KR20210079278A - 바이러스 감염의 치료를 위한 조성물 및 방법 - Google Patents

바이러스 감염의 치료를 위한 조성물 및 방법 Download PDF

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제임스 엠. 발코벡
다니엘 씨. 벤슨
앨런 보카르트
토마스 피. 브래디
지-용 첸
제이슨 코울
쿠엔-쿠엔 터이 도
시몬 도에르만
왕롱 지앙
탄 람
알랜 논코비치
레슬리 더블류. 타리
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시다라 세라퓨틱스, 인코포레이티드
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Abstract

바이러스 감염의 치료를 위한 조성물 및 방법은 Fc 단량체, Fc 도메인 및 Fc-결합 펩타이드, 알부민 단백질 또는 알부민-결합 펩타이드에 연결된 바이러스 뉴라미니다제의 저해제(예를 들어, 자나미비어, 페라미비어 또는 이의 유사체)를 함유하는 접합체를 포함한다. 특히, 접합체는 바이러스 감염(예를 들어, 인플루엔자 바이러스 감염)의 치료에 사용될 수 있다.

Description

바이러스 감염의 치료를 위한 조성물 및 방법
인플루엔자를 위한 신규한 항바이러스 치료제에 대한 요구는 의료 분야에서 의미있고, 특히 중요하다. 인플루엔자 또는 독감의 원인인 인플루엔자 바이러스는 매년 3 내지 5백만 건의 중증 질환을 유발하며, 전 세계적으로 대략 50만명이 사망한다. 대부분의 사람들은 약 1 내지 2주 내에 인플루엔자에서 완전히 회복되지만, 나머지 사람들은 폐렴과 같은 생명을 위협하는 합병증이 발병한다. 따라서, 인플루엔자는 특히 젊은이, 노인 또는 만성 질환자에게 치명적일 수 있다. 진행성 HIV 감염을 갖는 사람 또는 이식 장기 거부를 방지하기 위해 면역 체계가 의학적으로 억제된 이식 환자와 같은 면역 체계가 약하거나 손상된 사람들은 인플루엔자와 관련된 합병증에 대한 위험이 더 크다. 임산부 및 어린 아이들도 합병증의 위험이 높다.
인플루엔자에 대한 항바이러스 치료제의 개발은 지속적인 도전이었다. 몇몇 인플루엔자 항바이러스제가 임상에서 사용하도록 승인되어 있고, 이러한 작용제는 백신을 준비하는 동안 질환의 중증도를 조절하고, 전염병을 통제하는데 중요한 역할을 한다. 그러나, 가장 일반적으로 사용되는 저해제에 대해서 약물-내성 균주가 출현하였다.
인플루엔자 항바이러스제는 주로 인플루엔자 바이러스 입자의 표면 상에 존재하는 단백질을 표적으로 한다. 인플루엔자 바이러스의 외피는 바이러스 감염 및 확산에 중요한 역할을 하는 2개의 면역우세 당단백질인 헤마글루티닌 및 뉴라미니다제를 함유한다. 헤마글루티닌은 표면 시알산과의 상호작용을 통해 바이러스가 숙주 세포에 부착되어 침입을 개시한다. 뉴라미니다제는 감염된 숙주 세포의 표면 상의 글리칸 구조로부터 시알산(말단 뉴라민산 잔기)을 절단하여, 자손 바이러스를 방출하고 숙주 세포로부터 감염되지 않은 주변 세포로 바이러스가 확산되도록 하는 엑소-글리코시다제 효소이다. 따라서 뉴라미니다제의 저해는 항바이러스 약물의 약리학적 표적 역할을 한다. 오셀타미비어(TamifluTM), 자나미비어(RelenzaTM) 및 페라미비어(RapivabTM)를 비롯한 바이러스 확산을 감소시키는데 사용되는 바이러스 뉴라미니다제 저해제가 식별되어 있다.
그러나, 이식 수혜자의 인플루엔자는 장기간 바이러스를 방출하여, 약물 내성 균주가 발생할 가능성을 증가시키는 것을 특징으로 한다. 인플루엔자 치료를 위한 새롭고, 보다 효과적인 요법이 필요하다.
본 개시내용은 바이러스 성장을 저해하기 위한 접합체, 조성물 및 방법, 및 바이러스 감염의 치료 방법에 관한 것이다. 특히, 이러한 접합체는 Fc 단량체, Fc 도메인, Fc-결합 펩타이드, 알부민 단백질 또는 알부민 단백질-결합 펩타이드에 접합된 인플루엔자 바이러스 뉴라미니다제를 저해하는 모이어티의 단량체 또는 이랑체(예를 들어, 자나미비어, 페라미비어 또는 이의 유사체)를 함유한다. 이러한 접합체에서 뉴라미니다제 저해제(예를 들어, 자나미비어, 페라미비어 또는 이의 유사체)는 바이러스 입자의 표면 상의 뉴라미니다제를 표적으로 한다. 접합체에서 Fc 단량체 또는 Fc 도메인은 면역 세포, 예를 들어, 호중구 상의 FcγR(예를 들어, FcRn, FcγRI, FcγRIIa, FcγRIIc, FcγRIIIa 및 FcγRIIIb)에 결합하여, 식세포작용 및 효과기 기능, 예컨대, 항체-의존적 세포-매개된 세포독성(ADCC)을 활성화시킴으로써, 면역 세포에 의한 바이러스 입자의 섭취(engulfment) 및 파괴로 이어지고, 접합체의 항바이러스 활성을 추가로 향상시킨다. 알부민 또는 알부민-결합 펩타이드는 예를 들어, 재순환 신생아 Fc 수용체에 대한 알부민의 결합에 의해서, 접합체의 반감기를 연장시킬 수 있다. 이러한 조성물은 바이러스 성장의 저해 방법 및 바이러스 감염, 예컨대, 인플루엔자 바이러스 A, 인플루엔자 바이러스 B 및 인플루엔자 바이러스 C에 의해서 유발되는 것의 치료 방법에서 유용하다.
일 양상에서, 본 개시내용은 하기 화학식 (1)로 기재되는 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 특징으로 한다:
Figure pct00001
식 중, 각각의 A1 및 각각의 A2는 하기 화학식 (A-I) 내지 (A-XII) 중 어느 하나로부터 독립적으로 선택되되:
Figure pct00002
식 중, R1은 -OH, -NH2, -NHC(=NH)NH2 및 -NHC(=NH)NHR6으로부터 선택되며; R2 및 R3은 -H, -OH, -F, -Cl 및 -Br로부터 각각 독립적으로 선택되고; R4는 -CO2H, -P(=O)(OH)2, -SO3H로부터 선택되며; R5는 -COCH3, -COCF3, -SO2CH3로부터 선택되고; X는 -O- 및 -S-로부터 선택되며; Y는 하기로부터 선택되며:
Figure pct00003
R6은 하기로부터 선택되고:
Figure pct00004
R7은 H, C1-C20 알킬, C3-C20 사이클로알킬, C3-C20 헤테로사이클로알킬; C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되고; R8은 C3-C20 헤테로사이클로알킬, C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되며; 각각의 E는 Fc 도메인 단량체(예를 들어, 서열번호 1 내지 68 중 어느 하나의 서열을 갖는 Fc 도메인 단량체)를 포함하고; 각각의 A1-L-A2에서 L은 각각의 E 내의 힌지 시스테인의 황 원자 및 A1 및 A2 각각에 공유 부착된 링커이며; T는 1 내지 20(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20)의 정수이고, 2개의 E에 연결된 2개의 물결선은, 각각의 A1-L-A2가 (예를 들어, 공유 결합 또는 링커에 의해서) 2개의 E 내의 2개의 힌지 시스테인의 한 쌍의 황 원자에 공유 부착된다는 것을 나타낸다. T가 1보다 큰 경우(예를 들어, T가 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20)인 경우, 각각의 A1-L-A2는 독립적으로 선택될 수 있다(예를 들어, 본 명세서에 기재된 A1-L-A2 구조 중 임의의 것으로부터 독립적으로 선택될 수 있다).
또 다른 양상에서, 본 개시내용은 하기 화학식 (1)로 기재되는 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 특징으로 한다:
Figure pct00005
식 중, 각각의 A1 및 각각의 A2는 하기 화학식 (A-I) 내지 (A-V) 중 어느 하나로부터 독립적으로 선택되되:
Figure pct00006
식 중, R1은 -OH, -NH2, -NHC(=NH)NH2 및 -NHC(=NH)NHR6으로부터 선택되며; R2 및 R3은 -H, -OH, -F, -Cl 및 -Br로부터 각각 독립적으로 선택되고; R4는 -CO2H, -P(=O)(OH)2, -SO3H로부터 선택되며; R5는 -COCH3, -COCF3, -SO2CH3로부터 선택되고; X는 -O- 및 -S-로부터 선택되며; Y는 하기로부터 선택되고:
Figure pct00007
Figure pct00008
R6은 하기로부터 선택되며:
Figure pct00009
R7은 H, C1-C20 알킬, C3-C20 사이클로알킬, C3-C20 헤테로사이클로알킬; C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되고; R8은 C3-C20 헤테로사이클로알킬, C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되며; 각각의 E는 Fc 도메인 단량체(예를 들어, 서열번호 1 내지 68 중 어느 하나의 서열을 갖는 Fc 도메인 단량체)를 포함하고; 각각의 A1-L-A2에서 L은 각각의 E 내의 힌지 시스테인의 황 원자 및 A1 및 A2 각각에 공유 부착된 링커이며; T는 1 내지 20(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20)의 정수이고, 2개의 E에 연결된 2개의 물결선은, 각각의 A1-L-A2가 (예를 들어, 공유 결합 또는 링커에 의해서) 2개의 E 내의 2개의 힌지 시스테인의 한 쌍의 황 원자에 공유 부착된다는 것을 나타낸다. T가 1보다 큰 경우(예를 들어, T가 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20)인 경우, 각각의 A1-L-A2는 독립적으로 선택될 수 있다(예를 들어, 본 명세서에 기재된 A1-L-A2 구조 중 임의의 것으로부터 독립적으로 선택될 수 있다).
또 다른 양상에서, 본 개시내용은 하기 화학식 (1)로 기재되는 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 특징으로 한다:
Figure pct00010
식 중, 각각의 A1 및 각각의 A2는 하기 화학식 (A-VI) 내지 (A-IX) 중 어느 하나로부터 독립적으로 선택되되:
Figure pct00011
식 중, R1은 -OH, -NH2, -NHC(=NH)NH2 및 -NHC(=NH)NHR6으로부터 선택되며; R2 및 R3은 -H, -OH, -F, -Cl 및 -Br로부터 각각 독립적으로 선택되고; R4는 -CO2H, -P(=O)(OH)2, -SO3H로부터 선택되며; R5는 -COCH3, -COCF3, -SO2CH3로부터 선택되고; X는 -O- 및 -S-로부터 선택되며; Y는 하기로부터 선택되고:
Figure pct00012
R6은 하기로부터 선택되며:
Figure pct00013
R7은 H, C1-C20 알킬, C3-C20 사이클로알킬, C3-C20 헤테로사이클로알킬; C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되고; R8은 C3-C20 헤테로사이클로알킬, C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되며; 각각의 E는 Fc 도메인 단량체(예를 들어, 서열번호 1 내지 68 중 어느 하나의 서열을 갖는 Fc 도메인 단량체)를 포함하고; 각각의 A1-L-A2에서 L은 각각의 E 내의 힌지 시스테인의 황 원자 및 A1 및 A2 각각에 공유 부착된 링커이며; T는 1 내지 20(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20)의 정수이고, 2개의 E에 연결된 2개의 물결선은, 각각의 A1-L-A2가 (예를 들어, 공유 결합 또는 링커에 의해서) 2개의 E 내의 2개의 힌지 시스테인의 한 쌍의 황 원자에 공유 부착된다는 것을 나타낸다. T가 1보다 큰 경우(예를 들어, T가 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20)인 경우, 각각의 A1-L-A2는 독립적으로 선택될 수 있다(예를 들어, 본 명세서에 기재된 A1-L-A2 구조 중 임의의 것으로부터 독립적으로 선택될 수 있다).
또 다른 양상에서, 본 발명은 하기 화학식 (2)로 기재되는 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 특징으로 한다:
Figure pct00014
식 중, 각각의 A1은 하기 화학식 (A-I) 내지 (A-XII) 중 어느 하나로부터 독립적으로 선택되되:
Figure pct00015
식 중, R1은 -OH, -NH2, -NHC(=NH)NH2 및 -NHC(=NH)NHR6으로부터 선택되며; R2 및 R3은 -H, -OH, -F, -Cl 및 -Br로부터 각각 독립적으로 선택되고; R4는 -CO2H, -P(=O)(OH)2, -SO3H로부터 선택되며; R5는 -COCH3, -COCF3, -SO2CH3로부터 선택되고; X는 -O- 및 -S-로부터 선택되며; Y는 하기로부터 선택되고:
Figure pct00016
Figure pct00017
R6은 하기로부터 선택되며:
Figure pct00018
R7은 H, C1-C20 알킬, C3-C20 사이클로알킬, C3-C20 헤테로사이클로알킬; C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되고; R8은 C3-C20 헤테로사이클로알킬, C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되며;
각각의 E는 Fc 도메인 단량체(예를 들어, 서열번호 1 내지 68 중 어느 하나의 서열을 갖는 Fc 도메인 단량체)를 포함하고; 각각의 L-A1에서 L은 E 내의 힌지 시스테인 내의 황 원자 및 A1에 공유 부착된 링커이며; T는 1 내지 20(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20)의 정수이고, 2개의 황 원자에 연결된 2개의 물결선은, 각각의 L-A1이 (예를 들어, 공유 결합 또는 링커에 의해서) 2개의 E 내의 2개의 힌지 시스테인의 한 상의 황 원자에 공유 부착된다는 것을 나타낸다. T가 1 초과인 경우(예를 들어, T가 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20)인 경우, 각각의 A1은 화학식 (A-I) 내지 (A-XII) 중 어느 하나로부터 독립적으로 선택될 수 있다.
또 다른 양상에서, 본 발명은 하기 화학식 (2)로 기재되는 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 특징으로 한다:
Figure pct00019
식 중, 각각의 A1은 하기 화학식 (A-I) 내지 (A-V) 중 어느 하나로부터 독립적으로 선택되되:
Figure pct00020
식 중, R1은 -OH, -NH2, -NHC(=NH)NH2 및 -NHC(=NH)NHR6으로부터 선택되며; R2 및 R3은 -H, -OH, -F, -Cl 및 -Br로부터 각각 독립적으로 선택되고; R4는 -CO2H, -P(=O)(OH)2, -SO3H로부터 선택되며; R5는 -COCH3, -COCF3, -SO2CH3로부터 선택되고; X는 -O- 및 -S-로부터 선택되며; Y는 하기로부터 선택되고:
Figure pct00021
R6은 하기로부터 선택되며:
Figure pct00022
R7은 H, C1-C20 알킬, C3-C20 사이클로알킬, C3-C20 헤테로사이클로알킬; C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되고; R8은 C3-C20 헤테로사이클로알킬, C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되며;
각각의 E는 Fc 도메인 단량체(예를 들어, 서열번호 1 내지 68 중 어느 하나의 서열을 갖는 Fc 도메인 단량체)를 포함하고; 각각의 L-A1에서 L은 E 내의 힌지 시스테인 내의 황 원자 및 A1에 공유 부착된 링커이며; T는 1 내지 20(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20)의 정수이고, 2개의 황 원자에 연결된 2개의 물결선은, 각각의 L-A1이 (예를 들어, 공유 결합 또는 링커에 의해서) 2개의 E 내의 2개의 힌지 시스테인의 한 상의 황 원자에 공유 부착된다는 것을 나타낸다. T가 1 초과인 경우(예를 들어, T가 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20)인 경우, 각각의 A1은 화학식 (A-I) 내지 (A-V) 중 어느 하나로부터 독립적으로 선택될 수 있다.
또 다른 양상에서, 본 발명은 하기 화학식 (2)로 기재되는 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 특징으로 한다:
Figure pct00023
식 중, 각각의 A1은 하기 화학식 (A-VI) 내지 (A-IX) 중 어느 하나로부터 독립적으로 선택되되:
Figure pct00024
식 중, R1은 -OH, -NH2, -NHC(=NH)NH2 및 -NHC(=NH)NHR6으로부터 선택되며; R2 및 R3은 -H, -OH, -F, -Cl 및 -Br로부터 각각 독립적으로 선택되고; R4는 -CO2H, -P(=O)(OH)2, -SO3H로부터 선택되며; R5는 -COCH3, -COCF3, -SO2CH3로부터 선택되고; X는 -O- 및 -S-로부터 선택되며; Y는 하기로부터 선택되고:
Figure pct00025
R6은 하기로부터 선택되며:
Figure pct00026
Figure pct00027
Figure pct00028
R7은 H, C1-C20 알킬, C3-C20 사이클로알킬, C3-C20 헤테로사이클로알킬; C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되고; R8은 C3-C20 헤테로사이클로알킬, C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되며;
각각의 E는 Fc 도메인 단량체(예를 들어, 서열번호 1 내지 68 중 어느 하나의 서열을 갖는 Fc 도메인 단량체)를 포함하고; 각각의 L-A1에서 L은 E 내의 힌지 시스테인 내의 황 원자 및 A1에 공유 부착된 링커이며; T는 1 내지 20(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20)의 정수이고, 2개의 황 원자에 연결된 2개의 물결선은, 각각의 L-A1이 (예를 들어, 공유 결합 또는 링커에 의해서) 2개의 E 내의 2개의 힌지 시스테인의 한 상의 황 원자에 공유 부착된다는 것을 나타낸다. T가 1 초과인 경우(예를 들어, T가 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20)인 경우, 각각의 A1은 화학식 (A-VI) 내지 (A-IX) 중 어느 하나로부터 독립적으로 선택될 수 있다.
상기 실시혀애 중 임의의 것의 일부 실시형태에서, 각각의 E는 서열번호 1 내지 68 중 어느 하나의 서열을 갖는 Fc 도메인 단량체를 포함한다.
일부 실시형태에서, 각각의 E는 하기의 서열을 포함한다:
MVRSDKTHTCPPCPPC*KC*PAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKHHHHHH (서열번호 10).
일부 실시형태에서, 각각의 E는 하기의 서열을 포함한다:
MVRSDKTHTCPPCPPC*KC*PAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (서열번호 11).
일부 실시형태에서, 황 원자의 쌍 중 적어도 하나는 서열번호 10 또는 서열번호 11의 힌지 시스테인, 즉, 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys10, Cys13, Cys16 또는 Cys18에 상응하는 황 원자(힌지 시스테인의 황 원자)이다. 일부 실시형태에서, 황 원자의 쌍은 서열번호 10 또는 서열번호 11 내의 Cys10과 Cys13, 서열번호 10 또는 서열번호 11 내의 Cys10과 Cys16, 서열번호 10 또는 서열번호 11 내의 Cys 30과 Cys18, 서열번호 10 또는 서열번호 11 내의 Cys13과 Cys 36, 서열번호 10 또는 서열번호 11 내의 Cys13과 Cys 38 및/또는 서열번호 10 또는 서열번호 11 내의 Cys 36과 Cys 38에 상응하는 황 원자(이의 황 원자)이다.
일부 실시형태에서, T가 2인 경우, 황 원자의 쌍은 서열번호 10 또는 서열번호 11 내의 Cys10과 Cys13 또는 서열번호 10 또는 서열번호 11 내의 Cys 36과 Cys 38(예를 들어, 이에 상응하는 황 원자)이다.
일부 실시형태에서, 황 원자의 쌍은 각각의 E로부터의 시스테인의 1개의 황 원자를 포함하고, 즉, L-A는 이것이 부착되는 황 원자와 함께 2개의 Fc 도메인(예를 들어, 서열번호 10 또는 서열번호 11의 서열을 포함하는 2개의 Fc 도메인) 사이에 브리지를 형성한다. 일부 실시형태에서, 황 원자의 쌍은 하나의 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys10에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자) 및 또 다른 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys10에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자)이다. 일부 실시형태에서, 황 원자의 쌍은 하나의 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys13에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자) 및 또 다른 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys13에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자)이다. 일부 실시형태에서, 황 원자의 쌍은 하나의 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys16에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자) 및 또 다른 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys16에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자)이다. 일부 실시형태에서, 황 원자의 쌍은 하나의 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys18에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자) 및 또 다른 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys18에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자)이다.
일부 실시형태에서, T가 2인 경우, 황 원자의 쌍은 하나의 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys10에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자) 및 또 다른 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys10에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자) 및 하나의 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys13에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자) 및 또 다른 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys13에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자)이다. 일부 실시형태에서, T가 2인 경우, 황 원자의 쌍은 하나의 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys10에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자) 및 또 다른 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys10에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자) 및 하나의 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys16에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자) 및 또 다른 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys16에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자)이다. 일부 실시형태에서, T가 2인 경우, 황 원자의 쌍은 하나의 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys10에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자) 및 또 다른 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys10에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자) 및 하나의 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys18에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자) 및 또 다른 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys18에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자)이다.
일부 실시형태에서, T가 2인 경우, 황 원자의 쌍은 하나의 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys13에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자) 및 또 다른 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys13에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자) 및 하나의 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys16에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자) 및 또 다른 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys16에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자)이다. 일부 실시형태에서, T가 2인 경우, 황 원자의 쌍은 하나의 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys13에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자) 및 또 다른 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys13에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자) 및 하나의 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys18에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자) 및 또 다른 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys18에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자)이다.
일부 실시형태에서, T가 2인 경우, 황 원자의 쌍은 하나의 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys16에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자) 및 또 다른 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys16에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자) 및 하나의 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys18에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자) 및 또 다른 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys18에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자)이다.
일부 실시형태에서, T가 3인 경우, 황 원자의 쌍은 하나의 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys10에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자) 및 또 다른 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys10에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자); 하나의 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys13에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자) 및 또 다른 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys13에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자) 및 하나의 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys16에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자) 및 또 다른 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys16에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자)이다. 일부 실시형태에서, T가 3인 경우, 황 원자의 쌍은 하나의 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys10에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자) 및 또 다른 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys10에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자); 하나의 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys13에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자) 및 또 다른 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys13에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자) 및 하나의 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys18에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자) 및 또 다른 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys18에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자)이다. 일부 실시형태에서, T가 3인 경우, 황 원자의 쌍은 하나의 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys10에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자) 및 또 다른 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys10에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자); 하나의 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys18에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자) 및 또 다른 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys18에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자) 및 하나의 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys16에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자) 및 또 다른 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys16에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자)이다. 일부 실시형태에서, T가 3인 경우, 황 원자의 쌍은 하나의 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys13에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자) 및 또 다른 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys13에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자); 하나의 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys18에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자) 및 또 다른 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys18에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자) 및 하나의 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys16에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자) 및 또 다른 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys16에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자)이다.
일부 실시형태에서, T가 3인 경우, 황 원자의 쌍은 하나의 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys10에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자) 및 또 다른 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys10에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자); 하나의 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys13에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자) 및 또 다른 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys13에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자); 하나의 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys16에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자) 및 또 다른 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys16에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자) 및 하나의 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys18에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자) 및 또 다른 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys18에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자)이다.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기의 구조를 갖는다:
Figure pct00029
식 중, a, b, c 및 d 각각은 독립적으로, 0 또는 1이고, a, b, c 또는 d가 0인 경우, 2개의 황 원자는 다이설파이드 결합을 형성한다.
일부 실시형태에서, a는 1이고, b, c 및 d는 0이다. 일부 실시형태에서, a 및 b는 1이고, c 및 d는 0이다. 일부 실시형태에서, a 및 c는 1이고, b 및 d는 0이다. 일부 실시형태에서, a 및 d는 1이고, b 및 c는 0이다. 일부 실시형태에서, a, b 및 c는 1이고, d는 0이다. 일부 실시형태에서, a, b 및 d는 1이고, c는 0이다. 일부 실시형태에서, a, c 및 d는 1이고, b는 0이다. 일부 실시형태에서, b 및 c는 1이고, a 및 d는 0이다. 일부 실시형태에서, b 및 d는 1이고, a 및 c는 0이다. 일부 실시형태에서, b, c 및 d는 1이고, a는 0이다. 일부 실시형태에서, c 및 d는 1이고, a 및 b는 0이다. 일부 실시형태에서, a, b, c 및 d는 1이다.
일부 실시형태에서, 각각의 E는 하기의 서열을 포함한다:
MVRSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (서열번호 4).
일부 실시형태에서, 각각의 E는 하기의 서열을 포함한다:
MVRSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLYITREPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (서열번호 33).
일부 실시형태에서, 황 원자의 쌍 중 적어도 하나는 서열번호 4 또는 서열번호 33의 힌지 시스테인, 즉, Cys10 및/또는 Cys13에 상응하는 황 원자(이의 황 원자)이다. 일부 실시형태에서, 황 원자의 쌍은 서열번호 4 또는 서열번호 33 내의 Cys10 및 Cys13에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자)이다.
일부 실시형태에서, 황 원자의 쌍은 각각의 E로부터의 시스테인의 1개의 황 원자를 포함하고, 즉, L-A는 이것이 부착되는 황 원자와 함께 2개의 Fc 도메인(예를 들어, 서열번호 4 또는 서열번호 33의 서열을 포함하는 2개의 Fc 도메인) 사이에 브리지를 형성한다. 일부 실시형태에서, 황 원자의 쌍은 하나의 E로부터의 서열번호 4 또는 서열번호 33의 Cys10에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자) 및 또 다른 E로부터의 서열번호 4 또는 서열번호 33의 Cys10에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자)이다. 일부 실시형태에서, 황 원자의 쌍은 하나의 E로부터의 서열번호 4 또는 서열번호 33의 Cys13에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자) 및 또 다른 E로부터의 서열번호 4 또는 서열번호 33의 Cys13에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자)이다. 일부 실시형태에서, T가 2인 경우, 황 원자의 쌍은 하나의 E로부터의 서열번호 4 또는 서열번호 33의 Cys10에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자) 및 또 다른 E로부터의 서열번호 4 또는 서열번호 33의 Cys10에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자) 및 하나의 E로부터의 서열번호 4 또는 서열번호 33의 Cys13에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자) 및 또 다른 E로부터의 서열번호 4 또는 서열번호 33의 Cys13에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자)이다.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기의 구조를 갖는다:
Figure pct00030
식 중, a 및 b 각각은 독립적으로, 0 또는 1이고, a 또는 b가 0인 경우, 2개의 황 원자는 다이설파이드 결합을 형성한다. 일부 실시형태에서, a는 1이고, b는 0이다. 일부 실시형태에서, a는 0이고, b는 1이다. 일부 실시형태에서, a 및 b는 1이다.
일부 실시형태에서, 각각의 E는 하기의 서열을 포함한다:
MVRSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKHHHHHH (서열번호 8).
일부 실시형태에서, 황 원자의 쌍 중 적어도 하나는 서열번호 8의 힌지 시스테인, 즉, Cys10 및/또는 Cys13에 상응하는 황 원자(이의 황 원자)이다. 일부 실시형태에서, 황 원자의 쌍은 서열번호 8 내의 Cys10 및 Cys13에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자)이다.
일부 실시형태에서, 황 원자의 쌍은 각각의 E로부터의 시스테인의 1개의 황 원자를 포함하고, 즉, L-A는 이것이 부착되는 황 원자와 함께 2개의 Fc 도메인(예를 들어, 서열번호 8의 서열을 포함하는 2개의 Fc 도메인) 사이에 브리지를 형성한다. 일부 실시형태에서, 황 원자의 쌍은 하나의 E로부터의 서열번호 8의 Cys10에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자) 및 또 다른 E로부터의 서열번호 8의 Cys10에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자)이다. 일부 실시형태에서, 황 원자의 쌍은 하나의 E로부터의 서열번호 8의 Cys13에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자) 및 또 다른 E로부터의 서열번호 8의 Cys13에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자)이다. 일부 실시형태에서, T가 2인 경우, 황 원자의 쌍은 하나의 E로부터의 서열번호 8의 Cys10에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자) 및 또 다른 E로부터의 서열번호 8의 Cys10에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자) 및 하나의 E로부터의 서열번호 8의 Cys13에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자) 및 또 다른 E로부터의 서열번호 8의 Cys13에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자)이다.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기의 구조를 갖는다:
Figure pct00031
식 중, a 및 b 각각은 독립적으로, 0 또는 1이고, a 또는 b가 0인 경우, 2개의 황 원자는 다이설파이드 결합을 형성한다. 일부 실시형태에서, a는 1이고, b는 0이다. 일부 실시형태에서, a는 0이고, b는 1이다. 일부 실시형태에서, a 및 b는 1이다.
또 다른 양상에서, 본 발명은 또한 이전 양상 중 임의의 것에 기재된 접합체의 집단을 특징으로 하며, 여기서 T의 평균값은 1 내지 20이다(예를 들어, T의 평균값은 1 내지 2, 1 내지 3, 1 내지 4, 1 내지 5, 5 내지 10, 10 내지 15 또는 15 내지 20이다). 일부 실시형태에서, T의 평균값은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20이다.
또 다른 양상에서, 본 발명은 하기 화학식 (3)으로 기재되는 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 특징으로 한다:
Figure pct00032
식 중, 각각의 A1 및 각각의 A2는 하기 화학식 (A-I) 내지 (A-VII) 중 어느 하나로부터 독립적으로 선택되되:
Figure pct00033
식 중, R1은 -OH, -NH2, -NHC(=NH)NH2 및 -NHC(=NH)NHR6으로부터 선택되며; R2 및 R3은 -H, -OH, -F, -Cl 및 -Br로부터 각각 독립적으로 선택되고; R4는 -CO2H, -P(=O)(OH)2, -SO3H로부터 선택되며; R5는 -COCH3, -COCF3, -SO2CH3로부터 선택되고; X는 -O- 및 -S-로부터 선택되며; Y는 하기로부터 선택되고:
Figure pct00034
Figure pct00035
R6은 하기로부터 선택되며:
Figure pct00036
R7은 H, C1-C20 알킬, C3-C20 사이클로알킬, C3-C20 헤테로사이클로알킬; C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되고; R8은 C3-C20 헤테로사이클로알킬, C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되며; E는 Fc 도메인 단량체 또는 Fc 도메인(예를 들어, Fc 도메인 단량체 또는 Fc 도메인, 각각의 Fc 도메인 단량체는 서열번호 1 내지 68 중 어느 하나의 서열을 독립적으로 가짐)을 포함하고; 각각의 A1-L-A2에서 L은 E 내의 힌지 시스테인의 황 원자 및 A1 및 A2 각각에 공유 부착된 링커이며; T는 1 내지 20(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20)의 정수이고, E에 연결된 물결선은, 각각의 A1-L-A2가 (예를 들어, 공유 결합 또는 링커에 의해서) E 내의 힌지 시스테인의 황 원자에 공유 부착된다는 것을 나타낸다. T가 1보다 큰 경우(예를 들어, T가 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20)인 경우, 각각의 A1-L-A2는 독립적으로 선택될 수 있다(예를 들어, 본 명세서에 기재된 A1-L-A2 구조 중 임의의 것으로부터 독립적으로 선택될 수 있다).
또 다른 양상에서, 본 발명은 하기 화학식 (3)으로 기재되는 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 특징으로 한다:
Figure pct00037
식 중, 각각의 A1 및 각각의 A2는 하기 화학식 (A-I) 내지 (A-V) 중 어느 하나로부터 독립적으로 선택되되:
Figure pct00038
식 중, R1은 -OH, -NH2, -NHC(=NH)NH2 및 -NHC(=NH)NHR6으로부터 선택되며; R2 및 R3은 -H, -OH, -F, -Cl 및 -Br로부터 각각 독립적으로 선택되고; R4는 -CO2H, -P(=O)(OH)2, -SO3H로부터 선택되며; R5는 -COCH3, -COCF3, -SO2CH3로부터 선택되고; X는 -O- 및 -S-로부터 선택되며; Y는 하기로부터 선택되고:
Figure pct00039
R6은 하기로부터 선택되며:
Figure pct00040
R7은 H, C1-C20 알킬, C3-C20 사이클로알킬, C3-C20 헤테로사이클로알킬; C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되고; R8은 C3-C20 헤테로사이클로알킬, C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되며;E는 Fc 도메인 단량체 또는 Fc 도메인(예를 들어, Fc 도메인 단량체 또는 Fc 도메인, 각각의 Fc 도메인 단량체는 서열번호 1 내지 68 중 어느 하나의 서열을 독립적으로 가짐)을 포함하고; 각각의 A1-L-A2에서 L은 E 내의 힌지 시스테인의 황 원자 및 A1 및 A2 각각에 공유 부착된 링커이며; T는 1 내지 20(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20)의 정수이고, E에 연결된 물결선은, 각각의 A1-L-A2가 (예를 들어, 공유 결합 또는 링커에 의해서) E 내의 힌지 시스테인의 황 원자에 공유 부착된다는 것을 나타낸다. T가 1보다 큰 경우(예를 들어, T가 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20)인 경우, 각각의 A1-L-A2는 독립적으로 선택될 수 있다(예를 들어, 본 명세서에 기재된 A1-L-A2 구조 중 임의의 것으로부터 독립적으로 선택될 수 있다).
또 다른 양상에서, 본 발명은 하기 화학식 (3)으로 기재되는 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 특징으로 한다:
Figure pct00041
식 중, 각각의 A1 및 각각의 A2는 하기 화학식 (A-VI) 내지 (A-IX) 중 어느 하나로부터 독립적으로 선택되되:
Figure pct00042
식 중, R1은 -OH, -NH2, -NHC(=NH)NH2 및 -NHC(=NH)NHR6으로부터 선택되며; R2 및 R3은 -H, -OH, -F, -Cl 및 -Br로부터 각각 독립적으로 선택되고; R4는 -CO2H, -P(=O)(OH)2, -SO3H로부터 선택되며; R5는 -COCH3, -COCF3, -SO2CH3로부터 선택되고; X는 -O- 및 -S-로부터 선택되며; Y는 하기로부터 선택되고:
Figure pct00043
R6은 하기로부터 선택되고:
Figure pct00044
Figure pct00045
Figure pct00046
R7은 H, C1-C20 알킬, C3-C20 사이클로알킬, C3-C20 헤테로사이클로알킬; C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되고; R8은 C3-C20 헤테로사이클로알킬, C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되며;E는 Fc 도메인 단량체 또는 Fc 도메인(예를 들어, Fc 도메인 단량체 또는 Fc 도메인, 각각의 Fc 도메인 단량체는 서열번호 1 내지 68 중 어느 하나의 서열을 독립적으로 가짐)을 포함하고; 각각의 A1-L-A2에서 L은 E 내의 힌지 시스테인의 황 원자 및 A1 및 A2 각각에 공유 부착된 링커이며; T는 1 내지 20(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20)의 정수이고, E에 연결된 물결선은, 각각의 A1-L-A2가 (예를 들어, 공유 결합 또는 링커에 의해서) E 내의 힌지 시스테인의 황 원자에 공유 부착된다는 것을 나타낸다. T가 1보다 큰 경우(예를 들어, T가 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20)인 경우, 각각의 A1-L-A2는 독립적으로 선택될 수 있다(예를 들어, 본 명세서에 기재된 A1-L-A2 구조 중 임의의 것으로부터 독립적으로 선택될 수 있다).
일부 실시형태에서, 각각의 E는 서열번호 1 내지 68 중 어느 하나의 서열을 갖는 Fc 도메인 단량체를 포함한다.
일부 실시형태에서, 각각의 E는 하기의 서열을 포함한다:
MVRSDKTHTCPPCPPC*KC*PAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKHHHHHH (서열번호 10).
일부 실시형태에서, 각각의 E는 하기의 서열을 포함한다:
MVRSDKTHTCPPCPPC*KC*PAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (서열번호 11).
일부 실시형태에서, 황 원자의 쌍 중 적어도 하나는 서열번호 10 또는 서열번호 11의 힌지 시스테인, 즉, 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys10, Cys13, Cys16 또는 Cys18에 상응하는 황 원자(힌지 시스테인의 황 원자)이다. 일부 실시형태에서, 황 원자의 쌍은 서열번호 10 또는 서열번호 11 내의 Cys10과 Cys13, 서열번호 10 또는 서열번호 11 내의 Cys10과 Cys16, 서열번호 10 또는 서열번호 11 내의 Cys 30과 Cys18, 서열번호 10 또는 서열번호 11 내의 Cys13과 Cys 36, 서열번호 10 또는 서열번호 11 내의 Cys13과 Cys 38 및/또는 서열번호 10 또는 서열번호 11 내의 Cys 36과 Cys 38에 상응하는 황 원자(이의 황 원자)이다.
일부 실시형태에서, T가 2인 경우, 황 원자의 쌍은 서열번호 10 또는 서열번호 11 내의 Cys10과 Cys13 및 서열번호 10 또는 서열번호 11 내의 Cys 36과 Cys 38에 상응하는 황 원자(이의 황 원자)이다.
일부 실시형태에서, 황 원자의 쌍은 각각의 E로부터의 시스테인의 1개의 황 원자를 포함하고, 즉, L-A는 이것이 부착되는 황 원자와 함께 2개의 Fc 도메인(예를 들어, 서열번호 10 또는 서열번호 11의 서열을 포함하는 2개의 Fc 도메인) 사이에 브리지를 형성한다. 일부 실시형태에서, 황 원자의 쌍은 하나의 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys10에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자) 및 또 다른 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys10에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자)이다. 일부 실시형태에서, 황 원자의 쌍은 하나의 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys13에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자) 및 또 다른 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys13에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자)이다. 일부 실시형태에서, 황 원자의 쌍은 하나의 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys16에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자) 및 또 다른 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys16에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자)이다. 일부 실시형태에서, 황 원자의 쌍은 하나의 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys18에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자) 및 또 다른 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys18에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자)이다.
일부 실시형태에서, T가 2인 경우, 황 원자의 쌍은 하나의 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys10에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자) 및 또 다른 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys10에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자) 및 하나의 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys13에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자) 및 또 다른 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys13에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자)이다. 일부 실시형태에서, T가 2인 경우, 황 원자의 쌍은 하나의 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys10에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자) 및 또 다른 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys10에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자) 및 하나의 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys16에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자) 및 또 다른 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys16에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자)이다. 일부 실시형태에서, T가 2인 경우, 황 원자의 쌍은 하나의 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys10에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자) 및 또 다른 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys10에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자) 및 하나의 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys18에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자) 및 또 다른 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys18에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자)이다.
일부 실시형태에서, T가 2인 경우, 황 원자의 쌍은 하나의 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys13에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자) 및 또 다른 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys13에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자) 및 하나의 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys16에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자) 및 또 다른 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys16에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자)이다. 일부 실시형태에서, T가 2인 경우, 황 원자의 쌍은 하나의 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys13에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자) 및 또 다른 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys13에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자) 및 하나의 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys18에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자) 및 또 다른 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys18에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자)이다.
일부 실시형태에서, T가 2인 경우, 황 원자의 쌍은 하나의 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys16에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자) 및 또 다른 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys16에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자) 및 하나의 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys18에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자) 및 또 다른 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys18에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자)이다.
일부 실시형태에서, T가 3인 경우, 황 원자의 쌍은 하나의 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys10에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자) 및 또 다른 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys10에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자); 하나의 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys13에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자) 및 또 다른 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys13에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자) 및 하나의 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys16에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자) 및 또 다른 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys16에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자)이다. 일부 실시형태에서, T가 3인 경우, 황 원자의 쌍은 하나의 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys10에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자) 및 또 다른 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys10에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자); 하나의 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys13에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자) 및 또 다른 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys13에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자) 및 하나의 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys18에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자) 및 또 다른 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys18에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자)이다. 일부 실시형태에서, T가 3인 경우, 황 원자의 쌍은 하나의 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys10에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자) 및 또 다른 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys10에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자); 하나의 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys18에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자) 및 또 다른 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys18에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자) 및 하나의 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys16에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자) 및 또 다른 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys16에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자)이다. 일부 실시형태에서, T가 3인 경우, 황 원자의 쌍은 하나의 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys13에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자) 및 또 다른 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys13에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자); 하나의 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys18에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자) 및 또 다른 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys18에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자) 및 하나의 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys16에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자) 및 또 다른 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys16에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자)이다.
일부 실시형태에서, T가 3인 경우, 황 원자의 쌍은 하나의 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys10에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자) 및 또 다른 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys10에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자); 하나의 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys13에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자) 및 또 다른 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys13에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자); 하나의 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys16에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자) 및 또 다른 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys16에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자) 및 하나의 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys18에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자) 및 또 다른 E로부터의 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys18에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자)이다.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기의 구조를 갖는다:
Figure pct00047
식 중, a, b, c 및 d 각각은 독립적으로, 0 또는 1이고, a, b, c 또는 d가 0인 경우, 2개의 황 원자는 다이설파이드 결합을 형성한다.
일부 실시형태에서, a는 1이고, b, c 및 d는 0이다. 일부 실시형태에서, a 및 b는 1이고, c 및 d는 0이다. 일부 실시형태에서, a 및 c는 1이고, b 및 d는 0이다. 일부 실시형태에서, a 및 d는 1이고, b 및 c는 0이다. 일부 실시형태에서, a, b 및 c는 1이고, d는 0이다. 일부 실시형태에서, a, b 및 d는 1이고, c는 0이다. 일부 실시형태에서, a, c 및 d는 1이고, b는 0이다. 일부 실시형태에서, b 및 c는 1이고, a 및 d는 0이다. 일부 실시형태에서, b 및 d는 1이고, a 및 c는 0이다. 일부 실시형태에서, b, c 및 d는 1이고, a는 0이다. 일부 실시형태에서, c 및 d는 1이고, a 및 b는 0이다. 일부 실시형태에서, a, b, c 및 d는 1이다.
일부 실시형태에서, 각각의 E는 하기의 서열을 포함한다:
MVRSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (서열번호 4).
일부 실시형태에서, 각각의 E는 하기의 서열을 포함한다:
MVRSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLYITREPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (서열번호 33).
일부 실시형태에서, 황 원자의 쌍 중 적어도 하나는 서열번호 4 또는 서열번호 33의 힌지 시스테인, 즉, Cys10 및/또는 Cys13에 상응하는 황 원자(이의 황 원자)이다. 일부 실시형태에서, 황 원자의 쌍은 서열번호 4 또는 서열번호 33 내의 Cys10 및 Cys13에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자)이다.
일부 실시형태에서, 황 원자의 쌍은 각각의 E로부터의 시스테인의 1개의 황 원자를 포함하고, 즉, L-A는 이것이 부착되는 황 원자와 함께 2개의 Fc 도메인(예를 들어, 서열번호 4 또는 서열번호 33의 서열을 포함하는 2개의 Fc 도메인) 사이에 브리지를 형성한다. 일부 실시형태에서, 황 원자의 쌍은 하나의 E로부터의 서열번호 4 또는 서열번호 33의 Cys10에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자) 및 또 다른 E로부터의 서열번호 4 또는 서열번호 33의 Cys10에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자)이다. 일부 실시형태에서, 황 원자의 쌍은 하나의 E로부터의 서열번호 4 또는 서열번호 33의 Cys13에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자) 및 또 다른 E로부터의 서열번호 4 또는 서열번호 33의 Cys13에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자)이다. 일부 실시형태에서, T가 2인 경우, 황 원자의 쌍은 하나의 E로부터의 서열번호 4 또는 서열번호 33의 Cys10에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자) 및 또 다른 E로부터의 서열번호 4 또는 서열번호 33의 Cys10에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자) 및 하나의 E로부터의 서열번호 4 또는 서열번호 33의 Cys13에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자) 및 또 다른 E로부터의 서열번호 4 또는 서열번호 33의 Cys13에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자)이다.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기의 구조를 갖는다:
Figure pct00048
식 중, a 및 b 각각은 독립적으로, 0 또는 1이고, a 또는 b가 0인 경우, 2개의 황 원자는 다이설파이드 결합을 형성한다. 일부 실시형태에서, a는 1이고, b는 0이다. 일부 실시형태에서, a는 0이고, b는 1이다. 일부 실시형태에서, a 및 b는 1이다.
일부 실시형태에서, 각각의 E는 하기의 서열을 포함한다:
MVRSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKHHHHHH (서열번호 8).
일부 실시형태에서, 황 원자의 쌍 중 적어도 하나는 서열번호 8의 힌지 시스테인, 즉, Cys10 및/또는 Cys13에 상응하는 황 원자(이의 황 원자)이다. 일부 실시형태에서, 황 원자의 쌍은 서열번호 8 내의 Cys10 및 Cys13에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자)이다.
일부 실시형태에서, 황 원자의 쌍은 각각의 E로부터의 시스테인의 1개의 황 원자를 포함하고, 즉, L-A는 이것이 부착되는 황 원자와 함께 2개의 Fc 도메인(예를 들어, 서열번호 8의 서열을 포함하는 2개의 Fc 도메인) 사이에 브리지를 형성한다. 일부 실시형태에서, 황 원자의 쌍은 하나의 E로부터의 서열번호 8의 Cys10에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자) 및 또 다른 E로부터의 서열번호 8의 Cys10에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자)이다. 일부 실시형태에서, 황 원자의 쌍은 하나의 E로부터의 서열번호 8의 Cys13에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자) 및 또 다른 E로부터의 서열번호 8의 Cys13에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자)이다. 일부 실시형태에서, T가 2인 경우, 황 원자의 쌍은 하나의 E로부터의 서열번호 8의 Cys10에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자) 및 또 다른 E로부터의 서열번호 8의 Cys10에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자) 및 하나의 E로부터의 서열번호 8의 Cys13에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자) 및 또 다른 E로부터의 서열번호 8의 Cys13에 상응하는 황 원자(예를 들어, 이의 황 원자)이다.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기의 구조를 갖는다:
Figure pct00049
식 중, a 및 b 각각은 독립적으로, 0 또는 1이고, a 또는 b가 0인 경우, 2개의 황 원자는 다이설파이드 결합을 형성한다. 일부 실시형태에서, a는 1이고, b는 0이다. 일부 실시형태에서, a는 0이고, b는 1이다. 일부 실시형태에서, a 및 b는 1이다.
또 다른 양상에서, 본 발명은 하기 화학식 (4)로 기재되는 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 특징으로 한다:
Figure pct00050
식 중, 각각의 A1은 하기 화학식 (A-I) 내지 (A-XII) 중 어느 하나로부터 독립적으로 선택되되:
Figure pct00051
식 중, R1은 -OH, -NH2, -NHC(=NH)NH2 및 -NHC(=NH)NHR6으로부터 선택되며; R2 및 R3은 -H, -OH, -F, -Cl 및 -Br로부터 각각 독립적으로 선택되고; R4는 -CO2H, -P(=O)(OH)2, -SO3H로부터 선택되며; R5는 -COCH3, -COCF3, -SO2CH3로부터 선택되고; X는 -O- 및 -S-로부터 선택되며; Y는 하기로부터 선택되며:
Figure pct00052
R6은 하기로부터 선택되며:
Figure pct00053
R7은 H, C1-C20 알킬, C3-C20 사이클로알킬, C3-C20 헤테로사이클로알킬; C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되고; R8은 C3-C20 헤테로사이클로알킬, C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되며;
E는 Fc 도메인 단량체 또는 Fc 도메인(예를 들어, Fc 도메인 단량체 또는 Fc 도메인, 각각의 Fc 도메인 단량체는 서열번호 1 내지 68 중 어느 하나의 서열을 독립적으로 가짐)을 포함하고; 각각의 L-A1에서 L은 E 내의 힌지 시스테인의 황 원자 및 A1에 공유 부착된 링커이며; T는 1 내지 20(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20)의 정수이고, E에 연결된 물결선은, 각각의 L-A1이 (예를 들어, 공유 결합 또는 링커에 의해서) E 내의 힌지 시스테인의 황 원자에 공유 부착된다는 것을 나타낸다. T가 1 초과인 경우(예를 들어, T가 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20)인 경우, 각각의 A1은 화학식 (A-I) 내지 (A-XII) 중 어느 하나로부터 독립적으로 선택될 수 있다.
또 다른 양상에서, 본 발명은 하기 화학식 (4)로 기재되는 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 특징으로 한다:
Figure pct00054
식 중, 각각의 A1은 하기 화학식 (A-I) 내지 (A-V) 중 어느 하나로부터 독립적으로 선택되되:
Figure pct00055
식 중, R1은 -OH, -NH2, -NHC(=NH)NH2 및 -NHC(=NH)NHR6으로부터 선택되며; R2 및 R3은 -H, -OH, -F, -Cl 및 -Br로부터 각각 독립적으로 선택되고; R4는 -CO2H, -P(=O)(OH)2, -SO3H로부터 선택되며; R5는 -COCH3, -COCF3, -SO2CH3로부터 선택되고; X는 -O- 및 -S-로부터 선택되며; Y는 하기로부터 선택되고:
Figure pct00056
R6은 하기로부터 선택되며:
Figure pct00057
R7은 H, C1-C20 알킬, C3-C20 사이클로알킬, C3-C20 헤테로사이클로알킬; C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되고; R8은 C3-C20 헤테로사이클로알킬, C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되며;
E는 Fc 도메인 단량체 또는 Fc 도메인(예를 들어, Fc 도메인 단량체 또는 Fc 도메인, 각각의 Fc 도메인 단량체는 서열번호 1 내지 68 중 어느 하나의 서열을 독립적으로 가짐)을 포함하고; 각각의 L-A1에서 L은 E 내의 힌지 시스테인의 황 원자 및 A1에 공유 부착된 링커이며; T는 1 내지 20(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20)의 정수이고, E에 연결된 물결선은, 각각의 L-A1이 (예를 들어, 공유 결합 또는 링커에 의해서) E 내의 힌지 시스테인의 황 원자에 공유 부착된다는 것을 나타낸다. T가 1 초과인 경우(예를 들어, T가 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20)인 경우, 각각의 A1은 화학식 (A-I) 내지 (A-V) 중 어느 하나로부터 독립적으로 선택될 수 있다.
또 다른 양상에서, 본 발명은 하기 화학식 (4)로 기재되는 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 특징으로 한다:
Figure pct00058
식 중, 각각의 A1은 하기 화학식 (A-VI) 내지 (A-IX) 중 어느 하나로부터 독립적으로 선택되되:
Figure pct00059
식 중, R1은 -OH, -NH2, -NHC(=NH)NH2 및 -NHC(=NH)NHR6으로부터 선택되며; R2 및 R3은 -H, -OH, -F, -Cl 및 -Br로부터 각각 독립적으로 선택되고; R4는 -CO2H, -P(=O)(OH)2, -SO3H로부터 선택되며; R5는 -COCH3, -COCF3, -SO2CH3로부터 선택되고; X는 -O- 및 -S-로부터 선택되며; Y는 하기로부터 선택되고:
Figure pct00060
R6은 하기로부터 선택되며:
Figure pct00061
Figure pct00062
Figure pct00063
R7은 H, C1-C20 알킬, C3-C20 사이클로알킬, C3-C20 헤테로사이클로알킬; C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되고; R8은 C3-C20 헤테로사이클로알킬, C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되며;
E는 Fc 도메인 단량체 또는 Fc 도메인(예를 들어, Fc 도메인 단량체 또는 Fc 도메인, 각각의 Fc 도메인 단량체는 서열번호 1 내지 68 중 어느 하나의 서열을 독립적으로 가짐)을 포함하고; 각각의 L-A1에서 L은 E 내의 힌지 시스테인의 황 원자 및 A1에 공유 부착된 링커이며; T는 1 내지 20(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20)의 정수이고, E에 연결된 물결선은, 각각의 L-A1이 (예를 들어, 공유 결합 또는 링커에 의해서) E 내의 힌지 시스테인의 황 원자에 공유 부착된다는 것을 나타낸다. T가 1 초과인 경우(예를 들어, T가 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20)인 경우, 각각의 A1은 화학식 (A-VI) 내지 (A-IX) 중 어느 하나로부터 독립적으로 선택될 수 있다.
일부 실시형태에서, 각각의 E는 서열번호 1 내지 68 중 어느 하나의 서열을 갖는 Fc 도메인 단량체를 포함한다.
일부 실시형태에서, 각각의 E는 하기의 서열을 포함한다:
MVRSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (서열번호 4).
일부 실시형태에서, 각각의 E는 하기의 서열을 포함한다:
MVRSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLYITREPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (서열번호 33).
일부 실시형태에서, 황 원자 중 적어도 하나는 서열번호 4 또는 서열번호 33의 힌지 시스테인, 즉, Cys10 및/또는 Cys13에 상응하는 황 원자(이의 황 원자)이다. 일부 실시형태에서, 황 원자는 서열번호 4 또는 서열번호 33 내의 힌지 시스테인, 즉, Cys10에 상응하는 황 원자(이의 황 원자)이다. 일부 실시형태에서, 황 원자는 서열번호 4 또는 서열번호 33 내의 Cys10에 상응하는 황 원자(이의 황 원자)이다.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기의 구조를 갖는다:
Figure pct00064
식 중, a 및 b 각각은 독립적으로, 0 또는 1이고, a 또는 b가 0인 경우, 황 원자는 티올이다. 일부 실시형태에서, a는 1이고, b는 0이다. 일부 실시형태에서, a는 0이고, b는 1이다. 일부 실시형태에서, a 및 b는 1이다.
또 다른 양상에서, 본 발명은 접합체의 집단을 특징으로 하며, 여기서 T의 평균값은 1 내지 20이다(예를 들어, T의 평균값은 1 내지 2, 1 내지 3, 1 내지 4, 1 내지 5, 5 내지 10, 10 내지 15 또는 15 내지 20이다). 일부 실시형태에서, T의 평균값은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20이다.
또 다른 양상에서, 본 발명은 하기 화학식 (3)으로 기재되는 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 특징으로 한다:
Figure pct00065
식 중, 각각의 A1 및 각각의 A2는 하기 화학식 (A-I) 내지 (A-XII) 중 어느 하나로부터 독립적으로 선택되되:
Figure pct00066
Figure pct00067
식 중, R1은 -OH, -NH2, -NHC(=NH)NH2 및 -NHC(=NH)NHR6으로부터 선택되며; R2 및 R3은 -H, -OH, -F, -Cl 및 -Br로부터 각각 독립적으로 선택되고; R4는 -CO2H, -P(=O)(OH)2, -SO3H로부터 선택되며; R5는 -COCH3, -COCF3, -SO2CH3로부터 선택되고; X는 -O- 및 -S-로부터 선택되며; Y는 하기로부터 선택되고:
Figure pct00068
R6은 하기로부터 선택되며:
Figure pct00069
Figure pct00070
Figure pct00071
R7은 H, C1-C20 알킬, C3-C20 사이클로알킬, C3-C20 헤테로사이클로알킬; C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되고; R8은 C3-C20 헤테로사이클로알킬, C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되며; E는 Fc 도메인 단량체 또는 Fc 도메인(예를 들어, Fc 도메인 단량체 또는 Fc 도메인, 각각의 Fc 도메인 단량체는 서열번호 1 내지 68 중 어느 하나의 서열을 독립적으로 가짐)을 포함하고; 각각의 A1-L-A2에서 L은 E 내의 표면 노출된 라이신의 질소 원자 및 A1 및 A2 각각에 공유 부착된 링커이고; T는 1 내지 20(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20)의 정수이고, E에 연결된 물결선은, 각각의 A1-L-A2가 (예를 들어, 공유 결합 또는 링커에 의해서) E 내의 표면 노출된 라이신의 질소 원자에 공유 부착된다는 것을 나타낸다. T가 1보다 큰 경우(예를 들어, T가 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20)인 경우, 각각의 A1-L-A2는 독립적으로 선택될 수 있다(예를 들어, 본 명세서에 기재된 A1-L-A2 구조 중 임의의 것으로부터 독립적으로 선택될 수 있다).
또 다른 양상에서, 본 발명은 하기 화학식 (3)으로 기재되는 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 특징으로 한다:
Figure pct00072
식 중, 각각의 A1 및 각각의 A2는 하기 화학식 (A-I) 내지 (A-V) 중 어느 하나로부터 독립적으로 선택되되:
Figure pct00073
식 중, R1은 -OH, -NH2, -NHC(=NH)NH2 및 -NHC(=NH)NHR6으로부터 선택되며; R2 및 R3은 -H, -OH, -F, -Cl 및 -Br로부터 각각 독립적으로 선택되고; R4는 -CO2H, -P(=O)(OH)2, -SO3H로부터 선택되며; R5는 -COCH3, -COCF3, -SO2CH3로부터 선택되고; X는 -O- 및 -S-로부터 선택되며; Y는 하기로부터 선택되며:
Figure pct00074
R6은 하기로부터 선택되며:
Figure pct00075
Figure pct00076
Figure pct00077
R7은 H, C1-C20 알킬, C3-C20 사이클로알킬, C3-C20 헤테로사이클로알킬; C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되고; R8은 C3-C20 헤테로사이클로알킬, C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되며;E는 Fc 도메인 단량체 또는 Fc 도메인(예를 들어, Fc 도메인 단량체 또는 Fc 도메인, 각각의 Fc 도메인 단량체는 서열번호 1 내지 68 중 어느 하나의 서열을 독립적으로 가짐)을 포함하고; 각각의 A1-L-A2에서 L은 E 내의 표면 노출된 라이신의 질소 원자 및 A1 및 A2 각각에 공유 부착된 링커이고; T는 1 내지 20(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20)의 정수이고, E에 연결된 물결선은, 각각의 A1-L-A2가 (예를 들어, 공유 결합 또는 링커에 의해서) E 내의 표면 노출된 라이신의 질소 원자에 공유 부착된다는 것을 나타낸다. T가 1보다 큰 경우(예를 들어, T가 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20)인 경우, 각각의 A1-L-A2는 독립적으로 선택될 수 있다(예를 들어, 본 명세서에 기재된 A1-L-A2 구조 중 임의의 것으로부터 독립적으로 선택될 수 있다).
또 다른 양상에서, 본 발명은 하기 화학식 (3)으로 기재되는 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 특징으로 한다:
Figure pct00078
식 중, 각각의 A1 및 각각의 A2는 하기 화학식 (A-VI) 내지 (A-IX) 중 어느 하나로부터 독립적으로 선택되되:
Figure pct00079
식 중, R1은 -OH, -NH2, -NHC(=NH)NH2 및 -NHC(=NH)NHR6으로부터 선택되며; R2 및 R3은 -H, -OH, -F, -Cl 및 -Br로부터 각각 독립적으로 선택되고; R4는 -CO2H, -P(=O)(OH)2, -SO3H로부터 선택되며; R5는 -COCH3, -COCF3, -SO2CH3로부터 선택되고; X는 -O- 및 -S-로부터 선택되며; Y는 하기로부터 선택되고:
Figure pct00080
R6은 하기로부터 선택되며:
Figure pct00081
R7은 H, C1-C20 알킬, C3-C20 사이클로알킬, C3-C20 헤테로사이클로알킬; C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되고; R8은 C3-C20 헤테로사이클로알킬, C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되며; E는 Fc 도메인 단량체 또는 Fc 도메인(예를 들어, Fc 도메인 단량체 또는 Fc 도메인, 각각의 Fc 도메인 단량체는 서열번호 1 내지 68 중 어느 하나의 서열을 독립적으로 가짐)을 포함하고; 각각의 A1-L-A2에서 L은 E 내의 표면 노출된 라이신의 질소 원자 및 A1 및 A2 각각에 공유 부착된 링커이고; T는 1 내지 20(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20)의 정수이고, E에 연결된 물결선은, 각각의 A1-L-A2가 (예를 들어, 공유 결합 또는 링커에 의해서) E 내의 표면 노출된 라이신의 질소 원자에 공유 부착된다는 것을 나타낸다. T가 1보다 큰 경우(예를 들어, T가 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20)인 경우, 각각의 A1-L-A2는 독립적으로 선택될 수 있다(예를 들어, 본 명세서에 기재된 A1-L-A2 구조 중 임의의 것으로부터 독립적으로 선택될 수 있다).
또 다른 양상에서, 본 발명은 하기 화학식 (4)로 기재되는 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 특징으로 한다:
Figure pct00082
식 중, 각각의 A1은 하기 화학식 (A-I) 내지 (A-XII) 중 어느 하나로부터 독립적으로 선택되되:
Figure pct00083
식 중, R1은 -OH, -NH2, -NHC(=NH)NH2 및 -NHC(=NH)NHR6으로부터 선택되며; R2 및 R3은 -H, -OH, -F, -Cl 및 -Br로부터 각각 독립적으로 선택되고; R4는 -CO2H, -P(=O)(OH)2, -SO3H로부터 선택되며; R5는 -COCH3, -COCF3, -SO2CH3로부터 선택되고; X는 -O- 및 -S-로부터 선택되며; Y는 하기로부터 선택되고:
Figure pct00084
R6은 하기로부터 선택되며:
Figure pct00085
Figure pct00086
Figure pct00087
R7은 H, C1-C20 알킬, C3-C20 사이클로알킬, C3-C20 헤테로사이클로알킬; C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되고; R8은 C3-C20 헤테로사이클로알킬, C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되며;E는 Fc 도메인 단량체 또는 Fc 도메인(예를 들어, Fc 도메인 단량체 또는 Fc 도메인, 각각의 Fc 도메인 단량체는 서열번호 1 내지 68 중 어느 하나의 서열을 독립적으로 가짐)을 포함하고; 각각의 L-A1에서 L은 E 내의 표면 노출된 라이신의 질소 원자 및 A1에 공유 부착된 링커이고; T는 1 내지 20(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20)의 정수이고, E에 연결된 물결선은, 각각의 L-A1이 (예를 들어, 공유 결합 또는 링커에 의해서) E 내의 표면 노출된 라이신의 질소 원자에 공유 부착된다는 것을 나타낸다. T가 1 초과인 경우(예를 들어, T가 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20)인 경우, 각각의 A는 화학식 (A-I) 내지 (A-XII) 중 어느 하나로부터 독립적으로 선택될 수 있다.
또 다른 양상에서, 본 발명은 하기 화학식 (4)로 기재되는 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 특징으로 한다:
Figure pct00088
식 중, 각각의 A1은 하기 화학식 (A-I) 내지 (A-V) 중 어느 하나로부터 독립적으로 선택되되:
Figure pct00089
식 중, R1은 -OH, -NH2, -NHC(=NH)NH2 및 -NHC(=NH)NHR6으로부터 선택되며; R2 및 R3은 -H, -OH, -F, -Cl 및 -Br로부터 각각 독립적으로 선택되고; R4는 -CO2H, -P(=O)(OH)2, -SO3H로부터 선택되며; R5는 -COCH3, -COCF3, -SO2CH3로부터 선택되고; X는 -O- 및 -S-로부터 선택되며; Y는 하기로부터 선택되고:
Figure pct00090
R6은 하기로부터 선택되며:
Figure pct00091
R7은 H, C1-C20 알킬, C3-C20 사이클로알킬, C3-C20 헤테로사이클로알킬; C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되고; R8은 C3-C20 헤테로사이클로알킬, C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되며;E는 Fc 도메인 단량체 또는 Fc 도메인(예를 들어, Fc 도메인 단량체 또는 Fc 도메인, 각각의 Fc 도메인 단량체는 서열번호 1 내지 68 중 어느 하나의 서열을 독립적으로 가짐)을 포함하고; 각각의 L-A1에서 L은 E 내의 표면 노출된 라이신의 질소 원자 및 A1에 공유 부착된 링커이고; T는 1 내지 20(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20)의 정수이고, E에 연결된 물결선은, 각각의 L-A1이 (예를 들어, 공유 결합 또는 링커에 의해서) E 내의 표면 노출된 라이신의 질소 원자에 공유 부착된다는 것을 나타낸다. T가 1 초과인 경우(예를 들어, T가 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20)인 경우, 각각의 A1은 화학식 (A-I) 내지 (A-V) 중 어느 하나로부터 독립적으로 선택될 수 있다.
또 다른 양상에서, 본 발명은 하기 화학식 (4)로 기재되는 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 특징으로 한다:
Figure pct00092
식 중, 각각의 A1은 하기 화학식 (A-VI) 내지 (A-IX) 중 어느 하나로부터 독립적으로 선택되되:
Figure pct00093
식 중, R1은 -OH, -NH2, -NHC(=NH)NH2 및 -NHC(=NH)NHR6으로부터 선택되며; R2 및 R3은 -H, -OH, -F, -Cl 및 -Br로부터 각각 독립적으로 선택되고; R4는 -CO2H, -P(=O)(OH)2, -SO3H로부터 선택되며; R5는 -COCH3, -COCF3, -SO2CH3로부터 선택되고; X는 -O- 및 -S-로부터 선택되며; Y는 하기로부터 선택되고:
Figure pct00094
R6은 하기로부터 선택되며:
Figure pct00095
R7은 H, C1-C20 알킬, C3-C20 사이클로알킬, C3-C20 헤테로사이클로알킬; C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되고; R8은 C3-C20 헤테로사이클로알킬, C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되며;E는 Fc 도메인 단량체 또는 Fc 도메인(예를 들어, Fc 도메인 단량체 또는 Fc 도메인, 각각의 Fc 도메인 단량체는 서열번호 1 내지 68 중 어느 하나의 서열을 독립적으로 가짐)을 포함하고; 각각의 L-A1에서 L은 E 내의 표면 노출된 라이신의 질소 원자 및 A에 공유 부착된 링커이고; T는 1 내지 20(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20)의 정수이고, E에 연결된 물결선은, 각각의 L-A1이 (예를 들어, 공유 결합 또는 링커에 의해서) E 내의 표면 노출된 라이신의 질소 원자에 공유 부착된다는 것을 나타낸다. T가 1 초과인 경우(예를 들어, T가 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20)인 경우, 각각의 A1은 화학식 (A-VI) 내지 (A-IX) 중 어느 하나로부터 독립적으로 선택될 수 있다.
또 다른 양상에서, 본 발명은 하기 화학식 (5)로 기재되는 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 특징으로 한다:
Figure pct00096
식 중, 각각의 Int는 독립적으로 표 1의 중간체 중 임의의 하나로부터 선택되고; E는 Fc 도메인 단량체 또는 Fc 도메인(예를 들어, Fc 도메인 단량체 또는 Fc 도메인, 각각의 Fc 도메인 단량체는 서열번호 1 내지 68 중 어느 하나의 서열을 독립적으로 가짐)을 포함하고; 각각의 L-Int에서 L은 E 내의 표면 노출된 라이신의 질소 원자 및 Int에 공유 부착된 링커이고; T는 1 내지 20(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20)의 정수이고, E에 연결된 물결선은, 각각의 L-Int가 (예를 들어, 공유 결합 또는 링커에 의해서) E 내의 표면 노출된 라이신의 질소 원자 또는 표면 노출된 시스테인의 황 원자에 공유 부착된다는 것을 나타낸다. T가 1을 초과하는 경우(예를 들어, T가 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20을 초과하는 경우), 각각의 Int는 표 1의 중간체 중 임의의 하나로부터 독립적으로 선택될 수 있다.
표 1의 중간체는 본 명세서에 기재되거나 예시된 방법 중 임의의 것을 비롯하여, 당업자에게 공지된 임의의 적합한 방법에 의해서 (예를 들어, 링커에 의해서) Fc 도메인 또는 Fc 도메인 단량체에 접합될 수 있다. 일부 실시형태에서, 접합체(예를 들어, 화학식 (5)로 기재되는 접합체)는 E를 포함하며, 여기서 E는 Fc 도메인 단량체 또는 Fc 도메인(예를 들어, Fc 도메인 단량체 또는 Fc 도메인이고, 각각의 Fc 도메인 단량체는 독립적으로, 서열번호 1 내지 68 중 어느 하나의 서열을 가짐)이다. 바람직한 실시형태에서, E의 하나 이상의 표면 노출된 라이신 잔기의 하나 이상의 질소 원자 또는 E 내의 하나 이상의 표면 노출된 시스테인의 하나 이상의 황 원자는 링커(예를 들어, PEG2-PEG20 링커)에 공유 접합된다. E에 접합된 링커는 작용화되어 그것은 반응하여 본 명세서에 기재된 Int(예를 들어, 표 1의 Int) 중 임의의 것과 공유 결합을 형성할 수 있다. 바람직한 실시형태에서, E는 아지도기로 작용화된 링커에 접합되고, Int(예를 들어, 표 1의 Int)는 알킨기로 작용화된다. E의 링커-아지도와 Int의 링커-알킨의 (예를 들어, 클릭(click) 화학에 의한) 접합은 본 발명의 접합체, 예를 들어, 화학식 (5)로 기재되는 접합체를 형성한다. 더 다른 실시형태에서, E는 알킨로 작용화된 링커에 접합되고, Int(예를 들어, 표 1의 Int)는 아지도로 작용화된다. E의 링커-알킨과 Int의 링커-아지도의 (예를 들어, 클릭(click) 화학에 의한) 접합은 본 발명의 접합체, 예를 들어, 화학식 (5)로 기재되는 접합체를 형성한다.
Figure pct00097
Figure pct00098
Figure pct00099
Figure pct00100
Figure pct00101
Figure pct00102
Figure pct00103
Figure pct00104
Figure pct00105
Figure pct00106
Figure pct00107
Figure pct00108
Figure pct00109
Figure pct00110
Figure pct00111
Figure pct00112
Figure pct00113
Figure pct00114
일부 실시형태에서, 각각의 E는 서열번호 1 내지 68 중 어느 하나의 서열을 갖는 Fc 도메인 단량체를 포함한다.
일부 실시형태에서, E는 하기의 서열을 포함한다:
MVRSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (서열번호 4).
일부 실시형태에서, 각각의 E는 하기의 서열을 포함한다:
MVRSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLYITREPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (서열번호 33).
일부 실시형태에서, E는 하기의 서열을 포함한다:
MVRSDKTHTCPPCPPC*KC*PAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKHHHHHH (서열번호 10)
일부 실시형태에서, 각각의 E는 하기의 서열을 포함한다:
MVRSDKTHTCPPCPPC*KC*PAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (서열번호 11).
상기 3개의 양상의 일부 실시형태에서, 질소 원자는 표면 노출된 라이신의 질소, 예를 들어, 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Lys35, Lys63, Lys77, Lys79, Lys106, Lys123, Lys129, Lys181, Lys203, Lys228 또는 Lys236에 상응하는 질소 원자(예를 들어, 이의 질소 원자)이다. 일부 실시형태에서, 질소 원자는 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Lys65, Lys79, Lys108, Lys230, 및/또는 Lys238에 상응하는 질소 원자(예를 들어, 이의 질소 원자)이다.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기의 구조를 갖는다:
Figure pct00115
식 중, a, b, c, d 및 e 각각은 독립적으로, 0 또는 1이고, 여기서, a, b, c, d 또는 e가 0인 경우, 2개의 질소 원자는 NH2이다. 일부 실시형태에서, a는 1이고, b, c, d 및 e는 0이다. 일부 실시형태에서, b는 1이고, a, c, d 및 e는 0이다. 일부 실시형태에서, c는 1이고, a, b, d 및 e는 0이다. 일부 실시형태에서, d는 1이고, a, b, c 및 e는 0이다. 일부 실시형태에서, e는 1이고, a, b, c 및 d는 0이다. 일부 실시형태에서, a 및 b는 1이고, c, d 및 e는 0이다. 일부 실시형태에서, a 및 c는 1이고, b, d 및 e는 0이다. 일부 실시형태에서, a 및 d는 1이고, b, c 및 e는 0이다. 일부 실시형태에서, a 및 e는 1이고, b, c 및 d는 0이다. 일부 실시형태에서, b 및 c는 1이고, a, d 및 e는 0이다. 일부 실시형태에서, b 및 d는 1이고, a, c 및 e는 0이다. 일부 실시형태에서, b 및 e는 1이고, a, c 및 d는 0이다. 일부 실시형태에서, c 및 d는 1이고, a, b 및 e는 0이다. 일부 실시형태에서, c 및 e는 1이고, a, b 및 d는 0이다. 일부 실시형태에서, d 및 e는 1이고, a, b 및 c는 0이다. 일부 실시형태에서, a, b 및 c는 1이고, d 및 e는 0이다. 일부 실시형태에서, a, b 및 d는 1이고, c 및 e는 0이다. 일부 실시형태에서, a, b 및 e는 1이고, c 및 d는 0이다. 일부 실시형태에서, a, c 및 d는 1이고, b 및 e는 0이다. 일부 실시형태에서, a, c 및 e는 1이고, b 및 d는 0이다. 일부 실시형태에서, a, d 및 e는 1이고, b 및 c는 0이다. 일부 실시형태에서, b, c 및 d는 1이고, a 및 e는 0이다. 일부 실시형태에서, b, d 및 e는 1이고, a 및 c는 0이다. 일부 실시형태에서, c, d 및 e는 1이고, a 및 b는 0이다.
또 다른 양상에서, 본 발명은 이전 양상 중 임의의 것에 기재된 접합체의 집단을 특징으로 하며, 여기서 T의 평균값은 1 내지 20이다(예를 들어, T의 평균값은 1 내지 2, 1 내지 3, 1 내지 4, 1 내지 5, 5 내지 10, 10 내지 15 또는 15 내지 20이다). 일부 실시형태에서, T의 평균값은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20이다.
본 명세서에 기재된 접합체의 일부 실시형태에서, 접합체는 Fc 도메인을 포함하는 이종이량체를 형성한다.
본 명세서에 기재된 접합체의 일부 실시형태에서, E는 또 다른 E와 이종이량체화되어 Fc 도메인을 형성한다.
또 다른 양상에서, 본 발명은 하기 화학식 (3)으로 기재되는 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 특징으로 한다:
Figure pct00116
식 중, 각각의 A1 및 각각의 A2는 하기 화학식 (A-I) 내지 (A-XII) 중 어느 하나로부터 독립적으로 선택되되:
Figure pct00117
Figure pct00118
식 중, R1은 -OH, -NH2, -NHC(=NH)NH2 및 -NHC(=NH)NHR6으로부터 선택되며; R2 및 R3은 -H, -OH, -F, -Cl 및 -Br로부터 각각 독립적으로 선택되고; R4는 -CO2H, -P(=O)(OH)2, -SO3H로부터 선택되며; R5는 -COCH3, -COCF3, -SO2CH3로부터 선택되고; X는 -O- 및 -S-로부터 선택되며; Y는 하기로부터 선택되고:
Figure pct00119
R6은 하기로부터 선택되며:
Figure pct00120
Figure pct00121
Figure pct00122
R7은 H, C1-C20 알킬, C3-C20 사이클로알킬, C3-C20 헤테로사이클로알킬; C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되고; R8은 C3-C20 헤테로사이클로알킬, C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되며;
E는 알부민 단백질(예를 들어, 서열번호 69 내지 71 중 어느 하나의 서열을 갖는 알부민 단백질), 알부민 단백질-결합 펩타이드 또는 Fc-결합 펩타이드를 포함하고; 각각의 A1-L-A2에서 L은 E 내의 표면 노출된 시스테인의 황 원자 또는 표면 노출된 라이신의 질소 원자 및 A1 및 A2 각각에 독립적으로 공유 부착된 링커이며; T는 1 내지 20(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20)의 정수이고, E에 연결된 물결선은, 각각의 A1-L-A2가 (예를 들어, 결합 또는 링커에 의해서) E 내의 용매-노출된 시스테인의 황 원자 또는 용매-노출된 라이신의 질소 원자에 독립적으로 공유 부착된다는 것을 나타낸다. T가 1보다 큰 경우(예를 들어, T가 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20)인 경우, 각각의 A1-L-A2는 독립적으로 선택될 수 있다(예를 들어, 본 명세서에 기재된 A1-L-A2 구조 중 임의의 것으로부터 독립적으로 선택될 수 있다).
또 다른 양상에서, 본 발명은 하기 화학식 (3)으로 기재되는 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 특징으로 한다:
Figure pct00123
식 중, 각각의 A1 및 각각의 A2는 하기 화학식 (A-I) 내지 (A-V) 중 어느 하나로부터 독립적으로 선택되되:
Figure pct00124
식 중, R1은 -OH, -NH2, -NHC(=NH)NH2 및 -NHC(=NH)NHR6으로부터 선택되며; R2 및 R3은 -H, -OH, -F, -Cl 및 -Br로부터 각각 독립적으로 선택되고; R4는 -CO2H, -P(=O)(OH)2, -SO3H로부터 선택되며; R5는 -COCH3, -COCF3, -SO2CH3로부터 선택되고; X는 -O- 및 -S-로부터 선택되며; Y는 하기로부터 선택되고:
Figure pct00125
R6은 하기로부터 선택되며:
Figure pct00126
R7은 H, C1-C20 알킬, C3-C20 사이클로알킬, C3-C20 헤테로사이클로알킬; C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되고; R8은 C3-C20 헤테로사이클로알킬, C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되며;
E는 알부민 단백질(예를 들어, 서열번호 69 내지 71 중 어느 하나의 서열을 갖는 알부민 단백질), 알부민 단백질-결합 펩타이드 또는 Fc-결합 펩타이드를 포함하고; 각각의 A1-L-A2에서 L은 E 내의 표면 노출된 시스테인의 황 원자 또는 표면 노출된 라이신의 질소 원자 및 A1 및 A2 각각에 독립적으로 공유 부착된 링커이며; T는 1 내지 20(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20)의 정수이고, E에 연결된 물결선은, 각각의 A1-L-A2가 (예를 들어, 결합 또는 링커에 의해서) E 내의 용매-노출된 시스테인의 황 원자 또는 용매-노출된 라이신의 질소 원자에 독립적으로 공유 부착된다는 것을 나타낸다. T가 1보다 큰 경우(예를 들어, T가 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20)인 경우, 각각의 A1-L-A2는 독립적으로 선택될 수 있다(예를 들어, 본 명세서에 기재된 A1-L-A2 구조 중 임의의 것으로부터 독립적으로 선택될 수 있다).
또 다른 양상에서, 본 발명은 하기 화학식 (3)으로 기재되는 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 특징으로 한다:
Figure pct00127
식 중, 각각의 A1 및 각각의 A2는 하기 화학식 (A-VI) 내지 (A-IX) 중 어느 하나로부터 독립적으로 선택되되:
Figure pct00128
식 중, R1은 -OH, -NH2, -NHC(=NH)NH2 및 -NHC(=NH)NHR6으로부터 선택되며; R2 및 R3은 -H, -OH, -F, -Cl 및 -Br로부터 각각 독립적으로 선택되고; R4는 -CO2H, -P(=O)(OH)2, -SO3H로부터 선택되며; R5는 -COCH3, -COCF3, -SO2CH3로부터 선택되고; X는 -O- 및 -S-로부터 선택되며; Y는 하기로부터 선택되고:
Figure pct00129
R6은 하기로부터 선택되며:
Figure pct00130
R7은 H, C1-C20 알킬, C3-C20 사이클로알킬, C3-C20 헤테로사이클로알킬; C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되고; R8은 C3-C20 헤테로사이클로알킬, C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되며;
E는 알부민 단백질(예를 들어, 서열번호 69 내지 71 중 어느 하나의 서열을 갖는 알부민 단백질), 알부민 단백질-결합 펩타이드 또는 Fc-결합 펩타이드를 포함하고; 각각의 A1-L-A2에서 L은 E 내의 표면 노출된 시스테인의 황 원자 또는 표면 노출된 라이신의 질소 원자 및 A1 및 A2 각각에 독립적으로 공유 부착된 링커이며; T는 1 내지 20(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20)의 정수이고, E에 연결된 물결선은, 각각의 A1-L-A2가 (예를 들어, 결합 또는 링커에 의해서) E 내의 용매-노출된 시스테인의 황 원자 또는 용매-노출된 라이신의 질소 원자에 독립적으로 공유 부착된다는 것을 나타낸다. T가 1보다 큰 경우(예를 들어, T가 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20)인 경우, 각각의 A1-L-A2는 독립적으로 선택될 수 있다(예를 들어, 본 명세서에 기재된 A1-L-A2 구조 중 임의의 것으로부터 독립적으로 선택될 수 있다).
또 다른 양상에서, 본 발명은 하기 화학식 (4)로 기재되는 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 특징으로 한다:
Figure pct00131
식 중, 각각의 A1은 하기 화학식 (A-I) 내지 (A-XII) 중 어느 하나로부터 독립적으로 선택되되:
Figure pct00132
Figure pct00133
식 중, R1은 -OH, -NH2, -NHC(=NH)NH2 및 -NHC(=NH)NHR6으로부터 선택되며; R2 및 R3은 -H, -OH, -F, -Cl 및 -Br로부터 각각 독립적으로 선택되고; R4는 -CO2H, -P(=O)(OH)2, -SO3H로부터 선택되며; R5는 -COCH3, -COCF3, -SO2CH3로부터 선택되고; X는 -O- 및 -S-로부터 선택되며; Y는 하기로부터 선택되고:
Figure pct00134
R6은 하기로부터 선택되며:
Figure pct00135
R7은 H, C1-C20 알킬, C3-C20 사이클로알킬, C3-C20 헤테로사이클로알킬; C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되고; R8은 C3-C20 헤테로사이클로알킬, C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되며;
E는 알부민 단백질(예를 들어, 서열번호 69 내지 71 중 어느 하나의 서열을 갖는 알부민 단백질), 알부민 단백질-결합 펩타이드 또는 Fc-결합 펩타이드를 포함하고; 각각의 L-A1에서 L은 E 내의 표면 노출된 시스테인의 황 원자 또는 표면 노출된 라이신의 질소 원자 및 A1에 독립적으로 공유 부착된 링커이며; T는 1 내지 20(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20)의 정수이고, E에 연결된 물결선은, 각각의 L-A1이 (예를 들어, 결합 또는 링커에 의해서) E 내의 용매-노출된 시스테인의 황 원자 또는 용매-노출된 라이신의 질소 원자에 독립적으로 공유 부착된다는 것을 나타낸다. T가 1 초과인 경우(예를 들어, T가 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20)인 경우, 각각의 A는 화학식 (A-I) 내지 (A-XII) 중 어느 하나로부터 독립적으로 선택될 수 있다.
또 다른 양상에서, 본 발명은 하기 화학식 (4)로 기재되는 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 특징으로 한다:
Figure pct00136
식 중, 각각의 A1은 하기 화학식 (A-I) 내지 (A-V) 중 어느 하나로부터 독립적으로 선택되되:
Figure pct00137
식 중, R1은 -OH, -NH2, -NHC(=NH)NH2 및 -NHC(=NH)NHR6으로부터 선택되며; R2 및 R3은 -H, -OH, -F, -Cl 및 -Br로부터 각각 독립적으로 선택되고; R4는 -CO2H, -P(=O)(OH)2, -SO3H로부터 선택되며; R5는 -COCH3, -COCF3, -SO2CH3로부터 선택되고; X는 -O- 및 -S-로부터 선택되며; Y는 하기로부터 선택되고:
Figure pct00138
R6은 하기로부터 선택되며:
Figure pct00139
R7은 H, C1-C20 알킬, C3-C20 사이클로알킬, C3-C20 헤테로사이클로알킬; C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되고; R8은 C3-C20 헤테로사이클로알킬, C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되며;
E는 알부민 단백질(예를 들어, 서열번호 69 내지 71 중 어느 하나의 서열을 갖는 알부민 단백질), 알부민 단백질-결합 펩타이드 또는 Fc-결합 펩타이드를 포함하고; 각각의 L-A1에서 L은 E 내의 표면 노출된 시스테인의 황 원자 또는 표면 노출된 라이신의 질소 원자 및 A1에 독립적으로 공유 부착된 링커이며; T는 1 내지 20(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20)의 정수이고, E에 연결된 물결선은, 각각의 L-A가 (예를 들어, 결합 또는 링커에 의해서) E 내의 용매-노출된 시스테인의 황 원자 또는 용매-노출된 라이신의 질소 원자에 독립적으로 공유 부착된다는 것을 나타낸다. T가 1 초과인 경우(예를 들어, T가 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20)인 경우, 각각의 A1은 화학식 (A-I) 내지 (A-V) 중 어느 하나로부터 독립적으로 선택될 수 있다.
또 다른 양상에서, 본 발명은 하기 화학식 (4)로 기재되는 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 특징으로 한다:
Figure pct00140
식 중, 각각의 A1은 하기 화학식 (A-VI) 내지 (A-IX) 중 어느 하나로부터 독립적으로 선택되되:
Figure pct00141
식 중, R1은 -OH, -NH2, -NHC(=NH)NH2 및 -NHC(=NH)NHR6으로부터 선택되며; R2 및 R3은 -H, -OH, -F, -Cl 및 -Br로부터 각각 독립적으로 선택되고; R4는 -CO2H, -P(=O)(OH)2, -SO3H로부터 선택되며; R5는 -COCH3, -COCF3, -SO2CH3로부터 선택되고; X는 -O- 및 -S-로부터 선택되며; Y는 하기로부터 선택되고:
Figure pct00142
R6은 하기로부터 선택되며:
Figure pct00143
R7은 H, C1-C20 알킬, C3-C20 사이클로알킬, C3-C20 헤테로사이클로알킬; C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되고; R8은 C3-C20 헤테로사이클로알킬, C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되며;
E는 알부민 단백질(예를 들어, 서열번호 69 내지 71 중 어느 하나의 서열을 갖는 알부민 단백질), 알부민 단백질-결합 펩타이드 또는 Fc-결합 펩타이드를 포함하고; 각각의 L-A1에서 L은 E 내의 표면 노출된 시스테인의 황 원자 또는 표면 노출된 라이신의 질소 원자 및 A1에 독립적으로 공유 부착된 링커이며; T는 1 내지 20(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20)의 정수이고, E에 연결된 물결선은, 각각의 L-A1이 (예를 들어, 결합 또는 링커에 의해서) E 내의 용매-노출된 시스테인의 황 원자 또는 용매-노출된 라이신의 질소 원자에 독립적으로 공유 부착된다는 것을 나타낸다. T가 1 초과인 경우(예를 들어, T가 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20)인 경우, 각각의 A는 화학식 (A-VI) 내지 (A-IX) 중 어느 하나로부터 독립적으로 선택될 수 있다.
또 다른 양상에서, 본 발명은 하기 화학식 (5)로 기재되는 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 특징으로 한다:
Figure pct00144
식 중, 각각의 Int는 독립적으로 표 1의 중간체 중 임의의 하나로부터 선택되고; E는 알부민 단백질(예를 들어, 서열번호 69 내지 71 중 어느 하나의 서열을 갖는 알부민 단백질), 알부민 단백질-결합 펩타이드 또는 Fc-결합 펩타이드를 포함하고; 각각의 L-Int에서 L은 E 내의 표면 노출된 시스테인의 황 원자 또는 표면 노출된 라이신의 질소 원자 및 Int에 독립적으로 공유 부착된 링커이며; T는 1 내지 20(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20)의 정수이고, 상기 E에 연결된 물결선은, 각각의 L-Int가 독립적으로 E 내의 용매-노출된 시스테인의 황 원자 또는 용매-노출된 라이신의 질소 원자에 독립적으로 공유 부착된다는 것을 나타낸다. T가 1을 초과하는 경우(예를 들어, T가 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20을 초과하는 경우), 각각의 Int는 표 1의 중간체 중 임의의 하나로부터 독립적으로 선택될 수 있다.
표 1의 중간체는 본 명세서에 기재되거나 예시된 방법 중 임의의 것을 비롯하여, 당업자에게 공지된 임의의 적합한 방법에 의해서 (예를 들어, 링커에 의해서) 알부민 단백질, 알부민 단백질-결합 펩타이드 또는 Fc-결합 펩타이드에 접합될 수 있다. 일부 실시형태에서, 접합체(예를 들어, 화학식 (5)로 기재되는 접합체)는 E를 포함하며, 여기서 E는 알부민 단백질(예를 들어, 서열번호 69 내지 71 중 어느 하나의 서열을 갖는 알부민 단백질), 알부민 단백질-결합 펩타이드 또는 Fc-결합 펩타이드이다. 바람직한 실시형태에서, E의 하나 이상의 표면 노출된 라이신 잔기의 하나 이상의 질소 원자 또는 E 내의 하나 이상의 표면 노출된 시스테인의 하나 이상의 황 원자는 링커(예를 들어, PEG2-PEG20 링커)에 공유 접합된다. E에 접합된 링커는 작용화되어 그것은 반응하여 본 명세서에 기재된 Int(예를 들어, 표 1의 Int) 중 임의의 것과 공유 결합을 형성할 수 있다. 바람직한 실시형태에서, E는 아지도기로 작용화된 링커에 접합되고, Int(예를 들어, 표 1의 Int)는 알킨기로 작용화된다. E의 링커-아지도와 Int의 링커-알킨의 (예를 들어, 클릭(click) 화학에 의한) 접합은 본 발명의 접합체, 예를 들어, 화학식 (5)로 기재되는 접합체를 형성한다. 더 다른 실시형태에서, E는 알킨로 작용화된 링커에 접합되고, Int(예를 들어, 표 1의 Int)는 아지도로 작용화된다. E의 링커-알킨과 Int의 링커-아지도의 (예를 들어, 클릭(click) 화학에 의한) 접합은 본 발명의 접합체, 예를 들어, 화학식 (5)로 기재되는 접합체를 형성한다.
일부 실시형태에서, 각각의 E는 서열번호 69 내지 71 중 어느 하나의 서열을 갖는 알부민 단백질을 포함한다.
일부 실시형태에서, T는 1이고, L-A는 서열번호 69의 Cys34에 상응하는 황 원자에 공유 부착된다.
또 다른 양상에서, 본 발명은 이전 양상 중 임의의 것에 기재된 접합체의 집단을 특징으로 하며, 여기서 T의 평균값은 1 내지 20이다(예를 들어, T의 평균값은 1 내지 2, 1 내지 3, 1 내지 4, 1 내지 5, 5 내지 10, 10 내지 15 또는 15 내지 20이다). 일부 실시형태에서, T의 평균값은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20이다.
또 다른 양상에서, 본 발명은 (i) 제1 모이어티, A1; (ii) 제2 모이어티, A2; (iii) Fc 도메인 단량체 또는 Fc 도메인; 및(iv) A1 및 A2, 및 Fc 도메인 단량체 또는 Fc 도메인에 공유 부착된 링커를 포함하는 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 특징으로 하며; 여기서 각각의 A1 및 각각의 A2는 하기 화학식 (A-I) 내지 (A-XII) 중 어느 하나로부터 독립적으로 선택된다:
Figure pct00145
식 중, R1은 -OH, -NH2, -NHC(=NH)NH2 및 -NHC(=NH)NHR6으로부터 선택되며; R2 및 R3은 -H, -OH, -F, -Cl 및 -Br로부터 각각 독립적으로 선택되고; R4는 -CO2H, -P(=O)(OH)2, -SO3H로부터 선택되며; R5는 -COCH3, -COCF3, -SO2CH3로부터 선택되고; X는 -O- 및 -S-로부터 선택되며; Y는 하기로부터 선택되고:
Figure pct00146
R6은 하기로부터 선택되며:
Figure pct00147
R7은 H, C1-C20 알킬, C3-C20 사이클로알킬, C3-C20 헤테로사이클로알킬; C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴; R8 로부터 선택되며 C3-C20 헤테로사이클로알킬, C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택된다.
또 다른 양상에서, 본 발명은 (i) 제1 모이어티, A1; (ii) 제2 모이어티, A2; (iii) Fc 도메인 단량체 또는 Fc 도메인; 및(iv) A1 및 A2, 및 Fc 도메인 단량체 또는 Fc 도메인에 공유 부착된 링커를 포함하는 접합체를 특징으로 하며; 여기서 각각의 A1 및 각각의 A2는 하기 화학식 (A-I) 내지 (A-V) 중 어느 하나로부터 독립적으로 선택된다:
Figure pct00148
식 중, R1은 -OH, -NH2, -NHC(=NH)NH2 및 -NHC(=NH)NHR6으로부터 선택되며; R2 및 R3은 -H, -OH, -F, -Cl 및 -Br로부터 각각 독립적으로 선택되고; R4는 -CO2H, -P(=O)(OH)2, -SO3H로부터 선택되며; R5는 -COCH3, -COCF3, -SO2CH3로부터 선택되고; X는 -O- 및 -S-로부터 선택되며; Y는 하기로부터 선택되고:
Figure pct00149
R6은 하기로부터 선택되며:
Figure pct00150
R7은 H, C1-C20 알킬, C3-C20 사이클로알킬, C3-C20 헤테로사이클로알킬; C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되고; R8은 C3-C20 헤테로사이클로알킬, C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되며 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염;
또 다른 양상에서, 본 발명은 (i) 제1 모이어티, A1; (ii) 제2 모이어티, A2; (iii) Fc 도메인 단량체 또는 Fc 도메인; 및(iv) A1 및 A2, 및 Fc 도메인 단량체 또는 Fc 도메인에 공유 부착된 링커를 포함하는 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 특징으로 하며; 여기서 각각의 A1 및 각각의 A2는 하기 화학식 (A-VI) 내지 (A-IX) 중 어느 하나로부터 독립적으로 선택된다:
Figure pct00151
식 중, R1은 -OH, -NH2, -NHC(=NH)NH2 및 -NHC(=NH)NHR6으로부터 선택되며; R2 및 R3은 -H, -OH, -F, -Cl 및 -Br로부터 각각 독립적으로 선택되고; R4는 -CO2H, -P(=O)(OH)2, -SO3H로부터 선택되며; R5는 -COCH3, -COCF3, -SO2CH3로부터 선택되고; X는 -O- 및 -S-로부터 선택되며; Y는 하기로부터 선택되고:
Figure pct00152
R6은 하기로부터 선택되며:
Figure pct00153
R7은 H, C1-C20 알킬, C3-C20 사이클로알킬, C3-C20 헤테로사이클로알킬; C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되고; R8은 C3-C20 헤테로사이클로알킬, C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택된다.
또 다른 양상에서, 본 발명은 (i) 제1 모이어티, Int; (ii) Fc 도메인 단량체 또는 Fc 도메인; 및 (iv) Int 및 Fc 도메인 단량체 또는 Fc 도메인에 공유 부착된 링커를 포함하는 접합체를 특징으로 하며; 여기서 각각의 Int는 표 1의 중간체 중 어느 하나로부터 독립적으로 선택된다.
또 다른 양상에서, 본 발명은 (i) 제1 모이어티, A1; (ii) 제2 모이어티, A2; (iii) 알부민 단백질, 알부민 단백질-결합 펩타이드 또는 Fc-결합 펩타이드; 및(iv) A1 및 A2, 및 알부민 단백질, 알부민 단백질-결합 펩타이드 또는 Fc-결합 펩타이드에 공유 부착된 링커를 포함하는 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 특징으로 하며; 여기서 각각의 A1 및 각각의 A2는 하기 화학식 (A-I) 내지 (A-XII) 중 어느 하나로부터 독립적으로 선택된다:
Figure pct00154
Figure pct00155
식 중, R1은 -OH, -NH2, -NHC(=NH)NH2 및 -NHC(=NH)NHR6으로부터 선택되며; R2 및 R3은 -H, -OH, -F, -Cl 및 -Br로부터 각각 독립적으로 선택되고; R4는 -CO2H, -P(=O)(OH)2, -SO3H로부터 선택되며; R5는 -COCH3, -COCF3, -SO2CH3로부터 선택되고; X는 -O- 및 -S-로부터 선택되며; Y는 하기로부터 선택되고:
Figure pct00156
R6은 하기로부터 선택되며:
Figure pct00157
R7은 H, C1-C20 알킬, C3-C20 사이클로알킬, C3-C20 헤테로사이클로알킬; C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되고; R8은 C3-C20 헤테로사이클로알킬, C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택된다.
또 다른 양상에서, 본 발명은 (i) 제1 모이어티, A1; (ii) 제2 모이어티, A2; (iii) 알부민 단백질, 알부민 단백질-결합 펩타이드 또는 Fc-결합 펩타이드; 및(iv) A1 및 A2, 및 알부민 단백질, 알부민 단백질-결합 펩타이드 또는 Fc-결합 펩타이드에 공유 부착된 링커를 포함하는 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 특징으로 하며; 여기서 각각의 A1 및 각각의 A2는 하기 화학식 (A-I) 내지 (A-V) 중 어느 하나로부터 독립적으로 선택된다:
Figure pct00158
식 중, R1은 -OH, -NH2, -NHC(=NH)NH2 및 -NHC(=NH)NHR6으로부터 선택되며; R2 및 R3은 -H, -OH, -F, -Cl 및 -Br로부터 각각 독립적으로 선택되고; R4는 -CO2H, -P(=O)(OH)2, -SO3H로부터 선택되며; R5는 -COCH3, -COCF3, -SO2CH3로부터 선택되고; X는 -O- 및 -S-로부터 선택되며; Y는 하기로부터 선택되고:
Figure pct00159
R6은 하기로부터 선택되며:
Figure pct00160
R7은 H, C1-C20 알킬, C3-C20 사이클로알킬, C3-C20 헤테로사이클로알킬; C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되고; R8은 C3-C20 헤테로사이클로알킬, C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택된다.
또 다른 양상에서, 본 발명은 (i) 제1 모이어티, A1; (ii) 제2 모이어티, A2; (iii) 알부민 단백질, 알부민 단백질-결합 펩타이드 또는 Fc-결합 펩타이드; 및(iv) A1 및 A2, 및 알부민 단백질, 알부민 단백질-결합 펩타이드 또는 Fc-결합 펩타이드에 공유 부착된 링커를 포함하는 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 특징으로 하며; 여기서 각각의 A1 및 각각의 A2는 하기 화학식 (A-VI) 내지 (A-IX) 중 어느 하나로부터 독립적으로 선택된다:
Figure pct00161
식 중, R1은 -OH, -NH2, -NHC(=NH)NH2 및 -NHC(=NH)NHR6으로부터 선택되며; R2 및 R3은 -H, -OH, -F, -Cl 및 -Br로부터 각각 독립적으로 선택되고; R4는 -CO2H, -P(=O)(OH)2, -SO3H로부터 선택되며; R5는 -COCH3, -COCF3, -SO2CH3로부터 선택되고; X는 -O- 및 -S-로부터 선택되며; Y는 하기로부터 선택되고:
Figure pct00162
R6은 하기로부터 선택되며:
Figure pct00163
R7은 H, C1-C20 알킬, C3-C20 사이클로알킬, C3-C20 헤테로사이클로알킬; C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되고; R8은 C3-C20 헤테로사이클로알킬, C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택된다.
또 다른 양상에서, 본 발명은 하기 화학식 (D-I)로 기재되는 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 특징으로 한다:
Figure pct00164
식 중, 각각의 A1 및 각각의 A2는 하기 화학식 (A-I) 내지 (A-XII) 중 어느 하나로부터 독립적으로 선택되되:
Figure pct00165
Figure pct00166
식 중, R1은 -OH, -NH2, -NHC(=NH)NH2 및 -NHC(=NH)NHR6으로부터 선택되며; R2 및 R3은 -H, -OH, -F, -Cl 및 -Br로부터 각각 독립적으로 선택되고; R4는 -CO2H, -P(=O)(OH)2, -SO3H로부터 선택되며; R5는 -COCH3, -COCF3, -SO2CH3로부터 선택되고; X는 -O- 및 -S-로부터 선택되며; Y는 하기로부터 선택되고:
Figure pct00167
R6은 하기로부터 선택되며:
Figure pct00168
R7은 H, C1-C20 알킬, C3-C20 사이클로알킬, C3-C20 헤테로사이클로알킬; C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되고; R8은 C3-C20 헤테로사이클로알킬, C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되며; 각각의 E는 Fc 도메인 단량체(예를 들어, 서열번호 1 내지 68 중 어느 하나의 서열을 갖는 Fc 도메인 단량체), 알부민 단백질(예를 들어, 서열번호 69 내지 71 중 어느 하나의 서열을 갖는 알부민 단백질), 알부민 단백질-결합 펩타이드 또는 Fc-결합 펩타이드를 포함하고; n은 1 또는 2이며; T는 1 내지 20의 정수(예를 들어, T는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20임)이고, L은 E, A1 및 A2 각각에 공유 부착된 링커이다. T가 1보다 큰 경우(예를 들어, T가 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20)인 경우, 각각의 A1-L-A2는 독립적으로 선택될 수 있다(예를 들어, 본 명세서에 기재된 A1-L-A2 구조 중 임의의 것으로부터 독립적으로 선택될 수 있다).
또 다른 양상에서, 본 발명은 하기 화학식 (D-I)로 기재되는 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 특징으로 한다:
Figure pct00169
식 중, 각각의 A1 및 각각의 A2는 하기 화학식 (A-I) 내지 (A-V) 중 어느 하나로부터 독립적으로 선택되되:
Figure pct00170
식 중, R1은 -OH, -NH2, -NHC(=NH)NH2 및 -NHC(=NH)NHR6으로부터 선택되며; R2 및 R3은 -H, -OH, -F, -Cl 및 -Br로부터 각각 독립적으로 선택되고; R4는 -CO2H, -P(=O)(OH)2, -SO3H로부터 선택되며; R5는 -COCH3, -COCF3, -SO2CH3로부터 선택되고; X는 -O- 및 -S-로부터 선택되며; Y는 하기로부터 선택되고:
Figure pct00171
R6은 하기로부터 선택되며:
Figure pct00172
R7은 H, C1-C20 알킬, C3-C20 사이클로알킬, C3-C20 헤테로사이클로알킬; C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되고; R8은 C3-C20 헤테로사이클로알킬, C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되며; 각각의 E는 Fc 도메인 단량체(예를 들어, 서열번호 1 내지 68 중 어느 하나의 서열을 갖는 Fc 도메인 단량체), 알부민 단백질(예를 들어, 서열번호 69 내지 71 중 어느 하나의 서열을 갖는 알부민 단백질), 알부민 단백질-결합 펩타이드 또는 Fc-결합 펩타이드를 포함하고; n은 1 또는 2이며; T는 1 내지 20의 정수(예를 들어, T는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20임)이고, L은 E, A1 및 A2 각각에 공유 부착된 링커이다. T가 1보다 큰 경우(예를 들어, T가 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20)인 경우, 각각의 A1-L-A2는 독립적으로 선택될 수 있다(예를 들어, 본 명세서에 기재된 A1-L-A2 구조 중 임의의 것으로부터 독립적으로 선택될 수 있다).
또 다른 양상에서, 본 발명은 하기 화학식 (D-I)로 기재되는 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 특징으로 한다:
Figure pct00173
식 중, 각각의 A1 및 각각의 A2는 하기 화학식 (A-VI) 내지 (A-IX) 중 어느 하나로부터 독립적으로 선택되되:
Figure pct00174
식 중, R1은 -OH, -NH2, -NHC(=NH)NH2 및 -NHC(=NH)NHR6으로부터 선택되며; R2 및 R3은 -H, -OH, -F, -Cl 및 -Br로부터 각각 독립적으로 선택되고; R4는 -CO2H, -P(=O)(OH)2, -SO3H로부터 선택되며; R5는 -COCH3, -COCF3, -SO2CH3로부터 선택되고; X는 -O- 및 -S-로부터 선택되며; Y는 하기로부터 선택되고:
Figure pct00175
R6은 하기로부터 선택되며:
Figure pct00176
R7은 H, C1-C20 알킬, C3-C20 사이클로알킬, C3-C20 헤테로사이클로알킬; C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되고; R8은 C3-C20 헤테로사이클로알킬, C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되며; 각각의 E는 Fc 도메인 단량체(예를 들어, 서열번호 1 내지 68 중 어느 하나의 서열을 갖는 Fc 도메인 단량체), 알부민 단백질(예를 들어, 서열번호 69 내지 71 중 어느 하나의 서열을 갖는 알부민 단백질), 알부민 단백질-결합 펩타이드 또는 Fc-결합 펩타이드를 포함하고; n은 1 또는 2이며; T는 1 내지 20의 정수(예를 들어, T는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20임)이고, L은 E, A1 및 A2 각각에 공유 부착된 링커이다. T가 1보다 큰 경우(예를 들어, T가 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20)인 경우, 각각의 A1-L-A2는 독립적으로 선택될 수 있다(예를 들어, 본 명세서에 기재된 A1-L-A2 구조 중 임의의 것으로부터 독립적으로 선택될 수 있다).
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (D-II) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염으로 기재된다:
Figure pct00177
.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (D-II-1) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염으로 기재된다:
Figure pct00178
.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (D-II-2) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염으로 기재된다:
Figure pct00179
.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (D-II-3) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염으로 기재된다:
Figure pct00180
식 중, L'는 L의 잔여부이고, y1 및 y2는 각각 독립적으로 1 내지 20의 정수이다(예를 들어, y1 및 y2는 각각 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20임). 일부 실시형태에서, L'는 질소 원자이다.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기로부터 선택된 구조를 갖는다:
Figure pct00181
또는
Figure pct00182
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (D-II-4) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염으로 기재된다:
Figure pct00183
.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (D-II-5) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염으로 기재된다:
Figure pct00184
식 중, L'는 L의 잔여부이고, y1 및 y2는 각각 독립적으로 1 내지 20의 정수이다(예를 들어, y1 및 y2는 각각 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20임). 일부 실시형태에서, L'는 질소 원자이다.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기로부터 선택된 구조 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 갖는다:
Figure pct00185
또는
Figure pct00186
.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기로부터 선택된 구조 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 갖는다:
Figure pct00187
또는
Figure pct00188
.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (D-II-6) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염으로 기재된다:
Figure pct00189
식 중, R7은 H, C1-C20 알킬, C3-C20 사이클로알킬, C3-C20 헤테로사이클로알킬; C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택된다.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (D-II-7) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염으로 기재된다:
Figure pct00190
.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (D-II-8) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염으로 기재된다:
Figure pct00191
식 중, L'는 L의 잔여부이고, y1 및 y2는 각각 독립적으로 1 내지 20의 정수이다(예를 들어, y1 및 y2는 각각 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20임). 일부 실시형태에서, L'는 질소 원자이다.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기의 구조 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 갖는다:
Figure pct00192
또는
Figure pct00193
.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기의 구조 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 갖는다:
Figure pct00194
또는
Figure pct00195
.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기의 구조 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 갖는다:
Figure pct00196
또는
Figure pct00197
.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (D-II-9) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염으로 기재된다:
Figure pct00198
.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (D-II-10) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염으로 기재된다:
Figure pct00199
식 중, L'는 L의 잔여부이고, y1 및 y2는 각각 독립적으로 1 내지 20의 정수이다(예를 들어, y1 및 y2는 각각 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20임).. 일부 실시형태에서, L'는 질소 원자이다.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기의 구조 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 갖는다:
Figure pct00200
일부 실시형태에서, 접합체는 하기의 구조 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 갖는다:
Figure pct00201
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (D-III) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염으로 기재된다:
Figure pct00202
.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (D-III-1) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염으로 기재된다:
Figure pct00203
.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (D-III-2) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염으로 기재된다:
Figure pct00204
.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (D-III-3) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염으로 기재된다:
Figure pct00205
식 중, L'는 L의 잔여부이고, y1 및 y2는 각각 독립적으로 1 내지 20의 정수이다(예를 들어, y1 및 y2는 각각 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20임). 일부 실시형태에서, L'는 질소 원자이다.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (D-III-4) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염으로 기재된다:
Figure pct00206
.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (D-III-5) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염으로 기재된다:
Figure pct00207
식 중, L'는 L의 잔여부이고, y1 및 y2는 각각 독립적으로 1 내지 20의 정수이다(예를 들어, y1 및 y2는 각각 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20임). 일부 실시형태에서, L'는 질소 원자이다.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (D-III-6) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염으으로 기재된다:
Figure pct00208
.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (D-III-7) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염으로 기재된다:
Figure pct00209
식 중, L'는 L의 잔여부이고, y1 및 y2는 각각 독립적으로 1 내지 20의 정수이다(예를 들어, y1 및 y2는 각각 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20임). 일부 실시형태에서, L'는 질소 원자이다.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (D-III-8) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염으로 기재된다:
Figure pct00210
.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (D-III-9) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염로 기재된다:
Figure pct00211
식 중, L'는 L의 잔여부이고, y1 및 y2는 각각 독립적으로 1 내지 20의 정수이다(예를 들어, y1 및 y2는 각각 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20임). 일부 실시형태에서, L'는 질소 원자이다.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (D-IV) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염로 기재된다:
Figure pct00212
.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (D-IV-1) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염로 기재된다:
Figure pct00213
.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (D-IV-2) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염로 기재된다:
Figure pct00214
식 중, L'는 L의 잔여부이고, y1 및 y2는 각각 독립적으로 1 내지 20의 정수이다(예를 들어, y1 및 y2는 각각 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20임). 일부 실시형태에서, L'는 질소 원자이다.일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (D-V) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염로 기재된다:
Figure pct00215
.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (D-V-1) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염로 기재된다:
Figure pct00216
.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (D-V-2) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염로 기재된다:
Figure pct00217
.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (D-V-3) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염으로 기재된다:
Figure pct00218
식 중, L'는 L의 잔여부이고, y1 및 y2는 각각 독립적으로 1 내지 20의 정수이다(예를 들어, y1 및 y2는 각각 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20임). 일부 실시형태에서, L'는 질소 원자이다. 일부 실시형태에서, y1 및 y2는 각각 1이거나, y1 및 y2는 각각 2이거나, y1 및 y2는 각각 3이다.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (D-V-4) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염로 기재된다:
Figure pct00219
.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (D-V-5) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염로 기재된다:
Figure pct00220
식 중, L'는 L의 잔여부이고, y1 및 y2는 각각 독립적으로 1 내지 20의 정수이다(예를 들어, y1 및 y2는 각각 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20임). 일부 실시형태에서, L'는 질소 원자이다. 일부 실시형태에서, y1 및 y2는 각각 1이거나, y1 및 y2는 각각 2이거나, y1 및 y2는 각각 3이다.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (D-V-6) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염로 기재된다:
Figure pct00221
.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (D-V-7) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염로 기재된다:
Figure pct00222
.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (D-V-8) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염로 기재된다:
Figure pct00223
식 중, L'는 L의 잔여부이고, y1 및 y2는 각각 독립적으로 1 내지 20의 정수이다(예를 들어, y1 및 y2는 각각 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20임). 일부 실시형태에서, L'는 질소 원자이다. 일부 실시형태에서, y1 및 y2는 각각 1이거나, y1 및 y2는 각각 2이거나, y1 및 y2는 각각 3이다.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (D-V-9) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염로 기재된다:
Figure pct00224
.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (D-V-10) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염으로 기재된다:
Figure pct00225
식 중, L'는 L의 잔여부이고, y1 및 y2는 각각 독립적으로 1 내지 20의 정수이다(예를 들어, y1 및 y2는 각각 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20임). 일부 실시형태에서, L'는 질소 원자이다. 일부 실시형태에서, y1 및 y2는 각각 1이거나, y1 및 y2는 각각 2이거나, y1 및 y2는 각각 3이다.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (D-VI) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염으로 기재된다:
Figure pct00226
.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (D-VI-1) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염로 기재된다:
Figure pct00227
.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (D-VI-2) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염로 기재된다:
Figure pct00228
.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (D-VI-3) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염으로 기재된다:
Figure pct00229
식 중, L'는 L의 잔여부이고, y1 및 y2는 각각 독립적으로 1 내지 20의 정수이다(예를 들어, y1 및 y2는 각각 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20임). 일부 실시형태에서, L'는 질소 원자이다. 일부 실시형태에서, y1 및 y2는 각각 1이거나, y1 및 y2는 각각 2이거나, y1 및 y2는 각각 3이다.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (D-VI-4) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염로 기재된다:
Figure pct00230
.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (D-VI-5) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염로 기재된다:
Figure pct00231
식 중, L'는 L의 잔여부이고, y1 및 y2는 각각 독립적으로 1 내지 20의 정수이다(예를 들어, y1 및 y2는 각각 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20임). 일부 실시형태에서, L'는 질소 원자이다. 일부 실시형태에서, y1 및 y2는 각각 1이거나, y1 및 y2는 각각 2이거나, y1 및 y2는 각각 3이다.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (D-VI-6) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염으로 기재된다:
Figure pct00232
.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (D-VI-7) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염로 기재된다:
Figure pct00233
식 중, L'는 L의 잔여부이고, y1 및 y2는 각각 독립적으로 1 내지 20의 정수이다(예를 들어, y1 및 y2는 각각 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20임). 일부 실시형태에서, L'는 질소 원자이다. 일부 실시형태에서, y1 및 y2는 각각 1이거나, y1 및 y2는 각각 2이거나, y1 및 y2는 각각 3이다.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (D-VI-8) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염로 기재된다:
Figure pct00234
.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (D-VI-9) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염로 기재된다:
Figure pct00235
식 중, L'는 L의 잔여부이고, y1 및 y2는 각각 독립적으로 1 내지 20의 정수이다(예를 들어, y1 및 y2는 각각 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20임). 일부 실시형태에서, L'는 질소 원자이다. 일부 실시형태에서, y1 및 y2는 각각 1이거나, y1 및 y2는 각각 2이거나, y1 및 y2는 각각 3이다.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (D-VII) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염로 기재된다:
Figure pct00236
.
본 명세서에 기재된 양상 중 임의의 것의 일부 실시형태에서, R1은 OH이다. 본 명세서에 기재된 양상 중 임의의 것의 일부 실시형태에서, R1은 NH2이다. 본 명세서에 기재된 양상 중 임의의 것의 일부 실시형태에서, R1은 -NHC(=NH)NH2 이다.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (D-VIII) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염로 기재된다:
Figure pct00237
.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (D-VIII-1) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염로 기재된다:
Figure pct00238
.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (D-VIII-2) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염로 기재된다:
Figure pct00239
.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (D-VIII-3) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염으로 기재된다:
Figure pct00240
식 중, L'는 L의 잔여부이고, y1 및 y2는 각각 독립적으로 1 내지 20의 정수이다(예를 들어, y1 및 y2는 각각 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20임). 일부 실시형태에서, L'는 질소 원자이다.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기로부터 선택된 구조 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염를 갖는다:
Figure pct00241
또는
Figure pct00242
.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (D-VIII-4) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염로 기재된다:
Figure pct00243
.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (D-VIII-5) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염로 기재된다:
Figure pct00244
식 중, L'는 L의 잔여부이고, y1 및 y2는 각각 독립적으로 1 내지 20의 정수이다(예를 들어, y1 및 y2는 각각 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20임). 일부 실시형태에서, L'는 질소 원자이다.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기로부터 선택된 구조 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염를 갖는다:
Figure pct00245
또는
Figure pct00246
.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 구조 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염로 기재된다:
Figure pct00247
.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (D-VIII-6) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염으로 기재된다:
Figure pct00248
.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (D-VIII-7) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염로 기재된다:
Figure pct00249
식 중, L'는 L의 잔여부이고, y1 및 y2는 각각 독립적으로 1 내지 20의 정수이다(예를 들어, y1 및 y2는 각각 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20임). 일부 실시형태에서, L'는 질소 원자이다.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (D-VIII-8)로 기재된다:
Figure pct00250
.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (D-VIII-9) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염로 기재된다:
Figure pct00251
식 중, L'는 L의 잔여부이고, y1 및 y2는 각각 독립적으로 1 내지 20의 정수이다(예를 들어, y1 및 y2는 각각 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20임). 일부 실시형태에서, L'는 질소 원자이다.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (D-VIII-10) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염으로 기재된다:
Figure pct00252
.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (D-VIII-11) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염로 기재된다:
Figure pct00253
식 중, L'는 L의 잔여부이고, y1 및 y2는 각각 독립적으로 1 내지 20의 정수이다(예를 들어, y1 및 y2는 각각 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20임). 일부 실시형태에서, L'는 질소 원자이다. 일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (D-IX) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염로 기재된다:
Figure pct00254
.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (D-IX-1) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염로 기재된다:
Figure pct00255
.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (D-IX-2) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염로 기재된다:
Figure pct00256
.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (D-IX-3) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염으로 기재된다:
Figure pct00257
.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (D-IX-4) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염로 기재된다:
Figure pct00258
.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (D-IX-5) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염로 기재된다:
Figure pct00259
.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (D-IX-6) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염으로 기재된다:
Figure pct00260
.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (D-X) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염으로 기재된다:
Figure pct00261
.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (D-X-1) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염으로 기재된다:
Figure pct00262
.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (D-X-2) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염로 기재된다:
Figure pct00263
.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (D-X-3) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염으로 기재된다:
Figure pct00264
.
본 명세서에 기재된 양상 중 임의의 것의 일부 실시형태에서, L 또는 L'는 1개 이상의 선택적으로 치환된 C1-C20 알킬렌, 선택적으로 치환된 C1-C20 헤테로알킬렌, 선택적으로 치환된 C2-C20 알켄일렌, 선택적으로 치환된 C2-C20 헤테로알켄일렌, 선택적으로 치환된 C2-C20 알킨일렌, 선택적으로 치환된 C2-C20 헤테로알킨일렌, 선택적으로 치환된 C3-C20 사이클로알킬렌, 선택적으로 치환된 C3-C20 헤테로사이클로알킬렌, 선택적으로 치환된 C4-C20 사이클로알켄일렌, 선택적으로 치환된 C4-C20 헤테로사이클로알켄일렌, 선택적으로 치환된 C8-C20 사이클로알킨일렌, 선택적으로 치환된 C8-C20 헤테로사이클로알킨일렌, 선택적으로 치환된 C5-C15 아릴렌, 선택적으로 치환된 C2-C15 헤테로아릴렌, O, S, NRi, P, 카보닐, 티오카보닐, 설포닐, 포스페이트, 포스포릴 또는 이미노를 포함하고, Ri는 H, 선택적으로 치환된 C1-C20 알킬, 선택적으로 치환된 C1-C20 헤테로알킬, 선택적으로 치환된 C2-C20 알켄일, 선택적으로 치환된 C2-C20 헤테로알켄일, 선택적으로 치환된 C2-C20 알킨일, 선택적으로 치환된 C2-C20 헤테로알킨일, 선택적으로 치환된 C3-C20 사이클로알킬, 선택적으로 치환된 C3-C20 헤테로사이클로알킬, 선택적으로 치환된 C4-C20 사이클로알켄일, 선택적으로 치환된 C4-C20 헤테로사이클로알켄일, 선택적으로 치환된 C8-C20 사이클로알킨일, 선택적으로 치환된 C8-C20 헤테로사이클로알킨일, 선택적으로 치환된 C5-C15 아릴 또는 선택적으로 치환된 C2-C15 헤테로아릴이다.
본 명세서에 기재된 양상 중 임의의 것의 일부 실시형태에서, L 또는 L'의 골격은 1개 이상의 선택적으로 치환된 C1-C20 알킬렌, 선택적으로 치환된 C1-C20 헤테로알킬렌, 선택적으로 치환된 C2-C20 알켄일렌, 선택적으로 치환된 C2-C20 헤테로알켄일렌, 선택적으로 치환된 C2-C20 알킨일렌, 선택적으로 치환된 C2-C20 헤테로알킨일렌, 선택적으로 치환된 C3-C20 사이클로알킬렌, 선택적으로 치환된 C3-C20 헤테로사이클로알킬렌, 선택적으로 치환된 C4-C20 사이클로알켄일렌, 선택적으로 치환된 C4-C20 헤테로사이클로알켄일렌, 선택적으로 치환된 C8-C20 사이클로알킨일렌, 선택적으로 치환된 C8-C20 헤테로사이클로알킨일렌, 선택적으로 치환된 C5-C15 아릴렌, 선택적으로 치환된 C2-C15 헤테로아릴렌, O, S, NRi, P, 카보닐, 티오카보닐, 설포닐, 포스페이트, 포스포릴 또는 이미노로 이루어지고, Ri는 H, 선택적으로 치환된 C1-C20 알킬, 선택적으로 치환된 C1-C20 헤테로알킬, 선택적으로 치환된 C2-C20 알켄일, 선택적으로 치환된 C2-C20 헤테로알켄일, 선택적으로 치환된 C2-C20 알킨일, 선택적으로 치환된 C2-C20 헤테로알킨일, 선택적으로 치환된 C3-C20 사이클로알킬, 선택적으로 치환된 C3-C20 헤테로사이클로알킬, 선택적으로 치환된 C4-C20 사이클로알켄일, 선택적으로 치환된 C4-C20 헤테로사이클로알켄일, 선택적으로 치환된 C8-C20 사이클로알킨일, 선택적으로 치환된 C8-C20 헤테로사이클로알킨일, 선택적으로 치환된 C5-C15 아릴 또는 선택적으로 치환된 C2-C15 헤테로아릴이다.
본 명세서에 기재된 양상 중 임의의 것의 일부 실시형태에서, L 또는 L'는 치환된 옥소이다. 일부 실시형태에서, L 또는 L'의 골격은 250개 이하의 원자를 포함한다. 일부 실시형태에서, L 또는 L'는 아마이드, 카바메이트, 설포닐, 또는 유레아 링키지를 형성할 수 있다. 일부 실시형태에서 L 또는 L'는 결합이다. 일부 실시형태에서, L 또는 L'는 원자이다.
본 명세서에 기재된 양상 중 임의의 것의 일부 실시형태에서, 각각의 L은 하기 화학식 (D-L-I)로 기재된다:
Figure pct00265
식 중, LA는 화학식 GA1-(ZA1)g1-(YA1)h1-(ZA2)i1-(YA2)j1-(ZA3)k1-(YA3)l1-(ZA4)m1-(YA4)n1-(ZA5)o1-GA2로 기재되고; LB는 화학식 GB1-(ZB1)g2-(YB1)h2-(ZB2)i2-(YB2)j2-(ZB3)k2-(YB3)l2-(ZB4)m2-(YB4)n2-(ZB5)o2-GB2로 기재되며; LC는 화학식 GC1-(ZC1)g3-(YC1)h3-(ZC2)i3-(YC2)j3-(ZC3)k3-(YC3)l3-(ZC4)m3-(YC4)n3-(ZC5)o3-GC2로 기재되고; GA1은 Q에 부착된 결합이며; GA2는 A1에 부착된 결합이고; GB1은 Q에 부착된 결합이며; GB2는 A2에 부착된 결합이고; GC1은 Q에 부착된 결합이며;GC2는 E에 접합된 결합 또는 E에 접합된 작용기와 반응할 수 있는 작용기(예를 들어, 말레이미드 및 시스테인, 아민 및 활성화된 카복실산, 티올 및 말레이미드, 활성화된 설폰산 및 아민, 아이소사이아네이트 및 아민, 아자이드 및 알킨 및 알켄 및 테트라진)이고; ZA1, ZA2, ZA3, ZA4, ZA5, ZB1, ZB2, ZB3, ZB4, ZB5, ZC1, ZC2, ZC3, ZC4 및 ZC5 각각은 독립적으로, 선택적으로 치환된 C1-C20 알킬렌, 선택적으로 치환된 C1-C20 헤테로알킬렌, 선택적으로 치환된 C2-C20 알켄일렌, 선택적으로 치환된 C2-C20 헤테로알켄일렌, 선택적으로 치환된 C2-C20 알킨일렌, 선택적으로 치환된 C2-C20 헤테로알킨일렌, 선택적으로 치환된 C3-C20 사이클로알킬렌, 선택적으로 치환된 C3-C20 헤테로사이클로알킬렌, 선택적으로 치환된 C4-C20 사이클로알켄일렌, 선택적으로 치환된 C4-C20 헤테로사이클로알켄일렌, 선택적으로 치환된 C8-C20 사이클로알킨일렌, 선택적으로 치환된 C8-C20 헤테로사이클로알킨일렌, 선택적으로 치환된 C5-C15 아릴렌 또는 선택적으로 치환된 C2-C15 헤테로아릴렌이며; YA1, YA2, YA3, YA4, YB1, YB2, YB3, YB4, YC1, YC2, YC3 및 YC4 각각은 독립적으로, O, S, NRi, P, 카보닐, 티오카보닐, 설포닐, 포스페이트, 포스포릴 또는 이미노이고; Ri는 H, 선택적으로 치환된 C1-C20 알킬, 선택적으로 치환된 C1-C20 헤테로알킬, 선택적으로 치환된 C2-C20 알켄일, 선택적으로 치환된 C2-C20 헤테로알켄일, 선택적으로 치환된 C2-C20 알킨일, 선택적으로 치환된 C2-C20 헤테로알킨일, 선택적으로 치환된 C3-C20 사이클로알킬, 선택적으로 치환된 C3-C20 헤테로사이클로알킬, 선택적으로 치환된 C4-C20 사이클로알켄일, 선택적으로 치환된 C4-C20 헤테로사이클로알켄일, 선택적으로 치환된 C8-C20 사이클로알킨일, 선택적으로 치환된 C8-C20 헤테로사이클로알킨일, 선택적으로 치환된 C5-C15 아릴 또는 선택적으로 치환된 C2-C15 헤테로아릴이며; g1, h1, i1, j1, k1, l1, m1, n1, o1, g2, h2, i2, j2, k2, l2, m2, n2, o2, g3, h3, i3, j3, k3, l3, m3, n3 및 o3 각각은 독립적으로, 0 또는 1이고; Q는 질소 원자, 선택적으로 치환된 C1-C20 알킬렌, 선택적으로 치환된 C1-C20 헤테로알킬렌, 선택적으로 치환된 C2-C20 알켄일렌, 선택적으로 치환된 C2-C20 헤테로알켄일렌, 선택적으로 치환된 C2-C20 알킨일렌, 선택적으로 치환된 C2-C20 헤테로알킨일렌, 선택적으로 치환된 C3-C20 사이클로알킬렌, 선택적으로 치환된 C3-C20 헤테로사이클로알킬렌, 선택적으로 치환된 C4-C20 사이클로알켄일렌, 선택적으로 치환된 C4-C20 헤테로사이클로알켄일렌, 선택적으로 치환된 C8-C20 사이클로알킨일렌, 선택적으로 치환된 C8-C20 헤테로사이클로알킨일렌, 선택적으로 치환된 C5-C15 아릴렌 또는 선택적으로 치환된 C2-C15 헤테로아릴렌이다.
일부 실시형태에서, LC는 Fc 도메인, Fc-결합 펩타이드, 알부민 단백질 또는 알부민 단백질-결합 펩타이드에 대해서 2개의 부착점(예를 들어, 2개의 GC2)을 가질 수 있다.
본 명세서에 기재된 양상 중 임의의 것의 일부 실시형태에서, L은 폴리에틸렌 글리콜(PEG) 링커를 포함한다. PEG 링커는 반복 단위 구조(-CH2CH2O-)n을 갖는 링커를 포함하며, 식 중, n은 2 내지 100의 정수이다. 폴리에틸렌 글리콜 링커는 뉴라미니다제 저해제와 E(예를 들어, 화학식 (M-I) 내지 (M-X) 중 어느 하나의 접합체에서)를 공유 결합시킬 수 있다. 폴리에틸렌 글리콜 링커는 제1 뉴라미니다제 저해제와 제2 뉴라미니다제 저해제(예를 들어, 화학식 (D-I) 내지 (D-X) 중 어느 하나의 접합체에서)를 공유 결합시킬 수 있다. 폴리에틸렌 글리콜 링커는 뉴라미니다제 저해제 이량체와 E(예를 들어, 화학식 (D-I) 내지 (D-X) 중 어느 하나의 접합체에서)를 공유 결합시킬 수 있다. 폴리에틸렌 글리콜 링커는 PEG2 내지 PEG100(예를 들어, PEG2, PEG3, PEG4, PEG5, PEG5-PEG10, PEG10-PEG20, PEG20-PEG30, PEG30-PEG40, PEG50-PEG60, PEG60-PEG70, PEG70-PEG80, PEG80-PEG90, PEG90-PEG100) 중 어느 하나로부터 선택될 수 있다. 일부 실시형태에서, Lc는 PEG 링커를 포함하며, 식 중, LC는 Q 및 E 각각에 공유 부착된다.
일부 실시형태에서, L은 하기이다:
Figure pct00266
Figure pct00267
Figure pct00268
Figure pct00269
Figure pct00270
Figure pct00271
Figure pct00272
Figure pct00273
Figure pct00274
Figure pct00275
식 중, z1 및 z2는 각각 독립적으로 1 내지 20의 정수이고; 그리고 R9는 H, C1-C20 알킬, C3-C20 사이클로알킬, C3-C20 헤테로사이클로알킬; C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택된다.
일부 실시형태에서, L은 하기이다:
Figure pct00276
Figure pct00277
Figure pct00278
Figure pct00279
식 중, R*는 결합이거나 또는 선택적으로 치환된 C1-C20 알킬렌, 선택적으로 치환된 C1-C20 헤테로알킬렌, 선택적으로 치환된 C2-C20 알켄일렌, 선택적으로 치환된 C2-C20 헤테로알켄일렌, 선택적으로 치환된 C2-C20 알킨일렌, 선택적으로 치환된 C2-C20 헤테로알킨일렌, 선택적으로 치환된 C3-C20 사이클로알킬렌, 선택적으로 치환된 C3-C20 헤테로사이클로알킬렌, 선택적으로 치환된 C4-C20 사이클로알켄일렌, 선택적으로 치환된 C4-C20 헤테로사이클로알켄일렌, 선택적으로 치환된 C8-C20 사이클로알킨일렌, 선택적으로 치환된 C8-C20 헤테로사이클로알킨일렌, 선택적으로 치환된 C5-C15 아릴렌, 선택적으로 치환된 C2-C15 헤테로아릴렌, O, S, NRi, P, 카보닐, 티오카보닐, 설포닐, 포스페이트 및 이미노 중 1개 이상를 포함하고, Ri는 H, 선택적으로 치환된 C1-C20 알킬, 선택적으로 치환된 C1-C20 헤테로알킬, 선택적으로 치환된 C2-C20 알켄일, 선택적으로 치환된 C2-C20 헤테로알켄일, 선택적으로 치환된 C2-C20 알킨일, 선택적으로 치환된 C2-C20 헤테로알킨일, 선택적으로 치환된 C3-C20 사이클로알킬, 선택적으로 치환된 C3-C20 헤테로사이클로알킬, 선택적으로 치환된 C4-C20 사이클로알켄일, 선택적으로 치환된 C4-C20 헤테로사이클로알켄일, 선택적으로 치환된 C8-C20 사이클로알킨일, 선택적으로 치환된 C8-C20 헤테로사이클로알킨일, 선택적으로 치환된 C5-C15 아릴 또는 선택적으로 치환된 C2-C15 헤테로아릴이다.
일부 실시형태에서, Y는
Figure pct00280
(-NH(C=O)O-)이고, L은
Figure pct00281
이다.
일부 실시형태에서, Y는
Figure pct00282
(-NH(C=O)O-)이고, L은
Figure pct00283
이다.
일부 실시형태에서, Y는
Figure pct00284
(-NH(C=O)O-)이고, L은
Figure pct00285
이다.
일부 실시형태에서, Y는
Figure pct00286
(-O-)이고, L은
Figure pct00287
이다.
또 다른 양상에서, 본 발명은 하기 화학식 (M-I)로 기재되는 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염를 특징으로 한다:
Figure pct00288
식 중, 각각의 A1은 하기 화학식 (A-I) 내지 (A-XII) 중 어느 하나로부터 독립적으로 선택되되:
Figure pct00289
식 중, R1은 -OH, -NH2, -NHC(=NH)NH2 및 -NHC(=NH)NHR6으로부터 선택되며; R2 및 R3은 -H, -OH, -F, -Cl 및 -Br로부터 각각 독립적으로 선택되고; R4는 -CO2H, -P(=O)(OH)2, -SO3H로부터 선택되며; R5는 -COCH3, -COCF3, -SO2CH3로부터 선택되고; X는 -O- 및 -S-로부터 선택되며; Y는 하기로부터 선택되고:
Figure pct00290
R6은 하기로부터 선택되며:
Figure pct00291
R7은 H, C1-C20 알킬, C3-C20 사이클로알킬, C3-C20 헤테로사이클로알킬; C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되고; R8은 C3-C20 헤테로사이클로알킬, C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되며; 각각의 E는 Fc 도메인 단량체(예를 들어, 서열번호 1 내지 68 중 어느 하나의 서열을 갖는 Fc 도메인 단량체), 알부민 단백질(예를 들어, 서열번호 69 내지 71 중 어느 하나의 서열을 갖는 알부민 단백질), 알부민 단백질-결합 펩타이드 또는 Fc-결합 펩타이드를 포함하고; n은 1 또는 2이며; T는 1 내지 20의 정수(예를 들어, T는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20임)이고, L은 E 및 A1 각각에 공유 부착된 링커이다. T가 1 초과인 경우(예를 들어, T가 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20)인 경우, 각각의 A1은 화학식 (A-I) 내지 (A-XII) 중 어느 하나로부터 독립적으로 선택될 수 있다.
또 다른 양상에서, 본 발명은 하기 화학식 (M-I)로 기재되는 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염를 특징으로 한다:
Figure pct00292
식 중, 각각의 A1은 하기 화학식 (A-I) 내지 (A-V) 중 어느 하나로부터 독립적으로 선택되되:
Figure pct00293
식 중, R1은 -OH, -NH2, -NHC(=NH)NH2 및 -NHC(=NH)NHR6으로부터 선택되며; R2 및 R3은 -H, -OH, -F, -Cl 및 -Br로부터 각각 독립적으로 선택되고; R4는 -CO2H, -P(=O)(OH)2, -SO3H로부터 선택되며; R5는 -COCH3, -COCF3, -SO2CH3로부터 선택되고; X는 -O- 및 -S-로부터 선택되며; Y는 하기로부터 선택되고:
Figure pct00294
R6은 하기로부터 선택되며:
Figure pct00295
R7은 H, C1-C20 알킬, C3-C20 사이클로알킬, C3-C20 헤테로사이클로알킬; C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되고; R8은 C3-C20 헤테로사이클로알킬, C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되며; 각각의 E는 Fc 도메인 단량체(예를 들어, 서열번호 1 내지 68 중 어느 하나의 서열을 갖는 Fc 도메인 단량체), 알부민 단백질(예를 들어, 서열번호 69 내지 71 중 어느 하나의 서열을 갖는 알부민 단백질), 알부민 단백질-결합 펩타이드 또는 Fc-결합 펩타이드를 포함하고; n은 1 또는 2이며; T는 1 내지 20의 정수(예를 들어, T는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20임)이고, L은 E 및 A1 각각에 공유 부착된 링커이다. T가 1 초과인 경우(예를 들어, T가 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20)인 경우, 각각의 A1은 화학식 (A-I) 내지 (A-V) 중 어느 하나로부터 독립적으로 선택될 수 있다.
또 다른 양상에서, 본 발명은 하기 화학식 (M-I)로 기재되는 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 특징으로 한다:
Figure pct00296
식 중, 각각의 A1은 하기 화학식 (A-VI) 내지 (A-IX) 중 어느 하나로부터 독립적으로 선택되되:
Figure pct00297
식 중, R1은 -OH, -NH2, -NHC(=NH)NH2 및 -NHC(=NH)NHR6으로부터 선택되며; R2 및 R3은 -H, -OH, -F, -Cl 및 -Br로부터 각각 독립적으로 선택되고; R4는 -CO2H, -P(=O)(OH)2, -SO3H로부터 선택되며; R5는 -COCH3, -COCF3, -SO2CH3로부터 선택되고; X는 -O- 및 -S-로부터 선택되며; Y는 하기로부터 선택되고:
Figure pct00298
R6은 하기로부터 선택되며:
Figure pct00299
R7은 H, C1-C20 알킬, C3-C20 사이클로알킬, C3-C20 헤테로사이클로알킬; C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되고; R8은 C3-C20 헤테로사이클로알킬, C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되며; 각각의 E는 Fc 도메인 단량체(예를 들어, 서열번호 1 내지 68 중 어느 하나의 서열을 갖는 Fc 도메인 단량체), 알부민 단백질(예를 들어, 서열번호 69 내지 71 중 어느 하나의 서열을 갖는 알부민 단백질), 알부민 단백질-결합 펩타이드 또는 Fc-결합 펩타이드를 포함하고; n은 1 또는 2이며; T는 1 내지 20의 정수(예를 들어, T는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20임)이고, L은 E 및 A1 각각에 공유 부착된 링커이다. T가 1 초과인 경우(예를 들어, T가 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20)인 경우, 각각의 A1은 화학식 (A-VI) 내지 (A-IX) 중 어느 하나로부터 독립적으로 선택될 수 있다.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (M-II) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염로 기재된다:
Figure pct00300
.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (M-II-1) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염로 기재된다:
Figure pct00301
.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (M-II-2) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염로 기재된다:
Figure pct00302
.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (M-II-3) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염으로 기재된다:
Figure pct00303
식 중, L'는 L의 잔여부이고, y1은 1 내지 20의 정수이다(예를 들어, y1은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20임).
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (M-II-4) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염로 기재된다:
Figure pct00304
.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (M-II-5) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염로 기재된다:
Figure pct00305
식 중, L'는 L의 잔여부이고, y1은 1 내지 20의 정수이다(예를 들어, y1은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20임).
일부 실시형태에서, 접합체는 하기의 구조 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염를 갖는다:
Figure pct00306
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (M-II-6) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염으로 기재된다:
Figure pct00307
식 중, R7은 H, C1-C20 알킬, C3-C20 사이클로알킬, C3-C20 헤테로사이클로알킬; C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택된다.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (M-II-7) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염로 기재된다:
Figure pct00308
.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (M-II-8) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염로 기재된다:
Figure pct00309
식 중, L'는 L의 잔여부이고, y1은 1 내지 20의 정수이다(예를 들어, y1은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20임).
일부 실시형태에서, 접합체는 하기의 구조를 갖는다:
Figure pct00310
.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (M-II-9) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염로 기재된다:
Figure pct00311
.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (M-II-10) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염으로 기재된다:
Figure pct00312
식 중, L'는 L의 잔여부이고, y1은 1 내지 20의 정수이다(예를 들어, y1은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20임).
일부 실시형태에서, 접합체는 하기의 구조 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염를 갖는다:
Figure pct00313
.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (M-III) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염으로 기재된다:
Figure pct00314
.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (M-III-1) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염로 기재된다:
Figure pct00315
.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (M-III-2) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염로 기재된다:
Figure pct00316
.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (M-III-3) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염으로 기재된다:
Figure pct00317
식 중, L'는 L의 잔여부이고, y1은 1 내지 20의 정수이다(예를 들어, y1은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20임).
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (M-III-4) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염로 기재된다:
Figure pct00318
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (M-III-5) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염로 기재된다:
Figure pct00319
식 중, L'는 L의 잔여부이고, y1은 1 내지 20의 정수이다(예를 들어, y1은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20임).
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (M-III-6) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염으로 기재된다:
Figure pct00320
.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (M-III-7) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염로 기재된다:
Figure pct00321
식 중, L'는 L의 잔여부이고, y1은 1 내지 20의 정수이다(예를 들어, y1은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20임).
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (M-III-8) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염로 기재된다:
Figure pct00322
.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (M-III-9) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염로 기재된다:
Figure pct00323
식 중, L'는 L의 잔여부이고, y1은 1 내지 20의 정수이다(예를 들어, y1은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20임).
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (M-IV) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염로 기재된다:
Figure pct00324
.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (M-IV-1) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염로 기재된다:
Figure pct00325
.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (M-IV-2) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염로 기재된다:
Figure pct00326
식 중, L'는 L의 잔여부이고, y1은 1 내지 20의 정수이다(예를 들어, y1은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20임).
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (M-V) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염로 기재된다:
Figure pct00327
.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (M-V-1) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염로 기재된다:
Figure pct00328
.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (M-V-2) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염로 기재된다:
Figure pct00329
.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (M-V-3) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염으로 기재된다:
Figure pct00330
식 중, L'는 L의 잔여부이고, y1은 1 내지 20의 정수이다(예를 들어, y1은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20임).
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (M-V-4) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염로 기재된다:
Figure pct00331
.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (M-V-5) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염로 기재된다:
Figure pct00332
식 중, L'는 L의 잔여부이고, y1은 1 내지 20의 정수이다(예를 들어, y1은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20임).
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (M-V-6) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염으로 기재된다:
Figure pct00333
.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (M-V-7) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염로 기재된다:
Figure pct00334
.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (M-V-8) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염로 기재된다:
Figure pct00335
식 중, L'는 L의 잔여부이고, y1은 1 내지 20의 정수이다(예를 들어, y1은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20임).
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (M-V-9) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염로 기재된다:
Figure pct00336
.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (M-V-10) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염으로 기재된다:
Figure pct00337
식 중, L'는 L의 잔여부이고, y1은 1 내지 20의 정수이다(예를 들어, y1은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20임).
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (M-VI) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염으로 기재된다:
Figure pct00338
.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (M-VI-1) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염로 기재된다:
Figure pct00339
.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (M-VI-2) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염로 기재된다:
Figure pct00340
.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (M-VI-3) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염으로 기재된다:
Figure pct00341
식 중, L'는 L의 잔여부이고, y1은 1 내지 20의 정수이다(예를 들어, y1은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20임).
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (M-VI-4) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염로 기재된다:
Figure pct00342
.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (M-VI-5) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염로 기재된다:
Figure pct00343
식 중, L'는 L의 잔여부이고, y1은 1 내지 20의 정수이다(예를 들어, y1은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20임).
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (M-VI-6) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염으로 기재된다:
Figure pct00344
.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (M-VI-7) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염로 기재된다:
Figure pct00345
식 중, L'는 L의 잔여부이고, y1은 1 내지 20의 정수이다(예를 들어, y1은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20임).
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (M-VI-8) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염로 기재된다:
Figure pct00346
.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (M-VI-9) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염로 기재된다:
Figure pct00347
식 중, L'는 L의 잔여부이고, y1은 1 내지 20의 정수이다(예를 들어, y1은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20임).
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (M-VII) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염로 기재된다:
Figure pct00348
.
본 명세서에 기재된 양상 중 임의의 것의 일부 실시형태에서, R1은 OH이다. 본 명세서에 기재된 양상 중 임의의 것의 일부 실시형태에서, R1은 NH2이다. 본 명세서에 기재된 양상 중 임의의 것의 일부 실시형태에서, R1은 -NHC(=NH)NH2 이다.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (M-VIII) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염로 기재된다:
Figure pct00349
.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (M-VIII-1) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염로 기재된다:
Figure pct00350
.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (M-VIII-2) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염로 기재된다:
Figure pct00351
.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (M-VIII-3) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염으로 기재된다:
Figure pct00352
식 중, L'는 L의 잔여부이고, y1은 1 내지 20의 정수이다(예를 들어, y1은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20임).
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (M-VIII-4) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염로 기재된다:
Figure pct00353
.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (M-VIII-5) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염로 기재된다:
Figure pct00354
식 중, L'는 L의 잔여부이고, y1은 1 내지 20의 정수이다.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기의 구조 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염를 갖는다:
Figure pct00355
.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (M-VIII-6) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염으로 기재된다:
Figure pct00356
.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (M-VIII-7) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염로 기재된다:
Figure pct00357
식 중, L'는 L의 잔여부이고, y1은 1 내지 20의 정수이다(예를 들어, y1은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20임).
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (M-VIII-8) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염로 기재된다:
Figure pct00358
.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (M-VIII-9) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염로 기재된다:
Figure pct00359
식 중, L'는 L의 잔여부이고, y1은 1 내지 20의 정수이다(예를 들어, y1은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20임).
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (M-VIII-10) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염으로 기재된다:
Figure pct00360
.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (M-VIII-11) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염로 기재된다:
Figure pct00361
식 중, L'는 L의 잔여부이고, y1은 1 내지 20의 정수이다(예를 들어, y1은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20임).
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (M-IX) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염로 기재된다:
Figure pct00362
.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (M-IX-1) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염로 기재된다:
Figure pct00363
.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (M-IX-2) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염로 기재된다:
Figure pct00364
.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (M-IX-3) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염으로 기재된다:
Figure pct00365
.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (M-IX-4) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염로 기재된다:
Figure pct00366
.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (M-IX-5) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염로 기재된다:
Figure pct00367
.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (M-IX-6) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염으로 기재된다:
Figure pct00368
.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (M-X) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염으로 기재된다:
Figure pct00369
.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (M-X-1) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염로 기재된다:
Figure pct00370
.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (M-X-2) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염로 기재된다:
Figure pct00371
.
일부 실시형태에서, 접합체는 하기 화학식 (M-X-3) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염으로 기재된다:
Figure pct00372
.
본 명세서에 기재된 양상 중 임의의 것의 일부 실시형태에서, L 또는 L'는 1개 이상의 선택적으로 치환된 C1-C20 알킬렌, 선택적으로 치환된 C1-C20 헤테로알킬렌, 선택적으로 치환된 C2-C20 알켄일렌, 선택적으로 치환된 C2-C20 헤테로알켄일렌, 선택적으로 치환된 C2-C20 알킨일렌, 선택적으로 치환된 C2-C20 헤테로알킨일렌, 선택적으로 치환된 C3-C20 사이클로알킬렌, 선택적으로 치환된 C3-C20 헤테로사이클로알킬렌, 선택적으로 치환된 C4-C20 사이클로알켄일렌, 선택적으로 치환된 C4-C20 헤테로사이클로알켄일렌, 선택적으로 치환된 C8-C20 사이클로알킨일렌, 선택적으로 치환된 C8-C20 헤테로사이클로알킨일렌, 선택적으로 치환된 C5-C15 아릴렌, 선택적으로 치환된 C2-C15 헤테로아릴렌, O, S, NRi, P, 카보닐, 티오카보닐, 설포닐, 포스페이트, 포스포릴 또는 이미노를 포함하고, Ri는 H, 선택적으로 치환된 C1-C20 알킬, 선택적으로 치환된 C1-C20 헤테로알킬, 선택적으로 치환된 C2-C20 알켄일, 선택적으로 치환된 C2-C20 헤테로알켄일, 선택적으로 치환된 C2-C20 알킨일, 선택적으로 치환된 C2-C20 헤테로알킨일, 선택적으로 치환된 C3-C20 사이클로알킬, 선택적으로 치환된 C3-C20 헤테로사이클로알킬, 선택적으로 치환된 C4-C20 사이클로알켄일, 선택적으로 치환된 C4-C20 헤테로사이클로알켄일, 선택적으로 치환된 C8-C20 사이클로알킨일, 선택적으로 치환된 C8-C20 헤테로사이클로알킨일, 선택적으로 치환된 C5-C15 아릴 또는 선택적으로 치환된 C2-C15 헤테로아릴이다.
본 명세서에 기재된 양상 중 임의의 것의 일부 실시형태에서, L 또는 L'의 골격은 1개 이상의 선택적으로 치환된 C1-C20 알킬렌, 선택적으로 치환된 C1-C20 헤테로알킬렌, 선택적으로 치환된 C2-C20 알켄일렌, 선택적으로 치환된 C2-C20 헤테로알켄일렌, 선택적으로 치환된 C2-C20 알킨일렌, 선택적으로 치환된 C2-C20 헤테로알킨일렌, 선택적으로 치환된 C3-C20 사이클로알킬렌, 선택적으로 치환된 C3-C20 헤테로사이클로알킬렌, 선택적으로 치환된 C4-C20 사이클로알켄일렌, 선택적으로 치환된 C4-C20 헤테로사이클로알켄일렌, 선택적으로 치환된 C8-C20 사이클로알킨일렌, 선택적으로 치환된 C8-C20 헤테로사이클로알킨일렌, 선택적으로 치환된 C5-C15 아릴렌, 선택적으로 치환된 C2-C15 헤테로아릴렌, O, S, NRi, P, 카보닐, 티오카보닐, 설포닐, 포스페이트, 포스포릴 또는 이미노로 이루어지고, Ri는 H, 선택적으로 치환된 C1-C20 알킬, 선택적으로 치환된 C1-C20 헤테로알킬, 선택적으로 치환된 C2-C20 알켄일, 선택적으로 치환된 C2-C20 헤테로알켄일, 선택적으로 치환된 C2-C20 알킨일, 선택적으로 치환된 C2-C20 헤테로알킨일, 선택적으로 치환된 C3-C20 사이클로알킬, 선택적으로 치환된 C3-C20 헤테로사이클로알킬, 선택적으로 치환된 C4-C20 사이클로알켄일, 선택적으로 치환된 C4-C20 헤테로사이클로알켄일, 선택적으로 치환된 C8-C20 사이클로알킨일, 선택적으로 치환된 C8-C20 헤테로사이클로알킨일, 선택적으로 치환된 C5-C15 아릴 또는 선택적으로 치환된 C2-C15 헤테로아릴이다.
본 명세서에 기재된 양상 중 임의의 것의 일부 실시형태에서, L 또는 L'는 치환된 옥소이다. 일부 실시형태에서, L 또는 L'의 골격은 250개 이하의 원자를 포함한다. 일부 실시형태에서, L 또는 L'는 아마이드, 카바메이트, 설포닐, 또는 유레아 링키지를 형성할 수 있다. 일부 실시형태에서, L 또는 L'는 결합이다. 일부 실시형태에서, L 또는 L'는 원자이다. 일부 실시형태에서, L'는 질소 원자이다.
일부 실시형태에서, 각각의 L은 하기 화학식 (M-L-1) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염으로 기재된다:
J1-(Q1)g-(T1)h-(Q2)i-(T2)j-(Q3)k-(T3)l-(Q4)m-(T4)n-(Q5)o-J2
식 중, J1은 A1에 부착된 결합이고; 그리고 J2는 E에 접합된 결합 또는 E에 접합된 작용기와 반응할 수 있는 작용기(예를 들어, 말레이미드 및 시스테인, 아민 및 활성화된 카복실산, 티올 및 말레이미드, 활성화된 설폰산 및 아민, 아이소사이아네이트 및 아민, 아자이드 및 알킨 및 알켄 및 테트라진)이고; Q1, Q2, Q3, Q4 및 Q5 각각은 독립적으로, 선택적으로 치환된 C1-C20 알킬렌, 선택적으로 치환된 C1-C20 헤테로알킬렌, 선택적으로 치환된 C2-C20 알켄일렌, 선택적으로 치환된 C2-C20 헤테로알켄일렌, 선택적으로 치환된 C2-C20 알킨일렌, 선택적으로 치환된 C2-C20 헤테로알킨일렌, 선택적으로 치환된 C3-C20 사이클로알킬렌, 선택적으로 치환된 C3-C20 헤테로사이클로알킬렌, 선택적으로 치환된 C4-C20 사이클로알켄일렌, 선택적으로 치환된 C4-C20 헤테로사이클로알켄일렌, 선택적으로 치환된 C8-C20 사이클로알킨일렌, 선택적으로 치환된 C8-C20 헤테로사이클로알킨일렌, 선택적으로 치환된 C5-C15 아릴렌 또는 선택적으로 치환된 C2-C15 헤테로아릴렌이며; T1, T2, T3, T4 각각은 독립적으로, O, S, NRi, P, 카보닐, 티오카보닐, 설포닐, 포스페이트, 포스포릴 또는 이미노이고; Ri는 H, 선택적으로 치환된 C1-C20 알킬, 선택적으로 치환된 C1-C20 헤테로알킬, 선택적으로 치환된 C2-C20 알켄일, 선택적으로 치환된 C2-C20 헤테로알켄일, 선택적으로 치환된 C2-C20 알킨일, 선택적으로 치환된 C2-C20 헤테로알킨일, 선택적으로 치환된 C3-C20 사이클로알킬, 선택적으로 치환된 C3-C20 헤테로사이클로알킬, 선택적으로 치환된 C4-C20 사이클로알켄일, 선택적으로 치환된 C4-C20 헤테로사이클로알켄일, 선택적으로 치환된 C8-C20 사이클로알킨일, 선택적으로 치환된 C8-C20 헤테로사이클로알킨일, 선택적으로 치환된 C5-C15 아릴 또는 선택적으로 치환된 C2-C15 헤테로아릴이며; g, h, i, j, k, l, m, n 및 o 각각은 독립적으로, 0 또는 1이다.
일부 실시형태에서, J2는 Fc 도메인, Fc-결합 펩타이드, 알부민 단백질 또는 알부민 단백질-결합 펩타이드에 대해서 2개의 부착점(예를 들어, 2개의 J2)을 가질 수 있다.
일부 실시형태에서, L은 하기이다:
Figure pct00373
또는
Figure pct00374
;
식 중, d는 1 내지 20의 정수(예를 들어, d는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20임)이다.
일부 실시형태에서, L은 하기 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이다:
Figure pct00375
Figure pct00376
또는
Figure pct00377
;
식 중, d 및 e 각각은 독립적으로, 1 내지 26의 정수이다.
본 명세서에 기재된 양상 중 임의의 것의 일부 실시형태에서, L은 폴리에틸렌 글리콜(PEG) 링커를 포함한다. PEG 링커는 반복 단위 구조(-CH2CH2O-)n을 갖는 링커를 포함하며, 식 중, n은 2 내지 100의 정수이다. 폴리에틸렌 글리콜 링커는 뉴라미니다제 저해제와 E(예를 들어, 화학식 (M-I) 내지 (M-X) 중 어느 하나의 접합체에서)를 공유 결합시킬 수 있다. 폴리에틸렌 글리콜 링커는 제1 뉴라미니다제 저해제와 제2 뉴라미니다제 저해제(예를 들어, 화학식 (D-I) 내지 (D-X) 중 어느 하나의 접합체에서)를 공유 결합시킬 수 있다. 폴리에틸렌 글리콜 링커는 뉴라미니다제 저해제 이량체와 E(예를 들어, 화학식 (D-I) 내지 (D-X) 중 어느 하나의 접합체에서)를 공유 결합시킬 수 있다. 폴리에틸렌 글리콜 링커는 PEG2 내지 PEG100(예를 들어, PEG2, PEG3, PEG4, PEG5, PEG5-PEG10, PEG10-PEG20, PEG20-PEG30, PEG30-PEG40, PEG50-PEG60, PEG60-PEG70, PEG70-PEG80, PEG80-PEG90, PEG90-PEG100) 중 어느 하나로부터 선택될 수 있다. 일부 실시형태에서, Lc는 PEG 링커를 포함하며, 식 중, LC는 Q 및 E 각각에 공유 부착된다.
본 명세서에 기재된 양상 중 임의의 것의 일부 실시형태에서, R1은 -NHC(=NH)NH2 이다. 본 명세서에 기재된 양상 중 임의의 것의 일부 실시형태에서, R2는 -F이다. 본 명세서에 기재된 양상 중 임의의 것의 일부 실시형태에서, R3은 -F이다. 본 명세서에 기재된 양상 중 임의의 것의 일부 실시형태에서, R4는 -CO2H이다. 본 명세서에 기재된 양상 중 임의의 것의 일부 실시형태에서, R5는 -COCH3이다.
본 명세서에 기재된 양상 중 임의의 것의 일부 실시형태에서, L은 E의 표면 노출된 라이신의 질소 원자에 공유 부착되거나 또는 L은 E의 표면 노출된 시스테인의 황 원자에 공유 부착된다.
본 명세서에 기재된 양상 중 임의의 것의 일부 실시형태에서, E는 Fc 도메인 단량체이다. 일부 실시형태에서, n은 2이고, 각각의 E는 이량체화되어 Fc 도메인을 형성한다.
일부 실시형태에서, n은 2이고, 각각의 E는 Fc 도메인 단량체이며, 각각의 E는 이량체화되어 Fc 도메인을 형성하고, 상기 접합체는 하기 화학식 (D-I-1) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염로 기재된다.
Figure pct00378
식 중, J는 Fc 도메인이고; 그리고 T는 1 내지 20의 정수(예를 들어, T는 1,2,3,4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20임)이다.
일부 실시형태에서, n은 2이고, 각각의 E는 Fc 도메인 단량체이며, 각각의 E는 이량체화되어 Fc 도메인을 형성하고, 상기 접합체는 하기 화학식 (M-I-1) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염로 기재된다.
Figure pct00379
식 중, J는 Fc 도메인이고; 그리고 T는 1 내지 20의 정수(예를 들어, T는 1,2,3,4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20임)이다.
본 명세서에 기재된 양상 중 임의의 것의 일부 실시형태에서, E는 서열번호 1 내지 68 중 어느 하나의 서열을 갖는다.
본 명세서에 기재된 양상 중 임의의 것의 일부 실시형태에서, E는 알부민 단백질, 알부민 단백질-결합 펩타이드 또는 Fc-결합 펩타이드이다. E가 알부민 단백질, 알부민 단백질-결합 펩타이드 또는 Fc-결합 펩타이드인 일부 실시형태에서, n은 1이다.
일부 실시형태에서, n은 1이고, E는 알부민 단백질, 알부민 단백질-결합 펩타이드 또는 Fc-결합 펩타이드이며, 상기 접합체는 하기 화학식 (D-I-2) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염로 기재된다:
Figure pct00380
식 중, E는 알부민 단백질, 알부민 단백질-결합 펩타이드 또는 Fc-결합 펩타이드이고; 그리고 T는 1 내지 20의 정수이다.
일부 실시형태에서, n은 1이고, E는 알부민 단백질, 알부민 단백질-결합 펩타이드 또는 Fc-결합 펩타이드이며, 상기 접합체는 하기 화학식 (M-I-2) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염로 기재된다:
Figure pct00381
식 중, E는 알부민 단백질, 알부민 단백질-결합 펩타이드 또는 Fc-결합 펩타이드이고; 그리고 T는 1 내지 20의 정수이다.
본 명세서에 기재된 양상 중 임의의 것의 일부 실시형태에서, E는 서열번호 69 내지 71 중 어느 하나의 서열을 갖는 알부민 단백질이다.
본 명세서에 기재된 양상 중 임의의 것의 일부 실시형태에서, T는 1, 2, 3, 4 또는 5이다.
또 다른 양상에서, 본 발명은 본 명세서에 기재된 접합체 중 임의의 것의 구조를 갖는 접합체의 집단(예를 들어, 화학식 (1) 내지 (5), (D-I) 내지 (D-X), (D'-I), (M-I) 내지 (M-X) 또는 (M'-I) 중 어느 하나의 화학식을 갖는 접합체의 집단)을 제공하며, 식 중, T의 평균값은 1 내지 20이다(예를 들어, T의 평균값은 1 내지 2, 1 내지 3, 1 내지 4, 1 내지 5, 5 내지 10, 10 내지 15 또는 15 내지 20이다). 일부 실시형태에서, T의 평균값은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20이다.
본 명세서에 기재된 양상 중 임의의 것의 일부 실시형태에서, T가 1보다 큰 경우(예를 들어, T가 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20)인 경우, 각각의 A1-L-A2는 독립적으로 선택될 수 있다(예를 들어, 본 명세서에 기재된 A1-L-A2 구조 중 임의의 것으로부터 독립적으로 선택될 수 있다). 일부 실시형태에서, E는 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 또는 그 초과의 상이한 A1-L-A2 모이어티에 접합될 수 있다. 일부 실시형태에서, E는 제1 A1-L-A2 모이어티 및 제2 A1-L-A2, 모이어티에 접합된다. 일부 실시형태에서, 제1 A1-L-A2 모이어티의 A1 및 A2는 하기 화학식 (A-III) 내지 (A-V) 중 임의의 하나로부터 독립적으로 선택되고;
Figure pct00382
제2 A1-L-A2 모이어티의 A1 및 A2는 화학식 (A-I), (A-II), (A-VI), (A-VII), (A-VIII) 및 (A-IX)로부터 독립적으로 선택된다:
Figure pct00383
일부 실시형태에서, 제1 A1-L-A2 모이어티 각각은 E의 라이신 잔기(예를 들어, E의 표면 노출된 라이신 잔기의 질소 원자)에 특이적으로 접합되고, 제2 A1-L-A2 모이어티 각각은 E의 시스테인 잔기(예를 들어, E의 표면 노출된 시스테인 잔기의 황 원자)에 특이적으로 접합된다. 일부 실시형태에서, 제1 A1-L-A2 모이어티 각각은 E의 시스테인 잔기(예를 들어, E의 표면 노출된 시스테인 잔기의 황 원자)에 특이적으로 접합되고, 제2 A1-L-A2 모이어티 각각은 E의 라이신 잔기(예를 들어, E의 표면 노출된 라이신 잔기의 질소 원자)에 특이적으로 접합된다.
일부 실시형태에서, E에 접합된 제1 A1-L-A2 모이어티의 수는 1 내지 10의 정수(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10)이다. 일부 실시형태에서, E에 접합된 제2 A1-L-A2 모이어티의 수는 1 내지 10의 정수(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10)이다.
본 명세서에 기재된 양상 중 임의의 것의 일부 실시형태에서, T가 1보다 큰 경우(예를 들어, T가 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20)인 경우, 각각의 A1-L은 독립적으로 선택될 수 있다(예를 들어, 본 명세서에 기재된 A1-L 구조 중 임의의 것으로부터 독립적으로 선택될 수 있다). 일부 실시형태에서, E는 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 또는 그 초과의 상이한 A1-L 모이어티에 접합될 수 있다. 일부 실시형태에서, E는 제1 A1-L 모이어티 및 제2 A1-L, 모이어티에 접합된다. 일부 실시형태에서, 제1 A1-L 모이어티의 A1은 하기 화학식 (A-III) 내지 (A-V) 중 임의의 하나로부터 선택되고:
Figure pct00384
제2 A1-L 모이어티의 A1은 화학식 (A-I), (A-II), (A-VI), (A-VII), (A-VIII) 또는 (A-IX) 중 어느 하나로부터 선택된다:
Figure pct00385
Figure pct00386
일부 실시형태에서, 제1 A1-L 모이어티 각각은 E의 라이신 잔기(예를 들어, E의 표면 노출된 라이신 잔기의 질소 원자)에 특이적으로 접합되고, 제2 A1-L 모이어티 각각은 E의 시스테인 잔기(예를 들어, E의 표면 노출된 시스테인 잔기의 황 원자)에 특이적으로 접합된다. 일부 실시형태에서, 제1 A1-L 모이어티 각각은 E의 시스테인 잔기(예를 들어, E의 표면 노출된 시스테인 잔기의 황 원자)에 특이적으로 접합되고, 제2 A1-L 모이어티 각각은 E의 라이신 잔기(예를 들어, E의 표면 노출된 라이신 잔기의 질소 원자)에 특이적으로 접합된다.
일부 실시형태에서, E에 접합된 제1 A1-L 모이어티의 수는 1 내지 10의 정수(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10)이다. 일부 실시형태에서, E에 접합된 제2 A1-L 모이어티의 수는 1 내지 10의 정수(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10)이다.
또 다른 양상에서, 본 발명은 하기 화학식 (D'-I)로 기재되는 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염를 특징으로 한다:
Figure pct00387
식 중, 각각의 A1은 하기 화학식 (A-III) 내지 (A-V) 중 어느 하나로부터 독립적으로 선택되되:
Figure pct00388
식 중, 각각의 A2는 하기 화학식 (A-I), (A-II), (A-VI), (A-VII), (A-VIII) 및 (A-IX) 중 어느 하나로부터 독립적으로 선택되고:
Figure pct00389
식 중, R1은 -OH, -NH2, -NHC(=NH)NH2 및 -NHC(=NH)NHR6으로부터 선택되며; R2 및 R3은 -H, -OH, -F, -Cl 및 -Br로부터 각각 독립적으로 선택되고; R4는 -CO2H, -P(=O)(OH)2, -SO3H로부터 선택되며; R5는 -COCH3, -COCF3, -SO2CH3로부터 선택되고; X는 -O- 및 -S-로부터 선택되며; Y는 하기로부터 선택되고:
Figure pct00390
R6은 하기로부터 선택되며:
Figure pct00391
R7은 H, C1-C20 알킬, C3-C20 사이클로알킬, C3-C20 헤테로사이클로알킬; C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되고; R8은 C3-C20 헤테로사이클로알킬, C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되며; 각각의 E는 Fc 도메인 단량체(예를 들어, 서열번호 1 내지 68 중 어느 하나의 서열을 갖는 Fc 도메인 단량체), 알부민 단백질(예를 들어, 서열번호 69 내지 71 중 어느 하나의 서열을 갖는 알부민 단백질), 알부민 단백질-결합 펩타이드 또는 Fc-결합 펩타이드를 포함하고; n은 1 또는 2이며; T1은 1 내지 10의 정수이고(예를 들어, T1은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10임)이고; L1은 E 및 각각의 A1에 공유 접합된 링커이며; T1은 1 내지 10의 정수이고(예를 들어, T1은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10임)이고; L2는 E 및 각각의 A2에 공유 접합된 링커이고; T2는 1 내지 10의 정수이고(예를 들어, T2은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10임)이다.
일부 실시형태에서, 각각의 A1-L-A1은 E의 라이신 잔기(예를 들어, E의 표면 노출된 라이신 잔기의 질소 원자)에 특이적으로 접합되고, 각각의 A2-L-A2는 E의 시스테인 잔기(예를 들어, E의 표면 노출된 시스테인 잔기의 황 원자)에 특이적으로 접합된다. 일부 실시형태에서, 각각의 A1-L-A1 모이어티는 E의 시스테인 잔기(예를 들어, E의 표면 노출된 시스테인 잔기의 황 원자)에 특이적으로 접합되고, 각각의 A2-L-A2 모이어티는 E의 라이신 잔기(예를 들어, E의 표면 노출된 라이신 잔기의 질소 원자)에 특이적으로 접합된다.
또 다른 양상에서, 본 발명은 하기 화학식 (M'-I)로 기재되는 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염를 특징으로 한다:
Figure pct00392
식 중, 각각의 A1은 하기 화학식 (A-III) 내지 (A-V)의 어느 하나의 (M-IX)로부터 독립적으로 선택되되:
Figure pct00393
식 중, 각각의 A2는 하기 화학식 (A-I), (A-II), (A-VI), (A-VII), (A-VIII) 및 (A-IX) 중 어느 하나로부터 독립적으로 선택되고:
Figure pct00394
Figure pct00395
식 중, R1은 -OH, -NH2, -NHC(=NH)NH2 및 -NHC(=NH)NHR6으로부터 선택되며; R2 및 R3은 -H, -OH, -F, -Cl 및 -Br로부터 각각 독립적으로 선택되고; R4는 -CO2H, -P(=O)(OH)2, -SO3H로부터 선택되며; R5는 -COCH3, -COCF3, -SO2CH3로부터 선택되고; X는 -O- 및 -S-로부터 선택되며; Y는 하기로부터 선택되고:
Figure pct00396
R6은 하기로부터 선택되며:
Figure pct00397
R7은 H, C1-C20 알킬, C3-C20 사이클로알킬, C3-C20 헤테로사이클로알킬; C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되고; R8은 C3-C20 헤테로사이클로알킬, C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되며; 각각의 E는 Fc 도메인 단량체(예를 들어, 서열번호 1 내지 68 중 어느 하나의 서열을 갖는 Fc 도메인 단량체), 알부민 단백질(예를 들어, 서열번호 69 내지 71 중 어느 하나의 서열을 갖는 알부민 단백질), 알부민 단백질-결합 펩타이드 또는 Fc-결합 펩타이드를 포함하고; n은 1 또는 2이며; T1은 1 내지 10의 정수이고(예를 들어, T1은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10임)이고; L1은 E 및 A1에 공유 접합된 링커이고; T1은 1 내지 10의 정수이고(예를 들어, T1은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10임)이고; L2는 E 및 A2에 공유 접합된 링커이고; T2는 1 내지 10의 정수이고(예를 들어, T2는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10임)이다.
일부 실시형태에서, 각각의 A1-L은 E의 라이신 잔기(예를 들어, E의 표면 노출된 라이신 잔기의 질소 원자)에 특이적으로 접합되고, 각각의 A2-L은 E의 시스테인 잔기(예를 들어, E의 표면 노출된 시스테인 잔기의 황 원자)에 특이적으로 접합된다. 일부 실시형태에서, 각각의 A1-L 모이어티는 E의 시스테인 잔기(예를 들어, E의 표면 노출된 시스테인 잔기의 황 원자)에 특이적으로 접합되고, 각각의 A2-L 모이어티는 E의 라이신 잔기(예를 들어, E의 표면 노출된 라이신 잔기의 질소 원자)에 특이적으로 접합된다.
또 다른 양상에서, 본 발명은 본 명세서에 기재된 접합체 중 임의의 것(예를 들어, 화학식 (1) 내지 (5), (D-I) 내지 (D-X), (D'-I), (M-I) 내지 (M-X) 또는 (M'-I) 중 어느 하나의 접합체) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염, 및 약제학적으로 허용 가능한 부형제를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다.
또 다른 양상에서, 본 발명은 바이러스 감염을 갖거나 바이러스 감염을 갖는 것으로 추정되는 대상체의 치료 방법으로서, 이 방법은 대상체에게 유효량의 본 명세서에 기재된 접합체 또는 조성물(예를 들어, 화학식 (1) 내지 (5), (D-I) 내지 (D-X), (D'-I), (M-I) 내지 (M-X) 또는 (M'-I) 중 어느 하나의 접합체) 중 임의의 것을 투여하는 단계를 포함한다.
또 다른 양상에서, 본 발명은 바이러스 감염의 예방적 치료를 필요로 하는 대상체에서 바이러스 감염의 예방적 치료 방법으로서, 이 방법은 대상체에게 유효량의 본 명세서에 기재된 접합체 또는 조성물(예를 들어, 화학식 (1) 내지 (5), (D-I) 내지 (D-X), (D'-I), (M-I) 내지 (M-X) 또는 (M'-I) 중 어느 하나의 접합체) 중 임의의 것을 투여하는 단계를 포함한다.
일부 실시형태에서, 바이러스 감염은 인플루엔자 바이러스 또는 파라인플루엔자 바이러스에 의해서 유발된다. 일부 실시형태에서, 바이러스 감염은 인플루엔자 바이러스 A, B 또는 C 또는 파라인플루엔자 바이러스이다.
일부 실시형태에서, 대상체는 면역손상된다.
일부 실시형태에서, 대상체는 체액 면역 결핍, T 세포 결핍, 호중구감소증, 무비증(asplenia) 또는 보체 결손증(complement deficiency)으로 진단된다.
일부 실시형태에서, 대상체는 면역억제 요법으로 치료되고 있거나 치료될 예정이다.
일부 실시형태에서, 대상체는 면역억제를 유발하지 않는 질환으로 진단되었다. 일부 실시형태에서, 질환은 암 또는 후천성 면역결핍 증후군이다. 일부 실시형태에서, 암은 백혈병, 림프종 또는 다발성 골수종이다.
일부 실시형태에서, 대상체는 조혈 모세포 이식된 적이 있거나 조혈 모세포 이식될 예정이다.
일부 실시형태에서, 대상체는 장기 이식받은 적이 있거나 장기 이식받을 예정이다.
일부 실시형태에서, 조성물의 접합체는 근육내, 정맥내, 피부내, 동맥내, 복강내, 병변내, 두개내, 관절내, 전립선내, 흉막내, 기관내, 비강내, 유리체내, 질내, 직장내, 국지, 종양내, 복막, 피하, 결막하, 방광내, 점막내, 심장내, 배꼽내, 안구내, 경구, 국지, 흡입, 주사, 주입에 의해서 투여된다.
일부 실시형태에서, 대상체는 제2 치료제로 치료된다. 일부 실시형태에서, 제2 치료제는 항바이러스제이다. 일부 실시형태에서, 항바이러스제는 오셀타미비어(oseltamivir), 자나미비어(zanamivir), 페라미비어(peramivir), 라니나미비어(laninamivir), 아만타딘(amantadine) 또는 리만타딘(rimantadine)으로부터 선택된다. 일부 실시형태에서, 제2 치료제는 바이러스 백신이다. 일부 실시형태에서, 바이러스 백신은 대상체에서 인플루엔자 바이러스 A, B 또는 C 또는 파라인플루엔자 바이러스에 대해서 면역 반응을 도출한다.
일부 실시형태에서, Fc-도메인-함유 조성물은 Fc 도메인에 대해서 치환될 수 있고, Fc-도메인-단량체-함유 조성물은 화학식 (1) 내지 (5), (D-I) 내지 (D-X), (D'-I), (M-I) 내지 (M-X) 또는 (M'-I) 중 어느 하나(예를 들어, 화학식 (1), (2), (3), (4), (5), (D-I), (D-II), (D-II-1), (D-II-2), (D-II-3), (D-II-4), (D-II-5), (D-II-6), (D-II-7), (D-II-8), (D-II-9), (D-II-10), (D-III), (D-III-1), (D-III-2), (D-III-3), (D-III-4), (D-III-5), (D-III-6), (D-III-7), (D-III-8), (D-III-9), (D-IV), (D-IV-1), (D-IV-2), (D-V), (D-V-1), (D-V-2), (D-V-3), (D-V-4), (D-V-5), (D-V-6), (D-V-7), (D-V-8), (D-V-9), (D-V-10), (D-VI), (D-VI-1), (D-VI-2), (D-VI-3), (D-VI-4), (D-VI-5), (D-VI-6), (D-VI-7), (D-VI-8), (D-VI-9), (D-VII), (D-VIII), (D-VIII-1), (D-VIII-2), (D-VIII-3), (D-VIII-4), (D-VIII-5), (D-VIII-6), (D-VIII-7), (D-VIII-8), (D-VIII-9), (D-VIII-10), (D-VIII-11), (D-IX), (D-IX-1), (D-IX-2), (D-IX-3), (D-IX-4), (D-IX-5), (D-IX-6), (D-X), (D-X-1), (D-X-2), (D-X-3), (D'-I), (M-I), (M-II), (M-II-1), (M-II-2), (M-II-3), (M-II-4), (M-II-5), (M-II-6), (M-II-7), (M-II-8), (M-II-9), (M-II-10), (M-III), (M-III-1), (M-III-2), (M-III-3), (M-III-4), (M-III-5), (M-III-6), (M-III-7), (M-III-8), (M-III-9), (M-IV), (M-IV-1), (M-IV-2), (M-V), (M-V-1), (M-V-2), (M-V-3), (M-V-4), (M-V-5), (M-V-6), (M-V-7), (M-V-8), (M-V-9), (M-V-10), (M-VI), (M-VI-1), (M-VI-2), (M-VI-3), (M-VI-4), (M-VI-5), (M-VI-6), (M-VI-7), (M-VI-8), (M-VI-9), (M-VII), (M-VIII), (M-VIII-1), (M-VIII-2), (M-VIII-3), (M-VIII-4), (M-VIII-5), (M-VIII-6), (M-VIII-7), (M-VIII-8), (M-VIII-9), (M-VIII-10), (M-VIII-11), (M-IX), (M-IX-1), (M-IX-2), (M-IX-3), (M-IX-4), (M-IX-5), (M-IX-6), (M-X), (M-X-1), (M-X-2), (M-X-3) 또는 (M'-I) 중 어느 하나)에서 Fc 도메인 단량체에 대해서 치환될 수 있다. 본 명세서에 기재된 화학식 중 임의의 것(예를 들어, 화학식 (1) 내지 (5), (D-I) 내지 (D-X), (D'-I), (M-I) 내지 (M-X) 또는 (M'-I) 중 어느 하나)에서, n이 1인 경우, E는 Fc-도메인-단량체-함유 조성물이다. 본 명세서에 기재된 화학식 중 임의의 것(예를 들어, 화학식 (1) 내지 (5), (D-I) 내지 (D-X), (D'-I), (M-I) 내지 (M-X) 또는 (M'-I) 중 어느 하나)에서, n이 2인 경우, E는 Fc-도메인-함유 조성물이다.
특정 실시형태에서, Fc-도메인-함유 조성물은 항체 또는 항체 단편이다. 항체는 면역글로불린, 중쇄 항체, 경쇄 항체, LRR-기반 항체 또는 항체-유사 특성을 갖는 다른 단백질 스캐폴드뿐만 아니라 항체 단편(예를 들어, Fab, Fab', Fab'2, F(ab')2, Fd, Fv, Feb, scFv 또는 SMIP)을 포함하는, 당업계에 공지된 임의의 다른 면역학적 결합 모이어티의 임의의 형태를 포함할 수 있다. 항체의 상이한 부류의 소단위 구조 및 3차원 구성이 당업계에 공지되어 있다. 항체 단편은 항체로부터 유래된 부분을 포함하거나 항체와 상당한 동일성을 갖는 결합 모이어티, 예컨대, 항체의 항원-결정 영역을 포함할 수 있다. 예시적인 항체 단편은 Fab, Fab', Fab'2, F(ab')2, Fd, Fv, Feb, scFv 및 SMIP를 포함한다.
특정 실시형태에서, 항체 또는 항체 단편은 인간, 마우스, 낙타과(예를 들어, 라마, 알파카 또는 낙타), 염소, 양, 토끼, 닭, 기니피그, 햄스터, 말 또는 래트 항체 또는 항체 단편이다. 구체적인 실시형태에서, 항체는 IgG, IgA, IgD, IgE, IgM 또는 인트라바디이다. 특정 실시형태에서, 항체 단편은 scFv, sdAb, dAb, Fab, Fab', Fab'2, F(ab')2, Fd, Fv, Feb 또는 SMIP를 포함한다.
일부 실시형태에서, Fc-도메인-함유 조성물(예를 들어, 항체 또는 항체 단편)은 하나 이상의 표적(예를 들어, 항원)에 결합 특이성을 부여한다.
일부 실시형태에서, Fc-도메인-함유 조성물(예를 들어, 항체 또는 항체 단편)에 의해서 결합된 하나 이상의 표적(예를 들어, 항원)은 바이러스(예를 들어, 인플루엔자) 단백질, 예컨대, 뉴라미니다제 또는 헤마글루티닌이다. 일부 실시형태에서, 항체 또는 항체 단편은 바이러스 표면 항원이다. 일부 실시형태에서, 항체 또는 항체 단편은 헤마글루티닌을 표적으로 한다. 헤마글루티닌-표적화 항체는 단클론성 항체, 예컨대, CR6261, CR8020, MEDI8852, MHAA4549A 및 VIS410을 포함한다. 일부 실시형태에서, 항체 또는 항체 단편은 인플루엔자 헤마글루티닌(예를 들어, 문헌[Wu et al., J. Mol. Biol. 429:2694-2709 (2017)]에 기재된 항체 또는 항체 단편)을 표적으로 하는 항체 또는 항체 단편을 광범위하게 중화시킨다. 일부 실시형태에서 항체 또는 항체 단편은 바이러스 매트릭스 단백질(예를 들어, 매트릭스 2 단백질)을 표적으로 한다. TCN032는 매트릭스 2 단백질 표적화 단클론성 항체이다.
일부 실시형태에서, Fc-도메인-함유 조성물(예를 들어, 항체 또는 항체 단편)은 1개 이상의 단일-도메인 항체(sdAb)를 포함한다. 일부 실시형태에서 Fc-도메인-함유 조성물은 인플루엔자 A 반응성을 갖는 sdAb, 예컨대, 인플루엔자 A의 헤마글루티닌에 결합하는 sdAb(예를 들어, 문헌[Laursen et al. Science. 362:598-602 (2018)]에 기재된 SD36 또는 SD38)를 포함하는, 항체 또는 항체 단편이다. 일부 실시형태에서 Fc-도메인-함유 조성물은 인플루엔자 B 반응성을 갖는 sdAb, 예컨대, 인플루엔자 B의 헤마글루티닌에 결합하는 sdAb(예를 들어, 문헌[Laursen et al. Science. 362:598-602 (2018)]에 기재된 SD83 또는 SD84)를 포함하는, 항체 또는 항체 단편이다.
일부 실시형태에서 Fc-도메인-함유 조성물은 2개 초과(예를 들어, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개 초과)의 sdAb를 포함하는 다중도메인 항체(MDAb) 또는 다중도메인 항체 단편이다. 일부 실시형태에서, MDAb 또는 이의 단편은 인플루엔자 A의 헤마글루티닌에 결합하는 1개 이상의 sdAB 및 인플루엔자 B의 헤마글루티닌에 결합하는 1개 이상의 sdAB를 포함한다. 일부 실시형태에서, MDAb는 문헌[Laursen et al. Science. 362:598-602 (2018)]에 기재된 JNJ-7445(MD3606이라고도 공지됨)이다. 간략하면, JNJ-7445는 인플루엔자 A(SD36 및 SD38)의 헤마글루티닌에 결합하는 2개의 sdAb(SD83 및 SD84) 및 인플루엔자 B의 헤마글루티닌에 결합하는 2개의 sdAb(이것은 Fc 도메인(IgG1)에 연결됨)를 포함하는 MDAb이다. sdAb는 라마를 인플루엔자 백신 및 H7 및 H2 재조합 헤마글루티닌으로 면역화시킴으로써 생산되었다.
또 다른 양상에서, 본 발명은 화학식 (1) 내지 (5), (D-I) 내지 (D-X), (D'-I), (M-I) 내지 (M-X) 또는 (M'-I) 중 어느 하나(예를 들어, 화학식 (1), (2), (3), (4), (5), (D-I), (D-II), (D-II-1), (D-II-2), (D-II-3), (D-II-4), (D-II-5), (D-II-6), (D-II-7), (D-II-8), (D-II-9), (D-II-10), (D-III), (D-III-1), (D-III-2), (D-III-3), (D-III-4), (D-III-5), (D-III-6), (D-III-7), (D-III-8), (D-III-9), (D-IV), (D-IV-1), (D-IV-2), (D-V), (D-V-1), (D-V-2), (D-V-3), (D-V-4), (D-V-5), (D-V-6), (D-V-7), (D-V-8), (D-V-9), (D-V-10), (D-VI), (D-VI-1), (D-VI-2), (D-VI-3), (D-VI-4), (D-VI-5), (D-VI-6), (D-VI-7), (D-VI-8), (D-VI-9), (D-VII), (D-VIII), (D-VIII-1), (D-VIII-2), (D-VIII-3), (D-VIII-4), (D-VIII-5), (D-VIII-6), (D-VIII-7), (D-VIII-8), (D-VIII-9), (D-VIII-10), (D-VIII-11), (D-IX), (D-IX-1), (D-IX-2), (D-IX-3), (D-IX-4), (D-IX-5), (D-IX-6), (D-X), (D-X-1), (D-X-2), (D-X-3), (D'-I), (M-I), (M-II), (M-II-1), (M-II-2), (M-II-3), (M-II-4), (M-II-5), (M-II-6), (M-II-7), (M-II-8), (M-II-9), (M-II-10), (M-III), (M-III-1), (M-III-2), (M-III-3), (M-III-4), (M-III-5), (M-III-6), (M-III-7), (M-III-8), (M-III-9), (M-IV), (M-IV-1), (M-IV-2), (M-V), (M-V-1), (M-V-2), (M-V-3), (M-V-4), (M-V-5), (M-V-6), (M-V-7), (M-V-8), (M-V-9), (M-V-10), (M-VI), (M-VI-1), (M-VI-2), (M-VI-3), (M-VI-4), (M-VI-5), (M-VI-6), (M-VI-7), (M-VI-8), (M-VI-9), (M-VII), (M-VIII), (M-VIII-1), (M-VIII-2), (M-VIII-3), (M-VIII-4), (M-VIII-5), (M-VIII-6), (M-VIII-7), (M-VIII-8), (M-VIII-9), (M-VIII-10), (M-VIII-11), (M-IX), (M-IX-1), (M-IX-2), (M-IX-3), (M-IX-4), (M-IX-5), (M-IX-6), (M-X), (M-X-1), (M-X-2), (M-X-3) 또는 (M'-I) 중 어느 하나)에 의해서 기재되는 접합체를 포함하고, 여기서 E는 항체 또는 항체 단편이다. 바람직한 실시형태에서, E가 항체 또는 항체 단편인 경우, n은 1이다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 항체 또는 항체 단편은 임의의 항체 또는 항체 단편, 예컨대, 바이러스 헤마글루티닌에 결합하는 단클론성 항체(예를 들어, CR6261, CR8020, MEDI8852, MHAA4549A 또는 VIS410); 바이러스 헤마글루티닌을 표적으로 하는 광범위한 중화 항체 또는 항체 단편(예를 들어, 문헌[Wu et al., J. Mol. Biol. 429:2694-2709 (2017)]에 기재된 항체 또는 항체 단편); 바이러스 헤마글루티닌 표적화 sdAb(예를 들어, SD36, SD38, SD83 또는 SD84); 또는 바이러스 헤마글루티닌 표적화 MDAb 또는 단편(예를 들어, JNJ-7445)을 포함한다.
본 명세서에 기재된 양상 중 임의의 것의 일부 실시형태에서, E(예를 들어, 각각의 E)는 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, E는 서열번호 1의 아미노산 서열과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
본 명세서에 기재된 양상 중 임의의 것의 일부 실시형태에서, E(예를 들어, 각각의 E)는 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, E는 서열번호 2의 아미노산 서열과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
본 명세서에 기재된 양상 중 임의의 것의 일부 실시형태에서, E(예를 들어, 각각의 E)는 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, E는 서열번호 3의 아미노산 서열과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
본 명세서에 기재된 양상 중 임의의 것의 일부 실시형태에서, E(예를 들어, 각각의 E)는 서열번호 4의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, E는 서열번호 4의 아미노산 서열과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
본 명세서에 기재된 양상 중 임의의 것의 일부 실시형태에서, E(예를 들어, 각각의 E)는 서열번호 5의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, E는 서열번호 5의 아미노산 서열과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
본 명세서에 기재된 양상 중 임의의 것의 일부 실시형태에서, E(예를 들어, 각각의 E)는 서열번호 6의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, E는 서열번호 6의 아미노산 서열과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
본 명세서에 기재된 양상 중 임의의 것의 일부 실시형태에서, E(예를 들어, 각각의 E)는 서열번호 7의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, E는 서열번호 7의 아미노산 서열과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
본 명세서에 기재된 양상 중 임의의 것의 일부 실시형태에서, E(예를 들어, 각각의 E)는 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, E는 서열번호 8의 아미노산 서열과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
본 명세서에 기재된 양상 중 임의의 것의 일부 실시형태에서, E(예를 들어, 각각의 E)는 서열번호 9의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, E는 서열번호 9의 아미노산 서열과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
본 명세서에 기재된 양상 중 임의의 것의 일부 실시형태에서, E(예를 들어, 각각의 E)는 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, E는 서열번호 10의 아미노산 서열과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
본 명세서에 기재된 양상 중 임의의 것의 일부 실시형태에서, E(예를 들어, 각각의 E)는 서열번호 11의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, E는 서열번호 11의 아미노산 서열과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
본 명세서에 기재된 양상 중 임의의 것의 일부 실시형태에서, E(예를 들어, 각각의 E)는 서열번호 12의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, E는 서열번호 12의 아미노산 서열과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
본 명세서에 기재된 양상 중 임의의 것의 일부 실시형태에서, E(예를 들어, 각각의 E)는 서열번호 13의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, E는 서열번호 13의 아미노산 서열과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
본 명세서에 기재된 양상 중 임의의 것의 일부 실시형태에서, E(예를 들어, 각각의 E)는 서열번호 14의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, E는 서열번호 14의 아미노산 서열과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
본 명세서에 기재된 양상 중 임의의 것의 일부 실시형태에서, E(예를 들어, 각각의 E)는 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, E는 서열번호 15의 아미노산 서열과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
본 명세서에 기재된 양상 중 임의의 것의 일부 실시형태에서, E(예를 들어, 각각의 E)는 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, E는 서열번호 16의 아미노산 서열과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
본 명세서에 기재된 양상 중 임의의 것의 일부 실시형태에서, E(예를 들어, 각각의 E)는 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, E는 서열번호 17의 아미노산 서열과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
본 명세서에 기재된 양상 중 임의의 것의 일부 실시형태에서, E(예를 들어, 각각의 E)는 서열번호 18의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, E는 서열번호 18의 아미노산 서열과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
본 명세서에 기재된 양상 중 임의의 것의 일부 실시형태에서, E(예를 들어, 각각의 E)는 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, E는 서열번호 19의 아미노산 서열과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
본 명세서에 기재된 양상 중 임의의 것의 일부 실시형태에서, E(예를 들어, 각각의 E)는 서열번호 20의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, E는 서열번호 20의 아미노산 서열과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
본 명세서에 기재된 양상 중 임의의 것의 일부 실시형태에서, E(예를 들어, 각각의 E)는 서열번호 21의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, E는 서열번호 21의 아미노산 서열과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
본 명세서에 기재된 양상 중 임의의 것의 일부 실시형태에서, E(예를 들어, 각각의 E)는 서열번호 22의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, E는 서열번호 22의 아미노산 서열과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
본 명세서에 기재된 양상 중 임의의 것의 일부 실시형태에서, E(예를 들어, 각각의 E)는 서열번호 23의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, E는 서열번호 23의 아미노산 서열과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
본 명세서에 기재된 양상 중 임의의 것의 일부 실시형태에서, E(예를 들어, 각각의 E)는 서열번호 24의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, E는 서열번호 24의 아미노산 서열과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
본 명세서에 기재된 양상 중 임의의 것의 일부 실시형태에서, E(예를 들어, 각각의 E)는 서열번호 25의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, E는 서열번호 25의 아미노산 서열과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
본 명세서에 기재된 양상 중 임의의 것의 일부 실시형태에서, E(예를 들어, 각각의 E)는 서열번호 26의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, E는 서열번호 26의 아미노산 서열과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
본 명세서에 기재된 양상 중 임의의 것의 일부 실시형태에서, E(예를 들어, 각각의 E)는 서열번호 27의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, E는 서열번호 27의 아미노산 서열과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
본 명세서에 기재된 양상 중 임의의 것의 일부 실시형태에서, E(예를 들어, 각각의 E)는 서열번호 28의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, E는 서열번호 28의 아미노산 서열과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
본 명세서에 기재된 양상 중 임의의 것의 일부 실시형태에서, E(예를 들어, 각각의 E)는 서열번호 29의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, E는 서열번호 29의 아미노산 서열과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
본 명세서에 기재된 양상 중 임의의 것의 일부 실시형태에서, E(예를 들어, 각각의 E)는 서열번호 30의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, E는 서열번호 30의 아미노산 서열과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
본 명세서에 기재된 양상 중 임의의 것의 일부 실시형태에서, E(예를 들어, 각각의 E)는 서열번호 31의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, E는 서열번호 31의 아미노산 서열과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
본 명세서에 기재된 양상 중 임의의 것의 일부 실시형태에서, E(예를 들어, 각각의 E)는 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, E는 서열번호 32의 아미노산 서열과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
본 명세서에 기재된 양상 중 임의의 것의 일부 실시형태에서, E(예를 들어, 각각의 E)는 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, E는 서열번호 33의 아미노산 서열과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
본 명세서에 기재된 양상 중 임의의 것의 일부 실시형태에서, E(예를 들어, 각각의 E)는 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, E는 서열번호 34의 아미노산 서열과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
본 명세서에 기재된 양상 중 임의의 것의 일부 실시형태에서, E(예를 들어, 각각의 E)는 서열번호 35의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, E는 서열번호 35의 아미노산 서열과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
본 명세서에 기재된 양상 중 임의의 것의 일부 실시형태에서, E(예를 들어, 각각의 E)는 서열번호 36의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, E는 서열번호 36의 아미노산 서열과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
본 명세서에 기재된 양상 중 임의의 것의 일부 실시형태에서, E(예를 들어, 각각의 E)는 서열번호 37의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, E는 서열번호 37의 아미노산 서열과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
본 명세서에 기재된 양상 중 임의의 것의 일부 실시형태에서, E(예를 들어, 각각의 E)는 서열번호 38의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, E는 서열번호 38의 아미노산 서열과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
본 명세서에 기재된 양상 중 임의의 것의 일부 실시형태에서, E(예를 들어, 각각의 E)는 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, E는 서열번호 39의 아미노산 서열과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
본 명세서에 기재된 양상 중 임의의 것의 일부 실시형태에서, E(예를 들어, 각각의 E)는 서열번호 40의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, E는 서열번호 40의 아미노산 서열과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
본 명세서에 기재된 양상 중 임의의 것의 일부 실시형태에서, E(예를 들어, 각각의 E)는 서열번호 41의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, E는 서열번호 41의 아미노산 서열과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
본 명세서에 기재된 양상 중 임의의 것의 일부 실시형태에서, E(예를 들어, 각각의 E)는 서열번호 42의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, E는 서열번호 42의 아미노산 서열과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
본 명세서에 기재된 양상 중 임의의 것의 일부 실시형태에서, E(예를 들어, 각각의 E)는 서열번호 43의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, E는 서열번호 43의 아미노산 서열과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
본 명세서에 기재된 양상 중 임의의 것의 일부 실시형태에서, E(예를 들어, 각각의 E)는 서열번호 44의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, E는 서열번호 45의 아미노산 서열과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
본 명세서에 기재된 양상 중 임의의 것의 일부 실시형태에서, E(예를 들어, 각각의 E)는 서열번호 46의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, E는 서열번호 46의 아미노산 서열과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
본 명세서에 기재된 양상 중 임의의 것의 일부 실시형태에서, E(예를 들어, 각각의 E)는 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, E는 서열번호 47의 아미노산 서열과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
본 명세서에 기재된 양상 중 임의의 것의 일부 실시형태에서, E(예를 들어, 각각의 E)는 서열번호 48의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, E는 서열번호 48의 아미노산 서열과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
본 명세서에 기재된 양상 중 임의의 것의 일부 실시형태에서, E(예를 들어, 각각의 E)는 서열번호 49의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, E는 서열번호 49의 아미노산 서열과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
본 명세서에 기재된 양상 중 임의의 것의 일부 실시형태에서, E(예를 들어, 각각의 E)는 서열번호 50의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, E는 서열번호 50의 아미노산 서열과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
본 명세서에 기재된 양상 중 임의의 것의 일부 실시형태에서, E(예를 들어, 각각의 E)는 서열번호 51의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, E는 서열번호 51의 아미노산 서열과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
본 명세서에 기재된 양상 중 임의의 것의 일부 실시형태에서, E(예를 들어, 각각의 E)는 서열번호 52의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, E는 서열번호 52의 아미노산 서열과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
본 명세서에 기재된 양상 중 임의의 것의 일부 실시형태에서, E(예를 들어, 각각의 E)는 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, E는 서열번호 53의 아미노산 서열과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
본 명세서에 기재된 양상 중 임의의 것의 일부 실시형태에서, E(예를 들어, 각각의 E)는 서열번호 54의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, E는 서열번호 54의 아미노산 서열과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
본 명세서에 기재된 양상 중 임의의 것의 일부 실시형태에서, E(예를 들어, 각각의 E)는 서열번호 55의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, E는 서열번호 55의 아미노산 서열과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
본 명세서에 기재된 양상 중 임의의 것의 일부 실시형태에서, E(예를 들어, 각각의 E)는 서열번호 56의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, E는 서열번호 56의 아미노산 서열과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
본 명세서에 기재된 양상 중 임의의 것의 일부 실시형태에서, E(예를 들어, 각각의 E)는 서열번호 57의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, E는 서열번호 57의 아미노산 서열과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
본 명세서에 기재된 양상 중 임의의 것의 일부 실시형태에서, E(예를 들어, 각각의 E)는 서열번호 58의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, E는 서열번호 58의 아미노산 서열과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
본 명세서에 기재된 양상 중 임의의 것의 일부 실시형태에서, E(예를 들어, 각각의 E)는 서열번호 59의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, E는 서열번호 59의 아미노산 서열과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
본 명세서에 기재된 양상 중 임의의 것의 일부 실시형태에서, E(예를 들어, 각각의 E)는 서열번호 60의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, E는 서열번호 60의 아미노산 서열과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
본 명세서에 기재된 양상 중 임의의 것의 일부 실시형태에서, E(예를 들어, 각각의 E)는 서열번호 61의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, E는 서열번호 61의 아미노산 서열과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
본 명세서에 기재된 양상 중 임의의 것의 일부 실시형태에서, E(예를 들어, 각각의 E)는 서열번호 62의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, E는 서열번호 62의 아미노산 서열과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
본 명세서에 기재된 양상 중 임의의 것의 일부 실시형태에서, E(예를 들어, 각각의 E)는 서열번호 63의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, E는 서열번호 63의 아미노산 서열과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
본 명세서에 기재된 양상 중 임의의 것의 일부 실시형태에서, E(예를 들어, 각각의 E)는 서열번호 64의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, E는 서열번호 64의 아미노산 서열과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
본 명세서에 기재된 양상 중 임의의 것의 일부 실시형태에서, E(예를 들어, 각각의 E)는 서열번호 65의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, E는 서열번호 65의 아미노산 서열과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
본 명세서에 기재된 양상 중 임의의 것의 일부 실시형태에서, E(예를 들어, 각각의 E)는 서열번호 66의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, E는 서열번호 66의 아미노산 서열과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
본 명세서에 기재된 양상 중 임의의 것의 일부 실시형태에서, E(예를 들어, 각각의 E)는 서열번호 67의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, E는 서열번호 67의 아미노산 서열과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
본 명세서에 기재된 양상 중 임의의 것의 일부 실시형태에서, E(예를 들어, 각각의 E)는 서열번호 68의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, E는 서열번호 68의 아미노산 서열과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
본 명세서에 기재된 양상 중 임의의 것의 일부 실시형태에서, E(예를 들어, 각각의 E)는 서열번호 69의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, E는 서열번호 69의 아미노산 서열과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
본 명세서에 기재된 양상 중 임의의 것의 일부 실시형태에서, E(예를 들어, 각각의 E)는 서열번호 70의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, E는 서열번호 70의 아미노산 서열과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
본 명세서에 기재된 양상 중 임의의 것의 일부 실시형태에서, E(예를 들어, 각각의 E)는 서열번호 71의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, E는 서열번호 71의 아미노산 서열과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
본 명세서에 기재된 양상 중 임의의 것의 일부 실시형태에서, E가 Fc 도메인 단량체를 포함하는 경우, Fc 도메인 단량체(예를 들어, 서열번호 1 내지 68 중 어느 하나의 서열을 갖는 Fc 도메인 단량체)는 M252Y/S254T/T256E(YTE)에 상응하는 삼중 돌연변이를 포함한다. 본 명세서에서 사용되는 바와 같이, (예를 들어, 특정 아미노산 서열의) 특정 아미노산 잔기"에 상응하는" 아미노산은 (예를 들어, 특정 서열의) 특정 잔기에 정렬한다고 당업자에게 이해되는 임의의 아미노산 잔기를 포함한다고 이해되어야 한다. 예를 들어, 서열번호 1 내지 68 중 어느 하나는 YTE 돌연변이를 포함하도록 돌연변이될 수 있다.
본 명세서에 기재된 양상 중 임의의 것의 일부 실시형태에서, E가 Fc 도메인 단량체를 포함하는 경우, Fc 도메인 단량체(예를 들어, 서열번호 1 내지 68 중 어느 하나의 서열을 갖는 Fc 도메인 단량체)는 M428L/N434S(LS)에 상응하는 이중 돌연변이를 포함한다. 본 명세서에서 사용되는 바와 같이, (예를 들어, 특정 아미노산 서열의) 특정 아미노산 잔기"에 상응하는" 아미노산은 (예를 들어, 특정 서열의) 특정 잔기에 정렬한다고 당업자에게 이해되는 임의의 아미노산 잔기를 포함한다고 이해되어야 한다. 예를 들어, 서열번호 1 내지 68 중 어느 하나는 LS 돌연변이를 포함하도록 돌연변이될 수 있다.
본 명세서에 기재된 양상 중 임의의 것의 일부 실시형태에서, E가 Fc 도메인 단량체를 포함하는 경우, Fc 도메인 단량체(예를 들어, 서열번호 1 내지 68 중 어느 하나의 서열을 갖는 Fc 도메인 단량체)는 N434H에 상응하는 돌연변이를 포함한다. 본 명세서에서 사용되는 바와 같이, (예를 들어, 특정 아미노산 서열의) 특정 아미노산 잔기"에 상응하는" 아미노산은 (예를 들어, 특정 서열의) 특정 잔기에 정렬한다고 당업자에게 이해되는 임의의 아미노산 잔기를 포함한다고 이해되어야 한다. 예를 들어, 서열번호 1 내지 68 중 어느 하나는 N434H 돌연변이를 포함하도록 돌연변이될 수 있다.
본 명세서에 기재된 양상 중 임의의 것의 일부 실시형태에서, E가 Fc 도메인 단량체를 포함하는 경우, Fc 도메인 단량체(예를 들어, 서열번호 1 내지 68 중 어느 하나의 서열을 갖는 Fc 도메인 단량체)는 C220S에 상응하는 돌연변이를 포함한다. 본 명세서에서 사용되는 바와 같이, (예를 들어, 특정 아미노산 서열의) 특정 아미노산 잔기"에 상응하는" 아미노산은 (예를 들어, 특정 서열의) 특정 잔기에 정렬한다고 당업자에게 이해되는 임의의 아미노산 잔기를 포함한다고 이해되어야 한다. 예를 들어, 서열번호 1 내지 68 중 어느 하나는 C220S 돌연변이를 포함하도록 돌연변이될 수 있다.
본 명세서에 기재된 양상 중 임의의 것의 일부 실시형태에서, E가 Fc 도메인 단량체를 포함하는 경우, Fc 도메인 단량체(예를 들어, 서열번호 1 내지 68 중 어느 하나의 서열을 갖는 Fc 도메인 단량체)는 서열번호 1 내지 68로부터의 Fc 도메인 단량체의 단편(예를 들어, 적어도 25개(예를 들어, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50개 또는 그 초과), 적어도 50개(예를 들어, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75개 또는 그 초과), 적어도 75개(예를 들어, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100개 또는 그 초과)의 연속적인 아미노산 길이이다.
본 명세서에 기재된 양상 중 임의의 것의 일부 실시형태에서(예를 들어, 화학식 (1) 내지 (5), (D-I) 내지 (D-X), (D'-I), (M-I) 내지 (M-X) 또는 (M'-I) 중 어느 하나의 접합체), E에서 하나 이상의 E의 표면 노출된 라이신 잔기의 하나 이상의 질소 원자 또는 하나 이상의 표면 노출된 시스테인의 하나 이상의 황 원자는 링커(예를 들어, PEG2-PEG20 링커)에 공유 접합된다. E에 접합된 링커는 그것이 반응하여 본 명세서에 기재된 임의의 A1-L 또는 임의의 A2-L-A1의 L과 공유 결합을 형성하도록 작용화될 수 있다. 바람직한 실시형태에서, E는 아지도기로 작용화된 링커에 접합되고, A1-L 또는 임의의 A2-L-A1의 L은 알킨기로 작용화된다. E의 링커-아지도와 A1-L 또는 A2-L-A1의 링커-알킨의 (예를 들어, 클릭 화학에 의한) 접합은 본 발명의 접합체, 예를 들어, 화학식 (1) 내지 (5), (D-I) 내지 (D-X), (D'-I), (M-I) 내지 (M-X) 또는 (M'-I) 중 어느 하나로 기재되는 접합체를 형성한다. 추가의 다른 실시형태에서, E는 알킨기로 작용화된 링커에 접합되고, 임의의 A1-L 또는 임의의 A2-L-A1의 L은 아지도기로 작용화된다. E의 링커-알킨과 A1-L 또는 A2-L-A1의 링커-아지도의 (예를 들어, 클릭 화학에 의한) 접합은 본 발명의 접합체, 예를 들어, 화학식 (1) 내지 (5), (D-I) 내지 (D-X), (D'-I), (M-I) 내지 (M-X) 또는 (M'-I)로 기재되는 접합체를 형성한다.
본 명세서에 기재된 양상 중 임의의 것의 일부 실시형태에서, 화학식 (1) 내지 (5), (D-I) 내지 (D-X), (D'-I), (M-I) 내지 (M-X) 또는 (M'-I) 중 어느 하나의 물결선은 E와 A1-L 또는 A2-L-A1의 L 사이의 공유 결합을 나타낼 수 있다.
본 명세서에 기재된 양상 중 임의의 것의 일부 실시형태에서, 화학식 (1) 내지 (5), (D-I) 내지 (D-X), (D'-I), (M-I) 내지 (M-X) 또는 (M'-I) 중 어느 하나의 물결선은 E의 1개 이상의 아미노산 측쇄(예를 들어, E의 1개 이상의 표면 노출된 라이신 잔기의 1개 이상의 질소 원자 또는 E 내의 1개 이상의 표면 노출된 시스테인의 1개 이상의 황 원자)가 링커(예를 들어, PEG2-PEG20 링커)에 접합되었다는 것을 나타낼 수 있고, 링커는 반응성 모이어티로 작용화되어, 반응성 모이어티는 (예를 들어, 상기에 기재된 바와 같은 아지도 작용화된 링커와 알킨 작용화된 링커 사이에서의 클릭 화학에 의해서) 본 명세서에 기재된 임의의 A1-L 또는 임의의 A2-L-A1의 L과 공유 결합을 형성한다. 본 명세서에 기재된 양상 중 임의의 것의 일부 실시형태에서, A1 및/또는 A2는 (A-I)로 기재되는 구조를 갖는다:
Figure pct00398
바람직한 실시형태에서, A1 및/또는 A2가 (A-I)로 기재되는 구조를 갖는 경우: R1은 -NHC(=NH)NH2이고/이거나, R4는 -CO2H이고/이거나, R5는 -COCH3이고/이거나 X는 -O-이다. 바람직한 실시형태에서, A1 및/또는 A2는 하기로 기재되는 자나미비어의 구조를 갖는다:
Figure pct00399
본 명세서에 기재된 양상 중 임의의 것의 일부 실시형태에서, A1 및/또는 A2는 (A-II)로 기재되는 구조를 갖는다:
Figure pct00400
바람직한 실시형태에서, A1 및/또는 A2가 (A-II)로 기재되는 구조를 갖는 경우: R1은 -NHC(=NH)NH2이고/이거나, R2는 H 또는 F이고/이거나, R3은 H 또는 F이고/이거나, R4는 -CO2H이고/이거나, R5는 -COCH3이고/이거나, X는 -O-이다. 바람직한 실시형태에서, A1 및/또는 A2는 하기로 기재된 구조를 갖는다:
Figure pct00401
본 명세서에 기재된 양상 중 임의의 것의 일부 실시형태에서, A1 및/또는 A2는 (A-III)로 기재되는 구조를 갖는다:
Figure pct00402
바람직한 실시형태에서, A1 및/또는 A2가 (A-III)으로 기재되는 구조를 갖는 경우: R1은 -NHC(=NH)NH2이고/이거나, R4는 -CO2H이고/이거나, R5는 -COCH3이다. 바람직한 실시형태에서, A1 및/또는 A2는 하기로 기재되는 페라미비어의 구조를 갖는다:
Figure pct00403
본 명세서에 기재된 양상 중 임의의 것의 일부 실시형태에서, A1 및/또는 A2는 (A-IV)로 기재되는 구조를 갖는다:
Figure pct00404
바람직한 실시형태에서, A1 및/또는 A2가 (A-IV)로 기재되는 구조를 갖는 경우: R1은 -NHC(=NH)NH2이고/이거나, R4는 -CO2H이고/이거나, R5는 -COCH3이다. 바람직한 실시형태에서, A1 및/또는 A2는 하기로 기재된 구조를 갖는다:
Figure pct00405
본 명세서에 기재된 양상 중 임의의 것의 일부 실시형태에서, A1 및/또는 A2는 (A-V)로 기재되는 구조를 갖는다:
Figure pct00406
바람직한 실시형태에서, A1 및/또는 A2가 (A-V)로 기재되는 구조를 갖는 경우: R1은 -NHC(=NH)NH2이고/이거나, R4는 -CO2H이고/이거나, R5는 -COCH3이다. 바람직한 실시형태에서, A1 및/또는 A2는 하기로 기재된 구조를 갖는다:
Figure pct00407
본 명세서에 기재된 양상 중 임의의 것의 일부 실시형태에서, A1 및/또는 A2는 (A-VI)으로 기재되는 구조를 갖는다:
Figure pct00408
바람직한 실시형태에서, A1 및/또는 A2가 (A-VI)으로 기재되는 구조를 갖는 경우: R1은 -NHC(=NH)NH2이고/이거나, R4는 -CO2H이고/이거나, R5는 -COCH3이고/이거나 X는 -O-이다. 바람직한 실시형태에서, A1 및/또는 A2는 하기로 기재되는 자나미비어의 구조를 갖는다:
Figure pct00409
본 명세서에 기재된 양상 중 임의의 것의 일부 실시형태에서, A1 및/또는 A2는 (A-VII)로 기재되는 구조를 갖는다:
Figure pct00410
바람직한 실시형태에서, A1 및/또는 A2가 (A-VII)로 기재되는 구조를 갖는 경우: R1은 -NHC(=NH)NH2이고/이거나, R2는 H 또는 F이고/이거나, R3은 H 또는 F이고/이거나, R4는 -CO2H이고/이거나, R5는 -COCH3이고/이거나, X는 -O-이다. 바람직한 실시형태에서, A1 및/또는 A2는 하기로 기재된 구조를 갖는다:
Figure pct00411
본 명세서에 기재된 양상 중 임의의 것의 일부 실시형태에서, A1 및/또는 A2는 (A-VIII)로 기재되는 구조를 갖는다:
Figure pct00412
바람직한 실시형태에서, A1 및/또는 A2가 (A-VIII)로 기재되는 구조를 갖는 경우: R1은 -NHC(=NH)NH2이고/이거나, R5는 -COCH3이고/이거나 X는 -O-이다. 바람직한 실시형태에서, A1 및/또는 A2는 하기로 기재된 구조를 갖는다:
Figure pct00413
본 명세서에 기재된 양상 중 임의의 것의 일부 실시형태에서, A1 및/또는 A2는 (A-IX)로 기재되는 구조를 갖는다:
Figure pct00414
바람직한 실시형태에서, A1 및/또는 A2가 (A-IX)로 기재되는 구조를 갖는 경우: R1은 -NHC(=NH)NH2이고/이거나, R2는 H 또는 F이고/이거나, R3은 H 또는 F이고/이거나, R5는 -COCH3이고/이거나, X는 -O-이다. 바람직한 실시형태에서, A1 및/또는 A2는 하기로 기재된 구조를 갖는다:
Figure pct00415
본 명세서에 기재된 양상 중 임의의 것의 일부 실시형태에서, A1 및/또는 A2는 (A-X)로 기재되는 구조를 갖는다:
Figure pct00416
바람직한 실시형태에서, A1 및/또는 A2가 (A-X)로 기재되는 구조를 갖는 경우: R1은 -NHC(=NH)NH2이고/이거나, R3은 H이고/이거나, R5는 -COCH3이고/이거나 X는 -O-이다. 바람직한 실시형태에서, A1 및/또는 A2는 하기로 기재되는 설포자나미비어의 구조를 갖는다:
Figure pct00417
본 명세서에 기재된 양상 중 임의의 것의 일부 실시형태에서, A1 및/또는 A2는 (A-XI)로 기재되는 구조를 갖는다:
Figure pct00418
바람직한 실시형태에서, A1 및/또는 A2가 (A-XI)로 기재되는 구조를 갖는 경우: R4는 -CO2H이고/이거나, R5는 -COCH3이다. 바람직한 실시형태에서, 알켄은 (E), (Z) 또는 (E)/(Z)의 라세미 혼합물이다. 바람직한 실시형태에서, A1 및/또는 A2는 하기로 기재되는 A-315675(Abbott)의 구조를 갖는다:
Figure pct00419
본 명세서에 기재된 양상 중 임의의 것의 일부 실시형태에서, A1 및/또는 A2는 (A-XII)로 기재되는 구조를 갖는다:
Figure pct00420
바람직한 실시형태에서, A1 및/또는 A2가 (A-XII)로 기재되는 구조를 갖는 경우: R4은 -CO2H이다. 바람직한 실시형태에서, A1 및/또는 A2는 하기로 기재되는 A-315675(Abbott)의 구조를 갖는다:
Figure pct00421
일부 실시형태에서, 접합체는 접합체 1 또는 이의 임의의 위치이성질체이고, 약물-대-항체 비(DAR)(예를 들어, T)는 0.5 내지 10.0, 예를 들어, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1, 1.1, 1.2, 1.3, 1.4, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8, 1.9, 2, 2.1, 2.2, 2.3, 2.4, 2.5, 2.6, 2.7, 2.8, 2.9, 3, 3.1, 3.2, 3.3, 3.4, 3.5, 3.6, 3.7, 3.8, 3.9, 4, 4.1, 4.2, 4.3, 4.4, 4.5, 4.6, 4.7, 4.8, 4.9, 5.0, 5.1, 5.2, 5.3, 5.4, 5.5, 5.6, 5.7, 5.8, 5.9, 6.0, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4, 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, 6.9, 7.0, 7.1, 7.2, 7.3, 7.4, 7.5, 7.6, 7.7, 7.8.0, 7.9, 8, 8.1, 8.2, 8.3, 8.4, 8.5, 8.6, 8.7, 8.8, 8.9, 9.0, 9.1, 9.2, 9.3, 9.4, 9.5, 9.6, 9.7, 9.8, 9.9 또는 10.0이다. 일부 실시형태에서 DAR은 0.5 내지 2.0, 2.0 내지 4.0, 4.0 내지 6.0 내지 6.0 내지 8.0 또는 8.0 내지 10.0이다.
일부 실시형태에서, 접합체는 접합체 2 또는 이의 임의의 위치이성질체이고, DAR(예를 들어, T)은 0.5 내지 10.0, 예를 들어, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1, 1.1, 1.2, 1.3, 1.4, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8, 1.9, 2, 2.1, 2.2, 2.3, 2.4, 2.5, 2.6, 2.7, 2.8, 2.9, 3, 3.1, 3.2, 3.3, 3.4, 3.5, 3.6, 3.7, 3.8, 3.9, 4, 4.1, 4.2, 4.3, 4.4, 4.5, 4.6, 4.7, 4.8, 4.9, 5.0, 5.1, 5.2, 5.3, 5.4, 5.5, 5.6, 5.7, 5.8, 5.9, 6.0, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4, 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, 6.9, 7.0, 7.1, 7.2, 7.3, 7.4, 7.5, 7.6, 7.7, 7.8.0, 7.9, 8, 8.1, 8.2, 8.3, 8.4, 8.5, 8.6, 8.7, 8.8, 8.9, 9.0, 9.1, 9.2, 9.3, 9.4, 9.5, 9.6, 9.7, 9.8, 9.9 또는 10.0이다. 일부 실시형태에서 DAR은 0.5 내지 2.0, 2.0 내지 4.0, 4.0 내지 6.0 내지 6.0 내지 8.0 또는 8.0 내지 10.0이다.
일부 실시형태에서, 접합체는 접합체 3 또는 이의 임의의 위치이성질체이고, DAR(예를 들어, T)은 0.5 내지 10.0, 예를 들어, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1, 1.1, 1.2, 1.3, 1.4, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8, 1.9, 2, 2.1, 2.2, 2.3, 2.4, 2.5, 2.6, 2.7, 2.8, 2.9, 3, 3.1, 3.2, 3.3, 3.4, 3.5, 3.6, 3.7, 3.8, 3.9, 4, 4.1, 4.2, 4.3, 4.4, 4.5, 4.6, 4.7, 4.8, 4.9, 5.0, 5.1, 5.2, 5.3, 5.4, 5.5, 5.6, 5.7, 5.8, 5.9, 6.0, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4, 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, 6.9, 7.0, 7.1, 7.2, 7.3, 7.4, 7.5, 7.6, 7.7, 7.8.0, 7.9, 8, 8.1, 8.2, 8.3, 8.4, 8.5, 8.6, 8.7, 8.8, 8.9, 9.0, 9.1, 9.2, 9.3, 9.4, 9.5, 9.6, 9.7, 9.8, 9.9 또는 10.0이다. 일부 실시형태에서 DAR은 0.5 내지 2.0, 2.0 내지 4.0, 4.0 내지 6.0 내지 6.0 내지 8.0 또는 8.0 내지 10.0이다.
일부 실시형태에서, 접합체는 접합체 4 또는 이의 임의의 위치이성질체이고, DAR(예를 들어, T)은 0.5 내지 10.0, 예를 들어, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1, 1.1, 1.2, 1.3, 1.4, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8, 1.9, 2, 2.1, 2.2, 2.3, 2.4, 2.5, 2.6, 2.7, 2.8, 2.9, 3, 3.1, 3.2, 3.3, 3.4, 3.5, 3.6, 3.7, 3.8, 3.9, 4, 4.1, 4.2, 4.3, 4.4, 4.5, 4.6, 4.7, 4.8, 4.9, 5.0, 5.1, 5.2, 5.3, 5.4, 5.5, 5.6, 5.7, 5.8, 5.9, 6.0, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4, 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, 6.9, 7.0, 7.1, 7.2, 7.3, 7.4, 7.5, 7.6, 7.7, 7.8.0, 7.9, 8, 8.1, 8.2, 8.3, 8.4, 8.5, 8.6, 8.7, 8.8, 8.9, 9.0, 9.1, 9.2, 9.3, 9.4, 9.5, 9.6, 9.7, 9.8, 9.9 또는 10.0이다. 일부 실시형태에서 DAR은 0.5 내지 2.0, 2.0 내지 4.0, 4.0 내지 6.0 내지 6.0 내지 8.0 또는 8.0 내지 10.0이다.
일부 실시형태에서, 접합체는 접합체 5 또는 이의 임의의 위치이성질체이고, DAR(예를 들어, T)은 0.5 내지 10.0, 예를 들어, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1, 1.1, 1.2, 1.3, 1.4, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8, 1.9, 2, 2.1, 2.2, 2.3, 2.4, 2.5, 2.6, 2.7, 2.8, 2.9, 3, 3.1, 3.2, 3.3, 3.4, 3.5, 3.6, 3.7, 3.8, 3.9, 4, 4.1, 4.2, 4.3, 4.4, 4.5, 4.6, 4.7, 4.8, 4.9, 5.0, 5.1, 5.2, 5.3, 5.4, 5.5, 5.6, 5.7, 5.8, 5.9, 6.0, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4, 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, 6.9, 7.0, 7.1, 7.2, 7.3, 7.4, 7.5, 7.6, 7.7, 7.8.0, 7.9, 8, 8.1, 8.2, 8.3, 8.4, 8.5, 8.6, 8.7, 8.8, 8.9, 9.0, 9.1, 9.2, 9.3, 9.4, 9.5, 9.6, 9.7, 9.8, 9.9 또는 10.0이다. 일부 실시형태에서 DAR은 0.5 내지 2.0, 2.0 내지 4.0, 4.0 내지 6.0 내지 6.0 내지 8.0 또는 8.0 내지 10.0이다.
일부 실시형태에서, 접합체는 접합체 6 또는 이의 임의의 위치이성질체이고, DAR(예를 들어, T)은 0.5 내지 10.0, 예를 들어, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1, 1.1, 1.2, 1.3, 1.4, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8, 1.9, 2, 2.1, 2.2, 2.3, 2.4, 2.5, 2.6, 2.7, 2.8, 2.9, 3, 3.1, 3.2, 3.3, 3.4, 3.5, 3.6, 3.7, 3.8, 3.9, 4, 4.1, 4.2, 4.3, 4.4, 4.5, 4.6, 4.7, 4.8, 4.9, 5.0, 5.1, 5.2, 5.3, 5.4, 5.5, 5.6, 5.7, 5.8, 5.9, 6.0, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4, 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, 6.9, 7.0, 7.1, 7.2, 7.3, 7.4, 7.5, 7.6, 7.7, 7.8.0, 7.9, 8, 8.1, 8.2, 8.3, 8.4, 8.5, 8.6, 8.7, 8.8, 8.9, 9.0, 9.1, 9.2, 9.3, 9.4, 9.5, 9.6, 9.7, 9.8, 9.9 또는 10.0이다. 일부 실시형태에서 DAR은 0.5 내지 2.0, 2.0 내지 4.0, 4.0 내지 6.0 내지 6.0 내지 8.0 또는 8.0 내지 10.0이다.
일부 실시형태에서, 접합체는 접합체 7 또는 이의 임의의 위치이성질체이고, DAR(예를 들어, T)은 0.5 내지 10.0, 예를 들어, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1, 1.1, 1.2, 1.3, 1.4, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8, 1.9, 2, 2.1, 2.2, 2.3, 2.4, 2.5, 2.6, 2.7, 2.8, 2.9, 3, 3.1, 3.2, 3.3, 3.4, 3.5, 3.6, 3.7, 3.8, 3.9, 4, 4.1, 4.2, 4.3, 4.4, 4.5, 4.6, 4.7, 4.8, 4.9, 5.0, 5.1, 5.2, 5.3, 5.4, 5.5, 5.6, 5.7, 5.8, 5.9, 6.0, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4, 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, 6.9, 7.0, 7.1, 7.2, 7.3, 7.4, 7.5, 7.6, 7.7, 7.8.0, 7.9, 8, 8.1, 8.2, 8.3, 8.4, 8.5, 8.6, 8.7, 8.8, 8.9, 9.0, 9.1, 9.2, 9.3, 9.4, 9.5, 9.6, 9.7, 9.8, 9.9 또는 10.0이다. 일부 실시형태에서 DAR은 0.5 내지 2.0, 2.0 내지 4.0, 4.0 내지 6.0 내지 6.0 내지 8.0 또는 8.0 내지 10.0이다.
일부 실시형태에서, 접합체는 접합체 8 또는 이의 임의의 위치이성질체이고, DAR(예를 들어, T)은 0.5 내지 10.0, 예를 들어, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1, 1.1, 1.2, 1.3, 1.4, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8, 1.9, 2, 2.1, 2.2, 2.3, 2.4, 2.5, 2.6, 2.7, 2.8, 2.9, 3, 3.1, 3.2, 3.3, 3.4, 3.5, 3.6, 3.7, 3.8, 3.9, 4, 4.1, 4.2, 4.3, 4.4, 4.5, 4.6, 4.7, 4.8, 4.9, 5.0, 5.1, 5.2, 5.3, 5.4, 5.5, 5.6, 5.7, 5.8, 5.9, 6.0, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4, 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, 6.9, 7.0, 7.1, 7.2, 7.3, 7.4, 7.5, 7.6, 7.7, 7.8.0, 7.9, 8, 8.1, 8.2, 8.3, 8.4, 8.5, 8.6, 8.7, 8.8, 8.9, 9.0, 9.1, 9.2, 9.3, 9.4, 9.5, 9.6, 9.7, 9.8, 9.9 또는 10.0이다. 일부 실시형태에서 DAR은 0.5 내지 2.0, 2.0 내지 4.0, 4.0 내지 6.0 내지 6.0 내지 8.0 또는 8.0 내지 10.0이다.
일부 실시형태에서, 접합체는 접합체 9 또는 이의 임의의 위치이성질체이고, DAR(예를 들어, T)은 0.5 내지 10.0, 예를 들어, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1, 1.1, 1.2, 1.3, 1.4, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8, 1.9, 2, 2.1, 2.2, 2.3, 2.4, 2.5, 2.6, 2.7, 2.8, 2.9, 3, 3.1, 3.2, 3.3, 3.4, 3.5, 3.6, 3.7, 3.8, 3.9, 4, 4.1, 4.2, 4.3, 4.4, 4.5, 4.6, 4.7, 4.8, 4.9, 5.0, 5.1, 5.2, 5.3, 5.4, 5.5, 5.6, 5.7, 5.8, 5.9, 6.0, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4, 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, 6.9, 7.0, 7.1, 7.2, 7.3, 7.4, 7.5, 7.6, 7.7, 7.8.0, 7.9, 8, 8.1, 8.2, 8.3, 8.4, 8.5, 8.6, 8.7, 8.8, 8.9, 9.0, 9.1, 9.2, 9.3, 9.4, 9.5, 9.6, 9.7, 9.8, 9.9 또는 10.0이다. 일부 실시형태에서 DAR은 0.5 내지 2.0, 2.0 내지 4.0, 4.0 내지 6.0 내지 6.0 내지 8.0 또는 8.0 내지 10.0이다.
일부 실시형태에서, 접합체는 접합체 10 또는 이의 임의의 위치이성질체이고, DAR(예를 들어, T)은 0.5 내지 10.0, 예를 들어, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1, 1.1, 1.2, 1.3, 1.4, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8, 1.9, 2, 2.1, 2.2, 2.3, 2.4, 2.5, 2.6, 2.7, 2.8, 2.9, 3, 3.1, 3.2, 3.3, 3.4, 3.5, 3.6, 3.7, 3.8, 3.9, 4, 4.1, 4.2, 4.3, 4.4, 4.5, 4.6, 4.7, 4.8, 4.9, 5.0, 5.1, 5.2, 5.3, 5.4, 5.5, 5.6, 5.7, 5.8, 5.9, 6.0, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4, 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, 6.9, 7.0, 7.1, 7.2, 7.3, 7.4, 7.5, 7.6, 7.7, 7.8.0, 7.9, 8, 8.1, 8.2, 8.3, 8.4, 8.5, 8.6, 8.7, 8.8, 8.9, 9.0, 9.1, 9.2, 9.3, 9.4, 9.5, 9.6, 9.7, 9.8, 9.9 또는 10.0이다. 일부 실시형태에서 DAR은 0.5 내지 2.0, 2.0 내지 4.0, 4.0 내지 6.0 내지 6.0 내지 8.0 또는 8.0 내지 10.0이다.
일부 실시형태에서, 접합체는 접합체 11 또는 이의 임의의 위치이성질체이고, DAR(예를 들어, T)은 0.5 내지 10.0, 예를 들어, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1, 1.1, 1.2, 1.3, 1.4, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8, 1.9, 2, 2.1, 2.2, 2.3, 2.4, 2.5, 2.6, 2.7, 2.8, 2.9, 3, 3.1, 3.2, 3.3, 3.4, 3.5, 3.6, 3.7, 3.8, 3.9, 4, 4.1, 4.2, 4.3, 4.4, 4.5, 4.6, 4.7, 4.8, 4.9, 5.0, 5.1, 5.2, 5.3, 5.4, 5.5, 5.6, 5.7, 5.8, 5.9, 6.0, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4, 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, 6.9, 7.0, 7.1, 7.2, 7.3, 7.4, 7.5, 7.6, 7.7, 7.8.0, 7.9, 8, 8.1, 8.2, 8.3, 8.4, 8.5, 8.6, 8.7, 8.8, 8.9, 9.0, 9.1, 9.2, 9.3, 9.4, 9.5, 9.6, 9.7, 9.8, 9.9 또는 10.0이다. 일부 실시형태에서 DAR은 0.5 내지 2.0, 2.0 내지 4.0, 4.0 내지 6.0 내지 6.0 내지 8.0 또는 8.0 내지 10.0이다.
일부 실시형태에서, 접합체는 접합체 12 또는 이의 임의의 위치이성질체이고, DAR(예를 들어, T)은 0.5 내지 10.0, 예를 들어, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1, 1.1, 1.2, 1.3, 1.4, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8, 1.9, 2, 2.1, 2.2, 2.3, 2.4, 2.5, 2.6, 2.7, 2.8, 2.9, 3, 3.1, 3.2, 3.3, 3.4, 3.5, 3.6, 3.7, 3.8, 3.9, 4, 4.1, 4.2, 4.3, 4.4, 4.5, 4.6, 4.7, 4.8, 4.9, 5.0, 5.1, 5.2, 5.3, 5.4, 5.5, 5.6, 5.7, 5.8, 5.9, 6.0, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4, 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, 6.9, 7.0, 7.1, 7.2, 7.3, 7.4, 7.5, 7.6, 7.7, 7.8.0, 7.9, 8, 8.1, 8.2, 8.3, 8.4, 8.5, 8.6, 8.7, 8.8, 8.9, 9.0, 9.1, 9.2, 9.3, 9.4, 9.5, 9.6, 9.7, 9.8, 9.9 또는 10.0이다. 일부 실시형태에서 DAR은 0.5 내지 2.0, 2.0 내지 4.0, 4.0 내지 6.0 내지 6.0 내지 8.0 또는 8.0 내지 10.0이다.
일부 실시형태에서, 접합체는 접합체 13 또는 이의 임의의 위치이성질체이고, DAR(예를 들어, T)은 0.5 내지 10.0, 예를 들어, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1, 1.1, 1.2, 1.3, 1.4, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8, 1.9, 2, 2.1, 2.2, 2.3, 2.4, 2.5, 2.6, 2.7, 2.8, 2.9, 3, 3.1, 3.2, 3.3, 3.4, 3.5, 3.6, 3.7, 3.8, 3.9, 4, 4.1, 4.2, 4.3, 4.4, 4.5, 4.6, 4.7, 4.8, 4.9, 5.0, 5.1, 5.2, 5.3, 5.4, 5.5, 5.6, 5.7, 5.8, 5.9, 6.0, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4, 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, 6.9, 7.0, 7.1, 7.2, 7.3, 7.4, 7.5, 7.6, 7.7, 7.8.0, 7.9, 8, 8.1, 8.2, 8.3, 8.4, 8.5, 8.6, 8.7, 8.8, 8.9, 9.0, 9.1, 9.2, 9.3, 9.4, 9.5, 9.6, 9.7, 9.8, 9.9 또는 10.0이다. 일부 실시형태에서 DAR은 0.5 내지 2.0, 2.0 내지 4.0, 4.0 내지 6.0 내지 6.0 내지 8.0 또는 8.0 내지 10.0이다.
일부 실시형태에서, 접합체는 접합체 14 또는 이의 임의의 위치이성질체이고, DAR(예를 들어, T)은 0.5 내지 10.0, 예를 들어, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1, 1.1, 1.2, 1.3, 1.4, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8, 1.9, 2, 2.1, 2.2, 2.3, 2.4, 2.5, 2.6, 2.7, 2.8, 2.9, 3, 3.1, 3.2, 3.3, 3.4, 3.5, 3.6, 3.7, 3.8, 3.9, 4, 4.1, 4.2, 4.3, 4.4, 4.5, 4.6, 4.7, 4.8, 4.9, 5.0, 5.1, 5.2, 5.3, 5.4, 5.5, 5.6, 5.7, 5.8, 5.9, 6.0, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4, 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, 6.9, 7.0, 7.1, 7.2, 7.3, 7.4, 7.5, 7.6, 7.7, 7.8.0, 7.9, 8, 8.1, 8.2, 8.3, 8.4, 8.5, 8.6, 8.7, 8.8, 8.9, 9.0, 9.1, 9.2, 9.3, 9.4, 9.5, 9.6, 9.7, 9.8, 9.9 또는 10.0이다. 일부 실시형태에서 DAR은 0.5 내지 2.0, 2.0 내지 4.0, 4.0 내지 6.0 내지 6.0 내지 8.0 또는 8.0 내지 10.0이다.
일부 실시형태에서, 접합체는 접합체 15 또는 이의 임의의 위치이성질체이고, DAR(예를 들어, T)은 0.5 내지 10.0, 예를 들어, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1, 1.1, 1.2, 1.3, 1.4, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8, 1.9, 2, 2.1, 2.2, 2.3, 2.4, 2.5, 2.6, 2.7, 2.8, 2.9, 3, 3.1, 3.2, 3.3, 3.4, 3.5, 3.6, 3.7, 3.8, 3.9, 4, 4.1, 4.2, 4.3, 4.4, 4.5, 4.6, 4.7, 4.8, 4.9, 5.0, 5.1, 5.2, 5.3, 5.4, 5.5, 5.6, 5.7, 5.8, 5.9, 6.0, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4, 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, 6.9, 7.0, 7.1, 7.2, 7.3, 7.4, 7.5, 7.6, 7.7, 7.8.0, 7.9, 8, 8.1, 8.2, 8.3, 8.4, 8.5, 8.6, 8.7, 8.8, 8.9, 9.0, 9.1, 9.2, 9.3, 9.4, 9.5, 9.6, 9.7, 9.8, 9.9 또는 10.0이다. 일부 실시형태에서 DAR은 0.5 내지 2.0, 2.0 내지 4.0, 4.0 내지 6.0 내지 6.0 내지 8.0 또는 8.0 내지 10.0이다.
일부 실시형태에서, 접합체는 접합체 16 또는 이의 임의의 위치이성질체이고, DAR(예를 들어, T)은 0.5 내지 10.0, 예를 들어, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1, 1.1, 1.2, 1.3, 1.4, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8, 1.9, 2, 2.1, 2.2, 2.3, 2.4, 2.5, 2.6, 2.7, 2.8, 2.9, 3, 3.1, 3.2, 3.3, 3.4, 3.5, 3.6, 3.7, 3.8, 3.9, 4, 4.1, 4.2, 4.3, 4.4, 4.5, 4.6, 4.7, 4.8, 4.9, 5.0, 5.1, 5.2, 5.3, 5.4, 5.5, 5.6, 5.7, 5.8, 5.9, 6.0, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4, 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, 6.9, 7.0, 7.1, 7.2, 7.3, 7.4, 7.5, 7.6, 7.7, 7.8.0, 7.9, 8, 8.1, 8.2, 8.3, 8.4, 8.5, 8.6, 8.7, 8.8, 8.9, 9.0, 9.1, 9.2, 9.3, 9.4, 9.5, 9.6, 9.7, 9.8, 9.9 또는 10.0이다. 일부 실시형태에서 DAR은 0.5 내지 2.0, 2.0 내지 4.0, 4.0 내지 6.0 내지 6.0 내지 8.0 또는 8.0 내지 10.0이다.
일부 실시형태에서, 접합체는 접합체 17 또는 이의 임의의 위치이성질체이고, DAR(예를 들어, T)은 0.5 내지 10.0, 예를 들어, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1, 1.1, 1.2, 1.3, 1.4, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8, 1.9, 2, 2.1, 2.2, 2.3, 2.4, 2.5, 2.6, 2.7, 2.8, 2.9, 3, 3.1, 3.2, 3.3, 3.4, 3.5, 3.6, 3.7, 3.8, 3.9, 4, 4.1, 4.2, 4.3, 4.4, 4.5, 4.6, 4.7, 4.8, 4.9, 5.0, 5.1, 5.2, 5.3, 5.4, 5.5, 5.6, 5.7, 5.8, 5.9, 6.0, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4, 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, 6.9, 7.0, 7.1, 7.2, 7.3, 7.4, 7.5, 7.6, 7.7, 7.8.0, 7.9, 8, 8.1, 8.2, 8.3, 8.4, 8.5, 8.6, 8.7, 8.8, 8.9, 9.0, 9.1, 9.2, 9.3, 9.4, 9.5, 9.6, 9.7, 9.8, 9.9 또는 10.0이다. 일부 실시형태에서 DAR은 0.5 내지 2.0, 2.0 내지 4.0, 4.0 내지 6.0 내지 6.0 내지 8.0 또는 8.0 내지 10.0이다.
일부 실시형태에서, 접합체는 접합체 18 또는 이의 임의의 위치이성질체이고, DAR(예를 들어, T)은 0.5 내지 10.0, 예를 들어, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1, 1.1, 1.2, 1.3, 1.4, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8, 1.9, 2, 2.1, 2.2, 2.3, 2.4, 2.5, 2.6, 2.7, 2.8, 2.9, 3, 3.1, 3.2, 3.3, 3.4, 3.5, 3.6, 3.7, 3.8, 3.9, 4, 4.1, 4.2, 4.3, 4.4, 4.5, 4.6, 4.7, 4.8, 4.9, 5.0, 5.1, 5.2, 5.3, 5.4, 5.5, 5.6, 5.7, 5.8, 5.9, 6.0, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4, 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, 6.9, 7.0, 7.1, 7.2, 7.3, 7.4, 7.5, 7.6, 7.7, 7.8.0, 7.9, 8, 8.1, 8.2, 8.3, 8.4, 8.5, 8.6, 8.7, 8.8, 8.9, 9.0, 9.1, 9.2, 9.3, 9.4, 9.5, 9.6, 9.7, 9.8, 9.9 또는 10.0이다. 일부 실시형태에서 DAR은 0.5 내지 2.0, 2.0 내지 4.0, 4.0 내지 6.0 내지 6.0 내지 8.0 또는 8.0 내지 10.0이다.
일부 실시형태에서, 접합체는 접합체 19 또는 이의 임의의 위치이성질체이고, DAR(예를 들어, T)은 0.5 내지 10.0, 예를 들어, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1, 1.1, 1.2, 1.3, 1.4, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8, 1.9, 2, 2.1, 2.2, 2.3, 2.4, 2.5, 2.6, 2.7, 2.8, 2.9, 3, 3.1, 3.2, 3.3, 3.4, 3.5, 3.6, 3.7, 3.8, 3.9, 4, 4.1, 4.2, 4.3, 4.4, 4.5, 4.6, 4.7, 4.8, 4.9, 5.0, 5.1, 5.2, 5.3, 5.4, 5.5, 5.6, 5.7, 5.8, 5.9, 6.0, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4, 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, 6.9, 7.0, 7.1, 7.2, 7.3, 7.4, 7.5, 7.6, 7.7, 7.8.0, 7.9, 8, 8.1, 8.2, 8.3, 8.4, 8.5, 8.6, 8.7, 8.8, 8.9, 9.0, 9.1, 9.2, 9.3, 9.4, 9.5, 9.6, 9.7, 9.8, 9.9 또는 10.0이다. 일부 실시형태에서 DAR은 0.5 내지 2.0, 2.0 내지 4.0, 4.0 내지 6.0 내지 6.0 내지 8.0 또는 8.0 내지 10.0이다.
일부 실시형태에서, 접합체는 접합체 20 또는 이의 임의의 위치이성질체이고, DAR(예를 들어, T)은 0.5 내지 10.0, 예를 들어, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1, 1.1, 1.2, 1.3, 1.4, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8, 1.9, 2, 2.1, 2.2, 2.3, 2.4, 2.5, 2.6, 2.7, 2.8, 2.9, 3, 3.1, 3.2, 3.3, 3.4, 3.5, 3.6, 3.7, 3.8, 3.9, 4, 4.1, 4.2, 4.3, 4.4, 4.5, 4.6, 4.7, 4.8, 4.9, 5.0, 5.1, 5.2, 5.3, 5.4, 5.5, 5.6, 5.7, 5.8, 5.9, 6.0, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4, 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, 6.9, 7.0, 7.1, 7.2, 7.3, 7.4, 7.5, 7.6, 7.7, 7.8.0, 7.9, 8, 8.1, 8.2, 8.3, 8.4, 8.5, 8.6, 8.7, 8.8, 8.9, 9.0, 9.1, 9.2, 9.3, 9.4, 9.5, 9.6, 9.7, 9.8, 9.9 또는 10.0이다. 일부 실시형태에서 DAR은 0.5 내지 2.0, 2.0 내지 4.0, 4.0 내지 6.0 내지 6.0 내지 8.0 또는 8.0 내지 10.0이다.
일부 실시형태에서, 접합체는 접합체 21 또는 이의 임의의 위치이성질체이고, DAR(예를 들어, T)은 0.5 내지 10.0, 예를 들어, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1, 1.1, 1.2, 1.3, 1.4, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8, 1.9, 2, 2.1, 2.2, 2.3, 2.4, 2.5, 2.6, 2.7, 2.8, 2.9, 3, 3.1, 3.2, 3.3, 3.4, 3.5, 3.6, 3.7, 3.8, 3.9, 4, 4.1, 4.2, 4.3, 4.4, 4.5, 4.6, 4.7, 4.8, 4.9, 5.0, 5.1, 5.2, 5.3, 5.4, 5.5, 5.6, 5.7, 5.8, 5.9, 6.0, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4, 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, 6.9, 7.0, 7.1, 7.2, 7.3, 7.4, 7.5, 7.6, 7.7, 7.8.0, 7.9, 8, 8.1, 8.2, 8.3, 8.4, 8.5, 8.6, 8.7, 8.8, 8.9, 9.0, 9.1, 9.2, 9.3, 9.4, 9.5, 9.6, 9.7, 9.8, 9.9 또는 10.0이다. 일부 실시형태에서 DAR은 0.5 내지 2.0, 2.0 내지 4.0, 4.0 내지 6.0 내지 6.0 내지 8.0 또는 8.0 내지 10.0이다.
일부 실시형태에서, 접합체는 접합체 22 또는 이의 임의의 위치이성질체이고, DAR(예를 들어, T)은 0.5 내지 10.0, 예를 들어, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1, 1.1, 1.2, 1.3, 1.4, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8, 1.9, 2, 2.1, 2.2, 2.3, 2.4, 2.5, 2.6, 2.7, 2.8, 2.9, 3, 3.1, 3.2, 3.3, 3.4, 3.5, 3.6, 3.7, 3.8, 3.9, 4, 4.1, 4.2, 4.3, 4.4, 4.5, 4.6, 4.7, 4.8, 4.9, 5.0, 5.1, 5.2, 5.3, 5.4, 5.5, 5.6, 5.7, 5.8, 5.9, 6.0, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4, 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, 6.9, 7.0, 7.1, 7.2, 7.3, 7.4, 7.5, 7.6, 7.7, 7.8.0, 7.9, 8, 8.1, 8.2, 8.3, 8.4, 8.5, 8.6, 8.7, 8.8, 8.9, 9.0, 9.1, 9.2, 9.3, 9.4, 9.5, 9.6, 9.7, 9.8, 9.9 또는 10.0이다. 일부 실시형태에서 DAR은 0.5 내지 2.0, 2.0 내지 4.0, 4.0 내지 6.0 내지 6.0 내지 8.0 또는 8.0 내지 10.0이다.
일부 실시형태에서, 접합체는 접합체 23 또는 이의 임의의 위치이성질체이고, DAR(예를 들어, T)은 0.5 내지 10.0, 예를 들어, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1, 1.1, 1.2, 1.3, 1.4, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8, 1.9, 2, 2.1, 2.2, 2.3, 2.4, 2.5, 2.6, 2.7, 2.8, 2.9, 3, 3.1, 3.2, 3.3, 3.4, 3.5, 3.6, 3.7, 3.8, 3.9, 4, 4.1, 4.2, 4.3, 4.4, 4.5, 4.6, 4.7, 4.8, 4.9, 5.0, 5.1, 5.2, 5.3, 5.4, 5.5, 5.6, 5.7, 5.8, 5.9, 6.0, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4, 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, 6.9, 7.0, 7.1, 7.2, 7.3, 7.4, 7.5, 7.6, 7.7, 7.8.0, 7.9, 8, 8.1, 8.2, 8.3, 8.4, 8.5, 8.6, 8.7, 8.8, 8.9, 9.0, 9.1, 9.2, 9.3, 9.4, 9.5, 9.6, 9.7, 9.8, 9.9 또는 10.0이다. 일부 실시형태에서 DAR은 0.5 내지 2.0, 2.0 내지 4.0, 4.0 내지 6.0 내지 6.0 내지 8.0 또는 8.0 내지 10.0이다.
일부 실시형태에서, 접합체는 접합체 24 또는 이의 임의의 위치이성질체이고, DAR(예를 들어, T)은 0.5 내지 10.0, 예를 들어, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1, 1.1, 1.2, 1.3, 1.4, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8, 1.9, 2, 2.1, 2.2, 2.3, 2.4, 2.5, 2.6, 2.7, 2.8, 2.9, 3, 3.1, 3.2, 3.3, 3.4, 3.5, 3.6, 3.7, 3.8, 3.9, 4, 4.1, 4.2, 4.3, 4.4, 4.5, 4.6, 4.7, 4.8, 4.9, 5.0, 5.1, 5.2, 5.3, 5.4, 5.5, 5.6, 5.7, 5.8, 5.9, 6.0, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4, 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, 6.9, 7.0, 7.1, 7.2, 7.3, 7.4, 7.5, 7.6, 7.7, 7.8.0, 7.9, 8, 8.1, 8.2, 8.3, 8.4, 8.5, 8.6, 8.7, 8.8, 8.9, 9.0, 9.1, 9.2, 9.3, 9.4, 9.5, 9.6, 9.7, 9.8, 9.9 또는 10.0이다. 일부 실시형태에서 DAR은 0.5 내지 2.0, 2.0 내지 4.0, 4.0 내지 6.0 내지 6.0 내지 8.0 또는 8.0 내지 10.0이다.
일부 실시형태에서, 접합체는 접합체 25 또는 이의 임의의 위치이성질체이고, DAR(예를 들어, T)은 0.5 내지 10.0, 예를 들어, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1, 1.1, 1.2, 1.3, 1.4, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8, 1.9, 2, 2.1, 2.2, 2.3, 2.4, 2.5, 2.6, 2.7, 2.8, 2.9, 3, 3.1, 3.2, 3.3, 3.4, 3.5, 3.6, 3.7, 3.8, 3.9, 4, 4.1, 4.2, 4.3, 4.4, 4.5, 4.6, 4.7, 4.8, 4.9, 5.0, 5.1, 5.2, 5.3, 5.4, 5.5, 5.6, 5.7, 5.8, 5.9, 6.0, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4, 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, 6.9, 7.0, 7.1, 7.2, 7.3, 7.4, 7.5, 7.6, 7.7, 7.8.0, 7.9, 8, 8.1, 8.2, 8.3, 8.4, 8.5, 8.6, 8.7, 8.8, 8.9, 9.0, 9.1, 9.2, 9.3, 9.4, 9.5, 9.6, 9.7, 9.8, 9.9 또는 10.0이다. 일부 실시형태에서 DAR은 0.5 내지 2.0, 2.0 내지 4.0, 4.0 내지 6.0 내지 6.0 내지 8.0 또는 8.0 내지 10.0이다.
일부 실시형태에서, 접합체는 접합체 26 또는 이의 임의의 위치이성질체이고, DAR(예를 들어, T)은 0.5 내지 10.0, 예를 들어, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1, 1.1, 1.2, 1.3, 1.4, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8, 1.9, 2, 2.1, 2.2, 2.3, 2.4, 2.5, 2.6, 2.7, 2.8, 2.9, 3, 3.1, 3.2, 3.3, 3.4, 3.5, 3.6, 3.7, 3.8, 3.9, 4, 4.1, 4.2, 4.3, 4.4, 4.5, 4.6, 4.7, 4.8, 4.9, 5.0, 5.1, 5.2, 5.3, 5.4, 5.5, 5.6, 5.7, 5.8, 5.9, 6.0, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4, 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, 6.9, 7.0, 7.1, 7.2, 7.3, 7.4, 7.5, 7.6, 7.7, 7.8.0, 7.9, 8, 8.1, 8.2, 8.3, 8.4, 8.5, 8.6, 8.7, 8.8, 8.9, 9.0, 9.1, 9.2, 9.3, 9.4, 9.5, 9.6, 9.7, 9.8, 9.9 또는 10.0이다. 일부 실시형태에서 DAR은 0.5 내지 2.0, 2.0 내지 4.0, 4.0 내지 6.0 내지 6.0 내지 8.0 또는 8.0 내지 10.0이다.
일부 실시형태에서, 접합체는 접합체 27 또는 이의 임의의 위치이성질체이고, DAR(예를 들어, T)은 0.5 내지 10.0, 예를 들어, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1, 1.1, 1.2, 1.3, 1.4, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8, 1.9, 2, 2.1, 2.2, 2.3, 2.4, 2.5, 2.6, 2.7, 2.8, 2.9, 3, 3.1, 3.2, 3.3, 3.4, 3.5, 3.6, 3.7, 3.8, 3.9, 4, 4.1, 4.2, 4.3, 4.4, 4.5, 4.6, 4.7, 4.8, 4.9, 5.0, 5.1, 5.2, 5.3, 5.4, 5.5, 5.6, 5.7, 5.8, 5.9, 6.0, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4, 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, 6.9, 7.0, 7.1, 7.2, 7.3, 7.4, 7.5, 7.6, 7.7, 7.8.0, 7.9, 8, 8.1, 8.2, 8.3, 8.4, 8.5, 8.6, 8.7, 8.8, 8.9, 9.0, 9.1, 9.2, 9.3, 9.4, 9.5, 9.6, 9.7, 9.8, 9.9 또는 10.0이다. 일부 실시형태에서 DAR은 0.5 내지 2.0, 2.0 내지 4.0, 4.0 내지 6.0 내지 6.0 내지 8.0 또는 8.0 내지 10.0이다.
일부 실시형태에서, 접합체는 접합체 28 또는 이의 임의의 위치이성질체이고, DAR(예를 들어, T)은 0.5 내지 10.0, 예를 들어, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1, 1.1, 1.2, 1.3, 1.4, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8, 1.9, 2, 2.1, 2.2, 2.3, 2.4, 2.5, 2.6, 2.7, 2.8, 2.9, 3, 3.1, 3.2, 3.3, 3.4, 3.5, 3.6, 3.7, 3.8, 3.9, 4, 4.1, 4.2, 4.3, 4.4, 4.5, 4.6, 4.7, 4.8, 4.9, 5.0, 5.1, 5.2, 5.3, 5.4, 5.5, 5.6, 5.7, 5.8, 5.9, 6.0, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4, 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, 6.9, 7.0, 7.1, 7.2, 7.3, 7.4, 7.5, 7.6, 7.7, 7.8.0, 7.9, 8, 8.1, 8.2, 8.3, 8.4, 8.5, 8.6, 8.7, 8.8, 8.9, 9.0, 9.1, 9.2, 9.3, 9.4, 9.5, 9.6, 9.7, 9.8, 9.9 또는 10.0이다. 일부 실시형태에서 DAR은 0.5 내지 2.0, 2.0 내지 4.0, 4.0 내지 6.0 내지 6.0 내지 8.0 또는 8.0 내지 10.0이다.
일부 실시형태에서, 접합체는 접합체 29 또는 이의 임의의 위치이성질체이고, DAR(예를 들어, T)은 0.5 내지 10.0, 예를 들어, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1, 1.1, 1.2, 1.3, 1.4, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8, 1.9, 2, 2.1, 2.2, 2.3, 2.4, 2.5, 2.6, 2.7, 2.8, 2.9, 3, 3.1, 3.2, 3.3, 3.4, 3.5, 3.6, 3.7, 3.8, 3.9, 4, 4.1, 4.2, 4.3, 4.4, 4.5, 4.6, 4.7, 4.8, 4.9, 5.0, 5.1, 5.2, 5.3, 5.4, 5.5, 5.6, 5.7, 5.8, 5.9, 6.0, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4, 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, 6.9, 7.0, 7.1, 7.2, 7.3, 7.4, 7.5, 7.6, 7.7, 7.8.0, 7.9, 8, 8.1, 8.2, 8.3, 8.4, 8.5, 8.6, 8.7, 8.8, 8.9, 9.0, 9.1, 9.2, 9.3, 9.4, 9.5, 9.6, 9.7, 9.8, 9.9 또는 10.0이다. 일부 실시형태에서 DAR은 0.5 내지 2.0, 2.0 내지 4.0, 4.0 내지 6.0 내지 6.0 내지 8.0 또는 8.0 내지 10.0이다.
일부 실시형태에서, 접합체는 접합체 30 또는 이의 임의의 위치이성질체이고, DAR(예를 들어, T)은 0.5 내지 10.0, 예를 들어, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1, 1.1, 1.2, 1.3, 1.4, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8, 1.9, 2, 2.1, 2.2, 2.3, 2.4, 2.5, 2.6, 2.7, 2.8, 2.9, 3, 3.1, 3.2, 3.3, 3.4, 3.5, 3.6, 3.7, 3.8, 3.9, 4, 4.1, 4.2, 4.3, 4.4, 4.5, 4.6, 4.7, 4.8, 4.9, 5.0, 5.1, 5.2, 5.3, 5.4, 5.5, 5.6, 5.7, 5.8, 5.9, 6.0, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4, 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, 6.9, 7.0, 7.1, 7.2, 7.3, 7.4, 7.5, 7.6, 7.7, 7.8.0, 7.9, 8, 8.1, 8.2, 8.3, 8.4, 8.5, 8.6, 8.7, 8.8, 8.9, 9.0, 9.1, 9.2, 9.3, 9.4, 9.5, 9.6, 9.7, 9.8, 9.9 또는 10.0이다. 일부 실시형태에서 DAR은 0.5 내지 2.0, 2.0 내지 4.0, 4.0 내지 6.0 내지 6.0 내지 8.0 또는 8.0 내지 10.0이다.
일부 실시형태에서, 접합체는 접합체 31 또는 이의 임의의 위치이성질체이고, DAR(예를 들어, T)은 0.5 내지 10.0, 예를 들어, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1, 1.1, 1.2, 1.3, 1.4, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8, 1.9, 2, 2.1, 2.2, 2.3, 2.4, 2.5, 2.6, 2.7, 2.8, 2.9, 3, 3.1, 3.2, 3.3, 3.4, 3.5, 3.6, 3.7, 3.8, 3.9, 4, 4.1, 4.2, 4.3, 4.4, 4.5, 4.6, 4.7, 4.8, 4.9, 5.0, 5.1, 5.2, 5.3, 5.4, 5.5, 5.6, 5.7, 5.8, 5.9, 6.0, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4, 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, 6.9, 7.0, 7.1, 7.2, 7.3, 7.4, 7.5, 7.6, 7.7, 7.8.0, 7.9, 8, 8.1, 8.2, 8.3, 8.4, 8.5, 8.6, 8.7, 8.8, 8.9, 9.0, 9.1, 9.2, 9.3, 9.4, 9.5, 9.6, 9.7, 9.8, 9.9 또는 10.0이다. 일부 실시형태에서 DAR은 0.5 내지 2.0, 2.0 내지 4.0, 4.0 내지 6.0 내지 6.0 내지 8.0 또는 8.0 내지 10.0이다.
일부 실시형태에서, 접합체는 접합체 32 또는 이의 임의의 위치이성질체이고, DAR(예를 들어, T)은 0.5 내지 10.0, 예를 들어, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1, 1.1, 1.2, 1.3, 1.4, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8, 1.9, 2, 2.1, 2.2, 2.3, 2.4, 2.5, 2.6, 2.7, 2.8, 2.9, 3, 3.1, 3.2, 3.3, 3.4, 3.5, 3.6, 3.7, 3.8, 3.9, 4, 4.1, 4.2, 4.3, 4.4, 4.5, 4.6, 4.7, 4.8, 4.9, 5.0, 5.1, 5.2, 5.3, 5.4, 5.5, 5.6, 5.7, 5.8, 5.9, 6.0, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4, 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, 6.9, 7.0, 7.1, 7.2, 7.3, 7.4, 7.5, 7.6, 7.7, 7.8.0, 7.9, 8, 8.1, 8.2, 8.3, 8.4, 8.5, 8.6, 8.7, 8.8, 8.9, 9.0, 9.1, 9.2, 9.3, 9.4, 9.5, 9.6, 9.7, 9.8, 9.9 또는 10.0이다. 일부 실시형태에서 DAR은 0.5 내지 2.0, 2.0 내지 4.0, 4.0 내지 6.0 내지 6.0 내지 8.0 또는 8.0 내지 10.0이다.
일부 실시형태에서, 접합체는 접합체 33 또는 이의 임의의 위치이성질체이고, DAR(예를 들어, T)은 0.5 내지 10.0, 예를 들어, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1, 1.1, 1.2, 1.3, 1.4, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8, 1.9, 2, 2.1, 2.2, 2.3, 2.4, 2.5, 2.6, 2.7, 2.8, 2.9, 3, 3.1, 3.2, 3.3, 3.4, 3.5, 3.6, 3.7, 3.8, 3.9, 4, 4.1, 4.2, 4.3, 4.4, 4.5, 4.6, 4.7, 4.8, 4.9, 5.0, 5.1, 5.2, 5.3, 5.4, 5.5, 5.6, 5.7, 5.8, 5.9, 6.0, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4, 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, 6.9, 7.0, 7.1, 7.2, 7.3, 7.4, 7.5, 7.6, 7.7, 7.8.0, 7.9, 8, 8.1, 8.2, 8.3, 8.4, 8.5, 8.6, 8.7, 8.8, 8.9, 9.0, 9.1, 9.2, 9.3, 9.4, 9.5, 9.6, 9.7, 9.8, 9.9 또는 10.0이다. 일부 실시형태에서 DAR은 0.5 내지 2.0, 2.0 내지 4.0, 4.0 내지 6.0 내지 6.0 내지 8.0 또는 8.0 내지 10.0이다.
일부 실시형태에서, 접합체는 접합체 34 또는 이의 임의의 위치이성질체이고, DAR(예를 들어, T)은 0.5 내지 10.0, 예를 들어, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1, 1.1, 1.2, 1.3, 1.4, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8, 1.9, 2, 2.1, 2.2, 2.3, 2.4, 2.5, 2.6, 2.7, 2.8, 2.9, 3, 3.1, 3.2, 3.3, 3.4, 3.5, 3.6, 3.7, 3.8, 3.9, 4, 4.1, 4.2, 4.3, 4.4, 4.5, 4.6, 4.7, 4.8, 4.9, 5.0, 5.1, 5.2, 5.3, 5.4, 5.5, 5.6, 5.7, 5.8, 5.9, 6.0, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4, 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, 6.9, 7.0, 7.1, 7.2, 7.3, 7.4, 7.5, 7.6, 7.7, 7.8.0, 7.9, 8, 8.1, 8.2, 8.3, 8.4, 8.5, 8.6, 8.7, 8.8, 8.9, 9.0, 9.1, 9.2, 9.3, 9.4, 9.5, 9.6, 9.7, 9.8, 9.9 또는 10.0이다. 일부 실시형태에서 DAR은 0.5 내지 2.0, 2.0 내지 4.0, 4.0 내지 6.0 내지 6.0 내지 8.0 또는 8.0 내지 10.0이다.
일부 실시형태에서, 접합체는 접합체 35 또는 이의 임의의 위치이성질체이고, DAR(예를 들어, T)은 0.5 내지 10.0, 예를 들어, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1, 1.1, 1.2, 1.3, 1.4, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8, 1.9, 2, 2.1, 2.2, 2.3, 2.4, 2.5, 2.6, 2.7, 2.8, 2.9, 3, 3.1, 3.2, 3.3, 3.4, 3.5, 3.6, 3.7, 3.8, 3.9, 4, 4.1, 4.2, 4.3, 4.4, 4.5, 4.6, 4.7, 4.8, 4.9, 5.0, 5.1, 5.2, 5.3, 5.4, 5.5, 5.6, 5.7, 5.8, 5.9, 6.0, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4, 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, 6.9, 7.0, 7.1, 7.2, 7.3, 7.4, 7.5, 7.6, 7.7, 7.8.0, 7.9, 8, 8.1, 8.2, 8.3, 8.4, 8.5, 8.6, 8.7, 8.8, 8.9, 9.0, 9.1, 9.2, 9.3, 9.4, 9.5, 9.6, 9.7, 9.8, 9.9 또는 10.0이다. 일부 실시형태에서 DAR은 0.5 내지 2.0, 2.0 내지 4.0, 4.0 내지 6.0 내지 6.0 내지 8.0 또는 8.0 내지 10.0이다.
일부 실시형태에서, 접합체는 접합체 36 또는 이의 임의의 위치이성질체이고, DAR(예를 들어, T)은 0.5 내지 10.0, 예를 들어, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1, 1.1, 1.2, 1.3, 1.4, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8, 1.9, 2, 2.1, 2.2, 2.3, 2.4, 2.5, 2.6, 2.7, 2.8, 2.9, 3, 3.1, 3.2, 3.3, 3.4, 3.5, 3.6, 3.7, 3.8, 3.9, 4, 4.1, 4.2, 4.3, 4.4, 4.5, 4.6, 4.7, 4.8, 4.9, 5.0, 5.1, 5.2, 5.3, 5.4, 5.5, 5.6, 5.7, 5.8, 5.9, 6.0, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4, 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, 6.9, 7.0, 7.1, 7.2, 7.3, 7.4, 7.5, 7.6, 7.7, 7.8.0, 7.9, 8, 8.1, 8.2, 8.3, 8.4, 8.5, 8.6, 8.7, 8.8, 8.9, 9.0, 9.1, 9.2, 9.3, 9.4, 9.5, 9.6, 9.7, 9.8, 9.9 또는 10.0이다. 일부 실시형태에서 DAR은 0.5 내지 2.0, 2.0 내지 4.0, 4.0 내지 6.0 내지 6.0 내지 8.0 또는 8.0 내지 10.0이다.
일부 실시형태에서, 접합체는 접합체 37 또는 이의 임의의 위치이성질체이고, DAR(예를 들어, T)은 0.5 내지 10.0, 예를 들어, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1, 1.1, 1.2, 1.3, 1.4, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8, 1.9, 2, 2.1, 2.2, 2.3, 2.4, 2.5, 2.6, 2.7, 2.8, 2.9, 3, 3.1, 3.2, 3.3, 3.4, 3.5, 3.6, 3.7, 3.8, 3.9, 4, 4.1, 4.2, 4.3, 4.4, 4.5, 4.6, 4.7, 4.8, 4.9, 5.0, 5.1, 5.2, 5.3, 5.4, 5.5, 5.6, 5.7, 5.8, 5.9, 6.0, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4, 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, 6.9, 7.0, 7.1, 7.2, 7.3, 7.4, 7.5, 7.6, 7.7, 7.8.0, 7.9, 8, 8.1, 8.2, 8.3, 8.4, 8.5, 8.6, 8.7, 8.8, 8.9, 9.0, 9.1, 9.2, 9.3, 9.4, 9.5, 9.6, 9.7, 9.8, 9.9 또는 10.0이다. 일부 실시형태에서 DAR은 0.5 내지 2.0, 2.0 내지 4.0, 4.0 내지 6.0 내지 6.0 내지 8.0 또는 8.0 내지 10.0이다.
일부 실시형태에서, 접합체는 접합체 38 또는 이의 임의의 위치이성질체이고, DAR(예를 들어, T)은 0.5 내지 10.0, 예를 들어, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1, 1.1, 1.2, 1.3, 1.4, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8, 1.9, 2, 2.1, 2.2, 2.3, 2.4, 2.5, 2.6, 2.7, 2.8, 2.9, 3, 3.1, 3.2, 3.3, 3.4, 3.5, 3.6, 3.7, 3.8, 3.9, 4, 4.1, 4.2, 4.3, 4.4, 4.5, 4.6, 4.7, 4.8, 4.9, 5.0, 5.1, 5.2, 5.3, 5.4, 5.5, 5.6, 5.7, 5.8, 5.9, 6.0, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4, 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, 6.9, 7.0, 7.1, 7.2, 7.3, 7.4, 7.5, 7.6, 7.7, 7.8.0, 7.9, 8, 8.1, 8.2, 8.3, 8.4, 8.5, 8.6, 8.7, 8.8, 8.9, 9.0, 9.1, 9.2, 9.3, 9.4, 9.5, 9.6, 9.7, 9.8, 9.9 또는 10.0이다. 일부 실시형태에서 DAR은 0.5 내지 2.0, 2.0 내지 4.0, 4.0 내지 6.0 내지 6.0 내지 8.0 또는 8.0 내지 10.0이다.
일부 실시형태에서, 접합체는 접합체 39 또는 이의 임의의 위치이성질체이고, DAR(예를 들어, T)은 0.5 내지 10.0, 예를 들어, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1, 1.1, 1.2, 1.3, 1.4, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8, 1.9, 2, 2.1, 2.2, 2.3, 2.4, 2.5, 2.6, 2.7, 2.8, 2.9, 3, 3.1, 3.2, 3.3, 3.4, 3.5, 3.6, 3.7, 3.8, 3.9, 4, 4.1, 4.2, 4.3, 4.4, 4.5, 4.6, 4.7, 4.8, 4.9, 5.0, 5.1, 5.2, 5.3, 5.4, 5.5, 5.6, 5.7, 5.8, 5.9, 6.0, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4, 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, 6.9, 7.0, 7.1, 7.2, 7.3, 7.4, 7.5, 7.6, 7.7, 7.8.0, 7.9, 8, 8.1, 8.2, 8.3, 8.4, 8.5, 8.6, 8.7, 8.8, 8.9, 9.0, 9.1, 9.2, 9.3, 9.4, 9.5, 9.6, 9.7, 9.8, 9.9 또는 10.0이다. 일부 실시형태에서 DAR은 0.5 내지 2.0, 2.0 내지 4.0, 4.0 내지 6.0 내지 6.0 내지 8.0 또는 8.0 내지 10.0이다.
일부 실시형태에서, 접합체는 접합체 40 또는 이의 임의의 위치이성질체이고, DAR(예를 들어, T)은 0.5 내지 10.0, 예를 들어, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1, 1.1, 1.2, 1.3, 1.4, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8, 1.9, 2, 2.1, 2.2, 2.3, 2.4, 2.5, 2.6, 2.7, 2.8, 2.9, 3, 3.1, 3.2, 3.3, 3.4, 3.5, 3.6, 3.7, 3.8, 3.9, 4, 4.1, 4.2, 4.3, 4.4, 4.5, 4.6, 4.7, 4.8, 4.9, 5.0, 5.1, 5.2, 5.3, 5.4, 5.5, 5.6, 5.7, 5.8, 5.9, 6.0, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4, 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, 6.9, 7.0, 7.1, 7.2, 7.3, 7.4, 7.5, 7.6, 7.7, 7.8.0, 7.9, 8, 8.1, 8.2, 8.3, 8.4, 8.5, 8.6, 8.7, 8.8, 8.9, 9.0, 9.1, 9.2, 9.3, 9.4, 9.5, 9.6, 9.7, 9.8, 9.9 또는 10.0이다. 일부 실시형태에서 DAR은 0.5 내지 2.0, 2.0 내지 4.0, 4.0 내지 6.0 내지 6.0 내지 8.0 또는 8.0 내지 10.0이다.
일부 실시형태에서, 접합체는 접합체 41 또는 이의 임의의 위치이성질체이고, DAR(예를 들어, T)은 0.5 내지 10.0, 예를 들어, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1, 1.1, 1.2, 1.3, 1.4, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8, 1.9, 2, 2.1, 2.2, 2.3, 2.4, 2.5, 2.6, 2.7, 2.8, 2.9, 3, 3.1, 3.2, 3.3, 3.4, 3.5, 3.6, 3.7, 3.8, 3.9, 4, 4.1, 4.2, 4.3, 4.4, 4.5, 4.6, 4.7, 4.8, 4.9, 5.0, 5.1, 5.2, 5.3, 5.4, 5.5, 5.6, 5.7, 5.8, 5.9, 6.0, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4, 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, 6.9, 7.0, 7.1, 7.2, 7.3, 7.4, 7.5, 7.6, 7.7, 7.8.0, 7.9, 8, 8.1, 8.2, 8.3, 8.4, 8.5, 8.6, 8.7, 8.8, 8.9, 9.0, 9.1, 9.2, 9.3, 9.4, 9.5, 9.6, 9.7, 9.8, 9.9 또는 10.0이다. 일부 실시형태에서 DAR은 0.5 내지 2.0, 2.0 내지 4.0, 4.0 내지 6.0 내지 6.0 내지 8.0 또는 8.0 내지 10.0이다.
일부 실시형태에서, 접합체는 접합체 42 또는 이의 임의의 위치이성질체이고, DAR(예를 들어, T)은 0.5 내지 10.0, 예를 들어, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1, 1.1, 1.2, 1.3, 1.4, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8, 1.9, 2, 2.1, 2.2, 2.3, 2.4, 2.5, 2.6, 2.7, 2.8, 2.9, 3, 3.1, 3.2, 3.3, 3.4, 3.5, 3.6, 3.7, 3.8, 3.9, 4, 4.1, 4.2, 4.3, 4.4, 4.5, 4.6, 4.7, 4.8, 4.9, 5.0, 5.1, 5.2, 5.3, 5.4, 5.5, 5.6, 5.7, 5.8, 5.9, 6.0, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4, 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, 6.9, 7.0, 7.1, 7.2, 7.3, 7.4, 7.5, 7.6, 7.7, 7.8.0, 7.9, 8, 8.1, 8.2, 8.3, 8.4, 8.5, 8.6, 8.7, 8.8, 8.9, 9.0, 9.1, 9.2, 9.3, 9.4, 9.5, 9.6, 9.7, 9.8, 9.9 또는 10.0이다. 일부 실시형태에서 DAR은 0.5 내지 2.0, 2.0 내지 4.0, 4.0 내지 6.0 내지 6.0 내지 8.0 또는 8.0 내지 10.0이다.
일부 실시형태에서, 접합체는 접합체 43 또는 이의 임의의 위치이성질체이고, DAR(예를 들어, T)은 0.5 내지 10.0, 예를 들어, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1, 1.1, 1.2, 1.3, 1.4, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8, 1.9, 2, 2.1, 2.2, 2.3, 2.4, 2.5, 2.6, 2.7, 2.8, 2.9, 3, 3.1, 3.2, 3.3, 3.4, 3.5, 3.6, 3.7, 3.8, 3.9, 4, 4.1, 4.2, 4.3, 4.4, 4.5, 4.6, 4.7, 4.8, 4.9, 5.0, 5.1, 5.2, 5.3, 5.4, 5.5, 5.6, 5.7, 5.8, 5.9, 6.0, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4, 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, 6.9, 7.0, 7.1, 7.2, 7.3, 7.4, 7.5, 7.6, 7.7, 7.8.0, 7.9, 8, 8.1, 8.2, 8.3, 8.4, 8.5, 8.6, 8.7, 8.8, 8.9, 9.0, 9.1, 9.2, 9.3, 9.4, 9.5, 9.6, 9.7, 9.8, 9.9 또는 10.0이다. 일부 실시형태에서 DAR은 0.5 내지 2.0, 2.0 내지 4.0, 4.0 내지 6.0 내지 6.0 내지 8.0 또는 8.0 내지 10.0이다.
정의
본 발명의 이해를 용이하게 하기 위해서, 다수의 용어를 하기에 정의한다. 본 명세서에서 정의된 용어는 본 발명과 관련된 분야의 당업자에 의해 일반적으로 이해되는 의미를 갖는다. 단수 표현은 단일 엔티티만을 의미하는 것이 아니라 특정 예가 설명을 위해 사용될 수 있는 일반적인 부류를 포함한다. 본 명세서의 용어는 본 발명의 특정 실시형태를 설명하기 위해 사용되지만, 그 사용은 청구범위에 요약된 것을 제외하고는 본 발명을 제한하지 않는다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같은 용어 "뉴라미니다제 저해제" 또는 "바이러스 뉴라미니다제 저해제"는 (예를 들어, 인플루엔자 바이러스 A, B 또는 C로부터의) 효소 인플루엔자 바이러스 뉴라미니다제의 활성을 감소시키는 화합물을 지칭한다. 뉴라미니다제 저해제는 당업자에게 공지된 방법에 의해서, 예를 들어, 20μM 미만(예를 들어, 10μM, 5μM, 2μM, 1μM, 500nM 또는 100nM 미만)의 농도에서 인플루엔자 바이러스 플라크 감소 검정에서의 바이러스 복제의 감소에 의해서 식별될 수 있다. 당업자에게 공지된 바이러스 뉴라미니다제 저해제는 자나미비어, 설포자나미비어, 페라미비어 및 A-315675(Abbott)를 포함한다(예를 들어, 문헌[Hadhαzi et al. A sulfozanamivir analogue has potent anti-influenza virus activity. ChemMedChem Comm. 13:785-789 (2018) and In vitro characterization of A-315675, a highly potent inhibitor of A and B strain of influenze virus neuraminidases and influenza virus replication. Antimicrobial Agents and Chemotherapy 46(4):1014-1021 (2002)] 참고). 본 발명의 바이러스 뉴라미니다제 저해제는 자나미비어, 설포자나미비어, 페라마비어, A-315675 및 이의 유사체, 예컨대, 하기 화학식 (A-I) 내지 (A-XII)의 바이러스 뉴라미니다제 저해제를 포함한다:
Figure pct00422
식 중, R1은 -OH, -NH2, -NHC(=NH)NH2 및 -NHC(=NH)NHR6으로부터 선택되며; R2 및 R3은 -H, -OH, -F, -Cl 및 -Br로부터 각각 독립적으로 선택되고; R4는 -CO2H, -P(=O)(OH)2, -SO3H로부터 선택되며; R5는 -COCH3, -COCF3, -SO2CH3로부터 선택되고; X는 -O- 및 -S-로부터 선택되며; Y는 하기로부터 선택되고:
Figure pct00423
R6은 하기로부터 선택되며:
Figure pct00424
R7은 H, C1-C20 알킬, C3-C20 사이클로알킬, C3-C20 헤테로사이클로알킬; C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되고; R8은 C3-C20 헤테로사이클로알킬, C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택된다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같은 용어 "뉴라미니다제 활성을 저해하다"는 예를 들어, 본 명세서에서 실시예 2에서의 뉴라미니다제 저해 검정에 따라서 측정되는 경우, 1,000nM 이하의 IC50을 지칭한다. 구체적으로, IC50은 시험관내에서 50% 저해에 필요한 인플루엔자 바이러스 뉴라미니다제 저해제의 농도를 나타낸다. 일부 양상에서, 뉴라미니다제 저해 검정에서의 100nM 이하 또는 10nM 이하의 IC50은 뉴라미니다제 활성을 저해하는 화합물을 나타낸다.
"바이러스 감염"은 숙주 유기체(예를 들어, 인간 대상체)에서 바이러스(예를 들어, 인플루엔자 바이러스)의 병원성 성장을 의미한다. 바이러스 감염은 바이러스 집단(들)의 존재가 숙주 몸체에 손상을 유발하는 임의의 상황일 수 있다. 따라서, 대상체는 과도한 양의 바이러스 집단이 대상체의 신체에 또는 신체 상에 존재하는 경우 또는 바이러스 집단(들)의 존재가 세포 또는 대상체의 다른 조직에 손상을 유발하는 경우 바이러스 감염을 "앓고 있다".
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "Fc 도메인 단량체"는 적어도 힌지 도메인 및 제2 및 제3 항체 불변 도메인(CH2 및 CH3) 또는 이의 기능성 단편(예를 들어, (i) 또 다른 Fc 도메인 단량체과 이량체화되어 Fc 도메인을 형성할 수 있고, (ii) Fc 수용체에 결합할 수 있는 단편)을 포함하는 폴리펩타이드 쇄를 지칭한다. Fc 도메인 단량체는 IgG, IgE, IgM, IgA 또는 IgD(예를 들어, IgG)를 포함하는 임의의 면역글로불린 항체 아이소타입일 수 있다. 추가로, Fc 도메인 단량체는 IgG 서브타입(예를 들어, IgG1, IgG2a, IgG2b, IgG3 또는 IgG4)(예를 들어, IgG1)일 수 있다. Fc 도메인 단량체는 항원-인식 영역으로서 작용할 수 있는 면역글로불린의 임의의 부분, 예를 들어, 가변 도메인 또는 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하지 않는다. 명세서에 기재된 바와 같은 접합체 내의 Fc 도메인 단량체는 Fc 도메인과 Fc 수용체 간의 상호작용을 변경시키는 야생형 Fc 도메인 단량체 서열로부터의 하나 이상의 변화(예를 들어, 1 내지 10, 1 내지 8, 1 내지 6, 1 내지 4개의 아미노산 치환, 첨가 또는 결실)를 함유할 수 있다. 적합한 변화의 예는 당업계에 공지되어 있다. 특정 실시형태에서, 인간 Fc 도메인 단량체(예를 들어, IgG 중쇄, 예컨대, IgG1)는 Asn208, Glu216, Asp221, Lys222 또는 Cys226 중 임의의 것에서부터 Lys447에서의 중쇄의 카복실-말단으로 연장된 영역을 포함한다.　　Fc 영역의 구조 또는 안정성에 영향을 미치지 않으면서, Fc 영역의 C-말단 Lys447이 존재할 수 있거나 존재하지 않을 수 있다.　 본 명세서에 달리 명시되지 않는 한, IgG 또는 Fc 도메인 단량체에서 아미노산 잔기의 넘버링은 예를 들어, 문헌[Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1991]에 기재된 바와 같은 카밧 EU 인덱스라고도 불리는 항체에 대한 EU 넘버링 시스템에 따른다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "Fc 도메인"은 Fc 수용체에 결합할 수 있는 2개의 Fc 도메인 단량체의 이량체를 지칭한다. 야생형 Fc 도메인에서, 2개의 Fc 도메인 단량체는 2개의 CH3 항체 불변 도메인 간의 상호작용에 의해서 이량체화되고, 일부 실시형태에서, 1개 이상의 다이설파이드 결합은 2개의 이량체화 Fc 도메인 단량체의 힌지 도메인 사이에 형성된다.
용어 "공유 부착"은 접합체의 2개의 부분 내의 2개의 원자 사이에 형성된 공유 결합에 의해서 서로에 연결된 접합체의 2개의 부분을 지칭한다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "Fc-결합 펩타이드"는 Fc 도메인, 예컨대, 본 명세서에 기재된 Fc 도메인 중 임의의 것에 대한 친화도를 갖거나 이에 결합하는 작용을 하는 5 내지 50개(예를 들어, 5 내지 40, 5 내지 30, 5 내지 20, 5 내지 15, 5 내지 10, 10 내지 50, 10 내지 30 또는 10 내지 20개) 아미노산 잔기의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩타이드를 지칭한다. Fc-결합 펩타이드 펩타이드는 상이한 기원, 예를 들어, 합성, 인간, 마우스 또는 래트 기원일 수 있다. 본 발명의 Fc-결합 펩타이드는 1개 이상(예를 들어, 2개, 3개, 4개 또는 5개)의 용매-노출된 시스테인 또는 라이신 잔기를 포함하도록 조작된 Fc-결합 펩타이드를 포함하는데, 이것은 본 발명의 화합물에 대한 접합(예를 들어, 링커에 의한 것을 포함하는, 뉴라미니다제 저해제 단량체 또는 이량체에 대한 접합)을 위한 부위를 제공할 수 있다. 가장 바람직하게는, Fc-결합 펩타이드는 단일 용매-노출된 시스테인 또는 라이신은 함유할 것이어서, 본 발명의 화합물의 부위-특이적 접합이 가능할 수 있다. Fc-결합 펩타이드는 유일한 자연 발생 아미노산 잔기를 포함할 수 있거나 또는 1개 이상의 비-자연 발생 아미노산 잔기를 포함할 수 있다. 포함되는 경우, 비-자연 발생 아미노산 잔기(예를 들어, 비-자연 발생 아미노산 잔기의 측쇄)는 본 발명의 화합물(예를 들어, 링커에 의한 것을 포함하여, 링커 뉴라미니다제 저해제 단량체)에 대한 부착점으로서 사용될 수 있다. 본 발명의 Fc-결합 펩타이드는 선형이거나 환식일 수 있다. 본 발명의 Fc-결합 펩타이드는 당업자에게 공지된 임의의 Fc-결합 펩타이드를 포함한다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "알부민 단백질"은 자연-발생 알부민 단백질(예를 들어, 인간 혈청 알부민) 또는 이의 변이체, 예컨대, 자연-발생 알부민 단백질에 상응하는 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드를 지칭한다. 알부민 단백질의 변이체는 다형성, 단편, 예컨대, 도메인 및 하위-도메인 및 융합 단백질(예를 들어, C-말단 또는 N-말단 융합, 예컨대, 폴리펩타이드 링커를 갖는 알부민 단백질)을 포함한다. 바람직하게는 알부민 단백질은 인간 혈청 알부민(HSA)의 아미노산 서열 또는 이의 변이체 또는 단편, 가장 바람직하게는 이의 기능성 변이체 또는 단편을 갖는다. 본 발명의 알부민 단백질은 서열번호 69 내지 71 중 임의의 하나와 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 동일성을 갖는 단백질을 포함한다. 본 발명의 알부민 단백질은 1개 이상(예를 들어, 2개, 3개, 4개 또는 5개)의 용매-노출된 시스테인 또는 라이신 잔기를 포함하도록 조작된 알부민 단백질을 포함하는데, 이것은 본 발명의 화합물에 대한 접합(예를 들어, 링커에 의한 것을 포함하는, 뉴라미니다제 저해제 단량체 또는 이량체에 대한 접합)을 위한 부위를 제공할 수 있다. 가장 바람직하게는, 알부민 단백질은 단일 용매-노출된 시스테인 또는 라이신은 함유할 것이어서, 본 발명의 화합물의 부위-특이적 접합이 가능할 수 있다. 알부민 단백질은 유일한 자연 발생 아미노산 잔기를 포함할 수 있거나 또는 1개 이상의 비-자연 발생 아미노산 잔기를 포함할 수 있다. 포함되는 경우, 비-자연 발생 아미노산 잔기(예를 들어, 비-자연 발생 아미노산 잔기의 측쇄)는 본 발명의 화합물(예를 들어, 링커에 의한 것을 포함하여, 링커 뉴라미니다제 저해제 단량체)에 대한 부착점으로서 사용될 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "알부민 단백질-결합 펩타이드"는 알부민 단백질, 예컨대, 본 명세서에 기재된 알부민 단백질 중 임의의 것에 대한 친화도를 갖거나 이에 결합하는 작용을 하는 5 내지 50개(예를 들어, 5 내지 40, 5 내지 30, 5 내지 20, 5 내지 15, 5 내지 10, 10 내지 50, 10 내지 30 또는 10 내지 20개) 아미노산 잔기의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩타이드를 지칭한다. 바람직하게는, 알부민 단백질-결합 펩타이드는 자연-발생 혈청 알부민, 가장 바람직하게는 인간 혈청 알부민에 결합한다. 알부민 단백질-결합 펩타이드는 상이한 기원, 예를 들어, 합성, 인간, 마우스 또는 래트 기원일 수 있다. 본 발명의 알부민 단백질-결합 펩타이드는 1개 이상(예를 들어, 2개, 3개, 4개 또는 5개)의 용매-노출된 시스테인 또는 라이신 잔기를 포함하도록 조작된 알부민 단백질-결합 펩타이드를 포함하는데, 이것은 본 발명의 화합물에 대한 접합(예를 들어, 링커에 의한 것을 포함하는, 뉴라미니다제 저해제 단량체 또는 이량체에 대한 접합)을 위한 부위를 제공할 수 있다. 가장 바람직하게는, 알부민 단백질-결합 펩타이드는 단일 용매-노출된 시스테인 또는 라이신은 함유할 것이어서, 본 발명의 화합물의 부위-특이적 접합이 가능할 수 있다. 알부민 단백질-결합 펩타이드는 유일한 자연 발생 아미노산 잔기를 포함할 수 있거나 또는 1개 이상의 비-자연 발생 아미노산 잔기를 포함할 수 있다. 포함되는 경우, 비-자연 발생 아미노산 잔기(예를 들어, 비-자연 발생 아미노산 잔기의 측쇄)는 본 발명의 화합물(예를 들어, 링커에 의한 것을 포함하여, 링커 뉴라미니다제 저해제 단량체)에 대한 부착점으로서 사용될 수 있다. 본 발명의 알부민 단백질-결합 펩타이드는 선형이거나 환식일 수 있다. 본 발명의 알부민 단백질-결합 펩타이드는 당업자에게 공지된 임의의 알부민 단백질-결합 펩타이드를 포함하고, 이의 예는 본 명세서에 제공된다. 추가의 예시적인 알부민 단백질-결합 펩타이드는 전문이 본 명세서에 참조에 의해 포함된 미국 특허 출원 제2005/0287153호에 제공되어 있다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, "표면 노출된 아미노산" 또는 "용매-노출된 아미노산" 예컨대, 표면 노출된 시스테인 또는 표면 노출된 라이신은 단백질을 둘러싸는 용매에 허용 가능한 아미노산을 지칭한다. 표면 노출된 아미노산은 단백질의 자연-발생 또는 조작된 변이체(예를 들어, 치환 또는 삽입)일 수 있다. 일부 실시형태에서, 표면 노출된 아미노산은 치환되는 경우 단백질의 3차원 구조를 실질적으로 변화시키지 않는 아미노산이다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같은 용어 "링커" "L" 및 "L'"는 접합체 내의 2개 이상의 성분 사이(예를 들어, 본 명세서에 기재된 접합체 내의 2개의 뉴라미니다제 저해제 사이, 본 명세서에 기재된 접합체 내의 뉴라미니다제 저해제와 Fc 도메인 또는 알부민 단백질 사이 및 본 명세서에 기재된 접합체 내의 2개의 뉴라미니다제 저해제의 이량체와 Fc 도메인 또는 알부민 단백질 사이)의 공유 링키지 또는 연결을 지칭한다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 접합체는 3가 구조를 갖는 링커(예를 들어, 3가 링커)를 함유할 수 있다. 3가 링커는, 각각의 아암이 접합체의 성분에 공유 연결된 3개의 아암(예를 들어, 제1 뉴라미니다제 저해제에 접합된 제1 아암, 제2 뉴라미니다제 저해제에 접합된 제2 아암 및 Fc 도메인 또는 알부민 단백질에 접합된 제3 아암)을 갖는다.
링커로서 사용될 수 있는 분자는 동일하거나 상이한, 예를 들어, 2개의 카복실산기, 2개의 아민기, 2개의 설폰산기, 카복실산기 및 말레이미드기, 카복실산기 및 알킨기, 카복실산기 및 아민기, 카복실산기 및 설폰산기, 아민기 및 말레이미드기, 아민기 및 알킨기 또는 아민기 및 설폰산기일 수 있는 적어도 2개의 작용기를 포함한다. 제1 작용기는 접합체 내의 제2 성분과 공유 링키지를 형성할 수 있고, 제2 작용기는 접합체 내의 제2 성분과 공유 링키지를 형성할 수 있다. 3가 링커의 일부 실시형태에서, 링커의 2개의 아암은 2개의 다이카복실산을 함유할 수 있는데, 여기서 제1 카복실산은 접합체 내의 제1 뉴라미니다제 저해제와 공유 링키지를 형성할 수 있고, 제2 카복실산은 접합체 내의 제2 뉴라미니다제 저해제와 공유 링키지를 형성할 수 있고, 링커의 제3 아암은 접합체 내의 Fc 도메인 또는 알부민 단백질과 공유 링키지를 형성할 수 있다. 다이카복실산의 예는 본 명세서에 추가로 기재되어 있다. 일부 실시형태에서, 1개 이상의 말레이미드기를 함유하는 분자는, 말레이미드기가 접합체 내의 성분(예를 들어, Fc 도메인 또는 알부민 단백질)에서 시스테인과 탄소-황 링키지를 형성할 수 있는 링커로서 사용될 수 있다. 일부 실시형태에서, 1개 이상의 말레이미드기를 함유하는 분자는, 알킨기가 접합체 내의 성분(예를 들어, Fc 도메인 또는 알부민 단백질)에서 아자이드와 1,2,3-트라이아졸 링키지를 형성할 수 있는 링커로서 사용될 수 있다. 일부 실시형태에서, 1개 이상의 아자이드기를 함유하는 분자는, 아자이드기가 접합체 내의 성분(예를 들어, Fc 도메인 또는 알부민 단백질)에서 알킨과 1,2,3-트라이아졸 링키지를 형성할 수 있는 링커로서 사용될 수 있다. 일부 실시형태에서, 1개 이상의 아자이드기를 함유하는 분자는, 비스-설폰기가 접합체 내의 성분(예를 들어, Fc 도메인 또는 알부민 단백질)에서 아민기와 링키지를 형성할 수 있는 링커로서 사용될 수 있다. 일부 실시형태에서, 1개 이상의 설폰산기를 함유하는 분자는, 설폰산기가 접합체 내의 성분과 설폰아마이드 링키지를 형성할 수 있는 링커로서 사용될 수 있다. 일부 실시형태에서, 1개 이상의 아이소사이아네이트기를 함유하는 분자는, 아이소사이아네이트기가 접합체 내의 성분과 유레아 링키지를 형성할 수 있는 링커로서 사용될 수 있다. 일부 실시형태에서, 1개 이상의 할로알킬기ㄹㄹ 함유하는 분자는, 할로알킬기가 접합체 내의 성분과 공유 링키지, 예를 들어, C-N 및 C-O 링키지를 형성할 수 있는 링커로서 사용될 수 있다.
일부 실시형태에서, 링커는 2개 이상의 성분 사이에서 공간, 강직성 및/또는 가요성을 제공한다. 일부 실시형태에서, 링커는 결합, 예를 들어, 공유 결합일 수 있다. 용어 "결합"은 화학 반응, 예를 들어, 화학 접합으로부터 생성된 화학 결합, 예를 들어, 아마이드 결합, 다이설파이드 결합, C-O 결합, C-N 결합, N-N 결합, C-S 결합 또는 임의의 부류의 결합을 지칭한다. 일부 실시형태에서, 링커는 250개 이하의 원자를 포함한다. 일부 실시형태에서, 링커는 250개 이하의 비-수소 원자를 포함한다. 일부 실시형태에서, 링커의 골격은 250개 이하의 원자를 포함한다. 링커의 "골격"은 접합체의 하나의 부분으로부터 접합체의 또 다른 부분까지의 가장 짧은 경로(예를 들어, 제1 뉴라미니다제 저해제와 제2 뉴라미니다제 저해제를 연결하는 가장 짧은 경로)를 함께 형성하는 링커 내의 원자를 지칭한다. 링커의 골격 내의 원자는 접합체의 하나의 부분을 접합체의 또 다른 부분에 연결(예를 들어, 제1 뉴라미니다제 저해제와 제2 뉴라미니다제 저해제를 연결) 하는 것에 직접 관여한다. 예를 들어, 링커의 골격 내의 탄소에 부착된 수소 원자는 접합체의 하나의 부분을 접합체의 또 다른 부분에 연결하는 것에 직접 관련되는 것으로 간주되지 않는다.
일부 실시형태에서, 링커는 예를 들어, 합성 중합체(예를 들어, 폴리에틸렌 글리콜(PEG) 중합체)로부터 유래된 합성기를 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서, 링커는 1개 이상의 아미노산 잔기, 예컨대, D- 또는 L-아미노산 잔기를 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서, 링커는 아미노산 서열(예를 들어, 1 내지 25개 아미노산, 1 내지 10개 아미노산, 1 내지 9개 아미노산, 1 내지 8개 아미노산, 1 내지 7개 아미노산, 1 내지 6개 아미노산, 1 내지 5개 아미노산, 1 내지 4개 아미노산, 1 내지 3개 아미노산, 1 내지 2개 아미노산 또는 1개 아미노산 서열)의 잔기일 수 있다. 일부 실시형태에서, 링커는 1개 이상, 예를 들어, 1 내지 100개, 1 내지 50개, 1 내지 25개, 1 내지 10개, 1 내지 5개 또는 1 내지 3개의 선택적으로 치환된 알킬렌, 선택적으로 치환된 헤테로알킬렌(예를 들어, PEG 단위), 선택적으로 치환된 알켄일렌, 선택적으로 치환된 헤테로알켄일렌, 선택적으로 치환된 알킨일렌, 선택적으로 치환된 헤테로알킨일렌, 선택적으로 치환된 사이클로알킬렌, 선택적으로 치환된 헤테로사이클로알킬렌, 선택적으로 치환된 사이클로알켄일렌, 선택적으로 치환된 헤테로사이클로알켄일렌, 선택적으로 치환된 사이클로알킨일렌, 선택적으로 치환된 헤테로사이클로알킨일렌, 선택적으로 치환된 아릴렌, 선택적으로 치환된 헤테로아릴렌(예를 들어, 피리딘), O, S, NRi(Ri는 H, 선택적으로 치환된 알킬, 선택적으로 치환된 헤테로알킬, 선택적으로 치환된 알켄일, 선택적으로 치환된 헤테로알켄일, 선택적으로 치환된 알킨일, 선택적으로 치환된 헤테로알킨일, 선택적으로 치환된 사이클로알킬, 선택적으로 치환된 헤테로사이클로알킬, 선택적으로 치환된 사이클로알켄일, 선택적으로 치환된 헤테로사이클로알켄일, 선택적으로 치환된 사이클로알킨일, 선택적으로 치환된 헤테로사이클로알킨일, 선택적으로 치환된 아릴 또는 선택적으로 치환된 헤테로아릴임), P, 카보닐, 티오카보닐, 설포닐, 포스페이트, 포스포릴 또는 이미노를 포함할 수 있다. 예를 들어, 링커는 1개 이상의 선택적으로 치환된 C1-C20 알킬렌, 선택적으로 치환된 C1-C20 헤테로알킬렌(예를 들어, PEG 단위), 선택적으로 치환된 C2-C20 알켄일렌(예를 들어, C2 알켄일렌), 선택적으로 치환된 C2-C20 헤테로알켄일렌, 선택적으로 치환된 C2-C20 알킨일렌, 선택적으로 치환된 C2-C20 헤테로알킨일렌, 선택적으로 치환된 C3-C20 사이클로알킬렌(예를 들어, 사이클로프로필렌, 사이클로부틸렌), 선택적으로 치환된 C3-C20 헤테로사이클로알킬렌, 선택적으로 치환된 C4-C20 사이클로알켄일렌, 선택적으로 치환된 C4-C20 헤테로사이클로알켄일렌, 선택적으로 치환된 C8-C20 사이클로알킨일렌, 선택적으로 치환된 C8-C20 헤테로사이클로알킨일렌, 선택적으로 치환된 C5-C15 아릴렌(예를 들어, C6 아릴렌), 선택적으로 치환된 C2-C15 헤테로아릴렌(예를 들어, 이미다졸, 피리딘), O, S, NRi(Ri는 H, 선택적으로 치환된 C1-C20 알킬, 선택적으로 치환된 C1-C20 헤테로알킬, 선택적으로 치환된 C2-C20 알켄일, 선택적으로 치환된 C2-C20 헤테로알켄일, 선택적으로 치환된 C2-C20 알킨일, 선택적으로 치환된 C2-C20 헤테로알킨일, 선택적으로 치환된 C3-C20 사이클로알킬, 선택적으로 치환된 C3-C20 헤테로사이클로알킬, 선택적으로 치환된 C4-C20 사이클로알켄일, 선택적으로 치환된 C4-C20 헤테로사이클로알켄일, 선택적으로 치환된 C8-C20 사이클로알킨일, 선택적으로 치환된 C8-C20 헤테로사이클로알킨일, 선택적으로 치환된 C5-C15 아릴 또는 선택적으로 치환된 C2-C15 헤테로아릴임), P, 카보닐, 티오카보닐, 설포닐, 포스페이트, 포스포릴 또는 이미노를 포함할 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같은 용어 "알킬" "알켄일" 및 "알킨일"은 직쇄형 및 분지쇄형 1가 치환체뿐만 아니라 비치환된 경우 C 및 H만을 함유하는, 이들의 조합물을 포함한다. 알킬기가 적어도 1개의 탄소-탄소 이중 결합 또는 탄소-탄소 삼중 결합을 포함하는 경우, 알킬기는 각각 "알켄일" 또는 "알킨일"기로 지칭될 수 있다. 1가의 알킬, 알켄일 또는 알킨일기는 알킬, 알켄일 또는 알킨일기 상에 선택적인 치환체를 포함하지 않는다. 예를 들어, 알킬, 알켄일 또는 알킨일기가 화합물에 부착되는 경우, 1가의 알킬, 알켄일 또는 알킨일기는 화합물에 대한 이의 부착을 지칭하고, 알킬, 알켄일 또는 알킨일기 상에 존재할 수 있는 임의의 추가적인 치환을 포함하지 않는다. 일부 실시형태에서, 알킬 또는 헤테로알킬기는 예를 들어, 1 내지 20개 1 내지 18개, 1 내지 16개, 1 내지 14개, 1 내지 12개, 1 내지 10개, 1 내지 8개, 1 내지 6개, 1 내지 4개 또는 1 내지 2개 탄소 원자(예를 들어, C1-C20, C1-C18, C1-C16, C1-C14, C1-C12, C1-C10, C1-C8, C1-C6, C1-C4 또는 C1-C2)를 함유할 수 있다. 일부 실시형태에서, 알켄일, 헤테로알켄일, 알킨일 또는 헤테로알킨일기는 예를 들어, 2 내지 20개, 2 내지 18개, 2 내지 16개, 2 내지 14개, 2 내지 12개, 2 내지 10개, 2 내지 8개, 2 내지 6개 또는 2 내지 4개 탄소 원자(예를 들어, C2-C20, C2-C18, C2-C16, C2-C14, C2-C12, C2-C10, C2-C8, C2-C6 또는 C2-C4)를 함유할 수 있다. 예는 메틸, 에틸, 아이소부틸, sec-부틸, tert-부틸, 2-프로펜일 및 3-부틴일을 포함하지만 이들로 제한되지 않는다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같은 용어 "사이클로알킬"은 1가의 포화 또는 불포화 비방향족 환식 알킬기를 나타낸다. 사이클로알킬은 예를 들어, 3 내지 20개의 탄소(예를 들어, C3-C7, C3-C8, C3-C9, C3-C10, C3-C11, C3-C12, C3-C14, C3-C16, C3-C18 또는 C3-C20 사이클로알킬)를 가질 수 있다. 사이클로알킬의 예는 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸, 사이클로헥실 및 사이클로헵틸을 포함하지만 이들로 제한되지 않는다. 사이클로알킬기가 적어도 1개의 탄소-탄소 이중 결합을 포함하는 경우, 사이클로알킬기는 "사이클로알켄일"기로 지칭될 수 있다. 사이클로알켄일은 예를 들어, 4 내지 20개의 탄소(예를 들어, C4-C7, C4-C8, C4-C9, C4-C10, C4-C11, C4-C12, C4-C14, C4-C16, C4-C18 또는 C4-C20 사이클로알켄일)를 가질 수 있다. 예시적인 사이클로알켄일기는 사이클로펜텐일, 사이클로헥센일 및 사이클로헵텐일을 포함하지만 이들로 제한되지 않는다. 사이클로알킬기가 적어도 1개의 탄소-탄소 삼중 결합을 포함하는 경우, 사이클로알킬기는 "사이클로알킨일"기로 지칭될 수 있다. 사이클로알킨일은 예를 들어, 8 내지 20개의 탄소(예를 들어, C8-C9, C8-C10, C8-C11, C8-C12, C8-C14, C8-C16, C8-C18 또는 C8-C20 사이클로알킨일)를 가질 수 있다. 용어 "사이클로알킬"은 또한 1개 이상의 탄소가 단환식 고리의 2개의 비인접한 구성원을 브리징하는 브리징된 다환식 구조를 갖는 환식 화합물, 예를 들어, 바이사이클로[2.2.1.]헵틸 및 아다만탄을 포함한다. 용어 "사이클로알킬"은 또한 이환식, 삼환식 및 사환식 융합된 고리 구조, 예를 들어, 데칼린 및 스피로 환식 화합물을 포함한다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같은 용어 "아릴"은 고리계 전체에서 전자 분포와 관련하여 방향족성의 특징을 갖는 임의의 단환식 또는 융합된 이환식 또는 삼환식 시스템을 지칭한다. 일부 실시형태에서, 고리 시스템은 5 내지 15개의 고리원 원자 또는 5 내지 10개의 고리원 원자를 함유한다. 아릴기는 예를 들어, 5 내지 15개의 탄소(예를 들어, C5-C6, C5-C7, C5-C8, C5-C9, C5-C10, C5-C11, C5-C12, C5-C13, C5-C14 또는 C5-C15 아릴)를 가질 수 있다. 용어 "헤테로아릴"은 또한 O, S 및 N으로부터 선택된 1개 이상, 예를 들어, 1 내지 4개, 1 내지 3개, 1, 2, 3, 또는 4개의 헤테로원자를 함유하는 그러한 단횐식 또는 융합된 이환식 고리계를 지칭한다. 헤테로아릴기는 예를 들어, 2개 내지 15개의 탄소(예를 들어, C2-C3, C2-C4, C2-C5, C2-C6, C2-C7, C2-C8, C2-C9, C2-C10, C2-C11, C2-C12, C2-C13, C2-C14 또는 C2-C15 헤테로아릴)를 가질 수 있다. 헤테로원자의 포함은 방향족으로 간주되는 5원의 고리뿐만 아니라 6원의 고리를 포함하는 것을 허용한다. 따라서, 전형적인 헤테로아릴계는 예를 들어, 피리딜, 피리미딜, 인돌릴, 벤즈이미다졸릴, 벤조트라이아졸릴, 아이소퀴놀릴, 퀴놀릴, 벤조티아졸릴, 벤조퓨란일, 티엔일, 퓨릴, 피롤릴, 티아졸릴, 옥사졸릴, 아이속사졸릴, 벤조옥사졸릴, 벤조아이속사졸릴 및 이미다졸릴을 포함한다. 호변이성질체가 가능하기 때문에, 프탈이미도와 같은 기가 또한 헤테로아릴이라고 간주된다. 일부 실시형태에서, 아릴 또는 헤테로아릴기는 1 내지 2개의 질소 원자를 선택적으로 함유하는 5 또는 6원의 방향족 고리계이다. 일부 실시형태에서, 아릴 또는 헤테로아릴기는 선택적으로 치환된 페닐, 피리딜, 인돌릴, 피리미딜, 피리다진일, 벤조티아졸릴, 벤즈이미다졸릴, 피라졸릴, 이미다졸릴, 아이속사졸릴, 티아졸릴 또는 이미다조피리딘일이다. 일부 실시형태에서, 아릴기는 페닐이다. 일부 실시형태에서, 아릴기는 치환체, 예컨대, 아릴 치환체, 예를 들어, 바이페닐로 선택적으로 치환될 수 있다.
용어 "알크아릴"은 알킬렌, 알켄일렌 또는 알킨일렌기에 연결된 아릴기를 지칭한다. 일반적으로, 화합물이 알크아릴기에 부착되는 경우, 알크아릴의 알킬렌, 알켄일렌 또는 알킨일렌 부분이 화합물에 부착된다. 일부 실시형태에서, 알크아릴은 C6-C35 알크아릴(예를 들어, C6-C16, C6-C14, C6-C12, C6-C10, C6-C9, C6-C8, C7 또는 C6 알크아릴)이고, 여기서 탄소의 수는 아릴 부분 및 알크아릴의 알킬렌, 알켄일렌 또는 알킨일렌 부분 둘 다 내의 탄소의 총 수를 나타낸다. 알크아릴의 예는 (C1-C8)알킬렌(C6-C12)아릴, (C2-C8)알켄일렌(C6-C12)아릴, 또는 (C2-C8)알킨일렌(C6-C12)아릴을 포함하지만 이들로 제한되지 않는다. 일부 실시형태에서, 알크아릴은 벤질 또는 펜에틸이다. 헤테로알크아릴에서, N, O 및 S로부터 선택된 하나 이상의 헤테로원자는 알크아릴기의 알킬렌, 알켄일렌 또는 알킨일렌 부분에 존재할 수 있고/있거나 알크아릴기의 아릴 부분에 존재할 수 있다. 선택적으로 치환된 알크아릴에서, 치환체는 알크아릴기의 알킬렌, 알켄일렌 또는 알킨일렌 부분 상에 존재할 수 있고/있거나 알크아릴기의 아릴 부분에 존재할 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같은 용어 "아미노"는 -N(Rx)2 또는 -N+(Rx)3를 나타내고, 각각의 Rx는 독립적으로, H, 알킬, 알켄일, 알킨일, 아릴, 알크아릴, 사이클로알킬이거나, 2개의 Rx는 합쳐져서 헤테로사이클로알킬을 형성한다. 일부 실시형태에서, 아미노기는 -NH2이다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같은 용어 "알크아미노"는 알킬렌(예를 들어, C1-C5 알킬렌), 알켄일렌(예를 들어, C2-C5 알켄일렌) 또는 알킨일렌기(예를 들어, C2-C5 알켄일렌)에 부착된, 본 명세서에 기재된 아미노기를 지칭한다. 일반적으로, 화합물이 알크아미노기에 부착되는 경우, 알크아미노의 알킬렌, 알켄일렌 또는 알킨일렌 부분이 화합물에 부착된다. 알크아미노의 아미노 부분은 -N(Rx)2 또는 -N+(Rx)3를 지칭하고, 여기서 각각의 Rx는 독립적으로, H, 알킬, 알켄일, 알킨일, 아릴, 알크아릴, 사이클로알킬이거나, 2개의 Rx는 합쳐져서 헤테로사이클로알킬을 형성한다. 일부 실시형태에서, 알크아미노의 아미노 부분은 -NH2이다. 알크아미노기의 예는 C1-C5 알크아미노, 예를 들어, C2 알크아미노(예를 들어, CH2CH2NH2 또는 CH2CH2N(CH3)2)이다. 헤테로알크아미노기에서, N, O 및 S로부터 선택된 1개 이상, 예를 들어, 1 내지 4개, 1 내지 3개, 1개, 2개, 3개 또는 4개의 헤테로원자가 헤테로알크아미노기의 알킬렌, 알켄일렌 또는 알킨일렌 부분에 존재할 수 있다. 일부 실시형태에서, 알크아미노기는 선택적으로 치환될 수 있다. 치환된 알크아미노기에서, 치환체는 알크아미노기의 알킬렌, 알켄일렌 또는 알킨일렌 부분 상에 존재할 수 있고/있거나 알크아미노기의 아미노 부분 상에 존재할 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같은 용어 "알크아마이드"는 알킬렌(예를 들어, C1-C5 알킬렌), 알켄일렌(예를 들어, C2-C5 알켄일렌) 또는 알킨일렌(예를 들어, C2-C5 알켄일렌)기에 부착된, 아마이드기를 지칭한다. 일반적으로, 화합물이 알크아마이드기에 부착되는 경우, 알크아마이드의 알킬렌, 알켄일렌 또는 알킨일렌 부분이 화합물에 부착된다. 알크아마이드의 아마이드 부분은 -C(O)-N(Rx)2를 지칭하고, 여기서 각각의 Rx는 독립적으로, H, 알킬, 알켄일, 알킨일, 아릴, 알크아릴, 사이클로알킬이거나, 2개의 Rx는 합쳐져서 헤테로사이클로알킬을 형성한다. 일부 실시형태에서, 알크아마이드의 아마이드 부분은 -C(O)NH2이다. 알크아마이드기는 -(CH2)2-C(O)NH2 또는 -CH2-C(O)NH2일 수 있다. 헤테로알크아마이드기에서, N, O 및 S로부터 선택된 1개 이상, 예를 들어, 1 내지 4개, 1 내지 3개, 1개, 2개, 3개 또는 4개의 헤테로원자가 헤테로알크아마이드 기의 알킬렌, 알켄일렌 또는 알킨일렌 부분에 존재할 수 있다. 일부 실시형태에서, 알크아마이드기는 선택적으로 치환될 수 있다. 치환된 알크아마이드기에서, 치환체는 알크아마이드기의 알킬렌, 알켄일렌 또는 알킨일렌 부분 상에 존재할 수 있고/있거나 알크아마이드기의 아마이드 부분 상에 존재할 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같은 용어 "알킬렌" "알켄일렌" 및 "알킨일렌"은 명시된 크기를 갖는 2가 기를 지칭한다. 일부 실시형태에서, 알킬렌은 예를 들어, 1 내지 20개 1 내지 18개, 1 내지 16개, 1 내지 14개, 1 내지 12개, 1 내지 10개, 1 내지 8개, 1 내지 6개, 1 내지 4개 또는 1 내지 2개 탄소 원자(예를 들어, C1-C20, C1-C18, C1-C16, C1-C14, C1-C12, C1-C10, C1-C8, C1-C6, C1-C4 또는 C1-C2)를 함유할 수 있다. 일부 실시형태에서, 알켄일렌 또는 알킨일렌은 예를 들어, 2 내지 20개, 2 내지 18개, 2 내지 16개, 2 내지 14개, 2 내지 12개, 2 내지 10개, 2 내지 8개, 2 내지 6개 또는 2 내지 4개의 탄소 원자(예를 들어, C2-C20, C2-C18, C2-C16, C2-C14, C2-C12, C2-C10, C2-C8, C2-C6 또는 C2-C4)를 함유할 수 있다. 알킬렌, 알켄일렌, 및/또는 알킨일렌은 직쇄형 형태 및 분지쇄형 형태뿐만 아니라 이들의 조합물을 포함한다. 2가의 알킬렌, 알켄일렌 또는 알킨일렌기는 알킬렌, 알켄일렌 또는 알킨일렌기 상의 선택적인 치환체를 포함하지 않는다. 예를 들어, 2개의 뉴라미니다제 저해제는 알킬렌, 알켄일렌, 및/또는 알킨일렌 또는 이들의 조합물을 포함하는 링커에 의해서 서로에 부착될 수 있다. 링커에서 알킬렌, 알켄일렌, 및/또는 알킨일렌기 각각은 알킬렌, 알켄일렌 및/또는 알킨일렌기의 단부 상에 2개의 부착과 관련하여 2가인 것으로 간주된다. 예를 들어, 링커가 -(선택적으로 치환된 알킬렌)-(선택적으로 치환된 알켄일렌)-(선택적으로 치환된 알킬렌)-을 포함하는 경우, 알켄일렌은 링커의 단부에서 2개의 알킬렌에 대한 부착과 관련하여 2가인 것으로 간주된다. 알켄일렌 상의 선택적인 치환체는 2가의 알켄일렌에 포함되지 않는다. 알킬렌, 알켄일렌 또는 알킨일렌기(예를 들어, 링커 내의 알킬렌, 알켄일렌 또는 알킨일렌기)의 2가 본성은 기의 단부 둘 다를 지칭하고, 알킬렌, 알켄일렌 또는 알킨일렌기에 존재할 수 있는 선택적인 치환체를 포함하지 않는다. 이들이 2가이기 때문에, 이들은 접합체의 다수(예를 들어, 2개)의 부분, 예를 들어, 제1 뉴라미니다제 저해제 및 제2 뉴라미니다제 저해제를 함께 연결할 수 있다. 알킬렌, 알켄일렌, 및/또는 알킨일렌 기는 본 명세서에 언급된 바와 같은 알킬, 알켄일 및 알킨일기에 대한 치환체로서 전형적으로 적합한 기에 의해서 치환될 수 있다. 예를 들어, C=O는 옥소(=O)에 의해서 치환되는 C1 알킬렌이다. 예를 들어, -HCR-C≡C-는 선택적으로 치환된 알킨일렌으로서 간주될 수 있고, 그것이 선택적인 치환체인 R을 갖더라도 2가 기로 간주된다. 헤테로알킬렌, 헤테로알켄일렌 및/또는 헤테로알킨일렌기는 1개 이상, 예를 들어, 1 내지 4개, 1 내지 3개, 1개, 2개, 3개 또는 4개의 헤테로원자, 예를 들어, N, O 및 S를 포함하는 알킬렌, 알켄일렌 및/또는 알킨일렌기를 지칭한다. 예를 들어, 폴리에틸렌 글리콜(PEG) 중합체 또는 PEG 중합체 내의 PEG 단위 -(CH2)2-O-는 1개 이상의 산소 원자를 함유하는 헤테로알킬렌인 것으로 간주된다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같은 용어 "사이클로알킬렌"은 화합물의 2개의 부분을 함께 연결하는 2가 환식기를 지칭한다. 예를 들어, 사이클로알킬렌기 내의 1개의 탄소는 화합물의 하나의 부분에 연결될 수 있는 반면, 사이클로알킬렌기 내의 또 다른 탄소는 화합물의 또 다른 부분에 연결될 수 있다. 사이클로알킬렌기는 포화 또는 불포화 비-방향족 환식기를 포함할 수 있다. 사이클로알킬렌은 사이클로알킬렌의 환식 부분 내에 예를 들어, 3 내지 20개의 탄소(예를 들어, C3-C7, C3-C8, C3-C9, C3-C10, C3-C11, C3-C12, C3-C14, C3-C16, C3-C18 또는 C3-C20 사이클로알킬렌)를 가질 수 있다. 사이클로알킬렌기가 적어도 1개의 탄소-탄소 이중 결합을 포함하는 경우, 사이클로알킬렌기는 "사이클로알킬렌"기로 지칭될 수 있다. 사이클로알켄일렌은 사이클로알켄일렌의 환식 부분 내에 예를 들어, 4 내지 20개의 탄소(예를 들어, C4-C7, C4-C8, C4-C9, C4-C10, C4-C11, C4-C12, C4-C14, C4-C16, C4-C18 또는 C4-C20 사이클로알켄일렌)를 가질 수 있다. 사이클로알킬렌기가 적어도 1개의 탄소-탄소 삼중 결합을 포함하는 경우, 사이클로알킬렌기는 "사이클로알킬렌"기로 지칭될 수 있다. 사이클로알킨일렌은 사이클로알킨일렌의 환식 부분 내에 예를 들어, 4 내지 20개의 탄소(예를 들어, C4-C7, C4-C8, C4-C9, C4-C10, C4-C11, C4-C12, C4-C14, C4-C16, C4-C18 또는 C8-C20 사이클로알킨일렌)를 가질 수 있다. 사이클로알킬렌기는 본 명세서에 언급된 바와 같은 알킬, 알켄일 및 알킨일기에 대한 치환체로서 전형적으로 적합한 기에 의해서 치환될 수 있다. 헤테로사이클로알킬렌은 1개 이상, 예를 들어, 1 내지 4개, 1 내지 3개, 1개, 2개, 3개 또는 4개의 헤테로원자, 예를 들어, N, O 및 S를 포함하는 사이클로알킬렌기를 지칭한다. 사이클로알킬렌의 예는 사이클로프로필렌 및 사이클로부틸렌을 포함하지만 이들로 제한되지 않는다. 테트라하이드로퓨란은 헤테로사이클로알킬렌으로 간주될 수 있다.
용어 "아릴렌"은 본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 화합물의 다수(예를 들어, 2개 또는 3개)의 부분을 함께 연결하는 다가(예를 들어, 2가 또는 3가) 아릴기를 지칭한다. 예를 들어, 아릴렌기 내의 1개의 탄소는 화합물의 하나의 부분에 연결될 수 있는 반면, 사아릴렌기 내의 또 다른 탄소는 화합물의 또 다른 부분에 연결될 수 있다. 아릴렌은 아릴렌의 아릴 부분 내에 예를 들어, 5개 내지 15개의 탄소(예를 들어, C5-C6, C5-C7, C5-C8, C5-C9. C5-C10, C5-C11, C5-C12, C5-C13, C5-C14 또는 C5-C15 아릴렌)를 가질 수 있다. 아릴렌기는 본 명세서에 언급된 바와 같은 알킬, 알켄일 및 알킨일기에 대한 치환체로서 전형적으로 적합한 기에 의해서 치환될 수 있다. 헤테로아릴렌은 1개 이상, 예를 들어, 1 내지 4개, 1 내지 3개, 1개, 2개, 3개 또는 4개의 헤테로원자, 예를 들어, N, O 및 S를 포함하는 방향족기를 지칭한다. 헤테로아릴렌기는 예를 들어, 2 내지 15개의 탄소(예를 들어, C2-C3, C2-C4, C2-C5, C2-C6, C2-C7, C2-C8, C2-C9. C2-C10, C2-C11, C2-C12, C2-C13, C2-C14 또는 C2-C15 헤테로아릴렌)를 가질 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같은 용어 "선택적으로 치환된"은 0, 1 또는 그 초과의 치환체, 예컨대, 0 내지 25개, 0 내지 20개, 0 내지 10개 또는 0 내지 5개의 치환체를 갖는 것을 지칭한다. 치환체는 알킬, 알켄일, 알킨일, 아릴, 알크아릴, 아실, 헤테로아릴, 헤테로알킬, 헤테로알켄일, 헤테로알킨일, 헤테로알크아릴, 할로겐, 옥소, 사이아노, 나이트로, 아미노, 알크아미노, 하이드록시, 알콕시, 알칸오일, 카보닐, 카바모일, 구아니딘일, 우레이도, 아미딘일 및 상기에 기재된 기 또는 모이어티 중 임의의 것 및 상기에 기재된 기 또는 모이어티 중 임의의 것의 헤테로 버전을 포함하지만 이들로 제한되지 않는다. 치환체는 F, Cl, 메틸, 페닐, 벤질, OR, NR2, SR, SOR, SO2R, OCOR, NRCOR, NRCONR2, NRCOOR, OCONR2, RCO, COOR, 알킬-OOCR, SO3R, CONR2, SO2NR2, NRSO2NR2, CN, CF3, OCF3, SiR3 및 NO2를 포함하지만 이들로 제한되지 않으며, 여기서 각각의 R은, 독립적으로, H, 알킬, 알켄일, 아릴, 헤테로알킬, 헤테로알켄일 또는 헤테로아릴이고, 동일한 또는 인접한 원자 상의 선택적인 치환체 중 2개는 합쳐져서 3 내지 8개의 구성원을 함유하는 융합된, 선택적으로 치환된 방향족 또는 비방향족, 포화 또는 불포화 고리를 형성할 수 있거나, 동일한 원자 상의 선택적인 치환체 중 2개는 합쳐져서 3 내지 8개의 구성원을 함유하는 선택적으로 치환된 방향족 또는 비방향족, 포화 또는 불포화 고리를 형성할 수 있다.
선택적으로 치환된 기 또는 모이어티는 원자(예를 들어, 수소 원자) 중 하나가 또 다른 치환체로 선택적으로 대체된 기 또는 모이어티(예를 들어, 상기에 기재된 기 또는 모이어티 중 어느 하나)를 지칭한다. 예를 들어, 선택적으로 치환된 알킬은 메틸기의 수소 원자가 예를 들어, OH로 대체된, 선택적으로 치환된 메틸일 수 있다. 또 다른 예로서, 헤테로알킬 또는 이의 2가 반대부분 상의 치환체, 헤테로알킬렌은 탄소 상의 수소 또는 헤테로원자, 예컨대, N 상의 수소를 대체할 수 있다. 예를 들어, 기 -R-NH-R- 내의 수소 원자는 알크아마이드 치환체, 예를 들어, -R-N[(CH2C(O)N(CH3)2]-R로 치환될 수 있다.
일반적으로, 선택적인 치환체는 비간섭 치환체이다. "비간섭 치환체"는 바이러스 뉴라미니다제에 결합하거나 인플루엔자 바이러스을 저해하는 본 명세서에 기재된 접합체(예를 들어, 화학식 (1) 내지 (5), (D-I) 내지 (D-X), (D'-I), (M-I) 내지 (M-X) 또는 (M'-I) 중 어느 하나의 접합체)의 능력을 유지시키는 치환체를 지칭한다. 따라서, 일부 실시형태에서, 치환체는 이러한 활성 정도를 변경시킬 수 있다. 그러나, 접합체가 바이러스 뉴라미니다제에 결합하거나 저해제 바이러스 증식을 저해하는 능력을 유지하는 한, 치환체는 "비간섭"이라고 분류될 것이다. 예를 들어, 비간섭 치환체는 바이러스 플라크 감소 검정에서 IC50 값에 기초하여 10μM 이하, 예컨대, 인플루엔자 바이러스 뉴라미니다제에 대한 IC50 값에 기초하여 실시예 2에서 500nM 미만의 항바이러스 효능을 제공하는 화합물의 능력을 유지시킬 것이다. 따라서, 치환체는 플라크 저해 또는 인플루엔자 바이러스 뉴라미니다제 저해에 기초한 저해 정도를 변경시킬 수 있다. 그러나, 본 명세서에서 화합물, 예컨대, 화학식 (A-I), (A-II), (A-III), (A-IV), (A-V), (A-VI), (A-VII), (A-VIII), (A-IX), (A-X), (A-XI) 및 (A-XII)의 화합물이 인플루엔자 바이러스 뉴라미니다제 활성을 저해하는 능력을 보유하는 한, 치환체는 "비간섭"이라고 분류될 것이다. 바이러스 플라크 감소 또는 인플루엔자 바이러스 뉴라미니다제를 저해하는 임의의 화합물의 능력을 결정하기 위한 다수의 검정이 당업계에서 입수 가능하고, 일부는 하기 실시예에 예시된다.
화학 기 또는 모이어티를 기재하는데 사용되는 경우 용어 "헤테로"는 탄소 또는 수소가 아닌 적어도 하나의 헤테로원자, 예를 들어, N, O 및 S를 갖는 것을 지칭한다. 상기에 기재된 기 또는 모이어티 중 어느 하나는 그것이 적어도 하나의 헤테로원자를 함유하는 경우 헤테로라고 지칭될 수 있다. 예를 들어, 헤테로사이클로알킬, 헤테로사이클로알켄일 또는 헤테로사이클로알킨일기는 예를 들어, N, O 및 S로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 헤테로원자를 갖는 사이클로알킬, 사이클로알켄일 또는 사이클로알킨일기를 지칭한다. 헤테로사이클로알켄일기의 예는 말레이미도이다. 예를 들어, 헤테로아릴기는 예를 들어, N, O 및 S로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 헤테로원자를 갖는 방향족기를 지칭한다. 1개 이상 헤테로원자가 또한 본 명세서에 기재된 바와 같은 기 또는 모이어티 내의 수소 원자를 대체한 치환체에 포함될 수 있다. 예를 들어, 선택적으로 치환된 헤테로아릴기에서, 헤테로아릴기 내의 수소 원자 중 하나가 치환체(예를 들어, 메틸)로 대체되는 경우, 치환체는 또한 1개 이상의 헤테로원자(예를 들어, 메탄올)를 함유할 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이 용어 "아실"은 구조
Figure pct00425
를 갖는 기를 지칭하고: 식 중, Rz는 선택적으로 치환된 알킬, 알켄일, 알킨일, 사이클로알킬, 사이클로알켄일, 사이클로알킨일, 아릴, 알크아릴, 알크아미노, 헤테로알킬, 헤테로알켄일, 헤테로알킨일, 헤테로사이클로알킬, 헤테로사이클로알켄일, 헤테로사이클로알킨일, 헤테로아릴, 헤테로알크아릴 또는 헤테로알크아미노이다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같은 용어 "할로" 또는 "할로겐"은 임의의 할로겐 원자, 예를 들어, F, Cl, Br 또는 I를 지칭한다. 본 명세서에 기재된 기 또는 모이어티 중 어느 하나는, 그것이 적어도 하나의 할로겐 원자, 예컨대, 할로알킬을 함유하는 경우 "할로 모이어티"라고 지칭될 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같은 용어 "하이드록실"은 -OH기를 나타낸다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같은 용어 "옥소"는 구조=O를 갖는 치환체를 지칭하며, 여기서 원자와 산소 원자 사이에 이중 결합이 존재한다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같은 용어 "카보닐"은 구조:
Figure pct00426
를 갖는 기를 지칭한다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같은 용어 "티오카보닐"은 구조:
Figure pct00427
를 갖는 기를 지칭한다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같은 용어 "포스페이트"는 구조:
Figure pct00428
를 갖는 기를 나타낸다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같은 용어 "포스포릴"은 구조:
Figure pct00429
또는
Figure pct00430
를 갖는 기를 나타낸다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같은 용어 "설포닐"은 구조:
Figure pct00431
를 갖는 기를 나타낸다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같은 용어 "이미노"는 구조:
Figure pct00432
를 갖는 기를 나타내고, 식 중, R은 선택적인 치환체이다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같은 용어 "N-보호기"는 합성 절차 동안의 바람직하지 않은 반응에 대해서 아미노기를 보호하도록 의도되는 기를 나타낸다. 일반적으로 사용되는 N-보호기는 본 명세서에 참조에 의해 포함된 문헌[Greene, "Protective Groups in Organic Synthesis," 5th Edition (John Wiley & Sons, New York, 2014)]에 기재되어 있다. N-보호기는 예를 들어, 아실, 아릴로일 및 카바밀기, 예컨대, 폼일, 아세틸, 프로피온일, 피발로일, t-부틸아세틸, 2-클로로아세틸, 2-브로모아세틸, 트라이플루오로아세틸, 트라이클로로아세틸, 프탈릴, o-나이트로페녹시아세틸, α-클로로부티릴, 벤조일, 카복시벤질(CBz), 4-클로로벤조일, 4-브로모벤조일, 4-나이트로벤조일 및 카이럴 보조제(chiral auxiliary), 예컨대, 보호된 또는 비보호된 D, L 또는 D, L-아미노산 잔기, 예컨대, 알라닌, 류신, 페닐알라닌; 설포닐-함유기, 예컨대, 벤젠설포닐 및 p-톨루엔설포닐; 카바메이트 형성기, 예컨대, 벤질옥시카보닐, p-클로로벤질옥시카보닐, p-메톡시벤질옥시카보닐, p-나이트로벤질옥시카보닐, 2-나이트로벤질옥시카보닐, p-브로모벤질옥시카보닐, 3,4-다이메톡시벤질옥시카보닐, 3,5-다이메톡시벤질 옥시카보닐, 2,4-다이메톡시벤질옥시카보닐, 4-메톡시벤질옥시카보닐, 2-나이트로-4,5-다이메톡시벤질옥시카보닐, 3,4,5-트라이메톡시벤질옥시카보닐, 1-(p-바이페닐릴)-1-메틸에톡시카보닐, α,α-다이메틸-3,5-다이메톡시벤질옥시카보닐, 벤즈하이드릴옥시 카보닐, t-부틸옥시카보닐(BOC), 다이아이소프로필메톡시카보닐, 아이소프로필옥시카보닐, 에톡시카보닐, 메톡시카보닐, 알릴옥시카보닐, 2,2,2,-트라이클로로에톡시카보닐, 페녹시카보닐, 4-나이트로페녹시 카보닐, 플루오렌일-9-메톡시카보닐(Fmoc), 사이클로펜틸옥시카보닐, 아다만틸옥시카보닐, 사이클로헥실옥시카보닐 및 페닐티오카보닐; 알크아릴 기, 예컨대, 벤질, 트라이페닐메틸 및 벤질옥시메틸; 및 실릴기, 예컨대, 트라이메틸실릴을 포함한다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같은 용어 "아미노산"은 자연 발생 아미노산 및 비-자연 발생 아미노산을 의미한다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같은 용어 "자연 발생 아미노산"은 Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr 및 Val을 포함하는 아미노산을 의미한다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같은 용어 "비-자연 발생 아미노산"은 자연적으로 생성되지 않거나 포유동물에서 발견되지 않는 알파 아미노산을 의미한다. 비-자연 발생 아미노산의 예는 D-아미노산; 시스테인의 황 원자에 부착된 아세틸아미노메틸기를 갖는 아미노산; 페길화된 아미노산; 화학식 NH2(CH2)nCOOH(식 중, n은 2 내지 6임)의 오메가 아미노산, 중성 비극성 아미노산, 예컨대, 사코신, t-부틸 알라닌, t-부틸 글리신, N-메틸 아이소류신 및 노르류신; 옥시메티오닌; 페닐글리신; 시트룰린; 메티오닌 설폭사이드; 시스테산; 오르니틴; 다이아미노부티르산; 3-아미노알라닌; 3-하이드록시-D-프롤린; 2,4-다이아미노부티르산; 2-아미노펜탄산; 2-아미노옥탄산, 2-카복시 피페라진; 피페라진-2-카복실산, 2-아미노-4-페닐부탄산; 3-(2-나프틸)알라닌 및 하이드록시프롤린을 포함한다. 다른 아미노산은 α-아미노부티르산, α-아미노-α-메틸부티레이트, 아미노사이클로프로판-카복실레이트, 아미노아이소부티르산, 아미노노르보르닐-카복실레이트, L-사이클로헥실알라닌, 사이클로펜틸알라닌, L-N-메틸류신, L-N-메틸메티오닌, L-N-메틸노르발린, L-N-메틸페닐알라닌, L-N-메틸프롤린, L-N-메틸세린, L-N-메틸트립토판, D-오르니틴, L-N-메틸에틸글리신, L-노르류신, α-메틸-아미노아이소부티레이트, α-메틸사이클로헥실알라닌, D-α-메틸알라닌, D-α-메틸아르기닌, D-α-메틸아스파라긴, D-α-메틸아스파테이트, D-α-메틸시스테인, D-α-메틸글루타민, D-α-메틸히스티딘, D-α-메틸아이소류신, D-α-메틸류신, D-α-메틸라이신, D-α-메틸메티오닌, D-α-메틸오르니틴, D-α-메틸페닐알라닌, D-α-메틸프롤린, D-α-메틸세린, D-N-메틸세린, D-α-메틸트레오닌, D-α-메틸트립토판, D-α-메틸타이로신, D-α-메틸발린, D-N-메틸알라닌, D-N-메틸아르기닌, D-N-메틸아스파라긴, D-N-메틸아스파테이트, D-N-메틸시스테인, D-N-메틸글루타민, D-N-메틸글루타메이트, D-N-메틸히스티딘, D-N-메틸아이소류신, D-N-메틸류신, D-N-메틸라이신, N-메틸사이클로헥실알라닌, D-N-메틸오르니틴, N-메틸글리신, N-메틸아미노아이소부티레이트, N-(1-메틸프로필)글리신, N-(2-메틸프로필)글리신, D-N-메틸트립토판, D-N-메틸타이로신, D-N-메틸발린, γ-아미노부티르산, L-t-부틸글리신, L-에틸글리신, L-호모페닐알라닌, L-α-메틸아르기닌, L-α-메틸아스파테이트, L-α-메틸시스테인, L-α-메틸글루타민, L-α-메틸히스티딘, L-α-메틸아이소류신, L-α-메틸류신, L-α-메틸메티오닌, L-α-메틸노르발린, L-α-메틸페닐알라닌, L-α-메틸세린, L-α-메틸트립토판, L-α-메틸발린, N-(N-(2,2-다이페닐에틸) 카바밀메틸글리신, 1-카복시-1-(2,2-다이페닐-에틸아미노) 사이클로프로판, 4-하이드록시프롤린, 오르니틴, 2-아미노벤조일 (안트라닐로일), D-사이클로헥실알라닌, 4-페닐-페닐알라닌, L-시트룰린, α-사이클로헥실글리신, L-1,2,3,4-테트라하이드로아이소퀴놀린-3-카복실산, L-티아졸리딘-4-카복실산, L-호모타이로신, L-2-퓨릴알라닌, L-히스티딘(3-메틸), N-(3-구아니디노프로필)글리신, O-메틸-L-타이로신, O-글리칸-세린, 메타-타이로신, 노르-타이로신, L-N,N',N"-트라이메틸라이신, 호모라이신, 노르라이신, N-글리칸 아스파라긴, 7-하이드록시-1,2,3,4-테트라하이드로-4-플루오로페닐알라닌, 4-메틸페닐알라닌, 비스-(2-피콜릴)아민, 펜타플루오로페닐알라닌, 인돌린-2-카복실산, 2-아미노벤조산, 3-아미노-2-나프토산, 비대칭 다이메틸아르기닌, L-테트라하이드로아이소퀴놀린-1-카복실산, D-테트라하이드로아이소퀴놀린-1-카복실산, 1-아미노-사이클로헥산 아세트산, D/L-알릴글리신, 4-아미노벤조산, 1-아미노-사이클로부탄 카복실산, 2 또는 3 또는 4-아미노사이클로헥산 카복실산, 1-아미노-1-사이클로펜탄 카복실산, 1-아미노인단-1-카복실산, 4-아미노-피롤리딘-2-카복실산, 2-아미노테트랄린-2-카복실산, 아제티딘-3-카복실산, 4-벤질-피롤리딘-2-카복실산, tert-부틸글리신, b-(벤조티아졸릴-2-일)-알라닌, b-사이클로프로필 알라닌, 5,5-다이메틸-1,3-티아졸리딘-4-카복실산, (2R,4S)4-하이드록시피페리딘-2-카복실산, (2S,4S) 및 (2S,4R)-4-(2-나프틸메톡시)-피롤리딘-2-카복실산, (2S,4S) 및 (2S,4R)4-페녹시-피롤리딘-2-카복실산, (2R,5S) 및 (2S,5R)-5-페닐-피롤리딘-2-카복실산, (2S,4S)-4-아미노-1-벤조일-피롤리딘-2-카복실산, t-부틸알라닌, (2S,5R)-5-페닐-피롤리딘-2-카복실산, 1-아미노메틸-사이클로헥산-아세트산, 3,5-비스-(2-아미노)에톡시-벤조산, 3,5-다이아미노-벤조산, 2-메틸아미노-벤조산, N-메틸안트라닐산, L-N-메틸알라닌, L-N-메틸아르기닌, L-N-메틸아스파라긴, L-N-메틸아스파트산, L-N-메틸시스테인, L-N-메틸글루타민, L-N-메틸글루탐산, L-N-메틸히스티딘, L-N-메틸아이소류신, L-N-메틸라이신, L-N-메틸노르류신, L-N-메틸오르니틴, L-N-메틸트레오닌, L-N-메틸타이로신, L-N-메틸발린, L-N-메틸-t-부틸글리신, L-노르발린, α-메틸-γ-아미노부티레이트, 4,4'-바이페닐알라닌, α-메틸사이클로펜틸알라닌, α-메틸-α-나프틸알라닌, α-메틸페니실아민, N-(4-아미노부틸)글리신, N-(2-아미노에틸)글리신, N-(3-아미노프로필)글리신, N-아미노-α-메틸부티레이트, α-나프틸알라닌, N-벤질글리신, N-(2-카바밀에틸)글리신, N-(카바밀메틸)글리신, N-(2-카복시에틸)글리신, N-(카복시메틸)글리신, N-사이클로부틸글리신, N-사이클로데실글리신, N-사이클로헵틸글리신, N-사이클로헥실글리신, N-사이클로데실글리신, N-사이클로도데실글리신, N-사이클로옥틸글리신, N-사이클로프로필글리신, N-사이클로운데실글리신, N-(2,2-다이페닐에틸)글리신, N-(3,3-다이페닐프로필)글리신, N-(3-구아니디노프로필)글리신, N-(1-하이드록시에틸)글리신, N-(하이드록시에틸))글리신, N-(이미다졸릴에틸))글리신, N-(3-인돌릴릴에틸)글리신, N-메틸-γ-아미노부티레이트, D-N-메틸메티오닌, N-메틸사이클로펜틸알라닌, D-N-메틸페닐알라닌, D-N-메틸프롤린, D-N-메틸트레오닌, N-(1-메틸에틸)글리신, N-메틸-나프틸알라닌, N-메틸페니실아민, N-(p-하이드록시페닐)글리신, N-(티오메틸)글리신, 페니실아민, L-α-메틸알라닌, L-α-메틸아스파라긴, L-α-메틸-t-부틸글리신, L-메틸에틸글리신, L-α-메틸글루타메이트, L-α-메틸호모페닐알라닌, N-(2-메틸티오에틸)글리신, L-α-메틸라이신, L-α-메틸노르류신, L-α-메틸오르니틴, L-α-메틸프롤린, L-α-메틸트레오닌, L-α-메틸타이로신, L-N-메틸-호모페닐알라닌, N-(N-(3,3-다이페닐프로필) 카바밀메틸글리신, L-피로글루탐산, D-피로글루탐산, O-메틸-L-세린, O-메틸-L-호모세린, 5-하이드록시라이신, α-카복시글루타메이트, 페닐글리신, L-피페콜산(호모프롤린), L-호모류신, L-라이신 (다이메틸), L-2-나프틸알라닌, L-다이메틸도파 또는 L-다이메톡시-페닐알라닌, L-3-피리딜알라닌, L-히스티딘 (벤조일옥시메틸), N-사이클로헵틸글리신, L-다이페닐알라닌, O-메틸-L-호모타이로신, L-β-호모라이신, O-글리칸-트레오닌, 오쏘-타이로신, L-N,N'-다이메틸라이신, L-호모아르기닌, 네오트립토판, 3-벤조티엔일알라닌, 아이소퀴놀린-3-카복실산, 다이아미노프로피온산, 호모시스테인, 3,4-다이메톡시페닐알라닌, 4-클로로페닐알라닌, L-1,2,3,4-테트라하이드로노르하만-3-카복실산, 아다만틸알라닌, 대칭 다이메틸아르기닌, 3-카복시티오몰폴린, D-1,2,3,4-테트라하이드로노르하만-3-카복실산, 3-아미노벤조산, 3-아미노-1-카복시메틸-피리딘-2-온, 1-아미노-1-사이클로헥산 카복실산, 2-아미노사이클로펜탄 카복실산, 1-아미노-1-사이클로프로판 카복실산, 2-아미노인단-2-카복실산, 4-아미노-테트라하이드로티오피란-4-카복실산, 아제티딘-2-카복실산, b-(벤조티아졸-2-일)-알라닌, 네오펜틸글리신, 2-카복시메틸 피페리딘, b-사이클로부틸 알라닌, 알릴글리신, 다이아미노프로피온산, 호모-사이클로헥실 알라닌, (2S,4R)-4-하이드록시피페리딘-2-카복실산, 옥타하이드로인돌-2-카복실산, (2S,4R) 및 (2S,4R)-4-(2-나프틸), 피롤리딘-2-카복실산, 니페코산, (2S,4R) 및 (2S,4S)-4-(4-페닐벤질) 피롤리딘-2-카복실산, (3S)-1-피롤리딘-3-카복실산, (2S,4S)-4-트리틸머캅토-피롤리딘-2-카복실산, (2S,4S)-4-머캅토프롤린, t-부틸글리신, N,N-비스(3-아미노프로필)글리신, 1-아미노-사이클로헥산-1-카복실산, N-머캅토에틸글리신 및 셀레노시스테인이다. 일부 실시형태에서, 아미노산 잔기는 하전되거나 극성일 수 있다. 하전된 아미노산은 알라닌, 라이신, 아스파트산 또는 글루탐산 또는 이의 비-자연 발생 유사체를 포함한다. 극성 아미노산은 글루타민, 아스파라긴, 히스티딘, 세린, 트레오닌, 타이로신, 메티오닌 또는 트립토판 또는 이의 비자연 발생 유사체를 포함한다. 구체적으로 일부 실시형태에서, 아미노산에서 말단 아미노기는 아마이도기 또는 카바메이트기일 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "백분율(%) 동일성"은 서열을 정렬하고, 필요한 경우 최대 백분율 동일성을 달성하기 위해서 갭(즉, 갭은 최적의 정렬을 위해서 후보물질과 참조 서열 중 하나 또는 둘 다에 도입될 수 있고, 비-상동성 서열은 비교 목적을 위해서 무시될 수 있음)을 도입한 후 참조 서열의 아미노산 잔기와 동일한, 후보 서열, 예를 들어, Fc-IgG 또는 이의 단편의 아미노산 잔기의 백분율을 지칭한다. 백분율 동일성을 결정하려는 목적을 위한 정렬은 예를 들어, 공적으로 입수 가능한 컴퓨터 소프트웨어, 예컨대, BLAST, ALIGN 또는 Megalign(DNASTAR) 소프트웨어를 사용하여, 당업계의 다양한 방식으로 달성될 수 있다. 당업자는 비교될 서열의 전장에 걸친 최대 정렬을 달성하는데 필요한 임의의 알고리즘을 포함한, 정렬을 측정하기 위한 적절한 파라미터를 결정할 수 있다. 일부 실시형태에서, 주어진 참조 서열에, 서열과 또는 서열에 대한 주어진 후보 서열(이것은 대안적으로 참조 서열에, 서열과 또는 서열에 대한 특정 백분율 아미노산 서열 동일성을 갖거나 또는 포함하는 주어진 후보 서열로서 지칭될 수 있음)의 백분율 아미노산 서열 동일성은 하기와 같이 계산될 수 있다:
100 × (A/B의 비율)
식 중, A는 후보 서열과 참조 서열의 정렬 시에 동일한 것으로 스코어링된 아미노산 잔기의 수이고, B는 참조 서열 내의 아미노산 잔기의 총 수이다. 일부 실시형태에서 후보 서열의 길이가 참조 서열의 길이와 동일하지 않은 경우, 참조 서열에 대한 후보 서열의 백분율 아미노산 서열 동일성은 후보 서열에 대한 참조 서열의 백분율 아미노산 서열 동일성과 동일하지 않을 것이다.
2개의 폴리뉴클레오타이드 또는 폴리펩타이드 서열은, 2개의 서열 내의 뉴클레오타이드 또는 아미노산의 서열이 상기에 기재된 바와 같이 최대 관련성을 위해서 정렬된 경우 동일하면, "동일"하다고 지칭된다. 2개의 서열 간의 비교는 전형적으로 서열을 비교 윈도우에 걸쳐서 비교하여 서열 유사성의 국지 영역을 식별하고 비교함으로써 수행된다. 본 명세서에서 사용되는 바와 같은 "비교 윈도우"는 적어도 약 15개의 근접한 위치, 약 20개의 근접한 위치, 약 25개의 근접한 위치 또는 그 초과(예를 들어, 약 30 내지 약 75개의 근접한 위치 또는 약 40 내지 약 50개의 근접한 위치)의 분절을 지칭하며, 여기서 서열은 2개의 서열이 최적으로 정렬된 후 동일한 수의 근접한 위치의 참조 서열과 비교될 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같은 용어 "치료하는" 또는 "치료하기 위한"은 대상체에서 바이러스 감염(예를 들어, 바이러스 감염, 예컨대, 인플루엔자 감염)의 치료적 치료를 지칭한다. 일부 실시형태에서, 치료적 치료는 바이러스 감염의 진행을 둔화시키고/시키거나 대상체의 결과를 개선시키고/시키거나 감염을 제거할 수 있다. 일부 실시형태에서, 대상체에서 바이러스 감염의 치료적 치료는, 치료적 치료가 없는 바이러스 감염의 상태 및/또는 병태와 비교할 때, 바이러스 감염과 연관된 1종 이상의 증상 또는 병태를 개선시키고/시키거나, 바이러스의 양을 감소시키고/시키거나 바이러스 감염의 상태를 안정화시키고/시키거나(즉, 악화시키지 않고/않거나), 바이러스 감염의 확산을 예방하고/하거나 바이러스 감염의 진행을 지연시키거나 둔화시킬 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같은 용어 "T의 평균값"은 접합체의 집단 내의 Fc 도메인 또는 알부민 단백질에 접합된 뉴라미니다제 저해제의 단량체 또는 뉴라미다제 저해제의 이량체의 평균 수를 지칭한다. 일부 실시형태에서, 접합체의 집단 내에서, Fc 도메인 단량체에 접합된 뉴라미니다제 저해제의 단량체 또는 뉴라미다제 저해제의 이량체의 평균 수는 1 내지 20일 수 있다(예를 들어, T의 평균값은 1 내지 2, 1 내지 3, 1 내지 4, 1 내지 5, 5 내지 10, 10 내지 15 또는 15 내지 20이다). 일부 실시형태에서, T의 평균값은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20이다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같은 용어 "대상체"는 인간, 비-인간 영장류 또는 다른 포유동물, 예컨대, 비제한적으로, 개, 고양이 말, 소, 돼지, 칠면조, 염소, 어류, 원숭이, 닭, 래트, 마우스 및 양일 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같은 용어 "치료적 유효량"은 대상체에서 목적하는 효과를 유도하는데 또는 본 명세서에 기재된 병태 또는 장애(예를 들어, 바이러스 감염, 예컨대, 인플루엔자 감염)를 갖는 대상체를 치료하는데 효과적인 양, 예를 들어, 약제학적 용량을 지칭한다. 또한 본 명세서에서 "치료적 유효량"은 하나 이상의 용량으로 또는 임의의 투여량 또는 용량으로 복용되고/복용되거나 단독으로 또는 다른 치료제(예를 들어, 본 명세서에 기재된 항바이러스제)와 조합하여 복용되어 목적하는 치료적 및/또는 예방적 효과를 제공하는 양으로 해석될 수 있다는 것을 이해해야 한다. 예를 들어, 바이러스 감염의 치료를 위해서 사용되는 본 명세서에 기재된 접합체(예를 들어, 화학식 (1) 내지 (5), (D-I) 내지 (D-X), (D'-I), (M-I) 내지 (M-X) 또는 (M'-I) 중 어느 하나의 접합체)를 투여하는 것과 관련하여, 접합체의 유효량은 예를 들어, 접합체가 투여되지 않고 얻어진 반응과 비교할 때 바이러스 감염을 예방하거나, 둔화시키거나, 이의 진행을 반전시키기에 충분한 양이다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "약제학적 조성물"은 적어도 1종의 활성 성분(예를 들어, 화학식 (1) 내지 (5), (D-I) 내지 (D-X), (D'-I), (M-I) 내지 (M-X) 또는 (M'-I) 중 어느 하나의 접합체)뿐만 아니라 활성 성분을 투여 방법에 적합하도록 할 수 있는 1종 이상의 부형제 및 희석제를 함유하는 의학적 또는 약제학적 제형을 지칭한다. 본 개시내용의 약제학적 조성물은 본 명세서에 기재된 접합체(예를 들어, 화학식 (1) 내지 (5), (D-I) 내지 (D-X), (D'-I), (M-I) 내지 (M-X) 또는 (M'-I) 중 어느 하나의 접합체)와 상용성인 약제학적으로 허용 가능한 성분을 포함한다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "약제학적으로 허용 가능한 담체"는 약제학적 조성물 중의 부형제 또는 희석제를 지칭한다. 예를 들어, 약제학적으로 허용 가능한 담체는 활성 접합체(예를 들어, 화학식 (1) 내지 (5), (D-I) 내지 (D-X) 또는 (M-I) 내지 (M-VI) 중 어느 하나의 접합체)를 현탁 또는 용해시킬 수 있는 비히클일 수 있다. 약제학적으로 허용 가능한 담체는 제형의 다른 성분과 상용성이고, 수혜자에게 유해하지 않아야 한다. 본 개시내용에서, 약제학적으로 허용 가능한 담체는 본 명세서에 기재된 접합체에 적절한 약제학적 안정성을 제공해야 한다. 담체의 본성은 투여 모드로 달라진다. 예를 들어, 경구 투여의 경우, 고체 담체가 바람직하고; 정맥내 투여의 경우, 수성 용액 담체(예를 들어, WFI 및/또는 완충 용액)가 일반적으로 사용된다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같은 용어 "약제학적으로 허용 가능한 염"은 타당한 의학적 판단의 범주에서, 과도한 독성, 자극 및/또는 알레르기 반응이 없이 본 명세서에 기재된 방법에서 사용하기에 적합한 본 명세서에 기재된 접합체(예를 들어, 중 어느 하나의 접합체 화학식 (1) 내지 (5), (D-I) 내지 (D-X), (D'-I), (M-I) 내지 (M-X) 또는 (M'-I))의 염을 나타낸다. 약제학적으로 허용 가능한 염은 당업계에 널리 공지되어 있다. 예를 들어, 약제학적으로 허용 가능한 염은 문헌[Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use (Eds. P.H. Stahl and C.G. Wermuth), Wiley-VCH, 2008]에 기재되어 있다. 염은 본 명세서에 기재된 접합체의 단리 및 정제 동안 동일계에서 제조될 수 있거나 또는 염기 기를 적합한 유기 산과 별도로 반응시킴으로써 제조될 수 있다.
용어 "약물-대-항체 비" 또는 "DAR"은 본 명세서에 기재된 항체, Fc 도메인 또는 알부민 단백질에 접합된 소분자 약물 모이어티의 평균 수(예를 들어, 소분자 약물 단량체 또는 이량체의 평균 수)를 지칭한다. 본 명세서에 기재된 일부 실시형태에서, DAR은 (예를 들어, 화학식 (1) 내지 (5), (D-I) 내지 (D-X), (D'-I), (M-I) 내지 (M-X) 또는 (M'-I)에서) "T"로 표현된다. 본 명세서에서 사용되는 바와 같이, Fc 도메인, 항체 또는 알부민 단백질에 접합된 각각의 단량체 모이어티(예를 들어, 각각의 자나미비어 또는 페라미비어 단량체) 또는 각각의 이량체 모이어티(예를 들어, 각각의 자나미비어 이량체 또는 페라미비어 이량체)는 1.0(예를 들어, 1.0의 "T" 값)의 DAR 값에 상응한다. 예를 들어, 4개의 자나미비어 단량체에 접합된 Fc 도메인은 4.0(예를 들어, 4.0의 "T")의 DAR을 가질 것이다. 4개의 자나미비어 이량체(예를 들어, 총 8개의 자나미비어 분자)에 접합된 Fc 도메인은 또한 4.0(예를 들어, 4.0의 "T")의 DAR을 가질 것이다. DAR은 분자의 집단, 예컨대, Fc 도메인, 항체 또는 알부민 단백질의 집단에 대한 평균 DAR로서 계산될 수 있다. DAR 값은 약물의 효능, 효력, 약동학 또는 독성에 영향을 미칠 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같은 용어 "약"은 ±5%의 차이를 나타낸다. 예를 들어, 약 10%는 9.5% 내지 10.5%를 지칭한다.
값의 범위로 제공된 임의의 값은 상한 및 하한 둘 다를 포함하고, 상한 및 하한에 포함한 임의의 값을 포함한다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같은 용어 "(1) 내지 (5), (D-I) 내지 (D-X), (D'-I), (M-I) 내지 (M-X) 또는 (M'-I)"은 (1), (2), (3), (4), (5), (D-I), (D-II), (D-II-1), (D-II-2), (D-II-3), (D-II-4), (D-II-5), (D-II-6), (D-II-7), (D-II-8), (D-II-9), (D-II-10), (D-III), (D-III-1), (D-III-2), (D-III-3), (D-III-4), (D-III-5), (D-III-6), (D-III-7), (D-III-8), (D-III-9), (D-IV), (D-IV-1), (D-IV-2), (D-V), (D-V-1), (D-V-2), (D-V-3), (D-V-4), (D-V-5), (D-V-6), (D-V-7), (D-V-8), (D-V-9), (D-V-10), (D-VI), (D-VI-1), (D-VI-2), (D-VI-3), (D-VI-4), (D-VI-5), (D-VI-6), (D-VI-7), (D-VI-8), (D-VI-9), (D-VII), (D-VIII), (D-VIII-1), (D-VIII-2), (D-VIII-3), (D-VIII-4), (D-VIII-5), (D-VIII-6), (D-VIII-7), (D-VIII-8), (D-VIII-9), (D-VIII-10), (D-VIII-11), (D-IX), (D-IX-1), (D-IX-2), (D-IX-3), (D-IX-4), (D-IX-5), (D-IX-6), (D-X), (D-X-1), (D-X-2), (D-X-3), (D'-I), (M-I), (M-II), (M-II-1), (M-II-2), (M-II-3), (M-II-4), (M-II-5), (M-II-6), (M-II-7), (M-II-8), (M-II-9), (M-II-10), (M-III), (M-III-1), (M-III-2), (M-III-3), (M-III-4), (M-III-5), (M-III-6), (M-III-7), (M-III-8), (M-III-9), (M-IV), (M-IV-1), (M-IV-2), (M-V), (M-V-1), (M-V-2), (M-V-3), (M-V-4), (M-V-5), (M-V-6), (M-V-7), (M-V-8), (M-V-9), (M-V-10), (M-VI), (M-VI-1), (M-VI-2), (M-VI-3), (M-VI-4), (M-VI-5), (M-VI-6), (M-VI-7), (M-VI-8), (M-VI-9), (M-VII), (M-VIII), (M-VIII-1), (M-VIII-2), (M-VIII-3), (M-VIII-4), (M-VIII-5), (M-VIII-6), (M-VIII-7), (M-VIII-8), (M-VIII-9), (M-VIII-10), (M-VIII-11), (M-IX), (M-IX-1), (M-IX-2), (M-IX-3), (M-IX-4), (M-IX-5), (M-IX-6), (M-X), (M-X-1), (M-X-2), (M-X-3) 또는 (M'-I)) 중 어느 하나의 화학식을 나타낸다.
본 명세서에 기재된 접합체의 다른 특징 및 이점은 하기 상세한 설명 및 청구범위로부터 자명할 것이다.
도 1은 예를 들어, 링커의 방식에 의한 Fc 도메인 단량체, Fc 도메인, Fc-결합 펩타이드, 알부민 단백질 또는 알부민 단백질-결합 펩타이드에 대한 뉴라미니다제 저해제 단량체 또는 이량체의 예시적인 접합 방법을 도시한 이미지.
도 2는 비-환원 및 환원 SDS-PAGE 및 서열번호 1의 서열을 갖는 Fc 도메인 단량체로부터 형성된 Fc 도메인의 개략도.
도 3은 비-환원 및 환원 SDS-PAGE 및 서열번호 3의 서열을 갖는 Fc 도메인 단량체로부터 형성된 Fc 도메인의 개략도.
도 4는 비-환원 및 환원 SDS-PAGE 및 서열번호 5의 서열을 갖는 Fc 도메인 단량체로부터 형성된 Fc 도메인의 개략도.
도 5는 비-환원 및 환원 SDS-PAGE 및 서열번호 7의 서열을 갖는 Fc 도메인 단량체로부터 형성된 Fc 도메인의 개략도.
도 6은 비-환원 및 환원 SDS-PAGE 및 서열번호 9의 서열을 갖는 Fc 도메인 단량체로부터 형성된 Fc 도메인의 개략도.
도 7은 비-환원 및 환원 SDS-PAGE 및 서열번호 12의 서열을 갖는 Fc 도메인 단량체로부터 형성된 Fc 도메인의 개략도.
도 8은 비-환원 및 환원 SDS-PAGE 및 서열번호 14의 서열을 갖는 Fc 도메인 단량체로부터 형성된 Fc 도메인의 개략도.
도 9는 접합체 1의 비-환원 SDS-PAGE.
도 10은 접합체 2의 비-환원 SDS-PAGE.
도 11은 접합체 3의 비-환원 SDS-PAGE.
도 12는 접합체 4의 비-환원 SDS-PAGE.
도 13은 접합체 5의 비-환원 SDS-PAGE.
도 14는 접합체 6의 비-환원 SDS-PAGE.
도 15는 Int-2 및 접합체 1에 대한 H1N1 뉴라미니다제 저해 검정으로부터의 IC50 값을 나타낸 그래프.
도 16은 접합체 1 내지 6에 대한 H1N1 뉴라미니다제 저해 검정으로부터의 IC50 값을 나타낸 그래프.
도 17은 접합체 1 내지 6에 대한 H3N2 뉴라미니다제 저해 검정으로부터의 IC50 값을 나타낸 그래프.
도 18A 내지 도 18C는 접합체 3(도 18A), 접합체 4(도 18B) 또는 접합체 6(도 18C)으로 처리된 A549 세포 능력을 도시한 일련의 그래프.
도 19A 내지 19E는 인간 상피 세포에서 병원성 인플루엔자 바이러스 균주 A/WSN/33 H1N1(도 19A), A/Wyoming/3/03 H3N2(도 19B), A/California/04/09 H1N1 pdm(도 19C), A/Vietnam/1203/04 H5N1 할로(도 19D) 또는 B/Lee/40 Victoria(도 19E)의 성장을 저해하는 접합체 3의 능력을 나타낸 일련의 그래프.
도 20A 내지 도 20E는 인간 상피 세포에서 병원성 인플루엔자 바이러스 균주 A/WSN/33 H1N1(도 20A), A/Wyoming/3/03 H3N2(도 20B), A/California/04/09 H1N1 pdm(도 20C), A/Vietnam/1203/04 H5N1 할로(도 20D) 또는 B/Lee/40 Victoria(도 20E)의 성장을 저해하는 접합체 4의 능력을 나타낸 일련의 그래프.
도 21A 내지 도 21E는 인간 상피 세포에서 병원성 인플루엔자 바이러스 균주 A/WSN/33 H1N1(도 21A), A/Wyoming/3/03 H3N2(도 21B), A/California/04/09 H1N1 pdm(도 21C), A/Vietnam/1203/04 H5N1 할로(도 21D) 또는 B/Lee/40 Victoria(도 21E)의 성장을 저해하는 접합체 6의 능력을 나타낸 일련의 그래프.
도 22A 내지 도 22E는 오셀타미비어와 비교하여, 인간 상피 세포에서 병원성 인플루엔자 바이러스 균주 A/WSN/33 H1N1(도 22A), A/Wyoming/3/03 H3N2(도 22B), A/California/04/09 H1N1 pdm(도 22C), B/Lee/40 Victoria(도 22D) 또는 A/Vietnam/1203/04(도 22E)의 성장을 저해하는 접합체 6의 능력을 나타낸 일련의 그래프.
도 23은 Fc (hIgG1) 단독과 비교하여 접합체 6의 상대적인 마우스 혈정 농도를 나타낸 그래프.
도 24는 치명적인 마우스 인플루엔자 모델에서 마우스 체중에 대한 접합체 6의 효과를 나타낸 그래프. 실시예 29에 기재된 바와 같이 연구를 수행하였다.
도 25는 치명적인 마우스 인플루엔자 모델에서 생존에 대한 접합체 6의 효과를 나타낸 그래프. 실시예 29에 기재된 바와 같이 연구를 수행하였다.
도 26은 치명적인 마우스 인플루엔자 모델에서 마우스 체중에 대한 접합체 6의 효과를 나타낸 그래프. 실시예 30에 기재된 바와 같이 연구를 수행하였다.
도 27은 치명적인 마우스 인플루엔자 모델에서 생존에 대한 접합체 6의 효과를 나타낸 그래프. 실시예 30에 기재된 바와 같이 연구를 수행하였다.
도 28은 뉴라미니다제 저해제 단량체 또는 이량체를 예를 들어, 링커의 방식으로, 아미노산 잔기, 예를 들어, 표면 노출된 라이신의 질소 원자에 대한 옥심 접합에 의해서 Fc 도메인 단량체, Fc 도메인, Fc-결합 펩타이드, 알부민 단백질 또는 알부민 단백질-결합 펩타이드에 접합시키는 방법을 도시한 이미지.
도 29는 뉴라미니다제 저해제 단량체 또는 이량체를 예를 들어, 링커의 방식으로, 아미노산 잔기, 예를 들어, 표면 노출된 라이신의 질소 원자에 대한 티오에터 접합에 의해서 Fc 도메인 단량체, Fc 도메인, Fc-결합 펩타이드, 알부민 단백질 또는 알부민 단백질-결합 펩타이드에 접합시키는 방법을 도시한 이미지.
도 30은 뉴라미니다제 저해제 단량체 또는 이량체를 예를 들어, 링커의 방식으로, 리브리징된(rebridged) 시스테인 접합, 예를 들어, Fc 도메인 단량체 또는 Fc 도메인 내의 2개의 힌지 시스테인의 한 쌍의 황 원자에 대한 리브리징된 시스테인 접합에 의해서 Fc 도메인 단량체, Fc 도메인, Fc-결합 펩타이드, 알부민 단백질 또는 알부민 단백질-결합 펩타이드에 접합시키는 방법을 도시한 이미지.
도 31A 내지 도 31F는 치명적인 마우스 인플루엔자 모델에서 접합체 6으로 처리된 마우스의 생존을 나타낸 일련의 그래프. 마우스를 20㎎/㎏, 매일 2x, 감염 후 8시간에 시작하는 오셀타미비어(TamifluTM) 대조군(도 31A); 접합체 6, 50㎎/㎏, 감염 전 28일 1회 용량(도 31B); 접합체 6, 10㎎/㎏, 감염 전 28일 1회 용량(도 31C); 접합체 6, 5㎎/㎏, 감염 전 28일 1회 용량(도 31D); 접합체 6, 2.5㎎/㎏, 감염 전 28일 1회 용량(도 31E); 또는 접합체 6, 1.25㎎/㎏, 감염 전 28일 1회 용량(도 31F)으로 처리하였다. 실시예 33에 기재된 바와 같이 연구를 수행하였다.
도 32A 내지 도 32F는 접합체 6이 치명적인 마우스 인플루엔자 모델에서의 생존에 의해서 결정되는 경우 오셀타미비어(TamifluTM)와 비교할 때 치료 윈도우를 확장한다는 것을 나타낸 일련의 그래프. 마우스를 감염 전 4시간에 비히클(PBS), Fc 단독 10mpk 또는 접합체 6(도 32A); 감염 후 8시간에 접합체 6 또는 오셀타미비어(TamifluTM)(도 32B); 감염 후 24시간에 접합체 6 또는 오셀타미비어(TamifluTM)(도 32C); 감염 후 48시간에 접합체 6 또는 오셀타미비어(TamifluTM)(도 32D); 감염 후 72시간에 접합체 6 또는 오셀타미비어(TamifluTM)(도 32E); 또는 감염 후 96시간(도 32F)에 접합체 6 또는 오셀타미비어(TamifluTM)로 처리하였다. 실시예 34에 기재된 바와 같이 연구를 수행하였다.
도 33은 14일 래트 용량-범위 파인더 독성 연구에서 접합체 6의 투여 후 체중 증가의 상당한 효과가 관찰되지 않았다는 것을 나타낸 그래프. 실시예 35에 기재된 바와 같이 연구를 수행하였다.
도 34A 내지 도 34D는 접합체 6이 치명적인 마우스 인플루엔자 모델에서의 생존에 의해서 결정되는 경우 오셀타미비어(TamifluTM)와 비교할 때 치료 윈도우를 확장한다는 것을 나타낸 일련의 그래프. 마우스를 20㎎/㎏, 매일 2x, 감염 후 8시간에 시작하는 오셀타미비어(TamifluTM) 대조군(도 34A); 접합체 6, 10㎎/㎏, 감염 전 4시간, 1회 용량(도 34B); 접합체 6, 2㎎/㎏, 감염 전 4시간, 1회 용량(도 34C); 또는 접합체 6, 0.4㎎/㎏, 감염 전 4일, 1회 용량(도 34D)으로 처리하였다. 실시예 37에 기재된 바와 같이 연구를 수행하였다.
도 35는 치명적인 마우스 인플루엔자 모델에서 마우스 체중에 대한 접합체 6의 효과를 나타낸 그래프. 실시예 37에 기재된 바와 같이 연구를 수행하였다.
도 36은 접합체 6의 IV 투여 후 7-일 래트 약동학 연구를 나타낸 그래프. 실시예 38에 기재된 바와 같이 연구를 수행하였다.
도 37은 접합체 6의 IV 투여 후 14-일 래트 약동학 연구를 나타낸 그래프. 실시예 39에 기재된 바와 같이 연구를 수행하였다.
도 38은 접합체 6의 IV 및 SC 투여와 비교한 28-일 래트 약동학 연구를 나타낸 그래프. 실시예 40에 기재된 바와 같이 연구를 수행하였다.
도 39는 접합체 6의 IV 투여 후 28-일 비-인간 영장류 약동학 연구를 나타낸 그래프. 실시예 41에 기재된 바와 같이 연구를 수행하였다.
도 40은 접합체 6의 IV 투여 후 마우스 폐 분포 약동학 연구를 나타낸 그래프. 실시예 42에 기재된 바와 같이 연구를 수행하였다.
도 41은 접합체 6의 IV, SC 및 IM 투여와 비교한 5-일 마우스 약동학 연구를 나타낸 그래프. 실시예 43에 기재된 바와 같이 연구를 수행하였다.
도 42는 접합체 8의 비-환원 SDS-PAGE.
도 43은 접합체 6의 구조를 도시한 도면.
도 44는 대조군 및 니트 화합물과 비교하여 37℃에서 24시간 동안 인큐베이션된 접합체 6과 비교한 24시간 시험관내 마우스 혈장 안정성 연구를 나타낸 그래프.
도 45는 대조군 및 니트 화합물과 비교하여 37℃에서 24시간 동안 인큐베이션된 접합체 6과 비교한 24시간 시험관내 인간 혈장 안정성 연구를 나타낸 그래프.
도 46은 마우스 간 마이크로솜 세포에서 37℃에서 24시간 동안 인큐베이션된 접합체 6과 대조군으로서 열 사멸된 마우스 간 마이크로솜 세포를 비교한 24시간 마우스 간 마이크로솜 안정성 연구를 나타낸 그래프.
도 47은 인간 간 마이크로솜 세포에서 37℃에서 24시간 동안 인큐베이션된 접합체 6과 대조군으로서 열 사멸된 인간 간 마이크로솜 세포를 비교한 24시간 마우스 간 마이크로솜 안정성 연구를 나타낸 그래프.
도 48은 바이러스 시험감염 후 15일에 걸쳐서 마우스에서 체중 변화 %를 나타낸 그래프. 실시예 66에 기재된 바와 같이 연구를 수행하였다.
도 49는 바이러스 시험감염 후 15일에 걸쳐서 마우스에서 생존 %를 나타낸 그래프. 실시예 66에 기재된 바와 같이 연구를 수행하였다.
도 50은 Fcγ 수용체 IIIA에 대해서 hIgG1 Fc(WT) 및 hIgG1 Fc(N297A)와 비교한 접합체 6 및 접합체 12의 결합을 나타낸 그래프. 실시예 67에 기재된 바와 같이 연구를 수행하였다.
도 51은 Fcγ 수용체 IIIA에 대한 접합체 6 및 접합체의 결합을 나타낸 그래프. 실시예 67에 기재된 바와 같이 연구를 수행하였다.
도 52는 접합체 6의 IV 투여 후 7-일 비-인간 영장류 독성동태(toxicokinetic) 연구를 나타낸 그래프. 실시예 68에 기재된 바와 같이 연구를 수행하였다.
도 53은 접합체 6의 IV 및 SC 투여와 비교한 28-일 비-인간 영장류 약동학 연구를 나타낸 그래프. 실시예 68에 기재된 바와 같이 연구를 수행하였다.
도 54는 접합체 12의 비-환원 SDS-PAGE.
도 55는 상이한 약물-대-항체(DAR) 비 값을 갖는 접합체 13(접합체 13a, 접합체 13b, 접합체 13c, 접합체 13d, 접합체 13e, 접합체 13f 및 접합체 13g)의 비-환원 SDS-PAGE.
도 56은 바이러스 시험감염 후 35일에 걸쳐서 면역 손상된 마우스에서 생존 %를 나타낸 그래프. 0.3㎎/㎏의 접합체 6 처리 군은 100% 생존을 유지하였지만, 명확성을 위해 그래프에서 약간 상쇄되었다. 실시예 95에 기재된 바와 같이 연구를 수행하였다.
도 57은 바이러스 시험감염 후 35일에 걸쳐서 면역 손상된 마우스에서 체중 변화 %를 나타낸 그래프. 실시예 95에 기재된 바와 같이 연구를 수행하였다.
도 58은 접합체 6의 투여가 인플루엔자 A(H1N1)로 감염된 마우스 모델의 폐에서 용량-의존적인 바이러스 청소를 초래하고, 이러한 바이러스 청소가 PBS 대조군, Fc-단독 대조군 또는 오셀타미비어 대조군보다 더 크다는 것을 나타낸 그래프. 실시예 96에 기재된 바와 같이 연구를 수행하였다.
도 59는 접합체 6의 투여가 인플루엔자 A(H1N1)로 감염된 마우스 모델에서 폐에서 염증성 사이토카인의 요량-의존적 감소를 초래한다는 것을 나타낸 그래프. 실시예 97에 기재된 바와 같이 연구를 수행하였다.
도 60은 BALB/c SCID(면역손상된) 마우스 및 CD-1 마우스(면역적격)에서 접합체 6의 약동학을 나타낸 그래프. 실시예 98에 기재된 바와 같이 연구를 수행하였다.
도 61은 접합체 33을 도시한 이미지.
도 62A 및 도 62B는 3x LD95의 마우스 적응성 인플루엔자 A.PR/8/1934(H1N1)가 비강내로 시험감염된 BALB/c 마우스에서 체중 변화(%)를 도시한 그래프. 실시예 133에 기재된 바와 같이 연구를 수행하였다.
도 63A는 감염 후 4일에 바이러스 부담을 나타낸 그래프. 실시예 133에 기재된 바와 같이 연구를 수행하였다.
도 63B는 감염 4일 후 바이러스 부담에서의 로그 감소를 나타낸 그래프. 실시예 133에 기재된 바와 같이 연구를 수행하였다.
도 64A는 접합체 33의 투여가 PBS 대조군 또는 Fc-단독 대조군과 비교하여, 인플루엔자 A(H1N1)로 감염된 마우스 모델에서 바이러스 부담의 용량-의존적 감소를 초래한다는 것을 나타낸 그래프. 실시예 133에 기재된 바와 같이 연구를 수행하였다.
도 64B는 감염 4일 후 바이러스 부담에서의 로그 감소를 나타낸 그래프. 실시예 133에 기재된 바와 같이 연구를 수행하였다.
도 65A 내지 도 65E는 접합체 33의 투여가 TNF-α(도 65A), IL-6(도 65B), INF-γ(도 65C), MCP-1(도 65D) 및 MIP-1α(도 65E)에 대한 사이토카인 수준에서의 용량-의존적 배수-감소를 초래한다는 것을 나타낸 일련의 막대 그래프. 실시예 133에 기재된 바와 같이 연구를 수행하였다.
도 66은 37℃ 및 60℃에서 인큐베이션 7일째에 Int-4와 비교한 Int-80의 안정성을 나타낸 크로마토그래프. 실시예 142에 기재된 바와 같이 연구를 수행하였다.
도 67은 바이러스 저해제로의 선택적인 압력 하에서 약물 내성 돌연변이체 바이러스 균주의 발생 가능성을 평가하기 위한 A549 세포에서 접합체 6, 오셀타미비어, 발록사비어 또는 PBS 대조군의 존재 하에서 A/CA/09 pdm의 연속 계대를 나타낸 그래프. 실시예 147에 기재된 바와 같이 연구를 수행하였다.
도 68은 바이러스 저해제로의 선택적인 압력 하에서 약물 내성 돌연변이체 바이러스 균주의 발생 가능성을 평가하기 위한 MDCK 세포에서 접합체 6, 접합체 33, 오셀타미비어, 발록사비어 또는 PBS 대조군의 존재 하에서 A/WSN/1933의 연속 계대를 나타낸 그래프. 실시예 147에 기재된 바와 같이 연구를 수행하였다.
본 개시내용은 바이러스 감염(예를 들어, 인플루엔자 바이러스 감염)의 치료를 위한 접합체, 조성물 및 방법을 특징으로 한다. 본 명세서에 개시된 접합체는 Fc 단량체, Fc 도메인, Fc-결합 펩타이드, 알부민 단백질 또는 알부민 단백질-결합 펩타이드에 접합된 바이러스 뉴라미니다제 저해제의 단량체 또는 이랑체(예를 들어, 자나미비어, 페라미비어 또는 이의 유사체)를 포함한다. 이러한 접합체에서 뉴라미니다제 저해제(예를 들어, 자나미비어, 페라미비어 또는 이의 유사체)는 바이러스 입자의 표면 상의 뉴라미니다제를 표적으로 한다. 접합체에서 Fc 단량체 또는 Fc 도메인은 면역 세포, 예를 들어, 호중구 상의 FcγR(예를 들어, FcRn, FcγRI, FcγRIIa, FcγRIIc, FcγRIIIa 및 FcγRIIIb)에 결합하여, 식세포작용 및 효과기 기능, 예컨대, 항체-의존적 세포-매개된 세포독성(ADCC)을 활성화시킴으로써, 면역 세포에 의한 바이러스 입자의 섭취(engulfment) 및 파괴로 이어지고, 접합체의 항바이러스 활성을 추가로 향상시킨다. 알부민 또는 알부민-결합 펩타이드는 예를 들어, 재순환 신생아 Fc 수용체에 대한 알부민의 결합에 의해서, 접합체의 반감기를 연장시킬 수 있다. 이러한 조성물은 바이러스 성장의 저해 방법 및 바이러스 감염, 예컨대, 인플루엔자 바이러스 A, 인플루엔자 바이러스 B 및 인플루엔자 바이러스 C에 의해서 유발되는 것의 치료 방법에서 유용하다.
I. 바이러스 감염
본 명세서에 기재된 화합물 및 약제학적 조성물(예를 들어, 화학식 (1) 내지 (5), (D-I) 내지 (D-X), (D'-I), (M-I) 내지 (M-X) 또는 (M'-I) 중 어느 하나의 접합체)은 바이러스 감염(예를 들어, 인플루엔자 바이러스 감염, 예컨대, 인플루엔자 A, B, C 또는 파라인플루엔자)을 치료하는데 사용될 수 있다.
바이러스 감염은 숙주 유기체(예를 들어, 인간 대상체)에서 바이러스(예를 들어, 인플루엔자 바이러스)의 병원성 성장을 지칭한다. 바이러스 감염은 바이러스 집단(들)의 존재가 숙주 몸체에 손상을 유발하는 임의의 상황일 수 있다. 따라서, 대상체는 과도한 양의 바이러스 집단이 대상체의 신체에 또는 신체 상에 존재하는 경우 또는 바이러스 집단(들)의 존재가 세포 또는 대상체의 다른 조직에 손상을 유발하는 경우 바이러스 감염을 앓고 있다.
일반적으로 "독감"이라고 알려진 인플루엔자는 인플루엔자 바이러스에 의해서 유발되는 감염성 질환이다. 증상은 경증에서 중증까지일 수 있다. 가장 흔한 증상은 고열, 콧물, 인후통, 근육통, 두통, 기침, 피로감 등을 포함한다. 이러한 증상은 일반적으로 바이러스에 노출된 후 2일 후에 시작되며 대부분 1주 미만 동안 지속된다. 그러나 기침은 2주 이상 지속될 수 있다. 소아에서는 메스꺼움과 구토가 있을 수 있지만 성인에서는 덜 흔하다. 인플루엔자의 합병증은 바이러스성 폐렴, 2차 세균성 폐렴, 부비동 감염, 천식 또는 심부전과 같은 이전 건강 문제의 악화를 포함할 수 있다. 젊은 사람, 노인, 면역 체계를 약화시키는 병이 있는 사람, 면역 체계를 약화시키는 요법 치료를 받는 사람과 같이 면역 체계가 약화된 개체에서 중증 합병증이 발생할 수 있다.
3가지 유형의 인플루엔자 바이러스, 즉, 타입 A, 타입 B 및 타입 C가 사람에게 영향을 미친다. 일반적으로 바이러스는 기침 또는 재채기를 통해 공기를 통해 전파된다. 이것은 대부분 비교적 짧은 거리에서 발생하는 것으로 여겨진다. 바이러스에 의해 오염된 표면을 만진 다음 입이나 눈을 만져서 전염될 수도 있다. 사람은 증상을 나타내기 전 또는 나타내는 중에 다른 사람에게 전염될 수 있다. 인후, 객담 또는 코에서 바이러스를 검사하여 감염이 확인될 수 있다. 다수의 신속한 시험이 사용될 수 있지만, 결과가 음성이면 사람들은 여전히 감염이 있을 수 있다. 바이러스의 RNA를 검출하는 하나의 유형의 중합효소 연쇄 반응이 인플루엔자 감염을 진단하는데 사용될 수 있다.
II. 본 개시내용의 접합체
본 명세서에는 바이러스 감염(예를 들어, 인플루엔자 감염)의 치료에 유용한 합성 접합체가 제공된다. 본 명세서에 개시된 접합체는 1개 이상의 단량체 뉴라미니다제 저해제 또는 2개의 뉴라미니다제 저해제(예를 들어, 자나미비어, 설포자나미비어, 페라미비어, A-315675 또는 이의 유사체로부터 선택된 뉴라미니다제 저해제)의 1개 이상의 이량체에 접합된 Fc 도메인 또는 알부민 단백질을 포함한다. 2개의 뉴라미니다제 저해제의 이량체는 뉴라미니다제 저해제(예를 들어, 화학식 (A-I), (A-II), (A-III), (A-IV), (A-V), (A-VI), (A-VII), (A-VIII), (A-IX), (A-X), (A-XI) 또는 (A-XII)의 제1 뉴라미니다제 저해제) 및 제2 뉴라미니다제 저해제(예를 들어, 화학식 (A-I), (A-II), (A-III), (A-IV), (A-V), (A-VI), (A-VII), (A-VIII), (A-IX), (A-X), (A-XI) 또는 (A-XII)의 제2 뉴라미니다제 저해제)를 포함한다. 제1 및 제2 뉴라미니다제 저해제는 링커의 방식으로 서로에 연결된다.
이론에 얽매이고자 함은 아니지만, 일부 양상에서, 본 명세서에 기재된 접합체는 접합체 내의 뉴라미니다제 저해제 모이어티와 바이러스 입자의 표면 상의 단백질 간의 상호작용을 통해서 바이러스 입자에 결합한다(예를 들어, 인플루엔자 바이러스 입자 상의 표면 상의 바이러스 뉴라미니다제에 결합한다). 뉴라미니다제 저해제는 감염된 숙주 세포의 표면 상의 글리칸 구조로부터, 시알산, 즉, 말단 뉴라민산 잔기를 절단하여, 자손 바이러스를 방출하고 숙주 세포로부터 감염되지 않은 주변 세포로 바이러스가 확산되도록 하는, 외피 단단백질인 뉴라미니다제를 파괴한다.
본 발명의 접합체는 Fc 도메인, Fc 단량체 또는 Fc-결합 펩타이드에 접합된 뉴라미니다제 저해제 단량체 및 이량체를 포함한다. 본 명세서에 기재된 접합체에서 Fc 도메인은 면역 세포 상의 FcγR(예를 들어, FcRn, FcγRI, FcγRIIa, FcγRIIc, FcγRIIIa 및 FcγRIIIb)에 결합한다. 면역 세포 상의 FcγR에 대한 본 명세서에 기재된 접합체 내의 Fc 도메인의 결합은 식세포작용 및 효과기 기능, 예컨대, 항체-의존적 세포-매개된 세포독성(ADCC)을 활성화시킴으로써, 면역 세포에 의한 바이러스 입자의 섭취(engulfment) 및 파괴로 이어지고, 접합체의 항바이러스 활성을 추가로 향상시킨다.
본 발명의 접합체는 알부민 단백질 또는 알부민 단백질-결합 펩타이드에 접합된 뉴라미니다제 저해제 단량체 및 이량체를 포함한다. 알부민 단백질 또는 알부민 단백질-결합 펩타이드는 예를 들어, 재순환 신생아 Fc 수용체에 대한 알부민의 결합에 의해서, 접합체의 반감기를 연장시킬 수 있다.
본 명세서에 제공된 접합체는 화학식 (1) 내지 (5), (D-I) 내지 (D-X), (D'-I), (M-I) 내지 (M-X) 또는 (M'-I) 중 어느 하나에 의해서 기재된다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 접합체는 Fc 도메인 또는 알부민 단백질에 접합된 뉴라미니다제 저해제의 1개 이상의 단량체를 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 접합체는 Fc 도메인 또는 알부민 단백질에 접합된 뉴라미니다제 저해제의 1개 이상의 이량체를 포함한다. 일부 실시형태에서, n이 2인 경우, E(Fc 도메인 단량체)는 이량체화되어 Fc 도메인을 형성한다.
본 명세서에 기재된 접합체는 당업계의 사용 가능한 화학 합성 기술을 사용하여 합성될 수 있다. 작용기가 접합에 사용 가능하지 않은 경우, 분자는 당업계에 널리 공지된 종래의 화학 합성 기술을 사용하여 유도체화될 수 있다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 접합체는 1개 이상 카이럴 중심을 함유한다. 접합체는 단리된 입체이성질체 형태 각각뿐만 아니라 라세미 혼합물을 포함하여 다양한 카이럴 순도의 입체이성질체 혼합물을 포함한다. 또한 형성될 수 있는 다양한 부분입체이성질체, 거울상이성질체 및 호변이성질체를 포함한다.
뉴라미니다제 저해제
본 명세서에 기재된 접합체의 성분은 인플루엔자 바이러스 뉴라미니다제 저해제 모이어티이다. 인플루엔자 바이러스 뉴라미니다제 저해제는 감염된 숙주 세포의 표면 상의 글리칸 구조로부터, 시알산, 즉, 말단 뉴라민산 잔기를 절단하여, 자손 바이러스를 방출하고 숙주 세포로부터 감염되지 않은 주변 세포로 바이러스가 확산되도록 하는, 외피 단단백질인 뉴라미니다제를 파괴한다. 인플루엔자 바이러스 뉴라미니다제 저해제의 예는 자나미비어(Relenza), 설포자나미비어, A-315675 및 페라미비어를 포함한다. 또한, 자나미비어, 설포자나미비어, A-315675 및 페라미비어의 유도체, 예컨대, 문헌에 기재된 것은 뉴라미니다제 저해제 활성을 가지며, 본 명세서에서 화합물의 뉴라미니다제 저해제 모이어티로서 유용하다(예를 들어, 문헌[Hadhαzi et al. A sulfozanamivir analogue has potent anti-influenza virus activity. ChemMedChem Comm. 13:785-789 (2018) 및 In vitro characterization of A-315675, a highly potent inhibitor of A 및 B strain of influenze virus neuraminidases 및 influenza virus replication. Antimicrobial Agents 및 Chemotherapy 46(4):1014-1021 (2002)] 참고).
본 명세서에 기재된 접합체는 2개의 유형으로 나뉜다: (1) Fc 도메인 또는 알부민 단백질에 접합된 뉴라미니다제 저해제의 1개 이상의 이량체 및 (2) Fc 도메인 또는 알부민 단백질에 접합된 뉴라미니다제 저해제의 1개 이상의 단량체. 뉴라미니다제 저해제의 이량체는 링커, 예를 들어, 본 명세서에 기재된 링커의 방식에 의해서, 서로에 연결된다.
본 발명의 바이러스 뉴라미니다제 저해제는 자나미비어, 설포자나미비어, A-315675, 페라마비어 및 이의 유사체, 예컨대, 하기 화학식 (A-I) 내지 (A-XII)의 바이러스 뉴라미니다제 저해제를 포함한다:
Figure pct00433
Figure pct00434
식 중, R1은 -OH, -NH2, -NHC(=NH)NH2 및 -NHC(=NH)NHR6으로부터 선택되며; R2 및 R3은 -H, -OH, -F, -Cl 및 -Br로부터 각각 독립적으로 선택되고; R4는 -CO2H, -P(=O)(OH)2, -SO3H로부터 선택되며; R5는 -COCH3, -COCF3, -SO2CH3로부터 선택되고; X는 -O- 및 -S-로부터 선택되며; Y는 하기로부터 선택되고:
Figure pct00435
R6은 하기로부터 선택되며:
Figure pct00436
R7은 H, C1-C20 알킬, C3-C20 사이클로알킬, C3-C20 헤테로사이클로알킬; C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되고; R8은 C3-C20 헤테로사이클로알킬, C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택된다.가장 바람직하게는 화학식 (A-I), (A-II), (A-III), (A-IV), (A-V), (A-VI), (A-VII), (A-VIII), (A-IX), (A-X), (A-XI) 또는 (A-XII)의 바이러스 뉴라미니다제 저해제는 Y를 통해서 접합체에 공유 부착된다.
바람직하게는 바이러스 뉴라미니다제 저해제는 자나미비어, 설포자나미비어, 페라미비어 또는 A-315675로부터 선택된다:
Figure pct00437
자나미비어 설포자나미비어, 페라미비어 A-315675.
Fc 도메인 또는 알부민 단백질에 연결된 뉴라미니다제 저해제의 이량체의 접합체
본 명세서에 기재된 접합체는 뉴라미니다제 저해제의 1개 이상의 이량체에 공유 연결된 Fc 도메인 및 Fc 단량체, Fc-결합 펩타이드 및 알부민 단백질 또는 알부민 단백질-결합 펩타이드를 포함한다. 2개의 뉴라미니다제 저해제의 이량체는 제1 뉴라미니다제 저해제(예를 들어, 화학식 (A-I) 내지 (A-XII)의 제1 바이러스 뉴라미니다제 저해제) 및 제2 뉴라미니다제 저해제(예를 들어, 화학식 (A-I) 내지 (A-XII)의 제2 바이러스 뉴라미니다제 저해제)를 포함한다. 제1 및 제2 뉴라미니다제 저해제는 링커, 예컨대 본 명세서에 기재된 링커의 방식으로 서로에 연결된다. 뉴라미니다제 저해제의 이량체의 일부 실시형태에서, 제1 뉴라미니다제 저해제와 제2 뉴라미니다제 저해제는 동일하다. 일부 실시형태에서, 제1 뉴라미니다제 저해제와 제2 뉴라미니다제 저해제는 상이하다.
뉴라미니다제 저해제의 이량체는 자나미비어 또는 이의 유사체의 동종이량체(예를 들어, (A-I), (A-II), (A-VI), (A-VII), (A-VIII) 또는 (A-IX))를 포함한다. 예를 들어, 본 발명의 뉴라미니다제 저해제 이량체는 구조식 A1-L-A2를 갖는 이량체를 포함하며, 식 중, 각각의 A1 및 각각의 A2는 (A-I), (A-II), (A-VI), (A-VII), (A-VIII) 및 (A-IX)로부터 선택된다.
뉴라미니다제 저해제의 이량체는 페라미비어 또는 이의 유사체의 동종이량체(예를 들어, (A-III), (A-IV) 또는 (A-V))를 포함한다. 예를 들어, 본 발명의 뉴라미니다제 저해제 이량체는 구조식 A1-L-A2를 갖는 이량체를 포함하며, 식 중, 각각의 A1 및 각각의 A2는 (A-III), (A-IV) 및 (A-V)로부터 선택된다.
뉴라미니다제 저해제의 이량체는 자나미비어 또는 이의 유사체 및 페라미비어 또는 이의 유사체를 포함하는 이종이량체(예를 들어, (A-I) 내지 (A-IX))를 포함한다. 예를 들어, 본 발명의 뉴라미니다제 저해제 이량체는 구조식 A1-L-A2를 갖는 이량체를 포함하며, 식 중, 각각의 A1은 (A-I), (A-II), (A-VI), (A-VII), (A-VIII) 및 (A-IX)로부터 선택되고, 각각의 A2는 (A-III), (A-IV) 및 (A-V)로부터 선택된다.
일부 실시형태에서, T가 1을 초과하는 경우(예를 들어, T가 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20인 경우), 각각의 A1-L-A2는 독립적으로 선택될 수 있다(예를 들어, 본 명세서에 기재된 A1-L-A2 구조 중 임의의 것으로부터 독립적으로 선택될 수 있다). 일부 실시형태에서, E는 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 또는 그 초과의 상이한 A1-L-A2 모이어티에 접합될 수 있다. 일부 실시형태에서, E는 제1 A1-L-A2 모이어티 및 제2 A1-L-A2, 모이어티에 접합된다. 일부 실시형태에서, 제1 A1-L-A2 모이어티의 A1 및 A2는 하기 화학식 (A-III) 내지 (A-V) 중 임의의 하나로부터 독립적으로 선택되고;
Figure pct00438
제2 A1-L-A2 모이어티의 A1 및 A2는 화학식 (A-I), (A-II), (A-VI), (A-VII), (A-VIII) 또는 (A-IX)로부터 독립적으로 선택되고:
Figure pct00439
일부 실시형태에서, 제1 A1-L-A2 모이어티는 E의 라이신 잔기(예를 들어, E의 표면 노출된 라이신 잔기의 질소 원자)에 특이적으로 접합되고, 제2 A1-L-A2 모이어티는 E의 시스테인 잔기(예를 들어, E의 표면 노출된 시스테인 잔기의 황 원자)에 특이적으로 접합된다. 일부 실시형태에서, 제1 A1-L-A2 모이어티는 E의 시스테인 잔기(예를 들어, E의 표면 노출된 시스테인 잔기의 황 원자)에 특이적으로 접합되고, 제2 A1-L-A2 모이어티는 E의 라이신 잔기(예를 들어, E의 표면 노출된 라이신 잔기의 질소 원자)에 특이적으로 접합된다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 하기 화학식으로 기재되는 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 제공한다:
Figure pct00440
Figure pct00441
Figure pct00442
Figure pct00443
Figure pct00444
Figure pct00445
Figure pct00446
Figure pct00447
Figure pct00448
Figure pct00449
Figure pct00450
Figure pct00451
Figure pct00452
Figure pct00453
Figure pct00454
Figure pct00455
Figure pct00456
Figure pct00457
Figure pct00458
Figure pct00459
Figure pct00460
Figure pct00461
Figure pct00462
Figure pct00463
Figure pct00464
또는
Figure pct00465
.
본 명세서에 기재된 접합체에서, E에 연결된 물결선은 뉴라미니다제 저해제의 1개 이상(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20개)의 이량체가 Fc 도메인 단량체, Fc 도메인, Fc-결합 펩타이드, 알부민 단백질 또는 알부민 단백질-결합 펩타이드에 부착될 수 있다는 것을 나타낸다. 일부 실시형태에서, n이 1인 경우, 뉴라미니다제 저해제 1개 이상(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개)의 이량체가 Fc 도메인 단량체, Fc 도메인, Fc-결합 펩타이드, 알부민 단백질 또는 알부민 단백질-결합 펩타이드에 부착될 수 있다. 일부 실시형태에서, n이 2인 경우, 뉴라미니다제 저해제의 1개 이상(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20개)의 이량체가 Fc 도메인에 부착될 수 있다. 본 명세서에 기재된 접합체에서 물결선은 뉴라미니다제 저해제의 1개 이상의 이량체와 Fc 도메인 또는 알부민 단백질 내의 원자 간의 단일 결합으로 해석되어서는 안된다. 일부 실시형태에서, T가 1인 경우, 뉴라미니다제 저해제의 1개의 이량체가 Fc 도메인 단량체, Fc 도메인, Fc-결합 펩타이드, 알부민 단백질 또는 알부민 단백질-결합 펩타이드 내의 원자에 부착될 수 있다. 일부 실시형태에서, T가 2인 경우, 뉴라미니다제 저해제의 2개의 이량체가 Fc 도메인 단량체, Fc 도메인, Fc-결합 펩타이드, 알부민 단백질 또는 알부민 단백질-결합 펩타이드 내의 원자에 부착될 수 있다.
본 명세서에 추가로 기재된 바와 같이, 본 명세서에 기재된 접합체 내의 링커(예를 들어, L 또는 L')는 분지화 구조일 수 있다. 본 명세서에 추가로 기재된 바와 같이, 본 명세서에 기재된 접합체 내의 링커(예를 들어, L 또는 L')는 다가 구조일 수 있는데, 예를 들아 각각 2개 또는 3개의 아암을 갖는 2가 또는 3가일 수 있다. 일부 실시형태에서 링커가 3개의 아암을 갖는 경우, 아암 중 2개는 제1 및 제2 뉴라미니다제 저해제에 부착되고, 제3 아암은 Fc 도메인 단량체, Fc 도메인, Fc-결합 펩타이드, 알부민 단백질 또는 알부민 단백질-결합 펩타이드에 부착된다.
상기 화학식으로 표현되는 바와 같은, 뉴라미니다제 저해제의 1개 이상의 이량체에 공유 연결된 Fc 도메인을 갖는 접합체에서, n이 2인 경우, 2개의 Fc 도메인 단량체(각각의 Fc 도메인 단량체는 E로 표현됨)는 이량체화되어 Fc 도메인을 형성한다.
Fc 도메인 또는 알부민 단백질에 연결된 뉴라미니다제 저해제의 단량체의 접합체
일부 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 접합체는 뉴라미니다제 저해제의 1개 이상의 단량체에 공유 연결된 Fc 도메인 단량체, Fc 도메인, Fc-결합 펩타이드, 알부민 단백질 또는 알부민 단백질-결합 펩타이드를 포함한다. Fc 도메인 단량체 또는 알부민 단백질과 뉴라미니다제 저해제의 1개 이상 단량체의 접합체는 링커, 예컨대, 본 명세서에 기재된 링커 중 어느 하나를 통해서 뉴라미니다제 저해제의 단량체 각각에 Fc 도메인 또는 알부민 단백질을 연결함으로써 형성될 수 있다.
본 명세서에 기재된 뉴라미니다제 저해제의 1개 이상 단량체에 공유 연결된 Fc 도메인 또는 알부민 단백질을 갖는 접합체에서, E에 연결된 물결선은 뉴라미니다제 저해제의 1개 이상(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20개)의 단량체가 Fc 도메인 단량체, Fc 도메인, Fc-결합 펩타이드, 알부민 단백질 또는 알부민 단백질-결합 펩타이드에 부착될 수 있다는 것을 나타낸다. 일부 실시형태에서, n이 1인 경우, 뉴라미니다제 저해제의 1개 이상(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개)의 단량체는 Fc 도메인 단량체 또는 알부민 단백질에 부착될 수 있다. 일부 실시형태에서, n이 2인 경우, 뉴라미니다제 저해제의 1개 이상(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20개)의 단량체가 Fc 도메인에 부착될 수 있다. 본 명세서에 기재된 접합체에서 물결선은 뉴라미니다제 저해제의 1개 이상 단량체와 Fc 도메인 단량체, Fc 도메인, Fc-결합 펩타이드, 알부민 단백질 또는 알부민 단백질-결합 펩타이드 내의 원자 간의 단일 결합으로서 해석되어서는 안 된다. 일부 실시형태에서, T가 1인 경우, 뉴라미니다제 저해제의 1개의 단량체가 Fc 도메인 단량체, Fc 도메인, Fc-결합 펩타이드, 알부민 단백질 또는 알부민 단백질-결합 펩타이드 내의 원자에 부착될 수 있다. 일부 실시형태에서, T가 2인 경우, 뉴라미니다제 저해제의 2개의 단량체가 Fc 도메인 단량체, Fc 도메인, Fc-결합 펩타이드, 알부민 단백질 또는 알부민 단백질-결합 펩타이드 내의 원자에 부착될 수 있다.
일부 실시형태에서, T가 1을 초과하는 경우(예를 들어, T가 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20인 경우), 각각의 A1-L은 독립적으로 선택될 수 있다(예를 들어, 본 명세서에 기재된 A1-L 구조 중 임의의 것으로부터 독립적으로 선택될 수 있다). 일부 실시형태에서, E는 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 또는 그 초과의 상이한 A1-L 모이어티에 접합될 수 있다. 일부 실시형태에서, E는 제1 A1-L 모이어티 및 제2 A1-L, 모이어티에 접합된다. 일부 실시형태에서, 제1 A1-L 모이어티의 A1은 하기 화학식 (A-III) 내지 (A-V) 중 임의의 하나로부터 선택된다:
Figure pct00466
제2 A1-L 모이어티의 A1은 화학식 (A-I), (A-II), (A-VI), (A-VII), (A-VIII) 또는 (A-IX) 중 어느 하나로부터 선택된다:
Figure pct00467
일부 실시형태에서, 제1 A1-L 모이어티는 E의 라이신 잔기(예를 들어, E의 표면 노출된 라이신 잔기의 질소 원자)에 특이적으로 접합되고, 제2 A1-L 모이어티는 E의 시스테인 잔기(예를 들어, E의 표면 노출된 시스테인 잔기의 황 원자)에 특이적으로 접합된다. 일부 실시형태에서, 제1 A1-L 모이어티는 E의 시스테인 잔기(예를 들어, E의 표면 노출된 시스테인 잔기의 황 원자)에 특이적으로 접합되고, 제2 A1-L 모이어티는 E의 라이신 잔기(예를 들어, E의 표면 노출된 라이신 잔기의 질소 원자)에 특이적으로 접합된다.
본 명세서에 추가로 기재된 바와 같이, 본 명세서에 기재된 뉴라미니다제 저해제의 1개 이상 단량체에 공유 연결된 Fc 도메인 단량체, Fc 도메인, Fc-결합 펩타이드, 알부민 단백질 또는 알부민 단백질-결합 펩타이드를 갖는 접합체 내의 링커(예를 들어, L 또는 L')는 2개의 아암을 갖는 2가 구조일 수 있다. 2가 링커 내의 1개의 아암은 뉴라미니다제 저해제의 단량체에 부착될 수 있고, 다른 아암은 Fc 도메인 단량체, Fc 도메인, Fc-결합 펩타이드, 알부민 단백질 또는 알부민 단백질-결합 펩타이드에 부착될 수 있다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에 제공된 뉴라미니다제 저해제의 1개 이상 단량체에 공유 연결된 Fc 도메인 단량체, Fc 도메인, Fc-결합 펩타이드, 알부민 단백질 또는 알부민 단백질-결합 펩타이드를 함유하는 접합체는 하기 화학식 중 임의의 하나 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염에 의해서 기재된다:
Figure pct00468
Figure pct00469
Figure pct00470
Figure pct00471
Figure pct00472
Figure pct00473
Figure pct00474
Figure pct00475
Figure pct00476
Figure pct00477
Figure pct00478
Figure pct00479
Figure pct00480
Figure pct00481
Figure pct00482
Figure pct00483
Figure pct00484
Figure pct00485
Figure pct00486
Figure pct00487
Figure pct00488
Figure pct00489
Figure pct00490
Figure pct00491
또는
Figure pct00492
.
상기 화학식으로 표현되는 바와 같은, 뉴라미니다제 저해제의 1개 이상의 단량체에 공유 연결된 Fc 도메인을 갖는 접합체에서, n이 2인 경우, 2개의 Fc 도메인 단량체(각각의 Fc 도메인 단량체는 E로 표현됨)는 이량체화되어 Fc 도메인을 형성한다.
자나미비어 또는 이의 유사체를 포함하는 접합체의 위치이성질체
접합체(예를 들어, 본 명세서에서 상세하게 기재된 바와 같은 단량체 또는 이량체 접합체)는 혼합물 또는 위치이성질체로서 제조될 수 있다. 특정 위치이성질체 또는 위치이성질체의 혼합물은 합성 용이성, 열안정성, 산화 안정성, 약동학(예를 들어, 대사 안정성 및 생체이용률), 효과기 결합 또는 치료 효능과 같은 이유로 인해서 바람직할 수 있다.
일부 실시형태에서, 본 발명의 접합체는 자나미비어 또는 이의 유사체(예를 들어, (A-I), (A-II), (A-VI), (A-VII), (A-VIII), (A-IX) 또는 (A-X) 중 임의의 것)를 포함한다. 자나미비어 또는 이의 유사체는 (예를 들어, 링커의 방식으로) 예를 들어, C7 위치를 통해서(예를 들어, (A-I), (A-II) 또는 (A-X) 참고) 또는 C9 위치를 통해서(예를 들어, (A-VI) 또는 (A-VII) 참고) Fc 도메인 또는 알부민 단백질에 접합될 수 있다:
Figure pct00493
Figure pct00494
.
본 개시내용은 단량체 접합체의 집단(예를 들어, 화학식 (M-I)의 접합체의 집단)을 포함하며, 여기서 접합체의 집단은 본 명세서에 기재된 단량체 접합체 중 임의의 것 및 이의 상응하는 위치이성질체 중 1개 이상을 포함한다. 예를 들어, 접합체의 집단은(1) (예를 들어, 링커의 방식으로) C7 위치에서 Fc 도메인 또는 알부민 단백질에 접합된 자나미비어 또는 이의 유사체, 및 (2) (예를 들어, 링커의 방식으로) C9 위치에서 Fc 도메인 또는 알부민 단백질에 접합된 자나미비어 또는 이의 유사체를 포함할 수 있다.
단량체 접합체의 집단은 C7-연결된 접합체 대 C9-연결된 접합체의 명시된 비를 가질 수 있다. 예를 들어, 접합체의 집단은 실질적으로 100%의 C-7 연결된 접합체 및 실질적으로 0%의 C-9 연결된 접합체를 가질 수 있다. 접합체의 집단은 약 95%의 C-7 연결된 접합체 및 약 5%의 C-9 연결된 접합체를 가질 수 있다. 접합체의 집단은 약 90%의 C-7 연결된 접합체 및 약 10%의 C-9 연결된 접합체를 가질 수 있다. 접합체의 집단은 약 85%의 C-7 연결된 접합체 및 약 15%의 C-9 연결된 접합체를 가질 수 있다. 접합체의 집단은 약 80%의 C-7 연결된 접합체 및 약 20%의 C-9 연결된 접합체를 가질 수 있다. 접합체의 집단은 약 75%의 C-7 연결된 접합체 및 약 25%의 C-9 연결된 접합체를 가질 수 있다. 접합체의 집단은 약 70%의 C-7 연결된 접합체 및 약 30%의 C-9 연결된 접합체를 가질 수 있다. 접합체의 집단은 약 65%의 C-7 연결된 접합체 및 약 35%의 C-9 연결된 접합체를 가질 수 있다. 접합체의 집단은 약 60%의 C-7 연결된 접합체 및 약 40%의 C-9 연결된 접합체를 가질 수 있다. 접합체의 집단은 약 55%의 C-7 연결된 접합체 및 약 45%의 C-9 연결된 접합체를 가질 수 있다. 접합체의 집단은 약 50%의 C-7 연결된 접합체 및 약 50%의 C-9 연결된 접합체를 가질 수 있다. 접합체의 집단은 약 45%의 C-7 연결된 접합체 및 약 55%의 C-9 연결된 접합체를 가질 수 있다. 접합체의 집단은 약 40%의 C-7 연결된 접합체 및 약 60%의 C-9 연결된 접합체를 가질 수 있다. 접합체의 집단은 약 35%의 C-7 연결된 접합체 및 약 65%의 C-9 연결된 접합체를 가질 수 있다. 접합체의 집단은 약 30%의 C-7 연결된 접합체 및 약 70%의 C-9 연결된 접합체를 가질 수 있다. 접합체의 집단은 약 25%의 C-7 연결된 접합체 및 약 75%의 C-9 연결된 접합체를 가질 수 있다. 접합체의 집단은 약 20%의 C-7 연결된 접합체 및 약 80%의 C-9 연결된 접합체를 가질 수 있다. 접합체의 집단은 약 15%의 C-7 연결된 접합체 및 약 85%의 C-9 연결된 접합체를 가질 수 있다. 접합체의 집단은 약 10%의 C-7 연결된 접합체 및 약 90%의 C-9 연결된 접합체를 가질 수 있다. 접합체의 집단은 실질적으로 0%의 C-7 연결된 접합체 및 실질적으로 100%의 C-9 연결된 접합체를 가질 수 있다.
접합체의 집단은 99%, 98%, 97%, 96%, 95%, 90%, 85%, 80%, 75%, 70%, 60%, 65%, 60%, 55% 또는 50% 초과의 C7-연결된 접합체를 가질 수 있다.
접합체의 집단은 50%, 40%, 30%, 25%, 20%, 15%, 10%, 5%, 4%, 3%, 2% 또는 1% 미만의 C9-연결된 접합체를 가질 수 있다.
본 개시내용은 또한 이량체 접합체의 집단(예를 들어, 화학식 (D-I)의 접합체의 집단)을 포함하며, 여기서 접합체의 집단은 본 명세서에 기재된 이량체 접합체 중 임의의 것 및 이의 상응하는 위치이성질체 중 1개 이상을 포함한다. 예를 들어, 접합체의 집단은 (1) C7-C7 이량체(예를 들어, 이량체의 자나미비어 또는 이의 유사체 모이어티 둘 다는 (예를 들어, 링커의 방식으로) 이의 각각의 C7 위치에서 Fc 도메인 또는 알부민 단백질에 접합됨), (2) C9-C9 이량체(예를 들어, 이량체의 자나미비어 또는 이의 유사체 모이어티 둘 다는 (예를 들어, 링커의 방식으로) 이의 각각의 C9 위치에서 Fc 도메인 또는 알부민 단백질에 접합됨), 및/또는 (3) C7-C7 이량체(예를 들어, 1개의 자나미비어 또는 이의 유사체 모이어티는 (예를 들어, 링커의 방식으로) 이의 C7 위치를 통해서 Fc 도메인 또는 알부민 단백질에 접합되고, 다른 자나미비어 또는 이의 유사체 모이어티는 (예를 들어, 링커의 방식으로) C9 위치를 통해서 Fc 도메인 또는 알부민 단백질에 접합됨)를 포함할 수 있다.
이량체 접합체의 집단은 C7-C7 연결된 접합체 대 C7-C9 연결된 접합체 대 C9-C9 연결된 접합체의 명시된 비를 가질 수 있다. 예를 들어, 접합체의 집단은 실질적으로 100%의 C7-C7 연결된 접합체, 및 실질적으로 0%의 C7-C9 또는 C9-C9 연결된 접합체를 가질 수 있다. 접합체의 집단은 실질적으로 100%의 C9-C9 연결된 접합체, 및 실질적으로 0%의 C7-C7 또는 C7-C9 연결된 접합체를 가질 수 있다. 접합체의 집단은 실질적으로 100%의 C7-C9 연결된 접합체, 및 실질적으로 0%의 C7-C7 또는 C9-C9 연결된 접합체를 가질 수 있다.
접합체의 집단은 99%, 98%, 97%, 96%, 95%, 90%, 85%, 80%, 75%, 70%, 60%, 65%, 60%, 55% 또는 50% 초과의 C7-C7 연결된 접합체를 가질 수 있다.
접합체의 집단은 50%, 40%, 30%, 25%, 20%, 15%, 10%, 5%, 4%, 3%, 2% 또는 1% 미만의 C9-C9 연결된 접합체를 가질 수 있다.
접합체의 집단은 50%, 40%, 30%, 25%, 20%, 15%, 10%, 5%, 4%, 3%, 2% 또는 1% 미만의 C7-C9 연결된 접합체를 가질 수 있다.
위치이성질체의 상기에 기재된 집단 중 임의의 것의 경우, (예를 들어, (M-I) 또는 (D-I)의) A1 및/또는 A2는 본 명세서에 기재된 자나미비어 또는 자나미비어 유사체 중 임의의 것(예를 들어, (A-I), (A-II), (A-VI), (A-VII), (A-VIII), (A-IX) 또는 (A-X) 중 임의의 것)으로부터 선택될 수 있다. 특히, C7-연결된 자나미비어 또는 이의 유사체는 (A-I), (A-II) 및 (A-X)로 기재되고, C9-연결된 자나미비어 또는 이의 유사체는 (A-VI) 또는 (A-VII)로 기재된다. 위치이성질체, 예를 들어, C7, C9, C7-C7, C7-C9 및 C9-C9 연결된 위치이성질체의 예시적인 제조 방법은 실시예 100 내지 103, 123 및 124에 기재되어 있다. 일부 예에서, 95% 초과, 96% 초과, 97% 초과, 98% 초과, 99% 초과 또는 실질적으로 100%의 C7 연결된 단량체 접합체 또는 C7-C7 연결된 이량체 접합체를 갖는 것이 바람직할 수 있다. 이러한 예에서, 실질적으로 C7 연결된 단량체 또는 C7-C7 연결된 이량체 중간체를 형성하는 방법, 예컨대, 예를 들어, 실시예 103 및 123에 기재된 방법으로 중간체를 제조하는 것이 바람직하다. 실시예 103의 방법은 C7 또는 C7-C7 연결된 중간체를 주로 달성하는데 사용되는 예시적인 방법이며, 본 명세서에 기재된 임의의 중간체를 제조하는데 사용될 수 있다.
바람직한 실시형태에서, 접합체는 화학식 (D-I) 내지 (D-X), (D'-I), (M-I) 내지 (M-X) 또는 (M'-I) 중 어느 하나의 접합체이고, 식 중 A1 및/또는 A2는 화학식 (A-I), (A-II) 또는 (A-X)로 기재되며, Y는
Figure pct00495
Figure pct00496
이고, R7은 H, C1-C20 알킬, C3-C20 사이클로알킬, C3-C20 헤테로사이클로알킬; C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택된다. 바람직한 실시형태에서, A1 및/또는 A2는 화학식 (A-I)(예를 들어, 자나미비어)로 기재된다. 바람직한 실시형태에서, R7은 C1-C20 알킬(예를 들어, -CH3, -CH2CH3, -CH2CH2CH3)이다. 이러한 접합체는 C7-링키지의 증가된 안정성을 나타내어, 더 적은 C7에서 C9로의 이동을 초래하는 것으로 밝혀져 있다. 따라서 생성된 생성물은 보다 균질하고, 증가된 효능을 나타낼 것이라고 예측된다.
III. Fc 도메인 단량체 및 Fc 도메인
Fc 도메인 단량체는 힌지 도메인, CH2 항체 불변 도메인 및 CH3 항체 불변 도메인을 포함한다. Fc 도메인 단량체는 면역글로불린 항체 아이소타입 IgG, IgE, IgM, IgA 또는 IgD를 가질 수 있다. Fc 도메인 단량체는 또한 임의의 면역글로불린 항체 아이소타입(예를 들어, IgG1, IgG2a, IgG2b, IgG3 또는 IgG4)을 가질 수 있다. Fc 도메인 단량체는 임의의 면역글로불린 항체 알로타입(예를 들어, IGHG1*01(즉, G1m(za)), IGHG1*07(즉, G1m(zax)), IGHG1*04(즉, G1m(zav)), IGHG1*03 (G1m(f)), IGHG1*08(즉, G1m(fa)), IGHG2*01, IGHG2*06, IGHG2*02, IGHG3*01, IGHG3*05, IGHG3*10, IGHG3*04, IGHG3*09, IGHG3*11, IGHG3*12, IGHG3*06, IGHG3*07, IGHG3*08, IGHG3*13, IGHG3*03, IGHG3*14, IGHG3*15, IGHG3*16, IGHG3*17, IGHG3*18, IGHG3*19, IGHG2*04, IGHG4*01, IGHG4*03, 또는 IGHG4*02)(예를 들어, 문헌[Vidarsson et al. IgG subclasses 및 allotypes: from structure to effector function. Frontiers in Immunology. 5(520):1-17 (2014)]에 기재된 바와 같음)을 가질 수 있다. Fc 도메인 단량체는 임의의 종, 예를 들어, 인간, 뮤린 또는 마우스로부터 유래될 수 있다. Fc 도메인 단량체의 이량체는 백혈구의 표면 상에 위치된 수용체인 Fc 수용체에 결합할 수 있는 Fc 도메인이다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 접합체에서 Fc 도메인 단량체는 서열번호 1 내지 68 중 어느 하나의 서열을 갖는 Fc 도메인 단량체에 비해서 1개 이상의 아미노산 치환, 부가 및/또는 결실을 함유할 수 있다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 바와 같은 접합체에서 Fc 도메인 단량체 내의 Asn은 N-연결된 글리코실화를 예방하기 위해서 Ala에 의해서 대체될 수 있다(예를 들어, 서열번호 12 내지 15 참고, 여기서 Asn 대 Ala 치환은 *로 표지됨). 일부 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 접합체에서 Fc 도메인 단량체는 또한 추가적인 Cys 부가를 함유할 수 있다(예를 들어, 서열번호 9, 10 및 11 참고, 여기서 Cys 부가는 *로 표지됨).
일부 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 바와 같은 접합체 내의 Fc 도메인 단량체는 Fc 도메인 단량체의 N- 또는 C-말단에 부착된 추가적인 모이어티, 예를 들어, 알부민-결합 펩타이드, 정제 펩타이드(예를 들어, 헥사-히스티딘 펩타이드(HHHHHH(서열번호 72)) 또는 신호 서열(예를 들어, IL2 신호 서열 MYRMQLLSCIALSLALVTNS(서열번호 73))을 포함한다. 일부 실시형태에서, 접합체 내의 Fc 도메인 단량체는 임의의 유형의 항체 가변 영역, 예를 들어, VH, VL, 상보성 결정 영역(CDR) 또는 초가변 영역(HVR)을 함유하지 않는다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 바와 같은 접합체 내의 Fc 도메인 단량체는 하기에 제시된 서열번호 1 내지 68 중 어느 하나의 서열과 적어도 95% 동일한(예를 들어, 97%, 99% 또는 99.5% 동일한) 서열을 가질 수 있다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 바와 같은 접합체 내의 Fc 도메인 단량체는 하기에 제시된 서열번호 1 내지 68 중 어느 하나의 서열을 가질 수 있다.
서열번호 1: N-말단에 IL2 신호 서열(볼드체)을 갖는 뮤린 Fc-IgG2a
MYRMQLLSCIALSLALVTNSPRGPTIKPCPPCKCPAPNLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVDVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYNSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPAPIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLTCMVTDFMPEDIYVEWTNNGKTELNYKNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTPGK
서열번호 2: 성숙 뮤린 Fc-IgG2a
PRGPTIKPCPPCKCPAPNLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVDVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYNSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPAPIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLTCMVTDFMPEDIYVEWTNNGKTELNYKNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTPGK
서열번호 3: N-말단에 IL2 신호 서열(볼드체)을 갖고, N-말단 MVRS 아미노산 잔기(밑줄)가 추가된 인간 Fc-IgG1
MYRMQLLSCIALSLALVTNS MVRSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
서열번호 4: N-말단 MVRS 아미노산 잔기(밑줄)가 추가된 성숙 인간 Fc-IgG1
MVRSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
서열번호 5: N-말단에 IL2 신호 서열(볼드체)을 갖고, C-말단에 헥사-히스티딘 펩타이드(이탤릭체)를 갖는 뮤린 Fc-IgG2a
MYRMQLLSCIALSLALVTNSPRGPTIKPCPPCKCPAPNLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVDVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYNSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPAPIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLTCMVTDFMPEDIYVEWTNNGKTELNYKNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTPGKHHHHHH
서열번호 6: C-말단에 헥사-히스티딘 펩타이드(이탤릭체)를 갖는 성숙 뮤린 Fc-IgG2a
PRGPTIKPCPPCKCPAPNLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVDVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYNSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPAPIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLTCMVTDFMPEDIYVEWTNNGKTELNYKNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTPGKHHHHHH
서열번호 7: N-말단에 IL2 신호 서열(볼드체)을 갖고, N-말단 MVRS 아미노산 잔기(밑줄)가 추가되고, C-말단에 헥사-히스티딘 펩타이드(이탤릭체)를 갖는 인간 Fc-IgG1
MYRMQLLSCIALSLALVTNS MVRSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKHHHHHH
서열번호 8: C-말단에 헥사-히스티딘 펩타이드(이탤릭체)를 갖고, N-말단에 MVRS 아미노산 잔기(밑줄)가 추가된 성숙 인간 Fc-IgG1
MVRSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKHHHHHH
서열번호 9: N-말단에 IL2 신호 서열(볼드체)을 갖고, N-말단 MVRS 아미노산 잔기(밑줄)가 추가되고, 힌지 영역에 2개의 추가적인 시스테인(*)을 갖고, C-말단에 헥사-히스티딘 펩타이드(이탤릭체)를 갖는 인간 Fc-IgG1
MYRMQLLSCIALSLALVTNS MVRSDKTHTCPPCPPC*KC*PAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKHHHHHH
서열번호 10: N-말단 MVRS 아미노산 잔기(밑줄)가 추가되고, 힌지 영역에 2개의 추가적인 시스테인(*)을 갖고, C-말단에 헥사-히스티딘 펩타이드(이탤릭체)를 갖는 성숙 인간 Fc-IgG1
MVRSDKTHTCPPCPPC*KC*PAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKHHHHHH
서열번호 11: N-말단 MVRS 아미노산 잔기(밑줄)가 추가되고, 힌지 영역에 2개의 추가적인 시스테인(*)을 갖는 성숙 인간 Fc-IgG1
MVRSDKTHTCPPCPPC*KC*PAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
서열번호 12: N-말단에 IL2 신호 서열(볼드체)을 갖고, Asn 대 Ala 치환(*)을 갖고, C-말단에 헥사-히스티딘 펩타이드(이탤릭체)를 갖는 뮤린 Fc-IgG2a
MYRMQLLSCIALSLALVTNSPRGPTIKPCPPCKCPAPNLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVDVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYA*STLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPAPIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLTCMVTDFMPEDIYVEWTNNGKTELNYKNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTPGKHHHHHH
서열번호 13: Asn 대 Ala 치환(*)을 갖고, C-말단에 헥사-히스티딘 펩타이드(이탤릭체)를 갖는 뮤린 Fc-IgG2a
PRGPTIKPCPPCKCPAPNLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVDVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYA*STLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPAPIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLTCMVTDFMPEDIYVEWTNNGKTELNYKNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTPGKHHHHHH
서열번호 14: N-말단에 IL2 신호 서열(볼드체)을 갖고, N-말단 MVRS 아미노산 잔기(밑줄)가 추가되고, Asn 대 Ala 치환(*)을 갖고, C-말단에 헥사-히스티딘 펩타이드(이탤릭체)를 갖는 인간 Fc-IgG1
MYRMQLLSCIALSLALVTNS MVRSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYA*STYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKHHHHHH
서열번호 15: Asn 대 Ala 치환(*)을 갖고, N-말단 MVRS 아미노산 잔기(밑줄)가 추가되고, C-말단에 헥사-히스티딘 펩타이드(이탤릭체)를 갖는 성숙 인간 Fc-IgG1
MVRSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYA*STYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKHHHHHH
서열번호 16: N-말단에 인간 혈청 알부민 신호 서열(볼드체)을 갖고, N-말단 ISAMVRS 아미노산 잔기(밑줄)가 추가된 인간 IgG1 Fc
MKWVTFISLLFLFSSAYS ISAMVRSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
서열번호 17: N-말단에 인간 혈청 알부민 신호 서열(볼드체)을 갖고, N-말단 ISAMVRS 아미노산 잔기(밑줄)가 추가되고, C-말단 G4S 링커(이탤릭체) 및 C-말단 c-Myc 태그(밑줄, 이탤릭체)를 갖는 인간 IgG1 Fc
MKWVTFISLLFLFSSAYS ISAMVRSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGGS EQKLISEEDL
서열번호 18: N-말단 ISAMVRS 아미노산 잔기(밑줄)가 추가되고, C-말단 G4S 링커(이탤릭체) 및 C-말단 c-Myc 태그(밑줄, 이탤릭체)를 갖는 성숙 인간 IgG1 Fc
ISAMVRSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGGS EQKLISEEDL
서열번호 19: 인간 혈청 알부민 신호 서열(볼드체)을 갖고, N-말단 ISAMVRS 아미노산 잔기(밑줄)가 추가되고, 이 부위에서 라이신 접합을 예방하기 위한 라이신 대 세린 변형(*)을 갖는 인간 IgG1 Fc
MKWVTFISLLFLFSSAYS ISAMVRSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPS*DTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
서열번호 20: N-말단 ISAMVRS 아미노산 잔기(밑줄)가 추가되고, 이 부위에서 라이신 접합을 예방하기 위한 라이신 대 세린 변형(*)을 갖는 성숙 인간 IgG1 Fc
ISAMVRSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPS*DTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
서열번호 21: N-말단에 인간 혈청 알부민 신호 서열(볼드체)을 갖고, N-말단 ISAMVRS 아미노산 잔기(밑줄)가 추가되고, 이 부위에서 라이신 접합을 예방하기 위한 라이신 대 세린 변형(*)을 갖고, C-말단 G4S 링커(이탤릭체) 및 C-말단 c-Myc 태그(밑줄, 이탤릭체)를 갖는 인간 IgG1 Fc
MKWVTFISLLFLFSSAYS ISAMVRSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPS(*)DTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGGS EQKLISEEDL
서열번호 22: N-말단 ISAMVRS 아미노산 잔기(밑줄)가 추가되고, 이 부위에서 라이신 접합을 예방하기 위한 라이신 대 세린 변형(*)을 갖고, C-말단 G4S 링커(이탤릭체) 및 C-말단 c-Myc 태그(밑줄, 이탤릭체)를 갖는 성숙 인간 IgG1 Fc
ISAMVRSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPS(*)DTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGGS EQKLISEEDL
서열번호 23: N-말단에 인간 혈청 알부민 신호 서열(볼드체)을 갖고, N-말단 ISAMVRS 아미노산 잔기(밑줄)가 추가되고, Asn 대 Ala 치환(*)을 갖고, C-말단 G4S 링커(이탤릭체) 및 C-말단 C-myc 태그(밑줄, 이탤릭체)를 갖는 인간 IgG1 Fc
MKWVTFISLLFLFSSAYS ISAMVRSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYA(*)STYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGGS EQKLISEEDL
서열번호 24: N-말단 ISAMVRS 아미노산 잔기(밑줄)가 추가되고, Asn 대 Ala 치환(*)을 갖고, C-말단 G4S 링커(이탤릭체) 및 C-말단 C-myc 태그(밑줄, 이탤릭체)를 갖는 성숙 인간 IgG1 Fc
ISAMVRSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYA(*)STYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGGS EQKLISEEDL
서열번호 25: N-말단에 인간 혈청 알부민 신호 서열(볼드체)을 갖고, N-말단 ISAMVRS 아미노산 잔기(밑줄)가 추가되고, FcRn 결합을 지연시키기 위한 H310A(*) 및 H435A(*) 돌연변이, C-말단 G4S(이탤릭체) 및 C-말단 C-myc 태그(밑줄, 이탤릭체)를 갖는 인간 IgG1 Fc
MKWVTFISLLFLFSSAYS ISAMVRSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLA(*)QDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKA(*)KGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNAYTQKSLSLSPGGGGGS EQKLISEEDL
서열번호 26: N-말단에 인간 혈청 알부민 신호 서열(볼드체)을 갖고, N-말단 ISAMVRS 아미노산 잔기(밑줄)가 추가되고, FcRn 결합을 지연시키기 위한 H310A(*) 및 H435A(*) 돌연변이, C-말단 G4S(이탤릭체) 및 C-말단 C-myc 태그(밑줄, 이탤릭체)를 갖는 성숙 인간 IgG1 Fc
ISAMVRSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLA(*)QDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKA(*)KGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNAYTQKSLSLSPGGGGGS EQKLISEEDL
서열번호 27: N-말단에 인간 혈청 알부민 신호 서열(볼드체)을 갖고, N-말단 ISAMVRS 아미노산 잔기(밑줄)가 추가되고, C-말단 G4S 링커(이탤릭체) 및 C-말단 돌연변이된(라이신 대 페닐알라닌, 볼드체) C-myc 태그(밑줄, 이탤릭체)를 갖는 인간 IgG1 Fc
MKWVTFISLLFLFSSAYS ISAMVRSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGGS EQ F LISEEDL
서열번호 28: N-말단 ISAMVRS 아미노산 잔기(밑줄)가 추가되고, C-말단 G4S 링커(이탤릭체) 및 C-말단 돌연변이된(라이신 대 페닐알라닌, 볼드체) C-myc 태그(밑줄, 이탤릭체)를 갖는 성숙 인간 IgG1 Fc
ISAMVRSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGGS EQ F LISEEDL
서열번호 29: N-말단에 인간 혈청 알부민 신호 서열(볼드체)을 갖고, N-말단 ISAMVRS 아미노산 잔기(밑줄)가 추가되고, Asn 대 Ala 치환(*), C-말단 G4S 링커(이탤릭체) 및 C-말단 돌연변이된(라이신 대 페닐알라닌, 볼드체) C-myc 태그(밑줄, 이탤릭체)를 갖는 인간 IgG1 Fc
MKWVTFISLLFLFSSAYS ISAMVRSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYA(*)STYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGGS EQ F LISEEDL
서열번호 30: N-말단 MVRS 아미노산 잔기(밑줄)가 추가되고, Asn 대 Ala 치환(*), C-말단 G4S 링커(이탤릭체) 및 C-말단 돌연변이된(라이신 대 페닐알라닌, 볼드체) C-myc 태그(밑줄, 이탤릭체)를 갖는 성숙 인간 IgG1 Fc
ISAMVRSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYA(*)STYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGGS EQ F LISEEDL
서열번호 31: N-말단에 인간 혈청 알부민 신호 서열(볼드체), 알로타입 G1m(fa)(볼드체 이탤릭체), C-말단 G4S 링커(이탤릭체), 및 돌연변이된 C-말단(라이신 대 페닐알라닌, 볼드체) C-myc 태그(밑줄)를 갖는 인간 IgG1 Fc
MKWVTFISLLFLFSSAYSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR D E L TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGGS EQFLISEEDL
서열번호 32: N-말단에 인간 혈청 알부민 신호 서열(볼드체), 알로타입 G1m(fa)(볼드체 이탤릭체)을 갖는 인간 IgG1 Fc
MKWVTFISLLFLFSSAYSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR D E L TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
서열번호 33: YTE 삼중 돌연변이(볼드체 및 밑줄)를 갖고, N-말단 MVRS 아미노산 잔기(밑줄)가 추가된 성숙 인간 IgG1 Fc
MVRSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTL Y I T R E PEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
서열번호 34: N-말단에 인간 혈청 알부민 신호 서열(볼드체)을 갖고, 성숙 인간 IgG1 Fc의 N-말단 상에 전체 힌지 영역을 포함하는 잔기 EPKSS(밑줄)를 함유하고, Cys 대 Ser 치환(#), 알로타입 G1m(fa)(볼드체 이탤릭체)을 갖는 인간 IgG1 Fc
MKWVTFISLLFLFSSAYS EPKSS(#)DKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR D E L TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
서열번호 35: N-말단에 뮤린 IgG 신호 서열(볼드체)을 갖고, 성숙 인간 IgG1 Fc의 N-말단으로부터 EPKSSD 힌지 잔기가 제거되고, 알로타입 G1m(fa)(볼드체 이탤릭체)을 갖는 인간 IgG1 Fc
MGWSCIILFLVATATGVHSKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR D E L TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
서열번호 36: YTE 삼중 돌연변이(볼드체 및 밑줄)를 갖고, 성숙 인간 IgG1 Fc의 N-말단으로부터 EPKSSD 힌지 잔기가 제거되고, 알로타입 G1m(fa)(볼드체 이탤릭체)을 갖는 성숙 인간 IgG1 Fc
KTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTL Y I T R E PEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR D E
L TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
서열번호 37:LS 이중 돌연변이(볼드체 및 밑줄)를 갖고, 성숙 인간 IgG1 Fc의 N-말단으로부터 EPKSSD 힌지 잔기가 제거되고, 알로타입 G1m(fa)(볼드체 이탤릭체)을 갖는 성숙 인간 IgG1 Fc
KTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR D E L TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSV L HEALH S HYTQKSLSLSPGK
서열번호 38: N-말단에 인간 혈청 알부민 신호 서열(볼드체), YTE 삼중 돌연변이(볼드체 및 밑줄), 알로타입 G1m(fa)(볼드체 이탤릭체), C-말단 G4S 링커(이탤릭체), 및 C-말단 C-myc 태그(밑줄)를 갖는 성숙 인간 IgG1 Fc
MKWVTFISLLFLFSSAYSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTL Y I T R E PEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR D E L TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGGS EQKLISEEDL
서열번호 39: 성숙 인간 Fc IgG1, 여기서 X1은 Met 또는 Trp이고, X2는 Ser 또는 Thr이고, X3은 Thr 또는 Glu이고, X4는 Asp 또는 Glu이고, X5는 Leu 또는 Met이고, X6은 Met 또는 Leu이고, X7은 Asn 또는 Ser임
DKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLX 1 IX 2 RX 3 PEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRX 4 EX 5 TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVX 6 HEALHX 7 HYTQKSLSLSPG
서열번호 40: 성숙 인간 Fc IgG1, 여기서 X4는 Asp 또는 Glu이고, X5는 Leu 또는 Met임
DKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRX 4 EX 5 TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
서열번호 41: YTE 삼중 돌연변이(볼드체 및 밑줄)를 갖는 성숙 인간 Fc IgG1, 여기서 X4는 Asp 또는 Glu이고, X5는 Leu 또는 Met임
DKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTL Y I T R E PEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRX 4 EX 5 TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
서열번호 42: YTE 삼중 돌연변이(볼드체 및 밑줄)를 갖는 성숙 인간 Fc IgG1, 알로타입 G1m(fa)(볼드체 이탤릭체)
DKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTL Y I T R E PEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR D E L TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
서열번호 43: YTE 삼중 돌연변이(볼드체 및 밑줄), 알로타입 G1m(f)(볼드체 이탤릭체)을 갖는 성숙 인간 Fc IgG1
DKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTL Y I T R E PEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR E E M TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
서열번호 44: LS 이중 돌연변이(볼드체 및 밑줄)를 갖는 성숙 인간 Fc IgG1, 여기서 X4는 Asp 또는 Glu이고, 및 X5는 Leu 또는 Met임
DKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRX 4 EX 5 TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSV L HEALH S HYTQKSLSLSPG
서열번호 45: LS 이중 돌연변이(볼드체 및 밑줄), 알로타입 G1m(fa)(볼드체 이탤릭체)를 갖는 성숙 인간 Fc IgG1
DKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR D E L TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSV L HEALH S HYTQKSLSLSPG
서열번호 46: LS 이중 돌연변이(볼드체 및 밑줄), 알로타입 G1m(f)(볼드체 이탤릭체)을 갖는 성숙 인간 Fc IgG1,
DKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR E E M TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSV L HEALH S HYTQKSLSLSPG
서열번호 47: 마우스 중쇄 MIgG Vh 신호 서열(볼드체)을 갖고, Cys 대 Ser 치환(#)을 갖는 성숙 인간 Fc IgG1, 여기서 X1은 Met 또는 Trp이고, X2는 Ser 또는 Thr이고, X3은 Thr 또는 Glu이고, X4는 Asp 또는 Glu이고, X5는 Leu 또는 Met이고, X6은 Met 또는 Leu이고, X7은 Asn 또는 Ser임
MGWSCIILFLVATATGVHSNVNHKPSNTKVDKKVEPKSS(#)DKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLX 1 IX 2 RX 3 PEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRX 4 EX 5 TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVX 6 HEALHX 7 HYTQKSLSLSPG
서열번호 48: 마우스 중쇄 MIgG Vh 신호 서열(볼드체)을 갖고, Cys 대 Ser 치환(#)을 갖고, 알로타입 G1m(fa)(볼드체 이탤릭체)을 갖는 성숙 인간 IgG1 Fc
MGWSCIILFLVATATGVHSNVNHKPSNTKVDKKVEPKSS(#)DKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR D E L TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
서열번호 49: 마우스 중쇄 MIgG Vh 신호 서열(볼드체), Cys 대 Ser 치환(#), 알로타입 G1m(f)(볼드체 이탤릭체)을 갖는 성숙 인간 IgG1 Fc
MGWSCIILFLVATATGVHSNVNHKPSNTKVDKKVEPKSS(#)DKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR E E M TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
서열번호 50: 마우스 중쇄 MIgG Vh 신호 서열(볼드체), Cys 대 Ser 치환(#), M428L, N434S 돌연변이(볼드체/밑줄), 알로타입 G1m(fa)(볼드체 이탤릭체)를 갖는 성숙 인간 IgG1 Fc
MGWSCIILFLVATATGVHSNVNHKPSNTKVDKKVEPKSS(#)DKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR D E L TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSV L HEALH S HYTQKSLSLSPGK
서열번호 51: 마우스 중쇄 MIgG Vh 신호 서열(볼드체), Cys 대 Ser 치환(#), M428L, N434S 돌연변이(볼드체/밑줄), 알로타입 G1m(f)(볼드체 이탤릭체)을 갖는 성숙 인간 IgG1 Fc
MGWSCIILFLVATATGVHSNVNHKPSNTKVDKKVEPKSS(#)DKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR E E M TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSV L HEALH S HYTQKSLSLSPGK
서열번호 52: 마우스 중쇄 MIgG Vh 신호 서열(볼드체), Cys 대 Ser 치환(#), YTE 삼중 돌연변이(볼드체 및 밑줄), 알로타입 G1m(fa)(볼드체 이탤릭체)를 갖는 성숙 인간 IgG1 Fc
MGWSCIILFLVATATGVHSNVNHKPSNTKVDKKVEPKSS(#)DKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTL Y I T R E PEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR D E L TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
서열번호 53: 마우스 중쇄 MIgG Vh 신호 서열(볼드체), Cys 대 Ser 치환(#), YTE 삼중 돌연변이(볼드체 및 밑줄), 알로타입 G1m(f)(볼드체 이탤릭체)을 갖는 성숙 인간 IgG1 Fc
MGWSCIILFLVATATGVHSNVNHKPSNTKVDKKVEPKSS(#)DKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTL Y I T R E PEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR E E M TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
　서열번호 54: 마우스 중쇄 MIgG Vh 신호 서열(볼드체)을 갖고, N-말단 ISAMVRS 아미노산 잔기가 추가되고(이탤릭체), M428L, N434S 돌연변이(볼드체/밑줄), G4S 링커(이탤릭체), 및 C-말단 C-myc-tag (밑줄), 알로타입 G1m(f)(볼드체 이탤릭체)을 갖는 성숙 인간 IgG1 Fc
MGWSCIILFLVATATGVHS ISAMVRSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR E E M TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSV L HEALH S HYTQKSLSLSPGGGGGS EQKLISEEDL
서열번호 55: 마우스 중쇄 MIgG Vh 신호 서열(볼드체)을 갖고, N-말단 ISAMVRS 아미노산 잔기(이탤릭체)가 추가되고, M428L, N434S 돌연변이(볼드체/밑줄), G4S 링커(이탤릭체), C-말단 C-myc-태그(밑줄), 알로타입 G1m(fa)(볼드체 이탤릭체)을 갖는 성숙 인간 IgG1 Fc
MGWSCIILFLVATATGVHS ISAMVRSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR D E L TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSV L HEALH S HYTQKSLSLSPGGGGGS EQKLISEEDL
서열번호 56: 마우스 중쇄 MIgG Vh 신호 서열(볼드체), N-말단 ISAMVRS 아미노산 잔기 첨가하고(이탤릭체), YTE 삼중 돌연변이체(볼드체/밑줄), G4S 링커(이탤릭체), 및 C-말단 C-myc-tag (밑줄), 알로타입 G1m(f)(볼드체 이탤릭체)을 갖는 성숙 인간 IgG1 Fc
MGWSCIILFLVATATGVHS ISAMVRSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTL Y I T R E PEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR E E M TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGGS EQKLISEEDL
서열번호 57: 마우스 중쇄 MIgG Vh 신호 서열(볼드체)을 갖고, N-말단 ISAMVRS 아미노산 잔기(이탤릭체)가 추가되고, YTE 삼중 돌연변이(볼드체/밑줄), G4S 링커(이탤릭체), C-말단 C-myc-태그(밑줄), 알로타입 G1m(fa)(볼드체 이탤릭체)을 갖는 성숙 인간 IgG1 Fc
MGWSCIILFLVATATGVHS ISAMVRSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTL Y I T R E PEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR D E L TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGGS EQKLISEEDL
서열번호 58: 마우스 중쇄 MIgG1 신호 서열(볼드체), Cys 대 Ser 치환(#), C-말단 G4S(이탤릭체) 및 C-말단 IgA 펩타이드(밑줄), 알로타입 G1m(fa)(볼드체 이탤릭체)을 갖는 성숙 인간 IgG1
MGWSCIILFLVATATGVHSEPKSS(#)DKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR D E L TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGGS QRNPRLRLIRRHPTLRIPPI
서열번호 59: 마우스 중쇄 MIgG1 신호 서열(볼드체), Cys 대 Ser 치환(#), M428L, N434S 돌연변이(볼드체/밑줄), C-말단 G4S(이탤릭체) 및 C-말단 IgA 펩타이드(밑줄), 알로타입 G1m(fa)(볼드체 이탤릭체)을 갖는 성숙 인간 IgG1
MGWSCIILFLVATATGVHSEPKSS(#)DKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR D E L TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSV L HEALH S HYTQKSLSLSPGGGGGS QRNPRLRLIRRHPTLRIPPI
서열번호 60: 성숙 인간 Fc IgG1(Z1은 Cys 또는 Ser이고, X1은 Met 또는 Trp이고, X2는 Ser 또는 Thr이고, X3은 Thr 또는 Glu이고, X4는 Asp 또는 Glu이고, X5는 Leu 또는 Met이고, X6은 Met 또는 Leu이고, X7은 Asn 또는 Ser임)
NVNHKPSNTKVDKKVEPKSZ 1 DKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLX 1 IX 2 RX 3 PEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRX 4 EX 5 TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVX 6 HEALHX 7 HYTQKSLSLSPGK
서열번호 61: 성숙 인간 Fc IgG1, Cys 대 Ser 치환(#), 식 중, Z1은 Cys 또는 Ser이고, X1은 Met 또는 Trp이고, X2는 Ser 또는 Thr이고, X3은 Thr 또는 Glu이고, X4는 Asp 또는 Glu이고, X5는 Leu 또는 Met이고, X6은 Met 또는 Leu이고, X7은 Asn 또는 Ser임
NVNHKPSNTKVDKKVEPKSS(#)DKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLX 1 IX 2 RX 3 PEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRX 4 EX 5 TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVX 6 HEALHX 7 HYTQKSLSLSPGK
서열번호 62: 성숙 인간 IgG1 Fc, Cys 대 Ser 치환(#), X4는 Asp 또는 Glu이고, X5는 Leu 또는 Met임
NVNHKPSNTKVDKKVEPKSS(#)DKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRX 4 EX 5 TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
서열번호 63: 성숙 인간 IgG1 Fc, Cys 대 Ser 치환(#), 알로타입 G1m(f)(볼드체 이탤릭체)
NVNHKPSNTKVDKKVEPKSS(#)DKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR E E M TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
서열번호 64: 성숙 인간 IgG1 Fc, Cys 대 Ser 치환(#), 알로타입 G1m(fa)(볼드체 이탤릭체)　
NVNHKPSNTKVDKKVEPKSS(#)DKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR D E L TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
서열번호 65: 성숙 인간 IgG1 Fc, Cys 대 Ser 치환(#), M428L, N434S 돌연변이(볼드체/밑줄), 알로타입 G1m(fa)(볼드체 이탤릭체)
NVNHKPSNTKVDKKVEPKSS(#)DKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR D E L TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSV L HEALH S HYTQKSLSLSPGK
서열번호 66: 성숙 인간 IgG1 Fc, Cys 대 Ser 치환(#), M428L, N434S 돌연변이(볼드체/밑줄), 알로타입 G1m(f)(볼드체 이탤릭체)　
NVNHKPSNTKVDKKVEPKSS(#)DKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR E E M TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSV L HEALH S HYTQKSLSLSPGK
서열번호 67: 성숙 인간 IgG1 Fc, Cys 대 Ser 치환(#), YTE 삼중 돌연변이(볼드체 및 밑줄), 알로타입 G1m(fa)(볼드체 이탤릭체)
NVNHKPSNTKVDKKVEPKSS(#)DKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTL Y I T R E PEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR D E L TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
서열번호 68: 성숙 인간 IgG1 Fc, Cys 대 Ser 치환 (#), YTE 삼중 돌연변이(볼드체 및 밑줄), 알로타입 G1m(f)(볼드체 이탤릭체)
NVNHKPSNTKVDKKVEPKSS(#)DKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTL Y I T R E PEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR E E M TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
본 명세서에 정의된 바와 같이, Fc 도메인은 CH3 항체 불변 도메인 간의 상호작용에 의해서 이량체화된 2개의 Fc 도메인 단량체뿐만 아니라 2개의 이량체화 Fc 도메인 단량체의 힌지 도메인 사이에 형성되는 1개 이상의 다이설파이드 결합을 포함한다. Fc 도메인은 Fc 수용체, 예를 들어, Fc-감마 수용체(즉, Fcγ 수용체(FcγR)), Fc-알파 수용체(즉, Fcα 수용체(FcαR)), Fc-엡실론 수용체(즉, Fcε 수용체(FcεR)), 및/또는 신생아 Fc 수용체(FcRn)에 결합하는 최소 구조를 형성한다. 일부 실시형태에서, 본 발명의 Fc 도메인은 Fcγ 수용체(예를 들어, FcRn, FcγRI(CD64), FcγRIIa(CD32), FcγRIIb(CD32), FcγRIIIa(CD16a), FcγRIIIb(CD16b)), 및/또는 FcγRIV 및/또는 신생아 Fc 수용체(FcRn)에 결합한다.
일부 실시형태에서, 본 발명의 Fc 도메인 단량체 또는 Fc 도메인은 비글리코실화된(aglycosylated) Fc 도메인 단량체 또는 Fc 도메인(예를 들어, Fc 수용체(예를 들어, FcRn)에 대한 결속을 유지하는 Fc 도메인 단량체 또는 Fc 도메인)이다. 예를 들어, Fc 도메인은 Fc 수용체에 대한 결속을 유지시키는 비글리코실화된 IgG1 변이체(예를 들어, 글리코실화된 모티프의 N297 및/또는 T299에 아미노산 치환을 갖는 IgG1)이다. 예시적인 비글리코실화된 Fc 도메인 및 비글리코실화된 Fc 도메인의 제조 방법은 예를 들어, 전문이 본 명세서에 참조에 의해 포함된 문헌[Sazinsky S.L. et al., Aglycosylated immunoglobulin G1 variants productively engage activating Fc receptors, PNAS, 2008, 105(51):20167-20172]에 기재된 바와 같이 당업계에 공지되어 있다.
일부 실시형태에서, 본 발명의 Fc 도메인 또는 Fc 도메인 단량체는 신생아 Fc 수용체(FcRn)에 대한 결합을 향상시키도록 조작된다. 예를 들어, Fc 도메인은 M252Y/S254T/T256E(YTE)에 상응하는 삼중 돌연변이(예를 들어, YTE 돌연변이를 갖는 IgG1, 예컨대, 인간 또는 인간화된 IgG1, 예를 들어 서열번호 33, 서열번호 36, 서열번호 38, 서열번호 39, 서열번호 41, 서열번호 42, 서열번호 43, 서열번호 52, 서열번호 53, 서열번호 56, 또는 서열번호 57)를 포함할 수 있다. Fc 도메인은 M428L/N434S(LS)에 상응하는 이중 돌연변이체(예를 들어, LS 돌연변이를 갖는 IgG1, 예컨대, 인간 또는 인간화된 IgG1, 예컨대, 서열번호 37, 서열번호 39, 서열번호 44, 서열번호 45, 서열번호 46, 서열번호 50, 서열번호 51, 서열번호 54, 서열번호 55, 또는 서열번호 59)를 포함할 수 있다. Fc 도메인은 N434H에 상응하는 단일 돌연변이체(예를 들어, N434H 돌연변이를 갖는 IgG1, 예컨대, 인간 또는 인간화된 IgG1)를 포함할 수 있다. Fc 도메인은 C220S에 상응하는 단일 돌연변이체(예를 들어, C220S 돌연변이를 갖는 IgG1, 예컨대, 인간 또는 인간화된 IgG1, 예컨대, 서열번호 34, 서열번호 47, 서열번호 48, 서열번호 49, 서열번호 50, 서열번호 51, 서열번호 52, 서열번호 53, 서열번호 58, 서열번호 59, 서열번호 61, 서열번호 62, 서열번호 63, 서열번호 64, 서열번호 65, 서열번호 66, 서열번호 67, 서열번호 68)를 포함할 수 있다. Fc 도메인은 FcRn에 대한 결합을 향상시키는 상기에 기재된 돌연변이 중 1개 이상의 조합을 포함할 수 있다. FcRn에 대한 향상된 결합은 Fc 도메인-함유 접합체의 반감기를 증가시킬 수 있다. 예를 들어, FcRn에 대한 결합을 증가시키는 1개 이상 아미노산 돌연변이(예를 들어, YTE 돌연변이, LS 돌연변이 또는 N434H 돌연변이)의 혼입은, FcRn 결합을 향상시키는 돌연변이가 없는 상응하는 Fc 도메인을 갖는 접합체에 비해서 접합체의 반감기를 5%, 10%, 15%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 200%, 300%, 400%, 500% 또는 그 초과만큼 증가시킬 수 있다. FcRN에 대한 향상된 결합을 갖는 예시적인 Fc 도메인 및 FcRN에 대한 향상된 결합을 갖는 Fc 도메인의 제조 방법은 예를 들어, 전문이 본 명세서에 포함된 문헌[Maeda, A. et al., Identification of human IgG1 variant with enhanced FcRn binding and without increased binding to rheumatoid factor autoantibody, MABS, 2017, 9(5):844-853]에 기재된 바와 같이 당업계에 공지되어 있다. 본 명세서에서 사용되는 바와 같이, (예를 들어, 특정 아미노산 서열의) 특정 아미노산 잔기"에 상응하는" 아미노산은 (예를 들어, 특정 서열의) 특정 잔기에 정렬한다고 당업자에게 이해되는 임의의 아미노산 잔기를 포함한다고 이해되어야 한다. 예를 들어, 서열번호 1 내지 68 중 임의의 하나는 아미노산 서열의 "상응하는 잔기"를 돌연변이시킴으로써 YTE 돌연변이, LS 돌연변이, 및/또는 N434H 돌연변이를 포함하도록 돌연변이될 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 특정 서열번호의 특정 시스테인 잔기에 "상응하는" 황 원자는 당업자가 특정 서열의 특정 시스테인에 정렬한다고 이해할 임의의 시스테인 잔기의 황 원자를 포함한다고 이해되어야 한다. 인간 IgG1(UniProtKB: P01857; 서열번호 94), 인간 IgG2(UniProtKB: P01859; 서열번호 95), 인간 IgG3(UniProtKB: P01860; 서열번호 96) 및 인간 IgG4(UniProtKB: P01861; 서열번호 97)의 단백질 서열 정렬은 하기에 제공되어 있다(Clustal Omega Multiple Pairwise Alignment로 정렬됨). 정렬은 서로에 "상응하는" 시스테인 잔기(예를 들어, 시스테인 잔기의 황 원자)(상자 안에
Figure pct00497
상징으로 나타냄)를 나타낸다. 당업자는 본 발명의 임의의 IgG 변이체와의 이러한 정렬을 수행하여 본 명세서에 기재된 특정 서열번호(예를 들어, 서열번호 1 내지 68 중 어느 하나)의 특정 시스테인의 임의의 황 원자에 상응하는 시스테인의 황 원자를 쉽게 결정할 수 있을 것이다. 예를 들어, 당업자는 서열번호 10의 Cys10(Fc 도메인의 힌지 영역의 보존된 CPPC 모티프의 제1 시스테인)이 예를 들어, IgG1의 Cys109, IgG2의 Cys106, IgG3의 Cys156, 서열번호 1의 Cys29, 서열번호 2의 Cys9, 서열번호 3의 Cys30 또는 서열번호 10의 Cys10에 상응한다는 것을 쉽게 결정할 수 있을 것이다.
일부 실시형태에서, 본 발명의 Fc 도메인 또는 Fc 도메인 단량체는 N-말단 (Xaa)x에 추가적인 아미노산 및/또는 C-말단 (Xaa)z에 추가적인 아미노산을 추가로 포함할 수 있는 서열번호 39 내지 68 중 어느 하나의 서열을 가지며, 식 중, Xaa는 임의의 아미노산이고, x 및 z는 0 이상, 일반적으로는 100 미만, 바람직하게는 10 미만, 보다 바람직하게는 0, 1, 2, 3, 4 또는 5의 임의의 정수이다. 일부 실시형태에서, 추가적인 아미노산은 서열번호 94의 1개 이상의 연속적인 아미노산과 적어도 70%(예를 들어, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%) 동일하다. 예를 들어, 추가적인 아미노산은 IgG1(서열번호 94)의 Lys330에 상응하는 C-말단 상에 단일 아미노산일 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 특정 서열번호의 특정 라이신 잔기에 "상응하는" 질소 원자는 당업자가 특정 서열의 특정 라이신에 정렬한다고 이해할 임의의 라이신 잔기의 질소 원자를 포함한다고 이해되어야 한다. 인간 IgG1(UniProtKB: P01857; 서열번호 94), 인간 IgG2(UniProtKB: P01859; 서열번호 95), 인간 IgG3(UniProtKB: P01860; 서열번호 96) 및 인간 IgG4(UniProtKB: P01861; 서열번호 97)의 단백질 서열 정렬은 하기에 제공되어 있다(Clustal Omega Multiple Pairwise Alignment로 정렬됨). 정렬은 서로에 "상응하는" 라이신 잔기(예를 들어, 라이신 잔기의 질소 원자)(상자 안에 * 상징으로 나타냄)를 나타낸다. 당업자는 본 발명의 임의의 IgG 변이체와의 이러한 정렬을 수행하여 본 명세서에 기재된 특정 서열번호(예를 들어, 서열번호 1 내지 68 중 어느 하나)의 특정 라이신의 임의의 질소 원자에 상응하는 라이신의 질소 원자를 쉽게 결정할 수 있을 것이다. 예를 들어, 당업자는 서열번호 10의 Lys35가 예를 들어, IgG1의 Lys129, IgG2의 Lys126, IgG3의 Lys176, 서열번호 1의 Lys51, 서열번호 2의 Lys31, 서열번호 3의 Lys50 또는 서열번호 10의 Lys30에 상응한다는 것을 쉽게 결정할 수 있을 것이다.
IgG1(서열번호 94), IgG2(서열번호 95), IgG3(서열번호 96) 및 IgG4(서열번호 97)의 단백질 서열 정렬
Figure pct00498
면역 세포의 활성화
Fc-감마 수용체(FcγR)는 면역글로불린 G(IgG)의 Fc 부분에 결합하고, 면역 활성화 및 조절에 중요한 역할을 한다. 예를 들어, 면역 복합체(IC) 내의 IgG Fc 도메인은 높은 결합활성으로 FcγR에 결속하기 때문에, 면역 세포 활성화를 조절하는 신호전달 캐스케이드를 촉발한다. 인간 FcγR 패밀리는 몇몇 활성화 수용체(FcγRI, FcγRIIa, FcγRIIc, FcγRIIIa, 및 FcγRIIIb) 및 2개의 저해성 수용체(FcγRIIb)를 함유한다. FcγR 신호전달은 FcγR을 활성화시키기 위한 면역 타이로신 활성화 모티프(ITAM) 및 저해성 수용체 FcγRIIb를 위한 면역 타이로신 저해성 모티프(ITIM)를 함유하는 세포내 도메인에 의해서 매개된다. 일부 실시형태에서, Fc 도메인에 의한 FcγR 결합은 Src 패밀리 키나제에 의해서 ITAM 포스포릴화를 초래하고; 이것은 Syk 패밀리 키나제를 활성화시키고, 하류 신호전달 네트워크를 유도하는데, 이것은 PI3K 및 Ras 경로를 포함한다.
본 명세서에 기재된 접합체에서, 뉴라미니다제 저해제의 단량체 또는 이량체를 포함하는 접합체의 부분은 바이러스 뉴라미니다제에 결합하고, 이를 저해하여 바이러스 복제의 저해로 이어지는 반면, 접합체의 Fc 도메인 부분은 면역 세포 상의 FcγR(예를 들어, FcRn, FcγRI, FcγRIIa, FcγRIIc, FcγRIIIa 및 FcγRIIIb)에 결합하여, 식세포작용 및 효과기 기능, 예컨대, 항체-의존적 세포-매개된 세포독성(ADCC)을 활성화시킴으로써, 면역 세포에 의한 바이러스 입자의 섭취 및 파괴로 이어지고, 접합체의 항바이러스 활성을 추가로 향상시킨다. 본 명세서에 기재된 접합체에 의해서 활성화될 수 있는 면역 세포의 예는 대식세포, 호중구, 호산구, 호염기구, 림프구, 여포 수지상 세포, 자연 살해 세포 및 비만 세포를 포함하지만 이들로 제한되지 않는다.
IV. 알부민 단백질 및 알부민 단백질-결합 펩타이드
알부민 단백질
본 발명의 알부민 단백질은 자연-발생 알부민 또는 이의 변이체, 예컨대, 자연-발생 알부민 단백질의 조작된 변이체일 수 있다. 변이체는, 다형체, 단편, 예컨대, 도메인 및 하위-도메인 및 융합 단백질을 포함한다. 알부민 단백질은 임의의 공급원으로부터 얻은 알부민 단백질의 서열을 포함할 수 있다. 바람직하게는 공급원은 포유동물, 예컨대, 인간 또는 소이다. 가장 바람직하게는, 알부민 단백질은 인간 혈청 알부민(HSA) 또는 이의 변이체이다. 인간 혈청 알부민은 인간에서 자연 발생하는 아미노산 서열 및 이의 변이체를 갖는 임의의 알부민 단백질을 포함한다. 알부민 단백질 암호 서열은 인간 유전자에 상응하는 cDNA를 단리시키고, 서열결정하기 위한 당업자에게 공지된 방법에 의해서 얻어질 수 있다. 본 발명의 알부민 단백질은 서열번호 69 또는 서열번호 70에 제공된 인간 혈청 알부민(HSA)의 아미노산 서열 또는 서열번호 71에 제공된 마우스 혈청 알부민(MSA)의 아미노산 서열, 또는 이의 변이체 또는 단편, 바람직하게는 이의 기능성 변이체 또는 단편을 포함할 수 있다. 단편 또는 변이체는 기능성일 수 있거나 기능성이 아닐 수 있거나, 알부민의 기능을 어느 정도 유지시킬 수 있다. 예를 들어, 단편 또는 변이체는 알부민 수용체, 예컨대, HSA 또는 MSA에 결합하는 능력을, 모 알부민(예를 들어, 단편 또는 변이체가 유래된 모 알부민)의 능력의 적어도 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100% 또는 105%만큼 보유할 수 있다. 상대적인 결합 능력은 당업계에 공지된 방법, 예컨대, 표면 플라스몬 공명에 의해서 결정될 수 있다.
알부민 단백질은 알부민 단백질, 예컨대, 인간 혈청 알부민의 자연-발생 다형성 변이체일 수 있다. 일반적으로, 인간 혈청 알부민의 변이체 또는 단편은 인간 혈청 알부민 또는 마우스 혈청 알부민의 리간드 결합 활성의 적어도 5%, 10%, 15%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60% 또는 70%, 바람직하게는 80%, 90%, 95%, 100% 또는 105% 또는 그 초과를 가질 것이다.
알부민 단백질은 소 혈청 알부민의 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 소 혈청 알부민 단백질은 젖소에서 자연 발생하는 아미노산 서열을 갖는 임의의 알부민, 예를 들어, 본 명세서에 정의된 바와 같은 Swissprot 수탁 번호 P02769 및 이의 변이체를 포함한다. 소 혈청 알부민 단백질은 또한 본 명세서에 정의된 바와 같은 전장 소 혈청 알부민 또는 이의 변이체의 단편을 포함한다.
알부민 단백질은 개(예를 들어, Swissprot 수탁 번호 P49822-1), 돼지(예를 들어, Swissprot 수탁 번호 P08835-1), 염소(예를 들어, 시그마 제품 번호 A2514 또는 A4164), 고양이(예를 들어, Swissprot 수탁 번호 P49064-1), 닭(예를 들어, Swissprot 수탁 번호 P19121-1), 오브알부민(예를 들어, 닭 오브알부민)(예를 들어, Swissprot 수탁 번호 P01012-1), 칠면조 오브알부민(예를 들어, Swissprot 수탁 번호 O73860-1), 당나귀(예를 들어, Swissprot 수탁 번호 Q5XLE4-1), 기니피그(예를 들어, Swissprot 수탁 번호 Q6WDN9-1), 햄스터(예를 들어, 문헌[DeMarco et al. International Journal for Parasitology 37(11): 1201-1208 (2007)]에 기재된 바와 같음), 말(예를 들어, Swissprot 수탁 번호 P35747-1), 레서스 원숭이(예를 들어, Swissprot 수탁 번호 Q28522-1), 마우스(예를 들어, Swissprot 수탁 번호 P07724-1), 비둘기(예를 들어, 문헌[Khan et al. Int. J. Biol. Macromol. 30(3-4),171-8 (2002)]에 정의된 바와 같음), 토끼(예를 들어, Swissprot 수탁 번호 P49065-1), 래트(예를 들어, Swissprot 수탁 번호 P02770-1) 또는 양(예를 들어, Swissprot 수탁 번호 P14639-1)으로부터의 혈청 알부민 중 하나로부터 유래된 알부민의 서열을 포함할 수 있고, 본 명세서에 정의된 바와 같은 변이체 및 이의 단편을 포함한다.
알부민의 다수의 자연-발생 돌연변이체 형태가 당업계에 공지되어 있다. 알부민의 자연-발생 돌연변이체 형태는 예를 들어, 문헌[, Peters, et al. All About Albumin: Biochemistry, Genetics and Medical Applications, Academic Press, Inc., San Diego, Calif., p.170-181 (1996)]에 기재되어 있다.
본 발명의 알부민 단백질은 자연-발생 알부민 단백질의 변이체를 포함한다. 변이체 알부민은 적어도 1개의 아미노산 돌연변이, 예컨대, 보존적이거나 비보존적인 삽입, 결실 또는 치환에 의해서 생성되되, 단, 이러한 변화는 적어도 하나의 기본 특성이 유의하게 변경되지 않은(예를 들어,5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35% 또는 40% 초과만큼 변경되지 않은) 알부민 단백질을 초래하는, 아미노산 돌연변이를 갖는 알부민 단백질을 지칭한다. 알부민 단백질의 활성을 정의할 수 있는 예시적인 특성은 결합 활성(예를 들어, 빌리루빈 또는 지방산, 예컨대, 장쇄 지방산에 대한 결합 특이성 또는 친화도 포함), 삼투몰농도 또는 특정 pH-범위의 거동을 포함한다.
전형적으로 알부민 단백질 변이체는 자연-발생 알부민 단백질, 예컨대, 서열번호 69 내지 71 중 어느 하나의 알부민 단백질과 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 바람직하게는 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%의 아미노산 서열 동일성을 가질 것이다.
재조합 인간 알부민의 생산 및 정제 방법은 널리 확립되어 있고(문헌[Sleep et al. Biotechnology, 8(1):42-6 (1990)]), 약제학적 응용분야를 위한 재조합 인간 알부민의 생산을 포함한다(Bosse et al. J Clin Pharmacol 45(1):57-67 (2005)). HSA의 3차원 구조는 X-선 결정학(Carter et al. Science. 244(4909): 1195-8(1998)); Sugio et al. Protein Eng. 12(6):439-46 (1999))에 의해서 설명되었다. HSA 폴리펩타이드 쇄는 35개의 시스테인 잔기를 갖는데, 이것은 17개의 다이설파이드 결합 및 성숙 단백질의 34번 위치에서 1개의 짝지워지지 않은(예를 들어, 유리) 시스테인을 형성한다. HSA의 Cys-34는 알부민에 대한 분자의 접합을 위해서 사용되어 왔고(Leger et al. Bioorg Med Chem Lett 14(17):4395-8 (2004); Thibaudeau et al. Bioconjug Chem 16(4):1000-8 (2005)), 부위-특이적 접합을 위한 부위를 제공한다.
서열번호 69 (인간 혈청 알부민 (HSA), 변이체 1)
Figure pct00499
서열번호 70(인간 혈청 알부민 (HSA), 변이체 2)
Figure pct00500
서열번호 71 (마우스 혈청 알부민 (MSA))
Figure pct00501
알부민 단백질의 접합
본 발명의 알부민 단백질은 (예를 들어, 공유 결합의 방식으로) 본 발명의 임의의 화합물(예를 들어, 뉴라미니다제 저해제 단량체 또는 이량체의 링커 부분의 방식으로)에 접합될 수 있다. 알부민 단백질은 소분자-단백질 접합체를 생성시키기 위해서 당업자에게 널리 공지된 임의의 방법에 의해서 본 발명의 임의의 화합물에 접합될 수 있다. 이것은 용매-노출된 아미노산, 예컨대, 용매 노출된 시스테인 또는 라이신에 대한 공유 접합을 포함할 수 있다. 예를 들어, 인간 혈청 알부민은 서열번호 69의 Cys34 또는 서열번호 70의 Cys40에 상응하는 항 원자에 대한 공유 링키지에 의해서 본 발명의 화합물에 접합될 수 있다.
본 발명의 알부민 단백질은 알부민 단백질의 C-말단 또는 N-말단 단부의 10개 아미노산 잔기 내에 위치된 아미노산의 방식으로 본 발명의 임의의 화합물에 접합될 수 있따. 알부민 단백질은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15 또는 20개 또는 그 초과의 아미노산의 C-말단 또는 N-말단 폴리펩타이드 융합을 포함할 수 있다. C-말단 또는 N-말단 폴리펩타이드 융합은 1개 이상의 용매-노출된 시스테인 또는 라이신 잔기를 포함할 수 있는데, 이것은 본 발명의 화합물의 공유 접합(예를 들어, 링커에 의한 것을 포함하는, 뉴라미니다제 저해제 단량체 또는 이량체에 대한 접합)을 위해서 사용될 수 있다.
본 발명의 알부민 단백질은 1개 이상의 용매-노출된 시스테인 또는 라이신 잔기를 포함하도록 조작된 임의의 알부민 단백질을 포함하는데, 이것은 본 발명의 화합물에 대한 접합(예를 들어, 링커에 의한 것을 포함하는, 뉴라미니다제 저해제 단량체 또는 이량체에 대한 접합)을 위한 부위를 제공할 수 있다. 가장 바람직하게는, 알부빈 단백질은 단일 용매-노출된 시스테인 또는 라이신은 함유할 것이어서, 본 발명의 화합물의 부위-특이적 접합이 가능할 수 있다.
1개 이상의 접합-적격 시스테인 잔기를 포함하는 알부민 단백질의 조작된 변이체의 생성을 위한 예시적인 방법은 전문이 본 명세서에 참조에 의해 포함된 미국 특허 출원 제2017/0081389호에 제공되어 있다. 간략하면, 바람직한 알부민 단백질 변이체는 단일, 용매-노출된, 짝지워지지 않은(예를 들어, 유리) 시스테인 잔기를 포함하여, 시스테인 잔기에 대한 링커의 부위-특이적 접합을 가능하게 하는 것이다.
용매-노출된, 짝지워지지 않은 시스테인 잔기에 대한 화학적 접합을 가능하게 하도록 조작된 알부민 단백질은 하기 알부민 단백질 변이체를 포함한다:
(a) 서열번호 69의 L585, D1, A2, D562, A364, A504, E505, T79, E86, D129, D549, A581, D121, E82, S270, Q397 및 A578 중 임의의 것에 상응하는 아미노산 잔기에서 비-시스테인 아미노산 잔기의 시스테인으로의 치환을 갖는 알부민 단백질;
(b) 서열번호 69의 L585, D1, A2, D562, A364, A504, E505, T79, E86, D129, D549, A581, D121, E82, S270, Q397 및 A578 중 임의의 것에 상응하는 아미노산 잔기의 N- 또는 C-말단 측면에 인접한 위치에서 시스테인의 삽입을 갖는 알부민 단백질;
(c) 서열번호 69의 C369, C361, C91, C177, C567, C316, C75, C169, C124 또는 C558 중 어느 것에 상응하는 잔기에서 유리 티올기를 갖는 짝지워지지 않은 시스테인을 갖도록 조작되고, 서열번호 69의 C360, C316, C75, C168, C558, C361, C91, C124, C169 또는 C567에 상응하는 잔기의 결실 또는 치환에 의해서 생성될 수 있거나 생성될 수 없는 알부민 단백질; 및/또는
(d) 알부민 단백질의 N- 또는 C-말단에 대한 시스테인의 부가.
본 발명의 일부 실시형태에서, (a), (b), (c) 및/또는 (d)의 치환, 결실, 부가 또는 삽입 사건의 실제 결과는, 폴리펩타이드 서열의 접합 적격 시스테인 잔기의 수가 모 알부민 서열에 비해서 증가된다는 것이다. 본 발명의 일부 실시형태에서, (a), (b), (c) 및/또는 (d)의 치환, 결실, 부가 또는 삽입 사건의 실제 결과는, 폴리펩타이드 서열의 접합 적격 시스테인 잔기의 수가 1개여서, 부위-특이적 접합이 가능하다는 것이다.
바람직한 알부민 단백질 변이체는 단일 용매-노출된 라이신 잔기를 갖는 알부민 단백질을 포함하여, 라이신 잔기에 대한 링커의 부위-특이적 접합이 가능하다. 이러한 변이체는 이미 기재된 방법 중 임의의 것(예를 들어, 삽입, 결실, 치환 또는 C-말단 또는 N-말단 융합)을 포함하여, 알부민 단백질을 조작함으로써 생성될 수 있다.
알부민 단백질-결합 펩타이드
생물학적 활성 화합물의 알부민 단백질-결합 펩타이드에 대한 접합은 조직 흡수, 투과 및 확산의 변경을 포함하는, 생물학적 활성 화합물의 약력학을 변경시킬 수 있다. 바람직한 실시형태에서, 알부민 단백질-결합 펩타이드의 본 발명의 화합물(예를 들어, 뉴라미니다제 저해제 단량체 또는 이량체, 링커의 방식으로)에 대한 접합은 화합물 단독과 비교할 때, 화합물의 효능을 증가시키거나 독성을 감소시킨다.
본 발명의 알부민 단백질-결합 펩타이드는 알부민 단백질, 예컨대, 본 명세서에 기재된 알부민 단백질 중 임의의 것에 대한 친화도를 갖거나 이에 결합하는 작용을 하는 5 내지 50개(예를 들어, 5 내지 40, 5 내지 30, 5 내지 20, 5 내지 15, 5 내지 10, 10 내지 50, 10 내지 30 또는 10 내지 20개) 아미노산 잔기의 아미노산 서열을 갖는 임의의 폴리펩타이드를 포함한다. 바람직하게는, 알부민 단백질-결합 펩타이드는 자연-발생 혈청 알부민, 가장 바람직하게는 인간 혈청 알부민에 결합한다. 알부민 단백질-결합 펩타이드는 상이한 기원, 예를 들어, 합성, 인간, 마우스 또는 래트 기원일 수 있다. 본 발명의 알부민 단백질-결합 펩타이드는 1개 이상(예를 들어, 2개, 3개, 4개 또는 5개)의 용매-노출된 시스테인 또는 라이신 잔기를 포함하도록 조작된 알부민 단백질-결합 펩타이드를 포함하는데, 이것은 본 발명의 화합물에 대한 접합(예를 들어, 링커에 의한 것을 포함하는, 뉴라미니다제 저해제 단량체 또는 이량체에 대한 접합)을 위한 부위를 제공할 수 있다. 가장 바람직하게는, 알부민 단백질-결합 펩타이드는 단일 용매-노출된 시스테인 또는 라이신은 함유할 것이어서, 본 발명의 화합물의 부위-특이적 접합이 가능할 수 있다. 알부민 단백질-결합 펩타이드는 유일한 자연 발생 아미노산 잔기를 포함할 수 있거나 또는 1개 이상의 비-자연 발생 아미노산 잔기를 포함할 수 있다. 포함되는 경우, 비-자연 발생 아미노산 잔기(예를 들어, 비-자연 발생 아미노산 잔기의 측쇄)는 본 발명의 화합물(예를 들어, 링커에 의한 것을 포함하여, 링커 뉴라미니다제 저해제 단량체)에 대한 부착점으로서 사용될 수 있다. 본 발명의 알부민 단백질-결합 펩타이드는 선형이거나 환식일 수 있다. 본 발명의 알부민 단백질-결합 펩타이드는 당업자에게 공지된 임의의 알부민 단백질-결합 펩타이드를 포함하고, 이의 예는 본 명세서에 제공된다.
알부민 단백질-결합 펩타이드, 및 알부민 단백질-결합 펩타이드를 포함하는 접합체는, 바람직하게는 약 100μM 미만, 바람직하게는 약 100nM 미만인 해리 상수 Kd를 특징으로 하는 친화도로 알부민 단백질(예를 들어, 인간 혈청 알부민)에 결합하고, 가장 바람직하게는 다른 혈장 단백질에 실질적으로 결합하지 않는다. 이러한 화합물의 구체적인 예는 약 10 내지 20개 아미노산 잔기 길이이고, 선택적으로 N-말단 또는 C-말단 또는 둘 다에서 변형된 선형 또는 환식 펩타이드이다.
하기 일반 화학식을 포함하는 알부민 단백질-결합 펩타이드는 선형 및 환식 펩타이드를 포함하고, 식 중, Xaa는 임의의 아미노산이다:
서열번호 74
Xaa-Xaa-Cys-Xaa-Xaa-Xaa-Xaa-Xaa-Cys-Xaa-Xaa-Phe-Cys-Xaa-Asp-Trp-Pro-Xaa-Xaa-Xaa-Ser-Cys
서열번호 75
Val-Cys-Tyr-Xaa-Xaa-Xaa-Ile-Cys-Phe
서열번호 76
Cys-Tyr-Xaa-Pro-Gly-Xaa-Cys
서열번호 77
Asp-Xaa-Cys-Leu-Pro-Xaa-Trp-Gly-Cys-Leu-Trp
서열번호 78
Trp-Cys-Asp-Xaa-Xaa-Leu-Xaa-Ala-Xaa-Asp-Leu-Cys
서열번호 79
Asp-Leu-Val-Xaa-Leu-Gly-Leu-Glu-Cys-Trp
본 발명의 알부민 단백질-결합 펩타이드는 선형 또는 환식일 수 있는 하기 펩타이드 서열 중 임의의 것을 추가로 포함한다:
서열번호 80 DLCLRDWGCLW
서열번호 81 DICLPRWGCLW
서열번호 82 MEDICLPRWGCLWGD
서열번호 83 QRLMEDICLPRWGCLWEDDE
서열번호 84 QGLIGDICLPRWGCLWGRSV
서열번호 85 QGLIGDICLPRWGCLWGRSVK
서열번호 86 EDICLPRWGCLWEDD
서열번호 87 RLMEDICLPRWGCLWEDD
서열번호 88 MEDICLPRWGCLWEDD
서열번호 89 MEDICLPRWGCLWED
서열번호 90 RLMEDICLARWGCLWEDD
서열번호 91 EVRSFCTRWPAEKSCKPLRG
서열번호 92 RAPESFVCYWETICFERSEQ
서열번호 93 EMCYFPGICWM
서열번호 74 내지 93의 알부민 단백질-결합 펩타이드는 N-말단 (Xaa)x에 추가적인 아미노산 및/또는 C-말단 (Xaa)z에 추가적인 아미노산을 추가로 포함할 수 있고, 식 중, Xaa는 임의의 아미노산이고, x 및 z는 0 이상, 일반적으로는 100 미만, 바람직하게는 10 미만, 보다 바람직하게는 0, 1, 2, 3, 4 또는 5의 임의의 정수이다.
추가의 예시적인 알부민 단백질-결합 펩타이드는 전문이 본 명세서에 참조에 의해 포함된 미국 특허 출원 제2005/0287153호에 제공되어 있다.
알부민 단백질-결합 펩타이드의 접합
본 발명의 알부민 단백질-결합 펩타이드는 (예를 들어, 공유 결합의 방식으로) 본 발명의 임의의 화합물(예를 들어, 뉴라미니다제 저해제 단량체 또는 이량체의 링커 부분의 방식으로)에 접합될 수 있다. 알부민 단백질-결합 펩타이드는 펩타이드-소분자 접합체를 생성시키기 위해서 당업자에게 공지된 임의의 방법에 의해서 본 발명의 임의의 화합물에 접합될 수 있다. 이것은 아미노산 잔기, 예컨대, 시스테인, 라이신 또는 비-자연 아미노산의 측쇄 기에 대한 공유 접합을 포함할 수 있다. 대안적으로, 공유 접합은 C-말단(예를 들어, C-말단 카복실산에 또는 C-말단 잔기의 측쇄기에에서 또는 N-말단(예를 들어, N-말단 아미노기에 또는 N-말단 아미노산의 측쇄기에)에서 일어날 수 있다.
V. 링커
링커는 본 명세서에 기재된 접합체 내의 2개 이상의 성분 사이(예를 들어, 본 명세서에 기재된 접합체 내의 2개의 뉴라미니다제 저해제 사이, 본 명세서에 기재된 접합체 내의 뉴라미니다제 저해제와 Fc 도메인 또는 알부민 단백질 사이 및 본 명세서에 기재된 접합체 내의 2개의 뉴라미니다제 저해제의 이량체와 Fc 도메인 또는 알부민 단백질 사이)의 공유 링키지 또는 연결을 지칭한다.
뉴라미니다제 저해제의 이량체에 공유 연결된 Fc 도메인 또는 알부민 단백질을 갖는 접합체 내의 링커
본 명세서에 기재된 바와 같은 뉴라미니다제 저해제의 1개 이상의 이량체에 공유 연결된 Fc 도메인 단량체, Fc 도메인, Fc-결합 펩타이드, 알부민 단백질 또는 알부민 단백질-결합 펩타이드를 함유하는 접합체에서, 접합체 내의 링커(예를 들어, L 또는 L')는 분지화 구조일 수 있다. 본 명세서에 추가로 기재된 바와 같이, 본 명세서에 기재된 접합체 내의 링커(예를 들어, L 또는 L')는 다가 구조일 수 있는데, 예를 들아 각각 2개 또는 3개의 아암을 갖는 2가 또는 3가일 수 있다. 일부 실시형태에서 링커가 3개의 아암을 갖는 경우, 아암 중 2개는 제1 및 제2 뉴라미니다제 저해제에 부착되고, 제3 아암은 Fc 도메인 단량체, Fc 도메인, Fc-결합 펩타이드, 알부민 단백질 또는 알부민 단백질-결합 펩타이드에 부착된다. 일부 실시형태에서 링커가 2개의 아암을 갖는 경우, 1개의 아암은 Fc 도메인 또는 알부민 단백질에 부착될 수 있고, 다른 아암은 2개의 뉴라미니다제 저해제 중 하나에 부착될 수 있다. 다른 실시형태에서, 2개의 아암을 갖는 링커를 사용하여 뉴라미니다제 저해제의 1개 이상의 이량체에 공유 연결된 Fc 도메인 또는 알부민 단백질을 함유하는 접합체 상의 2개의 뉴라미니다제 저해제를 접합할 수 있다.
일부 실시형태에서, 뉴라미니다제 저해제의 1개 이상의 이량체에 공유 연결된 Fc 도메인 또는 알부민 단백질을 갖는 접합체 내의 링커는 하기 화학식 (D-L-I)로 기재된다:
Figure pct00502
식 중, LA는 화학식 GA1-(ZA1)g1-(YA1)h1-(ZA2)i1-(YA2)j1-(ZA3)k1-(YA3)l1-(ZA4)m1-(YA4)n1-(ZA5)o1-GA2로 기재되고; LB는 화학식 GB1-(ZB1)g2-(YB1)h2-(ZB2)i2-(YB2)j2-(ZB3)k2-(YB3)l2-(ZB4)m2-(YB4)n2-(ZB5)o2-GB2로 기재되며; LC는 화학식 GC1-(ZC1)g3-(YC1)h3-(ZC2)i3-(YC2)j3-(ZC3)k3-(YC3)l3-(ZC4)m3-(YC4)n3-(ZC5)o3-GC2로 기재되고; GA1은 화학식 (D-L-I)에서 Q에 부착된 결합이며; GA2는 제1 뉴라미니다제 저해제(예를 들어, A1)에 부착된 결합이고; GB1은 화학식 (D-L-I)에서 Q에 부착된 결합이며; GB2는 제2 뉴라미니다제 저해제(예를 들어, A2)에 부착된 결합이고; GC1은 화학식 (D-L-I)에서 Q에 부착된 결합이고; GC2는 Fc 도메인 단량체, Fc 도메인, Fc-결합 펩타이드, 알부민 단백질 또는 알부민 단백질-결합 펩타이드 또는 Fc 도메인 단량체, Fc 도메인, Fc-결합 펩타이드, 알부민 단백질 또는 알부민 단백질-결합 펩타이드에 접합된 작용기와 반응할 수 있는 작용기(예를 들어, 말레이미드 및 시스테인, 아민 및 활성화된 카복실산, 티올 및 말레이미드, 활성화된 설폰산 및 아민, 아이소사이아네이트 및 아민, 아자이드 및 알킨, 및 알켄 및 테트라진)에 부착된 결합이고; ZA1, ZA2, ZA3, ZA4, ZA5, ZB1, ZB2, ZB3, ZB4, ZB5, ZC1, ZC2, ZC3, ZC4 및 ZC5 각각은 독립적으로, 선택적으로 치환된 C1-C20 알킬렌, 선택적으로 치환된 C1-C20 헤테로알킬렌, 선택적으로 치환된 C2-C20 알켄일렌, 선택적으로 치환된 C2-C20 헤테로알켄일렌, 선택적으로 치환된 C2-C20 알킨일렌, 선택적으로 치환된 C2-C20 헤테로알킨일렌, 선택적으로 치환된 C3-C20 사이클로알킬렌, 선택적으로 치환된 C3-C20 헤테로사이클로알킬렌, 선택적으로 치환된 C4-C20 사이클로알켄일렌, 선택적으로 치환된 C4-C20 헤테로사이클로알켄일렌, 선택적으로 치환된 C8-C20 사이클로알킨일렌, 선택적으로 치환된 C8-C20 헤테로사이클로알킨일렌, 선택적으로 치환된 C5-C15 아릴렌 또는 선택적으로 치환된 C2-C15 헤테로아릴렌이며; YA1, YA2, YA3, YA4, YB1, YB2, YB3, YB4, YC1, YC2, YC3 및 YC4 각각은, 독립적으로, O, S, NRi, P, 카보닐, 티오카보닐, 설포닐, 포스페이트, 포스포릴 또는 이미노; Ri은 H, 선택적으로 치환된 C1-C20 알킬, 선택적으로 치환된 C1-C20 헤테로알킬, 선택적으로 치환된 C2-C20 알켄일, 선택적으로 치환된 C2-C20 헤테로알켄일, 선택적으로 치환된 C2-C20 알킨일, 선택적으로 치환된 C2-C20 헤테로알킨일, 선택적으로 치환된 C3-C20 사이클로알킬, 선택적으로 치환된 C3-C20 헤테로사이클로알킬, 선택적으로 치환된 C4-C20 사이클로알켄일, 선택적으로 치환된 C4-C20 헤테로사이클로알켄일, 선택적으로 치환된 C8-C20 사이클로알킨일, 선택적으로 치환된 C8-C20 헤테로사이클로알킨일, 선택적으로 치환된 C5-C15 아릴 또는 선택적으로 치환된 C2-C15 헤테로아릴이고; g1, h1, i1, j1, k1, l1, m1, n1, o1, g2, h2, i2, j2, k2, l2, m2, n2, o2, g3, h3, i3, j3, k3, l3, m3, n3 및 o3 각각은, 독립적으로, 0 또는 1이며; Q는 질소 원자, 선택적으로 치환된 C1-C20 알킬렌, 선택적으로 치환된 C1-C20 헤테로알킬렌, 선택적으로 치환된 C2-C20 알켄일렌, 선택적으로 치환된 C2-C20 헤테로알켄일렌, 선택적으로 치환된 C2-C20 알킨일렌, 선택적으로 치환된 C2-C20 헤테로알킨일렌, 선택적으로 치환된 C3-C20 사이클로알킬렌, 선택적으로 치환된 C3-C20 헤테로사이클로알킬렌, 선택적으로 치환된 C4-C20 사이클로알켄일렌, 선택적으로 치환된 C4-C20 헤테로사이클로알켄일렌, 선택적으로 치환된 C8-C20 사이클로알킨일렌, 선택적으로 치환된 C8-C20 헤테로사이클로알킨일렌, 선택적으로 치환된 C5-C15 아릴렌 또는 선택적으로 치환된 C2-C15 헤테로아릴렌이다.
일부 실시형태에서, LC는 Fc 도메인에 대해서 2개의 부착점(예를 들어, 2개의 GC2)을 가질 수 있다.
일부 실시형태에서, L은 폴리에틸렌 글리콜(PEG) 링커를 포함한다. PEG 링커는 반복 단위 구조(-CH2CH2O-)n을 갖는 링커를 포함하며, 식 중, n은 2 내지 100의 정수이다. 폴리에틸렌 글리콜 링커는 뉴라미니다제 저해제와 E(예를 들어, 화학식 (M-I) 내지 (M-X) 중 어느 하나의 접합체에서)를 공유 결합시킬 수 있다. 폴리에틸렌 글리콜 링커는 제1 뉴라미니다제 저해제와 제2 뉴라미니다제 저해제(예를 들어, 화학식 (D-I) 내지 (D-X) 중 어느 하나의 접합체에서)를 공유 결합시킬 수 있다. 폴리에틸렌 글리콜 링커는 뉴라미니다제 저해제 이량체와 E(예를 들어, 화학식 (D-I) 내지 (D-X) 중 어느 하나의 접합체에서)를 공유 결합시킬 수 있다. 폴리에틸렌 글리콜 링커는 PEG2 내지 PEG100(예를 들어, PEG2, PEG3, PEG4, PEG5, PEG5-PEG10, PEG10-PEG20, PEG20-PEG30, PEG30-PEG40, PEG50-PEG60, PEG60-PEG70, PEG70-PEG80, PEG80-PEG90, PEG90-PEG100) 중 어느 하나로부터 선택될 수 있다. 일부 실시형태에서, Lc는 PEG 링커를 포함하며, 식 중, LC는 Q 및 E 각각에 공유 부착된다.
본 명세서에 기재된 접합체에서 사용될 수 있는 화학식 (D-L-I)의 링커는 하기를 포함하지만 이들로 제한되지 않는다:
Figure pct00503
Figure pct00504
Figure pct00505
Figure pct00506
Figure pct00507
Figure pct00508
Figure pct00509
Figure pct00510
Figure pct00511
Figure pct00512
Figure pct00513
식 중, z1 및 z2는 각각 독립적으로, 1 내지 20의 정수이고; R9는 H, C1-C20 알킬, C3-C20 사이클로알킬, C3-C20 헤테로사이클로알킬; C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택된다.
화학식 (D-L-I)의 링커는 또한 하기 중 임의의 것을 포함할 수 있다:
Figure pct00514
Figure pct00515
Figure pct00516
Figure pct00517
뉴라미니다제 저해제의 단량체에 공유 연결된 Fc 도메인 또는 알부민 단백질을 갖는 접합체 내의 링커
본 명세서에 기재된 바와 같은 뉴라미니다제 저해제의 1개 이상의 단량체에 공유 연결된 Fc 도메인 단량체, Fc 도메인, Fc-결합 펩타이드, 알부민 단백질 또는 알부민 단백질-결합 펩타이드를 함유하는 접합체에서, 접합체 내의 링커(예를 들어, L 또는 L')는 2개의 아암을 갖는 2가 구조일 수 있다. 2가 링커 내의 1개의 아암은 뉴라미니다제 저해제의 단량체에 부착될 수 있고, 다른 아암은 Fc 도메인 단량체, Fc 도메인, Fc-결합 펩타이드, 알부민 단백질 또는 알부민 단백질-결합 펩타이드에 부착될 수 있다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 접합체에서 뉴라미니다제 저해제의 1개 이상의 단량체는 각각, 독립적으로, Fc 도메인 단량체 및 Fc 도메인, Fc-결합 펩타이드, 알부민 단백질 또는 알부민 단백질-결합 펩타이드 내의 원자에 연결될 수 있다.
일부 실시형태에서, 링커는 하기 화학식 (M-L-I)로 기재된다:
Figure pct00518
식 중, J1은 뉴라미니다제 저해제에 부착된 결합이고; J2는 Fc 도메인 단량체, Fc 도메인, Fc-결합 펩타이드, 알부민 단백질 또는 알부민 단백질-결합 펩타이드 또는 Fc 도메인 단량체, Fc 도메인, Fc-결합 펩타이드, 알부민 단백질 또는 알부민 단백질-결합 펩타이드에 접합된 작용기와 반응할 수 있는 작용기(예를 들어, 말레이미드 및 시스테인, 아민 및 활성화된 카복실산, 티올 및 말레이미드, 활성화된 설폰산 및 아민, 아이소사이아네이트 및 아민, 아자이드 및 알킨, 및 알켄 및 테트라진)에 부착된 결합이고; Q1, Q2, Q3, Q4 및 Q5 각각은 독립적으로, 선택적으로 치환된 C1-C20 알킬렌, 선택적으로 치환된 C1-C20 헤테로알킬렌, 선택적으로 치환된 C2-C20 알켄일렌, 선택적으로 치환된 C2-C20 헤테로알켄일렌, 선택적으로 치환된 C2-C20 알킨일렌, 선택적으로 치환된 C2-C20 헤테로알킨일렌, 선택적으로 치환된 C3-C20 사이클로알킬렌, 선택적으로 치환된 C3-C20 헤테로사이클로알킬렌, 선택적으로 치환된 C4-C20 사이클로알켄일렌, 선택적으로 치환된 C4-C20 헤테로사이클로알켄일렌, 선택적으로 치환된 C8-C20 사이클로알킨일렌, 선택적으로 치환된 C8-C20 헤테로사이클로알킨일렌, 선택적으로 치환된 C5-C15 아릴렌 또는 선택적으로 치환된 C2-C15 헤테로아릴렌이며; T1, T2, T3, T4 각각은 독립적으로, O, S, NRi, P, 카보닐, 티오카보닐, 설포닐, 포스페이트, 포스포릴 또는 이미노이고; Ri는 H, 선택적으로 치환된 C1-C20 알킬, 선택적으로 치환된 C1-C20 헤테로알킬, 선택적으로 치환된 C2-C20 알켄일, 선택적으로 치환된 C2-C20 헤테로알켄일, 선택적으로 치환된 C2-C20 알킨일, 선택적으로 치환된 C2-C20 헤테로알킨일, 선택적으로 치환된 C3-C20 사이클로알킬, 선택적으로 치환된 C3-C20 헤테로사이클로알킬, 선택적으로 치환된 C4-C20 사이클로알켄일, 선택적으로 치환된 C4-C20 헤테로사이클로알켄일, 선택적으로 치환된 C8-C20 사이클로알킨일, 선택적으로 치환된 C8-C20 헤테로사이클로알킨일, 선택적으로 치환된 C5-C15 아릴 또는 선택적으로 치환된 C2-C15 헤테로아릴이며; g, h, i, j, k, l, m, n 및 o 각각은 독립적으로, 0 또는 1이다.
일부 실시형태에서, J2는 Fc 도메인 단량체 및 Fc 도메인, Fc-결합 펩타이드, 알부민 단백질 또는 알부민 단백질-결합 펩타이드에 대해서 2개의 부착점(예를 들어, 2개의 J2)을 가질 수 있다.
본 명세서에 기재된 접합체에서 사용될 수 있는 화학식 (M-L-I)의 링커는 하기를 포함하지만 이들로 제한되지 않는다:
Figure pct00519
식 중, d는 1 내지 20의 정수(예를 들어, d는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20임)이다.
본 명세서에 기재된 접합체에서 사용될 수 있는 화학식 (M-L-I)의 링커는 하기를 포함하지만 이들로 제한되지 않고, 식 중, d 및 e 각각은, 독립적으로, 1 내지 26의 정수이다:
Figure pct00520
Figure pct00521
연결기
일부 실시형태에서, 링커는 뉴라미니다제 저해제와 본 명세서에 기재된 접합체 내의 Fc 도메인 단량체 및 Fc 도메인, Fc-결합 펩타이드, 알부민 단백질 또는 알부민 단백질-결합 펩타이드 또는 본 명세서에 기재된 접합체 내의 2개의 뉴라미니다제 저해제 사이에 공간, 강성 및/또는 가요성을 제공한다. 일부 실시형태에서, 링커는 화학 반응, 예를 들어, 화학 접합으로부터 생성된 결합, 공유 결합, 예를 들어, 아마이드 결합, 다이설파이드 결합, C-O 결합, C-N 결합, N-N 결합, C-S 결합 또는 임의의 부류의 결합일 수 있다. 일부 실시형태에서, 링커(화학식 (1) 내지 (5), (D-I) 내지 (D-X), (D'-I), (M-I) 내지 (M-X) 또는 (M'-I) 중 어느 하나에 도시된 바와 같은 L 또는 L')는 250개 이하의 원자(예를 들어, 1 내지 2개, 1 내지 4개, 1 내지 6개, 1 내지 8개, 1 내지 10개, 1 내지 12개, 1 내지 14개, 1 내지 16개, 1 내지 18개, 1 내지 20개, 1 내지 25개, 1 내지 30개, 1 내지 35개, 1 내지 40개, 1 내지 45개, 1 내지 50개, 1 내지 55개, 1 내지 60개, 1 내지 65개, 1 내지 70개, 1 내지 75개, 1 내지 80개, 1 내지 85개, 1 내지 90개, 1 내지 95개, 1 내지 100개, 1 내지 110개, 1 내지 120개, 1 내지 130개, 1 내지 140, 1 내지 150, 1 내지 160, 1 내지 170, 1 내지 180, 1 내지 190, 1 내지 200개, 1 내지 210개, 1 내지 220개, 1 내지 230개, 1 내지 240개 또는 1 내지 250개 원자(들); 250, 240, 230, 220, 210, 200, 190, 180, 170, 160, 150, 140, 130, 120, 110, 100, 95, 90, 85, 80, 75, 70, 65, 60, 55, 50, 45, 40, 35, 30, 28, 26, 24, 22, 20, 18, 16, 14, 12, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 또는 1개의 원자(들))를 포함한다. 일부 실시형태에서, 링커(L 또는 L')는 250개 이하의 비-수소 원자(예를 들어, 1 내지 2개, 1 내지 4개, 1 내지 6개, 1 내지 8개, 1 내지 10개, 1 내지 12개, 1 내지 14개, 1 내지 16개, 1 내지 18개, 1 내지 20개, 1 내지 25개, 1 내지 30개, 1 내지 35개, 1 내지 40개, 1 내지 45개, 1 내지 50개, 1 내지 55개, 1 내지 60개, 1 내지 65개, 1 내지 70개, 1 내지 75개, 1 내지 80개, 1 내지 85개, 1 내지 90개, 1 내지 95개, 1 내지 100개, 1 내지 110개, 1 내지 120개, 1 내지 130개, 1 내지 140, 1 내지 150, 1 내지 160, 1 내지 170, 1 내지 180, 1 내지 190, 1 내지 200개, 1 내지 210개, 1 내지 220개, 1 내지 230개, 1 내지 240개 또는 1 내지 250개의 비-수소 원자(들); 250, 240, 230, 220, 210, 200, 190, 180, 170, 160, 150, 140, 130, 120, 110, 100, 95, 90, 85, 80, 75, 70, 65, 60, 55, 50, 45, 40, 35, 30, 28, 26, 24, 22, 20, 18, 16, 14, 12, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 또는 1개의 비-수소 원자(들))를 포함한다. 일부 실시형태에서, 링커(L 또는 L')의 골격 250개 이하의 비-수소 원자(예를 들어, 1 내지 2개, 1 내지 4개, 1 내지 6개, 1 내지 8개, 1 내지 10개, 1 내지 12개, 1 내지 14개, 1 내지 16개, 1 내지 18개, 1 내지 20개, 1 내지 25개, 1 내지 30개, 1 내지 35개, 1 내지 40개, 1 내지 45개, 1 내지 50개, 1 내지 55개, 1 내지 60개, 1 내지 65개, 1 내지 70개, 1 내지 75개, 1 내지 80개, 1 내지 85개, 1 내지 90개, 1 내지 95개, 1 내지 100개, 1 내지 110개, 1 내지 120개, 1 내지 130개, 1 내지 140, 1 내지 150, 1 내지 160, 1 내지 170, 1 내지 180, 1 내지 190, 1 내지 200개, 1 내지 210개, 1 내지 220개, 1 내지 230개, 1 내지 240개 또는 1 내지 250개의 원자(들); 250, 240, 230, 220, 210, 200, 190, 180, 170, 160, 150, 140, 130, 120, 110, 100, 95, 90, 85, 80, 75, 70, 65, 60, 55, 50, 45, 40, 35, 30, 28, 26, 24, 22, 20, 18, 16, 14, 12, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 또는 1개의 원자(들))를 포함한다. 링커의 "골격"은 접합체의 하나의 부분으로부터 접합체의 또 다른 부분까지의 가장 짧은 경로를 함께 형성하는 링커 내의 원자를 지칭한다. 링커의 골격 내의 원자는 접합체의 하나의 부분을 접합체의 또 다른 부분에 연결하는 것에 직접 관련된다. 예를 들어, 링커의 골격 내의 탄소에 부착된 수소 원자는 접합체의 하나의 부분을 접합체의 또 다른 부분에 연결하는 것에 직접 관련되는 것으로 간주되지 않는다.
링커(L 또는 L')를 만드는데 사용될 수 있는 분자는 적어도 2개의 작용기, 예를 들어, 2개의 카복실산기를 포함한다. 3가 링커의 일부 실시형태에서, 링커의 2개의 아암은 2개의 다이카복실산을 함유할 수 있는데, 여기서 제1 카복실산은 접합체 내의 제1 뉴라미니다제 저해제와 공유 링키지를 형성할 수 있고, 제2 카복실산은 접합체 내의 제2 뉴라미니다제 저해제와 공유 링키지를 형성할 수 있고, 링커의 제3 아암은 접합체 내의 Fc 도메인 단량체, Fc 도메인, Fc-결합 펩타이드, 알부민 단백질 또는 알부민 단백질-결팝 펩타이드와 공유 링키지(예를 들어, C-O 결합)를 형성할 수 있다. 2가 링커의 일부 실시형태에서, 2가 링커는 2개의 카복실산을 함유할 수 있는데, 여기서 제1 카복실산은 접합체 내의 하나의 성분(예를 들어, 뉴라미니다제 저해제)과 공유 링키지를 형성할 수 있고, 제2 카복실산은 접합체 내의 또 다른 성분(예를 들어, Fc 도메인 단량체, Fc 도메인, Fc-결합 펩타이드, 알부민 단백질 또는 알부민 단백질-결합 펩타이드)과 공유 링키지(예를 들어, C-S 결합 또는 C-N 결합)를 형성할 수 있다.
일부 실시형태에서, 다이카복실산 분자는 링커(예를 들어, 다이카복실산 링커)로서 사용될 수 있다. 예를 들어, 뉴라미니다제 저해제의 1개 이상의 이량체에 공유 연결된 Fc 도메인 단량체, Fc 도메인, Fc-결합 펩타이드, 알부민 단백질 또는 알부민 단백질-결합 펩타이드를 함유하는 접합체에서, 다이카복실산 분자 내의 제1 카복실산은 제1 뉴라미니다제 저해제의 하이드록실 또는 아민기와 공유 링키지를 형성할 수 있고, 제2 카복실산은 제2 뉴라미니다제 저해제의 하이드록실 또는 아민기와 공유 링키지를 형성할 수 있다.
링커를 형성하는데 사용될 수 있는 다이카복실산 분자의 예는 하기를 포함하지만 이들로 제한되지 않는다:
Figure pct00522
Figure pct00523
식 중, n는 1 내지 20의 정수(예를 들어, n은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20임)이다.
링커를 형성하는데 사용될 수 있는 다이카복실산 분자의 다른 예는 하기를 포함하지만 이들로 제한되지 않는다:
Figure pct00524
Figure pct00525
일부 실시형태에서, 다이카복실산 분자, 예컨대, 본 명세서에 기재된 것은 1개 이상의 추가적인 작용기를 함유하도록 추가로 작용화될 수 있다. 다이카복실산은 예를 들어, Fc 도메인 단량체, Fc 도메인, Fc-결합 펩타이드, 알부민 단백질 또는 알부민 단백질-결합 펩타이드(예를 들어, 링커, 예컨대, PEG 링커의 방식으로)에 대한 부착점을 제공하도록 추가로 작용화될 수 있다.
일부 실시형태에서, 뉴라미니다제 저해제가 Fc 도메인 단량체, Fc 도메인, Fc-결합 펩타이드, 알부민 단백질 또는 알부민 단백질-결합 펩타이드에 부착되는 경우, 연결기는 1 내지 25개 원자만큼 이격된 카복실산 모이어티 및 아미노 모이어티를 포함하는 모이어티를 포함할 수 있다. 이러한 연결기의 예는 하기를 포함하지만 이들로 제한되지 않는다:
Figure pct00526
식 중, n은 1 내지 20의 정수(예를 들어, n은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20임)이다.
일부 실시형태에서, 연결기는 카복실산 모이어티 및 아미노 모이어티를 포함하는 모이어티를 포함할 수 있고, 예컨대, 본 명세서에 기재된 것은 1개 이상의 추가적인 작용기를 함유하도록 추가로 작용화될 수 있다. 이러한 연결기는 예를 들어, Fc 도메인 단량체, Fc 도메인, Fc-결합 펩타이드, 알부민 단백질 또는 알부민 단백질-결합 펩타이드(예를 들어, 링커, 예컨대, PEG 링커의 방식으로)에 대한 부착점을 제공하도록 추가로 작용화될 수 있다.
일부 실시형태에서, 뉴라미니다제 저해제가 Fc 도메인 단량체, Fc 도메인, Fc-결합 펩타이드, 알부민 단백질 또는 알부민 단백질-결합 펩타이드에 부착되는 경우, 연결기는 1 내지 25개 원자만큼 이격된 2개 또는 아미노 모이어티(예를 들어, 다이아미노 모이어티)를 포함하는 모이어티를 포함할 수 있다. 이러한 연결기의 예는 하기를 포함하지만 이들로 제한되지 않는다:
Figure pct00527
식 중, n은 1 내지 20의 정수(예를 들어, n은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20임)이다.
일부 실시형태에서, 연결기는 다이아미노 모이어티를 포함할 수 있고, 예컨대, 본 명세서에 기재된 것은 1개 이상의 추가적인 작용기를 함유하도록 추가로 작용화될 수 있다. 이러한 다이아미노 연결기는 예를 들어, Fc 도메인 단량체, Fc 도메인, Fc-결합 펩타이드, 알부민 단백질 또는 알부민 단백질-결합 펩타이드(예를 들어, 링커, 예컨대, PEG 링커의 방식으로)에 대한 부착점을 제공하도록 추가로 작용화될 수 있다.
일부 실시형태에서, 아자이드기를 함유하는 분자를 사용하여 링커를 형성할 수 있는데, 여기서 아자이드기는 알킨과 고리화첨가(cycloaddition) 반응하여 1,2,3-트라이아졸 링키지를 형성할 수 있다. 일부 실시형태에서, 알킨기를 함유하는 분자를 사용하여 링커를 형성할 수 있는데, 여기서 알킨기는 아자이드와 고리화첨가 반응하여 1,2,3-트라이아졸 링키지를 형성할 수 있다. 일부 실시형태에서, 말레이미드기를 함유하는 분자를 사용하여 링커를 형성할 수 있는데, 여기서 말레이미드기는 시스테인과 반응하여 C-S 링키지를 형성할 수 있다. 일부 실시형태에서, 1개 이상의 설폰산기를 함유하는 분자를 사용하여 링커를 형성할 수 있는데, 여기서 설폰산기는 뉴라미니다제 저해제 내의 연결 질소와 설폰아마이드 링키지를 형성할 수 있다. 일부 실시형태에서, 1개 이상의 아이소사이아네이트기를 함유하는 분자를 사용하여 링커를 형성할 수 있는데, 여기서 아이소사이아네이트기는 뉴라미니다제 저해제 내의 연결 질소와 유레아 링키지를 형성할 수 있다. 일부 실시형태에서, 1개 이상의 할로알킬기를 함유하는 분자를 사용하여 링커를 형성할 수 있는데, 여기서 할로알킬기는 뉴라미니다제 저해제와 공유 링키지, 예를 들어, C-N 및 C-O 링키지를 형성할 수 있다.
일부 실시형태에서, 링커(L 또는 L')는 예를 들어, 합성 중합체(예를 들어, 폴리에틸렌 글리콜(PEG) 중합체)로부터 유래된 합성기를 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서, 링커는 1개 이상의 아미노산 잔기를 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서, 링커는 아미노산 서열(예를 들어, 1 내지 25개 아미노산, 1 내지 10개 아미노산, 1 내지 9개 아미노산, 1 내지 8개 아미노산, 1 내지 7개 아미노산, 1 내지 6개 아미노산, 1 내지 5개 아미노산, 1 내지 4개 아미노산, 1 내지 3개 아미노산, 1 내지 2개 아미노산 또는 1개 아미노산 서열)일 수 있다. 일부 실시형태에서, 링커(L 또는 L')는 1개 이상의 선택적으로 치환된 C1-C20 알킬렌, 선택적으로 치환된 C1-C20 헤테로알킬렌(예를 들어, PEG 단위), 선택적으로 치환된 C2-C20 알켄일렌(예를 들어, C2 알켄일렌), 선택적으로 치환된 C2-C20 헤테로알켄일렌, 선택적으로 치환된 C2-C20 알킨일렌, 선택적으로 치환된 C2-C20 헤테로알킨일렌, 선택적으로 치환된 C3-C20 사이클로알킬렌(예를 들어, 사이클로프로필렌, 사이클로부틸렌), 선택적으로 치환된 C3-C20 헤테로사이클로알킬렌, 선택적으로 치환된 C4-C20 사이클로알켄일렌, 선택적으로 치환된 C4-C20 헤테로사이클로알켄일렌, 선택적으로 치환된 C8-C20 사이클로알킨일렌, 선택적으로 치환된 C8-C20 헤테로사이클로알킨일렌, 선택적으로 치환된 C5-C15 아릴렌(예를 들어, C6 아릴렌), 선택적으로 치환된 C2-C15 헤테로아릴렌(예를 들어, 이미다졸, 피리딘), O, S, NRi(Ri는 H, 선택적으로 치환된 C1-C20 알킬, 선택적으로 치환된 C1-C20 헤테로알킬, 선택적으로 치환된 C2-C20 알켄일, 선택적으로 치환된 C2-C20 헤테로알켄일, 선택적으로 치환된 C2-C20 알킨일, 선택적으로 치환된 C2-C20 헤테로알킨일, 선택적으로 치환된 C3-C20 사이클로알킬, 선택적으로 치환된 C3-C20 헤테로사이클로알킬, 선택적으로 치환된 C4-C20 사이클로알켄일, 선택적으로 치환된 C4-C20 헤테로사이클로알켄일, 선택적으로 치환된 C8-C20 사이클로알킨일, 선택적으로 치환된 C8-C20 헤테로사이클로알킨일, 선택적으로 치환된 C5-C15 아릴 또는 선택적으로 치환된 C2-C15 헤테로아릴임), P, 카보닐, 티오카보닐, 설포닐, 포스페이트, 포스포릴 또는 이미노를 포함할 수 있다.
접합 화학
(예를 들어, 접합체 화학식 (1) 내지 (5), (D-I) 내지 (D-X), (D'-I), (M-I) 내지 (M-X) 또는 (M'-I) 중 어느 하나의 접합체에서) 뉴라미니다제 저해제 단량체 또는 이량체는 예를 들어, 링커의 방식으로, 당업자에게 공지된 임의의 표준 접합 화학에 의해서 Fc 도메인 단량체, Fc 도메인, Fc-결합 펩타이드, 알부민 단백질 또는 알부민 단백질-결합 펩타이드에 접합될 수 있다. 예를 들어, Fc 도메인 단량체, Fc 도메인, Fc-결합 펩타이드, 알부민 단백질 또는 알부민 단백질-결합 펩타이드에 대한 PEG 링커(예를 들어, 작용화된 PEG 링커)의 접합을 위해서 하기 접합 화학이 구체적으로 고려된다.
링커를 사용하여 접합체에서 2개 이상의 성분을 접합하는 것은 널리 공지된 유기 화학 합성 기술 및 방법을 사용하여 달성될 수 있다. 2개의 성분 상의 상보적 작용기는 서로와 반응하여 공유 결합을 형성할 수 있다. 상보적 반응성 작용기의 예는 예를 들어, 말레이미드 및 시스테인, 아민 및 활성화된 카복실산, 티올 및 말레이미드, 활성화된 설폰산 및 아민, 아이소사이아네이트 및 아민, 아자이드 및 알킨, 및 알켄 및 테트라진을 포함하지만 이들로 제한되지 않는다. 폴리펩타이드(예를 들어, Fc 도메인 단량체, Fc 도메인, Fc-결합 펩타이드, 알부민 단백질 또는 알부민 단백질-결합 펩타이드)에 대한 부위-특이적 접합은 당업계에 공지된 기술을 사용하여 달성될 수 있다. Fc 도메인에 대한 소분자의 부위-특이적 접합에 대한 예시적인 기술은 문헌[Agarwall. P., et al. Bioconjugate Chem. 26:176-192 (2015)]에 기재되어 있다.
아미노기와 반응할 수 있는 작용기의 다른 예는 예를 들어, 알킬화제 및 아실화제를 포함한다. 대표적인 알킬화제는 (i) α-할로아세틸기, 예를 들어, XCH2CO-(식 중, X=Br, Cl, 또는 I임); (ii) 마이클 유형 반응을 통해서 또는 고리 카보닐기에 대한 첨가에 의한 아실화를 통해서 아미노기와 반응할 수 있는 N-말레이미드기; (iii) 아릴 할라이드, 예를 들어, 나이트로할로방향족기; (iv) 알킬 할라이드; (v) 아미노기와 쉬프(Schiff) 염기를 형성할 수 있는 알데하이드 또는 케톤; (vi) 아미노, 설프하이드릴 또는 페놀 하이드록실기와 반응할 수 있는 에폭사이드, 예를 들어, 에피클로로하이드린 및 비스옥시란; (vii) 친핵체, 예컨대, 아미노, 설프하이드릴 및 하이드록실기에 대해서 반응성인 s-트라이아진의 염소-함유; (viii) 개환에 의해서 친핵체, 예컨대, 아미노기에 대해서 반응성인 아지리딘; (ix) 스쿠아르산 다이에틸 에스터; 및 (x) α-할로알킬 에터를 포함한다.
아미노-반응성 아실화기의 예는 예를 들어, (i) 아이소사이아네이트 및 아이소티오사이아네이트; (ii) 설포닐 클로라이드; (iii) 산 할라이드; (iv) 활성 에스터, 예를 들어, 나이트로페닐에스터 또는 N-하이드록시석신이미딜 에스터 또는 이의 유도체(예를 들어, 아지도-PEG2-PEG40-NHS 에스터); (v) 산 무수물, 예를 들어, 혼합, 대칭 또는 N-카복시무수물; (vi) 아실아자이드; 및 (vii) 이미도에스터를 포함한다. 알데하이드 및 케톤은 아민을 아민과 반응시켜 쉬프 염기를 형성할 수 있고, 이것은 환원성 아민화를 통해서 안정화될 수 있다.
예를 들어, 추가 반응성 또는 선택성을 부여하기 위해서, 특정 작용기를 반응 전에 다른 작용기로 전환시킬 수 있다. 이러한 목적에 유용한 방법의 예는 시약, 예컨대, 다이카복실산 무수물을 사용한 아민의 카복실로의 전환; 시약, 예컨대, N-아세틸호모시스테인 티오락톤, S-아세틸머캅토석신산 무수물, 2-이미노티올란 또는 티올-함유 석신이미딜 유도체를 사용한 아민의 티올로의 전환; 시약, 예컨대, -할로아세테이트를 사용한 티올의 카복실로의 전환; 시약, 예컨대, 에틸렌이민 또는 2-브로모에틸아민을 사용한 티올의 아민으로의 전환; 시약, 예컨대, 카보다이이미드, 그 다음 다이아민을 사용한 카복실의 아민으로의 전환; 및 시약, 예컨대, 토실 클로라이드, 그 다음 티오아세테이트를 사용한 트랜스에스터화 및 아세트산나트륨을 사용한 티올로의 가수분해를 사용한 알코올의 티올로의 전환을 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 발명의 링커(예를 들어, L 또는 L', 예컨대, D-L-I의 LC)는 E(예를 들어, Fc 도메인 또는 알부민 단백질)에 (예를 들어, 본 명세서에 기재된 방법 중 임의의 것에 의해서) 접합된다. 본 발명의 바람직한 실시형태에서, 링커는 (a) E의 라이신에 대한 티오유레아 링키지(즉, -NH(C=S)NH-); (b) E의 라이신에 대한 카바메이트 링키지(즉, -NH(C=O)-O); (c) 라이신과 E 간의 환원성 아민화(즉, -NHCH2)에 의한 아민 링키지; (d) E의 라이신에 대한 아마이드(즉, -NH-(C=O)CH2); (e) E의 시스테인에 대한 링커의 말레이미드 간의 시스테인-말레이미드 접합체; (f) 링커와 E의 탄수화물(예를 들어, Fc 도메인 단량체 또는 Fc 도메인의 글리코실기) 간의 환원성 아민화(즉, -NHCH2)에 의한 아민 링키지; (g) 리브리징된 시스테인 접합체(여기서 링커는 E의 2개의 시스테인에 접합됨); (h) 링커와 E의 탄수화물(예를 들어, Fc 도메인 단량체 또는 Fc 도메인의 글리코실기) 간의 옥심 링키지; (i) 링커와 E의 아미노산 잔기 간의 옥심 링키지; (j) 링커와 E 간의 아지도 링키지; (k) E에 대한 링커의 직접 아실화; 또는 (l) 링커와 E 간의 티오에터 링키지의 방식으로 접합된다.
일부 실시형태에서, 링커는 E에 접합되며, 여기서 링키지는 구조식 -NH(C=NH)X-를 포함하며, 식 중, X는 O, HN 또는 결합이다. 일부 실시형태에서, 링커는 E에 접합되며, 여기서 링커의 잔여부와 E 간의 링키지는 구조식 -NH(C=O)NH-를 포함한다.
일부 실시형태에서, 링커(예를 들어, 활성 에스터, 예를 들어, 나이트로페닐에스터 또는 N-하이드록시석신이미딜 에스터 또는 이의 유도체(예를 들어, 작용화된 PEG 링커(예를 들어, 아지도-PEG2-PEG40-NHS 에스터)는 E에 접합되며, T(예를 들어, DAR)는 0.5 내지 10.0, 예를 들어, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1, 1.1, 1.2, 1.3, 1.4, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8, 1.9, 2, 2.1, 2.2, 2.3, 2.4, 2.5, 2.6, 2.7, 2.8, 2.9, 3, 3.1, 3.2, 3.3, 3.4, 3.5, 3.6, 3.7, 3.8, 3.9, 4, 4.1, 4.2, 4.3, 4.4, 4.5, 4.6, 4.7, 4.8, 4.9, 5.0, 5.1, 5.2, 5.3, 5.4, 5.5, 5.6, 5.7, 5.8, 5.9, 6.0, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4, 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, 6.9, 7.0, 7.1, 7.2, 7.3, 7.4, 7.5, 7.6, 7.7, 7.8.0, 7.9, 8, 8.1, 8.2, 8.3, 8.4, 8.5, 8.6, 8.7, 8.8, 8.9, 9.0, 9.1, 9.2, 9.3, 9.4, 9.5, 9.6, 9.7, 9.8, 9.9 또는 10.0의 이다. 이러한 예에서, E-(PEG2-PEG40)-아자이드는 클릭 접합을 통해서 말단 알킨 링커(예를 들어, L 또는 L', 예컨대, D-L-I의LC)를 갖는 Int와 반응할 수 있다. 클립 접합 동안, 아자이드(예를 들어, Fc-(PEG2-PEG40)-아자이드)와 알킨(예를 들어, 말단 알킨 링커(예를 들어, L 또는 L', 예컨대, D-L-I의 LC)를 갖는 Int)의 구리 촉매화 반응은 5원의 헤테로원자 고리를 형성한다. 일부 실시형태에서, E에 접합된 링커는 말단 알킨이고, 말단 아자이드를 갖는 Int에 접합된다. E-(PEG2-PEG40)-아자이드의 예시적인 제조 방법은 실시예 7, 8, 61, 84, 88 및 124에 기재되어 있다. 클릭 접합을 통해서 제조된 접합체의 예시적인 도면은 도 43 및 도 61에 도시되어 있다. 당업자는 클릭 화학 접합으로부터의 최종 생성물을 쉽게 이해할 것이다.
예시적인 연결 전략(예를 들어, 예컨대, 링커의 방식으로 뉴라미니다제 저해제의 단량체 또는 이량체를 E에 연결하는 방법)은 도 1, 도 28, 도 29, 도 30, 도 43 및 도 61에 추가로 도시되어 있다.
VI. 병용 요법
항바이러스제
일부 실시형태에서, 1종 이상의 항바이러스제는 본 명세서에 기재된 접합체(예를 들어, 화학식 (1) 내지 (5), (D-I) 내지 (D-X), (D'-I), (M-I) 내지 (M-X) 또는 (M'-I) 중 어느 하나의 접합체)와 병용으로 투여(예를 들어, 실질적으로 동시에(예를 들어, 동일한 약제학적 조성물로 또는 개별 약제학적 조성물로) 투여되거나 상이한 시간에 별개로 투여)될 수 있다.
일부 실시형태에서, 항바이러스제는 인플루엔자 바이러스의 치료를 위한 항바이러스제이다. 예를 들어, 항바이러스제는 M2 이온 채널 차단제, 뉴라미니다제 저해제(예를 들어, 장기간 작용 뉴라미니다제 저해제), 중합효소 저해제, 헤마글루티닌 저해제, 융합 단백질 저해제, COX-2 저해제 또는 PPAR 효능제일 수 있다. 항바이러스제는 바이러스 또는 숙주 대상체를 표적으로 할 수 있다. 본 명세서에 기재된 접합체(예를 들어, 화학식 (1) 내지 (5), (D-I) 내지 (D-X), (D'-I), (M-I) 내지 (M-X) 또는 (M'-I) 중 어느 하나의 접합체)와 조합하여 사용되는 인플루엔자 바이러스의 치료를 위한 항바이러스제는 오셀타미비어, 자나미비어, 페라미비어, 라니나미비어, CS-8958, 아만타딘, 리만타딘, 사이아노비린-N, cap-의존성 엔도뉴클레아제 저해제(예를 들어, 발록사비어 마복실), 중합효소 저해제(예를 들어, T-705), PB2 저해제(예를 들어, JNJ-63623872), 접합된 시알리다제(예를 들어, DAS181), 티아졸리드(예를 들어, 니타족사나이드), COX 저해제, PPAR 효능제, 헤마글루티닌-표적화 항체(예를 들어, 단클론성 항체, 예컨대, CR6261, CR8020, MEDI8852, MHAA4549A 또는 VIS410) 또는 숙주 또는 바이러스 유전자를 표적으로 하는 siRNA 또는 이의 전구약물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염으로부터 선택될 수 있다.
항바이러스 백신
일부 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 접합체 중 어느 하나(예를 들어, 화학식 (1) 내지 (5), (D-I) 내지 (D-X), (D'-I), (M-I) 내지 (M-X) 또는 (M'-I) 중 어느 하나의 접합체)는 항바이러스 백신(예를 들어, 바이러스에 대해서 지향되는 대상체에 면역 반응을 도출하는 조성물)과 병용하여 투여된다. 항바이러스 백신은 접합체로서 실질적으로 동시에(예를 들어, 동일한 약제학적 조성물로 또는 개별 약제학적 조성물로) 투여될 수 있거나 또는 접합체 이전에 또는 이후에(예를 들어, 1일, 2일, 5일, 1주, 2주, 3주, 1개월, 2개월, 6개월 또는 12개월 또는 그 초과의 기간 내에) 투여될 수 있다.
일부 실시형태에서, 바이러스 백신은 대상체에서 인플루엔자 바이러스 A, B, C 또는 파라인플루엔자 바이러스에 대해서 면역 반응을 도출하는 면역원을 포함한다. 일부 실시형태에서 면역원은 불활성화된 바이러스이다(예를 들어, 백신은 정제되고, 불활성화된 물질 인플루엔자 바이러스 A, B, C 또는 파라인플루엔자 바이러스 또는 이의 임의의 조합물을 함유하는 3가 인플루엔자 백신이다). 일부 실시형태에서 백신은 근육내 주사로서 제공된다. 일부 실시형태에서, 백신은 약독화된(약해진) 생 바이러스를 함유하는 생 바이러스 백신이다. 일부 실시형태에서 백신은 비강 스프레이로서 투여된다.
VII. 방법
본 명세서에 기재된 방법은 예를 들어, 대상체에서 바이러스 감염(예를 들어, 인플루엔자 바이러스 감염)에 대해서 보호하거나 바이러스 감염을 치료하는 방법, 바이러스 입자의 성장을 예방하거나, 안정화시키거나, 저해하는 방법을 포함한다. 대상체에서 바이러스 감염(예를 들어, 인플루엔자 바이러스 감염)을 치료하는 방법은 대상체에게 본 명세서에 기재된 접합체(예를 들어, 화학식 (1) 내지 (5), (D-I) 내지 (D-X), (D'-I), (M-I) 내지 (M-X) 또는 (M'-I) 중 어느 하나의 접합체) 또는 이의 약제학적 조성물을 투여하는 단계를 포함한다. 일부 실시형태에서, 바이러스 감염은 인플루엔자 바이러스(예를 들어, 인플루엔자 바이러스 A, B, C 또는 파라인플루엔자 바이러스)에 의해서 야기된다. 일부 실시형태에서, 바이러스 감염은 바이러스의 내성 균주에 의해서 야기된다. 바이러스 입자의 성장을 예방, 안정화 또는 저해하는 방법 또는 바이러스의 복제 및 확산을 예방하는 방법은 바이러스 또는 바이러스 성장에 민감한 부위를 본 명세서에 기재된 접합체(예를 들어, 화학식 (1) 내지 (5), (D-I) 내지 (D-X), (D'-I), (M-I) 내지 (M-X) 또는 (M'-I) 중 어느 하나의 접합체) 또는 이의 약제학적 조성물과 접촉시키는 단계를 포함한다.
더욱이, 본 명세서에 기재된 방법은 또한 대상체에게 본 명세서에 기재된 접합체(예를 들어, 화학식 (1) 내지 (5), (D-I) 내지 (D-X), (D'-I), (M-I) 내지 (M-X) 또는 (M'-I) 중 어느 하나의 접합체)를 투여함으로써 대상체에서 바이러스 감염에 대해서 보호하거나 바이러스 감염을 치료하는 방법을 포함한다. 일부 실시형태에서, 방법은 대상체에게 항바이러스제 또는 항바이러스 백신을 투여하는 단계를 추가로 포함한다.
본 명세서에 기재된 방법은 또한 상기 대상체에게 (1) 본 명세서에 기재된 접합체(예를 들어, 화학식 (1) 내지 (5), (D-I) 내지 (D-X), (D'-I), (M-I) 내지 (M-X) 또는 (M'-I) 중 어느 하나의 접합체) 및 (2) 항바이러스제 또는 항바이러스 백신을 투여함으로써 대상체에서 바이러스 감염에 대해서 보호하거나 바이러스 감염을 치료하는 방법을 포함한다. 본 명세서에 기재된 방법은 또한 바이러스 또는 바이러스 성장에 민감한 부위를 (1) 본 명세서에 기재된 접합체(예를 들어, 화학식 (1) 내지 (5), (D-I) 내지 (D-X), (D'-I), (M-I) 내지 (M-X) 또는 (M'-I) 중 어느 하나의 접합체) 및 (2) 항바이러스제 또는 항바이러스 백신과 접촉시킴으로써 바이러스 입자의 성장을 예방, 안정화 또는 저해하는 방법 또는 바이러스의 복제 또는 확산을 예방하는 방법을 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 접합체(예를 들어, 화학식 (1) 내지 (5), (D-I) 내지 (D-X), (D'-I), (M-I) 내지 (M-X) 또는 (M'-I) 중 어느 하나의 접합체)를 먼저 투여하고, 그 다음 항바이러스제 또는 항바이러스 백신 단독을 투여한다. 일부 실시형태에서, 항바이러스제 또는 항바이러스 백신을 먼저 투여하고, 본 명세서에 기재된 접합체 단독을 투여한다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 접합체 및 항바이러스제 또는 항바이러스 백신은 실질적으로 동시에(예를 들어, 동일한 약제학적 조성물로 또는 개별 약제학적 조성물로) 투여된다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 접합체 또는 항바이러스제 또는 항바이러스 백신을 먼저 투여하고, 그 다음 본 명세서에 기재된 접합체 및 항바이러스제 또는 항바이러스 백신 실질적으로 동시에(예를 들어, 동일한 약제학적 조성물로 또는 개별 약제학적 조성물로) 투여한다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 접합체 및 항바이러스제 또는 항바이러스 백신을 먼저 실질적으로 동시에(를 들어, 동일한 약제학적 조성물로 또는 개별 약제학적 조성물로) 투여하고, 그 다음 본 명세서에 기재된 접합체 또는 항바이러스제 또는 항바이러스 백신을 단독으로 투여한다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 접합체(예를 들어, 화학식 (1) 내지 (5), (D-I) 내지 (D-X), (D'-I), (M-I) 내지 (M-X) 또는 (M'-I) 중 어느 하나의 접합체) 및 항바이러스제 또는 항바이러스 백신을 함께(예를 들어, 동일한 또는 개별 약제학적 조성물로 실질적으로 동시에, 또는 동일한 치료 요법으로 개별적으로) 투여하는 경우, 접합체 및 항바이러스제 또는 항바이러스 백신 각각의 바이러스 복제의 저해는 각각을 치료 요법에서 단독으로 사용하는 경우의 접합체 및 항바이러스제 또는 항바이러스 백신 각각의 바이러스 복제의 저해보다 더 높을 수 있다(예를 들어, 더 낮은 농도에서 일어날 수 있다).
VIII. 약제학적 조성물 및 제제
본 명세서에 기재된 접합체는 본 명세서에 기재된 방법에 사용하기 위해서 약제학적 조성물로 제형화될 수 있다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 접합체는 약제학적 조성물 단독으로 제형화될 수 있다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 접합체는 항바이러스제 또는 항바이러스 백신과 조합하여 약제학적 조성물로 제형화될 수 있다. 일부 실시형태에서, 약제학적 조성물은 본 명세서에 기재된 접합체(예를 들어, 화학식 (1) 내지 (5), (D-I) 내지 (D-X), (D'-I), (M-I) 내지 (M-X) 또는 (M'-I) 중 어느 하나에 기재된 접합체) 및 약제학적으로 허용 가능한 담체 및 부형제를 포함한다.
약제학적 조성물 중의 허용 가능한 담체 및 부형제는 사용되는 투여량 및 농도에서 수혜자에게 비독성이다. 허용 가능한 담체 및 부형제는 완충제, 예컨대, 포스페이트, 시트레이트, HEPES 및 TAE, 항산화제 예컨대, 아스코르브산 및 메티오닌, 보존제, 예컨대, 헥사메토늄 클로라이드, 옥타데실다이메틸벤질 염화암모늄, 레소르시놀 및 벤즈알코늄 클로라이드, 단백질, 예컨대, 인간 혈청 알부민, 젤라틴, 덱스트란 및 면역글로불린, 친수성 중합체, 예컨대, 폴리바이닐피롤리돈, 아미노산 잔기, 예컨대, 글리신, 글루타민, 히스티딘 및 라이신 및 탄수화물, 예컨대, 글루코스, 만노스, 수크로스 및 솔비톨을 포함할 수 있다.
다른 부형제의 예는 부착 방지제, 결합제, 코팅제, 압축 보조제, 붕해제, 염료, 완화제, 유화제, 충전제 (희석제), 막 형성제 또는 코팅제, 플레이버(flavor), 향료, 활택제(유동 향상제), 윤활제, 흡착제, 현탁화제 또는 분산화제, 감미료를 포함하지만 이들로 제한되지 않는다. 예시적인 부형제는 부틸화 하이드록시톨루엔(BHT), 탄산칼슘, 칼슘 포스페이트(이염기성), 스테아르산칼슘, 크로스카르멜로스, 가교된 폴리바이닐 피롤리돈, 시트르산, 크로스포비돈, 시스테인, 에틸셀룰로스, 젤라틴, 하이드록시프로필 셀룰로스, 하이드록시프로필 메틸셀룰로스, 락토스, 스테아르산마그네슘, 말티톨, 만니톨, 메티오닌, 메틸셀룰로스, 메틸 파라벤, 미세결정질 셀룰로스, 폴리에틸렌 글리콜, 포비돈, 전호화 전분, 프로필 파라벤, 레티닐 팔미테이트, 쉘락, 이산화규소, 소듐 카복시메틸 셀룰로스, 시트르산나트륨, 소듐 전분 글리콜레이트, 솔비톨, 전분(옥수수), 스테아르산, 스테아르산, 수크로스, 탤크, 이산화티타늄, 비타민 A, 비타민 E, 비타민 C 및 자일리톨을 포함하지만 이들로 제한되지 않는다.
본 명세서에서 접합체는 약제학적으로 허용 가능한 염으로서 제조할 수 있도록 하는 이온화 가능한 기를 가질 수 있다. 이들 염은 무기산 또는 유기산을 포함하는 산 부가 염일 수 있거나, 염은 본 명세서에서 산성 형태의 접합체의 경우 무기 염기 또는 유기 염기로부터 제조될 수 있다. 종종, 접합체는 약제학적으로 허용 가능한 산 또는 염기의 부가 생성물로서 제조된 약제학적으로 허용 가능한 염으로 제조되거나 사용된다. 적합한 약제학적으로 허용 가능한 산 및 염기는 당업계에 널리 공지되어 있으며, 예를 들어, 산 부가 염을 형성하기 위한 염산, 황산, 브롬민화수소산, 아세트산, 락트산, 시트르산 또는 타타르산 및 염기성 염을 형성하기 위한 수산화칼륨, 수산화나트륨, 수산화암모늄, 카페인, 다양한 아민 등이다. 적절한 염의 제조 방법은 당업계에 잘 확립되어 있다.
대표적인 산 부가 염은 아세테이트, 아디페이트, 알지네이트, 아스코르베이트, 아스파테이트, 벤젠설포네이트, 벤조에이트, 비스설페이트, 보레이트, 부티레이트, 캄포레이트, 캄포설포네이트, 시트레이트, 사이클로펜탄프로피오네이트, 다이글루코네이트, 도데실설페이트, 에탄설포네이트, 퓨마레이트, 글루코헵토네이트, 글리세로포스페이트, 헤미설페이트, 헵토네이트, 헥사노에이트, 하이드로브로마이드, 하이드로클로라이드, 하이드로아이오다이드, 2-하이드록시-에탄설포네이트, 락토바이오네이트, 락테이트, 라우레이트, 라우릴 설페이트, 말레이트, 말레에이트, 말론에이트, 메탄설포네이트, 2-나프탈렌설포네이트, 니코티네이트, 니트레이트, 올레에이트, 옥살레이트, 팔미테이트, 파모에이트, 펙티네이트, 퍼설페이트, 3-페닐프로피오네이트, 포스페이트, 피크레이트, 피발레이트, 프로피오네이트, 스테아레이트, 석시네이트, 설페이트, 타타레이트, 티오사이아네이트, 톨루엔설포네이트, 운데카노에이트 및 발러레이트 염을 포함하지만 이들로 제한되지 않는다. 대표적인 알칼리 또는 알칼리 토금속 염은 나트륨, 리튬, 칼륨, 칼슘 및 마그네슘, 뿐만 아니라 비독성 암모늄, 4차 암모늄 및 아민 양이온, 예컨대, 비제한적으로 암모늄, 테트라메틸암모늄, 테트라에틸암모늄, 메틸아민, 다이메틸아민, 트라이메틸아민, 트라이에틸아민 및 에틸아민을 포함하지만 이들로 제한되지 않는다.
투여 경로 및 투여량에 따라서, 본 명세서에 기재된 방법에 사용되는 본 명세서의 접합체 또는 이의 약제학적 조성물은 손쉬운 전달을 허용하기에 적합한 약제학적 조성물로 제형화될 것이다. 접합체(예를 들어, 화학식 (1) 내지 (5), (D-I) 내지 (D-X), (D'-I), (M-I) 내지 (M-X) 또는 (M'-I) 중 어느 하나의 접합체) 또는 이의 약제학적 조성물은 근육내, 정맥내(예를 들어, 멸균 용액으로서 그리고 정맥내 사용에 적합한 용매 시스템으로), 피부내, 동맥내, 복강내, 병변내, 두개내, 관절내, 전립선내, 두개내, 관절내, 전립선내, 흉막내, 기관내, 비강내, 유리체내, 질내, 직장내, 국지, 종양내, 복막, 피하, 결막하, 방광내, 점막내, 심장내, 배꼽내, 안구내, 경구(예를 들어, 정제, 캡슐, 카플렛, 젤캡 또는 시럽), 국소(예를 들어, 크림, 겔, 로션 또는 연고), 국지, 흡입, 주사, 주입(예를 들어, 연속 주입, 표적 세포를 직접 침지하기 위한 국지화된 관류, 카테터, 세척, 크림 또는 지질 조성물)로 투여되도록 제형화될 수 있다. 투여 경로에 따라서, 본 명세서에서 접합체 또는 이의 약제학적 조성물은 예를 들어, 정제, 캡슐, 환제, 분말, 과립, 현탁액, 에멀션, 용액, 하이드로 겔을 포함하는 겔, 페이스트, 연고, 크림, 플라스터, 드렌치, 삼투 전달 장치, 좌약, 관장제, 주사제, 임플란트, 스프레이, 이온 삼투 전달에 적합한 제제 또는 에어로졸의 형태일 수 있다. 조성물은 종래의 약제학적 실시에 따라서 제형화될 수 있다.
본 명세서에 기재된 접합체는 당업계에 공지된 다양한 방식으로 제형화될 수 있다. 인간 및 동물 대상체의 치료제로서 사용하기 위해서, 본 명세서에 기재된 접합체는 약제학적 또는 수의학적 조성물로 제형화될 수 있다. 치료될 대상체(예를 들어, 인간), 투여 모드 및 목적하는 치료 유형, 예를 들어, 예방적 또는 요법에 따라서, 본 명세서에 기재된 접합체는 이들 파라미터와 일치하는 방식으로 제형화된다. 이러한 기술의 요약은 각각 본 명세서에 참조에 의해 포함된 문헌[Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 22nd Edition, Lippincott Williams & Wilkins (2012); 및 Encyclopedia of Pharmaceutical Technology, 4th Edition, J. Swarbrick and J. C. Boylan, Marcel Dekker, New York (2013)]에서 발견된다.
제형은 전신 투여 또는 국소 또는 국지 투여에 적합한 방식으로 제조될 수 있다. 전신 제형은 주사(예를 들어, 근육내, 정맥내 또는 피하 주사)를 위해서 설계된 것을 포함하거나 경피, 경점막 또는 경구 투여를 위해서 제조될 수 있다. 제형은 일반적으로 희석제뿐만 아니라 일부 경우에 아주반트, 완충제 및 보존제를 포함할 것이다. 접합체는 또한 리포솜 조성물로 또는 마이크로에멀션으로 투여될 수 있다. 전신 투여는 또한 비교적 비침습적 방법, 예컨대, 좌약, 경피 패치, 경점막 전달 및 비내 투여의 사용을 포함할 수 있다. 경구 투여가 또한 본 명세서에서 접합체에 적합하다. 적합한 형태는 당업계에 이해되는 바와 같은 시럽, 캡슐 및 정제를 포함한다.
약제학적 조성물은 주사 가능한 제형의 형태로 비경구로 투여될 수 있다. 주사용 약제학적 조성물은 비히클로서 멸균 용액 또는 임의의 약제학적으로 허용 가능한 액체를 사용하여 제형화될 수 있다. 제형은 주사 전에 용액 또는 액체 현탁액에 적합한 고체 형태로 또는 에멀션으로서 제조될 수 있다. 약제학적으로 허용 가능한 비히클은 멸균수, 생리 식염수 및 세포 배양 배지(예를 들어, 둘베코 변형 이글 배지(Dulbecco's Modified Eagle Medium: DMEM)), α-변형된 이글 배지(α-MEM), F-12 배지)를 포함하지만 이들로 제한되지 않는다. 이러한 주사 가능한 조성물은 또한 임의의 양의 비독성 보조제 물질, 예컨대, 습윤제 또는 유화제, pH 완충제, 예컨대, 아세트산나트륨 및 솔비탄 모노라우레이트를 함유할 수 있다. 제형 방법은 당업계에 널리 공지되어 있으며, 예를 들어, 문헌[Pharmaceutical Preformulation and Formulation, 2nd Edition, M. Gibson, Taylor & Francis Group, CRC Press (2009)]을 참고하기 바란다.
약제학적 조성물은 경구 제형의 형태로 제조될 수 있다. 경구 사용을 위한 제형은 비독성 약제학적으로 허용 가능한 부형제와의 혼합물로 활성 성분(들)을 함유하는 정제를 포함한다. 이들 부형제는 예를 들어, 불활성 희석제 또는 충전제(예를 들어, 수크로스, 솔비톨, 당, 만니톨, 미세결정질 셀룰로스, 감자 전분을 포함한 전분, 탄산칼슘, 염화나트륨, 락토스, 인산카??, 황산칼슘 또는 인산나트륨); 과립화제 및 붕해제(예를 들어, 미세결정질 셀룰로스를 포함하는 셀룰로스 유도체, 감자 전분을 포함하는 전분, 크로스카르멜로스 소듐, 알지네이트 또는 알긴산); 결합제(예를 들어, 수크로스, 글루코스, 솔비톨, 아카시아, 알긴산, 소듐 알기네이트, 젤라틴, 전분, 전호화 전분, 미세결정질 셀룰로스, 마그네슘 알루미늄 실리케이트, 카복시메틸셀룰로스 소듐, 메틸셀룰로스, 하이드록시프로필 메틸셀룰로스, 에틸셀룰로스, 폴리바이닐피롤리돈 또는 폴리에틸렌 글리콜); 및 윤활제, 활택제 및 접착방지제(예를 들어, 마그네슘 스테아레이트, 아연 스테아레이트, 스테아르산, 실리카, 수소화 식물유 또는 탤크)일 수 있다. 경구 사용을 위한 제형은 또한 씹을 수 있는 정제로서 또는 경질 젤라틴 캡슐(여기서 활성 성분은 불활성 고체 희석제(예를 들어, 감자 전분, 락토스, 미세결정질 셀룰로스, 탄산칼슘, 칼슘 포스페이트 또는 카올린)과 혼합됨)로서 또는 연질 젤라틴 캡슐(여기서 활성 성분은 물 또는 오일 매질, 예를 들어, 땅콩유, 액체 파라핀 또는 올리브유와 혼합됨)로 제공될 수 있다. 분말, 과립 및 펠릿은 예를 들어, 혼합기, 유동층 장치 또는 스프레이 건조 장비를 사용하여 통상적인 방식으로 정제 및 캡슐 하에 상기에 언급된 성분을 사용하여 제조될 수 있다.
경구 제형을 위한 다른 약제학적으로 허용 가능한 부형제는 착색제, 향료, 가소제, 휴멕턴트 및 완충제를 포함하지만 이들로 제한되지 않는다. 경구 사용을 위한 제형은 또한 씹을 수 있는 정제로서 또는 경질 젤라틴 캡슐(여기서 활성 성분은 불활성 고체 희석제(예를 들어, 감자 전분, 락토스, 미세결정질 셀룰로스, 탄산칼슘, 칼슘 포스페이트 또는 카올린)과 혼합됨)로서 또는 연질 젤라틴 캡슐(여기서 활성 성분은 물 또는 오일 매질, 예를 들어, 땅콩유, 액체 파라핀 또는 올리브유와 혼합됨)로 제공될 수 있다. 분말, 과립 및 펠릿은 예를 들어, 혼합기, 유동층 장치 또는 스프레이 건조 장비를 사용하여 통상적인 방식으로 정제 및 캡슐 하에 상기에 언급된 성분을 사용하여 제조될 수 있다.
본 명세서에 기재된 접합체(예를 들어, 화학식 (1) 내지 (5), (D-I) 내지 (D-X), (D'-I), (M-I) 내지 (M-X) 또는 (M'-I) 중 어느 하나의 접합체) 또는 이의 약제학적 조성물의 용해 또는 확산 제어형 방출은 접합체의 정제, 캐슐, 펠릿 또는 과립 제형의 적절한 코팅에 의해서 또는 접합체를 적절한 매트릭스에 혼입함으로써 달성될 수 있다. 제어형 방출 코팅은 상기에 언급된 코팅 물질 중 1종 이상 및/또는 예를 들어, 쉘락, 밀랍, 글리코왁스, 카스터 왁스, 카나우바 왁스, 스테아릴 알코올, 글리세릴 모노스테아레이트, 글리세릴 다이스테아레이트, 글리세롤 팔미토스테아레이트, 에틸셀룰로스, 아크릴 수지, dl-폴리락트산, 셀룰로스 아세테이트 부티레이트, 폴리바이닐 클로라이드, 폴리바이닐 아세테이트, 바이닐 피롤리돈, 폴리에틸렌, 폴리메타크릴레이트, 메틸메타크릴레이트, 2-하이드록시메타크릴레이트, 메타크릴레이트 하이드로겔, 1,3 부틸렌 글리콜, 에틸렌 글리콜 메타크릴레이트, 및/또는 폴리에틸렌 글리콜을 포함할 수 있다. 제어형 방출 매트릭스 제형에서, 매트릭스 물질은 또한 예를 들어, 수화된 메틸셀룰로스, 카나우바 왁스 및 스테아릴 알코올, 카보폴 934, 실리콘, 글리세릴 트라이스테아레이트, 메틸 아크릴레이트-메틸 메타크릴레이트, 폴리바이닐 클로라이드, 폴리에틸렌, 및/또는 할로겐화 플루오로탄소를 포함할 수 있다.
약제학적 조성물은 필요에 따라 단위 투여 형태로 형성될 수 있다. 약제학적 조성물에 포함된 활성 성분, 예를 들어, 본 명세서에 기재된 접합체(예를 들어, 화학식 (1) 내지 (5), (D-I) 내지 (D-X), (D'-I), (M-I) 내지 (M-X) 또는 (M'-I) 중 어느 하나의 접합체)의 양은 설계된 범위 내의 적합한 용량이 제공되도록 하는 양이다(예를 들어, 0.01 내지 100㎎/체중 ㎏의 범위 내의 용량).
IX. 투여 경로 및 투여량
본 명세서에 기재된 방법 중 임의의 것에서, 본 명세서에서 접합체는 바이러스 감염(예를 들어, 인플루엔자 감염)을 치료하거나 이에 대해서 보호하기 위해서 또는 바이러스(예를 들어, 인플루엔자 바이러스)의 증식 또는 확산을 예방, 안정화 또는 저해하기 위해서 임의의 적절한 경로에 의해서 투여될 수 있다. 본 명세서에 기재된 접합체는 약제학적으로 허용 가능한 희석제, 담체 또는 부형제와 함께 인간, 애완 동물, 가축 또는 기타 동물에게 투여될 수 있다. 일부 실시형태에서, 투여는 본 명세서에 기재된 접합체(예를 들어, 화학식 (1) 내지 (5), (D-I) 내지 (D-X), (D'-I), (M-I) 내지 (M-X) 또는 (M'-I) 중 어느 하나의 접합체) 또는 조성물의 근육내, 정맥내(예를 들어, 멸균 용액으로서 그리고 정맥내 사용에 적합한 용매 시스템으로), 피부내, 동맥내, 복강내, 병변내, 두개내, 관절내, 전립선내, 두개내, 관절내, 전립선내, 흉막내, 기관내, 비강내, 유리체내, 질내, 직장내, 국지, 종양내, 복막, 피하, 결막하, 방광내, 점막내, 심장내, 배꼽내, 안구내, 경구(예를 들어, 정제, 캡슐, 카플렛, 젤캡 또는 시럽), 국소(예를 들어, 크림, 겔, 로션 또는 연고), 국지, 흡입, 주사, 주입(예를 들어, 연속 주입, 표적 세포를 직접 침지하기 위한 국지화된 관류, 카테터, 세척, 크림 또는 지질 조성물)에 의한 투여를 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 접합체 이외에 항바이러스제가 또한 투여되는 경우, 항바이러스제 또는 이의 약제학적 조성물은 또한 본 명세서에 기재된 투여 경로 중 임의의 것으로 투여될 수 있다.
본 명세서에 기재된 접합체(예를 들어, 화학식 (1) 내지 (5), (D-I) 내지 (D-X), (D'-I), (M-I) 내지 (M-X) 또는 (M'-I) 중 어느 하나의 접합체) 또는 이의 약제학적 조성물의 투여량은 투여 경로, 치료될 질환(예를 들어, 바이러스 감염의 정도 및/또는 병태) 및 대사체의 물리적 특징, 예를 들어, 연령, 체중, 일반적인 건강을 포함하는 인자에 좌우된다. 전형적으로, 단위 용량에 함유된 접합체 또는 이의 약제학적 조성물의 양은 유의한 독성을 유도하지 않으면서, 바이러스 감염을 효과적으로 예방하거나, 지연시키거나, 치료하는 양일 수 있다. 약제학적 조성물은 0.01 내지 500㎎/㎏(예를 들어, 0.01, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 1, 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450 또는 500㎎/㎏)의 범위, 보다 구체적인 실시형태에서는 약 0.1 내지 약 30㎎/㎏, 보다 구체적인 실시형태에서는 약 1 내지 약 30㎎/㎏의 의 본 명세서에 기재된 접합체의 투여량을 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 접합체(예를 들어, 화학식 (1) 내지 (5), (D-I) 내지 (D-X), (D'-I), (M-I) 내지 (M-X) 또는 (M'-I) 중 어느 하나의 접합체) 및 항바이러스제 또는 항바이러스 백신이 (예를 들어, 동일한 또는 개별 약제학적 조성물로 실질적으로 동시에, 또는 동일한 치료 요법으로 개별적으로) 병용하여 투여되는 경우, 본 명세서에 기재된 접합체의 필요한 투여량은 접합체가 치료 요법에서 단독으로 사용되는 경우의 접합체의 필요한 투여량보다 더 낮을 수 있다.
본 명세서에 기재된 접합체(예를 들어, 화학식 (1) 내지 (5), (D-I) 내지 (D-X), (D'-I), (M-I) 내지 (M-X) 또는 (M'-I) 중 어느 하나의 접합체) 또는 이의 약제학적 조성물은 이를 필요로 하는 대상체에게 예를 들어, 매일, 매주, 매월, 2년마다, 매년 또는 의학적으로 필요에 따라서 1회 이상(예를 들어, 1 내지 10회 또는 그 초과; 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10회) 투여될 수 있다. 투여량은 단일 또는 다회 투여량 요법으로 제공될 수 있다. 투여 사이의 시기는 의학적 상태가 개선됨에 따라 감소하거나 환자의 건강이 감소함에 따라 증가할 수 있다. 투여량 및 투여 빈도는 감염 정도 및 대상체의 상이한 파라미터와 같은 통상적 인 요인에 따라 의사에 의해 조정될 수 있다.
실시예
하기 실시예는 본 명세서에 기재된 조성물 및 방법이 어떻게 사용되고, 제조되고, 평가될 수 있는지에 대한 설명을 당업자에게 제공하기 위해 제시되며, 순전히 본 발명의 예시일 뿐만 아니라 본 발명자가 자신의 발명으로 간주하는 범위를 제한하기 위한 것이다.
실시예 1: Fc 작제물의 제조
단백질 작제물(서열번호 1, 3, 5, 7, 9, 12 및 14)을 포함하는 아미노산의 역번역을 고체상 합성으로 합성하였다. 올리고뉴클레오타이드 주형을 클로닝 부위 BamHI 및 XhoI(뉴잉글랜드 앤드 바이오랩스사(New England Biolabs), 미국 매사추세츠주 입스위치 소재)에서 pcDNA3.1(라이프 테크놀로지즈사(Life Technologies), 미국 캘리포니아주 칼스배드 소재)에 클로닝하였고, 인간 인터류킨-2 또는 인간 알부민으로부터 유래된 신호 서열을 포함하였다. pcDNA3.1 플라스미드를 Top10 이. 콜라이(E. coli) 세포(라이프테크사(LifeTech))에 형질전환시켰다. DNA를 증폭시키고, 추출하고, PURELINK® HiPure Plasmid Filter Maxiprep Kit (라이프 테크사)를 사용하여 정제시켰다. 플라스미드 DNA를 ExpiFectamine™ 293 Transfection Kit(라이프 테크사)를 사용하여, 제조사의 프로토콜에 따라서 HEK-293 세포에 전달하였다. 세포를 원심분리시키고, 여과시키고, 상청액을 MabSelect Sure Resin(지이 헬쓰케어사(GE Healthcare), 미국 일리노이주 시카고 소재)을 사용하여 정제시켰다. 1 내지 2㎍의 각각의 분자를 겔에 로딩하고, 인스턴트(instant) Blue 염색을 사용하여 염색함으로써, 정제된 분자를 4 내지 12% Bis Tris SDS PAGE 겔을 사용하여 분석하였다. 각각의 겔은 제시된 분자량 표준품을 갖는 분자량 래더를 포함하였다(도 2 내지 8). 환원 및 비-환원 레인을 "R" 및 "NR"로 나타낸다. 도 2 내지 도 8은 각각 서열번호 1, 3, 5, 7, 9, 12 및 14의 서열을 갖는 Fc 도메인 단량체로부터 형성된 Fc 도메인의 비-환원 및 환원 SDS-PAGE를 도시한다.
실시예 2. 자나미비어 중간체의 합성
Figure pct00528
단계 a.
Figure pct00529
메틸 5-아세트아마이도-7,8,9-O-트라이아세틸-2,6-언하이드로-4-아지도-3,4,5-트라이데옥시-D-글리세로-D-갈락토-논-2-엔오네이트(4.56g, 10.0m㏖)를 무수 THF(15㎖)에 용해시키고, 용액을 대략 13℃까지 냉각시켰다. 트라이페닐포스핀(2.89g, 11m㏖)을 20분에 걸쳐서 나누어 첨가하였다. 생성된 혼합물을 대략 13℃내지 실온에서 2시간 동안 교반하고, 이어서 물 중의 LiOH(24㎎, 1m㏖)의 용액(1.5㎖)을 적가하였다. 동안 교반한 후 28시간, 반응 혼합물에 N,N'-비스-boc-1-구아닐피라졸(3.26g, 10.5m㏖) 및 4-다이메틸아미노피리딘(244.4㎎, 2m㏖)을 첨가하였다. 반응을 1.5일 동안 교반하였다. 이어서 그것을 에틸 아세테이트: 헥산(100㎖)의 1:1 혼합물로 희석시키고, 물(30㎖)추출하였다. 수성층을 에틸 아세테이트(30㎖)로 다시-추출하였다. 합한 유기층을 회전식 증발로 농축시켰다. 잔류물을 C18 역상 칼럼 크로마토그래피(150g, 25 내지 70% 아세토나이트릴 및 물)를 통해 정제시켰다. 수집한 분획을 실온에서 회전식 증발로 농축시켰다. 탁한 수성 용액이 생성되었고, 대부분의 생성물이 겔로서 플라스크에 침착되었다. 이어서 용액을 에틸 아세테이트(150㎖)로 추출하였다. 유기층을 사용하여 겔 물질을 재용해시켰다. 이어서 그것을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 회전식 증발로 농축시키고, 추가로 고압 하에서 건조시켜 표제 화합물을 백색 발포체로서 제공하였다. 수율 6.24g, 92.8%. LCMS로 관찰된 이온: [M + H]+ = 673.2.
단계 b.
Figure pct00530
무수 MeOH(20㎖) 중의 단계-a(6.24g, 9.28m㏖)로부터의 생성물의 용액을 빙수욕에서 냉각시키고, MeOH 중의 소듐 메톡사이드의 0.5M 용액(26㎖, 13m㏖)을 서서히 첨가하였다. 반응을 1시간 동안 교반하고, 이어서 다이옥산 중의 4N HCl 용액(3㎖)을 적가함으로써 이의 pH를 주의하여 7 내지 7.5로 조정하였다. 용매를 실온을 초과하지 않는 온도에서 회전식 증발로 제거하였다. 잔류물을 에틸 아세테이트와 헥산의 2:1 혼합물(150㎖)로 희석시키고, 생성된 용액을 물(20㎖)로 추출하였다. 수성층을 에틸 아세테이트(30㎖)로 다시-추출하였다. 합한 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 회전식 증발로 농축시키고, 추가로 고압 하에서 건조시켰다. 추가로 정제하지 않고 생성물로 후속 단계를 수행하였다. 수율 5.03g, 99.2%. LCMS로 관찰된 이온: [M + H]+ = 547.2.
단계 c.
Figure pct00531
무수 DCM(6㎖) 중의 단계-b 생성물(713㎎, 1.3m㏖)을 빙수욕에서 냉각시키고, 4-다이메틸아미노피리딘(159.8㎎, 1.3m㏖) 및 DIPEA(520㎎, 4m㏖)를 첨가하였다. 이어서 혼합물에 무수 DCM(2㎖) 중의 4-나이트로페닐 클로로폼에이트(356.6㎎, 2.2m㏖)의 용액을 적가하였다. 이어서 빙수욕을 제거하고, 반응 혼합물을 교반하였다 3시간 동안 및 LCMS로 모니터링하였다(필요에 따라 추가의 4-나이트로페닐 클로로폼에이트를 첨가할 수 있음). 반응이 완결된 후, 그것을 물(10㎖)로 반응정지시키고, 유기층을 추출하고, 회전식 증발로 농축시켰다. 잔류물을 C18 역상 칼럼 크로마토그래피(100g, 20에서 70% 아세토나이트릴 및 물)로 정제시켰다. 수집한 분획 중의 아세토나이트릴을 실온에서 회전식 증발로 제거하였다. 이어서 수성층을 에틸 아세테이트과 헥산(120㎖)의 1:1 혼합물로 추출하였다. 수성층을 에틸 아세테이트(30㎖)로 다시-추출하였다. 이어서 합한 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 회전식 증발로 농축시키고, 추가로 고압 하에서 건조시켜 표제 화합물을 백색 고체로서 제공하였다. 수율 520㎎, 70%. LCMS로 관찰된 이온: [M + H]+ = 573.2.
실시예 3. 링커-1의 합성
Figure pct00532
단계 a.
Figure pct00533
무수 DMF(7㎖) 중의 Z-D-글루탐 γ-메틸 에스터(2.0g, 6.77m㏖) 및 글리신 메틸 에스터 HCl(1.282g, 10.2m㏖)의 혼합물에 DIPEA(2.02g, 15.57m㏖), 그 다음 HATU(2.66g, 7.0m㏖)를 25분에 걸쳐서 나누어 첨가하였다. HATU를 용해시킨 후, 추가량의 DIPEA(1.15g, 8.8m㏖)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 1.5시간 동안 교반하고, 이어서 5% 수성 HCl(100㎖) 및 EtOAc(100㎖×2)로 추출하였다. 유기층을 회전식 증발로 농축시켰다. 잔류물을 물(100㎖) 및 EtOAc/헥산(2:1, 150㎖)으로 재추출하였다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 회전식 증발로 농축시키고, 추가로 백색 고체로 고압 하에서 건조시켰다. 추가로 정제하지 않고 조 생성물로 후속 단계를 수행하였다. 수율 2.3g, 93%. LCMS로 관찰된 이온: [M + H]+ = 367.
단계 b.
Figure pct00534
단계-a 생성물(2.3g, 6.29m㏖)을 MeOH 및 THF의 1:1 혼합물(10㎖)에 용해시켰다. 용액을 빙수욕에서 냉각시킨 후, 물 중의 LiOH 일수화물(630㎎, 15m㏖) 용액(9㎖)을 1.5시간에 걸쳐서 나누어 첨가하였다. 추가로 2시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 다이옥산 중의 4N HCl(3.7㎖)로 중화시켰다. 유기 용매를 실온에서 회전식 증발로 부분적으로 제거하였다. 남아있는 물질을 RPLC(150g, 0에서 39% 아세토나이트릴 및 물)로 직접 정제시켰다. 2단계에 걸쳐서 수율 2.03g, 88.7%. LCMS로 관찰된 이온: [M + H]+ = 339.2.
단계 c.
Figure pct00535
무수 DMF(6㎖) 및 DIPEA(1.3g, 10m㏖) 중의 단계-b 생성물(1.41g, 4.17m㏖) 및 N-Boc-1,6-다이아미노헥산(1.99g, 9.2m㏖)의 혼합물에, DMF(10㎖) 중의 HATU(3.5g, 9.2m㏖)의 용액을 11㎖/hr의 속도로 시린지 펌프에 의해서 첨가하였다. HATU의 첨가가 완결된 후, 반응을 30분 더 교반하고, RPLC(150g, 10에서 50% 아세토나이트릴 및 물, 개질제로서 0.1% TFA 함유)로 직접 정제시켰다. 수율 1.3g, 42.4%. LCMS로 관찰된 이온: [M + H]+ = 735, [M - Boc + H]+ = 635.4.
단계 d.
Figure pct00536
단계-c 생성물(1.3g, 1.77m㏖)을 MeOH(20㎖)에 용해시키고, Pd/C를 용액에 첨가하였다. 혼합물을 수소 하에서 4시간 동안 교반하였다. Pd/C를 여과시키고, 여과액을 회전식 증발로 농축시키고, 추가로 고압 하에서 건조시켰다. 수율 1.03g, 96.9%. LCMS로 관찰된 이온: [M + H]+ = 601.
단계 e.
Figure pct00537
화염 건조된 반응 플라스크를 질소로 플러싱하고, 4-아지도부티르산(77㎎, 0.6m㏖), N-하이드록시 석신이미드(92㎎, 0.8m㏖) 및 무수 DMF(0.5㎖)를 넣었다. 혼합물을 교반하여 고체를 용해시키고, 이어서 DCC(125.5㎎, 0.608m㏖)를 첨가하였다. 1시간 동안 교반한 후, 단계-d 생성물(300㎎, 0.5m㏖)을 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응을 6시간 동안 교반하고, RPLC(150g, 10에서 70% 아세토나이트릴 및 물, 개질제로서 01.% TFA 함유)를 사용하여 직접 정제시켰다. 수집한 분획을 백색 고체를 동결건조시켰다(LCMS: [M + H]+ = 712, [M - Boc + H]+ = 612). 물질을 DCM(약 2㎖) 및 TFA(약 1㎖)에 재용해시키고, 15분 동안 교반하였다. 이어서 그것을 회전식 증발로 농축시키고, 잔류물을 RPLC(50g, 0에서 40% 아세토나이트릴 및 물)로 정제시켰다. 수율 255㎎, 68. 9%. LCMS로 관찰된 이온: [M + H]+ = 512, [(M + 2H)/2]+ = 256.
실시예 4. Int-1의 합성
Figure pct00538
단계 a.
Figure pct00539
무수 THF(2㎖) 중의 자나미비어 중간체(실시예 2)(532.5㎎, 0.93m㏖)의 용액에 DMAP(490㎎, 4m㏖), 그 다음 비스(펜타플루오로페닐)카보네이트(385㎎, 0.911m㏖)를 첨가하였다. 밤새 교반한 후, 무수 DMF(1㎖) 및 DIPEA(91㎎, 0.3m㏖) 중의 링커-1(실시예 3)(245.6㎎, 0.332m㏖)의 용액을 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응을 2시간 동안 계속한 후, 이어서 RPLC(100g, 5에서 67% 아세토나이트릴 및 물)로 정제시켰다. 수율 135㎎, 23.8%. LCMS로 관찰된 이온: [(M + 2H)/2]+ = 845.9.
단계 b.
Figure pct00540
단계-a 생성물(135㎎, 0.079m㏖)을 TFA(0.5㎖)에 용해시키고, 용액을 실온에서 20분 동안 교반하였다. 이어서 그것을 직접 RPLC(50g, 5 내지 32% 아세토나이트릴 및 물)로 정제시켰다. 수율 88㎎, 85.1%. LCMS로 관찰된 이온: [(M + 2H)/2]+ = 654.8.
단계 c.
Figure pct00541
MeOH(1.5㎖) 중의 단계-b 생성물(88㎎, 0.0673m㏖)의 용액을 빙수욕에서 냉각시키고, 물(0.5㎖) 중의 LiOH(5㎎, 0.2m㏖)를 첨가하였다. 혼합물을 5시간 동안 교반한 후, 그것을 다이옥산 중의 4N HCl 용액(0.1㎖)으로 산성화시키고, HPLC(5에서 20% 아세토나이트릴 및 물, 개질제로서 0.1% TFA 함유)로 정제시켰다. 수율 76.4㎎, 78%. LCM으로 관찰된 이온: [(M + 2H)/2]+ = 614.8.
실시예 5. 링커-2의 합성
Figure pct00542
단계 a.
Figure pct00543
무수 DMF(2㎖) 중의 프로파길-PEG4-산(364.4㎎, 1.4m㏖)의 용액에 HATU(558.9㎎, 1.47m㏖)를 첨가하였다. 교반하여 모든 커플링 시약을 용해시킨 후, DIPEA(390㎎, 3m㏖)를 첨가하고, 10분 동안 교반하였다. 무수 DMF(1㎖) 중의 링커-1 단계-d 생성물(실시예 3, 단계 d)(701.1㎎, 1.167m㏖)의 용액을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 30분 동안 교반하고, RPLC(100g, 5에서 60% 아세토나이트릴 및 물)로 직접 정제시켰다. 수율 830㎎, 84.4%. LCMS로 관찰된 이온: [M + H]+ = 843.
단계 b.
Figure pct00544
단계-a 생성물을 THF(5㎖)에 용해시키고, 다이옥산 중의 4N HCl 용액(2.5㎖)으로 처리하였다. 실온에서 밤새 교반한 후, 반응 혼합물을 회전식 증발로 농축시켰다. 잔류물을 아세토나이트릴/물(1:1, 16㎖)에 재용해시키고, 용액을 동결건조시켰다. 추가로 정제하지 않고 조 생성물로 후속 단계를 수행하였다. 수율 761.8㎎, 100%. LCMS로 관찰된 이온: [M + H]+ = 643.8.
실시예 6. Int-2의 합성
Figure pct00545
단계 a.
Figure pct00546
화염 건조된 반응 플라스크를 질소로 플러싱시키고, 자나미비어 중간체(실시예 2) (533.6㎎, 0.812m㏖), DMAP(99.8㎎, 0.81m㏖), 및 무수 DCM(1㎖)을 넣었다. 교반하여 출발 물질을 용해시킨 후, 용액을 빙수욕에서 냉각시키고, 4-나이트로페닐 클로로폼에이트(242㎎, 1.2m㏖)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 5시간 동안 교반하고, 이어서 무수 DMF(1㎖) 및 DIPEA(130㎎, 1m㏖) 중의 링커-2(실시예 5)(228.4㎎, 0.319m㏖)의 용액에 첨가하였다. 반응을 밤새 교반하고, RPLC(150g, 20에서 65% 아세토나이트릴 및 물, 개질제로서 01% TFA 함유)로 정제시켰다. 수집한 분획을 동결건조시켰다. 수율 178.3㎎, 30.4%. LCMS로 관찰된 이온: [(M + 2H)/2]+ = 920.5, [(M + 3H)/3]+ = 614.2.
단계 b.
Figure pct00547
단계-a 생성물(178.3㎎, 0.0969m㏖)을 TFA(0.5㎖)에 용해시켰다. 용액을 20분 동안 교반하고, 이어서 HPLC(0에서 25% 아세토나이트릴 및 물, 개질제로서 0.1% TFA 함유)로 직접 정제시켰다. 수율 91.8㎎, 56.8%. LCMS로 관찰된 이온: [(M + 2H)/2]+ = 720.4, [(M + 3H)/3]+ = 480.6.
단계 c.
Figure pct00548
단계-b 생성물(91.8㎎, 0.055m㏖)을 MeOH(1㎖)에 용해시키고, 용액을 빙수욕에서 냉각시켰다. 물(1㎖) 중의 LiOH 일수화물(21㎎, 0.5m㏖)을 1시간에 걸쳐서 나누어 첨가하였다. 2시간 더 교반한 후, 반응 혼합물을 다이옥산 중의 4N HCl 용액(0.3㎖)으로 산성화시키고, HPLC(0에서 20% 아세토나이트릴 및 물, 개질제로서 0.1% TFA 함유)로 정제시켰다. 수율 36.2㎎, 59.4%. LCMS로 관찰된 이온: [(M + 2H)/2]+ = 680.3, [(M + 3H)/3]+ = 454.0.
실시예 7. h-IgG1 Fc-PEG4-아자이드의 합성
PEG4-아지도NHS 에스터(98%, 180μ㏖, 9.5당량, DMF 0.5㎖ 중의 71.4㎎ 및 pH 7.4 PBS 1× 완충 용액으로 3.60㎖로 희석됨)를 h-IgG1 Fc(서열번호 4)(70.0㎖의 pH 7.4 PBS 중의 1103㎎, MW 약 58,000Da, 19.0μ㏖)의 용액에 첨가하고, 혼합물을 12시간 동안 주변 온도에서 약하게 진탕하였다. 용액을 원심분리 농축기분리 농축기(30,000 MWCO)를 사용하여 약 1.5㎖의 부피까지 농축시켰다. 조 혼합물을 PBS pH 7.4 중에 1:10로 희석시키고, 다시 농축시켰다. 이러한 세척 절차를 총 3회 반복하였다. 소분자 시약을 이러한 세척 절차로 제거하였다. 농축된 Fc-PEG4-아자이드를 pH 7.4 PBS 1× 완충제로 70.0㎖로 희석시켰고, 클릭 접합을 위해서 준비되었다. 정제된 물질을 Nanodrop™ UV 가시 분광광도계(h-IgG1의 아미노산 서열에 기초하여 계산된 흡광 계수 사용)를 사용하여 정량하였다. 정제 후 수율은 정량적이다. DAR=4.3, MALDI에 의해서 결정됨. PEG4-아지도 NHS 에스터의 당량을 거의 선형 관계로 조정함으로써 DAR 값을 조정할 수 있다. 예를 들어, 7.0당량의 PEG4-아자이드 NHS 에스터가 사용되는 경우, DAR 값은 3.0일 것이다.
실시예 8. 재조합 마우스 혈청 알부민 (MSA)-PEG4-아자이드의 합성
PEG4-아지도NHS 에스터(98%, 81.7μ㏖, 4.5당량, 0.3㎖의 DMF 중의 32.4㎎ 및 pH 7.4 PBS 1× 완충 용액으로 1.63㎖로 희석됨)를 재조합 마우스 혈청 알부민(서열번호 71)(75.0㎖의 pH 7.4 PBS 중의 1200㎎, MW 약 66,000Da, 18.2μ㏖)의 용액에 첨가하고, 혼합물을 12시간 동안 주변 온도에서 약하게 진탕하였다. 용액을 원심분리 농축기분리 농축기(30,000 MWCO)를 사용하여 약 1.5㎖의 부피까지 농축시켰다. 조 혼합물을 PBS pH 7.4 중에 1:10로 희석시키고, 다시 농축시켰다. 이러한 세척 절차를 총 3회 반복하였다. 소분자 시약을 이러한 세척 절차로 제거하였다. 농축된 MSA-PEG4-아자이드를 pH 7.4 PBS 1× 완충제로 75.0㎖로 희석시켰고, 클릭 접합을 위해서 준비되었다. 정제된 물질을 Nanodrop™ UV 가시 분광광도계(h-IgG1의 아미노산 서열에 기초하여 계산된 흡광 계수 사용)를 사용하여 정량하였다. 정제 후 수율을 정량적이다. DAR=3.5, MALDI에 의해서 결정됨. PEG4-아지도 NHS 에스터의 당량을 h-IgG1 Fc(실시예 7)와 유사하게 조정함으로써 DAR 값을 조정할 수 있다.
실시예 9. 접합체 1의 합성
h-IgG1 Fc-PEG4-아자이드(실시예 7)(50㎎, 2.815㎖, 0.8591μ㏖)의 PBS 용액을 Int-2(실시예 6)(35.2㎎, 0.02217m㏖)를 함유하는 15㎖ 원심분리 튜브에 첨가하였다. 혼합물을 약하게 진탕하여 모든 Int-2를 용해시킨 후, PBS 7.4 완충액(1㎖) 중의 L-아스코르브산 소듐(59.4㎎, 0.3m㏖), 구리(II) 설페이트(10㎎, 0.05m㏖), 및 THPTA(23㎎, 0.05m㏖)의 용액 344㎕를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 밤새 약하게 진탕하였다. 그것을 실시예 8에 기재된 바와 같이 단백질 A 칼럼 상의 친화도 크로마토그래피로 정제시키고, 그 다음 크기 배제 크로마토그래피로 정제시켰다. 정제된 최종 생성물의 Maldi TOF 분석은 63797 Da(DAR=3.4)의 평균 질량을 제공하였다. 수율 27.39㎎, 55% 수율. 도 9는 접합체 1의 비-환원 SDS-PAGE.
실시예 10. 접합체의 정제
조 혼합물을 PBS pH 7.4 중에 1:10로 희석시키고, MabSelect Sure Resin(지이 헬쓰케어사, 미국 일리노이주 시카고 소재), 그 다음 크기 배제 크로마토그래피로 정제시켰다. (HiLoad 26/600 Superdex200 pg, 지이 헬쓰케어사, 미국 일리노이주 시카고 소재). 정제된 접합체를 풀링(pooling)시키고, 원심분리 농축기(30,000 MWCO)를 사용하여 대략 20㎎/㎖로 농축시켰다. 정제된 물질을 hIgG1 Fc(myc)의 아미노산 서열에 기초하여 계산된 흡광 계수 사용하여 Nanodrop™ UV 가시 분광광도계를 사용하여 정량하였다. 1㎍의 각각의 분자를 겔에 로딩하고, 인스턴트 Blue(익스페던사(Expedeon), 미국 캘리포니아주 샌디에고 소재)을 사용하여 염색함으로써, 정제된 분자를 4 내지 12% Bis Tris SDS PAGE 겔을 사용하여 분석하였다. 각각의 겔은 제시된 분자량 표준품을 갖는 분자량 래더를 포함하였다. 수율을 계산하고, Agilent Analytical HPLC로 순도를 결정하였다. 생성물 피크 및 MW를 Maldi MS로 관찰하고, 최종 DAR을 계산하였다.
실시예 11. Int-3의 합성
Figure pct00549
단계 a.
Figure pct00550
무수 DMF(1㎖) 중의 프로파길-PEG4-산(260㎎, 1m㏖) 및 HATU(380.2㎎, 1m㏖)의 용액에 DIPEA(130㎎)를 첨가하였다. 5분 교반한 후, NH-비스(PEG3-Boc)(500㎎, 0.881m㏖)를 첨가하고, 실온에서 밤새 교반을 계속하였다. 이어서 그것을 직접 RPLC(100g, 5에서 50% 아세토나이트릴 및 물, 개질제로서 0.1% TFA 함유)로 정제시켰다. 수율 683㎎, 95.8%. LCMS로 관찰된 이온: [M + H]+ = 810.4, [M - Boc + H]+ = 710.4, [(M - 2Boc + 2H)/2]+ = 305.8.
단계 b.
Figure pct00551
단계-a 생성물을 TFA(1㎖)에 용해시켰다. 용액을 2시간 동안 교반하고, 이어서 RPLC(100g, 0에서 30% 아세토나이트릴 및 물)로 직접 정제시켰다. 수율 589㎎, 98.7%. LCMS로 관찰된 이온: [(M + 2H)/2]+ = 305.8.
단계 c.
Figure pct00552
화염 건조된 반응 플라스크를 질소로 플러싱시키고, 자나미비어 중간체(실시예 2)(572㎎, 1m㏖) 및 무수 DCM(1㎖)을 넣었다. 교반하여 출발 물질을 용해시킨 후, 용액을 빙수욕에서 냉각시키고, 4-나이트로페닐 클로로폼에이트(302.4㎎, 1.5m㏖), 그 다음 DMAP(22.4㎎, 0.2m㏖)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 5시간 동안 교반하고, 이어서 물(0.2㎖)을 첨가하여 반응정지시켰다. 10분 동안 교반한 후, 무수 DMF(1㎖) 및 DIPEA(163.8㎎, 1.26m㏖) 중의 단계-b 생성물(256.7㎎, 0.355m㏖)을 첨가하였다. 2시간 동안 교반을 계속하고, 이어서 반응을 RPLC(150g, 20에서 65% 아세토나이트릴 및 물, 개질제로서 0.1% TFA 함유)로 직접 정제시켰다. 수집한 분획을 동결건조시켰다. 약간의 불순물로 오염된 목적하는 생성물 422.8㎎을 수득함, <69% 수율. 추가로 정제하지 않고 물질로 후속 단계를 수행하였다. LCMS로 관찰된 이온: [(M + 2H)/2]+ = 903.9, [(M + 3H)/3]+ = 603.2.
단계 d.
Figure pct00553
단계-c 생성물(422.8㎎, < 0.245m㏖)을 TFA(1㎖)에 용해시켰다. 용액을 20분 동안 교반하고, 이어서 HPLC(5에서 25% 아세토나이트릴 및 물, 개질제로서 0.1% TFA 함유)로 직접 정제시켰다. 2단계에 걸쳐서 수율 169.7㎎, 29.2%. LCMS로 관찰된 이온: [(M + 2H)/2]+ = 704.0, [(M + 3H)/3]+ = 469.6.
단계 e.
Figure pct00554
단계-d 생성물(169.7㎎, 0.0923m㏖)을 MeOH(1.5㎖)에 용해시키고, 용액을 빙수욕에서 냉각시켰다. 물(1㎖) 중의 LiOH 일수화물(21㎎, 0.5m㏖)을 1시간에 걸쳐서 나누어 첨가하였다. 밤새 교반한 후, 반응 혼합물을 Dowex 50W x 8 수소 형태로 산성화시키고, RPLC(0에서 30% 아세토나이트릴 및 물, 개질제로서 0.1% TFA 함유)로 정제시켰다. 수율 107.9㎎, 66.9%. LCMS로 관찰된 이온: [(M + 2H)/2]+ = 663.8, [(M + 3H)/3]+ = 442.9.
실시예 12. 접합체 2의 합성
표제 접합체를 Int-3(실시예 11)을 사용하여 접합체 1(실시예 9)과 유사하게 제조하였다. 정제된 최종 생성물의 Maldi TOF 분석은 63561Da(DAR=3.3)의 평균 질량을 제공하였다. 수율 43.4㎎, 43% 수율. 도 10은 접합체 2의 비-환원 SDS-PAGE.
실시예 13. Int-4의 합성
Figure pct00555
단계 a.
Figure pct00556
화염 건조된 반응 플라스크를 질소로 플러싱시키고, 자나미비어 중간체(실시예 2)(343.2㎎, 0.6m㏖) 및 무수 DCM(1.5㎖)을 넣었다. 용액을 빙수욕에서 냉각시키고, DIPEA(234㎎, 1.8m㏖) 그 다음 4-나이트로페닐 클로로폼에이트(121㎎, 0.6m㏖) 및 DMAP(67.4㎎, 0.6m㏖)을 첨가였다. 생성된 혼합물을 15분 동안 교반하고, 이어서 추가량의 4-나이트로페닐 클로로폼에이트(121㎎, 0.6m㏖)를 첨가하였다. 2시간 동안 교반한 후, 물(0.2㎖)을 첨가하여 미반응 클로로폼에이트를 반응정지시켰다. 10분 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 무수 DMF(0.5㎖) 중의 프로파길-PEG4-아민(185㎎, 0.8m㏖)의 용액과 함께 첨가하였다. 반응을 1시간 동안 계속하고, 이어서 RPLC(100g, 5에서 60% 아세토나이트릴 및 물, 개질제로서 0.1% TFA 함유)로 직접 정제시켰다. 수집한 분획을 동결건조시켰다. 수율 355㎎, 71.3%. LCMS로 관찰된 이온: [M + H]+ = 830.2.
단계 b.
Figure pct00557
단계-a 생성물(355㎎, 0.428m㏖)을 TFA(1㎖)에 용해시켰다. 용액을 밤새 교반하고, 이어서 RPLC(5에서 25% 아세토나이트릴 및 물, 개질제로서 0.1% TFA 함유)로 직접 정제시켰다. 2단계에 걸쳐서 수율 260.2㎎, 70.9%. LCMS로 관찰된 이온: [M + H]+ = 630.2.
단계 c.
Figure pct00558
단계-b 생성물(260.2㎎, 0.303m㏖)을 MeOH(1.5㎖)에 용해시켰다. 용액을 빙수욕에서 냉각시킨 후, 물(1㎖) 중의 LiOH 일수화물(42㎎, 1m㏖)의 용액을 1시간에 걸쳐서 나누어 첨가하였다. 반응을 밤새 교반하고, 이어서 Dowex 50W x 8 수소 형태로 산성화시키고, RPLC(0에서 50% 아세토나이트릴 및 물, 개질제로서 0.1% TFA 함유)로 정제시켰다. 수율 78.1㎎, 99%. LCMS로 관찰된 이온: [M + H]+ = 590.2.
실시예 14. 접합체 3의 합성
표제 접합체를 Int-4(실시예 13)를 사용하여 접합체 1(실시예 9)과 유사하게 제조하였다. 정제된 최종 생성물의 Maldi TOF 분석은 61182Da(DAR=3.4)의 평균 질량을 제공하였다. 수율 50.89㎎, 51% 수율. 도 11은 접합체 3의 비-환원 SDS-PAGE.
실시예 15. Int-5의 합성
Figure pct00559
단계 a.
Figure pct00560
화염 건조된 반응 플라스크를 질소로 플러싱시키고, (1S, 2S, 3R, 4R)-메틸 3-((S)-1-아세트아마이도-2-에틸부틸)-4-(tert-부톡시카보닐아미노)-2-하이드록시사이클로펜탄카복실레이트(320.4㎎, 0.8m㏖) 및 무수 DCM(2㎖)을 넣었다. 용액을 빙수욕에서 냉각시키고, DIPEA(312㎎, 2.4m㏖), 그 다음 4-나이트로페닐 클로로폼에이트(161.3㎎, 0.8m㏖) 및 DMAP(98㎎, 0.8m㏖)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 15분 동안 교반하고, 이어서 추가량의 4-나이트로페닐 클로로폼에이트(161.3㎎, 0.8m㏖)를 첨가하였다. 반응을 2시간 동안 교반하고, 이어서 물(0.2㎖)을 첨가하여 미반응 클로로폼에이트를 반응정지시켰다. 10분 동안 교반한 후, 무수 DMF(0.5㎖) 중의 프로파길-PEG4-아민(259㎎, 1.12m㏖)의 용액을 첨가하였다. 반응을 1시간 동안 교반하고, 이어서 RPLC(100g, 5에서 60% 아세토나이트릴 및 물, 개질제로서 0.1% TFA 함유)로 직접 정제시켰다. 수집한 분획을 동결건조시켰다. 수율 391.2㎎, 74.4%. LCMS로 관찰된 이온: [M + H]+ = 658.3, [M - Boc + H]+ = 558.3.
단계 b.
Figure pct00561
단계-a 생성물(391.2㎎, 0.595m㏖)을 TFA(0.8㎖)에 용해시키고, 용액을 실온에서 20분 동안 교반하였다. 이어서 그것을 직접 RPLC(100g, 5에서 60% 아세토나이트릴 및 물)로 정제시켰다. 수율 323.2㎎, 81%. LCMS로 관찰된 이온: [M + H]+ = 558.3.
단계 c.
Figure pct00562
THF(2㎖) 중의 단계-b 생성물(323.2㎎, 0.482m㏖)의 용액에 N,N'-비스-Boc-1-구아닐피라졸(224.4㎎, 0.723m㏖) 및 PIPEA(260㎎, 2m㏖)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 1일 동안 교반하고, 이어서 물(3㎖) 및 EtOAc/헥산(1:1, 8㎖)으로 추출하였다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 회전식 증발로 농축시켰다. 잔류물을 TFA(약 1㎖)에 재용해시키고, 및 용액을 밤새 교반하였다. 이어서 그것을 직접 RPLC(100g, 0에서 30% 아세토나이트릴 및 물, 개질제로서 0.1% TFA 함유)로 정제시켰다. 수집한 분획을 동결건조시켰다. 수율 254.2㎎, 83.2%. LCMS로 관찰된 이온: [M + H]+ = 600.3, [M - Boc + H]+ = 300.6.
단계 d.
Figure pct00563
단계-c 생성물(254.2㎎, 0.356m㏖)을 THF(1.5㎖)에 용해시키고, 용액을 빙수욕에서 냉각시켰다. CaCl2 이수화물(419㎎, 2.85m㏖)을 첨가하고, 이어서 물(2㎖) 중의 1.8㎖의 KOH(112㎎, 2m㏖)를 1시간에 걸쳐서 나누어 첨가하였다. 3시간 더 교반한 후, 반응 혼합물을 Dowex 50W x 8 수소 형태로 산성화시키고, RPLC(0에서 30% 아세토나이트릴 및 물, 개질제로서 0.1% TFA 함유)로 정제시켰다. 수율 102㎎, 49.8%. LCMS로 관찰된 이온: [M + H]+ = 586.4, [(M + 2H)/2]+ = 293.8.
실시예 16. 접합체 4의 합성
표제 접합체를 Int-5(실시예 15)를 사용하여 접합체 1(실시예 9)과 유사하게 제조하였다. 정제된 최종 생성물의 Maldi TOF 분석은 63002Da(DAR=3.4)의 평균 질량을 제공하였다. 수율 49.315㎎, 49% 수율. 도 12는 접합체 4의 비-환원 SDS-PAGE.
실시예 17. Int-6의 합성
Figure pct00564
단계 a.
Figure pct00565
화염 건조된 반응 플라스크를 질소로 플러싱시키고, (1S, 2S, 3R, 4R)-메틸 3-((S)-1-아세트아마이도-2-에틸부틸)-4-(tert-부톡시카보닐아미노)-2-하이드록시 사이클로펜탄카복실레이트(280.4㎎, 0.7m㏖) 및 무수 DCM(1㎖)을 넣었다. 교반하여 출발 물질을 용해시킨 후, DMAP(85.7㎎, 0.7m㏖), 그 다음 비스(펜타플루오로페닐)카보네이트(295.6㎎, 0.75m㏖)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 1시간 동안 교반하고, 이어서 무수 DMF(1㎖) 및 DIPEA(130㎎, 1m㏖) 중의 링커-2(실시예 5)(157.5㎎, 0.22m㏖)의 용액에 첨가하였다. 반응을 밤새 교반하고, RPLC(50g, 5에서 90% 아세토나이트릴 및 물)로 정제시켰다. 수집한 분획을 동결건조시켰다. 수율 134.1㎎, 40.7%. LCMS로 관찰된 이온: [(M + 2H)/2]+ = 748.6.
단계 b.
Figure pct00566
단계-a 생성물(134.1㎎, 0.0896m㏖)을 TFA(0.5㎖)에 용해시켰다. 용액을 20분 동안 교반하고, 이어서 그것을 직접 RPLC(50g, 5 내지 60% 아세토나이트릴 및 물)로 정제시켰다. 수율 108.4㎎, 93.4%. LCMS로 관찰된 이온: [(M + 2H)/2]+ = 648.3, [(M + 3H)/3]+ = 432.8.
단계 c.
Figure pct00567
무수 THF(1㎖) 중의 단계-b 생성물(108.4㎎, 0.0837m㏖)의 용액에 N,N'-비스-boc-1-구아닐피라졸(81.3㎎, 0.285m㏖) 및 DIEPA(65㎎, 0.5m㏖)를 첨가하였다. 반응을 실온에서 2.5일 동안 교반하고, 이어서 RPLC(100g, 40에서 75% 아세토나이트릴 및 물)로 직접 정제시켰다. 수율 73.6㎎, 49.4%. LCMS로 관찰된 이온: [(M + 3H)/3]+ = 594.2.
단계 d.
Figure pct00568
단계-c 생성물(73.6㎎, 0.041m㏖)을 TFA(0.5㎖)에 용해시켰다. 용액을 20분 동안 교반하고, 이어서 그것을 직접 RPLC(50g, 5 내지 60% 아세토나이트릴 및 물)로 정제시켰다. 수율 62.1㎎, 94.1%. LCMS로 관찰된 이온: [(M + 2H)/2]+ = 690.4, [(M + 3H)/3]+ = 460.8.
단계 e.
Figure pct00569
THF(3㎖) 중의 단계-d 생성물(62.1㎎, 0.0386m㏖)을 빙수욕에서 냉각시키고, KOH의 45% w/w 용액(0.2㎖)을 1시간에 걸쳐서 나누어 첨가하였다. 반응을 2시간 더 교반하고, 이어서 다이옥산 중의 4N HCl 용액(0.8㎖)으로 산성화시키고, 헥산(10㎖) 및 물(1.5㎖)로 추출하였다. 수성층을 HPLC(0에서 20% 아세토나이트릴 및 물, 개질제로서 0.1% TFA 함유)로 정제시켰다. 수율 36.2㎎, 59.4%. LCMS로 관찰된 이온: [(M + 2H)/2]+ = 676.5, [(M + 3H)/3]+ = 451.4.
실시예 18. 접합체 5의 합성
표제 접합체를 Int-6(실시예 17)를 사용하여 접합체 1(실시예 9)과 유사하게 제조하였다. 정제된 최종 생성물의 Maldi TOF 분석은 63561Da(DAR=3.3)의 평균 질량을 제공하였다. 수율 43.4㎎, 43% 수율. 도 13은 접합체 5의 비-환원 SDS-PAGE.
실시예 19. Int-7의 합성
Figure pct00570
단계 a.
Figure pct00571
무수 DMF(2㎖) 중의 프로파길-PEG4-산(609㎎, 2.34m㏖) 및 NH-비스(PEG1-아자이드)(500㎎, 2.055m㏖)의 용액에 HATU(889.7㎎, 2.34m㏖)를 5분에 걸쳐서 나누어 첨가하였다. 교반하여 모든 커플링 시약을 용해시킨 후, DIPEA(390㎎, 3m㏖)를 첨가하고, 1시간 동안 교반을 계속하였다. 이어서 그것을 직접 RPLC(100g, 5에서 40% 아세토나이트릴 및 물)로 정제시켰다. 수율 918㎎, 92%. LCMS로 관찰된 이온: [M + H]]+ = 486.2.
단계 b.
Figure pct00572
단계-a 생성물(918㎎, 1.89m㏖)을 THF에 용해시키고, 용액을 약 13℃까지 냉각시켰다. 트라이페닐포스핀(1.141g, 4.35m㏖)을 10분에 걸쳐서 나누어 첨가하였다. 생성된 혼합물을 약 13℃ 내지 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 물(2㎖) 및 MeOH(1㎖) 중의 LiOH 일수화물(42㎎, 1m㏖)의 용액을 첨가하였다. 20시간 교반을 계속한 후, 반응을 RPLC(100g, 0에서 30% 아세토나이트릴 및 물, 개질제로서 0.1% TFA 함유)로 정제시켰다. 수율 825㎎, 65.9%. LCMS로 관찰된 이온: [M + H]+ = 434.4.
단계 c.
Figure pct00573
화염 건조된 반응 플라스크를 질소로 플러싱시키고, 자나미비어 중간체(실시예 2)(865㎎, 1.51m㏖) 및 무수 DCM(5㎖)을 넣었다. 교반하여 출발 물질을 용해시킨 후, 용액을 빙수욕에서 냉각시키고, 4-나이트로페닐 클로로폼에이트(365.3㎎, 1.81m㏖), 그 다음 DMAP(152.2㎎, 0.755m㏖)를 첨가하였다. 빙수욕을 제거하고, 혼합물을 3시간 동안 교반하였다. 추가량의 4-나이트로페닐 클로로폼에이트(304.4㎎, 1.51m㏖)를 첨가하고, 1시간 동안 교반을 계속하였다. 이어서 반응을 물(1㎖)로 반응정지시켰다. 1시간 동안 격렬하게 교반한 후, 반응 혼합물을 물(20㎖×2) 및 DCM(20㎖)으로 추출하였다. 유기층을 밤새 교반하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 회전식 증발로 농축시켰다. 추가로 정제하지 않고 물질로 후속 단계를 수행하였다. LCMS로 관찰된 이온: [M + H]+ = 738.2.
단계 d.
Figure pct00574
무수 THF(1㎖) 중의 단계-b 생성물(429.7㎎, 0.65m㏖)과 DIPEA(260㎎, 2m㏖)의 혼합물의 용액을 단계-c 생성물에 적가하였다. 생성된 혼합물을 2시간 동안 교반하고, 이어서 RPLC(100g, 10에서 65% 아세토나이트릴 및 물)로 직접 정제시켰다. 수집한 분획 중의 아세토나이트릴을 실온에서 회전식 증발로 제거하였다. 불균질한 수성층을 EtOAc(200㎖)로 추출하고, 이어서 EtOAc(50㎖)로 다시 추출하였다. 합한 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 회전식 증발로 농축 건조시켰다. 수율 442㎎, 41.7%. LCMS로 관찰된 이온: [(M + 2H)/2]+ = 815.8, [(M - Boc + 2H)/2]+ = 765.8, [(M - 2Boc + 2H)/2]+ = 716.
단계 e.
Figure pct00575
단계-d 생성물(441㎎, 0.271m㏖)을 TFA(1㎖)에 용해시켰다. 용액을 20분 동안 교반하고, 이어서 HPLC(5에서 20% 아세토나이트릴 및 물, 개질제로서 0.1% TFA 함유)로 직접 정제시켰다. 수율 308㎎, 77.9%. LCMS로 관찰된 이온: [(M + 2H)/2]+ = 615.8, [(M + 3H)/3]+ = 411.
단계 f.
Figure pct00576
단계-e 생성물(308㎎, 0.211m㏖)을 MeOH(1㎖) 및 물(0.5㎖)에 용해시키고, 용액을 빙수욕에서 냉각시켰다. 물(1㎖) 중의 LiOH 일수화물(42㎎, 1m㏖)의 용액을 1시간에 걸쳐서 나누어 첨가하였다. 반응을 밤새 교반하고, 다이옥산 중의 4N HCl 용액(0.25㎖)으로 산성화시키고, RPLC(0에서 20% 아세토나이트릴 및 물, 개질제로서 0.1% TFA 함유)로 정제시켰다. 수율 198㎎, 64%. LCMS로 관찰된 이온: [(M + 2H)/2]+ = 575.8, [(M + 3H)/3]+ = 384.2.
실시예 20. 접합체 6의 합성
표제 접합체를 Int-7(실시예 19)를 사용하여 접합체 1(실시예 9)과 유사하게 제조하였다. 정제된 최종 생성물의 Maldi TOF 분석은 62854Da(DAR=3.1)의 평균 질량을 제공하였다. 수율 175.4㎎, 50% 수율. 도 14는 접합체 6의 비-환원 SDS-PAGE.
실시예 21. Int-8의 합성
Figure pct00577
단계 a.
Figure pct00578
메틸 5-아세토아마이도-7,8,9-O-트라이아세틸-2,6-언하이드로-4-아지도-3,4,5-트라이데옥시-D-글리세로-D-갈락토-논-2-엔오네이트(1.8g, 4.0m㏖)를 40㎖ 메탄올에 용해시키고, 이어서 400㎎의 5% Pd/C 및 1.1 g Boc 무수물(5.0m㏖)로 처리하고, 이어서 반응 혼합물을 실온에서 수소 분위기 하에서 1시간 교반하였다. 팔라듐-차콜을 여과로 제거하였다. 여과액을 농축시키고, 정제하지 않고 다음 단계에 사용하였다.
단계 b.
Figure pct00579
이전 단계로부터의 생성물을 20㎖ 무수 메탄올에 용해시키고, 이어서 빙수욕에서 냉각시키면서 메탄올 중의 2㎖ 소듐 메톡사이드(0.5M)를 적가하여 처리하였다. 2시간 후, 반응 진행을 LCMS로 결정하였다. 반응을 pH 5 내지 6의 1N HCl을 사용하여 반응정지시켰다. 생성된 용액을 농축시키고, 개질제로서 0.1% TFA를 함유하는 5%에서 100% 아세토나이트릴 및 물로 용리시키는 Isco COMBIFLASH® 액체 크로마토그래프를 사용하여 역상 액체 크로마토그래피(RPLC)로 정제시켰다. LCMS로 발견된 이온(들): (M+H)+ = 405
단계 c.
Figure pct00580
메틸 5-아세트아마이도-2,6-언하이드로-4-[(tert-부톡시카보닐)아미노]-3,4,5-트라이데옥시-D-에리트로-논-2-엔오네이트(0.4g, 1m㏖)를 10㎖의 아세톤, 4㎖의 2,2-다이메톡시프로판 및 20㎎의 p-톨루엔설폰산 수화물(0.1m㏖)에 용해시켰다. 생성된 용액을 실온에서 밤새 교반하고, 이어서 1㎖ 포화 NaHCO3로 반응정지시켰다. 혼합물을 농축시키고, 개질제 없이 5%에서 100% 아세토나이트릴 및 물로 용리시키는 Isco COMBIFLASH® 액체 크로마토그래프를 사용하여 역상 액체 크로마토그래피(RPLC)로 정제시켰다. LCMS로 발견된 이온(들): (M+H)+ = 445.
단계 d.
Figure pct00581
빙수욕으로 냉각시키면서 수소화 나트륨(40㎎, 오일 중의 60%, 1.0m㏖)을 5㎖의 무수 THF 중의 메틸 5-아세트아마이도-2,6-언하이드로-4-[(tert-부톡시카보닐)아미노]-3,4,5-트라이데옥시-8,9-O-(1-메틸에틸리덴)-D-에리트로-논-2-엔오네이트(0.25g, 0.50m㏖)에 첨가하였다. 생성된 용액을 0.5시간 동안 교반하고, 이어서 벤질 브로모아세테이트(0.23g, 1.0m㏖)를 첨가하였다. 생성된 용액을 2시간 동안 교반하고, 물 중의 10% 염화암모늄 5㎖로 반응정지시켰다. 이어서 용액을 50㎖ 에틸 아세테이트로 희석시켰다. 유기층을 분리시키고, 황산나트륨으로 건조시켰다. 건조된 유기 용액을 농축시키고, 개질제 없이 5%에서 100% 아세토나이트릴 및 물로 용리시키는 Isco COMBIFLASH® 액체 크로마토그래프를 사용하여 역상 액체 크로마토그래피(RPLC)로 정제시켰다. LCMS로 발견된 이온(들): (M+H)+ = 593.
실시예 22. Int-9의 합성
Figure pct00582
단계 a.
Figure pct00583
메틸 5-아세토아마이도-7,8,9-O-트라이아세틸-2,6-언하이드로-4-아지도-3,4,5-트라이데옥시-D-글리세로-D-갈락토-논-2-엔오네이트(10g, 22m㏖)를 100㎖ 메탄올에 용해시키고, 이어서 오일욕으로 60℃까지 가열시키고, SnCl2(5.7g, 20m㏖)를 용액에 3개의 부분으로 첨가하였다(주의, 가스 분출). 반응 혼합물을 10분 동안 교반하였고, 이 때 HPLC로 반응이 완결되었다. 격렬갛게 교반하면서, 반응 용액을 50㎖ 포화 NaHCO3 및 50g 셀라이트의 용액에 서서히 첨가하였다. 생성된 슬러리를 여과시켰다. 여과액을 Boc2O(6.6g, 30m㏖, 1.5당량)로 처리하였다. 실온에서 2시간 후, 용액을 농축시켜 메탄올 대부분을 제거하고, 200㎖의 DCM에 용해시키고, 100㎖ DCM으로 2회 추출하였다. 합한 추출물을 황산나트륨으로 건조시키고, 여과시키고, 추가로 정제하지 않고 다음 단계에 사용하였다. 조 생성물 수율 12g, 100%. LCMS로 발견된 이온(들): M+H=531.
단계 b.
Figure pct00584
이전 단계로부터의 물질을 60㎖ 무수 메탄올에 용해시키고, 이어서 빙수욕으로 냉각시키면서 메탄올 중의 10㎖ 소듐 메톡사이드(0.5M)로 처리하였다. 반응 진행을 LCMS로 모니터링하였고, 2시간 후에 완결되었다. 반응을 pH 5 내지 6의 1N HCl을 사용하여 반응정지시켰다. 생성된 용액을 농축시키고, 개질제로서 0.1% TFA를 함유하는 0%에서 30% 아세토나이트릴 및 물로 용리시키는 Isco COMBIFLASH® 액체 크로마토그래프를 사용하여 역상 액체 크로마토그래피(RPLC)로 정제시켰다. 생성물의 수율 7.2g, 80%. LCMS로 발견된 이온(들): M+H=405.
단계 c.
Figure pct00585
이전 단계로부터의 생성물(3.5g, 8.5m㏖), CDI(2.8g, 2당량), 트라이메틸아민 (4.2㎖, 30m㏖) 및 DMAP(240㎎, 2m㏖)의 용액을 아세토나이트릴(50㎖)에서 밤새 가열시키고, 이어서 농축시키고, 개질제 없이 0%에서 30% 아세토나이트릴 및 물로 용리시키는 Isco COMBIFLASH® 액체 크로마토그래프를 사용하여 역상 액체 크로마토그래피(RPLC)로 정제시켰다. 목적하는 생성물의 수율 2.3g, 60%. LCMS로 발견된 이온(들): M+H=431.
단계 d.
Figure pct00586
빙수욕 하에서 수소화 나트륨(400㎎, 오일 중의 60%, 10m㏖)을 50㎖ 무수 THF(수분 민감성 반응) 중의 이전 단계로부터의 생성물(1.45g, 3.3m㏖)에 첨가하였다. 생성된 용액을 0.5시간 동안 교반하고, 이어서 tert부틸 브로모-아세테이트(2g, 10m㏖)를 상기 용액에 첨가하고, 생성된 용액을 밤새 60℃까지 가열시키고, 아세트산으로 반응정지시켰다. 생성된 용액을 농축시키고, 개질제로서 TFA를 함유하는 0%에서 50% 아세토나이트릴 및 물로 용리시키는 Isco COMBIFLASH® 액체 크로마토그래프를 사용하여 역상 액체 크로마토그래피(RPLC)로 정제시켰다. 수율 1g, 57%. LCMS로 발견된 이온(들): M+H=593.
단계 e.
Figure pct00587
이전 단계로부터의 생성물(1.2g, 2.2m㏖)을 10㎖ TFA와 함께 실온에서 밤새 교반하고, 탈보호의 진행을 LCMS로 모니터링하였다. 생성된 용액을 농축시키고, 정제하지 않고 다음 단계에 사용하였다. 잔류물을 20㎖ THF에 재용해시키고, 이어서 N,N'-비스-boc-1-구아닐피라졸(1g, 3.3m㏖), 4-다이메틸아미노피리딘(120㎎, 1m㏖) 및 트라이에틸아민(0.7㎖, 5m㏖)을 용액에 첨가하고, 생성된 용액을 60℃까지 2시간 동안 가열시켰다. 생성된 용액을 농축시키고, 개질제 없이 0%에서 50% 아세토나이트릴 및 물로 용리시키는 Isco COMBIFLASH® 액체 크로마토그래프를 사용하여 역상 액체 크로마토그래피(RPLC)로 정제시켰다. 수율 700㎎, 84%. LCMS로 발견된 이온(들): M+H=631.
단계 f.
Figure pct00588
DMF(30㎖) 중의 링커-3(실시예 19에 기재된 바와 같이 제조됨)(73㎎g, 0.14m㏖) 및 이전 단계의 생성물(200㎎, 0.32m㏖, 2.2당량)의 용액에 EDC(100㎎, 0.5m㏖), HOAt(65㎎, 3m㏖) 및 DIEA(0.14㎖, 1m㏖)를 실온에서 첨가하였다. 용액을 밤새 교반하였다. 생성된 용액을 농축시키고, 개질제 없이 0%에서 50% 아세토나이트릴 및 물로 용리시키는 Isco COMBIFLASH® 액체 크로마토그래프를 사용하여 역상 액체 크로마토그래피(RPLC)로 정제시켰다. 수율 120㎎, 52%. LCMS로 발견된 이온(들): M/2+H=830.
단계 g.
Figure pct00589
2㎖ H2O 중의 수산화리튬(24㎎, 1m㏖)을 2㎖ THF 및 1㎖ MeOH 중의 이전 단계로부터의 생성물(120㎎, 0.07m㏖)의 용액에 첨가하고, LCMS로 반응의 진행을 모니터링하였다.\ 완결 후, 용액을 pH1로 조정된 AMBERLITE® IRN-77, 이온 교환 수지에 첨가하고, 이어서 생성된 용액을 여과시키고, 여과액을 농축시키고, 정제하지 않고 다음 단계에 사용하였다 생성된 화합물을 실온에서 2㎖ TFA로 처리하고, 용액을 밤새 40℃에서 교반하고, 이어서 농축시키고, 개질제로서 TFA를 함유하는 0%에서 20% 아세토나이트릴 및 물로 용리시키는 HPLC로 정제시켰다. 수율 60㎎, 74% 수율. LCMS로 발견된 이온(들): [M/2]+1=589.8.
실시예 23. 뉴라미니다제 저해 검정
2'-(4-메틸엄벨리페리)-알파-D-N-아세틸뉴라민산(MUNANA) 기질을 사용한 뉴라미니다제 저해 검정을 하기에 기재된 바와 같이 수행하였다. 간략하면, 50㎕의 정제된, 재조합 인플루엔자 바이러스 뉴라미니다제(0.1ng/㎕, 50mM Tris, 5mM CaCl2, 200mM NaCl, pH 7.5)를 50㎕의 저해제와 혼합하고, 30분 동안 실온에서 인큐베이션시켰다. 적절한 범위의 각각의 저해제의 적어도 5개의 농축물을 각각의 반복을 위해서 사용하였다. 인큐베이션 후, 50mM Tris, 5mM CaCl2, 200mM NaCl, (pH 7.5) 중의 50㎕의 400μM MUNANA를 용액에 첨가하여 12-팁 피펫(에펜토르프사(Eppendorf))을 사용하여 반응을 시작하였다. 양성 대조군 및 음성 대조군을 각각의 12-웰 레인에 포함시켰다. 플레이트 상의 각각의 레인에 대한 반응을 시작시킨 후, 반응 혼합물을 즉시 SpectraMax M5(몰레큘러 디바이스즈사(Molecular Devices))에 즉시 로딩하였는데, 여기서 365nm의 여기 파장 및 445nm의 방출 파장에서 25분에 걸쳐서 형광을 정량하였다. 양성 대조군이 대략 1,000의 형광 신호를 생성시키도록 단일 시점을 선택하였다. 모든 검정을 3회 수행하였고, 각각의 저해제에 대한 IC50 값을 GraphPad Prism을 사용하여 log[저해제] 대 저해 백분율의 시그모이드(sigmoidal) 피팅으로 계산하였다. 도 15는 뉴라미니다제 저해제로서의 접합체 1의 더 큰 효능을 나타내는 접합체 1 및 Int-2에 대한 선형 범위에 걸쳐 RFU/분으로서의 키네틱 데이터의 플롯을 나타낸다. 도 16 및 도 17은 각각 rH1N1 뉴라미니다제 및 rH3N2 뉴라미니다제에 대한 접합체 1 내지 6에 대한 검정 결과를 나타낸다(표 2).
Figure pct00590
실시예 24: 세포독성 검정
접합체 1, 2, 3, 및 6을 세포독성에 대해서 시험하였다. 96-웰 배양 플레이트에 MDCK 세포를 접종시키기 위해 10μM에서 시작하는 각각의 접합체의 10개의 2 배 연속 희석물을 삼중으로 준비하였다. 세포 능력을 CellTiter-GLO 키트를 사용하여 처리 4일 후에 결정하였다. XLfit 용량 반응 모델을 사용하여 50%의 세포독성 농도(CC50)를 계산하였다(표 3). 시험된 모든 화합물에 대해, 접합체 3을 제외하고는 10μM까지 세포독성이 관찰되지 않았다. 접합체 3의 경우, 세포변성 효과(cytopathic effect: CPE) 검정(실시예 23 참고)에서 EC50은 본 검정에서 CC50보다 725배 더 낮았다.
Figure pct00591
실시예 25. 세포변성 효과 검정
CPE-기반 미세중화 검정 #1
인플루엔자 바이러스에 의한 감염 및 파괴로부터 포유류 세포를 보호하는 뉴라미니다제 접합체의 능력을 측정하기 위해 세포 변성 효과(cytopathic effect: CPE) 기반 미세 중화 검정을 수행하였다. 간략하면, 96-웰 플레이트에 시딩된 MDCK 세포를 1시간 동안 접종시키기 위해 0.25μM에서 시작하는 각각의 접합체의 20개의 2배 연속 희석물을 이중으로 준비하였다. 1시간 인큐베이션동안 INFV CA/09 바이러스를 감염 다중도(MOI) 0.001로 세포에 첨가하였다. 인큐베이션 4일 후, 세포를 크리스탈 바이올렛으로 염색하고 광학 밀도를 판독하여 XLfit 용량 반응 모델을 사용하여 각각의 TA의 50% 유효 농도(EC50)를 계산하였다. 자나미비어를 비교물질 및 양성 대조군으로 사용하였다. 인간 Fc를 음성 대조군으로 포함시켰다. 접합체 1, 2, 3 및 6은 모두 자나미비어 대조군에 비해 우수한 성능을 나타내었으며, EC50은 자나미비어보다 42 내지 227배 더 낮았다(표 4).
Figure pct00592
CPE-기반 미세중화 검정 #2
추가적인 CPE-기반 미세중화 검정을 수행하여 접합체 6 및 접합체 7의 시험관내 활성을 추가로 평가하였다. 간략하면, 시험품을 160nM의 시작 농도에서 준비하고, 총 10개의 2배 희석물을 제조하였다. 이어서 시험품을 단일층에 비해 0.001의 감염 다중도로 인플루엔자 A 바이러스(INFV CA/09)와 미리 혼합하였다. 1시간 후, 96-웰 플레이트에서 표준 조건 하에서 70 내지 80%의 컨플루언스까지 성장한 Madin-Darby Canine Kidney(MDCK) 세포에 시험품 + 바이러스 혼합물을 첨가하였다. 자나미비어 대조군은 시험 중인 접합체보다 덜 강력할 것으로 예상되었기 때문에 시작 농도가 9600nM인 것을 제외하고는 동일하게 처리하였다. 4일의 인큐베이션 후, 단층을 크리스탈 바이올렛으로 염색하고 광학 밀도(단층 건강을 반영)를 결정하여 XLfit 용량 반응 모델(idbs; https://www.idbs.com)을 사용하여 50% 유효 농도(EC50)를 계산하였다.
표 5에 나타난 바와 같이, 496nM 농도의 자나미비어는 바이러스 매개 세포변성 효과를 절반으로 감소시켰다. 대조적으로, 접합체 6은 EC50이 단지 4.64nM로, 약 100배 더 활성이었다. 접합체 7은 활성을 약 15배 더 개선시켜, EC50을 M보다 더 낮은 수준으로 감소시켰다.
Figure pct00593
실시예 26. 세포 능력 검정
A549 세포를 화합물 처리 하루 전에 96-웰 플레이트에 시딩하였다. 세포를 1μM 내지 10nM 농도의 접합체 3(도 18A), 접합체 4(도 18B) 또는 접합체 6(도 18C)으로 24시간 동안 처리하였다. 그 다음 Cell Titer Glow(프로메가사(Promega))를 사용하여 세포 능력을 측정하였다. 결과를 3개의 생물학적 반복물의 평균 및 SD를 나타낸다. 바이러스 성장 검정(실시예 27)에 사용된 임의의 농도에서 임의의 접합체에 대한 능력에 의해 세포에 대한 효과가 관찰되지 않았다.
실시예 27. 바이러스 성장 검정
인간 상피 세포에서 관심대상 병원성 인플루엔자 바이러스 균주의 성장을 저해하는 뉴라미니다제 접합체의 능력을 측정하기 위해서, 바이러스 플라크 감소 검정을 수행하였다. 간략하면, A549 세포를 화합물 처리 하루 전에 24-웰 플레이트에 시딩하였다. 세포를 1μM 내지 10nM의 농도의 화합물로 2시간 동안 처리하고, MOI 0.01의 제시된 바이러스 균주로 1시간 인큐베이션 동안 감염시켰다. 바이러스를 제거하고 세포를 세척하고 화합물을 1μM 내지 10nM의 농도로 다시 적용하였다. 표시된 시점에서 상청액을 수집하고 MDCK 세포에서 플라크 검정 방법을 사용하여 적정하였다. 결과는 3개의 생물학적 반복물의 평균 및 SD를 나타낸다. 오셀타미비어를 비교 대조군 및 양성 대조군으로 사용하였다. 접합체 3(도 19A 내지 도 19E), 접합체 4(도 20A 내지 도 20E) 또는 접합체 6(도 21A 내지 도 21E 및 도 22A 내지 도 22E)은 모두 오셀타미비어 대조군에 비해 우수한 성능을 보여내어, 100배 더 낮은 농도에서 오셀타미비어와 유사하거나 이에 비해서 (일반적으로)에 비해 우수한 플라크 감소를 나타낸다. A549 세포에 대한 화합물(잠재적인 세포 독성에 대한 시험품을 평가하기 위해)의 효과를 세포를 사용하여 각 시험품에 대해 평가하였다(실시예 26). 간략하면, A549 세포를 화합물 처리 하루 전에 96-웰 플레이트에 시딩하였다. 세포를 1μM 내지 10nM의 농도의 화합물로 24시간 동안 처리하였다. 그 다음 Cell Titer Glow(프로메가사(Promega))를 사용하여 세포 능력을 측정하였다. 결과를 3개의 생물학적 반복물의 평균 및 SD를 나타낸다.
실시예 28. 마우스 혈청 반감기
약동학(PK) 연구는 20 내지 22그램의 암컷 CD-1 마우스(찰스 리버 래보러토리즈사(Charles River Laboratories))를 사용하였다.　 마우스에게 꼬리 정맥에 IV로, 50㎎/㎏의 시험품(10㎖/㎏ 용량 부피)을 주사하였다.　 동물을 표준 IACUC 승인된 사육 조건 하에서 사육하였다.　 적절한 시간에 동물을 응고를 방지하기 위해 EDTA 튜브에 수집된 혈액으로 비-말단 채혈(안구뒤, 뺨 또는 꼬리 정맥에 의해) 하였다.　 수집된 혈액을 원심분리(2,000×g, 10분 동안)시키고, 시간 경과에 따라서 시험품 농도 분석을 위해 혈장을 회수하였다.
접합체 6 또는 hIgG1 Fc에 대한 혈장 농도를 각 시점에서 샌드위치 ELISA로 하기와 같이 측정하였다. 접합체 6 분자를 뉴라미니다제 코팅 플레이트 또는 항-hIgG1 항체 코팅 플레이트에서 캡처한 다음, HRP 접합된 항-인간 IgG-Fc 항체를 사용하여 검출하였다. hIgG1을 항-hIgG1 Fc 항체를 사용하여 캡처하였다. 단백질 농도를 접합체 6(또는 hIgG1 Fc) 표준 곡선의 4PL 비선형 회귀를 사용하여 GraphPad Prism에서 계산하였다. 자세한 방법 설명을 하기에 제공한다.
Qiagen Ni-NTA HisSorb 플레이트(카탈로그 번호 35061, 퀴아젠사)를 1X KPL 코팅 완충액(5150-0041, 세라케어사(SeraCare)) 중의 A/California/04/2009로부터의 뉴라미니다제(H1N1)(11058-VNAHC, 시노 바이오사(Sino Bio)) 또는 항-IgG1 Fc 항체로 코팅하였다. 항-IgG1 Fc 항체를 사용하여 시험품을 캡처한 경우, 서로 다른 에피토프에 결합하는 항-IgG1 Fc 항체를 캡처하여 검출하였다. 플레이트를 실온에서 1시간 동안 인큐베이션시켰다. 혈장 샘플의 연속 희석액을 플레이팅하고 실온에서 2시간 동안 인큐베이션시켰다(샘플 희석제: PBS 0.05% Tween20 중의 0.5% 무지방 분유 + 3% 염소 혈청; 미경험 마우스 혈장 최종 농도 1:900). 500 내지 0.230ng/㎖ 범위의 접합체 6 또는 hIgG1 Fc 표준 곡선을 각각의 플레이트에서 이중으로 실시하였다.
2시간 인큐베이션 후, 플레이트를 0.05% Tween20이 함유된 300uL PBS로 5x 세척하였다. 이어서 플레이트(또는 항-hIgG1 Fc 항체) 상의 뉴라미니다제에 결합된 접합체 6을 샘플 희석제에서 1:2000으로 희석된 HRP 접합된 항-인간 IgG Fc F(ab')2(잭슨사 709-036-098)로 1시간 동안 실온에서 프로빙하였다. 이어서 플레이트를 0.05% Tween20이 포함된 300uL PBS에서 8회 세척하고. TMB 기질로 7분 동안 현상하였다. 반응을 1N H2SO4로 중단시켰다. 흡광도를 450nm에서 판독하였다. 유사한 프로토콜을 hIgG1 Fc에 대해서 사용하였는데, 여기서 항-hIgG1 Fc 항체 만 캡처에 사용하였다. 뉴라미니다제 또는 항-hIgG1 Fc 항체 캡처를 사용하여 서로 다른 시점에서 측정된 접합체 6의 양은 실험 오류 내에서 유사했으며, 이는 온전한 접합체가 생체 내에서 안정하다는 것을 시사한다.
시험 샘플의 총 접합체 6(또는 hIgG1 Fc)을 접합체 6(또는 hIgG1 Fc) 표준 곡선의 비선형 회귀 분석(시그모이드, 4PL 분석) 후 Graphpad Prism 버전 6을 사용하여 내삽하였다. PK 매개 변수를 WinNonlin 소프트웨어를 사용하여 계산하였다. 접합체 6과 hIgG1 Fc를 비교하는 곡선을 도 23에 도시하며, 주요 PK 파라미터의 요약을 표 6에 제공한다. 예기치 않게, 혈장 노출 및 최종 반감기가 야생형 hIgG1 Fc보다 접합체 6에 대해 훨씬 더 우수하다. 8일 동안의 AUC는 hIgG1 Fc보다 접합체 6의 경우 3배 더 높고, 접합체 6의 말단 반감기는 214시간인 반면 인간 IgG1 Fc의 경우 52시간이다.
Figure pct00594
실시예 29. 치명적인 마우스 인플루엔자 모델에서의 접합체 6의 효능: 연구 #1
접합체 6을 암컷 BALB/c 마우스에서 치명적인 INFV A H1N1 인플루엔자 감염에 대해 평가하였다. 실험은 5마리 마우스의 7개 군으로 구성되었다. 0일에, 모든 마우스에게 1xLD90 H1N1 A/Texas/36/91을 접종하였다. 군 1 내지 6은 시험감염 4시간 전에 치료 IV를 제공받았다(표 7). 인간 IgG1(Fc 단독)을 추가 음성 대조군으로 포함시켰다. 군 7은 오셀타미비어 포스페이트를 경구 전달을 통해, 감염 후 8시간에 시작하여 5일 동안 매일 2회 제공받았다. 모든 마우스를 시험감염 후 15일 동안 체중 감소(도 24, 표 8) 및 생존(도 25, 표 9)에 대해 모니터링하였다.
접합체 6으로 처리된 마우스는 비히클 대조군 및 hIgG1 대조군에서 각각 20% 및 0% 생존과 비교하여, 시험된 모든 농도에서 단일 용량으로 100% 생존을 나타냈다. 결과는 소그룹 크기(n=5)에도 불구하고 비히클 군(p=0.0135)과 비교할 때 통계적으로 유의미하였다. 오셀타미비어 포스페이트 군과 비교할 때 접합체 6은 500배 더 낮은 누적 용량(㎎/㎏)에서 유사한 효능을 입증하였다. 모든 접합체 6 용량에서 마우스는 오셀타미비어 대조군보다 우수한, 전체 실험 과정 동안 체중을 유지하였다.
Figure pct00595
Figure pct00596
Figure pct00597
실시예 30. 치명적인 마우스 인플루엔자 모델에서의 접합체 6의 효능: 연구 #2
접합체 6을 암컷 BALB/c 마우스에서 치명적인 INFV A H3N2 인플루엔자 감염에 대해 평가하였다. 실험은 5마리 마우스의 11개 군으로 구성되었다. 0일에, 모든 마우스에게 1xLD90 H3N2 A/Hong Kong/1/68을 접종하였다. 군 1 내지 10은 시험감염 4시간 전에 치료 IV를 제공받았다(표 10). 인간 IgG1(Fc 단독)을 추가 음성 대조군으로 포함시켰다. 군 11은 오셀타미비어 포스페이트를 경구 전달을 통해, 감염 후 8시간에 시작하여 5일 동안 매일 2회 제공받았다. 모든 마우스를 시험감염 후 15일 동안 체중 감소(도 26) 및 생존(도 27, 표 11)에 대해 모니터링하였다.
접합체 6으로 처리된 마우스는 비히클 대조군 및 hIgG1 대조군에서 각각 0% 생존과 비교하여, 0.4㎎/㎏까지 감소된 단일 용량으로 100% 생존 및 0.2㎎/㎏의 단일 용량으로 80% 생존을 나타냈다. 마우스의 80%가 오셀타미비어 대조군에서 생존하였다. 결과는 소그룹 크기(n=5)에도 불구하고 비히클 군(p=0.0128)과 비교할 때 통계적으로 유의미하였다. 오셀타미비어 포스페이트 군과 비교할 때 접합체 6은 1000배 더 낮은 누적 용량(㎎/㎏)에서 유사한 효능을 입증하였다. 모든 접합체 6 투여의 마우스는 0.4㎎/㎏까지 체중을 5% 이내에서 유지하였고 이는 오셀타미비어 대조군보다 우수하다.
Figure pct00598
Figure pct00599
실시예 31. Int-10의 합성
Figure pct00600
단계 a.
Figure pct00601
메틸 5-아세트아마이도-7,8,9-O-트라이아세틸-2,6-언하이드로-4-아지도-3,4,5-트라이데옥시-D-글리세로-D-갈락토-논-2-엔오네이트(SM-1, 10g, 22m㏖)를 100㎖ 메탄올에 용해시키고, 이어서 오일욕으로 60℃까지 가열시키고, SnCl2(5.7g, 20m㏖)를 용액에 3개의 부분으로 첨가하였다(주의, 가스 분출). 반응 혼합물을 10분 동안 교반하였고, 이 때 HPLC로 반응이 완결되었다. 격렬하게 교반하면서, 반응 용액을 50㎖ 포화 NaHCO3 및 50g 셀라이트의 용액에 서서히 첨가하였다. 생성된 슬러리를 여과시켰다. 여과액을 Boc2O(6.6g, 30m㏖, 1.5당량)로 처리하였다. 실온에서 2시간 후, 용액을 농축시켜 메탄올 대부분을 제거하고, 200㎖의 DCM에 용해시키고, 100㎖ DCM으로 2회 추출하였다. 합한 추출물을 황산나트륨으로 건조시키고, 여과시키고, 추가로 정제하지 않고 다음 단계에 사용하였다. 조 생성물 수율 12g, 100%. LCMS로 발견된 이온(들): M+H=531.
단계 b.
Figure pct00602
이전 단계로부터의 물질을 60㎖ 무수 메탄올에 용해시키고, 이어서 빙수욕으로 냉각시키면서 메탄올 중의 10㎖ 소듐 메톡사이드(0.5M)로 처리하였다. 반응 진행을 LCMS로 모니터링하였고, 2시간 후에 완결되었다. 반응을 pH 5 내지 6의 1N HCl을 사용하여 반응정지시켰다. 생성된 용액을 농축시키고, 개질제로서 0.1% TFA를 함유하는 0%에서 30% 아세토나이트릴 및 물로 용리시키는 Isco COMBIFLASH® 액체 크로마토그래프를 사용하여 역상 액체 크로마토그래피(RPLC)로 정제시켰다. 생성물의 수율 7.2g, 80%. LCMS로 발견된 이온(들): M+H=405.
단계 c.
Figure pct00603
이전 단계로부터의 중간체(3.5g, 8.5m㏖), CDI(2.8g, 2당량), 트라이메틸아민(4.2㎖, 30m㏖) 및 DMAP(240㎎, 2m㏖)의 용액을 DMF(50㎖)에서 밤새 60℃에서 가열시키고, 이어서 농축시키고, 개질제 없이 0%에서 30% 아세토나이트릴로 용리시키는 Isco COMBIFLASH® 액체 크로마토그래프를 사용하여 역상 액체 크로마토그래피(RPLC)로 정제시켰다. 목적하는 생성물의 수율 2.3g, 60%. LCMS로 발견된 이온(들): M+H=431.
단계 d.
Figure pct00604
빙수욕 하에서 수소화 나트륨(400㎎, 오일 중의 60%, 10m㏖)을 50㎖ 무수 THF(수분 민감성 반응) 중의 Int-4(1.45g, 3.3m㏖)에 첨가하였다. 생성된 용액을 0.5시간 동안 교반하고, 이어서 tert-부틸 브로모 아세테이트(2g, 10m㏖)를 상기 용액에 첨가하였다. 생성된 용액을 60℃까지 밤새 교반하고, 아세트산으로 반응정지시키고, 농축시키고, 개질제로서 TFA를 함유하는 0%에서 50% 아세토나이트릴 및 물로 용리시키는 Isco COMBIFLASH® 액체 크로마토그래프를 사용하여 역상 액체 크로마토그래피(RPLC)로 정제시켰다. 수율 1g, 57%. LCMS로 발견된 이온(들): M+H=593.(HPLC로 반응은 충분히 깨끗하지만, 단리된 수율은 낮음)
단계 f.
Figure pct00605
이전 단계로부터의 중간체(1.2g, 2.2m㏖)를 10㎖ TFA와 함께 실온에서 밤새 교반하였다. 탈보호의 진행을 LCMS로 모니터링하였다. 생성된 용액을을 농축시키고, 정제하지 않고 다음 단계에 사용하였다.
이전 반응으로부터의 잔류물을 20㎖ THF에 재용해시키고, 이어서 N,N'-비스-boc-1-구아닐피라졸(1g, 3.3m㏖), 4-다이메틸아미노피리딘(120㎎, 1m㏖) 및 트라이에틸아민(0.7㎖, 5m㏖)을 용액에 첨가하고, 생성된 용액을 60℃까지 2시간 동안 가열시켰다. 생성된 용액을 농축시키고, 개질제 없이 0%에서 50% 아세토나이트릴 및 물로 용리시키는 Isco COMBIFLASH® 액체 크로마토그래프를 사용하여 역상 액체 크로마토그래피(RPLC)로 정제시켰다. 수율 700㎎, 84%. LCMS로 발견된 이온(들): M+H=631.
단계 g.
Figure pct00606
DMF(30㎖) 중의 링커-3(실시예 19에 기재된 바와 같이 제조됨)(73㎎g, 0.14m㏖) 및 이전 단계로부터의 중간체(200㎎, 0.32m㏖, 2.2당량)의 용액에 EDC(100㎎, 0.5m㏖), HOAt(65㎎, 3m㏖) 및 DIEA(0.14㎖, 1m㏖)를 실온에서 첨가하였다. 용액을 밤새 교반하였다. 생성된 용액을 농축시키고, 개질제 없이 0%에서 50% 아세토나이트릴 및 물로 용리시키는 Isco COMBIFLASH® 액체 크로마토그래프를 사용하여 역상 액체 크로마토그래피(RPLC)로 정제시켰다. 수율 120㎎, 52%. LCMS로 발견된 이온(들): M/2+H=830.
단계 h.
Figure pct00607
2㎖ 물 중의 수산화리튬(24㎎, 1m㏖)을 2㎖ THF 및 1㎖ MeOH 중의 이전 단계로부터의 중간체(120㎎, 0.07m㏖)의 용액에 첨가하였다. LCMS로 반응이 완결된 후, 용액을 AMBERLITE® IRN-77, 이온 교환 수지로 반응정지시켜 pH=1까지 조정하고, 이어서 용액을 여과시키고, 여과액을 농축시켰고, 추가로 정제하지 않고 다음 단계에서 사용하였다.
이전 단계로부터의 중간체를 2㎖ TFA로 실온에서 밤새 40℃에서 처리하였다. 조 반응물을 농축시키고, 개질제로서 TFA를 함유하는 0%에서 20% 아세토나이트릴 및 물을 사용하여 HPLC로 정제시켰다. 수율 60㎎, 74% 수율. LCMS로 발견된 이온(들): [M/2]+1=589.8.
실시예 32. 접합체 7의 합성
PBSx1 완충 용액 중의 Fc-PEG4-아자이드(각각의 Fc 도메인 단량체는 서열번호 38의 서열을 가짐)(100㎎, 1.28μ㏖, 6.1㎖, MW=57260Da, DAR=3.6)의 용액을 Int-10(실시예 31에 기재된 바와 같이 제조)(TFA 염, 44㎎, 0.031m㏖) 및 CuSO4(0.7㎖의 50.0mM, 20당량)의 새로 제조된 pH 7.4 PBS 용액, 트리스(3-하이드록시프로필트라이아졸릴메틸)-아민(THPTA, 0.7㎖의 50.0mM, 20당량) 및 아스코르브산나트륨(1.05㎖의 50.0mM, 30당량)에 첨가하였다. 생성된 불균질 용액을 12시간 동안 락커 테이블로 교반하였다. 조 용액을 1㎎/㎖의 pH 7.4 PBS로 희석시키고, 및 1㎖의 부피까지 2회 초여과시켰다(10,000 MWCO). 이어서, 조 혼합물을 PBS pH 7.4 중에 1:10로 희석시키고, MabSelect Sure Resin(지이 헬쓰케어사, 미국 일리노이주 시카고 소재), 그 다음 크기 배제 크로마토그래피로 정제시켰다. 정제된 물질을 접합에 사용된 Fc의 아미노산 서열에 기초하여 계산된 흡광 계수 사용하여 Nanodrop™ UV 가시 분광광도계를 사용하여 정량하고, 원심분리 농축기(10,000 MWCO)를 사용하여 대략 10㎎/㎖로 농축시켰다. 1 내지 2㎍의 각각의 분자를 겔에 로딩하고, 인스턴트 Blue 염색을 사용하여 염색함으로써, 정제된 분자를 4 내지 12% Bis Tris SDS PAGE 겔을 사용하여 분석하였다. 각각의 겔은 제시된 분자량 표준품을 갖는 분자량 래더를 포함하였다. 수율은 전형적으로 40 내지 60%이다. MALDI MS 분석은 63633의 질량 평균을 갖는 다양한 질량(60000 내지 90000)을 나타내었다. 평균 DAR=4.5.
실시예 33. 치명적인 마우스 인플루엔자 모델에서의 접합체 6의 효능: 연구 #3
접합체 6을 암컷 BALB/c 마우스에서 치명적인 INFV A H1N1 인플루엔자 감염에 대해 평가하였다. 실험은 5마리 마우스의 7개 군으로 구성되었다. 0일에, 모든 마우스에게 1xLD90 H1N1 A/Texas/36/91을 접종하였다. 군 1 내지 6은 시험감염 28일 전에 IV 치료를 제공받았다(표 12). 비히클(PBS)을 추가 음성 대조군으로 포함시켰다. 군 7은 오셀타미비어 포스페이트를 경구 전달을 통해, 감염 후 8시간에 시작하여 5일 동안 매일 2회 제공받았다. 모든 마우스를 시험감염 후 15일 동안 생존(도 31A 내지 도 31F)에 대해서 모니터링하였다.
접합체 6으로 처리된 마우스는 비히클 대조군에서 0% 생존과 비교하여, 2.5㎎/㎏까지 감소된 모든 용량에서 단일 용량으로 100% 생존 및 1.25㎎/㎏에서 80% 생존을 나타냈다. 오셀타미비어 포스페이트 대조군에서 마우스가 생존하였다. 오셀타미비어 포스페이트 군과 비교하는 경우, 모든 접합체 6 군이 감염 전 28일에 1회 투여되었다는 사실에도 불구하고, 접합체 6은 20x 더 낮은 누적 용량(㎎/㎏ 단위)에서 오셀타미비어와 유사한 효능을 나타내었다.
Figure pct00608
실시예 34. 치명적인 마우스 인플루엔자 모델에서의 접합체 6의 효능: 연구 #4
접합체 6을 암컷 BALB/c 마우스에서 치명적인 INFV A H1N1 인플루엔자 감염에 대해 평가하였다. 실험은 5마리 마우스의 13개 군으로 구성되었다. 0일에, 모든 마우스에게 1xLD90 H1N1 A/Texas/36/91을 접종하였다. 모든 접합체 6 군(8 내지 13)에게 표 13에 요약된 바와 같이 상이한 시간, 감염 전 및 감염 후에 단일 10㎎/㎏ IV 용량을 제공하였다. 비히클(PBS) 및 Fc 단독을 음성 대조군으로 포함시켰다. 군 3 내지 7에게 표 13에 요약된 바와 같이, 감염 후 상이한 시점에서 시작하여, 오셀타미비어 포스페이트(20㎎/㎏)를 매일 2회, 5일 동안 경구 전달로 제공하였다. 모든 마우스를 시험감염 후 15일 동안 생존(도 32A 내지 도 32F)에 대해서 모니터링하였다.
접합체 6으로 처리된 마우스는 감염 후 24시간에 처리되는 경우 단일 10㎎/㎏으로 100% 생존을 나타내었고, 각각 감염 후 48 및 72시간에 60 및 80% 생존을 나타내었다. 오셀타미비어 포스페이트 군에서, 생존은 감염 후 48시간 및 72시간에 치료를 시작하는 경우, 군에서 각각 0% 및 20%로 급격하게 감소하였다. 이러한 결과는, 접합체 6이 인플루엔자 A 감염을 치료하는데 있어서 오셀타미비어에 비해서 우수한 치료 윈도우를 잠재적으로 갖는다는 것을 시사한다.
Figure pct00609
실시예 35. 접합체 6 독성 연구
접합체 6의 안정성을 14일 래트 용량-범위 파인더 독성 연구에서 평가하였다. 래트에게 5mpk, 20mpk 또는 50mpk의 접합체 6을 연구 0일 및 7일에 정맥내 투여에 의해서 투여하였다. 비히클 대조군에 비해서, 시험된 임의의 용량에서 체중 증가(도 33), 장기 중량, 음식 소모에 대해서 어떠한 유의한 효과도 관찰되지 않았다. 혈장 노출(AUC로 측정됨)은 용량에 비례하게 증가하였다. 이러한 전임상 안정성 결과는 높은 치료 지수와 일관된다. 관찰 요약을 표 14에 제공한다.
Figure pct00610
실시예 36. 3개의 상이한 경로에 의한 치명적인 마우스 인플루엔자 모델 용량에 대한 접합체 6의 효능: 연구 #5
접합체 6을 암컷 BALB/c 마우스(찰스 리버 래보러토리즈, 6 내지 8주령)에서 치명적인 IAV H1N1 인플루엔자 감염에 대해 평가하였다. 시험감염 바이러스(A/Texas/36/91)는 마우스에서 치명적인 감염을 초래할 수 있는 마우스-적응성 단리물이다. 실험은 5마리 마우스의 15개 군으로 구성되었다. 0일에, 아이소플루란으로 약하게 마취시킨 후, 모든 마우스를 50㎕의 부피의 비강내 접종으로 1×LD90로 바이러스로 시험감염시켰다. 군 1 내지 14는 시험감염 4시간 전에 단일 치료를 제공받았다(표 15). 상이한 투여 경로에 의한 접합체 6의 효력을 결정하기 위해서, 접합체의 매칭 농도(10, 2, 0.4, 및 0.1㎎/㎏)를 IV, IM 또는 SC로 투여하였다. 비히클(PBS) 단독 군에 더하여, 인간 IgG1(Fc 단독)을 추가 음성 대조군(군 2)으로서 포함시켰다. 군 15는 오셀타미비어 포스페이트를 경구 전달을 통해, 감염 후 8시간에 시작하여 5일 동안 매일 2회 제공받았다. 모든 마우스를 14일 동안 생존(표 15)에 대해서 모니터링하였다.
접합체 6으로 처리된 마우스는, 투여 경로에 관계없이 10, 2 또는 0.4㎎/㎏의 단일 용량으로 인플루엔자(H1N1)에 의한 시험감염에 대해서 14일에 100% 생존을 나타내었다. 가장 낮은 시험품에서만 IV, IM 및 SC 투여 사이에서 단일 마우스 변화가 인지되었다(표 16; 각각 60, 80, 및 100% 생존). 이러한 결과는, 접합체 6의 보호성 폐 농도가 다중 용량 경로에 의해서 달성될 수 있다는 것을 강하게 시사한다.
Figure pct00611
Figure pct00612
실시예 37. 치명적인 마우스 인플루엔자 모델에서 오셀타미비어-내성 단리물에 대한 접합체 6의 효능: 연구 #6
접합체 6을 암컷 BALB/c 마우스(찰스 리버 래보러토리즈, 6 내지 8주령)에서 치명적인 IAV H1N1 인플루엔자 감염에 대해 평가하였다. 시험감염 바이러스(A/Perth/261/2009)는 뉴라미니다제 저해제 오셀타미비어에 대한 내성을 유발하는 H275Y 돌연변이를 갖는 마우스-적응성 단리물이다.
실험은 5마리 마우스의 10개 군으로 구성되었다. 0일에, 마우스를 아이소플루란으로 약하게 마취시킨 후, 모든 마우스를 50㎕의 부피의 비강내 접종으로 1×LD90으로 A/Perth/261/2009(H1N1)로 시험감염시켰다. 군 1 내지 9는 시험감염 4시간 전에 IV로 단일 치료를 제공받았다(표 17). 비히클(PBS) 단독 군에 더하여, 인간 IgG1(Fc 단독)을 추가 음성 대조군으로서 포함시켰다. 군 10은 오셀타미비어 포스페이트를 경구 전달을 통해, 감염 후 8시간에 시작하여 5일 동안 매일 2회 제공받았다. 모든 마우스를 시험감염 후 15일 동안 생존(도 34A 내지 도 34D, 표 18) 및 체중 감소(도 35, 표 19)에 대해서 모니터링하였다.
접합체 6으로 처리된 마우스는 50, 10, 및 2㎎/㎏의 단일 용량으로 인플루엔자(A/Perth/261/2009)에 의한 시험감염에 대해서 100% 생존을 나타내었다. 추가로, 소그룹 크기(n=5)에도 불구하고, 이러한 결과는 비히클 대조군에 비해서 통계학적으로 유의하였다(표 18).
0.4, 0.2 또는 0.1㎎/㎏의 농도의 접합체 6에서, 생존은 60%인 반면, 비히클(PBS) 또는 hIgG1(Fc 단독) 단독이 투여된 경우 연구 마지막에 어떠한 마우스도 생존하지 않았다. 오셀타미비어 군은, 이전에 오셀타미비어 감응성 단리물(20㎎/㎏, bid x 5일)에 대해서 보호성이라고 밝혀진 용량으로의 처리에도 불구하고 단일 동물 생존(20% 효능)을 가졌다. 이러한 결과는, 시험감염 바이러스가 오셀타미비어에 내성이고, 접합체 6에 대해서 감응성이라는 것을 확인해 준다.
H275Y 돌연변이를 함유한 돌연변이체에 대한 접합체 6의 효력은 체중 데이터에 의해서 추가로 뒷받침되었다(도 35, 표 19). 2㎎/㎏ 또는 그 초과의 농도의 단일 용량의 접합체 6을 제공받은 군은 5% 또는 그 미만의 일시적인 체중 감소를 나타내었다.
Figure pct00613
Figure pct00614
Figure pct00615
실시예 38. 시험품의 IV 투여 후 7-일 래트 PK 연구
46 내지 49일령의 수컷 스프라그 돌리 래트(Sprague Dawley Rat)를 사용하여 Seventh Wave Laboratories(미국 미주리주 메릴랜드 하이츠 소재)에서 래트 약동학(PK) 연구를 수행하였다. 래트에게 꼬리 정맥에 IV로, 75㎎/㎏의 시험품(5㎖/㎏ 용량 부피)을 주사하였다. 동물을 표준 IACUC 승인된 사육 조건 하에서 사육하였다.　적절한 시간에 동물을 응고를 방지하기 위해 K2EDTA 튜브에 수집된 혈액으로 비-말단 채혈(안구뒤, 뺨 또는 꼬리 정맥에 의해) 하였다. 수집된 혈액을 원심분리(2,000×g, 10분 동안)시키고, 시간 경과에 따라서 시험품 농도 분석을 위해 혈장을 회수하였다.
접합체 6 또는 hIgG1 Fc에 대한 혈장 농도를 각 시점에서 샌드위치 ELISA로 하기와 같이 측정하였다. 접합체 6 분자를 뉴라미니다제 코팅 플레이트 또는 항-hIgG1 항체 코팅 플레이트에서 캡처한 다음, HRP 접합된 항-인간 IgG-Fc 항체를 사용하여 검출하였다. hIgG1을 항-hIgG1 Fc 항체를 사용하여 캡처하였다. 단백질 농도를 접합체 6(또는 hIgG1 Fc) 표준 곡선의 4PL 비선형 회귀를 사용하여 GraphPad Prism에서 계산하였다. 자세한 방법 설명을 하기에 제공한다.
Nunc Maxisorp 96-웰 플레이트(카탈로그 번호 12-565-136, 써모피셔사)를 1X KPL 코팅 완충액(5150-0041, 세라케어사) 중의 A/California/04/2009로부터의 뉴라미니다제(H1N1)(11058-VNAHC, 시노 바이올로지컬사) 또는 항-IgG1 Fc 항체로 코팅하였다. 항-IgG1 Fc 항체를 사용하여 시험품을 캡처한 경우, 서로 다른 에피토프에 결합하는 항-IgG1 Fc 항체를 캡처하여 검출하였다. 플레이트를 실온에서 1시간 동안 오비탈 플레이트 진탕기(500rpm)에서 인큐베이션시켰다. 혈장 샘플의 연속 희석액을 플레이팅하고 실온에서 2시간 동안 인큐베이션시켰다(샘플 희석제: PBS 0.05 \% Tween 20 중의 1% BSA + 미경험 래트 혈장 최종 농도 1:900). 500 내지 0.230ng/㎖ 범위의 접합체 6 또는 hIgG1 Fc 표준 곡선을 각각의 플레이트에서 이중으로 실시하였다.
2시간 인큐베이션 후, 플레이트를 0.05% Tween20이 함유된 300uL PBS로 5x 세척하였다. 이어서 플레이트(또는 항-hIgG1 Fc 항체) 상의 뉴라미니다제에 결합된 접합체 6을 샘플 희석제에서 1:1,000으로 희석된 HRP 접합된 항-인간 IgG Fc F(ab')2 (709-036-098, 잭슨사)로 1시간 동안 실온에서 프로빙하였다. 이어서 플레이트를 0.05% Tween 20이 포함된 300uL PBS에서 8회 세척하고. TMB 기질로 7 내지 8분 동안 현상하였다. 반응을 1N H2SO4로 중단시켰다. 흡광도를 450nm에서 판독하였다. 유사한 프로토콜을 hIgG1 Fc에 대해서 사용하였는데, 여기서 항-hIgG1 Fc 항체 만 캡처에 사용하였다. 뉴라미니다제 또는 항-hIgG1 Fc 항체 캡처를 사용하여 서로 다른 시점에서 측정된 접합체 6의 양은 실험 오류 내에서 유사했으며, 이는 온전한 접합체가 생체 내에서 안정하다는 것을 시사한다.
시험 샘플의 총 접합체 6(또는 hIgG1 Fc)을 접합체 6(또는 hIgG1 Fc) 표준 곡선의 비선형 회귀 분석(시그모이드, 4PL 분석) 후 Graphpad Prism 버전 6을 사용하여 내삽하였다. 접합체 6과 hIgG1 Fc를 비교하는 곡선을 도 36에 도시한다. 뉴라미니다제 또는 항-hIgG1 Fc 항체 캡처를 사용하여 서로 다른 시점에서 측정된 접합체 6의 양은 실험 오류 내에서 유사했으며, 이는 온전한 접합체가 생체 내에서 안정하다는 것을 시사한다.
실시예 39. 시험품의 IV 투여 후 14-일 래트 PK 연구
46 내지 49일령의 수컷 스프라그 돌리 래트를 사용하여 Seventh Wave Laboratories(미국 미주리주 메릴랜드 하이츠 소재)에서 래트 PK 연구를 수행하였다. 래트에게 꼬리 정맥에 IV로, 5, 20 또는 50㎎/㎏의 시험품(5㎖/㎏ 용량 부피)을 1일 및 8일에 주사하였다. 동물을 표준 IACUC 승인된 사육 조건 하에서 사육하였다.　적절한 시간에 동물을 응고를 방지하기 위해 K2EDTA 튜브에 수집된 혈액으로 비-말단 채혈(안구뒤, 뺨 또는 꼬리 정맥에 의해) 하였다.　수집된 혈액을 원심분리(2,000×g, 10분 동안)시키고, 시간 경과에 따라서 시험품 농도 분석을 위해 혈장을 회수하였다.
접합체 6에 대한 혈장 농도를 각 시점에서 샌드위치 ELISA로 하기와 같이 측정하였다. 접합체 6 분자를 뉴라미니다제 코팅 플레이트에서 캡처한 다음, HRP 접합된 항-인간 IgG-Fc 항체를 사용하여 검출하였다. hIgG1을 항-hIgG1 Fc 항체를 사용하여 캡처하였다. 단백질 농도를 접합체 6 표준 곡선의 4PL 비선형 회귀를 사용하여 GraphPad Prism에서 계산하였다. 자세한 방법 설명을 하기에 제공한다.
Nunc Maxisorp 96-웰 플레이트(카탈로그 번호 12-565-136, 써모피셔사)를 1X KPL 코팅 완충액(5150-0041, 세라케어사) 중의 A/California/04/2009로부터의 뉴라미니다제(H1N1)(11058-VNAHC, 시노 바이올로지컬사)로 코팅하였다. 플레이트를 실온에서 1시간 동안 오비탈 플레이트 진탕기(500rpm)에서 인큐베이션시켰다. 혈장 샘플의 연속 희석액을 플레이팅하고 실온에서 2시간 동안 인큐베이션시켰다(샘플 희석제: PBS 0.05% Tween 20 중의 1% BSA + 미경험 래트 혈장 최종 농도 1:900). 500 내지 0.230ng/㎖ 범위의 접합체 6 표준 곡선을 각각의 플레이트에서 이중으로 실시하였다.
2시간 인큐베이션 후, 플레이트를 0.05% Tween20이 함유된 300uL PBS로 5x 세척하였다. 이어서 플레이트 상의 뉴라미니다제에 결합된 접합체 6을 샘플 희석제에서 1:1,000으로 희석된 HRP 접합된 항-인간 IgG Fc F(ab')2 (709-036-098, 잭슨사)로 1시간 동안 실온에서 프로빙하였다. 이어서 플레이트를 0.05% Tween20이 포함된 300uL PBS에서 8회 세척하고. TMB 기질로 7 내지 8분 동안 현상하였다. 반응을 1N H2SO4로 중단시켰다. 흡광도를 450nm에서 판독하였다.
시험 샘플의 총 접합체 6(또는 hIgG1 Fc)을 접합체 6 표준 곡선의 비선형 회귀 분석(시그모이드, 4PL 분석) 후 Graphpad Prism 버전 6을 사용하여 내삽하였다. 도 37에 도시된 접합체 6을 비교하는 곡선은 선형 용량 비례를 입증한다.
실시예 40. 시험품의 IV 투여 및 SC 투여를 비교한 28-일 래트 PK 연구
46 내지 49일령의 수컷 스프라그 돌리 래트를 사용하여 Seventh Wave Laboratories(미국 미주리주 메릴랜드 하이츠 소재)에서 래트 PK 연구를 수행하였다. 래트에게 IV로 또는 SC로, 5㎎/㎏의 시험품(5㎖/㎏ 용량 부피)을 주사하였다. 동물을 표준 IACUC 승인된 사육 조건 하에서 사육하였다.　적절한 시간에 동물을 응고를 방지하기 위해 K2EDTA 튜브에 수집된 혈액으로 비-말단 채혈(안구뒤, 뺨 또는 꼬리 정맥에 의해) 하였다.　수집된 혈액을 원심분리(2,000×g, 10분 동안)시키고, 시간 경과에 따라서 시험품 농도 분석을 위해 혈장을 회수하였다.
접합체 6 또는 hIgG1 Fc에 대한 혈장 농도를 각 시점에서 샌드위치 ELISA로 하기와 같이 측정하였다. 접합체 6 분자를 뉴라미니다제 코팅 플레이트에서 캡처한 다음, HRP 접합된 항-인간 IgG-Fc 항체를 사용하여 검출하였다. 단백질 농도를 접합체 6 표준 곡선의 4PL 비선형 회귀를 사용하여 GraphPad Prism에서 계산하였다. 자세한 방법 설명을 하기에 제공한다.
Nunc Maxisorp 96-웰 플레이트(카탈로그 번호 12-565-136, 써모피셔사)를 1X KPL 코팅 완충액(5150-0041, 세라케어사) 중의 A/California/04/2009로부터의 뉴라미니다제(H1N1)(11058-VNAHC, 시노 바이올로지컬사)로 코팅하였다. 플레이트를 실온에서 1시간 동안 오비탈 플레이트 진탕기(500rpm)에서 인큐베이션시켰다. 혈장 샘플의 연속 희석액을 플레이팅하고 실온에서 2시간 동안 인큐베이션시켰다(샘플 희석제: PBS 0.05% Tween 20 중의 1% BSA + 미경험 래트 혈장 최종 농도 1:900). 500 내지 0.230ng/㎖ 범위의 접합체 6 표준 곡선을 각각의 플레이트에서 이중으로 실시하였다.
2시간 인큐베이션 후, 플레이트를 0.05% Tween20이 함유된 300uL PBS로 5x 세척하였다. 이어서 플레이트 상의 뉴라미니다제에 결합된 접합체 6을 샘플 희석제 중에 1:1,000으로 희석된 HRP 접합된 항-인간 IgG Fc F(ab')2 (709-036-098, 잭슨사)로 1시간 동안 실온에서 프로빙하였다. 이어서 플레이트를 0.05% Tween20이 포함된 300uL PBS에서 8회 세척하고. TMB 기질로 7 내지 8분 동안 현상하였다. 반응을 1N H2SO4로 중단시켰다. 흡광도를 450nm에서 판독하였다.
시험 샘플의 총 접합체 6(또는 hIgG1 Fc)을 접합체 6 표준 곡선의 비선형 회귀 분석(시그모이드, 4PL 분석) 후 Graphpad Prism 버전 6을 사용하여 내삽하였다. 도 38의 접합체 6을 비교한 곡선은, SC 및 IV 혈장 수준이 24시간에 수렴되었고, 실험 오차 내에서 336시간까지 유사함을 나타낸다.
실시예 41. 시험품의 IV 투여 후 28-일 비-인간 영장류 PK 연구
2.5 내지 6.5㎏ 범위의 체중의 4.5 내지 8령의 수컷 및 암컷 시노몰거스 원숭이를 사용하여 BTS Research(미국 캘리포니아주 샌디에고 소재)로 비-인간 영장류(NHP) PK 연구를 수행하였다. NHP에게 복재 또는 두부 정맥에 IV로, 5 또는 20㎎/㎏의 시험품(5㎖/㎏ 용량 부피)을 주사하였다. 동물을 표준 IACUC 승인된 사육 조건 하에서 사육하였다.　적절한 시간에 동물을 응고를 방지하기 위해 K2EDTA 튜브에 수집된 혈액으로 비-말단 채혈(대퇴 또는 두부 정맥에 의해) 하였다.　수집된 혈액을 원심분리(2,000×g, 10분 동안)시키고, 시간 경과에 따라서 시험품 농도 분석을 위해 혈장을 회수하였다.
접합체 6에 대한 혈장 농도를 각 시점에서 샌드위치 ELISA로 하기와 같이 측정하였다. 접합체 6 분자를 뉴라미니다제 코팅 플레이트에서 캡처한 다음, HRP 접합된 항-인간 IgG-Fc 항체를 사용하여 검출하였다. 단백질 농도를 접합체 6 표준 곡선의 4PL 비선형 회귀를 사용하여 GraphPad Prism에서 계산하였다. 자세한 방법 설명을 하기에 제공한다.
Nunc Maxisorp 96-웰 플레이트(카탈로그 번호 12-565-136, 써모피셔사)를 1X KPL 코팅 완충액(5150-0041, 세라케어사) 중의 A/California/04/2009로부터의 뉴라미니다제(H1N1)(11058-VNAHC, 시노 바이올로지컬사)로 코팅하였다. 플레이트를 실온에서 1시간 동안 오비탈 플레이트 진탕기(500rpm)에서 인큐베이션시켰다. 혈장 샘플의 연속 희석액을 플레이팅하고 실온에서 2시간 동안 인큐베이션시켰다(샘플 희석제: PBS 0.05% Tween 20 중의 1% BSA + 미경험 시노몰거스 원숭이 혈장 최종 농도 1:2,500). 500 내지 0.230ng/㎖ 범위의 접합체 6 표준 곡선을 각각의 플레이트에서 이중으로 실시하였다.
2시간 인큐베이션 후, 플레이트를 0.05% Tween20이 함유된 300uL PBS로 5x 세척하였다. 이어서 플레이트 상의 뉴라미니다제에 결합된 접합체 6을 샘플 희석제에서 1:1,000으로 희석된 HRP 접합된 항-인간 IgG Fc F(ab')2 (709-036-098, 잭슨사)로 1시간 동안 실온에서 프로빙하였다. 이어서 플레이트를 0.05% Tween20이 포함된 300uL PBS에서 8회 세척하고. TMB 기질로 7 내지 8분 동안 현상하였다. 반응을 1N H2SO4로 중단시켰다. 흡광도를 450nm에서 판독하였다.
시험 샘플의 총 접합체 6을 접합체 6(또는 hIgG1 Fc) 표준 곡선의 비선형 회귀 분석(시그모이드, 4PL 분석) 후 Graphpad Prism 버전 6을 사용하여 내삽하였다. PK 매개 변수를 WinNonlin 소프트웨어를 사용하여 계산하였다. 접합체 6을 비교하는 곡선을 도 39에 도시하며, 주요 PK 파라미터의 요약을 표 20에 제공한다. 용량 반응은 5와 20㎎/㎏ IV 사이에서 선형이어서, 두 용량에 걸쳐서 대략 9일의 반감기를 초래한다(마우스/래트에서 대등함).
Figure pct00616
실시예 42. 시험품의 IV 투여 후 마우스 폐 분포 PK 연구
6주령의 수컷 CD-1 마우스를 사용하여 마우스 PK 연구를 수행하였다. 마우스에게 꼬리 정맥에 IV로, 10㎎/㎏의 시험품(5㎖/㎏ 용량 부피)을 주사하였다. 동물을 표준 IACUC 승인된 사육 조건 하에서 사육하였다.　제시된 시점에, 동물을 안락사시켜(심장 천자에 의해서) K2EDTA 튜브에 혈액을 수거하고, 폐를 수거하였다. 혈액을 원심분리시켜(2,000×g, 10분 동안) 혈장을 얻었다. 폐를 칭량하고, 멸균 일회용 막자(Z359947, 시그마사)를 사용하여 1.5㎖ 튜브에서 11.64㎖의 조직 단백질 추출 시약(78510, 써모 사이언티픽사), 0.24㎖의 프로테아제 저해제 칵테일(78410, 써모 사이언티픽사), 및 0.12㎖의 EDTA로 구성된 100uL의 균질화 완충액 중에서 균질화시켰다. 1 내지 2분 균질화 후, 균질화 완충제를 사용하여 부피를 1㎖로 조정하고, 약하게 보텍싱하여 주기적으로 혼합하면서 샘플을 얼음 상에서 20분 동안 인큐베이션시켰다. 파쇄액을 8,000×g로 10분 동안 원심분리시키고, 상청액을 시간 경과에 따라서 시험품 농도 분석을 위해서 유지시켰다.
접합체 6에 대한 혈장 및 폐 농도를 각 시점에서 샌드위치 ELISA로 하기와 같이 측정하였다. 접합체 6 분자를 뉴라미니다제 코팅 플레이트에서 캡처하고, HRP 접합된 항-인간 IgG-Fc 항체를 사용하여 검출하였다. 단백질 농도를 접합체 6 표준 곡선의 4PL 비선형 회귀를 사용하여 GraphPad Prism에서 계산하였다. 자세한 방법 설명을 하기에 제공한다.
Nunc Maxisorp 96-웰 플레이트(카탈로그 번호 12-565-136, 써모피셔사)를 1X KPL 코팅 완충액(5150-0041, 세라케어사) 중의 A/California/04/2009로부터의 뉴라미니다제(H1N1)(11058-VNAHC, 시노 바이올로지컬사)로 코팅하였다. 플레이트를 실온에서 1시간 동안 오비탈 플레이트 진탕기(500rpm)에서 인큐베이션시켰다. 혈장 샘플의 연속 희석액을 플레이팅하고 실온에서 2시간 동안 인큐베이션시켰다(샘플 희석제: PBS 0.05% Tween 20 중의 1% BSA + 미경험 마우스 혈장 최종 농도 1:100). 500 내지 0.230ng/㎖ 범위의 접합체 6 표준 곡선을 각각의 플레이트에서 이중으로 실시하였다.
2시간 인큐베이션 후, 플레이트를 0.05% Tween20이 함유된 300uL PBS로 5x 세척하였다. 이어서 플레이트 상의 뉴라미니다제에 결합된 접합체 6을 샘플 희석제에서 1:1,000으로 희석된 HRP 접합된 항-인간 IgG Fc F(ab')2 (709-036-098, 잭슨사)로 1시간 동안 실온에서 프로빙하였다. 이어서 플레이트를 0.05% Tween20이 포함된 300uL PBS에서 8회 세척하고. TMB 기질로 7 내지 8분 동안 현상하였다. 반응을 1N H2SO4로 중단시켰다. 흡광도를 450nm에서 판독하였다.
시험 샘플의 총 접합체 6을 접합체 6 표준 곡선의 비선형 회귀 분석(시그모이드, 4PL 분석) 후 Graphpad Prism 버전 6을 사용하여 내삽하였다. 접합체 6 혈장 및 폐 농도를 비교하는 곡선을 도 40에 도시한다. 예상치 못하게, 폐 Cmax는 t=1시간에 도달되었다(19.5㎍/g 폐 조직, 약 310nM). 혈장에 비해서 접합체 6의 대략 10%가 존재하였다.
실시예 43. 시험품의 IV, SC 및 IM 투여를 비교하는 5-일 마우스 PK 연구
6주령의 수컷 CD-1 마우스를 사용하여 마우스 PK 연구를 수행하였다. 마우스에게 꼬리 정맥에 IV로, 5㎎/㎏의 시험품(5㎖/㎏ 용량 부피)을 주사하였다. 동물을 표준 IACUC 승인된 사육 조건 하에서 사육하였다.　적절한 시간에 동물을 응고를 방지하기 위해 K2EDTA 튜브에 수집된 혈액으로 비-말단 채혈(안구뒤, 뺨 또는 꼬리 정맥에 의해) 하였다.　수집된 혈액을 원심분리(2,000×g, 10분 동안)시키고, 시간 경과에 따라서 시험품 농도 분석을 위해 혈장을 회수하였다.
접합체 6에 대한 혈장 농도를 각 시점에서 샌드위치 ELISA로 하기와 같이 측정하였다. 접합체 6 분자를 뉴라미니다제 코팅 플레이트에서 캡처한 다음, HRP 접합된 항-인간 IgG-Fc 항체를 사용하여 검출하였다. 단백질 농도를 접합체 6(또는 hIgG1 Fc) 표준 곡선의 4PL 비선형 회귀를 사용하여 GraphPad Prism에서 계산하였다. 자세한 방법 설명을 하기에 제공한다.
Nunc Maxisorp 96-웰 플레이트(카탈로그 번호 12-565-136, 써모피셔사)를 1X KPL 코팅 완충액(5150-0041, 세라케어사) 중의 A/California/04/2009로부터의 뉴라미니다제(H1N1)(11058-VNAHC, 시노 바이올로지컬사)로 코팅하였다. 플레이트를 실온에서 1시간 동안 오비탈 플레이트 진탕기(500rpm)에서 인큐베이션시켰다. 혈장 샘플의 연속 희석액을 플레이팅하고 실온에서 2시간 동안 인큐베이션시켰다(샘플 희석제: PBS 0.05% Tween 20 중의 1% BSA + 미경험 마우스 혈장 최종 농도 1:100). 500 내지 0.230ng/㎖ 범위의 접합체 6 표준 곡선을 각각의 플레이트에서 이중으로 실시하였다.
2시간 인큐베이션 후, 플레이트를 0.05% Tween20이 함유된 300uL PBS로 5x 세척하였다. 이어서 플레이트 상의 뉴라미니다제에 결합된 접합체 6을 샘플 희석제에서 1:1,000으로 희석된 HRP 접합된 항-인간 IgG Fc F(ab')2 (709-036-098, 잭슨사)로 1시간 동안 실온에서 프로빙하였다. 이어서 플레이트를 0.05% Tween20이 포함된 300uL PBS에서8회 세척하고. TMB 기질로 7 내지 8분 동안 현상하였다. 반응을 1N H2SO4로 중단시켰다. 흡광도를 450nm에서 판독하였다.
시험 샘플의 총 접합체 6을 접합체 6 표준 곡선의 비선형 회귀 분석(시그모이드, 4PL 분석) 후 Graphpad Prism 버전 6을 사용하여 내삽하였다. 접합체 6을 비교하는 곡선을 도 41에 도시한다. IV, IM 및 SC에 대한 노출 수준은 각각 2082, 1944 및 2500의 AUC와 유사하였다.
실시예 44. 마우스 효능 및 다중-종 PK는 인간 대상체에서 드문 예방적 투여를 뒷받침한다.
마우스, 래트 및 영장류 PK 연구를 기반으로 한 마우스 효능 투여의 상대성장(allometric) 스케일링을 사용하여 인간 대상체에서, 투여 및 PK 파라미터를 예측하였다. 상대성장 스케일링은 28일 마우스 예방 연구(실시예 33 참조)에서 2.5㎎/㎏ 효능 용량의 곡선 하 면적(AUC)에 기초하였다.
시노몰거스 원숭이-단독 상대성장 스케일링의 경우, 단순 상대성장 방정식만 사용하여 시노몰거스 원숭이 PK 데이터(실시예 41)에 기초하여 인간 청소율(CL)을 계산하였다: CL(인간)=CL(원숭이)
Figure pct00617
[BW(인간)/BW(원숭이)]w, 식 중, BW=체중이고, w는 0.85로 고정된 스케일링 지수이다. 시노몰거스 원숭이-단독 상대성장 스케일링의 결과를 표 21에 제공한다.
마우스-래트-시노몰거스 상대성장 스케일링의 경우, 동물 종으로부터의 인간 청소율(CL)을 다음 상대성장 방정식에 따라 로그-로그 스케일에서 동물 체중(BW)에 대해 플룅하였다: CL=a
Figure pct00618
BWx, 식 중, a는 계수이고, x는 상대성장 방정식의 지수이다. 계수 a와 지수 x는 선형 회귀선의 절편과 기울기로부터 각각 계산하였다. 마우스-래트-시노 스케일링의 결과를 표 22에 제공한다.
이어서 상기 각각의 알고리즘에 의해 계산된 인간 청소율 값을 사용하여 하기 방정식을 사용하여 3700ug-hr/㎖(마우스 2.5㎎/㎏ 용량, 실시예 33)의 효능 AUC 목표를 달성하는데 필요한 상응하는 인간 용량을 계산하였다: 용량=CL
Figure pct00619
AUC.
Figure pct00620
Figure pct00621
실시예 45. Int-11의 합성
Figure pct00622
단계 a.
Figure pct00623
DMF(150㎖)에 용해된 tert-부틸 (4-브로모부틸)카바메이트(11.2g, 60m㏖) 및 tert-부틸 (4-아미노부틸)카바메이트(10g, 40m㏖)의 용액을 탄산칼륨(16.4g, 120m㏖)으로 처리하고, 이어서 80℃에서 6시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 DCM(500㎖)과 염수(100㎖) 사이에 분배시켰다. 유기층을 분리시키고, 염수로 세척하고, 이어서 황산나트륨으로 건조시켰다. 용액을 여과시키고, 농축시키고, 개질제로서 0.1% TFA를 함유하는 10%에서 100% 아세토나이트릴 및 물로 용리시키는 Isco COMBIFLASH® 액체 크로마토그래프를 사용하여 역상 액체 크로마토그래피(RPLC)로 정제시켰다. 생성물의 수율 11.0g, 77%. LCMS로 발견된 이온(들): M+H=360.4
단계 b.
Figure pct00624
이전 단계로부터의 생성물(0.4g, 1.11m㏖) 및 Fmoc-OSu(0.45㎎, 1.3m㏖)를 DCM(10㎖)에 용해시키고, 이어서 N-메틸몰폴린(0.22㎖, 2m㏖)으로 처리하고, 1시간 동안 실온에서 교반하였다. 반응을 농축시키고, 개질제로서 0.1% TFA를 사용하지 않고 10%에서 100% 아세토나이트릴 및 물로 용리시키는 Isco COMBIFLASH® 액체 크로마토그래프를 사용하여 역상 액체 크로마토그래피(RPLC)로 정제시켰다. 생성물의 수율 450㎎, 69%. LCMS로 발견된 이온(들): M/2+H=582.4.
단계 c.
Figure pct00625
이전 단계로부터의 생성물(0.4g, 0.7m㏖)을 TFA(5㎖)로 실온에서 0.5시간 동안 처리하고, 이어서 농축 건조시키고, 이를 추가로 정제하지 않고 다음 단계에서 사용하였다. 수율은 이 단계의 경우 정량적이었다. LCMS로 발견된 이온(들): M/2+H=382.3.
단계 d.
Figure pct00626
이전 단계로부터의 Fmoc 다이아민(24㎎, 0.063m㏖)을 DMF(5㎖) 중의 카복실산(80㎎, 0.126m㏖, Int-10, 단계 f의 합성에 기재됨)의 용액에 첨가하고, 이어서 HATU(50㎎, 0.13m㏖), 그 다음 N-메틸몰폴린(0.06㎖, 0.50m㏖)으로 처리하였다. 1시간 동안 교반한 후, 생성된 용액을 농축시키고, 개질제로서 TFA 함유하지 않고 10%에서 100% 아세토나이트릴 및 물로 용리시키는 Isco COMBIFLASH® 액체 크로마토그래프를 사용하여 역상 액체 크로마토그래피(RPLC)로 정제시켰다. 생성물의 수율 80㎎, 79%. LCMS로 발견된 이온(들): M/2+H=803.9.
단계 e.
Figure pct00627
이전 단계로부터의 생성물(80㎎, 0.050m㏖)을 DMF(2㎖) 중의 1% DBU(1,8-다이아자바이사이클로[5.4.0]운데스-7-엔)로 처리하고, 실온에서 교반하였다. LCMS로 반응이 완결된 후(15분), 그것을 농축시키고, 이어서 TFA(2㎖)로 처리하고, 30분 동안 실온에서 교반하였다. 반응 용액을 농축시키고, 개질제로서 0.1% TFA를 함유하는 10%에서 100% 아세토나이트릴 및 물로 용리시키는 Isco COMBIFLASH® 액체 크로마토그래프를 사용하여 역상 액체 크로마토그래피(RPLC)로 정제시켰다. 생성물의 수율은 TFA 염으로서 52㎎이었다. LCMS로 발견된 이온(들): M/2+H=492.7.
단계 f.
Figure pct00628
이전 단계로부터의 생성물을 물(2㎖)에 용해시키고, 이어서 수산화리튬 (12㎎, 1㎖ 물 중의 0.50m㏖) 용액으로 처리하였다. 생성된 반응을 LCMS로 모니터링하였다. 10분 동안 교반한 후, 반응을 0.1㎖ 아세트산으로 반응정지시켰다. 생성된 용액을 농축시키고, 개질제로서 0.1% TFA를 함유하는 0%에서 30% 아세토나이트릴 및 물로 용리시키는 Isco COMBIFLASH® 액체 크로마토그래프를 사용하여 역상 액체 크로마토그래피(RPLC)로 정제시켰다. 생성물의 수율: TFA 염으로서 30㎎, 66%. LCMS로 발견된 이온(들): M/2+H=452.7. M/3+H=302.1.
실시예 46. Int-12의 합성
Figure pct00629
단계 a.
Figure pct00630
DMF(50㎖) 중의 tert-부틸 (4-브로모부틸)카바메이트(4.8g, 19m㏖) 및 프로파길-PEG4 아민(2g, 8.6m㏖)의 용액에 탄산칼륨(3.6g, 26m㏖)을 첨가하였다. 용액을 80℃에서 6시간 동안 교반하고, 이어서 DCM(200㎖)과 염수(50㎖) 사이에 분배시켰다. 유기층을 분리시키고, 염수로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 여과시키고, 농축시키고, 이어서 개질제로서 0.1% TFA를 함유하는 10%에서 100% 아세토나이트릴 및 물로 용리시키는 Isco COMBIFLASH® 액체 크로마토그래프를 사용하여 역상 액체 크로마토그래피(RPLC)로 정제시켰다. 생성물의 수율 3.5g, 70%. LCMS로 발견된 이온(들): M/2+H=574.4.
단계 b.
Figure pct00631
이전 단계로부터의 생성물(3.5g, 8.6m㏖)을 TFA(20㎖)로 실온에서 0.5시간 동안 처리하고, 이어서 농축 건조시키고, 물에 용해시키고, 동결시키고, 동결건조시키고, 이를 추가로 정제하지 않고 다음 단계에서 사용하였다. 수율은 이 단계의 경우 정량적이었다. LCMS로 발견된 이온(들): M/2+H=374.3.
단계 c.
Figure pct00632
이전 단계로부터의 다이아민 TFA 염(37㎎, 0.1m㏖)을 10㎖ DMF 중의 카복실산(130㎎, 0.2m㏖, Int-10, 단계 f의 합성에 기재됨)의 용액에 첨가하고, 이어서 HATU(80㎎, 0.2m㏖), 및 N-메틸몰폴린(0.25㎖, 2m㏖)으로 처리하였다. 생성된 용액을 1시간 동안 교반하고, 이어서 반응을 농축시키고, 개질제로서 0.1% TFA를 사용하지 않고 10%에서 100% 아세토나이트릴 및 물로 용리시키는 Isco COMBIFLASH® 액체 크로마토그래프를 사용하여 역상 액체 크로마토그래피(RPLC)로 정제시켰다. 생성물의 수율 120㎎, 75%. LCMS로 발견된 이온(들): M/2+H=799.9.
단계 d.
Figure pct00633
이전 단계로부터의 생성물(120㎎, 0.075m㏖)을 2㎖ 트라이플루오로아세트산으로 처리하고, 30분 동안 실온에서 교반하였다. 생성된 용액을 농축시키고, 물(2㎖)에 용해시키고, 이어서 물(1㎖)에 용해된 수산화리튬(12㎎, 0.5m㏖)의 용액으로 처리하였다. 생성된 용액을 10분 동안 교반하고, 이어서 0.1㎖ 아세트산으로 약간 산성으로 만들고, 농축시키고, 개질제로서 0.1% TFA를 함유하는 0%에서 30% 아세토나이트릴 및 물로 용리시키는 Isco COMBIFLASH® 액체 크로마토그래프를 사용하여 역상 액체 크로마토그래피(RPLC)로 정제시켰다. 생성물의 수율 48㎎, TFA 염으로서, 57%. LCMS로 발견된 이온(들): M/2+H=559.757. M/3+H=373.5.
실시예 47. 접합체 8의 합성
PBSx1 완충 용액 중의 h-IgG1 Fc-PEG4-아자이드의 용액(100㎎, 1.71μ㏖, 7.011㎖, MW=58200 Da, DAR=3.7)을 알킨 유도체화된 소분자(Int-12 TFA 염, 45㎎, 0.031m㏖) 및 CuSO4(0.7㎖의 50.0 mM, 20 eq)의 새로 제조된 pH 7.4 PBS 용액, 트리스(3-하이드록시프로필트라이아졸릴메틸)-아민 (THPTA, 0.7㎖의 50.0 mM, 20 eq), 및 아스코르브산나트륨 (1.05㎖의 50.0 mM, 30eq)첨가하였다. 생성된 불균질 용액을 12시간 동안 락커 테이블로 교반하였다. 조 용액을 1㎎/㎖의 pH 7.4 PBS로 희석시키고, 및 1㎖의 부피까지 2회 초여과시켰다(10,000 MWCO). 이어서, 조 혼합물을 PBS pH 7.4 중에 1:10로 희석시키고, MabSelect Sure Resin(지이 헬쓰케어사, 미국 일리노이주 시카고 소재), 그 다음 크기 배제 크로마토그래피로 정제시켰다. 정제된 물질을 접합에 사용된 Fc의 아미노산 서열에 기초하여 계산된 흡광 계수 사용하여 Nanodrop™ UV 가시 분광광도계를 사용하여 정량하고, 원심분리 농축기(10,000 MWCO)를 사용하여 대략 10㎎/㎖로 농축시켰다. 1 내지 2㎍의 각각의 분자를 겔에 로딩하고, 인스턴트 Blue 염색을 사용하여 염색함으로써, 정제된 분자를 4 내지 12% Bis Tris SDS PAGE 겔을 사용하여 분석하였다. 각각의 겔은 제시된 분자량 표준품을 갖는 분자량 래더를 포함하였다(도 42). 수율은 전형적으로 40 내지 60%이다. MALDI MS 분석은 62358의 질량 평균을 갖는 다양한 질량(60000 내지 90000)을 나타내었다. 평균 DAR=3.
실시예 48. CPE 검정에서 그리고 치명적인 마우스 인플루엔자 모델에서 Fc-접합체를 갖는 선택된 저해제의 시험관내 및 생체내 효력의 비교
Fc에 대한 본 명세서에 기재된 뉴라미니다제 저해제의 접합이 바이러스 복제 검정 및 생체내 효능 모델에서 바이러스 복제에서 활성을 향상시킨다는 것을 입증하기 위해서, 본 발명자들은 세포변성 효과(CPE) 검정 및 치명적인 마우스 인플루엔자 감염 모델에서 Fc 접합체에 대한 선택된 비접합된 저해제의 활성을 비교하였다. CPE 미세중화 검정의 경우, 160nM 또는 400nM(자나미비어 및 오셀타미비어 대조군의 경우 9600nM)에서 시작하는, 각각의 시험품(TA)의 10개의 2배 연속 희석물을 감염 다중도(MOI) 0.001의 INFV A(A/CA/09 H1N1)로의 1시간 접종 및 MOI 0.01의 INFV B를 1시간 접종을 위해서 반복물로 준비하였다 이어서 TA-바이러스 혼합물을 96-웰 플레이트에 시딩된 MDCK 세포에 첨가하고, 1시간 동안 인큐베이션시켰다. INFV A의 경우 감염 3일 후 그리고 INFV B(B/Brisbane)의 경우 감염 5일 후, 세포를 고정시키고, 크리스탈 바이올렛으로 염색하고 광학 밀도를 판독하여 XLfit 용량 반응 모델을 사용하여 각각의 TA의 50% 유효 농도(EC50)를 계산하였다. 각각의 TA의 고유 세포독성을 또한 160nM 또는 400nM에서 시작하는 각각의 TA의 10개의 2배 연속 희석물을 사용하여 평가하였고, 96-웰 플레이트에서 MDCK 세포를 접종시키기 위해서 이중으로 준비하였다. 세포 능력을 CellTiter-Glo 키트를 사용하여 처리 3 및 5일 후에 결정하였다. XLfit 용량 반응 모델을 사용하여 50%의 세포독성 농도(CC50)를 계산하였다. 시험된 최고 농도까지 TA 중 어느 것의 경우에도 세포독성이 관찰되지 않았다. CPE-기반 미세중화 검정의 요약을 표 23에 나타낸다.
Figure pct00634
표 23에 요약된 데이터는, 뉴라미니다제 이량체의 Fc-접합된 형태가 비접합된 상대물보다 CPE 미세중화 검정에서 더 우수한 활성을 보유한다는 것을 입증한다. 접합체 6을 Int-7과 비교할 때 각각 INFV A 및 INFV B보다 166배 및 2배의 향상이 관찰되었다. 접합체 8을 Int-12와 비교할 때 각각 INFV A 및 INFV B보다 26배 및 2배의 향상이 관찰되었다.
접합체 6을 암컷 BALB/c 마우스(찰스 리버 래보러토리즈사, 6 내지 8주령)를 사용하여 치명적인 IAV H1N1 인플루엔자 감염 모델에서 표 23에 요약된 연구로부터의 가장 강력한 뉴라미니다제 저해제 이량체(Int-11, Fc에 대한 접합을 허용하는 삼량체 링커가 없는 Int-12에 상응하는 이량체-단독)와 비교하였다. 시험감염 바이러스(A/Puerto Rico/08/1934, PR8이라고도 함)는 마우스당 대략 30 플라크-형성 단위(pfu)의 LD90을 갖는 마우스-적응성 단리물이다.
실험은 5마리 마우스의 8개 군으로 구성되었다. 0일에, 마우스를 케타민/나일라진의 혼합물(각각 150 및 10㎎/㎏)로 마취된 마우스에 대한, 50㎕의 부피의 비강내 접종으로 10x LD90에서 PR8로 모든 마우스를 시험감염시켰다. 군은 시험감염 2시간 후 IV에 의해서 비히클, hIgG1 Fc 단독, 접합체 6 또는 Int-11의 단일 치료를 제공받았다(표 24; 군 1 내지 6). 군 7은 Int-11(15㎎/㎏)을 5일 동안 1일 2회(bid), 또한 IV에 의해서 제공받았다. 군 8은 오셀타미비어(15㎎/㎏)를 경구로(PO), bid, 5일 동안 제공받았다. 모든 마우스를 바이러스 시험감염 후 10일 동안 생존(표 25) 및 체중 감소(데이터 나타내지 않음)에 대해서 모니터링하였다.
예측된 바와 같이, 비히클 또는 hIgG1 Fc 단독으로 처리된 마우스는 7일에 감염에 대해서 굴복하였다(표 25). 오셀타미비어 10회 용량(총 150㎎/마우스)으로 처리된 마우스는 사망에서 통계학적으로 유의한 지연을 나타내었지만, 10일까지 단지 단일 동물이 생존하였다. 0.3 또는 3㎎/㎏의 단일 용량의 접합체 6을 제공받은 모든 마우스는 연구 마지막까지 생존하였고, 실험 과정에 걸쳐서 실제 체중 증가를 나타내었다. 중요한 것은, 0.3 또는 3㎎/㎏의 Int-11을 제공받은 모든 마우스는 연구 과정 중에 사망하였고, 비히클 및 hIgG1 Fc 단독 대조군에 비해서 사망에서 단지 최소한(2일 또는 그 미만)의 지연을 나타내었다. hIgG1 Fc는 고유한 항바이러스 활성(군 2)을 갖지 않기 때문에, 이것은 접합체 6의 상당히 개선된 활성이 표 23에 요약된 결과로 시사되는 바와 같이 Fc에 대한 다가 디스플레이로부터 야기된 개선된 결합활성뿐만 아니라 Fc 매개된 면역 결속으로부터의 개선된 약동학 및 기여의 결과라는 것을 시사한다. 저해제 이량체 단독과 접합체 6 간의 활성의 차이는 두 용량 농도에서 통계학적으로 유의하였다(군 3과 6, 그리고 군 4와 5를 비교함; 표 25). 질량 기준으로, Int-11의 500x 초과의 누적 용량이 접합체 6에 대한 동일한 효능을 관찰하기 위해서 필요하였다.
Figure pct00635
Figure pct00636
실시예 49. Int-13 ((5R)-((1R)-아세틸아미노-(2S)-메톡시-(2S)-메틸펜틸)-(4S)-E/Z-[3-(프로파길-PEG4)-프로펜일]-피롤리딘-(2R)-카복실산)의 합성
Figure pct00637
단계 a. (2R)-((1R)-아세틸아미노-(2S)-메톡시-(2S)-메틸펜틸)-(5R)-카복시-(3S)-Z-프로펜일피롤리딘-1-카복실산 tert-부틸 에스터.
아세토나이트릴(10㎖) 중의 (5R)-((1R)-아세틸아미노-(2S)-메톡시-(2S)-메틸펜틸)-(4S)-Z-프로펜일피롤리딘-(2R)-카복실산, HCI 염(문헌[JACS, 2002, 124, 4716-4721]에 따라서 제조됨; 1.0m㏖)의 교반 혼합물에, 트라이메틸암모늄 하이드록사이드(1.5m㏖)를 첨가한다. 실온에서 3시간 동안 교반한 후, 다이-tert-부틸다이카보네이트(4당량몰)를 첨가한다. 반응 완결 후, 모든 휘발성 물질을 진공 기술에 따라서 증발시킨다. 잔류물을 물(10㎖)로 희석시킨다. 에틸 아세테이트(10㎖)를 첨가하고, 수층이 pH 약 3에 도달할 때까지 1M 황산 수성 용액을 첨가한다. 수층을 에틸 아세테이트(10㎖)의 2개의 추가 분취물로 세척한다. 합한 유기물을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축시킨다. 잔류물을 크로마토그래피 기술로 정제시켜 목적하는 생성물을 제공한다.
단계 b. (2R)-((1R)-아세틸아미노-(2S)-메톡시-(2S)-메틸펜틸)-(5R)-카복시메틸-(3S)-Z-프로펜일피롤리딘-1-카복실산 tert-부틸 에스터.
다이클로로메탄(5.0㎖) 및 메탄올 (1.0㎖) 중의 (2R)-((1R)-아세틸아미노-(2S)-메톡시-(2S)-메틸펜틸)-(5R)-카복시-(3S)-Z-프로펜일피롤리딘-1-카복실산 tert-부틸 에스터(1.0m㏖)의 0℃의 교반 혼합물에 (트라이메틸실릴)다이아조메탄 (1.1m㏖)을 서서히 첨가한다. 온도를 주변 온도에 서서히 도달하게 하면서, 혼합물을 완결 시까지 교반한다. 모든 휘발성 물질을 진공 기술에 따라서 증발시킨다. 필요한 경우, 잔류물을 크로마토그래피 기술로 정제시켜 목적하는 생성물을 제공한다.
단계 c. (2R)-((1R)-아세틸아미노-(2S)-메톡시-(2S)-메틸펜틸)-(5R)-카복시메틸-(3S)-폼일피롤리딘-1-카복실산 tert-부틸 에스터.
다이클로로메탄(15㎖) 중의 (2R)-((1R)-아세틸아미노-(2S)-메톡시-(2S)-메틸펜틸)-(5R)-카복시메틸-(3S)-Z-프로펜일피롤리딘-1-카복실산 tert-부틸 에스터(1m㏖)의 실온 혼합물을 -78℃까지 냉각시킨다. 용해된 오전의 희미한 청색이 지속될 대까지 오존을 용액에 버블링한다. 청색이 사라질 때까지 질소를 용액에 버블링하고, 이어서 다이메틸 설파이드(4.0m㏖)를 첨가하고, 플라스크를 냉동고(-20℃)로 옮기고, 1시간 동안 정치시킨다. 용액을 농축시키고, 잔류물을 크로마토그래피 기술로 정제시켜 목적하는 생성물을 제공한다.
단계 d. (2R)-((1R)-아세틸아미노-(2S)-메톡시-(2S)-메틸펜틸)-(5R)-카복시메틸-(3S)-E/Z-[3-(프로파길-PEG4)-프로펜일]피롤리딘-1-카복실산 tert-부틸 에스터.
DMF(5.0㎖) 중의 프로파길-PEG4-포스포늄 브로마이드(1.0m㏖)의 0℃ 교반 혼합물에 수소화 나트륨(1.1m㏖)을 첨가하고, 10분 후에 온도를 주변 온도로 상승시킨다. 교반을 1시간 동안 계속하고, 이어서 (2R)-((1R)-아세틸아미노-(2S)-메톡시-(2S)-메틸펜틸)-(5R)-카복시메틸-(3S)-폼일피롤리딘-1-카복실산 tert-부틸 에스터(1.0m㏖)를 DMF(1.0㎖) 중에 첨가한다. 완결 후, 반응을 포화 염화암모늄 용액으로 반응정지시킨다. 수성 용액을 에틸 아세테이트로 수 회 추출하고, 합한 유기상을 염수로 세척하고, 건조시키고, 증발시킨다. 잔류물을 크로마토그래피 기술로 정제시켜 목적하는 생성물을 제공한다.
단계 e. (2R)-((1R)-아세틸아미노-(2S)-메톡시-(2S)-메틸펜틸)-(5R)-카복시-(3S) E/Z-[3-(프로파길-PEG4)-프로펜일]피롤리딘-1-카복실산 tert-부틸 에스터.
테트라하이드로퓨란(12.0㎖) 및 물(3.0㎖) 중의 (2R)-((1R)-아세틸아미노-(2S)-메톡시-(2S)-메틸펜틸)-(5R)-카복시메틸-(3S)-E/Z-[3-(프로파길-PEG4)-프로펜일]피롤리딘-1-카복실산 tert-부틸 에스터(1.0m㏖)의 0℃ 교반 혼합물에 수산화리튬(1.1m㏖)을 첨가한다. 교반을 계속하고, 온도를 15분 후 주변 온도로 상승시킨다. 완결 후, 과량의 AMBERLITE® IRN-77 수지를 첨가하여 산성 pH로 만든다. 혼합물을 여과시키고, 여과액을 진공 기술에 따라 농축시켜, 표제 화합물을 얻는다. 필요한 경우, 잔류물을 크로마토그래피 기술로 정제시켜 목적하는 생성물을 제공한다.
단계 f. (5R)-((1R)-아세틸아미노-(2S)-메톡시-(2S)-메틸펜틸)-(4S)-E/Z-[3-(프로파길-PEG4)-프로펜일]-피롤리딘-(2R)-카복실산.
다이클로로메탄(8.0㎖) 중의 (2R)-((1R)-아세틸아미노-(2S)-메톡시-(2S)-메틸펜틸)-(5R)-카복시-(3S) E/Z-[3-(프로파길-PEG4)-프로펜일]피롤리딘-1-카복실산 tert-부틸 에스터(1.0m㏖) 및 2-메틸-2-부텐 (0.5㎖)의 0℃ 교반 혼합물에, 트라이플루오로아세트산(4.0㎖)을 첨가한다. 10분 후, 반응을 주변 온도로 상승시킨다. 완결 후, 모든 휘발성 물질을 진공 기술에 따라서 증발시킨다. 잔류물을 크로마토그래피 기술로 정제시켜 목적하는 생성물을 제공한다.
실시예 50. 접합체 9의 합성
pH 7.4 PBS×1 완충 용액 중의 hIgG1 Fc-PEG4-아자이드의 용액(100㎎, 1.71umol, 7.011㎖, MW=58,200Da, DAR=3.7)을 Int-13((5R)-((1R)-아세틸아미노-(2S)-메톡시-(2S)-메틸펜틸)-(4S)-E/Z-[3-(프로파길-PEG4)-프로펜일]-피롤리딘-(2R)-카복실산)(0.031m㏖), 황산구리(0.62m㏖), 트리스(3-하이드록시프로필트라이아졸릴메틸)-아민(0.62m㏖), 및 아스코르브산나트륨 (0.93m㏖)의 pH 7.4 PBS×1 완충 용액(2.45㎖)에 첨가한다. 생성된 불균질 용액을 12시간 동안 락커 테이블로 약하게 진탕한다. 조 용액을 1㎎/㎖의 pH 7.4 PBS로 희석시키고, 및 1㎖의 부피까지 2회 초여과시킨다(10,000 MWCO). 이어서, 조 혼합물을 PBS pH 7.4 중에 1:10로 희석시키고, MabSelect Sure Resin(지이 헬쓰케어사, 미국 일리노이주 시카고 소재), 그 다음 크기 배제 크로마토그래피로 정제시킨다. 정제된 물질을 접합에 사용된 Fc의 아미노산 서열에 기초하여 계산된 흡광 계수 사용하여 Nanodrop™ UV 가시 분광광도계를 사용하여 정량하고, 원심분리 농축기(10,000 MWCO)를 사용하여 대략 10㎎/㎖로 농축시킨다. 1 내지 2㎍의 각각의 분자를 겔에 로딩하고, 인스턴트 Blue 염색을 사용하여 염색함으로써, 정제된 분자를 4 내지 12% Bis Tris SDS PAGE 겔을 사용하여 분석한다. 각각의 겔은 제시된 분자량 표준품을 갖는 분자량 래더를 포함한다. MALDI MS 분석을 사용하여 평균 DAR을 결정한다.
실시예 51. 프로파길-PEG4-포스포늄 브로마이드의 합성.
Figure pct00638
톨루엔(10㎖) 중의 프로파길-PEG4-브로마이드(1.0m㏖) 및 트라이페닐포스핀(1.2m㏖)의 혼합물을 환류시킨다. 완결 시, 혼합물을 주변 온도까지 냉각시킨다. 고체를 여과시키고, 어떠한 추가 정제도 하지 않고 다음 단계에 사용하였다.
실시예 52. Int-14 ((5R)-[(1R)-(프로파길-PEG4-카복시아마이드)-(2S)-메톡시-(2S)-메틸펜틸]-(4S)-Z-프로펜일피롤리딘-(2R)-카복실산, HCI 염)의 합성
Figure pct00639
단계 a. N-{(2.S)-메톡시-((1R)-[1-(4-메톡시벤질)-5-옥소-(3S)-Z-프로펜일피롤리딘-(2R)-일]-(2S)-메틸펜틸}-(프로파길-PEG4)-카복시아마이드.
무수 다이클로로메탄(5㎖) 중의 {(2S)-메톡시-(1R)-[1-(4-메톡시벤질)-5-옥소-(3S)-Z-프로펜일피롤리딘-(2R)-일]-(2S)-메틸펜틸}-카밤산 tert-부틸 에스터(그것은 문헌[JACS, 2002, 124, 4716-4721]에 기재된 바와 같이 제조됨; 1.0m㏖)의 0℃의 교반 혼합물에 트라이플루오로아세트산(10m㏖)을 첨가하고, 온도를 주변 온도까지 상승시킨다. 완결 후, 용매를 감암 하에서 제거한다. 생성된 잔류물을 다이클로로메탄(20㎖)에 용해시키고, 중탄산나트륨의 포화 수성 용액으로 추출시킨다. 유기층을 분리시키고, 건조시키고(황산나트륨), 여과시키고, 증발시킨다. 조 아민을 DMF(5㎖)에 용해시키고, 0℃에서 교반 하에서 프로파길-PEG4-산(1.1m㏖), 다이아이소프로필에틸아민(3.0m㏖) 및 HATU(1.1m㏖)로 처리한다. 반응 완결 후, 모든 휘발성 물질을 진공 기술에 따라서 증발시킨다. 잔류물을 에틸 아세테이트(15㎖)에 취하고, 및 중탄산나트륨의 포화 수성 용액(10㎖), 이어서 1M 황산 수성 용액(10㎖)으로 세척한다. 합한 유기물을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축시킨다. 잔류물을 크로마토그래피 기술로 정제시켜 목적하는 생성물을 제공한다.
단계 b. (2R)-((1R)-(프로파길-PEG4-카복시아마이드)-(2S)-메톡시-(2S)-메틸펜틸)-(5R)-옥소-(3S)-Z-프로펜일피롤리딘-1-카복실산 tert-부틸 에스터.
아세토나이트릴과 물의 혼합물(10:1, 5㎖) 중의 N-{(2.S)-메톡시-(1R)-[1-(4-메톡시벤질)-5-옥소-(3S)-Z-프로펜일피롤리딘-(2R)-일]-(2S)-메틸펜틸}-(프로파길-PEG4)-카복시아마이드(1.0m㏖)의 교반 용액에 첨가하고 세릭 암모늄 나이트레이트(2.0m㏖)를 1시간 동안 45℃에서 소량씩 첨가하고, 완결될 때까지 교반을 계속한다. 반응을 중탄산나트륨의 포화 수성 용액(5㎖)으로 반응정지시킨다. 수성층을 EtOAc(3×10㎖)로 추출하고, 합한 유기층을 건조시키고(황산나트륨), 증발시켜 조물질을 제공하고, 이것을 추가로 정제하지 않고 다음 단계에서 사용한다. 물질을 아세토나이트릴(5㎖)에 용해시키고, 다이-tert-부틸카보네이트를 첨가하고(1.5m㏖), 그 다음 트라이에틸아민(2.0m㏖) 및 DMAP(촉매)를 첨가한다. 완결 시, 반응을 염화암모늄의 포화 용액(5㎖)으로 반응정지시킨다. 수성층을 EtOAc(3×10㎖)로 추출하고, 합한 유기층을을 건조시킨다(황산나트륨). 모든 휘발성 물질을 진공 기술에 따라서 제거한다. 필요한 경우, 잔류물을 크로마토그래피 기술로 정제시켜 목적하는 생성물을 제공한다.
단계 c. (2R)-((1R)-(프로파길-PEG4-카복시아마이드)-(2S)-메톡시-(2S)-메틸펜틸)-(5R/S)-메톡시-(3S)-Z-프로펜일피롤리딘-1-카복실산 tert-부틸 에스터.
THF(8㎖) 중의 (2R)-((1R)-(프로파길-PEG4-카복시아마이드)-(2S)-메톡시-(2S)-메틸펜틸)-(5R)-옥소-(3S)-Z-프로펜일피롤리딘-1-카복실산 tert-부틸 에스터(1.0m㏖)의 -78℃의 교반 용액에 SUPER-HYDRIDE®(THF 중의 1M, 2.2m㏖)를 첨가한다. 30분 후, 반응 혼합물을 중탄산나트륨의 포화 수성 용액(4㎖) 및 30% 과산화수소(5방울)로 반응정지시킨다. 혼합물을 rt까지 가온시키고, 추가로 30분 동안 교반하고, 수성층을 EtOAc(3×10㎖)로 추출시킨다. 합한 유기층을 건조시키고(황산나트륨), 용매를 증발시켜 헤마아미날을 제공하고, 이것을 추가로 정제하지 않고 사용한다. 메탄올(16㎖) 중의 상기 생성물의 용액에 p-톨루엔설폰산 수화물(0.1m㏖)을 rt에서 첨가한다. 반응 혼합물을 밤새 교반하고, 중탄산나트륨의 포화 수성 용액(10㎖)으로 반응정지시킨다. 메탄올을 감압 하에서 제거하고, 물(10㎖)을 생성된 잔류물에 첨가하고, EtOAc(3×10㎖)로 추출시킨다. 유기물을 분리시키고, 염수 및 황산나트륨으로 건조시키고, 여과시키고, 농축시킨다. 필요한 경우, 잔류물을 크로마토그래피 기술로 정제시켜 목적하는 생성물을 제공한다.
단계 d. (2R)-((1R)-(프로파길-PEG4-카복시아마이드)-(2S)-메톡시-(2S)-메틸펜틸)-(5R)-사이아노-(3S)-Z-프로펜일피롤리딘-1-카복실산 tert-부틸 에스터.
다이클로로메탄(20㎖) 중의 (2R)-((1R)-(프로파길-PEG4-카복시아마이드)-(2S)-메톡시-(2S)-메틸펜틸)-(5R/S)-메톡시-(3S)-Z-프로펜일피롤리딘-1-카복실산 tert-부틸 에스터(1.0m㏖)의 -78℃의 교반 용액에 트라이메틸실릴 사이아나이드(2.0m㏖), 그 다음 보론 트라이플루오라이드 다이에틸 에터레이트(1.2m㏖)를 첨가한다. 반응 혼합물을 -78℃ 내지 -50℃에서 3시간의 기간에 걸쳐서 교반한다. 중탄산나트륨의 포화 수성 용액(40㎖)을 첨가하고, 수성층을 EtOAc(3×15㎖)로 추출시킨다. 합한 유기층을 건조시키고(황산나트륨), 여과시키고, 감압 하에서 농축시킨다. 에피머 사이아노 유도체의 혼합물로 이루어진 생성된 잔류물을 크로마토그래피 기술로 정제시켜 목적하는 생성물을 제공한다.
단계 e. (5R)-[(1R)-(프로파길-PEG4-카복시아마이드)-(2S)-메톡시-(2S)-메틸펜틸]-(4S)-Z-프로펜일피롤리딘-(2R)-카복실산, HCI 염.
AcOH(10㎖) 중의 (2R)-((1R)-(프로파길-PEG4-카복시아마이드)-(2S)-메톡시-(2S)-메틸펜틸)-(5R)-사이아노-(3S)-Z-프로펜일피롤리딘-1-카복실산 tert-부틸 에스터(1.0m㏖)의 용액에, 12N HCI(10㎖)을 rt에서 첨가한다. 용액을 완결 시까지 rt에서 교반하고, 용매를 감암 하에서 증발시킨다. 필요한 경우, 잔류물을 크로마토그래피 기술로 정제시켜 목적하는 생성물을 제공한다.
실시예 53. 접합체 10의 합성
pH 7.4 PBS×1 완충 용액 중의 hIgG1 Fc-PEG4-아자이드의 용액(100㎎, 1.71umol, 7.011㎖, MW=58,200Da, DAR=3.7)을 Int-14 ((5R)-[(1R)-(프로파길-PEG4-카복시아마이드)-(2S)-메톡시-(2S)-메틸펜틸]-(4S)-Z-프로펜일피롤리딘-(2R)-카복실산, HCI 염)(0.031m㏖), 황산구리(0.62m㏖), 트리스(3-하이드록시프로필트라이아졸릴메틸)-아민(0.62m㏖), 및 아스코르브산나트륨 (0.93m㏖)의 pH 7.4 PBS×1 완충 용액(2.45㎖)에 첨가한다. 생성된 불균질 용액을 12시간 동안 락커 테이블로 약하게 진탕한다. 조 용액을 1㎎/㎖의 pH 7.4 PBS로 희석시키고, 및 1㎖의 부피까지 2회 초여과시킨다(10,000 MWCO). 이어서, 조 혼합물을 PBS pH 7.4 중에 1:10로 희석시키고, MabSelect Sure Resin(지이 헬쓰케어사, 미국 일리노이주 시카고 소재), 그 다음 크기 배제 크로마토그래피로 정제시킨다. 정제된 물질을 접합에 사용된 Fc의 아미노산 서열에 기초하여 계산된 흡광 계수 사용하여 Nanodrop™ UV 가시 분광광도계를 사용하여 정량하고, 원심분리 농축기(10,000 MWCO)를 사용하여 대략 10㎎/㎖로 농축시킨다. 1 내지 2㎍의 각각의 분자를 겔에 로딩하고, 인스턴트 Blue 염색을 사용하여 염색함으로써, 정제된 분자를 4 내지 12% Bis Tris SDS PAGE 겔을 사용하여 분석한다. 각각의 겔은 제시된 분자량 표준품을 갖는 분자량 래더를 포함한다. MALDI MS 분석을 사용하여 평균 DAR을 결정한다.
실시예 54. Int-15, HCI 염의 합성
Figure pct00640
단계 a. N-{(2.S)-메톡시-((1R)-[1-(4-메톡시벤질)-5-옥소-(3S)-Z-프로펜일피롤리딘-(2R)-일]-(2S)-메틸펜틸}-(3-부틴일)-카복시아마이드.
무수 다이클로로메탄(5㎖) 중의 {(2S)-메톡시-(1R)-[1-(4-메톡시벤질)-5-옥소-(3S)-Z-프로펜일피롤리딘-(2R)-일]-(2S)-메틸펜틸}-카밤산 tert-부틸 에스터(그것은 문헌[JACS, 2002, 124, 4716-4721]에 기재된 바와 같이 제조됨; 1.0m㏖)의 0℃의 교반 혼합물에 트라이플루오로아세트산(10m㏖)을 첨가하고, 온도를 주변 온도까지 상승시킨다. 완결 후, 용매를 감암 하에서 제거한다. 생성된 잔류물을 다이클로로메탄(20㎖)에 용해시키고, 중탄산나트륨의 포화 수성 용액으로 추출시킨다. 유기층을 분리시키고, 건조시키고(황산나트륨), 여과시키고, 증발시킨다. 조 아민을 DMF(5㎖)에 용해시키고, 0℃에서 교반 하에서 4-펜틴산(1.1m㏖), 다이아이소프로필에틸아민(3.0m㏖) 및 HATU(1.1m㏖)로 처리한다. 반응 완결 후, 모든 휘발성 물질을 진공 기술에 따라서 증발시킨다. 잔류물을 에틸 아세테이트(15㎖)에 취하고, 및 중탄산나트륨의 포화 수성 용액(10㎖), 이어서 1M 황산 수성 용액(10㎖)으로 세척한다. 합한 유기물을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축시킨다. 잔류물을 크로마토그래피 기술로 정제시켜 목적하는 생성물을 제공한다.
단계 b. (2R)-((1R)-(4-펜틴오일)-(2S)-메톡시-(2S)-메틸펜틸)-(5R)-옥소-(3S)-Z-프로펜일피롤리딘-1-카복실산 tert-부틸 에스터.
아세토나이트릴과 물의 혼합물(10:1, 5㎖) 중의 N-{(2.S)-메톡시-((1R)-[1-(4-메톡시벤질)-5-옥소-(3S)-Z-프로펜일피롤리딘-(2R)-일]-(2S)-메틸펜틸}-(3-부틴일)-카복시아마이드(1.0m㏖)의 교반 용액에 첨가하고 세릭 암모늄 나이트레이트(2.0m㏖)를 1시간 동안 45℃에서 소량씩 첨가하고, 완결될 때까지 교반을 계속한다. 반응을 중탄산나트륨의 포화 수성 용액(5㎖)으로 반응정지시킨다. 수성층을 EtOAc(3×10㎖)로 추출하고, 합한 유기층을 건조시키고(황산나트륨), 증발시켜 조물질을 제공하고, 이것을 추가로 정제하지 않고 다음 단계에서 사용한다. 물질을 아세토나이트릴(5㎖)에 용해시키고, 다이-tert-부틸카보네이트를 첨가하고(1.5m㏖), 그 다음 트라이에틸아민(2.0m㏖) 및 DMAP(촉매)를 첨가한다. 완결 시, 반응을 염화암모늄의 포화 용액(5㎖)으로 반응정지시킨다. 수성층을 EtOAc(3×10㎖)로 추출하고, 합한 유기층을을 건조시킨다(황산나트륨). 모든 휘발성 물질을 진공 기술에 따라서 제거한다. 필요한 경우, 잔류물을 크로마토그래피 기술로 정제시켜 목적하는 생성물을 제공한다.
단계 c. (2R)-((1R)-(4-펜틴오일)-(2S)-메톡시-(2S)-메틸펜틸)-(5R/S)-메톡시-(3S)-Z-프로펜일피롤리딘-1-카복실산 tert-부틸 에스터.
THF(8㎖) 중의 (2R)-((1R)- (2R)-((1R)-(4-펜틴오일)-(2S)-메톡시-(2S)-메틸펜틸)-(5R)-옥소-(3S)-Z-프로펜일피롤리딘-1-카복실산 tert-부틸 에스터(1.0m㏖)의 -78℃의 교반 용액에 SUPER-HYDRIDE®(THF 중의 1M, 2.2m㏖)를 첨가한다. 30분 후, 반응 혼합물을 중탄산나트륨의 포화 수성 용액(4㎖) 및 30% 과산화수소(5방울)로 반응정지시킨다. 혼합물을 rt까지 가온시키고, 추가로 30분 동안 교반하고, 수성층을 EtOAc(3×10㎖)로 추출시킨다. 합한 유기층을 건조시키고(황산나트륨), 용매를 증발시켜 헤마아미날을 제공하고, 이것을 추가로 정제하지 않고 사용한다. 메탄올(16㎖) 중의 상기 생성물의 용액에 p-톨루엔설폰산 수화물(0.1m㏖)을 rt에서 첨가한다. 반응 혼합물을 밤새 교반하고, 중탄산나트륨의 포화 수성 용액(10㎖)으로 반응정지시킨다. 메탄올을 감압 하에서 제거하고, 물(10㎖)을 생성된 잔류물에 첨가하고, EtOAc(3×10㎖)로 추출시킨다. 유기물을 분리시키고, 염수 및 황산나트륨으로 건조시키고, 여과시키고, 농축시킨다. 필요한 경우, 잔류물을 크로마토그래피 기술로 정제시켜 목적하는 생성물을 제공한다.
단계 d. (2R)-((1R)-(4-펜틴오일)-(2S)-메톡시-(2S)-메틸펜틸)-(5R)-사이아노-(3S)-Z-프로펜일피롤리딘-1-카복실산 tert-부틸 에스터.
다이클로로메탄(20㎖) 중의 (2R)-((1R)-(4-펜틴오일)-(2S)-메톡시-(2S)-메틸펜틸)-(5R/S)-메톡시-(3S)-Z-프로펜일피롤리딘-1-카복실산 tert-부틸 에스터(1.0m㏖)의 -78℃의 교반 용액에 트라이메틸실릴 사이아나이드(2.0m㏖), 그 다음 보론 트라이플루오라이드 다이에틸 에터레이트(1.2m㏖)를 첨가한다. 반응 혼합물을 -78℃ 내지 -50℃에서 3시간의 기간에 걸쳐서 교반한다. 중탄산나트륨의 포화 수성 용액(40㎖)을 첨가하고, 수성층을 EtOAc(3×15㎖)로 추출시킨다. 합한 유기층을 건조시키고(황산나트륨), 여과시키고, 감압 하에서 농축시킨다. 에피머 사이아노 유도체의 혼합물로 이루어진 생성된 잔류물을 크로마토그래피 기술로 정제시켜 목적하는 생성물을 제공한다.
단계 e.
에탄올(5㎖) 및 물(5㎖) 중의 N-{(2.S)-메톡시-((1R)-[1-(4-메톡시벤질)-5-옥소-(3S)-Z-프로펜일피롤리딘-(2R)-일]-(2S)-메틸펜틸}-(3-부틴일)-카복시아마이드(1.0m㏖), 비스-[N'-(2-아지도에틸)]-이미노다이아세트 아마이드(0.5m㏖), 1H-1,2,3-트라이아졸-4-메탄아민, 1-(페닐메틸)-N,N-비스[1-(페닐메틸)-1H-1,2,3-트라이아졸-4-일]메틸]-(0.1m㏖) 및 아스코르브산나트륨(1.0m㏖)의 교반 혼합물에, 황산구리(0.1m㏖)를 첨가한다. 완결 시, 반응을 SiliaMetS TAAcONa(0.3m㏖)로 30분 동안 처리한다. 반응을 여과시키고, 모든 휘발성 물질을 진공 기술에 따라서 증발시킨다. 잔류물을 크로마토그래피 기술로 정제시켜 목적하는 생성물을 제공한다.
단계 f.
DMF(10㎖) 중의 단계 e로부터의 중간체(1.0m㏖), 프로파길-PEG4-산(1.05m㏖), 및 DIPEA(3.0m㏖)의 0℃의 교반 용액에 HATU(2.0m㏖)를 첨가한다. 모든 휘발성 물질을 진공 기술에 따라서 증발시키고, 잔류물을 크로마토그래피 기술로 정제시켜 목적하는 생성물을 제공한다.
단계 g. Int-15, HCl 염
AcOH(10㎖) 중의 단계 f.로부터의 중간체(1.0m㏖)의 용액에, 12N HCI(10㎖)을 rt에서 첨가한다. 용액을 완결 시까지 rt에서 교반하고, 용매를 감암 하에서 증발시킨다. 필요한 경우, 잔류물을 크로마토그래피 기술로 정제시켜 목적하는 생성물을 제공한다.
실시예 55. 의 합성 접합체 11
pH 7.4 PBS×1 완충 용액 중의 hIgG1 Fc-PEG4-아자이드의 용액(100㎎, 1.71umol, 7.011㎖, MW=58,200Da, DAR=3.7)을 Int-15 HCI 염(0.031m㏖), 황산구리(0.62m㏖), 트리스(3-하이드록시프로필트라이아졸릴메틸)-아민(0.62m㏖), 및 아스코르브산나트륨 (0.93m㏖)의 pH 7.4 PBS×1 완충 용액(2.45㎖)에 첨가한다. 생성된 불균질 용액을 12시간 동안 락커 테이블로 약하게 진탕한다. 조 용액을 1㎎/㎖의 pH 7.4 PBS로 희석시키고, 및 1㎖의 부피까지 2회 초여과시킨다(10,000 MWCO). 이어서, 조 혼합물을 PBS pH 7.4 중에 1:10로 희석시키고, MabSelect Sure Resin(지이 헬쓰케어사, 미국 일리노이주 시카고 소재), 그 다음 크기 배제 크로마토그래피로 정제시킨다. 정제된 물질을 접합에 사용된 Fc의 아미노산 서열에 기초하여 계산된 흡광 계수 사용하여 Nanodrop™ UV 가시 분광광도계를 사용하여 정량하고, 원심분리 농축기(10,000 MWCO)를 사용하여 대략 10㎎/㎖로 농축시킨다. 1 내지 2㎍의 각각의 분자를 겔에 로딩하고, 인스턴트 Blue 염색을 사용하여 염색함으로써, 정제된 분자를 4 내지 12% Bis Tris SDS PAGE 겔을 사용하여 분석한다. 각각의 겔은 제시된 분자량 표준품을 갖는 분자량 래더를 포함한다. MALDI MS 분석을 사용하여 평균 DAR을 결정한다.
실시예 56. 비스-[N'-(2-아지도에틸)]-이미노다이아세트산 아마이드의 합성.
Figure pct00641
단계 a. 비스-[N'-(2-아지도에틸)]-N-Boc-이미노다이아세트산 아마이드.
DMF(10㎖) 중의 N-Boc-이미노다이아세트산(1.0m㏖), 2-아지도에탄-1-아민 하이드로클로라이드(2.0m㏖), 및 DIPEA(6.0m㏖)의 0℃의 교반 용액에 HATU(2.0m㏖)를 첨가한다. 모든 휘발성 물질을 진공 기술에 따라서 증발시키고, 잔류물을 크로마토그래피 기술로 정제시켜 목적하는 생성물을 제공한다.
단계 b. 비스-[N'-(2-아지도에틸)]-이미노다이아세트산 아마이드.
다이클로로메탄(8.0㎖) 중의 비스-[N'-(2-아지도에틸)]-N-Boc-이미노다이아세트산 아마이드(1.0m㏖) 및 2-메틸-2-부텐 (0.5㎖)의 0℃ 교반 혼합물에, 트라이플루오로아세트산(4.0㎖)을 첨가한다. 10분 후, 반응을 주변 온도로 상승시킨다. 완결 후, 모든 휘발성 물질을 진공 기술에 따라서 증발시킨다. 잔류물을 크로마토그래피 기술로 정제시켜 목적하는 생성물을 제공한다.
실시예 57. Int-16의 합성
PEG4-알킨 링커에 접합되고, Fc 도메인 또는 알부민 단백질에 추가로 접합될 수 있는 설포자나미비어의 단량체를 하기 합성 방법에 따라서 제조한다. 설포자나미비어 출발 물질을 문헌[Hadhαzi et al. A sulfozanamivir analogue has potent anti-influenza virus activity. ChemMedChem Comm. 13:785-789 (2018)]에 따라서 제조한다.
Figure pct00642
실시예 58. Int-17의 합성
PEG4-알킨 링커에 접합되고, Fc 도메인 또는 알부민 단백질에 추가로 접합될 수 있는 설포자나미비어의 이량체를 하기 합성 방법에 따라서 제조한다. 설포자나미비어 출발 물질을 문헌[
Figure pct00643
. A sulfozanamivir analogue has potent anti-influenza virus activity. ChemMedChem Comm. 13:785-789 (2018)]에 따라서 제조한다.
Figure pct00644
Figure pct00645
실시예 59. 접합체 12의 합성
아지도 작용화된 비글리코실화된 Fc(70㎎, 4.7㎖, 1.3709μ㏖)의 용액을 알킨 유도체화된 소분자(29.8㎎, 0.0216m㏖, Int-7)를 함유한 15㎖의 원심분리 튜브에 첨가하였다. 약하게 진탕하여 모든 고체를 용해시킨 후, 혼합물을 PBS 7.4 완충액(1㎖) 중의 L-아스코르브산 나트륨(59.4㎎, 0.3m㏖), 황산구리(II)(15.9㎎, 0.1m㏖), 및 THPTA(43.5㎎, 0.1m㏖)의 206㎕의 혼합물 용액과 함께 첨가한다 생성된 혼합물을 밤새 약하게 진탕하였다. 그것을 실시예 8에 기재된 바와 같이 단백질 A 칼럼 상의 친화도 크로마토그래피로 정제시키고, 그 다음 크기 배제 크로마토그래피로 정제시켰다. 정제된 최종 생성물의 Maldi TOF 분석은 56,177Da(DAR=3.6)의 평균 질량을 제공하였다. 수율 10.1㎎, 14% 수율. 접합체 12의 비-환원 SDS-PAGE를 도 54에 제공한다.
실시예 60. Int-18의 의 합성
Figure pct00646
단계 a. tert-부틸 (17-{4-[(tert-부톡시카보닐)아미노]부틸}-16-옥소-4,7,10,13-테트라옥사-17-아자헤니코스-1-인-21-일)카바메이트의 합성
Figure pct00647
DCM(40㎖) 중의 다이-tert-부틸 [아잔다이일다이(부탄-4,1-다이일)]비스카바메이트(1.5g, 4.17m㏖, 실시예 45, 단계 a로부터) 및 프로파길-PEG4-산(1.08g, 4.17m㏖)의 용액에 EDC(1.0g, 5m㏖), HOBt(650㎎, 5m㏖), 및 DIEA(1.4㎖, 10m㏖)를 실온에서 첨가하고, 이어서 밤새 실온에서 교반하였다. 생성된 용액을 농축시키고, 개질제 없이 10%에서 100% 아세토나이트릴 및 물로 용리시키는 Isco COMBIFLASH® 액체 크로마토그래프를 사용하여 역상 액체 크로마토그래피(RPLC)로 정제시켰다. 수율 1.9g, 76%. LCMS로 발견된 이온(들): M+H=602.4.
단계 b. N,N-비스(4-아미노부틸)-4,7,10,13-테트라옥사헥사데스-15-인-1-아마이드의 합성
Figure pct00648
Tert-부틸 (17-{4-[(tert-부톡시카보닐)아미노]부틸}-16-옥소-4,7,10,13-테트라옥사-17-아자헤니코스-1-인-21-일)카바메이트(1.90, 3.1m㏖)를 실온에서 0.5시간 동안 20㎖ TFA로 처리하고, 이어서 농축 건조시키고, 이를 추가로 정제하지 않고 다음 단계에서 사용하였다. 수율은 이 단계의 경우 정량적이다. LCMS로 발견된 이온(들): M/2+H=402.3.
단계 c. 완전 보호된 Int-18의 합성
Figure pct00649
N,N-비스(4-아미노부틸)-4,7,10,13-테트라옥사헥사데스-15-인-1-아마이드(0.150g, 0.32m㏖)를 DCM(10㎖) 중의 에터 연결된 자나미비어 산(0.400g, 0.63m㏖, 실시예 31, 단계 f에 기재됨)의 용액에 첨가하고, 이어서 EDC(0.200g, 1.0m㏖), HOBt(0.135g, 1.00m㏖), 및 DIEA(0.14㎖, 1.00m㏖)로 실온에서 밤새 처리하였다. 생성된 용액을 농축시키고, 개질제로서 0.1% TFA를 사용하지 않고 10%에서 100% 아세토나이트릴 및 물로 용리시키는 Isco COMBIFLASH® 액체 크로마토그래프를 사용하여 역상 액체 크로마토그래피(RPLC)로 정제시켰다. 생성물의 수율 310㎎, 60.3%. LCMS로 발견된 이온(들): M/2+H=813.9.
단계 d. Int-18의 합성
Figure pct00650
이전 단계로부터의 생성물(300㎎, 0.18m㏖)을 트라이플루오로아세트산(2㎖)으로 처리하고, 30분 동안 실온에서 교반하였다. 생성된 용액을 농축시키고, 물(2㎖)재용해시키고, 이어서 물(1㎖)에 용해된 수산화리튬(24㎎, 1m㏖)의 용액으로 처리하였다. 반응을 10분 동안 교반하고, 이어서 0.1㎖ 아세트산으로 반응정지시키고, 농축시키고, 개질제로서 0.1% TFA를 함유하는 0%에서 50% 아세토나이트릴 및 물로 용리시키는 Isco COMBIFLASH® 액체 크로마토그래프를 사용하여 역상 액체 크로마토그래피(RPLC)로 정제시켰다. 생성물의 수율 140㎎, 52%. LCMS로 발견된 이온(들): M/2+H=573.8, M/3+H=382.9.
실시예 61. 접합체 13a에 대한 PEG4-아지도 Fc의 합성
DMF/PBS 중의 0.05M PEG4-아지도NHS 에스터 용액의 c-제조
PEG4-아지도 NHS 에스터(80.5㎎)를 0℃에서 DMF(0.50㎖)에 용해시키고, 0℃에서 PBS 1× 완충액 3.50㎖를 첨가하여 4.063㎖로 희석시켰다. 이러한 PEG4-아지도 NHS 에스터 PBS ×1 용액의 당량을 조정함으로써 이 용액을 다양한 약물-항체 비(DAR)를 갖는 다른 PEG4-아지도 Fc를 제조하기 위해서 사용하였다.
PEG4-아지도 Fc의 제조
0.05M PEG4-아지도NHS 에스터 PBS ×1 완충 용액(0.0984㎖, 4.92μ㏖, 2.5당량)을 h-IgG1 Fc(pH 7.4 PBS에서 5.031㎖ 중의 105㎎, MW 약 53,360Da, 1.968μ㏖)의 용액에 첨가하고, 혼합물을 12시간 동안 주변 온도에서 약하게 진탕하였다. 용액을 원심분리 농축기분리 농축기(30,000 MWCO)를 사용하여 약 1.5㎖의 부피까지 농축시켰다. 조 혼합물을 PBS pH 7.4 중에 1:10로 희석시키고, 다시 농축시켰다. 이러한 세척 절차를 총 3회 반복하였다. 미반응 아지도 시약을 이러한 절차로 제거하였다. 농축된 Fc-PEG4-아자이드를 pH 7.4 PBS 1× 완충제로 5.03㎖로 희석시켰고, 클릭 접합을 위해서 준비되었다. 정제된 물질을 Nanodrop™ UV 가시 분광광도계(h-IgG1의 아미노산 서열에 기초하여 계산된 흡광 계수 사용)를 사용하여 정량하였다. 완충제 교환/정제 후 수율은 정량적이었다.
실시예 62. 접합체 13a의 합성
클릭 시약 용액의 제조: PBS 완충 용액 중의 0.0050M CuSO4: 22.0㎎의 상기 CuSO4를 25.0㎖ PBS ×1에 용해시키고, 이어서 상기 CuSO4 용액을 취하고, 189.4㎎의 BTTAA 및 1090㎎의 Na 아스코르베이트를 첨가하여 투명한 용액(0.0050M CuSO4, 0.020M BTTAA 및 0.25M 아스코르브산나트륨)을 제공하였다.
아지도 작용화된 Fc(100㎎, 4.79㎖, 1.87μ㏖, CTP-161-4A-링커-1-아자이드)의 용액을 알킨 유도체화된 소분자, Int-18(11.2㎎, 0.00750m㏖, 실시예 60에서 제조됨)을 함유하는 15㎖ 원심분리 튜브에 첨가하였다. 약하게 진탕하여 모든 고체를 용해시킨 후, 용액을 3.00㎖의 상기 클릭 시약 용액으로 처리하였다. 생성된 무색 균질 용액을 밤새 진탕하였다. 그것을 단백질 A 칼럼 상의 친화도 크로마토그래피(실시예 10에서 일반 접합체 정제 프로토콜 참고)로 정제시키고, 그 다음 크기 배제 크로마토그래피로 정제시켰다. 정제된 최종 생성물의 Maldi TOF 분석은 55,913Da(DAR=1.7)의 평균 질량을 제공하였다. 수득량 54.0㎎, 54% 수율.
실시예 63. 접합체 13b, 접합체 13c, 접합체 13d, 접합체 13e, 접합체 13f, 및 접합체 13g의 합성
접합체 13b, 접합체 13c, 접합체 13d, 접합체 13e, 접합체 13f 및 접합체 13g에 대한 PEG4-아지도 Fc를 하기 표에 기재된 바와 같이 PEG4-아지도 NHS 에스터의 당량 수를 조정하여 접합체 13a의 PEG4-아지도 Fc(실시예 61)와 유사하게 제조하였다. 접합체 13b, 접합체 13c, 접합체 13d, 접합체 13e, 접합체 13f 및 접합체 13g를 실시예 62에서 접합체 13a와 유사하게 제조하였는데, 여기서 표적화 모이어티(Int-18)의 당량의 수를 목적하는 DAR 값에 기초하여 조정하였고(표 26), 사용된 클릭 시약 용액의 부피는 실시예 62에 대한 절차에서 사용된 것과 동일한 부피였다. DAR 값, 분자량 및 수율을 하기 표에 열거한다. 생성물 접합체를 실시예 8에 기재된 바와 같이 단백질 A 칼럼 상의 친화도 크로마토그래피로 정제시키고, 그 다음 크기 배제 크로마토그래피로 정제시켰다. 접합체 13a 내지 13g의 비-환원 SDS-PAGE를 도 55에 제공한다.
Figure pct00651
실시예 64. 접합체 6의 시험관내 안정성
마우스 및 인간 둘 다를 사용하여 접합체 6의 시험관내 안정성을 입증하기 위해서, 새로운 K2EDTA를 혈장 및 간 마이크로솜으로 처리하였다. MALDI-TOF 질량 분석 검출에 의해 37℃에서 혈장에서 24시간 인큐베이션시킨 후 약물 대 항체 비율(DAR) 외피를 비교하여 시험관내 마우스 및 인간 혈장 안정성을 결정하였다. MALDI-TOF 질량 분석 검출과 함께 37℃에서 24시간 동안 인큐베이션시킨 후 마우스 및 인간 마이크로솜을 사용한 간 마이크로 솜 안정성을 수행하였다. 이것은 Fc 단백질, 링커 또는 표적 부분에서 잠재적인 대사적으로 불안정한 부위를 확인하기 위한 것이었다.
64.1 혈장 안정성 샘플 제조
먼저 3㎎/㎖의 60㎕ 접합체 6을 120㎕ 혈장과 혼합하였다. 각각의 혈장 유형을 2개의 튜브로 분취하였다. 각각의 혈장 유형에서 1개의 분취물을을 즉시 동결시켰다. 남은 분취물을 수욕(37℃)에 24시간 동안 두었다. 현탁액 중에서 비드를 약하게 보텍싱시킴으로써 MAGNE® Protien A 비드(프로메가사(Promega))는 비드를 평형화시켰다. 두 혈장 유형에 대해 중복으로, 50㎕의 비드 슬러리를 1.5㎖ 마이크로 원심분리 튜브에 첨가하고, 10초 동안 자석 스탠드에 두었다. 10초 후, 저장 완충액을 제거하고, 폐기하였다. 500㎕의 결합/세척 완충액(1X PBS pH 7.4에서 0.1% BSA)을 비드를 함유한 1.5㎖ 마이크로 원심 분리 튜브에 첨가하였다. 비드를 혼합(보텍싱)하고, 자석 스탠드에 10초 동안 두었다. 10초 후, 결합/세척 완충액을 제거하고, 폐기하였다. 50㎕의 완충액(1X PBS, pH 7.4)을 비드를 함유한 마이크로 원심 분리 튜브에 첨가하였다. 50㎕의 플라즈마 혼합물을 비드에 첨가하고 약하게 보텍싱시켜 혼합하였다. 튜브 진탕기를 사용하여, 샘플을 실온에서 60분 동안 혼합시켜 비드가 현탁액에 남아있는지 확인하였다. 혼합 후 튜브를 10초 동안 자석 스탠드에 놓고 상청액을 제거하였다. 500㎕의 완충액(1x PBS, pH 7.4)을 첨가하고, 약하게 보텍싱시켜 혼합하였다. 혼합 후 튜브를 자석 스탠드에 10초 동안 놓고 세척 완충액을 제거하고, 버렸다. 총 2회 세척을 위해 세척 단계를 반복하였다. 500㎕의 완충액(1x PBS, pH 7.4)으로 2회 세척한 후, 각각 500㎕, 200㎕ 및 100㎕의 물로 3회 세척을 수행하였다. 적절한 부피의 물을 튜브에 첨가하고, 약하게 보텍싱시켜 잘 혼합한 다음 물을 제거하고, 버리기 전에 10초 동안 자석 스탠드에 두었다. 물로 세 번째 세척한 후, 30㎕의 용출 완충액(90:10:0.4 물:아세토나이트릴:TFA)을 비드에 첨가하였다. 튜브 진탕기를 사용하여 용출 완충액 및 샘플을 실온에서 30분 동안 혼합하였다. 혼합 후 튜브를 10초 동안 자석 스탠드에 놓고, 샘플을 함유한 용출 완충액을 제거하고, 유지시켰다. 2㎕의 샘플을 2㎕의 MALDI 매트릭스(70:30:0.1 물:아세토나이트릴:TFA 중의 20㎎/㎖ 시냅산)와 혼합하고, 이중층 기술을 사용하여 MALDI 표적 플레이트에 스팟팅하였다. 이어서 MALDI-TOF 질량 분석법으로 샘플을 분석하였다.
64.2 간 마이크로솜 샘플 제조
pH 7.5에서 500mM Tris-HCl 및 50 mM 마그네슘 클로라이드 육수화물을 사용하여 10x 완충액을 제조하였다. ACV-006을 1x PBS, pH 7.4에서 50μM로 희석시켰다. 간 마이크로솜을 해동시키고, 보텍싱시켰다. 대조군으로 사용하기 위해서 각각의 종의 간 마이크로솜(인간 및 마우스)의 분취물을 70℃에서 15분 동안 열 사멸시켰다. 반응 혼합물을 표 27에 따라서 두 종에 대해서 제조하였다. 튜브를 수욕(37℃)에서 24시간 동안 인큐베이션시켰다. 샘플을 59.1로부터의 프로토콜에 따라서 MAGNE® 단백질 A 비드(프로메가사)를 사용하여 분석을 위해서 추출하였다.
Figure pct00652
64.3 샘플 및 데이터 분석
Bruker Compass Flex Control 버전 3.4를 사용하여 샘플을 획득하여 전체 스캔 MALDI-TOF 질량 스펙트럼을 얻었다(표 28). BSA를 획득 질량 범위에 대한 내부 교정제로 사용하였다. 데이터를 Bruker Compass Flex Analysis 버전 3.4 소프트웨어로 추가로 분석하였다. 또한 대조군의 DAR 패턴을 시험 샘플의 DAR 패턴과 비교한다.
Figure pct00653
64.4 결과
시험 화합물, 접합체 6(도 43)을 마우스 및 인간 새로운 K2EDTA 처리된 혈장 및 간 마이크로솜 둘 다에서 시험관내 안정성을 위해서 처리하였다.
접합체 6을 새로운 K2EDTA 마우스 및 인간 혈장애 1㎎/㎖의 농도로 스파이킹하였다. 혈장을 2개의 분취물로 나누고 하나를 즉시 동결시키고, 나머지를 수욕에서 37℃에서 24시간 동안 인큐베이션시켰다. 인큐베이션 마지막에, 샘플을 MAGNE® 단백질 A 자석 비드로 혈장 매트릭스로부터 추출하였다. 혈장 인큐베이션 후, 샘플을 MALDI-TOF 질량 분석법으로 DAR의 변화에 대해서 분석하였다. 마우스(도 44) 또는 인간(도 45) 혈장 인큐베이션에서 접합체 6은 DAR에 어떠한 변화도 유발하지 않는 것을 발견하였다.
최종 5mM의 농축액에 0.5㎎/㎖ 및 MgCl2의 최종 농도로 활성 또는 열 사멸된 간 마이크로솜을 함유하는 50mM, pH 7.5 Tris-HCl 완충 용액 중의 5μM의 최종 농도에서 접합체 6 간 마이크로솜 안정성을 시험하였다. 모든 샘플을 37℃의 일정한 온도에서 인큐베이션시키고, 니코틴아마이드 아데닌 다이뉴클레오타이드 포스페이트(NADPH) 재생 용액을 사용하여 인큐베이션 동안 연속적 공동인자 사용 가능성을 제공하였다. 인큐베이션을 24시간 동안 수행하였다. 인큐베이션 마지막에, 샘플을 단백질 A 자석 비드로 마이크로솜 매트릭스로부터 추출하였다. 간 마이크로솜 인큐베이션 후, 샘플을 MALDI-TOF 질량 분석법으로 DAR의 변화에 대해서 분석하였다. 마우스(도 46) 또는 인간(도 47) 간 마이크로솜 인큐베이션에서 접합체 6은 DAR에 어떠한 변화도 유발하지 않는 것을 발견하였다.
37℃에서 24시간 동안의 인큐베이션 후 시험관내 혈장 안정성은, 마우스 또는 인간에서 접합체 6 Fc, 링커 또는 표적화 모이어티의 분해 결여를 시사한다. 유사하게 마우스 및 인간 간 마이크로솜 둘 다에서 인큐베이션 후 분해의 결여가 관찰되는데, 이는 대사산물의 부재를 시사한다. 이러한 시험관내 안정성 연구의 결과는 이것이 생물학적 책임을 가질 수 있는 분해물을 갖는 안정적인 화합물이라는 것을 뒷받침한다.
실시예 65. 치사 마우스 모델에서 인플루엔자 A(H1N1)에 대한 상이한 약물-대-항체 비(DAR)에서 접합체 13의 효능
접합체 13을 암컷 BALB/c 마우스(찰스 리버 래보러토리즈, 6 내지 8주령)에서 치명적인 IAV H1N1 인플루엔자 감염에 대해 평가하였다. 시험감염 바이러스(A/Puerto Rico/8/1934)는 마우스에서 치명적인 감염을 초래할 수 있는 마우스-적응성 단리물이다. 실험은 5마리 마우스의 13개 군으로 구성되었다. 0일에, 케타민/자일라진(각각 150 및 10㎎/㎏)의 혼합물로 약하게 마취시킨 후, 모든 마우스를 30㎕의 부피의 비강내 접종으로 3x LD95에서 바이러스로 시험감염시켰다.
군 1 내지 13은 바이러스 시험감염 2시간 후, 시험품 또는 비히클(PBS)의 단일 IV 처리를 제공받았다. 연구는, 접합체 13a, 접합체 13c, 접합체 13d 및 접합체 13g에 상응하는 접합체 13의 4개의 상이한 DAR 작제물(각각 DAR 1.7, 3.8, 5.8, 및 10.3)을 평가하였다. 접합체 13a, 접합체 13c, 접합체 13d, 및 접합체 13g의 합성을 실시예 61 내지 실시예 63에 기재한다. 각각의 작제물을 0.03, 0.1 및 0.3㎎/㎏에서 평가하였다. 각각의 접합체에 대한 일반적인 연구 설계를 표 29에 요약한다.
Figure pct00654
모든 작제물은 0.3㎎/㎏에서 완전히 보호성이었고, 반대로, 어떠한 작제물도 0.03㎎/㎏에서 활성이지 않았는데(모든 군에 대해서 0% 생존), 이는 이러한 낮은 용량이 역치 효능 용량보다 낮았다는 것을 나타낸다. 그러나, 0.1㎎/㎏의 접합체를 제공받은 군은 차별적일 수 있다(표 30). 이러한 용량 수준에서 1.7, 3.8, 및 5.8의 DAR을 갖는 접합체는 비히클 단독 처리된 마우스보다 상당히 더 보호성이었다(p=0.0027). 그러나 높은 DAR 작제물(10.3)은 비히클 단독 처리된 마우스보다 상당히 더 보호성이 아니었다(p=0.091). 높은 DAR 작제물이 활성을 잃는 근본적인 기전은 현재 알려지지 않았지만, 항체 재순환 방해를 포함한 여러 인자로 인해 반감기가 짧아질 수 있다.
Figure pct00655
실시예 66. 접합체 6 및 접합체 12의 생체내 효능
접합체 6 및 접합체 12(N297A에서의 Fc 돌연변이를 갖는 유사체)를 암컷 BALB/c 마우스(찰스 리버 래보러토리즈, 6 내지 8주령)에서 치명적인 IAV H1N1 인플루엔자 감염에 대해 평가하였다.　 시험감염 바이러스(A/Puerto Rico/8/34)는 마우스-적응성 단리물이다.　 실험은 군당 5마리의 마우스를 포함하였다. 마우스를 케타민/자일라진(150/10㎎/㎏)으로 마취시키고, 30㎕의 부피의 비강내 접종으로 LD95의 인플루엔자 바이러스로 3 내지 5x 시험감염시켰다. 감염 2시간 후 IV로 단일 1회 용량의 치료제를 투여하였다. PBS를 음성 대조군으로 제공하였다. 모든 마우스를 시험감염 후 15일 동안 체중 감소 %(도 48) 및 생존(도 49)에 대해 모니터링하였다.
실시예 67. 접합체 6 및 접합체 12의 시험관내 Fcγ 수용체 IIIA 결합
접합체 6 및 접합체 12의 결합(N297A에 Fc 돌연변이를 갖는 Fc 돌연변이)을 ELISA에 의해서 FcyRIIIA에 대해 평가하였다. 플레이트를 1㎍/㎖ 재조합 인간 FcγRIIIA로 밤새 코팅하였다. 다음 날, 플레이트를 1% BSA 용액으로 1시간 동안 차단시켰다. 접합체를 0.01 내지 1000nM 범위의 용량-반응으로 플레이트에 첨가하고, 2시간 동안 인큐베이션시켰다. 퍼옥시다제-접합된 항-인간 Fc와 함께 1시간 동안 인큐베이션시키고, 그 다음 TMB 기질 시약과 10 내지 15분 동안 인큐베이션시킴으로써 결합을 검출하였다.
결합을 450nm에서 흡광도를 판독함으로써 결정하였다(도 50 및 도 51).
실시예 68. 시험관내 접합체 6 혈장 샘플 분석
혈장 샘플에서 접합체 6을 뉴라미니다제 캡처 검출 ELISA로 정량하였다. 간략하면, 분자를 뉴라미니다제 코팅 플레이트에서 캡처한 다음, HRP 접합된 항-인간 IgG-Fc 항체를 사용하여 검출하였다. 단백질 농도를 접합체 6 표준 곡선의 4PL 비선형 회귀를 사용하여 GraphPad Prism에서 계산하였다. 자세한 방법 설명을 하기에 제공한다.
Nunc Maxisorp 96-웰 플레이트(카탈로그 번호 12-565-136, 써모피셔사)를 1X KPL 코팅 완충액(5150-0041, 세라케어사) 중의 A/California/04/2009로부터의 0.1U/웰 뉴라미니다제(H1N1)(11058-VNAHC, 시노 바이올로지컬사)로 코팅하였다. 플레이트를 실온에서 1시간 동안 오비탈 플레이트 진탕기(500rpm)에서 인큐베이션시켰다. 혈장 샘플의 연속 희석액을 플레이팅하고 실온에서 2시간 동안 인큐베이션시켰다(샘플 희석제: PBS 0.025% Tween 20 중의 0.5% BSA + 미경험 시노몰거스 원숭이 혈장 최종 농도 1:2,500). 0.230 내지 500ng/㎖ 범위의 접합체 6 표준 곡선을 각각의 플레이트에서 이중으로 실시하였다. 2시간 인큐베이션 후, 플레이트를 0.05% Tween20이 함유된 300uL PBS로 5x 세척하였다. 이어서 플레이트 상의 뉴라미니다제에 결합된 접합체를 샘플 희석제에서 1:1,000으로 희석된 HRP 접합된 항-인간 IgG Fc F(ab')2 (709-036-098, 잭슨사)로 1시간 동안 실온에서 프로빙하였다. 이어서 플레이트를 0.05% Tween20이 포함된 300㎕ PBS에서 8회 세척하고. TMB 기질로 7 내지 8분 동안 현상하였다. 반응을 1N H2SO4로 중단시켰다. 흡광도를 450nm에서 판독하였다. 혈장 샘플의 접합체 6을 표준 곡선의 비선형 회귀 분석(시그모이드, 4PL 분석) 후 Graphpad Prism 버전 6을 사용하여 내삽하였다.
이어서 생성된 평균 혈장 농도를 사용하여 Phoenix WinNonlin 7.0에 의해서 약동학 파리미터를 계산하였다.
독성동태학(TK), 군 2(IV, 5㎎/㎏) 및 3(IV, 20㎎/㎏)
투여 후에 1일(표 31) 및 8일(표 32)에 동일한 용량군에서 수컷 동물과 암컷 동물 사이에 농도는 대등하였다. 평균 혈장 노출은 두 날짜 모두에 걸쳐서 대략 용량-비례하게 증가하는 것으로 보였다. 제2 투여 후, 약 30%의 약간의 축적이 상이한 용량군에서 주목되었다. 상이한 용량군에 걸쳐서 1일 및 8일 평균 혈장 농도의 플롯을 도 52에 도시한다.
Figure pct00656
Figure pct00657
약동학(PK), 군 4(IV, 10㎎/㎏) 및 5(SC, 10㎎/㎏)
IV 투여 후, 수컷 및 암컷 동물로부터의 혈장 농도는 대등하였다. 긴 마지막 반감기를 초래하는 매우 낮은 청소율이 IV 투여 후에 관찰되었다(표 33A 및 표 33B).
[표 33A]
Figure pct00658
[표 33B]
Figure pct00659
SC 투여 후, 최대 농도에 도달하는 데까지의 시간은 투여 후 72시간이었지만, 투여 후 672시간에 걸쳐서 농도가 측정 가능하였다(표 34A 및 표 34B). SC 투여 후 생체이용률은 대략 139%로 높았다. 10㎎/㎏ IV 투여와 SC 투여 간의 시간에 따른 혈장 농도의 비교를 도 53에 나타낸다.
[표 34A]
Figure pct00660
[표 34B]
Figure pct00661
실시예 69. 치사 마우스 모델에서 인플루엔자 A/Puerto Rico/8/1934(H1N1)에 대한 접합체 6의 효능
접합체 6을 암컷 BALB/c 마우스(찰스 리버 래보러토리즈, 6 내지 8주령)에서 치명적인 IAV H1N1 인플루엔자 감염에 대해 평가하였다. 시험감염 바이러스(A/Puerto Rico/8/1934)는 마우스에서 치명적인 감염을 초래할 수 있는 마우스-적응성 단리물이다. 실험은 5마리 마우스의 7개 군으로 구성되었다. 0일에, 케타민/자일라진(각각 150 및 10㎎/㎏)의 혼합물로 약하게 마취시킨 후, 모든 마우스를 30㎕의 부피의 비강내 접종으로 3x LD95에서 바이러스로 시험감염시켰다. 사망률 및 체중을 매일 기록하였고, 체중이 20% 손실된 임의의 동물을 사망으로 점수 매겼다.
시험군은 바이러스 시험감염 2시간 후, 접합체 6, hIgG1 Fc 대조군 또는 비히클(PBS)의 단일 IV 처리를 제공받았다. 오셀타미비어를 제공받은 동물에게 바이러스 시험감염 2시간 후에 시작하여 5일 동안 매일 2회 경구로 투여하였다. 연구 설계를 표 35에 요약한다.
Figure pct00662
예측된 바와 같이, 비히클 또는 hIgG1 Fc 단독을 제공받은 마우스는 6일에 감염에 대해서 굴복하였다. 유사하게, 낮은 용량의 오셀타미비어(5㎎/㎏; 5일 동안 bid)로 처리된 마우스는 8일에 사망하였다(표 36). 그러나, 동일한 투여 스케줄로 20㎎/㎏의 오셀타미비어를 제공받은 마우스는 완전히 보호되었다(p=0.0027). 오셀타미비어에서 관찰된 것과 대조적으로, 접합체 6으로 처리된 마우스는 단일 IV 투여로부터의 모든 용량 수준(10, 2, 및 0.4㎎/㎏)에서 완전히 보호되었다(p=0.0027).
Figure pct00663
접합체 6의 효력은 매일 체중 측정에 의해서 추가로 뒷받침되었다. 예측된 바와 같이, 비히클 또는 hIgG1 Fc로 처리된 마우스는 사망으로 점수 매겨지는 20%를 초과할 때까지 체중의 꾸준한 감소를 나타내었다(표 37). 5㎎/㎏의 오셀타미비어로 처리된 군은 또한 8일에 사망에 도달할 때까지 체중의 일관적인 손실을 나타내었다. 높은 용량(20㎎/㎏)의 오셀타미비어로 처리된 마우스는 회복 전에, 8일에, 14%에 도달하는, 꾸준하지만, 감소된 체중 손실을 나타내었다.
대조군 및 오셀타미비어 처리된 마우스에 비해서, 접합체 6을 제공받은 이러한 군은 가장 낮은 용량 농도(0.4㎎/㎏)에서도 연구 전체에서 건강한 체중을 유지하였다(표 37). 접합체 6 처리된 마우스 중에서 가장 큰 일시적인 체중 손실은 2㎎/㎏ 용량군에서 14일에 단지 2%였다. 생존 및 체중 측정 둘 다에 의해서, 접합체 6은 0.4㎎/㎏만큼 낮은 단일 IV 용량으로 인플루엔자 A/Puerto Rico/8/1934로부터 강력한 보호를 나타내었다.
Figure pct00664
실시예 70. 접합체 14의 합성
표제 접합체를 PEG-아지도-Fc (서열번호35) 및 Int-7(실시예 19)을 사용하여 접합체 13a(실시예 61)와 유사하게 제조하였다. 정제된 최종 생성물의 Maldi TOF 분석은 56,502Da(DAR=2.1)의 평균 질량을 제공하였다. 수율 43.4㎎, 43.4%.
실시예 71. 접합체 15의 합성
이러한 접합체를 PEG4-아지도-Fc(서열번호 35, 실시예 61) 및 Int-12(실시예 46)에 의해서 실시예 62 (접합체 13a)와 유사하게 제조하였다. 정제된 최종 생성물의 Maldi TOF 분석은 56,528Da(DAR=2.2)의 평균 질량을 제공하였다. 수율 40.0㎎, 40.0%.
실시예 72. 접합체 16의 합성
이러한 접합체를 PEG4-아지도-Fc(서열번호 35, 실시예 61) 및 Int-10(실시예 31)에 의해서 실시예 62 (접합체 13a)와 유사하게 제조하였다. 정제된 최종 생성물의 Maldi TOF 분석은 56,507Da(DAR=2.1)의 평균 질량을 제공하였다. 수율 41.7㎎, 42%.
실시예 73. Int-19의 합성
Figure pct00665
단계 a.
Figure pct00666
30㎖ DMF 중의 tert-부틸 [2-(2-브로모에톡시)에틸]카바메이트(1.8g, 6.6m㏖) 및 프로파길-PEG4 아민(0.7g, 3.0m㏖)의 용액에 탄산칼륨(1.2g, 9m㏖)을 첨가하였다. 반응을 80℃에서 6시간 동안 교반하고, 이어서 DCM(200㎖)과 염수(50㎖) 사이에 분배시켰다. 유기층을 분리시키고, 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시켰다. 여과 시, 생성된 여과물을 농축시키고, 개질제로서 0.1% TFA를 함유하는 10%에서 100% 아세토나이트릴 및 물로 용리시키는 Isco COMBIFLASH® 액체 크로마토그래프를 사용하여 역상 액체 크로마토그래피(RPLC)로 정제시켰다. 생성물의 수율 1.0g, 65%. LCMS로 발견된 이온(들): M/2+H=606.4.
단계 b.
Figure pct00667
이전 단계로부터의 생성물(1.0g, 1.6m㏖)을 실온에서 0.5시간 동안 TFA(10㎖)로 처리하고, 이어서 농축 건조시키고, 이를 추가로 정제하지 않고 다음 단계에서 사용하였다. 수율은 이 단계의 경우 정량적이었다. LCMS로 발견된 이온(들): M/2+H=406.3.
단계 c.
Figure pct00668
이전 단계로부터의 생성물(120㎎, 0.17m㏖)을 10㎖ DMF 중의 에터 자나미비어 산(230㎎, 0.38m㏖, 실시예 31)의 용액으로 처리하였다. 이 용액에 EDC(100㎎, 0.5m㏖), HOBt(65㎎, 0.5m㏖), 및 DIEA(0.14㎖, 1m㏖)를 첨가하였다. 생성된 용액을 실온에서 밤새 교반하고, 이어서 개질제로서 TFA를 사용하지 않고 10%에서 100% 아세토나이트릴 및 물로 용리시키는 Isco COMBIFLASH® 액체 크로마토그래프를 사용하여 역상 액체 크로마토그래피(RPLC)로 정제시켰다. 생성물의 수율 180㎎, 60.2%. LCMS로 발견된 이온(들): M/2+H=816.9.
단계 d.
Figure pct00669
이전 단계로부터의 생성물(180㎎, 0.11m㏖)을 트라이플루오로아세트산(2㎖)으로 30분 동안 실온에서 처리하였다. 생성된 용액을 농축시키고, 물(2㎖)에 용해시키고, 이어서 H2O(1㎖)에 용해된 수산화리튬(24㎎, 1m㏖)의 용액으로 처리하였다. 생성된 반응을 10분 동안 교반하고, 이어서 0.1㎖ 아세트산으로 반응정지시켰다. 용액을 농축시키고, 개질제로서 0.1% TFA를 함유하는 0%에서 50% 아세토나이트릴 및 물로 용리시키는 Isco COMBIFLASH® 액체 크로마토그래프를 사용하여 역상 액체 크로마토그래피(RPLC)로 정제시켰다. 생성물의 수율 140㎎, 52%. LCMS로 발견된 이온(들): M/2+H=575.8, M/3+H=384.2.
실시예 74. 접합체 17의 합성
이러한 접합체를 PEG4-아지도-Fc(서열번호 35, 실시예 61) 및 Int-19(실시예 73)에 의해서 실시예 62 (접합체 13a)와 유사하게 제조하였다. 정제된 최종 생성물의 Maldi TOF 분석은 56,672Da(DAR=2.2)의 평균 질량을 제공하였다. 수율 36.7㎎, 36.7%.
실시예 75. Int-20의 합성
Figure pct00670
단계 a.
Figure pct00671
무수 DMF(36㎖) 중의 다이에틸 이미노다이아세테이트(3.1g, 16.06m㏖)의 용액에 벤질 브로마이드(2.38㎖, 19.64m㏖) 및 탄산칼륨(6.44g, 46.46m㏖)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 70℃에서 16시간 동안 가열시켰다. 실온까지 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 물로 희석시키고, 3차 부틸메틸에터(3×100㎖)로 추출하였다. 유기층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 이어서 농축시켰다. 잔류물을 정상 실리카겔 크로마토그래피(Isco, 0에서 10% 에틸 아세테이트 및 헥산)로 정제시켰다. 수율 3.13g, 69.8%. LCMS로 관찰된 이온: [M+H]+ = 280.2.
단계 b.
Figure pct00672
무수 THF(5㎖) 중의 단계-a(3.2g, 11.2m㏖)로부터의 다이-에틸 에스터의 용액을 질소 기체 하에서 0oC에서 THF(2㎖) 중의 LiALH4(425㎎, 14.2m㏖)를 함유하는 둥근 바닥 플라스크에 서서히 첨가하였다. 주사기를 THF(2 x 5㎖)로 헹궜다. 생성된 혼합물을 밤새 실온까지 서서히 가온시켰다. 메탄올(2㎖)을 서서히 첨가하고, 이어서 NaOH 수성(1㎖)을 첨가하여 반응을 반응정지시켰다. 생성된 혼합물을 1시간 동안 교반하고, 이어서 진공 하에서 여과시켰다. 여과액을 농축시키고, 정제하지 않고 다음 단계에 사용하였다. 수율 2.4g, 109%. LCMS로 관찰된 이온: [M+H]+ = 196.2.
단계 c.
Figure pct00673
무수 THF(4㎖) 중의 이전 단계로부터의 생성물(1.02g, 5.24m㏖)을 0oC에서 질소 하에서 NaH(60% 순도, 2.09g, 52.4m㏖) 및 THF(5㎖)를 함유하는 플라스크에 서서히 첨가하였다. 생성된 혼합물을 1시간 동안 교반하고, 그 다음 THF(20㎖) 중의 3-(Boc-아미노)프로필브로마이드(3.8g, 15.7m㏖)를 적가하였다. 반응 혼합물을 서서히 실온까지 가온시키고, 3일 동안 교반하였다. 반응을 0oC까지 냉각시키고, 이어서 물(6㎖)로 반응정지시키고, 1시간 동안 교반하였다. 그것을 에틸 아세테이트(2×100㎖)로 추출하였다. 합한 유기층을 1N HCl 수성 및 염수로 세척하였다. 그것을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축시켰다. 잔류물을 정상 크로마토그래피(Isco, 0에서 5% 메탄올 및 다이클로로메탄)로 정제시켰다. 수율 984㎎, 37%. LCMS로 관찰된 이온 [M+H]+ = 510.0.
단계 d.
Figure pct00674
팔라듐 하이드록사이드(543㎎, 0.77m㏖)를 H2 분위기 하에서 무수 메탄올(19.5㎖) 중의 단계-c 생성물(985.3㎎, 1.93m㏖)을 함유하는 플라스크에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 이어서 그것을 셀라이트 패드로 여과시키고, 메탄올로 세척하고, 농축시켰다. 잔류물을 정제하지 않고 다음 단계를 수행하였다. 수율 828.6㎎, 102%. LCMS로 관찰된 이온 [M+H]+ = 420.0.
단계 e.
Figure pct00675
H2O:THF(1:1, 16㎖) 중의 단계-d 생성물(829㎎, 1.97m㏖)을 0oC까지 냉각시켰다. 이 용액에 Na2CO3(314㎎, 2.96m㏖), 그 다음 Fmoc N-하이드록시석신이미드 에스터(826㎎, 2.37m㏖)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온까지 가온시키고, LCMS로 완결 시까지 교반하고, 이어서 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축시켰다. 잔류물을 정상 크로마토그래피(Isco, 0에서 60% 에틸 아세테이트 및 헥산)로 정제시켰다. 수율 784㎎, 62%. LCMS로 관찰된 이온 [M+H-Boc]+ = 542.0.
단계 f.
Figure pct00676
단계-e 생성물(1.01g, 1.57m㏖)을 TFA(5㎖) 및 CH2Cl2(9㎖) 중에서 실온에서 1시간 동안 교반하고, 이어서 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 RPLP(Isco, 5에서 100% 메탄올 및 물, 개질제 없음)로 정제시켰다. 수율 903㎎, 86%. LCMS로 관찰된 이온 [M+H]+ = 442.2.
단계 g.
Figure pct00677
무수 DMF(3㎖) 중의 에터 자나미비어 산(340㎎, 0.49m㏖), 단계-f 생성물(111㎎, 0.25m㏖, 실시예 31) 및 HATU(206㎎, 0.53m㏖)의 혼합물에 DIEA(162㎎, 1.23m㏖)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하고, 이어서 RPLC로 직접 정제시켰다(Isco, 30에서 100% 메탄올 및 물, 개질제 없음). 수율 249㎎, 61%. LCMS로 관찰된 이온 [(M+2H)/2]+ = 833.8.
단계 h.
Figure pct00678
무수 DMF(0.5㎖) 중의 단계-g 생성물(249㎎, 0.15m㏖)의 용액에 SilaMetS 티올(1.2g, 1.47m㏖) 및 1,8-다이아자바이사이클로[5.4.0]운데스-7-엔(12㎎, 0.07m㏖)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 1.5시간 동안 교반하고, 이어서 여과시키고, HATU(69㎎, 0.18m㏖), 프로파길 PEG-4 산(43㎎, 0.16m㏖) 및 DIEA(43㎎, 0.33m㏖)를 함유하는 플라스크에 직접 여과시켰다. 반응 혼합물을 1시간 동안 교반하고, 이어서 RPLC로 직접 정제시켰다(Isco, 30에서 100% 메탄올 및 물, 개질제 없음). 수율 298㎎, 118%. LCMS로 관찰된 이온 [(M+2H-Boc)/2]+ = 843.9.
단계 i.
Figure pct00679
단계-h 생성물(298㎎, 0.18m㏖)을 TFA(3㎖) 및 CH2Cl2(3㎖) 용해시키고, 액을 실온에서 16시간 동안 교반하였다 이어서 것을 감압 하에서 농축시키고, HPLC(ACCQ Isco, 0에서 25% 아세토나이트릴 및 물, 개질제로서 0.1% TFA 함유)로 정제시켰다. 수율 112㎎, 44%. LCMS로 관찰된 이온 [(M+2H)/2]+ = 643.8 및 [(M+3H)/3]+ = 429.6.
단계 j.
Figure pct00680
MeOH(4㎖) 및 물(2㎖) 중의 단계-i 생성물(112㎎, 0.072m㏖)의 용액에 LiOH(10.6㎎, 0.43m㏖)를 첨가하였다. 생성된 용액을 실온에서 1시간 동안 교반하고, 이어서 TFA로 산성화시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 HPLC(ACCQ Isco, 0에서 25% 아세토나이트릴 및 물, 개질제로서 0.1%TFA 함유)로 정제시켰다. 수율 37㎎, 36%. LCMS로 관찰된 이온 [(M+2H)/2]+ = 603.8, [(M+3H)/3]+ = 402.9.
실시예 76. 접합체 18의 합성
아지도 작용화된 비글리코실화된 Fc(100㎎, 5.4㎖, 1.87μ㏖, 서열번호 35)의 용액을 알킨 유도체화된 소분자(16.1㎎, 0.011m㏖, Int-20)를 함유한 15㎖의 원심분리 튜브에 첨가하였다. 약하게 진탕하여 모든 고체를 용해시킨 후, 혼합물을 PBS 7.4 완충액 중의 L-아스코르브산 나트륨(149㎎, 0.75m㏖, 0.25M), 황산구리(II)(2.4㎎, 0.015m㏖, 0.005 M) 및 BTTAA(25.8㎎, 0.6m㏖, 0.02 M)의 3㎖의 미리 혼합된 용액에 첨가하였다. 생성된 용액을 밤새 진탕하였다. 그것을 단백질 A 칼럼 상의 친화도 크로마토그래피(실시예 10에서 일반 접합체 정제 프로토콜 참고)로 정제시키고, 그 다음 크기 배제 크로마토그래피로 정제시켰다. 정제된 최종 생성물의 Maldi TOF 분석은 56826Da(DAR 2.2)의 평균 질량을 제공하였다. 수율 36.64㎎, 37%.
실시예 77. Int-21의 합성
Figure pct00681
단계 a.
Figure pct00682
무수 DCM(60㎖) 중의 2-(2-Boc-아미노에톡시) 에탄올(6.15g, 30m㏖)의 용액에 DIPEA(7.8g, 60m㏖) 및 DMAP(366.6㎎, 3m㏖)를 첨가하였다. 이어서 P-톨루엔설포닐 클로라이드(6.86g, 36m㏖)를 30분에 걸쳐서 나누어 첨가하였다. 생성된 혼합물을 3일 동안 교반한 후, 그것을 회전식 증발로 농축시키고, RPLC(20%에서 70% 아세토나이트릴/물, 개질제 없음)로 정제시켰다. 수율 3.71g, 34.4%. LCMS로 관찰된 이온: [M -Boc + H]+ = 260.
단계 b.
Figure pct00683
무수 THF(10㎖) 중의 단계-a 생성물(2.1g, 5.83m㏖)의 용액에 탄산나트륨(1.24g, 11.7m㏖) 및 모노-N-Boc-1,4-다이아미노부탄(1.32g, 7m㏖)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 60℃에서 1일 동안 가열시켰다. 이어서 염을 여과시키고, 여과액을 회전식 증발로 농축시켰다. 잔류물을 RPLC(100g, 5에서 50% 아세토나이트릴 및 물, 개질제로서 0.1% TFA 함유)로 정제시켰다. 수율 1.94g, 88.6%. LCMS로 관찰된 이온: [M + H]+ = 376.0.
단계 c.
Figure pct00684
무수 DMF(3㎖) 중의 프로파길 PEG-4 산(781㎎, 3m㏖) 및 HATU(1.14g, 3m㏖)의 용액에 DIPEA(390㎎, 3m㏖), 그 다음 무수 DMF(3㎖) 중의 용액 단계-b 생성물(940㎎, 2.5m㏖) 및 DIPEA(390㎎, 3m㏖)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 30분 동안 교반하고, 이어서 직접 RPLC(100g, 5 to 80% 아세토나이트릴 및 물, 개질제로서 0.1% TFA 함유)로 정제시켰다. 수율 960.2㎎, 65.3%. LCMS로 관찰된 이온: [M + H]+ = 618.3, [M - Boc + H] = 518.3.
단계 d.
Figure pct00685
단계-c 생성물(960.2㎎, 1.63m㏖)을 무수 THF(6㎖)에 용해시켰다. 다이옥산(4㎖) 중의 4N HCl 용액을 첨가하고, 반응 혼합물을 밤새 교반하였다. 이어서 그것을 회전식 증발로 농축시켰다. 잔류물을 물(3㎖ x 3) 및 에틸 아세테이트(10㎖)로 추출하였다. 합한 수성층을 동결건조시켰다. 수율 760㎎, 95.1%. LCMS로 관찰된 이온: [M + H]+ = 418.0.
단계 e.
Figure pct00686
무수 DMF(1㎖) 중의 에터 자나미비어 산(315㎎, 0.5m㏖) 및 HATU(190㎎, 0.5m㏖)의 혼합물에 무수 DMF(1㎖) 중의 단계-d 다이아민 생성물(148㎎, 0.3m㏖) 및 DIPEA(165㎎, 1.5m㏖)의 용액을 20분에 걸쳐서 나누어 첨가하였다. 첨가 후, 반응을 30분 더 교반하고, RPLC(50g, 30에서 90% 아세토나이트릴 및 물, 개질제로서 0.1% TFA 함유)로 직접 정제시켰다. 수율 233㎎, 56.7%. LCMS로 관찰된 이온: [(M + 2H)/2]+ = 821.3.
단계 f.
Figure pct00687
단계-e 생성물(233㎎, 0.142m㏖)을 TFA(1.5㎖)에 용해시키고, 용액을 30℃에서 30분 동안 가열시켰다. 이어서 그것을 농축시키고, RPLC(0%에서 30% 아세토나이트릴 및 물, 개질제로서 0.1% TFA 함유)로 직접 정제시켰다. 수율 120㎎, 57.4%. LCMS로 관찰된 이온: [(M + 2H)/2]+ = 621.4, [(M + 3H)/3]+ = 414.7.
단계 g.
Figure pct00688
MeOH(2㎖) 중의 단계-f 생성물(120㎎, 0.0816m㏖)의 용액에 물(2㎖) 중의 LiOH 일수화물(63㎎, 1.5m㏖) 용액을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 1.5시간 동안 교반하고, 이어서 회전식 증발로 농축시켰다. 잔류물을 다이옥산 중의 4N HCl 용액(0.5㎖)으로 산성화시키고, HPLC(0에서 15% 아세토나이트릴 및 물, 개질제로서 0.1% TFA 함유)로 정제시켰다. 수율 98.2㎎, 86.6%. LCMS로 관찰된 이온: [(M + 2H)/2]+ = 581.8,[(M + 3H)/3]+ = 388.2.
실시예 78. 접합체 19의 합성
이러한 접합체를 PEG4-아지도-Fc(서열번호 35, 실시예 61) 및 Int-21(실시예 78)에 의해서 실시예 62(접합체 13a)와 유사하게 제조하였다. 정제된 최종 생성물의 Maldi TOF 분석은 56,548Da(DAR=2.1)의 평균 질량을 제공하였다. 수율 39.7㎎, 39.7%.
실시예 79. Int-22의 합성
Figure pct00689
단계 a.
Figure pct00690
다이클로로메탄(50㎖) 중의 에터 자나미비어 산(1.8g, 2.8m㏖ 실시예 31) 및 프로파길-PEG4-아민(0.82g, 3.5m㏖. 1.2 eq.)의 혼합물에, EDC(1.0g, 5m㏖), HOBt(0. 65g, 5m㏖), 및 DIEA(1.4㎖, 10m㏖)를 첨가하였다. 생성된 용액을 실온에서 밤새 교반하고, 이어서 반응을 농축시키고, 개질제로서 0.1% TFA를 사용하지 않고 10%에서 100% 아세토나이트릴 및 물로 용리시키는 Isco COMBIFLASH® 액체 크로마토그래프를 사용하여 역상 액체 크로마토그래피(RPLC)로 정제시켰다. 생성물의 수율s 1.35g, 50.2%. LCMS로 발견된 이온(들): M+H=830.4.
단계 b.
Figure pct00691
이전 단계로부터의 생성물(1.35g, 1.6m㏖)을 트라이플루오로아세트산(20㎖)으로 30분 동안 실온에서 처리하였다. 생성된 용액을 농축시키고, 물(10㎖) 및 MeOH(10㎖)에 용해시키고, 이어서 물(10㎖) 중의 수산화리튬(120㎎, 5m㏖) 용액으로 처리하였다. 반응을 10분 동안 교반하고, 이어서 0.5㎖ 아세트산으로 반응정지시켰다. 반응을 농축시키고, 개질제로서 0.1% TFA를 함유하는 0%에서 50% 아세토나이트릴 및 물로 용리시키는 Isco COMBIFLASH® 액체 크로마토그래프를 사용하여 역상 액체 크로마토그래피(RPLC)로 정제시켰다. 생성물의 수율 510㎎, 52.8%. LCMS로 발견된 이온(들): M+H=604.3.
실시예 80. 접합체 20의 합성
이러한 접합체를 PEG4-아지도-Fc(서열번호 35, 실시예 61) 및 Int-22(실시예 79)에 의해서 실시예 62(접합체 13a)와 유사하게 제조하였다. 정제된 최종 생성물의 Maldi TOF 분석은 55,508Da(DAR=2.3)의 평균 질량을 제공하였다. 수율 37.0㎎, 37.0%.
실시예 81. Int-23의 합성
Figure pct00692
단계 a.
Figure pct00693
무수 THF(10㎖) 중의 N-Boc-1.4-다이아미노부탄(941.5㎎, 5m㏖)의 용액에 탄산나트륨(1.06g, 10m㏖) 및 3-(Boc-아미노)프로필브로마이드(1.43g, 6m㏖)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 50℃에서 1일 동안 가열시켰다. 이어서 염을 여과시키고, 회전식 증발로 농축시켰다. 잔류물을 RPLC(100g, 5에서 50% 아세토나이트릴 및 물, 개질제로서 0.1% TFA 함유)로 정제시켰다. 수율 1.35g, 58.8%. LCMS로 관찰된 이온: [M + H]+ = 346.0.
단계 b.
Figure pct00694
무수 DMF(3㎖) 중의 프로파길 PEG-4 산(781㎎, 3m㏖) 및 HATU(1.14g, 3m㏖)의 용액에 DIPEA(390㎎, 3m㏖), 그 다음 무수 DMF(3㎖) 중의 용액 단계-a 생성물(863.8㎎, 2.5m㏖) 및 DIPEA(390㎎, 3m㏖)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 30분 동안 교반하고, 이어서 직접 RPLC(100g, 5 to 80% 아세토나이트릴 및 물, 개질제로서 0.1% TFA 함유)로 정제시켰다. 수율 1.19g, 81%. LCMS로 관찰된 이온: [M + H]+ = 588.3.
단계 c.
Figure pct00695
단계-b 생성물(1.19 g, 2.02 m㏖)을 무수 THF(6㎖)에 용해시켰다. 다이옥산(4.5㎖) 중의 4N HCl 용액을 첨가하고, 반응 혼합물을 1일 동안 교반하였다. 그것을 이어서 회전식 증발로 농축시켰다. 잔류물을 물(3㎖×3) 및 에틸 아세테이트(15㎖)로 추출하였다. 합한 수성층을 동결건조시켰다. 수율 940㎎, 정량적 수율. LCMS로 관찰된 이온: [M + H]+ = 388.3.
단계 d.
Figure pct00696
무수 DMF(1㎖) 중의 에터 자나미비어 산(315㎎, 0.5m㏖, 실시예 31) 및 HATU(209.1㎎, 0.55m㏖)의 혼합물에 DIPEA(65㎎, 0.5m㏖)를 첨가하였다. 5분 후, 무수 DMF(1㎖) 중의 단계-c 생성물(170㎎, 0.439m㏖) 및 DIPEA(130㎎, 1m㏖)의 용액을 20분에 걸쳐서 나누어 첨가하였다. 반응을 30분 추가로 교반하고, 이어서 RPLC(50g, 30에서 90% 아세토나이트릴 및 물, 개질제로서 0.1% TFA 함유)로 직접 정제시켰다. 수율 208㎎, 51.6%. LCMS로 관찰된 이온: [(M + 2H)/2]+ = 806.7.
단계 e.
Figure pct00697
단계-d 생성물(208㎎, 0.129m㏖)을 TFA(1.5㎖)에 용해시키고, 용액을 30℃에서 30분 동안 가열시켰다. 이어서 그것을 직접 RPLC(100g, 0에서 30% 아세토나이트릴 및 물, 개질제로서 0.1% TFA 함유)로 정제시켰다. 수율 134㎎, 72%. LCMS로 관찰된 이온: [(M + 2H)/2]+ = 606.8, [(M + 3H)/3]+ = 405.0.
단계 f.
Figure pct00698
MeOH(2㎖) 중의 단계-e 생성물(134㎎, 0.093m㏖)의 용액에 물(2㎖) 중의 LiOH 일수화물(63㎎, 1.5m㏖)의 용액을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 1.5시간 동안 교반하고, 이어서 회전식 증발로 농축시켰다. 잔류물을 다이옥산 중의 4N HCl 용액(0.5㎖)으로 산성화시키고, HPLC(0에서 15% 아세토나이트릴 및 물, 개질제로서 0.1% TFA 함유)로 정제시켰다. 수율 78.4㎎, 62%. LCMS로 관찰된 이온: [(M + 2H)/2]+ = 566.4, [(M + 3H)/3]+ = 378.4.
실시예 82. 접합체 21의 합성
이러한 접합체를 PEG4-아지도-Fc(서열번호 35, 실시예 61) 및 Int-23(실시예 81)에 의해서 실시예 62(접합체 13a)와 유사하게 제조하였다. 정제된 최종 생성물의 Maldi TOF 분석은 56,503Da(DAR=2.2)의 평균 질량을 제공하였다. 수율 34.4㎎, 34%.
실시예 83. 세포변성 효과(CPE) 검정에서 고 경로 H7N9 인플루엔자 A, 및 2개의 인플루엔자 B 단리물에 대한 접합체 13 내지 21의 활성
총 9개의 접합체(표 38)를 100, 10, 1, 및 0.1nM의 농도에서 수행하였고, CPE 검정에서 리바비린과 비교하였다. CPE 검정은 표준 방법에 따랐지만, 간략하면, 96-웰 플레이트 내에서 MDCK 세포의 80 내지 100% 컨플루언트 단층을 사용하였다. 이를 위해서, 시험 물품을 삼중으로 첨가하고, CPE 효과가 시각적으로 보일 때까지 37℃(+ 5% CO2)에서 인큐베이션시켰다. CPE가 인지되면, 세포층을 0.011% 중성 레드(neutral red)로 대략 2시간 동안 염색시켰다. 그 후, Sorensen 시트레이트 완충액/에탄올의 50:50 혼합물을 첨가하고, 30분 동안 인큐베이션시키고, 이어서 A540을 분광광도계로 판독하고, EC50/CC50 값을 회귀 분석으로 계산하였다.
모든 접합체는 인플루엔자 B/Florida/4/2006 단리물에 대해서 상당한 활성을 가졌고, EC50 값은 3.05 내지 33.5nm 범위였다(표 39). 평균적으로, 접합체는 리바비린에 비해서 275-배 효력 이점을 나타내었다(EC50 3,250nM). 인플루엔자 B/Brisbane/60/2008에 대한 접합체의 활성은, 100nM 초과의 EC50을 갖는 접합체 14를 제외하고는 B/Florida에 대해서 인지되는 것과 매우 유사하였다.
중요한 것은, 모든 접합체가 마찬가지로 고 경로 인플루엔자 A/Anhui/1/2013 (H7N9) 단리물에 대해서 상당히 활성이었다. 모든 접합체에 대한 평균 EC50은 이 단리물에 대해서 21.2nM(12 내지 28.5nM의 범위)였고, 리바비린의 경우에는 14,000nM이었다. 마지막으로, 시험된 농도에서 MDCK 단층에 대한 접합체의 직접적인 세포독성 효과는 검출되지 않았다.
Figure pct00699
Figure pct00700
실시예 84. 접합체 22의 합성
단계 a. PEG4-아지도 IVIG의 합성
DMF/PBS 중의 0.05M PEG4-아지도NHS 에스터 용액의 제조 PEG4-아지도 NHS 에스터 6.05㎎을 0℃에서 DMF 0.50㎖에 용해시키고, 0℃에서 PBS 1× 완충액 0.250㎖를 첨가하여 0.305㎖로 희석시켰다. 이러한 PEG4-아지도 NHS 에스터 PBS 용액의 당량을 조정함으로써 이 용액을 다양한 DAR을 갖는 다른 PEG4-아지도 IVIG를 제조하기 위해서 사용하였다.
PEG4-아지도 IVIG의 제조: 0.05M PEG4-아지도NHS 에스터 PBS 완충 용액(0.301㎖, 15.0μ㏖, 5.5당량)을 IVIG(Intravenous Immune Globulin, 박스터사))(9.25㎖의 pH 7.4 PBS 중의 407㎎, MW 약 148863Da, 1.968μ㏖)의 용액에 첨가하고, 혼합물을 12시간 동안 주변 온도에서 약하게 진탕하였다. 용액을 원심분리 농축기분리 농축기(100,000 MWCO)를 사용하여 약 1.5㎖의 부피까지 농축시켰다. 조 혼합물을 PBS pH 7.4 중에 1:10로 희석시키고, 다시 농축시켰다. 이러한 세척 절차를 총 3회 반복하였다. 소분자 시약을 이러한 세척 절차로 제거하였다. 농축된 IVIG-PEG4-아자이드를 pH 7.4 PBS 1× 완충제로 9.25㎖로 희석시켰고, 클릭 접합을 위해서 준비되었다. 정제된 물질을NANODROP™ UV 가시 분광광도계(IVIG의 아미노산 서열에 기초하여 계산된 흡광 계수 사용)를 사용하여 정량하였다. 정제 후 수율은 정량적이다.
단계 b. 접합체의 합성
클릭 시약 용액을 제조하였다: PBS 완충 용액 중의 0.0050M CuSO4: 10.0㎎의 CuSO4를 12.53㎖ PBS ×1에 용해시키고, 이어서 6.00㎖ 0.0050M CuSO4 용액을 취하고, 57.7㎎ BTTAA(CAS 번호 1334179-85-9) 및 297.6㎎ Na 아스코르베이트를 첨가하여 클릭 시약 용액(0.0050M CuSO4, 0.020M BTTAA 및 0.25M 아스코르브산나트륨)을 제공하였다.
아지도 작용화된 IVIG의 용액(140㎎, 3.17㎖, 0.936μ㏖, IVIG-링커-1-아자이드)을 알킨 유도체화된 소분자(8.4㎎, 0.00618m㏖, 6.6eq, 실시예 60에 기재됨)을 함유하는 15㎖ 원심분리 튜브에 첨가하였다. 약하게 진탕하여 모든 고체를 용해시킨 후, 1.50㎖의 상기 클릭 시약 용액(L-아스코르브산 나트륨, 0.25M, 74.2㎎, 0.374m㏖, 황산나트륨(II) 0.0050M, 1.2㎎, 0.0075m㏖, 및 BTTAA 0.020M, 12.9㎎, 0.0300m㏖)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 밤새 약하게 진탕하였다. 그것을 단백질 A 칼럼 상의 친화도 크로마토그래피(실시예 10에서 접합체 정제 프로토콜 참고)로 정제시키고, 그 다음 크기 배제 크로마토그래피로 정제시켰다. 정제된 최종 생성물의 Maldi TOF 분석은 151873Da(DAR=2.7)의 평균 질량을 제공하였다. 수율 51.0㎎, 36% 수율.
실시예 85. 접합체 23의 합성
클릭 접합 단계에서 적절한 알킨 작용화된 소분자(실시예 81에 기재된 Int-23)를 치환시킴으로써 접합체 23을 접합체 22와 유사하게 제조하였다
실시예 86. 접합체 24의 합성
클릭 접합 단계에서 적절한 알킨 작용화된 소분자(실시예 19에 기재됨)를 치환시킴으로써 접합체 24를 접합체 22와 유사하게 제조하였다
실시예 87. 치사 마우스 모델에서 인플루엔자 B에 대한 접합체 13, 14, 및 21의 효능
접합체를 암컷 BALB/c 마우스(찰스 리버 래보러토리즈, 6 내지 8주령)에서 치명적인 플루엔자 B 감염에 대해 평가하였다. 시험감염 바이러스(B/Malaysia/2506/04)는 마우스에서 치명적인 감염을 초래할 수 있는 마우스-적응성 단리물이다. 실험은 5마리 마우스의 11개 군으로 구성되었다. 0일에, 케타민/자일라진(각각 150 및 10㎎/㎏)의 혼합물로 약하게 마취시킨 후, 모든 마우스를 30㎕(마우스당 대략 1E4)의 부피의 비강내 접종으로 3x LD95에서 바이러스로 시험감염시켰다.
모든 군은 바이러스 시험감염 2시간 후, 시험품, 비히클(PBS) 또는 Fc 단독 대조군(hIgG1 Fc)의 단일 IV 처리를 제공받았다. 연구를 동일한 Fc 단량체에 접합된 Int-18, Int-7, 및 Int-23(각각 접합체 13, 14, 및 21)에서 평가하였고 3.0, 1.0, 및 0.3㎎/㎏에서 시험하였다. 마우스를 2주 동안 모니터링하고, 20%를 초과하는 체중 손실을 갖거나 빈사 상태로 발견된 동물을 사망으로 점수 매겼다.
모든 마우스를 비히클 또는 Fc 단독 대조군으로 처리하였고, 7일에 사망하였다. 이에 반해서, 접합체 13, 14 및 21을 제공받은 마우스는 0.3㎎/㎏의 단일 IV 용량을 제공받은 후 완전히 보호되었다(표 40). 예측된 바와 같이, 1.0 또는 3.0㎎/㎏의 접합체를 제공받은 군은 마찬가지로 완전히 보호되었다. 인플루엔자 B에 대한 모든 접합체의 효력은 매일 체중 측정으로 뒷받침되었는데(표 41), 이것은 임의의 접합체 처리된 군의 경우 전체 연구에 걸쳐서 5%의 일시적인 감소를 나타낸다. 접합체 13, 14, 및 21의 활성은 인플루엔자 A H1N1 및 H3N2 하위유형에 대한 접합체 6의 활성에 대한 용량과 대등하다. 접합체 6 및 14는 동일한 표적화 모이어티(Int-7에 상응함)를 갖기 때문에, 단일 접합체는 우세한 계절별 인플루엔자 유형(인플루엔자 A(H1N1), 인플루엔자 A(H3N2), 및 인플루엔자 B)에 대해서 활성일 수 있다.
Figure pct00701
Figure pct00702
실시예 88. 접합체 25, 접합체 26, 접합체 27, 및 접합체 28에 대한 PEG4-아지도 Fc의 합성
DMF/PBS ×1 중의 0.05M PEG4-아지도NHS 에스터 용액의 제조 PEG4-아지도 NHS 에스터 27.40㎎을 0℃에서 DMF 0.155㎖에 용해시키고, 0℃에서 PBS 1× 완충액 1.200㎖를 첨가하여 희석시켰다. 이러한 PEG4-아지도 NHS 에스터 PBS ×1 용액의 당량을 조정함으로써 이 용액을 다양한 DAR을 갖는 다른 PEG4-아지도 Fc를 제조하기 위해서 사용하였다.
PEG4-아지도 Fc(서열번호 48)의 제조: 0.05M PEG4-아지도NHS 에스터 PBS ×1 완충 용액(0.0984㎖, 4.92μ㏖, 2.5당량)을 h-IgG1 Fc(서열번호 48)(13.605㎖의 pH 7.4 PBS 중의 234㎎, MW 약 57,976Da, 4.036μ㏖)의 용액에 첨가하고, 혼합물을 2시간 동안 주변 온도에서 약하게 진탕하였다. 용액을 원심분리 농축기분리 농축기(30,000 MWCO)를 사용하여 약 2㎖의 부피까지 농축시켰다. 조 혼합물을 PBS pH 7.4 중에 1:7로 희석시키고, 다시 농축시켰다. 이러한 세척 절차를 총 3회 반복하였다. 소분자 시약을 이러한 세척 절차로 제거하였다. 농축된 Fc(서열번호 48)-PEG4-아자이드를 pH 7.4 PBS 1× 완충제로 13.60㎖로 희석시켰고, 클릭 접합을 위해서 준비되었다. 정제된 물질을 Nanodrop™ UV 가시 분광광도계(h-IgG1의 아미노산 서열에 기초하여 계산된 흡광 계수 사용)를 사용하여 정량하였다.
PEG4-아지도 Fc(서열번호 50)의 제조는 상기 PEG4-아지도 Fc(서열번호 48)와 유사하였다.
실시예 89. 접합체 25의 합성
클릭 시약 용액의 제조: PBS ×1 완충 용액 중의 0.0050M CuSO4: 10.0㎎의 CuSO4를 12.53㎖ PBS ×1에 용해시키고, 이어서 10.00㎖의 이러한 CuSO4 용액을 취하고, 86.1㎎ BTTAA 및 495.3㎎ Na 아스코르베이트를 첨가하여 클릭 시약 용액(0.0050M CuSO4, 0.020M BTTAA 및 0.25M 아스코르브산나트륨)을 제공하였다. 이 클릭 시약 용액을 접합체 25 및 접합체 26에 대해서 사용할 것이다.
아지도 작용화된 비글리코실화된 Fc(78.0㎎, 4.535㎖, 1.35μ㏖, 서열번호 48-PEG4-아자이드)의 용액을 알킨 유도체화된 소분자(13.2㎎, 8.88μ㏖, Int-23)를 함유한 15㎖의 원심분리 튜브에 첨가하였다. 약하게 진탕하여 모든 고체를 용해시킨 후, 혼합물을 (L-스코르브산 나트륨, 0.25 M, 106.6㎎, 0.538m㏖, 황산나트륨(II) 0.0050M, 1.72㎎, 0.0107m㏖, 및 BTTAA 0.020M, 18.5㎎, 0.0431m㏖)의 상기 클릭 시약 용액 2.153㎖와 함께 첨가하였다. 생성된 혼합물을 주변 온도에서 6시간 동안 약하게 진탕하였다. 그것을 단백질 A 칼럼 상의 친화도 크로마토그래피(실시예 10에서 접합체 정제 프로토콜 참고)로 정제시키고, 그 다음 크기 배제 크로마토그래피로 정제시켰다. 정제된 최종 생성물의 Maldi TOF 분석은 60973Da(DAR=2.1)의 평균 질량을 제공하였다. 수율 50.3㎎, 64% 수율.
실시예 90. 접합체 26의 합성
접합체 26의 제조는 PEG4-아지도 Fc(서열번호 48) 및 알킨-유도체화된 소분자(Int-7)의 동일한 배취를 사용함으로써 접합체 25와 유사하였다. 정제된 최종 생성물의 Maldi TOF 분석은 61068Da(DAR=2.2)의 평균 질량을 제공하였다. 수율 49.5㎎, 63% 수율.
실시예 91. 접합체 27의 합성
클릭 시약 용액의 제조: PBS ×1 완충 용액 중의 0.0050M CuSO4: 10.0㎎의 CuSO4를 12.53㎖ PBS ×1에 용해시키고, 이어서 12.00㎖의 이러한 CuSO4 용액을 취하고, 103.3㎎ BTTAA 및 594.3㎎ Na 아스코르베이트를 첨가하여 클릭 시약 용액(0.0050M CuSO4, 0.020M BTTAA 및 0.25M 아스코르브산나트륨)을 제공하였다. 이 클릭 시약 용액을 접합체 28에 대해서 사용할 것이다.
아지도 작용화된 Fc(80.0㎎, 4.535㎖, 1.38μ㏖, 서열번호 50-PEG4-아자이드)의 용액을 알킨 유도체화된 소분자(13.5㎎, 9.10μ㏖, Int-23)를 함유하는 15㎖ 원심분리 튜브에 첨가하였다. 약하게 진탕하여 모든 고체를 용해시킨 후, 혼합물을 (L-아스코르브산 나트륨, 0.25M, 109.3㎎, 0.552m㏖, 황산나트륨(II) 0.0050M, 1.76㎎, 0.0110m㏖, 및 BTTAA 0.020M, 19.0㎎, 0.0441m㏖)의 상기 클릭 시약 용액 2.21㎖와 함께 첨가하였다. 생성된 혼합물을 주변 온도에서 6시간 동안 약하게 진탕하였다. 그것을 단백질 A 칼럼 상의 친화도 크로마토그래피(실시예 10에서 접합체 정제 프로토콜 참고)로 정제시키고, 그 다음 크기 배제 크로마토그래피로 정제시켰다. 정제된 최종 생성물의 Maldi TOF 분석은 61447Da(DAR=2.5)의 평균 질량을 제공하였다. 수율 37.1㎎, 46% 수율.
실시예 92. 접합체 28의 합성
접합체 28의 제조는 PEG4-아지도 Fc(서열번호 50) 및 알킨-유도체화된 소분자(Int-7)의 동일한 배취를 사용함으로써 접합체 27과 유사하였다. 정제된 최종 생성물의 Maldi TOF 분석은 61388Da(DAR=2.4)의 평균 질량을 제공하였다. 수율 44.6㎎, 56% 수율.
실시예 93. 세포변성 효과(CPE) 검정에서 고 경로 인플루엔자 A(H5N1, H7N9)에 대한 접합체 6 및 접합체 21의 활성
본 발명의 접합체의 효력을 결정하기 위한 시험관내 검정을 BSL-3(고 경로) 인플루엔자 A에 대해서 수행하고, 표준 절차에 따랐다. 간략하면, 상이한 농도의 접합체를 바이러스(대략 250 TCID50)와 혼합하고, 35℃에서 1시간 동안 인큐베이션시켰다. 인큐베이션 후, 혼합물을 MDCK 세포의 80 내지 90%의 컨플루언트 단층에 첨가하였다. 90분 인큐베이션 후, 세포를 세척하고, 접합체를 재적용하였다. 이어서, 단층을 카복시메틸셀룰로스로 덮어서 바이러스 확산을 최소화하고, 2일 동안 인큐베이션시켰다. 2일의 배양 후 세포를 PBS로 세척하고, 10% 폼알린으로 고정시켰다. 고정 후, MDCK 단층을 Triton X-100으로 투과시키고, 마우스 mAb를 인플루엔자 핵단백질에 대해서 면역염색시켰다. 단층은 적색이었고, 웰당 염색된 면적을 계산하여 EC50/100 값을 결정하였다.
연구 결과를 표 42에 요약하였고, 유행 가능성을 갖는 고병원성 균주에 대한 접합체 6 및 접합체 21의 효력을 나타내었다. 중요한 것은, 두 접합체 모두는 4개의 H5N1 및 1개의 H7N9 단리물에 대해서 15nM 또는 그 미만의 EC100 값을 생성시켰다. 이에 반해서, 오셀타미비어는 1개의 단리물(A/Vietnam/1194/2004)에 대해서만 대략 15nM의 EC100을 가졌는데, 값은 다른 고 경로 균주에 대해서 125 내지 1000nM 초과의 범위였다. 이러한 결과는, 고독성 인플루엔자에 의해서 유발되는 유행을 치료할 접합체 6 및 접합체 21의 가능성이 오셀타미비어의 가능성에 비해서 우수하다는 것을 시사한다.
Figure pct00703
실시예 94. 세포변성 효과(CPE) 검정에서 상이한 감염 다중도(MOI)의 인플루엔자 A(H1N1)에 대한 접합체 6 및 접합체 21의 활성
MDCK 세포를 96웰 플레이트(TC-처리됨) 내에서 MEM 배지에 4x104개 세포/웰로 시딩하고, 37℃, 5% CO2에서 18 내지 24시간 동안 인큐베이션시켰다. 1.93 내지 10000nM의 용량 범위의 시험품(자나미비어, 오셀타미비어, 발록사비어, 접합체 6, 및 접합체 21)을 0.001 내지 1의 바이러스:세포의 감염 다중도(MOI)로 인플루엔자 A/WSN/1933과 함께 1시간 동안 실온(RT)에서 인큐베이션시켰다. 1시간 후, 사전 인큐베이션된 바이러스 및 시험품을 MDCK 세포의 90 내지 100% 컨플루언트 층에 첨가하고, 1시간 동안 RT에서 인큐베이션시켰다.
1시간 후, L-글루타민 및 페니실린/스트렙토마이신이 보충된 MEM 배지를 웰에 첨가하였다. 감염된 세포를 37℃, 5% CO2에서 72시간 동안 인큐베이션시켰다. 세포를 크리스탈 바이올렛으로 고정 및 염색한 후 CPE를 결정하였다. EC50을 Graphpad Prism 6 소프트웨어를 사용하여 비선형 회귀 분석으로 계산하였다. 표 43에 제공된 CPE 검정의 결과는 접합체 6 및 접합체 21이 시험관내, 특히 높은 MOI에서 표준 치료제(standard of care agent)를 능가한다는 것을 나타낸다.
Figure pct00704
실시예 95. 치사 중증 조합 면역결핍 마우스 모델에서 인플루엔자 A(H1N1)에 대한 접합체 6의 효능
접합체를 수컷 BALB/c 중증 조합 면역결핍(SCID) 마우스(스톡 번호 001803; 잭슨 래보러토리즈사, 6 내지 8주령)에서 치명적인 인플루엔자 A 감염에 대해서 평가하였다. 시험감염 바이러스(A/Puerto Rico/08/1934)는 마우스에서 치명적인 감염을 초래할 수 있는 마우스-적응성 단리물이다. 실험은 각각 5마리 마우스의 5개 군으로 구성되었다. 0일에, 케타민 및 자일라진(각각 150 및 10㎎/㎏)의 혼합물로 약하게 마취시킨 후, 모든 마우스를 30㎕(마우스당 대략 1E3)의 부피의 비강내 접종으로 3x LD95에서 바이러스로 시험감염시켰다.
모든 군은 바이러스 시험감염 2시간 후, 접합체 6, 시험품, 비히클(PBS) 또는 Fc 단독 대조군(hIgG1 Fc)의 단일 IV 처리를 제공받았다. 연구를 접합체 6의 3개의 상이한 용량 농도에서 평가하였다(0.3, 1.0 또는 3.0㎎/㎏). 마우스를 5주 동안 모니터링하고, 20%를 초과하는 체중 손실을 갖거나 빈사 상태로 발견된 동물을 사망으로 점수 매겼다. 체중을 또한 기록하여 동물의 일반적인 건강을 모니터링하였다.
모든 마우스를 비히클 또는 Fc 단독 대조군으로 처리하였고, 2주에 사망하였다. 이에 반해서, 접합체 6을 제공받은 마우스는 연구 기간 동안 1 또는 3㎎/㎏의 단일 IV 용량을 제공받은 후 완전히 보호되었다(도 56, 표 44). 접합체 6의 용량이 0.3㎎/㎏으로 낮아지는 경우, 생존은 연구 마지막에 20%까지 낮아졌다. 0.3㎎/㎏ 용량은 3주 동안 완전히 보호되었다. 이러한 중증 면역결핍 모델에서 접합체 6의 효력은 체중 데이터에 의해서 추가로 뒷받침되었다(도 57, 표 45). 1 또는 3㎎/㎏ 용량 농도의 접합체 6을 제공받은 군은, 전체 연구 과정에 걸쳐서 3% 미만의 일시적인 체중 손실을 초과하지 않았다. 추가로, 연구 마지막에 두 용량 군 모두는 체중의 실제 증가를 나타내었다(각각 7.5 및 2.2%). 가장 낮은 농도의 접합체 6(0.3㎎/㎏)이 투여된 군은 연구 첫 3주 동안 4% 미만의 일시적인 체중 감소를 나타내었고, 그 다음 4주차에 감염 징후를 보였고, 결국 5마리 중 4마리의 경우 사망하였다.
총괄적으로 이러한 데이터는, 치명적으로 시험감염된 마우스를 1㎎/㎏의 낮은 단일 IV 용량의 접합체로 보호함으로써 접합체 6의 효력을 입증하였다. 추가로, 이러한 보호는 연구 5주 기간에 걸쳐서 연장되어 길게 지속되었다. 이는 인플루엔자 감염을 제거하는데 필수적인 T & B 면역 세포가 완전히 결여된 마우스에서 면역결핍의 극한 모델에서 달성되었다. 이러한 데이터는 면역 적격 및 면역 결핍 환자 집단 둘 다에서 접합체 6의 사용을 뒷받침한다.
Figure pct00705
Figure pct00706
실시예 96. 폐에서 접합체 6 용량-의존적 바이러스 청소
3x102개 PFU/마우스(3x LD95)의 마우스-적응성 인플루엔자 A/Puerto Rico/8/1934(H1N1)가 비강내로 시험감염된 6 내지 8주량의 암컷 BALB/c 마우스(찰스 리버사)에서 효능 연구를 수행하였다. 접합체 6 또는 인간 IgG1 Fc 대조군을 시험감염 2시간 후 단일 정맥내(IV) 용량으로 0.1 내지 3㎎/㎏으로 투여하였다. 오셀타미비어를 경구로 감염 후 2시간에서 시작하여 4일 동안 5 또는 15㎎/㎏으로 매일 2회 투여하였다. 체중(BW)을 4일 동안 기록하였다. 감염 후 4일에, 마우스를 CO2로 희생시키고, 양 폐엽(lung lobe)을 수거하였다. 폐를 MagNA Lyser(로슈사(Roche))를 사용하여 1mm 실리카 비드로 1㎖ PBS 중에서 균질화시켰다. 6,000rpm에서 60초 동안 균질화를 수행하고, 실시 사이에 얼음에서 5분 동안 급랭시켰다. 폐 균질화 후, 튜브를 10분 동안 600×g에서 원심분리시키고, 상청액을 새로운 튜브로 옮겼다.
폐의 바이러스 부담(플라크 형성 단위(Plaque Forming Unit: PFU)로 측정)을 결정하기 위해서, 폐 균질액의 상청액을 10-1 내지 10-6 범위의 감염 완충액에 희석시켰다. 100㎕의 바이러스 희석액을 24 웰 플레이트 내의 MDCK 세포의 컨플루언트 단일층에 첨가하고, 15분마다 흔들면서 실온에서 1시간 동안 인큐베이션시켰다. 바이러스를 제거한 후 Avicel을 함유한 액체 오버레이 배지를 MDCK 세포에 첨가하였다. 세포를 37℃, 5% CO2에서 40시간 동안 인큐베이션시켰다. 인큐베이션 후, 배지를 제거하고, 세포를 크리스탈 바이올렛으로 염색하여 플라크를 계수하였다. PFU를 폐의 중량에 대해서 계산하였다(PFU/g 폐).
본 연구의 결과는, 낮은 용량의 접합체 6이 바이러스 부담을 오셀타미비어(TAMIFLU®)보다 훨씬 더 양호하게 신속하게 낮춘다는 것을 입증한다(도 58, 표 46). 이러한 관찰은 임상적으로 유의한데, 그 이유는 중증 인플루엔자 감염이 초기 상기도 감염에서 폐로 이동하는 바이러스에 의해서 유발되기 때문이다.
Figure pct00707
실시예 97. 폐에서 염증성 사이토카인의 접합체 6 용량-의존적 감소
3x102개 PFU/마우스(3x LD95)의 마우스-적응성 인플루엔자 A/Puerto Rico/8/1934(H1N1)가 비강내로 시험감염된 6 내지 8주량의 암컷 BALB/c 마우스(찰스 리버사)에서 효능 연구를 수행하였다. 접합체 6 또는 인간 IgG1 Fc 대조군을 시험감염 2시간 후 단일 정맥내(IV) 용량으로 0.1 내지 3㎎/㎏으로 투여하였다. 오셀타미비어를 경구로 감염 후 2시간에서 시작하여 4일 동안 5 또는 15㎎/㎏으로 매일 2회 투여하였다. 체중(BW)을 4일 동안 기록하였다. 감염 후 4일에, 마우스를 CO2로 희생시키고, 양 폐엽을 수거하였다. 폐를 MagNA Lyser(로슈사(Roche))를 사용하여 1mm 실리카 비드로 1㎖ PBS 중에서 균질화시켰다. 6,000rpm에서 60초 동안 균질화를 수행하고, 실시 사이에 얼음에서 5분 동안 급랭시켰다. 폐 균질화 후, 튜브를 10분 동안 600×g에서 원심분리시키고, 상청액을 새로운 튜브로 옮겼다.
사이토카인 분석을 위해서, 폐 균질액의 상청액을 96 웰 플레이트에서 2배로 연속 희석시켰다. INF-γ, TNF-α, IL-6, MIP-1α 및 MCP-1에 대한 사이토카인 수준을 제조사(알앤디 시스템즈사(R&D Systems))의 지침에 따라서 ELISA로 결정하였다.
중증 인플루엔자로부터의 이환율 및 사망률은 폐에서 전염증성 사이토카인의 바이러스 유도된 유입에 의해서 궁극적으로 초래한다. 인플루엔자를 치료하기 위해서 Fc-접합체를 사용하는 것의 잠재적인 문제 중 하나는 Fc 단편이 사이토카인 유도 염증을 악화시킬 것인지의 여부일 것이다. H1N1 치사 감염 모델의 결과는 그 반대를 나타낸다: 감염된 폐 조직에서 전염증성 사이토카인(예를 들어, TNFα 및 IL-6)의 접합체 6 용량 의존적 감소(도 59, 표 47).
Figure pct00708
실시예 98. 시험관내 접합체 6 혈장 샘플 분석 CD-1 및 BALB/c 중증 조합 면역 결핍 마우스에서 PK의 비교.
혈장 샘플에서 접합체 6을 뉴라미니다제 캡처 검출 ELISA로 정량하였다. 간략하면, 분자를 뉴라미니다제 코팅 플레이트에서 캡처한 다음, HRP 접합된 항-인간 IgG-Fc 항체를 사용하여 검출하였다. 단백질 농도를 접합체 6 표준 곡선의 4PL 비선형 회귀를 사용하여 GraphPad Prism에서 계산하였다. 자세한 방법 설명을 하기에 제공한다.
Nunc Maxisorp 96-웰 플레이트(카탈로그 번호 12-565-136, 써모피셔사)를 1X KPL 코팅 완충액(5150-0041, 세라케어사) 중의 A/California/04/2009로부터의 0.1U/웰 뉴라미니다제(H1N1)(11058-VNAHC, 시노 바이올로지컬사)로 코팅하였다. 플레이트를 실온에서 1시간 동안 오비탈 플레이트 진탕기(500rpm)에서 인큐베이션시켰다. 혈장 샘플의 연속 희석액을 플레이팅하고 실온에서 2시간 동안 인큐베이션시켰다(샘플 희석제: PBS 0.025% Tween 20 중의 0.5% BSA + 미경험 마우스 혈장 최종 농도 1:2,500). 0.230 내지 500ng/㎖ 범위의 접합체 6 표준 곡선을 각각의 플레이트에서 이중으로 실시하였다. 2시간 인큐베이션 후, 플레이트를 0.05% Tween20이 함유된 300uL PBS로 5x 세척하였다. 이어서 플레이트 상의 뉴라미니다제에 결합된 접합체를 샘플 희석제에서 1:1,000으로 희석된 HRP 접합된 항-인간 IgG Fc F(ab')2 (709-036-098, 잭슨사)로 1시간 동안 실온에서 프로빙하였다. 이어서 플레이트를 0.05% Tween20이 포함된 300㎕ PBS에서 8회 세척하고. TMB 기질로 7 내지 8분 동안 현상하였다. 반응을 1N H2SO4로 중단시켰다. 흡광도를 450nm에서 판독하였다. 혈장 샘플의 접합체 6을 표준 곡선의 비선형 회귀 분석(시그모이드, 4PL 분석) 후 Graphpad Prism 버전 6을 사용하여 내삽하였다.
PK 프로파일, CD-1 대 BALB/c SCID 마우스
SCID 및 CD-1(면역 적격) 마우스에게 5㎎/㎏으로 정맥내로 투여된 접합체 6은 유사한 PK 프로파일(도 60)을 나타내었다. 샘플링된 시점에서 농도는 대등하였다. 2단계 PK 프로파일은 24시간 분포 단계, 그 다음 얕은 제거 단계를 포함한다. 접합체 6 혈장 수준은 연구 1주 기간에 걸쳐서 Cmax 수준에 비해서 높게(약 10㎍/㎖) 유지되었다.
실시예 99. 프로파길 다이아민 중심 링커의 합성
Figure pct00709
단계 a.
Figure pct00710
0℃에서 DCM(100㎖) 중의 2-(2-Boc-아미노에톡시)에탄올(16.0g, 78.0m㏖) 및 CBr4(31.0g, 93.5m㏖)의 용액을 PPh3(24.5g, 93.5m㏖)로 15분에 걸쳐서 서서히 처리하였다(발열). 첨가 기간 동안, 내부 온도를 30℃로 유지시켰다. PPh3의 첨가 후, 반응을 밤새 실온에서 교반하였다. 조 반응물을 오일로 농축시키고, 이어서 10% 에틸 아세테이트/헥산에서 80% 에틸 아세테이트/헥산으로 용리시키는 정상 크로마토그래피로 정제시켰다. 수집 튜브 내부에 오일 소적을 함유하는 분획을 합하고, 무색 오일로 농축시켰다. 수율 18.1g, 86%.
단계 b.
Figure pct00711
DMF(20㎖) 중의 단계-a 생성물(10g, 37.3m㏖), 벤질아민(1.60g, 14.9m㏖), 및 K2CO3(6.19g, 44.8m㏖)의 용액을 오일욕에서 75℃로 8시간 동안 가열시켰다. 혼합물을 여과시키고, 농축시키고, RPLC(5% ACN/물에서 100% ACN)로 정제시켰다. 수율 6.8g, 95%.
단계 c.
Figure pct00712
CHCl3/EtOH(1:20, 100㎖) 중의 단계-b 생성물(5.35g, 8.98m㏖)의 용액에 20% Pd(OH)2/C(1.26g, 1/80m㏖)를 첨가하였다. 반응을 밤새 수소 풍선 하에서 주변 온도에서 교반하였다. 반응 혼합물을 셀라이트 패드로 여과시켰다. 용매를 제거하고, 정제하지 않고 생성물로 후속 단계를 수행하였다.
단계 d.
Figure pct00713
단계-c 생성물을 20㎖의 DMF/다이클로로메탄(1:5)에 재용해시켰다. 이러한 유리 아민 용액에 프로파길 PEG4 산(2.36g, 8.98m㏖), EDCI(2.57g, 13.5m㏖), HOAt (1.83g, 13.5m㏖) 및 휴닉 염기(Hunig's base)(3.13㎖, 18.0m㏖)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 4시간 동안 교반하고, 이어서 농축시키고, RPLC(10% ACN/물에서 60% ACN/물)로 정제시켰다. 2단계에 걸쳐서 수율 4.00g, 70%. LCMS로 관찰된 이온: [M - Boc + H]+ = 534.2, [M + H]+ = 634.2.
단계 e.
Figure pct00714
단계-d 생성물(4.00g, 6.31m㏖)을 2시간 동안 다이옥산(30㎖) 중의 4N HCl로 처리하였다. 추가의 HCl 및 다이옥산을 회전식 증발로 제거하고, 나머지를 추가로 고압 하에서 건조시켜 Int-10을 2HCl 염으로서 제공하였다. 수율 3.15g, 99%. LCMS로 관찰된 이온: [M + H]+ = 434.2.
실시예 100. Int-7a (C7-C7 이성질체)의 합성
Figure pct00715
단계 a.
Figure pct00716
메틸 5-아세트아마이도-7,8,9-O-트라이아세틸-2,6-언하이드로-4-아지도-3,4,5-트라이데옥시-D-글리세로-D-갈락토-논-2-엔오네이트(30g, 65.7m㏖)를 메탄올(100㎖)에 용해시키고, 린들러 촉매(15g)와 배합하였다. 생성된 혼합물을 수소로 플러싱시키고, 30분마다 수소로 헤드스페이스에 수소를 플러싱시키면서 5시간 동안 교반하였다. HPLC로 결정하여 반응이 완결된 후, 촉매를 셀라이트로 여과시켰다. 여과액을 다음 단계에서 사용하였다.
이전 단계로부터의 조 아민(18.9g, 43.8m㏖)을 메탄올(100㎖) 중의 N,N'-비스-boc-1-구아닐피라졸(14.3g, 46.0m㏖), 및 DIEA(9.9㎖, 57.0m㏖)로 처리하였다. LCMS로 결정하여 모든 출발 물질이 소모될 때까지(약 30분), 생성된 용액을 실온에서 교반하였다. 용액을 발포체로 농축시키고, 고압 하에서 밤새 저장하고, 이어서 다음 단계에서 추가로 정제하지 않고 사용하였다.
이전 단계로부터의 조 트라이-아세테이트(43.8m㏖)를 100㎖ 무수 메탄올에 용해시키고, 이어서 실온에서 메탄올 중의소듐 메톡사이드(1.9㎖, 메탄올 중의 25% 용액, 8.76m㏖)로 처리하였다. 반응 진행을 LCMS로 모니터링하였고, 10분 후에 완결되었다. 반응을 pH 약 7의 1N HCl을 사용하여 반응정지시켰다. 생성된 용액을 농축시키고, 10%에서 100% 아세토나이트릴 및 물로 용리시키는 Isco COMBIFLASH® 액체 크로마토그래프를 사용하여 역상 액체 크로마토그래피(RPLC)로 정제시켰다. TFA 개질제를 본 정제에서 사용하지 않았다. 생성물의 수율 15.6g, 65%.
단계 b.
Figure pct00717
단계-a 생성물(5.47g, 10m㏖) 및 DMAP(1.222g, 10m㏖)의 혼합물을 무수 THF(30㎖)에 용해시켰다. 빙수욕에서 냉각시킨 후, 용액을 서서히 1,1'-카보닐다이이미다졸(2.6g, 16m㏖)로 처리하고, 이어서 30분 동안 0℃에서 교반하고, 그 다음 60℃에서 2시간 동안 가열시켰다. 이어서 그것을 실온까지 냉각시키고, 물(50㎖) 및 EtOAc/헥산(1:1, 100㎖)으로 추출하였다. 유기층을 물(50㎖ x 3)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 회전식 증발로 농축시켰다. 백색 발포체 생성물을 고압 하에서 추가로 건조시키고, 추가로 정제하지 않고 후속 단계를 수행하였다. LCMS로 관찰된 이온: [M + H]+ = 573.2.
단계 c.
Figure pct00718
단계-b 생성물을 함유하는 반응 플라스크를 질소로 플러싱시키고, 무수 DCM(50㎖)에 용해시키고, 이어서 빙수욕에서 냉각시켰다. 냉각된 용액에 DMAP(4.89g, 40m㏖)를 첨가하고, 그 다음 4-나이트로페닐클로로폼에이트(6.05g, 30m㏖)를 20분에 걸쳐서 나누어 첨가하였다. 용액을 0℃에서 교반하고, 이어서 실온까지 1시간 동안 가온시켰다. LCMS는, 출발 물질이 1시간의 추가적인 교반이 필요함을 나타내며, DMAP(1.22g, 10m㏖) 및 4-나이트로페닐클로로폼에이트(1g, 5m㏖)를 첨가하였다. 반응을 4시간 동안 계속하고, 이어서 2개의 실라카겔 칼럼(220g, 20% EtOAc 및 헥산으로 사전 습윤)으로 정제키고, 20%에서 80% EtOAc 및 헥산으로 용리시켰다. 2단계에 대해서 수율 4.42g, 59.9%. LCMS로 관찰된 이온: [M + H]+ = 738.2
단계 d.
Figure pct00719
무수 DCM(3㎖) 중의 단계-c 생성물(3.2 g. 4.34m㏖)의 용액에 30분에 걸쳐서 무수 DMF(5㎖) 중의 프로파길 다이아민 중심 링커(1.26g, 2.5m㏖, 실시예 99에 기재됨) 및 DIPEA(1.68g, 13m㏖)의 혼합물을 나누어 첨가하였다. 반응을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 이어서 그것을 농축시키고, RPLC(30%에서 90% 아세토나이트릴 및 물, TFA 개질제 없음)로 정제시켰다. LCMS로 관찰된 이온: [(M + 2H)/2]+ = 815.8, [(M - Boc + 2H)/2]+ = 765.8, [(M - 2Boc + 2H)/2]+ = 716. 수율 3.33g, 94.2%.
단계 e.
Figure pct00720
단계-d 생성물(3.33g, 2.04m㏖)을 DCM(5㎖) 및 TFA (5㎖)에 용해시키고, 이어서 35℃에서 약 6시간 동안 교반하였다. 반응을 LCMS로 모니터링하였다. 완결된 경우, 용액을 농축시키고, RPLC(5에서 30% 아세토나이트릴 및 물, TFA 없음)로 정제시켰다. LCMS로 관찰된 이온: [(M + 2H)/2]+ = 615.8, [(M + 3H)/3]+ = 411. 수율 2.29g, 91.3%.
단계 f.
Figure pct00721
단계-e 생성물(61.5㎎, 0.05m㏖)을 MeOH/물(1:1, 0.6㎖)에 용해시켰다. 용액을 -6℃(염/빙욕)까지 냉각시킨 후, 1.0M LiOH(0.3㎖, 0.3m㏖)를 적가하고, 반응을 30분 동안 교반하였다. 이어서 그것을 다이옥산 용액 중의 4N HCl(75 ㎕)로 pH 약 7.0으로 반응정지시키고, 정제용 HPLC(Isco ACCQ prep, Luna 5μm C18(2) 100Å LC 칼럼 100mm x 30mm; 구배: 2분 동안 0% 아세토나이트릴/물, 이어서 12분에 걸쳐서 0%에서 15% 아세토나이트릴/물, 이어서 10분 동안 15% 아세토나이트릴의 등용매, 0.1% TFA 함유)로 직접 정제시켰다. 수율 45㎎, 65.3%. LCMS로 관찰된 이온: [(M + 2H)/2]+ = 575.8, [(M + 3H)/3]+ = 384.2. 분석용 체류 시간: 6.013분. 조건: Phenomemex Gemini HPLC 칼럼, 3μm WX-C18 110 Å, 100mm x 3mm, 5에서95% 아세토나이트릴 및 물 구배로 25분에 걸쳐서 용리, 0.1% TFA 함유.
실시예 101. Int-7b (C7-C9 이성질체)의 합성
Figure pct00722
반응을 0℃에서 수행하고, HPLC(체류 시간: 6.112분. 조건: 실시예 100 참고, Int-7a의 합성 및 C7-C9 이성질체가 우세한 경우(약 3시간) 중단)로 모니터링한 것을 제외하고는, Int-7a(C7-C7 이성질체, 실시예 100)와 유사하게 C7-C9 헤테로이량체(Int-7b)를 제조하였다. 이러한 이성질체를 Int-7a를 단리시키는데 사용되는 동일한 조건을 사용하여 단리시킨다. LCMS로 관찰된 이온: [(M + 2H)/2]+ = 575.8, [(M + 3H)/3]+ = 384.2.
실시예 102. Int-7c(C9-C9 이성질체)의 합성
Figure pct00723
반응을 0℃에서 수행하고, HPLC(체류 시간: 6.232분. 조건: 실시예 100 참고, Int-7a의 합성 및 C9-C9 이성질체가 우세한 경우(약 6시간) 중단)로 모니터링한 것을 제외하고는, Int-7a(C7-C7 이성질체, 실시예 100)와 유사하게 Int-7c (C9-C9 이성질체)를 제조하였다. 이러한 이성질체를 Int-7a를 단리시키는데 사용되는 동일한 조건을 사용하여 단리시킨다. LCMS로 관찰된 이온: [(M + 2H)/2]+ = 575.8, [(M + 3H)/3]+ = 384.2.
실시예 103. Int-7(아세토나이드 경로)의 합성
Figure pct00724
단계 a.
Figure pct00725
메틸 5-아세트아마이도-7,8,9-O-트라이아세틸-2,6-언하이드로-4-아지도-3,4,5-트라이데옥시-D-글리세로-D-갈락토-논-2-엔오네이트(10.0g, 22m㏖)를 60㎖ 무수 메탄올에 용해시키고, 이어서 빙수욕에서 냉각시키면서 메탄올 중의 20㎖ 소듐 메톡사이드(메탄올 중의 0.5M, 10m㏖)로 처리하였다. 반응 진행을 LCMS로 모니터링하였고, 2시간 후에 완결되었다. 이어서 Amberlite IRN-77 이온 교환 수지를 사용함으로써 반응 용액의 pH를 5 내지 6의 값으로 조정하였다. 혼합물을 여과시켜 수지를 제거하고, 진공 하에서 증발 건조시켰다. 생성된 오일을 추가로 정제하지 않고 다음 단계에 사용하였다. LCMS로 발견된 이온(들): M+H=331.1.
단계 b.
Figure pct00726
70㎖의 아세톤 중의 이전 단계로부터의 생성물의 용액에 30㎖의 2,2-다이메톡시프로판 및 p-톨루엔설폰산 1수화물(400㎎, 2.0m㏖)을 첨가하고, 생성된 용액을 실온에서 밤새 교반하였다. 이 시간 마지막에, 중탄산나트륨(170㎎, 2.0m㏖)을 첨가하고, 혼합물을 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 정제하지 않고 다음 단계에 사용하였다. LCMS로 발견된 이온(들): M+H=371.2.
단계 c.
Figure pct00727
60㎖의 메탄올 중의 이전 단계로부터의 물질의 용액에 5.0g의 린들러 촉매를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 수소로 30분 마다 플러싱시키고, 5시간 동안 교반하였다. HPLC로 결정하여 반응이 완결된 후, 촉매를 셀라이트로 여과시켰다. 여과액을 농축시키고, 정제하지 않고 다음 단계에 사용하였다.
60㎖ THF 중의 이전 단계로부터의 조 생성물을 N,N'-비스-boc-1-구아닐피라졸(9.3g, 30.0m㏖), 및 DIEA(9.9㎖, 57.0m㏖)로 처리하였다. LCMS로 결정하여 모든 출발 물질이 소모될 때까지(4시간), 생성된 용액을 실온에서 교반하였다. 용액을 농축시키고, 20%에서 80% 에틸 아세테이트/다이클로로메탄으로 용리시키는 플래시 크로마토그래피로 정제시켰다. 4단계에 대해서 수율 8.8g, 59.0%. LCMS로 발견된 이온(들): M+H 587.3.
단계 d.
Figure pct00728
이전 단계로부터의 생성물(6.5g, 11m㏖)을 함유하는 반응 플라스크를 질소로 진공 플러싱시키고, 무수 다이클로로메탄(100㎖)에 용해시켰다. 용액을 빙수욕에서 냉각시키고, DMAP(4.89g, 40m㏖)를 첨가하고, 교반하여 용시키고, 이어서 0℃ 내지 실온에서 1시간 동안 교반하면서 4-나이트로페닐클로로폼에이트(5.58g, 28m㏖)를 나누어 첨가하였다. LCMS는, 출발 물질이 1시간의 추가적인 교반이 필요함을 나타내며, DMAP(1.22g, 10m㏖) 및 4-나이트로페닐클로로폼에이트(1.0g, 5m㏖)를 첨가하였다. 반응을 4시간 더 계속하고, 이어서 농축시키고, 20%에서 80% 에틸 아세테이트/다이클로로메탄으로 용리시키는 플래시 크로마토그래피로 정제시켰다. 수율 5.1g, 59.9%. LCMS로 관찰된 이온: [M + H]+ = 752.2
단계 e.
Figure pct00729
무수 다이클로로메탄(20㎖) 중의 이전 단계로부터의 나이트로페닐 카보네이트(1.8 g. 2.3m㏖)의 용액에 무수 DMF(20㎖) 중의 중심 링커(0.51g, 1.0m㏖, 30분에 걸쳐서 나누어 첨가함) 및 DIPEA(1.4㎖, 10m㏖)의 혼합물을 첨가하였다. 반응을 실온에서 밤새 교반하고, 이어서 농축시키고, 0% 내지 10% 메탄올/다이클로로메탄으로 용리시키는 플래시 크로마토그래피로 정제시켰다. 수율 1.35g, 80%. LCMS로 관찰된 이온: [(M + 2H)/2]+ = 830.4, [(M - Boc + 2H)/2]+ = 780.4, [(M - 2Boc + 2H)/2]+ = 730.4.
단계 f.
Figure pct00730
이전 단계로부터의 생성물(200㎎, 0.2m㏖)을 2㎖ MeOH 및 2㎖ THF에 용해시키고, 이어서 2㎖ 물에 용해된 수산화리튬(24㎎, 1m㏖)의 용액으로 처리하였다. 반응을 10분 동안 실온에서 교반하였고, 이 때 HPLC가 반응이 완결되었음을 나타내었다. Amberlite IRN-77 이온 교환 수지를 사용함으로써 반응 용액의 pH를 5 내지 6의 값으로 조정하고, 여과하여 수지를 제거하였다. 조 생성물을 진공 하에서 증발 건조시키고, 정제하지 않고 다음 단계에 사용하였다. LCMS로 관찰된 이온(들): [(M + 2H)/2]+ = 815.4, [(M - Boc + 2H)/2]+ = 765.4, [(M - 2Boc + 2H)/2]+ = 715.4.
단계 g.
Figure pct00731
단계 g로부터의 생성물(400㎎, 0.25m㏖)을 5㎖ 다이클로로메탄 및 5㎖ TFA에 용해시키고, 생성된 반응 용액을 실온에서 교반하였다. 반응의 진행을 LCMS로 모니터링하였다. 반응이 완결된 후(6시간), 용액을 제거하여 건조시키고, 이어서 4㎖ 물 및 4㎖ 아세토나이트릴에 용해시켰다. 생성된 용액을 또 다른 2시간 동안 실온에서 교반하였고, 이 때 LCMS는 아세토나이드 보호기의 완전한 탈보호를 나타내었다. 이 혼합물을 농축시키고, 개질제로서 0.1% TFA를 함유하는 5%에서 40% 아세토나이트릴/물로 용리시키는 Isco COMBIFLASH® 액체 크로마토그래프를 사용하여 역상 액체 크로마토그래피(RPLC)로 정제시켰다. 수율 270㎎, 68.0%. LCMS로 관찰된 이온(들): [(M + 2H)/2]+ = 575.8, [(M + 3H)/3]+ = 384.2.
실시예 104. Int-7a, Int-7b, 및 Int-7c에 대한 NMR 결과
Int-7a의 NMR
Figure pct00732
1HNMR (500 MHz, 메탄올-d 4) δ 5.91-5.89 (m, 2H), 5.00-4.96 (m, 2H), 4.58-4.53 (m, 2H),4.42-4.37(m, 2H), 4.20 - 4.17 (m, 6H), 4.02-3.97 (m, 2H), 3.78 - 3.49 (m, 28H), 3.29-3.18 (m, 4H), 2.86 (t, J=2.6 Hz, 1H), 2.85-2.72 (m, 2H), 1.96 (s, 3H), 1.95 (s, 3H).
13CNMR (125 MHz, MeOD) δ 171.73, 170.80, 170.29, 161.95, 156.06, 155.08, 154.99, 144.07, 143.93, 116.41, 114.10, 106.03, 105.86, 77.71, 74.46, 73.22, 68.62, 68.54, 68.50, 68.38, 68.12, 68.00, 67.94, 67.67, 67.64, 67.53, 67.20, 66.96, 65.44, 61.53, 56.17, 49.74, 49.64, 47.37, 45.17, 39.16, 39.06, 31.73, 19.96, 19.92.
Int-7b의 NMR
Figure pct00733
1HNMR (500 MHz, 메탄올-d 4) δ 5.91-5.87 (m, 2H), 5.04-4.95 (m, 1H), 4.58-4.48 (m, 2H), 4.45-4.37 (m, 3H), 4.20 - 4.10 (m, 5H), 4.08 - 3.98 (m, 2H), 3.79-3.44 (m, 29H), 3.29 - 3.18 (m, 4H), 2.88-2.70 (m, 3H), 2.02 (s, 3H), 1.96-1.94 (m, 3H).
1HNMR (500 MHz, DMSO-d 6) δ: 8.28 (d, J=8.4 Hz, 2H, -NH), 7.98 (d, J=11.5 Hz, 2H, -NH), 7.78 (d, J=8.7 Hz, 2H, -NH), 7.60 (t, J=8.5 Hz, 2H, -NH), 7.20 (bs, 2H, -NH), 7.06 (bs, 2H, -NH), 5.69 (bs, 1H), 5.67 (d, J=2.4 Hz, 1H), 4.83 (dd, J=9.2, 2.2 Hz, 1H), 4.45 (dt, J=9, 2.5 Hz, 1H), 4.37 (d, J=2.2 Hz, 1H), 4.33-4.24 (m, 2H), 4.13 (d, J=2.5 Hz, 2H), 4.05-4.32 (m, 41H), 3.23 (m, 1H), 3.15-3.09 (m, 2H), 3.06-3.02 (m, 2H), 2.59 (t, J=6.7 Hz, 2H), 1.91 (s, 3H), 1.78 (s, 3H).
13CNMR (125 MHz, MeOD) δ:173.19, 172.98, 172.25, 171.75, 164.26, 163.82, 157.88, 157.55, 156.51, 146.09, 107.21, 106.93, 106.59, 79.22, 76.19, 75.92, 74.72, 74.68, 70.12, 70.08, 70.03, 69.99, 69.92, 69.88, 69.66, 69.48, 69.12, 69.01, 68.94, 68.73, 68.69, 68.50, 68.19, 67.08, 66.93, 66.79, 63.04, 57.68, 51.24, 51.15, 50.13, 48.87, 48.72, 46.72, 46.58, 46.23, 40.64, 40.41, 33.21, 21.49, 21.45, 21.40.
Int-7c의 NMR
Figure pct00734
1HNMR (500MHz, 메탄올-d 4) δ: 5.88 (d, J=2.6 Hz, 2H), 4.50 (dt, J=8.5, 2.7 Hz, 2H), 4.43 (ddd, J=9.7, 3.9, 1.5 Hz, 2H), 4.39 (dd, J=11.5, 2.4 Hz, 2H), 4.25 - 4.16 (m, 2H), 4.19 (d, J=2.4 Hz, 2H), 4.13 (dt, J=11.5, 5.9 Hz, 2H), 4.05 (m, 2H), 3.77 (t, J=6.2 Hz, 2H), 3.72 - 3.55 (m, 22H), 3.51 (m, 4H), 3.35 - 3.23 (m, 4H), 2.86 (t, J=2.4 Hz, 1H), 2.74 (t, J=6.2 Hz, 2H), 2.02 (s, 6H).
13CNMR (125 MHz, MeOD) δ:173.03, 163.76, 157.89, 157.54, 145.60, 107.21, 79.28, 76.29, 74.70, 70.11, 70.07, 70.03, 69.92, 69.70, 69.47, 68.96, 68.89, 68.72, 68.54, 68.19, 67.05, 66.75, 57.69, 50.09, 48.69, 48.08, 46.10, 40.44, 40.38, 33.23, 21.42.
실시예 105. Int-60의 합성
Figure pct00735
단계 a.
DMF(8.0㎖) 중의 미리 제조된 에터-자나미비어 산(1.00g, 1.586m㏖, 실시예 31), 2-아지도에틸아민 하이드로클로라이드(213㎎, 1.744m㏖) 및 DIPEA(1.105㎖, 6.343m㏖)의 0℃의 교반 용액에, HATU(615㎎, 1.618m㏖)를 첨가하였다. 온도를 주변 온도까지 상승시키고, 완결될 때까지 교반을 계속하였다. 모든 휘발성 물질을 진공 기술에 따라서 제거한다. 잔류물을 에틸 아세테이트에 취하고, 황산의 1M 수성 용액(1 x 50㎖), 이어서 중탄산나트륨의 포화 수성 용액(3×20㎖), 및 염수(1 x 50㎖)로 세척하였다. 생성된 유기층을 황산마그네슘으로 건조시키고, 여과시키고, 모든 휘발성 물질을 진공 기술에 따라서 제거하였다. 이러한 방식에서, 816㎎의 목적하는 중간체 아자이드를 높은 순도로 얻었고, 임의로 추가로 정제하지 않고 다음 단계에서 사용하였다. (LCMS로 관찰된 이온: [M + H]+ = 699.2). 에탄올(10㎖) 및 물(5㎖) 중의 기재된 조 물질(816㎎, 1.168m㏖), 다이프로파길아민(54㎎, 0.584m㏖), 트리스((1-벤질-4-트라이아졸릴)메틸)아민(31㎎, 0.058m㏖) 및 아스코르브산나트륨(58㎎, 0.292m㏖)의 교반 용액에 황산구리(10㎎, 0.061m㏖)를 첨가하였다. 완결 후, 구리 스캐빈저 SiliaMetS TAAcONa(300㎎, 로딩 0.45m㏖/g)를 첨가하고, 1시간 동안 교반을 계속하였다. 다이클로로메탄을 사용하여 혼합물을 여과시켰다. 여과액을 중탄산나트륨의 포화 용액으로 세척하였다. 수성층을 다이클로로메탄(3회)으로 추가로 세척하였다. 합한 유기을 황산마그네슘으로 건조시키고, 여과시키고, 농축시켰다. 잔류물을 0%에서 100% 헥산 및 에틸 아세테이트, 그 다음 0%에서 30% 다이클로로메탄으로 용리시키는 Isco COMBIFLASH® 액체 크로마토그래피를 사용하는 실리카겔 칼럼으로 정제시켰다. 수율 817㎎, 94% 수율. LCMS로 관찰된 이온: [(M + 2H)/2]+ = 745.8, [(M + 3H)/3]+ = 497.5.
단계 b.
DMF(7.0㎖) 중의 단계 a 생성물(817㎎, 0.548m㏖), 프로파길-PEG4-산(185㎎, 0.712m㏖) 및 DIPEA(286 uL, 1.644m㏖)의 0℃의 교반 용액에, HATU(212㎎, 0.544m㏖)를 첨가하였다. 온도를 주변 온도까지 상승시키고, 완결될 때까지 교반을 계속하였다. 모든 휘발성 물질을 진공 기술에 따라서 제거한다. 잔류물을 HPLC(0에서 90% 메탄올 및 물)로 정제시켰다. 수율 520㎎, 56%. LCMS로 관찰된 이온: [(M + 2H)/2]+ = 866.8, [(M + 3H)/3]+ = 578.4.
단계 c.
2-메틸-2-부텐(0.25㎖), 다이클로로메탄(4.0㎖) 및 TFA(2.0㎖) 중의 단계 b 화합물(520㎎, 0.300m㏖)의 교반 용액을 가스 분출이 중단될 때까지 교반하였다. 모든 휘발성 물질을 진공 기술에 따라서 제거한다. 잔류물을 HPLC(0에서 30% 메탄올 및 물, 개질제로서 0.1% TFA 함유)로 정제시켰다. 수율 221㎎, 47%. LCMS로 관찰된 이온: [(M + 2H)/2]+ = 666.8, [(M + 3H)/3]+ = 444.8.
단계 d.
물(3.0㎖) 중의 단계 c 생성물(221㎎, 0.142m㏖)의 0℃ 교반 용액에 수산화리튬(20㎎, 0.850m㏖)을 첨가하였다. 반응을 아세트산(120 uL)으로 반응정지시키고, 모든 휘발성 물질을 진공 기술에 따라서 제거하였다. 잔류물을 HPLC(0에서 20% 메탄올 및 물, 개질제로서 0.1% TFA 함유)로 정제시켰다. 수율 130㎎, 62%. LCMS로 관찰된 이온: [(M + 2H)/2]+ = 626.8, [(M + 3H)/3]+ = 418.2.
실시예 106. 접합체 29의 합성
pH 7.4 PBS×1 완충 용액 중의 아지도 작용화된 비글리코실화된 Fc(서열번호 35)의 용액(100㎎, 10㎖, 1.874μ㏖)을 알킨 유도체화된 소분자(17㎎, 0.0112m㏖; 실시예 105, Int-60), 황산구리(4㎎, 0.0225m㏖), 트리스(3-하이드록시프로필트라이아졸릴메틸)-아민(39㎎, 0.0900m㏖) 및 아스코르브산나트륨(7.4㎎, 0.375m㏖)의 pH 7.4 PBS×1 완충 용액(10.50㎖)을 함유하는 원심분리 튜브에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 밤새 약하게 진탕하였다. 그것을 단백질 A 칼럼 상의 친화도 크로마토그래피(실시예 10 참고)로 정제시키고, 그 다음 크기 배제 크로마토그래피로 정제시켰다. 정제된 최종 생성물의 Maldi TOF 분석은 56938Da(DAR=2.3)의 평균 질량을 제공하였다. 수율 49.9㎎, 49% 수율.
실시예 107. Int-65의 합성
Figure pct00736
단계 a.
테트라하이드로퓨란(30㎖) 중의 이미 제조된 에터-자나미비어 산(2.00g, 3.172m㏖, 실시예 31) 및 4-메틸몰폴린(0.628㎖, 5.709m㏖)의 0℃ 교반 용액에 아이소부틸 클로로폼에이트(0.617㎖, 4.7574m㏖)를 첨가하였다. 10분 후, 온도를 주변 온도까지 상승시키고, 교반을 20분 동안 계속하였다. 온도를 0℃로 다시 낮추고, 및 소듐 보로하이드라이드(360㎎, 9.515m㏖)를 한번에 첨가하고, 그 다음 5분에 걸쳐서 (10㎖)를 적가하였다. 완결 후, 반응을 아세트산(2.860㎖, 50m㏖)으로 반응정지시키고, 가스 분출이 멈출 때까지 교반을 계속하면서, 5분 후 온도를 주변 온도로 상승시켰다. 모든 휘발성 물질을 증발시키고, 잔류물을 다이클로로메탄에 현탁시키고, 여과시켰다. 여과액을 농축시키고, 잔류물을 개질제로서 3% 메탄올을 사용하여 20%에서 100% 헥산 및 에틸 아세테이트로 용리시키는 Isco COMBIFLASH® 액체 크로마토그래피를 사용하는 실리카 칼럼으로 정제시켰다. 수율 1.302g, 66% 수율. LCMS로 관찰된 이온: [(M + H)]+ = 617.2.
단계 b.
다이클로로메탄(15㎖) 중의 단계 a 생성물(1.25g, 2.027m㏖) 및 DIPEA(1.095㎖, 6.284m㏖)의 0℃ 교반 용액에, 메탄설포닐 클로라이드 (0.314m㏖, 4.054m㏖)를 첨가하였다. 완결 후, 반응을 물(15㎖)로 처리하였다. 층을 분리하고, 다이클로로메탄층을 염수, 이어서 황산마그네슘으로 건조시키고, 여과시켰다. 용액을 농축시키고, 잔류물을 DMF(10㎖)에 용해시키고, 온도를 50℃까지 상승시키면서 소듐 아자이드(264㎎, 4.054m㏖)를 첨가하였다. 18시간 후 완결이 관찰되었고, 모든 휘발성 물질을 진공 기술에 따라서 증발시켰다. 잔류물을 개질제로서 3% 메탄올을 사용하여 20%에서 100% 헥산 및 에틸 아세테이트로 용리시키는 Isco COMBIFLASH® 액체 크로마토그래피를 사용하는 실리카 칼럼으로 정제시켰다. 수율 767㎎, 59% 수율. LCMS로 관찰된 이온: [(M + H)]+ = 642.2.
단계 c.
에탄올(16㎖) 및 물(8㎖) 중의 단계 b 생성물(496㎎, 0.773m㏖), 다이프로파길아민(36㎎, 0.386m㏖), 트리스((1-벤질-4-트라이아졸릴)메틸)아민(41㎎, 0.077m㏖) 및 아스코르브산나트륨(115㎎, 0.580m㏖)의 교반 용액에, 황산구리(13㎎, 0.081m㏖)를 첨가하였다. 완결 후, 구리 스캐빈저 SiliaMetS TAAcONa(600㎎, 로딩 0.45m㏖/g)를 첨가하고, 1시간 동안 교반을 계속하였다. 다이클로로메탄을 사용하여 혼합물을 여과시켰다. 여과액을 중탄산나트륨의 포화 용액으로 세척하였다. 수성층을 다이클로로메탄(3회)으로 추가로 세척하였다. 합한 유기물을 황산마그네슘으로 건조시키고, 여과시키고, 모든 휘발성 물질을 진공 기술에 따라서 증발시켰다. DMF(10.0㎖) 중의 잔류물 프로파길-PEG4-산(151㎎, 0.580m㏖) ) 및 DIPEA(337 uL, 1.933m㏖)의 0℃ 교반 용액에, HATU(220㎎, 0.580m㏖)를 첨가하였다. 온도를 주변 온도까지 상승시키고, 완결될 때까지 교반을 계속하였다. 모든 휘발성 물질을 진공 기술에 따라서 제거한다. 잔류물을 HPLC(0에서 90% 메탄올 및 물)로 정제시켰다. 수율 457㎎, 73%. LCMS로 관찰된 이온: [(M + 2H)/2]+ = 809.8, [(M + 2H - Boc)/2]+ = 759.8.
단계 d.
2-메틸-2-부텐(0.25㎖), 다이클로로메탄(4.0㎖) 및 TFA(2.0㎖) 중의 단계 c 화합물(451㎎, 0.279m㏖)의 교반 용액을 가스 분출이 중단될 때까지 교반하였다. 모든 휘발성 물질을 진공 기술에 따라서 제거하였다. LCMS로 관찰된 이온: [(M + 2H)/2]+ = 609.8, [(M + 3H)/3]+ = 407.0. 테트라하이드로퓨란(6㎖) 및 물(6㎖) 중의 잔류물의 0℃ 교반 용액에, 수산화리튬(240㎎, 10.03m㏖)을 첨가하였다. 완결 후, 반응을 아세트산(0.638㎖, 11.14m㏖)으로 반응정지시키고, 모든 휘발성 물질을 진공 기술에 따라서 제거하였다. 잔류물을 HPLC(0에서 90% 메탄올 및 물, 개질제로서 0.1% TFA 함유)로 정제시켰다. 수율 209㎎, 67%. LCMS로 관찰된 이온: [(M + 2H)/2]+ = 569.8, [(M + 2H - Boc)/2]+ = 380.3.
실시예 108. 접합체 30의 합성
pH 7.4 PBS×1 완충 용액 중의 아지도 작용화된 비글리코실화된 Fc(실시예 7, 서열번호 35)(50㎎, 5㎖, 1.874μ㏖)의 용액을 알킨 유도체화된 소분자(8.7㎎, 0.0064m㏖, Int-65), 황산구리(2㎎, 0.013m㏖), 트리스(3-하이드록시프로필트라이아졸릴메틸)-아민(22㎎, 0.0508m㏖), 및 아스코르브산나트륨 (25㎎, 0.127m㏖)의 pH 7.4 PBS×1 완충 용액(9.50㎖)을 함유하는 원심분리 튜브에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 밤새 약하게 진탕하였다. 그것을 단백질 A 칼럼 상의 친화도 크로마토그래피(실시예 10 참고)로 정제시키고, 그 다음 크기 배제 크로마토그래피로 정제시켰다. 정제된 최종 생성물의 Maldi TOF 분석은 61548Da(DAR=2.4)의 평균 질량을 제공하였다. 수율 32.33㎎, 67% 수율.
실시예 109: p-나이트로페닐 카보네이트 자나미비어 중간체의 합성
Figure pct00737
단계 a.
Figure pct00738
트라이아세트옥시-아지도 자나미비어 중간체(10.0g, 22m㏖)를 60㎖ 무수 메탄올에 용해시키고, 이어서 빙수욕에서 냉각시키면서 메탄올 중의 20㎖ 소듐 메톡사이드(메탄올 중의 0.5M, 10m㏖)로 처리하였다. 반응 진행을 LCMS로 모니터링하였고, 2시간 후에 완결되었다. 이어서 Amberlite IRN-77 이온 교환 수지를 사용함으로써 반응 용액의 pH를 5 내지 6의 값으로 조정하였다. 혼합물을 여과시켜 수지를 제거하고, 진공 하에서 증발 건조시켰다. 생성된 오일을 추가로 정제하지 않고 다음 단계에 사용하였다. LCMS로 발견된 이온(들): M+H=331.1.
단계 b.
Figure pct00739
70㎖의 아세톤 중의 이전 단계로부터의 생성물의 용액에 30㎖의 2,2-다이메톡시프로판 및 p-톨루엔설폰산 1수화물(400㎎, 2.0m㏖)을 첨가하고, 생성된 용액을 실온에서 밤새 교반하였다. 이 시간 마지막에, 중탄산나트륨(170㎎, 2.0m㏖)을 첨가하고, 혼합물을 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 정제하지 않고 다음 단계에 사용하였다. LCMS로 발견된 이온(들): M+H=371.2.
단계 c 및 d.
Figure pct00740
60㎖의 메탄올 중의 이전 단계로부터의 물질의 용액에 5.0g의 린들러 촉매를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 수소로 30분 마다 플러싱시키고, 5시간 동안 교반하였다. HPLC로 결정하여 반응이 완결된 후, 촉매를 셀라이트로 여과시켰다. 여과액을 농축시키고, 정제하지 않고 다음 단계에 사용하였다.
60㎖ THF 중의 이전 단계로부터의 조 생성물을 N,N'-비스-boc-1-구아닐피라졸(9.3g, 30.0m㏖), 및 DIEA(9.9㎖, 57.0m㏖)로 처리하였다. LCMS로 결정하여 모든 출발 물질이 소모될 때까지(4시간), 생성된 용액을 실온에서 교반하였다. 용액을 농축시키고, 20%에서 80% 에틸 아세테이트/다이클로로메탄으로 용리시키는 플래시 크로마토그래피로 정제시켰다. 4단계에 대해서 수율 8.8g, 59.0%. LCMS로 발견된 이온(들): M+H 587.3.
단계 e.
Figure pct00741
이전 단계로부터의 생성물(6.5g, 11m㏖)을 함유하는 반응 플라스크를 질소로 진공 플러싱시키고, 무수 다이클로로메탄(100㎖)에 용해시켰다. 용액을 빙수욕에서 냉각시키고, DMAP(4.89g, 40m㏖)를 첨가하고, 교반하여 용시키고, 이어서 0℃ 내지 실온에서 1시간 동안 교반하면서 4-나이트로페닐클로로폼에이트(5.58g, 28m㏖)를 나누어 첨가하였다. LCMS는, 출발 물질이 1시간의 추가적인 교반이 필요함을 나타내며, DMAP(1.22g, 10m㏖) 및 4-나이트로페닐클로로폼에이트(1.0g, 5m㏖)를 첨가하였다. 반응을 4시간 더 계속하고, 이어서 농축시키고, 20%에서 80% 에틸 아세테이트/다이클로로메탄으로 용리시키는 플래시 크로마토그래피로 정제시켰다. 수율 5.1g, 59.9%. LCMS로 관찰된 이온: [M + H]+ = 752.2.
실시예 110. Int-71의 합성
Figure pct00742
단계 a.
Figure pct00743
무수 DCM(60㎖) 중의 2-(2-Boc-아미노에톡시) 에탄올(6.15g, 30m㏖)의 용액에 DIPEA(7.8g, 60m㏖) 및 DMAP(366.6㎎, 3m㏖)를 첨가하였다. 이어서 P-톨루엔설포닐 클로라이드(6.86g, 36m㏖)를 30분에 걸쳐서 나누어 첨가하였다. 생성된 혼합물을 3일 동안 교반, 그것을 회전식 증발로 농축시키고, RPLC(20%에서 70% 아세토나이트릴/물)로 정제시켰다. 수율 3.71g, 34.4%. LCMS로 관찰된 이온: [M -Boc + H]+ = 260.
단계 b.
Figure pct00744
무수 THF(10㎖) 중의 단계-a 생성물(2.1g, 5.83m㏖)의 용액에 탄산나트륨(1.24g, 11.7m㏖) 및 N-Boc-1,4-다이아미노부탄(1.32g, 7m㏖)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 60℃에서 1일 동안 가열시켰다. 이어서 염을 여과시키고, 여과액을 회전식 증발로 농축시켰다. 잔류물을 RPLC(100g, 5 to 50% 아세토나이트릴 및 물)로 정제시켰다. 수율 1.94g, 88.6%. LCMS로 관찰된 이온: [M + H]+ = 376.0.
단계 c.
Figure pct00745
무수 DMF(3㎖) 중의 프로파길 PEG-4 산(781㎎, 3m㏖) 및 HATU(1.14g, 3m㏖)의 용액에 DIPEA(390㎎, 3m㏖), 그 다음 무수 DMF(3㎖) 중의 용액 단계-b 생성물(940㎎, 2.5m㏖) 및 DIPEA(390㎎, 3m㏖)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 30분 동안 교반하고, 이어서 직접 RPLC(5%에서 80% 아세토나이트릴 및 물, 개질제로서 0.1% TFA 사용)로 정제시켰다. 수율 960.2㎎, 65.3%. LCMS로 관찰된 이온: [M + H]+ = 618.3, [M - Boc + H]+ = 518.3.
단계 d.
Figure pct00746
단계-c 생성물(960.2㎎, 1.63m㏖)을 무수 THF(6㎖)에 용해시켰다. 다이옥산(4㎖) 중의 4N HCl 용액을 첨가하고, 반응 혼합물을 밤새 교반하였다. 이어서 그것을 회전식 증발로 농축시켰다. 잔류물을 물(3 x 3㎖) 및 에틸 아세테이트(10㎖)로 추출하였다. 합한 수성층을 동결건조시켰다. 수율 760㎎, 95.1%. LCMS로 관찰된 이온: [M + H]+ = 418.0.
단계 e.
Figure pct00747
무수 DMF(3㎖) 중의 단계-d 생성물(556.2㎎, 1.13m㏖) 및 DIPEA(741㎎, 5.7m㏖)의 혼합물에 자나미비어의 p-나이트로페닐 카보네이트(1.67g, 2.26m㏖, 실시예 109에 기재됨)를 20분 걸쳐서 나누어 첨가하였다. 반응을 1시간 동안 교반하고, 이어서 RPLC(30%에서 90% 아세토나이트릴/물, 개질제로서 0.1% TFA 함유)로 직접 정제시켰다. 수율 1.35g, 74%. LCMS로 관찰된 이온: [(M + 2H)/2]+ = 807.9.
단계 f.
Figure pct00748
단계-e 생성물(1.35g, 0.836m㏖)을 TFA(5㎖)에 용해시켰다. 반응을 30℃에서 1시간 가열시키고, 그것을 RPLC(0%에서 35% 아세토나이트릴/물, 개질제로서 0.1% TFA 함유)로 직접 정제시켰다. 수율 1.00g, 82.9%. LCMS로 관찰된 이온: [(M + 2H)/2]+ = 607.8.
단계 g.
Figure pct00749
단계-f 생성물(1.00g, 0.693m㏖)을 MeOH(12㎖)에 용해시키고, 이어서 빙수욕에서 냉각시켰다. 이어서 그것을 물(9㎖) 중의 LiOH 일수화물(286㎎, 6.6m㏖)의 용액으로 처리하였다. 생성된 혼합물을 밤새 교반하고, 이어서 다이옥산 중의 4N HCl 용액(2㎖)으로 산성화시켰다. 유기 용매를 회전식 증발로 제거한 후, 잔류물을 정제용 HPLC(Isco ACCQ prep, Luna 5μm C18(2) 100 Å LC 칼럼 100mm x 30mm; 구배: 2분 동안 0% 아세토나이트릴/물, 이어서 12분에 걸쳐서 0%에서 15% 아세토나이트릴/물, 이어서 10분 동안 15% 아세토나이트릴의 등용매, 0.1% TFA 사용)로 직접 정제시켰다. 수율 275.9㎎, 29.2%. LCMS로 관찰된 이온: [(M + 2H)/2]+ = 567.8, [(M + 3H)/3]+ = 378.9.
실시예 111. 접합체 31의 합성
15-㎖ 멸균 원심분리 튜브에 아스코르브산나트륨(68.1㎎, 0.344m㏖), THPTA(14.9㎎, 0.0344m㏖), 알킨 유도체화된 소분자(17.5㎎, 0.00953m㏖, 실시예 110에 기재됨) 및 완충액 PBS 7.4(1㎖)를 넣었다. 보텍싱에 의한 교반으로 모두를 용해시킨 후, Peg 4 아지도 Fc(50㎎, 0.0008588m㏖, 실시예 7에 기재됨, 서열번호 18), 그 다음 PBS(0.5㎖) 중의 CuSO4(2.05㎎, 0.0129m㏖)의 용액을 첨가하였다. 혼합물을 20시간 동안 약하게 회전시키고, 이어서 단백질-A 칼럼에서의 친화도 크로마토그래피, 그 다음 크기 배제 크로마토그래피로 정제시켰다. 정제된 최종 생성물의 Maldi TOF 분석은 63586Da(DAR=3.8)의 평균 질량을 제공하였다. 수율 32.8㎎, 66% 수율.
실시예 112. Int-72의 합성
Figure pct00750
단계 a.
Figure pct00751
무수 DMF(7㎖) 중의 N-Boc-1,4-다이아미노부탄(1.56g, 8.28m㏖)의 용액에 탄산나트륨(742㎎, 7m㏖) 및 5-(Boc-아미노)-1-펜틸브로마이드(1.73g, 6.5m㏖)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 50℃에서 24시간 동안 가열시켰다. 이어서 염을 여과시키고, 여과액을 회전식 증발로 농축시켰다. 잔류물을 RPLC(5%에서 50% 아세토나이트릴/물, 개질제로서 0.1% TFA 함유)로 정제시켰다. 수율 2g, 63.2%. LCMS로 관찰된 이온: [M + H]+ = 374.4.
단계 b.
Figure pct00752
무수 DMF(6㎖) 중의 프로파길 PEG-4 산(1.3g, 5m㏖) 및 HATU(2.1g, 5.5m㏖)의 용액에 DIPEA(1.3g, 10m㏖)를 첨가하였다. 5분 후, 반응 혼합물을 단계-a 생성물(2g, 4.1m㏖)에 첨가하고, 1시간 동안 교반하였다. 이어서 그것을 RPLC(5%에서 80% 아세토나이트릴/물, 개질제로서 0.1% TFA 함유)로 정제시켰다. 수율 2.34g, 95%. LCMS로 관찰된 이온: [M + H]+ = 616.4, [M - Boc + H]+ = 516.4.
단계 c.
Figure pct00753
단계-b 생성물(2.34g, 3.8m㏖)을 무수 THF(12㎖)에 용해시켰다. 다이옥산(10㎖) 중의 4N HCl 용액을 첨가하고, 반응 혼합물을 밤새 교반하였다. 이어서 그것을 회전식 증발로 농축시켰다. 잔류물을 아세토나이트릴/물(1:1, 약 16㎖)에 재용해시키고, 용액을 동결건조시켰다. 추가로 정제하지 않고 조 생성물로 후속 단계를 수행하였다. 수율 1.91g, 정량적 수율. LCMS로 관찰된 이온: [M + H]+ = 416.4.
단계 d.
Figure pct00754
무수 DCM(3㎖) 중의 자나미비어의 p-나이트로페닐 카보네이트(2.25g, 3.05m㏖, 실시예 109에 기재됨)의 용액에 무수 DMF(4㎖) 중의 단계-c 생성물(610㎎, 1.249m㏖) 및 DIPEA(1.05g, 8.1m㏖)의 혼합물을 20분에 걸쳐서 나누어 첨가하였다. 1시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 농축시키고, RPLC(30%에서 80% 아세토나이트릴/물, 개질제로서 0.1% TFA 함유)로 정제시켰다. 수율 1.73g, 85.9%. LCMS로 관찰된 이온: [(M + 2H)/2]+ = 806.8, [(M - Boc + 2H)/2]+ = 756.8.
단계 e.
Figure pct00755
단계-d 생성물(1.73g, 1.073m㏖)을 TFA(5㎖)에 용해시켰다. 용액을 30℃에서 3시간 가열시키고, 그것을 RPLC(0%에서 35% 아세토나이트릴/물, 개질제로서 0.1% TFA 함유)로 직접 정제시켰다. 수율 1.176g, 76.1%. LCMS로 관찰된 이온: [(M + 2H)/2]+ = 606.8, [(M + 3H)/3]+ = 405.
단계 f.
Figure pct00756
단계-e 생성물(1.176g, 0.817m㏖)을 MeOH(12㎖)에 용해시키고, 용액을 빙수욕에서 냉각시켰다. 이어서 그것을 물(9㎖) 중의 LiOH 일수화물(344.4㎎, 8.2m㏖)의 용액으로 적가로 처리하였다. 생성된 혼합물을 밤새 교반하고, 이어서 다이옥산 중의 4N HCl 용액(2㎖)으로 산성화시켰다. 유기 용매를 회전식 증발로 제거한 후, 잔류물을 정제용 HPLC(Isco ACCQ prep, Luna 5μm C18(2) 100 Å LC 칼럼 100mm x 30mm; 구배: 2분 동안 0% 아세토나이트릴/물, 이어서 12분에 걸쳐서 0%에서 15% 아세토나이트릴/물, 이어서 10분 동안 15% 아세토나이트릴의 등용매, 0.1% TFA 사용)로 직접 정제시켰다. 수율 108㎎, 9.7%. LCMS로 관찰된 이온: [(M + 2H)/2]+ = 566.8, [(M + 3H)/3]+ = 378.2.
실시예 113. 접합체 32의 합성
15-㎖ 멸균 원심분리 튜브에 아스코르브산나트륨(68.1㎎, 0.344m㏖), THPTA(14.9㎎, 0.0344m㏖), 실시예 112로부터의 생성물, Int-72(17.5㎎, 0.00953m㏖) 및 PBS 7.4 (1㎖)를 넣었다. 보텍싱에 의한 교반으로 모두를 용해시킨 후, ㅇ아지도 Fc(50㎎, 0.0008588m㏖, 실시예 7에 기재됨, 서열번호 4), 그 다음 PBS(0.5㎖) 중의 CuSO4(2.05㎎, 0.0129m㏖)의 용액을 첨가하였다. 혼합물을 20시간 동안 회전시켰다. 그것을 단백질 A 칼럼 상의 친화도 크로마토그래피로 정제시키고, 그 다음 크기 배제 크로마토그래피로 정제시켰다. 정제된 최종 생성물의 Maldi TOF 분석은 63588Da(DAR=3.8)의 평균 질량을 제공하였다. 수율 30.9㎎, 62% 수율.
실시예 114. Int-73의 합성
Figure pct00757
단계 a.
Figure pct00758
무수 DCM(2㎖) 중의 자나미비어의 p-나이트로페닐 카보네이트(698.4㎎, 0.95m㏖, 실시예 109에 기재됨)의 용액에 무수 DMF(2㎖) 중의 프로파길 다이아민 중심 링커(209㎎, 0.426m㏖, described in 실시예 110) 및 DIPEA(330.8㎎, 2.56m㏖)를 10분에 걸쳐서 첨가하였다. 반응을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 그것을 이어서 농축시키고, RPLC(30%에서 85% 아세토나이트릴/물, TFA 개질제 없음)로 정제시켰다. 수율 531㎎, 69.2%. LCMS로 관찰된 이온: [(M + 2H)/2]+ = 807.8, [(M - Boc + 2H)/2]+ = 757.8.
단계 b.
Figure pct00759
단계-b 생성물(531㎎, 0.329m㏖)을 DCM(1.5㎖) 및 TFA(1.5㎖)에 용해시키고, 이어서 35℃에서 3시간 동안 교반하였다. 그것을 농축시키고, RPLC(5%에서 30% 아세토나이트릴/물, TFA 개질제 없음)로 정제시켰다. 수율 387㎎, 97.1%. LCMS로 관찰된 이온: [(M + 2H)/2]+ = 607.6, [(M + 3H)/3]+ = 405.4.
단계 c.
Figure pct00760
단계-b 생성물(121.4㎎, 0.1m㏖)을 1.0M NaCl 용액(3㎖) 및 아세토나이트릴(1㎖)에 용해시켰다. 용액을 -8℃(염/빙욕)까지 냉각시키고, 1.0M NaOH(0.4㎖, 0.4m㏖)를 적가하고, 반응을 -14℃ 내지 -8℃에서 6시간 동안 교반하였다. 이어서 그것을 다이옥산 용액 중의 4N HCl(100㎕)로 중화시키고, 정제용 HPLC(Isco ACCQ prep, Luna 5μm C18(2) 100 Å LC 칼럼 100mm x 30mm; 구배: 2분 동안 0% 아세토나이트릴/물, 이어서 12분에 걸쳐서 0%에서 17.8% 아세토나이트릴/물, 이어서 10분 동안 17.8% 아세토나이트릴의 등용매, 0.1% TFA 사용)로 직접 정제시켰다. 수율 85.5㎎, 62.8%. LCMS로 관찰된 이온: [(M + 2H)/2]+ = 567.8, [(M + 3H)/3]+ = 378.9.　
실시예 115. Int-74의 합성
Figure pct00761
단계 a.
Figure pct00762
무수 DMF(5㎖) 중의 N-Boc-2-(2-아미노-에톡시)에틸아민(1.2g, 5m㏖)의 용액에 탄산나트륨(691㎎, 5m㏖) 및 N-Boc-6-브로모-헥실아민(1.4g, 5m㏖)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 70℃에서 24시간 동안 가열시켰다. 이어서 염을 여과시키고, 여과액을 회전식 증발로 농축시켰다. 잔류물을 RPLC(5%에서 50% 아세토나이트릴/물, 개질제로서 0.1% TFA 함유)로 정제시켰다. 수율 444㎎, 22%. LCMS로 관찰된 이온: [M + H]+ = 404.3.
단계 b.
Figure pct00763
무수 DMF(2㎖) 중의 프로파길 PEG-4 산(342.6㎎, 1.32m㏖) 및 HATU(601.5㎎, 1.58m㏖)의 용액에 DIPEA(258㎎, 2m㏖)를 첨가하였다. 5분 후, 반응 혼합물을 단계-a 생성물(444.3㎎, 0.858m㏖)에 첨가하고, 1시간 동안 교반하였다. 이어서 그것을 RPLC(5%에서 80% 아세토나이트릴/물, 개질제로서 0.1% TFA 함유)로 정제시켰다. 수율 297.1㎎, 53.6%. LCMS로 관찰된 이온: [M + H]+ = 646.2, [M - Boc + H]+ = 546.2.
단계 c.
Figure pct00764
단계-b 생성물(297.1㎎, 0.46m㏖)을 무수 THF(2㎖)에 용해시켰다. 다이옥산(4㎖) 중의 4N HCl 용액을 첨가하고, 반응 혼합물을 밤새 교반하였다. 이어서 그것을 회전식 증발로 농축시키고, 정제용 HPLC(5% to 50% 아세토나이트릴/물, 개질제로서 0.1% TFA 함유)로 정제시켰다. 수율 239.6㎎, 77.3%. LCMS로 관찰된 이온: [M + H]+ = 446.2.
단계 d.
Figure pct00765
무수 DCM(2㎖) 중의 자나미비어의 p-나이트로페닐 카보네이트(523.8㎎, 0.71m㏖, 실시예 2에 기재됨)의 용액에 무수 DMF(2㎖) 중의 단계-c 생성물(239.6㎎, 0.356m㏖) 및 DIPEA(245.5㎎, 1.9m㏖)의 혼합물을 10분에 걸쳐서 나누어 첨가하였다. 반응을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 그것을 이어서 농축시키고, RPLC(30%에서 85% 아세토나이트릴/물, TFA 개질제 없음)로 정제시켰다. 수율 553㎎, 96.5%. LCMS로 관찰된 이온: [(M + 2H)/2]+ = 821.8, [(M - Boc + 2H)/2]+ = 771.8.
단계 e.
Figure pct00766
단계-d 생성물(553㎎, 0.343m㏖)을 DCM(1.5㎖) 및 TFA(1.5㎖)에 용해시키고, 이어서 35℃에서 3시간 동안 교반하였다. 그것을 농축시키고, RPLC(5%에서 30% 아세토나이트릴/물, TFA 개질제 없음)로 정제시켰다. 수율 424.6㎎, 99.6%. LCMS로 관찰된 이온: [(M + 2H)/2]+ = 621.6, [(M + 3H)/3]+ = 415.0.
단계 f.
Figure pct00767
단계-e 생성물(424.6㎎, 0342m㏖)을 1.0M NaCl 용액(4㎖) 및 아세토나이트릴(4㎖)에 용해시켰다. 용액을 -11℃ 염/빙욕)까지 냉각시키고, 1.0M NaOH(1.53㎖, 1.53m㏖)를 적가하고, 반응을 -14℃내지 -8℃에서 6시간 동안 교반하였다. 이어서 그것을 다이옥산 용액 중의 4N HCl(375㎕)로 반응정지시키고, 정제용 HPLC(Isco ACCQ prep, Luna 5μm C18(2) 100 Å LC 칼럼 100mm x 30mm; 구배: 2분 동안 0% 아세토나이트릴/물, 이어서 13.6분에 걸쳐서 0%에서 20.9% 아세토나이트릴/물, 이어서 10분 동안 20.9% 아세토나이트릴의 등용매, 0.1% TFA 사용)로 직접 정제시켰다. 수율 439㎎, 92.3%. LCMS로 관찰된 이온: [(M + 2H)/2]+ = 581.8, [(M + 3H)/3]+ = 388.2.
실시예 116. Int-75의 합성
Figure pct00768
단계 a.
Figure pct00769
tert-부틸 (4-옥소부틸) 카바메이트(850㎎, 4.54㎎) 및 tert-부틸 N-{2-[2-(2-아미노에톡시) 에톡시] 에틸} 카바메이트(1.99g, 8m㏖)의 혼합물을 DCM(30㎖)에 용해시키고, Na2SO4 상에서 건조시켰다. 여과 및 농축 후, 잔류물을 무수 DCM(20㎖)에 재용해시켰다. 아세트산(641㎎, 11m㏖)을 첨가하고, 그 다음 소듐 트라이아세트옥시보로하이드라이드(3.4g, 16m㏖)를 1시간에 걸쳐서 나누어 첨가하였다. 반응 혼합물을 밤새 교반하고, 이어서 AcOH(3㎖) 및 MeOH(10㎖)로 반응정지시켰다. 혼합물을 여과시키고, 여과액을 회전식 증발로 농축시키고, RPLC(5%에서 45% 아세토나이트릴 및 물)로 정제시켰다. 수율 618㎎, 32.5%. LCMS로 관찰된 이온: [M + H]+ = 420.4.
단계 b.
Figure pct00770
이 화합물을 실시예 115의 단계-b 생성물과 유사하게 제조하였다. LCMS로 관찰된 이온: [M + H]+ = 662.4, [M - Boc + H]+ = 562.4.
단계 c.
Figure pct00771
이 화합물을 실시예 115의 단계-c 생성물과 유사하게 제조하였다. LCMS로 관찰된 이온: [M + H]+ = 462.4.
단계 d.
Figure pct00772
이 화합물을 실시예 115의 단계-d 생성물과 유사하게 제조하였다. LCMS로 관찰된 이온: [(M + 2H)/2]+ = 829.8, [(M - Boc + 2H)/2]+ = 779.8.
단계 e.
Figure pct00773
이 화합물을 실시예 115의 단계-e 생성물과 유사하게 제조하였다. LCMS로 관찰된 이온: [(M + 2H)/2]+ = 629.8, [(M + 3H)/3]+ = 420.2.
단계 f.
Figure pct00774
이 화합물을 실시예 115의 단계-f 생성물과 유사하게 제조하였다. LCMS로 관찰된 이온: [(M + 2H)/2]+ = 598.8, [(M + 3H)/3]+ = 393.6.
실시예 117. Int-76의 합성
Figure pct00775
단계 a.
Figure pct00776
무수 THF(8㎖) 중의 N-Boc-peg-1 토실레이트(1.54g, 4.28m㏖, 실시예 110에 기재됨)의 용액에 tert-부틸 N-2{2-[2-(2-아미노에톡시) 에톡시] 에틸} 카바메이트(1.59g, 6.42m㏖) 및 탄산나트륨(453.7㎎, 4.28m㏖)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 50℃에서 24시간 동안 가열시켰다. 고체를 여과시키고, 아세토나이트릴을 세척하였다. 여과액을 농축시키고, RPLC(100g, 5에서 90% 아세토나이트릴 및 물)로 정제시켰다. 수율 1.15g, 61.7%. LCMS로 관찰된 이온: [M + H]+ = 436.4.
단계 b.
Figure pct00777
이 화합물을 실시예 115의 단계-b로부터의 생성물과 유사하게 제조하였다. LCMS로 관찰된 이온: [M + H]+ = 678.2, [M - Boc + H]+ = 578.2.
단계 c.
Figure pct00778
이 화합물을 실시예 115의 단계-c의 생성물과 유사하게 제조하였다. LCMS로 관찰된 이온: [M + H]+ = 478.2.
단계 d.
Figure pct00779
이 화합물을 실시예 115의 단계-d로부터의 생성물과 유사하게 제조하였다. LCMS로 관찰된 이온: [(M + 2H)/2]+ = 837.6, [(M - Boc + 2H)/2]+ = 767.8.
단계 e.
Figure pct00780
이 화합물을 실시예 115의 단계-e로부터의 생성물과 유사하게 제조하였다. LCMS로 관찰된 이온: [(M + 2H)/2]+ = 637.5, [(M + 3H)/3]+ = 425.6.
단계 f.
Figure pct00781
이 화합물을 실시예 115의 단계-f로부터의 생성물과 유사하게 제조하였다. LCMS로 관찰된 이온: [(M + 2H)/2]+ = 597.8, [(M + 3H)/3]+ = 399.0.
실시예 118 Int-67의 합성
Figure pct00782
단계 a.
Figure pct00783
이미 제조된 에터 자나미비어 산 출발 물질(0.90g, 1.43m㏖, 실시예 22에 기재됨) 및 N-메틸 몰폴린(0.23㎖, 2.14m㏖)을 THF(35㎖)에 용해시키고, 질소 분위기 하에서 0℃(빙수욕)까지 냉각시켰다. 아이소부틸 클로로폼에이트(2㎖ DCM 중의 0.24㎖, 1.85m㏖)를 시린지를 사용하여 5분의 기간에 걸쳐서 적가하였다. 혼합물을 0℃에서 30분 동안 이어서 주변 온도에서 15분 동안 교반하고, 이어서 0℃까지 냉각시키고, 여기서 소듐 보로하이드라이드(540㎎, 14.3m㏖, 5㎖의 메탄올에 용해됨)를 5분에 걸쳐서 적가하였다. 반응을 15분 동안 교반하였고, 이 때 모든 출발 물질이 소모되었다(LC/MS). 몇 방울(약 1㎖)의 빙초산을 첨가하여 혼합물을 산성화시켰다(pH 약 5). 혼합물을 에틸 아세테이트 및 물로 희석시키고, 에틸 아세테이트(3x)추출하였다. 유기층을 염수로 세척하고, 유기 추출물을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 회전식 증발기로 농축시켰다. 조 물질을 실리카겔 크로마토그래피로 정제시키고, 먼저 셀라이트에서 건조시키고, 30분에 걸쳐서 DCM 중의 0% 내지 10% 메탄올로 용리시켰다. 수율 0.66g, 75%. LCMS로 관찰된 이온: [M + H]+ = 617.2.
단계 b.
Figure pct00784
20㎖ DCM 중의 이전 단계로부터의 생성물(0.66g, 1.10m㏖)의 교반 혼합물에, 트라이에틸아민(0.30㎖, 1.3m㏖)을 첨가하였다. 혼합물을 질소 분위기 하에서 0℃(빙수욕)까지 냉각시키고, 이어서 시린지를 사용하여 5분에 걸쳐서 메실 클로라이드(0.15g, 1.3m㏖)를 적가하였다. 빙욕을 제거하고, 반응을 45분 동안 교반하였다. 반응을 포화 수성 중탄산나트륨으로 반응정지시키고, 이어서 DCM(3x)으로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 염수로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 회전식 증발기로 농축시켰다. 수율 0.74g, 99%. LCMS로 관찰된 이온: [M + H]+ = 695.2. 중간체를 취하여 정제하지 않고 다음 단계를 수행하였다.
단계 c.
Figure pct00785
이전 단계로부터의 메실레이트(0.74g, 1.1m㏖)를 DMF(5㎖)에서 80℃에서 3당량의 소듐 아자이드(0.21g, 3.3m㏖)와 함께 5시간 동안 교반하였다. 혼합물을 물로 희석시키고, DCM(3x)으로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 염수로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 수율 0.67g, 95%. LCMS로 관찰된 이온: [M + H]+ = 642.4. 아자이드를 취하여 정제하지 않고 다음 단계를 수행하였다.
단계 d.
Figure pct00786
이전 단계(0.67g, 1.04m㏖)로부터의 아자이드를 린들러 촉매(300㎎)의 존재 하에서 수소 기체 1대기압 하에서 12시간 동안 메탄올(20㎖) 중에서 교반하였다. 혼합물을 셀라이트로 여과시키고, 농축시켜 표제 화합물을 투명한 오일로서 제공하였다. 아민을 취하여 정제하지 않고 다음 단계를 수행하였다. 수율 0.37g, 54%, 3단계. LCMS로 관찰된 이온: [M + H]+ = 616.2.
단계 e.
Figure pct00787
EDC(150㎎, 0.78m㏖)를 DMF(4㎖)에 용해된 이전 단계로부터의 아민(370㎎, 0.60m㏖), 프로파길-peg4-카복실산(188㎎, 0.72m㏖) 및 트라이에틸아민(0.100㎖, 0.72m㏖)의 교반 용액에 첨가하였다. 반응을 2시간 동안 주변 온도에서 교반하고, 이어서 직접 RPLC(10%-95% 아세토나이트릴/물, 개질제 없음, 30분 구배)로 정제시켰다. 순수한 분획을 풀링시키고, 동결건조시키고, 취하여 다음 단계에 직접 사용하였다. 수율 490㎎, 80%. LC/MS로 발견된 이온: [M+H]+ = 858.2
단계 f.
Figure pct00788
이전 단계로부터의 생성물(490㎎, 0.57m㏖)을 TFA(4㎖)에서 45분 동안 교반하고, 이어서 농축시키고, 회전식 증발기에서 메탄올(3x)과 공비증발시켰다. LC/MS로 발견된 이온: [M+H]+ = 658.2. 잔류물을 LiOH(43㎎, 1.8m㏖)를 함유하는 1/1 메탄올/물에서 30분 동안 교반하였다. 반응을 몇 방울의 빙초산으로 중화시키고, 회전식 증발기에서 부피를 절반으로 감소시켰다. 조 생성물을 반정제용 HPLC(0%-75% 아세토나이트릴/물, 0.1% TFA, 30분 구배)로 정제시켰다. 순수한 분획을 풀링시키고, 동결건조시켜 표제 화합물을 제공하였다. 수율 105㎎, 29%, 3단계. LC/MS로 발견된 이온: [M+H]+ = 618.2.
실시예 119. Int-68의 합성
Figure pct00789
단계 a.
Figure pct00790
p-나이트로페닐 클로로폼에이트(0.23g, 1.14m㏖)를 1차 알코올(0.47g, 0.76m㏖, 실시예 118에 기재됨) 및 트라이에틸아민(0.21㎖, 1.52m㏖)에 용해시키고 DCM(15㎖, 무수)의 교반 혼합물에 첨가하였다. 반응을 1시간 동안 교반하고, 이어서 추가 트라이메틸아민(0.21㎖) 및 p-나이트로페닐 클로로폼에이트(230㎎)를 첨가하고, 교반을 추가 시간 동안 계속하였고, 그 후 혼합물을 물로 희석시키고, DCM(3x)으로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 염수로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시켰다. 용매를 회전식 증발로 제거하였다. 조 잔류물을 DCM(3㎖)에 용해시키고, 셀라이트에 로딩하고, 실리카겔 크로마토그래피(0%에서 70% 에틸 아세테이트/헥산, 30분 구배)로 정제시켰다. 순수한 분획을 풀링시키고, 농축시켜 표제 화합물을 백색 고체로서 제공하였다. 수율 525㎎, 88%. LCMS로 관찰된 이온: [M + H]+ = 782.2.
단계 b.
Figure pct00791
트라이에틸아민(0.14㎖, 0.97m㏖)을 1㎖의 아세토나이트릴 중의 프로파길-peg4-아민(181㎎, 0.78m㏖)의 교반 용액에 첨가하였다. 트라이에틸아민/프로파길-peg4-아민 혼합물을 이전 단계로부터의 생성물(510㎎, 0.65m㏖, 2㎖ 아세토나이트릴)에 첨가하고, 1시간 동안 교반하였고, 이 때 모든 출발 물질이 소모되었다. 용매를 회전식 증발기에서 제거하였다. 조 잔류물을 RPLC(20-95% 아세토나이트릴/물, 30분 구배, 개질제 없음)로 정제시켰다. 수율 475㎎, 83%. LC/MS로 발견된 이온: [M+H]+ = 874.2.
단계 c.
Figure pct00792
이전 단계로부터의 생성물(475㎎, 0.54m㏖)을 TFA(5㎖)에서 2시간 동안 교반하고, 이어서 농축시키고, 메탄올(3x)과 함께 회전식 증발기에서 공비증발시켰다. LC/MS로 발견된 이온: [M+H]+ = 674.2. 잔류물을 LiOH(49㎎, 1.6m㏖)를 함유하는 1:1 메탄올/물 혼합물에서 30분 동안 교반하였다. 반응을 빙초산으로 중화시키고, 이어서 회전식 증발로 농축시켰다. 생성물을 반정제용 HPLC(0%-75% 아세토나이트릴/물, 0.1% TFA, 30분 구배)로 정제시켰다. 순수한 분획을 풀링시키고, 동결건조시켰다. 수율 204㎎, 59%. LCMS로 관찰된 이온: [M+H]+ = 634.2.
실시예 120 Int-77의 합성
Figure pct00793
단계 a.
Figure pct00794
HATU(DMF 1.5㎖ 중의 0.44g, 1.16m㏖)를 DMF(2㎖) 중의 프로파길-peg4-아민(0.24g, 1.05m㏖), 비스-Boc-D-오르니틴 (0.35g, 1.05m㏖) 및 트라이에틸아민(0.59㎖, 4.21m㏖)의 교반 용액에 적가하였다. 반응을 1시간 동안 주변 온도에서 교반하고, 이어서 RPLC(5%-90% 아세토나이트릴/물, 0.1% TFA, 35분 구배)로 직접 정제시켰다. 순수한 분획을 풀링시키고, 동결건조시켜 생성물을 점성 투명한 오일로서 제공하였다. LC/MS로 발견된 이온: [M+H]+ = 546.2
Boc-보호된 중간체를 다이옥산 중의 4N HCL(10㎖)에서 45분 동안 주변 온도에서 교반하였다. 용매를 회전식 증발로 제거하고, 이어서 생성된 잔류물을 DI 물(20㎖)에 용해시키고, 동결시키고, 동결건조시켜 생성물을 투명한 오일로서 제공하였다. 수율 310㎎, 70%, 2 단계s. LCMS로 관찰된 이온: [M+H]+ = 346.2
단계 b.
Figure pct00795
아세토나이트릴(2㎖) 중의 이전 단계로부터의 생성물(96㎎, 0.28m㏖) 및 트라이에틸아민(0.15㎖, 1.11m㏖)을 자나미비어의 p-나이트로페닐 카보네이트(6㎖의 아세토나이트릴 중의 435㎎, 0.56m㏖, 실시예 118에 기재됨)의 교반 용액에 첨가하고, 12시간 동안 주변 온도에서, 이어서 2시간 동안 80℃에서 교반하였다. 용매를 제거하고, 조 잔류물을 RPLC(10-95% 아세토나이트릴/물, 개질제 없음, 35분 구배)로 정제시켰다. 순수한 분획을 풀링시키고, 회전 증발기에서 농축시켰다. LC/MS로 발견된 이온: [(M+2H)/2]+ = 815.8
이 중간체를 TFA(5㎖) 중에서 45분 동안 교반하고, 이어서 농축시키고, 고압 하에서 건조시켰다. LC/MS로 발견된 이온[(M+2H)/2]+ = 615.8.
이러한 TFA 염을 LiOH(27㎎, 1.11m㏖)를 함유하는 (1/1)MeOH/DI 물(5㎖) 중에서 30분 동안 0℃에서 교반하였다. 혼합물을 빙초산을 사용하여 산성화시켰다(pH 약 5). 메탄올을 회전식 증발로 제거하고, 생성된 잔류물을 반정제용 HPLC(5% 내지 70% 아세토나이트릴/물, 0.1% TFA, 35분 구배)로 정제시켰다. 순수한 분획을 풀링시키고, 동결건조시켰다. 3단계에 대해서 수율 35㎎, 11%. LC/MS로 발견된 이온: [(M+2H)/2]+ = 575.8.
실시예 121. Int-78의 합성
Figure pct00796
단계 a.
Figure pct00797
프로파길-Peg4-산(640㎎, 2.46m㏖), 다이올-HCl 염(350㎎, 2.46m㏖), EDC(471㎎, 2.46m㏖), HOBt(377㎎, 2.46m㏖) 및 트라이에틸아민(249㎎, 2.46m㏖)을 DMF(3㎖) 중에서 주변 온도에서 4시간 동안 교반하였다. 혼합물을 RPLC(0%-80% 아세토나이트릴/물, 개질제 없음, 35분 구배)로 직접 정제시켰다. 순수한 분획을 풀링시키고, 농축시켜 생성물을 투명한 오일로서 제공하였다. 수율 580㎎, 68%. LCMS로 관찰된 이온: [M+H]+ = 348.4.
단계 b.
Figure pct00798
p-나이트로-페닐 클로로폼에이트(1.23g, 1.25m㏖)를 DCM(25㎖) 중의 이전 단계로부터의 생성물(530㎎, 6.10m㏖) 및 트라이에틸아민(925㎎, 9.15m㏖)의 교반 용액에 첨가하고, 이어서 질소 분위기 하에서 0℃까지 냉각시켰다. 혼합물을 0℃에서 15분 동안, 이어서 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응을 DI 물로 희석시키고, DCM(3×20㎖)에 추출하였다. 합한 유기 추출물을 염수로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시켰다. 조 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피(10%-100% 에틸 아세테이트/헥산, 25분 구배)로 정제시켜 생성물을 백색 고체로서 제공하였다. 수율, 250㎎, 24%. LCMS로 관찰된 이온: [M+H]+ = 678.2.
단계 c.
Figure pct00799
아세토나이트릴(2㎖) 중의 아민 작용화된 자나미비어(505㎎, 0.82m㏖, 실시예 118에 기재됨) 및 트라이에틸아민(0.15㎖, 1.11m㏖)을 아세토나이트릴(10㎖) 중의 이전 단계의 생성물(220㎎, 0.37m㏖)의 교반 용액에 첨가하고, 4시간 동안 주변 온도에서 교반하였다. 반응을 회전식 증발기에서 농축시켰다. 생성된 잔류물을을 RPLC(15-95% 아세토나이트릴/물, 개질제 없음, 35분 구배)로 정제시켰다. 순수한 분획을 풀링시키고, 회전 증발기에서 농축시켰다. LC/MS로 발견된 이온: [(M+2H)/2]+ = 815.2.
이 중간체를 TFA(5㎖) 중에서 45분 동안 교반하고, 이어서 농축시키고, 고압 하에서 건조시켰다. LC/MS로 발견된 이온: [(M+2H)/2]+ = 615.2.
생성된 TFA 염을 LiOH(71㎎, 2.98mmo)를 함유하는 (1/1)MeOH/DI 물(5㎖) 중에서 30분 동안 0℃에서 교반하였다. 혼합물을 빙초산을 사용하여 산성화시켰다(pH 약 5). 메탄올을 회전식 증발기로 제거하고, 반정제용 HPLC(5% 내지 70% 아세토나이트릴/물, 0.1% TFA, 35분 구배)로 정제시켰다. 순수한 분획을 풀링시키고, 동결건조시켰다. 3단계에 대해서 수율 125㎎, 29%. LC/MS로 발견된 이온: [(M+2H)/2]+ = 575.8.
실시예 122. Int-4a의 합성
Figure pct00800
단계 a.
Figure pct00801
프로파길-Peg 4-아민(165㎎, 0.71m㏖)을 아세토나이트릴(20㎖) 중의 자나미비어의 p-나이트로페닐 카보네이트(350㎎, 0.47m㏖, 실시예 109에 기재됨)의 교반 용액에 첨가하였다. 반응을 1시간 동안 주변 온도에서 교반하고, 이어서 회전식 증발기에서 용매를 제거하였다. 잔류물을 RPLC(10%-95% 아세토나이트릴/물, 개질제 없음, 30분 구배)로 정제시켰다. 순수한 분획을 풀링시키고, 동결건조시켜 boc-보호된 중간체를 백색 고체로서 제공하였다. LCMS로 관찰된 이온: [M+H]+ = 830.2.
이 중간체를 TFA(5㎖) 중에서 주변 온도에서 30분 동안 교반하였다. 회전식 증발기로 용매를 제거하고, 잔류물을 RPLC(10%-95% 아세토나이트릴/물, 0.1% TFA, 30분 구배)로 정제시켰다. 순수한 분획을 풀링시키고, 동결건조시켜 생성물을 백색 고체로서 제공하였다. 수율 155㎎, 52%, 2단계. LCMS로 관찰된 이온: [M+H]+ = 630.2.
단계 b.
Figure pct00802
이전 단계로부터의 생성물(140㎎, 0.22m㏖)을 0℃에서 20분 동안 LiOH(21㎎, 0.89m㏖)를 함유하는 메탄올:물(8㎖)의 1:3 혼합물에서 교반하였다. 혼합물을 몇 방울의 빙초산으로 산성화시키고, 회전식 증발기에서 농축시켰다. 조 물질을 반정제용 HPLC(5%-95% 아세토나이트릴/물, 0.1% TFA, 30분 구배)로 정제시켰다. 순수한 분획을 풀링시키고, 동결건조시켜 생성물을 백색 고체로서 제공하였다. 수율 60㎎, 45%. LCMS로 관찰된 이온: [M+H]+ = 590.2.
1HNMR (500 MHz, 메탄올-d 4) δ 5.86 (d, J=2.6 Hz, 1H), 4.99 (dd, J=9.0, 2.7 Hz, 1H), 4.55 (dd, J=9.7, 2.7 Hz, 1H), 4.38 (dd, J=8.6, 2.6 Hz, 1H), 4.24 - 4.14 (m, 1H), 4.19 (d, J=2.6 Hz, 2H), 4.02-3.98 (m, 1H), 3.74 - 3.59 (m, 13H), 3.54 (t, J=5.6 Hz, 2H), 3.52-3.48 (m, 1H), 3.29-3.22 (m, 2H), 2.84 (t, J=2.4 Hz, 1H), 1.96 (s, 3H).
13CNMR (126 MHz, MeOD) δ 172.33, 163.68, 157.54, 156.58, 106.80, 79.23, 75.91, 74.56, 70.18, 70.13, 69.96, 69.87, 69.59, 69.51, 69.14, 68.74, 62.98, 57.67, 51.11, 40.54, 21.37.
실시예 123. Int-4b의 합성
Figure pct00803
Peg 작용화된 중간체(100㎎, 0.13m㏖, 실시예 122에 기재됨)를 LiOH(12㎎, 0.52m㏖)를 함유하는 메탄올:물의 1:3 혼합물(5㎖)에서 주변 온도에서 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 빙초산으로 산성화시키고, 회전식 증발기에서 농축시켰다. 조 물질을 RPLC(DI 물 중의 5-95% 아세토나이트릴, 0.1% TFA, 30분 구배)로 정제시켰다. 순수한 분획을 풀링시키고, 동결건조시켜 생성물을 백색 고체로서 제공하였다. 수율 21㎎, 31%. LCMS로 관찰된 이온: [M+H]+ = 590.2.
1HNMR (메탄올-d 4) δ: 5.86 (d, J=2.6 Hz, 1H), 4.48 (dd, J=8.6, 2.7 Hz, 1H), 4.42 (dd, J=9.6, 1.4 Hz, 1H), 4.38 (d, J=12 Hz, 1H), 4.22 - 4.19 (m, 1H), 4.19 (d, J=2.4 Hz, 2H), 4.16-4.12 (dd, J=11.5, 6 Hz, 1H), 4.09 - 4.02 (m, 1H), 3.75 - 3.58 (m, 13H), 3.55 (t, J=5.5 Hz, 2H), 3.33-3.29 (m, 2H), 2.84 (t, J=2.4 Hz, 1H), 2.02 (s, 3H).
13CNMR (126 MHz, MeOD) δ 172.94, 163.82, 157.90, 157.53, 106.80, 79.23, 76.18, 74.55, 70.19, 70.13, 69.96, 69.90, 69.61, 68.96, 68.74, 68.17, 66.69, 57.67, 50.11, 40.43, 21.33.
실시예 124. 아지도 Fc의 합성에 대한 일반적인 절차
DMF/PBS 중의 PEG4-아지도 NHS 에스터 용액(0.050M)의 제조: PEG4-아지도 NHS 에스터 16.75㎎을 0℃에서 DMF 0.100㎖에 용해시키고, 0℃에서 PBS 1× 완충액을 첨가하여 0.837 ㎖로 희석시켰다. 이러한 PEG4-아지도 NHS 에스터 PBS 용액의 당량을 조정함으로써 이 용액을 다양한 DAR을 갖는 다른 PEG4-아지도 Fc를 제조하기 위해서 사용하였다.
h-IgG1 Fc, 서열번호 48(pH 7.4 PBS 8.800㎖ 중의 107.2㎎, MW 약 57891 Da, 1.852μ㏖)의 사전처리: Fc 용액을 4개의 원심분리 농축기(30,000 MWCO, 15㎖)로 옮기고, PBS ×1 완충액으로 15㎖로 희석시키고, 약 1.5㎖의 부피로 농축시켰다. 잔류물을 PBS pH 7.4 중에 1:10으로 희석시키고, 다시 농축시켰다. 이러한 세척 절차를 총 4회 반복한 후 8.80㎖로 희석시켰다.
PEG4-아지도 Fc의 제조 0.050M PEG4-아지도NHS 에스터 PBS 완충 용액(0.593㎖, 29.6μ㏖, 16당량)을 h-IgG1 Fc(서열번호 48)의 상기 용액에 첨가하고, 혼합물을 2시간 동안 주변 온도에서 회전 진탕하였다. 4개의 원심분리 농축기(30,000 MWCO, 15㎖)를 사용하여 용액을 약 1.5㎖의 부피로 농축시켰다. 조 혼합물을 PBS pH 7.4 중에 1:10로 희석시키고, 다시 농축시켰다. 이러한 세척 절차를 총 3회 반복하였다. 농축된 Fc-PEG4-아자이드를 pH 7.4 PBS 완충제로 8.80㎖로 희석시켰고, 클릭 접합을 위해서 준비되었다. 정제된 물질을 NANODROP™ UV 가시 분광광도계(h-IgG1의 아미노산 서열에 기초하여 계산된 흡광 계수 사용)를 사용하여 정량하였다. 정제 후 수율은 정량적이었다.
실시예 125. 접합체 34의 합성
아지도 작용화된 Fc(40㎎, 2.5㎖, 0.69μ㏖, 아지도 Fc의 일반적인 제조에 기재됨, 실시예 124, 서열번호 18)의 용액을 알킨 유도체화된 소분자(6.0㎎, 8.23μ㏖, Int-67 실시예 118)를 함유하는 15㎖ 원심분리 튜브에 첨가하였다. 약하게 진탕하여 모든 고체를 용해시킨 후, 혼합물을 PBS 7.4 완충액(1.09㎖) 중의 L-아스코르브산 나트륨 염(54㎎, 0.27m㏖), 황산나트륨(II) (0.88㎎, 5.5μ㏖), 및 BTTA (9.4㎎, 22μ㏖)의 용액에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 밤새 약하게 회전시켰다. 이어서 그것을 단백질 A 칼럼 상의 친화도 크로마토그래피(일반 접합체 정제 프로토콜 참고)로 정제시키고, 그 다음 크기 배제 크로마토그래피로 정제시켰다. 정제된 최종 생성물의 Maldi TOF 분석은 64,678Da(DAR=7.2)의 평균 질량을 제공하였다. 수율 24㎎, 54% 수율.
실시예 126. 접합체 35의 합성
아지도 작용화된 Fc(40㎎, 2.5㎖, 0.69μ㏖, 아지도 Fc의 일반적인 제조에 기재됨, 실시예 124, 서열번호 18)의 용액을 알킨 유도체화된 소분자(6.1㎎, 8.23μ㏖, Int-68 실시예 119)를 함유하는 15㎖ 원심분리 튜브에 첨가하였다. 약하게 진탕하여 모든 고체를 용해시킨 후, 혼합물을 PBS 7.4 완충액(1.09㎖) 중의 L-아스코르브산 나트륨 염(54㎎, 0.27m㏖), 황산나트륨(II) (0.88㎎, 5.5μ㏖), 및 BTTA (9.4㎎, 22μ㏖)의 용액에 첨가하였다. 생성된 용액을 밤새 약하게 회전시켰다. 이어서 그것을 단백질 A 칼럼 상의 친화도 크로마토그래피(일반 접합체 정제 프로토콜 참고)로 정제시키고, 그 다음 크기 배제 크로마토그래피로 정제시켰다. 정제된 최종 생성물의 Maldi TOF 분석은 64,830Da(DAR=7.3)의 평균 질량을 제공하였다. 수율 23㎎, 52% 수율.
실시예 127. 접합체 36의 합성
아지도 작용화된 Fc(50㎎, 2.5㎖, 0.86μ㏖, 아지도 Fc의 일반적인 제조에 기재됨, 실시예 124, 서열번호 18)의 용액을 알킨 유도체화된 소분자(7.1㎎, 5.2μ㏖, Int-77 실시예 120)를 함유하는 15㎖ 원심분리 튜브에 첨가하였다. 약하게 진탕하여 모든 고체를 용해시킨 후, 혼합물을 PBS 7.4 완충액(1.37㎖) 중의 L-아스코르브산 나트륨 염(68㎎, 0.34m㏖), 황산나트륨(II)(1.1㎎, 6.9μ㏖), 및 BTTA (12㎎, 27μ㏖)의 용액에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 밤새 약하게 회전시켰다. 이어서 그것을 단백질 A 칼럼 상의 친화도 크로마토그래피(일반 접합체 정제 프로토콜 참고)로 정제시키고, 그 다음 크기 배제 크로마토그래피로 정제시켰다. 정제된 최종 생성물의 Maldi TOF 분석은 63,300Da(DAR=3.6)의 평균 질량을 제공하였다. 수율 37㎎, 73% 수율.
실시예 128. 접합체 37의 합성
아지도 작용화된 Fc(70㎎, 2.5 ㎖, 1.2μ㏖, 아지도 Fc의 일반적인 제조에 기재됨, 실시예 124, 서열번호 18)의 용액을 알킨 유도체화된 소분자(13.3㎎, 9.6μ㏖, Int-78 실시예 121)를 함유하는 15㎖ 원심분리 튜브에 첨가하였다. 약하게 진탕하여 모든 고체를 용해시킨 후, 혼합물을 PBS 7.4 완충액(1.92㎖) 중의 L-아스코르브산 나트륨 염(96㎎, 0.48m㏖), 황산나트륨(II)(1.6㎎, 10μ㏖), 및 BTTA(17㎎, 38μ㏖)의 용액에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 밤새 약하게 진탕하였다. 이어서 그것을 단백질 A 칼럼 상의 친화도 크로마토그래피(일반 접합체 정제 프로토콜 참고)로 정제시키고, 그 다음 크기 배제 크로마토그래피로 정제시켰다. 정제된 최종 생성물의 Maldi TOF 분석은 63,574Da(DAR=3.6)의 평균 질량을 제공하였다. 수율 42㎎, 61% 수율.
실시예 129. 접합체 33의 합성
클릭 시약 용액의 제조: PBS 완충 용액 중의 0.0050M CuSO4: 10.0㎎의 CuSO4를 12.53㎖ PBS에 용해시키고, 이어서 5.00㎖의 이러한 CuSO4 용액을 취하고, 43.1㎎ BTTAA(CAS# 1334179-85-9) 및 247.5㎎ 아스코르브산나트륨을 첨가하여 클릭 시약 용액(0.0050M CuSO4, 0.020M BTTAA 및 0.25M 아스코르브산나트륨)을 제공하엿다.
15㎖ 원심분리 튜브 내의 아지도 작용화된 Fc(104.9㎎, 8.60㎖, 18.1μ㏖; 실시예 124, 서열번호 64)의 용액에 알킨 유도체화된 소분자(29.7㎎, 19.9μ㏖, 실시예 100에 기재됨, Fc 상의 각각의 아지도에 대해 2.5당량)를 첨가하였다. 약하게 교반하여 모든 고체를 용해시킨 후, 혼합물을 (L-아스코르브산 나트륨, 0.25M, 1086μ㏖, 황산나트륨(II) 0.0050M, 21.7μ㏖, 및 BTTAA 0.020M, 86.9μ㏖)의 클릭 시약 용액(4.34㎖)으로 처리하였다. 생성된 혼합물을 주변 온도에서 6시간 동안 약하게 회전시켰다. 그것을 단백질 A 칼럼 상의 친화도 크로마토그래피(일반 접합체 정제 프로토콜 참고)로 정제시키고, 그 다음 크기 배제 크로마토그래피로 정제시켰다. 정제된 최종 생성물의 Maldi TOF 분석은 64550Da(DAR=4.6)의 평균 질량을 제공하였다. 수율 90.7㎎, 98% 순도
실시예 130. 치사 마우스 모델에서 인플루엔자 B/Brisbane/60/2008에 대한 접합체 33의 효능
시험품을 암컷 BALB/c 마우스(잭슨 래보러토리즈, 6 내지 8주령)에서 치명적인 플루엔자 B 감염에 대해 평가하였다. 시험감염 바이러스(B/Brisbane/60/2008)는 마우스에서 치명적인 감염을 초래할 수 있는 마우스-적응성 단리물이다. 실험은 각각 5마리 마우스의 10개 군으로 구성되었다. 0일에, 아이소플루란으로 마취시킨 후, 모든 마우스를 50㎕(마우스당 대략 1E5 바이러스)의 부피의 비강내 접종으로 3x LD95에서 바이러스로 시험감염시켰다.
모든 군은 바이러스 시험감염 2시간 후에 접합체 33(실시예 129), 비히클(PBS) 또는 Fc 단독 대조군(hIgG1 Fc)의 단일 IV 치료를 제공받았다. 추가 군을 바이러스 시험감염 8시간 후에 시작하는 경구 오셀타미비어(20㎎/㎏, bid, 5일 동안)로 처리하였다.
연구를 접합체 33의 7개의 상이한 용량 농도에서 평가하였다(10, 3, 1, 0.3, 0.1, 0.03 및 0.01㎎/㎏)). 마우스를 2주 동안 모니터링하고, 20%를 초과하는 체중 손실을 갖거나 빈사 상태로 발견된 동물을 사망으로 점수 매겼다. 체중을 또한 기록하여 동물의 일반적인 건강을 모니터링하였다.
모든 마우스를 비히클 또는 Fc 단독 대조군으로 처리하였고, 예측된 바와 같이 8일에 사망하였다. 이에 반해서, 접합체 33을 제공받은 모든 마우스는 연구 기간 동안 10에서부터 0.3㎎/㎏의 단일 IV 용량을 제공받은 후 완전히 보호되었다(표 48). 이에 반해서, 오셀타미비어 처리된 군은, 이 마우스가 제공받은 누적 용량이 실험 과정 전체에서 200㎎/㎏이더라도 단지 40% 생존을 초래하였다. 접합체 33의 효력은 매일 체중 측정에 의해서 추가로 뒷받침되었다(표 49; 단지 군의 최초 사망까지 나타낸 데이터). 0.3㎎/㎏의 접합체 33으로 처리된 마우스는 1일 동안 최대 7%에 이르는 일시적인 체중 손실만을 나타내었다. 종합하면, 본 연구는, Yamagata 계통의 인플루엔자 균주에 대한 인플루엔자 B 감염을 나타내는 2가지 파라미터(생존 및 체중)에 의해서 측정되는 바와 같은 접합체 33의 효력을 입증한다.
Figure pct00804
Figure pct00805
실시예 131. 위치이성질체의 특징 규명
단량체 및 이량체 중간체를 특정 위치이성질체 또는 위치이성질체의 혼합물로서 제조할 수 있다. 실시예 100 내지 102는 Int-7 위치이성질체(C7-C7, 실시예 100; C7-C9, 실시예 101; C9-C9, 실시예 102; C7-C7 최적화됨, 실시예 103)의 제조 방법을 나타내었다. 본 명세서에 기재된 방법을 사용하여 본 명세서에 기재된 임의의 중간체의 위치이성질체의 혼합물을 분리시킬 수 있다. 표 50은 사전-접합 중간체의 이미 기재된 합성에서 C7 및 C9 연결된 단량체 및 C7-C7, C7-C9, 및 C9-C9 연결된 이량체의 상대적인 백분율(%)의 특징규명을 제공한다.
Figure pct00806
실시예 132. 치사 마우스 모델에서 인플루엔자 A/Puerto Rico/8/34(H1N1)에 대해서 피하로 투여된 접합체 33의 효능
접합체 33을 암컷 BALB/c 마우스(찰스 리버 래보러토리즈, 6 내지 8주령)에서 치명적인 IAV H1N1 인플루엔자 감염에 대해 평가하였다. 시험감염 바이러스(A/Puerto Rico/8/1934)는 마우스에서 치명적인 감염을 초래할 수 있는 마우스-적응성 단리물이다. 실험은 5마리 마우스의 6개 군으로 구성되었다. 0일에, 케타민/자일라진(각각 150 및 10㎎/㎏)의 혼합물로 약하게 마취시킨 후, 모든 마우스를 30㎕의 부피의 비강내 접종으로 3x LD95에서 바이러스로 시험감염시켰다. 사망률 및 체중을 매일 기록하였고, 체중이 20% 손실된 임의의 동물을 사망으로 점수 매겼다. 시험군은 바이러스 시험감염 2시간 후, 접합체 33, hIgG1 Fc 대조군 또는 비히클(PBS)의 단일 피하(SC) 처리를 제공받았다. 연구 설계를 표 51에 요약한다.
Figure pct00807
예측된 바와 같이, 비히클 또는 hIgG1 Fc 대조군을 제공받은 마우스는 6 내지 7일에 감염에 대해서 굴복하였다(표 52). 그러나, 접합체 33으로 처리된 마우스는 1, 0.3, 및 0.1㎎/㎏ 용량 수준에서 완전히 보호되었다. 접합체 33의 사망률은 0.03㎎/㎏의 가장 낮은 농도에서만 인지되었다.
Figure pct00808
접합체 33의 효력은 매일 체중 측정에 의해서 추가로 뒷받침되었다. 예측된 바와 같이, 비히클 또는 hIgG1 Fc로 처리된 마우스는 사망률로 점수 매겨지는 20%를 초과할 때까지 체중의 꾸준한 감소를 나타내었다(표 53).
대조군 마우스와 대조적으로, 1, 0.3, 및 0.1㎎/㎏의 접합체 33을 제공받은 이러한 군은 연구 전체에서 건강한 체중을 유지하였고, 8% 미만의 일시적인 체중 감소를 초과하지 않았다(0.1 mk/㎏ 용량군, 8일; 표 53). 생존 및 체중 측정 둘 다에 의해서, 접합체 33은 0.1㎎/㎏만큼 낮은 단일 SC 용량으로 인플루엔자 A/Puerto Rico/8/1934의 치명적인 시험감염으로부터 강력한 보호를 나타내었다.
Figure pct00809
실시예 133. A/PR/8/1934(H1N1), 폐 PFU 부담 및 사이토카인 수준에 대한 접합체 33의 효능
3E2 PFU/마우스(3x LD95)의 마우스-적응성 인플루엔자 A/PR /8/1934(H1N1)가 비강내로 시험감염된 6 내지 8주량의 암컷 BALB/c 마우스(찰스 리버사)에서 접합체 33에 대한 효능 연구를 수행하였다. 접합체 33 또는 인간 IgG1 Fc 대조군을 시험감염 2시간 후 단일 피하(SC) 용량으로 0.1 내지 3㎎/㎏으로 투여하였다. 오셀타미비어를 경구로 감염 후 2시간에서 시작하여 4일 동안 5 또는 50㎎/㎏으로 매일 2회 투여하였다. 발록사비어를 0.5% 메틸셀룰로스에 현탁시키고, 감염 후 2시간에 시작하여 4일 동안 매일 2회 경구로 30㎎/㎏을 투여하였다(표 54). 체중(BW)을 4일 동안 기록하였다(도 62A 및 도 62B). 감염 후 4일에, 마우스를 CO2로 희생시키고, 양 폐엽을 수거하였다. 폐를 MagNA Lyser(로슈사(Roche))를 사용하여 1mm 실리카 비드로 1㎖ PBS 중에서 균질화시켰다. 6,000rpm에서 60초 동안 균질화를 수행하고, 실시 사이에 얼음에서 5분 동안 급랭시켰다. 폐 균질화 후, 튜브를 10분 동안 600×g에서 원심분리시키고, 상청액을 새로운 튜브로 옮겼다.
Figure pct00810
PFU를 결정하기 위해서, 폐 균질액의 상청액을 10-1 내지 10-6 범위의 감염 완충액에 희석시켰다. 100㎕의 바이러스 희석액을 24 웰 플레이트 내의 MDCK 세포의 컨플루언트 단일층에 첨가하고, 15분마다 흔들면서 실온에서 1시간 동안 인큐베이션시켰다. 바이러스를 제거한 후 Avicel을 함유한 액체 오버레이 배지를 MDCK 세포에 첨가하였다. 세포를 37℃, 5% CO2에서 40시간 동안 인큐베이션시켰다. 인큐베이션 후, 배지를 제거하고, 세포를 크리스탈 바이올렛으로 염색하여 플라크를 계수하고, 플라크 형성 단위(PFU)를 폐의 중량에 대해서 계산하였다(PFU/g 폐).
사이토카인 분석을 위해서, 폐 균질액의 상청액을 96 웰 플레이트에서 2배로 연속 희석시켰다. INF-γ, TNF-α, IL-6, MIP-1α 및 MCP-1에 대한 사이토카인 수준을 제조사(알앤디 시스템즈사(R&D Systems))의 지침에 따라서 ELISA로 결정하였다. 마우스 모델에서 인플루엔자로의 치명적인 시험감염 후, 폐 PFU 부담(도 63A 및 도 63B) 및 폐 사이토카인 수준을 감염 4일 후에 결정하였다(각각 표 55, 및 표 56). 접합체 33은 바이러스 부담의 용량 의존적인 log 감소를 나타내었으며, 0.1㎎/㎏에서는 0.7, 0.3㎎/㎏에서는 1.88, 1㎎/㎏에서는 3 그리고 3㎎/㎏에서는 3.8이었다. 5㎎/㎏ 및 50㎎/㎏의 오셀타미비어는 바이러스 부담에 대해 약간의 효과를 가졌는데, 각각 0.86 및 2 log 감소였다. 발록사비어는 1e2 PFU/㎖인 검출 한계치보다 낮게 바이러스 부담을 감소시켰으므로, PBS 대조군과 비교할 때 5.99를 초과하게 바이러스 부담을 감소시켰다.
음성 대조군, PBS 및 hIgG1 Fc 사이에서는 예측된 바와 같이 어떠한 생물학적 관련 차이도 관찰되지 않았다.
접합체 33은 마우스 모델에서 인플루엔자 A로 시험감염된 감염 후 4일에 용량 의존적으로 바이러스 부담을 감소시킨다(표 55, 도 64A 내지 도 64B). 유사하게, 접합체 33은 마우스 모델에서 인플루엔자 A로 시험감염된 감염 후 4일에 대조군에 비해서 TNF-α, IL-6, INF-γ, MCP-1, 및 MIP-1α(각각 도 65A 내지 65E)에 대한 사이토카인 수준에서 용량 의존적 배수 감소를 나타내었다(표 56).
Figure pct00811
Figure pct00812
3㎎/㎏의 접합체 33의 시험된 최대 농도는, 감염되지 않은 대조군 마우스와 유사하게 감염 기간 전체에서 중량 손실을 나타내지 않았다(표 57).
Figure pct00813
실시예 134. 치사 중증 조합 면역결핍 마우스 모델(SCID)에서 인플루엔자 A(H1N1)에 대한 접합체 33의 효능
시험품을 암컷 BALB/c scid 마우스(잭슨 래보러토리즈, 6 내지 8주령)에서 치명적인 플루엔자 A 감염에 대해 평가하였다. 시험감염 바이러스(A/Puerto Rico/8/1934)는 마우스에서 치명적인 감염을 초래할 수 있는 마우스-적응성 단리물이다. 실험은 각각 5마리 마우스의 11개 군으로 구성되었다. 0일에, 케타민/자일라진(각각 150 및 10㎎/㎏)의 혼합물로 약하게 마취시킨 후, 모든 마우스를 30㎕(마우스당 대략 1E3)의 부피의 비강내 접종으로 3x LD95에서 바이러스로 시험감염시켰다.
군은 바이러스 시험감염 2시간 후에 비히클(PBS), hIgG1 Fc 대조군 또는 접합체 33(3, 1, 0.3, 0.1, 0.03㎎/㎏)의 단일 SC 치료를 제공받았다. 연구의 개별 아암은 발록사비어 마복실(디씨 케미컬즈사(DC Chemicals), 중국 상해 소재)로 경구로, 매일 2회, 1일 동안 처리되고; 또한 바이러스 시험감염 2시간 후에 시작하는 마우스의 3개의 군으로 이루어졌다. 마우스를 2주 동안 모니터링하고, 20%를 초과하는 체중 손실을 갖거나 빈사 상태로 발견된 동물을 사망으로 점수 매겼다.
연구 마지막(14일)에 접합체 33을 제공받은 마우스는 3 내지 0.1㎎/㎏의 모든 용량 농도에서 완전히 보호되었다(표 58). 접합체 33만 0.03㎎/㎏의 가장 낮은 시험 농도에서 치명적인 바이러스 시험감염에 대해서 보호하지 못했다. 예측된 바와 같이, 비히클 또는 hIgG1 Fc를 제공받은 군을 보호되지 않았다. 발록사비어로 처리된 마우스 또한 보호되었지만, 60 및 20㎎/㎏의 상당히 더 높은 누적 용량에서 보호되었으며, 6㎎/㎏의 총 용량에서 마우스 중 40%만 14일에 생존하였다.
Figure pct00814
중증 면역결핍의 이러한 모델에서 접합체 33의 효력은 또한 체중에 기초하여 입증되었다(표 59). 사망률 판독에 기초하여 완전 보호를 제공한 접합체의 가장 낮은 농도는 0.1㎎/㎏이었다. 이러한 용량 수준에서, 군에 대한 최대 평균 체중 감소는 일시적이었고, 5% 미만의 감소였다(2일에 일어남). 추가로, 1 및 3㎎/㎏ 용량 수준에서 군에 대한 체중 차이는 감염되지 않은 마우스에 비해서 14일에 2% 미만의 차이를 나타내었다.
총괄적으로 이러한 데이터는, 치명적으로 시험감염된 마우스를 0.1㎎/㎏의 낮은 단일 SC 용량의 접합체로 보호함으로써 접합체 33의 효력을 입증하였다. 이는 인플루엔자 감염을 제거하는데 필수적인 T & B 면역 세포가 완전히 결여된 마우스에서 면역결핍의 중증 모델에서 달성되었다. 이러한 데이터는 면역 적격 환자 집단에서 접합체 33의 사용을 뒷받침한다.
Figure pct00815
실시예 135. 치사 마우스 모델에서 인플루엔자 A/California/07/2009(H1N1)　pdm에 대해서 피하로 투여된 접합체 33의 효능
접합체 33을 암컷 BALB/c 마우스(찰스 리버 래보러토리즈, 6 내지 8주령)에서 치명적인 IAV H1N1 인플루엔자 감염에 대해 평가하였다. 시험감염 바이러스(A/California/07/2009(H1N1)　pdm)는 마우스에서 치명적인 감염을 초래할 수 있는 유행성 단리물이다. 실험은 5마리 마우스의 6개 군으로 구성되었다. 0일에, 케타민/자일라진(각각 150 및 10㎎/㎏)의 혼합물로 약하게 마취시킨 후, 모든 마우스를 30㎕의 부피의 비강내 접종으로 3x LD95에서 바이러스로 시험감염시켰다. 사망률 및 체중을 매일 기록하였고, 체중이 20% 손실된 임의의 동물을 사망으로 점수 매겼다.
시험군은 바이러스 시험감염 2시간 후, 접합체 33, hIgG1 Fc 대조군 또는 비히클(PBS)의 단일 피하(SC) 처리를 제공받았다. 연구 설계 및 용량 수준을 표 60에 요약한다.
Figure pct00816
예측된 바와 같이, 비히클 또는 hIgG1 Fc 대조군을 제공받은 마우스는 6 내지 7일에 감염에 대해서 굴복하였다(표 61). 그러나, 접합체 33으로 처리된 마우스는 1㎎/㎏에서 완전히 보호되었고, 0.3에서 거의 보호되었다(80% 생존). 접합체 33의 사용 시 유의한 사망은 0.1 및 0.03㎎/㎏의 더 낮은 용량에서만 인지되었다.
Figure pct00817
접합체 33의 효력은 매일 체중 측정에 의해서 추가로 뒷받침되었다. 예측된 바와 같이, 비히클 또는 hIgG1 Fc로 처리된 마우스는 사망률로 점수 매겨지는 20%를 초과할 때까지 체중의 꾸준한 감소를 나타내었다(표 62).
대조군 마우스와 대조적으로, 1㎎/㎏의 접합체 33을 제공받은 마우스만 대략 10%의 일시적인 체중 감소를 나타내었고, 이러한 감소는 3일에 최대였다(표 62). 생존 및 체중 측정 둘 다에 의해서, 접합체 33은 단일 1㎎/㎏ 용량이 SC로 투여되는 경우 인플루엔자 A/California/07/2009(H1N1)　pdm의 치명적인 시험감염으로부터 강력한 보호를 나타내었다. 본 연구에 사용된 임상적으로 관련된 유행성 균주에 대한 활성은 중증 인플루엔자 감염의 치료에서 접합체 33의 유용성을 뒷받침한다.
Figure pct00818
실시예 136. 지연된 치료의 치사 마우스 모델에서 인플루엔자 A/Puerto Rico/8/1934(H1N1)에 대한 정맥내(IV) 투여된 접합체 33의 효능
접합체 33을 암컷 BALB/c 마우스(찰스 리버 래보러토리즈, 6 내지 8주령)에서 치명적인 인플루엔자 A(H1N1)에 대해 평가하였다. 시험감염 바이러스(A/Puerto Rico/8/1934)는 마우스에서 치명적인 감염을 초래할 수 있는 마우스-적응성 단리물이다. 0일에, 케타민/자일라진(각각 150 및 10㎎/㎏)의 혼합물로 약하게 마취시킨 후, 모든 마우스를 30㎕의 부피의 비강내 접종으로 3x LD95에서 바이러스로 시험감염시켰다. 사망률 및 체중을 매일 기록하였고, 체중이 20% 손실된 임의의 동물을 사망으로 점수 매겼다.
연구 설계는 표 63에 상세히 기재되어 있고, 다중 아암으로 이루어진다. 대조군 아암은 바이러스 감염 24시간 후에 투여된 비히클(PBS) 및 hIgG1 Fc 단독 군을 포함한다(감염되지 않은 군을 또한 이 암의 일부임). 제2 아암은 치료의 개시가 24, 48 또는 72시간 동안 지연된, 4x 이의 인간화된 용량으로 투여된 오셀타미비어로 이루어졌다. 마지막 제3 아암은 10, 3 또는 1㎎/㎏의 단일 IV 용량으로 투여된 접합체 33으로 이루어졌고; 각각은 상기 오셀타미비어 아암과 동일한 스케줄로 투여되었다.
예측된 바와 같이, 비히클 및 hIgG1 Fc는 바이러스 감염 24시간 후에 투여되는 경우 보호적이 아니었고, 7일에 완전한 사망을 초래하였다. 다른 한편, 오셀타미비어는 4x 인간화된 용량(200㎎/㎏ cumulative dose)에서도 투여가 24시간 지연될 때 부분적으로 효능이 있었다(표 64; 40% 생존). 그러나, 접합체 33은 동일한 24시간 투여 스케줄에서 모든 농도(10, 3 및 1㎎/㎏)에서 완전히 보호적이었다.
투여가 바이러스 시험감염 후 전체적으로 48시간 지연된 경우, 오셀타미비어는 더 이상 효능이 없었지만(0% 생존), 접합체 33은 10 및 3㎎/㎏의 용량에서 80% 생존이었다. 투여가 72시간까지 지연되는 경우, 10㎎/㎏ 용량의 접합체 33만 부분적인 보호를 나타내었다(40%). 접합체 33의 효능은 또한 매일 체중 측정에 기초하여 입증되었다(표 65). 이는 특히 T+24시간 군에서 유의하였는데, 여기서 임의의 접합체 33군에서 3% 미만의 감소가 관찰되었고, 이는 일시적이었고, 1일에 일어났다. 본 연구에서, 접합체 33은 인플루엔자에 대한 승인된 치료제인 오셀타미비어보다 더 효능이 있다.
Figure pct00819
Figure pct00820
Figure pct00821
실시예 137. 접합체 38(Int-73), 접합체 39(Int-74), 접합체 40(Int-75), 및 접합체 41(Int-76)의 합성
15-㎖ 멸균 원심분리 튜브에 아스코르브산나트륨(68.3㎎, 0.345m㏖), BTTAA(11.9㎎, 0.0276m㏖), 실시예 114로부터의 생성물(Int-73), 115(Int-74), 116(Int-75) 또는 117(Int-76)(0.00953m㏖) 및 PBS 7.4(1㎖)를 넣었다. 균질해질 때까지 시약을 보텍싱시키고, 이어서 아지도 Fc(50㎎, 0.0008624m㏖, 실시예 124에 기재됨, 서열번호 64), 그 다음 물(0.5㎖) 중의 CuSO4(1.1㎎, 0.0069m㏖)의 용액과 혼합하였다. 혼합물을 12시간 동안 회전시키고, 이어서 단백질-A 칼럼에서의 친화도 크로마토그래피, 그 다음 크기 배제 크로마토그래피로 정제시켰다. 접합체를 Maldi TOF 분석으로 특징규명하였다(DAR 전형적으로=4.5). 수율은 전형적으로 50%이다.
실시예 138. Int-79의 합성
Figure pct00822
단계 a.
Figure pct00823
자나미비어-에터-산(0.90g, 1.43m㏖, 실시예 31) 및 N-메틸 몰폴린 (0.23㎖, 2.14m㏖)을 THF(35㎖)에 용해시키고, 질소 분위기 하에서 0℃(빙수욕)까지 냉각시켰다. 아이소부틸 클로로폼에이트(2㎖ DCM 중의 0.24㎖, 1.85m㏖)를 시린지를 사용하여 5분의 기간에 걸쳐서 적가하였다. 혼합물을 0℃에서 30분 동안 이어서 주변 온도에서 15분 동안 교반하고, 이어서 0℃까지 냉각시켰다. 소듐 보로하이드라이드(540㎎, 14.3m㏖, 5㎖의 메탄올에 용해됨)를 5분에 걸쳐서 적가하였다. 반응을 15분 동안 교반하였고, 이 때 모든 출발 물질이 소모되었다(LC/MS). 몇 방울(약 1㎖)의 빙초산을 첨가하여 혼합물을 산성화시켰다(pH 약 5). 에틸 아세테이트 및 물로 희석시키고, 에틸 아세테이트(3x)추출하였다. 유기층을 염수로 세척하고, 유기 추출물을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 회전식 증발기로 농축시켰다. 조 물질을 실리카겔 크로마토그래피(셀라이트가 먼저 로딩됨)로 정제시켰다(DCM 중의 0%-10% 메탄올, 30분). 수율 0.66g, 75%. LCMS로 관찰된 이온: [M + H]+ = 617.2.
단계 b.
Figure pct00824
알코올(20㎖ CH2Cl2 중의 0.66, 1.1 mol)의 교반 혼합물에, 트라이에틸아민(0.30㎖, 1.3m㏖)을 첨가하였다. 혼합물을 1대기압의 질소 하에서 0℃(빙수욕)까지 냉각시키고, 이어서 시린지를 사용하여 5분에 걸쳐서 메실 클로라이드(150㎎, 1.3m㏖)를 적가하였다. 빙욕을 제거하고, 반응을 45분 동안 교반하였다. 혼합물을 포화 수성 중탄산나트륨으로 희석시키고, DCM(3x)으로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 염수로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 회전식 증발기로 농축시켰다. LCMS로 관찰된 이온: [M + H]+ = 695.2. 중간체를 정제하지 않고 다음 단계에서 사용하였다.
자나미비어 메실레이트를 DMF에서 80℃에서 3당량의 소듐 아자이드와 함께 5시간 동안 교반하였다. 혼합물을 물로 희석시키고, DCM(3x)으로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 염수로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 농축시켰다. LCMS로 관찰된 이온: [M + H]+ = 695.2. 아자이드를 취하여 정제하지 않고 다음 단계를 수행하였다.
자나미비어 아자이드(670㎎, 1.04m㏖)를 린들러 촉매(300㎎)의 존재 하에서 수소 기체 1대기압 하에서 12시간 동안 메탄올(20㎖) 중에서 교반하였다. 혼합물을 셀라이트로 여과시키고, 농축시켜 표제 화합물을 투명한 오일로서 제공하였다. 아민을 취하여 정제하지 않고 다음 단계를 수행하였다. 3단계에 대해서 수율 0.37g, 54%. LCMS로 관찰된 이온: [M + H]+ = 616.2.
단계 c.
Figure pct00825
메틸 3-(벤질아미노)프로판오에이트(1g, 5.2m㏖), 메틸 4-브로모부탄오에이트(1.2g, 6.2m㏖) 및 다이아이소프로필에틸아민(1.34㎖, 7.8m㏖)을 DMF(5㎖)에서 65℃에서 4시간 동안 교반하였다. 대부분의 용매를 회전식 증발기에서 제거하고, 조 물질을 실리카겔 크로마토그래피(Isco, DCM 중의 0에서 9% 메탄올, 30분 구배)로 정제시켜 벤질 보호된 중간체를 투명한 오일로서 제공하였다. 벤질 보호된 중간체를 메탄올(20㎖) 중에서 1대기압의 수소 기체 분위기에서 탄소 상의 20% 팔라듐 하이드록사이드(300㎎)의 존재 하에서 12시간 동안 교반하였다. 혼합물을 셀라이트로 여과시키고, 농축시켜 표제 화합물을 투명한 오일로서 제공하였다. 수율 0.72g, 69%. LCMS로 관찰된 이온: [M + H]+ = 204.2.
단계 d.
Figure pct00826
DMF(2㎖) 중의 단계-c 생성물(0.70g, 2.16m㏖), 프로파길 PEG-4 산(0.63㎎, 2.38m㏖), HATU(1.26g, 3.24m㏖)를 실온에서 교반하고, 그 다음 DIEA(1.15㎖, 6.49m㏖)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 2시간 동안 교반하고, 이어서 역상 액체 크로마토그래피(Isco, 5에서 50% 아세토나이트릴 및 물, 개질제로서 0.1% TFA 함유)로 정제시켰다. 수율 840㎎, 87%. LCMS로 관찰된 이온 [M+H]+ = 446.2.
단계 e.
Figure pct00827
H2O:MeOH(1:2, 9㎖) 중의 단계-d 생성물(840㎎, 1.85m㏖) 및 LiOH(113.1㎎, 4.72m㏖)의 용액을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 이어서 반응을 TFA로 산성화시켰다. 생성된 용액을 농축시키고, 이어서 역상 액체 크로마토그래피(Isco, 0%에서 20% 아세토나이트릴 및 물)로 정제시켰다. 수율 454.5㎎, 59%. LCMS로 관찰된 이온 [M+H]+ = 418.2.
단계 f.
Figure pct00828
실온에서 무수 DMF(3㎖) 중의 단계-b 생성물(334.7㎎, 0.52m㏖), 단계-e 생성물(102㎎, 0.24m㏖) 및 HATU(273.25㎎, 0.704m㏖)의 용액에 DIEA(217㎎, 16.4m㏖)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 1시간 동안 교반하고, 이어서 RPLC(20%에서 100% 메탄올 및 물, 개질제 없음)로 직접 정제시켰다. 수율 206.5㎎, 55%. LCMS로 관찰된 이온 [(M+2H)/2]+ = 806.8.
단계 g.
Figure pct00829
CH2Cl2(5㎖) 중의 단계-f 생성물(206.5㎎, 0.128m㏖) 및 TFA(3㎖)를 실온에서 밤새 교반하고, 이어서 감압 하에서 농축시켰다. 생성된 잔류물을 반정제용 HPLC(0%에서 30% 아세토나이트릴 및 물, 개질제로서 0.1% TFA 함유)로 정제시켰다. 수율 144.5㎎, 69%. LCMS로 관찰된 이온 [(M+2H)/2]+ = 606.8.
단계 h.
Figure pct00830
MeOH(9㎖) 및 물(3㎖) 중의 단계-g 생성물(144.5㎎, 0.119m㏖)의 용액에 LiOH(18㎎, 0.75m㏖)를 첨가하였다. 생성된 용액을 실온에서 1시간 동안 교반하고, 이어서 TFA로 산성화시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 반정제용 HPLC(0%에서 25% 아세토나이트릴 및 물, 개질제로서 0.1%TFA 함유)로 정제시켰다. 수율 45㎎, 28%. LCMS로 관찰된 이온 [(M+2H)/2]+ = 566.8.
실시예 139. 접합체 42의 합성
아지도 작용화된 Fc(50㎎, 5.4㎖, 0.859μ㏖, 실시예 124, 서열번호 18)의 용액을 알킨 유도체화된 소분자(7.87㎎, 0.057m㏖, 실시예 138)를 함유하는 10 ㎖ 원심분리 튜브에 첨가하였다. 약하게 진탕하여 모든 고체를 용해시킨 후, 혼합물을 PBS 7.4 완충액 중의 L-아스코르브산 나트륨(0.68㎎, 0.34m㏖, 0.25 M), 황산나트륨(II)(1.1㎎, 0.0069m㏖, 0.005 M) 및 BTTAA(11.8㎎, 0.027m㏖, 0.02 M)의 3㎖의 미리 혼합된 용액에 첨가하였다. 생성된 용액을 밤새 약하게 회전시켰다. 그것을 단백질 A 칼럼 상의 친화도 크로마토그래피(일반 접합체 정제 프로토콜 참고)로 정제시키고, 그 다음 크기 배제 크로마토그래피로 정제시켰다. 정제된 최종 생성물의 Maldi TOF 분석은 63623Da(DAR 3.8)의 평균 질량을 제공하였다. 수율 36.01㎎, 72%.
실시예 140. Int-80의 합성
Figure pct00831
단계 a.
Figure pct00832
무수 다이클로로메탄(5㎖) 중의 자나미비어의 p-나이트로페닐 카보네이트(0.3 g. 0.4m㏖, 실시예 103)의 용액에 무수 DMF(5㎖) 중의 프로파길-PEG4-메틸아민 (0.11g, 0.44m㏖) 및 DIPEA(0.14㎖, 1.0m㏖)를 첨가하였다. 반응을 실온에서 밤새 교반하고, 이어서 농축시키고, 0% 내지 10% 메탄올/다이클로로메탄으로 용리시키는 플래시 크로마토그래피로 정제시켰다. 수율 0.28g, 81%. LCMS로 관찰된 이온: (M + H)+ = 858.4, (M - Boc)+H+ = 758.4.　
단계 b.
Figure pct00833
이전 단계로부터의 생성물(280㎎, 0.2m㏖)을 2㎖ MeOH 및 2㎖ THF에 용해시키고, 이어서 2㎖ 물에 용해된 수산화리튬(24㎎, 1m㏖)의 용액으로 처리하였다. 반응을 10분 동안 실온에서 교반하였고, 이 때 HPLC가 반응이 완결되었음을 나타내었다. Amberlite IRN-77 이온 교환 수지를 사용함으로써 반응의 pH를 5 내지 6의 값으로 조정하고, 이어서 여과하여 수지를 제거하였다. 조 여과액을 진공 하에서 증발 건조시키고, 정제하지 않고 다음 단계에 사용하였고, 수율은 정량적이었다. LCMS로 발견된 이온(들): (M + H)+ = 844.4, (M - Boc + H)+ = 744.4.
단계 c.
Figure pct00834
단계-b 생성물을 2㎖ 다이클로로메탄 및 2㎖ TFA에 용해시키고, 실온에서 교반하였다. 반응의 진행을 LCMS로 모니터링하였다. 반응이 완결된 후(6시간), 용액을 제거하여 건조시키고, 이어서 2㎖ 물 및 2㎖ 아세토나이트릴에 용해시켰다. 생성된 용액을 또 다른 2시간 동안 실온에서 교반하였고, 이 때 LCMS는 아세토나이드 보호기의 완전한 탈보호를 나타내었다. 이 혼합물을 농축시키고, 개질제로서 0.1% TFA를 함유하는 5%에서 40% 아세토나이트릴/물로 용리시키는 Isco CombiFlash 액체 크로마토그래프를 사용하여 역상 액체 크로마토그래피(RPLC)로 정제시켰다. 수율 180㎎, 78.0%. LCMS로 발견된 이온(들): (M + H)+ = 604.2.　
실시예 141. Int-4와 비교한 Int-80에 대한 안정성 데이터
Int-80(실시예 140) 및 Int-4(실시예 13)를 탈이온수에 10㎎/㎖로 용해시키고, 이어서 1㎎/㎖의 최종 농도로 1X PBS에 1:10으로 희석시켰다. 샘플을 37℃ 또는 60℃에서 1주 동안 인큐베이션시켰다. 25uL의 분취물을 HPLC 분석을 위해서 75uL의 물에 희석시켰다. Phenomenex Biozen PS-C18 칼럼(150x2.1mm, 1.6um)이 구비된 Waters Acquity H-Class UPLC를 사용하여, 물 중의 0.1% 폼산에서 아세토나이트릴 중의 0.1% 폼산까지의 구배를 하기와 같이 실시하였다: 0 내지 1분 동안 5% B, 1 내지 20분 동안 5-20% B. 검출은 다이오드 어레이 검출기를 사용하여 240nm에서 수행하였다. Int-80은 60℃에서 1주에 걸쳐서 1% 미만의 분해되었지만, Int-4는 동일한 시간 기간에 걸쳐서 15% 분해되었다(도 66)
실시예 142. 접합체 43의 합성
클릭 시약 용액의 제조: PBS ×1 완충 용액 중의 0.0050M CuSO4: 10.0㎎의 CuSO4를 12.53㎖ PBS ×1에 용해시키고, 이어서 10.00㎖의 이러한 CuSO4 용액을 취하고, 86.1㎎ BTTAA 및 495.3㎎ Na 아스코르베이트를 첨가하여 클릭 시약 용액(0.0050M CuSO4, 0.020M BTTAA 및 0.25M 아스코르브산나트륨)을 제공하였다.
아지도 작용화된 Fc(78.0㎎, 4.535㎖, 1.35μ㏖, 실시예 124, 서열번호 64)의 용액을 알킨 유도체화된 소분자(13.2㎎, 8.88umol, Int-80, 실시예 140)를 함유하는 15㎖ 원심분리 튜브에 첨가하였다. 약하게 진탕하여 모든 고체를 용해시킨 후, 혼합물을 (L-스코르브산 나트륨, 0.25 M, 106.6㎎, 0.538m㏖, 황산나트륨(II) 0.0050M, 1.72㎎, 0.0107m㏖, 및 BTTAA 0.020M, 18.5㎎, 0.0431m㏖)의 상기 클릭 시약 용액 2.153㎖와 함께 첨가하였다. 생성된 혼합물을 주변 온도에서 6시간 동안 약하게 회전시켰다. 그것을 단백질 A 칼럼 상의 친화도 크로마토그래피(일반 접합체 정제 프로토콜 참고)로 정제시키고, 그 다음 크기 배제 크로마토그래피로 정제시켰다. 정제된 최종 생성물의 Maldi TOF 분석은 64,012Da(DAR=7.0)의 평균 질량을 제공하였다. 수율 50.3㎎, 62% 수율.
실시예 143. Int-81의 합성
Figure pct00835
단계 a.
Figure pct00836
빙수욕으로 냉각된 DMSO(20㎖) 중의 N-Boc-N-Me-글리시놀(3.5g, 20m㏖)의 잘 교반되는 용액에 알릴 브로마이드(3.6g, 30.0m㏖), 그 다음 미분 KOH 분말(3.5g, 30.0m㏖)을 15분에 걸쳐서 첨가하였다. 생성된 용액을 밤새 실온에서 교반하였다. 생성된 혼합물을 5% 수성 HOAc(50㎖)와 에틸 아세테이트(200㎖) 사이에 분배시켰다. 유기층을 분리시키고, 염수로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 여과시키고, 농축시키고, 이어서 10%에서 80% 에틸 아세테이트/헥산으로 용리시키는 플래시 크로마토그래피로 정제시켰다. 생성물의 수율 4.1g, 95%. LCMS로 발견된 이온(들): M+H=216.3.
단계 b.
Figure pct00837
-78℃에서 오존을 MeOH(50㎖) 및 DCM(50㎖) 중의 단계 a로부터의 화합물(8.0g, 37m㏖)의 용액에 밝은 청색이 나타날 때까지 버블링하였다. 산소를 10분 동안 버블링하여 미반응 오존을 제거한 후, NaBH4(1.6g, 40m㏖)를 조금씩 10분에 걸쳐 첨가하였다. 모든 NaBH4를 첨가한 후, 혼합물을 서서히 실온까지 가온시켰다. 생성된 용액을 에틸 아세테이트(100㎖) 와 염수(50㎖) 사이에 분배시켰다. 유기층을 분리시키고, 염수로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 여과시키고, 오일로 농축시키고, 이어서 10%에서 80% 에틸 아세테이트/다이클로로메탄으로 용리시키는 플래시 크로마토그래피로 정제시켰다. 생성물의 수율 5.0g, 62%. LCMS로 발견된 이온(들): M+H=220.2.
단계 c.
Figure pct00838
0℃에서 DCM(50㎖) 중의 이전 단계로부터의 생성물(4.4g, 20m㏖) 및 CBr4(10.0g, 30.0m㏖)의 용액에 PPh3(8.0g, 30m㏖)를 서서히 15분에 걸쳐서 첨가하였다(발열). 첨가 기간 동안, 내부 온도를 30℃로 유지시켰다. PPh3의 첨가 후, 반응을 밤새 실온에서 교반하였다. 조 반응물을 오일로 농축시키고, 이어서 10% 에틸 아세테이트/헥산에서 80% 에틸 아세테이트/헥산으로 용리시키는 정상 크로마토그래피로 정제시켰다. 수집 튜브 내부에 오일 소적을 함유하는 분획을 합하고, 무색 오일로 농축시켰다. 4.0g, 70.5%. LCMS로 발견된 이온(들): M+H=282.1.
단계 d.
Figure pct00839
DMF(20㎖) 중의 단계-a 생성물(4g, 14m㏖), 벤질아민(0.60g, 5.7m㏖), 및 K2CO3(2.35g, 17m㏖)의 용액을 오일욕에서 75℃로 8시간 동안 가열시켰다. 혼합물을 여과시키고, 농축시키고, RPLC(5% ACN/물에서 100% ACN)로 정제시켰다. 수율 2.1g, 72.7%.
단계 e.
Figure pct00840
CHCl3/EtOH(1:20, 20㎖)에 용해된 단계-d 생성물(1.3g, 2.0m㏖)의 용액에 20% Pd(OH)2/C(0.50g)를 첨가하였다. 반응을 밤새 수소 풍선 하에서 주변 온도에서 교반하였다. 반응 혼합물을 셀라이트 패드로 여과시키고, 이어서 회전식 증발기로 농축시키고, 추가로 정제하지 않고 다음 단계에서 사용하였다.
단계 f.
Figure pct00841
단계-e 생성물을 10㎖의 DMF에 용해시키고, 이어서 프로파길 PEG4 산(0.52g, 2.0m㏖), EDCI(0.6g, 3.0m㏖), HOAt(0.45g, 3 mol) 및 휴닉 염기(0.7㎖, 5.0m㏖)로 실온에서 처리하였다. 반응 혼합물을 4시간 동안 교반하고, 이어서 농축시키고, RPLC(10% ACN/물에서 60% ACN/물)로 정제시켰다. 2단계에 대해서 수율 0.43g, 65%. LCMS로 관찰된 이온: [M - Boc + H]+ = 562.4, [M + H]+ = 662.4.
단계 g.
Figure pct00842
단계-d 생성물(70㎎, 0.1m㏖)을 TFA(2㎖)로 2시간 동안 실온에서 처리하였다. TFA를 회전식 증발로 제거하고, 나머지 오일을 추가로 고압 하에서 12시간 동안 건조시켜 목적하는 생성물을 비스-TFA 염으로서 제공하였다. 수율은 정량적이었다. LCMS로 관찰된 이온: [M + H]+ = 462.4.
단계 h.
Figure pct00843
무수 DMF(5㎖) 중의 실시예 109에 기재된 나이트로페닐 카보네이트(0.72 g. 0.95m㏖)의 용액에 무수 DMF(20㎖) 중의 단계 g 다이아민(0.3g, 0.43m㏖, 30분 동안 나누어 첨가함) 및 DIPEA(0.28㎖, 2m㏖)의 혼합물을 첨가하였다. 반응을 실온에서 밤새 교반하고, 이어서 농축시키고, 0% 내지 10% 메탄올/다이클로로메탄으로 용리시키는 플래시 크로마토그래피로 정제시켰다. 수율 0.63g, 86%. LCMS로 관찰된 이온: [(M + 2H)/2]+ = 844.4, [(M - Boc + 2H)/2]+ = 794.4, [(M - 2Boc + 2H)/2]+ = 744.4.
단계 i.
Figure pct00844
이전 단계로부터의 생성물(600㎎, 0.35m㏖)을 5㎖ MeOH 및 5㎖ THF에 용해시키고, 이어서 2㎖ 물에 용해된 수산화리튬(48㎎, 2m㏖)의 용액으로 처리하였다. 반응을 10분 동안 실온에서 교반하였고, 이 때 HPLC가 반응이 완결되었음을 나타내었다. Amberlite IRN-77 이온 교환 수지를 사용함으로써 반응 용액의 pH를 5 내지 6의 값으로 조정하고, 이어서 여과하여 수지를 제거하였다. 조 생성물을 회전식 증발로 증발 건조시키고, 정제하지 않고 다음 단계에 사용하였다. LCMS로 관찰된 이온(들): [(M + 2H)/2]+ = 829.9, [(M - Boc + 2H)/2]+ = 779.4, [(M - 2Boc + 2H)/2]+ = 729.4.　
단계 j.
Figure pct00845
단계-i로부터의 생성물을 5㎖ 다이클로로메탄 및 5㎖ TFA에 용해시키고, 실온에서 교반하였다. 반응의 진행을 LCMS로 모니터링하였다. 반응이 완결된 후(6시간), 용액을 제거하여 건조시키고, 이어서 4㎖ 물 및 4㎖ 메탄올에 용해시켰다. 생성된 용액을 또 다른 2시간 동안 실온에서 교반하였고, 이 때 LCMS는 아세토나이드 보호기의 완전한 탈보호를 나타내었다. 이 혼합물을 농축시키고, 개질제로서 0.1% TFA를 함유하는 5%에서 40% 아세토나이트릴/물로 용리시키는 Isco CombiFlash 액체 크로마토그래프를 사용하여 역상 액체 크로마토그래피(RPLC)로 정제시켰다. 수율 380㎎, 71.0%. LCMS로 관찰된 이온(들): [(M + 2H)/2]+ = 589.8, [(M + 3H)/]+ = 392.5.
실시예 144. Int-82의 합성
Figure pct00846
표제 화합물을 실시예 143, Int-81과 유사하게 제조하였는데, 여기서 N-Boc-N-Me-글리시놀을 단계 a에서 N-Boc-N-에틸-글리시놀로 대체하엿다. LCMS로 발견된 이온(들): [M/2]+1=603.8, [M/3]+1=402.9.
실시예 145. Int-83의 합성
Figure pct00847
단계 a.
Figure pct00848
CBZ-보호된-아미노-peg1-브로마이드(7.6g, 25.2m㏖), 벤질아민(1.1g, 10.1m㏖), 및 탄산칼륨(2.8g, 2.8m㏖)을 DMF(10㎖) 중에서 60℃에서 12시간 동안 교반하였다. 용액을 회전식 증발기로 농축시키고, 실리카겔 크로마토그래피(DCM 중의 0-10% 메탄올, 30분 구배)로 정제시켜 생성물을 투명한 점성 오일로서 제공하였다. 수율 3.2그램, 57%. LC/MS로 발견된 이온 [M+H]+ = 550.2.
단계 b.
Figure pct00849
단계 a의 생성물(1.9g, 3.5m㏖)을 THF(20㎖)에 용해시키고, 질소 분위기 하에서 얼음/수욕으로 0℃까지 냉각시켰다. LAH(6.9㎖, 13.8m㏖, THF 중의 2M)를 10분에 기간에 걸쳐서 주사기로 적가하였다. 혼합물을 2시간 동안 환류 하에서 교반하고, 이어서 얼음/수욕으로 0℃까지 냉각시켰다. 1㎖의 물을 적가하고, 그 다음 1㎖의 수성(15중량%) NaOH 용액을 적가하였다. 3㎖의 물을 첨가하고, 혼합물을 15분 동안 교반하고, 이 때 2g의 황산마그네슘을 첨가하였다. 혼합물을 10분 동안 교반하고, 이어서 셀라이트로 여과시키고, 2개의 추가 10㎖ 분획의 THF로 세척하고, 합한 여과액을 회전식 증발기로 농축시켰다. 잔류물을 아세토나이트릴(20㎖)에 취하고, 트라이에틸아민(1.4g, 13.8m㏖) 및 boc 무수물(3.0g, 13.8m㏖)을 첨가하였다. 혼합물을 45분 동안 교반하고, 농축시키고, 역상 HPLC(5-95% 아세토나이트릴/DI 물, 0.1% TFA 개질제, 30분 구배)로 정제시켰다. 수율 1.4g, 79%. LC/MS로 관찰된 이온[M+H]+ = 510.2.
단계 c.
Figure pct00850
본 실시예의 단계 b.로부터의 생성물(1g, 1.9m㏖)을 수소 분위기 하에서 팔라듐 하이드록사이드(200㎎)의 존재 하에서 메탄올(25㎖)에서 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 셀라이트로 여과시키고, 농축시켜 생성물을 투명한 오일로서 제공하였고, 이것을 추가로 정제하지 않고 사용하였다. 수율 0.73g, 89%. LC/MS로 발견된 이온 [M+H]+ = 420.4.
단계 d.
Figure pct00851
단계 c로부터의 생성물(0.73g, 1.7m㏖), 프로파길-peg4-토실레이트(0.91g, 2.4m㏖) 및 다이아이소프로필에틸아민(0.76g, 5.9m㏖)을 DMF(5㎖) 중에서 85℃에서 4시간 동안 교반하였다. 혼합물을 회전식 증발기에서 농축시키고, 이어서 역상 HPLC(5-95% 아세토나이트릴/DI 물, 0.1% TFA 개질제, 30분 구배)로 정제시켜 생성물을 투명한 점성 오일로서 제공하였다. 수율 0.89g, 82%. LC/MS로 관찰된 이온 [M+H]+ = 634.4.
단계 e.
Figure pct00852
단계 d.로부터의 생성물(0.89g, 1.4 m㎖)을 4N HCl(다이옥산)에서 45분 동안 주변 온도에서 교반하였다. 혼합물을 회전식 증발기에서 농축시키고, 벤젠과 함께 공비증발시켰다(3x). 생성된 잔류물을 DI 물(15㎖)에 취하고, 동결시키고, 동결건조시켜 생성물을 투명한 오일, 비스-HCl 염으로서 제공하였다. 수율 0.65g, 91%. LC/MS로 발견된 이온 [M+H}+ = 434.4.
단계 f.
Figure pct00853
본 화합물의 합성에서 나머지 4개의 단계는 실시예 143, Int-81의 합성에서 사용된 것과 유사하였다. LCMS로 발견된 이온(들): (M+2H)/2=575.8
실시예 146. Int-83의 대안적인 합성
Figure pct00854
당업자는 실시예 145에 기재된 생성물, Int-83을 본 특허에 기재된 방법을 사용하여 상기 반응식을 사용하여 대안적으로 제조할 수 있다.
실시예 147. 내성 인플루엔자 바이러스의 선택을 위한 연속 계대 실험
바이러스 저해제로의 선택적인 압력 하에서 약물 내성 돌연변이체 바이러스 균주의 발생 가능성을 평가하기 위해서, 접합체 6 및 33 대 오셀타미비어 및 발록사비어 대응물을 사용하여 연속 계대 연구를 수행하였다. 연속 계대 연구는 A549 또는 MDCK 세포를 사용하여 수행하였다. 계대를 다음과 같이 수행하였다: 웰당 150,000개 A549 또는 MDCK 세포를 500㎕ DMEM 10% FBS, 1% PS, 1% NaPyr 및 1% HEPES에 웰당(12-웰) 시딩하고, 약 24시간 동안 인큐베이션시켰다. 세포가 약 80% 컨플루언시에 도달하면, 이들을 PBS로 1회 세척하고, 화합물 또는 PBS 단독의 존재 하에서 2시간 동안 정상 배양 조건 하에서 인큐베이션시켰다. 후속 계대를 위해 충분한 바이러스 생산을 유지시키면서, 시험품 농도를 최대 바이러스 저해를 위해 필요에 따라 최적화하였다. 연속 계대 실험에 사용된 시험품의 농도를 도 67 및 도 68에 제시한다. 세포를 PBS, 소 알부민 35% 및 Ca2+/Mg2+를 함유하는 완충액에서 실온에서 1시간 동안 0.01 또는 0.05의 MOI(각각 MDCK 및 A549 세포; 감염 완충액에 희석된 150ul)로 감염시켰고, 접종물을 제거하고, DMEM 1% PS, 1% NaPyr 및 1% HEPES(FBS 없음)로 세포를 1회 세척한다. 이어서 세포를 DMEM 1% PS, 1% NaPyr, 1% HEPES 및 1㎍/㎖의 TPCK 처리된 트립신에 희석된 시험품의 존재 하에서 24시간 동안 인큐베이션시켰다. 인큐베이션 후, 바이러스 상청액을 수집하고, 원심분리(5분, 4℃, 1,400xg)로 세포와 파편을 제거하였다. 이어서 상청액을 사용하여 다음을 수행하였다:
i 플라크 검정으로 바이러스 역가를 정량함
ii 혈구응집(hemagglutination) 검정을 수행하여 바이러스가 화합물 저해를 탈출했는지를 결정함
iii 새로 시딩된 A549 또는 MDCK 세포를 화합물의 존재 하에서 다시 감염시킴.
이 과정을 10회 계대 또는 오셀타미비어 및 발록사비어 대조군에 대한 내성이 관찰될 때까지 반복하였다. 약물의 존재 하에서 증가된 역가가 2회의의 연속적인 계대 동안 검출되면, 바이러스를 플라크 정제시킬 수 있다. 플라크 정제 후, 모든 8개의 게놈 분절을 서열결정하고, PBS 처리된 대조군 바이러스와 비교하여 탈출 돌연변이를 검출할 수 있다. 2회의 상이한 연속 계대 실험의 요약을 도 67 내지 도 68에 도시한다. 도 67에 요약된 실험에서, A/California/04/09/H1N1 pdm으로 감염된 A549 세포를 사용하여 접합체 6을 오셀타미비어 및 발록사비어와 비교하였다. 접합체 6, 발록사비어 및 오셀타미비어는 각각 0.5nM, 0.5nM 및 200nM에서 사용되었다. 11회의 계대를 통해 접합체 6에 대해 바이러스 역가의 증가가 관찰되지 않은 반면(내성 돌연변이의 출현이 없음을 시사함), 발록사비어 및 오셀타미비어 역가는 각각 5 및 11회의 계대 후 PBS 대조군에서 관찰된 것과 유사한 수준으로 증가하였다. 도 68에 요약된 실험에서, 접합체 6 및 접합체 33을 A/WSN/1933 H1N1로 감염된 MDCK 세포를 사용하여 오셀타미비어 및 발록사비어와 비교하였다. 접합체 6, 접합체 33, 발록사비어 및 오셀타미비어는 각각 4nM, 2nM, 4nM 및 50nM에서 사용되었다. 10회의 계대를 통해 접합체 6 또는 접합체 33에 대해 바이러스 역가의 증가가 관찰되지 않은 반면(내성 돌연변이의 출현이 없음을 시사함), 발록사비어 및 오셀타미비어 역가는 각각 5 및 10회의 계대 후 PBS 대조군에서 관찰된 것과 유사한 수준으로 증가하였다.
SEQUENCE LISTING <110> CIDARA THERAPEUTICS, INC. <120> COMPOSITIONS AND METHODS FOR THE TREATMENT OF VIRAL INFECTIONS <130> WO/2020/051498 <140> PCT/US2019/050018 <141> 2019-09-06 <150> US 62/890,475 <151> 2019-08-22 <150> US 62/873,678 <151> 2019-07-12 <150> US 62/859,983 <151> 2019-06-11 <150> US 62/852,075 <151> 2019-05-23 <150> US 62/840,899 <151> 2019-04-30 <150> US 62/832,992 <151> 2019-04-12 <150> US 62/815,235 <151> 2019-03-07 <150> US 62/813,463 <151> 2019-03-04 <150> US 62/788,386 <151> 2019-01-04 <150> US 62/782,119 <151> 2018-12-19 <150> US 62/746,865 <151> 2018-10-17 <150> US 62/727,821 <151> 2018-09-06 <160> 97 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 252 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 1 Met Tyr Arg Met Gln Leu Leu Ser Cys Ile Ala Leu Ser Leu Ala Leu 1 5 10 15 Val Thr Asn Ser Pro Arg Gly Pro Thr Ile Lys Pro Cys Pro Pro Cys 20 25 30 Lys Cys Pro Ala Pro Asn Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe 35 40 45 Pro Pro Lys Ile Lys Asp 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sapiens <400> 94 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 1 5 10 15 Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 100 105 110 Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 115 120 125 Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 130 135 140 Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 145 150 155 160 Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 165 170 175 Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 180 185 190 His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 195 200 205 Lys 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70 75 80 Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 100 105 110 Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp 115 120 125 Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp 130 135 140 Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly 145 150 155 160 Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn 165 170 175 Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp 180 185 190 Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro 195 200 205 Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu 210 215 220 Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn 225 230 235 240 Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile 245 250 255 Ser Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr 260 265 270 Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys 275 280 285 Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys 290 295 300 Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu 305 310 315 320 Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 <210> 96 <211> 377 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 96 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 1 5 10 15 Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Thr Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Arg Val Glu Leu Lys Thr Pro Leu Gly Asp Thr Thr His Thr Cys Pro 100 105 110 Arg Cys Pro Glu Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg 115 120 125 Cys Pro Glu Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg Cys 130 135 140 Pro Glu Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg Cys Pro 145 150 155 160 Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys 165 170 175 Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val 180 185 190 Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Lys Trp Tyr 195 200 205 Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu 210 215 220 Gln Tyr Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His 225 230 235 240 Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys 245 250 255 Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln 260 265 270 Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met 275 280 285 Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro 290 295 300 Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Ser Gly Gln Pro Glu Asn Asn 305 310 315 320 Tyr Asn Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu 325 330 335 Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Ile 340 345 350 Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn Arg Phe Thr Gln 355 360 365 Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 370 375 <210> 97 <211> 327 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 97 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 1 5 10 15 Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr 65 70 75 80 Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro Ala Pro 100 105 110 Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 115 120 125 Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val 130 135 140 Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp 145 150 155 160 Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe 165 170 175 Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp 180 185 190 Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu 195 200 205 Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg 210 215 220 Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys 225 230 235 240 Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 245 250 255 Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 260 265 270 Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 275 280 285 Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser 290 295 300 Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser 305 310 315 320 Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 325

Claims (307)

  1. 하기 화학식 (1)로 기재되는 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct00855

    식 중, 각각의 A1 및 각각의 A2는 하기 화학식 (A-I) 내지 (A-XII) 중 어느 하나로부터 독립적으로 선택되되:
    Figure pct00856

    R1은 -OH, -NH2, -NHC(=NH)NH2 및 -NHC(=NH)NHR6으로부터 선택되며;
    R2 및 R3은 -H, -OH, -F, -Cl 및 -Br로부터 각각 독립적으로 선택되고;
    R4는 -CO2H, -P(=O)(OH)2, -SO3H로부터 선택되며;
    R5는 -COCH3, -COCF3, -SO2CH3로부터 선택되고;
    X는 -O- 및 -S-로부터 선택되며;
    Y는 -O-, -S-, -NR7-, -O(C=O)NR7-, -O(C=S)NR7-, -O(C=O)O-, -O(C=O)-, -NH(C=O)O-, -NH(C=O)-, -NH(C=NH)-, -NH(C=O)NR7-, -NH(C=NH)NR7-, -NH(C=S)NR7-, -NH(C=S)-, -OCH2(C=O)NR7-, -NH(SO2)-, -NH(SO2)NR7-, -OR8-, -NHR8- 및 -SR8-으로부터 선택되고;
    R6은 하기로부터 선택되며:
    Figure pct00857

    R7은 H, C1-C20 알킬, C3-C20 사이클로알킬, C3-C20 헤테로사이클로알킬; C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되고;
    R8은 C3-C20 헤테로사이클로알킬, C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되며;
    각각의 E는 Fc 도메인 단량체를 포함하고;
    각각의 A1-L-A2에서 L은 각각의 E 내의 힌지 시스테인의 황 원자 및 A1 및 A2 각각에 공유 부착된 링커이며;
    T는 1 내지 20의 정수이고, 그리고
    상기 2개의 E에 연결된 2개의 물결선은, 각각의 A1-L-A2가 2개의 E 내의 2개의 힌지 시스테인의 한 쌍의 황 원자에 공유 부착된다는 것을 나타낸다.
  2. 하기 화학식 (1)로 기재되는 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct00858

    식 중, 각각의 A1 및 각각의 A2는 하기 화학식 (A-I) 내지 (A-V) 중 어느 하나로부터 독립적으로 선택되되:
    Figure pct00859

    R1은 -OH, -NH2, -NHC(=NH)NH2 및 -NHC(=NH)NHR6으로부터 선택되며;
    R2 및 R3은 -H, -OH, -F, -Cl 및 -Br로부터 각각 독립적으로 선택되고;
    R4는 -CO2H, -P(=O)(OH)2, -SO3H로부터 선택되며;
    R5는 -COCH3, -COCF3, -SO2CH3로부터 선택되고;
    X는 -O- 및 -S-로부터 선택되며;
    Y는 -O-, -S-, -NR7-, -O(C=O)NR7-, -O(C=S)NR7-, -O(C=O)O-, -O(C=O)-, -NH(C=O)O-, -NH(C=O)-, -NH(C=NH)-, -NH(C=O)NR7-, -NH(C=NH)NR7-, -NH(C=S)NR7-, -NH(C=S)-, -OCH2(C=O)NR7-, -NH(SO2)-, -NH(SO2)NR7-, -OR8-, -NHR8- 및 -SR8-으로부터 선택되고;
    R6은 하기로부터 선택되며:
    Figure pct00860

    Figure pct00861

    Figure pct00862

    R7은 H, C1-C20 알킬, C3-C20 사이클로알킬, C3-C20 헤테로사이클로알킬; C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되고;
    R8은 C3-C20 헤테로사이클로알킬, C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되며;
    각각의 E는 Fc 도메인 단량체를 포함하고;
    각각의 A1-L-A2에서 L은 각각의 E 내의 힌지 시스테인의 황 원자 및 A1 및 A2 각각에 공유 부착된 링커이며;
    T는 1 내지 20의 정수이고, 그리고
    상기 2개의 E에 연결된 2개의 물결선은, 각각의 A1-L-A2가 2개의 E 내의 2개의 힌지 시스테인의 한 쌍의 황 원자에 공유 부착된다는 것을 나타낸다.
  3. 하기 화학식 (1)로 기재되는 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct00863

    식 중, 각각의 A1 및 각각의 A2는 하기 화학식 (A-VI) 내지 (A-IX) 중 어느 하나로부터 독립적으로 선택되되:
    Figure pct00864

    R1은 -OH, -NH2, -NHC(=NH)NH2 및 -NHC(=NH)NHR6으로부터 선택되며;
    R2 및 R3은 -H, -OH, -F, -Cl 및 -Br로부터 각각 독립적으로 선택되고;
    R4는 -CO2H, -P(=O)(OH)2, -SO3H로부터 선택되며;
    R5는 -COCH3, -COCF3, -SO2CH3로부터 선택되고;
    X는 -O- 및 -S-로부터 선택되며;
    Y는 -O-, -S-, -NR7-, -O(C=O)NR7-, -O(C=S)NR7-, -O(C=O)O-, -O(C=O)-, -NH(C=O)O-, -NH(C=O)-, -NH(C=NH)-, -NH(C=O)NR7-, -NH(C=NH)NR7-, -NH(C=S)NR7-, -NH(C=S)-, -OCH2(C=O)NR7-, -NH(SO2)-, -NH(SO2)NR7-, -OR8-, -NHR8- 및 -SR8-으로부터 선택되고;
    R6은 하기로부터 선택되며:
    Figure pct00865

    R7은 H, C1-C20 알킬, C3-C20 사이클로알킬, C3-C20 헤테로사이클로알킬; C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되고;
    R8은 C3-C20 헤테로사이클로알킬, C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되며;
    각각의 E는 Fc 도메인 단량체를 포함하고;
    각각의 A1-L-A2에서 L은 각각의 E 내의 힌지 시스테인의 황 원자 및 A1 및 A2 각각에 공유 부착된 링커이며;
    T는 1 내지 20의 정수이고, 그리고
    상기 2개의 E에 연결된 2개의 물결선은, 각각의 A1-L-A2가 2개의 E 내의 2개의 힌지 시스테인의 한 쌍의 황 원자에 공유 부착된다는 것을 나타낸다.
  4. 하기 화학식 (2)로 기재되는 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct00866

    식 중, 각각의 A1은 하기 화학식 (A-I) 내지 (A-XII) 중 어느 하나로부터 독립적으로 선택되되:
    Figure pct00867

    R1은 -OH, -NH2, -NHC(=NH)NH2 및 -NHC(=NH)NHR6으로부터 선택되며;
    R2 및 R3은 -H, -OH, -F, -Cl 및 -Br로부터 각각 독립적으로 선택되고;
    R4는 -CO2H, -P(=O)(OH)2, -SO3H로부터 선택되며;
    R5는 -COCH3, -COCF3, -SO2CH3로부터 선택되고;
    X는 -O- 및 -S-로부터 선택되며;
    Y는 -O-, -S-, -NR7-, -O(C=O)NR7-, -O(C=S)NR7-, -O(C=O)O-, -O(C=O)-, -NH(C=O)O-, -NH(C=O)-, -NH(C=NH)-, -NH(C=O)NR7-, -NH(C=NH)NR7-, -NH(C=S)NR7-, -NH(C=S)-, -OCH2(C=O)NR7-, -NH(SO2)-, -NH(SO2)NR7-, -OR8-, -NHR8- 및 -SR8-으로부터 선택되고;
    R6은 하기로부터 선택되며:
    Figure pct00868

    R7은 H, C1-C20 알킬, C3-C20 사이클로알킬, C3-C20 헤테로사이클로알킬; C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되고;
    R8은 C3-C20 헤테로사이클로알킬, C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되며;
    각각의 E는 Fc 도메인 단량체를 포함하고;
    각각의 L-A에서 L은 E 내의 힌지 시스테인 내의 황 원자 및 A에 공유 부착된 링커이며;
    T는 1 내지 20의 정수이고, 그리고
    상기 2개의 황 원자에 연결된 2개의 물결선은, 각각의 L-A가 2개의 E 내의 2개의 힌지 시스테인의 한 쌍의 황 원자에 공유 부착된다는 것을 나타낸다.
  5. 하기 화학식 (2)로 기재되는 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct00869

    식 중, 각각의 A1은 하기 화학식 (A-I) 내지 (A-V) 중 어느 하나로부터 독립적으로 선택되되:
    Figure pct00870

    R1은 -OH, -NH2, -NHC(=NH)NH2 및 -NHC(=NH)NHR6으로부터 선택되며;
    R2 및 R3은 -H, -OH, -F, -Cl 및 -Br로부터 각각 독립적으로 선택되고;
    R4는 -CO2H, -P(=O)(OH)2, -SO3H로부터 선택되며;
    R5는 -COCH3, -COCF3, -SO2CH3로부터 선택되고;
    X는 -O- 및 -S-로부터 선택되며;
    Y는 -O-, -S-, -NR7-, -O(C=O)NR7-, -O(C=S)NR7-, -O(C=O)O-, -O(C=O)-, -NH(C=O)O-, -NH(C=O)-, -NH(C=NH)-, -NH(C=O)NR7-, -NH(C=NH)NR7-, -NH(C=S)NR7-, -NH(C=S)-, -OCH2(C=O)NR7-, -NH(SO2)-, -NH(SO2)NR7-, -OR8-, -NHR8- 및 -SR8-으로부터 선택되고;
    R6은 하기로부터 선택되며:
    Figure pct00871

    R7은 H, C1-C20 알킬, C3-C20 사이클로알킬, C3-C20 헤테로사이클로알킬; C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되고;
    R8은 C3-C20 헤테로사이클로알킬, C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되며;
    각각의 E는 Fc 도메인 단량체를 포함하고;
    각각의 L-A에서 L은 E 내의 힌지 시스테인 내의 황 원자 및 A에 공유 부착된 링커이며;
    T는 1 내지 20의 정수이고, 그리고
    상기 2개의 황 원자에 연결된 2개의 물결선은, 각각의 L-A가 2개의 E 내의 2개의 힌지 시스테인의 한 쌍의 황 원자에 공유 부착된다는 것을 나타낸다.
  6. 하기 화학식 (2)로 기재되는 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct00872

    식 중, 각각의 A1은 하기 화학식 (A-VI) 내지 (A-IX) 중 어느 하나로부터 독립적으로 선택되되:
    Figure pct00873

    R1은 -OH, -NH2, -NHC(=NH)NH2 및 -NHC(=NH)NHR6으로부터 선택되며;
    R2 및 R3은 -H, -OH, -F, -Cl 및 -Br로부터 각각 독립적으로 선택되고;
    R4는 -CO2H, -P(=O)(OH)2, -SO3H로부터 선택되며;
    R5는 -COCH3, -COCF3, -SO2CH3로부터 선택되고;
    X는 -O- 및 -S-로부터 선택되며;
    Y는 -O-, -S-, -NR7-, -O(C=O)NR7-, -O(C=S)NR7-, -O(C=O)O-, -O(C=O)-, -NH(C=O)O-, -NH(C=O)-, -NH(C=NH)-, -NH(C=O)NR7-, -NH(C=NH)NR7-, -NH(C=S)NR7-, -NH(C=S)-, -OCH2(C=O)NR7-, -NH(SO2)-, -NH(SO2)NR7-, -OR8-, -NHR8- 및 -SR8-으로부터 선택되고;
    R6은 하기로부터 선택되며:
    Figure pct00874

    R7은 H, C1-C20 알킬, C3-C20 사이클로알킬, C3-C20 헤테로사이클로알킬; C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되고;
    R8은 C3-C20 헤테로사이클로알킬, C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되며;
    각각의 E는 Fc 도메인 단량체를 포함하고;
    각각의 L-A에서 L은 E 내의 힌지 시스테인 내의 황 원자 및 A에 공유 부착된 링커이며;
    T는 1 내지 20의 정수이고, 그리고
    상기 2개의 황 원자에 연결된 2개의 물결선은, 각각의 L-A가 2개의 E 내의 2개의 힌지 시스테인의 한 쌍의 황 원자에 공유 부착된다는 것을 나타낸다.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 각각의 E는 서열번호 1 내지 68 중 어느 하나의 서열을 갖는Fc 도메인 단량체를 포함하는, 접합체.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 각각의 Fc 도메인 단량체는 서열번호 10 또는 서열번호 11의 서열을 포함하는, 접합체.
  9. 제8항에 있어서, 황 원자의 쌍 중 적어도 하나는 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys10, Cys13, Cys16 또는 Cys18의 황 원자인, 접합체.
  10. 제8항에 있어서, 상기 황 원자의 쌍은 상기 2개의 E 내의 Cys10과 Cys13, Cys10과 Cys16, Cys 10과 Cys18, Cys13과 Cys 16, Cys13과 Cys 18 또는 Cys 16과 Cys 18의 황 원자인, 접합체.
  11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, T는 1, 2, 3, 4 또는 5인, 접합체.
  12. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항의 접합체의 집단으로서, T의 평균값은 1 내지 5인, 접합체의 집단.
  13. 하기 화학식 (3)으로 기재되는 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct00875

    식 중, 각각의 A1 및 각각의 A2는 하기 화학식 (A-I) 내지 (A-XII) 중 어느 하나로부터 독립적으로 선택되되:
    Figure pct00876

    Figure pct00877

    R1은 -OH, -NH2, -NHC(=NH)NH2 및 -NHC(=NH)NHR6으로부터 선택되며;
    R2 및 R3은 -H, -OH, -F, -Cl 및 -Br로부터 각각 독립적으로 선택되고;
    R4는 -CO2H, -P(=O)(OH)2, -SO3H로부터 선택되며;
    R5는 -COCH3, -COCF3, -SO2CH3로부터 선택되고;
    X는 -O- 및 -S-로부터 선택되며;
    Y는 -O-, -S-, -NR7-, -O(C=O)NR7-, -O(C=S)NR7-, -O(C=O)O-, -O(C=O)-, -NH(C=O)O-, -NH(C=O)-, -NH(C=NH)-, -NH(C=O)NR7-, -NH(C=NH)NR7-, -NH(C=S)NR7-, -NH(C=S)-, -OCH2(C=O)NR7-, -NH(SO2)-, -NH(SO2)NR7-, -OR8-, -NHR8- 및 -SR8-으로부터 선택되고;
    R6은 하기로부터 선택되며:
    Figure pct00878

    R7은 H, C1-C20 알킬, C3-C20 사이클로알킬, C3-C20 헤테로사이클로알킬; C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되고;
    R8은 C3-C20 헤테로사이클로알킬, C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되며;
    E는 Fc 도메인 단량체 또는 Fc 도메인을 포함하고;
    각각의 A1-L-A2에서 L은 E 내의 힌지 시스테인의 황 원자 및 A1 및 A2 각각에 공유 부착된 링커이며;
    T는 1 내지 20의 정수이고, 그리고
    상기 E에 연결된 물결선은, 각각의 A1-L-A2가 E 내의 힌지 시스테인의 황 원자에 공유 부착된다는 것을 나타낸다.
  14. 하기 화학식 (3)으로 기재되는 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct00879

    식 중, 각각의 A1 및 각각의 A2는 하기 화학식 (A-I) 내지 (A-V) 중 어느 하나로부터 독립적으로 선택되되:
    Figure pct00880

    R1은 -OH, -NH2, -NHC(=NH)NH2 및 -NHC(=NH)NHR6으로부터 선택되며;
    R2 및 R3은 -H, -OH, -F, -Cl 및 -Br로부터 각각 독립적으로 선택되고;
    R4는 -CO2H, -P(=O)(OH)2, -SO3H로부터 선택되며;
    R5는 -COCH3, -COCF3, -SO2CH3로부터 선택되고;
    X는 -O- 및 -S-로부터 선택되며;
    Y는 -O-, -S-, -NR7-, -O(C=O)NR7-, -O(C=S)NR7-, -O(C=O)O-, -O(C=O)-, -NH(C=O)O-, -NH(C=O)-, -NH(C=NH)-, -NH(C=O)NR7-, -NH(C=NH)NR7-, -NH(C=S)NR7-, -NH(C=S)-, -OCH2(C=O)NR7-, -NH(SO2)-, -NH(SO2)NR7-, -OR8-, -NHR8- 및 -SR8-으로부터 선택되고;
    R6은 하기로부터 선택되며:
    Figure pct00881

    R7은 H, C1-C20 알킬, C3-C20 사이클로알킬, C3-C20 헤테로사이클로알킬; C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되고;
    R8은 C3-C20 헤테로사이클로알킬, C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되며;
    E는 Fc 도메인 단량체 또는 Fc 도메인을 포함하고;
    각각의 A1-L-A2에서 L은 E 내의 힌지 시스테인의 황 원자 및 A1 및 A2 각각에 공유 부착된 링커이며;
    T는 1 내지 20의 정수이고, 그리고
    상기 E에 연결된 물결선은, 각각의 A1-L-A2가 E 내의 힌지 시스테인의 황 원자에 공유 부착된다는 것을 나타낸다.
  15. 하기 화학식 (3)으로 기재되는 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct00882

    식 중, 각각의 A1 및 각각의 A2는 하기 화학식 (A-VI) 내지 (A-IX) 중 어느 하나로부터 독립적으로 선택되되:
    Figure pct00883

    식 중, R1은 -OH, -NH2, -NHC(=NH)NH2 및 -NHC(=NH)NHR6으로부터 선택되며;
    R2 및 R3은 -H, -OH, -F, -Cl 및 -Br로부터 각각 독립적으로 선택되고;
    R4는 -CO2H, -P(=O)(OH)2, -SO3H로부터 선택되며;
    R5는 -COCH3, -COCF3, -SO2CH3로부터 선택되고;
    X는 -O- 및 -S-로부터 선택되며;
    Y는 -O-, -S-, -NR7-, -O(C=O)NR7-, -O(C=S)NR7-, -O(C=O)O-, -O(C=O)-, -NH(C=O)O-, -NH(C=O)-, -NH(C=NH)-, -NH(C=O)NR7-, -NH(C=NH)NR7-, -NH(C=S)NR7-, -NH(C=S)-, -OCH2(C=O)NR7-, -NH(SO2)-, -NH(SO2)NR7-, -OR8-, -NHR8- 및 -SR8-으로부터 선택되고;
    R6은 하기로부터 선택되며:
    Figure pct00884

    R7은 H, C1-C20 알킬, C3-C20 사이클로알킬, C3-C20 헤테로사이클로알킬; C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되고;
    R8은 C3-C20 헤테로사이클로알킬, C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되며;
    E는 Fc 도메인 단량체 또는 Fc 도메인을 포함하고;
    각각의 A1-L-A2에서 L은 E 내의 힌지 시스테인의 황 원자 및 A1 및 A2 각각에 공유 부착된 링커이며;
    T는 1 내지 20의 정수이고, 그리고
    상기 E에 연결된 물결선은, 각각의 A1-L-A2가 E 내의 힌지 시스테인의 황 원자에 공유 부착된다는 것을 나타낸다.
  16. 제13항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, E는 Fc 도메인 단량체 또는 Fc 도메인을 포함하되, 각각의 Fc 도메인 단량체는 독립적으로 서열번호 1 내지 68 중 어느 하나의 서열을 갖는, 접합체.
  17. 하기 화학식 (4)로 기재되는 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct00885

    식 중, 각각의 A1은 하기 화학식 (A-I) 내지 (A-XII) 중 어느 하나로부터 독립적으로 선택되되:
    Figure pct00886

    식 중, R1은 -OH, -NH2, -NHC(=NH)NH2 및 -NHC(=NH)NHR6으로부터 선택되며;
    R2 및 R3은 -H, -OH, -F, -Cl 및 -Br로부터 각각 독립적으로 선택되고;
    R4는 -CO2H, -P(=O)(OH)2, -SO3H로부터 선택되며;
    R5는 -COCH3, -COCF3, -SO2CH3로부터 선택되고;
    X는 -O- 및 -S-로부터 선택되며;
    Y는 -O-, -S-, -NR7-, -O(C=O)NR7-, -O(C=S)NR7-, -O(C=O)O-, -O(C=O)-, -NH(C=O)O-, -NH(C=O)-, -NH(C=NH)-, -NH(C=O)NR7-, -NH(C=NH)NR7-, -NH(C=S)NR7-, -NH(C=S)-, -OCH2(C=O)NR7-, -NH(SO2)-, -NH(SO2)NR7-, -OR8-, -NHR8- 및 -SR8-으로부터 선택되고;
    R6은 하기로부터 선택되며:
    Figure pct00887

    R7은 H, C1-C20 알킬, C3-C20 사이클로알킬, C3-C20 헤테로사이클로알킬; C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되고;
    R8은 C3-C20 헤테로사이클로알킬, C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되며;
    E는 Fc 도메인 단량체 또는 Fc 도메인을 포함하고;
    각각의 L-A에서 L은 E 내의 힌지 시스테인의 황 원자 및 A에 공유 부착된 링커이며;
    T는 1 내지 20의 정수이고; 그리고
    E에 연결된 물결선은, 각각의 L-A가 E 내의 힌지 시스테인의 황 원자에 공유 부착된다는 것을 나타낸다.
  18. 하기 화학식 (4)로 기재되는 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct00888

    식 중, 각각의 A1은 하기 화학식 (A-I) 내지 (A-V) 중 어느 하나로부터 독립적으로 선택되되:
    Figure pct00889

    R1은 -OH, -NH2, -NHC(=NH)NH2 및 -NHC(=NH)NHR6으로부터 선택되며;
    R2 및 R3은 -H, -OH, -F, -Cl 및 -Br로부터 각각 독립적으로 선택되고;
    R4는 -CO2H, -P(=O)(OH)2, -SO3H로부터 선택되며;
    R5는 -COCH3, -COCF3, -SO2CH3로부터 선택되고;
    X는 -O- 및 -S-로부터 선택되며;
    Y는 -O-, -S-, -NR7-, -O(C=O)NR7-, -O(C=S)NR7-, -O(C=O)O-, -O(C=O)-, -NH(C=O)O-, -NH(C=O)-, -NH(C=NH)-, -NH(C=O)NR7-, -NH(C=NH)NR7-, -NH(C=S)NR7-, -NH(C=S)-, -OCH2(C=O)NR7-, -NH(SO2)-, -NH(SO2)NR7-, -OR8-, -NHR8- 및 -SR8-으로부터 선택되고;
    R6은 하기로부터 선택되며:
    Figure pct00890

    R7은 H, C1-C20 알킬, C3-C20 사이클로알킬, C3-C20 헤테로사이클로알킬; C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되고;
    R8은 C3-C20 헤테로사이클로알킬, C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되며;
    E는 Fc 도메인 단량체 또는 Fc 도메인을 포함하고;
    각각의 L-A에서 L은 E 내의 힌지 시스테인의 황 원자 및 A에 공유 부착된 링커이며;
    T는 1 내지 20의 정수이고; 그리고
    E에 연결된 물결선은, 각각의 L-A가 E 내의 힌지 시스테인의 황 원자에 공유 부착된다는 것을 나타낸다.
  19. 하기 화학식 (4)로 기재되는 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct00891

    식 중, 각각의 A1은 하기 화학식 (A-VI) 내지 (A-IX) 중 어느 하나로부터 독립적으로 선택되되:
    Figure pct00892

    R1은 -OH, -NH2, -NHC(=NH)NH2 및 -NHC(=NH)NHR6으로부터 선택되며;
    R2 및 R3은 -H, -OH, -F, -Cl 및 -Br로부터 각각 독립적으로 선택되고;
    R4는 -CO2H, -P(=O)(OH)2, -SO3H로부터 선택되며;
    R5는 -COCH3, -COCF3, -SO2CH3로부터 선택되고;
    X는 -O- 및 -S-로부터 선택되며;
    Y는 -O-, -S-, -NR7-, -O(C=O)NR7-, -O(C=S)NR7-, -O(C=O)O-, -O(C=O)-, -NH(C=O)O-, -NH(C=O)-, -NH(C=NH)-, -NH(C=O)NR7-, -NH(C=NH)NR7-, -NH(C=S)NR7-, -NH(C=S)-, -OCH2(C=O)NR7-, -NH(SO2)-, -NH(SO2)NR7-, -OR8-, -NHR8- 및 -SR8-으로부터 선택되고;
    R6은 하기로부터 선택되며:
    Figure pct00893

    R7은 H, C1-C20 알킬, C3-C20 사이클로알킬, C3-C20 헤테로사이클로알킬; C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되고;
    R8은 C3-C20 헤테로사이클로알킬, C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되며;
    E는 Fc 도메인 단량체 또는 Fc 도메인을 포함하고;
    각각의 L-A에서 L은 E 내의 힌지 시스테인의 황 원자 및 A에 공유 부착된 링커이며;
    T는 1 내지 20의 정수이고; 그리고
    E에 연결된 물결선은, 각각의 L-A가 E 내의 힌지 시스테인의 황 원자에 공유 부착된다는 것을 나타낸다.
  20. 제17항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 각각의 E는 Fc 도메인 단량체 또는 Fc 도메인을 포함하되, 각각의 Fc 도메인 단량체는 독립적으로 서열번호 1 내지 68 중 어느 하나의 서열을 갖는, 접합체.
  21. 제13항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, E는 서열번호 10 또는 서열번호 11의 서열을 포함하는, 접합체.
  22. 제21항에 있어서, 상기 황 원자는 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Cys10, Cys13, Cys16 또는 Cys18 내에 존재하는, 접합체.
  23. 제13항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, T는 1, 2, 3, 4 또는 5인, 접합체.
  24. 제13항 내지 제15항 및 제17항 내지 제19항 중 어느 한 항의 접합체의 집단으로서, T의 평균값은 1 내지 5인, 접합체의 집단.
  25. 제13항 내지 제15항 및 제17항 내지 제19항 중 어느 한 항의 접합체의 집단으로서, T의 평균값은 1 내지 2인, 접합체의 집단.
  26. 하기 화학식 (3)으로 기재되는 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct00894

    식 중, 각각의 A1 및 각각의 A2는 하기 화학식 (A-I) 내지 (A-XII) 중 어느 하나로부터 독립적으로 선택되되:
    Figure pct00895

    Figure pct00896

    R1은 -OH, -NH2, -NHC(=NH)NH2 및 -NHC(=NH)NHR6으로부터 선택되며;
    R2 및 R3은 -H, -OH, -F, -Cl 및 -Br로부터 각각 독립적으로 선택되고;
    R4는 -CO2H, -P(=O)(OH)2, -SO3H로부터 선택되며;
    R5는 -COCH3, -COCF3, -SO2CH3로부터 선택되고;
    X는 -O- 및 -S-로부터 선택되며;
    Y는 -O-, -S-, -NR7-, -O(C=O)NR7-, -O(C=S)NR7-, -O(C=O)O-, -O(C=O)-, -NH(C=O)O-, -NH(C=O)-, -NH(C=NH)-, -NH(C=O)NR7-, -NH(C=NH)NR7-, -NH(C=S)NR7-, -NH(C=S)-, -OCH2(C=O)NR7-, -NH(SO2)-, -NH(SO2)NR7-, -OR8-, -NHR8- 및 -SR8-으로부터 선택되고;
    R6은 하기로부터 선택되며:
    Figure pct00897

    R7은 H, C1-C20 알킬, C3-C20 사이클로알킬, C3-C20 헤테로사이클로알킬; C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되고;
    R8은 C3-C20 헤테로사이클로알킬, C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되며;
    E는 Fc 도메인 단량체 또는 Fc 도메인을 포함하고;
    각각의 A1-L-A2에서 L은 E 내의 표면 노출된 라이신의 질소 원자 및 A1 및 A2 각각에 공유 부착된 링커이고;
    T는 1 내지 20의 정수이고, 그리고
    상기 E에 연결된 물결선은, 각각의 A1-L-A2가 E 내의 표면 노출된 라이신의 질소 원자에 공유 부착된다는 것을 나타낸다.
  27. 하기 화학식 (3)으로 기재되는 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct00898

    식 중, 각각의 A1 및 각각의 A2는 하기 화학식 (A-I) 내지 (A-V) 중 어느 하나로부터 독립적으로 선택되되:
    Figure pct00899

    R1은 -OH, -NH2, -NHC(=NH)NH2 및 -NHC(=NH)NHR6으로부터 선택되며;
    R2 및 R3은 -H, -OH, -F, -Cl 및 -Br로부터 각각 독립적으로 선택되고;
    R4는 -CO2H, -P(=O)(OH)2, -SO3H로부터 선택되며;
    R5는 -COCH3, -COCF3, -SO2CH3로부터 선택되고;
    X는 -O- 및 -S-로부터 선택되며;
    Y는 -O-, -S-, -NR7-, -O(C=O)NR7-, -O(C=S)NR7-, -O(C=O)O-, -O(C=O)-, -NH(C=O)O-, -NH(C=O)-, -NH(C=NH)-, -NH(C=O)NR7-, -NH(C=NH)NR7-, -NH(C=S)NR7-, -NH(C=S)-, -OCH2(C=O)NR7-, -NH(SO2)-, -NH(SO2)NR7-, -OR8-, -NHR8- 및 -SR8-으로부터 선택되고;
    R6은 하기로부터 선택되며:
    Figure pct00900

    R7은 H, C1-C20 알킬, C3-C20 사이클로알킬, C3-C20 헤테로사이클로알킬; C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되고;
    R8은 C3-C20 헤테로사이클로알킬, C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되며;
    E는 Fc 도메인 단량체 또는 Fc 도메인을 포함하고;
    각각의 A1-L-A2에서 L은 E 내의 표면 노출된 라이신의 질소 원자 및 A1 및 A2 각각에 공유 부착된 링커이고;
    T는 1 내지 20의 정수이고, 그리고
    상기 E에 연결된 물결선은, 각각의 A1-L-A2가 E 내의 표면 노출된 라이신의 질소 원자에 공유 부착된다는 것을 나타낸다.
  28. 하기 화학식 (3)으로 기재되는 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct00901

    식 중, 각각의 A1 및 각각의 A2는 하기 화학식 (A-VI) 내지 (A-IX) 중 어느 하나로부터 독립적으로 선택되되:
    Figure pct00902

    R1은 -OH, -NH2, -NHC(=NH)NH2 및 -NHC(=NH)NHR6으로부터 선택되며;
    R2 및 R3은 -H, -OH, -F, -Cl 및 -Br로부터 각각 독립적으로 선택되고;
    R4는 -CO2H, -P(=O)(OH)2, -SO3H로부터 선택되며;
    R5는 -COCH3, -COCF3, -SO2CH3로부터 선택되고;
    X는 -O- 및 -S-로부터 선택되며;
    Y는 -O-, -S-, -NR7-, -O(C=O)NR7-, -O(C=S)NR7-, -O(C=O)O-, -O(C=O)-, -NH(C=O)O-, -NH(C=O)-, -NH(C=NH)-, -NH(C=O)NR7-, -NH(C=NH)NR7-, -NH(C=S)NR7-, -NH(C=S)-, -OCH2(C=O)NR7-, -NH(SO2)-, -NH(SO2)NR7-, -OR8-, -NHR8- 및 -SR8-으로부터 선택되고;
    R6은 하기로부터 선택되며:
    Figure pct00903

    R7은 H, C1-C20 알킬, C3-C20 사이클로알킬, C3-C20 헤테로사이클로알킬; C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되고;
    R8은 C3-C20 헤테로사이클로알킬, C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되며;
    E는 Fc 도메인 단량체 또는 Fc 도메인을 포함하고;
    각각의 A1-L-A2에서 L은 E 내의 표면 노출된 라이신의 질소 원자 및 A1 및 A2 각각에 공유 부착된 링커이고;
    T는 1 내지 20의 정수이고, 그리고
    상기 E에 연결된 물결선은, 각각의 A1-L-A2가 E 내의 표면 노출된 라이신의 질소 원자에 공유 부착된다는 것을 나타낸다.
  29. 제26항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서, 각각의 E는 Fc 도메인의 Fc 도메인 단량체를 포함하되, 각각의 Fc 도메인 단량체는 독립적으로 서열번호 1 내지 68 중 어느 하나의 서열을 갖는, 접합체.
  30. 하기 화학식 (4)로 기재되는 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct00904

    식 중, 각각의 A1은 하기 화학식 (A-I) 내지 (A-XII) 중 어느 하나로부터 독립적으로 선택되되:
    Figure pct00905

    R1은 -OH, -NH2, -NHC(=NH)NH2 및 -NHC(=NH)NHR6으로부터 선택되며;
    R2 및 R3은 -H, -OH, -F, -Cl 및 -Br로부터 각각 독립적으로 선택되고;
    R4는 -CO2H, -P(=O)(OH)2, -SO3H로부터 선택되며;
    R5는 -COCH3, -COCF3, -SO2CH3로부터 선택되고;
    X는 -O- 및 -S-로부터 선택되며;
    Y는 -O-, -S-, -NR7-, -O(C=O)NR7-, -O(C=S)NR7-, -O(C=O)O-, -O(C=O)-, -NH(C=O)O-, -NH(C=O)-, -NH(C=NH)-, -NH(C=O)NR7-, -NH(C=NH)NR7-, -NH(C=S)NR7-, -NH(C=S)-, -OCH2(C=O)NR7-, -NH(SO2)-, -NH(SO2)NR7-, -OR8-, -NHR8- 및 -SR8-으로부터 선택되고;
    R6은 하기로부터 선택되며:
    Figure pct00906

    R7은 H, C1-C20 알킬, C3-C20 사이클로알킬, C3-C20 헤테로사이클로알킬; C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되고;
    R8은 C3-C20 헤테로사이클로알킬, C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되며;
    E는 Fc 도메인 단량체 또는 Fc 도메인을 포함하고;
    각각의 L-A에서 L은 E 내의 표면 노출된 라이신의 질소 원자 및 A에 공유 부착된 링커이고;
    T는 1 내지 20의 정수이고;
    상기 E에 연결된 물결선은, 각각의 L-A가 E 내의 표면 노출된 라이신의 질소 원자에 공유 부착된다는 것을 나타낸다.
  31. 하기 화학식 (4)로 기재되는 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct00907

    식 중, 각각의 A1은 하기 화학식 (A-I) 내지 (A-V) 중 어느 하나로부터 독립적으로 선택되되:
    Figure pct00908

    R1은 -OH, -NH2, -NHC(=NH)NH2 및 -NHC(=NH)NHR6으로부터 선택되며;
    R2 및 R3은 -H, -OH, -F, -Cl 및 -Br로부터 각각 독립적으로 선택되고;
    R4는 -CO2H, -P(=O)(OH)2, -SO3H로부터 선택되며;
    R5는 -COCH3, -COCF3, -SO2CH3로부터 선택되고;
    X는 -O- 및 -S-로부터 선택되며;
    Y는 -O-, -S-, -NR7-, -O(C=O)NR7-, -O(C=S)NR7-, -O(C=O)O-, -O(C=O)-, -NH(C=O)O-, -NH(C=O)-, -NH(C=NH)-, -NH(C=O)NR7-, -NH(C=NH)NR7-, -NH(C=S)NR7-, -NH(C=S)-, -OCH2(C=O)NR7-, -NH(SO2)-, -NH(SO2)NR7-, -OR8-, -NHR8- 및 -SR8-으로부터 선택되고;
    R6은 하기로부터 선택되며:
    Figure pct00909

    R7은 H, C1-C20 알킬, C3-C20 사이클로알킬, C3-C20 헤테로사이클로알킬; C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되고;
    R8은 C3-C20 헤테로사이클로알킬, C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되며;
    E는 Fc 도메인 단량체 또는 Fc 도메인을 포함하고;
    각각의 L-A에서 L은 E 내의 표면 노출된 라이신의 질소 원자 및 A에 공유 부착된 링커이고;
    T는 1 내지 20의 정수이고;
    상기 E에 연결된 물결선은, 각각의 L-A가 E 내의 표면 노출된 라이신의 질소 원자에 공유 부착된다는 것을 나타낸다.
  32. 하기 화학식 (4)로 기재되는 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct00910

    식 중, 각각의 A1은 하기 화학식 (A-VI) 내지 (A-IX) 중 어느 하나로부터 독립적으로 선택되되:
    Figure pct00911

    R1은 -OH, -NH2, -NHC(=NH)NH2 및 -NHC(=NH)NHR6으로부터 선택되며;
    R2 및 R3은 -H, -OH, -F, -Cl 및 -Br로부터 각각 독립적으로 선택되고;
    R4는 -CO2H, -P(=O)(OH)2, -SO3H로부터 선택되며;
    R5는 -COCH3, -COCF3, -SO2CH3로부터 선택되고;
    X는 -O- 및 -S-로부터 선택되며;
    Y는 -O-, -S-, -NR7-, -O(C=O)NR7-, -O(C=S)NR7-, -O(C=O)O-, -O(C=O)-, -NH(C=O)O-, -NH(C=O)-, -NH(C=NH)-, -NH(C=O)NR7-, -NH(C=NH)NR7-, -NH(C=S)NR7-, -NH(C=S)-, -OCH2(C=O)NR7-, -NH(SO2)-, -NH(SO2)NR7-, -OR8-, -NHR8- 및 -SR8-으로부터 선택되고;
    R6은 하기로부터 선택되며:
    Figure pct00912

    R7은 H, C1-C20 알킬, C3-C20 사이클로알킬, C3-C20 헤테로사이클로알킬; C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되고;
    R8은 C3-C20 헤테로사이클로알킬, C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되며;
    E는 Fc 도메인 단량체 또는 Fc 도메인을 포함하고;
    각각의 L-A에서 L은 E 내의 표면 노출된 라이신의 질소 원자 및 A에 공유 부착된 링커이고;
    T는 1 내지 20의 정수이고;
    상기 E에 연결된 물결선은, 각각의 L-A가 E 내의 표면 노출된 라이신의 질소 원자에 공유 부착된다는 것을 나타낸다.
  33. 제30항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서, 각각의 E는 Fc 도메인 단량체 또는 Fc 도메인을 포함하되, 각각의 Fc 도메인 단량체는 독립적으로 서열번호 1 내지 68 중 어느 하나의 서열을 갖는, 접합체.
  34. 제26항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서, E는 서열번호 10 또는 서열번호 11의 서열을 포함하는, 접합체.
  35. 제34항에 있어서, 각각의 질소 원자는 서열번호 10 또는 서열번호 11의 Lys35, Lys63, Lys77, Lys79, Lys106, Lys123, Lys129, Lys181, Lys203, Lys228 및 Lys236으로부터 독립적으로 선택되는, 접합체.
  36. 제26항 내지 제28항 및 제30항 내지 제32항 중 어느 한 항의 접합체의 집단으로서, T의 평균값은 1 내지 5인, 접합체의 집단.
  37. 제26항 내지 제28항 및 제30항 내지 제32항 중 어느 한 항의 접합체의 집단으로서, T의 평균값은 1 내지 2인, 접합체의 집단.
  38. 제1항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 접합체는 Fc 도메인을 포함하는 이종이량체를 형성하는, 접합체.
  39. 39. 제1항 내지 제38항 중 어느 한 항에 있어서, E는 또 다른 E와 이종이량체화되어 Fc 도메인을 형성하는, 접합체.
  40. 하기 화학식 (3)으로 기재되는 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct00913

    식 중, 각각의 A1 및 각각의 A2는 하기 화학식 (A-I) 내지 (A-XII) 중 어느 하나로부터 독립적으로 선택되되:
    Figure pct00914

    Figure pct00915

    식 중, R1은 -OH, -NH2, -NHC(=NH)NH2 및 -NHC(=NH)NHR6으로부터 선택되며;
    R2 및 R3은 -H, -OH, -F, -Cl 및 -Br로부터 각각 독립적으로 선택되고;
    R4는 -CO2H, -P(=O)(OH)2, -SO3H로부터 선택되며;
    R5는 -COCH3, -COCF3, -SO2CH3로부터 선택되고;
    X는 -O- 및 -S-로부터 선택되며;
    Y는 -O-, -S-, -NR7-, -O(C=O)NR7-, -O(C=S)NR7-, -O(C=O)O-, -O(C=O)-, -NH(C=O)O-, -NH(C=O)-, -NH(C=NH)-, -NH(C=O)NR7-, -NH(C=NH)NR7-, -NH(C=S)NR7-, -NH(C=S)-, -OCH2(C=O)NR7-, -NH(SO2)-, -NH(SO2)NR7-, -OR8-, -NHR8- 및 -SR8-으로부터 선택되고;
    R6은 하기로부터 선택되며:
    Figure pct00916

    R7은 H, C1-C20 알킬, C3-C20 사이클로알킬, C3-C20 헤테로사이클로알킬; C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되고;
    R8은 C3-C20 헤테로사이클로알킬, C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되며;
    E는 알부민 단백질, 알부민 단백질-결합 펩타이드 또는 Fc-결합 펩타이드를 포함하고;
    각각의 A1-L-A2에서 L은 E 내의 표면 노출된 시스테인의 황 원자 또는 표면 노출된 라이신의 질소 원자 및 A1 및 A2 각각에 독립적으로 공유 부착된 링커이며;
    T는 1 내지 20의 정수이고, 그리고
    상기 E에 연결된 물결선은, 각각의 A1-L-A2가 독립적으로 E 내의 용매-노출된 시스테인의 황 원자 또는 용매-노출된 라이신의 질소 원자에 독립적으로 공유 부착된다는 것을 나타낸다.
  41. 하기 화학식 (3)으로 기재되는 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct00917

    식 중, 각각의 A1 및 각각의 A2는 하기 화학식 (A-I) 내지 (A-V) 중 어느 하나로부터 독립적으로 선택되되:
    Figure pct00918

    식 중, R1은 -OH, -NH2, -NHC(=NH)NH2 및 -NHC(=NH)NHR6으로부터 선택되며;
    R2 및 R3은 -H, -OH, -F, -Cl 및 -Br로부터 각각 독립적으로 선택되고;
    R4는 -CO2H, -P(=O)(OH)2, -SO3H로부터 선택되며;
    R5는 -COCH3, -COCF3, -SO2CH3로부터 선택되고;
    X는 -O- 및 -S-로부터 선택되며;
    Y는 -O-, -S-, -NR7-, -O(C=O)NR7-, -O(C=S)NR7-, -O(C=O)O-, -O(C=O)-, -NH(C=O)O-, -NH(C=O)-, -NH(C=NH)-, -NH(C=O)NR7-, -NH(C=NH)NR7-, -NH(C=S)NR7-, -NH(C=S)-, -OCH2(C=O)NR7-, -NH(SO2)-, -NH(SO2)NR7-, -OR8-, -NHR8- 및 -SR8-으로부터 선택되고;
    R6은 하기로부터 선택되며:
    Figure pct00919

    R7은 H, C1-C20 알킬, C3-C20 사이클로알킬, C3-C20 헤테로사이클로알킬; C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되고;
    R8은 C3-C20 헤테로사이클로알킬, C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되며;
    E는 알부민 단백질, 알부민 단백질-결합 펩타이드 또는 Fc-결합 펩타이드를 포함하고;
    각각의 A1-L-A2에서 L은 E 내의 표면 노출된 시스테인의 황 원자 또는 표면 노출된 라이신의 질소 원자 및 A1 및 A2 각각에 독립적으로 공유 부착된 링커이며;
    T는 1 내지 20의 정수이고, 그리고
    상기 E에 연결된 물결선은, 각각의 A1-L-A2가 독립적으로 E 내의 용매-노출된 시스테인의 황 원자 또는 용매-노출된 라이신의 질소 원자에 독립적으로 공유 부착된다는 것을 나타낸다.
  42. 하기 화학식 (3)으로 기재되는 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct00920

    식 중, 각각의 A1 및 각각의 A2는 하기 화학식 (A-VI) 내지 (A-IX) 중 어느 하나로부터 독립적으로 선택되되:
    Figure pct00921

    식 중, R1은 -OH, -NH2, -NHC(=NH)NH2 및 -NHC(=NH)NHR6으로부터 선택되며;
    R2 및 R3은 -H, -OH, -F, -Cl 및 -Br로부터 각각 독립적으로 선택되고;
    R4는 -CO2H, -P(=O)(OH)2, -SO3H로부터 선택되며;
    R5는 -COCH3, -COCF3, -SO2CH3로부터 선택되고;
    X는 -O- 및 -S-로부터 선택되며;
    Y는 -O-, -S-, -NR7-, -O(C=O)NR7-, -O(C=S)NR7-, -O(C=O)O-, -O(C=O)-, -NH(C=O)O-, -NH(C=O)-, -NH(C=NH)-, -NH(C=O)NR7-, -NH(C=NH)NR7-, -NH(C=S)NR7-, -NH(C=S)-, -OCH2(C=O)NR7-, -NH(SO2)-, -NH(SO2)NR7-, -OR8-, -NHR8- 및 -SR8-으로부터 선택되고;
    R6은 하기로부터 선택되며:
    Figure pct00922

    R7은 H, C1-C20 알킬, C3-C20 사이클로알킬, C3-C20 헤테로사이클로알킬; C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되고;
    R8은 C3-C20 헤테로사이클로알킬, C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되며;
    E는 알부민 단백질, 알부민 단백질-결합 펩타이드 또는 Fc-결합 펩타이드를 포함하고;
    각각의 A1-L-A2에서 L은 E 내의 표면 노출된 시스테인의 황 원자 또는 표면 노출된 라이신의 질소 원자 및 A1 및 A2 각각에 독립적으로 공유 부착된 링커이며;
    T는 1 내지 20의 정수이고, 그리고
    상기 E에 연결된 물결선은, 각각의 A1-L-A2가 독립적으로 E 내의 용매-노출된 시스테인의 황 원자 또는 용매-노출된 라이신의 질소 원자에 독립적으로 공유 부착된다는 것을 나타낸다.
  43. 하기 화학식 (4)로 기재되는 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct00923

    식 중, 각각의 A1은 하기 화학식 (A-I) 내지 (A-XII) 중 어느 하나로부터 독립적으로 선택되되:
    Figure pct00924

    Figure pct00925

    R1은 -OH, -NH2, -NHC(=NH)NH2 및 -NHC(=NH)NHR6으로부터 선택되며;
    R2 및 R3은 -H, -OH, -F, -Cl 및 -Br로부터 각각 독립적으로 선택되고;
    R4는 -CO2H, -P(=O)(OH)2, -SO3H로부터 선택되며;
    R5는 -COCH3, -COCF3, -SO2CH3로부터 선택되고;
    X는 -O- 및 -S-로부터 선택되며;
    Y는 -O-, -S-, -NR7-, -O(C=O)NR7-, -O(C=S)NR7-, -O(C=O)O-, -O(C=O)-, -NH(C=O)O-, -NH(C=O)-, -NH(C=NH)-, -NH(C=O)NR7-, -NH(C=NH)NR7-, -NH(C=S)NR7-, -NH(C=S)-, -OCH2(C=O)NR7-, -NH(SO2)-, -NH(SO2)NR7-, -OR8-, -NHR8- 및 -SR8-으로부터 선택되고;
    R6은 하기로부터 선택되며:
    Figure pct00926

    R7은 H, C1-C20 알킬, C3-C20 사이클로알킬, C3-C20 헤테로사이클로알킬; C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되고;
    R8은 C3-C20 헤테로사이클로알킬, C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되며;
    E는 알부민 단백질, 알부민 단백질-결합 펩타이드 또는 Fc-결합 펩타이드를 포함하고;
    각각의 L-A에서 L은 E 내의 표면 노출된 시스테인의 황 원자 또는 표면 노출된 라이신의 질소 원자 및 A에 독립적으로 공유 부착된 링커이며;
    T는 1 내지 20의 정수이고; 그리고
    상기 E에 연결된 물결선은, 각각의 L-A가 독립적으로 E 내의 용매-노출된 시스테인의 황 원자 또는 용매-노출된 라이신의 질소 원자에 독립적으로 공유 부착된다는 것을 나타낸다.
  44. 하기 화학식 (4)로 기재되는 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct00927

    식 중, 각각의 A1은 하기 화학식 (A-I) 내지 (A-V) 중 어느 하나로부터 독립적으로 선택되되:
    Figure pct00928

    R1은 -OH, -NH2, -NHC(=NH)NH2 및 -NHC(=NH)NHR6으로부터 선택되며;
    R2 및 R3은 -H, -OH, -F, -Cl 및 -Br로부터 각각 독립적으로 선택되고;
    R4는 -CO2H, -P(=O)(OH)2, -SO3H로부터 선택되며;
    R5는 -COCH3, -COCF3, -SO2CH3로부터 선택되고;
    X는 -O- 및 -S-로부터 선택되며;
    Y는 -O-, -S-, -NR7-, -O(C=O)NR7-, -O(C=S)NR7-, -O(C=O)O-, -O(C=O)-, -NH(C=O)O-, -NH(C=O)-, -NH(C=NH)-, -NH(C=O)NR7-, -NH(C=NH)NR7-, -NH(C=S)NR7-, -NH(C=S)-, -OCH2(C=O)NR7-, -NH(SO2)-, -NH(SO2)NR7-, -OR8-, -NHR8- 및 -SR8-으로부터 선택되고;
    R6은 하기로부터 선택되며:
    Figure pct00929

    R7은 H, C1-C20 알킬, C3-C20 사이클로알킬, C3-C20 헤테로사이클로알킬; C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되고;
    R8은 C3-C20 헤테로사이클로알킬, C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되며;
    E는 알부민 단백질, 알부민 단백질-결합 펩타이드 또는 Fc-결합 펩타이드를 포함하고;
    각각의 L-A에서 L은 E 내의 표면 노출된 시스테인의 황 원자 또는 표면 노출된 라이신의 질소 원자 및 A에 독립적으로 공유 부착된 링커이며;
    T는 1 내지 20의 정수이고; 그리고
    상기 E에 연결된 물결선은, 각각의 L-A가 독립적으로 E 내의 용매-노출된 시스테인의 황 원자 또는 용매-노출된 라이신의 질소 원자에 독립적으로 공유 부착된다는 것을 나타낸다.
  45. 하기 화학식 (4)로 기재되는 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct00930

    식 중, 각각의 A1은 하기 화학식 (A-VI) 내지 (A-IX) 중 어느 하나로부터 독립적으로 선택되되:
    Figure pct00931

    R1은 -OH, -NH2, -NHC(=NH)NH2 및 -NHC(=NH)NHR6으로부터 선택되며;
    R2 및 R3은 -H, -OH, -F, -Cl 및 -Br로부터 각각 독립적으로 선택되고;
    R4는 -CO2H, -P(=O)(OH)2, -SO3H로부터 선택되며;
    R5는 -COCH3, -COCF3, -SO2CH3로부터 선택되고;
    X는 -O- 및 -S-로부터 선택되며;
    Y는 -O-, -S-, -NR7-, -O(C=O)NR7-, -O(C=S)NR7-, -O(C=O)O-, -O(C=O)-, -NH(C=O)O-, -NH(C=O)-, -NH(C=NH)-, -NH(C=O)NR7-, -NH(C=NH)NR7-, -NH(C=S)NR7-, -NH(C=S)-, -OCH2(C=O)NR7-, -NH(SO2)-, -NH(SO2)NR7-, -OR8-, -NHR8- 및 -SR8-으로부터 선택되고;
    R6은 하기로부터 선택되며:
    Figure pct00932

    R7은 H, C1-C20 알킬, C3-C20 사이클로알킬, C3-C20 헤테로사이클로알킬; C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되고;
    R8은 C3-C20 헤테로사이클로알킬, C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되며;
    E는 알부민 단백질, 알부민 단백질-결합 펩타이드 또는 Fc-결합 펩타이드를 포함하고;
    각각의 L-A에서 L은 E 내의 표면 노출된 시스테인의 황 원자 또는 표면 노출된 라이신의 질소 원자 및 A에 독립적으로 공유 부착된 링커이며;
    T는 1 내지 20의 정수이고; 그리고
    상기 E에 연결된 물결선은, 각각의 L-A가 독립적으로 E 내의 용매-노출된 시스테인의 황 원자 또는 용매-노출된 라이신의 질소 원자에 독립적으로 공유 부착된다는 것을 나타낸다.
  46. 제40항 내지 제45항 중 어느 한 항에 있어서, E는 서열번호 69 내지 71 중 어느 하나의 서열을 포함하는, 접합체.
  47. 제46항에 있어서, T는 1이고, L-A는 서열번호 69의 Cys34에 상응하는 황 원자에 공유 부착된, 접합체.
  48. 제40항 내지 제47항 중 어느 한 항에 있어서, T는 1, 2, 3, 4 또는 5인, 접합체.
  49. 제40항 내지 제45항 중 어느 한 항의 접합체의 집단으로서, T의 평균값은 1 내지 5인, 접합체의 집단.
  50. 제40항 내지 제45항 중 어느 한 항의 접합체의 집단으로서, T의 평균값은 1 내지 2인, 접합체의 집단.
  51. 접합체로서,
    (i) 제1 모이어티, A1;
    (ii) 제2 모이어티, A2;
    (iii) Fc 도메인 단량체 또는 Fc 도메인; 및
    (iv) A1 및 A2, 및 Fc 도메인 단량체 또는 Fc 도메인에 공유 부착된 링커
    를 포함하되;
    각각의 A1 및 각각의 A2는 하기 화학식 (A-I) 내지 (A-XII) 중 어느 하나로부터 독립적으로 선택되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct00933

    R1은 -OH, -NH2, -NHC(=NH)NH2 및 -NHC(=NH)NHR6으로부터 선택되며;
    R2 및 R3은 -H, -OH, -F, -Cl 및 -Br로부터 각각 독립적으로 선택되고;
    R4는 -CO2H, -P(=O)(OH)2, -SO3H로부터 선택되며;
    R5는 -COCH3, -COCF3, -SO2CH3로부터 선택되고;
    X는 -O- 및 -S-로부터 선택되며;
    Y는 -O-, -S-, -NR7-, -O(C=O)NR7-, -O(C=S)NR7-, -O(C=O)O-, -O(C=O)-, -NH(C=O)O-, -NH(C=O)-, -NH(C=NH)-, -NH(C=O)NR7-, -NH(C=NH)NR7-, -NH(C=S)NR7-, -NH(C=S)-, -OCH2(C=O)NR7-, -NH(SO2)-, -NH(SO2)NR7-, -OR8-, -NHR8- 및 -SR8-으로부터 선택되고;
    R6은 하기로부터 선택되며:
    Figure pct00934

    R7은 H, C1-C20 알킬, C3-C20 사이클로알킬, C3-C20 헤테로사이클로알킬; C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되고;
    R8은 C3-C20 헤테로사이클로알킬, C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택된다.
  52. 접합체로서,
    (i) 제1 모이어티, A1;
    (ii) 제2 모이어티, A2;
    (iii) Fc 도메인 단량체 또는 Fc 도메인; 및
    (iv) A1 및 A2, 및 Fc 도메인 단량체 또는 Fc 도메인에 공유 부착된 링커
    를 포함하되;
    각각의 A1 및 각각의 A2는 하기 화학식 (A-I) 내지 (A-V) 중 어느 하나로부터 독립적으로 선택되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct00935

    식 중, R1은 -OH, -NH2, -NHC(=NH)NH2 및 -NHC(=NH)NHR6으로부터 선택되며;
    R2 및 R3은 -H, -OH, -F, -Cl 및 -Br로부터 각각 독립적으로 선택되고;
    R4는 -CO2H, -P(=O)(OH)2, -SO3H로부터 선택되며;
    R5는 -COCH3, -COCF3, -SO2CH3로부터 선택되고;
    X는 -O- 및 -S-로부터 선택되며;
    Y는 -O-, -S-, -NR7-, -O(C=O)NR7-, -O(C=S)NR7-, -O(C=O)O-, -O(C=O)-, -NH(C=O)O-, -NH(C=O)-, -NH(C=NH)-, -NH(C=O)NR7-, -NH(C=NH)NR7-, -NH(C=S)NR7-, -NH(C=S)-, -OCH2(C=O)NR7-, -NH(SO2)-, -NH(SO2)NR7-, -OR8-, -NHR8- 및 -SR8-으로부터 선택되고;
    R6은 하기로부터 선택되며:
    Figure pct00936

    R7은 H, C1-C20 알킬, C3-C20 사이클로알킬, C3-C20 헤테로사이클로알킬; C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되고;
    R8은 C3-C20 헤테로사이클로알킬, C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택된다.
  53. 접합체로서,
    (i) 제1 모이어티, A1;
    (ii) 제2 모이어티, A2;
    (iii) Fc 도메인 단량체 또는 Fc 도메인; 및
    (iv) A1 및 A2, 및 Fc 도메인 단량체 또는 Fc 도메인에 공유 부착된 링커
    를 포함하되;
    각각의 A1 및 각각의 A2는 하기 화학식 (A-VI) 내지 (A-IX) 중 어느 하나로부터 독립적으로 선택되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct00937

    식 중, R1은 -OH, -NH2, -NHC(=NH)NH2 및 -NHC(=NH)NHR6으로부터 선택되며;
    R2 및 R3은 -H, -OH, -F, -Cl 및 -Br로부터 각각 독립적으로 선택되고;
    R4는 -CO2H, -P(=O)(OH)2, -SO3H로부터 선택되며;
    R5는 -COCH3, -COCF3, -SO2CH3로부터 선택되고;
    X는 -O- 및 -S-로부터 선택되며;
    Y는 -O-, -S-, -NR7-, -O(C=O)NR7-, -O(C=S)NR7-, -O(C=O)O-, -O(C=O)-, -NH(C=O)O-, -NH(C=O)-, -NH(C=NH)-, -NH(C=O)NR7-, -NH(C=NH)NR7-, -NH(C=S)NR7-, -NH(C=S)-, -OCH2(C=O)NR7-, -NH(SO2)-, -NH(SO2)NR7-, -OR8-, -NHR8- 및 -SR8-으로부터 선택되고;
    R6은 하기로부터 선택되며:
    Figure pct00938

    R7은 H, C1-C20 알킬, C3-C20 사이클로알킬, C3-C20 헤테로사이클로알킬; C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되고;
    R8은 C3-C20 헤테로사이클로알킬, C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택된다.
  54. 접합체로서,
    (i) 제1 모이어티, A1;
    (ii) 제2 모이어티, A2;
    (iii) 알부민 단백질, 알부민 단백질-결합 펩타이드 또는 Fc-결합 펩타이드; 및
    (iv) A1 및 A2, 및 알부민 단백질, 알부민 단백질-결합 펩타이드 또는 Fc-결합 펩타이드에 공유 부착된 링커
    를 포함하되;
    각각의 A1 및 각각의 A2는 하기 화학식 (A-I) 내지 (A-XII) 중 어느 하나로부터 독립적으로 선택되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct00939

    Figure pct00940

    식 중, R1은 -OH, -NH2, -NHC(=NH)NH2 및 -NHC(=NH)NHR6으로부터 선택되며;
    R2 및 R3은 -H, -OH, -F, -Cl 및 -Br로부터 각각 독립적으로 선택되고;
    R4는 -CO2H, -P(=O)(OH)2, -SO3H로부터 선택되며;
    R5는 -COCH3, -COCF3, -SO2CH3로부터 선택되고;
    X는 -O- 및 -S-로부터 선택되며;
    Y는 -O-, -S-, -NR7-, -O(C=O)NR7-, -O(C=S)NR7-, -O(C=O)O-, -O(C=O)-, -NH(C=O)O-, -NH(C=O)-, -NH(C=NH)-, -NH(C=O)NR7-, -NH(C=NH)NR7-, -NH(C=S)NR7-, -NH(C=S)-, -OCH2(C=O)NR7-, -NH(SO2)-, -NH(SO2)NR7-, -OR8-, -NHR8- 및 -SR8-으로부터 선택되고;
    R6은 하기로부터 선택되며:
    Figure pct00941

    R7은 H, C1-C20 알킬, C3-C20 사이클로알킬, C3-C20 헤테로사이클로알킬; C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되고;
    R8은 C3-C20 헤테로사이클로알킬, C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택된다.
  55. 접합체로서,
    (i) 제1 모이어티, A1;
    (ii) 제2 모이어티, A2;
    (iii) 알부민 단백질, 알부민 단백질-결합 펩타이드 또는 Fc-결합 펩타이드; 및
    (iv) A1 및 A2, 및 알부민 단백질, 알부민 단백질-결합 펩타이드 또는 Fc-결합 펩타이드에 공유 부착된 링커
    를 포함하되;
    각각의 A1 및 각각의 A2는 하기 화학식 (A-I) 내지 (A-V) 중 어느 하나로부터 독립적으로 선택되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct00942

    식 중, R1은 -OH, -NH2, -NHC(=NH)NH2 및 -NHC(=NH)NHR6으로부터 선택되며;
    R2 및 R3은 -H, -OH, -F, -Cl 및 -Br로부터 각각 독립적으로 선택되고;
    R4는 -CO2H, -P(=O)(OH)2, -SO3H로부터 선택되며;
    R5는 -COCH3, -COCF3, -SO2CH3로부터 선택되고;
    X는 -O- 및 -S-로부터 선택되며;
    Y는 -O-, -S-, -NR7-, -O(C=O)NR7-, -O(C=S)NR7-, -O(C=O)O-, -O(C=O)-, -NH(C=O)O-, -NH(C=O)-, -NH(C=NH)-, -NH(C=O)NR7-, -NH(C=NH)NR7-, -NH(C=S)NR7-, -NH(C=S)-, -OCH2(C=O)NR7-, -NH(SO2)-, -NH(SO2)NR7-, -OR8-, -NHR8- 및 -SR8-으로부터 선택되고;
    R6은 하기로부터 선택되며:
    Figure pct00943

    R7은 H, C1-C20 알킬, C3-C20 사이클로알킬, C3-C20 헤테로사이클로알킬; C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되고;
    R8은 C3-C20 헤테로사이클로알킬, C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되며.
  56. 접합체로서,
    (i) 제1 모이어티, A1;
    (ii) 제2 모이어티, A2;
    (iii) 알부민 단백질, 알부민 단백질-결합 펩타이드 또는 Fc-결합 펩타이드; 및
    (iv) A1 및 A2, 및 알부민 단백질, 알부민 단백질-결합 펩타이드 또는 Fc-결합 펩타이드에 공유 부착된 링커
    를 포함하되;
    각각의 A1 및 각각의 A2는 하기 화학식 (A-VI) 내지 (A-IX) 중 어느 하나로부터 독립적으로 선택되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct00944

    식 중, R1은 -OH, -NH2, -NHC(=NH)NH2 및 -NHC(=NH)NHR6으로부터 선택되며;
    R2 및 R3은 -H, -OH, -F, -Cl 및 -Br로부터 각각 독립적으로 선택되고;
    R4는 -CO2H, -P(=O)(OH)2, -SO3H로부터 선택되며;
    R5는 -COCH3, -COCF3, -SO2CH3로부터 선택되고;
    X는 -O- 및 -S-로부터 선택되며;
    Y는 -O-, -S-, -NR7-, -O(C=O)NR7-, -O(C=S)NR7-, -O(C=O)O-, -O(C=O)-, -NH(C=O)O-, -NH(C=O)-, -NH(C=NH)-, -NH(C=O)NR7-, -NH(C=NH)NR7-, -NH(C=S)NR7-, -NH(C=S)-, -OCH2(C=O)NR7-, -NH(SO2)-, -NH(SO2)NR7-, -OR8-, -NHR8- 및 -SR8-으로부터 선택되고;
    R6은 하기로부터 선택되며:
    Figure pct00945

    R7은 H, C1-C20 알킬, C3-C20 사이클로알킬, C3-C20 헤테로사이클로알킬; C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되고;
    R8은 C3-C20 헤테로사이클로알킬, C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택된다.
  57. 하기 화학식 (D-I)로 기재되는 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct00946

    식 중, 각각의 A1 및 각각의 A2는 하기 화학식 (A-I) 내지 (A-XII) 중 어느 하나로부터 독립적으로 선택되되:
    Figure pct00947

    Figure pct00948

    R1은 -OH, -NH2, -NHC(=NH)NH2 및 -NHC(=NH)NHR6으로부터 선택되며;
    R2 및 R3은 -H, -OH, -F, -Cl 및 -Br로부터 각각 독립적으로 선택되고;
    R4는 -CO2H, -P(=O)(OH)2, -SO3H로부터 선택되며;
    R5는 -COCH3, -COCF3, -SO2CH3로부터 선택되고;
    X는 -O- 및 -S-로부터 선택되며;
    Y는 -O-, -S-, -NR7-, -O(C=O)NR7-, -O(C=S)NR7-, -O(C=O)O-, -O(C=O)-, -NH(C=O)O-, -NH(C=O)-, -NH(C=NH)-, -NH(C=O)NR7-, -NH(C=NH)NR7-, -NH(C=S)NR7-, -NH(C=S)-, -OCH2(C=O)NR7-, -NH(SO2)-, -NH(SO2)NR7-, -OR8-, -NHR8- 및 -SR8-으로부터 선택되고;
    R6은 하기로부터 선택되며:
    Figure pct00949

    R7은 H, C1-C20 알킬, C3-C20 사이클로알킬, C3-C20 헤테로사이클로알킬; C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되고;
    R8은 C3-C20 헤테로사이클로알킬, C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되며;
    각각의 E는 Fc 도메인 단량체, 알부민 단백질, 알부민 단백질-결합 펩타이드 또는 Fc-결합 펩타이드를 포함하고;
    n은 1 또는 2이며;
    T는 1 내지 20의 정수이고; 그리고
    L은 E, A1 및 A2 각각에 공유 부착된 링커이다.
  58. 하기 화학식 (D-I)로 기재되는 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct00950

    식 중, 각각의 A1 및 각각의 A2는 하기 화학식 (A-I) 내지 (A-V) 중 어느 하나로부터 독립적으로 선택되되:
    Figure pct00951

    R1은 -OH, -NH2, -NHC(=NH)NH2 및 -NHC(=NH)NHR6으로부터 선택되며;
    R2 및 R3은 -H, -OH, -F, -Cl 및 -Br로부터 각각 독립적으로 선택되고;
    R4는 -CO2H, -P(=O)(OH)2, -SO3H로부터 선택되며;
    R5는 -COCH3, -COCF3, -SO2CH3로부터 선택되고;
    X는 -O- 및 -S-로부터 선택되며;
    Y는 -O-, -S-, -NR7-, -O(C=O)NR7-, -O(C=S)NR7-, -O(C=O)O-, -O(C=O)-, -NH(C=O)O-, -NH(C=O)-, -NH(C=NH)-, -NH(C=O)NR7-, -NH(C=NH)NR7-, -NH(C=S)NR7-, -NH(C=S)-, -OCH2(C=O)NR7-, -NH(SO2)-, -NH(SO2)NR7-, -OR8-, -NHR8- 및 -SR8-으로부터 선택되고;
    R6은 하기로부터 선택되며:
    Figure pct00952

    R7은 H, C1-C20 알킬, C3-C20 사이클로알킬, C3-C20 헤테로사이클로알킬; C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되고;
    R8은 C3-C20 헤테로사이클로알킬, C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되며;
    각각의 E는 Fc 도메인 단량체, 알부민 단백질, 알부민
    단백질-결합 펩타이드 또는 Fc-결합 펩타이드를 포함하고;
    n은 1 또는 2이며;
    T는 1 내지 20의 정수이고; 그리고
    L은 E, A1 및 A2 각각에 공유 부착된 링커이다.
  59. 하기 화학식 (D-I)로 기재되는 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct00953

    식 중, 각각의 A1 및 각각의 A2는 하기 화학식 (A-VI) 내지 (A-IX) 중 어느 하나로부터 독립적으로 선택되되:
    Figure pct00954

    R1은 -OH, -NH2, -NHC(=NH)NH2 및 -NHC(=NH)NHR6으로부터 선택되며;
    R2 및 R3은 -H, -OH, -F, -Cl 및 -Br로부터 각각 독립적으로 선택되고;
    R4는 -CO2H, -P(=O)(OH)2, -SO3H로부터 선택되며;
    R5는 -COCH3, -COCF3, -SO2CH3로부터 선택되고;
    X는 -O- 및 -S-로부터 선택되며;
    Y는 -O-, -S-, -NR7-, -O(C=O)NR7-, -O(C=S)NR7-, -O(C=O)O-, -O(C=O)-, -NH(C=O)O-, -NH(C=O)-, -NH(C=NH)-, -NH(C=O)NR7-, -NH(C=NH)NR7-, -NH(C=S)NR7-, -NH(C=S)-, -OCH2(C=O)NR7-, -NH(SO2)-, -NH(SO2)NR7-, -OR8-, -NHR8- 및 -SR8-으로부터 선택되고;
    R6은 하기로부터 선택되며:
    Figure pct00955

    R7은 H, C1-C20 알킬, C3-C20 사이클로알킬, C3-C20 헤테로사이클로알킬; C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되고;
    R8은 C3-C20 헤테로사이클로알킬, C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되며;
    각각의 E는 Fc 도메인 단량체, 알부민 단백질, 알부민 단백질-결합 펩타이드 또는 Fc-결합 펩타이드를 포함하고;
    n은 1 또는 2이며;
    T는 1 내지 20의 정수이고; 그리고
    L은 E, A1 및 A2 각각에 공유 부착된 링커이다.
  60. 제57항 내지 제59항 중 어느 한 항에 있어서, T는 2 내지 20의 정수이고,
    E는 1개 이상의 제1 A1-L-A2 모이어티에 접합되며, 각각의 A1 및 각각의 A2는 하기 화학식 (A-III) 내지 (A-V) 중 어느 하나로부터 독립적으로 선택되고:
    Figure pct00956

    E는 1개 이상의 제2 A1-L-A2 모이어티에 접합되며, 각각의 A1 및 각각의 A2는 하기 화학식 (A-I), (A-II), (A-VI), (A-VII), (A-VIII) 및 (A-IX) 중 어느 하나로부터 독립적으로 선택되는, 접합체:
    Figure pct00957

    Figure pct00958
  61. 제60항에 있어서, 상기 제1 A1-L-A2 모이어티 각각은 E의 표면 노출된 라이신 잔기의 질소 원자에 특이적으로 접합되고, 상기 제2 A1-L-A2 모이어티 각각은 E의 표면 노출된 시스테인 잔기의 황 원자에 특이적으로 접합된, 접합체.
  62. 제60항에 있어서, 상기 제1 A1-L-A2 모이어티 각각은 E의 표면 노출된 시스테인 잔기의 황 원자에 특이적으로 접합되고, 상기 제2 A1-L-A2 모이어티 각각은 E의 표면 노출된 라이신 잔기의 질소 원자에 특이적으로 접합된, 접합체.
  63. 제60항 내지 제62항 중 어느 한 항에 있어서, E에 접합된 제1 A1-L-A2 모이어티의 수는 1 내지 10의 정수인, 접합체.
  64. 제60항 내지 제63항 중 어느 한 항에 있어서, E에 접합된 제2 A1-L-A2 모이어티의 수는 1 내지 10의 정수인, 접합체.
  65. 제57항 또는 제58항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (D-II)로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct00959
    .
  66. 제65항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (D-II-1)로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct00960
    .
  67. 제66항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (D-II-2)로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct00961
    .
  68. 제67항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (D-II-3)으로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct00962

    식 중, L'는 L의 잔여부이고, 그리고
    y1 및 y2는 각각의 독립적으로 1 내지 20의 정수이다.
  69. 제68항에 있어서, L'는 질소 원자인, 접합체.
  70. 제69항에 있어서, 상기 접합체는 하기로부터 선택된 구조를 갖는, 접합체:
    Figure pct00963
    또는
    Figure pct00964
  71. 제66항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (D-II-4)로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct00965
    .
  72. 제71항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (D-II-5)로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct00966

    식 중, L'는 L의 잔여부이고, 그리고
    y1 및 y2는 각각의 독립적으로 1 내지 20의 정수이다.
  73. 제72항에 있어서, L'는 질소 원자인, 접합체.
  74. 제73항에 있어서, 상기 접합체는 하기로부터 선택된 구조를 갖는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct00967
    또는
    Figure pct00968
  75. 제71항에 있어서, 상기 접합체는 하기의 구조를 갖는, 접합체:
    Figure pct00969
    .
  76. 제66항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (D-II-6)으로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct00970

    식 중, R7은 H, C1-C20 알킬, C3-C20 사이클로알킬, C3-C20 헤테로사이클로알킬; C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택된다.
  77. 제76항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (D-II-7)로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct00971
    .
  78. 제77항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (D-II-8)로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct00972

    식 중, L'는 L의 잔여부이고, 그리고
    y1 및 y2는 각각의 독립적으로 1 내지 20의 정수이다.
  79. 제78항에 있어서, 상기 접합체는 하기의 구조를 갖는, 접합체:
    Figure pct00973
    또는
    Figure pct00974
  80. 제76항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (D-II-9)로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct00975
    .
  81. 제80항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (D-II-10)으로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct00976

    식 중, L'는 L의 잔여부이고, 그리고
    y1 및 y2는 각각의 독립적으로 1 내지 20의 정수이다.
  82. 제81항에 있어서, 상기 접합체는 하기의 구조를 갖는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct00977
    .
  83. 제57항 또는 제59항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (D-III)으로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct00978
    .
  84. 제83항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (D-III-1)로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct00979
    .
  85. 제84항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (D-III-2)로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct00980
    .
  86. 제85항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (D-III-3)으로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct00981

    식 중, L'는 L의 잔여부이고, 그리고
    y1 및 y2는 각각의 독립적으로 1 내지 20의 정수이다.
  87. 제84항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (D-III-4)로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct00982
    .
  88. 제87항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (D-III-5)로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct00983

    식 중, L'는 L의 잔여부이고, 그리고
    y1 및 y2는 각각의 독립적으로 1 내지 20의 정수이다.
  89. 제84항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (D-III-6)으로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct00984
    .
  90. 제89항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (D-III-7)로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct00985

    식 중, L'는 L의 잔여부이고, 그리고
    y1 및 y2는 각각의 독립적으로 1 내지 20의 정수이다
  91. 제84항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (D-III-8)로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct00986
  92. 제91항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (D-III-9)로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct00987

    식 중, L'는 L의 잔여부이고, 그리고
    y1 및 y2는 각각의 독립적으로 1 내지 20의 정수이다.
  93. 제57항 또는 제59항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (D-IV)로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct00988
    .
  94. 제93항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (D-IV-1)로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct00989
    .
  95. 제94항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (D-IV-2)로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct00990

    식 중, L'는 L의 잔여부이고, 그리고
    y1 및 y2는 각각의 독립적으로 1 내지 20의 정수이다.
  96. 제57항 또는 제58항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (D-V)로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct00991
    .
  97. 제96항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (D-V-1)로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct00992
    .
  98. 제97항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (D-V-2)로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct00993
    .
  99. 제98항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (D-V-3)로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct00994

    식 중, L'는 L의 잔여부이고, 그리고
    y1 및 y2는 각각의 독립적으로 1 내지 20의 정수이다.
  100. 제99항에 있어서, L'는 질소 원자인, 접합체.
  101. 제99항에 있어서, y1 및 y2는 각각 1이거나, y1 및 y2는 각각 2이거나, y1 및 y2는 각각 3인, 접합체.
  102. 제97항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (D-V-4)로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct00995
    .
  103. 제102항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (D-V-5)로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct00996

    식 중, L'는 L의 잔여부이고, 그리고
    y1 및 y2는 각각의 독립적으로 1 내지 20의 정수이다.
  104. 제103항에 있어서, L'는 질소 원자인, 접합체.
  105. 제103항에 있어서, y1 및 y2는 각각 1이거나, y1 및 y2는 각각 2이거나, y1 및 y2는 각각 3인, 접합체.
  106. 제96항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (D-V-6)으로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct00997
    .
  107. 제106항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (D-V-7)로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct00998
    .
  108. 제107항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (D-V-8)로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct00999

    식 중, L'는 L의 잔여부이고, 그리고
    y1 및 y2는 각각의 독립적으로 1 내지 20의 정수이다.
  109. 제108항에 있어서, L'는 질소 원자인, 접합체.
  110. 제108항에 있어서, y1 및 y2는 각각 1이거나, y1 및 y2는 각각 2이거나, y1 및 y2는 각각 3인, 접합체.
  111. 제106항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (D-V-9)로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct01000
    .
  112. 제108항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (D-V-10)으로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct01001

    식 중, L'는 L의 잔여부이고, 그리고
    y1 및 y2는 각각의 독립적으로 1 내지 20의 정수이다.
  113. 제112항에 있어서, L'는 질소 원자인, 접합체.
  114. 제113항에 있어서, y1 및 y2는 각각 1이거나, y1 및 y2는 각각 2이거나, y1 및 y2는 각각 3인, 접합체.
  115. 제57항 또는 제59항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (D-VI)로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct01002
    .
  116. 제115항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (D-VI-1)로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct01003
    .
  117. 제116항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (D-VI-2)로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct01004
    .
  118. 제117항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (D-VI-3)으로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct01005

    식 중, L'는 L의 잔여부이고, 그리고
    y1 및 y2는 각각의 독립적으로 1 내지 20의 정수이다.
  119. 제116항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (D-VI-4)로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct01006
    .
  120. 제119항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (D-VI-5)로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct01007

    식 중, L'는 L의 잔여부이고, 그리고
    y1 및 y2는 각각의 독립적으로 1 내지 20의 정수이다.
  121. 제116항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (D-VI-6)으로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct01008
    .
  122. 제121항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (D-VI-7)로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct01009

    식 중, L'는 L의 잔여부이고, 그리고
    y1 및 y2는 각각의 독립적으로 1 내지 20의 정수이다.
  123. 제116항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (D-VI-8)로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct01010
    .
  124. 제123항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (D-VI-9)로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct01011

    식 중, L'는 L의 잔여부이고, 그리고
    y1 및 y2는 각각의 독립적으로 1 내지 20의 정수이다.
  125. 제57항 또는 제59항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (D-VII)로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct01012
    .
  126. 제96항 내지 제125항 중 어느 한 항에 있어서, R1은 -OH인, 접합체.
  127. 제96항 내지 제125항 중 어느 한 항에 있어서, R1은 -NH2인, 접합체.
  128. 제96항 내지 제125항 중 어느 한 항에 있어서, R1은 -NHC(=NH)NH2인, 접합체.
  129. 제57항 또는 제58항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (D-VIII)로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct01013
    .
  130. 제129항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (D-VIII-1)로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct01014
    .
  131. 제130항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (D-VIII-2)로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct01015
    .
  132. 제131항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (D-VIII-3)으로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct01016

    식 중, L'는 L의 잔여부이고, 그리고
    y1 및 y2는 각각의 독립적으로 1 내지 20의 정수이다.
  133. 제132항에 있어서, L'는 질소 원자인, 접합체.
  134. 제132항에 있어서, 상기 접합체는 하기로부터 선택된 구조를 갖는, 접합체:
    Figure pct01017
    또는
    Figure pct01018
  135. 제130항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (D-VIII-4)로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct01019
    .
  136. 제135항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (D-VIII-5)로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct01020

    식 중, L'는 L의 잔여부이고, 그리고
    y1 및 y2는 각각의 독립적으로 1 내지 20의 정수이다.
  137. 제136항에 있어서, L'는 질소 원자인, 접합체.
  138. 제136항에 있어서, 상기 접합체는 하기로부터 선택된 구조를 갖는, 접합체:
    Figure pct01021
    또는
    Figure pct01022
  139. 제135항에 있어서, 상기 접합체는 하기의 구조식으로 기재되는, 접합체:
    Figure pct01023
  140. 제130항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (D-VIII-6)으로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct01024
    .
  141. 제140항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (D-VIII-7)로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct01025

    식 중, L'는 L의 잔여부이고, 그리고
    y1 및 y2는 각각의 독립적으로 1 내지 20의 정수이다.
  142. 제130항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (D-VIII-8)로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct01026
    .
  143. 제142항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (D-VIII-9)로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct01027

    식 중, L'는 L의 잔여부이고, 그리고
    y1 및 y2는 각각의 독립적으로 1 내지 20의 정수이다.
  144. 제130항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (D-VIII-10)으로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct01028
    .
  145. 제144항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (D-VIII-11)로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct01029

    식 중, L'는 L의 잔여부이고, 그리고
    y1 및 y2는 각각의 독립적으로 1 내지 20의 정수이다.
  146. 제57항 또는 제58항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (D-IX)로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct01030
    .
  147. 제146항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (D-IX-1)로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct01031
    .
  148. 제147항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (D-IX-2)로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct01032
    .
  149. 제147항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (D-IX-3)으로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct01033
    .
  150. 제147항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (D-IX-4)로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct01034
    .
  151. 제147항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (D-IX-5)로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct01035
    .
  152. 제147항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (D-IX-6)으로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct01036
    .
  153. 제57항 또는 제58항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (D-X)로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct01037
    .
  154. 제153항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (D-X-1)로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct01038
    .
  155. 제154항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (D-X-2)로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct01039
    .
  156. 제154항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (D-X-3)으로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct01040
    .
  157. 하기 화학식 (D'-I)로 기재되는 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct01041

    식 중, 각각의 A1은 하기 화학식 (A-III) 내지 (A-V) 중 어느 하나로부터 독립적으로 선택되되:
    Figure pct01042

    각각의 A2는 하기 화학식 (A-I), (A-II), (A-VI), (A-VII), (A-VIII) 및 (A-IX) 중 어느 하나로부터 독립적으로 선택되고:
    Figure pct01043

    R1은 -OH, -NH2, -NHC(=NH)NH2 및 -NHC(=NH)NHR6으로부터 선택되며;
    R2 및 R3은 -H, -OH, -F, -Cl 및 -Br로부터 각각 독립적으로 선택되고;
    R4는 -CO2H, -P(=O)(OH)2, -SO3H로부터 선택되며;
    R5는 -COCH3, -COCF3, -SO2CH3로부터 선택되고;
    X는 -O- 및 -S-로부터 선택되며;
    Y는 하기로부터 선택되며:
    Figure pct01044

    R6은 하기로부터 선택되며:
    Figure pct01045

    R7은 H, C1-C20 알킬, C3-C20 사이클로알킬, C3-C20 헤테로사이클로알킬; C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되고;
    R8은 C3-C20 헤테로사이클로알킬, C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되며;
    각각의 E는 Fc 도메인 단량체, 알부민 단백질, 알부민 단백질-결합 펩타이드 또는 Fc-결합 펩타이드를 포함하고;
    n은 1 또는 2이며;
    T1 및 T2는 각각 독립적으로 1 내지 10의 정수이고;
    L1은 E 및 각각의 A1에 공유 접합된 링커이며;
    L2는 E 및 각각의 A2에 공유 접합된 링커이다..
  158. 제157항에 있어서, 각각의 A1-L-A1은 E의 표면 노출된 라이신 잔기의 질소 원자에 특이적으로 접합되고, 각각의 A2-L-A2는 E의 표면 노출된 시스테인 잔기의 황 원자에 특이적으로 접합된, 접합체.
  159. 제157항에 있어서, 각각의 A1-L-A1 모이어티는 E의 표면 노출된 시스테인 잔기의 황 원자에 특이적으로 접합되고, 각각의 A2-L-A2 모이어티는 E의 표면 노출된 라이신 잔기의 질소 원자에 특이적으로 접합된, 접합체.
  160. 제1항 내지 제159항 중 어느 한 항에 있어서, L 또는 L'는 1개 이상의 선택적으로 치환된 C1-C20 알킬렌, 선택적으로 치환된 C1-C20 헤테로알킬렌, 선택적으로 치환된 C2-C20 알켄일렌, 선택적으로 치환된 C2-C20 헤테로알켄일렌, 선택적으로 치환된 C2-C20 알킨일렌, 선택적으로 치환된 C2-C20 헤테로알킨일렌, 선택적으로 치환된 C3-C20 사이클로알킬렌, 선택적으로 치환된 C3-C20 헤테로사이클로알킬렌, 선택적으로 치환된 C4-C20 사이클로알켄일렌, 선택적으로 치환된 C4-C20 헤테로사이클로알켄일렌, 선택적으로 치환된 C8-C20 사이클로알킨일렌, 선택적으로 치환된 C8-C20 헤테로사이클로알킨일렌, 선택적으로 치환된 C5-C15 아릴렌, 선택적으로 치환된 C2-C15 헤테로아릴렌, O, S, NRi, P, 카보닐, 티오카보닐, 설포닐, 포스페이트, 포스포릴 또는 이미노를 포함하고,
    Ri는 H, 선택적으로 치환된 C1-C20 알킬, 선택적으로 치환된 C1-C20 헤테로알킬, 선택적으로 치환된 C2-C20 알켄일, 선택적으로 치환된 C2-C20 헤테로알켄일, 선택적으로 치환된 C2-C20 알킨일, 선택적으로 치환된 C2-C20 헤테로알킨일, 선택적으로 치환된 C3-C20 사이클로알킬, 선택적으로 치환된 C3-C20 헤테로사이클로알킬, 선택적으로 치환된 C4-C20 사이클로알켄일, 선택적으로 치환된 C4-C20 헤테로사이클로알켄일, 선택적으로 치환된 C8-C20 사이클로알킨일, 선택적으로 치환된 C8-C20 헤테로사이클로알킨일, 선택적으로 치환된 C5-C15 아릴 또는 선택적으로 치환된 C2-C15 헤테로아릴인, 접합체.
  161. 제160항에 있어서, L 또는 L'의 골격은 1개 이상의 선택적으로 치환된 C1-C20 알킬렌, 선택적으로 치환된 C1-C20 헤테로알킬렌, 선택적으로 치환된 C2-C20 알켄일렌, 선택적으로 치환된 C2-C20 헤테로알켄일렌, 선택적으로 치환된 C2-C20 알킨일렌, 선택적으로 치환된 C2-C20 헤테로알킨일렌, 선택적으로 치환된 C3-C20 사이클로알킬렌, 선택적으로 치환된 C3-C20 헤테로사이클로알킬렌, 선택적으로 치환된 C4-C20 사이클로알켄일렌, 선택적으로 치환된 C4-C20 헤테로사이클로알켄일렌, 선택적으로 치환된 C8-C20 사이클로알킨일렌, 선택적으로 치환된 C8-C20 헤테로사이클로알킨일렌, 선택적으로 치환된 C5-C15 아릴렌, 선택적으로 치환된 C2-C15 헤테로아릴렌, O, S, NRi, P, 카보닐, 티오카보닐, 설포닐, 포스페이트, 포스포릴 또는 이미노로 이루어지고,
    Ri는 H, 선택적으로 치환된 C1-C20 알킬, 선택적으로 치환된 C1-C20 헤테로알킬, 선택적으로 치환된 C2-C20 알켄일, 선택적으로 치환된 C2-C20 헤테로알켄일, 선택적으로 치환된 C2-C20 알킨일, 선택적으로 치환된 C2-C20 헤테로알킨일, 선택적으로 치환된 C3-C20 사이클로알킬, 선택적으로 치환된 C3-C20 헤테로사이클로알킬, 선택적으로 치환된 C4-C20 사이클로알켄일, 선택적으로 치환된 C4-C20 헤테로사이클로알켄일, 선택적으로 치환된 C8-C20 사이클로알킨일, 선택적으로 치환된 C8-C20 헤테로사이클로알킨일, 선택적으로 치환된 C5-C15 아릴 또는 선택적으로 치환된 C2-C15 헤테로아릴인, 접합체.
  162. 제160항 또는 제161항에 있어서, L 또는 L'는 옥소 치환된, 접합체.
  163. 제1항 내지 제162항 중 어느 한 항에 있어서, L 또는 L'의 골격은 250개 이하의 원자를 포함하는, 접합체.
  164. 제1항 내지 제163항 중 어느 한 항에 있어서, L 또는 L'는 아마이드, 카바메이트, 설포닐, 또는 유레아 링키지를 형성할 수 있는, 접합체.
  165. 제1항 내지 제159항 중 어느 한 항에 있어서, L 또는 L'는 결합인, 접합체.
  166. 제1항 내지 제159항 중 어느 한 항에 있어서, L 또는 L'는 원자인, 접합체.
  167. 제1항 내지 제166항 중 어느 한 항에 있어서, 각각의 L은 하기 화학식 (D-L-I)로 기재되는, 접합체:
    Figure pct01046

    식 중, LA는 화학식 GA1-(ZA1)g1-(YA1)h1-(ZA2)i1-(YA2)j1-(ZA3)k1-(YA3)l1-(ZA4)m1-(YA4)n1-(ZA5)o1-GA2로 기재되고;
    LB는 화학식 GB1-(ZB1)g2-(YB1)h2-(ZB2)i2-(YB2)j2-(ZB3)k2-(YB3)l2-(ZB4)m2-(YB4)n2-(ZB5)o2-GB2로 기재되며;
    LC는 화학식 GC1-(ZC1)g3-(YC1)h3-(ZC2)i3-(YC2)j3-(ZC3)k3-(YC3)l3-(ZC4)m3-(YC4)n3-(ZC5)o3-GC2로 기재되고;
    GA1은 Q에 부착된 결합이며;
    GA2는 A1에 부착된 결합이고;
    GB1은 Q에 부착된 결합이며;
    GB2는 A2에 부착된 결합이고;
    GC1은 Q에 부착된 결합이며;
    GC2는 E에 접합된 결합 또는 E에 접합된 작용기와 반응할 수 있는 작용기(예를 들어, 말레이미드 및 시스테인, 아민 및 활성화된 카복실산, 티올 및 말레이미드, 활성화된 설폰산 및 아민, 아이소사이아네이트 및 아민, 아자이드 및 알킨 및 알켄 및 테트라진)이고;
    ZA1, ZA2, ZA3, ZA4, ZA5, ZB1, ZB2, ZB3, ZB4, ZB5, ZC1, ZC2, ZC3, ZC4 및 ZC5 각각은 독립적으로, 선택적으로 치환된 C1-C20 알킬렌, 선택적으로 치환된 C1-C20 헤테로알킬렌, 선택적으로 치환된 C2-C20 알켄일렌, 선택적으로 치환된 C2-C20 헤테로알켄일렌, 선택적으로 치환된 C2-C20 알킨일렌, 선택적으로 치환된 C2-C20 헤테로알킨일렌, 선택적으로 치환된 C3-C20 사이클로알킬렌, 선택적으로 치환된 C3-C20 헤테로사이클로알킬렌, 선택적으로 치환된 C4-C20 사이클로알켄일렌, 선택적으로 치환된 C4-C20 헤테로사이클로알켄일렌, 선택적으로 치환된 C8-C20 사이클로알킨일렌, 선택적으로 치환된 C8-C20 헤테로사이클로알킨일렌, 선택적으로 치환된 C5-C15 아릴렌 또는 선택적으로 치환된 C2-C15 헤테로아릴렌이며;
    YA1, YA2, YA3, YA4, YB1, YB2, YB3, YB4, YC1, YC2, YC3 및 YC4 각각은 독립적으로, O, S, NRi, P, 카보닐, 티오카보닐, 설포닐, 포스페이트, 포스포릴 또는 이미노이고;
    Ri는 H, 선택적으로 치환된 C1-C20 알킬, 선택적으로 치환된 C1-C20 헤테로알킬, 선택적으로 치환된 C2-C20 알켄일, 선택적으로 치환된 C2-C20 헤테로알켄일, 선택적으로 치환된 C2-C20 알킨일, 선택적으로 치환된 C2-C20 헤테로알킨일, 선택적으로 치환된 C3-C20 사이클로알킬, 선택적으로 치환된 C3-C20 헤테로사이클로알킬, 선택적으로 치환된 C4-C20 사이클로알켄일, 선택적으로 치환된 C4-C20 헤테로사이클로알켄일, 선택적으로 치환된 C8-C20 사이클로알킨일, 선택적으로 치환된 C8-C20 헤테로사이클로알킨일, 선택적으로 치환된 C5-C15 아릴 또는 선택적으로 치환된 C2-C15 헤테로아릴이며;
    g1, h1, i1, j1, k1, l1, m1, n1, o1, g2, h2, i2, j2, k2, l2, m2, n2, o2, g3, h3, i3, j3, k3, l3, m3, n3 및 o3 각각은 독립적으로, 0 또는 1이고;
    Q는 질소 원자, 선택적으로 치환된 C1-C20 알킬렌, 선택적으로 치환된 C1-C20 헤테로알킬렌, 선택적으로 치환된 C2-C20 알켄일렌, 선택적으로 치환된 C2-C20 헤테로알켄일렌, 선택적으로 치환된 C2-C20 알킨일렌, 선택적으로 치환된 C2-C20 헤테로알킨일렌, 선택적으로 치환된 C3-C20 사이클로알킬렌, 선택적으로 치환된 C3-C20 헤테로사이클로알킬렌, 선택적으로 치환된 C4-C20 사이클로알켄일렌, 선택적으로 치환된 C4-C20 헤테로사이클로알켄일렌, 선택적으로 치환된 C8-C20 사이클로알킨일렌, 선택적으로 치환된 C8-C20 헤테로사이클로알킨일렌, 선택적으로 치환된 C5-C15 아릴렌 또는 선택적으로 치환된 C2-C15 헤테로아릴렌이다.
  168. 제167항에 있어서, L은 하기로부터 선택되는, 접합체:
    Figure pct01047

    Figure pct01048

    Figure pct01049

    Figure pct01050

    Figure pct01051

    Figure pct01052

    Figure pct01053

    Figure pct01054

    Figure pct01055

    Figure pct01056

    Figure pct01057

    식 중, z1 및 z2는 각각 독립적으로 1 내지 20의 정수이고; 그리고
    R9는 H, C1-C20 알킬, C3-C20 사이클로알킬, C3-C20 헤테로사이클로알킬; C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택된다.
  169. 제168항에 있어서, Y는
    Figure pct01058
    (-NH(C=O)O-)이고, L은
    Figure pct01059
    , 접합체.
  170. 제168항에 있어서, Y는
    Figure pct01060
    (-NH(C=O)O-)이고, L은
    Figure pct01061
    , 접합체.
  171. 제168항에 있어서, Y는
    Figure pct01062
    (-NH(C=O)O-)이고, L은
    Figure pct01063
    , 접합체.
  172. 제168항에 있어서, Y는
    Figure pct01064
    (-O-)이고, L은
    Figure pct01065
    , 접합체.
  173. 하기 화학식 (M-I)로 기재되는 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct01066

    식 중, 각각의 A1은 하기 화학식 (A-I) 내지 (A-XII) 중 어느 하나로부터 독립적으로 선택되되:
    Figure pct01067

    R1은 -OH, -NH2, -NHC(=NH)NH2 및 -NHC(=NH)NHR6으로부터 선택되며;
    R2 및 R3은 -H, -OH, -F, -Cl 및 -Br로부터 각각 독립적으로 선택되고;
    R4는 -CO2H, -P(=O)(OH)2, -SO3H로부터 선택되며;
    R5는 -COCH3, -COCF3, -SO2CH3로부터 선택되고;
    X는 -O- 및 -S-로부터 선택되며;
    Y는 -O-, -S-, -NR7-, -O(C=O)NR7-, -O(C=S)NR7-, -O(C=O)O-, -O(C=O)-, -NH(C=O)O-, -NH(C=O)-, -NH(C=NH)-, -NH(C=O)NR7-, -NH(C=NH)NR7-, -NH(C=S)NR7-, -NH(C=S)-, -OCH2(C=O)NR7-, -NH(SO2)-, -NH(SO2)NR7-, -OR8-, -NHR8- 및 -SR8-으로부터 선택되고;
    R6은 하기로부터 선택되며:
    Figure pct01068

    R7은 H, C1-C20 알킬, C3-C20 사이클로알킬, C3-C20 헤테로사이클로알킬; C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되고;
    R8은 C3-C20 헤테로사이클로알킬, C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되며;
    각각의 E는 Fc 도메인 단량체, 알부민 단백질, 알부민
    단백질-결합 펩타이드 또는 Fc-결합 펩타이드를 포함하고;
    n은 1 또는 2이며;
    T는 1 내지 20의 정수이고; 그리고
    L은 E 및 A1 각각에 공유 부착된 링커이다.
  174. 하기 화학식 (M-I)로 기재되는 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct01069

    식 중, 각각의 A1은 하기 화학식 (A-I) 내지 (A-V) 중 어느 하나로부터 독립적으로 선택되되:
    Figure pct01070

    R1은 -OH, -NH2, -NHC(=NH)NH2 및 -NHC(=NH)NHR6으로부터 선택되며;
    R2 및 R3은 -H, -OH, -F, -Cl 및 -Br로부터 각각 독립적으로 선택되고;
    R4는 -CO2H, -P(=O)(OH)2, -SO3H로부터 선택되며;
    R5는 -COCH3, -COCF3, -SO2CH3로부터 선택되고;
    X는 -O- 및 -S-로부터 선택되며;
    Y는 -O-, -S-, -NR7-, -O(C=O)NR7-, -O(C=S)NR7-, -O(C=O)O-, -O(C=O)-, -NH(C=O)O-, -NH(C=O)-, -NH(C=NH)-, -NH(C=O)NR7-, -NH(C=NH)NR7-, -NH(C=S)NR7-, -NH(C=S)-, -OCH2(C=O)NR7-, -NH(SO2)-, -NH(SO2)NR7-, -OR8-, -NHR8- 및 -SR8-으로부터 선택되고;
    R6은 하기로부터 선택되며:
    Figure pct01071

    R7은 H, C1-C20 알킬, C3-C20 사이클로알킬, C3-C20 헤테로사이클로알킬; C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되고;
    R8은 C3-C20 헤테로사이클로알킬, C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되며;
    각각의 E는 Fc 도메인 단량체, 알부민 단백질, 알부민 단백질-결합 펩타이드 또는 Fc-결합 펩타이드를 포함하고;
    n은 1 또는 2이며;
    T는 1 내지 20의 정수이고; 그리고
    L은 E 및 A1 각각에 공유 부착된 링커이다..
  175. 하기 화학식 (M-I)로 기재되는 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct01072

    식 중, 각각의 A1은 하기 화학식 (A-VI) 내지 (A-IX) 중 어느 하나로부터 독립적으로 선택되되:
    Figure pct01073

    R1은 -OH, -NH2, -NHC(=NH)NH2 및 -NHC(=NH)NHR6으로부터 선택되며;
    R2 및 R3은 -H, -OH, -F, -Cl 및 -Br로부터 각각 독립적으로 선택되고;
    R4는 -CO2H, -P(=O)(OH)2, -SO3H로부터 선택되며;
    R5는 -COCH3, -COCF3, -SO2CH3로부터 선택되고;
    X는 -O- 및 -S-로부터 선택되며;
    Y는 -O-, -S-, -NR7-, -O(C=O)NR7-, -O(C=S)NR7-, -O(C=O)O-, -O(C=O)-, -NH(C=O)O-, -NH(C=O)-, -NH(C=NH)-, -NH(C=O)NR7-, -NH(C=NH)NR7-, -NH(C=S)NR7-, -NH(C=S)-, -OCH2(C=O)NR7-, -NH(SO2)-, -NH(SO2)NR7-, -OR8-, -NHR8- 및 -SR8-으로부터 선택되고;
    R6은 하기로부터 선택되며:
    Figure pct01074

    R7은 H, C1-C20 알킬, C3-C20 사이클로알킬, C3-C20 헤테로사이클로알킬; C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되고;
    R8은 C3-C20 헤테로사이클로알킬, C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되며;
    각각의 E는 Fc 도메인 단량체, 알부민 단백질, 알부민
    단백질-결합 펩타이드 또는 Fc-결합 펩타이드를 포함하고;
    n은 1 또는 2이며;
    T는 1 내지 20의 정수이고; 그리고
    L은 E 및 A1 각각에 공유 부착된 링커이다.
  176. 제173항 내지 제175항 중 어느 한 항에 있어서, T는 2 내지 20의 정수이고,
    E는 1개 이상의 제1 A1-L 모이어티에 접합되며, 각각의 A1은 하기 화학식 (A-III) 내지 (A-V) 중 어느 하나로부터 독립적으로 선택되고:
    Figure pct01075

    E는 1개 이상의 제2 A1-L-A2 모이어티에 접합되며, 각각의 A1은 하기 화학식 (A-I), (A-II), (A-VI), (A-VII), (A-VIII) 및 (A-IX) 중 어느 하나로부터 독립적으로 선택되는, 접합체:
    Figure pct01076
  177. 제176항에 있어서, 상기 제1 A1-L 모이어티 각각은 E의 표면 노출된 라이신 잔기의 질소 원자에 특이적으로 접합되고, 상기 제2 A1-L 모이어티 각각은 E의 표면 노출된 시스테인 잔기의 황 원자에 특이적으로 접합된, 접합체.
  178. 제176항에 있어서, 상기 제1 A1-L 모이어티 각각은 E의 표면 노출된 시스테인 잔기의 황 원자에 특이적으로 접합되고, 상기 제2 A1-L 모이어티 각각은 E의 표면 노출된 라이신 잔기의 질소 원자에 특이적으로 접합된, 접합체.
  179. 제176항 내지 제178항 중 어느 한 항에 있어서, E에 접합된 제1 A1-L 모이어티의 수는 1 내지 10의 정수인, 접합체.
  180. 제176항 내지 제179항 중 어느 한 항에 있어서, E에 접합된 제2 A1-L 모이어티의 수는 1 내지 10의 정수인, 접합체.
  181. 제173항 또는 제174항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (M-II)로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct01077
    .
  182. 제181항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (M-II-1)로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct01078
    .
  183. 제182항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (M-II-2)로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct01079
    .
  184. 제183항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (M-II-3)로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct01080

    식 중, L'는 L의 잔여부이고, 그리고
    y1은 1 내지 20의 정수이다.
  185. 제182항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (M-II-4)로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct01081
    .
  186. 제185항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (M-II-5)로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct01082

    식 중, L'는 L의 잔여부이고, 그리고
    y1은 1 내지 20의 정수이다.
  187. 제186항에 있어서, 상기 접합체는 하기의 구조를 갖는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct01083
    .
  188. 제181항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (M-II-6)로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct01084

    식 중, R7은 H, C1-C20 알킬, C3-C20 사이클로알킬, C3-C20 헤테로사이클로알킬; C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택된다.
  189. 제188항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (M-II-7)로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct01085
    .
  190. 제188항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (M-II-8)로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct01086

    식 중, L'는 L의 잔여부이고, 그리고
    y1은 1 내지 20의 정수이다.
  191. 제190항에 있어서, 상기 접합체는 하기의 구조를 갖는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct01087
    .
  192. 제188항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (M-II-9)로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct01088
    .
  193. 제192항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (M-II-10)으로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct01089

    식 중, L'는 L의 잔여부이고, 그리고
    y1은 1 내지 20의 정수이다.
  194. 제193항에 있어서, 상기 접합체는 하기의 구조를 갖는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct01090
    .
  195. 제174항 또는 제175항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (M-III)으로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct01091
    .
  196. 제195항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (M-III-1)로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct01092
    .
  197. 제196항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (M-III-2)로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct01093
    .
  198. 제197항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (M-III-3)으로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct01094

    식 중, L'는 L의 잔여부이고, 그리고
    y1 및 y2는 각각의 독립적으로 1 내지 20의 정수이다.
  199. 제196항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (M-III-4)로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct01095
    .
  200. 제199항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (M-III-5)로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct01096

    식 중, L'는 L의 잔여부이고, 그리고
    y1 및 y2는 각각의 독립적으로 1 내지 20의 정수이다.
  201. 제196항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (M-III-6)으로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct01097
    .
  202. 제201항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (M-III-7)로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct01098

    식 중, L'는 L의 잔여부이고, 그리고
    y1 및 y2는 각각의 독립적으로 1 내지 20의 정수이다.
  203. 제196항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (M-III-8)로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct01099
    .
  204. 제203항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (M-III-9)로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct01100

    식 중, L'는 L의 잔여부이고, 그리고
    y1 및 y2는 각각의 독립적으로 1 내지 20의 정수이다.
  205. 제173항 또는 제174항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (M-IV)로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct01101
    .
  206. 제205항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (M-IV-1)로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct01102
    .
  207. 제206항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (M-IV-2)로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct01103

    식 중, L'는 L의 잔여부이고, 그리고
    y1 및 y2는 각각의 독립적으로 1 내지 20의 정수이다.
  208. 제173항 또는 제174항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (M-V)로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct01104
    .
  209. 제208항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (M-V-1)로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct01105
    .
  210. 제209항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (M-V-2)로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct01106
    .
  211. 제210항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (M-V-3)으로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct01107

    식 중, L'는 L의 잔여부이고, 그리고
    y1은 1 내지 20의 정수이다.
  212. 제209항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (M-V-4)로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct01108
    .
  213. 제212항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (M-V-5)로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct01109

    식 중, L'는 L의 잔여부이고, 그리고
    y1은 1 내지 20의 정수이다.
  214. 제208항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (M-V-6)으로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct01110
    .
  215. 제214항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (M-V-7)로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct01111
    .
  216. 제215항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (M-V-8)로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct01112

    식 중, L'는 L의 잔여부이고, 그리고
    y1은 1 내지 20의 정수이다.
  217. 제214항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (M-V-9)로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct01113
    .
  218. 제217항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (M-V-10)으로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct01114

    식 중, L'는 L의 잔여부이고, 그리고
    y1은 1 내지 20의 정수이다.
  219. 제173항 또는 제174항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (M-VI)으로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct01115
    .
  220. 제219항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (M-VI-1)로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct01116
    .
  221. 제220항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (M-VI-2)로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct01117
    .
  222. 제221항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (M-VI-3)로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct01118

    식 중, L'는 L의 잔여부이고, 그리고
    y1 및 y2는 각각의 독립적으로 1 내지 20의 정수이다.
  223. 제220항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (M-VI-4)로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct01119
    .
  224. 제223항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (M-VI-5)로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct01120

    식 중, L'는 L의 잔여부이고, 그리고
    y1 및 y2는 각각의 독립적으로 1 내지 20의 정수이다.
  225. 제220항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (M-VI-6)으로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct01121
    .
  226. 제225항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (M-VI-7)로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct01122

    식 중, L'는 L의 잔여부이고, 그리고
    y1 및 y2는 각각의 독립적으로 1 내지 20의 정수이다.
  227. 제220항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (M-VI-8)로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct01123
    .
  228. 제227항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (M-VI-9)로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct01124

    식 중, L'는 L의 잔여부이고, 그리고
    y1 및 y2는 각각의 독립적으로 1 내지 20의 정수이다.
  229. 제173항 또는 제174항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (M-VII)로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct01125
    .
  230. 제173항 내지 제229항 중 어느 한 항에 있어서, R1은 -OH인, 접합체.
  231. 제173항 내지 제229항 중 어느 한 항에 있어서, R1은 -NH2인, 접합체.
  232. 제173항 내지 제229항 중 어느 한 항에 있어서, R1은 -NHC(=NH)NH2인, 접합체.
  233. 제173항 또는 제174항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (M-VIII)로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct01126
    .
  234. 제233항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (M-VIII-1)로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct01127
    .
  235. 제234항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (M-VIII-2)로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct01128
    .
  236. 제235항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (M-VIII-3)으로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct01129

    식 중, L'는 L의 잔여부이고, 그리고
    y1은 1 내지 20의 정수이다.
  237. 제234항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (M-VIII-4)로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct01130
    .
  238. 제237항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (M-VIII-5)로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct01131

    식 중, L'는 L의 잔여부이고, 그리고
    y1은 1 내지 20의 정수이다.
  239. 제238항에 있어서, 상기 접합체는 하기의 구조를 갖는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct01132
    .
  240. 제234항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (M-VIII-6)으로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct01133
    .
  241. 제240항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (M-VIII-7)로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct01134
    .
    식 중, L'는 L의 잔여부이고, 그리고
    y1 및 y2는 각각의 독립적으로 1 내지 20의 정수이다.
  242. 제234항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (M-VIII-8)로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct01135
    .
  243. 제242항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (M-VIII-9)로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct01136

    식 중, L'는 L의 잔여부이고, 그리고
    y1 및 y2는 각각의 독립적으로 1 내지 20의 정수이다.
  244. 제234항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (M-VIII-10)으로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct01137
    .
  245. 제244항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (M-VIII-11)로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct01138

    식 중, L'는 L의 잔여부이고, 그리고
    y1 및 y2는 각각의 독립적으로 1 내지 20의 정수이다.
  246. 제173항 또는 제174항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (M-IX)로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct01139
    .
  247. 제246항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (M-IX-1)로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct01140
    .
  248. 제247항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (M-IX-2)로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct01141
    .
  249. 제247항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (M-IX-3)으로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct01142
    .
  250. 제247항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (M-IX-4)로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct01143
    .
  251. 제247항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (M-IX-5)로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct01144
    .
  252. 제247항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (M-IX-6)으로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct01145
    .
  253. 제173항 또는 제174항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (M-X)으로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct01146
    .
  254. 제253항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (M-X-1)로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct01147
    .
  255. 제254항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (M-X-2)로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct01148
    .
  256. 제254항에 있어서, 상기 접합체는 하기 화학식 (M-X-3)으로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct01149
    .
  257. 하기 화학식 (M'-I)로 기재되는 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct01150

    식 중, 각각의 A1은 하기 화학식 (A-III) 내지 (A-V) 중 어느 하나로부터 독립적으로 선택되되:
    Figure pct01151

    각각의 A2는 하기 화학식 (A-I), (A-II), (A-VI), (A-VII), (A-VIII) 및 (A-IX) 중 어느 하나로부터 독립적으로 선택되고:
    Figure pct01152

    R1은 -OH, -NH2, -NHC(=NH)NH2 및 -NHC(=NH)NHR6으로부터 선택되며;
    R2 및 R3은 -H, -OH, -F, -Cl 및 -Br로부터 각각 독립적으로 선택되고;
    R4는 -CO2H, -P(=O)(OH)2, -SO3H로부터 선택되며;
    R5는 -COCH3, -COCF3, -SO2CH3로부터 선택되고;
    X는 -O- 및 -S-로부터 선택되며;
    Y는 하기로부터 선택되며:
    Figure pct01153

    R6은 하기로부터 선택되며:
    Figure pct01154

    R7은 H, C1-C20 알킬, C3-C20 사이클로알킬, C3-C20 헤테로사이클로알킬; C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되고;
    R8은 C3-C20 헤테로사이클로알킬, C5-C15 아릴 및 C2-C15 헤테로아릴로부터 선택되며;
    각각의 E는 Fc 도메인 단량체, 알부민 단백질, 알부민 단백질-결합 펩타이드 또는 Fc-결합 펩타이드를 포함하고;
    n은 1 또는 2이며;
    T1 및 T2는 각각 독립적으로 1 내지 10의 정수이고;
    L1은 E 및 A1에 공유 접합된 링커이다.
    L2는 E 및 A2에 공유 접합된 링커이다.
  258. 제257항에 있어서, 각각의 A1-L은 E의 표면 노출된 라이신 잔기의 질소 원자에 특이적으로 접합되고, 각각의 A2-L은 E의 표면 노출된 시스테인 잔기의 황 원자에 특이적으로 접합된, 접합체.
  259. 제257항에 있어서, 각각의 A1-L은 E의 표면 노출된 시스테인 잔기의 황 원자에 특이적으로 접합되고, 각각의 A2-L은 E의 표면 노출된 라이신 잔기의 질소 원자에 특이적으로 접합된, 접합체.
  260. 제173항 내지 제259항 중 어느 한 항에 있어서, L 또는 L'는 1개 이상의 선택적으로 치환된 C1-C20 알킬렌, 선택적으로 치환된 C1-C20 헤테로알킬렌, 선택적으로 치환된 C2-C20 알켄일렌, 선택적으로 치환된 C2-C20 헤테로알켄일렌, 선택적으로 치환된 C2-C20 알킨일렌, 선택적으로 치환된 C2-C20 헤테로알킨일렌, 선택적으로 치환된 C3-C20 사이클로알킬렌, 선택적으로 치환된 C3-C20 헤테로사이클로알킬렌, 선택적으로 치환된 C4-C20 사이클로알켄일렌, 선택적으로 치환된 C4-C20 헤테로사이클로알켄일렌, 선택적으로 치환된 C8-C20 사이클로알킨일렌, 선택적으로 치환된 C8-C20 헤테로사이클로알킨일렌, 선택적으로 치환된 C5-C15 아릴렌, 선택적으로 치환된 C2-C15 헤테로아릴렌, O, S, NRi, P, 카보닐, 티오카보닐, 설포닐, 포스페이트, 포스포릴 또는 이미노를 포함하고,
    Ri는 H, 선택적으로 치환된 C1-C20 알킬, 선택적으로 치환된 C1-C20 헤테로알킬, 선택적으로 치환된 C2-C20 알켄일, 선택적으로 치환된 C2-C20 헤테로알켄일, 선택적으로 치환된 C2-C20 알킨일, 선택적으로 치환된 C2-C20 헤테로알킨일, 선택적으로 치환된 C3-C20 사이클로알킬, 선택적으로 치환된 C3-C20 헤테로사이클로알킬, 선택적으로 치환된 C4-C20 사이클로알켄일, 선택적으로 치환된 C4-C20 헤테로사이클로알켄일, 선택적으로 치환된 C8-C20 사이클로알킨일, 선택적으로 치환된 C8-C20 헤테로사이클로알킨일, 선택적으로 치환된 C5-C15 아릴 또는 선택적으로 치환된 C2-C15 헤테로아릴인, 접합체.
  261. 제260항에 있어서, L 또는 L'의 골격은 1개 이상의 선택적으로 치환된 C1-C20 알킬렌, 선택적으로 치환된 C1-C20 헤테로알킬렌, 선택적으로 치환된 C2-C20 알켄일렌, 선택적으로 치환된 C2-C20 헤테로알켄일렌, 선택적으로 치환된 C2-C20 알킨일렌, 선택적으로 치환된 C2-C20 헤테로알킨일렌, 선택적으로 치환된 C3-C20 사이클로알킬렌, 선택적으로 치환된 C3-C20 헤테로사이클로알킬렌, 선택적으로 치환된 C4-C20 사이클로알켄일렌, 선택적으로 치환된 C4-C20 헤테로사이클로알켄일렌, 선택적으로 치환된 C8-C20 사이클로알킨일렌, 선택적으로 치환된 C8-C20 헤테로사이클로알킨일렌, 선택적으로 치환된 C5-C15 아릴렌, 선택적으로 치환된 C2-C15 헤테로아릴렌, O, S, NRi, P, 카보닐, 티오카보닐, 설포닐, 포스페이트, 포스포릴 또는 이미노로 이루어지고,
    Ri는 H, 선택적으로 치환된 C1-C20 알킬, 선택적으로 치환된 C1-C20 헤테로알킬, 선택적으로 치환된 C2-C20 알켄일, 선택적으로 치환된 C2-C20 헤테로알켄일, 선택적으로 치환된 C2-C20 알킨일, 선택적으로 치환된 C2-C20 헤테로알킨일, 선택적으로 치환된 C3-C20 사이클로알킬, 선택적으로 치환된 C3-C20 헤테로사이클로알킬, 선택적으로 치환된 C4-C20 사이클로알켄일, 선택적으로 치환된 C4-C20 헤테로사이클로알켄일, 선택적으로 치환된 C8-C20 사이클로알킨일, 선택적으로 치환된 C8-C20 헤테로사이클로알킨일, 선택적으로 치환된 C5-C15 아릴 또는 선택적으로 치환된 C2-C15 헤테로아릴인, 접합체.
  262. 제260항 또는 제261항에 있어서, L 또는 L'는 옥소 치환된, 접합체.
  263. 제173항 내지 제262항 중 어느 한 항에 있어서, L 또는 L'의 골격은 250개 이하의 원자를 포함하는, 접합체.
  264. 제173항 내지 제263항 중 어느 한 항에 있어서, L 또는 L'는 아마이드, 카바메이트, 설포닐, 또는 유레아 링키지를 형성할 수 있는, 접합체.
  265. 제173항 내지 제259항 중 어느 한 항에 있어서, L 또는 L'는 결합인, 접합체.
  266. 제173항 내지 제259항 중 어느 한 항에 있어서, L 또는 L'는 원자인, 접합체.
  267. 제173항 내지 제266항 중 어느 한 항에 있어서, 각각의 L은 하기 화학식 (M-L-I)로 기재되는, 접합체:
    Figure pct01155

    식 중, J1은 A1에 부착된 결합이고;
    J2는 E에 접합된 결합 또는 E에 접합된 작용기와 반응할 수 있는 작용기(예를 들어, 말레이미드 및 시스테인, 아민 및 활성화된 카복실산, 티올 및 말레이미드, 활성화된 설폰산 및 아민, 아이소사이아네이트 및 아민, 아자이드 및 알킨 및 알켄 및 테트라진)이고;
    Q1, Q2, Q3, Q4 및 Q5 각각은 독립적으로, 선택적으로 치환된 C1-C20 알킬렌, 선택적으로 치환된 C1-C20 헤테로알킬렌, 선택적으로 치환된 C2-C20 알켄일렌, 선택적으로 치환된 C2-C20 헤테로알켄일렌, 선택적으로 치환된 C2-C20 알킨일렌, 선택적으로 치환된 C2-C20 헤테로알킨일렌, 선택적으로 치환된 C3-C20 사이클로알킬렌, 선택적으로 치환된 C3-C20 헤테로사이클로알킬렌, 선택적으로 치환된 C4-C20 사이클로알켄일렌, 선택적으로 치환된 C4-C20 헤테로사이클로알켄일렌, 선택적으로 치환된 C8-C20 사이클로알킨일렌, 선택적으로 치환된 C8-C20 헤테로사이클로알킨일렌, 선택적으로 치환된 C5-C15 아릴렌 또는 선택적으로 치환된 C2-C15 헤테로아릴렌이며;
    T1, T2, T3, T4 각각은 독립적으로, O, S, NRi, P, 카보닐, 티오카보닐, 설포닐, 포스페이트, 포스포릴 또는 이미노이고;
    Ri는 H, 선택적으로 치환된 C1-C20 알킬, 선택적으로 치환된 C1-C20 헤테로알킬, 선택적으로 치환된 C2-C20 알켄일, 선택적으로 치환된 C2-C20 헤테로알켄일, 선택적으로 치환된 C2-C20 알킨일, 선택적으로 치환된 C2-C20 헤테로알킨일, 선택적으로 치환된 C3-C20 사이클로알킬, 선택적으로 치환된 C3-C20 헤테로사이클로알킬, 선택적으로 치환된 C4-C20 사이클로알켄일, 선택적으로 치환된 C4-C20 헤테로사이클로알켄일, 선택적으로 치환된 C8-C20 사이클로알킨일, 선택적으로 치환된 C8-C20 헤테로사이클로알킨일, 선택적으로 치환된 C5-C15 아릴 또는 선택적으로 치환된 C2-C15 헤테로아릴이며;g, h, i, j, k, l, m, n 및 o 각각은 독립적으로, 0 또는 1이다.
  268. 제1항 내지 제267항 중 어느 한 항에 있어서, R1은 -NHC(=NH)NH2인, 접합체.
  269. 제1항 내지 제268항 중 어느 한 항에 있어서, R2는 -F인, 접합체.
  270. 제1항 내지 제269항 중 어느 한 항에 있어서, R3은 -F인, 접합체.
  271. 제1항 내지 제270항 중 어느 한 항에 있어서, R4는 -CO2H인, 접합체.
  272. 제1항 내지 제271항 중 어느 한 항에 있어서, R5는 -COCH3인, 접합체.
  273. 제57항 내지 제272항 중 어느 한 항에 있어서, L은 E의 표면 노출된 라이신의 질소 원자에 공유 부착된, 접합체.
  274. 제57항 내지 제272항 중 어느 한 항에 있어서, L은 E의 표면 노출된 시스테인의 황 원자에 공유 부착된, 접합체.
  275. 제57항 내지 제274항 중 어느 한 항에 있어서, 각각의 E는 Fc 도메인 단량체인, 접합체.
  276. 제275항에 있어서, n은 2이고, 각각의 E는 이량체화되어 Fc 도메인을 형성하는, 접합체.
  277. 제57항 내지 제59항 중 어느 한 항에 있어서, n은 2이고, 각각의 E는 Fc 도메인 단량체이며, 각각의 E는 이량체화되어 Fc 도메인을 형성하고, 상기 접합체는 하기 화학식 (D-I-1)로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct01156

    식 중, J는 Fc 도메인이고; 그리고
    T는 1 내지 20의 정수이다.
  278. 제173항 내지 제175항 중 어느 한 항에 있어서, n은 2이고, 각각의 E는 Fc 도메인 단량체이며, 각각의 E는 이량체화되어 Fc 도메인을 형성하고, 상기 접합체는 하기 화학식 (M-I-1)로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct01157

    식 중, J는 Fc 도메인이고; 그리고
    T는 1 내지 20의 정수이다.
  279. 제275항 내지 제278항 중 어느 한 항에 있어서, 각각의 E는 서열번호 1 내지 68 중 어느 하나의 서열을 갖는, 접합체.
  280. 제275항 내지 제279항 중 어느 한 항에 있어서, T는 1, 2, 3, 4 또는 5인, 접합체.
  281. 제275항 내지 제280항 중 어느 한 항의 접합체의 집단으로서, T의 평균값은 1 내지 5인, 접합체의 집단.
  282. 제57항 내지 제274항 중 어느 한 항에 있어서, 각각의 E는 알부민 단백질, 알부민 단백질-결합 펩타이드 또는 Fc-결합 펩타이드인, 접합체.
  283. 제252항에 있어서, n은 1인, 접합체.
  284. 제57항 내지 제59항 중 어느 한 항에 있어서, n은 1이고, E는 알부민 단백질, 알부민 단백질-결합 펩타이드 또는 Fc-결합 펩타이드이며, 상기 접합체는 하기 화학식 (D-I-2)로 기재되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct01158

    식 중, E는 알부민 단백질, 알부민 단백질-결합 펩타이드 또는 Fc-결합 펩타이드이고; 그리고
    T는 1 내지 20의 정수이다.
  285. 제173항 내지 제175항 중 어느 한 항에 있어서, n은 1이고, E는 알부민 단백질, 알부민 단백질-결합 펩타이드 또는 Fc-결합 펩타이드이며, 상기 접합체는 하기 화학식 (M-I-2)로 기재되는, 접합체 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct01159

    식 중, E는 알부민 단백질, 알부민 단백질-결합 펩타이드 또는 Fc-결합 펩타이드이고; 그리고
    T는 1 내지 20의 정수이다.
  286. 제282항 내지 제285항 중 어느 한 항에 있어서, E는 서열번호 69 내지 71 중 어느 하나의 서열을 갖는 알부민 단백질인, 접합체.
  287. 제282항 내지 제285항 중 어느 한 항에 있어서, T는 1, 2, 3, 4 또는 5인, 접합체.
  288. 제282항 내지 제287항 중 어느 한 항의 접합체의 집단으로서, T의 평균값은 1 내지 5인, 접합체의 집단.
  289. 제1항 내지 제288항 중 어느 한 항의 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염 및 약제학적으로 허용 가능한 부형제를 포함하는, 약제학적 조성물.
  290. 바이러스 감염을 갖거나 바이러스 감염을 갖는 것으로 추정되는 대상체의 치료 방법으로서, 상기 대상체에게 유효량의 제1항 내지 제289항 중 어느 한 항의 접합체 또는 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 치료 방법.
  291. 바이러스 감염의 예방적 치료를 필요로 하는 대상체에서 바이러스 감염의 예방적 치료 방법으로서, 상기 대상체에게 유효량의 제1항 내지 제289항 중 어느 한 항의 접합체 또는 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 예방적 치료 방법.
  292. 제290항 또는 제291항에 있어서, 상기 바이러스 감염은 인플루엔자 바이러스 또는 파라인플루엔자 바이러스에 의해서 유발되는, 치료 방법.
  293. 제290항 내지 제292항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 바이러스 감염은 인플루엔자 바이러스 A, B 또는 C 또는 파라인플루엔자 바이러스인, 치료 방법.
  294. 제290항 내지 제293항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체는 면역손상된, 치료 방법.
  295. 제290항 내지 제294항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체는 체액 면역 결핍, T 세포 결핍, 호중구감소증, 무비증(asplenia) 또는 보체 결손증(complement deficiency)으로 진단된, 치료 방법.
  296. 제290항 내지 제295항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체는 면역억제 요법으로 치료되고 있거나 치료될 예정인, 치료 방법.
  297. 제290항 내지 제296항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체는 면역억제를 유발는 질환으로 진단된, 치료 방법.
  298. 제297항에 있어서, 상기 질환은 암 또는 후천성 면역결핍 증후군인, 치료 방법.
  299. 제298항에 있어서, 상기 암은 백혈병, 림프종 또는 다발성 골수종인, 치료 방법.
  300. 제290항 내지 제299항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체는 조혈 모세포 이식된 적이 있거나 조혈 모세포 이식될 예정인, 치료 방법.
  301. 제290항 내지 제300항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체는 장기 이식받은 적이 있거나 장기 이식받을 예정인, 치료 방법.
  302. 제290항 내지 제301항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물의 접합체는 근육내, 정맥내, 피부내, 동맥내, 복강내, 병변내, 두개내, 관절내, 전립선내, 흉막내, 기관내, 비강내, 유리체내, 질내, 직장내, 국지, 종양내, 복막, 피하, 결막하, 방광내, 점막내, 심장내, 배꼽내, 안구내, 경구, 국지, 흡입, 주사, 주입에 의해서 투여되는, 치료 방법.
  303. 제290항 내지 제302항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체는 제2 치료제로 치료되는, 치료 방법.
  304. 제303항에 있어서, 상기 제2 치료제는 항바이러스제인, 치료 방법.
  305. 제304항에 있어서, 상기 항바이러스제는 오셀타미비어(oseltamivir), 자나미비어(zanamivir), 페라미비어(peramivir), 라니나미비어(laninamivir), 아만타딘(amantadine) 또는 리만타딘(rimantadine)으로부터 선택되는, 치료 방법.
  306. 제303항에 있어서, 상기 제2 치료제는 방바이러스 백신인, 방법.
  307. 제306항에 있어서, 상기 항바이러스 백신은 대상체에서 인플루엔자 바이러스 A, B 또는 C 또는 파라인플루엔자 바이러스에 대해서 면역 반응을 도출하는, 치료 방법.
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