KR101935454B1

KR101935454B1 - A feed composition for preventing or treating flatfish-viral hemorrhagic septicemia comprising Reynoutria japonica extract

Info

Publication number: KR101935454B1
Application number: KR1020170077598A
Authority: KR
Inventors: 이우송; 류영배; 정형재; 권형준; 노문철; 박수진; 박지영
Original assignee: 한국생명공학연구원
Priority date: 2017-06-19
Filing date: 2017-06-19
Publication date: 2019-01-04
Also published as: KR20180137833A

Abstract

본 발명은 호장근 추출물, 또는 상기 호장근 추출물에 스테비아 추출물 또는 스테비오사이드를 추가로 포함하는 바이러스성 출혈성 패혈증(VHS)에 대한 예방 또는 치료용 사료 첨가제 조성물 등에 관한 것으로, 본 발명의 호장근 추출물, 또는 상기 호장근 추출물에 스테비아 추출물 또는 스테비오사이드를 추가로 포함하는 조성물은 어류에 감염된 VHSV에 대한 활성을 억제하는 효과를 나타내고 이를 이용하여 높은 안정성을 가진 어류의 VHS의 예방 또는 치료를 향상시키는 효과를 나타내므로, VHSV의 감염에 대한 어류의 생존율 향상 및 어업 생산성 향상으로 인한 어업 안정성 증대에 널리 활용될 수 있다.The present invention relates to a composition for preventing or treating viral hemorrhagic septicemia (VHS), which further comprises a stevia extract or stevioside in the callus root extract or the callus root extract of the present invention, Or the composition further comprising stevia extract or stevioside in the extract of the callus root has an effect of inhibiting the activity against VHSV infected with fish and using the same to improve the prevention or treatment of VHS of fish having high stability , It can be widely used to improve the survival rate of fish against infection of VHSV and enhance the stability of fishery due to improvement of fishery productivity.

Description

Technical Field [0001] The present invention relates to a feed additive composition for prevention or treatment of flounder viral hemorrhagic septicemia comprising as an active ingredient,

본 발명은 호장근 추출물, 또는 상기 호장근 추출물에 스테비아 추출물 또는 스테비오사이드를 추가로 포함하는 바이러스성 출혈성 패혈증의 예방 또는 치료용 사료 첨가제 조성물에 관한 것으로, 보다 구체적으로 본 발명은 호장근 추출물, 또는 상기 호장근 추출물에 스테비아 추출물 또는 스테비오사이드를 추가로 포함하는 사료 첨가제 조성물; 상기 사료 첨가제 조성물을 포함하는 사료; 상기 사료를 어류에 섭식시키는 단계를 포함하는 어류의 사육방법; 호장근 추출물, 또는 상기 호장근 추출물에 스테비아 추출물 또는 스테비오사이드를 추가로 포함하는 바이러스 출혈성 패혈증에 대한 예방 또는 치료용 약학 조성물; 상기 약학 조성물을 어류에 투여하는 단계를 포함하는 바이러스성 출혈성 패혈증의 예방 또는 치료방법; 호장근 추출물, 또는 상기 호장근 추출물에 스테비아 추출물 또는 스테비오사이드를 추가로 포함하는 바이러스성 출혈성 패혈증 바이러스에 대한 항바이러스용 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to a feed additive composition for preventing or treating vascular endotoxemia or viral hemorrhagic septicemia further comprising stevia extract or stevioside in the callus root extract, A feed additive composition further comprising stevia extract or stevioside in the callus root extract; A feed comprising the feed additive composition; Feeding the feed to the fish; A pharmaceutical composition for preventing or treating viral hemorrhagic septicemia further comprising Stevia extract or stevioside in the above extract of Hojokgang extract; A method for preventing or treating viral hemorrhagic sepsis comprising administering the pharmaceutical composition to fish; The present invention also relates to a composition for antiviral treatment of viral hemorrhagic septicemia virus, which further comprises a stevia extract or stevioside in the callus root extract.

일반적으로 넙치 양식 산업의 심각한 피해를 입히는 주요한 원인체는 3종 이상의 복합감염증, 그 중에서도 바이러스성 출혈성 패혈증 바이러스 (VHSV), 세균인 에드워지엘라 (Edwardsiella), 연쇄상구균 (Strepococcus), 비브리오 (Vibrio), 플렉시박터 (Flexibacter) 및 기생충인 스쿠티카충 (Miamiensis avidus)으로 잘 알려져 있다. 특히, 바이러스성 출혈성 패혈증 (Viral hemorrhagic septicemia, VHS)과 같은 바이러스성 질병은 넙치의 입식초기 저수온기에 발생하여 대량폐사를 유발하는데, 치어뿐만 아니라 성어에 있어서도 대량폐사를 유발하며, 해양오염 및 양식 수산물의 질병으로 인한 양식어가의 경제적 손실이 약 3,000억 원에 이른다고 보고되었다.In general, among the major woninche inflict serious damage halibut aquaculture industry has three or more complex infection, the viral hemorrhagic septicemia virus (VHSV), bacterial Ed woji Ella (Edwardsiella), Streptococcus (Strepococcus), Vibrio (Vibrio), Flexi bakteo (Flexibacter) and parasites in Utica Surgical charge (Miamiensis avidus ). In particular, viral diseases, such as viral hemorrhagic septicemia (VHS), occur in the initial water storage period of the flounder and cause mass mortality, causing mass mortality not only in the fish but also in the sea urchin, Reported that the economic loss of farmed fish due to the disease was about 300 billion won.

상기 VHS는 국내에서는 2001년 넙치에서 처음 보고되었으며 이후 각종 자연산 해산어에서도 보고되고 있고, 양식 넙치의 피해가 매우 심각한 치명적인 질병이다. 2011년 국내 넙치 양식장의 주요 폐사 원인체를 조사한 결과, VHSV에 의한 폐사가 전체 폐사 원인 중 약 12.5%를 차지하였으며, 이는 넙치의 바이러스 질병 중 가장 높은 비율을 차지하였다. 또한, 국내 넙치 생산량 중 절반 가량을 생산하는 제주도 지역의 경우 2007년부터 2010년까지 질병검사 의뢰 시료 중 바이러스성 출혈성 패혈증의 양성율이 30%로 가장 높게 나타났으며, 그 피해도 증가하고 있는 실정이다. 또한, VHSV는 국제수역사무국 (OIE)에서 'OIE 신고대상 질병 (OIE notifiable disease)'으로 규정되어 있어 수산물 유통시 검역 대상이 되는 질병으로 넙치를 포함한 양식 어류의 수출입에 있어서 무역장벽으로 작용하는 중요한 질병요인이기도 하다. VHSV는 무지개송어의 중요 바이러스성 질병으로 처음 보고가 되었는데 최근 다양한 어류, 송어, 무지개송어, 은연어, 강송어, 브라운송어, 스틸헤드 송어 (steelhead trout) 등의 연어과 어류뿐만 아니라 대구, 청어등과 같은 자연수계의 어류 및 넙치 등과 같은 해산양식어류에서도 널리 발생하며, 주로 유럽, 북미, 아시아 지역에서 널리 발생한다. 감염된 넙치를 육안으로 살펴보면, 체색흑화, 전신의 출혈, 복수저류로 인한 복부 팽만과 탈장, 아가미 퇴색, 무안측 체표에 붉은 반점모양의 출혈이 관찰된다. 발병 수온은 10~13℃로 넙치의 크기에 상관없이 폐사가 발생하며, 현재 치료법은 전무하며 다른 지역으로 전파되지 않도록 주의를 기울이는 것이 전부인 것이 현 실정이다. 이에 바이러스성 출혈성 패혈증에 의한 양식 어가의 경제적 손실을 줄이고, 넙치의 원활한 수출 및 유통을 위해 효과적인 바이러스성 출혈성 패혈증의 치료 방법이 절실히 요구되고 있다.The VHS was first reported in flounder in Korea in 2001 and has been reported in various wild-type marine fishes, and the damage of cultured flounder is a serious and serious fatal disease. In 2011, VHSV-induced mortality accounted for 12.5% of the total causative organisms in domestic flounder farms, which accounted for the highest percentage of virus diseases in flounder. In Jeju Island, which produces about half of domestic flounder production, the rate of viral hemorrhagic septicemia among the samples requested for disease testing was the highest at 30% from 2007 to 2010, and the damage is also increasing . In addition, VHSV is defined as 'OIE notifiable disease' by the International Bureau of OIE (OIE) and is subject to quarantine at the time of circulation of fisheries. It is important for VHSV to act as a trade barrier in the import and export of aquaculture including flounder It is also a disease factor. VHSV was first reported as a critical viral disease of rainbow trout. Recently, it has been reported that fishes such as salmon and fish such as fish, trout, rainbow trout, silver salmon, river trout, brown trout, steelhead trout, It also occurs widely in marine aquaculture fish such as fish of the same natural water system and flounder, and it occurs widely in Europe, North America and Asia. When the infected flounder is examined visually, it is observed that the body color blackening, hemorrhage of the whole body, abdominal distension due to multiple retention, hernia, fading of the gills, The onset temperature of the flounder is 10 ~ 13 ℃, regardless of the size of the flounder. Currently, there is no treatment and attention is paid to prevent spreading to other areas. Therefore, there is a desperate need for an effective method for treating viral hemorrhagic sepsis to reduce the economic loss of cultured fish due to viral hemorrhagic sepsis and smooth export and distribution of flounder.

VHSV는 음성 단일가닥 RNA 바이러스로 1963년에 국제수역사무국 (OIE)의 어병 심포지엄에 처음으로 보고되었으며, 총알 모양으로 길이는 180 ㎚, 직경이 60 ㎚인 바이러스이며 크기는 11 kb이며 뉴클레오캡시드 단백질 (nucleocapsid protein) (N), 폴리머라제-관련된 인산 단백질 (polymerase-associated phosphoprotein) (P), 기질 단백질 (matrix protein) (M), 표면 당단백질 (surface glycoprotein) (G), 독특한 비리온성 단백질 (a unique non-virion protein) (NV), 및 바이러스 폴리머라제 (virus polymerase) (L)의 6가지 단백질로 구성되어 있는 랍도바이러스 (rhabdovirus)과에 속한다. 유전자형은 4가지 아형으로 구분되어지고 있으며 I - III형은 북유럽에서 분리된 형이며 IV형은 북미에서 분리된 아형으로 알려져 있다. VHSV의 구조와 항원단백질에 대한 연구, 및 이들 기초 연구를 바탕으로 불활화백신, 단백질 재조합 백신, 약독화 백신, DNA 백신에 대한 연구가 수행되고 있다.VHSV is a negative single-stranded RNA virus, first reported in 1963 at the International Fisheries Symposium (OIE) Fish Symposium Symposium. It is a bullet-shaped virus with a length of 180 nm and a diameter of 60 nm, a size of 11 kb and a nucleocapsid protein (N), polymerase-associated phosphoprotein (P), matrix protein (M), surface glycoprotein (G), unique non-ionic protein a unique non-virion protein (NV), and a virus polymerase (L), which belong to the rhabdovirus . The genotypes are divided into four subtypes. Type I - III is isolated from Northern Europe. Type IV is known as a subtype isolated from North America. Studies on the structure of VHSV and antigenic proteins and studies on inactivated vaccines, protein recombinant vaccines, attenuated vaccines and DNA vaccines are being conducted based on these basic studies.

그러나 약독화 (attenuated) 바이러스 백신은 실험 조건에서는 효과가 있는 것으로 보고되고 있으나 바이러스의 병원성 회복의 위험성과 자연계로의 확산 위험성 때문에 허가가 되지 않고 있다. 또한, 출혈성 패혈증 바이러스 G 혹은 N 유전자를 삽입한 플라스미드를 근육 주사한 DNA백신 실험에서는 강력한 면역반응이 유도되고 폐사율도 경감되었다는 보고가 무지개송어와 넙치에서 보고되고 있으나 DNA백신 유전자 조작에 대한 안전성의 문제 때문에 현재까지 허가된 DNA백신은 단 한 개뿐으로, 아직은 실용화 단계의 DNA백신은 없는 실정이며 바이러스성 출혈성 패혈증에 대한 백신은 상용화되어 있지 않다. 국내에서는 넙치에서 분리된 바이러스주에 대한 백신개발이 주로 진행되고 있으며 천연제제를 사용한 바이러스 활성 억제 연구는 거의 이루어지고 있지 않다. 특히 조추출물에서 보다 정제된 물질 군을 대상으로 연구를 진행하여 저독성 및 약재 효율성의 향상뿐만 아니라 항-VHSV에 관한 연구는 미비한 실정이다.However, attenuated virus vaccines are reported to be effective in experimental conditions, but they are not licensed because of the risk of virulence recovery and the risk of spreading to the wild. In addition, a DNA vaccination experiment with intramuscular injection of a hematopoietic septic virus G or N gene-inserted plasmid has been reported in a rainbow trout and flounder to induce a strong immune response and reduce mortality. However, Therefore, only one DNA vaccine has been licensed so far, and there is no DNA vaccine yet in practical use. Vaccines against viral hemorrhagic sepsis are not commercially available. In Korea, the development of vaccine against virus strains isolated from flounder is mainly proceeding. In particular, the research on the purified group of substances from the crude extract has not been carried out on the anti-VHSV as well as the improvement of the low toxicity and the efficiency of the medicinal product.

이러한 배경 하에, 본 발명자들은 바이러스성 출혈성 패혈증을 예방 또는 치료하기 위한 방법을 개발하고자 예의 연구 노력한 결과, 호장근 추출물, 및 스테비아 추출물 또는 스테비오사이드를 일정한 비율로 혼합하여 사료 첨가제로 사용함으로써, 어류 특히 넙치의 바이러스성 출혈성 패혈증에 대한 우수한 저해 활성을 가지는 사료 조성물, 약학 조성물, 항바이러스용 조성물을 제공할 수 있음을 확인하고 본 발명을 완성하였다.Under these circumstances, the inventors of the present invention have made extensive efforts to develop a method for preventing or treating viral hemorrhagic sepsis. As a result, they have found that the use of a mixture of Hojokgang extract and Stevia extract or stevioside as a feed additive, The present invention provides a feed composition, a pharmaceutical composition, and an antiviral composition having an excellent inhibitory activity against viral hemorrhagic septicemia of a flounder.

본 발명의 하나의 목적은, 호장근 추출물울 유효성분으로 포함하는 바이러스성 출혈성 패혈증(VHS)의 예방 또는 치료용 사료 첨가제 조성물을 제공하는 것이다.It is an object of the present invention to provide a feed additive composition for preventing or treating viral hemorrhagic septicemia (VHS), which is contained as an active ingredient of a callus root extract.

구체적으로, 본 발명의 하나의 목적은, 상기 호장근 추출물에 스테비아 추출물 또는 스테비오사이드를 추가로 포함하는 바이러스성 출혈성 패혈증(VHS)의 예방 또는 치료용 사료 첨가제 조성물을 제공하는 것이다.Specifically, one object of the present invention is to provide a feed additive composition for preventing or treating viral hemorrhagic septicemia (VHS) further comprising stevia extract or stevioside in the callus root extract.

본 발명의 또 다른 하나의 목적은 상기 사료 첨가제 조성물을 포함하는 사료를 제공하는 것이다.It is another object of the present invention to provide a feed comprising the feed additive composition.

본 발명의 또 다른 하나의 목적은 상기 사료를 어류에 섭식시키는 단계를 포함하는 어류의 사육방법을 제공하는 것이다.Yet another object of the present invention is to provide a method for breeding fish comprising feeding the feed to a fish.

본 발명의 또 다른 하나의 목적은 호장근 추출물을 유효성분으로 포함하는 바이러스성 출혈성 패혈증의 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공하는 것이다.It is another object of the present invention to provide a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of viral hemorrhagic sepsis, which comprises an extract of Aspergillus oryzae as an active ingredient.

구체적으로, 본 발명의 하나의 목적은, 상기 호장근 추출물에 스테비아 추출물 또는 스테비오사이드를 추가로 포함하는 바이러스성 출혈성 패혈증의 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공하는 것이다.Specifically, one object of the present invention is to provide a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of viral hemorrhagic sepsis, which further comprises stevia extract or stevioside in the callus root extract.

본 발명의 또 다른 하나의 목적은 상기 약학 조성물을 어류에 투여하는 단계를 포함하는 바이러스성 출혈성 패혈증의 예방 또는 치료 방법을 제공하는 것이다.It is still another object of the present invention to provide a method for preventing or treating viral hemorrhagic sepsis comprising administering the pharmaceutical composition to fish.

본 발명의 또 다른 목적은 호장근 추출물을 유효성분으로 포함하는 바이러스성 출혈성 패혈증 바이러스(VHSV)에 대한 항바이러스용 조성물을 제공하는 것이다.Another object of the present invention is to provide a composition for antiviral treatment of viral hemorrhagic septicemia virus (VHSV) comprising the extract of Aspergillus oryzae as an active ingredient.

구체적으로, 본 발명의 하나의 목적은, 상기 호장근 추출물에 스테비아 추출물 또는 스테비오사이드를 추가로 포함하는 바이러스성 출혈성 패혈증 바이러스(VHSV)에 대한 항바이러스용 조성물을 제공하는 것이다.Specifically, one object of the present invention is to provide an antiviral composition for viral hemorrhagic septicemia virus (VHSV), which further comprises stevia extract or stevioside in the callus root extract.

이를 구체적으로 설명하면 다음과 같다. 한편, 본 발명에서 개시된 각각의 설명 및 실시형태는 각각의 다른 설명 및 실시 형태에도 적용될 수 있다. 즉, 본 발명에서 개시된 다양한 요소들의 모든 조합이 본 발명의 범주에 속한다. 또한, 하기 기술된 구체적인 서술에 의하여 본 발명의 범주가 제한된다고 볼 수 없다.This will be described in detail as follows. On the other hand, each description and embodiment disclosed in the present invention can be applied to each other description and embodiment. That is, all combinations of various elements disclosed in the present invention fall within the scope of the present invention. Further, the scope of the present invention is not limited by the detailed description described below.

상기 목적을 달성하기 위한 하나의 양태로서, 본 발명은 호장근 추출물을 유효성분으로 포함하는 바이러스성 출혈성 패혈증(VHS)의 예방 또는 치료용 사료 첨가제 조성물을 제공한다.To achieve the above object, the present invention provides a feed additive composition for preventing or treating viral hemorrhagic septicemia (VHS) comprising as an active ingredient a callus root extract.

본 발명에서 사용된 용어 "호장근(Reynoutria japonica HOUTT.)"이란, 천연, 잡종 또는 변종 호장근의 모든 기관, 예를 들어, 뿌리, 줄기, 잎, 꽃을 모두 포함하여 의미할 수 있다. 상기 호장근은 마디풀목 여뀌과에 속하는 다년초 초본식물로, 우리 나라 각처의 산과 들에서 자라고 있으며, 줄기의 속은 비었으며, 어릴 때의 줄기에는 붉은 자주색의 반점이 산재한다. 어릴 때 줄기의 생김새가 호피를 닮아서 호장근이라는 이름이 붙었다(한국 민족 문화 대백과, 한국학 중앙 연구원). 한방에서는 뿌리를 호장근이라고 하며 완화, 이뇨 및 통경제로 사용하고, 민간에서는 진정제로 쓴다. The term " Reynoutria japonica HOUTT. &Quot; as used in the present invention can be understood to include all organs of natural, hybrid or variant myofascial, such as roots, stems, leaves and flowers. It is a herbaceous perennial herb that belongs to the Lycopersicon esculentum. It grows in the mountains and branches of each country, the stem is empty, and the stem of the child is scattered with red purple spots. At the time of childhood, the shape of the stem resembled hoofy and was named Hojo Chang (Korean National Cultural Heritage Center, Korean Studies Central Researcher). In the oriental medicine, roots are called hojanggun, and they are used as relaxation, diuretic and general economy, and as a sedative in the private sector.

본 발명에서 사용된 용어 '호장근 추출물'은, 호장근으로부터 추출한 모든 추출물을 의미한다.As used herein, the term " Hojangun extract " means all the extracts extracted from Hojanggang.

구체적으로, 본 발명의 상기 호장근 추출물은 천연물질, 구체적으로는 호장근으로부터 분리할 수 있다. 천연, 잡종, 변종 식물의 다양한 기관, 뿌리, 줄기, 잎, 꽃뿐만 아니라 식물 조직 배양물을 추출하여 분리 가능하다. Specifically, the callus root extract of the present invention can be isolated from a natural substance, specifically, callus root. It can be extracted by extracting various organ, root, stem, leaf, flower as well as plant tissue culture of natural, hybrid, and variant plants.

본 발명에서 호장근은 상업적으로 판매되는 것을 구입하여 사용하거나, 자연에서 채취 또는 재배된 것을 사용할 수 있다.In the present invention, Hojangun can be commercially purchased, purchased, or harvested or cultivated in nature.

본 발명에서 호장근은 그대로 사용하거나, 또는 이를 그대로 말려 건조된 형태로 사용하거나, 또는 이의 주피를 제거하고 쪄서 말린 건조된 형태로 사용할 수도 있으며, 건조된 호장근은 세절화하여 세절 형태로 사용할 수도 있다.In the present invention, it may be used as it is, or it may be used in dry form by being dried in its original state, or it may be used in dry form by removing the juniors and steamed and dried. have.

본 발명에서, 호장근 추출물은 물, C₁ 내지 C₄의 저급 알콜 또는 이들의 혼합용매로 추출하여 얻을 수 있다. 구체적으로, 호장근 중량의 약 2~10배, 바람직하게는 2~5배의 부피의 물, 에탄올, 메탄올과 같은 저급 알코올로, 바람직하게는 에탄올로 20~50℃, 바람직하게는 25~30℃에서 교반 추출, 초음파 추출, 100℃에서 열수 추출방법으로 2~3회 연속 추출하여 수득한 후, 여지로 여과하고 여과액을 회전식 감압 농축기로 제거한 후 잔사를 진공 동결건조, 열풍건조를 통하여 호장근 추출물을 얻을 수 있다. In the present invention, the extract is obtained by extracting with water, C ₁ to C ₄ lower alcohol or a mixed solvent thereof. Concretely, it is mixed with water at a volume of about 2 to 10 times, preferably 2 to 5 times the weight of the root of the horse root, lower alcohol such as ethanol and methanol, preferably ethanol at 20 to 50 ° C, preferably 25 to 30 The mixture was filtered through a filter and the filtrate was removed with a rotary vacuum evaporator. The residue was purified by vacuum lyophilization and hot air drying to obtain the title compound Root root extract can be obtained.

또한, 본 발명의 상기 호장근 추출물은 추출처리에 의해 얻어지는 추출액, 추출액의 희석액 또는 농축액, 추출액을 건조하여 얻어지는 건조물 및 이들 조정제물 또는 정제물 중 어느 하나 이상을 포함할 수 있다.In addition, the callus root extract of the present invention may comprise at least one of an extract obtained by an extraction treatment, a diluted solution or a concentrate of the extract, a dried product obtained by drying the extract, and any of these adjusted preparations or tablets.

상기 사료 첨가제 조성물은 스테비아 추출물 또는 스테비오사이드를 추가로 포함하는 것일 수 있다.The feed additive composition may further comprise stevia extract or stevioside.

본 발명에서 사용된 용어 "스테비아(Stevia rebaudiana)"는, 국화과에 속하는 다년초 여러해살이풀로서 허브차, 음료, 한약조제, 건강보조식품 등에 사용될 수 있다. 또한 스테비아 잎에는 스테비오사이드(stevioside)와 리바우디오사이드(rebaudioside)와 같은 단맛을 내는 성분을 다량 포함하고 있어, 천연감미료로도 사용될 수 있다.The term " Stevia rebaudiana " as used in the present invention is a perennial herbaceous herb belonging to the family Asteraceae, and can be used for herbal tea, drinks, herbal medicine, health supplements and the like. Stevia leaves also contain a large amount of sweetening ingredients such as stevioside and rebaudioside, which can also be used as natural sweeteners.

본 발명에서 스테비아는 상업적으로 판매되는 것을 구입하여 사용하거나, 자연에서 채취 또는 재배된 것을 사용할 수 있으며, 주로 잎 부위를 사용하는 것이 바람직하나, 이에 제한되는 것은 아니다. In the present invention, commercially available stevia can be purchased and used, or can be harvested or cultivated in nature. The stevia is preferably, but not limited to, a leaf part.

본 발명에서 스테비아는 그대로 사용하거나, 또는 이를 그대로 말린 건조된 형태, 또는 이를 쪄서 말린 건조된 스테비아는 분말화 하여 분말 형태로 사용할 수도 있다.In the present invention, stevia may be used as it is, or it may be used in the form of a dried form in which it is dried, or in the form of powder obtained by drying the dried stevia.

본 발명에서, 스테비아 추출물은 정제수, C1 내지 C4의 저급알콜 또는 이들의 혼합용매로 추출하여 얻을 수 있다. 구체적으로, 스테비아 중량의 약 2~10배, 바람직하게는 2~5배의 부피의 정제수, 에탄올, 메탄올과 같은 저급 알코올로, 바람직하게는 정제수로 20~80℃, 바람직하게는 50~70℃에서 교반 추출, 초음파 추출, 100℃에서 열수 추출방법으로 2~3회 연속 추출하여 수득한 후, 여지로 여과하고 여과액을 회전식 감압 농축기로 제거한 후 잔사를 진공 동결건조, 열풍건조를 통하여 스테비아 추출물을 얻을 수 있다.In the present invention, the stevia extract can be obtained by extracting with purified water, C1 to C4 lower alcohols or a mixed solvent thereof. Concretely, purified water having a volume of about 2 to 10 times, preferably 2 to 5 times the weight of stevia, ethanol, lower alcohol such as methanol, preferably purified water at 20 to 80 캜, preferably 50 to 70 캜 The extract was filtered with a rotary evaporator, and the residue was subjected to vacuum lyophilization and hot-air drying to obtain a stevia extract Can be obtained.

또한, 본 발명의 상기 스테비아 추출물은 추출처리에 의해 얻어지는 추출액, 추출액의 희석액 또는 농축액, 추출액을 건조하여 얻어지는 건조물 및 이들 조정제물 또는 정제물 중 어느 하나 이상을 포함할 수 있다.In addition, the stevia extract of the present invention may contain at least one of an extract obtained by an extraction treatment, a diluted solution or a concentrate of the extract, a dried product obtained by drying the extract, and the adjusted product or the purified product.

본 발명에서 사용된 용어 "스테비오사이드(stevioside)"는, 스테비아 잎에 주로 함유되어 있는 설탕의 300배 당도를 가지는 천연 다당류 물질로서, 구체적으로 스테비오사이드 A1, A2, 스테비올 1,2,3, 둘코사이드, 리바우디오사이드(Rebaudioside) a,b,c,e,f 등 다양한 형태의 당으로 구성되어 있고, 혈당이나 비만 등에 영향을 주지 않으며, 또한 충치 균도 억제한다. As used herein, the term " stevioside "is a natural polysaccharide material having a sugar content of 300 times the sugar content of stevia leaves, and specifically steviosides A1 and A2, steviol 1,2,3, It is composed of various forms of sugars such as Duroside, Rebaudioside a, b, c, e, and f. It does not affect blood sugar and obesity, and also inhibits cavities.

본 발명의 스테비오사이드는 상업적으로 판매되는 것을 구입하여 사용하거나, 자연에서 채취 또는 재배된 스테비아로부터 추출·분리된 것을 사용할 수 있다. 이때 스테비오사이드의 추출·분리 방법은 공지된 방법을 사용할 수 있다. The stevioside of the present invention may be purchased commercially and used, or extracted and separated from stevia collected or cultivated in nature. At this time, a known method can be used for the extraction and separation of stevioside.

본 발명에서, 호장근 추출물과 스테비아 추출물의 복합제를 사용할 경우 이들의 혼합 비율은 임의로 선택할 수 있으며, 바람직하기로는 호장근 추출물:스테비아 추출물이 1:100 내지 100:1, 더욱 바람직하기로는 1:10 내지 10:1, 가장 바람직하기로는 1:3 내지 1:5의 비율로 혼합될 수 있다.In the present invention, when a combination of the extract of Staphylococcus aureus and Stevia extract is used, the mixing ratio of the Stevia extract and Stevia extract may be arbitrarily selected, and preferably 1: 100 to 100: 1, more preferably 1:10 To 10: 1, and most preferably from 1: 3 to 1: 5.

본 발명에서, 호장근 추출물과 스테비오사이드의 복합제를 사용할 경우 이들의 혼합 비율은 임의로 선택할 수 있으며, 바람직하기로는 호장근 추출물:스테비오사이드가 1:1000 내지 1000:1, 더욱 바람직하기로는 1:100 내지 100:1, 가장 바람직하기로는 1:3 내지 1:5의 비율로 혼합될 수 있다.In the present invention, when a combination of a callus root extract and a stevioside is used, the mixing ratio thereof may be arbitrarily selected. Preferably, the ratio of the callus root stevioside is 1: 1000 to 1000: 1, more preferably 1: 100 To 100: 1, and most preferably from 1: 3 to 1: 5.

본 발명에서 사용된 용어 "바이러스성 출혈성 패혈증 (Viral hemorrhagic septicemia, VHS)"은, "Egtved diseases"라고도 하고, 바이러스성 출혈성 패혈증 바이러스 (VHSV)에 의해 야기되는 어류의 전염성 질환을 의미하는데, 증상으로는 내장 기관, 피부, 근육 등의 내부기관에서 출혈이 발생하고, 외부적으로는 별다른 증상이 나타나지 않는다.The term " Viral hemorrhagic septicemia (VHS) " as used herein means a contagious disease of fish caused by viral hemorrhagic septicemia virus (VHSV), also referred to as "Egtved diseases" Bleeding occurs in internal organs such as internal organs, skin, and muscles, and no external symptoms appear.

본 발명에서 사용된 용어 "바이러스성 출혈성 패혈증 바이러스 (Viral hemorrhagic septicemia virus, VHSV)"는, "Egtved virus"라고도 하고, 11 kb의 negative sense 단일 가닥의 RNA를 포함하는, RNA 바이러스를 의미한다. 상기 VHSV는 지역적으로 서로 상이한 아종이 존재하고, 상호 다양한 영향을 미칠 수 있으나, 사람에게는 특별한 영향을 미치지 않는다고 알려져 있다.As used herein, the term " Viral hemorrhagic septicemia virus (VHSV) "refers to an RNA virus, also referred to as" Eggved virus ", that contains an 11 kb negative sense single stranded RNA. It is known that the VHSV has locally different subspecies and can have various influences from one another but does not have a special effect on a person.

본 발명에서 사용된 용어 "예방"은, 본 발명에 따른 호장근 추출물, 및 스테비아 추출물 또는 스테비오사이드의 복합제를 유효성분으로 포함하는 조성물의 투여로 VHS의 발병을 억제 또는 지연시키는 모든 행위를 말한다.As used herein, the term "prevention" refers to any action that inhibits or delays the onset of VHS by administering a composition comprising the extract of the present invention and a combination of stevia extract or stevioside as an active ingredient.

본 발명에서 사용된 용어 "치료"는, 본 발명에 따른 호장근 추출물, 및 스테비아 추출물 또는 스테비오사이드의 복합제를 유효성분으로 포함하는 조성물의 투여로 상기 질병의 증상이 호전되거나 이롭게 변경되는 모든 행위를 말한다.The term "treatment" used in the present invention refers to all treatments for improving or alleviating the symptom of the disease by administering a composition comprising the extract of the present invention and a combination of stevia extract or stevioside as an active ingredient It says.

본 발명의 사료 첨가제 조성물은, 넙치 바이러스성 출혈성 패혈증의 예방 또는 치료를 위하여 호장근 추출물, 및 스테비아 추출물 또는 스테비오사이드의 복합제를 유효성분으로 포함할 수 있으며, 상기 복합제는 분말 형태로 존재할 수 있다.The feed additive composition of the present invention may contain, as an active ingredient, a combination of a root extract and a stevia extract or stevioside for prevention or treatment of flounder viral hemorrhagic septicemia, and the combination may be present in powder form.

본 발명의 사료첨가제 조성물은 당업계에 공지된 다양한 제조방법에 따라 적절한 유효 농도 범위에서 호장근 추출물, 및 스테비아 추출물 또는 스테비오사이드의 복합제를 첨가하여 제조 가능하다. 구체적으로 본 발명의 사료첨가제 조성물은 호장근 추출물, 및 스테비아 추출물 또는 스테비오사이드의 복합제의 혼합 비율은 임의로 선택할 수 있으나, 바람직하게는 전체 사료첨가제 조성물 중 0.01 내지 100중량%, 보다 바람직하게는 전체 사료첨가제 조성물 중 0.01 내지 50중량%의 비율로 포함할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.The feed additive composition of the present invention can be prepared by adding a callus root extract and a combination of stevia extract or stevioside in an appropriate effective concentration range according to various production methods known in the art. Specifically, the feed additive composition of the present invention may be mixed with the combination of the sesame extract and stevia extract or the combination of stevia extract and stevioside, but it is preferably 0.01 to 100% by weight of the total feed additive composition, more preferably, But is not limited thereto, in a proportion of 0.01 to 50% by weight in the additive composition.

본 발명의 사료 첨가제는 통상적인 사료에 첨가될 수 있는 성분을 추가로 포함할 수 있다. 예를 들어, 어류 사료첨가제는 상기 기재한 성분 이외에 추가로 구연산, 후말산, 아디픽산, 젖산 등의 유기산이나 인산칼륨, 인산나트륨, 중합 인산염 등의 인산염이나 폴리페놀, 카테친, 토코페롤, 비타민 C, 녹차 추출물, 키토산, 탄니산 등의 천연 항산화제 중 1 성분 이상을 혼합하여 사용할 수 있으며, 필요에 따라 항인플루엔자제, 완충액, 정균제 등 다른 통상의 첨가제를 첨가할 수 있다. 또한 희석제, 분산제, 계면활성제, 결합제 및 윤활제를 부가적으로 첨가하여 수용액, 현탁액, 유탁액 등과 같은 주사용 제형, 캡슐, 과립 또는 정제로 제제화 할 수 있다.The feed additives of the present invention may further comprise ingredients that can be added to conventional feeds. For example, in addition to the components described above, the fish feed additive may further contain organic acids such as citric acid, fumaric acid, adipic acid, and lactic acid, phosphates such as potassium phosphate, sodium phosphate, and polymerized phosphate, polyphenol, catechin, tocopherol, vitamin C, Green tea extract, chitosan, and tannic acid. If necessary, other conventional additives such as anti-influenza agents, buffers, and antibacterial agents may be added. In addition, diluents, dispersants, surfactants, binders, and lubricants may be added to formulate into injectable formulations, capsules, granules or tablets such as aqueous solutions, suspensions, emulsions and the like.

본 발명의 사료 첨가제는 사료관리법상의 보조사료에 해당하며, 탄산수소나트륨, 벤토나이트(bentonite), 산화마그네슘, 복합광물질 등의 광물질제제, 아연, 구리, 코발트, 셀레늄 등의 미량 광물질인 미네랄제제, 케로틴, 비타민 E, 비타민 A, D, E, 니코틴산, 비타민 B 복합체 등의 비타민제, 메티오닌, 리이산 등의 보호아미노산제, 지방산 칼슘염 등의 보호지방산제, 생균제(유산균제), 효모배양물, 곰팡이 발효물 등의 생균, 효모제 등이 추가로 포함될 수 있다. The feed additive of the present invention corresponds to an auxiliary feed in the feed control method and is a mineral preparation such as sodium hydrogencarbonate, bentonite, magnesium oxide and complex mineral, a mineral preparation such as zinc, copper, cobalt and selenium, , Vitamins such as vitamin E, vitamin A, D, E, nicotinic acid and vitamin B complex, protective amino acids such as methionine and lysic acid, protective fatty acids such as calcium salt of fatty acid, probiotics (lactic acid bacteria), yeast culture, Fermented foods and the like, yeast preparations and the like may be further included.

본 발명의 사료 첨가제 조성물 및 이를 포함하는 사료는 보조성분으로 해양 단백질 (어분 또는 크릴밀), 식물성 단백질 (콩 분말, 밀 글루텐, 옥수수 글루텐, 루핀 분말, 완두콩 또는 해바라기 분말), 혈분 및 골분을 포함하는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 단백질원, 어류 기름 (오징어간유) 또는 식물성 기름 (평지씨 기름, 콩기름, 대두유)을 포함하는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 에너지원, 비타민혼합물 및 무기질혼합물을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.The feed additive composition of the present invention and the feed containing the same include marine protein (fish meal or krill mill), vegetable protein (soybean powder, wheat gluten, corn gluten, lupine powder, pea or sunflower powder) One or more energy sources selected from the group consisting of one or more proteins selected from the group consisting of fish oil (squid liver oil) or vegetable oil (rapeseed oil, soybean oil, soybean oil), vitamin mixture and mineral mixture, It is not limited.

본 발명의 사료첨가제 조성물은 포유류, 가금류, 어류 및 갑각류를 포함하는 다수의 동물 식이 즉, 사료에 적용할 수 있다.The feed additive composition of the present invention can be applied to a large number of animal diets, i.e. feeds, including mammals, poultry, fish and crustaceans.

본 발명에 따른 사료첨가제 조성물을 포함하는 어류용 사료 배합 방법은 사료첨가제 조성물을 동물사료에 건조 중량 기준으로 1kg 당 약 1g 내지 500g, 바람직하기로는 10g 내지 100g의 양으로 혼합할 수 있다. 또한 사료 혼합물을 완전히 혼합한 후, 매쉬로 공급하거나, 추가가공 공정을 통하여 팰렛화, 팽창화, 압출 공정을 거칠 수 있다.The method for mixing fish feeds comprising the feed additive composition according to the present invention can be carried out by mixing the feed additive composition in an amount of about 1 g to 500 g, preferably 10 g to 100 g, per 1 kg on a dry weight basis. In addition, the feed mixture may be thoroughly mixed and then fed into a mesh, or may be subjected to pelleting, expansion, and extrusion through additional processing steps.

상기 어류 사료용 사료 첨가제는 넙치 등의 어류의 사료에 직접 혼합하거나 사료와 별도로 단독으로 경구 제형, 주사 또는 경피로 다른 성분과 조합하여 쉽게 투여 할 수 있다. 투여량은 넙치 등의 어류의 체중, 건강상태, 식이, 투여방법 및 질환의 중증도 등에 따라 그 범위가 다양하다. 당 업계에서 잘 알려진 바와 같이 일일 투여량은 약 0.01~20㎎/g, 바람직하게는 0.05~10㎎/g이며, 하루 일회 내지 수회에 나누어 투여하는 것이 더욱 바람직하다.The feed additives for fish feeds can be mixed directly with the feed of fish such as flounder, or can be easily administered alone or in combination with other ingredients by oral administration, injection or transdermal administration. The dosage varies depending on the weight of the fish such as flounder, health condition, diet, method of administration and severity of disease. As is well known in the art, the daily dose is about 0.01 to 20 mg / g, preferably 0.05 to 10 mg / g, more preferably once to several times a day.

본 발명의 사료 첨가제는 바이러스성 출혈성 패혈증에 대한 내성 증강을 목적으로 사료에 첨가될 수 있다. 본 발명의 사료 첨가제를 사료 첨가물로 사용할 경우, 상기 사료 첨가제를 그대로 첨가하거나 다른 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 사료 첨가제의 투여 형태는 비독성 제약상 허용 가능한 담체와 조합하여 즉시 방출 또는 서방성 제형으로 제조 할 수 있다. 이러한 식용 담체는 옥수수 전분, 락토스, 수크로스와 콩 플레이트 프로필렌 글리콜일 수 있다. 고체 담체의 경우에는 정제, 산제, 토로키제로 사용될 수 있으며 액체형 담체의 경우 시럽제, 액체 현탁액제, 에멀젼제, 용액제 투여 형태일 수 있다. 또한, 투여제는 보존제, 윤화제, 용액 촉진제, 안정화제를 함유할 수 있으며 다른 염증 질환 개선제 및 바이러스 예방상 유용한 물질을 함유 할 수도 있다.The feed additive of the present invention can be added to the feed for the purpose of enhancing tolerance to viral hemorrhagic sepsis. When the feed additive of the present invention is used as a feed additive, the feed additive may be directly added or used together with other ingredients, and suitably used according to a conventional method. The dosage form of the feed additive may be prepared in an immediate release or sustained release formulation in combination with a non-toxic pharmaceutically acceptable carrier. Such edible carriers may be corn starch, lactose, sucrose and bean-coated propylene glycol. In the case of solid carriers, they may be used as tablets, powders, and troches. In the case of liquid carriers, they may be in the form of syrups, liquid suspensions, emulsions, and solutions. In addition, the agent may contain preservatives, lubricants, solution promoters, stabilizers, and may contain other inflammatory disease remedies and substances useful for virus protection.

본 발명의 일 실시예에서는 호장근 추출물:스테비오사이드가 1:3 내지 1:5의 비율로 혼합된 사료 첨가제 조성물을 사용하였다.In one embodiment of the present invention, a feed additive composition in which Hojokgang extract: stevioside was mixed in a ratio of 1: 3 to 1: 5 was used.

상기 목적을 달성하기 위한 다른 하나의 양태로서, 본 발명은 상기 사료 첨가제 조성물을 포함하는 사료를 제공한다.According to another aspect of the present invention, there is provided a feed comprising the feed additive composition.

본 발명에서 사용된 용어 "사료"는, 동물이 먹고, 섭취하며, 소화시키기 위한 또는 이에 적당한 임의의 천연 또는 인공 규정식, 한끼식 등 또는 상기 한끼식의 성분을 의미한다.The term "feed" as used in the present invention means any natural or artificial diet, single meal, or the like ingredients for eating, ingesting, digesting, or suitable for the animal.

구체적으로, 본 발명에 따른 호장근 추출물, 및 스테비아 추출물 또는 스테비오사이드의 복합제를 유효성분으로 포함하는 당업계의 공지된 다양한 형태로 사료로 제조 가능하며, 바람직하게는 농후사료, 조사료 및/또는 특수사료가 포함될 수 있다.Specifically, the present invention can be produced in various forms known in the art, including the extract of the present invention and a combination of stevia extract and stevioside as an active ingredient, Feeds may be included.

농후사료에는 밀, 귀리, 옥수수 등의 곡류를 포함하는 종자열매류, 곡물을 정제하고 얻는 부산물로서 쌀겨, 밀기울, 보릿겨 등을 포함하는 겨류, 콩, 유체, 깨, 아마인, 코코야자 등을 채유하고 얻는 부산물인 깻묵류와 고구마, 감자 등에서 녹말을 뺀 나머지인 녹말찌꺼기의 주성분인 잔존녹말질류 등의 찌꺼기류, 육분 (肉粉), 혈분, 우모분, 탈지분유, 우유에서 치즈, 탈지유에서 카제인을 제조할 때의 잔액인 훼이 (whey)를 건조한 건조훼이 등의 동물질 사료, 효모, 클로렐라, 해조류 등이 있다.Concentrated feeds include seeds containing cereals such as wheat, oats, and corn, and by-products such as rice bran, wheat bran, barley, etc., (Meat powder) such as residual starch residue, which is the main component of starch residue, which is the byproduct of starch residue, sweet potato and potato, which is a byproduct obtained from the sweet potato and sweet potato, and casein from skim milk and skim milk. Yeast, chlorella, seaweed, and the like, such as dry fescue, which is a balance of the whey produced during the production.

조사료에는 야초, 목초, 풋베기 등의 생초 (生草) 사료, 사료용 순무, 사료용 비트, 순무의 일종인 루터베어거 등의 뿌리채소류, 생초, 풋베기작물, 곡실 (穀實) 등을 사일로에 채워 놓고 젖산발효시킨 저장사료인 사일리지 (silage), 야초, 목초를 베어 건조시킨 건초, 종축용 (種畜用) 작물의 짚, 콩과 식물의 나뭇잎 등이 있다. 특수사료에는 굴껍테기, 암염 등의 미네랄 사료, 요소나 그 유도체인 디우레이드이소부탄 등의 요소사료, 천연사료원료만을 배합했을 때 부족하기 쉬운 성분을 보충하거나, 사료의 저장성을 높이기 위해서 배합사료에 미량으로 첨가하는 물질인 사료첨가물, 식이보조제 등이 있다.Roughage includes root vegetables such as wild grasses, grasses and fodder, raw turnip for feed, turnip for feed, feed bit, turnip root, Silage, which is filled with lactic acid fermented, hay, dried hay, herbaceous straw, and leaves of leguminous plants. Special diets include mineral feeds such as fodder, rock salt, urea and its derivatives such as diuretic isobutane, nutrients such as diuretic isobutane, and nutrients that can be supplemented when only natural feed ingredients are mixed or supplemented with diets Feed additives, dietary supplements, etc., which are added in small quantities.

상기 "식이 보조제"는 예를 들어 치료제 또는 소화제를 동물에 제공하는 제제 함유 조성물로, 통상 생체의 열량 섭취 공급원, 즉 에너지 공급원은 아니지만, 통상의 동물 사료에 추가하여 섭취되는 조성물을 의미한다.The term "dietary supplement" as used herein refers to a composition containing, for example, a therapeutic agent or an extinguishing agent in an animal, which is not normally a caloric intake source of the living body, that is, a composition consumed in addition to ordinary animal feed.

본 발명에 따른 사료 첨가제 조성물을 포함하는 어류용 사료 배합 방법은 사료 첨가제 조성물을 어류사료에 건조 중량 기준으로 1kg 당 약 1g 내지 500g, 바람직하기로는 5g 내지 50g의 양으로 혼합하는 것이다. 또한 사료 혼합물을 완전히 혼합한 후, 매쉬로 공급하거나, 추가가공 공정을 통하여 팰렛화, 팽창화, 압출 공정을 거치는 것이 바람직하다.The method for mixing a feed for fishes comprising a feed additive composition according to the present invention comprises mixing the feed additive composition in an amount of about 1 g to 500 g, preferably 5 g to 50 g, per kg on a dry weight basis. It is also preferable that the feed mixture is thoroughly mixed and then fed into a mesh or subjected to pelleting, expansion and extrusion through an additional processing step.

상기 목적을 달성하기 위한 또 다른 하나의 양태로서, 본 발명은 상기 사료를 어류에 섭식시키는 단계를 포함하는 어류의 사육방법을 제공한다.According to another aspect of the present invention, there is provided a method of breeding a fish, comprising feeding the feed to a fish.

본 발명의 사료 첨가제 조성물 또는 이를 포함하는 사료는 포유류, 가금류, 어류 및 갑각류를 포함하는 다수의 동물 식이 즉, 사료에 적용할 수 있다. 상업용으로 중요한 돼지, 소, 염소 등의 포유류, 코끼리, 낙타 등의 동물원 동물, 개, 고양이 등의 가축에게 사용할 수 있다. 상업적으로 중요한 가금류에는 닭, 오리, 거위 등이 포함되며 송어와 새우와 같은 상업적으로 사육되는 어류 및 갑각류를 포함 할 수 있다.The feed additive composition of the present invention or the feed containing the same can be applied to a large number of animal diets, i.e., feeds, including mammals, poultry, fish and crustaceans. It can be used for livestock such as pigs, cattle, goats, etc. important for commercial use, zoo animals such as elephants and camels, livestock such as dogs and cats. Commercially important poultry include chickens, ducks, and geese, and may include commercially reared fish and crustaceans such as trout and shrimp.

본 발명의 사료 첨가제 조성물이 적용될 수 있는 양식어류는 바람직하게는, 넙치 (Paralichthys olivaceus), 방어 (Seriola quinqueradiata), 참돔 (Pagrus major), 자주복 (Takifugu rubripes), 부시리 (Seriola aureovittata), 송어 (Oncorhynchus masou), 무지개 송어 (Oncorhynchus mykiss), 잿방어 (Seriola dumerili), 전갱이 (Trachurus japonicus), 흑점줄전갱이(Pseudocaranx dentex), 능성어 (Epinephelus septemfasciatus), 참다랑어 (Thunnus thynnus), 잉어 (Cyprinus carpio), 제브라피쉬 (Danio rerio), 메기 (Silurus asotus), 클라리아스 가리에피누스 (Clarias gariepinus), 틸라피아 (Oreochronis niloticus), 연어 (Oncorhynchus keta), 대서양 연어 (Salmo salar) 및 송사리 (Oryzias latipes)로 구성된 군으로부터 선택되는 하나의 어류이고 이에 한정하지 않는다. 가장 바람직하게는 넙치 (Paralichthys olivaceus)일 수 있다.Cultured fish to which the feed additive composition of the present invention can be applied are preferably olive flounder ( Paralichthys olivaceus ), defensive ( Seriola quinqueradiata), sea bream (Pagrus major), often clothing (Takifugu rubripes), busiri (Seriola aureovittata ), trout ( Oncorhynchus masou ), rainbow trout ( Oncorhynchus mykiss , Seriola dumerili , horse mackerel ( Trachurus japonicus ), Pseudocaranx dentex ), lentil ( Epinephelus septemfasciatus ), bluefin tuna ( Thunnus thynnus , carp ( Cyprinus carpio ), zebrafish ( Danio rerio ), catfish ( Silurus asotus , Clarias gariepinus ), tilapia ( Oreochronis niloticus ), salmon ( Oncorhynchus keta ), Atlantic salmon ( Salmo salar ) and birds ( Oryzias latipes ), but is not limited thereto. Most preferably, the flounder ( Paralichthys olivaceus .

본 발명의 실험예에서, 호장근 추출물 및 스테비오사이드의 복합제를 포함하는 사료 첨가제 조성물을 급이한 넙치에서 바이러스성 출혈성 패혈증 바이러스(VHSV)에 대한 내성이 현저히 증가함을 확인하였다(표 2 및 도 1).In the experimental examples of the present invention, it was confirmed that resistance to viral hemorrhagic septicemia virus (VHSV) was markedly increased in the flounder fed with the feed additive composition containing the combination of the carrageenan extract and stevioside (see Table 2 and FIG. One).

따라서, 본 발명의 호장근 추출물 및 스테비오사이드의 복합제는 VHS의 예방 또는 치료를 위하여 사용될 수 있다.Therefore, the combination of the extract of the present invention and the stevioside of the present invention can be used for prevention or treatment of VHS.

상기 목적을 달성하기 위한 또 다른 하나의 양태로서, 본 발명은 호장근 추출물, 및 스테비아 추출물 또는 스테비오사이드의 복합제를 유효성분으로 포함하는 바이러스성 출혈성 패혈증의 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.In another aspect of the present invention, the present invention provides a pharmaceutical composition for preventing or treating viral hemorrhagic septicemia comprising an extract of Callus root and a combination of stevia extract or stevioside as an active ingredient.

상기 호장근 추출물, 스테비아, 스테비오사이드, VHS, VHSV, 예방, 치료는 상기 설명한 바와 같다.The above extracts, stevia, stevioside, VHS, VHSV, prevention and treatment are as described above.

본 발명에서 사용된 용어 "약학 조성물"은, 약학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 또는 희석제를 추가로 포함할 수 있다. 구체적으로, 상기 약학 조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다. 본 발명에서, 상기 약학 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 상엽 추출물과 이의 분획물들에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는 데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.The term "pharmaceutical composition" as used herein may further comprise suitable carriers, excipients or diluents conventionally used in the manufacture of pharmaceutical compositions. Specifically, the pharmaceutical composition may be formulated in the form of powders, granules, tablets, capsules, suspensions, emulsions, syrups, aerosols and the like, oral preparations, suppositories and sterilized injection solutions according to a conventional method . In the present invention, the carrier, excipient and diluent which may be contained in the pharmaceutical composition include lactose, dextrose, sucrose, sorbitol, mannitol, xylitol, erythritol, maltitol, starch, acacia rubber, alginate, gelatin, calcium phosphate, Calcium silicate, cellulose, methylcellulose, microcrystalline cellulose, polyvinylpyrrolidone, water, methylhydroxybenzoate, propylhydroxybenzoate, talc, magnesium stearate and mineral oil. In the case of formulation, a diluent or excipient such as a filler, an extender, a binder, a wetting agent, a disintegrant, or a surfactant is usually used. Solid formulations for oral administration include tablets, pills, powders, granules, capsules and the like, which may contain at least one excipient such as starch, calcium carbonate, Sucrose, lactose, gelatin and the like. In addition to simple excipients, lubricants such as magnesium stearate and talc are also used. Liquid preparations for oral use may include various excipients such as wetting agents, sweetening agents, fragrances, preservatives, etc. in addition to water and liquid paraffin, which are simple diluents commonly used in suspension, liquid solutions, emulsions and syrups have. Formulations for parenteral administration include sterilized aqueous solutions, non-aqueous solutions, suspensions, emulsions, freeze-dried preparations, and suppositories. Examples of the suspending agent include propylene glycol, polyethylene glycol, vegetable oil such as olive oil, injectable ester such as ethyl oleate, and the like. As a base for suppositories, witepsol, macrogol, tween 61, cacao paper, laurin, glycerogelatin and the like can be used.

상기 본 발명의 약학 조성물은 약학적으로 유효한 양으로 투여될 수 있는데, 본 발명에서 "약제학적으로 유효한 양"이란, 의학적 치료 또는 예방에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료 또는 예방하기에 충분한 양을 의미하며, 유효 용량 수준은 질환의 중증도, 약물의 활성, 개체의 연령, 체중, 건강, 성별, 개체의 약물에 대한 민감도, 사용된 본 발명의 조성물의 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율 치료기간, 사용된 본 발명의 조성물과 배합 또는 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다. 본 발명의 약학 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고 종래의 치료제와는 순차적 또는 동시에 투여될 수 있다. 그리고 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기 요소를 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하다.The pharmaceutical composition of the present invention can be administered in a pharmaceutically effective amount. The term "pharmaceutically effective amount " in the present invention means a therapeutically effective amount for treating or preventing a disease at a reasonable benefit / risk ratio applicable to medical treatment or prevention And the effective dose level refers to the amount of the effective amount of the composition of the present invention, and the effective dose level is determined depending on the severity of the disease, the activity of the drug, the age, body weight, health, sex, The duration of the treatment, the factors including the drugs used in combination or concurrently with the composition of the present invention used, and other factors well known in the medical field. The pharmaceutical composition of the present invention may be administered as an individual therapeutic agent or in combination with another therapeutic agent, and may be administered sequentially or simultaneously with a conventional therapeutic agent. And can be administered singly or multiply. It is important to take into account all of the above factors and administer an amount that will achieve the maximum effect in the least amount without side effects.

본 발명의 약학조성물의 투여량은 예를 들어, 상기 호장근 추출물, 및 스테비아 추출물 또는 스테비오사이드의 복합제를 유효성분으로 포함하는 본 발명의 약학 조성물을 어류에 하루 동안 1 내지 20 ㎎/㎏, 보다 바람직하게는 1 내지 10 ㎎/㎏으로 투여할 수 있고, 본 발명의 조성물의 투여빈도는 특별히 이에 제한되지 않으나, 1일 1회 투여하거나 또는 용량을 분할하여 수회 투여할 수 있다.The dosage of the pharmaceutical composition of the present invention can be determined by administering the pharmaceutical composition of the present invention containing, for example, the above-described Hojanggang extract and a combination of stevia extract or stevioside as an active ingredient to fish at a daily dose of 1 to 20 mg / kg Preferably 1 to 10 mg / kg, and the administration frequency of the composition of the present invention is not particularly limited. However, it may be administered once a day or divided into several doses.

상기 목적을 달성하기 위한 또 다른 하나의 양태로서, 본 발명은 상기 약학 조성물을 어류에 투여하는 단계를 포함하는 바이러스성 출혈성 패혈증의 예방 또는 치료 방법을 제공한다.In another aspect of the present invention, the present invention provides a method for preventing or treating viral hemorrhagic sepsis comprising administering the pharmaceutical composition to fish.

상기 약학 조성물, VHS, VHSV, 예방, 치료는 상기 설명한 바와 같다.The pharmaceutical composition, VHS, VHSV, prevention and treatment are as described above.

본 발명에서 사용된 용어 "투여"란, 어떠한 적절한 방법으로 대상에게 본 발명의 약학 조성물을 도입하는 것을 말하며, 투여 경로는 목적 조직에 도달할 수 있는 한 경구 또는 비경구의 다양한 경로를 통하여 투여될 수 있다The term "administering " as used herein refers to the introduction of a pharmaceutical composition of the present invention to a subject by any appropriate method, and the administration route can be administered through various routes of oral or parenteral administration, have

본 발명의 바이러스성 출혈성 패혈증을 치료하는 방법에 있어서, 상기 약학 조성물의 투여 경로는 목적 조직에 도달할 수 있는 한 어떠한 일반적인 경로를 통하여도 투여될 수 있다. 본 발명의 약학 조성물은 특별히 이에 제한되지 않으나, 목적하는 바에 따라 복강내 투여, 정맥내 투여, 근육내 투여, 피하 투여, 피내 투여, 경구 투여, 비내 투여, 폐내 투여, 직장내 투여될 수 있다. 또한, 상기 조성물은 활성 물질이 표적 세포로 이동할 수 있는 임의의 장치에 의해 투여될 수 있다.In the method of treating viral hemorrhagic sepsis of the present invention, the route of administration of the pharmaceutical composition may be administered through any conventional route as long as it can reach the target tissue. The pharmaceutical composition of the present invention may be administered intraperitoneally, intravenously, intramuscularly, subcutaneously, intradermally, orally, intranasally, intracorporally, or rectally, as desired, though not particularly limited thereto. In addition, the composition may be administered by any device capable of transferring the active agent to the target cell.

상기 목적을 달성하기 위한 또 다른 하나의 양태로서, 본 발명은 호장근 추출물, 및 스테비아 추출물 또는 스테비오사이드의 복합제를 유효성분으로 포함하는 바이러스성 출혈성 패혈증 바이러스(VHSV)에 대한 항바이러스용 조성물을 제공한다.In another aspect of the present invention, there is provided an antiviral composition for viral hemorrhagic septicemia virus (VHSV) comprising as an active ingredient a combination of a callus root extract and a stevia extract or stevioside do.

상기 호장근 추출물, 스테비아, 스테비오사이드, VHS, VHSV는 상기 설명한 바와 같다.The callus root extract, stevia, stevioside, VHS, and VHSV are as described above.

본 발명의 상기 호장근 추출물, 및 스테비아 추출물 또는 스테비오사이드의 복합제를 포함하는 VHS에 대한 조성물은 천연물 기반으로서 종래 포르말린과 같은 항바이러스성 물질에 비하여 인체나 어류에 피해를 주지 않으면서 소독 효과를 나타내는 이점이 있다. 포르말린은 저가의 강력한 살균소독제 이지만 자극성 냄새를 발산하는 독극물일 뿐만 아니라 발암성 물질로 분류됨에 따라 해양오염 방지법, 약사법, 및 식품위생법 등에서 그 사용을 엄격하게 제한하고 있다. 또한, 본 발명의 항바이러스용 조성물의 경우 다른 항생제와 병용하여 그 효과를 극대화시킬 수 있다.The composition of VHS according to the present invention, which comprises the combination of the extracts of the present invention and the combination of stevia extract or stevioside, has a disinfecting effect without damaging the human body or fish as compared with antiviral substances such as formalin, There is an advantage. Formalin is a powerful sterilizing disinfectant at low cost, but it is not only a toxic substance that emits irritating odor, but it is also classified as a carcinogenic substance and its use is strictly restricted in the Marine Pollution Control Law, Pharmaceutical Affairs Law, and Food Sanitation Law. In addition, the antiviral composition of the present invention can be used in combination with other antibiotics to maximize its effect.

본 발명의 일 실시예에 의하면, 본 발명의 호장근 추출물 복합제는 어류에 바이러스성 출혈성 패혈증 바이러스의 감염을 억제하여 생존율을 증가시킨다(표 2 및 도 1).According to one embodiment of the present invention, the callus root extract of the present invention increases the survival rate by inhibiting the infection of viral hemorrhagic sepsis virus with fish (Table 2 and Fig. 1).

본 발명의 호장근 추출물, 또는 상기 호장근 추출물에 스테비아 추출물 또는 스테비오사이드를 추가로 포함하는 조성물은 어류에 감염된 VHSV에 대한 활성을 억제하는 효과를 나타내고 이를 이용하여 높은 안정성을 가진 어류의 VHS의 예방 또는 치료를 향상시키는 효과를 나타내므로, VHSV의 감염에 대한 어류의 생존율 향상 및 어업 생산성 향상으로 인한 어업 안정성 증대에 널리 활용될 수 있다.The composition of the present invention further comprising a stevia extract or stevioside in the extract of the present invention or the composition of the present invention inhibits the activity against VHSV infected with fish and can be used for prevention of VHS of fish having high stability Or treatment, it can be widely used for improving the survival rate of the fish against infections of VHSV and increasing the stability of the fishery by improving the productivity of the fish.

도 1은, 넙치를 대상으로 호장근 추출물 복합제의 VHSV에 대한 누적 폐사율을 비교 도식한 것이다.Fig. 1 is a graph showing the cumulative mortality rate of V. vulnificus extract of flounder in comparison with VHSV.

이하 본 발명을 실시예를 통하여 보다 상세하게 설명한다. 그러나 이들 실시예는 본 발명을 예시적으로 설명하기 위한 것으로 본 발명의 범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다. Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to examples. However, these examples are for illustrative purposes only, and the scope of the present invention is not limited to these examples.

실시예 1. 호장근 추출물 및 복합제의 제조Example 1: Preparation of callus root extract and complex agent

본 발명에서 사용한 호장근은 일반적으로 자연에서 쉽게 채집할 수 있는 것으로 추출물을 효율적으로 얻기 위하여 세절 형태로 분쇄하여 사용하였다.The hoof roots used in the present invention are generally easily collected from nature In order to obtain the extract efficiently, it was pulverized in the form of filament.

스테비오사이드 20Kg을 정제수(200 L)에 녹이고 추출장비에 호장근 100 ㎏을 넣고 제조된 스테비오사이드 용액을 첨가한 후 정제수(200L)를 가하여 60℃에서 24시간 동안 추출하고, 이를 여과지로 여과하여 제조 하였다.20 kg of stevioside was dissolved in purified water (200 L), 100 kg of acorn roots was added to the extraction equipment, stevioside solution prepared was added, purified water (200 L) was added and extracted at 60 ° C for 24 hours. Respectively.

실험예Experimental Example 2. 2. 호장근Hojo Chang 추출물 복합제의 Extractive VHSVVHSV 저해효과 Inhibitory effect

먼저, 상기 실시예 1 의 호장근 복합추출물을 포함하는 조성물에 대해 생체 내에서 항VHSV 효과를 검증하기 위하여, 넙치는 (9.0±0.8cm/6.3±1.4g) 각 그룹별로 200마리씩 구성하였고, 시판 펠렛 사료를 먹였을 때 매일 어체중당 5%이상의 사료를 먹였으므로, 본 실험은 5%의 어체중에 해당하는 60 g의 사료에 호장근 추출물 복합제를 1%함량으로 첨가하여 실험실과 양식장에서 넙치에 경구투여하였다. 각 실험어에 2주와 6주간에 걸쳐 사료를 섭식시켰으며, 각각의 섭식기간이 끝난 직후 각 그룹 당 15마리씩 무작위로 선발하여 복강감염을 통해 VHSV에 인위감염시켜 21일간 생존 여부를 관찰하였다.First, in order to examine the anti-VHSV effect in vivo on the composition containing the extract of the present invention from Example 1, the flounder (9.0 ± 0.8 cm / 6.3 ± 1.4 g) was divided into 200 groups for each group, When the pelleted feed was fed at a rate of 5% or more per day of the fish body, this experiment was conducted by adding 1% of the carrageenan extract to 60 g of the fish body weight of 5% Orally. Feeds were fed to each experimental fish for 2 weeks and 6 weeks. At the end of each feeding period, 15 rabbits were randomly selected for each group.

인위감염실험은 모든 개체에 2×10^7.8VHSV/fish 및 10^7.8VHSV/fish의 농도로 복강 주사하였다(표 1). 이후 약 1톤 규모의 원형 수조에서 함께 사육하였다. 환수는 1일 2회 실시하였으며, 냉각기를 사용하여 수온을 약 14℃ 정도로 유지하였고, 사육기간 동안에는 절식하였다. 이어, 3주 후의 폐사율을 비롯하여 상대생존율 (Relative Percent Survival, RPS = (1-실험군 페사율/대조군 폐사율)× 100)을 계산하였고 (수학식 1), 호장근 추출물 복합제의 VHSV에 대한 항바이러스 효과를 분석하였다.The artificial infection experiment was performed by intraperitoneal injection of 2 × 10 ^7.8 VHSV / fish and 10 ^7.8 VHSV / fish to all subjects (Table 1). After that, they were raised together in a circular tank of about 1 ton. The water was circulated twice a day, and the water temperature was maintained at about 14 ° C using a cooler. Next, the mortality rate after 3 weeks and the relative survival rate (RPS = (1 - experimental group / control group mortality) × 100) were calculated (Equation 1), and the antiviral effect Respectively.

구분 division 병원체Pathogen 감염농도Infection concentration 복강 주사감염Abdominal injection infection VHSVVHSV 2 x 10^7.8/fish2 x 10 ^7.8 / fish 복강 주사감염Abdominal injection infection VHSVVHSV 1 x 10^7.8/fish1 x 10 ^7.8 / fish

그 결과 VHSV 복강감염 대조구는 최종적으로 93.3%와 60.0%의 폐사율을 보였고, 실험실 및 양식현장에서 제조한 호장근 추출물 복합제 10 mg/g/day를 투여한 그룹에서, 53.5%, 33.3%, 46.7%, 및 26.7%의 최종 폐사율을 나타내었다(표 2). 또한, 호장근 추출물 복합제 (급이 사료 내 1% 함유; 5mg/Kg)시 2주간 투여한 그룹에서 강한 VHSV 폐사율 개선의 효과를 볼 수 있었다(도 1).As a result, the VHSV abdominal infected control group had a final rate of 93.3% and 60.0% The mortality rate was 53.5%, 33.3%, 46.7%, and 26.7%, respectively, in the group treated with 10 mg / g / day of the carrageenan extract manufactured at the laboratory and culture sites (Table 2). In addition, the effect of strong VHSV mortality was improved in the group administered for 2 weeks at the time of Hojangun Extract (containing 1% in feed diets; 5 mg / Kg) (Fig. 1).

접종농도

Inoculation concentration

Control

Control
10 ㎕/g
10 [mu] l / g
10 ㎕/g
10 [mu] l / g
양식장
nursery
실험실
laboratory

2 x 10^7.8/mL

2 x 10 ^7.8 / mL
MortalityMortality 93.393.3 53.353.3 46.746.7 RPS
RPS
0.00.0 42.942.9 50.050.0
1 x 10^7.8/mL

1 x 10 ^7.8 / mL
MortalityMortality 60.060.0 33.333.3 26.726.7 RPS
RPS
0.00.0 44.444.4 55.655.6

따라서, 상기 호장근 추출물 복합제를 사료 첨가제 조성물로 사용 할 경우, 바이러스성 출혈성 패혈증을 효과적으로 예방 및 치료할 수 있음을 알 수 있다.Therefore, it can be seen that the use of the callus root extract as a feed additive composition can effectively prevent and treat viral hemorrhagic sepsis.

이상의 설명으로부터, 본 발명이 속하는 기술분야의 당업자는 본 발명이 그 기술적 사상이나 필수적 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 실시될 수 있다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 이와 관련하여, 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적인 것이 아닌 것으로 이해해야만 한다. 본 발명의 범위는 상기 상세한 설명보다는 후술하는 특허 청구범위의 의미 및 범위 그리고 그 등가 개념으로부터 도출되는 모든 변경 또는 변형된 형태가 본 발명의 범위에 포함되는 것으로 해석되어야 한다.From the above description, it will be understood by those skilled in the art that the present invention may be embodied in other specific forms without departing from the spirit or essential characteristics thereof. In this regard, it should be understood that the embodiments described above are illustrative in all aspects and not restrictive. The scope of the present invention should be construed as being included in the scope of the present invention without departing from the scope of the present invention as defined by the appended claims.

Claims

A feed additive composition for the prevention or treatment of viral hemorrhagic sepsis comprising as an active ingredient an extract of Bombyx mori.

The composition of claim 1, wherein the composition further comprises stevia extract or stevioside.

The composition of claim 1 or 2, wherein the feed additive composition is for the prevention or treatment of viral hemorrhagic sepsis induced by Viral hemorrhagic septicemia virus (VHSV).

A feed comprising the feed additive composition of claim 1 or 2.

A method of breeding a fish, comprising feeding the feed of claim 4 to the fish.

A pharmaceutical composition for preventing or treating viral hemorrhagic sepsis, which comprises an extract of Aspergillus oryzae as an active ingredient.

7. The composition of claim 6, wherein the composition further comprises stevia extract or stevioside.

A composition for antiviral treatment of viral hemorrhagic sepsis virus, comprising as an active ingredient an extract of Bombyx mori.

9. The composition of claim 8, wherein the composition further comprises stevia extract or stevioside.