KR20210067378A - Extraction method of functional protein material derived from black soldier fly - Google Patents

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KR20210067378A
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박관호
이희삼
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대한민국(농촌진흥청장)
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Abstract

The present invention relates to a method for extracting functional protein substances derived from black solder fly. In the present invention, functional protein derived from black solder fly, which does not show cytotoxicity as a natural product, can be obtained in high yield in a short period of time at low cost by extracting immune-related substances from dry powder of black solder fly using water. In addition, according to the improved extraction method, immune candidates can be obtained in a powder form through an additional formulation processing step, and is expected to be usefully utilized by being added to the existing feed at the correct concentration in the field.

Description

동애등에 유래 기능성 단백질 물질의 추출 방법{Extraction method of functional protein material derived from black soldier fly}Extraction method of functional protein material derived from black soldier fly}

본 발명은 동애등에 유래 기능성 단백질 물질의 추출 방법에 관한 것이다.The present invention relates to a method for extracting functional protein substances derived from Dongae et al.

현재까지의 유용생물자원활용에 대한 관심이나 연구는 주로 한약재와 같은 식물군에 대하여 집중되어 왔으며, 유용곤충의 이용개발에 대해서는 전 세계적으로도 그 관심도가 아주 낮은 형편이었다. 환경 적응력이 뛰어난 곤충은 지구상에서 가장 많은 종을 가지고 있으며 전 세계에 분포되어 있다. 이러한 곤충자원은 생명공학기술의 발달로 다양한 분야에서 이용 가치를 높이고 있다. 곤충자원은 많은 분야에 응용되고 있는데 유용물질 생산, 인간의 질병연구 수단, 생물소재 개발, 약용곤충으로 이용, 친환경 농업 등에 이용이 되고 있다.Until now, interest or research on the utilization of useful biological resources has been mainly focused on plant groups such as herbal medicines, and the interest in the use and development of useful insects worldwide was very low. Insects, which are highly adaptable to the environment, have the largest number of species on the planet and are distributed all over the world. These insect resources are increasing the value of use in various fields with the development of biotechnology. Insect resources are being applied in many fields, such as the production of useful substances, research tools for human diseases, the development of biological materials, use as medicinal insects, and eco-friendly agriculture.

동애등에(Black Soldier Fly; Hermetia illucens (Diptera: Stratmyidae))는 북아메리카 원산지로서 세계적인 분포를 보이고 있으며, 먹이 선택폭이 매우 광범위하여 음식물쓰레기와 같은 유기성 폐기물로도 잘 사육되는 것으로 알려져 있다. 동애등에는 축사, 음식물 쓰레기장 등 유기성 폐기물이 축적되어있는 장소에서 서식하며 동애등에 성충 한 마리가 약 1000개의 알을 낳으며, 유충 기간은 15~20일 정도로 가축분뇨, 음식물쓰레기 등을 섭취하며 분해한다. 이러한 동애등에의 생태적 특성을 이용하여 유기성폐자원인 음식물쓰레기와 축산폐기물 등의 친환경적인 처리와 유기자원의 재활용에 대한 연구가 진행되고 있다. 동애등에를 활용한 이러한 유기성 폐기물의 처리 방법은 2차적인 환경오염이 없으며, 이 과정 중에 발생되는 부산물 또한 안전성이 높아 유기성 폐기물 재활용 방법 중 가장 친환경적인 방법이 될 수 있다. 더욱이 탁월한 식성을 자랑하는 동애등에는 번식능력이 좋아 지속적으로 활용가능성이 높다. Black Soldier Fly (Hermetia illucens (Diptera: Stratmyidae)) is native to North America and has a worldwide distribution, and is known to be well bred with organic waste such as food waste due to its wide range of food choices. Dongae, etc. live in places where organic waste is accumulated, such as livestock houses and food waste bins, and one adult on Dongae, etc. lays about 1000 eggs, and the larvae period is 15 to 20 days, ingesting livestock manure and food waste and decomposing it. . Research on the eco-friendly treatment of food waste and livestock waste, which are organic waste resources, and the recycling of organic resources, using the ecological characteristics of Dongae, etc. is being conducted. This organic waste treatment method using Dongae, etc. does not have secondary environmental pollution, and the by-products generated during this process are also highly safe, so it can be the most eco-friendly method among organic waste recycling methods. In addition, Dongae, which boasts excellent eating habits, has a good reproductive ability and is highly likely to be used continuously.

한편, 동애등에를 이용한 폐기물 처리 후 발생하는 노숙 유충 및 번데기는대부분 지방과 단백질로 이루어져 있어 양어사료첨가제, 가축사료 등 경제적 가치가 톤당 8천에서 4만 달러에 이른다고 알려져 있다. 동애등에 번데기의 경우 50% 이상의 조단백질을 함유하고 있고, 유충의 경우 아르기닌, 메티오닌, 라이신과 같은 필수아미노산의 좋은 공급원으로 알려져 있다. 동애등에 번데기와 유충의 아미노산 함량은 대두박보다 높고 어분과 비견되는 가치를 가지고 있어, 어류 사료, 가금 사료 및 다양한 동물의 특수 사료로의 사용에 대한 다양한 활용방안이 보고된 바 있다.On the other hand, the homeless larvae and pupae that are generated after waste treatment using Dongae, etc. are mostly made of fat and protein, so it is known that the economic value of fish feed additives and livestock feed reaches 8,000 to 40,000 dollars per ton. In the case of pupa of Dongae, etc., it contains more than 50% of crude protein, and in the case of larvae, it is known as a good source of essential amino acids such as arginine, methionine, and lysine. The amino acid content of pupae and larvae of Dongae, etc. is higher than that of soybean meal and has a value comparable to that of fish meal, so various application methods have been reported for use as fish feed, poultry feed, and special feed for various animals.

이렇듯, 지금까지의 연구에서 동애등에의 사료 가치가 입증되었음에도 불구하고, 가격경쟁력 미확보 및 부가가치 제고 방안의 부재로 현장에서의 동애등에 유충 사료 이용은 부진한 실정이다. 특히, 기존 연구는 동애등에 유충이 대두박 또는 어분 대체용으로 단순히 일반 영양소 공급 차원으로 이루어졌을 뿐이며, 이에 제조공정 및 제도 개선 등을 통한 가격경쟁력이 확보되어야 한다. 또한, 동애등에 유충의 부가가치 제고 차원에서 유충 내 기능성 물질 발굴 및 급여효과를 검증함으로써 보조 사료로의 활용 기술 개발이 필요한 실정이나, 동애등에 유래 기능성 물질의 최적화된 추출 방법에 대하여는 아직까지 보고된 바가 없고, 이에 대한 연구는 미미한 실정이다.As such, although the value of feed for Dongae has been proven in the previous studies, the use of larval feed for Dongae, etc. in the field is sluggish due to the lack of price competitiveness and the absence of measures to enhance added value. In particular, existing studies have only conducted general nutrient supply as a substitute for soybean meal or fish meal for larvae of Dongae, etc., so price competitiveness must be secured through improvement of manufacturing processes and systems. In addition, in order to enhance the added value of larvae in larvae, it is necessary to develop technology to use it as a supplementary feed by discovering functional substances in larvae and verifying the effect of feeding them. No, there are few studies on it.

김성현 외, 2013, “물고기 사료로서 동애등에의 영양학적 가치” 한국잠사곤충학회지(구 한국잠사학회지), 51(2), 95-98.Kim Seong-hyeon et al., 2013, “Nutritional Value of Dongae, etc. as Fish Feed,” Journal of the Korean Silkworm Society (former Journal of the Korean Silkworm Society), 51(2), 95-98.

이에, 본 발명자들은 동애등에 유충으로부터 기능성을 갖는 단백질 추출물의 최적화 추출 분리방법을 연구하던 중, 물을 용매로 하고 연속식 원심분리기를 이용하여 후보물질을 분리한 후 스프레드 건조방식을 통해 효율적으로 후보물질을 건조시킴으로써, 동애등에 유충 건조분말에서 면역 관련물질을 경제적이고 효율적으로 얻을 수 있음을 확인하고 본 발명을 완성하였다. Accordingly, the present inventors were studying the optimal extraction and separation method of a protein extract having functionality from larvae of Dongae et al., using water as a solvent and using a continuous centrifuge to separate candidate substances, and then efficiently using a spread drying method. By drying the material, it was confirmed that immune-related substances can be economically and efficiently obtained from dry powder of larvae such as Dongae, etc., and the present invention was completed.

따라서 본 발명의 목적은 (a) 동애등에 분말에 물을 가하여 추출하는 단계; (b) 상기 단계 (a)의 추출된 단백질 추출물을 원심분리하는 단계; 및 (c) 상기 단계 (b)의 결과물에서 상등액을 회수하여 건조시키는 단계;를 포함하는 것을 특징으로 하는 동애등에 유래 기능성 단백질 물질의 추출 방법을 제공하는 것이다.Therefore, an object of the present invention is to extract (a) adding water to the powder of Dongae, etc.; (b) centrifuging the extracted protein extract of step (a); and (c) recovering and drying the supernatant from the resultant of step (b); to provide a method for extracting functional protein material derived from Dongae, characterized in that it comprises a.

본 발명의 또 다른 목적은 상기 방법으로 추출되는 것을 특징으로 하는 동애등에 유래 기능성 단백질 물질 및 이의 용도를 제공하는 것이다.Another object of the present invention is to provide a functional protein material derived from Dongae, characterized in that it is extracted by the above method, and uses thereof.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 (a) 동애등에 분말에 물을 가하여 추출하는 단계; (b) 상기 단계 (a)의 추출된 단백질 추출물을 원심분리하는 단계; 및 (c) 상기 단계 (b)의 결과물에서 상등액을 회수하여 건조시키는 단계;를 포함하는 것을 특징으로 하는 동애등에 유래 기능성 단백질 물질의 추출 방법을 제공한다.In order to achieve the above object, the present invention comprises the steps of (a) extracting by adding water to the powder such as Dongae; (b) centrifuging the extracted protein extract of step (a); and (c) recovering and drying the supernatant from the resultant of step (b); provides a method for extracting functional protein material derived from Dongae, characterized in that it comprises a.

또한, 본 발명은 상기 방법으로 추출되는 것을 특징으로 하는 동애등에 유래 기능성 단백질 물질을 제공한다.In addition, the present invention provides a functional protein material derived from Dongae, characterized in that it is extracted by the above method.

또한, 본 발명은 상기 동애등에 유래 기능성 단백질 물질을 포함하는 항균용 조성물을 제공한다.In addition, the present invention provides an antibacterial composition comprising a functional protein material derived from Dongae, etc.

또한, 본 발명은 동애등에 유래 기능성 단백질 물질을 포함하는 사료 조성물을 제공한다.In addition, the present invention provides a feed composition comprising a functional protein material derived from Dongae, etc.

본 발명은 물을 이용해 동애등에 건조 분말에서 면역 관련물질을 추출함으로써 천연물로 세포독성을 나타내지 않는 동애등에 유래 기능성 단백질을 저비용으로 짧은 기간 안에 높은 수율로 얻을 수 있다. 뿐만 아니라, 개선된 추출방법에 따라 추가적인 제형화 가공 단계를 거쳐 상기 면역 후보물질을 분말상으로 얻을 수 있으며, 이에 현장에서 기존 사료에 정확한 농도로 첨가하여 유용하게 활용될 수 있을 것으로 기대된다.According to the present invention, functional protein derived from Dongae, etc., which does not show cytotoxicity as a natural product, can be obtained in high yield at low cost and in a short period of time by extracting immune-related substances from dry powder of Dongae, etc. using water. In addition, according to the improved extraction method, the immune candidate can be obtained in powder form through an additional formulation processing step, and it is expected that it will be usefully utilized by adding it to the existing feed at the correct concentration in the field.

도 1은 100% EtOH(에탄올) + 1% AcOH(아세트산)의 혼합용매를 사용하여 갈색거저리, 굼벵이 및 동애등에 추출에 사용하고, 상기 추출된 후보물질의 양(% of the dried biomass, g/100g)을 통해 각 면역후보물질의 수율을 측정한 결과를 나타낸 도이다.
도 2는 100% EtOH, 50% EtOH 및 증류수를 각각 사용하여 동애등에 추출에 사용하고, 상기 추출된 후보물질의 양(% of the dried biomass, g/100g)을 통해 추출용매에 따른 수율을 측정한 결과를 나타낸 도이다.
도 3은 Paper Disc를 이용하여 용매 추출물별 동애등에 유래 면역후보물질의 항균활성 검정 결과를 나타낸 것이다. (A) 1g / 1mL 증류수 희석액 20 ul, (B) 1g / 1mL 증류수 1/10 희석액 20 ul, (C) 대조군(증류수), (D) 1g / 1mL 증류수 1/100 희석액 20 ul, (E) 1g / 1mL 증류수 1/1000 희석액 20 ul.
도 4는 100% 증류수, 100% 증류수+아세트산 혼합용매, 50% 에탄올, 50% 에탄올+아세트산 혼합용매, 100% 에탄올, 100% 에탄올+아세트산 혼합용매를 각각 사용하여 동애등에 유래 면역후보물질을 추출하고, 상기 동애등에 유래 면역후보물질의 세포독성 측정 결과를 나타낸 도이다.
1 is 100% EtOH (ethanol) + 1% AcOH (acetic acid) used for extraction using a mixed solvent of brown mealworm, slug and snail, and the amount of the extracted candidate material (% of the dried biomass, g / 100 g) is a diagram showing the results of measuring the yield of each immune candidate material.
Figure 2 is 100% EtOH, 50% EtOH and distilled water, respectively, used for extraction in Dongae, etc., and the amount of the extracted candidate material (% of the dried biomass, g / 100 g) to measure the yield according to the extraction solvent A diagram showing a result.
Figure 3 shows the results of the antimicrobial activity assay of the immune candidates derived from Dongae, etc. by solvent extract using Paper Disc. (A) 1g / 1mL distilled water 20 ul, (B) 1g / 1mL distilled water 1/10 dilution 20 ul, (C) Control (distilled water), (D) 1g / 1mL distilled water 20 ul 1/100 dilution, (E) 1 g / 1 mL distilled water 1/1000 dilution 20 ul.
Figure 4 is 100% distilled water, 100% distilled water + acetic acid mixed solvent, 50% ethanol, 50% ethanol + acetic acid mixed solvent, 100% ethanol, 100% ethanol + acetic acid mixed solvent, respectively, extracting the immune candidate substances derived from Dongae, etc. And, it is a diagram showing the cytotoxicity measurement result of the immune candidate material derived from Dongae et al.

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described in detail.

본 명세서에서 달리 정의되지 않은 용어들은 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상적으로 사용되는 의미를 갖는 것이다.Terms not otherwise defined herein have meanings commonly used in the art to which the present invention pertains.

본 발명은 (a) 동애등에 분말에 물을 가하여 추출하는 단계; (b) 상기 단계 (a)의 추출된 단백질 추출물을 원심분리하는 단계; 및 (c) 상기 단계 (b)의 결과물에서 상등액을 회수하여 건조시키는 단계;를 포함하는 것을 특징으로 하는 동애등에 유래 기능성 단백질 물질의 추출 방법을 제공한다. The present invention comprises the steps of (a) extracting by adding water to the powder such as Dongae; (b) centrifuging the extracted protein extract of step (a); and (c) recovering and drying the supernatant from the resultant of step (b); provides a method for extracting functional protein material derived from Dongae, characterized in that it comprises a.

본 발명에서, 용어 “추출물”이란, 추출 과정에서 추출 용매에 의해 추출되는 부분이다. 즉, 추출에 의해 침전물과 상등액으로 분리되었을 때 “상등액”에 해당되는 부분이다. 또한, 상기 추출물은 광의적으로는 추출물을 추가적으로 분획(fractionation)한 분획물도 포함한다. 즉, 본 발명에 따른 동애등에 추출물은 물(증류수), 에탄올 등의 추출 용매를 이용하여 얻은 것뿐만 아니라, 여기에 정제과정을 추가적으로 적용하여 얻은 것도 모두 포함하는 의미이다.In the present invention, the term “extract” refers to a portion extracted by the extraction solvent during the extraction process. That is, when it is separated into a precipitate and a supernatant by extraction, it is a part corresponding to the “supernatant”. In addition, the extract includes a fraction obtained by additionally fractionating the extract in a broad sense. That is, the extract according to the present invention includes not only those obtained by using an extraction solvent such as water (distilled water) or ethanol, but also those obtained by additionally applying a purification process here.

본 발명에 있어서, 상기 동애등에 분말은 동애등에 유충(larva) 분말인 것을 특징으로 할 수 있다. 본 발명의 일 실시예에서는 상기 동애등에 유충 분말은 마이크로파 건조를 통해 제조된 것을 사용하고 있으나, 물을 가하여 기능성 단백질 물질의 추출이 가능한 동애등에 유충 분말이라면 제한없이 사용할 수 있다.In the present invention, the Dongae and the like powder may be characterized in that the larva powder is the same. In one embodiment of the present invention, the larvae powder prepared by microwave drying is used, but as long as it is a larvae powder that can be extracted with water to extract a functional protein material, it can be used without limitation.

본 발명에 있어서, 상기 (a) 단계는 동애등에 분말에 5 내지 15 중량배의 물을 가하여 50 내지 70℃에서 환류추출하는 것일 수 있으며, 바람직하게는 8 내지 12 중량배의 물을 가하여 55 내지 65℃에서 환류추출하는 것일 수 있고, 보다 바람직하게는 10 중량배의 물을 가하여 60℃에서 환류추출하는 것을 특징으로 할 수 있다.In the present invention, the step (a) may be to add 5 to 15 weight times of water to the powder in Dongae, etc., and extract under reflux at 50 to 70 ° C., preferably by adding 8 to 12 weight times of water to 55 to It may be to reflux extraction at 65 ℃, more preferably, it may be characterized in that the reflux extraction at 60 ℃ by adding 10 times by weight of water.

또한, 상기 (a) 단계는 추가적으로 가성소다를 가하여 pH 9로 조정한 후 추출하는 것을 특징으로 할 수 있다. 상기 가성소다는 식품첨가용 가성소다를 사용할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. In addition, the step (a) may be characterized in that the extraction is performed after adjusting the pH to 9 by additionally adding caustic soda. The caustic soda may be caustic soda for food additives, but is not limited thereto.

본 발명의 일 실시예에서는 마이크로파 건조를 통해 제조한 동애등에 유충 분말을 추출탱크에서 환류하면서 60℃의 10배량의 물과 식품첨가용 가성소다를 이용하여 pH 9로 조정한 후 1차 추출을 수행하였다. In one embodiment of the present invention, the larvae powder prepared through microwave drying is refluxed in an extraction tank while the pH is adjusted to 9 using water and caustic soda for food additives in an amount of 10 times 60°C, and then the primary extraction is performed. did.

본 발명에 있어서, 상기 (b) 단계의 원심분리는 6000 내지 7000 rpm, 바람직하게는 약 6,400 rpm(약 10,000g)의 조건으로 수행할 수 있으나, 물을 이용한 1차 추출 후 원심분리를 통해 면역 후보물질의 효율적인 분리가 가능한 조건이라면 상기 조건에 제한되지 않고 적용될 수 있다.In the present invention, the centrifugation of step (b) may be performed under the conditions of 6000 to 7000 rpm, preferably about 6,400 rpm (about 10,000 g), but after the first extraction using water, the centrifugation is performed to immunize As long as it is a condition capable of efficiently separating the candidate material, it may be applied without being limited to the above condition.

본 발명에 있어서, 상기 (c) 단계의 건조는 스프레드 건조기로 30 내지 50cmHg, 80 내지 90℃ 조건에서 수행할 수 있으며, 바람직하게는 35 내지 45cmHg, 83 내지 87℃ 조건에서 수행할 수 있고, 보다 바람직하게는 40cmHg, 85℃ 조건에서 수행할 수 있다. In the present invention, the drying of step (c) may be performed at 30 to 50 cmHg, 80 to 90 ° C. conditions with a spread dryer, preferably 35 to 45 cmHg, 83 to 87 ° C. conditions, and more Preferably it can be carried out at 40 cmHg, 85 ℃ conditions.

본 발명의 일 실시예에서는 1차 추출된 단백질 추출물을 2시간 동안 열처리하여 티로시나아제(tyrosinase) 활성을 제거한 뒤, 6,400rpm으로 원심분리하고 상등액을 회수하여 스프레드 건조기로 40cmHg, 85℃의 조건에서 48시간/kg로 건조시켜 본 발명에 따른 동애등에 유래 기능성 단백질 물질을 수득하였다.In one embodiment of the present invention, the firstly extracted protein extract is heat-treated for 2 hours to remove tyrosinase activity, centrifuged at 6,400 rpm, and the supernatant is recovered, using a spread dryer at 40 cmHg, 85 ° C. It was dried at 48 hours/kg to obtain a functional protein material derived from Dongae, etc. according to the present invention.

또한, 본 발명은 상기 방법으로 추출되는 것을 특징으로 하는 동애등에 유래 기능성 단백질 물질을 제공한다.In addition, the present invention provides a functional protein material derived from Dongae, characterized in that it is extracted by the above method.

또한, 본 발명은 상기 동애등에 유래 기능성 단백질 물질을 포함하는 항균용 조성물을 제공한다.In addition, the present invention provides an antibacterial composition comprising a functional protein material derived from Dongae, etc.

상기 항균 조성물은 그람 양성 세균(Gram-positive bacteria) 또는 그람 음성 세균(Gram-negative bacteria)에 대한 항균 활성을 갖는 것이 바람직하다.The antimicrobial composition preferably has antimicrobial activity against Gram-positive bacteria or Gram-negative bacteria.

상기 항균 조성물은 약학적 조성물, 건강 기능 식품, 화장료 조성물, 식품 첨가물, 동물 사료용 첨가물, 세정제 및 청결제로 이루어지는 군으로부터 선택되는 것이 바람직하다.The antibacterial composition is preferably selected from the group consisting of pharmaceutical compositions, health functional foods, cosmetic compositions, food additives, additives for animal feed, detergents and cleaners.

본 발명의 추출방법에 따라 수득된 동애등에 유래 기능성 단백질 물질은 강력한 항균 활성을 나타내어, 병원성 세균의 감염의 예방 또는 치료와 관련되는 약학 조성물, 건강 기능 식품, 식품, 동물 사료용 첨가물 및 각종 청결제의 소재로 사용될 수 있다.The functional protein material derived from Dongae, etc., obtained according to the extraction method of the present invention, exhibits strong antibacterial activity, and is a material for pharmaceutical compositions, health functional foods, foods, additives for animal feed, and various cleaning agents related to the prevention or treatment of pathogenic bacterial infections. can be used as

바람직한 구체예로서, 본 발명의 항균 조성물은 약학적 조성물의 용도로서 적용될 수 있다.In a preferred embodiment, the antimicrobial composition of the present invention can be applied as a pharmaceutical composition.

상기 약학적 조성물은 각각의 사용 목적에 맞게 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁제, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구 제형, 멸균 주사용액의 주사제 등 다양한 형태로 제형화하여 사용할 수 있으며, 경구 투여하거나 정맥 내, 복강 내, 피하, 직장, 국소 투여 등을 포함한 다양한 경로를 통해 투여될 수 있다. 이러한 약학적 조성물에는 추가적으로 담체, 부형제 또는 희석제 등이 더 포함될 수 있으며, 포함될 수 있는 적합한 담체, 부형제 또는 희석제의 예로는 락토오스, 덱스트로오스, 수크로오스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리쓰리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로스, 메틸 셀룰로스, 비정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸하이드록시벤조에이트, 프로필하이드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유 등을 들 수 있다. 또한, 본 발명의 약학적 조성물은 충전제, 항응집제, 윤활제, 습윤제, 향료, 유화제, 방부제 등을 추가로 더 포함할 수도 있다.The pharmaceutical composition is formulated in various forms, such as oral formulations such as powders, granules, tablets, capsules, suspensions, emulsions, syrups, aerosols, and injections of sterile injection solutions, according to conventional methods for each purpose of use. It can be used, and it can be administered through various routes including oral administration or intravenous, intraperitoneal, subcutaneous, rectal, topical administration, and the like. The pharmaceutical composition may further include a carrier, excipient, or diluent, and examples of suitable carriers, excipients or diluents that may be included include lactose, dextrose, sucrose, sorbitol, mannitol, xylitol, erythritol, maltitol, Starch, gum acacia, alginate, gelatin, calcium phosphate, calcium silicate, cellulose, methyl cellulose, amorphous cellulose, polyvinyl pyrrolidone, water, methylhydroxybenzoate, propylhydroxybenzoate, talc, magnesium stearate and mineral oil and the like. In addition, the pharmaceutical composition of the present invention may further include a filler, an anti-agglomeration agent, a lubricant, a wetting agent, a flavoring agent, an emulsifier, a preservative, and the like.

본 발명의 약학적 조성물은 약학적으로 유효한 양으로 투여한다. 본 발명에서, "약학적으로 유효한 양"은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 유효 용량 수준은 환자의 질환의 종류, 중증도, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료 기간, 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다. 본 발명의 약학적 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고, 종래의 치료제와 순차적으로 또는 동시에 투여될 수 있으며, 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기한 요소들을 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 이는 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.The pharmaceutical composition of the present invention is administered in a pharmaceutically effective amount. In the present invention, "pharmaceutically effective amount" means an amount sufficient to treat a disease with a reasonable benefit/risk ratio applicable to medical treatment, and the effective dose level is determined by the type, severity, activity of the drug, and the type of disease in the patient; Sensitivity to the drug, time of administration, route of administration and rate of excretion, duration of treatment, factors including concomitant drugs, and other factors well known in the medical field. The pharmaceutical composition of the present invention may be administered as an individual therapeutic agent or may be administered in combination with other therapeutic agents, may be administered sequentially or simultaneously with conventional therapeutic agents, and may be administered single or multiple. In consideration of all of the above factors, it is important to administer an amount that can obtain the maximum effect with a minimum amount without side effects, which can be easily determined by those skilled in the art.

본 발명의 약학적 조성물에서 항균 활성을 갖는 성분의 유효량은 환자의 나이, 성별, 체중에 따라 달라질 수 있으며, 일반적으로는 체중 당 1 내지 5,000mg, 바람직하게는 100 내지 3,000mg을 매일 또는 격일 투여하거나 1일 1 내지 3회로 나누어 투여할 수 있다. 그러나 투여 경로, 질병의 중증도, 성별, 체중, 연령 등에 따라서 증감될 수 있으므로 상기 투여량이 어떠한 방법으로도 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다. 본 발명의 약학적 조성물은 다양한 경로를 통하여 대상에 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁내 경막 또는 뇌혈관 내(intra-cerebroventricular) 주사에 의해 투여될 수 있다. 본 발명에서 "투여"는 임의의 적절한 방법으로 환자에게 소정의 물질을 제공하는 것을 의미하며, 본 발명의 약학적 조성물의 투여 경로는 목적 조직에 도달할 수 있는 한 일반적인 모든 경로를 통하여 경구 또는 비경구 투여될 수 있다. 또한, 본 발명의 조성물은 유효성분을 표적 세포로 전달할 수 있는 임의의 장치를 이용해 투여될 수도 있다. 본 발명에서 "대상"은, 특별히 한정되는 것은 아니지만, 예를 들어, 인간, 원숭이, 소, 말, 양, 돼지, 닭, 칠면조, 메추라기, 고양이, 개, 마우스, 쥐, 토끼 또는 기니피그를 포함한다.The effective amount of the component having antibacterial activity in the pharmaceutical composition of the present invention may vary depending on the age, sex, and weight of the patient, and generally 1 to 5,000 mg per body weight, preferably 100 to 3,000 mg per body weight, is administered daily or every other day Or it can be administered in divided doses 1 to 3 times a day. However, since it may increase or decrease depending on the route of administration, the severity of the disease, sex, weight, age, etc., the dosage is not intended to limit the scope of the present invention in any way. The pharmaceutical composition of the present invention may be administered to a subject through various routes. Any mode of administration can be envisaged, for example, by oral, rectal or intravenous, intramuscular, subcutaneous, intrauterine dural or intra-cerebroventricular injection. In the present invention, "administration" means providing a predetermined substance to a patient by any suitable method, and the administration route of the pharmaceutical composition of the present invention is oral or parenteral through all general routes as long as it can reach the target tissue. It can be administered orally. In addition, the composition of the present invention may be administered using any device capable of delivering an active ingredient to a target cell. In the present invention, "subject" includes, but is not particularly limited to, for example, humans, monkeys, cattle, horses, sheep, pigs, chickens, turkeys, quails, cats, dogs, mice, rats, rabbits or guinea pigs. .

바람직한 구체예로서, 본 발명의 항균 조성물은 건강 기능 식품의 용도로서 적용될 수 있다.In a preferred embodiment, the antimicrobial composition of the present invention can be applied as a dietary supplement.

본 발명의 건강 기능 식품은 병원성 미생물의 감염 우려가 높은 대상으로부터 감염의 가능성을 낮추어 줄 수 있는 효과적인 식품 및 음료 등에 다양하게 이용될 수 있다. 본 발명의 항균 활성이 우수한 유효성분을 포함하는 식품으로는, 예를 들어, 각종 식품류, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 건강보조 식품류 등이 있고, 분말, 과립, 정제, 캡슐 또는 음료인 형태로 사용할 수 있다. 본 발명의 활성 성분은 일반적으로 전체 식품 중량의 0.01 내지 15중량%로 가할 수 있으며, 건강음료 조성물은 100 ml를 기준으로 0.02 내지 10g, 바람직하게는 0.3 내지 1g의 비율로 가할 수 있다. 본 발명의 건강 기능 식품은 지시된 비율로 필수 성분으로서 상기 화합물을 함유하는 것 외에 식품학적으로 허용 가능한 식품보조 첨가제, 예컨대, 천연 탄수화물 및 다양한 향미제 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 예로는 포도당, 과당 등의 단당류, 말토오스, 수크로오스 등의 이당류 및 덱스트린, 시클로덱스트린 등의 다당류와 같은 통상적인 당 및 자일리톨, 소르비톨, 에리쓰리톨 등의 당알코올이 있다. 상기 향미제로는 타우마틴, 레바우디오시드 A, 글리시르히진, 사카린, 아스파르탐 등을 사용할 수 있다. 상기 향미제의 비율은 본 발명의 건강 기능 식품 100ml당 일반적으로 약 1 내지 20g, 바람직하게는 약 5 내지 12g을 사용한다. 상기 외에 본 발명의 건강 기능 식품은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물, 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그 밖에 본 발명의 건강 기능 식품은 천연 과일 주스 및 과일 주스 음료 및 야채 음료 등의 제조를 위한 과육을 함유할 수도 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 본 발명의 상기 활성 분획물 100 중량부 당 0.01 내지 약 20중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.The health functional food of the present invention can be used in various ways, such as effective food and beverages that can lower the possibility of infection from a subject with a high risk of infection with pathogenic microorganisms. Foods containing the active ingredient having excellent antibacterial activity of the present invention include, for example, various foods, beverages, gum, tea, vitamin complexes, health supplements, etc., in the form of powders, granules, tablets, capsules or beverages. can be used as The active ingredient of the present invention can generally be added in 0.01 to 15% by weight of the total food weight, and the health beverage composition can be added in a ratio of 0.02 to 10 g, preferably 0.3 to 1 g, based on 100 ml. In addition to containing the above compound as an essential ingredient in the proportion indicated, the health functional food of the present invention may contain food pharmaceutically acceptable food supplement additives, such as natural carbohydrates and various flavoring agents, as additional ingredients. Examples of the natural carbohydrate include monosaccharides such as glucose and fructose, disaccharides such as maltose and sucrose, and common sugars such as polysaccharides such as dextrin and cyclodextrin, and sugar alcohols such as xylitol, sorbitol, and erythritol. As the flavoring agent, thaumatin, rebaudioside A, glycyrrhizin, saccharin, aspartame, and the like may be used. The ratio of the flavoring agent is generally about 1 to 20 g, preferably about 5 to 12 g per 100 ml of the health functional food of the present invention. In addition to the above, the health functional food of the present invention includes various nutrients, vitamins, minerals, flavoring agents such as synthetic and natural flavoring agents, colorants and thickeners, pectic acid and its salts, alginic acid and its salts, organic acids, protective colloids It may contain thickeners, pH adjusters, stabilizers, preservatives, glycerin, alcohol, carbonation agents used in carbonated beverages, and the like. In addition, the health functional food of the present invention may contain natural fruit juice, fruit juice for the production of fruit juice drinks, vegetable drinks, and the like. These components may be used independently or in combination. The proportion of these additives is generally selected in the range of 0.01 to about 20 parts by weight per 100 parts by weight of the active fraction of the present invention.

바람직한 구체예로서, 본 발명의 항균 조성물은 식품 또는 동물 사료용 첨가제의 용도로서 적용될 수 있다.In a preferred embodiment, the antimicrobial composition of the present invention can be applied as an additive for food or animal feed.

상기 첨가제는 사용되는 식품 또는 동물 사료에 보존성을 부여하기 위하여 첨가되는 것으로서, 상기 항균 조성물은 천연성분으로 유해하지 아니하므로 식품 또는 동물용 사료에 안전하게 적용할 수 있다.The additive is added to impart preservation to the food or animal feed used, and since the antibacterial composition is not harmful as a natural ingredient, it can be safely applied to food or animal feed.

상기 첨가제는 그 사용 목적 및 용도에 따라 적의 선택된 추가적인 여타의 첨가물을 추가로 더 포함할 수 있으며, 통상적으로 사용되는 첨가물 등 다른 유효성분이나 색소, 계면활성제, 방부제 등의 첨가물과 혼합하여 사용할 수 있다. 상기 첨가제는 그 사용 목적 및 용도에 따라 분말화, 과립화, 정제화 또는 액상화하여 제조될 수 있으며, 제품화를 위하여 포장을 위해 통상의 방법을 사용할 수 있다.The additive may further include additional other additives appropriately selected according to the purpose and purpose of use, and may be used by mixing with other active ingredients such as commonly used additives or additives such as pigments, surfactants, and preservatives. . The additive may be manufactured by powdering, granulating, tableting, or liquefying according to the purpose and use thereof, and a conventional method for packaging may be used for commercialization.

또한, 상기 첨가제 중 항균 조성물의 사용량은 사용목적과 적용형태, 적용부위, 적용대상물품 등에 따라 적절히 사용될 수 있으며, 예를 들면 전체 조성물 기준으로 0.01 중량부 내지 50 중량부를 포함할 수 있으나, 상기 항균 조성물의 함량은 이에 한정되는 것은 아니다. 본원 발명의 항균 조성물은 천연성분으로 인체에 유해하지 아니하므로, 그 제품의 특성상 적용목적을 달성할 수 있는 경우라면 다양한 양으로 사용가능하다.In addition, the amount of the antimicrobial composition used among the additives may be appropriately used depending on the purpose of use, application form, application site, application target article, etc., for example, may include 0.01 parts by weight to 50 parts by weight based on the total composition, but the antibacterial composition The content of the composition is not limited thereto. Since the antibacterial composition of the present invention is a natural component and is not harmful to the human body, it can be used in various amounts as long as the application purpose can be achieved due to the characteristics of the product.

바람직한 구체예로서, 본 발명은 항균 조성물은 세정제의 용도로서 적용될 수 있다.In a preferred embodiment, the present invention can be applied as an antibacterial composition for use as a cleaning agent.

상기 세정제는 바람직하게는 의류용 세제, 식기 세척제, 식품 세정제, 가전제품 세척제일 수 있다. 상기 항균 조성물은 천연성분으로 인체에 유해하지 아니하므로, 더욱 바람직하게는 주방용품 또는 식품세척 등을 포함하는 각종 생활용품의 세척이나 항균성 부여를 목적으로 사용할 수 있다.The cleaning agent may be preferably a detergent for clothes, a dishwashing agent, a food cleaner, and a household appliance cleaner. Since the antibacterial composition is a natural component, it is not harmful to the human body, and more preferably, it can be used for the purpose of washing various household items including kitchenware or food washing or for imparting antibacterial properties.

상기 세정제는 그 사용 목적 및 용도에 따라 적의 선택된 첨가물을 추가로 포함할 수 있으며, 통상적으로 사용되는 세정제 등 다른 유효성분이나 색소, 계면활성제, 방부제 등의 첨가제와 혼합하여 사용할 수 있다. 상기 세정제는 그 사용 목적 및 용도에 따라 분말화, 과립화, 정제화 또는 액상화하여 제조될 수 있으며, 제품화를 위하여 포장을 위해 통상의 방법을 사용할 수 있다.The detergent may further include an additive selected appropriately according to the purpose and purpose of its use, and may be used by mixing with other active ingredients such as commonly used detergents or additives such as pigments, surfactants, and preservatives. The detergent may be manufactured by powdering, granulating, tableting or liquefying according to the purpose and use thereof, and a conventional method for packaging may be used for productization.

또한, 상기 세정제 중 항균 조성물의 사용량은 사용목적과 적용형태, 적용부위, 적용대상물품 등에 따라 적절히 사용될 수 있으며, 예를 들면 전체 조성물 기준으로 0.01 중량부 내지 50 중량부를 포함할 수 있으나, 상기 항균 조성물의 함량은 이에 한정되는 것은 아니다. 본원 발명의 항균 조성물은 천연성분으로 인체에 유해하지 아니하므로, 그 제품의 특성상 적용목적을 달성할 수 있는 경우라면 다양한 양으로 사용가능하다.In addition, the amount of the antibacterial composition used in the cleaning agent may be appropriately used depending on the purpose of use, application form, application site, application target article, etc., for example, it may include 0.01 parts by weight to 50 parts by weight based on the total composition, but the antibacterial composition The content of the composition is not limited thereto. Since the antibacterial composition of the present invention is a natural component and is not harmful to the human body, it can be used in various amounts as long as the application purpose can be achieved due to the characteristics of the product.

바람직한 구체예로서, 본 발명은 항균 조성물은 청결제의 용도로서 적용될 수 있다.In a preferred embodiment, the present invention can be applied as an antibacterial composition for use as a cleaning agent.

상기 청결제는 그 사용 목적 및 용도에 따라 적의 선택된 추가적인 여타의 첨가물을 추가로 더 포함할 수 있으며, 통상적으로 사용되는 첨가물 등 다른 유효성분이나 색소, 계면활성제, 방부제 등의 첨가물과 혼합하여 사용할 수 있다. 상기 청결제는 그 사용 목적 및 용도에 따라 분말화, 과립화, 정제화 또는 액상화하여 제조될 수 있으나, 액상형의 경우 편리한 사용이 가능할 것이다.The cleaning agent may further include additional additives appropriately selected according to the purpose and purpose of use, and may be used by mixing with other active ingredients such as commonly used additives or additives such as pigments, surfactants, and preservatives. . The cleaning agent may be manufactured by powdering, granulating, tableting, or liquefying depending on the purpose and use thereof, but in the case of a liquid type, convenient use will be possible.

또한, 상기 청결제 중 항균 조성물의 사용량은 사용목적과 적용형태, 적용부위 등에 따라 적절히 사용될 수 있으며, 예를 들면 전체 조성물 기준으로 0.01 중량부 내지 50 중량부를 포함할 수 있으나, 상기 항균 조성물의 함량은 이에 한정되는 것은 아니다. 본원 발명의 항균 조성물은 천연성분으로 인체에 유해하지 아니하므로, 그 제품의 특성상 적용목적을 달성할 수 있는 경우라면 다양한 양으로 사용가능하다.In addition, the amount of the antibacterial composition used in the cleaning agent may be appropriately used depending on the purpose of use, application form, application site, etc., for example, it may include 0.01 parts by weight to 50 parts by weight based on the total composition, but the content of the antibacterial composition is The present invention is not limited thereto. Since the antibacterial composition of the present invention is a natural component and is not harmful to the human body, it can be used in various amounts as long as the application purpose can be achieved due to the characteristics of the product.

또한, 본 발명은 상기 동애등에 유래 기능성 단백질 물질을 포함하는 사료 조성물을 제공한다.In addition, the present invention provides a feed composition comprising a functional protein material derived from Dongae, etc.

상기 사료 조성물은 극피동물, 갑각류, 연체동물, 어류, 양서류, 파충류, 조류, 포유류, 바람직하게는 성게류 또는 해삼류와 같은 극피동물, 게, 새우, 대하 등의 갑각류를 포함하는 절지동물, 두족류, 복족류 또는 이매패류 등의 연체동물, 참돔, 도미, 대구, 가자미, 넙치 등의 어류, 꿩 또는 닭 등의 가금류를 포함하는 조류 또는 돼지, 소, 염소 등의 포유류를 포함하는 동물에게 사용될 수 있다.The feed composition includes echinoderms, crustaceans, mollusks, fish, amphibians, reptiles, birds, mammals, preferably echinoderms such as sea urchins or sea cucumbers, arthropods including crustaceans such as crabs, shrimps and lobsters, cephalopods , molluscs such as gastropods or bivalves, fish such as red sea bream, sea bream, cod, flounder, halibut, birds including poultry such as pheasants or chickens, or animals including mammals such as pigs, cattle, goats, etc. .

상기 사료 조성물은 본 발명의 동애등에 유래 기능성 단백질 물질에 곡물, 식물성 단백질 사료, 동물성 단백질 사료, 당분 또는 유제품을 추가로 포함할 수 있다. 상기 곡물은 구체적으로는 분쇄 또는 파쇄된 밀, 귀리, 보리, 옥수수 및 쌀일 수 있고, 상기 식물성 단백질 사료는 구체적으로는 평지, 콩 및 해바라기를 주성분으로 하는 것일 수 있으며, 상기 동물성 단백질 사료는 구체적으로는 혈분, 육분, 골분 및 생선분일 수 있고, 상기 당분 또는 유제품은 구체적으로는 각종 분유 및 유장 분말로 이루어지는 건조성분일 수 있다.The feed composition may further include grains, vegetable protein feed, animal protein feed, sugar or dairy products in the functional protein material derived from Dongae, etc. of the present invention. The grain may be specifically pulverized or crushed wheat, oats, barley, corn and rice, and the vegetable protein feed may specifically include rapeseed, soybean and sunflower as main components, and the animal protein feed is specifically may be blood meal, meat meal, bone meal, and fish meal, and the sugar or dairy product may specifically be a dry component composed of various types of powdered milk and whey powder.

상기 사료 조성물은 추가로 영양 보충제, 소화 및 흡수 향상제, 성창 촉진제 또는 질병 예방제와 같은 성분을 함께 사용할 수 있다.The feed composition may further be used together with ingredients such as nutritional supplements, digestion and absorption enhancers, vocal tract promoters or disease prevention agents.

본 발명의 사료 조성물에 포함되는 동애등에 유래 기능성 단백질 물질은 사료의 사용목적 및 사용조건에 따라 달라질 수 있으며, 일 예로 최종 생산된 사료 1kg을 기준으로 상기 동애등에 유래 기능성 단백질 물질이 0.1g 내지 100g 포함될 수 있다.The functional protein material derived from Dongae, etc. included in the feed composition of the present invention may vary depending on the purpose and conditions of use of the feed, for example, 0.1 g to 100 g of the functional protein material derived from Dongae, etc. based on 1 kg of the final feed. may be included.

또한, 상기 사료 조성물은 성분들의 분쇄 정도에 따라 경점성의 조립 또는 과립 물질로 제조될 수 있으며, 상기 조성물은 메쉬로 공급되거나 추가 가공 및 포장을 위해 원하는 분리된 형상으로 형성시킬 수 있으며, 저장을 위해 펠렛화, 팽창화 또는 압출 공정을 거칠 수 있으며, 저장의 용이성을 위해 바람직하게는 과잉의 물을 건조 제거될 수 있다.In addition, the feed composition may be prepared as a hard viscous granulated or granular material depending on the degree of pulverization of the ingredients, and the composition may be supplied as a mesh or formed into a desired separated shape for further processing and packaging, and storage For ease of storage, it may be subjected to pelletization, expansion or extrusion process, and preferably excess water may be removed by drying.

본 발명의 일 실시예에서는 상기 동애등에 유래 기능성 단백질 물질의 항균활성을 확인하고, 나아가 상기 물질의 세포독성이 없음을 확인하여 본 발명의 추출방법에 의해 수득된 동애등에 유래 기능성 단백질 물질이 항균용 조성물 또는 사료 조성물로 유용하게 사용될 수 있음을 확인하였다. 뿐만 아니라, 본 발명에 따른 추출방법은 추가적인 제형화 가공 단계를 거쳐 동애등에 유래 기능성 단백질 물질을 분말화하므로 기존 사료에 정확한 농도로 첨가하여 사용하기가 매우 용이하다는 장점이 있다.In one embodiment of the present invention, the functional protein material derived from Dongae, etc. obtained by the extraction method of the present invention by confirming the antibacterial activity of the functional protein material derived from Dongae, etc. and further confirming that there is no cytotoxicity of the material is used for antibacterial use. It was confirmed that it can be usefully used as a composition or a feed composition. In addition, the extraction method according to the present invention has the advantage that it is very easy to use by adding it to an existing feed at an accurate concentration because the functional protein material derived from Dongae, etc. is powdered through an additional formulation processing step.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에 있어서 자명할 것이다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail through examples. These examples are only for illustrating the present invention in more detail, and it will be apparent to those skilled in the art that the scope of the present invention is not limited by these examples according to the gist of the present invention. .

실시예Example 1. One. 동애등에in a fraternity 유충 분말의 추출가능성 확인 Confirmation of extractability of larval powder

갈색거저리, 굼벵이 및 동애등에 유충의 사료화 적용을 위한 면역후보물질의 추출 수율을 측정하였다. 용매로는 100% EtOH(에탄올)+1% 아세트산을 사용하였으며, 각 곤충 유충으로부터의 면역후보물질의 수율은 추출된 후보물질의 양(% of the dried biomass, g/100g)으로부터 판단하였다. 그 결과를 하기 표 1 및 도 1에 나타내었다.The extraction yield of immune candidates for feeding larvae to brown mealworms, slugs and larvae was measured. As a solvent, 100% EtOH (ethanol) + 1% acetic acid was used, and the yield of the immune candidate material from each insect larva was determined from the amount of the extracted candidate material (% of the dried biomass, g/100 g). The results are shown in Table 1 and FIG. 1 below.

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Figure pat00001

표 1 및 도 1에 나타낸 바와 같이, 100g 당 추출된 동애등에 후보물질의 양은 12.93g으로, 식용으로 사용되고 있는 갈색거저리의 23.13g 보다는 적은 양이나 흰점박이꽃무지 유충(굼벵이)의 10.34g 보다는 높은 수율을 보임을 확인하였다. 상기 결과를 통해, 동애등에 유충 분말의 후보물질 추출가능성을 확인하였다. As shown in Table 1 and FIG. 1, the amount of the candidate substance extracted per 100 g is 12.93 g, which is less than 23.13 g of brown mealworm that is used for food, but higher than 10.34 g of white spot larvae (slug). It was confirmed that the yield was shown. Through the above results, it was confirmed the possibility of extracting candidate substances of larvae powder such as Dongae.

실시예Example 2. 2. 동애등에in a fraternity 유래 면역후보물질의 용매별 추출 수율 측정 Measurement of extraction yield for each solvent of the derived immune candidate material

물(증류수), 50% EtOH(에탄올) 및 100% EtOH(에탄올)를 사용하여 용매별 동애등에 면역후보물질의 추출 수율을 측정하였다. 그 결과를 하기 표 2 및 도 2에 나타내었다.Water (distilled water), 50% EtOH (ethanol), and 100% EtOH (ethanol) were used to measure the extraction yield of the immune candidates for Dongae et al. by solvent. The results are shown in Table 2 and FIG. 2 below.

Figure pat00002
Figure pat00002

표 2 및 도 2에 나타낸 바와 같이, 물(증류수)을 이용하여 후보물질을 추출하였을 때 100g에서 21.9g의 면역후보물질을 추출할 수 있었으며, 50% EtOH 및 100% EtOH를 이용하여 추출하였을 때는 각각 20.6, 23.9g의 추출 효율을 보임을 확인하였다. 상기 결과를 통해, 에탄올이 아닌 물을 이용하여 후보물질을 추출하더라도 그 수율의 차이는 많이 나타나지 않아서 산업적으로 활용하기에 문제가 없음을 확인하였다. As shown in Table 2 and Figure 2, when the candidate material was extracted using water (distilled water), 100 g to 21.9 g of the immune candidate material could be extracted, and when extracted using 50% EtOH and 100% EtOH, It was confirmed that the extraction efficiencies of 20.6 and 23.9 g, respectively, were shown. Through the above results, it was confirmed that even if the candidate material was extracted using water instead of ethanol, the difference in yield did not appear much, so there was no problem for industrial use.

실시예Example 3. 3. 동애등에in a fraternity 유래 면역후보물질의 용매별 항균활성 측정 Measurement of antimicrobial activity by solvent of derived immune candidates

3-1. 용매별 항균활성3-1. Antibacterial activity by solvent

물(증류수), 50% EtOH 및 100% EtOH를 이용하여 추출한 동애등에 유래 면역후보물질의 항균활성을 측정하고, 그 결과를 하기 표 3에 나타내었다. 표 안의 수치는 Paper disc 시험에 따라 측정된 Inhibition zone(Clear zone)의 직경(cm)을 나타내며, 항균활성 검정에는 다음의 시험균주를 이용하였다: Bacillus subtilis subsp. Spizizenii, KACC 14741(Gram-positive); Escherichia coli, KCCM 11234(Gram-negative); Salmonella gallinarum(Gram-negative); Listeria monocytogenes, KCCM 4315 (Gram-positive)Antibacterial activity of immune candidates derived from Dongae, etc. extracted using water (distilled water), 50% EtOH and 100% EtOH was measured, and the results are shown in Table 3 below. The figures in the table indicate the diameter (cm) of the inhibition zone (clear zone) measured according to the Paper disc test, and the following test strains were used for the antimicrobial activity assay: Bacillus subtilis subsp. Spizizenii, KACC 14741 (Gram-positive); Escherichia coli , KCCM 11234 (Gram-negative); Salmonella gallinarum (Gram-negative); Listeria monocytogenes , KCCM 4315 (Gram-positive)

Figure pat00003
Figure pat00003

표 3에 나타낸 바와 같이, 50% EtOH 추출 시 Bacillus subtilis, Listeria monocytogenesSalmonella gallinarum에 대한 항균활성을 나타냄을 확인하였다. 물(증류수) 추출 시에는 Listeria monocytogenes에 대한 항균활성을 나타냈으며, 100% EtOH 추출 시에는 Bacillus subtilis에 대한 항균활성을 나타냄을 확인하였다.As shown in Table 3, it was confirmed that 50% EtOH extraction showed antibacterial activity against Bacillus subtilis , Listeria monocytogenes and Salmonella gallinarum. Listeria for water (distilled water) extraction Monocytogenes showed antibacterial activity, and it was confirmed that 100% EtOH extraction showed antibacterial activity against Bacillus subtilis.

3-2. 용매추출물의 희석에 따른 농도별 항균활성3-2. Antimicrobial activity by concentration according to dilution of solvent extract

다음으로, 면역후보물질 용매추출물의 희석에 따른 항균활성을 확인하였다. 그 결과를 하기 표 4 및 도 3에 나타내었다. Next, the antibacterial activity according to the dilution of the solvent extract of the immune candidate substance was confirmed. The results are shown in Table 4 and FIG. 3 below.

Figure pat00004
Figure pat00004

표 4 및 도 3에 나타낸 바와 같이, 50% EtOH 추출물의 1/2배 희석액에서 또한 Bacillus subtilis, Listeria monocytogenesSalmonella gallinarum에서 항균효과가 나타남을 확인하였다.As shown in Table 4 and Figure 3, in a 1/2-fold dilution of 50% EtOH extract also Bacillus subtilis , Listeria It was confirmed that the antibacterial effect appeared in monocytogenes and Salmonella gallinarum.

실시예Example 4. 4. 동애등에in a fraternity 유래 면역후보물질의 세포독성 확인 Confirmation of cytotoxicity of derived immune candidates

항균활성이 확인된 동애등에 유래 면역후보물질의 사료 적용 가능성 확인을 위하여 세포독성을 측정하였다. 세포독성 분석에는 NO/MTS assay를 이용해 배양세포에서의 세포독성을 분석하였다. 그 결과를 도 4에 나타내었다.Cytotoxicity was measured to confirm the possibility of feed application of the immune candidate material derived from Dongae, etc., whose antimicrobial activity was confirmed. For cytotoxicity analysis, cytotoxicity in cultured cells was analyzed using NO/MTS assay. The results are shown in FIG. 4 .

도 4에 나타낸 바와 같이, 100% 물(DW) 추출물, 물(DW)+3% AcOH(아세트산) 추출물 및 50% EtOH(에탄올)+3% AcOH(아세트산) 추출물에서는 세포독성이 나타나지 않았다. 반면, 50% EtOH(에탄올), 100% EtOH(에탄올) 및 100% EtOH(에탄올)+3% AcOH(아세트산) 추출물은 세포독성이 나타났다. As shown in FIG. 4 , cytotoxicity was not observed in the 100% water (DW) extract, the water (DW)+3% AcOH (acetic acid) extract, and the 50% EtOH (ethanol)+3% AcOH (acetic acid) extract. On the other hand, extracts of 50% EtOH (ethanol), 100% EtOH (ethanol) and 100% EtOH (ethanol) + 3% AcOH (acetic acid) showed cytotoxicity.

상기 결과를 통해, 물(증류수) 100%를 활용하여 동애등에 유래 면역후보물질을 추출하는 경우 세포독성이 나타나지 않으면서도 저렴한 비용으로 추출할 수 있음을 확인하였다. Through the above results, it was confirmed that when 100% of water (distilled water) was used to extract the immune candidate material derived from Dongae, etc., it could be extracted at a low cost without showing cytotoxicity.

실시예Example 5. 5. 동애등에in a fraternity 유래 면역후보물질의 of derived immune candidates 제형화formulation 가공 기술 개발 processing technology development

기존의 가공법은 동애등에 분말을 물에 녹여 원심분리기를 이용하여 상등액을 채취한 다음 여과시킨 후 동결건조 혹은 열풍 건조를 이용하여 후보물질을 건조 제형화 하는 방법을 사용하였다. 한편, 본 발명자들은 동애등에 유충으로부터 기능성을 갖는 단백질 추출물을 최적화된 방법으로 추출하기 위해, 연속식 원심분리기를 이용하여 후보물질을 분리한 후에 스프레드 건조방식을 취하여 효율적으로 후보물질을 건조시키는 제형화 가공 기술을 개발하였다.The existing processing method used a method of dissolving dongae powder in water, collecting the supernatant using a centrifugal separator, filtering it, and then drying the candidate material by freeze-drying or hot air drying. On the other hand, in order to extract functional protein extracts from larvae of Dongae, etc. in an optimized method, the present inventors separated candidate substances using a continuous centrifuge and then spread drying method to efficiently dry candidate substances. processing technology was developed.

구체적으로, 마이크로파 건조를 통해 제조한 동애등에 유충 분말을 추출탱크에서 환류하면서 60℃의 10배량의 물과 식품첨가용 가성소다를 이용하여 pH 9로 조정한 후 1차 추출을 수행하였다. 그 후, 1차 추출된 단백질 추출물을 2시간 동안 열처리하여 티로시나아제(tyrosinase) 활성을 제거한 뒤, 6,400rpm으로 원심분리하고 상등액을 회수하여 스프레드 건조기로 40cmHg, 85℃의 조건에서 48시간/kg로 건조시켰다. 기존 제형화 가공 기술과 본 발명에 따른 개선 공정의 효과상의 차이를 하기 표 5에 나타내었다.Specifically, the larvae powder prepared through microwave drying was refluxed in an extraction tank and the pH was adjusted to 9 using 10 times the amount of water at 60°C and caustic soda for food additives, and then the primary extraction was performed. After that, the first extracted protein extract was heat treated for 2 hours to remove tyrosinase activity, centrifuged at 6,400 rpm, and the supernatant was recovered, using a spread dryer at 40 cmHg and 85° C. for 48 hours/kg dried with Table 5 below shows the difference in effectiveness of the existing formulation processing technology and the improvement process according to the present invention.

구분division 기존 가공법conventional processing 개선 공정improvement process 수율yield 15%15% 32%32% 정제기간Purification period 7일7 days 2일2 days 형태shape 겔상gel 분말상powdery 특징Characteristic 기존 사료에 활용하기 위해 용해하여 활용Dissolve and use for use in existing feed 기존 축산사료에 바로 첨가하여 바로 사용 가능Can be used immediately by adding it to existing livestock feed

표 5에 나타낸 바와 같이, 본 발명에 따른 추출 방법으로 동애등에 유래 면역후보물질을 분리 후 제형화 하였을 때 수율은 32%로 두 배 이상 향상되었고, 정제기간도 7일에서 2일로 단축됨을 확인하였다. 상기 동애등에 면역후보물질은 그 형태가 분말상으로 되어 있어 기존사료에 정확한 농도로 계산하여 활용하기가 가능할 것으로 기대된다.As shown in Table 5, when the immune candidate material derived from Dongae, etc. was isolated and formulated by the extraction method according to the present invention, the yield was more than doubled to 32%, and it was confirmed that the purification period was also shortened from 7 days to 2 days. . The immune candidate substances in Dongae et al. are in powder form, so it is expected that they can be calculated and utilized at an accurate concentration in existing feeds.

상기 결과를 통해, 본 발명의 추출방법은 우수한 항균활성을 갖는 동애등에 유충 유래 물 추출물을 얻을 수 있으며, 상기 추출물은 다양한 형태로 제형화될 수 있어 생산비 절감 효과가 기대되며 개발될 경우 실용성이 매우 크다. 또한, 상기 최적화된 추출방법에 따라 동애등에 유래 면역후보 물질을 분리 후 제형화 하였을 때 수율은 향상되고, 정제기간은 단축되는 효과를 얻을 수 있어 시간, 비용 면에서 경제적으로 사용될 수 있음을 확인하였다. Through the above results, the extraction method of the present invention can obtain an extract derived from larvae of Dongae, etc. having excellent antibacterial activity, and the extract can be formulated in various forms, which is expected to reduce production costs. Big. In addition, it was confirmed that the yield is improved and the purification period shortened, so that it can be used economically in terms of time and cost when it is formulated after isolating and formulating an immune candidate material derived from Dongae, etc. according to the optimized extraction method. .

이상으로 본 발명의 특정한 부분을 상세히 기술하였는바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 이러한 구체적인 기술은 단지 바람직한 구현 예일 뿐이며, 이에 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백하다. 따라서, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항과 그의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.As described above in detail a specific part of the present invention, for those of ordinary skill in the art, this specific description is only a preferred embodiment, and it is clear that the scope of the present invention is not limited thereto. Accordingly, the substantial scope of the present invention will be defined by the appended claims and their equivalents.

Claims (10)

(a) 동애등에 분말에 물을 가하여 추출하는 단계;
(b) 상기 단계 (a)의 추출된 단백질 추출물을 원심분리하는 단계; 및
(c) 상기 단계 (b)의 결과물에서 상등액을 회수하여 건조시키는 단계;를 포함하는 것을 특징으로 하는 동애등에 유래 기능성 단백질 물질의 추출 방법.
(a) extracting by adding water to the powder such as Dongae;
(b) centrifuging the extracted protein extract of step (a); and
(c) recovering the supernatant from the resultant of step (b) and drying the method;
제1항에 있어서, 상기 동애등에 분말은 동애등에 유충(larva) 분말인 것을 특징으로 하는, 동애등에 유래 기능성 단백질 물질의 추출 방법.The method for extracting functional protein material derived from Dongae, according to claim 1, wherein the powder of Dongae, etc. is a larva powder of Dongae, etc. 제1항에 있어서, 상기 동애등에 분말은 마이크로파 건조를 통해 제조된 것을 특징으로 하는, 동애등에 유래 기능성 단백질 물질의 추출 방법.The method for extracting functional protein material derived from Dongae, according to claim 1, wherein the powder of Dongae, etc. is prepared through microwave drying. 제1항에 있어서, 상기 (a) 단계는 동애등에 분말에 5 내지 15 중량배의 물을 가하여 50 내지 70℃에서 환류추출하는 것을 특징으로 하는, 동애등에 유래 기능성 단백질 물질의 추출 방법.The method of claim 1, wherein in step (a), 5 to 15 times by weight of water is added to the powder of Dongae, etc., and the extraction is performed under reflux at 50 to 70°C. 제1항에 있어서, 상기 (a) 단계는 추가적으로 가성소다를 가하여 pH 9로 조정한 후 추출하는 것을 특징으로 하는, 동애등에 유래 기능성 단백질 물질의 추출 방법.According to claim 1, wherein step (a) is characterized in that the extraction is performed after adjusting the pH to 9 by adding caustic soda. 제1항에 있어서, 상기 (b) 단계의 원심분리는 6000 내지 7000 rpm의 조건으로 수행하는 것을 특징으로 하는, 동애등에 유래 기능성 단백질 물질의 추출 방법.The method of claim 1, wherein the centrifugation of step (b) is performed under the conditions of 6000 to 7000 rpm. 제1항에 있어서, 상기 (c) 단계의 건조는 스프레드 건조기로 30 내지 50cmHg, 80 내지 90℃ 조건에서 수행하는 것을 특징으로 하는, 동애등에 유래 기능성 단백질 물질의 추출 방법.The method of claim 1, wherein the drying in step (c) is performed at 30 to 50 cmHg and 80 to 90° C. with a spread dryer. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항의 방법으로 추출되는 것을 특징으로 하는 동애등에 유래 기능성 단백질 물질.A functional protein material derived from Dongae, characterized in that it is extracted by the method of any one of claims 1 to 7. 제8항의 동애등에 유래 기능성 단백질 물질을 포함하는 항균용 조성물.An antibacterial composition comprising a functional protein material derived from Dongae of claim 8. 제8항의 동애등에 유래 기능성 단백질 물질을 포함하는 사료 조성물.
A feed composition comprising a functional protein material derived from Dongae and the like of claim 8.
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Title
김성현 외, 2013, "물고기 사료로서 동애등에의 영양학적 가치" 한국잠사곤충학회지(구 한국잠사학회지), 51(2), 95-98.

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