KR20210065086A

KR20210065086A - 자가-조립형 펩타이드 스캐폴드

Info

Publication number: KR20210065086A
Application number: KR1020217003917A
Authority: KR
Inventors: 케이쓰 더글라스 밀러
Original assignee: 헥사머 테라퓨틱스, 인코포레이티드
Priority date: 2018-07-12
Filing date: 2019-07-12
Publication date: 2021-06-03
Also published as: EP4218928A3; CN112512552A; AU2019300038A1; ZA202100952B; JP2021531337A; MA52591A; AU2023202175A1; JP2024036461A; EP3826661A2; EP4218928A2; WO2020014609A2; BR112021000455A2; AU2019300038C1; WO2020014609A4; US20210268105A1; AU2019300038B2; MX2021000444A; EP3826661A4; CA3105706A1; WO2020014609A3

Abstract

본 개시내용은 백신을 생성하기 위한 펩타이드 스캐폴드를 기재한다. 이러한 펩타이드 스캐폴드는 양친매성 알파-나선을 포함하는 합텐 담체(hC)로 자가-조립되는 펩타이드를 포함한다. 이러한 펩타이드는 특이적인 패턴에 따라 헵타드 반복부(heptad repeat)를 포함한다. hC는 이에 접합된 합텐 또는 제제를 추가로 포함하고, 선택적으로 hC는 하나 이상의 양친매성 알파-나선의 N-말단 및/또는 C-말단에 하나 이상의 T-세포 에피토프를 포함한다. 본 개시내용은 또한, 합텐-hC 또는 제제-hC 접합체를 포함하는 면역원성 조성물을 포함하여 조성물을 기재한다.

Description

자가-조립형 펩타이드 스캐폴드

관련 출원에 대한 교차 참조

본 출원은 2018년 7월 12일에 출원된 미국 가특허 출원 제62/697,132호의 이익을 주장하며, 이는 그 전체 내용이 본원에 인용되어 포함된다.

서열 목록 정보

2019년 7월 10일에 또는 그 즈음에 생성되고 파일 크기가 약 7 KB인 "A070-0003PCT_ST25.txt"라는 명칭의 컴퓨터 판독가능 텍스트파일은 이 출원에 대한 서열 목록을 포함하고, 그 전체 내용이 본원에 인용되어 포함된다.

기술분야

본 개시내용은 백신을 합성적으로 생성하기 위한 펩타이드 스캐폴드를 기재한다.

박테리아(주로 이. 콜라이(E. coli)), 효모, 곤충 세포, 및 포유류 세포와 같은 숙주에서의 재조합 단백질 발현은 현재, 서브유닛 백신을 생성하는 가장 보편적인 방법이다. 이는 매우 성공적이었으며, 백신 생산의 중요한 방법으로 남아 있을 것이다. 전형적으로, 감염성 병원체 단백질은 게놈 분석, 기능적 검정법, 인 실리코 분석(예를 들어, 기능적 예측, 구조적 분석, 에피토프 식별 등) 또는 이들 3개의 조합에 의해 식별된다. 발현 시험은 면역원성 시험에 대한 수율 및 용해도를 평가하기 위해 개시된다. 그 후에, 질환 표적에 대한 고-역가 항체를 생성하는 서브유닛은, 백신이 숙주를 감염 및/또는 질환 발현(manifestation) 및 진행으로부터 보호하는 상기 백신의 능력에 대해 시험되는 보호 연구를 위해 진척된다. 그 후에, 모든 이들 기준들을 충족시키는 서브유닛은 백신 생성 최적화, 안정성, 및 독성/안전성/투약량 연구로 진전된다. 발현 최적화 연구는 또한, 생산 규모 및 실행 가능성을 결정하는 데 중요하다. 전체 과정은 시간 소모적이며, 노동 집약적이고, 매우 비용이 많이 드는 것으로 잘 알려져 있다.

백신을 생성하기 위한 더욱 효율적이고 비용-효과적인 방법을 개발하는 필요성이 존재한다.

본 개시내용은 이량체, 삼량체, 사량체, 오량체, 육량체, 칠량체, 팔량체, 구량체 또는 십량체로 자가-조립되는 2개 이상의 헵타드(heptad)들을 포함하는 단량체 펩타이드를 기재한다. 각각의 헵타드는 SEQ ID NO: 1~11에 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 포함한다.

본원에 기재된 펩타이드는 합텐 담체(hC, hapten carrier)로 자가-조립된다. 구현예에서, 본원에 기재된 펩타이드는 육량체로 자가-조립되고, SEQ ID NO: 12~17에 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 포함한다. 육량체성 합텐 담체(HhC)는 이에 접합된 하나 이상의 합텐을 추가로 포함한다. HhC는 또한, 육량체성 나선의 N-말단 및 C-말단에 T-세포 에피토프를 포함한다.

구현예에서, 본 개시내용은 하나 이상의 합텐 및 T-세포 에피토프를 함유하는 본원에 기재된 합텐 담체(hC) 및 약학적으로 허용 가능한 부형제를 포함하는 조성물을 기재한다. 약학적 조성물은 이를 필요로 하는 대상체를 치료하는 데 사용된다.

구현예에서, 본 개시내용은 이를 필요로 하는 대상체에서 강력한 면역 반응을 유도하기 위해 본원에 기재된 약학적 조성물을 사용하는 방법을 기재한다.

도 1은 자가-조립형 육량체의 구조를 도시한다. 소수성 잔기는 양친매성 알파-나선의 한쪽 면 상에 있고, 합텐 커플링을 위한 반응성 잔기(여기서는 라이신이 도시되지만, 다른 잔기 또는 반응성 기를 함유하는 비-천연 아미노산은 공유 커플링될 수 있음)는 다른 면 상에 있다. 수화 시, 소수성 잔기는 회합되어 물을 배제하며, 이는 가장 에너지적으로 선호할 만한 복합체이다. 종-특이적 T-세포 에피토프의 배치는 N-말단 및 C-말단에 있다.
도 2는 HhC의 면역원성을 도시한다. 스캐폴드의 3개 도메인들은 좌측 상의 리본 다이어그램과 우측 상의 표면 다이어그램 둘 다에서 도시된다. 이 모델은 에피토프 예측 소프트웨어에 의해 분석되었고, 메타 데이터는 우측 상의 모델에서 이의 잠재적인 면역원성 점수에 따라 채색된다. 적색 = 더 높은 잠재적인 면역원성; 청색 = 더 낮은 잠재적인 면역원성.
도 3은 합텐 접합된 HhC의 합성을 도시한다. HhC(적색 결합으로서 도시됨) 상의 반응성 잔기는 잔기 특이적 헤테로이작용성 가교제로 활성화되거나, 활성화된 합텐성 펩타이드와 직접 반응하여(예를 들어, EDC/NHS 에스테르화), 합텐-접합된 육량체를 형성한다. 이 반응은 다량의(10 몰 당량 초과의) 가교제 및 펩타이드로 수행되어, 육량체가 완전히 로딩되게 보장한다(12개의 커플링된 펩타이드가 본원에 도시됨). 천연 발생 트립토판, 또는 SPPS 동안 첨가되는 것은, 형광 분광학에 의한 커플링 효율 정량화를 가능하게 한다. 여기서 단량체의 크기는 60개 잔기이다.
도 4는 자가-조립된 펩타이드의 PAGE 겔을 도시한다. 펩타이드(SEQ ID NO: 15)는 SPPS에 의해 합성되고, 저장 동안 동결건조되었다. 상기 펩타이드는 1X PBS에 용해된 다음, 청색 네이티브 PAGE 겔 상으로 로딩되고, 150 V(일정)에서 90분 동안 4~16% 아크릴아미드 구배 겔을 통한 전기영동에 의해 크기가 분획화되었다. 상기 겔은 메탄올:아세트산:물에서 고정된 다음, 동일한 용액에서 헹궈져서, 탈색되었다. 레인 1은 기준 단백질로서 BSA이고, 레인 2는 자가-조립된 육량체이다. MW 표준(도시되지 않음)은 우측 상에 있다. BSA는 66 kDa이고, 육량체는 20.7 kDa의 예상된 크기를 갖는다.

합텐은 이의 작은 크기로 인해 항원 결정기가 결여된 저분자이다. 항원성이 되기 위해서는, 이들 합텐은 면역원성인 더 큰 담체 단백질에 커플링되어야 한다. 작은 펩타이드(즉, 통상 5,000 달톤 미만의 펩타이드들) 또한, 항원 결정기가 결여되어 있어서 강력한 면역 반응을 유도하기 위해 이들 역시 면역원성인 더 큰 담체 단백질에 커플링되어야 한다. 따라서, 본원에 사용되는 바와 같이, "합텐"은 1) 더 큰 담체 단백질에 공유 또는 비-공유 부착될 때까지 항원 결정기가 결여되어 있는 임의의 분자, 또는 2) 더 큰 담체 단백질에 공유 또는 비-공유 커플링됨으로써 그 항원성이 증가되는 분자를 지칭한다.

본 개시내용은 하나 이상의 합텐을 함유하는 합텐 담체(hC)를 포함하는 백신을 제조하는 신규 방법을 기재한다. 상기 방법은 전통적인 서브유닛 백신 개발의 가장 비용이 많이 들고 시간-소모적인 단계들을 많이 없앤다. 재조합 발현 숙주에서 서브유닛을 생성하는 대신에, 모든 백신 구성요소들이 고체상 펩타이드 합성(SPPS)에 의해 합성적으로 생성되는 융통성 있는 모듈형 시스템이 존재한다. 구현예에서, 본원에 기재된 방법은 하나 이상의 합텐이 커플링된 후 강력한 면역 반응을 유도할 정도로 충분히 큰 담체 복합체로 짧은 펩타이드 양친매성 알파-나선을 자가-조립하는 hC 구성요소를 설계하는 단계를 포함한다. 구현예에서, 합텐 담체는 6개의 펩타이드 양친매성 알파-나선들을 포함한다. 일례로, 도 1은 본원에 기재된 육량체성 합텐 담체(HhC)의 구성요소를 도시한다. 수화 후 코어를 형성하는 중심 영역이 존재하고, 이 영역에서의 라이신은 더 큰 단백질 상에서 합텐, 예를 들어 작은 내인성 펩타이드 또는 B-세포 에피토프를 포함하는 펩타이드를 접합시키는 작용을 한다. HhC의 크기는 T-세포 에피토프 길이에 따라 달라질 수 있다. 육량체 형성 시, 비접합된 육량체는 38.5 kDa(도 1)이다. 접합된 육량체는 접합된 합텐의 길이 및 크기에 따라 더 클 것이다. 예를 들어, 육량체 상에 로딩된 2,156 달톤의 20-잔기 펩타이드는 크기를 38.5 kDa으로부터 64 kDa까지 증가시킬 것이다.

본 개시내용은 또한, 생체내에서 전달될 필요가 있는 제제에 대한 담체로서의 hC의 용도를 기재한다. 상기 제제는 생체내에서 특이적인 부위에 전달되기 위해 hC에 접합되거나 연결된다.

본 개시내용은 적어도 14개 아미노산 잔기 길이이고 적어도 2개의 헵타드 반복부들을 포함하는 펩타이드를 포함하는 hC의 코어 영역을 기재하며, 각각의 헵타드는 패턴 hwxhxyz(SEQ ID NO: 19)를 갖고, 상기 패턴에서,

h는 소수성 또는 비-극성 잔기이며;

w는 양으로 하전된, 음으로 하전된, 극성 비하전된, 또는 비-극성 지방족 잔기이며;

x는 합텐 또는 임의의 다른 분자에 커플링되는 에피토프에 대한 음으로 하전된, 양으로 하전된, 비-극성 지방족, 극성 비하전된 잔기, 또는 임의의 천연 또는 비-천연 잔기이며;

y는 합텐 또는 임의의 다른 분자에 커플링되는 에피토프에 대한 임의의 천연 또는 비-천연 잔기이고;

z는 합텐 또는 임의의 다른 분자에 커플링되는 에피토프에 대한 음으로 하전된, 양으로 하전된, 극성 비하전된, 비-극성 지방족 잔기, 또는 임의의 천연 또는 비-천연 잔기이다.

구현예에서, hC 코어 영역은 패턴 (hwxhxyz)n(SEQ ID NO: 20)을 갖는 펩타이드를 포함하며, 상기 패턴에서,

h는 I, L, V, F, W, Y, M, W, G, 또는 A이며;

w는 G, R, A, N, Q, H, S, D, E, K 또는 T이며;

x는 R, S, N, Q, A, G, T, D, E, K, H, 또는 C이며;

y는 K, H, C, D, E, R, W, Y, Q, N, 또는 공유 커플링될 수 있는 반응성 기를 함유하는 비-천연 아미노산 또는 분자이며;

Z는 A, D, H, S, E, R, N, Q, K, 또는 G이고;

n은 1 초과의 정수이다.

구현예에서, 본원에 기재된 예시적인 헵타드는 하기 아미노산 서열을 갖는다:

LRSIGKD(SEQ ID NO: 1);

LRSIGRD(SEQ ID NO: 2);

IREISRA(SEQ ID NO: 3);

IREVAQS(SEQ ID NO: 4);

IRDIAKA(SEQ ID NO: 5);

IRDIGRA(SEQ ID NO: 6);

IRDVGQS(SEQ ID NO: 7);

IRDLAKG(SEQ ID NO: 8);

VKDVARG(SEQ ID NO: 9);

IRDIGNS(SEQ ID NO: 10);

IKDLARG(SEQ ID NO: 11); 또는

IKKLKKK(SEQ ID NO: 12).

구현예에서, hC의 코어 영역은 본원에 기재된 하나 이상의 헵타드를 포함하고, n은 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 또는 11이다.

본 개시내용은 적어도 14개 잔기의 펩타이드를 포함하는 hC의 코어 영역을 기재한다. 구현예에서, 상기 펩타이드는 14개 잔기 내지 80개 잔기 길이이고, 11개 헵타드 반복부들 중 2개 내지 11개를 포함한다. 구현예에서, hC 코어 영역은 20개 내지 70개 잔기, 25개 내지 60개 잔기, 28개 내지 50개 잔기, 28개 내지 40개 잔기, 또는 28개 내지 30개 잔기를 포함하는 펩타이드를 포함한다. 14개 잔기 내지 80개 잔기 길이를 포함하는 펩타이드는 단량체이다.

구현예에서, 본원에 기재된 예시적인 펩타이드는 하기 아미노산 서열을 갖는다:

LRSIGKDLRSIGKDLRSIGKDLRSIGKD(SEQ ID NO: 13)

LRSIGKDLRSIGKDLRSIGKDLRSIGKDS(SEQ ID NO: 14);

LRSIGKDLRSIGRDLRSIGKDLRSIGRD(SEQ ID NO: 15);

IREISRAIREVAQSIRDIAKAIREIGKS(SEQ ID NO: 16);

IRDIGRAIRDVGQSIRDLAKGIRDISKG(SEQ ID NO: 17); 또는

VKDVARGIRDIGNSIKDLARGIRDIGRG(SEQ ID NO: 18).

본원에 기재된 펩타이드는 하나 이상의 치환, 삽입, 및/또는 결실을 포함하고 상기 기재된 hwxhxyz(SEQ ID NO: 19)의 패턴을 유지하도록 변형될 수 있다. 헵타드 반복부 또는 펩타이드 내의 각각의 위치에서의 변형은 펩타이드의 양친매성 알파-나선 구조, 안정성, 및 올리고머화 상태를 유지시켜야 한다.

구현예에서, 본원에 기재된 펩타이드는 (SEQ ID NO: 1)n, (SEQ ID NO: 2)n, (SEQ ID NO: 3)n, (SEQ ID NO: 4)n, (SEQ ID NO: 5)n, (SEQ ID NO: 6)n, (SEQ ID NO: 7)n, (SEQ ID NO: 8)n, (SEQ ID NO: 9)n, (SEQ ID NO: 10)n, (SEQ ID NO: 11)n과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드를 포함하며, 여기서, n은 2 내지 11의 정수이다. 구현예에서, 본원에 기재된 펩타이드는 SEQ ID NO: 12, 13, 14, 15, 16, 또는 17과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드를 포함한다. 서열 동일성은 정렬된 2개 서열들의 대응도(degree of correspondence)를 지칭하며, 이러한 대응도는 종종 백분율로 표현된다. 2개 서열들 사이의 차이는 동일성을 결정하기 위해 당업계에서 일상적으로 실시되는 방법에 의해 결정될 수 있으며, 상기 방법은 시험되는 서열들 사이에서 가장 큰 일치를 제공하도록 설계된다. 서열 동일성을 결정하는 방법은 공개적으로 입수 가능한 컴퓨터 프로그램을 사용함으로써 결정될 수 있다. 2개 서열들 사이의 동일성을 결정하기 위한 컴퓨터 프로그램 방법은 예를 들어, BLASTP, BLASTN, 및 FASTA를 포함한다. 프로그램의 BLAST 계통은 NCBI 및 다른 출처들로부터 공개적으로 입수 가능하다.

구현예에서, 잔기는 생체내에서 펩타이드의 안정성을 증가시키기 위해 본원에 기재된 펩타이드의 N-말단 또는 C-말단에 첨가될 수 있다. 예를 들어, V(발린), M(메티오닌), G(글리신), I(이소류신), D(아스파르트산), 또는 P(프롤린)는 펩타이드의 N-말단 또는 C-말단에 첨가될 수 있다. 더욱이, 보호기는 펩타이드의 안정성을 증가시키기 위해 잔기에 첨가될 수 있다. 이러한 보호기의 예는 아세틸, 아크릴, 9-플루오레닐메톡시카르보닐, tert-부틸옥시카르보닐, 알릴옥시카르보닐, 벤질옥시카르보닐, 및 PEG(폴리에틸렌글리콜)를 포함한다.

본원에 기재된 펩타이드(변형된 펩타이드를 포함함)는 수동 기법에 의해 또는 자동화된 절차에 의해 화학적으로 합성될 수 있다. 일례로, 고체상 폴리펩타이드 합성(SPPS)은 1960년대 초반부터 수행되어 왔다. 수년에 걸쳐, 초기 SPPS의 향상이 이루어졌으며, 많은 방법들이 자동화되었다. 화학자들은 말단 단부(terminal end) 및 다른 반응성 기를 보호하기 위해 개발하고 있다.

본원에 기재된 펩타이드는 또한, 이종 발현 시스템에서 생물학적으로 또는 재조합적으로 생성될 수 있다. 임의의 이종 발현 시스템은 본원에 기재된 펩타이드를 생성하는 데 사용될 수 있다. 구현예에서, 발현 시스템은 본원에 기재된 펩타이드를 생성하는 데 적합한 숙주로 만드는 번역-후 변형을 위한 머시너리가 결여된 이. 콜라이를 포함한다.

본원에 기재된 펩타이드는 단량체성 합텐 담체(hC)일 수 있으나, 펩타이드가 자가-조립형 펩타이드이기 때문에, 상기 펩타이드는 이량체, 삼량체, 사량체, 오량체, 육량체, 칠량체, 팔량체, 구량체 또는 십량체로 이루어진 올리고머인 hC로 자가-조립될 수 있다. 구현예에서, 펩타이드는 6개의 양친매성 알파-나선을 갖는 육량체로 자가-조립된다.

구현예에서, 본 개시내용은 합텐을 접합시기키 위해 하나 이상의 잔기를 포함하는 육량체성 합텐 담체(HhC)인 자가-조립형 육량체를 기재한다. 합텐을 접합시키기 위한 HhC 상의 최적 부위는 헵타드 반복부 내의 y 잔기이지만, 합텐 커플링은 또한, w, x 및 z 잔기가 용매 접근성이기 때문에 이들 잔기에서 발생할 수 있을 것이고, 상기 합텐은 합텐의 에피토프에 커플링할 수 있는 임의의 잔기를 사용하여 커플링될 수 있다. 구현예에서, y 잔기는 K, H, C, D, E, R, W, Y, Q, N, 또는 공유 커플링될 수 있는 반응성 기를 함유하는 비-천연 아미노산이다. 구현예에서, 커플링 부위를 제공하기 위해 6개의 양친매성 알파-나선 각각의 한쪽 면 상에 2개 내지 4개의 y 잔기들이 존재한다. 구현예에서, y 잔기는 라이신(K)이다.

hC는 y 잔기를 사용하여 하나 이상의 합텐에 접합될 수 있다. 합텐에 접합된 hC는 펩타이드 접합체이고, 합텐-hC 접합체 또는 합텐-올리고머 접합체로서 지칭된다. 구현예에서, hC는 1개 내지 100개, 10개 내지 90개, 20개 내지 80개, 30개 내지 70개, 40개 내지 60개, 또는 50개의 합텐에 연결된다. 합텐은 동일하거나 상이할 수 있다.

용어 "합텐"은 그 자체는 양호한 면역원이 아니지만 더 큰 분자에 부착될 때 면역원성으로 되는 분자를 지칭한다. 합텐은 예를 들어, 유기 저분자, 단당류, 이당류, 올리고당류, 지질, 핵산, 펩타이드 또는 폴리펩타이드일 수 있다. 합텐이 항체에 결합하게 될 수 있더라도, 합텐에 의한 면역화는 통상적으로 강한 항체 반응을 촉발하지 않는다. 그러나, 합텐이 연결 또는 접합에 의해 더 큰 담체 분자에 공유 부착될 때, 예컨대 5,000 달톤 초과의 합텐-담체 접합체일 때 면역원성이 달성될 수 있다. 본원에 기재된 합텐 담체(hC)는 이러한 합텐-담체 접합체의 예이다.

hC에 접합될 수 있는 합텐은 대상체에서 약물 중독을 포함한 질환 또는 장애의 증상을 치료하거나, 예방하거나, 증상을 완화시키거나, 이의 발병 위험을 감소시키는 데 유용한 항체의 생성을 유도할 수 있는 임의의 제제를 포함한다. 합텐의 예는 펩타이드, 지질, 지질펩타이드, 지질단백질, 탄수화물, 및 저분자를 포함한다. 합텐으로서 사용될 수 있는 펩타이드의 예는 T-세포 에피토프 및 B-세포 에피토프를 포함한다. 펩타이드, T-세포 에피토프, 및 B-세포 에피토프는 천연 또는 비-천연 D-아미노산 또는 L-아미노산을 포함하는 합성적으로 또는 재조합적으로 생성되는 또는 네이티브 펩타이드 또는 단백질을 포함한다. 합텐으로서 사용될 수 있는 지질은 TLR 및 MHC I 또는 II 수용체들에 결합함으로써 내재(innate) 및/또는 적응(adaptive) 면역 반응을 유도하는 것들을 포함한다. 지질은 또한 B-세포 에피토프로서 역할을 할 수 있다. 합텐으로서 역할을 할 수 있는 탄수화물은 글루코스, 이당류, 삼당류, 및 복합체 탄수화물을 포함하여 더 큰 당류를 포함한다.

합텐은 클릭(click) 화학 또는 동종이작용성 또는 이종이작용성 가교 시약 또는 펩타이드 결합 형성을 포함한 임의의 기지의 방법을 사용하여 hC에 커플링될 수 있다. 구현예에서, 합텐은 분자들을 접합하는 데 일상적으로 사용되는 EDC(1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필)카르보디이미드 하이드로클로라이드)/NHS(N-하이드록시숙신이미드) 또는 NHS/말레이미드 가교 화학을 사용하여 hC에 접합될 수 있다. y 잔기, 예를 들어 라이신은 잘 정의된(defined) 합텐 배치 및 커플링 화학양론을 제공하기 위해 위치된다.

합텐은 또한, 임의의 적합한 링커 모이어티를 통해 hC에 커플링될 수 있다. 링커의 예는 아미드 연결기, 에스테르 연결기, 및 디설파이드 연결기를 형성하는 것들을 포함한다. 링커는 절단성 링커, 예컨대 프로테아제 절단성 펩타이드 링커, 뉴클레아제 민감성 핵산 링커, 리파제 민감성 지질 링커, 글리코시다제 민감성 탄수화물 링커, pH 민감성 링커, 저산소증 민감성 링커, 광-절단성 링커, 이열성(heat-labile) 링커, 또는 효소 절단성 링커일 수 있다. 링커는 또한, 비-절단성 링커일 수 있다. 임의의 기지의 방법, 예를 들어, 클릭 화학, 수동 흡착, 다가 킬레이트화(multivalent chelation), 고친화도 비-공유 결합, 또는 공유 결합 형성은 링커를 hC와 회합시키는 데 사용될 수 있다. 합텐은 또한, 링커 없이 hC에 부착될 수 있다.

추가로, 합텐은 또 다른 분자를 통해 hC에 접합될 수 있다. 예를 들어, 합텐, 예컨대 B-세포 에피토프 또는 T-세포 에피토프는 우선, 관심 에피토프를 제시하기 위해 담체에 커플링되고, 그 후에 hC에 접합될 수 있다. 이러한 담체의 예는 단백질, 펩타이드, 나노입자, 바이러스-유사 입자, 또는 관심 에피토프를 제시하기 위해 담체로서 작용할 수 있는 임의의 것을 포함한다.

더욱이, 본 개시내용은 hC의 코어 내의 하나 이상의 나선의 N-말단 및/또는 C-말단에 연결된 하나 이상의 T-세포 에피토프를 선택적으로 포함하는 hC를 기재한다. 구현예에서, 하나 이상의 T-세포 에피토프는 hC의 코어 내의 각각의 나선의 N-말단 및/또는 C-말단에 연결된다. N-말단 및/또는 C-말단에서의 T-세포 에피토프는 T-세포를 동원하여(recruit), 합텐 접합된 육량체로부터 강력한 면역 반응을 제공하는 것을 돕는다. T-세포 에피토프 펩타이드를 선택하는 방법은 잘 알려져 있다. 예를 들어, T-세포 에피토프는 당업계에 알려져 있으며, 과학적 문헌으로부터 식별되며, 생물정보학 툴을 사용하여 예측되고, 드노보(de novo)에서 설계되는 실험 방법, 또는 이들 방법의 조합에 의해 선택될 수 있다. 구현예에서, N-말단 및 C-말단에서의 T-세포 에피토프는 동일하거나 상이할 수 있다. 구현예에서, T-세포 에피토프는 예를 들어, CD4+ T-세포 에피토프이며, 고친화도 항체를 생성하는 기억 B 세포 및 혈장 세포의 발달을 증강시키는 것으로 알려져 있다.

T-세포 에피토프는 고체상 합성 대신에 네이티브 화학적 리게이션(NCL)을 사용하여 N-말단 및/또는 C-말단에 커플링될 수 있다. T-세포 에피토프는 동종이작용성 또는 이종이작용성 가교제를 사용하거나 클릭 화학 시약을 사용하여 N-말단 및/또는 C-말단에 커플링될 수 있으며, 이들은 분자들을 커플링시키는 것으로 잘 알려져 있는 시약이다.

N-말단 또는 C-말단에서 T-세포 에피토프는 중간 작용성 시약, 예컨대 반응성 저분자 또는 대분자(large molecule)를 통해 hC에 연결되거나 접합될 수 있다. 이러한 저분자의 예는 촉매, 안정한 중간체, 또는 염을 포함한다. 이러한 대분자의 예는 다중 항원성 펩타이드, 단백질 또는 효소를 포함한다.

나아가, hC의 말단에서의 T-세포 에피토프의 접합 또는 hC의 코어에의 합텐 또는 다른 분자의 접합은 임의의 종류의 링커를 사용하여 수행될 수 있다. 상기 링커는 절단성 또는 비절단성일 수 있다. 절단성 링커는 프로테아제 절단성 펩타이드 링커, 뉴클레아제 민감성 핵산 링커, 리파제 민감성 지질 링커, 글리코시다제 민감성 탄수화물 링커, pH 민감성 링커, 효소 절단성 링커, 이열성 링커, 광-절단성 링커를 포함한다. 가교제는 또한, 중간 또는 최종 분자와의 공유 반응을 위해 측쇄 원자 또는 말단 원자의 활성화에 의해 사용되어 공유 결합을 형성할 수 있다.

합텐 이외의 제제는 생체내에서의 전달을 위해 hC에 접합될 수 있다. 용어 "제제"는 분자, 예컨대 핵산, 펩타이드, 및 치료제를 포함한다. 예를 들어, 핵산 또는 핵산의 유도체 또한, 세포 또는 세포 소기관의 내부로의 전달을 위해 공유 결합을 통해 hC에 접합될 수 있다. T-세포 에피토프는 예를 들어, 생체내에서 절단될 수 있는 절단성 스페이서 또는 링커와 접합될 수 있다. T-세포 에피토프는 일단 절단되면, 주 조직적합성 복합체(MHC)에의 결합을 통해 제시되어 T-세포 면역 반응을 촉발할 수 있다. 치료제의 예는 암 치료를 위한 저분자, 예컨대 파클리탁셀 및 독소루비신을 포함한다.

본원에 기재된 하나 이상의 제제는 합텐을 hC에 연결하기 위해 본원에 알려져 있고 기재된 임의의 방법을 사용하여 y 잔기를 통해 hC의 하나 이상의 N-말단 및/또는 C-말단에서 또는 코어에서 hC에 접합되거나 연결될 수 있다. 생성된 제제-hC 접합체는 T-세포 에피토프를 포함하지 않는다. 일례로, 치료제는 특이적인 부위로의 전달을 위해 절단성 또는 비절단성 가교제를 통해 hC에 연결되거나 접합될 수 있다.

구현예에서, 치료제를 포함하는 제제-hC 접합체는 특이적인 부위를 표적화하기 위한 하나 이상의 표적화제(T-세포 에피토프를 대체함)를 추가로 포함할 수 있다. 특이적인 부위는 세포외 또는 세포내 부위, 예컨대 준세포(subcellular) 소기관일 수 있다. 준세포 소기관의 예는 미토콘드리아, 퍼옥시좀, 핵, 세포기질, ER, 또는 골지체를 포함한다.

구현예에서, 표적화제는 세포 침투성 펩타이드(CPP)이다. CPP의 예는 TAT(HIV 단백질로부터 유래됨), 페네트라틴(Penetratin)(pAntp(4358)), Rn, 및 pVEC를 포함한다. 이들은 양이온성 CPP이다. CPP의 다른 예는 키메라 펩타이드인 양친매성 CPP를 포함한다. 이들 키메라 펩타이드는 소수성 도메인 및 핵 위치화 신호(NLS)를 포함한다. 이러한 키메라 펩타이드의 예는 MPG 및 Pep-1을 포함한다.

본 개시내용은 본원에 기재된 hC 및 하나 이상의 부형제를 포함하는 조성물을 기재한다. 구현예에서, hC는 하나 이상의 합텐(합텐-hC 접합체) 또는 제제(제제-hC 접합체)에 접합되고, 선택적으로 하나 이상의 T-세포 에피토프는 hC의 코어의 N-말단 및/또는 C-말단에서 연결(또는 이에 접합)된다. 구현예에서, 상기 조성물은 약학적 조성물이고, 상기 부형제는 약학적으로 허용 가능한 부형제이다. 구현예에서, hC는 HhC이다.

용어 "부형제"는 hC가 함께 투여되는 희석제, 아쥬반트 또는 비히클을 지칭한다. 아쥬반트의 예는 완전 및 불완전 프로인트(Freund's) 아쥬반트를 포함하고, 이는 동물, 특히 연구 동물과 함께 사용된다. 약학적으로 허용 가능한 부형제는 멸균 액체, 예컨대 물, 및 석유, 동물, 식물 또는 합성 기원의 오일, 예컨대 땅콩유, 대두유, 미네랄 오일, 참기름 등을 포함한 오일일 수 있다. 약학적 조성물이 정맥내로 투여될 때 물이 바람직한 부형제이다. 식염수 및 수성 덱스트로스 및 글리세롤 용액 또한, 특히 주사 용액을 위한 액체 부형제로서 이용될 수 있다. 적합한 약학적 부형제는 전분, 글루코스, 락토스, 수크로스, 젤라틴, 맥아, 쌀, 밀가루, 백악, 실리카 겔, 소듐 스테아레이트, 글리세롤 모노스테아레이트, 활석, 소듐 클로라이드, 탈지 분유, 글리세롤, 프로필렌, 글리콜, 물, 에탄올 등을 포함한다. 약학적으로 허용 가능한 아쥬반트는 스쿠알렌과 같이 오일과 혼합된 모노포스포릴 지질-A에 기반한 것들을 포함한다.

조성물 또는 약학적 조성물은 요망된다면, 미량의 습윤제 또는 유화제, 또는 pH 완충제를 또한 함유할 수 있다. 이들 조성물은 용액, 현탁액, 에멀젼, 정제, 알약, 캡슐, 분말, 지속-방출 제형 등의 형태를 취할 수 있다. 경구 제형은 표준 부형제, 예컨대 약학적 등급의 만니톨, 락토스, 전분, 마그네슘 스테아레이트, 소듐 사카린, 셀룰로스, 마그네슘 카르보네이트 등을 포함할 수 있다. 이러한 제형은 대상체로의 적절한 투여를 위한 형태를 제공하기 위해 적합한 양의 부형제와 함께, 치료적 유효량의 정제된 형태의 hC를 함유할 것이다. 상기 제형은 투여 방식을 맞춰야 한다.

본원에 기재된 약학적 조성물의 투여는 에어로졸 흡입, 주사, 섭취, 투입, 주입(implantation) 또는 이식에 의한 것을 포함하여 임의의 편리한 방식으로 수행될 수 있다. 본원에 기재된 조성물은 또한, 대상체에게 경구로, 국소로, 비내로, 장내로, 직장으로, 협측으로, 질내로, 설하로, 피하로, 피내로, 종양내로, 결절내로, 골수강내로, 근육내로, 정맥내로, 두개내로, 복강내로, 또는 이들의 조합에 의해 투여될 수 있다. 약학적 조성물의 투여는 이를 필요로 하는 대상체에게 치료적 및/또는 예방적 유효량의 합텐-hC 또는 제제-hC 접합체를 전달하기에 효과적인 임의의 방식으로 수행될 수 있다.

본 개시내용은 백신을 생성하는 데 유용한 펩타이드 스캐폴드를 기재한다. 본 개시내용은 또한, 백신을 제조하는 방법을 기재하며, 상기 방법은 본원에 기재된 hC의 코어에 대한 단량체성 펩타이드를 설계하고 제조하는 단계, 상기 단량체성 펩타이드를 올리고머화시키는 단계, 및 관심 합텐이 올리고머화된 hC에 접합되게 하는 단계를 포함한다. 상기 기재된 바와 같이, 단량체성 펩타이드는 제조된 단량체성 펩타이드를 동결건조된 형태로 제공하는 단계를 포함하는 SPPS에 의해 합성될 수 있다. 동결건조된 단량체성 펩타이드의 수화는 올리고머화가 발생되게 한다. 염 및 완충 역량을 포함하는 PBS는 동결건조된 단량체성 펩타이드를 수화시키는 데 사용될 수 있다. 구현예에서, 올리고머화된 hC는 HhC이다. 상기 방법은 하나 이상의 T-세포 에피토프를 hC의 코어의 하나 이상의 나선의 N-말단 또는 C-말단에 연결시키는 단계를 추가로 포함할 수 있다. 구현예에서, 단량체성 펩타이드는 이의 N-말단 및/또는 C-말단에 부착된 하나 이상의 T-세포 에피토프와 함께 합성된다.

나아가, 본원에 기재된 방법은 합텐의 면역원성을 증가시키는 단계를 포함한다. 상기 방법은 관심 합텐을 본원에 기재된 hC에 접합시키는 단계를 포함한다. 상기 방법은 하나 이상의 T-세포 에피토프를 hC의 코어의 하나 이상의 나선의 N-말단 또는 C-말단에 연결시키는 단계를 추가로 포함할 수 있다. 합텐의 면역원성의 증가는 합텐 자체의 면역원성, 예를 들어, 부형제에 연결되지 않거나 이와 회합되지 않은 합텐의 면역원성과 비교된다.

구현예에서, 본 개시내용은 상기 기재된 바와 같은 합텐-hC 접합체를 포함하는 면역원성 조성물을 기재한다. 합텐-hC 접합체는 하나 이상의 T-세포 에피토프를 선택적으로 포함한다. 면역원성 조성물은 하나 이상의 약학적으로 허용 가능한 부형제를 포함한다. 상기 부형제는 합텐-hC 접합체에 대한 면역 반응을 치료적으로 효과적인 방식으로 향상시키거나 증강시키는 데 사용되는 아쥬반트일 수 있다. 면역원성 조성물은 이를 필요로 하는 대상체에게 유효량의 약학적 조성물을 전달하기 위해 본원에 기재된 임의의 경로에 의해 이를 필요로 하는 대상체에게 투여될 수 있다.

본원에 기재된 약학적 및 면역원성 조성물을 대상체에게 투여하기 위한 투약량은 치료될 병태의 정확한 성질 및 치료의 수혜자에 따라 달라질 것이다. 인간 투여를 위한 투약량의 양조절(scaling)은 당업계에서 허용된 관행에 따라 의사에 의해 다양한 인자들에 따라 수행될 수 있다.

본원에 기재된 약학적 또는 면역원성 조성물은 제형일 수 있다. 구현예에서, 약학적 또는 면역원성 조성물은 즉시 방출을 위해 또는 지속 방출 또는 느린 방출을 위해 제형화될 수 있다. 이러한 제형은 잘 알려진 기술을 사용하여 제조될 수 있다. 지속 방출 제형은 부형제 매트릭스 내에 분산되고/거나 속도 제어 막에 의해 둘러싸인 저장소(reservoir) 내에 함유된 합텐-hC 또는 제제-hC 접합체를 함유할 수 있다. 이러한 제형 내에서 사용하기 위한 부형제는 생체적합성 및/또는 생체분해성이다. 상기 제형은 상대적으로 일정한 수준의 활성 구성요소 방출을 제공한다. 지속 방출 제형 내에 함유된 합텐-hC 또는 제제-hC 접합체의 양은 주입 부위, 방출 속도 및 예상된 기간, 및 치료되거나 예방되어야 할 병태의 성질에 좌우된다.

본 개시내용은 또한, 본원에 기재된 합텐-hC 또는 제제-hC 접합체의 단위 용량과 함께 키트를 기재한다. 이러한 키트는 단위 용량을 함유하는 용기, 관심 질환 또는 장애를 치료하거나 예방하기 위해 상기 키트를 사용하는 설명서와 함께 정보 패키지 삽입물, 및 선택적으로 조성물의 전달을 위한 기기 또는 장치를 포함할 수 있다.

본원에 기재된 방법은 대상체, 예컨대 인간, 수의학적 동물(개, 고양이, 파충류, 조류 등), 가축(말, 소, 염소, 돼지, 닭 등), 및 연구 동물(원숭이, 래트, 마우스, 어류 등)을 포함한다. 치료를 필요로 하는(이를 필요로 하는) 대상체는, 질환 또는 장애의 대상체를 치료하기에 충분하거나 치료적으로 효과적인, 대상체에서 면역 반응을 유도할 백신 또는 면역원성 조성물로 치료될 필요가 있는 질환 또는 장애를 갖는 대상체이다. 용어 "질환" 또는 "장애"는 또한, 남용 약물, 예컨대 니코틴, 헤로인, 코카인, 메타암페타민 등을 포함한다.

본원에 기재된 방법은 또한, 이를 필요로 하는 대상체의 예방적 치료를 포함한다. 본원에 기재된 방법은 질환 또는 장애로부터 대상체를 보호하기에 충분하거나 치료적으로 효과적인, 대상체에서 면역 반응을 유도함으로써 질환 또는 장애로부터 대상체를 보호한다.

상기 치료는 유효량의 합텐-hC 또는 제제-hC 접합체 또는 유효량의 합텐-hC 또는 제제-hC 접합체를 포함하는 조성물을 투여하는 단계를 포함한다. "유효량"은, 생체내에서 또는 시험관내에서 요망되는 생리학적 변화를 초래하는 데 필요한 활성 제제, 예를 들어 본원에 기재된 합텐-hC 또는 제제-hC 또는 조성물의 양이다. 치료적 유효량은 유효량을 제공하는 것들을 포함한다.

유효한 백신은 면역화 후 내재 면역 반응과 적응 면역 반응 둘 다를 유도할 수 있는 구성요소를 함유한다. 내재 면역력이 아쥬반트를 사용하여 유도되는 반면, 구현예에서, 본원에 기재된 hC는 도 1에 도시된 바와 같이 적응 B-세포 및 T-세포 에피토프들을 함유하는 HhC이다. 에피토프 접합 후, 육량체-에피토프 접합체는 B-세포 에피토프에 대한 더욱 초점화되고 강력한 면역 반응을 위해 최소의 외재 서열을 함유한다. 구현예에서, CD4+ T-세포 활성화를 위해, HhC의 코어 및/또는 6개 나선 각각의 N-말단 및 C-말단은 T-세포 헬프를 동원하며, 장기-수명 혈장 세포 및 고역가/고친화도 항체를 생성하고, 강력한 면역 기억 반응을 지향시키는(directing) 데 필요한 종-특이적 CD4+ T-세포 에피토프를 함유한다. 이들 에피토프는 HhC의 말단에 배치되어, 이들은 합텐 커플링을 간섭하지 않는다. 이들 에피토프는 라이신 및 시스테인 잔기가 결여되어 있어서, 이들이 B-세포 에피토프 커플링 과정 동안 합텐화되지 않거나 비제어 가능하게 가교되지 않도록 선택된다. T-세포 에피토프에서 라이신 합텐화는 이의 활성 및 기능을 크게 감소시키는 것으로 제시되었다. 많은 상이한 종들로부터의 T-세포 에피토프는 IEDB 데이터베이스로부터 획득될 수 있고, MHC 리간드 결합 검정법을 포함한 양성 T-세포 및 B-세포 검정법, T-세포 헬프를 동원시키는 능력, 및 B-세포 증식의 유도에 기반하여 선택된다. 본원에 기재된 백신 기술의 모듈형 성질은 종들 사이에서 백신 작제물의 전달을 단순화시키는데, 이것은 상이한 질환 또는 병태가 표적화되는 경우 T-세포 에피토프를 대체하고 B-세포 에피토프를 변형시키는 단순한 문제가 되기 때문이다.

본원에 기재된 HhC 코어 영역의 명백한 이점은 이의 감소된 면역원성(도 2)이며, 이러한 감소된 면역원성은 비-생산적 또는 비-보호적 면역우세 에피토프의 제시를 최소화한다. 그러므로, 다수의 B-세포 에피토프의 제시와 비-생산적 면역우세 에피토프의 감소의 조합과 다수의 T-세포 에피토프의 제시는 고도로 유효한 백신을 생성한다.

짧은 펩타이드(8개 내지 10개 잔기), 중간 길이 펩타이드(10개 내지 40개 잔기), 합성적인 긴 펩타이드(SLP, 40개 내지 100개 잔기), 또는 펩타이드 또는 단백질을 포함하는 합텐, 예컨대 B-세포 에피토프는, 표적에 결합하고 기능을 저해하는 항체를 생성하는 합텐을 처음에 식별하기 위해 역 백신학(reverse vaccinology) 접근법을 사용하여 설계될 수 있다. 예를 들어, 풍부한 바이러스 외피 당단백질로의 항체의 결합은, 바이러스가 숙주 세포 표면 수용체에 결합하는 것을 간섭하여, 이로써 세포 내로의 바이러스 진입을 교란시키는 잠재력을 가진다. 유사하게는, 풍부한 병원성 박테리아 표면 단백질(예를 들어, 외막 단백질의 세포외 부분)로의 항체의 결합은 숙주 세포 표면 수용체의 기능을 저해하거나 이로의 결합을 저해하고 세포성 진입을 예방할 수 있을 것이다. 기지의 암 항원성 단백질, 또는 항원성이 증강될 필요가 있는 단백질(예컨대 면역계에 의해 "그 자체"로서 인식되는 것들)은 HhC에 공유 커플링될 수 있을 펩타이드/단백질의 또 다른 예이다. 일단 후보 펩타이드 또는 단백질이 식별되면, 이들은 인 실리코에서 분석되어 선형 에피토프를 식별한다. 형태적(conformational) 에피토프는 3-차원 구조적 분석, 상동성 모델링, 및 구조적 에피토프 예측 소프트웨어에 의해 식별된다. 많은 공개적으로 입수 가능한 웹-기반 및 서버-기반 소프트웨어 프로그램은 이들 분석을 수행하기 위해 이용 가능하고, 본 발명자들은 또한, 에피토프 식별 및 분석을 미세-조정하기 위해 몇몇 독립형 프로그램을 갖는다. 역 백신화 접근법은 저분자 합텐을 포함하는 몇몇 에피토프들에 대해 삼량체성 코일드-코일 스캐폴드를 사용하여 성공적인 것으로 보고되었다. 동일한 방법론은 고역가/고친화도 항체를 유도할 뿐만 아니라 숙주로부터 항원을 중화시키거나, 감소시키거나 없앨 수 있는 항체를 생성할 수 있는 백신을 설계하기 위해, 기능적으로 관련된 세포 표면 단백질, 세포질 단백질, 또는 감염성 병원체의 분비된 인자 상에서 연속적 및 형태적 에피토프를 식별하는 데 사용된다.

완전히 합성적인 백신 스캐폴드를 사용하는 이점은 상당히 많다. 최신의 SPPS는 70개 내지 75개 이하의 잔기 길이의 펩타이드를 일상적으로 생성한다. 본원에 기재된 HhC는 크기가 55개 내지 65개 잔기 범위일 것이고, 이때 T-세포 에피토프의 길이는, HhC의 28개 내지 30개 잔기 코어 영역보다 얼마나 훨씬 더 길 것인지 정의한다. HhC에 공유 커플링되는 펩타이드 에피토프는 크기가 다양할 것이지만, 최적으로는 10개 내지 50개 잔기 길이여서, 백신의 전체적인 합성 작제가 실현되게 한다. cGMP 설비에서 킬로그램 양의 백신 펩타이드를 생성하는 것은 비용이 많이 들며, 시간 소모적이고 자원 집약적인 산업적 생산 및 재조합 단백질의 정제를 없애고, 후속적인 바이러스 청소, 내독소 제거, 또는 감염성 병원체의 존재에 대한 시험에 대한 필요성이 없다. 통상적으로, 펩타이드 합성은 대규모 백신 제조에는 비용이 너무 많이 드는 것으로 인지된다. 그러나, 고(high) 나노그램 내지 저(low) μg 용량이 사용되는 경우, 펩타이드 백신은 재조합 서브유닛 백신보다 몇 배 더 비용 효과적일 수 있다.

하나 이상의 CPP를 포함하는 제제-hC 접합체는 제제를 표적 부위로 수송하고 전달할 수 있다. 본 개시내용은 또한, 표적 부위로 전달될 제제를 제조하는 방법 및 제제를 표적 부위로 전달하는 방법을 기재한다. 표적 부위로 전달될 제제를 제조하는 방법은, 제제를 표적 부위로 전달할 전달 비히클을 제조하는 단계로서, 이 단계는 본원에 기재된 펩타이드를 제조하는 단계를 포함하는 단계, 상기 펩타이드를 올리고머로 자가-조립되게 하는 단계, 및 제제를 상기 올리고머에 접합시키는 단계를 포함한다. 상기 방법은 올리고머로 자가-조립 전에 CPP를 펩타이드에 접합시키는 단계, 또는 CPP를 올리고머에 접합시키는 단계를 추가로 포함한다. 제제를 표적 부위로 전달하는 방법은 제제-hC 접합체를 생체내에서는 이를 필요로 하는 대상체 내의 표적 부위로 그리고 시험관내에서는 배양물 내의 세포로 전달하는 단계를 포함한다.

용어 "잔기" 및 "아미노산 잔기"는 개시내용 전반에 걸쳐 상호 교환적으로 사용되어 "아미노산"을 지칭한다.

당업자가 이해하게 될 바와 같이, 본원에 개시된 각각의 구현예는 이의 특정하게 언급된 요소, 단계, 성분 또는 구성요소를 포함하거나, 이로 본질적으로 구성되거나, 이로 구성될 수 있다. 그러므로, 용어 "포함하다(include)" 또는 "포함하는(including)"은, "포함하다(comprise), 구성되다, 또는 본질적으로 구성된다"를 언급하는 것으로 해석되어야 한다. 과도기 용어(transitional term) "포함하다" 또는 "포함한다"는, 심지어 주요량이라도 명시되지 않은 요소, 단계, 성분 또는 구성요소를 포함하지만, 이로 제한되지 않고, 이의 포함을 가능하게 함을 의미한다. 과도기 용어 "구성되는"은 명시되지 않은 임의의 요소, 단계, 성분 또는 구성요소를 배제한다. 과도기 어구 "본질적으로 구성되는"은 구현예의 범위를 명시된 요소, 단계, 성분 또는 구성요소로, 그리고 구현예에 물질적으로 영향을 주지 않는 것들로 제한한다. 구현예에서, 물질 효과의 결여는 시험관내에서 또는 생체내에서 기능을 수행하는 구현예의 능력에 있어서 통계적으로-유의한 감소의 결여에 의해 입증된다.

게다가, 다르게 지시되지 않는 한, 명세서 및 청구항에서 사용되는 성분, 구성 성분, 반응 조건 등의 양을 표현하는 숫자는 용어 "약"에 의해 수식되는 것으로 이해되어야 한다. 이에, 대조적으로 지시되지 않는 한, 명세서 및 첨부된 청구항에 제시된 수치 매개변수는, 본원에 제시된 주제에 의해 수득되고자 하는 요망되는 특성에 따라 달라질 수 있는 근사치이다. 최소한으로, 그리고 청구항의 범위의 등가물의 원칙의 적용을 제한하려는 시도가 아니면서, 각각의 수치 매개변수는 보고된 유효 숫자의 측면에서 그리고 일반적인 반올림 기법을 적용함으로써 적어도 간주되어야 한다. 본원에 제시된 주제의 광범위한 범위를 설정하는 수치 범위 및 매개변수가 근사치임에도 불구하고, 구체적인 예에 제시된 수치값은 가능한 한 정밀하게 보고된다. 그러나, 임의의 수치값은 본질적으로 이들 각각의 시험 측정에서 발견되는 표준 편차로 인해 소정의 오차를 본질적으로 함유한다.

추가의 명료성이 필요할 때, 용어 "약"은, 언급된 수치값 또는 범위와 함께 사용될 때 당업자에 의해 이에 합리적으로 기인되는 의미를 가지며, 즉, 언급된 값 또는 범위보다 다소 많거나 또는 다소 적은 값, 언급된 값의 ±20%; 언급된 값의 ±15%; 언급된 값의 ±10%; 언급된 값의 ±5%; 언급된 값의 ±4%; 언급된 값의 ±3%; 언급된 값의 ±2%; 언급된 값의 ±1%; 또는 언급된 값의 1% 내지 20% 사이의 임의의 백분율을 의미한다.

본 발명을 설명하는 문맥에서(특히 하기 청구항의 문맥에서) 사용되는 용어 단수형("a", "an", "the") 및 유사한 지시물은 본원에서 다르게 지시되거나 문맥상 명확하게 상충되지 않는 한, 단수형과 복수형 둘 다 망라하는 것으로 간주되어야 한다.

본원에서 값의 범위에 대한 언급은 단지, 상기 범위에 속하는 모든 개별 값을 개별적으로 지칭하는 속기법으로서 역할을 하고자 한다. 본원에서 다르게 지시되지 않는 한, 각각의 개별값은 이것이 본원에서 개별적으로 언급된 것처럼 명세서에 포함된다. 범위 형식의 설명은 단순히 편의성과 단순성을 위한 것이고 개시내용의 범위에 융통성이 없는 제한으로서 간주되어서는 안됨을 이해해야 한다. 이에, 범위의 설명은 해당 범위 내의 모든 가능한 서브범위뿐만 아니라 개별 수치값을 구체적으로 개시한 것으로 간주되어야 한다. 예를 들어, 범위, 예컨대 1 내지 6의 설명은 구체적으로 개시된 서브범위, 예컨대 1 내지 3, 1 내지 4, 1 내지 5, 2 내지 4, 2 내지 6, 3 내지 6 등, 뿐만 아니라 해당 범위 내의 개별 수치, 예를 들어, 1, 2, 2.7, 3, 4, 5, 5.3, 및 6을 갖는 것으로 고려되어야 한다. 이는 범위의 폭과 상관없이 적용된다.

본원에 기재된 모든 방법들은 본원에서 다르게 지시되거나 문맥상 명확하게 상충되지 않는 한 임의의 적합한 순서로 수행될 수 있다.

본원에 제공된 임의의 그리고 모든 예, 또는 예시적인 언어(예를 들어, "예컨대")의 사용은 본 발명을 더 양호하게 예시하고자 할 뿐이고 본 발명의 범위에 청구된 것과 다르게 제한을 두는 것은 아니다. 명세서 내의 어떠한 언어도 본 발명의 실시에 필수적인 임의의 비-청구 요소를 지시하는 것으로 간주되어서는 안된다.

본원에 개시된 본 발명의 대안적인 요소 또는 구현예의 그룹핑은 제한으로서 간주되어서는 안된다. 각각의 그룹 구성원은 개별적으로 또는 본원에서 발견되는 그룹의 다른 구성원 또는 다른 요소와 임의의 조합되어 지칭되고 청구될 수 있다. 그룹의 하나 이상의 구성원은 편의성 및/또는 특허성의 이유에서 그룹으로 포함되거나 그룹으로 결실될 수 있는 것으로 예상된다. 임의의 이러한 포함 또는 결실이 발생할 때, 명세서는 변형 그룹을 함유하는 것으로 여겨져서, 첨부된 청구항에 사용된 모든 마쿠시 그룹들의 기재된 설명을 충족시킨다.

하기 실시예는 본원에 제공된 예시적인 방법을 예시한다. 이들 실시예는 개시내용의 범위를 제한하는 것으로 의도되지 않고, 이들이 제한하는 것으로 간주되어서도 안된다. 상기 방법은 본원에서 특정하게 기재된 것과 다르게 실시될 수 있음이 명확할 것이다. 많은 변형들 및 변화들은 본원의 교시의 측면에서 가능하고, 따라서, 개시내용의 범위 내에 포함된다.

실시예

실시예 1. 자가-조립형 합텐 담체(hC)의 합성

HhC 코어 영역은 적어도 28개 내지 30개 잔기 길이이고 일반적인 패턴 hwxhxyz(SEQ ID NO: 19)를 갖는 2개 내지 10개 헵타드 반복부를 함유하며, 상기 패턴에서, h는 소수성 또는 비-극성 잔기(예를 들어, I, L, V, F, W, Y, G, A, 또는 M)이며; w는 양으로 하전된, 음으로 하전된, 극성 비하전된, 또는 비-극성 지방족 잔기(예를 들어, G, R, A, N, Q, H, S, D, K, T, 또는 E)이며; x는 음으로 하전된, 양으로 하전된, 비-극성 지방족, 또는 극성 비하전된 잔기(예를 들어, R, S, N, Q, A, G, T, D, E, K, H, 또는 C)이며; y는 에피토프 커플링이 발생하는 잔기(예를 들어, K, H, C, D, E, R, W, Y, Q, 또는 N)이고; z는 음으로 하전된, 양으로 하전된, 극성 비하전된, 또는 비-극성 지방족 잔기(예를 들어, A, D, H, S, E, R, N, Q, K, 또는 G)이다. w 및 z 위치들에서 염기성 및 산성 잔기들은, 염 브릿지(bridge) 또는 수소 결합 상호작용이 인접 나선들 사이에서 발생하여 복합체의 안정성을 증가시키도록 설계된다.

육량체의 올바른 조립은 겔 여과 크로마토그래피 및/또는 네이티브 PAGE를 사용하여 확인된다. 이들 분석은 고차 구조물이 형성되는 정도를 보여준다. 원편광 이색성은 육량체 코어 영역이 알파-나선을 포함함을 확인하는 데 사용된다. 상이한 온도 및 카오트로프(chaotrope) 농도에서 육량체의 알파 나선 성질은, 안정성을 정의하기 위해 그리고 라이신이 접합 반응을 위해 용매 노출됨을 보장하기 위해 결정된다.

육량체의 CD 스펙트럼은 단량체성 펩타이드의 폴딩/언폴딩 평형뿐만 아니라 육량체의 안정성을 온도 및 변성 시약의 기능으로 정의하기 위해 22℃ 내지 95℃의 온도에서 그리고 0 M 내지 6 M의 구아니딘 HCl 농도에서 획득되며, 상기 온도와 변성 시약은 둘 다 펩타이드-기반 백신의 안정성을 특징화하는 데 있어서 중요한 인자이다.

단량체의 수화 후 육량체가 형성되는지 확인하며, 에피토프 커플링된 육량체의 용해도를 명시하며, 에피토프 커플링의 최대 밀도를 결정하고, 에피토프의 커플링 후 육량체성 구조가 유지되는지 확인하기 위해 실험을 수행하였다. 대표적인 펩타이드, SEQ ID NO: 15를 이전에 기재된 프로토콜을 사용하여 합성하였다. 메티오닌 및 아스파르트산 잔기들을 N-말단 상에 배치시키고, 메티오닌 잔기를 아세틸화에 의해 보호하여 아세틸-MD-(SEQ ID NO: 15)를 형성하였다. SPPS 후, 저장을 위해 펩타이드를 동결건조시켰다. 자가-조립을 보여주기 위해, 펩타이드를 1X PBS 완충액에 용해시키며, 실온에서 5분 동안 인큐베이션하고, Life Technologies로부터 구매한 시스템을 사용하여 Blue NativePAGE Novex Bis-Tris 겔 상으로 로딩하였다. 시료를 준비하고, 제조업체의 프로토콜을 사용하여 전기영동하였다. 도 4는 이 실험의 결과를 도시한다. 비-조립된 펩타이드의 크기는 3.443 kDa이어서, 육량체의 예상 크기는 20.7 kDa이다. 이 실험은 육량체의 자가-조립을 명확하게 보여주고, 어떠한 검출 가능한 고차의 구조물 또는 응집물을 보여주지 않는다. 그러므로, 본 발명자들은 기능을 확인하기 위한 본 발명자들의 인 실리코 설계 프로토콜, 뒤이어 실험적 분석의 유용성을 보여주었다.

B-세포 에피토프 서열의 식별을 돕기 위해, 전장 항원성 단백질의 아미노산 서열은 상동성 모델링 및 형태적 B-세포 에피토프 식별에 사용된다. 상동성 모델을 수득하는 것은 더욱 강력한 항원성 펩타이드 서열을 통상적으로 생성하는 형태적 B-세포 에피토프의 검색을 가능하게 한다. IEDB 웹사이트(https://www.iedb.org)의 서버는 연속적 에피토프 예측과 형태적 에피토프 예측 둘 다에 사용된다. 현재, 에피토프에 대한 단백질의 3D 구조를 분석할 수 있는 웹 서버는 단지 소수 존재한다. IEDB 사이트 상의 ElliPro 및 Discotope는 초기 스크리닝으로서 사용된다. 단백질 표면 상의 정전기적 탈용매화 전위(electrostatic desolvation potential)에 기반하여 에피토프를 예측하는 PTools라고 하는 제3의 독립형 프로그램은 후속적으로 형태화에 사용된다. 이들 소프트웨어 프로그램은 삼량체성 코일드-코일 합텐 담체 상에서 에피토프를 예측하는 데 있어서 특히 정확한 것으로 입증되었다. 일단 가장 항원성인 영역이 단백질 상에서 식별되면, 펩타이드 서열은 식별되고 용해도에 대해 분석된다. 20개 잔기 이상의 펩타이드 서열이 식별 가능한 3차 구조를 형성하는 경향이 있기 때문에, 적어도 10개 잔기 길이이지만 40개 미만인 에피토프가 선택된다. 더 긴 펩타이드는 네이티브 폴딩을 유도하고, 구조적 에피토프를 면역계에 제시하는 가장 큰 잠재력을 가진다. 펩타이드는 합성되고 N-말단 상에서 보호되며(예를 들어, 아세틸화됨), 공유 커플링을 받는 C-말단 잔기, 예컨대 시스테인 잔기를 갖는다. 육량체성 합텐 담체 상의 라이신 잔기는 이종이작용성 가교제 Sulfo-SIAB(설포숙신이미딜(4-요오도아세틸)아미노벤조에이트), 뒤이어 C-말단 시스테인 잔기를 함유하는 펩타이드의 첨가에 의해 유도체화된다. 시스테인 설피드릴은 트리스(2-카르복시에틸)포스핀을 반응에 첨가함으로써 환원된다. 설피드릴 반응성 기(요오도아세틸)로 라이신을 유도체화하는 별개의 이점은, 육량체들이 서로 가교되는 것을 방지한다는 점이다(육량체는 시스테인 잔기를 함유하지 않음).

실시예 2. 육량체-에피토프 접합에 의한 백신의 작제

합텐 접합(도 1)을 위한 각각의 육량체성 담체 상에 24개 이하의 커플링 부위들이 존재하지만, 입체 장해로 인해, 접합은 모든 부위들 상에서 발생할 것 같지 않다. 담체를 합텐으로 포화시키는 것이 가장 강력한 면역 반응을 항상 발휘하는 것은 아니고, 커플링 밀도, 올바른 B-세포 에피토프 제시를 위한 에피토프 공간적/입체적 이용성, 및 항체 역가 사이에서 균형(trade-off)이 존재한다는 것이 이전에 제시되었다. 따라서, 선택된 각각의 에피토프에 대해, 3개의 별개의 육량체 접합 반응들이 수행되어, 상이한 에피토프 로딩 수준을 갖는 접합체가 수득된다. 예를 들어, 하나의 반응은 3 내지 5 몰 당량으로 수행되어 단지 3개 또는 4개의 펩타이드가 접합되며, 또 다른 반응은 8 내지 10 몰 당량을 함유하여 6개 내지 10개의 펩타이드와 함께 접합체를 형성하고, 제3 반응은 25 내지 50 몰 당량을 사용하여 가능한 한 많은 에피토프들과 커플링하도록 수행된다(포화 조건).

도 3은 펩타이드 접합 절차를 예시한다. 펩타이드는, N-말단 잔기가 아세틸화되어 N-말단 아민을 가교제에 의한 유도체화로부터 보호하도록 설계된다. C-말단은, 필요하다면 pI를 조절하기 위해(예를 들어 등전점을 조절하기 위해), 형광-기반 펩타이드 정량화(W)를 위해 잔기를 첨가하기 위해, 그리고 접합 특이성(C)을 위한 설피드릴기를 첨가하기 위해 잔기가 첨가되었다. 육량체성 담체의 pI는 10.1이어서, 높은 pI(예를 들어, 8.5 초과)를 갖는 펩타이드의 커플링 효율은 전하 반발로 인해 감소되는 경향이 있을 것이다. 하나 이상의 산성 잔기는, 염기성 펩타이드가 순음전하(net negative charge)를 가질 때까지 상기 염기성 펩타이드의 pI를 감소시키기 위해 그리고 육량체로 끌어당겨지기 위해 C-말단에 첨가된다. 펩타이드의 pI가 산성 또는 중성인 경우, G 또는 S 잔기가 D 잔기를 대체하고 스페이서로서 단독으로 작용한다.

트립토판 형광, 겔 여과 크로마토그래피, 네이티브 PAGE, 및 SELDI-TOF(단백질-펩타이드 접합체의 분자량을 결정하도록 이상적으로 적합화된 MALDI-유사 MS 기기)는 본 발명자들이 펩타이드 에피토프 커플링 효율을 정량화기 위해 사용하는 방법이다. 육량체성 담체에 그리고 BSA에 접합된 펩타이드의 수를 계산하는 것이 상대적으로 간단하다. KLH가 꽤 크기 때문에, 접합된 펩타이드의 정확한 수를 계산하지 않고 성공적인 접합을 확인하는 것만 가능할 수 있다.

HhC 백신 작제물의 특징화

아쥬반트: 적응 B-세포 및 T-세포 반응을 증강시키며, 보호 면역력의 정도를 조절하고, 항원-특이적 항체 반응을 최대화하기 위해, 아쥬반트를 모든 면역화에 사용한다. 최상의 아쥬반트는 수지상 세포 성숙화를 직접 자극시키고, 이를 가이드하는 가장 효율적인 방식은 TLR-매개 활성화를 통하는 것이다. 합성 TLR4 기반 아쥬반트는 가장 효과적인 것들 중 일부이며, 이들 중 적어도 2개가 시험된다. 모노포스포릴 지질 A(MPL)는 본 발명자들의 1차 아쥬반트로서 작용할 강력한 TLR4 작용제(문헌[PERSING et al. 2002]; 문헌[EVANS et al. 2003]; 문헌[SINGH AND SRIVASTAVA 2003]; 문헌[PFAAR et al. 2012]; 문헌[DEL GIUDICE et al. 2018])이다. MPL은 스쿠알렌(Sq)(문헌[CIABATTINI et al. 2018]; 문헌[SEYDOUX et al. 2018])으로 유화되어, MPL-Sq를 형성한다. 에멀젼은, 기억 및 장기-수명 항체 반응 둘 다를 유도하는 데 중요한 CD4 T-세포를 효율적으로 프라임(prime)한다. 본 발명자들은 또한, 아쥬반트 E6020 및 GLA를 시험할 것이며, 이들은 둘 다 인간에 사용하기 위해 승인된다. 모든 아쥬반트들은 수지상 세포 내로의 CD4+ 유도 항원 흡수를 돕고 에피토프 특이적 Th1 CD4+ T 세포를 유도할 것이다. 아쥬반트 기능을 평가하기 위해, CD4+ T 세포와 IgG 이소타입 클래스 스위칭 둘 다 면역화된 마우스 혈청에서 정량화된다. 아쥬반트의 또 다른 중요한 이익은, 또한 시험될 것인 항원 용량-스페어링(antigen dose-sparing)의 높은 가능성이다. 용량-스페어링은 면역화당 항원의 양을 저하시키고, 합성 펩타이드 배치로부터 수득될 수 있는 용량의 수를 증가시킬 것이며, 합성 백신 제조 비용을 감축시키는 데 있어서 중요한 결정인자이다.

각각의 육량체 에피토프 접합체에 대해, 적어도 3개 세트의 실험들을 수행한다. 마우스는 프라임-부스트 면역화(IM)를 받고, B-세포 및 T-세포 기능을 지시된 시기에 측정한다. 제1 실험에서, 백신의 3개 용량 수준들을 비교하여, 어떤 수준에서 최대 역가가 수득되는지 결정한다. 육량체를 펩타이드 에피토프와 함께 최대로 로딩하고, 면역화 전에 MPL-Sq 아쥬반트와 함께 제형화한다. 0.1 μg, 1 μg 및 10 μg의 3개 용량 수준들을 시험하고, IgG 역가에 따라 최적화한다. 이 실험 또한, 육량체 단독, 펩타이드 에피토프 단독, 및 육량체 + 펩타이드 에피토프(비접합되나 조합됨)에 대한 IgG 반응을 측정함으로써 육량체-에피토프 접합체의 특이성을 시험한다.

마우스 면역화: 동계교배한 마우스(10 마리/그룹)는 아쥬반트 육량체-펩타이드 에피토프 접합체 또는 대조군(KLH-펩타이드 에피토프)에 의한 프라임/부스트 면역화를 받는다. 제1 세트의 연구는 최적의 육량체성 펩타이드 에피토프 용량을 제공하고, 비접합된 육량체 담체 및 유리(free) 펩타이드에대한 항체 역가를 측정하여 특이성을 확인한다. 프라임 면역화와 부스트(d35) 면역화 둘 다 이후 14일차에 혈청을 수집하고, 항체 중간점 역가를 측정한다. B-세포 및 T-세포 검정법을 수행하기 위해 마우스 혈액을 사용한다.

B-세포 기능: 표준 ELISA를 사용하여, 수집된 마우스 혈청 중 항원 특이적 항체 역가를 측정함으로써 백신 효능을 측정한다. ELISA 플레이트를 펩타이드 에피토프-BSA 접합체로 코팅하고, 블라킹 완충액 중 혈청의 8개의 순차적 10-배 희석물(1:10³ 내지 1:10¹⁰)을 만들고, ELISA 플레이트 웰에 첨가한다. HRP-표지 항-마우스 2차 항체를 첨가하고, 플레이트를 비색 기질로 발색시키고 ELISA 플레이트 판독기에서 측정한다. 데이터를 플롯화하며, 곡선 피트(curve fit)시키고, 중간점 및 종점 역가를 계산하기 위해 Prism Graph Pad 소프트웨어를 사용하여 통계학적으로 분석한다.

T-세포 기능: 잘-확립된 T-세포 ELISA 검정법에 의해 T-세포 에피토프 및 아쥬반트 기능을 측정한다. 상업적으로 입수 가능한 코팅 시약 및 1차/2차 항체를 구매하고 제조업체의 프로토콜에 따라 사용한다. IFN-γ, IL-2, IL-4, 및 TNF-α를 마우스 혈청에서 T-세포 기능의 판독물로서 정량화한다. 이들 표적은 IL-5, IL-8, IL-10, IL-12p70, 및 IL-13을 포함하여 T-세포 기능의 다른 마커를 포함하도록 쉽게 확장(expand)될 수 있을 것이다. 총 IgG, IgG1, 및 IgG2a에 대해 특이적인 시약을 사용하여 ELISA에 의해 백신 유도 T-세포 의존적 이소타입 클래스 스위칭을 검정한다.

백신 안전성: 안정성의 초기 평가를 비-GLP 설정에서 수행하여, 마우스가 백신 구성요소(합성 펩타이드, 육량체 담체, 아쥬반트)에 대해 부작용을 갖지 않음을 보장한다. 더욱 정밀하고 상세한 안전성 연구를 이후에 GLP 연구에서 수행하지만, 이러한 초기 평가는 일부 중요한 판독물을 제공하여 백신 용량, 아쥬반트 용량, 및 면역화 스케쥴링을 가이드한다. 주사 부위 반응 및 염증 징후, 뿐만 아니라 마우스 행동(예를 들어, 무기력의 징후)을 관찰함으로써 잠재적인 국소 및 전신 독성을 평가한다. 독성이 관찰되는 경우, 상이한 아쥬반트 및/또는 T-세포 에피토프를 평가한다.

본 발명자들이 본 발명을 수행하기 위해 알려진 최상의 방식을 포함하여 본 발명의 소정의 구현예는 본원에 기재된다. 당연하게도, 이들 기재된 구현예에 대한 변화는 상기 설명을 읽을 때 당업자에게 분명해질 것이다. 본 발명자들은 당업자가 이러한 변화를 적절하게 이용할 것임을 예상하고, 본 발명자들은 본 발명이 본원에서 구체적으로 기재된 것과 다르게 실시되는 것을 의도한다. 이에, 본 발명은 적용 법에 의해 허용되는 한 본원에 첨부된 청구항에서 언급된 주제의 모든 변형들 및 등가물들을 포함한다. 더욱이, 이의 모든 가능한 변화들에서 상기 기재된 요소들의 임의의 조합은 본원에서 다르게 지시되거나 문맥상 명확하게 다르게 상충되지 않는 한 본 발명에 의해 포괄된다.

상기 기재된 주제는 예시로만 제공되고 제한하는 것으로 간주되어서는 안된다. 다양한 변형 및 변화들은 예시되고 기재된 실시예 구현예 및 적용을 따르지 않으면서, 그리고 하기 청구항에서 제시된 본 개시내용의 참사상 및 범위로부터 벗어나지 않으면서 본원에 기재된 주제에 이루어질 수 있다.

본 명세서에서 인용된 모든 공보, 특허 및 특허 출원들은 각각의 개별적인 공보, 특허 또는 특허 출원이 인용되어 포함되는 것으로 구체적으로 그리고 개별적으로 지시된 것과 같이 그 전체 내용이 본원에 인용되어 포함된다. 상기 내용은 다양한 구현예들의 측면에서 기재되긴 하였지만, 당업자는 다양한 변형, 치환, 생략 및 변화가 이의 사상으로부터 벗어나지 않으면서 이루어질 수 있음을 이해할 것이다.

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Claims

하나 이상의 헵타드(heptad)를 포함하는 펩타이드로서,
상기 헵타드는 하기 아미노산 서열: hwxhxyz(SEQ ID NO: 19)를 가지며;
상기 펩타이드는 하기 아미노산 서열 패턴을 갖고:
(hwxhxyz)n(SEQ ID NO: 20),
여기서,
h는 소수성 또는 비-극성 잔기이며;
w는 양으로 하전된, 음으로 하전된, 극성 비하전된, 또는 비-극성 지방족 잔기이며;
x는 음으로 하전된, 양으로 하전된, 비-극성 지방족, 또는 극성 비하전된 잔기이며;
y는 에피토프 커플링을 위한 잔기이며;
z는 음으로 하전된, 양으로 하전된, 극성 비하전된, 또는 비-극성 지방족 잔기이고;
n은 1 초과의 정수인, 펩타이드.
제1항에 있어서,
h는 I, L, V, F, W, Y, M, W, G, 또는 A이며;
w는 G, R, A, N, Q, H, S, D, E, K 또는 T이며;
x는 R, S, N, Q, A, G, T, D, E, K, H, 또는 C이며;
y는 K, H, C, D, E, R, W, Y, Q, N, 또는 공유 커플링될 수 있는 반응성 기를 함유하는 비-천연 아미노산 또는 분자이며;
z는 A, D, H, S, E, R, N, Q, K, 또는 G이고;
n은 2 내지 10인, 펩타이드.
제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 헵타드는 SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11, 또는 SEQ ID NO: 12인, 펩타이드.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 펩타이드는 SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, 또는 SEQ ID NO: 18을 포함하는, 펩타이드.
제4항에 있어서, 상기 펩타이드는 N-말단에 잔기 M 및 D를 추가로 포함하는, 펩타이드.
제1항 내지 제5항 중 어느 한 항의 펩타이드를 포함하는 올리고머로서, 상기 올리고머는 이량체, 삼량체, 사량체, 오량체, 육량체, 칠량체, 팔량체, 구량체 또는 십량체인, 올리고머.
제6항에 있어서, 상기 올리고머는 육량체인, 올리고머.
제6항 또는 제7항의 올리고머 및 하나 이상의 합텐 또는 하나 이상의 제제를 포함하는 펩타이드 접합체.
제8항에 있어서, 상기 합텐은 y 잔기를 통해 상기 올리고머에 접합되는, 펩타이드 접합체.
제8항 또는 제9항에 있어서, 상기 합텐은 펩타이드, 지질, 지질펩타이드, 핵산, 또는 탄수화물을 포함하는, 펩타이드 접합체.
제10항에 있어서, 상기 펩타이드는 T-세포 에피토프 또는 B-세포 에피토프인, 펩타이드 접합체.
제8항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 올리고머는 올리고머의 나선의 하나 이상의 N-말단 또는 C-말단에 하나 이상의 T-세포 에피토프를 추가로 포함하는, 펩타이드 접합체.
제12항에 있어서, 상기 올리고머는 올리고머의 나선의 각각의 N-말단 및 C-말단에 T-세포 에피토프를 포함하는, 펩타이드 접합체.
제8항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 합텐은 B-세포 에피토프인, 펩타이드 접합체.
제8항 또는 제9항에 있어서, 상기 제제는 생체내에서 전달되어야 하는 분자인, 펩타이드 접합체.
제15항에 있어서, 상기 제제는 핵산, 펩타이드, 치료제, 또는 T-세포 에피토프인, 펩타이드 접합체.
제1항 내지 제5항 중 어느 한 항의 펩타이드, 또는 제6항 또는 제7항의 올리고머, 또는 제8항 내지 제16항 중 어느 한 항의 펩타이드 접합체, 및 부형제를 포함하는 조성물.
제17항에 있어서, 상기 조성물은 약학적 조성물이고, 상기 부형제는 약학적으로 허용 가능한 부형제인, 조성물.
대상체를 질환으로부터 보호하는 방법으로서, 상기 방법은 이를 필요로 하는 대상체에게, 유효량의 제8항 내지 제14항 중 어느 한 항의 펩타이드 접합체 또는 제18항의 조성물을 투여하는 단계를 포함하고, 상기 합텐은 대상체를 상기 질환으로부터 보호하기 위해 면역 반응을 유도하는, 방법.
질환을 갖는 대상체를 치료하는 방법으로서, 상기 방법은 이를 필요로 하는 대상체에게, 유효량의 제8항 내지 제14항 중 어느 한 항의 펩타이드 접합체 또는 제18항의 조성물을 투여하는 단계를 포함하고, 상기 합텐은 상기 대상체를 치료하기 위해 면역 반응을 유도하는, 방법.
대상체를 질환으로부터 보호하거나 질환을 갖는 대상체를 치료하는 방법으로서, 상기 방법은 이를 필요로 하는 대상체에게, 유효량의 제15항 또는 제16항의 펩타이드 접합체 또는 제18항의 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
제19항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체는 포유류인, 방법.
백신을 제조하는 방법으로서, 상기 방법은
제1항 내지 제5항 중 어느 한 항의 펩타이드를 수득하며, 상기 펩타이드를 올리고머로 자가-조립되게 하고, 합텐을 상기 올리고머에 접합시키는 단계; 또는
제6항 또는 제7항의 올리고머를 수득하고, 합텐을 상기 올리고머에 접합시키는 단계를 포함하는, 방법.
합텐의 면역원성을 증강시키는 방법으로서, 상기 방법은
제1항 내지 제5항 중 어느 한 항의 펩타이드를 수득하며, 상기 펩타이드를 올리고머로 자가-조립되게 하고, 합텐을 상기 올리고머에 접합시키는 단계; 또는
제6항 또는 제7항의 올리고머를 수득하고, 합텐을 상기 올리고머에 접합시키는 단계를 포함하는, 방법.
제제를 표적 부위로 전달하기 위한 전달 비히클을 제조하는 방법으로서, 상기 방법은
제1항 내지 제5항 중 어느 한 항의 펩타이드를 수득하며, 상기 펩타이드를 올리고머로 자가-조립되게 하고, 제제를 상기 올리고머에 접합시키는 단계; 또는
제6항 또는 제7항의 올리고머를 수득하고, 제제를 상기 올리고머에 접합시키는 단계를 포함하는, 방법.
제25항에 있어서, 상기 전달 비히클은 전달 비히클을 특이적인 부위로 표적화하는 하나 이상의 제제를 추가로 포함하는, 방법.
제26항에 있어서, 상기 특이적인 부위는 세포내 또는 세포외 부위인, 방법.
제25항에 있어서, 상기 하나 이상의 제제는 전달 비히클을 소기관으로 표적화하는 펩타이드를 포함하는, 방법.