KR20210058880A - 섬유증, nash, 및 nafld를 치료하기 위한 방법에서 사용을 위한 트립톨리드 및 이의 전구약물 - Google Patents

섬유증, nash, 및 nafld를 치료하기 위한 방법에서 사용을 위한 트립톨리드 및 이의 전구약물 Download PDF

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아소크 케이. 살루자
비카스 두데자
쉬에타 라바니아
아니켓 니캄
술라그나 바네르지
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미네암리타 테라퓨틱스, 엘엘씨
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Abstract

본 발명은 섬유증, 비알코올성 지방 간 질환 (NAFLD) 또는 비알코올성 지방간염 (NASH)의 예방적 또는 치료적 처치를 위한 화학식 I의 화합물; 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염을 제공한다:

Description

섬유증, NASH, 및 NAFLD를 치료하기 위한 방법에서 사용을 위한 트립톨리드 및 이의 전구약물
트립톨리드는 식물 미역줄나무(Tripterygium wilfordii)로부터 수득된 자연적으로 발생하는 화합물이다. 트립톨리드는 자가면역 질환, 이식 거부 (면역억제)를 치료하는데 유용한 것으로 공지되고, 항암 및 항-번식 효과 뿐만 아니라 다른 생물학적 효과를 보유한다 (Qui 및 Kao, 2003, Drugs R.D. 4, 1-18). 트립톨리드는 이종이식 종양에 대해 강한 항종양 효과를 갖는다 (예를 들어, Yang 등. Mol. Cancer Ther, 2003, 2, 65-72). 트립톨리드는 암 성장 및 전이에 연루되는 다중 세포성 표적을 가진 항-세포자멸성 제제이다. 트립톨리드는 NF-kB 활성화를 억제시키고, 비드(bid) 분열을 유도하고, 생존성 유전자 p21 WAF1/Cip1의 유도를 차단하고 (Wang 등. Journal of Molecular Medicine, 2006, 84, 405-415) 열 충격 전사 인자 1 (HSF1)의 기능을 억제시켜 이에 의해 내인성 HSP70 유전자 발현을 억제시킨다 (Westerheide 등. 2006, Journal of Biological Chemistry, 281, 9616-9622). 트립톨리드는 또한 강력한 종양 혈관신생 억제제로서 기능한다 (He 등. 2010, Int. Journal of Cancer, 126, 266-278).
국제 특허 출원 공개 번호 WO2010/129918은 암 치료에 유용한 것으로 보고되는 트립톨리드 전구약물을 보고한다. 이들 화합물들 중 하나인, 민넬리드(Minnelide)® (14-O-포스포노옥시메틸트립톨리드 2나트륨 염)는 다양한 암의 치료를 위하여 임상 개발 중이다. 섬유발생은 광범위한 사이토카인, 케모카인, 그리고 반응성 산소 종, 지질 매개체, 및 호르몬을 포함하는 비펩티드 매개체에 의해 유발되는 몇몇 세포 유형의 상호작용을 필요로 하는 복잡한 상처-치유 과정이다. 진행성 섬유증은 문맥 고혈압에 유리한 강성 증가와 함께 간의 구조적 변화와 관련되어서, 말기 경변증으로 진행할 수 있고, 간 암이 되기 쉬운 미세환경을 제공한다. 결과적으로, 생검 샘플에서 간 섬유증의 존재는 비알코올성 지방 간을 가진 환자에서 간-관련 합병증 및 사망률의 가장 강력한 예측인자이다.
섬유성 간 질환이 높은 사망률을 갖고 간 부전되기 쉽기 때문에, 간 섬유증은 여전히 주요한 건강 문제이다. 섬유증의 개시, 진행, 및 해결에서 연관된 기전의 더 나은 이해가 결정적으로 필요하다.
항섬유성 제제는 진행된 알코올성 (ASH) 및 비알코올성 지방간염 (NASH), 바이러스성 B형 및 C형 간염- 매우 효과적인 항바이러스 요법의 출현에도 불구하고-, 및 (소아) 대사적, 담즙성 및 자가면역 간 질환의 진행의 예방 및 반전의 유도를 위해 특별히 필요하다.
섬유성 간 질환이 높은 사망률을 갖고 간 부전되기 쉽기 때문에 간 섬유증은 여전히 주요한 건강 문제이다. 지난 20년 동안 집중 연구가 간 섬유증 병인에 대한 이해에 상당한 개선을 가져왔음에도, 효과적 항섬유성 요법은 아직 부족하다. 현재까지, 일반 항섬유성 요법은 임상 실무에서 현재 이용가능하지 않아, 기저 질환의 치료 및 궁극적으로 간 이식이 진행된 간 섬유증에 대한 유일한 치료 옵션으로서 남아 있다. 더욱이, 섬유성 질환의 치료를 위한 현행 옵션은 극히 제한되고, 현재까지 확립된 섬유증을 성공적으로 표적화하는 효과적 약물은 출현하지 않았다. 현재에, 대부분의 항섬유성 제제는 추가의 대사적 효과를 초래하는 비알코올성 지방 간 질환을 가진 환자들에서 현재 시험된다. 그래서 진행중인 시험으로부터 예상된 결과가 다른 만성 간 질환 예컨대 경변증 또는 초기의 간 섬유증에 외삽될 수 있는지 여부는 불분명하다.
비알코올성 지방 간 질환 (NAFLD)은 서방 국가 뿐만 아니라 전세계적으로 발생률 증가로 현대 사회에서 상당한 건강 부담을 나타낸다. NAFLD는 만성 간 질환 (CLD)의 가장 흔한 원인 중 하나로서 간주된다. NAFLD에 대한 핵심 위험 인자는 과체중, 인슐린 저항성, 2형 당뇨병 (T2D), 고혈압, 감소된 고밀도 지단백질 (HDL) 및 고중성지방혈증을 포함한다. NAFLD는 상대적으로 양성 지방증으로서 시작하며, 이는 가역적이고 간 지방 축적을 주로 특징으로 한다. 단순 지방증부터 비알코올성 지방간염 (NASH), 섬유증, 및 경변증까지 범위의 다양한 간 손상을 다룬다. 지방증의 NASH로의 진행은 심한 생명-위협 질환이다. 그 다음에, NASH가 경변증 또는 간세포성 암종으로 진행하면, 심각한 건강 의제를 야기한다. 흥미롭게, 대사적 질환, (비만, 및 II형 당뇨병)에 대하여 동일 위험 인자에 노출되는 환자들은 NASH를 항상 발생시키지 않으며, 이에 대한 이유는 여전히 미지이다. 연구는 미국에서 10-24%의 발생률, 그리고 유럽 및 아시아에서 아마도 유사한 통계로 만성 간 질환의 가장 흔한 형태인 것으로 NAFLD를 보여주었다. 또한, NASH에 대한 발생률은 마른 인구의 약 3-5% 및 비만 인구의 19%이다. NASH는 간 지방증이 염증과 함께 세포자멸사 및 간세포 풍선화를 연루하는 간 세포 손상과 일치하는 비알코올성 지방 간 질환의 하위그룹을 정의한다. 현재까지, 약리학적 치료가 NAFLD/NASH에 대하여 승인되지 않는다.
현재 섬유증 (예를 들면 간 또는 폐에서 섬유증)을 치료하기 위한 개선된 치료제, 또한 비알코올성 지방 간 질환 (NAFLD) 또는 비알코올성 지방간염 (NASH)을 치료하기 위한 개선된 치료제가 필요하다. 특히, 초기의 섬유증 반전에 효과적인 신규하고 효과적인 항-섬유성 제제가 필요하다.
출원인은 MinnelideTM (14-O-포스포노옥시메틸트립톨리드 2나트륨 염)가 섬유증, 비알코올성 지방 간 질환 (NAFLD), 및 비알코올성 지방간염 (NASH) 표적화에 유용함을 결정하였다. 따라서, 일 구현예에서, 본 발명은, 화학식 I의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염을, 동물에게 투여하는 단계를 포함하는, 동물에서 섬유증, 비알코올성 지방 간 질환 (NAFLD) 또는 비알코올성 지방간염 (NASH)의 치료 방법을 제공한다:
Figure pct00001
식중:
R은 H 또는 (CR1R2O)nP(O)(OH)2이고;
각각의 R1은 독립적으로 H, (C1-C6)알킬, 아릴(C1-C6)알킬-, (C3-C6)시클로알킬 또는 아릴이고; 각각의 R2는 독립적으로 H, (C1-C6)알킬, 아릴(C1-C6)알킬-, (C3-C6)시클로알킬 또는 아릴이거나; R1 및 R2는 이들이 부착되는 원자와 함께 (C3-C7)시클로알킬을 형성하고; R1 또는 R2의 임의의 알킬 또는 시클로알킬은 할로, (C1-C6)알콕시 및 NRaRb로부터 선택된 하나 이상 (예를 들면 1, 2, 3, 4 또는 5) 기로 임의로 치환될 수 있고 R1 또는 R2의 임의의 아릴은 할로, (C1-C6)알킬, (C1-C6)알콕시, NRaRb, 니트로 및 시아노로부터 선택된 하나 이상 (예를 들면 1, 2, 3, 4 또는 5) 기로 임의로 치환될 수 있으며;
Ra 및 Rb는 H, (C1-C6)알킬, (C3-C6)시클로알킬 및 아릴로부터 각각 독립적으로 선택되거나; Ra 및 Rb는 이들이 부착되는 질소와 함께 피롤리디노, 피페라디노, 피페라지노, 아제티디노, 모르폴리노, 또는 티오모르폴리노를 형성하며;
n은 1, 2 또는 3임.
본 발명은 섬유증, 비알코올성 지방 간 질환 (NAFLD) 또는 비알코올성 지방간염 (NASH)의 예방적 또는 치료적 처치에서 사용을 위한 화학식 I의 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염을 또한 제공한다.
본 발명은 포유동물 (예를 들면 인간)에서 섬유증, 비알코올성 지방 간 질환 (NAFLD) 또는 비알코올성 지방간염 (NASH)의 치료를 위한 약제의 제조를 위하여 화학식 I의 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염의 용도를 또한 제공한다.
아래 실시예에서 나타난 바와 같이, 화학식 I의 대표적 화합물, MinnelideTM (14-O-포스포노옥시메틸트립톨리드 2나트륨 염)는 간 섬유증의 2개 모델에서 유망한 결과를 제공하는 것으로 나타났다.
도 1. DIO-NASH 마우스 모델을 사용하는 엘라피브라노르 또는 리라글루티드와 함께 그리고 민넬리드 단독의 효능; 그리고 도 1의 레퍼런스 연구 섹션은 DIO-NASH 마우스 모델을 사용하는 엘라피브라노르 단독 또는 리라글루티드 단독의 효능에 관한 (Tølbøl, 등. World J Gastroenterol.　Jan 14, 2018;　24(2): 179-194로서 발표된) 이력 레퍼런스 연구를 지칭한다.
도 2. 간 갈렉틴-3의 조직학적 정량적 평가. 스캔된 슬라이드는 먼저 저배율로 조직의 조악한 검출 (A); 고배율로 항-갈렉틴-3으로 염색된 간의 대표적 이미지 (B, 상부 삽입); 그리고 지방증 (백색), 갈렉틴-3 (회색) 및 조직 (흑색)의 검출 (B, 하부 삽입); 간 갈렉틴-3 분획은 총 조직의 %로서 추정되었음; (C) 종료시 (배율 20x, 스케일 바 = 100 μm) 항-갈렉틴-3 (Biolegend, cat. 125402)으로 염색된 간의 대표적 이미지; 및 (D) 형태계측 (% 분획 면적)에 의해 정량화된 말기 상대 간 갈렉틴-3 (Gal-3)을 위하여 분석되었다. 값들은 n = 12-14의 평균 + SEM으로서 표현하였다. 던넷 시험 1-인자 선형 모델. 비히클 + 비히클과 비교된 **: P < 0.01, ***: P < 0.001.
도 3. 형태계측 (% 분획 면적)에 의해 정량화된 말기 상대 간 히드록시프롤린 (HP). 값들은 n = 12-14의 평균 + SEM으로서 표현하였다. 던넷 시험 1-인자 선형 모델. 비히클 + 비히클과 비교된 **: P < 0.01, ***: P < 0.001.
도 4. 형태계측 (% 분획 면적)에 의해 정량화된 말기 상대 간 α-SMA. 값들은 n = 12-14의 평균 + SEM으로서 표현하였다. 던넷 시험 1-인자 선형 모델. 비히클 + 비히클과 비교된 **: P < 0.01, ***: P < 0.001.
정의
본원에 사용된 바와 같이 용어 "(C1-C6)알킬"은 직선형 또는 분지형 기의 1 내지 6개의 탄소 원자를 갖는 알킬 기를 지칭한다. 이 용어는 기 예컨대 메틸, 에틸, n-프로필, 이소-프로필, n-부틸, t-부틸, 이소부틸, n-펜틸, 네오펜틸, 및 n-헥실, 그리고 기타 등등에 의해 예시된다.
본원에 사용된 바와 같이 용어 "(C1-C6)알콕시"는 (C1-C6)알킬이 본원에 정의된 바와 같은 기 (C1-C6)알킬O-를 지칭한다. 이 용어는 기 예컨대 메톡시, 에톡시, 프로폭시, 이소프로폭시, 부톡시, 이소-부톡시, sec-부톡시, 펜톡시, 3-펜톡시, 또는 헥실옥시, 및 기타 등등에 의해 예시된다.
본원에 사용된 바와 같이 용어 "(C3-C7)시클로알킬"은 3 내지 7개의 탄소 원자를 포함하는 포화된 또는 부분적으로 불포화된 환식 탄화수소 고리 시스템을 지칭한다. 이 용어는 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸, 시클로헥실, 시클로헥센, 또는 시클로헵탄, 및 기타 등등과 같은 기에 의해 예시된다.
본원에 사용된 바와 같이 용어 "아릴"은 적어도 하나의 고리가 방향족인 약 9 내지 10개의 탄소 고리 원자를 갖는 페닐 라디칼 또는 오르토-융합된 2환식 탄소환식 라디칼을 지칭한다. 이 용어는 그러한 기 페닐, 인다닐, 인데닐, 나프틸, 1,2-디히드로나프틸 및 1,2,3,4-테트라히드로나프틸에 의해 예시된다.
본원에 사용된 바와 같이 용어 "아릴(C1-C6)알킬-"은 (C1-C6)알킬 및 아릴이 본원에 정의된 바와 같은 기 아릴-(C1-C6)알킬-을 지칭한다. 이 용어는 벤질 및 페네틸 그리고 기타 등등과 같은 기에 의해 예시된다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "포함하는"은 구조 또는 기능에서 인용된 요소, 또는 그들의 등가물, 게다가 인용되지 않은 임의의 다른 요소(들)을 의미한다. 용어 "갖는" 및 "포괄하는"은 또한 문맥이 달리 제안하지 않는 한 개방형으로 해석되어야 한다. 용어들 예컨대 "약", "일반적으로", "실질적으로", 및 기타 등등은 절대적이지 않지만, 선행 기술에서 읽지 않는 용어 또는 값을 수정하는 것으로 해석되어야 한다. 그러한 용어들은 이들이 당업자들에 의해 이해되는 상황 및 용어들에 의해 정의될 것이다. 이것은 한 값을 측정하는데 사용된 주어진 기술에 대하여 최소 정도의 예상된 실험 오차, 기술 오차, 및 기기 오차를 포함한다.
어구 "치료적 유효량" 및 "약제학적 유효량"은, 예를 들어, 살아있는 포유동물에게 투여시 생체내 암성 세포 성장을 감소 또는 억제시키는데 충분한 양을 의미하기 위해 본원에 사용된다. 상기 어구는, 주어진 투여 경로에 대하여, 확립된 약동학적 방법 및 기술에 따라 측정된 경우, 주어진 활성 성분과 연관된 그리고 의도된 생리학적 효과를 생산하는데 필요한 것으로 결정된 양을 지칭하는 의미이다.
활성 화합물 및 조성물의 양과 연관하여 사용된 바와 같이 어구 "억제성 유효량"은, 예를 들어, 표준 세포 배양 검정 기술을 사용하여 입증된 경우 설명된 항종양 특성을 지칭하는 의미이다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "전구약물"은 생물학적으로 활성이 되기 전에 (비제한적으로 간을 포함하는) 추가 대사를 필요로 하는 약제학적 화합물을 지칭하는 의미이다.
키랄 중심을 갖는 화합물이 광학적으로 활성 및 라세미 형태로 실재할 수 있고 단리될 수 있다는 것이 당업자에 의해 인식될 것이다. 일부 화합물은 다형을 나타낼 수 있다. 화합물이, 본원에 기재된 유용한 특성을 소유하는, 한 화합물의 임의의 라세미, 광학적으로-활성, 다형성, 또는 입체이성질체성 형태, 또는 이들의 혼합물을 포괄하는 것이 이해되어야 하고, 예를 들어, 재결정화 기술로 라세미 형태의 해상도에 의해, 광학적으로-활성 출발 재료로부터 합성에 의해, 키랄 합성에 의해, 또는 키랄 고정상을 이용하는 크로마토그래피성 분리에 의해, 광학적으로 활성 형태를 제조하는 방법이 종래 기술에서 널리 공지된다.
화학식 I의 화합물의 염은 화학식 I의 화합물을 단리 또는 정제하기 위한 중간체로서 유용할 수 있다. 추가적으로, 약제학적으로 허용가능한 산 또는 염기 염으로서 화학식 I의 화합물의 투여는 적절할 수 있다. 약제학적으로 허용가능한 염의 예는 유기 산 부가 염 및 무기 염이다.
용어 "유기 양이온 또는 무기 양이온" 또는 "양이온성 유기 또는 무기 염"은 본 발명의 목적을 위하여 전구약물의 원하는 특성에 상당히 반대로 영향을 미치지 않으며 화합물상의 O 모이어티와 이온성 회합을 형성할 수 있는 양이온성 모이어티를 포함하고 종래 기술에서 널리 공지되는 유기 양이온 또는 무기 양이온 (예를 들면 금속 또는 아민 염)을 포함한다. 용어 "약제학적으로 허용가능한 유기 양이온 또는 무기 양이온" 또는 "약제학적으로 허용가능한 양이온성 유기 또는 무기 염"은 포유동물에서 사용하기 위하여 약제학적으로 허용가능하고 종래 기술에서 널리 공지되는 "유기 양이온 또는 무기 양이온"을 포함한다.
유기 양이온 또는 무기 양이온은 비제한적으로 리튬, 나트륨, 칼륨, 마그네슘, 칼슘, 바륨, 아연, 알루미늄 및 아민 양이온을 포함한다. 아민 양이온은 비제한적으로 암모니아, 트리에틸아민, 트로메타민 (TRIS), 트리에탄올아민, 에틸렌디아민, 글루카민, N-메틸글루카민, 글리신, 리신, 오르니틴, 아르기닌, 에탄올아민, 콜린 및 기타 등등으로부터 유래된 양이온을 포함한다. 일 구현예에서, 아민 양이온은 X+가 화학식 YH+이되 Y가 암모니아, 트리에틸아민, 트로메타민 (TRIS), 트리에탄올아민, 에틸렌디아민, 글루카민, N-메틸글루카민, 글리신, 리신, 오르니틴, 아르기닌, 에탄올아민, 콜린 및 기타 등등인 양이온이다.
일 구현예에서 사용될 수 있는 적당한 양이온성 유기 또는 무기 염은 본 발명의 목적을 위하여 전구약물의 원하는 특성, 예를 들면, 활성 화합물 형태의 증가된 가용성, 안정성, 및 신속한 가수분해성 방출에 상당히 반대로 영향을 미치지 않으며 화합물상의 O 모이어티와 이온성 회합을 형성할 수 있는 양이온성 모이어티를 포함한다. 바람직하게는, X는 Li+, K+, 또는 Na+로부터 선택된다. 더욱 바람직하게는, X는 Na+이고 그래서 2나트륨 염을 형성한다.
약제학적으로 허용가능한 염은 생리학적 허용가능한 음이온을 형성하는 산으로 형성된 염, 예를 들어, 토실레이트, 메탄설포네이트, 아세테이트, 시트레이트, 말로네이트, 타르트레이트, 석시네이트, 벤조에이트, 아스코르베이트, α-케토글루타레이트, 및 α-글리세로포스페이트를 또한 포함할 수 있다. 히드로클로라이드, 설페이트, 니트레이트, 비카보네이트, 및 카보네이트 염을 포함하는, 적당한 무기 염은 또한 형성될 수 있다. 약제학적으로 허용가능한 염을 포함하는, 염은 종래 기술에서 널리 공지된 표준 절차를 사용하여, 예를 들어 충분히 염기성 화합물 예컨대 아민을 생리학적으로 허용가능한 음이온을 제공하는 적당한 산과 반응시킴으로써 수득될 수 있다.
화학식 I의 화합물은 유리 산 (예를 들면 -OP(O)(OH)2), 단염 (예를 들면 -OP(O)(OH)(O-X+)) 및 이염 (예를 들면 -OP(O) O-X+)2)을 포함한다. 산 및 염은 종래 기술에서 널리 공지된 다양한 기술 예컨대 크로마토그래피, 이어서 동결건조 또는 재결정화에 의해 정제될 수 있다.
X+가 유기 양이온 또는 무기 양이온인 화학식 I의 화합물이 하나 이상 상이한 유기 또는 무기 양이온을 포함하는 화학식 I의 화합물로 전환될 수 있다는 것이 당업자에 의해 인식될 것이다. 그와 같은 전환은 비제한적으로 이온 교환 수지, 이온 교환 크로마토그래피 및 선택적 결정화를 포함하는 다양한 널리 공지된 기술 및 물질을 사용하여 달성될 수 있다.
구현예
R1에 대한 특정 값은 H 또는 (C1-C6)알킬이다.
R1에 대한 또 다른 특정 값은 H이다.
R1에 대한 또 다른 특정 값은 (C1-C6)알킬이다.
R1에 대한 또 다른 특정 값은 메틸 또는 에틸이다.
R2에 대한 특정 값은 H 또는 (C1-C6)알킬이다.
R2에 대한 또 다른 특정 값은 H이다.
X+에 대한 특정 값은 H이다.
X+에 대한 또 다른 특정 값은 독립적으로 리튬, 나트륨, 칼륨, 마그네슘, 칼슘, 바륨, 아연 또는 알루미늄이다.
화학식 I의 화합물의 또 다른 특정 기는 X+가 화학식 HY+이되 Y가 독립적으로 암모니아, 트리에틸아민, 트로메타민, 트리에탄올아민, 에틸렌디아민, 글루카민, N-메틸글루카민, 글리신, 리신, 오르니틴, 아르기닌, 에탄올아민 또는 콜린인 화합물이다.
X+에 대한 또 다른 특정 값은 독립적으로 Li+, K+ 또는 Na+이다.
X+에 대한 또 다른 특정 값은 Na+이다.
화학식 I의 특정 화합물은 4-O-포스포노옥시메틸트립톨리드 2나트륨 염, 14-O-포스포노옥시에틸트립톨리드 2나트륨 염 또는 14-O-포스포노옥시프로필트립톨리드 2나트륨 염, 또는 이들의 염이다.
염의 특정 기는 화학식 Ia의 염이다:
Figure pct00002
식중 각각의 X+는 독립적으로 약제학적으로 허용가능한 양이온성 유기 또는 무기　염이다.
화학식 I의 화합물 및 화학식 1의 화합물의 제조에 유용한 중간체를 제조하는데 사용될 수 있는 공정은 반응식 1 및 반응식 2에서 나타난다. 화합물 및 염은 국제 특허 출원 공개 번호 WO2010/129918에서 기재된 바와 같이 또한 제조될 수 있다.
반응식 1
Figure pct00003
식중 Q는 보호 기 예컨대 벤질 또는 tert-부틸이다.
반응식 2
Figure pct00004
Figure pct00005
화학식 I의 화합물은 화학식 I의 상응하는 화합물을 제공하기 위해 화학식 IA의 화합물로부터 하나 이상 보호 기를 제거함으로써 제조될 수 있다:
Figure pct00006
Q는 보호기 (예를 들면 벤질 또는 tert-부틸)이다
IA
그래서, 화학식 IA의 중간체는 화학식 I의 화합물 제조에 유용하다.
화학식 I의 화합물은 화학식 I의 상응하는 화합물을 제공하기 위해 화학식 IB의 화합물로부터 -SMe 기를 -OP(O)(O-X+)2 기로 전환시킴으로써 또한 제조될 수 있다:
Figure pct00007
IB
그래서, 화학식 IB의 중간체는 화학식 I의 화합물 제조에 유용하다.
화학식 I의 화합물은 화학식 I의 상응하는 화합물을 제공하기 위해 화학식 IC의 화합물로부터 하나 이상 보호 기를 제거함으로써 또한 제조될 수 있다:
Figure pct00008
Q는 보호기 (예를 들면 벤질 또는 tert-부틸)이다
IC
그래서, 화학식 IC의 중간체는 화학식 I의 화합물 제조에 유용하다.
화학식 I의 화합물은 화학식 I의 상응하는 화합물을 제공하기 위해 화학식 ID의 화합물로부터 -SMe 기를 -OP(O)(O-X+)2 기로 전환시킴으로써 또한 제조될 수 있다:
Figure pct00009
ID
그래서, 화학식 ID의 중간체는 화학식 I의 화합물 제조에 유용하다.
화학식 I의 화합물 또는 이의 염은 약제학적으로 허용가능한 담체와 함께 조합함으로써 또한 약제학적 조성물로 제형화될 수 있다. 약제학적 조성물은 약제학 분야에서 숙련된 이들에게 쉽게 이용가능한 널리 공지된 화합물 및 기술에 따라 제조될 수 있다. 본 발명의 목적을 위하여, 약제학적으로 허용가능한 담체는 활성 약제학적 성분과 화학적으로 혼화성이고 제형화 또는 전달시 이의 의도된 치료적 효과를 상당히 약화시키지 않는 임의의 종래 쉽게 이용가능한 생물학적으로 혼화성 또는 불활성 물질일 수 있다. 약제학적으로 허용가능한 염은 종래 기술에서 널리 공지된 표준 절차 및 기술을 사용하여 제조될 수 있다.
화학식 I의 화합물 또는 이의 염의 고체 형태는 나노입자일 수 있고 그래서 나노입자로서 제형화될 수 있다. 화학식 I의 화합물 또는 이의 염은 다양한 부형제 제형을 사용하여 제형화될 수 있고 하기 기재된 바와 같이 다양한 복용 형태로 제조될 수 있다. 화합물과 연관된 화학적 특성 및 속성은 구강 고체 복용 형태의 제조를 제공할 수 있다.
화학식 I의 화합물 또는 이의 염은 약제학적 조성물로서 제형화될 수 있고 원하는 특정한 투여 경로 또는 시스템에 적당한 다양한 형태로 수령자에게 투여될 수 있다. 투여 경로는 비제한적으로 경구 경로, 비경구 경로, 정맥내 경로 (펌프 주사에 의한 정맥내 경로 포함), 근육내 경로, 점안액을 포함하는 국부 경로, 피하 경로 및 점막 경로를 포함할 수 있다. 화합물은, 약제학적으로 허용가능한 담체 예컨대 불활성 희석제 또는 동화가능한 식용 담체와 함께, 전신으로, 예를 들면 경구로 투여될 수 있다. 그래서 활성 성분으로서 화합물을 포함하는 약제학적 조성물은 다양한 복용 형태로 제조될 수 있다. 예를 들어, 조성물은 경질 또는 연질 캡슐 (예를 들면, 젤라틴 또는 식물-유래된 캡슐형 재료)로 캡슐화될 수 있다. 조성물은 섭취가능한 또는 경점막 정제 형태, 트로키, 캡슐, 엘릭시르, 현탁액, 시럽, 웨이퍼, 좌약 및 기타 등등으로 압축될 수 있다. 활성 성분의 양은 특별히 원하는 약제학적으로 효과적 복용 양에 따라 가변할 수 있다.
정제, 트로키, 환제, 캡슐, 및 기타 등등은 추가의 성분 예컨대 결합제 (예컨대 트래거캔스 고무, 아카시아, 옥수수 전분 또는 젤라틴); 부형제 예컨대 인산이칼슘; 붕해제 예컨대 옥수수 전분, 감자 전분, 알긴산, 및 기타 등등; 예를 들어, 정제 압축 기술에 사용될 수 있는 윤활제 (예컨대 스테아르산마그네슘); 감미제 예컨대 수크로스, 프룩토스, 락토스 또는 아스파르탐; 및 향미 제제 예컨대 페퍼민트, 윈터그린, 체리, 및 기타 등등을 함유할 수 있다. 조성물에서 포함될 수 있는 추가의 성분은 만니톨, 우레아, 덱스트란, 및 락토스 비-환원 당이다.
복용 형태가 캡슐인 경우, 폴리에틸렌 글리콜, 식물 오일, 등을 포함하는 액체 담체를 함유할 수 있다. 특정 복용 형태와 사용될 수 있는 다른 재료는 젤라틴, 왁스, 쉘락, 당, 및 기타 등등을 포함한다. 시럽 또는 엘릭시르 형태는 수크로스, 프룩토스를 감미제로서, 메틸 및 프로필파라벤을 보존제, 염료 및 착색제, 그리고 향미 제제로서 함유할 수 있다.
주입 또는 주사에 의해 정맥내로 또는 복강내로 투여된 경우, 활성 성분 또는 이의 염의 용액은, 예를 들어, 비독성 계면활성제를 임의로 함유하는 물 또는 식염수에서 제조될 수 있다. 분산액은 글리세롤, 액체 폴리에틸렌 글리콜, 트리아세틴, 및 이들의 혼합물에서 그리고 오일에서 제조될 수 있다. 저장 조건은 또한 보존제의 포함을 필요로 할 수 있다.
주사 또는 주입에 적당한 약제학적 복용 형태는, 리포좀에서 임의로 캡슐화된, 멸균 주사가능한 또는 주입가능한 용액 또는 분산액의 즉석 제조에 적합화되는 활성 성분을 포함하는 멸균 수용액 또는 분산액 또는 멸균 분말제를 포함할 수 있다. 모든 경우에, 궁극적 복용 형태는 멸균성, 유체이어야 하고 제조 및 저장의 조건 하에서 안정적이어야 한다. 액체 담체 또는 비히클은, 예를 들어, 물, 에탄올, 폴리올 (예를 들어, 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 액체 폴리에틸렌 글리콜, 및 기타 등등), 식물 오일, 비독성 글리세릴 에스테르, 및 이들의 적당한 혼합물을 포함하는 액체 분산 매체 또는 용매일 수 있다. 적절한 유동성은, 예를 들어, 리포좀의 형성에 의해, 분산액의 경우에서 요구된 입자 크기의 유지에 의해 또는 계면활성제의 사용에 의해 유지될 수 있다. 미생물의 작용의 예방은 다양한 항박테리아 및 항진균 제제, 예를 들어, 파라벤, 클로로부탄올, 페놀, 소르브산, 티메로살, 및 기타 등등에 의해 발생될 수 있다. 많은 경우에, 등장성 제제, 예를 들어, 당, 완충액 또는 염화나트륨을 포함하는 것이 바람직할 것이다. 주사가능한 조성물의 연장된 흡수는 흡수를 지연시키는 제제, 예를 들어, 알루미늄 모노스테아레이트 및 젤라틴의 조성물에서 사용에 의해 발생될 수 있다.
멸균 주사가능한 용액은, 필요시, 상기 열거된 다양한 다른 성분과 적절한 용매에서 필요한 양으로 활성 화합물을 편입시키고, 이어서 필터 멸균화시킴으로써 제조된다. 멸균 주사가능한 용액의 제조를 위한 멸균 분말제의 경우에, 바람직한 제조 방법은 진공 건조 및 동결 건조 기술이며, 이는 활성 성분의 분말제 게다가 이전의 멸균-여과된 용액에서 존재하는 임의의 추가의 원하는 성분을 산출한다.
인젝티블(Injectible) 또는 주입가능한 약제학적 복용 형태는 즉석 제형화를 위하여 제조된 활성 화합물을 포함하는 멸균 수용액 또는 분산액 또는 멸균 분말제를 포함할 수 있다. 액체 담체는 물, 에탄올, 폴리올 (예를 들면, 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜), 및 기타 등등을 포함하는 액체 분산 매체 또는 용매를 포함할 수 있다. 다양한 제제, 예컨대 파라벤, 클로로부탄올, 페놀, 소르브산, 티메로살, 및 기타 등등은 항균 활성을 억제 또는 예방하기 위해 첨가될 수 있다.
화합물 및 조성물은 단일 용량으로서 또는 다중 용량 간격으로 투여될 수 있다. 복용 양, 복용 형태, 투여의 경로, 및 특정한 제형화 성분은 원하는 혈장 농도 및 관여된 약동학에 상응하여 가변할 수 있다.
화합물의 유용한 복용량은 동물 모델에서 그들의 시험관내 활성, 및 생체내 활성을 비교함으로써 결정될 수 있다. 마우스, 및 다른 동물에서 효과적 복용량의, 인간에의 외삽을 위한 방법은 종래 기술에 공지되고; 예를 들어, 미국 특허 번호 4,938,949를 참고한다.
치료에서 사용에 필요한, 화합물, 또는 이의 활성 염 또는 유도체의 양은 선택된 특정한 염에 따라 뿐만 아니라 투여의 경로, 치료중인 병태의 성격 그리고 환자의 연령 및 상태에 따라 가변할 것이고 궁극적으로 담당의사 또는 임상의의 재량에 따를 것이다.
원하는 용량은 적절한 간격에, 예를 들어, 2, 3, 4 또는 그 이상 하위-용량 / 일로서 투여된 분할된 용량으로서 또는 단일 용량으로 편리하게 제시될 수 있다. 하위-용량 자체는, 예를 들면, 다수의 분리된 느슨하게 이격된 투여로; 예컨대 취입기로부터 여러번 흡입 또는 눈에 여러 방울의 적용에 의해 추가로 분할될 수 있다.
화합물은 다른 치료적 제제, 예를 들어, 섬유증, 비알코올성 지방 간 질환 (NAFLD) 또는 비알코올성 지방간염 (NASH)의 치료에 유용한 다른 제제와 함께 또한 투여될 수 있다. 그러한 치료적 제제의 예는 인슐린 감작 제제 (예를 들면 메트포르민), 티아졸리딘온 (예를 들면 피오글리타존 또는 로시글리타존), 비타민 E, 우르소데옥시콜산, 오메가-3 지방 산, 갈렉틴-3 억제제 (예를 들면, GR-MD-02), 및 스테인을 포함한다. N. Chalasani, 등., Hepatology, 2012, 55, 9, 2005-2023을 참고한다. 따라서, 일 구현예에서 본 발명은 화학식 I의 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염, 치료적 제제, 및 약제학적으로 허용가능한 희석제 또는 담체를 포함하는 조성물을 또한 제공한다. 본 발명은 섬유증, 비알코올성 지방 간 질환 (NAFLD) 또는 비알코올성 지방간염 (NASH)을 치료하기 위해 화학식 I의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염 및 치료적 제제를 동물 (예를 들면 포유동물)에게 투여하기 위하여 화학식 I의 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염, 치료적 제제, 패키징 재료, 그리고 사용설명서를 포함하는 키트를 또한 제공한다. 일 구현예에서, 치료적 제제는 인슐린 감작 제제 (예를 들면 메트포르민), 티아졸리딘온 (예를 들면 피오글리타존 및 로시글리타존), 비타민 E, 우르소데옥시콜산, 오메가-3 지방 산, 갈렉틴-3 억제제 (예를 들면, GR-MD-02), 및 스테인으로 이루어지는 군으로부터 선택된다.
일 구현예에서, 치료적 제제는 GLP-1 작용제이다. GLP-1 작용제는 글루코스-유사 펩티드의 작용을 모방한다. GLP-1　수용체를 활성화시킴으로써,　GLP-1 작용제 및 내인성　GLP-1은 혈액 글루코스 수준을 감소시킬 수 있고 T2DM 환자들이 혈당 조절에 도달하도록 도울 수 있다. 일 구현예에서, 치료적 제제는 알비글루티드(Albiglutide) (Tanzeum), 둘라글루티드(Dulaglutide) (Trulicity), 엑세나티드(Exenatide) (Byetta), 확장-방출 엑세나티드 (Bydureon), 리라글루티드 (Victoza), 릭시세나티드(Lixisenatide) (Adlyxin), 및 세마글루티드(Semaglutide) (Ozempic)로 이루어지는 군으로부터 선택된다. 일 구현예에서, 치료적 제제는 리라글루티드이다.
일 구현예에서, 치료적 제제는 PPAR 작용제이다. PPAR 작용제는 퍼옥시좀 증식제-활성화된 수용체에서 작용한다. 일 구현예에서, 치료적 제제는 팬 PPAR 작용제이다. 일 구현예에서, 치료적 제제는 PPARα/δ 작용제이다. 일 구현예에서, 치료적 제제는 PPARγ/δ 작용제이다. 일 구현예에서, 치료적 제제는 PPARα 작용제이다. 일 구현예에서, 치료적 제제는 PPARδ 작용제이다. 일 구현예에서, 치료적 제제는 PPARγ 작용제이다. 일 구현예에서, 치료적 제제는 알비글루티드 (Tanzeum), 둘라글루티드 (Trulicity), 엘라피브라노르, 엑세나티드 (Byetta), 확장-방출 엑세나티드 (Bydureon), 리라글루티드 (Victoza), 릭시세나티드 (Adlyxin), 엘라피브라노르 (GFT505), 및 세마글루티드 (Ozempic)로 이루어지는 군으로부터 선택된다. 일 구현예에서, 치료적 제제엘라피브라노르 또는 이의 염이다.
본 발명은 하기 비제한 실시예에 의해 이제 실례될 것이다.
실시예 1 섬유증의 마우스 모델
2마리의 동물 모델이 사용되었다: 사염화탄소 (CCl4)의 마우스 모델. 이 모델에서, C57Bl6/J 마우스 (8 주령; ~25g)는 올리브 오일에서 희석된 3.5ml/kg의 용량으로 어느 한쪽 올리브 오일 또는 CCl4의 250 μL i.p. 4 주 동안 1주 2회 받았다. 동물들은 CCl4의 4 주후 0.2mg/kg 민넬리드로 치료되었다.
CCl4 + 디에틸니트로사민 (DEN)-유도된 간 손상의 마우스 모델. C57Bl6/J 마우스 (3 주령; ~15g)는 DEN의 1개 단일 용량 (25 mg/kg)을 받았다. 8 주령부터; (~25g) 이들은 올리브 오일에서 희석된 0.2 ml/kg의 용량으로 어느 한쪽 올리브 오일 또는 CCl4의 250 μL i.p. 4 주 동안 1주 2회 받았다. 동물들은 CCl4의 4 주후 0.2mg/kg 민넬리드로 치료되었다.
양쪽 모델에 대하여, 손상 및 섬유증은 H&E 염색 뿐만 아니라 피크로시리우스 레드 염색에 의해 조직학적 시료의 검사로 결정되었다.
결과
민넬리드는 CCl 4 및 DEN+CCl 4 마우스 모델에서 간 섬유증을 예방하였고 반전하였다.
0.2 mg/kg에서의 민넬리드는, 마송 트리크롬 (Massons Trichrome) 및 시리우스 레드 염색에 의해 관찰된 경우, 비히클과 비교하여 CCl4 및 DEN + CCl4-유도된 콜라겐 침착을 억제하였다. 간 H&E 염색의 조직학적 검사는 민넬리드가 8 주 시점에 CCl4 및 DEN+CCl4 투여에 의해 유도된 지방증, 풍선화, 및 염증성 병소를 감소시켰다는 것을 나타냈다. 민넬리드는 면역형광 염색에 의해 평가된 α-SMA 발현을 또한 감소시켰다.
민넬리드는 CCl 4 및 DEN+CCl 4 마우스 모델에서 섬유성 유전자 발현을 억제하였다.
0.2 mg/kg에서의 민넬리드는 TGF-β1, TGF-β2, TGF-β3 (도 14); TGF-β 수용체 TGF-βR1 및 TGF-βR2와 함께 핵심 섬유성 유전자 과발현 예컨대 α-SMA, 콜라겐1, 및 피브로넥틴의 발현을 억제된 CCl4 및 DEN+CCl4-유도된 억제하였다.
민넬리드는 DEN+CCl 4 마우스 모델에서 염증 연관된 유전자 발현을 억제하였다. 민넬리드는 8 주 시점에 Tnf-α, IL6, IL-1β 및 iNOS의 발현을 감소시켰다. 민넬리드는 DEN+CCl4 마우스 모델에서 임플라마좀-관련된 유전자 발현을 억제하였다. 민넬리드는 8 주 시점에 임플라마좀 유전자 NOD-유사 수용체 계열, 피린 도메인 함유 3 (NLRP3), CARD를 함유하는 세포자멸사-연관된 반점-유사 단백질, 카스파제1, 인터류킨 (IL)-1β, 및 IL18의 발현을 감소시켰다.
민넬리드는 DEN+CCl 4 마우스 모델에서 간 섬유증을 예방하였고 반전하였다. 0.2 mg/kg에서의 민넬리드는 마송 트리크롬 및 시리우스 레드 염색에 의해 관찰된 경우, 비히클과 비교하여 DEN + CCl4-유도된 콜라겐 침착을 억제하였다. 간 H&E 염색의 조직학적 검사는 민넬리드가 12 주 시점에 CCl4 및 DEN+CCl4 투여에 의해 유도된 지방증, 풍선화, 및 염증성 병소를 감소시켰다는 것을 나타냈다.
민넬리드는 간 섬유증의 2개 모델에서 유망한 결과를 보여주었다. 치료적 개입은 CCl4 유도된 간 섬유증 및 DEN + CCl4 유도된 간 섬유증에서 섬유증 뿐만 아니라 혈장 생화학 마커의 감소를 보여주었다. mRNA 발현, 웨스턴 블랏, 콜라겐 정량화, 염증 프로파일링 및 산화성 손상 파라미터에 의해 분자성 마커를 이용한 추가의 추적검사는 널리 공지되는 모델을 사용하여 실시될 수 있다.
화학식 I의 화합물의 항섬유성 활성은 다른 공지된 모델, 예컨대, 예를 들어, 비알코올성 지방 간 질환 및 간세포성 암의 식단-유도된 마우스 모델 또는 고지방, 콜린 결핍 식단 및 디에틸니트로사민 (DEN)의 복강내 주사를 사용하는 비알코올성 지방간염과 간세포성 암종의 마우스 모델을 사용하여 또한 평가될 수 있다.
실시예 2 비알코올성 지방간염　(NASH)의 식단-유도된 비만 (DIO) 마우스 모델
DIO-NASH 마우스 모델에서 엘라피브라노르 또는 리라글루티드와 함께 그리고 민넬리드 단독으로 8 주의 치료 효과를 조사하기 위해, 대사적 파라미터, 간 병리 그리고 섬유증 병기 데이터를 포함하는 NAFLD 활성 점수 (NAS)는 수집되었다.
방법
동물
숫컷 C56BL/6JRj 마우스는 Janvier Labs (Le Genest Saint Isle, France)로부터 수득되었다. 마우스는 수돗물에 자유롭게 접근하였고 어느 한쪽 일반 설치류 음식 (Altromin 1324, Brogaarden, Hoersholm, Denmark), 또는 지방이 많은 식단 (40%, 18% 트랜스-지방 함유), 40% 탄수화물 (20% 프룩토스) 및 2% 콜레스테롤 (AMLN 식단; D09100301, Research Diets, New Brunswick, NJ)을 가졌다. C57BL/6JRj 마우스는 치료 시작에 앞서 35 주 동안 비계가 적은 음식 비히클 대조 그룹으로서 일반 음식 또는 DIO-NASH 마우스로서 AMLN 식단이 급식되었다.
기준선 간 생검
약물 치료 실험에서 포함된 모든 동물은 간 파라미터의 기준선 특성규명 그리고 치료 그룹으로의 계층화된 무작위화를 위하여 간 생검을 경험하였다. 마우스는 이소플루란 (2-3%)을 사용하여 흡입 마취로 마취되었다. 작은 복부 절개가 중앙선에서 실시되고 간의 좌측엽이 노출된다. 간 조직 (대략 50 mg)의 원뿔형 쐐기는 엽의 원위 부분에서 절제되고 조직학을 위하여 10% 중성 완충된 포르말린 (10% NBF)에 고정된다. 간의 절단면은 양극성 응고 (ERBE VIO 100 전기수술 장치)를 사용하여 즉시 전기응고된다. 간은 복강으로 돌아가고, 복벽은 봉합되고, 피부는 스테이플러로 밀폐된다. 수술후 회복을 위하여 마우스는 OP 일 및 OP후 1 및 2 일째에 피하로 투여된 카프로펜 (5mg/kg)을 받을 것이다. 동물은 치료 시작에 앞서 3~4 주 동안 회복하게 되었다. 섬유증 병기 ≥ 1 및 지방증 점수 ≥ 2를 가진 마우스만이 이전에 기재된 바와 같이 무작위화를 위한 연구에서 포함되었다 (Tølbøl, 등. World J Gastroenterol.　Jan 14, 2018;　24(2): 179-194). 치료 그룹으로 계층화된 무작위화는 간 콜라겐 1a1 정량화에 따라 수행된다.
약물 치료
비히클은, 5 mL/kg의 용량화 부피로 투여된, 0.1% 소 혈청 알부민 (SC 용량화)를 가진 인산염-완충된 식염수 또는 0.01 % Tween-80 (PO 용량화)를 가진 0.5% 카복시메틸 셀룰로스 (CMC)이었다. 동물은 계층화되었고 (n　= 12-14 / 그룹) 8 주 동안 (1) 비히클 (0.5% CMC, PO, QD) 및 비히클 (식염수, SC, QD); (2) 민넬리드 (0.1 mg/kg, PO, QD) 및 비히클 (식염수, SC, QD), (3) 민넬리드 (0.1 mg/kg, PO, QD) 및 리라글루티드 (0.4 mg/kg, SC, QD); 또는 (4) 민넬리드 (0.1 mg/kg, PO, QD) 및 엘라피브라노르 (30 mg/kg, PO, QD)로 치료되었다. 말기 혈액 샘플은 비-단식된 마우스에서 꼬리 정맥으로부터 수집되었고 혈장 생화학에 사용되었다. 동물은 이소플루란 마취 하에서 심장 천자에 의해 희생되었다. 간 샘플은 하기 기재된 바와 같이 가공되었다.
생화학적 및 조직학적 분석
생화학적 및 조직학적 분석은 이전에 보고된 바와 같이 수행되었다 (Tølbøl, 등. World J Gastroenterol.　Jan 14, 2018;　24(2): 179-194). 혈장 분석물은 알라닌 아미노트랜스퍼라제 (ALT), 아스파르테이트 아미노트랜스퍼라제 (AST), 중성지방 (TG) 및 총 콜레스테롤 (TC)을 포함하였다. 간 균질물은 TG 및 TC에 대하여 분석되었다. 파라포름알데히드-고정된 간 사전- 및 사후-생검은 파라핀-포매되었고, 해체되었고, 헤마톡실린-에오신 (Dako, Glostrup, Denmark), 피크로-시리우스 레드 (Sigma-Aldrich, Broendby, Denmark), 항-I형 콜라겐 (Col1a1; Southern Biotech, Birmingham, AL), 또는 항-갈렉틴-3 (Biolegend, San Diego, CA, United States)으로 염색되었다. NAFLD 활성 점수 (NAS) 및 섬유증 병기화 시스템은 간 사전-생검 및 말기 샘플 (약물 치료 실험)에 또는 지방증, 소엽 염증, 간세포 풍선화, 및 섬유증의 점수화를 위하여 말기 샘플 (질환 진행 실험)에만 적용되었다. 모든 조직학적 평가는 치료에 맹검인 병리학자에 의해 수행되었다. 치료가 총 간 중량에 영향을 미칠 수 있기 때문에, 간 총 지질, 갈렉틴-3, Col1a1 함량에 관한 정량적 데이터는 개별 말기 간 중량을 상응하는 간 지질 농도 (생화학 데이터) 또는 퍼센트 분획 면적 (조직학 데이터)을, 각각 곱셈함으로써 전체-간 양으로서 표현되었다.
결과
비히클 치료를 이용한 DIO-NASH 마우스의 대사적, 생화학적 및 조직학적 변화
연구 종료시, DIO-NASH 비히클-치료된 동물은 간 중성지방 (TG) 및 총 콜레스테롤 (TC) 함량의 증가된 상대 (mg/g) 및 총 수준, 뿐만 아니라 혈장 TC 및 간 효소 ALT/AST의 상승된 수준과 함께 비만도 및 간비대를 표시하였다 (도 1). 지방간염은 간 지방증 (지질) 및 마크로파지 마커 갈렉틴-3 (Gal-3)의 증가된 상대 (%) 및 총 수준에 의해 조직학적으로 확인되었다 (이미지 분석). 게다가, 섬유성 표현형은 간 히드록시프롤린 (HP), 콜라겐 1a1 (Col1a1) 및 알파-SMA (α-SMA)의 증가된 상대 및 총 수준에 의해 확인되었다. 조직학적 점수화의 경우, 12마리 비히클-처리된 DIO-NASH 동물 중 9마리는 5-7 점 범위의 지속된 또는 증가된 복합 NAFLD 활성 점수 (NAS) (사전-치료 내지 사후-치료)를 입증하였고 12마리 동물 중 3마리는, 소엽 염증 점수에서 감소에 의해 구동된, 기준선으로부터 퇴행을 입증하였다. 마지막으로, 12마리 DIO-NASH 비히클-치료된 동물 중 11마리는, 모두 F2-F3인, 지속된 섬유증 병기 (사전-치료 내지 사후-치료)를 입증하였고, 12마리 동물 중 1마리는 기준선으로부터 퇴행을 입증하였다. 종합하면, 관찰된 대사적, 생화학적 및 조직학적 표현형은 DIO-NASH 마우스 모델에 대하여 이전 발견에 따른다.
민넬리드는 DIO-NASH 마우스의 간에서 갈렉틴-3 수준을 저하시켰다
갈렉틴-3은 지방 간 질환 및 섬유증의 병인에서 중요한 단백질이다. 갈렉틴-3의 억제는 전임상 및 초기 임상 연구에서 식단-유도된 NASH로부터의 보호에서 유망한 효능을 보여주었다. 간 갈렉틴-3은 총 조직 면적의 백분율로서 양성 갈렉틴-3 염색 면적의 분획으로서 평가되었다 (도 2a-b). 비히클 치료된 대조 DIO-NASH 마우스와 비교하여, 민넬리드 치료된 그룹은 간 갈렉틴-3에서 18.41% 감소 (% 분획 면적)을 입증하였다 (도 1 및 도 2c-d).
민넬리드 및 엘라피브라노르 병용 요법
8 주 동안 민넬리드 및 엘라피브라노르 콤보-요법을 이용한 치료는, DIO-NASH 비히클 치료된 동물과 비교된 경우, 기준선으로부터 대략 12 % 체중을 감소시켰고 (비히클-보정됨) 간비대를 동시에 감소시켰다. 또한, 민넬리드 및 엘라피브라노르 치료는 ALT/AST/TC/TG의 혈장 수준을 감소시켰고 간 TG/TC 함량의 상대 및 총 수준을 감소시켰다 (도 1). 게다가, 민넬리드 및 엘라피브라노르 치료는 간 지질 및 Gal-3의 상대 및 총 수준을 감소시켰다. 섬유증의 경우, 민넬리드 및 엘라피브라노르 치료는 간 히드록시프롤린 (HP) 함량의 상대 및 총 수준, 간 Col1a1의 상대 수준 그리고 α-SMA의 상대 및 총 수준을 감소시켰다. 조직학적 점수화의 경우, 모든 민넬리드 및 엘라피브라노르-치료된 동물은, 지방증 및 소엽 염증 점수에서 감소에 의해 우세하게 구동된, 복합 NAS (사전-치료 내지 사후-치료)를 감소시켰다. 더욱이, 민넬리드 및 엘라피브라노르 병용 요법은 Tølbøl, 등. World J Gastroenterol.　Jan 14, 2018;　24(2): 179-194에서 발표된 엘라피브라노르 단독요법 조직학적 레퍼런스 연구 (도 1의 레퍼런스 연구)와 비교하여 향상된 효능의 전체적 추세를 입증하였다.
민넬리드 및 리라글루티드 병용 요법
8 주 동안 민넬리드 및 리라글루티드 콤보-요법을 이용한 치료는, DIO-NASH 비히클 치료된 동물과 비교된 경우, 기준선으로부터 대략 13 % 체중을 감소시켰고 (비히클-보정됨) 간비대를 동시에 감소시켰다. 또한, 민넬리드 및 리라글루티드 치료는 ALT/AST/TC의 혈장 수준을 감소시켰고 간 TG/TC 함량의 상대 및 총 수준을 감소시켰다 (도 1). 게다가, 민넬리드 및 리라글루티드 치료는 간 지질 및 Gal-3의 상대 및 총 수준을 감소시켰다. 섬유증의 경우, 민넬리드 및 리라글루티드 치료는 간 HP 함량의 상대 및 총 수준, 간 Col1a1의 총 수준 그리고 α-SMA의 상대 및 총 수준을 감소시켰다. 조직학적 점수화의 경우, 13마리 민넬리드 및 리라글루티드-치료된 동물 중 10마리는, 소엽 염증 및 간세포성 풍선화 점수에서 감소에 의해 우세하게 구동된, 복합 NAS (사전-치료 내지 사후-치료)를 감소시켰다. 더욱이, 민넬리드 및 리라글루티드 병용 요법은 Tølbøl, 등. World J Gastroenterol.　2018년 1월 14일;　24(2): 179-194에서 발표된 리라글루티드 단독요법 조직학적 레퍼런스 연구 (도 1의 레퍼런스 연구)와 비교하여 향상된 효능의 전체적 추세를 입증하였다.
실시예 3 화학식 I의 대표적 화합물의 제조
MinnelideTM (14-O-포스포노옥시메틸트립톨리드 2나트륨 염)는 하기 반응식에서 실례된 바와 같이 제조될 수 있다.
Figure pct00010
14-O-포스포노옥시메틸트립톨리드 2나트륨 염의 합성.
테트라히드로푸란 (5 mL)내 14-O-포스포노옥시메틸트립톨리드 디벤질 에스테르 (50 mg, 0.08 mmol)의 용액에 탄소상의 팔라듐 (10%, 10mg)이 첨가되었다. 혼합물은 실온에서 수소 하에 (1 atm) 3 시간의 기간 동안 교반되었다. 촉매는 CELITE™를 통한 여과로 제거되었고, 여과물은 탄산나트륨 수화물의 용액 (3 mL 물내 8.9 mg, 0.076 mmol)으로 처리되었다. 테트라히드로푸란은 감압 하에서 증발되었고 잔류 수용액은 에테르 (3x3 mL)로 추출되었다. 수성 층은 증발 건조되었고 생성된 고체는 밤새 진공 하에서 건조되었고, 에테르로 세정되었고 진공 하에서 재차 건조되어 14-O-포스포노옥시메틸트립톨리드 2나트륨 염 (35 mg, 90% 수율)을 백색 분말제로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, D2O) δ 0.81 (d, 3H, J = 6.8 Hz), 1.00 (d, 3H, J = 6.8 Hz), 1.03 (s, 3H), 1.35 (m, 1H), 1.50 (m, 1H), 2.00 (dd, 1H, J 1 = 14.7 및 J 2 = 13.4 Hz), 2.08-2.61 (m, 4H), 2.85 (m, 1H), 3.63 (d, 1H, J = 5.5 Hz), 3.81 (d, 1H, J = 3.1 Hz), 3.86 (s, 1H), 4.12 (d, 1H, J = 3.1 Hz), 4.92 (m, 2H), 5.07 (m, 2H) ppm; 13C NMR (100 MHz, D2O) δ 12.9, 16.0, 16.3, 16.5, 22.3, 25.5, 28.9, 35.2, 39.8, 55.4, 56.1, 61.0, 61.5, 65.1, 65.5, 71.9, 77.6, 91.7, 123.8, 164.2, 177.3 ppm; 요구된 (C21H26O10P)에 대하여 계산치 HRMS m/z [M+1]+ 469.1264, 측정치 m/z 469.1267.
중간체 14-O-포스포노옥시메틸트립톨리드 디벤질 에스테르는 하기와 같이 제조될 수 있다.
a. 아세트산 (5 mL, 87.5 mmol)내 트립톨리드 (100 mg, 0.29 mmol) 및 DMSO (1.5 mL, 21.4 mmol)내 아세트산 무수물 (1 mL, 10.5 mmol)의 용액은 제조되었고 실온에서 5 일의 기간 동안 교반되어 14-O-메틸티오메틸트립톨리드 중간체를 산출하였다. 반응 혼합물은 그 다음 물 (100 mL)에 부어졌고, 부분적으로 첨가된, 고체 NaHCO3로 중성화되었다. 혼합물은 에틸 아세테이트 (50 mL x 3)로 추출되었고, 조합된 유기 추출물은 무수 황산나트륨에서 건조되었고 농축되어 생성물을 오일로서 제공하였다. 플래시 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피 (3:2 헥산/에틸 아세테이트)는 14-O-메틸티오메틸트립톨리드를 52% (60 mg)로 백색 포말로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 0.82 (d, 3H, J = 6.8 Hz), 1.00 (d, 3H, J = 6.8 Hz), 1.09 (s, 3H), 1.20 (m, 1H), 1.59 (m, 1H), 1.93 (dd, 1H, J 1 = 14.7 및 J 2 = 13.4 Hz), 2.19 (s, 3H), 2.10-2.42 (m, 4H), 2.68 (m, 1H), 3.24 (d, 1H, J = 5.5 Hz), 3.51 (d, 1H, J = 3.1 Hz), 3.67 (s, 1H), 3.79 (d, 1H, J = 3.1 Hz), 4.68 (m, 2H), 4.93 (d, 1H, J = 11.8 Hz), 5.07 (d, 1H, J = 11.8 Hz) ppm; 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 13.6, 14.8, 16.8, 17.0, 17.1, 23.4, 26.3, 29.5, 35.8, 40.4, 54.5, 55.0, 58.0, 61.5, 63.9, 64.4, 69.9, 75.8, 76.7, 125.5, 160.2, 173.2 ppm; 요구된 (C22H28O6SNa)에 대하여 계산치 HRMS m/z [M+Na]+ 443.1505, 측정치 m/z 443.1507.
b. N2 대기 하에서 건조 염화메틸렌 (2 mL)내 14-O-메틸티오메틸트립톨리드 (50 mg, 0.12 mmol)의 용액은 분말화된 활성화 4Å 분자 체 (50 mg)와 조합되었고, 이어서 테트라히드로푸란 (2 mL)내 디벤질포스페이트 (40 mg, 0.14 mmol) 및 N-요오도석신이미드 (32 mg, 0.14 mmol)의 혼합물이 첨가되었다. 반응 혼합물은 실온에서 5 시간의 기간 동안 교반되었고, 여과되었고, 염화메틸렌 (20 mL)으로 희석되었다. 생성된 용액은 티오황산나트륨의 용액 (2 mL, 1M 용액), 중탄산나트륨의 포화 용액, 염수로 세정되었고, 황산나트륨에서 건조되었고, 여과되었고, 진공 하에서 농축되었다. 오일성 잔류물은 실리카 겔 플래시 크로마토그래피 (1:2 헥산/에틸 아세테이트)로 정제되어 14-O-포스포노옥시메틸트립톨리드 디벤질 에스테르 (62 mg, 80% 수율)를 백색 포말로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 0.72 (d, 3H, J = 6.8 Hz), 0.89 (d, 3H, J = 6.8 Hz), 1.05 (s, 3H), 1.27 (m, 1H), 1.48 (m, 1H), 1.82 (dd, 1H, J 1 = 14.7 및 J 2 = 13.4 Hz), 2.03-2.35 (m, 4H), 2.64 (m, 1H), 3.14 (d, 1H, J = 5.5 Hz), 3.46 (d, 1H, J = 3.1 Hz), 3.65 (s, 1H), 3.76 (d, 1H, J = 3.1 Hz), 4.65 (m, 2H), 5.02 (m, 4H), 5.27 (m, 1H), 5.47 (m, 1H), 7.34 (m, 10H) ppm; 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 13.6, 16.8, 17.0, 23.3, 26.2, 29.62, 29.67, 35.7, 40.3, 54.7, 55.2, 59.3, 61.1, 63.6, 64.0, 69.36, 69.39, 69.42, 69.45, 69.9, 78.2, 92.9, 93.0, 125.5, 127.9, 128.0, 128.6, 135.5, 135.6, 160.1, 173.2 ppm; 요구된 (C35H39O10PNa)에 대하여 HRMS 계산치 m/z [M+Na]+ 673.2179, 측정치 m/z 673.2176.
실시예 4 Minnelide TM (14-O-포스포노옥시메틸트립톨리드 2나트륨 염)의 제조
MinnelideTM (14-O-포스포노옥시메틸트립톨리드 2나트륨 염)는 하기 반응식에서 실례된 바와 같이 또한 제조될 수 있다.
Figure pct00011
14-O-포스포노옥시메틸트립톨리드 2나트륨 염의 합성.
0 ℃에 THF (10 mL)내 14-O-메틸티오메틸트립톨리드 (50 mg, 0.12 mmol), 인산 (82 mg, 0.84 mmol), 및 분자 체 (4 Å, 0.45 g)를 함유하는 용액에 N-요오도석신이미드 (41 m g, 0.18 mmol)가 첨가되었고, 혼합물은 실온에서 1 시간 동안 교반되었다. 반응 혼합물은 셀라이트를 통해 여과되었고, 고체는 THF로 세정되었다. 여과물은 무색인 때까지 1 M Na2S2O3로 처리되었고 여과물은 탄산나트륨의 용액 (3 mL 물내 13 mg, 0.12 mmol)으로 처리되었다. 여과물은 감압 하에서 증발되었고 잔류 수용액은 에테르 (3x3 mL)로 추출되었다. 수성 층은 증발 건조되었고 생성된 잔류물은 물에서 0-100% 메탄올의 기울기로 용리하는, 크로마토그래피 (C18)로 정제되어 14-O-포스포노옥시메틸트립톨리드 2나트륨 염 (43 mg, 70% 수율)을 무색 분말제로서 제공하였다.
중간체 14-O-메틸티오메틸트립톨리드는 다음과 같이 제조될 수 있다.
a. 0 ℃에 아세토니트릴 (10 mL)내 트립톨리드 (100 mg, 0.28 mmol) 및 황화메틸 (0.16 mL, 2.24 mmol)의 용액에 20 분 동안 4개 동일 부분으로 벤조일 퍼옥시드 (0.27 g, 1.12 mmol)가 첨가되었고, 그 다음 혼합물은 0 ℃에 1 시간 동안 그후 실온에서 1 시간 동안 교반되었다. 혼합물은 에틸 아세테이트로 희석되었고 10% Na2CO3 및 그 다음 염수로 세정되었다. 유기 상은 MgSO4에서 건조되었고, 여과되었고, 증발되었다. 잔류물은 실리카 겔 플래시 크로마토그래피 (1:1 헥산/에틸 아세테이트)로 정제되어 14-O-메틸티오메틸트립톨리드 (63 mg, 54 % 수율)를 무색 분말제로서 제공하였다.
MinnelideTM (14-O-포스포노옥시메틸트립톨리드 2나트륨 염)는 하기 반응식에서 실례된 바와 같이 또한 제조될 수 있다.
Figure pct00012
14-O-포스포노옥시에틸트립톨리드 2나트륨 염의 합성.
0 ℃에 THF (10 mL)내 14-O-메틸티오에틸트립톨리드 (52 mg, 0.12 mmol), 인산 (82 mg, 0.84 mmol), 및 분자 체 (4 Å, 0.45 g)를 함유하는 용액에 N-요오도석신이미드 (41 mg, 0.18 mmol)가 첨가되었고, 혼합물은 실온에서 1 시간 동안 교반되었다. 반응 혼합물은 셀라이트를 통해 여과되었고, 고체는 THF로 세정되었다. 여과물은 무색인 때까지 1 M Na2S2O3으로 처리되었고 여과물은 탄산나트륨의 용액 (3 mL 물내 13 mg, 0.12 mmol)으로 처리되었다. 여과물은 감압 하에서 증발되었고 잔류 수용액은 에테르 (3x3 mL)로 추출되었다. 수성 층은 증발 건조되었고 생성된 잔류물은 물에서 0-100% 메탄올의 기울기로 용리하는, 크로마토그래피 (C18)로 정제되어 14-O-포스포노옥시에틸트립톨리드 2나트륨 염 (46 mg, 72% 수율)을 무색 분말제로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, D2O) δ 0.68 (d, 3H, J = 6.8 Hz), 0.70 (d, 3H, J = 6.8 Hz), 1.03 (s, 3H), 1.21 (m, 1H), 1.57 (d, 3H, J = 5.3 Hz), 1.58 (m, 1H), 1.94 (dd, 1H, J 1 = 14.7 및 J 2 = 13.4 Hz), 2.08-2.61 (m, 4H), 2.62 (m, 1H), 3.27 (d, 1H, J = 5.5 Hz), 3.45 (d, 1H, J = 3.1 Hz), 3.72 (d, 1H, J = 3.1 Hz), 3.79 (s, 1H), 4.63 (m, 2H), 6.43 (q, 1H, J = 5.3 Hz) ppm; 13C NMR (100 MHz, D2O) δ 13.5, 16.9, 17.0, 17.1, 21.4, 23.5, 26.8, 29.5, 35.9, 40.3, 54.0, 55.1, 59.4, 61.2, 63.6, 64.2, 69.8, 75.8, 76.5, 91.6, 125.6, 164.2, 177.2 ppm; 요구된 (C22H28O10P)에 대하여 HRMS 계산치 m/z [M+1]+ 483.1137, 측정치 m/z 483.1134.
중간체 14-O-메틸티오에틸트립톨리드는 하기와 같이 제조될 수 있다.
a. 0 ℃에 아세토니트릴 (10 mL)내 트립톨리드 (100 mg, 0.28 mmol) 및 황화에틸 (0.24 mL, 2.24 mmol)의 용액에 20 분 동안 4개 동일 부분으로 벤조일 퍼옥시드 (0.27 g, 1.12 mmol)가 첨가되었고, 그 다음 혼합물은 0 ℃에 1 시간 동안 그 다음 실온에서 1 시간 동안 교반되었다. 혼합물은 에틸 아세테이트로 추출되었고 10% Na2CO3 및 염수로 세정되었다. 유기 상은 MgSO4에서 건조되었고, 여과되었고, 증발되었다. 잔류물은 실리카 겔 플래시 크로마토그래피 (1:1 헥산/에틸 아세테이트)로 정제되어 14-O-메틸티오에틸트립톨리드 (60 mg, 50 % 수율)를 무색 분말제로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 0.68 (d, 3H, J = 6.8 Hz), 0.70 (d, 3H, J = 6.8 Hz), 1.04 (s, 3H), 1.20 (m, 1H), 1.57 (d, 3H, J = 5.3 Hz), 1.59 (m, 1H), 1.88 (dd, 1H, J 1 = 14.7 및 J 2 = 13.4 Hz), 2.19 (s, 3H), 2.06-2.27 (m, 4H), 2.62 (m, 1H), 3.24 (d, 1H, J = 5.5 Hz), 3.42 (d, 1H, J = 3.1 Hz), 3.70 (d, 1H, J = 3.1 Hz), 3.73 (s, 1H), 4.61 (m, 2H), 5.02 (q, 1H, J = 5.3 Hz) ppm; 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 13.6, 14.8, 16.9, 17.0, 17.1, 21.0, 23.5, 26.4, 29.6, 35.8, 40.5, 54.0, 55.2, 59.4, 61.3, 63.7, 64.2, 69.9, 75.8, 76.7, 125.6, 160.2, 173.2 ppm; 요구된 (C23H30O6SNa)에 대하여 HRMS 계산치 m/z [M+Na]+ 457.1763, 측정치 m/z 457.1765.
MinnelideTM (14-O-포스포노옥시메틸트립톨리드 2나트륨 염)는 하기 반응식에서 실례된 바와 같이 또한 제조될 수 있다.
Figure pct00013
Figure pct00014
14-O-포스포노옥시프로필트립톨리드 2나트륨 염의 합성.
0 ℃에 THF (10 mL)내 14-O-메틸티오프로필트립톨리드 (54 mg, 0.12 mmol), 인산 (82 mg, 0.84 mmol), 및 분자 체 (4 Å, 0.45 g)를 함유하는 용액에 N-요오도석신이미드 (41 mg, 0.18 mmol)가 첨가되었고, 혼합물은 실온에서 1 시간 동안 교반되었다. 반응 혼합물은 셀라이트를 통해 여과되었고, 고체는 THF로 세정되었다. 여과물은 무색인 때까지 1 M Na2S2O3으로 처리되었고 여과물은 탄산나트륨의 용액 (3 mL 물내 13 mg, 0.12 mmol)으로 처리되었다. 여과물은 감압 하에서 증발되었고 잔류 수용액은 에테르 (3x3 mL)로 추출되었다. 수성 층은 증발 건조되었고 생성된 잔류물은 물에서 0-100% 메탄올의 기울기로 용리하는, 크로마토그래피 (C18)로 정제되어 14-O-포스포노옥시프로필트립톨리드 2나트륨 염 (43 mg, 65% 수율)을 무색 분말제로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, D2O) δ 0.66 (d, 3H, J = 6.8 Hz), 0.68 (d, 3H, J = 6.8 Hz), 0.99 (t, 3H, J = 5.3 Hz), 1.03 (s, 3H), 1.20 (m, 1H), 1.53 (m, 1H), 1.90 (dd, 1H, J 1 = 14.7 및 J 2 = 13.4 Hz), 2.04-2.66 (m, 4H), 2.65 (m, 3H), 3.27 (d, 1H, J = 5.5 Hz), 3.49 (d, 1H, J = 3.1 Hz), 3.71 (d, 1H, J = 3.1 Hz), 3.78 (s, 1H), 4.69 (m, 2H), 6.31 (q, 1H, J = 5.3 Hz) ppm; 13C NMR (100 MHz, D2O) δ 7.55, 13.5, 16.2, 16.9, 17.2, 20.8, 23.2, 26.1, 28.4, 34.7, 38.5, 54.1, 55.0, 59.0, 61.3, 62.5, 63.9, 68.5, 75.4, 76.4, 91.9, 125.7, 160.1, 174.5 ppm; 요구된 (C23H29O10P)에 대하여 HRMS 계산치 m/z [M+1]+ 497.1294, 측정치 m/z 497.1292
중간체 14-O-메틸티오프로필트립톨리드는 하기와 같이 제조될 수 있다.
a. 0 ℃에 아세토니트릴 (10 mL)내 트립톨리드 (100 mg, 0.28 mmol) 및 황화프로필 (0.32 mL, 2.24 mmol)의 용액에 20 분 동안 4개 동일 부분으로 벤조일 퍼옥시드 (0.27 g, 1.12 mmol)가 첨가되었고, 혼합물은 0 ℃에 1 시간 동안 그 다음 실온에서 1 시간 동안 교반되었다. 혼합물은 에틸 아세테이트로 희석되었고 10% Na2CO3 및 그 다음 염수로 세정되었다. 유기 상은 MgSO4에서 건조되었고, 여과되었고, 증발되었다. 잔류물은 실리카 겔 플래시 크로마토그래피 (1:1 헥산/에틸 아세테이트)로 정제되어 14-O-메틸티오프로필트립톨리드 (60 mg, 48 % 수율)를 무색 분말제로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 0.65 (d, 3H, J = 6.8 Hz), 0.67 (d, 3H, J = 6.8 Hz), 0.99 (t, 3H, J = 5.3 Hz), 1.01 (s, 3H), 1.20 (m, 1H), 1.59 (m, 1H), 1.88 (dd, 1H, J 1 = 14.7 및 J 2 = 13.4 Hz), 2.18 (s, 3H), 2.01-2.26 (m, 4H), 2.62 (m, 3H), 3.24 (d, 1H, J = 5.5 Hz), 3.42 (d, 1H, J = 3.1 Hz), 3.70 (d, 1H, J = 3.1 Hz), 3.73 (s, 1H), 4.61 (m, 2H), 5.03 (q, 1H, J = 5.3 Hz) ppm; 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 7.68, 13.5, 14.6, 16.2, 17.0, 17.2, 21.4, 23.2, 26.1, 28.9, 34.7, 39.5, 54.1, 55.6, 59.0, 61.3, 63.5, 64.0, 69.5, 75.1, 76.4, 125.1, 160.9, 173.5 ppm; 요구된 (C24H32O6SNa)에 대하여 HRMS 계산치 m/z [M+Na]+ 471.1920, 측정치 m/z 471.1918.
모든 공보, 특허, 및 특허 문헌은, 참고로 개별적으로 편입된 것처럼, 본원에 참고로 편입된다. 본 발명은 다양한 특정 및 바람직한 구현예 및 기술을 참고로 기재되었다. 하지만, 많은 변형 및 수정이 본 발명의 사상 및 범위 내에 남아있으면서 실시될 수 있다는 것이 이해되어야 한다.

Claims (49)

  1. 섬유증, 비알코올성 지방 간 질환 (NAFLD) 또는 비알코올성 지방간염 (NASH)의 예방적 또는 치료적 처치를 위한, 하기 화학식 I의 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염:
    Figure pct00015

    식중:
    R은 H 또는 (CR1R2O)nP(O)(OH)2이고;
    각각의 R1은 독립적으로 H, (C1-C6)알킬, 아릴(C1-C6)알킬-, (C3-C6)시클로알킬 또는 아릴이고; 각각의 R2는 독립적으로 H, (C1-C6)알킬, 아릴(C1-C6)알킬-, (C3-C6)시클로알킬 또는 아릴이거나; R1 및 R2는 이들이 부착되는 원자와 함께 (C3-C7)시클로알킬을 형성하고; R1 또는 R2의 임의의 알킬 또는 시클로알킬은 할로, (C1-C6)알콕시 및 NRaRb로부터 선택된 하나 이상 (예를 들면 1, 2, 3, 4 또는 5) 기로 임의로 치환될 수 있고 R1 또는 R2의 임의의 아릴은 할로, (C1-C6)알킬, (C1-C6)알콕시, NRaRb, 니트로 및 시아노로부터 선택된 하나 이상 (예를 들면 1, 2, 3, 4 또는 5) 기로 임의로 치환될 수 있으며;
    Ra 및 Rb는 H, (C1-C6)알킬, (C3-C6)시클로알킬 및 아릴로부터 각각 독립적으로 선택되거나; Ra 및 Rb는 이들이 부착되는 질소와 함께 피롤리디노, 피페라디노, 피페라지노, 아제티디노, 모르폴리노, 또는 티오모르폴리노를 형성하며;
    n은 1, 2 또는 3임.
  2. 제 1 항에 있어서, 비알코올성 지방 간 질환의 치료 방법인, 화합물.
  3. 제 1 항에 있어서, 비알코올성 지방간염의 치료 방법인, 화합물.
  4. 제 1 항에 있어서, 간 섬유증의 치료 방법인, 화합물.
  5. 제 4 항에 있어서, 상기 섬유증이 바이러스성 B형 간염과 연관되는, 화합물.
  6. 제 4 항에 있어서, 상기 섬유증이 바이러스성 C형 간염과 연관되는, 화합물.
  7. 제 4 항에 있어서, 상기 섬유증이 대사적, 담즙성 또는 자가면역 간 질환과 연관되는, 화합물.
  8. 제 1 항에 있어서, 폐 섬유증의 치료 방법인, 화합물.
  9. 제 1 항 내지 제 8 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화학식 I의 화합물의 상기 약제학적으로 허용가능한 염이 하기 화학식　Ia의 염인, 화합물:
    Figure pct00016

    식중 각각의 X+는 독립적으로 약제학적으로 허용가능한 유기 양이온 또는 약제학적으로 허용가능한 무기 양이온임.
  10. 제 1 항 내지 제 8 항 중 어느 한 항에 있어서, R1이 H 또는 (C1-C6)알킬인, 화합물.
  11. 제 1 항 내지 제 8 항 중 어느 한 항에 있어서, R1이 H인, 화합물.
  12. 제 1 항 내지 제 8 항 중 어느 한 항에 있어서, R1이 (C1-C6)알킬인, 화합물.
  13. 제 1 항 내지 제 8 항 중 어느 한 항에 있어서, R1이 메틸 또는 에틸인, 화합물.
  14. 제 1 항 내지 제 8 항 및 제 10 항 내지 제 13 항 중 어느 한 항에 있어서, R2가 H 또는 (C1-C6)알킬인, 화합물.
  15. 제 1 항 내지 제 8 항 및 제 10 항 내지 제 13 항 중 어느 한 항에 있어서, R2가 H인, 화합물.
  16. 제 9 항에 있어서, 각각의 X+가 H인, 화합물.
  17. 제 9 항에 있어서, 각각의 X+가 독립적으로 리튬, 나트륨, 칼륨, 마그네슘, 칼슘, 바륨, 아연 또는 알루미늄인, 화합물.
  18. 제 9 항에 있어서, 각각의 X+가 화학식 HY+와 독립적이되 Y가 암모니아, 트리에틸아민, 트로메타민, 트리에탄올아민, 에틸렌디아민, 글루카민, N-메틸글루카민, 글리신, 리신, 오르니틴, 아르기닌, 에탄올아민 또는 콜린인, 화합물.
  19. 제 9 항에 있어서, 각각의 X+가 Li+, K+ 및 Na+로부터 독립적으로 선택되는, 화합물.
  20. 제 9 항에 있어서, 각각의 X+가 Na+인, 화합물.
  21. 제 1 항 내지 제 8 항 및 제 10 항 내지 제 15 항 중 어느 한 항에 있어서, R이 (CR1R2O)nP(O)(OH)2인, 화합물.
  22. 제 9 항에 있어서, 상기 약제학적으로 허용가능한 염이 14-O-포스포노옥시메틸트립톨리드 2나트륨 염, 14-O-포스포노옥시에틸트립톨리드 2나트륨 염 또는 14-O-포스포노옥시프로필트립톨리드 2나트륨 염인, 화합물.
  23. 제 9 항에 있어서, 상기 약제학적으로 허용가능한 염이 14-O-포스포노옥시메틸트립톨리드 2나트륨 염인, 화합물.
  24. 제 1 항 내지 제 23 항 중 어느 한 항에 있어서, 치료적 제제와 조합된, 화합물.
  25. 제 24 항에 있어서, 상기 치료적 제제가 인슐린 감작 제제, 티아졸리딘온, 비타민 E, 우르소데옥시콜산, 오메가-3 지방 산, 갈렉틴-3 억제제 및 스테인으로 이루어지는 군으로부터 선택되는, 화합물.
  26. 제 24 항에 있어서, 상기 치료적 제제가 GLP-1 작용제인, 화합물.
  27. 제 24 항에 있어서, 상기 치료적 제제가 리라글루티드인, 화합물.
  28. 제 24 항에 있어서, 상기 치료적 제제가 PPAR 작용제인, 화합물.
  29. 제 24 항에 있어서, 상기 치료적 제제가 엘라피브라노르 또는 이의 염인, 화합물.
  30. 약제학적 조성물로서, a) 제 1 항 및 제 9 항 내지 제 23 항 중 어느 한 항에 기재된 바와 같이 화학식 I의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염, b)　치료적 제제, 및 c) 약제학적으로 허용가능한 희석제 또는 담체를 포함하는, 약제학적 조성물.
  31. 제 30 항에 있어서, 상기 치료적 제제가 인슐린 감작 제제, 티아졸리딘온, 비타민 E, 우르소데옥시콜산, 오메가-3 지방산, 갈렉틴-3 억제제 및 스테인으로 이루어지는 군으로부터 선택되는, 조성물.
  32. 제 30 항에 있어서, 상기 치료적 제제가 GLP-1 작용제인, 조성물.
  33. 제 30 항에 있어서, 상기 치료적 제제가 리라글루티드인, 조성물.
  34. 제 30 항에 있어서, 상기 치료적 제제가 PPAR 작용제인, 조성물.
  35. 제 30 항에 있어서, 상기 치료적 제제가 엘라피브라노르 또는 이의 염인, 조성물.
  36. 포유동물 (예를 들면 인간)에서 섬유증, 비알코올성 지방 간 질환 (NAFLD) 또는 비알코올성 지방간염 (NASH)의 치료를 위한 약제의 제조를 위하여, 제 1 항 및 제 9 항 내지 제 23 항 중 어느 한 항에 기재된 바와 같이 화합물 또는 염의, 용도.
  37. 섬유증, 비알코올성 지방 간 질환 (NAFLD) 또는 비알코올성 지방간염 (NASH)을 치료하기 위해 동물 (예를 들면 포유동물)에게 상기 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염 및 상기 치료적 제제를 투여하기 위하여 a) 제 1 항 및 제 9 항 내지 제 23 항 중 어느 한 항에 기재된 바와 같이 화학식 I의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염, b)　치료적 제제, 및 3) 패키징 재료 및 사용설명서를 포함하는, 키트.
  38. 제 37 항에 있어서, 상기 치료적 제제가 인슐린 감작 제제, 티아졸리딘온, 비타민 E, 우르소데옥시콜산, 오메가-3 지방 산, 갈렉틴-3 억제제 및 스테인으로 이루어지는 군으로부터 선택되는, 키트.
  39. 제 37 항에 있어서, 상기 치료적 제제가 GLP-1 작용제인, 키트.
  40. 제 37 항에 있어서, 상기 치료적 제제가 리라글루티드인, 키트.
  41. 제 37 항에 있어서, 상기 치료적 제제가 PPAR 작용제인, 키트.
  42. 제 37 항에 있어서, 상기 치료적 제제가 엘라피브라노르 또는 이의 염인, 키트.
  43. 동물에서 섬유증, 비알코올성 지방 간 질환 (NAFLD) 또는 비알코올성 지방간염 (NASH)을 치료하는 방법에 있어서, 제 1 항 및 제 9 항 내지 제 23 항 중 어느 한 항에 기재된 바와 같이 화학식 I의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염을 상기 동물에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
  44. 제 43 항에 있어서, 상기 동물에게 치료적 제제를 투여하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
  45. 제 44 항에 있어서, 상기 치료적 제제가 인슐린 감작 제제, 티아졸리딘온, 비타민 E, 우르소데옥시콜산, 오메가-3 지방산, 갈렉틴-3 억제제 및 스테인으로 이루어지는 군으로부터 선택되는, 방법.
  46. 제 44 항에 있어서, 상기 치료적 제제가 GLP-1 작용제인, 방법.
  47. 제 44 항에 있어서, 상기 치료적 제제가 리라글루티드인, 방법.
  48. 제 44 항에 있어서, 상기 치료적 제제가 PPAR 작용제인, 방법.
  49. 제 44 항에 있어서, 상기 치료적 제제가 엘라피브라노르 또는 이의 염인, 방법.
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Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB202004471D0 (en) * 2020-03-27 2020-05-13 Kings College Hospital Methods
CN113521082A (zh) * 2021-08-23 2021-10-22 四川大学华西医院 雷公藤甲素在制备预防和/或治疗肝病的药物中的应用
CN115227829B (zh) * 2022-02-22 2023-10-13 成都中医药大学 酸敏感性适配体雷公藤甲素偶联物及应用

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4938949A (en) 1988-09-12 1990-07-03 University Of New York Treatment of damaged bone marrow and dosage units therefor
WO2006012204A2 (en) * 2004-06-25 2006-02-02 Pharmagenesis, Inc. Method for treatment of inflammatory disorders using triptolide compounds
US20080176861A1 (en) * 2007-01-23 2008-07-24 Kalypsys, Inc. Sulfonyl-substituted bicyclic compounds as ppar modulators for the treatment of non-alcoholic steatohepatitis
WO2010129918A1 (en) * 2009-05-07 2010-11-11 Regents Of The University Of Minnesota Triptolide prodrugs
EP3960181A3 (en) * 2016-02-02 2022-06-01 Board of Supervisors of Louisiana State University and Agricultural and Mechanical College Chemicals and methods to prevent and treat tgf-beta mediated activation of fibroblasts to reduce and treat cancer and fibrosis
CN111973604A (zh) * 2017-03-15 2020-11-24 中国科学院昆明植物研究所 雷公藤红素在制备治疗胆汁淤积性肝病的药物中的应用
CN106994129A (zh) * 2017-05-15 2017-08-01 王晓辉 雷公藤甲素及其衍生物在制备治疗和/或预防肺损伤疾病的药物中的应用

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