KR20210065519A - 프리마퀸을 포함하는 조성물 및 그의 용도 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 프리마퀸(primaquine)을 포함하는 조성물 및 그의 용도에 관한 것으로, 일 양상에 따른 프리마퀸은 근육세포에서 PGC-1α의 발현 및 미토콘드리아 생성을 증가시키고, 근육세포의 분화를 촉진하므로, 약학적 조성물 또는 건강기능식품 조성물에 유효성분으로 포함되어 근육 질환의 예방, 치료 또는 개선, 근 기능 개선, 근육 강화, 또는 운동수행능력 향상에 유용하게 사용될 수 있다.
Description
본 발명은 프리마퀸(primaquine)을 포함하는 조성물 및 그의 용도에 관한 것이다.
PGC-1α(peroxisome proliferator-activated receptor gamma coactivator-1 alpha)는 전사활성 단백질로서 PPAR-감마 및 여러 핵 수용체와 결합하여 다양한 유전자 발현을 조절하는 것으로 알려져 있다. PGC-1α는 운동에 의해 근육 세포에서 그의 발현이 증가하며 근육 내 미토콘드리아의 생성(biogenesis) 및 혈관 형성을 촉진하고, 골격근에서 산화성 근섬유의 함량을 증가시킨다.
사람의 근육은 40세 이후부터 매년 1% 이상씩 감소하며, 80세가 되면 최대 근육량의 50% 수준이 감소되며, 노년의 근육 감소는 전반적인 신체기능을 떨어뜨리는 중요한 요소로 인식되고 있다. 노년기 근 감소는 비만을 동반할 수 있고, 당뇨병 환자에서는 인슐린 분비 이상에 의해 세포에 에너지를 제대로 공급하지 못함에 따라 발생하는 근육 발달 장애가 나타날 수 있다. 또한, 근육의 감소는 관절염, 허리통증, 만성통증을 더 증가시키는 원인이 되며, 복부비만에 의한 요실금 증세도 악화시킬 수 있고, 골절에 의한 부상은 노년의 우울증을 증가시켜 사망에 이르게 할 수도 있다. 따라서, 근 기능 개선 및 근육량을 증가시키면서 부작용은 낮은 의약품 또는 건강기능식품 등의 개발이 필요하다.
일 양상은 프리마퀸, 그의 약학적으로 허용가능한 염, 또는 용매화물을 유효성분으로 포함하는, 근육 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.
다른 양상은 프리마퀸, 그의 약학적으로 허용가능한 염, 또는 용매화물을 유효성분으로 포함하는, 근육 질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공하는 것이다.
또 다른 양상은 프리마퀸, 그의 약학적으로 허용가능한 염, 또는 용매화물을 유효성분으로 포함하는, 근 기능 개선, 근육 강화, 또는 운동수행능력 향상용 건강기능식품 조성물을 제공하는 것이다.
일 양상은 프리마퀸, 그의 약학적으로 허용가능한 염, 또는 용매화물을 유효성분으로 포함하는, 근육 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "프리마퀸(primaquine)"은 N-(6-메톡시퀴놀린-8-일)펜테인-1,4-다이아민으로, 하기 화학식 1로 표시되는 화합물일 수 있다.
[화학식 1]
상기 프리마퀸은 상업적으로 판매되는 것 또는 직접 합성한 것일 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "약학적으로 허용가능한 염"은, 약학 분야에서 사용되는 통상의 산 부가염, 예를 들면 염산, 브롬산, 황산, 설팜산, 인산 또는 질산과 같은 무기산으로부터 유도된 염 및 아세트산, 프로피온산, 숙신산, 글리콜산, 스테아르산, 시트르산, 말레산, 말론산, 메탄술폰산, 타르타르산, 말산, 페닐아세트산, 글루탐산, 벤조산, 살리실산, 2-아세톡시벤조산, 푸마르산, 톨루엔술폰산, 옥살산 또는 트리플루오로아세트산과 같은 유기산으로부터 유도된 염을 포함한다. 일 구체예에서, 프리마퀸의 약학적으로 허용가능한 염은 프리마퀸 다이포스페이트일 수 있다. 또한, 상기 염은 통상의 금속 염 형태, 예를 들면 리튬, 소듐, 칼륨, 마그네슘, 또는 칼슘과 같은 금속으로부터 유도된 염을 포함한다. 상기 산 부가염 또는 금속염은 통상의 방법에 따라 제조될 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "용매화물(solvate)"은 비공유적 분자간력에 의해 결합된 화학양론적 또는 비화학양론적 량의 용매를 포함하고 있는 본 발명의 화합물 또는 그것의 염을 의미할 수 있다. 그에 관한 바람직한 용매들로는 휘발성, 비독성, 및/또는 인간에게 투여되기에 적합한 용매들일 수 있다.
상기 프리마퀸은 그의 입체 이성질체의 형태일 수 있다. 상기 입체 이성질체는 거울상 이성질체(enantiomer) 및 부분입체 이성질체(diastereomer)와 같은 모든 입체 이성질체를 포함한다. 상기 프리마퀸은 입체 이성질체의 순수 형태(stereoisomerically pure form) 또는 하나 이상의 입체 이성질체의 혼합물, 예를 들면 라세미 혼합물일 수 있다. 특정 입체 이성질체의 분리는 당해 분야에 공지된 통상의 방법 중 하나에 의해 수행될 수 있다.
본 명세서 사용되는 용어 "치료 또는 개선"은 질환, 장애, 상태 또는 병태, 또는 그의 하나 이상의 증상의 경감, 진행 억제 또는 예방을 지칭하거나, 그를 포함하며, "유효성분" 또는 "약제학적 유효량"은 질환, 장애, 상태 또는 병태, 또는 그의 하나 이상의 증상의 경감, 진행 억제 또는 예방에 충분한 본원에서 제공되는 발명을 실시하는 과정에서 이용되는 조성물의 임의의 양을 의미할 수 있다. 상기 유효량(또는 투여량)은 0.0001mg 내지 10,000mg, 0.001mg 내지 1,000mg, 1.0mg 내지 100mg, 0.01mg 내지 1,000mg, 0.01mg 내지 100mg, 0.01mg 내지 10mg, 또는 0.01mg 내지 1mg일 수 있다.
상기 프리마퀸, 그의 약학적으로 허용가능한 염, 또는 용매화물은 조성물 총 중량에 대하여 0.001 중량% 내지 95 중량%, 예를 들면, 0.01 중량% 내지 80 중량%, 0.01 중량% 내지 60 중량%, 0.01 중량% 내지 40 중량%, 0.01 중량% 내지 30 중량%, 0.01 중량% 내지 20 중량%, 0.01 중량% 내지 10 중량%, 0.01 중량% 내지 5 중량%, 0.05 중량% 내지 60 중량%, 0.05 중량% 내지 40 중량%, 0.05 중량% 내지 30 중량%, 0.05 중량% 내지 20 중량%, 0.05 중량% 내지 10 중량%, 0.05 중량% 내지 5 중량%, 0.1 중량% 내지 60 중량%, 0.1 중량% 내지 40 중량%, 0.1 중량% 내지 30 중량%, 0.1 중량% 내지 20 중량%, 0.1 중량% 내지 10 중량%, 또는 0.1 중량% 내지 5 중량%로 포함될 수 있다.
본 명세서에서 용어 "근육 질환"은 근 기능 저하, 근육 소모, 근육 퇴화, 또는 근육 손상 등으로 인해 발생하는 것일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 상기 근 기능 저하, 근육 소모, 근육 퇴화, 또는 근육 손상은 유전적 요인, 후천척 요인, 노화 등을 원인으로 발생할 수 있고, 상기 근육 소모는 근육량의 점진적인 감소를 의미할 수 있다. 예를 들어, 상기 근육 질환은 긴장감퇴증(atony), 근위축증(muscular atrophy), 근무력증, 악액질(cachexia) 및 근감소증(sarcopenia)으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 또한, 상기 근육 질환은 PGC-1α의 발현 감소에 의한 것일 수 있다.
상기 약학적 조성물은 약제학적으로 허용가능한 희석제 또는 담체를 추가적으로 포함할 수 있다. 상기 희석제는 유당, 옥수수 전분, 대두유, 미정질 셀룰로오스, 또는 만니톨, 활택제로는 스테아린산 마그네슘, 탈크, 또는 그 조합일 수 있다. 상기 담체는 부형제, 붕해제, 결합제, 활택제, 또는 그 조합일 수 있다. 상기 부형제는 미결정 셀룰로오즈, 유당, 저치환도 히드록시셀룰로오즈, 또는 그 조합일 수 있다. 상기 붕해제는 카르복시메틸셀룰로오스 칼슘, 전분글리콜산 나트륨, 무수인산일수소 칼슘, 또는 그 조합일 수 있다. 상기 결합제는 폴리비닐피롤리돈, 저치환도 히드록시프로필셀룰로오즈, 히드록시프로필셀룰로오즈, 또는 그 조합일 수 있다. 상기 활택제는 스테아린산 마그네슘, 이산화규소, 탈크, 또는 그 조합일 수 있다.
상기 약학적 조성물은 경구 또는 비경구 투여 제형으로 제형화될 수 있다. 경구 투여 제형은 과립제, 산제, 액제, 정제, 캅셀제, 건조시럽제, 또는 그 조합일 수 있다. 비경구 투여 제형은 주사제일 수 있다.
상기 약학적 조성물은 목적하는 방법에 따라 경구 또는 비경구로 투여될 수 있다. 비경구 투여는 복강내, 직장내, 피하, 정맥, 근육내 또는 흉부내 주사 방식을 포함할 수 있다.
상기 약학적 조성물은 근아세포(myoblast) 또는 근육세포의 PGC-1α 발현을 증가시키는 것일 수 있고, 근아세포의 근육세포로의 분화를 촉진시키는 것일 수 있으며, 근육량을 증가시키는 것일 수 있다.
다른 양상은 프리마퀸, 그의 약학적으로 허용가능한 염, 또는 용매화물을 유효성분으로 포함하는, 근육 질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공한다.
상기 프리마퀸 및 근육 질환은 상기한 바와 같다.
상기 건강기능식품 조성물은 근아세포 또는 근육세포의 PGC-1α 발현을 증가시키는 것일 수 있고, 근아세포의 근육세포로의 분화를 촉진시키는 것일 수 있으며, 근육량을 증가시키는 것일 수 있다.
또 다른 양상은 프리마퀸, 그의 약학적으로 허용가능한 염, 또는 용매화물을 유효성분으로 포함하는, 근 기능 개선, 근육 강화, 또는 운동수행능력 향상용 건강기능식품 조성물을 제공한다.
상기 프리마퀸 및 근육 질환은 상기한 바와 같다.
상기 건강기능식품 조성물은 근아세포 또는 근육세포의 PGC-1α 발현을 증가시키는 것일 수 있고, 근아세포의 근육세포로의 분화를 촉진시키는 것일 수 있으며, 근육량을 증가시키는 것일 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "근"은 심줄, 근육, 건을 포괄적으로 지칭하고, "근 기능" 또는 "근육 기능"은 근육의 수축에 의해 힘을 발휘할 수 있는 능력을 의미할 수 있고, 근육이 저항을 이겨내기 위하여 최대한의 수축력을 발휘할 수 있는 근력; 근육이 주어진 중량에 얼마나 오랫동안 또는 얼마나 여러 번 수축과 이완을 반복할 수 있는지 나타내는 능력인 근 지구력; 및 단시간 내에 강한 힘을 발휘하는 능력인 순발력을 포함할 수 있다. 상기 근 기능은 근육량에 비례하며, 본 명세서에서 사용되는 용어 "근 기능 개선"은 근 기능을 보다 긍정적인 방향으로 향상시키는 것을 의미할 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "운동수행능력"은 일상생활이나 스포츠에서 볼 수 있는 신체동작을 외형적으로 달리기, 뛰기, 던지기, 헤엄치기 등으로 구분할 때, 상기 동작을 빠르게, 강하게, 정확하게, 오래, 능숙하게 할 수 있는 정도를 나타내는 것으로, 운동수행능력은 근력, 민첩성 및 지구력 등의 인자로 규정될 수 있다. 본 명세서에서 사용되는 용어 "운동수행능력 향상"은 운동수행능력을 개선하거나 향상시키는 것을 의미할 수 있다.
상기 건강기능식품 조성물은 단독으로 사용되거나, 또는 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효 성분의 혼합 양은 사용 목적에 따라 적합하게 결정될 수 있고, 일반적으로, 상기 조성물은 전체 식품 중량의 0.01 내지 90 중량부로 첨가될 수 있다. 상기 식품은 육류, 소시지, 빵, 초콜릿, 캔디류, 스낵류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 수프, 음료수, 차, 드링크제, 알코올, 음료, 및 비타민 복합제 등에 한정되지 않고 통상적인 의미에서의 건강기능식품을 모두 포함할 수 있다.
상기 건강기능식품은 추가적으로 여러 가지 향미제, 감미제 또는 천연 탄수화물 등을 포함할 수 있다. 상기 천연 탄수화물은 포도당, 과당과 같은 모노사카라이드, 말토스, 슈크로스와 같은 디사카라이드, 및 덱스트린, 사이클로덱스트린과 같은 폴리사카라이드, 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜일 수 있다. 상기 감미제는 타우마틴, 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제나, 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등일 수 있다.
상기 건강기능식품 조성물은 또한 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제, 또는 그 조합을 포함할 수 있다. 상기 건강기능식품 조성물은 또한, 천연 과일쥬스, 과일쥬스 음료, 야채 음료의 제조를 위한 과육, 또는 그 조합을 포함할 수 있다.
또 다른 양상은 유효량의 상기한 조성물을 그를 필요로 하는 개체에 처리 또는 투여하는 단계를 포함하는 근육 질환의 예방, 개선, 또는 치료, 근 기능 개선, 근육 강화, 또는 운동수행능력 향상을 위한 방법을 제공한다.
상기 조성물은 상기한 약학적 조성물 또는 건강기능식품 조성물일 수 있고, 상기 근육 질환, 근 기능 및 운동수행능력 등에 대해서는 상기한 바와 같다.
일 양상에 따른 프리마퀸은 근육세포에서 PGC-1α의 발현 및 미토콘드리아 생성을 증가시키고, 근육세포의 분화를 촉진하므로, 약학적 조성물 또는 건강기능식품 조성물에 유효성분으로 포함되어 근육 질환의 예방, 치료 또는 개선, 근 기능 개선, 근육 강화, 또는 운동수행능력 향상에 유용하게 사용될 수 있다.
도 1은 프리마퀸 다이포스페이트의 근육세포에서 PGC-1α 프로모터 활성을 측정한 결과 그래프이다.
도 2는 프리마퀸 다이포스페이트를 처리한 근육세포에서 PGC-1α의 상대적인 mRNA 발현량을 측정한 결과 그래프이다.
도 3은 프리마퀸 다이포스페이트를 처리한 근육세포의 미토콘드리아 관련 마커인 COX2 및 SDHB의 상대적인 mRNA 발현량을 측정한 결과 그래프이다.
도 4는 프리마퀸 다이포스페이트를 처리한 근육세포의 근관을 염색한 형광 이미지(A) 및 이로부터 근관의 직경(diameter)을 측정한 결과 그래프(B)이다.
도 2는 프리마퀸 다이포스페이트를 처리한 근육세포에서 PGC-1α의 상대적인 mRNA 발현량을 측정한 결과 그래프이다.
도 3은 프리마퀸 다이포스페이트를 처리한 근육세포의 미토콘드리아 관련 마커인 COX2 및 SDHB의 상대적인 mRNA 발현량을 측정한 결과 그래프이다.
도 4는 프리마퀸 다이포스페이트를 처리한 근육세포의 근관을 염색한 형광 이미지(A) 및 이로부터 근관의 직경(diameter)을 측정한 결과 그래프(B)이다.
이하 본 발명을 실시예를 통하여 보다 상세하게 설명한다. 그러나, 이들 실시예는 하나 이상의 구체예를 예시적으로 설명하기 위한 것으로 본 발명의 범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.
실시예 1: 프리마퀸의 근아세포에서 PGC-1α 전사 활성 증가 효과
1-1. PGC-1α 리포터 발현 근아세포(myoblast) 확립
C2C12 근아세포(Cat No. CRL-1722, American Type Culture Collection, 미국)를 이용하여, PGC-1α 리포터를 발현하는 C2C12 세포주(이하 'PGC-1α 리포터 세포주'라 한다.)를 구축하였다.
구체적으로, 길이 1kb의 인간 PGC-1α 프로모터 하에 루시페라제(luciferase)와 dscGFP(destabilized Green Fluorescent Protein)를 발현하는 벡터를 제작하고, 이 벡터를 렌티바이러스에 삽입하여 C2C12 세포에 감염시켰다. 이 벡터를 유전적으로 안정하게 발현시키는 세포주를 선발하기 위해 벡터에 포함되어 있는 녹색형광단백질(Green fluorescent protein: GFP)로부터 나오는 형광을 모니터링하였다. 이 벡터의 선발 표지자인 푸로미신(puromycin)을 세포 배양액에 5 ㎍/mL로 첨가하고 PGC-1α 리포터를 발현하는 세포주를 선발하였다.
1-2. 프리마퀸의 근아세포에서 PGC-1α 프로모터 활성 증가 효과
상기 실시예 1-1에서 제작한 PGC-1α 리포터 세포주를 96웰 플레이트의 각 웰 중의 10% 소태아혈청(fetal bovine serum: FBS) 함유 DMEM(Dulbecco's modified Eagle's medium) 배지에서 2일에 한 번씩 배지를 교환하면서 70% 컨플루언시(confluency)가 될 때까지 5% CO2 배양기에서 배양하였다. 이후, DMSO에 용해된 10 μM의 프리마퀸 다이포스페이트(primaquine diphosphate, PRESTWICK CHEMICAL LIBRARY)를 첨가하고, 양성 대조군으로 DMSO에 용해된 10 μM AICAR(5-aminoimidazole-4-carboxamide ribonucleotide)를 첨가하고, 대조군은 DMSO만을 첨가하였다. 48 시간 동안 배양한 후, 세포를 회수하여 세포 용해 버퍼(Passive lysis buffer; 50 mM Tris-Hcl, 7.5 mM MgCl2, 750 mM NaCl, 5 mM EGTA, 1% Triton-x 100, 1mM Na3VO4, 10 mM NaF, 0.1 mM PMSF(phenylmethanesulfonylfluoride), PI(protease inhibitor)) 10 ㎕에 용해시키고 루시페라제의 기질인 루시페린을 50 ㎕ 첨가하여 효소반응을 시킨 후, 루시페라제 발광 정도를 측정하였다. 각 웰과 플레이트에 대해 측정값을 표준화시키고 대조군에 대한 상대적인 PGC-1α 프로모터 활성을 계산하여 나타내었다.
그 결과, 도 1에 나타낸 바와 같이, 프리마퀸 다이포스페이트는 대조군에 비하여 PGC-1α 프로모터 활성을 약 2 배 이상 증가시켰고, 이는 양성 대조군인 AICAR와 유사한 정도의 효과임을 확인하였다.
실시예 2: 프리마퀸의 근육세포 내 PGC-1α 발현 증가 효과
C2C12 근아세포의 근육세포로의 분화 유도 시 프리마퀸에 의한 PGC-1α 발현 증가 효과를 실시간 역전사 중합효소 연쇄반응(real-time reverse transcription polymerase chain reaction: real-time RT-PCR)으로 확인하였다.
구체적으로, C2C12 근아세포(Cat. No. CRL-1722, American Type Culture Collection, 미국)를 성장 배지(growth media)로 15% 소태아혈청(fetal bovine serum)이 첨가된 DMEM을, 분화 배지(differentiation media)로 2% 말혈청(horse serum)이 첨가된 DMEM을 사용하여 배양하였다. C2C12 근아세포의 근육세포로의 분화 유도 시, 분화 배지에 DMSO에 용해된 10 μM의 프리마퀸 다이포스페이트를 첨가하고, 대조군은 DMSO만을 첨가하였다. 48 시간 동안 배양하여 분화를 유도한 후, 세포를 회수하여 이지-블루 총 RNA 추출 키트(easy-BLUE Total RNA Extraction Kit, iNtRON)로 총 RNA를 추출하였다. 분리된 RNA를 이용하여, 하기 표 1의 프라이머들로 실시간 RT-PCR을 수행하였으며, PGC-1α의 mRNA 발현량을 L32의 mRNA 발현량에 대한 상대적 발현량으로 계산하여 나타내었다.
프라이머명 | 서열(5'→3') | 서열번호 |
PGC-1alpha forward | TGATGTGAATGACTTGGATACAGACA | 1 |
PGC-1alpha reverse | GCTCATTGTTGTACTGGTTGGATATG | 2 |
L32 forward | GGCCTCTGGTGAAGCCCAAGATCG | 3 |
L32 reverse | CCTCTGGGTTTCCGCCAGTTTCGC | 4 |
그 결과, 도 2에 나타낸 바와 같이, 프리마퀸 다이포스페이트는 근아세포가 근육세포로 분화하는 동안 PGC-1α의 mRNA 발현량을 대조군에 비하여 약 2 배까지 증가시켰다.
실시예 3: 프리마퀸의 근육세포 내 미토콘드리아 관련 마커 발현 증가 효과
C2C12 근아세포의 근육세포로의 분화 유도 시 프리마퀸에 의한 미토콘드리아 관련 마커인 COX2(cyclooxygenase 2) 및 SDHB(succinate dehydrogenase)의 mRNA 발현 증가 효과를 실시간 RT-PCR로 확인하였다.
구체적으로, 하기 표 2의 프라이머를 사용한 것을 제외하고는 상기 실시예 2에 기재된 것과 동일한 방법으로 실시간 RT-PCR을 수행하였고, COX2 및 SDHB의 mRNA 발현량을 L32의 mRNA 발현량에 대한 상대적 발현량으로 계산하여 나타내었다.
프라이머명 | 서열(5'→3') | 서열번호 |
COX2 forward | ACCTGGTGAACTACGACTGC | 5 |
COX2 reverse | GGACTGCTCATGAGTGGAGG | 6 |
SDHB forward | CAGAGTCGGCCTGCAGTTTC | 7 |
SDHB reverse | GGTCCCATCGGTAAATGGCA | 8 |
L32 forward | GGCCTCTGGTGAAGCCCAAGATCG | 3 |
L32 reverse | CCTCTGGGTTTCCGCCAGTTTCGC | 4 |
그 결과, 도 3에 나타낸 바와 같이, 프리마퀸 다이포스페이트는 근아세포가 근육세포로 분화하는 동안 미토콘드리아 관련 마커인 COX2 및 SDHB의 mRNA 발현량을 대조군에 비하여 증가시켰다. 이를 통하여, 프리마퀸 다이포스페이트가 근육세포의 미토콘드리아 생성을 촉진함으로써 운동수행능력 향상에 도움이 될 수 있음을 알 수 있었다.
실시예 4: 프리마퀸의 근육세포 분화 촉진 효과
C2C12 근아세포의 근육세포로의 분화 유도 시 프리마퀸에 의한 근육세포 분화 촉진 효과를 근관(myotube)에 대한 형광 염색으로 확인하였다.
구체적으로, C2C12 근아세포를 상기 실시예 2에 기재된 것과 동일한 배지를 이용하여 배양 후, 근육세포로의 분화 유도 시, 분화 배지에 DMSO에 용해된 10 μM의 프리마퀸 다이포스페이트를 첨가하고, 대조군은 DMSO만을 첨가하였다. 72 시간 동안 배양하여 분화를 유도한 후, 세포를 회수하여 PBS로 세척하고, 4% 파라포름알데하이드(paraformaldehyde)로 상온에서 15분간 반응시켜 세포를 고정시키고 1ХPBS로 3회 세척하였다. 이후, 5% 소태아혈청으로 상온에서 1 시간 동안 블로킹한 후, 1ХPBS로 3회 세척하였다. 1차 항체인 항-미오닌 중쇄 항체를 5% 염소 혈청(goat serum)에 1:500으로 희석하여 4℃에서 12시간 동안 반응시킨 후, 1ХPBS로 3회 세척하였다. 2차 항체인 항-마우스 IgG HRP 594 (Invitrogen, 미국)를 5% 염소 혈청에 1:500으로 희석하여 상온에서 1시간 동안 반응시킨 후, 1ХPBS로 3회 세척하였다. DAPI를 1ХPBS에 1:10000으로 희석하여 1분간 반응시키고, 1ХPBS로 세척한 후, 형광 현미경으로 분석하였다. 형광 이미지에서 각 근육세포의 근관의 직경(diameter)을 측정하여 나타내었다.
그 결과, 도 4에 나타낸 바와 같이, 프리마퀸 다이포스페이트는 근육세포의 크기를 대조군에 비하여 현저히 증가시킴을 형광 이미지를 통하여 확인할 수 있었고, 근관의 직경 수치 또한 대조군에 비하여 현저히 증가함을 확인하였다.
<110> Daegu Gyeongbuk Institute of Science and Technology
<120> Composition comprising primaquine and use thereof
<130> PN130367KR
<160> 8
<170> KoPatentIn 3.0
<210> 1
<211> 26
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> PGC-1alpha forward
<400> 1
tgatgtgaat gacttggata cagaca 26
<210> 2
<211> 26
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> PGC-1alpha reverse
<400> 2
gctcattgtt gtactggttg gatatg 26
<210> 3
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> L32 forward
<400> 3
ggcctctggt gaagcccaag atcg 24
<210> 4
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> L32 reverse
<400> 4
cctctgggtt tccgccagtt tcgc 24
<210> 5
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> COX2 forward
<400> 5
acctggtgaa ctacgactgc 20
<210> 6
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> COX2 reverse
<400> 6
ggactgctca tgagtggagg 20
<210> 7
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SDHB forward
<400> 7
cagagtcggc ctgcagtttc 20
<210> 8
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SDHB reverse
<400> 8
ggtcccatcg gtaaatggca 20
Claims (15)
- 프리마퀸, 그의 약학적으로 허용가능한 염, 또는 용매화물을 유효성분으로 포함하는, 근육 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
- 청구항 1에 있어서, 상기 근육 질환은 PGC-1α(peroxisome proliferator-activated receptor gamma coactivator-1 alpha)의 발현 감소에 의한 것인 약학적 조성물.
- 청구항 1에 있어서, 상기 근육 질환은 근 기능 저하, 근육 소모, 근육 퇴화, 또는 근육 손상으로 인한 것인 약학적 조성물.
- 청구항 1에 있어서, 상기 근육 질환은 긴장감퇴증(atony), 근위축증(muscular atrophy), 근무력증, 악액질(cachexia) 및 근감소증(sarcopenia)으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상인 것인 약학적 조성물.
- 청구항 1에 있어서, 상기 조성물은 근아세포(myoblast) 또는 근육세포의 PGC-1α 발현을 증가시키는 것인 약학적 조성물.
- 청구항 1에 있어서, 상기 조성물은 근아세포의 근육세포로의 분화를 촉진하는 것인 약학적 조성물.
- 청구항 1에 있어서, 상기 조성물은 근육량을 증가시키는 것인 약학적 조성물.
- 프리마퀸, 그의 약학적으로 허용가능한 염, 또는 용매화물을 유효성분으로 포함하는, 근육 질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물.
- 청구항 8에 있어서, 상기 근육 질환은 PGC-1α의 발현 감소에 의한 것인 건강기능식품 조성물.
- 청구항 8에 있어서, 상기 근육 질환은 근 기능 저하, 근육 소모, 근육 퇴화, 또는 근육 손상으로 인한 것인 건강기능식품 조성물.
- 청구항 8에 있어서, 상기 근육 질환은 긴장감퇴증, 근위축증, 근무력증, 악액질 및 근감소증으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상인 것인 건강기능식품 조성물.
- 청구항 8에 있어서, 상기 조성물은 근아세포 또는 근육세포의 PGC-1α 발현을 증가시키는 것인 건강기능식품 조성물.
- 청구항 8에 있어서, 상기 조성물은 근아세포의 근육세포로의 분화를 촉진하는 것인 건강기능식품 조성물.
- 청구항 8에 있어서, 상기 조성물은 근육량을 증가시키는 것인 건강기능식품 조성물.
- 프리마퀸, 그의 약학적으로 허용가능한 염, 또는 용매화물을 유효성분으로 포함하는, 근 기능 개선, 근육 강화, 또는 운동수행능력 향상용 건강기능식품 조성물.
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KR101793138B1 (ko) | 2016-02-05 | 2017-11-02 | 한국생명공학연구원 | 알로이리트산 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 포함하는 근력약화 관련 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 |
-
2019
- 2019-11-27 KR KR1020190154359A patent/KR20210065519A/ko unknown
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