KR20210120467A - 버섯 복합배양 균사체, 싱아, 바위솔 및 비름의 혼합 추출물을 함유하는 통풍의 예방 또는 치료용 조성물 - Google Patents
버섯 복합배양 균사체, 싱아, 바위솔 및 비름의 혼합 추출물을 함유하는 통풍의 예방 또는 치료용 조성물 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 버섯 균사체 및 각종 생약의 혼합추출물을 함유하는 통풍의 예방 또는 치료용 조성물의 제조방법에 관한 것이다. 상기 혼합추출물은 통풍 유발 물질인 잔틴 옥시다아제(Xanthine Oxidase) 및 요산염 발생으로 발현되는 MMP-9(Matrix metallopeptidase-9)의 억제 기능을 통해 통풍의 개선 효과가 우수한 약학 조성물 또는 건강기능식품의 제공이 가능하다.
Description
본 발명은 버섯 복합배양 균사체, 싱아, 바위솔 및 비름의 혼합 추출물을 함유하는 통풍의 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것이다.
상황버섯(Phellinus linteus)은 목질진흙버섯이라고도 하며, 동의보감에서는 상목이(桑木耳)라는 이름으로 탕액편에 기록되어 있다. 뽕나무 줄기에 자생하며 삿갓 표면을 제외하고는 모두 황색이다. 초기에는 진흙 덩어리가 뭉쳐진 것처럼 보이다가 다 자란 후에는 나무 그루터기에 혓바닥을 내민 모습이어서 수설(樹舌)이라고도 한다. 예로부터 상황버섯은 자궁출혈, 월경불순 등에 이용되어 왔으며 최근에는 종양 억제, 면역력 강화 및 미백에 우수한 효과가 있다고 보고된 바 있다.
영지버섯(Ganoderma lucidum)은 여름에 활엽수 뿌리에서 발생한다. 진시황의 불로초라고도 알려져 있고 본초강목에서는 인삼과 함께 이 버섯을 상약의 반열에 올려놓았다. 영지버섯은 강장, 진해, 소종(消腫) 등의 효능이 있어 호흡기 질환, 신경쇠약, 심장병, 고혈압 등에 효과가 있고 콜레스테롤을 낮춰주며 항암 효과가 있다고도 알려져 있다.
차가버섯(Inonotus obliquus)은 러시아, 캐나다, 일본 홋카이도와 같은 한랭지역에서 자생하는 자작나무, 오리나무 등에 기생하는 균핵이다. 미국에서도 차가버섯이 특수 천연 물질로 분류되어 미래 제약 및 건강식품으로 개발 중이다. 우리나라에서도 민간에서 위암 환자와 당뇨병 환자에게 차가버섯을 사용한 결과, 그 효과가 기타 버섯류에 비해 뛰어났던 것으로 보고된 바 있다. 그 외에 차가버섯이 신체 저항력 증가, 종양 발생 억제, 미백 등에도 효과가 있다고 보고되어 있다.
잔나비불로초 버섯(Ganoderma applanatum)은 잔나비걸상 버섯이라고도 하며 여름~가을까지 죽은 활엽수나 살아있는 나무의 죽은 부위에 발생하며, 간혹 침엽수에도 발생한다. 항종양, 면역조절, 항균, 항바이러스 작용이 있으며, 당뇨병 관련질환 치료 및 예방에 이로운 성분을 포함하고 있으며, 신경쇠약, 심장병, 폐결핵, 간염 등에 효능이 있다고 한다.
말굽버섯(Fomes fomentarius)은 일 년 내내 자작나무, 너도밤나무, 단풍나무류와 같은 활엽수의 죽은 나무 또는 살아 있는 나무에 무리를 지어 자라며 여러해살이 버섯이다. 일반적으로 껍질이 단단하여 식용이나 약용으로 사용할 때는 잘게 썰어 달여 차와 같은 형태로 사용하고, 간경변, 발열, 눈병, 복통, 감기, 변비, 폐결핵, 소아식체, 식도암, 위암, 자궁암 등에 약용한다. 해열과 이뇨 작용이 있으며, 히포크라테스도 상처의 뜸을 뜨는 데 이 버섯을 사용하였다는 기록이 있다.
한편, 상기 버섯류를 의약품, 기능성 식품의 혼합 원료로서 사용하기 위해서는 자실체인 버섯을 채취하여 사용해야 하지만 버섯 자체가 자연 상태에서 번식이 잘 되지 않는다는 점과, 채취 남용으로 인해 자원 고갈 및 생태계 파괴가 야기된다는 문제점이 있다. 산업적으로 사용할 수 있을 정도로 원료를 공급하기 위해서도 대량의 생산 시설 및 경비가 소요된다는 난점 때문에 대량 생산의 수요를 충족시키지 못하고 있다. 이와 같이, 상기 버섯류는 항암제나 면역 증강제로서 효과가 있음에도 그 공급이 제한적이며 대량 생산 및 속성 생산이 용이하지 않아 널리 활용되지 못하고 있다. 따라서, 상기 버섯들에 대하여, 버섯균의 자실체와 동등한 효과를 나타내는 균사체를 생산할 수 있는 대량 배양방법에 대한 연구가 최근 활발하게 이루어지고 있다.
대한민국 등록특허 제10-922311호에는 차가버섯, 상황버섯, 영지버섯, 꽃송이버섯 및 동충하초 균사체를 복합배양하는 방법이 개시되어 있고, 대한민국 등록특허 제10-1358648호에는 차가버섯, 상황버섯 및 영지버섯의 복합배양방법이, 대한민국 등록특허 제10-1652035호에는 차가버섯, 상황버섯 및 꽃송이버섯의 복합버섯 균사체의 배양방법이 개시되어 있다. 그러나 복합배양 균사체는 그 배양조건에 따라 균사체가 갖는 자체의 효소활성이나 베타글루칸 함량 등에 차이가 있으며 이를 이용하여 식품을 가공할 경우에도 각각 다른 맛과 풍미 등을 낼 수 있다.
한편, 최근 육류 섭취와 과다한 음주 등 식생활의 변화로 통풍이 급증하고 있다. 통풍(gout)은 고요산혈증에 의해 생성된 요산염결정(monosodium urate crystal, MSU)으로 인해 발생하는 관절염으로, 신장 배설능 감소를 제외한 나머지 10~15%의 고요산 혈증은 요산의 과다 생성이 원인인데 이들은 대부분 퓨린 대사 과정의 유전적 결함, ATP 대사 과정의 문제, 세포 전환 속도가 증가하게 되는 질환 등이 원인이다. 그라너 현재 통풍 치료제로 사용되는 페북소스타트나 알로푸리놀 성분 약물 등은 현기증, 두통, 가슴통증 등을 수반한 심혈관질환이 발생하는 등의 부작용이 많아 통풍의 치료가 적절히 수행되기가 쉽지 않는 실정이다.
이에 본 발명자들은 복합배양 방법을 통해 얻은 5종 버섯의 균사체 및 이를 이용한 조성물이 통풍의 개선 효능이 있음을 확인하여 본 발명을 완성하게 되었다.
본 발명의 목적은 버섯 복합배양 균사체, 싱아, 바위솔 및 비름의 혼합추출물을 함유하는 통풍의 예방 또는 치료용 조성물을 제공하는 데에 있다.
본 발명은 버섯 복합배양 균사체, 싱아(Aconogonon alpinum), 바위솔(Orostachys japonicus) 및 비름(Amaranthus mangostanus)의 혼합추출물을 함유하는 통풍의 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것이다.
상기 버섯 복합배양 균사체는, (제1단계) 차가버섯, 영지버섯, 상황버섯, 잔나비불로초, 말굽버섯의 자실체 조직을 각각 PDA(Potato Dextrose Agar)에 접종하여 각 버섯을 균사체 상태가 되도록 별도로 배양하는 단계;
(제2단계) 제1단계에서 배양된 각각의 차가버섯, 영지버섯, 상황버섯, 잔나비불로초, 말굽버섯 5종의 균사체를 PDB(Potato Dextrose Broth)에 혼합 접종하는 단계;
(제3단계) PDB(Potato Dextrose Broth) 배지에 접종된 5종의 균사체를 4~6주간 액체배양하여 복합 배양 균사체를 얻는 단계;
(제4단계) 옻나무 톱밥 및 비자 가종피의 혼합 추출물 배지에 제3단계의 배양을 통해 얻은 복합 배양 균사체를 접종하는 단계; 및,
(제5단계) 상기 4단계에서 옻나무 톱밥 및 비자 가종피의 혼합 추출물 배지에서 접종된 균사체를 1~2주간 추가 액체배양하여 복합배양 균사체를 얻는 단계;
를 통해 얻은 것일 수 있다.
상기 제3단계의 균사체 액체 배양은 상대습도 10~30%, 25~30℃에서 수행하는 것이 바람직하다. 또한 초기 1~2주 동안은 정치배양하되, 하루 주기로 1~2회 동안 1~5분간 교반하는 것이 바람직하며, 이후에는 50~150rpm으로 교반하며 진탕배양하는 것이 균사체의 배양에 좋다.
상기 제4단계의 옻나무 톱밥 및 비자 가종피 분말의 혼합 추출물 배지는 옻나무 톱밥과 비자 가종피 분말을 혼합한 후 물을 첨가하고 추출하여 얻은 액상으로서, 바람직하게는, 옻나무 톱밥 및 비자 가종피 분말의 혼합 추출물 배지는 옻나무 톱밥과 비자 가종피 분말을 1:0.5 내지 1:2 중량으로 혼합한 후 5~20배 중량의 물을 첨가하여 80~90℃에서 4~6일간 동안 추출하여 얻은 액상일 수 있으며, 최종적으로 멸균 후 사용할 수 있다.
상기 제5단계의 균사체 액체 배양은 상대습도 40~60%, 25~30℃에서 수행하는 것이 바람직하며, 정치배양하되 하루 주기로 1~2회 동안 1~5분간 교반하는 것이 좋다.
본 발명에서 버섯 균사체의 배양에 이용되는 PDA(Potato Dextrose Agar)는 총 부피 1ℓ 기준, 감자전분 3~5g, 덱스트로오스 10~30g, 아가로오즈 10~30g이 포함된 것을 멸균하여 제조한 것일 수 있다. 이 때 물은 잔량으로 총 부피 1ℓ가 되도록 첨가될 수 있다.
상기 멸균은 적어도 1.3~1.7기압에서 120~125℃에서 15~20분 동안 수행하는 것이 바람직하며, 이는 모든 배지의 멸균 조건에 동일하게 적용할 수 있다.
PDA(Potato Dextrose Agar)의 가장 바람직한 제조조건은 감자 전분 4g, 덱스트로오스 20g 및 아가로오즈 15g을 총 부피 1ℓ가 되도록 물을 첨가하여 멸균한 것일 수 있다.
또한 본 발명에서 버섯 균사체의 배양에 이용되는 PDB(Potato Dextrose Broth)는 PDA(Potato Dextrose Agar)의 제조 조건에서 아가로오즈 대신 물을 더 추가하여 제조한 것일 수 있다. PDB(Potato Dextrose Broth)의 가장 바람직한 제조조건은 감자 전분 4g 및 덱스트로오스 20g을 총 부피 1ℓ가 되도록 물을 첨가하여 멸균한 것일 수 있다.
상기 제1단계에서 각각의 버섯 자실체를 별도로 배양할 때, 각각의 버섯 자실체 조각을 각각 PDA(Potato Dextrose Agar)에 접종 후 1~3주 동안 25~30℃에서 배양하는 것이 바람직한데, 이 때의 배양기간은 버섯 자실체 개체가 갖는 성장능에 따라 1~3 주 이내에서 적절히 조절할 수 있다. 또한, 이 조건에서의 배양시의 상대습도는 10~60%인 것이 더 좋다. 습도가 10% 미만이거나 60%를 초과하게 되어도 균사체의 성장은 더딜 수 있다.
다만 배양기간이 1주 미만이 되면 균사체가 이후의 액체배양을 활성화할 수 있을 정도로 잘 자라지 않을 수 있고, 3주를 초과하여도 이후의 액체배양시 균사체 배양이 잘 되지 않을 수 있다. 또한 배양 온도가 25℃ 미만이나 30℃를 초과하여도 역시 액체배양시의 균사체 배양에 영향을 주어 바람직하지 않다.
상기 제2단계에서 3종의 균사체를 PDB(Potato Dextrose Broth)에 복합 접종할 때, 제1단계에서 배양된 각 버섯의 균사체를 일정량 비슷한 정도로 접종하기만 하면 되지만, 보다 더 바람직하게는 각각의 배양된 균사체를 평방 0.5~2mm로 절단하고 각 버섯 균사체별로 3~7 절편씩 PDB(Potato Dextrose Broth)에 3종의 균사체를 복합 접종할 수 있다.
상기 제3단계의 균사체 배양은 25~30℃에서 수행하는 것이 바람직한데, 특히, 배양온도가 25℃ 미만이 되면 균사체가 잘 자라지 않을 수 있으며, 30℃를 초과해도 역시 균사체의 배양이 더딜 수 있다. 또한 초기 1~2주 동안은 정치배양하되, 하루 주기로 1~2회 동안 1~5분간 교반하는 것이 바람직하며, 이후에는 50~150rpm으로 교반하며 진탕배양하는 것이 균사체의 배양에 좋다. 한편, 이 조건에서의 배양시의 상대습도는 크게 제한되지는 않으나 바람직하게는 상대습도 10~30%인 것이 더 좋다.
상기 제4단계의 옻나무 톱밥 및 비자 가종피의 혼합 추출물 배지에는 제3단계의 배양을 통해 얻은 균사체를 배양액 상태로 1~10㎖씩 접종할 수 있다. 이 때 균사체 배양액이 1㎖ 미만으로 접종되면 균사체 양이 적어 추가배양이 잘 되지 않을 수 있고, 배양액이 10㎖를 초과하여 접종하여도 배양이 더 활성화되지는 않아 바람직하지 않다.
상기 제5단계의 배양은 25~30℃에서 수행하는 것이 바람직하다. 배양온도가 25℃ 미만이 되면 균사체가 잘 자라지 않을 수 있으며, 30℃를 초과해도 역시 균사체의 배양이 더딜 수 있다. 또한, 이 조건에서의 배양시의 상대습도는 40~60%인 것이 더 좋다. 습도가 40% 미만이거나 60%를 초과하게 되어도 균사체의 성장은 더딜 수 있다.
상기 5종의 복합배양 균사체, 싱아, 바위솔 및 비름의 혼합 추출물은 균사체 100 중량부 기준으로 싱아 50~80 중량부, 바위솔 20~40 중량부 및 비름 40~70 중량부가 혼합한 후 용매를 첨가하여 추출한 것일 수 있다. 상기 용매의 첨가 중량은 크게 제한되지 않으나, 바람직하게는 균사체 100 중량부 기준으로 500~4000 중량부를 첨가하는 것이 바람직하다. 상기 용매로는 물, C1~C4 알코올 또는 이들의 혼합용액을 사용할 수 있으며, 상기 C1~C4 알코올은 메탄올, 에탄올, 프로판올, 이소프로판올, 부탄올 및 이소부탄올로 이루어진 군에서 선택될 수 있다. 상기 용매로서 바람직하게는 에탄올 50~90%(v/v)을 사용하는 것이 가장 좋다.
본 발명은 5종의 복합배양 균사체, 싱아, 바위솔 및 비름의 혼합 추출물과 약제학적 부형제를 포함하는 통풍의 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공할 수 있다.
상기 약학 조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다. 상기 약학 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 본 발명의 복합배양 균사체에 적어도 하나 이상의 부형제, 예를 들면, 전분, 탄산칼슘, 수크로스 또는 락토오스, 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.
본 발명의 약학 조성물의 투여량은 치료받을 대상의 연령, 성별, 체중과, 치료할 특정 질환 또는 병리 상태, 질환 또는 병리 상태의 심각도, 투여경로 및 처방자의 판단에 따라 달라질 것이다. 이러한 인자에 기초한 투여량 결정은 당업자의 수준 내에 있으며, 일반적으로 투여량은 0.01㎎/㎏/일 내지 대략 2000㎎/㎏/일의 범위이다. 더 바람직한 투여량은 1㎎/㎏/일 내지 500㎎/㎏/일이다. 투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수도 있다. 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.
본 발명의 약학 조성물은 쥐, 가축, 인간 등의 포유동물에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁내 경막 또는 뇌혈관내 주사에 의해 투여될 수 있다. 본 발명의 복합 배양 균사체는 독성 및 부작용이 거의 없으므로 예방 목적으로 장기간 복용시에도 안심하고 사용할 수 있는 약제이다.
또한, 본 발명은 5종의 복합배양 균사체, 싱아, 바위솔 및 비름의 혼합 추출물과 식품학적으로 허용 가능한 식품보조 첨가제를 포함하는 통풍의 예방 또는 개선용 건강기능식품을 제공한다. 상기 추출물은 본 발명의 건강기능식품에 0.001~100 중량%로 하여 첨가될 수 있다. 본 발명의 건강기능식품은 정제, 캡슐제, 환제 또는 액제 등의 형태를 포함하며, 본 발명의 추출물을 첨가할 수 있는 식품으로는, 예를 들어, 각종 드링크제, 육류, 소세지, 빵, 캔디류, 스넥류, 면류, 아이스크림, 유제품, 스프, 이온음료, 음료수, 알코올 음료, 껌, 차 및 비타민 복합제 등이 있다.
본 발명은 버섯 균사체 및 각종 생약의 혼합추출물을 함유하는 통풍의 예방 또는 치료용 조성물의 제조방법에 관한 것이다. 상기 혼합추출물은 통풍 유발 물질인 잔틴 옥시다아제(Xanthine Oxidase) 및 요산염 발생으로 발현되는 MMP-9(Matrix metallopeptidase-9)의 억제 기능을 통해 통풍의 개선 효과가 우수한 약학 조성물 또는 건강기능식품의 제공이 가능하다.
이하 본 발명의 바람직한 실시예를 상세히 설명하기로 한다. 그러나, 본 발명은 여기서 설명되는 실시예에 한정되지 않고 다른 형태로 구체화될 수도 있다. 오히려, 여기서 소개되는 내용이 철저하고 완전해지도록, 당업자에게 본 발명의 사상을 충분히 전달하기 위해 제공하는 것이다.
<제조예 1. 버섯 균사체의 복합 배양>
차가버섯, 영지버섯, 상황버섯, 잔나비불로초, 말굽버섯의 자실체 조직을 분리하여 PDA에 접종 후, 2주 동안 27~29℃에서 각 버섯의 균사체를 배양하였다. 100㎖ 단위로 소분된 PDB 배지를 준비한 후, PDA에서 배양된 각각의 버섯 균사체를 메스를 이용하여 평방 1mm로 절단하고, PDB 배지가 담긴 삼각플라스크 1병당 절단한 5종의 균사체를 5절편씩 혼합 접종하였다.
긱 균사체가 혼합 접종된 배지를 BOD incubator(Bio-Oxygen Demand 배양기, 저온배양기)에서 27~28℃, 습도 20% 조건에서 1주일간 정치 배양하되, 배양하는 동안 매일 1분 정도 교반하였다. 1주일 후에는 복합 접종되어 배양 중인 플라스크를 진탕배양기로 옮겨 27℃, 100rpm에서 4주 동안 배양하여 5종의 복합배양 균사체 배양액을 제조하였다.
옻나무 톱밥 및 비자 가종피를 동일 중량으로 혼합한 수 10배 중량의 물을 첨가하여 80℃에서 5일간 동안 추출하여 액상만을 수거하여 옻나무 톱밥 및 비자 가종피 분말의 혼합 추출물을 제조하였다. 이 후 상기 혼합추출물에 PDB 배지에서 4주간 배양된 복합배양 균사체를 동일한 BOD incubator에서 27~28℃, 습도 20% 조건에서 2주일간 정치 배양하되, 배양하는 동안 매일 1분 정도 교반하였다.
배양이 완료된 복합배양균사체는 남아있는 배양액을 회수한 후 건조기를 이용하여 60℃에서 24시간 동안 건조하였다.
<실시예 1. 버섯 복합배양 균사체, 싱아, 바위솔 및 비름의 혼합추출물 제조>
제조예 1의 5종 복합배양 균사체와 싱아 전초, 바위솔 전초, 비름 전초를 건조 중량 기준으로 표 1과 같이 혼합하여 이를 70%(v/v) 에탄올 수용액 2500g에 넣고 혼합하여 40℃에서 24시간 동안 추출한 후 액상을 얻었고, 상기 액상을 감압농축하여 얻은 농축물을 통풍 치료제 시료로 준비하였다.
| 시료 제조 조건 |
제조예 1의 5종 복합배양균사체 (g) |
싱아 (g) | 바위솔 (g) | 비름 (g) | 총합 (g) |
| 실시예 1-1 | 100 | 70 | 30 | 50 | 250 |
| 실시예 1-2 | 100 | 50 | 40 | 60 | 250 |
| 실시예 1-3 | 100 | 80 | 30 | 40 | 250 |
| 실시예 1-4 | 100 | 60 | 20 | 70 | 250 |
<비교예 1. 버섯 복합배양 균사체를 이용한 비교 추출물 제조>
비교예 1-1 내지 1-6
실시예 1에서와 같이 70%(v/v) 에탄올 수용액을 이용하여 추출물을 제조하되, 추출물 제조용 원료 시료는 표 2의 조건으로 혼합하였다.
| 시료 제조 조건 |
제조예 1의 5종 복합배양균사체 (g) |
싱아 (g) | 바위솔 (g) | 비름 (g) | 총합 (g) |
| 비교예 1-1 | 250 | 0 | 0 | 0 | 250 |
| 비교예 1-2 | 100 | 110 | 10 | 30 | 250 |
| 비교예 1-3 | 100 | 0 | 150 | 0 | 250 |
| 비교예 1-4 | 100 | 20 | 50 | 80 | 250 |
| 비교예 1-5 | 100 | 40 | 0 | 110 | 250 |
| 비교예 1-6 | 0 | 100 | 100 | 50 | 250 |
비교예 1-7
대한민국 등록특허 제10-1923408호의 실시예 1에 개시된 복합 균사체 250g을 시료로 사용하여 실시예 1에서처럼 70%(v/v) 에탄올 수용액으로 추출물을 제조하였다.
비교예 1-8
실시예 1-1 조건 중에서 5종 복합배양균사체 대신 대한민국 등록특허 제10-1923408호의 실시예 1에 개시된 균사체를 이용하여 추출물을 제조하였다.
<실험예 1. 잔틴 옥시다아제의 활성 확인>
잔틴 옥시다아제(Xanthine Oxidase)는 히포잔틴을 산화시켜 잔틴을 만들고 이것을 다시 산화시켜 요산으로 생성하는 효소로, 통풍을 일으키는 요산 생성을 방지하기 위해서는 잔틴 옥시다아제의 활성을 억제해야 한다.
이에 실시예 1 또는 비교예 1의 추출물을 잔틴 옥시다아제에 처리하여 요산의 생성량을 확인하였다. 이를 위해 0.1 M potassium phosphate buffer (pH 7.5)에 xanthine 2 mM을 녹인 기질액 1 ㎖에 Xanthine Oxidase (0.25 unit/㎖) 0.1 ㎖과 실시예 1 및 비교예 1의 추출물의 최종 농도가 0.5㎍/㎖이 되도록 0.1 ㎖을 첨가하였다. 이 때 음성대조군에는 증류수 0.1 ㎖을 첨가하였고, 양성대조군에는 대표적인 통풍 치료제인 Allopurinol(0.5㎍/㎖)을 사용하였다. 다음으로 37℃에서 5분간 반응시키고 20%(v/v) trichloroacetic acid 1 ㎖을 가하여 반응을 종료하였다. 이 후 3,500 rpm에서 15분간 원심분리하고, 292 nm에서 흡광도를 측정하여 반응액 중에 생성된 요산(uric acid) 양을 확인하였다. 이에 대한 결과는 하기의 표 3에 나타내었다.
| 조건 | 생성된 요산의 양 (㎍/㎖) |
| 대조구(증류수) | 23.7 |
| Allopurinol | 3.5 |
| 실시예 1-1 추출물 | 9.4 |
| 실시예 1-2 추출물 | 8.6 |
| 실시예 1-3 추출물 | 8.2 |
| 실시예 1-4 추출물 | 9.4 |
| 비교예 1-1 추출물 | 16.5 |
| 비교예 1-2 추출물 | 14.2 |
| 비교예 1-3 추출물 | 18.1 |
| 비교예 1-4 추출물 | 14.8 |
| 비교예 1-5 추출물 | 15.4 |
| 비교예 1-6 추출물 | 16.2 |
| 비교예 1-7 추출물 | 17.0 |
| 비교예 1-8 추출물 | 20.5 |
표 3을 참고하면, 잔틴 옥시다아제 활성의 억제로 인해 실시예 1 추출물 처리군에서 요산 생성이 현저히 감소되는 것을 확인할 수 있다.
<실험예 2. 요산염에 의해 유도된 MMP-9(Matrix metallopeptidase-9) 발현 억제 활성 확인>
RAW 264.7 세포를 한국세포주은행으로부터 구입하였다. 이 세포를 10%(v/v) FBS가 포함된 RPMI-1640 배지를 이용하여 계대배양 후 80~90% 세포가 자라게 되면 1%(v/v) FBS가 포함된 RPMI-1640 배지로 교환하고 20시간 더 배양하였다. 이 후 2 mg/㎖의 요산염(Endotoxin-free MSU; monosodium urate)에 실시예 1 또는 비교예 1의 추출물 0.5㎍/㎖을 동시에 처리하고 16시간 배양한 후 MMP-9 발현량을 ELISA(abcam, ab100732)로 분석하였고 이에 대한 결과는 표 4에 나타내었다.
| 조건 | 생성된 MMP의 양 (pg/㎖) |
| 대조군(증류수) | 113.1 |
| 요산염 | 582.4 |
| 요산염 + 실시예 1-1 추출물 | 198.2 |
| 요산염 + 실시예 1-2 추출물 | 225.4 |
| 요산염 + 실시예 1-3 추출물 | 167.2 |
| 요산염 + 실시예 1-4 추출물 | 216.5 |
| 요산염 + 비교예 1-1 추출물 | 423.2 |
| 요산염 + 비교예 1-2 추출물 | 387.6 |
| 요산염 + 비교예 1-3 추출물 | 401.8 |
| 요산염 + 비교예 1-4 추출물 | 354.3 |
| 요산염 + 비교예 1-5 추출물 | 412.0 |
| 요산염 + 비교예 1-6 추출물 | 462.1 |
| 요산염 + 비교예 1-7 추출물 | 432.3 |
| 요산염 + 비교예 1-8 추출물 | 402.2 |
표 4를 참고하면, MMP-9 발현량이 실시예 1 처리군에서 현저하게 줄어들고 있어, 상기 추출물이 통풍 치료에 효과적일 것이라 판단된다.
<제제예 1. 약학적 제제>
제제예 1-1. 정제의 제조
본 발명 실시예 1-1의 추출물 200g을 락토오스 175.9g, 감자전분 180g 및 콜로이드성 규산 32g과 혼합하였다. 이 혼합물에 10% 젤라틴 용액을 첨가시킨 후, 분쇄해서 14 메쉬체를 통과시켰다. 이것을 건조시키고 여기에 감자전분 160g, 활석 50g 및 스테아린산 마그네슘 5g을 첨가해서 얻은 혼합물을 정제로 만들었다.
<제제예 2. 식품 제조>
제제예 2-1. 조리용 양념의 제조
본 발명 실시예 1-1의 추출물을 조리용 양념에 1 중량%로 첨가하여 건강 증진용 조리용 양념을 제조하였다.
제제예 2-2. 밀가루 식품의 제조
본 발명 실시예 1-1의 추출물을 밀가루에 0.1 중량%로 첨가하고, 이 혼합물을 이용하여 빵, 케이크, 쿠키, 크래커 및 면류를 제조하여 건강 증진용 식품을 제조하였다.
제제예 2-3. 스프 및 육즙(gravies)의 제조
본 발명 실시예 1-1의 추출물을 스프 및 육즙에 0.1 중량%로 첨가하여 건강 증진용 수프 및 육즙을 제조하였다.
제제예 2-4. 유제품(dairy products)의 제조
본 발명 실시예 1-1의 추출물을 우유에 0.1 중량%로 첨가하고, 상기 우유를 이용하여 버터 및 아이스크림과 같은 다양한 유제품을 제조하였다.
제제예 2-5. 야채주스 제조
본 발명 실시예 1-1의 추출물 0.5g을 토마토주스 또는 당근주스 1,000㎖에 가하여 건강 증진용 야채주스를 제조하였다.
제제예 2-6. 과일주스 제조
본 발명 실시예 1-1의 추출물 0.1g을 사과주스 또는 포도주스 1,000㎖에 가하여 건강 증진용 과일주스를 제조하였다.
Claims (5)
- 버섯 복합배양 균사체, 싱아(Aconogonon alpinum), 바위솔(Orostachys japonicus) 및 비름(Amaranthus mangostanus)의 혼합추출물을 함유하는 것을 특징으로 하는 통풍의 예방 또는 치료용 조성물.
- 제1항에 있어서,
상기 버섯 복합배양 균사체는, (제1단계) 차가버섯, 영지버섯, 상황버섯, 잔나비불로초, 말굽버섯의 자실체 조직을 각각 PDA(Potato Dextrose Agar)에 접종하여 각 버섯을 균사체 상태가 되도록 별도로 배양하는 단계;
(제2단계) 제1단계에서 배양된 각각의 차가버섯, 영지버섯, 상황버섯, 잔나비불로초, 말굽버섯 5종의 균사체를 PDB(Potato Dextrose Broth)에 혼합 접종하는 단계;
(제3단계) PDB(Potato Dextrose Broth) 배지에 접종된 5종의 균사체를 4~6주간 액체배양하여 복합 배양 균사체를 얻는 단계;
(제4단계) 옻나무 톱밥 및 비자 가종피의 혼합 추출물 배지에 제3단계의 배양을 통해 얻은 복합 배양 균사체를 접종하는 단계; 및,
(제5단계) 상기 4단계에서 옻나무 톱밥 및 비자 가종피의 혼합 추출물 배지에서 접종된 균사체를 1~2주간 추가 액체배양하여 복합배양 균사체를 얻는 단계;
를 포함하여 제조된 것을 특징으로 하는 통풍의 예방 또는 치료용 조성물. - 제2항에 있어서,
상기 제4단계의 옻나무 톱밥 및 비자 가종피 분말의 혼합 추출물 배지는 옻나무 톱밥과 비자 가종피 분말을 혼합한 후 물을 첨가하고 추출하여 얻은 액상인 것을 특징으로 하는 통풍의 예방 또는 치료용 조성물. - 제1항에 있어서,
상기 혼합 추출물 제조용 용매로는 물, C1~C4 알코올 또는 이들의 혼합용액을 사용하는 것을 특징으로 하는 통풍의 예방 또는 치료용 조성물. - 버섯 복합배양 균사체, 싱아(Aconogonon alpinum), 바위솔(Orostachys japonicus) 및 비름(Amaranthus mangostanus)의 혼합추출물을 함유하는 것을 특징으로 하는 통풍의 예방 또는 개선용 건강기능식품.
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