KR20210048744A - 고구마 줄기 추출물을 유효성분으로 포함하는 이명의 예방 또는 치료용 조성물 - Google Patents
고구마 줄기 추출물을 유효성분으로 포함하는 이명의 예방 또는 치료용 조성물 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 고구마 줄기 추출물을 포함하는 이명의 예방, 개선 또는 치료용 조성물을 제공한다.
본 발명에 따른 조성물은 이명으로 인한 이상 행동의 감소와 청력 진폭을 정상으로 되돌리는 효과를 가짐으로써 이명의 예방 또는 치료에 유용하여, 약학 조성물 또는 건강기능식품으로써 유용하게 사용될 수 있다.
본 발명에 따른 조성물은 이명으로 인한 이상 행동의 감소와 청력 진폭을 정상으로 되돌리는 효과를 가짐으로써 이명의 예방 또는 치료에 유용하여, 약학 조성물 또는 건강기능식품으로써 유용하게 사용될 수 있다.
Description
본 발명은 고구마 줄기 추출물을 포함하는 이명의 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것이다.
이명은 흔히 "귀울림" (음향 신호의 외부 공급원의 부재 하에 소리의 지각)이라고 한다. 이명증(耳鳴症), 이명, 또는 귀울림은 상응하는 외부의 소리가 없는데 사람의 귀에서 소리를 인식하는 것이다. 쉽게 말하자면, 외부에서 발생하지 않은 소리가 내부에서 들리는 것이다 (Jastreboff et al., J Am Acad Audiol,. 11(3), pp162-177, 2000).
이러한 이명은 잠시 나타났다가 사라질 수도 있고 지속되는 수도 있으며 지속되는 소리로 느껴지기도 한다. 소리의 높낮이도 다양하며, 대개 한 쪽 귀에서 많이 나타나고, 혹은 양 쪽 귀에서도 들릴 수 있다. 통계상, 성인의 약 15 내지 20%가 다양한 이명을 경험하며, 그 중 4%가 심각한 이명 경험이 있다. 또한 난청인의 경우 70-80%가 이명을 경험한다고 한다 (Demeester K et al., B-ENT., l7, 37-49, 2007).
이명은 외부에서도 들리는 타각적 이명(또는 객관적 이명)과 이명 환자 본인만 들리고 외부에서 들리지 않는 자각적 이명(또는 주관적 이명)으로 구분할 수 있다. 또한, 이명은 병에 걸린 개인에 의해 지각되는 방법의 차이를 기초로 하여 말초성 이명 및 중추성 이명으로 분류될 수 있다. 말초성 (또는 와우성) 이명은 말초 신경계 및 와우로부터 유래하는 것으로 추정되고, 중추성 이명은 청각 피질로부터 유래하는 것으로 추정된다.
의사가 환자의 귀에서 나오는 실제의 소리를 들을 수 있는 타각적 이명은 중이(中耳) 주위의 근육이 경련으로 '찰칵' 또는 '탁탁' 하는 소리를 낼 수 있다. 어떤 사람들은 맥박에 맞추어 소리를 듣기도 한다. 박동성 이명은 혈류의 변화나 귀 주위의 정맥의 흐름에서 생길 수 있지만(Chandler JR, Laryngoscope, 93, pp892-895, 1983) 귓속의 혈액의 흐름에 대한 관심이 증가하여 생기는 자각적인 증상일 수 있다. 현재까지 자각적 이명의 병리생리학적 특성은 불충분하게 이해되고, 정확한 발병기전은 알려지지 않고 있다.
이명은 보통 주관적인 현상이어서, 일반적으로 평가하는 이과적 청력평가 방법으로 측정하기 어렵다. 이러한 점이 이명에 대한 동물실험의 한계점으로 작용하여 이명 치료제 개발을 성공시키지 못하는 요인으로 간주되었다. 임상에서는 이명의 평가를 설문지를 통해 환자의 주관적인 고통을 점수화하여 평가한다. 그 상태는 종종 임상적으로 수면이나 명상, 일상적인 행동의 방해 등의 현실적인 어려움에 따라 '경미'에서 '극심'까지의 간단한 측정 등급으로 평가된다. 지속적인 이명은 과민 반응, 피로, 및 가끔은 임상적인 우울증을 초래할 수 있으며, 또한, 환청이 들릴 수도 있다 (McCombe et al., Clin Otolaryngol., 26(5), pp388-393, 2001.; Davis et al., Epidemiology of Tinnitus. In: Tyler R, editor. Tinnitus Handbook. San Diego: Singular Publishing Group; 2000. pp1-23).
임상에서 이명은 객관적 평가도구가 없고 환자가 호소하는 주관적 평가 방법에 의존하여 이명을 평가하고 있다. 대부분의 이명 환자들은 자각적 이명에 속하며, 자각적 이명에 대한 치료법으로는 현재까지 재활을 통한 이명 완화에 초점이 맞춰져 있다. 예를 들면 보청기처럼 생긴 기구를 통해 환자의 이명과 유사한 소리를 외부에서 이명보다 더 큰 음량으로 들려주어서 이명이 들리지 않게 하는 이명 차폐법(masking method), 넓은 주파수에 걸쳐 실제 이명보다 작은 소리를 지속적으로 들려주어 난청을 동반하지 않으면서 이명을 치료하는 이명 재훈련치료(retraining therapy) 등이 있지만, 현재까지 미 식약성(FDA)에서 승인된 이명 치료제는 없다.
고구마(sweet potato, Ipomoea batatas)는 쌍떡잎식물 통화식물목 메꽃과의 여러해살이풀로, 감저라고도 불리우며, 남아메리카가 원산지이나 현재에는 한국, 중국, 인도네시아 등 아시아지역까지 분포지역이 확장되어 재배되는 전세계적으로 중요한 식량작물중의 하나이다. 상기 고구마의 경우, 주로 대부분 전분으로 이루어진 고구마의 뿌리 즉, 괴근이 식량 등 탄수화물 공급원으로 사용되고 있다. 상기 고구마의 괴근은 전분 위에 각종 비타민, 무기질 및 추출물 등이 풍부하며, 상기 고구마의 괴근은 식용으로 사용될 뿐만 아니라, 최근에는 부식 또는 간식이나 공업용 녹말 소주나 위스키 등의 주류, 알코올, 화장품 또는 의약품의 원료로 사용되고 있다.
한편, 고구마의 경우 괴근을 위주로 사용되고 있으며, 고구마의 주된 이용방법인 식품으로의 이용뿐만 아니라 주류 제조 등 여러 용도에서도 주로 괴근이 이용되고, 고구마 줄기는 우리나라 등에서 제한적으로 이용될 뿐이다. 특히, 고구마 괴근이 수확되는 가을 서리가 내리면 잎과 줄기는 시들게 되므로, 거의 수확을 하지 않거나, 고구마 괴근의 부산물로 취급될 뿐이고, 일반적으로 거의 활용되고 있지 않은 실정이다. 따라서, 상기 고구마 줄기에 대한 다양한 응용방법의 개발이 요구되나, 고구마 부위 중 고구마 괴근과 달리 고구마 줄기에 대해서는 제반 연구가 거의 진행되고 있지 않은 실정이다. 특히, 괴근과 줄기가 가지는 생리 활성 물질 등이 매우 상이하고, 일반적으로 고구마의 괴근 부분만 이용되고 있음을 고려할 때 고구마의 타 부위 추출물에 관한 연구 개발이 이루어질 필요성이 있다.
이러한 배경 하에, 본 발명자들은 이명에 효과가 있는 천연 추출물에 관한 연구 개발을 수행하여 본 발명을 완성하였다.
본 발명은 고구마 줄기 추출물을 유효성분으로 포함하는 이명의 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 고구마 줄기 추출물을 포함하는 이명의 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공한다.
본 발명자들은 안전성이 우수한 천연 소재를 대상으로 이명을 예방, 개선 및 치료할 수 있는 물질들을 찾기 위해 예의 노력한 결과, 놀랍게도 고구마 줄기 추출물이 이명을 효과적으로 예방, 개선 및 치료함을 확인하고 본 발명을 완성하였다.
본 발명은 고구마 줄기 추출물을 유효성분으로 포함하는 이명의 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.
본 발명의 이명 예방 또는 치료용 약학 조성물은 이명으로 인한 이상 행동의 감소와 청력 진폭을 정상으로 되돌리는 효과를 가짐으로써 이명에 우수한 치료 효과를 가진다.
특히, 고구마 줄기 추출물은 이명의 예방 및 치료에 현저한 효과를 가지며, 지금까지 약용 또는 건강기능식품으로 사용되지 않았던 부위인 줄기 추출물을 사용함으로써 경제적으로도 높은 효용성을 지닌다.
본 발명에서 "이명(Tinnitus)"은 타각적 이명과 자각적 이명을 포함한다. 자각적 이명은 예를 들어 말초성 이명 및/또는 중추성 이명을 포함할 수 있다.
타각적 이명은 중이(中耳) 주위의 근육이 경련으로 '찰칵' 또는 '탁탁' 하는 소리를 낼 수 있다. 어떤 사람들은 맥박에 맞추어 소리를 듣기도 한다. 박동성 이명은 혈류의 변화나 귀 주위의 정맥의 흐름에서 생길 수 있지만, 귓속의 혈액의 흐름에 대한 관심이 증가하여 생기는 자각적인 증상일 수 있다.
자각적 이명은 여러 원인이 있을 수 있으나, 보통 청각의 손실을 초래하는 이과적 장애에 의한다. 원인으로 가장 흔한 경우는 소음에 의한 것으로, 과도하거나 큰 소음에 노출되는 것에서 비롯된다. 또한 이명은 갑작스러운 청력의 상실과 함께 분명한 외부 요인이 없을 수도 있다. 자각적 이명은 또한 아스피린과 같은 몇몇 약제들의 부작용으로 발생된다고 알려져 있다. 그 외 노화와 같은 자연적인 청력 장애, 유전적(선천적)인 청력 장애의 부작용으로도 발생할 수 있다. 이에 따라, 이명은 소음, 약물, 노화, 외상, 바이러스 등의 다양한 원인에 의해 발생하는 자각적 이명을 포함한다.
본 발명에 따른 이명은 자각적 이명일 수 있다.
본 발명에서 사용되는 용어, "예방"이란 본 발명에 따른 약학적 조성물의 투여에 의해 이명을 억제시키거나 이명의 발병을 지연시키는 모든 행위를 의미한다.
본 발명에서 사용되는 용어, "치료"란 본 발명에 따른 약학적 조성물의 투여에 의해 이명의 증세가 호전되거나 이롭게 변경되는 모든 행위를 의미한다.
상기 고구마 줄기 추출물은 통상의 추출물 제조방법에 따라 고구마 줄기로부터 추출되어 제조될 수 있다. 예를 들어, 고구마 줄기 무게에 대하여 약 1 내지 25 배, 바람직하게는 약 3 내지 20 배의 1차 추출용매, 바람직하게는 물, C1내지 C4의 저급알코올, 예컨대, 메탄올, 에탄올, 프로판올, 이소프로판올, 부탄올 등, 또는 이들의 혼합용매로 추출함으로써 수행할 수 있다.
추출은 당 분야에 알려진 추출방법, 예컨대, 냉침, 열수 추출, 초음파 추출, 환류 냉각 추출 등의 방법으로 수행될 수 있으나, 이에 국한되지 않는다.
추출 온도는 당업자가 추출 방법에 적절한 다양한 온도 범위를 채택할 수 있으며, 예를 들어, 20℃ 내지 100℃ 등에서 수행될 수 있으나, 이에 국한되지 않는다.
또한, 추출시간은 추출방법에 따라 상이하며, 당업자가 적절한 추출시간을 채택할 수 있으며, 이에 국한되지 않으나, 약 1 시간 내지 10일의 범위에서 단회 또는 복수회로 수행될 수 있다.
상기 1차 추출용매로 추출을 수행하여 얻어진 추출물은 통상의 방법에 따라 여과하여 불순물을 제거한 액상 형태로 얻거나, 얻어진 액상 형태의 추출물을 통상의 방법에 따라 감압농축 및/또는 건조하여 분말 형태로 얻을 수 있다.
또한 상기 1차 추출용매로 추출 후 상기 추출 용매를 추가하여 2차 추출, 3차 추출 등의 추가의 추출을 수행할 수 있다.
또한, 상기 추출공정은 필요에 따라, 유효성분의 함량이 높은 분획을 얻는 단계를 더 포함할 수 있다. 즉, 상기 1차 추출용매로 추출하여 얻어진 추출물을 물에 분산시킨 후, 적절한 2차 추출용매, 예컨대, 물, C1 내지 C4의 저급알코올, 예컨대, 메탄올, 에탄올, 프로판올, 이소프로판올, 부탄올 등, 또는 이들의 혼합용매로 추출하는 단계를 수행하여 유효성분의 함량을 증진시킬 수 있다.
본원발명의 일 실시양태에 따르면, 고구마 줄기 추출물을 에탄올로 추출하여 제조하였다. 보다 바람직하게 에탄올 수용액으로 추출하여 제조하였다. 구체적으로, 약 50 내지 90%의 에탄올 수용액으로 추출하였다.
보다 구체적으로, 약 60 내지 80, 바람직하게 약 70% 에탄올 수용액으로 80 내지 100℃에서 2회 추출하고 이를 농축한 것일 수 있다.
본 발명의 고구마 줄기 추출물을 유효성분으로 함유하는 조성물의 총 중량에 대하여 0.1 내지 95 중량%로 고구마 줄기 추출물을 포함하는 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다.
본 발명의 약학 조성물은 약제학적으로 허용가능한 담체를 포함할 수 있으며, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제제화될 수 있다.
상기 약제학적으로 허용가능한 담체는 당업계에서 통상적으로 사용되는 것들, 예컨대 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유 등을 포함하나 이에 국한되지 않는다. 또한, 본 발명의 약학 조성물은 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제, 기타 약제학적으로 허용가능한 첨가제를 포함한다.
본 발명의 약학 조성물은 목적하는 방법에 따라 랫트, 마우스, 가축, 인간 등의 포유동물에 경구 투여하거나 비경구 투여 예를 들어, 복강 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁 내 경막 또는 뇌혈관 내 주사로 투여할 수 있으며, 본 발명의 약학 조성물에 함유되는 고구마 줄기 추출물의 투여량은 환자의 상태 및 체중, 연령, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 예를 들면, 고구마 줄기 추출물은 1일 0.0001 내지 100 mg/kg으로, 바람직하게는 0.001 내지 10 mg/kg의 용량으로 투여할 수 있으며, 상기 투여는 하루에 한 번 또는 수회 나누어 투여할 수도 있다.
본 발명에서 사용된 용어, "투여"는 어떠한 적절한 방법으로 환자에게 본 발명의 약학적 조성물을 도입하는 것을 의미하며, 본 발명의 조성물의 투여 경로는 목적 조직에 도달할 수 있는 한 경구 또는 비경구의 다양한 경로를 통하여 투여될 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물의 투여는 하루에 1회 투여될 수 있고, 수회에 나누어 투여될 수도 있다. 본 발명의 약학적 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고 종래의 치료제와는 순차적 또는 동시에 투여될 수 있다. 상기 요소를 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양으로 투여할 수 있으며, 이는 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.
본 발명의 약학 조성물이 경구용 고형 제제로 제제화된 경우 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등을 포함하며, 이러한 고형제제는 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트 (calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토즈, 젤라틴 등을 포함할 수 있으며, 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제 등을 포함하나 이에 국한되지 않는다.
본 발명의 약학 조성물이 경구용 액상 제제화된 경우 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등을 포함하며, 물, 리퀴드 파라핀 등의 희석제, 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등을 포함하나 이에 국한되지 않는다.
본 발명의 약학 조성물이 비경구용 제제화된 경우 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제를 포함하며, 비수성 용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르류 등을 포함하나 이에 국한되지 않는다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈 (tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로젤라틴 등이 사용될 수 있으나 이에 국한되지 않는다.
본 발명은 또한 고구마 줄기 추출물을 유효성분으로 포함하는 이명의 예방 또는 개선용 식품 조성물을 포함한다.
본 발명의 용어, “개선”이란, 본 발명의 조성물의 투여로 이명이 호전 또는 이롭게 변경되는 모든 행위를 의미한다.
본 발명의 식품 조성물은 건강기능식품으로서 사용될 수 있다. 상기 "건강기능식품"이라 함은 건강기능식품에 관한 법률에 따른 인체에 유용한 기능성을 가진 원료나 성분을 사용하여 제조 및 가공한 식품을 의미하며, "기능성"이라 함은 인체의 구조 및 기능에 대하여 영양소를 조절하거나 생리학적 작용 등과 같은 보건 용도에 유용한 효과를 얻을 목적으로 섭취하는 것을 의미한다.
본 발명의 식품 조성물은 통상의 식품 첨가물을 포함할 수 있으며, 상기 "식품 첨가물"로서의 적합 여부는 다른 규정이 없는 한, 식품의약품안전처에 승인된 식품 첨가물 공전의 총칙 및 일반시험법 등에 따라 해당 품목에 관한 규격 및 기준에 의하여 판정한다.
상기 "식품 첨가물 공전"에 수재된 품목으로는 예를 들어, 케톤류, 글리신, 구연산칼륨, 니코틴산, 계피산 등의 화학적 합성물, 감색소, 감초추출물, 결정셀룰로오스, 고량색소, 구아검 등의 천연첨가물, L-글루타민산나트륨 제제, 면류첨가알칼리제, 보존료제제, 타르색소제제 등의 혼합제제류들을 들 수 있다.
본 발명의 식품 조성물은 조성물 총 중량에 대하여 고구마 줄기 추출물을 0.01 내지 95 중량%, 바람직하게는 1 내지 80 중량%로 포함할 수 있다. 본 발명의 식품 조성물에 함유되는 고구마 줄기 추출물은 상기 약학 조성물의 제조에서 언급된 추출방법과 동일한 방법으로 얻어질 수 있다.
또한, 본 발명의 식품 조성물은 이명의 예방 및/또는 개선을 목적으로, 정제, 캡슐, 분말, 과립, 액상, 환 등의 형태로 제조 및 가공할 수 있다.
예를 들어, 상기 정제 형태의 건강기능식품은 고구마 줄기 추출물, 부형제, 결합제, 붕해제, 및 다른 첨가제와의 혼합물을 통상의 방법으로 과립화한 다음, 활택제 등을 넣어 압축성형하거나, 상기 혼합물을 직접 압축성형할 수 있다. 또한, 상기 정제 형태의 건강기능식품은 필요에 따라 교미제 등을 함유할 수 있으며, 필요에 따라 적당한 제피제로 제피할 수도 있다.
캡슐 형태의 건강기능식품 중 경질캡슐제는 통상의 경질캡슐에 고구마 줄기 추출물, 및 부형제 등의 첨가제와의 혼합물 또는 그의 입상물 또는 제피한 입상물을 충진하여 제조할 수 있으며, 연질캡슐제는 고구마 줄기 추출물 및 부형제 등의 첨가제와의 혼합물을 젤라틴 등 캡슐기제에 충진하여 제조할 수 있다. 상기 연질캡슐제는 필요에 따라 글리세린 또는 소르비톨 등의 가소제, 착색제, 보존제 등을 함유할 수 있다.
환 형태의 건강기능식품은 고구마 줄기 추출물, 부형제, 결합제, 붕해제 등의 혼합물을 적당한 방법으로 성형하여 조제할 수 있으며, 필요에 따라 백당이나 다른 적당한 제피제로 제피를, 또는 전분, 탈크 또는 적당한 물질로 환의를 입힐 수도 있다.
과립형태의 건강기능식품은 고구마 줄기 추출물, 부형제, 결합제, 붕해제 등의 혼합물을 적당한 방법으로 입상으로 제조할 수 있으며, 필요에 따라 착향제, 교미제 등을 함유할 수 있다. 과립형태의 건강기능식품은 12호 (1680 μm), 14호 (1410 μm) 및 45호 (350 μm) 체를 써서 다음 입도시험을 할 때에 12호체를 전량 통과하고 14호 체에 남는 것이 전체량의 5.0%이하이고 또 45호 체를 통과하는 것은 전체량의 15.0%이하일 수 있다.
상기 부형제, 결합제, 붕해제, 활택제, 교미제, 착향제 등에 대한 용어 정의는 당업계에 공지된 문헌에 기재된 것으로 그 기능 등이 동일 내지 유사한 것들을 포함한다 (대한약전 해설편, 문성사, 한국약학대학협의회, 제 5 개정판, p33-48, 1989).
상기 식품의 종류에는 특별한 제한이 없다. 본 발명의 추출물을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 음료, 껌, 비타민 복합제, 드링크제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강기능식품을 모두 포함한다.
본 발명은 고구마 줄기 추출물을 대상체에 투여하는 단계를 포함하는 이명의 치료방법을 제공한다.
본 발명에 "고구마 줄기 추출물", "이명" 및 "투여" 등의 용어는 상기에서 설명한 바와 동일하다.
상기 대상체는 동물을 말하며, 전형적으로 본 발명의 고구마 줄기 추출물을 이용한 치료로 유익한 효과를 나타낼 수 있는 포유동물일 수 있다. 이러한 대상체의 바람직한 예로 인간과 같은 영장류가 포함될 수 있다. 또한 이와 같은 대상체들에는 이명의 증상을 갖거나 이와 같은 증상을 가질 위험이 있는 대상체들이 모두 포함될 수 있다.
본 발명은 또한 이명의 치료를 위한 약제의 제조에서 상기 고구마 줄기 추출물의 용도를 제공한다.
본 발명은 또한 이명의 치료에 사용하기 위한 상기 고구마 줄기 추출물을 포함하는 조성물을 제공한다.
본 발명은 또한 이명의 치료를 위한 상기 고구마 줄기 추출물의 용도를 제공한다.
본 발명에 따른 고구마 줄기 추출물은 이명으로 인한 이상 행동의 감소와 청력 진폭을 정상으로 되돌리는 효과를 가짐으로써 이명의 예방 또는 치료에 유용하여, 약학 조성물 또는 건강기능식품으로써 유용하게 사용될 수 있다.
도 1은 이명 동물 모델에서 고구마 줄기 추출물 (stem of Ipomoea batatas)의 행동 평가 시, 수중에서 투명관을 통과한 시간 및 투명관 내에서 회전한 횟수를 나타낸다 (NOR: 이명 유발되지 않은 대조군, SS: 이명 단독 유발군, IBS 10: 고구마 줄기 추출물 10 ug/ml 처리 실험군).
도 2는 이명 동물 모델에서 고구마 줄기 추출물의 효과 평가 시 이명 단독 유발군과 이명 유발군에 고구마 줄기 추출물을 처리한 실험군의 SA ratio 결과를 나타낸다 (SS: 이명 단독 유발군, SS+IBS: 이명 유발군에 고구마 줄기 추출물 처리 실험군).
도 3은 소음 노출 후 클릭 자극음에서 청성유발전위를 이용하여 청력 진폭을 측정한 결과를 나타낸 그래프이다 (NOR: 이명 유발되지 않은 대조군, SS: 이명 단독 유발군, SS+IBS: 이명 유발군에 고구마 줄기 추출물 처리 실험군).
도 2는 이명 동물 모델에서 고구마 줄기 추출물의 효과 평가 시 이명 단독 유발군과 이명 유발군에 고구마 줄기 추출물을 처리한 실험군의 SA ratio 결과를 나타낸다 (SS: 이명 단독 유발군, SS+IBS: 이명 유발군에 고구마 줄기 추출물 처리 실험군).
도 3은 소음 노출 후 클릭 자극음에서 청성유발전위를 이용하여 청력 진폭을 측정한 결과를 나타낸 그래프이다 (NOR: 이명 유발되지 않은 대조군, SS: 이명 단독 유발군, SS+IBS: 이명 유발군에 고구마 줄기 추출물 처리 실험군).
이하, 본 발명을 실시예를 통하여 더욱 상세히 설명한다. 그러나 이들 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.
실시예 1. 고구마 줄기 (stem of Ipomoea batatas) 추출물의 제조
고구마 줄기 500 g을 70% 에탄올 9 ℓ와 함께 120분 동안 90℃에서 1차 추출하였다. 다시 70% 에탄올 4.5 ℓ를 첨가하고 60분 동안 같은 온도에서 2차 추출한 후, 추출액을 여과하고, 수조(water bath) 40℃에서 70~80 rpm으로 농축하였다. 농축물을 -50℃에서 냉동시킨 후 7일간 동결건조를 하였다. 동결건조 후 -50℃ 냉동고에 보관하였다. 총 500 g의 고구마 줄기 추출하여 추출물 7.27 g을 얻었으며, 수율은 1.5%로 확인되었다.
실시예 2. 살리실산으로 유발된 이명 제브라피시 모델에서 고구마 줄기 (stem of Ipomoea batatas) 추출물의 이명 억제 효과
물리적 스트레스 없이 제브라피쉬에 이명을 유발하여 평가할 수 있는 행동 반응 시험법을 이용하여 이명에 대한 치료 효과를 확인하였다.
구체적으로, 제브라피쉬 성어를 이명을 유발시키지 않은 대조군 (NOR), 살리실산 3 mM 에 5시간 노출시켜 이명이 유발된 실험군 (SS), 살리실산 3 mM에 5시간 노출된 직후 실시예 1에서 제조한 고구마 줄기 추출물에 17시간 노출시킨 실험군 (IBS)으로 나누었다. 이 때, IBS 실험군은 실시예 1에서 제조한 고구마 줄기 추출물 10 ug/ml 농도에 제브라피쉬 성어를 노출시켜 실험을 진행하였다 (IBS 10). 모든 실험은 0.03% 해수염 용액(sea salt solution)을 기본으로 용액으로 사용하며, 측정 직전 모든 실험군은 0.03% 해수염 용액에 1시간 동안 적응시켰다.
실시예 1에서 제조된 고구마 줄기 추출물의 효과 확인을 위해, 각 용액 및 고구마 줄기 추출물에 노출된 제브라피시를 수조 (75(W) x 45(D) x 45(H) cm)에 위치한 투명관 (외경 25 mm, 내경 21 mm, 총 길이 60 cm)에 통과시켜, 통과한 시간 및 투명관 내에서의 회전 횟수를 분석하였다. 수온은 수조 내 수중히터기를 설치하여 수온은 28℃로 유지하였다.
그 결과를 도 1에 나타내었다.
도 1에서 확인되는 바와 같이, SS 그룹은 NOR 그룹에 비해 투명관을 통과한 시간 및 투명관 내 회전 횟수가 유의적으로 증가하여 이명이 유발되었음을 확인할 수 있었다 (###p<0.001 vs. NOR). IBS 효능 비교에서는 IBS 10 그룹에서 투명관 통과 시간 및 투명관 내 회전횟수가 유의적으로 낮아져 이명이 억제됨을 확인하였다 (***p<0.001 vs. SS).
실시예 3. 살리실산으로 유발된 이명 랫트 모델에서 고구마 줄기 (stem of Ipomoea batatas) 추출물의 스키너 행동반응 평가
훈련이 된 랫트로 스키너 행동반응 평가 시, 이명이 유발된 동물의 경우 cue tone이 없을 때 trigger를 누르는 반응이 증가하는 경향을 보인다. 이때 동물은 이명소리를 cue tone으로 오인하여 trigger를 누르는 행동을 보이는 것으로 이명유발을 확인할 수 있다. 이때 정반응 (true positive)은 cue tone을 제공하였을 때 먹이를 습득하기 위해 trigger를 누르는 횟수를 말하며, 오반응 (false positive) 은 cue tone이 없을 때에 trigger를 누르는 횟수를 말한다.
실시예 1에서 제조한 고구마 줄기 추출물을 이용하여 이명이 유발되지 않은 대조군 (NOR), 이명이 유발된 실험군 (SS), 고구마 줄기 추출물 투여 실험군 (SS+IBS) 를 각 3마리씩 세 그룹으로 나누어 평가하였다.
실험에서 SS 그룹과 IBS 그룹은 이명을 유발하기 위해 일반적으로 이명 유발 동물모델에 사용하는 살리실산을 이용하였고, 350 mg/kg를 검사 3시간 전에 경구 투약하였다. SS 그룹은 살리실산만 경구 투약하여 검사를 진행하였고, SS+IBS 그룹은 이명 유발 후 실시예 1에서 제조한 고구마 줄기 추출물 100 mg/kg 을 검사하기 1시간 30분 전에 경구 투약하였다.
실험 일정은 투약 전 검사 1일 (Base), 살리실산과 동시 투약 후 검사 3일 (1 ~ 3 Day), 이명 회복 기간 중 검사 3일 (4 ~ 6 Day)로 진행하였다. SS 그룹의 경우 1 ~ 3일차 시 검사 3시간 전 살리실산 투약 후 검사 1시간 30분 전 물을 투약하였고, 4 ~ 6일차 시 검사 1시간 30분 전 물만 경구 투약하였다. SS+IBS 그룹의 경우 1 ~ 3일차 시 검사 3시간 전 살리실산 투약 후 검사 1시간 30분 전 고구마 줄기 추출물을 투약하였고, 4 ~ 6일차 시 검사 1시간 30분 전 고구마 줄기 추출물만 경구 투약하였다.
행동반응 분석을 위해서 정반응률 (Silence activity ratio, SA ratio) 및 오반응률 (False positive ratio, FP ratio) 수치를 사용하였다. SA ratio 은 cue tone이 없을 때 반응한 횟수에서 cue tone을 제공한 시간 중 반응한 횟수를 나누어 계산한 것이며, FP ratio는 전체 반응한 횟수에서 cue tone이 없을 때 반응한 횟수를 비율로 계산한 것이다.
그 결과를 도 2에 나타내었다.
도 2에서 확인되는 바와 같이, SS 그룹은 Base (0 Day)에 비해 SA ratio 및 FP ratio가 유의미하게 증가하여 이명이 유발되었음을 확인할 수 있었다. 고구마 줄기 추출물을 경구 투약한 SS+IBS 그룹의 경우 1 Day, 2 Day에서 SS 그룹에 비해 SA ratio 와 FP ratio 가 유의적으로 감소함으로써 이명이 억제됨을 확인할 수 있었고 (*p<0.05 vs SS, **p<0.01 vs SS), 3 내지 5 Day 에서는 유의적으로 감소하지는 않으나 SS 그룹에 비해 이명 증세가 감소하는 경향이 보였다. 또한 6 Day 에서는 SA ratio가 유의적으로 감소하여 IBS 경구 투약 시 이명 증세가 지속적으로 억제되는 것을 확인할 수 있었다 (**p<0.01 vs SS).
실시예 4. 이명 랫트 모델에서 고구마 줄기 (stem of Ipomoea batatas) 추출물의 청력 진폭 확인
이명 유발 후 청력 진폭을 측정하여 소리의 유무에 대한 감각에 있어서 고구마 줄기 추출물의 효과를 확인하기 위해 청성유발전위를 이용한 청력 진폭 측정 실험을 수행하였다.
청성유발전위(auditory brainstem response, ABR) 측정법은 소리자극이 청신경에서 전기적인 신호로 전달될 때, 상기 전기적인 에너지를 측정하여 소리에 대한 반응을 평가하는 방법이다. 소리가 외이와 중이 그리고 달팽이관을 거쳐 청신경에 도달했을 때의 반응은 외이, 중이, 달팽이관의 상태를 모두 반영하는 것으로 이는 뇌까지 소리 에너지가 도달하는 실제적인 소리 에너지를 반영하는 것이다. 청력역치라 함은 겨우 들을 수 있는 소리의 최소 감각지점을 말하는 것으로 정상 마우스의 경우 평균적으로 20 dB의 작은 소리에서도 반응이 관찰된다.
청력 진폭 측정 시, 통상 5개의 진폭이 관찰된다 (단위: μV, Wave Ⅰ ~ Wave Ⅴ). 1번 진폭에서 3번 진폭 (Wave Ⅰ ~ Ⅲ)은 8번째 뇌신경 및 그 이하 신경으로부터 뻗어나온 청각 가지로 인해 형성된다. 여기서 1번 진폭은 청각 신경 섬유의 수상돌기로부터, 2번 진폭은 와우핵으로부터 생성되며, 3번 진폭은 와우핵으로부터 청각 정보를 받아들이는 상올리브 복합체 (superior olivary complex)의 활성정도를 나타낸다. 또한 4번 진폭과 5번 진폭 (Wave Ⅳ ~ Ⅴ)은 상뇌간 (upper brainstem)으로부터 형성되며 외측섬유대 (lateral lemniscus)와 관련이 있다.
클릭 자극 검사 전의 일정 및 실험군 그룹은 실시예 3의 일정과 동일하며, 고구마 줄기 추출물 경구 투여 5일째에 클릭 자극 검사를 시행 및 평가하였다.
청성유발전위 검사를 위하여 케타민 (11.43 mg/kg)과 실라진 (1.08 mg/kg)을 랫트에게 근육 주사하여 마취시킨 뒤 체온 37±0.5℃를 유지시키면서 평가하였다. 청성유발전위 검사시 자극음은 광대역 자극음인 클릭 (click)음으로 90 dB부터 점차적으로 5 dB씩 소리를 낮춰가며 평가했으며 반응이 나오는 가장 작은 소리를 역치로 하였다.
그 결과를 도 3에 나타내었다.
도 3에서 확인되는 바와 같이, SS 그룹이 NOR 그룹에 비해 전반적으로 진폭이 증가하는 경향을 보였으며, 특히 1번, 5번 진폭에서 유의적으로 증가하여 이명이 유발되었음을 확인할 수 있었다 (*p<0.05 vs NOR, ***p<0.001 vs NOR). SS+IBS 그룹의 경우 SS 그룹에 비해 전반적으로 진폭이 감소하는 경향을 보였으며, 특히 1번, 4번, 5번 진폭에서 유의적으로 감소하여 이명 증세가 억제되는 것을 확인할 수 있었다 (*p<0.05 vs SS, **p<0.01 vs SS)
상술한 바와 같이, 고구마 줄기 추출물은 행동 반응 검사 시 이명으로 인한 오반응이 거의 정상 그룹과 비슷하게 나타나 이명이 억제되고 있음을 확인할 수 있었었다. 따라서, 고구마 줄기 추출물은 이명의 예방, 개선 및 치료를 위한 용도로 사용될 수 있다.
[제제예]
실시예 1의 고구마 줄기 추출물을 사용하여 아래와 같은 제형을 제조하였다. 그러나, 하기 제제예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 이에 의해 본 발명의 내용이 제한되는 것은 아니다.
제제예 1. 정제의 제조
고구마 줄기 추출물................1000 ㎎
유당 .....................................................100 ㎎
전분 .....................................................100 ㎎
스테아린산 마그네슘 ........................................적량
통상의 정제 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합하고 타정하여 정제를 제조하였다.
제제예 2. 액제의 제조
고구마 줄기 추출물................1000 ㎎
CMC-Na......................................................20 g
이성화당....................................................20 g
레몬향......................................................적량
정제수를 가하여 전체 1000 ㎖로 맞추었다. 통상의 액제의 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 갈색병에 충전하고 멸균시켜 액제를 제조하였다.
제제예 3. 캡슐제의 제조
고구마 줄기 추출물................1000 ㎎
결정성 셀룰로오스...........................................3 ㎎
락토오스.................................................14.8 ㎎
마그네슘 스테아레이트.....................................0.2 ㎎
통상의 캡슐제 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합하고 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다.
제제예 4. 주사제의 제조
고구마 줄기 추출물................1000 ㎎
만니톨....................................................180 ㎎
주사용 멸균 증류수.......................................2974 ㎎
Na2HPO412H2O................................................26 ㎎
통상의 주사제의 제조방법에 따라 1 앰플당 (2 ㎖) 상기의 성분 함량으로 제조하였다.
제제예 5. 건강기능성 음료의 제조
고구마 줄기 추출물 .................... 100 mg
구연산 ...................................................... 1000 mg
올리고당 .................................................... 100 g
매실농축액 ..................................................... 2 g
정제수를 가하여 전체 ........................................ 900 mL
통상의 건강기능성 음료 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합하여 건강 기능성 음료를 제조하였다.
Claims (8)
- 고구마 줄기 추출물을 유효성분으로 포함하는 이명의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 이명은 타각적 이명 또는 자각적 이명인, 이명의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 추출물은 물, C1 내지 C4의 저급알코올 또는 이들의 혼합용매의 추출물인 이명의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
- 제3항에 있어서, 상기 추출물은 고구마 줄기의 에탄올 추출물인 이명의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
- 고구마 줄기 추출물을 유효성분으로 포함하는 이명의 예방 또는 개선용 식품 조성물.
- 제5항에 있어서, 상기 이명은 타각적 이명 또는 자각적 이명인, 이명의 예방 또는 개선용 식품 조성물.
- 제5항에 있어서, 상기 추출물은 물, C1내지 C4의 저급알코올 또는 이들의 혼합용매의 추출물인 이명의 예방 또는 개선용 식품 조성물.
- 제7항에 있어서, 상기 추출물은 고구마 줄기의 에탄올 추출물인 이명의 예방 또는 개선용 식품 조성물.
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| CN104187654A (zh) * | 2014-08-21 | 2014-12-10 | 安徽广印堂中药股份有限公司 | 一种人参叶保健品及其制备方法 |
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