KR20210121132A - 치료용 펩티드 - Google Patents

Abstract

본 개시내용은 본 명세서에서 세포 생물학 분야 및 세포 생존력, 세포 증식 및 대사 과정을 제어하는 세포 기전의 조절에 관한 것이다. 보다 구체적으로는 본 명세서에는 일탈적인 세포 증식 및 악성종양과 연관된 세포 신호전달을 포함하는, 세포 생존력, 세포 증식 및 대사 과정을 제어하는 세포 기전을 조절하는 데 효과적인 펩티드가 개시된다. 또한 본 명세서에는 세포 생존력을 제어하는 세포 기전을 조절하고, 대사성 질환을 치료하고, 세포보호제로서 효과적인 펩티드가 개시된다. 또한 섬유증의 치료에 효과적인 펩티드가 개시된다.

Description

치료용 펩티드

기술분야

본 개시내용은 세포 생물학 분야 및 세포 생존력 및 대사 과정의 조절에 관한 것이다. 보다 구체적으로는 일탈적인 세포 증식 및 악성종양과 연관된 세포 신호전달을 조절하는 데 효과적인 펩티드가 개시된다. 또한 세포 생존력을 조절하고, 대사성 질환을 치료하고, 세포보호제로서 효과적인 펩티드가 개시된다. 또한 섬유증의 치료에 효과적인 펩티드가 개시된다.

전자적으로 제출된 자료의 참조에 의한 통합

본 출원과 함께 동시에 제출되고 하기와 같이 식별되고, 2020년 1월 27일에 생성된 컴퓨터-판독 가능한 뉴클레오티드/아미노산 서열 목록이 그 전문이 참조에 의해 원용된다: 17,824 바이트 ACII(텍스트) 파일명 "53065_SeqListing.txt". 본 명세서의 본문은, 컴퓨터 판독 가능한 서열 목록과 본 명세서 사이에 불일치가 있는 경우 우선시된다.

세포 거동의 제어는 명확하게 이해되지 않는다. 세포 대사 경로의 조절 장애는 에너지 항상성의 불균형을 초래할 수 있으며, 비만, 당뇨병, 고혈압, 동맥경화증, 고콜레스테롤혈증, 고지혈증 및 다른 질환을 포함하지만 이들로 제한되지 않는 광범위한 대사 장애를 초래할 수 있다. 세포 아폽토시스(apoptosis)를 조절하는 정확한 세포 기전은 완전히 알려져 있지 않다. 아폽토시스의 조절 장애는 많은 인간 질환과 관련이 있다. 세포에서 아폽토시스를 부적절하게 억제하면 그 세포의 증식이 제어되지 않아서, 잠재적으로 암 발병에 유리할 수 있다. 대조적으로, 아폽토시스 세포 사멸의 정도를 제어하는 데 실패하면 신경변성, 자가면역 장애 및 다른 질환에서 발생하는 것과 같은 특정 조직 및 세포 유형의 변성으로 이어질 수 있다.

예를 들어, 세포 대사, 세포 증식 및 세포 생존력을 포함하는 세포의 활성을 제어하는 세포 기전을 조절하는 보다 효과적인 요법이 필요하다. 보다 구체적으로, 대사 경로를 안전하게 조절함으로써 광범위한 대사 장애를 해결할 수 있는 보다 효과적인 치료법에 대한 필요성이 여전히 크다. 부적절한 세포 증식 또는 부적절한 세포 사멸을 특징으로 하는 장애를 앓고 있는 개체의 세포 및/또는 조직에서 아폽토시스를 유도하거나 억제하는 것을 포함하는 세포 기전을 조절하는 보다 효과적인 요법이 필요하다.

진핵 세포에서 대사 과정에 대한 중심인 미토콘드리아는 다른 것 중에서 에너지 생산, ATP 합성, 활성 산소종(ROS) 생성, 세포 예정사, 신호전달, 세포 분화 및 세포 주기의 제어 및 세포 성장을 포함하는 다수의 세포 과정에 관여한다. 소수의 미토콘드리아 DNA-유래 신호전달 펩티드가 다양한 구조와 매우 다른 생물학적 특성으로 현재까지 식별되었다. 이러한 노력에도 불구하고, 대부분의 이론적인 미토콘드리아 DNA-유래 펩티드 서열의 자연 발생 및 기능은 정의되지 않은 반면, 외인성 펩티드로서의 잠재적 생물학적 활성은 완전히 알려지지 않았으며, 이의 구조로부터 예측할 수 없다.

본 발명자들은 미토콘드리아 DNA에 기초한 예상치 못한 특성을 갖는 치료용으로 유용한 단리된 펩티드를 식별하였고, 개선된 특성을 갖는 신규한 유사체 및 유도체를 고안하였다.

세포 기전을 조절하는 데 활성을 나타내는 화학식 I 및/또는 화학식 II의 아미노산 서열을 포함하는 펩티드가 개시된다. 또한, 아미노산 서열 서열번호 1 내지 31, 이의 유사체 및 유도체를 포함하는 펩티드가 개시된다.

또한, 본 개시내용은 서열번호 1 내지 31의 아미노산 서열을 포함하는 펩티드, 본 명세서에 기재된 이의 유사체 및 유도체 및 약제학적으로 허용 가능한 부형제를 포함하는 펩티드를 포함하지만 이에 제한되지 않는 본 명세서에 기재된 펩티드를 포함하는 약제학적 조성물, 뿐만 아니라 본 명세서에 기재된 펩티드 및 조성물을 사용하여 환자에서 질환 또는 의학적 병태(예를 들어, 암, 대사성 질환, 섬유증)를 치료 또는 예방하는 방법을 포함한다. 이 방법은 본 명세서에 개시된 펩티드, 유도체 또는 유사체(선택적으로 약제학적 조성물로 제형화됨)를 적절한 질환 또는 의학적 병태를 치료하기에 효과적인 양으로 환자에게 투여하는 단계를 포함한다. 유사하게, 전술한 질환 또는 의학적 병태를 치료 또는 예방하기 위한 본 명세서에 기재된 펩티드, 유도체, 유사체 및 조성물의 용도가 개시된다. 본 발명의 다른 양태는 하기 상세한 설명 및 청구범위로부터 명백할 것이다.

일 양태에서, 세포 기전을 치료적으로 조절하는 펩티드가 개시된다. 본 개시내용은 펩티드, 펩티드 유사체 및 NASH, 체중, 혈당 수준, 및 체지방량과 관련된 질환, 예를 들어 비만, 지방간 질환, 및 당뇨병을 포함하는 대사성 질환을 치료하는 방법에서의 이의 용도를 제공한다. 본 개시내용은 또한 펩티드, 펩티드 유사체 및 섬유증과 관련된 질환을 치료하는 방법에서의 이의 용도를 제공한다. 이와 관련하여, 본 개시내용은 의약으로서 사용하기 위한 펩티드 및 펩티드 유사체를 제공한다.

일 실시형태에서, 서열번호 1 내지 31 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열 중 임의의 하나 이상의 펩티드가 개시된다.

실시형태는 화학식 I의 아미노산 서열의 펩티드 또는 이의 N-아세틸 유도체; 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 포함한다:

X¹-R-X²-IR-X³-X⁴-L-X⁵-X⁶-GL-X⁷-G-X⁸-X⁹ (I) (서열번호 1)

식 중, X¹은 존재하지 않거나 존재하는 경우 극성 측쇄 또는 비극성 측쇄를 갖는 아미노산이고; X²는 비극성 측쇄를 갖는 아미노산이고; X³은 비극성 측쇄를 갖는 아미노산이고; X⁴는 극성 측쇄를 갖는 아미노산이고; X⁵는 극성 측쇄 또는 비극성 측쇄를 갖는 아미노산이고; X⁶은 극성 측쇄 또는 비극성 측쇄를 갖는 아미노산이고; X⁷은 극성 측쇄 또는 비극성 측쇄를 갖는 아미노산이고; X⁸은 극성 측쇄를 갖는 아미노산이고; X⁹는 존재하지 않거나 -X¹⁰-X¹¹-X¹²-X¹³이고; 식 중, X¹⁰은 비극성 측쇄를 갖는 아미노산이고; X¹¹은 비극성 측쇄를 갖는 아미노산이고; X¹²는 존재하지 않거나 존재하는 경우 극성 측쇄 또는 비극성 측쇄를 갖는 아미노산이고; X¹³은 존재하지 않거나, 존재하는 경우 극성 측쇄를 갖는 아미노산이되, X¹²가 존재하지 않는 경우 X¹³은 존재하지 않는다.

실시형태는 화학식 I의 아미노산 서열의 펩티드 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 포함하고, 식 중, X¹은 존재하지 않거나, D, (dD), E, (dE), K, (dK), R, (dR), H, (dH), N, (dN), Q, (dQ), S, (dS), T, (dT), Y, (dY), C, (dC), G, A, (dA), V, (dV), L, (dL), I, (dI), F, (dF), W, (dW), P, (dP), M 및 (dM)으로부터 선택되고; X²는 G, A, (dA), V, (dV), L, (dL), I, (dI), F, (dF), W, (dW), P, (dP), M 및 (dM)으로부터 선택되고; X³은 G, A, (dA), V, (dV), L, (dL), I, (dI), F, (dF), W, (dW), P, (dP), Nle, M 및 (dM)으로부터 선택되고; X⁴는 D, (dD), E, (dE), K, (dK), R, (dR), H, (dH), N, (dN), Q, (dQ), S, (dS), T, (dT), Y, (dY), C 및 (dC)로부터 선택되고; X⁵는 D, (dD), E, (dE), K, (dK), R, (dR), H, (dH), N, (dN), Q, (dQ), S, (dS), T, (dT), Y, (dY), C, (dC), G, A, (dA), V, (dV), L, (dL), I, (dI), F, (dF), W, (dW), P, (dP), M 및 (dM)으로부터 선택되고; X⁶은 D, (dD), E, (dE), K, (dK), R, (dR), H, (dH), N, (dN), Q, (dQ), S, (dS), T, (dT), Y, (dY), C, (dC), G, A, (dA), V, (dV), L, (dL), I, (dI), F, (dF), W, (dW), P, (dP), M 및 (dM)으로부터 선택되고; X⁷은 D, (dD), E, (dE), K, (dK), R, (dR), H, (dH), N, (dN), Q, (dQ), S, (dS), T, (dT), Y, (dY), C, (dC), G, A, (dA), V, (dV), L, (dL), I, (dI), F, (dF), W, (dW), P, (dP), M 및 (dM)으로부터 선택되고; X⁸은 D, (dD), E, (dE), K, (dK), R, (dR), H, (dH), N, (dN), Q, (dQ), S, (dS), T, (dT), Y, (dY), C 및 (dC)로부터 선택되고; X⁹는 존재하지 않거나, -X¹⁰-X¹¹-X¹²-X¹³이고, 식 중 X¹⁰은 G, A, (dA), V, (dV), L, (dL), I, (dI), F, (dF), W, (dW), P, (dP), M 및 (dM)으로부터 선택되고; X¹¹은 G, A, (dA), V, (dV), L, (dL), I, (dI), F, (dF), W, (dW), P, (dP), M 및 (dM)으로부터 선택되고; X¹²는 존재하지 않거나, D, (dD), E, (dE), K, (dK), R, (dR), H, (dH), N, (dN), Q, (dQ), S, (dS), T, (dT), Y, (dY), C, (dC), G, A, (dA), V, (dV), L, (dL), I, (dI), F, (dF), W, (dW), P, (dP), M 및 (dM)으로부터 선택되고; X¹³은 존재하지 않거나, D, (dD), E, (dE), K, (dK), R, (dR), H, (dH), N, (dN), Q, (dQ), S, (dS), T, (dT), Y, (dY), C 및 (dC)로부터 선택된다. 실시형태는 화학식 I의 아미노산 서열의 펩티드 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 포함하고, 식 중, X¹은 존재하지 않거나, K 또는 M이고; X²는 V 또는 d(A)이고; X³은 M 또는 Nle이고; X⁴는 C 또는 S이고; X⁵는 G 또는 N이고; X⁶은 V 또는 N이고; X⁷은 L, N 또는 E이고; X⁸은 D 또는 E이고; X⁹는 존재하지 않거나, -LAG, -L(dA)G, -L(dA)E, -LAGK; 또는 -L(dA)이다. 실시형태는 이의 용매화물 및/또는 공결정을 더 포함하는 화학식 I의 아미노산 서열의 펩티드를 포함한다.

실시형태는 하기 화학식 II의 아미노산 서열의 펩티드; 또는 이의 C-말단 산 또는 아미드 및/또는 N-아세틸 유도체; 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 포함한다:

X¹-R-X²-IR-X³-X⁴-L-X⁵-X⁶-G-X¹⁴-X⁷-G-X⁸-X⁹ (II) (서열번호 31)

식 중, X¹은 존재하지 않거나 존재하는 경우 극성 측쇄 또는 비극성 측쇄를 갖는 아미노산이고; X²는 비극성 측쇄를 갖는 아미노산이고; X³은 비극성 측쇄를 갖는 아미노산이고; X⁴는 극성 측쇄를 갖는 아미노산이고; X⁵는 극성 측쇄 또는 비극성 측쇄를 갖는 아미노산이고; X⁶은 극성 측쇄 또는 비극성 측쇄를 갖는 아미노산이고; X⁷은 극성 측쇄 또는 비극성 측쇄를 갖는 아미노산이고; X⁸은 극성 측쇄를 갖는 아미노산이고; X⁹는 존재하지 않거나 -X¹⁰-X¹¹-X¹²-X¹³이고; 식 중, X¹⁰은 비극성 측쇄를 갖는 아미노산이고; X¹¹은 비극성 측쇄를 갖는 아미노산이고; X¹²는 존재하지 않거나 존재하는 경우 극성 측쇄 또는 비극성 측쇄를 갖는 아미노산이고; X¹³은 존재하지 않거나, 존재하는 경우 극성 측쇄를 갖는 아미노산이되, X¹²가 존재하지 않는 경우 X¹³은 존재하지 않고; X¹⁴는 극성 측쇄 또는 비극성 측쇄를 갖는 아미노산이다.

실시형태는 화학식 II의 아미노산 서열의 펩티드 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 포함하며, 식 중, X¹은 존재하지 않거나, D, (dD), E, (dE), K, (dK), R, (dR), H, (dH), N, (dN), Q, (dQ), S, (dS), T, (dT), Y, (dY), C, (dC), G, A, (dA), V, (dV), L, (dL), I, (dI), F, (dF), W, (dW), P, (dP), M 및 (dM)으로부터 선택되고; X²는 G, A, (dA), V, (dV), L, (dL), I, (dI), F, (dF), W, (dW), P, (dP), M 및 (dM)으로부터 선택되고; X³은 G, A, (dA), V, (dV), L, (dL), I, (dI), F, (dF), W, (dW), P, (dP), Nle, M 및 (dM)으로부터 선택되고; X⁴는 D, (dD), E, (dE), K, (dK), R, (dR), H, (dH), N, (dN), Q, (dQ), S, (dS), T, (dT), Y, (dY), C 및 (dC)로부터 선택되고; X⁵는 D, (dD), E, (dE), K, (dK), R, (dR), H, (dH), N, (dN), Q, (dQ), S, (dS), T, (dT), Y, (dY), C, (dC), G, A, (dA), V, (dV), L, (dL), I, (dI), F, (dF), W, (dW), P, (dP), M 및 (dM)으로부터 선택되고; X⁶은 D, (dD), E, (dE), K, (dK), R, (dR), H, (dH), N, (dN), Q, (dQ), S, (dS), T, (dT), Y, (dY), C, (dC), G, A, (dA), V, (dV), L, (dL), I, (dI), F, (dF), W, (dW), P, (dP), M 및 (dM)으로부터 선택되고; X⁷은 D, (dD), E, (dE), K, (dK), R, (dR), H, (dH), N, (dN), Q, (dQ), S, (dS), T, (dT), Y, (dY), C, (dC), G, A, (dA), V, (dV), L, (dL), I, (dI), F, (dF), W, (dW), P, (dP), M 및 (dM)으로부터 선택되고; X⁸은 D, (dD), E, (dE), K, (dK), R, (dR), H, (dH), N, (dN), Q, (dQ), S, (dS), T, (dT), Y, (dY), C 및 (dC)로부터 선택되고; X⁹는 존재하지 않거나, -X¹⁰-X¹¹-X¹²-X¹³이고, 식 중 X¹⁰은 G, A, (dA), V, (dV), L, (dL), I, (dI), F, (dF), W, (dW), P, (dP), M 및 (dM)으로부터 선택되고; X¹¹은 G, A, (dA), V, (dV), L, (dL), I, (dI), F, (dF), W, (dW), P, (dP), M 및 (dM)으로부터 선택되고; X¹²는 존재하지 않거나, D, (dD), E, (dE), K, (dK), R, (dR), H, (dH), N, (dN), Q, (dQ), S, (dS), T, (dT), Y, (dY), C, (dC), G, A, (dA), V, (dV), L, (dL), I, (dI), F, (dF), W, (dW), P, (dP), M 및 (dM)으로부터 선택되고; X¹³은 존재하지 않거나, D, (dD), E, (dE), K, (dK), R, (dR), H, (dH), N, (dN), Q, (dQ), S, (dS), T, (dT), Y, (dY), C 및 (dC)로부터 선택되고; X¹⁴는 D, (dD), E, (dE), K, (dK), R, (dR), H, (dH), N, (dN), Q, (dQ), S, (dS), T, (dT), Y, (dY), C, (dC), G, A, (dA), V, (dV), L, (dL), I, (dI), F, (dF), W, (dW), P, (dP), M 및 (dM)으로부터 선택된다. 실시형태는 화학식 II의 아미노산 서열의 펩티드; 또는 이의 C-말단 산 또는 아미드 또는 N-아세틸 유도체; 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 포함하고, 식 중, X¹은 존재하지 않거나, K 또는 M이고; X²는 V 또는 d(A)이고; X³은 M, A 또는 Nle이고; X⁴는 C 또는 S이고; X⁵는 G 또는 N이고; X⁶은 V 또는 N이고; X⁷은 L, N 또는 E이고; X⁸은 D 또는 E이고; X⁹는 존재하지 않거나, -LAG, -L(dA)G, -L(dA)E, -L(dA)GK,-LAGK; 또는 -L(dA)이고; X¹⁴는 N 또는 L이다. 실시형태는 이의 용매화물 및/또는 공결정을 더 포함하는 화학식 II의 아미노산 서열의 펩티드를 포함한다.

실시형태는 아미노산 서열 MRVIRMCLGVGLLGDLAG(서열번호 2)의 펩티드를 포함한다. 일부 실시형태에서 펩티드는 서열번호 2에 비해서 최대 10개의 아미노산 변형을 포함하는 서열번호 2의 변형된 형태로 존재한다. 일부 실시형태에서 펩티드는 서열번호 2에 비해서 최대 8개의 아미노산 변형을 포함하는 서열번호 2의 변형된 형태로 존재하며, 변형(들)은 위치 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 또는 18 중 하나 이상에 존재하고, 여기서 아미노산 넘버링은 서열번호 2에 상응한다. 일부 실시형태에서 펩티드는 서열번호 2에 비해서 최대 6개의 아미노산 변형을 포함하는 서열번호 2의 변형된 형태로 존재하며, 변형(들)은 위치 1, 9, 13, 15, 17 또는 18 중 하나 이상에 존재하고, 여기서 아미노산 넘버링은 서열번호 2에 상응한다. 실시형태는 MRVIRMCLGVGLLGDLAG(서열번호 2); RVIRMCLGVGLLGDLAG(서열번호 3); RVIRMCLGVGLLGDL(dA)G(서열번호 4); RVIRMCLNVGLLGEL(dA)G(서열번호 5); RVIR(Nle)CLNVGLLGEL(dA)G(서열번호 6); RVIRMSLNVGLLGEL(dA)G(서열번호 7); RVIR(Nle)SLNVGLLGEL(dA)G(서열번호 8); RVIRMCLNNGLLGEL(dA)G(서열번호 9); RVIRMCLNVGNLGEL(dA)G(서열번호 10); RVIRMCLNVGLNGEL(dA)G(서열번호 11); RVIRMCLNVGLLGEL(dA)E(서열번호 12); RVIRMSLNVGLEGEL(dA)(서열번호 13); RVIR(Nle)SLNVGLEGEL(dA)(서열번호 14); R(dA)IR(Nle)SLNVGLLGEL(dA)(서열번호 15); {PEG12}KRVIRMCLGVGLLGDLAG(서열번호 16); RVIRMCLGVGLLGDLAGK{PEG12}(서열번호 17); {PEG12}KRVIRMCLNVGLLGEL(dA)E(서열번호 18); RVIRMCLNVGLEGEL(dA)(서열번호 19); RVIRMCLNVGLNGEL(dA)E(서열번호 20); RVIRMCLNVGLNGE(서열번호 21); RVIRMCLNNGLNGEL(dA)G(서열번호 22); RVIRMCLNNGLNGEL(dA)E(서열번호 23); {5-FAM}-RVIRMCLGVGLLGDLAG(서열번호 24); 및 {5-FAM}-RVIRMCLGVGLLGDLAGK{PEG12}(서열번호 25)로부터 선택된 펩티드; 및 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 포함한다.

또 다른 실시형태는 RVIRMCLGVGLLGDL(dA)G(서열번호 4); RVIRMCLNVGLLGEL(dA)G(서열번호 5); RVIR(Nle)CLNVGLLGEL(dA)G(서열번호 6); RVIRMSLNVGLLGEL(dA)G(서열번호 7); RVIR(Nle)SLNVGLLGEL(dA)G(서열번호 8); RVIRMCLNNGLLGEL(dA)G(서열번호 9); RVIRMCLNVGNLGEL(dA)G(서열번호 10); RVIRMCLNVGLNGEL(dA)G(서열번호 11); RVIRMCLNVGLLGEL(dA)E(서열번호 12); RVIRMSLNVGLEGEL(dA)(서열번호 13); RVIR(Nle)SLNVGLEGEL(dA)(서열번호 14); R(dA)IR(Nle)SLNVGLLGEL(dA)(서열번호 15); {PEG12}KRVIRMCLGVGLLGDLAG(서열번호 16); RVIRMCLGVGLLGDLAGK{PEG12}(서열번호 17); {PEG12}KRVIRMCLNVGLLGEL(dA)E(서열번호 18); RVIRMCLNVGLEGEL(dA)(서열번호 19); RVIRMCLNVGLNGEL(dA)E(서열번호 20); RVIRMCLNVGLNGE(서열번호 21); RVIRMCLNNGLNGEL(dA)G(서열번호 22); RVIRMCLNNGLNGEL(dA)E(서열번호 23); {5-FAM}-RVIRMCLGVGLLGDLAG(서열번호 24); 및 {5-FAM}-RVIRMCLGVGLLGDLAGK{PEG12}(서열번호 25)로부터 선택된 펩티드; 및/또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 포함한다.

실시형태는 MRVIRMCLGVGLLGDLAG(서열번호 2); RVIRMCLGVGLLGDLAG(서열번호 3); RVIRMCLGVGLLGDL(dA)G(서열번호 4); RVIRMCLNVGLLGEL(dA)G(서열번호 5); RVIR(Nle)CLNVGLLGEL(dA)G(서열번호 6); RVIRMSLNVGLLGEL(dA)G(서열번호 7); RVIR(Nle)SLNVGLLGEL(dA)G(서열번호 8); RVIRMCLNNGLLGEL(dA)G(서열번호 9); RVIRMCLNVGNLGEL(dA)G(서열번호 10); RVIRMCLNVGLNGEL(dA)G(서열번호 11); RVIRMCLNVGLLGEL(dA)E(서열번호 12); RVIRMSLNVGLEGEL(dA)(서열번호 13); RVIR(Nle)SLNVGLEGEL(dA)(서열번호 14); R(dA)IR(Nle)SLNVGLLGEL(dA)(서열번호 15); {PEG12}KRVIRMCLGVGLLGDLAG(서열번호 16); RVIRMCLGVGLLGDLAGK{PEG12}(서열번호 17); {PEG12}KRVIRMCLNVGLLGEL(dA)E(서열번호 18); RVIRMCLNVGLEGEL(dA)(서열번호 19); RVIRMCLNVGLNGEL(dA)E(서열번호 20); RVIRMCLNVGLNGE(서열번호 21); RVIRMCLNNGLNGEL(dA)G(서열번호 22); RVIRMCLNNGLNGEL(dA)E(서열번호 23); {5-FAM}-RVIRMCLGVGLLGDLAG(서열번호 24); {5-FAM}-RVIRMCLGVGLLGDLAGK{PEG12}(서열번호 25); 및 RVIRACLGVGLLGDL(dA)GK{PEG12}(서열번호 29)로부터 선택된 펩티드; 및/또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 포함한다.

또 다른 실시형태는 RVIRMCLGVGLLGDL(dA)G(서열번호 4); RVIRMCLNVGLLGEL(dA)G(서열번호 5); RVIR(Nle)CLNVGLLGEL(dA)G(서열번호 6); RVIRMSLNVGLLGEL(dA)G(서열번호 7); RVIR(Nle)SLNVGLLGEL(dA)G(서열번호 8); RVIRMCLNNGLLGEL(dA)G(서열번호 9); RVIRMCLNVGNLGEL(dA)G(서열번호 10); RVIRMCLNVGLNGEL(dA)G(서열번호 11); RVIRMCLNVGLLGEL(dA)E(서열번호 12); RVIRMSLNVGLEGEL(dA)(서열번호 13); RVIR(Nle)SLNVGLEGEL(dA)(서열번호 14); R(dA)IR(Nle)SLNVGLLGEL(dA)(서열번호 15); {PEG12}KRVIRMCLGVGLLGDLAG(서열번호 16); RVIRMCLGVGLLGDLAGK{PEG12}(서열번호 17); {PEG12}KRVIRMCLNVGLLGEL(dA)E(서열번호 18); RVIRMCLNVGLEGEL(dA)(서열번호 19); RVIRMCLNVGLNGEL(dA)E(서열번호 20); RVIRMCLNVGLNGE(서열번호 21); RVIRMCLNNGLNGEL(dA)G(서열번호 22); RVIRMCLNNGLNGEL(dA)E(서열번호 23); {5-FAM}-RVIRMCLGVGLLGDLAG(서열번호 24); {5-FAM}-RVIRMCLGVGLLGDLAGK{PEG12}(서열번호 25); 및 RVIRACLGVGLLGDL(dA)GK{PEG12}(서열번호 29)로부터 선택된 펩티드; 및/또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 포함한다.

일부 실시형태에서 펩티드는 표 1에 열거된 펩티드로 표현된다.

일부 실시형태에서, 본 명세서에 개시된 펩티드는 아미노산 서열 서열번호 1 내지 31 중 어느 하나와 적어도 66% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함한다. 특정 실시형태에서, % 동일성은 주어진 서열과 예를 들어, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90% 또는 적어도 95% 또는 그 초과의 서열 동일성으로부터 선택된다. 특정 실시형태에서, % 동일성은 예를 들어, 약 65% 내지 약 70%, 약 70% 내지 약 80%, 약 80% 내지 약 85%, 약 85% 내지 약 90% 또는 약 90% 내지 약 95%; 약 70% 내지 약 80%, 약 80% 내지 약 90% 및 약 90% 내지 약 99% 서열 동일성의 범위이다.

특정 실시형태에서, 펩티드는 아미노산 서열 서열번호 1 내지 31 중 어느 하나와 적어도 66% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함한다. 특정 실시형태에서, % 동일성은 주어진 서열과 예를 들어, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90% 또는 적어도 95% 또는 그 초과의 서열 동일성으로부터 선택된다. 특정 실시형태에서, % 동일성은 예를 들어, 약 65% 내지 약 70%, 약 70% 내지 약 80%, 약 80% 내지 약 85%, 약 85% 내지 약 90% 또는 약 90% 내지 약 95%; 약 70% 내지 약 80%, 약 80% 내지 약 90% 및 약 90% 내지 약 99% 서열 동일성의 범위이지만, 서열번호 2 또는 서열번호 3에 제시된 서열을 포함하지 않는다.

예시적인 실시형태에서, 펩티드 또는 펩티드 유사체는 C-말단 산 또는 아미드 또는 이의 N-아세틸 유도체이다.

예시적인 실시형태에서, 펩티드 또는 펩티드 유도체는 이의 PEG, 아세틸, 비오틴 또는 지방산 유도체이다. 예시적인 실시형태에서, 펩티드 유도체는 PEG12, 아세틸, FAM 또는 팔미틸을 포함한다.

본 개시내용의 펩티드는 어떤 식으로든 그리고 임의의 이유로, 예를 들어, (1) 단백질분해에 대한 감수성을 감소시키고, (2) 결합 친화성을 변경시키고, 그리고 (3) 다른 물리화학 또는 기능적 특성을 부여 또는 변경시키기 위해 변형된 펩티드를 포함한다. 예를 들어, 단일 또는 다중 아미노산 치환(예를 들어, 동등한, 보존적 또는 비-보존적 치환, 결실 또는 첨가)이 서열에서 만들어질 수 있다.

보존적 아미노산 치환은 유사한 특성, 예를 들어, 크기, 전하, 소수성, 친수성, 및/또는 방향족성을 갖는 기능적으로 유사한 아미노산에 의한, 아미노산의 펩티드에서의 치환을 지칭한다. 하기 6개의 군 각각은 표 2에서 발견되는, 서로에 대해 보존적 치환인 아미노산을 함유한다.

추가로, 본 명세서에 적용된 용어 "동등한 아미노산 치환"의 의미 내에, 하나의 아미노산은, 일 실시형태에서, 하기에 제시된 아미노산의 군 내에 또 다른 것으로 치환될 수 있다:

1. 극성 측쇄를 갖는 아미노산(Asp, Glu, Lys, Arg, His, Asn, Gln, Ser, Thr, Tyr 및 Cys,)

2. 작은 비극성 또는 약간 극성 잔기를 갖는 아미노산(Ala, Ser, Thr, Pro, Gly);

3. 비극성 측쇄를 갖는 아미노산(Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Phe, Trp, Pro 및 Met)

4. 큰, 지방족, 비극성 잔기를 갖는 아미노산(Met, Leu, Ile, Val, Cys, 노르류신 (Nle), 호모시스테인)

5. 지방족 측쇄를 갖는 아미노산(Gly, Ala Val, Leu, Ile)

6. 환형 측쇄를 갖는 아미노산(Phe, Tyr, Trp, His, Pro)

7. 방향족 측쇄를 갖는 아미노산(Phe, Tyr, Trp)

8. 산성 측쇄를 갖는 아미노산을 갖는 아미노산(Asp, Glu)

9. 염기성 측쇄를 갖는 아미노산(Lys, Arg, His)

10. 아미드 측쇄를 갖는 아미노산(Asn, Gln)

11. 히드록시 측쇄를 갖는 아미노산(Ser, Thr)

12. 황-함유 측쇄를 갖는 아미노산(Cys, Met),

13. 중성, 약소수성 아미노산(Pro, Ala, Gly, Ser, Thr)

14. 친수성, 산성 아미노산(Gln, Asn, Glu, Asp) 및

15. 소수성 아미노산(Leu, Ile, Val).

예시적인 실시형태에서, 아미노산 치환은 보존적 아미노산 치환이 아니고, 예를 들어, 비-보존적 아미노산 치환이다. 이러한 부류는 일반적으로 상응하는 D-아미노산, 호모-아미노산, N-알킬 아미노산, 베타 아미노산 및 다른 비자연 아미노산을 포함한다. 비-보존적 아미노산 치환은 여전히 상기의 동등한 아미노산 치환에 대해 식별된 설명 내에 있다[예를 들어 극성, 비극성, 등]. 비-보존적 아미노산의 예는 아래에 제공된다.

알라닌 비-보존적 아미노산에 대한 비제한적인 예는 하기이다: D-알라닌[Dala, (dA), a], N-아세틸-3-(3,4-디메톡시페닐)-D-알라닌, N-Me-D-Ala-OH, N-Me-Ala-OH, H-β-Ala-β-나프탈렌, L-(-)-2-아미노-3-우레이도프로피온산, (R)-(+)-α-알릴알라닌, (S)-(-)-α-알릴알라닌, D-2-아미노부티르산, L-2-아미노부티르산, DL-2-아미노 부티르산, 2-아미노이소부티르산, α-아미노이소부티르산, (S)-(+)-2-아미노-4-페닐부티르산 에틸 에스테르, 벤질 α-아미노이소부티레이트, bu-OH, ib-OH, β-(9-안트릴)-Ala-OH, β-(3-벤조티에닐)-Ala-OH, β-(3-벤조티에닐)-D-Ala-OH, Cha-OH, Cha-OMe, β-(2-퓨릴)-Ala-OH, β-(2-퓨릴)-D-Ala-OH, β-아이오도-Ala-OBzl, β-아이오도-D-Ala-OBzl, 3-아이오도-D-Ala-OMe, β-아이오도-Ala-OMe, 1-Nal-OH, D-1-Nal-OH, 2-Nal-OH, D-2-Nal-OH, (R)-3-(2-나프틸)-β-Ala-OH, (S)-3-(2-나프틸)-β-Ala-OH, β-페닐-Phe-OH, 3-(2-피리딜)-Ala-OH, 3-(3-피리딜)-Ala-OH, 3-(3-피리딜)-D-Ala-OH, (S)-3-(3-피리딜)-β-Ala-OH, 3-(4-피리딜)-Ala-OH, 3-(4-피리딜)-D-Ala-OH, β-(2-퀴놀릴)-Ala-OH, 3-(2-퀴놀릴)-DL-Ala-OH, 3-(3-퀴놀릴)-DL-Ala-OH, 3-(2-퀴녹살릴)-DLAla-OH, β-(4-티아졸릴)-Ala-OH, β-(2-티에닐)-Ala-OH, β-(2-티에닐)-D-Ala-OH, β-(3-티에닐)-Ala-OH, β-(3-티에닐)-D-Ala-OH, 3-클로로-D-알라닌 메틸 에스테르, N-[(4-클로로페닐)설포닐]-β-알라닌, 3-시클로헥실-D-알라닌, 3-시클로펜틸-DL-알라닌, (-)-3-(3,4-디히드록시페닐)-2-메틸-L-알라닌, 3,3-디페닐-D-알라닌, 3,3-디페닐-L-알라닌, N-[(S)-(+)-1-(에톡시카르보닐)-3-페닐프로필]-L-알라닌, N-[1-(S)-(+)-에톡시카르보닐-3-페닐프로필]-L-알라닐 카르복시무수물, N-(3-플루오로벤질)알라닌, N-(3-인돌릴아세틸)-L-알라닌, 메틸 (RS)-2-(아미노메틸)-3-페닐프로피오네이트, 3-(2-옥소-1,2-디히드로-4-퀴놀리닐)알라닌, 3-(1-피라졸릴)-L-알라닌, 3-(2-피리딜)-D-알라닌, 3-(2-피리딜)-L-알라닌, 3-(3-피리딜)-L-알라닌, 3-(4-피리딜)-D-알라닌, 3-(4-피리딜)- L-알라닌, 3-(2-퀴놀릴)-DL-알라닌, 3-(4-퀴놀릴)-DL-알라닌, D-스티릴알라닌, L-스티릴알라닌, 3-(2-티에닐)-L-알라닌, 3-(2-티에닐)-DL-알라닌, 3-(2-티에닐)-DL-알라닌, 3,3,3-트리플루오로-DL-알라닌, N-메틸-L-알라닌, 3-우레이도프로피온산, ib-OH, Cha-OH, 데히드로-Ala-OMe, 데히드로-Ala-OH, D-2-Nal-OH, β-Ala-ONp, β-호모알라-OH, β-D-호모알라-OH, β-알라닌, β-알라닌 에틸 에스테르, β-알라닌 메틸 에스테르, (S)-디페닐-β-호모알라-OH, (R)-4-(4-피리딜)-β-호모알라-OH, (S)-4-(4-피리딜)-β-호모알라-OH, β-Ala-OH, (S)-디페닐-β-호모알라-OH, L-β-호모알라닌, (R)-4-(3-피리딜)-β-호모알라-OH, α-메틸-α-나프틸알라닌[Manap], N-메틸-시클로헥실알라닌[Nmchexa], 시클로헥실알라닌[Chexa], N-메틸-시클로펜틸알라닌[Nmcpen], 시클로펜틸알라닌[Cpen], N-메틸-α-나프틸알라닌[Nmanap], α-나프틸알라닌[Anap], L-N- 메틸알라닌[Nmala], D-N-메틸알라닌[Dnmala], α-메틸-시클로헥실알라닌[Mchexa], α-메틸-시클로펜틸알라닌[Mcpen]. 각각의 가능성은 별개의 실시형태를 나타낸다.

아르기닌 비-보존적 아미노산에 대한 비제한적인 예는 하기이다: 호모아르기닌(hArg), N-메틸 아르기닌(NMeArg), 시트룰린, 2-아미노-3-구아니디노프로피온산, N-이미노에틸-L-오르니틴, Νω-모노메틸-L-아르기닌, Νω-니트로-L-아르기닌, D-아르기닌, 2-아미노-3-우레이도프로피온산, Νω,ω-디메틸-L-아르기닌, Νω-니트로-D-아르기닌, L-α-메틸아르기닌[Marg], D-α-메틸아르기닌[Dmarg], L-N-메틸아르기닌[Nmarg], D-N-메틸아르기닌[Dnmarg], β-호모arg-OH, L-호모아르기닌, N-(3-구아니디노프로필)글리신[Narg] 및 D-아르기닌[Darg, (dR), r]. 각각의 가능성은 별개의 실시형태를 나타낸다.

아스파라긴 비-보존적 아미노산에 대한 비제한적인 예는 하기이다: L-α-메틸아스파라긴[Masn], D-α-메틸아스파라긴[Dmasn], L-N-메틸아스파라긴[Nmasn], D-N-메틸아스파라긴[Dnmasn], N-(카르바모일메틸)글리신[Nasn] 및 D-아스파라긴[Dasn, (dN), n]. 각각의 가능성은 별개의 실시형태를 나타낸다.

아스파르트산 비-보존적 아미노산에 대한 비제한적인 예는 하기이다: L-α-메틸아스파르테이트[Masp], D-α-메틸아스파르테이트[Dmasp], L-N-메틸아스파르트산[Nmasp], D-N-메틸아스파르테이트[Dnmasp], N-(카르복시메틸)글리신[Nasp] 및 D-아스파르트산[Dasp, (dD), d]. 각각의 가능성은 별개의 실시형태를 나타낸다.

시스테인 비-보존적 아미노산에 대한 비제한적인 예는 하기이다: L-시스테인산, L-시스테인설핀산, D-에티오닌, S-(2-티아졸릴)-L-시스테인, DL-호모시스테인, L-호모시스테인, L-호모시스틴, L-α-메틸시스테인[Mcys], D-α -메틸시스테인[Dmcys], L-N-메틸시스테인[Nmcys], D-N-메틸시스테인[Dnmcys], N-(티오메틸)글리신[Ncys] 및 D-시스테인[Dcys, (dC), c]. 각각의 가능성은 별개의 실시형태를 나타낸다.

글루탐산 비-보존적 아미노산에 대한 비제한적인 예는 하기이다: γ-카르복시-DL-글루탐산, 4-플루오로-DL-글루탐산, β-글루탐산, L-β-호모글루탐산, L-α-메틸글루타메이트[Mglu], D-α-메틸 글루탐산[Dmglu], L-N-메틸글루탐산[Nmglu], D-N-메틸글루타메이트[Dnmglu], N-(2-카르복시에틸)글리신[Nglu] 및 D-글루탐산[Dglu, (dE), e]. 각각의 가능성은 별개의 실시형태를 나타낸다.

글루타민 비-보존적 아미노산에 대한 비제한적인 예는 하기이다: Cit-OH, D-시트룰린, 티오-L-시트룰린, β-Gln-OH, L-β-호모글루타민, L-α-메틸글루타민[Mgln], D-α-메틸글루타민[Dmgln], L-N-메틸글루타민[Nmgln], D-N-메틸글루타민[Dnmgln], N-(2-카르바모일에틸)글리신[Ngln], 및 D-글루타민[Dgln, (dQ), q]. 각각의 가능성은 별개의 실시형태를 나타낸다.

글리신 비-보존적 아미노산에 대한 비제한적인 예는 하기이다: tBu-Gly-OH ,D-알릴글리신, N-[비스(메틸티오)메틸렌]글리신 메틸 에스테르, Chg-OH, D-Chg-OH, D-시클로프로필글리신, L-시클로프로필글리신, (R)-4-플루오로페닐글리신, (S)-4-플루오로페닐글리신, 이미노디아세트산, (2-인다닐)-Gly-OH, (±)-α-포스포노글리신 트리메틸 에스테르, D-프로파르길글리신, 프로파르길-Gly-OH, (R)-2-티에닐글리신, (S)-2-티에닐글리신, (R)-3-티에닐글리신, (S)-3-티에닐글리신, 2-(4-트리플루오로메틸-페닐)-DL-글리신, (2S,3R,4S)-α-(카르복시시클로프로필)글리신, N-(클로로아세틸)글리신 에틸 에스테르, (S)-(+)-2-클로로페닐글리신 메틸 에스테르, N-(2-클로로페닐)-N-(메틸설포닐)글리신, D-α-시클로헥실글리신, L-α-시클로프로필글리신, 디-tert-부틸-이미노디카르복실레이트, 에틸 아세트아미도시아노아세테이트, N-(2-플루오로페닐)-N-(메틸설포닐) 글리신, N-(4-플루오로페닐)-N-(메틸설포닐)글리신, N-(2-푸르푸릴리덴아세틸)글리신 메틸 에스테르, N-(2-푸로일)글리신, N-(2-히드록시에틸)이미노디아세트산, N-(4-히드록시페닐)글리신, 이미노디아세트산, N-라우로일사르코신 나트륨 염, L-α-네오펜틸글리신, N-(포스포노메틸)글리신, D-프로파르길글리신, L-C-프로파르길글리신, 사르코신, N,N-디메틸글리신, N,N-디메틸글리신 에틸 에스테르, D-Chg-OH, α-포스포노글리신 트리메틸 에스테르, N-시클로부틸글리신[Ncbut], L-α-메틸에틸글리신[Metg], N-시클로헵틸글리신[Nchep], L-α-메틸-i-부틸글리신[Mtbug], N-메틸글리신[Nmgly], L-N-메틸-에틸글리신[Nmetg], L-에틸글리신[Etg], L-N-메틸-t-부틸글리신[Nmtbug], L-t-부틸글리신[Tbug], N-시클로헥실글리신[Nchex], N-시클로데실글리신[Ncdec], N-시클로도데실글리신[Ncdod], N-시클로옥틸글리신[Ncoct], N-시클로프로필글리신[Ncpro], N-시클로운데실글리신[Ncund], N-(2-아미노에틸)글리신[Naeg], N-(N-(2,2-디페닐에틸) 디페닐에틸)글리신[Nnbhm], N-(2,2- 카르바모일메틸-글리신[Nbhm], N-(N-(3,3-디페닐프로필) 디페닐프로필)글리신[Nnbhe] 및 N-(3,3-카르바모일메틸-글리신[Nbhe]. 각각의 가능성은 별개의 실시형태를 나타낸다.

히스티딘 비-보존적 아미노산에 대한 비제한적인 예는 하기이다: L-α-메틸히스티딘[Mhis], D-α-메틸히스티딘[Dmhis], L-N-메틸히스티딘[Nmhis], D-N-메틸히스티딘[Dnmhis], N-(이미다졸릴에틸)글리신[Nhis] 및 D-히스티딘[Dhis, (dH), h]. 각각의 가능성은 별개의 실시형태를 나타낸다.

이소류신 비-보존적 아미노산에 대한 비제한적인 예는 하기이다: N-메틸-L-이소류신[Nmile], N-(3-인돌릴아세틸)-L-이소류신, 알로-Ile-OH, D-알로-이소류신, L-β-호모이소류신, L-α-메틸이소류신[Mile], D-α-메틸이소류신[Dmile], D-N-메틸이소류신[Dnmile], N-(1 -메틸프로필)글리신[Nile] 및 D-이소류신[Dile, (dD), i]. 각각의 가능성은 별개의 실시형태를 나타낸다.

류신 비-보존적 아미노산에 대한 비제한적인 예는 하기이다: D-류신[Dleu, (dL), l]. 시클로류신, DL-류신, N-포르밀-Leu-OH, D-tert-류신, L-tert-류신, DL-tert-류신, L-tert-류신 메틸 에스테르, 5,5,5-트리플루오로-DL-류신, D-β-Leu-OH, L-β-류신, DL-β-류신, L-β-호모류신, DL-β-호모류신, L-N-메틸-류신[Nmleu], D-N-메틸-류신[Dnmleu], L-α-메틸-류신[Mleu], D-α-메틸-류신[Dmleu], N-(2-메틸프로필)글리신[Nleu], D-류신[Dleu, l], D-노르류신, L-노르류신, DL-노르류신, L-N-메틸노르류신[Nmnle] 및 L-노르류신[Nle]. 각각의 가능성은 별개의 실시형태를 나타낸다.

라이신 비-보존적 아미노산에 대한 비제한적인 예는 하기이다: DL-5-히드록시라이신, (5R)-5-히드록시-L-라이신, β-Lys-OH, L-β-호모라이신, L-α-메틸-라이신[Mlys], D-α-메틸-라이신[Dmlys], L-N-메틸-라이신[Nmlys], D-N-메틸-라이신[Dnmlys], N-(4-아미노부틸)글리신[Nlys] 및 D-라이신[Dlys, (dK), k]. 각각의 가능성은 별개의 실시형태를 나타낸다.

메티오닌 비보존적 아미노산에 대한 비제한적인 예는 하기이다: L-β-호모메티오닌, DL-β-호모메티오닌, L-α-메틸메티오닌[Mmet], D-α-메틸메티오닌[Dmmet], L-N-메틸메티오닌[Nmmet], D-N-메틸메티오닌[Dnmmet], N-(2-메틸티오에틸)글리신[Nmet] 및 D-메티오닌[Dmet, (dM), m]. 각각의 가능성은 별개의 실시형태를 나타낸다.

페닐알라닌 비보존적 아미노산에 대한 비제한적인 예는 하기 이다: N-아세틸-2-플루오로-DL-페닐알라닌, N-아세틸-4-플루오로-DL-페닐알라닌, 4-아미노-L-페닐알라닌, 3-[3,4-비스(트리플루오로메틸)페닐]-L-알라닌, Bpa-OH, D-Bpa-OH, 4-tert-부틸-Phe-OH, 4-tert-부틸-D-Phe-OH, 4-(아미노)-L-페닐알라닌, rac-β²-호모페닐알라닌, 2-메톡시-L-페닐알라닌, (S)-4-메톡시-β-Phe-OH, 2-니트로-L-페닐알라닌, 펜타플루오로-D-페닐알라닌, 펜타플루오로-L-페닐알라닌, Phe(4-Br)-OH, D-Phe(4-Br)-OH, Phe(2-CF₃)-OH, D-Phe(2-CF₃)-OH, Phe(3-CF₃)-OH, D-Phe(3-CF₃)-OH, Phe(4-CF₃)-OH, D-Phe(4-CF₃)-OH, Phe(2-Cl)-OH, D-Phe(2-Cl)-OH, Phe(2,4-Cl₂)-OH, D-Phe(2,4-Cl₂)-OH, D-Phe(3-Cl)-OH, Phe(3,4-Cl₂)-OH, Phe(4-Cl)-OH, D-Phe(4-Cl)-OH, Phe(2-CN)-OH, D-Phe(2-CN)-OH, D-Phe(3-CN)-OH, Phe(4-CN)-OH, D-Phe(4-CN)-OH, Phe(2-Me)-OH, D-Phe(2-Me)-OH, Phe(3-Me)-OH, D-Phe(3-Me)-OH, Phe(4-Me)-OH, Phe(4-NH₂)-OH, Phe(4-NO₂)-OH, Phe(2-F)-OH, D-Phe(2-F)-OH, Phe(3-F)-OH, D-Phe(3-F)-OH, Phe(3,4-F₂)-OH, D-Phe(3,4-F₂)-OH, Phe(3,5-F₂)-OH, Phe(4-F)-OH, D-Phe(4-F)-OH, , Phe(4-I)-OH, D-3,4,5-트리플루오로페닐알라닌, p-브로모-DL-페닐알라닌, 4-브로모-L-페닐알라닌, β-페닐-D-페닐알라닌, 4-클로로-L-페닐알라닌, DL-2,3-다이플루오로페닐알라닌, DL-3,5-다이플루오로페닐알라닌, 3,4-디히드록시-L-페닐알라닌, 3-(3,4-디메톡시페닐)-L-알라닌, N-[(9H-플루오렌-9-일메톡시)카르보닐]-2-메톡시-L-페닐알라닌, o-플루오로-DL-페닐알라닌, m-플루오로-L-페닐알라닌, m-플루오로-DL-페닐알라닌, p-플루오로-L-페닐알라닌, p-플루오로-DL-페닐알라닌, 4-플루오로-D-페닐알라닌, 2-플루오로-L-페닐알라닌 메틸 에스테르, p-플루오로-DL-Phe-OMe, D-3-브로모페닐알라닌, D-4-브로모페닐알라닌, L-β-(6-클로로-4-피리딘일)알라닌, D-3,5-다이플루오로페닐알라닌, L-3-플루오로페닐알라닌, L-4-플루오로페닐알라닌, L-β-(1H-5-인돌릴)알라닌, 2-니트로-L-페닐알라닌, 펜타플루오로-L-페닐알라닌, phe(3-br)-oh, Phe(4-Br)-OH, Phe(2-CF₃)-OH, D-Phe(2-CF₃)-OH, Phe(3-CF₃)-OH, D-Phe(3-CF₃)-OH, Phe(4-CF₃)-OH, D-Phe(4-CF₃)-OH, Phe(2-Cl)-OH, D-Phe(2-Cl)-OH, Phe(2,4-Cl₂)-OH, D-Phe(2,4-Cl₂)-OH, Phe(3,4-Cl₂)-OH, D-Phe(3,4-Cl₂)-OH, Phe(4-Cl)-OH, D-Phe(4-Cl)-OH, Phe(2-CN)-OH, D-Phe(2-CN)-OH, D-Phe(3-CN)-OH, Phe(4-CN)-OH, Phe(2-Me)-OH, Phe(3-Me)-OH, D-Phe(3-Me)-OH, Phe(4-NO₂)-OH, D-Phe(4-NO₂)-OH, D-Phe(2-F)-OH, Phe(3-F)-OH, D-Phe(3-F)-OH, Phe(3,4-F₂)-OH, Phe(3,5-F₂)-OH, D-Phe(4-F)-OH, Phe(4-I)-OH, D-Phe(4-I)-OH, 4-(포스포노메틸)-Phe-OH, L-4-트리플루오로메틸페닐알라닌, 3,4,5-트리플루오로-D-페닐알라닌, L-3,4,5-트리플루오로페닐알라닌, 6-히드록시-DL-DOPA, 4-(히드록시메틸)-D-페닐알라닌, N-(3-인돌릴아세틸)-L-페닐알라닌, p-아이오도-D-페닐알라닌, 4-아이오도-L-페닐알라닌, α-메틸-D-페닐알라닌, α-메틸-L-페닐알라닌, α-메틸-DL-페닐알라닌, α-메틸-DL-페닐알라닌 메틸 에스테르, 4-니트로-D-페닐알라닌, 4-니트로-L-페닐알라닌, 4-니트로-DL-페닐알라닌, (S)-(+)-4-니트로페닐알라닌 메틸 에스테르, 2-(트리플루오로메틸)-D-페닐알라닌, 2-(트리플루오로메틸)-L-페닐알라닌, 3-(트리플루오로메틸)-D-페닐알라닌, 3-(트리플루오로메틸)-L-페닐알라닌, 4-(트리플루오로메틸)-D-페닐알라닌, 3,3′,5-트리아이오도-L-티로닌, (R)-4-브로모-β-Phe-OH, N-아세틸-DL-β-페닐알라닌, (S)-4-브로모-β-Phe-OH, (R)-4-클로로-β-Homophe-OH, (S)-4-클로로-β-Homophe-OH, (R)-4-클로로-β-Phe-OH, (S)-4-클로로-β-Phe-OH, (S)-2-시아노-β-Homophe-OH, (R)- 4-시아노-β-Homophe-OH, (S)-4-시아노-β-Homophe-OH, (R)-3-시아노-β-Phe-OH, (R)-4-시아노-β-Phe-OH, (S)-4-시아노-β-Phe-OH, (R)-3,4-디메톡시-β-Phe-OH, (S)-3,4-디메톡시-β-Phe-OH, (R)-4-플루오로-β-Phe-OH, (S)-4-플루오로-β-Phe-OH, (S)-4-아이오도-β-Homophe-OH, (S)-3-시아노-β-Homophe-OH, (S)-3,4-다이플루오로-β-Homophe-OH, (R)-4-플루오로-β-Homophe-OH, (S)-β2-호모페닐알라닌, (R)-3-메톡시-β-Phe-OH, (S)-3-메톡시-β-Phe-OH, (R)-4-메톡시-β-Phe-OH, (S)-4-메틸-β-Homophe-OH, (R)-2-메틸-β-Phe-OH, (S)-2-메틸-β-Phe-OH, (R)-3-메틸-β-Phe-OH, (S)-3-메틸-β-Phe-OH, (R)-4-메틸-β-Phe-OH, (S)-4-메틸-β-Phe-OH, β-Phe-OH, D-β-Phe-OH, (S)-2-(트리플루오로메틸)-β-Homophe-OH, (S)-2-(트리플루오로메틸)-β-Homophe-OH, (S)-3-(트리플루오로메틸)-β-Homophe-OH, (R)-4-(트리플루오로메틸)-β-Homophe-OH, (S)-2-(트리플루오로메틸)-β-Phe-OH, (R)-3-(트리플루오로메틸)-β-Phe-OH, (S)-3-(트리플루오로메틸)-β-Phe-OH, (R)-4-(트리플루오로메틸)-β-Phe-OH, (S)-4-(트리플루오로메틸)-β-Phe-OH, β-Homophe-OH, D-β-Homophe-OH, (S)-2-메틸-β-Homophe-OH, (S)-3-메틸-β-Homophe-OH, β-Phe-OH, β-D-Phe-OH, (S)-3-(트리플루오로메틸)-β-Homophe-OH, L-β-호모페닐알라닌, DL-β-호모페닐알라닌, DL-β-페닐알라닌, DL-호모페닐알라닌 메틸 에스테르, D-호모페닐알라닌, L-호모페닐알라닌, DL-호모페닐알라닌, D-호모페닐알라닌 에틸 에스테르, (R)-β²-호모페닐알라닌, L-α-메틸- 호모페닐알라닌[Mhphe], L-α-메틸페닐알라닌[Mphe], D-a-메틸페닐알라닌[Dmphe], L-N-메틸- 호모페닐알라닌[Nm phe], L-호모페닐알라닌[Hphe], L-N-메틸페닐알라닌[Nmphe], D-N-메틸페닐알라닌[Dnmphe], N-벤질글리신[Nphe] 및 D-페닐알라닌[Dphe, (dF), f]. 각각의 가능성은 별개의 실시형태를 나타낸다.

프롤린 비보존적 아미노산에 대한 비제한적인 예는 하기이다: 호모프롤린(hPro), (4-히드록시)Pro(4HyP), (3-히드록시)Pro(3HyP), 감마-벤질-프롤린, 감마-(2-플루오로-벤질)-프롤린, 감마-(3-플루오로-벤질)-프롤린, 감마-(4-플루오로-벤질)-프롤린, 감마-(2-클로로-벤질)-프롤린, 감마-(3-클로로-벤질)-프롤린, 감마-(4-클로로-벤질)-프롤린, 감마-(2-브로모-벤질)-프롤린, 감마-(3-브로모-벤질)-프롤린, 감마-(4-브로모-벤질)-프롤린, 감마-(2-메틸-벤질)-프롤린, 감마-(3-메틸-벤질)-프롤린, 감마-(4-메틸-벤질)-프롤린, 감마-(2-니트로-벤질)-프롤린, 감마-(3-니트로-벤질)-프롤린, 감마-(4-니트로-벤질)-프롤린, 감마-(1-나프탈렌일메틸)-프롤린, 감마-(2-나프탈렌일메틸)-프롤린, 감마-(2,4-디클로로-벤질)-프롤린, 감마-(3,4-디클로로-벤질)-프롤린, 감마-(3,4-다이플루오로-벤질)-프롤린, 감마-(2-트리플루오로-메틸-벤질)-프롤린, 감마-(3-트리플루오로-메틸-벤질)-프롤린, 감마-(4-트리플루오로-메틸-벤질)-프롤린, 감마-(2-시아노-벤질)-프롤린, 감마-(3-시아노-벤질)-프롤린, 감마-(4-시아노-벤질)-프롤린, 감마-(2-아이오도-벤질)-프롤린, 감마-(3-아이오도-벤질)-프롤린, 감마-(4-아이오도-벤질)-프롤린, 감마-(3-페닐-알릴-벤질)-프롤린, 감마-(3-페닐-프로필-벤질)-프롤린, 감마-(4-tert-부틸-벤질)-프롤린, 감마-벤즈히드릴-프롤린, 감마-(4-바이페닐-메틸)-프롤린, 감마-(4-티아졸릴-메틸)-프롤린, 감마-(3-벤조티에닐-메틸)-프롤린, 감마-(2-티에닐-메틸)-프롤린, 감마-(3-티에닐-메틸)-프롤린, 감마-(2-푸란일-메틸)-프롤린, 감마-(2-피리딘일-메틸)-프롤린, 감마-(3-피리딘일-메틸)-프롤린, 감마-(4-피리딘일-메틸)- 프롤린, 감마-알릴-프롤린, 감마-프로핀일-프롤린, 알파-변형된-프롤린 잔기, 피페콜산, 아제티딘-3-카르복실산, L-β-호모프롤린, L-β³-호모프롤린, L-β-호모히드록시프롤린, 히드록시프롤린[Hyp], L-α-메틸프롤린[Mpro], D-α-메틸프롤린[Dmpro], L-N-메틸프롤린[Nmpro], D-N-메틸프롤린[Dnmpro] 및 D-프롤린[Dpro, (dP), p]. 각각의 가능성은 별개의 실시형태를 나타낸다.

세린 비보존적 아미노산에 대한 비제한적인 예는 하기이다: (2R,3S)-3-페닐이소세린, D-시클로세린, L-이소세린, DL-이소세린, DL-3-페닐세린, L-β-호모세린, D-호모세린, D-호모세린, L-3-호모세린, L-호모세린, L-α-메틸세린[Mser], D-α-메틸세린[Dmser], L-N-메틸세린[Nmser], D-N-메틸세린[Dnmser], D-세린[Dser, (dS), s], N-(히드록시메틸)글리신[Nser] 및 포스포세린[pSer]. 각각의 가능성은 별개의 실시형태를 나타낸다.

트레오닌 비보존적 아미노산에 대한 비제한적인 예는 하기이다: L-알로-트레오닌, D-티록신, L-β-호모트레오닌, L-α-메틸트레오닌[Mthr], D-α-메틸트레오닌[Dmthr], L-N-메틸트레오닌[Nmthr], D-N-메틸트레오닌[Dnmthr], D-트레오닌[Dthr, (dT), t], N-(1-히드록시에틸)글리신[Nthr] 및 포스포트레오닌[pThr]. 각각의 가능성은 별개의 실시형태를 나타낸다.

트립토판 비보존적 아미노산에 대한 비제한적인 예는 하기이다: 5-플루오로-L-트립토판, 5-플루오로-DL-트립토판, 5-히드록시-L-트립토판, 5-메톡시-DL-트립토판, L-아브린(abrine), 5-메틸-DL-트립토판, H-Tpi-OMe. β-호모trp-OMe, L-β-호모트립토판, L-α-메틸트립토판 [Mtrp], D-α-메틸트립토판 [Dmtrp], L-N-메틸트립토판[Nmtrp], D-N-메틸트립토판 [Dnmtrp], N-(3-인돌릴에틸)글리신[Nhtrp], D-트립토판[Dtrp, (dW), w]. 각각의 가능성은 별개의 실시형태를 나타낸다.

티로신 비보존적 아미노산에 대한 비제한적인 예는 하기이다: 3,5 디아이오도티로신 (3,5-디Tyr), 3,5 디브로모티로신(3,5-dBTyr), 호모티로신, D-티로신, 3-아미노-L-티로신, 3-아미노-D-티로신, 3-아이오도-L-티로신, 3- 아이오도- D-티로신, 3-메톡시-L-티로신, 3-메톡시-D-티로신, L-티록신, D-티록신, L-티로닌, D-티로닌, O-메틸-L-티로신, O-메틸-D-티로신, D-티로닌, O-에틸-L-티로신, O-에틸-D-티로신, 3,5,3'-트리아이오도-L-티로닌, 3,5,3'-트리아이오도-D-티로닌, 3,5-디아이오도-L-티로닌, 3,5-디아이오도-D-티로닌, D-메타-티로신, L-메타-티로신, D-오르토- 티로신, L-오르토-티로신, 페닐알라닌, 치환된 페닐알라닌, N-니트로 페닐알라닌, p-니트로 페닐알라닌, 3-클로로-Dtyr-oh, Tyr(3,5-디I), 3-클로로-L-티로신, Tyr(3-NO₂)-OH , Tyr(3,5-디I)-OH, N-Me-Tyr-OH, α-메틸-DL-티로신, 3-니트로-L-티로신, DL-o-티로신, β-호모tyr-OH, (R)-β-Tyr-OH, (S)-β-Tyr-OH, L-α-메틸티로신[Mtyr], D-α-메틸티로신[Dmtyr], L-N-메틸티로신[Nmtyr], D-N-메틸티로신[Dnmtyr], D-티로신[Dtyr, (dY), y], O-메틸-티로신 및 포스포티로신[pTyr]. 각각의 가능성은 별개의 실시형태를 나타낸다.

발린 비보존적 아미노산에 대한 비제한적인 예는 하기이다: 3-플루오로-DL-발린, 4,4,4,4′,4′,4′-헥사플루오로-DL-발린, D-발린[Dval, (dV), v], N-Me-Val-OH[Nmval], N-Me-Val-OH, L-α-메틸발린[Mval], D-α-메틸발린[Dmval], (R)-(+)-α-메틸발린, (S)-(-)-α-메틸발린 및 D-N-메틸발린[Dnmval]. 각각의 가능성은 별개의 실시형태를 나타낸다.

비보존적 대체로서 치환될 수 있는 다른 비자연 아미노산은 하기를 포함한다: 오르니틴 및 이의 변형: D-오르니틴[Dorn], L-오르니틴[Orn], DL-오르니틴, L-α-메틸오르니틴[Morn], D-α-메틸오르니틴[Dmorn], L-N-메틸오르니틴[Nmorn], D-N-메틸오르니틴[Dnmorn] 및 N-(3-아미노프로필)글리신[Norn]. 각각의 가능성은 별개의 실시형태를 나타낸다.

지환식 아미노산: L-2,4-디아미노부티르산, L-2,3-디아미노프로피온산, N-Me-Aib-OH, (R)-2-(아미노)-5-헥신산, 피페리딘-2-카르복실산, 아미노노르보르닐- 카르복실레이트[Norb], 알파-아미노부티르산[Abu], 아미노시클로프로판-카르복실레이트[Cpro], (시스)-3-아미노바이시클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실산, 엑소-시스-3-아미노바이시클로[2.2.1]헵트-5-엔-2-카르복실산, 1-아미노-1-시클로부탄카르복실산, 시스-2-아미노시클로헵탄카르복실산, 1-아미노시클로헥산카르복실산, 시스-2-아미노시클로헥산카르복실산, 트랜스-2-아미노시클로헥산카르복실산, 시스-6-아미노-3-시클로헥센-1-카르복실산, 2-(1-아미노시클로헥실)아세트산, 시스-2-아미노-1-시클로옥탄카르복실산, 시스-2-아미노-3-시클로옥텐-1-카르복실산, (1R,2S)-(-)-2-아미노-1-시클로펜탄카르복실산, (1S,2R)-(+)-2-아미노-1-시클로펜탄카르복실산, 시스-2-아미노-1-시클로펜탄카르복실산, 2-(1-아미노시클로펜틸)아세트산, 시스-2-아미노-2-메틸시클로헥산카르복실산, 시스-2-아미노-2-메틸시클로펜탄카르복실산, 3-아미노-3-(4-니트로페닐)프로피온산, 3-아제티딘카르복실산, amchc-oh, 1-아미노시클로부탄 카르복실산, 1-(아미노)시클로헥산카르복실산, 시스-2-(아미노)-시클로헥산카르복실산, 트랜스-2-(아미노)-시클로헥산카르복실산, 시스-4-(아미노)시클로헥산카르복실산, 트랜스-4-(아미노)시클로헥산카르복실산, (±)-시스-2-(아미노)-3-시클로헥센-1-카르복실산, (±)-시스-6-(아미노)-3-시클로헥센-1-카르복실산, 2-(1-아미노시클로헥실)아세트산, 시스-[4-(아미노)시클로헥실]아세트산, 1-(아미노)시클로펜탄카르복실산, (±)-시스-2-(아미노)시클로펜탄카르복실산, (1R,4S)-(+)-4-(아미노)-2-시클로펜텐-1-카르복실산, (±)-시스-2-(아미노)-3-시클로펜텐-1-카르복실산, 2-(1-아미노시클로펜틸)아세트산, 1-(아미노)시클로프로판카르복실산, 에틸 1-아미노시클로프로판카르복실레이트, 1,2-트랜스-achec-oh, 1-(아미노)시클로부탄카르복실산, 1-(아미노)시클로헥산카르복실산, 시스-2-(아미노)-시클로헥산카르복실산, 트랜스-2-(아미노)시클로헥산카르복실산, 시스-4-(아미노)시클로헥산카르복실산, 트랜스-4-(아미노)시클로헥산카르복실산, 시스-[4-(아미노)시클로헥실]아세트산, 1-(아미노)시클로펜탄카르복실산, (1R,4S)-(+)-4-(아미노)-2-시클로펜텐-1-카르복실산, (1S,4R)-(-)-4-(아미노)-2-시클로펜텐-1-카르복실산, 1-(아미노)시클로프로판카르복실산, 트랜스-4-(아미노메틸)시클로헥산카르복실산, β-Dab-OH, 3-아미노-3-(3-브로모페닐)프로피온산, 3-아미노부탄산, 시스-2- 아미노-3-시클로펜텐-1-카르복실산, DL-3-아미노이소부티르산, (R)-3-아미노-2-페닐프로피온산, (±)-3-(아미노)-4-(4-바이페닐릴)부티르산, 시스-3-(아미노)시클로헥산카르복실산, (1S,3R)-(+)-3-(아미노)시클로펜탄카르복실산, (2R,3R)-3-(아미노)-2-히드록시-4-페닐부티르산, (2S,3R)-3-(아미노)-2-히드록시-4-페닐부티르산, 2-(아미노메틸)페닐아세트산, (R)-3-(아미노)-2-메틸프로피온산, (S)-3-(아미노)-2-메틸프로피온산, (R)-3-(아미노)-4-(2-나프틸)부티르산, (S)-3-(아미노)-4-(2-나프틸)부티르산, (R)-3-(아미노)-5-페닐펜탄산, (R)-3-(아미노)-2-페닐프로피온산, 에틸 3-(벤질아미노)프로피오네이트, 시스-3-(아미노)시클로헥산카르복실산, (S)-3-(아미노)-5-헥센산, (R)-3-(아미노)-2-메틸프로피온산, (S)-3-(아미노)-2-메틸프로피온산, (R)-3-(아미노)-4-(2-나프틸)부티르산, (S)-3-(아미노)-4-(2-나프틸)부티르산, (R)-(-)-피롤리딘-3-카르복실산, (S)-(+)-피롤리딘-3-카르복실산, N-메틸- γ -아미노부티레이트[Nmgabu], γ-아미노부티르산[Gabu], N-메틸- α-아미노- α-메틸부티레이트[Nmaabu], α-아미노- α-메틸부티레이트 [Aabu], N-메틸- α- 아미노이소부티레이트[Nmaib], α-아미노이소부티르산[Aib], α-메틸-y-아미노부티레이트 [Mgabu]. 각각의 가능성은 별개의 실시형태를 나타낸다.

페닐 글리신 및 이의 변형: Phg-OH, D-Phg-OH, 2-(피페라지노)-2-(3,4-디메톡시페닐)아세트산, 2-(피페라지노)-2-(2-플루오로페닐)아세트산, 2-(4-피페라지노)-2-(3-플루오로페닐)아세트산, 2-(4-피페라지노)-2-(4-메톡시페닐)아세트산, 2-(4-피페라지노)-2-(3-피리딜)아세트산, 2-(4-피페라지노)-2-[4-(트리플루오로메틸)페닐]아세트산, L-(+)-2-클로로페닐글리신, (±)-2-클로로페닐글리신, (±)-4-클로로페닐글리신, (R)-(-)-2-(2,5-디히드로페닐)글리신, (R)-(-)-N-(3,5-디니트로벤조일)-α-페닐글리신, (S)-(+)-N-(3,5-디니트로벤조일)-α-페닐글리신, 2,2-디페닐글리신, 2-플루오로-DL-α-페닐글리신, 4-플루오로-D-α-페닐글리신, 4-히드록시-D-페닐글리신, 4-히드록시-L-페닐글리신, 2-페닐글리신, D-(-)-α-페닐글리신, D-(-)-α-페닐글리신, DL-α-페닐글리신, L-(+)-α-페닐글리신, N-페닐글리신, (R)-(-)-2-페닐글리신 메틸 에스테르, (S)-(+)-2-페닐글리신 메틸 에스테르, 2-페닐글리시노니트릴 염산염, α-페닐글리시노니트릴, 3-(트리플루오로메틸)-DL-페닐글리신 및 4-(트리플루오로메틸)-L-페닐글리신. 각각의 가능성은 별개의 실시형태를 나타낸다.

페니실아민 및 이의 변형: N-아세틸-D-페니실아민, D-페니실아민, L-페니실아민[Pen], DL-페니실아민. α -메틸페니실아민[Mpen], N-메틸페니실아민[Nmpen]. 각각의 가능성은 별개의 실시형태를 나타낸다.

β-호모피롤리딘. 각각의 가능성은 별개의 실시형태를 나타낸다.

방향족 아미노산: 3-아세트아미도벤조산, 4-아세트아미도벤조산, 4-아세트아미도-2-메틸벤조산, N-아세틸안트라닐산, 3-아미노벤조산, 3-아미노벤조산 염산염, 4-아미노벤조산, 4-아미노벤조산, 4-아미노벤조산, 4-아미노벤조산, 4-아미노벤조산, 4-아미노벤조산, 2-아미노벤조페논-2′-카르복실산, 2-아미노-4-브로모벤조산, 2-아미노-5-브로모벤조산, 3-아미노-2-브로모벤조산, 3-아미노-4-브로모벤조산, 3-아미노-5-브로모벤조산, 4-아미노-3-브로모벤조산, 5-아미노-2-브로모벤조산, 2-아미노-3-브로모-5-메틸벤조산, 2-아미노-3-클로로벤조산, 2-아미노-4-클로로벤조산, 2-아미노-5-클로로벤조산, 2-아미노-5-클로로벤조산, 2-아미노-6-클로로벤조산, 3-아미노-2-클로로벤조산, 3-아미노-4-클로로벤조산, 4-아미노-2-클로로벤조산, 4-아미노-3-클로로벤조산, 5-아미노-2-클로로벤조산, 5-아미노-2-클로로벤조산, 4-아미노-5-클로로-2-메톡시벤조산, 2-아미노-5-클로로-3-메틸벤조산, 3-아미노-2,5-디클로로벤조산, 4-아미노-3,5-디클로로벤조산, 2-아미노-4,5-디메톡시벤조산, 4-(2-아미노에틸)벤조산 염산염, 2-아미노-4-플루오로벤조산, 2-아미노-5-플루오로벤조산, 2-아미노-6-플루오로벤조산, 4-아미노-2-플루오로벤조산, 2-아미노-5-히드록시벤조산, 3-아미노-4-히드록시벤조산, 4-아미노-3-히드록시벤조산, 2-아미노-5-아이오도벤조산, 5-아미노이소프탈산, 2-아미노-3-메톡시벤조산, 2-아미노-4-메톡시벤조산, 2-아미노-5-메톡시벤조산, 3-아미노-2-메톡시벤조산, 3-아미노-4-메톡시벤조산, 3-아미노-5-메톡시벤조산, 4-아미노-2-메톡시벤조산, 4-아미노-3-메톡시벤조산, 5-아미노-2-메톡시벤조산, 2-아미노-3-메틸벤조산, 2-아미노-5-메틸벤조산, 2-아미노-6-메틸벤조산, 3-(아미노메틸)벤조산, 3-아미노-2-메틸벤조산, 3-아미노-4-메틸벤조산, 4-(아미노메틸)벤조산, 4-아미노-2-메틸벤조산, 4-아미노-3-메틸벤조산, 5-아미노-2-메틸벤조산, 3-아미노-2-나프토산, 6-아미노-2-나프토산, 2-아미노-3-니트로벤조산, 2-아미노-5-니트로벤조산, 2-아미노-5-니트로벤조산, 4-아미노-3-니트로벤조산, 5-아미노-2-니트로벤조산, 3-(4-아미노페닐)프로피온산, 3-아미노프탈산, 4-아미노프탈산, 3-아미노살리실산, 4-아미노살리실산, 5-아미노살리실산, 5-아미노살리실산, 2-아미노테레프탈산, 2-아미노-3,4,5,6-테트라플루오로벤조산, 4-아미노-2,3,5,6-테트라플루오로벤조산, (R)-2-아미노-1,2,3,4-테트라히드로나프탈렌-2-카르복실산, (S)-2-아미노-1,2,3,4-테트라히드로-2-나프탈렌카르복실산, 2-아미노-3-(트리플루오로메틸)벤조산, 2-아미노-3-(트리플루오로메틸)벤조산, 3-아미노-5-(트리플루오로메틸)벤조산, 5-아미노-2,4,6-트리아이오도이소프탈산, 2-아미노-3,4,5-트리메톡시벤조산, 2-아닐리노페닐아세트산, 2-Abz-OH, 3-Abz-OH, 4-Abz-OH, 2-(아미노메틸)벤조산, 3-(아미노메틸)벤조산, 4-(아미노메틸)벤조산, tert-부틸 2-아미노벤조에이트, tert-부틸 3-아미노벤조에이트, tert-부틸 4-아미노벤조에이트, 4-(부틸아미노)벤조산, 2,3-디아미노벤조산, 3,4-디아미노벤조산, 3,5-디아미노벤조산, 3,5-디아미노벤조산, 3,5-디클로로안트라닐산, 4-(디에틸아미노)벤조산, 4,5-다이플루오로안트라닐산, 4-(Di메틸아미노)벤조산, 4-(Di메틸아미노)벤조산, 3,5-디메틸안트라닐산, 5-플루오로-2-메톡시벤조산, 2-Abz-OH, 3-Abz-OH, 4-Abz-OH, 3-(아미노메틸)벤조산, 4-(아미노메틸)벤조산, 4-(2-히드라지노)벤조산, 3-히드록시안트라닐산, 3-히드록시안트라닐산, 메틸 3-아미노벤조에이트, 3-(메틸아미노)벤조산, 4-(메틸아미노)벤조산, 메틸 2-아미노-4-클로로벤조에이트, 메틸 2-아미노-4,5-디메톡시벤조에이트, 4-니트로안트라닐산, N-페닐안트라닐산, N-페닐안트라닐산 및 소듐 4-아미노살리실레이트. 각각의 가능성은 별개의 실시형태를 나타낸다.

다른 아미노산: (S)-α-아미노-γ-부티로락톤, DL-2-아미노카프릴산, 7-아미노세팔로스포란산 , 4-아미노신남산, (S)-(+)-α-아미노시클로헥산프로피온산, (R)-아미노-(4-히드록시페닐)아세트산 메틸 에스테르, 5-아미노레불린산, 4-아미노-니코틴산, 3-아미노페닐아세트산, 4-아미노페닐아세트산, 2-아미노-2-페닐부티르산, 4-(4-아미노페닐)부티르산, 2-(4-아미노페닐티오)아세트산, DL-α-아미노-2-티오펜아세트산, 5-아미노발레르산, 8-벤질 (S)-2-아미노옥탄디오에이트, 4-(아미노)-1-메틸피롤-2-카르복실산, 4-(아미노)테트라히드로티오피란-4-카르복실산 , (1R,3S,4S)-2-아자바이시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복실산 , L-아제티딘-2-카르복실산, 아제티딘-3-카르복실산, 4-(아미노)피페리딘-4-카르복실산, 디아미노아세트산, Inp-OH, (R)-Nip-OH, (S)-4-옥소피페리딘-2-카르복실산, 2-(4-피페라지노)-2-(4-플루오로페닐)아세트산, 2-(4-피페라지노)-2-페닐아세트산, 4-피페리딘아세트알데히드, 4-피페리딜아세트산, (-)-L-티오프롤린, Tle-OH, 3-피페리딘카르복실산, L-(+)-카나바닌, (±)-카르니틴, 클로람부실, 2,6-디아미노피멜산, 메조-2,3-디아미노석신산, 4-(Di메틸아미노)신남산, 4-(디메틸아미노)페닐아세트산, 에틸 (S)-N-Boc-피페리딘-3-카르복실레이트, 에틸 피페라지노아세테이트 , 4-[2-(아미노)에틸]피페라진-1-일아세트산, (R)-4-(아미노)-5-페닐펜탄산, (S)-아제티딘-2-카르복실산, 아제티딘-3-카르복실산, 구바신, Inp-OH, (R)-Nip-OH, DL-Nip-OH, 4-페닐-피페리딘-4-카르복실산, 1-피페라진아세트산, 4-피페리딘아세트산, (R)-피페리딘-2-카르복실산, (S)-피페리딘-2-카르복실산, (S)-1,2,3,4-테트라히드로노르하만-3-카르복실산, Tic-OH, D-Tic-OH, 이미노디아세트산, 인돌린-2-카르복실산, DL-키누레닌, L-아지리딘-2-카르복실레이트, 메틸 4-아미노부티레이트, (S)-2-피페라진카르복실산, 2-(1-피페라지닐)아세트산, (R)-(-)-3-피페리딘카르복실산, 2-피롤리돈-5-카르복실산, (R)-(+)-2-피롤리돈-5-카르복실산, (R)-1,2,3,4-테트라히드로-3-이소퀴놀린카르복실산, (S)-1,2,3,4-테트라히드로-3-이소퀴놀린카르복실산, L-4-티아졸릴리딘카르복실산, (4R)-(-)-2-티옥소-4-티아졸릴리딘카르복실산, 히드라지노아세트산 및 3,3′,5-트리아이오도-L-티로닌. 각각의 가능성은 별개의 실시형태를 나타낸다.

본 개시내용은 추가로 개선된 안정성 및 세포 투과성 특성을 갖는 단백질모방체 화합물을 포함하는 펩티드를 제공한다. 일부 실시형태는 서열번호 1 내지 31 중 임의의 것에 따른 펩티드를 포함하며, 여기서 펩티드 내의 펩티드 결합(-CO-NH-) 중 하나 이상은 예를 들어, N-메틸화된 아미드 결합(-N(CH₃)-CO-), 에스테르 결합 (-C(=O)-O-), 케토메틸렌 결합(-CO-CH₂-), 설피닐메틸렌 결합 (-S(=O)-CH₂-), α-아자 결합(-NH-N(R)-CO-)(여기서 R은 임의의 알킬(예를 들어, 메틸)임), 아민 결합(-CH₂-NH-), 설파이드 결합(-CH₂-S-), 에틸렌 결합(-CH₂-CH₂-), 히드록시에틸렌 결합(-CH(OH)-CH₂-), 티오아미드 결합(-CS-NH-), 올레핀계 이중 결합(-CH=CH-), 플루오린화된 올레핀계 이중 결합(-CF=CH-), 또는 레트로 아미드 결합(-NH-CO-), 펩티드 유도체(-N(R^x)-CH₂-CO-)(여기서 R^x는 탄소 원자 상에 자연적으로 존재하는 "노르말" 측쇄임)에 의해 치환될 수 있다. 이들 변형은 펩티드 쇄를 따르는 결합 중 임의의 것에서 그리고, 동시에 심지어 몇 개(2 내지 3개의) 결합에서 발생할 수 있다.

일부 실시형태의 펩티드는 바람직하게는 선형 형태로 이용되지만, 고리화가 펩티드 특성을 심각하게 방해하지 않는 경우 펩티드의 환식 형태가 또한 이용될 수 있고 실시형태로서 고려된다는 것이 이해될 것이다.

본 명세서에 기재된 펩티드의 크기 변이체가 구체적으로 고려된다. 예시적인 펩티드는 6 내지 50개의 아미노산으로 구성된다. 6 내지 50개의 아미노산의 모든 정수 하위범위(예를 들어, 7 내지 50개 aa, 8 내지 50개 aa, 9 내지 50개 aa, 6 내지 49개 aa, 6 내지 48개 aa, 7 내지 49개 aa 등)가 본 명세서의 속으로서 대해 구체적으로 고려되고; 모든 정수 값은 본 발명의 종으로서 고려된다. 예시적인 실시형태에서, 펩티드는 펩티드 결합을 통해서 연결된 적어도 7개 또는 8개의 아미노산을 포함한다. 예시적인 양태에서, 펩티드는 적어도 약 9개 아미노산 길이, 약 10개 아미노산 길이, 약 11개 아미노산 길이, 약 12개 아미노산 길이, 또는 약 13개 아미노산 길이이다. 예시적인 양태에서, 펩티드는 적어도 약 14개 아미노산 길이, 약 15개 아미노산 길이, 약 16개 아미노산 길이 또는 약 17개 아미노산 길이이다. 예시적인 양태에서, 펩티드는 적어도 약 18개 아미노산 길이, 약 19개 아미노산 길이, 또는 약 20개 아미노산 길이이다. 예시적인 양태에서, 펩티드는 약 50개 미만의 아미노산 길이, 약 40개 미만의 아미노산, 또는 약 30개 미만의 아미노산, 약 25개 미만의 아미노산 길이 또는 약 20개 미만의 아미노산 길이이다. 예시적인 양태에서, 펩티드는 약 8 내지 약 30개 아미노산 길이 또는 약 10 내지 약 30개 아미노산 길이이다. 예시적인 양태에서, 펩티드는 약 10 내지 약 15개 아미노산 길이, 약 14 내지 약 20개 아미노산 길이, 약 18 내지 약 30개 아미노산 길이, 또는 약 18 내지 약 26개 아미노산 길이이다. 예시적인 양태에서, 펩티드는 11 내지 13, 12 내지 13, 12 내지 14, 13 내지 14, 13 내지 15, 14 내지 15, 14 내지 16, 15 내지 16, 16 내지 18, 16 내지 19, 17 내지 19, 18 내지 19, 20 내지 22, 22 내지 24, 23 내지 24 또는 24 내지 25개 아미노산 길이이다. 일부 실시형태에서, 펩티드는 10량체, 11량체, 12량체, 13량체, 14량체, 15량체, 16량체, 17량체, 18량체, 19량체, 20량체, 21량체, 22량체, 23량체, 24량체, 25량체, 26량체, 27량체, 28량체, 29량체 또는 30량체이다.

일부 실시형태에 따르면, 본 명세서에 기재된 펩티드 또는 유사체 중 임의의 것을 포함하는 접합체는 반감기를 연장시키거나 세포 침투를 증가시키기 위해 모이어티에 접합된다. 예를 들어, 반감기 연장 모이어티는 펩티드 또는 단백질일 수 있고 접합체는 융합 단백질 또는 키메라 폴리펩티드이다. 대안적으로, 반감기 연장 모이어티는 중합체, 예를 들어, 폴리에틸렌 글리콜일 수 있다. 본 개시내용은 추가로, 본 명세서에 기재된 펩티드 및 유사체 중 임의의 것을 포함하는 이량체 및 다량체를 제공한다.

펩티드의 세포로의 투과도를 활동적으로 또는 수동적으로 촉진하거나 향상시키기 위한 당업계에 공지된 임의의 모이어티가 펩티드 코어와의 접합을 위해 사용될 수 있다. 비제한적인 예는 하기를 포함한다: 소수성 모이어티 예컨대, 지방산, 스테로이드 및 큰 부피의 방향족 또는 지방족 화합물; 세포-막 수용체 또는 캐리 어를 가질 수 있는 모이어티, 예컨대, 스테로이드, 비타민 및 당, 천연 및 비-자연 아미노산 및 수송체 펩티드. 바람직한 실시형태에 따르면, 소수성 모이어티는 지질 모이어티 또는 아미노산 모이어티이다. 투과도-향상 모이어티는 직접적으로 또는 스페이서 또는 링커를 통해 펩티드 모이어티의 임의의 위치에, 바람직하게는 펩티드 모이어티의 아미노 말단에 연결될 수 있다. 소수성 모이어티는 바람직하게는 지질 모이어티 또는 아미노산 모이어티를 포함할 수 있다. 특정 실시형태에 따르면 소수성 모이어티는 하기로 구성된 군으로부터 선택되고: 인지질, 스테로이드, 스핑고신, 세라미드, 옥틸-글리신, 2-시클로헥실알라닌, 벤졸릴페닐알라닌, 프로피오노일(C₃); 부타노일(C₄); 펜타노일(C₅); 카프로일(C₆); 헵타노일(C₇); 카프릴로일(C₈); 노나노일(C₉); 카프릴(C₁₀); 운데카노일(C₁₁); 라우로일(C₁₂); 트리데카노일(C₁₃); 미리스토일(C₁₄); 펜타데카노일(C₁₅); 팔미토일(C₁₆); 프타노일((CH₃)₄); 헵타데카노일(C₁₆); 스테아로일(C₁₈); 노나데카노일(C₁₉); 아라키도일(C₂₀); 헤네이코사노일(C₂₁); 베헤노일(C₂₂); 트루시사노일(C₂₃); 및 리그로세로일(C₂₄); 여기서 상기 소수성 모이어티는 아미드 결합, 설프히드릴, 아민, 알코올, 페놀계 기, 또는 탄소-탄소 결합을 갖는 상기 키메라성 폴리펩티드에 부착된다. 사용될 수 있는 지질 모이어티의 다른 예는 하기를 포함한다: Lipofectamine, Transfectace, Transfectam, Cytofectin, DMRIE, DLRIE, GAP-DLRIE, DOTAP, DOPE, DMEAP, DODMP, DOPC, DDAB, DOSPA, EDLPC, EDMPC, DPH, TMADPH, CTAB, 라이실-PE, DC-Cho, -알라닐 콜레스테롤; DCGS, DPPES, DCPE, DMAP, DMPE, DOGS, DOHME, DPEPC, Pluronic, Tween, BRIJ, 플라즈말로겐, 포스파티딜에탄올아민, 포스파티딜콜린, 글리세롤-3-에틸 포스파티딜콜린, 디메틸 암모늄 프로판, 트리메틸 암모늄 프로판, 디에틸암모늄 프로판, 트리에틸암모늄 프로판, 디메틸디옥타데실암모늄 브로마이드, 스핑고지질, 스핑고미엘린, 라이소지질, 당지질, 설파티드, 글리코스핑고지질, 콜레스테롤, 콜레스테롤 에스테르, 콜레스테롤 염, 오일, N-석시닐디올레오일포스파티딜에탄올 아민, 1,2-디올레오일-sn-글리세롤, 1,3-디팔미토일-2-석시닐글리세롤, 1,2-디팔미토일-sn-3-석시닐글리세롤, 1-헥사데실-2-팔미토일글리세로포스파티딜에탄올아민, 팔미토일호모시스테인, N,N'-비스(도데실아미노카르보닐메틸렌)-N,N'-비스((-N,N,N-트리메틸암모늄에틸-아미노카르보닐메틸렌)에틸렌디아민 테트라아이오다이드; N,N"-비스(헥사데실아미노카르보닐메틸렌)-N,N',N"-트리스((-N,N,N-트리메틸암모늄-에틸아미노카르보닐메틸렌디에틸렌트리 아민 헥사아이오다이드; N,N'- 비스(도데실아미노카르보닐메틸렌)-N,N"-비스((-N,N,N-트리메틸암모늄 에틸아미노카르보닐메틸렌)시클로헥실렌-1,4-디아민 테트라아이오다이드; 1,7,7-테트라-((-N,N,N,N-테트라메틸암모늄에틸 아미노-카르보닐메틸렌)-3-헥사데실아미노카르보닐-메틸렌-1,3,7-트리아아자헵탄 헵타아이오다이드; N,N,N',N'-테트라((-N,N,N-트리메틸암모늄-에틸아미노카르보닐메틸렌)-N'- (1,2-디올레오일글리세로-3-포스포에탄올아미노 카르보닐메틸렌)디에틸렌트리아민 테트라아이오다이드; 디올레오일포스파티딜에탄올아민, 지방산, 라이소지질, 포스파티딜콜린, 포스파티딜에탄올아민, 포스파티딜세린, 포스파티딜글리세롤, 포스파티딜이노시톨, 스핑고지질, 당지질, 글루코리피드, 설파티드, 글리코스핑고지질, 포스파티드산, 팔미트산, 스테아르산, 아라키돈산, 올레산, 중합체를 보유하는 지질, 설폰화된 당류 보유 지질, 콜레스테롤, 토코페롤 헤미석시네이트, 에테르-연결된 지방산을 갖는 지질, 에스테르-연결된 지방산을 갖는 지질, 중합된 지질, 디아세틸 포스페이트, 스테아릴아민, 카디올리핀, 6-8개의 탄소 길이를 갖는 지방산을 갖는 인지질, 비대칭 아실 쇄를 갖는 인지질, 6-(5-콜레스텐-3b-일옥시)-1-티오-b-D-갈락토피라노시드, 디갈락토실디글리세라이드, 6-(5-콜레스텐-3b-일옥시)헥실-6-아미노- 6-데옥시-1-티오-b-D-갈락토피라노시드, 6-(5-콜레스텐-3b-일옥시)헥실-6-아미노-6-데옥실-1-티오-a-D-만노피라노시드, 12-(((7'-디에틸아미노-쿠마린-3-일)카르보닐)메틸아미노)-옥타데칸산; N-[12-(((7'-디에틸아미노쿠마린-3-일)카르보닐)메틸-아미노) 옥타데카노일]-2-아미노팔미트산; 콜레스테릴)4'-트리메틸-암모니오)부타노에이트; N-석시닐디올레오일-포스파티딜에탄올아민; 1,2-디올레오일-sn-글리세롤; 1,2-디팔미토일-3-석시닐-글리세롤; 1,3-디팔미토일-2-석시닐글리세롤, 1-헥사데실-2-팔미토일글리세로-포스포에탄올아민, 및 팔미토일호모시스테인. 5-Fam은 5-카르복시플루오레세인이다.

본 명세서에서 개시된 펩티드는 전구약물로서 기능하기 위해 접합을 야기하는 하나 이상의 모이어티에 접합될 수 있다. 예를 들어, 미국 특허 제8969288호 및 미국 특허출원공개 20160058881호에 기재된 N-아미노산 관련된 모이어티는 본 명세서에서 개시된 펩티드에 접합될 수 있고, 이러한 접합체는 본 개시내용에 포함된다.

일부 실시형태에 따르면 펩티드는 (공유적으로 또는 비-공유적으로) 침투제(penetrating agent)에 부착될 수 있다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이 어구 "침투제"는 세포막을 가로질러 부착된 펩티드 중 임의의 것의 전좌를 향상시키는 작용제를 지칭한다. 전형적으로, 펩티드 기반 침투제는 높은 상대 존재비의 양으로 하전된 아미노산, 예컨대, 라이신 또는 아르기닌을 함유하는 아미노산 조성물을 가지거나, 또는 극성/하전된 아미노산 및 비극성 소수성 아미노산의 교대 패턴을 함유하는 서열을 갖는다. 비-제한적인 예에 의해, 세포 침투 펩티드(CPP: cell penetrating peptide) 서열이 세포내 침투를 향상시키기 위해 사용될 수 있다. CPP는 HIV TAT 단백질, 예컨대, YARAAARQARA(서열번호 32), YGRKKRR(서열번호 33), YGRKKRRQRRR(서열번호 34), 또는 RRQRR(서열번호 35)의 단백질 형질도입 도메인(PTD)의 짧은 버전 및 긴 버전을 포함할 수 있다. 그러나, 본 개시내용은 이렇게 제한되지 않고, 임의의 적합한 침투제가 당업자에 의해 공지된 바와 같이 사용될 수 있다. 세포 침투를 향상시키는 또 다른 방법은 N-말단 미리스토일화를 통해서이다. 이러한 단백질 변형에서, (미리스트산으로부터 유래된) 미리스토일 기는 아미드 결합을 통해 N-말단 펩티드의 아미노산의 알파-아미노기에 공유 부착된다.

일부 실시형태에 따르면 펩티드는 지속 기간 향상 모이어티를 포함하도록 변형된다. 지속 기간 향상 모이어티는 수용성 중합체 또는 장쇄 지방족 기일 수 있다. 일부 실시형태에서, 복수의 지속 기간 향상 모이어티가 펩티드에 부착될 수 있고, 이 경우에 각각의 지속 기간 향상 모이어티에 대한 각각의 링커는 본 명세서에 기재된 링커로부터 독립적으로 선택된다.

일부 실시형태에 따르면 펩티드의 아미노 말단은 변형되고, 예를 들어 아실화된다. 추가 실시형태에 따르면, 카르복시 말단은 변형되고, 예를 들어, 아실화, 아미드화, 환원 또는 에스테르화될 수 있다. 일부 실시형태에 따르면, 펩티드는 아실화된 아미노산(예를 들어, 비-암호화된 아실화된 아미노산(예를 들어, 자연 발생 아미노산에 대해 비-천연인 아실 기를 포함하는 아미노산))을 포함한다. 일 실시형태에 따르면, 펩티드는 순환 중 반감기를 연장시키고/시키거나 작용의 개시를 지연하고/하거나 작용의 기간을 연장하고/하거나 프로테아제에 대한 내성을 개선하기 위해 에스테르, 티오에스테르, 또는 아미드 연결을 통해 펩티드에 부착된 아실 기를 포함한다. 아실화는 펩티드(예를 들어, C-말단의 아미노산) 내의 임의의 위치에서 수행될 수 있되, 단, 활성은, 향상되지 않으면, 유지된다. 펩티드는 일부 실시형태에서 친수성 모이어티가 연결되는 동일한 아미노산 위치에서, 또는 상이한 아미노산 위치에서 아실화될 수 있다. 아실 기는 스페이서를 통해 펩티드의 아미노산에 직접적으로, 또는 스페이서를 통해서 펩티드의 아미노산에 간접적으로 공유 연결될 수 있고, 여기서 스페이서는 펩티드의 아미노산과 아실 기 사이에 배치된다.

특정 양태에서, 펩티드는 펩티드의 아미노산의 측쇄의 아민, 히드록실, 또는 티올의 직접적인 아실화에 의해 아실 기를 포함하도록 변형된다. 이와 관련하여, 아실화된 펩티드는 본 명세서에 기재된 아미노산 변형 중 하나 이상을 포함하는 서열번호 1 내지 31 또는 이의 변형된 아미노산 서열을 포함할 수 있다.

일부 실시형태에서, 펩티드는 유사체와 아실 기 사이의 스페이서를 포함한다. 일부 실시형태에서, 펩티드는 아실 기에 공유 결합되는 스페이서에 공유 결합된다. 일부 실시형태에서, 스페이서는 측쇄 아민, 히드록실, 또는 티올을 포함하는 아미노산, 또는 측쇄 아민, 히드록실, 또는 티올을 포함하는 아미노산을 포함하는 디펩티드 또는 트리펩티드이다. 스페이서가 부착된 아미노산은 스페이서에 대한 연결을 허용하는 모이어티를 포함하는 임의의 아미노산(예를 들어, 단독으로 또는 이중으로 α-치환된 아미노산)일 수 있다. 예를 들어, 측쇄 NH₂, -OH, 또는 -COOH를 포함하는 아미노산(예를 들어, Lys, Orn, Ser, Asp, 또는 Glu)이 적합하다. 일부 실시형태에서, 스페이서는 측쇄 아민, 히드록실, 또는 티올을 포함하는 아미노산, 또는 측쇄 아민, 히드록실, 또는 티올을 포함하는 아미노산을 포함하는 디펩티드 또는 트리펩티드이다. 아실화가 스페이서의 아민 기를 통해 일어날 때, 아실화는 아미노산의 알파 아민 또는 측쇄 아민을 통해 발생할 수 있다. 알파 아민이 아실화되는 사례에서, 스페이서의 아미노산은 임의의 아미노산일 수 있다. 예를 들어, 스페이서의 아미노산은 소수성 아미노산, 예를 들어, Gly, la, Val, Leu, Ile, Trp, Met, Phe, Tyr, 6-아미노 헥산산, 5-아미노발레르산, 7-아미노헵탄산, 및 8-아미노옥탄산일 수 있다. 대안적으로, 스페이서의 아미노산은 산성 잔기, 예를 들어, Asp, Glu, 호모글루탐산, 호모시스테인산, 시스테인산, 감마-글루탐산일 수 있다. 스페이서의 아미노산의 측쇄 아민이 아실화되는 사례에서, 스페이서의 아미노산은 측쇄 아민을 포함하는 아미노산이다. 이러한 사례에서, 아실화될 스페이서의 아미노산의 알파 아민 및 측쇄 아민 둘 모두에 대해 가능하여, 펩티드는 디아실화된다. 실시형태는 이러한 디아실화된 분자를 포함한다. 아실화가 스페이서의 히드록실 기를 통해 일어날 때, 아미노산 또는 디펩티드 또는 트리펩티드의 아미노산 중 하나는 Ser일 수 있다. 아실화가 스페이서의 티올기를 통해 일어날 때, 아미노산 또는 디펩티드 또는 트리펩티드의 아미노산 중 하나는 Cys일 수 있다. 일부 실시형태에서, 스페이서는 친수성 이작용성 스페이서이다. 특정 실시형태에서, 친수성 이작용성 스페이서는 2개 이상의 반응성 기, 예를 들어, 아민, 히드록실, 티올, 및 카르복실기 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다. 특정 실시형태에서, 친수성 이작용성 스페이서는 히드록실 기 및 카르복실레이트를 포함한다. 다른 실시형태에서, 친수성 이작용성 스페이서는 아민 기 및 카르복실레이트를 포함한다. 다른 실시형태에서, 친수성 이작용성 스페이서는 티올 기 및 카르복실레이트를 포함한다.

특정 실시형태에서, 스페이서는 아미노 폴리(알킬옥시)카르복실레이트를 포함한다. 이와 관련하여, 스페이서는, 예를 들어, NH₂(CH₂CH₂O)_n(CH₂)_mCOOH, 식 중, m은 1 내지 6의 임의의 정수이고, n은 2 내지 12의 임의의 정수임, 예를 들어, 8-아미노-3,6-디옥사옥탄산을 포함할 수 있고, 이것은 Peptides International, Inc.(미국 켄터키주 루이스빌 소재)로부터 상업적으로 입수 가능하다. 일부 실시형태에서, 스페이서는 소수성 이작용성 스페이서이다. 소수성 이작용성 스페이서는 당업계에 공지되어 있다. 예를 들어, 전문이 참조에 의해 포함된 문헌[Bioconjugate Techniques, G. T. Hermanson (Academic Press, San Diego, Calif., 1996)] 참고. 특정 실시형태에서, 소수성 이작용성 스페이서는 2개 이상의 반응성 기, 예를 들어, 아민, 히드록실, 티올, 및 카르복실기 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다. 특정 실시형태에서, 소수성 이작용성 스페이서는 히드록실 기 및 카르복실레이트를 포함한다. 다른 실시형태에서, 소수성 이작용성 스페이서는 아민 기 및 카르복실레이트를 포함한다. 다른 실시형태에서, 소수성 이작용성 스페이서는 티올 기 및 카르복실레이트를 포함한다. 카르복실레이트 및 히드록실 기 또는 티올 기를 포함하는 적합한 소수성 이작용성 스페이서는 당업계에 공지되어 있고, 예를 들어, 8-히드록시옥탄산 및 8-머캅토옥탄산을 포함한다. 일부 실시형태에서, 이작용성 스페이서는 카르복실레이트 기들 사이의 1 내지 7개의 탄소 원자의 비분지형 메틸렌을 포함하는 디카르복실산이 아니다. 일부 실시형태에서, 이작용성 스페이서는 카르복실레이트 기들 사이의 1 내지 7개의 탄소 원자의 비분지형 메틸렌을 포함하는 디카르복실산이다. 스페이서(예를 들어, 아미노산, 디펩티드, 트리펩티드, 친수성 이작용성 스페이서, 또는 소수성 이작용성 스페이서)는 특정 실시형태에서 3 내지 10개의 원자(예를 들어, 6 내지 10개의 원자(예를 들어, 6, 7, 8, 9, 또는 10개의 원자)의 길이이다. 더 많은 특정 실시형태에서, 스페이서는 약 3 내지 10개의 원자(예를 들어, 6 내지 10개의 원자)의 길이이고, 아실 기는 C12 내지 C18 지방 아실 기, 예를 들어, C14 지방 아실 기, C16 지방 아실 기여서, 총 스페이서 및 아실 기의 길이는 14 내지 28개의 원자이고, 예를 들어, 약 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 또는 28개의 원자이다. 일부 실시형태에서, 스페이서 및 아실 기의 길이는 17 내지 28개(예를 들어, 19 내지 26, 19 내지 21개) 원자이다. 전술한 특정 실시형태에 따르면, 이작용성 스페이서는 3 내지 10개의 원자의 길이인 아미노산 골격을 포함하는 합성 또는 자연 발생 아미노산(본 명세서에서 기재된 것들 중 임의의 것을 비제한적으로 포함함)일 수 있다(예를 들어, 6-아미노 헥산산, 5-아미노발레르산, 7-아미노헵탄산, 및 8-아미노옥탄산). 대안적으로, 스페이서는 3 내지 10개의 원자(예를 들어, 6 내지 10개의 원자)의 길이인 펩티드 골격을 갖는 디펩티드 또는 트리펩티드 스페이서일 수 있다. 각각의 디펩티드 또는 트리펩티드의 아미노산 스페이서는 디펩티드 또는 트리펩티드의 다른 아미노산(들)과 동일하거나 또는 상이할 수 있고, 예를 들어, 자연 발생 아미노산(Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Arg, Ser, Thr, Val, Trp, Tyr)의 D 또는 L 이성질체, 또는 하기로 구성된 군으로부터 선택된 비-자연 발생 또는 비-암호화된 아미노산의 임의의 D 또는 L 이성질체 중 임의의 것을 포함하는 자연 발생 또는 암호화된 및/또는 비-암호화된 또는 비-자연 발생 아미노산으로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택될 수 있다: β-알라닌(β-Ala), N-α-메틸-알라닌(Me-Ala), 아미노부티르산(Abu), γ-아미노부티르산(7-Abu), 아미노헥산산(ε-Ahx), 아미노이소부티르산(Aib), 아미노메틸피롤 카르복실산, 아미노피페리딘카르복실산, 아미노 세린(Ams), 아미노테트라히드로피란-4-카르복실산, 아르기닌 N-메톡시-N-메틸 아미드, β-아스파르트산(β-Asp), 아제티딘 카르복실산, 3-(2-벤조티아졸릴)알라닌, α-tert-부틸글리신, 2-아미노-5-우레이도-n-발레르산(시트룰린, Cit), β-시클로헥실알라닌(Cha), 아세트아미도메틸-시스테인, 디아미노부탄산(Dab), 디아미노 프로피온산(Dpr), 디히드록시페닐알라닌(DOPA), 디메틸티오졸리딘(DMTA), γ-글루탐산(γ-Glu), 호모세린(Hse), 히드록시프롤린(Hyp), 이소류신 N-메톡시-N-메틸 아미드, 메틸-이소류신(MeIle), 이소니페코트산(Isn), 메틸-류신(MeLeu), 메틸-라이신, 디메틸-라이신, 트리메틸-라이신, 메타노프롤린, 메티오닌-설폭사이드 (Met(O)), 메티오닌-설폰(Met(O₂)), 노르류신(Nle), 메틸-노르류신(Me-Nle), 노르발린(Nva), 오르니틴(Orn), 파라-아미노벤조산(PABA), 페니실아민(Pen), 메틸페닐알라닌(MePhe), 4-클로로페닐알라닌(Phe(4-Cl)), 4-플루오로페닐알라닌(Phe(4-F)), 4-니트로페닐알라닌(Phe(4-NO₂)), 4-시아노페닐알라닌((Phe(4-CN)), 페닐글리신(Phg), 피페리디닐알라닌, 피페리디닐글리신, 3,4-데히드로프롤린, 피롤리디닐알라닌, 사르코신(Sar), 셀레시노시스테인(Sec), O-벤질-포스포세린, 4-아미노-3-히드록시-6-메틸헵탄산(Sta), 4-아미노- 5-시클로헥실-3-히드록시펜탄산(ACHPA), 4-아미노-3-히드록시-5-페닐펜탄산(AHPPA), 1,2,3,4,-테트라히드로-이소퀴놀린-3-카르복실산(Tic), 테트라히드로피란글리신, 티에닐알라닌(Thi), O-벤질-포스포티로신, O-포스포티로신, 메톡시티로신, 에톡시티로신, O-(비스-디메틸아미노-포스포노)-티로신, 티로신 설페이트 테트라부틸아민, 메틸-발린(MeVal), 및 알킬화된 3-머캅토프로피온산. 일부 실시형태에서, 스페이서는 전체적인 음전하를 포함하고, 예를 들어, 1 또는 2개의 음성-하전된 아미노산을 포함한다. 일부 실시형태에서, 디펩티드는 일반적인 구조 A-B의 디펩타이트 중 임의의 것이 아니되, A는 Gly, Gln, la, Arg, Asp, Asn, Ile, Leu, Val, Phe, 및 Pro로 이루어진 군으로부터 선택되고, B는 Lys, His, Trp 로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시형태에서, 디펩티드 스페이서는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다: Ala-Ala, β-Ala-β-Ala, Leu-Leu, Pro-Pro, γ-아미노부티르산-γ-아미노부티르산, Glu-Glu, 및 γ-Glu-γ-Glu.

아민, 히드록실, 및 티올을 통한 펩티드 아실화의 적합한 방법은 당업계에 공지되어 있다. 예를 들어, 문헌[Miller, Biochem Biophys Res Commun 218: 377-382 (1996); Shimohigashi and Stammer, Int J Pept Protein Res 19: 54-62 (1982)]; 및 문헌[Previero et al., Biochim Biophys Acta 263: 7-13 (1972) (for methods of acylating through a hydroxyl)]; 및 문헌[San and Silvius, J Pept Res 66: 169-180 (2005) (for methods of acylating through a thiol); Bioconjugate Chem. "Chemical Modifications of Proteins: History and Applications" pages 1, 2-12 (1990)]; 문헌[Hashimoto et al., Pharmaceutical Res. "Synthesis of Palmitoyl Derivatives of Insulin and their Biological Activity" Vol. 6, No: 2 pp. 171-176 (1989)]을 참고하기 바란다. 아실화된 아미노산의 아실 기는 임의의 크기, 예를 들어, 임의의 길이의 탄소 쇄일 수 있고, 선형 또는 분지형일 수 있다. 일부 특정 실시형태에서, 아실 기는 C4 내지 C30 지방산이다. 예를 들어, 아실 기는 C₄ 지방산, C₆ 지방산, C₈ 지방산, C₁₀ 지방산, C₁₂ 지방산, C₁₄ 지방산, C₁₆ 지방산, C₁₈ 지방산, C₂₀ 지방산, C₂₂ 지방산, C₂₄ 지방산, C₂₆ 지방산, C₂₈ 지방산 또는 C₃₀ 지방산 중 임의의 것일 수 있다. 일부 실시형태에서, 아실 기는 C₈ 내지 C₂₀ 지방산, 예를 들어, C₁₄ 지방산 또는 C₁₆ 지방산이다. 대안적인 실시형태에서, 아실 기는 담즙산이다. 담즙산은 콜산, 케노데옥시콜산, 데옥시콜산, 리토콜산, 타우로콜산, 글리코콜산, 및 콜레스테롤 산을 비제한적으로 포함하는 임의의 적합한 담즙산일 수 있다. 일부 실시형태에서, 펩티드는 펩티드 상의 장쇄 알칸의 아실화에 의해 아실화된 아미노산을 포함한다. 특정 양태에서, 장쇄 알칸은 펩티드의 카르복실기, 또는 이의 활성화된 형태와 반응하는 아민, 히드록실, 또는 티올 기(예를 들어, 옥타데실아민, 테트라데칸올, 및 헥사데칸티올)를 포함한다. 펩티드의 카르복실기, 또는 이의 활성화된 형태는 펩티드의 아미노산(예를 들어, 글루탐산, 아스파르트산)의 측쇄의 일부일 수 있거나 또는 유사체 골격의 일부일 수 있다. 특정 실시형태에서, 펩티드는 펩티드에 부착된 펩티드에 의한 장쇄 알칸의 아실화에 의해 아실 기를 포함하도록 변형된다. 특정 양태에서, 장쇄 알칸은 스페이서의 카르복실기, 또는 이의 활성화된 형태 와 반응하는 아민, 히드록실, 또는 티올 기를 포함한다. 카르복실기 또는 이의 활성화된 형태를 포함하는 적합한 스페이서는, 본 명세서에 기재되어 있고, 예를 들어, 이작용성 스페이서, 예를 들어, 아미노산, 디펩티드, 트리펩티드, 친수성 이작용성 스페이서 및 소수성 이작용성 스페이서를 포함한다.

본 명세서에서 사용된 바와 같이, 카르복실기의 용어 "활성화된 형태"는 일반식 R(C=O)X를 갖는 카르복실기를 지칭하며, 여기서 X는 이탈기이고, R은 펩티드 또는 스페이서이다. 예를 들어, 활성화된 형태의 카르복실기는, 비제한적으로, 아실 염화물, 무수물, 및 에스테르를 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서, 활성화된 카르복실기는 N-히드록시석신이미드 에스테르(NHS) 이탈기를 갖는 에스테르이다.

장쇄 알칸이 펩티드 또는 스페이서에 의해 아실화되는 이들 양태에 관해서, 장쇄 알칸은 임의의 크기일 수 있고, 탄소 쇄의 임의의 길이를 포함할 수 있다. 장쇄 알칸은 선형 또는 분지형일 수 있다. 특정 양태에서, 장쇄 알칸은 C4 내지 C30 알칸이다. 예를 들어, 장쇄 알칸은 C₄ 알칸, C₆ 알칸, C₈ 알칸, C₁₀ 알칸, C₁₂ 알칸, C₁₄ 알칸, C₁₆ 알칸, C₁₈ 알칸, C₂₀ 알칸, C₂₂ 알칸, C₂₄ 알칸, C₂₆ 알칸, C₂₈ 알칸 또는 C₃₀ 알칸 중 임의의 것일 수 있다. 일부 실시형태에서, 장쇄 알칸은 C₈ 내지 C₂₀ 알칸, 예를 들어, C₁₄ 알칸, C₁₆ 알칸, 또는 C₁₈ 알칸을 포함한다.

또한, 일부 실시형태에서, 펩티드의 아민, 히드록실, 또는 티올 기는 콜레스테롤 산으로 아실화된다. 특정 실시형태에서, 펩티드는 알킬화된 데스-아미노 Cys 스페이서, 즉, 알킬화된 3-머캅토프로피온산 스페이서를 통해 콜레스테롤산에 연결된다. 알킬화된 데스-아미노 Cys 스페이서는 be, 예를 들어, 도데카에틸렌 글리콜 모이어티를 포함하는 데스-아미노-Cys 스페이서일 수 있다.

본 명세서에 기재된 펩티드는 추가로 친수성 모이어티를 포함하도록 변형될 수 있다. 일부 특정 실시형태에서, 친수성 모이어티는 폴리에틸렌 글리콜(PEG) 쇄를 포함할 수 있다. 친수성 모이어티의 혼입은 임의의 적당한 수단, 예컨대, 본 명세서에서 기재된 방법 중 임의의 것을 통해 달성될 수 있다. 이와 관련하여, 아실화된 펩티드는 본 명세서에 기재된 변형 중 임의의 것을 포함하는 서열번호 1 내지 31중 임의의 것일 수 있고, 여기서 아미노산 중 적어도 하나는 아실 기를 포함하고, 아미노산 중 적어도 하나는 친수성 모이어티(예를 들어, PEG)에 공유 결합된다. 일부 실시형태에서, 아실 기는 Cys, Lys, Orn, 호모-Cys, 또는 Ac-Phe를 포함하는 스페이서를 통해 부착되고, 그리고 친수성 모이어티는 Cys 잔기에서 혼입된다.

대안적으로, 펩티드는 스페이서를 포함할 수 있고, 여기서 스페이서는 친수성 모이어티를 포함하도록 아실화 및 변형 둘 모두가 된다. 적합한 스페이서의 비제한적인 예는 Cys, Lys, Orn, 호모-Cys 및 Ac-Phe로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 아미노산을 포함하는 스페이서를 포함한다.

일부 실시형태에 따르면, 펩티드는 알킬화된 아미노산(예를 들어, 비-암호화된 알킬화된 아미노산(예를 들어, 자연 발생 아미노산에 대해 비-천연인 알킬기를 포함하는 아미노산))을 포함한다. 알킬화는 아미노산 위치 중 임의의 것을 비제한적으로 포함하는 아실화의 부위로서 본 명세서에 기재된 위치 중 임의의 것을 포함하는 펩티드 내의 임의의 위치에서, C-말단 연장 내의 위치, 또는 C-말단에서 수행될 수 있고, 단, 생물학적 활성은 유지된다. 알킬 기는 스페이서를 통해 펩티드의 아미노산에 직접적으로, 또는 스페이서를 통해서 펩티드의 아미노산에 간접적으로 공유 연결될 수 있고, 여기서 스페이서는 펩티드의 아미노산과 알킬 기 사이에 배치된다. 펩티드는 친수성 모이어티가 연결되는 동일한 아미노산 위치에서, 또는 상이한 아미노산 위치에서 알킬화될 수 있다. 특정 양태에서, 펩티드는 펩티드의 아미노산의 측쇄의 아민, 히드록실, 또는 티올의 직접적인 알킬화에 의해 알킬 기를 포함하도록 변형된다. 이와 관련하여, 알킬화된 펩티드는 측쇄 아민, 히드록실, 또는 티올을 포함하는 임의의 아미노산으로 변형된 아미노산 중 적어도 하나를 갖는 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 또 다른 실시형태에서, 측쇄 아민, 히드록실, 또는 티올을 포함하는 아미노산은 이치환된 아미노산이다. 일부 실시형태에서, 알킬화된 펩티드는 펩티드와 알킬 기 사이의 스페이서를 포함한다. 일부 실시형태에서, 펩티드는, 알킬 기에 공유 결합되는 스페이서에 공유 결합된다. 일부 예시적인 실시형태에서, 펩티드는, 스페이서가 아미노산의 측쇄에 부착되는 스페이서의 아민, 히드록실, 또는 티올의 알킬화에 의해 알킬 기를 포함하도록 변형된다. 스페이서가 부착된 아미노산은 스페이서에 대한 연결을 허용하는 모이어티를 포함하는 임의의 아미노산일 수 있다. 예를 들어, 측쇄 NH₂, -OH, 또는 -COOH를 포함하는 아미노산(예를 들어, Lys, Orn, Ser, Asp, 또는 Glu)이 적합하다. 일부 실시형태에서, 스페이서는 측쇄 아민, 히드록실, 또는 티올을 포함하는 아미노산, 또는 측쇄 아민, 히드록실, 또는 티올을 포함하는 아미노산을 포함하는 디펩티드 또는 트리펩티드이다. 알킬화가 스페이서의 아민 기를 통해 일어날 때, 알킬화는 아미노산의 알파 아민 또는 측쇄 아민을 통해 발생할 수 있다. 알파 아민이 알킬화되는 사례에서, 스페이서의 아미노산은 임의의 아미노산일 수 있다. 예를 들어, 스페이서의 아미노산은 소수성 아미노산, 예를 들어, Gly, la, Val, Leu, Ile, Trp, Met, Phe, Tyr, 6-아미노 헥산산, 5-아미노발레르산, 7-아미노헵탄산, 및 8-아미노옥탄산일 수 있다. 대안적으로, 스페이서의 아미노산은 산성 잔기, 예를 들어, Asp 및 Glu일 수 있되, 단 알킬화는 산성 잔기의 알파 아민에서 일어난다. 스페이서의 아미노산의 측쇄 아민이 알킬화되는 사례에서, 스페이서의 아미노산은 측쇄 아민, 예를 들어, 화학식 I의 아미노산을 포함하는 아미노산(예를 들어, Lys 또는 Orn)이다. 이러한 사례에서, 알킬화될 스페이서의 아미노산의 알파 아민 및 측쇄 아민 둘 모두에 대해 가능하여, 펩티드는 디알킬화된다. 실시형태는 이러한 디알킬화된 분자를 포함한다. 알킬화가 스페이서의 히드록실 기를 통해 일어날 때, 아미노산은 Ser일 수 있다. 알킬화가 스페이서의 티올 기를 통해 일어날 때, 아미노산은 Cys일 수 있다. 일부 실시형태에서, 스페이서는 친수성 이작용성 스페이서이다. 특정 실시형태에서, 친수성 이작용성 스페이서는 2개 이상의 반응성 기, 예를 들어, 아민, 히드록실, 티올, 및 카르복실기 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다. 특정 실시형태에서, 친수성 이작용성 스페이서는 히드록실 기 및 카르복실레이트를 포함한다. 다른 실시형태에서, 친수성 이작용성 스페이서는 아민 기 및 카르복실레이트를 포함한다. 다른 실시형태에서, 친수성 이작용성 스페이서는 티올 기 및 카르복실레이트를 포함한다. 특정 실시형태에서, 스페이서는 아미노 폴리(알킬옥시)카르복실레이트를 포함한다. 이와 관련하여, 스페이서는, 예를 들어, NH₂(CH₂CH₂O)_n(CH₂)_mCOOH(식 중, m은 1 내지 6의 임의의 정수이고, n은 2 내지 12의 임의의 정수임), 예를 들어, 8-아미노-3,6-디옥사옥탄산을 포함할 수 있고, 이것은 Peptides International, Inc.(미국 켄터키주 루이스빌 소재)로부터 상업적으로 입수 가능하다. 카르복실레이트 및 히드록실 기 또는 티올 기를 포함하는 적합한 소수성 이작용성 스페이서는 당업계에 공지되어 있고, 예를 들어, 8-히드록시옥탄산 및 8-머캅토옥탄산을 포함한다. 스페이서(예를 들어, 아미노산, 디펩티드, 트리펩티드, 친수성 이작용성 스페이서, 또는 소수성 이작용성 스페이서)는 특정 실시형태에서 3 내지 10개의 원자(예를 들어, 6 내지 10개의 원자(예를 들어, 6, 7, 8, 9, 또는 10개의 원자)의 길이이다. 더 많은 특정 실시형태에서, 스페이서는 약 3 내지 10개의 원자(예를 들어, 6 내지 10개의 원자)의 길이이고, 알킬 기는 C₁₂ 내지 C₁₈ 알킬 기, 예를 들어, C₁₄ 지방 알킬, C₁₆ 알킬 기여서, 총 스페이서 및 알킬 기의 길이는 14 내지 28개의 원자이고, 예를 들어, 약 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 또는 28개의 원자이다. 일부 실시형태에서, 스페이서 및 알킬 기의 길이는 17 내지 28개(예를 들어, 19 내지 26, 19 내지 21개) 원자이다. 전술한 특정 실시형태에 따르면, 이작용성 스페이서는 3 내지 10개의 원자의 길이인 아미노산 골격을 포함하는 합성 또는 비-자연 발생 또는 비-암호화된 아미노산일 수 있다(예를 들어, 6-아미노 헥산산, 5-아미노발레르산, 7-아미노헵탄산, 및 8-아미노옥탄산). 대안적으로, 스페이서는 3 내지 10개의 원자(예를 들어, 6 내지 10개의 원자)의 길이인 펩티드 골격을 갖는 디펩티드 또는 트리펩티드 스페이서일 수 있다. 디펩티드 또는 트리펩티드 스페이서는 자연-발생 또는 암호화 및/또는 비-암호화 또는 비-자연 발생 아미노산, 예를 들어, 본 명세서에 교시된 것 중 임의의 것으로 구성될 수 있다. 일부 실시형태에서, 스페이서는 전체적인 음전하를 포함하고, 예를 들어, 1 또는 2개의 음성-하전된 아미노산을 포함한다. 일부 실시형태에서, 디펩티드 스페이서는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다: Ala-Ala, β-Ala-β-Ala, Leu-Leu, Pro-Pro, γ-아미노부티르산-γ-아미노부티르산, 및 γ-Glu-γ-Glu. 아민, 히드록실, 및 티올을 통한 펩티드 알킬화의 적합한 방법은 당업계에 공지되어 있다. 예를 들어, 윌리암슨 에테르 합성이 사용되어 펩티드의 히드록실 기와 알킬 기 사이의 에스테르 연결을 형성할 수 있다. 또한, 펩티드와 알킬 할라이드와의 친핵성 치환 반응은 에테르, 티오에테르, 또는 아미노 연결 중 임의의 것을 초래할 수 있다. 알킬화된 펩티드의 알킬 기는 임의의 크기, 예를 들어, 임의의 길이의 탄소 쇄일 수 있고, 선형 또는 분지형일 수 있다. 일부 실시형태에서, 알킬 기는 C₄ 내지 C₃₀ 알킬이다. 예를 들어, 알킬 기는 C₄ 알킬, C₆ 알킬, C₈ 알킬, C₁₀ 알킬, C₁₂ 알킬, C₁₄ 알킬, C₁₆ 알킬, C₁₈ 알킬, C₂₀ 알킬, C₂₂ 알킬, C₂₄ 알킬, C₂₆ 알킬, C₂₈ 알킬 또는 C₃₀ 알킬 중 임의의 것일 수 있다. 일부 실시형태에서, 알킬 기는 C₈ 내지 C₂₀ 알킬, 예를 들어, C₁₄ 알킬 또는 C₁₆ 알킬이다. 본 개시내용의 일부 실시형태에서, 펩티드는 친핵성, 장쇄 알칸을 펩티드와 반응시킴으로써 알킬화된 아미노산을 포함하고, 여기서 펩티드는 친핵성 치환에 적합한 이탈기를 포함한다. 특정 양태에서, 장쇄 알칸의 친핵성 기는 아민, 히드록실, 또는 티올 기(예를 들어, 옥타데실아민, 테트라데칸올, 및 헥사데칸티올)를 포함한다. 펩티드의 이탈기는 아미노산의 측쇄의 일부일 수 있거나 또는 펩티드 골격의 일부일 수 있다. 적합한 이탈기는, 예를 들어, N-히드록시석신이미드, 할로겐, 및 설포네이트 에스테르를 포함한다. 특정 실시형태에서, 펩티드는 친핵성, 장쇄 알칸을 펩티드에 부착된 펩티드와 반응시킴으로써 알킬 기를 포함하도록 변형되고, 여기서 스페이서는 이탈기를 포함한다. 특정 양태에서, 장쇄 알칸은 아민, 히드록실, 또는 티올 기를 포함한다. 특정 실시형태에서, 이탈기를 포함하는 스페이서는 본 명세서에 논의된 임의의 스페이서, 예를 들어, 아미노산, 디펩티드, 트리펩티드, 친수성 이작용성 스페이서 및 소수성 이작용성 스페이서(이는 적합한 이탈기를 추가로 포함함)일 수 있다. 장쇄 알칸이 펩티드 또는 스페이서에 의해 알킬화되는 본 개시내용의 이들 양태와 관련하여, 장쇄 알칸은 임의의 크기일 수 있고, 탄소 사슬의 임의의 길이를 포함할 수 있다. 장쇄 알칸은 선형 또는 분지형일 수 있다. 특정 양태에서, 장쇄 알칸은 C4 내지 C30 알칸이다. 예를 들어, 장쇄 알칸은 C₄ 알칸, C₆ 알칸, C₈ 알칸, C₁₀ 알칸, C₁₂ 알칸, C₁₄ 알칸, C₁₆ 알칸, C₁₈ 알칸, C₂₀ 알칸, C₂₂ 알칸, C₂₄ 알칸, C₂₆ 알칸, C₂₈ 알칸 또는 C₃₀ 알칸 중 임의의 것일 수 있다. 일부 실시형태에서, 장쇄 알칸은 C₈ 내지 C₂₀ 알칸, 예를 들어, C₁₄ 알칸, C₁₆ 알칸, 또는 C₁₈ 알칸을 포함한다. 또한, 일부 실시형태에서, 알킬화는 펩티드와 콜레스테롤 모이어티 사이에서 일어날 수 있다. 예를 들어, 콜레스테롤의 히드록실기는 장쇄 알칸 상의 이탈기를 대체하여 콜레스테롤-펩티드 산물을 형성할 수 있다. 본 명세서에 기재된 알킬화된 펩티드는 추가로 친수성 모이어티를 포함하도록 변형될 수 있다. 일부 특정 실시형태에서, 친수성 모이어티는 폴리에틸렌 글리콜(PEG) 쇄를 포함할 수 있다. 친수성 모이어티의 혼입은 임의의 적당한 수단, 예컨대, 본 명세서에서 기재된 방법 중 임의의 것을 통해 달성될 수 있다. 대안적으로, 알킬화된 펩티드는 스페이서를 포함할 수 있고, 여기서 스페이서는 친수성 모이어티를 포함하도록 알킬화 및 변형 둘 모두가 된다. 적합한 스페이서의 비제한적인 예는 Cys, Lys, Orn, 호모-Cys 및 Ac-Phe로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 아미노산을 포함하는 스페이서를 포함한다.

일부 실시형태에서, 펩티드는 위치 1 또는 2에서, 또는 위치 1과 2 둘 모두에서, 펩티다제 절단에 대한 펩티드의 내성을 달성하는 아미노산을 포함한다. 일부 실시형태에서, 펩티드는 위치 1에서 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산을 포함한다: D-히스티딘, 데스아미노히스티딘, 히드록실-히스티딘, 아세틸-히스티딘, 호모-히스티딘, N-메틸 히스티딘, 알파-메틸 히스티딘, 이미다졸 아세트산, 또는 알파, 알파-디메틸 이미다졸 아세트산(DMIA). 일부 실시형태에서, 펩티드는 위치 2에서 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산을 포함한다: D-세린, D-알라닌, 발린, 글리신, N-메틸 세린, N-메틸 알라닌, 또는 알파, 아미노이소부티르산. 일부 실시형태에서, 펩티드는 펩티다제에 대한 펩티드의 내성을 달성하는 아미노산을 위치 2에서 포함하고, 펩티다제에 대한 펩티드의 내성을 달성하는 아미노산은 D-세린이 아니다. 일부 실시형태에서, 이러한 공유 결합은 락탐 브릿지 이외의 분자내 브릿지이다. 예를 들어, 적합한 공유 결합 방법은 올레핀 복분해, 란티오닌-기반 고리화, 디설파이드 브릿지 또는 변형된 황-함유 브릿지 형성, α,ω-디아미노알칸 테더의 사용, 금속-원자 브릿지의 형성, 및 펩티드 고리화의 다른 수단 중 임의의 하나 이상을 포함한다.

일부 실시형태에서, 펩티드는 하전된 아미노산을 유사체의 C-말단부로 도입하는 아미노산 치환 및/또는 첨가에 의해 변형된다. 일부 실시형태에서, 이러한 변형은 안정성 및 용해도를 향상시킨다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이 용어 "하전된 아미노산" 또는 "하전된 잔기"는 수용액 생리 pH에서 음성-하전된(즉, 탈-양성자화된) 또는 양성-하전된(즉, 양성자화된) 측쇄를 포함하는 아미노산을 지칭한다. 일부 양태에서, 하전된 아미노산 변형을 도입하는 이들 아미노산 치환 및/또는 첨가는 C-말단 위치에 있을 수 있다. 일부 실시형태에서, 1, 2 또는 3(및 일부 사례에서, 3개 초과) 하전된 아미노산은 C-말단 위치에서 도입될 수 있다. 예시적인 실시형태에서, 1, 2개 또는 모든 하전된 아미노산은 음성-하전될 수 있다. 음성-하전된 아미노산은 일부 실시형태에서 아스파르트산, 글루탐산, 시스테인산, 호모시스테인산, 또는 호모글루탐산이다. 일부 양태에서, 이들 변형은 용해도를 증가시킨다.

일부 실시형태에 따르면, 본 명세서에서 개시된 펩티드는 1 또는 2개의 아미노산 잔기에 의한 C-말단의 절단에 의해 변형될 수 있다. 이와 관련하여, 펩티드는 예시적인 양태에서 본 명세서에 기재된 추가 변형 중 임의의 것을 선택적으로 갖는, 서열(서열번호 1 내지 31)을 포함할 수 있다.

일부 실시형태에서, 펩티드는 변형된 서열번호 1 내지 31을 포함하고, 여기서 C-말단 아미노산의 카르복실산은 전하-중성기, 예컨대, 아미드 또는 에스테르로 대체된다. 따라서, 일부 실시형태에서, 펩티드는 아미드화된 펩티드여서, C-말단 잔기는 아미노산의 알파 카르복실레이트 대신에 아미드를 포함한다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이 펩티드 또는 유사체에 대한 일반적인 언급은 변형된 아미노 말단, 변형된 카르복시 말단, 또는 아미노 및 카르복시 말단 둘 모두의 변형을 갖는 펩티드를 포괄하는 것으로 의도된다. 예를 들어, 말단 카르복실산 대신에 아미드 기로 구성된 아미노산 쇄는 표준 아미노산을 지정하는 아미노산 서열에 의해 포괄되는 것으로 의도된다.

일부 실시형태에 따르면, 본 명세서에 개시된 펩티드는 적어도 하나의 아미노산 잔기 상의 접합에 의해 변형될 수 있다. 이와 관련하여, 펩티드는 예시적인 양태에서 본 명세서에 기재된 추가 접합체 중 임의의 것을 선택적으로 갖는, 서열(서열번호 1 내지 31)을 포함할 수 있다.

본 개시내용은 추가로, 이종성 모이어티에 접합된 본 명세서에 기재된 펩티드 중 하나 이상을 포함하는 접합체를 제공한다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "이종성 모이어티"는 용어 "접합체 모이어티"와 동의어이고 본 명세서에 기재된 펩티드와 상이한 임의의 분자(화학적 또는 생화학적, 자연 발생 또는 비-암호화된)를 지칭한다. 본 명세서에 기재된 유사체 중 임의의 것에 연결될 수 있는 예시적인 접합체 모이어티는, 비제한적으로 이종성 펩티드 또는 폴리펩티드(예를 들어, 혈장 단백질 포함), 표적 치료제, 면역글로불린 또는 이의 부분(예를 들어, 가변 영역, CDR, 또는 Fc 영역), 진단 표지, 예컨대, 방사선동위원소, 형광단 또는 효소 표지, 수용성 중합체를 포함하는 중합체, 또는 다른 치료제 또는 진단제를 포함한다. 일부 실시형태에서, 펩티드 및 혈장 단백질을 포함하는 접합체가 제공되고, 여기서 혈장 단백질은 알부민, 트랜스페린, 피브리노겐 및 글로불린으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시형태에서, 접합체의 혈장 단백질 모이어티는 알부민 또는 트랜스페린이다.

접합체는 일부 실시형태에서 본 명세서에 기재된 펩티드 중 하나 이상 및 하기 중 하나 이상을 포함한다: 상이한 펩티드(이는 본 명세서에 기재된 펩티드와 구별됨), 폴리펩티드, 핵산 분자, 항체 또는 이의 단편, 중합체, 양자점, 소분자, 독소, 진단제, 탄수화물, 또는 아미노산. 일부 실시형태에서, 이종성 모이어티는 중합체이다. 일부 실시형태에서, 중합체는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다: 폴리아미드, 폴리카르보네이트, 폴리알킬렌 및 이의 유도체 (폴리알킬렌 글리콜, 폴리알킬렌 옥사이드, 폴리 알킬렌 테레프탈레이트 포함), 아크릴과 메타크릴 에스테르의 중합체 (폴리(메틸 메타크릴레이트), 폴리(에틸 메타크릴레이트), 폴리(부틸메타크릴레이트), 폴리(이소부틸 메타크릴레이트), 폴리(헥실메타크릴레이트), 폴리(이소데실 메타크릴레이트), 폴리(라우릴 메타크릴레이트), 폴리(페닐 메타크릴레이트), 폴리(메틸 아크릴레이트), 폴리(이소프로필 아크릴레이트), 폴리(이소부틸 아크릴레이트), 및 폴리(옥타데실 아크릴레이트) 포함), 폴리비닐 중합체 (폴리비닐 알코올, 폴리비닐 에테르, 폴리비닐 에스테르, 폴리비닐 할라이드, 폴리(비닐 아세테이트), 및 폴리비닐피롤리돈, 폴리글라이콜라이드, 폴리실록산, 폴리우레탄 및 이의 공중합체), 셀룰로스(알킬 셀룰로스, 히드록시알킬 셀룰로스, 셀룰로스 에테르, 셀룰로스 에스테르, 니트로 셀룰로스, 메틸 셀룰로스, 에틸 셀룰로스, 히드록시프로필 셀룰로스, 히드록시-프로필 메틸 셀룰로스, 히드록시부틸 메틸 셀룰로스, 셀룰로스 아세테이트, 셀룰로스 프로피오네이트, 셀룰로스 아세테이트 부티레이트, 셀룰로스 아세테이트 프탈레이트, 카르복실에틸 셀룰로스, 셀룰로스 트리아세테이트, 및 셀룰로스 설페이트 나트륨 염 포함), 폴리프로필렌, 폴리(에틸렌 글리콜), 폴리(에틸렌 옥사이드), 및 폴리(에틸렌 테레프탈레이트)를 포함하는 폴리에틸렌, 및 폴리스티렌. 일부 양태에서, 중합체는 합성 생분해성 중합체(예를 들어, 락트산과 글라이콜산의 중합체, 폴리무수물, 폴리(오르토)에스테르, 폴리우레탄, 폴리(부트산), 폴리(발레르산), 및 폴리(락티드-코카프로락톤)), 및 천연 생분해성 중합체(예를 들어, 알기네이트 및 덱스트란 및 셀룰로스를 포함하는 다른 다당류, 콜라겐, 이의 화학 유도체(치환, 화학기, 예를 들어, 알킬, 알킬렌의 첨가, 히드록실화, 산화, 및 당업자에 의해 일상적으로 행해진 다른 변형), 알부민 및 다른 친수성 단백질(예를 들어, 제인 및 다른 프롤라민 및 소수성 단백질))을 포함하는 생분해성 중합체, 뿐만 아니라 임의의 공중합체 또는 이들의 혼합물이다. 일반적으로, 이들 물질은 효소적 가수분해 또는 표면 또는 벌크 침식에 의한 생체내 물에 대한 노출에 의해 분해된다. 일부 양태에서, 중합체는 셍체접착성 중합체, 예컨대, 문헌[H. S. Sawhney, C. P. Pathak and J. A. Hubbell in Macromolecules, 1993, 26, 581-587](이의 교시는 본 명세서에 포함됨)에 의해 기재된 생체붕괴성 히드로겔, 폴리하이알루론산, 카세인, 젤라틴, 글루틴, 폴리무수물, 폴리아크릴산, 알기네이트, 키토산, 폴리(메틸 메타크릴레이트), 폴리(에틸 메타크릴레이트), 폴리(부틸메타크릴레이트), 폴리(이소부틸 메타 크릴레이트), 폴리(헥실메타크릴레이트), 폴리(이소데실 메타크릴레이트), 폴리(라우릴 메타크릴레이트), 폴리(페닐 메타크릴레이트), 폴리(메틸 아크릴레이트), 폴리(이소프로필 아크릴레이트), 폴리(이소부틸 아크릴레이트), 및 폴리(옥타데실 아크릴레이트)이다.

일부 실시형태에서, 중합체는 수용성 중합체 또는 친수성 중합체이다. 일부 친수성 중합체는 "친수성 모이어티" 하에서 본 명세서에서 추가로 기재된다. 적합한 수용성 중합체는 당업계에 공지되어 있고, 예를 들어, 하기를 포함한다: 폴리비닐피롤리돈, 히드록시프로필 셀룰로스(HPC; 클루셀), 히드록시프로필 메틸셀룰로스(HPMC; 메토셀), 니트로셀룰로스, 히드록시프로필 에틸셀룰로스, 히드록시프로필 부틸셀룰로스, 히드록시프로필 펜틸셀룰로스, 메틸 셀룰로스, 에틸셀룰로스(에토셀), 히드록시에틸 셀룰로스, 다양한 알킬 셀룰로스 및 히드록시알킬 셀룰로스, 다양한 셀룰로스 에테르, 셀룰로스 아세테이트, 카르복시메틸 셀룰로스, 나트륨 카르복시메틸 셀룰로스, 칼슘 카르복시메틸 셀룰로스, 비닐 아세테이트/크로톤산 공중합체, 폴리-히드록시알킬 메타크릴레이트, 히드록시메틸 메타크릴레이트, 메타크릴산 공중합체, 폴리메타크릴산, 폴리메틸메타크릴레이트, 말레산 무수물/메틸 비닐 에테르 공중합체, 폴리 비닐 알코올, 나트륨 및 칼슘 폴리아크릴산, 폴리아크릴산, 산성 카르복시 중합체, 카르복시폴리메틸렌, 카르복시비닐 중합체, 폴리옥시에틸렌 폴리옥시프로필렌 공중합체, 폴리메틸비닐에테르 코-말레산 무수물, 카르복시메틸아미드, 칼륨 메타크릴레이트 디비닐벤젠 공중합체, 폴리옥시에틸렌글리콜, 폴리에틸렌 옥사이드, 및 이들의 유도체, 염, 및 조합물. 특정 실시형태에서, 중합체는, 예를 들어, 폴리에틸렌 글리콜(PEG)을 포함하는 폴리알킬렌 글리콜이다.

일부 실시형태에서, 이종성 모이어티는 탄수화물이다. 일부 실시형태에서, 탄수화물은 단당류(예를 들어, 글루코스, 갈락토스, 푸룩토스), 이당류(예를 들어, 수크로스, 락토스, 말토스), 올리고당(예를 들어, 라피노스, 스타키오스), 다당류 (전분, 아밀라제, 아밀로펙틴, 셀룰로스, 키틴, 칼로스, 라미나린, 자일란, 만난, 푸코이단, 또는 갈락토만난이다.

일부 실시형태에서, 이종성 모이어티는 지질이다. 지질은, 일부 실시형태에서, 지방산, 에이코사노이드, 프로스타글란딘, 류코트리엔, 트롬복산, N-아실 에탄올아민), 글리세롤지질(예를 들어, 모노-, 디-, 3-치환된 글리세롤), 글리세로인지질(예를 들어, 포스파티딜콜린, 포스파티딜이노시톨, 포스파티딜에탄올아민, 포스파티딜세린), 스핑고지질(예를 들어, 스핑고신, 세라미드), 스테롤 지질(예를 들어, 스테로이드, 콜레스테롤), 프레놀 지질, 사카로리피드, 또는 폴리케티드, 오일, 왁스, 콜레스테롤, 스테롤, 지방-가용성 비타민, 모노글리세라이드, 디글리세라이드, 트리글리세라이드 또는 인지질이다.

일부 실시형태에서, 이종성 모이어티는 본 개시내용의 펩티드에 대한 비-공유 또는 공유 결합을 통해 부착된다. 특정 양태에서, 이종성 모이어티는 링커를 통해 본 개시내용의 펩티드 또는 펩티드 유사체에 부착된다. 연결은 공유 화학 결합, 물리력 예컨대, 정전기, 수소, 이온성, 반데르발스, 또는 소수성 또는 친수성 상호작용에 의해 달성될 수 있다. 비오틴-아비딘, 리간드/수용체, 효소/기질, 핵산/핵산 결합 단백질, 지질/지질 결합 단백질, 세포 접착 분자 파트너; 또는 서로에 대해 친화성을 갖는 임의의 결합 파트너 또는 이의 단편을 포함하는 다양한 비-공유 결합 시스템이 사용될 수 있다. 펩티드는 일부 실시형태에서, 유사체의 표적화된 아미노산 잔기를, 이들 표적화된 아미노산의 선택된 측쇄 또는 N- 또는 C-말단 잔기와 반응할 수 있는 유기 유도체화제(derivatizing agent)와 반응시킴으로써 직접적인 공유 결합을 통해 모이어티를 접합시키기 위해 연결된다. 유사체 또는 접합체 모이어티에 대한 반응성 기는, 예를 들어, 알데히드, 아미노, 에스테르, 티올, α-할로아세틸, 말레이미도 또는 히드라지노 기를 포함한다. 유도체화제는, 예를 들어, 말레이미도벤조일 설포석신이미드 에스테르 (시스테인 잔기를 통합 접합), N-히드록시석신이미드 (라이신 잔기를 통해), 글루타르 알데히드, 석신산 무수물 또는 당업계에 공지된 다른 작용제를 포함한다. 대안적으로, 접합체 모이어티는 중간체 담체, 예컨대, 다당류 또는 폴리펩티드 담체를 통해 간접적으로 유사체에 연결될 수 있다. 다당류 담체의 예는 아미노덱스트란을 포함한다. 적합한 폴리펩티드 담체의 예로는 폴리리신, 폴리글루타민산, 폴리아스파르트산, 이들의 공중합체, 및 이들 아미노산과 다른 것, 예컨대, 세린의 혼합된 중합체를 포함하여 그 결과 로딩된 담체 상에 바람직한 용해성을 부여한다. 시스테인 잔기는 가장 일반적으로 클로로아세트산 또는 클로로아세트아미드와 같은 α-할로아세테이트(및 상응하는 아민)와 반응하여 카르복시메틸 또는 카르복시아미도메틸 유도체를 제공한다. 시스테인 잔기는 또한 브로모트리플루오로아세톤, 알파-브로모-β-(5-이미도조일)프로피온산, 클로로아세틸 포스페이트, N-알킬말레이미드, 3-나이트로-2-피리딜 다이설파이드, 메틸 2-피리딜 다이설파이드, p-클로로머큐리벤조에이트, 2-클로로머큐리-4-나이트로페놀, 또는 클로로-7-나이트로벤조-2-옥사-1,3-다이아졸과 반응하여 유도체화될 수 잇다. 히스티딜 잔기는 pH 5.5 내지 7.0에서 디에틸파이로카르보네이트와의 반응에 의해 유도될 수 있는데, 그 이유는 이러한 작용제가 히스티딜 측쇄에 대해 상대적으로 특이적이기 때문이다. 파라-브로모펜아실브로마이드가 또한 유용하고; 상기 반응은 바람직하게는 pH 6.0에서 0.1 M 나트륨 카코딜레이트에서 수행된다. 라이시닐 및 아미노-말단 잔기는 석신산 또는 다른 카르복실산 무수물과 반응될 수 있다. 이들 작용제에 의한 유도체화는 라이시닐 잔기의 전하를 역전시키는 효과를 갖는다. 알파-아미노-함유 잔기를 유도체화하기 위한 다른 적합한 시약은 이미도에스테르, 예컨대, 메틸 피콜린이미데이트, 피리독살 포스페이트, 피리독살, 클로로보로히드라이드, 트리니트로벤젠설폰산, O-메틸이소우레아, 2,4-펜탄디온, 및 글리옥실레이트와의 트랜스아미나제-촉매 반응을 포함한다. 아르기닐 잔기는 1개 또는 몇 개의 종래의 시약, 예컨대, 페닐글리옥살, 2,3-부탄디온, 1,2-시클로헥산디온, 및 닌히드린과의 반응에 의해 변형될 수 있다. 아르기닌 잔기의 유도체화는, 반응이 구아니딘 작용기의 높은 pKa 때문에 알칼리성 조건에서 수행되는 것이 요구된다. 게다가, 이들 시약은 라이신의 기뿐만 아니라 아르기닌 엡실론-아미노 기와 반응될 수 있다. 티로실 잔기의 특정 변형은 방향족 디아조늄 화합물 또는 테트라니트로메탄과의 반응에 의해 스펙트럼 표지를 티로실 잔기 내에 도입하는 특정 관심과 함께 행해질 수 있다. 가장 통상적으로, N-아세틸이미디졸 및 테트라니트로메탄이 사용되어 O-아세틸 티로실 종 및 3-니트로 유도체, 각각을 형성한다. 카르복실 측기(아스파틸 또는 글루타밀)는 카르보디이미드(R-N=C=N-R′)(식 중, R 및 R'는 상이한 알킬기임) 예를 들어, 1-시클로헥실-3-(2-모폴리닐-4-에틸)카르보디이미드 또는 1-에틸-3-(4-아조니아-4,4-다이메틸펜틸)카르보디이미드와의 반응에 의해 선택적으로 변형될 수 있다. 또한, 아스파틸 및 글루타밀 잔기들은 암모니아 이온과의 반응에 의해서 아스파라기닐 및 글루타미닐 잔기로 전환될 수 있다. 기타 변형으로서는, 프롤린과 라이신의 히드록실화, 세릴 또는 트레오닐 잔기들의 히드록실기의 인산화, 라이신, 아르기닌 및 히스티딘 측쇄의 알파-아미노기의 메틸화(문헌[T. E. Creighton, Proteins: Structure and Molecular Properties, W.H. Freeman & Co., San Francisco, pp. 79-86 (1983)]), 아스파라긴 또는 글루타민의 탈아미드화, N-말단 아민의 아세틸화, 및/또는 C-말단 카르복실산기의 아미드화를 포함한다. 공유 결합 변형의 또 다른 유형은 화학적 또는 효소적으로 글리코시드를 펩티드에 커플링시키는 것을 포함한다. 당(들)은 (a) 아르기닌 및 히스티딘, (b) 유리 카르복실기, (c) 유리 설프히드릴기 예를 들어, 시스테인의 유리 설프히드릴기, (d) 유리 히드록실기 예를 들어, 세린, 트레오닌 또는 히드록시프롤린의 유리 히드록실기, (e) 방향성 잔기 예를 들어, 티로신 또는 트립토판의 방향성 잔기, 또는 (f) 글루타민의 아미드기에 부착될 수 있다. 이들 방법은 국제공개 WO 87/05330호(공개일: 1987년 9월 11일) 및 문헌[Aplin 및 Wriston, (CRC Crit. Rev. Biochem., pp. 259-306 (1981))]에 기재되어 있다. 일부 실시형태에서, 펩티드는 펩티드의 아미노산의 측쇄와 이종성 모이어티 사이의 공유 결합을 통해 이종성 모이어티에 접합된다. 일부 양태에서, 이종성 모이어티에 공유 결합된 아미노산(예를 들어, 이종성 모이어티를 포함하는 아미노산)는 Cys, Lys, Orn, 호모-Cys, 또는 Ac-Phe이고, 아미노산의 측쇄는 이종성 모이어티에 공유 결합된다. 일부 실시형태에서, 접합체는 펩티드 또는 펩티드 유사체를 이종성 모이어티에 연결하는 링커를 포함한다. 일부 양태에서, 링커는 원자 1 내지 약 60, 또는 1 내지 30 초과 개의 원자, 2 내지 5 원자, 2 내지 10개의 원자, 5 내지 10개의 원자, 또는 10 내지 20개의 원자의 길이의 쇄를 포함한다. 일부 실시형태에서, 쇄 원자는 모든 탄소 원자일 수 있다. 일부 실시형태에서, 링커의 골격 중 쇄 원자는 C, O, N, 및 S로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다. 쇄 원자 및 링커는 더 많은 가용성 접합체를 제공하도록 그것의 기대된 용해도(친수성)에 따라 선택될 수 있다. 일부 실시형태에서, 링커는 효소 또는 다른 촉매에 의한 절단 또는 표적 조직 또는 장기 또는 세포에서 발견되는 가수분해 조건에 적용된 작용기를 제공한다. 일부 실시형태에서, 링커의 길이는 입체 장애에 대한 잠재력을 충분히 감소시킬 정도로 길다. 링커가 공유 결합 또는 펩티딜 결합이고 접합체가 폴리펩티드이면, 전체 접합체 융합 단백질일 수 있다. 이러한 펩티딜 링커는 임의의 길이일 수 있다. 예시적인 링커는 약 1 내지 50 개 길이의 아미노산, 5 내지 50, 3 내지 5, 5 내지 10, 5 내지 15, 또는 10 내지 30개 길이의 아미노산일 수 있다. 이러한 융합 단백질은 당업자에게 공지된 재조합 유전공학 방법에 의해 대안적으로 생산될 수 있다.

상기에 언급된 바와 같이, 일부 실시형태에서, 펩티드는 면역글로불린 또는 이의 부분(예를 들어, 가변 영역, CDR, 또는 Fc 영역)에 접합, 예를 들어, 융합될 수 있다. 공지된 유형의 면역글로불린(Ig)는 IgG, IgA, IgE, IgD 또는 IgM을 포함한다. Fc 영역은 Ig 중쇄의 C-말단 영역이며, 이 영역은 활성 예컨대, (지속된 반감기를 초래하는) 재순환을 수행하는 Fc 수용체에 대한 결합, 항체 의존적 세포-매개된 세포독성(ADCC), 및 보체 의존적 세포독성(CDC)에 대한 원인을 제공한다. 예를 들어, 일부 정의에 따르면, 인간 IgG 중쇄 Fc 영역은 Cys226으로부터 중쇄의 C-말단으로 신장된다. "힌지 영역"은 일반적으로 인간 IgG1의 Glu216로부터 Pro230로 연장된다 (다른 IgG 이소형의 힌지 영역은 시스테인 결합에 관여된 시스테인을 정렬함으로써 IgG1 서열과 정렬될 수 있다). IgG의 Fc 영역은 2개의 불변 도메인, CH2 및 CH3을 포함한다. 인간 IgG Fc 영역의 CH2 도메인은 일반적으로 아미노산 231로부터 아미노산 341로 연장된다. 인간 IgG Fc 영역의 CH3 도메인은 일반적으로 아미노산 342로부터 447 로 연장될 수 있다. 면역글로불린 또는 면역글로불린 단편, 또는 영역 모두의 아미노산 넘버링에 대한 언급은 모두 문헌[Kabat et al. 1991, Sequences of Proteins of Immunological Interest, U.S. Department of Public Health, Bethesda, Md.]에 기초한다. 관련 실시형태에서, Fc 영역은 CH1 이외의, 면역글로불린 중쇄로부터의 하나 이상의 천연 또는 변형된 불변 영역, 예를 들어, IgG 및 IgA의 CH2 및 CH3 영역, 또는 IgE의 CH3 및 CH4 영역을 포함할 수 있다. 적합한 접합체 모이어티는 FcRn 결합 부위를 포함하는 면역글로불린 서열의 부분을 포함한다. FcRn, 회수 수용체는, 재순환 면역글로불린을 재순환시키고 혈액의 순환으로 되돌리는데 원인을 제공한다. FcRn 수용체에 결합하는 IgG의 Fc 부분의 영역은 X-선 결정학을 기반으로 기재되었다(문헌[Burmeister et al. 1994, Nature 372:379]). FcRn을 갖는 Fc의 주요 접촉 영역은 CH2 및 CH3 도메인의 접합부 근처에 있다. Fc-FcRn 접촉 모두는 단일 Ig 중쇄 내에 있다. 주요 접촉 부위는 CH2 도메인의 아미노산 잔기 248, 250-257, 272, 285, 288, 290-291, 308-311 및 314 및 CH3 도메인의 아미노산 잔기 385-387, 428 및 433-436을 포함한다. 일부 접합체 모이어티는 FcγR 결합 부위(들)을 포함하거나 포함하지 않을 수 있다. FcγR는 ADCC 및 CDC에 대한 원인을 제공한다. FcγR과 직접 접촉하는 Fc 영역 내의 위치의 예는 아미노산 234-239(하부 힌지 영역), 아미노산 265-269(B/C 루프), 아미노산 297-299(C′/E 루프), 및 아미노산 327-332(F/G) 루프이다(문헌[Sondermann et al., Nature 406: 267-273, 2000]). IgE의 하부 힌지 영역도 FcRI 결합에 관여되어 있다(문헌[Henry, et al., Biochemistry 36, 15568-15578, 1997]). IgA 수용체 결합에 관여된 잔기는 문헌[Lewis et al., (J Immunol. 175:6694-701, 2005)]에 기재되어 있다. IgE 수용체 결합에 관여된 아미노산 잔기는 문헌[Sayers et al. (J Biol Chem. 279(34):35320-5, 2004)]에 기재되어 있다. 아미노산 변형은 면역글로불린의 Fc 영역에 대해 행해질 수 있다. 이러한 변이체 Fc 영역은 Fc 영역(잔기 342-447)의 CH3 도메인 에서의 적어도 하나의 아미노산 변형 및/또는 Fc 영역(잔기 231-341)의 CH2 도메인에서의 적어도 하나의 아미노산 변형을 포함한다. FcRn에 대한 증가된 친화성을 부여하는 것으로 여겨지는 돌연변이는 T256A, T307A, E380A, 및 N434A를 포함한다(문헌[Shields et al. 2001, J. Biol. Chem. 276:6591]). 다른 돌연변이는 FcRn에 대한 친화성을 상당히 감소시키지 않으면서 Fc 영역의 FcγRI, FcγRIIA, FcγRIIB 및/또는 FcγRIIIA에의 결합을 감소시킬 수 있다. 예를 들어, Ala 또는 또 다른 아미노산에 의한 Fc 영역의 위치 297에 있는 Asn의 치환은 고도로 보존된 N-글리코실화 부위를 제거하고, Fc 영역의 수반되는 지속된 반감기를 갖는 감소된 면역원성, 뿐만 아니라 FcγRs에 대한 감소된 결합을 초래할 수 있다(문헌[Routledge et al. 1995, Transplantation 60:847; Friend et al. 1999, Transplantation 68:1632; Shields et al. 1995, J. Biol. Chem. 276:6591]). FcγR에 대한 결합을 감소시키는, IgG1의 위치 233 내지 236에서의 아미노산 변형이 행해졌다(문헌[Ward and Ghetie 1995, Therapeutic Immunology 2:77] 및 문헌[Armour et al. 1999, Eur. J. Immunol. 29:2613]). 일부 예시적인 아미노산 치환은 미국 특허 제7,355,008호 및 제7,381,408호에 기재되어 있고, 이들 각각은 전체적으로 본 명세서에 포함된다. 특정 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 펩티드는 면역글로불린 분자 내의 루프 영역에 삽입된다. 다른 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 펩티드는 면역글로불린 분자 내의 루프 영역의 하나 이상의 아미노산을 대체한다.

본 명세서에 기재된 펩티드는 생물학적 활성을 유지하면서 생리 pH에서 수용액 중의 용해도 및 안정성을 향상시키기 위해 추가로 변형될 수 있다. 친수성 모이어티, 예컨대, PEG 기는 단백 질을 활성화된 중합체 분자와 반응시키기 위해 사용된 임의의 적당한 조건 하에서 유사체에 부착될 수 있다. 아실화, 환원성 알킬화, 마이클 첨가, 티올 알킬화 또는 상기 표적 화합물에 대한 반응성 기(예를 들어, 알데히드, 아미노, 에스테르, 티올, α-할로아세틸, 말레이미도 또는 히드라지노 기)에 대한 PEG 모이어티에 대한 반응성 기(예를 들어, 알데히드, 아미노, 에스테르, 티올, α-할로아세틸, 말레이미도 또는 히드라지노 기)를 통한 다른 화학선택적 접합/결찰 방법을 통하는 것을 포함하는 당업계에 공지된 임의의 수단이 사용될 수 있다. 수용성 중합체를 하나 이상의 단백질에 연결하기 위해 사용될 수 있는 활성화 기는 비제한적으로 설폰, 말레이미드, 설프히드릴, 티올, 트리플레이트, 트레실레이트, 아지디린, 옥시란, 5-피리딜, 및 알파-할로겐화된 아실 기(예를 들어, 알파-아이오도 아세트산, 알파-브로모아세트산, 알파-클로로아세트산)를 포함한다. 환원성 알킬화에 의해 유사체에 부착되면, 선택된 중합체는 단일 반응성 알데히드를 가져야 하여 중합도가 제어된다. 예를 들어, 문헌[Kinstler et al., Adv. Drug. Delivery Rev. 54: 477-485 (2002)]; 문헌[Roberts et al., Adv. Drug Delivery Rev. 54: 459-476 (2002)]; 및 문헌[Zalipsky et al., Adv. Drug Delivery Rev.16: 157-182 (1995)] 참고. 특정 양태에서, 티올을 갖는 펩티드의 아미노산 잔기는 친수성 모이어티, 예컨대, PEG로 변형된다. 일부 실시형태에서, 티올은 티오에테르 연결을 포함하는 페길화된 유사체를 얻기 위해 마이클 첨가 반응에서 말레이미드-활성화된 PEG로 변형된다. 일부 실시형태에서, 티올은 티오에테르 연결을 포함하는 페길화된 유사체를 얻기 위해 친핵성 치환 반응에서 할로아세틸-활성화된 PEG 로 변형된다. 적합한 친수성 모이어티는 폴리에틸렌 글리콜(PEG), 폴리프로필렌 글리콜, 폴리옥시에틸화된 폴리올(예를 들어, POG), 폴리 옥시에틸화된 소르비톨, 폴리옥시에틸화된 글루코스, 폴리옥시에틸화된 글리세롤(POG), 폴리옥시알킬렌, 폴리 에틸렌 글리콜 프로피온알데히드, 에틸렌 글리콜/프로필렌 글리콜의 공중합체, 모노메톡시-폴리에틸렌 글리콜, 모노-(C1-C10) 알콕시- 또는 아릴옥시-폴리에틸렌 글리콜, 카르복시메틸셀룰로스, 폴리아세탈, 폴리비닐 알코올(PVA), 폴리비닐 피롤리돈, 폴리-1,3-디옥솔란, 폴리-1,3,6-트리옥산, 에틸렌/말레산 무수물 공중합체, 폴리(.베타.-아미노산)(단일중합체 또는 랜덤 공중합체), 폴리(n-비닐 피롤리돈)폴리에틸렌 글리콜, 프로필렌 글리콜 단일중합체(PPG) 및 다른 폴리알킬렌 옥사이드, 폴리프로필렌 옥사이드/에틸렌 옥사이드 공중합체, 결장산(colonic acid) 또는 다른 다당류 중합체, 피콜 또는 덱스트란 및 이들의 혼합물을 포함한다. 덱스트란은 α1-6 연결기에 의해 우세하기 연결된 글루코스 소단위의 다당류 중합체이다. 덱스트란은 많은 분자량 범위, 예를 들어, 약 1 kD 내지 약 100 kD, 또는 약 5, 10, 15 또는 20 kD 내지 약 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80 또는 90 kD로 입수 가능하다. 선형 또는 분지형 중합체가 고려된다. 접합체의 수득한 제제는 본질적으로 단분산 또는 다분산일 수 있는 유사체당 약 0.5, 0.7, 1, 1.2, 1.5 또는 2개의 중합체 모이어티를 가질 수 있다.

일부 실시형태에서, 펩티드는 펩티드 또는 펩티드 유사체의 아미노산의 측쇄와 친수성 모이어티 사이의 공유 결합을 통해 친수성 모이어티에 접합된다. 일부 실시형태에서, 펩티드 또는 펩티드 유사체는 아미노산의 측쇄, C-말단 연장, 또는 C-말단 아미노산 내의 위치, 또는 이들 위치의 조합을 통해 친수성 모이어티에 접합된다. 일부 양태에서, 친수성 모이어티에 공유 결합된 아미노산(예를 들어, 친수성 모이어티를 포함하는 아미노산)는 Cys, Lys, Orn, 호모-Cys, 또는 Ac-Phe이고, 그리고 아미노산의 측쇄는 친수성 모이어티(예를 들어, PEG)에 공유 결합된다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 접합체는 화학적 PEG(예를 들어, 재조합 PEG(rPEG) 분자), 예컨대, 국제공개 WO2009/023270호 및 미국 특허출원공개 US20080286808호에 기재된 것과 유사한 연장된 형태를 형성할 수 있는 부속 유사체에 융합된 펩티드 또는 펩티드 유사체를 포함한다. rPEG 분자는 일부 양태에서, 글리신, 세린, 글루탐산, 아스파르트산, 알라닌, 또는 프롤린 중 하나 이상을 포함하는 폴리펩티드이다. 일부 양태에서, rPEG는 단일중합체, 예를 들어, 폴리-글리신, 폴리-세린, 폴리-글루탐산, 폴리-아스파르트산, 폴리-알라닌, 또는 폴리-프롤린이다. 다른 실시형태에서, rPEG는 반복된 2개 유형의 아미노산, 예를 들어, 폴리(Gly-Ser), 폴리(Gly-Glu), 폴리(Gly-Ala), 폴리(Gly-Asp), 폴리(Gly-Pro), 폴리(Ser-Glu)을 포함한다. 일부 양태에서, rPEG는 3개의 상이한 유형의 아미노산, 예를 들어, 폴리(Gly-Ser-Glu)를 포함한다. 특정 양태에서, rPEG는 펩티드의 반감기를 증가시킨다. 일부 양태에서, rPEG는 순 양성 또는 순 음성 전하를 포함한다. rPEG는 일부 양태에서 2차 구조가 없다. 일부 실시형태에서, rPEG는 10개 이상 길이의 아미노산이고, 일부 실시형태에서 약 40 내지 약 50개 길이의 아미노산이다. 부속 펩티드는 일부 양태에서, 펩티드 결합 또는 프로테이나제 절단 부위를 통해 본 개시내용의 펩티드의 N- 또는 C-말단에 융합되거나 본 개시내용의 펩티드의 루프에 삽입된다. rPEG는 일부 양태에서 친화성 태그를 포함하거나 또는 5 kDa 초과인 PEG에 연결된다. 일부 실시형태에서, rPEG는 증가된 유체역학적 반경, 혈청 반감기, 프로테아제 내성, 또는 용해도를 갖는 본 개시내용의 펩티드를 부여하고 일부 양태에서 감소된 면역원성을 갖는 유사체를 부여한다.

본 명세서에 기재된 접합 중 임의의 것을 선택적으로 갖는, 서열(서열번호 1 내지 31)을 포함하는 펩티드가 실시형태로서 고려된다.

본 개시내용은 추가로, 동종- 또는 이종-다량체 또는 동종- 또는 이종-이량체를 포함하는 본 명세서에 개시된 펩티드의 다량체 또는 이량체를 제공한다. 펩티드 중 2종 이상은 당업자에게 공지된 표준 결합제 및 절차를 사용하여 함께 연결될 수 있다. 예를 들어, 이량체는 특히 시스테인, 라이신 오르니틴, 호모시스테인 또는 아세틸 페닐알라닌 잔기로 치환된 유사체에 대해 이작용성 티올 가교결합제 및 이작용성 아민 가교결합제의 사용을 통해 2개의 펩티드 사이에 형성될 수 있다. 이량체는 동종이량체일 수 있거나 또는 대안적으로 이종이량체일 수 있다. 특정 실시형태에서, 2개(또는 그 초과)의 펩티드를 연결하는 링커는 PEG, 예를 들어, 5 kDa PEG, 20 kDa PEG이다. 일부 실시형태에서, 링커는 디설파이드 결합이다. 예를 들어, 이량체의 각각의 단량체는 Cys 잔기(예를 들어, 말단 또는 내부적으로 배치된 Cys)를 포함할 수 있고, 각각의 Cys 잔기의 황 원자는 디설파이드 결합의 형성에 참여한다. 일부 양태에서, 단량체는 말단 아미노산(예를 들어, N-말단 또는 C-말단)을 통해, 내부 아미노산을 통해, 또는 적어도 하나의 단량체의 말단 아미노산 및 적어도 하나의 다른 단량체의 내부 아미노산을 통해 연결될 수 있다. 특정 양태에서, 단량체는 N-말단 아미노산을 통해 연결되지 않는다. 일부 양태에서, 다량체의 단량체는, 각각의 단량체의 C-말단 아미노산이 부착될 수 있는 "테일-투-테일" 배향으로 함께 부착될 수 있다.

본 명세서에 개시된 펩티드는 다양한 방식으로 제조될 수 잇다. 펩티드를 드노보(de novo) 합성하는 적합한 방법은, 예를 들어, 문헌[Merrifield, J. Am. Chem. Soc, 85, 2149 (1963)]; 문헌[Davis et al., Biochem. Intl., 10, 394-414 (1985)]; 문헌[Larsen et al., J. Am. Chem. Soc, 115, 6247 (1993)]; 문헌[Smith et al., J. Peptide Protein Res., 44, 183 (1994)]; 문헌[O'Donnell et al., J. Am. Chem. Soc, 118, 6070 (1996)]; 문헌[Stewart and Young, Solid Phase Peptide Synthesis, Freeman (1969)]; 문헌[Finn et al., The Proteins, 3 ed., vol. 2, pp. 105-253 (1976)]; 문헌[Erickson et al., The Proteins, 3^rd ed., vol. 2, pp. 257-527 (1976)]; 및 문헌[Chan et al., Fmoc Solid Phase Peptide Synthesis, Oxford University Press, Oxford, United Kingdom, 2005]에 기재되어 있다. 본 개시내용은 합성 펩티드를 고려한다. 펩티드를 제조하는 방법은 자체 본 발명의 실시형태들이다.

대안적으로, 펩티드는 펩티드를 암호화하는 핵산을 숙주세포에 도입함으로써, 재조합으로 발현될 수 있고, 이는 표준 재조합 방법을 사용하여 펩티드를 발현시키도록 배양될 수 있다. 예를 들어, 문헌[Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual. 3rd ed., Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, N.Y. 2001]; 및 문헌[Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing Associates and John Wiley & Sons, N.Y., 1994] 참고. 이러한 펩티드는 배양 배지 또는 세포 펠릿으로부터 정제될 수 있다. 예시적인 핵산은 데옥시리보핵산(DNA) 및 리보핵산(RNA)을 포함한다. 이러한 핵산, 벡터, 숙주 세포 및 상기 중 임의의 것을 포함하는 조성물 및 상기 중 임의의 것의 용도가 본 발명의 실시형태이다.

일부 실시형태에서, 본 개시내용의 펩티드는 단리될 수 있다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 펩티드는 정제될 수 있다. "순도"는 상대적인 용어이고, 반드시 절대적인 순도 또는 절대적인 농도 또는 절대적인 선택으로 해석되지 않는 것으로 인식된다. 일부 양태에서, 순도는 적어도 또는 약 50%이고, 적어도 또는 약 60%, 적어도 또는 약 70%, 적어도 또는 약 80% 또는 적어도 또는 약 90%(예를 들어, 적어도 또는 약 91%, 적어도 또는 약 92%, 적어도 또는 약 93%, 적어도 또는 약 94%, 적어도 또는 약 95%, 적어도 또는 약 96%, 적어도 또는 약 97%, 적어도 또는 약 98%, 적어도 또는 약 99%)이거나 또는 대략 100%이다.

일부 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 펩티드는 회사, 예컨대, Genscript(미국 뉴저지주 피스카타웨이 소재), New England Peptide(미국 매사추세츠주 가드너 소재) 및 CPC Scientific(미국 캘리포니아주 서니베일 소재), Peptide Technologies Corp.(미국 메릴랜드주 게이터스버그 소재) 및 다중 펩티드 시스템(미국 캘리포니아주 샌디에고 소재)에 의해 상업적으로 합성될 수 있다. 이와 관련하여, 펩티드는 합성, 재조합, 단리, 및/또는 정제될 수 있다.

본 개시내용은 또한, 추가의 실시형태로서, 본 명세서에 기재된 2개 이상의 펩티드(또는 접합체, 핵산, 발현 벡터, 등)의 혼합물을 포함하고, 선택적으로 부형제 또는 담체를 추가로 포함하는 조성물을 포함한다.

본 개시내용의 펩티드는, 일 실시형태에 따르면 키트의 일부로서 제공될 수 있다. 따라서, 일부 실시형태에서, 펩티드를, 이를 필요로 하는 환자에게 투여하기 위한 키트가 제공되고, 여기서 키트는 본 명세서에서 기재된 바와 같은 펩티드를 포함한다.

일 실시형태에서 키트는 환자에게 조성물을 투여하기 위한 디바이스, 예를 들어, 시린지(syringe) 바늘, 펜 디바이스, 제트 주사기(jet injector) 또는 또 다른 무침 주사기와 함께 제공된다. 키트는 대안적으로 또는 더하여, 임의로 동결건조된 형태의 또는 수용액 중 펩티드를 함유하는, 하나 이상의 용기, 예를 들어, 바이알(vial), 튜브, 병, 단일 또는 다중-챔버의 사전-충전된(chambered pre-filled) 시린지, 카트리지, (외부의 또는 이식 가능한) 주입 펌프, 제트 주사기, 사전-충전된 펜 디바이스 등을 포함할 수 있다. 키트는 일부 실시형태에서 사용 설명서를 포함한다. 일 실시형태에 부합하게, 키트의 디바이스는 에어로졸 분배(aerosol dispensing) 디바이스이며, 상기 조성물은 에어로졸 디바이스 내에 사전패키징(prepackaging)된다. 또 다른 실시형태에서 키트는 시린지 및 바늘을 포함하며, 일 실시형태에서 멸균 조성물은 시린지 내에 사전패키징된다.

추가 실시형태는 본 명세서에 기재된 펩티드를 처방, 판매 또는 판매하기 위한 광고, 구매, 자가 투여 지시 또는 투여 중 하나 이상을 포함하는 질환을 치료하는 방법을 포함하며, 여기서 펩티드는 치료를 필요로 하는 대상체에게 병태의 치료를 위해서 규제 기관에 의해서 승인되어 있다.

추가 실시형태는 질환을 치료하기 위한 펩티드를 공급하는 방법을 포함하고, 상기 방법은 상기 펩티드의 판매에 대해 의사, 처방집, 환자 또는 보험 회사를 지원하는 것을 포함한다.

정의

용어 "펩티드"는 펩티드 결합에 의해 서로 연결된 2 이상의 아미노산 잔기를 포함하는 분자를 지칭한다. 이들 용어는, 예를 들어, 천연 및 인공 단백질, 단백질 서열의 단백질 단편 및 폴리펩티드 유사체(예컨대, 뮤테인, 변이체, 및 융합 단백질) 뿐만 아니라 번역 후에, 또는 달리 공유적으로 또는 비-공유적으로, 변형된 펩티드를 포괄한다. 펩티드는 단량체 또는 중합체일 수 있다. 특정 실시형태에서, "펩티드"는, 알파 탄소가 펩티드 결합을 통해 연결될 수 있는 아미노산의 쇄이다. 쇄의 하나의 말단(아미노 말단)에서의 말단 아미노산은 따라서 유리 아미노기를 가지며, 한편 쇄의 다른 말단 (카르복시 말단)에서의 말단 아미노산은 유리 카르복실기를 갖는다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "아미노 말단"(N-말단으로 약칭)은 펩티드의 아미노 말단에 있는 아미노산 상의 유리 β-아미노기 또는 펩티드 내의 임의의 다른 위치에 있는 아미노산의 β-아미노기(펩티드 결합에 참여하는 아미노기)를 지칭한다. 유사하게, 용어 "카르복시 말단"는 펩티드의 카르복시 말단 상의 유리 카르복실기 또는 펩티드 내의 임의의 다른 위치에 있는 아미노산의 카르복실기를 지칭한다. 펩티드는 또한 펩티드 모방체 예컨대, 아미드 결합과는 대조적으로 에테르에 의해 연결된 아미노산을 비제한적으로 포함하는 본질적으로 임의의 폴리아미노산을 포함한다.

용어 "치료용 펩티드"는 하나 이상의 치료용 및/또는 생물학적 활성을 갖는 펩티드 또는 단편 또는 이의 변이체를 지칭한다.

본 명세서에서 사용된 바와 같은 용어 "유사체" 또는 "펩티드 유사체"는 하나 이상의 아미노산 변형, 예컨대, 비제한적으로 임의의 천연 또는 비자연 아미노산, 합성 아미노산 또는 펩티드모방체를 갖는 아미노산 잔기 중 임의의 하나의 치환 및/또는 하나 이상의 결실(들) 및/또는 하나 이상의 첨가(들) 및/또는 치환체의, 임의의 이용 가능한 위치에 있는 천연 또는 비천연 아미노산, 합성 아미노산 또는 펩티드모방체 중 임의의 하나에 대한 부착을 포함하는 펩티드를 기재한다. 아미노산 잔기의 첨가 또는 결실은 펩티드의 N-말단에서 및/또는 펩티드의 C-말단에서 일어날 수 있다.

일부 실시형태에서, 유사체는 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 이러한 변형을 갖는다. 일부 실시형태에서, 유사체는 본래 펩티드의 생물학적 활성을 보유한다. 일부 실시형태에서, 유사체는 최초 펩티드의 경쟁적 또는 비-경쟁적 저해제이다.

펩티드 서열은 표준 1- 또는 3-문자 약어를 사용하여 나타낸다. 달리 나타내지 않는 한, 펩티드 서열은 좌측에 그것의 아미노 말단을 그리고 우측에 그것의 카르복시 말단을 가지며, 펩티드의 특정 부문은 아미노산 잔기 수, 예컨대, 아미노산 3 내지 6에 의해, 또는 그 부위에 있는 실제 잔기, 예컨대, Met3 내지 Gly6에 의해 지정될 수 있다. 특정 펩티드 서열은 또한 기준 서열과 어떻게 상이한 지를 설명함으로써 기재될 수 있다.

본 명세서에서 사용될 때, 용어 "자연 아미노산"은 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산(괄호 내에 통상적인 3 문자 암호 및 1 문자 암호를 가짐)이다: 글리신(Gly 및 G), 프롤린(Pro 및 P), 알라닌(Ala 및 A), 발린(Val 및 V), 류신(Leu 및 L), 이소류신(Ile 및 I), 메티오닌(Met 및 M), 시스테인(Cys 및 C), 페닐알라닌(Phe 및 F), 티로신(Tyr 및 Y), 트립토판(Trp 및 W), 히스티딘(His 및 H), 라이신(Lys 및 K), 아르기닌(Arg 및 R), 글루타민(Gin 및 Q), 아스파라긴(Asn 및 N), 글루탐산(Glu 및 E), 아스파르트산(Asp 및 D), 세린(Ser 및 S) 및 트레오닌(Thr 및 T). 본 명세서의 어디든지, 추가 지정되지 않으면서 G, P, A, V, L, I, M, C, F, Y, H, K, R, Q, N, E, D, S 또는 T를 포함하거나 포함하지 않는 펩티드, 유사체 또는 유도체 또는 펩타이드가 언급되면, 아미노산을 의미한다. 달리 지시되지 않으면, 대문자로 단일 문자 암호로 나타낸 아미노산은 L-동형체를 나타내지만, 이 아미노산이 소문자로 표기되는 경우, 이 아미노산은 D-형태 그대로 사용/적용된다. 이전에 정의된 이러한 D-형태 및 다른 비-보존적 아미노산 치환은 비자연 아미노산의 정의 내에 포함된다.

타이핑 오류로 인해, 통상적으로 사용된 코드로부터 편차가 있다면, 통상적으로 사용된 코드가 적합하다. 펩티드에 존재하는 아미노산은, 바람직하게는, 핵산에 의해 암호화될 수 있는 아미노산이다. 상기 예로부터 명백한 바와 같이, 아미노산 잔기는 그것의 완전한 명칭, 그것의 1-문자 코드, 및/또는 그것의 3-문자 코드에 의해 확인될 수 있다. 이들 3가지 방식은 완전하게 동등하다.

"비-보존적 아미노산 치환"은 또 다른 부류로부터의 구성원에 대한 이들 부류 중 하나의 구성원의 치환을 지칭한다. 이러한 변경을 할 때, 특정 실시형태에 따르면, 아미노 산의 소수성 지수가 고려될 수 있다. 각각의 아미노산은 그것의 소수성 및 전하 특성을 기준으로 한 소수성 지수가 부여되었다. 상기 아미노산은 하기이다: 이소류신(+4.5); 발린(+4.2); 류신(+3.8); 페닐알라닌(+2.8); 시스테인/cystine (+2.5); 메티오닌(+1.9); 알라닌(+1.8); 글리신(-0.4); 트레오닌(-0.7); 세린(-0.8); 트립토판(-0.9); 티로신 (-1.3); 프롤린(-1.6); 히스티딘(-3.2); 글루타메이트(-3.5); 글루타민 (-3.5); 아스파르테이트(-3.5); 아스파라긴(-3.5); 라이신 (-3.9); 및 아르기닌(-4.5). 단백질에 대한 상호작용 생물학적 기능을 부여하는데 수치요법 아미노산 지수의 중요성은 당업계에서 이해된다(예를 들어, 문헌[Kyte et al., 1982, J. Mol. Biol. 157:105-131]). 특정 아미노산이 유사한 소수성 지수 또는 점수를 갖는 다른 아미노산 대신 치환될 수 있고 유사한 생물학적 활성을 보유하는 것은 공지되어 있다. 소수성 지수를 기반으로 변화를 만들 때, 특정 실시형태에서, 수치요법 지수가 ±2 내인 아미노산의 치환이 포함된다. 특정 실시형태에서, ±1 내인 것이 포함되고, 그리고 특정 실시형태에서, ±0.5 내의 것이 포함된다. 예컨대, 아미노산의 치환이, 특히 이에 의해서 생성된 생물학적 기능성 단백질 또는 펩타이드가 본 명세서에서 개시된 바와 같은 면역학적 실시형태에서 사용하기 위한 경우 친수성을 기반으로 효과적으로 행해질 수 있음이 당업계에서 또한 이해된다. 특정 실시형태에서, 그것의 인접한 아미노산의 진수성에 의해 지배된 단백질의 최대 국소 평균 친수성은, 그것의 면역원성 및 항원성, 즉, 단백질의 생물학적 특성과 상관관계가 있다. 하기 친수성 값이 이들 아미노산 잔기에 배정되어 있다: 아르기닌(+3.0); 라이신(+3.0); 아스파르테이트(+3.0.+-.1); 글루타메이트 (+3.0.+-.1); 세린(+0.3); 아스파라긴(0.2); 글루타민 (+0.2); 글리신(0); 트레오닌(-0.4); 프롤린 (-0.5.+-.1); 알라닌(-0.5); 히스티딘(-0.5); 시스테인 (-1.0); 메티오닌(-1.3); 발린 (-1.5); 류신(-1.8); 이소류신(-1.8); 티로신 (-2.3); 페닐알라닌(-2.5) 및 트립토판(-3.4). 유사한 친수성 값을 기반으로 변경함에 있어서, 특정 실시형태에서, 친수성 값이 ±2 내인 아미노산의 치환이 포함되고, 특정 실시형태에서, ±1 내의 것이 포함되고, 그리고 특정 실시형태에서, ±0.5 내의 것이 포함된다.

다른 아미노산 치환이 표 3에 제시된다.

본 명세서에서 사용된 바와 같이 용어 "하전된 아미노산" 또는 "하전된 잔기"는 수용액 생리 pH에서 음성-하전된(즉, 탈-양성자화된) 또는 양성-하전된(즉, 양성자화된) 측쇄를 포함하는 아미노산을 지칭한다. 예를 들어, 음성-하전된 아미노산은 아스파르트산, 글루탐산, 시스테인산, 호모시스테인산, 및 호모글루탐산을 포함하고, 반면에 양성-하전된 아미노산은 아르기닌, 라이신 및 히스티딘을 포함한다. 하전된 아미노산은 20개의 암호화된 아미노산 중에서 하전된 아미노산, 뿐만 아니라 비정형 또는 비-자연 발생 또는 비-암호화된 아미노산을 포함한다.

본 명세서에서 사용된 바와 같이 용어 "산성 아미노산"은, 예를 들어, 카르복실산 또는 설폰산 기를 포함하는, (아미노산의 카르복실산 이외) 제2 산성 모이어티를 포함하는 아미노산을 지칭한다.

본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "아실화된 아미노산"은, 생산되는 수단 (예를 들어 아미노산의 펩티드 내로의 혼입에 앞서 아실화, 또는 펩티드 내로의 혼입 후 아실화)와 무관하게, 자연 발생 아미노산에 대해 비-자연인 아실기를 포함하는 아미노산을 지칭한다.

본 명세서에서 사용된 바와 같이 용어 "알킬화된 아미노산"은, 생산되는 수단과 무관하게, 자연 발생 아미노산에 대해 비-자연인 알킬기를 포함하는 아미노산을 지칭한다. 따라서, 본 개시내용의 아실화된 아미노산 및 알킬 화된 아미노산은 비-암호화된 아미노산이다.

당업자는, 널리 공지된 기술을 사용하여 본 명세서에서 제시된 바와 같은 펩티드의 활성 변이체를 결정할 수 있을 것이다. 특정 실시형태에서, 당업자는 활성에 중요한 것으로 여겨지는 표적화 영역에 의해 활성 파괴 없이 변화될 수 있는 분자의 적합한 영역을 식별할 수 있다. 다른 실시형태에서, 당업자는 유사한 펩티드 중에서 보존되는 분자의 잔기 및 부분을 식별할 수 있다. 추가 실시형태에서, 생물학적 활성에 또는 구조에 중요할 수 있는 영역조차 생물학적 활성 파괴 없이 또는 펩티드 구조에 부정적으로 영향을 미치지 않으면서 보존적 아미노산 치환을 거치게 될 수 있다. 시험 화합물로 처리된 세포에서 카스파제 활성의 변화는 잠재적인 치료 유용성의 지표로 잘 알려져 있다. 카스파제가 질환의 병인 또는 병리학적 결과에 결정적으로 연루되었는지 여부에 관계없이, 카스파제 활성의 감소는 당뇨병, 심혈관 질환, 유해한 간세포 사멸, 허혈 재관류 손상, 외상성 뇌 손상, 장기 이식 및 신경변성을 비롯한 부적절한 아폽토시스 세포 사멸에 의해 야기되는 여러 병태의 증상 개선과 관련이 있다(문헌[Choadhry, J Thorac Cardiovasc Surg. 2007 Jul;134(1):124-31, 131.e1-3.;McIlwain, Cold Spring Harb Perspect Biol 2013;5:a008656]). 또한, 카스파제 활성의 증가는 암, 자가면역 장애, 류마티스 관절염, 감염성 질환, 염증성 질환을 비롯한 아폽토시스 유도에 반응하는 질환 및 장애를 치료하는 데 잠재적인 유용성을 나타내는 것으로 널리 공지되어 있다(문헌[Elmore, Toxicol Pathol. 2007; 35(4): 495-516]). 시험 화합물로 처리된 세포에서 세포 생존력의 변화는 잠재적인 치료 유용성의 지표로 잘 알려져 있다. 세포 생존력의 감소는 예를 들어 암을 비롯한 세포 생존율/증식의 변화에 반응하는 질환 및 장애를 치료하기 위한 잠재적 유용성을 나타낸다(문헌[Boyd, Drug Dev Res 34:91-109 (1995)]). 세포 생존력의 증가는 당뇨병, 심혈관 질환, 허혈 재관류 손상, 외상성 뇌 손상, 장기 이식, 화학 요법 및 신경 퇴행을 포함하여 세포 생존력 감소와 관련된 질환 치료에 대한 잠재적 유용성을 나타낸다. 또한, 세포 생존력의 증가는 배양에서 동물의 세포 생존력을 향상시킬 수 있는 잠재적인 유용성을 나타낸다.

또한, 당업자는 활성 또는 구조에 중요한 유사한 펩티드의 잔기를 식별하는 구조-기능 연구를 검토할 수 있다. 이러한 비교의 관점에서, 당업자는 유사한 펩티드에서 활성 또는 구조에 중요한 아미노산 잔기에 상응하는 펩티드에서 아미노산 잔기의 중요성을 예측할 수 있다. 당업자는 이러한 예측된 중요한 아미노산 잔기에 대한 화학적으로 유사한 아미노산 치환에 대해서 선택할 수 있다.

당업자는 또한 유사한 펩티드내 그 구조에 관하여 3차원 구조 및 아미노산 서열을 분석할 수 있다. 이러한 정보의 관점에서, 당업자는 그것의 3차원 구조에 대하여 펩티드의 아미노산 잔기의 정렬을 예상할 수 있다. 특정 실시형태에서, 당업자가 펩티드의 표면 위에 있는 것으로 예상한 아미노산 잔기에 라디칼 변화를 하지 못하도록 선택할 수 있는 것은, 이러한 잔기가 다른 분자와 중요한 상호작용에서 관여될 수 있기 때문이다. 또한, 당업자는 각각의 원하는 아미노산 잔기에서 단일 아미노산 치환을 함유하는 시험 변이체를 생성할 수 있다. 변이체는 그 다음 당업자에게 공지된 활성 검정을 사용하여 스크리닝될 수 있다. 이러한 변이체는 적합한 변이체에 대한 정보를 수집하는데 사용될 수 있다. 예를 들어, 특정 아미노산 잔기에 대한 변화가 파괴된, 바람직하지 않게 감소된, 또는 부적합한 활성을 초래하였다는 것을 발견하였다면, 이러한 변화를 가진 변이체는 회피될 수 있다. 다시 말해서, 이러한 일상적인 실험으로부터 수집된 정보에 기반하여, 당업자는 추가 치환이 단독으로 또는 다른 돌연변이와 조합으로 회피될 수 있는 아미노산을 쉽게 결정할 수 있다.

본 명세서에서 사용된 바와 같이 용어 "유도체"는 화학적으로 변형된 펩티드를 의미하고, 여기서 하나 이상의 측쇄가 펩티드에 공유 부착되어 있다. 용어 "측쇄"는 또한 "치환체"로서 지칭될 수 있다. 이러한 측쇄를 포함하는 유도체는 따라서 "유도된" 펩티드 또는 "유도된" 유사체일 것이다. 이러한 용어는 또한 유리 카르복시기의 에스테르 및 아미드, 유리 아미노기의 아실 및 알킬 유도체, 유리 히드록시기의 포스포에스테르 및 에테르와 같은 정상적으로 펩티드 분자의 일부가 아닌 하나 이상의 화학적 모이어티를 함유하는 펩티드를 지칭할 수 있다. 이러한 변형은 선택된 측쇄 또는 말단 잔기와 반응할 수 있는 유기 유도체화제와 펩티드의 표적화된 아미노산 잔기를 반응시킴으로써 분자 내에 도입될 수 있다. 바람직한 화학 유도체는 인산화된, C-말단 아미드화된 또는 N-말단 아세틸화된 펩티드를 포함한다. 상기 용어는 또한, 당업계에 공지된 수단에 의해, 잔기 또는 N- 또는 C-말단 기에서 측쇄로서 발생하고, 이들이 약제학적으로 허용 가능하게 남아있는 한, 즉 이들이 펩티드의 활성을 파괴하지 않는 한, 그것을 함유하는 조성물에 독성 특성을 부여하지 않는 한 그리고 이의 항원성 특성에 부정적으로 영향을 주지 않는 한, 본 명세서에서 포함되는 본 명세서에서 사용된 바와 같이 펩티드를 지칭할 수 있다. 이들 유도체는, 예를 들어, 카르복실기의 지방족 에스테르, 암모니아와 또는 1차 또는 2차 아민과 반응에 의해 생산된 카르복실기의 아미드, 아실 모이어티 (예를 들어, 알카노일 또는 탄소환식 아로일 기)와 반응에 의해 형성된 아미노산 잔기의 유리 아미노기의 N-아실 유도체 또는 아실 모이어티와 반응에 의해 형성된 유리 히드록실기의 O-아실 유도체(예를 들어, 세릴 또는 트레오닐 잔기의 것)을 포함할 수 있다.

변형된 아미노산 잔기는, 아미노산 잔기의 작용가가 보존되는 한, 또는 작용가가 변화한 경우(예를 들어 티로신의 치환된 페닐알라닌으로의 대체) 변형이 변형된 잔기를 함유하는 펩티드의 활성을 손상시키지 않는 한, 임의의 기 또는 결합이 결실, 부가, 또는 상이한 기 또는 결합으로 대체에 의해 변형된 아미노산 잔기이다.

본 명세서에서 사용된 바와 같이 용어 "치환체" 또는 "측쇄"는 아미노산 잔기에, 특히 아미노산 잔기에서 임의의 이용 가능한 위치에 결합된, 특히 공유 결합된 임의의 적합한 모이어티를 의미한다. 전형적으로, 적합한 모이어티는 화학적 모이어티이다.

용어 "지방산"은 4 내지 28개의 탄소 원자를 갖는 지방족 모노카르복실산을 지칭하고, 이것은 바람직하게는 비-분지형이고, 포화 또는 불포화될 수 있다. 본 개시내용에서 10 내지 16개의 아미노산을 포함하는 지방산이 바람직하다.

용어 "지방 이산"은 오메가 위치에서 추가의 카르복실산 기를 갖는 것을 제외하고는, 상기에서 정의된 바와 같은 지방산을 지칭한다. 따라서, 지방 이산은 디카르복실산이다. 본 개시내용에서 14 내지 20개의 아미노산을 포함하는 지방산이 바람직하다.

용어 "% 서열 동일성"은 용어 "% 동일성"과 본 명세서에서 상호 교환적으로 사용되고, 서열 정렬 프로그램을 사용하여 정렬된 경우, 2개 이상의 펩티드 서열 사이의 아미노산 서열 동일성의 수준 또는 2개 이상의 뉴클레오티드 서열 사이의 뉴클레오티드 서열 동일성의 수준을 지칭한다. 예를 들어, 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 80% 동일성은 정의된 알고리즘에 의해 결정된 80% 서열 동일성과 동일한 것을 의미하고, 주어진 서열이 또 다른 서열의 또 다른 길이와 적어도 80% 동일한 것을 의미한다.

용어 "% 서열 상동성"은 용어 "% 상동성"과 본 명세서에서 상호교환적으로 사용되고, 서열 정렬 프로그램을 사 용하여 정렬된 경우, 2개 이상의 펩티드 서열 사이의 아미노산 서열 상동성의 수준 또는 2개 이상의 뉴클레오티드 서열 사이의 뉴클레오티드 서열 상동성의 수준을 지칭한다. 예를 들어, 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 80% 상동성은 정의된 알고리즘에 의해 결정된 80% 서열 상동성과 동일한 것을 의미하고, 따라서 주어진 서열의 동족체는 주어진 서열의 길이에 대해 80% 초과의 서열 상동성을 갖는다.

2개의 서열 사이의 동일성 또는 상동성의 정도를 결정하는데 사용될 수 있는 예시적인 컴퓨터 프로그램은, 비제한적으로, NCBI 웹사이트에서 인터넷으로 공공연하게 입수 가능한, 한 벌의 BLAST 프로그램, 예를 들어, BLASTN, BLASTX 및 TBLASTX, BLASTP 및 TBLASTN을 포함한다. 또한 문헌[See also Altschul et al., 1990, J. Mol. Biol. 215:403-10(공개된 디폴트 셋팅, 즉, 파라미터 w=4, t=17 특별 참조) 및 문헌[Altschul et al., 1997, Nucleic Acids Res., 25:3389-3402] 참고. 서열 검색은 유전자은행 단백질 서열 및 다른 공공 데이터베이스에서 아미노산 서열에 비해 주어진 아미노산 서열을 평가하는 경우 BLASTP 프로그램을 사용하여 전형적으로 수행된다. BLASTX 프로그램은 유전자은행 단백질 서열 및 다른 공공 데이터베이스에서 아미노산 서열에 대한 모든 해독틀(reading frame)에서 번역된 핵산 서열 검색에 바람직하다. BLASTP 및 BLASTX 둘 다는 개방 갭 페널티 11.0, 및 연장된 갭 페널티 1.0의 디폴트 파라미터를 사용하여 운영되고, BLOSUM-62 매트릭스를 이용한다. (Id). 백분율 서열 동일성 계산에 더하여, BLAST 알고리즘은 또한 2개의 서열 사이의 유사성의 통계적인 분석을 수행한다(예를 들어, 문헌[Karlin & Altschul, Proc. Nat'l. Acad. Sci. USA, 90:5873-5787 (1993) 참고)]. BLAST 알고리즘에 의해 제공된 유사성의 하나의 측정치는, 2개의 뉴클레오티드 또는 아미노산 서열 사이의 매치가 우연히 발생할 개연성의 적응증을 제공하는, 최소 합계 확률 (P(N))이다.

"약제학적 조성물"는 동물 또는 인간에서 약제학적 용도에 적합한 조성물을 지칭한다. 약제학적 조성물은 약리적으로 그리고/또는 치료적 유효량의 활성제 및 약제학적으로 허용 가능한 부형제 또는 담체를 포함한다. 약제학적 조성물 및 이의 제조 방법은 당업자에게 쉽게 자명할 것이다. 이러한 조성물 및 이의 제조 방법은, 예를 들어, 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences, 19th Edition (Mack Publishing Company, 1995)]에서 찾아볼 수 있다. 약제학적 조성물은 일반적으로 멸균, 실질적으로 등장성이고, 미국 식품 의약품국의 모든 GMP 규정을 완전히 준수하여 제형화된다. 이 용어는 또한 인간을 포함하는 동물에서 사용하기 위해 미국 약전에 열거된 작용제 중 임의의 것을 포괄한다. 적합한 약학적 담체 및 제형은 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences, 21st Ed. 2005, Mack Publishing Co, Easton]에 기재되어 있다.

"약제학적으로 허용 가능한 담체" 또는 "약제학적으로 허용 가능한 부형제"는, 동물 또는 인간에 투여될 때 부정적인, 알러지성, 또는 다른 유해한 반응을 생성하지 않는 조성물을 지칭한다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이, "약제학적으로 허용 가능한 담체" 또는 "약제학적으로 허용 가능한 부형제"는 임의의 및 모든 용매, 분산 매질, 코팅물, 항균 및 항진균제, 등장성 및 흡수 연제, 및 생리적으로 양립 가능한 기타 동종의 것을 포함한다. 약제학적으로 허용 가능한 부형제의 일부 예는 물, 염수, 포스페이트 완충 식염수, 덱스트로스, 글리세롤, 에탄올 및 등, 뿐만 아니라 이들의 조합물이다. 많은 사례에서, 부형제는 조성물 중의 등장제, 예를 들어, 당, 폴리알코올 예컨대, 만니톨, 소르비톨, 또는 염화나트륨을 포함할 것이다. 약제학적으로 허용 가능한 부형제의 추가 예는 습윤제 또는 소량의 보조 물질, 예컨대, 습윤 또는 유화제, 보존제 또는 완충액인데, 이들은 펩티드의 유통 기한 또는 유효성을 향상시킨다.

본 명세서에서 사용된 바와 같이 용어 "약제학적으로 허용 가능한 염"은 모 펩티드의 생물학적 활성을 보유하고 생물학적으로 또는 달리 바람직하지 않은 것이 아닌 펩티드의 염을 지칭한다. 다수의 본 명세서에 개시된 펩티드는 아미노 및/또는 카르복실기 또는 이와 유사한 기의 존재 덕분에 산 및/또는 염기성 염을 형성할 수 있다. 약제학적으로 허용 가능한 염기 부가 염은 무기 및 유기 염기로부터 제조될 수 있다. 무기 염기로부터 유래된 염은, 단지 예로서, 나트륨, 칼륨, 리튬, 암모늄, 칼슘 및 마그네슘 염을 포함한다. 유기 염기로부터 유래된 염은 비제한적으로 일차, 2차 및 3차 아민의 염을 포함한다.

펩티드의 상응하는 용매화물을 제조, 정제 및/또는 취급하는 것이 편리하거나 바람직할 수 있다. 용어 "용매화물"는 용질(예를 들어, 펩티드, 펩티드의 염) 및 용매의 복합체를 지칭하기 위한 종래의 의미로 본 명세서에서 사용된다. 용매가 물이면, 용매화물은 편리하게 수화물, 예를 들어, 일-화물, 이수화물, 삼수화물 등으로 지칭될 수 있다. 달리 명시되지 않는 한, 특정 펩티드에 대한 언급은 또한 그의 용매화물 및 수화물 형태를 포함한다.

본 명세서에서 사용된 바와 같은 "공결정" 또는 "공결정 염"은 실온에서 2 이상의 고유의 고체로 구성된 결정성 물질을 의미하고, 상기 각각은 고유의 물리적 특성 예컨대, 구조, 용융점, 및 융합열, 흡습성, 용해도 및 안정성을 갖는다. 공결정 또는 공결정 염은 그 자체로 공지된 공결정화 방법에 따라 생산될 수 있다. 용어 공결정(또는 공결정) 또는 공결정 염은 또한, 숙주 API(활성 약제학적 성분) 분자 또는 분자, 예컨대, 화학식 I의 펩티드, 및 게스트(또는 공형성체(co-former)) 분자 또는 분자가 존재하는 다성분 시스템을 지칭한다.

본 명세서에서 사용되는 바와 같이, "치료적 유효량"의 펩티드는 개시되고 청구된 방법에 따라 대상체에게 제공되는 경우 비정상적인 세포 증식 및 악성 종양과 관련된 세포 신호전달을 조절하고, 세포 생존력에 영향을 미치고, 신경보호를 제공하는 것과 같은 생물학적 활성에 영향을 미친다.

용어 "치료하다", "치료하는" 및 "치료"는 유익한 또는 원하는 임상 결과 수득을 위한 접근법을 지칭한다. 또한, 본 명세서에서 "치료"에 대한 언급은 치유, 일시적 및 예방적 치료를 포함한다. 용어 "치료하는"은 병상(pathology)(질환, 장애 또는 상태)의 발달 또는 진행 억제, 예방 또는 중지 및/또는 병상의 감소, 관해, 또는 퇴행을 지칭한다. 당업자는 다양한 방법론 및 검정을 사용하여 병상의 진전을 평가할 수 있으며, 유사하게, 다양한 방법론 및 검정을 사용하여 병상의 감소, 관해 또는 퇴행을 평가할 수 있음을 이해할 것이다.

용어 "세포 생존 향상"은, 대조군에 비교된 경우, 주어진 병태를 이겨내는 세포의 수, 예를 들어, 치료의 부재 하에서 동일한 병태를 이겨내는 세포의 수의 증가를 지칭한다. 병태는 시험관내, 생체내, 생체외, 또는 동소(in situ)일 수 있다. 개선된 세포 생존은 비교 값으로 표현될 수 있고, 예를 들어, 세포 생존이 2배 개선되면 2배 많은 세포가 생존한다. 개선된 세포 생존은 아폽토시스의 감소, 세포의 수명의 증가, 또는 세포 기능 및 상태의 향상에서 비롯할 수 있다.

명백하게 하기 위해, 용어 "지시사항"은 그것의 통상적으로 이해된 정의에 더하여, 관리 기관에 의해 승인된 표지에서 정보를 포함하는 의미이다.

실시형태에서, 펩티드는 유전자 요법 방법을 통해서 이의 뉴클레오티드 등가물로서 투여될 수 있다. 용어 "뉴클레오티드 등가물"은 펩티드를 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 임의의 핵산을 포함한다. 예를 들어, 본 발명은 본 명세서에 기재된 펩티드를 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 포함하거나 이것으로 이루어진 폴리뉴클레오티드를 포함한다. 본 발명은 본 명세서에 기재된 펩티드를 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 발현 벡터를 포함하는, 벡터를 또한 포함한다. 발현 벡터는 펩티드가 발현 벡터를 함유하는 적합한 숙주 세포에서 발현되도록 암호화 서열에 작동 가능하게 연결된 프로모터와 같은 하나 이상의 발현 조절 서열을 포함한다. 일 실시형태에서, 펩티드-관련된 폴리뉴클레오티드는 아데노-관련된 바이러스(AAV)로부터 유래될 수 있는 플라스미드 또는 벡터에서 암호화된다. AAV는 재조합 AAV 바이러스일 수 있고, 예컨대, 하기의 캡시드 혈청형을 비제한적으로 포함할 수 있다: AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV9.47, AAV9(hu14), AAV10, AAV11, AAV12, AAVrh8, AAVrh10, AAV-DJ 및 AAV-DJ8. 비제한적인 예로서, 재조합 AAV 바이러스의 캡시드는 AAV2이다. 비제한적인 예로서, 재조합 AAV 바이러스의 캡시드는 AAVrh10이다. 비제한적인 예로서, 재조합 AAV 바이러스의 캡시드는 AAV9(hu14)이다. 비제한적인 예로서, 재조합 AAV 바이러스의 캡시드는 AAV-DJ이다. 비제한적인 예로서, 재조합 AAV 바이러스의 캡시드는 AAV9.47이다. 비제한적인 예로서, 재조합 AAV 바이러스의 캡시드는 AAV-DJ8이다. 실시형태는 서열번호 1 내지 31의 펩티드 서열의 뉴클레오티드 등가물을 포함한다.

당업자는, 표적 세포가 종 특이적, 유도성, 조직- 특정, 또는 세포 주기-특이적인 프로모터를 비 제한적으로 포함하는 특이적 프로모터를 필요로 할 수 있음을 인식할 수 있다(내용이 전체적으로 참조에 의해 본 명세서에 포함된 문헌[Parr et al, Nat. Med. 3:1145-9 (1997)] 참고).

본 명세서에서 사용된 바와 같이, "벡터"는 본 발명의 폴리뉴클레오티드와 같은 이종성 분자의 담체로서 수송되고, 형질도입 또는 달리 작용하는 임의의 분자 또는 모이어티이다. "바이러스 벡터"는 관심 페이로드 분자를 암호화하거나 포함하는 하나 이상의 폴리뉴클레오티드 영역, 예를 들어, 트랜스진, 폴리펩티드 또는 다중-폴리펩티드를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터이다. 본 발명의 바이러스 벡터는 재조합으로 생산될 수 있고 아데노-관련된 바이러스(AAV) 모체 또는 기준 서열을 기반으로 할 수 있다. 본 발명에서 유용할 수 있는 혈청형은AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV9.47, AAV9(hul4), AAV10, AAV11, AAV 12, AAVrh8, AAVrhlO, AAV-DJ 및 AAV-DJ8로부터 발생하는 것들 중 임의의 것을 포함한다.

실시형태에서, 본 발명에서 유용할 수 있는 혈청형은 AAV-DJ8일 수 있다. AAV-DJ8의 아미노산 서열은 헤파린 결합 도메인 (HBD)를 제거하기 위해 2 이상의 돌연변이를 포함할 수 있다. 비제한적인 예로서, 미국 특허 제7,588,772호(이들의 내용은 본 명세서에 전체적으로 참조에 의해 포함됨)에서 서열번호 1로서 기재된 AV-DJ 서열은, 2개의 돌연변이를 포함할 수 있다: (1) 아미노산 587에서의 아르기닌(R; arg)이 글루타민(Q; gln)로 변화되는 R587Q 및 (2) 아미노산 590에서의 아르기닌(R; arg)이 트레오닌(T; thr)로 변화되는 R590T. 또 다른 비제한적인 예로서 3개의 돌연변이를 포함할 수 있다: (1) 아미노산 406에서의 라이신 (K; lys)이 아르기닌(R; arg)으로 변화되는 K406R, (2) 아미노산 587에서의 아르기닌(R; arg)이 글루타민(Q; gln)으로 변화되는 R587Q 및 (3) 아미노산 590에서의 아르기닌(R; arg)이 트레오닌(T; thr)으로 변화되는 R590T.

AAV 벡터는 또한, 자기-상보적 AAV 벡터 (scAAVs)를 포함할 수 있다. scAAV 벡터는 함께 어닐링되어 이중 가닥 DNA를 형성하는 DNA 가닥 둘 모두를 함유한다. 제2 가닥 합성을 스킵함으로써, scAAV는 세포에서 신속 발현을 허용한다.

일 실시형태에서, 약제학적 조성물은 AAV 캡시드 및 AAV 벡터 게놈을 포함하는 재조합 아데노-관련된 바이러스(AAV) 벡터를 포함한다. AAV 벡터 게놈은 본 명세서에 기재된 적어도 하나의 펩티드 관련된 폴리뉴클레오티드, 예컨대, 비제한적으로, 서열번호 1 내지 31 또는 이에 대해 적어도 95% 동일성을 갖는 변이체를 포함할 수 있다. 약제학적 조성물 중 재조합 AAV 벡터는 AAV 벡터 게놈을 함유하는 적어도 70%를 가질 수 있다.

일 실시형태에서, 약제학적 조성물은 AAV 캡시드 및 AAV 벡터 게놈을 포함하는 재조합 아데노-관련된 바이러스(AAV) 벡터를 포함한다. AAV 벡터 게놈은 본 명세서에 기재된 적어도 하나의 펩티드 관련된 폴리뉴클레오티드, 예컨대, 비제한적으로, 서열번호 1 내지 31 또는 이에 대해 적어도 95% 동일성을 갖는 변이체, 플러스 추가의 N-말단 프롤린을 포함할 수 있다. 약제학적 조성물 중 재조합 AAV 벡터는 AAV 벡터 게놈을 함유하는 적어도 70%를 가질 수 있다.

일 실시형태에서, 펩티드-관련된 폴리뉴클레오티드를 포함하는 바이러스 벡터는 유럽 특허 출원 제EP1857552(이들의 내용은 본 명세서에 전체적으로 참조에 의해 포함됨)호에 기재된 바와 같이 AAV 비리온의 전달 방법을 사용하여 투여 또는 전달될 수 있다.

일 실시형태에서, 펩티드-관련된 폴리뉴클레오티드를 포함하는 바이러스 벡터는 유럽 특허 출원 제EP2678433 (이들의 내용은 본 명세서에 전체적으로 참조에 의해 포함됨)호에 기재된 바와 같이 AAV 벡터를 사용하여 단백질을 전달하는 방법을 사용하여 투여 또는 전달될 수 있다.

일 실시형태에서, 펩타이드-관련된 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 바이러스 벡터는 미국 특허 제5858351호(이들의 내용은 본 명세서에 전체적으로 참조에 의해 포함됨)에 기재된 바와 같이 AAV 벡터를 사용하여 DNA 분자를 전달하는 방법을 사용하여 투여 또는 전달될 수 있다.

일 실시형태에서, 펩티드-관련된 폴리뉴클레오티드를 포함하는 바이러스 벡터는 미국 특허 제6211 163호(이들의 내용은 본 명세서에 전체적으로 참조에 의해 포함됨)에 기재된 바와 같이 DNA를 혈류로 전달하는 방법을 사용하여 투여 또는 전달될 수 있다.

일 실시형태에서, 펩티드-관련된 폴리뉴클레오티드를 포함하는 바이러스 벡터는 미국 특허 제6325998호(이들의 내용은 본 명세서에 전체적으로 참조에 의해 포함됨)에 기재된 바와 같이 AAV 비리온을 전달하는 방법을 사용하여 투여 또는 전달될 수 있다.

일 실시형태에서, 펩티드-관련된 폴리뉴클레오티드를 포함하는 바이러스 벡터는 미국 특허 제7588757호(이들의 내용은 본 명세서에 전체적으로 참조에 의해 포함됨)에 기재된 바와 같이 페이로드를 중추신경계에 전달하는 방법을 사용하여 투여 또는 전달될 수 있다.

일 실시형태에서, 펩티드-관련된 폴리뉴클레오티드를 포함하는 바이러스 벡터는 미국 특허 제8283151호(이들의 내용은 본 명세서에 전체적으로 참조에 의해 포함됨)에 기재된 바와 같이 페이로드를 전달하는 방법을 사용하여 투여 또는 전달될 수 있다.

일 실시형태에서, 펩티드-관련된 폴리뉴클레오티드를 포함하는 바이러스 벡터는 국제공개 WO2001089583호(이들의 내용은 본 명세서에 전체적으로 참조에 의해 포함됨)에 기재된 바와 같이 글루탐산 탈탄산효소(GAD) 전달 벡터를 사용하여 페이로드를 전달하는 방법을 사용하여 투여 또는 전달될 수 있다.

일 실시형태에서, 펩티드-관련된 폴리뉴클레오티드를 포함하는 바이러스 벡터는 국제공개 WO2012057363호(이들의 내용은 본 명세서에 전체적으로 참조에 의해 포함됨)에 기재된 바와 같이 페이로드를 신경 세포에 전달하는 방법을 사용하여 투여 또는 전달될 수 있다.

일 실시형태에서, 펩티드-관련된 폴리뉴클레오티드를 포함하는 바이러스 벡터는 미국 특허 제9585971호(이들의 내용은 본 명세서에 전체적으로 참조에 의해 포함됨)에 기재된 바와 같이 페이로드를 세포에 전달하는 방법을 사용하여 투여 또는 전달될 수 있다.

일 실시형태에서, 펩티드-관련된 폴리뉴클레오티드를 포함하는 바이러스 벡터는 문헌[Deverman et al. Nature Biotechnology, 34, 204-09 (2016)]에 기재된 바와 같이 페이로드를 세포에 전달하는 방법을 사용하여 투여 또는 전달될 수 있다.

일 실시형태에서, 펩티드-관련된 폴리뉴클레오티드를 포함하는 바이러스 벡터는 미국 특허 제7198951호[adeno-assoicated virus (AAV) serotype 9 sequences, vectors containing same, and uses therefor], 미국 특허 제9217155호[isolation of novel AAV's and uses thereof], 국제공개 WO2011126808호[pharmacologically induced transgene ablation system], 미국 특허 제6015709호[transcriptional activators, and compositions and uses related thereto], 미국 특허 제7094604호[Production of pseudotyped recombinant AAV virions], 국제공개 WO2016126993호[anti-tau constructs], 미국 특허 제7094604호[recombinant AAV capsid protein], 미국 특허 제8,292,769호[Avian adenoasssocited viru (aaav) and uses thereof], 미국 특허 제9102949호[CNS targeting aav vectors andmethods of use thereof], 미국 특허 제20160120960호[adeno-associated virus mediated gene transfer to the central nervous system], 국제공개 WO2016073693호[AADC polynucleotides for the treatment of parkinson's disease], 국제공개 WO2015168666호[AAV VECTORS FOR RETINAL AND CNS GENE Therapy], 미국 특허출원공개 US20090117156호[Gene Therapy for Niemann-Pick Disease type A] 또는 국제공개 WO2005120581호[gene therapy for neurometabolic disorders]에 기재된 바와 같이 AAV 비리온의 전달 방법을 사용하여 투여 또는 전달될 수 있다.

본 명세서에 기재된 바이러스 벡터의 약제학적 조성물은 생체이용률, 적정 약물 농도 및/또는 분포의 부피 중 하나 이상을 특징으로 할 수 있다.

일부 실시형태에서, 본 발명의 펩티드-관련된 뉴클레오티드 및/또는 펩티드-관련된 뉴클레오티드 조성물은 디바이스와 조합되고, 그것 상에 코팅되거나 그것 내에 포매될 수 있다. 디바이스는, 비제한적으로 스텐트, 펌프 및/또는 다른 이식가능 치료적 디바이스를 포함할 수 있다. 추가로, 펩티드-관련된 뉴클레오티드 및/또는 펩티드-관련된 뉴클레오티드 조성물은 대상체에게 전달될 수 있고, 한편 상기 대상체는 대상체에서 심부 정맥 혈전증(DVT: deep vein thrombosis)의 기회를 감소시키기 위해 압축 디바이스 예컨대, 비제한적으로, 압축 디바이스를 사용하는 것이다. 본 발명은 하나 이상의 펩티드-관련된 폴리뉴클레오티드 페이로드 분자를 암호화하는 바이러스 벡터를 혼입할 수 있는 디바이스를 제공한다. 이들 디바이스는 그것을 필요로 하는 대상체, 예컨대, 인간 환자에게 즉시 전달될 수 있는 바이러스 벡터를 안정한 제형 내에 함유한다.

투여용 디바이스는 본 명세서에 교시된 단일, 다중- 또는 분할-투약 레지멘에 따라 본 발명의 펩티드-관련된 뉴클레오티드를 포함하는 바이러스 벡터를 전달하기 위해 이용될 수 있다.

본 명세서 및 첨부된 청구범위에 사용된 단수 형태의 표현은, 문맥에서 명백하게 달리 지시되지 않는 한, 복수의 언급대상을 포함한다. 본 명세서에서 기재된 개시내용의 양태 및 변형이 양태 및 변형"으로 이루어진" 및/또는 "으로 본질적으로 이루어진"을 포함하는 것이 이해된다.

본 명세서에서 사용된 바와 같이 용어 "약"은 10 퍼센트만큼 언급된 값의 범위 또는 그 값 초과 또는 미만을 의미하지만, 임의의 값 또는 값의 범위를 이러한 더 넓은 정의로만 지정하도록 의도되지 않는다. 용어 "약"이 선행된 각각의 값 또는 값의 범위는 또한 언급된 절대값 또는 값의 범위의 실시형태를 포괄하도록 의도된다.

본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "예방하는"은 질환에 대하여 위험에 노출될 수 있는, 그러나 질환을 가진 것으로 아직 진단되지 않은 대상체에서 질환, 장애 또는 병태를 발생으로부터 막는 것을 지칭한다.

본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "대상체"는 포유동물, 바람직하게는 병상을 앓고 있는 임의의 연령에서 인간을 포함한다. 바람직하게는, 이러한 용어는 병상을 발달시키는 위험에 처한 개체를 포괄한다.

본 명세서에 사용된 용어 "예방"은 질병 또는 기타 바람직하지 않은/이상한 건강 사건 또는 과정의 예방을 의미한다. 본 명세서에서 사용된 "예방하다"는 용어 및 그로부터 파생된 단어는 100% 또는 완전한 예방 또는 영구적 예방을 의미하지 않는다. 발병 지연 및/또는 발생 감소(인구 수준에서 측정 가능)를 포함한 다양한 예방 수준은 모두 이점 또는 치료 효과로 인식되고 예방으로 점수가 매겨진다. 이와 관련하여, 본 명세서에 기재된 방법은 대상체에서 임의의 양의 임의의 예방 수준을 제공할 수 있다. 또한, 예방은 질환의 하나 이상의 병태 또는 증상의 예방(발병 지연 포함)을 포함할 수 있다. 예시적인 양태에서, 방법은 1일, 2일, 4일, 6일, 8일, 10일, 15일, 30일, 2개월, 4개월, 6개월, 1년, 2년, 4년 이상까지 발병 또는 재발을 예방한다.

개선, 보존, 예방, 악화 저해 및 예방은 임상적으로 의미 있는 최소 시간 동안 문제의 지표, 마커 또는 매개변수를 측정함으로써 개별적으로 입증할 수 있으며, 이는 해당 건강 평가에 따라 달라질 것이다. 예시적인 기간은 예를 들어 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 15, 18, 24, 30, 36, 42, 48, 60개월 이상, 또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10년 이상을 포함한다. 추가적으로 또는 대안적으로, 개선, 보존, 예방, 악화 저해 및 예방은 시간 경과에 따라 집단에서 문제의 매개변수를 측정함으로써 집단에서 입증될 수 있다. 집단 수준에서, 시간 경과에 따른 치료 집단의 측정값과 치료를 받지 않은 대조군의 측정값을 비교함으로써, 개선, 보존, 예방, 악화 저해 및 예방을 통계적으로 입증할 수 있다. 모든 건강 평가 유형에 대해 개체 수준에서 효과를 입증하는 것은 불가능할 수 있지만 이러한 효과는 종종 통계 분석을 통해 집단 수준에서 입증될 수 있다. 개선, 보존, 예방 제공, 악화 저해 또는 예방에 "유효한" 용량은 집단 연구를 통해 추정하거나 입증할 수 있다. 적어도 개체 수준에서 입증하기 어렵거나 어려운 매개변수의 경우, 집단 수준에서 효과를 입증하는 데 필요한 기간 동안 유효량을 투여받은 개체는 개선, 보존, 예방, 또는 건강 수명 매개변수의 악화 저해가 달성된 개체로 점수가 매겨졌다.

약제학적 조성물은 전형적으로 비경구 투여에 적합하다. 본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 약제학적 조성물의 "비경구 투여"는 대상체의 조직의 물리적 파괴 및 조직의 파괴를 통한 약제학적 조성물의 투여에 의해 특징지어지는 임의의 투여 경로를 포함하며, 이에 따라, 일반적으로 혈류 내로, 근육 내로, 또는 내부 기관 내로의 직접 투여를 초래한다. 이에 따라, 비경구 투여는, 이에 제한되지는 않으나, 조성물의 주사에 의한, 외과적 절개를 통한 조성물의 적용에 의한, 조직-관통성 비-수술적 상처를 통한 조성물의 적용 등에 의한 약제학적 조성물의 투여를 포함한다. 특히, 비경구 투여는, 이에 제한되지는 않으나, 피하 주사, 복강내 주사, 근육내 주사, 흉골내 주사, 정맥내 주사, 동맥내 주사, 경막내 주사, 심실내 주사, 요도내 주사, 두개내 주사, 윤활막내(intrasynovial) 주사 또는 주입; 또는 신장 투석 주입 기술을 포함하는 것으로 고려된다.

다양한 실시형태에서, 펩티드는 약제학적으로 허용 가능한 부형제와 혼합되어 경구로 또는 정맥내 주사, 근육내 주사, 피하 주사, 복강내 주사, 경피 주사, 동맥-내 주사, 흉골내 주사, 경막내 주사, 심실내 주사, 요도내 주사, 두개내 주사, 윤활막내 주사를 통해 또는 주입을 통해 대상체에 전신적으로 투여될 수 있는 약제학적 조성물을 형성한다. 약제학적 조성물은 바람직하게는 천연으로 발견되지 않는 적어도 하나의 성분을 함유한다.

비경구 투여에 적합한 약제학적 조성물의 제형은 일반적으로 멸균수 또는 멸균 등장 식염수와 같은 약제학적으로 허용되는 부형제와 조합된 활성 성분을 일반적으로 포함한다. 이러한 제형은 볼루스(bolus) 투여에 또는 연속 투여에 적합한 형태로 제조, 패키징, 또는 판매될 수 있다. 주사 가능한 제형은 단위 투여 형태, 예컨대, 보존제를 함유하는 앰플로 또는 다회-용량 용기로 제조, 패키징, 또는 판매될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제형은, 이에 제한되지는 않으나, 현탁액, 용액, 유성 또는 수성 비히클 중 에멀젼, 페이스트 등을 포함한다. 이러한 제형은, 이에 제한되지는 않으나, 현탁제, 안정화제, 또는 분산제를 포함하는 하나 이상의 추가적인 구성요소를 추가로 포함할 수 있다. 비경구 투여용 제형의 일 실시형태에서, 유효 성분은 재구성된 조성물의 비경구 투여에 앞서 적합한 비히클(예를 들어 멸균 발열원-무함유 물)을 이용한 재구성을 위해 건조(즉, 분말 또는 과립) 형태로 제공된다. 비경구 제형은 또한 염, 탄수화물 및 완충제(바람직하게는 pH 3 내지 9)와 같은 담체를 함유할 수 있는 수용액을 포함하지만, 일부 적용의 경우, 이것은 멸균 비수성 용액 또는 무균, 발열물질이 없는 물과 같은 적합한 비히클과 함께 사용되는 건조된 형태로서 더 적합하게 제형화될 수 있다. 예시적인 비경구 투여 형태는 멸균 수용액, 예를 들어, 수성 프로필렌 글리콜 또는 덱스트로스 용액 중의 용액 또는 현탁액을 포함한다. 이러한 투여 형태는, 바람직한 경우에, 적절하게 완충될 수 있다. 유용한 기타 비경구-투여 가능한 제형은 미정질 형태인, 또는 리포좀성 제제인 활성 성분을 포함하는 것을 포함한다. 비경구 투여를 위한 제형은 즉시 및/또는 변형 방출되도록 제형화될 수 있다. 변형 방출 제형은 지연된-, 지속된-, 펄스(pulse)된-, 제어된-, 표적화된 및 프로그래밍된 방출을 포함한다.

본 개시내용은 경피 또는 국소 전달을 위한, 적용 시점에서 국소적으로 작용하거나, 신체의 혈액 순환에 들어가는 즉시 전신적으로 작용하는 조성물 및 방법을 포함한다. 이러한 시스템에서, 전달은 기술, 예컨대, 연고 등의 형태인 물질 또는 약물의 직접적인 국소적 적용에 의해, 또는 약물(또는 기타 물질)을 보유하고 시간-제어 방식으로 피부에 이것을 방출하는 저장소 등과 함께인 패치의 부착에 의해 달성될 수 있다. 국소 투여에 대해, 조성물은 에멀젼, 로션, 겔, 크림, 젤리, 용액, 현탁액, 연고, 그리고 경피 패치의 형태일 수 있다. 일부 국소 전달 조성물은 폴리에닐포스파티딜콜린(본 명세서에 약칭 "PPC")을 함유할 수 있다. 일부 경우에, PPC는 표피 침투를 향상시키기 위해 사용될 수 있다. 용어 본 명세서에서 사용된 바와 같은 "폴리에닐포스파티딜콜린"은, 2개의 지방산 모이어티를 보유하고 있는 임의의 포스파티딜콜린을 의미하고, 2개의 지방산 중 적어도 하나는 그것의 구조 내에 적어도 2개의 이중 결합을 가지고 있는 불포화된 지방산, 예컨대, 리놀레산이다. 이러한 국소 제형은 하나 이상의 유화제, 하나 이상의 계면활성제, 하나 이상의 폴리글리콜, 하나 이상의 레시틴, 하나 이상의 지방산 에스테르, 또는 하나 이상의 경피 침투 증강제를 포함할 수 있다. 제제는 멸균 수성 또는 비수성 용액, 현탁액 및 에멀젼을 포함할 수 있으며, 이는 특정한 실시형태에서 대상체의 혈액과 등장성일 수 있다. 비수성 용매의 예는 폴리프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 식물성 오일, 예컨대, 올리브 오일, 참기름, 코코넛 오일, 낙화생유(arachis oil), 땅콩 오일, 미네랄 오일, 유기 에스테르, 예컨대, 올레인산에틸, 또는 합성 모노 또는 디-글리세리드를 포함하는 고정유(fixed oil)이다. 수성 용매는 식염수 및 완충 매질을 포함하는, 물, 알코올/수용액, 에멀젼 또는 현탁액을 포함한다. 비경구 비히클은 염화나트륨 용액, 1,3-부탄디올, 링거 덱스트로스, 덱스트로스 및 염화나트륨, 젖산화 링거 또는 고정유를 포함한다. 정맥 비히클은 체액 및 영양 보충제, 전해질 보충제(예컨대, 링거 덱스트로스를 기반으로 한 것) 등을 포함한다. 보존제 및 기타 첨가제, 예컨대, 예를 들어, 항균제, 항산화제, 킬레이트화제 및 불활성 가스 등이 또한 존재할 수 있다.

예를 들어, 일 양태에서, 멸균 주사 가능한 용액은, 요구되는 바에 따라, 상기에 열거된 구성요소의 하나 또는 조합과 함께 적절한 용매 중 요구되는 양의 펩티드를 혼입하고, 그후에 여과 멸균함으로써 제조될 수 있다. 일반적으로, 분산액은 염기성 분산액 매질 및 상기에 열거된 것들로부터 요구되는 기타 구성요소를 함유하는 멸균된 비히클 내로 활성 펩티드를 혼입함으로써 제조된다. 멸균 주사 가능한 용액의 제조를 위한 멸균 분말의 경우, 제조 방법, 예컨대, 진공 건조 및 동결-건조는 유효성분 더하기 이의 이전에 멸균-여과된 용액으로부터의 임의의 추가적인 바람직한 구성요소의 분말을 수득한다. 용액의 적절한 유동성은, 예를 들어, 코팅, 예컨대, 레시틴의 사용에 의해, 분산액의 경우 요구되는 입자 크기의 유지에 의해 및 계면활성제의 사용에 의해 유지될 수 있다. 주사 가능한 조성물의 연장된 흡수는 흡수를 지연시키는 작용제, 예를 들어, 모노스테아레이트 염 및 젤라틴을 조성물에 포함시킴으로써 야기될 수 있다. 다양한 실시형태에서, 주사 가능한 조성물은 상업적으로 입수 가능한 일회용 주사 가능한 디바이스를 사용하여 투여될 것이다.

비경구 제형은 단위-용량 또는 다회-용량 밀봉된 용기, 예컨대, 앰풀 및 바이알로 존재할 수 있으며, 주사를 위해 사용 직전에, 단지 멸균 액체 부형제, 예를 들어, 물의 첨가만을 요구하는 냉동-건조된(동결건조된) 상태로 저장될 수 있다. 즉석 주사 용액 및 현탁액은 당업계에 공지된 종류의 멸균 분말, 과립, 및 정제로부터 제조될 수 있다. 주사 가능한 제형은 본 개시내용에 부합한다. 주사 가능한 조성물을 위한 효과적인 약제학적 부형제에 대한 요구사항은 당업자에게 잘-공지되어 있다(예를 들어, 문헌[Pharmaceutics and Pharmacy Practice, J.B. Lippincott Company, Philadelphia, Pa., Banker and Chalmers, eds., pages 238-250 (1982)], 및 문헌[ASHP Handbook on Injectable Drugs, Toissel, 4th ed., pages 622-630 (1986)] 참고).

추가적으로, 본 개시내용의 펩티드는 다양한 염기, 예컨대, 유화 염기 또는 수-가용성 염기와 함께 혼합함으로써 직장 투여용 좌제로 만들어질 수 있다. 질 투여에 적합한 제형은 유효 성분에 더하여, 당업계에 적절한 것으로 공지된 담체를 함유하는 질 좌약(pessary), 탐폰, 크림, 겔, 페이스트(paste), 폼, 또는 스프레이 제형으로 존재할 수 있다.

상기-기재된 약제학적 조성물 외에, 본 개시내용의 펩티드가 봉입 복합체, 예컨대, 시클로덱스트린 봉입 복합체, 또는 리포좀으로 제형화될 수 있음이 당업자에 의해 인정될 것이다.

펩티드는 비강내로 또는 흡입에 의해, 전형적으로 건조 분말 흡입기로부터 건조 분말의 형태로 (예를 들어, 적합한 약제학적으로 허용 가능한 담체와 혼합된 단독으로, 혼합물로서, 또는 혼합된 성분 입자로서), 적합한 추진제의 사용과 함께 또는 사용 없이, 가압된 용기, 펌프, 스프레이, 아토마이저 (바람직하게는 미세 미스트를 생산하기 위해 전기유체역학을 사용하는 아토마이저), 또는 분무기로부터 에어로졸 분무로서, 또는 점비액으로서 투여될 수 있다. 가압된 용기, 펌프, 스프레이, 아토마이져, 또는 분무기는 일반적으로, 예를 들어, 용매로서 활성, 추진제(들)의 방출 분산, 가용화, 또는 확장에, 적합한 작용제를 포함하는 펩티드의 용액 또는 현탁액을 함유한다. 건조 분말 또는 현탁액 제형에서 사용에 앞서, 의약품은 흡입에 의한 전달에 적합한 크기(전형적으로 5 마이크론 미만)으로 일반적으로 미분화된다. 이것은 임의의 적절한 파쇄(comminuting) 방법, 예컨대, 나선형 제트 밀링, 유동층 제트 밀링, 나노입자를 형성하기 위한 초임계 유체 가공, 고압 균질화, 또는 분무 건조에 의해 달성될 수 있다. 흡입기 또는 취입기에서 사용을 위한 캡슐, 블리스터 및 카트리지는 펩티드, 적합한 분말 베이스 및 성능 변형제의 분말 믹스를 함유하도록 제형화될 수 있다. 적합한 풍미제, 예컨대, 멘톨 및 레보멘톨, 또는 감미제, 예컨대, 사카린 또는 사카린나트륨이 흡입된/비강내 투여를 위하여 의도된 그들 제형에 첨가될 수 있다. 흡입된/비강내 투여용 제형은 즉각적인 및/또는 변형된 방출이 되도록 제형화될 수 있다. 변형 방출 제형은 지연된-, 지속된-, 펄스(pulse)된-, 제어된-, 표적화된 및 프로그래밍된 방출을 포함한다. 건조 분말 흡입기 및 에어로졸의 경우에, 투여량 단위는 계량된 양을 전달하는 밸브에 의해 결정된다. 단위는 펩티드의 계량 용량 또는 "퍼프"를 투여하기 위해 전형적으로 배열된다. 전체적인 1일 용량은 전형적으로 단일 용량으로, 또는 더 일반적으로, 온종일 분할 용량으로서 투여될 것이다.

한 양상에 따르면, 펩티드는 의약, 특히 인간 의약에 사용하기 위한 것이다. 펩티드는 일탈적인 세포 증식 및 악성종양과 연관된 세포 신호전달을 조절하는 데 효과적이다. 추가로, 본 개시내용은 세포 생존력 및 세포보호작용에 영향을 미치는 데 효과적인 펩티드를 제공한다.

일부 양상에서, 아폽토시스 세포 사멸, 염증, 자가면역, 혈관신생 및/또는 전이가 병인학적 결정인자인 상태를 치료하기 위한 방법이 본 명세서에 제공된다.

또 다른 양상에서, 뼈 또는 연골 장애/질환, 암, 자가면역 질환, 섬유성 질환, 염증성 질환, 비만, I형 및 II형 당뇨병, 신경퇴행성 질환, 골절, 골격 연골이형성증, 감염성 질환, 폐 질환, 불임, 근육 질환, 노화, 피부 질환 및 대사성 질환의 예방 및/또는 치료에 사용하기 위한 펩티드가 제공된다.

일부 양상에서, 펩티드는 열 충격 단백질 및/또는 대사 및 산화 스트레스의 유도와 같은 이에 제한되지 않는 세포 스트레스 반응과 관련된 상태를 치료하기 위해 투여된다. 세포 스트레스 반응은 예를 들어, 열적, 면역학적, 사이토카인, 산화적, 대사적, 무산소성, 소포체, 단백질 풀림, 영양적, 화학적, 기계적, 삼투압 및 혈당 스트레스를 포함하는 임의의 스트레스 요인에 반응할 수 있다.

일부 양상에서, 펩티드는 염증성 병태, 예컨대, 비제한적으로 당뇨병, 심혈관 질환, 신장 질환, 망막병증, 비만, 대사 질환, 신경퇴행성 질환, 위장 질환, 자가면역 질환, 류마티스 질환 또는 감염성 질환을 치료하기 위해서 본 명세서에 제공된 방법에 따라서 투여된다.

구체적인 이론에 얽매이고자 함은 아니지만, 지방 세포를 펩티드로 처리한 후 세포 배양 배지에서의 유리 지방산(FFA)은 지질 또는 지방산 수준의 세포 조절에 관여된 경로의 조절을 나타낸다. 배지에서 지방산 수준의 감소는, 이에 제한되지는 않으나 신호전달 경로의 저해, 세포 지질생산의 감소, 지방분해의 감소, 또는 지방산 산화의 증가를 포함하는 많은 과정에 기인할 수 있다. 유리 지방산의 순 농도에 영향을 갖는 펩티드는 대사 장애의 치료에 대해 잠재적인 유용성을 갖는다.

펩티드는 포도당, 활성 산소 종(ROS) 및/또는 유리 지방산(FFA)의 비정상적인 혈중 수준에 의해 드러나는 불균형 대사 상태와 연관된 병태의 치료에 유용하다. 유리한 대사 상태는 균형잡힌 에너지 항상성으로 정의되며, 건강한 대상체의 것과 동등한(건강한 인구의 평균 수준의 범위 내) 포도당, ROS 및 FFA의 혈중 수준에 의해 특징지어진다. 따라서, 본 명세서에서 사용된 바와 같이 불리한 대사 상태는 비정상적인, 즉 건강한 대조군 대상체(예를 들어 의사 또는 당업자에 의해 평가됨)에서 그들의 각각의 수준과 비교하여 현저하게 변경된 포도당, ROS 및/또는 FFA의 혈중 수준을 지칭한다. 용어 불리한 대사 상태는 일부 실시형태에서 건강한 대조군 대상체(예를 들어 의사 또는 당업자에 의해 평가됨)에서 그들의 각각의 수준과 비교하여 현저하게 향상된 포도당, ROS 및/또는 FFA의 혈중 수준을 지칭한다. 불리한 대사 상태는 포도당(탄수화물) 및/또는 지방산 산화 경로를 수반할 수 있는 비정상적인 대사에 기인할 수 있다. 지방산 산화 경로에서 이상현상(aberration)이 수반될 때, 불리한 대사 상태는 건강한 대조군 대상체와 비교하여 현저하게 향상된 ROS 혈중 수준 및/또는 비정상적인 FFA 혈중 농도에 의해 전형적으로 드러난다. 이러한 이상현상은 산화된 저밀도 지단백질(LDL)의 상승된 혈중 수준에 의해 또한 드러날 수 있다. 포도당 대사에서 이상현상이 수반될 때, 포도당 혈중 수준은 건강한 대조군 대상체와 비교하여 전형적으로 현저하게 향상된다. 본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 불균형 혈당 제어에 대한 역치를 초과하지 않는 현저하게 향상된 혈중 수준을 갖는 환자는, 상기 향상이 비정상적 혈중 ROS 및/또는 FFA 값을 동반하는 경우에, 본 명세서에 기재된 바와 같이 불리한 대사 상태를 갖는 것으로 정의될 것이다. 불균형 대사 상태는 당업계에 공지된 바와 같이, 에너지 섭취 및 다양한 에너지 소비 및 이용 매개변수를 고려함으로써 상기 담당의 또는 당업자에 의해 또한 평가될 수 있다. 예를 들어, 비제한적으로, 세포 수준에서의 매개변수, 예컨대, 세포적(예를 들어, 혈소판) ATP 생산 및 세포 산화, 전신 수준에서의 매개변수, 예컨대, 호흡률(RQ: respiratory quotient)을 평가하여 대상체의 대사 상태를 결정할 수 있다. 예를 들어, 건강한 환자와 아픈 환자 사이의 이러한 매개변수의 상대적 비율을 비교함으로써 당업자는 건강한 대조군과 비교하여 대상체의 대사 상태를 평가할 수 있다. 불리한 대사 상태는 적합한 치료적 요법에 의해 충분히 치료되지 않거나 균형잡히지 않은 만성 대사 및/또는 염증 장애에 걸린 환자에게서 발견될 수 있다.

용어 "대사 질환" 또는 "대사 장애"는 포도당(탄수화물), 지방산 및/또는 단백질 산화 경로를 수반할 수 있는 대사의 오류, 대사 내 불균형, 또는 차선의 대사가 발생하는 식별된 장애의 군을 지칭한다. 따라서, 불균형할 때, 이들 장애는, 본 명세서에 기재된 바와 같이, 건강한 대조군 대상체에서 이들의 각각의 수준과 비교하여 포도당, ROS 및/또는 FFA의 비정상적 혈중 농도에 의해 특징지어지는 불리한 대사 상태에 의해 전형적으로 드러난다. 이러한 장애는 제한 없이 당뇨병 및 영양 또는 내분비 불균형과 연관된 장애를 포함한다.

불리한 대사 상태는 만성 염증 장애의 결과로서 또한 발생할 수 있는데, 이때 호전되지 않는(non-resolving), 불균형한 염증 과정은, 건강한 대조군 대상체에서 이들의 각각의 수준과 비교하여 포도당, ROS 및/또는 FFA의 비정상적 혈중 수준에 의해 드러나는 2차 대사 합병증을 동반한다. 이러한 장애의 비-제한적인 예는 패혈증 및 자가면역 질환이다.

X 증후군(또는 대사 증후군)은 복부에서의 지방 축적과 연관된 일련의 확인징후 및 증상을 상징한다. 이 형태의 지방 분포는 중년 남성에게서 일반적이며 종종 배불뚝이 또는 올챙이배로서 보인다. X 증후군은 통풍, 손상된 포도당 대사(당뇨병에 대한 감수성 증가), 증가된 혈압, 및 상승된 혈중 콜레스테롤 수준을 포함하는 많은 장애에 의해 특징지어진다. X 증후군 환자는 심장 질환의 높은 위험을 갖는다. X 증후군은 미국 임상 내분비 학자 협회(American Association of Clinical Endocrinologists)에 의해 혈청 또는 혈장 인슐린/포도당 수준 비율, 지질, 요산 수준, 혈관 생리학, 및 응고 인자 불균형에서의 대사 이상의 무리(constellation)로 정의된다. 이에 따라 본 명세서에서 사용되는 바와 같이 용어 "X 증후군"은 다음 중 적어도 2개의 양성 진단에 의해 특징지어지는 병태를 지칭한다: 비-인슐린-의존성 당뇨병, 정상으로 간주되는 수준을 초과하는 혈압, 정상으로 간주되는 수준을 초과하는 인슐린 수준, 이상지질혈증, 및 비만.

펩티드는 다음의 대사 질환에서 유용할 수 있다

(a) 모든 형태의 당뇨병, 예컨대, 고혈당증, 2형 당뇨병, 내당능 장애, 1형 당뇨병, 비-인슐린 의존성 당뇨병, MODY(저연령대의 성숙기 발병 당뇨병), 임신성 당뇨병의, 및/또는 HbAlC의 감소를 위한 예방 및/또는 치료;

(b) 당뇨병 질환 진행, 예컨대, 2형 당뇨병의 진행의 지연 또는 예방, 인슐린 필요성 2형 당뇨병으로의 내당능 장애(IGT)의 진행 지연, 인슐린 저항성 지연 또는 예방, 및/또는 인슐린 필요성 2형 당뇨병으로의 비-인슐린 필요성 2형 당뇨병의 진행 지연;

(c) β-세포 기능 개선, 예컨대, β-세포 아폽토시스 감소, β-세포 기능 및/또는 β-세포 질량 증가, 및/또는 β-세포에 대한 포도당 민감도 회복을 위해;

(d) 인지 장애 및/또는 신경퇴행성 장애, 예컨대, 알츠하이머병, 파킨슨병, 및/또는 다발성 경화증의 예방 및/또는 치료;

(e) 예를 들어, 음식 섭취 감소, 체중 감소, 식욕 억제, 포만감 유도에 의한 섭식 장애, 예컨대, 비만의 예방 및/또는 치료; 항정신병제 또는 스테로이드 투여에 의해 유도된 폭식 장애, 신경성 과식증, 및/또는 비만의 치료 또는 예방; 위 운동성 감소; 위 배출 지연; 신체적 이동성 증가; 및/또는 비만에 대한 동반질환, 예컨대, 골관절염 및/또는 요실금의 예방 및/또는 치료;

(f) 당뇨병 합병증, 예컨대, 혈관병증; 말초 신경병증을 포함한 신경병증; 신장병증; 및/또는 망막병증의 예방 및/또는 치료;

(g) 지질 매개변수 개선, 예컨대, 이상지질혈증의 예방 및/또는 치료, 총 혈청 지질 저하; HDL 증가; 저밀도 LDL 저하; VLDL 저하; 트리글리세리드 저하; 콜레스테롤 저하; 인간에서 지단백질 a(Lp(a))의 혈장 수준 저하; 시험관내 및/또는 생체내에서 아포지단백질 a(apo(a))의 생성 저해;

(h) 심혈관 질환, 예컨대, X 증후군, 죽상경화증, 심근 경색증, 관상동맥 심장 질환, 재관류 손상, 뇌졸중, 저산소증, 뇌 허혈, 초기 심장 또는 초기 심혈관 질환, 좌심실 비대, 관상 동맥 질환, 고혈압, 본태성 고혈압, 급성 고혈압성 응급, 심근병증, 심장 기능부전, 운동 불내성, 급성 및/또는 만성 심부전, 부정맥, 심장 부정맥, 졸도(syncopy), 협심증, 심장 우회로 및/또는 스텐트 재폐색, 간헐적 파행(죽상경화증 폐색), 확장기 기능장애, 및/또는 수축기 기능장애의 예방 및/또는 치료; 및/또는 혈압의 감소, 예컨대, 수축기 혈압의 감소;

(i) 위장 질환, 예컨대, 염증성 장 질환, 단장 증후군, 또는 크론병 또는 대장염; 소화불량, 및/또는 위 궤양; 및/또는 염증, 예컨대, 건선, 건선성 관절염, 류마티스성 관절염, 및/또는 전신성 홍반성 낭창의 예방 및/또는 치료;

(j) 중대 질환(critical illness), 예컨대, 중환자, 중환자 다발성 신장병증(CIPNP: critical illness poly-nephropathy) 환자, 및/또는 잠재적 CIPNP 환자의 예방 및/또는 치료; 중대 질환 또는 CIPNP의 발병 예방; 환자에서 전신성 염증 반응 증후군(SIRS)의 예방, 치료 및/또는 치유; 입원 동안의 균혈증, 패혈증, 및/또는 패혈성 쇼크를 앓고 있는 환자의 예방 또는 가능성 감소; 및/또는 급성 질환을 갖는 중환자실 환자에서 혈당, 인슐린 균형 및 임의로 대사의 안정화;

(k) 다낭성 난소 증후군(PCOS: polycystic ovary syndrome)의 예방 및/또는 치료;

(l) 뇌 질환, 예컨대, 뇌 허혈, 뇌출혈, 및/또는 외상성 뇌 손상의 예방 및/또는 치료;

(m) 수면 무호흡증의 예방 및/또는 치료;

(n) 남용, 예컨대, 알코올 남용 및/또는 약물 남용의 예방 및/또는 치료;

(o) 비제한적으로 지방간 질환(FLD), 비알코올성 지방간 질환(NAFLD), 및 비알코올성 지방간염(NASH)을 포함하는 지방간 병태의 예방 또는 치료; 및/또는

(p) 활성 산소 종(ROS)의 세포 내 생산의 치료.

추가의 양태에서, 치료가 필요한 환자에게 유효량의, 펩티드를 투여함으로써 당뇨병 및/또는 당뇨병 관련 합병증을 치료하기 위해 방법이 본 명세서에서 제공된다. 유리하게는, 본 명세서에서 제공된 방법에 따라 당뇨병 및/또는 관련 합병증을 치료하기 위해 사용되는 펩티드는, 펩티드를 투여하는 것이 인슐린 생산 β 세포의 수 및 환자에 의해 생산되는 인슐린의 수준을 증가시키도록, 췌장 β 세포에 대한 항-아폽토시스 활성을 갖고/갖거나, 췌장 β 세포의 증식을 자극한다.

본 개시내용은 치료가 필요한 대상체에 유효량의 펩티드 또는 이의 변이체를 투여하는 단계를 포함하는 암을 치료하는 방법을 또한 포함한다. 본 명세서에서 제공되는 펩티드는 다양한 항암 효과를 발휘하며 광범위한 암 및 기타 증식성 장애를 치료하는 데에 사용될 수 있다. 본 명세서에서 제공되는 펩티드는 다양한 항암 활성, 이에 제한되지는 않으나 예컨대, 암성 세포에서 아폽토시스 유도, 종양 혈관형성 저해, 종양 전이 저해, 세포 주기 조절, 암 세포 증식 저해, 암 세포 분화 촉진, 활성 산소 종의 생산 저해 및/또는 이에 대한 보호, 및 스트레스 저항성 향상을 가질 수 있다. "암"은 제어되지 않는 비정상적인 세포 성장 및 증식에 의해 특징지어지는 질환을 일반적으로 지칭한다. "종양" 또는 "신생물"은 과도한, 제어되지 않는, 및 진행성 세포 분열에 기인하는 조직의 비정상적 덩어리이다. 본 명세서에 기재된 방법은, 이에 제한되지는 않으나, 암종, 육종, 연조직 육종, 림프종, 혈액암, 백혈병, 생식 세포 종양, 및 고형 종양이 없는 암(예를 들어, 조혈암)을 포함하는 임의의 유형의 암 및 증식성 장애를 치료하는 데에 유용하다. 다양한 양태에서, 펩티드는, 이에 제한되지는 않으나, 폐, 유방, 상피, 대장, 직장, 고환, 방광, 갑상선, 담낭, 담관, 담도, 전립선, 결장, 위, 식도, 췌장, 간, 신장, 자궁, 자궁경부, 난소, 및 뇌 조직을 포함하는 임의의 조직으로부터 비롯되고/되거나 이에 영향을 미치는 암 및/또는 종양을 치료하는 데에 사용될 수 있다. 펩티드를 이용해 치료 가능한 구체적인 암의 비-제한적인 예는, 비제한적으로, 급성 림프모구 백혈병, 급성 골수성 백혈병, 만성 림프구성 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 부신피질 암종, AIDS-관련 림프종, 항문암, 별아교세포종, 뇌 기저 세포 암종, 담관암, 간외 방광암, 방광암, 골암, 골육종/악성 섬유 조직구종, 뇌 줄기 신경교종, 뇌 종양, 뇌 줄기 신경교종, 뇌 별아교세포종/악성 신경교종, 뇌실막종, 수모세포종, 천막위 원시 신경외배엽 종양, 시각경로 및 시상하부 신경교종, 유방암, 남성 기관지 선종/유암종, 버킷 림프종, 유암종 종양, 미지의 원발성 중추 신경계 림프종의 위장 암종, 자궁경부암, 만성 림프구성 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 만성 골수증식 장애, 결장암, 결장직장암, 피부 t-세포 림프종, 균상식육종 및 세자리 증후군, 자궁내막암, 뇌실막종, 식도암, 유잉 가족 종양, 생식 세포 종양, 간외 담관암, 안암, 안구내 흑색종, 망막모세포종, 담낭암, 위(위)암, 위장 유암종 종양, 난소 임신성, 영양막 종양, 신경교종, 시상하부 피부암(흑색종), 피부암(비-흑색종), 피부 암종, 소세포 폐암, 소장암, 연조직 육종, 편평 세포 암종, 잠복성 원발성, 전이성 위(위)암이 있는 편평 경부암, 위(위)암, t-세포 림프종, 고환암, 가슴샘종, 가슴샘 암종, 갑상선암, 신우의 이행 세포암, 요관 영양막 종양, 이행 세포암, 요도암, 자궁암, 자궁 육종, 질암, 시상하부 신경교종, 외음부암, 발덴스트롬 마크로글로불린혈증, 빌름즈 종양, 털 세포 백혈병, 두경부암, 간세포(간)암, 호지킨 림프종, 하인두암, 섬세포 암종(내분비 췌장), 카포시 육종, 신장(신장 세포)암, 신장암, 후두암, 털 세포 입술 및 구강암, 간암, 폐암, 비소세포 폐암, 소세포 림프종, 버킷 림프종, 피부 t-세포, 호지킨 림프종, 비-호지킨 림프종, 뼈의 발덴스트롬 악성 섬유성 조직구종/골육종 속질모세포종, 안내(눈) 메르켈 세포 암종, 중피종, 악성 중피종, 잠복성 원발성 다발성 내분비 신생물 증후군이 있는 전이성 편평 경부암, 다발성 골수종/혈장 세포 신생물, 균상식육종 골수형성이상 증후군, 골수형성이상/골수증식 질환, 골수성 백혈병, 다발성 골수증식 장애, 만성 비강 및 부비동암, 비인두암, 흉막폐장 모세포종, 뼈의 골육종/악성 섬유성 조직구종, 크롬친화세포종, 솔방울샘모세포종, 및 천막위 원시 신경외배엽 종양을 포함한다. 일부 바람직한 양태에서, 암은 유방암이다. 일부 바람직한 양태에서, 암은 전립선암이다.

일부 양태에서, 본 명세서에서 제공되는 방법에 따라 펩티드를 투여하는 것은 확립된 암 요법의 효능을 향상시킨다. 추가의 양태에서, 본 명세서에서 제공되는 방법에 따라 펩티드를 투여하는 것은 또 다른 암 요법, 예컨대, 방사선 또는 화학요법의 항암 활성을 향상시킨다. 일부 양태에서, 암 세포 및/또는 종양 세포에서 세포 사멸을 유도하기 위해 방법이 본 명세서에서 제공되며, 본 방법은 암 세포 사멸 및/또는 종양 세포 사멸을 유도하기에 충분한 양으로 본 명세서에 기재된 펩티드를 투여하는 단계를 포함한다.

일부 실시형태에서, 펩티드는 하나 이상의 세포 보호 또는 세포보호 활성을 갖는다. 예를 들어, 일부 양상에서, 펩티드는 세포 손상을 예방하고/하거나, 세포 생존을 개선하고/하거나, 환경 스트레스, 이에 제한되지는 않으나 예컨대, 열 충격, 혈청 회수(serum withdrawal), 화학요법, 및/또는 방사선에 대한 저항성을 향상시킬 수 있다.

일부 양상에서, 본 명세서에서 제공되는 방법에 따라 펩티드를 투여하는 것은 확립된 암 요법의 부작용을 감소시킨다.

본 명세서에 개시된 방법은 신경보호, 하기 조직 또는 세포에 대한 손상 또는 혈관-뇌 장벽의 온전성에 손상을 초래하였을 병태, 질환 또는 사건으로부터, CNS의 조직 또는 세포, 특히 뉴런, 신경교 세포 또는 내피 세포 중 임의의 것의 온전성 및 기능과 연관된 질환을 치료하거나, 이들에 대한 손상을 치료하는 것을 포함한다. 이러한 신경보호는 이러한 병태, 질환 또는 사건에 의해 야기되는 이러한 조직 또는 세포에 달리 발생할 수 있는 손상을 예방, 감소 또는 치료하는 역할을 한다. 이러한 방법에는 외상성 척수 손상, 외상성 뇌 손상, 다발성 경화증, 말초 신경 손상 및 허혈성 또는 출혈성 뇌졸중의 치료를 포함한다.

특히, 펩티드는 백혈구를 억제로부터 보호하고, 화학치료제에 의해 유도된 세포 사멸로부터 생식 세포를 보호하고, 화학치료제에 의해 유도되는 생식력의 감소 또는 감소를 저해하는 데 효과적일 수 있다.

예를 들어, 일부 양태에서, 본 명세서에 제공된 방법에 따라 펩티드를 투여하는 것은 비-특이적 암 요법, 예컨대, 방사선 또는 화학요법의 부작용으로부터 비-암성 세포를 보호한다.

일부 실시형태에서, 본 명세서에 제공된 펩티드는 화학치료제, 방사선 요법, 항감염제, 및/또는 기타 치료제와 관련된 신경독성을 포함하지만 이들로 제한되지 않는 말초 신경계의 신경독성에 대한 신경보호 활성을 갖는다. 예를 들어, 본 명세서에 제공된 펩티드는 빈카 알칼로이드, 백금 화합물, 수라민, 탁산 및/또는 기타 화학치료제와 관련된 말초 신경독성에 대해 신경보호 활성을 나타낼 수 있다.

일부 실시형태에서, 펩티드는 당뇨병, 신장 질환 및/또는 암을 앓고 있는 대상체의 세포와 같은(이에 대해 무시되지는 않음) 질환 관련 세포 및/또는 자극에 대해 세포 생존 촉진(예를 들어, 항-아폽토시스) 활성을 나타낸다. 예를 들어, 일부 측면에서, 펩티드는 당뇨병 대상체의 췌장 β-세포 및/또는 종양 세포에 대해 항-아폽토시스 활성을 갖는다.

유리하게는, 본 명세서에 제공된 방법에 따라 펩티드의 투여는, 신경퇴행성 효과, 예를 들어, 근위축성 측삭 경화증 대상체에서 SOD1 돌연변이체, 알츠하이머병 대상체에서 돌연변이체 APP, PS-1, PS-22, 또는 아밀로이드-베타(Aβ) 펩티드 및/또는 헌팅턴병 대상체에서 폴리글루타민 반복 돌연변이에 의해 유도된 세포 사멸에 대한 보호 효과를 제공한다.

일부 실시형태에서, 본 명세서에 제공된 펩티드는 당뇨병 대상체의 췌장 β-세포와 같지만 이에 제한되지 않는 질환 관련 세포에 대해 세포 성장-자극 활성을 갖는다.

일부 실시형태에서, 본 명세서에 제공된 펩티드는 질환 관련 세포에 대해 분화-자극 활성을 갖는다. 예를 들어, 일부 양태에서, 펩티드는 당뇨병 환자의 전면 지방세포의 인슐린-유도 분화를 자극한다.

일부 실시형태에서, 펩티드는 항암 활성을 갖는다. 예를 들어, 일부 양태에서, 펩티드는 암 세포, 이에 제한되지는 않으나 예컨대, 전립선암 세포 및/또는 유방암 세포에 대해 프로-아폽토시스(pro-아폽토시스) 활성을 갖는다. 추가의 양태에서, 펩티드는 암 세포, 이에 제한되지는 않으나 예컨대, 전립선암 세포 및/또는 유방암 세포에 대해 항-증식 활성을 갖는다.

추가로 바람직한 의학적 용도는 퇴행성 장애, 특별히 신경퇴행성 장애, 예컨대, 알츠하이머병, 파킨슨병, 헌팅턴병, 운동 실조증, 예를 들어, 척수소뇌 실조증, 케네디병, 근긴장 디스트로피, 루이소체 치매, 다계통 위축증, 근위축성 측삭 경화증, 원발성 측삭 경화증, 척수성 근위축, 프리온-연관 질환, 예를 들어, 크로이츠펠트-야콥병(Creutzfeldt-Jacob disease), 다발성 경화증, 모세혈관확장증, 배튼병, 피질기저 핵변성, 피질기저 핵변성, 아급성 연합성 척수변성증, 척수 매독, 테이-삭스병, 독성 뇌병증, 영아기 레프슘병, 레프슘병, 유극적혈구신경증, 니만-피크병, 라임병, 마카도 조셉병, 샌드호프병, 샤이-드래거 증후군, 비틀거리는 고슴도치 증후군(wobbly hedgehog syndrome), 변형단백질환(proteopathy), 뇌 β-아밀로이드 혈관병증, 녹내장의 망막 신경절 세포 변성, 시누클레인병증(synucleinopathy), 타우병증, 전측두엽 변성(FTLD), 치매, 카다실 증후군, 아밀로이드증이 있는 유전성 뇌출혈, 알렉산더병, 세이핀병증(seipinopathy), 가족성 아밀로이드 신경병증, 노인 전신성 아밀로이드증, 세르핀병증(serpinopathy), AL(경쇄) 아밀로이드증(원발성 전신성 아밀로이드증), AH(중쇄) 아밀로이드증, AA(속발성) 아밀로이드증, 대동맥 내측 아밀로이드증, ApoAI 아밀로이드증, ApoAII 아밀로이드증, ApoAIV 아밀로이드증, 핀란드 유형의 가족성 아밀로이드증(FAF), 리소자임 아밀로이드증, 피브리노겐 아밀로이드증, 투석 아밀로이드증, 봉입체 근염/근위측증, 백내장, 로돕신 돌연변이가 있는 망막 색소변성증, 갑상선 수질 암종, 심장 심방 아밀로이드증, 뇌하수체 프로락틴종(prolactinoma), 유전성 격자 각막 근위축증, 피부 태선양 아밀로이드증, 말로리 소체(Mallory bodies), 각막 락토페린 아밀로이드증, 폐포 단백질증, 치원성(핀드버그) 종양 아밀로이드, 낭포성 섬유증, 겸상 적혈구 빈혈증 또는 중환자 근육병증(CIM)의 치료 또는 예방을 포함한다. 특별한 이론에 제한하고자 함은 아니지만, 본 명세서에서 제공되는 펩티드는 신경 세포 및/또는 기타 세포 유형의 신경퇴행성 손상을 복구 및/또는 예방할 수 있는 하나 이상의 활성을 갖는 것으로 믿어진다. 본 명세서에서 제공되는 방법에 따라 치료 가능한 "신경퇴행성 질환"은, 예를 들어 뉴런 세포 사멸(아폽토시스)로 인한 뉴런의 퇴행 및/또는 손실을 초래하는 진행성 질환이다. 신경퇴행성 질환의 예는, 이에 제한되지는 않으나, 뇌 퇴행성 질환(예를 들어, 알츠하이머병(AD), 파킨슨병, 진행성 핵상 마비, 및 헌팅턴병(HD)), 및 척추 퇴행성 질환/운동 뉴런 퇴행성 질환(예를 들어, 근위축성 측삭 경화증(ALS), (SMA: 베르드니히-호프만 병 또는 쿠겔베르그-웰란더병), 척수소뇌 실조증, 구척수 근위축증(BSMA; 케네디-얼터-성(kennedy-alter-sung) 증후군))을 포함한다. "운동 뉴런 퇴행성 질환"은 신체에서 운동을 제어하는 상하 운동 뉴런의 진행성, 역행성 장애를 특징으로 하는 신경퇴행성 질환이다. 추가의 양태에서, 펩티드 및 이의 조성물은 운동 뉴런 퇴행성 질환, 예컨대, 근위축증, 근육 쇠약, 구 마비(얼굴, 인두, 및 혀에서의 근위축증 또는 쇠약, 및 이로써 야기되는 실어증 또는 연하곤란), 근육 연축(muscular fasciculation), 및 호흡 장애에 기인하는 병태를 개선하는 데에 또한 효과적이다.

추가의 용도는 미토콘드리아 기능부전과 연관된 질환 또는 병태의 예방 및 치료를 포함한다. 대사 과정의 중심인 미토콘드리아는 에너지 생산, 프로그래밍된 세포 사멸, 및 활성 산소 종(ROS) 생성에 관여한다. 전통적으로, 미토콘드리아는 에너지 생산 및 세포 사멸을 조절하기 위해 방대한 양의 세포 신호를 수신하고 처리하는 "마지막-기능(end-function)" 세포 기관으로 간주되어 왔다. 펩티드 및 이의 약제학적 제형은 많은 대사적 영향이 있는 다양한 연령-관련 질환을 치료하는 데에 사용될 수 있다. 또한 이들은 미토콘드리아 호흡, 포도당 수송, 포도당 이용, 해당작용, 인슐린 조절 및 세포 증식/생존에 영향을 미치기 위해 시험관내 및 생체내에서 다양한 방식으로 또한 시험되어온 영향을 갖는다. 미토콘드리아 기능부전은 이에 제한되지는 않으나 대사 장애, 신경퇴행성 질환, 만성 염증 질환, 및 노화의 질환과 연관되어 있다. 일부 미토콘드리아 질환은 미토콘드리아 게놈에서의 돌연변이 또는 결실로 인한 것이다. 미토콘드리아는 그들의 숙주 세포보다 더 빠른 대사회전속도로 분열하고 증식하며, 그들의 복제는 핵 게놈의 제어 하에 있다. 세포 내 미토콘드리아의 역치 비가 결함 미토콘드리아를 갖는 경우에, 및 조직 내 이러한 세포의 역치 비에 결함이 있는 경우에, 조직 또는 장기 기능부전의 증상이 초래될 수 있다. 사실상 임의의 조직이 영향을 받을 수 있으며, 상이한 조직이 관여하는 정도에 의존하여, 매우 다양한 증상이 나타날 수 있다. 유전적 결함이 있는 미토콘드리아와 연관된 선천성 장애에 더하여, 후천적 미토콘드리아 기능부전은 질환, 특별히 파킨슨병, 알츠하이머병, 및 헌팅턴병과 같은 노화와 연관된 신경퇴행성 장애에 일조한다. 미토콘드리아 DNA의 체세포 돌연변이 발생률은 나이와 함께 기하급수적으로 증가하고; 감소된 호흡 사슬 활동은 노인들에게서 보편적으로 발견된다. 미토콘드리아 기능부전은 흥분독성 신경 손상, 예컨대, 발작 또는 허혈과 연관된 것에 또한 책임이 있다. 미토콘드리아 기능부전과 연관된 기타 장애는 만성 염증 장애 및 대사 장애를 포함한다.

세포보호성인 펩티드는 자연에서 세포의 생존력을 연장시키기 위한 잠재적인 유용성을 갖는다. 펩티드는, 단백질, 항체 등을 포함하는, 생물학적 생성물의 제조에 유용하다. 본 개시내용은 일반적으로, 포유동물 세포 배양물, 예컨대, CHO 세포 배양물, 또는 대장균 세포 배양물을 포함하는, 세포 배양물의 하나 이상의 특성 조절 방법 그리고 펩티드에 관한 것이다. 일 실시형태에서, 배양 배지에서 포유동물 세포 배양물을 확립하는 단계; 세포 배양물을 펩티드를 포함하는 배양 배지와 접촉시킴으로써 세포 성장 생존력을 증가시키는 단계; 및 상기 배양물을 펩티드를 포함하는 배양 배지와 접촉시킴으로써 세포 배양물을 유지시키는 단계를 포함하는, 재조합 단백질을 발현시키는 포유동물 세포 배양물에서 특정 생산성의 증가 방법이 제공된다.

본 발명의 펩티드는 섬유증의 치료에 사용될 수 있다. 예를 들어, 펩티드는 특발성 폐 섬유증과 같은 폐 섬유증의 치료에 사용될 수 있다. 섬유증은 적어도 부분적으로 손상에 대한 반응과 같은 수선 또는 반응성 과정으로 인한 과도한 섬유성 결합 조직의 발달을 특징으로 한다. 섬유증에서 세포외 기질 단백질의 비정상적 축적은 영향을 받은 조직에 흉터를 남기고 두꺼워지게 할 수 있다. 섬유증은 폐, 간, 심장, 신장, 췌장, 피부 및 뇌를 포함한 다양한 기관에서 발생할 수 있다. 섬유증은 심근병증, 고혈압, 동맥경화, 만성 C형 간염, 크론병, 성인 호흡곤란 증후군, 유육종증과 같은 다양한 병태 및 장애를 동반한다. 예시적인 섬유증 질환은 다-전신성(예를 들어, 전신성 경화증, 다초점 섬유경화증, 골수 이식 수용자의 경피성 이식편대숙주 질환, 신원성 전신 섬유증, 또는 경피증) 및 장기-특이적 장애(예를 들어, 폐, 심장, 신장, 췌장, 피부, 뇌, 눈 및 다른 기관의 섬유증)를 포함하지만 이들로 제한되지 않는다. 예를 들어, 폐의 섬유증은 하기 중 하나 이상(에 대해서 이차임)과 관련될 수 있다: 석면폐증 및 규폐증과 같은 질환 과정; 직업상 위험; 환경오염물질; 담배 흡연; 자가면역 결합 조직 장애(예를 들어, 류마티스 관절염, 경피증 및 전신 홍반성 루푸스(SLE)); 결합 조직 장애(예를 들어, 유육종증); 또는 감염성 질환(예를 들어, 감염, 특히 만성 감염), 낭포성 섬유증, 다양한 병인의 기타 미만성 실질 폐 질환, 예컨대, 의인성 약물-유도 섬유증, 직업 및/또는 환경 유발 섬유증, 육아종 질환(과민성 폐렴), 콜라겐 혈관 질환, 폐포 단백증, 랑게르한스 세포 육아종증, 림프관 평활근종증, 유전 질환(헤르만스키-풀닥(Hermansky-Pudlak) 증후군, 신경 섬유종증, 대사 저장 장애, 가족성 간질 폐 질환), 블레오마이신 유도 폐 섬유증, 석면 유도 폐 섬유증, 세뇨관간질 섬유증, 사구체 신염, 국소 분절화 사구체 경화증, IgA 신병증, 알포트(Alport), 장 섬유증, 간경변, 알코올 유도 간 섬유증, 독성/약물 유도 간 섬유증, 혈색소 침착증, 비알코올성 지방간염(NASH), 담도 손상, 원발성 담도 경화증, 감염 유도 간 섬유증, 바이러스 유도 간 섬유증 및 자가면역 간염, 각막 반흔, 비대 반흔, 뒤퓌트렌병(Dupuytren disease), 켈로이드, 피부 섬유증, 피부 경피증, 척수 손상/섬유증, 골수섬유증, 혈관 재협착증, 죽상동맥경화증, 동맥경화증, 페이로니병(Peyronie's disease) 또는 만성 림프구성 갑상선염 섬유증.

일 실시형태에서, 폐의 섬유증 상태는 자가면역 결합 조직 장애(예를 들어, 피부경화증 또는 루푸스, 예를 들어, SLE)와 관련이 있다.

다른 실시형태에서, 폐 섬유증은 만성 폐쇄성 폐 질환(COPD), 급성 호흡 곤란 증후군(ARDS), 경피증, 흉막 섬유증, 만성 천식, 급성 폐 증후군, 아밀로이드증, 기관지폐 이형성증, 카플란병, 드레슬러 증후군, X형 조직구증, 특발성 폐혈류증, 림프관근종증, 승모판 협착증, 다발성 근염, 폐부종, 폐고혈압(예를 들어, 특발성 폐고혈압(IPH)), 진폐증, 방사선 요법(예를 들어, 방사선 유발성 섬유종증), 류마티스 질환, 쉐이버병, 전신 홍반성 루푸스, 전신 경화증, 열대성 폐 호산구 증가증, 결절 경화증, 웨버-크리스티안병, 베게너 육아종증, 휘플병 또는 독소 또는 자극제(예를 들어, 의약품, 예컨대, 아미오다론, 블레오마이신, 부설판, 카르무스틴, 클로람페니콜, 헥사메토늄, 메토트렉세이트, 메티세르지드, 미토마이신 C, 니트로푸란토인, 페니실라민, 페플로마이신 또는 프랙톨롤)에 대한 노출; 또는 활석 또는 먼지(예를 들어, 석탄 먼지, 실리카)의 흡입과 관련된 폐 섬유증을 포함하지만 이들로 제한되지는 않는다. 특정 실시형태에서, 폐 섬유증은 폐의 염증성 장애, 예를 들어 천식 또는 COPD 중 하나 또는 둘 모두와 연관된다.

"섬유증 관련 병태"는 섬유증과 관련된 모든 병태를 의미한다. 따라서 섬유증 관련 상태는 섬유증에 의해 유발되거나 섬유증과 동반되거나 섬유증을 유발할 수 있다. 만성 신장 질환은 섬유증 관련 병태의 일례이다.

또 다른 실시형태에 따르면, 펩티드는 다른 공지된 화학치료제 및/또는 항염증제와 공동 투여되거나 공동 제형화된다.

이에 따라, 당업자는 본 명세서에서 제공된 개시 내용에 기반하여, 용량 및 투여 요법(dosing regimen)이 치료 분야에 잘 공지된 방법에 부합하게 조정된다는 사실을 인식할 것이다. 즉, 최대 허용 가능한 용량은 용이하게 확립될 수 있으며, 검출 가능한 치료적 이익을 대상체에 제공하도록 각각의 제제를 투여하기 위한 시간적 요구사항일 수 있는 것과 같이, 대상체에게 검출 가능한 치료적 이익을 제공하는 유효량이 또한 결정될 수 있다. 따라서, 특정한 용량 및 투여 요법이 본 명세서에서 예시되지만, 이들 예는 본 개시내용을 실시함에 있어서 대상체에 제공될 수 있는 용량 및 투여 요법을 결코 제한하지 않는다.

투여량 값은 개선될 병태의 유형 및 중증도에 따라 달라질 수 있으며, 단일 또는 다회 용량을 포함할 수 있다는 사실에 유의해야 한다. 임의의 특별한 대상체에 대해, 개별적인 필요 및 투여하거나 조성물의 투여를 감독하는 사람의 전문적인 판단에 따라 시간이 지남에 따라 구체적인 투여 요법이 조정되어야 한다는 사실, 및 본 명세서에 제시된 투여량 범위는 단지 예시적이며 청구된 조성물의 범주 또는 실시를 제한하려는 의도가 아니라는 것이 추가로 이해되어야 한다. 추가로, 본 개시내용의 조성물을 이용한 투여 요법은, 질환의 유형, 연령, 체중, 성별, 대상체의 의학적 병태, 병태의 중증도, 투여 경로, 및 이용되는 특별한 펩티드를 포함하는 다양한 인자에 기반할 수 있다. 이에 따라, 투여 요법은 매우 다양할 수 있지만, 표준 방법을 사용하여 관례대로 결정될 수 있다. 예를 들어, 용량은 임상적 효과, 예컨대, 독성 효과 및/또는 실험실 값을 포함할 수 있는 약동학적 또는 약력학적 매개변수를 기반으로 조정될 수 있다. 이에 따라, 본 개시내용은 당업자에 의해 결정된 바와 같은 대상체-내부의 용량-증가를 포함한다. 적절한 투여량 및 요법을 결정하는 것은 관련된 기술분야에 잘 공지되어 있으며 일단 본 명세서에 개시된 교시내용이 제공되면 당업자에 의해 아울러지는 것으로 이해될 것이다.

본 개시내용의 펩티드의 용량은 본 개시내용의 특별한 펩티드의 투여에 수반될 수 있는 임의의 부작용의 존재, 성질 및 정도에 의해 또한 결정될 것이다. 전형적으로, 담당의는 다양한 인자들, 예컨대, 연령, 체중, 일반 건강, 식이, 성별, 투여될 본 개시내용의 펩티드, 투여 경로, 및 치료되는 병태의 중증도를 고려하여, 각각의 개별적인 환자를 치료할 본 개시내용의 펩티드의 투여량을 결정할 것이다. 제한하려는 의도가 아닌 한 예로서, 본 개시내용의 펩티드의 용량은 약 0.0001 내지 약 100 mg/치료되는 대상체의 체중 kg/일, 약 0.001 내지 약 10 mg/체중 kg/일, 또는 약 0.01 mg 내지 약 1 mg/체중 kg/일일 수 있다. 펩티드는 1회 이상의 용량, 예컨대, 1 내지 3회 용량으로 투여될 수 있다.

일부 실시형태에서, 약제학적 조성물은 본 명세서에 개시된 임의의 유사체를 환자에게 투여하기에 적합한 순도 수준으로 포함한다. 일부 실시형태에서, 유사체는 적어도 약 90%, 바람직하게는 약 95% 초과, 보다 바람직하게는 약 99% 초과의 순도 수준 및 약제학적으로 허용 가능한 희석제, 담체 또는 부형제를 갖는다.

약제학적 조성물은 생리학적으로 적합한 pH를 달성하도록 제형화될 수 있다. 일부 실시형태에서, 약제학적 조성물의 pH는 투여 제형 및 투여 경로에 따라서 적어도 5 또는 적어도 6 또는 적어도 7일 수 있다.

다양한 실시형태에서, 약제학적 조성물의 단일 또는 다중 투여는 대상체에 의해 요구되고 허용되는 투여량 및 빈도에 따라 투여된다. 어떤 경우에도, 조성물은 대상체를 효과적으로 치료하기 위해 본 명세서에 개시된 펩티드 중 적어도 하나의 충분한 양을 제공해야 한다. 투여량은 1회 투여될 수 있지만 치료적 결과가 달성될 때까지 또는 부작용이 요법의 중단을 정당하게 할 때까지 주기적으로 적용될 수 있다.

펩티드 약제학적 조성물의 투여의 복용 빈도는 요법의 성질 및 치료되는 특별한 질환에 의존한다. 펩티드의 경우, 투여는 1일 1회, 2회, 3회 또는 4회일 수 있다. 치료적으로 유효량의 펩티드를 이용한 대상체의 치료는, 단일 치료를 포함할 수 있거나, 또는 바람직하게는, 일련의 치료를 포함할 수 있다. 바람직한 예에서, 대상체는 매일, 일주일에 1회 또는 격주로 펩티드를 이용해 치료된다.

펩티드 및 이의 용도가 기재되었으며, 하기 실시예는 제한이 아니라 예시의 목적으로 제공된다.

실시예

실시예 1

펩티드는 달리 명시되지 않는 한 아래에 기재된 것과 유사한 방법에 의해서, t-Boc 또는 Fmoc 화학 또는 다른 널리 확립된 기술을 사용하여 적합한 수지에 대한 고체상 합성을 통해 제조된다(예를 들어, 문헌[Stewart and Young, Solid Phase Peptide Synthesis, Pierce Chemical Co., Rockford, III., 1984]; 문헌[E. Atherton and R. C. Sheppard, Solid Phase Peptide Synthesis. A Practical Approach, Oxford-IRL Press, New York, 1989]; 문헌[Greene and Wuts, "Protective Groups in Organic Synthesis", John Wiley & Sons, 1999], 문헌[Florencio Zaragoza Dorwald, "Organic Synthesis on solid Phase", Wiley-VCH Verlag GmbH, 2000], 및 문헌["Fmoc Solid Phase Peptide Synthesis", Edited by W.C. Chan and P.D. White, Oxford University Press, 2000] 참고).

고체상 합성은 카르복시 말단을 갖는 N-말단 보호된 아미노산을 절단 가능한 링커를 보유는 불활성 고체 지지체에 부착함으로써 개시된다. 이러한 고체 지지체는 초기 아미노산의 커플링을 허용하는 임의의 중합체, 예를 들어 팜(Pam) 수지, 트리틸 수지, 클로로트리틸 수지, 왕(Wang) 수지 또는 링크(Rink) 수지일 수 있고, 상기 카르복시 기(또는 링크(Rink) 수지에 대해서는 카르복사미드)의 수지에 대한 연결은 산에 민감하다(Fmoc 전략이 사용될 때). 중합체 지지체는 펩티드 합성 동안에 β-아미노기를 보호하기 위해 사용된 조건 하에서 안정하다. 제1 아미노산이 고형 지지체에 커플링된 후, 이러한 아미노산의 α-아미노 보호기는 제거된다. 그 다음 나머지 보호된 아미노산은 적절한 아미드 커플링 시약, 예를 들어, BOP(벤조트리아졸-1 -일-옥시-트리스-(디메틸아미노)-포스포늄), HBTU(2-(1 H-벤조트리아졸-1 -일)-1,1,3,3-테트라메틸-우로늄), HATU(O-(7-아자벤즈트리아졸-1 -일-옥시-트리스-(디메틸아미노)-포스포늄) 또는 DIC (N,N'-디이소프로필카르보디이미드)/HOBt (1-히드록시벤조트리아졸)을 사용하여 펩티드 서열에 의해 표시되는 순서로 교대로 커플링되고, 여기서 BOP, HBTU 및 HATU는 3차 아민 염기와 함께 사용된다. 대안적으로, 해방된 N-말단은 아미노산 이외의 기, 예를 들어 카르복실산 등으로 작용화될 수 있다. 일반적으로, 아미노산의 반응성 측쇄 기는 적합한 차단기로 보호된다. 이들 보호기는, 원하는 펩티드가 조립된 후에 제거된다. 이들은 동일한 조건 하에서 수지로부터 원하는 생성물의 절단과 동시에 제거된다. 보호기 및 보호기를 도입하는 절차는 문헌[Protective Groups in Organic Synthesis, 3d ed., Greene, T. W. and Wuts, P. G. M., Wiley & Sons (New York: 1999)]에서 찾아볼 수 있다. 일부 경우에, 선택적으로 제거될 수 있는 측쇄 보호기를 갖는 것이 바람직할 수 있고, 한편 다른 측쇄 보호기는 온전한 채로 있다. 이 경우에 해방된 작용기는 선택적으로 작용화될 수 있다. 예를 들어, 라이신은 고친핵성 염기, 예를 들어, DMF(디메틸 포름아미드) 중 4% 히드라진에 대해 불안정한 ivDde 보호기(문헌[S.R. Chhabra et al., Tetrahedron Lett. 39, (1998), 1603])로 보호될 수 있다. 따라서, N-말단 아미노기 및 모든 측쇄 작용기가 산 불안정성 보호기로 보호되면, ivDde([1-(4,4-디메틸-2,6-디옥소시클로헥스-1-일리덴)-3-메틸부틸) 기는 DMF 중의 4% 히드라진을 사용하여 선택적으로 제거될 수 있고, 그 다음 상응하는 유리 아미노기는 예를 들어, 아실화에 의해 추가로 변형될 수 있다. 라이신은 보호된 아미노산에 대안적으로 커플링될 수 있고, 그 다음 이러한 아미노산의 아미노기는 탈보호되어, 또 다른 유리 아미노기를 얻을 수 있고, 이는 아실화되거나 추가 아미노산에 부착될 수 있다. 마지막으로, 펩티드는 수지로부터 절단된다. 이것은 HF 또는 킹스 칵테일(King's cocktail)을 사용하여 달성될 수 있다(문헌[D. S. King, C. G. Fields, G. B. Fields, Int. J. Peptide Protein Res. 36, 1990, 255-266]). 그 다음 원료는 크로마토그래피, 예를 들어, 필요하면, 정제용 RP-HPLC에 의해 정제될 수 있다.

비-자연 아미노산 및/또는 공유결합된 N-말단 모노- 또는 디펩티드 모방체를 포함하는 펩티드, 유사체 또는 유도체는 실험 부분에 기재된 바와 같이 제조될 수 있다. 또한 예를 들어, 문헌[Hodgson et al: "The synthesis of peptides and proteins containing non-natural amino acids", and Chemical Society Reviews, vol. 33, no. 7 (2004), p. 422-430] 참고.

펩티드는 아래에 언급된 펩티드 합성에 따라 준비되고 표 1에서 제시된 서열은 달리 구체화되지 않는 한, 아래에 언급된 합성과 유사하게 준비될 수 있다.

펩티드 합성의 하나의 방법은 마이크로웨이브-기반 Liberty 펩티드 합성기(CEM Corp., 미국 노쓰캐롤라이나주 소재) 상에서Fmoc 화학에 의한 것이다. 수지는 약 0.25 mmol/g의 로딩을 갖는 Tentagel S RAM 또는 약 0.43 mmol/g의 로딩을 갖는 PAL-Chem매트릭스 또는 0.5 내지 0.75 mmol/g의 로딩을 갖는 PAL AM 매트릭스이다. 커플링 화학은 0.3 M의 아미노산 용액 및 6 내지 8배의 몰 과잉을 사용하는 NMP 또는 DMF내 DIC/HOAt 또는 DIC/Oxyma이다. 커플링 조건은 최대 70℃에서 5분이다. 탈보호는 최대 70℃에서 NMP 중의 10% 피페리딘을 사용한다. 사용된 보호된 아미노산(예를 들어, Anaspec 또는 Novabiochem 또는 Protein Technologies로부터 공급됨)은 표준 Fmoc-아미노산이다.

펩티드 합성의 또 다른 방법은 Prelude 펩티드 합성기(Protein Technologies, 미국 아리조나주 소재)에서 Fmoc 화학에 의한 것이다 수지는 약 0.25 mmol/g의 로딩을 갖는 Tentagel S RAM 또는 약 0.43 mmol/g의 로딩을 갖는 PAL-Chem매트릭스 또는 0.5 내지 0.75 mmol/g의 로딩을 갖는 PAL AM이다. 커플링 화학은 0.3 M의 아미노산 용액 및 6 내지 8배의 몰 과잉을 사용하는 NMP 또는 DMF내 DIC/HOAt 또는 DIC/Oxyma이다. 커플링 조건은 실온에서 1 또는 2시간 동안 단일 또는 이중 커플링이다. 탈보호는 NMP 중의 20% 피페리딘을 사용한다. 사용된 보호된 아미노산(예를 들어, Anaspec 또는 Novabiochem 또는 Protein Technologies로부터 공급됨)은 표준 Fmoc-아미노산이다. 조 펩티드는 예컨대, 어느 한쪽 5um 또는 7um C-18 실리카로 패키징된 20 mm x 250 mm 칼럼에서 반정제용 HPLC에 의해 정제된다. 펩티드 용액은 HPLC 칼럼에서 펌핑되고, 침전된 펩티드는5 ml 50% 아세트산 H2O에 용해되고, H2O로 20 ml로 희석되고, 칼럼 상에 주입되어 그 다음 40℃에서 50분 동안 0.1% TFA 10 ml/분으로 40에서 60% CH3CN의 구배로 용출된다. 펩티드 함유 분획이 수집된다. 정제된 펩티드는 물로 용출액의 희석 후 동결건조된다.

명세서에서 기재된 C 말단 아미드를 갖는 모든 펩티드는 달리 명시되지 않는 한 아래 기재된 것과 유사 한 방법에 의해 제조된다. MBHA 수지(4-메틸벤즈히드릴아민 폴리스티렌 수지)가 펩티드 합성 동안 사용된다. MBHA 수지, 100 내지 180 메쉬, 1% DVB 가교결합된 폴리스티렌; 0.7 내지 1.0 mmol/g의 로딩), Boc-보호된 및 Fmoc 보호된 아미노산은 Midwest Biotech로부터 구매될 수 있다. Boc-보호된 아미노산을 사용하는 고체상 펩티드 합성은 Applied Biosystem 430A 펩티드 합성기에서 수행된다. Fmoc 보호된 아미노산 합성은 Applied Biosystems 모델 433 펩티드 합성기를 사용하여 수행된다.

펩티드의 합성은 Applied Biosystem 모델 430A 펩티드 합성기에서 수행된다. 합성 펩티드는 2 mmol의 Boc 보호된 아미노산을 함유하는 카트리지에 아미노산의 순차적 첨가에 의해 작제된다. 구체적으로, 합성은Boc DEPBT-활성화된 단일 커플링을 사용하여 수행된다. 커플링 단계의 마지막에, 펩티딜-수지는 TFA로 처리되어 N-말단 Boc 보호기를 제거한다. DMF로 반복적으로 세정되고 이러한 반복적인 사이클은 커플링 단계의 원하는 수 동안 반복된다. 어셈블리 후, 측쇄 보호, Fmoc는 20% 피페리딘 처리에 의해 제거되고 아실화는 DIC를 이용하여 수행되었다. 전체 합성의 마지막에 펩티딜-수지는 DCM을 사용함으로써 건조되고, 펩티드는 무수 HF로 수지로부터 절단된다. 펩티딜-수지는 무수 HF로 처리되고, 이것은 전형적으로 대략 350 mg(약 50% 수율)의 미정제 탈보호된-펩티드를 산출하였다. 구체적으로, 펩티딜-수지(30 mg 내지 200 mg)를 절단용 불소화수소(HF) 반응 용기에 배치한다. 500 μL의 p-크레졸을 카르보늄 이온 포착제로서 용기에 첨가하였다. 용기를 HF 시스템에 부착하고, 메탄올/드라이 아이스 혼합물에 담근다. 용기를 진공 펌프로 진공처리하고, 10 mL의 HF는 반응 용기로 증류한다. 펩티딜-수지 및 HF의 이러한 반응 혼합물은 1시간 동안 0℃에서 교반하고, 그 후 진공을 확립하고, HF를 빠르게 진공처리한다(10 내지 15 분). 용기를 주의하여 제거하고, 대략 35 mL의 에테르를 채워서, 펩티드를 침전시키고 HF 처리에서 야기하는 소분자 유기 보호기 및 p-크레졸을 추출한다. 이러한 혼합물을 테플론 필터를 이용하여 여과하고, 2회 반복하여 모든 과잉의 크레졸을 제거한다. 이러한 여과물을 폐기한다. 침전된 펩티드를 대략 20 mL의 10% 아세트산(aq)에 용해시킨다. 원하는 펩티드를 함유하였던, 이러한 여과물을 수집하고, 동결건조한다.

실시예 2 - 카스파제 3/7 활성

세포 사멸/생존에 대한 펩티드의 효과를 배양된 세포에서 카스파제-3/7 검정을 사용하여 평가할 수 있다. 펩티드를 10 μM의 최종 농도에서 사용하기 위한 스톡 용액으로 DMSO에 10 mM로 용해시켰다. 스타우로스포린을 카스파제 유도에 대한 매우 강력한 양성 대조군으로 사용하였다. 스타우로스포린(Selleckchem)을 스톡 용액으로서 DMSO에 1 mM로 용해시켰다. 카스파제-Glo 3/7 검정 시약은 Promega(미국 위스콘신주 매디슨 소재)에서 구입하였다. A172 인간 뇌 교모세포종 세포주는 American Type Culture Collection(미국 버지니아주 매나서스 소재)에서 구입하였다. A172 세포를 100 IU/ml 페니실린 및 100 μg/ml 스트렙토마이신이 함유된 10% FBS가 보충된 DMEM에서 성장시켰다. 배양물을 5% CO2/95% 공기의 가습 분위기에서 37℃로 유지시켰다. A172 세포를 96웰 플레이트에 웰당 8,000개 세포로 시딩하였다. 다음날 세포를 0.1% DMSO의 최종 농도를 사용하여 10 μM의 시험 펩티드 또는 10 nM과 1 μM 사이의 농도의 스타우로스포린과 함께 인큐베이션시켰고, 18 내지 20시간 동안 5% CO2/95% 공기의 가습 분위기에서 37℃에서 유지시켰다. 제조사의 지침에 따라 Caspase-Glo 3/7 검정 키트(Promega)를 사용하여 카스파제 3/7 활성을 측정하였다. 플레이트 상의 각각의 샘플 웰에 대한 발광성을 Cytation 3 플레이트 판독기(BioTek, 미국 버몬트주 위노스키 소재)를 사용하여 측정하였다. 활성을 0.1% DMSO 대조군에 대해 계산하였다. DMSO 대조군의 상대 표준 편차는 10% 미만이었다. 스타우로스포린(10 nM) 처리의 카스파제 3/7 활성은 배경 보정된 DMSO 대조군 값의 189%였다. 결과를 표 4에 보고한다.

실시예 3 - 세포 생존력

생존력의 적합한 검정, 예컨대, PrestoBlue® 검정(Thermo Fisher Scientific, 미국 매사추세츠주 왈탐 소재)을 사용하여 세포 생존력에 대한 펩티드의 효과를 배양된 세포에서 평가하였다. 펩티드를 먼저 DMSO 중에 10 mM 스톡으로서 제조하였고, 10 μM(0.1% DMSO)의 최종 농도에서 시험하였다. 스타우로스포린을 아폽토시스/세포 사멸의 유도에 대한 매우 강력한 양성 대조군으로 사용하였다. 스타우로스포린을 DMSO를 사용하여 용해시키고, 10 nM에서 1 μM 사이의 최종 농도(0.1% DMSO)에서 시험하였다. PrestoBlue Assay Reagent을 Thermo Fisher Scientific으로부터 구입하였다. A172 인간 뇌 교모세포종 세포주는 American Type Culture Collection(미국 버지니아주 매나서스 소재)에서 구입하였다. A172 세포를 100 IU/ml 페니실린 및 100 μg/ml 스트렙토마이신이 함유된 10% FBS가 보충된 DMEM에서 성장시켰다. 배양물을 5% CO2/95% 공기의 가습 분위기에서 37℃로 유지시켰다. A172 세포를 96웰 플레이트에 웰당 8,000개 세포로 시딩하였다. 다음날 세포를 0.1% DMSO의 최종 농도를 사용하여 10 μM의 시험 펩티드 또는 스타우로스포린과 함께 인큐베이션시켰고, 18 내지 20시간 동안 5% CO2/95% 공기의 가습 분위기에서 37℃에서 유지시켰다. 세포 생존력을 제조사의 지침에 따라 PrestoBlue Assay 시약(Promega)을 사용하여 결정하였다. 플레이트 상의 각각의 샘플 웰에 대한 흡광을 Cytation 3 플레이트 판독기(BioTek, 미국 버몬트주 위노스키 소재)를 사용하여 560 nm 및 590 nm에서 측정하였다. 활성을 0.1% DMSO 미처리 대조군에 대해 계산하였다. 0.1% DMSO 단독을 사용한 처리를 세포 생존력 활성 대조군으로서 사용하였다. DMSO 대조군의 상대 표준 편차는 5% 미만이었다. 스타우로스포린을 세포 생존력 감소에 대한 매우 강력한 양성 대조군으로 사용하였다. 스타우로스포린(1 uM) 처리에 대한 세포 생존력은 배경 보정된 DMSO 대조군 값의 75%였다. 결과를 표 5에 보고한다.

실시예 4 - 배양된 마우스 지방세포에서 유리 지방산 수준

지방산 대사에 대한 펩티드의 효과를 마우스 지방세포와 같은 배양된 세포에서 유리 지방산 수준의 검정을 사용하여 평가할 수 있다. 펩티드를 먼저 DMSO 중에 10 mM 스톡으로서 제조하였고, 10 μM(0.1% DMSO)의 최종 농도에서 사용하였다. 이소프로테레놀을 매우 강력한 지방산 생성 유도제로 사용하였다. ZenBio에서 구입한 마우스 3T3-L1 세포를 Pre-adipocyte Medium(Zen-Bio)의 96웰 플레이트에 웰당 3,000개의 세포로 시딩하고, 5% CO2/95% 공기의 가습 분위기에서 37℃에서 컨플루언스까지 성장시켰다. 컨플루언스 2일 후, 세포를 Adipocyte Differentiation Medium(Zen-Bio)에 넣고, 5% CO2/95% 공기의 가습 분위기에서 37℃에서 추가로 3일 동안 배양하였다. 그런 다음 배양 배지를 Adipocyte Maintenance Medium(Zen-Bio)로 교체하고, 격일로 배지를 부분적으로 교체하면서 세포를 5% CO2/95% 공기의 가습 분위기에서 37℃에서 추가로 9 내지 12일 동안 유지하였다. 분화 12 내지 15일 후, 시험 펩티드를 0.1% DMSO 중의 10 μM의 최종 농도로 첨가하고, 5% CO2/95% 공기의 가습 분위기에서 37℃의 Adipocyte Maintenance Medium에서 20 내지 22시간 동안 배양하였다. 20 내지 22시간 후, 미처리 대조군을 제외한 모든 웰에 1 nM 이소프로테레놀을 첨가하고, 시험 펩티드를 보충하였다. 100 nM의 인슐린을 대조군 웰에 첨가하였다. 세포를 5% CO2/95% 공기의 가습 분위기에서 37℃의 검정 완충액(Zen-Bio)에서 3시간 동안 인큐베이션시켰다. 배지의 유리 지방산 농도를 540 nm에서 Cytation 3 플레이트 판독기(BioTek, 미국 버몬트주 위누스키 소재)를 사용하여 제조사의 지침에 따라 Free Fatty Acid Assay kit(Zen-Bio)를 사용하여 결정하였다. 흡광도 값을 미처리 배경에 대해 수정하였고, 이소프로테레놀 처리된 세포에 대해 표현하였다. 이소프로테레놀(1 nM) 단독으로의 처리를 유리 지방산 수준 자극 대조군으로 사용하였다. 이소프로테레놀 대조군의 상대 표준 편차는 10% 미만이었다. 인슐린을, 유리 지방산 수준을 감소시키기 위한 매우 강력한 양성 대조군으로 사용하였다. 인슐린(100 nM) 처리에 대한 유리 지방산 수준은 이소프로테레놀 대조군 값의 5% 미만이었다. 결과를 표 6에 보고한다.

실시예 5 - 글루코스 이용

글루코스 대사에 대한 펩티드의 효과를 배양된 배양 세포, 예컨대, 마우스 근아세포에서 글루코스 이용의 검정을 사용하여 평가할 수 있다. 펩티드를 먼저 DMSO 중에 10 mM 스톡으로서 제조하였고, 10 μM(0.1% DMSO)의 최종 농도에서 사용하였다. C2C12 마우스 근아세포주는 American Type Culture Collection(미국 버지니아주 매나서스 소재)에서 구입하였다. C2C12 배양물을 2일마다 변화시키면서 배양물을 5% CO2/95% 공기의 가습 분위기에서 37℃로 유지시켰다. C2C12 세포를 100 IU/ml 페니실린 및 100 μg/ml 스트렙토마이신이 함유된 10% FBS가 보충된 DMEM(1 g/L 글루코스)에서 성장시켰다. C2C12 세포를 96-웰 플레이트 상의 7,000 세포/웰에서 시딩하고, 컨플루언스까지 배양하였다. 세포가 컨플루언스에 도달하면, 배지를 100 IU/ml 페니실린 및 100 μg/ml 스트렙토마이신을 함유한 2% HS가 보충된 DMEM(1 g/L 글루코스)로 변화시키고, 37℃에서 5% CO2/95% 공기의 가습 분위기에서 유지시켰다. 분화 유도 5일 후, 100 IU/ml 페니실린 및 100 μg/ml 스트렙토마이신을 함유한 2% HS가 보충된 신선한 DMEM(1 g/L 글루코스)를 배양물에 첨가하였다. 세포를 5% CO2 및 95% 공기의 가습 분위기에서 5시간 동안 37℃로 유지시켰다. 5시간 후, 신선한 분화 배지에서 준비된 10 μM의 시험 펩티드 또는 대조군(1% DMSO 중의 0.5 mM 또는 1 mM 메트포르민)을 세포에 첨가하고, 배양물을 5% CO2/95% 공기의 가습 분위기에서 18 내지 22시간 동안 37℃로 유지시켰다. 인큐베이션 후에, 배양 배지를 세포로부터 제거하고, 남아있는 글루코스 농도를 570 nm에서 Cytation 3 플레이트 판독기(BioTek, 미국 버몬트주 위노스키 소재)를 사용하여 제조자의 지침에 따라 Glucose Assay kit(Abcam)를 사용하여 사용하였다. 배지 중의 글루코스 농도를 0.1% DMSO 처리된 대조군 세포에 대해 계산하였다. 0.1% DMSO 처리된 대조군에 대한 결과의 상대 표준 편차는 20% 미만이었다. 메트포르민을 글루코스 수준의 감소에 대한 양성 대조군으로서 사용하였다(메트포르민(1 mM) 치료로의 치료에 대한 증가된 글루코스 이용 글루코스 수준은 0.1% DMSO 처리된 대조군 값의 20% 미만이었다). 결과를 표 7에 보고한다.

실시예 6 - ATP 수준

세포 대사에 대한 펩티드의 효과를 인간 신경모세포종 세포와 같은 배양된 세포에서 ATP 수준의 검정을 사용하여 평가하였다. 펩티드를 먼저 DMSO 중에 10 mM 스톡으로서 제조하였고, 10 μM(0.1% DMSO)의 최종 농도에서 사용하였다. 스타우로스포린을 ATP 수준의 감소를 초래하는 아폽토시스/세포 사멸의 유도에 대한 매우 강력한 양성 대조군으로 사용하였다. 스타우로스포린을 DMSO 중에 용해시키고, 0.1% DMSO 중의 10 nM에서 1 μM 사이의 최종 농도로 사용하였다. CellTiter-Glo® Assay kit를 Promega에서 구매하였다. SH-SY5Y 인간 골수 신경모세포종 세포주를 American Type Culture Collection(미국 버지니아주 매나서스 소재)에서 구매하였고, Memorial Sloan-Kettering Cancer Center(미국 뉴욕주 소재)로부터 허가를 받았다. SH-SY5Y 세포를 100 IU/ml 페니실린 및 100 μg/ml 스트렙토마이신이 함유된 10% FBS가 보충된 DMEM/F12 배지에서 성장시켰다. 배양물을 5% CO2/95% 공기의 가습 분위기에서 37℃로 유지시켰다. SH-SY5Y 세포를 96웰 플레이트에 웰당 30,000개 세포로 시딩하였다. 다음날 세포를 0.1% DMSO 중의 제시된 농도에서 10 μM의 시험 펩티드 또는 스타우로스포린과 함께 인큐베이션시켰고, 18 내지 20시간 동안 5% CO2/95% 공기의 가습 분위기에서 37℃에서 유지시켰다. ATP 수준을 제조사의 지침에 따라서 CellTiter-Glo Assay kit(Promega)를 사용하여 결정하였다. 플레이트 상의 각각의 샘플 웰에 대한 발광성을 Cytation 3 플레이트 판독기(BioTek, 미국 버몬트주 위노스키 소재)를 사용하여 측정하였다. 활성을 0.1% DMSO 처리 대조군에 대해 계산하였다. 0.1% DMSO 처리된 대조군에 대한 결과의 상대 표준 편차는 5% 미만이었다. 스타우로스포린을 ATP 수준의 감소에 대한 매우 강력한 양성 대조군으로 사용하였다. 스타우로스포린(1 μM)으로의 치료에 대한 ATP 수준은 0.1% DMSO 처리 대조군 값의 5% 미만이었다. 결과를 표 8에 보고한다.

실시예 7 - 스타우로스포린에 노출된 세포에서 ATP 수준

스타우로스포린 노출과 같은 적합한 스트레스에 노출된 인간 신경모세포종 세포와 같은 배양된 세포에서 ATP 수준의 검정을 사용하여 펩티드의 세포 생존력에 대한 잠재적인 세포보호 효과 또는 잠재적인 상승작용 효과를 평가하였다. 펩티드를 먼저 DMSO 중에 10 mM 스톡으로서 제조하였고, 10 μM(0.1% DMSO)의 최종 농도에서 시험하였다. 스타우로스포린을 세포 ATP 수준을 감소시키는 아폽토시스/세포 사멸의 가장 강력한 유도제로서 사용하였다. 스타우로스포린을 10 nM 내지 1 μM의 범위의 농도로 사용하였다. CellTiter-Glo® Assay kit를 Promega에서 구매하였다. SH-SY5Y 인간 신경모세포종 세포주를 American Type Culture Collection(미국 버지니아주 매나서스 소재)에서 구매하였고, Memorial Sloan-Kettering Cancer Center(미국 뉴욕주 소재)로부터 허가를 받았다. SH-SY5Y 세포를 100 IU/ml 페니실린 및 100 μg/ml 스트렙토마이신이 함유된 10% FBS가 보충된 DMEM/F12 배지에서 성장시켰다. 배양물을 5% CO2/95% 공기의 가습 분위기에서 37℃로 유지시켰다. SH-SY5Y 세포를 96웰 플레이트에 웰당 30,000개 세포로 시딩하였다. 다음날 세포를 0.1% DMSO 중의 10 μM의 시험 펩티드 및 스타우로스포린(40 μM)과 함께 인큐베이션시켰고, 18 내지 20시간 동안 5% CO2/95% 공기의 가습 분위기에서 37℃에서 유지시켰다. ATP 수준을 제조사의 지침에 따라서 CellTiter-Glo Assay kit(Promega)를 사용하여 결정하였다. 플레이트 상의 각각의 샘플 웰에 대한 발광성을 Cytation 3 플레이트 판독기(BioTek, 미국 버몬트주 위노스키 소재)를 사용하여 측정하였다. 40 μM 스타우로스포린으로의 처리에 의한 ATP의 감소와 비교하여 활성을 계산하였다. 100% 미만의 값은 세포보호 효과를 나타내는 반면, 100% 초과의 값은 생존력에 대한 상승작용 효과를 나타낸다. 40 μM 스타우로스포린 처리된 대조군 세포에 대한 결과의 상대 표준 편차는 5% 미만이었다. 결과를 표 9에 보고한다.

실시예 8 - 세포 증식

배양된 세포에서 BrdU 혼입의 검정을 사용하여 세포 증식에 대한 펩티드의 효과를 평가할 수 있다. 펩티드를 먼저 DMSO 중에 10 mM 스톡으로서 제조하고, 10 μM(0.1% DMSO)의 최종 농도에서 시험한다. H-4-II-E 래트 간 간종 세포주를 American Type Culture Collection(미국 버지니아주 매나서스 소재)에서 구입한다. H-4-II-E 세포를 100 IU/ml 페니실린 및 100 μg/ml 스트렙토마이신이 함유된 10% FBS가 보충된 DMEM에서 성장시킨다. 배양물을 5% CO2/95% 공기의 가습 분위기에서 37℃로 유지시킨다. H-4-II-E 세포를 96웰 플레이트에 웰당 20,000개 세포로 시딩하였다. 다음날 세포를 0.1% DMSO 중의 10 μM의 시험 펩티드와 함께 인큐베이션시키고, 18 내지 20시간 동안 5% CO2/95% 공기의 가습 분위기에서 37℃에서 유지시킨다. 세포 증식을 제조사의 지침에 따라서 BrdU 세포 증식 Assay kit(Cell Signaling Technology)를 사용하여 결정한다. 플레이트 상의 각각의 샘플 웰에 대한 흡광을 Cytation 3 플레이트 판독기(BioTek, 미국 버몬트주 위노스키 소재)를 사용하여 450 nm에서 측정한다. 활성을 0.1% DMSO 미처리 대조군에 대해 계산한다.

실시예 9 - 반응성 산소 종의 개요

적합한 산화 스트레스에 노출된 배양된 세포에서 ROS의 검정을 사용하여 반응성 세포 종(ROS)의 세포 수준에 대한 펩티드의 보호 또는 상승작용 효과를 평가할 수 있다. 펩티드를 먼저 DMSO 중에 10 mM 스톡으로서 제조하고, 10 μM(0.1% DMSO)의 최종 농도에서 시험한다. Tert-부틸 히드로겐 퍼옥시드(TBHP)를 ROS의 가장 강력한 유도자로서 사용하였다. TBHP를 100 μM의 최종 농도에서 사용한다. 설포라판을 TBHP 유도된 ROS 생산에 대한 보호성 항산화성 대조군으로서 10 uM의 최종 농도로 사용한다. H-4-II-E 래트 간 간종 세포주를 American Type Culture Collection(미국 버지니아주 매나서스 소재)에서 구입한다. H-4-II-E 세포를 100 IU/ml 페니실린 및 100 μg/ml 스트렙토마이신이 함유된 10% FBS가 보충된 DMEM에서 성장시킨다. 배양물을 5% CO2/95% 공기의 가습 분위기에서 37℃로 유지시킨다. H-4-II-E 세포를 96웰 플레이트에 웰당 15,000 내지 20,000개 세포로 시딩하였다. 다음날 세포를 0.1% DMSO 중의 10 μM의 시험 펩티드 또는 10 uM의 설포라판과 함께 인큐베이션시키고, 18 내지 20시간 동안 5% CO2/95% 공기의 가습 분위기에서 37℃에서 유지시킨다. 18 내지 20시간의 인큐베이션 후 세포에 DCFDA를 45분 동안 로딩한다. 이어서 100 μM의 TBHP를 적절한 웰에 1시간 동안 첨가한다. 제조사의 지침에 따라서 DCFDA 세포 ROS Detection Assay kit(Abcam)를 사용하여 ROS 활성을 결정한다. 플레이트 상의 각각의 샘플 웰에서 형광을 Cytation 3 플레이트 판독기(BioTek, 미국 버몬트주 위노스키 소재)를 사용하여 Ex/Em= 485/535nm에서 측정한다. 활성을 TBHP 대조군에 대해서 계산한다.

실시예 10 - 식이 유도 비만(Diet Induced Obese: DIO) 마우스에서 대사 매개변수에 대한 효과

당업계에 널리 공지된 방법에 의해서 DIO 마우스 연구를 수행한다. C57BL/6 마우스를 6주 내지 48주 동안 고지방식이를 유지시켜 식이 유도 비만을 발생시킨다. 동물을 혈당 수준 및/또는 체중에 기초하여 처리군으로 무작위 배정한다. 본 발명의 펩티드 또는 비히클 대조군을 5 내지 21일 동안 복강내 또는 피하 주사에 의해 1일 2회 또는 1일 2회 투여한다. 체중, 혈당 수치 및 음식 섭취를 모니터링한다. 글루코스(1 내지 3 g/kg)을 복강 내 투여한 후 2시간 동안 혈당 수치를 측정함으로써 글루코스 내성을 평가한다. 본 발명의 펩티드의 투여는 비히클 대조군으로 처리된 동물과 비교할 때 더 큰 체중 감소, 더 큰 혈당 감소 및 개선된 글루코스 내성으로부터 선택되는 하나 이상의 효과를 초래한다.

실시예 11 - 마우스 이종이식 모델

마우스 이종이식 모델을 당업계에 널리 공지된 방법에 의해 제조한다. 예를 들어, SCID 마우스에 인간 종양 세포(예를 들어, MCF-7, MDA-MB-231, PC-3 등)를 주사하고, 종양 성장을 모니터링한다. 종양이 충분한 크기일 때, 동물을 치료군으로 무작위 배정하고, 본 발명의 펩티드, 비히클 대조군, 양성 대조군(예를 들어, 젬시타빈 또는 파클리탁셀) 또는 본 발명의 펩티드 + 양성 대조군의 조합물을 매일, 격일 또는 매주 투여한다. 종양 성장, 체중 및 생존을 14 내지 28일에 걸쳐 모니터링한다. 본 발명의 펩티드를 단독으로 그리고/또는 양성 대조군과 조합하여 투여하면 비히클 대조군으로 처리된 동물과 비교할 때 종양 성장이 감소되고/거나 생존이 연장된다.

실시예 12 - 세포독성 인설트(Cytotoxic Insult)로부터의 세포의 보호

세포(예를 들어, 설치류 뇌 세포, 설치류 또는 인간 신경 유래 세포주 등의 1차 배양물 등)를 당업계에 널리 공지된 방법에 의해 배양한다. 세포를 본 발명의 펩티드, 비히클 대조군 또는 양성 대조군으로 처리하고, 세포를 세포독성 조건, 예를 들어, 글루탐산 첨가, 혈청 제거, 활성 산소 종의 생성, 베타-아밀로이드 단백질 첨가, 세포독성제(예를 들어, MPTP, 스타우로스포린, 올리고마이신 등)에 대한 노출, 화학치료제(예를 들어, 시스플라틴 등)에 대한 노출 등으로 처리한다. 세포 생존을 당업계에 널리 공지된 방법에 의해 측정한다(예를 들어, 세포 추출물에서 락테이트 탈수소효소(LDH) 활성의 측정; 세포내 ATP의 측정, MTT(3-(4,5-디메틸-2-티아졸릴)-2,5-디페닐-2H-테트라졸륨 브로마이드) 검정; MTS(3(4,5-디메틸티아졸릴-2-일)-5-(3-카르복시메톡시페닐)-2 (4-설포페닐)-2H-테트라졸륨) 검정; 트리판 블루 염색; 칼세인 염색 등). 세포독성 조건에 노출하기 전 및/또는 노출 동안 본 발명의 펩티드로 세포를 처리하면 비히클 대조군으로 처리된 세포와 비교할 때 세포 생존이 증가한다.

실시예 13 - 혈청에서의 안정성

혈장 내 인큐베이션에 의해 시험관내에서 펩티드의 대사 안정성을 평가할 수 있다. 펩티드(100 uM)를 37℃에서 설치류 또는 영장류 종과 같은 적절한 종으로부터 풀링된 혈장에서 인큐베이션시키고, 샘플을 제거하고, 3시간 동안 LC/MS/MS에 의해 온전한 펩티드의 농도에 대해 즉시 분석한다. 각 시점에서 혈장에 남아 있는 펩티드의 백분율을 초기 피크 면적에 대해 계산한다.

실시예 14 - 간 손상에 대한 트리글리세리드 수준 및 마커의 효과

트리글리세리드의 순환 수준 및 간 손상 마커에 대한 펩티드의 효과를 적합한 동물 모델에서 평가할 수 있다. 수컷 C57BL/6 마우스를 12주 내지 22주 동안 고지방식이를 유지시켜 식이 유도 비만을 발생시킨다. 동물을 혈당 수준 및 체중에 기초하여 처리군으로 무작위 배정하였다. 펩티드를 5일 내지 28일 동안 적절한 경로에 의해서 1일 1회 또는 2회 수컷 DIO 마우스 군에 투여한다. 수컷 DIO 마우스의 추가 군(n = 8/군)에게 대조군 시험품 또는 비히클 단독을 제공하였다. 혈청 샘플을 종결 시 얻는다. 샘플을 당업계에 널리 공지된 방법에 의해 표준 임상 화학 매개변수에 대해 분석한다. 트루글리세리드의 혈청 농도 및 ALT 및 AST와 같은 간 손상 마커를 비히클 단독으로 처리된 동물의 농도와 비교한다.

실시예 15 - 시노몰거스 원숭이에서의 약동학

수컷 시노몰거스 원숭이(2 내지 6 kg)를 투여 전 8시간 동안 금식시킨다. 동물 군에 적합한 경로에 의해서 단일 용량의 시험 펩티드(0.1 내지 15 mg/kg)를 주사한다. 혈액 샘플을 24시간에 걸쳐서 간격으로 채취하고, 혈장에 대해서 가공한다. 음식을 주사 후 4시간에 다시 제공한다. 적합한 분석 방법(예를 들어, LC/MS-MS)에 의해서 혈장 샘플에서 펩티드 및/또는 대사산물의 농도를 결정하고, 약동학 매개변수를 비구획 방법에 의해 계산한다.

실시예 16 - 비만의 비-인간 영장류 모델의 효과

자발적으로 비만인 수컷 시노몰거스 원숭이를 적어도 3주 동안 투여 및 취급에 적응시킨다. 기준선 동물 특징을 결정하고, 동물을 체중 및 트리글리세리드 수준과 같은 기준선 대사 매개변수에 기초하여 처리군에 무작위 배정한다. 무작위 배정 후, 원숭이 군에게 4주 이상 동안 적합한 경로에 의해서 투여되는 본 발명의 펩티드의 1일 또는 2회 용량을 제공한다. 원숭이 대조군에게 비히클 또는 양성 대조군의 1일 용량을 제공한다. 음식 섭취량 및 체중을 연구 기간 동안 간격을 두고 측정한다. 체중, 음식 섭취, BMI 및/또는 대사 매개변수에 대한 투여된 펩티드의 효과를 비히클 처리된 대조군 동물과 비교한다.

실시예 17 - 비알코올성 지방간염(NASH)의 STAM® 마우스 모델에서의 효과.

NASH의 STAM 모델에서, C57/bl6 마우스에게 췌장 β-세포를 파괴하기 위해 출생 후 3일에 단일 피하 용량의 스트렙토톡신을 주사한다. 4주령에, 동물은 고지방 식이를 한다. 이러한 조합 처리는 고혈당증 및 중등도 고지혈증과 함께 지방증, 섬유증, 간경변 및 최종적으로 간세포암종(HCC)의 발병을 초래하므로 인간 NASH와 매우 유사하다. 6주령에서 시작하여, STAM 동물 군(군당 8마리 동물)을 연구 종료까지 적절한 경로에 의해 매일 또는 매일 2회 투여되는 본 발명의 펩티드로 처리한다. 동물의 대조군에게 적합한 양성 대조군 화합물(예를 들어, 텔미사탄)을 매일 제공한다. 대략 9주령에, 대사 매개변수를 결정하고, 동물을 희생시킨다. 간 샘플을 얻고, 고정하고, 파라핀에 포매하고, 헤마톡실린 및 에오신 또는 매슨 트리크롬(Masson's trichrome)으로 염색하고, 광학 현미경으로 검사한다. 지방증의 정도 및 비알코올성 지방간 질환(NAFLD) 활성 점수(NAS)를 당업계에 공지된 방법에 따라 조직병리학적으로 결정한다.

실시예 18 - 전립선암의 마우스 이종이식모델.

6 내지 7주령이고, 20 ± 2g인 수컷 BALB/c 누드 마우스에게 약 1x10⁷개의 인간 PC-3 종양 세포를 함유하는 세포 현탁액 0.1 ml의 단일 부피를 오른쪽 아래 옆구리에 피하 접종하였다. 평균 종양 크기가 대략 130 mm³일 때 동물의 체중을 측정하고, 처리군으로 무작위 배정하였다. 10마리 동물의 군에게 복강내 투여에 의해 시험품(5 mg/kg)의 매일 주사를 제공하였다. 캘리퍼스 및 표준 방법에 의해 계산된 종양 부피를 사용하여 2차원으로 주당 2회 종양 크기를 측정하였다. 초기 투여 후 제21일(제0일)에 연구를 종료하였다. 종양 부피에 대한 본 발명의 펩티드 투여 효과를 표 10에 나타낸다.

실시예 19 - 종양 세포 증식

세포를 표준화된 배지에서 표준 세포 밀도로 이중 384웰 플레이트에 시딩하였다. 펩티드를 DMSO에 1 mM(1000x)로 용해시켰다. 24시간 후, 1 μM의 최종 시험 농도에서 Echo 555 음향 에너지 기반 전달을 사용하여 펩티드를 하나의 플레이트에 첨가하였다. 다른 플레이트를 고정하고, 염색하고, 시간 0의 세포 계수치에 대해 분석하였다. 펩티드로 처리된 시험 플레이트를 72시간 동안 지속적으로 인큐베이션시켰다. 이어서 세포를 고정하고, 염색하여 핵을 시각화하였다. 인간 종양 세포의 시험관내 증식에 대한 본 발명의 펩티드의 효과를 표 11에 제시한다.

실시예 20 - 배양된 마우스 지방세포에서 유리 지방산 수준

지방산 대사에 대한 펩티드의 효과를 마우스 지방세포와 같은 배양된 세포에서 유리 지방산 수준의 검정을 사용하여 평가하였다. 펩티드를 먼저 DMSO 중에 10 mM 스톡으로서 제조하였고, 10 μM(0.1% DMSO)의 최종 농도에서 사용하였다. 이소프로테레놀을 매우 강력한 지방산 생성 유도제로 사용하였다. ZenBio에서 구입한 마우스 3T3-L1 세포를 Pre-adipocyte Medium(Zen-Bio)의 96웰 플레이트에 웰당 3,000개의 세포로 시딩하고, 5% CO2/95% 공기의 가습 분위기에서 37℃에서 컨플루언스까지 성장시켰다. 컨플루언스 2일 후, 세포를 Adipocyte Differentiation Medium(Zen-Bio)에 넣고, 5% CO2/95% 공기의 가습 분위기에서 37℃에서 추가로 3일 동안 배양하였다. 그런 다음 배양 배지를 Adipocyte Maintenance Medium(Zen-Bio)로 교체하고, 격일로 배지를 부분적으로 교체하면서 세포를 5% CO2/95% 공기의 가습 분위기에서 37℃에서 추가로 9 내지 12일 동안 유지하였다. 분화 12 내지 15일 후, 시험 펩티드를 0.1% DMSO 중의 10 μM의 최종 농도로 첨가하고, 5% CO2/95% 공기의 가습 분위기에서 37℃의 Adipocyte Maintenance Medium에서 20 내지 22시간 동안 배양하였다. 20 내지 22시간 후, 미처리 대조군을 제외한 모든 웰에 1 nM 이소프로테레놀을 첨가하고, 시험 펩티드를 보충하였다. 100 nM의 인슐린을 대조군 웰에 첨가하였다. 세포를 5% CO2/95% 공기의 가습 분위기에서 37℃의 검정 완충액(Zen-Bio)에서 3시간 동안 인큐베이션시켰다. 배지의 유리 지방산 농도를 540 nm에서 Cytation 3 플레이트 판독기(BioTek, 미국 버몬트주 위누스키 소재)를 사용하여 제조사의 지침에 따라 Free Fatty Acid Assay kit(Zen-Bio)를 사용하여 결정하였다. 흡광도 값을 미처리 배경에 대해 수정하였고, 이소프로테레놀 처리된 세포에 대해 표현하였다. 이소프로테레놀(1 nM) 단독으로의 처리를 유리 지방산 수준 자극 대조군으로 사용하였다. 이소프로테레놀 대조군의 상대 표준 편차는 10% 미만이었다. 인슐린을, 유리 지방산 수준을 감소시키기 위한 매우 강력한 양성 대조군으로 사용하였다. 인슐린(100 nM) 처리에 대한 유리 지방산 수준은 이소프로테레놀 대조군 값의 5% 미만이었다. 결과를 표 12에 보고한다.

실시예 21 - 배양된 래트 일차 피질 뉴런의 신경보호

배양된 신경 세포에서 앰로이드 베타 펩티드(1-42)의 독성의 예방에 의해서 본 발명의 펩티드의 신경보호 효과를 결정하였다. 래트의 일차 피질 뉴런을 당업계에 널리 공지된 방법으로 수집하고, 배양하였다(문헌[Singer et al., 1999] 및 문헌[Callizot et al., 2013]). 세포를 폴리-L-라이신으로 미리 코팅된 96웰 플레이트에 웰당 25,000개의 밀도로 시딩하고, 공기(95%)-CO2(5%) 인큐베이터에서 37℃에서 배양하였다. 배지를 2일마다 교체하였다. 피질 뉴런을 배양 11일 후에 처리하였다. 단량체 펩티드를 보장하기 위해 문헌[Callizot et al., 2013]에 기재된 절차를 사용하여 Aβ(1-42)를 제조하였다. 화합물 및 양성 대조군인 BDNF(50 ng/ml)를 배양 배지에 용해시킨 다음 Aβ(1-42)(20 μM)를 첨가하기 전에 1시간 동안 일차 피질 뉴런과 사전 인큐베이션시켰다. 처리 24시간 후, 세포 배양 상청액을 제거하고, 피질 뉴런을 -20℃에서 5분 동안 에탄올(95%) 및 아세트산(5%)의 차가운 용액으로 고정시켰다. 0.1% 사포닌으로 투과화한 후, 세포를 1% 우태아 혈청 및 0.1% 사포닌을 함유하는 PBS에 1/400으로 희석한 마우스 단클론성 항체 항-미세관 결합 단백질 2(MAP-2)와 함께 2시간 동안 인큐베이션시켜 세포체 및 신경돌기를 염색하였다.

이 항체를 실온에서 1시간 동안 1% FCS, 0.1% 사포닌을 함유하는 PBS에서 1/400으로 희석된 Alexa Fluor 488 염소 항-마우스 IgG로 검출하였다. 각각의 조건에 대해, lmageXpress(Molecular Devices)를 사용하여 20x 배율로 영상을 얻었다. 총 세포 수 및 신경돌기 네트워크의 정도를 Custom Module Editor(Molecular Devices)를 사용하여 결정하였다. 배양된 뉴런 세포에서 Aβ(1-42)의 신경독성에 대한 본 발명의 펩티드로의 처리 효과를 표 13에 제시한다. 펩티드는 온전한 뉴런의 생존을 유의하게 개선하고, Aβ(1-42)로부터 신경돌기 네트워크를 보호하였다.

실시예 22 - 배양된 마우스 지방세포에서 유리 지방산 수준에 대한 인슐린-의존적 효과

지방산 대사에 대한 펩티드의 효과를 마우스 지방세포와 같은 배양된 세포에서 유리 지방산 수준의 검정을 사용하여 인슐린의 부재 및 존재 하에서 평가하였다. 펩티드를 먼저 DMSO 중에 10 mM 스톡으로서 제조하였고, 10 μM(0.1% DMSO)의 최종 농도에서 사용하였다. 이소프로테레놀을 매우 강력한 지방산 생성 유도제로 사용하였다. 인슐린(0.25 nM)을 부분 저해제로서 사용하였고, 인슐린(10 nM)을 이소프로테레놀 자극된 지방산 생산의 강력한 저해제로서 사용하였다. ZenBio(미국 노쓰캐롤라이나주 리서치 트라이앵글 파크 소재)에서 구입한 마우스 3T3-L1 세포를 Pre-adipocyte Medium(Zen-Bio)의 96웰 플레이트에 웰당 3,000개의 세포로 시딩하고, 5% CO₂/95% 공기의 가습 분위기에서 37℃에서 컨플루언스까지 성장시켰다. 컨플루언스 2일 후, 세포를 Adipocyte Differentiation Medium(Zen-Bio)에 넣고, 5% CO₂/95% 공기의 가습 분위기에서 37℃에서 추가로 3일 동안 배양하였다. 그런 다음 배양 배지를 Adipocyte Maintenance Medium(Zen-Bio)로 부분적으로 교체하고, 격일로 배지를 부분적으로 교체하면서 세포를 5% CO₂/95% 공기의 가습 분위기에서 37℃에서 유지하였다. 분화 제12일에, 96웰 배양물을 인슐린이 없는 Adipocyte Maintenance Medium로 옮기고, 5% CO₂/95% 공기의 가습 분위기에서 37℃로 2일 동안 유지시켰다. 이러한 인큐베이션 기간 후, 배지를 14일 분화된 배양물로부터 제거하고, 적절한 경우 펩티드(10 μM), 인슐린(0.25 nM 또는 10 nM), 이소프로테레놀(0.1 nM)을 함유하는 Assay Buffer(Zen-Bio)로 대체하였다. 미처리 대조군을 제외한 모든 웰에 1 nM 이소프로테레놀을 첨가하였다. 0.1 nM 및 10 nM의 인슐린을 대조군 웰에 첨가하였다. 인슐린(0.25 nM)의 부재 또는 존재 하에서 펩티드(10 μM)를 시험 웰에 첨가하였다. 화합물의 존재 하의 세포를 5% CO₂/95% 공기의 가습 분위기에서 3시간 동안 37℃에 두었다. 최종 3시간 인큐베이션 후에, 각각의 웰에서 조건화된 검정 완충액을 제거하고, 유리 지방산 함량의 정량을 위해서 새로운 96웰 플레이트에 넣었다. 검정 완충 샘플의 유리 지방산 농도를 540 nm에서 Cytation 3 플레이트 판독기(BioTek, 미국 버몬트주 위누스키 소재)를 사용하여 제조사의 지침에 따라 Free Fatty Acid Assay kit(Zen-Bio)를 사용하여 결정하였다. 흡광도 값을 미처리 배경에 대해서 보정하고, 펩티드 단독의 경우 이소프로테레놀(0.1 nM) 처리 대조군 세포 또는 인슐린(0.25 nM)의 존재 하의 펩티드의 경우 이소프로테레놀(0.1 nM) + 인슐린(0.25 nM)의 백분율로서 표현하였다. 이소프로테레놀(1 nM) 단독으로의 처리를 유리 지방산 수준 자극 대조군으로 사용하였다. 이소프로테레놀 대조군의 상대 표준 편차는 10% 미만이었다. 인슐린을, 유리 지방산 수준을 감소시키기 위한 매우 강력한 양성 대조군으로 사용하였다. 인슐린(10 nM) 처리에 대한 유리 지방산 수준은 이소프로테레놀 대조군 값의 5% 미만이었다. 인슐린(0.25 nM) 처리에 대한 유리 지방산 수준은 이소프로테레놀 대조군 값의 60 내지 80%였다. 결과를 표 14에 보고한다.

실시예 23 - 배양된 래트 간 세포에 의한 글루코스 생산에 대한 인슐린-의존적 효과

래트 간세포와 같은 배양된 세포에서 글루코스 수준의 검정을 사용하여 인슐린의 부재 및 존재 하에서 글루코스 생산에 대한 펩티드의 효과를 평가하였다. 펩티드를 먼저 DMSO 중에 10 mM 스톡으로서 제조하였고, 10 μM(0.1% DMSO)의 최종 농도에서 사용하였다. 인슐린(800 pM)을 포도당 생산의 부분적 저해제로 사용하였다. ATCC(미국 버지니아주 매나서스 소재)에서 구입한 H4-IIE 세포를 96웰 플레이트에 표준 배지(DMEM/고 글루코스 + 10% FBS + 1X Glutamax + 항생제) 중에 100,000개 세포/웰로 시딩하고, 5% CO₂/95% 공기의 가습 분위기에서 37℃에서 밤새 부착되도록 두었다. 시딩 대략 24시간 후, 배지를 제거하고, 세포를 무글루코스 DMEM으로 헹구고, 글루코스 생산 배지(무글루코스 DMEM + 2mM 피루브산나트륨 + 10mM 젖산나트륨)를 첨가하였다. 배양물을 5% CO₂/95% 공기의 가습 분위기에서 37℃에 밤새 두었다. 다음날 아침, 배지를 제거하고 화합물을 함유하는 새로운 글루코스 생산 배지를 첨가하였다. 800 pM의 인슐린을 대조군 웰에 첨가하였다. 인슐린(800 pM)의 부재 또는 존재 하에서 펩티드(10 μM)를 시험 웰에 첨가하였다. 화합물의 존재 하의 세포를 5% CO₂/95% 공기의 가습 분위기에서 밤새 37℃에 두었다. 24시간 인큐베이션 후, 각각의 웰의 조건화된 배지를 글루코스 함량의 정량을 위해 새로운 96웰 플레이트로 옮겼다. 570 nm에서 Cytation 3 플레이트 판독기(BioTek, 미국 버몬트주 위누스키 소재)를 사용하여 제조사의 지침에 따라 Amplex Red Glucose Assay kit(Abacm; 미국 매사추세츠주 캠브리지 소재)를 사용하여 포도당 수준의 정량을 결정하였다. 펩티드 단독 샘플의 경우 미처리 대조군 세포(최대 글루코스 생산) 또는 인슐린(800 pM)의 존재 하의 펩티드의 경우 인슐린(800 pM)의 백분율로서 흡광도 값을 표현하였다. 인슐린(800 pM) 처리의 경우 글루코스 수준은 미처리 대조군 값의 약 80 내지 90%였다. 결과를 표 15에 보고한다.

실시예 24 - 섬유모세포에서 근섬유아세포로의 전이 검정

섬유아세포에서 근섬유아세포로의 전이(fibroblast-to-myofibroblast transition: FMT) 검정을 사용하고, 인간 태아 폐 섬유아세포와 같은 배양된 세포에 의해 생산된 프로-콜라겐 I 알파 1 발현을 모니터링함으로써 섬유증에 대한 펩티드의 효과를 시험관내에서 평가할 수 있다. 펩티드를 먼저 DMSO 중에 10 mM 스톡 용액 또는 H2O 중의 1 mM 스톡으로 제조하였고, 10 μM(0 내지 0.1% DMSO)의 최종 농도로 사용하였다. 변형 성장 인자 베타(Transforming Growth Factor beta: TGF-β)를 프로-콜라겐 I 알파 1 발현의 증가로 측정되는 바와 같은 FMT의 강력한 유도제로 사용하였다. 인간 WI-38 세포주는 American Type Culture Collection(미국 버지니아주 매나서스 소재)에서 구입하였다. WI-38 세포를 48웰 플레이트에 40,000개 세포/웰로 완전 배지(DMEM/고 글루코스(4 g/L) + 10% 우태아 혈청 + 1% 페니실린/스트렙토마이신)에 시딩하고, 37℃에서 5% CO₂/95% 공기의 가습 분위기에 두었다. 다음날, 배지를 제거하고, 세포를 HBSS로 2회 헹구고, 배지를 Serum Restricted Medium(DMEM/고 글루코스(4 g/L) + 0.2% 우태아 혈청 + 1% 페니실린/스트렙토마이신)로 교체하였다. 배양물을 5% CO₂/95% 공기의 가습 분위기에서 37℃에 밤새 두었다. Serum Restricted Medium에서 24시간 후, 배지를 제거하고, 다음을 첨가하였다: 신선한 Serum Restricted Medium 단독(TGF-β 대조군 없음); 5 ng/ml TGF-β를 함유하는 포함하는 신선한 Serum Restricted Medium(TGF-β 대조군); 또는 10 μM 펩티드와 5 ng/ml TGF-β를 함유하는 Serum Restricted Medium. 세포를 5% CO₂/95% 공기의 가습 분위기에서 37℃에서 48시간 동안 인큐베이션시키고, 차가운 HBSS로 2회 세척하고, 즉시 용해시켰다. 제조사의 지침에 따라 프로-콜라겐 I 알파 1 ELISA kit(Abcam; 미국 매사추세츠주 캠브리지 소재)를 사용하여 세포 용해물에서 프로-콜라겐 I 알파 1 농축액의 용해 및 결정을 수행하였고; 450 nm에서 Cytation 3 플레이트 판독기(BioTek, 미국 버몬트주 위누스키 소재)를 사용하여 흡광도를 측정하였다.

실시예 25 - 섬유모세포에서 근섬유아세포로의 전이 검정

섬유아세포에서 근섬유아세포로의 전이(FMT) 검정을 사용하고, 건강한 일차 인간 폐 섬유아세포와 같은 배양된 세포에 의해 생산된 알파 평활근 액틴(αSMA: alpha smooth muscle actin)을 모니터링함으로써 섬유증에 대한 펩티드의 효과를 시험관내에서 평가할 수 있다. 검정을 Charles River Discovery Research Services UK Limited(영국 에섹스 소재)에서 수행하였다. 3명의 건강한 기증자로부터 유래된 인간 폐 섬유아세포에서 변형 성장 인자 베타-1(TGF-β1) 자극 알파 평활근 액틴(αSMA) 발현을 사용하여 항섬유증 활성을 평가하였다. 펩티드를 DMSO 중의 10 mM 스톡으로 제조하였고, 0.5 LogM 희석 단계를 사용하여 8 단계 농도 반응 곡선에서 시험하였고, 최고 농도(0.1% DMSO 최종)로 10 μM을 사용하였다. 변형 성장 인자 베타(TGF-β1)를 αSMA 발현의 증가로 측정되는 바와 같은 FMT의 강력한 유도제로 사용하였다. 단리된 폐 섬유아세포를 96웰 또는 384웰 PureCol 코팅 플레이트에 시딩하였다. 시딩 후 5일 동안, 배지를 새로 갈았고, 펩티드, 참조 화합물 및 대조군을 세포에 첨가한다. 1시간 후, 1.25 ng/ml TGF-β1을 첨가하여 FMT를 유도하였다. αSMA의 발현을 72시간 후에 면역염색으로 측정하고, IN Cell Analyzer 2200(GE Healthcare)에서 고함량 영상화로 평가하고, IN Cell 개발자 소프트웨어(GE Healthcare)로 자체 개발한 알고리즘을 사용하여 정량하였다. 알고리즘의 출력은 염색 강도에 염색 영역을 곱한 값(DxA 수준)을 나타낸다. 잠재적인 독성의 척도인 세포 수를 정량하기 위해 DAPI를 사용한 세포 핵의 공동 염색을 수행하였다. 0.1% DMSO(음성 대조군)를 사용하여 관찰된 αSMA 발현 수준을 사용하여 각각의 펩티드에 의한 αSMA 저해 백분율을 계산하였다.

실시예 26 - 동계 마우스 암 모델에서 종양 성장

신장 선암종 세포주를 사용하는 마우스 종양 모델인 RENCA와 같은 동계 마우스 암 모델에서 종양 부피를 모니터링함으로써 종양 성장에 대한 펩티드의 효과를 평가할 수 있다. RENCA 세포를 배양물에서 성장시켰다. 제0일에 100 μl PBS 중의 1.0 x 10⁶개 세포를 암컷 BALB/c 마우스의 유선 지방 패드에 이식하였다. 종양 보유 마우스의 코호트에서 대략 30 내지 80 mm³의 평균 종양 부피에 도달했을 때, 이러한 종양 보유 동물을 군당 10마리의 마우스의 치료군으로 무작위 배정하고, 치료를 같은 날에 시작하였다. 시험 펩티드를 복강내 투여에 의해 10 mg/kg의 용량으로 매일 투여하였다. 주 2회 캘리퍼 측정에 의해 원발성 종양 부피를 결정하였다. 연구 제20일에 결정된 바와 같이, 각각의 종양의 성장률을 대조군 비히클-처리군에서 관찰된 종양의 평균 종양 성장의 백분율로 계산하였다.

실시예 27 - 특발성 폐 섬유증의 치료 마우스 모델

폐 섬유증, 폐 중량, 기관지폐포 세척액(BALF: bronchoalveolar lavage fluid) 중의 염증 세포, BALF 중의 가용성 콜라겐 및 특발성 폐섬유증의 치료 마우스 모델의 체중 변화를 모니터링함으로써 확립된 폐 섬유증의 진행에 대한 펩티드의 효과를 평가할 수 있다. 블레오마이신(PBS 중에 희석된 블레오마이신 임상 제형을 사용하여 1.5 U/kg)의 비인두 투여에 의해 6 내지 8주령의 수컷 C57BL/6 마우스의 폐에서 폐 섬유증을 유도하였다. 동물의 대조군에게 비인두 경로에 의해서 식염수를 투여하였다(비-블레오마이신 대조군). 1주 후, 블레오마이신-처리된 동물을 체중에 따라 처리군(군당 N = 10)으로 무작위 배정하고, 비히클 대조군, 닌테다닙 양성 대조군(60 mg/kg/일 PO) 또는 펩티드(5 mg/kg/일, 복강내 주사에 의해서)로 매일 처리하였다. 처리 14일 후(제21일), 폐를 적출하고, 중량을 재었다. 대동맥 뒤 폐엽(post-caval lobe)을 분리하고, 스냅 동결시켰다. 폐를 행크 완충액(Hanks Buffer)으로 플러싱하고, 기관지폐포 세척액(BALF)을 각각의 동물로부터 수거하였다. 총 BALF 백혈구를 계산하였다. 잔류하는 BALF 백혈구에서 슬라이드를 준비하고, May Geimsa 염색으로 고정 및 염색하고, 감별 계수를 수동으로 기록하였다. BALF를 Sircol 검정을 사용하여 가용성 콜라겐에 대해 평가하였다. 조직병리학적 분석을 위해 폐를 10% 중성 완충 포르말린(NBF)에 고정시켰다. Ashcroft 채점 시스템을 사용하여 H&E 염색된 마우스 폐의 조직병리학적 분석에 의해 섬유증을 평가하였다.

실시예 28.

염증성 장 질환의 덱스트란 소듐 설페이트(DSS)-유도 대장염 마우스 모델

DSS-유도 대장염 마우스 모델에서 대변 혈액, 대변 점조도 및 체중 감소를 모니터링함으로써 염증성 질환에 대한 펩티드의 효과를 평가할 수 있다. 암컷 C57BL/6NTac 마우스(9 내지 11주령)에서 8일 동안 멸균 음용수 중의 덱스트란 소듐 설페이트(DSS) 3%의 연속적인 임의량의 경구 투여에 의해서 대장염을 유도하였다. DSS 용액 대신에 대조군(DSS 없음) 마우스에 멸균수를 제공하였다. 펩티드를 경구 DSS와 조합하여 8일 동안 10 mg/kg/일로 1일 1회 복강내로 투여하였다. 양성 대조군은 경구 DSS와 함께 80 mg/kg/일로 경구 투여된 경구 시클로스포린 A(CsA)였다. 일일 평가는 조합된 처음 세 가지 매개변수에 기초하여, 체중 감소 점수, 대변 혈액 점수, 대변 일관성 점수 및 복합 질환 활동 지수(DAI) 점수를 포함하였다. 8일 동안 매일 기록된 점수를 사용하여 개별 동물의 각각의 종점에 대한 곡선 하 면적(AUC) 값을 계산하였다. 비히클의 투여에 비해서, 본 발명의 선택된 펩티드의 투여는 복합 DAI 점수에 대한 AUC 값의 감소 및 대변 혈액 점수, 대변 일관성 점수 및 체중 손실 점수로부터 선택된, DAI 점수의 개별 성분에 대한 AUC 값 중 하나 이상의 감소를 생성시켰다. 양성 대조군 시클로스포린 A의 투여는 DAI 점수, 대변 혈액 점수 및 대변 점조도에 대한 AUC 값을 감소시켰지만, 체중 감소 점수의 AUC를 증가시켰다.

본 명세서에서 개시되고 청구되는 모든 물품 및 방법은 본 개시내용의 측면에서 과도한 실험 없이 이루어지고 실행될 수 있다. 이 개시내용의 물품 및 방법이 바람직한 실시형태의 관점에서 기재되었지만, 개시내용의 사상 및 범주를 벗어나지 않고 변형이 물품 및 방법에 적용될 수 있음이 당업자에게 명백할 것이다. 당업자에게 명백한 이러한 모든 변형 및 등가물은, 현재 존재하든 이후에 개발되든지 간에, 첨부된 청구범위에 의해 정의된 바와 같이 개시내용의 사상 및 범주 내에 있는 것으로 간주된다. 명세서에 언급된 모든 특허, 특허 출원, 및 간행물은 개시내용이 속하는 분야의 당업자의 수준을 가리킨다. 본 명세서에 예시적으로 기재된 개시내용은 본 명세서에 구체적으로 개시되지 않은 임의의 요소(들)의 부재 시 적합하게 실시될 수 있다. 이에 따라, 예를 들어, 본 명세서에서의 각각의 경우에서 임의의 용어 "포함하는", "로 본질적으로 이루어지는", 및 "이루어지는"은 다른 2개의 용어 중 어느 하나로 대체될 수 있다. 이용된 용어 및 표현은 제한이 아닌 상세한 설명의 용어로서 사용되며, 이러한 용어 및 표현의 사용 시 나타나고 기재된 특성의 임의의 등가물 및 이의 일부분을 배제하는 의도는 없지만, 다양한 수정이 청구된 개시내용의 범주 내에서 가능하다는 사실이 인식된다. 이에 따라, 본 개시내용이 바람직한 실시형태 및 임의의 특성에 의해 구체적으로 개시되었지만, 본 명세서에 개시된 개념의 수정 및 변형이 당업자에 의해 쓰일 수 있으며, 이러한 수정 및 변형은 첨부된 청구범위에 의해 정의된 바와 같은 이 개시내용의 범주 내에 있는 것으로 간주된다는 것이 이해되어야 한다.

본 명세서에서 인용된 간행물, 특허 출원, 및 특허를 포함하는 모든 참조문헌은 그 전체가 이로써 참조로, 및 각각의 참조문헌이 개별적으로 및 구체적으로 참조로 포함되는 것으로 나타나고 그 전문이 본 명세서에 제시된 것과 같은 정도(법에 의해 허용되는 최대 정도까지)로 통합된다. 모든 표제 및 부제목들은 본 명세서에서 편의성을 위해서만 사용되며 어느 방식으로든 제한되는 것으로 해석되어서는 안 된다. 본 명세서에서 제공되는 임의의 및 모든 실시예, 또는 예시적인 언어(예를 들어, "예컨대")의 사용은 단지 개시내용을 더 잘 분명히 하기 위한 의도이며 달리 청구되지 않는 한, 개시내용의 범주에 대한 제한을 소유하지 않는다. 명세서에서 어떠한 언어도 본 명세서의 실시에 필수적인 것으로 청구되지 않은 요소를 나타내는 것으로 해석되어서는 안 된다. 본 명세서에서 특허 문헌의 인용 및 통합은 편의성을 위해서만 수행되며 이러한 특허 문서의 유효성, 특허가능성, 및/또는 실시가능성에 대한 어떤 관점도 반영하지 않는다.

이 개시내용은 적용 가능한 법률에 의해 허용되는 바와 같이 본 명세서에 첨부된 양태에서 나열된 주제의 모든 수정 및 등가물을 포함한다.

SEQUENCE LISTING <110> CohBar Inc. <120> Therapeutic Peptides <130> 32701/53065/PC <150> US 62/797,701 <151> 2019-01-28 <160> 35 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Xaa is absent or an amino acid having a polar or non-polar side chain <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Xaa can be Asp, D-Asp, Glu, D-Glu, Lys, D-Lys, Arg, D-Arg, His, D-His, Asn, D-Asn, Gln, D-Gln, Ser, D-Ser, Thr, D-Thr, Tyr, D-Tyr, Cys, D-Cys, Gly, Ala, D-Ala, Val, D-Val, Leu, D-Leu, Ile, D-Ile, Phe, D-Phe, Trp, D-Trp, Pro, D-Pro, Met, D-Met <220> <221> MISC_FEATURE <222> (3)..(3) <223> Xaa is an amino acid having a non-polar side chain <220> <221> MISC_FEATURE <222> (3)..(3) <223> Xaa can be Gly, Ala, D-Ala, Val, D-Val, Leu, D-Leu, Ile, D-Ile, Phe, D-Phe, Trp, D-Trp, Pro, D-Pro, Met, D-Met <220> <221> MISC_FEATURE <222> (6)..(6) <223> Xaa is an amino acid having a non-polar side chain <220> <221> MISC_FEATURE <222> (6)..(6) <223> Xaa can be Gly, Ala, D-Ala, Val, D-Val, Leu, D-Leu, Ile, D-Ile, Phe, D-Phe, Trp, D-Trp, Pro, D-Pro, Nle, Met, and D-Met <220> <221> MISC_FEATURE <222> (7)..(7) <223> Xaa is an amino acid having a polar side chain <220> <221> MISC_FEATURE <222> (7)..(7) <223> Xaa can be Asp, D-Asp, Glu, D-Glu, Lys, D-Lys, Arg, D-Arg, His, D-His, Asn, D-Asn, Gln, D-Gln, Ser, D-Ser, Thr, D-Thr, Tyr, D-Tyr, Cys, D-Cys <220> <221> MISC_FEATURE <222> (9)..(9) <223> Xaa is an amino acid having polar or non-polar side chain <220> <221> MISC_FEATURE <222> (9)..(9) <223> Xaa can be Asp, D-Asp, Glu, D-Glu, Lys, D-Lys, Arg, D-Arg, His, D-His, Asn, D-Asn, Gln, D-Gln, Ser, D-Ser, Thr, D-Thr, Tyr, D-Tyr, Cys, D-Cys, Gly, Ala, D-Ala, Val, D-Val, Leu, D-Leu, Ile, D-Ile, Phe, D-Phe, Trp, D-Trp, Pro, D-Pro, Met, D-Met <220> <221> MISC_FEATURE <222> (10)..(10) <223> Xaa is an amino acid having polar or non-polar side chain <220> <221> MISC_FEATURE <222> (10)..(10) <223> Xaa can be Asp, D-Asp, Glu, D-Glu, Lys, D-Lys, Arg, D-Arg, His, D-His, Asn, D-Asn, Gln, D-Gln, Ser, D-Ser, Thr, D-Thr, Tyr, D-Tyr, Cys, D-Cys, Gly, Ala, D-Ala, Val, D-Val, Leu, D-Leu, Ile, D-Ile, Phe, D-Phe, Trp, D-Trp, Pro, D-Pro, Met, D-Met <220> <221> MISC_FEATURE <222> (13)..(13) <223> Xaa is an amino acid having polar or non-polar side chain <220> <221> MISC_FEATURE <222> (13)..(13) <223> Xaa can be Asp, D-Asp, Glu, D-Glu, Lys, D-Lys, Arg, D-Arg, His, D-His, Asn, D-Asn, Gln, D-Gln, Ser, D-Ser, Thr, D-Thr, Tyr, D-Tyr, Cys, D-Cys, Gly, Ala, D-Ala, Val, D-Val, Leu, D-Leu, Ile, D-Ile, Phe, D-Phe, Trp, D-Trp, Pro, D-Pro, Met, D-Met <220> <221> MISC_FEATURE <222> (15)..(15) <223> Xaa is an amino acid having polar side chain <220> <221> MISC_FEATURE <222> (15)..(15) <223> Xaa can be Asp, D-Asp, Glu, D-Glu, Lys, D-Lys, Arg, D-Arg, His, D-His, Asn, D-Asn, Gln, D-Gln, Ser, D-Ser, Thr, D-Thr, Tyr, D-Tyr, Cys, D-Cys <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(16) <223> Xaa is absent or an amino acid having a non-polar side chain <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(16) <223> Xaa, when present, can be Gly, Ala, D-Ala, Val, D-Val, Leu, D-Leu, Ile, D-Ile, Phe, D-Phe, Trp, D-Trp, Pro, D-Pro, Met, D-Met <220> <221> MISC_FEATURE <222> (17)..(17) <223> Xaa is absent if Xaa16 is absent; if Xaa16 is present, Xaa is an amino acid having a non-polar sidechain <220> <221> MISC_FEATURE <222> (17)..(17) <223> Xaa, when present, can be Gly, Ala, D-Ala, Val, D-Val, Leu, D-Leu, Ile, D-Ile, Phe, D-Phe, Trp, D-Trp, Pro, D-Pro, Met, D-Met <220> <221> MISC_FEATURE <222> (18)..(18) <223> Xaa is absent if Xaa16 is absent; if Xaa16 is present, Xaa is absent or is an amino acid having a polar or non-polar side chain <220> <221> MISC_FEATURE <222> (18)..(18) <223> Xaa, when present, can be Asp, D-Asp, Glu, D-Glu, Lys, D-Lys, Arg, D-Arg, His, D-His, Asn, D-Asn, Gln, D-Gln, Ser, D-Ser, Thr, D-Thr, Tyr, D-Tyr, Cys, D-Cys, Gly, Ala, D-Ala, Val, D-Val, Leu, D-Leu, Ile, D-Ile, Phe, D-Phe, Trp, D-Trp, Pro, D-Pro, Met, D-Met <220> <221> MISC_FEATURE <222> (19)..(19) <223> Xaa is absent if Xaa16 or Xaa18 is absent; if Xaa16 and Xaa18 are both present, then Xaa is absent or is an amino acid having a polar side chain <220> <221> MISC_FEATURE <222> (19)..(19) <223> Xaa, when present, can be Asp, D-Asp, Glu, D-Glu, Lys, D-Lys, Arg, D-Arg, His, D-His, Asn, D-Asn, Gln, D-Gln, Ser, D-Ser, Thr, D-Thr, Tyr, D-Tyr, Cys, D-Cys <400> 1 Xaa Arg Xaa Ile Arg Xaa Xaa Leu Xaa Xaa Gly Leu Xaa Gly Xaa Xaa 1 5 10 15 Xaa Xaa Xaa <210> 2 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <400> 2 Met Arg Val Ile Arg Met Cys Leu Gly Val Gly Leu Leu Gly Asp Leu 1 5 10 15 Ala Gly <210> 3 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <400> 3 Arg Val Ile Arg Met Cys Leu Gly Val Gly Leu Leu Gly Asp Leu Ala 1 5 10 15 Gly <210> 4 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(16) <223> D-Ala <400> 4 Arg Val Ile Arg Met Cys Leu Gly Val Gly Leu Leu Gly Asp Leu Ala 1 5 10 15 Gly <210> 5 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(16) <223> D-Ala <400> 5 Arg Val Ile Arg Met Cys Leu Asn Val Gly Leu Leu Gly Glu Leu Ala 1 5 10 15 Gly <210> 6 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (5)..(5) <223> Nle <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(16) <223> D-Ala <400> 6 Arg Val Ile Arg Leu Cys Leu Asn Val Gly Leu Leu Gly Glu Leu Ala 1 5 10 15 Gly <210> 7 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(16) <223> D-Ala <400> 7 Arg Val Ile Arg Met Ser Leu Asn Val Gly Leu Leu Gly Glu Leu Ala 1 5 10 15 Gly <210> 8 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (5)..(5) <223> Nle <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(16) <223> D-Ala <400> 8 Arg Val Ile Arg Leu Ser Leu Asn Val Gly Leu Leu Gly Glu Leu Ala 1 5 10 15 Gly <210> 9 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(16) <223> D-Ala <400> 9 Arg Val Ile Arg Met Cys Leu Asn Asn Gly Leu Leu Gly Glu Leu Ala 1 5 10 15 Gly <210> 10 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(16) <223> D-Ala <400> 10 Arg Val Ile Arg Met Cys Leu Asn Val Gly Asn Leu Gly Glu Leu Ala 1 5 10 15 Gly <210> 11 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(16) <223> D-Ala <400> 11 Arg Val Ile Arg Met Cys Leu Asn Val Gly Leu Asn Gly Glu Leu Ala 1 5 10 15 Gly <210> 12 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(16) <223> D-Ala <400> 12 Arg Val Ile Arg Met Cys Leu Asn Val Gly Leu Leu Gly Glu Leu Ala 1 5 10 15 Glu <210> 13 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(16) <223> D-Ala <400> 13 Arg Val Ile Arg Met Ser Leu Asn Val Gly Leu Glu Gly Glu Leu Ala 1 5 10 15 <210> 14 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (5)..(5) <223> Nle <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(16) <223> D-Ala <400> 14 Arg Val Ile Arg Leu Ser Leu Asn Val Gly Leu Glu Gly Glu Leu Ala 1 5 10 15 <210> 15 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> D-Ala <220> <221> MISC_FEATURE <222> (5)..(5) <223> Nle <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(16) <223> D-Ala <400> 15 Arg Ala Ile Arg Leu Ser Leu Asn Val Gly Leu Leu Gly Glu Leu Ala 1 5 10 15 <210> 16 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Xaa is PEG12 <400> 16 Xaa Lys Arg Val Ile Arg Met Cys Leu Gly Val Gly Leu Leu Gly Asp 1 5 10 15 Leu Ala Gly <210> 17 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (19)..(19) <223> Xaa is PEG12 <400> 17 Arg Val Ile Arg Met Cys Leu Gly Val Gly Leu Leu Gly Asp Leu Ala 1 5 10 15 Gly Lys Xaa <210> 18 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Xaa is PEG12 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (18)..(18) <223> D-Ala <400> 18 Xaa Lys Arg Val Ile Arg Met Cys Leu Asn Val Gly Leu Leu Gly Glu 1 5 10 15 Leu Ala Glu <210> 19 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(16) <223> D-Ala <400> 19 Arg Val Ile Arg Met Cys Leu Asn Val Gly Leu Glu Gly Glu Leu Ala 1 5 10 15 <210> 20 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(16) <223> D-Ala <400> 20 Arg Val Ile Arg Met Cys Leu Asn Val Gly Leu Asn Gly Glu Leu Ala 1 5 10 15 Glu <210> 21 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <400> 21 Arg Val Ile Arg Met Cys Leu Asn Val Gly Leu Asn Gly Glu 1 5 10 <210> 22 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(16) <223> D-Ala <400> 22 Arg Val Ile Arg Met Cys Leu Asn Asn Gly Leu Asn Gly Glu Leu Ala 1 5 10 15 Gly <210> 23 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(16) <223> D-Ala <400> 23 Arg Val Ile Arg Met Cys Leu Asn Asn Gly Leu Asn Gly Glu Leu Ala 1 5 10 15 Glu <210> 24 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> 5-FAM <400> 24 Xaa Val Ile Arg Met Cys Leu Gly Val Gly Leu Leu Gly Asp Leu Ala 1 5 10 15 Gly <210> 25 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> 5-FAM <220> <221> MISC_FEATURE <222> (20)..(20) <223> PEG12 <400> 25 Xaa Arg Val Ile Arg Met Cys Leu Gly Val Gly Leu Leu Gly Asp Leu 1 5 10 15 Ala Gly Lys Xaa 20 <210> 26 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> DISULFID <222> (6)..(6) <400> 26 Arg Val Ile Arg Met Cys Leu Gly Val Gly Leu Leu Gly Asp Leu Ala 1 5 10 15 Gly <210> 27 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> DISULFID <222> (6)..(6) <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(16) <223> D-Ala <400> 27 Arg Val Ile Arg Met Cys Leu Asn Val Gly Leu Leu Gly Glu Leu Ala 1 5 10 15 Gly <210> 28 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> DISULFID <222> (6)..(6) <220> <221> MISC_FEATURE <222> (18)..(18) <223> PEG12 <400> 28 Arg Val Ile Arg Met Cys Leu Gly Val Gly Leu Leu Gly Asp Leu Ala 1 5 10 15 Gly Lys <210> 29 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(16) <223> d-Ala <220> <221> MISC_FEATURE <222> (18)..(18) <223> PEG12 <400> 29 Arg Val Ile Arg Ala Cys Leu Gly Val Gly Leu Leu Gly Asp Leu Ala 1 5 10 15 Gly Lys <210> 30 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(16) <223> d-Ala <220> <221> MISC_FEATURE <222> (18)..(18) <223> PEG12 <400> 30 Arg Val Ile Arg Ala Cys Leu Gly Val Gly Leu Leu Gly Asp Leu Ala 1 5 10 15 Gly Lys <210> 31 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Xaa is absent or if present is an amino acid having a polar side chain or a non-polar side chain <220> <221> MISC_FEATURE <222> (3)..(3) <223> Xaa is an amino acid having a non-polar side chain <220> <221> MISC_FEATURE <222> (6)..(6) <223> Xaa is an amino acid having a non-polar side chain <220> <221> MISC_FEATURE <222> (7)..(7) <223> Xaa is an amino acid having a polar side chain <220> <221> misc_feature <222> (9)..(9) <223> Xaa is an amino acid having a polar side chain or non-polar side chain <220> <221> MISC_FEATURE <222> (10)..(10) <223> Xaa is an amino acid having a polar side chain or a non-polar side chain <220> <221> MISC_FEATURE <222> (12)..(12) <223> Xaa is an amino acid having a polar side chain or a non-polar side chain <220> <221> MISC_FEATURE <222> (13)..(13) <223> Xaa is an amino acid having a polar side chain or a non-polar side chain <220> <221> MISC_FEATURE <222> (15)..(15) <223> Xaa is an amino acid having a polar side chain <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(16) <223> Xaa is absent or an amino acid having a non-polar side chain <220> <221> misc_feature <222> (17)..(17) <223> Xaa is absent if Xaa16 is absent; or is an amino acid with a non-polar side chain <220> <221> misc_feature <222> (18)..(18) <223> Xaa is absent if Xaa16 is absent; if Xaa16 is present then Xaa can be absent or an amino acid having a polar side chain or non-polar side chain <220> <221> MISC_FEATURE <222> (19)..(19) <223> Xaa is absent if Xaa16 or Xaa18 is absent; if Xaa16 and Xaa18 are both present, then Xaa can be absent or an amino acid having a polar side chain <400> 31 Xaa Arg Xaa Ile Arg Xaa Xaa Leu Xaa Xaa Gly Xaa Xaa Gly Xaa Xaa 1 5 10 15 Xaa Xaa Xaa <210> 32 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <400> 32 Tyr Ala Arg Ala Ala Ala Arg Gln Ala Arg Ala 1 5 10 <210> 33 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <400> 33 Tyr Gly Arg Lys Lys Arg Arg 1 5 <210> 34 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <400> 34 Tyr Gly Arg Lys Lys Arg Arg Gln Arg Arg Arg 1 5 10 <210> 35 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <400> 35 Arg Arg Gln Arg Arg 1 5

Claims (39)

1. 하기 화학식 II의 아미노산 서열을 포함하는 펩티드; 또는 이의 C-말단 산 또는 아미드 및/또는 N-아세틸 유도체; 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염으로서:
   X¹-R-X²-IR-X³-X⁴-L-X⁵-X⁶-G-X¹⁴-X⁷-G-X⁸-X⁹ (II) (서열번호 31)
   식 중, X¹은 존재하지 않거나 존재하는 경우 극성 측쇄 또는 비극성 측쇄를 갖는 아미노산이고; X²는 비극성 측쇄를 갖는 아미노산이고; X³은 비극성 측쇄를 갖는 아미노산이고; X⁴는 극성 측쇄를 갖는 아미노산이고; X⁵는 극성 측쇄 또는 비극성 측쇄를 갖는 아미노산이고; X⁶은 극성 측쇄 또는 비극성 측쇄를 갖는 아미노산이고; X⁷은 극성 측쇄 또는 비극성 측쇄를 갖는 아미노산이고; X⁸은 극성 측쇄를 갖는 아미노산이고; X⁹는 존재하지 않거나 -X¹⁰-X¹¹-X¹²-X¹³이고; 식 중, X¹⁰은 비극성 측쇄를 갖는 아미노산이고; X¹¹은 비극성 측쇄를 갖는 아미노산이고; X¹²는 존재하지 않거나 존재하는 경우 극성 측쇄 또는 비극성 측쇄를 갖는 아미노산이고; X¹³은 존재하지 않거나, 존재하는 경우 극성 측쇄를 갖는 아미노산이되, X¹²가 존재하지 않는 경우 X¹³은 존재하지 않고; X¹⁴는 극성 측쇄 또는 비극성 측쇄를 갖는 아미노산인, 펩티드; 또는 이의 C-말단 산 또는 아미드 및/또는 N-아세틸 유도체; 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염.
2. 제1항에 있어서, X¹은 존재하지 않거나, D, (dD), E, (dE), K, (dK), R, (dR), H, (dH), N, (dN), Q, (dQ), S, (dS), T, (dT), Y, (dY), C, (dC), G, A, (dA), V, (dV), L, (dL), I, (dI), F, (dF), W, (dW), P, (dP), M 및 (dM)으로부터 선택되고; X²는 G, A, (dA), V, (dV), L, (dL), I, (dI), F, (dF), W, (dW), P, (dP), M 및 (dM)으로부터 선택되고; X³은 G, A, (dA), V, (dV), L, (dL), I, (dI), F, (dF), W, (dW), P, (dP), Nle, M 및 (dM)으로부터 선택되고; X⁴는 D, (dD), E, (dE), K, (dK), R, (dR), H, (dH), N, (dN), Q, (dQ), S, (dS), T, (dT), Y, (dY), C 및 (dC)로부터 선택되고; X⁵는 D, (dD), E, (dE), K, (dK), R, (dR), H, (dH), N, (dN), Q, (dQ), S, (dS), T, (dT), Y, (dY), C, (dC), G, A, (dA), V, (dV), L, (dL), I, (dI), F, (dF), W, (dW), P, (dP), M 및 (dM)으로부터 선택되고; X⁶은 D, (dD), E, (dE), K, (dK), R, (dR), H, (dH), N, (dN), Q, (dQ), S, (dS), T, (dT), Y, (dY), C, (dC), G, A, (dA), V, (dV), L, (dL), I, (dI), F, (dF), W, (dW), P, (dP), M 및 (dM)으로부터 선택되고; X⁷은 D, (dD), E, (dE), K, (dK), R, (dR), H, (dH), N, (dN), Q, (dQ), S, (dS), T, (dT), Y, (dY), C, (dC), G, A, (dA), V, (dV), L, (dL), I, (dI), F, (dF), W, (dW), P, (dP), M 및 (dM)으로부터 선택되고; X⁸은 D, (dD), E, (dE), K, (dK), R, (dR), H, (dH), N, (dN), Q, (dQ), S, (dS), T, (dT), Y, (dY), C 및 (dC)로부터 선택되고; X⁹는 존재하지 않거나, -X¹⁰-X¹¹-X¹²-X¹³이고, 식 중 X¹⁰은 G, A, (dA), V, (dV), L, (dL), I, (dI), F, (dF), W, (dW), P, (dP), M 및 (dM)으로부터 선택되고; X¹¹은 G, A, (dA), V, (dV), L, (dL), I, (dI), F, (dF), W, (dW), P, (dP), M 및 (dM)으로부터 선택되고; X¹²는 존재하지 않거나, D, (dD), E, (dE), K, (dK), R, (dR), H, (dH), N, (dN), Q, (dQ), S, (dS), T, (dT), Y, (dY), C, (dC), G, A, (dA), V, (dV), L, (dL), I, (dI), F, (dF), W, (dW), P, (dP), M 및 (dM)으로부터 선택되고; X¹³은 존재하지 않거나, D, (dD), E, (dE), K, (dK), R, (dR), H, (dH), N, (dN), Q, (dQ), S, (dS), T, (dT), Y, (dY), C 및 (dC)로부터 선택되고; X¹⁴는 D, (dD), E, (dE), K, (dK), R, (dR), H, (dH), N, (dN), Q, (dQ), S, (dS), T, (dT), Y, (dY), C, (dC), G, A, (dA), V, (dV), L, (dL), I, (dI), F, (dF), W, (dW), P, (dP), M 및 (dM)으로부터 선택되는, 펩티드; 또는 이의 C-말단 산 또는 아미드 및/또는 N-아세틸 유도체; 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염.
3. 제1항에 있어서, X¹은 존재하지 않거나, K 또는 M이고; X²는 V 또는 d(A)이고; X³은 M, A 또는 Nle이고; X⁴는 C 또는 S이고; X⁵는 G 또는 N이고; X⁶은 V 또는 N이고; X⁷은 L, N 또는 E이고; X⁸은 D 또는 E이고; X⁹는 존재하지 않거나, -LAG, -L(dA)G, -L(dA)E, -L(dA)GK, -LAGK; 또는 -L(dA)이고; X¹⁴는 N 또는 L인, 펩티드; 또는 이의 C-말단 산 또는 아미드 및/또는 N-아세틸 유도체; 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염.
4. 제1항에 있어서, MRVIRMCLGVGLLGDLAG(서열번호 2); RVIRMCLGVGLLGDLAG(서열번호 3); RVIRMCLGVGLLGDL(dA)G(서열번호 4); RVIRMCLNVGLLGEL(dA)G(서열번호 5); RVIR(Nle)CLNVGLLGEL(dA)G(서열번호 6); RVIRMSLNVGLLGEL(dA)G(서열번호 7); RVIR(Nle)SLNVGLLGEL(dA)G(서열번호 8); RVIRMCLNNGLLGEL(dA)G(서열번호 9); RVIRMCLNVGNLGEL(dA)G(서열번호 10); RVIRMCLNVGLNGEL(dA)G(서열번호 11); RVIRMCLNVGLLGEL(dA)E(서열번호 12); RVIRMSLNVGLEGEL(dA)(서열번호 13); RVIR(Nle)SLNVGLEGEL(dA)(서열번호 14); R(dA)IR(Nle)SLNVGLLGEL(dA)(서열번호 15); {PEG12}KRVIRMCLGVGLLGDLAG(서열번호 16); RVIRMCLGVGLLGDLAGK{PEG12}(서열번호 17); {PEG12}KRVIRMCLNVGLLGEL(dA)E(서열번호 18); RVIRMCLNVGLEGEL(dA)(서열번호 19); RVIRMCLNVGLNGEL(dA)E(서열번호 20); RVIRMCLNVGLNGE(서열번호 21); RVIRMCLNNGLNGEL(dA)}G(서열번호 22); RVIRMCLNNGLNGEL(dA)E(서열번호 23); {5-FAM}-RVIRMCLGVGLLGDLAG(서열번호 24); {5-FAM}-RVIRMCLGVGLLGDLAGK{PEG12}(서열번호 25); 및 RVIRACLGVGLLGDL(dA)GK{PEG12}(서열번호 29)로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하거나 이것으로 이루어진, 단백질; 또는 이의 C-말단 산 또는 아미드 및/또는 N-아세틸 유도체; 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염.
5. 제1항에 있어서, RVIRMCLGVGLLGDL(dA)G(서열번호 4); RVIRMCLNVGLLGEL(dA)G(서열번호 5); RVIR(Nle)CLNVGLLGEL(dA)G(서열번호 6); RVIRMSLNVGLLGEL(dA)G(서열번호 7); RVIR(Nle)SLNVGLLGEL(dA)G(서열번호 8); RVIRMCLNNGLLGEL(dA)G(서열번호 9); RVIRMCLNVGNLGEL(dA)G(서열번호 10); RVIRMCLNVGLNGEL(dA)G(서열번호 11); RVIRMCLNVGLLGEL(dA)E(서열번호 12); RVIRMSLNVGLEGEL(dA)(서열번호 13); RVIR(Nle)SLNVGLEGEL(dA)(서열번호 14); R(dA)IR(Nle)SLNVGLLGEL(dA)(서열번호 15); {PEG12}KRVIRMCLGVGLLGDLAG(서열번호 16); RVIRMCLGVGLLGDLAGK{PEG12}(서열번호 17); {PEG12}KRVIRMCLNVGLLGEL(dA)E(서열번호 18); RVIRMCLNVGLEGEL(dA)(서열번호 19); RVIRMCLNVGLNGEL(dA)E(서열번호 20); RVIRMCLNVGLNGE(서열번호 21); RVIRMCLNNGLNGEL(dA)G(서열번호 22); RVIRMCLNNGLNGEL(dA)E(서열번호 23); {5-FAM}-RVIRMCLGVGLLGDLAG(서열번호 24); {5-FAM}-RVIRMCLGVGLLGDLAGK{PEG12}(서열번호 25); 및 RVIRACLGVGLLGDL(dA)GK{PEG12}(서열번호 29)로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하거나 이것으로 이루어진, 펩티드; 또는 이의 C-말단 산 또는 아미드 및/또는 N-아세틸 유도체; 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염.
6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 따른 제2 펩티드에 부착된 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 따른 펩티드로 구성된, 이량체; 또는 이의 C-말단 산 또는 아미드 및/또는 N-아세틸 유도체; 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염.
7. 제7항에 있어서, 동종이량체인 이량체; 또는 이의 C-말단 산 또는 아미드 및/또는 N-아세틸 유도체; 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염.
8. 제8항에 있어서, 하기를 포함하거나 이것으로 이루어진, 동종이량체; 또는 이의 C-말단 산 또는 아미드 및/또는 N-아세틸 유도체; 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
   

   
9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 따른 단리된 펩티드 또는 펩티드 이량체; 또는 이의 C-말단 산 또는 아미드 및/또는 N-아세틸 유도체; 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염.
10. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 따른 펩티드와 적어도 약 70% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 단리된 펩티드; 또는 이의 C-말단 산 또는 아미드 및/또는 N-아세틸 유도체; 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염.
11. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 따른 펩티드와 적어도 약 80% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 단리된 펩티드; 또는 이의 C-말단 산 또는 아미드 및/또는 N-아세틸 유도체; 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염.
12. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 따른 펩티드와 적어도 약 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 단리된 펩티드; 또는 이의 C-말단 산 또는 아미드 및/또는 N-아세틸 유도체; 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염.
13. 하기로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 참조 펩티드에 비해서 1 내지 6개의 아미노산의 결실, 삽입 또는 치환을 갖는 아미노산 서열을 포함하는, 펩티드 또는 펩티드 이량체; 또는 이의 C-말단 산 또는 아미드 및/또는 N-아세틸 유도체; 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    

    

    
    

    
14. 제13항에 있어서, 상기 펩티드 또는 이량체는 (i) D-배위를 갖는 아미노산 및 (ii) 비-자연 발생 아미노산 잔기로부터 선택된 적어도 하나의 아미노산으로의 치환을 포함하는, 펩티드 또는 펩티드 이량체; 또는 이의 C-말단 산 또는 아미드 및/또는 N-아세틸 유도체; 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염.
15. 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 펩티드에 부착된 지속 기간 향상 모이어티(duration enhancing moiety)를 더 포함하고, 펩티드를 지속 기간 향상 모이어티에 커플링시키는 대사적으로 절단 가능한 링커를 선택적으로 더 포함하는, 펩티드 또는 펩티드 이량체.
16. 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 펩티드 또는 이량체는 유도체화된, 펩티드 또는 펩티드 이량체.
17. 제16항에 있어서, 아세틸화, 페길화, 비오티닐화 또는 아실화를 통해서 유도체화된, 펩티드 또는 이량체.
18. 제17항에 있어서, 유도체는 PEG12, 아세틸, 비오틴 또는 팔미틸인, 펩티드 또는 이량체.
19. 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항의 펩티드 또는 이량체 또는 이의 C-말단 산 또는 아미드 및/또는 N-아세틸 유도체, 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염; 및 약제학적으로 허용 가능한 부형제를 포함하는, 조성물.
20. 제19항에 있어서, 부형제는 자연에서 발견되지 않는, 조성물.
21. 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항의 펩티드 또는 이량체 또는 이의 C-말단 산 또는 아미드 및/또는 N-아세틸 유도체, 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 포함하는, 약제학적 조성물.
22. 제1항 내지 제5항 및 제9항 내지 제18항 중 어느 한 항의 펩티드를 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 자연 발생 아미노산으로 구성된, 단리된 핵산.
23. 제22항에 따른 단리된 핵산을 포함하는 벡터 또는 발현 벡터.
24. 제22항에 따른 핵산 또는 제23항에 따른 벡터 또는 발현 벡터를 포함하는, 숙주 세포.
25. 세포 생존력을 조절하는 방법으로서, 환자에게 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 따른 펩티드 또는 이량체, 제19항 내지 제21항 중 어느 한 항에 따른 조성물, 제22항에 따른 핵산, 제23항에 따른 벡터 또는 발현 벡터 또는 제24항에 따른 숙주 세포를 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
26. 암의 치료를 필요로 하는 대상체에서 암을 치료하는 방법으로서, 환자에게 약리학적 유효량의 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항의 펩티드 또는 이량체, 제19항 내지 제21항 중 어느 한 항에 따른 조성물, 제22항에 따른 핵산, 제23항에 따른 벡터 또는 발현 벡터 또는 제24항에 따른 숙주 세포를 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
27. 세포 증식의 치료를 필요로 하는 대상체에서 세포 증식을 치료하는 방법으로서, 환자에게 약리학적 유효량의 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항의 펩티드 또는 이량체, 제19항 내지 제21항 중 어느 한 항에 따른 조성물, 제22항에 따른 핵산, 제23항에 따른 벡터 또는 발현 벡터 또는 제24항에 따른 숙주 세포를 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
28. 아폽토시스 질환(apoptotic disease)의 치료를 필요로 하는 환자에서 아폽토시스 질환을 치료하는 방법으로서, 환자에게 약리학적 유효량의 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항의 펩티드 또는 이량체, 제19항 내지 제21항 중 어느 한 항에 따른 조성물, 제22항에 따른 핵산, 제23항에 따른 벡터 또는 발현 벡터 또는 제24항에 따른 숙주 세포를 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
29. 대사성 질환의 치료를 필요로 하는 환자에서 대사성 질환을 치료하는 방법으로서, 환자에게 약리학적 유효량의 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항의 펩티드 또는 이량체, 제19항 내지 제21항 중 어느 한 항에 따른 조성물, 제22항에 따른 핵산, 제23항에 따른 벡터 또는 발현 벡터 또는 제24항에 따른 숙주 세포를 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
30. 세포보호작용의 제공을 필요로 하는 환자에서 세포보호작용을 제공하는 방법으로서, 환자에게 약리학적 유효량의 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항의 펩티드 또는 이량체, 제19항 내지 제21항 중 어느 한 항에 따른 조성물, 제22항에 따른 핵산, 제23항에 따른 벡터 또는 발현 벡터 또는 제24항에 따른 숙주 세포를 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
31. 섬유증 치료를 필요로 하는 환자에서 섬유증을 치료하는 방법으로서, 환자에게 약리학적 유효량의 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항의 펩티드 유사체 또는 이량체, 제19항 내지 제21항 중 어느 한 항에 따른 조성물, 제22항에 따른 핵산, 제23항에 따른 벡터 또는 발현 벡터 또는 제24항에 따른 숙주 세포를 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
32. 제31항에 있어서, 섬유증은 간경화; 폐 섬유증, 특발성 폐 섬유증; 심근경색 후 섬유증; 뇌졸중 또는 신경 퇴행성 장애(예를 들어, 알츠하이머병, 다발성 경화증) 후 CNS 섬유증; 증식성 유리체망막병(PVR: proliferative vitreoretinopathy) 및 관절염; 예를 들어, 소화관, 복부, 골반, 척추에서의 접착; 신장성 전신성 섬유증; 심근 섬유증; 간/허파 섬유증; 경막외 섬유증(척추수술 후 요통 증후군); 심내막심근 섬유증; 요세관간질 섬유증; 신장성 사이질 섬유증; 종격 섬유증; 복막후 섬유증; 음경 섬유증; 구강 점막하; 신장 섬유증; 특발성 폐 상엽 섬유증(아미타니병(Amitani disease)); 선천성 허파 섬유증; 척추후궁절개술후 섬유증; 고통스러운 디스크 섬유증; 이식편 섬유증; 심방 섬유증; 각막 상피하 섬유증; 선천성 안구 섬유증(orbital fibrosis); 골 섬유증; 복막 섬유증; 신장성 전신성 섬유증; 비간경변성 문맥 섬유증; 폐결핵, 강직성 척추염에서 질환 관련 폐첨 섬유증(pulmonary apical fibrosis); 결장직장 섬유증; 사구체주위 섬유증/세뇨관 사구체(atubular glomeruli); 기저 섬유증 증후군(기종/ 섬유증 증후군); 조직 섬유증; 및 대규모 경부(neck) 섬유증 중 어느 하나인, 방법.
33. 제31항에 있어서, 섬유증은 특발성 폐 섬유증인, 방법.
34. 제31항에 있어서, 섬유증은 피부경화증 또는 전신 경화증인, 방법.
35. 제31항에 있어서, 서열은 RVIRMCLGVGLLGDLAGK{PEG12}(서열번호 17) 또는 RVIRACLGVGLLGDL(dA)GK{PEG12}(서열번호 29)이고; 이량체는
    

    
36. 섬유증의 치료에 사용하기 위한, 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항의 펩티드 또는 펩티드 유사체 또는 이량체, 제19항 내지 제21항 중 어느 한 항에 따른 조성물, 제22항에 따른 핵산, 제23항에 따른 벡터 또는 발현 벡터 또는 제24항에 따른 숙주 세포.
37. 섬유증 치료를 위한 의약의 제조에서의, 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항의 펩티드 또는 펩티드 유사체 또는 이량체, 제19항 내지 제21항 중 어느 한 항에 따른 조성물, 제22항에 따른 핵산, 제23항에 따른 벡터 또는 발현 벡터 또는 제24항에 따른 숙주 세포의 용도.
38. 환자에게 약리학적 유효량의 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항의 펩티드 또는 이량체, 제19항 내지 제21항 중 어느 한 항에 따른 조성물, 제22항에 따른 핵산, 제23항에 따른 벡터 또는 발현 벡터 또는 제24항에 따른 숙주 세포를 투여하는 단계를 포함하는, 섬유증 치료를 필요로 하는 환자에서 섬유증을 치료하기 위한 의약.
39. (a) 세포 생존력의 조절; (b) 암의 치료; (c) 세포 증식의 조절; (d) 아폽토시스 질환의 치료; (e) 대사성 질환의 치료; 및 세포보호작용의 제공 중 하나 이상을 위한 의약으로서 사용하기 위한, 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항의 펩티드 또는 펩티드 유사체 또는 이량체, 제19항 내지 제21항 중 어느 한 항에 따른 조성물, 제22항에 따른 핵산, 제23항에 따른 벡터 또는 발현 벡터 또는 제24항에 따른 숙주 세포.