CN110072883A

CN110072883A - 治疗性mots-c相关的肽

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Publication number: CN110072883A
Application number: CN201780059877.XA
Authority: CN
Inventors: K·C·坎迪; K·K·格林茨塔弗; R·玛格南; W·罗; 姚永妗; 颜亮祯
Original assignee: Cobba Co
Current assignee: Cobba Co
Priority date: 2016-09-28
Filing date: 2017-09-27
Publication date: 2019-07-30
Also published as: TW201819398A; JP2020501514A; US20200181197A1; MX2019003567A; US11332497B2; US11111271B2; IL265463A; US20210363187A1; AU2017336440B2; KR20190057110A; EP3519431A1; CA3038292A1; WO2018064098A1; AU2017336440A1; JP7035033B2; US20220242912A1; US11753445B2

Abstract

本文提供了肽和肽类似物以及治疗代谢疾病(例如肥胖、糖尿病)的方法、治疗癌症的方法、治疗肝病的方法和调节脂肪酸代谢的方法。

Description

治疗性MOTS-C相关的肽

电子提交的引用材料的并入

通过引用整体并入的是与本文同时提交的计算机可读核苷酸/氨基酸序列表，并且如下所示：2017年9月21日创建的名称为“51155A_SeqListing.txt”的124,437字节ACII(文本)文件。

背景技术

在美国20岁或以上的成年人中，2011-2014年期间超过三分之一的人肥胖(Ogden等人，Prevalence of Obesity Among Adults and Youth：United States，2011-2014)，NCHS Data Brief，No.219(2015年11月)。在此期间，美国(2-19岁)儿童肥胖的患病率为17％(Ogden，2015，同上)。肥胖是许多健康问题发展的风险因素，包括代谢综合征、胰岛素抗性、2型糖尿病、脂肪肝病、心血管疾病、阻塞性睡眠呼吸暂停、中风、高血压、骨关节炎，生殖问题和癌症(National Heart,Lung,and Blood Institute article：http://www.nhlbi.nih.gov/health/health-topics/topics/obe/risks)。

糖尿病是一种肥胖相关疾病，是2010年美国第7大致死原因。2012年，9.3％的美国人口(或2910万人)患有糖尿病，估计美国约有208000名儿童被诊断患有糖尿病。每年，美国有140万人被诊断患有糖尿病。糖尿病与几种并发症和合病症有关，包括低血糖、高血压、血脂异常症、心血管疾病、中风、失明、糖尿病视网膜病、肾病和截肢。根据美国糖尿病协会，2012年美国诊断糖尿病的总成本估计为2450亿美元(Diabetes Care 36：1033-1046(2013年4月))。该成本凸显了糖尿病给美国社会带来的沉重负担。

尽管在2000-2015年期间美国食品和药品管理局批准了超过35种药物，但仍然需要更好的肥胖和糖尿病治疗方法。

非酒精性脂肪肝病(NAFLD)是肝脏中以甘油三酯(脂肪变性)形式过多脂肪累积的病症。NAFLD是美国最常见的慢性肝病形式，影响多达8000万人，特别是40多岁和50多岁的人。除肝脏相关的发病率和死亡率之外，越来越多的证据表明，NAFLD是一种多系统疾病，增加了2型糖尿病、心血管疾病和心脏病、癌症和慢性肾病的风险。虽然NAFLD患者中大多数死亡归因于心血管疾病，但美国多达1500万人也患有肝细胞损伤和炎症，这种情况称为NASH(非酒精性脂肪性肝炎)。NASH最常发生在中年和超重或肥胖的人群中，是美国肝硬化的主要原因之一，并且预计到2030年将成为最常见的肝移植指征。目前尚无批准用于治疗NASH的药物。

发明内容

本公开提供了肽和肽类似物及其在治疗与NASH、体重、血糖水平和脂肪量有关的疾病(例如代谢疾病，包括肥胖、脂肪肝病和糖尿病)的方法中的用途。

在示例性实施方式中，本公开的肽包含式I的氨基酸序列或其药学上可接受的盐：

X¹-Q-E-X²-X³-Y-I-X⁴-Y-X⁵-R-X⁶ (I)(SEQ ID NO：1)

其中，X¹不存在或者如果存在的话是X⁷-RW-，其中，X⁷不存在或者如果存在的话是具有非极性侧链或极性侧链的氨基酸；X²和X³各自独立地为具有非极性侧链或极性侧链的氨基酸；X⁴和X⁵各自独立地为具有非极性侧链的氨基酸；X⁶不存在或者如果存在的话是-KL-X⁸或-X⁹-LR，其中，X⁸不存在或者如果存在的话是具有非极性侧链的氨基酸，并且X⁹是具有非极性侧链的氨基酸；条件是该肽不是：MRWQEMGYIFYPRKLR(SEQ ID NO：2)；MRWQEMGYIFYFRKLR(SEQ ID NO：316)；MGWQEMGYIFYPRKLR(SEQ ID NO：317)；和/或MGYIFYPRKLR(SEQ ID NO：318)。

在一些示例性实施方式中，该肽包含如具体实施方式中所示的式II或式III的氨基酸序列。

在示例性实施方式中，分离式I、式II和/或式III的肽。

在示例性实施方式中，该肽包含选自以下的肽序列的修饰：

MRWQEAGYIFYPRKLR(SEQ ID NO：11)；

MRWQEMGYIFYPR(dA)LR(SEQ ID NO：149)；

MRWQEMNYIFYPR(SEQ ID NO：208)；

MRWQEMGYIFYPRNLR(SEQ ID NO：213)；

MRWQEMQYIFYPRALR(SEQ ID NO：219)；

RWQEMNYIFYPR(SEQ ID NO：248)；

MRWQEMGYIFYPRALR(SEQ ID NO：19)；

MRWQEMGYIFYPRKLA(SEQ ID NO：21)；

MRWQEMGYIFYARKLR(SEQ ID NO：17)；

RWQEMGYIFYPRQLR(SEQ ID NO：217)；

MRWQEEGYIFYPRKLR(SEQ ID NO：172)；

MRWQEMGYIFYPRKL(SEQ ID NO：45)；

ERWQEAGYIAYPR(SEQ ID NO：241)；

RWQEMQYIFYPR(SEQ ID NO：211)；和

MRWQEMGYIFYPAKLR(SEQ ID NO：18)；

其中，所述修饰包含用另一种氨基酸或其药学上可接受的盐取代肽中的至少一个氨基酸，所述另一种氨基酸选自(i)具有D-构型的氨基酸，和(ii)非天然存在的氨基酸残基。

在示例性实施方式中，将肽与赋形剂配制以提供药物组合物，该组合物可用于治疗患者的疾病或另一种医学病症。

在示例性实施方式中，肽包含式I的氨基酸序列或其药学上可接受的盐，其中，X¹不存在或者如果存在的话是X⁷-RW-，其中，X⁷不存在或者如果存在的话则选自D、(dD)、E、(dE)、K、(dK)、R、(dR)、H、(dH)、N、(dN)、Q、(dQ)、S、(dS)、T、(dT)、Y、(dY)、C、(dC)、G、A、(dA)、V、(dV)、L、(dL)、I、(dI)、F、(dF)、W、(dW)、P(dP)、M和(dM)；X²和X³各自独立地选自D、(dD)、E、(dE)、K、(dK)、R、(dR)、H、(dH)、N、(dN)、Q、(dQ)、S、(dS)、T、(dT)、Y、(dY)、C、(dC)、G、A、(dA)、V、(dV)、L、(dL)、I、(dI)、F、(dF)、W、(dW)、P(dP)、M和(dM)；X⁴和X⁵各自独立地选自G、A、(dA)、V、(dV)、L、(dL)、I、(dI)、F、(dF)、W、(dW)、P(dP)、M和(dM)；X⁶不存在或者如果存在的话是-KL-X⁸或-X⁹-LR，其中，X⁸不存在或者如果存在的话则选自G、A、(dA)、V、(dV)、L、(dL)、I、(dI)、F、(dF)、W、(dW)、P(dP)、M和(dM)，并且X⁹选自G、A、(dA)、V、(dV)、L、(dL)、I、(dI)、F、(dF)、W、(dW)、P(dP)、M和(dM)。

在示例性实施方式中，肽包含式I的氨基酸序列或其药学上可接受的盐，其中，X¹不存在或者如果存在的话是X⁷-RW-，其中，X⁷不存在或者如果存在的话是M或E；X²是M、A或E；X³是G、N或Q；X⁴是F或A；X⁵是P或A；X⁶不存在或者如果存在的话是-KL-X⁸或-X⁹-LR，其中，X⁸不存在或者如果存在的话是R或A，并且X⁹选自K、A、(dA)、N和Q。

在示例性实施方式中，肽包含选自以下组成的组中的序列以及其药学上可接受的盐：MRWQEAGYIFYPRKLR(SEQ ID NO：11)；MRWQEMGYIFYPR(dA)LR(SEQ ID NO：149)；MRWQEMNYIFYPR(SEQ ID NO：208)；MRWQEMGYIFYPRNLR(SEQ ID NO：213)；MRWQEMQYIFYPRALR(SEQ ID NO：219)；RWQEMNYIFYPR(SEQ ID NO：210)；MRWQEMGYIFYPRALR(SEQ ID NO：19)；MRWQEMGYIFYPRKLA(SEQ ID NO：21)；MRWQEMGYIFYARKLR(SEQ ID NO：17)；RWQEMGYIFYPRQLR(SEQ ID NO：217)；MRWQEEGYIFYPRKLR(SEQ ID NO：172)；MRWQEMGYIFYPRKL(SEQ ID NO：45)；ERWQEAGYIAYPR(SEQ ID NO：241)；RWQEMQYIFYPR(SEQ ID NO：211)；MRWQEMGYIFYPAKLR(SEQ ID NO：18)。

在示例性实施方式中，本公开的肽或肽类似物包含：(a)RWQE(SEQ ID NO：294)，(b)YIFY(SEQ ID NO：295)，或(c)RWQE(SEQ ID NO：294)和YIFY(SEQ ID NO：295)两者，其中，该肽或肽类似物(i)在37摄氏度下在鼠血浆中呈现至少10％的稳定性达60分钟，(ii)降低人原代脂肪细胞中的游离脂肪酸水平，(iii)或者(i)和(ii)两者。在示例性实施方式中，该肽或肽类似物的长度为8至20个氨基酸。

在示例性实施方式中，该肽或肽类似物是其C-末端酸或酰胺、或N-乙酰基衍生物。

在示例性实施方式中，该肽或肽衍生物是PEG、乙酰基、生物素或其脂肪酸衍生物。在示例性实施方式中，该肽衍生物包括PEG600、乙酰基、生物素或棕榈基。

在示例性实施方式中，本公开的肽或肽类似物包含：(A)RWQE(SEQ ID NO：294)的氨基酸序列和(B)具有一个氨基酸取代的YIFY(SEQ ID NO：295)的氨基酸序列。在示例性实施方式中，具有一个氨基酸取代的YIFY(SEQ ID NO：295)的氨基酸序列包含XIFY(SEQ IDNO：300)、YXFY(SEQ ID NO：301)、YIXY(SEQ ID NO：302)或YIFX(SEQ ID NO：303)，其中，X是任何氨基酸。在示例性实施方式中，该肽或肽类似物的长度为8至20个氨基酸。在示例性实施方式中，该肽或肽类似物在部分(A)和部分(B)之间包含一个、两个、三个或更多个氨基酸。在示例性实施方式中，该肽或肽类似物(i)在37摄氏度下在鼠血浆中呈现至少10％的稳定性达60分钟，(ii)降低人原代脂肪细胞中的游离脂肪酸水平，(iii)或者(i)和(ii)两者。

在示例性实施方式中，本公开的肽或肽类似物包含：(A)RWQE(SEQ ID NO：294)的氨基酸序列和(B)具有两个氨基酸修饰的YIFY(SEQ ID NO：295)的氨基酸序列。在示例性实施方式中，本公开的肽或肽类似物包含：(A)RWQE(SEQ ID NO：294)的氨基酸序列和(B)具有两个氨基酸取代的YIFY(SEQ ID NO：295)的氨基酸序列。在示例性实施方式中，本公开的肽或肽类似物包含RWQE(SEQ ID NO：294)和YIAE(SEQ ID NO：308)或EIFE(SEQ ID NO：309)的氨基酸序列。在示例性实施方式中，本公开的肽或肽类似物包含：(A)RWQE(SEQ ID NO：294)的氨基酸序列和(B)截短形式的YIFY(SEQ ID NO：295)。在示例性实施方式中，本公开的肽或肽类似物包含：(A)RWQE(SEQ ID NO：294)的氨基酸序列和(B)YI或YIF。在示例性实施方式中，该肽或肽类似物的长度为8至20个氨基酸。在示例性实施方式中，该肽或肽类似物在部分(A)和部分(B)之间包含一个、两个、三个或更多个氨基酸。在示例性实施方式中，该肽或肽类似物(i)在37摄氏度下在鼠血浆中呈现至少10％的稳定性达60分钟，(ii)降低人原代脂肪细胞中的游离脂肪酸水平，(iii)或者(i)和(ii)两者。

在示例性实施方式中，肽或肽类似物包含：(A)YIFY(SEQ ID NO：295)的氨基酸序列和(B)具有一个氨基酸取代的RWQE(SEQ ID NO：294)的氨基酸序列。在示例性实施方式中，具有一个氨基酸取代的RWQE(SEQ ID NO：294)的氨基酸序列包含XWQE(SEQ ID NO：304)、RXQE(SEQ ID NO：305)、RWXE(SEQ ID NO：306)、或RWQX(SEQ ID NO：307)，其中，X是任何氨基酸。在示例性实施方式中，该肽或肽类似物的长度为8至20个氨基酸。在示例性实施方式中，该肽或肽类似物在部分(A)和部分(B)之间包含一个、两个、三个或更多个氨基酸。在示例性实施方式中，该肽或肽类似物(i)在37摄氏度下在鼠血浆中呈现至少10％的稳定性达60分钟，(ii)降低人原代脂肪细胞中的游离脂肪酸水平，(iii)或者(i)和(ii)两者。

在示例性实施方式中，本公开的肽或肽类似物包含RWQEX¹X²YIFY(SEQ ID NO：319)的氨基酸序列，其中，X¹和X²各自独立地为任何氨基酸。在示例性实施方式中，本公开的肽或肽类似物包含RWQEX¹X²X³IFY(SEQ ID NO：320)、RWQEX¹X²YX³FY(SEQ ID NO：321)、RWQEX¹X²YIX³Y(SEQ ID NO：322)、或RWQEX¹X²YIFX³(SEQ ID NO：323)的氨基酸序列，其中，X¹，X²和X³各自独立地为任何氨基酸。在示例性实施方式中，本公开的肽或肽类似物包含SEQID NO：1、3-41、43-76和79-293、310-315、319-323和354-377的氨基酸序列。在示例性实施方式中，本公开的肽或肽类似物包含表1中所示的结构和/或氨基酸序列。

在示例性实施方式中，本公开的肽或肽类似物不是由以下氨基酸序列组成的任何肽：MRWQEMGYIFYPRKLR(SEQ ID NO：2)；MRWQEMGYIFYFRKLR(SEQ ID NO：316)；MGWQEMGYIFYPRKLR(SEQ ID NO：317)；或MGYIFYPRKLR(SEQ ID NO：318)。

在一些实施方式中，本文公开的肽包含与氨基酸序列SEQ ID NO：11、17、18、19、21、45、149、172、208、210、211、213、217、219、217和241中的任一个具有至少66％序列同一性的序列。在某些实施方式中，％同一性选自例如与给定序列具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、或至少95％或更多序列同一性。在某些实施方式中，％同一性在例如约65％至约70％、约70％至约80％、约80％至约85％、约85％至约90％、或约90％至约95％的范围内；约70％至约80％之间、约80％至约90％之间以及约90％至约99％之间的序列同一性。

在某些实施方式中，肽包含与氨基酸序列SEQ ID NO：11、17、18、19、21、45、149、172、208、210、211、213、217、219、217和241中的任一个具有至少66％序列同一性的序列。在某些实施方式中，％同一性选自例如与给定序列具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、或至少95％或更多序列同一性。在某些实施方式中，％同一性在例如约65％至约70％、约70％至约80％、约80％至约85％、约85％至约90％、或约90％至约95％的范围内；约70％至约80％之间、约80％至约90％之间以及约90％至约99％之间的序列同一性，但不包含SEQ ID NO：2、42、77-78、316-318或328-349所示的序列。

本公开进一步提供了包含本公开的任一种或多种肽或肽类似物和异源部分的缀合物。

本公开还提供了一种包含编码本公开的任一种或多种肽或肽类似物的核苷酸序列的核酸。此外，本文提供了一种包含本公开的核酸的表达载体。本公开提供了一种包含核酸或表达载体的宿主细胞。

另外，本公开提供了一种包含肽、肽类似物、缀合物、核酸、表达载体、宿主细胞或其组合以及运载体、赋形剂或稀释剂的组合物。在示例性方面，该组合物是药物组合物。在示例性方面，本公开的药物组合物包含式I的氨基酸序列，该药物组合物包括本文所述的SEQ ID NO：1、3-41、43-76和79-293、310-315、319-323和354-377的氨基酸序列、类似物和衍生物以及药学上可接受的赋形剂。

作为另外的实施方式，本公开还包括组合物，该组合物包含本文所述的两种或更多种肽或肽类似物(或缀合物、核酸、表达载体等)的混合物，任选地还包括赋形剂或运载体。

此外，本公开提供了相关的试剂盒，其包含肽、肽类似物、缀合物、核酸、表达载体、宿主细胞或其组合。

本公开提供了产生肽或肽类似物的方法。在示例性实施方式中，该方法包括：(i)使第一氨基酸与第二氨基酸反应以在第一氨基酸和第二氨基酸之间形成共价连接，其中，所述第一氨基酸或第二氨基酸任选地连接至另一个氨基酸，以及(ii)重复(i)的反应步骤，由此产生肽或肽类似物。

不受特定理论的束缚，本公开的肽和肽类似物非常适合作为治疗剂。本文提供的数据支持这些肽和肽类似物在治疗与游离脂肪酸、体重、血糖水平、脂质分布和脂肪量有关的疾病、障碍或医学病症中的用途。

因此，本公开提供了一种调节有此需要的受试者的脂肪酸代谢的方法，其包括以调节脂肪酸代谢的有效量向所述受试者施用本公开的肽或肽类似物、缀合物、核酸、重组表达载体或宿主细胞。

本公开还提供了一种治疗有此需要的受试者的代谢疾病的方法，其包括以治疗代谢疾病的有效量向所述受试者施用本公开的肽或肽类似物、缀合物、核酸、重组表达载体或宿主细胞。

此外，不受特定理论的束缚，鉴于一些代谢疾病状态与肝脏相关或与肝脏有关，本公开的肽和肽类似物非常适合于治疗肝脏疾病，包括但不限于NAFLD和NASH。因此，本公开还提供了一种治疗有此需要的受试者的肝脏疾病的方法，其包括以治疗肝脏疾病的有效量向所述受试者施用本公开的肽或肽类似物、缀合物、核酸、重组表达载体或宿主细胞。

本公开还提供了一种治疗有此需要的受试者的癌症的方法，其包括以治疗癌症的有效量向所述受试者施用本公开的肽或肽类似物、缀合物、核酸、重组表达载体或宿主细胞。

本公开还提供了一种治疗有此需要的受试者的肥胖或体重过重的方法，其包括以治疗肥胖或体重过重的有效量向所述受试者施用本公开的肽或肽类似物、缀合物、核酸、重组表达载体或宿主细胞。

本公开还提供了一种治疗有此需要的受试者的中风的方法，其包括以治疗中风的有效量向所述受试者施用本公开的肽或肽类似物、缀合物、核酸、重组表达载体或宿主细胞。

本公开还提供了一种治疗有此需要的受试者的心血管疾病的方法，其包括以治疗心血管疾病的有效量向所述受试者施用本公开的肽或肽类似物、缀合物、核酸、重组表达载体或宿主细胞。

本公开还提供了一种治疗有此需要的受试者的阻塞性睡眠呼吸暂停的方法，其包括以治疗阻塞性睡眠呼吸暂停的有效量向所述受试者施用本公开的肽或肽类似物、缀合物、核酸、重组表达载体或宿主细胞。

本公开还提供了一种治疗有此需要的受试者的高血压的方法，其包括以治疗高血压的有效量向所述受试者施用本公开的肽或肽类似物、缀合物、核酸、重组表达载体或宿主细胞。

本公开还提供了一种调节(包括降低)一个脂肪细胞或多个脂肪细胞中脂肪酸(如游离脂肪酸)水平的方法，该方法包括以降低该水平的有效量使脂肪细胞与本公开的肽或肽类似物、缀合物、核酸、重组表达载体或宿主细胞接触。在一些变型中，该方法在体外进行，例如在细胞培养中进行。在一些变型中，该方法在体内进行，例如通过将材料施用于有需要的受试者。

本公开还提供了一种调节(包括降低)受试者的血液或血清葡萄糖和/或血清甘油三酯水平的方法，该方法包括以降低血液/血清葡萄糖的有效量向所述受试者施用本公开的肽或肽类似物、缀合物、核酸、重组表达载体或宿主细胞。

对于本文所述的与核酸和载体的用途相关的实施方式，该方法可包括在体外或体内转化或转染细胞。

已经在本文中描述为方法的本发明的方面也可以被描述为“用途”，并且所有这些用途都被设想为本发明的方面。同样地，本文所述的具有“用途”的组合物可以替代地被描述为使用的过程或方法，其被设想作为本发明的方面。例如，本文所述的作为治疗疾病或病症的方法的实施方式还应被理解为包括涉及试剂或物质在治疗所述疾病或病症中的用途，或所述物质在制造治疗疾病或病症的药物中的用途的实施方式。

本发明的方面在本文中被描述为用于特定目的使用两种或多种试剂的组合(或试剂组合的用途)的治疗方法。本发明的相关方面包括物质的组合物，其中两种或多种试剂是混合物；和试剂盒，其中两种或多种试剂以单位剂量制剂包装在一起，但不是混合物。

在整个本说明书中对“一个实施方式”或“一些实施方式”或“一种实施方式”的引用意味着结合该实施方式描述的特定特征、结构或特性包括在本公开的至少一种实施方式中。本文描述的特定特征，结构或特性可以以任何合适的方式组合，并且所有这样的组合都被设想为本发明的方面。

除非另有说明，否则使用序数形容词“第一”、“第二”、“第三”等来描述共同的对象，仅表示提到了相似对象的不同实例，并不意味着暗示所述对象在时间上、空间上、排序上或以任何其它方式必须处于给定的序列中。

作为另外的方面，本发明包括范围在任何方面比由上面的特定段落或由原始权利要求限定的变型更窄的本发明的所有实施方式。例如，在描述为属或集的本发明的某些方面的情况下，应当理解，属或集的每个成员单独地是本发明的一个方面。同样地，每个单独的子集旨在作为本发明的一个方面。举例来说，如果本发明的一个方面被描述为选自1、2、3和4组成的组中的成员，那么亚组(例如，选自{1,2,3}或{1,2,4}或{2,3,4}或{1,2}或{1,3}或{1,4}或{2,3}或{2,4}或{3,4}的成员)被设想且每个单独种类{1}或{2}或{3}或{4}被设想为本发明的方面或变型。同样地，如果本发明的一个方面被表征为范围，或者可以在如温度范围的范围内实践，那么整数子范围被设想为本发明的方面或变型。

本文的标题是为了方便读者而不是限制性的。根据具体实施方式和/或附图和/或原始权利要求，本发明的另外方面、实施方式和变型将是显而易见的。原始权利要求在此通过引用并入本发明的发明内容中。

尽管申请人发明了本文所述的本发明的全部范围，但申请人并不旨在要求保护其它现有技术中描述的主题。因此，如果在专利局、仲裁庭或其它实体或个体提请申请人注意到权利要求范围内的法定现有技术，则申请人保留根据适用的专利法行使修改权利以重新定义此类权利要求的主题的权利，以明确地将此类法定现有技术或法定现有技术的明显或非本发明的变型排除在该权利要求的范围之外。由这些修改的权利要求限定的本发明的变型也旨在作为本发明的各方面。

具体实施方式

定义

在描述和要求保护本发明时，将根据下面所述的定义使用以下术语。

术语“肽”是指包含通过肽键彼此连接的两个或更多个氨基酸残基的分子。这些术语包括例如蛋白质序列的天然和人工蛋白质，蛋白质片段和多肽类似物(如突变蛋白质、变体和融合蛋白质)以及翻译后或以其它方式共价或非共价修饰的肽。肽可以是单体或聚合体。在某些实施方式中，“肽”是氨基酸链，其α碳可以通过肽键连接。因此，链的一端(氨基末端)的末端氨基酸具有游离氨基，而链的另一端(羧基末端)的末端氨基酸具有游离羧基。如本文所用，术语“氨基末端”(缩写为N-末端)是指肽的氨基末端的氨基酸上的游离氨基或在肽内任何其它位置的氨基酸的氨基(参与肽键时的亚氨基)。类似地，术语“羧基末端”是指肽的羧基末端上的游离羧基或在肽内任何其它位置的氨基酸的羧基。肽还基本上包括任何聚氨基酸，包括但不限于肽模拟物，如由醚而不是酰胺键连接的氨基酸。

术语“治疗性肽”是指具有一种或多种治疗和/或生物活性的肽或其片段或变体。

如本文所用的术语“类似物”或“肽类似物”描述了包含一种或多种氨基酸修饰的肽，如但不限于用任何天然或非天然氨基酸、合成氨基酸或模拟肽对任一个氨基酸残基进行取代和/或一或多个缺失和/或一个或多个添加，和/或在任何可用位置处将取代基附接于天然或非天然氨基酸、合成氨基酸或模拟肽中的任一种。氨基酸残基的添加或缺失可以发生在肽的N-末端和/或肽的C-末端。

在一些实施方式中，类似物具有1、2、3、4或5个这样的修饰。在一些实施方式中，类似物保留了原始肽的生物活性。在一些实施方式中，类似物是原始肽的竞争性或非竞争性抑制剂。

使用标准的单字母或三字母缩写表示肽序列。除非另有说明，否则肽序列在左侧处具有氨基末端且在右侧处具有羧基末端。肽的特定部分可以由氨基酸残基编号(如氨基酸3至6)或由该位点处的实际残基(如Met3到Gly6)指定。特定的肽序列也可以通过解释它与参考序列有何不同来描述。

当在本文中使用时，术语“天然氨基酸”是选自以下组成的组中的氨基酸(括号中的通常三字母代码和一个字母代码)：甘氨酸(Gly&G)、脯氨酸(Pro&P)、丙氨酸(Ala&A)、缬氨酸(Val&V)、亮氨酸(Leu&L)、异亮氨酸(Ile&I)、蛋氨酸(Met&M)、半胱氨酸(Cys&C)、苯丙氨酸(Phe&F)、酪氨酸(Tyr和Y)、色氨酸(Trp&W)、组氨酸(His&H)、赖氨酸(Lys&K)、精氨酸(Arg&R)、谷氨酰胺(Gin&Q)、天冬酰胺(Asn&N)、谷氨酸(Glu&E)、天冬氨酸(Asp&D)、丝氨酸(Ser&S)和苏氨酸(Thr&T)。如果在本文中的任何地方提及肽、类似物或衍生物、包含或不包含G、P、A、V、L、I、M、C、F、Y、H、K、R、Q、N、E、D、S或T的肽，没有进一步说明，则是指氨基酸。如果没有另外说明，用大写字母中单个字母代码表示的氨基酸表示L-异构体。然而，如果用大写字母中的单个字母代码指定的氨基酸前面是小写字母d并在括号中，如“(dD)”和“(dE)”，则该氨基酸用作/应用为其D-异构体。例如，“(dD)”是指D或天冬氨酸的D-异构体，“(dA)”是指A或丙氨酸的D-异构体，“(dE)”是指E或谷氨酸的D-异构体。在某些情况下，氨基酸的D-异构体用“D-”表示，后面是用三字母代码指定的氨基酸。因此，例如，“D-Ala”是指丙氨酸的D-异构体，“D-Asp”是指天冬氨酸的D-异构体，“D-Glu”是指谷氨酸的D-异构体。先前定义的此类D-形式和其它非保守氨基酸取代包括在非天然氨基酸的定义中。

如果由于输入错误而与常用代码存在偏差，则应用常用代码。存在于肽中的氨基酸优选是可以由核酸编码的氨基酸。从以上示例可以明显看出，氨基酸残基可以通过它们的全名、它们的单字母代码和/或它们的三字母代码来识别。这三种方式完全等同。

如本文所用，术语“带电荷的氨基酸”或“带电荷的残基”是指包含在生理pH值的水溶液中带负电荷(即去质子化)或带正电荷(即质子化)的侧链的氨基酸。例如，带负电荷的氨基酸包括天冬氨酸、谷氨酸、磺基丙氨酸、同型磺基丙氨酸和同型谷氨酸，而带正电荷的氨基酸包括精氨酸、赖氨酸和组氨酸。带电荷的氨基酸包括20种编码氨基酸以及非典型或非天然存在或非编码氨基酸中的带电荷氨基酸。

如本文所用，术语“酸性氨基酸”是指包含第二酸性部分(除氨基酸的羧酸外)的氨基酸，该第二酸性部分包括例如羧酸或磺酸基团。

如本文所用，术语“酰化氨基酸”是指包含酰基的氨基酸，该酰基对天然存在的氨基酸是非天然的，无论其产生的方式如何(例如在将氨基酸掺入肽之前进行酰化，或在掺入肽之后进行酰化)。

如本文所用，术语“烷基化氨基酸”是指包含烷基的氨基酸，该烷基对天然存在的氨基酸是非天然的，无论其产生的方式如何。因此，本公开的酰化氨基酸和烷基化氨基酸是非编码氨基酸。

本领域技术人员将能够使用本文所述的材料和方法(如合成技术和活性测定，包括脂肪酸代谢和其它代谢测定)确定本文所述的肽的活性变体。参见，实施例部分。在某些实施方式中，本领域技术人员可以鉴定分子的合适区域，通过靶向不被认为对活动很重要的区域，可以在不破坏活动的情况下改变该分子。在其它实施方式中，本领域技术人员可以鉴定分子的残基和部分，该分子在类似的肽(如本文所述的具有类似调节活性的肽)中是保守的。在进一步的实施方式中，即使对生物活性或结构可能重要的区域也可以进行保守氨基酸取代而不破坏生物活性或不对肽结构产生不利影响。

另外，本领域技术人员可以综述结构-功能研究以鉴定对活性或结构重要的类似肽中的残基。鉴于这种比较，本领域技术人员可以预测肽中氨基酸残基的重要性，该氨基酸残基对应于对类似肽中的活性或结构重要的氨基酸残基。对于这种预测的重要氨基酸残基，本领域技术人员可以选择化学上类似的氨基酸取代。

本领域技术人员还可以分析与类似肽中的该结构相关的三维结构和氨基酸序列。鉴于此类信息，本领域技术人员可以预测肽的氨基酸残基相对于其三维结构的比对。在某些实施方式中，本领域技术人员可以选择不对预测在肽表面上的氨基酸残基进行根本改变，因为这些残基可能参与与其它分子的重要相互作用。此外，本领域技术人员可以产生在每个所需氨基酸残基处含有单个氨基酸取代的测试变体。然后可以使用本领域技术人员已知的活性测定筛选变体。这些变体可用于收集关于合适变体的信息。例如，如果发现特定氨基酸残基的变化导致破坏、不希望的减少或不适合的活性，则可以避免具有这种变化的变体。换句话说，基于从这些常规实验收集的信息，本领域技术人员可以容易地确定应该单独或与其它突变组合地避免进一步取代的氨基酸。

本文所用的术语“衍生物”是指化学修饰的肽，其中，一个或多个取代基或部分已与肽共价连接。因此，包含这些取代基或部分的衍生物将是“衍生的”肽或“衍生的”类似物。该术语还可以指含有一个或多个化学部分的肽，所述化学部分通常不是肽分子的一部分，如游离羧基的酯和酰胺、游离氨基的酰基和烷基衍生物、游离羟基的磷酸酯和醚。通过使肽的靶向氨基酸残基与能够与选择的侧链或末端残基反应的有机衍生剂反应，可以将这些修饰引入到分子中。优选的化学衍生物包括已磷酸化、C-末端酰胺化或N-末端乙酰化的肽。该术语还可以指本文所用的肽，其可以通过本领域已知的方式由作为残基或N-末端或C-末端基团上的侧链出现的官能团制备，并且只要它们保持药学上可接受的(即它们不破坏肽的活性，不赋予含有它的组合物的毒性，并且不会不利地影响其抗原性)，则便包括在本文中。这些衍生物可以例如包括羧基的脂族酯、通过与氨或与伯胺或仲胺反应产生的羧基的酰胺、通过与酰基部分(例如，烷酰基或碳环芳酰基基团)反应形成的氨基酸残基的游离氨基的N酰基衍生物、或通过与酰基部分反应形成的游离羟基的O-酰基衍生物(例如，丝氨酰基或苏氨酰基残基的O-酰基衍生物)。

修饰的氨基酸残基是其中通过缺失、添加或用不同的基团或键替换而修饰任何基团或键的氨基酸残基，只要保留氨基酸残基的功能，或如果功能改变(例如用取代的苯丙氨酸替换酪氨酸)，只要该修饰不损害含有修饰残基的肽的活性即可。

本文所用的术语“取代基”是指与氨基酸残基(特别是氨基酸残基上的任何可用位置)键合(特别是共价键合)的任何合适的部分。通常，合适的部分是化学部分。

术语“脂肪酸”是指具有4至28个碳原子的脂肪族一元羧酸，优选是非支链的，并且它可以是饱和的或不饱和的。在本公开中，优选包含10至16个氨基酸的脂肪酸。

术语“脂肪二酸”是指如上定义的脂肪酸，但在ω位置具有另外的羧酸基团。因此，脂肪二酸是二羧酸。在本公开中，优选包含14至20个氨基酸的脂肪酸。

术语“％序列同一性”在本文中可与术语“％同一性”互换使用，并且是指当使用序列比对程序比对时，两个或多个肽序列之间的氨基酸序列同一性水平或两个或多个核苷酸序列之间的核苷酸序列同一性水平。例如，如本文所用，80％同一性意指由定义的算法确定与相同的事物有80％的序列同一性，并且意指给定序列与另一序列的另一长度至少80％相同。

术语“％序列同源性”在本文中可与术语“％同源性”互换使用，并且是指当使用序列比对程序比对时，两个或多个肽序列之间的氨基酸序列同源性水平或两个或多个核苷酸序列之间的核苷酸序列同源性水平。例如，如本文所用，80％同源性意指由定义的算法确定与相同的事物有80％的序列同源性，因此，给定序列的同源物在给定序列的长度上具有大于80％的序列同源性。

可用于确定两个序列之间的同一性或同源性程度的示例性计算机程序包括但不限于公众通过网络在NCBI网站上可获得的BLAST程序包，例如BLASTN、BLASTX和TBLASTX、BLASTP和TBLASTN。还参见Altschul等人,1990,J.Mol.Biol.215:403-10(特别参考公布的默认设置，即参数w＝4，t＝17)和Altschul等人,1997,Nucleic Acids Res.,25:3389-3402。当相对于GenBank蛋白质序列和其它公共数据库中的氨基酸序列评估给定氨基酸序列时，通常使用BLASTP程序进行序列搜索。针对GenBank蛋白质序列和其它公共数据库中的氨基酸序列，BLASTX程序优选用于搜索已在所有阅读框中翻译的核酸序列。BLASTP和BLASTX两者均使用11.0的开放空位罚分和1.0的扩展空位罚分的默认参数运行，并利用BLOSUM-62矩阵(Id)。除了计算序列同一性百分率外，BLAST算法还对两个序列之间的相似性进行统计学分析(参见例如Karlin和Altschul,Proc.Nat'l.Acad.Sci.美国90:5873-5787(1993))。BLAST算法提供的一种相似性度量是最小和概率(P(N))，其提供了两个核苷酸或氨基酸序列之间偶然发生匹配概率的指示。

如本文所用，肽的“治疗有效量”是指当根据所公开和要求保护的方法提供给受试者时会影响生物活性，如降低游离脂肪酸水平、血清甘油三酯水平、血糖水平、体重、脂肪量或调节脂肪酸代谢。

术语“治疗”是指用于获得有益或期望的临床结果的方法。此外，本文提及“治疗”包括提及治愈性治疗、姑息性治疗和预防性治疗。术语“治疗”是指抑制、预防或阻止病理(疾病、障碍或病症)的发展或进展和/或引起病理的减轻、缓解或消退。本领域技术人员将理解，可以使用各种方法和测定来评估病理学的发展，并且类似地，可以使用各种方法和测定来评估病理学的减轻、缓解或消退。

术语“改善细胞存活”是指与对照相比，在给定条件下存活的细胞数量的增加，例如在没有治疗的情况下在相同条件下存活的细胞数量。该条件可以是体外、体内、离体或原位。经改善的细胞存活可以表示为比较值，例如，如果细胞存活率改善两倍，则两倍细胞存活。经改善的细胞存活可以由细胞凋亡的减少、细胞寿命的增加或细胞功能和状况的改善引起。

为清楚起见，术语“说明”旨在除了其通常理解的定义外，还包括由管理机构批准的标签上的信息。

如本文和所附权利要求中所使用的，单数形式“一”，“或”和“该”包括复数指示物，除非上下文另有明确说明。应理解的是，本文所述的本公开的方面和变型包括“由......组成”和/或“基本上由......组成”方面和变型。

本文所用的术语“约”意指大于或小于10％所述值的值或范围，但并不旨在将值的任何值或值范围仅指定为更广泛的定义。在术语“约”之前的每个值或值范围也旨在包括所述绝对值或值范围的实施方式。

如本文所用，术语“预防”是指防止疾病、障碍或病症在可能有疾病风险但尚未被诊断为患有该疾病的受试者中发生。在人口研究中可以证明预防(以及有效预防的剂量)。例如，相对于未治疗的对照人口，预防给定疾病或医学病症的有效量是减少治疗人口中发生率的有效量。

如本文所用，术语“受试者”包括哺乳动物，优选患有病理特征的任何年龄的人。优选地，该术语包括有发展病理特征风险的个体。

肽

本公开提供了降低脂肪细胞中游离脂肪酸水平的肽和肽类似物。有利地，本公开的肽和肽类似物在血浆中显示出足够的稳定性，如本文进一步讨论的。

X¹-Q-E-X²-X³-Y-I-X⁴-Y-X⁵-R-X⁶ (I)SEQ ID NO：1

在示例性实施方式中，本公开的肽包含式II的氨基酸序列和/或其C-末端酸或酰胺，或N-乙酰基衍生物；或其药学上可接受的盐：

X¹⁷-X¹⁸-X¹⁹-Q-E-X²⁰-X²¹-Y-I-X²²-Y-X²³-X²⁴-X²⁵ (II)(SEQ ID NO：378)

其中，X¹⁷不存在或者如果存在的话是具有非极性侧链或极性侧链的氨基酸；X¹⁸不存在或者如果存在的话是具有非极性侧链或极性侧链的氨基酸；X¹⁹不存在或者如果存在的话是具有非极性侧链或极性侧链的氨基酸；X²⁰是具有非极性侧链或极性侧链的氨基酸；X²¹是具有非极性侧链或极性侧链的氨基酸；X²²是具有非极性侧链或极性侧链的氨基酸；X²³是具有非极性侧链或极性侧链的氨基酸；X²⁴是具有非极性侧链或极性侧链的氨基酸；X²⁵不存在或者如果存在的话则选自具有非极性侧链或极性侧链的氨基酸、-LKR、-KLX²⁶、-X²⁷LR、-KX²⁸R、-RX²⁹R和-KRX³⁰；其中，X²⁶不存在或存在的话则选自具有非极性侧链或极性侧链的氨基酸；其中，X²⁷选自具有非极性侧链或极性侧链的氨基酸；其中，X²⁸选自具有非极性侧链或极性侧链的氨基酸；其中，X²⁹选自具有非极性侧链或极性侧链的氨基酸；并且其中，X³⁰不存在或者如果存在的话则选自具有非极性侧链的氨基酸；条件是该肽不是由SEQ ID NO：2、42、77、78、316-318和328-349的氨基酸序列中的任一个组成的肽；还有情况是如果X¹⁹不存在，则X¹⁷和X¹⁸不存在；还有情况是如果X¹⁸不存在，则X¹⁷不存在。

在示例性实施方式中，肽包含式II的氨基酸序列或其C-末端酸或酰胺，或N-乙酰基衍生物；或其药学上可接受的盐，其中，X¹⁷不存在或者如果存在的话则选自D、(dD)、E、(dE)、K、(dK)、R、(dR)、H、(dH)、N、(dN)、Q、(dQ)、S、(dS)、T、(dT)、Y、(dY)、C、(dC)、G、A、(dA)、V、(dV)、L、(dL)、Nle、I、(dI)、F、(dF)、W、(dW)、P(dP)、M和(dM)；X¹⁸不存在或如果存在的话则选自D、(dD)、E、(dE)、K、(dK)、R、(dR)、H、(dH)、N、(dN)、Q、(dQ)、S、(dS)、T、(dT)、Y、(dY)、C、(dC)、G、A、(dA)、Aib、V、(dV)、L、(dL)、I、(dI)、F、(dF)、W、(dW)、P(dP)、M和(dM)；X¹⁹不存在或者如果存在的话则选自D、(dD)、E、(dE)、K、(dK)、R、(dR)、H、(dH)、N、(dN)、Q、(dQ)、S、(dS)、T、(dT)、Y、(dY)、C、(dC)、G、A、(dA)、V、(dV)、L、(dL)、I、(dI)、F、(dF)、W、(dW)、P(dP)、M和(dM)；X²⁰选自D、(dD)、E、(dE)、K、(dK)、R、(dR)、H、(dH)、N、(dN)、Q、(dQ)、S、(dS))、T、(dT)、Y、(dY)、C、(dC)、G、A、(dA)、Aib、V、(dV)、L、(dL)、I、(dI)、F、(dF)、W、(dW)、P(dP)、M和(dM)；X²¹选自D、(dD)、E、(dE)、K、(dK)、R、(dR)、H、(dH)、N、(dN)、Q、(dQ)、S、(dS))、T、(dT)、Y、(dY)、C、(dC)、G、A、(dA)、Aib、V、(dV)、L、(dL)、I、(dI)、F、(dF)、W、(dW)、P(dP)、M和(dM)；X²²选自D、(dD)、E、(dE)、K、(dK)、R、(dR)、H、(dH)、N、(dN)、Q、(dQ)、S、(dS))、T、(dT)、Y、(dY)、C、(dC)、G、A、(dA)、Aib、V、(dV)、L、(dL)、I、(dI)、F、(dF)、W、(dW)、P(dP)、M和(dM)；X²³选自D、(dD)、E、(dE)、K、(dK)、R、(dR)、H、(dH)、N、(dN)、Q、(dQ)、S、(dS))、T、(dT)、Y、(dY)、C、(dC)、G、A、(dA)、Aib、V、(dV)、L、(dL)、I、(dI)、F、(dF)、W、(dW)、P(dP)、M和(dM)；X²⁴不存在或者如果存在的话则选自D、(dD)、E、(dE)、K、(dK)、R、(dR)、H、(dH)、N、(dN)、Q、(dQ)、S、(dS)、T、(dT)、Y、(dY)、C、(dC)、G、A、(dA)、V、(dV)、L、(dL)、I、(dI)、F、(dF)、W、(dW)、P(dP)、M和(dM)；X²⁵不存在或如果存在的话则选自D、(dD)、E、(dE)、K、(dK)、R、(dR)、H、(dH)、N、(dN)、Q、(dQ)、S、(dS)、T、(dT)、Y、(dY)、C、(dC)、G、A、(dA)、V、(dV)、L、(dL)、I、(dI)、F、(dF)、W、(dW)、P(dP)、M、(dM)、-LRK、-KLX²⁶、-X²⁷LR、-KX²⁸R、-XX²⁹R和-KRX³⁰；其中X²⁶不存在或如果存在的话则选自-RE、D、(dD)、E、(dE)、K、(dK)、R、(dR)、H、(dH)、N、(dN)、Q、(dQ)、S、(dS)、T、(dT)、Y、(dY)、C、(dC)、G、A、(dA)、V、(dV)、L、(dL)、I、(dI)、F、(dF)、W、(dW)、P(dP)、M和(dM)；其中，X²⁷选自D、(dD)、E、(dE)、K、(dK)、R、(dR)、H、(dH)、N、(dN)、Q、(dQ)、S、(dS)、T、(dT)、Y、(dY)、C、(dC)、G、A、(dA)、V、(dV)、L、(dL)、I、(dI)、F、(dF)、W、(dW)、P(dP)、M和(dM)；其中，X²⁸选自D、(dD)、E、(dE)、K、(dK)、R、(dR)、H、(dH)、N、(dN)、Q、(dQ)、S、(dS)、T、(dT)、Y、(dY)、C、(dC)、G、A、(dA)、V、(dV)、L、(dL)、I、(dI)、F、(dF)、W、(dW)、P(dP)、M和(dM)；其中，X²⁹选自D、(dD)、E、(dE)、K、(dK)、R、(dR)、H、(dH)、N、(dN)、Q、(dQ)、S、(dS)、T、(dT)、Y、(dY)、C、(dC)、G、A、(dA)、V、(dV)、L、(dL)、I、(dI)、F、(dF)、W、(dW)、P(dP)、M和(dM)；其中，X³⁰不存在或如果存在的话则选自G、A、(dA)、V、(dV)、L、(dL)、I、(dI)、F、(dF)、W、(dW)、P(dP)、M和(dM)。

在示例性实施方式中，肽包含式II的氨基酸序列、其C-末端酸或酰胺、或N-乙酰基衍生物；或其药学上可接受的盐，其中，X¹⁷不存在或者如果存在的话是M、L、G、K、E、A、(dA)或Nle；X¹⁸不存在或者如果存在的话是R、A、G、D、K、Aib、(dA)或E；X¹⁹不存在或如果存在的话是W、A、(dA)、G或E；X²⁰是Nle、G、K、Ccyc、(dA)、M或A；X²¹是G、N、Q、(dA)或A；X²²是F、G、E、(dA)或A；X²³是P、G、E、F、Ccyc、Kcyc、(dA)或A；X²⁴不存在或者如果存在的话是R、G、D、L、K、E、(dA)或A；X²⁵不存在或如果存在的话则选自-K、-R、N、Q、(dA)、-KL、-KR、-R(Da)、-KLR、-K(Ac)LR、-K(cyc)LR、-ALR、-(dA)LR、-GLR、-ELR、-NLR、-QLR、-KAR、-K(dA)R、-KGR、-KER、-KLA、-KL(dA)、-KLD、-KLE、-KLG、-KLK、-RKR、-RLR、-LKR、-KRL和-KLRE。

在示例性实施方式中，本公开的肽包含式III的氨基酸序列或其C-末端酸或酰胺，或N-乙酰基衍生物；或其药学上可接受的盐：

X³¹-X³²-X³³-X³⁴-X³⁵-X³⁶-X³⁷-X³⁸-X³⁹-X⁴⁰-X⁴¹-X⁴²-X⁴³-X⁴⁴-X⁴⁵-X⁴⁶-X⁴⁷ (III)(SEQID NO：379)

其中，X³¹不存在或者如果存在的话是M、L、G、K、E、A、(dA)或Nle；X³²不存在或者如果存在的话是R、A、G、D、K、Aib、(dA)或E；X³³不存在或如果存在的话是W、A、(dA)、G或E；X³⁴是Q、G、A、(dA)、Ecyc、N或E；X³⁵是E、Ecyc、D、G、(dA)或A；X³⁶是Nle、G、K、Ccyc、(dA)、M或A；X³⁷是G、N、Q、(dA)或A；X³⁸是Y、G、E、(dA)或A；X³⁹是I、G、E、(dA)或A；X⁴⁰是F、G、E、(dA)或A；X⁴¹是Y、G、E、(dA)或A；X⁴²不存在或者如果存在的话是P、G、E、F、Ccyc、Kcyc、(dA)或A；X⁴³不存在或者如果存在的话是R、G、D、L、K、E、(dA)或A；X⁴⁴不存在或者如果存在的话是K、K-Ac、G、R、L、Q、N、Kcyc、E、(dA)或A；X⁴⁵不存在或者如果存在的话是L、G、R、K、Deg、E、(dA)或A；X⁴⁶不存在或者如果存在的话是R、D、E、L、K、G、(dA)或A；并且X⁴⁷不存在或者如果存在的话是E；条件是该肽是其中肽不是由SEQ ID NO：2、42、77、78、316-318和328-349的氨基酸序列中的任一个组成的肽；还有情况是如果X³³不存在，则X³¹和X³²不存在；还有情况是如果X³²不存在，则X³¹不存在；还有情况是如果X⁴²不存在，则X⁴⁷、X⁴⁶、X⁴⁵、X⁴⁴和X⁴³不存在；还有情况是如果X⁴³不存在，则X⁴⁷、X⁴⁶、X⁴⁵和X⁴⁴不存在；还有情况是如果X⁴⁴不存在，则X⁴⁷、X⁴⁶和X⁴⁵不存在；还有情况是如果X⁴⁵不存在，则X⁴⁷和X⁴⁶不存在；还有情况是如果X⁴⁶不存在，则X⁴⁷不存在。

在示例性实施方式中，肽包含式III的氨基酸序列或其C-末端酸或酰胺，或N-乙酰基衍生物；或其药学上可接受的盐，其中，X³⁴是Q；X³⁵是E；X³⁶是M；X³⁷是G；X³⁸是Y；X³⁹是I；X⁴⁰是F；X⁴¹是Y；X⁴²是P；X⁴³是R；X⁴⁴不存在或者如果存在的话是K；X⁴⁵不存在或者如果存在的话是L；X⁴⁶不存在或者如果存在的话是R；且X⁴⁷不存在。

在示例性实施方式中，分离式I-III的肽。

在示例性实施方式中，肽包含选自以下的肽序列的修饰：

MRWQEAGYIFYPRKLR(SEQ ID NO：11)；

MRWQEMGYIFYPR(dA)LR(SEQ ID NO：149)；

MRWQEMNYIFYPR(SEQ ID NO：208)；

MRWQEMGYIFYPRNLR(SEQ ID NO：213)；

MRWQEMQYIFYPRALR(SEQ ID NO：219)；

RWQEMNYIFYPR(SEQ ID NO：210)；

MRWQEMGYIFYPRALR(SEQ ID NO：19)；

MRWQEMGYIFYPRKLA(SEQ ID NO：21)；

MRWQEMGYIFYARKLR(SEQ ID NO：17)；

RWQEMGYIFYPRQLR(SEQ ID NO：217)；

MRWQEEGYIFYPRKLR(SEQ ID NO：172)；

MRWQEMGYIFYPRKL(SEQ ID NO：45)；

ERWQEAGYIAYPR(SEQ ID NO：241)；

RWQEMQYIFYPR(SEQ ID NO：211)；

MRWQEMGYIFYPAKLR(SEQ ID NO：18)；

其中，所述修饰包含用另一种氨基酸或其药学上可接受的盐取代肽中的至少一个氨基酸，另一种氨基酸选自(i)具有D-构型的氨基酸，和(ii)非天然存在的氨基酸残基。

在示例性实施方式中，本公开的肽或肽类似物包含：(a)RWQE(SEQ ID NO：294)、(b)YIFY(SEQ ID NO：295)、或(c)RWQE(SEQ ID NO：294)和YIFY(SEQ ID NO：295)两者，其中，该肽或肽类似物(i)在37摄氏度下在鼠血浆中呈现至少10％的稳定性达60分钟，(ii)降低人原代脂肪细胞中的游离脂肪酸水平，(iii)或者(i)和(ii)两者。在示例性实施方式中，该肽或肽类似物的长度为8至20个氨基酸。在示例性实施方式中，肽或肽类似物的部分(A)是部分(B)的N-末端，具有0-10个插入氨基酸，特别是一个、两个、三个、四个或五个插入氨基酸的氨基酸。在示例性实施方式中，肽或肽类似物包含紧邻SEQ ID NO：294的Arg的N-末端或紧邻SEQ ID NO：294的Glu的C-末端的Met。在示例性实施方式中，肽或肽类似物包含MRWQE(SEQ ID NO：350)、RWQEM(SEQ ID NO：351)或MRWQEM(SEQ ID NO：352)。在示例性实施方式中，肽或肽类似物包含紧邻SEQ ID NO：295的第一个氨基酸的N-末端的Gly、紧邻SEQID NO：295的最后一个氨基酸的C-末端的Pro，或包含GYIFYP(SEQ ID NO：353)。在示例性实施方式中，肽或肽类似物包含YIFYPR(SEQ ID NO：296)、YIFYPRK(SEQ ID NO：297)、YIFYPRKL(SEQ ID NO：298)或YIFYPRKLR(SEQ ID NO：299)。

在示例性实施方式中，本公开的肽或肽类似物包含：(A)RWQE(SEQ ID NO：294)的氨基酸序列和(B)具有一个氨基酸取代的YIFY(SEQ ID NO：295)的氨基酸序列。在示例性实施方式中，具有一个氨基酸取代的YIFY(SEQ ID NO：295)的氨基酸序列包含XIFY(SEQ IDNO：300)、YXFY(SEQ ID NO：301)、YIXY(SEQ ID NO：302)或YIFX(SEQ ID NO：303)，其中，X是任何氨基酸。在示例性实施方式中，SEQ ID NO：300-303中任一个的X是小脂肪族氨基酸或酸性氨基酸。在示例性实施方式中，SEQ ID NO：300-303中任一个的X选自由Ala、Gly、(dA)和Glu组成的组。在示例性实施方式中，该肽或肽类似物的长度为8至20个氨基酸。在示例性实施方式中，肽或肽类似物的部分(A)是部分(B)的N-末端，具有0-10个插入氨基酸，特别是一个、两个、三个、四个或五个插入氨基酸的氨基酸。在示例性实施方式中，该肽或肽类似物(i)在37摄氏度下在鼠血浆中呈现至少10％的稳定性达60分钟，(ii)降低人原代脂肪细胞中的游离脂肪酸水平，(iii)或者(i)和(ii)两者。

在示例性实施方式中，本公开的肽或肽类似物包含：(A)RWQE(SEQ ID NO：294)的氨基酸序列和(B)具有两个氨基酸修饰的YIFY(SEQ ID NO：295)的氨基酸序列。在示例性实施方式中，本公开的肽或肽类似物包含(RWQE(SEQ ID NO：294)的氨基酸序列和(B)具有两个氨基酸取代的YIFY(SEQ ID NO：295)的氨基酸序列。在示例性实施方式中，本公开的肽或肽类似物包含RWQE(SEQ ID NO：294)和YIAE(SEQ ID NO：308)或EIFE(SEQ ID NO：309)的氨基酸序列。在示例性实施方式中，本公开的肽或肽类似物包含RWQE(SEQ ID NO：294)和YI或YIF的氨基酸序列。在示例性实施方式中，该肽或肽类似物的长度为8至20个氨基酸。在示例性实施方式中，肽或肽类似物的部分(A)是部分(B)的N-末端，具有0-10个插入氨基酸，特别是一个、两个、三个、四个或五个插入氨基酸的氨基酸。在示例性实施方式中，该肽或肽类似物(i)在37摄氏度下在鼠血浆中呈现至少10％的稳定性达60分钟，(ii)降低人原代脂肪细胞中的游离脂肪酸水平，(iii)或者(i)和(ii)两者。

在示例性实施方式中，肽或肽类似物包含(A)YIFY(SEQ ID NO：295)的氨基酸序列和(B)具有一个氨基酸取代的RWQE(SEQ ID NO：294)的氨基酸序列。在示例性实施方式中，具有一个氨基酸取代的RWQE(SEQ ID NO：294)的氨基酸序列包含XWQE(SEQ ID NO：304)、RXQE(SEQ ID NO：305)、RWXE(SEQ ID NO：306)、或RWQX(SEQ ID NO：307)，其中，X是任何氨基酸。在示例性实施方式中，X是脂肪族氨基酸或带电荷的氨基酸。在示例性方面，当肽或肽类似物包含XWQE(SEQ ID NO：304)时，X选自由Ala、Gly、Asp、Lys、Aib、(dA)、Glu组成的组。在示例性方面，当肽或肽类似物包含RXQE(SEQ ID NO：305)时，X选自由Ala、Gly、(dA)、Glu组成的组。在示例性方面，当肽或肽类似物包含RWXE(SEQ ID NO：306)时，X选自由Gln、Ala、Glu、Gly、Asn、(dA)组成的组。在示例性方面，当肽或肽类似物包含RWQX(SEQ ID NO：307)时，X选自由Glu、Ala、Gly、Asp、(dA)组成的组。在示例性实施方式中，该肽或肽类似物的长度为8至20个氨基酸。在示例性实施方式中，肽或肽类似物的部分(A)是部分(B)的N-末端，具有0-10个插入氨基酸，特别是一个、两个、三个、四个或五个插入氨基酸的氨基酸。在示例性实施方式中，该肽或肽类似物(i)在37摄氏度下在鼠血浆中呈现至少10％的稳定性达60分钟，(ii)降低人原代脂肪细胞中的游离脂肪酸水平，(iii)或者(i)和(ii)两者。

在示例性实施方式中，本公开的肽或肽类似物包含RWQEX¹X²YIFY(SEQ ID NO：319)的氨基酸序列，其中，X¹和X²各自独立地为任何氨基酸。在示例性方面，X¹选自由Met、Ala、Nle、Gly、(dA)、Glu、Cys及其等同物组成的组。在示例性方面，X¹选自由Met、Ala、Nle、Gly、(dA)、Glu和Cys组成的组。在示例性方面，X²选自由Asn、Gln、Gly、(dA)、Glu及其等同物组成的组。在示例性方面，X²选自由Asn、Gln、Gly、(dA)和Glu组成的组。在示例性方面，-X¹X²-是Met-Asn、Met-Gln、Ala-Gly、Met-Ala、Nle-Gly、Gly-Gly、Met-(dA)、(dA)-Gly、Glu-Gly、Met-Glu、Cys-Gly、Glu-Asn或Glu-Gln。在示例性方面，肽或肽类似物不由序列SEQ ID NO：2组成。在示例性实施方式中，该肽或肽类似物的长度为8至20个氨基酸。在示例性实施方式中，肽或肽类似物的部分(A)是部分(B)的N-末端，具有0-10个插入氨基酸，特别是一个、两个、三个、四个或五个插入氨基酸的氨基酸。在示例性实施方式中，该肽或肽类似物(i)在37摄氏度下在鼠血浆中呈现至少10％的稳定性达60分钟，(ii)降低人原代脂肪细胞中的游离脂肪酸水平，(iii)或者(i)和(ii)两者。

在示例性实施方式中，本公开的肽或肽类似物包含RWQEX⁴⁸X⁴⁹X⁵⁰IFY(SEQ ID NO：373)的氨基酸序列，其中，X⁴⁸、X⁴⁹和X⁵⁰各自独立地为任何氨基酸。在示例性方面，X⁴⁸选自由Met、Ala、Nle、Gly、(dA)、Glu、Cys及其等同物组成的组。在示例性方面，X⁴⁸选自由Met、Ala、Nle、Gly、(dA)、Glu和Cys组成的组。在示例性方面，X⁴⁹选自由Asn、Gln、Gly、(dA)、Glu及其等同物组成的组。在示例性方面，X⁴⁹选自由Asn、Gln、Gly、(dA)和Glu组成的组。在示例性实施方式中，X⁵⁰选自由Ala、Gly、(dA)和Glu及其等同物组成的组。在示例性实施方式中，X⁵⁰选自由Ala、Gly、(dA)和Glu组成的组。在示例性方面，肽或肽类似物不由序列SEQ ID NO：2组成。在示例性实施方式中，该肽或肽类似物的长度为8至20个氨基酸。在示例性实施方式中，肽或肽类似物的部分(A)是部分(B)的N-末端，具有0-10个插入氨基酸，特别是一个、两个、三个、四个或五个插入氨基酸的氨基酸。在示例性实施方式中，该肽或肽类似物(i)在37摄氏度下在鼠血浆中呈现至少10％的稳定性达60分钟，(ii)降低人原代脂肪细胞中的游离脂肪酸水平，(iii)或者(i)和(ii)两者。

在示例性实施方式中，本公开的肽或肽类似物包RWQEX¹X²X³IFY(SEQ ID NO：320)、RWQEX¹X²YX³FY(SEQ ID NO：321)、RWQEX¹X²YIX³Y(SEQ ID NO：322)或RWQEX¹X²YIFX³(SEQ IDNO：323)的氨基酸序列，其中，X各自独立地是任何氨基酸。在示例性方面，X¹选自由Met、Ala、Nle、Gly、(dA)、Glu、Cys及其等同物组成的组。在示例性方面，X¹选自由Met、Ala、Nle、Gly、(dA)、Glu和Cys组成的组。在示例性方面，X²选自由Asn、Gln、Gly、(dA)、Glu及其等同物组成的组。在示例性方面，X²选自由Asn、Gln、Gly、(dA)和Glu组成的组。在示例性方面，X¹X²是Met-Asn、Met-Gln、Ala-Gly、Met-Ala、Nle-Gly、Gly-Gly、Met-(dA)、(dA)-Gly、Glu-Gly、Met-Glu、Cys-Gly、Glu-Asn或Glu-Gln。在示例性实施方式中，X³是小脂肪族氨基酸或酸性氨基酸。在示例性实施方式中，X³选自由Ala、Gly、(dA)和Glu组成的组。在示例性实施方式中，该肽或肽类似物的长度为8至20个氨基酸。在示例性实施方式中，肽或肽类似物的部分(A)是部分(B)的N-末端，具有0-10个插入氨基酸，特别是一个、两个、三个、四个或五个插入氨基酸的氨基酸。在示例性实施方式中，该肽或肽类似物(i)在37摄氏度下在鼠血浆中呈现至少10％的稳定性达60分钟，(ii)降低人原代脂肪细胞中的游离脂肪酸水平，(iii)或者(i)和(ii)两者。

在示例性实施方式中，本公开的肽或肽类似物包含RWQEX⁴⁸X⁴⁹X⁵⁰IFY(SEQ ID NO：373)、RWQEX⁴⁸X⁴⁹YX⁵¹FY(SEQ ID NO：374)、RWQEX⁴⁸X⁴⁹YIX⁵²Y(SEQ ID NO：375)或RWQEX⁴⁸X⁴⁹YIFX⁵³(SEQ ID NO：376)的氨基酸序列，其中，X⁴⁸、X⁴⁹、X⁵⁰、X⁵¹、X⁵²和X⁵³各自独立地为任何氨基酸。在示例性实施方式中，本公开的肽或肽类似物包含SEQ ID NO：1、3-41、43-76和79-293、310-315、319-323和354-377的氨基酸序列。在示例性实施方式中，本公开的肽或肽类似物包含表1中所示的结构和/或氨基酸序列。在示例性方面，X⁴⁸选自由Met、Ala、Nle、Gly、(dA)、Glu、Cys及其等同物组成的组。在示例性方面，X⁴⁸选自由Met、Ala、Nle、Gly、(dA)、Glu和Cys组成的组。在示例性方面，X⁴⁹选自由Asn、Gln、Gly、(dA)、Glu及其等同物组成的组。在示例性方面，X⁴⁹选自由Asn、Gln、Gly、(dA)和Glu组成的组。在示例性方面，-X⁴⁸X⁴⁹-是Met-Asn、Met-Gln、Ala-Gly、Met-Ala、Nle-Gly、Gly-Gly、Met-(dA)、(dA)-Gly、Glu-Gly、Met-Glu、Cys-Gly、Glu-Asn或Glu-Gln。在示例性实施方式中，X⁵⁰、X⁵¹、X⁵²和X⁵³各自是小脂肪族氨基酸或酸性氨基酸。在示例性实施方式中，X⁵⁰、X⁵¹、X⁵²和X⁵³各自选自由Ala、Gly、(dA)和Glu组成的组。在示例性实施方式中，该肽或肽类似物的长度为8至20个氨基酸。在示例性实施方式中，肽或肽类似物的部分(A)是部分(B)的N-末端，具有0-10个插入氨基酸，特别是一个、两个、三个、四个或五个插入氨基酸的氨基酸。在示例性实施方式中，该肽或肽类似物(i)在37摄氏度下在鼠血浆中呈现至少10％的稳定性达60分钟，(ii)降低人原代脂肪细胞中的游离脂肪酸水平，(iii)或者(i)和(ii)两者。

在本公开的每个实施方式中，肽不是由以下氨基酸序列组成的肽：MRWQEMGYIFYPRKLR(SEQ ID NO：2)；MRWQEMGYIFYFRKLR(SEQ ID NO：316)；MGWQEMGYIFYPRKLR(SEQ ID NO：317)或MGYIFYPRKLR(SEQ ID NO：318)。在本公开的每个实施方式中，该肽也不是由SEQ ID NOs：42、77、78、328-349的氨基酸序列中的任一个组成的肽。在示例性实施方式中，另外，本公开的肽不是天然存在的肽。在示例性方面，该肽不是由SEQ ID NO：328-349的氨基酸序列中的任一个组成的肽。在其它示例性实施方式中，该肽不包含任何上述序列。本发明的肽实施方式不包括以下文献中氨基酸序列具体描述的肽：美国专利申请公开号2014/0296139，国际公开号WO01/76532和Lee等人，Cell Metabolism21:443-454(2015)，其中每个文献的肽和肽序列的公开都通过引用并入。

在示例性实施方式中，本公开的肽或肽类似物包含SEQ ID NO：1、3-41、43-76和79-293、310-315、319-323和354-377的氨基酸序列。在示例性实施方式中，本公开的肽或肽类似物包含表1中所示的氨基酸序列。在示例性实施方式中，该肽或肽类似物的长度为8至20个氨基酸。在示例性实施方式中，肽或肽类似物的部分(A)是部分(B)的N-末端，具有0-10个插入氨基酸，特别是一个、两个、三个、四个或五个插入氨基酸的氨基酸。在示例性实施方式中，该肽或肽类似物(i)在37摄氏度下在鼠血浆中呈现至少10％的稳定性达60分钟，(ii)降低人原代脂肪细胞中的游离脂肪酸水平，(iii)或者(i)和(ii)两者。

该肽或肽类似物包含SEQ ID NO：1、3-41、43-76和79-293、310-315、319-323和354-377中的任一个、基本上由其组成或由其组成，或包含与SEQ ID NO：1、3-41、43-76和79-293、310-315、319-323和354-377之一具有至少或约75％、至少或约80％、至少或约85％、至少或约90％、或至少或约95％序列同一性的序列、基本上由其组成或由其组成。在示例性实施方式中，该肽或肽类似物的长度为8至20个氨基酸。在示例性方面，该肽或肽类似物包含具有一个、两个、三个或四个氨基酸取代的SEQ ID NO：1、3-41、43-76和79-293、310-315、319-323和354-377中的任一个的序列、基本上由其组成或由其组成。在示例性方面，该肽或肽类似物包含具有一个或两个氨基酸取代的SEQ ID NO：1、3-41、43-76和79-293、310-315、319-323和354-377中的任一个的序列、基本上由其组成或由其组成。在示例性实施方式中，该肽或肽类似物的长度为8至20个氨基酸。在示例性实施方式中，该肽或肽类似物(i)在37摄氏度下在鼠血浆中呈现至少10％的稳定性达60分钟，(ii)降低人原代脂肪细胞中的游离脂肪酸水平，(iii)或者(i)和(ii)两者。在示例性方面，该肽或肽类似物包含SEQ ID NO：11、17-19、21、32、45、148、172、208、210、211、213、219和241中的任一个、基本上由其组成或由其组成，或包含与SEQ ID NO：11、17-19、21、32、45、148、172、208、210、211、213、219和241之一具有至少或约75％、至少或约80％、至少或约85％、至少或约90％、或至少或约95％序列同一性的序列、基本上由其组成或由其组成。在示例性实施方式中，该肽或肽类似物的长度为8至20个氨基酸。在示例性实施方式中，肽或肽类似物的部分(A)是部分(B)的N-末端，具有0-10个插入氨基酸，特别是一个、两个、三个、四个或五个插入氨基酸的氨基酸。在示例性实施方式中，该肽或肽类似物(i)在37摄氏度下在鼠血浆中呈现至少10％的稳定性达60分钟，(ii)降低人原代脂肪细胞中的游离脂肪酸水平，(iii)或者(i)和(ii)两者。

表1

生物活性

在示例性方面，本公开的肽或肽类似物可降低脂肪细胞(例如人原代脂肪细胞)中的游离脂肪酸水平。在示例性方面，相对于对照，游离脂肪酸水平降低了至少或约5％。在示例性方面，相对于对照，游离脂肪酸水平降低了至少或约10％、至少或约20％、至少或约30％、至少或约40％、至少或约50％、至少或约60％、至少或约70％、至少或约80％、至少或约90％。在示例性方面，相对于对照，游离脂肪酸水平降低了90％以上。在示例性方面，相对于由MOTS-c肽(例如由SEQ ID NO：2组成的肽)实现或与其相关的程度，本公开的肽或肽类似物可降低脂肪细胞(例如人原代脂肪细胞)中的游离脂肪酸水平至更佳水平。在示例性方面，本公开的肽或肽类似物将脂肪细胞(例如人原代脂肪细胞)中的游离脂肪酸水平降低至至少或约10％、至少或约20％、至少或约30％、至少或约40％、至少或约50％、至少或约60％、至少或约70％、至少或约80％、至少或约90％的程度，低于由MOTS-c肽(例如由SEQ IDNO：2组成的肽)引起或与其相关的降低。测定脂肪细胞中游离脂肪酸水平的合适方法是已知的，在本文实施例2-5和17中描述了其一些示例性方法。在示例性方面，本公开的肽或肽类似物可降低脂肪细胞(例如人原代脂肪细胞)中的游离脂肪酸水平，如通过实施例2-5和17之一中描述的方法所测定。在示例性方面，本公开的肽或肽类似物可降低脂肪细胞(例如人原代脂肪细胞)中的游离脂肪酸水平，如通过实施例2-5和17之一中描述的单剂量测定法所测定。

在示例性方面，本公开的肽或肽类似物可降低哺乳动物(例如DIO小鼠、人)的体重、血糖水平和/或脂肪量。在示例性方面，相对于对照，哺乳动物中体重、血糖水平和/或脂肪量降低了至少或约5％。在示例性方面，相对于对照，哺乳动物中体重、血糖水平和/或脂肪量降低了至少或约10％、至少或约20％、至少或约30％、至少或约40％、至少或约50％、至少或约60％、至少或约70％、至少或约80％。在示例性方面，相对于由MOTS-c肽(例如由SEQID NO：2组成的肽)实现或与其相关的程度，本公开的肽或肽类似物可降低脂肪细胞(例如人原代脂肪细胞)中的体重、血糖水平和/或脂肪量至更佳水平。在示例性方面，本公开的肽或肽类似物将哺乳动物(例如DIO小鼠、人)的体重、血糖水平和/或脂肪量降低至至少或约10％、至少或约20％、至少或约30％、至少或约40％、至少或约50％、至少或约60％、至少或约70％、至少或约80％、至少或约90％的程度，低于由MOTS-c肽(例如由SEQ ID NO：2组成的肽)引起或与其相关的降低。在示例性方面，本公开的肽或肽类似物可降低血清甘油三酯水平和/或肝损伤的酶标记物(例如AST、ALT)的血清水平。在示例性方面，相对于对照，哺乳动物中血清甘油三酯水平和/或肝损伤的酶标记物(例如AST、ALT)的血清水平降低了至少或约5％。在示例性方面，相对于对照，哺乳动物中血清甘油三酯水平和/或肝损伤的酶标记物(例如AST、ALT)的血清水平降低了至少或约10％、至少或约20％、至少或约30％、至少或约40％、至少或约50％、至少或约60％、至少或约70％、至少或约80％、至少或约90％。在示例性方面，相对于对照，哺乳动物中血清甘油三酯水平和/或肝损伤的酶标记物(例如AST、ALT)的血清水平降低了90％以上。在示例性方面，相对于由MOTS-c肽(例如由SEQ ID NO：2组成的肽)实现或与其相关的程度，本公开的肽或肽类似物可降低血清甘油三酯水平和/或肝损伤的酶标记物(例如AST、ALT)的血清水平至更佳水平。在示例性方面，本公开的肽或肽类似物将血清甘油三酯水平和/或肝损伤的酶标记物(例如AST、ALT)的血清水平降低至至少或约10％、至少或约20％、至少或约30％、至少或约40％、至少或约50％、至少或约60％、至少或约70％、至少或约80％、至少或约90％的程度，低于由MOTS-c肽(例如由SEQ ID NO：2组成的肽)引起或与其相关的降低。测定哺乳动物的体重、血糖水平、脂肪量、血清甘油三酯水平和肝损伤酶标志物的血清水平的合适方法是本领域已知的，在本文实施例6-9和18-20中描述了其一些示例性方法。在示例性方面，本公开的肽或肽类似物可降低哺乳动物(例如DIO小鼠、人)的体重、血糖水平和/或脂肪量，如通过实施例6-9和18-20之一中描述的方法所测定，例如，以剂量15mg/kg/剂每天皮下或腹膜内注射一次或两次持续10天(实施例6)、以剂量15mg/kg/剂每天通过适当途径注射两次持续21天(实施例7)、以剂量5mg/kg/剂每天通过适当途径注射一次持续21天(实施例8)、以剂量15mg/kg/剂每天通过适当途径注射两次持续21天(实施例9)。

在示例性方面，本公开的肽或肽类似物在37摄氏度下在鼠血浆中呈现至少10％的稳定性60分钟。换句话说，在37摄氏度下在鼠血浆中温育60分钟后，肽或肽类似物的起始测定量的至少10％以完整状态(例如未降解、切割等)存在。在示例性方面，在37摄氏度下在血浆中肽或肽类似物呈现至少20％稳定性、至少或约30％稳定性、至少或约40％稳定性、至少或约50％稳定性、至少或约60％稳定性、至少或约70％稳定性、至少或约80％稳定性、或至少或约90％稳定性60分钟。测定血浆(包括鼠血浆)中肽稳定性的合适方法是本领域已知的，在本文实施例14-16中描述了其一些示例性方法。在示例性方面，如通过实施例14-16之一中描述的方法所测定，本公开的肽或肽类似物在37摄氏度下在鼠血浆中呈现至少10％的稳定性60分。在示例性方面，如通过实施例14中描述的单一肽剂量/浓度测定法所测定，本公开的肽或肽类似物在37摄氏度下在鼠血浆中呈现至少10％的稳定性60分钟。

肽长度

在示例性实施方式中，本公开的肽或肽类似物是包含通过肽键或其它共价连接的至少四个氨基酸的肽或肽类似物，如本文所述。在示例性方面，肽或肽类似物的长度为约4至约50个氨基酸。本文的肽特别设想了4至50个氨基酸的所有整数子范围。在示例性方面，肽或肽类似物的长度为约5至约35个氨基酸、长度为约5至约30个氨基酸、长度为约5至约25个氨基酸或长度为约5至约20个氨基酸。在示例性方面，肽或肽类似物的长度为约6至约35个氨基酸、长度为约7至约30个氨基酸、长度为约6至约25个氨基酸或长度为约6至约20个氨基酸。在示例性方面，肽或肽类似物的长度为约7至约35个氨基酸、长度为约7至约30个氨基酸、长度为约7至约25个氨基酸或长度为约7至约20个氨基酸。在示例性方面，肽或肽类似物的长度为约8至约35个氨基酸、长度为约8至约30个氨基酸、长度为约8至约25个氨基酸或长度为约8至约20个氨基酸。在示例性方面，肽的长度为约8至约17或18、或约9至约16或17个氨基酸。在示例性方面，肽的长度为约10至约17、或约12至约16或17、或约14至约16个氨基酸。在一些实施方式中，肽是5聚体、6聚体、7聚体、8聚体、9聚体、10聚体、11聚体、12聚体、13聚体、14聚体、15聚体、16聚体、17聚体、18聚体、19聚体或20聚体。

肽修饰

本公开的肽包括以任何方式和任何原因已进行修饰的肽，例如以：(1)降低对蛋白水解的易感性，(2)改变结合亲和力和(3)赋予或修饰其它物理化学或功能特性。例如，可以在序列中进行单个或多个氨基酸取代(例如等同的、保守的或非保守的取代、缺失或添加)。在示例性方面，本公开的肽或肽类似物包含表1中列出的序列或其修饰的序列。在本公开的示例性实施方式中，肽或肽类似物是脂化的(例如豆蔻酰化、棕榈酰化、与C₇-C₂₀脂质部分连接)，糖基化，酰胺化，羧化，磷酸化，酯化，酰化，乙酰化，环化，聚乙二醇化(例如与5-20kDaPEG连接、与5kDa PEG、12kDa PEG、20kDa PEG连接)为或转化为酸加成盐和/或任选二聚或聚合、或缀合，如本文进一步描述的。大小为200-4600分子量(mol wt)的PEG也可用于修饰本发明的肽。线性、分支和星形几何形状的PEG也可用于修饰本发明的肽。PEG600也称为PEG12。在本公开的示例性实施方式中，肽或肽类似物在N-末端乙酰化、在C-末端酰胺化和/或在Tyr残基上磷酸化。在示例性方面，肽或肽类似物连接至N-末端或内部残基侧链上的脂质部分。在示例性方面，肽或肽类似物直接连接至脂质部分。在示例性方面，肽或肽类似物间接连接至脂质部分。例如，脂质部分可通过接头连接至肽。该接头可以是氨基酸。在示例性方面，该脂质部分通过Glu残基连接(任选通过ε胺连接)至肽或肽类似物的Lys残基。本发明的修饰肽的示例见表1。

一些实施方式的肽优选为线性形式，但应理解的是，在环化不严重干扰肽特征的情况下，也可利用肽的环状形式并被设想作为本公开的实施方式。

在示例性方面，该肽或肽类似物是环化的。例如，该肽或肽类似物包含两个Cys残基，其硫原子参与二硫桥的形成。在示例性方面，该肽或肽类似物包含作为末端残基的Cys残基。用二硫桥或硫基环化修饰肽的合适方法描述于例如Jackson等人,J.Am.Chem.Soc.113:9391-9392(1991)以及Rudinger和Jost,Experientia 20:570-571(1964)。

可替换地，该肽或肽类似物可以通过肽环化的其它方式稳定，在Davies,J.Peptide.Sci.9:471-501(2003)中综述了该方式。该肽或肽类似物可以通过形成酰胺桥、硫醚桥、硫酯桥、脲桥(urea bridge)、氨基甲酸酯桥、磺酰胺桥、内酰胺桥、内酯桥等来稳定。例如，可以在C-末端和Cys残基的侧链之间形成硫酯桥。或者，可以通过具有硫醇的氨基酸(Cys)和羧酸(例如Asp、Glu)的氨基酸侧链形成硫酯。在另一种方法中，交联剂(如二羧酸，如软木酸(辛二酸)等)可以在氨基酸侧链的两个官能团(如游离氨基、羟基、硫醇基团及其组合)之间引入连接。在示例性实施方式中，该肽或肽类似物可通过内酰胺桥环化。可形成内酰胺桥的氨基酸对的示例包括但不限于鸟氨酸(Orn)和Glu、Lys和Asp、Lys和Glu、同型赖氨酸和Asp、Orn和同型谷氨酸、4-氨基Phe和Asp、同型赖氨酸和Glu、Lys和同型谷氨酸以及4-氨基Phe和Glu。在示例性实施方式中，该肽或肽类似物可通过内酯桥环化。可形成内酯桥的氨基酸对的示例包括但不限于Homoser-Homoglu、Tyr和Glu以及Tyr和Asp。

在示例性实施方式中，该肽或肽类似物包含表1中所示的序列、基本上由其组成或由其组成。在本公开的可替换实施方式中，该肽或肽类似物包含相对于表1中所示序列的修饰序列、基本上由其组成或由其组成。在示例性实施方式中，本公开的肽或肽类似物包含与表1中的任一个氨基酸序列具有至少50％序列同一性的氨基酸序列。在示例性实施方式中，本公开的肽或肽类似物包含与表1中的任一个氨基酸序列具有至少60％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％或大于90％序列同一性的氨基酸序列。在示例性方面，该肽或肽类似物包含相对于表1中所示序列的修饰序列、基本上由其组成或由其组成，其中，该肽或肽类似物包含表1所示的、具有一个或多个(例如2、3或4个)氨基酸取代的序列、基本上由其组成或由其组成。在示例性方面，该氨基酸取代是保守氨基酸取代或等同氨基酸取代。

该保守氨基酸取代是指用具有相似特性(例如大小、电荷、疏水性、亲水性和/或芳香性)的功能相似的氨基酸来替换肽中的氨基酸。以下六组各自含有彼此保守取代的氨基酸，见表2。

表2

第I组	丙氨酸(A)、丝氨酸(S)和苏氨酸(T)
		第II组	天冬氨酸(D)和谷氨酸(E)
第III组	天冬酰胺(N)和谷氨酰胺(Q)
		第IV组	精氨酸(R)和赖氨酸(K)
第V组	异亮氨酸(I)、亮氨酸(L)、蛋氨酸(M)和缬氨酸(V)
		第VI组	苯丙氨酸(F)、酪氨酸(Y)和色氨酸(W)

另外，在本文所用的术语“等同氨基酸取代”的含义内，在一个实施方式中，在下文所示的氨基酸组内，一个氨基酸可以取代另一个氨基酸：

其它氨基酸取代示于表3中。

表3

在示例性实施方式中，氨基酸取代不是保守氨基酸取代，例如是非保守氨基酸取代。该类通常包括相应的D-氨基酸、同型氨基酸、N烷基氨基酸、β氨基酸和其它非天然氨基酸。非保守氨基酸取代仍然属于上述等同氨基酸取代[例如极性的、非性的等]所确定的描述。“非保守氨基酸取代”也指将这些类中的一个成员取代来自另一类的成员。在进行这种改变时，根据某些实施方式，可以考虑氨基酸的亲水性指数。基于其疏水性和电荷特征，每种氨基酸已被指定了亲水性指数。该氨基酸和亲水性指数是：异亮氨酸(+4.5)；缬氨酸(+4.2)；亮氨酸(+3.8)；苯丙氨酸(+2.8)；半胱氨酸/胱氨酸(+2.5)；蛋氨酸(+1.9)；丙氨酸(+1.8)；甘氨酸(-0.4)；苏氨酸(-0.7)；丝氨酸(-0.8)；色氨酸(-0.9)；酪氨酸(-1.3)；脯氨酸(-1.6)；组氨酸(-3.2)；谷氨酸(-3.5)；谷氨酰胺(-3.5)；天冬氨酸(-3.5)；天冬酰胺(-3.5)；赖氨酸(-3.9)和精氨酸(-4.5)。本领域理解亲水性氨基酸指数在赋予蛋白质相互作用生物学功能方面的重要性(参见，例如Kyte等人,1982,J.Mol.Biol.157:105-131)。已知某些氨基酸可以取代具有相似的亲水指数或分数的其它氨基酸，并且仍然保留相似的生物活性。在基于亲水性指数进行改变时，在某些实施方式中，包括其亲水性指数在+2内的氨基酸的取代。在某些实施方式中，包括亲水性指数在+1内的那些氨基酸的取代，并且在某些实施方式中，包括亲水性指数在+0.5内的那些氨基酸的取代。本领域还应理解的是，可以基于亲水性有效地进行相似氨基酸的取代，特别是当由此产生的生物学功能蛋白质或肽旨在用于免疫学实施方式时，如本文所公开的。在某些实施方式中，蛋白质的最大局部平均亲水性(由其相邻氨基酸的亲水性决定)与其免疫原性和抗原性相关，即与蛋白质的生物学性质相关。以下亲水性值已被指定给这些氨基酸残基：精氨酸(+3.0)；赖氨酸(+3.0)；天冬氨酸(+3.0.+-.1)；谷氨酸(+3.0.+-.1)；丝氨酸(+0.3)；天冬酰胺(+0.2)；谷氨酰胺(+0.2)；甘氨酸(0)；苏氨酸(-0.4)；脯氨酸(-0.5.+-.1)；丙氨酸(-0.5)；组氨酸(-0.5)；半胱氨酸(-1.0)；蛋氨酸(-1.3)；缬氨酸(-1.5)；亮氨酸(-1.8)；异亮氨酸(-1.8)；酪氨酸(-2.3)；苯丙氨酸(-2.5)和色氨酸(-3.4)。在基于相似亲水性值进行改变时，在某些实施方式中，包括亲水性指数在+2内的氨基酸的取代，在某些实施方式中，包括亲水性指数在+1内的那些氨基酸的取代，并且在某些实施方式中，包括亲水性指数在+0.5内的那些氨基酸的取代。

以下提供了非保守氨基酸的示例。

丙氨酸非保守氨基酸的非限制性示例是：D-丙氨酸[Dala,(dA),a]、N-乙酰基-3-(3,4-二甲氧基苯基)-D-丙氨酸、N-Me-D-Ala-OH、N-Me-Ala-OH、H-β-Ala-β-萘、L-(-)-2-氨基-3-脲基丙酸、(R)-(+)-α-烯丙基丙氨酸、(S)-(-)-α-烯丙基丙氨酸、D-2-氨基丁酸、L-2-氨基丁酸、DL-2-氨基丁酸,2-氨基异丁酸、α-氨基异丁酸、(S)-(+)-2-氨基-4-苯基丁酸乙酯、苄基α-氨基异丁酸酯、Abu-OH、Aib-OH、β-(9-蒽基)-Ala-OH、β-(3-苯并噻吩基)-Ala-OH、β-(3-苯并噻吩基)-D-Ala-OH、Cha-OH、Cha-OMe、β-(2-呋喃基)-Ala-OH、β-(2-呋喃基)-D-Ala-OH、β-碘-Ala-OBzl、β-碘-D-Ala-OBzl、3-碘-D-Ala-OMe、β-碘-Ala-OMe、1-Nal-OH、D-1-Nal-OH、2-Nal-OH、D-2-Nal-OH、(R)-3-(2-萘基)-β-Ala-OH、(S)-3-(2-萘基)-β-Ala-OH、β-苯基-Phe-OH、3-(2-吡啶基)-Ala-OH、3-(3-吡啶基)-Ala-OH、3-(3-吡啶基)-D-Ala-OH、(S)-3-(3-吡啶基)-β-Ala-OH、3-(4-吡啶基)-Ala-OH、3-(4-吡啶基)-D-Ala-OH、β-(2-喹啉基)-Ala-OH、3-(2-喹啉基)-DL-Ala-OH、3-(3-喹啉基)-DL-Ala-OH、3-(2-喹噁啉基)-DL-Ala-OH、β-(4-噻唑基)-Ala-OH、β-(2-噻吩基)-Ala-OH、β-(2-噻吩基)-D-Ala-OH、β-(3-噻吩基)-Ala-OH、β-(3-噻吩基)-D-Ala-OH、3-氯-D-丙氨酸甲酯、N-[(4-氯苯基)磺酰基]-β-丙氨酸、3-环己基-D-丙氨酸、3-环戊基-DL-丙氨酸、(-)-3-(3,4-二羟基苯基)-2-甲基-L-丙氨酸、3,3-二苯基-D-丙氨酸、3,3-二苯基-L-丙氨酸、N-[(S)-(+)-1-(乙氧甲酰基)-3-苯基丙基]-L-丙氨酸、N-[1-(S)-(+)-乙氧甲酰基-3-苯基丙基]-L-丙氨酰羧酸酐、N-(3-氟苄基)丙氨酸、N-(3-吲哚基乙酰基)-L-丙氨酸、甲基(RS)-2-(氨甲基)-3-苯基丙酸甲酯、3-(2-氧代-1,2-二氢-4-喹啉基)丙氨酸、3-(1-吡唑基)-L-丙氨酸、3-(2-吡啶基)-D-丙氨酸、3-(2-吡啶基)-L-丙氨酸、3-(3-吡啶基)-L-丙氨酸、3-(4-吡啶基)-D-丙氨酸、3-(4-吡啶基)-L-丙氨酸、3-(2-喹啉基)-DL-丙氨酸、3-(4-喹啉基)-DL-丙氨酸、D-苯乙烯基丙氨酸、L-苯乙烯基丙氨酸、3-(2-噻吩基)-L-丙氨酸、3-(2-噻吩基)-DL-丙氨酸、3-(2-噻吩基)-DL-丙氨酸、3,3,3-三氟-DL-丙氨酸、N-甲基-L-丙氨酸、3-脲基丙酸、Aib-OH、Cha-OH、脱氢-Ala-OMe、脱氢-Ala-OH、D-2-Nal-OH、β-Ala-ONp、β-Homoala-OH、β-D-Homoala-OH、β-丙氨酸、β-丙氨酸乙酯、β-丙氨酸甲酯、(S)-二苯基-β-Homoala-OH、(R)-4-(4-吡啶基)-β-Homoala-OH、(S)-4-(4-吡啶基)-β-Homoala-OH、β-Ala-OH、(S)-二苯基-β-Homoala-OH、L-β-同型丙氨酸、(R)-4-(3-吡啶基)-β-Homoala-OH、α-甲基-α-萘基丙氨酸[Manap]、N-甲基-环己基丙氨酸[Nmchexa]、环己基丙氨酸[Chexa]、N-甲基-环戊基丙氨酸[Nmcpen]、环戊基丙氨酸[Cpen]、N-甲基-α--萘基丙氨酸[Nmanap]、α--萘基丙氨酸[Anap]、L-N-甲基丙氨酸[Nmala]、D-N-甲基丙氨酸[Dnmala]、α-甲基-环己基丙氨酸[Mchexa]、α-甲基-环己基丙氨酸[Mcpen]。每种可能性代表单独的实施方式。

精氨酸非保守氨基酸的非限制性示例是：同型精氨酸(hArg)、N-甲基精氨酸(NMeArg)、瓜氨酸、2-氨基-3-胍基丙酸、N-亚胺乙基-L-鸟氨酸、Νω-单甲基-L-精氨酸、Νω-硝基-L-精氨酸、D-精氨酸、2-氨基-3-脲基丙酸、Νω,ω-二甲基-L-精氨酸、Νω-硝基-D-精氨酸、L-α-甲基精氨酸[Marg]、D-α-甲基精氨酸[Dmarg]、LN-甲基精氨酸[Nmarg]、DN-甲基精氨酸[Dnmarg]、β-Homoarg-OH、L-同型精氨酸、N-(3-胍基丙基)甘氨酸[Narg]、及D-精氨酸[Darg,(dR),r]每种可能性代表单独的实施方式。

天冬酰胺非保守氨基酸的非限制性示例是：L-α-甲基天冬酰胺[Masn]、D-α-甲基天冬酰胺[Dmasn]、L-N-甲基天冬酰胺[Nmasn]、D-N-甲基天冬酰胺[Dnmasn]、N-(氨甲酰甲基)甘氨酸[Nasn]及D-天冬酰胺[Dasn,(dN),n]。每种可能性代表单独的实施方式。

天冬氨酸非保守氨基酸的非限制性示例是：L-α-甲基天冬氨酸酯[Masp]、D-α-甲基天冬氨酸酯[Dmasp]、L-N-甲基天冬氨酸[Nmasp]、D-N-甲基天冬氨酸酯[Dnmasp]、N-(羧甲基)甘氨酸[Nasp]及D-天冬氨酸[Dasp,(dD),d]。每种可能性代表单独的实施方式。

半胱氨酸非保守氨基酸的非限制性示例是：L-磺基丙氨酸、L-半胱亚磺酸、D-乙硫氨酸、S-(2-噻唑基)-L-半胱氨酸、DL-同型半胱氨酸、L-同型半胱氨酸、L-同型半胱氨酸、L-α-甲基半胱氨酸[Mcys]、D-α-甲基半胱氨酸[Dmcys]、L-N-甲基半胱氨酸[Nmcys]、D-N-甲基半胱氨酸[Dnmcys]、N-(巯甲基)甘氨酸[Ncys]及D-半胱氨酸[Dcys,(dC),c]。每种可能性代表单独的实施方式。

谷氨酸非保守氨基酸的非限制性示例是：γ-羧基-DL-谷氨酸、4-氟-DL-谷氨酸、β-谷氨酸、L-β-同型谷氨酸、L-α-甲基谷氨酸酯[Mglu]、D-α-甲基谷氨酸[Dmglu]、L-N-甲基谷氨酸[Nmglu]、D-N-甲基谷氨酸酯[Dnmglu]、N-(2-羧乙基)甘氨酸[Nglu]及D-谷氨酸[Dglu,(dE),e]。每种可能性代表单独的实施方式。

谷氨酰胺非保守氨基酸的非限制性示例是：Cit-OH、D-瓜氨酸、巯基-L-瓜氨酸、β-Gln-OH、L-β-同型谷氨酰胺、L-α-甲基谷氨酰胺[Mgln]、D-α-甲基谷氨酰胺[Dmgln]、L-N-甲基谷氨酰胺[Nmgln]、D-N-甲基谷氨酰胺[Dnmgln]、N-(2-氨基甲酰基乙基)甘氨酸[Ngln]及D-谷氨酰胺[Dgln,(dQ),q]。每种可能性代表单独的实施方式。

甘氨酸非保守氨基酸的非限制性示例是：tBu-Gly-OH、D-烯丙基甘氨酸、N-[二(甲硫基)亚甲基]甘氨酸甲基酯、Chg-OH、D-Chg-OH、D-环丙基甘氨酸、L-环丙基甘氨酸、(R)-4-氟苯基甘氨酸、(S)-4-氟苯基甘氨酸、亚氨基二乙酸、(2-茚满基)-Gly-OH、(±)-α-膦酰基甘氨酸三甲酯、D-炔丙基甘氨酸、炔丙基-Gly-OH、(R)-2-噻吩基甘氨酸、(S)-2-噻吩基甘氨酸、(R)-3-噻吩基甘氨酸、(S)-3-噻吩基甘氨酸、2-(4-三氟甲基-苯基)-DL-甘氨酸、(2S,3R,4S)-α-(羧基环丙基)甘氨酸、N-(氯乙酰基)甘氨酸乙酯、(S)-(+)-2-氯苯基甘氨酸甲酯、N-(2-氯苯基)-N-(甲磺酰基)甘氨酸、D-α-环己基甘氨酸、L-α-环丙基甘氨酸、而-叔丁基-亚氨基二羧酸酯、乙酰氨基氰乙酸乙酯、N-(2-氟苯基)-N-(甲磺酰基)甘氨酸、N-(4-氟苯基)-N-(甲磺酰基)甘氨酸、N-(2-亚糠基乙酰基)甘氨酸甲酯、N-(2-糠酰基)甘氨酸、N-(2-羟乙基)亚氨基二乙酸、N-(4-羟基苯基)甘氨酸、亚氨基二乙酸、N-月桂酰肌氨酸钠盐、L-α-新戊基甘氨酸、N-(膦酰基甲基)甘氨酸、D-炔丙基甘氨酸、L-C-炔丙基甘氨酸、肌氨酸、N,N-二甲基甘氨酸、N,N-二甲基甘氨酸乙酯、D-Chg-OH、α-膦酰基甘氨酸三甲酯、N-环丁基甘氨酸[Ncbut]、L-α-甲基乙基甘氨酸[Metg]、N-环庚基甘氨酸[Nchep]、L-α-甲基-异丁基甘氨酸[Mtbug]、N-甲基甘氨酸[Nmgly]、L-N-甲基-乙基甘氨酸[Nmetg]、L-乙基甘氨酸[Etg]、α,α-二乙基甘氨酸[Deg]、L-N-甲基-叔丁基甘氨酸[Nmtbug]、L-叔丁基甘氨酸[Tbug]、N-环己基甘氨酸[Nchex]、N-环癸基甘氨酸[Ncdec]、N-环十二烷基甘氨酸[Ncdod]、N-环辛基甘氨酸[Ncoct]、N-环丙基甘氨酸[Ncpro]、N-环十一烷基甘氨酸[Ncund]、N-(2-氨基乙基)甘氨酸[Naeg]、N-(N-(2,2-二苯基乙基)二苯基乙基)甘氨酸[Nnbhm]、N-(2,2-氨甲酰甲基-甘氨酸[Nbhm]、N-(N-(3,3-二苯基丙基)二苯基丙基)甘氨酸[Nnbhe]及N-(3,3-氨甲酰甲基-甘氨酸[Nbhe]。每种可能性代表单独的实施方式。

组氨酸非保守氨基酸的非限制性示例是：L-α-甲基组氨酸[Mhis]、D-α-甲基组氨酸[Dmhis]、L-N-甲基组氨酸[Nmhis]、D-N-甲基组氨酸[Dnmhis]、N-(咪唑基乙基)甘氨酸[Nhis]及D-组氨酸[Dhis,(dH),h]。每种可能性代表单独的实施方式。

异亮氨酸非保守氨基酸的非限制性示例是：N-甲基-L-异亮氨酸[Nmile]、N-(3-吲哚基乙酰基)-L-异亮氨酸、别异亮氨酸、D-别异亮氨酸、L-β-同型异亮氨酸、L-α-甲基异亮氨酸[Mile]、D-α-甲基异亮氨酸[Dmile]、D-N-甲基异亮氨酸[Dnmile]、N-(1-甲基丙基)甘氨酸[Nile]及D-异亮氨酸[Dile,(dD),i]。每种可能性代表单独的实施方式。

亮氨酸非保守氨基酸的非限制性示例是：D-亮氨酸[Dleu,(dL),l]、环亮氨酸、DL-亮氨酸、N-甲酰基-Leu-OH、D-叔亮氨酸、L-叔亮氨酸、DL-叔亮氨酸、L-叔亮氨酸甲酯、5,5,5-三氟-DL-亮氨酸、D-β-Leu-OH、L-β-亮氨酸、DL-β-亮氨酸、L-β-同型亮氨酸、DL-β-同型亮氨酸、L-N-甲基-亮氨酸[Nmleu]、D-N-甲基-亮氨酸[Dnmleu]、L-α-甲基-亮氨酸[Mleu]、D-α-甲基-亮氨酸[Dmleu]、N-(2-甲基丙基)甘氨酸[Nleu]、D-亮氨酸[Dleu，l]、D-正亮氨酸、L-正亮氨酸、DL-正亮氨酸、L-N-甲基正亮氨酸[Nmnle]及L-正亮氨酸[Nle]。每种可能性代表单独的实施方式。

赖氨酸非保守氨基酸的非限制性示例是：DL-5-羟基赖氨酸、(5R)-5-羟基-L-赖氨酸、β-Lys-OH、L-β-同型赖氨酸、L-α-甲基-赖氨酸[Mlys]、D-α-甲基-赖氨酸[Dmlys]、L-N-甲基-赖氨酸[Nmlys]、D-N-甲基-赖氨酸[Dnmlys]、N-(4-氨基丁基)甘氨酸[Nlys]及D-赖氨酸[Dlys,(dK),k]。每种可能性代表单独的实施方式。

蛋氨酸非保守氨基酸的非限制性示例是：L-β-同型蛋氨酸、DL-β-同型蛋氨酸、L-α-甲基蛋氨酸[Mmet]、D-α-甲基蛋氨酸[Dmmet]、L-N-甲基蛋氨酸[Nmmet]、D-N-甲基蛋氨酸[Dnmmet]、N-(2-甲硫基乙基)甘氨酸[Nmet]及D-蛋氨酸[Dmet,(dM),m]。每种可能性代表了单独的实施方式。

苯丙氨酸非保守氨基酸的非限制性示例为：N-乙酰基-2-氟-DL-苯丙氨酸、N-乙酰基-4-氟-DL-苯丙氨酸、4-氨基-L-苯丙氨酸、3-[3,4-双(三氟甲基)苯基]-L-丙氨酸、Bpa-OH、D-Bpa-OH、4-叔丁基-Phe-OH、4-叔丁基-D-Phe-OH、4-(氨基)-L-苯丙氨酸、rac-β2-同型苯丙氨酸、2-甲氧基-L-苯丙氨酸、(S)-4-甲氧基-β-Phe-OH、2-硝基-L-苯丙氨酸、五氟-D-苯丙氨酸、五氟-L-苯丙氨酸、Phe(4-Br)-OH、D-Phe(4-Br)-OH、Phe(2-CF₃)-OH、D-Phe(2-CF₃)-OH、Phe(3-CF₃)-OH、D-Phe(3-CF₃)-OH、Phe(4-CF₃)-OH、D-Phe(4-CF₃)-OH、Phe(2-Cl)-OH、D-Phe(2-Cl)-OH、Phe(2,4-Cl₂)-OH、D-Phe(2,4-Cl₂)-OH、D-Phe(3-Cl)-OH、Phe(3,4-Cl₂)-OH、Phe(4-Cl)-OH、D-Phe(4-Cl)-OH、Phe(2-CN)-OH、D-Phe(2-CN)-OH、D-Phe(3-CN)-OH、Phe(4-CN)-OH、D-Phe(4-CN)-OH、Phe(2-Me)-OH、D-Phe(2-Me)-OH、Phe(3-Me)-OH、D-Phe(3-Me)-OH、Phe(4-Me)-OH、Phe(4-NH₂)-OH、Phe(4-NO₂)-OH、Phe(2-F)-OH、D-Phe(2-F)-OH、Phe(3-F)-OH、D-Phe(3-F)-OH、Phe(3,4-F₂)-OH、D-Phe(3,4-F₂)-OH、Phe(3,5-F₂)-OH、Phe(4-F)-OH、D-Phe(4-F)-OH、Phe(4-I)-OH、D-3,4,5-三氟苯丙氨酸、对溴-DL-苯丙氨酸、4-溴-L-苯丙氨酸、β-苯基-D-苯丙氨酸、4-氯-L-苯丙氨酸、DL-2,3-二氟苯丙氨酸、DL-3,5-二氟苯丙氨酸、3,4-二羟基-L-苯丙氨酸、3-(3,4-二甲氧基苯基)-L-丙氨酸、N-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-2-甲氧基-L-苯丙氨酸、邻氟-DL-苯丙氨酸、间氟-L-苯丙氨酸、间氟-DL-苯丙氨酸、对氟-L-苯丙氨酸、对氟-DL-苯丙氨酸、4-氟-D-苯丙氨酸、2-氟-L-苯丙氨酸甲酯、对氟-DL-Phe-OMe、D-3-溴苯丙氨酸、D-4-溴苯丙氨酸、L-β-(6-氯-4-吡啶基)丙氨酸、D-3,5-二氟苯丙氨酸、L-3-氟苯丙氨酸、L-4-氟苯丙氨酸、L-β-(1H-5-吲哚基)丙氨酸、2-硝基-L-苯丙氨酸、五氟-L-苯丙氨酸、phe(3-br)-oh、Phe(4-Br)-OH、Phe(2-CF₃)-OH、D-Phe(2-CF₃)-OH、Phe(3-CF₃)-OH、D-Phe(3-CF₃)-OH、Phe(4-CF₃)-OH、D-Phe(4-CF₃)-OH、Phe(2-Cl)-OH、D-Phe(2-Cl)-OH、Phe(2,4-Cl₂)-OH、D-Phe(2,4-Cl₂)-OH、Phe(3,4-Cl₂)-OH、D-Phe(3,4-Cl₂)-OH、Phe(4-Cl)-OH、D-Phe(4-Cl)-OH、Phe(2-CN)-OH、D-Phe(2-CN)-OH、D-Phe(3-CN)-OH、Phe(4-CN)-OH、Phe(2-Me)-OH、Phe(3-Me)-OH、D-Phe(3-Me)-OH、Phe(4-NO₂)-OH、D-Phe(4-NO₂)-OH、D-Phe(2-F)-OH、Phe(3-F)-OH、D-Phe(3-F)-OH、Phe(3,4-F₂)-OH、Phe(3,5-F₂)-OH、D-Phe(4-F)-OH、Phe(4-I)-OH、D-Phe(4-I)-OH、4-(膦酰甲基)-Phe-OH、L-4-三氟甲基苯丙氨酸、3,4,5-三氟-D-苯丙氨酸、L-3,4,5-三氟苯丙氨酸、6-羟基-DL-DOPA、4-(羟甲基)-D-苯丙氨酸、N-(3-吲哚基乙酰基)-L-苯丙氨酸、对碘-D-苯丙氨酸、4-碘-L-苯丙氨酸、α-甲基-D-苯丙氨酸、α-甲基-L-苯丙氨酸、α-甲基-DL-苯丙氨酸、α-甲基-DL-苯丙氨酸甲酯、4-硝基-D-苯丙氨酸、4-硝基-L-苯丙氨酸、4-硝基-DL-苯丙氨酸、(S)-(+)-4-硝基苯丙氨酸甲酯、2-(三氟甲基)-D-苯丙氨酸、2-(三氟甲基)-L-苯丙氨酸、3-(三氟甲基)-D-苯丙氨酸、3-(三氟甲基)-L-苯丙氨酸、4-(三氟甲基)-D-苯丙氨酸、3,3',5-三碘-L-甲状腺素、(R)-4-溴-Phe-OH N-乙酰基-DL-β-苯丙氨酸、(S)-4-溴-β-Phe-OH、(R)-4-氯-β-同型phe-OH、(S)-4-氯-β-同型phe-OH、(R)-4-氯-β-Phe-OH、(S)-4-氯-β-Phe-OH、(S)-2-氰基-β-同型phe-OH、(R)-4-氰基-β-同型phe-OH、(S)-4-氰基-β-同型phe-OH、(R)-3-氰基-β-Phe-OH、(R)-4-氰基-β-Phe-OH、(S)-4-氰基-β-Phe-OH、(R)-3,4-二甲氧基-β-Phe-OH、(S)-3,4-二甲氧基-β-Phe-OH、(R)-4-氟-β-Phe-OH、(S)-4-氟-β-Phe-OH、(S)-4-碘-β-同型phe-OH、(S)-3-氰基-β-同型phe-OH、(S)-3,4-二氟-β-同型phe-OH、(R)-4-氟-β-同型phe-OH、(S)-β2-同型苯丙氨酸、(R)-3-甲氧基-β-Phe-OH、(S)-3-甲氧基-β-Phe-OH、(R)-4-甲氧基-β-Phe-OH、(S)-4-甲基-β-同型phe-OH、(R)-2-甲基-β-Phe-OH、(S)-2-甲基-β-Phe-OH、(R)-3-甲基-β-Phe-OH、(S)-3-甲基-β-Phe-OH、(R)-4-甲基-β-Phe-OH、(S)-4-甲基-β-Phe-OH、β-Phe-OH、D-β-Phe-OH、(S)-2-(三氟甲基)-β-同型phe-OH、(S)-2-(三氟甲基)-β-同型phe-OH、(S)-3-(三氟甲基)-β-同型phe-OH、(R)-4-(三氟甲基)-β-同型phe-OH、(S)-2-(三氟甲基)-β-Phe-OH、(R)-3-(三氟甲基)-β-Phe-OH、(S)-3-(三氟甲基)-β-Phe-OH、(R)-4-(三氟甲基)-β-Phe-OH、(S)-4-(三氟甲基)-β-Phe-OH、β-同型phe-OH、D-β-同型phe-OH、(S)-2-甲基-β-同型phe-OH、(S)-3-甲基-β-同型phe-OH、β-Phe-OH、β-D-Phe-OH、(S)-3-(三氟甲基)-β-同型phe-OH、L-β-同型苯丙氨酸、DL-β-同型苯丙氨酸、DL-β-苯丙氨酸、DL-同型苯丙氨酸甲酯、D-同型苯丙氨酸、L-同型苯丙氨酸、DL-同型苯丙氨酸、D-同型苯丙氨酸乙酯、(R)-β²-同型苯丙氨酸、L-α-甲基-同型苯丙氨酸[Mhphe]、L-α-甲基苯丙氨酸[Mphe]、D-a-甲基苯丙氨酸[Dmphe]、L-N-甲基-同型苯丙氨酸[Nm phe]、L-同型苯丙氨酸[Hphe]、L-N-甲基苯丙氨酸[Nmphe]、D-N-甲基苯丙氨酸[Dnmphe]、N-苄基甘氨酸[Nphe]及D-苯丙氨酸[Dphe,(dF),f]，每种可能性代表单独的实施方式。

脯氨酸非保守氨基酸的非限制性示例为：同型脯氨酸(hPro)、(4-羟基)Pro(4HyP)、(3-羟基)Pro(3HyP)、γ-苄基-脯氨酸、γ-(2-氟-苄基)-脯氨酸、γ-(3-氟-苄基)-脯氨酸、γ-(4-氟-苄基)-脯氨酸、γ-(2-氯-苄基)-脯氨酸、γ-(3-氯-苄基)-脯氨酸、γ-(4-氯-苄基)-脯氨酸、γ-(2-溴-苄基)-脯氨酸、γ-(3-溴-苄基)-脯氨酸、γ-(4-溴-苄基)-脯氨酸、γ-(2-甲基-苄基)-脯氨酸、γ-(3-甲基-苄基)-脯氨酸、γ-(4-甲基-苄基)-脯氨酸、γ-(2-硝基-苄基)-脯氨酸、γ-(3-硝基-苄基)-脯氨酸、γ-(4-硝基-苄基)-脯氨酸、γ-(l-萘基甲基)-脯氨酸、γ-(2-萘基甲基)-脯氨酸、γ-(2,4-二氯-苄基)-脯氨酸、γ-(3,4-二氯-苄基)-脯氨酸、γ-(3,4-二氟-苄基)-脯氨酸、γ-(2-三氟-甲基-苄基)-脯氨酸、γ-(3-三氟-甲基-苄基)-脯氨酸、γ-(4-三氟-甲基-苄基)-脯氨酸、γ-(2-氰基-苄基)-脯氨酸、γ-(3-氰基-苄基)-脯氨酸、γ-(4-氰基-苄基)-脯氨酸、γ-(2-碘-苄基)-脯氨酸、γ-(3-碘-苄基)-脯氨酸、γ-(4-碘-苄基)-脯氨酸、γ-(3-苯基-烯丙基-苄基)-脯氨酸、γ-(3-苯基-丙基-苄基)-脯氨酸、γ-(4-叔丁基-苄基)-脯氨酸、γ-二苯甲基-脯氨酸、γ-(4-联苯基-甲基)-脯氨酸、γ-(4-噻唑基-甲基)-脯氨酸、γ-(3-苯并噻吩基-甲基)-脯氨酸、γ-(2-噻吩基-甲基)-脯氨酸、γ-(3-噻吩基-甲基)-脯氨酸、γ-(2-呋喃基-甲基)-脯氨酸、γ-(2-吡啶基-甲基)-脯氨酸、γ-(3-吡啶基-甲基)-脯氨酸、γ-(4-吡啶基-甲基)-脯氨酸、γ-烯丙基-脯氨酸、γ-丙炔基-脯氨酸、α-经修饰脯氨酸残基、哌啶酸、氮杂环丁烷-3-羧酸、L-β-同型脯氨酸、L-β³-同型脯氨酸、L-β-同型羟基脯氨酸、羟基脯氨酸[Hyp]、L--甲基脯氨酸[Mpro]、D--甲基脯氨酸[Dmpro]、L-N-甲基脯氨酸[Nmpro]、D-N-甲基脯氨酸[Dnmpro]及D-脯氨酸[Dpro,(dP),p]。每种可能性代表单独的实施方式。

丝氨酸非保守氨基酸的非限制性示例是：(2R,3S)-3-苯基异丝氨酸、D-环丝氨酸、L-异丝氨酸、DL-异丝氨酸、DL-3-苯基丝氨酸、L-β-同型丝氨酸、D-同型丝氨酸、D-同型丝氨酸、L-3-同型丝氨酸、L-同型丝氨酸、L-α-甲基丝氨酸[Mser]、D-α-甲基丝氨酸[Dmser]、L-N-甲基丝氨酸[Nmser]、D-N-甲基丝氨酸[Dnmser]、D-丝氨酸[Dser,(dS),s]、N-(羟甲基)甘氨酸[Nser]及磷酸丝氨酸[pSer]。每种可能性代表单独的实施方式。

苏氨酸非保守氨基酸的非限制性示例是：L-别苏氨酸、D-甲状腺素、L-β-同型苏氨酸、L-α-甲基苏氨酸[Mthr]、D-α-甲基苏氨酸[Dmthr]、L-N-甲基苏氨酸[Nmthr]、D-N-甲基苏氨酸[Dnmthr]、D-苏氨酸[Dthr,(dT),t]、N-(1-羟乙基)甘氨酸[Nthr]及磷酸苏氨酸[pThr]。每种可能性代表单独的实施方式。

色氨酸非保守氨基酸的非限制性示例是：5-氟-L-色氨酸、5-氟-DL-色氨酸、5-羟基-L-色氨酸、5-甲氧基-DL-色氨酸、L-红豆碱(L-abrine)、5-甲基-DL-色氨酸、H-Tpi-OMe、β-Homotrp-OMe、L-β-同型色氨酸、L-α-甲基色氨酸[Mtrp]、D-α-甲基色氨酸[Dmtrp]、L-N-甲基色氨酸[Nmtrp]、D-N-甲基色氨酸[Dnmtrp]、N-(3-吲哚基乙基)甘氨酸[Nhtrp]、D-色氨酸[Dtrp,(dW),w]。每种可能性代表单独的实施方式。

酪氨酸非保守氨基酸的非限制性示例是：3,5二碘酪氨酸(3,5-dITyr)、3,5二溴酪氨酸(3,5-dBTyr)、同型酪氨酸、D-酪氨酸、3-氨基-L-酪氨酸、3-氨基-D-酪氨酸、3-碘-L-酪氨酸、3-碘-D-酪氨酸、3-甲氧基-L-酪氨酸、3-甲氧基-D-酪氨酸、L-甲状腺素、D-甲状腺素、L-甲状腺原氨酸、D-甲状腺原氨酸、O-甲基-L-酪氨酸、O-甲基-D-酪氨酸、D-甲状腺原氨酸、O-乙基-L-酪氨酸、O-乙基-D-酪氨酸、3,5,3'-三碘-L-甲状腺原氨酸、3,5,3'-三碘-D-甲状腺原氨酸、3,5-二碘-L-甲状腺原氨酸、3,5-二碘-D-甲状腺原氨酸、D-间酪氨酸、L-间酪氨酸、D-邻酪氨酸、L-邻酪氨酸、苯丙氨酸、经取代苯丙氨酸、N-硝基苯丙氨酸、对硝基苯丙氨酸、3-氯-Dtyr-oh、Tyr(3,5-diI)、3-氯-L-酪氨酸、Tyr(3-NO₂)-OH、Tyr(3,5-diI)-OH、N-Me-Tyr-OH、α-甲基-DL-酪氨酸、3-硝基-L-酪氨酸、DL-o-酪氨酸、β-Homotyr-OH、(R)-β-Tyr-OH、(S)-β-Tyr-OH、L-α-甲基酪氨酸[Mtyr]、D-α-甲基酪氨酸[Dmtyr]、L-N-甲基酪氨酸[Nmtyr]、D-N-甲基酪氨酸[Dnmtyr]、D-酪氨酸[Dtyr,(dY),y]、O-甲基-酪氨酸及磷酸酪氨酸[pTyr]。每种可能性代表单独的实施方式。

缬氨酸非保守氨基酸的非限制性示例是：3-氟-DL-缬氨酸、4,4,4,4',4',4'-六氟-DL-缬氨酸、D-缬氨酸[Dval,(dV),v]、N-Me-Val-OH[Nmval]、N-Me-Val-OH、L-α-甲基缬氨酸[Mval]、D-α-甲基缬氨酸[Dmval]、(R)-(+)-α-甲基缬氨酸、(S)-(-)-α-甲基缬氨酸及D-N-甲基缬氨酸[Dnmval]。每种可能性代表单独的实施方式。

可取代为非保守替代品的其它非天然氨基酸包括：鸟氨酸及其修饰：D-鸟氨酸[Dorn]、L-鸟氨酸[Orn]、DL-鸟氨酸、L-α-甲基鸟氨酸[Morn]、D-α-甲基鸟氨酸[Dmorn]、L-N-甲基鸟氨酸[Nmorn]、D-N-甲基鸟氨酸[Dnmorn]及N-(3-氨基丙基)甘氨酸[Norn]。每种可能性代表单独的实施方式。

脂环族氨基酸：L-2,4-二氨基丁酸、L-2,3-二氨基丙酸、N-Me-Aib-OH、(R)-2-(氨基)-5-己炔酸、哌啶-2-羧酸、氨基降冰片基-羧酸酯[Norb]、α-氨基丁酸[Abu]、氨基环丙烷-羧酸酯[Cpro]、(顺)-3-氨基二环[2.2.1]庚烷-2-羧酸、外-顺-3-氨基二环[2.2.1]庚-5-烯-2-羧酸、1-氨基-1-环丁烷羧酸、顺-2-氨基环庚烷羧酸、1-氨基环己烷羧酸、顺-2-氨基环己烷羧酸、反-2-氨基环己烷羧酸、顺-6-氨基-3-环己烯-1-羧酸、2-(1-氨基环己基)乙酸、顺-2-氨基-1-环辛烷羧酸、顺-2-氨基-3-环辛烯-1-羧酸、(1R,2S)-(-)-2-氨基-1-环戊烷羧酸、(1S,2R)-(+)-2-氨基-1-环戊烷羧酸、顺-2-氨基-1-环戊烷羧酸、2-(1-氨基环戊基)乙酸、顺-2-氨基-2-甲基环己烷羧酸、顺-2-氨基-2-甲基环戊烷羧酸、3-氨基-3-(4-硝基苯基)丙酸、3-氮杂环丁烷羧酸、amchc-oh、1-氨基环丁烷羧酸、1-(氨基)环己烷羧酸、顺-2-(氨基)-环己烷羧酸、反-2-(氨基)-环己烷羧酸、顺-4-(氨基)环己烷羧酸、反-4-(氨基)环己烷羧酸、(±)-顺-2-(氨基)-3-环己烯-1-羧酸、(±)-顺-6-(氨基)-3-环己烯-1-羧酸、2-(1-氨基环己基)乙酸、顺-[4-(氨基)环己基]乙酸、1-(氨基)环戊烷羧酸、(±)-顺-2-(氨基)环戊烷羧酸、(1R,4S)-(+)-4-(氨基)-2-环戊烯-1-羧酸、(±)-顺-2-(氨基)-3-环戊烯-1-羧酸、2-(1-氨基环戊基)乙酸、1-(氨基)环丙烷羧酸、1-氨基环丙烷羧酸乙酯、1,2-反-achec-oh、1-(氨基)环丁烷羧酸、1-(氨基)环己烷羧酸、顺-2-(氨基)-环己烷羧酸、反-2-(氨基)环己烷羧酸、顺-4-(氨基)环己烷羧酸、反-4-(氨基)环己烷羧酸、顺-[4-(氨基)环己基]乙酸、1-(氨基)环戊烷羧酸、(1R,4S)-(+)-4-(氨基)-2-环戊烯-1-羧酸、(1S,4R)-(-)-4-(氨基)-2-环戊烯-1-羧酸、1-(氨基)环丙烷羧酸、反-4-(氨基甲基)环己烷羧酸、β-Dab-OH、3-氨基-3-(3-溴苯基)丙酸、3-氨基丁酸、顺-2-氨基-3-环戊烯-1-羧酸、DL-3-氨基异丁酸、(R)-3-氨基-2-苯基丙酸、(±)-3-(氨基)-4-(4-联苯基)丁酸、顺-3-(氨基)环己烷羧酸、(1S,3R)-(+)-3-(氨基)环戊烷羧酸、(2R,3R)-3-(氨基)-2-羟基-4-苯基丁酸、(2S,3R)-3-(氨基)-2-羟基-4-苯基丁酸、2-(氨基甲基)苯基乙酸、(R)-3-(氨基)-2-甲基丙酸、(S)-3-(氨基)-2-甲基丙酸、(R)-3-(氨基)-4-(2-萘基)丁酸、(S)-3-(氨基)-4-(2-萘基)丁酸、(R)-3-(氨基)-5-苯基戊酸、(R)-3-(氨基)-2-苯基丙酸、3-(苄基氨基)丙酸乙酯、顺-3-(氨基)环己烷羧酸、(S)-3-(氨基)-5-己烯酸、(R)-3-(氨基)-2-甲基丙酸、(S)-3-(氨基)-2-甲基丙酸、(R)-3-(氨基)-4-(2-萘基)丁酸、(S)-3-(氨基)-4-(2-萘基)丁酸、(R)-(-)-吡咯烷-3-羧酸、(S)-(+)-吡咯烷-3-羧酸、N-甲基-γ-氨基丁酸酯[Nmgabu]、γ-氨基丁酸[Gabu]、N-甲基-α-氨基-α-甲基丁酸酯[Nmaabu]、α-氨基-α-甲基丁酸酯[Aabu]、N-甲基-α-氨基异丁酸酯[Nmaib]、α-氨基异丁酸[Aib]、α-甲基-y-氨基丁酸酯[Mgabu]。每种可能性代表单独的实施方式。

苯基甘氨酸及其修饰：Phg-OH、D-Phg-OH、2-(哌嗪基)-2-(3,4-二甲氧基苯基)乙酸、2-(哌嗪基)-2-(2-氟苯基)乙酸、2-(4-哌嗪基)-2-(3-氟苯基)乙酸、2-(4-哌嗪基)-2-(4-甲氧基苯基)乙酸、2-(4-哌嗪基)-2-(3-吡啶基)乙酸、2-(4-哌嗪基)-2-[4-(三氟甲基)苯基]乙酸、L-(+)-2-氯苯基甘氨酸、(±)-2-氯苯基甘氨酸、(±)-4-氯苯基甘氨酸、(R)-(-)-2-(2,5-二羟苯基)甘氨酸、(R)-(-)-N-(3,5-二硝基苯甲酰基)-α-苯基甘氨酸、(S)-(+)-N-(3,5-二硝基苯甲酰基)-α-苯基甘氨酸、2,2-二苯基甘氨酸、2-氟-DL-α-苯基甘氨酸、4-氟-D-α-苯基甘氨酸、4-羟基-D-苯基甘氨酸、4-羟基-L-苯基甘氨酸、2-苯基甘氨酸、D-(-)-α-苯基甘氨酸、D-(-)-α-苯基甘氨酸、DL-α-苯基甘氨酸、L-(+)-α-苯基甘氨酸、N-苯基甘氨酸、(R)-(-)-2-苯基甘氨酸甲酯、(S)-(+)-2-苯基甘氨酸甲酯、2-苯基甘氨腈盐酸盐、α-苯基甘氨腈、3-(三氟甲基)-DL-苯基甘氨酸及4-(三氟甲基)-L-苯基甘氨酸。每种可能性代表单独的实施方式。

青霉胺及其修饰：N-乙酰基-D-青霉胺、D-青霉胺、L-青霉胺[Pen]，DL-青霉胺、α–甲基青霉胺[Mpen]、N-甲基青霉胺[Nmpen]。每种可能性代表单独的实施方式。

β-同型吡咯烷。每种可能性代表单独的实施方式。

芳香族氨基酸：3-乙酰氨基苯甲酸、4-乙酰氨基苯甲酸、4-乙酰氨基-2-甲基苯甲酸、N-乙酰基邻氨基苯甲酸、3-氨基苯甲酸、3-氨基苯甲酸盐酸盐、4-氨基苯甲酸、4-氨基苯甲酸、4-氨基苯甲酸、4-氨基苯甲酸、4-氨基苯甲酸、4-氨基苯甲酸、2-氨基二苯甲酮-2′-羧酸、2-氨基-4-溴苯甲酸、2-氨基-5-溴苯甲酸、3-氨基-2-溴苯甲酸、3-氨基-4-溴苯甲酸、3-氨基-5-溴苯甲酸、4-氨基-3-溴苯甲酸、5-氨基-2-溴苯甲酸、2-氨基-3-溴-5-甲基苯甲酸、2-氨基-3-氯苯甲酸、2-氨基-4-氯苯甲酸、2-氨基-5-氯苯甲酸、2-氨基-5-氯苯甲酸、2-氨基-6-氯苯甲酸、3-氨基-2-氯苯甲酸、3-氨基-4-氯苯甲酸、4-氨基-2-氯苯甲酸、4-氨基-3-氯苯甲酸、5-氨基-2-氯苯甲酸、5-氨基-2-氯苯甲酸、4-氨基-5-氯-2-甲氧基苯甲酸、2-氨基-5-氯-3-甲基苯甲酸、3-氨基-2,5-二氯苯甲酸、4-氨基-3,5-二氯苯甲酸、2-氨基-4,5-二甲氧基苯甲酸、4-(2-氨基乙基)苯甲酸盐酸盐、2-氨基-4-氟苯甲酸、2-氨基-5-氟苯甲酸、2-氨基-6-氟苯甲酸、4-氨基-2-氟苯甲酸、2-氨基-5-羟基苯甲酸、3-氨基-4-羟基苯甲酸、4-氨基-3-羟基苯甲酸、2-氨基-5-碘苯甲酸、5-氨基间苯二甲酸、2-氨基-3-甲氧基苯甲酸、2-氨基-4-甲氧基苯甲酸、2-氨基-5-甲氧基苯甲酸、3-氨基-2-甲氧基苯甲酸、3-氨基-4-甲氧基苯甲酸、3-氨基-5-甲氧基苯甲酸、4-氨基-2-甲氧基苯甲酸、4-氨基-3-甲氧基苯甲酸、5-氨基-2-甲氧基苯甲酸、2-氨基-3-甲基苯甲酸、2-氨基-5-甲基苯甲酸、2-氨基-6-甲基苯甲酸、3-(氨基甲基)苯甲酸、3-氨基-2-甲基苯甲酸、3-氨基-4-甲基苯甲酸、4-(氨基甲基)苯甲酸、4-氨基-2-甲基苯甲酸、4-氨基-3-甲基苯甲酸、5-氨基-2-甲基苯甲酸、3-氨基-2-萘甲酸、6-氨基-2-萘甲酸、2-氨基-3-硝基苯甲酸、2-氨基-5-硝基苯甲酸、2-氨基-5-硝基苯甲酸、4-氨基-3-硝基苯甲酸、5-氨基-2-硝基苯甲酸、3-(4-氨基苯基)丙酸、3-氨基邻苯二甲酸、4-氨基邻苯二甲酸、3-氨基水杨酸、4-氨基水杨酸、5-氨基水杨酸、5-氨基水杨酸、2-氨基对苯二甲酸、2-氨基-3,4,5,6-四氟苯甲酸、4-氨基-2,3,5,6-四氟苯甲酸、(R)-2-氨基-1,2,3,4-四氢萘-2-羧酸、(S)-2-氨基-1,2,3,4-四氢-2-萘羧酸、2-氨基-3-(三氟甲基)苯甲酸、2-氨基-3-(三氟甲基)苯甲酸、3-氨基-5-(三氟甲基)苯甲酸、5-氨基-2,4,6-三碘间苯二甲酸、2-氨基-3,4,5-三甲氧基苯甲酸、2-苯胺基苯基乙酸、2-Abz-OH、3-Abz-OH、4-Abz-OH、2-(氨基甲基)苯甲酸、3-(氨基甲基)苯甲酸、4-(氨基甲基)苯甲酸、叔基2-氨基苯甲酸酯、叔丁基3-氨基苯甲酸酯、叔丁基4-氨基苯甲酸酯、4-(丁基氨基)苯甲酸、2,3-二氨基苯甲酸、3,4-二氨基苯甲酸、3,5-二氨基苯甲酸、3,5-二氨基苯甲酸、3,5-二氯邻氨基苯甲酸、4-(二乙基胺基)苯甲酸、4,5-二氟邻氨基苯甲酸、4-(二甲基氨基)苯甲酸、4-(二甲基氨基)苯甲酸、3,5-二甲基邻氨基苯甲酸、5-氟-2-甲氧基苯甲酸、2-Abz-OH、3-Abz-OH、4-Abz-OH、3-(氨基甲基)苯甲酸、4-(氨基甲基)苯甲酸、4-(2-肼基)苯甲酸、3-羟基邻氨基苯甲酸、3-羟基邻氨基苯甲酸、3-氨基苯甲酸甲酯、3-(甲基氨基)苯甲酸、4-(甲基氨基)苯甲酸、2-氨基-4-氯苯甲酸甲酯、2-氨基-4,5-二甲氧基苯甲酸甲酯、4-硝基邻氨基苯甲酸、N-苯基邻氨基苯甲酸、N-苯基邻氨基苯甲酸及4-氨基水杨酸钠。每种可能性代表单独的实施方式。

其它氨基酸：(S)-α-氨基-γ-丁内酯、DL-2-氨基辛酸、7-氨基头孢烷酸、4-氨基肉桂酸、(S)-(+)-α-氨基环己烷丙酸、(R)-氨基-(4-羟基苯基)乙酸甲酯、5-氨基乙酰丙酸、4-氨基-烟酸、3-氨基苯基乙酸、4-氨基苯基乙酸、2-氨基-2-苯基丁酸、4-(4-氨基苯基)丁酸、2-(4-氨基苯基硫代)乙酸、DL-α-氨基-2-噻吩乙酸、5-氨基戊酸、8-苄基(S)-2-氨基辛烷二酸酯、4-(氨基)-1-甲基吡咯-2-羧酸、4-(氨基)四氢噻喃-4-羧酸、(1R,3S,4S)-2-氮杂双环[2.2.1]庚烷-3-羧酸、L-氮杂环丁烷-2-羧酸、氮杂环丁烷-3-羧酸、4-(氨基)哌啶-4-羧酸、二氨基苯甲酸、Inp-OH、(R)-Nip-OH、(S)-4-氧代哌啶-2-羧酸、2-(4-哌嗪基)-2-(4-氟苯基)乙酸、2-(4-哌嗪基)-2-苯基乙酸、4-哌啶乙醛、4-哌啶基乙酸、(-)-L-硫代脯氨酸、Tle-OH、3-哌啶羧酸、L-(+)-刀豆氨酸、(±)-肉碱、苯丁酸氮芥、2,6-二氨基庚二酸、内消旋-2,3-二氨基琥珀酸、4-(二甲氨基)肉桂酸、4-(二甲氨基)苯基乙酸、(S)-N-Boc-哌啶-3-羧酸乙酯、哌嗪基乙酸乙酯、4-[2-(氨基)乙基]哌嗪-1-基乙酸、(R)-4-(氨基)-5-苯基戊酸、(S)-氮杂环丁烷-2-羧酸、氮杂环丁烷-3-羧酸、四氢烟酸、Inp-OH、(R)-Nip-OH、DL-Nip-OH、4-苯基-哌啶-4-羧酸、1-哌嗪乙酸、4-哌啶乙酸、(R)-哌啶-2-羧酸、(S)-哌啶-2-羧酸、(S)-1,2,3,4-四氢去甲哈尔满-3-羧酸、Tic-OH、D-Tic-OH、亚氨基二乙酸、二氢吲哚-2-羧酸、DL-犬尿氨酸、L-氮丙啶-2-羧酸酯、4-氨基丁酸甲酯、(S)-2-哌嗪羧酸、2-(1-哌嗪基)乙酸、(R)-(–)-3-哌啶羧酸、2-吡咯烷酮-5-羧酸、(R)-(+)-2-吡咯烷酮-5-羧酸、(R)-1,2,3,4-四氢-3-异喹啉羧酸、(S)-1,2,3,4-四氢-3-异喹啉羧酸、L-4-噻唑烷羧酸、(4R)-(-)-2-硫代-4-噻唑烷羧酸、肼基乙酸、及3,3′,5-三碘-L-甲状腺原氨酸。每种可能性代表单独的实施方式。

在一些实施方式中，该肽或肽类似物在第1或2位或在第1和2位两者处包含实现肽对肽酶切割抗性的氨基酸。在一些实施方式中，该肽或肽类似物在第1位处包含选自由以下组成的组中的氨基酸：D-组氨酸、脱氨基组氨酸、羟基-组氨酸、乙酰基-组氨酸、同型组氨酸、N-甲基组氨酸、α-甲基组氨酸、咪唑乙酸或α，α-二甲基咪唑乙酸(DMIA)。在一些实施方式中，该肽或肽类似物在第2位处包含选自由以下组成的组中的氨基酸：D-丝氨酸、D-丙氨酸、缬氨酸、甘氨酸、N-甲基丝氨酸、N-甲基丙氨酸或α氨基异丁酸。在一些实施方式中，该肽或肽类似物在第2位处包含实现肽或肽类似物对肽酶抗性的氨基酸，并且实现肽或肽类似物对肽酶抗性的氨基酸不是D-丝氨酸。在一些实施方式中，该共价键是除内酰胺桥之外的分子内桥。例如，合适的共价键合方法包括烯烃复分解、基于羊毛硫氨酸的环化，二硫桥或经修饰的含硫桥形成、α,ω-二氨基烷系链的使用、金属原子桥的形成和肽环化的其它方式中的任一种或多种。

在一些实施方式中，该肽或肽类似物通过氨基酸取代和/或添加来修饰，所述氨基酸取代和/或添加将带电荷的氨基酸引入到类似物的C-末端部分。在一些实施方式中，此类修饰增强了稳定性和溶解性。如本文所用，术语“带电荷的氨基酸”或“带电荷的残基”是指包含在生理pH值的水溶液中带负电(即去质子化)或带正电荷(即质子化)的侧链的氨基酸。在一些方面，引入带电荷的氨基酸修饰的这些氨基酸取代和/或添加可以在C-末端位置。在一些实施方式中，可以在C-末端位置引入一个、两个或三个(并且在一些情况下，多于三个)带电荷的氨基酸。在示例性实施方式中，带电荷的氨基酸中的一个、两个或全部可以带负电荷。在一些实施方式中，带负电荷的氨基酸是天冬氨酸、谷氨酸、磺基丙氨酸、同型磺基丙氨酸或同型谷氨酸。在一些方面，这些修饰增加了溶解度。

根据一些实施方式，本文公开的肽或肽类似物可以通过将C-末端截短一个或两个氨基酸残基来修饰。在这方面，示例性方面中的肽或肽类似物包含(任选用任何本文所述的另外修饰)在C-末端截短一个或两个氨基酸残基的SEQ ID NO：1、3至41、43至76、及79至293、310至315、319至323及354至377中任一个的序列。

在一些实施方式中，所述肽包含SEQ ID NO：1、3至41、43至76、及79至293、310至315、319至323及354至377中任一个的修饰序列，其中，用电荷中性基团(如酰胺或酯)取代C-末端氨基酸的羧酸。因此，在一些实施方式中，该肽是酰胺化肽，使得C-末端残基包含代替氨基酸的α羧酸盐的酰胺。如本文所用，对肽或类似物的一般性提及旨在包括具有修饰的氨基末端、修饰的羧基末端或修饰的氨基末端和羧基末端的肽。例如，构成代替末端羧酸的酰胺基团的氨基酸链旨在包括指定标准氨基酸的氨基酸序列。

根据一些实施方式，本文公开的肽可以通过在至少一个氨基酸残基上缀合来修饰。在这方面，示例性方面的肽包含与异源部分缀合的SEQ ID NO：1、3至41、43至76、及79至293、310至315、319至323、及354至377中的任一个的序列。如本文所述的。

肽类似物

本公开提供了肽类似物，如但不限于模拟肽化合物，其可具有改善的稳定性和细胞渗透特性。模拟肽化合物包含根据SEQ ID NO：1、3至41、43至76、及79至293、310至315、319至323及354至377中的任一个的序列，其中，该肽中的多个肽键(-CO-NH-)中的一个例如由如下取代：N-甲基化酰胺键(-N(CH3)-CO-)、酯键(-C(＝0)-0-)、酮亚甲基键(-CO-CH₂-)、亚磺酰基亚甲基键(-S(＝0)-CH₂-)，α-氮杂键(-NH-N(R)-CO-)，其中，R是任何烷基(例如甲基)、胺键(-CH₂-NH-)、硫化物键(-CH₂-S-)、亚乙基键(-CH₂-CH₂-)，羟基亚乙基键(-CH(OH)-CH₂-)、硫代酰胺键(-CS-NH-)、烯双键(-CH＝CH-)、氟化烯双键(-CF＝CH-)、或反酰胺键(-NH-CO-)、肽衍生物(-N(R^x)-CH₂-CO-)，其中，R^x是天然存在于碳原子上的“正常”侧链。这些修饰可以发生在沿着肽链的任何键上，甚至同时发生在几个(2-3)键上。

在示例性方面，该肽类似物是模拟肽。该模拟肽及其制备方法是本领域已知的。参见，例如，Advances in Amino Acid Mimetics and Peptidomimetics，第1卷和第2卷，编辑，Abell,A.,JAI Press Inc.,Greenwich,CT,2006。在示例性方面，该模拟肽是包含D-异构体氨基酸的D-肽模拟肽。在示例性方面，该模拟肽是其中氨基酸的侧链连接至肽骨架的α氮原子的类肽。制备类肽的方法是本领域已知的。参见，例如，Zuckermann等人,JACS 114(26):10646-10647(1992)和Design,Synthesis,and Evaluation of Novel Peptoids,Fowler,Sarah,University of Wisconsin-Madison,2008。在一些方面，该模拟肽是包含β氨基酸的β肽，该β肽具有与β碳而不是α碳键合的氨基基团。制备β肽的方法是本领域已知的。参见，例如，Seebach等人,Helvetica Chimica Acta 79(4):913-941(1996)。

缀合物

本公开进一步提供了缀合、连接、桥接、邻接或键合至异源部分的本文所述的肽或肽类似物。因此，本公开提供了包含一种或多种本文所述的肽或肽类似物和异源部分的缀合物。如本文所用，术语“异源部分”与术语“缀合部分”同义，并且是指与本文所述的肽不同的任何分子(化学或生物化学、天然存在的或非编码的)。可与本文所述的任何肽或肽类似物连接的示例性缀合部分包括但不限于异源肽或多肽(包括例如血浆蛋白)、靶向剂、免疫球蛋白或其部分(例如可变区、CDR、或Fc区)、诊断标记物(如放射性同位素标记物、荧光团标记物或酶标记物)、包括水溶性聚合物的聚合物、或其它治疗剂或诊断剂。在一些实施方式中，提供了包含肽和血浆蛋白的缀合物，其中，所述血浆蛋白选自由白蛋白、转铁蛋白、纤维蛋白原和球蛋白组成的组。在一些实施方式中，该缀合物的血浆蛋白部分是白蛋白或转铁蛋白。

在一些实施方式中，该缀合物包含一种或多种本文所述的肽或肽类似物和如下中的一种或多种：不同的肽(不同于本文所述的肽)、多肽、核酸分子、抗体或其片段、聚合物、量子点、小分子、毒素、诊断剂、碳水化合物、或氨基酸。

在一些实施方式中，该异源部分是聚合物。在一些实施方式中，该聚合物选自由以下组成的组：聚酰胺；聚碳酸酯；聚烯烃及其衍生物，包括：聚亚烷基二醇、聚环氧烷烃、聚亚烷基对苯二甲酸酯；丙烯酸酯与甲基丙烯酸酯的聚合物，该聚合物包括聚(甲基丙烯酸甲酯)、聚(甲基丙烯酸乙酯)、聚(甲基丙烯酸丁酯)、聚(甲基丙烯酸异丁酯)、聚(甲基丙烯酸己酯)、聚(甲基丙烯酸异癸酯)、聚(甲基丙烯酸十二酯)、聚(甲基丙烯酸苯基酯)、聚(丙烯酸甲酯)、聚(丙烯酸异丙酯)、聚(丙烯酸异丁酯)及聚(丙烯酸十八酯)；聚乙烯基聚合物，该聚乙烯基聚合物包括：聚乙烯醇、聚乙烯基醚、聚乙烯基酯、聚卤乙烯、聚(乙酸乙烯酯)及聚乙烯吡咯烷酮；聚乙交酯；聚硅氧烷；聚氨酯及其共聚物；纤维素，该纤维素包括：烷基纤维素、羟烷基纤维素、纤维素醚、纤维素酯、硝基纤维素、甲基纤维素、乙基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羟丁基甲基纤维素、乙酸纤维素、丙酸纤维素、乙酸丁酸纤维素、乙酸邻苯二甲酸纤维素、羧基乙基纤维素、三乙酸纤维素及硫酸纤维素钠盐；聚丙烯；聚乙烯，该聚乙烯包括：聚(乙二醇)、聚(氧化乙烯)及聚(对苯二甲酸乙二醇酯)；及聚苯乙烯。在一些方面，该聚合物是可生物降解的聚合物，包括合成可生物降解聚合物(例如，乳酸与乙醇酸的聚合物、聚酸酐、聚原酸酯、聚氨酯、聚(丁酸)、聚(戊酸)及聚(丙交酯共己内酯))、及天然可生物降解聚合物(例如，藻酸盐及包括葡聚糖及纤维素的其它多糖、胶原、及其化学衍生物(例如，烷基、亚烷基等化学基团的取代、添加；羟基化；氧化；及本领域技术人员常规进行的其它修饰)、白蛋白及其它亲水性蛋白(例如，玉米蛋白及其它醇溶谷蛋白与疏水性蛋白))、及其任意共聚物或混合物。通常，这些材料通过酶水解或体内暴露于水而表面或整体侵蚀而降解。在一些方面，该聚合物是生物粘附性聚合物，如由H.S.Sawhney,C.P.Pathak和J.A.Hubbell in Macromolecules,1993,26,581-587中描述的可生物侵蚀的水凝胶，其教导内容并入本文，聚透明质酸、酪蛋白、明胶、明胶蛋白、聚酸酐、聚丙烯酸、藻酸盐、壳聚糖、聚(甲基丙烯酸甲酯)、聚(甲基丙烯酸乙酯)、聚(甲基丙烯酸丁酯)、聚(甲基丙烯酸异丁酯)、聚(甲基丙烯酸己酯)、聚(甲基丙烯酸异癸酯)、聚(甲基丙烯酸十二酯)、聚(甲基丙烯酸苯基酯)、聚(丙烯酸甲酯)、聚(丙烯酸异丙酯)、聚(丙烯酸异丁酯)及聚(丙烯酸十八酯)。

在一些实施方式中，该聚合物是水溶性聚合物或亲水性聚合物。本文中在“亲水性部分”下进一步描述了亲水性聚合物。合适的水溶性聚合物是本领域已知的，包括例如聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基纤维素(HPC；Klucel)、羟丙基甲基纤维素(HPMC；Methocel)、硝酸纤维素、羟丙基乙基纤维素、羟丙基丁基纤维素、羟丙基戊基纤维素、甲基纤维素、乙基纤维素、羟乙基纤维素、各种烷基纤维素及羟烷基纤维素、各种纤维素醚、乙酸纤维素、羧甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、羧甲基纤维素钙、乙酸乙烯酯/丁烯酸共聚物、聚羟烷基甲基丙烯酸酯、羟甲基甲基丙烯酸酯、甲基丙烯酸共聚物、聚甲基丙烯酸、聚甲基丙烯酸甲酯、马来酸酐/甲基乙烯基醚共聚物、聚乙烯醇、聚丙烯酸钠及聚丙烯酸钙、聚丙烯酸、酸性羧基聚合物、羧基聚亚甲基、羧基乙烯基聚合物、聚氧化乙烯聚氧化丙烯共聚物、聚甲基乙烯基醚共马来酐共聚物、羧基甲酰胺、甲基丙烯酸钾二乙烯苯共聚物、聚氧乙烯二醇、聚环氧乙烷及其衍生物、盐及组合。在具体的实施方式中，该聚合物是聚亚烷基二醇，包括例如聚乙二醇(PEG)。

在一些实施方式中，异源部分是碳水化合物。在一些实施方式中，该碳水化合物是单糖(例如葡萄糖、半乳糖、果糖)、二糖(例如蔗糖、乳糖、麦芽糖)、寡糖(例如棉籽糖、水苏糖)、多糖(淀粉、淀粉酶、支链淀粉、纤维素、壳多糖、胼胝质、海带多糖、木聚糖、甘露聚糖、褐藻聚糖或半乳甘露聚糖)。

在一些实施方式中，该异源部分是脂质。在一些实施方式中，该脂质是脂肪酸、类花生酸、前列腺素、白三烯、血栓素、N-酰基-乙醇胺、甘油脂(例如，单取代甘油、二取代甘油、三取代甘油)、甘油磷脂(例如，磷脂酰胆碱、磷脂酰肌醇、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸)、鞘脂(例如，鞘氨醇、神经酰胺)、固醇脂质(例如，类固醇、胆固醇)、戊烯醇脂质、糖脂、或聚酮化合物、油、蜡、胆固醇、固醇、脂溶性维生素、单甘油酯、二甘油酯、三甘油酯或磷脂。

在一些实施方式中，该异源部分通过非共价或共价键合连接至本公开的肽或肽类似物。在某些方面，该异源部分通过接头与本公开的肽或肽类似物连接。连接可以通过共价化学键、物理力(如静电、氢、离子、范德华力或疏水性或亲水性相互作用)来实现。可以使用多种非共价偶联系统，包括生物素-抗生物素蛋白、配体/受体、酶/底物、核酸/核酸结合蛋白、脂质/脂质结合蛋白、细胞粘附分子配偶体；或任何彼此具有亲和力的结合配偶体或其片段。在一些实施方式中，该肽或肽类似物通过直接共价连接由使类似物的靶向氨基酸残基与有机衍生剂反应连接至缀合物部分，该有机衍生剂能够与选择的侧链或这些靶向氨基酸的N或C-末端残基反应。类似物或缀合部分上的反应性基团包括例如醛、氨基、酯、巯基、α-卤代乙酰基、马来酰亚胺基或肼基基团。衍生剂包括例如马来酰亚胺基苯甲酰磺基琥珀酰亚胺酯(通过半胱氨酸残基缀合)、N-羟基琥珀酰亚胺(通过赖氨酸残基)、戊二醛、琥珀酸酐或本领域已知的其它试剂。可替换地，该缀合物部分可以通过中间运载体(如多糖或多肽运载体)间接连接至类似物。该多糖运载体的示例包括氨基葡聚糖。合适的多肽运载体的示例包括聚赖氨酸、聚谷氨酸、聚天冬氨酸、其共聚物，以及这些氨基酸和其它氨基酸(例如丝氨酸)的混合聚合物，以赋予所得负载运载体所需的溶解特性。半胱氨酰残基最常与如氯乙酸、氯乙酰胺的α-卤代乙酸盐(和相应的胺)反应以得到羧甲基衍生物或羧酰胺甲基衍生物。也可以通过与溴三氟丙酮、α-溴-β-(5-咪唑基)丙酸、氯乙酰基磷酸盐、N-烷基马来酰亚胺、3-硝基-2-吡啶二硫化物、甲基2-吡啶二硫化物、对氯汞苯甲酸、2-氯汞基-4-硝基苯酚、或氯-7-硝基苯-2-氧杂-1,3-恶二唑发生反应衍生化半胱氨酰残基。通过在pH 5.5-7.0时与焦碳酸二乙酯反应可以衍生化组氨酰残基，因为这种制剂可以相对特异地针对组氨酰侧链。对溴苯酰基溴化物也是有用的；优选在pH 6.0时，在0.1M二甲胂酸钠中进行该反应。赖氨酰基末端残基和氨基末端残基可与琥珀酸酐或其它羧酸酐反应。这些试剂的衍生化具有逆转赖氨酰基残基电荷的效果。用于衍生化含α氨基的残基的其它合适试剂包括亚氨基酯，如甲基皮考啉亚氨酸酯、吡哆醛磷酸盐、吡哆醛、氯氢硼酸盐、三硝基苯磺酸、O-甲基异脲、2,4-戊二酮、及与转氨酶催化的乙醛酸。通过与苯基乙二醛、2,3-丁二酮、1,2-环己二酮及茚三酮中的一种或几种常规试剂反应可以修饰精氨酰基残基。因为胍官能团的pKa高，因此精氨酸残基的衍生化要求在碱性条件下进行反应。此外，这些试剂可以与赖氨酸基团以及精氨酸ε-氨基基团反应。可以进行酪氨酰残基的特定修饰，特别感兴趣的是通过与芳族重氮化合物或四硝基甲烷反应将光谱标记物引入酪氨酰残基中。最常见的是，N-乙酰基咪唑和四硝基甲烷分别用于形成O-乙酰基酪氨酰基种类和3-硝基衍生物。可以通过与碳二亚胺(R-N＝C＝N-R')反应而选择性地修饰羧基侧基团(天冬氨酰基或谷氨酰基)，其中，R和R'是不同的烷基基团，如1-环己基-3-(2-吗啉基-4-乙基)碳二亚胺或1-乙基-3-(4-氮杂-4-二甲基戊基)碳二亚胺。此外，可通过与铵离子反应将天冬氨酰残基和谷氨酰残基转化为天冬酰胺酰基和谷氨酰胺残基。其它修饰包括脯氨酸和赖氨酸的羟基化、丝氨酰或苏氨酰残基的羟基基团的磷酸化、赖氨酸、精氨酸和组氨酸侧链α氨基基团的甲基化(T.E.Creighton,Proteins:Structure and Molecular Properties,W.H.Freeman&Co.,San Francisco,pp.79-86(1983))、天冬酰胺或谷氨酰胺的脱酰胺化、N-末端胺的乙酰化和/或C-末端羧酸基团的酰胺化或酯化。另一种类型的共价修饰涉及将糖苷化学或酶促地偶联至肽或肽类似物。可以将糖连接至：(a)精氨酸及组氨酸，(b)游离羧基基团，(c)游离氢硫基基团(freesulfhydryl group)，如半胱氨酸的游离氢硫基基团，(d)游离羟基基团，如丝氨酸、苏氨酸或羟基脯氨酸的游离羟基基团，(e)芳香族残基，如酪氨酸或色氨酸的芳香族残基或(f)谷氨酰胺的酰胺基基团。这些方法描述于1987年9月11日公开的WO87/05330以及Aplin和Wriston,CRC Crit.Rev.Biochem.,pp.259-306(1981)。在一些实施方式中，通过肽的氨基酸侧链和异源部分之间的共价连接将肽或肽类似物与异源部分缀合。在一些方面，与异源部分(例如包含异源部分的氨基酸)共价连接的氨基酸是Cys、Lys、Orn、homo-Cys或Ac-Phe，并且氨基酸的侧链共价键合到异源部分。在一些实施方式中，该缀合物包含将肽或肽类似物与异源部分连接的接头。在一些方面，该接头包含1至约60个、或1至30个原子或更长、2至5个原子、2至10个原子、5至10个原子或10至20个原子长的原子链。在一些实施方式中，链原子可以是所有碳原子。在一些实施方式中，接头主链中的链原子可选自由C、O、N和S组成组。可根据其预期的溶解度(亲水性)选择链原子和接头以便提供更可溶的缀合物。在一些实施方式中，接头提供了经受靶组织或器官或细胞中发现的酶或其它催化剂或水解条件切割的官能团。在一些实施方式中，接头的长度足够长以降低空间位阻的可能性。如果接头是共价键或肽键并且缀合物是多肽，则整个缀合物可以是融合蛋白。这种肽基接头可以是任何长度。示例性接头的长度可为约1至50个氨基酸，长度为5至50、3至5、5至10、5至15或10至30个氨基酸。可替换地，可通过本领域普通技术人员已知的重组基因工程方法产生此类融合蛋白。

在示例性实施方式中，肽或肽类似物与人源蛋白的非天然存在的类似物缀合。在示例性方面，肽或肽类似物在N或C-末端与人源蛋白类似物HNG17缀合，HNG17是具有S→G取代的人源蛋白的17聚体截短类似物。在示例性方面，肽或肽类似物在N或C-末端与人源蛋白类似物HNG缀合，HNG是具有S→G取代的人源蛋白的24聚体截短类似物。本公开提供了包含与人源蛋白类似物连接的肽或肽类似物的缀合物SEQ ID NO：98-102。

在一些实施方式中，肽或肽类似物可以缀合(例如融合)至免疫球蛋白或其部分(例如可变区、CDR或Fc区)。已知类型的免疫球蛋白(Ig)包括IgG、IgA、IgE、IgD或IgM。Fc区是Ig重链的C-末端区，其负责结合Fc受体，该Fc受体实现如再循环(其导致延长的半衰期)、抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)和补体依赖性细胞毒性(CDC)等活性。例如，根据一些定义，人IgG重链Fc区从Cys226伸至重链的C-末端。“铰链区”通常从人IgG1的Glu216延伸至Pro230(可通过比对参与半胱氨酸键合的半胱氨酸将其它IgG同种型的铰链区与IgG1序列比对)。IgG的Fc区包括两个恒定结构域CH2和CH3。人IgG Fc区的CH2结构域通常从氨基酸231延伸至氨基酸341。人IgG Fc区的CH3结构域通常从氨基酸342延伸至447。对免疫球蛋白或免疫球蛋白片段或区域的氨基酸编号的参考均基于Kabat等人1991,Sequences ofProteins of Immunological Interest,美国公共卫生部，贝塞斯达，马里兰州。在相关实施方式中，Fc区可包含来自免疫球蛋白重链的一个或多个天然或修饰的恒定区(除CH1外)，例如IgG和IgA的CH2和CH3区，或IgE的CH3和CH4区。合适的缀合部分包括免疫球蛋白序列的部分，该免疫球蛋白序列包括FcRn结合位点。FcRn是一种补救受体，负责回收免疫球蛋白并使其返回血液循环。已经基于X射线晶体学描述了与FcRn受体结合的IgG的Fc部分区(Burmeister等人1994,Nature 372:379)。Fc与FcRn的主要接触面积接近CH2和CH3结构域的结(junction)。Fc-FcRn接触都在单个Ig重链内。主要接触位点包括CH2结构域的氨基酸残基248、250至257、272、285、288、290至291、308至311及314以及CH3结构域的氨基酸残基385至387、428及433至436。一些缀合部分可以包括或不包括FcγR结合位点。FcγR负责ADCC和CDC。Fc区内与FcγR直接接触的位置的示例是氨基酸234-239(低级铰链区)、氨基酸265-269(B/C环)、氨基酸297-299(C'/E环)和氨基酸327-332(F/G)环(Sonderman等人，Nature 406：267-273,2000)。IgE的低级铰链区也已涉及FcRI结合(Henry等人，Biochemistry 36,15568-15578,1997)。参与IgA受体结合的残基描述于Lewis等(JImmunol.175:6694-701,2005)。参与IgE受体结合的氨基酸残基描述于Sayers等人(J BiolChem.279(34):35320-5,2004)。可以对免疫球蛋白的Fc区进行氨基酸修饰。此类变体Fc区包含Fc区的CH3结构域中的至少一个氨基酸修饰(残基342-447)和/或Fc区的CH2结构域中的至少一个氨基酸修饰(残基231-341)。认为赋予FcRn增加亲和力的突变包括T256A、T307A、E380A和N434A(Shields等人2001,J.Biol.Chem.276:6591)。其它突变可以降低Fc区与FcγRI、FcγRIIA、FcγRIIB和/或FcγRIIIA的结合，而不显著降低对FcRn的亲和力。例如，用Ala或另一种氨基酸取代Fc区297位处的Asn去除了高度保守的N-糖基化位点，并且可能导致免疫原性降低，伴随着Fc区的半衰期延长以及与FcγRs结合的降低(Routledge等人1995,Transplantation 60:847；Friend等人1999,Transplantation 68:1632；Shields等人1995,J.Biol.Chem.276:6591)。已经制备了IgG1的233-236位处的氨基酸修饰，该氨基酸修饰降低了与FcγR的结合(Ward和Ghetie 1995,Therapeutic Immunology 2:77和Armour等人1999,Eur.J.Immunol.29:2613)。一些示例性氨基酸取代描述于美国专利号7,355,008和7,381,408中，各自通过引用整体并入本文。在某些实施方式中，将本文所述的肽或肽类似物插入免疫球蛋白分子内的环区域。在其它实施方式中，本文所述的肽或肽类似物代替免疫球蛋白分子内环区域的一个或多个氨基酸。

可以进一步修饰本文所述的肽或肽类似物以改善其在生理pH下在水溶液中的溶解度和稳定性，同时保持生物活性。在用于使蛋白质与活化的聚合物分子反应的任何合适条件下，亲水性部分(如PEG基团)可以与类似物连接。可以使用本领域已知的任何方式，包括通过PEG部分上的反应性基团(例如，醛、氨基、酯、巯、α-卤代乙酰基、马来酰亚胺基或肼基基团)至靶化合物的反应性基团(例如，醛、氨基、酯、巯、α-卤代乙酰基、马来酰亚胺基或肼基基团)的酰化、还原性烷基化、Michael加成、巯基烷基化或其它化学选择性缀合/联结方法。可用于将水溶性聚合物与一种或多种蛋白质连接的活化基团包括但不限于砜、马来酰亚胺、氢硫基、巯基、三氟甲磺酸酯、三氟乙磺酸、氮丙啶、环氧乙烷、5-吡啶基、及α-卤代酰基基团(例如，α-碘乙酸、α-溴乙酸、α-氯乙酸)。如果通过还原性烷基化与类似物连接，则所选择的聚合物应具有单一反应性醛，从而控制聚合度。参见，例如，Kinstler等人,Adv.Drug.Delivery Rev.54:477-485(2002)；Roberts等人,Adv.Drug Delivery Rev.54:459-476(2002)和Zalipsky等人,Adv.Drug Delivery Rev.16:157-182(1995)。在具体方面，具有巯基的肽或肽类似物的氨基酸残基用亲水性部分(如PEG)修饰。在一些实施方式中，在Michael加成反应中用马来酰亚胺活化的PEG修饰巯基以产生包含硫醚连接的PEG化类似物。在一些实施方式中，在亲核取代反应中用卤代乙酰基活化的PEG修饰巯基以产生包含硫醚连接的PEG化类似物。合适的亲水性部分包括聚乙二醇(PEG)、聚丙二醇、聚氧乙烯化多元醇(例如，POG)、聚氧乙烯化山梨糖醇、聚氧乙烯化葡萄糖、聚氧乙烯化甘油(POG)、聚氧化烯、聚乙二醇丙醛、乙二醇/丙二醇共聚物、单甲氧基聚乙二醇、单-(C1-C10)烷氧基-或芳氧基-聚乙二醇、羧甲基纤维素、聚缩醛、聚乙烯醇(PVA)、聚乙烯吡咯烷酮、聚-1,3-二氧戊环、聚-1,3,6-三恶烷、乙烯/马来酸酐共聚物、聚(β-氨基酸)(均聚物或无规共聚物)、聚(n-乙烯基吡咯烷酮)聚乙二醇、丙烯乙二醇均聚物(PPG)及其它聚环氧烷、聚环氧丙烷/环氧乙烷共聚物、结肠酸或其它多糖聚合物、Ficoll或葡聚糖及其混合物。葡聚糖是主要通过α1-6连接连接的葡萄糖亚基的多糖聚合物。葡聚糖有许多分子量范围，例如约1kD至约100kD，或约5、10、15或20kD至约20、30、40、50、60、70、80或90kD。设想了线性或分支聚合物。得到的缀合物制剂可以基本上是单分散的或多分散的，并且每个类似物可以具有约0.5、0.7、1、1.2、1.5或2个聚合物部分。

在一些实施方式中，通过肽或肽类似物的氨基酸侧链和亲水性部分之间的共价连接将肽或的肽类似物与亲水性部分缀合。在一些实施方式中，通过氨基酸的侧链、C-末端延伸内的位置、或C-末端氨基酸或这些位置的组合将肽或肽类似物与亲水性部分缀合。在一些方面，与亲水性部分(例如包含亲水性部分的氨基酸)共价连接的氨基酸是Cys、Lys、Orn、homo-Cys或Ac-Phe，并且氨基酸的侧链共价键合到亲水性部分(例如，PEG)。在一些实施方式中，本公开的缀合物包含与辅助类似物融合的肽或肽类似物，该辅助类似物能够形成类似于化学PEG(例如重组PEG(rPEG)分子)的延伸构象，如在国际专利申请公开号WO2009/023270和美国专利申请公开号US20080286808中描述的那些。在一些方面，rPEG分子是包含甘氨酸、丝氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、丙氨酸或脯氨酸中的一种或多种的多肽。在一些方面，rPEG是均聚物，例如聚甘氨酸、聚丝氨酸、聚谷氨酸、聚天冬氨酸、聚丙氨酸或聚脯氨酸。在其它实施方式中，rPEG包含重复的两种类型的氨基酸，例如聚(Gly-Ser)、聚(Gly-Glu)、聚(Gly-Ala)、聚(Gly-Asp)、聚(Gly-Pro)、聚(Ser-Glu)等。在一些实施方式中，rPEG包含三种不同类型的氨基酸，例如聚(Gly-Ser-Glu)。在特定方面，rPEG增加了肽或肽类似物的半衰期。在一些方面，rPEG包含净正电荷或净负电荷。在某些方面，rPEG缺乏二级结构。在一些实施方式中，rPEG的长度大于或等于10个氨基酸，并且在一些实施方式中，长度为约40至约50个氨基酸。在一些方面，辅助肽通过肽键或蛋白酶切割位点与本公开的肽或肽类似物的N或C-末端融合，或插入本公开的肽或肽类似物的环中。在一些方面，rPEG包含亲和标签或与大于5kDa的PEG连接。在一些实施方式中，rPEG赋予本公开的肽或肽类似物增加的流体动力学半径、血清半衰期、蛋白酶抗性或溶解度，并且在一些方面赋予类似物降低的免疫原性。

设想将包含表1中所示的序列(SEQ ID NO：3-293和354-377)的肽或肽类似物(任选地具有本文所述的任何缀合物)作为实施方式。

本公开还提供了本文公开的肽或肽类似物的多聚体或二聚体，包括同型或异型多聚体、或同型或异型二聚体。可以使用本领域技术人员已知的标准连接剂和程序将两种或多种肽或肽类似物连接在一起。例如，通过使用双官能巯基交联剂和双官能胺基交联剂，可以在两种肽或肽类似物之间形成二聚体，特别是对于已被半胱氨酸、赖氨酸、鸟氨酸、同型半胱氨酸或乙酰基苯丙氨酸残基取代的类似物。该二聚体可以是同型二聚体，或者可替换地可以是异型二聚体。在某些实施方式中，连接两种(或多种)肽或肽类似物的接头是PEG，例如5kDa PEG、20kDa PEG。在一些实施方式中，该接头是二硫键。例如，二聚体的每个单体可以包含Cys残基(例如，末端或内部定位的Cys)，并且每个Cys残基的硫原子参与二硫键的形成。在一些方面，单体可以通过末端氨基酸(例如，N-末端或C-末端)、通过内部氨基酸，或通过至少一种单体的末端氨基酸和至少一种其它单体的内部氨基酸连接。在特定方面，单体不通过N-末端氨基酸连接。在一些方面，多聚体的单体可以以“尾对尾”方向连接在一起，其中，每个单体的C-末端氨基酸可以连接在一起。

根据一些实施方式，包含本文所述的任何肽或肽类似物的缀合物与异源部分缀合以延长半衰期或增加细胞渗透。例如，延长半衰期的部分可以是肽或蛋白质，并且缀合物是融合蛋白或嵌合多肽。可替换地，延长半衰期的部分可以是聚合物，例如聚乙二醇。本公开还提供了包含本文所述的任何肽和类似物的二聚体和多聚体。

本领域已知的促进主动或被动或增强肽进入细胞的渗透性的异源部分可用于与肽核缀合。非限制性示例包括：疏水性部分，如脂肪酸、类固醇及庞大的芳香族或脂族化合物；可具有细胞膜受体或运载体的部分，如类固醇、维生素和糖、天然的和非天然的氨基酸及转运肽。根据优选的实施方式，该疏水性部分是脂质部分或氨基酸部分。增加渗透性的部分可以直接或通过间隔子或接头连接到肽部分中的任何位置，优选连接到肽部分的氨基末端。该疏水性部分可以优选包含脂质部分或氨基酸部分。根据特定实施方式，疏水性部分选自由以下组成的组：磷脂、类固醇、鞘氨醇、神经酰胺、辛基-甘氨酸、2-环己基丙氨酸、苯甲酰基苯丙氨酸、丙酰基(C₃)；丁酰基(C₄)；戊酰基(C₅)；己酰基(C₆)；庚酰基(C₇)；辛酰基(C₈)；壬酰基(C₉)；辛酰基(C₁₀)；十一烷酰(Cn)；月桂酰基(C₁₂)；十三烷酰基(C₁₃)；肉豆蔻酰基(C₁₄)；十五烷酰基(C₁₅)；棕榈酰基(C₁₆)；phtanoyl((CH₃)₄)；十七烷酰基(C₁₆)；硬脂酰基(C₁₈)；十九烷酰基(C₁₉)；花生酰基(C₂₀)；heniecosanoyl(C₂₁)；山嵛酰基(C₂₂)；trucisanoyl(C₂₃)和二十四烷酰基(C₂₄)；其中，所述疏水性部分与所述嵌合多肽连接，该嵌合多肽具有酰胺键、巯基、胺、醇、酚基或碳-碳键。可以使用的脂质部分的其它示例包括：脂质体、Transfectace、Transfectam、细胞转染剂、DMRIE、DLRIE、GAP-DLRIE、DOTAP、DOPE、DMEAP、DODMP、DOPC、DDAB、DOSPA、EDLPC、EDMPC、DPH、TMADPH、CTAB、赖氨酰-PE、DC-Cho、-丙氨酰胆固醇；DCGS、DPPES、DCPE、DMAP、DMPE、DOGS、DOHME、DPEPC、Pluronic、Tween、BRIJ、缩醛磷脂、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰胆碱、甘油-3-乙基磷脂酰胆碱、二甲基铵丙烷、三甲基铵丙烷、二乙基铵丙烷、三乙基铵丙烷、二甲基双十八烷基溴化铵、鞘脂、鞘磷脂、溶血脂、糖脂、硫苷脂、鞘糖脂、胆固醇、胆固醇酯、胆固醇盐、油、N-琥珀酰基二油酰基磷脂酰乙醇胺、1,2-二油酰基-sn-甘油、1,3-二棕榈酰基-2-琥珀酰基甘油、1,2-二棕榈酰基-sn-3-琥珀酰基甘油、1-十六烷基-2-棕榈酰基甘油基磷脂酰乙醇胺、棕榈酰基同型半胱氨酸、N,N'-双(十二烷基氨基羰基亚甲基)-N,N'-双((-N,N,N-三甲基铵甲基-氨基羰基亚甲基)乙二胺四碘化物；N,N″-双(十六烷基氨基羰基亚甲基)-N,N',N″-三((-N,N,N-三甲基铵-乙基氨基羰基亚甲基二亚乙基三胺六碘化物；N,N'-双(十二烷基氨基羰基亚甲基)-N,N″-双((-N,N,N-三甲基铵乙基氨基羰基亚甲基)亚环己基-1,4-二胺四碘化物；1,7,7-四-((-N,N,N,N-四甲基铵甲基氨基-羰基亚甲基)-3-十六烷基氨基羰基-亚甲基-1,3,7-三氮杂庚烷七碘化物；N,N,N',N'-四((-N,N,N-三甲基铵-乙基氨基羰基亚甲基)-N'-(1,2-二油酰基甘油基-3-磷酰乙醇氨基羰基亚甲基)二亚乙基三胺四碘化物；二油酰基磷脂酰乙醇胺、脂肪酸、溶血脂、磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰甘油、磷脂酰肌醇、鞘脂、糖脂、类脂肪、硫苷脂、鞘糖脂、磷脂酸、棕榈酸、硬脂酸、花生四烯酸、油酸、携带聚合物的脂质、携带磺化糖的脂质、胆固醇、生育酚半琥珀酸酯、具有醚连接脂肪酸的脂质、具有酯连接脂肪酸的脂质、聚合脂质、磷酸二乙酰酯、硬脂胺，心磷脂、具有6至8个碳长度的脂肪酸的磷脂、具有不对称酰基链的磷脂、6-(5-胆甾烯-3b-基氧基)-1-硫代-b-D-半乳糖苷、二半乳糖基二甘油酯、6-(5-胆甾烯-3b-基氧基)己基-6-氨基-6-去氧基-1-硫代-b-D-半乳糖苷、6-(5-胆甾烯-3b-基氧基)己基-6-氨基-6-去氧基-1-硫代-a-D-吡喃甘露糖苷、12-(((7'-二乙基氨基-香豆素-3-基)羰基)甲基氨基)-十八烷酸；N-[12-(((7'-二乙基氨基香豆素-3-基)羰基)甲基-氨基)十八碳酰基]-2-氨基棕榈酸；胆甾醇基)4'-三甲基-铵)丁酸乙酯；N-琥珀酰基二油酰基-磷脂酰乙醇胺；1,2-二油酰基-sn-甘油；1,2-二棕榈酰基-3-琥珀酰基-甘油；1,3-二棕榈酰基-2-琥珀酰基甘油、1-十六烷基-2-棕榈酰基甘油基-磷酸乙醇胺；及棕榈酰基同型半胱氨酸。

本文公开的肽或肽类似物可以与一个或多个异源部分缀合，所述异源部分使缀合物起前药的作用。例如，美国专利号8,969,288和美国专利公开2016/0058881中所述的N-氨基酸相关部分可与本文公开的肽或肽类似物缀合，并且此类缀合物包括在本公开中。

根据一些实施方式，肽或肽类似物可以(共价或非共价)连接至渗透剂。如本文所用，短语“渗透剂”是指增强任何连接肽穿过细胞膜的易位的试剂。通常，基于肽的渗透剂具有氨基酸组合物，其含有高相对丰度的带正电荷的氨基酸(如赖氨酸或精氨酸)，或具有含有极性/带电荷氨基酸和非极性疏水性氨基酸的交替模式的序列。作为非限制性示例，可以使用细胞渗透肽(CPP)序列以便增强细胞内渗透。CPP可包括HIV TAT蛋白的蛋白转导结构域(PTD)的短版和长版，例如，如YARAAARQARA(SEQ ID NO：324)、YGRKKRR(SEQ ID NO：325)、YGRKKRRQRRR(SEQ ID NO：326)或RRQRR(SEQ ID NO：327)。然而，本公开不限于此，并且可以使用任何合适的渗透剂，如本领域技术人员已知的。增强细胞渗透的另一种方法是通过N-末端肉豆蔻酰化。在该蛋白质修饰中，肉豆蔻酰基基团(衍生自肉豆蔻酸)通过酰胺键共价连接至肽或肽类似物的N-末端氨基酸的α-氨基基团。

根据一些实施方式，修饰肽或肽类似物以包括持续时间增强部分。该持续时间增强部分可以是水溶性聚合物或长链脂肪族基团。在一些实施方式中，多个持续时间增强部分可以连接至肽或肽类似物，在这种情况下，每个持续时间增强部分的每个连接子独立地选自本文所述的接头。

根据一些实施方式，修饰肽或肽类似物的氨基末端，例如酰化。根据另外的实施方式，修饰羧基末端，例如，可以酰化、酰胺化、还原或酯化该羧基末端。根据一些实施方式，肽或肽类似物包含酰化氨基酸(例如，非编码酰化氨基酸(例如，包含对天然存在的氨基酸非天然的酰基基团的氨基酸))。根据一个实施方式，出于延长循环中的半衰期和/或延迟动作的开始和/或延长动作的持续时间和/或改善对蛋白酶的抗性的目的，该肽或肽类似物包含通过酯、硫酯、或酰胺连接连接至该肽或肽类似物的酰基基团。可以在肽或肽类似物内的任何位置(例如C-末端氨基酸)进行酰化，条件是如果不增强活性，则保持该活性。在一些实施方式中，可以在亲水性部分连接的相同氨基酸位置，或在不同的氨基酸位置处酰化肽。酰基基团可以直接与肽或肽类似物的氨基酸共价连接，或通过间隔子间接地与肽的氨基酸连接，其中，间隔子位于肽的氨基酸和酰基基团之间。

在特定方面，通过肽的氨基酸侧链的胺、羟基或巯基的直接酰化，将肽或肽类似物修饰为包含酰基基团。在这方面，酰化肽可包含SEQ ID NO：1、3至41、43至76、79至293、310至315、319至323及354至377中任一个的氨基酸序列，其被修饰为包含酰基基团。

在一些实施方式中，该肽或肽类似物包含类似物和酰基基团之间的间隔子。在一些实施方式中，该肽或肽类似物与间隔子共价结合，间隔子与酰基基团共价结合。在一些实施方式中，该间隔子是包含侧链胺基、羟基或巯基的氨基酸，或包括包含侧链胺基、羟基或巯基的氨基酸的二肽或三肽。与间隔子连接的氨基酸可以是包含允许与间隔子连接的部分的任何氨基酸(例如单或双α-取代的氨基酸)。例如，包含侧链NH₂、-OH或-COOH(例如Lys、Orn、Ser、Asp或Glu)的氨基酸是合适的。在一些实施方式中，该间隔子是包含侧链胺基、羟基或巯基的氨基酸，或包括包含侧链胺基、羟基或巯基的氨基酸的二肽或三肽。当通过间隔子的胺基基团发生酰化时，该酰化可以通过氨基酸的α-胺基或侧链胺基发生。在酰化α胺基的情况下，间隔子的氨基酸可以是任何氨基酸。例如，间隔子的氨基酸可以是疏水性氨基酸，例如Gly、Ala、Val、Leu、Ile、Trp、Met、Phe、Tyr、6-氨基己酸、5-氨基戊酸、7-氨基庚酸和8-氨基辛酸。可替换地，间隔子的氨基酸可以是酸性残基，例如Asp、Glu、同型谷氨酸、同型半胱磺酸、半胱磺酸、γ-谷氨酸。在酰化间隔子的氨基酸侧链胺基的情况下，间隔子的氨基酸是包含侧链胺基的氨基酸。在这种情况下，可以酰化间隔子的氨基酸的α胺基和侧链胺基，使得二酰化该肽或肽类似物。实施方式包括这种二酰化分子。当通过间隔子的羟基基团发生酰化时，二肽或三肽的氨基酸或氨基酸之一可以是Ser。当通过间隔子的巯基发生酰化时，二肽或三肽的氨基酸或氨基酸之一可以是Cys。在一些实施方式中，该间隔子是亲水性双官能间隔子。在某些实施方式中，该亲水性双官能间隔子包含两个或多个反应性基团，例如胺、羟基、巯基和羧基基团或其任何组合。在某些实施方式中，该亲水性双官能间隔子包含羟基基团和羧酸酯。在其它实施方式中，该亲水性双官能间隔子包含胺基基团和羧酸酯。在其它实施方式中，该亲水性双官能间隔子包含巯基基团和羧酸酯。

在特定实施方式中，该间隔子包含氨基聚(烷氧基)羧酸酯。在这方面，该间隔子可包含例如NH₂(CH₂CH₂O)_n(CH₂)_mCOOH，其中，m为1至6的任何整数，n为2至12的任何整数，如8-氨基-3,6-二氧杂辛酸，可从肽国际股份有限公司(Peptides International,Inc.)(肯塔基州，路易斯维尔)商购获得。在一些实施方式中，该间隔子是疏水性双官能间隔子。疏水性双官能间隔子在本领域中是已知的。参见，例如，Bioconjugate Techniques,G.T.Hermanson(Academic Press,San Diego,Calif.,1996)，其全部内容通过引用并入本文。在某些实施方式中，该疏水性双官能间隔子包含两个或多个反应性基团，例如胺、羟基、巯基和羧基或其任何组合。在某些实施方式中，该疏水性双官能间隔子包含羟基基团和羧酸酯。在其它实施方式中，该疏水性双官能间隔子包含胺基基团和羧酸酯。在其它实施方式中，该疏水性双官能间隔子包含巯基基团和羧酸酯。包含羧酸盐和羟基基团或巯基基团的合适疏水性双官能间隔子是本领域已知的，包括例如8-羟基辛酸和8-巯基辛酸。在一些实施方式中，该双官能间隔子不是在羧酸酯基团之间包含1-7个碳原子的非分支亚甲基的二羧酸。在一些实施方式中，该双官能间隔子是在羧酸酯基团之间包含1-7个碳原子的非分支亚甲基的二羧酸。在特定实施方式中，间隔子(例如氨基酸、二肽、三肽、亲水性双官能间隔子或疏水性双官能间隔子)的长度为3至10个原子(例如6至10个原子(例如6、7、8、9或10个原子))。在更特定的实施方式中，该间隔子的长度为约3至10个原子(例如6至10个原子)，并且酰基基团为C₁₂至C₁₈脂肪酰基基团，例如C₁₄脂肪酰基基团，C₁₆脂肪酰基基团，使得间隔子和酰基基团的总长度为14至28个原子，例如，约14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、或28个原子。在一些实施方式中，该间隔子和酰基基团的长度为17至28(例如19至26、19至21)个原子。根据某些前述实施方式，双官能间隔子可以是合成的或天然存在的氨基酸(包括但不限于本文所述的任何氨基酸)，其包含长度为3至10个原子的氨基酸主链(例如6-氨基己酸、5-氨基戊酸、7-氨基庚酸和8-氨基辛酸)。可替换地，间隔子可以是二肽或三肽间隔子，其具有长度为3至10个原子(例如6至10个原子)的肽主链。该二肽或三肽间隔子的每个氨基酸能够与该二肽或三肽的其它(各)氨基酸相同或不同，并且能够独立地选自由以下组成的组：天然存在的或编码的氨基酸和/或非编码的或非天然存在的氨基酸，包括例如天然存在的氨基酸(Ala、Cys、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Arg、Ser、Thr、Val、Trp、Tyr)的任何D或L异构体，或选自由以下组成的组中的非天然存在的或非编码的氨基酸的任何D或L异构体：β-丙氨酸(β-Ala)、N-α-甲基-丙氨酸(Me-Ala)、氨基丁酸(Abu)、γ-氨基丁酸(7-Abu)、氨基己酸(ε-Ahx)、氨基异丁酸(Aib)、氨基甲基吡咯羧酸、氨基哌啶羧酸、氨基丝氨酸(Ams)、氨基四氢吡喃-4-羧酸、精氨酸N-甲氧基-N-甲基酰胺、β-天冬氨酸(β-Asp)、氮杂环丁烷羧酸、3-(2-苯并噻唑基)丙氨酸、α-叔丁基甘氨酸、2-氨基-5-脲基-正戊酸(瓜氨酸，Cit)、β-环己基丙氨酸(Cha)、乙酰氨甲基-半胱氨酸、二氨基丁酸(Dab)、二氨基丙酸(Dpr)、二羟苯丙氨酸(DOPA)、二甲基噻唑烷(DMTA)、γ-谷氨酸(γ-Glu)、同型丝氨酸(Hse)、羟基脯氨酸(Hyp)、异亮氨酸N-甲氧基-N-甲基酰胺、甲基-异亮氨酸(MeIle)、异哌啶甲酸(Isn)、甲基-亮氨酸(MeLeu)、甲基-赖氨酸、二甲基-赖氨酸、三甲基-赖氨酸、甲醇基脯氨酸、蛋氨酸亚砜(Met(O))、蛋氨酸砜(Met(O₂))、正亮氨酸(Nle)、甲基-正亮氨酸(Me-Nle)、正缬氨酸(Nva)、鸟氨酸(Orn)、对氨基苯甲酸(PABA)、青霉胺(Pen)、甲基苯丙氨酸(MePhe)、4-氯苯丙氨酸(Phe(4-Cl))、4-氟苯丙氨酸(Phe(4-F))、4-硝基苯丙氨酸(Phe(4-NO₂))、4-氰基苯丙氨酸(Phe(4-CN))、苯甘氨酸(Phg)、哌啶基丙氨酸、哌啶基甘氨酸、3,4-脱氢脯氨酸、吡咯烷酮丙氨酸、肌氨酸(Sar)、硒代半胱氨酸(Sec)、O-苄基-磷酸丝氨酸、4-氨基-3-羟基-6-甲基庚酸(Sta)、4-氨基-5-环己基-3-羟基戊酸(ACHPA)、4-氨基-3-羟基-5-苯基戊酸(AHPPA)、1,2,3,4，-四氢-异喹啉-3-羧酸(Tic)、四氢吡喃甘氨酸、噻吩基丙氨酸(Thi)、O-苄基-磷酸酪氨酸、O-磷酸酪氨酸、甲氧基酪氨酸、乙氧基酪氨酸、O-(双-二甲氨基-膦酰基)-酪氨酸、硫酸化酪氨酸四丁基胺、甲基-缬氨酸(MeVal)、及烷基化3-巯基丙酸。在一些实施方式中，间隔子包含总负电荷，例如包含一个或两个带负电荷的氨基酸。在一些实施方式中，二肽不是通用结构AB的任何二肽，其中，A选自由Gly、Gln、Ala、Arg、Asp、Asn、Ile、Leu、Val、Phe和Pro组成的组，其中，B选自由Lys、His、Trp组成的组。在一些实施方式中，二肽间隔子选自由Ala-Ala、β-Ala-β-Ala、Leu-Leu、Pro-Pro、γ-氨基丁酸-γ-氨基丁酸、Glu-Glu和γ-Glu-γ-Glu组成的组。

通过胺基、羟基和巯基的肽酰化的合适方法是本领域已知的。参见，例如，Miller,Biochem Biophys Res Commun 218:377-382(1996)；Shimohigashi和Stammer,Int J PeptProtein Res 19:54-62(1982)和Previero等人,Biochim Biophys Acta 263:7-13(1972)(关于通过羟基酰化的方法)；以及San和Silvius,J Pept Res 66:169-180(2005)(关于通过巯基酰化的方法)；Bioconjugate Chem.“Chemical Modifications of Proteins:History and Applications”pages 1,2-12(1990)；Hashimot等人,Pharmaceutical Res.“Synthesis of Palmitoyl Derivatives of Insulin and their Biological Activity”Vol.6,No:2pp.171-176(1989)。酰化氨基酸的酰基基团可以是任何大小(例如任何长度)的碳链，并且可以是线性或分支的。在一些特定实施方式中，该酰基基团是C₄至C₃₀脂肪酸。例如，酰基基团可以是C₄脂肪酸、C₆脂肪酸、C₈脂肪酸、C₁₀脂肪酸、C₁₂脂肪酸、C₁₄脂肪酸、C₁₆脂肪酸、C₁₈脂肪酸、C₂₀脂肪酸、C₂₂脂肪酸、C₂₄脂肪酸、C₂₆脂肪酸、C₂₈脂肪酸或C₃₀脂肪酸中的任一种。在一些实施方式中，该酰基基团是C₈至C₂₀脂肪酸，例如C₁₄脂肪酸或C₁₆脂肪酸。在另一个可替换实施方式中，该酰基基团是胆汁酸。该胆汁酸可以是任何合适的胆汁酸，包括但不限于胆酸、鹅去氧胆酸、去氧胆酸、石胆酸、牛磺胆酸、甘氨胆酸和胆固醇酸。在一些实施方式中，肽或肽类似物包含通过肽或肽类似物上长链烷烃的酰化的酰化氨基酸。在特定方面，该长链烷烃包含与肽或肽类似物的羧基基团或其活化形式反应的胺、羟基或巯基(例如十八烷基胺、十四烷醇和十六烷硫醇)。肽或肽类似物的羧基基团或其活化形式可以是肽的氨基酸(例如谷氨酸、天冬氨酸)的侧链的一部分，或者可以是类似物主链的一部分。在某些实施方式中，通过与肽或肽类似物连接的间隔子对长链烷烃进行酰化，将肽或肽类似物修饰为包含酰基基团。在特定方面，该长链烷烃包含与间隔子的羧基基团或其活化形式反应的胺、羟基或巯基基团。本文描述了包含羧基基团或其活化形式的合适间隔子，其包括例如双官能间隔子，如氨基酸、二肽、三肽、亲水性双官能间隔子和疏水性双官能间隔子。

如本文所用，术语“活化形式”的羧基基团是指具有通式R(C＝O)X^a的羧基基团，其中，X^a是离去基团，且R是肽或间隔子。例如，羧基基团的活化形式可包括但不限于酰氯、酸酐和酯。在一些实施方式中，活化的羧基基团是具有N-羟基琥珀酰亚胺酯(NHS)离去基团的酯。

关于这些方面，其中，长链烷烃被肽或间隔子酰化，该长链烷烃可以是任何大小的并且可以包含任何长度的碳链。该长链烷烃可以是线性或分支的。在某些方面，该长链烷烃是C₄至C₃₀烷烃。例如，长链烷烃可以是C₄烷烃、C₆烷烃、C₈烷烃、C₁₀烷烃、C₁₂烷烃、C₁₄烷烃、C₁₆烷烃、C₁₈烷烃、C₂₀烷烃、C₂₂烷烃、C₂₄烷烃、C₂₆烷烃、C₂₈烷烃或C₃₀烷烃中的任一种。在一些实施方式中，该长链烷烃包含C₈至C₂₀烷烃，例如C₁₄烷烃、C₁₆烷烃或C₁₈烷烃。

而且，在一些实施方式中，用胆固醇酸酰化该肽或肽类似物的胺、羟基或巯基基团。在特定实施方式中，该肽或肽类似物通过烷基化的脱氨基Cys间隔子(即烷基化的3-巯基丙酸间隔子)与胆固醇酸连接。烷基化的脱氨基Cys间隔子可以是例如包含十二甘醇部分的脱氨基Cys间隔子。

可以进一步修饰本文所述的肽或肽类似物以包含亲水性部分。在一些特定实施方式中，该亲水性部分可包含聚乙二醇(PEG)链。亲水性部分的掺入可以通过任何合适的方式(如本文所述的任何方法)完成。在这方面，酰化肽可以是包括本文所述的任何修饰的SEQID NO：1、3至41、43至76、及79至293、310至315、319至323及354至377中的任一个，其中，至少一个氨基酸包含酰基基团，并且至少一个氨基酸与亲水性部分(例如PEG)共价键合。在一些实施方式中，该酰基基团通过包含Cys、Lys、Orn、homo-Cys或Ac-Phe的间隔子连接，并且在Cys残基处掺入亲水性部分。

可替换地，肽或肽类似物可包含间隔子，其中，酰化并修饰间隔子以包含亲水性部分。合适的间隔子的非限制性示例包括包含选自由Cys、Lys、Orn、homo-Cys和Ac-Phe组成的组中的一个或多个氨基酸的间隔子。

根据一些实施方式，该肽或肽类似物包含烷基化氨基酸(例如，非编码烷基化氨基酸(例如，包含对天然存在的氨基酸非天然的烷基基团的氨基酸))。烷基化可以在肽或肽类似物内的任何位置进行，包括本文所述的任何位置作为酰化位点，包括但不限于任何氨基酸位置、C-末端延伸内的位置处、或C-末端处，条件是保留生物活性。烷基基团可以直接与肽或肽类似物的氨基酸共价连接，或通过间隔子间接地与肽或肽类似物的氨基酸连接，其中，间隔子位于肽的氨基酸和烷基基团之间。可以在亲水性部分连接的相同氨基酸位置，或在不同的氨基酸位置处烷基化肽或肽类似物。在特定方面，通过肽的氨基酸侧链的胺、羟基或巯基的直接烷基化，将肽或肽类似物修饰为包含烷基基团。在这方面，烷基化肽可包含至少一个氨基酸被修饰为包含侧链胺、羟基或巯基的任何氨基酸的氨基酸序列。在其它实施方式中，包含侧链胺、羟基或巯基的氨基酸是二取代的氨基酸。在一些实施方式中，烷基化肽包含肽和烷基基团之间的间隔子。在一些实施方式中，该肽或肽类似物与间隔子共价结合，该间隔子与烷基基团共价结合。在一些示例性实施方式中，通过间隔子的胺、羟基或巯基的烷基化将肽修饰为包含烷基基团，该间隔子连接至氨基酸的侧链。与间隔子连接的氨基酸可以是包含允许与间隔子连接的部分的任何氨基酸。例如，包含侧链NH₂、-OH或-COOH(例如Lys、Orn、Ser、Asp或Glu)的氨基酸是合适的。在一些实施方式中，该间隔子是包含侧链胺基、羟基或巯基的氨基酸或包括包含侧链胺基、羟基或巯基的氨基酸的二肽或三肽。当通过间隔子的胺基基团发生烷基化时，该烷基化可以通过氨基酸的α-胺基或侧链胺基发生。在烷基化α胺基的情况下，间隔子的氨基酸可以是任何氨基酸。例如，间隔子的氨基酸可以是疏水性氨基酸，例如Gly、Ala、Val、Leu、Ile、Trp、Met、Phe、Tyr、6-氨基己酸、5-氨基戊酸、7-氨基庚酸和8-氨基辛酸。可替换地，间隔子的氨基酸可以是酸性残基，例如Asp和Glu，条件是烷基化发生在酸性残基的α胺基上。在烷基化间隔子的氨基酸侧链胺基的情况下，间隔子的氨基酸是包含侧链胺基的氨基酸，例如式I的氨基酸(例如Lys或Orn)。在这种情况下，可以烷基化间隔子的氨基酸的α胺基和侧链胺基，使得二烷基化该肽或肽类似物。实施方式包括这种二烷基化分子。当通过间隔子的羟基基团发生烷基化时，氨基酸可以是Ser。当通过间隔子的巯基基团发生烷基化时，氨基酸可以是Cys。在一些实施方式中，该间隔子是亲水性双官能间隔子。在某些实施方式中，该亲水性双官能间隔子包含两个或多个反应性基团，例如胺、羟基、巯基和羧基基团或其任何组合。在某些实施方式中，该亲水性双官能间隔子包含羟基基团和羧酸酯。在其它实施方式中，该亲水性双官能间隔子包含胺基基团和羧酸酯。在其它实施方式中，该亲水性双官能间隔子包含巯基基团和羧酸酯。在特定实施方式中，该间隔子包含氨基聚(烷氧基)羧酸酯。在这方面，该间隔子可包含例如NH₂(CH₂CH₂O)_n(CH₂)_mCOOH，其中，m为1至6的任何整数，n为2至12的任何整数，如8-氨基-3,6-二氧杂辛酸，可从肽国际股份有限公司(Peptides International,Inc.)(肯塔基州，路易斯维尔)商购获得。包含羧酸盐和羟基基团或巯基基团的合适疏水性双官能间隔子是本领域已知的，包括例如8-羟基辛酸和8-巯基辛酸。在特定实施方式中，间隔子(例如氨基酸、二肽、三肽、亲水性双官能间隔子或疏水性双官能间隔子)的长度为3至10个原子(例如6至10个原子(例如6、7、8、9或10个原子))。在更特定的实施方式中，该间隔子的长度为约3至10个原子(例如6至10个原子)，并且烷基为C₁₂至C₁₈烷基基团，例如C₁₄烷基基团，C₁₆烷基基团，使得间隔子和烷基基团的总长度为14至28个原子，例如，约14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、或28个原子。在一些实施方式中，该间隔子和烷基的长度为17至28(例如19至26、19至21)个原子。根据某些前述实施方式，双官能间隔子可以是合成的或非天然存在的或非编码的氨基酸，其包含长度为3至10个原子的氨基酸主链(例如，6-氨基己酸、5-氨基戊酸、7-氨基庚酸和8-氨基辛酸)。可替换地，间隔子可以是二肽或三肽间隔子，其具有长度为3至10个原子(例如6至10个原子)的肽主链。二肽或三肽间隔子可以由天然存在的或编码的和/或非编码的或非天然存在的氨基酸组成，包括例如本文教导的任何氨基酸。在一些实施方式中，间隔子包含总负电荷，例如包含一个或两个带负电荷的氨基酸。在一些实施方式中，二肽间隔子选自由Ala-Ala、β-Ala-β-Ala、Leu-Leu、Pro-Pro、γ-氨基丁酸-γ-氨基丁酸和γ-Glu-γ-Glu组成的组。通过胺基、羟基和巯基的肽烷基化的合适方法是本领域已知的。例如，Williamson醚合成可用于在肽的羟基基团和烷基基团之间形成醚连接。而且，肽或肽类似物与烷基卤的亲核取代反应可以产生任何醚、硫醚或氨基连接。烷基化肽或肽类似物的烷基基团可以是任何大小(例如任何长度)的碳链，并且可以是线性或分支的。在一些实施方式中，该烷基基团是C₄至C₃₀烷基。例如，该烷基基团可以是C₄烷基、C₆烷基、C₈烷基、C₁₀烷基、C₁₂烷基、C₁₄烷基、C₁₆烷基、C₁₈烷基、C₂₀烷基、C₂₂烷基、C₂₄烷基、C₂₆烷基、C₂₈烷基或C₃₀烷基中的任一种。在一些实施方式中，该烷基基团是C₈至C₂₀烷基，例如C₁₄烷基或C₁₆烷基。在本公开的一些实施方式中，肽或肽类似物通过使亲核的长链烷烃与肽或肽类似物反应而包含烷基化的氨基酸，其中，肽或肽类似物包含适于亲核取代的离去基团。在特定方面，长链烷烃的亲核基团包含胺基、羟基或巯基基团(例如，十八烷基胺、十四烷醇和十六烷硫醇)。肽或肽类似物的离去基团可以是氨基酸侧链的一部分或可以是肽主链的一部分。合适的离去基团包括例如N-羟基琥珀酰亚胺，卤素和磺酸酯。在某些实施方式中，通过使亲核的长链烷烃与连接至肽或肽类似物的间隔子反应，将肽或肽类似物修饰为包含烷基基团，其中，间隔子包含离去基团。在特定方面，该长链烷烃包含胺基、羟基或巯基基团。在某些实施方式中，包含离去基团的间隔子可以是本文讨论的任何间隔子，例如还包含合适的离去基团的氨基酸、二肽、三肽、亲水性双官能间隔子和疏水性双官能间隔子。关于本公开的这些方面，其中，长链烷烃被肽或间隔子烷基化，该长链烷烃可以是任何大小的并且可以包含任何长度的碳链。该长链烷烃可以是线性或分支的。在某些方面，该长链烷烃是C₄至C₃₀烷烃。例如，长链烷烃可以是C₄烷烃、C₆烷烃、C₈烷烃、C₁₀烷烃、C₁₂烷烃、C₁₄烷烃、C₁₆烷烃、C₁₈烷烃、C₂₀烷烃、C₂₂烷烃、C₂₄烷烃、C₂₆烷烃、C₂₈烷烃或C₃₀烷烃中的任一种。在一些实施方式中，该长链烷烃包含C₈至C₂₀烷烃，例如C₁₄烷烃、C₁₆烷烃或C₁₈烷烃。而且，在一些实施方式中，烷基化可以在肽和胆固醇部分之间发生。例如，胆固醇的羟基基团可代替长链烷烃上的离去基团以形成胆固醇-肽产物。可以进一步修饰本文所述的烷基化肽以包含亲水性部分。在一些特定实施方式中，该亲水性部分可包含聚乙二醇(PEG)链。亲水性部分的掺入可以通过任何合适的方式(如本文所述的任何方法)完成。可替换地，烷基化肽可包含间隔子，其中，烷基化并修饰间隔子以包含亲水性部分。合适的间隔子的非限制性示例包括包含选自由Cys、Lys、Orn、homo-Cys和Ac-Phe组成的组中的一个或多个氨基酸的间隔子。

制备肽和肽类似物的方法

本文公开的肽和肽类似物以多种方式制备，包括但不限于实施例1中所述的任何方式。新合成肽的合适方法描述于例如N.Leo Benoiton,Chemistry of Peptide Synthesis CRC Press,Boca Raton,FL,2006；Merrifield,J.Am.Chem.Soc,85,2149(1963)；Davis等人,Biochem.Intl.,10,394-414(1985)；Larsen等人,J.Am.Chem.Soc,115,6247(1993)；Smith等人,J.Peptide Protein Res.,44,183(1994)；O'Donnell等人,J.Am.Chem.Soc,118,6070(1996)；Stewart和Young,Solid Phase Peptide Synthesis,Freeman(1969)；Finn等人,The Proteins,3ed.,vol.2,pp.105-253(1976)；Erickson等人,The Proteins,3^rd ed.,vol.2,pp.257-527(1976)；以及Chan等人,Fmoc Solid PhasePeptide Synthesis,Oxford University Press,Oxford,United Kingdom,2005。本公开设想了合成肽。制备肽的方法本身就是本发明的实施方式。因此，本公开提供了一种产生肽或肽类似物的方法。在示例性实施方式中，该方法包含(i)使第一氨基酸与第二氨基酸反应以在第一氨基酸和第二氨基酸之间形成共价连接，其中，所述第一氨基酸或第二氨基酸任选地连接至另一个氨基酸，和(ii)重复(i)的反应步骤，由此产生肽或肽类似物。在示例性方面，该方法包含一个或多个固相合成步骤。在示例性方面，该方法包含实施例1中所述的一个或多个步骤。

可替换地，可以通过将编码肽的核酸引入宿主细胞中来重组表达肽，可以使用标准重组方法培养所述宿主细胞以表达肽。参见，例如，Sambrook等人,Molecular Cloning:ALaboratory Manual.3rd ed.,Cold Spring Harbor Press,Cold Spring Harbor,N.Y.2001；以及Ausubel等人,Current Protocols in Molecular Biology,GreenePublishing Associates和John Wiley&Sons,N.Y.,1994。可从培养基或细胞沉淀(cellpellet)中纯化此类肽。

在一些实施方式中，可以分离本公开的肽。在一些实施方式中，可以纯化本公开的肽。认识到“纯度”是相对术语，并不一定被解释为绝对纯度或绝对富集或绝对选择。在一些方面，该纯度为至少或约50％，为至少或约60％、至少或约70％、至少或约80％、或至少或约90％(例如，至少或约91％、至少或约92％、至少或约93％、至少或约94％、至少或约95％、至少或约96％、至少或约97％、至少或约98％、至少或约99％或接近100％)。

在一些实施方式中，本文所述的肽可以由公司商业合成，如Genscript(Piscataway,NJ)、New England Peptide(Gardner，MA)、以及CPC Scientific(Sunnyvale，CA)、Peptide Technologies Corp.(Gaithersburg，Md.)、以及Multiple Peptide Systems(San Diego，Calif.)。在这方面，肽可以是合成的、重组的、分离的和/或纯化的。

核酸

本文提供了包含编码本文所述的任何肽或缀合物(包括其肽类似物)的核苷酸序列的核酸。核酸可包含编码任何肽或其类似物或缀合物的任何核苷酸序列。

本文所用的“核酸”包括“多核苷酸”、“寡核苷酸”和“核酸分子”，并且通常是指DNA或RNA的聚合物，其可以是单链或双链的，由天然来源合成的或获得的(例如分离和/或纯化的)，可以含有天然的、非天然的或改变的核苷酸，并且可以含有天然的、非天然的或改变的核苷酸间连接，如氨基磷酸酯连接或硫代磷酸酯连接，而不是在未修饰的寡核苷酸的核苷酸之间发现的磷酸二酯。在一些实施方式中，该核酸不包含任何插入、缺失、倒置和/或取代。在其它实施方式中，该核酸包含一个或多个插入、缺失、倒置和/或取代。

在一些方面，本公开的核酸是重组的。如本文所用，术语“重组”是指(i)通过将天然或合成的核酸片段连接至可在活细胞中复制的核酸分子而在活细胞外构建的分子，或(ii)由上述(i)中所述的那些分子复制产生的分子。出于本文的目的，该复制可以是体外复制或体内复制。

在一些方面中，基于化学合成和/或酶促连接反应使用本领域已知的程序构建核酸。参见，例如，Sambrook等人，同上；和Ausubel等人，同上。例如，可以使用天然存在的核苷酸或各种修饰的核苷酸(例如硫代磷酸酯衍生物和吖啶取代的核苷酸)化学合成核酸，所述各种修饰的核苷酸设计用于增加分子的生物稳定性或增加杂交时形成的双链体的物理稳定性。可用于产生核酸的经修饰的核苷酸的示例包括但不限于5-氟尿嘧啶、5-溴尿嘧啶、5-氯尿嘧啶、5-碘尿嘧啶、次黄嘌呤、黄嘌呤、4-乙酰基胞嘧啶、5-(羧基羟甲基)尿嘧啶、5-羧基甲基氨基甲基-2-硫代尿苷、5-羧基甲基氨基甲基尿嘧啶、二氢尿嘧啶、β-D-半乳糖Q核苷、肌苷、N⁶-异戊烯基腺嘌呤、1-甲基鸟嘌呤、1-甲基肌苷、2,2-二甲基鸟嘌呤、2-甲基腺嘌呤、2-甲基鸟嘌呤、3-甲基胞嘧啶、5-甲基胞嘧啶、N–取代腺嘌呤、7-甲基鸟嘌呤、5-甲基氨基甲基尿嘧啶、5-甲氧基氨基甲基-2-硫尿嘧啶、β-D-甘露糖基Q核苷、5’-甲氧基羟甲基尿嘧啶、5-甲氧基尿嘧啶、2-甲硫基-N⁶-异戊烯腺嘌呤、尿嘧啶-5-羟基乙酸(v)、wybutoxosine、假尿嘧啶、Q核苷、2-硫代胞嘧啶、5-甲基-2-硫代尿嘧啶、2-硫代尿嘧啶、4-硫代尿嘧啶、5-甲基尿嘧啶、尿嘧啶-5-氧乙酸甲酯、3-(3-氨基-3-N-2-羧基丙基)尿嘧啶及2,6-二氨基嘌呤。可替换地，本发明的一种或多种核酸可购自公司，如MacromolecularResources(Fort Collins，CO)和Synthegen(Houston，TX)。

表达载体

在一些方面，将本公开的核酸掺入表达载体中。在这方面，本公开提供了包含任何本发明公开的核酸的表达载体。出于本文的目的，术语“表达载体”是指允许宿主细胞表达mRNA、蛋白质、多肽或肽的遗传修饰的寡核苷酸或多核苷酸构建体，当该构建体包含编码mRNA、蛋白质、多肽或肽的核苷酸序列时，在足以使细胞内表达mRNA、蛋白质、多肽或肽的条件下使载体与细胞接触。本公开的载体整体上不是天然存在的。然而，该载体的部分可以是天然存在的。本发明公开的表达载体可包含任何类型的核苷酸，包括但不限于DNA和RNA，其可以是单链或双链的，部分地由天然来源合成或获得，并且可以含有天然的、非天然或改变的核苷酸。该表达载体可包含天然存在的或非天然存在的核苷酸间连接，或两种类型的连接。在一些方面，改变的核苷酸或非天然存在的核苷酸间连接不妨碍载体的转录或复制。

本公开的表达载体可以是任何合适的表达载体，并且可以用于转化或转染任何合适的宿主。合适的载体包括设计用于繁殖和扩增或用于表达或两者的载体，如质粒和病毒。该载体可选自由pUC系列(Fermentas Life Sciences)、pBluescript系列(Stratagene，LaJoIIa，CA)、pET系列(Novagen，Madison，WI)、pGEX系列(Pharmacia Biotech，Uppsala，Sweden)和pEX系列(Clontech，Palo Alto，CA)组成组。还可以使用噬菌体载体，如λGTIO、λGT11、λZapII(Stratagene)，λEMBL4和λNM1149。植物表达载体的示例包括pBIO1、pBI101.2、pBI101.3、pBI121和pBIN19(Clontech)。动物表达载体的示例包括pEUK-Cl、pMAM和pMAMneo(Clontech)。在一些方面，重组表达载体是病毒载体，例如逆转录病毒载体。

本公开的表达载体可以使用例如Sambrook等(同上)和Ausubel等(同上)所述的标准重组DNA技术制备。可以制备环状或线性的表达载体构建体以在原核或真核宿主细胞中含有功能性复制系统。复制系统可以衍生自例如CoIE1、2μ质粒、λ、SV40、牛乳头瘤病毒等。

在一些方面，表达载体包含调节序列(如转录和翻译起始和终止密码子)，该调节序列对向其中引入载体的宿主(例如，细菌、真菌、植物或动物)的类型是特异的，适当时并考虑该载体是基于DNA还是基于RNA。

该表达载体可包括一个或多个标记基因，其允许选择转化或转染的宿主。标记基因包括杀生物剂抗性(例如对抗生素、重金属等的抗性)，营养缺陷型宿主中的互补以提供原养性等。用于本公开的表达载体的合适标记基因包括，例如，新霉素/G418抗性基因、潮霉素抗性基因、组氨醇抗性基因、四环素抗性基因和氨苄青霉素抗性基因。

表达载体可包含与编码肽的核苷酸序列可操作地连接的天然或标准启动子，或与编码肽的核苷酸序列互补或与其杂交的核苷酸序列。启动子(例如强、弱、诱导型、组织特异性型和发育特异型)的选择在技术人员的普通技术范围内。类似地，核苷酸序列与启动子的组合也在技术人员的技术范围内。启动子可以是非病毒启动子或病毒启动子，例如巨细胞病毒(CMV)启动子、SV40启动子、RSV启动子和在鼠干细胞病毒的长末端重复中发现的启动子。

本公开的表达载体可以被设计用于瞬时表达、稳定表达或两者。而且，可以使该表达载体用于组成型表达或用于诱导型表达。此外，可以使表达载体包括自杀基因。如本文所用，术语“自杀基因”是指使表达自杀基因的细胞死亡的基因。在一些方面，自杀基因是赋予表达基因的细胞对试剂(例如药物)敏感性，并且当细胞与试剂接触或暴露于试剂时使细胞死亡的基因。自杀基因是本领域已知的(参见，例如Suicide Gene Therapy:Methods andReviews.Springer,Caroline J.(Cancer Research UK Centre for CancerTherapeutics at the Institute of Cancer Research,Sutton,Surrey,UK),HumanaPress,2004)，并且包括例如，单纯疱疹病毒(HSV)胸苷激酶(TK)基因、胞嘧啶脱氨酶、嘌呤核苷磷酸化酶和硝基还原酶。

宿主细胞

本公开提供了包含本文所述的核酸或表达载体的宿主细胞。如本文所用，术语“宿主细胞”是指可含有本公开的表达载体的任何类型的细胞。在某些方面，宿主细胞是真核细胞，例如植物、动物、真菌或藻类，或可以是原核细胞，例如细菌或原生动物。在某些方面，宿主细胞是培养细胞或原代细胞，即直接从生物体(例如人)中分离。在某些方面，宿主细胞是贴壁细胞或悬浮细胞，即悬浮生长的细胞。合适的宿主细胞是本领域已知的，包括例如DH5α大肠杆菌细胞、中国仓鼠卵巢细胞、猴VERO细胞、COS细胞、HEK293细胞等。出于扩增或复制表达载体的目的，在某些方面，宿主细胞是原核细胞，例如DH5α细胞。出于产生肽的目的，在某些方面，宿主细胞是哺乳动物细胞，例如人细胞。宿主细胞可以是任何细胞类型，可以源自任何类型的组织，并且可以处于任何发育阶段。

本发明还提供了一种包含至少一种本文所述宿主细胞的细胞群。除了至少一种不包含任何核酸或表达载体的其它细胞外，在一些方面，细胞群是包含宿主细胞的异质群体，所述宿主细胞包含本文所述的任何核酸或表达载体。可替换地，在一些方面，细胞群是基本上同质的群体，其中，该群体主要包括包含表达载体的宿主细胞(例如，基本上由…组成)。在一些方面，该群体是克隆细胞群，其中，该群体的所有细胞都是包含表达载体的单个宿主细胞的克隆，使得该群体的所有细胞都包含表达载体。在本发明的一个实施方式中，该细胞群是包含宿主细胞的克隆群，所述宿主细胞包含如本文所述的核酸或表达载体。

药物组合物和制剂

本文提供了包含肽、肽类似物、缀合物、核酸、表达载体、宿主细胞或其组合、以及运载体、赋形剂或稀释剂的组合物。在示例性方面，该组合物是药物组合物。“药物组合物”是指适用于动物或人的药物用途的组合物。药物组合物包含药理上和/或治疗有效量的活性剂和药学上可接受的赋形剂或运载体。药物组合物及其制备方法对于本领域技术人员来说是显而易见的。这些组合物及其制备方法可以在例如Reming’on's PharmaceuticalSciences，19th Edition(Mack Publishing Company，1995)中找到。通常将药物组合物配制成无菌的，基本上等渗的并且完全符合美国食品和药品管理局的所有GMP规定。该术语还包括美国药典中列出的任何用于动物(包括人)用途的试剂。合适的药物运载体和制剂描述于Reming’on's Pharmaceutical Sciences,21st Ed.2005,Mack Publishing Co,Easton中。“药学上可接受的运载体”或“药学上可接受的赋形剂”是指当施用于动物或人时不产生不利、过敏或其它不良反应的组合物。如本文所用，“药学上可接受的运载体”或“药学上可接受的赋形剂”包括生理上相容的任何和所有溶剂、分散介质、包衣、抗菌剂及抗真菌剂、等渗剂及延迟吸收剂等。药学上可接受的赋形剂的一些示例是水、盐水、磷酸盐缓冲盐水、右旋糖、甘油、乙醇等及其组合。在许多情况下，赋形剂将包括组合物中的等渗剂(如糖)、多元醇(如甘露醇、山梨糖醇)或氯化钠。药学上可接受的赋形剂的其它示例是润湿剂或少量辅助物质(如润湿剂或乳化剂、防腐剂或缓冲剂)，其可增强肽的保质期或有效性。

在示例性方面，药物组合物包含任何药学上可接受的成分，包括例如酸化剂、添加剂、吸附剂、气雾剂推进剂、空气替换剂、碱化剂、抗结块剂、抗凝剂、抗微生物防腐剂、抗氧化剂、消毒剂、基质、粘结剂、缓冲剂、螯合剂、包衣剂、着色剂、干燥剂、洗涤剂、稀释剂、消毒剂、崩解剂、分散剂、溶解增强剂、染料、润滑物、乳化剂、乳化稳定剂、填充剂、成膜剂、风味增强剂、调味剂、流动增强剂、胶凝剂、粒化剂、保湿剂、润滑剂、粘膜粘合剂、软膏基质、软膏、油脂运输体、有机基质、锭剂基质、颜料、增塑剂、抛光剂、防腐剂、隐蔽剂、皮肤渗透剂、增溶剂、溶剂、稳定剂、栓剂基质、表面活性剂、表面活性物质、悬浮剂、甜味剂、治疗剂、增稠剂、张力剂、毒性剂、增粘剂、吸水剂、水混溶共溶剂、水软化剂、或湿润剂。

在一些实施方式中，前述组分可以至少A的任何浓度存在于药物组合物中，例如，如其中，A为0.0001％w/v、0.001％w/v、0.01％w/v、0.1％w/v、1％w/v、2％w/v、5％w/v、10％w/v、20％w/v、30％w/v、40％w/v、50％w/v、60％w/v、70％w/v、80％w/v或90％w/v。在一些实施方式中，前述组分可以至多B的任何浓度存在于药物组合物中，例如，如其中，B为90％w/v、80％w/v、70％w/v、60％w/v、50％w/v、40％w/v、30％w/v、20％w/v、10％w/v、5％w/v、2％w/v、1％w/v、0.1％w/v、0.001％w/v或0.0001％。在其它实施方式中，前述组分可以任何浓度范围存在于药物组合物中，例如，如约A至约B。在一些实施方式中，A为0.0001％且B为90％。

在一些实施方式中，药物组合物以适合于对患者施用的纯度水平包含本文公开的任何肽或肽类似物。在一些实施方式中，类似物具有至少约90％，优选高于约95％，更优选高于约99％的纯度水平，和药学上可接受的稀释剂、运载体或赋形剂。在示例性方面，药物组合物是无菌的。

可以配制药物组合物以实现生理学上相容的pH。在一些实施方式中，药物组合物的pH可以为至少2、或至少3、或至少4、或至少5、或至少6、或至少7、或至少8，这取决于施用的制剂和途径。在一些实施方式中，药物组合物的pH可以为3至9。

在一个实施方式中，可以通过基因治疗方法作为其核苷酸等同物施用肽。在一个实施方式中，在质粒或载体中编码肽相关多核苷酸，该质粒或载体可以衍生自腺相关病毒(AAV)。AAV可以是重组AAV病毒，并且可以包含衣壳血清型，如但不限于AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV9.47、AAV9(hu14)、AAV10、AAV11、AAV12、AAVrh8、AAVrh10、AAV-DJ及AAV-DJ8。作为非限制性示例，重组AAV病毒的衣壳是AAV2。作为非限制性示例，重组AAV病毒的衣壳是AAVrh10。作为非限制性示例，重组AAV病毒的衣壳是AAV9(hu14)。作为非限制性示例，重组AAV病毒的衣壳是AAV-DJ。作为非限制性示例，重组AAV病毒的衣壳是AAV9.47。作为非限制性示例，重组AAV病毒的衣壳是AAV-DJ8。一个实施方式包含SEQ ID NO：1、3至41、43至76、79至293、310至315、319至323及354至377的肽序列的核苷酸等同物。

本领域技术人员可以认识到靶细胞可能需要特异性的启动子，包括但不限于物种特异性、诱导型、组织特异性或细胞周期特异性的启动子，参见Parr等人,Nat.Med.3:1145-9(1997)；其内容通过引用整体并入本文中。

如本文所用，“载体”是转运、转导或以其它方式充当异源分子(如本发明的多核苷酸)的运载体的任何分子或部分。“病毒载体”是包含编码或包含目的有效负载分子的一个或多个多核苷酸区域的载体，例如编码多肽或多个多肽的转基因、多核苷酸。本发明的病毒载体可以重组产生，并且可以基于腺相关病毒(AAV)亲本或参考序列。可用于本发明的血清型包括由AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV9.47、AAV9(hul4)、AAV10、AAV11、AAV12、AAVrh8、AAVrhlO、AAV-DJ及AAV-DJ8产生的任何血清型。

在一个实施方式中，可用于本发明的血清型可以是AAV-DJ8。AAV-DJ8的氨基酸序列可包含两个或多个突变以除去肝素结合结构域(HBD)。作为非限制性示例，在美国专利号7,588,772中描述为SEQ ID NO：1的AAV-DJ序列(其内容通过引用整体并入本文)可包含两个突变：(1)R587Q，其中，位于氨基酸587处的精氨酸(R；arg)改变为谷氨酰胺(Q；gln)；及(2)R590T，其中，位于氨基酸590处的精氨酸(R；arg)改变为苏氨酸(T；thr)。作为另一个非限制性示例，可包含三个突变：(1)K406R，其中，位于氨基酸406处的赖氨酸(K；lys)改变为精氨酸(R；arg)；(2)R587Q，其中，位于氨基酸587处的精氨酸(R；arg)改变为谷氨酰胺(Q；gln)；及(3)R590T，其中，位于氨基酸590处的精氨酸(R；arg)改变为苏氨酸(T；thr)。

AAV载体还可以包含自身互补的AAV载体(scAAV)。scAAV载体含有两种DNA链，该两种DNA链一起退火以形成双链DNA。通过跳过第二链合成，scAAV允许在细胞中快速表达。

在一个实施方式中，该药物组合物包含重组腺相关病毒(AAV)载体，该重组腺相关病毒载体包含AAV衣壳和AAV载体基因组。AAV载体基因组可包含至少一种本文所述的肽相关多核苷酸，如但不限于SEQ ID NO：1、3至41、43至76、79至293、310至315、319至323及354至377或与其具有至少95％同一性的变体。药物组合物中的重组AAV载体可以有至少70％含有AAV载体基因组。

在一个实施方式中，该药物组合物包含重组腺相关病毒(AAV)载体，该重组腺相关病毒载体包含AAV衣壳和AAV载体基因组。AAV载体基因组可包含至少一种本文所述的肽相关多核苷酸，如但不限于SEQ ID NO：1、3至41、43至76、79至293、310至315、319至323及354至377或与其具有至少95％同一性的变体及附加N-末端脯氨酸。药物组合物中的重组AAV载体可以有至少70％含有AAV载体基因组。

在一个实施方式中，可以使用欧洲专利申请号EP1857552中所述的AAV病毒体的递送方法施用或递送包含肽相关多核苷酸的病毒载体，其内容通过引用整体并入本文。

在一个实施方式中，可以使用用于欧洲专利申请号EP2678433中所述的AAV载体递送蛋白质的方法施用或递送包含肽相关多核苷酸的病毒载体，其内容通过引用整体并入本文。

在一个实施方式中，可以使用美国专利号US5858351中所述的AAV载体递送DNA分子的方法施用或递送包含肽相关多核苷酸的病毒载体，其内容通过引用整体并入本文。

在一个实施方式中，可以使用美国专利号US6211163中所述的将DNA递送至血流的方法施用或递送包含肽相关多核苷酸的病毒载体，其内容通过引用整体并入本文。

在一个实施方式中，可以使用美国专利号US6325998中所述的递送AAV病毒体的方法施用或递送包含肽相关多核苷酸的病毒载体，其内容通过引用整体并入本文。

在一个实施方式中，可以使用美国专利号US7588757中所述的将有效负载递送至中枢神经系统的方法施用或递送包含肽相关多核苷酸的病毒载体，其内容通过引用整体并入本文。

在一个实施方式中，可以使用美国专利号US8283151中所述的递送有效负载的方法施用或递送包含肽相关多核苷酸的病毒载体，其内容通过引用整体并入本文。

在一个实施方式中，可以使用国际专利公开号WO2001089583中所述的谷氨酸脱羧酶(GAD)递送载体递送有效负载的方法施用或递送包含肽相关多核苷酸的病毒载体，其内容通过引用整体并入本文。

在一个实施方式中，可以使用国际专利公开号WO2012057363中所述的将有效负载递送至神经细胞的方法施用或递送包含肽相关多核苷酸的病毒载体，其内容通过引用整体并入本文。

在一个实施方式中，可以使用美国专利号9585971中所述的将有效负载递送至细胞的方法施用或递送包含肽相关多核苷酸的病毒载体，其内容通过引用整体并入本文。

在一个实施方式中，可以使用Deverman等人，Nature Biotechnology,34,204-09(2016)中描述的用于向细胞递送有效负载的方法施用或递送包含肽相关多核苷酸的病毒载体。

在一个实施方式中，可以使用US7198951[腺相关病毒(AAV)血清型9序列、含有其的载体及其用途]、US 9217155[新型AAV的分离及其用途]、WO2011126808[药理学诱导转基因消融系统]、US6015709[转录激活因子、与其有关的组合物及用途]、US7094604[假型重组AAV病毒体的产生]、WO2016126993[抗tau构建体]、US7094604[重组AAV衣壳蛋白]、US8,292,769[禽腺相关病毒(aaav)及其用途]、US9102949[CNS靶向aav载体及其使用方法]、US20160120960[腺相关病毒介导基因转移至中枢神经系统]、WO2016073693[用于治疗帕金森病的AADC多核苷酸]、WO2015168666[用于视网膜及CNS基因疗法的AAV载体]、US20090117156[A型尼曼-皮克病的基因疗法]或WO2005120581[神经代谢障碍的基因疗法]中所述的AAV病毒体的递送方法施用或递送包含肽相关多核苷酸的病毒载体。

可通过生物利用度、治疗窗口和/或分布容积中的一种或多种表征本文所述的病毒载体的药物组合物。

在一些实施方式中，本发明的肽相关核苷酸和/或肽相关核苷酸组合物可以与装置组合、包被在装置上或嵌入装置中。装置可包括但不限于支架、泵和/或其它可植入治疗装置。另外，当受试者正在使用压迫装置(如但不限于减少受试者中深静脉血栓形成(DVT)机会的压迫装置)时，可将肽相关核苷酸和/或肽相关核苷酸组合物递送至受试者。本发明提供了可以掺入编码一种或多种肽相关多核苷酸有效负载分子的病毒载体的装置。这些装置以稳定的制剂含有病毒载体，该病毒载体可以立即被递送给有此需要的受试者，如人患者。

根据本文教导的单剂量、多剂量或分次剂量方案，可以利用用于施用的装置递送包含本发明的肽相关核苷酸的病毒载体。

脑施用

在本发明的一些实施方式中，将本发明的肽或组合物递送至CNS可以通过全身施用注射到CSF途径中，或直接注射到脑中，并且在一些实施方式中，配制用于任何这些途径的本发明组合物。在一个实施方式中，为了在CNS中的靶向作用，通过全身或直接施用至CNS中施用本发明的组成物，并且在一些实施方式中，配制用于任何这些途径的本发明组合物。在一个实施方式中，配制用于脑特异性递送的如本文所述的组合物，并且在一些实施方式中，配制用于任何这些途径的本发明组合物。在一个实施方式中，向脑递送药物的策略包括血脑屏障(BBB)的渗透和化学开放，以及控制分子渗入血脑屏障内皮中的转运或运载体系统、酶和受体的使用，并且在一些实施方式中，配制用于任何这些途径的本发明组合物。在另一个实施方式中，受体介导的转胞吞可以跨BBB转运肽和蛋白质，并且在一些实施方式中，配制用于任何这些途径的本发明组合物。在其它实施方式中，向脑递送药物的策略涉及绕过BBB，并且在一些实施方式中，配制用于任何这些途径的本发明组合物。在一些实施方式中，使用各种药理学试剂以打开BBB，并且在一些实施方式中，配制用于任何这些途径的本发明组合物。在另一个实施方式中，施用途径可以针对与受神经变性病症影响的器官或系统不同的器官或系统。例如，可以胃肠外施用化合物以治疗神经变性病症。因此，如本领域技术人员所理解的，本发明提供了适合于使用本文列出的任何途径以及任何利用这些物质的CNS途径施用的各种剂型的用途。

药学上可接受的盐

本公开还提供了一种本文所述的肽或肽类似物的药学上可接受的盐。如本文所用，术语“药学上可接受的盐”是指保留亲本肽的生物活性的肽盐，并且其在生物学上或其它方面不是不合需要的。由于存在氨基和/或羧基基团或与其类似的基团，本文公开的许多肽能够形成酸盐和/或碱盐。药学上可接受的碱加成盐可由无机碱和有机碱制备。衍生自无机碱的盐，仅举例来说，包括钠盐、钾盐、锂盐、铵盐、钙盐和镁盐。衍生自有机碱的盐包括但不限于伯胺盐、仲胺盐和叔胺盐。

药学上可接受的酸加成盐可以由无机酸和有机酸制备。代表性的酸加成盐包括但不限于乙酸盐、己二酸盐、海藻酸盐、柠檬酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、二葡糖酸盐、甘油磷酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、富马酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、2-羟基乙磺酸盐(异硫代酸盐)、乳酸盐、马来酸盐、甲磺酸盐、烟酸盐、2-萘磺酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、果胶盐、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、苦味酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、磷酸盐、谷氨酸盐、碳酸氢盐、对甲苯磺酸盐、及十一酸盐。衍生自无机酸的盐包括盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等。衍生自有机酸的盐包括乙酸、丙酸、乙醇酸、丙酮酸、草酸、苹果酸、丙二酸、琥珀酸、马来酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、对甲苯磺酸、水杨酸等。可用于形成药学上可接受的酸加成盐的酸的示例包括，例如无机酸，例如盐酸、氢溴酸、硫酸和磷酸；以及有机酸，例如草酸、马来酸、琥珀酸和柠檬酸。

也可以在水杨酸源的最终分离和纯化过程期间，或者通过使含羧酸的部分与合适的碱(如药学上可接受的金属阳离子的氢氧化物、碳酸盐或碳酸氢盐)，或与氨或有机伯胺、仲胺或叔胺反应来原位制备碱加成盐。药学上可接受的盐包括但不限于基于碱金属或碱土金属的阳离子(如锂盐、钠盐、钾盐、钙盐、镁盐和铝盐等)，以及无毒的季铵氨和胺阳离子(包括铵、四甲基铵、四乙基铵、甲基铵、二甲基铵、三甲基铵、三乙基铵、二乙基铵、及乙基铵等)。用于形成碱加成盐的其它代表性有机胺包括例如乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、哌啶、哌嗪等。衍生自有机碱的盐包括但不限于伯胺盐、仲胺盐和叔胺盐。

此外，可以用本公开的类似物将碱性含氮基团季铵化为低级烷基卤化物(如甲基、乙基、丙基和丁基的氯化物，溴化物和碘化物)；长链卤化物(如癸基、月桂基、肉豆蔻基和硬脂酰基的氯化物，溴化物和碘化物)；芳基烷基卤化物(如苄基和苯乙基溴等)。由此获得水溶性或油溶性或可分散的产物。

制备、纯化和/或处理肽的相应溶剂化物可能是方便或期望的。本文所用的术语“溶剂化物”在常规意义上是指溶质(例如肽、肽盐)和溶剂的复合物。如果溶剂是水，则溶剂化物可以方便地称为水合物，例如，一水合物、二水合物、三水合物等。除非另有说明，否则对特定肽的提及也包括溶剂化物和其水合物形式。

本文所用的“共晶”或“共晶盐”是指在室温下由两种或多种独特固体组成的结晶材料，每种固体具有不同的物理特性，如结构、熔点和熔化热、吸湿性、溶解性和稳定性。可以根据本身已知的共结晶方法产生共晶或共晶盐。术语共-晶(或共晶)或共晶盐也指多组分体系，其中，存在一个宿主API(活性药物成分)分子或多个分子，如式I的肽和一个客体(或共前体)分子或多个分子。

施用途径、剂量和施用方案

该药物组合物通常适合于肠胃外施用。如本文所用，药物组合物的“肠胃外施用”包括通过物理破坏受试者的组织并通过组织中的突破口施用药物组合物来表征的任何施用途径，因此通常导致直接施用于血液流、肌肉、或内脏器官中。因此，肠胃外施用包括但不限于通过注射组合物，通过手术切口施用组合物，通过组织渗透非手术伤口施用组合物等施用药物组合物。特别地，设想肠胃外施用包括但不限于皮下注射、腹膜内注射、肌内注射、胸骨内注射、静脉内注射、动脉内注射、鞘内注射、脑室内注射、尿道内注射、颅内注射、滑膜内注射或输注；或肾透析输注技术。

在各种实施方式中，将肽与药学上可接受的赋形剂混合以形成药物组合物，该药物组合物可以向受试者口服或通过静脉内注射、肌内注射、皮下注射、腹膜内注射、经皮注射、动脉内注射、胸骨内注射、鞘内注射、脑室内注射、尿道内注射、颅内注射、滑膜内注射或通过输注全身施用。药物组合物优选含有至少一种在自然界中未发现的组分。

适于胃肠外施用的药物组合物的制剂一般通常包含活性成分与药学上可接受的赋形剂，如无菌水或无菌等渗盐水。可以以适于推注施用或连续施用的形式制备、包装或销售这些制剂。可以以单位剂量形式(如在含有防腐剂的安瓿中或多剂量容器中)制备、包装或销售可注射制剂。用于肠胃外施用的制剂包括但不限于悬浮液、溶液、油性载体或水性载体中的乳液、糊剂等。此类制剂可进一步包含一种或多种另外的成分，包括但不限于悬浮剂、稳定剂或分散剂。在用于肠胃外施用的制剂的一个实施方式中，以干燥(即粉末或颗粒)形式提供活性成分，用于在肠胃外施用重构组合物之前用合适的载体(例如无菌无热原水)重建。肠胃外制剂还包括含有如盐、碳水化合物和缓冲剂(优选pH为3至9)运载体的水溶液，但是，对于某些应用，它们可以更合适地被配制成无菌非水溶液或作为干燥形式以结合合适的载体(如无菌无热原水)使用。示例性肠胃外施用形式包括在无菌水溶液中的溶液或悬浮液，例如丙二醇水溶液或右旋糖溶液。如果需要，可以适当地缓冲这些剂型。其它可用于肠胃外施用的制剂包括以微晶形式或脂质体制剂包含活性成分的制剂。可以将用于肠胃外施用的制剂配制成立即释放和/或缓释。缓释制剂包括延迟释放、持续释放、脉冲释放、控释、靶向释放和程序释放。

本公开包括用于经皮或局部递送的组合物和方法，在施用点局部起作用，或一旦进入身体的血液循环就全身起作用。在这些系统中，可以通过如以软膏等形式直接局部施用物质或药物的技术，或者通过将贴剂与容纳药物(或其它物质)的储库等粘附并以时间控制的方式将其释放到皮肤上实现递送。对于局部施用，该组合物可以是乳液、洗剂、凝胶、乳膏、果冻、溶液、悬浮液、软膏及经皮贴片的形式。一些局部递送组合物可含有多烯基磷脂酰胆碱(本文缩写为“PPC”)。在某些情况下，PPC可用于增强表皮渗透。本文所用的术语“多烯基磷脂酰胆碱”是指带有两个脂肪酸部分的任何磷脂酰胆碱，其中，两个脂肪酸中的至少一个是在其结构中具有至少两个双键的不饱和脂肪酸，如亚油酸。此类局部制剂可包含一种或多种乳化剂、一种或多种表面活性剂、一种或多种聚乙二醇、一种或多种卵磷脂、一种或多种脂肪酸酯、或一种或多种经皮渗透增强剂。制剂可包括无菌的水溶液或非水溶液、悬浮液和乳液，其在某些实施方式中可与受试者的血液等渗。非水溶剂的示例是聚丙二醇，聚乙二醇，植物油(如橄榄油、芝麻油、椰子油、花生属油、花生油、矿物油)，有机酯(如油酸乙酯)或不挥发油(包括合成的单甘油酯或二甘油酯)。水溶剂包括水、酒精溶液/水溶液、乳液或悬浮液，包括盐水及缓冲介质。肠胃外载体包括氯化钠溶液、1,3-丁二醇、林格氏右旋糖、右旋糖及氯化钠、乳酸林格氏油或不挥发油。静脉内载体包括液体和营养补充剂，电解质补充剂(如基于林格氏右旋糖的电解质补充剂)等。还可以存在防腐剂和其它添加剂，例如，如抗微生物剂、抗氧化剂、螯合剂和惰性气体等。

例如，在一个方面，可以通过将所需量的肽掺入具有根据需要上面列举的成分中的一种或其组合的适当溶剂中，然后过滤灭菌来制备无菌可注射溶液。通常，通过将活性肽掺入无菌载体中来制备分散体，所述无菌载体含有基础分散介质和来自上面列举的那些所需其它成分。在用于制备无菌可注射溶液的无菌粉末的情况下，制备方法(如真空干燥和冷冻干燥)由其先前无菌过滤溶液产生活性成分的粉末以及任何其它所需成分。例如，通过使用如卵磷脂的包衣、通过在分散的情况下保持所需的粒度和通过使用表面活性剂，可以保持溶液的适当流动性。通过在组合物中包括延迟吸收的试剂(例如单硬脂酸盐和明胶)可以实现可注射组合物的延长吸收。在各种实施方式中，将使用商购的一次性可注射装置施用可注射组合物。

肠胃外制剂可以以单位剂量或多剂量密封容器(如安瓿和小瓶)呈现，并且可以在冷冻干燥(冻干)条件下储存，仅需要在使用之前立即添加无菌液体赋形剂(例如水)来进行注射。即时注射溶液和悬浮液可由本领域已知类型的无菌粉末、颗粒和片剂制备。可注射制剂符合本公开。对可注射组合物的有效药物赋形剂的要求是本领域普通技术人员所熟知的(参见例如Pharmaceutics and Pharmacy Practice,J.B.Lippincott Company,Philadelphia,Pa.,Banker和Chalmers,eds.,pages 238-250(1982)以及ASHP Handbookon Injectable Drugs,Toissel,4th ed.,pages 622-630(1986))。

另外，可以通过与各种碱(如乳化基质或水溶性基质)混合将本公开的肽制成用于直肠施用的栓剂。适于阴道施用的制剂可以作为阴道栓、阴道塞、乳膏、凝胶、糊剂、泡沫或喷雾配方呈现，除活性成分外，还含有本领域已知的适当运载体。

本领域技术人员将理解的是，除了上述药物组合物外，可以将本公开的肽配制成包合复合物如环糊精包合复合物或脂质体。

通常以来自干粉吸入器的干粉形式(单独、作为混合物、或作为混合组分颗粒，例如与合适的药学上可接受的运载体混合)，在使用或不使用合适推进剂情况下作为来自加压容器、泵、喷射器、雾化器(优选使用电流体动力学以产生细雾的雾化器)或喷雾器的气雾剂喷雾，或作为滴鼻剂，可以鼻内或通过吸入施用该肽。加压容器、泵、喷射器、雾化器或喷雾器通常含有肽的溶液或悬浮液，该溶液或悬浮液包含例如合适的用于分散、溶解或延长活性释放的试剂、作为溶剂的推进剂。在用于干粉或悬浮液制剂之前，通常将药物产品微粉化至适于通过吸入递送的尺寸(通常小于5微米)。这可以通过任何适当的粉碎方法来实现，如螺旋喷射研磨、流化床喷射研磨、形成纳米颗粒的超临界流体加工、高压均质化或喷雾干燥。可以将用于吸入器或吹入器的胶囊、泡罩和盒配制成含有肽、合适的粉末基质和性能修饰剂的粉末混合物。可以将合适的调味剂(如薄荷醇和左旋薄荷醇)或甜味剂(如糖精或糖精钠)添加到用于吸入/鼻内施用的那些制剂中。可以将用于吸入/鼻内施用的制剂配制成立即释放和/或缓释。缓释制剂包括延迟释放、持续释放、脉冲释放、控释、靶向释放和程序释放。在干粉吸入器和气雾剂的情况下，利用递送计量量的阀门来确定剂量单位。单位通常设置为施用肽的计量剂量或“喷射”。通常以单剂量，或者更通常地，在一天中以分剂量施用每日总剂量。

剂量

因此，基于本文提供的公开，技术人员将理解，根据治疗领域中熟知的方法调整剂量和施用方案。也就是说，可以容易地确定最大可耐受剂量，并且还可以确定向受试者提供可检测的治疗益处的有效量，以及还可以确定施用每种试剂的时间要求以向受试者提供可检测的治疗益处。因此，虽然本文举例说明了某些剂量和施用方案，但这些示例决不限制可在实施本公开时提供给受试者的剂量和施用方案。

请注意，剂量值可能会随着待改善病症的类型和严重性而变化，并且可能包括单剂量或多剂量。应进一步理解，对任何特定受试者，应根据个体需要和施用组合物或监督组合物施用的人的专业判断，随时间调整特定剂量方案，并且本文所述的剂量范围仅是示例性的，并非旨在限制所要求保护的组合物的范围或实践。此外，具有本公开的组合物的剂量方案可以基于多种因素，包括受试者的疾病类型、年龄、体重、性别、生理状况、病症的严重性、施用途径和采用的特定肽。因此，剂量方案可以广泛变化，但能够使用标准方法常规确定。例如，可以基于药代动力学参数或药效学参数来调整剂量，这些参数可以包括临床效果(如毒性效果和/或实验室值)。因此，本公开包括由技术人员确定的受试者体内剂量递增。确定适当剂量和方案在相关领域中是所熟知的，并且一旦提供本文公开的教导，将被理解为包括在本领域技术人员的范围内。

本公开的肽剂量还将由可能伴随施用本公开的特定肽的任何不利副作用的存在、性质和程度来确定。通常，考虑多种因素，如年龄、体重、总体健康、饮食、性别、待施用的本公开的肽、施用途径和所治疗病症得严重性，主治医师将决定用于治疗每个个体患者的本公开的肽剂量。作为示例而不旨在限制，本公开的肽剂量可为约0.0001至约100mg/kg所治疗的受试者体重/天、约0.001至约10mg/kg体重/天、或约0.01mg至约1mg/kg体重/天。可以以一剂量或多剂量(如1-3剂量)施用该肽。

在各种实施方式中，根据受试者所需和耐受的剂量和频率，施用药物组合物的单次或多次施用。在任何情况下，组合物应提供足够量的至少一种本文公开的肽以有效治疗受试者。可以一次性施用剂量，也可以定期施加，直到达到治疗结果或直到副作用需要停止治疗。

肽药物组合物施用的剂量频率取决于治疗的性质和所治疗的特定疾病。对于肽，可以每天施用一次、两次、三次或四次。用治疗有效量的肽治疗受试者可包括单次治疗，或者优选地，可包括一系列治疗。在优选的示例中，每天、每周一次或每两周一次用肽治疗受试者。

组合治疗

根据另一个实施方式，肽与其它已知治疗剂共同施用或共同配制。根据本发明的另一方面，本文提供组合治疗，其包含施用药理学有效量的根据本公开的肽或肽类似物或其药学上可接受的盐，任选与药学上可接受的稀释剂或运载体一起施用，同时、顺序或分开施用一种或多种选自下列的试剂：(1)胰岛素和胰岛素类似物；(2)胰岛素促分泌剂，包括磺酰脲(例如，格列吡嗪)和餐时葡萄糖调节剂(有时称为“短效促分泌剂”)，如美格列奈(例如，瑞格列奈和那格列奈)；(3)改善降血糖素作用的试剂，例如，二肽基肽酶IV(DPP-4)抑制剂(例如，维格列汀、萨格列汀和西他列汀)和胰高血糖素样肽-1(GLP-1)激动剂(例如，依森泰德)；(4)胰岛素敏化剂，包括过氧化物酶体增殖体活化受体γ(PPARy)激动剂，如噻唑烷二酮类(例如，吡格列酮和罗格列酮)，及具有PPARα、γ和δ活性的任何组合的试剂；(5)调节肝葡萄糖平衡的试剂，例如，双胍(例如，二甲双胍)、果糖1,6-二磷酸酶抑制剂、糖原磷酸化酶抑制剂、糖原合成酶激酶抑制剂及葡萄糖激酶活化剂；(6)旨在减少/减缓从肠道吸收葡萄糖的试剂，如α-葡萄糖苷酶抑制剂(例如，米格列醇和阿卡波糖)；及(7)拮抗胰高血糖素作用或减少胰高血糖素分泌的试剂，如胰淀素类似物(例如，普兰林肽)；(7)防止肾重吸收葡萄糖的试剂，如钠依赖性葡萄糖转运蛋白2(SGLT-2)抑制剂(例如，达格列嗪)；(8)旨在治疗长期高血糖症并发症的试剂，如醛糖还原酶抑制剂(例如，依帕司他及雷尼司他)；及用于治疗与微血管病有关的并发症的试剂；(9)抗血脂异常的试剂，如HMG-CoA还原酶抑制剂(他汀类药物，例如，罗苏伐他汀)及其它降胆固醇试剂；PPARa激动剂(贝特类药，例如，吉非罗齐及非诺贝特)；胆汁酸多价螯合剂(例如，考来烯胺)；(10)胆固醇吸收抑制剂(例如，植物固醇(即，植物性固醇)、合成抑制剂)；胆固醇酯转移蛋白(CETP)抑制剂；回肠胆汁酸转运系统抑制剂(I BAT抑制剂)；胆汁酸结合树脂；烟酸及其类似物；抗氧化物，如普罗布考；及ω-3脂肪酸；(11)抗高血压试剂，包含肾上腺素能受体拮抗剂，如β阻断剂(例如，阿替洛尔)、α阻断剂(例如，多沙唑嗪)和混合的α/β阻断剂(例如，拉贝洛尔)；肾上腺素能受体激动剂，包括α-2激动剂(例如，可乐定)；血管紧张素转换酶(ACE)抑制剂(例如，赖诺普利)、钙通道阻断剂，如二氢吡啶(例如，硝苯地平)、苯烷胺类(例如，维拉帕米)及苯并硫氮杂类(例如，地尔硫卓)；血管紧张素II受体拮抗剂(例如，坎地沙坦)；醛固酮受体拮抗剂(例如，依普利酮)：中枢性肾上腺素能药物，如中枢α激动剂(例如，可乐定)；及利尿剂(例如，呋塞米)；(12)止血调节剂，包括抗血栓剂，如纤溶活化剂；凝血酶拮抗剂；VIIa因子抑制剂；抗凝血剂，如维生素K拮抗剂(例如，华法林)、肝素及其低分子量类似物、Xa因子抑制剂、及直接凝血酶抑制剂(例如，阿加曲班)；抗血小板剂，如环氧合酶抑制剂(例如，阿司匹林)、二磷酸腺苷(ADP)受体抑制剂(例如，氯吡格雷)、磷酸二酯酶抑制剂(例如，西洛他唑)、糖蛋白I IB/II A抑制剂(例如，替罗非班)及腺苷再摄取抑制剂(例如，双嘧达莫)；(14)抗肥胖剂，如食欲抑制剂(例如，麻黄素)，包括去甲肾上腺素能试剂(例如，芬特明)及血清素能试剂(例如，西布曲明)、胰脂肪酶抑制剂(例如，奥利司他)、微粒体转移蛋白(MTP)调节剂、二酰基甘油转移酶(DGAT)抑制剂、及大麻素(CB1)受体拮抗剂(例如，利莫那班)；(15)摄食行为改良试剂，如食欲素受体调节剂及黑色素浓缩激素(MCH)调节剂；(16)胰高血糖素样肽-1(GLP-1)受体调节剂；(17)神经肽Y(NPY)/NPY受体调节剂；(18)丙酮酸脱氢酶激酶(PDK)调节剂；(19)血清素受体调节剂；(20)瘦素/瘦素受体调节剂；(21)胃饥饿素/胃饥饿素受体调节剂；或(22)单胺输送调节剂，如选择性血清素再摄取抑制剂(SSRI)(例如，氟西汀)、去甲肾上腺素再摄取抑制剂(NARI)、去甲肾上腺素-血清素再摄取抑制剂(SNRI)、三单胺再摄取阻断剂(例如，特索芬辛)及单胺氧化酶抑制剂(MAOI)(例如，托洛沙酮及阿米夫胺)、或其药学上可接受的盐、溶剂化物、这种盐的溶剂化物或其前药，任选地与药学上可接受的运载体一起用于需要这种治疗处理的哺乳动物，如人。

根据另一个实施方式，可以将肽与其它已知的用于治疗NASH的治疗试剂共同施用或共同配制。根据本公开的另一方面，本文提供组合治疗，其包含施用药理学有效量的根据本公开的肽或肽类似物或其药学上可接受的盐，任选与药学上可接受的稀释剂或运载体一起施用，同时、顺序或分开施用一种或多种选自下列的试剂：(miR-103/107拮抗剂、FXR激动剂、半乳凝素-1/3激动剂、ACC抑制剂、CB-1抑制剂、酮己糖激酶(Ketohexakinase)抑制剂、PDE4抑制剂、PPARγ激动剂、A3AR激动剂、PDE抑制剂、氟酮内酯(fluoroketolide)、mTOT胰岛素敏化剂、半胱天冬酶抑制剂、瘦素类似物、半乳凝素-1/3激动剂、SCD1抑制剂、PPARαδ激动剂、LOXL2抗体、ASK1抑制剂、11β-HSD1抑制剂、PPARαδγ激动剂、THR-β激动剂、醛固酮抑制剂、FGF-19类似物、SBAT抑制剂、CCR2/CCR5抑制剂、GLP-1激动剂和PPARαγ激动剂)。与下列化合物一起的组合也被设想作为本发明的实施方式：阿斯特拉(Astra)ZenecA AZD4076、Enanta EDP-305、半乳凝素疗法GR-MD-02、吉卡宾(gemcabene)、吉利德(Gilead)GS-0976、吉利德GS-9674、默克(Merck)MK-4074、吡格列酮、辉瑞(Pfizer)PF-06835919、辉瑞CP-945598、安斯泰来(Astellas)ASP9831、勃林格殷格翰(Boehringer Ingelheim)BI1467335、百时美施贵宝(Bristol Myers Squibb)BMS-986036、文迪雅(avandia)、二甲双胍、洛沙坦(losartan)、Can-Fite CF102、己酮可可碱、索利霉素、Cirius MSDC-0602K、恩利卡生(emricasan)、珂尼蒂思(Conatus)IDN-6556、美曲普汀、aramchol、Genfit GFT505、simtuzumab、吉利德GS-4997、吉利德GS-9450、罗氏(Roche)TRO19622、罗氏RO5093151、Immuron IMM-124E、奥贝胆酸、Inventiva IVA337、Madrigal MGL-3196、MN-001、三菱田边(Mitsubishi Tanabe)MT-3995、Mochida EPA-E、NGM生物制药NGM282、诺华(Novartis)LMB763、诺华LJN452、夏尔(Shire)SHP626、cenicriviroc、利拉鲁肽和saroglitazar。

与肥胖相关的合并症-单一疗法或组合疗法

例如，除了超重或肥胖外，受试者或患者还可以具有超重或肥胖相关的合并症，即与超重或肥胖相关、由其加重的或由其促使的疾病和其它不利健康病症。本文设想的是将本发明公开的肽与至少一种其它试剂组合单独施用，先前已显示了所述其它试剂可治疗这些超重或肥胖相关病症。

例如，II型糖尿病与肥胖相关。II型糖尿病的某些并发症(例如残疾和过早死亡)可以通过持续的体重减轻来预防、改善或消除(Astrup，A.Pub Health Nutr(2001)4：499-515)。用于治疗II型糖尿病的试剂包括磺脲类(例如，氯磺丙脲、格列吡嗪、格列本脲、格列美脲)；美格列奈(例如，瑞格列奈及那格列奈)；双胍类(例如，二甲双胍)；噻唑烷二酮类(罗格列酮、曲格列酮和吡格列酮)；二肽基肽酶-4抑制剂(例如，西他列汀、维格列汀、及萨格列汀)；胰高血糖素样肽-1模拟物(例如，依森泰德及利拉鲁肽)；及α-葡萄糖苷酶抑制剂(例如，阿卡波糖及米格列醇)。

心脏障碍和病症(例如高血压、血脂异常、缺血性心脏病、心肌病、心肌梗塞、中风、静脉血栓栓塞疾病及肺动脉高压)与超重或肥胖有联系。例如，高血压与肥胖有联系，因为过量的脂肪组织会分泌由肾脏作用的物质，导致高血压。另外，对于肥胖，通常产生更高量的胰岛素(由于过量的脂肪组织)，并且这种过量的胰岛素也会升高血压。高血压的主要治疗选择是减轻体重。用于治疗高血压的试剂包括氯噻酮；氢氯噻嗪；吲达帕胺、美托拉宗；袢性利尿剂(例如，布美他尼、依他尼酸、呋塞米、呋喃苯胺酸、托拉塞米)；保钾利尿试剂(例如，盐酸阿米洛利、苯甲酰胺、螺内酯及氨苯蝶啶)；外周试剂(例如，利血平)；中枢α-激动剂(例如，盐酸可乐定、胍那苄醋酸盐、盐酸胍法辛及甲基多巴)；α-阻断剂(例如，甲磺酸多沙唑嗪、盐酸哌唑嗪及盐酸特拉唑嗪)；β-阻断剂(例如，醋丁洛尔、阿替洛尔、倍他洛尔、富马酸比索洛尔、盐酸卡替洛尔、酒石酸美托洛尔、琥珀酸美托洛尔、纳多洛尔、硫酸喷布洛尔、吲哚洛尔、盐酸普萘洛尔及马来酸噻吗洛尔)；组合α和β阻断剂(例如，卡维地洛及盐酸拉贝洛尔)；直接血管扩张剂(例如，盐酸肼苯哒嗪及米诺地尔)；钙拮抗剂(例如，盐酸地尔硫卓及盐酸维拉帕米)；二氢吡啶类(例如，苯磺酸氨氯地平、非洛地平、伊拉地平、尼卡地平、硝苯地平及尼索地平)；ACE抑制剂(盐酸贝那普利、卡托普利、马来酸依那普利、福辛普利钠、赖诺普利、莫昔普利、盐酸喹那普利、雷米普利、群多普利)；血管紧张素II受体阻断剂(例如，氯沙坦钾、缬沙坦及厄贝沙坦)；肾素抑制剂(例如，阿利吉仑)；及其组合。以本领域已知的方案和剂量施用这些化合物。

Carr等人(The Journal of Clinical Endocrinology&Metabolism(2004)Vol.89,No.6 2601-2607)讨论了超重或肥胖与血脂异常之间的联系。通常用他汀类治疗血脂异常。他汀类(HMG-CoA还原酶抑制剂)减缓了受试者胆固醇的产生和/或除去动脉中的胆固醇累积。他汀类包括美伐他汀、洛伐他汀、普伐他汀、辛伐他汀、维洛他汀、二氢康帕丁、氟伐他汀、阿托伐他汀、达伐他汀、卡维他汀、克伐他汀、贝伐他汀、西立伐他汀、罗苏伐他汀、匹伐他汀及格仑伐地汀。以本领域已知的方案和剂量施用这些化合物。Eckel(Circulation(1997)96：3248-3250)讨论了超重或肥胖与缺血性心脏病之间的联系。用于治疗缺血性心脏病的试剂包括他汀类、硝酸盐类(例如，硝酸异山梨酯及单硝酸异山梨酯)、β-阻断剂及钙通道拮抗剂。以本领域已知的方案和剂量施用这些化合物。

Wong等人(Nature Clinical Practice Cardiovascular Medicine(2007)4：436-443)讨论了超重或肥胖与心肌病之间的联系。用于治疗心肌病的试剂包括正性肌力试剂(例如，地高辛)、利尿剂(例如，呋塞米)、ACE抑制剂、钙拮抗剂、抗心律不齐试剂(例如，索他洛尔、胺碘酮及丙吡胺)及β-阻断剂。以本领域已知的方案和剂量施用这些化合物。Yusef等人(Lancet(2005)366(9497)：1640-1649)讨论了超重或肥胖与心肌梗塞之间的联系。用于治疗心肌梗塞的试剂包括ACE抑制剂、血管紧张素II受体阻断剂、直接血管扩张剂、β-阻断剂、抗心律不齐试剂及血栓溶解试剂(例如，阿替普酶、瑞替普酶、替奈普酶、阿尼普酶及尿激酶)。以本领域已知的方案和剂量施用这些化合物。

Suk等人(Stroke(2003)34：1586-1592)讨论了超重或肥胖与中风之间的联系。用于治疗中风的试剂包括抗血小板试剂(例如，阿司匹林、氯吡格雷、双嘧达莫及噻氯匹定)、抗凝血试剂(例如，肝素)及血栓溶解试剂。Stein等人(The American Journal ofMedicine(2005)18(9)：978-980)讨论了超重或肥胖与静脉血栓栓塞疾病之间的联系。用于治疗静脉血栓栓塞疾病的试剂包括抗血小板试剂、抗凝血试剂和血栓溶解试剂。Sztrymf等人(Rev Pneumol Clin(2002)58(2)：104-10)讨论了超重或肥胖与肺动脉高压之间的联系。用于治疗肺动脉高血压的试剂包括正性肌力试剂、抗凝血试剂、利尿剂、钾(例如，K-dur)、血管扩张剂(例如，硝苯地平及地尔硫卓)、波生坦、依前列醇及西地那非。呼吸系统障碍和病症(如肥胖-通气不足综合征、哮喘和阻塞性睡眠呼吸暂停)与超重或肥胖有联系。Elamin(Chest(2004)125：1972-1974)讨论了超重或肥胖与哮喘之间的联系。用于治疗哮喘的试剂包括支气管扩张剂、抗炎试剂、白三烯阻断剂及抗-Ige试剂。特定的哮喘试剂包括扎鲁司特、氟尼缩松、曲安奈德、倍氯米松、特普他林、氟替卡松、福莫特罗、倍氯米松、沙美特罗、茶碱及左旋沙丁胺醇。

Kessler等人(Eur RespirJ(1996)9：787-794)讨论了超重或肥胖与阻塞性睡眠呼吸暂停之间的联系。用于治疗睡眠呼吸暂停的试剂包括莫达非尼和安非他明。

肝功能障碍和病症(如非酒精性脂肪肝病)与超重或肥胖有联系。Tolman等人(Ther Clin Risk Manag(2007)6：1153-1163)讨论了超重或肥胖与非酒精性脂肪肝病之间的联系。用于治疗非酒精性脂肪肝病的试剂包括抗氧化剂(例如，维生素E及C)、胰岛素敏化剂(二甲双胍、吡格列酮、罗格列酮及甜菜碱)、肝保护剂及降脂剂。

骨骼障碍和病症(如负重关节的背痛和骨关节炎)与超重或肥胖有联系，vanSaase(J Rheumatol(1988)15(7)：1152-1158)讨论了超重或肥胖与负重关节的骨关节炎之间的联系。用于治疗负重关节的骨关节炎的试剂包括对乙酰氨基酚，非甾体抗炎剂(例如，布洛芬、依托度酸、奥沙普秦、萘普生、双氯芬酸及萘丁美酮)、COX-2抑制剂(例如，塞来昔布)、类固醇、补充剂(例如，葡糖胺及硫酸软骨素)及人造关节液。

代谢障碍和病症(例如，Prader-Willi综合征和多囊卵巢综合症)与超重或肥胖有联系。Cassidy(Journal of Medical Genetics(1997)34：917-923)讨论了超重或肥胖与Prader-Willi综合症之间的联系。用于治疗Prader-Willi综合征的试剂包括人生长激素(HGH)、促生长激素(及体重减轻剂(例如，奥利司他、西布曲明、脱氧麻黄碱、苯丁胺、芬特明、安非他酮、安非拉酮、苯甲曲秦、苄非他明及妥泰)。

Hoeger(Obstetrics and Gynecology Clinics of North America(2001)28(1):85-97)讨论了超重或肥胖与多囊卵巢综合症之间的联系。用于治疗多囊卵巢综合征的试剂包括胰岛素敏化剂、合成雌激素及孕酮的组合、螺内酯、依氟鸟氨酸及氯米芬。生殖障碍和病症(如性功能障碍、勃起功能障碍、不孕症、产科并发症及胎儿异常)与超重或肥胖有联系。Larsen等人(Int J Obes(Lond)(2007)8:1189-1198)讨论了超重或肥胖与性功能障碍之间的联系。Chung等人(Eur Urol(1999)36(l):68-70)讨论了超重或肥胖与勃起功能障碍之间的联系。用于治疗勃起功能障碍的试剂包括磷酸二酯酶抑制剂(例如，他达拉非、枸橼酸西地那非和伐地那非)、前列腺素E类似物(例如，前列地尔)、生物碱类(例如，育亨宾)和睾酮。Pasquali等人(Hum Reprod(1997)1：82-87)讨论了超重或肥胖与不孕症之间的联系。用于治疗、不孕症的试剂包括克氯米芬、氯米芬柠檬酸盐、溴隐亭、促性腺激素释放激素(GnRH)、GnRH激动剂、GnRH拮抗剂、他莫昔芬/诺瓦得士、促性腺激素、人绒毛膜促性腺激素(HCG)、人绝经期促性腺激素(HmG)、孕酮、重组卵泡刺激素(FSH)、尿促卵泡素、肝素、促卵泡素α及促卵泡素β。

Weiss等人(American Journal of Obstetrics and Gynecology(2004)190(4):1091-1097)讨论了超重或肥胖与产科并发症之间的联系。用于治疗产科并发症的试剂包括盐酸布比卡因、地诺前列酮PGE2、哌替啶HCl、亚铁化合物-叶酸-500/益补力-叶酸-500、哌替啶、马来酸甲麦角新碱、罗哌卡因HCl、纳布啡HCl、氧吗啡酮HCl、缩宫素、地诺前列酮、利托君、氢溴酸东莨菪碱、枸橼酸舒芬太尼及催产药。

精神障碍和病症(例如体重相关的抑郁和焦虑)与超重或肥胖有联系。Dixson等人(Arch Intern Med(2003)163：2058-2065)讨论了超重或肥胖与抑郁之间的联系。用于治疗抑郁的试剂包括血清素再摄取抑制剂(例如，氟西汀、依地普仑、西酞普兰、帕罗西汀、舍曲林及文拉法辛)；三环抗抑郁药(例如，阿米替林、阿莫沙平、氯米帕明、地昔帕明、盐酸度硫平、多塞平、丙米嗪、伊普吲哚、洛非帕明、去甲替林、奥匹哌醇、普罗替林及曲米帕明)；单胺氧化酶抑制剂(例如，异卡波肼、吗氯贝胺、苯乙肼、反苯环丙胺、司来吉兰、雷沙吉兰、尼亚拉胺、异丙烟肼、异丙氯肼、托洛沙酮、利奈唑胺、二烯内酯卡瓦内酯去甲氧基麻醉椒素及右旋安非他明)；精神兴奋剂(例如，安非他明、脱氧麻黄碱、哌甲酯及槟榔碱)；抗精神病药(例如，丁酰苯、吩噻嗪、噻吨、氯氮平、奥氮平、利培酮、喹硫平、齐拉西酮、氨磺必利、帕潘立酮、氟西汀、四苯喹嗪及大麻二酚)；及情绪稳定剂(例如，碳酸锂、丙戊酸、双丙戊酸钠、丙戊酸钠、拉莫三嗪、卡马西平、加巴喷丁、奥卡西平及托吡酯)。

Simon等人(Archives of General Psychiatry(2006)63(7):824-830)讨论了超重或肥胖与焦虑之间的联系。用于治疗焦虑的试剂包括血清素再摄取抑制剂、情绪稳定剂、苯二氮卓类(例如，阿普唑仑、氯硝西泮、地西泮及劳拉西泮)、三环抗抑郁药、单胺氧化酶抑制剂及β-阻断剂。

本发明的另一方面提供了用于促进和保持受试者体重减轻的方法，涉及向受试者施用有效导致受试者体重减轻量的所公开化合物；并施用治疗有效量的不同体重减轻试剂以保持受试者体重减轻。该体重减轻试剂包括血清素及去甲肾上腺素能再摄取抑制剂；去甲肾上腺素能再摄取抑制剂；选择性血清素再摄取抑制剂；及肠道脂肪酶抑制剂。特别的体重减轻试剂包括利拉鲁肽、奥利司他、西布曲明、脱氧麻黄碱、苯丁胺、芬特明、安非他酮、安非拉酮、苯甲曲秦、苄非他明、溴隐亭、氯卡色林、托吡酯、或通过阻断胃饥饿素的作用、抑制二酰基甘油酰基转移酶1(DGATl)的活性、抑制硬脂酰基CoA脱氢酶1(SCD1)的活性、抑制神经肽Y受体1的功能、活化神经肽Y受体2或4的功能、或抑制钠葡糖转运蛋白1或2的活性而用于调节进食的试剂。以本领域已知的方案和剂量施用这些化合物。

治疗方法

本文提供的数据证明了本公开的肽降低脂肪细胞中游离脂肪酸水平并支持使用这些肽降低有此需要的哺乳动物的体重、血糖水平和/或脂肪量的能力。本文提供的数据还证明了这些肽在血浆中的稳定性，并支持它们作为适合施用于哺乳动物的治疗性肽的用途。因此，本公开提供了治疗与体重、血糖水平和脂肪量有关的疾病的方法，例如代谢疾病，包括肥胖、脂肪肝病和糖尿病。

不受特定理论的束缚，用肽处理脂肪细胞后，细胞培养基中的游离脂肪酸(FFA)表明涉及脂质或脂肪酸水平细胞调整的调节途径。培养基中脂肪酸水平的降低可以由许多过程引起，包括但不限于抑制信号途径；减少细胞脂肪生成；减少脂肪分解；或增加脂肪酸氧化。对游离脂肪酸净浓度有影响的肽具有治疗代谢障碍的潜在效用。因此，本公开提供了一种调节有此需要的受试者的脂肪酸代谢的方法，其包含以调节脂肪酸代谢的有效量向所述受试者施用本公开的肽或肽类似物、缀合物、核酸、重组表达载体或宿主细胞。在示例性方面，该方法是增加有此需要的受试者的脂肪酸代谢的方法。因此，本公开还提供了一种调节细胞中脂肪酸代谢的方法，其包含以调节脂肪酸代谢的有效量使所述细胞与本公开的肽或肽类似物、缀合物、核酸、重组表达载体或宿主细胞接触。在示例性方面，该方法是增加细胞中脂肪酸代谢的方法。

脂肪营养不良是一种其特征在于来自各种身体区域的脂肪组织(身体脂肪)的选择性丧失和/或其它区域中过量脂肪的积累的常见疾病名称。来自一个区域(如面部)的局部脂肪减少被称为脂肪萎缩。脂肪减少的程度可以从身体的一部分上的非常小的区域到几乎整个身体都缺乏脂肪组织。此外，患者可能有严重的代谢并发症或仅仅是美容问题。与严重脂肪减少相关的脂肪营养不良可能导致与胰岛素抗性相关的代谢并发症，如糖尿病、高水平的血清甘油三酯及脂肪肝(肝脂肪变性)。脂肪营养不良可以是先天性(如家族性部分脂肪营养不良或Beradinelli-Seip综合征)或获得性(例如与各种类型的疾病或药物相关)。获得性脂肪营养不良是由药物、自身免疫机制引起的，或者可能是特发性的。获得性脂肪营养不良包括由高效抗逆转录病毒疗法(HAART)诱导的HIV-感染患者(LD-HIV)中的脂肪营养不良；获得性全身性脂肪营养不良(AGL)；获得性部分脂肪营养不良(APL)；及局部脂肪营养不良。获得性脂肪营养不良没有直接的遗传基础。根据一些实施方式，本发明提供了一种用于减少、改善或预防脂肪营养不良的方法。

所述肽可用于治疗与由葡萄糖、活性氧(ROS)和/或游离脂肪酸(FFA)的异常血液水平表现的不平衡代谢状态相关的病症。有利的代谢状态被定义为平衡的能量稳态，其特征在于葡萄糖、ROS和FFA血液水平等同于健康受试者的血液水平(在健康群体的平均水平范围内)。因此，本文所用的不利代谢状态是指葡萄糖、ROS和/或FFA的异常血液水平，即与健康对照受试者中它们各自的水平相比显著改变(例如由医师或技术人员评估的)。在一些实施方式中，术语不利代谢状态是指与健康对照受试者中它们各自的水平相比，葡萄糖、ROS和/或FFA的血液水平显著增强(例如由医师或技术人员评估的)。不利代谢状态可能由异常代谢引起，其可能涉及葡萄糖(碳水化合物)和/或脂肪酸氧化途径。当涉及脂肪酸氧化途径的紊乱时，不利代谢状态通常表现为通过与健康对照受试者相比，显著增强的ROS血液水平和/或异常的FFA血液水平。这些紊乱也可以表现为氧化的低密度脂蛋白(LDL)的血液水平升高。当涉及葡萄糖代谢的紊乱时，与健康对照受试者相比，葡萄糖血液水平通常显著增强。如本文所用，如果所述增强伴随有如本文所述的异常血液ROS和/或FFA值，则将具有显着增强的血液葡萄糖水平但不超过不平衡血糖控制阈值的患者定义为具有不利代谢状态。如本领域已知的，通过考虑能量摄入和各种能量消耗和利用参数，所述医师或技术人员还可以评估不平衡代谢状态。例如但不限于，可以评估细胞水平的参数(如细胞(如血小板)ATP产生和细胞氧化)以及全身水平的参数(如呼吸商(RQ))以确定受试者的代谢状态。例如，通过比较健康患者和患病患者之间的这些参数的相对比例，技术人员可以评估与健康对照相比的受试者的代谢状态。在患有慢性代谢和/或炎性障碍的患者中可以发现不利代谢状态，所述慢性代谢和/或炎性障碍未经过合适的治疗性方案进行充分治疗或平衡。

因此，本公开提供了一种治疗有此需要的受试者的代谢疾病的方法，其包含以治疗代谢疾病的有效量向所述受试者施用本公开的肽或肽类似物、缀合物、核酸、重组表达载体或宿主细胞。

术语“代谢疾病”或“代谢障碍”是指其中发生代谢错误、代谢不平衡或次优代谢的一组已鉴定的障碍，这可能涉及葡萄糖(碳水化合物)、脂肪酸和/或蛋白质氧化途径。因此，如本文所述，当不平衡时，与健康对照受试者中它们各自的水平相比，这些障碍通常表现为特征在于葡萄糖、ROS和/或FFA的异常血液水平的不利代谢状态。此类障碍包括但不限于糖尿病和与营养或内分泌不平衡相关的障碍。

不利代谢状态也可能由于慢性炎症障碍而发生，其中，非分辨性、不平衡的炎症过程伴有次级代谢并发症，该次级代谢并发症与健康对照受试者中的它们各自的水平相比表现为葡萄糖、ROS和/或FFA的异常血液水平。此类障碍的非限制性示例是脓毒症和自身免疫疾病。

X综合征(或代谢综合征)表示与腹部脂肪积累相关的一系列迹象和症状。这种形式的脂肪分布在中年男性中很常见，并且通常可以看作是啤酒肚或大肚子。X综合征的特征在于许多障碍，包括痛风、葡萄糖代谢受损(对糖尿病的易感性提高)、血压升高及血胆固醇水准升高。X综合征患者患心脏病的风险很高。美国临床内分泌学家协会将综合征X定义为血清或血浆胰岛素/葡萄糖水平比例、脂质、尿酸水平、血管生理学和凝血因子不平衡的一组代谢异常。因此，本文所用的术语“X综合征”是指以下至少两种阳性诊断为特征的病症：非胰岛素依赖性糖尿病、血压高于被认为的正常水平、胰岛素水平高于被认为的正常水平、血脂异常及肥胖。

肽可能在以下代谢疾病中有用：

(a)预防和/或治疗所有形式的糖尿病，如高血糖症、2型糖尿病、葡萄糖耐量受损、1型糖尿病、非胰岛素依赖性糖尿病、MODY(青年发病的成年型糖尿病)、妊娠糖尿病和/或HbAlC减少；

(b)延迟或预防糖尿病进展，如2型糖尿病的进展，延迟葡萄糖耐量受损(IGT)进展至需要胰岛素的2型糖尿病，延迟或预防胰岛素抗性，和/或延迟不需要胰岛素的2型糖尿病进展至需要胰岛素的2型糖尿病；

(c)改善β细胞功能，如减少β细胞凋亡，提高β细胞功能和/或β细胞量，和/或恢复对β细胞的葡萄糖敏感性；

(d)预防和/或治疗认知障碍和/或神经退行性障碍，如阿尔茨海默病、帕金森病及/或多发性硬化症；

(e)例如，通过减少食品摄入、降低体重、抑制食欲、诱导饱腹感来预防和/或治疗饮食障碍，如肥胖；治疗或预防由施用抗精神病药物或类固醇诱导的暴食障碍、神经性贪食症和/或肥胖；减少胃动力；延迟胃排空；增加身体机动性；和/或预防和/或治疗肥胖的合并症，如骨关节炎及/或和失禁；

(f)预防和/或治疗糖尿病合并症，如血管病；神經病(包括外周神經病)；肾病；和/或视网膜病；

(g)改善脂质参数，如预防和/或治疗血脂异常，降低总血清脂质；增加HDL；降低密度小的LDL；降低VLDL；降低甘油三脂；降低胆固醇；降低人体中脂蛋白a(Lp(a))的血浆水准；抑制在体外和/或体内产生载脂蛋白a(apo(a))；

(h)预防和/或治疗心血管疾病，如X综合征、动脉粥样硬化、心肌梗塞、冠心病、再灌注损伤、中风、缺氧、脑缺血、早期心脏病及早期心血管病、左心室肥厚、冠状动脉疾病、高血压、原发性高血压、急性高血压急症、心肌病、心功能不全、锻炼不耐受、急性和/或慢性心力衰竭、心律不齐、心律不整、昏厥、心绞痛、心脏转流和/或支架再闭塞、间歇性跛行(动脉粥样硬化闭塞症)、舒张功能障碍和/或收缩功能障碍；和/或血压降低，如收缩压降低；

(i)预防和/或治疗胃肠病，如炎症肠病、短肠综合征或克罗恩病或结肠炎；消化不良和/或胃溃疡；和/或炎症，如牛皮癣、银屑病关节炎、类风湿性关节炎和/或全身性红斑狼疮；

(j)预防和/或治疗危重病，如治疗危重病患者、危重病多发性肾病(CIPNP)患者、和/或潜在CIPNP患者；预防危重病或CIPNT发展；预防、治疗和/或治愈患者的全身性炎症反应综合征(SIRS)；预防或降低住院期间患有菌血症、败血症和/或败血性休克患者的可能性；和/或稳定具有危重病的重症监护患者的血糖、胰岛素平衡及任选的代谢；

(k)预防和/或治疗多囊卵巢综合征(PCOS)；

(l)预防和/或治疗脑疾病，如脑缺血、脑出血和/或创伤性脑损伤；

(m)预防和/或治疗睡眠呼吸暂停；

(n)预防和/或治疗滥用，如滥用酒精和/或滥用药物；

(o)预防或治疗脂肪肝病症，包括但不限于脂肪肝病(FLD)、非酒精性脂肪肝病(NAFLD)和非酒精性脂肪肝炎(NASH)；和/或

(p)治疗细胞内活性氧(ROS)的产生。

在其它方面，本文提供了用于通过向需要治疗的患者施用有效量的肽来治疗糖尿病和/或糖尿病相关并发症的方法。有利地，根据本文提供的方法用于治疗糖尿病和/或相关并发症的肽对胰腺β细胞具有抗细胞凋亡活性和/或刺激其增殖，使得施用肽可增加产生胰岛素的β细胞的数量和患者产生胰岛素的水平。

肝病

本公开还提供了一种治疗有此需要的受试者的肝病的方法，其包含以治疗肝病的有效量向所述受试者施用本公开的肽或肽类似物、缀合物、核酸、重组表达载体或宿主细胞。

在一些实施方式中，疾病或医学病症是非酒精性脂肪肝病(NAFLD)。NAFLD是指广泛的肝病，从单纯性脂肪肝(脂肪变性)到非酒精性脂肪肝炎(NASH)，再到肝硬化(不可逆的晚期肝瘢痕)。NAFLD的所有阶段都共同具有肝脏细胞(肝细胞)中脂肪(脂肪浸润)的积累。单纯性脂肪肝是肝脏细胞中某些类型脂肪、甘油三酯的异常积累，无炎症或瘢痕。在NASH中，脂肪积累与肝脏的炎症(肝炎)和瘢痕(纤维化)的变化程度相关。炎症细胞可以破坏肝脏细胞(肝细胞坏死)。在术语“脂肪性肝炎”和“脂肪性坏死”中，脂肪性是指脂肪浸润，肝炎是指肝脏中的炎症，而坏死是指被破坏的肝脏细胞。NASH最终可导致肝脏瘢痕(纤维化)，然后导致不可逆的晚期瘢痕(肝硬化)。由NASH引起的肝硬化是NAFLD谱中最后和最严重的阶段(Mendler，Michel，“Fatty Liver：Nonalcoholic Fatty Liver Disease(NAFLD)和Nonalcoholic Steatohepatitis(NASH)”，ed.Schoenfield，Leslie J.，MedicineNet.com，2005年8月29日)。

酒精性肝病或酒精引起的肝病包括与过量消耗酒精有关或由其引起的三种病理学上不同的肝病：脂肪肝(脂肪变性)、慢性或急性肝炎和肝硬化。酒精性肝炎的范围从轻度肝炎(异常实验室检查是疾病的唯一指征)到严重肝功能障碍伴有并发症，如黄疸(由胆红素潴留引起的黄皮肤)、肝性脑病(由肝功能衰竭引起的神经功能障碍)、腹水(腹部液体积聚)、食管静脉曲张出血(食道静脉曲张)、异常血液凝固和昏迷。组织学上，酒精性肝炎具有肝细胞膨胀变性、中性粒细胞炎症和有时Mallory体炎症(细胞中间丝蛋白的异常聚集)的特征性外观。肝硬化的解剖学特征是肝脏中广泛的结节与纤维化相结合(Worman,HowardJ.,“Alcoholic Liver Disease”,Columbia University Medical Center website)。

不受任何特定理论的束缚，本文所述的肽和肽类似物可用于治疗酒精性肝病、NAFLD或其任何阶段，包括例如脂肪变性、脂肪性肝炎、肝炎、肝脏炎症、NASH、肝硬化或其并发症。因此，本公开提供了一种预防或治疗受试者的酒精性肝病、NAFLD或其任何阶段的方法，其包含以预防或治疗酒精性肝病、NAFLD或其阶段的有效量向所述受试者提供本文所述的肽或肽类似物。这些治疗方法包括减少以下一种、两种、三种或更多种：肝脂肪含量、肝硬化的发病率或进展、肝细胞癌的发病率、炎症迹象、例如异常的肝酶水平(如天冬氨酸转氨酶AST和/或丙氨酸转氨酶ALT或LDH)、升高的血清铁蛋白、升高的血清胆红素和/或纤维化迹象，例如升高的TGF-β水平。在示例性实施方式中，该肽或肽类似物用于治疗已经进展至超过单纯性脂肪肝(脂肪变性)并且表现出炎症或肝炎迹象的患者。这些方法可以导致例如AST和/或ALT水平的降低。

癌症治疗

在一些实施方式中，该肽具有抗癌活性。例如，在一些方面，该肽具有针对癌细胞的促细胞凋亡活性，如但不限于前列腺癌细胞和/或乳腺癌细胞。在其它方面，该肽具有针对癌细胞的抗增殖活性，如但不限于前列腺癌细胞和/或乳腺癌细胞。

本公开还提供了一种治疗有此需要的受试者的癌症的方法，其包含以治疗癌症的有效量向所述受试者施用本公开的肽或肽类似物、缀合物、核酸、重组表达载体或宿主细胞。本公开还包括治疗癌症的方法，其包含向需要治疗的受试者施用有效量的肽或其变体。本文提供的肽发挥多种抗癌效果，并可用于治疗广泛的癌症和其它增殖障碍。本文提供的肽可具有多种抗癌活性，如但不限于，诱导癌细胞凋亡、抑制肿瘤血管发生、抑制肿瘤转移、调节细胞周期、抑制癌细胞增殖、促进癌细胞分化、抑制活性氧的产生和/或免受活性氧影响、和增强抗逆性。“癌症”通常是指以不受控制的异常细胞生长和增殖为特征的疾病。“瘤”或“肿瘤”是由过度、不受控制和进行性细胞分裂引起的异常组织块。本文所述的方法可用于治疗任何类型的癌症和增殖障碍，包括但不限于癌、肉瘤、软组织肉瘤、淋巴瘤、血液癌症、白血病、生殖细胞肿瘤和无固体瘤的癌症(例如，造血系统癌症)。在各个方面，所述肽可用于治疗源自和/或影响任何组织的癌症和/或肿瘤，该组织包括但不限于肺、乳房、上皮、大肠、直肠、睾丸、膀胱、甲状腺、胆囊、胆管、胆道、前列腺、结肠、胃、食道、胰腺、肝脏、肾脏、子宫、子宫颈、卵巢和脑组织。可用肽治疗的特定癌症的非限制性示例包括但不限于急性淋巴细胞白血病、急性髓细胞样白血病、慢性淋巴细胞白血病、慢性髓细胞性白血病、肾上腺皮质癌、艾滋病相关淋巴瘤、肛门癌、星形细胞瘤、大脑基底细胞癌、胆道癌、肝外膀胱癌、膀胱癌、骨癌、骨肉瘤/恶性纤维组织细胞瘤、脑干胶质瘤、脑肿瘤、脑干胶质瘤、星形细胞瘤/恶性胶质瘤、室管膜瘤、成神经管细胞瘤、幕上原始神经外胚层肿瘤、视觉途径和下丘脑胶质瘤、乳腺癌、男性支气管腺瘤/类癌、伯基特淋巴瘤、类癌、胃肠癌、未知原发性中枢神经系统淋巴瘤、宫颈癌、慢性淋巴细胞白血病、慢性髓细胞样白血病、慢性骨髓性增殖疾病、结肠癌、结肠直肠癌、皮肤T细胞淋巴瘤、蕈样真菌病和Sezary综合征、子宫内膜癌、室管膜瘤、食道癌、尤文氏家族肿瘤、生殖细胞肿瘤、肝外胆管癌、眼癌、眼内黑色素瘤、视网膜母细胞瘤、胆囊癌、胃癌(胃癌)、胃肠道类癌、卵巢妊娠、滋养细胞肿瘤、胶质瘤、下丘脑皮肤癌(黑色素瘤)、皮肤癌(非黑色素瘤、皮肤癌、小细胞肺癌、小肠癌、软组织肉瘤、鳞状细胞癌、隐性原发性颈部癌、转移性胃癌(胃癌)、胃部(胃部)癌)、T细胞淋巴瘤、睾丸癌、胸腺瘤、胸腺癌、甲状腺癌、移行细胞肾盂癌、输尿管滋养细胞肿瘤、移行细胞癌、尿道癌、子宫癌、子宫肉瘤、阴道癌、下丘脑胶质瘤、外阴癌、瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症、肾母细胞瘤、毛细胞白血病、头颈癌、肝细胞癌(肝癌)、霍奇金氏淋巴瘤、下咽癌、胰岛细胞(内分泌胰腺)癌)、卡波西氏肉瘤、肾(肾细胞)癌、肾癌、喉癌、毛细胞唇和口腔癌、肝癌、肺癌、非小细胞肺癌、小细胞淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、皮肤T细胞、霍奇金氏淋巴瘤、非霍奇金氏淋巴瘤、瓦尔登斯特伦骨/骨质疏松症、恶性纤维组织细胞瘤、人类神经节细胞瘤、眼内(眼)梅克尔细胞癌、间皮瘤、恶性间皮瘤、隐性原发性多发性内分泌腺瘤的转移性鳞状颈部癌、多发性骨髓瘤/浆细胞肿瘤、蕈样真菌病、骨髓增生异常综合征、骨髓增生异常/骨髓增殖疾病、骨髓性白血病、多发性骨髓增殖障碍、慢性鼻腔和鼻窦癌、鼻咽癌、胸膜肺母细胞瘤、骨肉瘤/骨恶性纤维组织细胞瘤、嗜铬细胞瘤、松果体母细胞肿瘤和幕上原始神经外胚层肿瘤。在一些优选的方面，癌症是乳腺癌。在一些优选的方面，癌症是前列腺癌。

在一些方面，根据本文提供的方法施用肽来增强已建立的癌症疗法的功效。在其它方面，根据本文提供的方法施用肽来增强另一种癌症疗法(如放射疗法或化学疗法)的抗癌活性。在一些方面，本文提供了用于诱导癌细胞和/或肿瘤细胞中的细胞死亡的方法，所述方法包含以足以诱导癌细胞死亡和/或肿瘤细胞死亡的量施用本文所述的肽。

在一些实施方式中，该肽具有一种或多种细胞保护或细胞保护性活性。例如，在一些方面，该肽能够预防细胞损伤，改善细胞存活和/或增强对环境胁迫(如但不限于热休克、血清去除、化学疗法和/或放射)的抗性。

在一些方面，根据本文提供的方法施用肽来降低已建立的癌症疗法的不利影响。

进一步优选的医学用途包括治疗或预防退行性障碍，特别是神经退行性障碍，例如退行性疾病，如阿尔茨海默病、帕金森病、亨廷顿病、共济失调(例如脊髓小脑性共济失调)、肯尼迪病、强直性肌营养不良、路易体痴呆、多系统萎缩、肌萎缩侧索硬化、原发性侧索硬化症、脊髓性肌萎缩、朊病毒相关疾病(例如Creutzfeldt-Jacob病)、多发性硬化、毛细血管扩张、贝敦氏病、皮质基底节变性、皮质基底节变性、脊髓亚急性联合变性、脊髓痨、泰-萨二氏病、中毒性脑病、婴儿雷夫叙姆病、雷夫叙姆病、神经棘红细胞增多症、尼曼-匹克病、莱姆病、马查多-约瑟夫病、山德霍夫氏病、Shy-Drager综合征、刺猬摇摆综合征、蛋白病、脑β淀粉样血管病、青光眼中视网膜神经节细胞变性、突触核蛋白病、tau病、額颞叶变性(FTLD)、痴呆、cadasil综合征、伴有淀粉样变性的遗传性脑出血、亚历山大病、seipin病、家族性淀粉样变性神經病、老年系统性淀粉样变性病、serpin病、AL(轻链)淀粉样变性(原发全身性淀粉样变性)、AH(重链)淀粉样变性、AA(继发性)淀粉样变性、主动脉瓣内侧淀粉样变性、ApoAI淀粉样变性、ApoAII淀粉样变性、ApoAIV淀粉样变性、Finnish型家族性淀粉样变性(FAF)、溶菌酶淀粉样变性、纤维蛋白原淀粉样变性、Dialysis淀粉样变性、包含体肌炎/肌病、白内障、伴有视紫红质突变的视网膜色素变性、甲状腺髓样癌、心房性淀粉样变性、垂体催乳素瘤、遗传性格子状角膜营养不良、皮肤苔癣淀粉样变性、马洛里小体、角膜乳铁蛋白淀粉样变性、肺泡蛋白沉积症、牙源性(Pindborg)肿瘤淀粉样变性、囊性纤维化、镰状细胞病或危重病肌病(CIM)。不受特定理论的限制，可以认为本文提供的肽具有一种或多种能够修复和/或预防神经细胞和/或其它细胞类型的神经退行性损伤的活性。可根据本文提供的方法治疗的“神经退行性疾病”是导致神经元变性和/或丧失(例如由于神经元细胞死亡(细胞凋亡))的进行性疾病。神经退行性疾病的示例包括但不限于脑退行性疾病(例如，阿尔茨海默病(AD)、帕金森病、进行性核上性麻痹和亨廷顿病(HD))、以及脊柱退行性疾病/运动神经元退行性疾病(例如，肌萎缩侧索硬化(ALS)、(SMA：Werdnig-Hoffmann病或Kugelberg-Welander综合征)、脊髓小脑性共济失调、延髓肌肉萎缩(BSMA；Kennedy-Alter-Sung综合征))。“运动神经元退行性疾病”是一种神经退行性疾病，其特征在于控制体内运动的上下运动神经元的进行性逆行性障碍。在其它方面，所述肽及其组合物还有效改善了由运动神经元退行性疾病引起的病症，如肌肉萎缩、肌肉无力、延髓麻痹(面部、咽部和舌头的肌肉萎缩或肌无力，及由此导致的失语症或吞咽困难)、肌肉震颤和呼吸障碍。

进一步的用途包括预防和治疗与线粒体功能障碍相关的疾病或病症。线粒体是代谢过程的核心，涉及能量产生、程序性细胞死亡和活性氧(ROS)的产生。传统上，线粒体被认为是“终端功能”细胞器，接收和处理大量细胞信号以调节能量产生和细胞死亡。该肽和肽类似物及其药物制剂可用于治疗与线粒体功能障碍相关的各种年龄有关的疾病。它们已经表现出在体外和体内以各种方式影响代谢过程，如线粒体呼吸、葡萄糖转运、葡萄糖利用、糖酵解、胰岛素调节和细胞增殖/存活。线粒体功能障碍与代谢障碍、神经退行性疾病、慢性炎症疾病和衰老疾病相关但不限于此。一些线粒体疾病是由于线粒体基因组中的突变或缺失。线粒体以比其宿主细胞更快的转换率分裂和增殖，并且它们的复制受核基因组的控制。如果细胞中线粒体的阈值比例有缺陷，并且如果组织内这种细胞的阈值比例具有缺陷的线粒体，则可导致组织或器官功能障碍的症状。实际上，任何组织都可能受到影响，并且可能存在多种症状，这取决于涉及不同组织的程度。除了涉及遗传性缺陷线粒体的先天性障碍外，获得性线粒体功能障碍还会导致疾病，特别是与衰老相关的神经退行性障碍，如帕金森病、阿尔茨海默病和亨廷顿病。线粒体DNA中体细胞突变的发病率随年龄呈指数上升；老年人普遍存在呼吸链活动减少。线粒体功能障碍还涉及兴奋毒性神经元损害，如与癫痫发作或缺血相关的损害。与线粒体功能障碍相关的其它障碍包括慢性炎症障碍和代谢障碍。

细胞保护性肽具有延长培养细胞活力的潜在效用。该肽可用于制造生物产品，包括蛋白质、抗体等。本公开一般涉及用于调节细胞培养物的一种或多种特性的肽和过程，包括哺乳动物细胞培养物(如CHO细胞培养物或大肠杆菌细胞培养物)。在一个实施方式中，提供了一种在表达重组蛋白的哺乳动物细胞培养物中提高比生产率的方法，该方法包含在培养基中建立哺乳动物细胞培养物；通过使细胞培养物与包含肽的培养基接触来增加细胞生长活力；通过使培养物与包含肽的培养基接触来保持细胞培养物。

试剂盒

可根据一个实施方式提供本公开的肽或肽类似物作为试剂盒的一部分。因此，在一些实施方式中，提供了用于向有此需要的患者施用肽或肽类似物的试剂盒，其中，所述试剂盒包含如本文所述的肽。

在一个实施方式中，该试剂盒具有用于将组合物施用至患者的装置，例如注射器针头、笔装置、喷射注射器或另一种无针注射器。该试剂盒可替代地或另外地包括一个或多个容器，例如小瓶、管、瓶、单室式或多室式预充注射器、盒、输注泵(外部或可植入的)、喷射注射器、预充笔装置等，任选地含有冻干形式的肽或水溶液中的肽。在一些实施方式中，该试剂盒包含使用说明书。根据一个实施方式，试剂盒的装置是气雾剂分配装置，其中，组合物预先包装在气雾剂装置内。在另一个实施方式中，该试剂盒包含注射器和针，并且在一个实施方式中，将无菌组合物预先包装在注射器内。

以下实施例仅用于说明本发明，而不以任何方式限制其范围。

实施例

在以下实施例中，测试肽参考对应于表1(参见附录)中列出的和此处提交的序列表的独特SEQ ID NO：。

实施例1

该实施例证明了合成本公开的肽或肽类似物的示例性方法。

除非另有说明，否则使用t-Boc或Fmoc化学或其它成熟的技术，通过类似于下述方法的方法，在合适的树脂上通过固相合成制备肽(参见例如：Stewart和Young,Solid PhasePeptide Synthesis,Pierce Chemical Co.,Rockford,III.,1984；E.Atherton和R.C.Sheppard,Solid Phase Peptide Synthesis.A Practical Approach,Oxford-IRLPress,New York,1989；Greene和Wuts,"Protective Groups in Organic Synthesis",John Wiley&Sons,1999，Florencio Zaragoza Dorwald,"Organic Synthesis on solidPhase",Wiley-VCH Verlag GmbH,2000以及"Fmoc Solid Phase Peptide Synthesis",W.C.Chan和P.D.White编辑,Oxford University Press,2000)。

固相合成是通过将具有羧基末端的N-末端保护的氨基酸连接到带有可切割接头的惰性固体支持物上而引发的。该固体支持物可以是允许偶联起始氨基酸的任何聚合物，例如Pam树脂、三苯甲基树脂、氯三苯甲基树脂、Wang树脂或Rink树脂，其中，羧基(或Rink树脂的羧酰胺)与所述树脂的连接对酸敏感(当使用Fmoc策略时)。在肽合成期间，在用于脱保护α氨基基团的条件下，聚合物支持物是稳定的。在第一个氨基酸已与固体支持物偶联后，除去该氨基酸的α氨基保护基团。然后使用适当的以下酰胺偶联试剂以肽序列表示的顺序一个接一个地将剩余的受保护的氨基酸偶联：例如BOP(苯并三唑-l-基-氧基-三-(二甲基氨基)-鏻鎓)、HBTU(2-(1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基-脲鎓)、HATU(O-(7-氮杂苯并三唑-1-基-氧基-三-(二甲基氨基)-鏻鎓)或DIC(Ν,Ν'-二异丙基碳二亚胺)/HOBt(1-羟基苯并三唑)，其中，BOP、HBTU和HATU与叔胺碱一起使用。可替换地，可以用除氨基酸以外的基团(例如羧酸等)官能化释放的N-末端。通常，用合适的封闭基团保护氨基酸的反应性侧链基团。在组装所需的肽后除去这些保护基团。在相同条件下从树脂上裂解所需产物，同时除去这些保护基团。保护基团和引入保护基团的程序可在Protective Groups in OrganicSynthesis,3d ed.,Greene,T.W.和Wuts,P.G.M.,Wiley&Sons(New York:1999)中找到。在某些情况下，可能需要具有选择性除去的侧链保护基团，而其它侧链保护基团保持完整。在这种情况下，可以选择性地官能化释放的功能。例如，可以用ivDde保护基团保护赖氨酸(S.R.Chhabra等人,Tetrahedron Lett.39,(1998),1603)，该保护基团对于非常亲核的碱是不稳定的，例如在DMF(二甲基甲酰胺)中的4％肼。因此，如果用酸不稳定保护基团保护N-末端氨基基团和所有侧链官能团，则可以使用DMF中的4％肼选择性地除去ivDde([1-(4,4-二甲基-2,6-二氧代环己-1-亚基)-3-甲基丁基)基团，然后例如可以通过酰化进一步修饰相应的游离氨基基团。可替代地，赖氨酸可以与受保护的氨基酸偶联，然后可以将该氨基酸的氨基基团脱保护，得到另外的游离氨基基团，该另外的游离氨基基团可以被酰化或与其它氨基酸连接。最后，将该肽从树脂上裂解下来。这可以通过使用HF或King氏混合物来实现(D.S.King,C.G.Fields,G.B.Fields,Int.J.Peptide Protein Res.36,1990,255-266)。然后，如果需要，则可以通过色谱法(例如制备型RP-HPLC)纯化原料。

可以产生包括非天然氨基酸和/或共价连接的N-末端单-或二肽模拟物的那些肽、类似物或衍生物，如实验部分中所述，或参见例如Hodgson等人："The synthesis ofpeptides and proteins containing non-natural amino acids",and ChemicalSociety Reviews,vol.33,no.7(2004),p.422-430。

根据下述肽合成制备肽，并且除非另有说明，否则可以与下述合成类似地制备表1中所示的序列。

肽合成的一种方法是通过基于微波的Liberty肽合成仪(CEM Corp.，NorthCarolina)上的Fmoc化学。树脂是负载量为约0.25mmol/g的Tentagel S RAM、或负载量为约0.43mmol/g的PAL-ChemMatrix、或负载量为0.5-0.75mmol/g的PAL AM基质。偶联化学是使用0.3M和6-8倍摩尔过量的氨基酸溶液的NMP或DMF中的DIC/HOAt或DIC/Oxyma。在高达70℃的温度下，偶联条件为5分钟。脱保护是在高达70℃的NMP中使用10％哌啶。所用的受保护的氨基酸是标准的Fmoc-氨基酸(由例如Anaspec或Novabiochem或Protein Technologies提供)。

肽合成的另一种方法是通过Prelude肽合成仪(Protein Technologies，Arizona)上的Fmoc化学。树脂是负载量约为0.25mmol/g的Tentagel S RAM、或负载量约为0.43mmol/g的PAL-ChemMatrix、或负载量为0.5-0.75mmol/g的PAL AM。偶联化学是使用0.3M和6-8倍摩尔过量的氨基酸溶液的NMP或DMF中的DIC/HOAt或DIC/Oxyma。偶联条件是在室温下单偶联或双偶联1或2小时。脱保护是在NMP中使用20％哌啶。所用的受保护的氨基酸是标准的Fmoc-氨基酸(由例如Anaspec或Novabiochem或Protein Technologies提供)。如通过半制备型HPLC在填充有5μm或7μm C-18二氧化硅的20mm×250mm柱上纯化粗肽。将肽溶液泵入HPLC柱，将沉淀的肽溶于5ml 50％乙酸水中，用水将其稀释至20ml，并注入柱中，然后以10ml/min用40-60％CH₃CN(在0.1％TFA中)梯度，在40℃下洗脱该柱50分钟。收集含有肽的级分。用水稀释洗脱液后，将纯化的肽冻干。

除非另有说明，否则通过类似于下文所述的方法制备本文所述的所有具有C-末端酰胺的肽。肽合成期间，使用MBHA树脂(4-甲基二苯甲基胺聚苯乙烯树脂)。MBHA树脂(100-180目，1％DVB交联聚苯乙烯；负载量为0.7-1.0mmol/g)、Boc保护的氨基酸和Fmoc保护的氨基酸可购自Midwest Biotech。使用Boc保护的氨基酸在Applied Biosystem 430A肽合成仪上进行固相肽合成。使用Applied Biosystems Model 433肽合成仪进行Fmoc保护的氨基酸合成。

在Applied Biosystem Model 430A肽合成仪上进行肽的合成。通过将氨基酸顺序添加到含有2mmol Boc保护的氨基酸的盒中来构建合成肽。具体地，使用Boc DEPBT活化的单偶联进行合成。在偶联步骤结束时，用TFA处理肽基树脂以除去N-末端Boc保护基团。用DMF反复洗涤，对于所需数量的偶联步骤，重复该重复循环。组装后，通过20％哌啶处理除去侧链保护Fmoc，并使用DIC进行酰化。通过使用DCM干燥整个合成结束时的肽基树脂，并用无水HF从树脂上切割下该肽。用无水HF处理肽基树脂，这通常产生接近350mg(～50％产率)的粗脱保护肽。具体地，将肽基树脂(30mg至200mg)置于氟化氢(HF)反应容器中进行切割。将500μL对甲酚作为碳鎓离子清除剂添加到容器中。将该容器连接到HF系统并浸没在甲醇/干冰混合物中。用真空泵抽空容器，并将10ml HF蒸馏到反应容器中。将肽基树脂和HF的该反应混合物在0℃搅拌1小时，然后建立真空并快速抽空HF(10-15分钟)。小心地取出容器并用接近35ml乙醚填充以沉淀肽并提取对甲酚和由HF处理产生的小分子有机保护基团。利用Teflon过滤器过滤该混合物并重复两次以除去所有过量的甲酚。弃去该滤液。将沉淀的肽溶解于接近20ml的10％乙酸(水溶液)中。收集含有所需肽的滤液并冻干。

实施例2

该实施例证明了示例性肽对培养的鼠脂肪细胞中游离脂肪酸水平的影响。

将鼠3T3-L1细胞以每孔1000-20000个细胞的密度接种在96孔、48孔或24孔板的前脂肪细胞培养基(Zen-Bio，Durham，NC)中，并在37℃，5％CO₂/95％空气的湿润气氛中生长至汇合。汇合后两天，将细胞置于脂肪细胞分化培养基(Zen-Bio，Durham，NC)中，并在37℃，5％CO₂/95％空气的湿润气氛中再培养3天。然后用脂肪细胞保持培养基(Zen-Bio)替换培养基，并将细胞在37℃，5％CO₂/95％空气的湿润气氛中再保持9-14天，每隔一天更换部分培养基。分化12-17天后，添加终浓度为25μM的测试肽，并在37℃，5％CO₂/95％的湿润气氛中、在脂肪细胞保持培养基中温育18-20小时。18-20小时后，用含有测试肽的新鲜脂肪细胞保持培养基更换培养基，并在37℃，5％CO₂/95％的湿润气氛中温育1小时。1小时后，将培养基更换为含有异丙肾上腺素(1nM)(添加到除未处理对照之外的所有样品中)和测试肽的测定缓冲液(Zen-Bio)。在37℃，5％CO₂/95％的湿润气氛中将细胞再温育3小时。使用游离脂肪酸测定试剂盒(Zen-Bio)，根据制造商的说明书使用读板器(540nm)测定培养基中的游离脂肪酸浓度。

对未经处理的背景校正吸光度值，并且相对于异丙肾上腺素处理的细胞表达该吸光度值。将单独用异丙肾上腺素(1nM)处理用作游离脂肪酸水平刺激对照。异丙肾上腺素对照的相对标准偏差<10％。将胰岛素用作降低游离脂肪酸水平的高效阳性对照。胰岛素(100nM)处理的游离脂肪酸水平<异丙肾上腺素对照值的5％。结果报告于表4中。

表4

3T3-L1脂肪细胞中的游离脂肪酸水平，表示为异丙肾上腺素对照的百分比

实施例3

将鼠3T3-L1细胞以每孔1000-20000个细胞接种在96孔、48孔或24孔板的前脂肪细胞培养基(Zen-Bio，Durham，NC)中，并在37℃，5％CO₂/95％空气的湿润气氛中生长至汇合。汇合后两天，将细胞置于脂肪细胞分化培养基(Zen-Bio，Durham，NC)中，并在37℃，5％CO₂/95％空气的湿润气氛中再培养3天。然后用脂肪细胞保持培养基(Zen-Bio)替换培养基，并将细胞在37℃，5％CO₂/95％空气的潮湿气氛中再保持9-14天，每隔一天更换部分培养基。分化12-17天后，添加终浓度为25μM的测试肽，并在37℃，5％CO₂/95％的湿润气氛中、在脂肪细胞保持培养基中温育18-20小时。18-20小时后，用含有测试肽的新鲜脂肪细胞保持培养基更换培养基，并在37℃，5％CO₂/95％的湿润气氛中温育1小时。1小时后，将培养基更换为含有毛喉素(1μM)(添加到除未处理对照之外的所有样品中)和测试肽的测定缓冲液(Zen-Bio)。在37℃，5％CO₂/95％的湿润气氛中将细胞再温育3小时。使用游离脂肪酸测定试剂盒(Zen-Bio)，根据制造商使用读板器(540nm)的说明书测定培养基中的游离脂肪酸浓度。对未经处理的背景校正吸光度值，并且相对于毛喉素处理的细胞表达该吸光度值。将单独用毛喉素(1μM)处理用作游离脂肪酸水平刺激对照。毛喉素对照的相对标准偏差<10％。将胰岛素用作降低游离脂肪酸水平的高效阳性对照。胰岛素(100nM)处理的游离脂肪酸水平<毛喉素对照值的9％。结果报告于表5中。

表5

3T3-L1脂肪细胞中的游离脂肪酸水平，表示为毛喉素对照的百分比

SEQ ID NO：	对照值百分比
		21	56.0
39	114
		40	96.1
46	66.8
		47	45.3
52	88.0
		203	54.5
204	57.3
		205	64.5
206	50.6
		207	51.6
208	62.4
		209	33.3
210	29.2
		211	33.7
213	36.0
		214	50.2
215	37.4
		216	50.1
217	40.3
		218	43.6
219	41.5
		2	59.2

实施例4

该实施例证明了示例性肽对培养的人原代脂肪细胞中游离脂肪酸水平的影响。将人原代脂肪细胞以每孔5000-100000个细胞接种在96孔、48孔或24孔板的前脂肪细胞培养基(Zen-Bio，Durham，NC)中，并在37℃，5％CO₂/95％空气的湿润气氛中生长至汇合。汇合后两天，将细胞置于脂肪细胞分化培养基(Zen-Bio，Durham，NC)中，并在37℃，5％CO₂/95％空气的湿润气氛中再培养3天。然后用脂肪细胞保持培养基(Zen-Bio)替换培养基，并将细胞在37℃，5％CO₂/95％空气的潮湿气氛中再保持11-21天，每隔一天更换部分培养基。分化14-24天后，添加终浓度为25μM的测试肽，并在37℃，5％CO₂/95％的湿润气氛中、在脂肪细胞保持培养基中温育18-20小时。18-20小时后，用含有测试肽的新鲜脂肪细胞保持培养基更换培养基，并在37℃，5％CO₂/95％的湿润气氛中温育1小时。1小时后，将培养基更换为含有异丙肾上腺素(1nM)(添加到除未处理对照之外的所有样品中)和测试肽的测定缓冲液(Zen-Bio)。在37℃，5％CO₂/95％的湿润气氛中将细胞再温育3小时。使用游离脂肪酸测定试剂盒(Zen-Bio)，根据制造商使用读板器(540nm)的说明书测定培养基中的游离脂肪酸浓度。对未经处理的背景校正吸光度值，并且相对于异丙肾上腺素处理的细胞表达该吸光度值。将单独用异丙肾上腺素(1nM)处理用作游离脂肪酸水平刺激对照。异丙肾上腺素对照的相对标准偏差<14％。将胰岛素用作降低游离脂肪酸水平的高效阳性对照。胰岛素(100nM)处理的游离脂肪酸水平<异丙肾上腺素对照值的5％。结果报告于表6中。

表6

人原代脂肪细胞中的游离脂肪酸水平，表示为异丙肾上腺素对照的百分比

SEQ ID NO：	对照值百分比
		8	22.2
21	88.9
		39	22.2
40	122
		45	22.2
46	71.6
		47	60.5
52	126
		58	164
69	53.0
		208	70.9
209	66.8
		210	75.5
211	79.9
		213	103
219	69.4
		2	107

实施例5

该实施例证明了示例性肽对培养的人原代脂肪细胞中游离脂肪酸水平的影响。将人原代脂肪细胞以每孔5000-100000个细胞接种在96孔、48孔或24孔板的前脂肪细胞培养基(Zen-Bio，Durham，NC)中，并在37℃，5％CO₂/95％空气的湿润气氛中生长至汇合。汇合后两天，将细胞置于脂肪细胞分化培养基(Zen-Bio，Durham，NC)中，并在37℃，5％CO₂/95％空气的湿润气氛中再培养3天。然后用脂肪细胞保持培养基(Zen-Bio)替换培养基，并将细胞在37℃，5％CO₂/95％空气的潮湿气氛中再保持11-21天，每隔一天更换部分培养基。分化14-24天后，添加终浓度为25μM的测试肽，并在37℃，5％CO₂/95％的湿润气氛中、在脂肪细胞保持培养基中温育18-20小时。18-20小时后，用含有测试肽的新鲜脂肪细胞保持培养基更换培养基，并在37℃，5％CO₂/95％的湿润气氛中温育1小时。1小时后，将培养基更换为含有毛喉素(1μM)(添加到除未处理对照之外的所有样品中)和测试肽的测定缓冲液(Zen-Bio)。在37℃，5％CO₂/95％的湿润气氛中将细胞再温育3小时。使用游离脂肪酸测定试剂盒(Zen-Bio)，根据制造商使用读板器(540nm)的说明书测定培养基中的游离脂肪酸浓度。对未经处理的背景校正吸光度值，并且相对于毛喉素处理的细胞表达该吸光度值。将单独用毛喉素(1μM)处理用作游离脂肪酸水平刺激对照。毛喉素对照的相对标准偏差<20％。将胰岛素用作降低游离脂肪酸水平的高效阳性对照。胰岛素(100nM)处理的游离脂肪酸水平<毛喉素对照值的8％。结果报告于表7中。

表7

人原代脂肪细胞中的游离脂肪酸水平，表示为毛喉素对照的百分比

实施例6

该实施例证明了示例性肽对饮食诱导的肥胖(DIO)小鼠的体重、血糖水平和脂肪量的影响。将雄性C57BL/6小鼠保持高脂肪饮食18周以发展为饮食诱导的肥胖。基于血糖水平和体重将动物随机分配至处理组。通过皮下或腹膜内注射以15mg/kg/剂的剂量将本发明的肽每天一次或两次施用于两组雄性DIO小鼠10天(N＝每个处理组8只动物)。另一组雄性DIO小鼠(n＝8)仅接受载体(水或盐水)。监测体重、血糖水平和食物摄入。在施用前和施用结束时通过定量全身NMR测定体重分布(脂肪相对于瘦肉)。当与单独用载体处理的动物相比时，施用本发明的肽相对于基线值产生更大的体重减轻、更大的血糖降低以及更大的脂肪量减少(表8)。

表8

在每天两次以15mg/kg腹膜内处理10天后，雄性DIO小鼠代谢参数自基线的减少相对于载体对照的平均差异(N＝8)

实施例7

该实施例证明了一项21天的研究，旨在确定示例性肽对饮食诱导的肥胖(DIO)小鼠体重和脂肪量的影响。将雄性C57BL/6小鼠保持高脂肪饮食12至22周以发展为饮食诱导的肥胖。基于血糖水平和体重将动物随机分配至处理组。通过适当途径以15mg/kg/剂的剂量各自将肽(SEQ ID No：208和SEQ ID NO：210)每天两次施用于一组雄性DIO小鼠21天(N＝每个处理组8至12只动物)。另外一组雄性DIO小鼠(n＝8/组)单独接受对照测试物品(利拉鲁肽或吡格列酮)或载体(水或盐水)。监测代谢参数(包括体重、血糖水平和食物摄入)。在施用前和施用结束时适当通过定量全身NMR测定体重分布(脂肪相对于瘦肉)。当与用SEQID NO：2的肽、对照测试物品(吡格列酮或利拉鲁肽)或用单独的载体处理的动物相比时，施用肽相对于基线值产生更大的体重减轻、更大的血糖降低和/或更大的脂肪量减少(表9)。

表9

在每天两次以15mg/kg处理21天后，雄性DIO小鼠代谢参数自基线的平均(SD)减少(N＝8-12)

*每天处理一次。IP-腹膜内。PO-口服。ND-未确定。

实施例8

该实施例证明了一项21天的研究，旨在确定包含本公开的示例性肽和商购抗糖尿病治疗剂的组合疗法对饮食诱导的肥胖(DIO)小鼠的体重和脂肪量的影响。

将雄性C57BL/6小鼠保持高脂肪饮食12至22周以发展为饮食诱导的肥胖。基于血糖水平和体重将动物随机分配至处理组。通过适当途径各自将肽(SEQ ID No：208和SEQ IDNO：210)以5mg/kg/剂的剂量并联合腹腔内施用利拉鲁肽(10nmol/kg/天)每天一次施用于一组雄性DIO小鼠21天(N＝每个处理组8只动物)。另外一组雄性DIO小鼠(n＝8/组)单独接受对照测试物品(单独利拉鲁肽)或载体(水或盐水)。监测代谢参数(包括体重、血糖水平和食物摄入)。在施用前和施用结束时适当通过定量全身NMR测定体重分布(脂肪相对于瘦肉)。当与单独用利拉鲁肽或单独用载体处理的动物相比时，施用肽并联合利拉鲁肽相对于基线值产生更大的体重减轻、更大的血糖降低和/或更大的脂肪量减少(表10)。

表10

在每天一次以5mg/kg处理21天后，雄性DIO小鼠代谢参数自基线的平均(SD)减少(N＝8)

*每天治疗两次。

实施例9

该实施例证明了示例性肽对甘油三酯水平和肝损伤标记物的影响。

将雄性C57BL/6小鼠保持高脂肪饮食12至22周以发展为饮食诱导的肥胖。基于血糖水平和体重将动物随机分配至处理组。通过适当途径以15mg/kg/剂的剂量各自将肽(SEQID No：208，和SEQ ID NO：210)每天两次施用于一组雄性DIO小鼠21天(N＝每个处理组8至12只动物)。另外一组雄性DIO小鼠(n＝8/组)单独接受对照测试物品(利拉鲁肽)或载体(水或盐水)。在第21天第一次施用后2小时结束时获得血清样品。通过本领域熟知的方法分析样品的标准临床化学参数。当与用对照测试物品(利拉鲁肽)或用单独的载体处理的动物相比时，施用SEQ ID NO：208和SEQ ID NO：210的肽产生更大的血清甘油三酯降低、ALT降低和AST降低(表11)。

表11

每天两次处理21天后，雄性DIO小鼠血清中甘油三酯和肝损伤酶标记物的平均浓度

*每天处理一次。IP-腹膜内。

实施例10

该实施例证明了本公开的示例性肽在猕猴中的药代动力学。

在施用前将雄性猕猴(2至6kg)禁食8小时。用单次静脉内或皮下推注剂量的测试肽(0.1至15mg/kg)注射动物。通过隐静脉或其它合适的静脉施用静脉内注射。在肩胛区域施用皮下注射。每隔24小时取出血样并处理血浆。在注射后4小时恢复用餐。通过合适的分析方法(例如LCMS)确定血浆样品中肽和/或代谢物的浓度，并通过非隔室方法计算药代动力学参数。相对于SEQ ID No：2，本发明的肽显示出增加的暴露(例如，增加的C_max、AUC和/或半衰期)。

实施例11

该实施例证明了本公开的示例性肽在非人灵长类动物的肥胖模型中的功效。

自发性肥胖的雄性猕猴被施用驯化且处理至少3周。确定基线动物特征，并基于体重和基线代谢参数(如甘油三酯水平)将动物随机分配成处理组。随机分配后，每组猴子接受每天或每天两次剂量的本发明的肽，该肽通过合适途径施用4周或更长时间。对照组的猴子接受每天剂量的载体或阳性对照。在研究期间每隔一段时间测量食物消耗和体重。将施用的肽对体重、食物摄入、BMI和/或代谢参数的影响与用载体处理的对照动物进行比较。

实施例12

该实施例证明了本公开的示例性肽在非酒精性脂肪肝炎(NASH)鼠模型中的功效。

在NASH的STAM模型中，在出生后三天用单次皮下剂量的链球菌毒素注射C57/bl6以破坏胰腺β细胞。在4周龄时，动物进行高脂肪饮食。这种组合治疗导致脂肪变性、纤维化、肝硬化和最终肝细胞癌(HCC)的发展并伴随高血糖症和中度高脂血症，因此非常类似于人NASH。从5周龄开始，用每天或每天两次通过适当的途径施用本发明的肽处理STAM动物组(每组8只动物)直至研究终止。对照组动物每天接受施用合适的阳性对照化合物(例如替米沙坦)。在接近10周龄时，测定代谢参数并处死动物。获得肝脏样品并固定，包埋在石蜡中，用苏木精和曙红或马森三色染剂染色，并通过光学显微镜检查。根据本领域已知的方法，组织病理学地确定脂肪变性程度和非酒精性脂肪肝病(NAFLD)活性评分(NAS)。

实施例13

该实施例证明了本公开的示例性肽在携带肿瘤的鼠异种移植模型中肿瘤生长的功效。

通过本领域熟知的方法制备鼠异种移植模型。例如，用人肿瘤细胞(例如，MCF-7、MDA-MB-231、PC-3等)注射SCID小鼠并监测肿瘤生长。当肿瘤具有足够尺寸时，将动物随机分配至处理组，并且每天，每天、每隔一天或每周施用本发明的肽、载体对照、阳性对照(例如吉西他滨或紫杉醇)或本发明的肽+阳性对照的组合。在14至28天内监测肿瘤生长、体重和存活。当与用载体对照处理的动物相比时，检查单独施用本发明的肽和/或其与阳性对照组合施用的肿瘤生长的减少和/或存活的延长。

实施例14

该实施例证明了本公开的示例性肽在鼠血浆中的稳定性。

在37℃下，在合并的鼠血浆中将肽(100uM)温育，取出样品并立即通过LC/MS/MS在3小时内分析完整肽的浓度。相对于初始峰面积计算在每个时间点保留在血浆中的肽的百分比(表12)。

表12

鼠血浆中的稳定性

实施例15

该实施例证明了本公开的示例性肽在鼠血浆中的稳定性。

在37℃下，在合并的鼠血浆中将肽(10uM)温育，取出样品并立即通过LC/MS/MS在3小时内分析完整肽的浓度。相对于初始峰面积计算在每个时间点保留在血浆中的肽的百分比(表13)。

表13

鼠血浆中的稳定性

实施例16

该实施例证明了本发明的示例性肽在猴和人血浆中的稳定性。在37℃下，在合并的鼠或人血浆中将肽(10uM)温育，取出样品并立即通过LC/MS/MS在3小时内分析完整肽的浓度。相对于初始峰面积计算在每个时间点保留在血浆中的肽的百分比(表14)。

表14

猴子和人血浆中的稳定性

实施例17

该实施例证明了示例性肽对培养的鼠脂肪细胞中游离脂肪酸水平的影响。将鼠3T3-L1细胞以每孔1000-20000个细胞的密度接种在96孔、48孔或24孔板的前脂肪细胞培养基(Zen-Bio，Durham，NC)中，并在37℃，5％CO₂/95％空气的湿润气氛中生长至汇合。汇合后两天，将细胞置于脂肪细胞分化培养基(Zen-Bio，Durham，NC)中，并在37℃，5％CO₂/95％空气的湿润气氛中再培养3天。然后用脂肪细胞保持培养基(Zen-Bio)替换培养基，并将细胞在37℃，5％CO₂/95％空气的潮湿气氛中再保持9-14天，每隔一天更换部分培养基。分化12-17天后，添加终浓度为25-50μM的测试肽，并在37℃，5％CO₂/95％的湿润气氛中、在脂肪细胞保持培养基中温育18-20小时。在培养基温育后，除去培养基并更换为含有异丙肾上腺素(1nM)(添加到除未处理对照之外的所有样品中)和测试肽的测定缓冲液(Zen-Bio)。在37℃，5％CO₂/95％的湿润气氛中将细胞再温育3小时。使用游离脂肪酸测定试剂盒(Zen-Bio)，根据制造商的说明书使用读板器(540nm)测定培养基中的游离脂肪酸浓度。

对未经处理的背景校正吸光度值，并且相对于异丙肾上腺素处理的细胞表达该吸光度值。将单独用异丙肾上腺素(1nM)处理用作游离脂肪酸水平刺激对照。异丙肾上腺素对照的相对标准偏差<10％。将胰岛素用作降低游离脂肪酸水平的高效阳性对照。胰岛素(100nM)处理的游离脂肪酸水平<异丙肾上腺素对照值的5％。结果报告于表15中。

表15

实施例18

该实施例证明了本公开的示例性肽在非酒精性脂肪肝炎(NASH)鼠模型中的功效。在NASH的模型中，在出生后两天用单次皮下剂量的200μg链球菌毒素注射C57/BL6小鼠以破坏胰腺β细胞。在4周龄时，动物进行高脂肪饮食(来自脂肪的57％千卡)并在整个研究中保持相同的饮食。这种组合治疗导致脂肪变性、纤维化、肝硬化和最终肝细胞癌(HCC)的发展并伴随高血糖症和中度高脂血症，因此非常类似于人NASH。从6周龄开始，用每天两次通过腹膜内注射施用本发明的肽处理STAM动物组(每组8只动物)直至研究终止。对照组的STAM动物(n＝8)接受每天剂量的替米沙坦对照化合物(10mg/kg)。另一组正常小鼠(n＝8)未接受任何处理。施用21天后，在9周龄时，测定代谢参数并处死动物。获得肝脏样品并固定，包埋在石蜡中，用苏木精和曙红染色，并通过光学显微镜检查。根据本领域已知的方法，组织病理学地确定脂肪变性程度和非酒精性脂肪肝病(NAFLD)活性得分(NAS)。得到的NAS得分如表16所示。

表16

开始于6周龄并处理21天后(N＝8)，雄性小鼠的平均(SD)NAFLD活性得分(NAS)

*与载体对照相比，NAS得分显著降低(学生t检验和Mann-Whitney检验P<0.01)

实施例19

该实施例证明了本公开的示例性肽在非酒精性脂肪肝炎(NASH)鼠模型中降低肝脏甘油三酯水平和血浆ALT水平的功效。在NASH的模型中，在出生后两天用单次皮下剂量的200μg链球菌毒素注射C57/BL6小鼠以破坏胰腺β细胞。在4周龄时，动物进行高脂肪饮食(来自脂肪的57％千卡)并在整个研究中保持相同的饮食。这种组合治疗导致脂肪变性、纤维化、肝硬化和最终肝细胞癌(HCC)的发展并伴随高血糖症和中度高脂血症，因此非常类似于人NASH。从6周龄开始，用每天两次通过腹膜内注射施用本发明的肽处理STAM动物组(每组8只动物)直至研究终止。对照组的STAM动物(n＝8)接受每天剂量的替米沙坦对照化合物(10mg/kg)。另一组正常小鼠(n＝8)未接受任何处理。施用21天后，在9周龄时，测定代谢参数并处死动物。通过在氯仿-甲醇中均化并在室温下温育过夜来测定肝脏甘油三酯水平。用氯仿-甲醇-水洗涤后，将提取液蒸发至干，并溶于异丙醇中。然后通过甘油三酯E-测试(Wako，日本)测量肝脏甘油三酯含量。通过使用Fuji Dri-Chem 7000(Fujifilm，日本)测定血浆ALT水平。结果如表17所示。

表17

开始于6周龄并处理21天后(N＝8)，雄性小鼠的平均(SD)肝脏甘油三酯水平和血浆ALT水平

*与载体对照相比有显著差异(学生t检验P<0.05)

实施例20

该实施例证明了示例性肽对饮食诱导的肥胖(DIO)小鼠的体重、血糖水平和脂肪量的影响。

将雄性C57BL/6小鼠保持高脂肪饮食18周以发展为饮食诱导的肥胖。基于血糖水平和体重将动物随机分配至处理组。通过腹膜内或皮下注射以5至15mg/kg/剂的剂量将本发明的肽每天一次或两次施用于两组雄性DIO小鼠10天(N＝每个处理组8只动物)。另一组雄性DIO小鼠(n＝8)仅接受载体(水或盐水)。监测体重、血糖水平和食物摄入。在施用前和施用结束时通过定量全身NMR测定体重分布(脂肪相对于瘦肉)。施用本发明的肽相对于基线值产生体重减轻和/或脂肪量减少(表18)。

表18

在每天两次以15mg/kg(N＝8)腹腔内处理10天后，雄性DIO小鼠代谢参数自基线的平均(SEM)减少

*每天施用一次。

实施例21-葡萄糖利用

可以使用培养的培养细胞(如鼠成肌细胞)中葡萄糖利用的测定来评估肽对葡萄糖代谢的影响。最初将肽制备为DMSO中的10mM原液，并以10μM(0.1％DMSO)的终浓度使用。C2C12鼠成肌细胞系购自American Type Culture Collection(Manassas，VA)。将C2C12培养物保持在37℃，5％CO₂/95％空气的湿润气氛中，每隔一天更换培养基。C2C12细胞在补充有10％FBS、100IU/ml青霉素和100μg/ml链霉素的DMEM(1g/L葡萄糖)中生长。将C2C12细胞以每孔7000个细胞接种在96孔板上并培养至汇合。一旦细胞达到汇合，将培养基更换为DMEM(1g/L葡萄糖)，该DMEM补充有2％HS、100IU/ml青霉素和100μg/ml链霉素，并保持在37℃，5％CO₂/95％空气的湿润气氛中。诱导分化后5天，将新鲜的补充有2％HS、100IU/ml青霉素和100μg/ml链霉素的DMEM(1g/L葡萄糖)添加到培养物中。将细胞在37℃，5％CO₂和95％空气的湿润气氛中保持5小时。5小时后，将在新鲜分化培养基中制备的10μM的测试肽或对照(在1％DMSO中的0.5mM或1mM二甲双胍)添加到细胞中，并将培养物保持在37℃，5％CO₂/95％空气的湿润气氛中18-22小时。在温育结束时，从细胞中除去培养基，并使用GlucoseAssay试剂盒(Abcam)根据制造商的说明书，使用Cytation 3读板器(BioTek，Winooski，VT)在570nm测量剩余的葡萄糖浓度。相对于0.1％DMSO处理的对照细胞计算培养基中的葡萄糖浓度。将二甲双胍用作降低葡萄糖水平的阳性对照。单独施用本发明的肽和/或其与阳性对照组合施用导致C2C12鼠成肌细胞中的葡萄糖利用比用载体对照处理的那些葡萄糖利用增加或降低。

实施例22-暴露于星形孢菌素的细胞中的ATP水平

可以使用培养细胞(如暴露于合适的胁迫(如星形孢菌素暴露)的人神经母细胞瘤细胞)中的ATP水平的测定来评估对肽的细胞活力的潜在细胞保护性效果或潜在的协同效果。最初将肽制备为DMSO中的10mM原液，并以10μM(0.1％DMSO)的终浓度测试。将星形孢菌素用作可降低细胞ATP水平的细胞凋亡/细胞死亡的高效诱导剂。以10nM至1μM浓度范围使用星形孢菌素。检测试剂盒购自Promega。SH-SY5Y人神经母细胞瘤细胞系购自美国典型培养物保藏中心(Manassas，VA)并获自纪念斯隆-凯特琳癌症中心(New York，NY)许可。SH-SY5Y细胞在补充有10％FBS、100IU/ml青霉素和100μg/ml链霉素的DMEM/F12培养基中生长。将培养物保持在37℃，5％CO₂/95％空气的湿润气氛中。将SH-SY5Y细胞以每孔30000个细胞接种在96孔板上。第二天，将细胞与10μM的测试肽在0.1％DMSO和星形孢菌素(40μM)中温育，并在37℃，5％CO₂/95％空气的湿润气氛中保持18-20小时。根据制造商的说明，使用CellTiter-Glo测定试剂盒(Promega)测定ATP水平。使用Cytation 3读板器(BioTek，Winooski，VT)测量板上每个样品孔的发光。通过用40μM星形孢菌素处理计算相对于ATP活性减少。小于100％的值表示细胞保护性效果，而大于100％的值表示对活力的协同效果。40μM星形孢菌素处理的对照细胞结果的相对标准偏差<5％。单独施用本发明的肽和/或其与阳性对照组合施用导致暴露于星形孢菌素的培养SH-SY5Y神经母细胞瘤细胞中的ATP水平比用载体对照处理的那些ATP水平增加或降低。

根据本公开，无需过度实验就可以制备和实施本文公开和要求保护的所有物品和方法。虽然已经根据优选实施方式描述了本公开的物品和方法，但是对于本领域技术人员显而易见的是，在不脱离本公开的精神和范围的情况下，可以对物品和方法应用变型。对于本领域技术人员显而易见的所有这些变型和等同物，无论是现在存在的还是以后开发的，都被认为是在由所附权利要求限定的本公开的精神和范围内。例如，本文所述的作为使用方法的所有方面和/或实施方式也被设想为用于所述用途的组合物，或用于特定用途的药物中的组合物。本说明书中提及的所有专利、专利申请和出版物表示本公开所属领域的普通技术人员的水平。可适当地在不存在本文未具体公开的任何要素的情况下实施本文说明性描述的公开。因此，例如，在本文的每种情况下，术语“包含”，“基本上由......组成”和“由...组成”中的任一个可以用其它两个术语中的任一个替换。将已经利用的术语和表达用作描述的术语而非限制性术语，并且在使用这些术语和表达时，无意排除所示和所述特征的任何等同物或其部分，但应认识到，在所要求保护的范围内可以进行各种修改。因此，应该理解的是，尽管已经通过优选实施方式和任选特征具体公开了本公开，但是本领域技术人员可以采用本文公开的概念的修改和变型，并且这些修改和变型被认为是在由所附权利要求限定的本公开的范围内。

本文引用的所有参考文献(包括出版物、专利申请和专利)均通过引用整体并入本文，其程度如同每个参考文献被单独且具体地指出通过引用并入并且在本文中完整地阐述(在法律允许的最大程度内)。本文使用的所有标题和子标题仅为了方便，不应被解释为以任何方式进行限制。除非另外声明，否则本文提供的任何和所有示例或示例性语言(例如，“如”)的使用仅旨在更好地说明本公开，并且不对本公开的范围构成限制。本说明书中的任何语言都不应被解释为表示任何未声明的要素对于本公开的实践是必不可少的。本文中引用和并入专利文献仅是为了方便，并不反映这些专利文献的有效性、可专利性和/或可执行性的任何观点。

本公开包括适用法律所允许的所附方面中所引用主题的所有修改和等同物。

Claims

1.一种包含式I的氨基酸序列的肽；或其C-末端酸或酰胺、或N-乙酰基衍生物；或其药学上可接受的盐，

X¹-QE-X²-X³-YI-X⁴-Y-X⁵-R-X⁶ (I)(SEQ ID NO：1)

其中，X¹不存在或者如果存在的话是X⁷-RW，其中，X⁷不存在或者如果存在的话是具有非极性侧链或极性侧链的氨基酸；X²和X³各自独立地为具有非极性侧链或极性侧链的氨基酸；X⁴和X⁵各自独立地为具有非极性侧链的氨基酸；X⁶不存在或者如果存在的话是KL-X⁸或X⁹-LR，其中，X⁸不存在或者如果存在的话是具有非极性侧链的氨基酸，并且X⁹是具有非极性侧链的氨基酸；

其中，所述肽不是由SEQ ID NO：2、42、77、78、316-318和328-349的氨基酸序列中的任一个组成的肽。

2.根据权利要求1所述的肽或其药学上可接受的盐，其中，X¹不存在或者如果存在的话是X⁷-RW，其中，X⁷不存在或者如果存在的话则选自D、(dD)、E、(dE)、K、(dK)、R、(dR)、H、(dH)、N、(dN)、Q、(dQ)、S、(dS)、T、(dT)、Y、(dY)、C、(dC)、G、A、(dA)、V、(dV)、L、(dL)、I、(dI)、F、(dF)、W、(dW)、P(dP)、M和(dM)；X²和X³各自独立地选自D、(dD)、E、(dE)、K、(dK)、R、(dR)、H、(dH)、N、(dN)、Q、(dQ)、S、(dS)、T、(dT)、Y、(dY)、C、(dC)、G、A、(dA)、V、(dV)、L、(dL)、I、(dI)、F、(dF)、W、(dW)、P(dP)、M和(dM)；X⁴和X⁵各自独立地选自G、A、(dA)、V、(dV)、L、(dL)、I、(dI)、F、(dF)、W、(dW)、P(dP)、M和(dM)；X⁶不存在或者如果存在的话是KL-X⁸或X⁹-LR，其中，X⁸不存在或者如果存在的话则选自G、A、(dA)、V、(dV)、L、(dL)、I、(dI)、F、(dF)、W、(dW)、P(dP)、M和(dM)，并且X⁹选自G、A、(dA)、V、(dV)、L、(dL)、I、(dI)、F、(dF)、W、(dW)、P(dP)、M和(dM)。

3.根据权利要求1所述的肽或其药学上可接受的盐，其中，X¹不存在或者如果存在的话是X⁷-RW，其中，X⁷不存在或者如果存在的话是M或E；X²是M、A或E；X³是G、N或Q；X⁴是F或A；X⁵是P或A；X⁶不存在或者如果存在的话是KL-X⁸或X⁹-LR，其中，X⁸不存在或者如果存在的话是R或A，并且X⁹选自K、A、(dA)、N和Q。

4.根据权利要求1所述的肽或其药学上可接受的盐，所述肽选自由以下组成的组：

MRWQEMNYIFYPR(SEQ ID NO：208)；

MRWQEAGYIFYPRKLR(SEQ ID NO：11)；

MRWQEMGYIFYPR(dA)LR(SEQ ID NO：149)；

MRWQEMGYIFYPRNLR(SEQ ID NO：213)；

MRWQEMQYIFYPRALR(SEQ ID NO：219)；

RWQEMNYIFYPR(SEQ ID NO：248)；

MRWQEMGYIFYPRALR(SEQ ID NO：19)；

MRWQEMGYIFYPRKLA(SEQ ID NO：21)；

MRWQEMGYIFYARKLR(SEQ ID NO：17)；

RWQEMGYIFYPRQLR(SEQ ID NO：217)；

MRWQEEGYIFYPRKLR(SEQ ID NO：172)；

MRWQEMGYIFYPRKL(SEQ ID NO：45)；

ERWQEAGYIAYPR(SEQ ID NO：241)；

RWQEMQYIFYPR(SEQ ID NO：211)；

MRWQEMGYIFYPAKLR(SEQ ID NO：18)。

5.一种包含式I的氨基酸序列的分离肽；或其药学上可接受的盐，

X¹-QE-X²-X³-YI-X⁴-Y-X⁵-R-X⁶ (I)

6.根据权利要求5所述的分离肽或其药学上可接受的盐，其中，X¹不存在或者如果存在的话是X⁷-RW，其中，X⁷不存在或者如果存在的话则选自D、(dD)、E、(dE)、K、(dK)、R、(dR)、H、(dH)、N、(dN)、Q、(dQ)、S、(dS)、T、(dT)、Y、(dY)、C以及(dC)、G、A、(dA)、V、(dV)、L、(dL)、I、(dI)、F、(dF)、W、(dW)、P(dP)、M和(dM)；X²和X³各自独立地选自D、(dD)、E、(dE)、K、(dK)、R、(dR)、H、(dH)、N、(dN)、Q、(dQ)、S、(dS)、T、(dT)、Y、(dY)、C以及(dC)、G、A、(dA)、V、(dV)、L、(dL)、I、(dI)、F、(dF)、W、(dW)、P(dP)、M和(dM)；X⁴和X⁵各自独立地选自G、A、(dA)、V、(dV)、L、(dL)、I、(dI)、F、(dF)、W、(dW)、P(dP)、M和(dM)；X⁶不存在或者如果存在的话是KL-X⁸或X⁹-LR，其中，X⁸不存在或者如果存在的话则选自G、A、(dA)、V、(dV)、L、(dL)、I、(dI)、F、(dF)、W、(dW)、P(dP)、M和(dM)，并且X⁹选自G、A、(dA)、V、(dV)、L、(dL)、I、(dI)、F、(dF)、W、(dW)、P(dP)、M和(dM)。

7.根据权利要求5所述的分离肽或其药学上可接受的盐，其中，X¹不存在或者如果存在的话是X⁷-RW，其中，X⁷不存在或者如果存在的话是M或E；X²是M、A或E；X³是G、N或Q；X⁴是F或A；X⁵是P或A；X⁶不存在或者如果存在的话是KL-X⁸或X⁹-LR，其中，X⁸不存在或者如果存在的话是R或A，并且X⁹选自K、A、(dA)、N和Q。

8.根据权利要求5所述的分离肽或其药学上可接受的盐，所述分离肽选自：

MRWQEMNYIFYPR(SEQ ID NO：208)；

MRWQEAGYIFYPRKLR(SEQ ID NO：11)；

MRWQEMGYIFYPR(dA)LR(SEQ ID NO：149)；

MRWQEMGYIFYPRNLR(SEQ ID NO：213)；

MRWQEMQYIFYPRALR(SEQ ID NO：219)；

RWQEMNYIFYPR(SEQ ID NO：248)；

MRWQEMGYIFYPRALR(SEQ ID NO：19)；

MRWQEMGYIFYPRKLA(SEQ ID NO：21)；

MRWQEMGYIFYARKLR(SEQ ID NO：17)；

RWQEMGYIFYPRQLR(SEQ ID NO：217)；

MRWQEEGYIFYPRKLR(SEQ ID NO：172)；

MRWQEMGYIFYPRKL(SEQ ID NO：45)；

ERWQEAGYIAYPR(SEQ ID NO：241)；

RWQEMQYIFYPR(SEQ ID NO：211)；

MRWQEMGYIFYPAKLR(SEQ ID NO：18)。

9.一种包含选自以下肽的修饰肽；或其药学上可接受的盐：

MRWQEMNYIFYPR(SEQ ID NO：208)；

MRWQEAGYIFYPRKLR(SEQ ID NO：11)；

MRWQEMGYIFYPR(dA)LR(SEQ ID NO：149)；

MRWQEMGYIFYPRNLR(SEQ ID NO：213)；

MRWQEMQYIFYPRALR(SEQ ID NO：219)；

RWQEMNYIFYPR(SEQ ID NO：248)；

MRWQEMGYIFYPRALR(SEQ ID NO：19)；

MRWQEMGYIFYPRKLA(SEQ ID NO：21)；

MRWQEMGYIFYARKLR(SEQ ID NO：17)；

RWQEMGYIFYPRQLR(SEQ ID NO：217)；

MRWQEEGYIFYPRKLR(SEQ ID NO：172)；

MRWQEMGYIFYPRKL(SEQ ID NO：45)；

ERWQEAGYIAYPR(SEQ ID NO：241)；

RWQEMQYIFYPR(SEQ ID NO：211)；

MRWQEMGYIFYPAKLR(SEQ ID NO：18)；

其中，所述肽包含用选自以下的至少一个氨基酸进行的取代：(i)具有D-构型的氨基酸，和(ii)非天然存在的氨基酸残基。

10.根据权利要求1-9中任一项所述的肽，其还包含持续时间增强部分，任选地用代谢可切割的接头将所述肽偶联至所述持续时间增强部分。

11.一种肽或肽类似物，其包含：(a)RWQE(SEQ ID NO：294)、(b)YIFY(SEQ ID NO：295)、或(c)RWQE(SEQ ID NO：294)和YIFY(SEQ ID NO：295)两者，其中，所述肽或肽类似物的长度为8至20个氨基酸，其中，所述肽或肽类似物(i)在37摄氏度下在鼠血浆中呈现至少10％的稳定性达60分钟，(ii)降低人原代脂肪细胞中的游离脂肪酸水平，(iii)或者(i)和(ii)两者。

12.根据权利要求11所述的肽或肽类似物，其包含(a)和(b)，其中，所述肽或肽类似物的部分(a)是部分(b)的N-末端，其具有0-10个插入氨基酸。

13.根据权利要求12所述的肽或肽类似物，其中，所述肽或肽类似物的部分(a)是部分(b)的N-末端，其具有1、2或3个插入氨基酸。

14.根据权利要求11-13中任一项所述的肽或肽类似物，其中，所述肽或肽类似物包含紧邻SEQ ID NO：294的Arg的N-末端或紧邻SEQ ID NO：294的Glu的C-末端的Met。

15.根据权利要求14所述的肽或肽类似物，其包含MRWQE(SEQ ID NO：350)、RWQEM(SEQID NO：351)或MRWQEM(SEQ ID NO：352)。

16.根据权利要求11-15中任一项所述的肽或肽类似物，其包含紧邻SEQ ID NO：295的第一个氨基酸的N-末端的Gly、紧邻SEQ ID NO：295的最后一个氨基酸的C-末端的Pro，或包含GYIFYP(SEQ ID NO：353)。

17.根据权利要求11-16中任一项所述的肽或肽类似物，其包含YIFYPR(SEQ ID NO：296)、YIFYPRK(SEQ ID NO：297)、YIFYPRKL(SEQ ID NO：298)或YIFYPRKLR(SEQ ID NO：299)。

18.根据权利要求11-17中任一项所述的肽或肽类似物，其包含：

(A)RWQE(SEQ ID NO：294)的氨基酸序列，和

(B)具有一个氨基酸取代的YIFY(SEQ ID NO：295)的氨基酸序列。

19.根据权利要求18所述的肽或肽类似物，其中，所述具有一个氨基酸取代的YIFY(SEQID NO：295)的氨基酸序列包含XIFY(SEQ ID NO：300)、YXFY(SEQ ID NO：301)、YIXY(SEQ IDNO：302)或YIFX(SEQ ID NO：303)，其中，X是任何氨基酸。

20.根据权利要求19所述的肽或肽类似物，其中，SEQ ID NO：300-303中任一个的X是小脂肪族氨基酸或酸性氨基酸。

21.根据权利要求19或20所述的肽或肽类似物，其中，SEQ ID NO：300-303中任一个的X选自由以下组成的组：Ala、Gly、(dA)和Glu。

22.根据权利要求11-21中任一项所述的肽或肽类似物，其包含：

(A)RWQE(SEQ ID NO：294)的氨基酸序列，和

(B)具有两个氨基酸修饰的YIFY(SEQ ID NO：295)的氨基酸序列。

23.根据权利要求22所述的肽或肽类似物，其包含：

(A)RWQE(SEQ ID NO：294)的氨基酸序列，和

(B)具有两个氨基酸取代的YIFY(SEQ ID NO：295)的氨基酸序列。

24.根据权利要求23所述的肽或肽类似物，其包含RWQE(SEQ ID NO：294)和YIAE(SEQID NO：308)或EIFE(SEQ ID NO：309)的氨基酸序列。

25.根据权利要求11-24中任一项所述的肽或肽类似物，其包含RWQE(SEQ ID NO：294)和YI或YIF的氨基酸序列。

26.根据前述权利要求中任一项所述的肽或肽类似物，其包含：

(A)YIFY(SEQ ID NO：295)的氨基酸序列，和

(B)具有一个氨基酸取代的RWQE(SEQ ID NO：294)的氨基酸序列。

27.根据权利要求26所述的肽或肽类似物，包含所述具有一个氨基酸取代的RWQE(SEQID NO：294)的氨基酸序列包含XWQE(SEQ ID NO：304)、RXQE(SEQ ID NO：305)、RWXE(SEQ IDNO：306)、或RWQX(SEQ ID NO：307)，其中，X是任何氨基酸。

28.根据权利要求26所述的肽或肽类似物，其中，X是脂肪族氨基酸或带电荷的氨基酸。

29.根据权利要求27所述的肽或肽类似物，其中，当所述肽或肽类似物包含XWQE(SEQID NO：304)时，X选自由以下组成的组：Ala、Gly、Asp、Lys、Aib、(dA)、Glu。

30.根据权利要求27所述的肽或肽类似物，其中，当所述肽或肽类似物包含RXQE(SEQID NO：305)时，X选自由以下组成的组：Ala、Gly、(dA)、Glu。

31.根据权利要求27所述的肽或肽类似物，其中，当所述肽或肽类似物包含RWXE(SEQID NO：306)时，X选自由以下组成的组：Gln、Ala、Glu、Gly、Asn、(dA)。

32.根据权利要求27所述的肽或肽类似物，其中，当所述肽或肽类似物包含RWQX(SEQID NO：307)时，X选自由以下组成的组：Glu、Ala、Gly、Asp、(dA)。

33.根据权利要求14-32中任一项所述的肽或肽类似物，其中，所述肽或肽类似物的部分(A)是部分(B)的N-末端，其具有0-10个插入氨基酸。

34.根据权利要求33所述的肽或肽类似物，其中，所述肽或肽类似物的部分(A)是部分(B)的N-末端，其具有1、2或3个插入氨基酸。

35.根据权利要求11-34中任一项所述的肽或肽类似物，其包含RWQEX¹X²YIFY(SEQ IDNO：319)的氨基酸序列，其中，X¹和X²各自独立地为任何氨基酸。

36.根据权利要求35所述的肽或肽类似物，其中，X¹选自由以下组成的组：Met、Ala、Nle、Gly、(dA)、Glu、Cys及其等同物。

37.根据权利要求36所述的肽或肽类似物，其中，X¹选自由以下组成的组：Met、Ala、Nle、Gly、(dA)、Glu和Cys。

38.根据权利要求35-37中任一项所述的肽或肽类似物，其中，X²选自由以下组成的组：Asn、Gln、Gly、(dA)、Glu及其等同物。

39.根据权利要求35所述的肽或肽类似物，其中，X²选自由以下组成的组：Asn、Gln、Gly、(dA)和Glu。

40.根据权利要求35-39中任一项所述的肽或肽类似物，其中，X¹X²是Met-Asn、Met-Gln、Ala-Gly、Met-Ala、Nle-Gly、Gly-Gly、Met-(dA)、(dA)-Gly、Glu-Gly、Met-Glu、Cys-Gly、Glu-Asn或Glu-Gln。

41.根据权利要求11-41中任一项所述的肽或肽类似物，其包含RWQEX¹X²X³IFY(SEQ IDNO：320)、RWQEX¹X²YX³FY(SEQ ID NO：321)、RWQEX¹X²YIX³Y(SEQ ID NO：322)或RWQEX¹X²YIFX³(SEQ ID NO：323)的氨基酸序列，其中，X¹、X²或X³各自独立地是任何氨基酸。

42.根据权利要求42所述的肽或肽类似物，其中，X¹选自由以下组成的组：Met、Ala、Nle、Gly、(dA)、Glu、Cys及其等同物。

43.根据权利要求42所述的肽或肽类似物，其中，X¹选自由以下组成的组：Met、Ala、Nle、Gly、(dA)、Glu和Cys。

44.根据权利要求41-43中任一项所述的肽或肽类似物，其中，X²选自由以下组成的组：Asn、Gln、Gly、(dA)、Glu及其等同物。

45.根据权利要求44所述的肽或肽类似物，其中，X²选自由以下组成的组：Asn、Gln、Gly、(dA)和Glu。

46.根据权利要求44所述的肽或肽类似物，其中，X¹X²是Met-Asn、Met-Gln、Ala-Gly、Met-Ala、Nle-Gly、Gly-Gly、Met-(dA)、(dA)-Gly、Glu-Gly、Met-Glu、Cys-Gly、Glu-Asn或Glu-Gln。

47.根据权利要求41-45中任一项所述的肽或肽类似物，其中，X³是小脂肪族氨基酸或酸性氨基酸。

48.根据权利要求46所述的肽或肽类似物，其中，X³选自由以下组成的组：Ala、Gly、(dA)和Glu。

49.根据权利要求35-47中任一项所述的肽或肽类似物，其中，所述肽或肽类似物的部分(A)是部分(B)的N-末端，其具有0-10个插入氨基酸。

50.根据权利要求48所述的肽或肽类似物，其中，所述肽或肽类似物的部分(A)是部分(B)的N-末端，其具有1、2或3个插入氨基酸。

51.根据权利要求11-49中任一项所述的肽或肽类似物，其中，所述肽或肽类似物不由序列SEQ ID NO：2、42、77、78、316-318和328-349组成。

52.一种包含SEQ ID NO：1、3-41、43-76和79-293、310-315、319-323和354-377中的任一个的肽或肽类似物。

53.一种肽或肽类似物，其包含SEQ ID NO：1、3-41、43-76和79-293、310-315、319-323和354-377中的任一个、基本上由其组成或由其组成，或包含与SEQ ID NO：1、3-41、43-76和79-293、310-315、319-323和354-377之一具有至少95％序列同一性的序列、基本上由其组成或由其组成。

54.根据权利要求52所述的肽或肽类似物，其长度为8至20个氨基酸。

55.根据权利要求52或53所述的肽或肽类似物，该肽或肽类似物(i)在37摄氏度下在鼠血浆中呈现至少10％的稳定性达60分钟，(ii)降低人原代脂肪细胞中的游离脂肪酸水平，(iii)或者(i)和(ii)两者。

56.根据权利要求52-54中任一项所述的肽或肽类似物，其包含SEQ ID NO：11、17-19、21、32、45、148、172、208、210、211、213、219和241中的任一个、基本上由其组成或由其组成。

57.一种包含式II的氨基酸序列的肽；和或其C-末端酸或酰胺、或N-乙酰基衍生物；或其药学上可接受的盐，

其中，X¹⁷不存在或者如果存在的话是具有非极性侧链或极性侧链的氨基酸；X¹⁸不存在或者如果存在的话是具有非极性侧链或极性侧链的氨基酸；X¹⁹不存在或者如果存在的话是具有非极性侧链或极性侧链的氨基酸；X²⁰是具有非极性侧链或极性侧链的氨基酸；X²¹是具有非极性侧链或极性侧链的氨基酸；X²²是具有非极性侧链或极性侧链的氨基酸；X²³是具有非极性侧链或极性侧链的氨基酸；X²⁴是具有非极性侧链或极性侧链的氨基酸；X²⁵不存在或者如果存在的话则选自具有非极性侧链或极性侧链的氨基酸、-LKR、-KLX²⁶、-X²⁷LR、-KX²⁸R、-RX²⁹R和-KRX³⁰；其中，X²⁶不存在或存在的话则选自具有非极性侧链或极性侧链的氨基酸；其中，X²⁷选自具有非极性侧链或极性侧链的氨基酸；其中，X²⁸选自具有非极性侧链或极性侧链的氨基酸；其中，X²⁹选自具有非极性侧链或极性侧链的氨基酸；并且其中，X³⁰不存在或者如果存在的话则选自具有非极性侧链的氨基酸；还有情况是如果X¹⁹不存在，则X¹⁷和X¹⁸不存在；还有情况是如果X¹⁸不存在，则X¹⁷不存在；条件是该肽不是由SEQ ID NO：2、42、77、78、316-318和328-349的氨基酸序列中的任一个组成的肽。

58.根据权利要求57所述的肽；或其末端酸或酰胺、或N-乙酰基衍生物；或其药学上可接受的盐，其中，X¹⁷不存在或者如果存在的话则选自D、(dD)、E、(dE)、K、(dK)、R、(dR)、H、(dH)、N、(dN)、Q、(dQ)、S、(dS)、T、(dT)、Y、(dY)、C、(dC)、G、A、(dA)、V、(dV)、L、(dL)、Nle、I、(dI)、F、(dF)、W、(dW)、P(dP)、M和(dM)；X¹⁸不存在或者如果存在的话则选自D、(dD)、E、(dE)、K、(dK)、R、(dR)、H、(dH)、N、(dN)、Q、(dQ)、S、(dS)、T、(dT)、Y、(dY)、C、(dC)、G、A、(dA)、Aib、V、(dV)、L、(dL)、I、(dI)、F、(dF)、W、(dW)、P(dP)、M和(dM)；X¹⁹不存在或者如果存在的话则选自D、(dD)、E、(dE)、K、(dK)、R、(dR)、H、(dH)、N、(dN)、Q、(dQ)、S、(dS)、T、(dT)、Y、(dY)、C、(dC)、G、A、(dA)、V、(dV)、L、(dL)、I、(dI)、F、(dF)、W、(dW)、P(dP)、M和(dM)；X²⁰选自D、(dD)、E、(dE)、K、(dK)、R、(dR)、H、(dH)、N、(dN)、Q、(dQ)、S、(dS)、T、(dT)、Y、(dY)、C、(dC)、G、A、(dA)、Aib、V、(dV)、L、(dL)、I、(dI)、F、(dF)、W、(dW)、P(dP)、M和(dM)；X²¹选自D、(dD)、E、(dE)、K、(dK)、R、(dR)、H、(dH)、N、(dN)、Q、(dQ)、S、(dS)、T、(dT)、Y、(dY)、C、(dC)、G、A、(dA)、Aib、V、(dV)、L、(dL)、I、(dI)、F、(dF)、W、(dW)、P(dP)、M和(dM)；X²²选自D、(dD)、E、(dE)、K、(dK)、R、(dR)、H、(dH)、N、(dN)、Q、(dQ)、S、(dS)、T、(dT)、Y、(dY)、C、(dC)、G、A、(dA)、Aib、V、(dV)、L、(dL)、I、(dI)、F、(dF)、W、(dW)、P(dP)、M和(dM)；X²³选自D、(dD)、E、(dE)、K、(dK)、R、(dR)、H、(dH)、N、(dN)、Q、(dQ)、S、(dS)、T、(dT)、Y、(dY)、C、(dC)、G、A、(dA)、Aib、V、(dV)、L、(dL)、I、(dI)、F、(dF)、W、(dW)、P(dP)、M和(dM)；X²⁴不存在或者如果存在的话则选自D、(dD)、E、(dE)、K、(dK)、R、(dR)、H、(dH)、N、(dN)、Q、(dQ)、S、(dS)、T、(dT)、Y、(dY)、C、(dC)、G、A、(dA)、V、(dV)、L、(dL)、I、(dI)、F、(dF)、W、(dW)、P(dP)、M和(dM)；X²⁵不存在或者如果存在的话则选自D、(dD)、E、(dE)、K、(dK)、R、(dR)、H、(dH)、N、(dN)、Q、(dQ)、S、(dS)、T、(dT)、Y、(dY)、C、(dC)、G、A、(dA)、V、(dV)、L、(dL)、I、(dI)、F、(dF)、W、(dW)、P(dP)、M、(dM)、-LRK、-KLX²⁶、-X²⁷LR、-KX²⁸R、-XX²⁹R和-KRX³⁰；其中，X²⁶不存在或者如果存在的话则选自-RE、D、(dD)、E、(dE)、K、(dK)、R、(dR)、H、(dH)、N、(dN)、Q、(dQ)、S、(dS)、T、(dT)、Y、(dY)、C、(dC)、G、A、(dA)、V、(dV)、L、(dL)、I、(dI)、F、(dF)、W、(dW)、P(dP)、M和(dM)；其中，X²⁷选自D、(dD)、E、(dE)、K、(dK)、R、(dR)、H、(dH)、N、(dN)、Q、(dQ)、S、(dS)、T、(dT)、Y、(dY)、C、(dC)、G、A、(dA)、V、(dV)、L、(dL)、I、(dI)、F、(dF)、W、(dW)、P(dP)、M和(dM)；其中，X²⁸选自D、(dD)、E、(dE)、K、(dK)、R、(dR)、H、(dH)、N、(dN)、Q、(dQ)、S、(dS)、T、(dT)、Y、(dY)、C、(dC)、G、A、(dA)、V、(dV)、L、(dL)、I、(dI)、F、(dF)、W、(dW)、P(dP)、M和(dM)；其中，X²⁹选自D、(dD)、E、(dE)、K、(dK)、R、(dR)、H、(dH)、N、(dN)、Q、(dQ)、S、(dS)、T、(dT)、Y、(dY)、C、(dC)、G、A、(dA)、V、(dV)、L、(dL)、I、(dI)、F、(dF)、W、(dW)、P(dP)、M和(dM)；并且其中，X³⁰不存在或者如果存在的话则选自G、A、(dA)、V、(dV)、L、(dL)、I、(dI)、F、(dF)、W、(dW)、P(dP)、M和(dM)。

59.根据权利要求57所述的肽；其末端酸或酰胺、或N-乙酰基衍生物；或其药学上可接受的盐，其中，X¹⁷不存在或者如果存在的话是M、L、G、K、E、A、(dA)或Nle；X¹⁸不存在或者如果存在的话是R、A、G、D、K、Aib、(dA)或E；X¹⁹不存在或如果存在的话是W、A、(dA)、G或E；X²⁰是Nle、G、K、Ccyc、(dA)、M或A；X²¹是G、N、Q、(dA)或A；X²²是F、G、E、(dA)或A；X²³是P、G、E、F、Ccyc、Kcyc、(dA)或A；X²⁴不存在或者如果存在的话是R、G、D、L、K、E、(dA)或A；X²⁵不存在或如果存在的话则选自-K、-R、N、Q、(dA)、-KL、-KR、-R(Da)、-KLR、-K(Ac)LR、-K(cyc)LR、-ALR、-(dA)LR、-GLR、-ELR、-NLR、-QLR、-KAR、-K(dA)R、-KGR、-KER、-KLA、-KL(dA)、-KLD、-KLE、-KLG、-KLK、-RKR、-RLR、-LKR、-KRL和-KLRE。

60.一种包含式III的氨基酸序列的肽；和或其C-末端酸或酰胺、或N-乙酰基衍生物；或其药学上可接受的盐，

其中，X³¹不存在或者如果存在的话是M、L、G、K、E、A、(dA)或Nle；X³²不存在或者如果存在的话是R、A、G、D、K、Aib、(dA)或E；X³³不存在或如果存在的话是W、A、(dA)、G或E；X³⁴是Q、G、A、(dA)、Ecyc、N或E；X³⁵是E、Ecyc、D、G、(dA)或A；X³⁶是Nle、G、K、Ccyc、(dA)、M或A；X³⁷是G、N、Q、(dA)或A；X³⁸是Y、G、E、(dA)或A；X³⁹是I、G、E、(dA)或A；X⁴⁰是F、G、E、(dA)或A；X⁴¹是Y、G、E、(dA)或A；X⁴²不存在或者如果存在的话是P、G、E、F、Ccyc、Kcyc、(dA)或A；X⁴³不存在或者如果存在的话是R、G、D、L、K、E、(dA)或A；X⁴⁴不存在或者如果存在的话是K、K-Ac、G、R、L、Q、N、Kcyc、E、(dA)或A；X⁴⁵不存在或者如果存在的话是L、G、R、K、Deg、E、(dA)或A；X⁴⁶不存在或者如果存在的话是R、D、E、L、K、G、(dA)或A；并且X⁴⁷不存在或者如果存在的话是E；还有情况是如果X³³不存在，则X³¹和X³²不存在；还有情况是如果X³²不存在，则X³¹不存在；还有情况是如果X⁴²不存在，则X⁴⁷、X⁴⁶、X⁴⁵、X⁴⁴和X⁴³不存在；还有情况是如果X⁴³不存在，则X⁴⁷、X⁴⁶、X⁴⁵和X⁴⁴不存在；还有情况是如果X⁴⁴不存在，则X⁴⁷、X⁴⁶和X⁴⁵不存在；还有情况是如果X⁴⁵不存在，则X⁴⁷和X⁴⁶不存在；还有情况是如果X⁴⁶不存在，则X⁴⁷不存在；条件是该肽不是由SEQ ID NO：2、42、77、78、316-318和328-349的氨基酸序列中的任一个组成的肽。

61.根据上述权利要求中任一项所述的肽，其中，所述肽是衍生化的。

62.根据权利要求61所述的肽，其中，通过乙酰化、聚乙二醇化、生物素化或酰化制备衍生物。

63.根据权利要求62所述的肽，其中，所述衍生物是PEG600、乙酰基、生物素或棕榈基。

64.一种本文所述的肽或肽类似物。

65.一种缀合物，其包含根据前述权利要求中任一项所述的肽或肽类似物和异源部分。

66.一种核酸，其包含编码根据前述权利要求中任一项所述的肽或肽类似物或缀合物的核苷酸序列。

67.一种表达载体，其包含根据权利要求66所述的核酸。

68.一种宿主细胞，其包含根据权利要求66所述的核酸或根据权利要求67所述的表达载体。

69.一种组合物，其包含根据前述权利要求中任一项所述的肽或肽类似物、缀合物、核酸、表达载体或宿主细胞以及运载体、赋形剂或稀释剂。

70.一种试剂盒，其在容器或包装中包含根据前述权利要求中任一项所述的肽或肽类似物、缀合物、核酸、表达载体或宿主细胞。

71.一种产生包含以下氨基酸序列的肽或肽类似物的方法：

a.RWQE(SEQ ID NO：294)，

b.YIFY(SEQ ID NO：295)，或

c.RWQE(SEQ ID NO：294)和YIFY(SEQ ID NO：295)两者，

其中，所述肽或肽类似物的长度为8-20个氨基酸；

其中，所述肽或肽类似物(i)在37摄氏度下在鼠血浆中呈现至少10％的稳定性达60分钟，(ii)降低人原代脂肪细胞中的游离脂肪酸水平，(iii)或者(i)和(ii)两者，

所述方法包括：(i)使第一氨基酸与第二氨基酸反应以在所述第一氨基酸和所述第二氨基酸之间形成共价连接，其中，所述第一氨基酸或所述第二氨基酸任选地连接至另一个氨基酸，以及(ii)重复(i)的反应步骤，由此产生所述肽或肽类似物。

72.根据权利要求所述71的方法，其包括实施例1中所述的一个或多个步骤。

73.一种治疗有此需要的受试者的代谢疾病的方法，其包括以治疗所述代谢疾病的有效量向所述受试者施用根据前述权利要求中任一项所述的肽或肽类似物、缀合物、核酸、表达载体或宿主细胞。

74.前述权利要求中任一项所述的肽或肽类似物、缀合物、核酸、表达载体或宿主细胞用于治疗代谢疾病的用途。

75.根据权利要求73或74所述的方法或用途，其中，所述代谢疾病选自由肥胖、糖尿病(例如2型糖尿病)、认知障碍和/或神经退行性障碍、心血管疾病、脂肪肝病和胃肠病组成的组。

76.一种治疗有此需要的受试者的癌症的方法，其包括以治疗所述癌症的有效量向所述受试者施用根据前述权利要求中任一项所述的肽或肽类似物、缀合物、核酸、表达载体或宿主细胞。

77.根据权利要求75所述的方法，其中，所述癌症是肺癌、胰腺癌、乳腺癌、前列腺癌、卵巢癌或肝细胞癌。

78.一种治疗有此需要的受试者的肝病的方法，其包括以治疗所述肝病的有效量向所述受试者施用根据前述权利要求中任一项所述的肽或肽类似物、缀合物、核酸、表达载体或宿主细胞。

79.根据权利要求77所述的方法，其中，所述肝病是脂肪肝病。

80.根据权利要求78所述的方法，其中，所述脂肪肝病是NAFLD或NASH。

81.一种调节有此需要的受试者的脂肪酸代谢的方法，其包括以调节所述脂肪酸代谢的有效量向所述受试者施用根据前述权利要求中任一项所述的肽或肽类似物、缀合物、核酸、表达载体或宿主细胞。

82.根据权利要求80所述的方法，其中，在将所述肽或肽类似物、缀合物、核酸、表达载体或宿主细胞施用于所述受试者后，所述受试者的脂肪酸代谢增加。

83.一种降低有此需要的受试者的体重的方法，其包括以降低所述受试者的体重的有效量向所述受试者施用根据前述权利要求中任一项所述的肽或肽类似物、缀合物、核酸、表达载体或宿主细胞。

84.根据前述权利要求中任一项所述的肽、肽类似物、缀合物、核酸、表达载体或宿主细胞中的任一种在治疗性治疗本文所述的代谢疾病、癌症、肝病或任何疾病、障碍或医学病症中的用途。

85.根据前述权利要求中任一项所述的肽、肽类似物、缀合物、核酸、表达载体或宿主细胞中的任一种在制造用于治疗本文所述的代谢疾病、癌症、肝病或任何疾病、障碍或医学病症的药物中的用途。