KR20210028220A - 항체 종양-표적화 조립 복합체 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 종양 미세 환경에서 목적으로 하는 면역 세포를 선택적으로 활성화하기 위한 항체 종양-표적화 조립 복합체 (ATTAC)를 제공한다.

Description

항체 종양-표적화 조립 복합체
관련 출원에 대한 상호 참조
본 출원은 35 U.S.C. §119 (e)하에 2018 년 7 월 2 일자로 출원된 미국 가출원 제 62/693,125 호의 이익을 주장하며, 그의 내용은 전체가 본 문에 참조로 포함되어 있다.
분야
본 출원은 암을 치료하기 위한 표적화된 면역 세포 관여제(engaging agents)에 관한 것이다.
암은 상당한 생명 손실, 고통 및 경제적 영향을 초래한다. 암을 표적화하기 위한 면역 치료 전략은 과도기적 임상 연구의 활발한 분야였다.
면역 요법을 위해 다양한 다른 접근법들이 개발되었지만, 이러한 기존의 접근법들 중의 다수는 특정 암세포에 대한 충분한 특이성을 결여하고 있다. 예를 들어, 데미바디(demibody)는 각각 표적 세포상에서 상이한 항원에 결합하는 scFv 부분, 상보적인 데미바디에 쌍을 이루게 하는 Fc 도메인, 및 상보적인 데미바디상에서 다른 결합 파트너와 결합을 형성할 수 있는 결합 파트너를 갖도록 설계되었다. 국제 공개 WO 2007/062466. 그러나, 이러한 데미바디는 반드시 암세포에 특이적인 것은 아니며 동일한 항원을 발현하는 다른 세포상에서 결합하여 활성을 가질 수 있다. 또한, 제 1 항원에 결합하는 표적화 잔기 및 기능성 도메인의 제 1 단편을 갖는 제 1 폴리펩티드와, 제 2 항원에 결합하는 표적화 잔기 및 기능성 도메인의 제 1 단편에 상보적인 기능성 도메인의 제 2 단편을 갖는 제 2 폴리펩티드를 함께 제공하는 국제 공개 WO 2013/104804를 참조 바란다. 마찬가지로, 이러한 접근법도 반드시 암세포에 특이적인 것은 아니며 동일한 항원을 발현하는 다른 세포상에서 결합하여 활성을 가질 수 있다.
이중 특이적 T-세포 관여 항체 (BiTE)는 다른 사람들에 의해 제안되었지만; 이러한 구조는 종종 종양 환경에 충분히 특이적이지 않다. 추가적으로, BiTE도 조절 T-세포 (Treg)를 활성화하여 종양 부위에서 원하지 않는 Treg 활성을 촉진할 수 있다. 예를 들어, Treg를 자극하는 것은 특정 환자에서 억제성 Treg의 높은 수준의 증식 및 과진행성 질환이라고 하는 급속한 암 진행과 관련이 있다 (Kamada et al., PNAS 116 (20): 9999-10008 (2019) 참조). 특정 종양-침윤 PD-1+ Treg 세포를 활성화하고 확장하는 항-PD-1 항체로 치료받은 환자에게서 과진행성 질환의 특정 사례가 관찰되었지만, Treg를 자극하는 다른 수단이 소수의 환자에게서 유사한 원치 않는 영향을 미칠 수 있다는 우려가 있다.
T-세포를 암세포에 표적화 하도록 더 많은 특이성을 이용하는 다른 접근법은 어느 T-세포가 암 부위에 도달하거나 암 부위에서 활성화되는지를 선택하는 수단을 가지고 있지 않는다. 국제 공개 WO 2017/087789. 환자의 암을 치료하기 위한 면역 종양 접근법에 도움이 되지 않는 T-세포를 포함한 모든 T-세포를 활성화한다.
CD3를 통해 T-세포를 활성화시키는 현재의 이중 특이적 항체 접근법에는 두 가지 문제점이 있다. 그 첫 번째는 면역 반응의 과잉 활성화이다. 광범위하게 논의되지는 않았지만, 이러한 약제는 엄청나게 강력하여 전체 항체 요법에 비해 매우 낮은 용량으로 제공된다. 이는 부분적으로 이러한 시약이 CD3에 결합하여 이론적으로는 모든 T-세포를 활성화할 수 있다는 사실에 기인한다. 누군가가 바이러스에 감염되면 이들 T-세포의 약 1 내지 10 %가 활성화되며 이들은 면역 반응으로 인해 무기력하고 아픈 것 같이 느끼게 된다. 더 많은 T-세포가 활성화되면 드물게 사이토카인 방출 증후군 (CRS) 및 사망을 포함하는 더 큰 문제가 유발할 수 있다. CRS는 생물학적 제제에 의해 표적화된 세포로부터 사이토카인의 방출에 의해 촉발될 뿐만 아니라 모집된 면역 이펙터 세포로부터 사이토카인의 방출에 의해 촉발될 수 있다. 따라서, 이러한 시스템을 사용하여 활성화되는 T-세포의 총 수를 제한할 필요가 있다.
현재 BiTE 치료법의 두 번째 문제점은 BiTE 결합 표적 세포 근처에 있는 임의의 T-세포의 CD3 특이적 활성화이다. 어느 세포가 BiTE에 결합하는 가에 따라 CD4 T-세포 (헬퍼 (helper), 조절, TH17 등) 및 CD8 T-세포를 비롯하여 많은 면역 세포가 CD3 활성화에 반응한다. 이는 조절 T-세포 및 TH17 T-세포와 같은 원치 않는 T-세포의 활성화로 인해 BiTE의 효능이 상실되어 CD8 T-세포 및 세포 독성 CD4 T-세포와 같은 T-세포의 세포 용해 기능을 억제하기 때문일 수 있다. CD8+ T-세포만 활성화하는 것과 같이 특정 유형의 T-세포만 활성화된다면 치료법 또한 개선될 수 있다. 상기 기술은 이전에 이 문제에 대한 해결책을 제안하지 않았다. 단지 본 발명에 따라, 종양 표적화가 원치 않는 세포에 대한 특이성을 제공하기 위해 존재하고 원치 않는 암세포들의 부위에서 결합하여 그들을 사멸시킬 수 있는 바람직한 면역 세포에 선택적으로 결합하기 위하여 제 2 잔기가 존재하는 시스템의 이점이 밝혀졌다.
상세한 설명에 따라, 본 출원은 항체 종양-표적화 조립 복합체 (ATTAC)를 사용하여 암을 치료하는 약제 및 방법을 기술한다.
일부 구현예에 있어서, 환자의 암을 치료하기 위한 약제는 (a) (i) 암을 표적화 할 수 있는 표적화 잔기, 및 (ii) 제 2 면역 세포 관여 도메인에 결합할 때 면역 관여 활성이 가능한 제 1 면역 세포 관여 도메인으로서, 상기 제 2 면역 세포 관여 도메인이 상기 제 1 성분의 일부가 아닌, 제 1 면역 세포 관여 도메인;을 포함한 표적화된 면역 세포 결합제를 포함하는 제 1 성분-;
(b) (i) 면역 세포를 선택적으로 표적화 할 수 있는 면역 세포, 및 (ii) 제 1 면역 세포 관여 도메인에 결합할 때 면역 세포 관여 활성이 가능한 제 2 면역 세포 관여 도메인;을 포함한 선택적인 면역 세포 결합제를 포함하는 제 2 성분을 포함하며,
상기 제 1 및 제 2 면역 세포 관여 도메인은 둘 다 불활성 결합 파트너에 결합되지 않을 때 결합할 수 있고, 상기 제 1 면역 세포 관여 도메인 또는 제 2 면역 세포 관여 도메인 중 적어도 하나가 불활성 결합 파트너에 결합되며, 이에 따라 상기 제 1 및 제 2 면역 세포 관여 도메인은 불활성 결합 파트너가 제거되지 않는 한 서로 결합되지 않으며;
상기 약제는 불활성 결합 파트너 및 이것이 결합하는 면역 세포 관여 도메인을 분리하는 절단 부위를 추가로 포함하며,
상기 절단 부위는 (i) 암세포에 의해 발현된 효소에 의해 절단되거나; (ii) 암세포 내부에서 pH-민감성 절단 반응을 통해 절단되거나; (iii) 보체-의존적 절단 반응에 의해 절단되거나; 또는 (iv) 상기 약제 내의 표적화 잔기와 동일하거나 상이한 표적화 잔기에 의해 암세포에 공동 국소화된(colocalized) 프로테아제에 의해 절단된다.
일부 구현예에 있어서, 제 1 성분은 제 2 성분에 공유 결합되지 않는다. 일부 구현예에 있어서, 제 1 성분은 제 2 성분에 공유 결합된다.
일부 구현예에 있어서, 면역 세포 관여 도메인은 서로 결합될 때 면역 세포의 표면에서 발현되는 항원에 결합할 수 있다. 일부 구현예에 있어서, 면역 세포를 선택적으로 표적화 할 수 있는 면역 세포 선택 잔기는 T-세포, 대식세포, 자연 살상 세포, 호중구, 호산구, 호염기구, γδ T-세포, 자연 살상 T-세포 (NKT-세포) 또는 조작된 면역 세포를 선택적으로 표적화 한다.
일부 구현예에 있어서, 면역 세포를 선택적으로 표적화 할 수 있는 면역 세포 선택 잔기는 T-세포를 선택적으로 표적화 한다. 일부 구현예에 있어서, T-세포는 세포 독성 T-세포이다. 일부 구현예에 있어서, 세포 독성 T-세포는 CD8+ T-세포이다. 일부 구현예에 있어서, T-세포는 헬퍼 T-세포이다. 일부 구현예에 있어서, 헬퍼 T-세포는 CD4+ T-세포이다. 일부 구현예에 있어서, 면역 세포 선택 잔기는 CD8, CD4 또는 CXCR3을 표적으로 한다. 일부 구현예에 있어서, 면역 세포 선택 잔기는 조절 T-세포에 특이적으로 결합하지 않는다. 일부 구현예에 있어서, 면역 세포 선택 잔기는 TH17 세포에 특이적으로 결합하지 않는다. 일부 구현예에 있어서, 면역 세포 관여 도메인은 서로 결합될 때 CD3에 결합할 수 있다. 일부 구현예에 있어서, 면역 세포 관여 도메인은 서로 결합될 때 TCR에 결합할 수 있다.
일부 구현예에 있어서, 면역 세포를 선택적으로 표적화 할 수 있는 면역 세포 선택 잔기는 자연 살상 세포를 선택적으로 표적화 한다. 일부 구현예에 있어서, 면역 세포 선택 잔기는 CD2 또는 CD56을 표적으로 한다. 일부 구현예에 있어서, 면역 세포 관여 도메인은 서로 결합될 때 NKG2D, CD16, NKp30, NKp44, NKp46 또는 DNAM에 결합할 수 있다.
일부 구현예에 있어서, 면역 세포를 선택적으로 표적화 할 수 있는 면역 세포 선택 잔기는 대식세포를 선택적으로 표적화 한다. 일부 구현예에 있어서, 면역 세포 선택 잔기는 CD14, CD11b 또는 CD40을 표적으로 한다. 일부 구현예에 있어서, 면역 세포 관여 도메인은 서로 결합될 때 CD89 (Fc 알파 수용체 1), CD64 (Fc 감마 수용체 1), CD32 (Fc 감마 수용체 2A) 또는 CD16a (Fc 감마 수용체 3A)에 결합할 수 있다.
일부 구현예에 있어서, 면역 세포를 선택적으로 표적화 할 수 있는 면역 세포 선택 잔기는 호중구를 선택적으로 표적화 한다. 일부 구현예에 있어서, 면역 세포 선택 잔기는 CD15를 표적으로 한다. 일부 구현예에 있어서, 면역 세포 관여 도메인은 서로 결합될 때 CD89 (FcαR1), FcγRI (CD64), FcγRIIA (CD32), FcγRIIIA (CD16a), CD11b (CR3, αMβ2), TLR2, TLR4, CLEC7A (Dectin1), 포르밀 펩티드 수용체 1 (FPR1), 포르밀 펩티드 수용체 2 (FPR2) 또는 포르밀 펩티드 수용체 3 (FPR3)에 결합할 수 있다.
일부 구현예에 있어서, 면역 세포를 선택적으로 표적화 할 수 있는 면역 세포 선택 잔기는 호산구를 선택적으로 표적화 한다. 일부 구현예에 있어서, 면역 세포 선택 잔기는 CD193, Siglec-8 또는 EMR1을 표적으로 한다. 일부 구현예에 있어서, 면역 세포 관여 도메인은 서로 결합될 때 CD89 (Fc 알파 수용체 1), FcεRI, FcγRI (CD64), FcγRIIA (CD32), FcγRIIIB (CD16b) 또는 TLR4에 결합할 수 있다.
일부 구현예에 있어서, 면역 세포를 선택적으로 표적화 할 수 있는 면역 세포 선택 잔기는 호염기구를 선택적으로 표적화 한다. 일부 구현예에 있어서, 면역 세포 선택 잔기는 2D7, CD203c 또는 FcεRIα를 표적으로 한다. 일부 구현예에 있어서, 면역 세포 관여 도메인은 서로 결합될 때 CD89 (Fc 알파 수용체 1) 또는 FcεRI에 결합할 수 있다.
일부 구현예에 있어서, 면역 세포를 선택적으로 표적화 할 수 있는 면역 세포 선택 잔기는 γδ T-세포를 선택적으로 표적화 한다. 일부 구현예에 있어서, 면역 세포 선택 잔기는 γδ TCR을 표적으로 한다. 일부 구현예에 있어서, 면역 세포 관여 도메인은 서로 결합될 때 γδ TCR, NKG2D, CD3 복합체 (CD3ε, CD3γ, CD3δ, CD3ζ, CD3η), 4-1BB, DNAM-1 또는 TLR (TLR2, TLR6)에 결합할 수 있다.
일부 구현예에 있어서, 면역 세포를 선택적으로 표적화 할 수 있는 면역 세포 선택 잔기는 자연 살상 T-세포를 선택적으로 표적화 한다. 일부 구현예에 있어서, 면역 세포 선택 잔기는 Vα24 또는 CD56을 표적으로 한다. 일부 구현예에 있어서, 면역 세포 관여 도메인은 서로 결합될 때 αβTCR, NKG2D, CD3 복합체 (CD3ε, CD3γ, CD3δ, CD3ζ, CD3η), 4-1BB, 또는 IL-12R에 결합할 수 있다.
일부 구현예에 있어서, 면역 세포를 선택적으로 표적화 할 수 있는 면역 세포 선택 잔기는 조작된 면역 세포를 선택적으로 표적화 한다. 일부 구현예에 있어서, 조작된 면역 세포는 CAR T-세포, 자연 살상 세포, 자연 살상 T-세포 또는 γδ T-세포다. 일부 구현예에 있어서, 면역 세포 선택 잔기는 CAR 또는 면역 세포상에서 발현되는 마커를 표적으로 한다. 일부 구현예에 있어서, 면역 선택 잔기는 LNGFR 또는 CD20을 표적으로 한다. 일부 구현예에 있어서, 면역 세포 관여 도메인은 서로 결합될 때 조작된 면역 세포에 의해 발현된 항원에 결합할 수 있다. 일부 구현예에 있어서, 조작된 면역 세포에 의해 발현되는 항원은 CD3이다.
일부 구현예에 있어서, 면역 세포 선택 잔기는 항체 또는 그의 항원-특이적 결합 단편을 포함한다. 일부 구현예에 있어서, 항체 또는 그의 항원-특이적 결합 단편은 T-세포상에서 항원에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에 있어서, 항체 또는 그의 항원-특이적 결합 단편은 세포 독성 또는 헬퍼 T-세포상에서 항원에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에 있어서, 항체 또는 그의 항원-특이적 결합 단편은 대식세포상에서 항원에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에 있어서, 항체 또는 그의 항원-특이적 결합 단편은 자연 살상 세포상에서 항원에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에 있어서, 항체 또는 그의 항원-특이적 결합 단편은 호중구상에서 항원에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에 있어서, 항체 또는 그의 항원-특이적 결합 단편은 호산구상에서 항원에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에 있어서, 항체 또는 그의 항원-특이적 결합 단편은 γδ T-세포상에서 항원에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에 있어서, 항체 또는 그의 항원-특이적 결합 단편은 자연 살상 T-세포상에서 항원에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에 있어서, 항체 또는 그의 항원-특이적 결합 단편은 조작된 면역 세포상에서 항원에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에 있어서, 조작된 면역 세포는 CAR T-세포, 자연 살상 세포, 자연 살상 T-세포 또는 γδ T-세포이다.
일부 구현예에 있어서, 면역 선택 잔기는 앱타머(aptamer)를 포함한다. 일부 구현예에 있어서, 앱타머는 T-세포상에서 항원에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에 있어서, 앱타머는 세포 독성 또는 헬퍼 T-세포상에서 항원에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에 있어서, 앱타머는 대식세포상에서 항원에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에 있어서, 앱타머는 자연 살상 세포상에서 항원에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에 있어서, 앱타머는 호중구상에서 항원에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에 있어서, 앱타머는 호산구상에서 항원에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에 있어서, 앱타머는 γδ T-세포상에서 항원에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에 있어서, 앱타머는 자연 살상 T-세포상에서 항원에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에 있어서, 앱타머는 조작된 면역 세포상에서 항원에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에 있어서, 조작된 면역 세포는 CAR T-세포, 자연 살상 세포, 자연 살상 T-세포 또는 γδ T-세포이다.
일부 구현예에 있어서, 앱타머는 DNA를 포함한다. 일부 구현예에 있어서, 앱타머는 RNA를 포함한다. 일부 구현예에 있어서, 앱타머는 단일 가닥이다. 일부 구현예에 있어서, 앱타머는 무작위 후보 라이브러리로부터 선택된 선택적 면역 세포 결합-특이적 앱타머이다.
일부 구현예에 있어서, 표적화 잔기는 항체 또는 그의 항원-특이적 결합 단편이다. 일부 구현예에 있어서, 항체 또는 그의 항원-특이적 결합 단편은 암 항원에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에 있어서, 표적화 잔기는 앱타머이다. 일부 구현예에 있어서, 앱타머는 암 항원에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에 있어서, 앱타머는 DNA를 포함한다. 일부 구현예에 있어서, 앱타머는 RNA를 포함한다. 일부 구현예에 있어서, 앱타머는 단일 가닥이다. 일부 구현예에 있어서, 앱타머는 무작위 후보 라이브러리로부터 선택된 표적 세포-특이적 앱타머이다. 일부 구현예에 있어서, 앱타머는 항-EGFR 앱타머이다. 일부 구현예에 있어서, 항-EGFR 앱타머는 서열 번호: 95 내지 164 중 어느 하나를 포함한다. 일부 구현예에 있어서, 앱타머는 1 피코몰 내지 500 나노몰의 Kd로 암세포상에서 암에 결합한다. 일부 구현예에 있어서, 앱타머는 1 피코몰 내지 100 나노몰의 Kd로 암에 결합한다.
일부 구현예에 있어서, 표적화 잔기는 IL-2, IL-4, IL-6, α-MSH, 트랜스페린, 엽산, EGF, TGF, PD1, IL-13, 줄기 세포 인자, 인슐린-유사 성장 인자 (IGF) 또는 CD40을 포함한다. 일부 구현예에 있어서, 표적화 잔기는 IL-2, IL-4, IL-6, α-MSH, 트랜스페린(transferrin), 엽산, EGF, TGF, PD1, IL-13, 줄기 세포 인자, 인슐린-유사 성장 인자 (IGF) 또는 CD40의 전장 서열을 포함한다. 일부 구현예에 있어서, 표적화 잔기는 IL-2, IL-4, IL-6, α-MSH, 트랜스페린, 엽산, EGF, TGF, PD1, IL-13, 줄기 세포 인자, 인슐린-유사 성장 인자 (IGF) 또는 CD40의 절단된 형태, 유사체, 변이체 또는 유도체를 포함한다. 일부 구현예에 있어서, 표적화 잔기는 IL-2 수용체, IL-4, IL-6, 멜라닌 세포 자극 호르몬 수용체 (MSH 수용체), 트랜스페린 수용체 (TR), 엽산 수용체 1 (FOLR), 엽산 수산화 효소 (FOLH1), EGF 수용체, PD-L1, PD-L2, IL-13R, CXCR4, IGFR 또는 CD40L을 포함하는 암의 표적에 결합한다.
일부 구현예에 있어서, 하나의 면역 세포 관여 도메인은 VH 도메인을 포함하고 다른 면역 세포 관여 도메인은 VL 도메인을 포함한다. 일부 구현예에 있어서, 제 1 면역 세포 결합 파트너는 불활성 결합 파트너에 결합되고 절단 부위에 의해 불활성 결합 파트너로부터 분리된다.
일부 구현예에 있어서, 제 2 면역 세포 결합 파트너는 불활성 결합 파트너에 결합되고 절단 부위에 의해 불활성 결합 파트너로부터 분리된다.
본 출원은 또한 제 1 면역 세포 결합 파트너가 불활성 결합 파트너에 결합되고 제 1 절단 부위에 의해 불활성 결합 파트너로부터 분리되며 제 2 면역 세포 결합 파트너가 불활성 결합 파트너에 결합되고 제 2 절단 부위에 의해 불활성 결합 파트너로부터 분리되는 약제를 기술한다.
일부 구현예에 있어서, 제 1 절단 부위 및 제 2 절단 부위는 동일한 절단 부위이다. 일부 구현예에 있어서, 제 1 절단 부위 및 제 2 절단 부위는 상이한 절단 부위이다.
일부 구현예에 있어서, 적어도 하나의 절단 부위는 프로테아제 절단 부위이다.
일부 구현예에 있어서, 암세포에 의해 발현되는 적어도 하나의 효소는 프로테아제이다.
일부 구현예에 있어서, 적어도 하나의 불활성 결합 파트너는 면역 세포 관여 도메인에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에 있어서, 적어도 하나의 불활성 결합 파트너는 VH 또는 VL 도메인이다.
일부 구현예에 있어서, 면역 세포 관여 도메인이 VH 도메인일 때, 불활성 결합 파트너는 VL 도메인이고, 면역 세포 관여 도메인이 VL 도메인일 때, 불활성 결합 파트너는 VH 도메인이다.
본 출원은 또한 (a) (i) 암을 표적화 할 수 있는 표적화 잔기; (ii) 제 2 면역 세포 관여 도메인에 결합할 때 면역 관여 활성이 가능한 제 1 면역 세포 관여 도메인으로서, 상기 제 2 면역 세포 관여 도메인이 제 1 성분의 일부가 아닌, 제 1 면역 세포 관여 도메인;을 포함한 표적화된 면역 세포 결합제를 포함하는 제 1 성분; 및 (b) 제 1 면역 세포 관여 도메인 및 불활성 결합 파트너를 분리하는 절단 부위를 포함하는 선택적인 면역 세포 결합제를 포함하는 암 치료용 2-성분계에서 사용하기 위한 약제를 기술하며,
상기 절단 부위는 (i) 암세포에 의해 발현된 효소에 의해 절단되거나; (ii) 암세포 내부에서 pH-민감성 절단 반응을 통해 절단되거나; (iii) 보체-의존적 절단 반응에 의해 절단되거나; 또는 (iv) 상기 약제의 표적화 잔기와 동일하거나 상이한 표적화 잔기에 의해 암세포에 공동 국소화된 프로테아제에 의해 절단되며,
상기 절단 부위의 절단은 불활성 결합 파트너의 손실을 유발하고 상기 약제의 일부가 아닌 제 2 면역 세포 관여 도메인에 결합하게 할 수 있다.
일부 구현예에 있어서, 제 1 성분은 절단 부위를 포함하는 링커에 의해 제 2 성분에 공유 결합된다.
일부 구현예에 있어서, 절단 부위는 프로테아제 절단 부위이다.
일부 구현예에 있어서, 프로테아제 절단 부위는 혈액에서 절단될 수 있다. 일부 구현예에 있어서, 프로테아제 절단 부위는 트롬빈, 호중구 엘라스타제 또는 푸린(furin)에 대한 절단 부위이다.
일부 구현예에 있어서, 프로테아제 절단 부위는 종양-관련 프로테아제에 의해 절단될 수 있다. 일부 구현예에 있어서, 종양-관련 프로테아제 절단 부위는 서열 번호 1 내지 84 중 어느 하나를 포함한다.
본 출원은 또한 상기 약제의 제 1 및 제 2 성분을 암호화하는 핵산 분자 세트를 기술한다.
본 출원은 또한 선택적인 면역 세포 결합제를 암호화하는 핵산 분자를 기술한다.
본 출원은 또한 본 출원에 기재된 약제를 투여하는 것을 포함하는 환자의 암을 치료하는 방법을 기술한다.
일부 구현예에 있어서, 환자가 종양에서 조절 T-세포를 갖는 경우, 선택적인 면역 세포 결합제는 조절 면역 세포 (CD4 및 CD25를 포함하지만 이에 제한되지 않음)에 존재하는 마커를 표적으로 하지 않는다.
일부 구현예에 있어서, 선택적인 면역 세포 결합제는 TH17 세포에 존재하는 마커를 표적으로 하지 않는다. 일부 구현예에 있어서, 선택적인 면역 세포 결합제는 용해를 위해 종양 세포를 표적화 하는 T-세포를 활성화시킨다.
일부 구현예에 있어서, 환자가 종양에서 조절 T-세포를 갖는 경우, 면역 세포 선택 잔기는 CD8에 특이적으로 결합함으로써 CD8+ T-세포를 표적으로 한다.
일부 구현예에 있어서, 환자가 종양에서 조절 T-세포를 갖는 경우, 면역 세포 선택 잔기는 CXCR3에 특이적으로 결합함으로써 CD8+ T-세포 및 CD4+ T-세포를 표적으로 한다.
일부 구현예에 있어서, 암은 유방암, 난소암, 자궁 내막암, 자궁 경부암, 방광암, 신장암, 흑색종, 폐암, 전립선암, 고환암, 갑상선암, 뇌암, 식도암, 위암, 췌장암, 결장 직장암, 간암, 백혈병, 골수종, 비-호지킨 (non-Hodgkin) 림프종, 호지킨 림프종, 급성 골수성 백혈병, 급성 림프모구 백혈병, 만성 림프모구 백혈병, 림프 증식성 장애, 골수형성 이상 장애, 골수 증식성 질환 또는 전암성 질환 중 어느 하나이다.
본 출원은 또한 본 출원에 기재된 약제를 환자에게 투여하는 것을 포함하는 암에 대한 환자의 면역 반응을 표적화 하는 방법을 기술한다.
추가적인 목적 및 이점은 다음과 같은 설명에서 부분적으로 설명될 것이며, 이러한 설명으로부터 부분적으로 명백하거나 또는 실제로 학습될 수 있다. 상기 목적 및 이점은 첨부된 특허 청구 범위에서 특정적으로 기술된 요소들 및 조합들에 의해 실현 및 달성될 것이다.
전술한 일반적인 설명 및 하기의 상세한 설명은 모두 예시적이고 설명적일 뿐이지 특허 청구 범위를 제한하지 않는다는 것을 이해해야 한다.
본 명세서에 통합되고 그 일부를 구성하는 첨부된 도면들은 하나의 (복수의) 구현예(들)을 예시하며, 상세한 설명과 함께 본 명세서에 기술된 원리를 설명하는 역할을 한다.
도 1A 및 1B는 환자의 암을 치료하기 위한 약제의 도식적 표현을 제공한다. 도 1A (시점 1)에 나타낸 바와 같이, 약제는 표적화된 면역 세포 결합제 (ATTAC1)를 포함하는 제 1 성분 및 선택적인 면역 세포 결합제 (ATTAC 2)를 포함하는 제 2 성분으로 구성된다. ATTAC1은 암세포 (원형 및 원형 결합 잔기)에 특이적으로 결합하며, ATTAC2는 면역 세포 (정사각형 및 정사각형 결합 잔기)에 특이적으로 결합한다. ATTAC1 및 ATTAC2는 모두 면역 세포 관여 활성이 가능한 면역 세포 관여 도메인의 절반을 구성한다 (콩 형상으로 표시됨). ATTAC1과 ATTAC2는 서로 결합되지 않는 한 면역 세포 관여 활성이 가능하지 않다. 따라서, "표적화된 면역 세포 결합제"란 암세포를 표적화 할 수 있고 선택적인 면역 세포 결합제에 결합될 때 면역 세포 관여 활성이 가능한 약제를 의미한다. 마찬가지로, "선택적인 면역 세포 결합제"란 특정 유형의 면역 세포에 선택적으로 결합할 수 있고 표적화된 면역 세포 결합제에 결합될 때 면역 세포 관여 활성이 가능한 약제를 의미한다. 면역 결합 도메인 중 적어도 하나 및 선택적으로 둘 모두는 불활성 결합 파트너에 의해 차폐된다 (여기서는 둘 다 차폐된 것으로 표시됨). 적어도 하나 (또는 선택적으로 둘 다)의 불활성 결합 도메인이 절단 부위의 절단에 의해 제거될 때까지, 면역 활성 잔기 (삼각형으로 표시됨)는 관여되지 않은 상태로 남게 된다. 각각의 불활성 결합 파트너 및 면역 세포 관여 도메인을 분리하는 절단 부위는 직사각형으로 표시된다. 도 1B (시점 2)에 나타낸 바와 같이, 불활성 결합 파트너의 효소적 절단은 제 1 면역 세포 관여 도메인 및 제 2 면역 세포 관여 도메인의 결합을 허용하여 면역 세포 관여 도메인 (여기서는 VH-VL)의 결합을 통해 면역 세포를 면역 세포상의 항원 (삼각형으로 표시)에 특이적으로 활성화시킨다. 그 결과 암세포가 파괴된다.
도 2A 및 2B는 본 출원에 기재된 현재 ATTAC 구조 (도 2B)와 비교하여 WO 2017/087789 (도 2A)에서 논의된 바와 같은 2-성분 구조 또는 T-세포 관여 항체 회로 (TEAC)의 특이성의 논리적 제어를 나타낸다. TEAC는 (i) 암을 표적화 할 수 있는 표적화 잔기 ("항원 1") 및 (ii) 절단 부위 ("프로테아제 1")를 모두 갖는 제 1 성분, 및 (i) 암을 표적화 할 수 있는 표적화 잔기 ("항원 2") 및 (ii) 선택적 절단 부위 ("프로테아제 2")를 갖는 제 2 성분을 사용하였다. 현재 ATTAC 구조는 암에 대한 제 2 성분의 특이성을 제거하며 (항원 2에 대해 표적화 하는 잔기를 더 이상 포함하지 않음) 면역 세포를 선택적으로 표적화 할 수 있는 면역 세포 선택 잔기 ("면역 세포 마커")로 제 2 성분을 대체하였다. ATTAC에서, 적어도 제 1 또는 제 2 성분은 절단 부위를 포함하며, 여기서 절단 부위는 제 1 성분에 나타내고 선택적으로 제 2 성분에 나타낸다. 그 반대의 구성도 적용된다.
도 3A 내지 3C는 TEAC에 의한 T-세포 활성화를 나타내며, 이는 FITC-접합 항체로 T-세포를 표지하는 것이 종양 세포 표면에서 CD3 분자를 인식하는 능력을 변경하지 않고 그에 대한 반응으로 활성화된다는 것을 나타낸다. T-세포는 상이한 FITC-접합 항체로 표지되었으며; 표적 세포 (MCF-7)는 EpCAM VH (서열 번호 166) 및 EpCAM VL (서열 번호: 167) TEAC 성분 (20G6)으로 표지되었다. 대조군은 BiTE (서열 번호 168)로 표지되었다. 도 3A는 TEAC 표지된 종양 세포를 사용한 IFN 감마 방출을 나타낸다. 도 3B (CD4 T-세포) 및 도 3C (CD8 T-세포)는 판독값으로서 배경 위의 평균 형광 강도 (MFI)를 사용하여 CD69 유세포 분석 염색에 의한 T-세포 활성화를 나타낸다. T-세포가 FITC 접합 항체로 표지되었을 때 EpCAM TEAC 성분 쌍에 대한 강한 T-세포 반응이 있었다. 결합된 항체에 의한 차단은 없었다. TEAC는 CD4 및 CD8 세포를 모두 활성화시켰으며 두 세포 유형 모두 CD3를 발현하기 때문에 이들 세포를 구별하지 못했다. 이러한 대조 실험은 TEAC가 CD4와 CD8 사이에서 선택적이지 않으며 FITC 모델을 사용하더라도 예상 결과가 변경되지 않았음을 나타낸다. FITC 모델의 사용은 T-세포 활성화를 막지 못한다. 도 3A 내지 3C에 나타난 결과는 종양 세포상에서 완전한 항-CD3 활성화 도메인이 있을 때 모든 T-세포 하위 세트 (CD4 및 CD8)의 활성화를 입증한다.
도 4A 내지 4C는 종양 세포가 단 하나의 ATTAC 성분을 갖고 T-세포가 항-FITC ATTAC 성분을 갖는 실험 설계를 사용하여 ATTAC에 의한 선택적인 T-세포 활성화를 제공한다. T-세포는 상이한 FITC-접합 항체로 PL 표지된 다음, 항-FITC ATTAC 성분 (CD3 VL (20G6); 서열 번호: 165); EpCAM VH ATTAC 성분 (20G6; 서열 번호: 166)으로 표지된 표적 세포 (MCF-7)로 표지된다. 도 4A는 ATTAC 표지된 종양 세포를 사용한 IFN 감마 방출을 나타낸다. 도 4B (CD4 T-세포) 및 도 4C (CD8 T-세포)는 판독값으로서 배경 위의 MFI를 사용하여 CD69 유세포 분석 염색에 의한 T-세포 활성화를 입증한다. T-세포가 CD8, CD52 및 CXCR3에 결합된 FITC-접합 항체로 표지되었을 때 EpCAM ATTAC 성분/FITC ATTAC 성분 쌍에 대한 강한 T-세포 반응이 있었다. 항-CD8 FITC-접합 항체를 사용하는 경우 CD4 T-세포의 활성화없이 CD8 T-세포의 선택적인 활성화가 있었다 (도 4B 및 도 4C에서 화살표로 표시).
도 5A 내지 도 5I는 단백질의 표면에서 단백질의 T-세포 발현을 나타내며, ATTAC 성분을 CD52, CD8 및 CXCR3 (FITC를 통해)에 결합하는 것만이 T-세포 활성화를 허용한다는 것을 나타낸다. 도 5A (CD5), 도 5B (CD8); 도 5C (CD28); 도 5D (CD45RO); 도 5E (CD52); 도 5F (HLA-DR); 도 5G (CD19); 도 5H (CD278 (ICOS)); 및 도 5I (CD279 (PD-1))에 나타낸 바와 같이 다양한 T-세포 항원들을 시험하였다.
도 6A 내지 도 6F는 TEAC에 의한 CD4 T-세포 활성화가 FITC 항체에 의해 억제되지 않음을 나타낸다. T-세포는 상이한 FITC-접합 항체; 항-EpCAM VH 및 VL TEAC 성분 (20G6)으로 표지된 표적 세포 (MCF-7)로 표지되었다. 도 6A는 인터페론 감마 방출을 나타낸다. 유세포 분석 원시 데이터는 표지되지 않은 T-세포 (도 6B) 또는 CD-19 표지화 (도 6C), CD52 표지화 (도 6D), 또는 CD8 표지화 (Hit8a, 6E)에 대해 제공된다. 도 6F는 CD4 T-세포에 대한 유세포 분석 데이터를 수집한다. T-세포가 FITC-접합 항체로 표지되었을 때 EpCAM TEAC 성분 쌍에 대한 강한 T-세포 반응이 있었다. 결합된 항체에 의한 차단은 없었다.
도 7A 내지 도 7F는 TEAC에 의한 CD8 T-세포 활성화가 FITC 항체에 의해 억제되지 않음을 나타낸다. 패널링(paneling)은 도 6A 내지 도 6F에 대해 기재된 것과 같다. T-세포가 FITC-접합 항체로 표지되었을 때 EpCAM TEAC 성분 쌍에 대한 강한 T-세포 반응이 있었다. 결합된 항체에 의한 차단은 없었다.
도 8A 내지 8F는 ATTAC에 의한 선택적 CD4 T-세포 활성화를 나타낸다. 패널링은 도 6A 내지 도 6F에 대해 설명된 것과 같다. T-세포가 CD8, CD52 또는 CXCR3에 결합된 FITC-접합 항체로 표지되었을 때 EpCAM ATTAC 성분/FITC ATTAC 성분 쌍에 대한 강한 T-세포 반응이 있었다. 항-CD52 또는 항-CXCR3 FITC-접합 항체를 사용할 때 CD4 T-세포가 활성화되었다.
도 9A 내지 도 9F는 ATTAC에 의한 선택적 CD8 T-세포 활성화를 나타낸다. 패널링은 도 6A 내지 도 6F에 대해 설명된 것과 같다. T-세포가 CD8, CD52 또는 CXCR3에 결합된 FITC-접합 항체로 표지되었을 때 EpCAM ATTAC 성분/FITC ATTAC 성분 쌍에 대한 강한 T-세포 반응이 있었다. 항-CD52, 항-CXCR3 또는 4 개의 항-CD8 FITC-접합 항체를 사용할 때 CD8 T-세포가 활성화되었다.
도 10A 및 도 10B는 EpCAM-발현 종양 세포에 의한 FACS 결과를 나타낸다. EpCAM을 과발현하는 MDA-MB-231 세포는 항-EpCAM VH 및 VL로 표지되어 항-CD8 ATTAC 성분의 결합 도메인을 형성하고 엔테로키나제 (프로테아제)에 의해 절단된다. T-세포 (도 11D) 또는 PBMC 내의 T-세포 (도 11C)의 활성화를 위한 대조군은 EpCAM BiTE (서열 번호: 168; 양성 대조군)의 존재하에 또는 미처리된 표적 MDA-MB-231 세포 (음성 대조군)와 함께 배양될 때 T-세포 단독에 대한 인터페론 방출을 포함했다. EpCAM VH란 항-EpCAM ATTAC1 (EpCAM 암 항원을 표적으로 하고 항-CD3 VH 도메인 (서열 번호: 166)을 함유하는 성분)을 의미한다. CD8 VL이란 항-CD8 ATTAC2 (CD8을 표적으로 하고 항-CD3 VL 도메인(서열 번호: 170)을 함유하는 성분)을 의미한다.
도 12A 내지 도 12C는 ATTAC의 농도 의존성을 나타낸다. EpCAM을 과발현하는 MDA-MB-231 세포는 증가하는 농도의 EpCAM VH ATTAC 성분으로 표지되었다. T-세포 또는 건강한 기증자 PBMC는 증가하는 농도의 항-CD8 VL ATTAC 성분 (서열 번호: 172)으로 표지되었다. 도 12A는 하룻밤 동안 동시 배양되고 IFN 감마 방출에 의한 T-세포 활성화에 대해 분석된 세포의 결과를 나타낸다. EpCAMx20G6-VH는 항-EpCAM 및 항-CD3 VH ATTAC 성분을 의미하며, CD8x20G6-VL은 항-CD8 및 항-CD3 VL ATTAC 성분을 의미한다. 2 개의 ATTAC 성분들의 농도는 분석시 우세한 ATTAC 성분이 있는지를 결정하기 위하여 동일하게 유지되지 않았다. 항-CD8 ATTAC 성분의 불활성 결합 도메인은 엔테로키나제(프로테아제)에 의해 절단되었다. 도 12B는 2 개의 ATTAC 성분들의 농도를 증가시킨 결과를 나타낸다. 대조군은 단독으로 배양된 PBMC 내에서, EpCAM BiTE (서열 번호: 168; 양성 대조군)의 존재하에 또는 미처리된 표적 MDA-MB-231 세포(음성 대조군)와 함께 배양될 때, T-세포로부터의 인터페론 방출을 포함했다 (도 12C).
도 13A 및 도 13B는 혼합된 T-세포 활성화 분석에서 종양 세포에 결합하는 ATTAC1 및 T-세포에 결합된 FITC 접합 항체에 결합하는 ATTAC2를 사용하여 CD4 또는 CD8 T-세포의 활성화를 입증한다. PBMC는 CD4-FITC, CD8-FITC 또는 CD19-FITC (음성 대조군)로 표지되고, ATTAC1에 의해 결합된 종양 세포와 함께 배양되었다. 항-CD4-FITC가 T-세포에 결합될 때 CD4 T-세포만 활성화되고, CD8 T-세포는 항-CD8 FITC가 T-세포에 결합될 때만 활성화된다. 이는 T-세포의 하위 세트에 대한 ATTAC2의 결합이 ATTAC2와 결합된 T-세포만을 활성화시키고 다른 T-세포의 하위 세트는 ATTAC2에 의해 결합되지 않는다고 하는 사상을 확인시켜 준다.
서열 설명
하기 표 1A는 본 원에서 참조된 특정 서열의 목록을 제공한다. 하기 표 1B는 본 원에 사용된 특정 구조 서열의 목록을 제공한다.
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구현예의 설명
I. ATTAC
용어 ATTAC는 항체 종양-표적화 조립 복합체를 지칭한다. “복합체”라는 단어는 완전한 기능성 분자 (즉, "복합체")를 만들기 위하여 제 1 성분과 제 2 성분을 모두 가질 필요가 있음을 의미한다. 용어 복합체는 또한 (i) 암세포에서 항원 발현, (ii) 프로테아제 위치 및 (iii) 원하는 면역 세포의 면역 세포 마커를 기반으로 하는 부울 연산자 논리(Boolean operator logic)를 의미한다. 논리 게이팅 (logic gating)을 적용함으로써 T-세포 관여 항체에 대한 현재의 많은 과제를 제거한다.
ATTAC는 암 항원에 결합하는 하나의 ATTAC 성분 및 암 항원에 결합하지 않는 하나의 ATTAC 성분을 사용함을 의미하지만, 그 대신 면역 세포를 선택적으로 표적화 한다. 따라서, ATTAC 성분은 (ATTAC 쌍의 두 구성원이 모두 암 항원에 결합된 종래의 약제에서와 같이) 병렬 구성을 갖지 않지만, 그 대신 트랜스 구성을 갖는다.
ATTAC 성분 또는 쌍에서, (a) 표적화된 면역 세포 결합제를 포함하는 제 1 성분은:
ⅰ. 암을 표적화 할 수 있는 표적화 잔기;
ii. 제 2 면역 세포 관여 도메인에 결합할 때 면역 세포 관여 활성이 가능한 제 1 면역 세포 관여 도메인으로서, 상기 제 2 면역 세포 관여 도메인이 제 1 성분의 일부가 아닌, 제 1 면역 세포 관여 도메인;을 포함하며;
(b) 선택적인 면역 세포 결합제를 포함하는 제 2 성분은:
ⅰ. 면역 세포를 선택적으로 표적화 할 수 있는 면역 세포 선택 잔기;
ii. 제 1 면역 세포 관여 도메인에 결합할 때 면역 세포 관여 활성이 가능한 제 2 면역 세포 관여 도메인으로서, 상기 제 1 및 제 2 면역 세포 관여 도메인이 둘 다 불활성 결합 파트너에 결합되지 않을 때 결합할 수 있는, 제 2 면역 세포 관여 도메인;을 포함한다.
제 1 면역 세포 관여 도메인 또는 제 2 면역 세포 관여 도메인 중 적어도 하나는 불활성 결합 파트너에 결합되며, 이에 따라 제 1 및 제 2 면역 세포 관여 도메인은 불활성 결합 파트너가 제거되지 않는 한 서로 결합되지 않는다. 불활성 결합 파트너는, 존재하는 경우, 불활성 결합 파트너 및 이것이 결합하는 면역 세포 관여 도메인을 분리하는 절단 부위에 의해 면역 세포 관여 도메인에 결합되며,
상기 절단 부위는:
a. 암세포에 의해 발현되는 효소에 의해 절단되거나;
b. 암세포 내부에서 pH-민감성 절단 반응을 통해 절단되거나;
c. 보체-의존적 절단 반응에 의해 절단되거나; 또는
d. 약제의 표적화 잔기와 동일하거나 상이한 표적화 잔기에 의해 암세포에 공동 국소화된 프로테아제에 의해 절단된다.
A. 단일 폴리펩티드 사슬 또는 2 성분
일부 구현예에 있어서, 제 1 성분은 제 2 성분에 공유 결합된다. 일부 구현예에 있어서, 제 1 성분은 제 2 성분에 공유 결합되지 않는다.
일부 구현예에 있어서, ATTAC는 2 개의 개별 성분으로 구성된다. 즉, ATTAC는 별개의 폴리펩티드인 제 1 및 제 2 성분으로 구성될 수 있다.
일부 구현예에 있어서, ATTAC는 단일 폴리펩타이드 사슬로 구성된다. 일부 구현예에 있어서, 제 1 및 제 2 성분은 단일 아미노산 서열 내에 포함된다.
ATTAC가 단일 폴리펩티드 사슬로 구성되는 경우, 제 1 및 제 2 성분은 링커에 의해 분리될 수 있다. 일부 구현예에 있어서, 링커는 제 1 및 제 2 성분을 공유 결합한다. 일부 구현예에 있어서, 링커는 절단 가능한 링커를 포함한다. 일부 구현예에 있어서, 제 1 및 제 2 성분 사이의 절단 가능한 링커는 프로테아제 절단 부위를 포함한다.
일부 구현예에 있어서, 제 1 성분 및 제 2 성분을 공유 결합하는 링커 내에 포함된 절단 부위는 프로테아제 절단 부위이다. 서열 번호: 1 내지 84는 사용될 수 있는 일부 예시적인 프로테아제 절단 부위를 나열하지만, 본 발명은 이러한 세트의 프로테아제 절단 부위에 제한됨이 없이 다른 프로테아제 절단 부위를 사용할 수 있다.
일부 구현예에 있어서, 제 1 성분 및 제 2 성분을 공유 결합하는 링커 내에 포함된 절단 부위는 종양-관련 프로테아제 절단 부위이다. 종양-관련 프로테아제는 종양과 관련된 것이다. 일부 구현예에 있어서, 종양-관련 프로테아제는 신체의 다른 부위에 비해 종양에서 더 높은 발현을 갖는다. 표 3A는 종양-관련 프로테아제의 예를 제공하지만, 종양에서 발현되는 임의의 프로테아제도 본 발명의 종양-관련 프로테아제 절단 부위를 선택하는데 사용될 수 있다.
일부 구현예에 있어서, 제 1 성분 및 제 2 성분을 공유 결합하는 링커 내에 포함된 절단 부위는 혈액에서 발견되는 프로테아제에 대한 절단 부위이다. 혈액에서 발견되는 예시적인 프로테아제는 트롬빈, 호중구 엘라스타제 및 푸린 (furin)을 포함한다.
B. 면역 세포 선택 잔기
일부 구현예에 있어서, ATTAC는 특정 면역 세포에 특이적인 면역 세포 선택 잔기를 포함한다. 일부 구현예에 있어서, 면역 세포 선택 잔기는 CD8+ T-세포, CD4+ T-세포, 자연 살상 (NK) 세포, 대식세포, 호중구, 호산구, 호염기구, γδ T-세포, 자연 살상 T-세포 (NKT-세포) 또는 조작된 면역 세포에 특이성이 있다. 조작된 면역 세포란 새로운 특이성을 갖는 조작된 수용체를 함유한 면역 세포를 의미한다. 조작된 면역 세포의 예로는 키메라 항원 수용체 (CAR) T-세포, NK, NKT 또는 γδ T-세포를 들 수 있다.
일부 구현예에 있어서, 면역 세포 선택 잔기는 종양 항원이 아닌 면역 세포 마커를 표적으로 한다. 일부 구현예에 있어서, 면역 세포 선택 잔기는 면역 세포에 대한 ATTAC의 표적화를 가능하게 하며, 여기서 상기 면역 세포는 암세포가 아니다. 일부 구현예에 있어서, 면역 세포 선택 잔기는 ATTAC를 림프종, 골수종 또는 백혈병에 표적화하지 않는다. 일부 구현예에 있어서, ATTAC는 고형 종양 (즉, 면역 세포가 아닌 임의의 종양)을 표적으로 한다.
일부 구현예에 있어서, 면역 세포 선택 잔기는 조절 T-세포에 특이적으로 결합하지 않는다. 일부 구현예에 있어서, 면역 세포 선택 잔기는 TH17 세포에 특이적으로 결합하지 않는다. 일부 구현예에 있어서, 선택적인 면역 세포 결합제는 조절 면역 세포 (CD4 및 CD25를 포함하지만, 이에 제한되지 않음)에 존재하는 마커를 표적으로 하지 않는다.
하기 표 2는 상이한 목적 면역 세포에 대한 일부 대표적인 면역 세포 선택 잔기를 나열한다.
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C. 암을 표적화 할 수 있는 표적화 잔기
표적화 잔기는 표적화된 면역 세포 관여제를 암세포의 국소 환경에 전달함으로써 상기 결합제를 함유한 제 1 성분에서 작용하여 국소화된 치료 전략을 가능하게 한다. 특정 구현예에서, 표적화 잔기는 암세포에 특이적으로 결합함으로써 암세포를 표적화 한다. 일부 예에서, 표적화 잔기는 불활성 결합 파트너가 제 1 면역 세포 관여 도메인에 결합하는 동안에도 암세포에 특이적으로 결합한다.
특정 구현예에서, 표적화 잔기는 항체 또는 이의 항원 결합 단편이다. 항원 결합 단편이란 scFv, 또는 경쇄, VHH, VNAR, Fab, Fab', F(ab')2, Fv, 항체 단편, 디아바디 (diabody), scAB, 단일-도메인 중쇄 항체, 단일-도메인 경쇄 항체, Fd, CDR 영역, 또는 항원 또는 에피토프 (epitope)에 결합할 수 있는 항체의 임의의 부분 또는 펩티드 서열이 없는 면역 글로불린을 포함하는 기타 기능성 단편과 같이, 암세포의 표적에 대한 결합 활성을 보유하는 항체 단편을 의미한다. VHH 및 VNAR은 고전적인 항체의 대안이며, 이들이 서로 다른 종 (각각 낙타과 및 상어)에서 생산될지라도, 항체의 항원 결합 단편에도 이들이 포함된다. "전장 항체"로서 구체적으로 언급되지 않는 한, 본 출원이 항체를 언급하면 이는 본질적으로 그의 항원 결합 단편에 대한 언급을 포함한다.
특정 항체 표적 (괄호 안에 암세포 유형의 예들을 포함함)은 다음과 같은 것들을 포함할 수 있다: Her2/Neu (상피 악성 종양); CD22 (B 세포,자가 면역 또는 악성); EpCAM (CD326) (상피 악성 종양); EGFR (상피 악성 종양); PSMA (전립선암종); CD30 (B 세포 악성 종양); CD20 (B 세포,자가 면역, 알레르기성 또는 악성); CD33 (골수성 악성 종양); 세포막 lgE (알레르기성 B 세포); lgE 수용체 (CD23) (알레르기 질환의 비만 세포 또는 B 세포), CD80 (B 세포, 자가 면역, 알레르기성 또는 악성); CD86 (B 세포, 자가 면역, 알레르기성 또는 악성); CD2 (T-세포 또는 NK 세포 림프종); CA125 (난소암종을 포함한 다중 암); 탄산 탈수 효소 IX (신장 세포 암종을 포함한 다중 암); CD70 (B 세포, 자가 면역, 알레르기성 또는 악성); CD74 (B 세포, 자가 면역, 알레르기성 또는 악성); CD56 (T-세포 또는 NK 세포 림프종); CD40 (B 세포, 자가 면역, 알레르기성 또는 악성); CD19 (B 세포, 자가 면역, 알레르기성 또는 악성); c-met/HGFR (위장관 및 간 악성 종양); TRAIL-R1 (난소암 및 결장 직장암을 포함한 다발성 악성 종양); DRS (난소암 및 결장 직장 암종을 포함한 다발성 악성 종양); PD-1 (B 세포, 자가 면역, 알레르기성 또는 악성); PD1L (상피 선암을 포함한 다발성 악성 종양); IGF-1R (상피 선암을 포함한 대부분의 악성 종양); VEGF-R2 (상피 선암을 포함한 대부분의 악성 종양과 관련된 혈관 구조); 전립선 줄기 세포 항원 (PSCA) (전립선 선암); MUC1 (상피 악성 종양); CanAg (결장 및 췌장의 암종과 같은 종양); 메조텔린 (Mesothelin) (중피종 및 난소 및 췌장 선암을 포함한 많은 종양); P-카드헤린 (P-cadherin) (유방 선암을 포함한 상피 악성 종양); 미오스타틴 (Myostatin) (GDF8) (육종, 난소 및 췌장 선암을 포함한 많은 종양); 크립토 (Cripto) (TDGF1) (결장암, 유방암, 폐암, 난소암 및 췌장암을 포함한 상피 악성 종양); ACVRL 1/ALK1 (백혈병 및 림프종을 포함한 다발성 악성 종양); MUC5AC (유방 선암을 포함한 상피 악성 종양); CEACAM (유방 선암을 포함한 상피 악성 종양); CD137 (B 세포 또는 T-세포, 자가 면역, 알레르기성 또는 악성); CXCR4 (B 세포 또는 T-세포, 자가 면역, 알레르기성 또는 악성); 뉴로필린 1 (Neuropilin 1) (폐암을 포함한 상피 악성 종양); 글리피칸 (Glypican) (간암, 뇌암 및 유방암을 포함한 다중 암); HER3/EGFR (상피 악성 종양); PDGFRa (상피 악성 종양); EphA2 (신경 모세포종, 흑색종, 유방암 및 소세포 폐 암종을 포함하는 다중 암); CD38 (골수종); CD138 (골수종); α4-인테그린 (integrin) (AML, 골수종, CLL 및 대부분의 림프종).
특정 방식에 있어서, 항체는 세툭시맙 (Cetuximab)과 같은 항-표피 성장 인자 수용체 항체, 항-Her2 항체, 리툭시맙 (Rituximab)과 같은 항-CD20 항체, 이노투주맙 (Inotuzumab)과 같은 항-CD22 항체, G544 또는 BU59, 항-CD70 항체, hp67.6 또는 젬투주맙 (Gemtuzumab)과 같은 항-CD33 항체, GP1.4 및 SM3과 같은 항-MUC1 항체, 항-CD40 항체, 항-CD74 항체, 항-P-카드헤린 (cadherin) 항체, 항-EpCAM 항체, 항-CD138 항체, 항-E-카드헤린 항체, 항-CEA 항체, 항-FGFR3 항체, 및 나탈리주맙 (Natalizumab)과 같은 항 α4-인테그린 항체를 포함한다.
하기 표 3A는 암 유형, 가능한 표적화 잔기, 및 이러한 암 유형에 의해 발현되는 프로테아제의 비 제한적인 실례를 제공한다. 암과 관련된 프로테아제는 종양-관련 프로테아제로 불릴 수 있다. ATTAC를 제조하기 위하여, 암이 식별될 수 있으며, 표적화 잔기 (필요에 따라서)에 대해 선택된 표적 및 암 유형에 대해 선택된 1 또는 2 개의 프로테아제 (필요에 따라서)도 식별될 수 있다.
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하기 표 3B는 일부 표적화 잔기가 다수의 상이한 유형의 암을 표적화 할 수 있다는 사실을 비롯하여 상이한 표적화 잔기로 표적화 할 수 있는 암에 대한 추가 정보를 제공한다. ATTAC에서, 제 1 성분은 암을 표적화 할 수 있는 표적화 잔기를 포함한다.
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종양 항원에 결합하고 종양 세포에 대한 특이성을 갖는 항체는 당업계에서 널리 알려져 있다. 하기 표 3C는 본 발명에서 종양 항원에 결합하고 표적화 잔기로서 사용될 수 있는 예시적인 항체에 대한 선별된 간행물을 요약하고 있다.
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FDA는 암 치료용으로 승인된 항체 약물 목록을 유지하고 있으며, 이들 중 다수는 암 항원에 결합하고 이러한 맥락에서 사용될 수 있다. FDA 웹 사이트에서 The Orange Book Online 또는 Drugs @ FDA를 참조하십시오. FDA는 또한 질병명으로 검색할 수 있는 clinicaltrials.gov 데이터베이스에서 진행중인 임상 시험 목록을 보관하고 있다. 하기 표 3D는 종양 세포에 대한 특이성을 갖는 승인된 항체의 대표적인 목록을 제공한다. 하기 표 3E는 종양 세포에 대한 특이성을 갖는 개발중인 항체의 대표적인 목록을 제공한다.
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당업계에서 널리 알려진 다른 항체는 주어진 암에 표적화 하기 위한 표적화 잔기로서 사용될 수 있다. 항체들 및 이들 각각의 항원으로는 니볼루맙 (nivolumab) (항-PD-1 Ab), TA99 (항-gp75), 3F8 (항-GD2), 8H9 (항-B7-H3), 아바고보맙 (abagovomab) (항-CA-125 (모방)), 아데카투무맙 (adecatumumab) (항-EpCAM), 아푸투주맙 (afutuzumab) (항-CD20), 알라시주맙 페골 (alacizumab pegol) (항-VEGFR2), 알투모맙 펜테테이트 (altumomab pentetate) (항-CEA), 아마툭시맙 (amatuximab) (항-메조텔린), AME-133 (항-CD20), 아나투모맙 마페나톡스 (anatumomab mafenatox) (항-TAG-72), 아폴리주맙 (apolizumab) (항-HLA-DR), 아키투모맙 (arcitumomab) (항-CEA), 바비툭시맙 (bavituximab) (항-포스파티딜세린), 벡투모맙 (bectumomab) (항-CD22), 벨리무맙 (belimumab) (항-BAFF), 베실레소맙 (besilesomab) (항-CEA-관련 항원), 베바시주맙 (bevacizumab) (항-VEGF-A), 비바투주맙 메르탄신 (bivatuzumab mertansine) (항-CD44 v6), 블리나투모맙 (blinatumomab) (항-CD19), BMS-663513 (항-CD137), 브렌툭시맙 베도틴 (brentuximab vedotin) (항-CD30 (TNFRSF8)), 칸투주맙 메르탄신 (항-뮤신 CanAg), 칸투주맙 라브탄신 (항-MUC1), 카프로맙 펜데타이드 (capromab pendetide) (항 전립선 암종 세포), 칼루맙 (carlumab) (항-MCP-1), 카투막소맙 (catumaxomab) (항-EpCAM, CD3), cBR96-독소루비신 (doxorubicin) 면역 접합체 (항-루이스-Y 항원), CC49 (항-TAG-72), 세델리주맙 (cedelizumab) (항-CD4), Ch.14.18 (항-GD2), ch-TNT (항-DNA 관련 항원), 시타투주맙 보가톡스 (citatuzumab bogatox) (항-EpCAM), 시추투무맙 (cixutumumab) (항-IGF-1 수용체), 클리바투주맙 테트라크세탄 (clivatuzumab tetraxetan) (항-MUC1), 코나투무맙(conatumumab) (항-TRAIL-R2), CP-870893 (항-CD40), 다세투주맙 (dacetuzumab) (항-CD40), 다클리주맙 (daclizumab) (항-CD25), 달로투주맙 (dalotuzumab) (항 인슐린-유사 성장 인자 I 수용체), 다라투무맙 (daratumumab) (항-CD38 (고리형 ADP 리보스 가수 분해 효소)), 뎀시주맙 (demcizumab) (항-DLL4), 데투모맙 (detumomab) (항-B-림프종 세포), 드로지투맙 (drozitumab) (항-DR5), 둘리고투맙 (duligotumab) (항-HER3), 두시기투맙 (dusigitumab) (항-ILGF2), 에크로멕시맙 (ecromeximab) (항-GD3 강글리오사이드 (ganglioside)), 에드레콜로맙 (edrecolomab) (항-EpCAM), 엘로투주맙 (elotuzumab) (항-SLAMF7), 엘실리모맙 (elsilimomab) (항-IL-6), 에나바투주맙 (enavatuzumab) (항-TWEAK 수용체), 에노티쿠맙 (enoticumab) (항-DLL4), 엔시툭시맙 (ensituximab) (항-5AC), 에피투모맙 시툭세탄 (epitumomab cituxetan) (항-에피시알린 (episialin)), 에프라투주맙 (epratuzumab) (항-CD22), 에르투막소맙 (ertumaxomab) (항-HER2/neu, CD3), 에타라시주맙 (etaracizumab) (항-인테그린 αvβ3), 페럴리모맙 (faralimomab) (항-인터페론 수용체), 파레투주맙 (farletuzumab) (항-엽산 수용체 1), FBTA05 (항-CD20), 피클라투주맙 (ficlatuzumab) (항-HGF), 피기투무맙 (figitumumab) (항-IGF-1 수용체), 플란보투맙 (flanvotumab) (항-TYRP1 (당 단백질 75)), 프레졸리무맙 (fresolimumab) (항-TGF β), 푸툭시맙 (항-EGFR), 갈릭시맙 (항-CD80), 가니투맙 (ganitumab) (항-IGF-I), 젬투주맙 오조가미신 (항-CD33), 지렌툭시맙 (girentuximab) (항-탄산 탈수 효소 9 (CA-IX)), 글렘바투무맙 베도틴 (glembatumumab vedotin) (항-GPNMB), 구셀쿠맙 (guselkumab) (항-IL13), 이발리주맙 (항-CD4), 이브리투모맙 티우세탄 (ibritumomab tiuxetan) (항-CD20), 이크루쿠맙 (icrucumab) (항-VEGFR-1), 이고보맙 (igovomab) (항-CA-125), IMAB362 (항-CLDN18.2), IMC-CS4 (항-CSF1R), IMC-TR1 (TGFβRII), 임가투주맙 (imgatuzumab) (항-EGFR), 인클라쿠맙 (inclacumab) (항-selectin P), 인다툭시맙 라탄신 (indatuximab ravtansine) (항-SDC1), 이노투주맙 오조가미신 (inotuzumab ozogamicin) (항-CD22), 인테투무맙 (항-CD51), 이필리무맙 (항-CD152), 이라투무맙 (항-CD30 (TNFRSF8)), KM3065 (항-CD20), KW-0761 (항-CD194), LY2875358 (항-MET), 라베투주맙 (항-CEA), 람브롤리주맙 (lambrolizumab) (항-PDCD1), 렉사투무맙 (lexatumumab) (항-TRAIL-R2), 린투주맙 (항-CD33), 리릴루맙 (lirilumab) (항-KIR2D), 로보투주맙 메르탄신 (lorvotuzumab mertansine) (항-CD56), 루카투무맙 (lucatumumab) (항-CD40), 루밀리시맙 (lumiliximab) (항-CD23 (IgE 수용체)), 마파투무맙 (mapatumumab) (항-TRAIL-R1), 마르게툭시맙 (margetuximab) (항-ch4D5), 마투주맙 (matuzumab) (항-EGFR), 마브릴리무맙 (mavrilimumab) (항-GMCSF 수용체 a-쇄), 밀라투주맙 (milatuzumab) (항-CD74), 민레투모맙 (minretumomab) (항-TAG-72), 미투모맙 (mitumomab) (항-GD3 강글리오사이드), 모가물리주맙 (mogamulizumab) (항-CCR4), 목세투모맙 파수도톡스 (moxetumomab pasudotox) (항-CD22), 나콜로맙 타페나톡스 (nacolomab tafenatox) (항-C242 항원), 나프투모맙 에스타페나톡스 (naptumomab estafenatox) (항-5T4), 나르나투맙 (narnatumab) (항-RON), 네시투무맙 (항-EGFR), 네스바쿠맙 (nesvacumab) (항-안지오포이에틴 2), 니모투주맙 (항-EGFR), 니볼루맙 (항-IgG4), 노페투모맙 메르펜탄 (nofetumomab merpentan), 오크렐리주맙 (ocrelizumab) (항-CD20), 오카라투주맙 (ocaratuzumab) (항-CD20), 올라라투맙 (olaratumab) (항-PDGF-R α), 오나르투주맙 (onartuzumab) (항-c-MET), 온툭시주맙 (ontuxizumab) (항-TEM1), 오포투주맙 모나톡스 (oportuzumab monatox) (항- EpCAM), 오레고보맙 (항-CA-125), 오틀레투주맙 (항-CD37), 판코맙 (MUC1의 항-종양 특이성 글리코실화), 파사투주맙 (항-EGFL7), 파스콜리주맙 (항-IL-4), 파트리투맙 (항-HER3), 펨투모맙 (항-MUC1), 페르투주맙 (항-HER2/neu), 피딜리주맙 (pidilizumab) (항-PD-1), 피나투주맙 베도틴 (pinatuzumab vedotin) (항-CD22), 핀투모맙 (pintumomab) (항-선암종 항원), 폴라투주맙 베도틴 (polatuzumab vedotin) (항-CD79B), 프리투무맙 (pritumumab) (항-비멘틴 (vimentin)), PRO131921 (항-CD20), 퀼리주맙 (quilizumab) (항-IGHE), 라코투모맙 (항-N-글리콜릴뉴라민 산), 라드레투맙 (radretumab) (항-피브로넥틴 엑스트라 도메인-B), 라무시루맙 (ramucirumab) (항-VEGFR2), 리로투무맙 (rilotumumab) (항-HGF), 로바투무맙 (robatumumab) (항-IGF-1 수용체), 롤두맙 (roledumab) (항-RHD), 로벨리주맙 (rovelizumab) (항-CD11 및 CD18), 사말리주맙 (항-CD200), 사투모맙 펜데타이드 (satumomab pendetide) (항-TAG-72), 세리반투맙 (항-ERBB3), SGN-CD19A (항-CD19), SGN-CD33A (항-CD33), 시브로투주맙 (sibrotuzumab) (항-FAP), 실툭시맙 (항-IL-6), 솔리토맙 (항-EpCAM), 손투주맙 (항-에피시알린), 타발루맙 (항-BAFF), 타카투주맙 테트라크세탄 (tacatuzumab tetraxetan) (항-알파 태아 단백질), 타플리투모맙 파프톡스 (taplitumomab paptox) (항-CD19), 텔리모맙 아리톡스 (telimomab aritox), 테나투모맙 (항-테나신 C), 테넬릭시맙 (항-CD40), 테프로투무맙 (항-CD221), TGN1412 (항-CD28), 티실리무맙 (항-CTLA-4), 티가투주맙 (항-TRAIL-R2), TNX-650 (항-IL-13), 토시투모맙 (항-CS20), 토베투맙 (항-CD140a), TRBS07 (항-GD2), 트레갈리주맙 (tregalizumab) (항-CD4), 트레멜리무맙 (tremelimumab) (항-CTLA-4), TRU-016 (항-CD37), 투코투주맙 셀몰루킨 (tucotuzumab celmoleukin) (항-EpCAM), 우블리툭시맙 (항-CD20), 우렐루맙 (항-4-1BB), 반티투맙 (항-프리즐드 (anti-Frizzled) 수용체), 바팔릭시맙 (vapaliximab) (항-AOC3 (VAP-1)), 바텔리주맙 (vatelizumab) (항-ITGA2), 벨트주무맙 (veltuzumab) (항-CD20), 베센쿠맙 (vesencumab) (항-NRP1), 비실리주맙 (visilizumab) (항-CD3), 볼로시시마브 (volociximab) (항-인테그린 α5β1), 보르세투주맙 마포도틴 (vorsetuzumab mafodotin) (항-CD70), 보투무맙 (votumumab) (항-종양 항원 CTAA16.88), 잘루투무맙 (항-EGFR), 자놀리무맙 (항-CD4), 자툭시맙 (항-HER1), 지랄리무맙 (항-CD147 (염기)), RG7636 (항-ETBR), RG7458 (항- MUC16), RG7599 (항-NaPi2b), MPDL3280A (항-PD-L1), RG7450 (항-STEAP1), 및 GDC-0199 (항-Bcl-2)을 들 수 있다.
또한, 이들 항원에 결합하는 항체는 특히 다음과 같은 암 유형에 대한 표적화 잔기로 사용될 수 있다: 아미노펩티다제 N (CD13), 아넥신 A1, B7-H3 (CD276, 다양한 암), CA125 (난소암), CA15-3 (암종), CA19-9 (암종), L6 (암종), 루이스 Y (암종), 루이스 X (암종), 알파 태아 단백질 (암종), CA242 (결장 직장암), 태반 알칼리성 포스파타제 (암종), 전립선 s7 특이성 항원 (전립선), 전립선 산 포스파타제 (전립선), 표피 성장 인자 (암종), CD2 (호지킨 병, NHL 림프종, 다발성 골수종), CD3 엡실론 (T-세포 림프종, 폐암, 유방암, 위암, 난소암, 자가 면역 질환, 악성 복수), CD19 (B 세포 악성 종양), CD20 (비-호지킨 림프종, B 세포 신생물, 자가 면역 질환), CD21 (B-세포 림프종), CD22 (백혈병, 림프종, 다발성 골수종, SLE), CD30 (호지킨 림프종), CD33 (백혈병, 자가 면역 질환), CD38 (다발성 골수종), CD40 (림프종, 다발성 골수종, 백혈병 (CLL)), CD51 (전이성 흑색종, 육종), CD52 (백혈병), CD56 (소세포 폐암, 난소암, 메르켈 세포 암종, 액체 종양, 및 다발성 골수종), CD66e (암종), CD70 (전이성 신세포 암종 및 비-호지킨 림프종), CD74 (다발성 골수종), CD80 (림프종), CD98 (암종), CD123 (백혈병), 뮤신 (암종), CD221 (고형 종양), CD22 (유방암, 난소암), CD262 (NSCLC 및 기타 암), CD309 (난소암), CD326 (고형 종양), CEACAM3 (결장 직장암, 위암), CEACAM5 (CEA, CD66e) (유방암, 결장 직장암 및 폐암), DLL4 (A-유사-4), EGFR (다양한 암), CTLA4 (흑색종), CXCR4 (CD 184, 혈 종양학, 고형 종양), 엔도글린 (CD 105, 고형 종양), EPCAM (상피 세포 부착 분자, 방광암, 두부암, 목암, 결장암, NHL 전립선암 및 난소암), ERBB2 (폐암, 유방암, 전립선암), FCGR1 (자가 면역 질환), FOLR (엽산 수용체, 난소암), FGFR (암종), GD2 강글리오사이드 (암종), G-28 (세포 표면 항원 당지질, 흑색종), GD3 특이형 (암종), 열 충격 단백질 (암종), HER1 (폐암, 위암), HER2 (유방암, 폐암 및 난소암), HLA-DR10 (NHL), HLA-DRB (NHL, B 세포 백혈병), 인간 융모막 성선 자극 호르몬 (암종), IGF1R (고형 종양, 혈액암), IL-2 수용체 (T-세포 백혈병 및 림프종), IL-6R (다발성 골수종, RA, 캐슬만씨 병, IL6 의존성 종양), 인테그린 (다양한 암에 대한 αvβ3, α5β1, α6β4, α11β3, α5β5, αvβ5), MAGE-1 (암종), MAGE-2 (암종), MAGE-3 (암종), MAGE 4 (암종), 항-트랜스페린 수용체 (암종), p97 (흑색종), MS4A1 (막-스패닝 4-도메인 하위군 A 구성원 1, 비-호지킨 B 세포 림프종, 백혈병), MUC1 (유방암, 난소암, 자궁 경부암, 기관지 암 및 위장관 암), MUC16 (CA125) (난소암), CEA (결장 직장암), gp100 (흑색종), MARTI (흑색종), MPG (흑색종), MS4A1 (막-스패닝 4-도메인 하위군 A, 소세포 폐암, NHL), 뉴클레올린, Neu 종양 유전자 산물 (암종), P21 (암종), 넥틴-4 (암종), 항-N-글리콜릴뉴라민 산의 파라토프 (paratope) (유방암, 흑색종 암), PLAP-유사 고환 알칼리 포스파타제 (난소암, 고환암), PSMA (전립선 종양), PSA (전립선), ROB04, TAG 72 (종양 관련 당 단백질 72, AML, 위암, 결장 직장암, 난소암), T-세포 막 횡단 단백질 (암), Tie (CD202b), 조직 인자, TNFRSF10B (종양 괴사 인자 수용체 수퍼 패밀리 구성원 10B, 암종), TNFRSF13B (종양 괴사 인자 수용체 수퍼 패밀리 구성원 13B, 다발성 골수종, NHL, 기타 암, RA 및 SLE), TPBG (영양 모세포 당 단백질, 신장 세포 암종), TRAIL-R1 (리간드 수용체 1을 유도하는 종양 괴사 세포사멸, 림프종, NHL, 결장 직장암, 폐암), VCAM-1 (CD106, 흑색종), VEGF, VEGF-A, 및 VEGF-2 (CD309) (다양한 암들). 일부 다른 종양 관련 항원 표적이 검토되었다 (Gerber, et al, mAbs 2009 1: 247-253; Novellino et al, Cancer Immunol Immunother. 2005 54: 187-207, Franke, et al, Cancer Biother Radiopharm. 2000, 15: 459-76, Guo, et al., Adv Cancer Res. 2013; 119: 421-475, Parmiani et al., J Immunol. 2007 178: 1975-9). 이러한 항원의 예로는 분화 클러스터 (CD4, CDS5, CD6, CD7, CD8, CD9, CD10, CD11a, CD11b, CD11c, CD12w, CD14, CD15, CD16, CDw17, CD18, CD21, CD23, CD24, CD25, CD26, CD27, CD28, CD29, CD31, CD32, CD34, CD35, CD36, CD37, CD41, CD42, CD43, CD44, CD45, CD46, CD47, CD48, CD49b, CD49c, CD53, CD54, CD55, CD58, CD59, CD61 , CD62E, CD62L, CD62P, CD63, CD68, CD69, CD71, CD72, CD79, CD81, CD82, CD83, CD86, CD87, CD88, CD89, CD90, CD91, CD95, CD96, CD100, CD103, CD105, CD106, CD109, CD117, CD120, CD127, CD133, CD134, CD135, CD138, CD141, CD142, CD143, CD144, CD147, CD151, CD152, CD154, CD156, CD158, CD163, CD166, CD168, CD184, CDw186, CD195, CD202 (a, b), CD209, CD235a, CD271, CD303, CD304), 아넥신 A1, 뉴클레올린, 엔도글린 (CD105), ROB04, 아미노-펩티다제 N,-유사-4 (DLL4), VEGFR-2 (CD309), CXCR4 (CD184), Tie2, B7-H3, WT1, MUC1, LMP2, HPV E6 E7, EGFRvIII, HER-2/neu, 특이형, MAGE A3, p53 비-돌연변이, NY-ESO-1, GD2, CEA, 멜란A/MART1, Ras 돌연변이, gp100, p53 돌연변이, 프로테이나제3 (PR1), bcr-abl, 티로시나제, 서바이빈 (survivin), hTERT, 육종 전위 중단점, EphA2, PAP, ML-IAP, AFP, EpCAM, ERG (TMPRSS2 ETS 융합 유전자), NA17, PAX3, ALK 및 안드로겐 수용체, 사이클린 B 1, 폴리시알 산, MYCN, RhoC, TRP-2, GD3, 푸코실 GM1, 메조텔린, PSCA, MAGE A1, sLe (a), CYPIB I, PLAC1, GM3, BORIS, Tn, GloboH, ETV6-AML, NY-BR-1 , RGS5, SART3, STn, 탄산 탈수 효소 IX, PAXS, OY-TES1, 정자 단백질 17, LCK, HMWMAA, AKAP-4, SSX2, XAGE 1, B7H3, 레구마인 (legumain), Tie 2, Page4, VEGFR2, MAD-CT-1, FAP, PDGFR-β, MAD-CT-2, 및 Fos-관련 항원 1을 들 수 있다.
일부 구현예에 있어서, 암을 표적화 할 수 있는 표적화 잔기는 항체가 아니라, 또 다른 유형의 표적화 잔기이다. DNA 앱타머, RNA 앱타머, 알부민, 리포칼린 (lipocalin), 피브로넥틴 (fibronectin), 안키린 (ankyrin), CH1/2/3 스캐폴드 (아브두린 (abdurin) (IgG CH2 스캐폴드)를 포함), 피노머 (fynomer), 오바디 (obody), DARPin, 노틴 (knotin), 애비머 (avimer), 아트리머 (atrimer), 안티칼린 (anticalin), 아필린 (affilin), 아피바디 (affibody), 이환식 펩티드, cys-knots, FN3 (애드넥틴 (adnectin), 센트리린 (centryrin), 프로넥틴 (pronectin), TN3), 및 Kunitz 도메인을 비롯하여 암을 표적화 할 수 있는 폭 넓은 범위의 표적화 잔기가 공지되어 있다. 이들 및 다른 비-항체 스캐폴드 구조는 암세포를 표적으로 하기 위해 사용될 수 있다. 더 작은 비-항체 스캐폴드는 혈류로부터 빠르게 제거되고 단일 클론 항체보다 반감기가 더욱 짧다. 이들은 또한 혈관 내피 및 기저막을 통해 모세관 루멘으로부터 빠른 유출로 인해 더 빠른 조직 침투를 나타낸다. 문헌 [Vazquez-Lombardi et al., Drug Discovery Today 20 (1): 1271-1283 (2015)]을 참조 바란다. 암을 표적으로 하는 많은 비-항체 스캐폴드는 이미 임상 개발 중이며 다른 후보물은 전임상 단계에 있다. Vazquez-Lombardi의 표 1을 참조 바란다.
Figure pct00036
다른 구현예에 있어서, 표적화 잔기는 암세포에서 발현되는 것으로 알려진 단백질에 대한 결합 파트너일 수 있다. 이러한 발현 수준은 과발현을 포함할 수 있다. 예를 들어, 하기 표 4에 기재된 결합 파트너는 암세포에 대한 다음과 같은 표적에 결합할 수 있다.
Figure pct00037
결합 파트너는 상기 표 4B에 나열된 결합 파트너에 대한 전장 또는 야생형 서열을 포함할 필요가 없다. 필요한 것은 결합 파트너가 암세포의 표적에 결합하고, 따라서 당업계에 널리 알려진 절단된 형태, 유사체, 변이체 및 유도체를 포함할 수 있다는 것이 전부이다.
추가로, 일부 구현예에 있어서, 결합 파트너는 암세포에서 발현되는 것으로 알려진 단백질에 결합할 수 있는 앱타머일 수 있다. 암세포와 같은 암세포에 결합하는 앱타머는 널리 알려져 있으며 이를 설계하는 방법도 알려져 있다.
세포 기반 SELEX 계통은 무작위 후보 라이브러리로부터 표적 세포-특이적 앱타머의 패널을 선택하기 위해 사용될 수 있다. ssDNA 또는 ssRNA 풀 (pool)은 결합 완충액에 용해되어 변성된 다음 표적 세포와 함께 배양될 수 있다. 세척 후 결합된 DNA 또는 RNA를 가열하여 용출한 다음 음성 세포 (원하는 경우)와 함께 배양하고 원심 분리하여 상청액을 제거할 수 있다. 상청액은 비오틴 표지된 프라이머를 사용하여 PCR에 의해 증폭될 수 있다. 선택된 센스 ssDNA 또는 ssRNA는 스트렙타비딘 (streptavidin) 코팅된 비드를 사용하여 안티센스 비오티닐화된 가닥으로부터 분리될 수 있다. 친화력을 높이기 위하여, 세척 시간, 완충액의 양, 세척 횟수를 늘려 세척 강도를 증가시킬 수 있다. 원하는 라운드의 선택 후, 선택된 ssDNA 또는 ssRNA 풀은 PCR로 증폭되고 E. coli로 클로닝되고 서열 분석될 수 있다. 문헌[Shangguan et al., Aptamers evolved from live cells as effective molecule probes for cancer study, PNAS 103 (32: 11838-11843 (2006); Lyu et al, Generating Cell Targeting Aptamers for Nanotherapeutics Using Cell-SELEX, Theranostics 6 (9): 1440-1452 (2016)]을 참조하고; 또한, 문헌[Li et al., Inhibition of Cell Proliferation by an anti-EGFR Aptamer, PLoS One 6 (6): e20229 (2011)]을 참조 바란다. 이들 참고 문헌에서, 암세포에 결합하는 앱타머 및 특이적 앱타머를 설계하기 위한 특정 접근법은 본 명세서에 참고로 포함되어 있다.
예를 들어, 앱타머는 서열 번호: 94 내지 164를 포함할 수 있다. 일부 구현예에 있어서, 앱타머는 서열 번호: 95를 포함할 수 있다. 이러한 앱타머는 EGFR로 지정되며, 암세포에 제시된 표적에 결합할 수 있는 앱타머의 대표로서만 제공된다. 암세포상의 다른 표적에 대한 다른 앱타머는 문헌[Zhu et al., Progress in Aptamer Mediated Drug Delivery Vehicles for Cancer Targeting, Theranostics 4 (9): 931-944 (2014)]에 기재된 바와 같이 본 명세서의 일부로서 마찬가지로 설명되어 있으며 참고로 포함되어 있다.
일부 구현예에 있어서, 본 원에서 사용하기 위한 앱타머는 나노몰 내지 피코몰 범위의 Kd (예를 들어, 1 피코몰 내지 500 나노몰 또는 1 피코몰 내지 100 나노몰)로 암세포상의 표적에 결합한다.
추가의 특정 표적화 잔기는 하기 표 4C에 제공된 것들을 포함한다.
Figure pct00038
D. 면역 세포 관여 도메인
면역 세포 관여 도메인은 제 1 면역 세포 관여 도메인이 제 2 면역 세포 관여 도메인에 결합할 때 면역 세포 관여 활성을 가능하게 하는 기능을 한다. 제 1 및 제 2 면역 세포 관여 도메인이 함께 쌍을 이루면, 불활성 결합 파트너가 제거될 때 이들은 면역 세포에 결합할 수 있다. 이러한 결합은 면역 세포의 활성화를 유발할 수 있다.
제 1 및 제 2 면역 세포 관여 도메인이 쌍을 이루지 않는 경우, 제 1 및 제 2 면역 세포 관여 도메인 단독으로는 면역 세포에 결합할 수 없다.
일부 구현예에 있어서, 면역 세포는 T-세포, 자연 살상 세포, 대식세포, 호중구, 호산구, 호염기구, γδ T-세포, NKT-세포 또는 조작된 면역 세포이다. 일부 구현예에 있어서, 제 1 및 제 2 면역 세포 관여 도메인이 함께 쌍을 이룰 때 이들은 면역 세포를 활성화시킬 수 있다.
1. T-세포 관여 도메인
일부 구현예에 있어서, 면역 세포 관여 도메인은 T-세포 관여 도메인이다. 표적화된 T-세포 결합제는 T-세포 단독으로는 결합할 수 없는 제 1 T-세포 관여 도메인을 포함한다. 그 대신에, 제 1 T-세포 관여 도메인은 표적화된 T-세포 결합제의 일부가 아닌 제 2 T-세포 관여 도메인에 결합할 때 활성을 가질 수 있다. 따라서, 제 1 및 제 2 T-세포 관여 도메인은 T-세포 결합 활성을 단독으로는 보유하지 않지만 서로 쌍을 이룰 때 보유하는 임의의 2 개의 잔기일 수 있다. 즉, 제 1 및 제 2 T-세포 관여 도메인은 기능적 활성 단백질의 상보적인 절반이다.
2 개의 T-세포 관여 도메인이 2-성분계로 함께 결합되면, 이들은 T-세포를 활성화함에 따라 T-세포의 표면에서 CD3 항원 및/또는 T-세포 수용체에 결합할 수 있다. CD3는 모든 T-세포에 존재하며 γ, δ, ε, ζ 및 η로 지정된 하위 단위로 구성된다. CD3의 세포질 꼬리는 TCR 수용체 복합체의 다른 성분의 부재하에 T-세포 활성화에 필요한 신호를 변환하기에 충분한다. 보편적으로, T-세포 세포 독성의 활성화는 먼저 별도의 세포에 위치한 외래 항원에 결합된 주요 조직 적합성 복합체 (MHC) 단백질과 TCR의 결합에 따라 달라진다. 정상적인 상황에서, 이러한 초기 TCR-MHC 결합이 일어났을 때만 CD3 의존성 신호 캐스케이드가 T-세포 클론 확장 및 궁극적으로 T-세포 세포 독성을 초래할 수 있다. 그러나, 본 구현예 중 일부에서, 2-성분계가 CD3 및/또는 TCR에 결합할 때, 독립적인 TCR-MHC의 부재하에 세포 독성 T-세포의 활성화는 면역 시냅스 형성을 모방한 CD3 및/또는 TCR 분자의 가교결합으로 인해 발생할 수 있다. 이는 T-세포가 클론적으로 독립적인 방식으로, 즉, T-세포에 의해 운반되는 특정 TCR 클론과 독립적인 방식으로 세포 독성적으로 활성화될 수 있음을 의미한다. 이를 통해 단지 특정 클론 정체성의 특이적 T-세포만 활성화하지 않고 전체 T-세포 구획을 활성화 할 수 있다.
일부 구현예에 있어서, 제 1 T-세포 관여 도메인은 VH 도메인이고 제 2 T-세포 관여 도메인은 VL 도메인이다. 다른 구현예에 있어서, 제 1 T-세포 관여 도메인은 VL 도메인이고 제 2 T-세포 관여 도메인은 VH 도메인이다. 이러한 구현예에서, 함께 쌍을 이루는 경우 제 1 및 제 2 T-세포 관여 도메인은 scFv를 포함할 수 있다 (이에 의해 scFv와 동등하지만 VH 및 VL이 단일-쇄 구성으로 되어 있지 않다는 사실을 알 수 있음).
제 1 및 제 2 T-세포 관여 도메인이 한 쌍의 VH 및 VL 도메인 인 경우, VH 및 VL 도메인은 CD3 또는 TCR과 같은 T-세포 표면에서 발현되는 항원에 대해 특이적일 수 있다. 항원이 CD3인 경우, 하나의 잠재적인 T-세포 관여 도메인은 무로모납 (muromonab) (무로모납-CD3 또는 OKT3), 오텔릭시주맙 (otelixizumab), 테플리주맙 (teplizumab), 비실리주맙 (visilizumab), 포랄루맙 (foralumab) 또는 SP34로부터 유래될 수 있다. 당업자라면 광범위한 항-CD3 항체를 알고 있을 것이며, 그중 일부는 승인된 요법이거나 인간 환자에서 임상적으로 시험되었음을 알고 있을 것이다 (Kuhn and Weiner Immunotherapy 8 (8): 889-906 (2016) 참조). 학기 표 5는 예시적인 항-CD3 항체에 대해 선택된 문헌을 제공한다.
Figure pct00039
Figure pct00040
αβ 및 γδ TCR을 포함하는 TCR에 특이성을 갖는 항체도 널리 알려져 있다. 하기 표 6은 예시적인 항-TCR 항체에 대해 선택된 문헌을 제공한다.
Figure pct00041
2. 자연 살상 세포 관여 도메인
일부 구현예에 있어서, 면역 세포 관여 도메인은 자연 살상 세포 관여 도메인이다. 2 개의 자연 살상 세포 관여 도메인이 2-성분계로 함께 연관될 때, 이들은 NK 세포 표면에서 항원에 결합하여 이들 세포를 관여시킬 수 있다. 일부 구현예에 있어서, NK 세포 표면의 항원은 NKG2D, CD16, NKp30, NKp44, NKp46 또는 DNAM일 수 있다.
일부 구현예에 있어서, 2-성분계의 절반이 자연 살상 세포의 표면 단백질에 결합하고 2-성분계의 다른 절반이 암세포에 결합함으로써 자연 살상 세포를 특이적으로 관여시킬 수 있다. 자연 살상 세포의 관여는 이들의 활성화로 이어질 수 있으며 자연 살상 세포-매개성 세포 독성 및 사이토카인 방출을 유도할 수 있다.
2 개의 자연 살상 세포 관여 도메인이 ATTAC에서 함께 연관될 때, 자연 살상 세포는 암-특이적 ATTAC 성분에 의해 결합된 암세포를 특이적으로 용해시킬 수 있다. 암세포의 살상은 퍼포린 (perforin)/그랜자임 (granzyme)계 또는 FasL-Fas 관여에 의해 매개될 수 있다. 이러한 잠재적인 세포 독성 기능뿐만 아니라, 자연 살상 세포는 인터페론 감마 및 종양 괴사 인자 알파를 포함하는 전염증성 사이토카인을 분비할 수 도 있으며, 이는 바로 근처의 대식세포 및 수지상 세포를 활성화하여 항암 면역 반응을 향상시킬 수 있다.
일부 구현예에 있어서, 제 1 자연 살상 세포 관여 도메인은 VH 도메인이고 제 2 자연 살상 세포 관여 도메인은 VL 도메인이다. 다른 구현예에 있어서, 제 1 자연 살상 세포 관여 도메인은 VL 도메인이고 제 2 자연 살상 세포 관여 도메인은 VH 도메인이다. 이러한 구현예에서, 제 1 및 제 2 자연 살상 세포 관여 도메인이 함께 쌍을 이룰 때 이들은 scFv를 포함할 수 있다 (이에 의해 scFv와 동등하지만 VH 및 VL이 단일-쇄 구성으로 되어 있지 않다는 사실을 알 수 있음).
제 1 및 제 2 자연 살상 세포 관여 도메인이 한 쌍의 VH 및 VL 도메인인 경우, VH 및 VL 도메인은 NKG2D, CD16, NKp30, NKp44, NKp46 및 DNAM과 같은 자연 살상 세포의 표면에서 발현되는 항원에 대해 특이적일 수 있다.
하기 표 7은 자연 살상 세포의 표면에서 발현되는 항원에 특이적인 일부 예시적인 항체에 대해 선택된 문헌을 제시한다.
Figure pct00042
Figure pct00043
Figure pct00044
Figure pct00045
3. 대식세포 관여 도메인
일부 구현예에 있어서, 면역 세포 관여 도메인은 대식세포 관여 도메인이다. 본 원에 사용된 "대식세포"란 그룹화된 계통-수탁된 골수 전구체, 순환 단핵구, 상주 대식세포 및 수지상 세포 (DC)와 같은 단핵 식세포계의 임의의 세포를 의미할 수 있다. 상주 대식세포의 예는 쿠퍼 (Kupffer) 세포 및 소교 세포를 포함할 수 있다.
2 개의 대식세포 관여 도메인이 2-성분계로 함께 연관될 때, 이들은 대식세포 표면 상에서 항원에 결합하여 이들 세포를 관여시킬 수 있다. 일부 구현예에 있어서, 대식세포 표면상의 항원은 CD89 (Fc 알파 수용체 1), CD64 (Fc 감마 수용체 1), CD32 (Fc 감마 수용체 2A) 또는 CD16a (Fc 감마 수용체 3A)일 수 있다.
일부 구현예에 있어서, 2-성분계의 절반이 대식세포의 표면 단백질에 결합하고 2-성분계의 다른 절반이 암세포에 결합함으로써 대식세포를 특이적으로 관여시킬 수 있다. 대식세포의 관여는 대식세포가 암세포를 식균하도록 유도할 수 있다.
일부 구현예에 있어서, 대식세포 표면상의 항원에 대한 결합을 통해 대식세포 식균 작용을 유도하는 것은 Fc 수용체 결합과 무관하며, 이는 이전에 대식세포에 의한 종양 세포 사멸 방법인 것으로 밝혀졌다. 보편적으로, 암세포는 전체 항체에 의해 결합되고 항체의 Fc 부분은 Fc 수용체에 결합하여 식균 작용을 유도한다.
일부 구현예에 있어서, 대식세포 표면상의 톨 (toll)-유사 수용체의 관여 (특허 출원 US20150125397A1 참조)는 대식세포의 관여를 유도한다.
2 개의 대식세포 관여 도메인이 ATTAC에서 함께 연관될 때, 이들은 대식세포가 암-특이적 ATTAC 성분에 의해 결합된 암세포를 식균하도록 유도할 수 있다.
일부 구현예에 있어서, 제 1 대식세포 관여 도메인은 VH 도메인이고 제 2 대식세포 관여 도메인은 VL 도메인이다. 다른 구현예에 있어서, 제 1 대식세포 관여 도메인은 VL 도메인이고 제 2 대식세포 관여 도메인은 VH 도메인이다. 이러한 구현예에서, 함께 쌍을 이룰 때 제 1 및 제 2 대식세포 관여 도메인은 scFv를 포함할 수 있다 (이에 의해 scFv와 동등하지만 VH 및 VL이 단일-쇄 구성으로 되어 있지 않다는 사실을 알 수 있음).
제 1 및 제 2 대식세포 관여 도메인이 한 쌍의 VH 및 VL 도메인인 경우, VH 및 VL 도메인은 CD89 (Fc 알파 수용체 1), CD64 (Fc 감마 수용체 1), CD32 (Fc 감마 수용체 2A) 및 CD16a (Fc 감마 수용체 3A) 또는 톨-유사 수용체와 같은 대식세포 표면에서 발현되는 항원에 대해 특이적일 수 있다.
하기 표 8은 대식세포 표면에 발현된 항원에 특이적인 일부 예시적인 항체에 대해 선택된 문헌을 제시한다.
Figure pct00046
Figure pct00047
Figure pct00048
4. 호중구 관여 도메인
일부 구현예에 있어서, 면역 세포 관여 도메인은 호중구 관여 도메인이다. 2 개의 호중구 관여 도메인이 2-성분계로 함께 연관될 때, 이들은 호중구 표면상의 항원에 결합하여 이들 세포를 관여시킬 수 있다. 일부 구현예에 있어서, 호중구 표면의 항원은 CD89 (FcαR1), FcγRI (CD64), FcγRIIA (CD32), FcγRIIIA (CD16a), CD11b (CR3, αMβ2), TLR2, TLR4, CLEC7A (덱틴1), 포르밀 펩티드 수용체 1 (FPR1), 포르밀 펩티드 수용체 2 (FPR2) 또는 포르밀 펩티드 수용체 3 (FPR3)일 수 있다.
일부 구현예에 있어서, 2-성분계의 절반이 호중구상의 표면 단백질에 결합하고 2-성분계의 다른 절반이 암세포에 결합함으로써 호중구를 특이적으로 관여시킬 수 있다. 호중구의 관여는 식균 작용 및 세포 흡수로 이어질 수 있다.
2 개의 호중구 관여 도메인이 ATTAC에서 함께 연관될 때, 호중구는 표적 세포를 뒤덮을 수 있다.
일부 구현예에 있어서, 제 1 호중구 관여 도메인은 VH 도메인이고 제 2 호중구 관여 도메인은 VL 도메인이다. 다른 구현예에 있어서, 제 1 호중구 관여 도메인은 VL 도메인이고 제 2 호중구 관여 도메인은 VH 도메인이다. 이러한 구현예에서, 함께 쌍을 이룰 때 제 1 및 제 2 호중구 관여 도메인은 scFv를 포함할 수 있다 (이에 의해 scFv와 동등하지만 VH 및 VL이 단일-쇄 구성으로 되어 있지 않다는 사실을 알 수 있음).
제 1 및 제 2 호중구 관여 도메인이 한 쌍의 VH 및 VL 도메인인 경우, VH 및 VL 도메인은 CD89 (FcαR1), FcγRI (CD64), FcγRIIA (CD32), FcγRIIIA (CD16a), CD11b (CR3, αMβ2), TLR2, TLR4, CLEC7A (덱틴1), FPR1, FPR2 또는 FPR3와 같은 호중구 표면에서 발현되는 항원에 대해 특이적일 수 있다.
하기 표 9는 호중구의 표면에서 발현되는 항원에 특이적인 일부 예시적인 항체에 대해 선택된 문헌을 제시한다.
Figure pct00049
Figure pct00050
5. 호산구 관여 도메인
일부 구현예에 있어서, 면역 세포 관여 도메인은 호산구 관여 도메인이다. 2 개의 호산구 관여 도메인이 2-성분계로 함께 연관되면 이들은 호산구 표면상의 항원에 결합하여 이들 세포를 관여시킬 수 있다. 일부 구현예에 있어서, 호산구 표면상의 항원은 CD89 (Fc 알파 수용체 1), FcεRI, FcγRI (CD64), FcγRIIA (CD32), FcγRIIIB (CD16b) 또는 TLR4일 수 있다.
일부 구현예에 있어서, 2-성분계의 절반이 호산구상의 표면 단백질에 결합하고 2-성분계의 다른 절반이 암세포에 결합함으로써 호산구를 특이적으로 관여시킬 수 있다. 호산구의 관여는 EPO, 주요 염기성 단백질 1 (MBP1) 및 호산구-관여된 리보뉴클레아제 (EAR)와 같은 미리 형성된 양이온성 단백질의 탈과립화 및 방출로 이어질 수 있으며, 상기 양이온성 단백질은 ECP 및 호산구-유래된 신경독으로 알려져 있다.
2 개의 호중구 관여 도메인이 ATTAC에서 함께 연관될 때, 호중구는 표적 세포를 식균하거나 또는 호중구 세포외 트랩 (NET)을 분비할 수 있으며; 최종적으로, 이들은 식균된 세포를 죽이기 위하여 이들의 호흡 버스트 캐스케이드(burst cascade)를 활성화할 수 있다.
일부 구현예에 있어서, 제 1 호산구 관여 도메인은 VH 도메인이고 제 2 호산구 관여 도메인은 VL 도메인이다. 다른 구현예에 있어서, 제 1 호산구 관여 도메인은 VL 도메인이고 제 2 호산구 관여 도메인은 VH 도메인이다. 이러한 구현예에서, 함께 쌍을 이룰 때 제 1 및 제 2 호산구 관여 도메인은 scFv를 포함할 수 있다 (이에 의해 scFv와 동등하지만 VH 및 VL이 단일-쇄 구성으로 되어 있지 않다는 사실을 알 수 있음).
제 1 및 제 2 호산구 관여 도메인이 한 쌍의 VH 및 VL 도메인인 경우, VH 및 VL 도메인은 CD89 (Fc 알파 수용체 1), FcεRI, FcγRI (CD64), FcγRIIA (CD32), FcγRIIIB (CD16b) 또는 TLR4와 같은, 호산구 표면에서 발현되는 항원에 대해 특이적일 수 있다.
하기 표 10은 호산구 표면에서 발현되는 항원에 대해 예시적인 항체의 특이성을 나타내는 선택된 문헌을 제시한다.
Figure pct00051
6. 호염기구 관여 도메인
일부 구현예에 있어서, 면역 세포 관여 도메인은 호염기구 관여 도메인이다. 2 개의 호염기구 관여 도메인이 2-성분계로 함께 연관되면 이들은 호염기구 표면상의 항원에 결합하여 이들 세포를 관여시킬 수 있다. 일부 구현예에 있어서, 호염기구 표면상의 항원은 CD89 (Fc 알파 수용체 1) 또는 FcεRI일 수 있다.
일부 구현예에 있어서, 2-성분계의 절반이 호염기구상의 표면 단백질에 결합하고 2-성분계의 다른 절반이 암세포에 결합함으로써 호염기구를 특이적으로 관여시킬 수 있다. 호염기구의 관여는 히스타민, 프로테오글리칸 및 단백질 분해 효소와 같은 호염기구 과립 성분의 방출로 이어질 수 있다. 이들은 또한 류코트리엔 (LTD-4) 및 사이토카인을 분비한다.
2 개의 호염기구 관여 도메인이 ATTAC에서 함께 연관될 때, 호염기구는 탈과립될 수 있다.
일부 구현예에 있어서, 제 1 호염기구 관여 도메인은 VH 도메인이고 제 2 호염기구 관여 도메인은 VL 도메인이다. 다른 구현예에 있어서, 제 1 호염기구 관여 도메인은 VL 도메인이고 제 2 호염기구 관여 도메인은 VH 도메인이다. 이러한 구현예에서, 함께 쌍을 이룰 때 제 1 및 제 2 호염기구 관여 도메인은 scFv를 포함할 수 있다 (이에 의해 scFv와 동등하지만 VH 및 VL이 단일-쇄 구성으로 되어 있지 않다는 사실을 알 수 있음).
제 1 및 제 2 호염기구 관여 도메인이 한 쌍의 VH 및 VL 도메인인 경우, VH 및 VL 도메인은 CD89 (Fc 알파 수용체 1) 또는 FcεRI와 같은 호염기구 표면에서 발현되는 항원에 대해 특이적일 수 있다.
하기 표 11은 호염기구 표면에서 발현되는 항원에 특이적인 일부 예시적인 항체에 대해 선택된 문헌을 제시한다.
Figure pct00052
7. γδ T-세포
일부 구현예에 있어서, 면역 세포 관여 도메인은 γδ T-세포 관여 도메인이다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이, γδ T-세포란 하나의 감마 쇄 (γ) 및 하나의 델타 쇄 (δ)로 구성된 TCR을 갖는 T-세포를 의미한다.
2 개의 γδ T-세포 관여 도메인이 2-성분계로 함께 연관될 때, 이들은 γδ T-세포 표면상의 항원에 결합하여 이들 세포를 관여시킬 수 있다. 일부 구현예에 있어서, γδ T-세포의 표면상의 항원은 γδ TCR, NKG2D, CD3 복합체 (CD3ε, CD3γ, CD3δ, CD3ζ, CD3η), 4-1BB, DNAM-1 또는 TLR (예: TLR2, TLR6)일 수 있다.
일부 구현예에 있어서, 2-성분계의 절반이 γδ T-세포상의 표면 단백질에 결합하고 2-성분계의 다른 절반이 암세포에 결합함으로써 γδ T-세포를 특이적으로 관여시킬 수 있다. γδ T-세포의 관여는 표적 세포의 세포 용해, 및 TNFα 및 IFNγ와 같은 전염증성 사이토카인의 방출로 이어질 수 있다.
2 개의 γδ T-세포 관여 도메인이 ATTAC에서 함께 연관될 때, γδ T-세포는 표적 세포를 죽일 수 있다.
일부 구현예에 있어서, 제 1 γδ T-세포 관여 도메인은 VH 도메인이고 제 2 γδ T-세포 관여 도메인은 VL 도메인이다. 다른 구현예에 있어서, 제 1 γδ T-세포 관여 도메인은 VL 도메인이고 제 2 γδ T-세포 관여 도메인은 VH 도메인이다. 이러한 구현예에서, 함께 쌍을 이룰 때 제 1 및 제 2 γδ T-세포 관여 도메인은 scFv를 포함할 수 있다 (이에 의해 scFv와 동등하지만 VH 및 VL이 단일-쇄 구성으로 되어 있지 않다는 사실을 알 수 있음).
제 1 및 제 2 γδ T-세포 관여 도메인이 VH 및 VL 도메인의 쌍인 경우, VH 및 VL 도메인은 γδ TCR, NKG2D, CD3 복합체 (CD3ε, CD3γ, CD3δ, CD3ζ, CD3η), 4-1BB, DNAM-1 또는 TLR (TLR2, TLR6)와 같은, γδ T-세포의 표면에서 발현되는 항원에 대해 특이적일 수 있다.
하기 표 12는 γδ T-세포의 표면에서 발현되는 항원에 특이적인 일부 예시적인 항체에 대해 선택된 문헌을 제시한다.
Figure pct00053
8. 자연 살상 T-세포 (NKT-세포)
일부 구현예에 있어서, 면역 세포 관여 도메인은 NKT 관여 도메인이다. NKT-세포란 Vα24 및 Vβ11 TCR 수용체를 발현하는 T-세포를 의미한다.
2 개의 NKT 관여 도메인이 2-성분계로 함께 연관될 때, 이들은 NKT 표면상의 항원에 결합하여 이들 세포를 관여시킬 수 있다. 일부 구현예에 있어서, NKT 표면상의 항원은 αβTCR, NKG2D, CD3 복합체 (CD3ε, CD3γ, CD3δ, CD3ζ, CD3η), 4-1BB 또는 IL-12R일 수 있다.
일부 구현예에 있어서, 2-성분계의 절반이 NKT상의 표면 단백질에 결합하고 2-성분계의 다른 절반이 암세포에 결합함으로써 NKT를 특이적으로 관여시킬 수 있다. NKT의 관여는 표적 세포의 세포 용해로 이어질 수 있다.
2 개의 NKT 관여 도메인이 ATTAC에서 함께 연관될 때, NKT는 표적 세포의 세포 용해 및 전염증성 사이토카인의 방출을 일으킬 수 있다.
일부 구현예에 있어서, 제 1 NKT 관여 도메인은 VH 도메인이고 제 2 NKT 관여 도메인은 VL 도메인이다. 다른 구현예에 있어서, 제 1 NKT 관여 도메인은 VL 도메인이고 제 2 NKT 관여 도메인은 VH 도메인이다. 이러한 구현예에서, 함께 쌍을 이룰 때 제 1 및 제 2 NKT 관여 도메인은 scFv를 포함할 수 있다 (이에 의해 scFv와 동등하지만 VH 및 VL이 단일-쇄 구성으로 되어 있지 않다는 사실을 알 수 있음).
제 1 및 제 2 NKT 관여 도메인이 한 쌍의 VH 및 VL 도메인이면, VH 및 VL 도메인은 αβTCR, NKG2D, CD3 복합체 (CD3ε, CD3γ, CD3δ, CD3ζ, CD3η), 4-1BB 또는 IL-12R과 같은, NKT의 표면에서 발현되는 항원에 대해 특이적일 수 있다.
하기 표 13은 NKT의 표면에서 발현된 항원에 특이적인 일부 예시적인 항체에 대해 선택된 문헌을 제시한다.
Figure pct00054
9. 조작된 면역 세포
일부 구현예에 있어서, 면역 세포 관여 도메인은 조작된 면역 세포 관여 도메인이다.
일부 구현예에 있어서, 조작된 면역 세포는 키메라 항원 수용체 (CAR) 세포이다. 일부 구현예에 있어서, CAR은 면역 세포에 의해 자연적으로 발현되는 수용체로부터 부분적으로 유래된 신호 전달 도메인에 융합된 종양 항원 (예를 들어, scFv)에 단단하게 결합할 수 있는 세포외 도메인을 포함한다. 예시적인 CAR은 문헌 [Facts about Chimeric Antigen Receptor (CAR) T-Cell Therapy, Leukemia and Lymphoma Society, December 2017]에 기재되어 있다. CAR은 종양 항원에 특이적인 scFV 영역, 세포내 동시 자극 도메인, 링커 및 막 횡단 영역을 포함할 수 있다. 예를 들어, CAR T-세포내의 CAR은 T-세포 수용체로부터 부분적으로 유래된 신호 전달 도메인에 융합된 종양 항원의 세포외 도메인을 포함할 수 있다. CAR은 또한 CD28, 4-1 BB 또는 OX40과 같은 동시 자극 도메인을 포함할 수 있다. 일부 구현예에 있어서, 면역 세포에 의해 발현된 CAR을 종양 표적 항원에 결합하면 면역 세포 활성화, 증식 및 표적 세포 제거를 할 수 있다. 따라서, 조작된 면역 세포를 생성하기 위하여 scFV 영역, 세포내 동시 자극 도메인, 링커 및 막 횡단 영역을 달리 하여 다양한 CAR을 사용할 수 있다.
예시적인 조작된 면역 세포는 CAR T-세포, NK 세포, NKT-세포 및 γδ 세포를 포함한다. 일부 구현예에 있어서, 조작된 면역 세포는 환자 자신의 면역 세포로부터 유래된다. 일부 구현예에 있어서, 환자의 종양은 CAR의 scFV에 결합하는 종양 항원을 발현한다.
지금까지 연구된 잠재적인 CAR 표적은 CD19, CD20, CD22, CD30, CD33, CD123, ROR1, Igk 경쇄, BCMA, LNGFR 및 NKG2D를 포함한다. 그러나, CAR 기술은 다양한 종양 항원에 대해 조작된 면역 세포를 개발하는데 사용할 수 있다.
일부 구현예에 있어서, 조작된 면역 세포는 유전적으로 조작된 면역 세포이다.
2 개의 조작된 면역 세포 관여 도메인이 2-성분계로 함께 연관될 때, 이들은 조작된 면역 세포의 표면상의 항원에 결합하여 이들 세포를 관여시킬 수 있다. 일부 구현예에 있어서, 조작된 면역 세포의 표면상의 항원은 T-세포, NK 세포, NKT-세포 또는 γδ 세포에 대한 특이성을 갖는 본 출원에 인용된 관여 도메인일 수 있다.
일부 구현예에 있어서, 2-성분계의 절반이 조작된 면역 세포상의 표면 단백질에 결합하고 2-성분계의 다른 절반이 암세포에 결합함으로써 조작된 면역 세포를 특이적으로 관여시킬 수 있다. 조작된 면역 세포의 관여는 표적의 세포 용해 및 사이토카인의 방출과 같은 이들 세포의 이펙터 (effector) 반응의 활성화로 이어질 수 있다.
2 개의 조작된 면역 세포 관여 도메인이 ATTAC에서 함께 연관될 때, 조작된 면역 세포는 표적 세포를 살해할 수 있다.
일부 구현예에 있어서, 제 1 조작된 면역 세포 관여 도메인은 VH 도메인이고 제 2 조작된 면역 세포 관여 도메인은 VL 도메인이다. 다른 구현예에 있어서, 제 1 조작된 면역 세포 관여 도메인은 VL 도메인이고 제 2 조작된 면역 세포 관여 도메인은 VH 도메인이다. 이러한 구현예에서, 함께 쌍을 이룰 때 제 1 및 제 2 조작된 면역 세포 관여 도메인은 scFv를 포함할 수 있다 (이에 의해 scFv와 동등하지만 VH 및 VL이 단일-쇄 구성으로 되어 있지 않다는 사실을 알 수 있음).
제 1 및 제 2 조작된 면역 세포 관여 도메인이 한 쌍의 VH 및 VL 도메인인 경우, VH 및 VL 도메인은 조작에 대해 사용된 세포 유형에 기반하여 조작된 면역 세포의 표면에서 발현되는 항원에 대해 특이적일 수 있다.
E. 불활성 결합 파트너
ATTAC는 또한 그것이 결합하는 면역 세포 관여 도메인에 결합할 수 있고 특정 조건이 없는 한 다른 면역 결합 도메인에 결합하는 것을 방지할 수 있는 적어도 하나의 불활성 결합 파트너를 포함한다. 면역 세포 관여 도메인이 적어도 하나의 불활성 결합 파트너에 결합될 때 면역 세포 관여 활성을 갖고 있지 않다.
다시 말해서, 적어도 하나의 불활성 결합 파트너는 상보적인 쌍 (다른 면역 세포 관여 도메인)에 결합하는 것을 차단하고 2 개의 도메인이 함께 결합하여 면역 세포 관여 활성을 갖는 것을 방지함으로써 면역 결합 도메인의 기능을 못 하게 한다. 이와 같이, 불활성 결합 파트너는 그것이 제거되지 않는 한 면역 세포 관여 도메인이 다른 면역 세포 관여 도메인에 결합하지 않도록 면역 세포 관여 도메인에 결합한다. 이렇게 결합하지 않음으로써 본 출원은 비-특이적 결합 또는 낮은 수준의 결합 (예를 들어, ≤ 1 %, ≤ 5 %, ≤ 10 %)을 배제하지 않는다.
일부 구현예에 있어서, 제 1 면역 세포 관여 도메인은 불활성 결합 파트너에 결합된다. 제 1 면역 세포 관여 도메인에 결합된 불활성 결합 파트너는 제 1 면역 세포 관여 도메인이 제 2 면역 세포 관여 도메인에 결합하는 것을 방지한다.
일부 구현예에 있어서, 제 2 면역 세포 관여 도메인은 불활성 결합 파트너에 결합된다. 제 2 면역 세포 관여 도메인에 결합된 불활성 결합 파트너는 제 2 면역 세포 관여 도메인이 제 1 면역 세포 관여 도메인에 결합하는 것을 방지한다.
일부 구현예에 있어서, 제 1 및 제 2 면역 세포 관여 도메인은 둘 다 불활성 결합 파트너에 결합된다. 제 1 및 제 2 면역 세포 관여 도메인에 결합된 불활성 결합 파트너는 2 개의 면역 세포 관여 도메인이 서로 결합하는 것을 방지한다.
일부 구현예에 있어서, 불활성 결합 파트너는 면역 세포 관여 도메인에 특이적으로 결합한다.
일부 구현예에 있어서, 적어도 하나의 불활성 결합 파트너는 VH 또는 VL 도메인이다. 일부 구현예에 있어서, ATTAC내의 면역 세포 관여 도메인이 VH 도메인일 때, 불활성 결합 파트너는 VL 도메인일 수 있으며, 제 1 면역 세포 관여 도메인이 VL 도메인일 때, 불활성 결합 파트너는 VH 도메인일 수 있다.
일부 구현예에 있어서, 제 1 성분이 표적화 잔기 및 VL 면역 세포 관여 도메인 및 VH 불활성 결합 파트너를 포함하면, VH 불활성 결합 파트너는 VL 면역 세포 관여 도메인에 결합하기 위한 평형 해리 상수를 가지며, 이것은 제 2 성분에서 그의 파트너인 VH 면역 세포 관여 도메인에 대한 VL 면역 세포 관여 도메인의 평형 해리 상수보다 크다. 일부 구현예에 있어서, 상기 기술된 내용은 VH가 VL로 전환될 때 동일하게 적용되며 그 반대의 경우도 마찬가지이다.
구조체내의 면역 세포 관여 도메인과의 미스페어링 (mispairing) 파트너로서 불활성 결합 파트너를 사용하면 보다 안정적이고 제조하기 용이한 구조체가 생성되는 것으로 믿어진다. 일부 구현예에 있어서, 제 1 및 제 2 면역 결합 도메인 모두는 본 출원에 기재된 바와 같이 불활성 결합 파트너에 결합될 수 있다. 일부 구현예에 있어서, 면역 결합 도메인 중 하나만이 불활성 결합 파트너에 결합된다.
1. 불활성 결합 파트너로서 비-활성화된 VH 또는 VL 도메인
일부 구현예에 있어서, 면역 세포 관여 도메인이 VH 또는 VL 도메인인 경우, 불활성 결합 파트너는 면역 세포 관여 도메인과 쌍을 이루어 기능성 항체를 형성하며 면역 세포 항원에 결합할 수 있는 상응하는 VL 또는 VH 도메인에 대한 상동성을 갖는다. 이러한 면역 세포 항원은 T-세포, 대식세포, 자연 살상 세포, 호중구, 호산구, 호염기구, γδ T-세포, 자연 살상 T-세포 (NKT-세포) 또는 조작된 면역 세포를 포함하는 임의의 면역 세포에 존재하는 항원일 수 있다. 일부 구현예에 있어서, 이러한 면역 세포 항원은 CD3이다.
일부 구현예에 있어서, 불활성 결합 파트너는 면역 세포 관여 도메인의 상응하는 VL 또는 VH와 쌍을 이룰 때 항원에 특이적으로 결합할 수 없는 VH 또는 VL이며, 이는 불활성 결합 파트너에서 생성된 하나 이상의 돌연변이로 인해 표적 항원에 대한 결합을 억제하기 때문이다. 일부 구현예에 있어서, 불활성 결합 파트너의 VH 또는 VL은 하나 이상의 아미노산에 의해 면역 세포 항원에 특이적인 VH 또는 VL과 다를 수 있다. 다시 말해서, 하나 이상의 돌연변이가 표적 면역 세포 항원에 특이적인 VH 또는 VL에 대해 발생하여 불활성 결합 파트너를 생성할 수 있다.
이러한 돌연변이는, 예를 들어, 면역 세포 항원에 특이적인 VH 또는 VL의 폴리펩티드 서열에서 치환, 삽입 또는 결실이 일어나서 불활성 결합 파트너를 생성할 수 있다. 일부 구현예에 있어서, 면역 세포 항원에 특이적인 VH 또는 VL에서의 돌연변이는 CDR1, CDR2 또는 CDR3 내에서 만들어져서 불활성 결합 파트너를 생성할 수 있다. 일부 구현예에 있어서, 불활성 결합 파트너로서 사용되는 VH 또는 VL은 면역 세포 관여 도메인과 쌍을 이루는 능력을 보유할 수 있지만, 결과의 쌍을 이룬 VH/VL 도메인은 면역 세포 항원에 대한 결합을 감소시켰다. 일부 구현예에 있어서, 불활성 결합 파트너는 그의 상응하는 면역 세포 관여 도메인에 결합하기 위한 정상적인 친화성을 갖지만, 쌍을 이룬 VH/VL은 불활성 결합 파트너의 돌연변이를 포함하지 않은 쌍으로 된 VH/VL에 비해 면역 세포 항원에 대해 더 낮은 결합 친화성을 갖는다. 예를 들어, 이러한 낮은 친화성은 면역 세포 항원에 대해 20 배, 100 배 또는 1000 배 낮은 결합일 수 있다.
일부 구현예에 있어서, 제 1 면역 세포 관여 도메인은 면역 세포 항원에 특이적인 VH이며, 불활성 결합 파트너는 쌍을 이룬 VH/VL이 항원에 대한 결합을 감소시키거나 또는 결합하지 하도록 하나 이상의 돌연변이를 갖는 동일한 항원에 대한 VL 도메인이다. 일부 구현예에 있어서, 제 1 면역 세포 관여 도메인은 면역 세포 항원에 특이적인 VL이며, 불활성 결합 파트너는 쌍을 이룬 VH/VL이 항원에 대한 결합을 감소시키거나 또는 결합하지 않도록 하나 이상의 돌연변이를 갖는 동일한 항원에 대한 VH 도메인이다.
일부 구현예에 있어서, 제 2 면역 세포 관여 도메인은 면역 세포 항원에 특이적인 VH이며, 불활성 결합 파트너는 쌍을 이룬 VH/VL이 항원에 대한 결합을 감소시키거나 또는 결합하지 않도록 하나 이상의 돌연변이를 갖는 동일한 항원에 대한 VL 도메인이다. 일부 구현예에 있어서, 제 2 면역 세포 관여 도메인은 면역 세포 항원에 특이적인 VL이며, 불활성 결합 파트너는 쌍을 이룬 VH/VL이 항원에 대한 결합을 감소시키거나 또는 결합하지 않도록 하나 이상의 돌연변이를 갖는 동일한 항원에 대한 VH 도메인이다.
2. 관련없는 항체로부터 얻은 불활성 결합 파트너
일부 구현예에 있어서, 불활성 결합 파트너로서 사용되는 VH 또는 VL은 면역 세포 관여 도메인의 VL 또는 VH와 관련이 없다. 다시 말해서, 불활성 결합 파트너는 면역 세포 관여 도메인의 VL 또는 VH와 정상적으로 결합하는 상응하는 VH 또는 VL에 대해 서열 상동성을 거의 갖고 있지 않거나 또는 전혀 갖고 있지 않을 수 있다. 일부 구현예에 있어서, 불활성 결합 파트너로서 사용되는 VH 또는 VL은 면역 세포 관여 도메인으로서 사용되는 VL 또는 VH와는 다른 항체 또는 scFv로부터 유래될 수 있다.
일부 구현예에 있어서, 2 개의 성분 모두 불활성 결합 파트너를 가지면, 한 성분의 VH 불활성 결합 파트너 및 다른 성분의 VL 불활성 결합 파트너는 서로 상이한 항체로부터 유래될 수 있다.
F. 절단 부위
개략적으로, 절단 부위는 (i) 암세포에 의해 발현된 효소에 의해 절단되거나; (ii) 암세포 내부에서 pH-민감성 절단 반응을 통해 절단되거나; (iii) 보체-의존적 절단 반응에 의해 절단되거나; 또는 (iv) 약제 내의 표적화 잔기와 동일하거나 상이한 표적화 잔기에 의해 암세포에 공동 국소화된 프로테아제에 의해 절단될 수 있다. 일부 구현예에 있어서, 절단 부위는 프로테아제 절단 부위이다.
절단 부위는 제 1 면역 세포 관여 도메인으로부터 불활성 결합 파트너를 방출하는 기능을 한다. 절단 부위는 암세포의 미세 환경에서 하나 또는 둘 모두의 면역 세포 관여 도메인으로부터 불활성 결합 파트너를 방출하기 위하여 다양한 방식으로 기능할 수 있다. 절단은 사용되는 전략에 따라서 암세포의 내부 또는 암세포의 외부에서 일어날 수 있다. 절단이 암세포의 외부에서 일어나면, 면역 세포 관여 도메인은 먼저 세포내로 내재화되고 고전적인 항원-처리 경로에 관여함이 없이 존재할 수 있다.
특정 구현예에서, 적어도 하나의 절단 부위는 암세포에 의해 발현되는 효소에 의해 절단될 수 있다. 예를 들어, 암세포는 프로테아제와 같은 특정 효소들을 발현하는 것으로 알려져 있으며, 이들은 ATTAC의 하나 이상의 절단 부위를 절단하기 위하여 이러한 전략에 사용될 수 있다. 비 제한적인 실례로서, 카텝신 B는 다른 것 중에서도 FR, FK, VA 및 VR을 절단하며; 카텝신 D는 PRSFFRLGK (서열 번호: 45)를 절단하고, ADAM28은 KPAKFFRL (서열 번호: 1), DPAKFFRL (서열 번호: 2), KPMKFFRL (서열 번호: 3) 및 LPAKFFRL (서열 번호: 4)을 절단하며; MMP2는, 예를 들어, AIPVSLR (서열 번호: 46), SLPLGLWAPNFN (서열 번호: 47), HPVGLLAR (서열 번호: 48), GPLGVRGK (서열 번호: 49) 및 GPLGLWAQ (서열 번호: 50)를 절단한다. 표 1A 또는 표 3A에 나열된 다른 절단 부위도 사용할 수 있다. 암과 관련된 프로테아제 절단 부위 및 프로테아제는 당업계에 널리 알려져 있다. Oncomine (www.oncomine.org)은 온라인 암 유전자 발현 데이터베이스이므로, 본 발명의 약제가 암 치료용인 경우 숙련된 자라면 Oncomine 데이터베이스를 검색하여 주어진 암 유형을 치료하는데 적합한 특정 프로테아제 절단 부위 (또는 2 개의 프로테아제 절단 부위)를 동정할 수 있다. 대체적인 데이터베이스로는 유럽 생물정보학 연구소 (www.ebi.ac.uk), 특히 (www.ebi.ac.uk/gxa)를 들 수 있다. 프로테아제 데이터베이스로는 ExPASy Peptide Cutter (ca.expasy.org/tools/peptidecutter) 및 PMAP.Cut DB (cutdb.burnham.org)를 들 수 있다.
일부 구현예에 있어서, 적어도 하나의 절단 부위는 암세포 내부에서 pH-민감성 절단 반응을 통해 절단될 수 있다. ATTAC가 세포내로 내재화되면, 절단 반응이 세포 내부에서 일어날 수 있으며 암세포 외부의 미세 환경과 세포 내부 사이에서 pH 변화에 의해 촉발될 수 있다. 특히, 일부 암 유형은 암세포 내부에서 산성 환경을 갖는 것으로 알려져 있다. 이러한 접근법은 내부 암세포 유형이 특히 글리코칼릭스 (glycocalyx)와 같은 세포외 미세 환경과 특성적으로 상이한 pH를 가질 때 사용될 수 있다. pH 절단은 리소자임내의 모든 세포에서 일어날 수 있기 때문에, pH-민감성 절단 부위를 사용할 때 표적화제를 선택하려면 필요에 따라서 더 많은 특이성을 요구할 수 있다. 예를 들어, pH-민감성 절단 부위를 사용하는 경우, 암세포에만 결합하거나 매우 바람직하게는 암세포에 결합하는 표적화제 (예를 들어, 폐암 치료를 위해 메조텔린에 결합하는 항체)가 필요할 수 있다.
특정 구현예에서, 적어도 하나의 절단 부위는 보체-의존적 절단 반응에 의해 절단될 수 있다. ATTAC가 암세포에 결합하면 환자의 보체 캐스케이드가 촉발될 수 있다. 이러한 경우, 보체 캐스케이드는 또한 보체 프로테아제에 민감한 절단 부위를 사용하여 제 1 면역 세포 관여 도메인으로부터 불활성 결합 파트너를 절단하는데 사용될 수 있다. 예를 들어, C1r 및 C1s 및 C3 전환 효소 (C4B, 2a 및 C3b, Bb)는 세린 프로테아제이다. C3/C5 및 C5는 또한 보체 프로테아제이다. 만노즈-관련 결합 단백질 (MASP), 보체 캐스케이드에도 연루되고 C4 및 C2를 C4b2b (C3 전환 효소)로 절단하는 역할을 하는 세린 프로테아제도 사용할 수 있다. 예를 들어, 제한없이, C1은 YLGRSYKV 및 MQLGRX를 절단한다. MASP2는 SLGRKIQI를 절단하는 것으로 믿어진다. 보체 성분 C2a 및 보체 인자 Bb는 GLARSNLDE를 절단하는 것으로 믿어진다.
일부 구현예에 있어서, 적어도 하나의 절단 부위는 ATTAC내의 표적화 잔기와 동일하거나 상이한 표적화 잔기에 의해 암세포에 공동 국소화된 프로테아제에 의해 절단될 수 있다. 예를 들어, 임의의 프로테아제는 프로테아제를 그 위치로 전달하는 표적화제에 프로테아제를 접합함으로써 암세포의 미세 환경으로 동시에 유도될 수 있다. 표적화제는 본 출원에 기재된 임의의 표적화제일 수 있다. 프로테아제는 펩티드 또는 화학적 링커를 통해 표적화제에 부착될 수 있으며, 표적화제에 결합될 때 충분한 효소 활성을 유지할 수 있다.
일부 구현예에 있어서, 제 1 성분 및 제 2 성분은 둘 다 불활성 결합 파트너와 미스페어링된다. 일부 구현예에 있어서, 제 1 성분 및 제 2 성분내의 프로테아제 절단 부위는 동일하다. 다른 구현예에 있어서, 제 1 성분 및 제 2 성분내의 프로테아제 절단 부위는 동일한 프로테아제와는 상이한 절단 부위이다. 다른 구현예에 있어서, 제 1 성분 및 제 2 성분내의 프로테아제 절단 부위는 상이한 프로테아제에 대한 절단 부위이다. 2 개의 상이한 프로테아제를 사용하는 일부 구현예에 있어서, 암세포는 2 개의 프로테아제를 모두 발현한다.
일부 구현예에 있어서, 제 1 성분에서 절단되지 않은 상태의 불활성 결합 파트너는 제2 성분에서 VL 또는 VH 면역 결합 도메인을 그의 파트너인 VH 또는 VL 면역 세포 관여 도메인에 각각 특이적으로 결합하는 것을 방해한다. 일부 구현예에 있어서, 절단되지 않은 상태의 제 2 성분에서 파트너 VH 또는 VL 면역 세포 관여 도메인 각각에 대한 VL 또는 VH 면역 세포 관여 도메인의 해리 상수 (Kd)가 절단된 상태의 제 2 성분에서 파트너 VH 또는 VL 면역 세포 관여 도메인 각각에 대한 VL 또는 VH 면역 세포 관여 도메인의 Kd보다 적어도 100 배 더 크도록, 절단되지 않은 상태의 불활성 결합 파트너는 제 2 성분에서 파트너 VH 또는 VL 면역 세포 관여 도메인 각각에 대한 VL 또는 VH 면역 세포 관여 도메인의 결합을 억제한다.
G. 링커
절단 부위이외에도, 링커는 ATTAC의 개별 부분을 함께 부착하기 위하여 선택적으로 사용될 수 있다. 링커는 이러한 개별 부분을 함께 부착하는 임의의 화학적 잔기를 포함한다. 일부 구현예에 있어서, 링커는 유연한 링커일 수 있다. 링커로는 펩티드, 중합체, 뉴클레오티드, 핵산, 다당류 및 지질 유기종 (예: 폴리에틸렌 글리콜)을 들 수 있다. 일부 구현예에 있어서, 링커는 펩티드 링커이다. 펩티드 링커는 약 2 내지 100 개, 10 내지 50 개 또는 15 내지 30 개의 아미노산 길이일 수 있다. 일부 구현예에 있어서, 펩티드 링커는 적어도 10 개, 적어도 15 개 또는 적어도 20 개의 아미노산 길이 및 80 개 이하, 90 개 이하 또는 100 개 이하의 아미노산 길이일 수 있다. 일부 구현예에 있어서, 링커는 단일 또는 반복 GGGGS (서열 번호: 85), GGGS (서열 번호: 86), GS (서열 번호: 87), GSGGS (서열 번호: 88), GGSG (서열 번호: 89), GGSGG (서열 번호: 90), GSGSG (서열 번호: 91), GSGGG (서열 번호: 92), GGGSG (서열 번호: 93) 및/또는 GSSSG (서열 번호: 94) 서열 (들)을 갖는 펩티드 링커이다.
일부 구현예에 있어서, 링커는 말레이미드 (MPA) 또는 SMCC 링커이다.
H. 제조 방법
본 출원에 기재된 ATTAC는 유전 공학 기술을 이용하여 제조할 수 있다. 구체적으로, 핵산은 ATTAC를 생성하기에 적합한 숙주에서 발현될 수 있다. 예를 들어, 일부 성분 및 링커 모두를 포함한 ATTAC를 암호화하는 핵산 서열을 포함하는 벡터를 제조할 수 있으며, 이러한 벡터는 적절한 숙주 세포를 형질 전환하는데 사용될 수 있다.
숙주의 특성 및 숙주내로 핵산을 도입하는 방식 및 에피솜 (episome) 유지 또는 통합이 필요한지 여부에 따라 다양한 조절 요소가 벡터에 또한 사용될 수 있다.
말레이미드 또는 SMCC 링커를 사용하는 것과 같은 화학적 연결 기술도 사용될 수 있다.
결합 파트너가 앱타머인 경우, 당업자라면 앱타머를 단백질, 즉 면역 세포 관여 도메인에 결합하는 방법을 이해할 것이다. 앱타머는 티올 연결 또는 기타 표준 결합 화학 물질을 사용하여 결합될 수 있다. 말레이미드, 숙신이미드 또는 SH 그룹을 앱타머에 부착하여 그것을 면역 세포 관여 도메인에 부착할 수 있다.
II. 약학적 조성물
ATTAC는 약학적 조성물로서 사용될 수 있다. 이와 같이, 이들은 약학적으로 허용되는 담체와 함께 제조될 수 있다. 예를 들어, 비경구 투여가 필요한 경우, ATTAC는 주사용 멸균 무 발열원의 물 또는 멸균 무 발열원의 식염수로 제공될 수 있다. 대안적으로, ATTAC는 멸균 액체 담체의 첨가와 함께 재현탁용 동결 건조 형태로 제공될 수 있다.
III. ATTAC의 사용 방법
본 출원에 기재된 ATTAC는 적어도 제 1 및 제 2 성분 - 각각의 성분은 상기 다양한 구현예들에서 상세하게 설명되었음 -을 함유한 ATTAC를 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 암세포의 존재를 특징으로 하는 환자의 질환을 치료하는 방법에 사용될 수 있다. 추가로, 본 출원에 기재된 약제는 또한 ATTAC를 환자에게 투여하는 것을 포함하는 암세포에 대한 환자 자신의 면역 반응을 표적화 하는 방법에 사용될 수 있다.
일부 구현예에 있어서, 환자는 암에 걸리거나 또는 인지된 전암성 상태를 앓고 있다. 일부 구현예에 있어서, 환자는 검출할 수 없는 암을 앓고 있지만, 암 위험 증가와 관련된 돌연변이를 갖는 것을 포함하여 암 발병 위험이 높다. 일부 구현예에 있어서, 암 발병 위험이 높은 환자는 형질 전환 위험이 높은 전암성 종양을 갖는다. 일부 구현예에 있어서, 암 발병 위험이 높은 환자는 높은 위험과 관련된 유전적 프로파일을 갖는다. 일부 구현예에 있어서, 환자의 암 또는 전암성 상태의 존재는 순환 종양 DNA (ctDNA) 또는 순환 종양 세포의 존재를 기반으로 하여 결정된다. 일부 구현예에 있어서, 치료는 선제적이거나 또는 예방적이다. 일부 구현예에 있어서, 치료는 암의 발생 또는 재발을 늦추거나 차단한다.
환자에게 투여되는 약제의 양은 우려되는 상태를 치료하는데 효과적인 양을 제공하기 위하여 환자의 담당 의사에 의해 선택될 수 있다. ATTAC의 제 1 성분 및 제 2 성분은 환자에서 활성화되기에 충분히 가까운 시점 내에서 동일한 제형 또는 2 개의 상이한 제형으로 투여될 수 있다.
치료를 받는 환자는 인간일 수 있다. 환자는 영장류 또는 포유 동물일 수 있다. 택일적으로, 환자는 가축 (예: 개 또는 고양이)과 같은 동물, 실험용 동물 (예: 마우스, 쥐 또는 토끼와 같은 실험실 설치류) 또는 농업에 중요한 동물 (예: 말, 소, 양 또는 염소)일 수 있다.
암은 고형암 또는 비-고형암일 수 있으며, 암은 유방암, 난소암, 자궁 내막암, 자궁 경부암, 방광암, 신장암, 흑색종, 폐암, 전립선암, 고환암, 갑상선암, 뇌암, 식도암, 위암, 췌장암, 결장 직장암, 간암, 백혈병, 골수종, 비-호지킨 림프종, 호지킨 림프종, 급성 골수성 백혈병, 급성 림프모구 백혈병, 만성 림프모구 백혈병, 림프 증식성 장애, 골수형성 이상 장애 , 골수 증식성 질환 및 전악성 질환과 같은 임의의 암일 수 있다..
일부 구현예에 있어서, ATTAC로 치료되는 환자는 높은 수준의 조절 T-세포의 존재를 특징으로 하는 종양을 갖는다 (표 1에서 Fridman WH et al., Nature Reviews Cancer 12: 298-306 (2012) 참조). 높은 수준의 조절 T-세포의 존재를 특징으로 하는 종양 환자에서, ATTAC 요법은 비-선택적인 BiTE와 같은 T-세포를 비-선택적으로 표적화 하는 다른 요법보다 유리할 수 있다. 일부 구현예에 있어서, ATTAC 요법은 조절 T-세포의 관여를 회피한다. 일부 구현예에 있어서, 활성화된 T-세포의 적어도 80 %, 85 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 %는 조절 T-세포가 아니다. 일부 구현예에 있어서, 조절 T-세포는 ATTAC 요법에 의해 활성화되지 않는다.
일부 구현예에 있어서, 생물지표의 존재는 ATTAC를 받을 환자를 선택하기 위해 사용된다. www.cancer.gov/about-cancer/diagnosis-staging/diagnosis/tumor-markers-fact-sheet에서 기재된 것들과 같은 매우 다양한 종양 표지자가 당업계에 공지되어 있다. 일부 구현예에 있어서, 종양 표지자는 ALK 유전자 재배열 또는 과발현; 알파-태아 단백질; 베타-2-마이크로글로불린; 베타-인간 융모성 성선 자극 호르몬; BRCA1 또는 BRCA2 유전자 돌연변이; BCR-ABL 융합 유전자 (필라델피아 염색체); BRAF V600 돌연변이; C-kit/CD117; CA15-3/CA27.29; CA19-9; CA-125; 칼시토닌; 암 배아 항원 (CEA); CD20; 크로모그라닌 A (CgA); 염색체 3, 7, 17 또는 9p21; 상피 기원의 순환 종양 세포 (CELLSEARCH®); 사이토케라틴 단편 21-1; EGFR 유전자 돌연변이 분석; 에스트로겐 수용체 (ER)/프로게스테론 수용체 (PR); 피브린/피브리노겐; HE4; HER2/neu 유전자 증폭 또는 단백질 과발현; 면역 글로불린; KRAS 유전자 돌연변이 분석; 젖산 탈수소 효소; 뉴런-특이적 에놀라제 (NSE); 핵 기질 단백질 22; 프로그램된 사멸 리간드 1 (PD-L1); 전립선-특이적 항원 (PSA); 티로글로불린; 유로키나제 플라스미노겐 활성화제 (uPA); 플라스미노겐 활성화제 억제제 (PAI-1); 5-단백질 서명 (OVA1®); 21-유전자 서명 (Oncotype DX®); 또는 70-유전자 서명 (Mammaprint®)이다.
ATTAC는 단독으로 투여되거나, 또는 수술, 방사선, 전통적인 화학 요법 또는 면역 요법을 포함한 다른 형태의 요법과 결합하여 투여될 수 있다.
일부 구현예에 있어서, 면역 요법은 체크 포인트 차단이다. 체크 포인트 차단이란 면역 기능을 억제하는 억제 체크 포인트 분자를 억제하거나 차단하는 제제를 의미한다. 일부 구현예에 있어서, 체크 포인트 차단은 CTLA4, PD1, PD-L1, LAG3, CD40, TIGIT, TIM3, VISTA 또는 HLA-G를 표적으로 한다.
일부 구현예에 있어서, 면역 요법은 면역 사이토카인 또는 사이토카인 융합이다. 사이토카인이란 면역 체계를 활성화하고 조절하기 위하여 신체에서 자연적으로 만들어지는 세포-신호 전달 단백질을 의미한다. 사이토카인 융합은 사이토카인의 전부 또는 일부를 포함하는 조작된 분자를 의미한다. 예를 들어, 사이토카인 융합은 달루킨 (Darleukin)과 같은 종양에 대한 표적화를 허용하는 항체에 부착된 사이토카인의 전부 또는 일부를 포함할 수 있다 (참조: Zegers et al. (2015) Clin. Cancer Res., 21, 1151-60), Teleukin (WO2018087172 참조)).
일부 구현예에 있어서, 면역 요법은 암 치료 백신 접종이다. 일부 구현예에 있어서, 암 치료 백신 접종은 암과 싸우기 위한 신체의 자연 방어력들을 강화한다. 이들은 공유 종양 항원 (예: E6, E7, NY-ESO, MUC1 또는 HER2) 또는 개인화된 돌연변이 신생 항원에 대항할 수 있다.
실시예
실시예1: ATTAC에 의한 T 세포의 표지화
ATTAC 플랫폼의 초기 시험을 용이하게 하고 개념을 입증하기 위하여, FITC를 사용하는 모델 시스템을 이용하였다. 면역 세포를 면역 세포 마커에 대한 FITC-표지된 항체로 염색하고, 항-FITC ATTAC 성분을 초기 시험에 사용하였다.
이에 따라서, 상기 모델에서, 항-FITC ATTAC 성분 (서열 번호: 165)은 어댑터 ATTAC 성분으로서 작용하며, 이에 의해 FITC-표지된 항체를 먼저 사용하여 관심있는 면역 세포상에서 상이한 표적 항원을 표지할 수 있다. 어댑터 ATTAC 성분의 사용이란 필요한 2 개의 성분의 절반을 구성하는 하나의 ATTAC 성분을 사용하여 면역 세포 표면에 있는 많은 수의 항원을 분석할 수 있다는 것을 의미한다. 면역 세포는 FITC-표지된 항체가 관심 세포에 결합한 경우에만 항-FITC ATTAC 성분으로 표지된다. 항-FITC ATTAC 성분은 면역 세포 활성화 도메인의 절반과, 원치 않는 종양 세포상에서 항원에 결합된 제 2 ATTAC 성분으로부터 유래한 면역 세포 활성화 도메인의 나머지 절반을 함유한다.
이러한 실험에서, T 세포 (4x106)를 계산하고 RPMI + 10 % NBS 내에서 두 번 세척하였다. T 세포를 2.6x106/ml로 재현탁하고 95 μl를 15 ml의 팔콘 (Falcon) 튜브에 첨가하고 5 μl의 FITC 항체를 첨가 (미처리된 T 세포에는 아무것도 첨가하지 않음)한 다음 실온에서 30 분 동안 배양하였다.
5 ml의 배지를 첨가하고 스핀 다운 (spin down)하여 과잉의 항체를 씻어냈다. 상청액을 제거하고 잔여 배지 (약 80 ul)에서 세포를 재현탁하였다. 각각의 튜브에 100 ul의 배지를 첨가하였다.
20 μl의 항-FITC ATTAC 성분 (서열 번호: 165, 300 μg/ml)을 각각의 튜브에 첨가하여 최종 농도가 30 μg/ml가 되도록 하고, 이를 실온에서 30 분 동안 배양하였다.
5 ml의 배지를 추가하고 스핀 다운하여 과잉의 ATTAC 성분을 씻어내고, 상청액을 제거하고 세포를 ml 당 0.3x106으로 재현탁하고 96 웰 (well) U-bottom plate의 웰 당 100 μl를 첨가하였다.
이어서, T 세포를 항-FITC ATTAC 성분을 통해 (20G6 항-CD3 클론으로부터) CD3-VL으로 표지하였다.
실시예 2: ATTAC에 의한 종양 세포의 표지화
불필요한 종양 세포를 EpCAM에 결합하는 ATTAC 또는 T-세포 관여 항체 (TEAC) 성분들의 조합으로 표지하고 세포 표면에서 한 번 처리하고 재결합시켜서 기능성 항-CD3 활성화 도메인을 생성한다. TEAC란 2 개의 성분이 모두 암세포를 표적으로 하는 키트 또는 조성물을 의미한다 (WO2017/087789 참조). TEAC에는 ATTAC에 포함된 면역 세포 선택 잔기가 없다. 이러한 쌍은 사이토카인의 분비에 의해 T 세포 반응을 일으키므로 양성 대조군으로 사용되었다.
항-FITC ATTAC 성분과 쌍을 이루기 위하여, 불필요한 종양 세포를 종양 세포 내에서 EpCAM에 결합한 ATTAC 성분으로 표지하고 세포 표면에서 한 번 처리하고 항-FITC ATTAC 성분에 대한 상응하는 CD3 도메인을 발현하였다. 항-FITC ATTAC 성분을 갖는 T 세포와 항-EpCAM ATTAC 성분을 갖는 종양 세포가 함께 혼합되면, 기능성 항-CD3 VH-VL 도메인이 존재하여 원하는 T 세포의 하위 세트를 활성화시킨다. MCF-7 세포 (12x106)를 계산하고 RPMI + 10 % NBS로 두 번 세척하였다.
160 μl 당 300,000 개의 세포가 되도록 배지에 재현탁하고, (i) EpCAM VH TEAC 성분 (서열 번호: 166)과 EpCAM VL TEAC 성분 (서열 번호: 167) (2 개의 성분이 암세포를 표적으로 하고 어떠한 성분도 면역 세포 선택 잔기를 포함하지 않을 때 상기 성분은 TEAC [대조군으로 사용됨]를 형성함) 및 (ii) EpCAM VH ATTAC 성분 (서열 번호: 166)으로만 표지된 2 개의 15ml의 팔콘 튜브에 2.56 ml를 추가하였다. 또한, 160 ul를 (iii) 표지된 BiTE (서열 번호: 168) 및 (iv) 미처리된 물질의 다른 2 개의 팔콘 튜브에 추가하였다.
320 μl의 EpCAM-20G6 VL TEAC 성분 (300 μg/ml) 및 320 μl의 EpCAM-20G6 VH TEAC 성분 (300 μg/ml)을 함께 혼합하고 640 ul를 튜브 (i)에 첨가하였다. 튜브 (ii)에 320 ul의 EpCAM-20G6 VH ATTAC 성분 (300 μg/ml)를 첨가하였다. 각각의 ATTAC/TEAC 성분의 최종 농도는 30 μg/ml이며, 이를 실온에서 30 분 동안 배양하였다.
5ml의 배지를 첨가하고 스핀 다운하여 과잉의 ATTAC/TEAC 성분을 씻어냈다. 상청액을 제거하고 세포를 1x106/ml로 재현탁하고 이미 T 세포를 함유한 웰 당 100 ul를 첨가하였다 (위 참조).
튜브 (i)에서, 종양 세포를 VH 및 VL을 모두 함유하는 TEAC 성분으로 표지하였다. 튜브 (ii)에서, 종양 세포를 항-CD3의 VH 도메인을 함유하는 EpCAM ATTAC 성분으로만 표지하였으며, 이는 T 세포에서 발견될 수 있는 항-CD3의 VL 도메인을 보완할 수 있다.
실시예 3: 대조군
완전한 항-CD3 분자가 종양 세포의 표면에 있으면 T 세포가 활성화될 수 있다는 것을 입증하기 위하여 양성 대조군으로서 종양 세포를 BiTE (서열 번호: 168)로 표지하였다. 종양 세포의 표면에 항-CD3 분자가 없으면 T 세포 활성화가 일어나지 않는다는 것을 입증하기 위하여 음성 대조군으로서 T 세포를 미치료된 종양 세포와 함께 배양하였다.
BiTE 처리된 세포에 대해, 20 μl의 BiTE (서열 번호: 168 - 20 μg/ml)를 첨가하였다. BiTE의 최종 농도는 2 μg/ml이다. 이를 실온에서 30 분 동안 배양하였다.
5 ml의 배지를 첨가하고 스핀 다운하여 과량의 BiTE를 씻어냈다. 상청액을 제거하고 세포를 1x106/ml로 재현탁하고 웰 당 100 ul를 첨가하였다.
미처리된 표적 세포에 대해서는 아무것도 첨가하지 않았다. 이를 실온에서 30 분 동안 배양하였다.
5 ml의 배지를 추가하고 스핀 다운하였다. 상청액을 제거하고 세포를 1x106/ml로 재현탁하고 웰당 100 ul를 첨가하였다.
플레이트를 37 ℃에서 밤새 배양하고 IFN-감마 ELISA에 대해 100 μl의 상청액을 사용한 다음 삼중 웰에서 세포를 풀링하고 FACS 염색에 사용하였다.
실시예 4: IFN-감마 ELISA
IFN-감마 ELISA 분석을 위하여 ThermoFisher (Cat # 88-7316-77)의 키트를 사용하였다.
일반적인 IFNγ 분석의 배경: IFNγ발현과 같은 시험관내 사이토카인 마커의 발현은 T 세포 반응에 대한 예측 값을 갖는 것으로 알려져 있으며, 이에 따라서 생체내 결과를 예측한다. 문헌 [Ghanekar et al., Clin Diag Lab Immunol j8 (3): 628-31 (2001)]에 설명된 바와 같이, 사이토카인 유세포 분석 (CFC)에 의해 측정된 CD8+ T 세포의 IFNγ 발현은 세포 독성 T 림프구의 반응에 대한 대리 마커이다 [Ghanekar at 628]. 기존의 연구는 CD8+ T 세포에 의한 IFNγ의 발현과 CTL 이펙터 세포의 활성 간에 강한 상관 관계가 있음을 보여주고 있다 [Ghanekar at 630]. 기존의 연구는 IFNγ 발현에 대한 데이터의 사용에 의해 임상 환경에서 CD8+ T-세포 반응을 평가하는데 있어서 정확성이 더욱 높아진 다는 것을 보여주고 있다 [Id. at 631]. 이는 본 원의 사이토카인 발현 분석이 생체내 및 임상 반응에 대한 예측 값을 갖는 것으로 알려져 있음을 입증한다. IFNγ 발현을 평가하는 다양한 방법이 존재하기 때문에 본 원의 방법은 Ghanekar의 정확한 방법 단계를 따르지 않지만, Ghanekar는 IFNγ 발현이 T-세포 활성에 대한 프록시임을 입증하고 있다.
실시예 5: 유세포 분석
세포를 3ml의 FACS 완충액 (PBS + 2 % 혈청) 내에서 세척하고 상청액을 제거하였다. 세포를 30 분 동안 CD3, CD4, CD8 및 CD69 (T 세포 활성화 마커)에 대한 항체로 염색하였다. FACS 완충액을 사용하여 과잉의 항체를 세척하였다. 유세포 분석기에서 실행하기 전에 세포를 여과하였다.
실시예 6: 결과
도 3A 내지 3C는 TEAC로부터 선택적인 T-세포 활성화의 결과를 제공한다. 이러한 실험은 FITC-접합 항체로 T 세포를 표지하는 것이 종양 세포 표면에서 CD3 분자를 인식하는 능력을 변경하지 않고 그에 반응하여 활성화된다는 것을 입증한다. 표적 세포는 EpCAM-CD3VH 및 EpCAM-CD3VL TEAC 성분에 의해 결합된다 (따라서, 항-CD3 분자의 양쪽 절반을 가짐). 도 3A에 나타난 바와 같이, 예상한 대로 TEAC 표지된 종양 세포를 사용한 모든 시험에 걸쳐 IFN 감마 방출의 양이 매우 유사하므로, T 세포 표면에 대한 FITC-접합 항체의 명백한 억제 효과는 없다. 즉, 결합된 항체에 의해 차단되어 있지 않다.
대조군은 BiTE에 의한 강력한 T 세포 활성화로 양호하게 작동했으며, 표지되지 않은 표적 세포와 함께 배양될 때 T 세포 활성화가 일어나지 않는다 (세포 표면 상에서 항-CD3가 없음). 따라서, 보다 구체적으로, 이러한 대조군 실험은 TEAC가 CD4와 CD8 사이에서 선택적이지 않으며 FITC 모델을 사용하는 것이 예상된 결과를 벗어나지 않았음을 보여주고 있다. FITC 모델의 사용은 T 세포 활성화를 방지하지 못한다. 도 3A 내지 도 3C에 나타난 결과는 종양 세포 상에서 완전한 항-CD3 활성화 도메인이 존재할 때 모든 T 세포 하위 세트 (CD4 및 CD8)의 활성화를 입증한다.
도 3B 및 도 3C는 판독값으로서 배경위의 평균 형광 강도를 사용하여 CD69 유세포 분석 염색에 의한 T 세포 활성화를 입증한다. IFN 감마 결과와 유사하게, CD4 T 세포의 활성화 (도 3B)는 T 세포를 표지하는 항체의 억제 효과가 없었음을 다시 입증하였다. 유사한 결과는 CD8 T 세포에서도 볼 수 있다 (도 3C).
도 4A 내지 도 4C는 ATTAC에 의한 선택적인 T-세포 활성화의 추가 증거를 제공한다. 동일한 실험의 이러한 부분은 도 3의 것을 반복하고 있지만, 이번에는 종양 세포가 하나의 ATTAC 성분 (EpCAM VH (서열 번호: 166))만을 가지고 있으며; 항-CD3 분자의 절반 및 T 세포는 항-FITC ATTAC 성분 (항-FITC VH (서열 번호: 165))을 가지며; 항-CD3 분자의 상보적인 절반을 갖고 있다. IFN 감마 결과를 T 세포 활성화에 대한 프록시 (도 4A)로서 관찰해 보면, T 세포가 CD52, CD8 및 CXCR3으로 표지될 때 T 세포 활성화만 일어났다. EpCAM ATTAC 성분/FITC ATTAC 성분 쌍에 대한 강한 T 세포 반응은 FITC-접합 항체로 표지된 T 세포가 CD8, CD52 및 CXCR3에 결합했을 때 나타났다. 도 4B (CD4 T 세포) 및 도 4C (CD8 T 세포)는 판독값으로서 배경 위의 MFI를 사용하여 CD69 유세포 분석 염색에 의한 T 세포 활성화를 입증한다. CD8 T 세포의 선택적 활성화는 항-CD8 FITC ATTAC 성분을 사용할 때 나타났으며 CD4 T 세포의 활성화는 일어나지 않았다 (도 4B 대 도 4C의 화살표 참조).
따라서, 모든 T 세포가 세포 표면에서 목록된 단백질을 발현하더라도 (도 5A 내지 도 5I 참조), ATTAC 성분을 (FITC를 통해) CD52, CD8 및 CXCR3에 결합하는 것만이 T 세포 활성화를 허용하였다.
항-FITC ATTAC 성분이 결합하는 T 세포 표면에 FITC가 존재한다는 것을 입증하기 위하여 실험을 실행하기 전에 T 세포를 FITC-접합 항체로 염색하였다.
도 4B 및 4C는 판독값으로서 배경 위의 평균 형광 강도를 이용하여 CD69 유세포 분석 염색에 의한 T 세포 활성화를 다시 입증한다. CD4 및 CD8 T 세포는 모두 CD52, CD5, CXCR3 및 HLA-DR을 발현한다. 따라서, 이러한 항체로 표지된 CD4 및 CD8 T 세포 모두의 활성화를 나타내는 결과가 예상되며, 이러한 결과는 IFN 감마 ELISA의 결과와 일치한다.
CD8 표지화를 이용한 도 4B 및 4C의 결과는 ATTAC가 한 유형의 T 세포를 다른 유형에 대해 특이적으로 활성화할 수 있음을 입증하기 때문에 본 원에서 가장 중요하다. 모든 T 세포가 CD8-FITC ATTAC 성분 및 항-FITC ATTAC 성분으로 표지되면 이러한 단백질은 CD4 T 세포가 아닌 CD8 T 세포에만 결합한다. 모든 T 세포가 상보적인 ATTAC 성분을 발현하는 종양 세포와 함께 밤새 배양되면, CD4 T 세포의 활성화는 일어나지 않지만 CD69 염색에 의해 CD8 T 세포의 활성화가 일어난다는 것을 유세포 분석으로부터 알 수 있다.
도 6A 내지 도 6F의 결과는 위와 동일한 프로토콜을 사용하며, 도 3A 내지 도 3C 및 도 4A 내지 도 4C에 나타낸 실험과 다른 점은 오로지 실험을 실행하고 T 세포 표지화에 대해 더 많은 FITC-접합 항체를 첨가하기 전에 새로 단리된 자극되지 않은 T 세포를 사용한다는 것이다.
도 6A 내지 도 6F는 FITC 항체에 의한 차단없이 TEAC에 의한 선택적 T-세포 활성화의 추가적인 증거를 제공한다.
표적 세포는 EpCAM-CD3VH 및 EpCAM-CD3VL 모두를 갖는다 (따라서 항-CD3 분자의 양쪽 절반을 갖는다). 도 6A는 예상한 바와 같이 EpCAM VH/VL TEAC 쌍-표지된 종양 세포를 사용한 모든 시험 전 반야에 걸쳐 IFN 감마 방출의 양이 매우 유사하며 이에 따라 T 세포 표면상에서 FITC-접합 항체의 명백한 억제 효과가 나타나지 않았음을 나타낸다. 즉, 결합된 항체에 의한 차단이 없음을 나타낸다.
도 6A의 대조군은 BiTE에 의한 강력한 T 세포 활성화에 의해 양호하게 작동했으며, 비-표지된 표적 세포와 함께 배양될 때 T 세포 활성화가 일어나지 않는다 (세포 표면에 항-CD3가 없음).
도 6B 내지 도 6E는 CD4 T 세포에 대한 T 세포 활성화 데이터를 분석하는 도 6F와 함께 대표적인 원시 데이터 유세포 분석 그래프이다. 도 6B 내지 도 6E에 나타내 바와 같이 점선으로 표시된 그래프는 CD69 활성화의 배경 수준으로서 작용하는 미처리된 T 세포의 CD69 염색을 나타낸다. 도 6B 내지 도 6E의 실선 그래프는 ATTAC 표지된 종양 세포와 함께 밤새 배양된 T 세포의 CD69 염색을 나타낸다. 도 6B 내지 도 6E는 도 6F에서 제시된 분석 데이터와 함께 대표적인 원시 데이터 유세포 분석 그래프를 나타낸다.
예상된 바와 같이, 2 개의 TEAC 성분이 종양 세포에 결합됨에 따라 모든 항체 표지된 T 세포 전 반야에 걸쳐 매우 유사한 CD4 T 세포 활성화가 일어난다.
도 7A 내지 도 7F는도 6A 내지 도 6F와 유사한 정보를 제공하지만, CD8 T 세포에 관한 것이다. 도 7F는 2 개의 TEAC 성분이 종양 세포에 결합됨에 따라 모든 항체 표지된 T 세포 전 반야에 걸쳐 유사한 CD8 T 세포 활성화를 나타낸다. 도 7B 내지 도 7E는 도 7F에 제시된 분석 데이터와 함께 대표적인 원시 데이터 유세포 분석 그래프를 나타낸다.
도 8A 내지 도 8F는 추가 정보를 제공하며 도 6A 내지 도 6F 및 도 7A 내지 도7F를 기반으로 하지만, 이번에는 종양 세포가 하나의 ATTAC 성분 (항-CD3 분자의 절반)에 의해 결합되고 T 세포는 항-FITC ATTAC 성분 (항-CD3 분자의 상보적인 절반)에 의해 결합된다. IFN 감마 결과를 T 세포 활성화에 대한 프록시로서 관찰해 보면 T 세포가 CD52, CD8 (4 개의 다른 항-CD8 항체 클론) 및 CXCR3 (도 8A)로 표지될 때만 T 세포 활성화가 일어났다. 다시, 도 8B 내지 도 8E는 도 8F에 제시된 분석 데이터와 함께 대표적인 원시 데이터 유세포 분석 그래프를 나타낸다.
CD4 T 세포의 활성화는 CD52 및 CXCR3 항체와 결합된 경우에만 나타났고, CD8 항체를 포함한 다른 항체와 결합된 경우에는 CD4 T 세포의 활성화가 보이지 않았다.
도 9A 내지 도 9F는 도 8A 내지 도 8F에 도시된 것과 유사한 실험을 제공하지만, CD8 T 세포에 관한 것이다. 분석된 데이터 (도 9F)에 나타낸 바와 같이, CD52 및 CXCR3 항체는 이들이 CD4 T 세포를 활성화하는 것과 동일한 방식으로 CD8 T 세포를 활성화했지만, 이번에는 CD8 항체가 CD8 T 세포도 활성화시킨다.
이러한 데이터는 CD8 FITC 항체 및 항-FITC ATTAC 성분을 사용하여 CD4 T 세포가 아닌 CD8 T 세포의 특이적 활성화를 T 세포 표면에서 항-CD3 VL을 얻는 수단으로서 지원하며, 항-CD3 VL은 EpCAM ATTAC 성분의 결합으로부터 종양 세포 표면에 존재하는 항-CD3 VH와 쌍을 이룰 수 있다.
실시예 7: 항-CD8 ATTAC를 사용한 FAC 분석 실험
FITC를 사용하는 모델 시스템을 이용하는 대신에 면역 세포에 대한 직접적인 표적으로 하는 실험을 수행하였다.
ATTAC는 2 개의 성분을 포함한다. 이러한 실시예에서, 편의상, 표적화된 면역 세포 결합제를 포함하는 제 1 성분은 ATTAC1이라고 하고, 선택된 면역 세포 결합제를 포함하는 제 2 성분은 ATTAC2라고 한다.
일부 실험에서, 암을 표적화 할 수 있는 표적화 잔기를 포함하는 성분은 암을 표적화 할 수 있는 표적화 잔기를 또한 포함하는 제 2 성분과 함께 사용하여 TEAC를 생성하였다. TEAC는 본 명세서에서 대조군으로 사용된다. TEAC 대조군은 2 개의 성분이 모두 암세포를 표적으로 할 때 유도되는 활성을 나타낸다.
EpCAM을 과발현하는 MDA-MB-231 세포를 항-EpCAM ATTAC1 (항-CD3 VH 도메인 (서열 번호: 166)을 함유함)로 표지하고 과량의 ATTAC 성분을 세척하여 제거하였다.
건강한 기증자로부터의 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC)를 항-CD8 ATTAC2 (항-CD3 VL 도메인 (서열 번호: 170)을 함유함)로 표지하고 과량의 ATTAC 성분을 세척하여 제거하였다.
대조군 세포를 항-EpCAM TEAC로 표지하였다. 항-EpCAM TEAC (서열 번호: 166 및 167)가 사용된 실험의 경우, 2 개의 성분은 모두 면역 세포에 결합하는 표적화 잔기없이 종양 세포에서 EpCAM에 결합한다. 이러한 대조군 실험에서 TEAC 쌍은 면역 세포 선택 잔기에 특이성을 부여하지 않는다.
이어서, PBMC를 1: 2의 PBMC 대 종양 세포의 비율로 종양 세포와 함께 공동 배양하였다. ATTAC는 혼합된 세포에 첨가되거나 첨가되지 않은 프로테아제와 함께 외인성 프로테아제 (엔테로키나제)를 첨가함으로써 단백질 분해적으로 활성화될 수 있다. 공동 배양된 세포는 37 ℃에서 밤새 배양되었다.
배양 후, 공동 배양된 세포를 FACS 완충액 (PBS + 2 % 혈청)에서 세척하고, CD3 APC-Cy7, CD4 PE, CD8 APC 및 CD69 FITC로 유세포 분석을 하기 위해 표지하여 CD4 및 CD8 T 세포 하위 세트의 T 세포 활성화 수준 (CD69 염색의 증가에 의한 측정)을 확인하였다.
CD8 T 세포의 활성화 증가는 엔테로키나제 (프로테아제)를 첨가했을 때 항-EpCAM ATTAC1 및 항-CD8 ATTAC2로 처리한 후에 관찰되었다 (도 10B, 점선). 외인성 프로테아제 (도 10B, 실선) 또는 미처리된 PBMC (채워진 히스토그램)의 첨가없이 표지된 PBMC에 대해 이러한 ATTAC 쌍의 활성화는 일어나지 않았다. 이러한 결과는 ATTAC 활성에 단백질 분해 활성화가 필요함을 확인한다. 더욱이, 프로테아제의 존재하에 항-EpCAM ATTAC1 및 항-CD8 ATTAC2로 처리한 후 CD4 T 세포 하위 세트의 활성화는 일어나지 않으며 (도 10A, 점선), 이는 미처리된 PBMC와 유사한 결과 (채워진 히스토그램)를 나타낸다.
TEAC의 2 성분이 종양 세포에 결합되어 (TEAC 성분 쌍이 모두 EpCAM에 결합하는 대조군) 종양 세포 표면에서 기능성 항-CD3 잔기를 형성할 때, 2 개의 CD4 T 세포 (도 10A, 점선) 및 CD8 T 세포 (도 10B, 점선)는 CD69 염색에 의해 측정된 바와 같이 활성화된다.
이러한 결과는 EpCAM ATTAC VH (ATTAC1) + CD8 ATTAC VL (ATTAC2)을 사용한 처리가 CD4 T 세포를 활성화함이 없이 프로테아제의 존재하에 CD8 T 세포를 활성화시킨다는 것을 나타낸다. 대조적으로, EpCAM TEAC 성분 쌍으로 처리하면 CD4 및 CD8 T 세포를 모두 활성화시킨다.
따라서, ATTAC는 성공적인 항-종양 면역 반응에 중요한 CD8 T 세포를 특이적으로 활성화시키는데 사용될 수 있다.
실시예 8: 항-CD8 ATTAC를 사용한 인터페론 감마 방출 실험
인터페론 감마 방출은 또한 종양 세포 항원을 표적으로 하는 ATTAC1 및 면역 세포 항원을 표적으로 하는 ATTAC2의 활성을 평가하는데 사용되었다. 본 실시예에서, ATTAC1은 종양 세포 및 항-CD3 VH 도메인에서 발현되는 EpCAM을 표적화 함으로써 암을 표적화 할 수 있는 표적화 잔기를 포함한다. ATTAC2는 CD8 및 항-CD3 VH 도메인을 표적화 함으로써 면역 세포를 선택적으로 표적화 할 수 있는 면역 세포 선택 잔기를 포함한다.
종양 세포를 증가하는 농도의 항-EpCAM ATTAC1 (항-EpCAM 기능 및 항-CD3 VH 도메인 (서열 번호: 166)을 모두 함유하며, "EpCAM VH"이라고 함)으로 표지하고, 과잉의 ATTAC 성분을 세척에 의해 제거하였다. 건강한 기증자 (도 11A) 또는 배양된 T 세포 (도 11B)로부터의 PBMC를 증가하는 농도의 항-CD8 ATTAC2 (항-CD8 기능 및 항-CD3 VL 도메인 (서열 번호: 170)를 모두 함유하며; "CD8 VL"이라고 함))로 표지하고, 과잉의 ATTAC 성분을 세척에 의해 제거하였다. 그 다음, PBMC 또는 T 세포는 1: 4의 PBMC 대 종양 세포의 비율로 종양 세포와 공동 배양하였다. ATTAC는 혼합된 세포에 첨가되거나 첨가되지 않은 프로테아제와 함께 외인성 프로테아제 (엔테로키나제)를 첨가함으로써 단백질 분해적으로 활성화할 수 있었다. 공동 배양된 세포는 37 ℃에서 밤새 배양하였다.
공동 배양 후, 활성화된 T 세포에 의한 사이토카인 방출을 나타내는 인터페론 감마 (IFN-감마)의 존재에 대하여 상청액을 분석하였다. 세포가 외인성 프로테아제의 존재하에 배양될 때 PBMC (도 11A) 및 배양된 T 세포 (도 11B) 모두에 의한 인터페론 감마 방출의 용량 의존적 증가가 있었지만, 프로테아제가 존재하지 않을 때에는 인터페론 감마 방출의 증가가 없었다. NK 세포가 인터페론 감마를 생성할 수 있음에 따라, 배양된 T 세포와 비교하여 PBMC에서 인터페론 감마의 더 높은 기준 수준은 PBMC 샘플내에 NK 세포가 존재하기 때문일 수 있다.
도 11A 및 도 11B의 결과는 T 세포 반응을 일으키는데 있어서 ATTAC의 단백질 분해 활성화의 요건을 입증한다. 또한, ATTAC 반응은 용량 의존적이었다.
실험 대조군에서, T 세포 (도 11D) 또는 PBMC 배양물 (도 11C)내의 T 세포가 단독으로 또는 미처리된 종양 세포 (표적 + T 세포 그룹)와 함께 배양되었을 때 인터페론 감마 방출에 의해 측정된 바와 같이 T 세포 활성화가 결여되었다. 양성 대조군으로서, T 세포는 EpCAM-결합 이중 특이적 T 세포 참여자 (BiTE; 서열 번호: 168)로 표지된 종양 세포와 함께 배양할 때 활성화되었다.
실시예 9: ATTAC의 농도 의존성 분석
ATTAC 쌍의 농도 의존성을 시험하였으며, 여기서 ATTAC1은 종양 세포 항원을 표적으로 하고 ATTAC2는 면역 세포 항원을 표적으로 하였다.
종양 세포를 항-EpCAM ATTAC1 (항-CD3 VH 도메인 함유; 서열 번호: 166)의 농도를 증가시켜 표지하고 과잉의 ATTAC 성분을 세척에 의해 제거하였다. 건강한 기증자로부터의 PBMC (도 12A)를 항-CD8 ATTAC2 (항-CD3 VL 도메인 함유; 서열 번호: 170)의 농도를 증가시켜 표지하고, 과잉의 ATTAC 성분을 세척에 의해 제거하였다. ATTAC1 및 ATTAC2를 등몰 농도로 유지하는 대신에, ATTAC1 및 ATTAC2의 농도는 2 개의 ATTAC 성분 중 하나에 대한 T 세포 활성화의 치우침 (인터페론 감마에 대한 분석에 의해)이 있는지 여부를 확인하기 위하여 다른 몰 농도로 하였다. 종양 세포와 PBMC를 모두 각각의 ATTAC 성분으로 표지한 후, 세포를 37 ℃에서 밤새 공동 배양하였다.
데이터는 ATTAC1 및 ATTAC 2의 농도가 등몰 농도에서 증가할 때 강한 T 세포 활성화를 입증한다 (도 12A). 농도가 ATTAC1 또는 ATTAC2 중 어느 한 쪽으로 치우치면 T 세포 활성화 수준이 감소하며, 이는 T 세포 (PBMC 내)의 가장 강력한 활성화가 ATTAC1 및 ATTAC2의 등몰 농도에서 관찰됨을 시사한다. 도 12B는 등몰 농도의 ATTAC1 및 ATTAC2 (도 12A에서 점선으로 표시됨)가 증가함에 따라 T 세포 활성화가 증가하는 것이 사용된 ATTAC 성분 중 하나에 치우침이 없었으며 ATTAC1 및 ATTAC2 모두가 T 세포를 활성화하는데 똑같이 중요하다는 것을 나타낸다.
도 12C는 단독으로 또는 미처리된 표적 세포와 함께 배양된 PBMC에서 T 세포로부터의 인터페론 방출에 대한 대조 데이터를 나타낸다. 양성 대조군으로서, 도 12C는 배양된 표적 세포가 BiTE (서열 번호: 168)에 의해 표지되었을 때 PBMC에서 T 세포로부터 강력한 인터페론 감마 방출을 나타낸다.
실시예 10: ATTAC에 의한 T 세포 하위 세트의 선택적 활성화
FITC를 사용하는 모델 시스템을 이용하여 T 세포 하위 세트의 선택적 활성화를 또한 시험하였다.
종양 세포를 항-EpCAM ATTAC1 (항-CD3 VH 도메인 (서열 번호: 166) 함유)으로 표지하고, 과잉의 ATTAC 성분을 세척하여 제거하였다. 건강한 기증자의 PBMC는 CD4, CD8 또는 CD19에 대한 FITC-접합 항체로 표지하였으며, 과잉의 항체는 세척으로 제거하였다. PBMC를 항-FITC ATTAC2 (항-CD3 VL 도메인 (서열 번호: 165)를 함유함)로 추가로 표지하고, 과잉의 ATTAC 성분은 세척에 의해 제거하였다. 그 다음, PBMC를 1: 2의 PBMC 대 종양 세포의 비율로 종양 세포와 공동 배양하였다. ATTAC는 혼합된 세포에 첨가된 프로테아제와 함께 외인성 프로테아제 (엔테로키나제)를 첨가함으로써 단백질 분해적으로 활성화할 수 있었다. 공동 배양된 세포는 37 ℃에서 밤새 배양하였다.
이들 실험에서, FITC-표지된 CD19 세포는 CD19-발현 세포가 정상적으로 CD3를 발현하지 않기 때문에 음성 대조군이다. 따라서, 항-FITC ATTAC 성분을 CD19-양성 세포에 결합시키는 것은 ATTAC 성분 쌍으로부터 쌍을 이룬 항-CD3 VH/VL을 통한 활성화로 이어지지 않을 것이다.
배양 후, 공동 배양된 세포를 FACS 완충액 (PBS + 2 % 혈청)에서 세척하고, CD3 APC-Cy7, CD4 PE, CD8 APC 및 CD69 BV421에 의한 유세포 분석을 위해 표지하여 T 세포 활성화 수준을 확인하였다 (CD4 및 CD8 T 세포 하위 세트의 CD69 염색의 증가로 측정함). 과잉의 항체는 세척으로 제거하고, 세포는 유세포 분석으로 분석하였다. CD4 T 세포는 PBMC가 항-CD4 FITC 항체로 표지되었을 때 (미처리된 T 세포의 배경 활성화와 비교하여) 유의하게 활성화되었다 (도 13A). 이 경우, 항-CD3 VL 도메인을 함유하는 항-FITC ATTAC2는 CD4 T 세포에만 결합하고 T 세포의 이러한 하위 세트는 활성화되었다. 항-CD8 또는 항-CD19 FITC 항체로 표지된 PBMC는 CD4 T 세포가 이러한 항원을 발현하지 않기 때문에 CD4 T 세포의 유의한 활성화를 유발하지 않았다.
대조적으로, CD8 T 세포는 PBMC가 항-CD8 FITC 항체로 표지되었을 때 (미처리된 T 세포의 배경 활성화와 비교할 때) 유의하게 활성화되었다 (도 13B). 이 경우, 항-CD3 VL 도메인을 함유하는 항-FITC ATTAC2는 CD8 T 세포에만 결합하고 T 세포의 이러한 하위 세트는 활성화되었다. 항-CD4 또는 항-CD19 FITC 항체로 표지된 PBMC는 CD8 T 세포가 이러한 항원을 발현하지 않기 때문에 CD8 T 세포의 활성화를 유발하지 않았다.
이들 데이터는 T 세포의 더 많은 복합체 혼합물 내에서 T 세포의 특정 하위 세트를 활성화하는 ATTAC의 능력을 나타낸다. 도 13A 및 도 13B에 도시된 바와 같이, 동일한 표적 세포 및 동일한 PBMC를 사용하더라도, 상이한 ATTAC2 성분을 사용하여 면역 세포의 상이한 하위 세트가 활성화될 수 있다.
면역 세포의 특정 하위 세트의 선택적 활성화는 치료적으로 유용할 수 있다. 예를 들어, 세포 독성 T 세포만 활성화하는 ATTAC는 조절 T 세포와 같은 불필요한 T 세포의 활성화를 피할 수 있다. 또한, 종양-관련 프로테아제에 의한 절단을 필요로 하는 ATTAC를 사용하여 종양 미세 환경 내에서 면역 세포를 활성화시킬 수 있다. 이러한 방식에 있어서, ATTAC는 종양 미세 환경 내에서 면역 세포의 특정 하위 세트를 활성화하기 위한 특이성을 제공할 수 있다.
실시예 11: 서열 번호 169 및 170과 같은 항-CD8 ATTAC를 사용한 예언적 ATTAC 실험
말초 혈액 단핵 세포를 항-CD8 ATTAC 성분으로 표지하고, 과잉의 ATTAC 성분을 세척에 의해 제거한다. 항-CD8 ATTAC 성분은 항-CD3 활성화 도메인 (VL)의 절반을 함유한다. 불필요한 종양 세포주는 항-CD3 활성화 도메인 (VH) (서열 번호: 166)의 상응하는 절반을 함유하는 항-EpCAM ATTAC 성분으로 표지한다. 그 다음, ATTAC는 말초 혈액 단핵 세포 내의 CD8 T 세포에서 CD3를 특히 활성화할 수 있다. CD8 T 세포의 활성화는 IFN 감마 분비에 대한 ELISA에 의해 또는 CD69 및 CD38과 같은 활성화 마커에 대한 유세포 분석에 의해 분석될 수 있다.
실시예 12: 서열 번호 171과 같은 항-CD4 ATTAC를 사용한 예언적 ATTAC 실험
말초 혈액 단핵 세포를 항-CD4 ATTAC 성분으로 표지하고, 과잉의 ATTAC 성분을 세척에 의해 제거한다. 항-CD4 ATTAC 성분은 항-CD3 활성화 도메인 (VL) (서열 번호: 166)의 절반을 함유한다. 불필요한 종양 세포주는 항-CD3 활성화 도메인 (VH)의 상응하는 절반을 함유하는 항-EpCAM ATTAC 성분으로 표지한다. 그 다음, ATTAC는 말초 혈액 단핵 세포 내의 CD4 T 세포에서 CD3를 특히 활성화할 수 있다. CD4 T 세포의 활성화는 IFN 감마 분비에 대한 ELISA에 의해 또는 CD69 및 CD38과 같은 활성화 마커에 대한 유세포 분석에 의해 분석될 수 있다.
실시예 13: 구현예
다음과 같은 번호가 매겨진 항목은 본 명세서에서 기술된 구현예를 제공하지만, 본 명세서에서 인용된 구현예에 제한되지 않는다.
항목 1. 환자의 암을 치료하기 위한 약제로서,
a. i. 암을 표적화 할 수 있는 표적화 잔기, 및 ii. 제 2 면역 세포 관여 도메인에 결합할 때 면역 관여 활성이 가능한 제 1 면역 세포 관여 도메인으로서, 상기 제 2 면역 세포 관여 도메인이 상기 제 1 성분의 일부가 아닌, 제 1 면역 세포 관여 도메인; 을 포함한 표적화된 면역 세포 결합제를 포함하는 제 1 성분;
b. i. 면역 세포를 선택적으로 표적화 할 수 있는 면역 세포 선택 잔기, 및 ii. 제 1 면역 세포 관여 도메인에 결합할 때 면역 세포 관여 활성이 가능한 제 2 면역 세포 관여 도메인(여기서, 제1 및 제2 면역 세포 관여 도메인은 그들 중 어느 것도 불활성 결합 파트너에 결합되지 않을 경우 결합할 수 있다);을 포함한 선택적인 면역 세포 결합제를 포함하는 제 2 성분을 포함하며,
상기 제 1 면역 세포 관여 도메인 또는 제 2 면역 세포 관여 도메인 중 적어도 하나가 불활성 결합 파트너에 결합되며, 이에 따라 상기 제 1 및 제 2 면역 세포 관여 도메인은 불활성 결합 파트너가 제거되지 않는 한 서로 결합되지 않으며;
상기 약제는 불활성 결합 파트너 및 이것이 결합하는 면역 세포 관여 도메인을 분리하는 절단 부위를 추가로 포함하며,
상기 절단 부위는 1. 암세포에 의해 발현된 효소에 의해 절단되거나; 2. 암세포 내부에서 pH-민감성 절단 반응을 통해 절단되거나; 3. 보체-의존적 절단 반응에 의해 절단되거나; 또는 4. 상기 약제 내의 표적화 잔기와 동일하거나 상이한 표적화 잔기에 의해 암세포에 공동 국소화된 프로테아제에 의해 절단되는,
약제.
항목 2. 항목 1에 있어서, 제 1 성분은 제 2 성분에 공유 결합되지 않는 약제.
항목 3. 항목 1에 있어서, 제 1 성분이 제 2 성분에 공유 결합되는 약제.
항목 4. 항목 1 내지 3 중 어느 한 항목에 있어서, 면역 세포 관여 도메인이 서로 결합될 때 면역 세포의 표면에서 발현된 항원에 결합할 수 있는 약제.
항목 5. 항목 1 내지 4 중 어느 한 항목에 있어서, 면역 세포를 선택적으로 표적화 할 수 있는 면역 세포 선택 잔기는 T-세포, 대식세포, 자연 살상 세포, 호중구, 호산구, 호염기구, γδ T-세포, 자연 살상 T-세포 (NKT-세포) 또는 조작된 면역 세포를 선택적으로 표적화 하는 약제.
항목 6. 항목 5에 있어서, 면역 세포를 선택적으로 표적화 할 수 있는 면역 세포 선택 잔기가 T 세포를 선택적으로 표적화 하는 약제.
항목 7. 항목 6에 있어서, T 세포가 세포 독성 T 세포인 약제.
항목 8. 항목 7에 있어서, 세포 독성 T 세포가 CD8+ T 세포인 약제.
항목 9. 항목 6에 있어서, T 세포가 헬퍼 T 세포인 약제.
항목 10. 항목 9에 있어서, 헬퍼 T 세포가 CD4+ T 세포인 약제.
항목 11. 항목 6 내지 10 중 어느 한 항목에 있어서, 면역 세포 선택 잔기가 CD8, CD4 또는 CXCR3을 표적으로 하는 약제.
항목 12. 항목 6 내지 11 중 어느 한 항목에 있어서, 면역 세포 선택 잔기가 조절 T 세포에 특이적으로 결합하지 않는 약제.
항목 13. 항목 6 내지 12 중 어느 한 항목에 있어서, 면역 세포 선택 잔기가 TH17 세포에 특이적으로 결합하지 않는 약제.
항목 14. 항목 6 내지 13 중 어느 한 항목에 있어서, 면역 세포 관여 도메인이 서로 결합될 때 CD3에 결합할 수 있는 약제.
항목 15. 항목 6 내지 13 중 어느 한 항목에 있어서, 면역 세포 관여 도메인이 서로 결합될 때 TCR에 결합할 수 있는 약제.
항목 16. 항목 5에 있어서, 면역 세포를 선택적으로 표적화 할 수 있는 면역 세포 선택 잔기가 자연 살상 세포를 선택적으로 표적화 하는 약제.
항목 17. 항목 16에 있어서, 면역 세포 선택 잔기가 CD2 또는 CD56을 표적으로 하는 약제.
항목 18. 항목 16 또는 17에 있어서, 면역 세포 관여 도메인이 서로 결합될 때 NKG2D, CD16, NKp30, NKp44, NKp46 또는 DNAM에 결합할 수 있는 약제.
항목 19. 항목 5에 있어서, 면역 세포를 선택적으로 표적화 할 수 있는 면역 세포 선택 잔기가 대식세포를 선택적으로 표적화 하는 약제.
항목 20. 항목 19에 있어서, 면역 세포 선택 잔기가 CD14, CD11b 또는 CD40을 표적으로 하는 약제.
항목 21. 항목 19 또는 20에 있어서, 면역 세포 관여 도메인은 서로 결합될 때 CD89 (Fc 알파 수용체 1), CD64 (Fc 감마 수용체 1), CD32 (Fc 감마 수용체 2A) 또는 CD16a (Fc 감마 수용체 3A)에 결합할 수 있는 약제.
항목 22. 항목 5에 있어서, 면역 세포를 선택적으로 표적화 할 수 있는 면역 세포 선택 잔기가 호중구를 선택적으로 표적화 하는 약제.
항목 23. 항목 22에 있어서, 면역 세포 선택 잔기가 CD15를 표적으로 하는 약제.
항목 24. 항목 22 또는 23에 있어서, 면역 세포 관여 도메인이 서로 결합될 때 CD89 (FcαR1), FcγRI (CD64), FcγRIIA (CD32), FcγRIIIA, (CD16a), CD11b (CR3, αMβ2), TLR2, TLR4, CLEC7A (데틴1), 포르밀 펩티드 수용체 1 (FPR1), 포르밀 펩티드 수용체 2 (FPR2) 또는 포르밀 펩티드 수용체 3 (FPR3)에 결합할 수 있는 약제.
항목 25. 항목 5에 있어서, 면역 세포를 선택적으로 표적화 할 수 있는 면역 세포 선택 잔기가 호산구를 선택적으로 표적화 하는 약제.
항목 26. 항목 25에 있어서, 면역 세포 선택 잔기가 CD193, Siglec-8 또는 EMR1을 표적으로 하는 약제.
항목 27. 항목 25 또는 26에 있어서, 면역 세포 관여 도메인이 서로 결합될 때 CD89 (Fc 알파 수용체 1), FcεRI, FcγRI (CD64), FcγRIIA (CD32), FcγRIIIB (CD16b) 또는 TLR4에 결합할 수 있는 약제.
항목 28. 항목 5에 있어서, 면역 세포를 선택적으로 표적화 할 수 있는 면역 세포 선택 잔기가 호염기구를 선택적으로 표적화 하는 약제.
항목 29. 항목 28에 있어서, 면역 세포 선택 잔기가 2D7, CD203c 또는 FcεRIα를 표적으로 하는 약제.
항목 30. 항목 28 또는 29에 있어서, 면역 세포 관여 도메인이 서로 결합될 때 CD89 (Fc 알파 수용체 1) 또는 FcεRI에 결합할 수 있는 약제.
항목 31. 항목 5에 있어서, 면역 세포를 선택적으로 표적화 할 수 있는 면역 세포 선택 잔기가 γδT 세포를 선택적으로 표적화 하는 약제.
항목 32. 항목 31에 있어서, 면역 세포 선택 잔기가 γδ TCR을 표적으로 하는 약제.
항목 33. 항목 31 또는 32에 있어서, 면역 세포 관여 도메인은 서로 결합될 때 γδ TCR, NKG2D, CD3 복합체 (CD3ε, CD3γ, CD3δ, CD3ζ, CD3η), 4-1BB, DNAM-1 또는 TLR (TLR2, TLR6)에 결합할 수 있는 약제.
항목 34. 항목 5에 있어서, 면역 세포를 선택적으로 표적화 할 수 있는 면역 세포 선택 잔기가 자연 살상 T 세포를 선택적으로 표적화 하는 약제.
항목 35. 항목 34에 있어서, 면역 세포 선택 잔기가 Vα24 또는 CD56을 표적으로 하는 약제.
항목 36. 항목 34 또는 35에 있어서, 면역 세포 관여 도메인이 서로 결합될 때 αβTCR, NKG2D, CD3 복합체 (CD3ε, CD3γ, CD3δ, CD3ζ, CD3η), 4-1BB 또는 IL-12R에 결합할 수 있는 약제.
항목 37. 항목 5에 있어서, 면역 세포를 선택적으로 표적화 할 수 있는 면역 세포 선택 잔기가 조작된 면역 세포를 선택적으로 표적화 하는 약제.
항목 38. 항목 37에 있어서, 조작된 면역 세포가 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포, 자연 살상 세포, 자연 살상 T 세포 또는 γδ T 세포인 약제.
항목 39. 항목 37 또는 38에 있어서, 면역 세포 선택 잔기가 면역 세포상에서 발현되는 CAR 또는 마커를 표적으로 하는 약제.
항목 40. 항목 37 내지 39 중 어느 한 항목에 있어서, 면역 선택 잔기가 LNGFR 또는 CD20을 표적으로 하는 약제.
항목 41. 항목 37 내지 40 중 어느 한 항목에 있어서, 면역 세포 관여 도메인은 서로 결합될 때 조작된 면역 세포에 의해 발현된 항원에 결합할 수 있는 약제.
항목 42. 항목 37 내지 41 중 어느 한 항목에 있어서, 조작된 면역 세포에 의해 발현되는 항원이 CD3인 약제.
항목 43. 항목 1 내지 42 중 어느 한 항목에 있어서, 면역 세포 선택 잔기가 항체 또는 그의 항원-특이적 결합 단편을 포함하는 약제.
항목 44. 항목 43에 있어서, 항체 또는 그의 항원-특이적 결합 단편이 T 세포상에서 항원에 특이적으로 결합하는 약제.
항목 45. 항목 43에 있어서, 항체 또는 그의 항원-특이적 결합 단편이 세포 독성 또는 헬퍼 T 세포상에서 항원에 특이적으로 결합하는 약제.
항목 46. 항목 43에 있어서, 항체 또는 그의 항원-특이적 결합 단편이 대식세포상에서 항원에 특이적으로 결합하는 약제.
항목 47. 항목 43에 있어서, 항체 또는 그의 항원-특이적 결합 단편이 자연 살상 세포상에서 항원에 특이적으로 결합하는 약제.
항목 48. 항목 43에 있어서, 항체 또는 그의 항원-특이적 결합 단편이 호중구상에서 항원에 특이적으로 결합하는 약제.
항목 49. 항목 43에 있어서, 항체 또는 그의 항원-특이적 결합 단편이 호산구상에서 항원에 특이적으로 결합하는 약제.
항목 50. 항목 43에 있어서, 항체 또는 그의 항원-특이적 결합 단편이 γδ T 세포상에서 항원에 특이적으로 결합하는 약제.
항목 51. 항목 43에 있어서, 항체 또는 그의 항원-특이적 결합 단편이 자연 살상 T 세포상에서 항원에 특이적으로 결합하는 약제.
항목 52. 항목 43에 있어서, 항체 또는 그의 항원-특이적 결합 단편이 조작된 면역 세포상에서 항원에 특이적으로 결합하는 약제.
항목 53. 항목 43에 있어서, 조작된 면역 세포가 CAR T 세포, 자연 살상 세포, 자연 살상 T 세포 또는 γδ T 세포인 약제.
항목 54. 항목 1 내지 42 중 어느 한 항목에 있어서, 면역 선택 잔기가 앱타머 (aptamer)를 포함하는 약제.
항목 55. 항목 54에 있어서, 앱타머가 T 세포상에서 항원에 특이적으로 결합하는 약제.
항목 56. 항목 55에 있어서, T 세포가 세포 독성 또는 헬퍼 T 세포인 약제.
항목 57. 항목 54에 있어서, 앱타머가 대식세포상에서 항원에 특이적으로 결합하는 약제.
항목 58. 항목 54에 있어서, 앱타머가 자연 살상 세포상에서 항원에 특이적으로 결합하는 약제.
항목 59. 항목 54에 있어서, 앱타머가 호중구상에서 항원에 특이적으로 결합하는 약제.
항목 60. 항목 54에 있어서, 앱타머가 호산구상에서 항원에 특이적으로 결합하는 약제.
항목 61. 항목 54에 있어서, 앱타머가 γδ T 세포상에서 항원에 특이적으로 결합하는 약제.
항목 62. 항목 54에 있어서, 앱타머가 자연 살상 T 세포상에서 항원에 특이적으로 결합하는 약제.
항목 63. 항목 54에 있어서, 앱타머가 조작된 면역 세포상에서 항원에 특이적으로 결합하는 약제.
항목 64. 항목 54에 있어서, 조작된 면역 세포가 CAR T 세포, 자연 살상 세포, 자연 살상 T 세포 또는 γδ T 세포인 약제.
항목 65. 항목 54 내지 64 중 어느 한 항목에 있어서, 앱타머가 DNA를 포함하는 약제.
항목 66. 항목 54 내지 64 중 어느 한 항목에 있어서, 앱타머가 RNA를 포함하는 약제.
항목 67. 항목 65 또는 66에 있어서, 앱타머가 단일 가닥인 약제.
항목 68. 항목 54 내지 67 중 어느 한 항목에 있어서, 앱타머가 무작위 후보 라이브러리로부터 선택된 선택적인 면역 세포 결합-특이적 앱타머인 약제.
항목 69. 항목 1 내지 68 중 어느 한 항목에 있어서, 표적화 잔기가 항체 또는 그의 항원-특이적 결합 단편인 약제.
항목 70. 항목 69에 있어서, 항체 또는 그의 항원-특이적 결합 단편이 암 항원에 특이적으로 결합하는 약제.
항목 71. 항목 1 내지 68 중 어느 한 항목에 있어서, 표적화 잔기가 앱타머인 약제.
항목 72. 항목 71에 있어서, 앱타머가 암 항원에 특이적으로 결합하는 약제.
항목 73. 항목 71 또는 72에 있어서, 앱타머가 DNA를 포함하는 약제.
항목 74. 항목 71 또는 72에 있어서, 앱타머가 RNA를 포함하는 약제.
항목 75. 항목 73 또는 74에 있어서, 앱타머가 단일 가닥인 약제.
항목 76. 항목 71 내지 75 중 어느 한 항목에 있어서, 앱타머가 무작위 후보 라이브러리로부터 선택된 표적 세포-특이적 앱타머인 약제.
항목 77. 항목 71 내지 76 중 어느 한 항목에 있어서, 앱타머가 항-EGFR 앱타머인 약제.
항목 78. 항목 77에 있어서, 항-EGFR 앱타머가 서열 번호: 95 내지 164 중 어느 하나를 포함하는 약제.
항목 79. 항목 71 내지 78 중 어느 한 항목에 있어서, 앱타머가 1 피코몰 내지 500 나노몰의 Kd로 암 세포상에서 암에 결합하는 약제.
항목 80. 항목 71 내지 79 중 어느 한 항목에 있어서, 앱타머가 1 피코몰 내지 100 나노몰의 Kd로 암에 결합하는 약제.
항목 81. 항목 1 내지 68 중 어느 한 항목에 있어서, 표적화 잔기가 IL-2, IL-4, IL-6, α-MSH, 트랜스페린, 엽산, EGF, TGF, PD1, IL-13, 줄기 세포 인자, 인슐린-유사 성장 인자 (IGF) 또는 CD40, TGF, PD1, IL-13, 줄기 세포 인자, 인슐린-유사 성장 인자 (IGF) 또는 CD40을 포함하는 약제.
항목 82. 항목 1 내지 68 중 어느 한 항목에 있어서, 표적화 잔기가 IL-2, IL-4, IL-6, α-MSH, 트랜스페린, 엽산, EGF의 전장 서열을 포함하는 약제.
항목 83. 항목 1 내지 68 중 어느 한 항목에 있어서, 표적화 잔기가 IL-2, IL-4, IL-6, α-MSH, 트랜스페린, 엽산, EGF, TGF, PD1, IL-13, 줄기 세포 인자, 인슐린-유사 성장 인자 (IGF) 또는 CD40의 절단된 형태, 유사체, 변이체 또는 유도체를 포함하는 약제.
항목 84. 항목 1 내지 68 중 어느 한 항목에 있어서, 표적화 잔기가 IL-2 수용체, IL-4, IL-6, 멜라닌 세포 자극 호르몬 수용체 (MSH 수용체), 트랜스페린 수용체 (TR), 엽산 수용체 1 (FOLR), 엽산 수산화 효소 (FOLH1), EGF 수용체, PD-L1, PD-L2, IL-13R, CXCR4, IGFR 또는 CD40L를 포함하는 암상의 표적에 결합하는 약제.
항목 85. 항목 1 내지 84 중 어느 한 항목에 있어서, 하나의 면역 세포 관여 도메인이 VH 도메인을 포함하고 다른 면역 세포 관여 도메인이 VL 도메인을 포함하는 약제.
항목 86. 항목 1 내지 85 중 어느 한 항목에 있어서, 제 1 면역 세포 결합 파트너가 불활성 결합 파트너에 결합되고, 절단 부위에 의해 불활성 결합 파트너로부터 분리되는 약제.
항목 87. 항목 1 내지 86 중 어느 한 항목에 있어서, 제 2 면역 세포 결합 파트너가 불활성 결합 파트너에 결합되고, 절단 부위에 의해 불활성 결합 파트너로부터 분리되는 약제.
항목 88. 항목 1 내지 87 중 어느 한 항목에 있어서,
a. 제 1 면역 세포 결합 파트너가 불활성 결합 파트너에 결합되고, 제 1 절단 부위에 의해 분리되며,
b. 제 2 면역 세포 결합 파트너는 불활성 결합 파트너에 결합되고, 제 2 절단 부위에 의해 분리되는 약제.
항목 89. 항목 88에 있어서, 제 1 절단 부위 및 제 2 절단 부위가 동일한 절단 부위인 약제.
항목 90. 항목 88에 있어서, 제 1 절단 부위 및 제 2 절단 부위가 상이한 절단 부위인 약제.
항목 91. 항목 1 내지 90 중 어느 한 항목에 있어서, 적어도 하나의 절단 부위가 프로테아제 절단 부위인 약제.
항목 92. 항목 1 내지 91 중 어느 한 항목에 있어서, 암 세포에 의해 발현되는 하나 이상의 효소가 프로테아제인 약제.
항목 93. 항목 1 내지 92 중 어느 한 항목에 있어서, 적어도 하나의 불활성 결합 파트너가 면역 세포 관여 도메인에 특이적으로 결합하는 약제.
항목 94. 항목 93에 있어서, 하나 이상의 불활성 결합 파트너가 VH 또는 VL 도메인인 약제.
항목 95. 항목 94에 있어서,
a. 면역 세포 관여 도메인이 VH 도메인일 때 불활성 결합 파트너는 VL 도메인이고,
b. 면역 세포 관여 도메인이 VL 도메인일 때 불활성 결합 파트너는 VH 도메인인 약제.
항목 96. 항목 3에 있어서, 제 1 성분이 절단 부위를 포함하는 링커에 의해 제 2 성분에 공유 결합되는 약제.
항목 97. 항목 96에 있어서, 절단 부위가 프로테아제 절단 부위인 약제.
항목 98. 항목 97에 있어서, 프로테아제 절단 부위가 혈액에서 절단될 수 있는 약제.
항목 99. 항목 98에 있어서, 프로테아제 절단 부위가 트롬빈, 호중구 엘라스타제 또는 푸린에 대한 절단 부위인 약제.
항목 100. 항목 97에 있어서, 프로테아제 절단 부위가 종양-관련 프로테아제에 의해 절단될 수 있는 약제.
항목 101. 항목 100에 있어서, 종양-관련 프로테아제 절단 부위가 서열 번호: 1 내지 84 중 어느 하나를 포함하는 약제.
항목 102. 선택적인 면역 세포 결합제를 포함하는 환자의 암을 치료하기 위한 약제로서,
a. i. 암을 표적화 할 수 있는 표적화 잔기; ii. 제 2 면역 세포 관여 도메인에 결합할 때 면역 관여 활성이 가능한 제 1 면역 세포 관여 도메인을 포함한 표적화된 면역 세포 결합제를 포함하는 제 1 성분 - 상기 제 2 면역 세포 관여 도메인은 제 1 성분의 일부가 아님 -; 및
b. 제 1 면역 세포 관여 도메인 및 불활성 결합 파트너를 분리하는 절단 부위를 포함하며,
상기 절단 부위는 i. 암세포에 의해 발현된 효소에 의해 절단되거나; ⅱ. 암세포 내부에서 pH-민감성 절단 반응을 통해 절단되거나; ⅲ. 보체-의존적 절단 반응에 의해 절단되거나; 또는 iv. 상기 약제의 표적화 잔기와 동일하거나 상이한 표적화 잔기에 의해 암세포에 공동 국소화된 프로테아제에 의해 절단되며,
상기 절단 부위의 절단은 불활성 결합 파트너의 손실을 유발하고 상기 약제의 일부가 아닌 제 2 면역 세포 관여 도메인에 결합하게 할 수 있는 약제.
항목 103. 항목 1 내지 101 중 어느 하나의 약제의 제 1 및 제 2 성분을 암호화하는 핵산 분자의 세트.
항목 104. 항목 102의 선택적 면역 세포 결합제를 암호화하는 핵산 분자.
항목 105. 항목 1 내지 101 중 어느 하나의 약제를 투여하는 것을 포함하는 환자의 암을 치료하기 위한 방법.
항목 106. 항목 105에 있어서, 환자가 종양에서 조절 T 세포를 갖는 경우, 선택적인 면역 세포 결합제가 조절 면역 세포에 존재하는 마커 (CD4 및 CD25를 포함하지만, 이에 제한되지 않음)를 표적으로 하지 않는 방법.
항목 107. 항목 105 또는 106에 있어서, 선택적인 면역 세포 결합제가 TH17 세포에 존재하는 마커를 표적으로 하지 않는 방법.
항목 108. 항목 105 내지 107 중 어느 한 항목에 있어서, 선택적인 면역 세포 결합제가 용해를 위해 종양 세포를 표적화 하는 T 세포를 활성화시키는 방법.
항목 109. 항목 105 내지 108 중 어느 한 항목에 있어서, 환자가 종양에 조절 T 세포를 갖는 경우, 면역 세포 선택 잔기는 CD8에 특이적으로 결합함으로써 CD8+ T 세포를 표적화 하는 방법.
항목 110. 항목 105 내지 108 중 어느 한 항목에 있어서, 환자가 종양에서 조절 T 세포를 갖는 경우, 면역 세포 선택 잔기는 CXCR3에 특이적으로 결합함으로써 CD8+ T 세포 및 CD4+ T 세포를 표적으로 하는 방법.
항목 111. 항목 105 내지 110 중 어느 한 항목에 있어서, 암이 유방암, 난소암, 자궁 내막암, 자궁 경부암, 방광암, 신장암, 흑색종, 폐암, 전립선암, 고환암, 갑상선암, 뇌암, 식도암, 위암, 췌장암, 결장 직장암, 간암, 백혈병, 골수종, 비-호지킨 (non-Hodgkin) 림프종, 호지킨 림프종, 급성 골수성 백혈병, 급성 림프모구 백혈병, 만성 림프모구 백혈병, 림프 증식성 장애, 골수형성 이상 장애, 골수 증식성 질환 또는 전암성 질환 중 어느 하나인 방법.
항목 112. 항목 1 내지 101 중 어느 하나의 약제를 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 암에 대한 환자의 면역 반응을 표적화 하는 방법.
균등물
전술 한 명세서는 당업자가 구현예들을 실시할 수 있도록 충분한 것으로 고려된다. 전술 한 설명 및 실시예들은 특정 구현예들을 상세히 설명하며 본 발명자들에 의해 고려된 최상의 방식을 기재하고 있다. 그러나, 전술 한 내용이 명세서에 아무리 상세하게 기재되더라도, 구현예는 다양한 방식으로 실행될 수 있으며 첨부된 특허 청구 범위 및 그의 임의의 균등물에 따라서 해석되어야 한다는 것을 이해할 것이다.
본 원에 사용된 바와 같은 용어 “약”은 명시적으로 나타냈는지 여부에 관계없이, 예를 들어, 정수, 분수 및 백분율을 포함하는 수치를 의미한다. 용어 “약”은 일반적으로 당업자가 인용된 값과 동등 (예를 들어, 동일한 기능 또는 결과를 가짐)하다고 간주할 수 있는 수치 범위 (예를 들어, 인용된 범위의 +/- 5 내지 10 %)를 의미한다. “적어도” 및 “약”과 같은 용어가 수치 또는 범위의 목록 앞에 있으면 해당 용어들은 목록에서 제공된 모든 값 또는 범위를 조절한다. 일부 경우에 있어서, “약”이라는 용어는 가장 가까운 유효 숫자로 반올림한 수치를 포함할 수 있다.
SEQUENCE LISTING <110> THE GENERAL HOSPITAL CORPORATION COBBOLD, Mark MILLAR, David <120> ANTIBODY TUMOR-TARGETING ASSEMBLY COMPLEXES <130> 01131-7001-00PCT <140> PCT/US2019/040336 <141> 2019-07-02 <150> US 62/693,125 <151> 2018-07-02 <160> 172 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: ADAM28 cleavage site <400> 1 Lys Pro Ala Lys Phe Phe Arg Leu 1 5 <210> 2 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: ADAM28 cleavage site <400> 2 Asp Pro Ala Lys Phe Phe Arg Leu 1 5 <210> 3 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: ADAM28 cleavage site <400> 3 Lys Pro Met Lys Phe Phe Arg Leu 1 5 <210> 4 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: ADAM28 cleavage site <400> 4 Leu Pro Ala Lys Phe Phe Arg Leu 1 5 <210> 5 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: ADAM28 cleavage site <400> 5 Leu Pro Met Lys Phe Phe Arg Leu 1 5 <210> 6 <211> 8 <212> PRT 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Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: ADAM28 cleavage site <400> 13 Lys Met Ala Met Phe Phe Ile Met 1 5 <210> 14 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: ADAM28 cleavage site <400> 14 Lys Pro Ala Met Phe Phe Ile Met 1 5 <210> 15 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: ADAM28 cleavage site <400> 15 Leu Pro Ala Met Phe Phe Arg Leu 1 5 <210> 16 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: ADAM28 cleavage site <400> 16 Leu Pro Met Met Phe Phe Arg Leu 1 5 <210> 17 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: ADAM28 cleavage site <400> 17 Leu Met Ala Met Phe Phe Arg Leu 1 5 <210> 18 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: ADAM28 cleavage site <400> 18 Leu Met Ala Met Phe Phe Ile Met 1 5 <210> 19 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: ADAM28 cleavage site <400> 19 Leu Pro Ala Met Phe Phe Ile Met 1 5 <210> 20 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: ADAM28 cleavage site <400> 20 Leu Pro Ala Met Phe Phe Tyr Met 1 5 <210> 21 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: ADAM28 cleavage site <400> 21 Lys Pro Met Met Phe Phe Arg Leu 1 5 <210> 22 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: ADAM28 cleavage site <400> 22 Lys Pro Ala Lys Phe Phe Tyr Met 1 5 <210> 23 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: ADAM28 cleavage site <400> 23 Lys Pro Ala Lys Phe Phe Ile Met 1 5 <210> 24 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: ADAM28 cleavage site <400> 24 Ile Pro Met Lys Phe Phe Arg Leu 1 5 <210> 25 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: ADAM28 cleavage site <400> 25 Ile Pro Ala Met Phe Phe Arg Leu 1 5 <210> 26 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: ADAM28 cleavage site <400> 26 Ile Pro Met Met Phe Phe Arg Leu 1 5 <210> 27 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: ADAM28 cleavage site <400> 27 Ile Met Ala Met Phe Phe Arg Leu 1 5 <210> 28 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: ADAM28 cleavage site <400> 28 Ile Met Ala Met Phe Phe Ile Met 1 5 <210> 29 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: ADAM28 cleavage site <400> 29 Ile Pro Ala Met Phe Phe Ile Met 1 5 <210> 30 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: ADAM28 cleavage site <400> 30 Ile Pro Ala Met Phe Phe Tyr Met 1 5 <210> 31 <211> 2 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: cathepsin B cleavage site <400> 31 Phe Arg 1 <210> 32 <211> 2 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: cathepsin B cleavage site <400> 32 Phe Lys 1 <210> 33 <211> 2 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: cathepsin B cleavage site <400> 33 Val Ala 1 <210> 34 <211> 2 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: cathepsin B cleavage site <400> 34 Val Arg 1 <210> 35 <211> 1 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: cathepsin B cleavage site <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> citrulline <400> 35 Val 1 <210> 36 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: cathepsin B cleavage site <400> 36 His Leu Val Glu Ala Leu Tyr Leu 1 5 <210> 37 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: cathepsin B cleavage site <400> 37 Ser Leu Leu Lys Ser Arg Met Val Pro Asn Phe Asn 1 5 10 <210> 38 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: cathepsin B cleavage site <400> 38 Ser Leu Leu Ile Ala Arg Arg Met Pro Asn Phe Asn 1 5 10 <210> 39 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: cathepsin B cleavage site <400> 39 Lys Lys Phe Ala 1 <210> 40 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: cathepsin B cleavage site <400> 40 Ala Phe Lys Lys 1 <210> 41 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 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<220> <223> Synthetic: MMP11 cleavage site <400> 62 Ala Ala Gly Ala Met Phe Leu Glu 1 5 <210> 63 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: MMP13 cleavage site <400> 63 Gly Pro Gln Gly Leu Ala Gly Gln Arg Gly Ile Val 1 5 10 <210> 64 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: MMP14 cleavage site <400> 64 Pro Arg His Leu Arg 1 5 <210> 65 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: MMP14 cleavage site <400> 65 Pro Gln Gly Leu Leu Gly Ala Pro Gly Ile Leu Gly 1 5 10 <210> 66 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: MMP14 cleavage site <400> 66 Pro Arg Ser Ala Lys Glu Leu Arg 1 5 <210> 67 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: PSA / KLK3 <400> 67 His Ser Ser Lys Leu Gln 1 5 <210> 68 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: PSA / KLK3 <400> 68 Ser Ser Lys Leu Gln 1 5 <210> 69 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: KLK4 <400> 69 Arg Gln Gln Arg 1 <210> 70 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: TMPRSS2 <400> 70 Gly Gly Arg 1 <210> 71 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Legumain <400> 71 Ala Ala Asn 1 <210> 72 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: ST14 (Matriptase) <400> 72 Gln Ala Arg 1 <210> 73 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: C1s cleavage site <400> 73 Tyr Leu Gly Arg Ser Tyr Lys Val 1 5 <210> 74 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: C1s cleavage site <220> <221> misc_feature <222> (6)..(6) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 74 Met Gln Leu Gly Arg Xaa 1 5 <210> 75 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: MASP2 cleavage site <400> 75 Ser Leu Gly Arg Lys Ile Gln Ile 1 5 <210> 76 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: C2a and Bb cleavage site <400> 76 Gly Leu Ala Arg Ser Asn Leu Asp Glu 1 5 <210> 77 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: uPa cleavage site <400> 77 Thr Tyr Ser Arg Ser Arg Tyr Leu 1 5 <210> 78 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: uPa cleavage site <400> 78 Lys Lys Ser Pro Gly Arg Val Val Gly Gly Ser Val 1 5 10 <210> 79 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: uPa cleavage site <400> 79 Asn Ser Gly Arg Ala Val Thr Tyr 1 5 <210> 80 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: uPa cleavage site <400> 80 Ala Phe Lys 1 <210> 81 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: tissue-type plasminogen activator (tPA) <400> 81 Gly Gly Ser Gly Gln Arg Gly Arg Lys Ala Leu Glu 1 5 10 <210> 82 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: ADAM10 <400> 82 Pro Arg Tyr Glu Ala Tyr Lys Met Gly Lys 1 5 10 <210> 83 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: ADAM12 <400> 83 Leu Ala Gln Ala Phe 1 5 <210> 84 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: ADAM17 <400> 84 Glu His Ala Asp Leu Leu Ala Val Val Ala Lys 1 5 10 <210> 85 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: flexible amino acid linker (may be presented in repeating fashion) <400> 85 Gly Gly Gly Gly Ser 1 5 <210> 86 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: flexible amino acid linker (may be presented in repeating fashion) <400> 86 Gly Gly Gly Ser 1 <210> 87 <211> 2 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: flexible amino acid linker (may be presented in repeating fashion) <400> 87 Gly Ser 1 <210> 88 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: flexible amino acid linker (may be presented in repeating fashion) <400> 88 Gly Ser Gly Gly Ser 1 5 <210> 89 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: flexible amino acid linker (may be presented in repeating fashion) <400> 89 Gly Gly Ser Gly 1 <210> 90 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: flexible amino acid linker (may be presented in repeating fashion) <400> 90 Gly Gly Ser Gly Gly 1 5 <210> 91 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: flexible amino acid linker (may be presented in repeating fashion) <400> 91 Gly Ser Gly Ser Gly 1 5 <210> 92 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: flexible amino acid linker (may be presented in repeating fashion) <400> 92 Gly Ser Gly Gly Gly 1 5 <210> 93 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: flexible amino acid linker (may be presented in repeating fashion) <400> 93 Gly Gly Gly Ser Gly 1 5 <210> 94 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: flexible amino acid linker (may be presented in repeating fashion) <400> 94 Gly Ser Ser Ser Gly 1 5 <210> 95 <211> 51 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Anti-EGFR aptamer (tight binder with Kd=2.4 nM) <400> 95 ugccgcuaua augcacggau uuaaucgccg uagaaaagca ugucaaagcc g 51 <210> 96 <211> 51 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Anti-EGFR aptamer <400> 96 uggcgcuaaa uagcacggaa auaaucgccg uagaaaagca ugucaaagcc g 51 <210> 97 <211> 51 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Anti-EGFR aptamer <400> 97 ugcuaguaua ucgcacggau uuaaucgccg uagaaaagca ugucaaagcc g 51 <210> 98 <211> 51 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Anti-EGFR aptamer <400> 98 ugccgccaua ucacacggau uuaaucgccg uagaaaagca ugucaaagcc g 51 <210> 99 <211> 51 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Anti-EGFR aptamer <400> 99 uuccgcugua uaacacggac uuaaucgccg uaguaaagca ugucaaagcc g 51 <210> 100 <211> 51 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Anti-EGFR aptamer <400> 100 ugucgcucua uugcacggau uuaaucgccg uagaaaagca ugucaaagcc g 51 <210> 101 <211> 51 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Anti-EGFR aptamer <400> 101 ugcugcuuua ucccacauau uuuuuccccu cauaacaaua uuucuccccc c 51 <210> 102 <211> 51 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Anti-EGFR aptamer <220> <221> misc_feature <222> (4)..(4) <223> n is a, c, g, or u <220> <221> misc_feature <222> (15)..(15) <223> n is a, c, g, or u <220> <221> misc_feature <222> (45)..(45) <223> n is a, c, g, or u <220> <221> misc_feature <222> (47)..(47) <223> n is a, c, g, or u <400> 102 ugcngcuaua ucgcncguau uuaaucgccg uagaaaagca ugucnangcc g 51 <210> 103 <211> 51 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Anti-EGFR aptamer <400> 103 ugcaaagaaa acgcacguau uuaaucgccg uaguaaagca ugucaaagcc g 51 <210> 104 <211> 53 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Anti-EGFR aptamer <400> 104 ugcaucacua ucgaaccuau uuaauccacc aaaauaauug caaguccaua cuc 53 <210> 105 <211> 51 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Anti-EGFR aptamer <220> <221> misc_feature <222> (5)..(6) <223> n is a, c, g, or u <220> <221> misc_feature <222> (17)..(17) <223> n is a, c, g, or u <220> <221> misc_feature <222> (48)..(48) <223> n is a, c, g, or u <400> 105 ugccnnaaua acacacnuau auaaucgccg uacaaaauca ugucaaancc g 51 <210> 106 <211> 51 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Anti-EGFR aptamer <400> 106 ugcagcugua uugcacguau uuaaucgccg uagaaaagca ugucaaagcc g 51 <210> 107 <211> 50 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Anti-EGFR aptamer <400> 107 uuccgauaau cccgcguacu aaaucaccau agucaacaau uuccaaccuc 50 <210> 108 <211> 50 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Anti-EGFR aptamer <400> 108 uccacuauau cacacguauu uaaucgccgu agaaaagcau gucaaagccg 50 <210> 109 <211> 51 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Anti-EGFR aptamer <400> 109 ucccucaacc ucgcuacuau uuaaucgccg uagaaaagca ugucaaagcc u 51 <210> 110 <211> 51 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Anti-EGFR aptamer <400> 110 ugccgcuaua ucacacgaau uuaaucgccg uagaaaagca ugucaaagcc g 51 <210> 111 <211> 51 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Anti-EGFR aptamer <400> 111 agccccuaga acacacggau uuaaucgccg uagaaaagca ugucaaagcc g 51 <210> 112 <211> 51 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Anti-EGFR aptamer <400> 112 ugccaauaua uaacacggaa uuaaucgccg uagaaaagca ugucaaagcc g 51 <210> 113 <211> 51 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Anti-EGFR aptamer <400> 113 ugccgcuaua gcgcacggau uuaaucgccg uagaaaagca ugucaaagcc g 51 <210> 114 <211> 50 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Anti-EGFR aptamer <400> 114 ugcagauaua ugucacucau uaauccccgu auaaaaacau aacuaagcuc 50 <210> 115 <211> 51 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Anti-EGFR aptamer <400> 115 uguagcugua uugcacacau uaaaucgccg uaguaaagca ugucaaagcc g 51 <210> 116 <211> 50 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Anti-EGFR aptamer <400> 116 uaccaauaua ucgccacaca uaaucgccgu agaaaagcau gucaaagccg 50 <210> 117 <211> 51 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Anti-EGFR aptamer <400> 117 ugccgcuaug cccacggaau uuaaucgccg uagaaaaaca ugucaaaguc g 51 <210> 118 <211> 51 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Anti-EGFR aptamer <400> 118 ugccgcuauu uagcacggau uaaaucgccg uagaaaagca ugucaaagcc g 51 <210> 119 <211> 51 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Anti-EGFR aptamer <220> <221> misc_feature <222> (45)..(45) <223> n is a, c, g, or u <400> 119 ugccgcuauu uagcacggau uaaaucgccg uagaaaagca ugucnaagcc g 51 <210> 120 <211> 51 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Anti-EGFR aptamer <220> <221> misc_feature <222> (41)..(41) <223> n is a, c, g, or u <400> 120 uguaguaaua ugacacggau uuaaucgccg uagaaaagca ngucaaagcc u 51 <210> 121 <211> 51 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Anti-EGFR aptamer <400> 121 ugucgccauu acgcacggau uuaaucgccg uagaaaagca ugucaaagcc g 51 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<212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Anti-EGFR aptamer <220> <221> misc_feature <222> (46)..(48) <223> n is a, c, g, or u <400> 134 ugcacuaucu cacacguacu aaucgccgua uaaaagcaug ucaaannng 49 <210> 135 <211> 50 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Anti-EGFR aptamer <220> <221> misc_feature <222> (3)..(3) <223> n is a, c, g, or u <220> <221> misc_feature <222> (6)..(6) <223> n is a, c, g, or u <220> <221> misc_feature <222> (8)..(10) <223> n is a, c, g, or u <220> <221> misc_feature <222> (21)..(21) <223> n is a, c, g, or u <220> <221> misc_feature <222> (45)..(45) <223> n is a, c, g, or u <400> 135 aungcnannn uacacguauu naaucgccgu agaaaagcau gucanagccg 50 <210> 136 <211> 51 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Anti-EGFR aptamer <400> 136 ugcugcuaua uugcaauuuu uuaaacuaag uagaaaacca uguacaaguc g 51 <210> 137 <211> 51 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Anti-EGFR aptamer <400> 137 ugucgccaua uugcacggau 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Thr Val Thr Val Ser 435 440 445 Ser Gly Ser His His His His His His 450 455

Claims (20)

  1. 환자의 암을 치료하기 위한 약제로서,
    a. i. 암을 표적화 할 수 있는 표적화 잔기(targeting moiety), 및 ii. 제 2 면역 세포 관여(engaging) 도메인에 결합할 때 면역 관여 활성이 가능한 제 1 면역 세포 관여 도메인으로서, 상기 제 2 면역 세포 관여 도메인이 제 1 성분의 일부가 아닌, 제 1 면역 세포 관여 도메인; 을 포함하는 표적화된 면역 세포 결합제를 포함하는 제 1 성분;
    b. i. 면역 세포를 선택적으로 표적화 할 수 있는 면역 세포 선택 잔기, 및 ii. 제 1 면역 세포 관여 도메인에 결합할 때 면역 세포 관여 활성이 가능한 제 2 면역 세포 관여 도메인(여기서, 제1 및 제2 면역 세포 관여 도메인은, 둘 중 어느 쪽도 불활성 결합 파트너에 결합되지 않는 경우, 서로 결합할 수 있다);을 포함하는 선택적인 면역 세포 결합제를 포함하는 제 2 성분을 포함하며,
    상기 제 1 면역 세포 관여 도메인 또는 제 2 면역 세포 관여 도메인 중 적어도 하나가 불활성 결합 파트너에 결합되며, 이에 따라 상기 제 1 및 제 2 면역 세포 관여 도메인은 불활성 결합 파트너가 제거되지 않는 한 서로 결합되지 않으며;
    상기 약제는 불활성 결합 파트너 및 이것이 결합하는 면역 세포 관여 도메인을 분리하는 절단 부위를 추가로 포함하며,
    상기 절단 부위는
    i. 암세포에 의해 발현된 효소에 의해 절단되거나;
    ⅱ. 암세포 내부에서 pH-민감성 절단 반응을 통해 절단되거나;
    ⅲ. 보체-의존적 절단 반응에 의해 절단되거나; 또는
    iv. 상기 약제 내의 표적화 잔기와 동일하거나 상이한 표적화 잔기에 의해 암세포에 공동 국소화된(colocalized) 프로테아제에 의해 절단되는,
    약제.
  2. 제 1 항에 있어서,
    상기 제 1 성분은 제 2 성분에 공유 결합되지 않는 약제.
  3. 제 1 항에 있어서,
    상기 제 1 성분은 제 2 성분에 공유 결합되는 약제.
  4. 제 1 항에 있어서,
    상기 면역 세포 관여 도메인은 서로 결합될 때 면역 세포의 표면에서 발현되는 항원에 결합할 수 있는 약제.
  5. 제 1 항에 있어서,
    상기 면역 세포를 선택적으로 표적화 할 수 있는 면역 세포 선택 잔기는 T 세포, 대식세포, 자연 살상 세포, 호중구, 호산구, 호염기구, γδ T 세포, 자연 살상 T 세포 (NKT 세포) 또는 조작된 면역 세포를 선택적으로 표적화 할 수 있는 약제.
  6. 제 5 항에 있어서,
    상기 면역 세포를 선택적으로 표적화 할 수 있는 면역 세포 선택 잔기는 선택적으로 T 세포가 CD8+ 또는 CD4+ T 세포인 경우에 T 세포를 선택적으로 표적화 할 수 있는 약제.
  7. 제 1 항에 있어서,
    상기 면역 세포 선택 잔기는 CD8, CD4 또는 CXCR3을 표적으로 하거나, 또는 조절 T 세포에 특이적으로 결합하지 않는 약제.
  8. 제 1 항에 있어서,
    상기 면역 세포 관여 도메인은 서로 결합될 때 CD3 또는 TCR에 결합할 수 있는 약제.
  9. 제 1 항에 있어서,
    상기 면역 세포 선택 잔기는 앱타머 또는 항체 또는 이의 항원-특이적 결합 단편을 포함하며, 선택적으로 상기 앱타머 또는 항체 또는 이의 항원-특이적 결합 단편은 T 세포상에서 항원에 특이적으로 결합하는 약제.
  10. 제 1 항에 있어서,
    상기 표적화 잔기는 앱타머 또는 항체 또는 이의 항원-특이적 결합 단편이며, 선택적으로 앱타머 또는 항체 또는 이의 항원-특이적 결합 단편은 암 항원에 특이적으로 결합하는 약제.
  11. 제 1 항에 있어서,
    상기 표적화 잔기는 IL-2 수용체, IL-4, IL-6, 멜라닌 세포 자극 호르몬 수용체 (MSH 수용체), 트랜스페린 수용체 (TR), 엽산 수용체 1 (FOLR), 엽산 수산화 효소 (FOLH1), EGF 수용체, PD-L1, PD-L2, IL-13R, CXCR4, IGFR 또는 CD40L을 포함하는 암의 표적에 결합하는 약제.
  12. 제 1 항에 있어서,
    하나의 상기 면역 세포 관여 도메인은 VH 도메인을 포함하고 다른 면역 세포 관여 도메인은 VL 도메인을 포함하며, 선택적으로 적어도 하나의 상기 불활성 결합 파트너는 VH 또는 VL 도메인인 약제.
  13. 제 1 항에 있어서,
    상기 제 1 면역 세포 관여 도메인 및/또는 상기 제 2 면역 세포 관여 도메인은 불활성 결합 파트너에 결합되고 절단 부위에 의해 불활성 결합 파트너로부터 분리되며, 선택적으로 적어도 하나의 상기 절단 부위는 프로테아제 절단 부위인 약제.
  14. 제 13 항에 있어서,
    a. 상기 면역 세포 관여 도메인이 VH 도메인일 때 상기 불활성 결합 파트너는 VL 도메인이며,
    b. 상기 면역 세포 관여 도메인이 VL 도메인일 때 상기 불활성 결합 파트너는 VH 도메인인 약제.
  15. 제 3 항에 있어서,
    상기 제 1 성분은 절단 부위를 포함하는 링커에 의해 상기 제 2 성분에 공유 결합되며, 선택적으로 상기 절단 부위는 프로테아제 절단 부위인 약제.
  16. 선택적인 면역 세포 결합제를 포함하는 암 치료용 키트 또는 조성물에 사용하기 위한 약제로서,
    a. 하기를 포함하는 표적화된 면역 세포 결합제를 포함하는 제 1 성분을 포함하며,
    i. 암을 표적화 할 수 있는 표적화 잔기;
    ii. 제 2 면역 세포 관여 도메인에 결합할 때 면역 관여 활성이 가능한 제 1 면역 세포 관여 도메인으로서, 상기 제 2 면역 세포 관여 도메인이 제 1 성분의 일부가 아닌, 제 1 면역 세포 관여 도메인; 및
    ⅲ. 제 1 면역 세포 관여 도메인 및 불활성 결합 파트너를 분리하는 절단 부위, 이때 상기 절단 부위는
    1. 암세포에 의해 발현된 효소에 의해 절단되거나;
    2. 암세포 내부에서 pH-민감성 절단 반응을 통해 절단되거나;
    3. 보체-의존적 절단 반응에 의해 절단되거나; 또는
    4. 상기 약제의 표적화 잔기와 동일하거나 상이한 표적화 잔기에 의해 암세포에 공동 국소화된 프로테아제에 의해 절단되며,
    상기 절단 부위의 절단은 불활성 결합 파트너의 손실을 유발하고 상기 약제의 일부가 아닌 제 2 면역 세포 관여 도메인에 결합하게 할 수 있는
    약제.
  17. 제 1 항의 약제의 제 1 및 제 2 성분을 암호화하는 핵산 분자의 세트
  18. 제 1 항의 약제를 투여하는 것을 포함하는 환자의 암을 치료하기 위한 방법으로서,
    선택적으로 상기 암이 유방암, 난소암, 자궁 내막암, 자궁 경부암, 방광암, 신장암, 흑색종, 폐암, 전립선암, 고환암, 갑상선암, 뇌암, 식도암, 위암, 췌장암, 결장 직장암, 간암, 백혈병, 골수종, 비-호지킨 림프종, 호지킨 림프종, 급성 골수성 백혈병, 급성 림프모구 백혈병, 만성 림프모구 백혈병, 림프 증식성 장애, 골수형성 이상 장애, 골수 증식성 질환 또는 전암성 질환 중 어느 하나인 방법.
  19. 제 18 항에 있어서,
    환자가 종양에서 조절 T 세포를 갖는 경우, 선택적인 면역 세포 결합제가 조절 면역 세포에 존재하는 마커 (CD4 및 CD25를 포함하지만, 이에 제한되지 않음)를 표적으로 하지 않는 방법.
  20. 제 1 항의 약제를 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 암에 대한 환자의 면역 반응을 표적화 하는 방법.
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2017019729A1 (en) * 2015-07-27 2017-02-02 The General Hospital Corporation Antibody derivatives with conditionally enabled effector function
EP3962950A1 (en) * 2019-05-02 2022-03-09 The General Hospital Corporation Teac and attac immunooncology compositions and methods
EP4165084A1 (en) * 2020-06-14 2023-04-19 Shimon Slavin Multifunctional immunotherapeutic monoclonal antibody complexes and conjugates
JP2024527020A (ja) 2021-07-27 2024-07-19 モルフォシス・アーゲー 抗原結合分子の組合せ
CN116948012B (zh) * 2022-04-13 2024-07-26 星奕昂(上海)生物科技有限公司 增强细胞功能的cd16抗剪切突变体
CN114748627B (zh) * 2022-05-13 2023-10-27 中国医学科学院北京协和医院 可溶性cd58在胰腺癌预防和治疗中的应用
WO2024145108A1 (en) * 2022-12-28 2024-07-04 Binacea Pharma, Inc. Anti-cd8 antibodies and methods of use thereof
CN116874606B (zh) * 2023-09-08 2023-11-24 益科思特(北京)医药科技发展有限公司 一种靶向trop2和cd3的双特异性抗体及其制备方法与应用

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8623356B2 (en) 2005-11-29 2014-01-07 The University Of Sydney Demibodies: dimerization-activated therapeutic agents
CN104159923B (zh) 2012-01-13 2018-01-23 乌利班-马克西姆利安大学 双抗原诱导的双功能互补作用
GB201203442D0 (en) * 2012-02-28 2012-04-11 Univ Birmingham Immunotherapeutic molecules and uses
US20150125397A1 (en) 2013-10-06 2015-05-07 Abbvie Inc. Dual specific binding proteins directed against immune cell receptors and autoantigens
PL3377103T3 (pl) 2015-11-19 2021-10-04 Revitope Limited Komplementacja funkcjonalnego fragmentu przeciwciała dla dwuskładnikowego układu do przekierowanego zabijania niepożądanych komórek
EP3538547B1 (en) 2016-11-09 2021-07-07 Philogen S.p.A. Immunoconjugates comprising il-2, anti-fibronectin antibody and mutant tnf-alpha

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