KR20210098571A - 반코마이신 내성 a균 검출용 유전자 마커에 특이적으로 결합가능한 프로브, 이를 포함하는 반코마이신 내성 a균 검출용 조성물, 검출용 키트 및 이를 이용한 반코마이신 내성 a균 검출방법 - Google Patents

반코마이신 내성 a균 검출용 유전자 마커에 특이적으로 결합가능한 프로브, 이를 포함하는 반코마이신 내성 a균 검출용 조성물, 검출용 키트 및 이를 이용한 반코마이신 내성 a균 검출방법 Download PDF

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임원래
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Abstract

본 발명은 실시간 PCR법을 통해 반코마이신 내성 A균을 신속하게 검출 및 정량하기 위한 반코마이신 내성 A균 검출용 유전자 마커에 특이적으로 결합가능한 프로브, 이를 포함하는 반코마이신 내성 A균 검출용 조성물, 검출용 키트 및 이를 이용한 반코마이신 내성 A균 검출방법을 제공하는 것이다.

Description

반코마이신 내성 A균 검출용 유전자 마커에 특이적으로 결합가능한 프로브, 이를 포함하는 반코마이신 내성 A균 검출용 조성물, 검출용 키트 및 이를 이용한 반코마이신 내성 A균 검출방법{Kit for Detection of Vancomycin-Resistant Enterococci and Detection Method using the Kit}
본 발명은 반코마이신 내성 A균 검출용 유전자 마커에 특이적으로 결합가능한 프로브, 이를 포함하는 반코마이신 내성 A균 검출용 조성물, 검출용 키트 및 이를 이용한 반코마이신 내성 A균 검출방법에 관한 것이다.
반코마이신 내성 장구균(vancomycin resistant enterococci, VRE)은 장구균 중 반코마이신 항생제에 내성인 균을 지칭하는 용어로, 메티실린 내성 황색포도알균(MRSA)과 함께 병원 감염의 주요한 원인균으로 알려져 있다.
지난 수십년간 자연적 방어 기제로 나타난 내성균은 항균제 사용 증가, 국가 간 교역 및 이동 증가 등과 맞물리면서 점점 더 다양한 양상으로 전개되었으며, 내성 유전자를 주고받는 세균의 특성에 따라 신규 변종 내성균이 증가하였다.
특히, 장구균은 본래의 성격상 여러 항균제에 내성이 있어 효과적인 치료를 위해서 penicilin 계열과 aminoglycoside 계열 항균제의 병합요법이 사용되었으나, 내성이 증가함으로써 vancomycin의 사용이 급증하였고 이어 vancomycin에도 내성을 보이는 장구균이 등장하였다.
장구균의 vancomycin에 대한 내성기전은 vancomycin 내성 유전자에 의하여 암호화되어 있는 ligase에 의하여 vancomycin에 대한 친화력이 낮은 단백이 합성되어 장구균의 세포벽 전구체에 대한 vancomycin의 공격을 차단하는 것으로 내성 유전자형은 vanA, vanB, vanC, vanD, vanE, 및 vanG 등 6가지가 있다. 그중
이 중 VanA 표현형은 E faecalis와 E faecium에서 주로 발견되는데, vancomycin와 teicoplanin에 고도내성을 가지고 있어 VRE 중 가장 심각한 문제가 되고 있다.
현재 중환자실에서 분리되는 Enterococcus faecium의 30-45%에서 반코마이신에 내성을 보이고 있어 적절한 감염관리가 필요하며, 반코마이신 내성 장구균의 신속하고 민감한 검출은 감염 환자에게는 적절한 항균제 치료를 가능하게 하고 균 정
착이 있는 환자에게는 적절한 감염관리를 시행하여 내성 장구균의 전파를 예방할 수 있게 한다.
통상적인 반코마이신 내성 장구균의 검출방법은 중합효소 연쇄반응(polymerase chain reaction, PCR)법을 수행한 다음, 상기 반응의 증폭산물을 전기영동법으로 확인하는 것으로 정량적 분석이 어렵고, 수일이 소요되어 감염관리에 문제가 되고 있다.
본 발명자들은 반코마이신 내성 유전자 중 고도내성을 가져 심각한 문제가 되고 있는 반코마이신 내성 A균을 간단ㆍ신속ㆍ정확하게 검출 및 정량할 수 있는 기술개발의 일환으로 실시간 PCR법을 이용하여 반코마이신 내성 A균을 검출 및 정량하고자 하였으며, 반코마이신 내성 A균 검출용 유전자 마커에 특이적으로 결합가능한 프로브, 이를 포함하는 반코마이신 내성 A균 검출용 조성물, 검출용 키트 및 이를 이용한 반코마이신 내성 A균 검출방법을 개발하여 본 발명에 이르게 되었다.
http://www.snuh.org/health/nMedInfo/nView.do?category=DIS&medid=AA000493 Cuzon, G., Naas, T., Fortineau, N., Nordmann, P., 2008. Novel chromogenic medium for detection of vancomycin-resistant Enterococcus faecium and Enterococcus faecalis. Journal of clinical microbiology. 46, 2442-2444. Delmas, J., Robin, F., Schweitzer, C., Lesens, O., Bonnet, R., 2007. Evaluation of a new chromogenic medium, ChromID VRE, for detection of vancomycin-resistant Enterococci in stool samples and rectal swabs. Journal of clinical microbiology. 45, 2731-2733.
상기와 같은 문제점을 해결하기 위한 본 발명의 목적은 실시간 PCR법을 통해 반코마이신 내성 A균을 신속하게 검출 및 정량하기 위한 반코마이신 내성 A균 검출용 유전자 마커에 특이적으로 결합가능한 프로브, 이를 포함하는 반코마이신 내성 A균 검출용 조성물, 검출용 키트 및 이를 이용한 반코마이신 내성 A균 검출방법을 제공하는 것이다.
본 발명은 반코마이신 내성 A균 검출용 유전자 마커에 특이적으로 결합가능한 프로브, 이를 포함하는 반코마이신 내성 A균 검출용 조성물, 검출용 키트 및 이를 이용한 반코마이신 내성 A균 검출방법에 관한 것으로, 다중 실시간 PCR법을 적용하여 간단ㆍ신속ㆍ정확하게 반코마이신 내성 A균을 검출 및 정량할 수 있다.
본 발명의 명세서에서 사용되는 용어의 정의는 하기에 기재된 것과 같다.
"유전자 마커″는 본 발명에서 검출하고자 하는 균의 특정 유전자에서만 발견되는 염기서열로서 이를 이용하여 각 균을 특이적으로 검출할 수 있게 된다고 이해될 수 있다.
"프라이머 (primer)″는 DNA 합성시 DNA 중합효소가 합성을 시작할 수 있도록 3′-OH를 제공하는 DNA 짧은 가닥으로 의미할 수 있으며, 중합효소연쇄반응 (PCR)시 이 프라이머를 시발점으로 하기 위하여 합성하여 사용할 수 있다.
"상보적″이라는 용어는 핵산 사이의 염기쌍을 혼성화할 수 있는 것을 의미하며, 통상 A와 T(또는 U), 또는 C와 G를 두고 상보적이라고 할 수 있다.
"혼성화(hybridization)″란 상보적인 단일가닥 핵산들이 이중가닥을 이루는 과정을 의미하는 것으로 양 염기서열의 상보성이 높으면 안정한 혼성화가 이루어질 수 있다. 혼성화는 2개의 핵산 가닥 간의 상보성이 완전할 경우(perfect match) 일어나거나 또는 일부 부정합(mismatch) 염기가 존재하여도 일어날 수 있다. 혼성화에 필요한 상보성의 정도는 혼성화 조건에 따라 달라질 수 있으며, 특히 온도에 의하여 조절될 수 있다.
"중합효소연쇄반응(Polymerase chain reaction, PCR)″이라는 용어는 최초의 주형 DNA를 반복과정(가열 및 냉각이 교대로 이루어짐)에 의하여 다량의 동일 DNA가 증폭되는 일련의 과정을 의미할 수 있다. 여기에는 (ⅰ) 증폭하고자하는 주형 DNA, (ⅱ) 복제의 시발점이 되는 프라이머, (ⅲ) DNA를 합성할 수 있는 효소인 DNA polymerase 그리고 (ⅳ) DNA의 재료가 되는 dNTPs 등이 필요하다.
"Real time PCR″이라는 용어는 증폭되는 유전자의 정량적인 정보를 실시간으로 확인할 수 있는 PCR 기법으로 이해될 수 있다. PNA probe가 증폭된 염기서열과 결합하면서 형광을 발생시키고 이것이 해리되면서 소광되는 현상을 측정·분석하여 증폭된 표적핵산의 정량적 정보를 획득할 수 있다.
PCR 증폭 산물량은 형광으로 검출 가능한 양에 도달하면 증폭곡선이 일어나기 시작해 지수적으로 시그널이 상승하다가 정체 상태에 도달한다. 초기 DNA량이 많을수록 증폭 산물량이 검출 가능한 양에 달하는 사이클 수가 적어지므로 증폭곡선이 빨리 나타난다. 따라서, 단계적으로 희석한 표준시료를 사용하여 실-시간 PCR 반응을 하면 초기 DNA량이 많은 순서로 같은 간격으로 늘어선 증폭 곡선이 얻어진다. 여기서 적당한 지점에 역치(threshold)를 설정하면 역치와 증폭 곡선이 교차하는 지점 Ct 값이 산출된다.
실시간 PCR에서는 PCR 증폭 산물을 형광을 통해 검출한다. 검출 방법은 크게 인터킬레이팅(interchelating)방법(SYBR 그린 I 방법), 형광 표지 프로브를 이용하는 방법(TaqMan 프로브 방법) 등이 있으며, 형광 표지 프로브를 이용하는 방법은 검출 특이성이 높아 유사 서열까지도 구별해서 검출할 수 있으며, 본 발명의
방법 및 키트는 TaqMan 프로브 방법을 이용한다.
"프로브(probe)"는 합성된 인공 DNA(deoxyribonucleic acid), PNA(peptide nucleic acids) 및 LNA(Locked nucleic acid)로 구성된 군에서 하나 이상 선택하여 표적핵산과 상보적으로 결합할 수 있도록 합성하여 사용할수 있으며, 양 말단에 리포터(reporter)와 리포터 형광을 소광(quenching) 할 수 있는 소광자(quencher)의 형광물질이 결합할 수 있다.
"TaqMan 프로브"는 전형적으로 5’-말단에 형광물질(fluorophore) 및 3’-말단에 퀀처(quencher; 예컨대, TAMRA 또는 비-형광 퀀처(NFQ))를 포함하는 프라이머(예컨대, 20-30 뉴클레오타이드) 보다 더 긴 올리고뉴클레오타이드이다. 여기된 형광물질은 형광을 내기 보다는 근처의 퀀처에 에너지를 전달하며, 프로브가 정상인 경우, 어떠한 형광도 발생되지 않는다. TaqMan 프로브는 PCR 생산물
의 내부 부위에 어닐링할 수 있도록 고안되며, 구체적으로는, TaqMan 프로브는 16S rRNA 유전자, vanA 또는 vanB 유전자 절편의 내부서열로 고안될 수 있다.
"리포터(reporter)'는 특정 파장의 빛을 흡수, 방출하여 형광을 발하는 물질로서, 프로브에 표지하여 표적 핵산과 프로브 사이의 혼성화가 이루어졌는지 확인할 수 있는 물질을 의미하여, 플루오레신(fluorescein), 플루오레신 클로로트리아지닐(fluorescein chlorotriazinyl), 로다민 그린(rhodamine green), 로다민 레드
(rhodamine red), 테트라메틸로다민(tetramethylrhodamine), FITC, 오레곤 그린(Oregon green), 알렉사 플루오로(Alexa Fluor), FAM, JOE, ROX, HEX, 텍사스 레드(Texas Red), TET, TRITC, TAMRA, 시아닌(Cyanine) 계열 염료 및 씨아디카르보시아닌(thiadicarbocyanine) 염료로 구성되는 군에서 선택되는 하나 이상일 수 있다.
"소광자(quencher)"는 리포터가 발생시킨 빛을 흡수하여 형광세기를 감소시키는 물질을 의미하며, 답실(Dabcyl), TAMRA, Eclipse, DDQ, QSY, 블랙베리 퀸처(Blackberry Quencher), 블랙홀 퀸처(Black Hole Quencher), Qxl, 아이오와 블랙(Iowa black) FQ, 아이오와 블랙 RQ 및 IRDye QC-1 로 구성되는 군으로부터 선택되는 하나 이상일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니며, 소광자는 종류에 따라 형광세기를 감소하는 범위가 다르므로 이를 고려하여 사용할 수 있다
"증폭″은 주형 DNA의 적어도 하나의 세그먼트의 복수개 복제물을 형성하기 위하여 반복적으로 일어나는 일련의 반응을 의미할 수 있다.
"검체 시료″는 다양한 시료를 포함하며 본 발명의 방법을 이용하여 생물시료(biosample)를 분석한다. 보다 바람직하게는, 본 발명에 반코마이신 내성A균에 감염된 개체의 시료일 수 있으며, 인간 및 세균 기원의 생물시료가 분석될 수 있으며 분석되는 생물시료는 생물학적 근원으로부터 나온 어떠한 세포, 조직, 유체액(fluid), 또는 본 발명에 의하여 잘 분석될 수 있는 어떠한 다른 매질(medium)도 포함된다. 분석되는 생물시료는 체액 시료를 포함하며 이는 혈액, 혈청, 혈장, 림프, 안구 유액, 타액 및 조직 추출물이 포함되나 이에 한정되는 것은 아니다.
"키트″는 버퍼, DNA 중합효소 및 dNTPs와 같은 표적 핵산 증폭 반응(예컨대, PCR 반응)을 실시하는데 통상적으로 필요한 시약을 선택적으로 포함할 수 있다. 또한, 다양한 폴리뉴클레오타이드 분자, 역전사효소, 다양한 버퍼 및 시약 등을 포함할 수 있다. 또한, 상기 키트에 있어서, 특정 반응에 사용되는 시약의 최적량은 본 명세서에 개시사항을 습득한 당업자에 의해서 용이하게 결정될 수 있다. 전형적으로, 본 발명의 장비는 앞서 언급된 구성 성분들을 포함하는 별도의 포장 또는 컴파트먼트로 제작될 수 있다. 여기서, DNA 중합효소는 Taq 중합효소일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
"표적 핵산"은 검출하고자 하는 모든 종류의 핵산을 의미하며, 돌연변이 유전자를 포함하거나 포함하지 않을 수 있다. genomic DNA 와 mitchondrial DNA, viral DNA를 포함하는 모든 종류의 DNA 또는 mRNA,ribosomal RNA, non-cording RNA, tRNA, viral RNA등을 포함하는 모든 종류의 RNA를 특징으로 할 수 있으나 이에 한정하지 않는다. 혼성화, 어닐링(annealing) 또는 증폭 조건 하에서 프라이머 또는 프로브와 어닐링 또는 혼성화된다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 서열번호 1의 염기서열로 표시되는 반코마이신 내성 A균 검출용 유전자 마커와 상기 유전자 마커를 증폭시키기 위한 서열번호 2와 3 염기서열로 표시되는 반코마이신 내성 A균 검출용 프라이머 쌍 및 상기 유전자 마커에 상보적으로 결합하는 서열번호 4의 염기서열로 표시되는 반코마이신 내성 A균 검출용 프로브를 제공한다.
이때, 반코마이신 내성 A균 검출용 프로브는 양 말단에 리포터(reporter)와 리포터 형광을 소광(quenching)할 수 있는 소광자(quencher)의 형광 물질이 결합할 수 있다. 바람직하게는 상기 리포터는 FAM(6-carboxyfluorescein), Texas red, HEX(2',4',5',7',-tetrachloro-6-carboxy-4,7-dichlorofluorescein), JOE, Cy3 및 Cy5로 구성되는 군에서 선택되는 하나 이상일 수 있으며, 상기 소광자는 TAMRA(6-carboxytetramethyl-rhodamine), BHQ1, BHQ2 및 Dabcyl로 구성되는 군에서 선택되는 하나 이상일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명은 또한, 서열번호 1의 염기서열로 표시되는 반코마이신 내성 A균 검출용 유전자 마커와 상기 유전자 마커를 증폭시키기 위한 서열번호 2와 3 염기서열로 표시되는 반코마이신 내성 A균 검출용 프라이머 쌍 및 및 상기 유전자 마커에 상보적으로 결합하는 서열번호 4의 염기서열로 표시되는 반코마이신 내성 A균 검출용 프로브를 포함하는 다중 실시간 PCR 반코마이신 내성 A균검출용 조성물 및 상기 반코마이신 내성 A균검출용 조성물을 포함하는 키트를 제공한다.
본 발명은 또한, (a) 검체시료로부터 표적 핵산을 추출하는 단계, (b) 반코마이신 내성 세균의 염기서열을 주형으로 서열번호 2와 서열번호 3으로 염기서열로 표시되는 프라이머 쌍을 이용하여 증폭된 서열단편을 생성시키는 단계, (c) 상기 증폭된 서열단편을 서열번호 4의 염기서열로 표시되는 프로브를 혼성화 및 분해시켜 형광 시그널을 검출하는 단계 및 (d) 상기 형광시그널을 조사하여 vanA를 검출 및 정량하는 단계를 포함하는 반코마이신 내성 A균검출방법을 제공한다.
상술한 바와 같이, 본 발명에 따른 반코마이신 내성 A균 검출용 유전자 마커에 특이적으로 결합가능한 프로브, 이를 포함하는 반코마이신 내성 A균 검출용 조성물, 검출용 키트 및 이를 이용한 반코마이신 내성 A균 검출방법에 의하면, 간단ㆍ신속ㆍ정확하게 반코마이신 내성 A균을 검출 및 정량함으로써 반코마이신 내성 A균의 감염 및 확산을 조기에 차단할 수 있는 효과가 있다.
도 1은 반코마이신 내성 세균의 염기서열 일부와 이로부터 도출된 유전자 마커, TaqMan 프로브를 포함하는 염기서열도.
도 2는 반코마이신 A 내성 유전자를 진단하기 위한 프라이머 및 TaqMan 프로브를 이용하여 real time-PCR법으로 검증한 실험 결과.
본 발명은 첨부된 도면과 하기의 설명에 의하여 모두 달성될 수 있을 것이다. 다만, 하기의 설명은 본 발명의 바람직한 구체예를 기술하는 것으로 이해되어야 하며, 본 발명이 반드시 이에 한정되는 것은 아님을 이해해야 한다.
실시예 1: 반코마이신 내성 세균 유전자 검출용 유전자 마커, 이에 특이적인 프라이머 및 TaqMan 프로브 제작
특이적 유전자 마커를 도출하기 위하여 미국 국립생물공학정보센터(National Center for Biotechnology Information, NCBI)의 뉴클레오티드 DB(nucleotide database)에 등록된 염기서열을 수집하였고 대표(consensus) 염기서열로 제작하였다.
반코마이신 내성 A균 유전자는 199개의 유전자를 분석하였으며, 그 결과, 서열번호 1 로 표시되는 5'-CCGGATAAAAAAATGCACGG-3', 염기서열을 확보하고, 상기 염기서열을 반코마이신 내성 세균 검출용 유전자 마커로 선정하였으며, TaqMan 프로브로 제작하였다.
도 1은 반코마이신 내성 세균의 염기서열 일부와 이로부터 도출된 유전자 마커, TaqMan 프로브를 포함하는 염기서열도이며, 프로브 및 유전자 마커는 유전자 마커 부위는 특히 초록색으로 표시하였다.
하기의 표 1과 같이 염기서열과 리포터(FAM)및 소광자(Dabcyl)로 프로브를 제작하였다. 합성된 모든 프로브의 순도는 질량분석법을 이용하여 확인하였고, 표적 핵산과의 더 효과적인 결합을 위해 프로브의 불필요한 이차구조는 피하였다.
구분 서열번호 서열(5'->3') 변형
유전자 마커 서열번호 1 CCGGATAAAAAAATGCACGG -
VanA 프라이머 서열번호 2 GTAAAATCTGCAATAG -
VanA 프라이머 서열번호 3 TACCGGACAATTCAAACAG -
TaqMan 프로브 서열번호 4 CCGGATAAAAAAATGCACGG FAM, Dabsyl
실시예 2: 실시간 유전자 증폭 반코마이신 내성 세균 키트의 최적화
실시예 1에서 제작된 TaqMan 프로브 및 프라이머를 이용하여, 반코마이신 내성 세균 핵산 샘플에 대하여 증폭곡선을 도출하였고, 이를 분석하여 실시간 유전자 증폭 확인 조건을 최적화하였다.
real-time PCR 반응은 CFX96™ Real-Time 시스템(BIO-RAD 사, 미국)을 이용하여 수행하였으며 버퍼의 조성은 2X의 사용 농도로 nTaq-HOT(0.2 unit/μl), nTaq-HOT buffer(4mM MgCl2 함유), dNTP 혼합물(A, T, G, C 각각 0.4mM) 및 안정제(Stabilizer)를 포함한다.
real-time PCR을 위한 반응물의 조성은 표 2에 나타내었다. 키트의 master mix을 만든 후 DNA를 1~3μL 첨가하여 분석을 수행하였다.
조성 용량
버퍼 10μL
Oligomer mix (TaqMan 프로브, 프라이머) 5μL
주형(Template, DNA) 1~3μL
증류수 up to 20μL
표 3은 PCR 반응 조건을 나타낸 것으로, 프로브와 혼성화 및 형광이 나오면서 실시간 유전자 증폭이 되는 것을 확인하는 단계를 통해 실시간 유전자 증폭을 확인 할 수 있다.(*단계에서는 형광 촬영을 통해 실시간 유전자 증폭을 확인하였다.)
단계 온도(℃) 반응시간 및 사이클

유전자 증폭 및 실시간 유전자 확인		 95 10 min 10 cycle
95 10 sec
45 cycle
60* 60 sec
도 2는 반코마이신 A 내성 유전자를 진단하기 위한 프라이머와 프로브를 이용하여 real time-PCR법으로 검증한 실험 결과를 보여준다.
그 결과, 나타난 바와 같이, 실시간 유전자 증폭을 확인하였을 때 ,반코마이신 내성 A균는 18.44의 증폭곡선을 확인할 수 있었으며, 이를 통해 효과적이고 간편하게 반코마이신 내성 A균을 검출 및 정량할 수 있음을 확인할 수 있었다.
<110> T&S <120> Kit for Detection of Vancomycin-Resistant Enterococci and Detection Method using the Kit <130> KP19-006 <160> 4 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Genetic marker of Vancomycin-Resistant Enterococci <400> 1 ccggataaaa aaatgcacgg 20 <210> 2 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Forward primer <400> 2 gtaaaatctg caatag 16 <210> 3 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse primer <400> 3 taccggacaa ttcaaacag 19 <210> 4 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> vanA gene probe <400> 4 ccggataaaa aaatgcacgg 20

Claims (7)

  1. 서열번호 1의 염기서열로 표시되는 반코마이신 내성 A균 검출용 유전자 마커.
  2. 제1항의 유전자 마커를 증폭시키기 위한 서열번호 2와 3 염기서열로 표시되는 반코마이신 내성 A균 검출용 프라이머 쌍.
  3. 제1항의 유전자 마커에 상보적으로 결합하는 서열번호 4의 염기서열로 표시되는 반코마이신 내성 A균 검출용 프로브.
  4. 제3항에 있어서,
    리포터, 소광자 및 이들의 조합 중에서 어느 하나가 결합되어 있는 것을 특징으로 하는 반코마이신 내성 A균 검출용 프로브.
  5. 제 2항의 프라이머 쌍과 제3항의 프로브를 포함하는 다중 실시간 PCR 반코마이신 내성 A균검출용 조성물.
  6. 제 2항의 프라이머 쌍과 제3항의 프로브를 포함하는 다중 실시간 PCR 반코마이신 내성 A균 검출용 조성물을 포함하는 검출용 키트.
  7. (a) 검체시료로부터 표적 핵산을 추출하는 단계;
    (b) 반코마이신 내성 A균의 염기서열을 주형으로 하고, 서열번호 2와 서열번호 3 의 염기서열로 표시되는 프라이머 쌍과 서열번호 4의 프로브 및 DNA 폴리머라제를 포함하는 반응액으로부터 표적 핵산서열을 증폭하는 단계;
    (c) 증폭된 산물의 형광값을 조사하여 반코마이신 내성 A균을 검출하는 단계;를 포함하는 반코마이신 내성 A균 검출 방법.
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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Cuzon, G., Naas, T., Fortineau, N., Nordmann, P., 2008. Novel chromogenic medium for detection of vancomycin-resistant Enterococcus faecium and Enterococcus faecalis. Journal of clinical microbiology. 46, 2442-2444.
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http://www.snuh.org/health/nMedInfo/nView.do?category=DIS&medid=AA000493

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