KR20210090503A - TGF-β 수용체에 특이적으로 결합하는 항체 및 이의 이용방법 - Google Patents

Abstract

TGF-β 수용체에 특이적으로 결합하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편 및 이의 이용방법에 관한 것이다. 일 양상에 따른 TGF-β 수용체에 특이적으로 결합하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 인간 TGFβⅡ세포외 도메인에 특이적으로 결합하면서, 마우스 TGFβⅡ과 교차 반응이 나타나지 않고 TGF-β 수용체에만 특이적으로 결합하므로, TGF-β 신호 전달 체계의 활성을 막는 역할을 효과적으로 수행할 수 있어, TGF-β 신호 전달에 의해 유발되는 다양한 질병에 효과적으로 활용될 수 있다.

Description

TGF-β 수용체에 특이적으로 결합하는 항체 및 이의 이용방법{Antibody against transforming growth factor beta receptor and uses thereof}

TGF-β 수용체에 특이적으로 결합하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편 및 이의 이용방법에 관한 것이다.

TGFββ복합체와 TGFβ리간드 복합체는 다양한 세포 단위의 신호 전달 과정에 관여하는 것으로, 암 발병 과정에서도 암 생성, 진행, 전이 등 다양한 과정에서 중요한 역할을 하는 것으로 알려져 있다. 특히 TGFβ신호 전달 체계는 종양 형성 이전 단계에서는 TGFβ리간드가 종양 형성을 억제하거나 세포 성장을 억제하는 등의 종양 억제제 역할을 하는 반면, 종양 형성 과정에 들어가게 되면, 억제제 역할을 했던 TGFβ신호 전달 체계가 그 기능성이 변화하여 종양 형성을 유도하거나 방치하는 등의 결과로 이어지게 된다.

TGF-β2, 3 등 3가지 리간드가 알려져 있는 TGF-β 신호는 LAP (latency-associated protein) 가 분해되면서 활성화 상태로 변화하여, TGFβ에 결합한 후, TGFβ과 함께 복합체를 형성하여 SMAD, MAPK, Rho, Part6, PP2A 등을 활성화하는 신호 전달 체계로 이어진다.

이러한 TGF-β 신호 전달 체계는 하위 신호 전달 과정에서, 면역 약화, 암 진전, 암 전이 등에서 다양한 역할들을 하는 유전자들을 활성화시키는데 이러한 점에서 TGFβ에 TGFβ리간드가 결합하는 과정을 막는 것이 TGFβ신호 전달의 효과를 제어하는 효과적인 방법일 수 있다는 점에서 TGF-β 수용체에 특이적으로 결합하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편에 대한 관심이 높아지고 있다.

일 양상은 TGF-β 수용체 (TGF-β receptor)에 특이적으로 결합하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 제공하는 것이다.

다른 양상은 상기 TGF-β 수용체 (TGF-β receptor)에 특이적으로 결합하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편 생산용 재조합 발현 벡터를 제공하는 것이다.

다른 양상은 상기 재조합 발현 벡터로 시험관(in vitro) 내 형질전환된 숙주세포를 제공하는 것이다.

또 다른 양상은 상기 TGF-β 수용체 (TGF-β receptor)에 특이적으로 결합하는 항체의 생산방법을 제공하는 것이다.

또 다른 양상은 TGF-β 수용체 (TGF-β receptor)에 특이적으로 결합하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 포함하는 키메라 항원 수용체를 제공하는 것이다.

또 다른 양상은 상기 키메라 항원 수용체를 발현하는 유전적으로 변형된 면역 세포를 제공하는 것이다.

일 양상은 TGF-β 수용체 (TGF-β receptor)에 특이적으로 결합하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 제공한다.

항체는 항원에 선택적으로 작용하여 생체 면역에 관여하는 단백질의 총칭을 말하는 것으로, 중쇄(heavy chain)와 경쇄(light chain)로 구성된 결합체이다. 항체의 중쇄와 경쇄는 가변영역을 포함하는 에피토프를 인식하는 항원 결합 부위를 가지고 있고, 가변영역의 서열 변화에 따라 항원 특이성이 나타나게 된다. 항원 결합 부위의 가변영역은 가변성이 적은 FR 과 가변성이 큰 CDR 로 나눠지고, 중쇄와 경쇄 모두 CDR1, 2, 3 로 나눠지는 3개의 CDR 부위와, 4개의 FR 부위를 가진다.

본 발명에 따른 항체는 TGFβRⅡ 세포외 도메인에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항체의 단편으로서, Genbank accession No. P37173.2 단백질의 세포외 도메인 부위를 에피토프로 인식하는 것을 특징으로 한다.

용어 "에피토프"는 항체가 특이적으로 결합할 수 있는 항원분자 내의 특정한 입체분자구조를 의미한다.

용어 "항체"는 특정 항원과 면역학적으로 반응성인 면역글로불린 분자로, 항원을 특이적으로 인식하는 수용체 역할을 하는 단백질 분자를 의미한다. 본 발명의 범위에는 전체 항체 형태뿐만 아니라, 상기 항체 분자의 항원 결합 단편도 포함한다.

전체 항체는 2개의 전체 길이의 경쇄 및 2개의 전체 길이의 중쇄를 가지는 구조이며, 각각의 경쇄는 중쇄와 디설파이드 결합으로 연결되어 있다. 상기 전체 항체는 IgA, IgD, IgE, IgM 및 IgG를 포함하며, IgG는 아형(subtype)으로 IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4를 포함한다.

상기 항체는 단일클론 항체, 다특이적 항체, 인간 항체, 인간화 항체, 키메라 항체(예: 인간화 뮤린 항체), 단쇄 Fvs(scFV), 단쇄 항체, Fab 단편, F(ab') 단편, 디설파이드-결합 Fvs(sdFV) 등을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 또한, 상기 항체는 디아바디, 트리아바디 및 테트라바디를 포함할 수 있다.

용어 "항원 결합 단편" 또는 "항체 단편"이란 항원 결합 기능을 보유하고 있는 단편을 의미하며, Fab, F(ab'), F(ab')2, Fv 등을 포함한다. 항체 단편 중 Fab는 경쇄 및 중쇄의 가변영역과 경쇄의 불변영역 및 중쇄의 첫번째 불변영역(CH1)을 가지는 구조로 1개의 항원 결합 부위를 가진다. Fab'는 중쇄 CH1 도메인의 C-말단에 하나 이상의 시스테인 잔기를 포함하는 힌지 영역(hinge region)을 가진다는 점에서 Fab와 차이가 있다. F(ab')2 항체는 Fab'의 힌지 영역의 시스테인 잔기가 디설파이드 결합을 이루면서 생성된다. Fv는 중쇄 가변영역 및 경쇄 가변영역만을 가지고 있는 최소의 항체조각이다. 이중쇄 Fv(two-chain Fv)는 비공유 결합으로 중쇄 가변영역과 경쇄 가변영역이 연결되어 있다. 단쇄 Fv(single-chain Fv, scFv)는 일반적으로 펩티드 링커를 통하여 중쇄의 가변영역과 경쇄의 가변영역이 공유결합으로 연결되거나 또는 C-말단에서 바로 연결되어 있어서 이중쇄 Fv와 같이 다이머와 같은 구조를 이룰 수 있다. 이러한 항체 단편은 단백질 가수분해 효소를 이용해서 얻을 수 있고(예를 들어, 전체 항체를 파파인으로 제한 절단하면 Fab를 얻을 수 있고 펩신으로 절단하면 F(ab')2 단편을 얻을 수 있음), 유전자 재조합 기술을 통하여 제작할 수도 있다.

면역글로불린은 중쇄 및 경쇄를 가지며 각각의 중쇄 및 경쇄는 불변 영역 및 가변 영역을 포함한다. 경쇄 및 중쇄의 가변 영역은, 상보성 결정 영역 (complementarity-determining region: CDR)이라 불리는 3개의 다변가능한 영역 및 4개의 구조 영역(framework region)을 포함한다. 상기 CDR은 주로 항원의 에피토프에 결합하는 역할을 한다. 각각의 사슬의 CDR은 전형적으로 N-말단으로부터 시작하여 순차적으로 CDR1, CDR2, CDR3로 불리우고, 또한 특정 CDR이 위치하고 있는 사슬에 의해서 식별된다.

상기 단일클론 항체는 실질적으로 동질적 항체 집단으로부터 수득한 단일 분자 조성의 항체 분자를 의미한다. 단일클론 항체는 고도로 특이적이어서, 특정 에피토프에 대해 단일 결합 특이성 및 친화도를 나타낼 수 있다.

일 양상의 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 서열번호 1, 4, 또는 7의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정영역(Heavy chian complementarity determining region: HCDR) 1, 서열번호 2, 5, 또는 8의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2, 및 서열번호 3, 6, 또는 9의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3;을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및 서열번호 10, 또는 13의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정영역(Light chian complementarity determining region, LCDR) 1, 서열번호 11, 또는 14의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2, 및 서열번호 12, 또는 15의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3;을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);을 포함하는 TGF-β 수용체 (TGF-β receptor)에 특이적으로 결합하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 포함한다.

상기 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 하기 조합 a), b) 및 c) 중 하나의 중쇄 상보성 결정영역 및 경쇄 상보성 결정영역을 포함할 수 있다.

a) 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열로 이루어지는 HCDR1, 서열번호 2로 표시되는 아미노산 서열로 이루어지는 HCDR2 및 서열번호 3으로 표시되는 아미노산 서열로 이루어지는 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변영역; 및 서열번호 10으로 표시되는 아미노산 서열로 이루어지는 LCDR1, 서열번호 11로 표시되는 아미노산 서열로 이루어지는 LCDR2 및 서열번호 12로 표시되는 아미노산 서열로 이루어지는 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변영역;

b) 서열번호 4로 표시되는 아미노산 서열로 이루어지는 HCDR1, 서열번호 5로 표시되는 아미노산 서열로 이루어지는 HCDR2 및 서열번호 6으로 표시되는 아미노산 서열로 이루어지는 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변영역; 및 서열번호 10로 표시되는 아미노산 서열로 이루어지는 LCDR1, 서열번호 11로 표시되는 아미노산 서열로 이루어지는 LCDR2 및 서열번호 12로 표시되는 아미노산 서열로 이루어지는 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변영역; 및

c) 서열번호 7로 표시되는 아미노산 서열로 이루어지는 HCDR1, 서열번호 8로 표시되는 아미노산 서열로 이루어지는 HCDR2 및 서열번호 9로 표시되는 아미노산 서열로 이루어지는 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변영역; 및 서열번호 13으로 표시되는 아미노산 서열로 이루어지는 LCDR1, 서열번호 14로 표시되는 아미노산 서열로 이루어지는 LCDR2 및 서열번호 15로 표시되는 아미노산 서열로 이루어지는 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변영역.

상기 항체의 중쇄 영역은 서열번호 16, 17, 또는 18로 표시되는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 경쇄 영역은 서열번호 19, 또는 20으로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.

또한 상기 항체의 중쇄는 서열번호 26, 27, 또는 28로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있으며, 상기 항체의 경쇄는 서열번호 29 또는 30으로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.

중쇄 가변영역은 서열번호 21, 22 또는 23으로 표시되는 폴리뉴클레오티드 서열로부터 코딩되고, 상기 경쇄 가변영역은 서열번호 24 또는 25로 표시되는 폴리뉴클레오티드 서열로부터 코딩되는 것일 수 있다.

상기 항체는 단일클론항체 또는 폴리클론 항체일 수 있다. 또한 상기 항체가 특이적으로 결합하는 TGF-β 수용체는 Ⅱ형 수용체이다.

TGFβ Ⅱ형 수용체는 TGFβ receptor 로 보고되고 있는 3가지 수용체 중 하나로, 세포의 증식, 이동 등의 세포 상태 변화에 광범위하게 작용하는 TGFβ 리간드와 결합하는 수용체이다. 특히 수용체 유형 중, TGFβRⅡ 는 TGFβ 리간드 결합을 매개로 TGFβRI 을 인산화시켜 하위 신호 전달 체계의 활성화를 담당하는 중요한 역할을 하는 수용체로, 신호 체계의 과발현, 억제 등을 자가 조절 피드백 형태로 조절하는 것으로 알려져 있다.

상기 일 양상에 따른 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 TGF-β 수용체의 에피토프를 특이적으로 인식할 수 있는 범위 내에서, 본 명세서에 기재된 항- TGF-β 수용체 특이적 결합 항체의 서열뿐만 아니라, 이의 생물학적 균등물도 포함할 수 있다. 예를 들면, 항체의 결합 친화도 및/또는 기타 생물학적 특성을 보다 더 개선시키기 위하여 항체의 아미노산 서열에 추가적인 변화를 줄 수 있다. 이러한 변형은 예를 들어, 항체의 아미노산 서열 잔기의 결실, 삽입 및/또는 치환을 포함한다. 이러한 아미노산 변이는 아미노산 곁사슬 치환체의 상대적 유사성, 예컨대, 소수성, 친수성, 전하, 크기 등에 기초하여 이루어진다. 아미노산 곁사슬 치환체의 크기, 모양 및 종류에 대한 분석에 의하여, 아르기닌, 라이신과 히스티딘은 모두 양전하를 띤 잔기이고; 알라닌, 글라이신과 세린은 유사한 크기를 가지며; 페닐알라닌, 트립토판과 타이로신은 유사한 모양을 갖는다는 것을 알 수 있다. 따라서, 이러한 고려 사항에 기초하여, 아르기닌, 라이신과 히스티딘; 알라닌, 글라이신과 세린; 그리고 페닐알라닌, 트립토판과 타이로신은 생물학적으로 기능 균등물이라 할 수 있다.

상술한 생물학적 균등 활성을 갖는 변이를 고려한다면, 본 발명의 항체 또는 이를 코딩하는 핵산 분자는 서열번호에 기재된 서열과 실질적인 동일성(substantial identity)을 나타내는 서열도 포함하는 것으로 해석된다. 상기의 실질적인 동일성은, 상기한 본 발명의 서열과 임의의 다른 서열을 최대한 대응되도록 얼라인하고, 당업계에서 통상적으로 이용되는 알고리즘을 이용하여 얼라인된 서열을 분석한 경우에, 최소 61%의 상동성, 보다 바람직하게는 70%의 상동성, 보다 더 바람직하게는 80%의 상동성, 보다 더 바람직하게는 90%의 상동성, 보다 더 바람직하게는 95%의 상동성, 가장 바람직하게는 98%의 상동성을 나타내는 서열을 의미한다. 서열비교를 위한 얼라인먼트 방법은 당업계에 공지되어 있다.

다른 양상은 상기 TGF-β 수용체 (TGF-β receptor)에 특이적으로 결합하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편 생산용 재조합 발현 벡터를 제공한다.

용어 '재조합(recombinant)'은 '유전자 조작(genetic manipulation)'과 호환하여 사용될 수 있으며, 유전자에 변형을 가하고 자르고 연결하는 등 분자적 클로닝 (molecular cloning) 실험 기법을 이용하여 자연의 상태에는 존재하지 않는 형태의 유전자를 제조하는 것을 의미한다. 상기 '발현(expression)'은 세포에서 단백질 또는 핵산이 생성되는 것을 의미한다.

상기 '재조합 발현벡터'란 적합한 숙주세포 (host cell) 에서 목적하는 단백질 또는 핵산 (RNA) 을 발현할 수 있는 벡터로서, DNA (유전자) 삽입물이 발현될 수 있도록 작동가능하게 연결된 필수적인 조절 요소를 포함하는 유전자 작제물을 말한다. '작동가능하게 연결된 (operably linked)'이란 일반적 기능을 수행하도록 핵산 발현 조절 서열과 목적하는 단백질 또는 RNA 를 코딩하는 핵산 서열이 기능적으로 연결 (functional linkage) 되어 있는 것으로, 발현 조절 서열에 의해 유전자가 발현될 수 있도록 연결된 것을 의미한다. 상기 '발현 조절 서열 (expression control sequence)'이란 특정한 숙주세포에서 작동가능하게 연결된 DNA 서열의 발현을 조절하는 DNA 서열을 의미한다. 그러한 조절 서열은 전사를 실시하기 위한 프로모터, 전사를 조절하기 위한 임의의 오퍼레이터 서열, 적합한 mRNA 리보좀 결합 부위를 코딩하는 서열, 전사 및 해독의 종결을 조절하는 서열, 개시 코돈, 종결 코돈, 폴리아데닐화 시그널 및 인핸서 등을 포함한다.

일 양상의 재조합 발현벡터는 클로닝과 항체 제조 분야에서 통상적으로 사용되는 벡터라면 그 종류가 특별히 제한되지 않으며, 그 예로는 플라스미드 벡터, 코스미드 벡터, 박테리오파지 벡터 및 바이러스 벡터 등을 포함하나 이에 제한되지 않는다. 상기 플라스미드에는 대장균 유래 플라스미드 (pBR322, pBR325, pUC118 및 pUC119, pET-21b(+)), 바실러스 서브틸리스 유래 플라스미드(pUB110 및 pTP5) 및 효모 유래 플라스미드(YEp13, YEp24 및 YCp50) 등이 있으며, 상기 바이러스는 레트로바이러스, 아데노바이러스 또는 백시니아 바이러스와 같은 동물 바이러스, 배큘로 바이러스와 같은 곤충 바이러스 등이 사용될 수 있다. 파지 표시 등에 통상적으로 사용되는 pComb3 계열의 벡터를 사용할 수도 있고, 항체를 포유류 세포에서 발현하기 위하여 포유류 세포에서 단백질을 발현하기 위하여 통상적으로 사용되는 벡터, 예를 들어 pcDNA 나 pVITRO 등의 벡터를 사용할 수 있다.

상기 재조합 발현 벡터는 서열번호 16, 17, 또는 18로 표시되는 중쇄 영역 아미노산 및 서열번호 19, 또는 20으로 표시되는 경쇄 영역 아미노산을 포함하는 아미노산 서열을 코딩하는 단리된 핵산을 포함할 수 있다.

상기 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 코딩하는 핵산을 분리하여 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 재조합적으로 생산할 수 있다. 핵산을 분리하고, 이를 복제 가능한 벡터 내로 삽입하여 추가로 클로닝하거나 또는 추가로 발현시킨다.

상기 "핵산"은 DNA 및 RNA 분자를 포괄적으로 포함하는 의미이며, 핵산에서 기본 구성단위인 뉴클레오티드는 자연의 뉴클레오티드 뿐만 아니라, 당 또는 염기 부위가 변형된 유사체(analogue)도 포함한다. 본 발명의 중쇄 및 경쇄 가변영역을 코딩하는 핵산의 서열은 변형될 수 있다. 상기 변형은 뉴클레오티드의 추가, 결실, 또는 비보존적 치환 또는 보존적 치환을 포함한다.

상기 핵산은 상기 핵산의 뉴클레오티드 서열에 대하여 실질적인 동일성을 나타내는 뉴클레오티드 서열도 포함하는 것으로 해석된다. 실질적인 동일성은 본 발명의 뉴클레오티드 서열과 임의의 다른 서열을 최대한 대응되도록 얼라인하고, 당업계에서 통상적으로 이용되는 알고리즘을 이용하여 얼라인 된 서열을 분석한 경우에, 최소80%의 상동성, 보다 바람직하게는 최소 90%의 상동성, 가장 바람직하게는 최소 95%의 상동성을 나타내는 뉴클레오티드 서열을 의미한다.

다른 양상은 상기 재조합 발현 벡터로 시험관(in vitro) 내 형질전환된 숙주세포를 제공한다.

용어, “형질전환”은, 본래의 세포가 가지고 있던 것과 다른 종류의 외래 유전자가 있는 DNA사슬 조각 또는 플라스미드가 세포들 사이에 침투되어 원래 세포에 존재하던 DNA와 결합함으로써 세포의 유전형질을 변화시키는 분자생물학적 기술을 의미한다. 본 발명의 목적상 형질전환은 상기 서열번호 16, 17, 또는 18로 표시되는 중쇄 영역 아미노산 및 서열번호 19, 또는 20으로 표시되는 경쇄 영역 아미노산을 포함하는 아미노산 서열로 이루어지는 아미노산 서열을 코딩하는 단리된 핵산이 숙주세포 내로 삽입되어 본 발명의 항체를 생산하는 것을 의미한다.

상기 숙주세포는 바람직하게는 박테리아 (E.Coli)나 효모 (Yeast)등의 미생물, CHO 세포, F2N 세포, HEK293 세포 및 항체 생산 하이브리도마세포로 이루어지는 군으로부터 선택된 어느 하나일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

또 다른 양상은 상기 TGF-β 수용체 (TGF-β receptor)에 특이적으로 결합하는 항체의 생산방법을 제공한다.

상기 방법은 본 발명에 따른 항체 또는 그 단편을 생산하기 위한 숙주세포를 상기 항체 또는 그 단편을 암호화하는 DNA 가 작동가능하게 연결된 재조합 발현벡터로 형질전환하는 단계를 포함할 수 있다. 선택된 숙주세포와 재조합 발현벡터의 종류에 따라 앞서 서술한 바와 같으며, 이를 적절한 형질 전환 방법을 선택하여 본 단계를 실시할 수 있다. 상기 기재된 중쇄와 경쇄의 염기서열을 포함하는 재조합 발현벡터는 동일한 숙주세포에 공동 형질 전환하여 중쇄와 경쇄가 하나의 세포에서 발현되도록 할 수도 있고, 중쇄와 경쇄의 염기서열을 포함하는 재조합 발현벡터를 각각 별개의 숙주세포에 형질전환하여 중쇄와 경쇄가 따로 발현되도록 할 수도 있다.

또한 상기 방법은 추가적으로 상기 형질 전환된 숙주세포를 배양하여 숙주세포에 도입된 재조합 발현 벡터로부터 일 양상에 따른 항체의 중쇄와 경쇄를 포함하는 항체 또는 항체의 단편의 폴리펩티드가 생산되도록 하는 단계를 포함할 수 있다. 선택한 숙주세포를 배양하기 위한 배지 조성과 배양 조건, 배양 시간 등을 적절하게 선택할 수 있으며, 숙주세포에서 생산되는 항체 분자는 세포의 세포질 내에 축적되거나, 적절한 신호 서열에 의하여 세포 외부 또는 배양 배지로 분비되거나, 페리플라즘 등으로 표적화 되도록 할 수 있다. 또한 본 발명에 따른 항체가 TGFβⅡ에 대한 결합특이성을 유지하도록 당업계에 공지되어 있는 방법을 이용하여 단백질 리폴딩 시키고 기능성 구조를 갖도록 할 수 있다. 또한 IgG 형태의 항체를 생산하는 경우, 중쇄와 경쇄는 별개의 세포에서 발현시키고 별도의 단계에서 중쇄와 경쇄를 접촉시켜 완전한 항체를 구성하도록 제조할 수도 있고, 중쇄와 경쇄를 동일한 세포에서 발현되도록 하여 세포 내부에서 완전한 항체를 형성하도록 할 수도 있다.

또한 상기 방법은 숙주세포에서 생산된 항체 또는 그 단편을 수득하는 단계를 추가적으로 포함할 수 있다. 숙주세포에서 생산된 항체 또는 그 단편 폴리펩티드의 특성, 숙주세포의 특성, 발현 방식 또는 폴리펩티드의 표적화 여부 등을 고려하여 수득 방법을 적절히 선택 및 조절할 수 있다. 예를 들어, 배양 배지로 분비된 항체 또는 그 단편은 숙주세포를 배양한 배지를 수득하고, 원심 분리하여 불순물을 제거하는 등의 방법으로 항체를 회수할 수 있고, 필요에 따라 세포 내 특정 소기관이나 세포질에 존재하는 항체를 세포 외부로 방출하여 회수하기 위하여 항체 또는 그 단편의 기능적 구조에 영향을 미치지 않는 범위에서 세포를 용해시킬 수도 있다. 또한 수득한 항체는 크로마토그래피, 필터 등에 의한 여과, 투석 등의 방법을 통해 불순물을 더욱 제거하고 농축하는 과정을 추가로 거칠 수 있다.

상기 항체 또는 그의 항원 결합 단편의 회수는 예를 들어 원심분리 또는 한외여과에 의해 불순물을 제거하고, 그 결과물을 예를 들어 친화 크로마토그래피 등을 통해 정제할 수 있다. 추가의 정제 기술, 예를 들어 음이온 또는 양이온 교환 크로마토그래피, 소수성 상호작용 크로마토그래피, 히드록실아파타이트 크로마토그래피 등이 사용될 수 있다.

또 다른 양상은 TGF-β 수용체 (TGF-β receptor)에 특이적으로 결합하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 포함하는 키메라 항원 수용체를 제공한다.

다른 양상은 면역 세포에 발현되는 상기 일 양상에 따른 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 포함하는 키메라 항원 수용체에 있어서, 상기 키메라 항원 수용체가 순차적으로 연결된 상기 일 양상에 따른 항체 또는 그의 항원 결합 단편, 세포막 관통 영역 및 세포 내 신호 영역을 포함하는 것인 키메라 항원 수용체를 제공한다.

상기 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 단일 사슬 항체 또는 도메인 항체일 수 있다. 일 구체예에서, 상기 키메라 항원 수용체는 본 발명의 항- TGF-β 수용체의 항원 결합 단편, 예를 들어, scFV를 포함할 수 있다.

상기 면역 세포는 T세포, NK세포 또는 NKT세포일 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.

상기 키메라 항원 수용체에 포함되는 세포막 관통 영역 및 세포 내 신호 영역은 당해 기술분야에 잘 알려져 있다.

일 구체예에서, 상기 세포막 관통 영역은 CD8 또는 CD28의 막 관통 영역을 포함할 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.

일 구체예에서, 상기 세포 내 신호 영역은 CD3ζ, FcεRIγ, CD27, CD28, CD137, 또는 CD134의 세포 내 신호 영역 서열일 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.

다른 양상은 상기 일 양상에 따른 키메라 항원 수용체를 발현하는 유전적으로 변형된 면역 세포를 제공한다.

상기 면역 세포는 T세포, NK세포 또는 NKT세포일 수 있으나, 이에 한정되지 않는다. 따라서, 상기 면역 세포는 키메라 항원 수용체-T 세포(CAR-T)일 수 있다.

상기 키메라 항원 수용체를 발현하는 유전적으로 변형된 면역 세포에 대해서는 당해 기술분야에 공지되어 있다.

또 다른 양상은 상기 TGFβRⅡ 표적 항체 또는 단편을 포함하는 암의 치료 또는 예방용 약학적 조성물을 제공할 수 있다. 구체적으로, 상기 TGFβRⅡ 표적 항체 또는 단편을 포함하는 조성물은 TGFβ 신호 전달과 관련된 질환 및 암을 포함하는 질병의 치료에 활용될 수 있다. TGF-β 신호 전달 체계는 하위 신호 전달 과정에서, 면역 약화, 암 진전, 암 전이 등에서 다양한 역할들을 하는 유전자들을 활성화시키므로, 상기 항체 또는 이의 단편은 TGFβRII 에 TGFβ 리간드가 결합하는 과정을 막을 수 있으므로, 상기 조성물은 TGFβ 신호 전달과 관련된 질환 및 암을 포함하는 질병을 예방 또는 치료할 수 있다.

일 양상에 따른 TGF-β 수용체에 특이적으로 결합하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 인간 TGFβⅡ세포외 도메인에 특이적으로 결합하면서, 마우스 TGFβⅡ과 교차 반응이 나타나지 않고 TGF-β 수용체에만 특이적으로 결합하므로, TGF-β 신호 전달 체계의 활성을 막는 역할을 효과적으로 수행할 수 있어, TGF-β 신호 전달에 의해 유발되는 다양한 질병에 효과적으로 활용될 수 있다.

도 1은 TGFβⅡ세포외 도메인에 결합하는 항체 또는 단편을 개발하기 위하여, 표적 물질인 TGFβⅡ세포외 도메인에 결합력을 보이는 파지 입자를 선택적으로 골라내는 파지 표면 제시법을 과정을 나타낸 모식도이다.
도 2는 monoclonal ELISA 를 수행하여 TGFβⅡ세포외 도메인과의 일정 수준 이상의 결합력이 나타나는 항체를 확인하는 결과(도 2A), 상기 결합력을 확인한 항체가 실제적으로 TGFβⅡ세포외 도메인/TGFβ리간드 간 결합을 방해할 수 있는지를 경쟁적 ELISA를 통해 확인한 실험결과(도 2B)를 나타낸 도이다.
도 3은 정제한 TBR2-1, TBR2-2, TBR2-3 클론의 scFv를 PAGE 겔에서 확인한 결과와 그의 정량값을 확인한 실험 결과를 나타낸 도이다.
도 4는 정제한 TBR2-1, TBR2-2, TBR2-3 클론의 scFv 와 TGFβⅡ세포외 도메인과의 결합력을 확인한 ELISA 결과를 나타낸 도이다.
도 5는 정제한 TBR2-1, TBR2-2, TBR2-3 클론의 scFv 가 TGFββⅡ세포외 도메인의 결합을 농도 의존적으로 방해하는 결과를 확인한 도이다.
도 6은 human TGFβⅡ세포외 도메인에 결합력을 가지는 TBR2-1, TBR2-2, TBR2-3 클론이, mouse TGFβⅡextracellular domain 결합력이 있는지 여부를 확인한 ELISA 결과이다.

이하 일 양상을 실시예 및 실험예를 통하여 보다 상세하게 설명한다. 그러나 이들 실시예 및 실험예는 일 양상을 예시적으로 설명하기 위한 것으로 일 양상의 범위가 이들 실시예 및 실험예에 한정되는 것은 아니며, 일 양상의 실시예 및 실험예는 당업계에서 평균적인 지식을 가진 자에게 일 양상을 보다 완전하게 설명하기 위해서 제공되는 것이다.

실시예 1. Anti-TGFβⅡ세포외 도메인scFv 선별

25 kDa 크기를 가지는 scFv 단편을 pComb3XTT 벡터를 기반으로 대장균 (XL1-blue) 에 형질전환하고, 헬퍼 파지 (helper phage) 로 감염시켜 Fab 라이브러리를 구축하였으며, 구체적으로 면역 글로불린의 VH 도메인과 VL 도메인을 15개의 아미노산으로 이루어진 사슬 즉 (Gly-Gly-Gly-Gly-Ser)₃ 로 연결한 하나의 폴리펩티드 사슬로 이루어진 scFv 단편을 이용한 라이브러리를 구축하였다.

한 개의 골격을 가진 라이브러리를 모든 클론들이 인간 면역글로불린의 V_H3-23 유전자와 V_L1g 유전자를 골격으로 가지며, 이 중 상보성 결정부위에 인공적 다양성을 도입하여 라이브러리를 구축하였다.

상기 구축된 라이브러리를 암피실린을 함유하는 SB (Super broth) 배지 400 ml 에 배양하고, 600 나노미터 흡광도가 0.5 가 되었을 때 10¹³ CFU의 VCSM13 보조파지를 가하고 80 rpm에서 교반하면서 1시간동안 37℃에서 감염시켰다. 여기에 최종 70 μg/ml 의 카나마이신 항생제를 넣고 30℃에서 200 rpm에서 교반하며 밤새 배양하여 scFv가 표면 제시된 파지를 생산하였다. 다음날 아침에 배양액을 원심 분리하고, 배양액 속의 파지를 4% PEG-6000 과 3% NaCl 을 가하여 침전시켰다. 침전된 파지를 50 ml 의 PBS 완충용액에 용해시키고, 위와 같은 방식으로 재차 침전하여 최종적으로 2 ml 의 PBS 완충용액에 용해시켰다. 이를 원심 분리하여 이물질을 제거함으로써 파지 scFv 라이브러리를 수득하였으며, 평균적으로 최종 파지 라이브러리에는 10¹³ CFU/ml 이상의 파지 입자를 포함시켰다.

이뮤노-튜브에 5 μg/ml 농도의 hTGFβⅡECD/Fc (R&D systems, Cat. No. 341-BR-050) 를 첨가하여, 1시간 동안 시험관 표면에 단백질을 흡착시킨 후 4% skim milk 용액을 시험관에 첨가하여 hTGFβⅡECD/Fc 가 흡착되지 않은 표면을 보호하였다. 시험관을 비운 후 여기에 4% skim milk 용액에 분산된 10¹³ CFU의 항체 파지 라이브러리를 넣어 항원과 결합시켰다. 비특이적으로 결합한 파지를 0.05% PBST (phosphate buffered saline - tween-20) 용액으로 3회 씻어낸 후, 남아있는 항원 특이적 파지 항체를 100 mM 트리에틸아민 용액을 이용하여 용리하였다.

용리된 파지를 1.0M 농도의 Tris-HCl (pH 7.4) 로 중화시킨 후, TG1 대장균에 37℃에서 1시간 감염시키고, 감염된 대장균을 암피실린을 함유하는 LB(Luria-Bertani) 한천배지에 도포하여 37℃에서 배양하였다. 다음날 배양된 대장균을 3 ml SB (super broth) - 암피실린 배양액에 현탁하고 15% glycerol 을 첨가하여 600 나노미터 파장에서의 흡광도 값을 측정한 후 일부는 -80℃에 보관하고, 나머지 중 측정된 흡광도값을 기준으로 20 ml SB-암피실린-2% 포도당 용액에 최종 흡광도 값이 0.1 이 되도록 접종하여 37℃에서 배양하였다. 배양액의 600 나노미터 파장 흡광도가 0.5 가 되면 원심 분리하여 박테리아만을 분리하고, 이를 다시 20 ml SB-암피실린 배양액에 현탁한 후, 배양된 세포수에 따른 희석배수의 VCSM13 보조 파지를 넣고 서서히 교반하며 37℃에서 배양하였다. 1시간 후 카나마이신 70 μg/ml을 첨가하고 30℃에서 200 rpm 교반하며 밤새 배양하였다. 다음날 배양액을 원심 분리한 상층액과 PEG-6000 용액을 섞어 파지 입자를 형성시킨 후, 다시 원심 분리 과정을 거쳐 다음 패닝 과정에 들어갈 라이브러리를 형성시켰으며, 이의 과정은 도1에 모식화하여 나타내었다.

이후, 3차 내지 4차 패닝 과정을 거치면서 이뮤노-튜브에 코팅된 hTGFβⅡECD/Fc 의 양은 5 μg/ml 농도에서 2.5 μg/ml 농도로 줄였고, 비특이적 결합 파지를 제거하기 위한 워싱 과정은 5회 및 10회로 증가시켜 최종적인 scFv를 선별하였다.

실시예 2. Anti-TGFβⅡ세포외 도메인 scFv 선별 클론의 결합력 확인

파지 표면 제시법으로 패닝을 진행한 뒤, 분류된 일부 콜로니들에 대해, scFv 를 플레이트 단위로 소량 발현시켜 용리된 페리플라즘 용액을 대상으로 단일클론항체 ELISA 를 진행하여 표적 물질인 TGFβⅡ세포외 도메인과의 결합력을 확인하는 실험을 수행하였다. 3차 및 4차 패닝 후, 패닝 과정 중에 상기 용리된 파지를 감염시킨 대장균을 암피실린을 함유하는 LB 한천배지에 도포하고 배양하여 얻은 단일 콜로니들 중 선별된 일부 콜로니들을 대상으로 Anti-TGFβⅡ세포 외 도메인과 결합하는 클론을 선별하기 위해서 ELISA 를 수행하였다.

LB 한천배지에 도포 및 배양하여 얻은 단일 콜로니 각각을, 200 μl SB-암피실린 용액에 접종하여 37℃ 조건에서 3시간 배양한 후, IPTG 를 통해 밤새 배양을 유지하여 scFv 단백질을 대장균 페리플라즘에 발현시켰다. 클론별 발현된 대장균들을 40 μl 1X TES (50 mM 트리스, 1 mM EDTA, 20% 수크로오스, pH 8.0) 용액에 10분 이상 처리하여 현탁하고, 여기에 0.2X TES 용액 60 μl 를 추가하여 4℃에서 30분 이상 처리한 후, 원심 분리하여 상층액으로 페리플라즘을 추출하였다.

미리 TGFβⅡ세포외 도메인/Fc 를 코팅한 96 웰 이뮨-플레이트 (NUNC, 3690) 에 4% BSA를 함유한 PBST 용액을 첨가하여 상온에서 1시간동안 블로킹 시킨 후 PBST 로 3번 세척하였다. 상기 분리한 페리플라즘 용액을 25 μl로 처리하고 상온에서 1시간 이상 반응시켜, TGFβⅡ세포 외 도메인에 결합하는 클론들이 충분히 결합할 수 있도록 하였다. 발현된 scFv 내 존재하는 HA 태그 부위를 활용해 겨자무과산화효소(horseradish peroxidase: HRP)가 연결된 HA 항체를 상온에서 1시간 처리해주었다. 이후, PBST 용액으로 3번 씻어낸 뒤, HRP 기질인 TMB 용액 100 μl 를 첨가하여 발색 반응을 확인하였고, TMB stop 용액 100 μl 를 처리하여 발색 반응을 멈춘 후, 플레이트 리더를 통해 650 nm 파장에서 발광을 확인하였다. 패닝 과정 이후, monoclonal ELISA 를 수행하여 TGFβⅡ세포외 도메인과의 일정 수준 이상의 결합력이 나타나는 항체를 확인하는 결과를 도 2A에, 상기 결합력을 확인한 항체가 실제적으로 TGFβⅡ세포외 도메인/TGFβ리간드 간 결합을 방해할 수 있는지를 경쟁적 ELISA를 통해 확인한 실험결과를 도 2B에 나타내었다.

도 2A에서 확인한 바와 같이, TGFβⅡ세포외 도메인과의 일정 수준 이상의 결합력이 나타나는 클론은 TBR2-1, 2-2, 및 2-3 이외 7개의 클론이 있음을 확인하였다. 다만, 도 2B에서 확인한 바와 같이, TGFβⅡ세포외 도메인과의 일정 수준 이상의 결합력이 나타나더라도, 실제적으로 TGFβⅡ세포외 도메인/TGFβ리간드 간 결합을 유의하게 저해할 수 있는 클론은 TBR2-1, 2-2, 및 2-3인 것을 확인할 수 있었다. 이에, 이후 실시예에서는 TBR2-1, 2-2, 및 2-3 scFv로 이의 결합력 및 실제적인 활성을 확인하는 실험을 수행하였다.

실시예 3. Anti-TGFβⅡ세포외 도메인 scFv 항체 발현 및 정제

3.1 TGFβⅡ세포외 도메인에 대해 선별된 scFv 항체 발현

선별된 TGFβⅡ세포외 도메인에 대한 scFv 양성 단일 콜로니 클론을 암피실린을 함유하는 SB 배지 5 ml에 배양하여 seed culture를 시작하여 밤새 배양 후 암피실린 함유 SB 400 ml 에 옮겨 600 나노미터 파장 흡광도가 0.5 정도 되었을 때, 1 mM IPTG 를 넣어 30℃에서 밤새 배양하여 scFv 단백질을 대장균의 페리플라즘에서 발현시켰다. 다음날 원심 분리하여 수득한 대장균을 1X TES buffer (50 mM 트리스, 1 mM EDTA, 20% 수크로오스, pH 8.0) 에 현탁한 후 0.2 X TES를 1.5배 첨가하여 섞어주고 원심 분리하여 페리플라즘을 추출하였다.

3.2 선별된 scFv 항체의 정제

페리플라즘에서 추출한 scFv 항체에 미리 PBS에 평형시킨 Ni-NTA 비드와 섞어 1시간 동안 냉장에서 교반하여 Ni- 비드에 결합시킨후 친화도 크로마토그래피를 수행하여 결합하지 않은 단백질을 PBS로 충분히 씻어내었다. 5 mM 이미다졸이 함유된 버퍼로 충분히 씻어준 다음 결합한 scFv 항체는 300 mM 이미다졸 버퍼를 이용하여 용출하였다. 용출된 항체는 투석하여 전기이동을 통해 순도를 확인하고 BCA 방법으로 단백질 정량을 하여 정제된 항체양을 기록 후 일정양을 분주하여 냉동 보관하였으며, 상기 정제된 항체를 도 3에 나타내었다.

3.3 정제된 TBR2-1, 2-2, 2-3 scFv 의 실제적인 결합력 확인

상기 실시예 3.2의 페리플라즘에서 추출한 scFv 항체는 상기 패닝 과정에서 확인했던 ELISA 방법과 동일한 방법을 사용하여 정제된 scFv 항체가 실제 TGFβⅡ세포외 도메인에 결합하는지 여부를 확인하는 실험을 수행하였다.

상기 선별 클론 확인에서 서술했던 것과 동일하게, 미리 TGFβⅡ세포외 도메인/Fc 를 코팅한 96 웰 이뮨-플레이트 (NUNC, 3690) 에 4% BSA를 함유한 PBST 용액을 첨가하여 블록킹시킨 후, 상기 라지 스케일에서 정제 분리한 scFv 용액을 25 μl 처리하여 반응시켰다. 이후, HRP 가 연결된 HA 항체를 처리하고, HRP 기질인 TMB 용액 50 μl 를 첨가하여 발색 반응을 확인하였고, TMB 스탑 용액 50 μl 를 처리하여 발색 반응을 멈춘 후, 플레이트 리더를 통해 650 nm 파장에서 발광을 확인하였으며, 이를 도 4에 나타내었다.

도 4에서 확인한 바와 같이, TGFβⅡ세포외 도메인항원에 대해 각 정제된 TBR2-1, 2-2, 2-3 scFv 가 TGFβⅡ세포외 도메인과 우수한 결합력을 가지고 있음을 확인하였다.

TGFβⅡ세포외 도메인/Fc과 결합력을 가지는 scFv 클론을 확인한 뒤, 이들이 실제 TGFβ리간드와 TGFβⅡ가 결합하는 부위를 방해하는지 확인하기 위한 목적으로, ELISA 실험을 진행하였다.

미리 TGFβ리간드를 코팅한 96 웰 이뮨-플레이트 (NUNC, 3690) 에 4% BSA를 함유한 PBST 용액을 첨가하여 상온에서 1시간동안 블로킹한 후, PBST 로 3번 세척하였다. 라지 스케일에서 정제 분리한 scFv 용액을 1X, 1/3X, 1/9X로 희석해 TGFβⅡ세포외 도메인/Fc 와 함께 동시 처리하여 상온에서 1시간이상 반응시켰다. TGFβⅡ세포외 도메인/Fc 의 Fc 태그 부위를 활용해 HRP 가 연결된 Fc 항체(Thermo, #31413) 를 상온에서 1시간 동안 처리하였다. 이후, PBST 용액으로 3번 씻어낸 뒤, HRP 기질인 TMB 용액 50 μl 를 첨가하여 발색 반응을 확인하였고, 이후 TMB 스탑 용액 50 μl 를 처리하여 발색 반응을 멈춘 후, 플레이트 리더를 통해 650 nm 파장에서 그 발광 확인하고, 이를 도 5에 나타내었다.

상기 도 5에 나타난 바와 같이, TBR2-1, TBR2-2, TBR2-3 선별 클론들은 TGFβRⅡ세포외 도메인에 대해 효과적으로 결합할 수 있음을 확인하였다. TBR2-1, TBR2-2, TBR2-3 의 농도가 높아질수록 음성대조군 대비 TGFβ리간드-TGFβⅡ와의 결합을 현저하게 저해하는 것을 확인하였다.

3.4 정제된 TBR2-1, 2-2, 2-3 scFv 의 실제적인 시퀀싱 확인

상기 실시예 3.4에서 확인된 항원 특이적 TBR2-1, TBR2-2, TBR2-3 클론을 암피실린이 함유된 SB 배지 10 ml에 밤새 배양하고 플라스미드 미니프렙 키트를 사용하여 플라스미드 DNA 를 추출하여 시퀀싱 하였다. 시퀀싱한 결과를 Kabat 프로테인 시퀀스 데이터베이스와 IMGT(the international ImMunoGeneTics information system) 분석방법에 근거하여 서열을 분석하였다.

상기 분석에 의하여 확인된 TBR2-1, TBR2-2, TBR2-3의 HCDR 1-3 아미노산 서열을 각각 서열번호 1-9에, TBR2-1, TBR2-2, TBR2-3의 LCDR 1-3 아미노산 서열을 각각 서열번호 1-15에 나타내었다. 그리고, 각각 TBR2-1, TBR2-2, TBR2-3항체의 중쇄 서열을 16-18에, TBR2-1, TBR2-2, TBR2-3경쇄의 서열을 19 및 20에 나타내었다(TBR2-1 및 TBR2-2의 경쇄 아미노산 서열은 동일함). 아울러, 각각 TBR2-1, TBR2-2, TBR2- 항체의 아미노산 서열을 인코딩하는 DNA 서열은 서열번호 21 내지 25 에 나타내었다.

실시예 4. Anti-TGFβⅡ세포외 도메인scFv 항체의 마우스 교차 반응성(cross activity) 확인

상기 실시예 2 및 3에서 선별된 scFv 항체가 마우스의 TGFβⅡ세포외 도메인항원과 반응성이 있는지 판단하기 위하여 ELISA 방법을 활용하여 마우스의 세포외 도메인과 교차 반응성을 확인하였다.

미리 마우스TGFβⅡ세포외 도메인/Fc (R&D systems, Cat. No. 532-R2-050)을 코팅한 96 웰 이뮨-플레이트 (NUNC, 3690) 에 4% BSA를 함유한 PBST 용액을 첨가하여 블로킹시켰다. 이후, 정제 분리한 scFv 용액을 25 μl로 처리하여 반응시킨 후, HRP 가 연결된 HA 항체를 처리하였다. HRP 기질인 TMB 용액 50 μl 를 첨가하여 발색 반응을 확인하였고, 이후 TMB 스탑 용액 50 μl 를 첨가하여 발색 반응을 멈춘 후, 플레이트 리더를 통해 650 nm 파장에서 그 발광을 확인하고, 이를 통한 항체의 교차 반응성을 확인한 결과를 도 6에 나타내었다.

상기 도 6에서 확인한 바와 같이, 서열 TBR2-1 의 경우에는 마우스의 TGFβⅡ세포외 도메인에도 높은 결합력을 나타나는 것을 확인할 수 있어 교차 반응성이 일부 나타나는 것을 확인하였다. 다만, 서열 TBR2-2, TBR2-3 의 경우에는 인간 TGFβⅡ세포외 도메인에는 높은 결합력을 보이는 반면 마우스 TGFβⅡ세포외 도메인에는 상대적으로 낮은 결합력을 보임을 확인하여 교차 반응성이 현저하게 낮은 것을 확인할 수 있었다.

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Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Arg Val Thr Ala Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 19 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence of TBR2-1 and TBR2-2 Light chain variable region <400> 19 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn 20 25 30 Ala Val Ser Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Ala Asn Ser His Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Thr Trp Asp Ser Ser Leu 85 90 95 Ser Gly Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly 100 105 110 <210> 20 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence of TBR2-3 Light chain variable region <400> 20 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Asn Asn 20 25 30 Ser Val Ser Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Ala Asn Ser His Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Thr Trp Asp Ser Ser Leu 85 90 95 Ser Gly Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly 100 105 110 <210> 21 <211> 348 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> nucleotide sequence of TBR2-1 Heavy chain variable region <400> 21 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agttattcta tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcatgg atctcttata atggtggtag taaatattac 180 gctgattctg taaaaggtcg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactgtgc gagaaggatt 300 gcggctttcg actactgggg ccagggtaca ctggtcaccg tgagctca 348 <210> 22 <211> 348 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> nucleotide sequence of TBR2-2 Heavy chain variable region <400> 22 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agttattcta tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcatgg atctcgtata atgatcgcag tgtatattac 180 gctgattctg taaaaggtcg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactgtgc gagaaggatt 300 gcggctttcg actactgggg ccagggtaca ctggtcaccg tgagctca 348 <210> 23 <211> 348 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> nucleotide sequence of TBR2-3 Heavy chain variable region <400> 23 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggcc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc gattattcta tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcatcg atctattatg atagtggtag tatatattac 180 gctgattctg taaaaggtcg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactgtgc gagaagggtt 300 actgcgttcg actactgggg ccagggtaca ctggtcaccg tgagctca 348 <210> 24 <211> 333 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> nucleotide sequence of TBR2-1 and TBR2-2 light chain variable region <400> 24 cagtctgtgc tgactcagcc accctcagcg tctgggaccc ccgggcagag ggtcaccatc 60 tcttgtactg gctcttcatc taatattggc agtaatgctg tctcctggta ccagcagctc 120 ccaggaacgg cccccaaact cctcatctat gctaatagtc atcggccgag cggggtccct 180 gaccgattct ctggctccaa gtctggcacc tcagcctccc tggccatcag tgggctccgg 240 tccgaggatg aggctgatta ttactgtggt acttgggatt ctagcctgag tggttatgtc 300 ttcggcggag gcaccaagct gacggtccta ggc 333 <210> 25 <211> 333 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> nucleotide sequence of TBR2-3 light chain variable region <400> 25 cagtctgtgc tgactcagcc accctcagcg tctgggaccc ccgggcagag ggtcaccatc 60 tcttgtactg gctcttcatc taatattggc aataattctg tctcctggta ccagcagctc 120 ccaggaacgg cccccaaact cctcatctat gctaatagtc atcggccaag cggggtccct 180 gaccgattct ctggctccaa gtctggcacc tcagcctccc tggccatcag tgggctccgg 240 tccgaggatg aggctgatta ttactgtggt acttgggatt ctagcctgag tggttatgtc 300 ttcggcggag gcaccaagct gacggtccta ggc 333 <210> 26 <211> 446 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence of TBR2-1 Heavy chain full-length <400> 26 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ser Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Trp Ile Ser Tyr Asn Gly Gly Ser Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Arg Ile Ala Ala Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125 Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 130 135 140 Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 145 150 155 160 Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 165 170 175 Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 180 185 190 Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr 195 200 205 Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr 210 215 220 Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe 225 230 235 240 Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 245 250 255 Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 260 265 270 Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 275 280 285 Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val 290 295 300 Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 305 310 315 320 Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser 325 330 335 Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 340 345 350 Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 355 360 365 Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 370 375 380 Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 385 390 395 400 Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 405 410 415 Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 420 425 430 Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 27 <211> 448 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence of TBR2-2 Heavy chain full-length <400> 27 Ser Ala Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro 1 5 10 15 Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser 20 25 30 Ser Tyr Ser Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu 35 40 45 Trp Val Ser Trp Ile Ser Tyr Asn Asp Arg Ser Val Tyr Tyr Ala Asp 50 55 60 Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr 65 70 75 80 Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr 85 90 95 Tyr Cys Ala Arg Arg Ile Ala Ala Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro 115 120 125 Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly 130 135 140 Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn 145 150 155 160 Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln 165 170 175 Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser 180 185 190 Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser 195 200 205 Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr 210 215 220 His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser 225 230 235 240 Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg 245 250 255 Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro 260 265 270 Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala 275 280 285 Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val 290 295 300 Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr 305 310 315 320 Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr 325 330 335 Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu 340 345 350 Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys 355 360 365 Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser 370 375 380 Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp 385 390 395 400 Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser 405 410 415 Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala 420 425 430 Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 28 <211> 448 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence of TBR2-3 Heavy chain full-length <400> 28 Ser Ala Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro 1 5 10 15 Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser 20 25 30 Asp Tyr Ser Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu 35 40 45 Trp Val Ser Ser Ile Tyr Tyr Asp Ser Gly Ser Ile Tyr Tyr Ala Asp 50 55 60 Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr 65 70 75 80 Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr 85 90 95 Tyr Cys Ala Arg Arg Val Thr Ala Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro 115 120 125 Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly 130 135 140 Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn 145 150 155 160 Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln 165 170 175 Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser 180 185 190 Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser 195 200 205 Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr 210 215 220 His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser 225 230 235 240 Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg 245 250 255 Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro 260 265 270 Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala 275 280 285 Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val 290 295 300 Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr 305 310 315 320 Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr 325 330 335 Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu 340 345 350 Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys 355 360 365 Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser 370 375 380 Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp 385 390 395 400 Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser 405 410 415 Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala 420 425 430 Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 29 <211> 216 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence of TBR2-1 and TBR2-2 Light chain full-length <400> 29 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn 20 25 30 Ala Val Ser Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Ala Asn Ser His Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Thr Trp Asp Ser Ser Leu 85 90 95 Ser Gly Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln 100 105 110 Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu 115 120 125 Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr 130 135 140 Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys 145 150 155 160 Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr 165 170 175 Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His 180 185 190 Lys Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys 195 200 205 Thr Val Ala Pro Ala Glu Cys Ser 210 215 <210> 30 <211> 218 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence of TBR2-3 Light chain full-length <400> 30 Ser Ala Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro 1 5 10 15 Gly Gln Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly 20 25 30 Asn Asn Ser Val Ser Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys 35 40 45 Leu Leu Ile Tyr Ala Asn Ser His Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg 50 55 60 Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly 65 70 75 80 Leu Arg Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Thr Trp Asp Ser 85 90 95 Ser Leu Ser Gly Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 110 Gly Gln Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser 115 120 125 Glu Glu Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp 130 135 140 Phe Tyr Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro 145 150 155 160 Val Lys Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn 165 170 175 Lys Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys 180 185 190 Ser His Lys Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val 195 200 205 Glu Lys Thr Val Ala Pro Ala Glu Cys Ser 210 215

Claims (13)

1. 서열번호 1, 4, 또는 7의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정영역(Heavy chian complementarity determining region: HCDR) 1, 서열번호 2, 5, 또는 8의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2, 및 서열번호 3, 6, 또는 9의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3;을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및
   서열번호 10, 또는 13의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정영역(Light chian complementarity determining region, LCDR) 1, 서열번호 11, 또는 14의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2, 및 서열번호 12, 또는 15의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3;을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);을 포함하는,
   TGF-β 수용체 (TGF-β receptor)에 특이적으로 결합하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편.
   
2. 청구항 1에 있어서, 하기 조합 a), b) 및 c) 중 하나의 중쇄 상보성 결정영역 및 경쇄 상보성 결정영역을 포함하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편:
   a) 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열로 이루어지는 HCDR1, 서열번호 2로 표시되는 아미노산 서열로 이루어지는 HCDR2 및 서열번호 3으로 표시되는 아미노산 서열로 이루어지는 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변영역; 및 서열번호 10으로 표시되는 아미노산 서열로 이루어지는 LCDR1, 서열번호 11로 표시되는 아미노산 서열로 이루어지는 LCDR2, 및 서열번호 12로 표시되는 아미노산 서열로 이루어지는 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변영역;
   b) 서열번호 4로 표시되는 아미노산 서열로 이루어지는 HCDR1, 서열번호 5로 표시되는 아미노산 서열로 이루어지는 HCDR2, 및 서열번호 6으로 표시되는 아미노산 서열로 이루어지는 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변영역; 및 서열번호 10로 표시되는 아미노산 서열로 이루어지는 LCDR1, 서열번호 11로 표시되는 아미노산 서열로 이루어지는 LCDR2, 및 서열번호 12로 표시되는 아미노산 서열로 이루어지는 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변영역; 및
   c) 서열번호 7로 표시되는 아미노산 서열로 이루어지는 HCDR1, 서열번호 8로 표시되는 아미노산 서열로 이루어지는 HCDR2, 및 서열번호 9로 표시되는 아미노산 서열로 이루어지는 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변영역; 및 서열번호 13으로 표시되는 아미노산 서열로 이루어지는 LCDR1, 서열번호 14로 표시되는 아미노산 서열로 이루어지는 LCDR2, 및 서열번호 15로 표시되는 아미노산 서열로 이루어지는 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변영역.
   
3. 청구항 1에 있어서, 상기 중쇄 영역은 서열번호 16, 17, 또는 18로 표시되는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 경쇄 영역은 서열번호 19, 또는 20으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 것인 항체 또는 그의 항원 결합 단편.
   
4. 청구항 1에 있어서, 상기 중쇄 가변영역은 서열번호 21, 22 또는 23으로 표시되는 폴리뉴클레오티드 서열로부터 코딩되고, 상기 경쇄 가변영역은 서열번호 24 또는 25로 표시되는 폴리뉴클레오티드 서열로부터 코딩되는 것인 항체 또는 그의 항원 결합 단편.
   
5. 청구항 1에 있어서, 상기 TGF-β 수용체는 Ⅱ형 수용체인 것인 항체 또는 그의 항원 결합 단편.
   
6. 청구항 1 내지 4 중 어느 하나에 있어서, 상기 항체는 단일클론 항체 또는 폴리클론 항체인 것인 항체 또는 그의 항원 결합 단편.
   
7. 서열번호 16, 17, 또는 18로 표시되는 중쇄 영역 아미노산 및 서열번호 19, 또는 20으로 표시되는 경쇄 영역 아미노산을 포함하는 아미노산 서열을 코딩하는 단리된 핵산을 포함하는, TGF-β 수용체 (TGF-β receptor)에 특이적으로 결합하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편 생산용 재조합 발현 벡터.
   
8. 청구항 7의 재조합 발현 벡터로 시험관(in vitro) 내 형질전환된 숙주세포.
   
9. 청구항 8에 있어서, 상기 숙주세포는 박테리아, 효모, CHO 세포, F2N 세포, HEK293 세포 및 항체 생산 하이브리도마세포로 이루어지는 군으로부터 선택된 어느 하나인 것을 특징으로 하는 숙주세포.
   
10. 청구항 7의 발현 벡터를 이용하여 시험관(in vitro) 내에서 숙주세포에 감염시키는 단계를 포함하는, TGF-β 수용체 (TGF-β receptor)에 특이적으로 결합하는 항체의 생산방법.
    
11. 면역 세포에 발현되는 청구항 1 내지 4 중 어느 한 항의 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 포함하는 키메라 항원 수용체에 있어서, 상기 키메라 항원 수용체가 순차적으로 연결된 청구항 1 내지 4 중 어느 한 항의 항체 또는 그의 항원 결합 단편, 세포막 관통 영역 및 세포 내 신호 영역을 포함하는 것인 키메라 항원 수용체.
    
12. 청구항 11에 있어서, 상기 면역 세포는 T세포, NK세포 또는 NKT세포인 것인 키메라 항원 수용체.
    
13. 청구항 11의 키메라 항원 수용체를 발현하는 유전적으로 변형된 면역 세포.

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