicas e afecções que permitiriam a produção em grande escala de vetores, assim como a produção dos ácidos nucleicos codificados por vetores e seus polipeptídeos cognatos, proteínas ou peptídeos.
[651] Também são fornecidos no presente documento os métodos para propagar um vírus descrito na Seção 5.2.4 com o uso de uma célula, uma linhagem celular, ou uma linhagem celular empacotadora descrita nas Seções 5.2.6 e 5.4. Em um aspecto, é fornecido no presente documento um método para propagar um vírus, que compreende cultivar uma célula, uma linhagem celular, ou uma linhagem celular empacotadora infectada com um vírus descrito no presente documento. Em algumas modalidades, o vírus é isolado ou purificado após a propagação. Consultar exemplos na Seção 6 para métodos e técnicas exemplificativos para propagar vírus.
5.5. MÉTODOS DE TRATAMENTO
5.5.1. COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, ADMINISTRAÇÃO E DOSES
[652] Também é fornecida no presente documento a composição farmacêutica que compreende um vírus descrito na Seção 5.2.4 e um carreador fisiologicamente aceitável. Em certas modalidades, a composição farmacêutica fornecida no presente documento compreende uma quantidade terapeuticamente eficaz do vírus. Em certas modalidades, a composição farmacêutica fornecida no presente documento deve ser usada em um método de tratamento descrito no presente documento.
[653] As composições terapêuticas que contêm vetores de ortopoxvírus recombinantes da invenção podem ser preparadas com o uso de métodos conhecidos na técnica. Por exemplo, tais composições podem ser preparadas com o uso de, por exemplo, carreadores, excipientes ou estabilizadores fisiologicamente aceitáveis (Remington’s Pharmaceutical Sciences 16ª edição, Osol, A. Ed. (1980); incorporados ao presente documento a título de referência), e em uma forma desejável, por exemplo, na forma de formulações liofilizadas ou soluções aquosas.
[654] Para induzir oncólise, exterminar células, inibir crescimento, inibir metástases, diminuir o tamanho de tumor e, de outro modo, inverter ou reduzir o fenótipo maligno de células tumorais, com o uso dos métodos e composições da presente invenção, um indivíduo pode contatar um tumor com o ortopoxvírus modificado, por exemplo, por administração do ortopoxvírus a um paciente que tem câncer a título de, por exemplo, uma ou mais das vias de administração descritas no presente documento. A rota de administração pode variar com a localização e a natureza do câncer, e pode incluir, por exemplo, administração e formulação intradérmica, transdérmica, parenteral, intravenosa, intramuscular, intranasal, subcutânea, regional (por exemplo, na proximidade de um tumor, particularmente com a vasculatura ou vasculatura adjacente de um tumor), percutânea, intratraqueal, intraperitoneal, intra-arterial, intravesicular, intratumoral, inalação, perfusão, lavagem e oral. Em modalidades específicas, a composição farmacêutica fornecida no presente documento é formulada de modo que seja adequada para a via de administração a ser empregada.
[655] O termo “intravascular” é entendido como se referindo à distribuição na vasculatura de um paciente, que significa para, dentro ou em um vaso ou vasos do paciente. Em certas modalidades, a administração é em um recipiente considerado como uma veia (intravenoso), enquanto a administração em outros é em um recipiente considerado como uma artéria. As veias incluem, mas sem limitação, a veia jugular interna, uma veia periférica, uma veia coronária, uma veia hepática, a veia portal, veia safena magna, a veia pulmonar, a veia cava superior, veia cava inferior, uma veia gástrica, uma veia esplênica, veia mesentérica inferior, veia mesentérica superior, veia cefálica e/ou veia femoral. As artérias incluem, mas sem limitação, artéria coronária, artéria pulmonar, artéria braquial, artéria carótida interna, arco aórtico, artéria femoral, artéria periférica e/ou artéria ciliar. É contemplado que a administração pode ser através de ou a uma ateríola ou vaso capilar.
[656] Injeção intratumoral, ou injeção diretamente na vasculatura de tumor é especificamente contemplada para tumores discretos, sólidos e acessíveis. A administração local, regional ou sistêmica também pode ser apropriada. As partículas virais podem ser vantajosamente contatadas administrando-se múltiplas injeções ao tumor, separadas, por exemplo, em aproximadamente intervalos de 1 cm. No caso de intervenção cirúrgica, a presente invenção pode ser usada de modo pré-operacional, como para tornar um tumor inoperável submetido à resseção. A administração contínua também pode ser aplicada quando apropriado, por exemplo, implantando-se um cateter em um tumor ou em vasculatura de tumor. Tal perfusão contínua pode ocorrer, por exemplo, por um período de cerca de 1-2 horas, a cerca de 2-6 horas, a cerca de 6-12 horas, ou cerca de 12-24 horas após a iniciação de tratamento. Em geral, a dose da composição terapêutica por meio de perfusão contínua pode ser equivalente àquela dada a injeções únicas ou múltiplas, ajustada por um período de tempo durante o qual a perfusão ocorre. É adicionalmente contemplado que a perfusão de membros pode ser usada para administrar composições terapêuticas da presente invenção, particularmente no tratamento de melanomas e sarcomas.
[657] Os regimes de tratamento podem variar, e depender frequentemente do tipo de tumor, localização de tumor, progressão de doença e idade e saúde do paciente. Certos tipos de tumor necessitarão de tratamento mais agressivo, enquanto, ao mesmo tempo, certos pacientes não podem tolerar mais protocolos fiscais. O médico será mais bem adequado para realizar tais decisões com base na eficácia e toxicidade conhecidas (se houver) das formulações terapêuticas. Em certas modalidades, o tumor sendo tratado pode não, pelo menos inicialmente, ser ressecável. Os tratamentos com o agente terapêutico da divulgação podem aumentar a ressecabilidade do tumor devido à contração nas margens ou por eliminação de certas porções particularmente invasivas. Após os tratamentos, a resseção pode ser possível. Os tratamentos adicionais subsequentes à resseção servirão para eliminar doença residual microscópica no sítio de tumor.
[658] Os tratamentos podem incluir várias “doses unitárias”. A dose unitária é definida como contendo uma quantidade predeterminada da composição terapêutica. A quantidade a ser administrada, e a rota e formulação particular, estão dentro da capacidade daqueles nas técnicas clínicas. Uma dose unitária não precisa ser administrada como uma injeção única, mas pode compreender infusão contínua por um período de tempo definido. A dose unitária da presente invenção pode ser convenientemente descrita em termos de unidades formadoras de placa (pfu) para um construto viral. As doses unitárias podem estar na faixa de 10 3, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 1010, 1011, 1012 a 1013 pfu e maior. Adicional ou alternativamente, dependendo do tipo de vírus e do título alcançável, um indivíduo pode distribuir 1 a 100, 10 a 50, 100-1000, ou até cerca de ou pelo menos cerca de 1×104, 1×105, 1×106, 1×107, 1×108, 1×109, 1×1010, 1×1011, 1×1012, 1×1013, 1×1014 ou 1×1015 ou partículas virais (vp) infecciosas mais altas, incluindo todos os valores e faixas entre os mesmos, ao tumor ou sítio de tumor.
[659] Qualquer método de distribuição do genoma de ortopoxvírus recombinante divulgado no presente documento a câncer ou células tumorais pode ser por meio de injeção intratumoral. Entretanto, as composições farmacêuticas divulgadas no presente documento podem ser alternativamente administradas por via parenteral, intravenosa, intradérmica, intramuscular, transdérmica ou até mesmo intraperitoneal conforme descrito na Patente US nº 5.543.158; Patente US nº 5.641.515 e Patente US nº 5.399.363 (cada uma especificamente incorporado ao presente documento a título de referência em sua totalidade). A injeção de construtos de ácido nucleico pode ser distribuída por seringa ou qualquer outro método usado para injeção de uma solução, enquanto o construto de expressão pode passar através do calibre particular de agulha necessário para injeção. Um sistema de injeção sem agulha exemplificativo que pode ser usado para a administração de ortopoxvírus recombinante descrito no presente documento é exemplificado na Patente US nº 5.846.233. Esse sistema apresenta um bocal que define uma câmara de ampola para reter a solução e um dispositivo de energia para empurrar a solução para fora do bocal para o sítio de distribuição. Outro sistema de seringa exemplificativo é um que permite múltiplas injeções de quantidades predeterminadas de uma solução precisamente em qualquer profundidade (Patente US nº 5.846.225).
[660] As misturas das partículas virais ou ácidos nucleicos descritos no presente documento podem ser preparados em água adequadamente misturada com um ou mais excipientes, carreadores ou diluentes. As dispersões também podem ser preparadas em glicerol, polietileno glicóis líquidos e misturas dos mesmos e em óleos. Sob afecções comuns de armazenamento e uso, essas preparações podem conter um conservante para impedir o crescimento de micro- organismos. As formas farmacêuticas adequadas para uso injetável incluem soluções aquosas estéreis ou dispersões e pós estéreis para a preparação extemporânea de soluções injetáveis estéreis ou dispersões (Patente US nº
5.466.468, especificamente incorporada no presente documento a título de referência em sua totalidade). Em todos os casos, a forma pode ser estéril e pode ser fluida para a extensão em que seringabilidade fácil existe. A mesma pode ser estável sob as afecções de fabricação e armazenamento e devem ser preservadas contra a ação contaminante de micro-organismos, como bactérias e fungos. O carreador pode ser um solvente ou meio de dispersão que contém, por exemplo, água, etanol, poliol (por exemplo, glicerol, propileno glicol e polietileno glicol líquido, e semelhantes), misturas adequadas dos mesmos, e/ou óleos vegetais. A fluidez apropriada pode ser mantida, por exemplo, pelo uso de um revestimento, como lecitina, pela fabricação do tamanho de partícula necessário no caso de dispersão e pelo uso de tensoativos. A prevenção da ação de micro-organismos pode ser ocasionada por vários agentes antibacterianos e antifúngicos; por exemplo, parabenos, clorobutanol, fenol, ácido sórbico, timerosal e semelhantes. Em muitos casos, será preferencial incluir agentes isotônicos, por exemplo, açúcares ou cloreto de sódio. A absorção prolongada das composições injetáveis pode ser ocasionada com o uso nas composições de agentes que retardam a absorção, por exemplo, monoestearato de alumínio e gelatina.
[661] Para administração parenteral em uma solução aquosa, por exemplo, a solução pode ser adequadamente tamponada se necessário e o diluente líquido primeiro tornado isotônico com solução salina ou glicose suficientes. Essas soluções aquosas particulares são essencialmente adequadas para administração intravenosa, intramuscular, subcutânea, intratumoral e intraperitoneal. Nessa conexão, meio aquoso estéril que pode ser empregado será conhecido por aqueles versados na técnica em luz da presente divulgação. Por exemplo, uma dosagem pode ser dissolvida em 1 ml de solução de NaCl isotônica e adicionada a 1000 ml de fluido de hipodermóclise ou injetada no sítio proposto de infusão. Alguma variação na dosagem ocorrerá necessariamente dependendo da condição do indivíduo sendo tratado. A pessoa responsável pela administração, em qualquer evento, determinará a dose apropriada para o sujeito individual. Além disso, para administração humana, as preparações devem satisfazer a esterilidade, pirogenicidade, segurança geral e padrões de pureza conforme necessário por padrões de FDA Office of Biologics.
[662] Conforme usado no presente documento, “carreador” inclui quaisquer e todos os solventes, meios de dispersão, veículos, revestimentos, diluentes, agentes antibacterianos e antifúngicos, agentes de atraso isotônico e absorção, tampões, soluções de carreador, suspensões, coloides e semelhantes. O uso de tal meio e agentes para substâncias farmacêuticas ativas é bem conhecido na técnica. Exceto na medida em que qualquer meio ou agente convencional é incompatível como ingrediente ativo, seu uso nas composições terapêuticas é contemplado. Ingredientes ativos complementares também podem ser incorporados nas composições. A expressão “farmaceuticamente ativo” ou “farmacologicamente aceitável” se refere a entidades moleculares e composições que não produzem uma reação alérgica ou reação indevida similar quando administrada a um ser humano. A preparação de uma composição aquosa que contém uma proteína como um ingrediente ativo é bem entendida na técnica. Tipicamente, tais composições são preparadas como injetáveis, em soluções líquidas ou suspensões; formas sólidas adequadas para solução em, ou suspensão em, líquido antes da injeção também podem ser preparadas.
5.5.2. MÉTODOS DE TRATAMENTO
[663] Também são fornecidos no presente documento métodos para tratar um distúrbio de proliferação de célula, como câncer em um paciente (por exemplo, um paciente mamífero, como um paciente humano).
[664] Em um aspecto, é fornecido no presente documento um método para tratar um distúrbio de proliferação de célula, como câncer em um paciente (por exemplo, um paciente mamífero, como um paciente humano), o método que compreende administrar ao paciente (por exemplo, um paciente mamífero, como um paciente humano) uma quantidade terapeuticamente eficaz de um vírus descrito na Seção 5.2.4.
[665] Em outro aspecto, é fornecido no presente documento um método para tratar um distúrbio de proliferação de célula, como câncer em um paciente (por exemplo, um paciente mamífero, como um paciente humano), o método que compreende administrar ao paciente (por exemplo, um paciente mamífero, como um paciente humano) uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma composição farmacêutica descrita na Seção 5.5.1.
[666] Em uma modalidade específica do método para tratamento descrito no presente documento, o paciente mamífero é um paciente humano.
[667] Em certas modalidades do método para tratamento descrito no presente documento, o câncer é selecionado do grupo que consiste em leucemia, linfoma, câncer de fígado, câncer ósseo, câncer de pulmão, câncer de cérebro, câncer de bexiga, câncer gastrointestinal, câncer de mama, câncer cardíaco, câncer cervical, câncer uterino, câncer de cabeça e pescoço, câncer de vesícula biliar, câncer laríngeo, câncer de lábio e cavidade oral, câncer ocular, melanoma, câncer pancreático, câncer de próstata, câncer colorretal, câncer testicular e câncer de garganta.
[668] Em certas modalidades do método para tratamento descrito no presente documento, o câncer é selecionado do grupo que consiste em leucemia linfoblástica aguda (ALL), leucemia mieloide aguda (AML), leucemia linfocítica crônica (CLL), leucemia mieloide crônica (CML), carcinoma adrenocortical, linfoma relacionado a AIDS, linfoma primário de SNC, câncer anal, câncer de apêndice, astrocitoma, tumor teratoide/rabdoide atípico, carcinoma de célula basal, câncer de ducto biliar, câncer extra-hepático, família de sarcoma de Ewing, osteossarcoma e histiocitoma fibroso maligno, tumores embrionários de sistema nervoso central, tumores de célula germinativa de sistema nervoso central, craniofaringioma, ependimoma, tumores brônquicos, linfoma de Burkitt, tumor carcinoide, linfoma primário, cordoma, neoplasmas mieloproliferativos crônicos, câncer de cólon, câncer de ducto biliar extra-hepático, carcinoma ductal in situ (DCIS), câncer de endométrio, ependimoma, câncer esofágico, estesioneuroblastoma, tumor de célula germinativa extracrania, tumor de célula germinativa extragonadal, câncer de trompa de falópio, histiocitoma fibroso de osso, tumor carcinoide gastrointestinal, tumores estromais gastrointestinais (GIST), tumor de célula germinativa testicular,
doença trofoblástica gestacional, glioma, glioma de tronco encefálico infantil, leucemia de células pilosas, câncer hepatocelular, histiocitose de células de Langerhans, linfoma de Hodgkin, câncer hipofaríngeo, tumores de célula de ilhota, tumores neuroendócrinos pancreáticos, tumor de Wilms e outros tumores renais infantis, histiocitose de células de Langerhans, câncer de pulmão de células pequenas, linfoma cutâneo de células T, melanoma intraocular, carcinoma de células de Merkel, mesotelioma, câncer metastático de pescoço de células escamosas, carcinoma de trato intermediário, síndromes de neoplasia endócrina múltipla, mieloma múltiplo/neoplasma de célula plasmática, síndromes mielodisplásicas, câncer de cavidade nasal e seio paranasal, câncer de nasofaringe, neuroblastoma, linfoma não Hodgkin (NHL), câncer de pulmão de células não pequenas (NSCLC), câncer de ovário epitelial, câncer de ovário de célula germinativa, câncer de ovário de baixo potencial maligno, tumores neuroendócrinos pancreáticos, papilomatose, paraganglioma, seio paranasal e câncer de cavidade nasal, câncer de paratireoide, câncer de pênis, câncer faríngeo, feocromocitoma, tumor pituitário, blastoma pleuropulmonar, câncer peritoneal primário, câncer retal, retinoblastoma, rabdomiossarcoma, câncer de glândula salivar, sarcoma de Kaposi, rabdomiossarcoma, síndrome de Sézary, câncer de intestino delgado, sarcoma de tecido mole, câncer de garganta, carcinoma timoma e tímico, câncer de tireoide, câncer de célula transitória da pelve renal e ureter, câncer de uretra, câncer uterino de endométrio, sarcoma uterino, câncer vaginal, câncer vulvar e macroglobulinemia de Waldenström.
[669] Em algumas modalidades do método para tratamento descrito no presente documento, o vírus e a composição farmacêutica não são administrados em combinação com outro agente para tratar o distúrbio de proliferação de célula (como câncer).
[670] Em outras modalidades do método para tratamento descrito no presente documento, o vírus ou a composição farmacêutica é administrada em combinação com um ou mais agentes adicionais para tratar o distúrbio de proliferação de célula (como câncer), por exemplo, o um ou mais agentes adicionais descritos na Seção 5.5.3.
[671] O ortopoxvírus recombinante e a composição farmacêutica divulgados no presente documento podem ser administrados a um indivíduo, por exemplo, um indivíduo mamífero, como um ser humano, que sofre de um distúrbio de proliferação de célula, como câncer, por exemplo, para exterminar células cancerígenas diretamente por oncólise e/ou para intensificar a eficácia da resposta imune adaptativa contra as células cancerígenas alvo.
Em algumas modalidades, o distúrbio de proliferação de célula é um câncer, como leucemia, linfoma, câncer de fígado, câncer ósseo, câncer de pulmão, câncer de cérebro, câncer de bexiga, câncer gastrointestinal, câncer de mama, câncer cardíaco, câncer cervical, câncer uterino, câncer de cabeça e pescoço, câncer de vesícula biliar, câncer laríngeo, câncer de lábio e cavidade oral, câncer ocular, melanoma, câncer pancreático, câncer de próstata, câncer colorretal, câncer testicular ou câncer de garganta.
Em particular cases, o distúrbio de proliferação de célula pode ser um câncer selecionado do grupo que consiste em leucemia linfoblástica aguda (ALL), leucemia mieloide aguda (AML), leucemia linfocítica crônica (CLL), leucemia mieloide crônica (CML), carcinoma adrenocortical, linfoma relacionado a AIDS, linfoma primário de SNC, câncer anal, câncer de apêndice, astrocitoma, tumor teratoide/rabdoide atípico, carcinoma de célula basal, câncer de ducto biliar, câncer extra-hepático, família de sarcoma de Ewing, osteossarcoma e histiocitoma fibroso maligno, tumores embrionários de sistema nervoso central, tumores de célula germinativa de sistema nervoso central, craniofaringioma, ependimoma, tumores brônquicos, linfoma de Burkitt, tumor carcinoide, linfoma primário, cordoma, neoplasmas mieloproliferativos crônicos, câncer de cólon, câncer de ducto biliar extra-hepático, carcinoma ductal in situ (DCIS), câncer de endométrio, ependimoma, câncer esofágico, estesioneuroblastoma, tumor de célula germinativa extracrania, tumor de célula germinativa extragonadal, câncer de trompa de falópio, histiocitoma fibroso de osso, tumor carcinoide gastrointestinal, tumores estromais gastrointestinais (GIST), tumor de célula germinativa testicular, doença trofoblástica gestacional, glioma, glioma de tronco encefálico infantil, leucemia de células pilosas, câncer hepatocelular, histiocitose de células de Langerhans, linfoma de Hodgkin, câncer hipofaríngeo, tumores de célula de ilhota, tumores neuroendócrinos pancreáticos, tumor de Wilms e outros tumores renais infantis, histiocitose de células de Langerhans, câncer de pulmão de células pequenas,
linfoma cutâneo de células T, melanoma intraocular, carcinoma de células de Merkel, mesotelioma, câncer metastático de pescoço de células escamosas, carcinoma de trato intermediário, síndromes de neoplasia endócrina múltipla, mieloma múltiplo/neoplasma de célula plasmática, síndromes mielodisplásicas, câncer de cavidade nasal e seio paranasal, câncer de nasofaringe, neuroblastoma, linfoma não Hodgkin (NHL), câncer de pulmão de células não pequenas (NSCLC), câncer de ovário epitelial, câncer de ovário de célula germinativa, câncer de ovário de baixo potencial maligno, tumores neuroendócrinos pancreáticos, papilomatose, paraganglioma, seio paranasal e câncer de cavidade nasal, câncer de paratireoide, câncer de pênis, câncer faríngeo, feocromocitoma, tumor pituitário, blastoma pleuropulmonar, câncer peritoneal primário, câncer retal, retinoblastoma, rabdomiossarcoma, câncer de glândula salivar, sarcoma de Kaposi, rabdomiossarcoma, síndrome de Sézary, câncer de intestino delgado, sarcoma de tecido mole, câncer de garganta, carcinoma timoma e tímico, câncer de tireoide, câncer de célula transitória da pelve renal e ureter, câncer de uretra, câncer uterino de endométrio, sarcoma uterino, câncer vaginal, câncer vulvar e macroglobulinemia de Waldenström.
[672] Um médico que tem habilidade comum na técnica pode determinar prontamente uma quantidade eficaz do vetor de ortopoxvírus recombinante para administração a um indivíduo, por exemplo, um indivíduo mamífero (por exemplo, um ser humano) que necessita do mesmo. Por exemplo, um médico pode iniciar a prescrição de doses de vetor de ortopoxvírus recombinante em níveis mais baixos do que o necessário a fim de alcançar o efeito terapêutico desejável e aumenta gradualmente a dosagem até o efeito desejável ser alcançado. Alternativamente, um médico pode começar um regime de tratamento administrando-se uma dose de vetor de ortopoxvírus recombinante e administrando subsequentemente doses progressivamente mais baixas até um efeito terapêutico ser alcançado (por exemplo, uma redução no volume de um ou mais tumores). Em geral, uma dose diária adequada de um vetor de ortopoxvírus recombinante da invenção será uma quantidade do vetor de ortopoxvírus recombinante que é a dose mais baixa eficaz para produzir um efeito terapêutico. Uma dose diária de uma composição terapêutica do vetor de ortopoxvírus recombinante da invenção pode ser administrada como uma dose única ou como duas, três, quatro, cinco, seis ou mais doses administradas separadamente em intervalos apropriados ao longo do dia, semana, mês, ou ano, opcionalmente, em formas de dosagem unitária. Embora seja possível que o vetor de ortopoxvírus recombinante da invenção seja administrado sozinho, o mesmo também pode ser administrado como uma formulação farmacêutica em combinação com excipientes, carreadores e opcionalmente, agentes terapêuticos adicionais.
[673] Os vetores de ortopoxvírus recombinantes da invenção podem ser monitorados quanto à sua capacidade para atenuar o progresso de uma doença de proliferação de célula, como câncer, por qualquer um dentre uma variedade de métodos conhecidos na técnica. Por exemplo, um médico pode monitorar a resposta de um indivíduo, por exemplo, um indivíduo mamífero (por exemplo, um ser humano) para tratamento com vetor de ortopoxvírus recombinante da invenção analisando-se o volume de um ou mais tumores no paciente. Alternativamente, um médico pode monitorar a responsividade de um indivíduo (por exemplo, um ser humano) ao tratamento com vetor de ortopoxvírus recombinante da invenção analisando-se a população de célula T-reg no linfonodo de um indivíduo particular. Por exemplo, um médico pode retirar uma amostra de um indivíduo, por exemplo, um indivíduo mamífero (por exemplo, um ser humano) e determinar a quantidade ou densidade de células cancerígenas com o uso de procedimentos estabelecidos, como classificação de célula ativada por fluorescência. Uma constatação que a quantidade de células cancerígenas na amostra diminuiu (por exemplo, em 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou mais) em relação à quantidade de células cancerígenas em uma amostra obtida do indivíduo antes da administração do ortopoxvírus recombinante pode ser uma indicação de que a administração de ortopoxvírus trata de modo eficaz o câncer.
5.5.3. TERAPIA DE COMBINAÇÃO
[674] Os vetores de ortopoxvírus recombinantes descritos no presente documento podem ser administradas com um ou mais agentes adicionais, como um inibidor de ponto de verificação imune. Por exemplo, o vetor de ortopoxvírus recombinante pode ser administrado simultaneamente com, misturado por adição com, ou administrado separadamente de um inibidor de ponto de verificação imune.
Inibidores de ponto de verificação imune exemplificativos para uso em combinação com as composições e métodos da invenção incluem, mas sem limitação, ligante OX40, ligante ICOS, anticorpo anti-CD47 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, anticorpo anti-CD40/CD40L ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, anticorpo anti-Lag3 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, anticorpo anti-CTLA-4 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, anticorpo anti-PD-L1 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, anticorpo anti-PD1 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo e anticorpo anti-Tim-3 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo.
Adicional ou alternativamente, um vetor da invenção pode ser administrado simultaneamente com, misturado por adição com, ou administrado separadamente de uma interleucina (IL). Por exemplo, o vetor de ortopoxvírus recombinante pode ser administrado simultaneamente com, misturado por adição com, ou administrado separadamente de uma interleucina.
Interleucinas exemplificativas para uso em combinação com as composições e métodos da invenção incluem, mas sem limitação, IL-1 alfa, IL-1 beta, IL-2, IL-4, IL-7, IL-10, p35 de IL-12, p40 de IL-12, p70 de IL-12, IL-15, IL-18, IL-21 e IL-23. Adicional ou alternativamente, um vetor da invenção pode ser administrado simultaneamente com, misturado por adição com, ou administrado separadamente de um interferon.
Por exemplo, o vetor de ortopoxvírus recombinante pode ser administrado simultaneamente com, misturado por adição com, ou administrado separadamente de um interferon.
Os interferons exemplificativos para uso em combinação com as composições e métodos da invenção incluem, mas sem limitação, IFN-alfa, IFN- beta, IFN-delta, IFN-épsilon, IFN-tau, IFN-ômega, IFN-zeta e IFN-gama.
Adicional ou alternativamente, um vetor da invenção pode ser administrado simultaneamente com, misturado por adição com ou administrado separadamente de uma proteína de membro de superfamília de TNF.
Por exemplo, o vetor de ortopoxvírus recombinante pode ser administrado simultaneamente com, misturado por adição com, ou administrado separadamente de uma proteína de membro de superfamília de TNF.
Proteínas de membro de superfamília de TNF exemplificativas para uso em combinação com as composições e métodos da invenção incluem, mas sem limitação, TRAIL, ligante Fas, LIGHT (TNFSF-14), TNF-alfa e ligante 4-1BB.
Adicional ou alternativamente, um vetor da invenção pode ser administrado simultaneamente com, misturado por adição com, ou administrado separadamente de uma citocina. Por exemplo, o vetor de ortopoxvírus recombinante pode ser administrado simultaneamente com, misturado por adição com, ou administrado separadamente de uma citocina. Citocinas exemplificativas para uso em combinação com as composições e métodos da invenção incluem, mas sem limitação, GM-CSF, ligante Flt3, ligante CD40, anti-TGF-beta, anti-VEGF-R2 e cGAS (guanil adenilato ciclase).
[675] Adicional ou alternativamente, os inibidores de ponto de verificação imune podem ser expressos no ortopoxvírus em si. Por exemplo, o vetor de ortopoxvírus recombinante pode incluir um transgene que codifica um inibidor de ponto de verificação imune. Inibidores de ponto de verificação imune exemplificativos para expressão pelo ortopoxvírus das composições e métodos da invenção incluem, mas sem limitação, ligante OX40, ligante ICOS, anticorpo anti- CD47 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, anticorpo anti-CD40/CD40L ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, anticorpo anti-Lag3 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, anticorpo anti-CTLA-4 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, anticorpo anti-PD-L1 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, anticorpo anti-PD1 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo e anticorpo anti-Tim-3 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo. Adicional ou alternativamente, as interleucinas podem ser expressas no ortopoxvírus em si. Por exemplo, o vetor de ortopoxvírus recombinante pode incluir um transgene que codifica uma interleucina. Os inibidores de ponto de verificação imune exemplificativos para expressão pelo ortopoxvírus das composições e métodos da invenção incluem, mas sem limitação, IL-1 alfa, IL-1 beta, IL-2, IL-4, IL-7, IL-10, p35 de IL-12, p40 de IL-12, p70 de IL-12, IL-15, IL-18, IL-21 e IL-23. Adicional ou alternativamente, os interferons podem ser expressos no ortopoxvírus em si. Por exemplo, o vetor de ortopoxvírus recombinante pode incluir um transgene que codifica um interferon. Interferons exemplificativos para expressão pelo ortopoxvírus das composições e métodos da invenção incluem, mas sem limitação, IFN-alfa, IFN-beta, IFN-delta, IFN-épsilon, IFN-tau, IFN-ômega, IFN-zeta e IFN- gama. Adicional ou alternativamente, as proteínas de membro de superfamília de
TNF podem ser expressas no ortopoxvírus em si. Por exemplo, o vetor de ortopoxvírus recombinante pode incluir um transgene que codifica uma proteína de membro de superfamília de TNF. Proteínas de membro de superfamília de TNF exemplificativas para expressão pelo ortopoxvírus das composições e métodos das composições e métodos da invenção incluem, mas sem limitação, TRAIL, ligante Fas, LIGHT (TNFSF-14), TNF-alfa e ligante 4-1BB. Adicional ou alternativamente, as citocinas podem ser expressas no ortopoxvírus em si. Por exemplo, o vetor de ortopoxvírus recombinante pode incluir um transgene que codifica uma citocina. Citocinas exemplificativas para expressão pelo ortopoxvírus das composições e métodos da invenção incluem, mas sem limitação, GM-CSF, ligante tirosina quinase relacionado a fms 3 (Flt3), ligante CD40, TGF-beta, VEGF-R2 e c-KIT.
[676] Adicional ou alternativamente, antígenos associados a tumor podem ser expressos no ortopoxvírus em si. Por exemplo, o vetor de ortopoxvírus recombinante pode incluir um transgene que codifica um antígeno associado a tumor. Antígenos associados a tumor exemplificativos para expressão pelo ortopoxvírus das composições e métodos da invenção incluem, mas sem limitação, CD19, CD33, EpCAM, CEA, PSMA, EGFRvIII, CD133, EGFR, CDH19, ENPP3, DLL3, MSLN, ROR1, HER2, HLAA2, EpHA2, EpHA3, MCSP, CSPG4, NG2, RON, FLT3, BCMA, CD20, FAPα, FRα, CA-9, PDGFRα, PDGFRβ, FSP1, S100A4, ADAM12m, RET, MET, FGFR, INSR, NTRK, MAGE-A3, NY-ESO-1, uma ou mais proteínas de papilomavírus humano (HPV), proteínas E6 e E7 de HPV16, proteínas E6 e E7 de HPV18, brachyury ou fosfatase de ácido prostático, ou um ou mais fragmentos dos mesmos. Exemplos adicionais de antígenos associados a tumor para uso em combinação com as composições e métodos descritos no presente documento incluem, mas sem limitação, aqueles listados nas Tabelas 3-30.
[677] Em certas modalidades do método para tratamento descrito no presente documento, o método compreende adicionalmente administrar ao paciente (por exemplo, um paciente mamífero, como um paciente humano) um inibidor de ponto de verificação imune. Em modalidades específicas, o inibidor de ponto de verificação imune é selecionado do grupo que consiste em ligante OX40, ligante ICOS, anticorpo anti-CD47 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, anticorpo anti-CD40/CD40L ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo,
anticorpo anti-Lag3 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, anticorpo anti- CTLA-4 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, anticorpo anti-PD-L1 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, anticorpo anti-PD1 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, e anticorpo anti-Tim-3 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo. Em uma modalidade específica, o inibidor de ponto de verificação imune é um anticorpo anti-PD1 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo ou um anticorpo anti-CTLA-4 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo. Em outra modalidade específica, o inibidor de ponto de verificação imune é um anticorpo anti-PD1 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo. Em outra modalidade específica, o inibidor de ponto de verificação imune é um anticorpo anti- CTLA-4 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo. Em outra modalidade específica, o inibidor de ponto de verificação imune é um anticorpo anti-PD-L1 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo. Em uma modalidade específica, o inibidor de ponto de verificação imune é ipilimumab. Em outra modalidade específica, o inibidor de ponto de verificação imune é tremelimumab. Em outra modalidade específica, o inibidor de ponto de verificação imune é nivolumab. Em outra modalidade específica, o inibidor de ponto de verificação imune é pembrolizumab. Em outra modalidade específica, o inibidor de ponto de verificação imune é cemiplimab. Em outra modalidade específica, o inibidor de ponto de verificação imune é atezolizumab. Em outra modalidade específica, o inibidor de ponto de verificação imune é avelumab. Em outra modalidade específica, o inibidor de ponto de verificação imune é durvalumab.
[678] Em certas modalidades do método para tratamento descrito no presente documento, o método compreende adicionalmente administrar ao paciente (por exemplo, um paciente mamífero, como um paciente humano) uma interleucina. Em modalidades específicas, a interleucina é selecionada do grupo que consiste em IL-1 alfa, IL-1 beta, IL-2, IL-4, IL-7, IL-10, p35 de IL-12, p40 de IL- 12, p70 de IL-12, IL-15, IL-18, IL-21 e IL-23. Em modalidades específicas, a interleucina é selecionada do grupo que consiste em p35 de IL-12, p40 de IL-12 e p70 de IL-12. Em modalidades específicas, a interleucina é ligada à membrana.
[679] Em certas modalidades do método para tratamento descrito no presente documento, o método compreende adicionalmente administrar ao paciente (por exemplo, um paciente mamífero, como um paciente humano) um interferon. Em modalidades específicas, o interferon é selecionado do grupo que consiste em IFN-alfa, IFN-beta, IFN-delta, IFN-épsilon, IFN-tau, IFN-ômega, IFN- zeta e IFN-gama.
[680] Em certas modalidades do método para tratamento descrito no presente documento, o método compreende adicionalmente administrar ao paciente (por exemplo, um paciente mamífero, como um paciente humano) uma citocina. Em modalidades específicas, a citocina é uma proteína de membro de superfamília de TNF. Em uma modalidade específica, a proteína de membro de superfamília de TNF é selecionada do grupo que consiste em TRAIL, ligante Fas, LIGHT (TNFSF-14), TNF-alfa e ligante 4-1BB. Em modalidades específicas, a citocina é selecionada do grupo que consiste em GM-CSF, ligante Flt3, ligante CD40, TGF-beta, VEGF-R2 e cKit. Em uma modalidade específica, a citocina é ligante Flt3.
5.6. KITS
[681] Também são fornecidos no presente documento kits que podem ser usados de acordo com a invenção.
[682] Em um aspecto, é fornecido no presente documento um kit que compreende um ácido nucleico descrito na Seção 5.2.3 e um inserto de pacote que instrui um usuário do kit para expressar o ácido nucleico em uma célula hospedeira.
[683] Em outro aspecto, é fornecido no presente documento um kit que compreende um vírus descrito na Seção 5.2.4 e um inserto de pacote que instrui um usuário do kit para expressar o vírus em uma célula hospedeira.
[684] Em outro aspecto, é fornecido no presente documento um kit que compreende um vírus descrito na Seção 5.2.4 e um inserto de pacote que instrui um usuário para administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz do vírus a um paciente (por exemplo, um paciente mamífero, como um paciente humano) que tem câncer, assim tratando o câncer. Em certas modalidades, o paciente mamífero é um paciente humano. O câncer a ser tratado pode ser um câncer descrito na Seção
5.5.
[685] Em modalidades preferenciais, o ácido nucleico ou o vírus é armazenado em um ou mais recipientes adequados para armazenar o ácido nucleico ou o vírus. Em certas modalidades, os kits fornecidos no presente documento compreendem adicionalmente controles adequados para seu uso pretendido.
5.7. MODALIDADES ILUSTRATIVAS
5.7.1. CONJUNTO 1
1. Um ácido nucleico que compreende um genoma de ortopoxvírus recombinante, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 2 genes, cada um independentemente selecionado do grupo que consiste em F1L, N1L, B14R, M2L, K1L, K7R, C2L, N2L, M1L, K2L, K3L, F3L, B16R, B19R, K4L, K5L, K6L, F2L, B15R, B17L, B18R e B20R.
2. O ácido nucleico da modalidade 1, em que a dita deleção compreende pelo menos 3 genes, cada um independentemente selecionado do grupo que consiste em F1L, N1L, B14R, M2L, K1L, K7R, C2L, N2L, M1L, K2L, K3L, F3L, B16R, B19R, K4L, K5L, K6L, F2L, B15R, B17L, B18R e B20R.
3. O ácido nucleico da modalidade 2, em que a dita deleção compreende pelo menos 4 genes, cada um independentemente selecionado do grupo que consiste em F1L, N1L, B14R, M2L, K1L, K7R, C2L, N2L, M1L, K2L, K3L, F3L, B16R, B19R, K4L, K5L, K6L, F2L, B15R, B17L, B18R e B20R.
4. O ácido nucleico da modalidade 3, em que a dita deleção compreende pelo menos 5 genes, cada um independentemente selecionado do grupo que consiste em F1L, N1L, B14R, M2L, K1L, K7R, C2L, N2L, M1L, K2L, K3L, F3L, B16R, B19R, K4L, K5L, K6L, F2L, B15R, B17L, B18R e B20R.
5. O ácido nucleico da modalidade 4, em que a dita deleção compreende pelo menos 6 genes, cada um independentemente selecionado do grupo que consiste em F1L, N1L, B14R, M2L, K1L, K7R, C2L, N2L, M1L, K2L, K3L, F3L, B16R, B19R, K4L, K5L, K6L, F2L, B15R, B17L, B18R e B20R.
6. O ácido nucleico da modalidade 5, em que a dita deleção compreende pelo menos 7 genes, cada um independentemente selecionado do grupo que consiste em F1L, N1L, B14R, M2L, K1L, K7R, C2L, N2L, M1L, K2L, K3L, F3L, B16R, B19R, K4L, K5L, K6L, F2L, B15R, B17L, B18R e B20R.
7. O ácido nucleico da modalidade 6, em que a dita deleção compreende pelo menos 8 genes, cada um independentemente selecionado do grupo que consiste em F1L, N1L, B14R, M2L, K1L, K7R, C2L, N2L, M1L, K2L, K3L, F3L, B16R, B19R, K4L, K5L, K6L, F2L, B15R, B17L, B18R e B20R.
8. O ácido nucleico da modalidade 7, em que a dita deleção compreende pelo menos 9 genes, cada um independentemente selecionado do grupo que consiste em F1L, N1L, B14R, M2L, K1L, K7R, C2L, N2L, M1L, K2L, K3L, F3L, B16R, B19R, K4L, K5L, K6L, F2L, B15R, B17L, B18R e B20R.
9. O ácido nucleico da modalidade 8, em que a dita deleção compreende pelo menos 10 genes, cada um independentemente selecionado do grupo que consiste em F1L, N1L, B14R, M2L, K1L, K7R, C2L, N2L, M1L, K2L, K3L, F3L, B16R, B19R, K4L, K5L, K6L, F2L, B15R, B17L, B18R e B20R.
10. O ácido nucleico da modalidade 9, em que a dita deleção compreende pelo menos 11 genes, cada um independentemente selecionado do grupo que consiste em F1L, N1L, B14R, M2L, K1L, K7R, C2L, N2L, M1L, K2L, K3L, F3L, B16R, B19R, K4L, K5L, K6L, F2L, B15R, B17L, B18R e B20R.
11. O ácido nucleico da modalidade 10, em que a dita deleção compreende pelo menos 12 genes, cada um independentemente selecionado do grupo que consiste em F1L, N1L, B14R, M2L, K1L, K7R, C2L, N2L, M1L, K2L, K3L, F3L, B16R, B19R, K4L, K5L, K6L, F2L, B15R, B17L, B18R e B20R.
12. O ácido nucleico da modalidade 11, em que a dita deleção compreende pelo menos 13 genes, cada um independentemente selecionado do grupo que consiste em F1L, N1L, B14R, M2L, K1L, K7R, C2L, N2L, M1L, K2L, K3L, F3L, B16R, B19R, K4L, K5L, K6L, F2L, B15R, B17L, B18R e B20R.
13. O ácido nucleico da modalidade 12, em que a dita deleção compreende pelo menos 14 genes, cada um independentemente selecionado do grupo que consiste em F1L, N1L, B14R, M2L, K1L, K7R, C2L, N2L, M1L, K2L, K3L, F3L, B16R, B19R, K4L, K5L, K6L, F2L, B15R, B17L, B18R e B20R.
14. O ácido nucleico da modalidade 13, em que a dita deleção compreende pelo menos 15 genes, cada um independentemente selecionado do grupo que consiste em F1L, N1L, B14R, M2L, K1L, K7R, C2L, N2L, M1L, K2L, K3L, F3L, B16R, B19R, K4L, K5L, K6L, F2L, B15R, B17L, B18R e B20R.
15. O ácido nucleico da modalidade 14, em que a dita deleção compreende pelo menos 16 genes, cada um independentemente selecionado do grupo que consiste em F1L, N1L, B14R, M2L, K1L, K7R, C2L, N2L, M1L, K2L, K3L, F3L, B16R, B19R, K4L, K5L, K6L, F2L, B15R, B17L, B18R e B20R.
16. O ácido nucleico da modalidade 15, em que a dita deleção compreende pelo menos 17 genes, cada um independentemente selecionado do grupo que consiste em F1L, N1L, B14R, M2L, K1L, K7R, C2L, N2L, M1L, K2L, K3L, F3L, B16R, B19R, K4L, K5L, K6L, F2L, B15R, B17L, B18R e B20R.
17. O ácido nucleico da modalidade 16, em que a dita deleção compreende pelo menos 18 genes, cada um independentemente selecionado do grupo que consiste em F1L, N1L, B14R, M2L, K1L, K7R, C2L, N2L, M1L, K2L, K3L, F3L, B16R, B19R, K4L, K5L, K6L, F2L, B15R, B17L, B18R e B20R.
18. O ácido nucleico da modalidade 17, em que a dita deleção compreende pelo menos 19 genes, cada um independentemente selecionado do grupo que consiste em F1L, N1L, B14R, M2L, K1L, K7R, C2L, N2L, M1L, K2L, K3L, F3L, B16R, B19R, K4L, K5L, K6L, F2L, B15R, B17L, B18R e B20R.
19. O ácido nucleico da modalidade 18, em que a dita deleção compreende pelo menos 20 genes, cada um independentemente selecionado do grupo que consiste em F1L, N1L, B14R, M2L, K1L, K7R, C2L, N2L, M1L, K2L, K3L, F3L, B16R, B19R, K4L, K5L, K6L, F2L, B15R, B17L, B18R e B20R.
20. O ácido nucleico da modalidade 19, em que a dita deleção compreende pelo menos 21 genes, cada um independentemente selecionado do grupo que consiste em F1L, N1L, B14R, M2L, K1L, K7R, C2L, N2L, M1L, K2L, K3L, F3L, B16R, B19R, K4L, K5L, K6L, F2L, B15R, B17L, B18R e B20R.
21. O ácido nucleico da modalidade 20, em que a dita deleção compreende cada um dos ditos genes F1L, N1L, B14R, M2L, K1L, K7R, C2L, N2L, M1L, K2L, K3L, F3L, B16R, B19R, K4L, K5L, K6L, F2L, B15R, B17L, B18R e B20R.
22. Um ácido nucleico que compreende um genoma de ortopoxvírus recombinante, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 1 gene selecionado do grupo que consiste em B14R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R.
23. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-22, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 1 gene selecionado do grupo que consiste em B14R, B16R, B17L, B18R, B19R e
B20R.
24. O ácido nucleico da modalidade 23, em que a dita deleção compreende pelo menos 2 genes, cada um independentemente selecionado do grupo que consiste em B14R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R.
25. O ácido nucleico da modalidade 24, em que a dita deleção compreende pelo menos 3 genes, cada um independentemente selecionado do grupo que consiste em B14R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R.
26. O ácido nucleico da modalidade 25, em que a dita deleção compreende pelo menos 4 genes, cada um independentemente selecionado do grupo que consiste em B14R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R.
27. O ácido nucleico da modalidade 26, em que a dita deleção compreende pelo menos 5 genes, cada um independentemente selecionado do grupo que consiste em B14R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R.
28. O ácido nucleico da modalidade 27, em que a dita deleção compreende cada um dos ditos genes B14R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R.
29. Um ácido nucleico que compreende um genoma de ortopoxvírus recombinante, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 1 gene selecionado do grupo que consiste em C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, K1L, K2L, K3L, K4L, K7R e F2L.
30. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-29, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 1 gene selecionado do grupo que consiste em C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, K1L, K2L, K3L, K4L, K7R e F2L.
31. O ácido nucleico da modalidade 30, em que a dita deleção compreende pelo menos 2 genes, cada um independentemente selecionado do grupo que consiste em C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, K1L, K2L, K3L, K4L, K7R e F2L.
32. O ácido nucleico da modalidade 31, em que a dita deleção compreende pelo menos 3 genes, cada um independentemente selecionado do grupo que consiste em C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, K1L, K2L, K3L, K4L, K7R e F2L.
33. O ácido nucleico da modalidade 32, em que a dita deleção compreende pelo menos 4 genes, cada um independentemente selecionado do grupo que consiste em C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, K1L, K2L, K3L, K4L, K7R e F2L.
34. O ácido nucleico da modalidade 33, em que a dita deleção compreende pelo menos 5 genes, cada um independentemente selecionado do grupo que consiste em C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, K1L, K2L, K3L, K4L, K7R e F2L.
35. O ácido nucleico da modalidade 34, em que a dita deleção compreende pelo menos 6 genes, cada um independentemente selecionado do grupo que consiste em C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, K1L, K2L, K3L, K4L, K7R e F2L.
36. O ácido nucleico da modalidade 35, em que a dita deleção compreende pelo menos 7 genes, cada um independentemente selecionado do grupo que consiste em C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, K1L, K2L, K3L, K4L, K7R e F2L.
37. O ácido nucleico da modalidade 36, em que a dita deleção compreende pelo menos 8 genes, cada um independentemente selecionado do grupo que consiste em C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, K1L, K2L, K3L, K4L, K7R e F2L.
38. O ácido nucleico da modalidade 37, em que a dita deleção compreende pelo menos 9 genes, cada um independentemente selecionado do grupo que consiste em C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, K1L, K2L, K3L, K4L, K7R e F2L.
39. O ácido nucleico da modalidade 38, em que a dita deleção compreende pelo menos 10 genes, cada um independentemente selecionado do grupo que consiste em C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, K1L, K2L, K3L, K4L, K7R e F2L.
40. O ácido nucleico da modalidade 39, em que a dita deleção compreende cada um dos ditos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, K1L, K2L, K3L, K4L, K7R e F2L.
41. Um ácido nucleico que compreende um genoma de ortopoxvírus recombinante, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 1 gene que codifica um inibidor de caspase 9.
42. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-41, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 1 gene que codifica um inibidor de caspase 9.
43. O ácido nucleico da modalidade 41 ou 42, em que o dito gene que codifica um inibidor de caspase 9 é F1L.
44. Um ácido nucleico que compreende um genoma de ortopoxvírus recombinante, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 1 gene que codifica um inibidor de BCL-2.
45. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-44, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 1 gene que codifica um inibidor de BCL-2.
46. O ácido nucleico da modalidade 44 ou 45, em que o dito gene que codifica um inibidor de BCL-2 é N1L.
47. Um ácido nucleico que compreende um genoma de ortopoxvírus recombinante, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 1 gene que codifica uma dUTPase.
48. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-47, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 1 gene que codifica uma dUTPase.
49. O ácido nucleico da modalidade 46 ou 47, em que o dito gene que codifica uma dUTPase é F2L.
50. Um ácido nucleico que compreende um genoma de ortopoxvírus recombinante, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 1 gene que codifica uma glicoproteína secretada do tipo IFN alfa/receptor beta.
51. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-50, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 1 gene que codifica uma glicoproteína secretada do tipo IFN alfa/receptor beta.
52. O ácido nucleico da modalidade 50 ou 51, em que o dito gene que codifica uma glicoproteína secretada do tipo IFN alfa/receptor beta é B19R.
53. Um ácido nucleico que compreende um genoma de ortopoxvírus recombinante, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 1 gene que codifica um inibidor de IL-1-beta.
54. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-53, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 1 gene que codifica um inibidor de IL-1-beta.
55. O ácido nucleico da modalidade 53 ou 54, em que o dito gene que codifica um inibidor de IL-1-beta é B16R.
56. Um ácido nucleico que compreende um genoma de ortopoxvírus recombinante, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 1 gene que codifica uma fosfolipase D.
57. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-56, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 1 gene que codifica uma fosfolipase D.
58. O ácido nucleico da modalidade 56 ou 57, em que o dito gene que codifica uma fosfolipase D é K4L.
59. Um ácido nucleico que compreende um genoma de ortopoxvírus recombinante, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 1 gene que codifica um inibidor de PKR.
60. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-59, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 1 gene que codifica um inibidor de PKR.
61. O ácido nucleico da modalidade 59 ou 60, em que o dito gene que codifica um inibidor de PKR é K3L.
62. Um ácido nucleico que compreende um genoma de ortopoxvírus recombinante, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 1 gene que codifica um inibidor de serina protease.
63. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-62, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 1 gene que codifica um inibidor de serina protease.
64. O ácido nucleico da modalidade 62 ou 63, em que o dito gene que codifica um inibidor de serina protease é K2L.
65. Um ácido nucleico que compreende um genoma de ortopoxvírus recombinante, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 1 gene que codifica um inibidor de sinalização de TLR.
66. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-65, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 1 gene que codifica um inibidor de sinalização de TLR.
67. O ácido nucleico da modalidade 65 ou 66, em que o dito gene que codifica um inibidor de sinalização de TLR é N2L.
68. Um ácido nucleico que compreende um genoma de ortopoxvírus recombinante, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 1 gene que codifica uma proteína do tipo Kelch.
69. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-68, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 1 gene que codifica uma proteína do tipo Kelch.
70. O ácido nucleico da modalidade 69, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 2 genes que codificam, cada um, uma proteína do tipo Kelch.
71. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 68-70, em que os ditos genes que codificam uma proteína do tipo Kelch são, independentemente, selecionados do grupo que consiste em F3L e C2L.
72. Um ácido nucleico que compreende a genoma de ortopoxvírus recombinante, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 1 gene que codifica uma monoglicerídeo lipase.
73. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-72, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 1 gene que codifica uma monoglicerídeo lipase.
74. O ácido nucleico da modalidade 73, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 2 genes que codificam uma monoglicerídeo lipase.
75. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 72-74, em que os ditos genes que codificam uma monoglicerídeo lipase são, independentemente, selecionados do grupo que consiste em K5L e K6L.
76. Um ácido nucleico que compreende um genoma de ortopoxvírus recombinante, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 1 gene que codifica um inibidor de NF-κB.
77. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-76, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 1 gene que codifica um inibidor de NF-κB.
78. O ácido nucleico da modalidade 77, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 2 genes que codificam, cada um, um inibidor de NF-κB.
79. O ácido nucleico da modalidade 78, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 3 genes que codificam, cada um, um inibidor de NF-κB.
80. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 76-79, em que os ditos genes que codificam um inibidor de NF-κB são, independentemente, selecionados do grupo que consiste em K7R, K1L e M2L.
81. Um ácido nucleico que compreende um genoma de ortopoxvírus recombinante, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 1 gene que codifica uma proteína de repetição de anquirina.
82. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-81, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 1 gene que codifica uma proteína de repetição de anquirina.
83. O ácido nucleico da modalidade 82, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 2 genes que codificam, cada um, uma proteína de repetição de anquirina.
84. O ácido nucleico da modalidade 83, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 3 genes que codificam, cada um, uma proteína de repetição de anquirina.
85. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 81-84, em que os ditos genes que codificam uma proteína de repetição de anquirina são, independentemente, selecionados do grupo que consiste em B18R, B20R e M1L.
86. Um ácido nucleico que compreende um genoma de ortopoxvírus recombinante, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 1 gene selecionado do grupo que consiste em B15R, B17R e B14R.
87. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-86, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 1 gene selecionado do grupo que consiste em B15R, B17R e B14R.
88. O ácido nucleico da modalidade 87, em que a dita deleção compreende pelo menos 2 genes, cada um independentemente selecionado do grupo que consiste em B15R, B17R e B14R.
89. O ácido nucleico da modalidade 88, em que a dita deleção compreende cada um dos ditos genes B15R, B17R e B14R.
90. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-89, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 1 gene selecionado do grupo de genes ITR que consiste em B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R e B29R.
91. O ácido nucleico da modalidade 90, em que a dita deleção compreende pelo menos 2 genes, cada um independentemente selecionado do dito grupo de genes ITR que consiste em B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R e B29R.
92. O ácido nucleico da modalidade 91, em que a dita deleção compreende pelo menos 3 genes, cada um independentemente selecionado do dito grupo de genes ITR que consiste em B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R e B29R.
93. O ácido nucleico da modalidade 92, em que a dita deleção compreende pelo menos 4 genes, cada um independentemente selecionado do dito grupo de genes ITR que consiste em B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R e B29R.
94. O ácido nucleico da modalidade 93, em que a dita deleção compreende pelo menos 5 genes, cada um independentemente selecionado do dito grupo de genes ITR que consiste em B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R e B29R.
95. O ácido nucleico da modalidade 94, em que a dita deleção compreende pelo menos 6 genes, cada um independentemente selecionado do dito grupo de genes ITR que consiste em B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R e B29R.
96. O ácido nucleico da modalidade 95, em que a dita deleção compreende pelo menos 7 genes, cada um independentemente selecionado do dito grupo de genes ITR que consiste em B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R e B29R.
97. O ácido nucleico da modalidade 96, em que a dita deleção compreende pelo menos 8 genes, cada um independentemente selecionado do dito grupo de genes ITR que consiste em B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R e B29R.
98. O ácido nucleico da modalidade 97, em que a dita deleção compreende cada um dos ditos genes B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R e B29R.
99.
100.
102. O ácido nucleico da modalidade 101, em que o dito vírus vaccinia é uma cepa selecionada do grupo que consiste em Copenhagen, Western Reserve, Wyeth, Lister, EM63, ACAM2000, LC16m8, CV-1, vaccinia Ankara modificado (MVA), Dairen I, GLV-1h68, IHD-J, L-IVP, LC16m8, LC16mO, Tashkent, Tian Tan e WAU86/88-1.
103. O ácido nucleico da modalidade 101, em que o dito vírus vaccinia é uma cepa selecionada do grupo que consiste em Copenhagen, Western Reserve, Tian Tan, Wyeth e Lister.
104. O ácido nucleico da modalidade 101, em que o dito vírus vaccinia é um vírus vaccinia de cepa Copenhagen.
105. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-104, em que cada uma das ditas deleções é uma deleção do polinucleotídeo inteiro que codifica o gene correspondente.
106. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-104, em que cada uma das ditas deleções é uma deleção de uma porção do polinucleotídeo que codifica o gene correspondente, e em que a dita deleção é suficiente para tornar o dito gene não funcional mediante introdução em uma célula hospedeira.
107. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-106, em que o dito ácido nucleico compreende adicionalmente um transgene que codifica um antígeno associado a tumor.
108. O ácido nucleico da modalidade 107, em que o dito antígeno associado a tumor é um antígeno associado a tumor listado em qualquer uma das Tabelas 3-
30.
109. O ácido nucleico da modalidade 107, em que o dito antígeno associado a tumor é um antígeno associado a tumor selecionado do grupo que consiste em CD19, CD33, EpCAM, CEA, PSMA, EGFRvIII, CD133, EGFR, CDH19, ENPP3,
DLL3, MSLN, ROR1, HER2, HLAA2, EpHA2, EpHA3, MCSP, CSPG4, NG2, RON, FLT3, BCMA, CD20, FAPα, FRα, CA-9, PDGFRα, PDGFRβ, FSP1, S100A4, ADAM12m, RET, MET, FGFR, INSR e NTRK.
110. O ácido nucleico da modalidade 107, em que o dito antígeno associado a tumor compreende MAGE-A3, ou um ou mais fragmentos dos mesmos.
111. O ácido nucleico da modalidade 107, em que o dito antígeno associado a tumor compreende NY-ESO-1 ou um ou mais fragmentos do mesmo.
112. O ácido nucleico da modalidade 107, em que o dito antígeno associado a tumor compreende uma ou mais proteínas de papilomavírus humano (HPV) ou fragmentos das mesmas.
113. O ácido nucleico da modalidade 107, em que o dito antígeno associado a tumor compreende (i) proteínas E6 e E7, ou fragmentos das mesmas, de HPV16 e (ii) proteínas E6 e E7, ou fragmentos das mesmas, de HPV18.
114. O ácido nucleico da modalidade 107, em que o dito antígeno associado a tumor compreende brachyury ou um ou mais fragmentos do mesmo.
115. O ácido nucleico da modalidade 107, em que o dito antígeno associado a tumor compreende fosfatase de ácido prostático, ou um ou mais fragmentos da mesma.
116. Um método para produzir o ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 107-115, em que o dito método compreende: a. introduzir um sítio de inserção de transposon no ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-106; b. contatar o ácido nucleico formado (a) com um elemento transponível que compreende um gene que codifica o dito antígeno associado a tumor, assim introduzindo o dito gene no dito ácido nucleico; e c. recuperar o ácido nucleico formado em (b).
117. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-115, em que o dito ácido nucleico compreende adicionalmente um transgene que codifica um inibidor de ponto de verificação imune.
118. O ácido nucleico da modalidade 117, em que o dito inibidor de ponto de verificação imune é selecionado do grupo que consiste em ligante OX40, ligante ICOS, anticorpo anti-CD47 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo,
anticorpo anti-CD40/CD40L ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, anticorpo anti-Lag3 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, anticorpo anti- CTLA-4 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, anticorpo anti-PD-L1 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, anticorpo anti-PD1 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, e anticorpo anti-Tim-3 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo.
119. O ácido nucleico da modalidade 117, em que o dito inibidor de ponto de verificação imune é um anticorpo anti-PD-L1 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo ou um anticorpo anti-CTLA-4 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo.
120. O ácido nucleico da modalidade 117, em que o dito inibidor de ponto de verificação imune é um anticorpo anti-PD1 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo.
121. O ácido nucleico da modalidade 117, em que o dito inibidor de ponto de verificação imune é um anticorpo anti-CTLA-4 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo.
122. Um método para produzir o ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 117-121, em que o dito método compreende: a. introduzir um sítio de inserção de transposon no ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-116; b. contatar o ácido nucleico formado (a) com um elemento transponível que compreende um gene que codifica o dito inibidor de ponto de verificação imune, assim introduzindo o dito gene no dito ácido nucleico; e c. recuperar o ácido nucleico formado em (b).
123. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-115 e 117-121, em que o dito ácido nucleico compreende adicionalmente um transgene que codifica uma interleucina (IL).
124. O ácido nucleico da modalidade 123, em que a dita interleucina é selecionada do grupo que consiste em IL-1 alfa, IL-1 beta, IL-2, IL-4, IL-7, IL-10, p35 de IL-12, p40 de IL-12, p70 de IL-12, IL-15, IL-18, IL-21 e IL-23.
125. O ácido nucleico da modalidade 123, em que a dita interleucina é selecionada do grupo que consiste em p35 de IL-12, p40 de IL-12 e p70 de IL-12.
126. O ácido nucleico da modalidade 125, em que a dita interleucina é ligada à membrana.
127. Um método para produzir o ácido nucleico de uma das modalidades 123-126, em que o dito método compreende: a. introduzir um sítio de inserção de transposon no ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-115 e 117-121; b. contatar o ácido nucleico formado (a) com um elemento transponível que compreende um gene que codifica a dita interleucina, assim introduzindo o dito gene no dito ácido nucleico; e c. recuperar o ácido nucleico formado em (b).
128. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-115, 117-121, e 123-126, em que o dito ácido nucleico compreende adicionalmente um transgene que codifica um interferon (IFN).
129. O ácido nucleico da modalidade 128, em que o dito interferon é selecionado do grupo que consiste em IFN-alfa, IFN-beta, IFN-delta, IFN-épsilon, IFN-tau, IFN-ômega, IFN-zeta e IFN-gama.
130. Um método para produzir o ácido nucleico da modalidade 128 ou 129, em que o dito método compreende: a. introduzir um sítio de inserção de transposon no ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-115, 117-121 e 123-126; b. contatar o ácido nucleico formado (a) com um elemento transponível que compreende um gene que codifica o dito interferon, assim introduzindo o dito gene no dito ácido nucleico; e c. recuperar o ácido nucleico formado em (b).
131. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-115, 117-121, 123-126, 128 e 129, em que o dito ácido nucleico compreende adicionalmente um transgene que codifica uma proteína de membro de superfamília de TNF.
132. O ácido nucleico da modalidade 131, em que a dita proteína de membro de superfamília de TNF é selecionada do grupo que consiste em TRAIL, ligante Fas, LIGHT (TNFSF-14), TNF-alfa e ligante 4-1BB.
133. Um método para produzir o ácido nucleico da modalidade 131 ou 132,
em que o dito método compreende: a. introduzir um sítio de inserção de transposon no ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-115, 117-121, 123-126, 128 e 129; b. contatar o ácido nucleico formado (a) com um elemento transponível que compreende um gene que codifica a dita proteína de membro de superfamília de TNF, assim introduzindo o dito gene no dito ácido nucleico; e c. recuperar o ácido nucleico formado em (b).
134. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-115, 117-121, 123-126, 128, 129, 131 e 132, em que o dito ácido nucleico compreende adicionalmente um transgene que codifica uma citocina.
135. O ácido nucleico da modalidade 134, em que a dita citocina é selecionada do grupo que consiste em GM-CSF, ligante Flt3, ligante CD40, anti- TGF-beta, anti-VEGF-R2 e cGAS (guanil adenilato ciclase).
136. O ácido nucleico da modalidade 134, em que a dita citocina é ligante Flt3.
137. Um método para produzir o ácido nucleico da modalidade 135 ou 136, em que o dito método compreende: a. introduzir um sítio de inserção de transposon no ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-115, 117-121, 123-126, 128, 129, 131 e 132; b. contatar o ácido nucleico formado (a) com um elemento transponível que compreende um gene que codifica a dita citocina, assim introduzindo o dito gene no dito ácido nucleico; e c. recuperar o ácido nucleico formado em (b).
138. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-115, 117-121, 123-126, 128, 129, 131, 132 e 134-136, em que o dito ácido nucleico compreende adicionalmente um transgene que codifica microRNA (miRNA).
139. O ácido nucleico da modalidade 138, em que o dito miRNA é mir-6.
140. Um método para produzir o ácido nucleico da modalidade 138 ou 139, em que o dito método compreende: a. introduzir um sítio de inserção de transposon no ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-115, 117-121, 123-126, 128, 129, 131, 132 e 134- 136;
b. contatar o ácido nucleico formado (a) com um elemento transponível que compreende um gene que codifica o dito miRNA, assim introduzindo o dito gene no dito ácido nucleico; e c. recuperar o ácido nucleico formado em (b).
141. Um vetor de ortopoxvírus recombinante que compreende uma deleção de pelo menos 2 genes, cada um independentemente selecionado do grupo que consiste em F1L, N1L, B14R, M2L, K1L, K7R, C2L, N2L, M1L, K2L, K3L, F3L, B16R, B19R, K4L, K5L, K6L, F2L, B15R, B17L, B18R e B20R.
142. O vetor de ortopoxvírus recombinante da modalidade 141, em que a dita deleção compreende pelo menos 3 genes, cada um independentemente selecionado do grupo que consiste em F1L, N1L, B14R, M2L, K1L, K7R, C2L, N2L, M1L, K2L, K3L, F3L, B16R, B19R, K4L, K5L, K6L, F2L, B15R, B17L, B18R e B20R.
143. O vetor de ortopoxvírus recombinante da modalidade 142, em que a dita deleção compreende pelo menos 4 genes, cada um independentemente selecionado do grupo que consiste em F1L, N1L, B14R, M2L, K1L, K7R, C2L, N2L, M1L, K2L, K3L, F3L, B16R, B19R, K4L, K5L, K6L, F2L, B15R, B17L, B18R e B20R.
144. O vetor de ortopoxvírus recombinante da modalidade 143, em que a dita deleção compreende pelo menos 5 genes, cada um independentemente selecionado do grupo que consiste em F1L, N1L, B14R, M2L, K1L, K7R, C2L, N2L, M1L, K2L, K3L, F3L, B16R, B19R, K4L, K5L, K6L, F2L, B15R, B17L, B18R e B20R.
145. O vetor de ortopoxvírus recombinante da modalidade 144, em que a dita deleção compreende pelo menos 6 genes, cada um independentemente selecionado do grupo que consiste em F1L, N1L, B14R, M2L, K1L, K7R, C2L, N2L, M1L, K2L, K3L, F3L, B16R, B19R, K4L, K5L, K6L, F2L, B15R, B17L, B18R e B20R.
146. O vetor de ortopoxvírus recombinante da modalidade 145, em que a dita deleção compreende pelo menos 7 genes, cada um independentemente selecionado do grupo que consiste em F1L, N1L, B14R, M2L, K1L, K7R, C2L, N2L, M1L, K2L, K3L, F3L, B16R, B19R, K4L, K5L, K6L, F2L, B15R, B17L, B18R e B20R.
147. O vetor de ortopoxvírus recombinante da modalidade 146, em que a dita deleção compreende pelo menos 8 genes, cada um independentemente selecionado do grupo que consiste em F1L, N1L, B14R, M2L, K1L, K7R, C2L, N2L, M1L, K2L, K3L, F3L, B16R, B19R, K4L, K5L, K6L, F2L, B15R, B17L, B18R e B20R.
148. O vetor de ortopoxvírus recombinante da modalidade 147, em que a dita deleção compreende pelo menos 9 genes, cada um independentemente selecionado do grupo que consiste em F1L, N1L, B14R, M2L, K1L, K7R, C2L, N2L, M1L, K2L, K3L, F3L, B16R, B19R, K4L, K5L, K6L, F2L, B15R, B17L, B18R e B20R.
149. O vetor de ortopoxvírus recombinante da modalidade 148, em que a dita deleção compreende pelo menos 10 genes, cada um independentemente selecionado do grupo que consiste em F1L, N1L, B14R, M2L, K1L, K7R, C2L, N2L, M1L, K2L, K3L, F3L, B16R, B19R, K4L, K5L, K6L, F2L, B15R, B17L, B18R e B20R.
150. O vetor de ortopoxvírus recombinante da modalidade 149, em que a dita deleção compreende pelo menos 11 genes, cada um independentemente selecionado do grupo que consiste em F1L, N1L, B14R, M2L, K1L, K7R, C2L, N2L, M1L, K2L, K3L, F3L, B16R, B19R, K4L, K5L, K6L, F2L, B15R, B17L, B18R e B20R.
151. O vetor de ortopoxvírus recombinante da modalidade 150, em que a dita deleção compreende pelo menos 12 genes, cada um independentemente selecionado do grupo que consiste em F1L, N1L, B14R, M2L, K1L, K7R, C2L, N2L, M1L, K2L, K3L, F3L, B16R, B19R, K4L, K5L, K6L, F2L, B15R, B17L, B18R e B20R.
152. O vetor de ortopoxvírus recombinante da modalidade 151, em que a dita deleção compreende pelo menos 13 genes, cada um independentemente selecionado do grupo que consiste em F1L, N1L, B14R, M2L, K1L, K7R, C2L, N2L, M1L, K2L, K3L, F3L, B16R, B19R, K4L, K5L, K6L, F2L, B15R, B17L, B18R e B20R.
153. O vetor de ortopoxvírus recombinante da modalidade 152, em que a dita deleção compreende pelo menos 14 genes, cada um independentemente selecionado do grupo que consiste em F1L, N1L, B14R, M2L, K1L, K7R, C2L, N2L, M1L, K2L, K3L, F3L, B16R, B19R, K4L, K5L, K6L, F2L, B15R, B17L, B18R e B20R.
154. O vetor de ortopoxvírus recombinante da modalidade 153, em que a dita deleção compreende pelo menos 15 genes, cada um independentemente selecionado do grupo que consiste em F1L, N1L, B14R, M2L, K1L, K7R, C2L, N2L, M1L, K2L, K3L, F3L, B16R, B19R, K4L, K5L, K6L, F2L, B15R, B17L, B18R e B20R.
155. O vetor de ortopoxvírus recombinante da modalidade 154, em que a dita deleção compreende pelo menos 16 genes, cada um independentemente selecionado do grupo que consiste em F1L, N1L, B14R, M2L, K1L, K7R, C2L, N2L, M1L, K2L, K3L, F3L, B16R, B19R, K4L, K5L, K6L, F2L, B15R, B17L, B18R e B20R.
156. O vetor de ortopoxvírus recombinante da modalidade 155, em que a dita deleção compreende pelo menos 17 genes, cada um independentemente selecionado do grupo que consiste em F1L, N1L, B14R, M2L, K1L, K7R, C2L, N2L, M1L, K2L, K3L, F3L, B16R, B19R, K4L, K5L, K6L, F2L, B15R, B17L, B18R e B20R.
157. O vetor de ortopoxvírus recombinante da modalidade 156, em que a dita deleção compreende pelo menos 18 genes, cada um independentemente selecionado do grupo que consiste em F1L, N1L, B14R, M2L, K1L, K7R, C2L, N2L, M1L, K2L, K3L, F3L, B16R, B19R, K4L, K5L, K6L, F2L, B15R, B17L, B18R e B20R.
158. O vetor de ortopoxvírus recombinante da modalidade 157, em que a dita deleção compreende pelo menos 19 genes, cada um independentemente selecionado do grupo que consiste em F1L, N1L, B14R, M2L, K1L, K7R, C2L, N2L, M1L, K2L, K3L, F3L, B16R, B19R, K4L, K5L, K6L, F2L, B15R, B17L, B18R e B20R.
159. O vetor de ortopoxvírus recombinante da modalidade 158, em que a dita deleção compreende pelo menos 20 genes, cada um independentemente selecionado do grupo que consiste em F1L, N1L, B14R, M2L, K1L, K7R, C2L, N2L, M1L, K2L, K3L, F3L, B16R, B19R, K4L, K5L, K6L, F2L, B15R, B17L, B18R e B20R.
160. O vetor de ortopoxvírus recombinante da modalidade 159, em que a dita deleção compreende pelo menos 21 genes, cada um independentemente selecionado do grupo que consiste em F1L, N1L, B14R, M2L, K1L, K7R, C2L, N2L, M1L, K2L, K3L, F3L, B16R, B19R, K4L, K5L, K6L, F2L, B15R, B17L, B18R e B20R.
161. O vetor de ortopoxvírus recombinante da modalidade 160, em que a dita deleção compreende cada um dos ditos genes F1L, N1L, B14R, M2L, K1L, K7R, C2L, N2L, M1L, K2L, K3L, F3L, B16R, B19R, K4L, K5L, K6L, F2L, B15R, B17L, B18R e B20R.
162. Um vetor de ortopoxvírus recombinante que compreende uma deleção de pelo menos 1 gene selecionado do grupo que consiste em B14R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R.
163. O vetor de ortopoxvírus recombinante de qualquer uma das modalidades 141-162, em que o dito vetor compreende uma deleção de pelo menos 1 gene selecionado do grupo que consiste em B14R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R.
164. O vetor da modalidade 163, em que a dita deleção compreende pelo menos 2 genes, cada um independentemente selecionado do grupo que consiste em B14R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R.
165. O vetor da modalidade 164, em que a dita deleção compreende pelo menos 3 genes, cada um independentemente selecionado do grupo que consiste em B14R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R.
166. O vetor da modalidade 165, em que a dita deleção compreende pelo menos 4 genes, cada um independentemente selecionado do grupo que consiste em B14R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R.
167. O vetor da modalidade 166, em que a dita deleção compreende pelo menos 5 genes, cada um independentemente selecionado do grupo que consiste em B14R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R.
168. O vetor da modalidade 167, em que a dita deleção compreende cada um de B14R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R.
169. Um vetor de ortopoxvírus recombinante que compreende uma deleção de pelo menos 1 gene selecionado do grupo que consiste em C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, K1L, K2L, K3L, K4L, K7R e F2L.
170. O vetor de ortopoxvírus recombinante de qualquer uma das modalidades 141-169, em que o dito vetor compreende uma deleção de pelo menos 1 gene selecionado do grupo que consiste em C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, K1L, K2L, K3L, K4L, K7R e F2L.
171. O vetor da modalidade 170, em que a dita deleção compreende pelo menos 2 genes, cada um independentemente selecionado do grupo que consiste em C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, K1L, K2L, K3L, K4L, K7R e F2L.
172. O vetor da modalidade 171, em que a dita deleção compreende pelo menos 3 genes, cada um independentemente selecionado do grupo que consiste em C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, K1L, K2L, K3L, K4L, K7R e F2L.
173. O vetor da modalidade 172, em que a dita deleção compreende pelo menos 4 genes, cada um independentemente selecionado do grupo que consiste em C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, K1L, K2L, K3L, K4L, K7R e F2L.
174. O vetor da modalidade 173, em que a dita deleção compreende pelo menos 5 genes, cada um independentemente selecionado do grupo que consiste em C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, K1L, K2L, K3L, K4L, K7R e F2L.
175. O vetor da modalidade 174, em que a dita deleção compreende pelo menos 6 genes, cada um independentemente selecionado do grupo que consiste em C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, K1L, K2L, K3L, K4L, K7R e F2L.
176. O vetor da modalidade 175, em que a dita deleção compreende pelo menos 7 genes, cada um independentemente selecionado do grupo que consiste em C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, K1L, K2L, K3L, K4L, K7R e F2L.
177. O vetor da modalidade 176, em que a dita deleção compreende pelo menos 8 genes, cada um independentemente selecionado do grupo que consiste em C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, K1L, K2L, K3L, K4L, K7R e F2L.
178. O vetor da modalidade 177, em que a dita deleção compreende pelo menos 9 genes, cada um independentemente selecionado do grupo que consiste em C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, K1L, K2L, K3L, K4L, K7R e F2L.
179. O vetor da modalidade 178, em que a dita deleção compreende pelo menos 10 genes, cada um independentemente selecionado do grupo que consiste em C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, K1L, K2L, K3L, K4L, K7R e F2L.
180. O vetor da modalidade 179, em que a dita deleção compreende cada um de C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, K1L, K2L, K3L, K4L, K7R e F2L.
181. Um vetor de ortopoxvírus recombinante que compreende uma deleção de pelo menos 1 gene que codifica um inibidor de caspase 9.
182. O vetor de ortopoxvírus recombinante de qualquer uma das modalidades 141-181, em que o dito vetor compreende uma deleção de pelo menos 1 gene que codifica um inibidor de caspase 9.
183. O vetor da modalidade 181 ou 182, em que o dito gene que codifica um inibidor de caspase 9 é F1L.
184. Um vetor de ortopoxvírus recombinante, em que o dito vetor compreende uma deleção de pelo menos 1 gene que codifica um inibidor de BCL-
2.
185. O vetor de ortopoxvírus recombinante de qualquer uma das modalidades 141-184, em que o dito vetor compreende uma deleção de pelo menos 1 gene que codifica um inibidor de BCL-2.
186. O vetor da modalidade 184 ou 185, em que o dito gene que codifica um inibidor de BCL-2 é N1L.
187. Um vetor de ortopoxvírus recombinante, em que o dito vetor compreende uma deleção de pelo menos 1 gene que codifica uma dUTPase.
188. O vetor de ortopoxvírus recombinante de qualquer uma das modalidades 141-187, em que o dito vetor compreende uma deleção de pelo menos 1 gene que codifica uma dUTPase.
189. O vetor da modalidade 187 ou 188, em que o dito gene que codifica uma dUTPase é F2L.
190. Um vetor de ortopoxvírus recombinante, em que o dito vetor compreende uma deleção de pelo menos 1 gene que codifica uma glicoproteína secretada do tipo IFN alfa/receptor beta.
191. O vetor de ortopoxvírus recombinante de qualquer uma das modalidades 141-190, em que o dito vetor compreende uma deleção de pelo menos 1 gene que codifica uma glicoproteína secretada do tipo IFN alfa/receptor beta.
192. O vetor da modalidade 190 ou 191, em que o dito gene que codifica uma glicoproteína secretada do tipo IFN alfa/receptor beta é B19R.
193. Um vetor de ortopoxvírus recombinante, em que o dito vetor compreende uma deleção de pelo menos 1 gene que codifica um inibidor de IL-1- beta.
194. O vetor de ortopoxvírus recombinante de qualquer uma das modalidades 141-193, em que o dito vetor compreende uma deleção de pelo menos 1 gene que codifica um inibidor de IL-1-beta.
195. O vetor da modalidade 193 ou 194, em que o dito gene que codifica um inibidor de IL-1-beta é B16R.
196. Um vetor de ortopoxvírus recombinante, em que o dito vetor compreende uma deleção de pelo menos 1 gene que codifica uma fosfolipase D.
197. O vetor de ortopoxvírus recombinante de qualquer uma das modalidades 141-196, em que o dito vetor compreende uma deleção de pelo menos 1 gene que codifica uma fosfolipase D.
198. O vetor da modalidade 196 ou 197, em que o dito gene que codifica uma fosfolipase D é K4L.
199. Um vetor de ortopoxvírus recombinante, em que o dito vetor compreende uma deleção de pelo menos 1 gene que codifica um inibidor de PKR.
200. O vetor de ortopoxvírus recombinante de qualquer uma das modalidades 141-199, em que o dito vetor compreende uma deleção de pelo menos 1 gene que codifica um inibidor de PKR.
201. O vetor da modalidade 199 ou 200, em que o dito gene que codifica um inibidor de PKR é K3L.
202. Um vetor de ortopoxvírus recombinante, em que o dito vetor compreende uma deleção de pelo menos 1 gene que codifica um inibidor de serina protease.
203. O vetor de ortopoxvírus recombinante de qualquer uma das modalidades 141-202, em que o dito vetor compreende uma deleção de pelo menos 1 gene que codifica um inibidor de serina protease.
204. O vetor da modalidade 202 ou 203, em que o dito gene que codifica um inibidor de serina protease é K2L.
205. Um vetor de ortopoxvírus recombinante, em que o dito vetor compreende uma deleção de pelo menos 1 gene que codifica um inibidor de sinalização de TLR.
206. O vetor de ortopoxvírus recombinante de qualquer uma das modalidades 141-205, em que o dito vetor compreende uma deleção de pelo menos 1 gene que codifica um inibidor de sinalização de TLR.
207. O vetor da modalidade 205 ou 206, em que o dito gene que codifica um inibidor de sinalização de TLR é N2L.
208. Um vetor de ortopoxvírus recombinante, em que o dito o vetor compreende uma deleção de pelo menos 1 gene que codifica uma proteína do tipo Kelch.
209. O vetor de ortopoxvírus recombinante de qualquer uma das modalidades 141-208, em que o dito vetor compreende uma deleção de pelo menos 1 gene que codifica uma proteína do tipo Kelch.
210. O vetor da modalidade 209, em que o dito vetor compreende uma deleção de pelo menos 2 genes que codificam, cada um, uma proteína do tipo Kelch.
211. O vetor de qualquer uma das modalidades 208-210, em que os ditos genes que codificam uma proteína do tipo Kelch são, independentemente, selecionados do grupo que consiste em F3L e C2L.
212. Um vetor de ortopoxvírus recombinante, em que o dito vetor compreende uma deleção de pelo menos 1 gene que codifica uma monoglicerídeo lipase.
213. O vetor de ortopoxvírus recombinante de qualquer uma das modalidades 141-212, em que o dito vetor compreende uma deleção de pelo menos 1 gene que codifica uma monoglicerídeo lipase.
214. O vetor da modalidade 213, em que o dito vetor compreende uma deleção de pelo menos 2 genes que codificam uma monoglicerídeo lipase.
215. O vetor de qualquer uma das modalidades 212-214, em que os ditos genes que codificam uma monoglicerídeo lipase são, independentemente, selecionados do grupo que consiste em K5L e K6L.
216. Um vetor de ortopoxvírus recombinante, em que o dito vetor compreende uma deleção de pelo menos 1 gene que codifica um inibidor de NF- κB.
217. O vetor de ortopoxvírus recombinante de qualquer uma das modalidades 141-216, em que o dito vetor compreende uma deleção de pelo menos 1 gene que codifica um inibidor de NF-κB.
218. O vetor da modalidade 217, em que a dita deleção compreende pelo menos 2 genes que codificam, cada um, um inibidor de NF-κB.
219. O vetor da modalidade 218, em que a dita deleção compreende pelo menos 3 genes que codificam, cada um, um inibidor de NF-κB.
220. O vetor de qualquer uma das modalidades 216-219, em que os ditos genes que codificam um inibidor de NF-κB são, independentemente, selecionados do grupo que consiste em K7R, K1L e M2L.
221. Um vetor de ortopoxvírus recombinante, em que o dito o vetor compreende uma deleção de pelo menos 1 gene que codifica uma proteína de repetição de anquirina.
222. O vetor de ortopoxvírus recombinante de qualquer uma das modalidades 141-221, em que o dito vetor compreende uma deleção de pelo menos 1 gene que codifica uma proteína de repetição de anquirina.
223. O vetor da modalidade 222, em que a dita deleção compreende pelo menos 2 genes que codificam, cada um, uma proteína de repetição de anquirina.
224. O vetor da modalidade 223, em que a dita deleção compreende pelo menos 3 genes que codificam, cada um, uma proteína de repetição de anquirina.
225. O vetor de ortopoxvírus recombinante de qualquer uma das modalidades 221-224, em que os ditos genes que codificam uma proteína de repetição de anquirina são, independentemente, selecionados do grupo que consiste em B18R, B20R e M1L.
226. Um vetor de ortopoxvírus recombinante, em que o dito vetor compreende uma deleção de pelo menos 1 gene selecionado do grupo que consiste em B15R, B17R e B14R.
227. O vetor de ortopoxvírus recombinante de qualquer uma das modalidades 1-226, em que o dito vetor compreende uma deleção de pelo menos 1 gene selecionado do grupo que consiste em B15R, B17R e B14R.
228. O vetor da modalidade 227, em que a dita deleção compreende pelo menos 2 genes, cada um independentemente selecionado do grupo que consiste em B15R, B17R e B14R.
229. O vetor da modalidade 228, em que a dita deleção compreende cada um dos ditos genes B15R, B17R e B14R.
230. O vetor de ortopoxvírus recombinante de qualquer uma das modalidades 141-229, em que o dito vetor compreende a deleção de pelo menos 1 gene selecionado do grupo de genes ITR que consiste em B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R e B29R.
231. O vetor da modalidade 230, em que a dita deleção compreende pelo menos 2 genes, cada um independentemente selecionado do dito grupo de genes ITR que consiste em B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R e B29R.
232. O vetor da modalidade 231, em que a dita deleção compreende pelo menos 3 genes, cada um independentemente selecionado do dito grupo de genes ITR que consiste em B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R e B29R.
233. O vetor da modalidade 232, em que a dita deleção compreende pelo menos 4 genes, cada um independentemente selecionado do dito grupo de genes ITR que consiste em B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R e B29R.
234. O vetor da modalidade 233, em que a dita deleção compreende pelo menos 5 genes, cada um independentemente selecionado do dito grupo de genes
ITR que consiste em B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R e B29R.
235. O vetor da modalidade 234, em que a dita deleção compreende pelo menos 6 genes, cada um independentemente selecionado do dito grupo de genes ITR que consiste em B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R e B29R.
236. O vetor da modalidade 235, em que a dita deleção compreende pelo menos 7 genes, cada um independentemente selecionado do dito grupo de genes ITR que consiste em B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R e B29R.
237. O vetor da modalidade 236, em que a dita deleção compreende pelo menos 8 genes, cada um independentemente selecionado do dito grupo de genes ITR que consiste em B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R e B29R.
238. O vetor da modalidade 237, em que a dita deleção compreende cada um de B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R e B29R.
239.
242. O vetor de ortopoxvírus recombinante da modalidade 241, em que o dito vírus vaccinia é uma cepa selecionada do grupo que consiste em Copenhagen, Western Reserve, Wyeth, Lister, EM63, ACAM2000, LC16m8, CV-1, vaccinia Ankara modificado (MVA), Dairen I, GLV-1h68, IHD-J, L-IVP, LC16m8, LC16mO, Tashkent, Tian Tan e WAU86/88-1.
243. O vetor de ortopoxvírus recombinante da modalidade 241, em que o dito vírus vaccinia é uma cepa selecionada do grupo que consiste em Copenhagen, Western Reserve, Tian Tan, Wyeth e Lister.
244. O vetor de ortopoxvírus recombinante da modalidade 241, em que o dito vírus vaccinia é um vírus vaccinia de cepa Copenhagen.
245. O vetor de ortopoxvírus recombinante de qualquer uma das modalidades 141-244, em que as ditas deleções são uma deleção do polinucleotídeo inteiro que codifica o gene correspondente.
246. O vetor de ortopoxvírus recombinante de qualquer uma das modalidades 141-244, em que cada uma das ditas deleções é uma deleção de uma porção do polinucleotídeo que codifica o gene correspondente, e em que a dita deleção é suficiente para tornar o dito gene não funcional mediante introdução em uma célula hospedeira.
247. O vetor de ortopoxvírus recombinante de qualquer uma das modalidades 14141-246, em que o dito vetor compreende adicionalmente um transgene que codifica um antígeno associado a tumor.
248. O vetor de ortopoxvírus recombinante de qualquer uma das modalidades 141-247, em que o dito vetor de ortopoxvírus recombinante compreende adicionalmente um transgene que codifica um antígeno associado a tumor.
249. O vetor de ortopoxvírus recombinante da modalidade 248, em que o dito antígeno associado a tumor é um antígeno associado a tumor listado em qualquer uma das Tabelas 3-30.
250. O vetor de ortopoxvírus recombinante da modalidade 248, em que o dito antígeno associado a tumor é um antígeno associado a tumor selecionado do grupo que consiste em CD19, CD33, EpCAM, CEA, PSMA, EGFRvIII, CD274, EGFR, CDH19, ENPP3, DLL3, MSLN, ROR1, HER2, HLAA2, EpHA2, EpHA3, MCSP, CSPG4, NG2, RON, FLT3, BCMA, CD20, FAPα, FRα, CA-9, PDGFRα, PDGFRβ, FSP1, S100A4, ADAM12m, RET, MET, FGFR, INSR e NTRK.
251. O vetor de ortopoxvírus recombinante da modalidade 248, em que o dito antígeno associado a tumor compreende MAGE-A3, ou um ou mais fragmentos dos mesmos.
252. O vetor de ortopoxvírus recombinante da modalidade 248, em que o dito antígeno associado a tumor compreende NY-ESO-1 ou um ou mais fragmentos do mesmo.
253. O vetor de ortopoxvírus recombinante da modalidade 248, em que o dito antígeno associado a tumor compreende uma ou mais proteínas de papilomavírus humano (HPV) ou fragmentos das mesmas.
254. O vetor de ortopoxvírus recombinante da modalidade 248, em que o dito antígeno associado a tumor compreende (i) proteínas E6 e E7, ou fragmentos das mesmas, de HPV16 e (ii) proteínas E6 e E7, ou fragmentos das mesmas, de HPV18.
255. O vetor de ortopoxvírus recombinante da modalidade 248, em que o dito antígeno associado a tumor compreende brachyury ou um ou mais fragmentos do mesmo.
256. O vetor de ortopoxvírus recombinante da modalidade 248, em que o dito antígeno associado a tumor compreende fosfatase de ácido prostático, ou um ou mais fragmentos da mesma.
257. Um método para produzir o vetor de ortopoxvírus recombinante de qualquer uma das modalidades 248-256, em que o dito método compreende: d. introduzir um sítio de inserção de transposon no vetor de ortopoxvírus recombinante de qualquer uma das modalidades 141-247; e. contatar o vetor de ortopoxvírus recombinante formado (a) com um elemento transponível que compreende um gene que codifica o dito antígeno associado a tumor, assim introduzindo o dito gene no dito vetor de ortopoxvírus recombinante; e f. recuperar o vetor de ortopoxvírus recombinante formado em (b).
258. O vetor de ortopoxvírus recombinante de qualquer uma das modalidades 141-256, em que o dito vetor de ortopoxvírus recombinante compreende adicionalmente um transgene que codifica um inibidor de ponto de verificação imune.
259. O vetor de ortopoxvírus recombinante da modalidade 258, em que o dito inibidor de ponto de verificação imune é selecionado do grupo que consiste em ligante OX40, ligante ICOS, anticorpo anti-CD47 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, anticorpo anti-CD40/CD40L ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, anticorpo anti-Lag3 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, anticorpo anti-CTLA-4 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, anticorpo anti-PD-L1 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, anticorpo anti-PD1 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, e anticorpo anti-Tim-3 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo.
260. O vetor de ortopoxvírus recombinante da modalidade 258, em que o dito inibidor de ponto de verificação imune é um anticorpo anti-PD-L1 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo ou um anticorpo anti-CTLA-4 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo.
261. O vetor de ortopoxvírus recombinante da modalidade 258, em que o dito inibidor de ponto de verificação imune é um anticorpo anti-PD1 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo.
262. O vetor de ortopoxvírus recombinante da modalidade 258, em que o dito inibidor de ponto de verificação imune é um anticorpo anti-CTLA-4 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo.
263. Um método para produzir o vetor de ortopoxvírus recombinante de qualquer uma das modalidades 258-262, em que o dito método compreende: d. introduzir um sítio de inserção de transposon no vetor de ortopoxvírus recombinante de qualquer uma das modalidades 141-257; e. contatar o vetor de ortopoxvírus recombinante formado (a) com um elemento transponível que compreende um gene que codifica o dito inibidor de ponto de verificação imune, assim introduzindo o dito gene no dito vetor de ortopoxvírus recombinante; e f. recuperar o vetor de ortopoxvírus recombinante formado em (b).
264. O vetor de ortopoxvírus recombinante de qualquer uma das modalidades 141-256 e 258-262, em que o dito vetor de ortopoxvírus recombinante compreende adicionalmente um transgene que codifica uma interleucina (IL).
265. O vetor de ortopoxvírus recombinante da modalidade 264, em que a dita interleucina é selecionada do grupo que consiste em IL-1 alfa, IL-1 beta, IL-2, IL-4, IL-7, IL-10, p35 de IL-12, p40 de IL-12, p70 de IL-12, IL-15, IL-18, IL-21 e IL-23.
266. O vetor de ortopoxvírus recombinante da modalidade 264, em que a dita interleucina é selecionada do grupo que consiste em p35 de IL-12, p40 de IL- 12 e p70 de IL-12.
267. O vetor de ortopoxvírus recombinante da modalidade 266, em que a dita interleucina é ligada à membrana.
268. Um método para produzir o vetor de ortopoxvírus recombinante de qualquer uma das modalidades 264-267, em que o dito método compreende: d. introduzir um sítio de inserção de transposon no vetor de ortopoxvírus recombinante de qualquer uma das modalidades 141-256 e 258-262; e. contatar o vetor de ortopoxvírus recombinante formado (a) com um elemento transponível que compreende um gene que codifica a dita interleucina, assim introduzindo o dito gene no dito vetor de ortopoxvírus recombinante; e f. recuperar o vetor de ortopoxvírus recombinante formado em (b).
269. O vetor de ortopoxvírus recombinante de qualquer uma das modalidades 141-256, 258-262, e 264-267, em que o dito vetor de ortopoxvírus recombinante compreende adicionalmente um transgene que codifica um interferon (IFN).
270. O vetor de ortopoxvírus recombinante da modalidade 269, em que o dito interferon é selecionado do grupo que consiste em IFN-alfa, IFN-beta, IFN-delta, IFN-épsilon, IFN-tau, IFN-ômega, IFN-zeta e IFN-gama.
271. Um método para produzir o vetor de ortopoxvírus recombinante da modalidade 269 ou 270, em que o dito método compreende: d. introduzir um sítio de inserção de transposon no vetor de ortopoxvírus recombinante de qualquer uma das modalidades 141-256, 258-262 e 264-267; e. contatar o vetor de ortopoxvírus recombinante formado (a) com um elemento transponível que compreende um gene que codifica o dito interferon, assim introduzindo o dito gene no dito vetor de ortopoxvírus recombinante; e f. recuperar o vetor de ortopoxvírus recombinante formado em (b).
272. O vetor de ortopoxvírus recombinante de qualquer uma das modalidades 141-256, 258-262, 264-267, 269, e 270, em que o dito vetor de ortopoxvírus recombinante compreende adicionalmente um transgene que codifica uma proteína de membro de superfamília de TNF.
273. O vetor de ortopoxvírus recombinante da modalidade 272, em que a dita proteína de membro de superfamília de TNF é selecionada do grupo que consiste em TRAIL, ligante Fas, LIGHT (TNFSF-14), TNF-alfa e ligante 4-1BB.
274. Um método para produzir o vetor de ortopoxvírus recombinante da modalidade 272 ou 273, em que o dito método compreende: d. introduzir um sítio de inserção de transposon no vetor de ortopoxvírus recombinante de qualquer uma das modalidades 141-256, 258-262, 264-267, 269 e 270; e. contatar o vetor de ortopoxvírus recombinante formado em (a) com um elemento transponível que compreende um gene que codifica a dita proteína de membro de superfamília de TNF, assim introduzindo o dito gene no dito vetor de ortopoxvírus recombinante; e f. recuperar o vetor de ortopoxvírus recombinante formado em (b).
275. O vetor de ortopoxvírus recombinante de qualquer uma das modalidades 141-256, 258-262, 264-267, 269, 270, 272 e 273, em que o dito vetor de ortopoxvírus recombinante compreende adicionalmente um transgene que codifica uma citocina.
276. O vetor de ortopoxvírus recombinante da modalidade 275, em que a dita citocina é selecionada do grupo que consiste em GM-CSF, ligante Flt3, ligante CD40, anti-TGF-beta, anti-VEGF-R2 e cGAS (guanil adenilato ciclase).
277. O vetor de ortopoxvírus recombinante da modalidade 275, em que a dita citocina é ligante Flt3.
278. Um método para produzir o vetor de ortopoxvírus recombinante da modalidade 276 ou 277, em que o dito método compreende: d. introduzir um sítio de inserção de transposon no vetor de ortopoxvírus recombinante de qualquer uma das modalidades 141-256, 258-262, 264-267, 269, 270, 272 e 273; e. contatar o vetor de ortopoxvírus recombinante formado (a) com um elemento transponível que compreende um gene que codifica a dita citocina, assim introduzindo o dito gene no dito vetor de ortopoxvírus recombinante; e f. recuperar o vetor de ortopoxvírus recombinante formado em (b).
279. O vetor de ortopoxvírus recombinante de qualquer uma das modalidades 141-256, 258-262, 264-267, 269, 270, 272, 273 e 275-277, em que o dito vetor de ortopoxvírus recombinante compreende adicionalmente um transgene que codifica microRNA (miRNA).
280. O vetor de ortopoxvírus recombinante da modalidade 279, em que o dito miRNA é mir-6.
281. Um método para produzir o vetor de ortopoxvírus recombinante da modalidade 279 ou 280, em que o dito método compreende: d. introduzir um sítio de inserção de transposon no vetor de ortopoxvírus recombinante de qualquer uma das modalidades 141-256, 258-262, 264-267, 269, 270, 272, 273 e 275-277; e. contatar o vetor de ortopoxvírus recombinante formado (a) com um elemento transponível que compreende um gene que codifica o dito miRNA, assim introduzindo o dito gene no dito vetor de ortopoxvírus recombinante; e f. recuperar o vetor de ortopoxvírus recombinante formado em (b).
282. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-115, 117-121, 123-126, 128, 129, 131, 132, 134-136, 138 e 139, ou o vetor de ortopoxvírus recombinante de qualquer uma das modalidades 141-256, 258-262, 264-267, 269, 270, 272, 273, 275-277, 279, e 280, em que o dito ácido nucleico ou o dito vetor de ortopoxvírus recombinante compreende o gene de Timidina Quinase (TK).
283. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-115, 117-121, 123-126, 128, 129, 131, 132, 134-136, 138, 139 e 282, ou o vetor de ortopoxvírus recombinante de qualquer uma das modalidades 141-256, 258-262, 264-267, 269, 270, 272, 273, 275-277, 279, 280 e 282, em que o dito ácido nucleico ou o dito vetor de ortopoxvírus recombinante compreende o gene de ribonucleotídeo redutase.
284. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-115, 117-121, 123-126, 128, 129, 131, 132, 134-136, 138, 139, 282 e 283, ou o vetor de ortopoxvírus recombinante de qualquer uma das modalidades 141-256, 258-262, 264-267, 269, 270, 272, 273, 275-277, 279, 280, 282 e 283, em que, mediante contato com uma população de células de mamíferos com o dito ácido nucleico ou o dito vetor de ortopoxvírus recombinante, as células exibem formação de sincítios aumentada em relação a uma população de células de mamíferos do mesmo tipo em contato com uma forma do vetor de ortopoxvírus que não compreende as ditas deleções.
285. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-115, 117-121, 123-126, 128, 129, 131, 132, 134-136, 138, 139 e 282-284 ou o vetor de ortopoxvírus recombinante de qualquer uma das modalidades 141-256, 258-262, 264-267, 269, 270, 272, 273, 275-277, 279, 280 e 282-284, em que, mediante contato com uma população de células de mamíferos com o dito ácido nucleico ou o dito vetor de ortopoxvírus recombinante, as células exibem espalhamento aumentado do vetor de ortopoxvírus em relação a uma população de células de mamíferos do mesmo tipo em contato com uma forma do vetor de ortopoxvírus que não compreende as ditas deleções.
286. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-115, 117-121, 123-126, 128, 129, 131, 132, 134-136, 138, 139 e 282-285, ou o vetor de ortopoxvírus recombinante de qualquer uma das modalidades 141-256, 258-262, 264-267, 269, 270, 272, 273, 275-277, 279, 280 e 282-285, em que o dito ácido nucleico ou o dito vetor de ortopoxvírus recombinante exerce um efeito citotóxico aumentado em uma população de células de mamíferos em relação àquele de uma forma do vetor de ortopoxvírus que não compreende as ditas deleções.
287. O ácido nucleico ou o vetor de ortopoxvírus recombinante de qualquer uma das modalidades 284-286, em que as ditas células de mamíferos são células humanas.
288. O ácido nucleico ou o vetor de ortopoxvírus recombinante da modalidade 287, em que as ditas células humanas são células de câncer.
289. O ácido nucleico ou o vetor de ortopoxvírus recombinante de qualquer uma das modalidades 284-286, em que as ditas células de mamíferos são de uma linhagem celular selecionada do grupo que consiste em U2OS, 293, 293T, Vero, HeLa, A549, BHK, BSC40, CHO, OVCAR-8, 786-0, NCI-H23, U251, SF-295, T-47D, SKMEL2, BT-549, SK-MEL-28, MDA-MB-231, SK-OV-3, MCF7, M14, SF-268, CAKI-1, HPAV, OVCAR-4, HCT15, K-562 e HCT-116.
290. Uma linhagem celular empacotadora que compreende o ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-115, 117-121, 123-126, 128, 129, 131, 132, 134-136, 138, 139 e 282-289 ou o vetor de ortopoxvírus recombinante de qualquer uma das modalidades 141-256, 258-262, 264-267, 269, 270, 272, 273, 275-277, 279, 280 e 282-289.
291. Um método para tratar câncer em um paciente mamífero, em que o dito método compreende administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz do ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-115, 117-121, 123-126, 128, 129, 131, 132, 134-136, 138, 139 e 282-289, ou o vetor de ortopoxvírus recombinante de qualquer uma das modalidades 141-256, 258-262, 264-267, 269, 270, 272, 273, 275-277, 279, 280 e 282-289 ao dito paciente.
292. O método da modalidade 291, em que o dito paciente mamífero é um paciente humano.
293. O método da modalidade 291 ou 292, em que o dito câncer é selecionado do grupo que consiste em leucemia, linfoma, câncer de fígado, câncer ósseo, câncer de pulmão, câncer de cérebro, câncer de bexiga, câncer gastrointestinal, câncer de mama, câncer cardíaco, câncer cervical, câncer uterino, câncer de cabeça e pescoço, câncer de vesícula biliar, câncer laríngeo, câncer de lábio e cavidade oral, câncer ocular, melanoma, câncer pancreático, câncer de próstata, câncer colorretal, câncer testicular e câncer de garganta.
294. O método da modalidade 291 ou 292, em que o dito câncer é selecionado do grupo que consiste em leucemia linfoblástica aguda (ALL), leucemia mieloide aguda (AML), leucemia linfocítica crônica (CLL), leucemia mieloide crônica (CML), carcinoma adrenocortical, linfoma relacionado a AIDS, linfoma primário de SNC, câncer anal, câncer de apêndice, astrocitoma, tumor teratoide/rabdoide atípico, carcinoma de célula basal, câncer de ducto biliar, câncer extra-hepático, família de sarcoma de Ewing, osteossarcoma e histiocitoma fibroso maligno, tumores embrionários de sistema nervoso central, tumores de célula germinativa de sistema nervoso central, craniofaringioma, ependimoma, tumores brônquicos, linfoma de Burkitt, tumor carcinoide, linfoma primário, cordoma, neoplasmas mieloproliferativos crônicos, câncer de cólon, câncer de ducto biliar extra-hepático, carcinoma ductal in situ (DCIS), câncer de endométrio, ependimoma, câncer esofágico, estesioneuroblastoma, tumor de célula germinativa extracrania, tumor de célula germinativa extragonadal, câncer de trompa de falópio, histiocitoma fibroso de osso, tumor carcinoide gastrointestinal, tumores estromais gastrointestinais (GIST), tumor de célula germinativa testicular, doença trofoblástica gestacional, glioma, glioma de tronco encefálico infantil, leucemia de células pilosas, câncer hepatocelular, histiocitose de células de Langerhans, linfoma de Hodgkin, câncer hipofaríngeo, tumores de célula de ilhota, tumores neuroendócrinos pancreáticos, tumor de Wilms e outros tumores renais infantis, histiocitose de células de Langerhans, câncer de pulmão de células pequenas, linfoma cutâneo de células T, melanoma intraocular, carcinoma de células de Merkel, mesotelioma, câncer metastático de pescoço de células escamosas, carcinoma de trato intermediário, síndromes de neoplasia endócrina múltipla, mieloma múltiplo/neoplasma de célula plasmática, síndromes mielodisplásicas, câncer de cavidade nasal e seio paranasal, câncer de nasofaringe, neuroblastoma, linfoma não Hodgkin (NHL), câncer de pulmão de células não pequenas (NSCLC), câncer de ovário epitelial, câncer de ovário de célula germinativa, câncer de ovário de baixo potencial maligno, tumores neuroendócrinos pancreáticos, papilomatose, paraganglioma, seio paranasal e câncer de cavidade nasal, câncer de paratireoide,
câncer de pênis, câncer faríngeo, feocromocitoma, tumor pituitário, blastoma pleuropulmonar, câncer peritoneal primário, câncer retal, retinoblastoma, rabdomiossarcoma, câncer de glândula salivar, sarcoma de Kaposi, rabdomiossarcoma, síndrome de Sézary, câncer de intestino delgado, sarcoma de tecido mole, câncer de garganta, carcinoma timoma e tímico, câncer de tireoide, câncer de célula transitória da pelve renal e ureter, câncer de uretra, câncer uterino de endométrio, sarcoma uterino, câncer vaginal, câncer vulvar e macroglobulinemia de Waldenström.
295. O método de qualquer uma das modalidades 291-294, em que o dito método compreende adicionalmente administrar ao dito paciente um inibidor de ponto de verificação imune.
296. O método da modalidade 295, em que o dito inibidor de ponto de verificação imune é selecionado do grupo que consiste em ligante OX40, ligante ICOS, anticorpo anti-CD47 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, anticorpo anti-CD40/CD40L ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, anticorpo anti-Lag3 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, anticorpo anti- CTLA-4 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, anticorpo anti-PD-L1 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, anticorpo anti-PD1 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, e anticorpo anti-Tim-3 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo.
297. O método da modalidade 295, em que o dito inibidor de ponto de verificação imune é um anticorpo anti-PD1 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo ou um anticorpo anti-CTLA-4 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo.
298. O método da modalidade 295, em que o dito inibidor de ponto de verificação imune é um anticorpo anti-PD1 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo.
299. O método da modalidade 295, em que o dito inibidor de ponto de verificação imune é um anticorpo anti-CTLA-4 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo.
300. O método de qualquer uma das modalidades 291-299, em que o dito método compreende adicionalmente administrar ao dito paciente uma interleucina.
301. O método da modalidade 300, em que a dita interleucina é selecionada do grupo que consiste em IL-1 alfa, IL-1 beta, IL-2, IL-4, IL-7, IL-10, p35 de IL-12, p40 de IL-12, p70 de IL-12, IL-15, IL-18, IL-21 e IL-23.
302. O método da modalidade 300, em que a dita interleucina é selecionada do grupo que consiste em p35 de IL-12, p40 de IL-12 e p70 de IL-12.
303. O método da modalidade 301 ou 302, em que a dita interleucina é ligada à membrana.
304. O método de qualquer uma das modalidades 291-303, em que o dito método compreende adicionalmente administrar ao dito paciente um interferon.
305. O método da modalidade 304, em que o dito interferon é selecionado do grupo que consiste em IFN-alfa, IFN-beta, IFN-delta, IFN-épsilon, IFN-tau, IFN-ômega, IFN-zeta e IFN-gama.
306. O método de qualquer uma das modalidades 291-305, em que o dito método compreende administrar adicionalmente ao dito paciente uma proteína de membro de superfamília de TNF.
307. O método da modalidade 306, em que a dita proteína de membro de superfamília de TNF é selecionada do grupo que consiste em TRAIL, ligante Fas, LIGHT (TNFSF-14), TNF-alfa e ligante 4-1BB.
308. O método de qualquer uma das modalidades 291-307, em que o dito método compreende adicionalmente administrar ao dito paciente uma citocina.
309. O método da modalidade 308, em que a dita citocina é selecionada do grupo que consiste em GM-CSF, ligante Flt3, ligante CD40, anti-TGF-beta, anti- VEGF-R2 e cGAS (guanil adenilato ciclase).
310. O método da modalidade 308, em que a dita citocina é ligante Flt3.
311. O método de qualquer uma das modalidades 291-310, em que o dito método compreende adicionalmente administrar ao dito paciente um miRNA.
312. O método da modalidade 311, em que o dito miRNA é mir-6.
313. Um kit que compreende o ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-115, 117-121, 123-126, 128, 129, 131, 132, 134-136, 138, 139, e 282-289 ou o vetor de ortopoxvírus recombinante de qualquer uma das modalidades 141-256, 258-262, 264-267, 269, 270, 272, 273, 275-277, 279, 280 e
282-289 e um inserto de pacote que instrui um usuário do dito kit para expressar o dito ácido nucleico ou o dito vetor em uma célula hospedeira.
314. A kit que compreende o ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-115, 117-121, 123-126, 128, 129, 131, 132, 134-136, 138, 139, e 282-289 ou o vetor de ortopoxvírus recombinante de qualquer uma das modalidades 141-256, 258-262, 264-267, 269, 270, 272, 273, 275-277, 279, 280, e 282-289 e um inserto de pacote que instrui um usuário para administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz do dito ácido nucleico ou vetor de ortopoxvírus recombinante a um paciente mamífero que tem câncer, assim tratando o dito câncer.
315. O kit de modalidade 314, em que o dito paciente mamífero é um paciente humano.
316. O ortopoxvírus de qualquer uma das modalidades anteriores, em que o gene B8R é deletado.
317. O ortopoxvírus da modalidade 316, em que pelo menos um transgene é inserido no lócus do gene B8R deletado.
318. O ortopoxvírus da modalidade 317, em que pelo menos dois transgenes são inseridos no lócus do gene B8R deletado.
319. O ortopoxvírus da modalidade 318, em que pelo menos três transgenes são inseridos no lócus do gene B8R deletado.
320. O ortopoxvírus de qualquer uma das modalidades 316-319, em que pelo menos um transgene adicional é inserido no lócus que não é o lócus do gene B8R.
321. O ortopoxvírus da modalidade 320, em que o lócus é a delimitação da deleção 5p.
322. O ortopoxvírus da modalidade 321, em que o lócus é a delimitação da deleção 3p.
323. O ortopoxvírus das modalidades 316-322, em que pelo menos um dos seguintes transgenes é inserido: IL-12TM, FLT3-L ou anticorpo anti-CLTA-4.
324. O ortopoxvírus da modalidade 323, em que os genes IL-12-TM e FLT3- L são inseridos no lócus do gene B8R deletado.
325. O ortopoxvírus de qualquer uma das modalidades 323-324, em que o anticorpo anti-CLTA-4 é inserido na delimitação da deleção 5p.
326. O ortopoxvírus de qualquer uma das modalidades 323-325, em que o vírus compreende a sequência da SEQ ID. NO: 210.
326. O ortopoxvírus de qualquer uma das modalidades 323-325, em que o anticorpo anti-CLTA é a SEQ ID NO: 211.
327. O ortopoxvírus de qualquer uma das modalidades 323-326, em que a IL-12-TM é a SEQ ID NO: 212.
328. O ortopoxvírus de qualquer uma das modalidades 323-327 em que a FLT3-L é a SEQ ID NO: 213.
329. Um ortopoxvírus que compreende uma sequência de ácidos nucleicos em que a sequência de ácidos nucleicos é um derivado da SEQ ID NO: 210, em que o dito derivado compreende uma deleção do gene B8R da SEQ ID NO: 210, em que, uma IL-12-TM e um transgene FLT3-L são inseridos no lócus do dito gene B8R deletado, em que, os genes que codificam uma cadeia pesada e uma cadeia pesada de um anticorpo anti-CLTA-4 são inseridos nas delimitações da deleção 5p presente na SEQ ID NO: 210; em que a IL-12-TM é a SEQ ID NO: 212; em que a FLT3-L é a SEQ ID NO: 213; e em que o anticorpo anti-CLTA4 é codificado pela SEQ ID NO: 211.
5.7.2. CONJUNTO 2
1. Um ácido nucleico que compreende um genoma de ortopoxvírus recombinante, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 2 genes selecionados do grupo que consiste nos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R.
2. O ácido nucleico da modalidade 1, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 3 genes, cada gene selecionado do grupo que consiste nos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R.
3. O ácido nucleico da modalidade 2, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 4 genes, cada gene selecionado do grupo que consiste nos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R.
4. O ácido nucleico da modalidade 3, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 5 genes, cada gene selecionado do grupo que consiste nos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R.
5. O ácido nucleico da modalidade 4, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 6 genes, cada gene selecionado do grupo que consiste nos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R.
6. O ácido nucleico da modalidade 5, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 7 genes, cada gene selecionado do grupo que consiste nos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R.
7. O ácido nucleico da modalidade 6, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 8 genes, cada gene selecionado do grupo que consiste nos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R.
8. O ácido nucleico da modalidade 7, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 9 genes, cada gene selecionado do grupo que consiste nos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R.
9. O ácido nucleico da modalidade 8, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 10 genes, cada gene selecionado do grupo que consiste nos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R,
B19R e B20R.
10. O ácido nucleico da modalidade 9, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 11 genes, cada gene selecionado do grupo que consiste nos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R.
11. O ácido nucleico da modalidade 10, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 12 genes, cada gene selecionado do grupo que consiste nos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R.
12. O ácido nucleico da modalidade 11, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 13 genes, cada gene selecionado do grupo que consiste nos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R.
13. O ácido nucleico da modalidade 12, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 14 genes, cada gene selecionado do grupo que consiste nos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R.
14. O ácido nucleico da modalidade 13, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 15 genes, cada gene selecionado do grupo que consiste nos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R.
15. O ácido nucleico da modalidade 14, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 16 genes, cada gene selecionado do grupo que consiste nos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R.
16. O ácido nucleico da modalidade 15, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 17 genes, cada gene selecionado do grupo que consiste nos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R.
17. O ácido nucleico da modalidade 16, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 18 genes, cada gene selecionado do grupo que consiste nos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R.
18. O ácido nucleico da modalidade 17, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 19 genes, cada gene selecionado do grupo que consiste nos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R.
19. O ácido nucleico da modalidade 18, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 20 genes, cada gene selecionado do grupo que consiste nos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R.
20. O ácido nucleico da modalidade 19, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 21 genes, cada gene selecionado do grupo que consiste nos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R.
21. O ácido nucleico da modalidade 20, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 22 genes, cada gene selecionado do grupo que consiste nos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R.
22. O ácido nucleico da modalidade 21, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de cada um dos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L,
B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R.
23. Um ácido nucleico que compreende um genoma de ortopoxvírus recombinante, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 1 gene selecionado do grupo que consiste nos genes B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R.
24. O ácido nucleico da modalidade 23, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 2 genes, cada gene selecionado do grupo que consiste nos genes B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R.
25. O ácido nucleico da modalidade 24, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 3 genes, cada gene selecionado do grupo que consiste nos genes B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R.
26. O ácido nucleico da modalidade 25, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 4 genes, cada gene selecionado do grupo que consiste nos genes B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R.
27. O ácido nucleico da modalidade 26, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 5 genes, cada gene selecionado do grupo que consiste nos genes B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R.
28. O ácido nucleico da modalidade 27, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 6 genes, cada gene selecionado do grupo que consiste nos genes B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R.
29. O ácido nucleico da modalidade 28, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de cada um dos genes B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R.
30. Um ácido nucleico que compreende um genoma de ortopoxvírus recombinante, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 1 gene selecionados do grupo que consiste nos genes, C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L e
F3L.
31. O ácido nucleico da modalidade 30, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 2 genes, cada gene selecionado do grupo que consiste nos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L e F3L.
32. O ácido nucleico da modalidade 31, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 3 genes, cada gene selecionado do grupo que consiste nos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L e F3L.
33. O ácido nucleico da modalidade 32, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 4 genes, cada gene selecionado do grupo que consiste nos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L e F3L.
34. O ácido nucleico da modalidade 33, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 5 genes, cada gene selecionado do grupo que consiste nos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L e F3L.
35. O ácido nucleico da modalidade 34, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 6 genes, cada gene selecionado do grupo que consiste nos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L e F3L.
36. O ácido nucleico da modalidade 35, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 7 genes, cada gene selecionado do grupo que consiste nos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L e F3L.
37. O ácido nucleico da modalidade 36, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 8 genes, cada gene selecionado do grupo que consiste nos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L e F3L.
38. O ácido nucleico da modalidade 37, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 9 genes, cada gene selecionado do grupo que consiste nos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L,
K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L e F3L.
39. O ácido nucleico da modalidade 38, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 10 genes, cada gene selecionado do grupo que consiste nos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L e F3L.
40. O ácido nucleico da modalidade 39, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 11 genes, cada gene selecionado do grupo que consiste nos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L e F3L.
41. O ácido nucleico da modalidade 40, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 12 genes, cada gene selecionado do grupo que consiste nos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L e F3L.
42. O ácido nucleico da modalidade 41, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 13 genes, cada gene selecionado do grupo que consiste nos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L e F3L.
43. O ácido nucleico da modalidade 42, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 14 genes, cada gene selecionado do grupo que consiste nos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L e F3L.
44. O ácido nucleico da modalidade 43, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 15 genes, cada gene selecionado do grupo que consiste nos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L e F3L.
45. O ácido nucleico da modalidade 44, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de cada um dos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L e F3L.
46. O ácido nucleico que compreende um genoma de ortopoxvírus recombinante de qualquer uma das modalidades 1-45, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 1 gene que codifica uma proteína envolvida na interação de hospedeiro.
47. O ácido nucleico da modalidade 46, em que a dita proteína afeta a adesão independente de cálcio à matriz extracelular.
48. O ácido nucleico da modalidade 46, em que a dita proteína é um inibidor de NF-B.
49. O ácido nucleico da modalidade 48, em que a dita proteína é codificada por um gene selecionado do grupo que consiste nos genes C2L, N1L, M2L, K1L e K7R.
50. O ácido nucleico da modalidade 46, em que a dita proteína é um inibidor de apoptose.
51. O ácido nucleico da modalidade 47, em que o dito inibidor de apoptose é um inibidor de caspase 9.
52. O ácido nucleico da modalidade 51, em que o dito inibidor de caspase 9 é codificado pelo gene F1L.
53. O ácido nucleico da modalidade 50, em que o dito inibidor de apoptose é uma proteína de tipo BCL-2.
54. O ácido nucleico da modalidade 53, em que a dita proteína de tipo BCL- 2 é codificada por N1L.
55. O ácido nucleico da modalidade 46, em que a dita proteína é um inibidor de fator regulador de interferon 3 (IRF3).
56. O ácido nucleico da modalidade 55, em que o dito inibidor IRF3 é codificado por N2L ou K7R.
57. O ácido nucleico da modalidade 46, em que a dita proteína é um inibidor de serina protease.
58. O ácido nucleico da modalidade 46, em que a dita proteína impede a fusão de célula.
59. O ácido nucleico da modalidade 58, em que a dita proteína é codificada por K2L.
60. O ácido nucleico da modalidade 46, em que a dita proteína é um inibidor de proteína quinase ativada por RNA (PKR).
61. O ácido nucleico da modalidade 60, em que a dita proteína é codificada por K1L ou K3L.
62. O ácido nucleico da modalidade 46, em que a dita proteína é um fator de virulência.
63. O ácido nucleico da modalidade 63, em que a dita proteína é codificada por F3L.
64. O ácido nucleico da modalidade 46, em que a dita proteína é um inibidor de IL-1-beta.
65. O ácido nucleico da modalidade 64, em que a dita proteína é codificada por B16R.
66. O ácido nucleico da modalidade 46, em que a dita proteína é um sequestrante de IFNα secretado.
67. O ácido nucleico da modalidade 67, em que a dita proteína é codificada por B19R.
68. O ácido nucleico que compreende um genoma de ortopoxvírus recombinante de qualquer uma das modalidades 1-67, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 1 gene que codifica uma proteína envolvida na replicação de DNA.
69. O ácido nucleico da modalidade 68, em que a dita proteína é uma nuclease de modificação de DNA.
70. O ácido nucleico da modalidade 69, em que a dita proteína é codificada por K4L.
71. O ácido nucleico da modalidade 70, em que a dita proteína é uma desoxiuridina trifosfatase (dUTPase).
72. O ácido nucleico da modalidade 71, em que a dUTPase é codificada por F2L.
73. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-72, em que pelo menos uma sequência de nucleotídeos inteira do gene deletado é deletada.
74. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-72, em que pelo menos um gene deletado é apenas parcialmente deletado, e em que a deleção parcial é suficiente para tornar o dito gene parcialmente deletado não funcional mediante introdução em uma célula hospedeira.
75. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-74, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende pelo menos duas cópias de repetições terminais invertidas (ITRs).
76. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-74, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante não tem quaisquer cópias de ITRs.
77. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-74, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção em pelo menos uma cópia de uma ITR selecionada do grupo que consiste em B21R-ITR, B22R- ITR, B23R-ITR, B24R-ITR, B25R-ITR, B26R-ITR, B27R-ITR, B28R-ITR e B29R- ITR.
78. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-74, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção em pelo menos todas as seguintes cópias de ITRs: B21R-ITR, B22R-ITR, B23R-ITR, B24R-ITR, B25R-ITR, B26R-ITR, B27R-ITR, B28R-ITR e B29R-ITR.
79. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-78, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção no gene B8R.
80. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-78, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende um gene B8R intacto.
81. Um ácido nucleico que compreende um genoma de ortopoxvírus recombinante, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende (i) uma deleção de cada um dos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, B20R e B8R; e (ii) uma deleção em cada cópia das seguintes ITRs: B21R-ITR, B22R-ITR, B23R-ITR, B24R-ITR, B25R-ITR, B26R-ITR, B27R-ITR, B28R-ITR e B29R-ITR.
82. Um ácido nucleico que compreende um genoma de ortopoxvírus recombinante, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende (i) uma deleção de cada um dos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R; e (ii) uma deleção em cada cópia das seguintes ITRs: B21R-ITR, B22R-ITR, B23R-ITR, B24R-ITR, B25R-ITR, B26R-ITR, B27R-ITR, B28R-ITR e B29R-ITR, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende um gene B8R intacto.
83. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-82 que compreende adicionalmente pelo menos um transgene selecionado do grupo que consiste em um transgene que codifica um inibidor de ponto de verificação imune, um transgene que codifica uma interleucina (IL) e um transgene que codifica uma citocina.
84. O ácido nucleico da modalidade 83, em que o ácido nucleico compreende pelo menos dois transgenes selecionados do grupo que consiste em um transgene que codifica um inibidor de ponto de verificação imune, um transgene que codifica uma interleucina (IL) e um transgene que codifica uma citocina.
85. O ácido nucleico da modalidade 84, em que o ácido nucleico compreende um transgene que codifica um inibidor de ponto de verificação imune, um transgene que codifica uma interleucina (IL) e um transgene que codifica uma citocina.
86. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 83 ou 84, em que o dito ácido nucleico compreende um transgene que codifica um inibidor de ponto de verificação imune.
87. O ácido nucleico da modalidade 85 ou 86, em que o dito inibidor de ponto de verificação imune é selecionado do grupo que consiste em ligante OX40, ligante ICOS, anticorpo anti-CD47 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, anticorpo anti-CD40/CD40L ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, anticorpo anti-Lag3 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, anticorpo anti- CTLA-4 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, anticorpo anti-PD-L1 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, anticorpo anti-PD1 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, e anticorpo anti-Tim-3 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo.
88. O ácido nucleico da modalidade 87, em que o dito inibidor de ponto de verificação imune é um anticorpo anti-PD-L1 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo ou um anticorpo anti-CTLA-4 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo.
89. O ácido nucleico da modalidade 88, em que o dito inibidor de ponto de verificação imune é um anticorpo anti-PD1 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo.
90. O ácido nucleico da modalidade 88, em que o dito inibidor de ponto de verificação imune é um anticorpo anti-CTLA-4 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo.
91. O ácido nucleico da modalidade 83 ou 84, em que o dito ácido nucleico compreende um transgene que codifica uma interleucina (IL).
92. O ácido nucleico da modalidade 85 ou 91, em que a dita interleucina é selecionada do grupo que consiste em IL-1 alfa, IL-1 beta, IL-2, IL-4, IL-7, IL-10, p35 de IL-12, p40 de IL-12, p70 de IL-12, IL-15, IL-18, IL-21 e IL-23.
93. O ácido nucleico da modalidade 92, em que a dita interleucina é selecionada do grupo que consiste em p35 de IL-12, p40 de IL-12 e p70 de IL-12.
94. O ácido nucleico da modalidade 93, em que a dita interleucina é ligada à membrana.
95. O ácido nucleico da modalidade 94, em que a dita interleucina é ligada à membrana p70 de IL-12.
96. O ácido nucleico da modalidade 83 ou 84, em que o dito ácido nucleico compreende um transgene que codifica uma citocina.
97. O ácido nucleico da modalidade 96, em que a dita citocina é um interferon (IFN).
98. O ácido nucleico da modalidade 97, em que o dito interferon é selecionado do grupo que consiste em IFN-alfa, IFN-beta, IFN-delta, IFN-épsilon, IFN-tau, IFN-ômega, IFN-zeta e IFN-gama.
99. O ácido nucleico da modalidade 96, em que a dita citocina é uma proteína de membro de superfamília de TNF.
100. O ácido nucleico da modalidade 99, em que a dita proteína de membro de superfamília de TNF é selecionada do grupo que consiste em TRAIL, ligante Fas, LIGHT (TNFSF-14), TNF-alfa e ligante 4-1BB.
101. O ácido nucleico da modalidade 96, em que a dita citocina é selecionada do grupo que consiste em GM-CSF, ligante Flt3, ligante CD40, TGF- beta, VEGF-R2 e c-kit.
102. O ácido nucleico da modalidade 101, em que a dita citocina é ligante Flt3.
103. O ácido nucleico da modalidade 83-102, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção no gene B8R e pelo menos um transgene é inserido na deleção no gene B8R.
104. O ácido nucleico da modalidade 103, em que pelo menos dois transgenes são inseridos na deleção no gene B8R.
105. O ácido nucleico da modalidade 104, em que pelo menos três transgenes são inseridos na deleção no gene B8R.
106. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 103-105, em que pelo menos um transgene é inserido em um lócus que não está na deleção no gene B8R.
107. O ácido nucleico da modalidade 106, em que o lócus está na delimitação de uma deleção na extremidade 5’ do genoma de ortopoxvírus.
108. O ácido nucleico da modalidade 106, em que o lócus está na delimitação de uma deleção na extremidade 3’ do genoma de ortopoxvírus.
109. Um ácido nucleico que compreende um genoma de ortopoxvírus recombinante, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende (i) uma deleção de cada um dos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, B20R e B8R; (ii) uma deleção em cada cópia das seguintes ITRs: B21R-ITR, B22R-ITR, B23R-ITR, B24R-ITR, B25R-ITR, B26R-ITR, B27R-ITR, B28R-ITR e B29R-ITR; (iii) um transgene IL-12-TM inserido na deleção no gene B8R; (iv) um transgene ligante Flt3 inserido na deleção no gene B8R; e (v) um de: (a) um transgene que codifica um anticorpo anti-CTLA-4 de cadeia única ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo ou (b) (i) um transgene que codifica uma cadeia pesada de um anticorpo anti- CTLA-4 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, e (ii) um transgene que codifica uma cadeia leve de um anticorpo anti-CTLA-4 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, em que o transgene (ou transgenes) em parte (v) é/são inseridos nas delimitações de uma deleção 5p presente no genoma de ortopoxvírus recombinante, e em que o anticorpo anti-CTLA-4 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo tem capacidade para se ligar a CTLA-4.
110. O ácido nucleico da modalidade 109, em que o genoma de ortopoxvírus é derivado de uma sequência da SEQ ID NO: 210, em que (a) a dita sequência derivada compreende uma deleção do gene B8R, e o transgene IL-12-TM, o transgene ligante Flt3, e o transgene (ou transgenes) que codifica o anticorpo anti-CTLA-4 de cadeia única ou dupla; (b) o transgene IL-12-TM codifica uma proteína que compreende uma sequência de aminoácidos é a SEQ ID NO: 212; (c) o transgene ligante Flt3 codifica uma proteína que compreende uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 213; e (d) o anticorpo anti-CTLA-4 compreende uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 211.
111. Um vírus que compreende o ácido nucleico que compreende o genoma de ortopoxvírus recombinante de qualquer uma das modalidades 1-110.
112. O vírus da modalidade 111, em que a) o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 2 genes selecionados do grupo que consiste nos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R; b) o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 1 gene selecionado do grupo que consiste nos genes B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R; ou c) o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 1 gene selecionados do grupo que consiste nos genes, C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L e F3L.
113. O vírus da modalidade 111 ou 112, em que o dito vírus é derivado de um vírus vaccinia.
114. O vírus da modalidade 113, em que o dito vírus vaccinia é derivado de uma cepa selecionada do grupo que consiste em Copenhagen, Western Reserve, Wyeth, Lister, EM63, ACAM2000, LC16m8, CV-1, vaccinia Ankara modificado (MVA), Dairen I, GLV-1h68, IHD-J, L-IVP, LC16mO, Tashkent, Tian Tan e WAU86/88-1.
115. O vírus da modalidade 114, em que o dito vírus vaccinia é derivado de uma cepa selecionada do grupo que consiste em Copenhagen, Western Reserve, Tian Tan, Wyeth e Lister.
116. O vírus da modalidade 115, em que o dito vírus vaccinia é um derivado de um vírus vaccinia de cepa Copenhagen.
117. O vírus de qualquer uma das modalidades 111-116, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende adicionalmente um gene de Timidina Quinase (TK).
118. O vírus de qualquer uma das modalidades 111-117, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende adicionalmente um gene de ribonucleotídeo redutase.
119. O vírus de qualquer uma das modalidades 111-118, em que mediante o contato com uma população de células de mamíferos com o dito vírus, a população de células de mamíferos exibe formação de sincítios aumentada em relação a uma população de células de mamíferos do mesmo tipo em contato com uma forma do vírus que não compreende a dita deleção.
120. O vírus de qualquer uma das modalidades 111-119, em que mediante contato com uma população de células de mamíferos com o dito vírus, a população de células de mamíferos exibe espalhamento aumentado do vírus em relação a uma população de células de mamíferos do mesmo tipo em contato com uma forma do vírus que não compreende a dita deleção.
121. O vírus de qualquer uma das modalidades 111-120, em que o dito vírus exerce um efeito citotóxico aumentado em uma população de células de mamíferos em relação àquela de uma forma do vírus que não compreende a dita deleção.
122. O vírus de qualquer uma das modalidades 119-121, em que as ditas células de mamíferos são células humanas.
123. O vírus de modalidade 122, em que as ditas células humanas são células de câncer.
124. O vírus de qualquer uma das modalidades 119-121, em que as ditas células de mamíferos são de uma linhagem celular selecionada do grupo que consiste em U2OS, 293, 293T, Vero, HeLa, A549, BHK, BSC40, CHO, OVCAR-8, 786-0, NCI-H23, U251, SF-295, T-47D, SKMEL2, BT-549, SK-MEL-28, MDA-MB-
231, SK-OV-3, MCF7, M14, SF-268, CAKI-1, HPAV, OVCAR-4, HCT15, K-562 e HCT-116.
125. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-110 ou o vírus de qualquer uma das modalidades 111-124, em que o dito ácido nucleico ou o dito vírus compreende adicionalmente um transgene que codifica um antígeno associado a tumor.
126. O ácido nucleico ou o vírus da modalidade 125, em que o dito antígeno associado a tumor é um antígeno associado a tumor listado em qualquer uma das Tabelas 3-30.
127. O ácido nucleico ou o vírus da modalidade 126, em que o dito antígeno associado a tumor é um antígeno associado a tumor selecionado do grupo que consiste em CD19, CD33, EpCAM, CEA, PSMA, EGFRvIII, CD133, EGFR, CDH19, ENPP3, DLL3, MSLN, ROR1, HER2, HLAA2, EpHA2, EpHA3, MCSP, CSPG4, NG2, RON, FLT3, BCMA, CD20, FAPα, FRα, CA-9, PDGFRα, PDGFRβ, FSP1, S100A4, ADAM12m, RET, MET, FGFR, INSR e NTRK.
128. O ácido nucleico ou o vírus da modalidade 125, em que o dito antígeno associado a tumor compreende MAGE-A3, ou um ou mais fragmentos dos mesmos.
129. O ácido nucleico ou o vírus da modalidade 125, em que o dito antígeno associado a tumor compreende NY-ESO-1 ou um ou mais fragmentos do mesmo.
130. O ácido nucleico ou o vírus da modalidade 125, em que o dito antígeno associado a tumor compreende uma ou mais proteínas de papilomavírus humano (HPV) ou fragmentos das mesmas.
131. O ácido nucleico ou o vírus da modalidade 125, em que as ditas proteínas de HPV ou fragmentos das mesmas compreendem um ou mais de (i) proteínas E6 e E7, ou fragmentos das mesmas, de HPV16 e (ii) proteínas E6 e E7, ou fragmentos das mesmas, de HPV18.
132. O ácido nucleico ou o vírus de modalidade 131, em que as sequências das ditas proteínas de HPV ou fragmentos são divulgados na Publicação de Patente Internacional nº WO/2014/127478, cujo conteúdo é incorporado ao presente documento a título de referência.
133. O ácido nucleico ou o vírus da modalidade 125, em que o dito antígeno associado a tumor compreende brachyury ou um ou mais fragmentos do mesmo.
134. O ácido nucleico ou o vírus da modalidade 125, em que o dito antígeno associado a tumor compreende fosfatase de ácido prostático, ou um ou mais fragmentos da mesma.
135. Uma linhagem celular empacotadora que compreende o ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-110 ou o vírus de qualquer uma das modalidades 111-124.
136. Um método para tratar câncer em um paciente mamífero, em que o dito método compreende administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz do vírus de qualquer uma das modalidades 111-134 ao dito paciente.
137. O método da modalidade 136, em que o dito paciente mamífero é um paciente humano.
138. O método da modalidade 136 ou 137, em que o vírus é usado como um iniciador em um tratamento de iniciador:reforço.
139. O método da modalidade 136 ou 137, em que o vírus é usado como um reforço em um tratamento de iniciador:reforço.
140. O método de qualquer uma das modalidades 136-139, em que o dito paciente mamífero tem câncer.
141. O método da modalidade 140, em que o dito câncer é selecionado do grupo que consiste em leucemia, linfoma, câncer de fígado, câncer ósseo, câncer de pulmão, câncer de cérebro, câncer de bexiga, câncer gastrointestinal, câncer de mama, câncer cardíaco, câncer cervical, câncer uterino, câncer de cabeça e pescoço, câncer de vesícula biliar, câncer laríngeo, câncer de lábio e cavidade oral, câncer ocular, melanoma, câncer pancreático, câncer de próstata, câncer colorretal, câncer testicular e câncer de garganta.
142. O método da modalidade 140, em que o dito câncer é selecionado do grupo que consiste em leucemia linfoblástica aguda (ALL), leucemia mieloide aguda (AML), leucemia linfocítica crônica (CLL), leucemia mieloide crônica (CML), carcinoma adrenocortical, linfoma relacionado a AIDS, linfoma primário de SNC, câncer anal, câncer de apêndice, astrocitoma, tumor teratoide/rabdoide atípico, carcinoma de célula basal, câncer de ducto biliar, câncer extra-hepático, família de sarcoma de Ewing, osteossarcoma e histiocitoma fibroso maligno, tumores embrionários de sistema nervoso central, tumores de célula germinativa de sistema nervoso central, craniofaringioma, ependimoma, tumores brônquicos, linfoma de Burkitt, tumor carcinoide, linfoma primário, cordoma, neoplasmas mieloproliferativos crônicos, câncer de cólon, câncer de ducto biliar extra-hepático, carcinoma ductal in situ (DCIS), câncer de endométrio, ependimoma, câncer esofágico, estesioneuroblastoma, tumor de célula germinativa extracrania, tumor de célula germinativa extragonadal, câncer de trompa de falópio, histiocitoma fibroso de osso, tumor carcinoide gastrointestinal, tumores estromais gastrointestinais (GIST), tumor de célula germinativa testicular, doença trofoblástica gestacional, glioma, glioma de tronco encefálico infantil, leucemia de células pilosas, câncer hepatocelular, histiocitose de células de Langerhans, linfoma de Hodgkin, câncer hipofaríngeo, tumores de célula de ilhota, tumores neuroendócrinos pancreáticos, tumor de Wilms e outros tumores renais infantis, histiocitose de células de Langerhans, câncer de pulmão de células pequenas, linfoma cutâneo de células T, melanoma intraocular, carcinoma de células de Merkel, mesotelioma, câncer metastático de pescoço de células escamosas, carcinoma de trato intermediário, síndromes de neoplasia endócrina múltipla, mieloma múltiplo/neoplasma de célula plasmática, síndromes mielodisplásicas, câncer de cavidade nasal e seio paranasal, câncer de nasofaringe, neuroblastoma, linfoma não Hodgkin (NHL), câncer de pulmão de células não pequenas (NSCLC), câncer de ovário epitelial, câncer de ovário de célula germinativa, câncer de ovário de baixo potencial maligno, tumores neuroendócrinos pancreáticos, papilomatose, paraganglioma, seio paranasal e câncer de cavidade nasal, câncer de paratireoide, câncer de pênis, câncer faríngeo, feocromocitoma, tumor pituitário, blastoma pleuropulmonar, câncer peritoneal primário, câncer retal, retinoblastoma, rabdomiossarcoma, câncer de glândula salivar, sarcoma de Kaposi, rabdomiossarcoma, síndrome de Sézary, câncer de intestino delgado, sarcoma de tecido mole, câncer de garganta, carcinoma timoma e tímico, câncer de tireoide, câncer de célula transitória da pelve renal e ureter, câncer de uretra, câncer uterino de endométrio, sarcoma uterino, câncer vaginal, câncer vulvar e macroglobulinemia de Waldenström.
143. O método de qualquer uma das modalidades 136-142, em que o dito método compreende adicionalmente administrar ao dito paciente um inibidor de ponto de verificação imune.
144. O método da modalidade 143, em que o dito inibidor de ponto de verificação imune é selecionado do grupo que consiste em ligante OX40, ligante ICOS, anticorpo anti-CD47 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, anticorpo anti-CD40/CD40L ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, anticorpo anti-Lag3 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, anticorpo anti- CTLA-4 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, anticorpo anti-PD-L1 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, anticorpo anti-PD1 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, e anticorpo anti-Tim-3 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo.
145. O método da modalidade 144, em que o dito inibidor de ponto de verificação imune é um anticorpo anti-PD1 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo ou um anticorpo anti-CTLA-4 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo.
146. O método da modalidade 145, em que o dito inibidor de ponto de verificação imune é um anticorpo anti-PD1 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo.
147. O método da modalidade 145, em que o dito inibidor de ponto de verificação imune é um anticorpo anti-CTLA-4 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo.
148. O método de qualquer uma das modalidades 136-147, em que o dito método compreende adicionalmente administrar ao dito paciente uma interleucina.
149. O método da modalidade 148, em que a dita interleucina é selecionada do grupo que consiste em IL-1 alfa, IL-1 beta, IL-2, IL-4, IL-7, IL-10, p35 de IL-12, p40 de IL-12, p70 de IL-12, IL-15, IL-18, IL-21 e IL-23.
150. O método da modalidade 149, em que a dita interleucina é selecionada do grupo que consiste em p35 de IL-12, p40 de IL-12 e p70 de IL-12.
151. O método da modalidade 149 ou 150, em que a dita interleucina é ligada à membrana.
152. O método de qualquer uma das modalidades 136-151, em que o dito método compreende adicionalmente administrar ao dito paciente um interferon.
153. O método da modalidade 152, em que o dito interferon é selecionado do grupo que consiste em IFN-alfa, IFN-beta, IFN-delta, IFN-épsilon, IFN-tau, IFN-ômega, IFN-zeta e IFN-gama.
154. O método de qualquer uma das modalidades 136-153, em que o dito método compreende adicionalmente administrar ao dito paciente uma citocina.
155. O método da modalidade 154, em que a dita citocina é uma proteína de membro de superfamília de TNF.
156. O método da modalidade 155, em que a dita proteína de membro de superfamília de TNF é selecionada do grupo que consiste em TRAIL, ligante Fas, LIGHT (TNFSF-14), TNF-alfa e ligante 4-1BB.
157. O método da modalidade 154, em que a dita citocina é selecionada do grupo que consiste em GM-CSF, ligante Flt3, ligante CD40, TGF-beta, VEGF-R2 e cKit.
158. O método da modalidade 157, em que a dita citocina é ligante Flt3.
159. Um kit que compreende o ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-110 ou o vírus de qualquer uma das modalidades 111-134 e um inserto de pacote que instrui um usuário do dito kit para expressar o dito ácido nucleico ou o dito vírus em uma célula hospedeira.
160. Um kit que compreende o vírus de qualquer uma das modalidades 111- 134 e um inserto de pacote que instrui um usuário para administrar uma terapeuticamente eficaz quantidade do dito vírus a um paciente mamífero que tem câncer, assim tratando o dito câncer.
161. O kit de modalidade 160, em que o dito paciente mamífero é um paciente humano.
162. O ácido nucleico da modalidade 94, em que a dita interleucina é ligada à membrana p35 de IL-12.
5.7.3. CONJUNTO 3
1. Um ácido nucleico que compreende um genoma de ortopoxvírus recombinante, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 2 genes selecionados do grupo que consiste nos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R.
2. O ácido nucleico da modalidade 1, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 3 genes, cada gene selecionado do grupo que consiste nos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R.
3. O ácido nucleico da modalidade 2, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 4 genes, cada gene selecionado do grupo que consiste nos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R.
4. O ácido nucleico da modalidade 3, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 5 genes, cada gene selecionado do grupo que consiste nos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R.
5. O ácido nucleico da modalidade 4, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 6 genes, cada gene selecionado do grupo que consiste nos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R.
6. O ácido nucleico da modalidade 5, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 7 genes, cada gene selecionado do grupo que consiste nos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R.
7. O ácido nucleico da modalidade 6, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 8 genes, cada gene selecionado do grupo que consiste nos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R.
8. O ácido nucleico da modalidade 7, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 9 genes, cada gene selecionado do grupo que consiste nos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R.
9. O ácido nucleico da modalidade 8, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 10 genes, cada gene selecionado do grupo que consiste nos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R.
10. O ácido nucleico da modalidade 9, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 11 genes, cada gene selecionado do grupo que consiste nos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R.
11. O ácido nucleico da modalidade 10, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 12 genes, cada gene selecionado do grupo que consiste nos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R.
12. O ácido nucleico da modalidade 11, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 13 genes, cada gene selecionado do grupo que consiste nos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R.
13. O ácido nucleico da modalidade 12, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 14 genes, cada gene selecionado do grupo que consiste nos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R.
14. O ácido nucleico da modalidade 13, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 15 genes, cada gene selecionado do grupo que consiste nos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L,
B18R, B19R e B20R.
15. O ácido nucleico da modalidade 14, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 16 genes, cada gene selecionado do grupo que consiste nos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R.
16. O ácido nucleico da modalidade 15, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 17 genes, cada gene selecionado do grupo que consiste nos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R.
17. O ácido nucleico da modalidade 16, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 18 genes, cada gene selecionado do grupo que consiste nos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R.
18. O ácido nucleico da modalidade 17, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 19 genes, cada gene selecionado do grupo que consiste nos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R.
19. O ácido nucleico da modalidade 18, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 20 genes, cada gene selecionado do grupo que consiste nos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R.
20. O ácido nucleico da modalidade 19, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 21 genes, cada gene selecionado do grupo que consiste nos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R.
21. O ácido nucleico da modalidade 20, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 22 genes, cada gene selecionado do grupo que consiste nos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R.
22. O ácido nucleico da modalidade 21, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de cada um dos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R.
23. Um ácido nucleico que compreende um genoma de ortopoxvírus recombinante, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 1 gene selecionado do grupo que consiste nos genes B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R.
24. O ácido nucleico da modalidade 23, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 2 genes, cada gene selecionado do grupo que consiste nos genes B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R.
25. O ácido nucleico da modalidade 24, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 3 genes, cada gene selecionado do grupo que consiste nos genes B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R.
26. O ácido nucleico da modalidade 25, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 4 genes, cada gene selecionado do grupo que consiste nos genes B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R.
27. O ácido nucleico da modalidade 26, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 5 genes, cada gene selecionado do grupo que consiste nos genes B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R.
28. O ácido nucleico da modalidade 27, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 6 genes, cada gene selecionado do grupo que consiste nos genes B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R.
29. O ácido nucleico da modalidade 28, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de cada um dos genes B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R.
30. Um ácido nucleico que compreende um genoma de ortopoxvírus recombinante, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 1 gene selecionados do grupo que consiste nos genes, C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L e F3L.
31. O ácido nucleico da modalidade 30, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 2 genes, cada gene selecionado do grupo que consiste nos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L e F3L.
32. O ácido nucleico da modalidade 31, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 3 genes, cada gene selecionado do grupo que consiste nos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L e F3L.
33. O ácido nucleico da modalidade 32, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 4 genes, cada gene selecionado do grupo que consiste nos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L e F3L.
34. O ácido nucleico da modalidade 33, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 5 genes, cada gene selecionado do grupo que consiste nos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L e F3L.
35. O ácido nucleico da modalidade 34, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 6 genes, cada gene selecionado do grupo que consiste nos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L e F3L.
36. O ácido nucleico da modalidade 35, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 7 genes, cada gene selecionado do grupo que consiste nos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L e F3L.
37. O ácido nucleico da modalidade 36, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 8 genes, cada gene selecionado do grupo que consiste nos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L e F3L.
38. O ácido nucleico da modalidade 37, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 9 genes, cada gene selecionado do grupo que consiste nos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L e F3L.
39. O ácido nucleico da modalidade 38, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 10 genes, cada gene selecionado do grupo que consiste nos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L e F3L.
40. O ácido nucleico da modalidade 39, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 11 genes, cada gene selecionado do grupo que consiste nos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L e F3L.
41. O ácido nucleico da modalidade 40, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 12 genes, cada gene selecionado do grupo que consiste nos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L e F3L.
42. O ácido nucleico da modalidade 41, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 13 genes, cada gene selecionado do grupo que consiste nos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L e F3L.
43. O ácido nucleico da modalidade 42, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 14 genes, cada gene selecionado do grupo que consiste nos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L e F3L.
44. O ácido nucleico da modalidade 43, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 15 genes, cada gene selecionado do grupo que consiste nos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L e F3L.
45. O ácido nucleico da modalidade 44, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de cada um dos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L e F3L.
46. O ácido nucleico que compreende um genoma de ortopoxvírus recombinante de qualquer uma das modalidades 1-45, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 1 gene que codifica uma proteína envolvida na interação de hospedeiro.
47. O ácido nucleico da modalidade 46, em que a dita proteína afeta a adesão independente de cálcio à matriz extracelular.
48. O ácido nucleico da modalidade 46, em que a dita proteína é um inibidor de NF-B.
49. O ácido nucleico da modalidade 48, em que a dita proteína é codificada por um gene selecionado do grupo que consiste nos genes C2L, N1L, M2L, K1L e K7R.
50. O ácido nucleico da modalidade 46, em que a dita proteína é um inibidor de apoptose.
51. O ácido nucleico da modalidade 47, em que o dito inibidor de apoptose é um inibidor de caspase 9.
52. O ácido nucleico da modalidade 51, em que o dito inibidor de caspase 9 é codificado pelo gene F1L.
53. O ácido nucleico da modalidade 50, em que o dito inibidor de apoptose é uma proteína de tipo BCL-2.
54. O ácido nucleico da modalidade 53, em que a dita proteína de tipo BCL- 2 é codificada por N1L.
55. O ácido nucleico da modalidade 46, em que a dita proteína é um inibidor de fator regulador de interferon 3 (IRF3).
56. O ácido nucleico da modalidade 55, em que o dito inibidor IRF3 é codificado por N2L ou K7R.
57. O ácido nucleico da modalidade 46, em que a dita proteína é um inibidor de serina protease.
58. O ácido nucleico da modalidade 46, em que a dita proteína impede a fusão de célula.
59. O ácido nucleico da modalidade 58, em que a dita proteína é codificada por K2L.
60. O ácido nucleico da modalidade 46, em que a dita proteína é um inibidor de proteína quinase ativada por RNA (PKR).
61. O ácido nucleico da modalidade 60, em que a dita proteína é codificada por K1L ou K3L.
62. O ácido nucleico da modalidade 46, em que a dita proteína é um fator de virulência.
63. O ácido nucleico da modalidade 63, em que a dita proteína é codificada por F3L.
64. O ácido nucleico da modalidade 46, em que a dita proteína é um inibidor de IL-1-beta.
65. O ácido nucleico da modalidade 64, em que a dita proteína é codificada por B16R.
66. O ácido nucleico da modalidade 46, em que a dita proteína é um sequestrante de IFNα secretado.
67. O ácido nucleico da modalidade 67, em que a dita proteína é codificada por B19R.
68. O ácido nucleico que compreende um genoma de ortopoxvírus recombinante de qualquer uma das modalidades 1-67, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 1 gene que codifica uma proteína envolvida na replicação de DNA.
69. O ácido nucleico da modalidade 68, em que a dita proteína é uma nuclease de modificação de DNA.
70. O ácido nucleico da modalidade 69, em que a dita proteína é codificada por K4L.
71. O ácido nucleico da modalidade 70, em que a dita proteína é uma desoxiuridina trifosfatase (dUTPase).
72. O ácido nucleico da modalidade 71, em que a dUTPase é codificada por F2L.
73. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-72, em que pelo menos uma sequência de nucleotídeos inteira do gene deletado é deletada.
74. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-72, em que pelo menos um gene deletado é apenas parcialmente deletado, e em que a deleção parcial é suficiente para tornar o dito gene parcialmente deletado não funcional mediante introdução em uma célula hospedeira.
75. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-74, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende pelo menos duas cópias de repetições terminais invertidas (ITRs).
76. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-74, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante não tem quaisquer cópias de ITRs.
77. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-74, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção em pelo menos uma cópia de uma ITR selecionada do grupo que consiste em B21R-ITR, B22R- ITR, B23R-ITR, B24R-ITR, B25R-ITR, B26R-ITR, B27R-ITR, B28R-ITR e B29R- ITR.
78. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-74, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção em pelo menos todas as seguintes cópias de ITRs: B21R-ITR, B22R-ITR, B23R-ITR, B24R-ITR, B25R-ITR, B26R-ITR, B27R-ITR, B28R-ITR e B29R-ITR.
79. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-78, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção no gene B8R.
80. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-78, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende um gene B8R intacto.
81. Um ácido nucleico que compreende um genoma de ortopoxvírus recombinante, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende (i) uma deleção de cada um dos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, B20R e B8R; e (ii) uma deleção em cada cópia das seguintes ITRs: B21R-ITR, B22R-ITR, B23R-ITR, B24R-ITR, B25R-ITR, B26R-ITR, B27R-ITR, B28R-ITR e B29R-ITR.
82. Um ácido nucleico que compreende um genoma de ortopoxvírus recombinante, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende (i) uma deleção de cada um dos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L,
K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R; e (ii) uma deleção em cada cópia das seguintes ITRs: B21R-ITR, B22R-ITR, B23R-ITR, B24R-ITR, B25R-ITR, B26R-ITR, B27R-ITR, B28R-ITR e B29R-ITR, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende um gene B8R intacto.
83. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-82 que compreende adicionalmente pelo menos um transgene selecionado do grupo que consiste em um transgene que codifica um inibidor de ponto de verificação imune, um transgene que codifica uma interleucina (IL) e um transgene que codifica uma citocina.
84. O ácido nucleico da modalidade 83, em que o ácido nucleico compreende pelo menos dois transgenes selecionados do grupo que consiste em um transgene que codifica um inibidor de ponto de verificação imune, um transgene que codifica uma interleucina (IL) e um transgene que codifica uma citocina.
85. O ácido nucleico da modalidade 84, em que o ácido nucleico compreende um transgene que codifica um inibidor de ponto de verificação imune, um transgene que codifica uma interleucina (IL) e um transgene que codifica uma citocina.
86. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 83 ou 84, em que o dito ácido nucleico compreende um transgene que codifica um inibidor de ponto de verificação imune.
87. O ácido nucleico da modalidade 85 ou 86, em que o dito inibidor de ponto de verificação imune é selecionado do grupo que consiste em ligante OX40, ligante ICOS, anticorpo anti-CD47 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, anticorpo anti-CD40/CD40L ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, anticorpo anti-Lag3 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, anticorpo anti- CTLA-4 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, anticorpo anti-PD-L1 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, anticorpo anti-PD1 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, e anticorpo anti-Tim-3 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo.
88. O ácido nucleico da modalidade 87, em que o dito inibidor de ponto de verificação imune é um anticorpo anti-PD-L1 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo ou um anticorpo anti-CTLA-4 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo.
89. O ácido nucleico da modalidade 88, em que o dito inibidor de ponto de verificação imune é um anticorpo anti-PD1 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo.
90. O ácido nucleico da modalidade 88, em que o dito inibidor de ponto de verificação imune é um anticorpo anti-CTLA-4 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo.
91. O ácido nucleico da modalidade 83 ou 84, em que o dito ácido nucleico compreende um transgene que codifica uma interleucina (IL).
92. O ácido nucleico da modalidade 85 ou 91, em que a dita interleucina é selecionada do grupo que consiste em IL-1 alfa, IL-1 beta, IL-2, IL-4, IL-7, IL-10, p35 de IL-12, p40 de IL-12, p70 de IL-12, IL-15, IL-18, IL-21 e IL-23.
93. O ácido nucleico da modalidade 92, em que a dita interleucina é selecionada do grupo que consiste em p35 de IL-12, p40 de IL-12 e p70 de IL-12.
94. O ácido nucleico da modalidade 93, em que a dita interleucina é ligada à membrana.
95. O ácido nucleico da modalidade 94, em que a dita interleucina é ligada à membrana p70 de IL-12.
96. O ácido nucleico da modalidade 83 ou 84, em que o dito ácido nucleico compreende um transgene que codifica uma citocina.
97. O ácido nucleico da modalidade 96, em que a dita citocina é um interferon (IFN).
98. O ácido nucleico da modalidade 97, em que o dito interferon é selecionado do grupo que consiste em IFN-alfa, IFN-beta, IFN-delta, IFN-épsilon, IFN-tau, IFN-ômega, IFN-zeta e IFN-gama.
99. O ácido nucleico da modalidade 96, em que a dita citocina é uma proteína de membro de superfamília de TNF.
100. O ácido nucleico da modalidade 99, em que a dita proteína de membro de superfamília de TNF é selecionada do grupo que consiste em TRAIL, ligante Fas, LIGHT (TNFSF-14), TNF-alfa e ligante 4-1BB.
101. O ácido nucleico da modalidade 96, em que a dita citocina é selecionada do grupo que consiste em GM-CSF, ligante Flt3, ligante CD40, TGF- beta, VEGF-R2 e c-kit.
102. O ácido nucleico da modalidade 101, em que a dita citocina é ligante Flt3.
103. O ácido nucleico da modalidade 83-102, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção no gene B8R e pelo menos um transgene é inserido na deleção no gene B8R.
104. O ácido nucleico da modalidade 103, em que pelo menos dois transgenes são inseridos na deleção no gene B8R.
105. O ácido nucleico da modalidade 104, em que pelo menos três transgenes são inseridos na deleção no gene B8R.
106. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 103-105, em que pelo menos um transgene é inserido em um lócus que não está na deleção no gene B8R.
107. O ácido nucleico da modalidade 106, em que o lócus está na delimitação de uma deleção na extremidade 5’ do genoma de ortopoxvírus.
108. O ácido nucleico da modalidade 106, em que o lócus está na delimitação de uma deleção na extremidade 3’ do genoma de ortopoxvírus.
109. Um ácido nucleico que compreende um genoma de ortopoxvírus recombinante, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende (i) uma deleção de cada um dos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, B20R e B8R; (ii) uma deleção em cada cópia das seguintes ITRs: B21R-ITR, B22R-ITR, B23R-ITR, B24R-ITR, B25R-ITR, B26R-ITR, B27R-ITR, B28R-ITR e B29R-ITR; (iii) um transgene IL-12-TM inserido na deleção no gene B8R; (iv) um transgene ligante Flt3 inserido na deleção no gene B8R; e (v) um de: (a) um transgene que codifica um anticorpo anti-CTLA-4 de cadeia única ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo ou (b) (i) um transgene que codifica uma cadeia pesada de um anticorpo anti-
CTLA-4 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, e (ii) um transgene que codifica uma cadeia leve de um anticorpo anti-CTLA-4 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, em que o transgene (ou transgenes) em parte (v) é/são inseridos nas delimitações de uma deleção 5p presente no genoma de ortopoxvírus recombinante, e em que o anticorpo anti-CTLA-4 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo tem capacidade para se ligar a CTLA-4.
110. O ácido nucleico da modalidade 109, em que o genoma de ortopoxvírus é derivado de uma sequência da SEQ ID NO: 210, em que (a) a dita sequência derivada compreende uma deleção do gene B8R, e o transgene IL-12-TM, o transgene ligante Flt3, e o transgene (ou transgenes) que codifica o anticorpo anti-CTLA-4 de cadeia única ou dupla; (b) o transgene IL-12-TM codifica uma proteína que compreende uma sequência de aminoácidos é a SEQ ID NO: 212; (c) o transgene ligante Flt3 codifica uma proteína que compreende uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 213; e (d) o anticorpo anti-CTLA-4 compreende uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 211.
111. Um vírus que compreende o ácido nucleico que compreende o genoma de ortopoxvírus recombinante de qualquer uma das modalidades 1-110.
112. O vírus da modalidade 111, em que a) o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 2 genes selecionados do grupo que consiste nos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R; b) o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 1 gene selecionado do grupo que consiste nos genes B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R; ou c) o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende uma deleção de pelo menos 1 gene selecionados do grupo que consiste nos genes, C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L e F3L.
113. O vírus da modalidade 111 ou 112, em que o dito vírus é derivado de um vírus vaccinia.
114. O vírus da modalidade 113, em que o dito vírus vaccinia é derivado de uma cepa selecionada do grupo que consiste em Copenhagen, Western Reserve, Wyeth, Lister, EM63, ACAM2000, LC16m8, CV-1, vaccinia Ankara modificado (MVA), Dairen I, GLV-1h68, IHD-J, L-IVP, LC16mO, Tashkent, Tian Tan e WAU86/88-1.
115. O vírus da modalidade 114, em que o dito vírus vaccinia é derivado de uma cepa selecionada do grupo que consiste em Copenhagen, Western Reserve, Tian Tan, Wyeth e Lister.
116. O vírus da modalidade 115, em que o dito vírus vaccinia é um derivado de um vírus vaccinia de cepa Copenhagen.
117. O vírus de qualquer uma das modalidades 111-116, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende adicionalmente um gene de Timidina Quinase (TK).
118. O vírus de qualquer uma das modalidades 111-117, em que o dito genoma de ortopoxvírus recombinante compreende adicionalmente um gene de ribonucleotídeo redutase.
119. O vírus de qualquer uma das modalidades 111-118, em que mediante o contato com uma população de células de mamíferos com o dito vírus, a população de células de mamíferos exibe formação de sincítios aumentada em relação a uma população de células de mamíferos do mesmo tipo em contato com uma forma do vírus que não compreende a dita deleção.
120. O vírus de qualquer uma das modalidades 111-119, em que mediante contato com uma população de células de mamíferos com o dito vírus, a população de células de mamíferos exibe espalhamento aumentado do vírus em relação a uma população de células de mamíferos do mesmo tipo em contato com uma forma do vírus que não compreende a dita deleção.
121. O vírus de qualquer uma das modalidades 111-120, em que o dito vírus exerce um efeito citotóxico aumentado em uma população de células de mamíferos em relação àquela de uma forma do vírus que não compreende a dita deleção.
122. O vírus de qualquer uma das modalidades 119-121, em que as ditas células de mamíferos são células humanas.
123. O vírus de modalidade 122, em que as ditas células humanas são células de câncer.
124. O vírus de qualquer uma das modalidades 119-121, em que as ditas células de mamíferos são de uma linhagem celular selecionada do grupo que consiste em U2OS, 293, 293T, Vero, HeLa, A549, BHK, BSC40, CHO, OVCAR-8, 786-0, NCI-H23, U251, SF-295, T-47D, SKMEL2, BT-549, SK-MEL-28, MDA-MB- 231, SK-OV-3, MCF7, M14, SF-268, CAKI-1, HPAV, OVCAR-4, HCT15, K-562 e HCT-116.
125. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-110 ou o vírus de qualquer uma das modalidades 111-124, em que o dito ácido nucleico ou o dito vírus compreende adicionalmente um transgene que codifica um antígeno associado a tumor.
126. O ácido nucleico ou o vírus da modalidade 125, em que o dito antígeno associado a tumor é um antígeno associado a tumor listado em qualquer uma das Tabelas 3-30.
127. O ácido nucleico ou o vírus da modalidade 126, em que o dito antígeno associado a tumor é um antígeno associado a tumor selecionado do grupo que consiste em CD19, CD33, EpCAM, CEA, PSMA, EGFRvIII, CD133, EGFR, CDH19, ENPP3, DLL3, MSLN, ROR1, HER2, HLAA2, EpHA2, EpHA3, MCSP, CSPG4, NG2, RON, FLT3, BCMA, CD20, FAPα, FRα, CA-9, PDGFRα, PDGFRβ, FSP1, S100A4, ADAM12m, RET, MET, FGFR, INSR e NTRK.
128. O ácido nucleico ou o vírus da modalidade 125, em que o dito antígeno associado a tumor compreende MAGE-A3, ou um ou mais fragmentos dos mesmos.
129. O ácido nucleico ou o vírus da modalidade 125, em que o dito antígeno associado a tumor compreende NY-ESO-1 ou um ou mais fragmentos do mesmo.
130. O ácido nucleico ou o vírus da modalidade 125, em que o dito antígeno associado a tumor compreende uma ou mais proteínas de papilomavírus humano (HPV) ou fragmentos das mesmas.
131. O ácido nucleico ou o vírus da modalidade 125, em que as ditas proteínas de HPV ou fragmentos das mesmas compreendem um ou mais de (i) proteínas E6 e E7, ou fragmentos das mesmas, de HPV16 e (ii) proteínas E6 e E7,
ou fragmentos das mesmas, de HPV18.
132. O ácido nucleico ou o vírus de modalidade 131, em que as sequências das ditas proteínas de HPV ou fragmentos são divulgados na Publicação de Patente Internacional nº WO/2014/127478, cujo conteúdo é incorporado ao presente documento a título de referência.
133. O ácido nucleico ou o vírus da modalidade 125, em que o dito antígeno associado a tumor compreende brachyury ou um ou mais fragmentos do mesmo.
134. O ácido nucleico ou o vírus da modalidade 125, em que o dito antígeno associado a tumor compreende fosfatase de ácido prostático, ou um ou mais fragmentos da mesma.
135. Uma linhagem celular empacotadora que compreende o ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-110 ou o vírus de qualquer uma das modalidades 111-124.
136. Um método para tratar câncer em um paciente mamífero, em que o dito método compreende administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz do vírus de qualquer uma das modalidades 111-134 ao dito paciente.
137. O método da modalidade 136, em que o dito paciente mamífero é um paciente humano.
138. O método da modalidade 136 ou 137, em que o vírus é usado como um iniciador em um tratamento de iniciador:reforço.
139. O método da modalidade 136 ou 137, em que o vírus é usado como um reforço em um tratamento de iniciador:reforço.
140. O método de qualquer uma das modalidades 136-139, em que o dito paciente mamífero tem câncer.
141. O método da modalidade 140, em que o dito câncer é selecionado do grupo que consiste em leucemia, linfoma, câncer de fígado, câncer ósseo, câncer de pulmão, câncer de cérebro, câncer de bexiga, câncer gastrointestinal, câncer de mama, câncer cardíaco, câncer cervical, câncer uterino, câncer de cabeça e pescoço, câncer de vesícula biliar, câncer laríngeo, câncer de lábio e cavidade oral, câncer ocular, melanoma, câncer pancreático, câncer de próstata, câncer colorretal, câncer testicular e câncer de garganta.
142. O método da modalidade 140, em que o dito câncer é selecionado do grupo que consiste em leucemia linfoblástica aguda (ALL), leucemia mieloide aguda (AML), leucemia linfocítica crônica (CLL), leucemia mieloide crônica (CML), carcinoma adrenocortical, linfoma relacionado a AIDS, linfoma primário de SNC, câncer anal, câncer de apêndice, astrocitoma, tumor teratoide/rabdoide atípico, carcinoma de célula basal, câncer de ducto biliar, câncer extra-hepático, família de sarcoma de Ewing, osteossarcoma e histiocitoma fibroso maligno, tumores embrionários de sistema nervoso central, tumores de célula germinativa de sistema nervoso central, craniofaringioma, ependimoma, tumores brônquicos, linfoma de Burkitt, tumor carcinoide, linfoma primário, cordoma, neoplasmas mieloproliferativos crônicos, câncer de cólon, câncer de ducto biliar extra-hepático, carcinoma ductal in situ (DCIS), câncer de endométrio, ependimoma, câncer esofágico, estesioneuroblastoma, tumor de célula germinativa extracrania, tumor de célula germinativa extragonadal, câncer de trompa de falópio, histiocitoma fibroso de osso, tumor carcinoide gastrointestinal, tumores estromais gastrointestinais (GIST), tumor de célula germinativa testicular, doença trofoblástica gestacional, glioma, glioma de tronco encefálico infantil, leucemia de células pilosas, câncer hepatocelular, histiocitose de células de Langerhans, linfoma de Hodgkin, câncer hipofaríngeo, tumores de célula de ilhota, tumores neuroendócrinos pancreáticos, tumor de Wilms e outros tumores renais infantis, histiocitose de células de Langerhans, câncer de pulmão de células pequenas, linfoma cutâneo de células T, melanoma intraocular, carcinoma de células de Merkel, mesotelioma, câncer metastático de pescoço de células escamosas, carcinoma de trato intermediário, síndromes de neoplasia endócrina múltipla, mieloma múltiplo/neoplasma de célula plasmática, síndromes mielodisplásicas, câncer de cavidade nasal e seio paranasal, câncer de nasofaringe, neuroblastoma, linfoma não Hodgkin (NHL), câncer de pulmão de células não pequenas (NSCLC), câncer de ovário epitelial, câncer de ovário de célula germinativa, câncer de ovário de baixo potencial maligno, tumores neuroendócrinos pancreáticos, papilomatose, paraganglioma, seio paranasal e câncer de cavidade nasal, câncer de paratireoide, câncer de pênis, câncer faríngeo, feocromocitoma, tumor pituitário, blastoma pleuropulmonar, câncer peritoneal primário, câncer retal, retinoblastoma, rabdomiossarcoma, câncer de glândula salivar, sarcoma de Kaposi,
rabdomiossarcoma, síndrome de Sézary, câncer de intestino delgado, sarcoma de tecido mole, câncer de garganta, carcinoma timoma e tímico, câncer de tireoide, câncer de célula transitória da pelve renal e ureter, câncer de uretra, câncer uterino de endométrio, sarcoma uterino, câncer vaginal, câncer vulvar e macroglobulinemia de Waldenström.
143. O método de qualquer uma das modalidades 136-142, em que o dito método compreende adicionalmente administrar ao dito paciente um inibidor de ponto de verificação imune.
144. O método da modalidade 143, em que o dito inibidor de ponto de verificação imune é selecionado do grupo que consiste em ligante OX40, ligante ICOS, anticorpo anti-CD47 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, anticorpo anti-CD40/CD40L ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, anticorpo anti-Lag3 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, anticorpo anti- CTLA-4 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, anticorpo anti-PD-L1 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, anticorpo anti-PD1 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, e anticorpo anti-Tim-3 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo.
145. O método da modalidade 144, em que o dito inibidor de ponto de verificação imune é um anticorpo anti-PD1 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo ou um anticorpo anti-CTLA-4 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo.
146. O método da modalidade 145, em que o dito inibidor de ponto de verificação imune é um anticorpo anti-PD1 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo.
147. O método da modalidade 145, em que o dito inibidor de ponto de verificação imune é um anticorpo anti-CTLA-4 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo.
148. O método de qualquer uma das modalidades 136-147, em que o dito método compreende adicionalmente administrar ao dito paciente uma interleucina.
149. O método da modalidade 148, em que a dita interleucina é selecionada do grupo que consiste em IL-1 alfa, IL-1 beta, IL-2, IL-4, IL-7, IL-10, p35 de IL-12, p40 de IL-12, p70 de IL-12, IL-15, IL-18, IL-21 e IL-23.
150. O método da modalidade 149, em que a dita interleucina é selecionada do grupo que consiste em p35 de IL-12, p40 de IL-12 e p70 de IL-12.
151. O método da modalidade 149 ou 150, em que a dita interleucina é ligada à membrana.
152. O método de qualquer uma das modalidades 136-151, em que o dito método compreende adicionalmente administrar ao dito paciente um interferon.
153. O método da modalidade 152, em que o dito interferon é selecionado do grupo que consiste em IFN-alfa, IFN-beta, IFN-delta, IFN-épsilon, IFN-tau, IFN-ômega, IFN-zeta e IFN-gama.
154. O método de qualquer uma das modalidades 136-153, em que o dito método compreende adicionalmente administrar ao dito paciente uma citocina.
155. O método da modalidade 154, em que a dita citocina é uma proteína de membro de superfamília de TNF.
156. O método da modalidade 155, em que a dita proteína de membro de superfamília de TNF é selecionada do grupo que consiste em TRAIL, ligante Fas, LIGHT (TNFSF-14), TNF-alfa e ligante 4-1BB.
157. O método da modalidade 154, em que a dita citocina é selecionada do grupo que consiste em GM-CSF, ligante Flt3, ligante CD40, TGF-beta, VEGF-R2 e cKit.
158. O método da modalidade 157, em que a dita citocina é ligante Flt3.
159. Um kit que compreende o ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-110 ou o vírus de qualquer uma das modalidades 111-134 e um inserto de pacote que instrui um usuário do dito kit para expressar o dito ácido nucleico ou o dito vírus em uma célula hospedeira.
160. Um kit que compreende o vírus de qualquer uma das modalidades 111- 134 e um inserto de pacote que instrui um usuário para administrar uma terapeuticamente eficaz quantidade do dito vírus a um paciente mamífero que tem câncer, assim tratando o dito câncer.
161. O kit de modalidade 160, em que o dito paciente mamífero é um paciente humano.
162. O ácido nucleico da modalidade 94, em que a dita interleucina é ligada à membrana p35 de IL-12.
5.7.4. CONJUNTO 4
1. Um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende: (a) uma sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210, que compreende genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R parciais e que compreende uma deleção no gene B8R; (b) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo que se liga especificamente à Proteína 4 Associada a Linfócito T Citotóxico (CTLA-4), em que a primeira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 214; (c) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de Interleucina 12 (IL-12), em que a segunda sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 215; e (d) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica o ligante de tirosina quinase 3 de tipo FMS (FLT3L), em que a terceira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 216.
2. O ácido nucleico da modalidade 1, em que a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a primeira sequência de nucleotídeos, a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a segunda sequência de nucleotídeos, e a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a terceira sequência de nucleotídeos.
3. O ácido nucleico da modalidade 1 ou 2 que compreende adicionalmente uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos que codifica o anticorpo anti-CTLA-4.
4. O ácido nucleico da modalidade 3, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos que codifica o anticorpo anti-CTLA-4 é um promotor H5R, um promotor pS ou um promotor LEO.
5. O ácido nucleico da modalidade 3, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos que codifica o anticorpo anti-CTLA-4 é um promotor H5R.
6. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-5, que compreende adicionalmente uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos que codifica o polipeptídeo de IL-12.
7. O ácido nucleico da modalidade 6, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos que codifica o polipeptídeo de IL-12 é um promotor tardio.
8. O ácido nucleico da modalidade 7, em que o promotor tardio compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561, um promotor F17R ou um promotor D13L.
9. O ácido nucleico da modalidade 7, em que o promotor tardio compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561.
10. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-9, que compreende adicionalmente uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L.
11. O ácido nucleico da modalidade 10, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L é um promotor B8R, um promotor B19R, a E3L promotor, um promotor F11L ou um promotor B2R.
12. O ácido nucleico da modalidade 10, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L é um promotor B8R.
13. O ácido nucleico da modalidade 10, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L é um promotor B19R.
14. O ácido nucleico da modalidade 10, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L é um promotor B8R e um promotor B19R.
15. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-14, em que o primeiro transgene está presente entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais na SEQ ID NO: 210.
16. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-14, em que o segundo transgene está presente entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais na SEQ ID NO: 210.
17. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-14, em que o terceiro transgene está presente entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais na SEQ ID NO: 210.
18. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-14, em que o primeiro transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R.
19. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-14, em que o segundo transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R.
20. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-14, em que o terceiro transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R.
21. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-14, em que o primeiro transgene está presente entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais na SEQ ID NO: 210.
22. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-14, em que o segundo transgene está presente entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais na SEQ ID NO: 210.
23. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-14, em que o terceiro transgene está presente entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais na SEQ ID NO: 210.
24. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-14, em que o primeiro transgene e o segundo transgene estão presentes entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais na SEQ ID NO: 210.
25. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-14, em que o primeiro transgene e o segundo transgene estão presentes no lócus da deleção no gene B8R.
26. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-14, em que o primeiro transgene e o segundo transgene estão presentes entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais na SEQ ID NO: 210.
27. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-14, em que o primeiro transgene e o terceiro transgene estão presentes entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais na SEQ ID NO: 210.
28. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-14, em que o primeiro transgene e o terceiro transgene estão presentes no lócus da deleção no gene B8R.
29. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-14, em que o primeiro transgene e o terceiro transgene estão presentes entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais na SEQ ID NO: 210.
30. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-14, em que o segundo transgene e o terceiro transgene estão presentes entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais na SEQ ID NO: 210.
31. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-14, em que o segundo transgene e o terceiro transgene estão presentes no lócus da deleção no gene B8R.
32. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-14, em que o segundo transgene e o terceiro transgene estão presentes entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais na SEQ ID NO: 210.
33. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-14, em que o primeiro transgene está presente entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais na SEQ ID NO: 210, e o segundo transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R.
34. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-14, em que o segundo transgene está presente entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais na SEQ ID NO: 210, e o primeiro transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R.
35. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-14, em que o primeiro transgene está presente entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais na SEQ ID NO: 210, e o terceiro transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R.
36. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-14, em que o terceiro transgene está presente entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais na
SEQ ID NO: 210, e o primeiro transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R.
37. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-14, em que o segundo transgene está presente entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais na SEQ ID NO: 210, e o terceiro transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R.
38. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-14, em que o terceiro transgene está presente entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais na SEQ ID NO: 210, e o segundo transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R.
39. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-14, em que o primeiro transgene está presente entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais na SEQ ID NO: 210, e o segundo transgene está presente entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais na SEQ ID NO: 210.
40. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-14, em que o segundo transgene está presente entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais na SEQ ID NO: 210, e o primeiro transgene está presente entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais na SEQ ID NO: 210.
41. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-14, em que o primeiro transgene está presente entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais na SEQ ID NO: 210, e o terceiro transgene está presente entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais na SEQ ID NO: 210.
42. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-14, em que o terceiro transgene está presente entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais na SEQ ID NO: 210, e o primeiro transgene está presente entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais na SEQ ID NO: 210.
43. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-14, em que o segundo transgene está presente entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais na SEQ ID NO: 210, e o terceiro transgene está presente entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais na SEQ ID NO: 210.
44. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-14, em que o terceiro transgene está presente entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais na
SEQ ID NO: 210, e o segundo transgene está presente entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais na SEQ ID NO: 210.
45. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-14, em que o primeiro transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R, e o segundo transgene está presente entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais na SEQ ID NO: 210.
46. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-14, em que o segundo transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R, e o primeiro transgene está presente entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais na SEQ ID NO: 210.
47. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-14, em que o primeiro transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R, e o terceiro transgene está presente entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais na SEQ ID NO: 210.
48. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-14, em que o terceiro transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R, e o primeiro transgene está presente entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais na SEQ ID NO: 210.
49. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-14, em que o segundo transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R, e o terceiro transgene está presente entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais na SEQ ID NO: 210.
50. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-14, em que o terceiro transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R, e o segundo transgene está presente entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais na SEQ ID NO: 210.
51. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-14, em que o primeiro transgene, o segundo transgene, e o terceiro transgene estão presentes entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais na SEQ ID NO: 210.
52. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-14, em que o primeiro transgene, o segundo transgene e o terceiro transgene estão presentes no lócus da deleção no gene B8R.
53. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-14, em que o primeiro transgene, o segundo transgene, e o terceiro transgene estão presentes entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais na SEQ ID NO: 210.
54. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-14, em que o primeiro transgene está presente entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais na SEQ ID NO: 210, e o segundo transgene e o terceiro transgene estão presentes no lócus da deleção no gene B8R.
55. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-14, em que o segundo transgene está presente entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais na SEQ ID NO: 210, e o primeiro transgene e o terceiro transgene estão presentes no lócus da deleção no gene B8R.
56. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-14, em que o terceiro transgene está presente entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais na SEQ ID NO: 210, e o primeiro transgene e o segundo transgene estão presentes no lócus da deleção no gene B8R.
57. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-14, em que o primeiro transgene e o segundo transgene estão presentes entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais na SEQ ID NO: 210, e o terceiro transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R.
58. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-14, em que o primeiro transgene e o terceiro transgene estão presentes entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais na SEQ ID NO: 210, e o segundo transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R.
59. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-14, em que o segundo transgene e o terceiro transgene estão presentes entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais na SEQ ID NO: 210, e o primeiro transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R.
60. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-14, em que o primeiro transgene está presente entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais na SEQ ID NO: 210, e o segundo transgene e o terceiro transgene estão presentes entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais na SEQ ID NO: 210.
61. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-14, em que o segundo transgene está presente entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais na SEQ ID NO: 210, e o primeiro transgene e o terceiro transgene estão presentes entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais na SEQ ID NO: 210.
62. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-14, em que o terceiro transgene está presente entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais na SEQ ID NO: 210, e o primeiro transgene e o segundo transgene estão presentes entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais na SEQ ID NO: 210.
63. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-14, em que o primeiro transgene e o segundo transgene estão presentes entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais na SEQ ID NO: 210, e o terceiro transgene está presente entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais na SEQ ID NO: 210.
64. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-14, em que o primeiro transgene e o terceiro transgene estão presentes entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais na SEQ ID NO: 210, e o segundo transgene está presente entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais na SEQ ID NO: 210.
65. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-14, em que o segundo transgene e o terceiro transgene estão presentes entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais na SEQ ID NO: 210, e o primeiro transgene está presente entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais na SEQ ID NO: 210.
66. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-14, em que o primeiro transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R, e o segundo transgene e o terceiro transgene estão presentes entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais na SEQ ID NO: 210.
67. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-14, em que o segundo transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R, e o primeiro transgene e o terceiro transgene estão presentes entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais na SEQ ID NO: 210.
68. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-14, em que o terceiro transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R, e o primeiro transgene e o segundo transgene estão presentes entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais na SEQ ID NO: 210.
69. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-14, em que o primeiro transgene e o segundo transgene estão presentes no lócus da deleção no gene B8R, e o terceiro transgene está presente entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais na SEQ ID NO: 210.
70. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-14, em que o primeiro transgene e o terceiro transgene estão presentes no lócus da deleção no gene B8R, e o segundo transgene está presente entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais na SEQ ID NO: 210.
71. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-14, em que o segundo transgene e o terceiro transgene estão presentes no lócus da deleção no gene B8R, e o primeiro transgene está presente entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais na SEQ ID NO: 210.
72. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-14, em que o primeiro transgene está presente entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais na SEQ ID NO: 210, o segundo transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R, e o terceiro transgene está presente entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais na SEQ ID NO: 210.
73. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-14, em que o primeiro transgene está presente entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais na SEQ ID NO: 210, o terceiro transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R, e o segundo transgene está presente entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais na SEQ ID NO: 210.
74. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-14, em que o segundo transgene está presente entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais na SEQ ID NO: 210, o primeiro transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R, e o terceiro transgene está presente entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais na SEQ ID NO: 210.
75. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-14, em que o segundo transgene está presente entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais na SEQ ID NO: 210, o terceiro transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R, e o primeiro transgene está presente entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais na SEQ ID NO: 210.
76. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-14, em que o terceiro transgene está presente entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais na SEQ ID NO: 210, o primeiro transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R, e o segundo transgene está presente entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais na SEQ ID NO: 210.
77. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-14, em que o terceiro transgene está presente entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais na SEQ ID NO: 210, o segundo transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R, e o primeiro transgene está presente entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais na SEQ ID NO: 210.
78. Um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende: (a) uma sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210, que compreende genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R parciais e que compreende uma deleção no gene B8R; (b) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo que se liga especificamente a CTLA-4, em que a primeira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 214; (c) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12, em que a segunda sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 215; e (d) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L, em que a terceira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 216; em que o ácido nucleico compreende adicionalmente: (i) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor H5R; (ii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos é um promotor tardio que compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561; e (iii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R e um promotor B19R.
79. O ácido nucleico da modalidade 78, em que a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a primeira sequência de nucleotídeos, a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a segunda sequência de nucleotídeos, e a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a terceira sequência de nucleotídeos.
80. O ácido nucleico da modalidade 78 ou 79, em que o primeiro transgene está presente entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais na SEQ ID NO: 210, e o segundo transgene e o terceiro transgene estão presentes no lócus da deleção no gene B8R.
81. O ácido nucleico da modalidade 78 ou 79, em que o primeiro transgene está presente entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais na SEQ ID NO: 210, e o segundo transgene e o terceiro transgene estão presentes no lócus da deleção no gene B8R.
82. O ácido nucleico da modalidade 80 ou 81, em que o terceiro transgene está a montante do segundo transgene.
83. O ácido nucleico da modalidade 80 ou 81, em que o terceiro transgene está a jusante do segundo transgene.
84. Um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende: (a) uma sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210, que compreende genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R parciais e que compreende uma deleção no gene B8R; (b) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo que se liga especificamente a CTLA-4, em que a primeira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 214, e em que a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a primeira sequência de nucleotídeos e o primeiro transgene está presente entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais da sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210; (c) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12, em que a segunda sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 215, e em que a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a segunda sequência de nucleotídeos e o segundo transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R da sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210; e (d) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L, em que a terceira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 216, em que a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a terceira sequência de nucleotídeos e o terceiro transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R da sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210, e em que o terceiro transgene está a montante do segundo transgene; em que o ácido nucleico compreende adicionalmente: (i) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor H5R; (ii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos é um promotor tardio que compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561; e (iii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R ou um promotor B19R.
85. O ácido nucleico da modalidade 84, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R e um promotor B19R.
86. O ácido nucleico da modalidade 85, em que o promotor B8R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 564 e o promotor B19R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 565.
87. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 84-86, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor inicial H5R ou um promotor tardio H5R.
88. O ácido nucleico da modalidade 87, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor inicial H5R e um promotor tardio H5R.
89. O ácido nucleico da modalidade 88, em que o promotor inicial H5R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 553 e o promotor tardio H5R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 554.
90. Um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende: (a) uma sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210, que compreende genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R parciais e que compreende uma deleção no gene B8R; (b) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo que se liga especificamente a CTLA-4, em que a primeira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 214, e em que a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a primeira sequência de nucleotídeos e o primeiro transgene está presente entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais da sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210; (c) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12, em que a segunda sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 215, e em que a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a segunda sequência de nucleotídeos e o segundo transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R da sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210; e (d) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L, em que a terceira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 216, em que a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a terceira sequência de nucleotídeos e o terceiro transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R da sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210, e em que o terceiro transgene está a jusante do segundo transgene; em que o ácido nucleico compreende adicionalmente: (i) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor H5R; (ii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos é um promotor tardio que compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561; e (iii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R ou um promotor B19R.
91. O ácido nucleico da modalidade 90, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R e um promotor B19R.
92. O ácido nucleico da modalidade 91, em que o promotor B8R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 564 e o promotor B19R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 565.
93. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 90-92, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor inicial H5R ou um promotor tardio H5R.
94. O ácido nucleico da modalidade 93, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor inicial H5R e um promotor tardio H5R.
95. O ácido nucleico da modalidade 94, em que o promotor inicial H5R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 553 e o promotor tardio H5R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 554.
96. Um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende: (a) uma sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210, que compreende genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R parciais e que compreende uma deleção no gene B8R; (b) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo que se liga especificamente a CTLA-4, em que a primeira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 214, e em que a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a primeira sequência de nucleotídeos e o primeiro transgene está presente entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais na SEQ ID NO: 210; (c) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12, em que a segunda sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 215, e em que a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a segunda sequência de nucleotídeos e o segundo transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R da sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210; e (d) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L, em que a terceira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 216, em que a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a terceira sequência de nucleotídeos e o terceiro transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R da sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210, e em que o terceiro transgene está a montante do segundo transgene;
em que o ácido nucleico compreende adicionalmente: (i) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor H5R; (ii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos é um promotor tardio que compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561; e (iii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R ou um promotor B19R.
97. O ácido nucleico da modalidade 96, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R e um promotor B19R.
98. O ácido nucleico da modalidade 97, em que o promotor B8R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 564 e o promotor B19R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 565.
99. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 96-98, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor inicial H5R ou um promotor tardio H5R.
100. O ácido nucleico da modalidade 99, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor inicial H5R e um promotor tardio H5R.
101. O ácido nucleico da modalidade 100, em que o promotor inicial H5R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 553 e o promotor tardio H5R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 554.
102. Um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende: (a) uma sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210,
que compreende genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R parciais e que compreende uma deleção no gene B8R; (b) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo que se liga especificamente a CTLA-4, em que a primeira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 214, e em que a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a primeira sequência de nucleotídeos e o primeiro transgene está presente entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais da sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210; (c) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12, em que a segunda sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 215, e em que a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a segunda sequência de nucleotídeos e o segundo transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R da sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210; e (d) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L, em que a terceira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 216, em que a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a terceira sequência de nucleotídeos e o terceiro transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R da sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210, e em que o terceiro transgene está a jusante do segundo transgene; em que o ácido nucleico compreende adicionalmente: (i) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor H5R; (ii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos é um promotor tardio que compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561; e (iii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R ou um promotor B19R.
103. O ácido nucleico da modalidade 102, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R e um promotor B19R.
104. O ácido nucleico da modalidade 103, em que o promotor B8R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 564 e o promotor B19R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 565.
105. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 102-104, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor inicial H5R ou um promotor tardio H5R.
106. O ácido nucleico da modalidade 105, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor inicial H5R e um promotor tardio H5R.
107. O ácido nucleico da modalidade 106, em que o promotor inicial H5R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 553 e o promotor tardio H5R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 554.
108. Um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende: (a) uma sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210, que compreende genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R parciais e que compreende uma deleção no gene B8R; (b) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo que se liga especificamente a CTLA-4, em que a primeira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 214, e em que a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a primeira sequência de nucleotídeos e o primeiro transgene está presente entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais da sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210;
(c) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12, em que a segunda sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 215, e em que a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a segunda sequência de nucleotídeos e o segundo transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R da sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210; e (d) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L, em que a terceira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 216, em que a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a terceira sequência de nucleotídeos e o terceiro transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R da sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210, e em que o terceiro transgene está a montante do segundo transgene; em que o ácido nucleico compreende adicionalmente: (i) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor pS; (ii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos é um promotor tardio que compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561; e (iii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R ou um promotor B19R.
109. O ácido nucleico da modalidade 108, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R e um promotor B19R.
110. O ácido nucleico da modalidade 109, em que o promotor B8R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 564 e o promotor B19R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 565.
111. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 108-110, em que a sequência de nucleotídeos do pS compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 555, SEQ ID NO: 556 ou SEQ ID NO: 557.
112. Um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende: (a) uma sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210, que compreende genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R parciais e que compreende uma deleção no gene B8R; (b) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo que se liga especificamente a CTLA-4, em que a primeira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 214, e em que a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a primeira sequência de nucleotídeos e o primeiro transgene está presente entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais da sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210; (c) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12, em que a segunda sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 215, e em que a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a segunda sequência de nucleotídeos e o segundo transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R da sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210; e (d) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L, em que a terceira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 216, em que a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a terceira sequência de nucleotídeos e o terceiro transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R da sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210, e em que o terceiro transgene está a jusante do segundo transgene; em que o ácido nucleico compreende adicionalmente:
(i) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor pS; (ii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos é um promotor tardio que compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561; e (iii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R ou um promotor B19R.
113. O ácido nucleico da modalidade 112, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R e um promotor B19R.
114. O ácido nucleico da modalidade 113, em que o promotor B8R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 564 e o promotor B19R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 565.
115. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 112-114, em que a sequência de nucleotídeos do pS compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 555, SEQ ID NO: 556 ou SEQ ID NO: 557.
116. Um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende: (a) uma sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210, que compreende genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R parciais e que compreende uma deleção no gene B8R; (b) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo que se liga especificamente a CTLA-4, em que a primeira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 214, e em que a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a primeira sequência de nucleotídeos e o primeiro transgene está presente entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais da sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210; (c) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12, em que a segunda sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 215, e em que a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a segunda sequência de nucleotídeos e o segundo transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R da sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210; e (d) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L, em que a terceira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 216, em que a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a terceira sequência de nucleotídeos e o terceiro transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R da sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210, e em que o terceiro transgene está a montante do segundo transgene; em que o ácido nucleico compreende adicionalmente: (i) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor pS; (ii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos é um promotor tardio que compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561; e (iii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R ou um promotor B19R.
117. O ácido nucleico da modalidade 116, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R e um promotor B19R.
118. O ácido nucleico da modalidade 117, em que o promotor B8R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 564 e o promotor B19R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 565.
119. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 116-118, em que a sequência de nucleotídeos do pS compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 555, SEQ ID NO: 556 ou SEQ ID NO: 557.
120. Um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende: (a) uma sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210, que compreende genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R parciais e que compreende uma deleção no gene B8R; (b) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo que se liga especificamente a CTLA-4, em que a primeira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 214, e em que a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a primeira sequência de nucleotídeos e o primeiro transgene está presente entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais da sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210; (c) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12, em que a segunda sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 215, e em que a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a segunda sequência de nucleotídeos e o segundo transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R da sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210; e (d) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L, em que a terceira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 216, em que a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a terceira sequência de nucleotídeos e o terceiro transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R da sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ
ID NO: 210, e em que o terceiro transgene está a jusante do segundo transgene; em que o ácido nucleico compreende adicionalmente: (i) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor pS; (ii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos é um promotor tardio que compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561; e (iii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R ou um promotor B19R.
121. O ácido nucleico da modalidade 120, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R e um promotor B19R.
122. O ácido nucleico da modalidade 121, em que o promotor B8R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 564 e o promotor B19R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 565.
123. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 120-122, em que a sequência de nucleotídeos do pS compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 555, SEQ ID NO: 556 ou SEQ ID NO: 557.
124. Um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende: (a) uma sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210, que compreende genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R parciais e que compreende uma deleção no gene B8R; (b) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo que se liga especificamente a CTLA-4, em que a primeira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 214, e em que a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a primeira sequência de nucleotídeos e o primeiro transgene está presente entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais da sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210; (c) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12, em que a segunda sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 215, e em que a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a segunda sequência de nucleotídeos e o segundo transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R da sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210; e (d) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L, em que a terceira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 216, em que a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a terceira sequência de nucleotídeos e o terceiro transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R da sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210, e em que o terceiro transgene está a montante do segundo transgene; em que o ácido nucleico compreende adicionalmente: (i) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor H5R; (ii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos é um promotor F17R; e (iii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R ou um promotor B19R.
125. O ácido nucleico da modalidade 124, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R e um promotor B19R.
126. O ácido nucleico da modalidade 125, em que o promotor B8R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 564 e o promotor B19R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 565.
127. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 124-126, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor inicial H5R ou um promotor tardio H5R.
128. O ácido nucleico da modalidade 127, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor inicial H5R e um promotor tardio H5R.
129. O ácido nucleico da modalidade 128, em que o promotor inicial H5R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 553 e o promotor tardio H5R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 554.
130. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 124-129, em que a sequência de nucleotídeos do promotor F17R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 563.
131. Um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende: (a) uma sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210, que compreende genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R parciais e que compreende uma deleção no gene B8R; (b) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo que se liga especificamente a CTLA-4, em que a primeira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 214, e em que a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a primeira sequência de nucleotídeos e o primeiro transgene está presente entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais da sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210; (c) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12, em que a segunda sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 215, e em que a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a segunda sequência de nucleotídeos e o segundo transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R da sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210; e (d) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L, em que a terceira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 216, em que a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a terceira sequência de nucleotídeos e o terceiro transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R, da sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210 e em que o terceiro transgene está a jusante do segundo transgene; em que o ácido nucleico compreende adicionalmente: (i) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor H5R; (ii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos é um promotor F17R; e (iii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R ou um promotor B19R.
132. O ácido nucleico da modalidade 131, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R e um promotor B19R.
133. O ácido nucleico da modalidade 132, em que o promotor B8R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 564 e o promotor B19R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 565.
134. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 131-133, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor inicial H5R ou um promotor tardio H5R.
135. O ácido nucleico da modalidade 134, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor inicial H5R e um promotor tardio H5R.
136. O ácido nucleico da modalidade 135, em que o promotor inicial H5R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 553 e o promotor tardio H5R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 554.
137. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 131-136, em que a sequência de nucleotídeos do promotor F17R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 563.
138. Um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende: (a) uma sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210, que compreende genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R parciais e que compreende uma deleção no gene B8R; (b) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo que se liga especificamente a CTLA-4, em que a primeira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 214, e em que a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a primeira sequência de nucleotídeos e o primeiro transgene está presente entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais da sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210; (c) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12, em que a segunda sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 215, e em que a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a segunda sequência de nucleotídeos e o segundo transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R da sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210; e (d) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L, em que a terceira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 216, em que a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a terceira sequência de nucleotídeos e o terceiro transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R da sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210, e em que o terceiro transgene está a montante do segundo transgene; em que o ácido nucleico compreende adicionalmente: (i) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor H5R; (ii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos é um promotor F17R; e (iii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R ou um promotor B19R.
139. O ácido nucleico da modalidade 138, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R e um promotor B19R.
140. O ácido nucleico da modalidade 139, em que o promotor B8R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 564 e o promotor B19R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 565.
141. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 138-140, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor inicial H5R ou um promotor tardio H5R.
142. O ácido nucleico da modalidade 141, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor inicial H5R e um promotor tardio H5R.
143. O ácido nucleico da modalidade 142, em que o promotor inicial H5R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 553 e o promotor tardio H5R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 554.
144. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 138-143, em que a sequência de nucleotídeos do promotor F17R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 563.
145. Um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende: (a) uma sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210, que compreende genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R parciais e que compreende uma deleção no gene B8R; (b) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo que se liga especificamente a CTLA-4, em que a primeira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 214, e em que a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a primeira sequência de nucleotídeos e o primeiro transgene está presente entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais da sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210; (c) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12, em que a segunda sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 215, e em que a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a segunda sequência de nucleotídeos e o segundo transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R da sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210; e (d) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L, em que a terceira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 216, em que a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a terceira sequência de nucleotídeos e o terceiro transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R da sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210, e em que o terceiro transgene está a jusante do segundo transgene; em que o ácido nucleico compreende adicionalmente: (i) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor H5R; (ii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos é um promotor F17R; e (iii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R e um promotor B19R.
146. O ácido nucleico da modalidade 145, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R e um promotor B19R.
147. O ácido nucleico da modalidade 146, em que o promotor B8R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 564 e o promotor B19R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 565.
148. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 145-147, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor inicial H5R ou um promotor tardio H5R.
149. O ácido nucleico da modalidade 148, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor inicial H5R e um promotor tardio H5R.
150. O ácido nucleico da modalidade 149, em que o promotor inicial H5R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 553 e o promotor tardio H5R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 554.
151. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 145-150, em que a sequência de nucleotídeos do promotor F17R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 563.
152. Um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende: (a) uma sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210, que compreende genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R parciais e que compreende uma deleção no gene B8R; (b) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo que se liga especificamente a CTLA-4, em que a primeira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 214, e em que a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a primeira sequência de nucleotídeos e o primeiro transgene está presente entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais da sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210; (c) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12, em que a segunda sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 215, e em que a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a segunda sequência de nucleotídeos e o segundo transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R da sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210; e (d) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L, em que a terceira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 216, em que a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a terceira sequência de nucleotídeos e o terceiro transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R da sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210, e em que o terceiro transgene está a montante do segundo transgene; em que o ácido nucleico compreende adicionalmente: (i) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor H5R; (ii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos é um promotor tardio que compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561; e
(iii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor E3L.
153. O ácido nucleico da modalidade 152, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor inicial H5R ou um promotor tardio H5R.
154. O ácido nucleico da modalidade 153, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor inicial H5R e um promotor tardio H5R.
155. O ácido nucleico da modalidade 154, em que o promotor inicial H5R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 553 e o promotor tardio H5R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 554.
156. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 152-155, em que a sequência de nucleotídeos do promotor E3L compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 567.
157. Um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende: (a) uma sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210, que compreende genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R parciais e que compreende uma deleção no gene B8R; (b) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo que se liga especificamente a CTLA-4, em que a primeira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 214, e em que a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a primeira sequência de nucleotídeos e o primeiro transgene está presente entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais da sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210; (c) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12, em que a segunda sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 215, e em que a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a segunda sequência de nucleotídeos e o segundo transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R da sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210; e (d) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L, em que a terceira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 216, em que a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a terceira sequência de nucleotídeos e o terceiro transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R da sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210, e em que o terceiro transgene está a jusante do segundo transgene; em que o ácido nucleico compreende adicionalmente: (i) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor H5R; (ii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos é um promotor tardio que compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561; e (iii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor E3L.
158. O ácido nucleico da modalidade 157, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor inicial H5R ou um promotor tardio H5R.
159. O ácido nucleico da modalidade 158, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor inicial H5R e um promotor tardio H5R.
160. O ácido nucleico da modalidade 159, em que o promotor inicial H5R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 553 e o promotor tardio
H5R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 554.
161. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 157-160, em que a sequência de nucleotídeos do promotor E3L compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 567.
162. Um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende: (a) uma sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210, que compreende genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R parciais e que compreende uma deleção no gene B8R; (b) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo que se liga especificamente a CTLA-4, em que a primeira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 214, e em que a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a primeira sequência de nucleotídeos e o primeiro transgene está presente entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais da sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210; (c) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12, em que a segunda sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 215, e em que a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a segunda sequência de nucleotídeos e o segundo transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R da sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210; e (d) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L, em que a terceira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 216, em que a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a terceira sequência de nucleotídeos e o terceiro transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R da sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210, e em que o terceiro transgene está a montante do segundo transgene; em que o ácido nucleico compreende adicionalmente: (i) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor H5R; (ii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos é um promotor tardio que compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561; e (iii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor E3L.
163. O ácido nucleico da modalidade 162, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor inicial H5R ou um promotor tardio H5R.
164. O ácido nucleico da modalidade 163, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor inicial H5R e um promotor tardio H5R.
165. O ácido nucleico da modalidade 164, em que o promotor inicial H5R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 553 e o promotor tardio H5R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 554.
166. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 162-165, em que a sequência de nucleotídeos do promotor E3L compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 567.
167. Um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende: (a) uma sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210, que compreende genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R parciais e que compreende uma deleção no gene B8R; (b) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo que se liga especificamente a CTLA-4, em que a primeira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 214, e em que a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a primeira sequência de nucleotídeos e o primeiro transgene está presente entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais da sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210; (c) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12, em que a segunda sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 215, e em que a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a segunda sequência de nucleotídeos e o segundo transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R da sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210; e (d) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L, em que a terceira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 216, em que a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a terceira sequência de nucleotídeos e o terceiro transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R da sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210, e em que o terceiro transgene está a jusante do segundo transgene; em que o ácido nucleico compreende adicionalmente: (i) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor H5R; (ii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos é um promotor tardio que compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561; e (iii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor E3L.
168. O ácido nucleico da modalidade 167, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor inicial H5R ou um promotor tardio H5R.
169. O ácido nucleico da modalidade 168, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor inicial H5R e um promotor tardio H5R.
170. O ácido nucleico da modalidade 169, em que o promotor inicial H5R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 553 e o promotor tardio H5R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 554.
171. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 167-170, em que a sequência de nucleotídeos do promotor E3L compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 567.
172. Um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende: (a) uma sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210, que compreende genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R parciais e que compreende uma deleção no gene B8R; (b) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo que se liga especificamente a CTLA-4, em que a primeira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 214, e em que a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a primeira sequência de nucleotídeos e o primeiro transgene está presente entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais da sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210; (c) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12, em que a segunda sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 215, e em que a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a segunda sequência de nucleotídeos e o segundo transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R da sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210; e (d) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L, em que a terceira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 216, em que a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a terceira sequência de nucleotídeos e o terceiro transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R da sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210, e em que o terceiro transgene está a montante do segundo transgene; em que o ácido nucleico compreende adicionalmente: (i) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor pS; (ii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos é um promotor F17R; e (iii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor E3L.
173. O ácido nucleico da modalidade 172, em que a sequência de nucleotídeos do promotor pS compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 555, SEQ ID NO: 556 ou SEQ ID NO: 557.
174. O ácido nucleico da modalidade 172 ou 173, em que a sequência de nucleotídeos do promotor F17R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 563.
175. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 172-174, em que a sequência de nucleotídeos do promotor E3L compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 567.
176. Um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende: (a) uma sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210, que compreende genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R parciais e que compreende uma deleção no gene B8R; (b) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo que se liga especificamente a CTLA-4, em que a primeira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 214, e em que a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a primeira sequência de nucleotídeos e o primeiro transgene está presente entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais da sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210; (c) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12, em que a segunda sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 215, e em que a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a segunda sequência de nucleotídeos e o segundo transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R da sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210; e (d) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L, em que a terceira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 216, em que a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a terceira sequência de nucleotídeos e o terceiro transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R da sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210, e em que o terceiro transgene está a jusante do segundo transgene; em que o ácido nucleico compreende adicionalmente: (i) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor pS; (ii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos é um promotor F17R; e (iii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor E3L.
177. O ácido nucleico da modalidade 176, em que a sequência de nucleotídeos do promotor pS compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 555, SEQ ID NO: 556 ou SEQ ID NO: 557.
178. O ácido nucleico da modalidade 176 ou 177, em que a sequência de nucleotídeos do promotor F17R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 563.
179. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 176-178, em que a sequência de nucleotídeos do promotor E3L compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 567.
180. Um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende: (a) uma sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210, que compreende genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R parciais e que compreende uma deleção no gene B8R; (b) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo que se liga especificamente a CTLA-4, em que a primeira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 214, e em que a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a primeira sequência de nucleotídeos e o primeiro transgene está presente entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais da sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210; (c) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12, em que a segunda sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 215, e em que a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a segunda sequência de nucleotídeos e o segundo transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R da sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210; e (d) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L, em que a terceira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 216, em que a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a terceira sequência de nucleotídeos e o terceiro transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R da sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210, e em que o terceiro transgene está a montante do segundo transgene; em que o ácido nucleico compreende adicionalmente: (i) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor pS; (ii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos é um promotor F17R; e (iii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor E3L.
181. O ácido nucleico da modalidade 180, em que a sequência de nucleotídeos do promotor pS compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 555, SEQ ID NO: 556 ou SEQ ID NO: 557.
182. O ácido nucleico da modalidade 170 ou 181, em que a sequência de nucleotídeos do promotor F17R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 563.
183. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 180-182, em que a sequência de nucleotídeos do promotor E3L compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 567.
184. Um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende: (a) uma sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210, que compreende genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R parciais e que compreende uma deleção no gene B8R; (b) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo que se liga especificamente a CTLA-4, em que a primeira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 214, e em que a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a primeira sequência de nucleotídeos e o primeiro transgene está presente entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais da sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210; (c) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12, em que a segunda sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 215, e em que a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a segunda sequência de nucleotídeos e o segundo transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R da sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210; e (d) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L, em que a terceira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 216, em que a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a terceira sequência de nucleotídeos e o terceiro transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R da sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210, e em que o terceiro transgene está a jusante do segundo transgene; em que o ácido nucleico compreende adicionalmente: (i) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor pS; (ii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos é um promotor F17R; e (iii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor E3L.
185. O ácido nucleico da modalidade 184, em que a sequência de nucleotídeos do promotor pS compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 555, SEQ ID NO: 556 ou SEQ ID NO: 557.
186. O ácido nucleico da modalidade 174 ou 185, em que a sequência de nucleotídeos do promotor F17R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 563.
187. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 184-186, em que a sequência de nucleotídeos do promotor E3L compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 567.
188. Um vírus que compreende o ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante de qualquer uma das modalidades 1-187.
189. Uma linhagem celular empacotadora que compreende o ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-187.
190. Uma linhagem celular empacotadora que compreende o vírus da modalidade 188.
191. Uma composição farmacêutica que compreende o vírus da modalidade 188 e um carreador fisiologicamente aceitável.
192. Um kit que compreende o ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-187 e um inserto de pacote que instrui um usuário do kit a expressar o ácido nucleico em uma célula hospedeira.
193. Um kit que compreende o vírus da modalidade 188 e um inserto de pacote que instrui um usuário do kit para expressar o vírus em uma célula hospedeira.
194. Um kit que compreende o vírus da modalidade 188 e um inserto de pacote que instrui um usuário para administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz do vírus a um paciente mamífero que tem câncer, assim tratando o câncer.
195. O kit da modalidade 194, em que o paciente mamífero é um paciente humano.
196. Um método para tratar câncer em um paciente mamífero, sendo que o método compreende administrar ao paciente mamífero uma quantidade terapeuticamente eficaz do vírus, conforme definido na modalidade 188.
197. Um método para tratar câncer em um paciente mamífero, sendo que o método compreende administrar ao paciente mamífero uma quantidade terapeuticamente eficaz da composição farmacêutica, conforme definido na modalidade 191.
198. O método da modalidade 196 ou 197, em que o paciente mamífero é um paciente humano.
199. O método de qualquer uma das modalidades 196-198, em que o câncer é selecionado do grupo que consiste em leucemia, linfoma, câncer de fígado, câncer ósseo, câncer de pulmão, câncer de cérebro, câncer de bexiga, câncer gastrointestinal, câncer de mama, câncer cardíaco, câncer cervical, câncer uterino, câncer de cabeça e pescoço, câncer de vesícula biliar, câncer laríngeo, câncer de lábio e cavidade oral, câncer ocular, melanoma, câncer pancreático, câncer de próstata, câncer colorretal, câncer testicular e câncer de garganta.
200. O método da modalidade 199, em que o método compreende adicionalmente administrar ao paciente mamífero um anticorpo anti-PD1 ou um anticorpo anti-PD-L1.
5.7.5. CONJUNTO 5
1. Um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende: (a) deleções nos seguintes genes: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B8R, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R; (b) deleções nos seguintes genes na repetição terminal invertida 3' (ITR): B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R e B29R; e (c) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que se liga especificamente à Proteína 4 Associada a Linfócito T Citotóxico (CTLA-4); em que as deleções nos genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R são deleções parciais.
2. O ácido nucleico da modalidade 1, que compreende adicionalmente uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos.
3. O ácido nucleico da modalidade 2, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor H5R, um promotor pS ou um promotor LEO.
4. O ácido nucleico da modalidade 2, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor H5R.
5. Um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende: (a) deleções nos seguintes genes: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R, e opcionalmente uma deleção no gene B8R; (b) deleções nos seguintes genes na ITR 3’: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R e B29R; (c) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que se liga especificamente à CTLA-4; e (d) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor H5R, um promotor pS ou um promotor LEO; em que as deleções nos genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R são deleções parciais.
6. O ácido nucleico da modalidade 5, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor H5R.
7. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-6, em que a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a primeira sequência de nucleotídeos.
8. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-7, em que a primeira sequência de nucleotídeos codifica uma sequência de aminoácidos que compreende a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 211.
9. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-8, em que a primeira sequência de nucleotídeos compreende a sequência estabelecida na SEQ ID NO:
214.
10. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-8, em que a primeira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 214.
11. Um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende: (a) deleções nos seguintes genes: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B8R, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R; (b) deleções nos seguintes genes na ITR 3’: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R e B29R; e (c) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de Interleucina 12 (IL-12); em que as deleções nos genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R são deleções parciais.
12. O ácido nucleico da modalidade 11, que compreende adicionalmente uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos.
13. O ácido nucleico da modalidade 12, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos é um promotor tardio.
14. O ácido nucleico da modalidade 13, em que o promotor tardio compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561, um promotor F17R ou um promotor D13L.
15. O ácido nucleico da modalidade 13, em que o promotor tardio compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561.
16. Um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende: (a) deleções nos seguintes genes: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R, e opcionalmente uma deleção no gene B8R;
(b) deleções nos seguintes genes na ITR 3’: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R e B29R; (c) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12; e (d) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos é um promotor tardio; em que as deleções nos genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R são deleções parciais.
17. O ácido nucleico da modalidade 16, em que o promotor tardio compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561, um promotor F17R ou um promotor D13L.
18. O ácido nucleico da modalidade 16, em que o promotor tardio compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561.
19. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 11-18, em que a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a segunda sequência de nucleotídeos.
20. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 11-19, em que o polipeptídeo de IL-12 está ligado à membrana.
21. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 11-20, em que o polipeptídeo de IL-12 compreende p35 de IL-12 ou p70 de IL-12.
22. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 11-21, em que o polipeptídeo de IL-12 compreende a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 212.
23. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 11-22, em que a segunda sequência de nucleotídeos compreende a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 215.
24. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 11-22, em que a segunda sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 215.
25. Um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende:
(a) deleções nos seguintes genes: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B8R, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R; (b) deleções nos seguintes genes na ITR 3’: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R e B29R; e (c) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica o ligante de tirosina quinase 3 de tipo FMS (FLT3L); em que as deleções nos genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R são deleções parciais.
26. O ácido nucleico da modalidade 25, que compreende adicionalmente uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos.
27. O ácido nucleico da modalidade 26, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R, um promotor B19R, a E3L promotor, um promotor F11L ou um promotor B2R.
28. O ácido nucleico da modalidade 26, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R.
29. O ácido nucleico da modalidade 26, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B19R.
30. O ácido nucleico da modalidade 26, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R e um promotor B19R.
31. Um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende: (a) deleções nos seguintes genes: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R, e opcionalmente uma deleção no gene B8R; (b) deleções nos seguintes genes na ITR 3’: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R e B29R; (c) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L; e (d) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R, um promotor B19R, um promotor E3L, um promotor F11L ou um promotor B2R; em que as deleções nos genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R são deleções parciais.
32. O ácido nucleico da modalidade 31, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R.
33. O ácido nucleico da modalidade 31, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B19R.
34. O ácido nucleico da modalidade 31, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R e um promotor B19R.
35. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 25-34, em que a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a terceira sequência de nucleotídeos.
36. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 25-35, em que o FLT3L compreende a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 213.
37. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 25-36, em que a terceira sequência de nucleotídeos compreende a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 216.
38. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 25-36, em que a terceira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 216.
39. Um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende: (a) deleções nos seguintes genes: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B8R, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R; (b) deleções nos seguintes genes na ITR 3’: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R e B29R; (c) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que se liga especificamente à CTLA-4; e (d) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12; em que as deleções nos genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R são deleções parciais.
40. O ácido nucleico da modalidade 39, que compreende adicionalmente uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos.
41. O ácido nucleico da modalidade 40, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor H5R, um promotor pS ou um promotor LEO.
42. O ácido nucleico da modalidade 40, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor H5R.
43. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 39-42, que compreende adicionalmente uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos.
44. O ácido nucleico da modalidade 43, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos é um promotor tardio.
45. O ácido nucleico da modalidade 44, em que o promotor tardio compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561, um promotor F17R ou um promotor D13L.
46. O ácido nucleico da modalidade 44, em que o promotor tardio compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561.
47. Um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende: (a) deleções nos seguintes genes: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R, e opcionalmente uma deleção no gene B8R; (b) deleções nos seguintes genes na ITR 3’: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R e B29R;
(c) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que se liga especificamente à CTLA-4; e (d) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12; em que as deleções nos genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R são deleções parciais; e em que o ácido nucleico compreende adicionalmente: (i) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor H5R, um promotor pS ou um promotor LEO; e/ou (ii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos é um promotor tardio.
48. O ácido nucleico que compreende a modalidade 47, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor H5R.
49. O ácido nucleico que compreende a modalidade 47 ou 48, em que o promotor tardio compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561, um promotor F17R ou um promotor D13L.
50. O ácido nucleico da modalidade 47 ou 48, em que o promotor tardio compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561.
51. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 39-50, em que a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a primeira sequência de nucleotídeos, e a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a segunda sequência de nucleotídeos.
52. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 39-51, em que o polipeptídeo de IL-12 está ligado à membrana.
53. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 39-52, em que o polipeptídeo de IL-12 compreende p35 de IL-12 ou p70 de IL-12.
54. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 39-53, em que a primeira sequência de nucleotídeos codifica uma sequência de aminoácidos que compreende a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 211.
55. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 39-54, em que a primeira sequência de nucleotídeos compreende a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 214.
56. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 39-54, em que a primeira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 214.
57. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 39-56, em que o polipeptídeo de IL-12 compreende a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 212.
58. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 39-57, em que a segunda sequência de nucleotídeos compreende a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 215.
59. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 39-57, em que a segunda sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 215.
60. Um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende: (a) deleções nos seguintes genes: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B8R, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R; (b) deleções nos seguintes genes na ITR 3’: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R e B29R; (c) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que se liga especificamente à CTLA-4; e (d) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L; em que as deleções nos genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R são deleções parciais.
61. O ácido nucleico da modalidade 60, que compreende adicionalmente uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos.
62. O ácido nucleico da modalidade 61, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor H5R, um promotor pS ou um promotor LEO.
63. O ácido nucleico da modalidade 61, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor H5R.
64. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 60-63, que compreende adicionalmente uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos.
65. O ácido nucleico da modalidade 64, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R, um promotor B19R, a E3L promotor, um promotor F11L ou um promotor B2R.
66. O ácido nucleico da modalidade 64, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R.
67. O ácido nucleico da modalidade 64, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B19R.
68. O ácido nucleico da modalidade 64, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R e um promotor B19R.
69. Um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende: (a) deleções nos seguintes genes: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R, e opcionalmente uma deleção no gene B8R; (b) deleções nos seguintes genes na ITR 3’: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R e B29R; (c) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que se liga especificamente à CTLA-4; e (d) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L;
em que as deleções nos genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R são deleções parciais; e em que o ácido nucleico compreende adicionalmente: (i) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor H5R, um promotor pS ou um promotor LEO; e/ou (ii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R, um promotor B19R, um promotor E3L, um promotor F11L ou um promotor B2R.
70. O ácido nucleico da modalidade 69, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor H5R.
71. O ácido nucleico da modalidade 69 ou 70, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R.
72. O ácido nucleico da modalidade 69 ou 70, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B19R.
73. O ácido nucleico da modalidade 69 ou 70, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R e um promotor B19R.
74. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 60-73, em que a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a primeira sequência de nucleotídeos e a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a terceira sequência de nucleotídeos.
75. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 60-74, em que a primeira sequência de nucleotídeos codifica uma sequência de aminoácidos que compreende a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 211.
76. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 60-75, em que a primeira sequência de nucleotídeos compreende a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 214.
77. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 60-75, em que a primeira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 214.
78. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 60-77, em que o FLT3L compreende a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 213.
79. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 60-78, em que a terceira sequência de nucleotídeos compreende a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 216.
80. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 60-78, em que a terceira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 216.
81. Um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende: (a) deleções nos seguintes genes: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B8R, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R; (b) deleções nos seguintes genes na ITR 3’: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R e B29R; (c) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12; e (d) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L; em que as deleções nos genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R são deleções parciais.
82. O ácido nucleico da modalidade 81, que compreende adicionalmente uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos.
83. O ácido nucleico da modalidade 82, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos é um promotor tardio.
84. O ácido nucleico da modalidade 83, em que o promotor tardio compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561, um promotor F17R ou um promotor D13L.
85. O ácido nucleico da modalidade 83, em que o promotor tardio compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561.
86. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 81-85, que compreende adicionalmente uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos.
87. O ácido nucleico da modalidade 86, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R, um promotor B19R, a E3L promotor, um promotor F11L ou um promotor B2R.
88. O ácido nucleico da modalidade 86, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R.
89. O ácido nucleico da modalidade 86, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B19R.
90. O ácido nucleico da modalidade 86, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R e um promotor B19R.
91. Um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende: (a) deleções nos seguintes genes: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R, e opcionalmente uma deleção no gene B8R; (b) deleções nos seguintes genes na ITR 3’: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R e B29R; (c) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12; e (d) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L; em que as deleções nos genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R são deleções parciais; e em que o ácido nucleico compreende adicionalmente: (i) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos é um promotor tardio; e/ou (ii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R, um promotor B19R, um promotor E3L, um promotor F11L ou um promotor B2R.
92. O ácido nucleico da modalidade 91, em que o promotor tardio compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561, um promotor F17R ou um promotor D13L.
93. O ácido nucleico da modalidade 91, em que o promotor tardio compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561.
94. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 91-93, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R.
95. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 91-93, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B19R.
96. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 91-93, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R e um promotor B19R.
97. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 81-96, em que a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a segunda sequência de nucleotídeos e a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes vaccinia endógeno que flanqueiam a terceira sequência de nucleotídeos.
98. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 81-97, em que o polipeptídeo de IL-12 está ligado à membrana.
99. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 81-98, em que o polipeptídeo de IL-12 compreende p35 de IL-12 ou p70 de IL-12.
100. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 81-99, em que o polipeptídeo de IL-12 compreende a sequência de aminoácidos estabelecida na
SEQ ID NO: 212.
101. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 81-100, em que a segunda sequência de nucleotídeos compreende a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 215.
102. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 81-100, em que a segunda sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 215.
103. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 81-102, em que o FLT3L compreende a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 213.
104. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 81-103, em que a terceira sequência de nucleotídeos compreende a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 216.
105. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 81-103, em que a terceira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 216.
106. Um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende: (a) deleções nos seguintes genes: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B8R, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R; (b) deleções nos seguintes genes na ITR 3’: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R e B29R; (c) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que se liga especificamente à CTLA-4; (d) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12; e (e) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L; em que as deleções nos genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R são deleções parciais.
107. O ácido nucleico da modalidade 106, que compreende adicionalmente uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos.
108. O ácido nucleico da modalidade 107, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor H5R, um promotor pS ou um promotor LEO.
109. O ácido nucleico da modalidade 107, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor H5R.
110. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 106-109, que compreende adicionalmente uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos.
111. O ácido nucleico da modalidade 110, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos é um promotor tardio.
112. O ácido nucleico da modalidade 111, em que o promotor tardio compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561, um promotor F17R ou um promotor D13L.
113. O ácido nucleico da modalidade 111, em que o promotor tardio compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561.
114. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 106-113, que compreende adicionalmente uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos.
115. O ácido nucleico da modalidade 114, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R, um promotor B19R, a E3L promotor, um promotor F11L ou um promotor B2R.
116. O ácido nucleico da modalidade 114, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R.
117. O ácido nucleico da modalidade 114, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B19R.
118. O ácido nucleico da modalidade 114, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R e um promotor B19R.
119. Um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende:
(a) deleções nos seguintes genes: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R, e opcionalmente uma deleção no gene B8R; (b) deleções nos seguintes genes na ITR 3’: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R e B29R; (c) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que se liga especificamente à CTLA-4; (d) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12; e (e) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L; em que as deleções nos genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R são deleções parciais; e em que o ácido nucleico compreende adicionalmente: (i) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor H5R, um promotor pS ou um promotor LEO; (ii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos é um promotor tardio; e/ou (iii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R, um promotor B19R, um promotor E3L, um promotor F11L ou um promotor B2R.
120. O ácido nucleico da modalidade 119, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor H5R.
121. O ácido nucleico da modalidade 119 ou 120, em que o promotor tardio compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561, um promotor F17R ou um promotor D13L.
122. O ácido nucleico da modalidade 119 ou 120, em que o promotor tardio compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561.
123. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 119-122, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R.
124. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 119-122, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B19R.
125. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 119-122, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R e um promotor B19R.
126. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 106-125, em que a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a primeira sequência de nucleotídeos, a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a segunda sequência de nucleotídeos, e a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a terceira sequência de nucleotídeos.
127. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 106-126, em que o polipeptídeo de IL-12 está ligado à membrana.
128. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 106-127, em que o polipeptídeo de IL-12 compreende p35 de IL-12 ou p70 de IL-12.
129. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 106-128, em que a primeira sequência de nucleotídeos codifica uma sequência de aminoácidos que compreende a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 211.
130. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 106-129, em que a primeira sequência de nucleotídeos compreende a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 214.
131. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 106-129, em que a primeira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 214.
132. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 106-131, em que o polipeptídeo de IL-12 compreende a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 212.
133. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 106-132, em que a segunda sequência de nucleotídeos compreende a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 215.
134. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 106-132, em que a segunda sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 215.
135. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 106-134, em que o FLT3L compreende a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 213.
136. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 106-135, em que a terceira sequência de nucleotídeos compreende a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 216.
137. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 106-135, em que a terceira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 216.
138. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 106-137, em que o primeiro transgene está presente entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais, e o segundo transgene e o terceiro transgene estão presentes no lócus da deleção no gene B8R.
139. O ácido nucleico da modalidade 138, em que o terceiro transgene está a montante do segundo transgene.
140. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-10, 39-80 e 106- 137, em que o primeiro transgene está presente entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais.
141. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 11-24, 39-59, e 81- 137, em que o segundo transgene está presente entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais.
142. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 25-38 e 60-137, em que o terceiro transgene está presente entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais.
143. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-10, 39-80, e 106- 137, em que o primeiro transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R.
144. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 11-24, 39-59, e 81- 137, em que o segundo transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R.
145. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 25-38 e 60-137, em que o terceiro transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R.
146. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-10, 39-80, e 106- 137, em que o primeiro transgene está presente entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais.
147. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 11-24, 39-59, e 81- 137, em que o segundo transgene está presente entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais.
148. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 25-38 e 60-137, em que o terceiro transgene está presente entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais.
149. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 39-59 e 106-137, em que o primeiro transgene e o segundo transgene estão presentes entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais.
150. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 39-59 e 106-137, em que o primeiro transgene e o segundo transgene estão presentes no lócus da deleção no gene B8R.
151. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 39-59 e 106-137, em que o primeiro transgene e o segundo transgene estão presentes entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais.
152. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 60-80 e 106-137, em que o primeiro transgene e o terceiro transgene estão presentes entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais.
153. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 60-80 e 106-137, em que o primeiro transgene e o terceiro transgene estão presentes no lócus da deleção no gene B8R.
154. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 60-80 e 106-137, em que o primeiro transgene e o terceiro transgene estão presentes entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais.
155. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 81-137, em que o segundo transgene e o terceiro transgene estão presentes entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais.
156. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 81-137, em que o segundo transgene e o terceiro transgene estão presentes no lócus da deleção no gene B8R.
157. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 81-137, em que o segundo transgene e o terceiro transgene estão presentes entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais.
158. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 39-59 e 106-137, em que o primeiro transgene está presente entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais, e o segundo transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R.
159. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 39-59 e 106-137, em que o segundo transgene está presente entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais, e o primeiro transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R.
160. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 60-80 e 106-137, em que o primeiro transgene está presente entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais, e o terceiro transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R.
161. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 60-80 e 106-137, em que o terceiro transgene está presente entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais, e o primeiro transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R.
162. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 81-137, em que o segundo transgene está presente entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais, e o terceiro transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R.
163. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 81-137, em que o terceiro transgene está presente entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais, e o segundo transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R.
164. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 39-59 e 106-137, em que o primeiro transgene está presente entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais, e o segundo transgene está presente entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais.
165. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 39-59 e 106-137, em que o segundo transgene está presente entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais, e o primeiro transgene está presente entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais.
166. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 60-80 e 106-137, em que o primeiro transgene está presente entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais, e o terceiro transgene está presente entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais.
167. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 60-80 e 106-137, em que o terceiro transgene está presente entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais, e o primeiro transgene está presente entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais.
168. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 81-137, em que o segundo transgene está presente entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais, e o terceiro transgene está presente entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais.
169. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 81-137, em que o terceiro transgene está presente entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais, e o segundo transgene está presente entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais.
170. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 39-59 e 106-137, em que o primeiro transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R, e o segundo transgene está presente entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais.
171. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 39-59 e 106-137, em que o segundo transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R, e o primeiro transgene está presente entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais.
172. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 60-80 e 106-137, em que o primeiro transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R, e o terceiro transgene está presente entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais.
173. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 60-80 e 106-137, em que o terceiro transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R, e o primeiro transgene está presente entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais.
174. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 81-137, em que o segundo transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R, e o terceiro transgene está presente entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais.
175. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 81-137, em que o terceiro transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R, e o segundo transgene está presente entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais.
176. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 106-137, em que o primeiro transgene, o segundo transgene, e o terceiro transgene estão presentes entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais.
177. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 106-137, em que o primeiro transgene, o segundo transgene e o terceiro transgene estão presentes no lócus da deleção no gene B8R.
178. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 106-137, em que o primeiro transgene, o segundo transgene, e o terceiro transgene estão presentes entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais.
179. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 106-137, em que o primeiro transgene está presente entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais, e o segundo transgene e o terceiro transgene estão presentes no lócus da deleção no gene B8R.
180. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 106-137, em que o segundo transgene está presente entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais, e o primeiro transgene e o terceiro transgene estão presentes no lócus da deleção no gene B8R.
181. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 106-137, em que o terceiro transgene está presente entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais, e o primeiro transgene e o segundo transgene estão presentes no lócus da deleção no gene B8R.
182. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 106-137, em que o primeiro transgene e o segundo transgene estão presentes entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais, e o terceiro transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R.
183. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 106-137, em que o primeiro transgene e o terceiro transgene estão presentes entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais, e o segundo transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R.
184. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 106-137, em que o segundo transgene e o terceiro transgene estão presentes entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais, e o primeiro transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R.
185. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 106-137, em que o primeiro transgene está presente entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais, e o segundo transgene e o terceiro transgene estão presentes entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais.
186. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 106-137, em que o segundo transgene está presente entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais, e o primeiro transgene e o terceiro transgene estão presentes entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais.
187. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 106-137, em que o terceiro transgene está presente entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais, e o primeiro transgene e o segundo transgene estão presentes entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais.
188. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 106-137, em que o primeiro transgene e o segundo transgene estão presentes entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais, e o terceiro transgene está presente entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais.
189. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 106-137, em que o primeiro transgene e o terceiro transgene estão presentes entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais, e o segundo transgene está presente entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais.
190. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 106-137, em que o segundo transgene e o terceiro transgene estão presentes entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais, e o primeiro transgene está presente entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais.
191. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 106-137, em que o primeiro transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R, e o segundo transgene e o terceiro transgene estão presentes entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais.
192. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 106-137, em que o segundo transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R, e o primeiro transgene e o terceiro transgene estão presentes entre os genes vaccinia B14R e
B29R parciais.
193. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 106-137, em que o terceiro transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R, e o primeiro transgene e o segundo transgene estão presentes entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais.
194. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 106-137, em que o primeiro transgene e o segundo transgene estão presentes no lócus da deleção no gene B8R, e o terceiro transgene está presente entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais.
195. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 106-137, em que o primeiro transgene e o terceiro transgene estão presentes no lócus da deleção no gene B8R, e o segundo transgene está presente entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais.
196. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 106-137, em que o segundo transgene e o terceiro transgene estão presentes no lócus da deleção no gene B8R, e o primeiro transgene está presente entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais.
197. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 106-137, em que o primeiro transgene está presente entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais, o segundo transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R, e o terceiro transgene está presente entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais.
198. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 106-137, em que o primeiro transgene está presente entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais, o terceiro transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R, e o segundo transgene está presente entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais.
199. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 106-137, em que o segundo transgene está presente entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais, o primeiro transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R, e o terceiro transgene está presente entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais.
200. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 106-137, em que o segundo transgene está presente entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais, o terceiro transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R, e o primeiro transgene está presente entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais.
201. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 106-137, em que o terceiro transgene está presente entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais, o primeiro transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R, e o segundo transgene está presente entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais.
202. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 106-137, em que o terceiro transgene está presente entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais, o segundo transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R, e o primeiro transgene está presente entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais.
203. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-202, em que a deleção no gene B8R é uma deleção de pelo menos 50% da sequência de genes B8R.
204. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-202, em que a deleção no gene B8R é uma deleção de pelo menos 60% da sequência de genes B8R.
205. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-202, em que a deleção no gene B8R é uma deleção de pelo menos 70% da sequência de genes B8R.
206. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-202, em que a deleção no gene B8R é uma deleção de pelo menos 80% da sequência de genes B8R.
207. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-202, em que a deleção no gene B8R é uma deleção de cerca de 75% da sequência de genes B8R.
208. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-202, em que a deleção no gene B8R é uma deleção de cerca de 80% da sequência de genes B8R.
209. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-208, em que o genoma de vírus vaccinia recombinante é derivado do genoma de um vírus vaccinia de cepa Copenhagen.
210. Um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende: (a) deleções nos seguintes genes: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R, e opcionalmente uma deleção no gene B8R; (b) deleções nos seguintes genes na ITR 3’: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R e B29R; (c) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que se liga especificamente à CTLA-4; (d) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12; e (e) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L; em que as deleções nos genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R são deleções parciais; e em que o ácido nucleico compreende adicionalmente: (i) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor H5R; (ii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos é um promotor tardio que compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561; e (iii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R e um promotor B19R.
211. O ácido nucleico da modalidade 210, em que a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a primeira sequência de nucleotídeos, a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a segunda sequência de nucleotídeos, e a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a terceira sequência de nucleotídeos.
212. O ácido nucleico da modalidade 210 ou 211, em que o primeiro transgene está presente entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais, e o segundo transgene e o terceiro transgene estão presentes no lócus da deleção no gene B8R.
213. O ácido nucleico da modalidade 210 ou 211, em que o primeiro transgene está presente entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais, e o segundo transgene e o terceiro transgene estão presentes no lócus da deleção no gene B8R.
214. O ácido nucleico da modalidade 212 ou 213, em que o terceiro transgene está a montante do segundo transgene.
215. O ácido nucleico da modalidade 212 ou 213, em que o terceiro transgene está a jusante do segundo transgene.
216. Um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende: (a) deleções nos seguintes genes: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R, e opcionalmente uma deleção no gene B8R; (b) deleções nos seguintes genes na ITR 3’: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R e B29R; (c) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que se liga especificamente à CTLA-4, em que a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a primeira sequência de nucleotídeos, e em que o primeiro transgene está presente entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais; (d) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12, em que a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a segunda sequência de nucleotídeos, e em que o segundo transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R; e (e) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L, em que a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a terceira sequência de nucleotídeos, em que o terceiro transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R, e em que o terceiro transgene está a montante do segundo transgene; em que as deleções nos genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R são deleções parciais; e em que o ácido nucleico compreende adicionalmente: (i) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor H5R; (ii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos é um promotor tardio que compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561; e (iii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R e um promotor B19R.
217. Um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende: (a) deleções nos seguintes genes: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R, e opcionalmente uma deleção no gene B8R; (b) deleções nos seguintes genes na ITR 3’: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R e B29R; (c) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que se liga especificamente à CTLA-4, em que a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a primeira sequência de nucleotídeos, e em que o primeiro transgene está presente entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais; (d) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12, em que a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a segunda sequência de nucleotídeos, e em que o segundo transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R; e (e) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L; em que as deleções nos genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R são deleções parciais, em que a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a terceira sequência de nucleotídeos, em que o terceiro transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R, e em que o terceiro transgene está a jusante do segundo transgene; e em que o ácido nucleico compreende adicionalmente: (i) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor H5R; (ii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos é um promotor tardio que compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561; e (iii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R e um promotor B19R.
218. Um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende: (a) deleções nos seguintes genes: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R, e opcionalmente uma deleção no gene B8R; (b) deleções nos seguintes genes na ITR 3’: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R e B29R; (c) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que se liga especificamente à CTLA-4, em que a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a primeira sequência de nucleotídeos, e em que o primeiro transgene está presente entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais; (d) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12, em que a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a segunda sequência de nucleotídeos, e em que o segundo transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R; e (e) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L; em que as deleções nos genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R são deleções parciais, em que a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueia a terceira sequência de nucleotídeos, em que o terceiro transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R, e em que o terceiro transgene está a montante do segundo transgene; e em que o ácido nucleico compreende adicionalmente: (i) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor H5R; (ii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos é um promotor tardio que compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561; e
(iii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R e um promotor B19R.
219. Um ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante que compreende: (a) deleções nos seguintes genes: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R, e opcionalmente uma deleção no gene B8R; (b) deleções nos seguintes genes na ITR 3’: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R e B29R; (c) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que se liga especificamente à CTLA-4, em que a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a primeira sequência de nucleotídeos, e em que o primeiro transgene está presente entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais; (d) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12, em que a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a segunda sequência de nucleotídeos, e em que o segundo transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R; e (e) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L; em que as deleções nos genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R são deleções parciais, em que a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a terceira sequência de nucleotídeos, em que o terceiro transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R, e em que o terceiro transgene está a jusante do segundo transgene; e em que o ácido nucleico compreende adicionalmente: (i) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor H5R; (ii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos é um promotor tardio que compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561; e (iii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R e um promotor B19R.
220. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-219, em que o genoma de vírus vaccinia recombinante compreende uma sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 624.
221. O ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-105, em que o genoma de vírus vaccinia recombinante compreende uma sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210.
222. Um vírus que compreende o ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante de qualquer uma das modalidades 1-221.
223. Uma linhagem celular empacotadora que compreende o ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-221.
224. Uma linhagem celular empacotadora que compreende o vírus da modalidade 222.
225. Uma composição farmacêutica que compreende o vírus da modalidade 222 e um carreador fisiologicamente aceitável.
226. Um kit que compreende o ácido nucleico de qualquer uma das modalidades 1-221 e um inserto de pacote que instrui um usuário do kit a expressar o ácido nucleico em uma célula hospedeira.
227. Um kit que compreende o vírus da modalidade 222 e um inserto de pacote que instrui um usuário do kit para expressar o vírus em uma célula hospedeira.
228. Um kit que compreende o vírus da modalidade 222 e um inserto de pacote que instrui um usuário para administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz do vírus a um paciente mamífero que tem câncer, assim tratando o câncer.
229. O kit da modalidade 228, em que o paciente mamífero é um paciente humano.
230. Um método para tratar câncer em um paciente mamífero, sendo que o método compreende administrar ao paciente mamífero uma quantidade terapeuticamente eficaz do vírus, conforme definido na modalidade 222.
231. Um método para tratar câncer em um paciente mamífero, sendo que o método compreende administrar ao paciente mamífero uma quantidade terapeuticamente eficaz da composição farmacêutica, conforme definido na modalidade 225.
232. O método da modalidade 230 ou 231, em que o paciente mamífero é um paciente humano.
233. O método de qualquer uma das modalidades 230-232, em que o câncer é selecionado do grupo que consiste em leucemia, linfoma, câncer de fígado, câncer ósseo, câncer de pulmão, câncer de cérebro, câncer de bexiga, câncer gastrointestinal, câncer de mama, câncer cardíaco, câncer cervical, câncer uterino, câncer de cabeça e pescoço, câncer de vesícula biliar, câncer laríngeo, câncer de lábio e cavidade oral, câncer ocular, melanoma, câncer pancreático, câncer de próstata, câncer colorretal, câncer testicular e câncer de garganta.
234. O método de qualquer uma das modalidades 230-233, em que o método compreende adicionalmente administrar ao paciente mamífero um inibidor de ponto de verificação imune.
235. O método da modalidade 234, em que o inibidor de ponto de verificação imune é selecionado do grupo que consiste em ligante OX40, ligante ICOS, anticorpo anti-CD47 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, anticorpo anti- CD40/CD40L ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, anticorpo anti-Lag3 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, anticorpo anti-CTLA-4 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, anticorpo anti-PD-L1 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, anticorpo anti-PD1 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, e anticorpo anti-Tim-3 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo.
236. O método da modalidade 234, em que o inibidor de ponto de verificação imune é um anticorpo anti-PD1 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo ou um anticorpo anti-CTLA-4 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo.
237. O método da modalidade 234, em que o inibidor de ponto de verificação imune é um anticorpo anti-PD1 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo.
238. O método da modalidade 234, em que o inibidor de ponto de verificação imune é um anticorpo anti-CTLA-4 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo.
239. O método da modalidade 234, em que o inibidor de ponto de verificação imune é um anticorpo anti-PD-L1 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo.
240. O método de qualquer uma das modalidades 219-228, em que o método compreende adicionalmente administrar ao paciente mamífero uma interleucina.
241. O método da modalidade 240, em que a interleucina é selecionada do grupo que consiste em IL-1 alfa, IL-1 beta, IL-2, IL-4, IL-7, IL-10, p35 de IL-12, p40 de IL-12, p70 de IL-12, IL-15, IL-18, IL-21 e IL-23.
242. O método da modalidade 240, em que a interleucina é selecionada do grupo que consiste em p35 de IL-12, p40 de IL-12 e p70 de IL-12.
243. O método de qualquer uma das modalidades 240-242, em que a interleucina é ligada à membrana.
244. O método de qualquer uma das modalidades 230-243, em que o método compreende adicionalmente administrar ao paciente mamífero um interferon.
245. O método da modalidade 244, em que o interferon é selecionado do grupo que consiste em IFN-alfa, IFN-beta, IFN-delta, IFN-épsilon, IFN-tau, IFN- ômega, IFN-zeta e IFN-gama.
246. O método de qualquer uma das modalidades 230-245, em que o método compreende adicionalmente administrar ao paciente mamífero uma citocina.
247. O método da modalidade 246, em que a citocina é uma proteína de membro de superfamília de TNF.
248. O método da modalidade 247, em que a proteína de membro de superfamília de TNF é selecionada do grupo que consiste em TRAIL, ligante Fas, LIGHT (TNFSF-14), TNF-alfa e ligante 4-1BB.
249. O método da modalidade 246, em que a citocina é selecionada do grupo que consiste em GM-CSF, ligante Flt3, ligante CD40, TGF-beta, VEGF-R2 e cKit.
250. O método da modalidade 246, em que a citocina é ligante Flt3.
5.8. TABELAS 3-45 REFERENCIADAS NO PEDIDO TABELA 3. CÂNCER DE OVÁRIO Nº Antígeno Epítopos Fontes associado a imunogênicos tumor relatados 1 Calicreína 4 FLGYLILGV (SEQ ID Wilkinson et al. Cancer NO: 410); Immunol. Immunother. SVSESDTIRSISIAS 61(2):169-79 (2012). (SEQ ID NO: 199); Hural et al. J. Immunol. LLANGRMPTVLQCVN 169(1):557-65 (2002). (SEQ ID NO: 209); e
RMPTVLQCVNVSVVS (SEQ ID NO: 220) 2 PBF CTACRWKKACQR Tsukahara et al. Cancer Res. (SEQ ID NO: 221) 64(15):5442-8 (2004). 3 PRAME VLDGLDVLL (SEQ ID Kessler et al. J. Exp. Med. NO: 222); 193(1):73-88 (2001). SLYSFPEPEA (SEQ ID Ikeda et al. Immunity 6(2):199- NO: 223); 208 (1997). ALYVDSLFFL (SEQ ID NO: 224); SLLQHLIGL (SEQ ID NO: 225); e LYVDSLFFL (SEQ ID NO: 226) 4 WT1 TSEKRPFMCAY (SEQ Asemissen et al. Clin. Cancer ID NO: 227); Res. 12(24):7476-82 (2006) CMTWNQMNL (SEQ ID Ohminami et al. Blood. NO: 228); 95(1):286-93 (2000). LSHLQMHSRKH (SEQ Guo et al. Blood. 106(4):1415-8 ID NO: 229); (2005). KRYFKLSHLQMHSRK Lin et al. J. Immunother. H (SEQ ID NO: 230); e 36(3):159-70 (2013). KRYFKLSHLQMHSRK Fujiki et al. J. Immunother. H (SEQ ID NO: 230) 30(3):282-93 (2007). 5 HSDL1 CYMEAVAL (SEQ ID Wick et al. Clin. Cancer Res. NO: 231) 20(5):1125-34 (2014).
Nº Antígeno Epítopos Fontes associado a imunogênicos tumor relatados 6 Mesotelina SLLFLLFSL (SEQ ID Hassan et al.
Appl.
NO: 232) Immunohistochem.
Mol.
VLPLTVAEV (SEQ ID Morphol. 13(3):243-7 (2005). NO: 233) Thomas et al J Exp Med. 2 de ALQGGGPPY (SEQ ID agosto de 2004; 200(3): 297– NO: 234) 306. LYPKARLAF (SEQ ID NO: 235) AFLPWHRLF (SEQ ID NO: 236) 7 NY-ESO-1 HLA-A2-peptídeo Jager et al.
Proc.
Natl.
Acad. restrito p157–165 Scie.
U.S.A. 103(39):14453-8 (SLLMWITQC (SEQ ID (2006). NO: 237)), HLA-Cw3- Gnjatic et al.
PNAS restrito p92–100 26 de setembro de 2000 vol. 97 (LAMPFATPM (SEQ ID nº 20 p. 10919 NO: 238)) e HLA-Cw6- Jager et al.
J Exp Med. restrito p80–88 187(2):265-70 (1998). (ARGPESRLL (SEQ ID Chen et al.
J Immunol.
NO: 239)) 165(2):948-55 (2000). SLLMWITQC (SEQ ID Valmori et al.
Cancer Res.
NO: 237) 60(16):4499-506 (2000). MLMAQEALAFL (SEQ Aarnoudse et al.
Int J Cancer.
ID NO: 240) 82(3):442-8 (1999). YLAMPFATPME (SEQ Eikawa et al.
Int J Cancer.
ID NO: 241) 132(2):345-54 (2013). ASGPGGGAPR (SEQ Wang et al.
J Immunol.
ID NO: 242) 161(7):3598-606 (1998). LAAQERRVPR (SEQ ID Matsuzaki et al.
Cancer NO: 243) Immunol Immunother.
TVSGNILTIR (SEQ ID 57(8)1185-95 (2008). NO: 244) Ebert et al.
Cancer Res.
APRGPHGGAASGL 69(3):1046-54 (2009). (SEQ ID NO: 245) Eikawa et al.
Int J Cancer.
MPFATPMEAEL (SEQ 132(2):345-54 (2013). ID NO: 246) Knights et al.
Cancer Immunol KEFTVSGNILTI (SEQ Immunother. 58(3):325- ID NO: 247) 38 (2009). MPFATPMEA (SEQ ID Jäger et al.
Cancer Immun.
NO: 248) 2:12 (2002). FATPMEAEL (SEQ ID Zeng et al.
Proc Natl Acad Sci U NO: 249) S A. 98(7):3964-9 (2001). FATPMEAELAR (SEQ Mandic et al.
J Immunol.
ID NO: 250) 174(3):1751-9 (2005).
Nº Antígeno Epítopos Fontes associado a imunogênicos tumor relatados LAMPFATPM (SEQ ID Chen et al. Proc Natl Acad Sci NO: 238) U S A. 101(25):9363-8 (2004). ARGPESRLL (SEQ ID Ayyoub et al. Clin Cancer Res. NO: 239) 16(18):4607-15 (2010). SLLMWITQCFLPVF Slager et al. J Immunol. (SEQ ID NO: 251) 172(8):5095-102 (2004). LLEFYLAMPFATPMEA Mizote et al. Vaccine. ELARRSLAQ (SEQ ID 28(32):5338-46 (2010). NO: 252) Jager et al. J Exp Med. EFYLAMPFATPM (SEQ 191(4):625-30 (2000). ID NO: 253) Zarour et al. Cancer Res. PGVLLKEFTVSGNILTI 60(17):4946-52 (2000). RLTAADHR (SEQ ID Zeng et al. J Immunol. NO: 254) 165(2):1153-9 (2000). RLLEFYLAMPFA (SEQ Bioley et al. Clin Cancer Res. ID NO: 255) 15(13):4467-74 (2009). QGAMLAAQERRVPRA Zarour et al. Cancer Res. AEVPR (SEQ ID NO: 62(1):213-8 (2002). 256) Hasegawa et al. Clin Cancer PFATPMEAELARR Res. 12(6):1921-7 (2006). (SEQ ID NO: 257)
PGVLLKEFTVSGNILTI RLT (SEQ ID NO: 258) VLLKEFTVSG (SEQ ID NO: 259)
AADHRQLQLSISSCLQ QL (SEQ ID NO: 260)
LKEFTVSGNILTIRL (SEQ ID NO: 261)
PGVLLKEFTVSGNILTI RLTAADHR (SEQ ID NO: 254)
LLEFYLAMPFATPMEA ELARRSLAQ (SEQ ID NO: 252) KEFTVSGNILT (SEQ ID NO: 262)
LLEFYLAMPFATPM (SEQ ID NO: 263)
AGATGGRGPRGAGA (SEQ ID NO: 264) 8 CEA/PMEL ou TYYRPGVNLSLSC Galanis et al. Cancer Res. gp100 (SEQ ID NO: 265) 70(3):875-82 (2010). EIIYPNASLLIQN (SEQ Bast et al. Am. J. Obstet.
Nº Antígeno Epítopos Fontes associado a imunogênicos tumor relatados ID NO: 266) Gynecol. 149(5):553-9 (1984). YACFVSNLATGRNNS Crosti et al.
J Immunol. (SEQ ID NO: 267) 176(8):5093-9 (2006). LWWVNNQSLPVSP Kobayashi et al.
Clin Cancer (SEQ ID NO: 268) Res. 8(10):3219-25 (2002). LWWVNNQSLPVSP Campi et al.
Cancer Res. (SEQ ID NO: 268) 63(23):8481-6 (2003). LWWVNNQSLPVSP Bakker et al.
Int J Cancer. (SEQ ID NO: 268) 62(1):97-102 (1995). EIIYPNASLLIQN (SEQ Tsai et al.
J Immunol.
ID NO: 266) 158(4):1796-802 (1997). NSIVKSITVSASG (SEQ Kawakami et al.
J Immunol.
ID NO: 269) 154(8):3961-8 (1995). KTWGQYWQV (SEQ ID Cox et al.
Science.
NO: 270) 264(5159):716-9 (1994). AMLGTHTMEV (SEQ ID Kawakami et al.
J Immunol.
NO: 271) 154(8):3961-8 (1995). MLGTHTMEV (SEQ ID Kawakami et al.
J Immunol.
NO: 627) 161(12):6985-92 (1998). ITDQVPFSV (SEQ ID Skipper et al.
J Immunol.
NO: 272) 157(11):5027-33 (1996). YLEPGPVTA (SEQ ID Michaux et al.
J Immunol.
NO: 273) 192(4):1962-71 (2014). LLDGTATLRL (SEQ ID NO: 274) VLYRYGSFSV (SEQ ID NO: 275) SLADTNSLAV (SEQ ID NO: 276) RLMKQDFSV (SEQ ID NO: 277) RLPRIFCSC (SEQ ID NO: 278) LIYRRRLMK (SEQ ID NO: 279) ALLAVGATK (SEQ ID NO: 280) IALNFPGSQK (SEQ ID NO: 281) RSYVPLAHR (SEQ ID NO: 282) 9 p53 VVPCEPPEV (SEQ ID Hung et al.
Immunol.
Rev.
NO: 283) 222:43-69 (2008).
Nº Antígeno Epítopos Fontes associado a imunogênicos tumor relatados 10 Her2/Neu HLYQGCQVV (SEQ ID Nakatsuka et al.
Mod.
Pathol.
NO: 284) 19(6):804-814 (2006). YLVPQQGFFC (SEQ ID Pils et al.
Br.
J.
Cancer NO: 285) 96(3):485-91 (2007). PLQPEQLQV (SEQ ID Scardino et al.
Eur J Immunol.
NO: 286) 31(11):3261-70 (2001). TLEEITGYL (SEQ ID Scardino et al.
J Immunol.
NO: 287) 168(11):5900-6 (2002). ALIHHNTHL (SEQ ID Kawashima et al.
Cancer Res.
NO: 288) 59(2):431-5 (1999). PLTSIISAV (SEQ ID NO: Okugawa et al.
Eur J Immunol. 289) 30(11):3338-46 (2000). VLRENTSPK (SEQ ID NO: 290) TYLPTNASL (SEQ ID NO: 291) 11 EpCAM RYQLDPKFI (SEQ ID Spizzo et al.
Gynecol.
Oncol.
NO: 292) 103(2):483-8 (2006). Tajima et al.
Tissue Antigens. 64(6):650-9 (2004). 12 CA125 ILFTINFTI (SEQ ID NO: Bast et al.
Cancer 293) 116(12):2850-2853 (2010). VLFTINFTI (SEQ ID NO: 294) TLNFTITNL (SEQ ID NO: 295) VLQGLLKPL (SEQ ID NO: 296) VLQGLLRPV (SEQ ID NO: 297) RLDPKSPGV (SEQ ID NO: 298) QLYWELSKL (SEQ ID NO: 299) KLTRGIVEL (SEQ ID NO: 300) QLTNGITEL (SEQ ID NO: 301) QLTHNITEL (SEQ ID NO: 302) TLDRNSLYV (SEQ ID NO: 303) 13 Receptor de FLLSLALML (SEQ ID Bagnoli et al.
Gynecol.
Oncol.
Nº Antígeno Epítopos Fontes associado a imunogênicos tumor relatados folato α NO: 304) 88:S140-4 (2003). NLGPWIQQV (SEQ ID Pampeno et al. (2016) High- NO: 305) ranking In Silico epitopes [determined by 3 algorithms: BISMAS, IEDB, RANKPEP] não publicado 14 Proteína de ILDSSEEDK (SEQ ID Chiriva-Inernati et al.
J. esperma 17 NO: 306) Immunother. 31(8):693-703 (2008). 15 TADG-12 YLPKSWTIQV (SEQ ID Bellone et al.
Cancer NO: 307) 115(4):800-11 (2009). WIHEQMERDLKT (SEQ Underwood et al.
BBA Mol.
ID NO: 308) Basis of Disease. 1502(3):337- 350 (2000). 16 MUC-16 ILFTINFTI (SEQ ID NO: Chekmasova et al.
Clin.
Cancer 293) Res. 16(14):3594-606 (2010). VLFTINFTI (SEQ ID NO: 294) TLNFTITNL (SEQ ID NO: 295) VLQGLLKPL (SEQ ID NO: 296) VLQGLLRPV (SEQ ID NO: 297) RLDPKSPGV (SEQ ID NO: 298) QLYWELSKL (SEQ ID NO: 299) KLTRGIVEL (SEQ ID NO: 300) QLTNGITEL (SEQ ID NO: 301) QLTHNITEL (SEQ ID NO: 302) TLDRNSLYV (SEQ ID NO: 303) 17 L1CAM LLANAYIYV (SEQ ID Hong et al.
J.
Immunother.
NO: 309) 37(2):93-104 (2014). YLLCKAFGA (SEQ ID Pampeno et al. (2016) High- NO: 310) ranking In Silico epitopes KLSPYVHYT (SEQ ID [determined by 3 NO: 311) algorithms: BISMAS, IEDB,
Nº Antígeno Epítopos Fontes associado a imunogênicos tumor relatados RANKPEP] não publicado 18 Mannan-MUC-1 PDTRPAPGSTAPPAHG Loveland et al.
Clin.
Cancer VTSA (SEQ ID NO: 312) Res. 12(3 Pt 1):869-77 (2006). STAPPVHNV (SEQ ID Godelaine et al.
Cancer NO: 313) Immunol Immunother.
LLLLTVLTV (SEQ ID 56(6):753-9 (2007). NO: 314) Ma et al.
Int J Cancer.
PGSTAPPAHGVT (SEQ 129(10):2427-34 (2011). ID NO: 315) Wen et al.
Cancer Sci. 102(8):1455-61 (2011). Jerome et al.
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Blood. 93(12):4309-17 (1999). Hiltbold et al.
Cancer Res. 58(22):5066-70 (1998). 19 HERV-K-MEL MLAVISCAV (SEQ ID Schiavetti et al.
Cancer Res.
NO: 316) 62(19):5510-6 (2002). 20 KK-LC-1 RQKRILVNL (SEQ ID Fukuyama et al.
Cancer Res.
NO: 317) 66(9):4922-8 (2006). 21 KM-HN-1 NYNNFYRFL (SEQ ID Fukuyama et al.
Cancer Res.
NO: 318) 66(9):4922-8 (2006). EYSKECLKEF (SEQ ID Monji et al.
Clin Cancer Res.
NO: 319) 10(19 Pt 1): 6047-57 (2004). EYLSLSDKI (SEQ ID NO: 320) 22 LAGE-1 MLMAQEALAFL (SEQ Aarnoudse et al.
Int J Cancer.
ID NO: 240) 82(3):442-8 (1999). SLLMWITQC (SEQ ID Rimoldi et al.
J Immunol.
NO: 237) 165(12):7253-61 (2000). LAAQERRVPR (SEQ ID Wang et al.
J Immunol.
NO: 243) 161(7):3598-606 (1998). ELVRRILSR (SEQ ID Sun et al.
Cancer Immunol NO: 321) Immunother. 55(6):644-52 APRGVRMAV (SEQ ID (2006). NO: 322) Slager et al.
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SLLMWITQCFLPVF 11(3):227-36 (2004). (SEQ ID NO: 251) Zeng et al.
Proc Natl Acad Sci U QGAMLAAQERRVPRA S A. 98(7):3964-9 (2001). AEVPR (SEQ ID NO: Slager et al.
J Immunol. 256) 172(8):5095-102 (2004).
Nº Antígeno Epítopos Fontes associado a imunogênicos tumor relatados AADHRQLQLSISSCLQ Jager et al. J Exp Med. QL (SEQ ID NO: 260) 191(4):625-30 (2000). CLSRRPWKRSWSAGS Slager et al. J Immunol. CPGMPHL (SEQ ID NO: 170(3):1490-7 (2003). 323) Wang et al. Immunity. ILSRDAAPLPRPG 20(1):107-18 (2004). (SEQ ID NO: 324) Hasegawa et al. Clin Cancer AGATGGRGPRGAGA Res. 12(6):1921-7 (2006). (SEQ ID NO: 264) 23 MAGE-A4 EVDPASNTY (SEQ ID Kobayashi et al. Tissue NO: 325) Antigens. 62(5):426-32 (2003). GVYDGREHTV (SEQ Duffour et al. Eur J Immunol. ID NO: 326) 29(10):3329-37 (1999). NYKRCFPVI (SEQ ID Miyahara et al. Clin Cancer NO: 327) Res. 11(15):5581-9 (2005). SESLKMIF (SEQ ID NO: Ottaviani et al. Cancer Immunol 328) Immunother. 55(7):867-72 (2006) Zhang et al. Tissue Antigens. 60(5):365-71 (2002). 24 Sp17 ILDSSEEDK (SEQ ID Chiriva-Internati et al. Int J NO: 306) Cancer. 107(5):863-5 (2003). 25 SSX-4 INKTSGPKRGKHAWTH Ayyoub et al. Clin Immunol. RLRE (SEQ ID NO: 329) 114(1):70-8 (2005). YFSKKEWEKMKSSEKI Valmori et al. Clin Cancer Res. VYVY (SEQ ID NO: 330) 12(2):398-404 (2006).
MKLNYEVMTKLGFKVT LPPF (SEQ ID NO: 331)
KHAWTHRLRERKQLV VYEEI (SEQ ID NO: 332)
LGFKVTLPPFMRSKRA ADFH (SEQ ID NO: 333)
KSSEKIVYVYMKLNYE VMTK (SEQ ID NO: 334)
KHAWTHRLRERKQLV VYEEI (SEQ ID NO: 332) 26 TAG-1 SLGWLFLLL (SEQ ID Adair et al. J Immunother. NO: 335) 31(1):7-17 (2008). LSRLSNRLL (SEQ ID NO: 336)
Nº Antígeno Epítopos Fontes associado a imunogênicos tumor relatados 27 TAG-2 LSRLSNRLL (SEQ ID Adair et al. J Immunother. NO: 336) 31(1):7-17 (2008).
TABELA 4. CÂNCER DE MAMA Nº Antígeno Epítopos Fontes associado a imunogênicos tumor relatados 1 ENAH (hMena) TMNGSKSPV (SEQ ID Di Modugno et al. Int. J. NO: 337) Cancer. 109(6):909-18 (2004). 2 mamaglobina-A PLLENVISK (SEQ ID Jaramillo et al. Int. J. Cancer. NO: 338) 102(5):499-506 (2002). 3 NY-BR-1 SLSKILDTV (SEQ ID NO: Wang et al. Cancer Res. 339) 66(13):6826-33 (2006). 4 EpCAM RYQLDPKFI (SEQ ID Gastl et al. Lancet NO: 292) 356(9246):1981-2 (2000). Tajima, 2004 5 NY-ESO-1 HLA-A2-peptídeo restrito Jager et al. Proc. Natl. Acad. p157–165 (SLLMWITQC Scie. U.S.A. 103(39):14453-8 (SEQ ID NO: 237)), HLA- (2006). Cw3-restrito p92–100 Gnjatic et al. PNAS (LAMPFATPM (SEQ ID 26 de setembro de 2000 vol. 97 NO: 238)) e HLA-Cw6- nº 20 p. 10919 restrito p80–88 Jager et al. J Exp Med. (ARGPESRLL (SEQ ID 187(2):265-70 (1998). NO: 239)) Chen et al. J Immunol. SLLMWITQC (SEQ ID 165(2):948-55 (2000). NO: 237) Valmori et al. Cancer Res. MLMAQEALAFL (SEQ ID 60(16):4499-506 (2000). NO: 240) Aarnoudse et al. Int J Cancer. YLAMPFATPME (SEQ ID 82(3):442-8 (1999). NO: 241) Eikawa et al. Int J Cancer. ASGPGGGAPR (SEQ ID 132(2):345-54 (2013). NO: 242) Wang et al. J Immunol. LAAQERRVPR (SEQ ID 161(7):3598-606 (1998). NO: 243) Matsuzaki et al. Cancer TVSGNILTIR (SEQ ID Immunol Immunother. NO: 244) 57(8)1185-95 (2008). APRGPHGGAASGL Ebert et al. Cancer Res. (SEQ ID NO: 245) 69(3):1046-54 (2009). MPFATPMEAEL (SEQ ID Eikawa et al. Int J Cancer. NO: 246) 132(2):345-54 (2013).
Nº Antígeno Epítopos Fontes associado a imunogênicos tumor relatados KEFTVSGNILTI (SEQ ID Knights et al. Cancer Immunol NO: 247) Immunother. 58(3):325- MPFATPMEA (SEQ ID 38 (2009). NO: 248) Jäger et al. Cancer Immun. FATPMEAEL (SEQ ID 2:12 (2002). NO: 249) Zeng et al. Proc Natl Acad Sci FATPMEAELAR (SEQ ID U S A. 98(7):3964-9 (2001). NO: 250) Mandic et al. J Immunol. LAMPFATPM (SEQ ID 174(3):1751-9 (2005). NO: 238) Chen et al. Proc Natl Acad Sci ARGPESRLL (SEQ ID U S A. 101(25):9363-8 (2004). NO: 239) Ayyoub et al. Clin Cancer Res. SLLMWITQCFLPVF 16(18):4607-15 (2010). (SEQ ID NO: 251) Slager et al. J Immunol. LLEFYLAMPFATPMEAE 172(8):5095-102 (2004). LARRSLAQ (SEQ ID NO: Mizote et al. Vaccine. 252) 28(32):5338-46 (2010). EFYLAMPFATPM (SEQ Jager et al. J Exp Med. ID NO: 253) 191(4):625-30 (2000). PGVLLKEFTVSGNILTIR Zarour et al. Cancer Res. LTAADHR (SEQ ID NO: 60(17):4946-52 (2000). 254) Zeng et al. J Immunol. RLLEFYLAMPFA (SEQ 165(2):1153-9 (2000). ID NO: 255) Bioley et al. Clin Cancer Res. QGAMLAAQERRVPRAA 15(13):4467-74 (2009). EVPR (SEQ ID NO: 256) Zarour et al. Cancer Res. PFATPMEAELARR (SEQ 62(1):213-8 (2002). ID NO: 257) Hasegawa et al. Clin Cancer PGVLLKEFTVSGNILTIR Res. 12(6):1921-7 (2006). LT (SEQ ID NO: 258) VLLKEFTVSG (SEQ ID NO: 259)
AADHRQLQLSISSCLQ QL (SEQ ID NO: 260)
LKEFTVSGNILTIRL (SEQ ID NO: 261)
PGVLLKEFTVSGNILTIR LTAADHR (SEQ ID NO: 254)
LLEFYLAMPFATPMEAE LARRSLAQ (SEQ ID NO: 252) KEFTVSGNILT (SEQ ID NO: 262)
Nº Antígeno Epítopos Fontes associado a imunogênicos tumor relatados
LLEFYLAMPFATPM (SEQ ID NO: 263)
AGATGGRGPRGAGA (SEQ ID NO: 264) 6 BAGE-1 AARAVFLAL (SEQ ID Boel et al. Immunity. 2(2):167- NO: 340) 75 (1995). 7 HERV-K-MEL MLAVISCAV (SEQ ID Schiavetti et al. Cancer Res. NO: 316) 62(19):5510-6 (2002). 8 KK-LC-1 RQKRILVNL (SEQ ID Fukuyama et al. Cancer Res. NO: 317) 66(9):4922-8 (2006). 9 KM-HN-1 NYNNFYRFL (SEQ ID Fukuyama et al. Cancer Res. NO: 318) 66(9):4922-8 (2006). EYSKECLKEF (SEQ ID Monji et al. Clin Cancer Res. NO: 319) 10(18 Pt 1):6047-57 (2004). EYLSLSDKI (SEQ ID NO: 320) 10 LAGE-1 MLMAQEALAFL (SEQ ID Aarnoudse et al. Int J Cancer. NO: 240) 82(3):442-8 (1999). SLLMWITQC (SEQ ID Rimoldi et al. J Immunol. NO: 237) 165(12):7253-61 (2000). LAAQERRVPR (SEQ ID Wang et al. J Immunol. NO: 243) 161(7):3598-606 (1998). ELVRRILSR (SEQ ID Sun et al. Cancer Immunol NO: 321) Immunother. 55(6):644-52 APRGVRMAV (SEQ ID (2006). NO: 322) Slager et al. Cancer Gene SLLMWITQCFLPVF Ther. 11(3):227-36 (2004). (SEQ ID NO: 251) Zeng et al. Proc Natl Acad Sci QGAMLAAQERRVPRAA U S A. 98(7):3964-9 (2001). EVPR (SEQ ID NO: 256) Slager et al. J Immunol. AADHRQLQLSISSCLQ 172(8):5095-102 (2004). QL (SEQ ID NO: 260) Jager et al. J Exp Med. CLSRRPWKRSWSAGS 191(4):625-30 (2000). CPGMPHL (SEQ ID NO: Slager et al. J Immunol. 323) 170(3):1490-7 (2003). ILSRDAAPLPRPG (SEQ Wang et al. Immunity. ID NO: 324) 20(1):107-18 (2004). AGATGGRGPRGAGA Hasegawa et al. Clin Cancer (SEQ ID NO: 264) Res. 12(6):1921-7 (2006). 11 MAGE-A1 EADPTGHSY (SEQ ID Traversari et al. J Exp Med. NO: 341) 176(5):1453-7 (1992). KVLEYVIKV (SEQ ID Ottaviani et al. Cancer
Nº Antígeno Epítopos Fontes associado a imunogênicos tumor relatados NO: 342) Immunol Immunother.
SLFRAVITK (SEQ ID NO: 54(12):1214-20 (2005). 343) Pascolo et al.
Cancer Res.
EVYDGREHSA (SEQ ID 61(10):4072-7 (2001). NO: 344) Chaux et al.
J Immunol.
RVRFFFPSL (SEQ ID 163(5):2928-36 (1999). NO: 345) Luiten et al.
Tissue Antigens.
EADPTGHSY (SEQ ID 55(2):49-52 (2000). NO: 341) Luiten et al.
Tissue Antigens.
REPVTKAEML (SEQ ID 56(1):77-81 (2000). NO: 346) Tanzarella et al.
Cancer Res.
KEADPTGHSY (SEQ ID 59(11):2668-74 (1999). NO: 347) Stroobant et al.
Eur J Immunol.
DPARYEFLW (SEQ ID 42(6):1417-28 (2012). NO: 348) Corbière et al.
Tissue Antigens.
ITKKVADLVGF (SEQ ID 63(5):453-7 (2004). NO: 349) Goodyear et al.
Cancer SAFPTTINF (SEQ ID Immunol Immunother.
NO: 350) 60(12):1751-61 (2011). SAYGEPRKL (SEQ ID van der Bruggen et al.
Eur J NO: 351) Immunol. 24(9):2134- RVRFFFPSL (SEQ ID 40 (1994). NO: 345) Wang et al.
Cancer Immunol TSCILESLFRAVITK Immunother. 56(6):807- (SEQ ID NO: 352) 18 (2007). PRALAETSYVKVLEY Chaux et al.
J Exp Med. (SEQ ID NO: 353) 189(5):767-78 (1999). FLLLKYRAREPVTKAE Chaux et al.
Eur J Immunol. (SEQ ID NO: 354) 31(6): 1910-6 (2001). EYVIKVSARVRF (SEQ ID NO: 355) 12 MAGE-A2 YLQLVFGIEV (SEQ ID Kawashima et al.
Hum NO: 356) Immunol. 59(1):1-14 (1998). EYLQLVFGI (SEQ ID Tahara et al.
Clin Cancer Res.
NO: 357) 5(8):2236-41 (1999). REPVTKAEML (SEQ ID Tanzarella et al.
Cancer Res.
NO: 346) 59(11):2668-74 (1999). EGDCAPEEK (SEQ ID Breckpot et al.
J Immunol.
NO: 358) 172(4):2232-7 (2004). LLKYRAREPVTKAE Chaux et al.
J Exp Med. (SEQ ID NO: 359) 89(5):767-78 (1999). 13 mucink PDTRPAPGSTAPPAHG Jerome et al.
J Immunol.
VTSA (SEQ ID NO: 312) 151(3):1654-62 (1993).
Nº Antígeno Epítopos Fontes associado a imunogênicos tumor relatados 14 Sp17 ILDSSEEDK (SEQ ID Chiriva-Internati et al.
Int J NO: 306) Cancer. 107(5):863-5 (2003). 15 SSX-2 KASEKIFYV (SEQ ID Ayyoub et al.
J Immunol.
NO: 360) 168(4):1717-22 (2002). EKIQKAFDDIAKYFSK Ayyoub et al.
J Immunol. (SEQ ID NO: 361) 172(11):7206-11 (2004). FGRLQGISPKI (SEQ ID Neumann et al.
Cancer NO: 362) Immunol Immunother.
WEKMKASEKIFYVYMK 60(9):1333-46 (2011). RK (SEQ ID NO: 363) Ayyoub et al.
Clin Immunol.
KIFYVYMKRKYEAMT 114(1):70-8 (2005). (SEQ ID NO: 364) Neumann et al.
Int J Cancer.
KIFYVYMKRKYEAM 112(4):661-8 (2004). (SEQ ID NO: 365) Ayyoub et al.
J Clin Invest. 113(8):1225-33 (2004). 16 TAG-1 SLGWLFLLL (SEQ ID Adair et al.
J Immunother.
NO: 335) 31(1):7-17 (2008). LSRLSNRLL (SEQ ID NO: 336) 17 TAG-2 LSRLSNRLL (SEQ ID Adair et al.
J Immunother.
NO: 336) 31(1):7-17 (2008). 18 TRAG-3 CEFHACWPAFTVLGE Janjic et al.
J Immunol. (SEQ ID NO: 366) 177(4):2717-27 (2006). 19 Her2/Neu HLYQGCQVV (SEQ ID Nakatsuka et al.
Mod.
Pathol.
NO: 284) 19(6):804-814 (2006). YLVPQQGFFC (SEQ ID Pils et al.
Br.
J.
Cancer NO: 285) 96(3):485-91 (2007). PLQPEQLQV (SEQ ID Scardino et al.
Eur J Immunol.
NO: 286) 31(11):3261-70 (2001). TLEEITGYL (SEQ ID NO: Scardino et al.
J Immunol. 287) 168(11):5900-6 (2002). ALIHHNTHL (SEQ ID Kawashima et al.
Cancer Res.
NO: 288) 59(2):431-5 (1999). PLTSIISAV (SEQ ID NO: Okugawa et al.
Eur J Immunol. 289) 30(11):3338-46 (2000). VLRENTSPK (SEQ ID NO: 290) TYLPTNASL (SEQ ID NO: 291) 20 c-myc Reuschenbach et al.
Cancer Immunol.
Immunother. 58:1535-1544 (2009)
Nº Antígeno Epítopos Fontes associado a imunogênicos tumor relatados 21 ciclina B1 Reuschenbach et al.
Cancer Immunol.
Immunother. 58:1535-1544 (2009) 22 MUC1 Reuschenbach et al.
Cancer Immunol.
Immunother. 58:1535-1544 (2009) 23 p53 VVPCEPPEV (SEQ ID Hung et al.
Immunol.
Rev.
NO: 283) 222:43-69 (2008). http://cancerimmunity.org/pepti de/mutations/ 24 p62 Reuschenbach et al.
Cancer Immunol.
Immunother. 58:1535-1544 (2009) 25 Survivina Reuschenbach et al.
Cancer Immunol.
Immunother. 58:1535-1544 (2009)
TABELA 5. CÂNCER TESTICULAR
Nº Antígeno Epítopos imunogênicos Fontes associado a relatados tumor 1 CD45 KFLDALISL (SEQ ID NO: Tomita et al.
Cancer Sci. 367) 102(4):697-705 (2011). 2 DKK1 ALGGHPLLGV (SEQ ID Qian et al.
Blood. (5):1587-94 NO: 368) (2007). 3 PRAME VLDGLDVLL (SEQ ID NO: Kessler et al.
J Exp Med. 222), SLYSFPEPEA (SEQ 193(1):73-88 (2001). ID NO: 223), Ikeda et al.
Immunity ALYVDSLFFL (SEQ ID 6(2):199-208 (1997). NO: 224), SLLQHLIGL (SEQ ID NO: 225), LYVDSLFFL (SEQ ID NO: 226) 4 RU2AS LPRWPPPQL (SEQ ID Van Den Eynde et al.
J.
Exp.
NO: 369) Med. 190(12):1793-800 (1999). 5 Telomerase ILAKFLHWL (SEQ ID NO: Vonderheide et al.
Immunity 370); 10(6):673-9 (1999). RLVDDFLLV (SEQ ID NO: Miney et al.
Proc.
Natl.
Acad.
Nº Antígeno Epítopos imunogênicos Fontes associado a relatados tumor 371); Sci. U.S.A. 97(9):4796-801 RPGLLGASVLGLDDI (2000). (SEQ ID NO: 372); e Schroers et al. Cancer Res. LTDLQPYMRQFVAHL 62(9):2600-5 (2002). (SEQ ID NO: 373) Schroers et al. Clin. Cancer Res. 9(13):4743-55 (2003).
TABELA 6. CÂNCER PANCREÁTICO Nº Antígeno Epítopos imunogênicos Fontes associado a relatados tumor 1 ENAH (hMena) TMNGSKSPV (SEQ ID NO: Di Modugno et al. Int. J. 337) Cancer. 109(6):909-18 (2004). 2 PBF CTACRWKKACQR (SEQ ID Tsukahara et al. Cancer NO: 221) Res. 64(15):5442-8 (2004). 3 K-ras VVVGAVGVG (SEQ ID NO: Gjertsen et al. Int. J. 374) Cancer. 72(5):784-90 (1997). 4 Mesotelina SLLFLLFSL (SEQ ID NO: Le et al. Clin. Cancer Res. 232) 18(3):858-68 (2012). VLPLTVAEV (SEQ ID NO: Hassan et al. Appl. 233) Immunohistochem. Mol. ALQGGGPPY (SEQ ID NO: Morphol. 13(3):243-7 234) (2005). LYPKARLAF (SEQ ID NO: Thomas et al J Exp Med. 2 235) de agosto de 2004; 200(3): AFLPWHRLF (SEQ ID NO: 297–306. 236) 5 mucink PDTRPAPGSTAPPAHGVTSA Jerome et al. J Immunol. (SEQ ID NO: 312) 151(3):1654-62 (1993).
TABELA 7. CÂNCER DE FÍGADO N Antígeno Epítopos imunogênicos Fontes º associad relatados o a tumor 1 G250 / HLSTAFARV (SEQ ID NO: Vissers et al. Cancer Res. MN / 375); 59(21):5554-9 (1999).
N Antígeno Epítopos imunogênicos Fontes º associad relatados o a tumor CAIX KIFGSLAFL (SEQ ID NO: Fisk et al.
J Exp Med. 181(6):2109- 376); 17 (1995). IISAVVGIL (SEQ ID NO: 377); Brossart et al.
Cancer Res.
ALCRWGLLL (SEQ ID NO: 58(4):732-6 (1998). 378); Kawashima et al.
Hum Immunol.
ILHNGAYSL (SEQ ID NO: 59(1):1-14 (1998). 379); Rongcun et al.
J Immunol.
RLLQETELV (SEQ ID NO: 163(2):1037-44 (1999). 380); VVKGVVFGI (SEQ ID NO: 381); e YMIMVKCWMI (SEQ ID NO: 382) 2 Hepsina SLLSGDWVL (SEQ ID NO: Guo et al.
Scand J Immunol. 383); 78(3):248-57 (2013). GLQLGVQAV (SEQ ID NO: 384); e PLTEYIQPV (SEQ ID NO: 385) 3 Carboxil SPRWWPTCL (SEQ ID NO: Ronsin et al.
J Immunol. 163(1):483- esterase 386) 90 (1999). intestinal 4 alfa- GVALQTMKQ (SEQ ID NO: Butterfield et al.
Cancer Res. fetoproteí 387); 59(13):3134-42 (1999). na FMNKFIYEI (SEQ ID NO: Pichard et al.
J Immunother. 388); e QLAVSVILRV (SEQ ID 31(3):246-53 (2008) NO: 389) Alisa et al.
Clin.
Cancer Res. 11(18):6686-94 (2005). 5 M-CSF LPAVVGLSPGEQEY (SEQ ID Probst-Kepper et al.
J Exp Med.
NO: 390) 193(10):1189-98 (2001). 6 PBF CTACRWKKACQR (SEQ ID Tsukahara et al.
Cancer Res.
NO: 221) 64(15):5442-8 (2004). 7 PSMA NYARTEDFF (SEQ ID NO: Horiguchi et al.
Clin Cancer Res. 391) 8(12):3885-92 (2002). 8 NY-ESO- HLA-A2-peptídeo restrito Jager et al.
Proc.
Natl.
Acad.
Scie. 1 p157–165 (SLLMWITQC U.S.A. 103(39):14453-8 (2006). (SEQ ID NO: 237)), HLA-Cw3- Gnjatic et al.
PNAS restrito p92–100 26 de setembro de 2000 vol. 97 nº (LAMPFATPM (SEQ ID NO: 20 p. 10919 238)) e HLA-Cw6-restrito Jager et al.
J Exp Med. 187(2):265- p80–88 (ARGPESRLL (SEQ 70 (1998).
N Antígeno Epítopos imunogênicos Fontes º associad relatados o a tumor ID NO: 239)) Chen et al.
J Immunol. 165(2):948- SLLMWITQC (SEQ ID NO: 55 (2000). 237) Valmori et al.
Cancer Res.
MLMAQEALAFL (SEQ ID NO: 60(16):4499-506 (2000). 240) Aarnoudse et al.
Int J Cancer.
YLAMPFATPME (SEQ ID NO: 82(3):442-8 (1999). 241) Eikawa et al.
Int J Cancer.
ASGPGGGAPR (SEQ ID NO: 132(2):345-54 (2013). 242) Wang et al.
J Immunol. 161(7):3598- LAAQERRVPR (SEQ ID NO: 606 (1998). 243) Matsuzaki et al.
Cancer Immunol TVSGNILTIR (SEQ ID NO: Immunother. 57(8)1185-95 (2008). 244) Ebert et al.
Cancer Res. 69(3):1046- APRGPHGGAASGL (SEQ ID 54 (2009). NO: 245) Eikawa et al.
Int J Cancer.
MPFATPMEAEL (SEQ ID NO: 132(2):345-54 (2013). 246) Knights et al.
Cancer Immunol KEFTVSGNILTI (SEQ ID NO: Immunother. 58(3):325-38 (2009). 247) Jäger et al.
Cancer Immun. 2:12 MPFATPMEA (SEQ ID NO: (2002). 248) Zeng et al.
Proc Natl Acad Sci U S A.
FATPMEAEL (SEQ ID NO: 98(7):3964-9 (2001). 249) Mandic et al.
J Immunol.
FATPMEAELAR (SEQ ID NO: 174(3):1751-9 (2005). 250) Chen et al.
Proc Natl Acad Sci U S LAMPFATPM (SEQ ID NO: A. 101(25):9363-8 (2004). 238) Ayyoub et al.
Clin Cancer Res.
ARGPESRLL (SEQ ID NO: 16(18):4607-15 (2010). 239) Slager et al.
J Immunol.
SLLMWITQCFLPVF (SEQ ID 172(8):5095-102 (2004). NO: 251) Mizote et al.
Vaccine. 28(32):5338- LLEFYLAMPFATPMEAELAR 46 (2010). RSLAQ (SEQ ID NO: 252) Jager et al.
J Exp Med. 191(4):625- EFYLAMPFATPM (SEQ ID 30 (2000). NO: 253) Zarour et al.
Cancer Res.
PGVLLKEFTVSGNILTIRLTAA 60(17):4946-52 (2000). DHR (SEQ ID NO: 254) Zeng et al.
J Immunol. 165(2):1153- RLLEFYLAMPFA (SEQ ID 9 (2000). NO: 255) Bioley et al.
Clin Cancer Res.
QGAMLAAQERRVPRAAEVP 15(13):4467-74 (2009). R (SEQ ID NO: 256) Zarour et al.
Cancer Res. 62(1):213- PFATPMEAELARR (SEQ ID 8 (2002). NO: 257) Hasegawa et al.
Clin Cancer Res.
N Antígeno Epítopos imunogênicos Fontes º associad relatados o a tumor PGVLLKEFTVSGNILTIRLT 12(6):1921-7 (2006). (SEQ ID NO: 258) VLLKEFTVSG (SEQ ID NO: 259)
AADHRQLQLSISSCLQQL (SEQ ID NO: 260) LKEFTVSGNILTIRL (SEQ ID NO: 261)
PGVLLKEFTVSGNILTIRLTAA DHR (SEQ ID NO: 254)
LLEFYLAMPFATPMEAELAR RSLAQ (SEQ ID NO: 252) KEFTVSGNILT (SEQ ID NO: 262) LLEFYLAMPFATPM (SEQ ID NO: 263) AGATGGRGPRGAGA (SEQ ID NO: 264) 9 LAGE-1 MLMAQEALAFL (SEQ ID NO: Aarnoudse et al. Int J Cancer. 240) 82(3):442-8 (1999). SLLMWITQC (SEQ ID NO: Rimoldi et al. J Immunol. 237) 165(12):7253-61 (2000). LAAQERRVPR (SEQ ID NO: Wang et al. J Immunol. 161(7):3598- 243) 606 (1998). ELVRRILSR (SEQ ID NO: Sun et al. Cancer Immunol 321) Immunother. 55(6):644-52 (2006). APRGVRMAV (SEQ ID NO: Slager et al. Cancer Gene Ther. 322) 11(3):227-36 (2004). SLLMWITQCFLPVF (SEQ ID Zeng et al. Proc Natl Acad Sci U S A. NO: 251) 98(7):3964-9 (2001). QGAMLAAQERRVPRAAEVP Slager et al. J Immunol. R (SEQ ID NO: 256) 172(8):5095-102 (2004). AADHRQLQLSISSCLQQL Jager et al. J Exp Med. 191(4):625- (SEQ ID NO: 260) 30 (2000). CLSRRPWKRSWSAGSCPG Slager et al. J Immunol. MPHL (SEQ ID NO: 323) 170(3):1490-7 (2003). ILSRDAAPLPRPG (SEQ ID Wang et al. Immunity. 20(1):107-18 NO: 324) (2004). AGATGGRGPRGAGA (SEQ Hasegawa et al. Clin Cancer Res. ID NO: 264) 12(6):1921-7 (2006). 1 HERV-K- MLAVISCAV (SEQ ID NO: Schiavetti et al. Cancer Res. 0 MEL 316) 62(19):5510-6 (2002).
N Antígeno Epítopos imunogênicos Fontes º associad relatados o a tumor 1 KK-LC-1 RQKRILVNL (SEQ ID NO: Fukuyama et al.
Cancer Res. 1 317) 66(9):4922-8 (2006). 1 KM-HN-1 NYNNFYRFL (SEQ ID NO: Fukuyama et al.
Cancer Res. 2 318) 66(9):4922-8 (2006). EYSKECLKEF (SEQ ID NO: Monji et al.
Clin Cancer Res. 10(18 319) Pt 1):6047-57 (2004). EYLSLSDKI (SEQ ID NO: 320) 1 Sp17 ILDSSEEDK (SEQ ID NO: Chiriva-Internati et al.
Int J Cancer. 3 306) 107(5):863-5 (2003). 1 c-myc Reuschenbach et al.
Cancer 4 Immunol.
Immunother. 58:1535- 1544 (2009) 1 ciclina B1 Reuschenbach et al.
Cancer 5 Immunol.
Immunother. 58:1535- 1544 (2009) 1 p53 VVPCEPPEV (SEQ ID NO: Hung et al.
Immunol.
Rev. 222:43-69 6 283) (2008). http://cancerimmunity.org/peptide/m utations/ 1 p62 Reuschenbach et al.
Cancer 7 Immunol.
Immunother. 58:1535- 1544 (2009) 1 Survivina Reuschenbach et al.
Cancer 8 Immunol.
Immunother. 58:1535- 1544 (2009)
TABELA 8. CÂNCER COLORRETAL
N Antígeno Epítopos imunogênicos Fontes º associado relatados a tumor 1 ENAH (hMe TMNGSKSPV (SEQ ID NO: Di Modugno et al.
Int.
J Cancer. na) 337) 109(6):909-18 (2004). 2 Carboxil SPRWWPTCL (SEQ ID NO: Ronsin et al.
J Immunol. esterase 386) 163(1):483-90 (1999). intestinal 3 CASP-5 FLIIWQNTM (SEQ ID NO: Schwitalle et al.
Cancer Immun. 4:
N Antígeno Epítopos imunogênicos Fontes º associado relatados a tumor 392) 14 (2004). 4 COA-1 TLYQDDTLTLQAAG (SEQ Maccalli et al.
Cancer Res.
ID NO: 393) 63(20):6735-43 (2003). 5 OGT SLYKFSPFPL (SEQ ID NO: Ripberger.
J Clin Immunol. 394) 23(5):415-23 (2003). 6 OS-9 KELEGILLL (SEQ ID NO: Vigneron et al.
Cancer Immun. 2: 9 395) (2002). 7 TGF- RLSSCVPVA (SEQ ID NO: Linnebacher et al.
Int.
J.
Cancer. betaRII 396) 93(1):6-11 (2001). 8 NY-ESO-1 HLA-A2-peptídeo restrito Jager et al.
Proc.
Natl.
Acad.
Scie. p157–165 (SLLMWITQC U.S.A. 103(39):14453-8 (2006). (SEQ ID NO: 237)), HLA- Gnjatic et al.
PNAS Cw3-restrito p92–100 26 de setembro de 2000 vol. 97 nº (LAMPFATPM (SEQ ID NO: 20 p. 10919 238)) e HLA-Cw6-restrito Jager et al.
J Exp Med. 187(2):265- p80–88 (ARGPESRLL (SEQ 70 (1998). ID NO: 239)) Chen et al.
J Immunol. 165(2):948- SLLMWITQC (SEQ ID NO: 55 (2000). 237) Valmori et al.
Cancer Res.
MLMAQEALAFL (SEQ ID 60(16):4499-506 (2000). NO: 240) Aarnoudse et al.
Int J Cancer.
YLAMPFATPME (SEQ ID 82(3):442-8 (1999). NO: 241) Eikawa et al.
Int J Cancer.
ASGPGGGAPR (SEQ ID 132(2):345-54 (2013). NO: 242) Wang et al.
J Immunol.
LAAQERRVPR (SEQ ID NO: 161(7):3598-606 (1998). 243) Matsuzaki et al.
Cancer Immunol TVSGNILTIR (SEQ ID NO: Immunother. 57(8)1185-95 (2008). 244) Ebert et al.
Cancer Res.
APRGPHGGAASGL (SEQ ID 69(3):1046-54 (2009). NO: 245) Eikawa et al.
Int J Cancer.
MPFATPMEAEL (SEQ ID 132(2):345-54 (2013). NO: 246) Knights et al.
Cancer Immunol KEFTVSGNILTI (SEQ ID NO: Immunother. 58(3):325-38 (2009). 247) Jäger et al.
Cancer Immun. 2:12 MPFATPMEA (SEQ ID NO: (2002). 248) Zeng et al.
Proc Natl Acad Sci U S FATPMEAEL (SEQ ID NO: A. 98(7):3964-9 (2001). 249) Mandic et al.
J Immunol.
FATPMEAELAR (SEQ ID 174(3):1751-9 (2005). NO: 250) Chen et al.
Proc Natl Acad Sci U S LAMPFATPM (SEQ ID NO: A. 101(25):9363-8 (2004).
N Antígeno Epítopos imunogênicos Fontes º associado relatados a tumor 238) Ayyoub et al. Clin Cancer Res. ARGPESRLL (SEQ ID NO: 16(18):4607-15 (2010). 239) Slager et al. J Immunol. SLLMWITQCFLPVF (SEQ ID 172(8):5095-102 (2004). NO: 251) Mizote et al. Vaccine. 28(32):5338- LLEFYLAMPFATPMEAELA 46 (2010). RRSLAQ (SEQ ID NO: 252) Jager et al. J Exp Med. 191(4):625- EFYLAMPFATPM (SEQ ID 30 (2000). NO: 253) Zarour et al. Cancer Res. PGVLLKEFTVSGNILTIRLTA 60(17):4946-52 (2000). ADHR (SEQ ID NO: 254) Zeng et al. J Immunol. 165(2):1153- RLLEFYLAMPFA (SEQ ID 9 (2000). NO: 255) Bioley et al. Clin Cancer Res. QGAMLAAQERRVPRAAEV 15(13):4467-74 (2009). PR (SEQ ID NO: 256) Zarour et al. Cancer Res. PFATPMEAELARR (SEQ ID 62(1):213-8 (2002). NO: 257) Hasegawa et al. Clin Cancer Res. PGVLLKEFTVSGNILTIRLT 12(6):1921-7 (2006). (SEQ ID NO: 258) VLLKEFTVSG (SEQ ID NO: 259)
AADHRQLQLSISSCLQQL (SEQ ID NO: 260) LKEFTVSGNILTIRL (SEQ ID NO: 261)
PGVLLKEFTVSGNILTIRLTA ADHR (SEQ ID NO: 254)
LLEFYLAMPFATPMEAELA RRSLAQ (SEQ ID NO: 252) KEFTVSGNILT (SEQ ID NO: 262) LLEFYLAMPFATPM (SEQ ID NO: 263) AGATGGRGPRGAGA (SEQ ID NO: 264) 9 CEA/PMEL TYYRPGVNLSLSC (SEQ ID Duffy, Clin. Chem. 47(4):624-30 ou gp100 NO: 265) (2001). EIIYPNASLLIQN (SEQ ID Parkhurst et al. Mol. Ther. NO: 266) 19(3):620-6 (2011). YACFVSNLATGRNNS (SEQ Galanis et al. Cancer Res. ID NO: 267) 70(3):875-82 (2010). LWWVNNQSLPVSP (SEQ Bast et al. Am. J. Obstet. Gynecol. ID NO: 268) 149(5):553-9 (1984). LWWVNNQSLPVSP (SEQ Crosti et al. J Immunol.
N Antígeno Epítopos imunogênicos Fontes º associado relatados a tumor ID NO: 268) 176(8):5093-9 (2006). LWWVNNQSLPVSP (SEQ Kobayashi et al.
Clin Cancer Res.
ID NO: 268) 8(10):3219-25 (2002). EIIYPNASLLIQN (SEQ ID Campi et al.
Cancer Res.
NO: 266) 63(23):8481-6 (2003). NSIVKSITVSASG (SEQ ID Bakker et al.
Int J Cancer. 62(1):97- NO: 269) 102 (1995). KTWGQYWQV (SEQ ID NO: Tsai et al.
J Immunol. 158(4):1796- 270) 802 (1997). AMLGTHTMEV (SEQ ID NO: Kawakami et al.
J Immunol. 271) 154(8):3961-8 (1995). MLGTHTMEV (SEQ ID NO: Cox et al.
Science. 264(5159):716- 627) 9 (1994). ITDQVPFSV (SEQ ID NO: Kawakami et al.
J Immunol. 272) 154(8):3961-8 (1995). YLEPGPVTA (SEQ ID NO: Kawakami et al.
J Immunol. 273) 161(12):6985-92 (1998). LLDGTATLRL (SEQ ID NO: Skipper et al.
J Immunol. 274) 157(11):5027-33 (1996). VLYRYGSFSV (SEQ ID NO: Michaux et al.
J Immunol. 275) 192(4):1962-71 (2014). SLADTNSLAV (SEQ ID NO: 276) RLMKQDFSV (SEQ ID NO: 277) RLPRIFCSC (SEQ ID NO: 278) LIYRRRLMK (SEQ ID NO: 279) ALLAVGATK (SEQ ID NO: 280) IALNFPGSQK (SEQ ID NO: 281) RSYVPLAHR (SEQ ID NO: 282) 1 HERV-K- MLAVISCAV (SEQ ID NO: Schiavetti et al.
Cancer Res. 0 MEL 316) 62(19):5510-6 (2002). 1 KK-LC-1 RQKRILVNL (SEQ ID NO: Fukuyama et al.
Cancer Res. 1 317) 66(9):4922-8 (2006). 1 KM-HN-1 NYNNFYRFL (SEQ ID NO: Fukuyama et al.
Cancer Res. 2 318) 66(9):4922-8 (2006). EYSKECLKEF (SEQ ID NO: Monji et al.
Clin Cancer Res. 10(18 319) Pt 1):6047-57 (2004).
N Antígeno Epítopos imunogênicos Fontes º associado relatados a tumor EYLSLSDKI (SEQ ID NO: 320) 1 LAGE-1 MLMAQEALAFL (SEQ ID Aarnoudse et al.
Int J Cancer. 3 NO: 240) 82(3):442-8 (1999). SLLMWITQC (SEQ ID NO: Rimoldi et al.
J Immunol. 237) 165(12):7253-61 (2000). LAAQERRVPR (SEQ ID NO: Wang et al.
J Immunol. 243) 161(7):3598-606 (1998). ELVRRILSR (SEQ ID NO: Sun et al.
Cancer Immunol 321) Immunother. 55(6):644-52 (2006). APRGVRMAV (SEQ ID NO: Slager et al.
Cancer Gene Ther. 322) 11(3):227-36 (2004). SLLMWITQCFLPVF (SEQ ID Zeng et al.
Proc Natl Acad Sci U S NO: 251) A. 98(7):3964-9 (2001). QGAMLAAQERRVPRAAEV Slager et al.
J Immunol.
PR (SEQ ID NO: 256) 172(8):5095-102 (2004). AADHRQLQLSISSCLQQL Jager et al.
J Exp Med. 191(4):625- (SEQ ID NO: 260) 30 (2000). CLSRRPWKRSWSAGSCP Slager et al.
J Immunol.
GMPHL (SEQ ID NO: 323) 170(3):1490-7 (2003). ILSRDAAPLPRPG (SEQ ID Wang et al.
Immunity. 20(1):107-18 NO: 324) (2004). AGATGGRGPRGAGA (SEQ Hasegawa et al.
Clin Cancer Res.
ID NO: 264) 12(6):1921-7 (2006). 1 MAGE-A2 YLQLVFGIEV (SEQ ID NO: Kawashima et al.
Hum Immunol. 4 356) 59(1):1-14 (1998). EYLQLVFGI (SEQ ID NO: Tahara et al.
Clin Cancer Res. 357) 5(8):2236-41 (1999). REPVTKAEML (SEQ ID NO: Tanzarella et al.
Cancer Res. 346) 59(11):2668-74 (1999). EGDCAPEEK (SEQ ID NO: Breckpot et al.
J Immunol. 358) 172(4):2232-7 (2004). LLKYRAREPVTKAE (SEQ Chaux et al.
J Exp Med. 89(5):767- ID NO: 359) 78 (1999). 1 Sp17 ILDSSEEDK (SEQ ID NO: Chiriva-Internati et al.
Int J Cancer. 5 306) 107(5):863-5 (2003). 1 TAG-1 SLGWLFLLL (SEQ ID NO: Adair et al.
J Immunother. 31(1):7- 6 335) 17 (2008). LSRLSNRLL (SEQ ID NO: 336) 1 TAG-2 LSRLSNRLL (SEQ ID NO: Adair et al.
J Immunother. 31(1):7- 7 336) 17 (2008).
N Antígeno Epítopos imunogênicos Fontes º associado relatados a tumor 1 c-myc Reuschenbach et al.
Cancer 8 Immunol.
Immunother. 58:1535- 1544 (2009) 1 ciclina B1 Reuschenbach et al.
Cancer 9 Immunol.
Immunother. 58:1535- 1544 (2009) 2 MUC1 Reuschenbach et al.
Cancer 0 Immunol.
Immunother. 58:1535- 1544 (2009) 2 p53 VVPCEPPEV (SEQ ID NO: Hung et al.
Immunol.
Rev. 222:43- 1 283) 69 (2008). http://cancerimmunity.org/peptide/ mutations/ 2 p62 Reuschenbach et al.
Cancer 2 Immunol.
Immunother. 58:1535- 1544 (2009) 2 Survivina Reuschenbach et al.
Cancer 3 Immunol.
Immunother. 58:1535- 1544 (2009) 2 gp70 Castle et al., BMC Genomics 4 15:190 (2014)
TABELA 9. CÂNCER DE TIREOIDE
Nº Antígeno Epítopos imunogênicos relatados Fontes associado a tumor 1 CALCA VLLQAGSLHA (SEQ ID NO: 397) El Hage et al.
Proc.
Natl.
Acad.
Sci.
U.S.A. 105(29):10119-24 (2008). 2 NY-ESO-1 HLA-A2-peptídeo restrito p157–165 Jager et al.
Proc.
Natl. (SLLMWITQC (SEQ ID NO: 237)), Acad.
Scie.
U.S.A.
HLA-Cw3-restrito p92–100 103(39):14453-8 (LAMPFATPM (SEQ ID NO: 238)) e (2006). HLA-Cw6-restrito p80–88 Gnjatic et al.
PNAS (ARGPESRLL (SEQ ID NO: 239)) 26 de setembro de SLLMWITQC (SEQ ID NO: 237) 2000 vol. 97 nº 20 p.
MLMAQEALAFL (SEQ ID NO: 240) 10919 YLAMPFATPME (SEQ ID NO: 241) Jager et al.
J Exp Med.
Nº Antígeno Epítopos imunogênicos relatados Fontes associado a tumor ASGPGGGAPR (SEQ ID NO: 242) 187(2):265-70 (1998). LAAQERRVPR (SEQ ID NO: 243) Chen et al.
J Immunol.
TVSGNILTIR (SEQ ID NO: 244) 165(2):948-55 (2000). APRGPHGGAASGL (SEQ ID NO: Valmori et al.
Cancer 245) Res. 60(16):4499- MPFATPMEAEL (SEQ ID NO: 246) 506 (2000). KEFTVSGNILTI (SEQ ID NO: 247) Aarnoudse et al.
Int J MPFATPMEA (SEQ ID NO: 248) Cancer. 82(3):442- FATPMEAEL (SEQ ID NO: 249) 8 (1999). FATPMEAELAR (SEQ ID NO: 250) Eikawa et al.
Int J LAMPFATPM (SEQ ID NO: 238) Cancer. 132(2):345-54 ARGPESRLL (SEQ ID NO: 239) (2013). SLLMWITQCFLPVF (SEQ ID NO: Wang et al.
J Immunol. 251) 161(7):3598- LLEFYLAMPFATPMEAELARRSLAQ 606 (1998). (SEQ ID NO: 252) Matsuzaki et al.
Cancer EFYLAMPFATPM (SEQ ID NO: 253) Immunol Immunother.
PGVLLKEFTVSGNILTIRLTAADHR 57(8)1185-95 (2008). (SEQ ID NO: 254) Ebert et al.
Cancer Res.
RLLEFYLAMPFA (SEQ ID NO: 255) 69(3):1046-54 (2009). QGAMLAAQERRVPRAAEVPR Eikawa et al.
Int J (SEQ ID NO: 256) Cancer. 132(2):345- PFATPMEAELARR (SEQ ID NO: 54 (2013). 257) Knights et al.
Cancer PGVLLKEFTVSGNILTIRLT (SEQ ID Immunol Immunother.
NO: 258) 58(3):325-38 (2009). VLLKEFTVSG (SEQ ID NO: 259) Jäger et al.
Cancer AADHRQLQLSISSCLQQL (SEQ ID Immun. 2:12 (2002). NO: 260) Zeng et al.
Proc Natl LKEFTVSGNILTIRL (SEQ ID NO: Acad Sci U S A. 261) 98(7):3964-9 (2001). PGVLLKEFTVSGNILTIRLTAADHR Mandic et al.
J (SEQ ID NO: 254) Immunol. 174(3):1751- LLEFYLAMPFATPMEAELARRSLAQ 9 (2005). (SEQ ID NO: 252) Chen et al.
Proc Natl KEFTVSGNILT (SEQ ID NO: 262) Acad Sci U S A.
LLEFYLAMPFATPM (SEQ ID NO: 101(25):9363-8 (2004). 263) Ayyoub et al.
Clin AGATGGRGPRGAGA (SEQ ID NO: Cancer Res. 264) 16(18):4607-15 (2010). Slager et al.
J Immunol. 172(8):5095- 102 (2004). Mizote et al.
Vaccine.
Nº Antígeno Epítopos imunogênicos relatados Fontes associado a tumor 28(32):5338-46 (2010). Jager et al.
J Exp Med. 191(4):625-30 (2000). Zarour et al.
Cancer Res. 60(17):4946- 52 (2000). Zeng et al.
J Immunol. 165(2):1153-9 (2000). Bioley et al.
Clin Cancer Res. 15(13):4467- 74 (2009). Zarour et al.
Cancer Res. 62(1):213-8 (2002). Hasegawa et al.
Clin Cancer Res. 12(6):1921-7 (2006). 3 HERV-K-MEL MLAVISCAV (SEQ ID NO: 316) Schiavetti et al.
Cancer Res. 62(19):5510-6 (2002). 4 KK-LC-1 RQKRILVNL (SEQ ID NO: 317) Fukuyama et al.
Cancer Res. 66(9):4922-8 (2006). 5 KM-HN-1 NYNNFYRFL (SEQ ID NO: 318) Fukuyama et al.
EYSKECLKEF (SEQ ID NO: 319) Cancer Res.
EYLSLSDKI (SEQ ID NO: 320) 66(9):4922-8 (2006). Monji et al.
Clin Cancer Res. 10(18 Pt 1):6047- 57 (2004). 6 LAGE-1 MLMAQEALAFL (SEQ ID NO: 240) Aarnoudse et al.
Int J SLLMWITQC (SEQ ID NO: 237) Cancer. 82(3):442-8 LAAQERRVPR (SEQ ID NO: 243) (1999). ELVRRILSR (SEQ ID NO: 321) Rimoldi et al.
J APRGVRMAV (SEQ ID NO: 322) Immunol.
SLLMWITQCFLPVF (SEQ ID NO: 165(12):7253-61 251) (2000). QGAMLAAQERRVPRAAEVPR Wang et al.
J Immunol. (SEQ ID NO: 256) 161(7):3598-606 AADHRQLQLSISSCLQQL (SEQ ID (1998). NO: 260) Sun et al.
Cancer CLSRRPWKRSWSAGSCPGMPHL Immunol Immunother. (SEQ ID NO: 323) 55(6):644-52 (2006).
Nº Antígeno Epítopos imunogênicos relatados Fontes associado a tumor ILSRDAAPLPRPG (SEQ ID NO: Slager et al. Cancer 324) Gene Ther. 11(3):227- AGATGGRGPRGAGA (SEQ ID NO: 36 (2004). 264) Zeng et al. Proc Natl Acad Sci U S A. 98(7):3964-9 (2001). Slager et al. J Immunol. 172(8):5095- 102 (2004). Jager et al. J Exp Med. 191(4):625-30 (2000). Slager et al. J Immunol. 170(3):1490-7 (2003). Wang et al. Immunity. 20(1):107-18 (2004). Hasegawa et al. Clin Cancer Res. 12(6):1921-7 (2006). 7 Sp17 ILDSSEEDK (SEQ ID NO: 306) Chiriva-Internati et al. Int J Cancer. 107(5):863-5 (2003).
Tabela 10. Câncer de pulmão N Antígeno Epítopos imunogênicos Fontes º associado relatados a tumor 1 CD274 LLNAFTVTV (SEQ ID NO: Munir et al. Cancer Res. 398) 73(6):1764-76 (2013). 2 mdm-2 VLFYLGQY (SEQ ID NO: Asai et al. Cancer Immun. 2: 3 399) (2002). 3 alfa- FIASNGVKLV (SEQ ID NO: Echchakir et al. Cancer Res. actinina-4 400) 61(10):4078-83 (2001). 4 Fator de ETVSEQSNV (SEQ ID NO: Hogan et al. Cancer Res. alongame 401) 58(22):5144-50 (1998). nto 2 (carcinom a de células escamosa s do pulmão)
N Antígeno Epítopos imunogênicos Fontes º associado relatados a tumor 5 ME1 FLDEFMEGV (SEQ ID NO: Karanikas et al.
Cancer Res. (carcinom 402) 61(9):3718-24 (2001). a de pulmão de células não pequenas ) 6 NFYC QQITKTEV (SEQ ID NO: 403) Takenoyama et al.
Int.
J Cancer. (carcinom 118(8):1992-7 (2006). a de células escamosa s do pulmão) 7 NY-ESO-1 HLA-A2-peptídeo restrito Jager et al.
Proc.
Natl.
Acad.
Scie. p157–165 (SLLMWITQC U.S.A. 103(39):14453-8 (2006). (SEQ ID NO: 237)), HLA- Gnjatic et al.
PNAS Cw3-restrito p92–100 26 de setembro de 2000 vol. 97 nº (LAMPFATPM (SEQ ID NO: 20 p. 10919 238)) e HLA-Cw6-restrito Jager et al.
J Exp Med. 187(2):265- p80–88 (ARGPESRLL (SEQ 70 (1998). ID NO: 239)) Chen et al.
J Immunol. 165(2):948- SLLMWITQC (SEQ ID NO: 55 (2000). 237) Valmori et al.
Cancer Res.
MLMAQEALAFL (SEQ ID 60(16):4499-506 (2000). NO: 240) Aarnoudse et al.
Int J Cancer.
YLAMPFATPME (SEQ ID 82(3):442-8 (1999). NO: 241) Eikawa et al.
Int J Cancer.
ASGPGGGAPR (SEQ ID NO: 132(2):345-54 (2013). 242) Wang et al.
J Immunol.
LAAQERRVPR (SEQ ID NO: 161(7):3598-606 (1998). 243) Matsuzaki et al.
Cancer Immunol TVSGNILTIR (SEQ ID NO: Immunother. 57(8)1185-95 (2008). 244) Ebert et al.
Cancer Res.
APRGPHGGAASGL (SEQ ID 69(3):1046-54 (2009). NO: 245) Eikawa et al.
Int J Cancer.
MPFATPMEAEL (SEQ ID NO: 132(2):345-54 (2013). 246) Knights et al.
Cancer Immunol KEFTVSGNILTI (SEQ ID NO: Immunother. 58(3):325-38 (2009). 247) Jäger et al.
Cancer Immun. 2:12 MPFATPMEA (SEQ ID NO: (2002). 248) Zeng et al.
Proc Natl Acad Sci U S
N Antígeno Epítopos imunogênicos Fontes º associado relatados a tumor FATPMEAEL (SEQ ID NO: A. 98(7):3964-9 (2001). 249) Mandic et al. J Immunol. FATPMEAELAR (SEQ ID NO: 174(3):1751-9 (2005). 250) Chen et al. Proc Natl Acad Sci U S LAMPFATPM (SEQ ID NO: A. 101(25):9363-8 (2004). 238) Ayyoub et al. Clin Cancer Res. ARGPESRLL (SEQ ID NO: 16(18):4607-15 (2010). 239) Slager et al. J Immunol. SLLMWITQCFLPVF (SEQ ID 172(8):5095-102 (2004). NO: 251) Mizote et al. Vaccine. 28(32):5338- LLEFYLAMPFATPMEAELAR 46 (2010). RSLAQ (SEQ ID NO: 252) Jager et al. J Exp Med. 191(4):625- EFYLAMPFATPM (SEQ ID 30 (2000). NO: 253) Zarour et al. Cancer Res. PGVLLKEFTVSGNILTIRLTA 60(17):4946-52 (2000). ADHR (SEQ ID NO: 254) Zeng et al. J Immunol. 165(2):1153- RLLEFYLAMPFA (SEQ ID 9 (2000). NO: 255) Bioley et al. Clin Cancer Res. QGAMLAAQERRVPRAAEV 15(13):4467-74 (2009). PR (SEQ ID NO: 256) Zarour et al. Cancer Res. PFATPMEAELARR (SEQ ID 62(1):213-8 (2002). NO: 257) Hasegawa et al. Clin Cancer Res. PGVLLKEFTVSGNILTIRLT 12(6):1921-7 (2006). (SEQ ID NO: 258) VLLKEFTVSG (SEQ ID NO: 259)
AADHRQLQLSISSCLQQL (SEQ ID NO: 260) LKEFTVSGNILTIRL (SEQ ID NO: 261)
PGVLLKEFTVSGNILTIRLTA ADHR (SEQ ID NO: 254)
LLEFYLAMPFATPMEAELAR RSLAQ (SEQ ID NO: 252) KEFTVSGNILT (SEQ ID NO: 262) LLEFYLAMPFATPM (SEQ ID NO: 263) AGATGGRGPRGAGA (SEQ ID NO: 264) 8 GAGE- YRPRPRRY (SEQ ID NO: Van den Eynde et al. J Exp Med. 1,2,8 404) 182(3):689-98 (1995). 9 HERV-K- MLAVISCAV (SEQ ID NO: Schiavetti et al. Cancer Res.
N Antígeno Epítopos imunogênicos Fontes º associado relatados a tumor MEL 316) 62(19):5510-6 (2002). 1 KK-LC-1 RQKRILVNL (SEQ ID NO: Fukuyama et al.
Cancer Res. 0 317) 66(9):4922-8 (2006). 1 KM-HN-1 NYNNFYRFL (SEQ ID NO: Fukuyama et al.
Cancer Res. 1 318) 66(9):4922-8 (2006). EYSKECLKEF (SEQ ID NO: Monji et al.
Clin Cancer Res. 10(18 319) Pt 1):6047-57 (2004). EYLSLSDKI (SEQ ID NO: 320) 1 LAGE-1 MLMAQEALAFL (SEQ ID Aarnoudse et al.
Int J Cancer. 2 NO: 240) 82(3):442-8 (1999). SLLMWITQC (SEQ ID NO: Rimoldi et al.
J Immunol. 237) 165(12):7253-61 (2000). LAAQERRVPR (SEQ ID NO: Wang et al.
J Immunol. 243) 161(7):3598-606 (1998). ELVRRILSR (SEQ ID NO: Sun et al.
Cancer Immunol 321) Immunother. 55(6):644-52 (2006). APRGVRMAV (SEQ ID NO: Slager et al.
Cancer Gene Ther. 322) 11(3):227-36 (2004). SLLMWITQCFLPVF (SEQ ID Zeng et al.
Proc Natl Acad Sci U S NO: 251) A. 98(7):3964-9 (2001). QGAMLAAQERRVPRAAEV Slager et al.
J Immunol.
PR (SEQ ID NO: 256) 172(8):5095-102 (2004). AADHRQLQLSISSCLQQL Jager et al.
J Exp Med. 191(4):625- (SEQ ID NO: 260) 30 (2000). CLSRRPWKRSWSAGSCPG Slager et al.
J Immunol.
MPHL (SEQ ID NO: 323) 170(3):1490-7 (2003). ILSRDAAPLPRPG (SEQ ID Wang et al.
Immunity. 20(1):107-18 NO: 324) (2004). AGATGGRGPRGAGA (SEQ Hasegawa et al.
Clin Cancer Res.
ID NO: 264) 12(6):1921-7 (2006). 1 MAGE-A2 YLQLVFGIEV (SEQ ID NO: Kawashima et al.
Hum Immunol. 3 356) 59(1):1-14 (1998). EYLQLVFGI (SEQ ID NO: Tahara et al.
Clin Cancer Res. 357) 5(8):2236-41 (1999). REPVTKAEML (SEQ ID NO: Tanzarella et al.
Cancer Res. 346) 59(11):2668-74 (1999). EGDCAPEEK (SEQ ID NO: Breckpot et al.
J Immunol. 358) 172(4):2232-7 (2004). LLKYRAREPVTKAE (SEQ ID Chaux et al.
J Exp Med. 89(5):767- NO: 359) 78 (1999). 1 MAGE-A6 MVKISGGPR (SEQ ID NO: Zorn et al.
Eur J Immunol.
N Antígeno Epítopos imunogênicos Fontes º associado relatados a tumor 4 (carcinom 529) 29(2):602-7 (1999). a de EVDPIGHVY (SEQ ID NO: Benlalam et al.
J Immunol. pulmão de 530) 171(11):6283-9 (2003). células REPVTKAEML (SEQ ID NO: Tanzarella et al.
Cancer Res. escamosa 346) 59(11):2668-74 (1999). s) EGDCAPEEK (SEQ ID NO: Breckpot et al.
J Immunol. 358) 172(4):2232-7 (2004). ISGGPRISY (SEQ ID NO: Vantomme et al.
Cancer Immun. 406) 3:17 (2003). LLKYRAREPVTKAE (SEQ ID Chaux et al.
J Exp Med. 189(5):767- NO: 359) 78 (1999). 1 Sp17 ILDSSEEDK (SEQ ID NO: Chiriva-Internati et al.
Int J Cancer. 5 306) 107(5):863-5 (2003). 1 TAG-1 SLGWLFLLL (SEQ ID NO: Adair et al.
J Immunother. 31(1):7- 6 335) 17 (2008). LSRLSNRLL (SEQ ID NO: 336) 1 TAG-2 LSRLSNRLL (SEQ ID NO: Adair et al.
J Immunother. 31(1):7- 7 336) 17 (2008). 1 TRAG-3 CEFHACWPAFTVLGE (SEQ Janjic et al.
J Immunol. 8 ID NO: 366) 177(4):2717-27 (2006). 1 XAGE- RQKKIRIQL (SEQ ID NO: Ohue et al.
Int J Cancer. 9 1b/GAGE 407) 131(5):E649-58 (2012). D2a HLGSRQKKIRIQLRSQ (SEQ Shimono et al.
Int J Oncol. (câncer de ID NO: 408) 30(4):835-40 (2007). pulmão de CATWKVICKSCISQTPG células (SEQ ID NO: 409) não pequenas) 2 c-myc Reuschenbach et al.
Cancer 0 Immunol.
Immunother. 58:1535- 1544 (2009) 2 ciclina B1 Reuschenbach et al.
Cancer 1 Immunol.
Immunother. 58:1535- 1544 (2009) 2 Her2/Neu HLYQGCQVV (SEQ ID NO: Nakatsuka et al.
Mod.
Pathol. 2 284) 19(6):804-814 (2006). YLVPQQGFFC (SEQ ID NO: Pils et al.
Br.
J.
Cancer 96(3):485- 285) 91 (2007). PLQPEQLQV (SEQ ID NO: Scardino et al.
Eur J Immunol. 286) 31(11):3261-70 (2001).
N Antígeno Epítopos imunogênicos Fontes º associado relatados a tumor TLEEITGYL (SEQ ID NO: Scardino et al.
J Immunol. 287) 168(11):5900-6 (2002). ALIHHNTHL (SEQ ID NO: Kawashima et al.
Cancer Res. 288) 59(2):431-5 (1999). PLTSIISAV (SEQ ID NO: 289) Okugawa et al.
Eur J Immunol.
VLRENTSPK (SEQ ID NO: 30(11):3338-46 (2000). 290) TYLPTNASL (SEQ ID NO: 291) 2 MUC1 Reuschenbach et al.
Cancer 3 Immunol.
Immunother. 58:1535- 1544 (2009) 2 p53 VVPCEPPEV (SEQ ID NO: Hung et al.
Immunol.
Rev. 222:43- 4 283) 69 (2008). http://cancerimmunity.org/peptide/ mutations/ 2 p62 Reuschenbach et al.
Cancer 5 Immunol.
Immunother. 58:1535- 1544 (2009) 2 Survivina Reuschenbach et al.
Cancer 6 Immunol.
Immunother. 58:1535- 1544 (2009)
TABELA 11. CÂNCER DE PRÓSTATA
Nº Antígeno Epítopos imunogênicos relatados Fontes associado a tumor 1 DKK1 ALGGHPLLGV (SEQ ID NO: 368) Qian et al.
Blood. 110(5):1587-94 (2007). 2 ENAH (hMena) TMNGSKSPV (SEQ ID NO: 337) Di Modugno et al.
Int.
J.
Cancer. 109(6):909-18 (2004). 3 Calicreína 4 FLGYLILGV (SEQ ID NO: 410); Wilkinson et al.
SVSESDTIRSISIAS (SEQ ID NO: Cancer Immunol 199); LLANGRMPTVLQCVN (SEQ Immunother.
ID NO: 209); e 61(2):169-79 (2012). RMPTVLQCVNVSVVS (SEQ ID NO: Hural et al.
J. 220) Immunol.
Nº Antígeno Epítopos imunogênicos relatados Fontes associado a tumor 169(1):557-65 (2002). 4 PSMA NYARTEDFF (SEQ ID NO: 391) Horiguchi et al.
Clin Cancer Res. 8(12):3885-92 (2002). 5 STEAP1 MIAVFLPIV (SEQ ID NO: 411) e Rodeberg et al.
Clin.
HQQYFYKIPILVINK (SEQ ID NO: Cancer Res. 412) 11(12):4545-52 (2005). Kobayashi et al.
Cancer Res. 67(11):5498-504 (2007). 6 PAP FLFLLFFWL (SEQ ID NO: 413); Olson et al.
Cancer TLMSAMTNL (SEQ ID NO: 414); e Immunol ALDVYNGLL (SEQ ID NO: 415) Immunother. 59(6):943-53 (2010). 7 PSA (carcinoma FLTPKKLQCV (SEQ ID NO: 416) e Correale et al.
J Natl. de próstata) VISNDVCAQV (SEQ ID NO: 417) Cancer Inst. 89(4):293-300 (1997). 8 NY-ESO-1 HLA-A2-peptídeo restrito p157–165 Jager et al.
Proc. (SLLMWITQC (SEQ ID NO: 237)), Natl.
Acad.
Scie.
HLA-Cw3-restrito p92–100 U.S.A. (LAMPFATPM (SEQ ID NO: 238)) e 103(39):14453-8 HLA-Cw6-restrito p80–88 (2006). (ARGPESRLL (SEQ ID NO: 239)) Gnjatic et al.
PNAS SLLMWITQC (SEQ ID NO: 237) 26 de setembro de MLMAQEALAFL (SEQ ID NO: 240) 2000 vol. 97 nº 20 p.
YLAMPFATPME (SEQ ID NO: 241) 10919 ASGPGGGAPR (SEQ ID NO: 242) Jager et al.
J Exp LAAQERRVPR (SEQ ID NO: 243) Med. 187(2):265- TVSGNILTIR (SEQ ID NO: 244) 70 (1998). APRGPHGGAASGL (SEQ ID NO: Chen et al.
J 245) Immunol.
MPFATPMEAEL (SEQ ID NO: 246) 165(2):948- KEFTVSGNILTI (SEQ ID NO: 247) 55 (2000). MPFATPMEA (SEQ ID NO: 248) Valmori et al.
Cancer FATPMEAEL (SEQ ID NO: 249) Res. 60(16):4499- FATPMEAELAR (SEQ ID NO: 250) 506 (2000). LAMPFATPM (SEQ ID NO: 238) Aarnoudse et al.
Int J
Nº Antígeno Epítopos imunogênicos relatados Fontes associado a tumor ARGPESRLL (SEQ ID NO: 239) Cancer. 82(3):442- SLLMWITQCFLPVF (SEQ ID NO: 8 (1999). 251) Eikawa et al.
Int J LLEFYLAMPFATPMEAELARRSLAQ Cancer. 132(2):345- (SEQ ID NO: 252) 54 (2013). EFYLAMPFATPM (SEQ ID NO: 253) Wang et al.
J PGVLLKEFTVSGNILTIRLTAADHR Immunol. (SEQ ID NO: 254) 161(7):3598- RLLEFYLAMPFA (SEQ ID NO: 255) 606 (1998). QGAMLAAQERRVPRAAEVPR Matsuzaki et al. (SEQ ID NO: 256) Cancer Immunol PFATPMEAELARR (SEQ ID NO: Immunother. 257) 57(8)1185- PGVLLKEFTVSGNILTIRLT (SEQ ID 95 (2008). NO: 258) Ebert et al.
Cancer VLLKEFTVSG (SEQ ID NO: 259) Res. 69(3):1046- AADHRQLQLSISSCLQQL (SEQ ID 54 (2009). NO: 260) Eikawa et al.
Int J LKEFTVSGNILTIRL (SEQ ID NO: Cancer. 132(2):345- 261) 54 (2013). PGVLLKEFTVSGNILTIRLTAADHR Knights et al.
Cancer (SEQ ID NO: 254) Immunol LLEFYLAMPFATPMEAELARRSLAQ Immunother. (SEQ ID NO: 252) 58(3):325-38 (2009). KEFTVSGNILT (SEQ ID NO: 262) Jäger et al.
Cancer LLEFYLAMPFATPM (SEQ ID NO: Immun. 2:12 (2002). 263) Zeng et al.
Proc Natl AGATGGRGPRGAGA (SEQ ID NO: Acad Sci U S A. 264) 98(7):3964-9 (2001). Mandic et al.
J Immunol. 174(3):1751- 9 (2005). Chen et al.
Proc Natl Acad Sci U S A. 101(25):9363- 8 (2004). Ayyoub et al.
Clin Cancer Res. 16(18):4607-15 (2010). Slager et al.
J Immunol. 172(8):5095-
Nº Antígeno Epítopos imunogênicos relatados Fontes associado a tumor 102 (2004). Mizote et al.
Vaccine. 28(32):5338- 46 (2010). Jager et al.
J Exp Med. 191(4):625- 30 (2000). Zarour et al.
Cancer Res. 60(17):4946- 52 (2000). Zeng et al.
J Immunol. 165(2):1153- 9 (2000). Bioley et al.
Clin Cancer Res. 15(13):4467- 74 (2009). Zarour et al.
Cancer Res. 62(1):213-8 (2002). Hasegawa et al.
Clin Cancer Res. 12(6):1921-7 (2006). 9 BAGE-1 AARAVFLAL (SEQ ID NO: 340) Boel et al.
Immunity. (carcinoma de 2(2):167-75 (1995). pulmão de células não pequenas) 10 GAGE-1,2,8 YRPRPRRY (SEQ ID NO: 404) Van den Eynde et al. (carcinoma de J Exp Med. pulmão de 182(3):689- células não 98 (1995). pequenas) 11 GAGE-3,4,5,6,7 YYWPRPRRY (SEQ ID NO: 418) De Backer et al. (carcinoma de Cancer Res. células 59(13):3157-65 escamosas de (1999). pulmão e adenocarcinoma de pulmão)
Nº Antígeno Epítopos imunogênicos relatados Fontes associado a tumor 12 HERV-K-MEL MLAVISCAV (SEQ ID NO: 316) Schiavetti et al.
Cancer Res. 62(19):5510-6 (2002). 13 KK-LC-1 RQKRILVNL (SEQ ID NO: 317) Fukuyama et al.
Cancer Res. 66(9):4922-8 (2006). 14 KM-HN-1 NYNNFYRFL (SEQ ID NO: 318) Fukuyama et al.
EYSKECLKEF (SEQ ID NO: 319) Cancer Res.
EYLSLSDKI (SEQ ID NO: 320) 66(9):4922-8 (2006). Monji et al.
Clin Cancer Res. 10(18 Pt 1):6047-57 (2004). 15 LAGE-1 MLMAQEALAFL (SEQ ID NO: 240) Aarnoudse et al.
Int J SLLMWITQC (SEQ ID NO: 237) Cancer. 82(3):442-8 LAAQERRVPR (SEQ ID NO: 243) (1999). ELVRRILSR (SEQ ID NO: 321) Rimoldi et al.
J APRGVRMAV (SEQ ID NO: 322) Immunol.
SLLMWITQCFLPVF (SEQ ID NO: 165(12):7253-61 251) (2000). QGAMLAAQERRVPRAAEVPR Wang et al.
J (SEQ ID NO: 256) Immunol.
AADHRQLQLSISSCLQQL (SEQ ID 161(7):3598-606 NO: 260) (1998). CLSRRPWKRSWSAGSCPGMPHL Sun et al.
Cancer (SEQ ID NO: 323) Immunol ILSRDAAPLPRPG (SEQ ID NO: Immunother. 324) 55(6):644-52 (2006). AGATGGRGPRGAGA (SEQ ID NO: Slager et al.
Cancer 264) Gene Ther. 11(3):227-36 (2004). Zeng et al.
Proc Natl Acad Sci U S A. 98(7):3964-9 (2001). Slager et al.
J Immunol. 172(8):5095- 102 (2004). Jager et al.
J Exp Med. 191(4):625- 30 (2000). Slager et al.
J
Nº Antígeno Epítopos imunogênicos relatados Fontes associado a tumor Immunol. 170(3):1490- 7 (2003). Wang et al. Immunity. 20(1):107- 18 (2004). Hasegawa et al. Clin Cancer Res. 12(6):1921-7 (2006). 16 Sp17 ILDSSEEDK (SEQ ID NO: 306) Chiriva-Internati et al. Int J Cancer. 107(5):863-5 (2003).
TABELA 12. CÂNCER RENAL Nº Antígeno Epítopos imunogênicos Fontes associado a relatados tumor 1 FGF5 NTYASPRFK (SEQ ID NO: Hanada et al. Nature. 419) 427(6971):252-6 (2004). 2 Hepsina SLLSGDWVL (SEQ ID NO: Guo et al. Scand J Immunol. 383); 78(3):248-57 (2013). GLQLGVQAV (SEQ ID NO: 384); e PLTEYIQPV (SEQ ID NO: 385) 3 Carboxil SPRWWPTCL (SEQ ID NO: Ronsin et al. J Immunol. esterase 386) 163(1):483-90 (1999). intestinal 4 M-CSF LPAVVGLSPGEQEY (SEQ ID Probst-Kepper et al. J Exp NO: 390) Med. 193(10):1189-98 (2001). 5 RU2AS LPRWPPPQL (SEQ ID NO: Van Den Eynde et al. J. Exp. 369) Med. 190(12):1793-800 (1999). 6 hsp70-2 SLFEGIDIYT (SEQ ID NO: Gaudin et al. J. Immunol. (carcinoma de 420) 162(3):1730-8 (1999). célula renal) 7 Mannan-MUC-1 PDTRPAPGSTAPPAHGVTSA Loveland et al. Clin. Cancer (carcinoma de (SEQ ID NO: 312) Res. 12(3 Pt 1):869-77
Nº Antígeno Epítopos imunogênicos Fontes associado a relatados tumor célula renal) STAPPVHNV (SEQ ID NO: (2006). 313) Loveland et al.
Clin.
Cancer LLLLTVLTV (SEQ ID NO: 314) Res. 12(3 Pt 1):869-77 PGSTAPPAHGVT (SEQ ID (2006). NO: 315) Godelaine et al.
Cancer Immunol Immunother. 56(6):753-9 (2007). Ma et al.
Int J Cancer. 129(10):2427-34 (2011). Wen et al.
Cancer Sci. 102(8):1455-61 (2011). Jerome et al.
J Immunol. 151(3):1654-62 (1993). Brossart et al.
Blood. 93(12):4309-17 (1999). Hiltbold et al.
Cancer Res. 58(22):5066-70 (1998). 8 MAGE-A9 ALSVMGVYV (SEQ ID NO: Oehlrich et al.
Int J Cancer. (carcinoma de 421) 117(2):256-64 (2005). célula renal)
TABELA 13. MELANOMA
Nº Antígeno Epítopos Fontes associado a imunogênicos tumor relatados 1 Hepsina SLLSGDWVL (SEQ ID Guo et al.
Scand J Immunol.
NO: 383); 78(3):248-57 (2013). GLQLGVQA (SEQ ID NO: 422); e PLTEYIQPV (SEQ ID NO: 385) 2 ARTC1 YSVYFNLPADTIYTN Wang et al J Immunol. (SEQ ID NO: 423) 174(5):2661-70 (2005). 3 B-RAF EDLTVKIGDFGLATEKS Sharkey et al.
Cancer Res.
RWSGSHQFEQLS (SEQ 64(5):1595-9 (2004). ID NO: 424) 4 beta-catenina SYLDSGIHF (SEQ ID Robbins et al.
J.
Exp.
Med.
NO: 425) 183(3):1185-92 (1996). 5 Cdc27 FSWAMDLDPKGA (SEQ Wang et al.
Science.
ID NO: 426) 284(5418):1351-4 (1999).
Nº Antígeno Epítopos Fontes associado a imunogênicos tumor relatados 6 CDK4 ACDPHSGHFV (SEQ ID Wölfel et al.
Science.
NO: 427) 269(5228):1281-4 (1995). 7 CDK12 CILGKLFTK (SEQ ID Robbins et al.
Nat Med.
NO: 428) 19(6):747-52. (2013). 8 CDKN2A AVCPWTWLR (SEQ ID Huang et al.
J Immunol.
NO: 429) 172(10):6057-64 (2004). 9 CLPP ILDKVLVHL (SEQ ID NO: Corbière et al.
Cancer Res. 430) 71(4):1253-62 (2011). 10 CSNK1A1 GLFGDIYLA (SEQ ID Robbins et al.
Nat Med.
NO: 431) 19(6):747-52 (2013). 11 FN1 MIFEKHGFRRTTPP Wang et al.
J Exp Med. (SEQ ID NO: 432) 195(11):1397-406 (2003). 12 GAS7 SLADEAEVYL (SEQ ID Robbins, et al.
Nat Med.
NO: 433) 19(6):747-52 (2013). 13 GPNMB TLDWLLQTPK (SEQ ID Lennerz et al.
Proc.
Natl.
Acad.
NO: 434) Sci.
U.S.A. 102(44):16013-8 (2005). 14 HAUS3 ILNAMIAKI (SEQ ID NO: Robbins et al.
Nat Med. 435) 19(6):747-52 (2013). 15 LDLR- WRRAPAPGA (SEQ ID Wang et al.
J Exp Med. fucosiltransferas NO: 436) e 189(10):1659-68 (1999). e PVTWRRAPA (SEQ ID NO: 437) 16 MART2 FLEGNEVGKTY (SEQ Kawakami et al.
J Immunol.
ID NO: 438) 166(4):2871-7 (2001). 17 MATN KTLTSVFQK (SEQ ID Robbins et al.
Nat Med.
NO: 439) 19(6):747-52 (2013). 18 MUM-1 EEKLIVVLF (SEQ ID NO: Coulie et al.
Proc.
Natl.
Acad. 440) Sci.
U.S.A. 92(17):7976-80 (1995). 19 MUM-2 SELFRSGLDSY (SEQ ID Chiari et al.
Cancer Res.
NO: 441) e 59(22):5785-92 (1999). FRSGLDSYV (SEQ ID NO: 442) 20 MUM-3 EAFIQPITR (SEQ ID NO: Baurain et al.
J.
Immunol. 443) 164(11):6057-66 (2000). 21 neo-PAP RVIKNSIRLTL (SEQ ID Topalian et al.
Cancer Res.
NO: 444) 62(19):5505-9 (2002).
Nº Antígeno Epítopos Fontes associado a imunogênicos tumor relatados 22 Miosina classe I KINKNPKYK (SEQ ID Zorn, et al. Eur. J. Immunol. NO: 445) 29(2):592-601 (1999). 23 PPP1R3B YTDFHCQYV (SEQ ID Robbins et al. Nat Med. NO: 446) 19(6):747-52 (2013). Lu et al. J Immunol. 190(12):6034-42 (2013). 24 PRDX5 LLLDDLLVSI (SEQ ID Sensi et al. Cancer Res. NO: 447) 65(2):632-40 (2005). 25 PTPRK PYYFAAELPPRNLPEP Novellino et al. J. Immunol. (SEQ ID NO: 448) 170(12):6363-70 (2003). 26 N-ras ILDTAGREEY (SEQ ID Linard et al. J. Immunol. NO: 449) 168(9):4802-8 (2002). 27 RBAF600 RPHVPESAF (SEQ ID Lennerz et al. Proc. Natl. Acad. NO: 450) Sci. U.S.A. 102(44):16013-8 (2005). 28 SIRT2 KIFSEVTLK (SEQ ID Lennerz et al. Proc. Natl. Acad. NO: 451) Sci. U.S.A. 102(44):16013-8 (2005). 29 SNRPD1 SHETVIIEL (SEQ ID NO: Lennerz et al. Proc. Natl. Acad. 452) Sci. U.S.A. 102(44):16013-8 (2005). 30 Triosefosfato GELIGILNAAKVPAD Pieper et al. J Exp Med. isomerase (SEQ ID NO: 453) 189(5):757-66 (1999). 31 OA1 LYSACFWWL (SEQ ID Touloukian et al. J. Immunol. NO: 454) 170(3):1579-85 (2003). 32 RAB38 / NY- VLHWDPETV (SEQ ID Walton et al. J Immunol. MEL-1 NO: 455) 177(11):8212-8 (2006). 33 TRP-1 / gp75 MSLQRQFLR (SEQ ID Touloukian et al. Cancer Res. NO: 456); 62(18):5144-7 (2002). ISPNSVFSQWRVVCDS Robbins et al. J. Immunol. LEDY (SEQ ID NO: 457); (10):6036-47 (2002). SLPYWNFATG (SEQ ID Osen et al. PLoS One. NO: 458); e 5(11):e14137 (2010).
SQWRVVCDSLEDYDT (SEQ ID NO: 459) 34 TRP-2 SVYDFFVWL (SEQ ID Parkhurst et al. Cancer Res. NO: 460); 58(21):4895-901 (1998). TLDSQVMSL (SEQ ID Noppen et al. Int. J. Cancer. NO: 461); 87(2):241-6 (2000).
Nº Antígeno Epítopos Fontes associado a imunogênicos tumor relatados LLGPGRPYR (SEQ ID Wang et al. J. Exp. Med. NO: 462); 1184(6):2207-16 (1996). ANDPIFVVL (SEQ ID Wang et al. J. Immunol. NO: 463); 160(2):890-7 (1998). QCTEVRADTRPWSGP Castelli et al. J. Immunol. (SEQ ID NO: 464); e 162(3):1739-48 (1999). ALPYWNFATG (SEQ ID Paschen et al. Clin. Cancer NO: 465) Res. (14):5241-7 (2005). Robbins et al. J. Immunol. 169(10):6036-47 (2002). 35 tirosinase KCDICTDEY (SEQ ID Kittlesen et al. J. Immunol. NO: 466); 160(5):2099-106 (1998). SSDYVIPIGTY (SEQ ID Kawakami et al. J. Immunol. NO: 467); (12):6985-92 (1998). MLLAVLYCL (SEQ ID Wölfel et al. Eur. J. Immunol. NO: 468); 24(3):759-64 (1994). CLLWSFQTSA (SEQ ID Riley et al. J. Immunother. NO: 469); 24(3):212-20 (2001). YMDGTMSQV (SEQ ID Skipper et al. J. Exp. Med. NO: 470); 183(2):527-34 (1996). AFLPWHRLF (SEQ ID Kang et al. J. Immunol. NO: 236); 155(3):1343-8 (1995). IYMDGTADFSF (SEQ ID Dalet et al. Proc. Natl. Acad. NO: 471); Sci. U.S.A. 108(29):E323-31 QCSGNFMGF (SEQ ID (2011) NO: 472); Lennerz et al. Proc. Natl. Acad. TPRLPSSADVEF (SEQ Sci. U.S.A. 102(44):16013-8 ID NO: 473); (2005). LPSSADVEF (SEQ ID Benlalam et al. J. Immunol. NO: 474); 171(11):6283-9 (2003). LHHAFVDSIF (SEQ ID Morel et al. Int. J. Cancer. NO: 475); 83(6):755-9 (1999). SEIWRDIDF (SEQ ID Brichard et al. Eur. J. Immunol. NO: 476); 26(1):224-30 (1996). QNILLSNAPLGPQFP Topalian et al. J. Exp. Med. (SEQ ID NO: 477); (5):1965-71 (1996). SYLQDSDPDSFQD Kobayashi et al. Cancer Res. (SEQ ID NO: 478); e 58(2):296-301 (1998).
FLLHHAFVDSIFEQWLQ RHRP (SEQ ID NO: 479) 36 Melan-A/MART- YTTAEEAAGIGILTVILG Meng et al. J. Immunother. 1 VLLLIGCWYCRR (SEQ 23:525-534 (2011) ID NO: 480)
Nº Antígeno Epítopos Fontes associado a imunogênicos tumor relatados 37 gp100 / Pmel17 ALNFPGSQK (SEQ ID El Hage et al. Proc. Natl. Acad. NO: 481) Sci. U.S.A. 105(29):10119-24 ALNFPGSQK (SEQ ID (2008). NO: 481) Kawashima et al. Hum VYFFLPDHL (SEQ ID Immunol. 59(1):1-14 (1998). NO: 482) Robbins et al. J Immunol. RTKQLYPEW (SEQ ID 159(1):303-8 (1997). NO: 483) Sensi et al. Tissue Antigens. HTMEVTVYHR (SEQ ID 59(4):273-9 (2002). NO: 484) Lennerz et al. Proc Natl Acad SSPGCQPPA (SEQ ID Sci U S A. 102(44):16013-8 NO: 485) (2005). VPLDCVLYRY (SEQ ID Benlalam et al. J Immunol. NO: 486) 171(11):6283-9 (2003). LPHSSSHWL (SEQ ID Vigneron et al. Tissue Antigens. NO: 487) 65(2):156-62 (2005). SNDGPTLI (SEQ ID NO: Castelli et al. J Immunol. 488) 162(3):1739-48 (1999). GRAMLGTHTMEVTVY Touloukian et al. J Immunol. (SEQ ID NO: 489) 164(7):3535-42 (2000). WNRQLYPEWTEAQRL Parkhurst et al. J Immunother. D (SEQ ID NO: 490) 27(2):79-91 (2004). TTEWVETTARELPIPEP Lapointe et al. J Immunol. E (SEQ ID NO: 491) 167(8):4758-64 (2001). TGRAMLGTHTMEVTVY Kobayashi et al. Cancer Res. H (SEQ ID NO: 492) 61(12):4773-8 (2001).
GRAMLGTHTMEVTVY (SEQ ID NO: 489) 38 NY-ESO-1 HLA-A2-peptídeo restrito Jager et al. Proc. Natl. Acad. p157–165 (SLLMWITQC Scie. U.S.A. 103(39):14453-8 (SEQ ID NO: 237)), HLA- (2006). Cw3-restrito p92–100 Gnjatic et al. PNAS (LAMPFATPM (SEQ ID 26 de setembro de 2000 vol. 97 NO: 238)) e HLA-Cw6- nº 20 p. 10919 restrito p80–88 Jager et al. J Exp Med. (ARGPESRLL (SEQ ID 187(2):265-70 (1998). NO: 239)) Chen et al. J Immunol. SLLMWITQC (SEQ ID 165(2):948-55 (2000). NO: 237) Valmori et al. Cancer Res. MLMAQEALAFL (SEQ ID 60(16):4499-506 (2000). NO: 240) Aarnoudse et al. Int J Cancer. YLAMPFATPME (SEQ ID 82(3):442-8 (1999). NO: 241) Eikawa et al. Int J Cancer. ASGPGGGAPR (SEQ ID 132(2):345-54 (2013).
Nº Antígeno Epítopos Fontes associado a imunogênicos tumor relatados NO: 242) Wang et al. J Immunol. LAAQERRVPR (SEQ ID 161(7):3598-606 (1998). NO: 243) Matsuzaki et al. Cancer TVSGNILTIR (SEQ ID Immunol Immunother. NO: 244) 57(8)1185-95 (2008). APRGPHGGAASGL Ebert et al. Cancer Res. (SEQ ID NO: 245) 69(3):1046-54 (2009). MPFATPMEAEL (SEQ ID Eikawa et al. Int J Cancer. NO: 246) 132(2):345-54 (2013). KEFTVSGNILTI (SEQ ID Knights et al. Cancer Immunol NO: 247) Immunother. 58(3):325- MPFATPMEA (SEQ ID 38 (2009). NO: 248) Jäger et al. Cancer Immun. 2:12 FATPMEAEL (SEQ ID (2002). NO: 249) Zeng et al. Proc Natl Acad Sci U FATPMEAELAR (SEQ ID S A. 98(7):3964-9 (2001). NO: 250) Mandic et al. J Immunol. LAMPFATPM (SEQ ID 174(3):1751-9 (2005). NO: 238) Chen et al. Proc Natl Acad Sci U ARGPESRLL (SEQ ID S A. 101(25):9363-8 (2004). NO: 239) Ayyoub et al. Clin Cancer Res. SLLMWITQCFLPVF 16(18):4607-15 (2010). (SEQ ID NO: 251) Slager et al. J Immunol. LLEFYLAMPFATPMEAE 172(8):5095-102 (2004). LARRSLAQ (SEQ ID NO: Mizote et al. Vaccine. 252) 28(32):5338-46 (2010). EFYLAMPFATPM (SEQ Jager et al. J Exp Med. ID NO: 253) 191(4):625-30 (2000). PGVLLKEFTVSGNILTIR Zarour et al. Cancer Res. LTAADHR (SEQ ID NO: 60(17):4946-52 (2000). 254) Zeng et al. J Immunol. RLLEFYLAMPFA (SEQ 165(2):1153-9 (2000). ID NO: 255) Bioley et al. Clin Cancer Res. QGAMLAAQERRVPRAA 15(13):4467-74 (2009). EVPR (SEQ ID NO: 256) Zarour et al. Cancer Res. PFATPMEAELARR 62(1):213-8 (2002). (SEQ ID NO: 257) Hasegawa et al. Clin Cancer PGVLLKEFTVSGNILTIR Res. 12(6):1921-7 (2006). LT (SEQ ID NO: 258) VLLKEFTVSG (SEQ ID NO: 259)
AADHRQLQLSISSCLQ QL (SEQ ID NO: 260)
LKEFTVSGNILTIRL
Nº Antígeno Epítopos Fontes associado a imunogênicos tumor relatados (SEQ ID NO: 261)
PGVLLKEFTVSGNILTIR LTAADHR (SEQ ID NO: 254)
LLEFYLAMPFATPMEAE LARRSLAQ (SEQ ID NO: 252) KEFTVSGNILT (SEQ ID NO: 262)
LLEFYLAMPFATPM (SEQ ID NO: 263)
AGATGGRGPRGAGA (SEQ ID NO: 264) 39 BAGE-1 AARAVFLAL (SEQ ID Boel et al. Immunity. 2(2):167- NO: 340) 75 (1995). 40 GAGE-1,2,8 YRPRPRRY (SEQ ID Van den Eynde et al. J Exp NO: 404) Med. 182(3):689-98 (1995). 41 GAGE-3,4,5,6,7 YYWPRPRRY (SEQ ID De Backer et al. Cancer Res. (melanoma NO: 418) 59(13):3157-65 (1999). cutâneo) 42 GnTVf VLPDVFIRCV (SEQ ID Guilloux et al. J Exp Med. NO: 493) 183(3):1173-83 (1996). VLPDVFIRC (SEQ ID NO: 628) 43 HERV-K-MEL MLAVISCAV (SEQ ID Schiavetti et al. Cancer Res. NO: 316) 62(19):5510-6 (2002). 44 KK-LC-1 RQKRILVNL (SEQ ID Fukuyama et al. Cancer Res. NO: 317) 66(9):4922-8 (2006). 45 KM-HN-1 NYNNFYRFL (SEQ ID Fukuyama et al. Cancer Res. NO: 318) 66(9):4922-8 (2006). EYSKECLKEF (SEQ ID Monji et al. Clin Cancer Res. NO: 319) 10(18 Pt 1):6047-57 (2004). EYLSLSDKI (SEQ ID NO: 320) 46 LAGE-1 MLMAQEALAFL (SEQ ID Aarnoudse et al. Int J Cancer. NO: 240) 82(3):442-8 (1999). SLLMWITQC (SEQ ID Rimoldi et al. J Immunol. NO: 237) 165(12):7253-61 (2000). LAAQERRVPR (SEQ ID Wang et al. J Immunol. NO: 243) 161(7):3598-606 (1998). ELVRRILSR (SEQ ID Sun et al. Cancer Immunol
Nº Antígeno Epítopos Fontes associado a imunogênicos tumor relatados NO: 321) Immunother. 55(6):644-52 APRGVRMAV (SEQ ID (2006). NO: 322) Slager et al. Cancer Gene Ther. SLLMWITQCFLPVF 11(3):227-36 (2004). (SEQ ID NO: 251) Zeng et al. Proc Natl Acad Sci U QGAMLAAQERRVPRAA S A. 98(7):3964-9 (2001). EVPR (SEQ ID NO: 256) Slager et al. J Immunol. AADHRQLQLSISSCLQ 172(8):5095-102 (2004). QL (SEQ ID NO: 260) Jager et al. J Exp Med. CLSRRPWKRSWSAGS 191(4):625-30 (2000). CPGMPHL (SEQ ID NO: Slager et al. J Immunol. 323) 170(3):1490-7 (2003). ILSRDAAPLPRPG (SEQ Wang et al. Immunity. ID NO: 324) 20(1):107-18 (2004). AGATGGRGPRGAGA Hasegawa et al. Clin Cancer (SEQ ID NO: 264) Res. 12(6):1921-7 (2006). 47 LY6K RYCNLEGPPI (SEQ ID Suda et al. Cancer Sci. NO: 494) 98(11):1803-8 (2007). KWTEPYCVIAAVKIFPR Tomita et al. Oncoimmunology. FFMVAKQ (SEQ ID NO: 3:e28100 (2014). 495)
KCCKIRYCNLEGPPINS SVF (SEQ ID NO: 496) 48 MAGE-A1 EADPTGHSY (SEQ ID Traversari et al. J Exp Med. NO: 341) 176(5):1453-7 (1992). KVLEYVIKV (SEQ ID Ottaviani et al. Cancer Immunol NO: 342) Immunother. 54(12):1214- SLFRAVITK (SEQ ID NO: 20 (2005). 343) Pascolo et al. Cancer Res. EVYDGREHSA (SEQ ID 61(10):4072-7 (2001). NO: 344) Chaux et al. J Immunol. RVRFFFPSL (SEQ ID 163(5):2928-36 (1999). NO: 345) Luiten et al. Tissue Antigens. EADPTGHSY (SEQ ID 55(2):149-52 (2000). NO: 341) Luiten et al. Tissue Antigens. REPVTKAEML (SEQ ID 56(1):77-81 (2000). NO: 346) Tanzarella et al. Cancer Res. KEADPTGHSY (SEQ ID 59(11):2668-74 (1999). NO: 347) Stroobant et al. Eur J Immunol. DPARYEFLW (SEQ ID 42(6):1417-28 (2012). NO: 348) Corbière et al. Tissue Antigens. ITKKVADLVGF (SEQ ID 63(5):453-7 (2004). NO: 349) Goodyear et al. Cancer
Nº Antígeno Epítopos Fontes associado a imunogênicos tumor relatados SAFPTTINF (SEQ ID Immunol Immunother.
NO: 350) 60(12):1751-61 (2011). SAYGEPRKL (SEQ ID van der Bruggen et al.
Eur J NO: 351) Immunol. 24(9):2134-40 (1994). RVRFFFPSL (SEQ ID Wang et al.
Cancer Immunol NO: 345) Immunother. 56(6):807-18 TSCILESLFRAVITK (2007). (SEQ ID NO: 352) Chaux et al.
J Exp Med.
PRALAETSYVKVLEY 189(5):767-78 (1999). (SEQ ID NO: 353) Chaux et al.
Eur J Immunol.
FLLLKYRAREPVTKAE 31(6):1910-6 (2001). (SEQ ID NO: 354) EYVIKVSARVRF (SEQ ID NO: 355) 49 MAGE-A6 MVKISGGPR (SEQ ID Zorn et al.
Eur J Immunol.
NO: 529) 29(2):602-7 (1999). EVDPIGHVY (SEQ ID Benlalam et al.
J Immunol.
NO: 530) 171(11):6283-9 (2003). REPVTKAEML (SEQ ID Tanzarella et al.
Cancer Res.
NO: 346) 59(11):2668-74 (1999). EGDCAPEEK (SEQ ID Breckpot et al.
J Immunol.
NO: 358) 172(4):2232-7 (2004). ISGGPRISY (SEQ ID Vantomme et al.
Cancer NO: 406) Immun. 3:17 (2003). LLKYRAREPVTKAE Chaux et al.
J Exp Med. (SEQ ID NO: 359) 189(5):767-78 (1999). 50 MAGE-A10 GLYDGMEHL (SEQ ID Huang et al.
J Immunol.
NO: 497) 162(11):6849-54 (1999). DPARYEFLW (SEQ ID Chaux et al.
J Immunol.
NO: 348) 163(5):2928-36 (1999). 51 MAGE-A12 FLWGPRALV (SEQ ID van der Bruggen et al.
Eur J NO: 498) Immunol. 24(12):3038- VRIGHLYIL (SEQ ID NO: 43 (1994). 499) Heidecker et al.
J Immunol.
EGDCAPEEK (SEQ ID 164(11):6041-5 (2000). NO: 358) Panelli et al.
J Immunol.
REPFTKAEMLGSVIR 164(8):4382-92 (2000). (SEQ ID NO: 500) Breckpot et al.
J Immunol.
AELVHFLLLKYRAR 172(4):2232-7 (2004). (SEQ ID NO: 501) Wang et al.
Cancer Immunol Immunother. 56(6):807-18 (2007). Chaux et al.
J Exp Med.
Nº Antígeno Epítopos Fontes associado a imunogênicos tumor relatados 189(5):767-78 (1999). 52 MAGE-C2 LLFGLALIEV (SEQ ID Ma et al. Int J Cancer. NO: 502) 109(5):698-702 (2004). ALKDVEERV (SEQ ID Godelaine et al. Cancer NO: 405) Immunol Immunother. SESIKKKVL (SEQ ID 56(6):753-9 (2007). NO: 503) Ma et al. Int J Cancer. ASSTLYLVF (SEQ ID 129(10):2427-34 (2011). NO: 504) Wen et al. Cancer Sci. SSTLYLVFSPSSFST 102(8):1455-61 (2011). (SEQ ID NO: 505) 53 NA88-A QGQHFLQKV (SEQ ID Moreau-Aubry et al. J Exp Med. NO: 506) 191(9):1617-24 (2000). 54 Sp17 ILDSSEEDK (SEQ ID Chiriva-Internati et al. Int J NO: 306) Cancer. 107(5):863-5 (2003). 55 SSX-2 KASEKIFYV (SEQ ID Ayyoub et al. J Immunol. NO: 360) 168(4):1717-22 (2002). EKIQKAFDDIAKYFSK Ayyoub et al. J Immunol. (SEQ ID NO: 361) 172(11):7206-11 (2004). FGRLQGISPKI (SEQ ID Neumann et al. Cancer NO: 362) Immunol Immunother. WEKMKASEKIFYVYMK 60(9):1333-46 (2011). RK (SEQ ID NO: 363) Ayyoub et al. Clin Immunol. KIFYVYMKRKYEAMT 114(1):70-8 (2005). (SEQ ID NO: 364) Neumann et al. Int J Cancer. KIFYVYMKRKYEAM 112(4):661-8 (2004). (SEQ ID NO: 365) Ayyoub et al. J Clin Invest. 113(8):1225-33 (2004). 56 SSX-4 INKTSGPKRGKHAWTH Ayyoub et al. J Immunol. RLRE (SEQ ID NO: 329) 174(8):5092-9 (2005). YFSKKEWEKMKSSEKI Valmori et al. Clin Cancer Res. VYVY (SEQ ID NO: 330) 12(2):398-404 (2006).
MKLNYEVMTKLGFKVT LPPF (SEQ ID NO: 331)
KHAWTHRLRERKQLVV YEEI (SEQ ID NO: 332)
LGFKVTLPPFMRSKRA ADFH (SEQ ID NO: 333)
KSSEKIVYVYMKLNYEV MTK (SEQ ID NO: 334)
KHAWTHRLRERKQLVV YEEI (SEQ ID NO: 332)
Nº Antígeno Epítopos Fontes associado a imunogênicos tumor relatados 57 TRAG-3 CEFHACWPAFTVLGE Janjic et al. J Immunol. (SEQ ID NO: 366) 177(4):2717-27 (2006). 58 TRP2-INT2g EVISCKLIKR (SEQ ID Lupetti et al. J Exp Med. NO: 507) 188(6):1005-16 (1998). 59 pgk Morgan et al., J. Immunol. 171:3287-3295 (2003) TABELA 14. CARCINOMA DE CÉLULAS ESCAMOSAS Nº Antígeno Epítopos imunogênicos Fontes associado a relatados tumor 1 CASP-8 FPSDSWCYF (SEQ ID Mandruzzato et al. J. Exp. Med. NO: 508) 186(5):785-93 (1997). 2 p53 VVPCEPPEV (SEQ ID Ito et al. Int. J. Cancer. NO: 283) 120(12):2618-24 (2007). 3 SAGE LYATVIHDI (SEQ ID NO: Miyahara et al. Clin Cancer 509) Res. 11(15):5581-9 (2005).
TABELA 15. LEUCEMIA MIELOIDE CRÔNICA Nº Antígeno Epítopos imunogênicos Fontes associado a relatados tumor 1 BCR-ABL SSKALQRPV (SEQ ID NO: Yotnda et al. J. Clin. Invest. 510); 101(10):2290-6 (1998). GFKQSSKAL (SEQ ID NO: Bosch et al. Blood. 511); 88(9):3522-7 (1996). ATGFKQSSKALQRPVAS Makita et al. Leukemia. (SEQ ID NO: 512); e 16(12):2400-7 (2002).
ATGFKQSSKALQRPVAS (SEQ ID NO: 512) 2 dek-can TMKQICKKEIRRLHQY Makita et al. Leukemia. (SEQ ID NO: 513) 16(12):2400-7 (2002). 3 EFTUD2 KILDAVVAQK (SEQ ID NO: Lennerz et al. Proc. Natl. 514) Acad. Sci. U.S.A. 102(44):16013-8 (2005). 4 GAGE-3,4,5,6,7 YYWPRPRRY (SEQ ID De Backer et al. Cancer Res. NO: 418) 59(13):3157-65 (1999).
TABELA 16. LEUCEMIA LINFOBLÁSTICA AGUDA Nº Antígeno Epítopos imunogênicos Fontes associado a relatados tumor 1 ETV6-AML1 RIAECILGM (SEQ ID NO: Yotnda et al. J. Clin. Invest. 515) e (2):455-62 (1998). IGRIAECILGMNPSR Yun et al. Tissue Antigens. (SEQ ID NO: 516) 54(2):153-61 (1999). 2 GAGE-3,4,5,6,7 YYWPRPRRY (SEQ ID De Backer et al. Cancer Res. NO: 418) 59(13):3157-65 (1999).
TABELA 17. LEUCEMIA MIELOIDE AGUDA Nº Antígeno Epítopos imunogênicos Fontes associado a relatados tumor 1 FLT3-ITD YVDFREYEYY (SEQ ID Graf et al. Blood. 109(7):2985- NO: 517) 8 (2007). 2 Ciclina-A1 FLDRFLSCM e (SEQ ID Ochsenreither et al. Blood. NO: 518) 119(23):5492-501 (2012). SLIAAAAFCLA (SEQ ID NO: 519) 3 GAGE-3,4,5,6,7 YYWPRPRRY (SEQ ID De Backer et al. Cancer Res. NO: 418) 59(13):3157-65 (1999).
TABELA 18. LEUCEMIA LINFOCÍTICA CRÔNICA Nº Antígeno Epítopos imunogênicos Fontes associado a relatados tumor 1 FNDC3B VVMSWAPPV (SEQ ID Rajasagi et al. Blood. NO: 520) 124(3):453-62 (2014). 2 GAGE-3,4,5,6,7 YYWPRPRRY (SEQ ID De Backer et al. Cancer Res. NO: 418) 59(13):3157-65 (1999).
TABELA 19. LEUCEMIA PROMIELOCÍTICA Nº Antígeno Epítopos Fontes associado a imunogênicos tumor relatados 1 pml-RARalpha NSNHVASGAGEAAIET Gambacorti-Passerini et al.
Nº Antígeno Epítopos Fontes associado a imunogênicos tumor relatados QSSSSEEIV (SEQ ID Blood. 81(5):1369-75 (1993). NO: 521) 2 GAGE-3,4,5,6,7 YYWPRPRRY (SEQ ID De Backer et al. Cancer Res. NO: 418) 59(13):3157-65 (1999).
TABELA 20. MIELOMA MÚLTIPLO Nº Antígeno Epítopos Fontes associado a imunogênicos tumor relatados 1 MAGE-C1 ILFGISLREV (SEQ ID Anderson et al. Cancer NO: 522) Immunol Immunother. KVVEFLAML (SEQ ID 60(7):985-97 (2011). NO: 523) Nuber et al. Proc Natl Acad Sci SSALLSIFQSSPE (SEQ U S A. 107(34):15187- ID NO: 524) 92 (2010). SFSYTLLSL (SEQ ID NO: 525) VSSFFSYTL (SEQ ID NO: 526) 2 NY-ESO-1 HLA-A2-peptídeo restrito Jager et al. Proc. Natl. Acad. p157–165 (SLLMWITQC Scie. U.S.A. 103(39):14453-8 (SEQ ID NO: 237)), HLA- (2006). Cw3-restrito p92–100 Gnjatic et al. PNAS (LAMPFATPM (SEQ ID 26 de setembro de 2000 vol. 97 NO: 238)) e HLA-Cw6- nº 20 p. 10919 restrito p80–88 Jager et al. J Exp Med. (ARGPESRLL (SEQ ID 187(2):265-70 (1998). NO: 239)) Chen et al. J Immunol. SLLMWITQC (SEQ ID 165(2):948-55 (2000). NO: 237) Valmori et al. Cancer Res. MLMAQEALAFL (SEQ 60(16):4499-506 (2000). ID NO: 240) Aarnoudse et al. Int J Cancer. YLAMPFATPME (SEQ ID 82(3):442-8 (1999). NO: 241) Eikawa et al. Int J Cancer. ASGPGGGAPR (SEQ ID 132(2):345-54 (2013). NO: 242) Wang et al. J Immunol. LAAQERRVPR (SEQ ID 161(7):3598-606 (1998). NO: 243) Matsuzaki et al. Cancer TVSGNILTIR (SEQ ID Immunol Immunother. NO: 244) 57(8)1185-95 (2008). APRGPHGGAASGL Ebert et al. Cancer Res.
Nº Antígeno Epítopos Fontes associado a imunogênicos tumor relatados (SEQ ID NO: 245) 69(3):1046-54 (2009). MPFATPMEAEL (SEQ ID Eikawa et al. Int J Cancer. NO: 246) 132(2):345-54 (2013). KEFTVSGNILTI (SEQ ID Knights et al. Cancer Immunol NO: 247) Immunother. 58(3):325- MPFATPMEA (SEQ ID 38 (2009). NO: 248) Jäger et al. Cancer Immun. FATPMEAEL (SEQ ID 2:12 (2002). NO: 249) Zeng et al. Proc Natl Acad Sci U FATPMEAELAR (SEQ ID S A. 98(7):3964-9 (2001). NO: 250) Mandic et al. J Immunol. LAMPFATPM (SEQ ID 174(3):1751-9 (2005). NO: 238) Chen et al. Proc Natl Acad Sci ARGPESRLL (SEQ ID U S A. 101(25):9363-8 (2004). NO: 239) Ayyoub et al. Clin Cancer Res. SLLMWITQCFLPVF 16(18):4607-15 (2010). (SEQ ID NO: 251) Slager et al. J Immunol. LLEFYLAMPFATPMEAE 172(8):5095-102 (2004). LARRSLAQ (SEQ ID NO: Mizote et al. Vaccine. 252) 28(32):5338-46 (2010). EFYLAMPFATPM (SEQ Jager et al. J Exp Med. ID NO: 253) 191(4):625-30 (2000). PGVLLKEFTVSGNILTIR Zarour et al. Cancer Res. LTAADHR (SEQ ID NO: 60(17):4946-52 (2000). 254) Zeng et al. J Immunol. RLLEFYLAMPFA (SEQ 165(2):1153-9 (2000). ID NO: 255) Bioley et al. Clin Cancer Res. QGAMLAAQERRVPRA 15(13):4467-74 (2009). AEVPR (SEQ ID NO: Zarour et al. Cancer Res. 256) 62(1):213-8 (2002). PFATPMEAELARR Hasegawa et al. Clin Cancer (SEQ ID NO: 257) Res. 12(6):1921-7 (2006).
PGVLLKEFTVSGNILTIR LT (SEQ ID NO: 258) VLLKEFTVSG (SEQ ID NO: 259)
AADHRQLQLSISSCLQ QL (SEQ ID NO: 260)
LKEFTVSGNILTIRL (SEQ ID NO: 261)
PGVLLKEFTVSGNILTIR LTAADHR (SEQ ID NO: 254)
LLEFYLAMPFATPMEAE
Nº Antígeno Epítopos Fontes associado a imunogênicos tumor relatados LARRSLAQ (SEQ ID NO: 252) KEFTVSGNILT (SEQ ID NO: 262)
LLEFYLAMPFATPM (SEQ ID NO: 263)
AGATGGRGPRGAGA (SEQ ID NO: 264) 3 LAGE-1 MLMAQEALAFL (SEQ Aarnoudse et al. Int J Cancer. ID NO: 240) 82(3):442-8 (1999). SLLMWITQC (SEQ ID Rimoldi et al. J Immunol. NO: 237) 165(12):7253-61 (2000). LAAQERRVPR (SEQ ID Wang et al. J Immunol. NO: 243) 161(7):3598-606 (1998). ELVRRILSR (SEQ ID Sun et al. Cancer Immunol NO: 321) Immunother. 55(6):644-52 APRGVRMAV (SEQ ID (2006). NO: 322) Slager et al. Cancer Gene Ther. SLLMWITQCFLPVF 11(3):227-36 (2004). (SEQ ID NO: 251) Zeng et al. Proc Natl Acad Sci U QGAMLAAQERRVPRA S A. 98(7):3964-9 (2001). AEVPR (SEQ ID NO: Slager et al. J Immunol. 256) 172(8):5095-102 (2004). AADHRQLQLSISSCLQ Jager et al. J Exp Med. QL (SEQ ID NO: 260) 191(4):625-30 (2000). CLSRRPWKRSWSAGS Slager et al. J Immunol. CPGMPHL (SEQ ID NO: 170(3):1490-7 (2003). 323) Wang et al. Immunity. ILSRDAAPLPRPG (SEQ 20(1):107-18 (2004). ID NO: 324) Hasegawa et al. Clin Cancer AGATGGRGPRGAGA Res. 12(6):1921-7 (2006). (SEQ ID NO: 264) 4 HERV-K-MEL MLAVISCAV (SEQ ID Schiavetti et al. Cancer Res. NO: 316) 62(19):5510-6 (2002). 5 KK-LC-1 RQKRILVNL (SEQ ID Fukuyama et al. Cancer Res. NO: 317) 66(9):4922-8 (2006). 6 KM-HN-1 NYNNFYRFL (SEQ ID Fukuyama et al. Cancer Res. NO: 318) 66(9):4922-8 (2006). EYSKECLKEF (SEQ ID Monji et al. Clin Cancer Res. NO: 319) 10(18 Pt 1):6047-57 (2004). EYLSLSDKI (SEQ ID NO: 320)
Nº Antígeno Epítopos Fontes associado a imunogênicos tumor relatados 7 Sp17 ILDSSEEDK (SEQ ID Chiriva-Internati et al. Int J NO: 306) Cancer. 107(5):863-5 (2003).
TABELA 21. LINFOMA DE CÉLULA B Nº Antígeno Epítopos Fonte associado a imunogênicos tumor relatados 1 KPLFRRMSSLELVIA Vauchy et al. Int J Cancer. D393-CD20 (SEQ ID NO: 528) 137(1):116-26 (2015).
TABELA 22. CARCINOMA DE BEXIGA Nº Antígeno Epítopos Fontes associado a imunogênicos tumor relatados 1 BAGE-1 AARAVFLAL (SEQ ID Boel et al. Immunity. 2(2):167- NO: 340) 75 (1995). 2 GAGE-1,2,8 YRPRPRRY (SEQ ID Van den Eynde et al. J Exp NO: 404) Med. 182(3):689-98 (1995). 3 GAGE-3,4,5,6,7 YYWPRPRRY (SEQ ID De Backer et al. Cancer Res. NO: 418) 59(13):3157-65 (1999). 4 MAGE-A4 EVDPASNTY (SEQ ID Kobayashi et al. Tissue (carcinoma de NO: 325) Antigens. 62(5):426-32 (2003). célula transitória GVYDGREHTV (SEQ ID Duffour et al. Eur J Immunol. de bexiga NO: 326) 29(10):3329-37 (1999). urinária) NYKRCFPVI (SEQ ID Miyahara et al. Clin Cancer NO: 327) Res. 11(15):5581-9 (2005). SESLKMIF (SEQ ID NO: Ottaviani et al. Cancer Immunol 328) Immunother. 55(7):867- 72 (2006). Zhang et al. Tissue Antigens. 60(5):365-71 (2002). 5 MAGE-A6 MVKISGGPR (SEQ ID Zorn et al. Eur J Immunol. NO: 529) 29(2):602-7 (1999). EVDPIGHVY (SEQ ID Benlalam et al. J Immunol. NO: 530) 171(11):6283-9 (2003). REPVTKAEML (SEQ ID Tanzarella et al. Cancer Res. NO: 346) 59(11):2668-74 (1999). EGDCAPEEK (SEQ ID Breckpot et al. J Immunol. NO: 358) 172(4):2232-7 (2004).
Nº Antígeno Epítopos Fontes associado a imunogênicos tumor relatados ISGGPRISY (SEQ ID Vantomme et al.
Cancer NO: 406) Immun. 3:17 (2003). LLKYRAREPVTKAE Chaux et al.
J Exp Med. (SEQ ID NO: 359) 189(5):767-78 (1999). 6 SAGE LYATVIHDI (SEQ ID NO: Miyahara et al.
Clin Cancer 509) Res. 11(15):5581-9 (2005). 7 NY-ESO-1 HLA-A2-peptídeo restrito Jager et al.
Proc.
Natl.
Acad. p157–165 (SLLMWITQC Scie.
U.S.A. 103(39):14453-8 (SEQ ID NO: 237)), HLA- (2006). Cw3-restrito p92–100 Gnjatic et al.
PNAS (LAMPFATPM (SEQ ID 26 de setembro de 2000 vol. 97 NO: 238)) e HLA-Cw6- nº 20 p. 10919 restrito p80–88 Jager et al.
J Exp Med. (ARGPESRLL (SEQ ID 187(2):265-70 (1998). NO: 239)) Chen et al.
J Immunol.
SLLMWITQC (SEQ ID 165(2):948-55 (2000). NO: 237) Valmori et al.
Cancer Res.
MLMAQEALAFL (SEQ 60(16):4499-506 (2000). ID NO: 240) Aarnoudse et al.
Int J Cancer.
YLAMPFATPME (SEQ ID 82(3):442-8 (1999). NO: 241) Eikawa et al.
Int J Cancer.
ASGPGGGAPR (SEQ ID 132(2):345-54 (2013). NO: 242) Wang et al.
J Immunol.
LAAQERRVPR (SEQ ID 161(7):3598-606 (1998). NO: 243) Matsuzaki et al.
Cancer TVSGNILTIR (SEQ ID Immunol Immunother.
NO: 244) 57(8)1185-95 (2008). APRGPHGGAASGL Ebert et al.
Cancer Res. (SEQ ID NO: 245) 69(3):1046-54 (2009). MPFATPMEAEL (SEQ ID Eikawa et al.
Int J Cancer.
NO: 246) 132(2):345-54 (2013). KEFTVSGNILTI (SEQ ID Knights et al.
Cancer Immunol NO: 247) Immunother. 58(3):325- MPFATPMEA (SEQ ID 38 (2009). NO: 248) Jäger et al.
Cancer Immun.
FATPMEAEL (SEQ ID 2:12 (2002). NO: 249) Zeng et al.
Proc Natl Acad Sci U FATPMEAELAR (SEQ ID S A. 98(7):3964-9 (2001). NO: 250) Mandic et al.
J Immunol.
LAMPFATPM (SEQ ID 174(3):1751-9 (2005). NO: 238) Chen et al.
Proc Natl Acad Sci ARGPESRLL (SEQ ID U S A. 101(25):9363-8 (2004). NO: 239) Ayyoub et al.
Clin Cancer Res.
Nº Antígeno Epítopos Fontes associado a imunogênicos tumor relatados SLLMWITQCFLPVF 16(18):4607-15 (2010). (SEQ ID NO: 251) Slager et al. J Immunol. LLEFYLAMPFATPMEAE 172(8):5095-102 (2004). LARRSLAQ (SEQ ID NO: Mizote et al. Vaccine. 252) 28(32):5338-46 (2010). EFYLAMPFATPM (SEQ Jager et al. J Exp Med. ID NO: 253) 191(4):625-30 (2000). PGVLLKEFTVSGNILTIR Zarour et al. Cancer Res. LTAADHR (SEQ ID NO: 60(17):4946-52 (2000). 254) Zeng et al. J Immunol. RLLEFYLAMPFA (SEQ 165(2):1153-9 (2000). ID NO: 255) Bioley et al. Clin Cancer Res. QGAMLAAQERRVPRA 15(13):4467-74 (2009). AEVPR (SEQ ID NO: Zarour et al. Cancer Res. 256) 62(1):213-8 (2002). PFATPMEAELARR Hasegawa et al. Clin Cancer (SEQ ID NO: 257) Res. 12(6):1921-7 (2006).
PGVLLKEFTVSGNILTIR LT (SEQ ID NO: 258) VLLKEFTVSG (SEQ ID NO: 259)
AADHRQLQLSISSCLQ QL (SEQ ID NO: 260)
LKEFTVSGNILTIRL (SEQ ID NO: 261)
PGVLLKEFTVSGNILTIR LTAADHR (SEQ ID NO: 254)
LLEFYLAMPFATPMEAE LARRSLAQ (SEQ ID NO: 252) KEFTVSGNILT (SEQ ID NO: 262)
LLEFYLAMPFATPM (SEQ ID NO: 263)
AGATGGRGPRGAGA (SEQ ID NO: 264) 8 LAGE-1 MLMAQEALAFL (SEQ Aarnoudse et al. Int J Cancer. ID NO: 240) 82(3):442-8 (1999). SLLMWITQC (SEQ ID Rimoldi et al. J Immunol. NO: 237) 165(12):7253-61 (2000). LAAQERRVPR (SEQ ID Wang et al. J Immunol. NO: 243) 161(7):3598-606 (1998). ELVRRILSR (SEQ ID Sun et al. Cancer Immunol
Nº Antígeno Epítopos Fontes associado a imunogênicos tumor relatados NO: 321) Immunother. 55(6):644-52 APRGVRMAV (SEQ ID (2006). NO: 322) Slager et al. Cancer Gene Ther. SLLMWITQCFLPVF 11(3):227-36 (2004). (SEQ ID NO: 251) Zeng et al. Proc Natl Acad Sci U QGAMLAAQERRVPRA S A. 98(7):3964-9 (2001). AEVPR (SEQ ID NO: Slager et al. J Immunol. 256) 172(8):5095-102 (2004). AADHRQLQLSISSCLQ Jager et al. J Exp Med. QL (SEQ ID NO: 260) 191(4):625-30 (2000). CLSRRPWKRSWSAGS Slager et al. J Immunol. CPGMPHL (SEQ ID NO: 170(3):1490-7 (2003). 323) Wang et al. Immunity. ILSRDAAPLPRPG (SEQ 20(1):107-18 (2004). ID NO: 324) Hasegawa et al. Clin Cancer AGATGGRGPRGAGA Res. 12(6):1921-7 (2006). (SEQ ID NO: 264) 9 HERV-K-MEL MLAVISCAV (SEQ ID Schiavetti et al. Cancer Res. NO: 316) 62(19):5510-6 (2002). 10 KK-LC-1 RQKRILVNL (SEQ ID Fukuyama et al. Cancer Res. NO: 317) 66(9):4922-8 (2006). 11 KM-HN-1 NYNNFYRFL (SEQ ID Fukuyama et al. Cancer Res. NO: 318) 66(9):4922-8 (2006). EYSKECLKEF (SEQ ID Monji et al. Clin Cancer Res. NO: 319) 10(18 Pt 1):6047-57 (2004). EYLSLSDKI (SEQ ID NO: 320) 12 Sp17 ILDSSEEDK (SEQ ID Chiriva-Internati et al. Int J NO: 306) Cancer. 107(5):863-5 (2003).
TABELA 23. CÂNCER DE CABEÇA E PESCOÇO Nº Antígeno Epítopos Fontes associado a imunogênicos tumor relatados 1 BAGE-1 AARAVFLAL (SEQ ID Boel et al. Immunity. 2(2):167- (carcinoma de NO: 340) 75 (1995). células escamosas de cabeça e pescoço)
2 GAGE-1,2,8 YRPRPRRY (SEQ ID Van den Eynde et al. J Exp NO: 404) Med. 182(3):689-98 (1995). 3 GAGE-3,4,5,6,7 YYWPRPRRY (SEQ ID De Backer et al. Cancer Res. NO: 418) 59(13):3157-65 (1999). 4 LY6K RYCNLEGPPI (SEQ ID Suda et al. Cancer Sci. NO: 494) 98(11):1803-8 (2007). KWTEPYCVIAAVKIFPR Tomita et al. Oncoimmunology. FFMVAKQ (SEQ ID NO: 3:e28100 (2014). 495)
KCCKIRYCNLEGPPINS SVF (SEQ ID NO: 496) 5 MAGE-A3 EVDPIGHLY (SEQ ID Gaugler et al. J Exp Med. (carcinoma de NO: 532) 179(3):921-30 (1994). células FLWGPRALV (SEQ ID van der Bruggen et al. Eur J escamosas de NO: 498) Immunol. 24(12):3038-43 cabeça e KVAELVHFL (SEQ ID (1994). pescoço) NO: 533) Kawashima et al. Hum TFPDLESEF (SEQ ID Immunol. 59(1):1-14 (1998). NO: 534) Oiso et al. Int J Cancer. VAELVHFLL (SEQ ID 81(3):387-94 (1999). NO: 535) Miyagawa et al. Oncology. MEVDPIGHLY (SEQ ID 70(1):54-62 (2006). NO: 536) Bilsborough et al. Tissue EVDPIGHLY (SEQ ID Antigens. 60(1):16-24 (2002). NO: 532) Schultz et al. Tissue Antigens. REPVTKAEML (SEQ ID 57(2):103-9 (2001). NO: 346) Tanzarella et al. Cancer Res. AELVHFLLL (SEQ ID 59(11):2668-74 (1999). NO: 537) Schultz et al. J Exp Med. MEVDPIGHLY (SEQ ID 195(4):391-9 (2002). NO: 536) Herman et al. Immunogenetics. WQYFFPVIF (SEQ ID 43(6):377-83 (1996). NO: 538) Russo et al. Proc Natl Acad Sci EGDCAPEEK (SEQ ID U S A. 97(5):2185-90 (2000). NO: 358) Breckpot et al. J Immunol. KKLLTQHFVQENYLEY 172(4):2232-7 (2004). (SEQ ID NO: 539) Schultz et al. Cancer Res. RKVAELVHFLLLKYR 60(22):6272-5 (2000). (SEQ ID NO: 540) Cesson et al. Cancer Immunol KKLLTQHFVQENYLEY Immunother. 60(1):23-35 (SEQ ID NO: 539) (2011). ACYEFLWGPRALVETS Schultz et al. J Immunol. (SEQ ID NO: 541) 172(2):1304-10 (2004). RKVAELVHFLLLKYR Zhang et al. J Immunol. (SEQ ID NO: 540) 171(1):219-25 (2003). VIFSKASSSLQL (SEQ Cesson et al. Cancer Immunol
ID NO: 542) Immunother. 60(1):23-35 VFGIELMEVDPIGHL (2010). (SEQ ID NO: 543) Kobayashi et al. Cancer Res. GDNQIMPKAGLLIIV 61(12):4773-8 (2001). (SEQ ID NO: 544) Cesson et al. Cancer Immunol TSYVKVLHHMVKISG Immunother. 60(1):23-35 (SEQ ID NO: 545) (2011). RKVAELVHFLLLKYRA Consogno et al. Blood. (SEQ ID NO: 546) 101(3):1038-44 (2003). FLLLKYRAREPVTKAE Manici et al. J Exp Med. (SEQ ID NO: 354) 189(5):871-6 (1999). Chaux et al. J Exp Med. 189(5):767-78 (1999). 6 MAGE-A6 MVKISGGPR (SEQ ID Zorn et al. Eur J Immunol. NO: 529) 29(2):602-7 (1999). EVDPIGHVY (SEQ ID Benlalam et al. J Immunol. NO: 530) 171(11):6283-9 (2003). REPVTKAEML (SEQ ID Tanzarella et al. Cancer Res. NO: 346) 59(11):2668-74 (1999). EGDCAPEEK (SEQ ID Breckpot et al. J Immunol. NO: 358) 172(4):2232-7 (2004). ISGGPRISY (SEQ ID Vantomme et al. Cancer NO: 406) Immun. 3:17 (2003). LLKYRAREPVTKAE Chaux et al. J Exp Med. (SEQ ID NO: 359) 189(5):767-78 (1999). 7 SAGE LYATVIHDI (SEQ ID NO: Miyahara et al. Clin Cancer 509) Res. 11(15):5581-9 (2005).
TABELA 24. CÂNCER ESOFÁGICO Nº Antígeno Epítopos Fontes associado a imunogênicos tumor relatados 1 GAGE-3,4,5,6,7 YYWPRPRRY (SEQ ID De Backer et al. Cancer Res. (carcinoma de NO: 418) 59(13):3157-65 (1999). células escamosas esofágicas e adenocarcinoma esofágico) 2 MAGE-A2 YLQLVFGIEV (SEQ ID Kawashima et al. Hum NO: 356) Immunol. 59(1):1-14 (1998). EYLQLVFGI (SEQ ID Tahara et al. Clin Cancer Res. NO: 357) 5(8):2236-41 (1999). REPVTKAEML (SEQ ID Tanzarella et al. Cancer Res.
NO: 346) 59(11):2668-74 (1999). EGDCAPEEK (SEQ ID Breckpot et al.
J Immunol.
NO: 358) 172(4):2232-7 (2004). LLKYRAREPVTKAE Chaux et al.
J Exp Med. (SEQ ID NO: 359) 189(5):767-78 (1999). 3 MAGE-A6 MVKISGGPR (SEQ ID Zorn et al.
Eur J Immunol.
NO: 529) 29(2):602-7 (1999). EVDPIGHVY (SEQ ID Benlalam et al.
J Immunol.
NO: 530) 171(11):6283-9 (2003). REPVTKAEML (SEQ ID Tanzarella et al.
Cancer Res.
NO: 346) 59(11):2668-74 (1999). EGDCAPEEK (SEQ ID Breckpot et al.
J Immunol.
NO: 358) 172(4):2232-7 (2004). ISGGPRISY (SEQ ID Vantomme et al.
Cancer NO: 406) Immun. 3:17 (2003). LLKYRAREPVTKAE Chaux et al.
J Exp Med. (SEQ ID NO: 359) 189(5):767-78 (1999). 4 NY-ESO-1 HLA-A2-peptídeo restrito Jager et al.
Proc.
Natl.
Acad. p157–165 (SLLMWITQC Scie.
U.S.A. 103(39):14453-8 (SEQ ID NO: 237)), HLA- (2006). Cw3-restrito p92–100 Gnjatic et al.
PNAS (LAMPFATPM (SEQ ID 26 de setembro de 2000 vol. 97 NO: 238)) e HLA-Cw6- nº 20 p. 10919 restrito p80–88 Jager et al.
J Exp Med. (ARGPESRLL (SEQ ID 187(2):265-70 (1998). NO: 239)) Chen et al.
J Immunol.
SLLMWITQC (SEQ ID 165(2):948-55 (2000). NO: 237) Valmori et al.
Cancer Res.
MLMAQEALAFL (SEQ 60(16):4499-506 (2000). ID NO: 240) Aarnoudse et al.
Int J Cancer.
YLAMPFATPME (SEQ ID 82(3):442-8 (1999). NO: 241) Eikawa et al.
Int J Cancer.
ASGPGGGAPR (SEQ ID 132(2):345-54 (2013). NO: 242) Wang et al.
J Immunol.
LAAQERRVPR (SEQ ID 161(7):3598-606 (1998). NO: 243) Matsuzaki et al.
Cancer TVSGNILTIR (SEQ ID Immunol Immunother.
NO: 244) 57(8)1185-95 (2008). APRGPHGGAASGL Ebert et al.
Cancer Res. (SEQ ID NO: 245) 69(3):1046-54 (2009). MPFATPMEAEL (SEQ ID Eikawa et al.
Int J Cancer.
NO: 246) 132(2):345-54 (2013). KEFTVSGNILTI (SEQ ID Knights et al.
Cancer Immunol NO: 247) Immunother. 58(3):325- MPFATPMEA (SEQ ID 38 (2009). NO: 248) Jäger et al.
Cancer Immun.
FATPMEAEL (SEQ ID 2:12 (2002).
NO: 249) Zeng et al. Proc Natl Acad Sci U FATPMEAELAR (SEQ ID S A. 98(7):3964-9 (2001). NO: 250) Mandic et al. J Immunol. LAMPFATPM (SEQ ID 174(3):1751-9 (2005). NO: 238) Chen et al. Proc Natl Acad Sci ARGPESRLL (SEQ ID U S A. 101(25):9363-8 (2004). NO: 239) Ayyoub et al. Clin Cancer Res. SLLMWITQCFLPVF 16(18):4607-15 (2010). (SEQ ID NO: 251) Slager et al. J Immunol. LLEFYLAMPFATPMEAE 172(8):5095-102 (2004). LARRSLAQ (SEQ ID NO: Mizote et al. Vaccine. 252) 28(32):5338-46 (2010). EFYLAMPFATPM (SEQ Jager et al. J Exp Med. ID NO: 253) 191(4):625-30 (2000). PGVLLKEFTVSGNILTIR Zarour et al. Cancer Res. LTAADHR (SEQ ID NO: 60(17):4946-52 (2000). 254) Zeng et al. J Immunol. RLLEFYLAMPFA (SEQ 165(2):1153-9 (2000). ID NO: 255) Bioley et al. Clin Cancer Res. QGAMLAAQERRVPRA 15(13):4467-74 (2009). AEVPR (SEQ ID NO: Zarour et al. Cancer Res. 256) 62(1):213-8 (2002). PFATPMEAELARR Hasegawa et al. Clin Cancer (SEQ ID NO: 257) Res. 12(6):1921-7 (2006).
PGVLLKEFTVSGNILTIR LT (SEQ ID NO: 258) VLLKEFTVSG (SEQ ID NO: 259)
AADHRQLQLSISSCLQ QL (SEQ ID NO: 260)
LKEFTVSGNILTIRL (SEQ ID NO: 261)
PGVLLKEFTVSGNILTIR LTAADHR (SEQ ID NO: 254)
LLEFYLAMPFATPMEAE LARRSLAQ (SEQ ID NO: 252) KEFTVSGNILT (SEQ ID NO: 262)
LLEFYLAMPFATPM (SEQ ID NO: 263)
AGATGGRGPRGAGA (SEQ ID NO: 264) 5 LAGE-1 MLMAQEALAFL (SEQ Aarnoudse et al. Int J Cancer. ID NO: 240) 82(3):442-8 (1999). SLLMWITQC (SEQ ID Rimoldi et al. J Immunol.
NO: 237) 165(12):7253-61 (2000). LAAQERRVPR (SEQ ID Wang et al. J Immunol. NO: 243) 161(7):3598-606 (1998). ELVRRILSR (SEQ ID Sun et al. Cancer Immunol NO: 321) Immunother. 55(6):644-52 APRGVRMAV (SEQ ID (2006). NO: 322) Slager et al. Cancer Gene Ther. SLLMWITQCFLPVF 11(3):227-36 (2004). (SEQ ID NO: 251) Zeng et al. Proc Natl Acad Sci U QGAMLAAQERRVPRA S A. 98(7):3964-9 (2001). AEVPR (SEQ ID NO: Slager et al. J Immunol. 256) 172(8):5095-102 (2004). AADHRQLQLSISSCLQ Jager et al. J Exp Med. QL (SEQ ID NO: 260) 191(4):625-30 (2000). CLSRRPWKRSWSAGS Slager et al. J Immunol. CPGMPHL (SEQ ID NO: 170(3):1490-7 (2003). 323) Wang et al. Immunity. ILSRDAAPLPRPG (SEQ 20(1):107-18 (2004). ID NO: 324) Hasegawa et al. Clin Cancer AGATGGRGPRGAGA Res. 12(6):1921-7 (2006). (SEQ ID NO: 264) 6 HERV-K-MEL MLAVISCAV (SEQ ID Schiavetti et al. Cancer Res. NO: 316) 62(19):5510-6 (2002). 7 KK-LC-1 RQKRILVNL (SEQ ID Fukuyama et al. Cancer Res. NO: 317) 66(9):4922-8 (2006). 8 KM-HN-1 NYNNFYRFL (SEQ ID Fukuyama et al. Cancer Res. NO: 318) 66(9):4922-8 (2006). EYSKECLKEF (SEQ ID Monji et al. Clin Cancer Res. NO: 319) 10(18 Pt 1):6047-57 (2004). EYLSLSDKI (SEQ ID NO: 320) 9 Sp17 ILDSSEEDK (SEQ ID Chiriva-Internati et al. Int J NO: 306) Cancer. 107(5):863-5 (2003).
TABELA 25. CÂNCER DE CÉREBRO Nº Antígeno Epítopos Fontes associado a imunogênicos tumor relatados 1 TAG-1 SLGWLFLLL (SEQ ID Adair et al. J Immunother. NO: 335) 31(1):7-17 (2008). LSRLSNRLL (SEQ ID NO: 336) 2 TAG-2 LSRLSNRLL (SEQ ID Adair et al. J Immunother. NO: 336) 31(1):7-17 (2008).
TABELA 26. CÂNCER DE FARINGE Nº Antígeno Epítopos Fontes associado a imunogênicos tumor relatados 1 TAG-1 SLGWLFLLL (SEQ ID Adair et al. J Immunother. NO: 335) 31(1):7-17 (2008). LSRLSNRLL (SEQ ID NO: 336) 2 TAG-2 LSRLSNRLL (SEQ ID Adair et al. J Immunother. NO: 336) 31(1):7-17 (2008).
TABELA 27. TUMORES DA LÍNGUA Nº Antígeno Epítopos Fontes associado a imunogênicos tumor relatados 1 TAG-1 SLGWLFLLL (SEQ ID Adair et al. J Immunother. NO: 335) 31(1):7-17 (2008). LSRLSNRLL (SEQ ID NO: 336) 2 TAG-2 LSRLSNRLL (SEQ ID Adair et al. J Immunother. NO: 336) 31(1):7-17 (2008).
TABELA 28. SARCOMA DE CÉLULA SINOVIAL Nº Antígeno Epítopos Fontes associado a imunogênicos tumor relatados 1 LAGE-1 MLMAQEALAFL (SEQ ID Aarnoudse et al. Int J Cancer. NO: 240) 82(3):442-8 (1999). SLLMWITQC (SEQ ID Rimoldi et al. J Immunol. NO: 237) 165(12):7253-61 (2000). LAAQERRVPR (SEQ ID Wang et al. J Immunol. NO: 243) 161(7):3598-606 (1998). ELVRRILSR (SEQ ID Sun et al. Cancer Immunol NO: 321) Immunother. 55(6):644-52 APRGVRMAV (SEQ ID (2006). NO: 322) Slager et al. Cancer Gene Ther. SLLMWITQCFLPVF 11(3):227-36 (2004). (SEQ ID NO: 251) Zeng et al. Proc Natl Acad Sci QGAMLAAQERRVPRAA U S A. 98(7):3964-9 (2001). EVPR (SEQ ID NO: 256) Slager et al. J Immunol.
Nº Antígeno Epítopos Fontes associado a imunogênicos tumor relatados AADHRQLQLSISSCLQ 172(8):5095-102 (2004). QL (SEQ ID NO: 260) Jager et al.
J Exp Med.
CLSRRPWKRSWSAGS 191(4):625-30 (2000). CPGMPHL (SEQ ID NO: Slager et al.
J Immunol. 323) 170(3):1490-7 (2003). ILSRDAAPLPRPG (SEQ Wang et al.
Immunity.
ID NO: 324) 20(1):107-18 (2004). AGATGGRGPRGAGA Hasegawa et al.
Clin Cancer (SEQ ID NO: 264) Res. 12(6):1921-7 (2006). 2 NY-ESO-1 HLA-A2-peptídeo restrito Jager et al.
Proc.
Natl.
Acad. p157–165 (SLLMWITQC Scie.
U.S.A. 103(39):14453-8 (SEQ ID NO: 237)), HLA- (2006). Cw3-restrito p92–100 Gnjatic et al.
PNAS (LAMPFATPM (SEQ ID 26 de setembro de 2000 vol. 97 NO: 238)) e HLA-Cw6- nº 20 p. 10919 restrito p80–88 Jager et al.
J Exp Med. (ARGPESRLL (SEQ ID 187(2):265-70 (1998). NO: 239)) Chen et al.
J Immunol.
SLLMWITQC (SEQ ID 165(2):948-55 (2000). NO: 237) Valmori et al.
Cancer Res.
MLMAQEALAFL (SEQ ID 60(16):4499-506 (2000). NO: 240) Aarnoudse et al.
Int J Cancer.
YLAMPFATPME (SEQ ID 82(3):442-8 (1999). NO: 241) Eikawa et al.
Int J Cancer.
ASGPGGGAPR (SEQ ID 132(2):345-54 (2013). NO: 242) Wang et al.
J Immunol.
LAAQERRVPR (SEQ ID 161(7):3598-606 (1998). NO: 243) Matsuzaki et al.
Cancer TVSGNILTIR (SEQ ID Immunol Immunother.
NO: 244) 57(8)1185-95 (2008). APRGPHGGAASGL Ebert et al.
Cancer Res. (SEQ ID NO: 245) 69(3):1046-54 (2009). MPFATPMEAEL (SEQ ID Eikawa et al.
Int J Cancer.
NO: 246) 132(2):345-54 (2013). KEFTVSGNILTI (SEQ ID Knights et al.
Cancer Immunol NO: 247) Immunother. 58(3):325- MPFATPMEA (SEQ ID 38 (2009). NO: 248) Jäger et al.
Cancer Immun.
FATPMEAEL (SEQ ID 2:12 (2002). NO: 249) Zeng et al.
Proc Natl Acad Sci FATPMEAELAR (SEQ ID U S A. 98(7):3964-9 (2001). NO: 250) Mandic et al.
J Immunol.
LAMPFATPM (SEQ ID 174(3):1751-9 (2005). NO: 238) Chen et al.
Proc Natl Acad Sci
Nº Antígeno Epítopos Fontes associado a imunogênicos tumor relatados ARGPESRLL (SEQ ID U S A. 101(25):9363-8 (2004). NO: 239) Ayyoub et al. Clin Cancer Res. SLLMWITQCFLPVF 16(18):4607-15 (2010). (SEQ ID NO: 251) Slager et al. J Immunol. LLEFYLAMPFATPMEAE 172(8):5095-102 (2004). LARRSLAQ (SEQ ID NO: Mizote et al. Vaccine. 252) 28(32):5338-46 (2010). EFYLAMPFATPM (SEQ Jager et al. J Exp Med. ID NO: 253) 191(4):625-30 (2000). PGVLLKEFTVSGNILTIR Zarour et al. Cancer Res. LTAADHR (SEQ ID NO: 60(17):4946-52 (2000). 254) Zeng et al. J Immunol. RLLEFYLAMPFA (SEQ 165(2):1153-9 (2000). ID NO: 255) Bioley et al. Clin Cancer Res. QGAMLAAQERRVPRAA 15(13):4467-74 (2009). EVPR (SEQ ID NO: 256) Zarour et al. Cancer Res. PFATPMEAELARR (SEQ 62(1):213-8 (2002). ID NO: 257) Hasegawa et al. Clin Cancer PGVLLKEFTVSGNILTIR Res. 12(6):1921-7 (2006). LT (SEQ ID NO: 258) VLLKEFTVSG (SEQ ID NO: 259)
AADHRQLQLSISSCLQ QL (SEQ ID NO: 260)
LKEFTVSGNILTIRL (SEQ ID NO: 261)
PGVLLKEFTVSGNILTIR LTAADHR (SEQ ID NO: 254)
LLEFYLAMPFATPMEAE LARRSLAQ (SEQ ID NO: 252) KEFTVSGNILT (SEQ ID NO: 262)
LLEFYLAMPFATPM (SEQ ID NO: 263)
AGATGGRGPRGAGA (SEQ ID NO: 264) 3 HERV-K-MEL MLAVISCAV (SEQ ID Schiavetti et al. Cancer Res. NO: 316) 62(19):5510-6 (2002). 4 KK-LC-1 RQKRILVNL (SEQ ID Fukuyama et al. Cancer Res. NO: 317) 66(9):4922-8 (2006). 5 KM-HN-1 NYNNFYRFL (SEQ ID Fukuyama et al. Cancer Res.
Nº Antígeno Epítopos Fontes associado a imunogênicos tumor relatados NO: 318) 66(9):4922-8 (2006). EYSKECLKEF (SEQ ID NO: 319) EYLSLSDKI (SEQ ID NO: 320) 6 Sp17 ILDSSEEDK (SEQ ID Chiriva-Internati et al. Int J NO: 306) Cancer. 107(5):863-5 (2003).
TABELA 29. NEUROBLASTOMA Nº Antígeno Epítopos Fontes associado a imunogênicos tumor relatados 1 LAGE-1 MLMAQEALAFL (SEQ Aarnoudse et al. Int J Cancer. ID NO: 240) 82(3):442-8 (1999). SLLMWITQC (SEQ ID Rimoldi et al. J Immunol. NO: 237) 165(12):7253-61 (2000). LAAQERRVPR (SEQ ID Wang et al. J Immunol. NO: 243) 161(7):3598-606 (1998). ELVRRILSR (SEQ ID Sun et al. Cancer Immunol NO: 321) Immunother. 55(6):644-52 APRGVRMAV (SEQ ID (2006). NO: 322) Slager et al. Cancer Gene Ther. SLLMWITQCFLPVF 11(3):227-36 (2004). (SEQ ID NO: 251) Zeng et al. Proc Natl Acad Sci U QGAMLAAQERRVPRA S A. 98(7):3964-9 (2001). AEVPR (SEQ ID NO: Slager et al. J Immunol. 256) 172(8):5095-102 (2004). AADHRQLQLSISSCLQ Jager et al. J Exp Med. QL (SEQ ID NO: 260) 191(4):625-30 (2000). CLSRRPWKRSWSAGS Slager et al. J Immunol. CPGMPHL (SEQ ID NO: 170(3):1490-7 (2003). 323) Wang et al. Immunity. ILSRDAAPLPRPG (SEQ 20(1):107-18 (2004). ID NO: 324) Hasegawa et al. Clin Cancer AGATGGRGPRGAGA Res. 12(6):1921-7 (2006). (SEQ ID NO: 264) 2 NY-ESO-1 HLA-A2-peptídeo restrito Jager et al. Proc. Natl. Acad. p157–165 (SLLMWITQC Scie. U.S.A. 103(39):14453-8 (SEQ ID NO: 237)), HLA- (2006). Cw3-restrito p92–100 Gnjatic et al. PNAS (LAMPFATPM (SEQ ID 26 de setembro de 2000 vol. 97
Nº Antígeno Epítopos Fontes associado a imunogênicos tumor relatados NO: 238)) e HLA-Cw6- nº 20 p. 10919 restrito p80–88 Jager et al.
J Exp Med. (ARGPESRLL (SEQ ID 187(2):265-70 (1998). NO: 239)) Chen et al.
J Immunol.
SLLMWITQC (SEQ ID 165(2):948-55 (2000). NO: 237) Valmori et al.
Cancer Res.
MLMAQEALAFL (SEQ 60(16):4499-506 (2000). ID NO: 240) Aarnoudse et al.
Int J Cancer.
YLAMPFATPME (SEQ ID 82(3):442-8 (1999). NO: 241) Eikawa et al.
Int J Cancer.
ASGPGGGAPR (SEQ ID 132(2):345-54 (2013). NO: 242) Wang et al.
J Immunol.
LAAQERRVPR (SEQ ID 161(7):3598-606 (1998). NO: 243) Matsuzaki et al.
Cancer TVSGNILTIR (SEQ ID Immunol Immunother.
NO: 244) 57(8)1185-95 (2008). APRGPHGGAASGL Ebert et al.
Cancer Res. (SEQ ID NO: 245) 69(3):1046-54 (2009). MPFATPMEAEL (SEQ ID Eikawa et al.
Int J Cancer.
NO: 246) 132(2):345-54 (2013). KEFTVSGNILTI (SEQ ID Knights et al.
Cancer Immunol NO: 247) Immunother. 58(3):325- MPFATPMEA (SEQ ID 38 (2009). NO: 248) Jäger et al.
Cancer Immun.
FATPMEAEL (SEQ ID 2:12 (2002). NO: 249) Zeng et al.
Proc Natl Acad Sci U FATPMEAELAR (SEQ ID S A. 98(7):3964-9 (2001). NO: 250) Mandic et al.
J Immunol.
LAMPFATPM (SEQ ID 174(3):1751-9 (2005). NO: 238) Chen et al.
Proc Natl Acad Sci ARGPESRLL (SEQ ID U S A. 101(25):9363-8 (2004). NO: 239) Ayyoub et al.
Clin Cancer Res.
SLLMWITQCFLPVF 16(18):4607-15 (2010). (SEQ ID NO: 251) Slager et al.
J Immunol.
LLEFYLAMPFATPMEAE 172(8):5095-102 (2004). LARRSLAQ (SEQ ID NO: Mizote et al.
Vaccine. 252) 28(32):5338-46 (2010). EFYLAMPFATPM (SEQ Jager et al.
J Exp Med.
ID NO: 253) 191(4):625-30 (2000). PGVLLKEFTVSGNILTIR Zarour et al.
Cancer Res.
LTAADHR (SEQ ID NO: 60(17):4946-52 (2000). 254) Zeng et al.
J Immunol.
RLLEFYLAMPFA (SEQ 165(2):1153-9 (2000). ID NO: 255) Bioley et al.
Clin Cancer Res.
Nº Antígeno Epítopos Fontes associado a imunogênicos tumor relatados QGAMLAAQERRVPRA 15(13):4467-74 (2009). AEVPR (SEQ ID NO: Zarour et al. Cancer Res. 256) 62(1):213-8 (2002). PFATPMEAELARR Hasegawa et al. Clin Cancer (SEQ ID NO: 257) Res. 12(6):1921-7 (2006).
PGVLLKEFTVSGNILTIR LT (SEQ ID NO: 258) VLLKEFTVSG (SEQ ID NO: 259)
AADHRQLQLSISSCLQ QL (SEQ ID NO: 260)
LKEFTVSGNILTIRL (SEQ ID NO: 261)
PGVLLKEFTVSGNILTIR LTAADHR (SEQ ID NO: 254)
LLEFYLAMPFATPMEAE LARRSLAQ (SEQ ID NO: 252) KEFTVSGNILT (SEQ ID NO: 262)
LLEFYLAMPFATPM (SEQ ID NO: 263)
AGATGGRGPRGAGA (SEQ ID NO: 264) 3 HERV-K-MEL MLAVISCAV (SEQ ID Schiavetti et al. Cancer Res. NO: 316) 62(19):5510-6 (2002). 4 KK-LC-1 RQKRILVNL (SEQ ID Fukuyama et al. Cancer Res. NO: 317) 66(9):4922-8 (2006). 5 KM-HN-1 NYNNFYRFL (SEQ ID Fukuyama et al. Cancer Res. NO: 318) 66(9):4922-8 (2006). EYSKECLKEF (SEQ ID Monji et al. Clin Cancer Res. NO: 319) 10(18 Pt 1):6047-57 (2004). EYLSLSDKI (SEQ ID NO: 320) 6 Sp17 ILDSSEEDK (SEQ ID Chiriva-Internati et al. Int J NO: 306) Cancer. 107(5):863-5 (2003).
TABELA 30. CÂNCER UTERINO
Nº Antígeno Epítopos Fontes associado a imunogênicos tumor relatados 1 LAGE-1 MLMAQEALAFL (SEQ Aarnoudse et al.
Int J Cancer.
ID NO: 240) 82(3):442-8 (1999). SLLMWITQC (SEQ ID Rimoldi et al.
J Immunol.
NO: 237) 165(12):7253-61 (2000). LAAQERRVPR (SEQ ID Wang et al.
J Immunol.
NO: 243) 161(7):3598-606 (1998). ELVRRILSR (SEQ ID Sun et al.
Cancer Immunol NO: 321) Immunother. 55(6):644-52 APRGVRMAV (SEQ ID (2006). NO: 322) Slager et al.
Cancer Gene Ther.
SLLMWITQCFLPVF 11(3):227-36 (2004). (SEQ ID NO: 251) Zeng et al.
Proc Natl Acad Sci U QGAMLAAQERRVPRA S A. 98(7):3964-9 (2001). AEVPR (SEQ ID NO: Slager et al.
J Immunol. 256) 172(8):5095-102 (2004). AADHRQLQLSISSCLQ Jager et al.
J Exp Med.
QL (SEQ ID NO: 260) 191(4):625-30 (2000). CLSRRPWKRSWSAGS Slager et al.
J Immunol.
CPGMPHL (SEQ ID NO: 170(3):1490-7 (2003). 323) Wang et al.
Immunity.
ILSRDAAPLPRPG (SEQ 20(1):107-18 (2004). ID NO: 324) Hasegawa et al.
Clin Cancer AGATGGRGPRGAGA Res. 12(6):1921-7 (2006). (SEQ ID NO: 264) 2 NY-ESO-1 HLA-A2-peptídeo restrito Jager et al.
Proc.
Natl.
Acad. p157–165 (SLLMWITQC Scie.
U.S.A. 103(39):14453-8 (SEQ ID NO: 237)), HLA- (2006). Cw3-restrito p92–100 Gnjatic et al.
PNAS (LAMPFATPM (SEQ ID 26 de setembro de 2000 vol. 97 NO: 238)) e HLA-Cw6- nº 20 p. 10919 restrito p80–88 Jager et al.
J Exp Med. (ARGPESRLL (SEQ ID 187(2):265-70 (1998). NO: 239)) Chen et al.
J Immunol.
SLLMWITQC (SEQ ID 165(2):948-55 (2000). NO: 237) Valmori et al.
Cancer Res.
MLMAQEALAFL (SEQ 60(16):4499-506 (2000). ID NO: 240) Aarnoudse et al.
Int J Cancer.
YLAMPFATPME (SEQ ID 82(3):442-8 (1999). NO: 241) Eikawa et al.
Int J Cancer.
ASGPGGGAPR (SEQ ID 132(2):345-54 (2013). NO: 242) Wang et al.
J Immunol.
LAAQERRVPR (SEQ ID 161(7):3598-606 (1998). NO: 243) Matsuzaki et al.
Cancer TVSGNILTIR (SEQ ID Immunol Immunother.
Nº Antígeno Epítopos Fontes associado a imunogênicos tumor relatados NO: 244) 57(8)1185-95 (2008). APRGPHGGAASGL Ebert et al. Cancer Res. (SEQ ID NO: 245) 69(3):1046-54 (2009). MPFATPMEAEL (SEQ ID Eikawa et al. Int J Cancer. NO: 246) 132(2):345-54 (2013). KEFTVSGNILTI (SEQ ID Knights et al. Cancer Immunol NO: 247) Immunother. 58(3):325- MPFATPMEA (SEQ ID 38 (2009). NO: 248) Jäger et al. Cancer Immun. FATPMEAEL (SEQ ID 2:12 (2002). NO: 249) Zeng et al. Proc Natl Acad Sci U FATPMEAELAR (SEQ ID S A. 98(7):3964-9 (2001). NO: 250) Mandic et al. J Immunol. LAMPFATPM (SEQ ID 174(3):1751-9 (2005). NO: 238) Chen et al. Proc Natl Acad Sci ARGPESRLL (SEQ ID U S A. 101(25):9363-8 (2004). NO: 239) Ayyoub et al. Clin Cancer Res. SLLMWITQCFLPVF 16(18):4607-15 (2010). (SEQ ID NO: 251) Slager et al. J Immunol. LLEFYLAMPFATPMEAE 172(8):5095-102 (2004). LARRSLAQ (SEQ ID NO: Mizote et al. Vaccine. 252) 28(32):5338-46 (2010). EFYLAMPFATPM (SEQ Jager et al. J Exp Med. ID NO: 253) 191(4):625-30 (2000). PGVLLKEFTVSGNILTIR Zarour et al. Cancer Res. LTAADHR (SEQ ID NO: 60(17):4946-52 (2000). 254) Zeng et al. J Immunol. RLLEFYLAMPFA (SEQ 165(2):1153-9 (2000). ID NO: 255) Bioley et al. Clin Cancer Res. QGAMLAAQERRVPRA 15(13):4467-74 (2009). AEVPR (SEQ ID NO: Zarour et al. Cancer Res. 256) 62(1):213-8 (2002). PFATPMEAELARR Hasegawa et al. Clin Cancer (SEQ ID NO: 257) Res. 12(6):1921-7 (2006).
PGVLLKEFTVSGNILTIR LT (SEQ ID NO: 258) VLLKEFTVSG (SEQ ID NO: 259)
AADHRQLQLSISSCLQ QL (SEQ ID NO: 260)
LKEFTVSGNILTIRL (SEQ ID NO: 261)
PGVLLKEFTVSGNILTIR LTAADHR (SEQ ID NO:
Nº Antígeno Epítopos Fontes associado a imunogênicos tumor relatados 254)
LLEFYLAMPFATPMEAE LARRSLAQ (SEQ ID NO: 252) KEFTVSGNILT (SEQ ID NO: 262)
LLEFYLAMPFATPM (SEQ ID NO: 263)
AGATGGRGPRGAGA (SEQ ID NO: 264) 3 HERV-K-MEL MLAVISCAV (SEQ ID Schiavetti et al. Cancer Res. NO: 316) 62(19):5510-6 (2002). 4 KK-LC-1 RQKRILVNL (SEQ ID Fukuyama et al. Cancer Res. NO: 317) 66(9):4922-8 (2006). 5 KM-HN-1 NYNNFYRFL (SEQ ID Fukuyama et al. Cancer Res. NO: 318) 66(9):4922-8 (2006). EYSKECLKEF (SEQ ID Monji et al. Clin Cancer Res. NO: 319) 10(18 Pt 1):6047-57 (2004). EYLSLSDKI (SEQ ID NO: 320) 6 Sp17 ILDSSEEDK (SEQ ID Chiriva-Internati et al. Int J NO: 306) Cancer. 107(5):863-5 (2003).
TABELA 31. EXEMPLOS DE PROTEÍNAS CODIFICADAS POR GENES VACCINIA COPENHAGEN DELETADOS NO VETOR CopMD5p ID de SEQ ID Localiza Gene Acesso de Sequência de Aminoácidos NO. ção Proteína
MESVIFSINGEIIQVNKEIITASPY NFFKRIQDHHLKDEAIILNGINYH AFESLLDYIRWKKINITINNVEMIL VAAIIIDVPPVVDLCVKTMIHNINS
TNCIRMFNFSKRYGIKKLYNASM SEQ ID C2L SEIINNITAVTSDPEFGKLSKDELT Deleção AAA47999.1 NO:219 (26% 5’) TILSHENVNVNHEDVTAMILLKWI Interna
HKNPNDVDIINILHPKFMTNTMR NAISLLGLTISKSTKPVTRNGIKH NIVVIKNSDYISTITHYSPRTEYW TIVGNTDRQFYNANVLHNCLYIIG GMINNRHVYSVSRVDLETKKWK
ID de SEQ ID Localiza Gene Acesso de Sequência de Aminoácidos NO. ção Proteína
TVTNMSSLKSEVSTCVNDGKLY VIGGLEFSISTGVAEYLKHGTSK WIRLPNLITPRYSGASVFVNDDIY VMGGVYTTYEKYVVLNDVECFT KNRWIKKSPMPRHHSIVYAVEYD GDIYVITGITHETRNYLYKYIVKED KWIELYMYFNHVGKMFVCSCGD YILIIADAKYEYYPKSNTWNLFDM STRNIEYYDMFTKDETPKCNVTH KSLPSFLSNCEKQFLQ MVKNNKISNSCRMIMSTNPNNIL MRHLKNLTDDEFKCIIHRSSDFLY LSDSDYTSITKETLVSEIVEEYPD
DCNKILAIIFLVLDKDIDVDIETKLK SEQ ID PKPAVRFAILDKMTEDIKLTDLVR Deleção C1L AAA48000.1 NO:24 HYFRYIEQDIPLGPLFKKIDSYRT Interna
RAINKYSKELGLATEYFNKYGHL MFYTLPIPYNRFFCRNSIGFLAVL SPTIGHVKAFYKFIEYVSIDDRRK FKKELMSK MRTLLIRYILWRNDNDQTYYNDD
FKKLMLLDELVDDGDVCTLIKNM SEQ ID Deleção N1L AAA48001.1 RMTLSDGPLLDRLNQPVNNIEDA NO:25 Interna
KRMIAISAKVARDIGERSEIRWEE SFTILFRMIETYFDDLMIDLYGEK MTSSAMDNNEPKVLEMVYDATIL PEGSSMDPNIMDCINRHINMCIQ
RTYSSSIIAILNRFLTMNKDELNN SEQ ID TQCHIIKEFMTYEQMAIDHYGEY Deleção N2L AAA48002.1 NO:26 VNAILYQIRKRPNQHHTIDLFKKI Interna
KRTPYDTFKVDPVEFVKKVIGFV SILNKYKPVYSYVLYENVLYDEFK CFINYVETKYF MIFVIESKLLQIYRNRNRNINFYT TMDNIMSAEYYLSLYAKYNSKNL DVFRNMLQAIEPSGNNYHILHAY
CGIKGLDERFVEELLHRGYSPNE SEQ ID Deleção M1L AAA48003.1 TDDDGNYPLHIASKINNNRIVAML NO:27 Interna
LTHGADPNACDKHNKTPLYYLS GTDDEVIERINLLVQYGAKINNSV DEEGCGPLLACTDPSERVFKKIM SIGFEARIVDKFGKNHIHRHLMS
ID de SEQ ID Localiza Gene Acesso de Sequência de Aminoácidos NO. ção Proteína
DNPKASTISWMMKLGISPSKPD HDGNTPLHIVCSKTVKNVDIIDLL LPSTDVNKQNKFGDSPLTLLIKTL SPAHLINKLLSTSNVITDQTVNICI FYDRDDVLEIINDKGKQYDSTDF KMAVEVGSIRCVKYLLDNDIICED AMYYAVLSEYETMVDYLLFNHFS VDSVVNGHTCMSECVRLNNPVI LSKLMLHNPTSETMYLTMKAIEK DKLDKSIIIPFIAYFVLMHPDFCKN RRYFTSYKRFVTDYVHEGVSYE VFDDYF MVYKLVLLFCIASLGYSVEYKNTI CPPRQDYRYWYFAAELTIGVNY DINSTIIGECHMSESYIDRNANIVL
TGYGLEINMTIMDTDQRFVAAAE SEQ ID GVGKDNKLSVLLFTTQRLDKVH Deleção M2L AAA48004.1 NO:28 HNISVTITCMEMNCGTTKYDSDL Interna
PESIHKSSSCDITINGSCVTCVNL ETDPTKINPHYLHPKDKYLYHNS EYGMRGSYGVTFIDELNQCLLDI KELSYDICYRE MDLSRINTWKSKQLKSFLSSKDT FKADVHGHSALYYAIADNNVRLV CTLLNAGALKNLLENEFPLHQAA TLEDTKIVKILLFSGMDDSQFDD KGNTALYYAVDSGNMQTVKLFV
KKNWRLMFYGKTGWKTSFYHA SEQ ID Deleção HR/K1L AAA48005.1 VMLNDVSIVSYFLSEIPSTFDLAIL NO:29 Interna
LSCIHTTIKNGHVDMMILLLDYMT STNTNNSLLFIPDIKLAIDNKDIEM LQALFKYDINIYSVNLENVLLDDA EITKMIIEKHVEYKSDSYTKDLDIV KNNKLDEIISKNKELRLMYVNCV KKN MIALLILSLTCSVSTYRLQGFTNA GIVAYKNIQDDNIVFSPFGYSFSM
FMSLLPASGNTRIELLKTMDLRK SEQ ID RDLGPAFTELISGLAKLKTSKYTY Deleção SPI-3/K2L AAA48006.1 NO:30 TDLTYQSFVDNTVCIKPLYYQQY Interna
HRFGLYRLNFRRDAVNKINSIVE RRSGMSNVVDSNMLDNNTLWAI INTIYFKGTWQYPFDITKTRNASF
ID de SEQ ID Localiza Gene Acesso de Sequência de Aminoácidos NO. ção Proteína
TNKYGTKTVPMMNVVTKLQGNT ITIDDEEYDMVRLPYKDANISMYL AIGDNMTHFTDSITAAKLDYWSF QLGNKVYNLKLPKFSIENKRDIK SIAEMMAPSMFNPDNASFKHMT RDPLYIYKMFQNAKIDVDEQGTV AEASTIMVATARSSPEKLEFNTPF VFIIRHDITGFILFMGKVESP
MGHIITYCQVHTNISILIRKAHHIIF SEQ ID FVIDCDCISLQFSNYVHHGNRFR Deleção K ORF A AAA48007.1 NO:31 TVLISKTSIACFSDIKRILPCTFKIY Interna
SINDCP
MGTVFVPYLLVKLALRVLVISNGY SEQ ID CHVPLKYIVLMIAHRVLLSSILEST Deleção K ORF B AAA48008.1 NO:32 TLDIPDLRSTIELILLTASRLKFNLY Interna
RPNL
MLAFCYSLPNAGDVIKGRVYEK SEQ ID DYALYIYLFDYPHSEAILAESVKM Deleção K3L AAA48009.1 NO:33 HMDRYVEYRDKLVGKTVKVKVIR Interna
VDYTKGYIDVNYKRMCRHQ MNPDNTIAVITETIPIGMQFDKVY LSTFNMWREILSNTTKTLDISSFY WSLSDEVGTNFGTIILNEIVQLPK RGVRVRVAVNKSNKPLKDVERL QMAGVEVRYIDITNILGGVLHTKF WISDNTHIYLGSANMDWRSLTQ VKELGIAIFNNRNLAADLTQIFEV YWYLGVNNLPYNWKNFYPSYY
NTDHPLSINVSGVPHSVFIASAP SEQ ID Deleção K4L AAA48010.1 QQLCTMERTNDLTALLSCIRNAS NO:34 Interna
KFVYVSVMNFIPIIYSKAGKILFW PYIEDELRRSAIDRQVSVKLLISC WQRSSFIMRNFLRSIAMLKSKNI DIEVKLFIVPDADPPIPYSRVNHA KYMVTDKTAYIGTSNWTGNYFT DTCGASINITPDDGLGLRQQLED IFMRDWNSKYSYELYDTSPTKR CKLLKNMKQCTNDIYCDEIQPEK EIPEYSLE
MGATISILASYDNPNLFTAMILMS SEQ ID Deleção K5L AAA48011.1 PLVNADAVSRLNLLAAKLMGTITP NO:35 Interna
NAPVGKLCPESVSRDMDKVYKY
ID de SEQ ID Localiza Gene Acesso de Sequência de Aminoácidos NO. ção Proteína
QYDPLINHEKIKAGFASQVLKAT NKVRKIISKINTPRLSYSREQTMR LVMFQVHIISCNMQIVIE
MSANCMFNLDNDYIYWKPITYPK SEQ ID ALVFISHGAGKHSGRYDELAENI Deleção K6L AAA48012.1 NO:36 SSLGILVFSHDHIGHGRSNGEKM Interna
MIDDFGTARGNY MATKLDYEDAVFYFVDDDKICSR DSIIDLIDEYITWRNHVIVFNKDIT
SCGRLYKELMKFDDVAIRYYGID SEQ ID Deleção K7R AAA48013.1 KINEIVEAMSEGDHYINFTKVHD NO:37 Interna
QESLFATIGICAKITEHWGYKKIS ESRFQSLGNITDLMTDDNINILILF LEKKLN MLSMFMCNNIVDYVDDIDNGIVQ DIEDEASNNVDHDYVYPLPENM VYRFDKSTNILDYLSTERDHVMM
AVRYYMSKQRLDDLYRQLPTKT SEQ ID RSYIDIINIYCDKVSNDYNRDMNI Deleção F1L AAA48014.1 NO:38 MYDMASTKSFTVYDINNEVNTIL Interna
MDNKGLGVRLATISFITELGRRC MNPVKTIKMFTLLSHTICDDCFV DYITDISPPDNTIPNTSTREYLKLI GITAIMFATYKTLKYMIG MFNMNINSPVRFVKETNRAKSP TRQSPGAAGYDLYSAYDYTIPPG
ERQLIKTDISMSMPKICYGRIAPR SEQ ID Deleção DUT/F2L AAA48015.1 SGLSLKGIDIGGGVIDEDYRGNIG NO:39 Interna
VILINNGKCTFNVNTGDRIAQLIY QRIYYPELEEVQSLDSTNRGDQ GFGSTGLR MPIFVNTVYCKNILALSMTKKFKT IIDAIGGNIIVNSTILKKLSPYFRTH LRQKYTKNKDPVTRVCLDLDIHS LTSIVIYSYTGKVYIDSHNVVNLL
RASILTSVEFIIYTCINFILRDFRKE SEQ ID F3L (75% Deleção AAA48016.1 YCVECYMMGIEYGLSNLLCHTK NO:40 3’) Interna
NFIAKHFLELEDDIIDNFDYLSMK LILESDELNVPDEDYVVDFVIKW YIKRRNKLGNLLLLIKNVIRSNYL SPRGINNVKWILDCTKIFHCDKQ PRKSYKYPFIEYPMNMDQIIDIFH
ID de SEQ ID Localiza Gene Acesso de Sequência de Aminoácidos NO. ção Proteína
MCTSTHVGEVVYLIGGWMNNEI HNNAIAVNYISNNWIPIPPMNSPR LYATGIPANNKLYVVGGLPNPTSV ERWFHGDAAWVNMPSLLKPRC NPAVASINNVIYVMGGHSETDTT TEYLLPNHDQWQFGPSTYYPHY KSCALVFGRRLFLVGRNAEFYCE SSNTWTLIDDPIYPRDNPELIIVD NKLLLIGGFYRGSYIDTIEVYNHH
TYSWNIWDGK TABELA 32. EXEMPLOS DE PROTEÍNAS CODIFICADAS POR GENES
VACCINIA WESTERN RESERVE EQUIVALENTES ÀQUELES DELETADOS NO VETOR CopMD5p ID de SEQ ID Localiza Gene Acesso de Sequência de Aminoácidos NO. ção Proteína
MESVIFSINGEIIQVNKEIITASPY NFFKRIQDHHLKDEAIILNGINYH AFESLLDYIRWKKINITINNVEMIL VAAIIIDVPPVVDLCVKTMIHNINS TNCIRMFNFSKRYGIKKLYNASM SEIINNITAVTSDPEFGKLSKDELT TILSHENVNVNHEDVTAMILLKWI HKNPNDVDIINILHPKFMTNTMR NAISLLGLTISKSTKPVTRNGIKH
NIVVIKNSDYISTITHYSPRTEYW SEQ ID VACWR026 AAO89305. TIVGNTDRQFYNANVLHNCLYIIG Deleção NO:41 (26% 5’) 1 GMINNRHVYSVSRVDLETKKWK Interna
TVTNMSSLKSEVSTCVNDGKLY VIGGLEFSISTGVAEYLKHGTSK WIRLPNLITPRYSGASVFVNDDI YVMGGVYTTYEKYVVLNDVECF TKNRWIKKSPMPRHHSIVYAVEY DGDIYVITGITHETRNYLYKYIVK EDKWIELYMYFNHVGKMFVCSC GDYILIIADAKYEYYPKSNTWNLF DMSTRNIEYYDMFTKDETPKCN
VTHKSLPSFLSNCEKQFLQ SEQ ID AAO89306. MVKNNKIQKNKISNSCRMIMSTD Deleção VACWR027 NO:42 1 PNNILMRHLKNLTDDEFKCIIHRS Interna
ID de SEQ ID Localiza Gene Acesso de Sequência de Aminoácidos NO. ção Proteína
SDFLYLSDSDYTSITKETLVSEIV EEYPDDCNKILAIIFLVLDKDIDVD IKTKLKPKPAVRFAILDKMTEDIKL TDLVRHYFRYIEQDIPLGPLFKKI DSYRTRAINKYSKELGLATEYFN KYGHLMFYTLPIPYNRFFCRNSI GFLAVLSPTIGHVKAFYKFIEYVS IDDRRKFKKELMSK MRTLLIRYILWRNDNDQTYYNDN
FKKLMLLDELVDDGDVCTLIKNM SEQ ID AAO89307. RMTLSDGPLLDRLNQPVNNIED Deleção VACWR028 NO:43 1 AKRMIAISAKVARDIGERSEIRWE Interna
ESFTILFRMIETYFDDLMIDLYGE K MTSSAMDNNEPKVLEMVYDATI LPEGSSMDPNIMDCINRHINMCI
QRTYSSSIIAILDRFLMMNKDELN SEQ ID AAO89308. NTQCHIIKEFMTYEQMAIDHYGG Deleção VACWR029 NO:44 1 YVNAILYQIRKRPNQHHTIDLFKR Interna
IKRTRYDTFKVDPVEFVKKVIGF VSILNKYKPVYSYVLYENVLYDE FKCFINYVETKYF MIFVIESKLLQIYRNRNRNINFYT TMDNIMSAEYYLSLYAKYNSKNL DVFRNMLQAIEPSGNNYHILHAY CGIKGLDERFVEELLHRGYSPN ETDDDGNYPLHIASKINNNRIVA MLLTHGADPNACDKHNKTPLYY LSGTDDEVIERINLLVQYGAKINN SVDEEGCGPLLACTDPSERVFK KIMSIGFEARIVDKFGKNHIHRHL
MSDNPKASTISWMMKLGISPSK SEQ ID AAO89309. Deleção VACWR030 PDHDGNTPLHIVCSKTVKNVDII NO:45 1 Interna
DLLLPSTDVNKQNKFGDSPLTLL IKTLSPAHLINKLLSTSNVITDQTV NICIFYDRDDVLEIINDKGKQYDS TDFKMAVEVGSIRCVKYLLDNDII CEDAMYYAVLSEYETMVDYLLF NHFSVDFVVNGHTCMSECVRLN NPVILSKLMLHNPTSETMYLTMK AIEKDRLDKSIIIPFIAYFVLMHPD FCKNRRYFTSYKRFVTDYVHEG VSYEVFDDYF
ID de SEQ ID Localiza Gene Acesso de Sequência de Aminoácidos NO. ção Proteína
MVYKLVLLFCIASLGYSVEYKNTI CPPRQDYRYWYFAAELTIGVNY DINSTIIGECHMSESYIDRNANIV
LTGYGLEINMTIMDTDQRFVAAA SEQ ID AAO89310. EGVGKDNKLSVLLFTTQRLDKV Deleção VACWR031 NO:46 1 HHNISVTITCMEMNCGTTKYDS Interna
DLPESIHKSSSCDITINGSCVTCV NLETDPTKINPHYLHPKDKYLYH NSEYSMRGSYGVTFIDELNQCL LDIKELSYDICYRE MDLSRINTWKSKQLKSFLSSKD AFKADVHGHSALYYAIADNNVRL VCTLLNAGALKNLLENEFPLHQA ATLEDTKIVKILLFSGLDDSQFDD KGNTALYYAVDSGNMQTVKLFV
KKNWRLMFYGKTGWKTSFYHA SEQ ID Deleção VACWR032 AAO89311.1 VMLNDVSIVSYFLSEIPSTFDLAI NO:47 Interna
LLSCIHITIKNGHVDMMILLLDYM TSTNTNNSLLFIPDIKLAIDNKDIE MLQALFKYDINIYSANLENVLLD DAEIAKMIIEKHVEYKSDSYTKDL DIVKNNKLDEIISKNKELRLMYVN CVKKN MIALLILSLTCSVSTYRLQGFTNA GIVAYKNIQDDNIVFSPFGYSFS MFMSLLPASGNTRIELLKTMDLR KRDLGPAFTELISGLAKLKTSKY TYTDLTYQSFVDNTVCIKPSYYQ QYHRFGLYRLNFRRDAVNKINSI VERRSGMSNVVDSNMLDNNTL
WAIINTIYFKGIWQYPFDITKTRN SEQ ID AAO89312. Deleção SPI-3 ASFTNKYGTKTVPMMNVVTKLQ NO:48 1 Interna
GNTITIDDEEYDMVRLPYKDANI SMYLAIGDNMTHFTDSITAAKLD YWSFQLGNKVYNLKLPKFSIENK RDIKSIAEMMAPSMFNPDNASF KHMTRDPLYIYKMFQNAKIDVDE QGTVAEASTIMVATARSSPEKLE FNTPFVFIIRHDITGFILFMGKVE SP
MLAFCYSLPNAGDVIKGRVYEK SEQ ID AAO89313. Deleção VACWR034 DYALYIYLFDYPHFEAILAESVKM NO:49 1 Interna
HMDRYVEYRDKLVGKTVKVKVI
ID de SEQ ID Localiza Gene Acesso de Sequência de Aminoácidos NO. ção Proteína
RVDYTKGYIDVNYKRMCRHQ MNPDNTIAVITETIPIGMQFDKVY LSTFNMWREILSNTTKTLDISSF YWSLSDEVGTNFGTIILNKIVQLP KRGVRVRVAVNKSNKPLKDVER LQMAGVEVRYIDITNILGGVLHT KFWISDNTHIYLGSANMDWRSL TQVKELGIAIFNNRNLAADLTQIF EVYWYLGVNNLPYNWKNFYPS
YYNTDHPLSINVSGVPHSVFIAS SEQ ID AAO89314. Deleção VACWR035 APQQLCTMERTNDLTALLSCIRN NO:50 1 Interna
ASKFVYVSVMNFIPIIYSKAGNIL FWPYIEDELRRAAIDRQVSVKLLI SCWQRSSFIMRNFLRSIAMLKS KNINIEVKLFIVPDADPPIPYSRV NHAKYMVTDKTAYIGTSNWTGN YFTDTCGASINITPDDGLGLRQQ LEDIFMRDWNSKYSYELYDTSP TKRCRLLKNMKQCTNDIYCDEIQ
PEKEIPEYSLE SEQ ID AAO89315. MQHANCNREIKIYEGAKHHLHK Deleção VACWR036 NO:51 1 ETDEVKKSVMKEIETWIFNRVK Externa
MTLVQHVVTIKSTYWVIPWELAS
YDNPNLFTAMILMSPLVNADAVS SEQ ID AAO89316. KLNLLAAKLMGTITLNAPVGKLC Deleção VACWR037 NO:52 1 PESVSRDMDKVYKYQYDPLINH Interna
EKIKAGFASQVLKATNKVRKIISKI NTPRLSYSREQTIRLAMF
MSANCMFNLDNDYIYWKPITYP SEQ ID AAO89317. KALVFISHGAGKHSGRYDELAEN Deleção VACWR038 NO:53 1 ISSLGILVFSHDHIGHGRSNGEK Interna
MMIDDFGTARGNY MATKLDYEDAVFYFVDDDKICSR DSIIDLIDEYITWRNHVIVFNKDIT
SCGRLYKELMKFDDVAIRYYGID SEQ ID AAO89318. Deleção VACWR039 KINEIVEAMSEGDHYINFTKVHD NO:54 1 Interna
QESLFATIGICAKITEHWGYKKIS ESRFQSLGNITDLMTDDNINILIL FLEKKLN
MLSMFMCNNIVDYVDDIDNGIVQ SEQ ID AAO89319. Deleção VACWR040 DIEDEASNNVDHDYVYPLPENM NO:55 1 Interna
VYRFDKSTNILDYLSTERDHVM
ID de SEQ ID Localiza Gene Acesso de Sequência de Aminoácidos NO. ção Proteína
MAVRYYMSKQRLDDLYRQLPTK TRSYIDIINIYCDKVSNDYNRDMN IMYDMASTKSFTVYDINNEVNTIL MDNKGLGVRLATISFITELGRRC MNPVETIKMFTLLSHTICDDYFV DYITDISPPDNTIPNTSTREYLKLI GITAIMFATYKTLKYMIG MFNMNINSPVRFVKETNRAKSP TRQSPYAAGYDLYSAYDYTIPPG
ERQLIKTDISMSMPKFCYGRIAP SEQ ID AAO89320. Deleção
DUT RSGLSLKGIDIGGGVIDEDYRGN NO:56 1 Interna
IGVILINNGKCTFNVNTGDRIAQLI YQRIYYPELEEVQSLDSTNRGD QGFGSTGLR MPIFVNTVYCKNILALSMTKKFK TIIDAIGGNIIVNSTILKKLSPYFRT HLRQKYTKNKDPVTWVCLDLDI HSLTSIVIYSYTGKVYIDSHNVVN LLRASILTSVEFIIYTCINFILRDFR KEYCVECYMMGIEYGLSNLLCH TKNFIAKHFLELEDDIIDNFDYLS MKLILESDELNVPDEDYVVDFVI KWYIKRRNKLGNLLLLIKNVIRSN
YLSPRGINNVKWILDCTKIFHCD SEQ ID VACWR042 AAO89321. Deleção
KQPRKSYKYPFIEYPMNMDQIIDI NO:57 (75% 3’) 1 Interna
FHMCTSTHVGEVVYLIGGWMN NEIHNNAIAVNYISNNWIPIPPMN SPRLYASGIPANNKLYVVGGLPN PTSVERWFHGDAAWVNMPSLL KPRCNPAVASINNVIYVMGGHSE TDTTTEYLLPNHDQWQFGPSTY YPHYKSCALVFGRRLFLVGRNA EFYCESSNTWTLIDDPIYPRDNP ELIIVDNKLLLIGGFYRESYIDTIE
VYNHHTYSWNIWDGK TABELA 33. EXEMPLOS DE PROTEÍNAS CODIFICADAS POR GENES
VACCINIA TIAN TAN EQUIVALENTES ÀQUELES DELETADOS NO VETOR CopMD5p
ID de SEQ ID Localiza Gene Acesso de Sequência de Aminoácidos NO. ção Proteína
MESVIFSINGEIIQVNKEIITASPY NFFKRIQDHHLKDEAIILNGINYH AFESLLDYIRWKKINITINNVEMIL VAAIIIDVPPVVDLCVKTMIHNINS TNCIRMFNFSKQYGIKKLYNASM SEIINNITAVTSDPEFGKLSKDELT TILSHEDVNVNHEDVTAMILLKWI HKNPNDVDIINILHPKFMTNTMR NAISLLGLTISKSTKPVTRNGIKH
NIVVIKNSDYISTITHYSPRTEYW SEQ ID TC2L (26% TIVGNTDRQFYNANVLHNCLYIIG Deleção AAF33878.1 NO:58 5’) GMINNRHVYSVSRVDLETKKWK Interna
TVTNMSSLKSEVSTCVNNGKLY VIGGLEFSISTGVAEYLKHGTSK WIRLPNLITPRYSGASVFVNDDI YVMGGVYTTYEKYVVLNDVECF TKNRWIKKSPMPRHHSIVYAVEY DGDIYVITGITHETRNYLYKYIVK EDKWIELYMYFNHVGKMFVCSC GDYILIIADAKYEYYPKSNTWNLF DMSTRNIEYYDMFTKDETPKCN VTHKSLPSFLSNCEKQFLQ MVKNNKISNSCRMIMSTDPNNIL MRHLKNLTDDEFKCIIHRSSDFL YLSDSDYTSITKETLVSEIVEEYP
DDCNKILAIIFLVLDKDIDVDIKTK SEQ ID LKPKPAVRFAILDKMTEDIKLTDL Deleção TC1L AAF33879.1 NO:59 VRHYFRYIEQDIPLGPLFKKIDSY Interna
RTRAINKYSKELGLATEYFNKYG HLMFYTLPIPYNRFFCRNSIGFL AVLSPTIGHVKAFYKFIEYVSIDD RRKFKKELMSK MRTLLIRYILWRNDNDQTYYNDD
FKKLMLLDELVDDGDVCTLIKNM SEQ ID RMTLSDGPLLDRLNQPVNNIED Deleção TN1L AAF33880.1 NO:60 AKRMIAISAKVARDIGERSEIRWE Interna
ESFTILFRMIETYFDDLMIDLYGE K
MTSSAMDNNEPKVLEMVYDATI SEQ ID LPEGSSMDPYIMDCINRHINMCI Deleção TN2L AAF33881.1 NO:61 QRTYSSSIIAILDRFLMMNKDELN Interna
NTQCHIIKNL
ID de SEQ ID Localiza Gene Acesso de Sequência de Aminoácidos NO. ção Proteína
MIFVIESKLLQIYRNRNRNINFYT TMDNIMSAEYYLSLYAKYNSKNL DVFRNMLQAIEPSGNNYHILHAY CGIKGLDERFVEELLHRGYSPN ETDDDGNYPLHIASKINNNRIVA MLLTHGADPNACDKHNKTPLYY LSGTDDEVIERINLLVQYGAKINN SVDEEGCGPLLACTDPSERVFK KIMSIGFEARIVDKFGKNHIHRHL
MSDNPKASTISWMMKLGISPSK SEQ ID Deleção TM1L AAF33882.1 PDHDGNTPLHIVCSKTVKNVDII NO:62 Interna
DLLLPSTDVNKQNKFGDSPLTLL IKTLSPAHLINKLLSTSNVITDQTV NICIFYDRDDVLEIINDKGKQYDS TDFKMAVEVGSIRCVKYLLDNDII CEDAMYYAVLSEYETMVDYLLF NHFSVDFVVNGHTCMSECVRLN NPVILSKLMLHNLTSETMYLTMK AIEKDRLDKSIIIPFIAYFVLMHPD FCKNRRYFTSYKRFVTDYVHEG VSYEVFDDYF MSSSTRLPVLVLAAELTIGVNYDI NSTIIGECHMSESYIDRNANIVLT GYGLEINMTIMDTDQRFVAAAE
GVGKDNKLSVLLFTTQRLDKVH SEQ ID Deleção TM2L AAF33883.1 HNISVTITCMEMNCGTTKYDSDL NO:63 Interna
PESIHKSSSCDITINGSCVTCVNL ETDPTKINPHYLHPKDKYLYHNS EYGMRGSYGVTFIDELNQCLLDI KELSYDICYRE
MLQALFKYDINIYSANLENVLLD SEQ ID DAEIAKMIIEKHVEYKSDSYTKDL Deleção TK1L AAF33884.1 NO:64 DIVKNNKLDEIISKNKELRLMYVN Interna
CVKKN MDLSRINTWKSKQLKSFLSSKD TFKADVHGHSALYYAIADNNVRL VCTLLNSGALKNLLENEFPLHQA
ATLEDTKIVKILLFSGLDDSQFDD SEQ ID Deleção TK2L AAF33885.1 KGNTALYYAVDSGNMQTVKLFV NO:65 Interna
KKNWRLMFYGKTGWKTSFYHA VMLNDVSIVSYFLSEIPSTFDLAI LLSCIHITIKNGHVDMMILLLDYM TVDKHQ
ID de SEQ ID Localiza Gene Acesso de Sequência de Aminoácidos NO. ção Proteína
MIALLILSLACSASAYRLQGFTNA GIVAYKNIQDDNIVFSPFGYSFS MFMSLLPASGNTRIELLKTMDLR KRDLGPAFTELISGLAKLKTSKY TYTDLTYQSFVDNTVCIKPSYYQ QYHRFGLYRLNFRRDAVNKINSI VERRSGMSNVVDSNMLDNNTL
WAIINTIYFKGTWQYPFDITKTRN SEQ ID Deleção TK3L AAF33886.1 ASFTNKYGTKTVPMMNVVTKLQ NO:66 Interna
GNTITIDDEEYDMVRLPYKDANI SMYLAIGDNMTHFTDSITAAKDY WSFQLGNKVYNLKLPKFSIENK RDIKSIAEMMAPSMFNPDNASF KHMTRDPLYIYKMFQNAKIDVDE QGTVAEASTIMVATARSSPEELE FNTPFVFIIRHDITGFILFMGKVE SP MGHIITYCQVHTNISILIRKAYHIIF
SEQ ID FVIDCDCISLQFSNYVHHGNRFR ORFR AAF33887.1 NO:67 TVLISKTSIACFSDIKRILPCTFKIY
SINDCP
MLAFCYSLPNAGDVIKGRVYEK SEQ ID DYALYIYLFDYPHSEAILAESVKM Deleção TK4L AAF33888.1 NO:68 HMDRYVEYRDKLVGKTVKVKVI Interna
RVDYTKGYIDVNYKRMCRHQ MTLVQHVVTIKSTYWVIPWELAS
YDNPNLFTAMILMSPLVNADAVS SEQ ID KLNLLAAKLMGTITLNAPVGKLC Deleção TK6L AAF33889.1 NO:69 PESVSRDMDKVYKYQYDPLINH Interna
EKIKAGFASQVLKATNKVRKIISKI NTPRLSYSREQTIRLAMF MATKLDYEDAVFYFVDDDKICSR DSIIDLIDEYITWRNHVIVFNKDIT
SCGRLYKELMKFDDVAIRYYGID SEQ ID Deleção TK8R AAF33890.1 KINEIVEAMSEGDHYINFTKVHD NO:70 Interna
QESLFATIGICAKITEHWGYKKIS ESRFQSLGNITDLMTDDNINILIL FLEKKLN
MLSMFMCNNIVDYVDDIDNGIVQ SEQ ID DIEDEASNNVDRDYVYPLPENM Deleção TF1L AAF33891.1 NO:71 VYRFDKSTNILDYLSTERDHVM Interna
MAVRYYMSKQRLDDLYRQLPTK
ID de SEQ ID Localiza Gene Acesso de Sequência de Aminoácidos NO. ção Proteína
TRSYIDIINIYCDKVSNDYNRDMN IMYDMASTKSFTVYDINNEVNTIL MDNKGLGVRLATISFITELGRRC MNPVKTIKMFTLLSHTICDDCFV DYITDISPPDNTIPNTSTREYLKLI GITAIMFATYKTLKYMIG MFNMNINSPVRFVKETNRAKSP TRQSPGAAGYDLYSAYDYTIPPG
ERQLIKTDISMSMPKICYGRIAPR SEQ ID Deleção TF2L AAF33892.1 SGLSLKGIDIGGGVIDEDYRGNI NO:72 Interna
GVILINNGKCTFNVNTGDRIAQLI YQRIYYPELEEVQSLDSTDRGD QGFGSTGLR MPIFVNTVYCKNILALSMTKKFK TIIDAIGGNIIVNSTILKKLSPYFRT HLRQKYTKNKDPVTRVCLDLDIH SLTSIVIYSYTGKVYIDSHNVVNL LRASILTSVEFIIYTCINFILRDFRK EYCVECYMMGIEYGLSNLLCHT KNFIAKHFLELEDDIIDNFDYLSM KLILESDELNVPDEDYVVDFVIK WYIKRRNKLGNLLLLIKNVIRSNY
LSPRGINNVKWILDCTKIFHCDK SEQ ID TF3L (75% Deleção AAF33893.1 QPRKSYKYPFIEYPMNMDQIIDIF NO:73 3’) Interna
HMCTSTHVGEVVYLIGGWMNN EIHNNAIAVNYISNNWIPIPPMNS PRLYASGIPANNKLYVVGGLPNP TSVERWFHGDAAWVNMPSLLK PRCNPAVASINNVIYVMGGHSET DTTTEYLLPNHDQWQFGPSTYY PHYKSCALVFGRRLFLVGRNAE FYCESSNTWTLIDDPIYPRDNPE LIIVDNKLLLIGGFYRESYIDTIEV
YNHHTYSWNIWDGK TK5L
ORFR TK7L TABELA 34. EXEMPLOS DE PROTEÍNAS CODIFICADAS POR GENES
VACCINIA WYETH EQUIVALENTES ÀQUELES DELETADOS NO VETOR CopMD5p
ID de SEQ ID Localiza Gene Acesso de Sequência de Aminoácidos NO. ção Proteína
MESVTFSINGEIIQVNKEIITASPY NFFKRIQEHHINDEVIILNGINYH AFESLLDYMRWKKINITINNVEMI LVAAVIIDVTPVVDLCVKTMIHNIN STNCIRMFNFSKRYGIKKLYNAS MSEIINNITAVTSDPEFGKLSKDE LTTILSHEDVNVNHEDVTAMILLK WIHKNPNDVDIINILHPKFMTNT MRNAISLLGLTISKSTKPVTRNGI
KHNIVVIKNSDYISTITHYSPRTE VAC_DPP2 SEQ ID YWTIVGNTDRQFYNANVLHNCL Deleção 0_035 AEY74729.1 NO:74 YIIGGMINNRHVYSVSRVDLETK Interna (26% 5’)
KWKTVTNMSSLKSEVSTCVNNG KLYVIGGLEFSISTGVAEYLKHGT SKWIRLPNLITPRYSGASVFVND DIYVMGGVYTTYEKYVVLNDVE CFTKNRWIKKSPMPRHHSIVYAV EYDGDIYAITGITHETRNYLYKYIV KEDKWIELYMYFNHVGKMFVCS CGDYILIIADAKYEYYPKSNTWN LFDMSTRNIEYYDMFTKDETHK SLPSFLSNCEKQFLQ MVKNNKISNSCRMIMSTNPNNIL MRHLKNLTDDEFKCIIHRSSDFL YLSDRDYTSITKETLVSEIVEEYP
DDCNKILAIIFLVLDKDIDVDIKTK SEQ ID VAC_DPP1 LKPKPAVRFAILDKMTEDIKLTDL Deleção AEY74730.1 NO:75 0_036 VRHYFRYIEQDIPLGPLFKKIDSY Interna
RTRAINKYSKELGLATEYFNKYG HLMFYTLPIPYNRFFCRNSIGFL AVLSPTIGHVKAFYKFIEYVSIDD RRKFKKELMSK MRTLLIRYILWRNDNDQTYYNDD
FKKLMLLDELVDDGDVCTLIKNM SEQ ID RMTLSDGPLLDRLNQPVNNIED Deleção N1L AEY74731.1 NO:76 AKRMIAISAKVARDIGERSEIRWE Interna
ESFTILFRMIETYFDDLMIDLYGE K MTSSAMDNNEPKVLEMVYDATI
LPEGSSMDPNIIDCINRHINMCIQ SEQ ID VAC_DPP1 Deleção AEY74732.1 RTYSSSIIAILDRFLTMNKDELNN NO:77 1_038 Interna
TQCHIIKEFMTYEQMAIDHYGGY VNAILYQIRKRPNQHHTIDLFKKI
ID de SEQ ID Localiza Gene Acesso de Sequência de Aminoácidos NO. ção Proteína
KRTRYDTFKVDPVEFVKKVIGFV SILNKYKPVYSYVLYENVLYDEF KCFIDYVETKYF
MLHNPTSETMYLTMNAIKKDKLD SEQ ID VAC_DPP1 KSIIIPFIAYFVLMHPDFCKNRRYF Não AEY74733.1 NO:78 1_039 TSYKRFVTDYVHEGVSYEVFDD Presente
YF MSIGFEARIVDKFGKNHIHRHLM SDNPKASTISWMMKLGISPSKP DHDGNTPLHIVCSKTVKYVDIIDL
LLPSTDVNKQNKFGDSPLTLLIK SEQ ID VAC_DPP1 TLSLAHLINKLLSTSNVITDQTVNI Deleção AEY74734.1 NO:79 2_040 CIFYDRDDVLEIINDKGKQYDFK Interna
MAVEVGSIKCVKYLLDNDIICEDA MYYAVLSEYKTMVDYLLFNHFSV DSVVNGHTCMSECVKLNNRHFI EADVT MIFVIESKLLQIYRNRNRNINFYT TMDNIMSAEYYLSLYAKYNSKNL
DVFRNMLQAIEPSGNNYHILHAY SEQ ID VAC_DPP1 Não AEY74735.1 CGIKGLDERFVEELLHRGYSPN NO:80 2_041 Presente
ETDDDGNYPLHIASKINNNRIVA MLLTHGADPNACDKHNKTPLYY LSGTDDEVIERINLLVQYGAKINN MVYKLVLLFCIASLGYSVEYKNTI CPPRQDYRYWYFAAELTIGVNY DINSTIIGECHMSESYIDRNANIV
LTGYGLEINMTIMDTDQRFVAAA SEQ ID VAC_DPP1 EGVGKDNKLSVLLFTTQRLDKV Deleção AEY74736.1 NO:81 2_042 HHNISVTITCMEMNCGTTKYDS Interna
DLPESIHKSSSCDITINGSCVTCV NLETDPTKINPHYLHPKDKYLYH NSEYGMRGSYGVTFIDELNQCL LDIKELSYDICYRE MDLSRINTWKSKQLKSFLSSKD TFKADVHGHSALYYAIADNNVRL
VCTLLNAGALKNLLENEFPLHQA SEQ ID VAC_DPP1 ATLEDTKIVKILLFSGLDDSQFDD Deleção AEY74737.1 NO:82 0_043 KGNTALYYAVDSGNMQTVKLFV Interna
KKNWRLMFYGKTGWKTSFYHA VMLNDVSIVSYFLSEIPSTFDLAI LLSCIHITIKNGHVDMMILLLDYM
ID de SEQ ID Localiza Gene Acesso de Sequência de Aminoácidos NO. ção Proteína
TSTNTNNSLLFIPDIKLAIDNKDIE MLQALFKYDINIYSANLENVLLD DAEIAKMIIEKHVEYKSDSYTKDL DIVKNNKLDEIISKNKELRLMYVN CVKKN MIALLILSLTCSVSTYRLQGFTNA GIVAYKNIQDDNIVFSPFGYSFS MFMSLLPASGNTRIELLKTMDLR KRDLGPAFTELISGLAKLKTSKY TYTDLTYQSFVDNTVCIKPSYYQ QYHRLNFRRDAVNKINSIVERRS
GMSNVVDSNMLDNNTLWAIINTI SEQ ID VAC_DPP2 YFKGIWQYPFDITKTRNASFTNK Deleção AEY74738.1 NO:83 0_044 YGTKTVPMMNVVTKLQGNTITID Interna
DKEYDMVRLPYKDANISMYLAIG DNMTHFTDSITAAKLDYWSFQL GNKVYNLKLPKFSIENKRDIKSIA EMMAPSMFNPDNASFKHMTRD PLYIYKMFQNAKIDVDEQGTVAE ASTIMVATARSSPEKLEFNTPFV FIIRHDITGFILFMGKVESP
MLAFCYSLPNAGDVIKGRVYEN SEQ ID VAC_DPP1 DYALYIYLFDYPHFEAILAESVKM Deleção AEY74739.1 NO:84 0_045 HMDRYVEYRDKLVGKTVKVKVI Interna
RVDYTKGYIDVNYKRMCRHQ MNPDNTIAVITETIPIGMQFDKVY LSTFNMWREILSNTTKTLDISSF YWSLSDEVGTNFGTIILNEIVQLP KRGVRVRVAVNKSNKPLKDVER LQMAGVEVRYIDITNILGGVLHT KFWISDNTHIYLGSANMDWRSL TQVKELGIAIFNNRNLAADLTQIF
EVYWYLGVNNLPYNWKNFYPS SEQ ID YYNTDHPLSINVSGVPHSVFIAS Deleção K4L AEY74740.1 NO:85 APQQLCTMERTNDLTALLSCIRN Interna
ASKFVYVSVMNFIPIIYSKAGKILF WPYIEDELRRSAIDRQVSVKLLIS CWQRSSFIMRNFLRSIAMLKSK NINIEVKLFIVPDADPPIPYSRVN HAKYMVTDKTAYIGTSNWTGNY FTDTCGASINITPDDGLGLRQQL EDIFMRDWNSKYSYELYDTSPT KRCKLLKNMKQCTNDIYCDEIQP
ID de SEQ ID Localiza Gene Acesso de Sequência de Aminoácidos NO. ção Proteína
EKEIPEYSLE MGATISILASYDNPNLFTAMILMS PLVNADAVSKLNLLAAKLMGTIT
PNAPVGKLCPESVSRDMDKVYK SEQ ID VAC_DPP2 YQYDPLINHEKIKAGFASQVLKA Deleção AEY74741.1 NO:86 0_047 TNKVRKIISKINTPPTLILQGTNNE Interna
ISDVLGAYYFMQHANCNREIKIY EGAKHHLHKETDEVKKSVMKEI ETWIFNRVK
MSANCMFNLDNDYIYWKPITYP List034/VA SEQ ID KALVFISHGAGKHSGRYDELAEN Deleção C_DPP20_ AEY74742.1 NO:87 ISSLGILVFSHDHIGHGRSNGEK Interna 048
MMIDDFGTARGNY MATKLDYEDAVFYFVDDDKICSR DSIIDLIDEYITWRNHVIVFNKDIT
SCGRLYKELMKFDDVAIRYYGID SEQ ID K7R/VAC_ Deleção AEY74743.1 KINEIVEAMSEGDHYINFTKVHD NO:88 DPP20_49 Interna
QESLFATIGICAKITEHWGYKKIS ESRFQSLGNITDLMTDDNINILIL FLEKKLN MLSMFMCNNIVDYVDDIDNGIVQ DIEDEASNNVDHDYVYPLPENM
VYRFDKSTNILDYLSTERDHVM LIVPclone1 MAVRYYMSKQRLDDLYRQLPTK SEQ ID 4_046/VAC TRSYIDIINIYCDKVSNDYNRDMN Deleção AEY74744.1 NO:89 _DPP20_0 IMYDMASTKSFTVYDINNEVNTIL Interna 47 MDNKGLGVRLATISFITKLGRRC
MNPVKTIKMFTLLSHTICDDCFV DYITDISPPDNTIPNTSTREYLKLI GITAIMFATYKTLKYMIG MFNMNINSPVRFVKETNRAKSP TRQSPGAAGYDLYSAYDYTIPPG
ERQLIKTDISMSMPKICYGRIAPR SEQ ID F2L/VAC_D Deleção AEY74745.1 SGLSLKGIDIGGGVIDEDYRGNI NO:90 PP20_051 Interna
GVILINNGKCTFNVNTGDRIAQLI YQRIYYPELEEVQSLDSTNRGD QGFGSTGLR MPIFVNTVYCKNILALSMTKKFK
TIIDAIGGNIIVNSTILKKLSPYFRT SEQ ID F3L (75% Deleção AEY74746.1 HLRQKYTKNKDPVTRVCLDLDIH NO:91 3’) Interna
SLTSIVIYSYTGKVYIDSHNVVNL LRASILTSVEFIIYTCINFILRDFRK
ID de SEQ ID Localiza Gene Acesso de Sequência de Aminoácidos NO. ção Proteína
EYCVECYMMGIEYGLSNLLCHT KNFIAKHFLELEDDIIDNFDYLSM KLILESDELNVPDEDYVVDFVIK WYIKRRNKLGNLLLLIKNVIRSNY LSPRGINNVKWILDCTKIFHCDK QPRKSYKYPFIEYPMNMDQIIDIF HMCTSTHVGEVVYLIGGWMNN EIHNNAIAVNYISNNWIPIPPMNS PRLYASGIPANNKLYVVGGLPNP TSVERWFHGDAAWVNMPSLLK PRCNPAVASINNVIYVMGGHSET DTTTEYLLPNHDQWQFGPSTYY PHYKSCALVFGRRLFLVGRNAE FYCESSNTWTLIDDPIYPRDNPE LIIVDNKLLLIGGFYRESYIDTIEV
YNHHTYSWNIWDGK TABELA 35. EXEMPLOS DE PROTEÍNAS CODIFICADAS POR GENES
VACCINIA LISTER EQUIVALENTES ÀQUELES DELETADOS NO VETOR COPMD5P ID de SEQ ID Localiza Gene Acesso de Sequência de Aminoácidos NO. ção Proteína
MESVIFSINGEIIQVNKEIITASPY NFFKRIQDHHLKDEAIILNGINYH AFESLLDYMRWKKINITINNVEMI LVAAIIIDVPPVVDLCVKTMIHNIN FTNCIRMFNFSKRYGIKKLYNAS MSEIINNITAVTSDPEFGKLSKDE LTTILSHEDVNVNHEDVTAMILLK
WIHKNPNDVDIINILHPKFMTNT SEQ ID List023 MRNAISLLGLTISKSTKPVTRNGI Deleção ABD52473.1 NO:92 (26% 5’) KHNIVVIKNSDYISTITHYSPRTE Interna
YWTIVGNTDRQFYNANVLHNCL YIIGGMINNRHVYSVSRVDLKTK KWKTVTNMSSLKSEVSTCVNDG KLYVIGGLEFSISTGVAEYLKHGT SKWIRLPNLITPRYSGASVFVND DIYVMGGVYTTYEKYVVLNDVE CFTKNRWIKKSPMPRHHSIVYAV EYDGDIYVITGITHETRNYLYKYI
ID de SEQ ID Localiza Gene Acesso de Sequência de Aminoácidos NO. ção Proteína
VKEDKWIELYMYFNHVGKMFVC SCGDYILIIADAKYEYYPKSNTW NLFDMSTRNIEYYDMFTKDETP KCNVTHKSLPSFLSNCEKQFLQ MVKNNKISNSCRMIMSTNPNNIL MRHLKNLTDDEFKCIIHRSSDFL YLSDSDYTSITKETLVSEIVEEYP
DDCNKILAIIFLVLDKDIDVDIETK SEQ ID LKPKPAVRFAILDKMTADIKLTDL Deleção C1L/List024 ABD52474.1 NO:93 VRHYFRYIEQDIPLGPLFKKIDSY Interna
RTRAINKYSKELGLATEYFNKYG HLMFYTLPIPYNRFFCRNSIGFL AVLSPTIGHVKAFYKFIEYVSIDD RRKFKKELMSK MRTLLIRYILWRNDNDQTYYNDD
FKKLMLLDELVDDGDVCTLIKNM SEQ ID RMTLSDGPLLDRLNQPVNNIED Deleção N1L/List025 ABD52475.1 NO:94 AKRMIAISAKVARDIGERSEIRWE Interna
ESFTILFRMIETYFDDLMIDLYGE K MTSSAMDNNEPKVLEMVYDATI LPEGSSMDPNIMDCINRHINMCI
QRTYSSSIIAILDRFLTMNKDELN SEQ ID NTQCHIIKEFMTYEQMAIDHYGE Deleção List026 ABD52476.1 NO:95 YVNAILYQIRKRPNQHHTIDLFKK Interna
IKRTRYDTFKVDPVEFVKKVIGF VSILNKYKPVYSYVLYENVLYDE FKCFIDYVETKYF MIFVIESKLLQIYRNRNINFYTTM DNIMSAEYYLSLYAKYNSKNLDV FRNMLQAIEPSGNNYHILHAYCG IKGLDERFVEELLHRGYSPNETD DDGNYPLHIASKINNNRIVAMLLT
HGADPNACDKQHKTPLYYLSGT SEQ ID DDEVIERINLLVQYGAKINNSVDE Deleção List027 ABD52477.1 NO:96 EGCGPLLACTDPSERVFKKIMSI Interna
GFEARIVDKFGKNHIHRHLMSD NPKASTISWMMKLGISPSKPDH DGNTPLHIVCSKTVKNVDIIDLLL PSTDVNKQNKFGDSPLTLLIKTL SPAHLINKLLSTSNVITDQTVNICI FYDRDDVLEIINDKGKQYDSTDF
ID de SEQ ID Localiza Gene Acesso de Sequência de Aminoácidos NO. ção Proteína
KMAVEVGSIRCVKYLLDNDIICE DAMYYAVLSEYETMVDYLLFNH FSVDSVVNGHTCMSECVRLNNP VILSKLMLHNPTSETMYLTMKAIE KDRLDKSIIIPFIAYFVLMHPDFCK NRRYFTSYKRFVTDYVHEGVSY EVFDDYF MVYKLVLLFCIASLGYSVEYKNTI CPPRQDYRYWYFAAELTIGVNY DINSTIIGECHMSESYIDRNANIV
LTGYGLEINMTIMDTDQRFVAAA SEQ ID EGVGKDNKLSVLLFTTQRLDKV Deleção List028 ABD52478.1 NO:97 HHNISVTITCMEMNCGTTKYDS Interna
DLPESIHKSSSCDITINGSCVTCV NLETDPTKINPHYLHPKDKYLYH NSEYGMRGSYGVTFIDELNQCL LDIKELSYDICYRE MDLSRINTWKSKQLKSFLSSKD AFKADINGHSALYYAIADNNVRL VCTLLNAGALKNLLENEFPLHQA ATLEDTKIVKILLFSGLDDSQFDD KGNTALYYAVDSGNMQTVKLFV
KKNWRLMFYGKTGWKTSFYHA SEQ ID Deleção K1L/List029 ABD52479.1 VMLNDVSIVSYFLSEIPSTFDLAI NO:98 Interna
LLSCIHITIKNGHVDMMILLLDYM TSTNTNNSLLFIPDIKLAIDNKDIE MLQALFKYDINIYSANLENVLLD DAEIAKMIIEKHVEYKSDSYTKDL DIVKNNKLDEIISKNKELKLMYVN CVKKN IELLKTMDLRKRDLGPAFTELISG LAKLKTSKYTYTDLTYQSFVDNT VCIKPSYYQQYHRFGLYRLNFR RDAVNKINSIVERRSGMSNVVD SNMLDNNTLWAIINTIYFKGIWQY
PFDITKTRNASFTNKYGTKTVPM SEQ ID Deleção List030 ABD52480.1 MNVVTKLQGNTITIDDEEYDMVR NO:99 Interna
LPYKDANISMYLAIGDNMTHFTD SITAAKLDYWSSQLGNKVYNLKL PKFSIENKRDIKSIAEMMAPSMF NPDNASFKHMTRDPLYIYKMFQ NAKIDVDEQGTVAEASTIMVATA RSSPEKLEFNTPFVFIIRHDITGFI
ID de SEQ ID Localiza Gene Acesso de Sequência de Aminoácidos NO. ção Proteína
LFMGKVESP
MLAFCYSLPNAGDVIKGRVYEN SEQ ID DYALYIYLFDYPHSEAILAESVKM Deleção K3L/List031 ABD52483.1 NO:100 HMDRYVEYRDKLVGKTVKVKVI Interna
RVDYTKGYIDVNYKRMCRHQ MNPDNTIAVITETIPIGMQFDKVY LSTFNMWREILSNTTKTLDISSF YWSLSDEVGTNFGTIILNEIVQLP KRGVRVRVAVNKSNKPLKDVER LQMAGVEVRYIDITNILGGVLHT KFWISDNTHIYLGSANMDWRSL TQVKELGIAIFNNRNLAADLTQIF EVYWYLGVNNLPYNWKNFYPS
YYNTDHPLSINVSGVPHSVFIAS SEQ ID Deleção K4L/List032 ABD52484.1 APQQLCTMERTNDLTALLSCIRN NO:101 Interna
ASKFVYVSVMNFIPIIYSKAGKILF WPYIEDELRRSAIDRQVSVKLLIS CWQRSSFIMRNFLRSIAMLKSK NINIEVKLFIVPDADPPIPYSRVN HAKYMVTDKTAYIGTSNWTGNY FTDTCGASINITPDDGLGLRQQL EDIFMRDWNSKYSYELYDTSPT KRCKLLKNMKQCTNDIYCDEIQP EKEIPEYSLE MGHSMGATISILASYDNPNLFTA MILMSPLVNADAVSRLNLLAAKL
MGTITPNAPVGKLCPESVSRDM SEQ ID DKVYKYQYDPLINHEKIKAGFAS Deleção List033 ABD52485.1 NO:102 QVLKATNKVRKIISKINTPPTLILQ Externa
GTNNKISDVLGAYYFMQHANCN REIKIYEGAKHHLHKETDEVKKS VMKEIETWIFNRVK
MSANCMFNLDNDYIYWKPITYP SEQ ID KALVFISHGAGKHSGRYDELAEN Deleção List034 ABD52486.1 NO:103 ISSLGILVFSHDHIGHGRSNGEK Interna
MMIDDFGTARGNY MATKLDYEDAVFYFVDDDKICSR
DSIIDLIDEYITWRNHVIVFNKDIT SEQ ID K7R/List03 SCGRLYKELMKFDDVAIRYYGID Deleção ABD52487.1 NO:104 5 KINEIVEAMSEGDHYINFTKVHD Interna
QESLFATIGICAKITEHWGYKKIS ESRFQSLGNITDLMTDDNINILIL
ID de SEQ ID Localiza Gene Acesso de Sequência de Aminoácidos NO. ção Proteína
FLEKKLN MLSMFMCNNIVDYVDDIDNGIVQ DIEDEASNNVDHDYVYPLPENM VYRFDKSTNILDYLSTERDHVM
MAVRYYMSKQRLDDLYRQLPTK SEQ ID TRSYIDIINIYCDKVSNDYNRDMN Deleção F1L/List036 ABD52489.1 NO:105 IMYDMASTKSFTVYDINNEVNTIL Interna
MDNKGLGVRLATISFITELGRRC MNPVKTIKMFTLLSHTICDDCFV DYITDISPPDNTIPNTSTREYLKLI GITAIMFATYKTLKYMIG MFNMNINSPVRFVKETNRAKSP TRQSPGAAGYDLYSAYDYTIPPG
ERQLIKTDISMSMPKFCYGRIAP SEQ ID Deleção List037 ABD52490.1 RSGLSLKGIDIGGGVIDEDYRGN NO:106 Interna
IGVILINNGKCTFNVNTGDRIAQLI YQRIYYPELEEVQSLDSTNRGD QGFGSTGLR MPIFVNTVYCKNILALSMTKKFK TIIDAIGGNIIVNSTILKKLSPYFRT HLRQKYTKNKDPVTRVCLDLDIH SLTSIVIYSYTGKVYIDSHNVVNL LRASILTSVEFIIYTCINFILRDFRK EYCVECYMMGIEYGLSNLLCHT KNFIAKHFLELEDDIIDNFDYLSIK LILESDELNVPDEDYVVDFVIKW YIKRRNKLGNLLLLIKNVIRSNYL
SPRGINNVKWILDCTKIFHCDKQ SEQ ID List038 Deleção ABD52491.1 PRKSYKYPFIEYPMNMDQIIDIFH NO:107 (75% 3’) Interna
MCTSTHVGEVVYLIGGWMNNEI HNNAIAVNYISNNWIPIPPMNSP RLYASGIPANNKLYVVGGLPNPT SVERWFHGDAAWVNMPSLLKP RCNPAVASINNVIYVMGGHSETD TTTEYLLPNHDQWQFGPSTYYP HYKSCALVFGRRLFLVGRNAEF YCESSNTWTLIDDPIYPRDNPELI IVDNKLLLIGGFYRESYIDTIEVYN
HHTYSWNIWDGK TABELA 36. EXEMPLOS DE PROTEÍNAS CODIFICADAS POR GENES VACCINIA COPENHAGEN DELETADOS NO VETOR CopMD3p
ID de SEQ ID Localiza Gene Acesso de Sequência de Aminoácidos NO. ção Proteína
MNHCLLAISAVYFKAKWLTPFEK EFTSDYPFYVSPTEMVDVSMMS MYGELFNHASVKESFGNFSIIEL
PYVGDTSMMVILPDKIDGLESIE SEQ ID B14R (41% QNLTDTNFKKWCNSLDAMFIDV Deleção AAA48211.1 NO:108 3’) HIPKFKVTGSYNLVDTLVKSGLT Interna
EVFGSTGDYSNMCNLDVSVDA MIHKTYIDVNEEYTEAAAATCALV SDCASTITNEFCVDHPFIYVIRHV DGKILFVGRYCSPTTNC MTANFSTHVFSPQHCGCDRLTSI DDVKQCLTEYIYWSSYAYRNRQ
CAGQLYSTLLSFRDDAELVFIDIR SEQ ID Deleção B15R AAA48212.1 ELVKNMPWDDVKDCTEIIRCYIP NO:109 Interna
DEQKTIREISAIIGLCAYAATYWG GEDHPTSNSLNALFVMLEMLNY VDYNIIFRRMN
MYNSSIHTPEYDVIIHVIEHLKHH SEQ ID KQCVQTVTSGMVFTSPVSSSIC Deleção B ORF E AAA48213.1 NO:110 TKSDDGRNLSDGFLLIRYITTDD Interna
FCTIFDIIPRHIFYQLANVDEH MSILPVIFLPIFFYSSFVQTFNAS ECIDKGXYFASFMELENEPVILP CPQINTLSSGYNILDILWEKRGA DNDRIIPIDNGSNMLILNPTQSDS GIYICITTNETYCDMMSLNLTIVS VSESNIDFISYPQIVNERSTGEM VCPNINAFIASNVNADIIWSGHR RLRNKRLKQRTPGIITIEDVRKN
SEQ ID DAGYYTCVLEYIYGGKTYNVTRI Deleção NOS:11 B16R AAA48214.1 VKLEVRDKIIHPTMQLPEGVVTSI Interna 1 e 625 GSNLTIACRVSLRPPTTDADVFW
ISNGMYYEEDDGDGDGRISVAN
KIYMTDKRRVITSRLNINPVKEED ATTFTCMAFTIPSISKTVTVSITa a SEQ ID NO: 111 representa a sequência de aminoácidos antes do “X” e SEQ ID NO: 625 representa a sequência de aminoácidos após o “X.” SEQ ID MVIIPGVRCLSLLFLRRRCPLHIIS Deleção B ORF F AAA48215.1 NO:112 AFTLLAINALILGHTISPVDLSFTI Interna
ID de SEQ ID Localiza Gene Acesso de Sequência de Aminoácidos NO. ção Proteína
CGYEIKSIFDSETDTIVKFNDIMS Q MSRKFMQVYEYDREQYLDEFIE DRYNDSFITSPEYYSAEKYMCR YTTLNHNCVNVRRCALDSKLLH DIITNCKIYNNIELVRATKFVYYLD LIKCNWVSKVGDSVLYPVIFITHT STRNLDKVSVKTYKGVKVKKLN
RCADHAIVINPFVKFKLTLPNKTS SEQ ID Deleção B17L AAA48216.1 HAKVLVTFCKLRTDITPVEAPLP NO:113 Interna
GNVLVYTFPDINKRIPGYIHVNIE GCIDGMIYINSSKFACVLKLHRS MYRIPPFPIDICSCCSQYTNDDIE IPIHDLIKDVAIFKNKETVYYLKLN NKTIARFTYFNNIDTAITQEHEYV KIALGIVCKLMINNMHSIVGVNHS NTFVNCLLEDNV MSRRLIYVLNINRKSTHKIQENEI YTYFSHCNIDHTSTELDFVVKNY DLNRRQHVTGYTALHCYLYNNY FTNDVLKILLNHDVNVTMKTSSG RMPVYILLTRCCNISHDVVIDMID KDKNHLSHRDYSNLLLEYIKSRY MLLKEEDIDENIVSTLLDKGIDPN FKQDGYTALHYYYLCLAHVYKP GECRKPITIKKAKRIISLFIQHGAN LNALDNCGNTPFHLYLSIEMCNN IHMTKMLLTFNPNFKICNNHGLT
PILCYITSDYIQHDILVMLIHHYET SEQ ID Deleção B18R AAA48217.1 NVGEMPIDERRMIVFEFIKTYST NO:114 Interna
RPADSITYLMNRFKNINIYTRYEG KTLLHVACEYNNTQVIDYLIRING DINALTDNNKHATQLIIDNKENSP YTINCLLYILRYIVDKNVIRSLVDQ LPSLPIFDIKSFEKFISYCILLDDT FYDRHVKNRDSKTYRYAFSKYM SFDKYDGIITKCHDETMLLKLST VLDTTLYAVLRCHNSRKLRRYLT ELKKYNNDKSFKIYSNIMNERYL NVYYKDMYVSKVYDKLFPVFTD KNCLLTLLPSEIIYEILYMLTINDLY
NISYPPTKV SEQ ID B19R AAA48218.1 MTMKMMVHIYFVSLSLLLLLFHS Deleção
ID de SEQ ID Localiza Gene Acesso de Sequência de Aminoácidos NO. ção Proteína NO:115 YAIDIENEITEFFNKMRDTLPAKD Interna
SKWLNPACMFGGTMNDMATLG EPFSAKCPPIEDSLLSHRYKDYV VKWERLEKNRRRQVSNKRVKH GDLWIANYTSKFSNRRYLCTVTT KNGDCVQGIVRSHIKKPPSCIPK TYELGTHDKYGIDLYCGILYAKHY NNITWYKDNKEINIDDIKYSQTG KELIIHNPELEDSGRYDCYVHYD DVRIKNDIVVSRCKILTVIPSQDH RFKLILDPKINVTIGEPANITCTAV STSLLIDDVLIEWENPSGWLIGF DFDVYSVLTSRGGITEATLYFEN VTEEYIGNTYKCRGHNYYFEKTL TTTVVLE MDEDTRLSRYLYLTDREHINVDS
IKQLCKISDPNACYRCGCTALHE SEQ ID YFYNYRSVNGKYKYRYNGYYQ Deleção B20R AAA48219.1 NO:116 YYSSSDYENYNEYYYDDYDRTG Interna
MNSESDSESDNISIKTEYENEYE FYDETQDQSTQHNDL
MSLESFIITTFNNNSSTNIDNMC SEQ ID HLYVKVCPSSLLFRLFVECCDIN Deleção B21R AAA48220.1 NO:117 KLVEGTTPLHCYLMNEGFESSV Interna
LKNLLKEYVMNTFNVHDIHYTNI MISLSFLIHNPLKKWKLKPSISIN GYRSTFTMAFPCAQFRPCHCHA
TKDSLNTVADVRHCLTEYILWVS SEQ ID HRWTHRESAGSLYRLLISFRTDA Deleção B22R AAA48221.1 NO:118 TELFGGELKDSLPWDNIDNCVEI Interna
IKCFIRNDSMKTAEELRAIIGLCT QSAIVSGRVFNDKYIDILLMLRKI LNENDYLTLLDHIRTAKY MIAFIIFREIGIISTRIAMDYCGRE CTILCRLLDEDVTYKKIKLEIETC HNLSKHIDRRGNNALHCYVSNK
CDTDIKIVRLLLSRGVERLCRNN SEQ ID Deleção B23R AAA48222.1 EGLTPLGAYSKHRYVKSQIVHLLI NO:119 Interna
SSYSNSSNELKSNINDFDLSSDN IDLRLLKYLIVDKRIRPSKNTNYAI NGLGLVDIYVTTPNPRPEVLLWL LKSECYSTGYVFRTCMYNSDMC
ID de SEQ ID Localiza Gene Acesso de Sequência de Aminoácidos NO. ção Proteína
KNSLHYYISSHRESQSLSKDVIK CLINNNVSIHGRDEGGSLPIQYY WSFSTIDIEIVKLLLIKDVDTCRVY DVSPILEAYYLNKRFRVTPYNVD MEIVNLLIERRHTLVDVMRSITSY DSREYNHYIIDNILKRFRQQDESI VQAMLINYLHYGDMVVRCMLDN GQQLSSARLLC MYGLILSRFNNCGYHCYETILIDV FDILSKYMDDIDMIDNENKTLLYY
AVDVNNIQFAKRLLEYGASVTTS SEQ ID Deleção B24R AAA48223.1 RSIINTAIQKSSYQRENKTRIVDL NO:120 Interna
LLSYHPTLETMIDAFNRDIRYLYP EPLFACIRYALILDDDFPSKVSMI SPVIIRN
MRRCIHIKERKIHMTNIVDRNVTF SEQ ID ILTVVHKYVRYVPHTVANDAHNL Deleção B ORF G AAA48224.1 NO:121 VHLAHLIHFIIYFFIIRDVRKKKKK Interna
KKKNRTIYFFSNVYARHIK MSRINITKKIYCSVFLFLFLFLSYI SNYEKVNDEMYEMGEMDEIVSI VRDSMWYIPNVFMDDGKNEGH VSVNNVCHMYFTFFDVDTSSHL
FKLVIKHCDLNKRGNSPLHCYTM SEQ ID NTRFNPSVLKILLHHGMRNFDSK Deleção B25R AAA48225.1 NO:122 DEKGHHYLIHSLSIDNKIFDILTDT Interna
IDDFSKSSDLLLCYLRYKFNGSL NYYVLYKGSDPNCADEDELTSL HYYCKHISTFYKSNYYKLSHTKM RAEKRFIYAIIDYGANINAVTHLPS TVYQT MEQTLTRLHTYLQQYTKHSPRV
VYALLSRGYVIILIVHPSWNDCAT SEQ ID Deleção B26R AAA48226.1 GHILIMLLNWHEQKEEGQHLLYL NO:123 Interna
FIKHNQGYTLNILRYLLDRFDIQK DEYIYRLSKL MLPHTSDTTSTFRLKTVFDLVFE
NRNIIYKADVVNDIIHHRLKVSLP SEQ ID Deleção B27R AAA48227.1 MIKSLFYKMSEFSPYDDYYVKKI NO:124 Interna
LAYCLLRDESFAELHSKFCLNED
YKSVFMKNISFDKIDSIIVT SEQ ID B28R AAA48228.1 MKSVLYSYILFLSCIIINGRDIAPH Deleção
ID de SEQ ID Localiza Gene Acesso de Sequência de Aminoácidos NO. ção Proteína NO:125 APSDGKCKDNEYKRHNLCPGTY Interna
ASRLCDSKTNTQCTPCGSGTFT SRNNHLPACLSCNGRRDRVTLL TIESVNALPDIIVFSKDHPDARHV FPKQNVE MHVPASLQQSSSSSSSCTEEEN KHHMGIDVIIKVTKQDQTPTNDKI CQSVTEITESESDPDPEVESED DSTSVEDVDPPTTYYSIIGGGLR
MNFGFTKCPQIKSISESADGNTV SEQ ID C23L/B29R Deleção AAA48229.1 NARLSSVSPGQGKDSPAITREE NO:126 (44% 5’) Interna
ALAMIKDCEVSIDIRCSEEEKDS DIKTHPVLGSNISHKKVSYEDIIG STIVDTKCVKNLEFSVRIGDMCK ESSELEVKDGFKYVDGSASEGA
TDDTSLIDSTKLKACV TABELA 37. EXEMPLOS DE PROTEÍNAS CODIFICADAS POR GENES
VACCINIA WESTERN RESERVE EQUIVALENTES ÀQUELES DELETADOS NO VETOR CopMD3p ID de SEQ ID Localiza Gene Acesso de Sequência de Aminoácidos NO. ção Proteína
MDIFREIASSMKGENVFISPASIS SVLTILYYGANGSTAEQLSKYVE KEENMDKVSAQNISFKSINKVYG RYSAVFKDSFLRKIGDKFQTVDF TDCRTIDAINKCVDIFTEGKINPL LDEPLSPDTCLLAISAVYFKAKW SPI-
LTPFEKEFTSDYPFYVSPTEMVD SEQ ID 2/B13R/VA AAO89474. Deleção
VSMMSMYGKAFNHASVKESFG NO:127 CWR195 1 Interna
NFSIIELPYVGDTSMMVILPDKID (26% 3’)
GLESIEQNLTDTNFKKWCNSLEA TFIDVHIPKFKVTGSYNLVDTLVK SGLTEVFGSTGDYSNMCNSDVS VDAMIHKTYIDVNEEYTEAAAAT CALVSDCASTITNEFCVDHPFIY
VIRHVDGKILFVGRYCSPTTNC SEQ ID AAO89475. MTANFSTHVFSPQHCGCDRLTS Deleção VACWR196 NO:128 1 IDDVRQCLTEYIYWSSYAYRNRQ Interna
ID de SEQ ID Localiza Gene Acesso de Sequência de Aminoácidos NO. ção Proteína
CAGQLYSTLLSFRDDAELVFIDIR ELVKNMPWDDVKDCAEIIRCYIP DEQKTIREISAIIGLCAYAATYWG GEDHPTSNSLNALFVMLEMLNY VDYNIIFRRMN MSILPVIFLSIFFYSSFVQTFNAP ECIDKGQYFASFMELENEPVILP CPQINTLSSGYNILDILWEKRGA DNDRIIPIDNGSNMLILNPTQSDS GIYICITTNETYCDMMSLNLTIVS
VSESNIDLISYPQIVNERSTGEM SEQ ID AAO89476. VCPNINAFIASNVNADIIWSGHR Deleção VACWR197 NO:129 1 RLRNKRLKQRTPGIITIEDVRKN Interna
DAGYYTCVLEYIYGGKTYNVTRI VKLEVRDKIIPSTMQLPDGIVTSI GSNLTIACRVSLRPPTTDADVFW ISNGMYYEEDDGDGNGRISVAN KIYMTDKRRVITSRLNINPVKEED ATTFTCMAFTIPSISKTVTVSIT MSRKFMQVYEYDREQYLDEFIE DRYNDSFITSPEYYSAEKYMCR YTTLNHNCINVRRCALDSKLLHD IITNCKIYNNIELVRATKFVYYLDLI KCNWVSKVGDSVLYPVIFITHTS TRNLDKVSVKTYKGVKVKKLNR
CADHAIVINPFVKFKLTLPNKTSH SEQ ID AAO89477. Deleção VACWR198 AKVLVTFCKLKTDITPVEAPLPG NO:130 1 Interna
NVLVYTFPDINKRIPGYIHLNIEG CIDGMIYINSSKFACVLKLHRSM YRIPPFPIDICSCCSQYINYDIEIPI HDLIKDVAIFKNKETVYYLKLNNK TIARFTYFNNIDTAITQEHEYVKIA LGIVCKLMINNMHSIVGVNHSNT FVNCLLEDNV MSRRLIYVLNINRESTHKIQENEI YTYFSHCNIDHTSTELDFVVKNY DLNRRQPVTGYTALHCYLYNNY
FTNDVLKILLNHGVDVTMKTSSG SEQ ID AAO89478. Deleção VACWR199 RMPVYILLTRCCNISHDVVIDMID NO:131 1 Interna
KDKNHLLHRDYSNLLLEYIKSRY MLLKEEDIDENIVSTLLDKGIDPN FKQDGYTALHYYYLCLAHVYKP GECRKPITIKKAKRIISLFIQHGAN
ID de SEQ ID Localiza Gene Acesso de Sequência de Aminoácidos NO. ção Proteína
LNALDNCGNTPFHLYLSIEMCNN IHMTKMLLTFNPNFEICNNHGLT PILCYITSDYIQHDILVMLIHHYET NVGEMPIDERRIIVFEFIKTYSTR PADSITYLMNRFKNIDIYTRYEGK TLLHVACEYNNTHVIDYLIRINGD INALTDNNKHATQLIIDNKENSPY TINCLLYILRYIVDKNVIRSLVDQL PSLPIFDIKSFEKFISYCILLDDTF YNRHVRNRDSKTYRYAFSKYMS FDKYDGIITKCHKETILLKLSTVL DTTLYAVLRCHNSKKLRRYLTEL KKYNNDKSFKIYSNIMNERYLNV YYKDMYVSKVYDKLFPVFTDKN CLLTLLPSEIIYEILYMLTINDLYNI SYPPTKV MTMKMMVHIYFVSLLLLLFHSYA IDIENEITEFFNKMRDTLPAKDSK WLNPACMFGGTMNDIAALGEPF SAKCPPIEDSLLSHRYKDYVVK WERLEKNRRRQVSNKRVKHGD LWIANYTSKFSNRRYLCTVTTKN
GDCVQGIVRSHIRKPPSCIPKTY SEQ ID B18R/VAC AAO89479. ELGTHDKYGIDLYCGILYAKHYN Deleção NO:132 WR200 1 NITWYKDNKEINIDDIKYSQTGK Interna
ELIIHNPELEDSGRYDCYVHYDD VRIKNDIVVSRCKILTVIPSQDHR FKLILDPKINVTIGEPANITCTAVS TSLLIDDVLIEWENPSGWLIGFD FDVYSVLTSRGGITEATLYFENV TEEYIGNTYKCRGHNYYFEKTLT TTVVLE
MHVIDVDVRLYMSTFIIIDQSTEN SEQ ID AAO89480. Não VACWR201 TSIDTTVTINIIYLAIMKIIMNIIMMI NO:133 1 Presente
MIELV
MNSESDNISIKTEYEFYDETQDQ SEQ ID AAO89481. Não VACWR202 STQLVGYDIKLKTNEDDFMAMID NO:134 1 Presente
QWVSMII
MEMYPRHRYSKHSVFKGFSDK SEQ ID AAO89482. VRKNDLDMNVVKELLSNGASLTI Deleção VACWR203 NO:135 1 KDSSNKDPITVYFRRTIMNLEMI Interna
DERKYIVHSYLKNYKNFDYPFFR
ID de SEQ ID Localiza Gene Acesso de Sequência de Aminoácidos NO. ção Proteína
KLVLTNKHCLNNYYNISDSKYGT PLHILASNKKLITPNYMKLLVYNG NDINARGEDTQMRTPLHKYLCK FVYHNIEYGIRYYNEKIIDAFIELG ADLTIPNDDGMIPVVYCIHSNAE YGYNNITNIKIIRKLLNLSRRASH NLFRDRVMHDYISNTYIDLECLDI IRSLDGFDINGYFEGRTPLHCAI QHNFTQIAKYLLDRGADIVVPNT LIIHQYIQ MEEDTNISNKVIRYNTVNNIWET LPNFWTGTINPGVVSHKDDIYVV
SEQ ID AAO89483. CDIKDEKNVKTCIFRYNTNTYNG Não NO: VACWR204 1 WELVTTTESRLSALHTILYNNTIM Presente 136
MLHCYESYMLQDTFNVYTREW
NHMCHQHSNSYIMYNILPIY SEQ ID VACWR204 AAO89483. MLNFSLCLYPVFILNKLVLRTQSII Não NO:629 .5 1 LHTINNASIKNR Presente
MDIFKELILKHTDENVLISPVSILS TLSILNHGAAGSTAEQLSKYIEN MNENTPDDNNDMDVDIPYCATL ATANKIYGSDSIEFHASFLQKIKD DFQTVNFNNANQTKELINEWVK TMTNGKINSLLTSPLSINTRMTV
VSAVHFKAMWKYPFSKHLTYTD SPI- SEQ ID AAO89484. KFYISKNIVTSVDMMVSTENNLQ Deleção 1/VACWR2 NO:137 1 YVHINELFGGFSIIDIPYEGNSSM Externa 05
VIILPDDIEGIYNIEKNITDEKFKK WCGMLSTKSIDLYMPKFKVEMT EPYNLVPILENLGLTNIFGYYADF SKMCNETITVEKFLHTTFIDVNE EYTEASAVTGVFMTNFSMVYRT KVYINHPFMYMIKDNTGRILFIGK YCYPQ MMIYGLIACLIFVTSSIASPLYIPVI PPISEDKSFNSVEVLVSLFRDDQ
KDYTVTSQFNNYTIDTKDWTIGV SEQ ID C13L/VAC AAO89485. LSTPDGLDIPLTNITYWSRFTIGR Deleção NO:138 WR206 1 ALFKSESEDIFQKKMSILGVSIEC Externa
KKSSTLLTFLTVRKMTRVFNKFP DMAYYRGDCLKAVYVTMTYKNT KTGETDYTYLSNGGLPAYYRNG
ID de SEQ ID Localiza Gene Acesso de Sequência de Aminoácidos NO. ção Proteína
VDG
MKLFTQNDRYFGLLDSCTHIFCI SEQ ID AAO89486. Deleção VACWR207 TCINIWHKTRRETGASDNCPICR NO:139 1 Externa
TRFRNITMSKFYKLVN MEFDPAKINTSSIDHVTILQYIDE PNDIRLTVCIIRNINNITYYINITKIN
THLANQFRAWKKRIAGRDYMTN SEQ ID p28/VACW AAO89487. LSRDTGIQQSKLTETIRNCQKNR Deleção NO:140 R208 1 NIYGLYIHYNLVINVVIDWITDVIV Externa
QSILRGLVNWYIANNTYTPNTPN NTTTISELDIIKILDKYEDVYRVSK EKECGICYEVVYSKR MDIYDDKGLQTIKLFNNEFDCIR NDIRELFKHVTDSDSIQLPMEDN SDIIENIRKILYRRLKNVECVDIDS TITFMKYDPNDDNKRTCSNWVP LTNNYMEYCLVIYLETPICGGKIK LYHPTGNIKSDKDIMFAKTLDFK
SKKVLTGRKTIAVLDISVSYNRS SEQ ID C10L/VAC AAO89488. Deleção
MTTIHYNDDVDIDIHTDKNGKEL NO:141 WR209 1 Externa
CYCYITIDDHYLVDVETIGVIVNR SGKCLLVNNHLGIGIVKDKRISDS FGDVCMDTIFDFSEARELFSLTN DDNRNIAWDTDKLDDDTDIWTP VTEDDYKFLSRLVLYAKSQSDTV FDYYVLTGDTEPPTVFIFKVTRF YFNMPK MSMKYLMLLFAAMIIRSFADSGN
AIETTSPEITNATTDIPAIRLCGPE VGF- SEQ ID AAO89489. GDGYCLHGDCIHARDIDGMYCR Deleção 1/VACWR2 NO:142 1 CSHGYTGIRCQHVVLVDYQRSE Externa 10
NPNTTTSYIPSPGIMLVLVGIIIITC CLLSVYRFTRRTKLPIQDMVVP MDEIVRIVRDSMWYIPNVFMDD
GKNEGHVSVNNVCHMYFTFFD SEQ ID AAO89490. Deleção VACWR211 VDTSSHLFKLVIKHCDLNKRGNS NO:143 1 Interna
PLHCYTMNTRFNPSVLKILLHHG MRNFDSKDEKGHHYQSITRSLIY
MLFYLEEPIRGYVIILIVHPSWND SEQ ID C20L/VAC AAO89491. CATGHILIMLLNWHEQKEEGQHL Deleção NO:144 WR212 1 LYLFIKHNQGYTLNILRYLLDRFD Interna
IQKDEYYNTAFQNCNNNVASYIG
ID de SEQ ID Localiza Gene Acesso de Sequência de Aminoácidos NO. ção Proteína
YDINLPTKDGIRLGV
MLPHTSDTTSTFRLKTVFDLVFE SEQ ID AAO89492. Deleção VACWR213 NRNIIYKADVVNDIIHHRLKVSLP NO:145 1 Interna
MIKSLFYKMSLPTTITT
MYDDLIEQCHLSMERKSKLVDK SEQ ID AAO89493. Deleção VACWR214 ALNKLESTIGQSRLSYLPPEIMR NO:146 1 Externa
NII MKSVLYSYILFLSCIIINGRDIAPH
APSDGKCKDNEYKRHNLCPGT SEQ ID B28R/VAC AAO89494. YASRLCDSKTNTQCTPCGSGTF Deleção NO:147 WR215 1 TSRNNHLPACLSCNGRRDRVTR Interna
LTIESVNALPDIIVFSKDHPDARH VFPKQNVE
MDSLRPVVVVNWIQINFHIDIVK SEQ ID AAO89495. GITGYGFAFICGRDGVRICSETT Deleção VACWR216 NO:148 1 RRTDDVSGYSVSYSTFCLGNTC Externa
LASG
MWKLICIQLTTTTGLSESISTSEL SEQ ID AAO89496. Deleção VACWR217 TITMNHKDCNPVFREEYFSVLN NO:149 1 Externa
KVATSGFFTGERCAL MHVPASLQQSSSSSSSCTEEEN KHHMGIDVIIKVTKQDQTPTNDKI CQSVTEITESESDPDPEVESED
DSTSVEDVDPPTTYYSIIGGGLR B29R/VAC MNFGFTKCPQIKSISESADGNTV SEQ ID AAO89497. Deleção WR218 NARLSSVSPGQGKDSPAITHEE NO:150 1 Interna (44% 5’) ALAMIKDCEVSIDIRCSEEEKDS
DIKTHPVLGSNISHKKVSYEDIIG STIVDTKCVKNLEFSVRIGDMCK ESSELEVKDGFKYVDGSASEGA
TDDTSLIDSTKLKACV TABELA 38. EXEMPLOS DE PROTEÍNAS CODIFICADAS POR GENES
VACCINIA TIAN TAN EQUIVALENTES ÀQUELES DELETADOS NO VETOR CopMD3p ID de SEQ ID Localizaç Gene Acesso de Sequência de Aminoácidos NO. ão Proteína SEQ ID TF3L (41% AAF34083.1 MNHCLLAISAVYFKAKWLTPFEK Deleção
ID de SEQ ID Localizaç Gene Acesso de Sequência de Aminoácidos NO. ão Proteína NO:151 3’) EFTSDYPFYVSPTEMVDVSMM Interna
SMYGKAFNHASVKESFGNFSIIE LPYVGDTSMMVILPDKIDGLESI EQNLTDTNFKKWCDFMDAMFID VHIPKFKVTGSYNLVDTLVKSGL TEVFGSTGDYSNMCNLDVSVD AMIHKTYIDVNEEYTEAAAATCA LVSDCASTITNEFCVDHPFIYVIR HVDGKILFVGRYCSPTTNC MTANFSTHVFSPQHCGCDRLTS IDDVKQCLTEYIYWSSYAYRNRQ
CAGQLYSTLLSFRDDAELVFIDIR SEQ ID Deleção TB15R AAF34084.1 ELVKNMPWDDVKDCTEIIRCYIP NO:152 Interna
DEQKTIREISAIIGLCAYAATYWG GEDHPTSNSLNALFVMLEMLNY VDYNIIFRRMN MYNSSIHTPEYDVIIHVIEHLKHH
SEQ ID KQCVQTVTSGMVFTSPVSSSIC ORFL AAF34085.1 NO:153 TKSDDGRNLSDGFLLIRYITTDD
FCTIFDIIPRHIFYQLANVDEH MELENEPVILPCPQINTLSSGYN ILDILWEKRGADNDRIIPIDNGSN MLILNPTQSDSGIYICITTNETYC DMMSLNLTIVSVLESNIDLISYPQ IVNERSTGEMVCPNINAFIASNV
NADIIWSGHRRLRNKRLKQRTP SEQ ID Deleção TB16R AAF34086.1 GIITIEDVRKNDAGYYTCVLEYIY NO:154 Interna
RGKTYNVTRIVKLEVRDKIIPST MQLPDGIVTSIGSNLTIACRVSL RPPTTDADVFWISNGMYYEEDD GDGNGRISVANKIYMTDKRRVIT SRLNINPVKEEDATTFTCMAFTI PSISKTVTVSIT MVIIPGVRCLSLLFLRRRCPLHII
SEQ ID SAFTLLAINALILGHTISPVDLSFT ORFL AAF34087.1 NO:155 ICGYEIRSIFDSKTDTIVKFNDIM
SQ MSRKFMQVYEYDREQYLDEFIE
DRYNDSFITSPEYYSAEKYMCR SEQ ID Deleção TB17L AAF34088.1 YTTLNHNCVNVRRCALDSKLLH NO:156 Interna
DIITNCKIYNNIELVRATKFVYYLD LIKCNWVSKVGDSVLYPVIFITHT
ID de SEQ ID Localizaç Gene Acesso de Sequência de Aminoácidos NO. ão Proteína
STRNLDKVSVKTYKGVKVKKLN RCADHAIVINPFVKFKLTLPNKTS HAKVLVTFCKLRTDITQIEAPLSG NVLVYTFPNINKRIPGYIHVNIEG CIDGMIYINSSKFACVLKLHRSM YRIPPFPIDICSCCSQYTNGDIEI PIHDLIKDVAIFKNKETVYYLKLN NKTIARFTYFNNIDTAITQEHEYV KIALGIVCKLMINNMHSIVGVNH SNTFVNCLLEDNV MSRRLIYVLNINRESTHKIQENEI YTYFSHCNIDHTSTELDFVVKNY DLNRRHPVTGYTALHCYLYNNY FTNDVLKILLNHGVDVTMKTSS GRMPVYILLTRCCNISHDVVIDMI DKDKNHLLHRDYSNLLLEYIKSR YMLLKEEDIDENIVSTLLDKGIDP NFKQDGYTALHYYYLCLAHVYK PGECRKPITIKKAKRIISLFIQHG ANLNALDNCGNTPFHLYLSIEMC NNIHMTKMLLTFNPNFKICNNHG
LTPILCYITSDYIQHDILVMLIHHY SEQ ID Deleção TB18R AAF34089.1 ETNVGEMPIDERRIIVFEFIKTYS NO:157 Interna
TRPADSITYLMNRFKNINIYTRYE GKTLLHVACEYNNTQVIDYLIRIN GDINALTDNNKHATQLIIDNKEN SPYTINCLLYILRYIVDKNVIRSLV DQLPSLPIFDIKSFEKFISYCILLD DTFYDRHVKNRNSKTYRYAFSK YMSFDKYDGIITKCHDETMLLKL STVLDTTLYAVLRCHNSRKLRRY LTELKKYNNDKSFKIYSNIMNER YLNVYYKDMYVSKVYDKLFPVF TDKNCLLTLLPSEIIYEILYMLTIN DLYNISYPPTKV MTMKMMVHIYFVSLSLLLLLFHS YAIDIENEITEFFNKMRDTLPAKD
SKWLNPACMFGGTMNDIAALGE SEQ ID PFSAKCPPIEDSLLSHRYKDYVV Deleção TB19R AAF34090.1 NO:158 KWERLEKNRRRQVSNKRVKHG Interna
DLWIANYTSKFSNRRYLCTVTTK NGDCVQGIVRSHIKKPPSCIPKT YELGTHDKYGIDLYCGILYAKHY
ID de SEQ ID Localizaç Gene Acesso de Sequência de Aminoácidos NO. ão Proteína
NNITWYKDNKEINIDDIKYSQTG KELIIHNPELEDSGRYDCYVHYD DVRIKNDIVVSRCKILTVIPSQDH RFKLILDPKINVTIGEPANITCTAV STSLLIDDVLIEWENPSGWLIGF DFDVYSVLTSRGGITEATLYFEN VTEEYIGNTYKCRGHNYYFEKT LTTTVVLE MHVIDVDVRLYMSTFIIIDQSTEN
SEQ ID ORFR AAF34091.1 TSIDTTVTINIIYLAIMKIIMNIIMMI NO:159
MIELV LKNVECVDIDSTITFMKYDPNDD NKRTCSNWVPLTNNYMEYCLVI YLETPICGGKIKLYHPTGNIKSDK DIMFAKTLDFKSTKVLTGRKTIAV LDISVSYNRSMTTIHYNDDVDIDI
SEQ ID HTDKNGKELCYCYITIDDHYLVD TB21R AAF34092.1 NO:160 VETIGVIVNRSGKCLLVNNHLGI
GIVKDKRISDSFGDVCMDTIFDF SEARELFSLTNDDNRNIAWDTD KLDDDTDIWTPVTENDYKFLSR LVLYAKSQSDTVFDYYVLTGDTE PPTVFIFKVTRFYFNMPK MYCRCSHGYTGIRCQHVVLVDY
SEQ ID QRSEKPNTTTSYIPSPGIMLVLV TB22L AAF34093.1 NO:161 GIIIITCCLLSVYRFTRRTKLPLQD
MVVP MHVPASLQQSSSSSSSCTEEEN KHHMGIDVIIKVTKQDQTPTNDK ICQSVTEITESESDPDPEVESED DSTSVEDVDPPTTYYSIIGGGLR
MNFGFTKCPQIKSISESADGNT SEQ ID TB23R Deleção AAF34094.1 VNARLSSVSPGQGKDSPAITHE NO:162 (44% 5’) Interna
EALAMIKDCEVSIDIRCSEEEKD SDIKTHPVLGSNISHKKVSYEDII GSTIVDTKCVKNLEFSVRIGDMC KESSELEVKDGFKYVDGSASEG
ATDDTSLIDSTKLKACV TB20R
ORFL
TABELA 39. EXEMPLOS DE PROTEÍNAS CODIFICADAS POR GENES
VACCINIA WYETH EQUIVALENTES ÀQUELES DELETADOS NO VETOR CopMD3p ID de SEQ ID Localizaç Gene Acesso de Sequência de Aminoácidos NO. ão Proteína
MNHCLLAISAVYFKAKWLTPFEK EFTSDYPFYVSPTEMVDVSMM SMYGKAFNHASVKESFGNFSIIE
LPYVGDTSMMVILPDKIDGLESI SEQ ID VAC_DPP2 EQNLTDTNFKKWCDFMDAMFID Deleção AEY74905.1 NO:163 0_207 VHIPKFKVTGSYNLVDTLVKSGL Interna
TEVFGSTGDYSNMCNLDVSVD AMIHKTYIDVNEEYTEAAAATCA LVSDCASTVTNEFCADHPFIYVI RHVDGKILFVGRYCSPTTNC MTANFSTHVFSPQHCGCDRLTS IDDVKQCLTEYIYWSSYAYRNRQ
CAGQLYSTLLSFRDDAELVFIDIR SEQ ID VAC_DPP1 Deleção AEY74906.1 ELVKHMPWDDVKDCAEIIRCYIP NO:164 0_208 Interna
DEQKTIREISAIIGLCAYAATYWG GEDHPTSNSLNALFVMLEMLNY VDYNIIFRRMN MSILPVIFLSIFFYSSFVQTFNAS ECIDKGQYFASFMELENEPVILP CPQINTLSSGYNILDILWEKRGA DNDRIIPIDNGSNMLILNPTQSD SGIYICITTNETYCDMMSLNLTIV SVSESNIDLISYPQIVNERSTGE
MVCPNINAFIASNVNADIIWSGH SEQ ID VAC_DPP1 Deleção AEY74907.1 RRLRNKRLKQRTPGIITIEDVRK NO:165 2_209 Interna
NDAGYYTCVLEYIYGGKTYNVT RIVKLEVRDKIIPSTMQLPDGIVT SIGSNLTIACRVSLRPPTTDTDV FWISNGMYYEEDDGDGDGRIS VANKIYMTDKRRVITSRLNINPV KEEDATTFTCMAFTIPSISKTVTV SIT MSRKFMQVYEYDREQYLDEFIE
DRYNDSFITSPEYYSAEKYMCR SEQ ID VAC_DPP2 YTTLNHNCVNVRRCALDSKLLH Deleção AEY74908.1 NO:166 0_210 DIITNCKIYNNIELVRATKFVYYLD Interna
LIKCNWVSKVGDSVLYPVIFITHT STRNLDKVSVKTYKGVKVKKLN RCADHAIVINPFVKFKLTLPNKTS HAKVLVTFCKLRTDITQIEAPLSG NVLVYTFPDINKRIPGYIHVNIEG CIDGMIYINSSKFACVLKLHRSM YRIPPFPIDICSCCSQYTNDDIEI PIHDLIKDVAIFKNKETVYYLKLN NKTIARFTYFNNIDTAITQEHEYV KIALGIVCKLMINNMHSIVGVNH SNTFVNCLLEDNV MSRRLIYVLNINRESTHKIQENEI YTYFSHCNIDHTSTELDFVVKNY DLNRRQPVTGYTALHCYLYNNY FTNDVLKILLNHGVDVTMKTSS GRMPVYILLTRCCNISHDVVIDMI DKDKNHLSHRDYSNLLLEYIKSR YMLLKEEDIDENIVSTLLDKGIDP NFKQDGYTALHYYYLCLAHVYK PGECRKPITIKKAKRIISLFIQHG ANLNALDNCGNTPFHLYLSIEMC NNIHMTKMLLTFNPNFKICNNHG
LTPILCYITSDYIQHDILVMLIHHY SEQ ID VAC_DPP2 Deleção AEY74909.1 ETNVGEMPIDERRIIVFEFIKTYS NO:167 0_211 Interna
TRPADSITYLMNRFKNINIYTRYE GKTLLHVACEYNNTHVIDYLIRIN GDINALTDNNKHAIQLIIDNKENS PYTIDCLLYILRYIVDKNVIRSLVD QLPSLPIFDIKSFEKFISYCILLDD TFYNRHVRNRNSKTYRYAFSKY MSFDKYDGIITKCHDETMLLKLS TVLDTTLYAVLRCHNSKKLRRYL NELKKYNNDKSFKIYSNIMNERY LNVYYKDMYVSKVYDKLFPVFT DKNCLLTLLPSEIIYEILYMLTIND LYNISYPPTKV MTMKMMVHIYFVSLSLLLLLFHS YAIDIENEITEFFNKMRDTLPAKD SKWLNPACMFGGTMNDIATLGE PFSAKCPPIEDSLLSHRYKDYVV
KWERLEKNRRRQVSNKRVKHG SEQ ID VAC_DPP2 DLWIANYTSKFSNRRYLCTVTTK Deleção AEY74910.1 NO:168 0_212 NGDCVQGIVRSHIRKPPSCIPKT Interna
YELGTHDKYGIDLYCGILYAKHY NNITWYKDNKEINIDDIKYSQTG KKLIIHNPELEDSGRYDCYVHYD DVRIKNDIVVSRCKILTVIPSQDH RFKLKRNCGYASN
MRQIKINGTDMLTVMYMLNKPT SEQ ID VAC_DPP1 KKRYVNNPIFTDWANKQYKFYN Não AEY74911.1 NO:169 0_217 QIIYNANKLIEQSKKIDDMIEEVSI Presente
DDNRLSTLPLEIRHLIFSYAFL
MSSKGGSGGMWSVFIHGHDGS SEQ ID VAC_DPP1 Deleção AEY74912.1 NKGSKTYTSGGGGMWGGGSS NO:170 0_218 Externa
SGVNGGVKSGTGKI
MFDYLENEEVALDELKQMLRDR SEQ ID VAC_DPP1 DPNDTRNQFKNNALHAYLFNEH Deleção AEY74913.1 NO:171 0_219 CNNVEVVKLLLDSGTNPLRKNW Externa
RQLPH
MLKLKDIAMALLEATGFSNINDF SEQ ID VAC_DPP1 NIFSYMKSKNVDVDLIKVLVEHG Deleção AEY74914.1 NO:172 0_220 FDLSVKCENHRSVIENYVMTMIL Externa
FIENGCSVLYEDEY MKGIDNTAYSYIDDLTCCTRGIM ADYLNSDYRYNKDVDLVKLFLE
NGKPHGIMCSIVPLWRNDKETIF SEQ ID VAC_DPP1 LILKTMNSDVLQHILIEYMTFGDI Deleção AEY74915.1 NO:173 0_221 PLVEYGTVVNKEAIHGYFRNINI Externa
DSYTMKYLLKKEGRCHQLSRLD TYVNPTMDVIISTLIHTKRVFVTC LMLAQFLVL MPSIISIGHLCKSNYGCYNFYTY TYKKGLCDMSYACPILSTINICLP
YLKDINMIDKRGETLLHKAVRYN SEQ ID VAC_DPP1 KQSLVSLLLESGSDVNIRSNNGY Deleção AEY74916.1 NO:174 0_222 TCIAIAINESKNIELLKMLLCHKPT Externa
LDYVIDSLREISNIVDNDYAIKQCI KYAMIIDDCTSSKIPEFISQRYND YIDLCN
MKKIMVGGNTMFSLIFTDHGAKI SEQ ID VAC_DPP1 IHRYANNPELREYYELKQNKIYV Deleção AEY74917.1 NO:175 0_223 EAYDIISNAIVKHDRIHKTIESVDD Externa
NTYISNLPYTIKYKIFEQQ MRILFLIAFMYGCVHSYVNAVET
KCSNLDIVTSSGEFHCSGCVEH SEQ ID VAC_DPP1 MPNFSYMYWLAKDMRSDEDAK Deleção AEY74918.1 NO:176 0_224 FIEHLGEGIKEDETVRTIDGRIVT Externa
LQKVLHVTDTNKFAHYRFTCVLT TIDGVSKKNIWLK
MKLFTQNDRYFGLLDSCNHIFCI SEQ ID VAC_DPP1 Deleção AEY74919.1 TCINIWHKTRRETGASDNCPICR NO:177 0_225 Externa
TRFRNITMSKFYKLVN
MHYPKYYINITKINPHLANQFRA SEQ ID VAC_DPP1 Deleção AEY74920.1 WKKRIAGRDYMTNLSKDTGIQQ NO:178 0_226 Externa
SKLYVTVKKIETYMVYIYTTI MDIYDDKGLQTIKLFNNEFDCIR NDIRELFKHVTDSDSIQLPMEDN SDIIENIRKILYRRLKNVECVDIDN TITFMKYDPNDDNKRTCSNWVP LTNNYMEYCLVIYLETPICGGKIK LYHPTGNIKSDKDIMFAKTLDFK
SKKVLTGRKTIAVLDISVSYNRSI SEQ ID VAC_DPP2 Deleção AEY74921.1 TTIHYNDDVDIDIHTDKNGKELC NO:179 0_227 Externa
YCYITIDDHYLVDVETIGVIVNRS GKCLLVNNHLGIGIVKDKRISDS FGDVCMDTIFDFSEARELFSLTN DDNRNIAWDTDKLDDDTDIWTP VTENDYKFLSRLVLYAKSQSDTV FDYYVLTGDTEPPTVFIFKVTRF YFNMPK MLINYLMLLFAAMIIRSFADSGNA
IETTLPEITNATTDIPAIRLCGPEG SEQ ID VAC_DPP2 DGYCLHGDCIHARDIDGMYCRC Deleção AEY74922.1 NO:180 0_228 SHGYTGIRCQHVVLVDYQRSEK Externa
PNTTTSYIPSPGIMLVLVGIIIITCC LLSVYRFTRRTNKLPLQDMVVP MDIFKELIVKHPDENVLISPVSIL STLSILNHGAAGSTAEQLSKYIE NMNENTPDDKKDDNNDMDVDI PYCATLATANKIYGSDSIEFHASF LQKIKDDFQTVNFNNANQTKELI NEWVKTMTNGKINSLLTSPLSIN
TRMTVVSAVHFKAMWKYPFSK SEQ ID VAC_DPP2 HLTYTDKFYISKNIVTSVDMMVG Deleção AEY74923.1 NO:181 0_229 TENNLQYVHINELFGGFSIIDIPY Externa
EGNSSMVIILPDDIEGIYNIEKNIT DEKFKKWCGMLSTKSIDLYMPK FKVEMTEPYNLVPILENLGLTNIF GYYADFSKMCNETITVEKFLHTT FIDVNEEYTEASAVTGVFMTNFA MVYRTKVYINHPFMYMIKDTTG RILFIGKYCYPQ MMIYGLIACLIFVTSSIASPLYIPVI
PPITEDKSFNSVEVLVSLFRDDQ C13L/VAC_ SEQ ID KDYTVTSQFNNYTIDTKDWTIGV Deleção DPP20_23 AEY74924.1 NO:182 LSTPDGLDIPLTNITYWSRFTIGR Externa 0
ALFKSESEDIFQKKMSILGVSIEC KKSSTLLTFLTVRKMTRVFNKFP DMAYYRGDCLKAVYVTMTYKNT KTGETDYTYLSNGGLPAYYRNG VDG
MNLQKLSLAIYLTATCSWCYETC SEQ ID VAC_DPP2 Deleção AEY74925.1 IRKTALYHDIQLEHVEDNKDSVA NO:183 0_231 Externa
SLPYK
MSLESFIITTFNNNSSTNIDNMC SEQ ID VAC_DPP2 HLYVKVCPSSLLFRLFVECCDIN Deleção AEY74926.1 NO:184 0_232 KLVEGTTPLHCYLMNEGFESSV Interna
LKNLLKEYVMTSITQIFNS MISLSFLIHNPLKKWKLKPSISIN GYRSTFTMAFPCAQFRPCHCH
ATKDSLNTVADVRHCLTEYILWV SEQ ID VAC_DPP2 SHRWTHRETAGPLYRLLISFRTD Deleção AEY74927.1 NO:185 0_233 ATELFGGELKDSLPWDNIDNCV Interna
EIIKCFIRNDSMKTAEELRAIIGLC TQSAIVSGRVFNDKYIDILLMLRK ILNENDYLTLLDHIRTAKY MIAFIIFREIGIISTRIAMDCTCILC RLLDEDVTYKKIKLEIETCHNLSK HIDRRGNNALHCYVFNKCDTDI KIVRLLLSRGVERLCRNNEGLTP LGVYSKHRYVKSQIVHLLISSYS NSSNELKSNINDFDLSSDNIDLR LLKYLIVDKRIRPSKNTNYAINSL
GLVDIYVTTPNPRPEVLLWLLKS SEQ ID VAC_DPP2 Deleção AEY74928.1 ECYSTGYVFRTCMYNSDMCKN NO:186 0_234 Interna
SLHYYISSHRESQSLSKDVIKCLI NNNVSIHGRDEGGSLPIQYYWS FSTIDIEIVKLLLIKDVDTCRVYDV SPILEAYYLNKRFRVTPYNVDME IVNLLIERRHTLVDVMRSITSYDS REYNHYIIDNILKRFRQQDESIV QAMLINYLHYGDMVVRCMLDN GQQLSSARLLC MYGLILSRFNNCGYHCYETILID VFDILSKYMDNIDMIDNENKTLLY YAVDVNNIQFAKRLLEYGASVTT
SRSIINTAIQKSSYRRENKTKLVD SEQ ID VAC_DPP2 Deleção AEY74929.1 LLLSYHPTLETMIDAFNRDIRYLY NO:187 0_235 Interna
PEPLFACIRYALILDDDFPSKVKY DISGRHKELKRYRVDINRMKNA YISGVSMFDILFKRSKRHRLRYA
KNPTSNGTKKN SEQ ID VAC_DPP2 AEY74930.1 MSRINITKKIYCSVFLFLFLSYISN Deleção
NO:188 0_236 YEKVNDEMYEMGEMDEIVSIVR Interna
DSMWYIPNVFMDDGKNEGHVS VNNVCHMYFTFFDVDTSSHLFK LVIKHCDLNKRGNSPLHCYTMN TRFNPSVLKILLHHGMRNFDSK DDHYQSITRSLIY MEQTLTRLHTYLQQYTKHSPRV
VYALLSRGYVIILIVHPSWNDCAT SEQ ID VAC_DPP2 GHILIMLLNWHEQKEEGQHLLYL Deleção AEY74931.1 NO:189 0_237 FIKHNQGYTLNILRYLLDRFDIQK Interna
DEYYNTAFQNCNNNVASYIGYDI NLPTKDGIRLGV MLPHTSDTTSTFRLKTVFDLVFE
NRNIIYKADVVNDIIHHRLKVPMI SEQ ID VAC_DPP2 Deleção AEY74932.1 KSLFYKMSEFSPYDDYYVKKILA NO:190 0_238 Interna
YCLLRDESFAELHSKFCLNEDY KSVFMKNISFDKIDSIIVT MHHPMESVKTTNTNAIICVREH
TLPDYANTQCTPCGSGTFTSRN SEQ ID VAC_DPP2 Deleção AEY74933.1 NHLPACLSCNGRRDRVTLLTIES NO:191 0_239 Interna
VNALPDIIVFSKDHPDARHVFPK QNVE MHVPASLQQSSSSCTEEENKH HMGIDVIIKVTKQDQTPTNDKIC QSVTEITESESDPDPEVESEDD
STSVEDVDLPTTYYSIIGGGLRM VAC_DPP2 NFGFTKCPQIKSISESADGNTVN SEQ ID Deleção 0_241 AEY74934.1 ARLSSVSPGQGKDSPAITHEEA NO:192 Interna (43% 5’) LAMIKDCEVSIDIRCSEEEKDSDI
KTHPVLGSNISHKKVSYEDIIGS TIVDTKCVKNLEFSVRIGDMCKE SSELEVKDGFKYVDGSASEGAT DDTSLIDSTKLKACV
MKLFTQNDRYFGLLDSCNHIFCI SEQ ID VAC_DPP1 Deleção AEY74919.1 TCINIWHKTRRETGASDNCPICR NO:193 0_225 Externa
TRFRNITMSKFYKLVN
MHYPKYYINITKINPHLANQFRA SEQ ID VAC_DPP1 Deleção AEY74920.1 WKKRIAGRDYMTNLSKDTGIQQ NO:194 0_226 Externa
SKLYVTVKKIETYMVYIYTTI MDIYDDKGLQTIKLFNNEFDCIR
NDIRELFKHVTDSDSIQLPMEDN SEQ ID VAC_DPP2 SDIIENIRKILYRRLKNVECVDIDN Deleção AEY74921.1 NO:195 0_227 TITFMKYDPNDDNKRTCSNWVP Externa
LTNNYMEYCLVIYLETPICGGKIK LYHPTGNIKSDKDIMFAKTLDFK SKKVLTGRKTIAVLDISVSYNRSI TTIHYNDDVDIDIHTDKNGKELC YCYITIDDHYLVDVETIGVIVNRS GKCLLVNNHLGIGIVKDKRISDS FGDVCMDTIFDFSEARELFSLTN DDNRNIAWDTDKLDDDTDIWTP VTENDYKFLSRLVLYAKSQSDTV FDYYVLTGDTEPPTVFIFKVTRF YFNMPK MLINYLMLLFAAMIIRSFADSGNA
IETTLPEITNATTDIPAIRLCGPEG SEQ ID VAC_DPP2 DGYCLHGDCIHARDIDGMYCRC Deleção AEY74922.1 NO:196 0_228 SHGYTGIRCQHVVLVDYQRSEK Externa
PNTTTSYIPSPGIMLVLVGIIIITCC LLSVYRFTRRTNKLPLQDMVVP MHHPMESVKTTNTNAIICVREH
TLPDYANTQCTPCGSGTFTSRN SEQ ID VAC_DPP2 Deleção AEY74933.1 NHLPACLSCNGRRDRVTLLTIES NO:197 0_239 Interna
VNALPDIIVFSKDHPDARHVFPK QNVE MHVPASLQQSSSSCTEEENKH HMGIDVIIKVTKQDQTPTNDKIC QSVTEITESESDPDPEVESEDD
STSVEDVDLPTTYYSIIGGGLRM VAC_DPP2 NFGFTKCPQIKSISESADGNTVN SEQ ID Deleção 0_241 AEY74934.1 ARLSSVSPGQGKDSPAITHEEA NO:198 Interna (43% 5’) LAMIKDCEVSIDIRCSEEEKDSDI
KTHPVLGSNISHKKVSYEDIIGS TIVDTKCVKNLEFSVRIGDMCKE SSELEVKDGFKYVDGSASEGAT
DDTSLIDSTKLKACV TABELA 40. EXEMPLOS DE PROTEÍNAS CODIFICADAS POR GENES
VACCINIA LISTER EQUIVALENTES ÀQUELES DELETADOS NO VETOR COPMD3P ID de SEQ ID Localizaç Gene Acesso de Sequência de Aminoácidos NO. ão Proteína
MTANFSTHVFSPQHCGCDRLTS
IDDVKQCLTEYIYWSSYAYRNRQ SEQ ID B15R/List1 ABD52695. Deleção
CAGQLYSTLLSFRDDAELVFIDIR NO:200 91 1 Interna
ELVKNMPWDDVKDCTEIIRCYIP DEQKTIREISAIIGLCAYAATYWG GEDHPTSNSLNALFVMLEMLNY VDYNIIFRRMN MSILPVIFLPIFFYSSFVQTFNAP ECIDKGQYFASFMELENEPVILP CPQINTLSSGYNILDILWEKRGA DNDRIIPIDNGSNMLILNPTQSD SGIYICITTNETYCDMMSLNLTIV SVSESNIDLISYPQIVNERSTGE
MVCPNINAFIASNVNADIIWSGH SEQ ID ABD52696. Deleção List192 RRLRNKRLKQRTPGIITIEDVRK NO:201 1 Interna
NDAGYYTCVLEYIYRGKTYNVT RIVKLEVRDKIIPSTMQLPDGIVT SIGSNLTIACRVSLRPPTTDADV FWISNGMYYEEDDGDGNGRIS VANKIYMTDKRRVITSRLNINPV KEEDATTFTCMAFTIPSISKTVTV SIT MSRKFMQVYEYDREQYLDEFIE DRYNDSFITSPEYYSAEKYMCR YTTLNHNCINVRRCALDSKLLHD IITNCKIYNNIELVRATKFVYYLDL IKCNWVSKVGDSVLYPVIFITHT STRNLDKVSVKTYKGVKVKKLN
RCADHAIVINPFVKFKLTLPNKTS SEQ ID B17L/List19 ABD52698. Deleção
HAKVLVTFCKLRTDITQIEAPLSG NO:202 3 1 Interna
NVLVYTFPDINKRIPGYIHVNIEG CIDGMIYINSSKFACVLKLHRSM YRIPPFPIDICSCCSQYTNDDIEI PIHDLIKDVAIFKNKETVYYLKLN NKTIARFTYFNNIDTAITQEHEYV KIALGIVCKLMINNMHSIVGVNH SNTFVNCLLEDNV MTKVIIILGFLIINTNSLSMKCEQ GVSYYNSQELKCCKLCKPGTYS
DHRCDKYSDTICGHCPSDTFTSI SEQ ID crmE/List19 ABD52700. YNRSPWCHSCRGPCGTNRVEV Não NO:203 5 1 TPCTPTTNRICHCDSNSYCLLKA Presente
SDGNCVTCAPKTKCGRGYGKK GEDEMGNTICKKCRKGTYSDIV SDSDQCKPMTR MAMPSLSACSSIEDDFNYGSSV
ASASVHIRMAFLRKVYGILCLQF SEQ ID ABD52701. LLTTATTAVFLYFDCMRTFIQGSP Não L6/List196 NO:204 1 VLILASMFGSIGLIFALTLHRHKH Presente
PLNLYLLCGFTLSESLTLASVVTF YDVHVVMQAFMLTTAAFLALTTY TLQSKRDFSKLGAGLFAALWILIL SGLLGIFVQNETVKLVLSAFGAL VFCGFIIYDTHSLIHKLSPEEYVL ASINLYLDIINLFLHLLQLLEVSNK K MASPCAKFRPCHCHATKDSLNT VADVRHCLTEYILWVSHRWTHR
ESAGSLYRLLISFRTDATELFGG SEQ ID ABD52704. Deleção List197 ELKDSLPWDNCVEIIKCFIRNDS NO:205 1 Interna
MKTAEELRAIIGLCTQSAIVSGR VFNDKYIDILLMLRKILNENDYLT LLDHIRTAKY MEQTLTRLHTYLQQYTKHSPRV
VYALLSRGYVIILIVHPSWNDCAT SEQ ID ABD52706. GHILIMLLNWHEQKEEGQHLLYL Deleção List199C NO:206 1 FIKHNQGYTLNILRYLLDRFDIQK Interna
DEYYNTAFQNCNNNVASYIGYDI NLPTKDGIRLGV
MLPHTSDTTSTFRLKTVFDLVFE SEQ ID Deleção List199D ABL63830.1 NRNIIYKADVVNDIIHHRLKVSLP NO:207 Interna
MIKSLFYKMSLPTTITT MKQYIVLACMCLAAAAMPASLQ QSSSSSSSCTEEENKHHMGIDV IIKVTKQDQTPTNDKICQSVTEIT ESESDPDPEVESEDDSTSVEDV
DPPTTYYSIIGGGLRMNFGFTKC SEQ ID C23L/List2 PQIKSISESADGNTVNARLSSVS Deleção ABL63827.1 NO:208 01 (47% 5’) PGQGKDSPAITHEEALAMIKDCE Interna
VSIDIRCSEEEKDSDIKTHPVLG SNISHKKVSYEDIIGSTIVDTKCV KNLEFSVRIGDMCKESSELEVK DGFKYVDGSASEGATDDTSLID
STKLKACV List198A List198B List199A List199B List200 List194 TABELA 41. ALINHAMENTO DE GENE
[686] Um alinhamento exemplificativo de genes de ortopoxvírus selecionados é mostrado abaixo. Vários genes de 5 cepas de vírus vaccinia, Copenhagen (“cop”), Western Reserver (“WR”), Tian Tan (“Tian”), Wyeth e Lister, se alinham conforme o seguinte: C2L CLUSTAL O(1.2.4) alinhamento de múltiplas sequências cop
MESVIFSINGEIIQVNKEIITASPYNFFKRIQDHHLKDEAIILNGINYHAFESLLDYIRW 60
WR
MESVIFSINGEIIQVNKEIITASPYNFFKRIQDHHLKDEAIILNGINYHAFESLLDYIRW 60 Tian
MESVIFSINGEIIQVNKEIITASPYNFFKRIQDHHLKDEAIILNGINYHAFESLLDYIRW 60 Wyeth
MESVTFSINGEIIQVNKEIITASPYNFFKRIQEHHINDEVIILNGINYHAFESLLDYMR W 60 Lister
MESVIFSINGEIIQVNKEIITASPYNFFKRIQDHHLKDEAIILNGINYHAFESLLDYMR W 60 **** ***************************:**::**.*****************:** cop
KKINITINNVEMILVAAIIIDVPPVVDLCVKTMIHNINSTNCIRMFNFSKRYGIKKLYNA 120
WR
KKINITINNVEMILVAAIIIDVPPVVDLCVKTMIHNINSTNCIRMFNFSKRYGIKKLYNA 120 Tian
KKINITINNVEMILVAAIIIDVPPVVDLCVKTMIHNINSTNCIRMFNFSKQYGIKKLYNA 120 Wyeth
KKINITINNVEMILVAAVIIDVTPVVDLCVKTMIHNINSTNCIRMFNFSKRYGIKKLYNA
Lister
KKINITINNVEMILVAAIIIDVPPVVDLCVKTMIHNINFTNCIRMFNFSKRYGIKKLYNA 120 *****************:**** *************** ***********:********* cop
SMSEIINNITAVTSDPEFGKLSKDELTTILSHENVNVNHEDVTAMILLKWIHKNPND VDI 180
WR
SMSEIINNITAVTSDPEFGKLSKDELTTILSHENVNVNHEDVTAMILLKWIHKNPND VDI 180 Tian
SMSEIINNITAVTSDPEFGKLSKDELTTILSHEDVNVNHEDVTAMILLKWIHKNPND VDI 180 Wyeth
SMSEIINNITAVTSDPEFGKLSKDELTTILSHEDVNVNHEDVTAMILLKWIHKNPND VDI 180 Lister
SMSEIINNITAVTSDPEFGKLSKDELTTILSHEDVNVNHEDVTAMILLKWIHKNPND VDI 180 *********************************:************************** cop
INILHPKFMTNTMRNAISLLGLTISKSTKPVTRNGIKHNIVVIKNSDYISTITHYSPRT E 240
WR
INILHPKFMTNTMRNAISLLGLTISKSTKPVTRNGIKHNIVVIKNSDYISTITHYSPRT E 240 Tian
INILHPKFMTNTMRNAISLLGLTISKSTKPVTRNGIKHNIVVIKNSDYISTITHYSPRT E 240 Wyeth
INILHPKFMTNTMRNAISLLGLTISKSTKPVTRNGIKHNIVVIKNSDYISTITHYSPRT
E 240 Lister
INILHPKFMTNTMRNAISLLGLTISKSTKPVTRNGIKHNIVVIKNSDYISTITHYSPRT E 240 ************************************************************ cop
YWTIVGNTDRQFYNANVLHNCLYIIGGMINNRHVYSVSRVDLETKKWKTVTNMSS LKSEV 300
WR
YWTIVGNTDRQFYNANVLHNCLYIIGGMINNRHVYSVSRVDLETKKWKTVTNMSS LKSEV 300 Tian
YWTIVGNTDRQFYNANVLHNCLYIIGGMINNRHVYSVSRVDLETKKWKTVTNMSS LKSEV 300 Wyeth
YWTIVGNTDRQFYNANVLHNCLYIIGGMINNRHVYSVSRVDLETKKWKTVTNMSS LKSEV 300 Lister
YWTIVGNTDRQFYNANVLHNCLYIIGGMINNRHVYSVSRVDLKTKKWKTVTNMSS LKSEV 300 ******************************************:***************** cop
STCVNDGKLYVIGGLEFSISTGVAEYLKHGTSKWIRLPNLITPRYSGASVFVNDDIY VMG 360
WR
STCVNDGKLYVIGGLEFSISTGVAEYLKHGTSKWIRLPNLITPRYSGASVFVNDDIY VMG 360 Tian
STCVNNGKLYVIGGLEFSISTGVAEYLKHGTSKWIRLPNLITPRYSGASVFVNDDIY VMG 360 Wyeth
STCVNNGKLYVIGGLEFSISTGVAEYLKHGTSKWIRLPNLITPRYSGASVFVNDDIY
VMG 360 Lister
STCVNDGKLYVIGGLEFSISTGVAEYLKHGTSKWIRLPNLITPRYSGASVFVNDDIY VMG 360 *****:****************************************************** cop
GVYTTYEKYVVLNDVECFTKNRWIKKSPMPRHHSIVYAVEYDGDIYVITGITHETR NYLY 420
WR
GVYTTYEKYVVLNDVECFTKNRWIKKSPMPRHHSIVYAVEYDGDIYVITGITHETR NYLY 420 Tian
GVYTTYEKYVVLNDVECFTKNRWIKKSPMPRHHSIVYAVEYDGDIYVITGITHETR NYLY 420 Wyeth
GVYTTYEKYVVLNDVECFTKNRWIKKSPMPRHHSIVYAVEYDGDIYAITGITHETR NYLY 420 Lister
GVYTTYEKYVVLNDVECFTKNRWIKKSPMPRHHSIVYAVEYDGDIYVITGITHETR NYLY 420 **********************************************.************* cop
KYIVKEDKWIELYMYFNHVGKMFVCSCGDYILIIADAKYEYYPKSNTWNLFDMSTR NIEY 480
WR
KYIVKEDKWIELYMYFNHVGKMFVCSCGDYILIIADAKYEYYPKSNTWNLFDMSTR NIEY 480 Tian
KYIVKEDKWIELYMYFNHVGKMFVCSCGDYILIIADAKYEYYPKSNTWNLFDMSTR NIEY 480 Wyeth
KYIVKEDKWIELYMYFNHVGKMFVCSCGDYILIIADAKYEYYPKSNTWNLFDMSTR
NIEY 480 Lister
KYIVKEDKWIELYMYFNHVGKMFVCSCGDYILIIADAKYEYYPKSNTWNLFDMSTR NIEY 480 ************************************************************ cop YDMFTKDETPKCNVTHKSLPSFLSNCEKQFLQ 512 (SEQ ID NO: 219) WR YDMFTKDETPKCNVTHKSLPSFLSNCEKQFLQ 512 (SEQ ID NO: 41) Tian YDMFTKDETPKCNVTHKSLPSFLSNCEKQFLQ 512 (SEQ ID NO: 58) Wyeth YDMFTKDET------HKSLPSFLSNCEKQFLQ 506 (SEQ ID NO: 74) Lister YDMFTKDETPKCNVTHKSLPSFLSNCEKQFLQ 512 (SEQ ID NO: 92) ********* ***************** C1L CLUSTAL O(1.2.4) alinhamento de múltiplas sequências Cop MVKNNKI----- SNSCRMIMSTNPNNILMRHLKNLTDDEFKCIIHRSSDFLYLSDSDYTS 55
WR
MVKNNKIQKNKISNSCRMIMSTDPNNILMRHLKNLTDDEFKCIIHRSSDFLYLSDS DYTS 60 Tian MVKNNKI----- SNSCRMIMSTDPNNILMRHLKNLTDDEFKCIIHRSSDFLYLSDSDYTS 55 Wyeth MVKNNKI----- SNSCRMIMSTNPNNILMRHLKNLTDDEFKCIIHRSSDFLYLSDRDYTS 55 Lister MVKNNKI----- SNSCRMIMSTNPNNILMRHLKNLTDDEFKCIIHRSSDFLYLSDSDYTS 55 ******* **********:******************************** **** Cop
ITKETLVSEIVEEYPDDCNKILAIIFLVLDKDIDVDIETKLKPKPAVRFAILDKMTEDIK 115
WR
ITKETLVSEIVEEYPDDCNKILAIIFLVLDKDIDVDIKTKLKPKPAVRFAILDKMTEDIK 120 Tian
ITKETLVSEIVEEYPDDCNKILAIIFLVLDKDIDVDIKTKLKPKPAVRFAILDKMTEDIK 115 Wyeth
ITKETLVSEIVEEYPDDCNKILAIIFLVLDKDIDVDIKTKLKPKPAVRFAILDKMTEDIK 115 Lister
ITKETLVSEIVEEYPDDCNKILAIIFLVLDKDIDVDIETKLKPKPAVRFAILDKMTADIK 115 *************************************:****************** *** Cop
LTDLVRHYFRYIEQDIPLGPLFKKIDSYRTRAINKYSKELGLATEYFNKYGHLMFYT LPI 175
WR
LTDLVRHYFRYIEQDIPLGPLFKKIDSYRTRAINKYSKELGLATEYFNKYGHLMFYT LPI 180 Tian
LTDLVRHYFRYIEQDIPLGPLFKKIDSYRTRAINKYSKELGLATEYFNKYGHLMFYT LPI 175 Wyeth
LTDLVRHYFRYIEQDIPLGPLFKKIDSYRTRAINKYSKELGLATEYFNKYGHLMFYT LPI 175 Lister
LTDLVRHYFRYIEQDIPLGPLFKKIDSYRTRAINKYSKELGLATEYFNKYGHLMFYT LPI 175 ************************************************************ Cop PYNRFFCRNSIGFLAVLSPTIGHVKAFYKFIEYVSIDDRRKFKKELMSK 224 (SEQ ID NO: 24)
WR PYNRFFCRNSIGFLAVLSPTIGHVKAFYKFIEYVSIDDRRKFKKELMSK 229 (SEQ ID NO: 42) Tian PYNRFFCRNSIGFLAVLSPTIGHVKAFYKFIEYVSIDDRRKFKKELMSK 224 (SEQ ID NO: 59) Wyeth
PYNRFFCRNSIGFLAVLSPTIGHVKAFYKFIEYVSIDDRRKFKKELMSK 224 (SEQ ID NO: 75) Lister PYNRFFCRNSIGFLAVLSPTIGHVKAFYKFIEYVSIDDRRKFKKELMSK 224 (SEQ ID NO: 93) ************************************************* N1L CLUSTAL O(1.2.4) alinhamento de múltiplas sequências Cop
MRTLLIRYILWRNDNDQTYYNDDFKKLMLLDELVDDGDVCTLIKNMRMTLSDGPL LDRLN 60
WR
MRTLLIRYILWRNDNDQTYYNDNFKKLMLLDELVDDGDVCTLIKNMRMTLSDGPL LDRLN 60 Tian
MRTLLIRYILWRNDNDQTYYNDDFKKLMLLDELVDDGDVCTLIKNMRMTLSDGPL LDRLN 60 Wyeth
MRTLLIRYILWRNDNDQTYYNDDFKKLMLLDELVDDGDVCTLIKNMRMTLSDGPL LDRLN 60 Lister
MRTLLIRYILWRNDNDQTYYNDDFKKLMLLDELVDDGDVCTLIKNMRMTLSDGPL LDRLN 60 **********************:************************************* Cop
QPVNNIEDAKRMIAISAKVARDIGERSEIRWEESFTILFRMIETYFDDLMIDLYGEK 117
WR
QPVNNIEDAKRMIAISAKVARDIGERSEIRWEESFTILFRMIETYFDDLMIDLYGEK 117 Tian
QPVNNIEDAKRMIAISAKVARDIGERSEIRWEESFTILFRMIETYFDDLMIDLYGEK
Wyeth
QPVNNIEDAKRMIAISAKVARDIGERSEIRWEESFTILFRMIETYFDDLMIDLYGEK 117 Lister
QPVNNIEDAKRMIAISAKVARDIGERSEIRWEESFTILFRMIETYFDDLMIDLYGEK 117 ********************************************************* Cop (SEQ ID NO: 25) WR (SEQ ID NO: 43) Tian (SEQ ID NO: 60) Wyeth (SEQ ID NO: 76) Lister (SEQ ID NO: 94) N2L CLUSTAL O(1.2.4) alinhamento de múltiplas sequências Cop
MTSSAMDNNEPKVLEMVYDATILPEGSSMDPNIMDCINRHINMCIQRTYSSSIIAIL NRF 60
WR
MTSSAMDNNEPKVLEMVYDATILPEGSSMDPNIMDCINRHINMCIQRTYSSSIIAIL DRF 60 Tian
MTSSAMDNNEPKVLEMVYDATILPEGSSMDPYIMDCINRHINMCIQRTYSSSIIAIL DRF 60 Wyeth
MTSSAMDNNEPKVLEMVYDATILPEGSSMDPNIIDCINRHINMCIQRTYSSSIIAILD RF 60 Lister
MTSSAMDNNEPKVLEMVYDATILPEGSSMDPNIMDCINRHINMCIQRTYSSSIIAIL DRF 60 ******************************* *:***********************:** Cop
LTMNKDELNNTQCHIIKEFMTYEQMAIDHYGEYVNAILYQIRKRPNQHHTIDLFKKI KRT 120
WR
LMMNKDELNNTQCHIIKEFMTYEQMAIDHYGGYVNAILYQIRKRPNQHHTIDLFKR IKRT 120 Tian LMMNKDELNNTQCHIIKNL----------------------------------------- 79 Wyeth
LTMNKDELNNTQCHIIKEFMTYEQMAIDHYGGYVNAILYQIRKRPNQHHTIDLFKKI KRT 120 Lister
LTMNKDELNNTQCHIIKEFMTYEQMAIDHYGEYVNAILYQIRKRPNQHHTIDLFKKI KRT 120 * ***************:: Cop
PYDTFKVDPVEFVKKVIGFVSILNKYKPVYSYVLYENVLYDEFKCFINYVETKYF 175
WR
RYDTFKVDPVEFVKKVIGFVSILNKYKPVYSYVLYENVLYDEFKCFINYVETKYF 175 Tian ------------------------------------------------------- Wyeth
RYDTFKVDPVEFVKKVIGFVSILNKYKPVYSYVLYENVLYDEFKCFIDYVETKYF 175 Lister
RYDTFKVDPVEFVKKVIGFVSILNKYKPVYSYVLYENVLYDEFKCFIDYVETKYF 175 Cop (SEQ ID NO: 26) WR (SEQ ID NO: 44) Tian (SEQ ID NO: 61) Wyeth (SEQ ID NO: 77) Lister (SEQ ID NO: 95) M1L
CLUSTAL O(1.2.4) alinhamento de múltiplas sequências Cop
MIFVIESKLLQIYRNRNRNINFYTTMDNIMSAEYYLSLYAKYNSKNLDVFRNMLQAI EPS 60
WR
MIFVIESKLLQIYRNRNRNINFYTTMDNIMSAEYYLSLYAKYNSKNLDVFRNMLQAI EPS 60 Tian
MIFVIESKLLQIYRNRNRNINFYTTMDNIMSAEYYLSLYAKYNSKNLDVFRNMLQAI EPS 60 Wyeth
MIFVIESKLLQIYRNRNRNINFYTTMDNIMSAEYYLSLYAKYNSKNLDVFRNMLQAI EPS 60 Lister MIFVIESKLLQIYRN-- RNINFYTTMDNIMSAEYYLSLYAKYNSKNLDVFRNMLQAIEPS 58 *************** ******************************************* Cop
GNNYHILHAYCGIKGLDERFVEELLHRGYSPNETDDDGNYPLHIASKINNNRIVAM LLTH 120
WR
GNNYHILHAYCGIKGLDERFVEELLHRGYSPNETDDDGNYPLHIASKINNNRIVAM LLTH 120 Tian
GNNYHILHAYCGIKGLDERFVEELLHRGYSPNETDDDGNYPLHIASKINNNRIVAM LLTH 120 Wyeth
GNNYHILHAYCGIKGLDERFVEELLHRGYSPNETDDDGNYPLHIASKINNNRIVAM LLTH 120 Lister
GNNYHILHAYCGIKGLDERFVEELLHRGYSPNETDDDGNYPLHIASKINNNRIVAM LLTH 118 ************************************************************
Cop
GADPNACDKHNKTPLYYLSGTDDEVIERINLLVQYGAKINNSVDEEGCGPLLACT DPSER 180
WR
GADPNACDKHNKTPLYYLSGTDDEVIERINLLVQYGAKINNSVDEEGCGPLLACT DPSER 180 Tian
GADPNACDKHNKTPLYYLSGTDDEVIERINLLVQYGAKINNSVDEEGCGPLLACT DPSER 180 Wyeth GADPNACDKHNKTPLYYLSGTDDEVIERINLLVQYGAKINN------------ ------- 161 Lister
GADPNACDKQHKTPLYYLSGTDDEVIERINLLVQYGAKINNSVDEEGCGPLLACT DPSER 178 *********::****************************** Cop
VFKKIMSIGFEARIVDKFGKNHIHRHLMSDNPKASTISWMMKLGISPSKPDHDGNT PLHI 240
WR
VFKKIMSIGFEARIVDKFGKNHIHRHLMSDNPKASTISWMMKLGISPSKPDHDGNT PLHI 240 Tian
VFKKIMSIGFEARIVDKFGKNHIHRHLMSDNPKASTISWMMKLGISPSKPDHDGNT PLHI 240 Wyeth ------------------------------------------------------------ Lister
VFKKIMSIGFEARIVDKFGKNHIHRHLMSDNPKASTISWMMKLGISPSKPDHDGNT PLHI 238 Cop
VCSKTVKNVDIIDLLLPSTDVNKQNKFGDSPLTLLIKTLSPAHLINKLLSTSNVITDQ TV 300
WR
VCSKTVKNVDIIDLLLPSTDVNKQNKFGDSPLTLLIKTLSPAHLINKLLSTSNVITDQ TV 300 Tian
VCSKTVKNVDIIDLLLPSTDVNKQNKFGDSPLTLLIKTLSPAHLINKLLSTSNVITDQ TV 300 Wyeth ------------------------------------------------------------ Lister
VCSKTVKNVDIIDLLLPSTDVNKQNKFGDSPLTLLIKTLSPAHLINKLLSTSNVITDQ TV 298 Cop
NICIFYDRDDVLEIINDKGKQYDSTDFKMAVEVGSIRCVKYLLDNDIICEDAMYYAV LSE 360
WR
NICIFYDRDDVLEIINDKGKQYDSTDFKMAVEVGSIRCVKYLLDNDIICEDAMYYAV LSE 360 Tian
NICIFYDRDDVLEIINDKGKQYDSTDFKMAVEVGSIRCVKYLLDNDIICEDAMYYAV LSE 360 Wyeth ------------------------------------------------------------ Lister
NICIFYDRDDVLEIINDKGKQYDSTDFKMAVEVGSIRCVKYLLDNDIICEDAMYYAV LSE 358 Cop
YETMVDYLLFNHFSVDSVVNGHTCMSECVRLNNPVILSKLMLHNPTSETMYLTM KAIEKD 420
WR
YETMVDYLLFNHFSVDFVVNGHTCMSECVRLNNPVILSKLMLHNPTSETMYLTM KAIEKD 420 Tian
YETMVDYLLFNHFSVDFVVNGHTCMSECVRLNNPVILSKLMLHNLTSETMYLTMK AIEKD 420 Wyeth ------------------------------------------------------------
Lister
YETMVDYLLFNHFSVDSVVNGHTCMSECVRLNNPVILSKLMLHNPTSETMYLTM KAIEKD 418 Cop KLDKSIIIPFIAYFVLMHPDFCKNRRYFTSYKRFVTDYVHEGVSYEVFDDYF 472
WR RLDKSIIIPFIAYFVLMHPDFCKNRRYFTSYKRFVTDYVHEGVSYEVFDDYF 472 Tian RLDKSIIIPFIAYFVLMHPDFCKNRRYFTSYKRFVTDYVHEGVSYEVFDDYF 472 Wyeth ---------------------------------------------------- Lister RLDKSIIIPFIAYFVLMHPDFCKNRRYFTSYKRFVTDYVHEGVSYEVFDDYF 470 Cop (SEQ ID NO: 27) WR (SEQ ID NO: 45) Tian (SEQ ID NO: 62) Wyeth (SEQ ID NO: 80) Lister (SEQ ID NO: 96) M2L CLUSTAL O(1.2.4) alinhamento de múltiplas sequências Cop
MVYKLVLLFCIASLGYSVEYKNTICPPRQDYRYWYFAAELTIGVNYDINSTIIGECH MSE 60
WR
MVYKLVLLFCIASLGYSVEYKNTICPPRQDYRYWYFAAELTIGVNYDINSTIIGECH MSE 60 Tian ------------------------MSSSTRLPVLVLAAELTIGVNYDINSTIIGECHMSE 36 Wyeth
MVYKLVLLFCIASLGYSVEYKNTICPPRQDYRYWYFAAELTIGVNYDINSTIIGECH MSE 60 Lister
MVYKLVLLFCIASLGYSVEYKNTICPPRQDYRYWYFAAELTIGVNYDINSTIIGECH
MSE 60 :************************ Cop
SYIDRNANIVLTGYGLEINMTIMDTDQRFVAAAEGVGKDNKLSVLLFTTQRLDKVH HNIS 120
WR
SYIDRNANIVLTGYGLEINMTIMDTDQRFVAAAEGVGKDNKLSVLLFTTQRLDKVH HNIS 120 Tian
SYIDRNANIVLTGYGLEINMTIMDTDQRFVAAAEGVGKDNKLSVLLFTTQRLDKVH HNIS 96 Wyeth
SYIDRNANIVLTGYGLEINMTIMDTDQRFVAAAEGVGKDNKLSVLLFTTQRLDKVH HNIS 120 Lister
SYIDRNANIVLTGYGLEINMTIMDTDQRFVAAAEGVGKDNKLSVLLFTTQRLDKVH HNIS 120 ************************************************************ Cop
VTITCMEMNCGTTKYDSDLPESIHKSSSCDITINGSCVTCVNLETDPTKINPHYLH PKDK 180
WR
VTITCMEMNCGTTKYDSDLPESIHKSSSCDITINGSCVTCVNLETDPTKINPHYLH PKDK 180 Tian
VTITCMEMNCGTTKYDSDLPESIHKSSSCDITINGSCVTCVNLETDPTKINPHYLH PKDK 156 Wyeth
VTITCMEMNCGTTKYDSDLPESIHKSSSCDITINGSCVTCVNLETDPTKINPHYLH PKDK 180 Lister
VTITCMEMNCGTTKYDSDLPESIHKSSSCDITINGSCVTCVNLETDPTKINPHYLH
PKDK 180 ************************************************************ Cop YLYHNSEYGMRGSYGVTFIDELNQCLLDIKELSYDICYRE 220 (SEQ ID NO: 28) WR YLYHNSEYSMRGSYGVTFIDELNQCLLDIKELSYDICYRE 220 (SEQ ID NO: 46) Tian YLYHNSEYGMRGSYGVTFIDELNQCLLDIKELSYDICYRE 196 (SEQ ID NO: 63) Wyeth YLYHNSEYGMRGSYGVTFIDELNQCLLDIKELSYDICYRE 220 (SEQ ID NO: 81) Lister YLYHNSEYGMRGSYGVTFIDELNQCLLDIKELSYDICYRE 220 (SEQ ID NO: 97) ********.******************************* K1L CLUSTAL O(1.2.4) alinhamento de múltiplas sequências Cop
MDLSRINTWKSKQLKSFLSSKDTFKADVHGHSALYYAIADNNVRLVCTLLNAGAL KNLLE 60
WR
MDLSRINTWKSKQLKSFLSSKDAFKADVHGHSALYYAIADNNVRLVCTLLNAGAL KNLLE 60 Tian
MDLSRINTWKSKQLKSFLSSKDTFKADVHGHSALYYAIADNNVRLVCTLLNSGAL KNLLE 60 Wyeth
MDLSRINTWKSKQLKSFLSSKDTFKADVHGHSALYYAIADNNVRLVCTLLNAGAL KNLLE 60 Lister
MDLSRINTWKSKQLKSFLSSKDAFKADINGHSALYYAIADNNVRLVCTLLNAGALK NLLE 60 **********************:****::**********************:******** Cop
NEFPLHQAATLEDTKIVKILLFSGMDDSQFDDKGNTALYYAVDSGNMQTVKLFVK KNWRL 120
WR
NEFPLHQAATLEDTKIVKILLFSGLDDSQFDDKGNTALYYAVDSGNMQTVKLFVKK NWRL 120 Tian
NEFPLHQAATLEDTKIVKILLFSGLDDSQFDDKGNTALYYAVDSGNMQTVKLFVKK NWRL 120 Wyeth
NEFPLHQAATLEDTKIVKILLFSGLDDSQFDDKGNTALYYAVDSGNMQTVKLFVKK NWRL 120 Lister
NEFPLHQAATLEDTKIVKILLFSGLDDSQFDDKGNTALYYAVDSGNMQTVKLFVKK NWRL 120 ************************:*********************************** Cop
MFYGKTGWKTSFYHAVMLNDVSIVSYFLSEIPSTFDLAILLSCIHTTIKNGHVDMMI LLL 180
WR
MFYGKTGWKTSFYHAVMLNDVSIVSYFLSEIPSTFDLAILLSCIHITIKNGHVDMMIL LL 180 Tian
MFYGKTGWKTSFYHAVMLNDVSIVSYFLSEIPSTFDLAILLSCIHITIKNGHVDMMIL LL 180 Wyeth
MFYGKTGWKTSFYHAVMLNDVSIVSYFLSEIPSTFDLAILLSCIHITIKNGHVDMMIL LL 180 Lister
MFYGKTGWKTSFYHAVMLNDVSIVSYFLSEIPSTFDLAILLSCIHITIKNGHVDMMIL LL 180 ********************************************* ************** Cop
DYMTSTNTNNSLLFIPDIKLAIDNKDIEMLQALFKYDINIYSVNLENVLLDDAEITKMI I 240
WR
DYMTSTNTNNSLLFIPDIKLAIDNKDIEMLQALFKYDINIYSANLENVLLDDAEIAKMI I 240 Tian DYMTVDKHQ--------------------------------------------------- 189 Wyeth
DYMTSTNTNNSLLFIPDIKLAIDNKDIEMLQALFKYDINIYSANLENVLLDDAEIAKMI I 240 Lister
DYMTSTNTNNSLLFIPDIKLAIDNKDIEMLQALFKYDINIYSANLENVLLDDAEIAKMI I 240 **** : : Cop EKHVEYKSDSYTKDLDIVKNNKLDEIISKNKELRLMYVNCVKKN 284 (SEQ ID NO: 29) WR EKHVEYKSDSYTKDLDIVKNNKLDEIISKNKELRLMYVNCVKKN 284 (SEQ ID NO: 47) Tian -------------------------------------------- (SEQ ID NO: 65) Wyeth EKHVEYKSDSYTKDLDIVKNNKLDEIISKNKELRLMYVNCVKKN 284 (SEQ ID NO: 82) Lister EKHVEYKSDSYTKDLDIVKNNKLDEIISKNKELKLMYVNCVKKN 284 (SEQ ID NO: 98) K2L CLUSTAL O(1.2.4) alinhamento de múltiplas sequências Cop
MIALLILSLTCSVSTYRLQGFTNAGIVAYKNIQDDNIVFSPFGYSFSMFMSLLPASG NTR 60
WR
MIALLILSLTCSVSTYRLQGFTNAGIVAYKNIQDDNIVFSPFGYSFSMFMSLLPASG NTR 60 Tian
MIALLILSLACSASAYRLQGFTNAGIVAYKNIQDDNIVFSPFGYSFSMFMSLLPASG
NTR 60 Wyeth
MIALLILSLTCSVSTYRLQGFTNAGIVAYKNIQDDNIVFSPFGYSFSMFMSLLPASG NTR 60 Lister ------------------------------------------------------------ Cop
IELLKTMDLRKRDLGPAFTELISGLAKLKTSKYTYTDLTYQSFVDNTVCIKPLYYQQ YHR 120
WR
IELLKTMDLRKRDLGPAFTELISGLAKLKTSKYTYTDLTYQSFVDNTVCIKPSYYQQ YHR 120 Tian
IELLKTMDLRKRDLGPAFTELISGLAKLKTSKYTYTDLTYQSFVDNTVCIKPSYYQQ YHR 120 Wyeth
IELLKTMDLRKRDLGPAFTELISGLAKLKTSKYTYTDLTYQSFVDNTVCIKPSYYQQ YHR 120 Lister
IELLKTMDLRKRDLGPAFTELISGLAKLKTSKYTYTDLTYQSFVDNTVCIKPSYYQQ YHR 60 **************************************************** ******* Cop
FGLYRLNFRRDAVNKINSIVERRSGMSNVVDSNMLDNNTLWAIINTIYFKGTWQYP FDIT 180
WR
FGLYRLNFRRDAVNKINSIVERRSGMSNVVDSNMLDNNTLWAIINTIYFKGIWQYP FDIT 180 Tian
FGLYRLNFRRDAVNKINSIVERRSGMSNVVDSNMLDNNTLWAIINTIYFKGTWQYP FDIT 180 Wyeth -----
LNFRRDAVNKINSIVERRSGMSNVVDSNMLDNNTLWAIINTIYFKGIWQYPFDIT
Lister
FGLYRLNFRRDAVNKINSIVERRSGMSNVVDSNMLDNNTLWAIINTIYFKGIWQYP FDIT 120 ********************************************** ******** Cop
KTRNASFTNKYGTKTVPMMNVVTKLQGNTITIDDEEYDMVRLPYKDANISMYLAI GDNMT 240
WR
KTRNASFTNKYGTKTVPMMNVVTKLQGNTITIDDEEYDMVRLPYKDANISMYLAI GDNMT 240 Tian
KTRNASFTNKYGTKTVPMMNVVTKLQGNTITIDDEEYDMVRLPYKDANISMYLAI GDNMT 240 Wyeth
KTRNASFTNKYGTKTVPMMNVVTKLQGNTITIDDKEYDMVRLPYKDANISMYLAI GDNMT 235 Lister
KTRNASFTNKYGTKTVPMMNVVTKLQGNTITIDDEEYDMVRLPYKDANISMYLAI GDNMT 180 **********************************:************************* Cop
HFTDSITAAKLDYWSFQLGNKVYNLKLPKFSIENKRDIKSIAEMMAPSMFNPDNAS FKHM 300
WR
HFTDSITAAKLDYWSFQLGNKVYNLKLPKFSIENKRDIKSIAEMMAPSMFNPDNAS FKHM 300 Tian HFTDSITAA- KDYWSFQLGNKVYNLKLPKFSIENKRDIKSIAEMMAPSMFNPDNASFKHM 299 Wyeth
HFTDSITAAKLDYWSFQLGNKVYNLKLPKFSIENKRDIKSIAEMMAPSMFNPDNAS FKHM 295
Lister
HFTDSITAAKLDYWSSQLGNKVYNLKLPKFSIENKRDIKSIAEMMAPSMFNPDNAS FKHM 240 ********* **** ******************************************** Cop
TRDPLYIYKMFQNAKIDVDEQGTVAEASTIMVATARSSPEKLEFNTPFVFIIRHDITG FI 360
WR
TRDPLYIYKMFQNAKIDVDEQGTVAEASTIMVATARSSPEKLEFNTPFVFIIRHDITG FI 360 Tian
TRDPLYIYKMFQNAKIDVDEQGTVAEASTIMVATARSSPEELEFNTPFVFIIRHDITG FI 359 Wyeth
TRDPLYIYKMFQNAKIDVDEQGTVAEASTIMVATARSSPEKLEFNTPFVFIIRHDITG FI 355 Lister
TRDPLYIYKMFQNAKIDVDEQGTVAEASTIMVATARSSPEKLEFNTPFVFIIRHDITG FI 300 ****************************************:******************* Cop LFMGKVESP 369 (SEQ ID NO: 30) WR LFMGKVESP 369 (SEQ ID NO: 48) Tian LFMGKVESP 368 (SEQ ID NO: 66) Wyeth LFMGKVESP 364 (SEQ ID NO: 83) Lister LFMGKVESP 309 (SEQ ID NO: 547) *********
K ORF A CLUSTAL O(1.2.4) alinhamento de múltiplas sequências Cop
MGHIITYCQVHTNISILIRKAHHIIFFVIDCDCISLQFSNYVHHGNRFRTVLISKTSIAC 60 Tian
MGHIITYCQVHTNISILIRKAYHIIFFVIDCDCISLQFSNYVHHGNRFRTVLISKTSIAC 60 *********************:************************************** Cop FSDIKRILPCTFKIYSINDCP 81 (SEQ ID NO: 31) Tian FSDIKRILPCTFKIYSINDCP 81 (SEQ ID NO: 67) ********************* K3L CLUSTAL O(1.2.4) alinhamento de múltiplas sequências Cop
MLAFCYSLPNAGDVIKGRVYEKDYALYIYLFDYPHSEAILAESVKMHMDRYVEYR DKLVG 60
WR
MLAFCYSLPNAGDVIKGRVYEKDYALYIYLFDYPHFEAILAESVKMHMDRYVEYR DKLVG 60 Tian
MLAFCYSLPNAGDVIKGRVYEKDYALYIYLFDYPHSEAILAESVKMHMDRYVEYR DKLVG 60 Wyeth
MLAFCYSLPNAGDVIKGRVYENDYALYIYLFDYPHFEAILAESVKMHMDRYVEYR DKLVG 60 Lister
MLAFCYSLPNAGDVIKGRVYENDYALYIYLFDYPHSEAILAESVKMHMDRYVEYR DKLVG 60 *********************:************* ************************ Cop KTVKVKVIRVDYTKGYIDVNYKRMCRHQ 88 (SEQ ID NO: 33) WR KTVKVKVIRVDYTKGYIDVNYKRMCRHQ 88 (SEQ ID NO: 49) Tian KTVKVKVIRVDYTKGYIDVNYKRMCRHQ 88 (SEQ ID NO: 68) Wyeth KTVKVKVIRVDYTKGYIDVNYKRMCRHQ 88 (SEQ ID NO: 84) Lister KTVKVKVIRVDYTKGYIDVNYKRMCRHQ 88 (SEQ ID NO: 100) **************************** K4L CLUSTAL O(1.2.4) alinhamento de múltiplas sequências
Cop
MNPDNTIAVITETIPIGMQFDKVYLSTFNMWREILSNTTKTLDISSFYWSLSDEVGT NFG 60
WR
MNPDNTIAVITETIPIGMQFDKVYLSTFNMWREILSNTTKTLDISSFYWSLSDEVGT NFG 60 Wyeth
MNPDNTIAVITETIPIGMQFDKVYLSTFNMWREILSNTTKTLDISSFYWSLSDEVGT NFG 60 Lister
MNPDNTIAVITETIPIGMQFDKVYLSTFNMWREILSNTTKTLDISSFYWSLSDEVGT NFG 60 ************************************************************ Cop
TIILNEIVQLPKRGVRVRVAVNKSNKPLKDVERLQMAGVEVRYIDITNILGGVLHTK FWI 120
WR
TIILNKIVQLPKRGVRVRVAVNKSNKPLKDVERLQMAGVEVRYIDITNILGGVLHTK FWI 120 Wyeth
TIILNEIVQLPKRGVRVRVAVNKSNKPLKDVERLQMAGVEVRYIDITNILGGVLHTK FWI 120 Lister
TIILNEIVQLPKRGVRVRVAVNKSNKPLKDVERLQMAGVEVRYIDITNILGGVLHTK FWI 120 *****:****************************************************** Cop
SDNTHIYLGSANMDWRSLTQVKELGIAIFNNRNLAADLTQIFEVYWYLGVNNLPY NWKNF 180
WR
SDNTHIYLGSANMDWRSLTQVKELGIAIFNNRNLAADLTQIFEVYWYLGVNNLPY NWKNF 180
Wyeth
SDNTHIYLGSANMDWRSLTQVKELGIAIFNNRNLAADLTQIFEVYWYLGVNNLPY NWKNF 180 Lister
SDNTHIYLGSANMDWRSLTQVKELGIAIFNNRNLAADLTQIFEVYWYLGVNNLPY NWKNF 180 ************************************************************ Cop
YPSYYNTDHPLSINVSGVPHSVFIASAPQQLCTMERTNDLTALLSCIRNASKFVYV SVMN 240
WR
YPSYYNTDHPLSINVSGVPHSVFIASAPQQLCTMERTNDLTALLSCIRNASKFVYV SVMN 240 Wyeth
YPSYYNTDHPLSINVSGVPHSVFIASAPQQLCTMERTNDLTALLSCIRNASKFVYV SVMN 240 Lister
YPSYYNTDHPLSINVSGVPHSVFIASAPQQLCTMERTNDLTALLSCIRNASKFVYV SVMN 240 ************************************************************ Cop
FIPIIYSKAGKILFWPYIEDELRRSAIDRQVSVKLLISCWQRSSFIMRNFLRSIAMLK SK 300
WR
FIPIIYSKAGNILFWPYIEDELRRAAIDRQVSVKLLISCWQRSSFIMRNFLRSIAMLK SK 300 Wyeth
FIPIIYSKAGKILFWPYIEDELRRSAIDRQVSVKLLISCWQRSSFIMRNFLRSIAMLK SK 300 Lister
FIPIIYSKAGKILFWPYIEDELRRSAIDRQVSVKLLISCWQRSSFIMRNFLRSIAMLK SK 300
**********:*************:*********************************** Cop
NIDIEVKLFIVPDADPPIPYSRVNHAKYMVTDKTAYIGTSNWTGNYFTDTCGASINI TPD 360
WR
NINIEVKLFIVPDADPPIPYSRVNHAKYMVTDKTAYIGTSNWTGNYFTDTCGASINI TPD 360 Wyeth
NINIEVKLFIVPDADPPIPYSRVNHAKYMVTDKTAYIGTSNWTGNYFTDTCGASINI TPD 360 Lister
NINIEVKLFIVPDADPPIPYSRVNHAKYMVTDKTAYIGTSNWTGNYFTDTCGASINI TPD 360 **:********************************************************* Cop
DGLGLRQQLEDIFMRDWNSKYSYELYDTSPTKRCKLLKNMKQCTNDIYCDEIQP EKEIPE 420
WR
DGLGLRQQLEDIFMRDWNSKYSYELYDTSPTKRCRLLKNMKQCTNDIYCDEIQP EKEIPE 420 Wyeth
DGLGLRQQLEDIFMRDWNSKYSYELYDTSPTKRCKLLKNMKQCTNDIYCDEIQP EKEIPE 420 Lister
DGLGLRQQLEDIFMRDWNSKYSYELYDTSPTKRCKLLKNMKQCTNDIYCDEIQP EKEIPE 420 **********************************:************************* Cop YSLE 424 (SEQ ID NO: 34) WR YSLE 424 (SEQ ID NO: 50) Wyeth YSLE 424 (SEQ ID NO: 85) Lister YSLE 424 (SEQ ID NO: 101) ****
K5L CLUSTAL O(1.2.4) alinhamento de múltiplas sequências Cop ------------- MGATISILASYDNPNLFTAMILMSPLVNADAVSRLNLLAAKLMGTIT 47
WR
MTLVQHVVTIKSTYWVIPWELASYDNPNLFTAMILMSPLVNADAVSKLNLLAAKLM GTIT 60 Tian
MTLVQHVVTIKSTYWVIPWELASYDNPNLFTAMILMSPLVNADAVSKLNLLAAKLM GTIT 60 Wyeth ------------- MGATISILASYDNPNLFTAMILMSPLVNADAVSKLNLLAAKLMGTIT 47 Lister --------- MGHSMGATISILASYDNPNLFTAMILMSPLVNADAVSRLNLLAAKLMGTIT 51 . **************************:************* Cop
PNAPVGKLCPESVSRDMDKVYKYQYDPLINHEKIKAGFASQVLKATNKVRKIISKI NTPR 107
WR
LNAPVGKLCPESVSRDMDKVYKYQYDPLINHEKIKAGFASQVLKATNKVRKIISKIN TPR 120 Tian
LNAPVGKLCPESVSRDMDKVYKYQYDPLINHEKIKAGFASQVLKATNKVRKIISKIN TPR 120 Wyeth
PNAPVGKLCPESVSRDMDKVYKYQYDPLINHEKIKAGFASQVLKATNKVRKIISKI NTPP 107 Lister
PNAPVGKLCPESVSRDMDKVYKYQYDPLINHEKIKAGFASQVLKATNKVRKIISKI NTPP 111 ********************************************************** Cop LSYSREQTMRL-----VMFQVHIISCNMQIVIE--------------------------- 135
WR LSYSREQTIRL-----AMF----------------------------------------- 134 Tian LSYSREQTIRL-----AMF----------------------------------------- 134 Wyeth
TLILQGTNNEISDVLGAYYFMQHANCNREIKIYEGAKHHLHKETDEVKKSVMKEIE TWIF 167 Lister
TLILQGTNNKISDVLGAYYFMQHANCNREIKIYEGAKHHLHKETDEVKKSVMKEIE TWIF 171 : . .: . : Cop ---- (SEQ ID NO: 35) WR ---- (SEQ ID NO: 52) Tian ---- (SEQ ID NO: 69) Wyeth NRVK 171 (SEQ ID NO: 86) Lister NRVK 175 (SEQ ID NO: 102) K6L CLUSTAL O(1.2.4) alinhamento de múltiplas sequências Cop
MSANCMFNLDNDYIYWKPITYPKALVFISHGAGKHSGRYDELAENISSLGILVFSH DHIG 60
WR
MSANCMFNLDNDYIYWKPITYPKALVFISHGAGKHSGRYDELAENISSLGILVFSH DHIG 60 Wyeth
MSANCMFNLDNDYIYWKPITYPKALVFISHGAGKHSGRYDELAENISSLGILVFSH DHIG 60 Lister
MSANCMFNLDNDYIYWKPITYPKALVFISHGAGKHSGRYDELAENISSLGILVFSH DHIG 60 ************************************************************ Cop HGRSNGEKMMIDDFGTARGNY 81 (SEQ ID NO: 36) WR HGRSNGEKMMIDDFGTARGNY 81 (SEQ ID NO: 53) Wyeth HGRSNGEKMMIDDFGTARGNY 81 (SEQ ID NO: 87)
Lister HGRSNGEKMMIDDFGTARGNY 81 (SEQ ID NO: 103) *********************
K7R CLUSTAL O(1.2.4) alinhamento de múltiplas sequências Cop
MATKLDYEDAVFYFVDDDKICSRDSIIDLIDEYITWRNHVIVFNKDITSCGRLYKELM KF 60
WR
MATKLDYEDAVFYFVDDDKICSRDSIIDLIDEYITWRNHVIVFNKDITSCGRLYKELM KF 60 Tian
MATKLDYEDAVFYFVDDDKICSRDSIIDLIDEYITWRNHVIVFNKDITSCGRLYKELM KF 60 Wyeth
MATKLDYEDAVFYFVDDDKICSRDSIIDLIDEYITWRNHVIVFNKDITSCGRLYKELM KF 60 Lister
MATKLDYEDAVFYFVDDDKICSRDSIIDLIDEYITWRNHVIVFNKDITSCGRLYKELM KF 60 ************************************************************ Cop
DDVAIRYYGIDKINEIVEAMSEGDHYINFTKVHDQESLFATIGICAKITEHWGYKKIS ES 120
WR
DDVAIRYYGIDKINEIVEAMSEGDHYINFTKVHDQESLFATIGICAKITEHWGYKKIS ES 120 Tian
DDVAIRYYGIDKINEIVEAMSEGDHYINFTKVHDQESLFATIGICAKITEHWGYKKIS ES 120 Wyeth
DDVAIRYYGIDKINEIVEAMSEGDHYINFTKVHDQESLFATIGICAKITEHWGYKKIS ES 120 Lister
DDVAIRYYGIDKINEIVEAMSEGDHYINFTKVHDQESLFATIGICAKITEHWGYKKIS
ES 120 ************************************************************ Cop RFQSLGNITDLMTDDNINILILFLEKKLN 149 (SEQ ID NO: 37) WR RFQSLGNITDLMTDDNINILILFLEKKLN 149 (SEQ ID NO: 54) Tian RFQSLGNITDLMTDDNINILILFLEKKLN 149 (SEQ ID NO: 70) Wyeth RFQSLGNITDLMTDDNINILILFLEKKLN 149 (SEQ ID NO: 88) Lister RFQSLGNITDLMTDDNINILILFLEKKLN 149 (SEQ ID NO: 104) ***************************** F1L CLUSTAL O(1.2.4) alinhamento de múltiplas sequências Cop
MLSMFMCNNIVDYVDDIDNGIVQDIEDEASNNVDHDYVYPLPENMVYRFDKSTNI LDYLS 60
WR
MLSMFMCNNIVDYVDDIDNGIVQDIEDEASNNVDHDYVYPLPENMVYRFDKSTNI LDYLS 60 Tian
MLSMFMCNNIVDYVDDIDNGIVQDIEDEASNNVDRDYVYPLPENMVYRFDKSTNI LDYLS 60 Wyeth
MLSMFMCNNIVDYVDDIDNGIVQDIEDEASNNVDHDYVYPLPENMVYRFDKSTNI LDYLS 60 Lister
MLSMFMCNNIVDYVDDIDNGIVQDIEDEASNNVDHDYVYPLPENMVYRFDKSTNI LDYLS 60 **********************************:************************* Cop
TERDHVMMAVRYYMSKQRLDDLYRQLPTKTRSYIDIINIYCDKVSNDYNRDMNIM YDMAS 120
WR
TERDHVMMAVRYYMSKQRLDDLYRQLPTKTRSYIDIINIYCDKVSNDYNRDMNIM YDMAS 120
Tian
TERDHVMMAVRYYMSKQRLDDLYRQLPTKTRSYIDIINIYCDKVSNDYNRDMNIM YDMAS 120 Wyeth
TERDHVMMAVRYYMSKQRLDDLYRQLPTKTRSYIDIINIYCDKVSNDYNRDMNIM YDMAS 120 Lister
TERDHVMMAVRYYMSKQRLDDLYRQLPTKTRSYIDIINIYCDKVSNDYNRDMNIM YDMAS 120 ************************************************************ Cop
TKSFTVYDINNEVNTILMDNKGLGVRLATISFITELGRRCMNPVKTIKMFTLLSHTIC DD 180
WR
TKSFTVYDINNEVNTILMDNKGLGVRLATISFITELGRRCMNPVETIKMFTLLSHTIC DD 180 Tian
TKSFTVYDINNEVNTILMDNKGLGVRLATISFITELGRRCMNPVKTIKMFTLLSHTIC DD 180 Wyeth
TKSFTVYDINNEVNTILMDNKGLGVRLATISFITKLGRRCMNPVKTIKMFTLLSHTIC DD 180 Lister
TKSFTVYDINNEVNTILMDNKGLGVRLATISFITELGRRCMNPVKTIKMFTLLSHTIC DD 180 **********************************:*********:*************** Cop CFVDYITDISPPDNTIPNTSTREYLKLIGITAIMFATYKTLKYMIG 226 (SEQ ID NO: 38) WR YFVDYITDISPPDNTIPNTSTREYLKLIGITAIMFATYKTLKYMIG 226 (SEQ ID NO: 55) Tian CFVDYITDISPPDNTIPNTSTREYLKLIGITAIMFATYKTLKYMIG 226 (SEQ ID NO: 71)
Wyeth CFVDYITDISPPDNTIPNTSTREYLKLIGITAIMFATYKTLKYMIG 226 (SEQ ID NO: 89) Lister CFVDYITDISPPDNTIPNTSTREYLKLIGITAIMFATYKTLKYMIG 226 (SEQ ID NO: 105) ********************************************* F2L CLUSTAL O(1.2.4) alinhamento de múltiplas sequências Cop
MFNMNINSPVRFVKETNRAKSPTRQSPGAAGYDLYSAYDYTIPPGERQLIKTDIS MSMPK 60
WR
MFNMNINSPVRFVKETNRAKSPTRQSPYAAGYDLYSAYDYTIPPGERQLIKTDISM SMPK 60 Tian
MFNMNINSPVRFVKETNRAKSPTRQSPGAAGYDLYSAYDYTIPPGERQLIKTDIS MSMPK 60 Wyeth
MFNMNINSPVRFVKETNRAKSPTRQSPGAAGYDLYSAYDYTIPPGERQLIKTDIS MSMPK 60 Lister
MFNMNINSPVRFVKETNRAKSPTRQSPGAAGYDLYSAYDYTIPPGERQLIKTDIS MSMPK 60 *************************** ******************************** Cop
ICYGRIAPRSGLSLKGIDIGGGVIDEDYRGNIGVILINNGKCTFNVNTGDRIAQLIYQ RI 120
WR
FCYGRIAPRSGLSLKGIDIGGGVIDEDYRGNIGVILINNGKCTFNVNTGDRIAQLIY QRI 120 Tian
ICYGRIAPRSGLSLKGIDIGGGVIDEDYRGNIGVILINNGKCTFNVNTGDRIAQLIYQ RI 120
Wyeth
ICYGRIAPRSGLSLKGIDIGGGVIDEDYRGNIGVILINNGKCTFNVNTGDRIAQLIYQ RI 120 Lister
FCYGRIAPRSGLSLKGIDIGGGVIDEDYRGNIGVILINNGKCTFNVNTGDRIAQLIY QRI 120 :*********************************************************** Cop YYPELEEVQSLDSTNRGDQGFGSTGLR 147 (SEQ ID NO: 39) WR YYPELEEVQSLDSTNRGDQGFGSTGLR 147 (SEQ ID NO: 56) Tian YYPELEEVQSLDSTDRGDQGFGSTGLR 147 (SEQ ID NO: 72) Wyeth YYPELEEVQSLDSTNRGDQGFGSTGLR 147 (SEQ ID NO: 90) Lister YYPELEEVQSLDSTNRGDQGFGSTGLR 147 (SEQ ID NO: 106) **************:************ F3L CLUSTAL O(1.2.4) alinhamento de múltiplas sequências Cop
MPIFVNTVYCKNILALSMTKKFKTIIDAIGGNIIVNSTILKKLSPYFRTHLRQKYTKNK D 60
WR
MPIFVNTVYCKNILALSMTKKFKTIIDAIGGNIIVNSTILKKLSPYFRTHLRQKYTKNK D 60 Tian
MPIFVNTVYCKNILALSMTKKFKTIIDAIGGNIIVNSTILKKLSPYFRTHLRQKYTKNK D 60 Wyeth
MPIFVNTVYCKNILALSMTKKFKTIIDAIGGNIIVNSTILKKLSPYFRTHLRQKYTKNK D 60 Lister
MPIFVNTVYCKNILALSMTKKFKTIIDAIGGNIIVNSTILKKLSPYFRTHLRQKYTKNK D 60 ************************************************************ Cop
PVTRVCLDLDIHSLTSIVIYSYTGKVYIDSHNVVNLLRASILTSVEFIIYTCINFILRDF 120
WR
PVTWVCLDLDIHSLTSIVIYSYTGKVYIDSHNVVNLLRASILTSVEFIIYTCINFILRDF 120 Tian
PVTRVCLDLDIHSLTSIVIYSYTGKVYIDSHNVVNLLRASILTSVEFIIYTCINFILRDF 120 Wyeth
PVTRVCLDLDIHSLTSIVIYSYTGKVYIDSHNVVNLLRASILTSVEFIIYTCINFILRDF 120 Lister
PVTRVCLDLDIHSLTSIVIYSYTGKVYIDSHNVVNLLRASILTSVEFIIYTCINFILRDF 120 *** ******************************************************** Cop
RKEYCVECYMMGIEYGLSNLLCHTKNFIAKHFLELEDDIIDNFDYLSMKLILESDEL NVP 180
WR
RKEYCVECYMMGIEYGLSNLLCHTKNFIAKHFLELEDDIIDNFDYLSMKLILESDEL NVP 180 Tian
RKEYCVECYMMGIEYGLSNLLCHTKNFIAKHFLELEDDIIDNFDYLSMKLILESDEL NVP 180 Wyeth
RKEYCVECYMMGIEYGLSNLLCHTKNFIAKHFLELEDDIIDNFDYLSMKLILESDEL NVP 180 Lister
RKEYCVECYMMGIEYGLSNLLCHTKNFIAKHFLELEDDIIDNFDYLSIKLILESDELN VP 180 ***********************************************:************ Cop
DEDYVVDFVIKWYIKRRNKLGNLLLLIKNVIRSNYLSPRGINNVKWILDCTKIFHCD KQP 240
WR
DEDYVVDFVIKWYIKRRNKLGNLLLLIKNVIRSNYLSPRGINNVKWILDCTKIFHCD KQP 240 Tian
DEDYVVDFVIKWYIKRRNKLGNLLLLIKNVIRSNYLSPRGINNVKWILDCTKIFHCD KQP 240 Wyeth
DEDYVVDFVIKWYIKRRNKLGNLLLLIKNVIRSNYLSPRGINNVKWILDCTKIFHCD KQP 240 Lister
DEDYVVDFVIKWYIKRRNKLGNLLLLIKNVIRSNYLSPRGINNVKWILDCTKIFHCD KQP 240 ************************************************************ Cop
RKSYKYPFIEYPMNMDQIIDIFHMCTSTHVGEVVYLIGGWMNNEIHNNAIAVNYIS NNWI 300
WR
RKSYKYPFIEYPMNMDQIIDIFHMCTSTHVGEVVYLIGGWMNNEIHNNAIAVNYIS NNWI 300 Tian
RKSYKYPFIEYPMNMDQIIDIFHMCTSTHVGEVVYLIGGWMNNEIHNNAIAVNYIS NNWI 300 Wyeth
RKSYKYPFIEYPMNMDQIIDIFHMCTSTHVGEVVYLIGGWMNNEIHNNAIAVNYIS NNWI 300 Lister
RKSYKYPFIEYPMNMDQIIDIFHMCTSTHVGEVVYLIGGWMNNEIHNNAIAVNYIS NNWI 300 ************************************************************ Cop
PIPPMNSPRLYATGIPANNKLYVVGGLPNPTSVERWFHGDAAWVNMPSLLKPRC NPAVAS 360
WR
PIPPMNSPRLYASGIPANNKLYVVGGLPNPTSVERWFHGDAAWVNMPSLLKPRC NPAVAS 360 Tian
PIPPMNSPRLYASGIPANNKLYVVGGLPNPTSVERWFHGDAAWVNMPSLLKPRC NPAVAS 360 Wyeth
PIPPMNSPRLYASGIPANNKLYVVGGLPNPTSVERWFHGDAAWVNMPSLLKPRC NPAVAS 360 Lister
PIPPMNSPRLYASGIPANNKLYVVGGLPNPTSVERWFHGDAAWVNMPSLLKPRC NPAVAS 360 ************:*********************************************** Cop
INNVIYVMGGHSETDTTTEYLLPNHDQWQFGPSTYYPHYKSCALVFGRRLFLVG RNAEFY 420
WR
INNVIYVMGGHSETDTTTEYLLPNHDQWQFGPSTYYPHYKSCALVFGRRLFLVG RNAEFY 420 Tian
INNVIYVMGGHSETDTTTEYLLPNHDQWQFGPSTYYPHYKSCALVFGRRLFLVG RNAEFY 420 Wyeth
INNVIYVMGGHSETDTTTEYLLPNHDQWQFGPSTYYPHYKSCALVFGRRLFLVG RNAEFY 420 Lister
INNVIYVMGGHSETDTTTEYLLPNHDQWQFGPSTYYPHYKSCALVFGRRLFLVG RNAEFY 420 ************************************************************ Cop
CESSNTWTLIDDPIYPRDNPELIIVDNKLLLIGGFYRGSYIDTIEVYNHHTYSWNIW DGK 480
WR
CESSNTWTLIDDPIYPRDNPELIIVDNKLLLIGGFYRESYIDTIEVYNHHTYSWNIW DGK 480 Tian
CESSNTWTLIDDPIYPRDNPELIIVDNKLLLIGGFYRESYIDTIEVYNHHTYSWNIW DGK 480 Wyeth
CESSNTWTLIDDPIYPRDNPELIIVDNKLLLIGGFYRESYIDTIEVYNHHTYSWNIW DGK 480 Lister
CESSNTWTLIDDPIYPRDNPELIIVDNKLLLIGGFYRESYIDTIEVYNHHTYSWNIW DGK 480 ************************************* ********************** Cop (SEQ ID NO: 40) WR (SEQ ID NO: 57) Tian (SEQ ID NO: 73) Wyeth (SEQ ID NO: 91) Lister (SEQ ID NO: 107) B14R CLUSTAL O(1.2.4) alinhamento de múltiplas sequências Cop ------------------------------------------------------------
WR
MDIFREIASSMKGENVFISPASISSVLTILYYGANGSTAEQLSKYVEKEENMDKVSA QNI 60 Tian ------------------------------------------------------------ Wyeth ------------------------------------------------------------ Cop ------------------------------------------------------------
WR
SFKSINKVYGRYSAVFKDSFLRKIGDKFQTVDFTDCRTIDAINKCVDIFTEGKINPLL DE 120
Tian ------------------------------------------------------------ Wyeth ------------------------------------------------------------ Cop ---
MNHCLLAISAVYFKAKWLTPFEKEFTSDYPFYVSPTEMVDVSMMSMYGELFNHA SVK 57
WR
PLSPDTCLLAISAVYFKAKWLTPFEKEFTSDYPFYVSPTEMVDVSMMSMYGKAFN HASVK 180 Tian ---
MNHCLLAISAVYFKAKWLTPFEKEFTSDYPFYVSPTEMVDVSMMSMYGKAFNHA SVK 57 Wyeth ---
MNHCLLAISAVYFKAKWLTPFEKEFTSDYPFYVSPTEMVDVSMMSMYGKAFNHA SVK 57 : *********************************************: ******* Cop
ESFGNFSIIELPYVGDTSMMVILPDKIDGLESIEQNLTDTNFKKWCNSLDAMFIDVH IPK 117
WR
ESFGNFSIIELPYVGDTSMMVILPDKIDGLESIEQNLTDTNFKKWCNSLEATFIDVHI PK 240 Tian
ESFGNFSIIELPYVGDTSMMVILPDKIDGLESIEQNLTDTNFKKWCDFMDAMFIDV HIPK 117 Wyeth
ESFGNFSIIELPYVGDTSMMVILPDKIDGLESIEQNLTDTNFKKWCDFMDAMFIDV HIPK 117 **********************************************: ::* ******** Cop
FKVTGSYNLVDTLVKSGLTEVFGSTGDYSNMCNLDVSVDAMIHKTYIDVNEEYTE AAAAT 177
WR
FKVTGSYNLVDTLVKSGLTEVFGSTGDYSNMCNSDVSVDAMIHKTYIDVNEEYTE AAAAT 300 Tian
FKVTGSYNLVDTLVKSGLTEVFGSTGDYSNMCNLDVSVDAMIHKTYIDVNEEYTE AAAAT 177 Wyeth
FKVTGSYNLVDTLVKSGLTEVFGSTGDYSNMCNLDVSVDAMIHKTYIDVNEEYTE AAAAT 177 ********************************* ************************** Cop CALVSDCASTITNEFCVDHPFIYVIRHVDGKILFVGRYCSPTTNC 222 (SEQ ID NO: 108) WR CALVSDCASTITNEFCVDHPFIYVIRHVDGKILFVGRYCSPTTNC 345 (SEQ ID NO: 127) Tian CALVSDCASTITNEFCVDHPFIYVIRHVDGKILFVGRYCSPTTNC 222 (SEQ ID NO: 151) Wyeth CALVSDCASTVTNEFCADHPFIYVIRHVDGKILFVGRYCSPTTNC 222 (SEQ ID NO: 548) **********:*****.**************************** B15R CLUSTAL O(1.2.4) alinhamento de múltiplas sequências Cop
MTANFSTHVFSPQHCGCDRLTSIDDVKQCLTEYIYWSSYAYRNRQCAGQLYSTLL SFRDD 60
WR
MTANFSTHVFSPQHCGCDRLTSIDDVRQCLTEYIYWSSYAYRNRQCAGQLYSTLL SFRDD 60 Tian
MTANFSTHVFSPQHCGCDRLTSIDDVKQCLTEYIYWSSYAYRNRQCAGQLYSTLL SFRDD 60 Wyeth
MTANFSTHVFSPQHCGCDRLTSIDDVKQCLTEYIYWSSYAYRNRQCAGQLYSTLL SFRDD 60
Lister
MTANFSTHVFSPQHCGCDRLTSIDDVKQCLTEYIYWSSYAYRNRQCAGQLYSTLL SFRDD 60 **************************:********************************* Cop
AELVFIDIRELVKNMPWDDVKDCTEIIRCYIPDEQKTIREISAIIGLCAYAATYWGGE DH 120
WR
AELVFIDIRELVKNMPWDDVKDCAEIIRCYIPDEQKTIREISAIIGLCAYAATYWGGE DH 120 Tian
AELVFIDIRELVKNMPWDDVKDCTEIIRCYIPDEQKTIREISAIIGLCAYAATYWGGE DH 120 Wyeth
AELVFIDIRELVKHMPWDDVKDCAEIIRCYIPDEQKTIREISAIIGLCAYAATYWGGE DH 120 Lister
AELVFIDIRELVKNMPWDDVKDCTEIIRCYIPDEQKTIREISAIIGLCAYAATYWGGE DH 120 *************:*********:************************************ Cop PTSNSLNALFVMLEMLNYVDYNIIFRRMN 149 (SEQ ID NO: 109) WR PTSNSLNALFVMLEMLNYVDYNIIFRRMN 149 (SEQ ID NO: 128) Tian PTSNSLNALFVMLEMLNYVDYNIIFRRMN 149 (SEQ ID NO: 152) Wyeth PTSNSLNALFVMLEMLNYVDYNIIFRRMN 149 (SEQ ID NO: 164) Lister PTSNSLNALFVMLEMLNYVDYNIIFRRMN 149 (SEQ ID NO: 200) *****************************
B ORF E CLUSTAL O(1.2.4) alinhamento de múltiplas sequências Cop
MYNSSIHTPEYDVIIHVIEHLKHHKQCVQTVTSGMVFTSPVSSSICTKSDDGRNLS DGFL 60 Tian
MYNSSIHTPEYDVIIHVIEHLKHHKQCVQTVTSGMVFTSPVSSSICTKSDDGRNLS DGFL 60 ************************************************************ Cop LIRYITTDDFCTIFDIIPRHIFYQLANVDEH 91 (SEQ ID NO: 110) Tian LIRYITTDDFCTIFDIIPRHIFYQLANVDEH 91 (SEQ ID NO: 153) ******************************* B16R CLUSTAL O(1.2.4) alinhamento de múltiplas sequências Cop
MSILPVIFLPIFFYSSFVQTFNASECIDKGXYFASFMELENEPVILPCPQINTLSSGY NI 60
WR
MSILPVIFLSIFFYSSFVQTFNAPECIDKGQYFASFMELENEPVILPCPQINTLSSGY NI 60 Tian ------------------------------------MELENEPVILPCPQINTLSSGYNI 24 Wyeth
MSILPVIFLSIFFYSSFVQTFNASECIDKGQYFASFMELENEPVILPCPQINTLSSGY NI 60 Lister
MSILPVIFLPIFFYSSFVQTFNAPECIDKGQYFASFMELENEPVILPCPQINTLSSGY NI 60 ************************ Cop
LDILWEKRGADNDRIIPIDNGSNMLILNPTQSDSGIYICITTNETYCDMMSLNLTIVS VS 120
WR
LDILWEKRGADNDRIIPIDNGSNMLILNPTQSDSGIYICITTNETYCDMMSLNLTIVS VS 120 Tian
LDILWEKRGADNDRIIPIDNGSNMLILNPTQSDSGIYICITTNETYCDMMSLNLTIVS VL 84 Wyeth
LDILWEKRGADNDRIIPIDNGSNMLILNPTQSDSGIYICITTNETYCDMMSLNLTIVS VS 120 Lister
LDILWEKRGADNDRIIPIDNGSNMLILNPTQSDSGIYICITTNETYCDMMSLNLTIVS VS 120 *********************************************************** Cop
ESNIDFISYPQIVNERSTGEMVCPNINAFIASNVNADIIWSGHRRLRNKRLKQRTP GIIT 180
WR
ESNIDLISYPQIVNERSTGEMVCPNINAFIASNVNADIIWSGHRRLRNKRLKQRTP GIIT 180 Tian
ESNIDLISYPQIVNERSTGEMVCPNINAFIASNVNADIIWSGHRRLRNKRLKQRTP GIIT 144 Wyeth
ESNIDLISYPQIVNERSTGEMVCPNINAFIASNVNADIIWSGHRRLRNKRLKQRTP GIIT 180 Lister
ESNIDLISYPQIVNERSTGEMVCPNINAFIASNVNADIIWSGHRRLRNKRLKQRTP GIIT 180 *****:****************************************************** Cop
IEDVRKNDAGYYTCVLEYIYGGKTYNVTRIVKLEVRDKIIHPTMQLPEGVVTSIGSN LTI 240
WR
IEDVRKNDAGYYTCVLEYIYGGKTYNVTRIVKLEVRDKIIPSTMQLPDGIVTSIGSN LTI 240 Tian
IEDVRKNDAGYYTCVLEYIYRGKTYNVTRIVKLEVRDKIIPSTMQLPDGIVTSIGSN LTI 204 Wyeth
IEDVRKNDAGYYTCVLEYIYGGKTYNVTRIVKLEVRDKIIPSTMQLPDGIVTSIGSN LTI 240 Lister
IEDVRKNDAGYYTCVLEYIYRGKTYNVTRIVKLEVRDKIIPSTMQLPDGIVTSIGSN LTI 240 ******************** ******************* *****:*:********** Cop
ACRVSLRPPTTDADVFWISNGMYYEEDDGDGDGRISVANKIYMTDKRRVITSRLN INPVK 300
WR
ACRVSLRPPTTDADVFWISNGMYYEEDDGDGNGRISVANKIYMTDKRRVITSRLN INPVK 300 Tian
ACRVSLRPPTTDADVFWISNGMYYEEDDGDGNGRISVANKIYMTDKRRVITSRLN INPVK 264 Wyeth
ACRVSLRPPTTDTDVFWISNGMYYEEDDGDGDGRISVANKIYMTDKRRVITSRLN INPVK 300 Lister
ACRVSLRPPTTDADVFWISNGMYYEEDDGDGNGRISVANKIYMTDKRRVITSRLN INPVK 300 ************:******************:**************************** Cop EEDATTFTCMAFTIPSISKTVTVSIT 326 (SEQ ID NOS: 111 e 625)a WR EEDATTFTCMAFTIPSISKTVTVSIT 326 (SEQ ID NO: 129) Tian EEDATTFTCMAFTIPSISKTVTVSI- 289 (SEQ ID NO: 549) Wyeth EEDATTFTCMAFTIPSISKTVTVSIT 326 (SEQ ID NO: 165) Lister EEDATTFTCMAFTIPSISKTVTVSIT 326 (SEQ ID NO: 201) ************************* a SEQ ID NO: 111 representa a sequência de aminoácidos antes do “X” e SEQ ID NO: 625 representa a sequência de aminoácidos após o “X.”
B ORF F CLUSTAL O(1.2.4) alinhamento de múltiplas sequências
Cop
MVIIPGVRCLSLLFLRRRCPLHIISAFTLLAINALILGHTISPVDLSFTICGYEIKSIFD 60 Tian
MVIIPGVRCLSLLFLRRRCPLHIISAFTLLAINALILGHTISPVDLSFTICGYEIRSIFD 60 *******************************************************:**** Cop SETDTIVKFNDIMSQ 75 (SEQ ID NO: 112) Tian SKTDTIVKFNDIMSQ 75 (SEQ ID NO: 155) *:************* B17L CLUSTAL O(1.2.4) alinhamento de múltiplas sequências Cop
MSRKFMQVYEYDREQYLDEFIEDRYNDSFITSPEYYSAEKYMCRYTTLNHNCVN VRRCAL 60
WR
MSRKFMQVYEYDREQYLDEFIEDRYNDSFITSPEYYSAEKYMCRYTTLNHNCINV RRCAL 60 Tian
MSRKFMQVYEYDREQYLDEFIEDRYNDSFITSPEYYSAEKYMCRYTTLNHNCVN VRRCAL 60 Wyeth
MSRKFMQVYEYDREQYLDEFIEDRYNDSFITSPEYYSAEKYMCRYTTLNHNCVN VRRCAL 60 Lister
MSRKFMQVYEYDREQYLDEFIEDRYNDSFITSPEYYSAEKYMCRYTTLNHNCINV RRCAL 60 ****************************************************:******* Cop
DSKLLHDIITNCKIYNNIELVRATKFVYYLDLIKCNWVSKVGDSVLYPVIFITHTSTRN L 120
WR
DSKLLHDIITNCKIYNNIELVRATKFVYYLDLIKCNWVSKVGDSVLYPVIFITHTSTRN L 120 Tian
DSKLLHDIITNCKIYNNIELVRATKFVYYLDLIKCNWVSKVGDSVLYPVIFITHTSTRN L 120 Wyeth
DSKLLHDIITNCKIYNNIELVRATKFVYYLDLIKCNWVSKVGDSVLYPVIFITHTSTRN L 120 Lister
DSKLLHDIITNCKIYNNIELVRATKFVYYLDLIKCNWVSKVGDSVLYPVIFITHTSTRN L 120 ************************************************************ Cop
DKVSVKTYKGVKVKKLNRCADHAIVINPFVKFKLTLPNKTSHAKVLVTFCKLRTDIT PVE 180
WR
DKVSVKTYKGVKVKKLNRCADHAIVINPFVKFKLTLPNKTSHAKVLVTFCKLKTDIT PVE 180 Tian
DKVSVKTYKGVKVKKLNRCADHAIVINPFVKFKLTLPNKTSHAKVLVTFCKLRTDIT QIE 180 Wyeth
DKVSVKTYKGVKVKKLNRCADHAIVINPFVKFKLTLPNKTSHAKVLVTFCKLRTDIT QIE 180 Lister
DKVSVKTYKGVKVKKLNRCADHAIVINPFVKFKLTLPNKTSHAKVLVTFCKLRTDIT QIE 180 ****************************************************:**** :* Cop
APLPGNVLVYTFPDINKRIPGYIHVNIEGCIDGMIYINSSKFACVLKLHRSMYRIPPF PI 240
WR
APLPGNVLVYTFPDINKRIPGYIHLNIEGCIDGMIYINSSKFACVLKLHRSMYRIPPF PI 240 Tian
APLSGNVLVYTFPNINKRIPGYIHVNIEGCIDGMIYINSSKFACVLKLHRSMYRIPPF PI 240 Wyeth
APLSGNVLVYTFPDINKRIPGYIHVNIEGCIDGMIYINSSKFACVLKLHRSMYRIPPF PI 240 Lister
APLSGNVLVYTFPDINKRIPGYIHVNIEGCIDGMIYINSSKFACVLKLHRSMYRIPPF PI 240 *** *********:**********:*********************************** Cop
DICSCCSQYTNDDIEIPIHDLIKDVAIFKNKETVYYLKLNNKTIARFTYFNNIDTAITQ E 300
WR
DICSCCSQYINYDIEIPIHDLIKDVAIFKNKETVYYLKLNNKTIARFTYFNNIDTAITQE 300 Tian
DICSCCSQYTNGDIEIPIHDLIKDVAIFKNKETVYYLKLNNKTIARFTYFNNIDTAITQ E 300 Wyeth
DICSCCSQYTNDDIEIPIHDLIKDVAIFKNKETVYYLKLNNKTIARFTYFNNIDTAITQ E 300 Lister
DICSCCSQYTNDDIEIPIHDLIKDVAIFKNKETVYYLKLNNKTIARFTYFNNIDTAITQ E 300 ********* * ************************************************ Cop HEYVKIALGIVCKLMINNMHSIVGVNHSNTFVNCLLEDNV 340 (SEQ ID NO: 113) WR HEYVKIALGIVCKLMINNMHSIVGVNHSNTFVNCLLEDNV 340 (SEQ ID NO: 130)
Tian HEYVKIALGIVCKLMINNMHSIVGVNHSNTFVNCLLEDNV 340 (SEQ ID NO: 156) Wyeth HEYVKIALGIVCKLMINNMHSIVGVNHSNTFVNCLLEDNV 340 (SEQ ID NO: 166) Lister HEYVKIALGIVCKLMINNMHSIVGVNHSNTFVNCLLEDNV 340 (SEQ ID NO: 202) **************************************** B18R CLUSTAL O(1.2.4) alinhamento de múltiplas sequências Cop
MSRRLIYVLNINRKSTHKIQENEIYTYFSHCNIDHTSTELDFVVKNYDLNRRQHVT GYTA 60
WR
MSRRLIYVLNINRESTHKIQENEIYTYFSHCNIDHTSTELDFVVKNYDLNRRQPVT GYTA 60 Tian
MSRRLIYVLNINRESTHKIQENEIYTYFSHCNIDHTSTELDFVVKNYDLNRRHPVT GYTA 60 Wyeth
MSRRLIYVLNINRESTHKIQENEIYTYFSHCNIDHTSTELDFVVKNYDLNRRQPVT GYTA 60 *************:**************************************: ****** Cop
LHCYLYNNYFTNDVLKILLNHDVNVTMKTSSGRMPVYILLTRCCNISHDVVIDMIDK DKN 120
WR
LHCYLYNNYFTNDVLKILLNHGVDVTMKTSSGRMPVYILLTRCCNISHDVVIDMIDK DKN 120 Tian
LHCYLYNNYFTNDVLKILLNHGVDVTMKTSSGRMPVYILLTRCCNISHDVVIDMIDK DKN 120 Wyeth
LHCYLYNNYFTNDVLKILLNHGVDVTMKTSSGRMPVYILLTRCCNISHDVVIDMIDK DKN 120 *********************.*:************************************ Cop
HLSHRDYSNLLLEYIKSRYMLLKEEDIDENIVSTLLDKGIDPNFKQDGYTALHYYYL CLA 180
WR
HLLHRDYSNLLLEYIKSRYMLLKEEDIDENIVSTLLDKGIDPNFKQDGYTALHYYYL CLA 180 Tian
HLLHRDYSNLLLEYIKSRYMLLKEEDIDENIVSTLLDKGIDPNFKQDGYTALHYYYL CLA 180 Wyeth
HLSHRDYSNLLLEYIKSRYMLLKEEDIDENIVSTLLDKGIDPNFKQDGYTALHYYYL CLA 180 ** ********************************************************* Cop
HVYKPGECRKPITIKKAKRIISLFIQHGANLNALDNCGNTPFHLYLSIEMCNNIHMT KML 240
WR
HVYKPGECRKPITIKKAKRIISLFIQHGANLNALDNCGNTPFHLYLSIEMCNNIHMT KML 240 Tian
HVYKPGECRKPITIKKAKRIISLFIQHGANLNALDNCGNTPFHLYLSIEMCNNIHMT KML 240 Wyeth
HVYKPGECRKPITIKKAKRIISLFIQHGANLNALDNCGNTPFHLYLSIEMCNNIHMT KML 240 ************************************************************ Cop
LTFNPNFKICNNHGLTPILCYITSDYIQHDILVMLIHHYETNVGEMPIDERRMIVFEFI K 300
WR
LTFNPNFEICNNHGLTPILCYITSDYIQHDILVMLIHHYETNVGEMPIDERRIIVFEFIK 300 Tian
LTFNPNFKICNNHGLTPILCYITSDYIQHDILVMLIHHYETNVGEMPIDERRIIVFEFIK 300 Wyeth
LTFNPNFKICNNHGLTPILCYITSDYIQHDILVMLIHHYETNVGEMPIDERRIIVFEFIK 300 *******:********************************************:******* Cop
TYSTRPADSITYLMNRFKNINIYTRYEGKTLLHVACEYNNTQVIDYLIRINGDINALT DN 360
WR
TYSTRPADSITYLMNRFKNIDIYTRYEGKTLLHVACEYNNTHVIDYLIRINGDINALT DN 360 Tian
TYSTRPADSITYLMNRFKNINIYTRYEGKTLLHVACEYNNTQVIDYLIRINGDINALT DN 360 Wyeth
TYSTRPADSITYLMNRFKNINIYTRYEGKTLLHVACEYNNTHVIDYLIRINGDINALT DN 360 ********************:********************:****************** Cop
NKHATQLIIDNKENSPYTINCLLYILRYIVDKNVIRSLVDQLPSLPIFDIKSFEKFISYC 420
WR
NKHATQLIIDNKENSPYTINCLLYILRYIVDKNVIRSLVDQLPSLPIFDIKSFEKFISYC 420 Tian
NKHATQLIIDNKENSPYTINCLLYILRYIVDKNVIRSLVDQLPSLPIFDIKSFEKFISYC 420
Wyeth
NKHAIQLIIDNKENSPYTIDCLLYILRYIVDKNVIRSLVDQLPSLPIFDIKSFEKFISYC 420 **** **************:**************************************** Cop
ILLDDTFYDRHVKNRDSKTYRYAFSKYMSFDKYDGIITKCHDETMLLKLSTVLDTT LYAV 480
WR
ILLDDTFYNRHVRNRDSKTYRYAFSKYMSFDKYDGIITKCHKETILLKLSTVLDTTL YAV 480 Tian
ILLDDTFYDRHVKNRNSKTYRYAFSKYMSFDKYDGIITKCHDETMLLKLSTVLDTT LYAV 480 Wyeth
ILLDDTFYNRHVRNRNSKTYRYAFSKYMSFDKYDGIITKCHDETMLLKLSTVLDTT LYAV 480 ********:***:**:*************************.**:*************** Cop
LRCHNSRKLRRYLTELKKYNNDKSFKIYSNIMNERYLNVYYKDMYVSKVYDKLFP VFTDK 540
WR
LRCHNSKKLRRYLTELKKYNNDKSFKIYSNIMNERYLNVYYKDMYVSKVYDKLFP VFTDK 540 Tian
LRCHNSRKLRRYLTELKKYNNDKSFKIYSNIMNERYLNVYYKDMYVSKVYDKLFP VFTDK 540 Wyeth
LRCHNSKKLRRYLNELKKYNNDKSFKIYSNIMNERYLNVYYKDMYVSKVYDKLFP VFTDK 540 ******:******.********************************************** Cop NCLLTLLPSEIIYEILYMLTINDLYNISYPPTKV 574 (SEQ ID NO: 114) WR NCLLTLLPSEIIYEILYMLTINDLYNISYPPTKV 574 (SEQ ID NO: 131)
Tian NCLLTLLPSEIIYEILYMLTINDLYNISYPPTKV 574 (SEQ ID NO: 157) Wyeth NCLLTLLPSEIIYEILYMLTINDLYNISYPPTKV 574 (SEQ ID NO: 167) ********************************** B19R CLUSTAL O(1.2.4) alinhamento de múltiplas sequências Cop
MTMKMMVHIYFVSLSLLLLLFHSYAIDIENEITEFFNKMRDTLPAKDSKWLNPACM FGGT 60 WR MTMKMMVHIYFVSL-- LLLLFHSYAIDIENEITEFFNKMRDTLPAKDSKWLNPACMFGGT 58 Tian
MTMKMMVHIYFVSLSLLLLLFHSYAIDIENEITEFFNKMRDTLPAKDSKWLNPACM FGGT 60 Wyeth
MTMKMMVHIYFVSLSLLLLLFHSYAIDIENEITEFFNKMRDTLPAKDSKWLNPACM FGGT 60 ************** ******************************************** Cop
MNDMATLGEPFSAKCPPIEDSLLSHRYKDYVVKWERLEKNRRRQVSNKRVKHG DLWIANY 120
WR
MNDIAALGEPFSAKCPPIEDSLLSHRYKDYVVKWERLEKNRRRQVSNKRVKHGD LWIANY 118 Tian
MNDIAALGEPFSAKCPPIEDSLLSHRYKDYVVKWERLEKNRRRQVSNKRVKHGD LWIANY 120 Wyeth
MNDIATLGEPFSAKCPPIEDSLLSHRYKDYVVKWERLEKNRRRQVSNKRVKHGD LWIANY 120 ***:*:****************************************************** Cop
TSKFSNRRYLCTVTTKNGDCVQGIVRSHIKKPPSCIPKTYELGTHDKYGIDLYCGIL
YAK 180
WR
TSKFSNRRYLCTVTTKNGDCVQGIVRSHIRKPPSCIPKTYELGTHDKYGIDLYCGI LYAK 178 Tian
TSKFSNRRYLCTVTTKNGDCVQGIVRSHIKKPPSCIPKTYELGTHDKYGIDLYCGIL YAK 180 Wyeth
TSKFSNRRYLCTVTTKNGDCVQGIVRSHIRKPPSCIPKTYELGTHDKYGIDLYCGI LYAK 180 *****************************:****************************** Cop
HYNNITWYKDNKEINIDDIKYSQTGKELIIHNPELEDSGRYDCYVHYDDVRIKNDIV VSR 240
WR
HYNNITWYKDNKEINIDDIKYSQTGKELIIHNPELEDSGRYDCYVHYDDVRIKNDIV VSR 238 Tian
HYNNITWYKDNKEINIDDIKYSQTGKELIIHNPELEDSGRYDCYVHYDDVRIKNDIV VSR 240 Wyeth
HYNNITWYKDNKEINIDDIKYSQTGKKLIIHNPELEDSGRYDCYVHYDDVRIKNDIV VSR 240 **************************:********************************* Cop
CKILTVIPSQDHRFKLILDPKINVTIGEPANITCTAVSTSLLIDDVLIEWENPSGWLIG F 300
WR
CKILTVIPSQDHRFKLILDPKINVTIGEPANITCTAVSTSLLIDDVLIEWENPSGWLIG F 298 Tian
CKILTVIPSQDHRFKLILDPKINVTIGEPANITCTAVSTSLLIDDVLIEWENPSGWLIG
F 300 Wyeth CKILTVIPSQDHRFKLKRNCGYASN----------------------------------- 265 **************** : . Cop DFDVYSVLTSRGGITEATLYFENVTEEYIGNTYKCRGHNYYFEKTLTTTVVLE 353
WR DFDVYSVLTSRGGITEATLYFENVTEEYIGNTYKCRGHNYYFEKTLTTTVVLE 351 Tian DFDVYSVLTSRGGITEATLYFENVTEEYIGNTYKCRGHNYYFEKTLTTTVVLE 353 Wyeth ----------------------------------------------------- Cop (SEQ ID NO: 115) WR (SEQ ID NO: 132) Tian (SEQ ID NO: 158) Wyeth (SEQ ID NO: 168) B21R CLUSTAL O(1.2.4) alinhamento de múltiplas sequências Cop
MSLESFIITTFNNNSSTNIDNMCHLYVKVCPSSLLFRLFVECCDINKLVEGTTPLHC YLM 60 Wyeth
MSLESFIITTFNNNSSTNIDNMCHLYVKVCPSSLLFRLFVECCDINKLVEGTTPLHC YLM 60 ************************************************************ Cop NEGFESSVLKNLLKEYVMNTFNVHDIHYTNI 91 (SEQ ID NO: 117) Wyeth NEGFESSVLKNLLKEYVMTSITQIFNS---- 87 (SEQ ID NO: 184) ******************.::. B22R CLUSTAL O(1.2.4) alinhamento de múltiplas sequências Cop
MISLSFLIHNPLKKWKLKPSISINGYRSTFTMAFPCAQFRPCHCHATKDSLNTVAD VRHC 60 Wyeth
MISLSFLIHNPLKKWKLKPSISINGYRSTFTMAFPCAQFRPCHCHATKDSLNTVAD VRHC 60 Lister -------------------------------MASPCAKFRPCHCHATKDSLNTVADVRHC 29 ** ***:********************** Cop
LTEYILWVSHRWTHRESAGSLYRLLISFRTDATELFGGELKDSLPWDNIDNCVEIIK CFI 120 Wyeth
LTEYILWVSHRWTHRETAGPLYRLLISFRTDATELFGGELKDSLPWDNIDNCVEIIK CFI 120 Lister LTEYILWVSHRWTHRESAGSLYRLLISFRTDATELFGGELKDSLPWD- --NCVEIIKCFI 86 ****************:** *************************** ********** Cop
RNDSMKTAEELRAIIGLCTQSAIVSGRVFNDKYIDILLMLRKILNENDYLTLLDHIRT AK 180 Wyeth
RNDSMKTAEELRAIIGLCTQSAIVSGRVFNDKYIDILLMLRKILNENDYLTLLDHIRT AK 180 Lister
RNDSMKTAEELRAIIGLCTQSAIVSGRVFNDKYIDILLMLRKILNENDYLTLLDHIRT AK 146 ************************************************************ Cop Y 181 (SEQ ID NO: 118) Wyeth Y 181 (SEQ ID NO: 185) Lister Y 147 (SEQ ID NO: 205) * B23R CLUSTAL O(1.2.4) alinhamento de múltiplas sequências Cop
MIAFIIFREIGIISTRIAMDYCGRECTILCRLLDEDVTYKKIKLEIETCHNLSKHIDRRG
Wyeth MIAFIIFREIGIISTRIAMDCT---- CILCRLLDEDVTYKKIKLEIETCHNLSKHIDRRG 56 ******************** ********************************* Cop
NNALHCYVSNKCDTDIKIVRLLLSRGVERLCRNNEGLTPLGAYSKHRYVKSQIVHL LISS 120 Wyeth
NNALHCYVFNKCDTDIKIVRLLLSRGVERLCRNNEGLTPLGVYSKHRYVKSQIVHL LISS 116 ******** ********************************.****************** Cop
YSNSSNELKSNINDFDLSSDNIDLRLLKYLIVDKRIRPSKNTNYAINGLGLVDIYVTT PN 180 Wyeth
YSNSSNELKSNINDFDLSSDNIDLRLLKYLIVDKRIRPSKNTNYAINSLGLVDIYVTT PN 176 ***********************************************.************ Cop
PRPEVLLWLLKSECYSTGYVFRTCMYNSDMCKNSLHYYISSHRESQSLSKDVIKC LINNN 240 Wyeth
PRPEVLLWLLKSECYSTGYVFRTCMYNSDMCKNSLHYYISSHRESQSLSKDVIKC LINNN 236 ************************************************************ Cop
VSIHGRDEGGSLPIQYYWSFSTIDIEIVKLLLIKDVDTCRVYDVSPILEAYYLNKRFR VT 300 Wyeth
VSIHGRDEGGSLPIQYYWSFSTIDIEIVKLLLIKDVDTCRVYDVSPILEAYYLNKRFR VT 296 ************************************************************
Cop
PYNVDMEIVNLLIERRHTLVDVMRSITSYDSREYNHYIIDNILKRFRQQDESIVQAM LIN 360 Wyeth
PYNVDMEIVNLLIERRHTLVDVMRSITSYDSREYNHYIIDNILKRFRQQDESIVQAM LIN 356 ************************************************************ Cop YLHYGDMVVRCMLDNGQQLSSARLLC 386 (SEQ ID NO: 119) Wyeth YLHYGDMVVRCMLDNGQQLSSARLLC 382 (SEQ ID NO: 186) ************************** B24R CLUSTAL O(1.2.4) alinhamento de múltiplas sequências Cop
MYGLILSRFNNCGYHCYETILIDVFDILSKYMDDIDMIDNENKTLLYYAVDVNNIQFA KR 60 Wyeth
MYGLILSRFNNCGYHCYETILIDVFDILSKYMDNIDMIDNENKTLLYYAVDVNNIQFA KR 60 *********************************:************************** Cop
LLEYGASVTTSRSIINTAIQKSSYQRENKTRIVDLLLSYHPTLETMIDAFNRDIRYLY PE 120 Wyeth
LLEYGASVTTSRSIINTAIQKSSYRRENKTKLVDLLLSYHPTLETMIDAFNRDIRYLY PE 120 ************************:*****::**************************** Cop PLFACIRYALILDDDFPSKVSMISPVIIRN------------------------------ 150 Wyeth
PLFACIRYALILDDDFPSKVKYDISGRHKELKRYRVDINRMKNAYISGVSMFDILFK RSK 180 ********************. :: Cop ------------------ (SEQ ID NO: 120)
Wyeth RHRLRYAKNPTSNGTKKN 198 (SEQ ID NO: 187) B25R CLUSTAL O(1.2.4) alinhamento de múltiplas sequências Cop
MSRINITKKIYCSVFLFLFLFLSYISNYEKVNDEMYEMGEMDEIVSIVRDSMWYIPN VFM 60 WR ----------------------------------------MDEIVRIVRDSMWYIPNVFM 20 Wyeth MSRINITKKIYCSVFLF-- LFLSYISNYEKVNDEMYEMGEMDEIVSIVRDSMWYIPNVFM 58 ***** ************** Cop
DDGKNEGHVSVNNVCHMYFTFFDVDTSSHLFKLVIKHCDLNKRGNSPLHCYTMN TRFNPS 120
WR
DDGKNEGHVSVNNVCHMYFTFFDVDTSSHLFKLVIKHCDLNKRGNSPLHCYTMN TRFNPS 80 Wyeth
DDGKNEGHVSVNNVCHMYFTFFDVDTSSHLFKLVIKHCDLNKRGNSPLHCYTMN TRFNPS 118 ************************************************************ Cop
VLKILLHHGMRNFDSKDEKGHHYLIHSLSIDNKIFDILTDTIDDFSKSSDLLLCYLRY KF 180 WR VLKILLHHGMRNFDSKDEKGHHYQSITRSLIY---------------------------- 112 Wyeth VLKILLHHGMRNFDSKD---DHYQSITRSLIY---------------------------- 147 ***************** .** : *: Cop
NGSLNYYVLYKGSDPNCADEDELTSLHYYCKHISTFYKSNYYKLSHTKMRAEKRF IYAII 240 WR ------------------------------------------------------------ Wyeth ------------------------------------------------------------ Cop DYGANINAVTHLPSTVYQT 259 (SEQ ID NO: 122)
WR ------------------- (SEQ ID NO: 143) Wyeth ------------------- (SEQ ID NO: 188) B26R CLUSTAL O(1.2.4) alinhamento de múltiplas sequências Cop
MEQTLTRLHTYLQQYTKHSPRVVYALLSRGYVIILIVHPSWNDCATGHILIMLLNW HEQK 60 WR ------------------- MLFYLEEPIRGYVIILIVHPSWNDCATGHILIMLLNWHEQK 41 Wyeth
MEQTLTRLHTYLQQYTKHSPRVVYALLSRGYVIILIVHPSWNDCATGHILIMLLNW HEQK 60 Lister
MEQTLTRLHTYLQQYTKHSPRVVYALLSRGYVIILIVHPSWNDCATGHILIMLLNW HEQK 60 . ******************************** Cop EEGQHLLYLFIKHNQGYTLNILRYLLDRFDIQKDEYIYRLSKL------------- ---- 103
WR
EEGQHLLYLFIKHNQGYTLNILRYLLDRFDIQKDEYYNTAFQNCNNNVASYIGYDIN LPT 101 Wyeth
EEGQHLLYLFIKHNQGYTLNILRYLLDRFDIQKDEYYNTAFQNCNNNVASYIGYDIN LPT 120 Lister
EEGQHLLYLFIKHNQGYTLNILRYLLDRFDIQKDEYYNTAFQNCNNNVASYIGYDIN LPT 120 ************************************ : Cop -------- (SEQ ID NO: 123) WR KDGIRLGV 109 (SEQ ID NO: 144) Wyeth KDGIRLGV 128 (SEQ ID NO: 189) Lister KDGIRLGV 128 (SEQ ID NO: 206)
B27R CLUSTAL O(1.2.4) alinhamento de múltiplas sequências Cop
MLPHTSDTTSTFRLKTVFDLVFENRNIIYKADVVNDIIHHRLKVSLPMIKSLFYKMS EFS 60
WR
MLPHTSDTTSTFRLKTVFDLVFENRNIIYKADVVNDIIHHRLKVSLPMIKSLFYKMSL PT 60 Wyeth MLPHTSDTTSTFRLKTVFDLVFENRNIIYKADVVNDIIHHRLK-- VPMIKSLFYKMSEFS 58 Lister
MLPHTSDTTSTFRLKTVFDLVFENRNIIYKADVVNDIIHHRLKVSLPMIKSLFYKMSL PT 60 ******************************************* :*********** : Cop PYDDYYVKKILAYCLLRDESFAELHSKFCLNEDYKSVFMKNISFDKIDSIIVT 113 WR TITT------------------------------------------------- 64 Wyeth PYDDYYVKKILAYCLLRDESFAELHSKFCLNEDYKSVFMKNISFDKIDSIIVT 111 Lister TITT------------------------------------------------- 64 Cop (SEQ ID NO: 124) WR (SEQ ID NO: 207) Wyeth (SEQ ID NO: 190) Lister (SEQ ID NO: 145) B28R CLUSTAL O(1.2.4) alinhamento de múltiplas sequências Cop
MKSVLYSYILFLSCIIINGRDIAPHAPSDGKCKDNEYKRHNLCPGTYASRLCDSKT NTQC 60
WR
MKSVLYSYILFLSCIIINGRDIAPHAPSDGKCKDNEYKRHNLCPGTYASRLCDSKT NTQC 60
Wyeth -----------------------MHHPMESVKTTN--TNAIICV---REHTLPDYANTQC 32 * * :. . * .. :* .: . :**** Cop
TPCGSGTFTSRNNHLPACLSCNGRRDRVTLLTIESVNALPDIIVFSKDHPDARHVF PKQN 120
WR
TPCGSGTFTSRNNHLPACLSCNGRRDRVTRLTIESVNALPDIIVFSKDHPDARHVF PKQN 120 Wyeth
TPCGSGTFTSRNNHLPACLSCNGRRDRVTLLTIESVNALPDIIVFSKDHPDARHVF PKQN 92 ***************************** ****************************** Cop VE 122 (SEQ ID NO: 125) WR VE 122 (SEQ ID NO: 147) Wyeth V- 93 (SEQ ID NO: 527) * C23L/B29R CLUSTAL O(1.2.4) alinhamento de múltiplas sequências Cop -------------- MHVPASLQQSSSSSSSCTEEENKHHMGIDVIIKVTKQDQTPTNDKI 46 WR -------------- MHVPASLQQSSSSSSSCTEEENKHHMGIDVIIKVTKQDQTPTNDKI 46 Tian -------------- MHVPASLQQSSSSSSSCTEEENKHHMGIDVIIKVTKQDQTPTNDKI 46 Wyeth --------------MHVPASLQQ--- SSSSCTEEENKHHMGIDVIIKVTKQDQTPTNDKI 43 Lister
MKQYIVLACMCLAAAAMPASLQQSSSSSSSCTEEENKHHMGIDVIIKVTKQDQTP TNDKI 60 :****** ********************************** Cop
CQSVTEITESESDPDPEVESEDDSTSVEDVDPPTTYYSIIGGGLRMNFGFTKCPQ IKSIS 106
WR
CQSVTEITESESDPDPEVESEDDSTSVEDVDPPTTYYSIIGGGLRMNFGFTKCPQ IKSIS 106 Tian
CQSVTEITESESDPDPEVESEDDSTSVEDVDPPTTYYSIIGGGLRMNFGFTKCPQ IKSIS 106 Wyeth
CQSVTEITESESDPDPEVESEDDSTSVEDVDLPTTYYSIIGGGLRMNFGFTKCPQI KSIS 103 Lister
CQSVTEITESESDPDPEVESEDDSTSVEDVDPPTTYYSIIGGGLRMNFGFTKCPQ IKSIS 120 ******************************* **************************** Cop
ESADGNTVNARLSSVSPGQGKDSPAITREEALAMIKDCEVSIDIRCSEEEKDSDIK THPV 166
WR
ESADGNTVNARLSSVSPGQGKDSPAITHEEALAMIKDCEVSIDIRCSEEEKDSDIK THPV 166 Tian
ESADGNTVNARLSSVSPGQGKDSPAITHEEALAMIKDCEVSIDIRCSEEEKDSDIK THPV 166 Wyeth
ESADGNTVNARLSSVSPGQGKDSPAITHEEALAMIKDCEVSIDIRCSEEEKDSDIK THPV 163 Lister
ESADGNTVNARLSSVSPGQGKDSPAITHEEALAMIKDCEVSIDIRCSEEEKDSDIK THPV 180 ***************************:******************************** Cop
LGSNISHKKVSYEDIIGSTIVDTKCVKNLEFSVRIGDMCKESSELEVKDGFKYVDG SASE 226
WR
LGSNISHKKVSYEDIIGSTIVDTKCVKNLEFSVRIGDMCKESSELEVKDGFKYVDG SASE 226 Tian
LGSNISHKKVSYEDIIGSTIVDTKCVKNLEFSVRIGDMCKESSELEVKDGFKYVDG SASE 226 Wyeth
LGSNISHKKVSYEDIIGSTIVDTKCVKNLEFSVRIGDMCKESSELEVKDGFKYVDG SASE 223 Lister
LGSNISHKKVSYEDIIGSTIVDTKCVKNLEFSVRIGDMCKESSELEVKDGFKYVDG SASE 240 ************************************************************ Cop GATDDTSLIDSTKLKACV 244 (SEQ ID NO: 126) WR GATDDTSLIDSTKLKACV 244 (SEQ ID NO: 531) Tian GATDDTSLIDSTKLKACV 244 (SEQ ID NO: 162) Wyeth GATDDTSLIDSTKLKACV 241 (SEQ ID NO: 192) Lister GATDDTSLIDSTKLKACV 258 (SEQ ID NO: 208) ****************** TABELA 42. SEQUÊNCIAS DE NUCLEOTÍDEOS DE GENOMA DE VÍRUS
VACCINIA DE CEPA COPENHAGEN DO TIPO SELVAGEM E AS SEQUÊNCIAS DE CODIFICAÇÃO (CDSs) DE GENES REPRESENTATIVOS Descriçã Sequência de nucleotídeos o e SEQ
ID
NO Vírus GTAAAATTAAATTAATTATAAAATTATGTATATGATTTACTAACTTTAGT Vaccinia TAGATAAGTTAGTAATACAT Copenh AAATTTTAGTATATTAATATTATATTTTAAATATTTATTTAGTGTCTAGAA agen, AAAAATGTGTGACCAACGA genoma CCGTAGGAAACTCTAGAGGGTAAGAAAAATCAATCGCTTTATAGAG complet ACCATCAGAAAGAGGTTTAATATT a (nº de TTTGTGAGACCATCGAAGGAGAAAGAGATAAAACTTTTTTACGACT
Acesso CCATCAGAAAGAGGTTTAATATTT GenBan TTGTGAGACCATCGAAGGAGAAAGAGATAAAACTTTTTTACGACTC k CATCAGAAAGAGGTTTAATATTTT M35027. TGTGAGACCATCGAAGGAGAAAGAGATAAAACTTTTTTACGACTCC 1) ATCAGAAAGAGGTTTAATATTTTT (SEQ ID GTGAGAAAGGAGAAAGAGATAAAACTTTTTTACGACTCCATCAGAA NO: AGAGGTTTAATATTTTTGTGAGAC 590) CATCGAAGGAGAAAGAGATAAAACTTTTTTACGACTCCATCAGAAA
GAGGTTTAATATTTTTGTGAGACC ATCGAAGGAGAAAGAGATAAAACTTTTTTACGACTCCATCAGAAAG AGGTTTAATATTTTTGTGAGACCA TCGAAGGAGAAAGAGATAAAACTTTTTTACGACTCCATCAGAAAGA GGTTTAATATTTTTGTGAGACCAT CGAAGGAGACTCCATCAGAAAGAGGTTTAATATTTTTGTGAGAAAG GAGAAAGAGATAAAACTTTTTTAC GACTCCATCAGAAAGAGGTTTAATATTTTTGTGAGAAAGGAGAAAG AGATAAAACTTTTTTACGACTCCA TCAGAAAGAGGTTTAATATTTTTGTGAGACCATCGAAGGAGAAAGA GATAAAACTTTTTTACGACTCCAT CAGAAAGAGGTTTAATATTTTTGTGAGACCATCGAAGGAGAAAGAG ATAAAACTTTTTTACGACTCCATC AGAAAGAGGTTTAATATTTTTGTGAGACCATCGAAGAGAGAAAGAG ATAAAACTTTTTTACGACTCCATC AGAAAGAGGTTTAATATTTTTGTGAGACCATCGAAGAGAGAAAGAG ATAAAACTTTTTTACGACTCCATC AGAAAGAGGTTTAATATTTTTGTGAGACCATCGAAGAGAGAAAGAG ATAAAACTTTTTTACGACTCCATC AGAAAGAGGTTTAATATTTTTGTGAGACCATCGAAGAGAGAAAGAG ATAAAACTTTTTTACGACTACTCC ATCAGAAAGAGGTTTAATATTTTTGTGAGACCATCGAAGAGAGAAA GAGATAAAACTTTTTTACGACTCC ATCAGAAAGAGGTTTAATATTTTTGTGAGACCATCGAAGAGAGAAA GAGATAAAACTTTTTTACGACTCC ATCAGAAAGAGGTTTAATATTTTTGTGAGACCATCGAAGAGAGAAA GAGATAAAACTTTTTTACGACTCC ATCAGAAAGAGGTTTAATATTTTTGTGAGACCATCGAAGAGAGAAA GAGATAAAACTTTTTTACGACTCC ATCAGAAAGAGGTTTAATATTTTTGTGAGACCATCGAAGAGAGAAA GAGATAAAACTTTTTTACGACTCC ATCAGAAAGAGGTTTAATATTTTTGTGAGACCATCGAAGAGAGAAA GAGATAAAACTTTTTTACGACTCC ATCAGAAAGAGGTTTAATATTTTTGTGAGACCATCGAAGAGAGAAA GAGATAAAACTTTTTTACGACTCC ATCAGAAAGAGGTTTAATATTTTTGTGAGACCATCGAAGAGAGAAA GAGATAAAACTTTTTTACGACTCC ATCAGAAAGAGGTTTAATATTTTTGTGAGACCATCGAAGAGAGAAA GAGATAAAACTTTTTTACGACTCC ATCAGAAAGAGGTTTAATATTTTTGTGAGACCATCGAAGAGAGAAA GAGATAAAACTTTTTTACGACTCC ATCAGAAAGAGGTTTAATATTTTTGTGAGACCATCGAAGAGAGAAA GAGATAAAACTTTTTTACGACTCC ATCAGAAAGAGGTTTAATATTTTTGTGAGACCATCGAAGAGAGAAA GAGATAAAACTTTTTTACGACTCC ATCAGAAAGAGGTTTAATATTTTTGTGAGACCATCGAAGAGAGAAA GAGATAAAACTTTTTTACGACTCC ATCAGAAAGAGGTTTAATATTTTTGTGAGACCATCGAAGAGAGAAA GAGATAAAACTTTTTTACGACTCC ATCAGAAAGAGGTTTAATATTTTTGTGAGACCATCGAAGAGAGAAA GAGATAAAACTTTTTTACGACTCC ATCAGAAAGAGGTTTAATATTTTTGTGAGACCATCGAAGAGAGAAA GAGATAAAACTTTTTTACGACTCC ATCAGAAAGAGGTTTAATATTTTTGTGAGACCATCGAAGAGAGAAA GAGATAAAACTTTTTTACGACTCC ATCAGAAAGAGGTTTAATATTTTTGTGAGACCATCGAAGAGAGAAA GAGATAAAACTTTTTTACGACTCC ATCAGAAAGAGGTTTAATATTTTTGTGAGACCATCGAAGAGAGAAA GAGATAAAACTTTTTTACGACTCC ATCAGAAAGAGGTTTAATATTTTTGTGAGACCATCGAAGAGAGAAA GATAAAACTTTTTTACGACTCCAT CAGAAAGAGGTTTAATATTTTTGTGAGACCATCGAAGAGAGAAAGA GATAAAACTTTTTTACGACTCCAT CAGAAAGAGGTTTAATATTTTTGTGAGACCATCGAAGAGAGAAAGA GATAAAACTTTTTTACGACTCCAT CAGAAAGAGGTTTAATATTTTTGTGAGACCATCGAAGAGAGAAAGA GAAAGAGATAGTTAGTCTAGATAT TTTTCTTAGTACAAAAGTCAATGTTTTAAAATATATGGACAAGAATTT GTCTGTATAAAAACTTGTGTGA AATTTTGTACCAAAGAAAAAATGTGAGCAGTATCCCCTACATGGATT TTACTAGATCATTTATATACCAA AAAATATTATACGATCTACGTTTTATTATATGATTTTAACGTGTAAATTA TAAACATTATTTTATGATAT ACAATTGTCTGGTAACCTAGATGGGCATAGGGGATGTTGATAAGCT CGACGAGTATATGTTGTTGGACGT TATTGTTTAAGAAATAGTTGATGCATCAGAAAGAGAATAAAAAATATT TTAGTGAGACCATCGAAGAGAG AAAGAGATAAAACTTTTTTACGACTCCATCAGAAAGAGGTTTAATATT TTTGTGAGACCATCGAAGAGAG AAAGAGAATAAAAATATTTTATGACTCCATTGAAGAGAGAAAGAGAA AATGAGAATGAGAATAAAAATAT TTTAGTGACACCATCAGAAAGAGGTTTAATATTTTTGTGAGACCATC GAAGAGAGAAAGAGAATAAAAAT ATTTTATGACTCCATTGAAGAGAGAAAGAGAAAATGAGAATGAGAAT AAAAATATTTTAGTGACACCATC AGAAAGAGGTTTAATATTTTTTATGAGACCATCAAAGAGAGAAAGAG AATAAAAATATTTTTGTAAAACT TTTTTTATGAGACCATCAAAGAGAGAAAGAGAATAAAAATATTTTTGT AAAACTTTTTTTGTGAGACCAT CGAAGAGAGAAAGAGAATAAAAATATTTTTGTAAAACTTTTTTTATGA GACCATCAAAGAGAGAAAGAGA ATAAAAATATTTTTGTAAAACTTTTTTTATGAGACCATCAAAGAGAGA AAGAGAATAAAAATATTTTTGT AAAACTTTTTTTATGAGACCATCAAAGAGAGAAAGAGAATAAAAATA TTTTTGTAAAACTTTTTTTATGA GACCATCAAAGAGAGAAAGAGAATAAAAATATTTTTGTAAAACTTTTT TTATGAGACCATCAAAGAGAGA AAGAGAATAAAAATATTTTTGTAAAACTTTTTTTATGAGACCATCAAA GAGAGAAAGAGAATAAAAATAT TTTTGTAAAACTTTTTTTATGAGACCATCAGAAAGAGGTTTAATATTT TTGTGATACCCTGAAAGGAAAT AGGAATAGGAATAGGAATAGTGTCATAATCGTATCACACTATTGAGA CAGAAAAAGAAGAAGTAACGAGA GGTAACTTTTTGTGAATGTAGTTAAGAACATTTTTGTTTTGCAAACC GGAATATAGTGTCCGGTACACTT TTTTAATTCGTGGTGTGCCTGAATCGTTCGATTAACCCTACTCATCC AATTTCAGATGAATAGAGTTATC GATTCAGACACACGCTTTGAGTTTTGTTGAATCGATGAGTGAAGTA TCATCGGTTGCACCTTCAGATGCC GATCCGTCGACATACTTGAATCCATCCTTGACCTCAAGTTCAGATG ATTCCTTGCACATGTCTCCGATAC GAACGCTAAACTCTAGATTCTTGACACATTTTGTATCGACGATCGTT GAACCGATGATATCTTCGTAACT CACTTTCTTATGAGAGATGTTAGACCCGAGTACTGGATGGGTCTTG ATGTCGCTGTCTTTCTCTTCTTCG CTACATCTGATGTCGATAGACACCTCACAGTCTTTGATCATAGCCAG AGCTTCTTCACGAGTGATCGCGG GAGAGTCCTTACCTTGTCCTGGGGACACGCTGGACAATCTAGCATT CACTGTGTTTCCATCAGCGGATTC TGAGATGGATTTAATCTGAGGACATTTGGTGAATCCAAAGTTCATTC TCAGACCTCCACCGATGATGGAG TAATAAGTGGTAGGAGGATCTACATCCTCGACTGATGTGGAATCATC TTCTGATTCCACCTCGGGATCTG GATCTGACTCGGACTCTGTAATTTCCGTTACGGATTGGCAAATCTTA TCATTGGTCGGTGTTTGGTCTTG CTTTGTGACTTTGATAATAACATCGATTCCCATATGATGTTTGTTTTC TTCTTCCGTACACGAGGAGGAG GATGAGGATGATTGCTGAAGACTGGCAGGCACATGCATGCCAGGA CGATATATTGTTTCATAATTGCTAT TGATTGAGTACTGTTCTTTATGATTCTACTTCCTTACCATGCAATAAA TTAGAATATATTTTCTACTTTT ACGAGAAATTAATTATTGTATTTATTATTTATGGGTGAAAAACTTACTA TAAAAAGCGGGTGGGTTTGGA ATTAGTGATCAGTTTATGTATATCGCAACTACCGGGCATATGGCTATC GACATCGAGAACATTACCCACA TGATAAGAGATTGTATCAGTTTCGTAGTCTTGAGTATTGGTATTACTA TATAGTATATAGATGTCGACGC TAGATATACAGTCTCCGAATGCGGCATGATACCGTCATCATTCTTTG CTTTCGTTAACTGTTTGGAGGAA GAATCTTTGTTATTGCATTTAATCTCGAAATTCAGAGTGCACACCTTT CTCCTGTAAAGAATCCTGAAGT CGCTACCTTATTAAGAACGGAGAAGTATCCATCACGAAATACGGGAT TACAGTCTTTATGATTCATAGTA ATAGTTAGTTCCGACGTTGAGATGGATTCACTGAGACCGGTAGTGG TCGTCCGAGTACACGACGTGTCGT TGACGGGATACAGATTAATTTCCACATCGATATAGTTAAAGGTATTTC TGGGTACGGGTTCGCATTTATC TGCGGAAGAGACGGTGTGAGAATATGTTCCGAGACCACACGGAGA ACAGATGACGTCTCCGGATACTCCG TATCCTATTCCACATTTTGTTTGGGAAACACATGCCTTGCATCCGGA TGATCCTTTGAGAAGACAATAAT ATCCGGGAGAGCATTCACAGATTCTATTGTGAGTAGTGTTACACGA TCGCGTCTTCCGTTACAACTTAGA CAAGCGGGTAAATGATTATTGCGAGATGTGAAGGTACCCGAACCAC ACGGCGTACATTGTGTGTTAGTCT TGCTATCGCATAATCTGGAAGCGTATGTTCCCGGACACAAATTATGG CGTTTGTATTCGTTGTCTTTACA CTTTCCATCGGATGGTGCATGCGGTGCTATATCTCTTCCGTTTATTA TTATACATGAGAGAAACAATATA TACGAGTATAATACGGACTTCATAATTTAATAATGTAGTAATCGTTGTC GTGTTCCTGTTTCCTACTTCT CCAATCATATAGATATTTTCTTTCTATCATGGATAATATTTGTAATGGTT CTTTCCGTACAACATACTGT TTAGATGATATTGCGCATAATTTCCGGAGGCAAATACGATAGTCTAG ATTGACCGATGGTAGACTCTAAT TTATTGAGTGCTTTGTCGACGAGTTTACTTTTACGCTCCATCGATAG ATGGCACTGTTCTATGAGATCGT CGTACATGGGAAATGAAATGTGTCTGTCCGAATGTATGGCTTCAAG ATAGCTGTGATACCGTATACAGGT CGGTGTCGGAGATTCGAATCTCTTTGAGGCGACTTATGTCACGATG ATGGAATCTATCTTATCGAATGAT ATATTTTTCATAAATACACTTTTATAGTCCTCGTTTAAACAGAATTTAC TATGTAGTTCCGCGAATGACT CGTCCCTTAATAGGCAGTAGGCTAGTATCTTTTTTACGTAGTAATCG TCGTAGGGAGAGAATTCTGACAT CTTGTAGAACAACGATTTAATCATAGGTAGAGATACTTTCAGTCTGT GGTGGATGATGTCATTCACAACA TCCGCCTTGTATATGATGTTTCTGTTTTCAAACACCAAGTCGAATAC CGTCTTTAGTCGGAAGGTTGATG TCGTATCCGATGTATGAGGCAACATTGTTGTTACAATTTTGAAAGGC GGTATATGTATTCGTCTTTCTGA ATGTCGAACCTATCTAGTAGATACCGTAGTATATTGAGAGTGTATCCT TGATTATGTTTTATGAATAGAT AAAGTAGATGTTGTCCTTCTTCCTTTTGTTCGTGCCAATTGAGTAAC ATTATGAGAATATGACCTGTTGC ACAATCGTTCCATGATGGGTGTACAATCAAGATTATTACGTATCCTC GAGATAAAAGAGCATACACCACA CGAGGACTATGTTTGGTATACTGTTGAAGGTAAGTGTGTAACCGCG TTAATGTTTGCTCCATAATCTATT 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TTATCTCTTTCTCCTTCGATGGT CTCACAAAAATATTAAACCTCTTTCTGATGGAGTCGTAAAAAAGTTT TATCTCTTTCTCCTTCGATGGTC TCACAAAAATATTAAACCTCTTTCTGATGGTCTCTATAAAGCGATTGA TTTTTCTTACCCTCTAGAGTTT CCTACGGTCGTTGGTCACACATTTTTTTCTAGACACTAAATAAATAG TAAAATTAAATTAATTATAAAAT TATGTATATGATTTACTAACTTTAGTTAGATAAGTTAGTAATACATAAAT TTTAGTATATTAATATTATA TTTTAAA
B8R ATGAGATATATTATAATTCTCGCAGTTTTGTTCATTAATAGTATACACG CDS, C vírus TAAAATAACTAGTTATAAGTTTGAATCCGTCAATTTTGATTCCAAAATT Vaccinia G Copenh AATGGACTGGGGATGGTCTATACAATATATCCCTTAAAAATTATGGCA agen TC (nº de AAGACGTGGCAAACAATGTATACAAATGTACCAGAAGGAACATACG Acesso ACAT GenBan ATCCGCATTTCCAAAGAATGATTTCGTATCTTTCTGGGTTAAATTTGA k AC M35027. AAGGCGATTATAAAGTGGAAGAGTATTGTACGGGACTATGCGTCGA 1: AGTA
169594.. AAAATTGGACCACCGACTGTAACATTGACTGAATACGACGACCATAT 170412) CAA (SEQ ID TTTGTACATCGAGCATCCGTATGCTACTAGAGGTAGCAAAAAGATTC NO: CTA 591) TTTACAAACGCGGTGACATGTGTGATATCTACTTGTTGTATACGGCT
AAC TTCACATTCGGAGATTCTGAAGAACCAGTAACATATGATATCGATGA CTA CGATTGCACGTCTACAGGTTGCAGCATAGACTTTGCCACAACAGAA AAAG TGTGCGTGACAGCACAGGGAGCCACAGAAGGGTTTCTCGAAAAAA TTACT CCATGGAGTTCGGAAGTATGTCTGACACCTAAAAAGAATGTATATAC ATG TGCAATTAGATCCAAAGAAGATGTTCCCAATTTCAAGGACAAAATGG CCA GAGTTATCAAGAGAAAATTTAATAAACAGTCTCAATCTTATTTAACTA AA TTTCTCGGTAGCACATCAAATGATGTTACCACTTTTCTTAGCATGCT TAA
CTTGACTAAATATTCATAA B14R ATGAACCATTGTCTCCTAGCAATTAGTGCCGTATACTTTAAAGCAAA CDS, ATG Vírus GTTGACGCCATTCGAAAAGGAATTTACCAGTGATTATCCCTTTTACG Vaccinia TAT Copenh CACCAACGGAAATGGTAGATGTAAGTATGATGTCTATGTACGGCGA agen GCTA (nº de TTTAATCACGCATCTGTAAAGGAATCATTCGGCAACTTTTCAATCATA Acesso GA GenBan ACTGCCATATGTTGGAGATACTAGTATGATGGTCATTCTTCCAGACA k AGA M35027. TTGATGGATTAGAATCCATAGAACAAAATCTAACAGATACAAATTTTA 1: AG
172887.. AAATGGTGTAACTCTCTGGATGCTATGTTTATAGATGTTCACATTCC 173555) CAA
(SEQ ID GTTTAAGGTAACAGGCTCGTATAATCTGGTGGATACTCTAGTAAAGT NO: CAG 592) GACTGACAGAGGTGTTCGGTTCAACTGGAGATTATAGCAATATGTG
TAAT TTAGATGTGAGTGTCGACGCTATGATCCACAAAACGTATATAGATGT CAA TGAAGAGTATACAGAAGCAGCTGCAGCAACTTGTGCACTGGTGTC AGACT GTGCATCAACAATTACAAATGAGTTCTGTGTAGATCATCCGTTCATC TAT GTGATTAGGCATGTTGATGGAAAAATTCTTTTCGTTGGTAGATATTG CTC
TCCAACAACTAATTGTTAA B15R ATGACAGCCAACTTTAGTACCCACGTCTTTTCACCACAGCACTGTG CDS, GATG Vírus TGACAGACTGACCAGTATTGATGACGTCAAACAATGTTTGACTGAA Vaccinia TATA Copenh TTTATTGGTCGTCCTATGCATACCGCAACAGGCAATGCGCTGGACA agen GTTG (nº de TATTCCACACTCCTCTCTTTTAGAGATGATGCGGAATTAGTGTTCAT Acesso CGA GenBan CATTCGCGAGCTGGTAAAAAATATGCCGTGGGATGATGTCAAAGAT k TGTA M35027. CAGAAATCATCCGTTGTTATATACCGGATGAGCAAAAAACCATCAGA 1: GAG
173632.. ATTTCGGCCATCATCGGACTTTGTGCATATGCTGCTACTTACTGGG 174081) GAGG (SEQ ID TGAAGACCATCCCACTAGTAACAGTCTGAACGCATTGTTTGTGATG NO: CTTG 593) AGATGCTCAATTACGTGGATTATAACATCATATTCCGGCGTATGAATT
GA B16R ATGAGTATACTACCTGTTATATTTCTTCCTATATTTTTTTATTCTTCATT CDS, CGTTCAGACTTTTAACGCGTCTGAATGTATCGACAAA Vírus GGGTAATATTTT Vaccinia GCATCATTCATGGAGTTAGAAAACGAGCCAGTAATCTTACCATGTCC Copenh TCA agen AATAAATACGCTATCATCCGGATATAATATATTAGATATTTTATGGGAA (nº de A Acesso AACGAGGAGCGGATAATGATAGAATTATACCGATAGATAATGGTAGC GenBan AAT k ATGCTAATTCTGAACCCGACACAATCAGACTCTGGTATTTATATATGC M35027. AT 1: TACCACGAACGAAACCTACTGTGACATGATGTCGTTAAATTTGACAA
174164.. TCG 175144) TGTCTGTCTCAGAATCAAATATAGATTTTATCTCGTATCCACAAATAG (SEQ ID TA NO: AATGAGAGATCTACTGGCGAAATGGTATGTCCCAATATTAATGCATT
594) TAT
TGCTAGTAACGTAAACGCAGATATTATATGGAGCGGACATCGACGC CTTA GAAATAAGAGACTTAAACAACGGACACCTGGAATTATTACCATAGAA GAT GTTAGAAAAAATGATGCTGGTTATTATACATGTGTTTTAGAATATATAT A CGGTGGCAAAACATATAACGTAACCAGAATTGTAAAATTAGAGGTAC GGG ATAAAATAATACATCCTACTATGCAATTACCAGAAGGTGTTGTAACTT CA ATAGGTAGTAATTTGACTATTGCGTGTAGAGTATCGTTGAGACCTCC CAC AACGGATGCAGACGTCTTTTGGATAAGTAATGGTATGTATTACGAAG AAG ATGATGGGGACGGAGACGGTAGAATAAGTGTAGCAAATAAAATCTA TATG ACCGATAAGAGACGTGTTATTACATCCCGGTTAAACATTAATCCTGT CAA GGAAGAAGATGCTACAACGTTTACGTGTATGGCGTTTACTATTCCTA GCA
TCAGCAAAACAGTTACTGTTAGTATAACGTGA B17L ATGTCTAGAAAGTTTATGCAGGTGTATGAATATGACAGAGAGCAATA CDS, TCT Vírus CGATGAGTTCATTGAAGACAGATATAACGATAGTTTTATCACTAGTC Vaccinia CAG Copenh AATACTATAGCGCGGAAAAATACATGTGTAGATATACTACACTAAATC agen AC (nº de AATTGTGTAAACGTACGACGATGTGCGTTAGATTCCAAGTTATTACA Acesso TGA GenBan TATCATAACCAATTGTAAAATATATAACAATATAGAATTAGTTAGGGCG k A M35027. CAAAATTTGTTTATTATCTGGATCTGATAAAATGTAATTGGGTATCTAA 1: G
175190.. GTAGGTGATTCGGTTCTATATCCCGTTATATTTATAACACATACAAGT 176212) AC (SEQ ID TAGAAATTTAGATAAAGTCTCTGTAAAAACATACAAGGGCGTTAAAG NO: TAA 595) AAAAACTTAATAGATGCGCGGATCATGCTATTGTAATTAATCCATTCG
TC AAGTTTAAACTAACGTTGCCGAACAAAACAAGTCATGCAAAGGTATT GGT TACATTTTGTAAGTTAAGAACGGATATAACTCCGGTAGAAGCTCCGC TTC CGGGCAATGTTTTAGTTTATACATTTCCTGACATTAATAAAAGAATTC CT GGATATATACATGTCAACATAGAAGGATGTATCGATGGAATGATTTAT AT AAATTCTTCAAAGTTTGCGTGTGTTTTAAAACTACATAGATCAATGTA TC GCATTCCACCCTTTCCTATAGATATCTGCTCTTGTTGTTCACAATATA CT AACGATGACATAGAAATTCCCATTCATGATTTAATAAAGGATGTGGC AAT TTTTAAAAATAAGGAGACGGTATATTATCTAAAATTAAATAATAAAACT A TAGCTAGATTTACGTACTTTAATAATATAGATACTGCAATTACACAAGA A CACGAGTATGTCAAAATAGCTCTAGGTATAGTCTGCAAGTTAATGAT TAA TAATATGCATAGTATCGTGGGAGTTAATCATAGCAATACGTTCGTCAA TT
GCTTGTTGGAAGATAATGTATAA B18R ATGAGTCGTCGTCTGATTTATGTTTTAAATATCAACCGCAAATCAACT CDS, CA vírus TAAAATACAAGAGAATGAAATATATACATATTTTAGTCATTGCAATATA Vaccinia G Copenh ACCATACTTCTACAGAACTTGATTTTGTAGTTAAAAACTATGATCTAA agen AC (nº de AGACGACAACATGTAACTGGGTATACTGCACTACACTGCTATTTGTA Acesso TAA GenBan TAATTACTTTACAAACGATGTACTGAAGATATTATTAAATCATGACGTA k A M35027. ATGTAACGATGAAAACCAGTAGCGGACGTATGCCTGTTTATATATTG 1: CTT
176349.. ACTAGATGTTGTAATATTTCACATGATGTAGTGATAGATATGATAGAC 178073) AA (SEQ ID AGATAAAAACCACTTATCGCATAGAGACTATTCCAACCTACTACTAG NO: AGT 596) ATATAAAATCTCGTTACATGTTATTGAAGGAAGAGGATATCGATGAGA
AC ATAGTATCAACTTTATTAGATAAGGGAATCGATCCTAACTTTAAACAA GA CGGATATACAGCGTTACATTATTATTATTTGTGTCTCGCACACGTTTA TA AACCAGGTGAGTGTAGAAAACCGATAACGATAAAAAAGGCCAAGC GAATT ATTTCTTTGTTTATACAACATGGAGCTAATCTAAACGCGTTAGATAAT TG TGGTAATACACCATTCCATTTGTATCTTAGTATTGAAATGTGTAATAAT A TTCATATGACTAAAATGCTGTTGACTTTTAATCCGAATTTCAAAATAT GT AATAATCATGGATTAACGCCTATACTATGTTATATAACTTCCGACTACA T ACAACACGATATTCTTGTTATGTTAATACATCACTATGAAACAAATGT TG GAGAAATGCCGATAGATGAGCGTCGTATGATCGTATTCGAGTTTATC AAA ACATATTCTACACGTCCTGCAGATTCGATAACTTATTTGATGAATAGG TT TAAAAATATAAATATTTATACCCGCTATGAAGGAAAGACATTATTACAC G TAGCATGTGAATATAATAATACACAAGTAATAGATTATCTTATACGTAT C AACGGAGATATAAATGCGTTAACCGACAATAACAAACACGCTACACA ACT CATTATAGATAACAAAGAAAATTCCCCATATACCATTAATTGTTTACTG T ATATACTTAGATATATTGTAGATAAGAATGTGATAAGATCGTTGGTGG AT CAACTTCCATCTCTACCTATCTTCGATATAAAATCATTTGAGAAATTC AT ATCCTACTGTATACTTTTAGATGACACATTTTACGATAGGCACGTTAA GA ATCGCGATTCTAAAACGTATCGATACGCATTTTCAAAATACATGTCGT TC GATAAATACGATGGTATAATAACTAAATGTCACGACGAAACAATGTTA CT CAAACTGTCCACTGTTCTAGACACTACACTATATGCAGTTTTAAGAT GTC ATAATTCGAGAAAGTTAAGAAGATACCTCACCGAGTTAAAAAAATATA AT AACGATAAGTCCTTTAAAATATATTCTAATATTATGAATGAGAGATACC T TAATGTATATTATAAAGATATGTACGTGTCAAAGGTATATGATAAACTA T TTCCTGTTTTCACAGATAAAAATTGTCTACTAACATTACTACCTTCAG AA ATTATATACGAAATATTATACATGCTGACAATTAACGATCTTTATAATAT
ATCGTATCCACCTACCAAAGTATAG B19R ATGACGATGAAAATGATGGTACATATATATTTCGTATCATTATCATTAT CDS, T vírus GTTATTGCTATTCCACAGTTACGCCATAGACATCGAAAATGAAATCA Vaccinia CAG Copenh AATTCTTCAATAAAATGAGAGATACTCTACCAGCTAAAGACTCTAAAT agen GG (nº de TTGAATCCAGCATGTATGTTCGGAGGCACAATGAATGATATGGCCA Acesso CTCT GenBan AGGAGAGCCATTCAGTGCAAAGTGTCCTCCTATTGAAGACAGTCTT k TTAT
M35027. CGCACAGATATAAAGACTATGTGGTTAAATGGGAGAGGCTAGAAAA 1: GAAT
178145.. AGACGGCGACAGGTTTCTAATAAACGTGTTAAACATGGTGATTTATG 179206) GAT (SEQ ID AGCCAACTATACATCTAAATTCAGTAACCGTAGGTATTTGTGCACCG NO: TAA 597) CTACAAAGAATGGTGACTGTGTTCAGGGTATAGTTAGATCTCATATT
AAA AAACCTCCTTCATGCATTCCAAAAACATATGAACTAGGTACTCATGA TAA GTATGGCATAGACTTATACTGTGGAATTCTTTACGCAAAACATTATAA TA ATATAACTTGGTATAAAGATAATAAGGAAATTAATATCGACGACATTAA G TATTCACAAACGGGAAAGGAATTAATTATTCATAATCCAGAGTTAGAA GA TAGCGGAAGATACGACTGTTACGTTCATTACGACGACGTTAGAATC AAGA ATGATATCGTAGTATCAAGATGTAAAATACTTACGGTTATACCGTCAC AA GACCACAGGTTTAAACTAATACTAGATCCGAAAATCAACGTAACGAT AGG AGAACCTGCCAATATAACATGCACTGCTGTGTCAACGTCATTATTGA TTG ACGATGTACTGATTGAATGGGAAAATCCATCCGGATGGCTTATAGG ATTC GATTTTGATGTATACTCTGTTTTAACTAGTAGAGGCGGTATCACCGA GGC GACCTTGTACTTTGAAAATGTTACTGAAGAATATATAGGTAATACATA TA AATGTCGTGGACACAACTATTATTTTGAAAAAACCCTTACAACTACA GTA
GTATTGGAGTAA B20R ATGGATGAAGATACGCGACTATCTAGGTATTTGTATCTCACCGATAG CDS, AGA vírus ACATATAAATGTAGACTCTATTAAACAGTTGTGTAAAATATCAGATCC Vaccinia TA Copenh ATGCATGTTATAGATGTGGATGTACGGCTTTACATGAGTACTTTTATA agen AT (nº de TATAGATCAGTCAACGGAAAATACAAGTATAGATACAACGGTTACTAT Acesso CA GenBan ATATTATTCATCTAGCGATTATGAAAATTATAATGAATATTATTATGATG k ATTATGATAGAACTGGTATGAACAGCGAGAGCGATAGTGAGAGTGA M35027. TAAT 1: ATATCAATCAAAACAGAATATGAGAATGAATATGAATTCTATGATGAA
179300.. AC 179683) ACAAGATCAAAGTACACAACACAATGACTTATAA
(SEQ ID NO: 598) B21R ATGTCGTTAGAATCATTTATCATAACTACGTTTAATAATAATTCATCAA CDS, C vírus GAATATCGATAACATGTGTCATTTATACGTTAAAGTCTGTCCGTCTTC Vaccinia TC Copenh TATTGTTTAGACTGTTTGTAGAATGCTGTGATATAAACAAACTAGTAG agen AA (nº de GGTACGACTCCGTTACACTGTTATCTAATGAATGAAGGATTTGAATC Acesso ATC GenBan TGTTTTAAAAAACCTATTAAAGGAGTATGTCATGAATACGTTTAATGT k TC M35027. ATGACATCCATTACACAAATATTTAA 1:
180585.. 180860) (SEQ ID NO: 599) B22R ATGATATCACTCTCATTCCTCATCCACAACCCATTAAAAAAATGGAAA CDS, TT vírus AAAGCCCTCTATTAGCATAAACGGCTACAGGTCTACCTTTACAATGG Vaccinia CCT Copenh TTCCTTGTGCCCAGTTCAGACCCTGTCATTGCCACGCTACTAAGGA agen CTCC (nº de CTGAATACCGTGGCCGACGTCAGACATTGTCTGACTGAATACATCC Acesso TGTG GenBan GGTTTCTCATAGATGGACCCATAGAGAAAGCGCAGGGTCTCTCTAC k AGGC M35027. TTCTCATCTCTTTCAGAACTGATGCAACGGAGCTCTTTGGTGGTGA 1: GTTG
181199.. AAGGATTCACTTCCGTGGGACAATATCGACAATTGCGTGGAGATCA 181744) TTAA (SEQ ID ATGTTTCATCAGAAATGACTCCATGAAAACCGCCGAAGAACTTCGT NO: GCAA 600) TCATTGGACTTTGTACTCAATCAGCTATCGTCTCTGGAAGAGTCTTC
AAC GATAAGTATATCGACATACTACTTATGCTGCGAAAGATTCTGAACGA GAA
CGACTATCTCACCCTCTTGGATCATATCCGCACTGCTAAATACTAA B23R ATGATTGCCTTCATCATTTTTCGTGAAATAGGAATAATTAGCACCAGA CDS, AT vírus AGCTATGGATTATTGTGGTAGAGAGTGCACTATTCTATGTCGTCTAC Vaccinia TGG Copenh ATGAAGATGTGACGTACAAAAAAATAAAACTAGAGATTGAAACGTGT agen CAC (nº de AACTTATCAAAACATATAGATAGACGAGGAAACAATGCGCTACATTG Acesso TTA GenBan CGTCTCCAATAAATGCGATACAGACATTAAGATTGTTCGACTGTTAC k TCT M35027. CTCGCGGAGTCGAGAGACTTTGTAGAAACAACGAAGGATTAACTC 1: CGCTA
181791.. GGAGCATACAGTAAGCATAGATACGTAAAATCTCAGATTGTGCATCT 182951) ACT (SEQ ID GATATCCAGCTATTCGAATTCCTCTAACGAACTCAAGTCGAATATAA NO: ATG 601) ATTTCGATCTGTCTTCGGATAATATCGACTTACGTCTGCTAAAATACC
TA ATTGTGGATAAACGGATACGTCCGTCCAAGAATACGAATTATGCAAT CAA TGGTCTCGGATTGGTGGATATATACGTAACGACGCCTAATCCGAGA CCAG AAGTATTGCTATGGCTTCTTAAATCAGAATGTTACAGCACCGGTTAC GTA TTTCGTACCTGTATGTACAACAGTGATATGTGTAAGAACTCTCTTCAT TA CTATATATCGTCTCATAGAGAATCTCAATCTCTATCCAAGGATGTAAT TA AATGTTTGATCAATAACAATGTTTCCATCCATGGCAGAGACGAAGGA GGA TCTTTACCCATCCAATACTACTGGTCTTTCTCAACCATAGATATAGAG AT TGTTAAATTATTATTAATAAAGGATGTGGACACGTGTAGAGTATACGA CG TCAGCCCTATATTAGAGGCGTATTATCTAAACAAGCGATTTAGAGTAA CC CCATATAATGTAGACATGGAAATCGTTAATCTTCTTATTGAGAGACGT CA TACTCTTGTCGACGTAATGCGTAGTATTACTTCGTACGATTCCAGAG AAT ATAACCACTACATCATCGATAACATTCTAAAGAGATTTAGACAACAG GAT GAATCCATCGTACAAGCCATGTTGATAAACTACTTACATTACGGCGA TAT GGTCGTTCGATGCATGTTAGATAACGGACAACAACTATCCTCTGCA CGAC
TACTTTGTTAA B24R ATGTACGGTCTGATATTATCGAGATTTAATAATTGCGGGTATCACTGT CDS, TA vírus TGAAACCATACTAATAGATGTATTTGATATACTAAGCAAGTACATGGA Vaccinia TG Copenh ATATAGATATGATCGATAATGAGAATAAAACTCTACTATATTACGCGGT agen C (nº de GATGTCAATAATATACAATTTGCAAAGCGGTTATTGGAATATGGAGC Acesso GAG GenBan TGTTACAACATCACGCTCGATAATCAATACGGCCATCCAGAAAAGC k AGTT M35027. ACCAAAGAGAAAACAAAACGAGGATAGTTGATTTATTACTTAGCTAC 1: CAT
183045.. CCCACTCTAGAGACTATGATTGACGCATTTAATAGAGATATACGCTAT 183497) CT (SEQ ID ATATCCTGAACCATTATTCGCCTGTATCAGATACGCCTTAATCCTAGA NO: TG 602) ATGATTTTCCTTCTAAAGTAAGTATGATATCGCCGGTCATCATAAGGA
AC
TAA B25R ATGTCTCGCATAAACATTACTAAAAAAATATATTGTTCTGTTTTTCTTT CDS, T vírus TCTTTTTCTTTTTCTTTCGTACATCTCTAATTATGAAAAAGTAAATGAT Vaccinia G Copenh AAATGTATGAGATGGGCGAGATGGACGAGATTGTGAGCATCGTTCG agen CGAC (nº de AGTATGTGGTACATACCTAACGTATTTATGGACGACGGTAAGAATGA Acesso AGG GenBan TCACGTTTCTGTCAACAATGTTTGTCATATGTATTTTACGTTCTTTGA k TG M35027. TGGATACATCGTCTCATCTGTTTAAGCTAGTTATTAAACACTGCGAT 1: CTG
183882.. AATAAACGAGGTAACTCTCCATTACATTGCTATACGATGAATACACG 184661) ATT (SEQ ID TAATCCATCTGTATTAAAGATATTGTTACACCACGGCATGCGTAACTT NO: TG 603) ATAGCAAGGATGAAAAAGGACACCACTATCTGATTCATTCACTATCA
ATC GATAACAAGATCTTTGATATACTAACGGACACCATTGATGACTTTAGT AA ATCATCCGATCTATTGCTGTGTTATCTTAGATATAAATTCAATGGGAG CT TAAACTACTACGTTCTGTACAAAGGATCCGACCCTAATTGCGCCGA CGAG GATGAACTCACTTCTCTTCATTACTACTGTAAACACATATCCACGTT CTA CAAAAGCAATTATTACAAGTTAAGTCACACTAAGATGCGAGCCGAG AAGC GATTCATCTACGCGATAATAGATTATGGAGCAAACATTAACGCGGTT ACA
CACTTACCTTCAACAGTATACCAAACATAG B26R ATGGAGCAAACATTAACGCGGTTACACACTTACCTTCAACAGTATAC CDS, CAA vírus ACATAGTCCTCGTGTGGTGTATGCTCTTTTATCTCGAGGATACGTAA Vaccinia TAA Copenh TCTTGATTGTACACCCATCATGGAACGATTGTGCAACAGGTCATATT agen CTC (nº de ATAATGTTACTCAATTGGCACGAACAAAAGGAAGAAGGACAACATC Acesso TACT GenBan TTATCTATTCATAAAACATAATCAAGGATACACTCTCAATATACTACGG k T M35027. ATCTACTAGATAGGTTCGACATTCAGAAAGACGAATACATATACCGC 1: CTT
184606.. TCAAAATTGTAA 184917) (SEQ ID NO: 604) B27R ATGTTGCCTCATACATCGGATACGACATCAACCTTCCGACTAAAGAC CDS, GGT vírus ATTCGACTTGGTGTTTGAAAACAGAAACATCATATACAAGGCGGAT Vaccinia GTTG Copenh TGAATGACATCATCCACCACAGACTGAAAGTATCTCTACCTATGATT agen AAA (nº de TCGTTGTTCTACAAGATGTCAGAATTCTCTCCCTACGACGATTACTA Acesso CGT GenBan AAAAAAGATACTAGCCTACTGCCTATTAAGGGACGAGTCATTCGCG k GAAC M35027. TACATAGTAAATTCTGTTTAAACGAGGACTATAAAAGTGTATTTATGA 1: AA
184923.. AATATATCATTCGATAAGATAGATTCCATCATCGTGACATAA 185264) (SEQ ID NO: 605) B28R ATGAAGTCCGTATTATACTCGTATATATTGTTTCTCTCATGTATAATAA CDS, T vírus AAACGGAAGAGATATAGCACCGCATGCACCATCCGATGGAAAGTGT Vaccinia AAAG Copenh ACAACGAATACAAACGCCATAATTTGTGTCCGGGAACATACGCTTC agen CAGA (nº de TTATGCGATAGCAAGACTAACACACAATGTACGCCGTGTGGTTCGG Acesso GTAC GenBan CTTCACATCTCGCAATAATCATTTACCCGCTTGTCTAAGTTGTAACG k GAA M35027. GACGCGATCGTGTAACACTACTCACAATAGAATCTGTGAATGCTCT 1: CCCG
185625.. GATATTATTGTCTTCTCAAAGGATCATCCGGATGCAAGGCATGTGTT 185993) TCC (SEQ ID CAAACAAAATGTGGAATAG
NO: 606) B29R ATGCATGTGCCTGCCAGTCTTCAGCAATCATCCTCATCCTCCTCCT CDS, CGTG vírus TACGGAAGAAGAAAACAAACATCATATGGGAATCGATGTTATTATCA Vaccinia AAG Copenh TCACAAAGCAAGACCAAACACCGACCAATGATAAGATTTGCCAATC agen CGTA (nº de ACGGAAATTACAGAGTCCGAGTCAGATCCAGATCCCGAGGTGGAA Acesso TCAGA GenBan AGATGATTCCACATCAGTCGAGGATGTAGATCCTCCTACCACTTATT k ACT M35027. CCATCATCGGTGGAGGTCTGAGAATGAACTTTGGATTCACCAAATG 1: TCCT
186730.. CAGATTAAATCCATCTCAGAATCCGCTGATGGAAACACAGTGAATG 187464) CTAG (SEQ ID ATTGTCCAGCGTGTCCCCAGGACAAGGTAAGGACTCTCCCGCGAT NO: CACTC 607) GTGAAGAAGCTCTGGCTATGATCAAAGACTGTGAGGTGTCTATCGA
CATC AGATGTAGCGAAGAAGAGAAAGACAGCGACATCAAGACCCATCCA GTACT CGGGTCTAACATCTCTCATAAGAAAGTGAGTTACGAAGATATCATCG GTT CAACGATCGTCGATACAAAATGTGTCAAGAATCTAGAGTTTAGCGTT CGT ATCGGAGACATGTGCAAGGAATCATCTGAACTTGAGGTCAAGGATG GATT CAAGTATGTCGACGGATCGGCATCTGAAGGTGCAACCGATGATACT TCAC
TCATCGATTCAACAAAACTCAAAGCGTGTGTCTGA C1L ATGGTGAAAAATAATAAAATAAGTAATAGCTGCCGAATGATAATGAGT CDS, AC vírus TAACCCTAATAATATTCTAATGAGACATCTCAAAAATCTTACAGATGA Vaccinia TG Copenh AATTTAAATGTATTATTCATCGATCATCTGATTTTCTTTATTTGTCCGA agen T (nº de AGTGACTATACTAGTATAACCAAAGAAACATTAGTTAGTGAGATCGTA Acesso GA GenBan AGAATATCCGGATGATTGTAATAAAATATTAGCTATTATATTTTTGGTG k T M35027. TAGATAAAGACATAGATGTAGATATAGAAACTAAACTAAAGCCTAAAC 1: CC
24226.. GCAGTTAGATTTGCCATTCTAGACAAGATGACTGAGGATATTAAACT 24900) AAC (SEQ ID GGATCTAGTCAGACATTATTTTAGATACATAGAACAAGATATACCACT NO: AG
608) GTCCGTTGTTCAAAAAAATAGATTCGTACAGAACAAGAGCCATTAAT
AAG TATTCGAAAGAGTTAGGATTGGCTACTGAATACTTTAATAAGTACGG ACA TTTAATGTTTTATACTCTCCCTATACCATATAACAGATTCTTTTGTAGA A ATTCGATAGGCTTTTTAGCGGTTCTATCGCCTACGATAGGACACGTA AAA GCATTTTATAAATTCATAGAATATGTTTCTATAGATGATAGACGCAAAT T
TAAAAAGGAATTAATGTCGAAATGA C2L ATGGAAAGCGTGATATTTTCTATCAATGGGGAAATTATACAAGTGAAT CDS, AA vírus GGAAATTATTACGGCGTCTCCGTATAATTTTTTTAAACGCATTCAGG Vaccinia ATC Copenh ACCATCTAAAGGATGAAGCGATTATATTGAATGGTATAAACTATCACG agen CG (nº de TTTGAATCGCTATTAGACTATATGCGCTGGAAGAAGATAAACATCAC Acesso CAT GenBan AAACAATGTAGAAATGATACTAGTTGCTGCCGTAATAATTGATGTTC k CGC M35027. CTGTAGTAGATCTATGTGTAAAAACTATGATTCATAATATTAATTCCAC 1: A
22618.. AATTGTATAAGGATGTTTAACTTTTCTAAAAGATATGGAATTAAAAAA 24156) CT (SEQ ID ATATAATGCGTCGATGTCAGAAATAATCAACAATATTACTGCGGTGA NO: CAT 609) CCGATCCAGAATTTGGAAAATTATCAAAGGATGAACTGACAACTATC
TTA TCCCACGAAGACGTTAACGTAAATCATGAGGATGTTACAGCTATGAT ATT ATTAAAGTGGATACATAAAAATCCAAACGATGTAGATATCATCAACAT TT TACATCCCAAGTTTATGACTAATACTATGCGCAATGCTATATCATTGT TG GGATTAACTATATCCAAATCTACAAAGCCAGTGACACGAAATGGTAT AAA ACATAATATAGTAGTCATTAAAAACTCTGATTATATATCCACAATAACC C ATTACTCTCCTAGGACAGAATATTGGACGATAGTCGGTAATACAGAT AGA CAATTCTATAATGCAAATGTTTTACATAATTGTCTATACATTATTGGCG G CATGATTAACAATAGACATGTTTATTCCGTATCGCGGGTAGATCTTG AAA CGAAAAAATGGAAAACGGTTACTAATATGTCGTCGTTAAAATCAGAA GTT AGTACTTGTGTTAACGATGGAAAGTTATATGTAATAGGAGGATTAGA ATT TTCTATTTCAACGGGTGTGGCAGAATATTTGAAACACGGCACTTCG AAAT GGATAAGACTTCCAAACTTAATTACTCCTAGATATTCAGGCGCGTCG GTA TTCGTAAACGATGATATATATGTAATGGGTGGAGTTTATACCACGTAT GA AAAATATGTAGTATTAAACGATGTGGAATGTTTCACTAAAAATCGTTG GA TAAAAAAGTCTCCCATGCCTAGACATCATAGTATAGTTTATGCTGTAG AG TACGACGGCGACATCTATGTAATTACTGGAATTACTCACGAGACTCG TAA TTATCTATACAAATATATAGTTAAGGAAGACAAATGGATAGAATTGTAC A TGTACTTTAACCATGTAGGAAAGATGTTCGTGTGTTCTTGCGGTGAT TAT ATCTTAATTATAGCAGATGCAAAATACGAATATTATCCAAAATCAAATA C TTGGAATTTGTTCGATATGTCAACTCGTAATATCGAATATTATGATATG T TTACTAAAGATGAGACTCCAAAGTGTAACGTAACTCATAAGTCACTG CCA
TCGTTTTTGAGCAACTGTGAAAAACAATTTCTACAATAG F1L ATGTTGTCGATGTTTATGTGTAATAATATCGTAGATTATGTAGATGATA CDS, T vírus AGATAATGGTATAGTACAGGATATAGAAGATGAGGCTAGCAATAATG Vaccinia TTG Copenh ATCACGACTATGTATATCCACTTCCAGAAAATATGGTATATAGATTTG agen AC (nº de AAGTCCACTAACATACTCGATTATCTATCAACGGAACGGGACCATGT Acesso AAT GenBan GATGGCTGTTCGATACTATATGAGTAAACAACGTTTAGACGACTTGT k ATA M35027. GACAGTTGCCCACAAAGACTAGATCATATATAGATATTATCAACATAT 1: AT
33417.. TGTGATAAAGTTAGTAATGATTATAATAGGGACATGAATATCATGTATG 34097) A (SEQ ID TATGGCATCTACAAAATCATTTACAGTTTATGACATAAATAACGAAGT NO: TA 610) ATACTATACTAATGGATAACAAGGGGTTGGGTGTAAGATTGGCGACA
ATT TCATTTATAACCGAATTGGGTAGACGATGTATGAATCCAGTAAAAAC TAT AAAAATGTTTACTCTACTATCGCATACTATATGCGATGATTGTTTTGTA G ATTATATAACGGACATTTCACCACCAGATAATACCATCCCTAACACTA GC ACGCGTGAATATCTAAAGCTTATTGGCATCACAGCTATCATGTTTGC TAC
ATATAAAACTCTCAAATACATGATAGGATAA F2L ATGTTCAACATGAATATTAACTCACCAGTTAGATTTGTTAAGGAAACT CDS, AA vírus CAGAGCTAAATCTCCTACTAGGCAATCGCCGGGTGCTGCCGGATAT Vaccinia GATT Copenh TGTATAGCGCTTACGATTATACTATCCCTCCAGGAGAAAGACAGTTA agen ATT (nº de AAGACAGATATTAGTATGTCCATGCCTAAGATTTGCTATGGTAGAATA Acesso GC GenBan TCCTAGGTCTGGTCTGTCACTAAAAGGCATTGATATAGGAGGTGGT k GTAA M35027. TAGACGAAGATTATAGGGGAAACATAGGAGTCATTCTTATTAATAATG 1: GA
34109.. AAATGTACGTTTAATGTAAATACTGGAGATAGAATAGCTCAGCTAATC 34552) TA (SEQ ID TCAACGTATATATTATCCAGAACTGGAAGAAGTACAATCTCTAGATAG NO: TA 611) CAAATAGAGGAGATCAAGGGTTTGGATCAACAGGACTTAGATAA F3L ATGCCGATATTTGTCAATACTGTGTACTGTAAGAATATATTAGCATTG CDS, TC vírus TATGACTAAGAAATTCAAAACAATTATTGATGCTATAGGTGGCAATAT Vaccinia AA Copenh TAGTCAATTCTACGATATTGAAAAAGTTATCTCCTTACTTTCGCACAC agen AT (nº de TTACGTCAAAAATACACGAAAAATAAAGATCCAGTTACAAGGGTTTG Acesso TCT GenBan AGACCTTGACATTCACAGTTTAACTTCTATAGTTATTTACTCGTATAC k TG M35027. GAAAGGTATATATAGATAGTCATAACGTCGTCAATTTATTACGTGCTT 1: CT
34576.. ATATTAACCTCTGTAGAATTTATCATCTACACTTGTATAAACTTTATCT 36018) T (SEQ ID ACGAGATTTTAGAAAGGAATATTGTGTCGAGTGTTACATGATGGGTA NO: TAG 612) AATACGGACTATCCAATCTCTTATGTCATACTAAAAACTTTATTGCCA
AA CACTTTTTGGAACTGGAAGATGACATCATAGACAATTTTGATTATCTA TC TATGAAACTTATTCTAGAAAGCGATGAACTAAATGTTCCAGATGAGG ATT ATGTAGTTGATTTTGTCATTAAGTGGTATATAAAGCGAAGAAATAAAT TA GGAAATCTGCTACTCCTTATCAAAAATGTAATCAGGTCAAATTATCTT TC TCCCAGAGGTATAAATAATGTAAAATGGATACTAGACTGTACCAAAAT AT TTCATTGTGATAAACAACCACGCAAATCATACAAGTATCCATTCATAG AG TATCCTATGAACATGGATCAAATTATAGATATATTCCATATGTGTACAA G TACTCATGTTGGAGAAGTAGTATATCTCATCGGTGGATGGATGAACA ATG AAATACATAACAATGCTATAGCTGTAAATTATATATCAAACAATTGGAT T CCAATTCCTCCGATGAATAGCCCCAGACTGTATGCTACGGGGATAC CCGC TAACAATAAATTATACGTAGTAGGAGGTCTACCAAATCCCACATCTGT TG AGCGTTGGTTCCACGGGGATGCTGCTTGGGTTAATATGCCGAGTC TTCTG AAACCTAGATGTAATCCAGCAGTGGCATCCATAAACAATGTTATATAC GT AATGGGAGGACATTCTGAAACTGATACAACTACAGAATATTTGCTAC CCA ATCATGATCAGTGGCAGTTTGGACCATCCACTTATTATCCTCATTATA AA TCATGCGCGTTAGTGTTCGGTAGAAGGTTATTCTTGGTTGGTAGAA ATGC GGAATTTTATTGTGAATCCAGCAATACATGGACTCTGATAGATGATC CTA TTTATCCGAGGGATAATCCAGAATTGATCATAGTGGATAATAAACTG CTA TTGATAGGAGGATTTTATCGTGGATCGTATATAGATACTATAGAAGTG TA
CAATCATCACACTTATTCATGGAATATATGGGATGGTAAATAA K1L ATGGATCTGTCACGAATTAATACTTGGAAGTCTAAGCAGCTGAAAA CDS, GCTT vírus TCTCTCTAGTAAAGATACATTTAAGGCGGATGTCCATGGACATAGTG Vaccinia CCT Copenh TGTATTATGCAATAGCTGATAATAACGTGCGTCTAGTATGTACGTTGT agen TG (nº de AACGCTGGAGCATTGAAAAATCTTCTAGAGAATGAATTTCCATTACA Acesso TCA GenBan GGCAGCCACATTAGAAGATACCAAAATAGTAAAGATTTTGCTATTCA k GTG M35027. GAATGGATGATTCACAATTTGATGACAAAGGAAACACCGCATTGTAT 1: TAT
28121.. GCGGTTGATAGTGGTAACATGCAAACGGTGAAACTGTTTGTTAAGA 28975) AAAA (SEQ ID TTGGAGACTGATGTTCTATGGGAAAACTGGATGGAAAACTTCATTTT
NO: ATC 613) ATGCCGTCATGCTTAATGATGTAAGTATTGTATCATACTTTCTTTCAG
AA ATACCATCTACTTTTGATCTGGCTATTCTCCTTAGTTGTATTCACACC AC TATAAAAAATGGACACGTGGATATGATGATTCTCTTGCTCGACTATAT GA CGTCGACAAACACCAATAATTCCCTTCTCTTCATTCCGGACATTAAA TTG GCTATAGATAATAAAGACATTGAGATGTTACAGGCTCTGTTCAAATAC GA CATTAATATCTACTCTGTTAATCTGGAAAATGTACTATTGGATGATGC CG AAATAACTAAGATGATTATAGAAAAGCATGTTGAATACAAGTCTGACT CC TATACAAAAGATCTCGATATCGTCAAGAATAATAAATTGGATGAAATA AT TAGCAAAAACAAGGAACTCAGACTCATGTACGTCAATTGTGTAAAG AAAA
ACTAA K2L ATGATTGCGTTATTGATACTATCGTTAACGTGTTCAGTGTCTACCTAT CDS, CG vírus TCTGCAAGGATTTACCAATGCCGGTATAGTAGCGTATAAAAATATTCA Vaccinia AG Copenh ATGATAATATTGTCTTCTCACCGTTTGGTTATTCGTTTTCTATGTTTAT agen G (nº de TCGCTATTGCCTGCATCAGGTAATACTAGAATAGAATTATTGAAGACT Acesso AT GenBan GGATTTGAGAAAAAGAGATCTGGGTCCAGCATTTACAGAATTAATAT k CAG M35027. GATTAGCTAAGCTGAAAACATCTAAATATACGTACACTGATCTAACTT 1: AT
29204.. CAAAGTTTCGTAGATAATACTGTGTGCATTAAACCGTTGTATTATCAA 30313) CA (SEQ ID ATATCATAGATTCGGCCTATATAGATTAAACTTTAGACGAGATGCGGT NO: TA 614) ATAAAATTAATTCTATAGTAGAACGTAGATCCGGTATGTCTAATGTAG
TA GATTCTAATATGCTCGACAATAATACTCTATGGGCAATCATTAATACTA T ATATTTTAAAGGTACATGGCAATATCCGTTTGATATCACTAAAACACG CA ATGCTAGTTTTACTAATAAGTACGGTACGAAAACGGTTCCCATGATG AAC GTAGTTACTAAATTGCAAGGAAATACAATCACAATCGATGACGAAGA ATA TGATATGGTGCGCCTTCCGTATAAGGATGCTAATATTAGTATGTACCT GG CAATAGGTGATAATATGACCCATTTCACAGATTCTATTACGGCTGCA AAA TTAGACTATTGGTCGTTTCAATTAGGGAATAAAGTGTACAATCTTAAA CT CCCTAAATTTTCTATCGAAAATAAGAGGGATATTAAGTCGATAGCCG AAA TGATGGCTCCTAGTATGTTTAATCCAGATAATGCGTCGTTTAAACATA TG ACTAGGGACCCATTATATATTTATAAAATGTTTCAGAATGCAAAGATA GA TGTCGACGAACAAGGAACTGTAGCAGAGGCATCTACTATCATGGTA GCTA CGGCGAGATCATCTCCTGAAAAACTGGAATTTAATACACCATTTGTG TTC ATCATTAGACATGATATTACTGGATTTATATTGTTTATGGGTAAGGTAG A
ATCTCCTTAA K3L ATGCTTGCATTTTGTTATTCGTTGCCCAATGCGGGCGATGTAATAAA CDS, GGG vírus CAGAGTATACGAGAAGGATTATGCTCTATACATTTATCTTTTTGACTA Vaccinia TC Copenh CTCACTCTGAAGCTATCTTGGCAGAGAGTGTTAAGATGCATATGGA agen TAGA (nº de TATGTTGAATATAGGGATAAACTGGTAGGGAAAACTGTAAAAGTTAA Acesso AGT GenBan GATTAGAGTTGATTATACAAAAGGATATATAGATGTCAATTACAAAAG k GA M35027. TGTGTAGACATCAATAA 1:
30363.. 30629) (SEQ ID NO: 615) K4L ATGAATCCGGATAATACAATCGCAGTGATTACAGAGACTATTCCTATA CDS, GG vírus TATGCAATTTGATAAAGTATATTTGTCTACATTTAACATGTGGAGGGA Vaccinia AA Copenh TTCTATCCAATACCACAAAAACACTAGATATATCATCTTTTTATTGGA agen GT (nº de TTATCGGATGAAGTGGGTACGAATTTCGGCACGATAATATTAAACGA Acesso GAT GenBan TGTACAATTACCCAAAAGAGGAGTACGAGTTAGAGTAGCCGTCAAT k AAAT M35027. CTAACAAACCATTAAAGGATGTTGAAAGACTACAAATGGCCGGAGT 1: TGAA
30681.. GTACGATACATAGATATTACAAATATCCTAGGAGGAGTTCTTCATACA 31955) AA (SEQ ID ATTTTGGATATCTGATAATACACATATTTATTTAGGAAGCGCTAACATG NO: G 616) ATTGGAGATCACTAACTCAGGTCAAAGAATTGGGTATTGCGATCTTC
AAT AATAGGAACTTGGCAGCGGATCTCACTCAAATTTTTGAGGTATACTG GTA TCTTGGAGTTAACAATCTACCATATAATTGGAAAAACTTTTATCCGTC GT ATTATAATACAGATCATCCTCTTAGTATTAACGTAAGTGGTGTTCCAC AC TCTGTATTTATTGCTTCTGCACCGCAACAACTATGTACTATGGAAAG AAC CAATGATTTAACCGCTTTATTGTCATGTATTAGAAATGCGAGTAAATT CG TTTATGTATCTGTTATGAACTTTATCCCTATTATTTATTCGAAGGCGG GT AAAATTTTGTTTTGGCCTTATATAGAAGATGAATTAAGAAGATCCGCT AT AGACAGACAAGTATCCGTTAAGCTATTGATTAGTTGCTGGCAACGAT CTT CGTTTATCATGAGAAACTTTTTAAGATCTATCGCTATGCTAAAATCTA AA AACATAGATATAGAAGTAAAGCTATTTATTGTACCAGATGCTGATCCT CC CATTCCGTATTCTAGGGTAAACCATGCCAAATATATGGTAACCGATAA AA CGGCCTATATAGGTACCTCAAATTGGACAGGAAATTACTTTACGGAT ACA TGTGGAGCATCTATTAATATTACACCGGATGATGGATTAGGTCTTCG TCA ACAATTGGAAGATATTTTTATGCGTGATTGGAATTCAAAATACAGCTA TG AATTGTACGATACTAGTCCTACTAAAAGGTGTAAACTATTAAAAAATA TG AAACAATGTACAAATGATATATACTGCGATGAGATACAACCGGAAAA AGA
AATTCCTGAATATTCTCTTGAATAA K5L ATGGGAGCAACAATTTCTATACTAGCCTCTTACGATAATCCAAACTT CDS, GTT vírus TACAGCAATGATTCTAATGTCTCCTCTAGTTAATGCAGATGCTGTTT Vaccinia CAA Copenh GACTGAATCTGCTAGCTGCCAAACTTATGGGAACCATCACACCAAA agen TGCG (nº de CCAGTCGGAAAGCTATGTCCAGAATCAGTATCTAGAGATATGGATAA Acesso AGT
GenBan TTATAAATACCAATACGACCCATTAATCAATCATGAAAAAATTAAGGC k TG M35027. GATTTGCTAGTCAGGTCTTGAAGGCTACCAACAAGGTTAGAAAAAT 1: AATT
32087.. TCCAAGATTAACACCCCCCGACTCTCATACTCCAGGGAACAAACAA 32497) TGAG (SEQ ID ATTAGTGATGTTTCAGGTGCATATTATTTCATGCAACATGCAAATTGT NO: AA 617) TAGAGAAATAA K6L ATGAGTGCAAACTGTATGTTCAATCTGGACAATGATTACATATATTGG CDS, AA vírus ACCTATTACATATCCTAAGGCATTAGTATTCATAAGTCATGGAGCTGG Vaccinia TA Copenh AACATTCTGGACGTTATGACGAACTAGCTGAAAACATATCATCGTTA agen GGA (nº de ATTTTAGTATTCTCACATGATCATATTGGACATGGAAGAAGTAATGGT Acesso GA GenBan AAAAATGATGATTGATGACTTTGGTACAGCACGTGGTAACTATTAA k M35027. 1:
32519.. 32764) (SEQ ID NO: 618) K7R ATGGCGACTAAATTAGATTATGAGGATGCTGTTTTTTACTTTGTGGAT CDS, GA vírus TGATAAAATATGTAGTCGCGACTCCATCATCGATCTAATAGATGAATA Vaccinia TA Copenh TTACGTGGAGAAATCATGTTATAGTGTTTAACAAAGATATTACCAGTT agen GT (nº de GGAAGACTGTACAAGGAATTGATGAAGTTCGATGATGTCGCTATAC Acesso GGTA GenBan CTATGGTATTGATAAAATTAATGAGATTGTCGAAGCTATGAGCGAAG k GAG M35027. ACCACTACATCAATTTTACAAAAGTCCATGATCAGGAAAGTTTATTC 1: GCT
32903.. ACCATAGGAATATGTGCTAAAATCACTGAACATTGGGGATACAAAAA 33352) GAT (SEQ ID TTCAGAATCTAGATTCCAATCATTGGGAAACATTACAGATCTGATGA NO: CCG 619) ACGATAATATAAACATCTTGATACTTTTTCTAGAAAAAAAATTGAATTG
A M1L ATGATATTTGTTATAGAGAGTAAATTGTTGCAAATATACAGAAATAGA CDS, AA vírus TAGAAATATTAATTTTTATACTACAATGGACAACATTATGTCGGCCGA Vaccinia GT Copenh ATTATCTATCTCTTTATGCCAAATATAATAGTAAAAATTTAGATGTATTT agen AGGAATATGCTACAAGCTATCGAACCTTCTGGAAATAATTATCACATT (nº de CT Acesso ACATGCGTATTGTGGAATTAAAGGACTAGATGAACGATTTGTCGAA GenBan GAAC k TTCTTCATAGAGGATACTCTCCAAATGAGACGGATGATGATGGAAAT M35027. TAT 1: CCATTGCATATAGCTTCTAAAATTAATAATAATAGAATAGTCGCGATG
25928.. CT 27346) GCTGACGCACGGCGCAGATCCAAACGCGTGTGATAAACATAATAAA (SEQ ID ACAC NO: CTCTATATTATCTCTCGGGAACAGATGATGAAGTCATAGAGAGAATA 620) AAT
TTATTGGTACAGTATGGAGCCAAGATTAACAACTCGGTTGATGAAGA AGG ATGTGGTCCGTTGTTGGCGTGTACAGATCCTTCAGAAAGAGTGTTT AAAA AAATAATGTCCATCGGATTCGAAGCCAGGATAGTGGATAAATTTGGC AAA AATCATATTCATAGACATCTTATGTCAGACAATCCAAAAGCTTCTACA AT CTCATGGATGATGAAACTAGGAATTAGTCCCTCAAAACCAGATCATG ATG GAAATACACCTCTCCATATTGTATGCTCTAAAACAGTCAAGAATGTA GAC ATTATAGATCTTTTACTTCCATCAACGGATGTTAATAAACAAAACAAA TT CGGAGATAGTCCTCTTACACTTCTTATTAAGACATTGAGCCCAGCG CATC TTATTAACAAATTGCTATCGACTAGCAATGTTATTACGGATCAAACAG TT AATATTTGTATCTTTTATGATAGAGATGATGTTCTAGAAATTATTAATG A TAAAGGAAAGCAATATGATTCTACCGATTTTAAGATGGCTGTTGAAG TGG GATCCATAAGATGCGTCAAATATCTATTAGACAATGATATAATTTGTG AA GATGCTATGTACTACGCTGTACTATCTGAATACGAAACAATGGTAGA CTA TCTATTGTTCAATCATTTTAGTGTAGACTCTGTAGTTAACGGTCATAC AT GTATGAGCGAATGTGTAAGACTAAATAACCCAGTCATTTTATCGAAG CTG ATGTTACATAATCCTACTTCTGAGACCATGTATCTAACTATGAAAGCT AT AGAAAAAGATAAACTAGATAAATCTATTATTATTCCGTTTATCGCGTAC T TTGTACTTATGCATCCGGACTTTTGTAAAAATCGTAGATACTTTACTT CA TATAAACGTTTTGTAACTGATTATGTTCATGAAGGAGTATCTTACGAA GT
ATTCGATGATTATTTTTAA M2L ATGGTTTACAAATTAGTCTTGCTCTTTTGTATCGCATCTCTCGGGTAT CDS, TC vírus GGTAGAATACAAGAATACTATATGTCCTCCTCGACAAGATTACCGGT Vaccinia ATT Copenh GGTACTTTGCCGCCGAACTCACTATTGGTGTAAATTACGACATTAAT agen TCT (nº de ACTATTATTGGTGAGTGTCATATGAGTGAAAGCTATATCGACAGAAA Acesso TGC GenBan TAACATAGTGTTGACTGGATACGGACTAGAAATAAACATGACCATCA k TGG M35027. ATACGGATCAGAGATTTGTGGCAGCGGCTGAGGGTGTTGGTAAAG 1: ATAAT
27324.. AAACTATCTGTTCTGTTGTTTACCACTCAGCGGCTAGATAAAGTTCA 27986) TCA (SEQ ID TAATATTAGTGTGACAATAACATGTATGGAAATGAATTGTGGAACCAC NO: AA 621) AATACGATAGCGATCTTCCGGAATCAATTCATAAATCATCATCGTGT
GAT ATAACTATAAATGGATCATGTGTGACATGTGTTAACTTAGAGACTGAT CC AACAAAGATTAATCCCCATTACCTACACCCCAAGGATAAATATCTTTA TC ATAATTCTGAGTATGGCATGCGTGGTAGTTATGGCGTGACATTTATA GAT GAACTAAACCAGTGCCTTCTTGACATAAAAGAACTAAGTTATGATAT TTG
TTATAGAGAGTAA N1L ATGAGGACTCTACTTATTAGATATATTCTTTGGAGAAATGACAACGAT CDS, CA vírus AACCTATTATAATGATGATTTTAAAAAGCTTATGTTGTTGGATGAATT Vaccinia GG Copenh TAGATGACGGCGATGTATGTACATTGATTAAGAACATGAGAATGACG agen CTG (nº de TCCGACGGTCCATTGCTAGATAGATTGAATCAACCAGTTAATAATATA Acesso GA GenBan AGACGCTAAGCGAATGATCGCTATTAGTGCCAAAGTGGCTAGAGAC k ATTG M35027. GTGAACGTTCAGAAATTAGATGGGAAGAGTCATTCACCATACTCTTT 1: AGG
24887.. ATGATTGAAACATATTTTGATGATCTAATGATTGATCTATATGGTGAAA 25240) A
(SEQ ID ATAA NO: 622) N2L ATGACGTCCTCTGCAATGGATAACAATGAACCTAAAGTACTAGAAAT CDS, GGT vírus ATATGATGCTACAATTTTACCCGAAGGTAGTAGCATGGATCCAAATAT Vaccinia CA Copenh TGGATTGTATAAACAGACACATCAATATGTGTATACAACGCACCTATA agen GT (nº de TCTAGTATAATTGCCATTTTGAATAGATTCCTAACAATGAACAAGGAT Acesso GA GenBan ACTAAACAATACACAGTGTCATATAATTAAAGAATTTATGACATACGA k AC M35027. AAATGGCGATTGACCATTATGGAGAATATGTAAACGCTATTCTATATC 1: AA
25359.. ATTCGTAAAAGACCTAATCAACATCACACCATTGATCTGTTTAAAAAA 25886) AT (SEQ ID AAAAAGAACCCCGTATGACACTTTTAAAGTGGATCCCGTAGAATTC NO: GTAA 623) AAAAAGTTATCGGATTTGTATCTATCTTGAACAAATATAAACCGGTTT
AT AGTTACGTCCTGTACGAGAACGTCCTGTACGATGAGTTCAAATGTT TCAT
TAACTACGTGGAAACTAAGTATTTCTAA TABELA 43. SEQUÊNCIAS DE NUCLEOTÍDEOS DE GENOMAS DE
VÍRUS VACCINIA RECOMBINANTE O genoma SKV que compreende uma deleção no gene B8R e um sítio loxP: SEQ ID NO: 210
TCAGACACACGCTTTGAGTTTTGTTGAATCGATGAGTGAAGTATCATCGGTTG CACCTTCAGATGCCGATCCGTCGACAT ACTTGAATCCATCCTTGACCTCAAGTTCAGATGATTCCTTGCACATGTCTCCG ATACGAACGCTAAACTCTAGATTCTTG ACACATTTTGTATCGACGATCGTTGAACCGATGATATCTTCGTAACTCACTTTC TTATGAGAGATGTTAGACCCGAGTAC TGGATGGGTCTTGATGTCGCTGTCTTTCTCTTCTTCGCTACATCTGATGTCGA TAGACACCTCACAGTCTTTGATCATAG CCAGAGCTTCTTCACGAGTGATCGCGGGAGAGTCCTTACCTTGTCCTGGGG ACACGCTGGACAATCTAGCATTCACTGTG TTTCCATCAGCGGATTCTGAGATGGATTTAATCTGAGGACATTTGGTGAATCC AAAGTTCATTCTCAGACCTCCACCGAT GATGGAGTAATAAGTGGTAGGAGGATCTACATCCTCGACTGATGTGGAATCAT CTTCTGATTCCACCTCGGGATCTGGAT CTGACTCGGACTCTGTAATTTCCGTTACGGATTGGCAAATCTTATCATTGGTC GGTGTTTGGTCTTGCTTTGTGACTTTG ATAATAACATCGATTCCCATATGATGTTTGTTTTCTTCTTCCGTACACGAGGAG GAGGATGAGGATGATTGCTGAAGACT GGCAGGCACATGCATGCCAGGACGATATATTGTTTCATAATTGCTATTGATTGA GTACTGTTCTTTATGATTCTACTTCC TTACCATGCAATAAATTAGAATATATTTTCTACTTTTACGAGAAATTAATTATTGT ATTTATTATTTATGGGTGAAAAAC TTACTATAAAAAGCGGGTGGGTTTGGAATTAGTGATCAGTTTATGTATATCGCA ACTACCGGGCATATGGCTATCGACAT CGAGAACATTACCCACATGATAAGAGATTGTATCAGTTTCGTAGTCTTGAGTAT TGGTATTACTATATAGTATATAGATG TCGACGCTAGATATACAGTCTCCGAATGCGGCATGATACCGTCATCATTCTTT GCTTTCGTTAACTGTTTGGAGGAAGAA TCTTTGTTATTGCATTTAATCTCGAAATTCAGAGTGCACACCTTTCTCCTGTAA AGAATCCTGAAGTCGCTACCTTATTA AGAACGGAGAAGTATCCATCACGAAATACGGGATTACAGTCTTTATGATTCATA GTAATAGTTAGTTCCGACGTTGAGAT GGATTCACTGAGACCGGTAGTGGTCGTCCGAGTACACGACGTGTCGTTGAC GGGATACAGATTAATTTCCACATCGATAT AGTTAAAGGTATTTCTGGGTACGGGTTCGCATTTATCTGCGGAAGAGACGGT GTGAGAATATGTTCCGAGACCACACGGA GAACAGATGACGTCTCCGGATACTCCGTATCCTATTCCACATTTTGTTTGGGA AACACATGCCTTGCATCCGGATGATCC TTTGAGAAGACAATAATATCCGGGAGAGCATTCACAGATTCTATTGTGAGTAG TGTTACACGATCGCGTCTTCCGTTACA ACTTAGACAAGCGGGTAAATGATTATTGCGAGATGTGAAGGTACCCGAACCA CACGGCGTACATTGTGTGTTAGTCTTGC TATCGCATAATCTGGAAGCGTATGTTCCCGGACACAAATTATGGCGTTTGTATT CGTTGTCTTTACACTTTCCATCGGAT GGTGCATGCGGTGCTATATCTCTTCCGTTTATTATTATACATGAGAGAAACAAT ATATACGAGTATAATACGGACTTCAT AATTTAATAATGTAGTAATCGTTGTCGTGTTCCTGTTTCCTACTTCTCCAATCAT ATAGATATTTTCTTTCTATCATGGA TAATATTTGTAATGGTTCTTTCCGTACAACATACTGTTTAGATGATATTGCGCAT AATTTCCGGAGGCAAATACGATAGT CTAGATTGACCGATGGTAGACTCTAATTTATTGAGTGCTTTGTCGACGAGTTT ACTTTTACGCTCCATCGATAGATGGCA CTGTTCTATGAGATCGTCGTACATGGGAAATGAAATGTGTCTGTCCGAATGTA TGGCTTCAAGATAGCTGTGATACCGTA TACAGGTCGGTGTCGGAGATTCGAATCTCTTTGAGGCGACTTATGTCACGAT GATGGAATCTATCTTATCGAATGATATA TTTTTCATAAATACACTTTTATAGTCCTCGTTTAAACAGAATTTACTATGTAGTTC CGCGAATGACTCGTCCCTTAATAG GCAGTAGGCTAGTATCTTTTTTACGTAGTAATCGTCGTAGGGAGAGAATTCTG ACATCTTGTAGAACAACGATTTAATCA TAGGTAGAGATACTTTCAGTCTGTGGTGGATGATGTCATTCACAACATCCGCC TTGTATATGATGTTTCTGTTTTCAAAC ACCAAGTCGAATACCGTCTTTAGTCGGAAGGTTGATGTCGTATCCGATGTATG AGGCAACATTGTTGTTACAATTTTGAA AGGCGGTATTATAGTATTCGTCTTTCTGAATGTCGAACCTATCTAGTAGATACC GTAGTATATTGAGAGTGTATCCTTGA TTATGTTTTATGAATAGATAAAGTAGATGTTGTCCTTCTTCCTTTTGTTCGTGCC AATTGAGTAACATTATGAGAATATG ACCTGTTGCACAATCGTTCCATGATGGGTGTACAATCAAGATTATTACGTATCC TCGAGATAAAAGAGCATACACCACAC GAGGACTATGTTTGGTATACTGTTGAAGGTAAGTGTGTAACCGCGTTAATGTT TGCTCCATAATCTATTATCGCGTAGAT GAATCGCTTCTCGGCTCGCATCTTAGTGTGACTTAACTTGTAATAATTGCTTTT GTAGAACGTGGATATGTGTTTACAGT AGTAATGAAGAGAAGTGAGTTCATCCTCGTCGGCGCAATTAGGGTCGGATCC TTTGTACAGAACGTAGTAGTTTAAGCTC CCATTGAATTTATATCTAAGATAACACAGCAATAGATCGGATGATTTACTAAAGT CATCAATGGTGTCCGTTAGTATATC AAAGATCTTGTTATCGATTGATAGTGAATGAATCAGATAGTGGTGTCCTTTTTC ATCCTTGCTATCAAAGTTACGCATGC CGTGGTGTAACAATATCTTTAATACAGATGGATTAAATCGTGTATTCATCGTATA GCAATGTAATGGAGAGTTACCTCGT TTATTCAGATCGCAGTGTTTAATAACTAGCTTAAACAGATGAGACGATGTATCC ACATCAAAGAACGTAAAATACATATG ACAAACATTGTTGACAGAAACGTGACCTTCATTCTTACCGTCGTCCATAAATA CGTTAGGTATGTACCACATACTGTCGC GAACGATGCTCACAATCTCGTCCATCTCGCCCATCTCATACATTTCATCATTTA CTTTTTCATAATTAGAGATGTACGAA AGAAAAAGAAAAAGAAAAAGAAAAACAGAACAATATATTTTTTTAGTAATGTTT ATGCGAGACATATAAAATAAACTCCG TGTTTATGATGCCGGTAAATGTTTTTATCATCTTGGACGGAATCGATTTTGTAA TATGTCATGGAAACAAATGAAACAGG ACATTATCACTCCATGATAAATTATTTAATGGAGTAATAAAGTATCTCCATGGGT AATTTCGAAATCAAGTTATCGTCTG TATTAATGTTGTCCACTATGGAGTCGATCCTCTCACTGTTCTTTACAGTTTCTG TAATGATGGACGTTAGTTCTTTTTTG TACCATTTGATGTCGGATTCTTTGCGTATCTCAGTCTGTGGCGTTTGCTTCGT TTAAATAATATATCAAACATGGAGACG CCTGATATGTAGGCATTCTTCATTCTATTAATGTCTACTCTATAGCGCTTTAGTT CCTTATGATGACCGGCGATATCATA CTTACTTTAGAAGGAAAATCATCATCTAGGATTAAGGCGTATCTGATACAGGC GAATAATGGTTCAGGATATAGATAGCG TATATCTCTATTAAATGCGTCAATCATAGTCTCTAGAGTGGGATGGTAGCTAAG TAATAAATCAACTATCCTCGTTTTGT TTTCTCTTTGGTAACTGCTTTTCTGGATGGCCGTATTGATTATCGAGCGTGAT GTTGTAACACTCGCTCCATATTCCAAT AACCGCTTTGCAAATTGTATATTATTGACATCGACCGCGTAATATAGTAGAGTT TTATTCTCATTATCGATCATATCTAT ATCATCCATGTACTTGCTTAGTATATCAAATACATCTATTAGTATGGTTTCATAAC AGTGATACCCGCAATTATTAAATC TCGATAATATCAGACCGTACATACATAGACGGCCATTGTTAGATATGTGATTTA CAGCCGCGTGTCCATATTTTCCACGA TAAACCTTACGACGTTTACATCGACGAGATTATTATTAACAAAGTAGTCGTGCA GAGGATAGTTGTTGTCCGTTATCTAA CATGCATCGAACGACCATATCGCCGTAATGTAAGTAGTTTATCAACATGGCTT GTACGATGGATTCATCCTGTTGTCTAA ATCTCTTTAGAATGTTATCGATGATGTAGTGGTTATATTCTCTGGAATCGTACG AAGTAATACTACGCATTACGTCGACA AGAGTATGACGTCTCTCAATAAGAAGATTAACGATTTCCATGTCTACATTATAT GGGGTTACTCTAAATCGCTTGTTTAG ATAATACGCCTCTAATATAGGGCTGACGTCGTATACTCTACACGTGTCCACATC CTTTATTAATAATAATTTAACAATCT CTATATCTATGGTTGAGAAAGACCAGTAGTATTGGATGGGTAAAGATCCTCCTT CGTCTCTGCCATGGATGGAAACATTG TTATTGATCAAACATTTAATTACATCCTTGGATAGAGATTGAGATTCTCTATGAG ACGATATATAGTAATGAAGAGAGTT CTTACACATATCACTGTTGTACATACAGGTACGAAATACGTAACCGGTGCTGTA ACATTCTGATTTAAGAAGCCATAGCA ATACTTCTGGTCTCGGATTAGGCGTCGTTACGTATATATCCACCAATCCGAGA CCATTGATTGCATAATTCGTATTCTTG GACGGACGTATCCGTTTATCCACAATTAGGTATTTTAGCAGACGTAAGTCGAT ATTATCCGAAGACAGATCGAAATCATT TATATTCGACTTGAGTTCGTTAGAGGAATTCGAATAGCTGGATATCAGTAGATG CACAATCTGAGATTTTACGTATCTAT GCTTACTGTATGCTCCTAGCGGAGTTAATCCTTCGTTGTTTCTACAAAGTCTC TCGACTCCGCGAGAGAGTAACAGTCGA ACAATCTTAATGTCTGTATCGCATTTATTGGAGACGTAACAATGTAGCGCATTG TTTCCTCGTCTATCTATATGTTTTGA TAAGTTGTGACACGTTTCAATCTCTAGTTTTATTTTTTTGTACGTCACATCTTCA TCCAGTAGACGACATAGAATAGTGC ACTCTCTACCACAATAATCCATAGCTATTCTGGTGCTAATTATTCCTATTTCACG AAAAATGATGAAGGCAATCATTCCT CATAAGATGATAAAAAGTGTAGTGAGAGAGCATGAAGGAGATTTAGTATTTAG CAGTGCGGATATGATCCAAGAGGGTGA GATAGTCGTTCTCGTTCAGAATCTTTCGCAGCATAAGTAGTATGTCGATATACT TATCGTTGAAGACTCTTCCAGAGACG ATAGCTGATTGAGTACAAAGTCCAATGATTGCACGAAGTTCTTCGGCGGTTTT CATGGAGTCATTTCTGATGAAACATTT AATGATCTCCACGCAATTGTCGATATTGTCCCACGGAAGTGAATCCTTCAACT CACCACCAAAGAGCTCCGTTGCATCAG TTCTGAAAGAGATGAGAAGCCTGTAGAGAGACCCTGCGCTTTCTCTATGGGT CCATCTATGAGAAACCCACAGGATGTAT TCAGTCAGACAATGTCTGACGTCGGCCACGGTATTCAGGGAGTCCTTAGTAG CGTGGCAATGACAGGGTCTGAACTGGGC ACAAGGAAAGGCCATTGTAAAGGTAGACCTGTAGCCGTTTATGCTAATAGAG GGCTTTAATTTCCATTTTTTTAATGGGT TGTGGATGAGGAATGAGAGTGATATCATATTGAGATACGTAGTTATGTAGAGG TGTATTTCCTATATTATTTACTTTCGG TTTCATATTTTACCAACTCTTTAATAAATTTCTTTTCACGATGCATCTTATTGAAT GACGTTTTCTCATAAGTGGACATA TAGATGCAGAAGTAATGAAGAAAAGTATTACCTCTATCATCTACATAATTAGGG TCTGCTCCTTTTTTTAACAACTTATA CAGTACGTAGTAGTAGTTTATCGGTTTTAAATCAAGTCTAGAATATATAGTGGAT TAATATATTTTTATATTAGCTAAAG CTATCTATACTATCAGAAAGCATATCATTCTCAACTTCATCATGAGTTAAATATTT GTGTAATGGATGTCATGAACATTA AACGTATTCATGACATACTCCTTTAATAGGTTTTTTAAAACAGATGATTCAAATC CTTCATTCATTAGATAACAGTGTAA CGGAGTCGTACCTTCTACTAGTTTGTTTATATCACAGCATTCTACAAACAGTCT AAACAATAGAGAAGACGGACAGACTT TAACGTATAAATGACACATGTTATCGATATTCGTTGATGAATTATTATTAAACGTA GTTATGATAAATGATTCTAACGAC ATCTCTCGCTAGAGATAAAATCTAGTATCGTATCATTAAACATCTTTGCATCATA CTCGCATAGCATAGTTTTTCATAAT TAATACAATATTTAAAAGACTTATTCGGAAAGTATTTTAATACATGTATCATCGAT GGAGATCCATATGAGGAGTCACTT GTAGTTCTTCAGTAGTAATAACAGTGCTATCATCGATAGTATAATTATATGTAGA AGGTTCATATGTTGTTGTAATTGGA GTAACTGTTGGTAGTTCTTCCGTGGAATCAATAATTATACTAACAGCAATAGTA TAATTATATAAATATGTTCCGTTGAT ATCACATATTTTAATGAACTCATTTCTAACACCCTCAGCTATATCTGTCCAATTA AATGTAGCCAACAATCTACTACGTT CTCTTTGATTGACTACTTGTACGGTAGCGACGCTACACTATCTTTATTGTCTTC TACATGCTCCAATTGAATGTCATGAT ACAACGCAGTTTTTCTTATGCATGTTTCATAACACCACGAACATGTCGCAGTA AGATATATAGCCAGAGATAATTTCTGT AAATTCATGATTGCCGGTCATAAACAAGCCCGTCAATAATTGTGGCTATATATT CAGTTTATAGAGCAAAATAATTAAGC ACAATAGCGCTTAATCTCAAAATATGTTATGTTTATTTTTTTCATATTAAACATAC TGGTTAAAATCCTCTAAAGGCTGA TCTTCATCTATAAATCAAGATCATAATTACATTTAGACAGTGGTTTCATGTTTATA AAAATGTTCTTTTTGTGTGAATAA 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TTGAGGTCAAGGATGGATTCAAGTATGTCGACGGATCGGCATCTGAAGGTGC
AACCGATGATACTTCACTCATCGATTCA +++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++ +++++++++++++++++++
ACAAAACTCAAAGCGTGTGTCTGA ++++++++++++++++++++++++ (sequência que tem * abaixo das letras: porção restante do gene C2L (isto é, o gene C2L parcial); sequência que tem # abaixo das letras: porção restante do gene F3L (isto é, o gene F3L parcial); sequência que tem - abaixo das letras: porção restante do gene B14R (isto é, o gene B14R parcial); sequência que tem + abaixo das letras: porção restante do gene B29R (ITR) (isto é, o gene B29R(ITR) parcial); sublinhado: sequência que substitui uma porção da sequência de genes B8R; itálico e negrito: porção restante do gene B8R (isto é, o gene B8R parcial); sequência que tem ^ abaixo das letras: sítio loxP; sequências que têm x abaixo das letras: sequências reguladoras de transcrição potencial do gene B9R.) Genoma SKVB8R+ que compreende um gene B8R intacto: SEQ ID NO: 624
TCAGACACACGCTTTGAGTTTTGTTGAATCGATGAGTGAAGTATCATCGGTTG CACCTTCAGATGCCGAT CCGTCGACATACTTGAATCCATCCTTGACCTCAAGTTCAGATGATTCCTTGCA CATGTCTCCGATACGAA CGCTAAACTCTAGATTCTTGACACATTTTGTATCGACGATCGTTGAACCGATG ATATCTTCGTAACTCAC TTTCTTATGAGAGATGTTAGACCCGAGTACTGGATGGGTCTTGATGTCGCTGT CTTTCTCTTCTTCGCTA CATCTGATGTCGATAGACACCTCACAGTCTTTGATCATAGCCAGAGCTTCTTC ACGAGTGATCGCGGGAG AGTCCTTACCTTGTCCTGGGGACACGCTGGACAATCTAGCATTCACTGTGTT TCCATCAGCGGATTCTGA GATGGATTTAATCTGAGGACATTTGGTGAATCCAAAGTTCATTCTCAGACCTC CACCGATGATGGAGTAA TAAGTGGTAGGAGGATCTACATCCTCGACTGATGTGGAATCATCTTCTGATTC CACCTCGGGATCTGGAT CTGACTCGGACTCTGTAATTTCCGTTACGGATTGGCAAATCTTATCATTGGTC GGTGTTTGGTCTTGCTT TGTGACTTTGATAATAACATCGATTCCCATATGATGTTTGTTTTCTTCTTCCGTA CACGAGGAGGAGGAT GAGGATGATTGCTGAAGACTGGCAGGCACATGCATGCCAGGACGATATATTG TTTCATAATTGCTATTGA TTGAGTACTGTTCTTTATGATTCTACTTCCTTACCATGCAATAAATTAGAATATAT TTTCTACTTTTACG AGAAATTAATTATTGTATTTATTATTTATGGGTGAAAAACTTACTATAAAAAGCGG GTGGGTTTGGAATT AGTGATCAGTTTATGTATATCGCAACTACCGGGCATATGGCTATCGACATCGA 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TGCATATTATACACTGGTTAACGCCCTTATAGGCTCTAACCATTTTCAAGATGA
GGTCCCTGATTATAGT xxxxxxxxxxxx
CCTTCTGTTCCCCTCTATCATCTACTCCATGTCTATTAGACGATGTGAGAAGA CTGAAGAGGAAACATGG GGATTGAAAATAGGGTTGTGTATAATTGCCAAAGATTTCTATCCCGAAAGAACT GATTGCAGTGTTCATC TCCCAACTGCAAGTGAAGGATTGATAACTGAAGGCAATGGATTCAGGGATATA CGAAACACCGATAAATT ATAAAAAAAGCAATGTGTCCGCTGTTTCCGTTAATAATACTATTTTCGTAACTG GCGGATTATTCATAAA TAACTCTAATAGCACGATCGTGGTTAACAATATGGAAAAACTTGACATTTATAA AGACAAACAATGGTCG ATTATAGAAATGCCTATGGCTAGGGTATATCACGGCATCGACTCGACATTTGG AATGTTATATTTTGCCG GAGGTCTATCCGTTACCGAACAATATGGTAATTTAGAGAAAAACAACGAGATAT CTTGTTACAATCCTAG AACGAATAAGTGGTTTGATATTTCATATACTATTTATAAGATATCCATATCATCAT TGTGTAAACTAAAT AACGTCTTCTATGTATTTAGTAAGGACATTGGATATGTGGAAAAGTATGATGGT GCATGGAAGTTAGTAC ATGATCGTCTCCCCGCTATAAAGGCATTATCAACTTCTCCTTATTGATTGAAAA TGAAAATATAAATAGT TTTTATGTATAGCAGTATTACCCTATAGTTTTATTGCTTACTACTAACATGGATAC AGATACAGATACAG ATACAGATACAGATACAGATACAGATACAGATACAGATGTTACAAATGTAGAAG ATATCATAAATGAAAT AGATAGAGAGAAAGAAGAAATACTAAAAAATGTAGAAATTGAAAATAATAAAAA CATTAACAAGAATCAT CCAAGTGGATATATTAGAGAAGCACTCGTTATTAATACAAGTAGTAATAGTGATT CCATTGATAAAGAAG TTATAGAATGTATCAGTCACGATGTAGGAATATAGATCATATCTACTAATTTTTAT AATCAATACAAAAC ATAAAAAACAACTCGTTATTACATAGCAGGCATGGAATCCTTCAAGTATTGTTT TGATAACGATGGCAAG AAATGGATTATCGGAAATACTTTATATTCTGGTAATTCAATACTCTATAAGGTCA GAAAAAATTTCACTA GTTCGTTCTACAATTACGTAATGAAGATAGATCACAAATCACACAAGCCATTGT TGTCTGAAATACGATT CTATATATCTGTATTGGATCCTTTGACTATCGACAACTGGACACGGGAACGTG GTATAAAGTATTTGGCT ATTCCAGATCTGTATGGAATTGGAGAAACCGATGATTATATGTTCTTCGTTATA AAGAATTTGGGAAGAG TATTCGCCCCAAAGGATACTGAATCAGTCTTCGAAGCATGTGTCACTATGATA AACACGTTAGAGTTTAT ACACTCTCGAGGATTTACCCATGGAAAAATAGAACCGAGGAATATACTGATTA GAAATAAACGTCTTTCA CTAATTGACTATTCTAGAACTAACAAACTATACAAGAGTGGAAACTCACATATA GATTACAACGAGGACA TGATAACTTCAGGAAATATCAATTATATGTGTGTAGACAATCATCTTGGAGCAA CAGTTTCAAGACGAGG AGATTTAGAAATGTTGGGATATTGCATGATAGAATGGTTCGGTGGCAAACTTC CATGGAAAAACGAAAGT AGTATAAAAGTAATAAAACAAAAAAAAGAATATAAAAAATTTATAGCTACTTTCTT TGAGGACTGTTTTC CTGAAGGAAATGAACCTCTGGAATTAGTTAGATATATAGAATTAGTATACACGT TAGATTATTCTCAAAC TCCTAATTATGACAGACTACGTAGACTGTTTATACAAGATTGAAATTATATTCTT TTTTTATAGAGTGTG GTAGTGTTACGGATATCTAATATTAATATTAGACTATCTCTATCGCGCTACACGA CCAATATCGATTACT ATGAATATCTTCTATGAAAGGAGAGAATGTATTCATTTCTCCAGCGTCAATCTC GTCAGTATTGACAATA CTGTATTATGGAGCTAATGGATCCACTGCTGAACAGCTATCAAAATATGTAGAA ACGGAGGAGAACACGG ATAAGGTTAGCGCTCAGAATATCTCATTCAAATCCATAAATAAAGTATATGGGC GATATTCTGCCGTGTT TAAAGATTTCTTTTTGGGAAAAATTGGCGATAAGTTTCAAACTGTTGACTTCAC TGATTGTCGCACTATA GATGCAATCAACAAGTGTGTAGATATCTTTACTGAGGGGAAAATCAATCCACT ATTGGATGAACCATTGT ------------ CTCCTAGCAATTAGTGCCGTATACTTTAAAGCAAAATGGTTGACGCCATTCGA AAAGGAATTTACCAGTG ---------------------------------------------------------------------- ATTATCCCTTTTACGTATCACCAACGGAAATGGTAGATGTAAGTATGATGTCTA TGTACGGCGAGCTATT ---------------------------------------------------------------------- TAATCACGCATCTGTAAAGGAATCATTCGGCAACTTTTCAATCATAGAACTGC CATATGTTGGAGATACT ---------------------------------------------------------------------- AGTATGATGGTCATTCTTCCAGACAAGATTGATGGATTAGAATCCATAGAACAA AATCTAACAGATACAA ---------------------------------------------------------------------- ATTTTAAGAAATGGTGTAACTCTCTGGATGCTATGTTTATAGATGTTCACATTC CCAAGTTTAAGGTAAC ---------------------------------------------------------------------- AGGCTCGTATAATCTGGTGGATACTCTAGTAAAGATCCGCTGATGGAAACACA
GTGAATGCTAGATTGTC ----------------------------------++++++++++++++++++++++++++++++++++++
CAGCGTGTCCCCAGGACAAGGTAAGGACTCTCCCGCGATCACTCGTGAAGA
AGCTCTGGCTATGATCAAA +++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++ +++++++++
GACTGTGAGGTGTCTATCGACATCAGATGTAGCGAAGAAGAGAAAGACAGC
GACATCAAGACCCATCCAG +++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++ +++++++++
TACTCGGGTCTAACATCTCTCATAAGAAAGTGAGTTACGAAGATATCATCGGT
TCAACGATCGTCGATAC +++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++ +++++++++
AAAATGTGTCAAGAATCTAGAGTTTAGCGTTCGTATCGGAGACATGTGCAAGG
AATCATCTGAACTTGAG +++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++ +++++++++
GTCAAGGATGGATTCAAGTATGTCGACGGATCGGCATCTGAAGGTGCAACCG
ATGATACTTCACTCATCG +++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++ +++++++++
ATTCAACAAAACTCAAAGCGTGTGTCTGA +++++++++++++++++++++++++++++ (sequência que tem * abaixo das letras: porção restante do gene C2L (isto é, o gene C2L parcial); sequência que tem # abaixo das letras: porção restante do gene F3L (isto é, o gene F3L parcial); sequência que tem - abaixo das letras: porção restante do gene B14R (isto é, o gene B14R parcial); sequência que tem + abaixo das letras: porção restante do gene B29R (ITR) (isto é, o gene B29R (ITR) parcial); sublinhado: a sequência que é deletada e substituída na SEQ ID NO: 210; itálico e negrito: porção do gene B8R que permanece na SEQ ID NO: 210; sequências que têm x abaixo das letras: sequências reguladoras de transcrição potencial do gene B9R.) TABELA 44. NOMENCLATURA PARA CERTAS ABREVIAÇÕES USADAS NAS TABELAS 43 E 45 Nomenclatura Descrição SKVB8R+ CopMD5p3p SKV CopMD5p3p com uma deleção de gene B8R 1 Anticorpo anti-CTLA-4 humano de comprimento completo (que compreende cadeias pesadas e leves de ipilimumab com T2A interferindo nas cadeias pesadas e leves) 1sc CTLA-4 anti-humano de fragmento variável de cadeia única m1sc CTLA-4 anti-camundongo de fragmento variável de cadeia (9D9) 2 FLT3L (FLT3L humano que é reativo de modo cruzado tanto em ser humano quanto em camundongo) 3 IL12p35-TM humano m3 IL12p35-TM de camundongo SKV-123-v2 SKV-123 com B8R e promotor B19R que aciona FLT3LG 3F IL12p70-TM humano (p40-p35-TM) m3F IL12p70-TM de camundongo (p40-p35-TM) HeLa Linhagem celular de câncer cervical humano U2OS Linhagem celular epitelial de osteossarcoma ósseo humano HT-29 Linhagem celular de câncer colorretal humano CT26.WT Linhagem celular de câncer colorretal murino COLO-205 Linhagem celular de câncer colorretal humano MiaPaca-2 Linhagem celular de câncer pancreático humano
TABELA 45. TABELA DE VETOR
Nome de Transgene e Compete Express Linhagem Vetor Promotor/lócus de nte de Citotoxicida ão de celular inserção/Comentá replicaçã de de transgen canceríge rios o linhagem e na testada celular cancerígen a* Vetores anti-CTLA-4 SKV SKV-1sc- CTLA-4 anti- Sim Sim Sim HeLa eGFP humano de U2OS fragmento variável de cadeia única acionado pelo promotor B8R; eGFP acionada pelo promotor p7.5. Inserido no lócus B8R resultando em deleção do gene B8R.
SKV-m1sc- CTLA-4 anti- Sim Sim Sim HeLa eGFP camundongo de U2OS fragmento variável de cadeia única (9D9) acionado pelo promotor B8R; eGFP acionada pelo promotor p7.5. Inserido no lócus B8R resultando em deleção do gene B8R.
CopMD5p Anticorpo anti- Sim Sim Sim HeLa 3p-1-eGFP CTLA-4 humano de U2OS comprimento completo (anticorpo de comprimento completo que compreende cadeias pesadas e leves de ipilimumab com T2A interferindo nas cadeias pesadas e leves) acionado pelo promotor H5R; eGFP acionada pelo promotor E3L.
Inserido nas delimitações da deleção 5p.
CopMD5p Anticorpo anti- Sim Sim Sim HeLa 3p-1 CTLA-4 humano de U2OS comprimento completo (anticorpo de comprimento completo que compreende cadeias pesadas e leves de ipilimumab com T2A interferindo nas cadeias pesadas e leves) acionado pelo promotor H5R.
Inserido nas delimitações da deleção 5p.
SKV-1- Anticorpo anti- Sim Sim Sim HeLa eGFP CTLA-4 humano de U2OS comprimento completo (anticorpo de comprimento completo que compreende cadeias pesadas e leves de ipilimumab com T2A interferindo nas cadeias pesadas e leves) acionado pelo promotor H5R; eGFP acionada pelo promotor E3L.
Inserido nas delimitações da deleção 5p.
Contém uma deleção de gene B8R.
SKV-1 Anticorpo anti- Sim Sim Sim HeLa CTLA-4 humano de U2OS comprimento completo (anticorpo de comprimento completo que compreende cadeias pesadas e leves de ipilimumab com T2A interferindo nas cadeias pesadas e leves) acionado pelo promotor H5R.
Inserido nas delimitações da deleção 5p.
Contém uma deleção de gene B8R.
Vetores SKV FLT3L SKV-2- FLT3L acionado Sim Sim Sim HeLa eGFP pelo promotor B8R U2OS e o promotor B19R; eGFP acionada pelo promotor p7.5. Inserido no lócus B8R resultando em deleção do gene B8R.
Vetores SKV IL12 SKV-3- IL12p35-TM Sim Sim Sim HeLa eGFP humano acionado U2OS pelo promotor B8R e um promotor tardio que tem a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561; eGFP acionada pelo promotor p7.5. Inserido no lócus B8R resultando em deleção do gene B8R.
SKV-m3- IL12p35-TM de Sim Sim Sim HeLa eGFP camundongo U2OS acionado pelo promotor B8R e um promotor tardio que tem a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561; eGFP acionada pelo promotor p7.5. Inserido no lócus B8R resultando em deleção do gene B8R.
SKV-m3F - IL12p70-TM de Sim Sim Sim HeLa eGFP camundongo (p40- U2OS p35-TM) acionado pelo promotor B8R e um promotor tardio que tem a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561; eGFP acionada pelo promotor p7.5. Inserido no lócus
B8R resultando em deleção do gene B8R.
SKV-3F- IL12p70-TM Sim Sim Sim HeLa eGFP humano (p40-p35- U2OS TM) acionado pelo promotor B8R e um promotor tardio que tem a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561; eGFP acionada pelo promotor p7.5. Inserido no lócus B8R resultando em deleção do gene B8R.
Vetores anti-CTLA-4 SKV e FLT3L SKV-1sc2- Fragmento anti- Sim Sim Sim HeLa eGFP CTLA-4 variável de U2OS cadeia única acionado pelo promotor B8R; FLT3L acionado pelo promotor B19R; eGFP acionado pelo promotor p7.5. Inserido no lócus B8R resultando em deleção do gene B8R.
Vetores anti-CTLA-4 SKV e IL12 SKV-1sc3- CTLA-4 anti- Sim Sim Sim HeLa eGFP humano de U2OS fragmento variável de cadeia única acionado pelo promotor B8R; IL12p35-TM humano acionado por um promotor tardio que tem a sequência de nucleotídeos da
SEQ ID NO: 561; eGFP acionada pelo promotor p7.5. Inserido no lócus B8R resultando em deleção do gene B8R.
Vetores SKV FLT3L e IL12 SKV-23- FLT3L acionado Sim Sim Sim HeLa eGFP pelo promotor B8R; U2OS IL12p35-TM humano acionado por um promotor tardio que tem a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561; eGFP acionada pelo promotor p7.5. Inserido no lócus B8R resultando em deleção do gene B8R.
SKV-2m3- FLT3L acionado Sim Sim Sim HeLa eGFP pelo promotor B8R; U2OS IL12p35-TM de camundongo acionado por um promotor tardio que tem a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561; eGFP acionada pelo promotor p7.5. Inserido no lócus B8R resultando em deleção do gene B8R.
SKV-2m3- FLT3L acionado Sim Sim Sim HeLa v2-eGFP pelo promotor B8R U2OS e o promotor B19R; IL12p35-TM de camundongo acionado por um promotor tardio que tem a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561; eGFP acionada pelo promotor p7.5. Inserido no lócus B8R resultando em deleção do gene B8R.
SKV-2m3- FLT3L acionado Sim Sim Sim HeLa v2 pelo promotor B8R U2OS e o promotor B19R; IL12p35-TM de camundongo acionado por um promotor tardio que tem a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561. Inserido no lócus B8R resultando em deleção do gene B8R.
Vetores anti-CTLA-4 SKV, FLT3L e IL12 SKV- CTLA-4 anti- Sim Sim Sim HeLa 1sc23- humano de U2OS eGFP fragmento variável de cadeia única acionado pelo promotor B8R; FLT3L acionado pelo promotor B19R; IL12p35-TM humano acionado por um promotor tardio que tem a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561; eGFP acionada pelo promotor p7.5. Inserido no lócus B8R resultando em deleção do gene B8R.
SKV-1sc23 CTLA-4 anti- Sim Sim Sim HeLa humano de U2OS fragmento variável de cadeia única acionado pelo promotor B8R; FLT3L acionado pelo promotor B19R; IL12p35-TM humano acionado por um promotor tardio que tem a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561. Inserido no lócus B8R resultando em deleção do gene B8R.
SKV-123- Anticorpo CTLA-4 Sim Sim Sim HeLa eGFP anti-humano de U2OS comprimento completo (anticorpo de comprimento completo que compreende cadeias pesadas e leves de ipilimumab com T2A interferindo nas cadeias pesadas e leves) acionado pelo promotor H5R; FLT3L acionado pelo promotor B8R; IL12p35-TM humano acionado por um promotor tardio que tem a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561; eGFP acionada pelo promotor E3L e a jusante de CTLA- 4 anti-humano.
CTLA-4 anti- humano e eGFP são inseridos nas delimitações da deleção 5p e na orientação antissenso.
IL12p35-TM e FLT3L humanos são inseridos no lócus B8R resultando na deleção do gene B8R.
SKV-123 Anticorpo CTLA-4 Sim Sim Sim HeLa anti-humano de U2OS comprimento completo (anticorpo de comprimento completo que compreende cadeias pesadas e leves de ipilimumab com T2A interferindo nas cadeias pesadas e leves) acionado pelo promotor H5R; FLT3L acionado pelo promotor B8R; IL12p35-TM humano acionado por um promotor tardio que tem a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561. CTLA-4 anti- humano é inserido nas delimitações da deleção 5p e na orientação antissenso.
IL12p35-TM e FLT3L humanos são inseridos no lócus B8R resultando na deleção do gene B8R.
SKV-123- Anticorpo CTLA-4 Sim Sim Sim HeLa v2-eGFP anti-humano de U2OS comprimento completo (anticorpo de comprimento completo que compreende cadeias pesadas e leves de ipilimumab com T2A interferindo nas cadeias pesadas e leves) acionado pelo promotor H5R; FLT3L acionado pelo promotor B8R e o promotor B19R; IL12p35-TM humano acionado por um promotor tardio que tem a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561; eGFP acionada pelo promotor p7.5 e a jusante de CTLA-4 anti- humano.
CTLA-4 anti- humano e eGFP são inseridos nas delimitações da deleção 5p e com a orientação antissenso.
IL12p35-TM e FLT3L humanos são inseridos no lócus B8R resultando na deleção do gene B8R.
SKV-123- Anticorpo CTLA-4 Sim Sim Sim HeLa v2 anti-humano de U2OS comprimento HT-29 completo (anticorpo CT26.WT de comprimento COLO-205 completo que MiaPaca-2 compreende cadeias pesadas e leves de ipilimumab com T2A interferindo nas cadeias pesadas e leves) acionado pelo promotor H5R; FLT3L acionado pelo promotor B8R e o promotor B19R; IL12p35-TM humano acionado por um promotor tardio que tem a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561. CTLA-4 anti- humano é inserido nas delimitações da deleção 5p e na orientação antissenso.
IL12p35-TM e FLT3L humanos são inseridos no lócus B8R resultando na deleção do gene B8R.
SKV- CTLA-4 anti- Sim Sim Sim HeLa m1sc2m3- camundongo de U2OS eGFP fragmento variável de cadeia única (9D9) acionado pelo promotor B8R; FLT3L acionado pelo promotor B19R; IL12p35-TM de camundongo acionado por um promotor tardio que tem a sequência de nucleotídeos da
SEQ ID NO: 561; eGFP acionada pelo promotor p7.5. Inserido no lócus B8R resultando em deleção do gene B8R.
SKV- Anticorpo CTLA-4 Sim Sim Sim HeLa 12m3-v2- anti-humano de U2OS eGFP comprimento completo (anticorpo de comprimento completo que compreende cadeias pesadas e leves de ipilimumab com T2A interferindo nas cadeias pesadas e leves) acionado pelo promotor H5R; FLT3L acionado pelo promotor B8R e o promotor B19R; IL12p35-TM de camundongo acionado por um promotor tardio que tem a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561; eGFP acionada pelo promotor p7.5. CTLA-4 anti- humano e eGFP são inseridos nas delimitações da deleção 5p.
IL12p35-TM e FLT3L de camundongo são inseridos no lócus B8R resultando na deleção do gene B8R.
SKV-123F- Anticorpo CTLA-4 Sim Sim Sim HeLa v2-eGFP anti-humano de U2OS comprimento completo (anticorpo de comprimento completo que compreende cadeias pesadas e leves de ipilimumab com T2A interferindo nas cadeias pesadas e leves) acionado pelo promotor H5R; FLT3L acionado pelo promotor B8R e o promotor B19R; IL12p70-TM humano (p40-p35) acionado por um promotor tardio que tem a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561; eGFP acionada pelo promotor p7.5. CTLA-4 anti- humano e eGFP são inseridos nas delimitações da deleção 5p.
IL12p70-TM humano (p40-p35- TM) e FLT3L são inseridos no lócus B8R resultando na deleção do gene B8R.
SKV-123F- Anticorpo CTLA-4 Sim Sim Sim HeLa v2 anti-humano de U2OS comprimento completo (anticorpo de comprimento completo que compreende cadeias pesadas e leves de ipilimumab com T2A interferindo nas cadeias pesadas e leves) acionado pelo promotor H5R; FLT3L acionado pelo promotor B8R e o promotor B19R; IL12p70-TM humano (p40-p35- TM) acionado por um promotor tardio que tem a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561. CTLA-4 anti- humano é inserido nas delimitações da deleção 5p.
IL12p70-TM humano (p40-p35- TM) e FLT3L são inseridos no lócus B8R resultando na deleção do gene B8R.
SKV- CTLA-4 anti- Sim Sim Sim HeLa m1sc2m3F camundongo de U2OS -eGFP fragmento variável de cadeia única (9D9) acionado pelo promotor B8R; FLT3L acionado pelo promotor B19R; IL12p70-TM de camundongo (p40-p30-TM) acionado por um promotor tardio que tem a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561; eGFP acionada pelo promotor p7.5. Inserido no lócus B8R resultando em deleção do gene B8R.
* Células de câncer infectadas por vírus em MOI de 0,01. TABELA 46. POLIMORFISMOS DE NUCLEOTÍDEO EM GENOMA DE
VÍRUS COPENHAGEN Referên Posiç Sequênc Polimorfismo Gen Mudança Mudança cia ão ia de e de AA GenBan referênc k ia M35027 34 G A Sem codificação de proteína M35027 58 GTTAG ATTAA Sem codificação de proteína M35027 12006 ACCCC ACCCCCCA,CCCC C14 Deslocame p.Cys70fs CA CCA L nto de quadro M35027 16033 A G Sem codificação de proteína M35027 23443 C T C2L Variante p.Arg238A sinônima rg M35027 24256 G C C1L Variante p.Arg215A sinônima rg M35027 25525 G C N2L Mudança p.Pro121A de rg Aminoácido M35027 35080 CG GC F3L Mudança p.Thr313S de er Aminoácido M35027 44312 A G F13 Variante p.Asp256A L sinônima sp M35027 46742 CG GC F16 Mudança p.Arg10Al L de a Aminoácido M35027 77258 A T G7L Mudança p.Val348Gl de u Aminoácido M35027 81834 G A L3L Mudança p.Leu138P de he Aminoácido
M35027 85139 T C J3R Mudança p.Val229Al de a Aminoácido M35027 10465 C T D6R Mudança p.Thr280M 6 de et Aminoácido M35027 14584 T A Sem 0 codificação de proteína M35027 14890 A T A41 Variante p.Thr84Th 5 L sinônima r M35027 15270 GCG GCCG A46 Deslocame p.Asn186f 0 R nto de s quadro M35027 17972 TGGGG TGGGGGGT,TGGG Sem 7 GT GGG codificação de proteína M35027 19167 G A Sem 1 codificação de proteína M35027 19169 GTTAG ATTAA Sem 5 codificação de proteína
6. EXEMPLOS
[687] Os seguintes exemplos são demonstrados de modo a dotar aqueles de habilidade comum na técnica de uma descrição de como as composições e métodos reivindicados no presente documento são realizados, produzidos e avaliados, e são destinados a serem puramente exemplificativos da invenção e não são destinados a limitar o escopo de como o inventor considera sua invenção.
6.1. EXEMPLO 1 – CONSTATAÇÃO DE OncoVac
[688] Os quadros de leitura aberta (ORFs) de 59 cepas de poxvírus foram agrupados em ortólogos e alinhados no nível de aminoácido (consultar a Figura 1 para análise filogenética). Análise bayesiana foi realizada para determinar a relação de todas as cepas. Os poxvírus são muito diversos em conteúdo de gene e faixa de hospedeiro. Há diversas cepas de tipo selvagem Vaccinia de ocorrência natural que são diferentes uma da outra.
[689] A Figura 33 mostra a porcentagem de genes deletados em
CopMD5p3p (Tabela 2) em vários genomas de poxvírus. Cada ponto no gráfico representa um genoma de poxvírus. As pesquisas de homologia foram usadas para consultar poxvírus de outros clades com sequências de aminoácidos de genes da Tabela 2 do genoma Copenhagen. A quantidade de genes deletados presente em outros vírus de varíola diminui com a sua divergência crescente.
[690] Cepas de tipo selvagem vaccinia foram misturadas em contagens de unidade formadora de placa iguais e sequenciadas com NGS (agrupamento de entrada). A mistura resultante foi passada três vezes em linhagens celulares cancerígenas diferentes. A população final foi sequenciada com sequenciamento de Illumina NGS. As leituras (fragmentos de DNA curtos) foram atribuídas a várias cepas com base em identidade de sequência e usadas para calcular a porcentagem de cada cepa na população final. A abundância de cepas virais diferentes após passar 5 vírus Vaccinia em tipos de tumor diferentes é mostrada na Figura 2. A cepa Copenhagen pode ultrapassar outras cepas e, portanto, se replicar mais rápido.
[691] Cepas de tipo selvagem Vaccinia diferentes também foram usadas para infectar em baixa PFU (1 x 104) vários núcleos tumorais de paciente. Cada cepa infectada em 4 réplicas em média contém três núcleos tumorais 2 x 2 mm. A réplica foi avaliada através de titulação de vírus e é expressa como unidades formadoras de partícula (PFU) conforme mostrado na Figura 3. A cepa Copenhagen cresce para títulos mais altos do que outras cepas e, portanto, se replica mais rápido em amostras ex vivo de paciente. Os núcleos ex vivo de paciente são uma boa imitação de um tumor 3D do paciente.
[692] As cepas de tipo selvagem vaccinia foram, então, submetidas a um ensaio de placa em células U2-OS com uma sobreposição de CMC 3%. Dois dias após a infecção, 20-30 placas para cada cepa tiveram seu tamanho medido. As medições de tamanho de placa para Copenhagen, Western Reserve, Wyeth, Lister e Tian Tan são mostradas na Figura 4. A formação de placa é afetada pela capacidade do vírus de se replicar, espalhar e exterminar. Os tamanhos de placa maiores observados para a cepa Copenhagen sugerem que essa cepa é superior nessas capacidades que são importantes para o desenvolvimento de um vírus oncolítico.
[693] Finalmente, todos os 59 genomas de poxvírus da Figura 1 foram usados para constatar ORFs e agrupados em grupos ortólogos. Grupos que contêm genes Copenhagen foram plotados com base na localização do gene no genoma Copenhagen (eixo geométrico x) e tamanho do grupo (eixo geométrico y). Quando 59 espécies compartilham o mesmo gene, a conservação é considerada como 100%. Genes que são parte das deleções principais CopMD5p e CopMD3p foram constatados como menos importantes para replicação viral à medida que sua deleção não impacta a aptidão.
[694] Um fenótipo inovador foi constatado deletando-se o gene A47L anteriormente não caracterizado. Deletar A47L induz o vírus Copenhagen para criar placas maiores.
[695] O sequenciamento profundo Illumina NGS revelou a presença de deleções maiores durante o processo de purificação de placa. CopMD5p e CopMD3p representam clones que foram purificados em placa e constatados como portando deleções genômicas principais. Esses 2 clones foram usados para coinfectar uma monocamada de células HeLa em um MOI alto (MOI 10) para induzir a recombinação. A coleta aleatória de placa e PCR revelaram a presença de um CopMD5p3p deletado duplo que continha ambas as deleções de genoma (consultar a Figura 5). Desse modo, duas deleções de ocorrência natural na população Copenhagen tipo selvagem foram constatadas. Essas 2 deleções foram combinadas e purificadas para gerar um vírus replicante, denominado no presente documento como “CopMD5p3p”, que exibe deleções nos genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R, assim como deleções em cada uma das cópias B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R e B29R de ITRs. Conforme usado no presente documento, “CopWT” se refere ao vírus vaccinia Copenhagen do tipo selvagem, “CopMD5p” se refere a um vírus vaccinia Copenhagen que porta deleções em genes 5’ representativos (C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L e F3L), e “CopMD3p” se refere a um vírus vaccinia Copenhagen que porta deleções nos genes 3’ representativos (B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R) assim como deleções em cada uma das cópias B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R e B29R de ITRs.
6.2. EXEMPLO 2 – MORTE DE CÉLULA CANCERÍGENA
[696] As células cancerígenas foram infectadas com CopMD5p3p em uma faixa de MOIs (1 a 0,01) em placas de 24 poços em 4 réplicas. Dois dias após a infecção com vírus, as placas foram manchadas com violeta cristal. A mancha de violeta cristal foi dissolvida em SDS e lida por espectrofotometria. Os dados são representados como porcentagem de absorbância de células não infectadas (consultar a Figura 6). Esses dados mostram que a maior parte de linhagens celulares cancerígenas morrem mais rápido quando expostas ao vírus CopMD5p3p.
[697] A capacidade de vírus vaccinia Copenhagen do tipo selvagem e diversos vírions vaccinia Copenhagen modificados para induzir uma resposta imune antitumoral e para se propagar em várias linhagens celulares cancerígenas também é mostrada nas Figuras 23, 24 e 26-32.
6.3. EXEMPLO 3 – CRESCIMENTO EM CÉLULAS CANCERÍGENAS
[698] Quatro linhagens celulares cancerígenas foram infectadas com CopMD5p3p em um baixo MOI (0,001) em placas de 24 de poços em triplicados, e em pontos no tempo diferentes, o vírus foi coletado e titulado. O tempo 0 h representa a entrada. As curvas de crescimento de HeLa, 786-O, HT-29 e MCF7 são mostradas na Figura 7. Esses dados mostram que o vírus CopMD5p3p modificado não é prejudicado em sua habilidade para crescer in vitro. Isso significa que o vírus é competente de replicação, até mesmo na presença de resposta de interferon. A capacidade de replicar em linhagens celulares de mamífero fornece outra vantagem importante. Como tais, os vírus podem ser fabricados com velocidade intensificada e eficiência.
6.4. EXEMPLO 4 – CRESCIMENTO EM AMOSTRAS DE TUMOR DE
PACIENTE
[699] As amostras de tumor de paciente foram obtidas imediatamente após a cirurgia e cortadas em núcleos de 2 mm x 2 mm. Três núcleos foram infectados com uma pequena quantidade de vírus (1 x 10 4 PFU), Copenhagen do tipo selvagem ou CopMD5p3p. Após 72 h a saída de vírus foi avaliada por ensaio de placa e o título viral final expresso como PFU (consultar a Figura 8). Esses dados mostram que o vírus CopMD5p3p modificado pode replicar em amostras de tumor de paciente frescas. A replicação em amostras de tumor de paciente é um modelo satisfatório de replicação em um tumor 3D de paciente.
6.5. EXEMPLO 5 – SINCÍTIOS EM CÉLULAS U2-OS
[700] Monocamadas de células U2-OS foram infectadas com tipo selvagem Copenhagen ou vírus CopMD5p3p. Após 2 h, o meio foi mudado para sobrepor meios conforme feito para um ensaio de placa. Em 48 h pós-infecção, foram tiradas fotos com EVOS para avaliar fenótipo de placa (consultar a Figura 9). A fusão celular, também conhecida como sincítios, é considerada como auxiliando o vírus a espalhar, visto que as células não infectadas se unem com as células infectadas. Adicionalmente, foi mostrado que as células fundidas são imunogênicas e, no caso de células cancerígenas, podem auxiliar a iniciar uma resposta imune antitumoral.
6.6. EXEMPLO 6 – SINCÍTIOS EM CÉLULAS 786-O
[701] Monocamadas de células 786-O foram infectadas com tipo selvagem Copenhagen ou vírus CopMD5p3p. Após 24 h, as fotos foram tiradas com EVOS em 10X de ampliação (consultar a Figura 10). Isso é evidência adicional para a ocorrência de sincítios. Na Figura 9, o fenótipo de uma placa é mostrado. No experimento atual, monocamadas de células foram infectadas sem sobreposição. A maioria das células infectadas pelo vírus CopMD5p3p se fundiu.
6.7. EXEMPLO 7 – CONTROLE DE TUMOR E PERDA DE PESO EM
MODELO DE CAMUNDONGO
[702] Os camundongos atímicos CD-1 foram inoculados com xenoenxerto de câncer de cólon humano HT-29. Uma vez que tumores subcutâneos estabeleceram um tamanho 5 mm x 5 mm aproximado, os camundongos foram tratados três vezes (linhas tracejadas) com 24 h de intervalo com 1 x 107 PFU de qualquer vírus vaccinia de modo intravenoso. Os camundongos foram medidos aproximadamente dia sim, dia não quanto ao tamanho de tumor e perda de peso (consultar a Figura 11). Esse experimento mostra que CopMD5p3p é um vírus muito mais seguro devido ao fato de que não causa qualquer perda de peso ou outros sinais de doença em camundongos atímicos imunocomprometidos. Esse experimento também mostra que CopMD5p3p pode controlar o crescimento tumoral de modo similar ao vírus de tipo selvagem Copenhagen parental.
6.8. EXEMPLO 8 – FORMAÇÃO DE LESÃO DE VARÍOLA
[703] Camundongos CD-1 atímicos foram tratados uma vez com 1 x 107 PFU de qualquer vírus vaccinia de modo intravenoso, seis camundongos por grupo. Duas semanas pós-tratamento, os camundongos foram sacrificados e fotos de caudas foram tiradas. As lesões de varíola em caudas foram contadas manualmente em todas as caudas de camundongo. As fotos representativas são mostradas na Figura 12. Esse experimento mostra que CopMD5p3p é um vírus muito mais seguro devido ao fato de que não causa quaisquer lesões de varíola em camundongos atímicos imunocomprometidos. Isso é importante visto que dados clínicos de Vaccinia Oncolítica anteriores mostraram pacientes que desenvolvem lesões de varíola mediante tratamento. Knockout de timidina quinase (TK) é uma maneira popular de aumentar a segurança de um OV (vírus oncolítico), atualmente presente em um Vaccinia Oncolítico de Fase III e em T-Vec Oncolítico aprovado por FDA. Os dados mostram que deletar TK não tem uma função nesse ensaio, em que os camundongos desenvolvem lesões de varíola quando desafiados com vírus deletado por TK, mas não desenvolvem lesões de varíola com CopMD5p3p que tem um TK intacto.
6.9. EXEMPLO 9 – BIODISTRIBUIÇÃO IVIS DE VACCINIA APÓS
ADMINISTRAÇÃO SISTÊMICA
[704] Os vírus Vaccinia do tipo selvagem Wyeth, tipo selvagem Copenhagen e CopMD5p3p foram manipulados para expressar Luciferase de Vagalume (Fluc) através da transfecção de células infectadas com um plasmídeo pSEM1 que substitui TK por Fluc. Os vírus foram purificados em placa e expandidos. Todos os vírus são knockouts TK e codificam Fluc funcional em seu lócus TK.
[705] Os camundongos atímicos CD-1 foram, então, inoculados com xenoenxerto de câncer de cólon humano HT-29. Uma vez que tumores subcutâneos tiverem estabelecido um tamanho 5 mm x 5 mm aproximado, os camundongos foram tratados uma vez com 1e7 PFU de qualquer Fluc vaccinia que codifica vírus de modo intravenoso, quatro camundongos por grupo. Quatro dias pós-tratamento, os camundongos foram injetados i.p. (intraperitoneal) com luciferina e imageados com IVIS para a presença de vírus (consultar a Figura 13). Esse experimento mostra que CopMD5p3p é um vírus muito mais seguro devido ao fato de que é mais específico ao tumor. Outro vírus mostra a replicação fora de alvo na cauda, músculo, patas e cavidade intranasal. CopMD5p3p está apenas localizado no tumor. Conforme mostrado nas Figuras anteriores 12 e 13, há menos CopMD5p3p detectável na cauda em comparação com as outras cepas. A Figura 14 mostra que CopMD5p3p também tem títulos mais baixos em outros órgãos quando em comparação com outra Vaccinia oncolítica. Visto que o CopMD5p3p se replica no mesmo nível que o outro vírus no tumor, mas menos em tecidos fora de alvo, CopMD5p3p se ajusta melhor ao perfil de um vírus oncolítico.
[706] Um exemplo adicional da biodistribuição de vários vetores virais vaccinia, incluindo o vírus vaccinia Copenhagen do tipo selvagem e diversos vírions vaccinia Copenhagen modificados, é mostrado na Figura 25.
6.10. EXEMPLO 10 – IMUNOGENICIDADE DE VACCINIA EM PBMCS
HUMANAS
[707] PBMCs foram isoladas de sangue doadores humanos saudáveis (n = 2). PBMCs foram incubadas com Vaccinia por 24 h e verificadas por marcadores de ativação iniciais com o uso de Citometria de Fluxo (consultar a Figura 15). Esse experimento mostra que CopMD5p3p é mais imunogênico e mais prontamente detectável por células imunes. Acredita-se que isso é um traço desejável, visto que OVs se replicam em tecido tumoral precisam ativar células imunes para uma resposta imune antitumoral com sucesso.
6.11. EXEMPLO 11 – IMUNOGENICIDADE DE VACCINIA EM
ESPLENÓCITOS DE CAMUNDONGO
[708] Camundongos Balb/C competentes imunes foram injetados com 1e7 PFU de vírus Vaccinia de modo intravenoso. Após um ou dois dias, camundongos foram sacrificados, baços foram coletados e analisados para ativação imune com o uso de Citometria de Fluxo (consultar Figura 16). Esse experimento mostra que CopMD5p3p é mais imunogênico e mais prontamente detectável por células imunes de camundongo. Esses dados complementam satisfatoriamente a Figura 15 anterior, visto que a maioria dos experimentos in vivo são feitos em camundongos.
6.12. EXEMPLO 12 – IMUNOGENICIDADE DE VACCINIA EM CÉLULAS
HUMANAS
[709] Células cancerígenas humanas 786-O foram infectadas em um MOI de 0,01 com qualquer vírus. No próximo dia, as células foram colhidas e os núcleos e citoplasma foram separados por fracionamento de célula. A proteína foi extraída de cada fração e manchada para subunidades NF-kB p65 e p50 (consultar Figura 17). O fator de transcrição imune NF-kB iniciou uma resposta imune uma vez que sua subunidade p65 e p50 é translocada no núcleo. Alguns vírus são imunossupressores e bloqueiam essa translocação, impedindo uma resposta imune. Suprimir a função NF-kB é contraintuitivo ao objetivo de usar o vírus oncolítico em combinação com abordagens imunoterapêuticas. Desse modo, CopMD5p3p é um vírus mais vantajoso visto que se comporta de modo similar a MG-1.
6.13. EXEMPLO 13 – SINERGIA COM ANTICORPO ANTI-CTLA-4 DE
INIBIDOR DE PONTO DE VERIFICAÇÃO IMUNE EM MODELO DE MELANOMA AGRESSIVO
[710] Os camundongos C57BL/6 competentes imunes foram inoculados (5x105 células) de modo subcutâneo com tumores de melanoma B16-F10. O tratamento começou uma vez que os tumores subcutâneos estabeleceram um tamanho 5 mm x 5 mm aproximado. Os camundongos tratados com vírus CopMD5p3p receberam três doses de 1e7 PFU no tumor (intratumor) com um dia de intervalo. Os camundongos tratados com anti-CTLA-4 receberam cinco doses de 100 ug de anticorpo i.p. com um dia de intervalo. A sobrevivência foi registrada dia sim, dia não uma vez que o tratamento se iniciou (consultar a Figura 18). Nesse experimento, foi testado se o efeito oncolítico do vírus CopMD5p3p pode sinergizar com um inibidor de ponto de verificação bem conhecido CTLA-4 em um modelo murino de melanoma muito agressivo. A sobrevivência mediana de camundongos tratados com vírus e ponto de verificação foi muito mais alta do que qualquer outro grupo. Isso sugere que CopMD5p3p tem algumas propriedades estimulantes que sinergizam com imunoterapia de bloqueio de ponto de verificação.
6.14. EXEMPLO 14 – SINERGIA COM ANTICORPO ANTI-CTLA-4 DE
INIBIDOR DE PONTO DE VERIFICAÇÃO IMUNE
[711] Camundongos Balb/C competentes imunes foram inoculados (5 x 10 5 células) de modo subcutâneo com tumores CT26-LacZ. O tratamento começou uma vez que os tumores subcutâneos estabeleceram um tamanho 5 mm x 5 mm aproximado. Os camundongos tratados com vírus Vaccinia receberam três (24 h de intervalo, primeiras três linhas tracejadas) doses de 1e7 PFU no tumor (intratumoral). Os camundongos tratados com anti-CTLA-4 receberam cinco (24 h de intervalo, linhas tracejadas) 100 ug de doses de anticorpo i.p. O tamanho de tumor e a sobrevivência foram registrados dia sim, dia não uma vez que o tratamento se iniciou (consultar a Figura 19). Os dados mostram que um vírus Vaccinia knockout TK não funciona tão bem com Anti-CTLA-4 quanto CopMD5p3p. Isso sugere que CopMD5p3p é mais imunogênico e mais capaz de gerar uma resposta imune antitumoral.
6.15. EXEMPLO 15 – SINERGIA COM ANTICORPO ANTI-PD1 DE
INIBIDOR DE PONTO DE VERIFICAÇÃO IMUNE
[712] Camundongos Balb/C competentes imunes foram inoculados (5 x 10 5 células) de modo subcutâneo com tumores CT26-LacZ. O tratamento começou uma vez que os tumores subcutâneos estabeleceram um tamanho 5 mm x 5 mm aproximado. Os camundongos tratados com vírus Vaccinia receberam três (24 h de intervalo, primeiras três linhas tracejadas) doses de 1e7 PFU no tumor (intratumoral). Os camundongos tratados com anti-PD1 receberam cinco (24 h de intervalo, últimas cinco linhas tracejadas) 100 ug de doses de anticorpo i.p. 24 h após a última dose de vírus Vaccinia. O tamanho de tumor e a sobrevivência foram registrados dia sim, dia não uma vez que o tratamento se iniciou (consultar a Figura 20). Os dados mostram que um vírus Vaccinia knockout TK não funciona tão bem com Anti-PD1 quanto CopMD5p3p. Isso sugere que CopMD5p3p é mais imunogênico e mais capaz de gerar uma resposta imune antitumoral.
6.16. EXEMPLO 16 - SINERGIA COM ANTICORPO ANTI-PD1 DE INIBIDOR DE PONTO DE VERIFICAÇÃO IMUNE E ANTICORPO ANTI-CTLA-4
[713] Camundongos Balb/C competentes imunes foram inoculados (5 x 10 5 células) de modo subcutâneo com tumores CT26-LacZ. O tratamento começou uma vez que os tumores subcutâneos estabeleceram um tamanho 5 mm x 5 mm aproximado. Os camundongos tratados com vírus Vaccinia receberam três (24 h de intervalo, primeiras três linhas tracejadas) doses de 1e7 PFU no tumor (intratumoral). Os camundongos tratados com anti-CTLA-4 receberam cinco (24 h de intervalo, primeiras cinco linhas tracejadas) 100 ug de doses de anticorpo i.p. Os camundongos tratados com anti-PD1 receberam cinco (24 h de intervalo, últimas cinco linhas tracejadas) 100 µg de doses de anticorpo i.p. 24 h após a última dose de vírus Vaccinia. O tamanho de tumor e a sobrevivência foram registrados dia sim, dia não uma vez que o tratamento se iniciou (consultar a Figura 21). Nesse experimento, foi testado se uma dose mais baixa (25 µg em vez de 100 µg) de anticorpo de inibidor de ponto de verificação pode funcionar se bloquear ambos os pontos de verificação simultaneamente. O CopMD5p3p ainda pôde alcançar curas nesse modelo imune com uma dose mais baixa (50 µg no total) de pontos de verificação. Visto que inibidores de ponto de verificação têm toxicidade dependente de dose, é vantajoso que doses muito pequenas de bloqueadores de ponto de verificação ainda podem alcançar um fenótipo observável. Como em outros experimentos, o vírus CopMD5p3p consegue curar tumores estabelecidos e esse efeito não é observado com vírus de tipo selvagem que não tem as deleções correspondentes de CopMD5p3p.
6.17. EXEMPLO 17 – ADMINISTRAÇÃO PARA O TRATAMENTO DE UM
INDIVÍDUO
[714] Com o uso dos métodos descritos no presente documento, um clínico versado na técnica pode administrar a um indivíduo (por exemplo, um paciente) uma composição farmacêutica que contém um vetor de ortopoxvírus recombinante descrito no presente documento para tratar câncer ou células tumorais. O câncer pode ser, por exemplo, leucemia, linfoma, câncer de fígado, câncer ósseo, câncer de pulmão, câncer de cérebro, câncer de bexiga, câncer gastrointestinal, câncer de mama, câncer cardíaco, câncer cervical, câncer uterino, câncer de cabeça e pescoço, câncer de vesícula biliar, câncer laríngeo, câncer de lábio e cavidade oral, câncer ocular, melanoma, câncer pancreático, câncer de próstata, câncer colorretal, câncer testicular ou câncer de garganta, entre outros.
[715] Por exemplo, um clínico de habilidade comum na técnica pode avaliar que um paciente sofre de câncer ou tumores e pode administrar ao paciente uma quantidade terapeuticamente eficaz (por exemplo, uma quantidade suficiente para diminuir o tamanho do tumor) de uma composição farmacêutica que contém o vetor de ortopoxvírus recombinante divulgado no presente documento. A composição farmacêutica pode ser administrada ao indivíduo em uma ou mais doses (por exemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25 ou mais) por um intervalo de tempo (por exemplo, semanalmente, diário ou por hora). O paciente pode ser avaliado entre doses para monitorar a eficácia da terapia e aumentar ou diminuir a dosagem com base na resposta do paciente. A composição farmacêutica pode ser administrada ao paciente por via oral, parenteral (por exemplo, por via tópica), intravenosa, intramuscular, subcutânea ou intranasal. O tratamento pode envolver uma dosagem única da composição farmacêutica. O tratamento pode envolver a dosagem contínua da composição farmacêutica (por exemplo, dias, semanas, meses ou anos). O tratamento pode envolver adicionalmente o uso de outro agente terapêutico (por exemplo, um inibidor de ponto de verificação imune, como um anticorpo anti-PD-1 ou anti-CTLA-4 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, IL-12 ou ligante Flt3, entre outros agentes).
6.18. EXEMPLO 18 – DELEÇÕES ALVEJADAS DE CopMD5p E CopMD3p
EM DIVERSAS CEPAS VACCINIA
[716] O seguinte protocolo para produzir vetores virais vaccinia modificadas utiliza técnicas descritas, por exemplo, em Rintoul et al. PLoS One. 6(9): e24643 (2011), cuja divulgação é incorporada ao presente documento a título de referência.
[717] Brevemente, CopMD5p (o vírus vaccinia Copenhagen que porta deleções em genes 5’: (os genes C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L e F3L) e CopMd3p (vírus vaccinia Copenhagen que porta deleções em genes 3’: os genes B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R e B20R) que alvejam construtos recombinantes foram sintetizados por tecnologia g- Block (IDT, Coralville Iowa). As células U2OS foram infectadas com vírus vaccinia de tipo selvagem (Wyeth, Western Reserve, Tian Tan, Lister) em um MOI de 0,01 em DMEM livre de soro para 1,5 horas. O sobrenadante viral foi aspirado e células U2OS foram transfectadas com CopMD5p amplificado por PCR ou CopMD3p que alvejam g-Blocks por Lipofectamine 2000 (Invitrogen) em OptiMEM (Gibco). DMEM suplementado com FBS 10% foi adicionado a células 30 minutos após a transfecção e deixado de um dia para o outro. No dia seguinte, o meio de transfecção foi aspirado e meio FBS 10% de DMEM fresco foi adicionado às células. 48 horas após a transfecção de infecção, células U2OS foram colhidas e lisadas por um ciclo de congelamento/descongelamento único. Os lisados diluídos em série foram transferidos para placa em uma monocamada confluente de células U2OS e placas positivas de eGFP (CopMD5p alvejado) ou positivas de mCherry (CopMD3p alvejado) foram isoladas e purificadas através de 5 ciclos de purificações de placa.
[718] Vírus vaccinia deletados principais duplos foram gerados por coinfecção de vírus vaccinia deletado CopMD5p e CopMD3p em um MOI de 5 para cada vírus em células U2OS. As células foram colhidas no próximo dia e lisadas por um ciclo de congelamento/descongelamento. Os lisados foram diluídos em série e transferidos para placa em uma monocamada confluente de células U2OS e selecionados para placas positivas duplas (eGFP + mCherry). As placas foram purificadas por 5 ciclos de purificação de placa.
[719] Um esquema exemplificativo para a produção de vetores ortopoxvírus modificados (por exemplo, vetores virais vaccinia modificados, como vetores virais vaccinia Copenhagen modificados) da divulgação é mostrado na Figura 22.
6.19. EXEMPLO 19 – SKV (CopMD5p3p-B8R-) TEM EFICÁCIA SIMILAR EM CONTROLE DE TUMOR EM COMPARAÇÃO COM SKV-B8R+
[720] O gene B8R de vírus vaccinia (VV) codifica uma proteína secretada com homologia para receptor de interferon gama (IFN-γ). In vitro, a proteína B8R se liga a e neutraliza a atividade antiviral de diversas espécies de interferon gama incluindo interferon gama humano e de rato; entretanto, não se liga significativamente a IFN-γ murino. Aqui, é descrita a construção e a caracterização de VVs recombinantes que não têm o gene B8R. A recombinação homóloga entre o construto de alvejamento e o lócus B8R resultou na substituição de 75% do gene B8R com os transgenes eGFP flanqueados por dois sítios loxP (SKV-GFP).
[721] Os vírus B8R mostraram eficácia similar a vírus B8R+. Figura 37. A sobrevivência de camundongos tratados com SKV ou SKV-GFP foi avaliada. As 5 x 105 células CT26-LacZ foram inoculadas subcutaneamente no dia 0. No dia 14, 16 e 18, os tumores foram tratados em uma dose de 10 7 pfu com uma injeção intratumoural de SKV ou SKV-GFP. Nenhuma diminuição significativa em eficácia foi vista quando os vírus injetados tiveram uma deleção do lócus B8R.
6.20. EXEMPLO 20 – INFECÇÃO DE LINHAGENS CELULARES
NORMAIS VERSUS CANCERÍGENAS DE VÍRUS SKV-B8R+
[722] A viabilidade celular de saúde primária foi comparada com aquela das células cancerígenas. As células cancerígenas ou normais confluentes foram infectadas em uma faixa de MOI (pfu/célula) por 48 h, após a qual a viabilidade foi quantificada. Conforme indicado na Figura 34, o vírus SKV-B8R+ infecta preferencialmente as células cancerígenas.
6.21. EXEMPLO 21-SKV-B8R+ NÃO PREJUDICA A SINALIZAÇÃO DE INTERFERON.
[723] A sinalização de interferon foi avaliada determinando-se o número de genes na via de interferon que é regulado positivamente (expressão induzida) ou regulado negativamente (expressão reprimida) em uma variedade de linhagens celulares normais e uma linhagem celular cancerígena (786-O). Figura 35 Monocamadas confluentes de 1 milhão de células foram infectadas em um MOI de 3 (3e6 PFU) por 18 h com SKV-B8R+ (CopMD5p3p) ou o vírus Copenhagen parental que tem o gene TK desabilitado. RNA foi sequenciado com o uso de RNA- seq e a expressão de gene de genes de interferon foi determinada após mapeamento de leitura e normalização de expressão. Embora o vírus SKV-B8R+ (CopMD5p3p) induza principalmente genes na via de interferon, o Copenhagen parental reprime genes. Isso sugere que SKV-B8R+ (CopMD5p3p) pode induzir sinalização de Interferon de Tipo I que é crítica em depuração viral de células normais.
6.22. EXEMPLO 22 – VÍRUS VACCINIA NEGATIVO B8R MANIPULADO PARA EXPRESSAR Flt3L, IL-12 TM E ANTI-HCTLA-4
[724] Vírus vaccinia modificados que contêm tanto as deleções CopMD5p3p quanto B8R, conforme descrito acima, foram manipulados para expressar os transgenes imunoterapêuticos, Flt3L e IL-12-TM, assim como um anticorpo para hCTLA-4, conforme mostrado na Figura 38. Os transgenes Flt3L, IL- 12 TM e eGFP foram inseridos no lócus B8R no genoma de vírus vaccinia Copenhagen. Consultar Figura 36. A recombinação homóloga entre o construto de alvejamento e o lócus B8R resultou na substituição de 75% do gene B8R com os transgenes Flt3-LG, IL-12-TM e eGFP (SKV-23). Essa estratégia permitiu a criação de um vírus knockout B8R enquanto insere transgenes no lugar de B8R. Uma IgG anti-CTLA-4 foi inserida na cadeia principal de SKV-23 alvejando-se as delimitações das deleções 5p para inserir uma cadeia pesada e leve de um anticorpo anti-CTLA-4 humano separado por um motivo proteômico T2A (SKV- 123v2; consultar a Figura 38).
[725] A capacidade desse vírus manipulado para expressar o transgene de IL-12 ligada à membrana foi avaliada. As células foram infectadas com genes vaccinia manipulados SKV-1sc23, SKV-3 ou SKV-GFP. Conforme representado na Figura 42, as células Vero foram manchadas com um anticorpo específico IL- 12p35. As células Vero foram coidentificadas com fluoróforo conjugado com aglutinina de germe de trigo (WGA) como uma contramancha para visualizar os padrões de coloração específicos de membrana celular. A produção de hIL-12 foi adicionalmente quantificada para vários vírus SKV que expressam transgenes através de quantificação de western blot. Consultar Figura 41. Monocamadas de 1 x106 células HeLa foram infectadas em MOI 0,1 (1x10 5 pfu) com vários SKV Vaccinia que expressam combinações diferentes dos três transgenes (anti-hCTLA- 4, FTL3L, IL—12). Após 48 h pós-infecção, o sobrenadante e o lisado foram coletados e sondados para expressão de subunidade de p35 de IL-12. SKV-123 e SKV-3, ambos os vírus manipulados para expressar subunidade de p35 de IL-12 com um domínio transmembranar apenas expressam a proteína em frações de lisado, sugerindo que a IL-12 não é secretada no sobrenadante.
[726] Os níveis de expressão de anti-hCTLA-4 e hFLT3L foram medidos com o uso de um protocolo ELISA. As monocamadas de 1e6 células HeLa foram infectadas em MOI 0,1 (1 x 105 pfu) com SKV-123 expressando todos os três transgenes. 48 horas pós-infecção, o sobrenadante foi coletado e ensaiado por meio de ELISA para expressão do anticorpo anti-CTLA-4 humano e o ligante Flt3. Conforme representado na Figura 40, o vírus SKV-123 teve capacidade para produzir mais anticorpo contra CTLA-4 do que proteína solúvel ligante Flt3.
[727] O vírus SKV-123 que expressa todos os três transgenes foi avaliado em termos de cinética de expressão de transgene ao longo do tempo (Figura 39). As monocamadas confluentes de linhagens celulares de adenocarcinoma humano 786-O foram infectadas com vírus SKV-123 em um MOI de 3 (3 x106 pfu). RNA foi sequenciado com o uso de RNA-seq e a expressão de gene de transgenes inseridos foi determinada após mapeamento de leitura e normalização de expressão. Os dados sugerem que a expressão de transgene tem pico em 3-4 h após a infecção de célula ocorrer.
[728] Em um experimento separado, a expressão dos três transgenes do vírus SKV-123v2 foi adicionalmente avaliada em três outras linhagens celulares cancerígenas: Células cancerígenas cervicais humanas HeLa (American Type Culture Collection (ATCC) nº de Cat.: CCL-2), células cancerígenas colorretais humanas HT-29 (ATCC nº de Cat.: HTB-38), e células cancerígenas colorretais murinas CT26.WT (ATCC nº de Cat.: CRL-2638). A infecção de vírus SKV-123 em MOIs de 0,1 ou 1,0 resultou em anticorpo CTLA-4, FLT3L e produção de produto de transgene de IL-12 em cada uma das células cancerígenas HeLa, HT-29 e CT26.WT (Figuras 56-59).
6.23. EXEMPLO 23 Membrana p35 de IL-12 murina que expressa SKV tem eficácia maior no controle de tumores murinos.
[729] A sobrevivência de camundongos tratados com vírus SKV ou SKV-3 (que expressa p35 de IL-12 ligado à membrana murina) foi avaliada. 5e6 células CT26-LacZ foram inoculadas subcutaneamente no dia 0. Nos dias 14, 16 e 18, tumores foram tratados em uma dose de 1e7 pfu com uma injeção intratumoural de SKV ou SKV-3. Embora vírus SKV tenha estendido a sobrevivência de camundongos que portam tumores de cólon CT26, a expressão de SKV-3 de IL-12 pode induzir remissões que levam a curas duráveis. Consultar a Figura 43.
6.24. EXEMPLO 24 – DELEÇÕES DUPLAS PRINCIPAIS MANIPULADAS
EM VÁRIAS CEPAS VACCINIA INTENSIFICAM O EXTERMÍNIO DE CÉLULA DE CÂNCER IN VITRO
[730] As células Hela foram infectadas em um MOI de 0,1 com as seguintes cepas de vírus vaccinia manipulado: (1) vírus de tipo selvagem parental (wt); (2) iniciador principal 5 deletado (5p), (3) iniciador principal 3 deletado (3p), e (4) iniciador recombinado 5 e iniciador principal 3 deletado duplo (5p3p). A viabilidade celular foi quantificada por ensaio alamar blue 72 horas pós-infecção. Tanto as cepas vaccinia deletadas duplas principais 5p3p quanto 5p são mais citotóxicas em células HeLa quando em comparação com seu tipo selvagem parental e cepas deletadas principais 3p. Consultar as Figuras 44-47.
6.25. EXEMPLO 25 – EFICÁCIA DE SKV EM VOLUME TUMORAL E BENEFÍCIO DE SOBREVIVÊNCIA EM 8 MODELOS DE CAMUNDONGO DE
XENOENXERTO DIFERENTES
[731] O objetivo desses estudos de eficácia foi determinar a atividade anticancerígena dos vírus vaccinia modificados que compreendem tanto as deleções CopMD5p3p quanto B8R (SKV) injetados por via intravenosa (IV) e/ou intratumoral (IT) em camundongos sem pelo atímicos implantados por via subcutânea (SC) com células tumorais pancreáticas humanas Mia PaCa-2, células tumorais de próstata humana PC-3, células de glioma humano U87MG, células de melanoma humano UACC-62, células tumorais de bexiga humana UM-UC-3, células tumorais de cólon humanas COLO-205, células tumorais pulmonares humanas NCI-H460 ou células de adenocarcinoma de cólon humano HT29.
[732] As células foram cultivadas e, quando o número necessário de células foi obtido, um total de 45 camundongos sem pelo atímicos fêmeas de 6-8 semanas de idade foi inoculado com células tumorais (Dia 0). Cada camundongo foi injetado SC no flanco direito com dez milhões de células (1 x 10 7 células) em 0,2 ml de 1:1 Matrigel™. Quando 25 camundongos tiveram tumores de aproximadamente 100 a 200 mg (peso de tumor médio de grupo alvo de aproximadamente 200 mg), o tratamento com vírus Vaccinia foi iniciado.
[733] Os camundongos foram administrados com 0,05 ml de SKV (dose de 1e7 pfu) IT (10 camundongos) e/ou IV (10 camundongos). Controles (5 camundongos) foram administrados com 0,05 ml de PBS. Para injeções IT, uma agulha 31G ½” fixa a uma seringa estéril foi usada para injetar em cada tumor. Se o tumor foi grande ou tem formato irregular, o tumor foi injetado em uma área diferente em cada dia de infecção. Os camundongos foram observados duas vezes por dia quanto à mortalidade e moribundidade. Os tumores foram medidos duas vezes por semana começando no primeiro dia de tratamento. Os volumes tumorais (mm3) foram calculados com o uso da equação para uma esfera elipsoide (l x w2)/2 = mm3, em que l e w se referem às dimensões maiores e menores coletados em cada medição.
[734] No Dia 60 após a implantação tumoral ou antes, qualquer animal moribundo, qualquer animal com perda de peso de corpo excessiva (>30% do peso corporal do primeiro dia de tratamento) ou qualquer animal cujo fardo tumoral total alcançou 4000 mg, foi ulcerado, ou faleceu foi removido do estudo.
[735] Esses estudos de eficácia mostraram uma redução mensurável em volume tumoral nos modelos de xenoenxerto Mia PaCa-2, PC-3, U87MG, UACC- 62 e UM-UC-3 quando uma dose de 1e7 pfu de SKV foi administrada IV ou IT, conforme mostrado nas Figuras 48A-48E assim como em modelos de xenoenxerto COLO-205, H460 e HT29 quando uma dose de 1e7 pfu de SKV foi administrada IT, conforme mostrado nas Figuras 48F-48H. Esses estudos de eficácia também mostraram um aumento significativo em porcentagem de sobrevivência (p <0,0001) em todos os 8 modelos de xenoenxerto quando administrados com SKV IV e/ou IT em comparação com camundongos de controle tratados apenas com PBS, conforme mostrado nas Figuras 48A-48H.
6.26. EXEMPLO 26 – EFICÁCIA DE VÁRIOS VETORES SKV EM VOLUME
TUMORAL E BENEFÍCIO DE SOBREVIVÊNCIA EM UM MODELO DE CAMUNDONGO SINGÊNICO
[736] Vários vetores SKV foram gerados (consultar as Tabelas 44 e 45 acima). O propósito desse estudo foi comparar a eficácia de SKV-12m3v2-eGFP, ipilimumab e SKV em um modelo de camundongo singênico em que todos os transgenes codificados foram ativos. As células cancerígenas colorretais MC38 (5 x 105) foram ressuspensas em 100 l de mistura 1:1 de Matrigel e meio DMEM livre de soro foi injetado SC no flanco direito de camundongo C57BL/6 transgênico que expressa CTLA-4 humano. Os animais foram, então, aleatorizados em 5 grupos de tratamento e, então, tratados com PBS, PBS mais Ipilimumab, SKV, anticorpo anti- PD-1, SKV-12m3v2-eGFP ou SKV-12m3v2-eGFP mais anticorpo anti-PD-1. SKV- 12m3v2-eGFP é SKV que expressa o anticorpo anti-CTLA-4 humano, ligante Flt3 humano e p35 de IL-12 TM de camundongo. O vírus foi diluído em PBS para distribuir 1 x 108 PFU/camundongo em 50l e, então, o volume total injetado no centro do tumor criando um trajeto de agulha único. Anticorpos (ipilimumab 20g em 100l e anticorpo anti-PD-1 250g em 100l) foram diluídos em PBS estéril para dose apropriada e distribuídos por injeção ip. Os camundongos que portam tumores MC38 SC foram tratados com 3 doses de a) ipilimumab em 1 mg/kg, b) SKV em 1 x 108 PFU ou c) SKV-12m3v2-eGFP em 1 x 108 PFU. Os tumores foram medidos,
volumes registrados e bem estar básico avaliado anterior ao tratamento e, então, ao longo do curso do estudo (21 dias de duração). Os resultados do estudo são mostrados nas Figuras 49 (volume tumoral médio e curvas de sobrevivência) e Figura 50 (volumes tumorais individuais). Ipilimumab sozinho resultou em crescimento tumoral atrasado e 1 cura (10%); SKV sozinho mostrou eficácia e 2 curas (20%); SKV que expressa três transgenes melhorou significativamente o controle tumoral, aumentou a sobrevivência e resultou em 3 curas (30%); a adição de anticorpo PD-1 dobrou a taxa de cura (30-60%); e o anticorpo PD-1 sozinho não teve efeito (dados não mostrados).
[737] O controle tumoral, como em comparação com o grupo tratado com PBS no momento do primeiro ponto final humano no estudo, foi observado em resposta ao tratamento com ipilimumab (P< 0,05), SKV (P< 0,05), SKV-12m3v2- eGFP (P< 0,05), e SKV-12m3v2-eGFP + anticorpo anti-PD-1 (P<0,05). Não houve diferença estatisticamente significativa em controle tumoral entre o vírus diferente ou com a adição de anticorpo anti-PD-1. Todos os testes estatísticos foram realizados com o uso de múltiplos testes t com GraphPad Prism 8.2.
[738] O tempo de sobrevivência aumentou em comparação com o grupo tratado com PBS (sobrevivência mediana de 19 dias) foi observado com o tratamento com SKV (P< 0,005, sobrevivência mediana 20=5 dias, Ipilimumab (P< 0,001, sobrevivência mediana 30 dias), SKV-12m3v2-eGFP (P< 0,001, sobrevivência mediana 33 dias) e SKV-12m3v2-eGFP + anticorpo anti-PD-1 (P< 0,001). A regressão tumoral completa observada nos seguintes grupos de tratamento: Ipilimumab (n=1), SKV (n=2), SKV-12m3v2-eGFP (n=3) e SKV- 12m3v2-eGFP (n=6). O tratamento com SKV-12m3v2-eGFP + anticorpo anti-PD-1 mostraram benefício de sobrevivência aumentado em comparação com o tratamento apenas com SKV (P<0,05); entretanto, não houve diferença estatisticamente significativa em sobrevivência quando comparando SKV-12m3v2- eGFP + anticorpo anti-PD-1 com apenas SKV-12m3v2-eGFP. Todos os testes estatísticos foram realizados com o uso do teste log-rank (Mantel-Cox) com GraphPad Prism 8.2.
[739] Quando os seis camundongos com regressão completa de tumores iniciais no grupo SKV-12m3v2-eGFP + anticorpo anti-PD-1 foram desafiados novamente com 5 × 105 células MC38 no flanco oposto, 2 camundongos exibiram crescimento tumoral e 4 camundongos permaneceram resistentes ao crescimento tumoral.
6.27. EXEMPLO 27 – COMPARAÇÃO DE EFICÁCIA DE SKV QUE EXPRESSA SUBUNIDADE IL-12p35-TM LIGADA À MEMBRANA VERSUS subunidade IL12p70-TM EM MODELOS DE CAMUNDONGO MC-38 DE
VOLUME TUMORAL
[740] O propósito desse estudo foi comparar a eficácia de SKV-mIL12p35 com SKV-mIL12p70 e SKV no modelo de tumor MC38 para avaliar se há diferença em controle de tumor e sobrevivência relacionada ao potencial estimulante imune das 2 subunidades de IL12. As células cancerígenas colorretais MC38 (5 x 10 5) foram ressuspensas em 100 l de mistura 1:1 de Matrigel e meio DMEM livre de soro foi injetado SC no flanco direito de camundongos C57BL/6. Permitiu-se que os tumores crescessem por 7 dias até serem aproximadamente 3x3 mm. Os animais foram, então, aleatorizados em 4 grupos de tratamento e, então, tratados com PBS, SKV, SKV-mIL12p35 ou SKV-mIL12p70. O vírus foi diluído em PBS para distribuir 1 x 107 PFU/camundongo em 100l e, então, o volume total foi injetado no centro do tumor criando um trajeto de agulha único. Os resultados são mostrados na Figura 51. Os camundongos tratados com SKV, SKV-mIL12p35 e SKV-mIL12p70 mostraram todos uma redução em volume de tumor em comparação com camundongos tratados com PBS de controle. O tratamento com SKV-mIL12p35 e SKV-mIL12p70 foi mais eficaz do que tratamento apenas com SKV. Os camundongos tratados com SKV-mIL12p35 e SKV-mIL12p70 mostraram reduções comparáveis em volume tumoral.
6.28. EXEMPLO 28 – SKV EM UM REGIME DE VACINA ONCOLÍTICA DE INICIADOR-REFORÇO HETERÓLOGO
[741] Os resultados preliminares mostraram que SKV pode ser usado para iniciar ou reforçar uma resposta imune em uma vacina heteróloga. Ovalbumina (OVA) foi usada como um antígeno estranho em uma combinação de iniciador- reforço heteróloga. Os animais foram iniciados no dia 1, avaliados no dia 8-10 e, então, reforçados no dia 14 e avaliados novamente após o reforço no dia 21-24. Os camundongos pretos C57 saudáveis foram tratados com PBS (controle),
Adenovírus que expressa OVA, vírus vaccinia de cepa Copenhagen de tipo selvagem que expressa OVA ou CopMD5p3p (cadeia principal de SKV) que expressa OVA como um iniciador ou um reforço. A análise de tetrâmero foi realizada avaliando respostas específicas de OVA no Dia 21. Os camundongos foram avaliados em 10 dias, que mostram que cadeia principal CopMD5p3p ou SKV, mas não vírus Copenhagen induziram respostas imunes tanto em definição de iniciador quanto em reforço em camundongos C57BL/6 que foram dosados com iniciador no dia 1 e, então, reforçados de modo imune no Dia 14 conforme mostrado na Figura 52. CopMD5p3p (cadeia principal de SKV) pode iniciar, e a resposta iniciadora pode ser reforçada por rabdovírus oncolítico Maraba MG1. CopMD5p3p (cadeia principal de SKV) pode reforçar uma resposta iniciadora de Adenovírus. CopMD5p3p (cadeia principal de SKV) superou o desempenho de vírus Copenhagen parental em iniciação e reforço de uma resposta imune ao antígeno estranho.
6.29. EXEMPLO 29 – BIODISTRIBUIÇÃO DE TRANSGENES SKV-123
COM ADMINISTRAÇÃO IT VS IV
[742] O efeito de rotas diferentes de administração (IV vs IT) na biodistribuição dos transgenes (anticorpo Anti-CTLA-4, FLT3L e IL-12-TM) expressos como resultado de tratamento com SKV-123 foi estudado. Os camundongos BALB/c fêmeas foram enxertados com as células tumorais CT26- LacZ (3 x 105 células) e subsequentemente receberam SKV-123 duas semanas depois (dose 1 x 108 PFU) por injeção IV nos Dias de Estudo 1, 3 e 5, ou injeção IT nos Dias de Estudo 1 e 3. Sangue e tecidos foram colhidos nos Dias 2, 4, 6, 8 e 22 para grupos que portam tumor. Os baços foram colhidos nos Dias 28 e 43 para grupos que não portam tumor. O soro foi isolado de amostras sanguíneas (coletadas de punções cardíacas) e os tecidos foram homogeneizados para ELISA de FLT3L e expressão de anticorpo anti-CTLA-4. ELISA foi realizado apenas em amostras que testaram positivo para genomas virais por PCR. Para biodistribuição de IL-12-TM, os tecidos foram colhidos nos Dias 2, 4, 8, 22, 28 e 43. Os tecidos foram homogeneizados para análise Western Blot de expressão de transgene IL- 12-TM. Western Blotting foi realizado apenas em amostras que testaram positivo para genomas virais por PCR. Anti-Tubulina foi usada como um controle de carregamento. Tubulina pode não ser detectada em baço e amostras de cauda, entretanto, a presença de proteína foi confirmada com mancha de Ponceau do blot após a transferência. SKV-123 dado por injeção IV nos Dias 1 e 3 resultou em níveis detectáveis de anticorpo anti-CTLA-4 e FLT3L no soro (Figuras 53A, 53B) e em concentrações mais baixas nos tumores de camundongos no dia 2 (Figuras 53C, 53D). FLT3L também pode ser detectado no Dia 2 no baço e cauda, e ainda no Dia 4 após o tratamento IV (Figuras 53C, 53D). O anticorpo Anti-CTLA-4 permaneceu detectável no soro no Dia 4 independentemente tratamento IV ou IT (Figura 53A). O tratamento IT de SKV-123 resultou em concentrações de FLT3L no tumor no Dia 4 (Figura 53F), enquanto as concentrações de anticorpo anti-CTLA-4 foram baixas, mas detectáveis (Figura 53E). A expressão de transgene seletiva de tumor foi demonstrada em modelos tumorais murinos em que concentrações de carga útil terapêuticas foram alcançadas no tumor (por exemplo, >7,5ng/ml de FLT3L) sem qualquer produto de transgene detectável detectado na circulação sistêmica.
[743] O Western blotting para IL-12-TM mostrou apenas bandas não específicas no fígado (Figura 54A), enquanto nenhum IL-12-TM foi detectado no tumor, baço, pulmões ou cauda de animais (Figuras 54A-54D). A biodistribuição de SKV-123 em camundongos que portam tumores imunocompetentes foi restrita ao tumor em animais tratados IT e ao tumor e um número limitado de outros tecidos em níveis muito baixos nos primeiros dias após tratamento IV.
[744] Os genomas virais não foram detectados no cérebro, coração, rim, ovário, linfonodo inguinal, medula óssea, ou soro em qualquer um dos pontos no tempo avaliados. Os genomas virais foram apenas detectáveis em amostras de tumor no ponto no tempo do Dia 4, com a exceção de uma amostra no ponto no tempo do Dia 9. Os genomas foram detectáveis em algumas amostras de cauda, pulmão, baço e fígado, primariamente nos pontos no tempo dos Dias 2 e 4. Nenhum genoma foi detectado em quaisquer amostras do grupo de colheita de Dia 23.
[745] Títulos virais para vírus SKV-123 foram mais altos na cauda no Dia 2 pós-tratamento por injeção IV, com baixos níveis detectáveis no baço, pulmão e fígado. No Dia 4, títulos foram apenas detectados na cauda para grupos de injeção IV. Os títulos virais foram detectados no tumor para ambas as rotas de administração, com altos títulos encontrados após injeção IT em comparação com injeção IV. O vírus também foi detectado no pulmão em níveis comparáveis para ambas as rotas de administração.
[746] Nenhuma das amostras de transmissão ambiental (soro, urina, saliva) examinadas nesse estudo continham quaisquer genomas virais detectáveis ou vírus replicante.
6.30. EXEMPLO 30 – EFICÁCIA DE SKV-123v2 EM VOLUME TUMORAL
EM UM MODELO DE CAMUNDONGO HUMANIZADO
[747] A eficácia de SKV-123v2 no crescimento de tumores em um modelo de camundongo humanizado foi estudado. Os camundongos NOD scid gama (NSG) são uma marca de camundongos de laboratório imunodeficientes que podem ser tratados com PBMCs humanas e desenvolvem, como resultado, um sistema imune do tipo humano. Os camundongos NSG fêmeas foram implantados com PBMCs humanas e, então, 2 semanas depois, enxertados subcutaneamente com 1 x 107 células tumorais de bexiga humana de xenoenxerto UM-UC-3. Os volumes tumorais (mm3) foram calculados com o uso da equação para uma esfera elipsoide (l ×w2)/2 = mm3, em que l e w se referem às dimensões maiores e menores coletados em cada medição. Quando os tumores foram um mínimo de 100 mm 3, os camundongos foram tratados com SKV-123v2 em 1×108 PFU ou controle salino por injeção IV a cada dois dias por três semanas. O bem estar de camundongo básico foi avaliado e o volume de tumor medido ao longo do curso do estudo. Os tumores foram medidos duas vezes por semana começando no Dia 4 de implante e, então, do primeiro dia de tratamento. No Dia 21, os animais tratados com SKV- 123v2 tiveram um volume de tumor médio de 164 mm 3 correspondente a uma diferença de -8,4% em relação ao controle tratado por veículo com o efeito máximo sendo observado no Dia 32 com uma diferença de -53,2% em relação ao controle (Figura 55).
6.31. EXEMPLO 31 – COMPARAÇÃO DE INFECTIVIDADE IN VITRO DE SKV-123v2 EM CÉLULAS TUMORAIS E NORMAIS
[748] Replicação viral, citotoxicidade, expressão de transgene e produção de citocina após infecção de vírus SKV-123v2 de células normais humanas (PBMC, PrEC) e cancerígenas (786-O, HeLa) foram caracterizadas in vitro. As células mononucleares sanguíneas periféricas humanas (PBMCs) foram adquiridas a partir de Lonza (nº de Cat.: CC-2702). Células epiteliais de próstata humanas (PrEC) foram adquiridas a partir de Lonza (nº de Cat.: CC-2555). Células de adenocarcinoma renal 786-O humanas foram adquiridas a partir de ATCC (nº de Cat.:CRL-1932). As células cancerígenas cervicais humanas HeLa foram adquiridas de ATCC (nº de Cat.: CCL-2).
[749] As células foram semeadas em placas de 24 poços. Viabilidade celular e a expressão de citocina foram avaliadas em quatro pontos no tempo: 6 h, 24 h, 48 h e 72 h pós-infecção. Para determinar o número de células viáveis/ml e porcentagem de viabilidade de cada suspensão de célula, as suspensões de célula foram colocadas em um copo ViCell em 0,6 ml cada e as amostras foram registradas no instrumento. As diluições foram preparadas. As células foram infectadas quando monocamadas foram > 80% confluentes (24 h após inoculação de célula). No dia de infecção, o vírus foi diluído às doses apropriadas conforme destacado na Tabela 47 abaixo. A infecção foi conduzida em placas de 24 poços. TABELA 47. CÁLCULOS DE INFECÇÃO PARA PLACAS DE 24 POÇOS SKV-123v2 nº de nº de poços a Volume de Volume de SFM (µl) MOI células produzir vírus /poço 1,64 µl de MOI 0,01 2 × 105 55 1:10× 2750 MOI 0,1 2 × 105 55 1,64 µl 2750 estoque MOI 1 2 × 105 55 16,4 µl 2733,6 estoque
[750] O perfilamento de citocina foi conduzido nos pontos no tempo indicados. Os sobrenadantes celulares infectados foram aliquotados, armazenados a -20°C e enviados para Eve Technologies para análise com o uso do Arranjo de Citocina Humana/Arranjo de Quimiocina 42-Plex com IL-18 (HD42). FLT3L e a expressão de ipilimumab foram avaliados com o uso de ensaios ELISA. A viabilidade celular foi conduzida em cada ponto no tempo de colheita com o uso de Alamar Blue, lida em Fluoroskan para determinar a % de viabilidade de poços de tratamento em relação a poços de controle não tratados. O título viral foi determinado para avaliar a cinética de replicação entre linhagens celulares diferentes.
[751] As células normais foram cultivadas na presença de fatores de crescimento de soro e em uma falta de inibição de contato a fim de maximizar a viabilidade de célula no momento de infecção. Sob as afecções testadas e na densidade celular equivalente usada para experimentos de infecção SKV-123v2, PrECs (células epiteliais de próstata) demonstraram uma taxa proliferativa quase tão alta quanto células cancerígenas HeLa. Para definir melhor o fenótipo das linhagens celulares normais testadas quando cultivadas sob essas afecções, um ensaio de proliferação que mede a incorporação de BrdU foi conduzida em células PrEC e PBMCs em um estudo de acompanhamento. A replicação intermediária de SKV-123v2 em PrECs como em comparação com as linhagens celulares cancerígenas e PBMCs correlacionadas com a taxa de proliferação relativa dessa linhagem celular normal observada sob afecções de infecção in vitro.
[752] Os resultados mostram que linhagens celulares cancerígenas 786-O e HeLa foram sensíveis à infecção com vírus SKV-123v2 conforme evidenciado por uma diminuição em viabilidade celular de maneira dependente de dose e dependente de tempo (Figura 56). A viabilidade celular 786-O diminuiu ao longo do tempo em todos os MOIs testados enquanto a viabilidade celular de HeLa diminuiu mediante infecção com vírus SKV-123v2 em um MOI de 1 e 0,1. PBMCs humanas normais foram resistentes à infecção conforme evidenciado por alta viabilidade celular após a infecção de vírus SKV-123v2 em MOIs de 1, 0,1, e 0,01 (Figura 56). As PrECs humanas normais foram menos sensíveis à infecção de vírus SKV-123v2 quando em comparação com linhagens celulares cancerígenas. Nenhuma diminuição em viabilidade celular foi observada em qualquer MOI (1, 0,1 e 0,01) até 48 horas pós-infecção. Por 72 h pós-infecção, a viabilidade celular diminuída foi observada mediante infecção de vírus SKV-123v2 em um MOI de 1 e 0,1 (Figura 56).
[753] O vírus SKV-123v2 infectado e replicado em linhagens celulares cancerígenas em taxas mais altas quando em comparação com PrECs humanos normais (Figura 57). Os mesmos infectaram e replicaram em linhagens celulares cancerígenas 786-O e HeLa a níveis maiores do que 10 vezes quando em comparação com PrECs humanos normais. O vírus SKV-123v2 não se replica em PBMCs humanas normais em MOIs de 1, 0,1 e 0,01 (Figura 59).
[754] A produção de anticorpo Anti-CTLA-4 e FLT3L (dois produtos de transgene produzidos por células infectadas por vírus SKV-123v2) foi monitorada em sobrenadante celular em cada MOI e ponto no tempo. A infecção de vírus SKV- 123v2 resultou em produção maior de anticorpo anti-CTLA-4 e FLT3L em células cancerígenas quando em comparação com células normais (células PrEC ou PBMCs) (Figuras 58 e 59). No anticorpo anti-CTLA-4 ou FLT3L pode ser detectado em sobrenadante celular de PBMC. As concentrações de produto de transgene de anticorpo anti-CTLA-4 e FLT3L são correlacionadas com a susceptibilidade celular à infecção por SKV-123v2.
[755] No experimento de perfilamento de citocina, os níveis mais altos de citotoxicidade foram observados em células cancerígenas infectadas por vírus SKV-123v2 em relação a células normais.
[756] A linhagem celular PrEC foi particularmente responsiva à infecção viral, produzindo EGF, G-CSF, IL-1a, IL-1RA, IL-4 e IL-18 em um contexto em que apenas baixas ou concentrações negligenciáveis dessas citocinas foram detectáveis a partir de HeLa, 786-0 e PBMCs. PrEC e 786-0 foram apenas as linhagens celulares que produziram IL-8, TGF-α e TNFα em resposta à infecção; enquanto apenas PrEC e PBMC produziram IP-10. PrEC mostraram produção dependente de dose de EGF, com produção aumentada em MOI mais alto de infecção de vírus. A concentração EGF permaneceu consistente com o mesmo grupo de dosagem entre 24 a 72 horas com um aumento leve em 72 horas para células infectadas com MOI 1 de vírus. Em células PrEC, a produção de IL-1a permaneceu principalmente consistente com a linha de base por 48 horas pós- infecção, e, então, aumentou em 72 horas, com as concentrações mais altas observadas em MOI 1. De modo semelhante, a produção de IL-1RA e IL-18 por PrEC mostrou aumentos drásticos em concentração em 72 horas pós-infecção com baixa (aumento de IL-1RA em 24 horas em MOI 0,1 mais alto e 1) infecção ou negligenciável antes desse ponto no tempo. Embora a produção de IL-1RA tenha parecido dependente de dose em 72 horas, MOI 1 de vírus resultou em produção de IL-18 reduzida em comparação com MOI 0,1. PrEC produziu IL-4 reduzida em 6 horas pós-infecção em todos os grupos de dosagem em comparação com controle não tratado. Entretanto, essa produção de IL-4 aumentou em 24 horas acima da linha de base e permaneceu alta em 72 horas pós-infecção.
[757] Alternativamente, todas as linhagens celulares, exceto PrEC, produziram MCP-1. Em células HeLa e 786-0, altas concentrações de MCP-1 foram produzidas em linha de base e não afetadas por infecção viral. Em PBMCs, MCP- 1 foi induzido acima da linha de base por altas doses de vírus: MOI 1 de vírus em 24 horas e MOI 0,1 e 1 de vírus em 72 horas pós-infecção.
[758] Diversas citocinas aumentaram em 24 e 72 horas pós-infecção, mas não 48 horas (ou apenas marginalmente), sobre a linha de base. Em células HeLa, os mesmos são FGF-2 (em MOI 1, embora a baixa dosagem pôde apenas induzir a produção em 72 horas) e IL-6 (MOI 0,01 e 0,1 apenas; concentrações de MOI 1 foram consistentes ao longo do tempo). Em células PrEC, as mesmas são G-CSF (em MOI 0,01 e 0,1 apenas; concentrações de MOI 1 foram consistentes ao longo do tempo), TGF-α (em MOI 0,01 e 0,1 apenas; concentrações de MOI 1 foram consistentes ao longo do tempo), TNFα (em MOI 0,01 e 0,1 apenas; MOI 1 aumentou ao longo do tempo), e IP-10 (MOI 0,1 e 0,1 apenas; MOI 1 produziu baixas concentrações). Em células 786-0, há FGF-2 (em MOI 0,1 e 1 apenas; MOI 0,01 de dose mais baixa induziu apenas produção em 72 horas), IL-8 (em MOI 0,01 e 0,1 apenas; concentrações de MOI 1 foram consistentes ao longo do tempo) e TGF-α (em MOI 0,01 e 0,1 apenas), TNFα (MOI 0,01 e 0,1 apenas; concentrações de MOI foram linha de base ao longo do tempo). Em PBMCs, a citocina é IP-10 (em apenas MOI 1).
[759] A produção IFNα2 em células HeLa e 786-0 tiveram pico em 24 horas pós-infecção e, então, diminuíram ao longo do curso do tempo, enquanto em células PrEC, a produção de IFNα2 foi a mais alta em 72 horas. Em todas as três linhagens celulares, a dosagem mais alta em MOI 0,1 ou 1 exibiu produção de citocina mais baixa entre os grupos de dosagem.
[760] A produção de IFNγ foi baixa em todas as linhagens celulares, com 786-0 exibindo produção de pico em 24 horas e, então, diminuindo ao longo do tempo.
6.32. EXEMPLO 32 – GERAÇÃO DE VÍRUS VACCINIA RECOMBINANTE
[761] Os métodos e técnicas descritos nesse exemplo foram usados para gerar os vetores descritos na Tabela 45. Conforme resumido na Tabela 45, cada um dos vetores demonstrou ser competente em replicação, para expressar o transgene (ou transgenes) contido no vetor, e para exibir a citotoxicidade em linhagens celulares cancerígenas conforme indicado. Os ensaios conforme descrito abaixo foram usados para gerar os dados resumidos na Tabela 45.
[762] RECOMBINAÇÃO
[763] As monocamadas de células U2OS quase confluentes (80-90%) são primeiramente infectadas por 2 h com vírus vaccinia (por exemplo, vírus SKV) a ser modificado. Após a infecção, o DNA de alvejamento (Figura 60) é transfectado em células infectadas. No dia seguinte (12-18 h pós-transfecção), o meio de transfecção é removido e o meio fresco é adicionado às células. No segundo dia (~48 h pós-transfecção), as células são congeladas e descongeladas para purificação de placa.
[764] PURIFICAÇÃO E AMPLIFICAÇÃO DE PLACA
[765] Para identificar vírus vaccinia recombinante, as placas são triadas com o uso do marcador fluorescente. As diluições em série (1:10) da mistura de infecção/transfecção da etapa anterior são adicionadas a monocamadas confluentes de células U2OS por 2 h após as quais o meio é substituído por meio de sobreposição para permitir a formação de placa. Dois dias depois, as placas fluorescentes são coletadas, diluídas em série e adicionadas a monocamadas frescas de células U2OS seguidas por meio de sobreposição. Esse processo de purificação de placa é repetido até todas as placas serem fluorescentes. A fim de remover o marcador fluorescente, a recombinase apropriada é transfectada com o vírus fluorescente conforme destacado na etapa acima (isto é, Recombinação). O processo de purificação de placa é, então, continuado para selecionar placas não flourescentes.
[766] Uma placa de um vírus recombinante puro é, então, usada para infectar monocamadas de outra linhagem celular (por exemplo, células HeLa) para expansão, nessa etapa nenhuma sobreposição é adicionada. Uma vez que o efeito citopático visível é visto em células infectadas, o lisado de célula é coletado e a concentração de vírus recombinante é determinada por titulação viral.
[767] EXPRESSÃO DE TRANSGENE
[768] Os vírus recombinantes são usados para infectar uma variedade de células cancerígenas (por exemplo, HeLa, U2OS, 786-O, etc.) em várias concentrações (por exemplo, MOI 0,01, 0,1 ou 1) para várias quantidades de tempo (por exemplo, 6 h, 24 h, 48 h e 72 h pós-infecção). Os lisados celulares (para Western blot) e sobrenadantes celulares (para ELISA) são congelados e armazenados a -80 oC para ensaios em relação à produção de transgene. Para transgenes que codificam uma proteína solúvel (por exemplo, FLT3L, o anticorpo anti-CTLA-4), os kits ELISA são usados para quantificar a produção de transgene. Para transgenes que codificam produtos de proteína (por exemplo, IL-12 ligada à membrana) restritos em célula (por exemplo, dentro da célula ou ligados à membrana), western blots de lisados de célula são usados para quantificar a produção de transgene.
[769] CITOTOXICIDADE DE LINHAGEM CELULAR CANCERÍGENA
[770] A citotoxicidade de linhagem celular cancerígena é determinada pelo efeito citopático visível visto por microscopia de luz em células infectadas. O lisado de célula pode ser coletado e a concentração de vírus recombinante determinada por titulação viral.
ALGUMAS MODALIDADES
[771] Todas as publicações, patentes e pedidos de patente mencionados neste relatório descritivo são incorporados ao presente documento a título de referência até o mesmo ponto, como se cada publicação independente ou pedido de patente tivesse sido especificamente e individualmente indicado para ser incorporado a título de referência.
[772] Embora a invenção tenha sido descrita em conexão com modalidades específicas da mesma, será entendido que a mesma tem capacidade para modificações adicionais e este pedido é destinado a cobrir quaisquer variações, usos ou adaptações da invenção seguindo, em geral, os princípios da invenção e incluindo tais desvios da invenção que entrarão em prática conhecida ou costumeira à qual a invenção pertence e pode ser aplicada aos recursos essenciais estabelecidos doravante e segue no escopo das reivindicações.
[773] Algumas modalidades estão dentro das reivindicações.

Claims (200)

REIVINDICAÇÕES
1. Ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante caracterizado pelo fato de que compreende: (a) uma sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210, que compreende genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R parciais e que compreende uma deleção no gene B8R; (b) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo que se liga especificamente à Proteína 4 Associada a Linfócito T Citotóxico (CTLA-4), em que a primeira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 214; (c) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de Interleucina 12 (IL-12), em que a segunda sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 215; e (d) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica o ligante de tirosina quinase 3 de tipo FMS (FLT3L), em que a terceira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 216.
2. Ácido nucleico, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a primeira sequência de nucleotídeos, a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a segunda sequência de nucleotídeos, e a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a terceira sequência de nucleotídeos.
3. Ácido nucleico, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que compreende adicionalmente uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos que codifica o anticorpo anti-CTLA-4.
4. Ácido nucleico, de acordo com a reivindicação 3, caracterizado pelo fato de que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos que codifica o anticorpo anti-CTLA-4 é um promotor H5R, um promotor pS ou um promotor LEO.
5. Ácido nucleico, de acordo com a reivindicação 3, caracterizado pelo fato de que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos que codifica o anticorpo anti-CTLA-4 é um promotor H5R.
6. Ácido nucleico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-5, caracterizado pelo fato de que compreende uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos que codifica o polipeptídeo de IL-12.
7. Ácido nucleico, de acordo com a reivindicação 6, caracterizado pelo fato de que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado ao segundo sequência de nucleotídeos que codifica o polipeptídeo de IL-12 é um promotor tardio.
8. Ácido nucleico, de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pelo fato de que o promotor tardio compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561, um promotor F17R ou um promotor D13L.
9. Ácido nucleico, de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pelo fato de que o promotor tardio compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO:
561.
10. Ácido nucleico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-9, caracterizado pelo fato de que compreende uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L.
11. Ácido nucleico, de acordo com a reivindicação 10, caracterizado pelo fato de que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L é um promotor B8R, um promotor B19R, a E3L promotor, um promotor F11L ou um promotor B2R.
12. Ácido nucleico, de acordo com a reivindicação 10, caracterizado pelo fato de que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L é um promotor B8R.
13. Ácido nucleico, de acordo com a reivindicação 10, caracterizado pelo fato de que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L é um promotor B19R.
14. Ácido nucleico, de acordo com a reivindicação 10, caracterizado pelo fato de que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L é um promotor B8R e um promotor
B19R.
15. Ácido nucleico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-14, caracterizado pelo fato de que o primeiro transgene está presente entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais na SEQ ID NO: 210.
16. Ácido nucleico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-14, caracterizado pelo fato de que o segundo transgene está presente entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais na SEQ ID NO: 210.
17. Ácido nucleico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-14, caracterizado pelo fato de que o terceiro transgene está presente entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais na SEQ ID NO: 210.
18. Ácido nucleico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-14, caracterizado pelo fato de que o primeiro transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R.
19. Ácido nucleico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-14, caracterizado pelo fato de que o segundo transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R.
20. Ácido nucleico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-14, caracterizado pelo fato de que o terceiro transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R.
21. Ácido nucleico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-14, caracterizado pelo fato de que o primeiro transgene está presente entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais na SEQ ID NO: 210.
22. Ácido nucleico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-14, caracterizado pelo fato de que o segundo transgene está presente entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais na SEQ ID NO: 210.
23. Ácido nucleico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-14, caracterizado pelo fato de que o terceiro transgene está presente entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais na SEQ ID NO: 210.
24. Ácido nucleico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-14, caracterizado pelo fato de que o primeiro transgene e o segundo transgene estão presentes entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais na SEQ ID NO: 210.
25. Ácido nucleico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-14,
caracterizado pelo fato de que o primeiro transgene e o segundo transgene estão presentes no lócus da deleção no gene B8R.
26. Ácido nucleico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-14, caracterizado pelo fato de que o primeiro transgene e o segundo transgene estão presentes entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais na SEQ ID NO: 210.
27. Ácido nucleico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-14, caracterizado pelo fato de que o primeiro transgene e o terceiro transgene estão presentes entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais na SEQ ID NO: 210.
28. Ácido nucleico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-14, caracterizado pelo fato de que o primeiro transgene e o terceiro transgene estão presentes no lócus da deleção no gene B8R.
29. Ácido nucleico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-14, caracterizado pelo fato de que o primeiro transgene e o terceiro transgene estão presentes entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais na SEQ ID NO: 210.
30. Ácido nucleico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-14, caracterizado pelo fato de que o segundo transgene e o terceiro transgene estão presentes entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais na SEQ ID NO: 210.
31. Ácido nucleico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-14, caracterizado pelo fato de que o segundo transgene e o terceiro transgene estão presentes no lócus da deleção no gene B8R.
32. Ácido nucleico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-14, caracterizado pelo fato de que o segundo transgene e o terceiro transgene estão presentes entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais na SEQ ID NO: 210.
33. Ácido nucleico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-14, caracterizado pelo fato de que o primeiro transgene está presente entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais na SEQ ID NO: 210, e o segundo transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R.
34. Ácido nucleico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-14, caracterizado pelo fato de que o segundo transgene está presente entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais na SEQ ID NO: 210, e o primeiro transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R.
35. Ácido nucleico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-14,
caracterizado pelo fato de que o primeiro transgene está presente entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais na SEQ ID NO: 210, e o terceiro transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R.
36. Ácido nucleico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-14, caracterizado pelo fato de que o terceiro transgene está presente entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais na SEQ ID NO: 210, e o primeiro transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R.
37. Ácido nucleico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-14, caracterizado pelo fato de que o segundo transgene está presente entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais na SEQ ID NO: 210, e o terceiro transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R.
38. Ácido nucleico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-14, caracterizado pelo fato de que o terceiro transgene está presente entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais na SEQ ID NO: 210, e o segundo transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R.
39. Ácido nucleico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-14, caracterizado pelo fato de que o primeiro transgene está presente entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais na SEQ ID NO: 210, e o segundo transgene está presente entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais na SEQ ID NO: 210.
40. Ácido nucleico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-14, caracterizado pelo fato de que o segundo transgene está presente entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais na SEQ ID NO: 210, e o primeiro transgene está presente entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais na SEQ ID NO: 210.
41. Ácido nucleico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-14, caracterizado pelo fato de que o primeiro transgene está presente entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais na SEQ ID NO: 210, e o terceiro transgene está presente entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais na SEQ ID NO: 210.
42. Ácido nucleico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-14, caracterizado pelo fato de que o terceiro transgene está presente entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais na SEQ ID NO: 210, e o primeiro transgene está presente entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais na SEQ ID NO: 210.
43. Ácido nucleico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-14,
caracterizado pelo fato de que o segundo transgene está presente entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais na SEQ ID NO: 210, e o terceiro transgene está presente entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais na SEQ ID NO: 210.
44. Ácido nucleico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-14, caracterizado pelo fato de que o terceiro transgene está presente entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais na SEQ ID NO: 210, e o segundo transgene está presente entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais na SEQ ID NO: 210.
45. Ácido nucleico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-14, caracterizado pelo fato de que o primeiro transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R, e o segundo transgene está presente entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais na SEQ ID NO: 210.
46. Ácido nucleico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-14, caracterizado pelo fato de que o segundo transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R, e o primeiro transgene está presente entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais na SEQ ID NO: 210.
47. Ácido nucleico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-14, caracterizado pelo fato de que o primeiro transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R, e o terceiro transgene está presente entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais na SEQ ID NO: 210.
48. Ácido nucleico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-14, caracterizado pelo fato de que o terceiro transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R, e o primeiro transgene está presente entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais na SEQ ID NO: 210.
49. Ácido nucleico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-14, caracterizado pelo fato de que o segundo transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R, e o terceiro transgene está presente entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais na SEQ ID NO: 210.
50. Ácido nucleico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-14, caracterizado pelo fato de que o terceiro transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R, e o segundo transgene está presente entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais na SEQ ID NO: 210.
51. Ácido nucleico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-14,
caracterizado pelo fato de que o primeiro transgene, o segundo transgene e o terceiro transgene estão presentes entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais na SEQ ID NO: 210.
52. Ácido nucleico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-14, caracterizado pelo fato de que o primeiro transgene, o segundo transgene e o terceiro transgene estão presentes no lócus da deleção no gene B8R.
53. Ácido nucleico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-14, caracterizado pelo fato de que o primeiro transgene, o segundo transgene e o terceiro transgene estão presentes entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais na SEQ ID NO: 210.
54. Ácido nucleico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-14, caracterizado pelo fato de que o primeiro transgene está presente entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais na SEQ ID NO: 210, e o segundo transgene e o terceiro transgene estão presentes no lócus da deleção no gene B8R.
55. Ácido nucleico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-14, caracterizado pelo fato de que o segundo transgene está presente entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais na SEQ ID NO: 210, e o primeiro transgene e o terceiro transgene estão presentes no lócus da deleção no gene B8R.
56. Ácido nucleico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-14, caracterizado pelo fato de que o terceiro transgene está presente entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais na SEQ ID NO: 210, e o primeiro transgene e o segundo transgene estão presentes no lócus da deleção no gene B8R.
57. Ácido nucleico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-14, caracterizado pelo fato de que o primeiro transgene e o segundo transgene estão presentes entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais na SEQ ID NO: 210, e o terceiro transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R.
58. Ácido nucleico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-14, caracterizado pelo fato de que o primeiro transgene e o terceiro transgene estão presentes entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais na SEQ ID NO: 210, e o segundo transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R.
59. Ácido nucleico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-14, caracterizado pelo fato de que o segundo transgene e o terceiro transgene estão presentes entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais na SEQ ID NO: 210, e o primeiro transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R.
60. Ácido nucleico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-14, caracterizado pelo fato de que o primeiro transgene está presente entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais na SEQ ID NO: 210, e o segundo transgene e o terceiro transgene estão presentes entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais na SEQ ID NO: 210.
61. Ácido nucleico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-14, caracterizado pelo fato de que o segundo transgene está presente entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais na SEQ ID NO: 210, e o primeiro transgene e o terceiro transgene estão presentes entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais na SEQ ID NO: 210.
62. Ácido nucleico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-14, caracterizado pelo fato de que o terceiro transgene está presente entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais na SEQ ID NO: 210, e o primeiro transgene e o segundo transgene estão presentes entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais na SEQ ID NO: 210.
63. Ácido nucleico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-14, caracterizado pelo fato de que o primeiro transgene e o segundo transgene estão presentes entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais na SEQ ID NO: 210, e o terceiro transgene está presente entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais na SEQ ID NO: 210.
64. Ácido nucleico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-14, caracterizado pelo fato de que o primeiro transgene e o terceiro transgene estão presentes entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais na SEQ ID NO: 210, e o segundo transgene está presente entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais na SEQ ID NO: 210.
65. Ácido nucleico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-14, caracterizado pelo fato de que o segundo transgene e o terceiro transgene estão presentes entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais na SEQ ID NO: 210, e o primeiro transgene está presente entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais na SEQ ID NO: 210.
66. Ácido nucleico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-14, caracterizado pelo fato de que o primeiro transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R, e o segundo transgene e o terceiro transgene estão presentes entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais na SEQ ID NO: 210.
67. Ácido nucleico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-14, caracterizado pelo fato de que o segundo transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R, e o primeiro transgene e o terceiro transgene estão presentes entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais na SEQ ID NO: 210.
68. Ácido nucleico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-14, caracterizado pelo fato de que o terceiro transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R, e o primeiro transgene e o segundo transgene estão presentes entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais na SEQ ID NO: 210.
69. Ácido nucleico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-14, caracterizado pelo fato de que o primeiro transgene e o segundo transgene estão presentes no lócus da deleção no gene B8R, e o terceiro transgene está presente entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais na SEQ ID NO: 210.
70. Ácido nucleico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-14, caracterizado pelo fato de que o primeiro transgene e o terceiro transgene estão presentes no lócus da deleção no gene B8R, e o segundo transgene está presente entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais na SEQ ID NO: 210.
71. Ácido nucleico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-14, caracterizado pelo fato de que o segundo transgene e o terceiro transgene estão presentes no lócus da deleção no gene B8R, e o primeiro transgene está presente entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais na SEQ ID NO: 210.
72. Ácido nucleico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-14, caracterizado pelo fato de que o primeiro transgene está presente entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais na SEQ ID NO: 210, o segundo transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R, e o terceiro transgene está presente entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais na SEQ ID NO: 210.
73. Ácido nucleico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-14, caracterizado pelo fato de que o primeiro transgene está presente entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais na SEQ ID NO: 210, o terceiro transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R, e o segundo transgene está presente entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais na SEQ ID NO: 210.
74. Ácido nucleico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-14, caracterizado pelo fato de que o segundo transgene está presente entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais na SEQ ID NO: 210, o primeiro transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R, e o terceiro transgene está presente entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais na SEQ ID NO: 210.
75. Ácido nucleico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-14, caracterizado pelo fato de que o segundo transgene está presente entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais na SEQ ID NO: 210, o terceiro transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R, e o primeiro transgene está presente entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais na SEQ ID NO: 210.
76. Ácido nucleico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-14, caracterizado pelo fato de que o terceiro transgene está presente entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais na SEQ ID NO: 210, o primeiro transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R, e o segundo transgene está presente entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais na SEQ ID NO: 210.
77. Ácido nucleico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-14, caracterizado pelo fato de que o terceiro transgene está presente entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais na SEQ ID NO: 210, o segundo transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R, e o primeiro transgene está presente entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais na SEQ ID NO: 210.
78. Ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante caracterizado pelo fato de que compreende: (a) uma sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210, que compreende genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R parciais e que compreende uma deleção no gene B8R; (b) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo que se liga especificamente a CTLA-4, em que a primeira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 214; (c) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12, em que a segunda sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 215; e (d) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L, em que a terceira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 216; em que o ácido nucleico compreende adicionalmente: (i) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor H5R; (ii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos é um promotor tardio que compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561; e (iii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R e um promotor B19R.
79. Ácido nucleico, de acordo com a reivindicação 78, caracterizado pelo fato de que a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a primeira sequência de nucleotídeos, a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a segunda sequência de nucleotídeos, e a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a terceira sequência de nucleotídeos.
80. Ácido nucleico, de acordo com a reivindicação 78 ou 79, caracterizado pelo fato de que o primeiro transgene está presente entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais na SEQ ID NO: 210, e o segundo transgene e o terceiro transgene estão presentes no lócus da deleção no gene B8R.
81. Ácido nucleico, de acordo com a reivindicação 78 ou 79, caracterizado pelo fato de que o primeiro transgene está presente entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais na SEQ ID NO: 210, e o segundo transgene e o terceiro transgene estão presentes no lócus da deleção no gene B8R.
82. Ácido nucleico, de acordo com a reivindicação 80 ou 81, caracterizado pelo fato de que o terceiro transgene está a montante do segundo transgene.
83. Ácido nucleico, de acordo com a reivindicação 80 ou 81, caracterizado pelo fato de que o terceiro transgene está a jusante do segundo transgene.
84. Ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante caracterizado pelo fato de que compreende: (a) uma sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210, que compreende genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R parciais e que compreende uma deleção no gene B8R; (b) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo que se liga especificamente a CTLA-4, em que a primeira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 214, e em que a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a primeira sequência de nucleotídeos e o primeiro transgene está presente entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais da sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210; (c) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12, em que a segunda sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 215, e em que a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a segunda sequência de nucleotídeos e o segundo transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R da sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210; e (d) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L, em que a terceira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 216, em que a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a terceira sequência de nucleotídeos e o terceiro transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R da sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210, e em que o terceiro transgene está a montante do segundo transgene;
em que o ácido nucleico compreende adicionalmente: (i) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor H5R; (ii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos é um promotor tardio que compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561; e (iii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R ou um promotor B19R.
85. Ácido nucleico, de acordo com a reivindicação 84, caracterizado pelo fato de que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R e um promotor B19R.
86. Ácido nucleico, de acordo com a reivindicação 85, caracterizado pelo fato de que o promotor B8R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 564 e o promotor B19R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 565.
87. Ácido nucleico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 84-86, caracterizado pelo fato de que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor inicial H5R ou um promotor tardio H5R.
88. Ácido nucleico, de acordo com a reivindicação 87, caracterizado pelo fato de que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor inicial H5R e um promotor tardio H5R.
89. Ácido nucleico, de acordo com a reivindicação 88, caracterizado pelo fato de que o promotor inicial H5R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 553 e o promotor tardio H5R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 554.
90. Ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante caracterizado pelo fato de que compreende: (a) uma sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210, que compreende genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R parciais e que compreende uma deleção no gene B8R; (b) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo que se liga especificamente a CTLA-4, em que a primeira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 214, e em que a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a primeira sequência de nucleotídeos e o primeiro transgene está presente entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais da sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210; (c) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12, em que a segunda sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 215, e em que a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a segunda sequência de nucleotídeos e o segundo transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R da sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210; e (d) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L, em que a terceira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 216, em que a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a terceira sequência de nucleotídeos e o terceiro transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R da sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210, e em que o terceiro transgene está a jusante do segundo transgene; em que o ácido nucleico compreende adicionalmente: (i) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor H5R; (ii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos é um promotor tardio que compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561; e (iii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R ou um promotor B19R.
91. Ácido nucleico, de acordo com a reivindicação 90, caracterizado pelo fato de que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R e um promotor B19R.
92. Ácido nucleico, de acordo com a reivindicação 91, caracterizado pelo fato de que o promotor B8R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 564 e o promotor B19R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 565.
93. Ácido nucleico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 90-92, caracterizado pelo fato de que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor inicial H5R ou um promotor tardio H5R.
94. Ácido nucleico, de acordo com a reivindicação 93, caracterizado pelo fato de que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor inicial H5R e um promotor tardio H5R.
95. Ácido nucleico, de acordo com a reivindicação 94, caracterizado pelo fato de que o promotor inicial H5R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 553 e o promotor tardio H5R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 554.
96. Ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante caracterizado pelo fato de que compreende: (a) uma sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210, que compreende genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R parciais e que compreende uma deleção no gene B8R; (b) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo que se liga especificamente a CTLA-4, em que a primeira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 214, e em que a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a primeira sequência de nucleotídeos e o primeiro transgene está presente entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais na SEQ ID NO: 210; (c) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12, em que a segunda sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 215, e em que a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a segunda sequência de nucleotídeos e o segundo transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R da sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210; e (d) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L, em que a terceira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 216, em que a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a terceira sequência de nucleotídeos e o terceiro transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R da sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210, e em que o terceiro transgene está a montante do segundo transgene; em que o ácido nucleico compreende adicionalmente: (i) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor H5R; (ii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos é um promotor tardio que compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561; e (iii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R ou um promotor B19R.
97. Ácido nucleico, de acordo com a reivindicação 96, caracterizado pelo fato de que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R e um promotor B19R.
98. Ácido nucleico, de acordo com a reivindicação 97, caracterizado pelo fato de que o promotor B8R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 564 e o promotor B19R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 565.
99. Ácido nucleico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 96-98, caracterizado pelo fato de que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor inicial H5R ou um promotor tardio H5R.
100. Ácido nucleico, de acordo com a reivindicação 99, caracterizado pelo fato de que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor inicial H5R e um promotor tardio H5R.
101. Ácido nucleico, de acordo com a reivindicação 100, caracterizado pelo fato de que o promotor inicial H5R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 553 e o promotor tardio H5R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 554.
102. Ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante caracterizado pelo fato de que compreende: (a) uma sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210, que compreende genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R parciais e que compreende uma deleção no gene B8R; (b) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo que se liga especificamente a CTLA-4, em que a primeira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 214, e em que a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a primeira sequência de nucleotídeos e o primeiro transgene está presente entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais da sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210;
(c) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12, em que a segunda sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 215, e em que a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a segunda sequência de nucleotídeos e o segundo transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R da sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210; e (d) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L, em que a terceira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 216, em que a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a terceira sequência de nucleotídeos e o terceiro transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R da sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210, e em que o terceiro transgene está a jusante do segundo transgene; em que o ácido nucleico compreende adicionalmente: (i) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor H5R; (ii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos é um promotor tardio que compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561; e (iii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R ou um promotor B19R.
103. Ácido nucleico, de acordo com a reivindicação 102, caracterizado pelo fato de que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R e um promotor B19R.
104. Ácido nucleico, de acordo com a reivindicação 103, caracterizado pelo fato de que o promotor B8R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 564 e o promotor B19R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 565.
105. Ácido nucleico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 102- 104, caracterizado pelo fato de que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor inicial H5R ou um promotor tardio H5R.
106. Ácido nucleico, de acordo com a reivindicação 105, caracterizado pelo fato de que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor inicial H5R e um promotor tardio H5R.
107. Ácido nucleico, de acordo com a reivindicação 106, caracterizado pelo fato de que o promotor inicial H5R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 553 e o promotor tardio H5R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 554.
108. Ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante caracterizado pelo fato de que compreende: (a) uma sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210, que compreende genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R parciais e que compreende uma deleção no gene B8R; (b) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo que se liga especificamente a CTLA-4, em que a primeira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 214, e em que a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a primeira sequência de nucleotídeos e o primeiro transgene está presente entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais da sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210; (c) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12, em que a segunda sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 215, e em que a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a segunda sequência de nucleotídeos e o segundo transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R da sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210; e (d) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L, em que a terceira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 216, em que a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a terceira sequência de nucleotídeos e o terceiro transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R da sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210, e em que o terceiro transgene está a montante do segundo transgene; em que o ácido nucleico compreende adicionalmente: (i) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor pS; (ii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos é um promotor tardio que compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561; e (iii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R ou um promotor B19R.
109. Ácido nucleico, de acordo com a reivindicação 108, caracterizado pelo fato de que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R e um promotor B19R.
110. Ácido nucleico, de acordo com a reivindicação 109, caracterizado pelo fato de que o promotor B8R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 564 e o promotor B19R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 565.
111. Ácido nucleico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 108- 110, caracterizado pelo fato de que a sequência de nucleotídeos do pS compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 555, SEQ ID NO: 556 ou
SEQ ID NO: 557.
112. Ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante caracterizado pelo fato de que compreende: (a) uma sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210, que compreende genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R parciais e que compreende uma deleção no gene B8R; (b) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo que se liga especificamente a CTLA-4, em que a primeira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 214, e em que a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a primeira sequência de nucleotídeos e o primeiro transgene está presente entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais da sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210; (c) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12, em que a segunda sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 215, e em que a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a segunda sequência de nucleotídeos e o segundo transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R da sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210; e (d) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L, em que a terceira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 216, em que a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a terceira sequência de nucleotídeos e o terceiro transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R da sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210, e em que o terceiro transgene está a jusante do segundo transgene; em que o ácido nucleico compreende adicionalmente: (i) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor pS;
(ii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos é um promotor tardio que compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561; e (iii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R ou um promotor B19R.
113. Ácido nucleico, de acordo com a reivindicação 112, caracterizado pelo fato de que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R e um promotor B19R.
114. Ácido nucleico, de acordo com a reivindicação 113, caracterizado pelo fato de que o promotor B8R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 564 e o promotor B19R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 565.
115. Ácido nucleico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 112- 114, caracterizado pelo fato de que a sequência de nucleotídeos do pS compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 555, SEQ ID NO: 556 ou SEQ ID NO: 557.
116. Ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante caracterizado pelo fato de que compreende: (a) uma sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210, que compreende genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R parciais e que compreende uma deleção no gene B8R; (b) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo que se liga especificamente a CTLA-4, em que a primeira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 214, e em que a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a primeira sequência de nucleotídeos e o primeiro transgene está presente entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais da sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210;
(c) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12, em que a segunda sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 215, e em que a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a segunda sequência de nucleotídeos e o segundo transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R da sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210; e (d) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L, em que a terceira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 216, em que a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a terceira sequência de nucleotídeos e o terceiro transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R da sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210, e em que o terceiro transgene está a montante do segundo transgene; em que o ácido nucleico compreende adicionalmente: (i) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor pS; (ii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos é um promotor tardio que compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561; e (iii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R ou um promotor B19R.
117. Ácido nucleico, de acordo com a reivindicação 116, caracterizado pelo fato de que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R e um promotor B19R.
118. Ácido nucleico, de acordo com a reivindicação 117, caracterizado pelo fato de que o promotor B8R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 564 e o promotor B19R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 565.
119. Ácido nucleico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 116- 118, caracterizado pelo fato de que a sequência de nucleotídeos do pS compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 555, SEQ ID NO: 556 ou SEQ ID NO: 557.
120. Ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante caracterizado pelo fato de que compreende: (a) uma sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210, que compreende genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R parciais e que compreende uma deleção no gene B8R; (b) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo que se liga especificamente a CTLA-4, em que a primeira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 214, e em que a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a primeira sequência de nucleotídeos e o primeiro transgene está presente entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais da sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210; (c) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12, em que a segunda sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 215, e em que a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a segunda sequência de nucleotídeos e o segundo transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R da sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210; e (d) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L, em que a terceira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 216, em que a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a terceira sequência de nucleotídeos e o terceiro transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R da sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ
ID NO: 210, e em que o terceiro transgene está a jusante do segundo transgene; em que o ácido nucleico compreende adicionalmente: (i) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor pS; (ii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos é um promotor tardio que compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561; e (iii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R ou um promotor B19R.
121. Ácido nucleico, de acordo com a reivindicação 120, caracterizado pelo fato de que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R e um promotor B19R.
122. Ácido nucleico, de acordo com a reivindicação 121, caracterizado pelo fato de que o promotor B8R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 564 e o promotor B19R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 565.
123. Ácido nucleico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 120- 122, caracterizado pelo fato de que a sequência de nucleotídeos do pS compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 555, SEQ ID NO: 556 ou SEQ ID NO: 557.
124. Ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante caracterizado pelo fato de que compreende: (a) uma sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210, que compreende genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R parciais e que compreende uma deleção no gene B8R; (b) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo que se liga especificamente a CTLA-4, em que a primeira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 214, e em que a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a primeira sequência de nucleotídeos e o primeiro transgene está presente entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais da sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210; (c) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12, em que a segunda sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 215, e em que a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a segunda sequência de nucleotídeos e o segundo transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R da sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210; e (d) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L, em que a terceira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 216, em que a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a terceira sequência de nucleotídeos e o terceiro transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R da sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210, e em que o terceiro transgene está a montante do segundo transgene; em que o ácido nucleico compreende adicionalmente: (i) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor H5R; (ii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos é um promotor F17R; e (iii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R ou um promotor B19R.
125. Ácido nucleico, de acordo com a reivindicação 124, caracterizado pelo fato de que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R e um promotor B19R.
126. Ácido nucleico, de acordo com a reivindicação 125, caracterizado pelo fato de que o promotor B8R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 564 e o promotor B19R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 565.
127. Ácido nucleico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 124- 126, caracterizado pelo fato de que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor inicial H5R ou um promotor tardio H5R.
128. Ácido nucleico, de acordo com a reivindicação 127, caracterizado pelo fato de que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor inicial H5R e um promotor tardio H5R.
129. Ácido nucleico, de acordo com a reivindicação 128, caracterizado pelo fato de que o promotor inicial H5R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 553 e o promotor tardio H5R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 554.
130. Ácido nucleico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 124- 129, caracterizado pelo fato de que a sequência de nucleotídeos do promotor F17R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 563.
131. Ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante caracterizado pelo fato de que compreende: (a) uma sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210, que compreende genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R parciais e que compreende uma deleção no gene B8R; (b) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo que se liga especificamente a CTLA-4, em que a primeira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 214, e em que a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a primeira sequência de nucleotídeos e o primeiro transgene está presente entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais da sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210; (c) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12, em que a segunda sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 215, e em que a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a segunda sequência de nucleotídeos e o segundo transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R da sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210; e (d) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L, em que a terceira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 216, em que a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a terceira sequência de nucleotídeos e o terceiro transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R, da sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210 e em que o terceiro transgene está a jusante do segundo transgene; em que o ácido nucleico compreende adicionalmente: (i) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor H5R; (ii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos é um promotor F17R; e (iii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R ou um promotor B19R.
132. Ácido nucleico, de acordo com a reivindicação 131, caracterizado pelo fato de que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R e um promotor B19R.
133. Ácido nucleico, de acordo com a reivindicação 132, caracterizado pelo fato de que o promotor B8R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 564 e o promotor B19R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 565.
134. Ácido nucleico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 131- 133, caracterizado pelo fato de que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor inicial H5R ou um promotor tardio H5R.
135. Ácido nucleico, de acordo com a reivindicação 134, caracterizado pelo fato de que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor inicial H5R e um promotor tardio H5R.
136. Ácido nucleico, de acordo com a reivindicação 135, caracterizado pelo fato de que o promotor inicial H5R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 553 e o promotor tardio H5R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 554.
137. Ácido nucleico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 131- 136, caracterizado pelo fato de que a sequência de nucleotídeos do promotor F17R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 563.
138. Ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante caracterizado pelo fato de que compreende: (a) uma sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210, que compreende genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R parciais e que compreende uma deleção no gene B8R; (b) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo que se liga especificamente a CTLA-4, em que a primeira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 214, e em que a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a primeira sequência de nucleotídeos e o primeiro transgene está presente entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais da sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210; (c) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12, em que a segunda sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 215, e em que a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a segunda sequência de nucleotídeos e o segundo transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R da sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210; e (d) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L, em que a terceira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 216, em que a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a terceira sequência de nucleotídeos e o terceiro transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R da sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210, e em que o terceiro transgene está a montante do segundo transgene; em que o ácido nucleico compreende adicionalmente: (i) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor H5R; (ii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos é um promotor F17R; e (iii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R ou um promotor B19R.
139. Ácido nucleico, de acordo com a reivindicação 138, caracterizado pelo fato de que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R e um promotor B19R.
140. Ácido nucleico, de acordo com a reivindicação 139, caracterizado pelo fato de que o promotor B8R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 564 e o promotor B19R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 565.
141. Ácido nucleico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 138- 140, caracterizado pelo fato de que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor inicial H5R ou um promotor tardio H5R.
142. Ácido nucleico, de acordo com a reivindicação 141, caracterizado pelo fato de que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor inicial H5R e um promotor tardio H5R.
143. Ácido nucleico, de acordo com a reivindicação 142, caracterizado pelo fato de que o promotor inicial H5R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 553 e o promotor tardio H5R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 554.
144. Ácido nucleico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 138- 143, caracterizado pelo fato de que a sequência de nucleotídeos do promotor F17R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 563.
145. Ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante caracterizado pelo fato de que compreende: (a) uma sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210, que compreende genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R parciais e que compreende uma deleção no gene B8R; (b) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo que se liga especificamente a CTLA-4, em que a primeira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 214, e em que a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a primeira sequência de nucleotídeos e o primeiro transgene está presente entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais da sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210; (c) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12, em que a segunda sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 215, e em que a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a segunda sequência de nucleotídeos e o segundo transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R da sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210; e (d) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L, em que a terceira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 216, em que a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a terceira sequência de nucleotídeos e o terceiro transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R da sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210, e em que o terceiro transgene está a jusante do segundo transgene; em que o ácido nucleico compreende adicionalmente: (i) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor H5R; (ii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos é um promotor F17R; e (iii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R e um promotor B19R.
146. Ácido nucleico, de acordo com a reivindicação 145, caracterizado pelo fato de que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor B8R e um promotor B19R.
147. Ácido nucleico, de acordo com a reivindicação 146, caracterizado pelo fato de que o promotor B8R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 564 e o promotor B19R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 565.
148. Ácido nucleico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 145- 147, caracterizado pelo fato de que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor inicial H5R ou um promotor tardio H5R.
149. Ácido nucleico, de acordo com a reivindicação 148, caracterizado pelo fato de que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor inicial H5R e um promotor tardio H5R.
150. Ácido nucleico, de acordo com a reivindicação 149, caracterizado pelo fato de que o promotor inicial H5R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 553 e o promotor tardio H5R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 554.
151. Ácido nucleico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 145- 150, caracterizado pelo fato de que a sequência de nucleotídeos do promotor F17R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 563.
152. Ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante caracterizado pelo fato de que compreende: (a) uma sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210, que compreende genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R parciais e que compreende uma deleção no gene B8R; (b) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo que se liga especificamente a CTLA-4, em que a primeira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 214, e em que a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a primeira sequência de nucleotídeos e o primeiro transgene está presente entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais da sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210; (c) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12, em que a segunda sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 215, e em que a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a segunda sequência de nucleotídeos e o segundo transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R da sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210; e (d) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L, em que a terceira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 216, em que a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a terceira sequência de nucleotídeos e o terceiro transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R da sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210, e em que o terceiro transgene está a montante do segundo transgene; em que o ácido nucleico compreende adicionalmente: (i) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor H5R; (ii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos é um promotor tardio que compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561; e (iii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor E3L.
153. Ácido nucleico, de acordo com a reivindicação 152, caracterizado pelo fato de que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor inicial H5R ou um promotor tardio H5R.
154. Ácido nucleico, de acordo com a reivindicação 153, caracterizado pelo fato de que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor inicial H5R e um promotor tardio H5R.
155. Ácido nucleico, de acordo com a reivindicação 154, caracterizado pelo fato de que o promotor inicial H5R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 553 e o promotor tardio H5R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 554.
156. Ácido nucleico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 152- 155, caracterizado pelo fato de que a sequência de nucleotídeos do promotor E3L compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 567.
157. Ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante caracterizado pelo fato de que compreende: (a) uma sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210, que compreende genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R parciais e que compreende uma deleção no gene B8R; (b) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo que se liga especificamente a CTLA-4, em que a primeira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 214, e em que a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a primeira sequência de nucleotídeos e o primeiro transgene está presente entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais da sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210; (c) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12, em que a segunda sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 215, e em que a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a segunda sequência de nucleotídeos e o segundo transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R da sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210; e (d) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L, em que a terceira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 216, em que a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a terceira sequência de nucleotídeos e o terceiro transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R da sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210, e em que o terceiro transgene está a jusante do segundo transgene; em que o ácido nucleico compreende adicionalmente: (i) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor H5R; (ii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos é um promotor tardio que compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561; e (iii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor E3L.
158. Ácido nucleico, de acordo com a reivindicação 157, caracterizado pelo fato de que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor inicial H5R ou um promotor tardio H5R.
159. Ácido nucleico, de acordo com a reivindicação 158, caracterizado pelo fato de que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor inicial H5R e um promotor tardio H5R.
160. Ácido nucleico, de acordo com a reivindicação 159, caracterizado pelo fato de que o promotor inicial H5R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 553 e o promotor tardio H5R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 554.
161. Ácido nucleico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 157- 160, caracterizado pelo fato de que a sequência de nucleotídeos do promotor E3L compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 567.
162. Ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante caracterizado pelo fato de que compreende: (a) uma sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210, que compreende genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R parciais e que compreende uma deleção no gene B8R; (b) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo que se liga especificamente a CTLA-4, em que a primeira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 214, e em que a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a primeira sequência de nucleotídeos e o primeiro transgene está presente entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais da sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210;
(c) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12, em que a segunda sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 215, e em que a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a segunda sequência de nucleotídeos e o segundo transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R da sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210; e (d) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L, em que a terceira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 216, em que a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a terceira sequência de nucleotídeos e o terceiro transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R da sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210, e em que o terceiro transgene está a montante do segundo transgene; em que o ácido nucleico compreende adicionalmente: (i) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor H5R; (ii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos é um promotor tardio que compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561; e (iii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor E3L.
163. Ácido nucleico, de acordo com a reivindicação 162, caracterizado pelo fato de que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor inicial H5R ou um promotor tardio H5R.
164. Ácido nucleico, de acordo com a reivindicação 163, caracterizado pelo fato de que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor inicial H5R e um promotor tardio H5R.
165. Ácido nucleico, de acordo com a reivindicação 164, caracterizado pelo fato de que o promotor inicial H5R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 553 e o promotor tardio H5R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 554.
166. Ácido nucleico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 162- 165, caracterizado pelo fato de que a sequência de nucleotídeos do promotor E3L compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 567.
167. Ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante caracterizado pelo fato de que compreende: (a) uma sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210, que compreende genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R parciais e que compreende uma deleção no gene B8R; (b) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo que se liga especificamente a CTLA-4, em que a primeira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 214, e em que a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a primeira sequência de nucleotídeos e o primeiro transgene está presente entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais da sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210; (c) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12, em que a segunda sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 215, e em que a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a segunda sequência de nucleotídeos e o segundo transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R da sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210; e (d) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L, em que a terceira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 216, em que a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a terceira sequência de nucleotídeos e o terceiro transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R da sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210, e em que o terceiro transgene está a jusante do segundo transgene; em que o ácido nucleico compreende adicionalmente: (i) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor H5R; (ii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos é um promotor tardio que compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 561; e (iii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor E3L.
168. Ácido nucleico, de acordo com a reivindicação 167, caracterizado pelo fato de que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor inicial H5R ou um promotor tardio H5R.
169. Ácido nucleico, de acordo com a reivindicação 168, caracterizado pelo fato de que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor inicial H5R e um promotor tardio H5R.
170. Ácido nucleico, de acordo com a reivindicação 169, caracterizado pelo fato de que o promotor inicial H5R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 553 e o promotor tardio H5R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 554.
171. Ácido nucleico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 167- 170, caracterizado pelo fato de que a sequência de nucleotídeos do promotor E3L compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 567.
172. Ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante caracterizado pelo fato de que compreende:
(a) uma sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210, que compreende genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R parciais e que compreende uma deleção no gene B8R; (b) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo que se liga especificamente a CTLA-4, em que a primeira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 214, e em que a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a primeira sequência de nucleotídeos e o primeiro transgene está presente entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais da sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210; (c) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12, em que a segunda sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 215, e em que a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a segunda sequência de nucleotídeos e o segundo transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R da sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210; e (d) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L, em que a terceira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 216, em que a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a terceira sequência de nucleotídeos e o terceiro transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R da sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210, e em que o terceiro transgene está a montante do segundo transgene; em que o ácido nucleico compreende adicionalmente: (i) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor pS; (ii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos é um promotor F17R; e (iii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor E3L.
173. Ácido nucleico, de acordo com a reivindicação 172, caracterizado pelo fato de que a sequência de nucleotídeos do promotor pS compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 555, SEQ ID NO: 556 ou SEQ ID NO: 557.
174. Ácido nucleico, de acordo com a reivindicação 172 ou 173, caracterizado pelo fato de que a sequência de nucleotídeos do promotor F17R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 563.
175. Ácido nucleico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 172- 174, caracterizado pelo fato de que a sequência de nucleotídeos do promotor E3L compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 567.
176. Ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante caracterizado pelo fato de que compreende: (a) uma sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210, que compreende genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R parciais e que compreende uma deleção no gene B8R; (b) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo que se liga especificamente a CTLA-4, em que a primeira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 214, e em que a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a primeira sequência de nucleotídeos e o primeiro transgene está presente entre os genes vaccinia C2L e F3L parciais da sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210; (c) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12, em que a segunda sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 215, e em que a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a segunda sequência de nucleotídeos e o segundo transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R da sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210; e (d) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L, em que a terceira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 216, em que a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a terceira sequência de nucleotídeos e o terceiro transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R da sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210, e em que o terceiro transgene está a jusante do segundo transgene; em que o ácido nucleico compreende adicionalmente: (i) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor pS; (ii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos é um promotor F17R; e (iii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor E3L.
177. Ácido nucleico, de acordo com a reivindicação 176, caracterizado pelo fato de que a sequência de nucleotídeos do promotor pS compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 555, SEQ ID NO: 556 ou SEQ ID NO: 557.
178. Ácido nucleico, de acordo com a reivindicação 176 ou 177, caracterizado pelo fato de que a sequência de nucleotídeos do promotor F17R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 563.
179. Ácido nucleico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 176- 178, caracterizado pelo fato de que a sequência de nucleotídeos do promotor E3L compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 567.
180. Ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante caracterizado pelo fato de que compreende:
(a) uma sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210, que compreende genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R parciais e que compreende uma deleção no gene B8R; (b) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo que se liga especificamente a CTLA-4, em que a primeira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 214, e em que a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a primeira sequência de nucleotídeos e o primeiro transgene está presente entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais da sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210; (c) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12, em que a segunda sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 215, e em que a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a segunda sequência de nucleotídeos e o segundo transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R da sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210; e (d) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L, em que a terceira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 216, em que a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a terceira sequência de nucleotídeos e o terceiro transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R da sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210, e em que o terceiro transgene está a montante do segundo transgene; em que o ácido nucleico compreende adicionalmente: (i) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor pS; (ii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos é um promotor F17R; e (iii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor E3L.
181. Ácido nucleico, de acordo com a reivindicação 180, caracterizado pelo fato de que a sequência de nucleotídeos do promotor pS compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 555, SEQ ID NO: 556 ou SEQ ID NO: 557.
182. Ácido nucleico, de acordo com a reivindicação 170 ou 181, caracterizado pelo fato de que a sequência de nucleotídeos do promotor F17R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 563.
183. Ácido nucleico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 180- 182, caracterizado pelo fato de que a sequência de nucleotídeos do promotor E3L compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 567.
184. Ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante caracterizado pelo fato de que compreende: (a) uma sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210, que compreende genes vaccinia C2L, F3L, B14R e B29R parciais e que compreende uma deleção no gene B8R; (b) um primeiro transgene que compreende uma primeira sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo que se liga especificamente a CTLA-4, em que a primeira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 214, e em que a primeira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a primeira sequência de nucleotídeos e o primeiro transgene está presente entre os genes vaccinia B14R e B29R parciais da sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210; (c) um segundo transgene que compreende uma segunda sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de IL-12, em que a segunda sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 215, e em que a segunda sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a segunda sequência de nucleotídeos e o segundo transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R da sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210; e (d) um terceiro transgene que compreende uma terceira sequência de nucleotídeos que codifica FLT3L, em que a terceira sequência de nucleotídeos é estabelecida na SEQ ID NO: 216, em que a terceira sequência de nucleotídeos está na mesma orientação que os genes de vírus vaccinia endógeno que flanqueiam a terceira sequência de nucleotídeos e o terceiro transgene está presente no lócus da deleção no gene B8R da sequência de nucleotídeos de vírus vaccinia da SEQ ID NO: 210, e em que o terceiro transgene está a jusante do segundo transgene; em que o ácido nucleico compreende adicionalmente: (i) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à primeira sequência de nucleotídeos é um promotor pS; (ii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à segunda sequência de nucleotídeos é um promotor F17R; e (iii) uma sequência de nucleotídeos que compreende pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos, em que o pelo menos um promotor operacionalmente ligado à terceira sequência de nucleotídeos é um promotor E3L.
185. Ácido nucleico, de acordo com a reivindicação 184, caracterizado pelo fato de que a sequência de nucleotídeos do promotor pS compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 555, SEQ ID NO: 556 ou SEQ ID NO: 557.
186. Ácido nucleico, de acordo com a reivindicação 174 ou 185, caracterizado pelo fato de que a sequência de nucleotídeos do promotor F17R compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 563.
187. Ácido nucleico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 184- 186, caracterizado pelo fato de que a sequência de nucleotídeos do promotor E3L compreende a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 567.
188. Vírus caracterizado pelo fato de que compreende o ácido nucleico que compreende um genoma de vírus vaccinia recombinante, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1-187.
189. Linhagem celular empacotadora caracterizada pelo fato de que compreende o ácido nucleico, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1-187.
190. Linhagem celular empacotadora caracterizada pelo fato de que compreende o vírus, conforme definido na reivindicação 188.
191. Composição farmacêutica caracterizada pelo fato de que compreende o vírus, conforme definido na reivindicação 188, e um carreador fisiologicamente aceitável.
192. Kit caracterizado pelo fato de que compreende o ácido nucleico, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1-187, e um inserto de pacote que instrui um usuário do kit a expressar o ácido nucleico em uma célula hospedeira.
193. Kit caracterizado pelo fato de que compreende o vírus, conforme definido na reivindicação 188, e um inserto de pacote que instrui um usuário do kit a expressar o vírus em uma célula hospedeira.
194. Kit caracterizado pelo fato de que compreende o vírus, conforme definido na reivindicação 188, e um inserto de pacote que instrui um usuário para administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz do vírus a um paciente mamífero que tem câncer, assim tratando o câncer.
195. Kit, de acordo com a reivindicação 194, caracterizado pelo fato de que o paciente mamífero é um paciente humano.
196. Método para tratar câncer em um paciente mamífero, sendo que o método é caracterizado pelo fato de que compreende administrar ao paciente mamífero uma quantidade terapeuticamente eficaz do vírus, conforme definido na reivindicação 188.
197. Método para tratar câncer em um paciente mamífero, sendo que o método é caracterizado pelo fato de que compreende administrar ao paciente mamífero uma quantidade terapeuticamente eficaz da composição farmacêutica, conforme definido na reivindicação 191.
198. Método, de acordo com a reivindicação 196 ou 197, caracterizado pelo fato de que o paciente mamífero é um paciente humano.
199. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 196-198, caracterizado pelo fato de que o câncer é selecionado do grupo que consiste em leucemia, linfoma, câncer de fígado, câncer ósseo, câncer de pulmão, câncer de cérebro, câncer de bexiga, câncer gastrointestinal, câncer de mama, câncer cardíaco, câncer cervical, câncer uterino, câncer de cabeça e pescoço, câncer de vesícula biliar, câncer laríngeo, câncer de lábio e cavidade oral, câncer ocular, melanoma, câncer pancreático, câncer de próstata, câncer colorretal, câncer testicular e câncer de garganta.
200. Método, de acordo com a reivindicação 199, sendo que o método é caracterizado pelo fato de que compreende adicionalmente administrar ao paciente mamífero um anticorpo anti-PD1 ou um anticorpo anti-PD-L1.
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