KR20210056285A - 비타민 a의 급여에 의한 한우 육량 및 육질의 개선 방법 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 비타민 A의 급여에 의한 한우 육량 및 육질의 개선 방법에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 어린 송아지 시기에 비타민 A를 경구로 추가 급여함으로써 한우 육량 및 육질을 개선하는 방법에 관한 것이다.
Description
본 발명은 비타민 A의 급여에 의한 한우 육량 및 육질의 개선 방법에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 어린 송아지시기에 비타민 A를 경구로 추가 급여함으로써 한우 육량 및 육질을 개선하는 방법에 관한 것이다.
소고기의 마블링은 우리나라의 직화 구이 식문화, 다즙성 및 기호도에 중요한 요인으로 작용하고 있어 육질 평가에 중요한 지표로 사용되고 있다. 하지만 소에 있어 마블링을 증가시키기 위한 과정에서 경제적 손실로 작용하는 피하지방 및 내장지방과 같이 불가식 지방이 함께 증가한다. 아울러 가식 부위인 근내지방 중에서도 현행의 지방의 총량만을 중시하는 마블링의 경우 건강 및 선호도 측면에서 소비자에게 부정적인 인식으로 작용한다. 이와 같은 소비자의 요구를 반영하여 일본에서는 같은 근내지방량을 가지고 있다고 하더라도 근내지방분포도가 높은 소고기에게 더 높은 등급을 부여한다(Kuchida, K et al., 2006) (도 1 참조). 근내지방분포도가 높은 소고기는 한우육의 다즙성, 풍미, 식욕촉진 등 기호성 및 소비자 선호도가 높은 고기로 인정되는 추세이며 상대적으로 소고기내 총 지방함량을 낮추는 효과가 있다. 근내지방분포도를 높이기 위해서는 지방세포의 크기를 늘리는 것이 아닌 지방세포의 수를 증가시켜야 한다.
지방의 증가는 지방세포 증식과 성장에 의해 일어나는데 세포의 증식과 성장은 Hyperplasia와 Hypertrophy로 두 가지로 나뉘며 Hyperplasia는 세포의 증식을 의미하고 분화 전에 일어나는 반면에 Hypertrophy는 세포의 크기 증가를 의미하며 분화가 일어난 후에 일어난다. 이전 지방대사 연구는 Lipid metabolism, Lipid deposition 즉 Hypertrophy에 초점을 두고 연구되었지만 Hyperplasia에 대한 연구는 미흡하다 (Smith. S. B et al., 2009). 일반적으로 임신우의 임신중기 전부터 태아에서 지방세포와 지방조직이 발견된다 (Berry, D.C et al., 2012). 쥐 모델에 많은 실험을 통해서 지방세포는 평생 동안 생성이 가능하지만 나이를 먹을수록 생성량이 감소하므로 태아 시기와 어린 송아지 시기가 근내지방분포도를 증가시키기 위한 최적의 시기를 예상하였다 (Du. M et al., 2010). 이와 같은 이유로 태아 시기와 어린 송아지 시기(출생 후 250일까지)에 근육내 지방전구세포의 Hyperplasia가 일어나는 시기로서 중요하게 관리되어져야함에도 불구하고 이와 관련된 연구는 미미한 실정이다.
영양소 중 Retinoic acid(비타민A)는 DNA Promoter에 메틸화를 억제하여 전구지방세포와 관련된 유전자를 촉진시키며 지방세포의 Hyperplasia와 관련된 대사각인 효과가 있다고 보고되고 있다. 흰쥐에게 Retinoic acid를 급여했을 때 extracellular-signal-reulated kinases(ERKs) pathway를 활성화시켜 Adipogenic commitment를 유도하는 결과가 발표되었다 (Bost. F et al., 2002). 줄기세포주의 성장단계에 Retinoic acid를 처리한 결과 Adipogenic commitment가 유도된다 (Dani, C et al., 1997). Retinoic acid는 지방전구세포와 성숙한 지방세포에서 서로 다른 반응을 나타낸다. 지방전구세포에서는 CRABP-II/FABP5의 비율이 높아 CRABP-II와 결합하는 Retinoic acid가 많이 존재하고 이는 RAR(Retinoic acid receptor)로 이동시켜 지방전구세포와 관련된 유전자인 Pref1, Sox9을 촉진시켜 분화를 억제하고 지방전구세포의 증식을 촉진한다 (Noy. N., 2013).
레티노익 산 (retinoic acid, RA)이 stem cell을 낮은 범위로 골격근 lineage의 분화를 유도할 뿐만 아니라 embryonic stem 세포로부터 muscle progenitor pool을 늘릴 수 있다는 것이 밝혀졌다. 그러나 retinoic acid의 과급여는 myotube의 성숙에 부정적인 영향을 끼친다 (Yu et al. 2004; Ryan et al. 2012; Chen and Li 2016; Liu et al. 2016). 앞서 설명했듯이, RAR와 RXR은 RA의 수용체로 알려져 있으며, 이들은 myogenic 분화과정에서 RXR과 RAR의 선택적인 리간드 메커니즘을 따라 RA의 대사산물에 의해 활성화된다 (Le May et al. 2011; Jin et al. 2016). zebrafish 모델에서는 RA가 근육분화인자로 알려져 있는 Fgf8 gene을 따라서 근육 분화를 활성화 한다는 것이 밝혀졌다. 그리고 RA신호의 억제는 근육 분화와 myoD expression을 억제할 것이다. (Hamade et al. 2006).
본 발명은 비타민 A의 급여에 의한 한우 육량 및 육질의 개선 방법을 제공한다. 보다 구체적으로 어린 송아지 시기에 비타민 A를 경구로 추가 급여함으로써 한우 육량 및 육질을 개선하는 방법을 제공한다.
본 발명은 비타민 A을 2개월 경까지 송아지에 급여하는 단계;를 포함하는 한우 육량 및 육질의 개선 방법을 제공한다.
상기 비타민 A의 급여는 경구 급여일 수 있다.
상기 비타민 A의 급여량은 20,000 IU/day 내지 120,000 IU/day일 수 있다.
본 발명에서는, 신생 송아지의 대용유에 DM의 45,000 IU/feed kg의 비타민 A 급여를 2개월령까지 진행할 경우 송아지의 등심 조직에서 preadipocyte 및 근육발달에 촉진 되는 것을 확인하였다.
신생 송아지의 대용유에 DM의 45,000 IU/feed kg 의 비타민 A 급여를 2개월령까지 진행할 경우 송아지의 성장 성적(체중증가 및 일당증체량)이 개선되는 것을 확인하였다.
도 1은 등심 조직 내 근내지방분포도에 따른 형상을 나타내는 사진 (Kuchida, K et al., 2006) 이다.
도 2는 실험 플로우 차트이다.
도 3은 송아지 출생후 2개월령까지 대용유 및 사료급여 전략을 나타내는 것이다.
도 4는 비타민A를 추가 급여한 송아지의 근육 섬유수 계산한 결과를 나타내는 것이다.
도 5는 비타민A를 추가 급여한 2개월령된 송아지의 등심 조직에서의 유전자 발현량 결과를 나타내는 것이다.
도 2는 실험 플로우 차트이다.
도 3은 송아지 출생후 2개월령까지 대용유 및 사료급여 전략을 나타내는 것이다.
도 4는 비타민A를 추가 급여한 송아지의 근육 섬유수 계산한 결과를 나타내는 것이다.
도 5는 비타민A를 추가 급여한 2개월령된 송아지의 등심 조직에서의 유전자 발현량 결과를 나타내는 것이다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 보다 상세하게 설명한다. 본 발명의 목적, 특징, 장점은 이하의 실시예를 통하여 쉽게 이해될 것이다. 본 발명은 여기서 설명하는 실시예에 한정되지 않고, 다른 형태로 구체화될 수도 있다. 여기서 소개되는 실시예는 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 본 발명의 사상이 충분히 전달될 수 있도록 하기 위해 제공되는 것이다. 따라서 이하의 실시예에 의해 본 발명이 제한되어서는 안 된다.
본 발명은 비타민 A을 2개월 경까지 송아지에 급여하는 단계;를 포함하는 한우 육량 및 육질의 개선 방법을 제공한다.
상기 비타민 A의 급여는 경구 급여일 수 있다.
상기 비타민 A의 급여량은 20,000 IU(international unit)/day 내지 120,000 IU/day일 수 있다.
생후 5일부터 2개월 경까지 송아지에 DM의 45,000 IU/feed kg 의 비타민 A 급여를 포함하는 대용유를 급여하면 송아지의 성장 성적(체중증가 및 일당증체량)이 개선될 수 있다.
본 발명에서는 한우 송아지 시기에 vitamin A 대사각인 효과로 인한 송아지 지방전구세포의 hyperplasia 및 근육발달에 미치는 영향을 확인하였다. 구체적으로, 한우 육량 및 육질 개선을 위한 송아지 시기 지방전구세포의 hyperplasia 및 근육발달에 필요한 비타민 A 경구 급여 효과를 분석하였다.
준비예 1. 실험동물의 준비 및 관리
본 발명은 27 마리의 한국 토종 (한우) 암소 (2 등분, 초기 평균 BW = 320 kg [SD 31.2])를 대상으로 하였다. 모든 암소는 스테인리스 스틸 게이트와 자동 물통이 있는 여러 개의 우리에 무작위로 배치하였다. 매월 교체되는 침구용 바닥에 깨끗하고 마른 짚을 뿌렸다. 실험 동물은 다양한 한우의 무작위 정액을 사용하여 임신을 하였다. 임신한 소의 경우 총 13kg의 혼합 사료를 하루에 한 번 급여하였다. 사료의 양과 영양 성분은 한우의 한국 사료 기준에 따라 결정되었다 (표 1). 예비 연구에 따라 높은 비타민 A 보충제 (총 100,000 IU/day, retinyl acetate, Hanyou Feed, Wuxi, China)를 임신 후기(약 220일부터 분만까지)에 제공하였다.
모든 갓 태어난 송아지는 출생시 체중을 재고 즉시 어미에서 분리하여 개별 나무 우리(200cm (L) Х 135cm (B) Х 120cm (H))에 배치하였다. 신생아 송아지는 대조군 군 (n=13, 수송아지 9 마리, 암송아지 4마리)과 처리군 (n=14, 수송아지 10마리, 암송아지 4마리)에 대해 초기에 유사한 평균 몸무게(body weight; BW)로 무작위로 선택 되었다 (초기 평균 BW = 31.6kg [SD 3.98]). 실험 플로우 차트는 도 2에 나타내었다. 도 3은 송아지 출생후 2개월령까지 대용유 및 사료급여 전략을 나타낸 것이다. 생후 첫 12 시간 동안 3.6L의 상업용 초유 (625ml의 45℃ 물, Headstart, NAC No. 15360020, Saskatoon Colostrum Company Ltd., Saskatoon, SsK, CA)를 공급하였다. 각 송아지 마다 물, 사료 및 대용유는 별도의 양동이에 제공되었다. 대용유 (Nukamel Yellow, The Dawn Ltd., Seoul, Republic)는 140g의 분유 대체제를 45℃ 물 1L에 녹인 후, 자동 송아지 공급기 (Foerster Technik, Gerwigstraße 25, 78234 Engen, Germany)를 사용하여 출생부터 1개월까지 최대 용량 6.1L (출생 체중의 약 20 %)로 설정하여 하루에 6회 각 송아지에게 급여하였다. 1개월부터 2개월(이유기)까지 공급량을 점진적으로 늘려 대용유의 공급을 줄였다. 총 사료 섭취량(우유 대체제, 농축액 및 조사료 포함)을 매일 모니터링하고, 실험 기간 동안 건조 톱밥을 매주 교체하였다. 송아지의 건강 상태를 매일 감독하고 설사를 하는 개체는 네오다스이스티린(Neodiaristin)과 혼합되 바이오딜(biodyl), 베이트릴(baytril), 케토프로펜(ketoprofen) 및 구강 영양 보충제 (Life-aid, Norbrook, Northamptonshire, UK)를 투여하여 치료하였다. 콕시디아증(coccidiosis)의 예방을 위해 Ampura-q의 투여도 한 달령 송아지에 시행되었다. 실험 기간 동안 대조군 또는 비타민 A 처리군의 각 송아지는 생후 1개월 이 내에 약 1 ~3일 동안 설사를 하였다 (대조군과 비타민 A 처리군 사이의 빈도는 유의하지 않았으며 데이터는 기재하지 않음). 추가 비타민 A 보충제 (25,000/IU per day, retinyl acetate, Hanyou Feed, Wuxi, China)는 생후 5일부터 처리 군의 2개월(이유기)까지 대용유에 보충제로 투여되었다. 혈액 샘플 및 체중 데이터는 출생 후 5, 15, 30, 45 및 60일에 얻었다. 대용유, 사료 및 섬유질로 구성된 총 사료 섭취량(g/day of DM)을 실험 기간 동안 기록하고 평균 일일 증가량(Average Daily Gain; ADG) 및 사료 효율을 계산하였다.
최장근 근육 (Longissimus muscle) 샘플 (12 번째에서 13 번째 갈비뼈, 약 2g)은 송아지가 2 개월 일 때 각 그룹의 수컷 송아지 머리 5 개에서 수술 생검을 통해 수집하였다. 모든 생검 절차는 건국 대학교의 "실험 동물 관리 및 사용 지침"에 따라 수의사에의해 진행 되었다. 국소 마취제는 갈비뼈의 12번째 에서 13번째까지 장근배근 (longissimus dorsi muscle) 주위에 4 등거리 지점 (4 equidistant points)에 투여하였다. 수의사가 대상 근육 부위에서 약 5츠 정도 피부를 절제하고 수술 장비를 이용하여 약 2g의 장근배근을 절제하였다. 조직 샘플을 즉시 5 ml DEPC 처리된 마이크로 튜브에 넣고 액체 질소에서 급속 냉동한 다음 실험실에 도착할 때까지 드라이 아이스로 가득 찬 상자에 넣었다. 모든 근육 샘플은 추가 분석 전에 -80 ℃ 냉동고에 보관되었다. 샘플링 절차는 채혈 당일에 수행되었지만 1400에 채혈 후 수행되었다. 생검 시술후 수의사의 처방에 따라 수술 후 2주까지 관리를 진행하였다.
준비예 2. 혈액 샘플 준비 및 완전 혈구 수 (CBC) 측정
모든 혈액 샘플은 0900 시간에 18GX 바늘로 각각의 경정맥에서 채취하였다. 혈청 비타민 A 분석을 위한 혈액은 은박지로 감싼 응고 활성화제 튜브 (BD Vacutainer®, Belliver Industrial Estate, Plymouth, UK)에 수집하였다. 전 혈구검사(complete cell counts; CBC)를 위한 전혈은 7.2 mg K2 EDTA (BD Vacutainer®, Belliver Industrial Estate, Plymouth, UK)를 포함하는 혈액 수집 튜브에 수집하였다. 채혈 후 모든 튜브는 얼음 주머니를 포함하는 불투명한 상자를 통해 실험실로 운반되었다. 혈청 비타민 A의 혈액을 실온(Room temperature; RT)에서 1시간 방치한 후 원심 분리 (3,500 rpm (radius: 155 mm), 15분, 4℃)하고, 혈청은 적색광 아래에서 갈색 1.5mL 마이크로 튜브로 분리한 뒤, 분석을 위해 -80 ℃에 보관 하였다. 실험실에 도착하자마자 VetScanHM2 분석기 (Abaxis, Whipple Road Union City, California, USA)을 이용하여 전혈 샘플의 CBC를 분석하였다. 전 혈구(CBC) 분석을 위한 전혈은 7.2mg K2 EDTA를 포함하는 튜브에 수집하였다. 혈액 분석기에 따라 전 혈구 수 (CBC) 측정을 수행하였다. 백혈구 (WBC), 적혈구 (RBC), 헤모글로빈, 헤마토크릿(hematocrit), 평균 혈구 용적(mean corpuscular volume; MCV), 평균 혈구 혈색소 (mean corpuscular hemoglobin; MCH), 평균 혈구 함량 (mean corpuscular hemoglobin content; MCHC), 혈소판, 림프구 및 단핵구를 포함하여 총 10개 매개 변수를 분석하였다.
준비예 3. 혈청 비타민 A 분석
혈청 내 비타민 A 분석 방법은 이전 연구에 따라 수행되었다 (Peng et al., 2019). 메탄올, 에탄올 및 헥산은 HPLC 등급으로 제조되었다. 한편 레티닐 아세테이트(retinyl acetat), 레티놀(retinol), BHT (2.6-di-tert-butyl-4-methylphenol)는 Sigma (Sigma-Aldrich, Seoul, Korea)에서 구입하였다. 표준 스톡 용액은 0.04 % BHT-EtOH 용액 (0.4g의 BHT가 1L 에탄올에 용해 됨)에 용해된 1mg/mL 레티닐 아세테이트를 준비하였다. 표준 용액의 스톡은 0.1mg/0.9 mL(25 mg 레티놀은 0.04 % BHT-EtOH 용액 225 mL에 용해 됨)를 준비하였다. 그런 다음 900μL의 표준 스톡 용액을 0.04 % BHT-EtOH 용액으로 각 튜브에 이중 희석하여 계속하였다. 마지막으로, 100 μL 희석된 내부 표준 작업 용액 (20 μL 스톡 내부 표준 용액 및 1,980 μL 0.04 % BHT-EtOH와 혼합)을 나중에 표준 곡선 분석을 위해 최종 농도가 50, 25, 12.5, 6.25, 3.13, 1.56, 0.78, 0.39, 0.20, 0.10 및 0.05 ug/mL의 범위 농도로 각 튜브에 첨가하였다. 샘플 분석을 위해 25 μL 스톡 내부 표준 용액과 975 μL 0.04 % BHT-EtOH 용액을 혼합하여 새로운 내부 표준 작업 용액을 만들었다. 적색광(비타민 A의 분해를 방지하기 위해)의 암실에서 RT에서 표적 혈청 샘플을 녹인 후, 200 μL 혈청과 20 μL 내부 작업 용액을 각각 2 mL 마이크로 튜브에 첨가하였다. 그런 다음 200μL의 증류수 (DW)와 400μL의 0.04 % BHT-EtOH 용액을 튜브에 넣고 격렬하게 볼텍싱 하였다. 다음으로, 800 μL의 0.04 % BHT-헥산 (250 mL 헥산에 용해 된 0.1 g의 BHT)을 첨가하고 격렬하게 볼텍싱 하였다. 다음으로 모든 튜브를 3,500g으로 4℃에서 10분 동안 원심 분리하였다. 그 후, 700 μL의 헥산 상층을 각각의 새로운 1.5 mL의 갈색 마이크로 튜브로 이동시키고, N2 가스를 불어서 건식 블록 배양기 (MG-2200, EYELA, Tokyo, Japan)에서 헥산을 완벽하게 증발시켰다. 모든 샘플을 95% 메탄올에 용해한 뒤, 볼텍싱 하였다. 주사기 필터 (PES, 0.22 μm, Millex, Darmstadt, Germany)로 필터링 한 후, 각 샘플을 HPLC (High Performance Liquid Chromatography, Agilent 1100 series)에 의한 비타민 A 분석을 위해 갈색 LC 바이알 (Infochroma AG, 스위스 Goldau)로 분주하였다. 주사기 필터 (PES, 0.22 μm, Millex, Darmstadt, Germany)로 필터링 한 후, 각 샘플을 HPLC (High Performance Liquid Chromatography, Agilent 1100 series, Waldbronn, 독일)에 의한 비타민 A 분석을 위해 갈색 LC 바이알 (Infochroma AG, 스위스 Goldau)로 이동하였다. 분석을 위해 대조군 내부 표준 샘플 (20 μL의 내부 표준 작업 용액 및 0.04 % BHTEtOH 480μL을 혼합함)도 준비하였다. 비타민 A 분석을 위한 HPLC 시스템의 경우, 95 % 메탄올을 1mL/min의 유속으로 이동상으로 사용하였다. 스테인리스 스틸 Novapak C18 컬럼 (4-mm 역상 컬럼, 3.9mm ID · 150mm, Waters, Dublin, Ireland)이 이 시스템에서 20℃ 분석 온도로 선택되었으며 DAD- UV 램프에 의해 325nm 흡광도에서 검출되었다. 샘플의 레티닐 아세테이트 및 레티놀의 모든 데이터는 HPLC 프로그램에서 얻었다.
준비예 4. 최장근 근육 (Longissimus muscle) mRNA 발현 측정
이전 연구에서 사용한 Trizol 추출 방법을 기반으로 total RNA를 추출했습니다 (Peng et al., 2019). RNA 및 qRT-PCR 분석을 위한 모든 튜브와 팁은 DEPC 처리된 증류수로 처리되고 오토 클레이브 및 멸균하였다. 최장근 근육은 모두 DEPC 처리된 증류수로 세척하고 모든 물질은 RNase ZAPTM (Sigma-Aldrich, Seoul, Korea)로 전처리 하였다. 생검에서 얻은 각 근육 샘플을 액체 질소에서 분말로 분쇄하였다. 분쇄 직후, 0.1g의 근육 샘플을 Trizol 시약 (Ambion®, Thermo Fisher Scientific Korea Ltd., Seoul, Republic)을 첨가하여 2.0 mL의 마이크로 튜브에 분리하였다. 균질기 (IKA® T10 basic with dispersion tool S10-5G, Seoul, Republic of Korea)를 이용하여 균질화 후 모든 샘플을 4℃에서 10분 동안 12,000 x g에서 원심 분리하였다. 상부 수성상을 새로운 1.5 mL 마이크로 튜브로 옮긴 다음 각각 튜브에 200 μL의 클로로포름을 첨가하였다. 볼텍싱한 후, 모든 샘플을 RT에서 2 분 동안 배양 한 다음 4 ℃에서 15 분 동안 12,000 x g로 원심 분리하였다. 전단계를 위해, 상부 수성상을 또 다른 1.5 mL 마이크로 튜브로 옮긴 다음, 500 μL의 이소프로판올을 RT에서 10분 배양하면서 튜브에 첨가하고, 원심 분리를 4℃에서 10 분 동안 12,000 x g에서 원심 분리하였다. RNA 단계를 위해 상층 액을 제거하고 75 % 에탄올 1mL를 튜브에 넣고 격렬하게 볼텍싱하고 4℃에서 10 분 동안 12,000xg에서 원심 분리하였다. 다음으로 상등액을 완전히 제거한 후 100% 에탄올 1mL를 튜브에 넣고 볼텍싱한 후 모든 시료를 4℃에서 12,000Хg에서 10분간 원심 분리하여 상등액을 완전히 제거하였다. 추출된 RNA를 진공하에서 15 분 동안 건조하고 즉시 30 μL의 DEPC 처리된 증류수에 용해시키고 60℃에서 10 분 더 배양하였다. 총 RNA의 농도는 분광 광도법 (NanoDrop 1000, Thermo Scientific, 서울, 대한민국)으로 확인 하였다. RNA integrity (RIN) 테스트는 제조업체의 지침에 따라 Agilent Bioanalyzer 2100 시스템 (Agilent Technologies, Richardson, USA)에서 RNA Nano 6000 Assay Kit로 수행되었다. RNA integrity number (RIN)이 6이상인 샘플을 complementary DNA (cDNA) 합성에 사용하였다. 실시간 PCR 분석에 사용된 RNA의 RIN은 7.3 (SD = 0.3)이었다. cDNA 합성은 iScript ?? cDNA 합성 키트 (Bio-Rad, 서울, 대한민국)에 의해 수행되었다. 프로토콜에 따라 추출된 총 RNA 1μg을 5x iScript 반응 믹스, iScript 역전사 효소 및 뉴클레아제가 없는 물과 혼합된 20μL 부피 시스템의 튜브에 첨가하였다. 그런 다음 완전한 반응 혼합물을 25℃에서 5분 동안 배양한 다음 42℃에서 30분, 85℃에서 5분 동안 배양하고 4℃에서 유지하였다. cDNA는 이후의 qRT-PCR (정량적 실시간 중합 효소 연쇄 반응) 실험을 위해 DEPC 처리 된 3x 증류수로 200ng/μL로 희석되었다.
하기 표 2와 같은 프라미어 세트를 이용하여 qRT-PCR을 수행하였다. 프라이머 혼합물 (정방향 및 역방향), cDNA, DEPC 처리 된 증류수 및 사이버 그린 슈퍼 믹스 (AccuPower® 2X GreenStarTM qPCR MasterMix, Bioneer, 서울, 대한민국)를 혼합하여 총 20 μL의 혼합하였다. 다음 PCR 조건이 사용되었다. 95℃에서 3분 (1단계); 95 ℃에서 10 초 (2 단계); 유전자의 각 프라이머에 대해 30초 동안 적용 가능한 온도 (3 단계); 이어서 72℃에서 30초 및 플레이트 기록 (4 단계); 2 내지 4 단계에서 39 cycle 반복 (5 단계); 95 ℃ 에서 10초 동안 보관하였다. 마지막으로 용융 곡선은 65 ~ 95 ℃에서 측정되었으며, 5초 동안 유지한 후 매 0.5 ℃에서 기록하였다. 상대적 유전자 발현 수준은 Bio-Rad CFX Manager 3.1 소프트웨어 (Bio-Rad, 서울, 대한민국)를 사용한 △△Cq 정규화된 발현 모델에 의해 18s rRNA를 기반으로 계산하였다. 모든 유전자 발현 수준은 대조군과 비교하여 배 변화 (fold change)에 의해 수행되었다.
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실시예 1. 대용유의 경구용 비타민 A 보충제는 송아지의 성장 성적을 향상시킨다.
1개월까지 체중(BW) 결과는 대조군과 비타민 A 보충제를 급여한 군에서 유의한 영향을 나타내지 않았다 (표 3). 그러나 비타민 A 보충제를 급여한 군에서 45 일에 더 높은 BW (p=0.041)를 보였고 60일에 증가 추세 (p=0.079)를 나타냈다. 그러나 비타민 A 보충제를 급여한 군의 평균 일일 증가량(Average Daily Gain; ADG)은 5일에서 30일 (p=0.395), 31일에서 60일 (p=0.405), 5일에서 60일 (p=0.162)까지 차이가 없었다. 사료 섭취량 (g/day of DM)과 사료 효율 (g gain/kg of DM)은 두 그룹 사이에 어떠한 차이도 보이지 않았다 (p> 0.05). 그러나 45 일과 60 일에 수송아지에서 약간 그러나 실질적으로 높은 체중을 보여주는 것을 제외하고, 출생 5 일, 15 일 및 30 일에 송아지의 성장 성적에서 유의미한 성 효과가 발견되지 않았다.
또한 실험 기간 동안 우유 대체제, 사료, 총 사료 섭취량의 세부 사항을 표 4에 나타내었다. 대조군과 비타민 A 처리 군간에 유의한 차이 (p> 0.05)는 없었다. 비타민 A를 추가 급여한 군 및 대조군의 근육 섬유도를 계산하였다 (도 4). 그 결과 비타민 A를 급여한 군이 대조군 보다 근육의 섬유소가 증가하였다.
실시예 2. 대용유의 경구용 비타민 A 보충제는 혈액 지표에 영향을 주지 않고 혈청 비타민 A의 수치를 증가시킨다.
혈청 비타민 A의 농도는 5일(초기), 15일, 30일, 45일, 60일에 확인하였다 (표 5). 30일까지 비교하면 대조군과 처리군의 혈청 비타민 A에서 차이가 관찰되지 않았다. 혈청 비타민 A 수준의 증가 추세는 45일 및 60일에서 처리군에서 확인되었다 (각각 p = 0.098 및 p = 0.060).
그러나 혈청 비타민 A은 수송아지 및 암송아지에서 차이가 발견되지 않았다. 혈액학적 지표를 확인하기 위해 CBC 분석은 5일(초기) 및 60일(이유기)에서 수행되었다. 초기 5일 및 60일에 경구 비타민 A 보충이 CBC에 영향을 미치지 않는 것으로 확인되었다 (표 6). 상기 분석에서 성 효과는 발견되지 않았습니다 (p> 0.05). 결과는 45,000 IU / 일의 비타민 A 섭취가 출생 후 송아지의 면역 반응에 영향을 미치지 않는 것으로 확인되었다.
실시예 3. 최장근에서 경구 비타민 A 보충에 의해 전 지방 세포와 근육 발달이 확인되었다.
최장근에서 유전자 발현 결과를 확인한 것으로, 처리군의 유전자 발현은 대조군 보다 ERK1, ERK2, CTNNB1, Pref-1, Zfp423, MyoD, MYF6 및 Myogenin 에서 더 높은 수준을 나타내었다. 그 결과 처리군의 비타민 A가 β-카테닌/ERK 경로, 전지방 세포 발달 및 송아지 근육 발달을 개선 할 수 있음 확인하였다. 그러나 KLF2, Pax-7, Myf5, PPARγ, FABP4, C/EBPα 및 SCD 유전자 발현에서는 유의한 차이가 관찰되지 않았다. 처리군의 비타민 A 보충제가 성숙한 세포 마커에 영향을 주지 않으면서 관련 마커 유전자 및 경로의 발현을 증가시켜 전 지방 세포 및 근육 발달을 촉진하는 것을 확인하였다.
Claims (3)
- 비타민 A을 2개월 경까지 송아지에 급여하는 단계;를 포함하는, 한우 육량 및 육질의 개선 방법.
- 제 1항에 있어서, 상기 비타민 A의 급여는 경구 급여인, 한우 육량 및 육질의 개선 방법.
- 제 1항에 있어서, 상기 비타민 A의 급여량은 20,000 IU/day 내지 120,000 IU/day인, 한우 육량 및 육질의 개선 방법.
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|---|
| Journal of Animal Science and Biotechnology, 9:55(2018)* * |
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