KR20200130835A - 면역 반응을 조절하기 위한 생체분자의 세포내 전달 - Google Patents
면역 반응을 조절하기 위한 생체분자의 세포내 전달 Download PDFInfo
- Publication number
- KR20200130835A KR20200130835A KR1020207028580A KR20207028580A KR20200130835A KR 20200130835 A KR20200130835 A KR 20200130835A KR 1020207028580 A KR1020207028580 A KR 1020207028580A KR 20207028580 A KR20207028580 A KR 20207028580A KR 20200130835 A KR20200130835 A KR 20200130835A
- Authority
- KR
- South Korea
- Prior art keywords
- cells
- modified
- cell
- antigen
- adjuvant
- Prior art date
Links
- 230000028993 immune response Effects 0.000 title claims abstract description 134
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 title description 10
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 1283
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 679
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 675
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 675
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims abstract description 408
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 299
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 claims description 230
- 230000006835 compression Effects 0.000 claims description 209
- 238000007906 compression Methods 0.000 claims description 209
- 229940046168 CpG oligodeoxynucleotide Drugs 0.000 claims description 205
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 200
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 183
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 104
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 80
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 80
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 77
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 claims description 63
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 claims description 62
- 230000006870 function Effects 0.000 claims description 54
- 241000701806 Human papillomavirus Species 0.000 claims description 50
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 49
- 238000012986 modification Methods 0.000 claims description 48
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 47
- 230000004048 modification Effects 0.000 claims description 47
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 37
- 102000006992 Interferon-alpha Human genes 0.000 claims description 35
- 108010047761 Interferon-alpha Proteins 0.000 claims description 35
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 claims description 34
- OHDXDNUPVVYWOV-UHFFFAOYSA-N n-methyl-1-(2-naphthalen-1-ylsulfanylphenyl)methanamine Chemical compound CNCC1=CC=CC=C1SC1=CC=CC2=CC=CC=C12 OHDXDNUPVVYWOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 34
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 33
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 28
- 210000001266 CD8-positive T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 26
- 229940076838 Immune checkpoint inhibitor Drugs 0.000 claims description 25
- 102000037984 Inhibitory immune checkpoint proteins Human genes 0.000 claims description 25
- 108091008026 Inhibitory immune checkpoint proteins Proteins 0.000 claims description 25
- 239000012274 immune-checkpoint protein inhibitor Substances 0.000 claims description 25
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 claims description 25
- 230000004044 response Effects 0.000 claims description 25
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 claims description 24
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 23
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 23
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 22
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 22
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 claims description 21
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 21
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 21
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 20
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 claims description 19
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 claims description 19
- 108091036414 Polyinosinic:polycytidylic acid Proteins 0.000 claims description 18
- 229940115272 polyinosinic:polycytidylic acid Drugs 0.000 claims description 18
- 238000003825 pressing Methods 0.000 claims description 18
- 230000007423 decrease Effects 0.000 claims description 17
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 claims description 17
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 claims description 16
- 230000015788 innate immune response Effects 0.000 claims description 16
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 claims description 16
- 230000035899 viability Effects 0.000 claims description 16
- 230000004913 activation Effects 0.000 claims description 15
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 claims description 15
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 claims description 14
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 claims description 14
- 241000341655 Human papillomavirus type 16 Species 0.000 claims description 14
- 229940044606 RIG-I agonist Drugs 0.000 claims description 14
- 102100038929 V-set domain-containing T-cell activation inhibitor 1 Human genes 0.000 claims description 14
- 230000012202 endocytosis Effects 0.000 claims description 13
- VQWNELVFHZRFIB-UHFFFAOYSA-N odn 1826 Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1C(O1)CC(O)C1COP(O)(=O)OC1CC(N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)OC1COP(O)(=O)OC1CC(N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)OC1COP(O)(=O)OC1CC(N2C(N=C(N)C=C2)=O)OC1COP(O)(=O)OC1CC(N2C3=NC=NC(N)=C3N=C2)OC1COP(O)(=O)OC1CC(N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)OC1COP(O)(=O)OC1CC(N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)OC1COP(O)(=O)OC1CC(N2C(N=C(N)C=C2)=O)OC1COP(O)(=O)OC1CC(N2C(N=C(N)C=C2)=O)OC1COP(O)(=O)OC1CC(N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)OC1COP(O)(=O)OC(C(O1)COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C(N=C(N)C=C2)=O)COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C3=NC=NC(N)=C3N=C2)COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C3=NC=NC(N)=C3N=C2)COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C(N=C(N)C=C2)=O)COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C(N=C(N)C=C2)=O)COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)COP(O)(O)=O)CC1N1C=C(C)C(=O)NC1=O VQWNELVFHZRFIB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 13
- 229940046166 oligodeoxynucleotide Drugs 0.000 claims description 13
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 claims description 13
- 102000043129 MHC class I family Human genes 0.000 claims description 12
- 108091054437 MHC class I family Proteins 0.000 claims description 12
- 102000043131 MHC class II family Human genes 0.000 claims description 12
- 108091054438 MHC class II family Proteins 0.000 claims description 12
- 229940044665 STING agonist Drugs 0.000 claims description 12
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 12
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 claims description 12
- 239000002184 metal Substances 0.000 claims description 12
- 229960004793 sucrose Drugs 0.000 claims description 12
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- 108010074708 B7-H1 Antigen Proteins 0.000 claims description 11
- 108010021064 CTLA-4 Antigen Proteins 0.000 claims description 11
- 229940045513 CTLA4 antagonist Drugs 0.000 claims description 11
- 102100039498 Cytotoxic T-lymphocyte protein 4 Human genes 0.000 claims description 11
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 11
- 102100034458 Hepatitis A virus cellular receptor 2 Human genes 0.000 claims description 11
- 101710083479 Hepatitis A virus cellular receptor 2 homolog Proteins 0.000 claims description 11
- 102100024216 Programmed cell death 1 ligand 1 Human genes 0.000 claims description 11
- 101710089372 Programmed cell death protein 1 Proteins 0.000 claims description 11
- 229940126547 T-cell immunoglobulin mucin-3 Drugs 0.000 claims description 11
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 claims description 11
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 claims description 11
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 claims description 11
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 claims description 11
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 210000000172 cytosol Anatomy 0.000 claims description 10
- 210000001163 endosome Anatomy 0.000 claims description 10
- 210000002443 helper t lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 10
- 238000011534 incubation Methods 0.000 claims description 10
- 210000003071 memory t lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 10
- 210000000581 natural killer T-cell Anatomy 0.000 claims description 10
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 10
- ZKHQWZAMYRWXGA-KQYNXXCUSA-N Adenosine triphosphate Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)[C@@H](O)[C@H]1O ZKHQWZAMYRWXGA-KQYNXXCUSA-N 0.000 claims description 9
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 claims description 9
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 claims description 9
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 101001137987 Homo sapiens Lymphocyte activation gene 3 protein Proteins 0.000 claims description 9
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N L-arginine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims description 9
- 229930064664 L-arginine Natural products 0.000 claims description 9
- 235000014852 L-arginine Nutrition 0.000 claims description 9
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 claims description 9
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 claims description 9
- 102000017578 LAG3 Human genes 0.000 claims description 9
- 101000930477 Mus musculus Albumin Proteins 0.000 claims description 9
- 229920002535 Polyethylene Glycol 1500 Polymers 0.000 claims description 9
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 claims description 9
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 claims description 9
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 9
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 9
- 239000011591 potassium Substances 0.000 claims description 9
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 claims description 9
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 claims description 9
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 claims description 8
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims description 8
- 102100029822 B- and T-lymphocyte attenuator Human genes 0.000 claims description 7
- 102100034459 Hepatitis A virus cellular receptor 1 Human genes 0.000 claims description 7
- 101000864344 Homo sapiens B- and T-lymphocyte attenuator Proteins 0.000 claims description 7
- 101001068136 Homo sapiens Hepatitis A virus cellular receptor 1 Proteins 0.000 claims description 7
- 101000831286 Homo sapiens Protein timeless homolog Proteins 0.000 claims description 7
- 101000752245 Homo sapiens Rho guanine nucleotide exchange factor 5 Proteins 0.000 claims description 7
- 101000955999 Homo sapiens V-set domain-containing T-cell activation inhibitor 1 Proteins 0.000 claims description 7
- 101000666896 Homo sapiens V-type immunoglobulin domain-containing suppressor of T-cell activation Proteins 0.000 claims description 7
- 108010079206 V-Set Domain-Containing T-Cell Activation Inhibitor 1 Proteins 0.000 claims description 7
- 102100038282 V-type immunoglobulin domain-containing suppressor of T-cell activation Human genes 0.000 claims description 7
- IJJVMEJXYNJXOJ-UHFFFAOYSA-N fluquinconazole Chemical compound C=1C=C(Cl)C=C(Cl)C=1N1C(=O)C2=CC(F)=CC=C2N=C1N1C=NC=N1 IJJVMEJXYNJXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- KDWFDOFTPHDNJL-TUBOTVQJSA-N odn-2006 Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(=O)O[C@@H]2[C@H](O[C@H](C2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)COP(O)(=O)O[C@H]2[C@H]([C@@H](O[C@@H]2COP(O)(=S)O[C@H]2[C@H]([C@@H](O[C@@H]2COP(O)(=O)O[C@@H]2[C@H](O[C@H](C2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)COP(O)(=O)O[C@@H]2[C@H](O[C@H](C2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)COP(O)(=O)O[C@@H]2[C@H](O[C@H](C2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)COP(O)(=O)O[C@@H]2[C@H](O[C@H](C2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)COP(O)(=O)O[C@H]2[C@H]([C@@H](O[C@@H]2COP(O)(=O)O[C@@H]2[C@H](O[C@H](C2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)COP(O)(=O)O[C@H]2[C@H]([C@@H](O[C@@H]2COP(O)(=S)O[C@H]2[C@H]([C@@H](O[C@@H]2COP(O)(=O)OC[C@@H]2[C@H](C[C@@H](O2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]2[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)OP(O)(=O)OC[C@@H]2[C@H](C[C@@H](O2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]2[C@H](C[C@@H](O2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]2[C@H](C[C@@H](O2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]2[C@H](C[C@@H](O2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]2[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)OP(S)(=O)OC[C@@H]2[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O2)N2C(N=C(N)C=C2)=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]2[C@H](C[C@@H](O2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]2[C@H](C[C@@H](O2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)O)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)O)N2C(N=C(N)C=C2)=O)O)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)O)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)O)N2C(N=C(N)C=C2)=O)O)[C@@H](O)C1 KDWFDOFTPHDNJL-TUBOTVQJSA-N 0.000 claims description 7
- -1 LIGHT Proteins 0.000 claims description 6
- 230000001143 conditioned effect Effects 0.000 claims description 6
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 claims description 6
- 230000028709 inflammatory response Effects 0.000 claims description 6
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 claims description 6
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 claims description 6
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 5
- 229960002751 imiquimod Drugs 0.000 claims description 5
- DOUYETYNHWVLEO-UHFFFAOYSA-N imiquimod Chemical compound C1=CC=CC2=C3N(CC(C)C)C=NC3=C(N)N=C21 DOUYETYNHWVLEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 102100034980 ICOS ligand Human genes 0.000 claims description 4
- 229960004316 cisplatin Drugs 0.000 claims description 4
- DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L cisplatin Chemical compound N[Pt](N)(Cl)Cl DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 4
- 108010082808 4-1BB Ligand Proteins 0.000 claims description 3
- 101150013553 CD40 gene Proteins 0.000 claims description 3
- 102100036008 CD48 antigen Human genes 0.000 claims description 3
- 102100025221 CD70 antigen Human genes 0.000 claims description 3
- 101000716130 Homo sapiens CD48 antigen Proteins 0.000 claims description 3
- 101000934356 Homo sapiens CD70 antigen Proteins 0.000 claims description 3
- 101001063392 Homo sapiens Lymphocyte function-associated antigen 3 Proteins 0.000 claims description 3
- 101000669511 Homo sapiens T-cell immunoglobulin and mucin domain-containing protein 4 Proteins 0.000 claims description 3
- 101000914484 Homo sapiens T-lymphocyte activation antigen CD80 Proteins 0.000 claims description 3
- 101100207070 Homo sapiens TNFSF8 gene Proteins 0.000 claims description 3
- 101710093458 ICOS ligand Proteins 0.000 claims description 3
- 102100030984 Lymphocyte function-associated antigen 3 Human genes 0.000 claims description 3
- 108010061593 Member 14 Tumor Necrosis Factor Receptors Proteins 0.000 claims description 3
- 101100207071 Mus musculus Tnfsf8 gene Proteins 0.000 claims description 3
- 101000597780 Mus musculus Tumor necrosis factor ligand superfamily member 18 Proteins 0.000 claims description 3
- 102100035488 Nectin-2 Human genes 0.000 claims description 3
- 102000004473 OX40 Ligand Human genes 0.000 claims description 3
- 108010042215 OX40 Ligand Proteins 0.000 claims description 3
- 102100029740 Poliovirus receptor Human genes 0.000 claims description 3
- 108010074687 Signaling Lymphocytic Activation Molecule Family Member 1 Proteins 0.000 claims description 3
- 102100029215 Signaling lymphocytic activation molecule Human genes 0.000 claims description 3
- 102100039367 T-cell immunoglobulin and mucin domain-containing protein 4 Human genes 0.000 claims description 3
- 102100027222 T-lymphocyte activation antigen CD80 Human genes 0.000 claims description 3
- 102100024587 Tumor necrosis factor ligand superfamily member 15 Human genes 0.000 claims description 3
- 108090000138 Tumor necrosis factor ligand superfamily member 15 Proteins 0.000 claims description 3
- 102100035283 Tumor necrosis factor ligand superfamily member 18 Human genes 0.000 claims description 3
- 102100032100 Tumor necrosis factor ligand superfamily member 8 Human genes 0.000 claims description 3
- 102100032101 Tumor necrosis factor ligand superfamily member 9 Human genes 0.000 claims description 3
- 102100028785 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 14 Human genes 0.000 claims description 3
- 102100040245 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 5 Human genes 0.000 claims description 3
- 108010048507 poliovirus receptor Proteins 0.000 claims description 3
- 102100023990 60S ribosomal protein L17 Human genes 0.000 claims 1
- 101001019455 Homo sapiens ICOS ligand Proteins 0.000 claims 1
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 claims 1
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 claims 1
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 claims 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 claims 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 claims 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 83
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 45
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 35
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 35
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 23
- 238000011260 co-administration Methods 0.000 description 22
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 22
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 21
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 17
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 16
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 16
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 16
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 14
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 14
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 14
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 13
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 13
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 13
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 12
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 12
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 12
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 12
- 101000946843 Homo sapiens T-cell surface glycoprotein CD8 alpha chain Proteins 0.000 description 11
- 241000701024 Human betaherpesvirus 5 Species 0.000 description 11
- 102100034922 T-cell surface glycoprotein CD8 alpha chain Human genes 0.000 description 11
- 230000009471 action Effects 0.000 description 11
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 11
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 11
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 11
- 102100040678 Programmed cell death protein 1 Human genes 0.000 description 10
- 230000005867 T cell response Effects 0.000 description 10
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 10
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 10
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 10
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 9
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 9
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 9
- 239000000463 material Substances 0.000 description 9
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 9
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 9
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 9
- 229940074410 trehalose Drugs 0.000 description 9
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 8
- 101000954493 Human papillomavirus type 16 Protein E6 Proteins 0.000 description 8
- 101000767631 Human papillomavirus type 16 Protein E7 Proteins 0.000 description 8
- 101500027983 Rattus norvegicus Octadecaneuropeptide Proteins 0.000 description 8
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 8
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 8
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 8
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 8
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 8
- 101000831496 Homo sapiens Toll-like receptor 3 Proteins 0.000 description 7
- 102100024324 Toll-like receptor 3 Human genes 0.000 description 7
- 230000005684 electric field Effects 0.000 description 7
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 7
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 6
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 6
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 6
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 6
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 description 6
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 6
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 6
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 6
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 6
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 6
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 6
- 210000003171 tumor-infiltrating lymphocyte Anatomy 0.000 description 6
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 6
- 101000831007 Homo sapiens T-cell immunoreceptor with Ig and ITIM domains Proteins 0.000 description 5
- 101000669447 Homo sapiens Toll-like receptor 4 Proteins 0.000 description 5
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 5
- 102100024834 T-cell immunoreceptor with Ig and ITIM domains Human genes 0.000 description 5
- 102100039360 Toll-like receptor 4 Human genes 0.000 description 5
- 230000008859 change Effects 0.000 description 5
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 5
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 5
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 5
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 5
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 5
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 5
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 5
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 5
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 5
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 5
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 5
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 5
- 229940044655 toll-like receptor 9 agonist Drugs 0.000 description 5
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 5
- IAKHMKGGTNLKSZ-INIZCTEOSA-N (S)-colchicine Chemical compound C1([C@@H](NC(C)=O)CC2)=CC(=O)C(OC)=CC=C1C1=C2C=C(OC)C(OC)=C1OC IAKHMKGGTNLKSZ-INIZCTEOSA-N 0.000 description 4
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 4
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 description 4
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 4
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 4
- 101000914514 Homo sapiens T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Proteins 0.000 description 4
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 4
- 102100027213 T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Human genes 0.000 description 4
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 4
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 4
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 4
- OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N cytosine Chemical compound NC=1C=CNC(=O)N=1 OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 4
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 4
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 4
- RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N glutathione Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N 0.000 description 4
- 229910021645 metal ion Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 4
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 4
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 4
- DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M sodium pyruvate Chemical group [Na+].CC(=O)C([O-])=O DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 4
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 4
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 4
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 3
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 3
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 3
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 3
- KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M Potassium hydroxide Chemical compound [OH-].[K+] KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 3
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 3
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 3
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 3
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 3
- 230000006057 immunotolerant effect Effects 0.000 description 3
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 3
- PGHMRUGBZOYCAA-UHFFFAOYSA-N ionomycin Natural products O1C(CC(O)C(C)C(O)C(C)C=CCC(C)CC(C)C(O)=CC(=O)C(C)CC(C)CC(CCC(O)=O)C)CCC1(C)C1OC(C)(C(C)O)CC1 PGHMRUGBZOYCAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- PGHMRUGBZOYCAA-ADZNBVRBSA-N ionomycin Chemical compound O1[C@H](C[C@H](O)[C@H](C)[C@H](O)[C@H](C)/C=C/C[C@@H](C)C[C@@H](C)C(/O)=C/C(=O)[C@@H](C)C[C@@H](C)C[C@@H](CCC(O)=O)C)CC[C@@]1(C)[C@@H]1O[C@](C)([C@@H](C)O)CC1 PGHMRUGBZOYCAA-ADZNBVRBSA-N 0.000 description 3
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 3
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 3
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 3
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 3
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 3
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 3
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 3
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 3
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 3
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 3
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 3
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 3
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 7H-purine Chemical compound N1=CNC2=NC=NC2=C1 KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229930024421 Adenine Natural products 0.000 description 2
- GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N Adenine Chemical compound NC1=NC=NC2=C1N=CN2 GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100037435 Antiviral innate immune response receptor RIG-I Human genes 0.000 description 2
- 108700023353 CpG ODN 2216 Proteins 0.000 description 2
- 108091029430 CpG site Proteins 0.000 description 2
- 229920000089 Cyclic olefin copolymer Polymers 0.000 description 2
- 239000004713 Cyclic olefin copolymer Substances 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 2
- AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N Doxorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N 0.000 description 2
- 241000272186 Falco columbarius Species 0.000 description 2
- 108010024636 Glutathione Proteins 0.000 description 2
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 2
- 101000952099 Homo sapiens Antiviral innate immune response receptor RIG-I Proteins 0.000 description 2
- 101000954519 Human papillomavirus type 18 Protein E6 Proteins 0.000 description 2
- 101000767629 Human papillomavirus type 18 Protein E7 Proteins 0.000 description 2
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 2
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 2
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 2
- 230000006052 T cell proliferation Effects 0.000 description 2
- 108091008874 T cell receptors Proteins 0.000 description 2
- 102000016266 T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 description 2
- 206010064390 Tumour invasion Diseases 0.000 description 2
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 2
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 2
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 2
- 229960000643 adenine Drugs 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 230000009400 cancer invasion Effects 0.000 description 2
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 2
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 2
- 230000020411 cell activation Effects 0.000 description 2
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 2
- 230000022131 cell cycle Effects 0.000 description 2
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 2
- 229920002301 cellulose acetate Polymers 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 239000000919 ceramic Substances 0.000 description 2
- 229960001338 colchicine Drugs 0.000 description 2
- 230000002338 cryopreservative effect Effects 0.000 description 2
- 229940104302 cytosine Drugs 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 2
- 238000002716 delivery method Methods 0.000 description 2
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 2
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 2
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 2
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 2
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 2
- 229960003180 glutathione Drugs 0.000 description 2
- 230000005484 gravity Effects 0.000 description 2
- UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N guanine Chemical compound O=C1NC(N)=NC2=C1N=CN2 UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002631 hypothermal effect Effects 0.000 description 2
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 2
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- DDVBPZROPPMBLW-ZJBINBEQSA-N latrunculin a Chemical compound C([C@H]1[C@@]2(O)C[C@H]3C[C@H](O2)CC[C@@H](/C=C\C=C/CC\C(C)=C/C(=O)O3)C)SC(=O)N1 DDVBPZROPPMBLW-ZJBINBEQSA-N 0.000 description 2
- DDVBPZROPPMBLW-UHFFFAOYSA-N latrunculin-A Natural products O1C(=O)C=C(C)CCC=CC=CC(C)CCC(O2)CC1CC2(O)C1CSC(=O)N1 DDVBPZROPPMBLW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 2
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 2
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 2
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 2
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 2
- DHYWDEXXBWTTEH-UHFFFAOYSA-N odn 2007 Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C(N=C(N)C=C2)=O)COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C(N=C(N)C=C2)=O)COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C(N=C(N)C=C2)=O)COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C(N=C(N)C=C2)=O)COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)COP(O)(O)=O)C(O)C1 DHYWDEXXBWTTEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UIRLPEMNFBJPIT-UHFFFAOYSA-N odn 2395 Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(COP(O)(O)=O)C(OP(O)(=O)OCC2C(CC(O2)N2C(N=C(N)C=C2)=O)OP(O)(=O)OCC2C(CC(O2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)OP(O)(=O)OCC2C(CC(O2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)OP(O)(=O)OCC2C(CC(O2)N2C(N=C(N)C=C2)=O)OP(O)(=O)OCC2C(CC(O2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)OP(O)(=O)OCC2C(CC(O2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)OP(O)(=O)OCC2C(CC(O2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)OP(O)(=O)OCC2C(CC(O2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)OP(O)(=O)OCC2C(CC(O2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)OP(O)(=O)OCC2C(CC(O2)N2C(N=C(N)C=C2)=O)OP(O)(=O)OCC2C(CC(O2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)OP(O)(=O)OCC2C(CC(O2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)OP(O)(=O)OCC2C(CC(O2)N2C(N=C(N)C=C2)=O)OP(O)(=O)OCC2C(CC(O2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)OP(O)(=O)OCC2C(CC(O2)N2C(N=C(N)C=C2)=O)OP(O)(=O)OCC2C(CC(O2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)OP(O)(=O)OCC2C(CC(O2)N2C(N=C(N)C=C2)=O)OP(O)(=O)OCC2C(CC(O2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)OP(O)(=O)OCC2C(CC(O2)N2C(N=C(N)C=C2)=O)OP(O)(=O)OCC2C(CC(O2)N2C(N=C(N)C=C2)=O)OP(O)(=O)OCC2C(CC(O2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)O)C1 UIRLPEMNFBJPIT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002572 peristaltic effect Effects 0.000 description 2
- 125000002467 phosphate group Chemical group [H]OP(=O)(O[H])O[*] 0.000 description 2
- BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N platinum Chemical group [Pt] BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920001983 poloxamer Polymers 0.000 description 2
- 229920002239 polyacrylonitrile Polymers 0.000 description 2
- 239000004926 polymethyl methacrylate Substances 0.000 description 2
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 2
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 2
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 2
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 2
- 210000003289 regulatory T cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000010187 selection method Methods 0.000 description 2
- 229910052710 silicon Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000010703 silicon Substances 0.000 description 2
- 229940054269 sodium pyruvate Drugs 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 2
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 2
- 238000007910 systemic administration Methods 0.000 description 2
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 2
- RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-K thiophosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=S RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- JFMGVNVAZVRZMU-UHFFFAOYSA-N 3-[[4-(2,4-dimethyl-1,3-thiazol-5-yl)pyrimidin-2-yl]amino]benzonitrile Chemical compound S1C(C)=NC(C)=C1C1=CC=NC(NC=2C=C(C=CC=2)C#N)=N1 JFMGVNVAZVRZMU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UZOVYGYOLBIAJR-UHFFFAOYSA-N 4-isocyanato-4'-methyldiphenylmethane Chemical compound C1=CC(C)=CC=C1CC1=CC=C(N=C=O)C=C1 UZOVYGYOLBIAJR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LRSASMSXMSNRBT-UHFFFAOYSA-N 5-methylcytosine Chemical compound CC1=CNC(=O)N=C1N LRSASMSXMSNRBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 102000006306 Antigen Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010083359 Antigen Receptors Proteins 0.000 description 1
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 1
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 1
- 102100022005 B-lymphocyte antigen CD20 Human genes 0.000 description 1
- 229920002799 BoPET Polymers 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000025254 Cannabis sativa Species 0.000 description 1
- 229940123587 Cell cycle inhibitor Drugs 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-M D-gluconate Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C([O-])=O RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-M 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 1
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- GHASVSINZRGABV-UHFFFAOYSA-N Fluorouracil Chemical compound FC1=CNC(=O)NC1=O GHASVSINZRGABV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 102000006354 HLA-DR Antigens Human genes 0.000 description 1
- 108010058597 HLA-DR Antigens Proteins 0.000 description 1
- 206010018910 Haemolysis Diseases 0.000 description 1
- 101000897405 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD20 Proteins 0.000 description 1
- 101001046686 Homo sapiens Integrin alpha-M Proteins 0.000 description 1
- 101001057504 Homo sapiens Interferon-stimulated gene 20 kDa protein Proteins 0.000 description 1
- 101001055144 Homo sapiens Interleukin-2 receptor subunit alpha Proteins 0.000 description 1
- 101000917858 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-A Proteins 0.000 description 1
- 101000917839 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-B Proteins 0.000 description 1
- 101000946889 Homo sapiens Monocyte differentiation antigen CD14 Proteins 0.000 description 1
- 101000669402 Homo sapiens Toll-like receptor 7 Proteins 0.000 description 1
- 101000800483 Homo sapiens Toll-like receptor 8 Proteins 0.000 description 1
- 101000801234 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 18 Proteins 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 102000037982 Immune checkpoint proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091008036 Immune checkpoint proteins Proteins 0.000 description 1
- 229930010555 Inosine Natural products 0.000 description 1
- UGQMRVRMYYASKQ-KQYNXXCUSA-N Inosine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C2=NC=NC(O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 1
- 102100022338 Integrin alpha-M Human genes 0.000 description 1
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 1
- 102100026878 Interleukin-2 receptor subunit alpha Human genes 0.000 description 1
- 102100029185 Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-B Human genes 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 102000029749 Microtubule Human genes 0.000 description 1
- 108091022875 Microtubule Proteins 0.000 description 1
- 102100035877 Monocyte differentiation antigen CD14 Human genes 0.000 description 1
- 239000005041 Mylar™ Substances 0.000 description 1
- ZDZOTLJHXYCWBA-VCVYQWHSSA-N N-debenzoyl-N-(tert-butoxycarbonyl)-10-deacetyltaxol Chemical compound O([C@H]1[C@H]2[C@@](C([C@H](O)C3=C(C)[C@@H](OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)OC(C)(C)C)C=4C=CC=CC=4)C[C@]1(O)C3(C)C)=O)(C)[C@@H](O)C[C@H]1OC[C@]12OC(=O)C)C(=O)C1=CC=CC=C1 ZDZOTLJHXYCWBA-VCVYQWHSSA-N 0.000 description 1
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 1
- 108091005461 Nucleic proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000004677 Nylon Substances 0.000 description 1
- 108010038807 Oligopeptides Proteins 0.000 description 1
- 102000015636 Oligopeptides Human genes 0.000 description 1
- 239000012124 Opti-MEM Substances 0.000 description 1
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002033 PVDF binder Substances 0.000 description 1
- 229930012538 Paclitaxel Natural products 0.000 description 1
- 208000002151 Pleural effusion Diseases 0.000 description 1
- 239000004695 Polyether sulfone Substances 0.000 description 1
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- 102000002067 Protein Subunits Human genes 0.000 description 1
- 108010001267 Protein Subunits Proteins 0.000 description 1
- CZPWVGJYEJSRLH-UHFFFAOYSA-N Pyrimidine Chemical compound C1=CN=CN=C1 CZPWVGJYEJSRLH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091028664 Ribonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 239000006146 Roswell Park Memorial Institute medium Substances 0.000 description 1
- 241000315672 SARS coronavirus Species 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000024932 T cell mediated immunity Effects 0.000 description 1
- 229940123237 Taxane Drugs 0.000 description 1
- 239000004809 Teflon Substances 0.000 description 1
- 229920006362 Teflon® Polymers 0.000 description 1
- RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-N Thiophosphoric acid Chemical class OP(O)(S)=O RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010060818 Toll-Like Receptor 9 Proteins 0.000 description 1
- 102000008235 Toll-Like Receptor 9 Human genes 0.000 description 1
- 102100039390 Toll-like receptor 7 Human genes 0.000 description 1
- 102100033110 Toll-like receptor 8 Human genes 0.000 description 1
- 102100033728 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 18 Human genes 0.000 description 1
- 206010067584 Type 1 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- FJWGYAHXMCUOOM-QHOUIDNNSA-N [(2s,3r,4s,5r,6r)-2-[(2r,3r,4s,5r,6s)-4,5-dinitrooxy-2-(nitrooxymethyl)-6-[(2r,3r,4s,5r,6s)-4,5,6-trinitrooxy-2-(nitrooxymethyl)oxan-3-yl]oxyoxan-3-yl]oxy-3,5-dinitrooxy-6-(nitrooxymethyl)oxan-4-yl] nitrate Chemical compound O([C@@H]1O[C@@H]([C@H]([C@H](O[N+]([O-])=O)[C@H]1O[N+]([O-])=O)O[C@H]1[C@@H]([C@@H](O[N+]([O-])=O)[C@H](O[N+]([O-])=O)[C@@H](CO[N+]([O-])=O)O1)O[N+]([O-])=O)CO[N+](=O)[O-])[C@@H]1[C@@H](CO[N+]([O-])=O)O[C@@H](O[N+]([O-])=O)[C@H](O[N+]([O-])=O)[C@H]1O[N+]([O-])=O FJWGYAHXMCUOOM-QHOUIDNNSA-N 0.000 description 1
- 230000001594 aberrant effect Effects 0.000 description 1
- 229940022663 acetate Drugs 0.000 description 1
- 230000021736 acetylation Effects 0.000 description 1
- 238000006640 acetylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 1
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 1
- 229940100198 alkylating agent Drugs 0.000 description 1
- 239000002168 alkylating agent Substances 0.000 description 1
- 239000013566 allergen Substances 0.000 description 1
- 239000000956 alloy Substances 0.000 description 1
- 229910045601 alloy Inorganic materials 0.000 description 1
- WYTGDNHDOZPMIW-RCBQFDQVSA-N alstonine Natural products C1=CC2=C3C=CC=CC3=NC2=C2N1C[C@H]1[C@H](C)OC=C(C(=O)OC)[C@H]1C2 WYTGDNHDOZPMIW-RCBQFDQVSA-N 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000000137 annealing Methods 0.000 description 1
- 230000008485 antagonism Effects 0.000 description 1
- 230000000340 anti-metabolite Effects 0.000 description 1
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 1
- 229940127219 anticoagulant drug Drugs 0.000 description 1
- 230000030741 antigen processing and presentation Effects 0.000 description 1
- 229940100197 antimetabolite Drugs 0.000 description 1
- 239000002256 antimetabolite Substances 0.000 description 1
- 239000003972 antineoplastic antibiotic Substances 0.000 description 1
- 230000005775 apoptotic pathway Effects 0.000 description 1
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 description 1
- VSRXQHXAPYXROS-UHFFFAOYSA-N azanide;cyclobutane-1,1-dicarboxylic acid;platinum(2+) Chemical compound [NH2-].[NH2-].[Pt+2].OC(=O)C1(C(O)=O)CCC1 VSRXQHXAPYXROS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 210000001772 blood platelet Anatomy 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 1
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 229960004562 carboplatin Drugs 0.000 description 1
- 230000032823 cell division Effects 0.000 description 1
- 230000003915 cell function Effects 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 1
- 230000012292 cell migration Effects 0.000 description 1
- 210000003855 cell nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 230000005754 cellular signaling Effects 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- 150000001945 cysteines Chemical class 0.000 description 1
- 230000016396 cytokine production Effects 0.000 description 1
- 108010021994 cytomegalovirus matrix protein 65kDa Proteins 0.000 description 1
- 210000004292 cytoskeleton Anatomy 0.000 description 1
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003145 cytotoxic factor Substances 0.000 description 1
- 230000002939 deleterious effect Effects 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 238000000432 density-gradient centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000005547 deoxyribonucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000002637 deoxyribonucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 230000000779 depleting effect Effects 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 229940061607 dibasic sodium phosphate Drugs 0.000 description 1
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 1
- 239000004205 dimethyl polysiloxane Substances 0.000 description 1
- 235000013870 dimethyl polysiloxane Nutrition 0.000 description 1
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000002224 dissection Methods 0.000 description 1
- 239000003534 dna topoisomerase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 229960003668 docetaxel Drugs 0.000 description 1
- 229960004679 doxorubicin Drugs 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 238000001312 dry etching Methods 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 230000005966 endogenous activation Effects 0.000 description 1
- 210000004700 fetal blood Anatomy 0.000 description 1
- 238000009459 flexible packaging Methods 0.000 description 1
- 229960002949 fluorouracil Drugs 0.000 description 1
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 229940050410 gluconate Drugs 0.000 description 1
- 229960001031 glucose Drugs 0.000 description 1
- 229960005150 glycerol Drugs 0.000 description 1
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 1
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 1
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 230000008588 hemolysis Effects 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000006450 immune cell response Effects 0.000 description 1
- 239000012642 immune effector Substances 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 230000017555 immunoglobulin mediated immune response Effects 0.000 description 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 1
- 229940121354 immunomodulator Drugs 0.000 description 1
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 1
- 238000010874 in vitro model Methods 0.000 description 1
- 229940060367 inert ingredients Drugs 0.000 description 1
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 238000001746 injection moulding Methods 0.000 description 1
- 229960003786 inosine Drugs 0.000 description 1
- 230000031146 intracellular signal transduction Effects 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 229960004768 irinotecan Drugs 0.000 description 1
- UWKQSNNFCGGAFS-XIFFEERXSA-N irinotecan Chemical compound C1=C2C(CC)=C3CN(C(C4=C([C@@](C(=O)OC4)(O)CC)C=4)=O)C=4C3=NC2=CC=C1OC(=O)N(CC1)CCC1N1CCCCC1 UWKQSNNFCGGAFS-XIFFEERXSA-N 0.000 description 1
- 230000001788 irregular Effects 0.000 description 1
- 238000000608 laser ablation Methods 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 230000002934 lysing effect Effects 0.000 description 1
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 229940041290 mannose Drugs 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 210000004688 microtubule Anatomy 0.000 description 1
- 230000011278 mitosis Effects 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 229940045641 monobasic sodium phosphate Drugs 0.000 description 1
- 229910000403 monosodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019799 monosodium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 229920005615 natural polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000001613 neoplastic effect Effects 0.000 description 1
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 1
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 229920001778 nylon Polymers 0.000 description 1
- CXQXSVUQTKDNFP-UHFFFAOYSA-N octamethyltrisiloxane Chemical compound C[Si](C)(C)O[Si](C)(C)O[Si](C)(C)C CXQXSVUQTKDNFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002515 oligonucleotide synthesis Methods 0.000 description 1
- 229960001756 oxaliplatin Drugs 0.000 description 1
- DWAFYCQODLXJNR-BNTLRKBRSA-L oxaliplatin Chemical compound O1C(=O)C(=O)O[Pt]11N[C@@H]2CCCC[C@H]2N1 DWAFYCQODLXJNR-BNTLRKBRSA-L 0.000 description 1
- 239000005022 packaging material Substances 0.000 description 1
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 1
- 229960001592 paclitaxel Drugs 0.000 description 1
- 208000003154 papilloma Diseases 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 1
- 210000005105 peripheral blood lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000002085 persistent effect Effects 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- PTMHPRAIXMAOOB-UHFFFAOYSA-L phosphoramidate Chemical compound NP([O-])([O-])=O PTMHPRAIXMAOOB-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 150000008298 phosphoramidates Chemical class 0.000 description 1
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 1
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000000206 photolithography Methods 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 238000004987 plasma desorption mass spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 229910052697 platinum Inorganic materials 0.000 description 1
- 229920000435 poly(dimethylsiloxane) Polymers 0.000 description 1
- 229920003229 poly(methyl methacrylate) Polymers 0.000 description 1
- 229920000515 polycarbonate Polymers 0.000 description 1
- 239000004417 polycarbonate Substances 0.000 description 1
- 229920000728 polyester Polymers 0.000 description 1
- 229920006393 polyether sulfone Polymers 0.000 description 1
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 1
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 description 1
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 1
- 229940068965 polysorbates Drugs 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 229920001343 polytetrafluoroethylene Polymers 0.000 description 1
- 239000004810 polytetrafluoroethylene Substances 0.000 description 1
- 229920002981 polyvinylidene fluoride Polymers 0.000 description 1
- 229910052573 porcelain Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940093932 potassium hydroxide Drugs 0.000 description 1
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 230000007115 recruitment Effects 0.000 description 1
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 1
- 239000002336 ribonucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000002652 ribonucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 238000004904 shortening Methods 0.000 description 1
- 230000009450 sialylation Effects 0.000 description 1
- 229910052709 silver Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004332 silver Substances 0.000 description 1
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940083542 sodium Drugs 0.000 description 1
- 235000015424 sodium Nutrition 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M sodium dihydrogen phosphate Chemical compound [Na+].OP(O)([O-])=O AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 229940083608 sodium hydroxide Drugs 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 239000010935 stainless steel Substances 0.000 description 1
- 229910001220 stainless steel Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 150000005846 sugar alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 230000008093 supporting effect Effects 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 229920001059 synthetic polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000009897 systematic effect Effects 0.000 description 1
- DKPFODGZWDEEBT-QFIAKTPHSA-N taxane Chemical class C([C@]1(C)CCC[C@@H](C)[C@H]1C1)C[C@H]2[C@H](C)CC[C@@H]1C2(C)C DKPFODGZWDEEBT-QFIAKTPHSA-N 0.000 description 1
- RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N taxol Chemical compound O([C@@H]1[C@@]2(C[C@@H](C(C)=C(C2(C)C)[C@H](C([C@]2(C)[C@@H](O)C[C@H]3OC[C@]3([C@H]21)OC(C)=O)=O)OC(=O)C)OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)C=1C=CC=CC=1)C=1C=CC=CC=1)O)C(=O)C1=CC=CC=C1 RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 210000001541 thymus gland Anatomy 0.000 description 1
- 229940044693 topoisomerase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 230000002110 toxicologic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000027 toxicology Toxicity 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 1
- 102000035160 transmembrane proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091005703 transmembrane proteins Proteins 0.000 description 1
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 1
- 239000013638 trimer Substances 0.000 description 1
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 150000003722 vitamin derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 1
- 238000001039 wet etching Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
- C12N5/0636—T lymphocytes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/461—Cellular immunotherapy characterised by the cell type used
- A61K39/4611—T-cells, e.g. tumor infiltrating lymphocytes [TIL], lymphokine-activated killer cells [LAK] or regulatory T cells [Treg]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/462—Cellular immunotherapy characterized by the effect or the function of the cells
- A61K39/4622—Antigen presenting cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/464—Cellular immunotherapy characterised by the antigen targeted or presented
- A61K39/464838—Viral antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/515—Animal cells
- A61K2039/5154—Antigen presenting cells [APCs], e.g. dendritic cells or macrophages
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/55—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the host/recipient, e.g. newborn with maternal antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55522—Cytokines; Lymphokines; Interferons
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55561—CpG containing adjuvants; Oligonucleotide containing adjuvants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/58—Medicinal preparations containing antigens or antibodies raising an immune response against a target which is not the antigen used for immunisation
- A61K2039/585—Medicinal preparations containing antigens or antibodies raising an immune response against a target which is not the antigen used for immunisation wherein the target is cancer
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46
- A61K2239/31—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46 characterized by the route of administration
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46
- A61K2239/38—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46 characterised by the dose, timing or administration schedule
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46
- A61K2239/46—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46 characterised by the cancer treated
- A61K2239/55—Lung
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2510/00—Genetically modified cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/16011—Herpesviridae
- C12N2710/16111—Cytomegalovirus, e.g. human herpesvirus 5
- C12N2710/16134—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/20011—Papillomaviridae
- C12N2710/20034—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Immunology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Virology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Hematology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
본 출원은 항원 및 아주반트를 포함하는 T 세포, 이러한 T 세포를 제조하는 방법, 및 이러한 T 세포를 사용하는 방법, 예컨대 개체에서 면역 반응을 조정하는 방법을 제공한다.
Description
관련 출원에 대한 상호 참조
본 출원은 2018년 3월 12일에 출원된 미국 가출원 번호 62/641,987, 2018년 9월 28일에 출원된 미국 가출원 번호 62/738,941, 2019년 1월 18일에 출원된 미국 가출원 번호 62/794,516을 우선권 주장하며, 이들은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
ASCII 텍스트 파일의 서열 목록의 제출
하기 ASCII 텍스트 파일의 제출 내용은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다: 컴퓨터 판독가능 형태 (CRF)의 서열 목록 (파일명: 750322001540SEQLIST.TXT, 기록된 날짜: 2019년 3월 11일, 크기: 14 KB).
발명의 분야
본 개시내용은 일반적으로 항원 및/또는 아주반트를 포함하는 T 세포, 이러한 T 세포를 제조하는 방법 및 이러한 T 세포를 사용하는 방법, 예컨대 개체에서 면역 반응을 조정하는 방법에 관한 것이다.
면역요법은 수동 또는 능동의 2가지 주요 유형의 개입으로 나누어질 수 있다. 수동 프로토콜은 사전-활성화 및/또는 조작된 세포, 질환-특이적 치료 항체 및/또는 시토카인의 투여를 포함한다. 능동 면역요법 전략은 생체내 면역계 이펙터 기능을 자극하는 것을 겨낭한다. 여러 현행 능동 프로토콜은 질환-연관 펩티드, 용해물 또는 동종이형 전세포를 사용한 백신접종 전략, 종양 항원 전달을 위한 비히클로서의 자가 DC의 주입, 및 면역 체크포인트 조정제의 주입을 포함한다. 문헌 [Papaioannou, Nikos E., et al. Annals of translational medicine 4.14 (2016)]을 참조한다.
질환-연관 항원에 의해 자극된 CD8+ 세포독성 T 림프구 (CTL) 및 CD4+ 헬퍼 T (Th) 세포는 이환 세포를 표적화하고 파괴할 잠재력을 갖지만, 내인성 T 세포 반응을 유도하기 위한 현행 방법은 도전에 직면하였다.
특허 출원 및 공개를 포함한 본원에 인용된 모든 참고문헌은 그 전문이 참조로 포함된다.
일부 측면에서, 본 발명은 항원 및 아주반트를 포함하는 변형된 T 세포이며, 여기서 항원은 변형된 T 세포에 대해 외인성이고 면역원성 에피토프를 포함하고, 여기서 아주반트는 세포내 존재하는 것인 변형된 T 세포를 제공한다. 일부 실시양태에서, 본 발명은 서열식별번호(SEQ ID NO): 18-25 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 항원을 포함하는 변형된 T 세포를 제공한다.
일부 측면에서, 본 발명은 항원 및 아주반트를 포함하는 변형된 T 세포이며, 여기서 항원은 면역원성 에피토프를 포함하고, a) 투입 T 세포를 포함하는 세포 현탁액을 세포-변형 압박부에 통과시키며, 여기서 압박부의 직경은 현탁액 중 투입 T 세포의 직경의 함수이고, 이에 의해 항원 및 아주반트가 통과하기에 충분히 큰 투입 T 세포의 교란을 유발하여 교란된 투입 T 세포를 형성하는 단계; 및 b) 교란된 투입 T 세포로 항원 및 아주반트가 들어가도록 하기에 충분한 시간 동안 교란된 투입 T 세포를 항원 및 아주반트와 함께 인큐베이션하고, 이에 의해 항원 및 아주반트를 포함하는 변형된 T 세포를 생성시키는 단계를 포함하는 방법에 의해 제조되는 변형된 T 세포를 제공한다. 일부 실시양태에서, 교란된 투입 T 세포와 함께 인큐베이션된 항원의 농도는 약 0.1 μM 내지 약 1 mM이고/거나 교란된 투입 T 세포와 함께 인큐베이션된 아주반트의 농도는 약 0.1 μM 내지 약 1 mM이다. 일부 실시양태에서, 교란된 투입 T 세포와 함께 인큐베이션된 아주반트에 대한 항원의 비는 약 10000:1 내지 약 1:10000이다.
일부 측면에서, 본 발명은 항원 및 아주반트를 포함하는 변형된 T 세포이며, 여기서 항원은 면역원성 에피토프를 포함하고, a) 아주반트를 포함하는 투입 T 세포를 포함하는 세포 현탁액을 세포-변형 압박부에 통과시키며, 여기서 압박부의 직경은 현탁액 중 투입 T 세포의 직경의 함수이고, 이에 의해 항원이 통과하기에 충분히 큰 투입 T 세포의 교란을 유발하여 교란된 투입 T 세포를 형성하는 단계; 및 b) 교란된 투입 T 세포로 항원이 들어가도록 하기에 충분한 시간 동안 교란된 투입 T 세포를 항원과 함께 인큐베이션하고, 이에 의해 항원 및 아주반트를 포함하는 변형된 T 세포를 생성시키는 단계를 포함하는 방법에 의해 제조되는 변형된 T 세포를 제공한다. 일부 실시양태에서, 교란된 투입 T 세포와 함께 인큐베이션된 항원의 농도는 약 0.1 μM 내지 약 1 mM이다.
일부 측면에서, 본 발명은 항원 및 아주반트를 포함하는 변형된 T 세포이며, 여기서 항원은 면역원성 에피토프를 포함하고, a) 항원을 포함하는 투입 T 세포를 포함하는 세포 현탁액을 세포-변형 압박부에 통과시키며, 여기서 압박부의 직경은 현탁액 중 투입 T 세포의 직경의 함수이고, 이에 의해 아주반트가 통과하기에 충분히 큰 투입 T 세포의 교란을 유발하여 교란된 투입 T 세포를 형성하는 단계; 및 b) 교란된 투입 T 세포로 아주반트가 들어가도록 하기에 충분한 시간 동안 교란된 투입 T 세포를 아주반트와 함께 인큐베이션하고, 이에 의해 항원 및 아주반트를 포함하는 변형된 T 세포를 생성시키는 단계를 포함하는 방법에 의해 제조되는 변형된 T 세포를 제공한다. 일부 실시양태에서, 교란된 투입 T 세포와 함께 인큐베이션된 아주반트의 농도는 약 0.1 μM 내지 약 1 mM이다.
일부 실시양태에서, 투입 T 세포가 압박부를 통과할 때 투입 T 세포에 변형력이 가해져 투입 T 세포의 교란을 유발한다. 일부 실시양태에서, 방법은 추가의 인큐베이션 단계 없이 제조된 상응하는 변형된 T 세포와 비교하여 변형된 T 세포의 생존율 및/또는 기능을 증진시키는 작용제와 함께 투입 T 세포 및/또는 변형된 T 세포를 인큐베이션하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 작용제는 세포내이입을 증진시키는 화합물이거나 또는 안정화제 또는 보조-인자로서 작용한다. 일부 실시양태에서, 압박부의 직경은 투입 T 세포의 직경보다 더 작다. 일부 실시양태에서, 압박부의 직경은 투입 T 세포의 직경의 약 20% 내지 약 99%이다. 일부 실시양태에서, 압박부의 직경은 투입 T 세포의 직경의 약 20% 내지 약 60%이다.
일부 실시양태에서, 항원 및/또는 아주반트는 변형된 T 세포의 시토졸 및/또는 소포에 존재한다. 일부 실시양태에서, 소포는 엔도솜이다. 일부 실시양태에서, 항원 및/또는 아주반트는 변형된 T 세포의 다중 구획에 존재한다. 일부 실시양태에서, 항원 또는 면역원성 에피토프는 변형된 T 세포의 표면에 결합된다.
일부 실시양태에서, 아주반트는 CpG 올리고데옥시뉴클레오티드 (ODN), IFN-α, STING 효능제, RIG-I 효능제 또는 폴리 I:C이다. 일부 실시양태에서, 아주반트는 CpG ODN이다. 일부 실시양태에서, CpG ODN은 부류 A CpG ODN, 부류 B CpG ODN 또는 부류 C CpG ODN이다.
일부 실시양태에서, 면역원성 에피토프는 질환-연관 항원으로부터 유래된다. 일부 실시양태에서, 면역원성 에피토프는 이환 세포로부터 단리된 펩티드 또는 mRNA로부터 유래된다. 일부 실시양태에서, 면역원성 에피토프는 비-자기 항원으로부터 유래된다. 일부 실시양태에서, 면역원성 에피토프는 종양 항원, 바이러스 항원, 박테리아 항원 또는 진균 항원으로부터 유래된다. 일부 실시양태에서, 면역원성 에피토프는 인간 유두종바이러스 (HPV) 항원으로부터 유래된다. 일부 실시양태에서, HPV는 HPV-16 또는 HPV-18이다. 일부 실시양태에서, 항원은 HPV E6 및/또는 E7로부터 유래된 HLA-A2-제한 펩티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, HLA-A2-제한 펩티드는 서열식별번호: 1-4 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항원은 서열식별번호: 18-25 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변형된 T 세포는 복수의 면역원성 에피토프를 포함하는 복수의 항원을 포함한다. 일부 실시양태에서, 개체에게 복수의 면역원성 에피토프를 포함하는 복수의 항원을 포함하는 변형된 T 세포를 투여한 후에, 복수의 면역원성 에피토프 중 어떠한 것도 개체에서 임의의 다른 면역원성 에피토프에 대한 면역 반응을 감소시키지 않는다. 일부 실시양태에서, 항원은 폴리펩티드이고, 면역원성 에피토프는 면역원성 펩티드 에피토프이다. 일부 실시양태에서, 면역원성 펩티드 에피토프는 N-말단 플랭킹 폴리펩티드 및/또는 C-말단 플랭킹 폴리펩티드에 융합된다. 일부 실시양태에서, 항원은 면역원성 펩티드 에피토프 및 1개 이상의 이종 펩티드 서열을 포함하는 폴리펩티드이다. 일부 실시양태에서, 항원은 N-말단 및/또는 C-말단에 이종 펩티드 서열이 플랭킹되어 있는 면역원성 펩티드 에피토프를 포함하는 폴리펩티드이다. 일부 실시양태에서, 플랭킹 이종 펩티드 서열은 질환-연관 면역원성 펩티드로부터 유래된다. 일부 실시양태에서, N-말단 플랭킹 폴리펩티드는 서열식별번호: 5-10 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하고/거나 C-말단 플랭킹 폴리펩티드는 서열식별번호: 11-17 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항원은 MHC 부류 I-제한 펩티드 및/또는 MHC 부류 II-제한 펩티드로 프로세싱될 수 있다.
일부 실시양태에서, 변형된 T 세포는 아주반트를 약 0.1 μM 내지 약 1 mM의 농도로 포함한다. 일부 실시양태에서, 변형된 T 세포는 항원을 약 0.1 μM 내지 약 1 mM의 농도로 포함한다. 일부 실시양태에서, 항원 대 아주반트의 비는 약 10000:1 내지 약 1:10000이다. 일부 실시양태에서, 변형된 T 세포는 a) 항원, b) 항원 및 적어도 1종의 다른 항원, 및/또는 c) 항원 및 아주반트를 포함하는 복합체를 포함한다.
일부 실시양태에서, 변형된 T 세포는 작용제를 포함하지 않는 상응하는 변형된 T 세포와 비교하여 변형된 T 세포의 생존율 및/또는 기능을 증진시키는 작용제를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 작용제는 세포내이입을 증진시키는 화합물, 안정화제 또는 보조-인자이다. 일부 실시양태에서, 작용제는 알부민이다. 일부 실시양태에서, 알부민은 마우스, 소 또는 인간 알부민이다. 일부 실시양태에서, 작용제는 2가 금속 양이온, 글루코스, ATP, 칼륨, 글리세롤, 트레할로스, D-수크로스, PEG1500, L-아르기닌, L-글루타민 또는 EDTA이다. 일부 실시양태에서, 작용제는 마우스 혈청 알부민 (MSA)을 포함한다.
일부 실시양태에서, 세포는 공동-자극 분자 중 1종 이상의 발현을 증가시키도록 추가로 변형된다. 일부 실시양태에서, 공동-자극 분자는 B7-H2 (ICOSL), B7-1 (CD80), B7-2 (CD86), CD70, LIGHT, HVEM, CD40, 4-1BBL, OX40L, TL1A, GITRL, CD30L, TIM4, SLAM, CD48, CD58, CD155 또는 CD112이다. 일부 실시양태에서, 세포는 1종 이상의 공동-자극 분자의 증가된 발현을 유발하는 핵산을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변형된 T 세포는 MHC 부류 I 발현을 조정하는 추가의 변형을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변형된 T 세포는 MHC 부류 II 발현을 조정하는 추가의 변형을 포함한다.
일부 실시양태에서, 동종이형 맥락에서 변형된 T 세포의 투여에 반응하여 개체에서 시작되는 선천성 면역 반응은, 동종이형 맥락에서 추가의 변형을 포함하지 않는 상응하는 변형된 T 세포의 투여에 반응하여 개체에서 시작되는 선천성 면역 반응과 비교하여 감소된다. 일부 실시양태에서, 변형된 T 세포가 투여된 개체에서의 이들 세포의 순환 반감기는, 추가의 변형을 포함하지 않는 상응하는 변형된 T 세포가 투여된 개체에서의 이들 세포의 순환 반감기와 비교하여 증가된다.
일부 실시양태에서, 변형된 T 세포는 헬퍼 T 세포, 세포독성 T 세포, 기억 T 세포 또는 자연 킬러 T 세포 중 1종 이상을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변형된 T 세포는 CD3+ T 세포, CD4+ T 세포, CD8+ T 세포, CD45RA+ T 세포, CD45RO+ T 세포 또는 γδ-T 세포 중 1종 이상을 포함한다.
일부 측면에서, 본 발명은 본원에 기재된 임의의 변형된 T 세포를 포함하는 조성물을 제공한다. 일부 측면에서, 본 발명은 본원에 기재된 바와 같은 변형된 T 세포 및 제약상 허용되는 담체를 포함하는 제약 조성물을 제공한다.
일부 측면에서, 본 발명은 개체에게 본원에 기재된 바와 같은 변형된 T 세포, 본원에 기재된 바와 같은 조성물 또는 본원에 기재된 바와 같은 제약 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 면역 반응을 조정하는 방법을 제공한다.
일부 측면에서, 본 발명은 a) 개체에게 서열식별번호: 18-25 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 항원을 포함하는 변형된 T 세포를 투여하는 단계; 및 b) 개체에게 아주반트를 투여하는 단계를 포함하는, 개체에서 면역 반응을 조정하는 방법을 제공한다.
일부 측면에서, 본 발명은 a) 투입 T 세포를 포함하는 세포 현탁액을 세포-변형 압박부에 통과시키며, 여기서 압박부의 직경은 현탁액 중 투입 T 세포의 직경의 함수이고, 이에 의해 항원 및 아주반트가 통과하기에 충분히 큰 투입 T 세포의 교란을 유발하여 교란된 투입 T 세포를 형성하며, 여기서 항원은 면역원성 에피토프를 포함하는 것인 단계; b) 교란된 투입 T 세포로 항원 및 아주반트가 들어가도록 하기에 충분한 시간 동안 교란된 투입 T 세포를 항원 및 아주반트와 함께 인큐베이션하고, 이에 의해 항원 및 아주반트를 포함하는 변형된 T 세포를 생성시키는 단계; 및 c) 개체에게 변형된 T 세포를 투여하는 단계를 포함하는, 개체에서 면역 반응을 조정하는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 교란된 투입 T 세포와 함께 인큐베이션된 항원의 농도는 약 0.1 μM 내지 약 1 mM이고/거나 교란된 투입 T 세포와 함께 인큐베이션된 아주반트의 농도는 약 0.1 μM 내지 약 1 mM이다. 일부 실시양태에서, 교란된 투입 T 세포와 함께 인큐베이션된 아주반트에 대한 항원의 비는 약 10000:1 내지 약 1:10000이다.
일부 측면에서, 본 발명은 a) 아주반트를 포함하는 투입 T 세포를 포함하는 세포 현탁액을 세포-변형 압박부에 통과시키며, 여기서 압박부의 직경은 현탁액 중 투입 T 세포의 직경의 함수이고, 이에 의해 항원이 통과하기에 충분히 큰 투입 T 세포의 교란을 유발하여 교란된 투입 T 세포를 형성하며, 여기서 항원은 면역원성 에피토프를 포함하는 것인 단계; b) 교란된 투입 T 세포로 항원이 들어가도록 하기에 충분한 시간 동안 교란된 투입 T 세포를 항원과 함께 인큐베이션하고, 이에 의해 항원 및 아주반트를 포함하는 변형된 T 세포를 생성시키는 단계; 및 c) 개체에게 변형된 T 세포를 투여하는 단계를 포함하는, 개체에서 면역 반응을 조정하는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 교란된 투입 T 세포와 함께 인큐베이션된 항원의 농도는 약 0.1 μM 내지 약 1 mM이다.
일부 측면에서, 본 발명은 a) 항원을 포함하는 투입 T 세포를 포함하는 세포 현탁액을 세포-변형 압박부에 통과시키며, 여기서 항원은 면역원성 에피토프를 포함하고, 여기서 압박부의 직경은 현탁액 중 투입 T 세포의 직경의 함수이고, 이에 의해 아주반트가 통과하기에 충분히 큰 투입 T 세포의 교란을 유발하여 교란된 투입 T 세포를 형성하는 단계; b) 교란된 투입 T 세포로 아주반트가 들어가도록 하기에 충분한 시간 동안 교란된 투입 T 세포를 아주반트와 함께 인큐베이션하고, 이에 의해 항원 및 아주반트를 포함하는 변형된 T 세포를 생성시키는 단계; 및 c) 개체에게 변형된 T 세포를 투여하는 단계를 포함하는, 개체에서 면역 반응을 조정하는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 교란된 투입 T 세포와 함께 인큐베이션된 아주반트의 농도는 약 0.1 μM 내지 약 1 mM이다. 일부 실시양태에서, 변형된 T 세포는 항원을 약 0.1 μM 내지 약 1 mM의 농도로 포함한다. 일부 실시양태에서, 변형된 T 세포는 아주반트를 약 0.1 μM 내지 약 1 mM의 농도로 포함한다. 일부 실시양태에서, 변형된 T 세포에서 항원 대 아주반트의 비는 약 10000:1 내지 약 1:10000이다.
일부 실시양태에서, 변형된 T 세포는 a) 항원, b) 항원 및 적어도 1종의 다른 항원, 및/또는 c) 항원 및 아주반트를 포함하는 복합체를 포함한다.
일부 측면에서, 본 발명은 a) 투입 T 세포를 포함하는 세포 현탁액을 세포-변형 압박부에 통과시키며, 여기서 압박부의 직경은 현탁액 중 투입 T 세포의 직경의 함수이고, 이에 의해 항원이 통과하기에 충분히 큰 투입 T 세포의 교란을 유발하여 교란된 투입 T 세포를 형성하며, 여기서 항원은 면역원성 에피토프를 포함하는 것인 단계; b) 교란된 투입 T 세포로 항원이 들어가도록 하기에 충분한 시간 동안 교란된 투입 T 세포를 항원과 함께 인큐베이션하고, 이에 의해 항원을 포함하는 변형된 T 세포를 생성시키는 단계; c) 개체에게 변형된 T 세포를 투여하는 단계; 및 d) 개체에게 아주반트를 투여하는 단계를 포함하는, 개체에서 면역 반응을 조정하는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 교란된 투입 T 세포와 함께 인큐베이션된 항원의 농도는 약 0.1 μM 내지 약 1 mM이다.
일부 실시양태에서, 투입 T 세포가 압박부를 통과할 때 투입 T 세포에 변형력이 가해져 투입 T 세포의 교란을 유발한다. 일부 실시양태에서, 방법은 추가의 인큐베이션 단계 없이 제조된 상응하는 변형된 T 세포와 비교하여 변형된 T 세포의 생존율 및/또는 기능을 증진시키는 작용제와 함께 투입 T 세포 및/또는 변형된 T 세포를 인큐베이션하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 작용제는 세포내이입을 증진시키는 화합물, 안정화제 또는 보조-인자이다. 방법의 일부 실시양태에서, 면역 반응이 증진된다. 일부 실시양태에서, 증진된 면역 반응은 항원에 대한 것이다. 일부 실시양태에서, 압박부의 직경은 투입 T 세포의 직경보다 더 작다. 일부 실시양태에서, 압박부의 직경은 투입 T 세포의 직경의 약 20% 내지 약 99%이다. 일부 실시양태에서, 압박부의 직경은 투입 T 세포의 직경의 약 20% 내지 약 60%이다.
일부 실시양태에서, 항원 및/또는 아주반트는 변형된 T 세포의 시토졸 및/또는 소포에 존재한다. 일부 실시양태에서, 소포는 엔도솜이다. 일부 실시양태에서, 항원 및/또는 아주반트는 변형된 T 세포의 다중 구획에 존재한다. 일부 실시양태에서, 항원 또는 면역원성 에피토프는 변형된 T 세포의 표면에 결합된다.
일부 실시양태에서, 아주반트는 CpG ODN, IFN-α, STING 효능제, RIG-I 효능제 또는 폴리 I:C이다. 일부 실시양태에서, 아주반트는 CpG ODN이다. 일부 실시양태에서, CpG ODN은 부류 A CpG ODN, 부류 B CpG ODN 또는 부류 C CpG ODN이다.
일부 실시양태에서, 면역원성 에피토프는 질환-연관 항원으로부터 유래된다. 일부 실시양태에서, 면역원성 에피토프는 이환 세포로부터 단리된 펩티드 또는 mRNA로부터 유래된다. 일부 실시양태에서, 면역원성 에피토프는 비-자기 항원으로부터 유래된다. 일부 실시양태에서, 면역원성 에피토프는 종양 항원, 바이러스 항원, 박테리아 항원 또는 진균 항원으로부터 유래된다. 일부 실시양태에서, 면역원성 에피토프는 인간 유두종바이러스 (HPV) 항원으로부터 유래된다. 일부 실시양태에서, HPV는 HPV-16 또는 HPV-18이다. 일부 실시양태에서, 항원은 HPV E6 및/또는 E7로부터 유래된 HLA-A2-제한 펩티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, HLA-A2-제한 펩티드는 서열식별번호: 1-4 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항원은 서열식별번호: 18-25 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변형된 T 세포는 복수의 면역원성 에피토프를 포함하는 복수의 항원을 포함한다. 일부 실시양태에서, 복수의 면역원성 에피토프 중 어떠한 것도 개체에서 임의의 다른 면역원성 에피토프에 대한 면역 반응을 감소시키지 않는다. 일부 실시양태에서, 항원은 폴리펩티드이고, 면역원성 에피토프는 면역원성 펩티드 에피토프이다. 일부 실시양태에서, 면역원성 펩티드 에피토프는 N-말단 플랭킹 폴리펩티드 및/또는 C-말단 플랭킹 폴리펩티드에 융합된다. 일부 실시양태에서, N-말단 플랭킹 폴리펩티드 및/또는 C-말단 플랭킹 폴리펩티드에 융합된 면역원성 펩티드 에피토프는 비-자연 발생 서열이다. 일부 실시양태에서, N-말단 및/또는 C-말단 플랭킹 폴리펩티드는 면역원성 합성 긴 펩티드 (SLP)로부터 유래된다. 일부 실시양태에서, N-말단 및/또는 C-말단 플랭킹 폴리펩티드는 질환-연관 면역원성 SLP로부터 유래된다. 일부 실시양태에서, N-말단 플랭킹 폴리펩티드는 서열식별번호: 5-10 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하고/거나 C-말단 플랭킹 폴리펩티드는 서열식별번호: 11-17 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항원은 MHC 부류 I-제한 펩티드 및/또는 MHC 부류 II-제한 펩티드로 프로세싱될 수 있다.
일부 실시양태에서, 변형된 T 세포는 작용제를 포함하지 않는 상응하는 변형된 T 세포와 비교하여 변형된 T 세포의 생존율 및/또는 기능을 증진시키는 작용제를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 작용제는 세포내이입을 증진시키는 화합물, 안정화제 또는 보조-인자이다. 일부 실시양태에서, 작용제는 알부민이다. 일부 실시양태에서, 알부민은 마우스, 소 또는 인간 알부민이다. 일부 실시양태에서, 작용제는 2가 금속 양이온, 글루코스, ATP, 칼륨, 글리세롤, 트레할로스, D-수크로스, PEG1500, L-아르기닌, L-글루타민 또는 EDTA이다. 일부 실시양태에서, 변형된 T 세포는 MHC 부류 I 발현을 조정하는 추가의 변형을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변형된 T 세포는 MHC 부류 II 발현을 조정하는 추가의 변형을 포함한다.
일부 실시양태에서, 동종이형 맥락에서 변형된 T 세포의 투여에 반응하여 개체에서 시작되는 선천성 면역 반응은, 동종이형 맥락에서 추가의 변형을 포함하지 않는 상응하는 변형된 T 세포의 투여에 반응하여 개체에서 시작되는 선천성 면역 반응과 비교하여 감소된다. 일부 실시양태에서, 변형된 T 세포가 투여된 개체에서의 이들 세포의 순환 반감기는, 추가의 변형을 포함하지 않는 상응하는 변형된 T 세포가 투여된 개체에서의 이들 세포의 순환 반감기와 비교하여 증가된다.
일부 실시양태에서, 변형된 T 세포는 헬퍼 T 세포, 세포독성 T 세포, 기억 T 세포 또는 자연 킬러 T 세포 중 1종 이상을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변형된 T 세포는 CD3+ T 세포, CD4+ T 세포, CD8+ T 세포, CD45RA+ T 세포, CD45RO+ T 세포 또는 γδ-T 세포 중 1종 이상을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변형된 T 세포는 개체에 대해 동종이형이다. 일부 실시양태에서, 변형된 T 세포는 개체에 대해 자가이다. 일부 실시양태에서, 개체는 염증 및/또는 면역 반응을 조정하도록 사전-조건화된다.
일부 실시양태에서, 방법은 개체에게 제2 아주반트를 투여하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 제2 아주반트는 IFN-α 또는 CpG ODN이다. 일부 실시양태에서, 변형된 T 세포 및 제2 아주반트는 공동으로 또는 동시에 투여된다. 일부 실시양태에서, 변형된 T 세포 및 제2 아주반트는 순차적으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 변형된 T 세포는 제2 아주반트의 투여 전에 투여된다. 일부 실시양태에서, 변형된 T 세포는 제2 아주반트의 투여 후에 투여된다.
일부 실시양태에서, 변형된 T 세포는 면역 체크포인트 억제제의 투여 전에, 그와 공동으로 또는 그 후에 투여된다. 일부 실시양태에서, 면역 체크포인트 억제제는 PD-1, PD-L1, CTLA-4 및 TIM-3 중 어느 하나를 표적화한다. 일부 실시양태에서, 개체에게 변형된 T 세포를 투여하는 것은 항원에 특이적인 세포독성 T 림프구 (CTL)의 활성화 및/또는 확장을 유발한다. 일부 실시양태에서, 개체에게 변형된 T 세포를 투여하는 것은 항원에 특이적인 헬퍼 T (Th) 세포의 활성화 및/또는 확장을 유발한다. 일부 실시양태에서, 개체에게 투여되는 변형된 T 세포의 양은 약 1 x 106 내지 약 1 x 1012개의 세포이다.
일부 실시양태에서, 방법은 변형된 T 세포의 다중 투여를 포함한다. 일부 실시양태에서, 변형된 T 세포의 2회 연속 투여 사이의 시간 간격은 약 1일 내지 약 30일이다.
일부 측면에서, 본 발명은 개체에게 항원과 회합된 변형된 T 세포를 투여하는 것을 포함하며, 여기서 변형된 T 세포는
a) 항원이 투입 T 세포의 세포 표면과 회합되도록 하기에 충분한 시간 동안 투입 T 세포를 항원 및/또는 아주반트와 함께 인큐베이션하고, 여기서 항원은 면역원성 에피토프를 포함하고, 이에 의해 항원과 회합된 변형된 T 세포를 생성시키는 단계; 및 b) 개체에게 변형된 T 세포를 투여하는 단계
를 포함하는 방법에 의해 제조되는 것인, 개체에서 면역 반응을 조정하는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, HPV 항원은 서열식별번호: 18-25 중 어느 하나에 대해 적어도 90% 유사성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, HPV 항원은 서열식별번호: 23의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 아주반트는 CpG ODN이다. 일부 실시양태에서, CpG ODN은 CpG ODN 1018, CpG ODN 1826 또는 CpG ODN 2006이다.
도 1a는 처리군 및 스케줄의 대표적인 개략도를 보여준다. 도 1b는 도 1a에 약술된 비처리군 (T 세포의 입양 전달 부재)과 처리군 B-E로부터의 마우스 사이를 비교한, 식 ((길이 x 폭2)/2)에 의해 측정된 종양 성장을 보여준다.
도 2a는 E7 항원을 평가하기 위한 대표적인 개략도를 보여준다. 도 2b는 TAPC 백신접종에 반응하여 생성된 IFN-γ-생산 CD8+ T 세포에 대한 SLP 서열의 영향을 보여준다.
도 3은 시험관내 인간 모델에서 E6 반응자 T 세포에서의 항원-특이적 면역 반응을 유도하는 E6 SLP의 능력을 보여주는 그래프이다.
도 4는 시험관내 인간 모델에서 E711-20 반응자 T 세포에서의 항원-특이적 면역 반응을 유도하는 E7 SLP의 능력, 뿐만 아니라 SQZ T 세포 APC (Tapc) 활성화에 대한 SLP 서열의 영향을 보여준다.
도 5는 시험관내 인간 모델에서 SQZ T 세포 APC에 대한 항원의 용량을 평가하는 연구의 결과를 보여준다.
도 6은 시험관내 인간 모델에서 SQZ T 세포 APC에 대한 공여자 가변성을 결정하는 연구의 결과를 보여준다.
도 7a는 상이한 아주반트를 사용한 면역 반응의 강건성을 비교하는 실험의 개략도이다. 도 7b는 폴리 I:C 및 CpG ODN을 사용한 면역 반응의 강건성을 비교하는 실험의 결과를 보여준다.
도 8a는 면역 반응에 대한 CpG ODN의 농도의 효과를 평가하는 실험의 개략도이다. 도 8b는 면역 반응에 대한 CpG ODN의 농도의 효과를 평가하는 실험의 결과를 보여준다.
도 9a는 면역 반응에 대한 CpG ODN의 투여 스케줄을 평가하는 실험의 개략도이다. 도 9b는 면역 반응에 대한 CpG ODN의 투여 스케줄을 평가하는 실험의 결과를 보여준다.
도 10a는 TAPC 항종양 기능에 대한 세포내 및 전신 아주반트 투여의 조합을 평가하는 실험의 개략도이다. 도 10b는 각각의 실험군에 대한 T 세포 반응을 보여주고, 도 10c는 각각의 실험군에 대한 종양의 성장을 보여준다. 도 10d는 비처리된 동물에 비해 SQZ (E7+CpG)로 처리된 동물에서의 리챌린지 후 종양 성장을 보여준다.
도 11a는 TAPC 항종양 기능에 대한 다중 HPV 항원의 조합의 효과를 평가하는 실험의 개략도이다. 도 11b는 각각의 실험군에 대한 T 세포 반응을 보여주고, 도 11c는 각각의 실험군에 대한 종양의 성장을 보여준다.
도 12a는 E7-특이적 TAPC 항종양 효과에 대한 CpG 아주반트 투여 경로의 중요성을 평가하는 실험의 결과를 보여준다. 투여 스케줄이 제공된다. 도 12b는 각각의 처리군 내의 개별 마우스에 대한 시간 경과에 따른 종양 부피를 보여준다.
도 13은 공-투여된 아주반트가 E7-특이적 T 세포 종양 침윤을 유도하는 능력을 평가하는 실험의 개략도를 보여준다. T 세포 반응은 하부 패널에 제시된다.
도 14a는 E7 합성 긴 펩티드 (SLP) + CpG가 로딩된 TAPC의 프라임 및 부스트 둘 다에 대한 백신접종 스케줄을 결정하는 실험의 개략도이다. 도 14b는 각각의 실험군에 대한 종양의 성장을 보여준다.
도 15는 SQZ된 TAPC가 직접 항원을 제시할 수 있다는 것을 보여주는 실험의 결과를 보여준다.
도 16은 아주반트의 SQZ 전달이 시험관내 T 세포 시토카인 수준을 유의하게 변경시키지 않는다는 것을 보여준다.
도 17은 항원 +/- 아주반트의 SQZ 전달이 생체내 혈청 시토카인 수준을 유의하게 변경시키지 않는다는 것을 보여준다.
도 18a는 MHC-I 상에 제시된 최소 에피토프의 상대량을 갖는 세포 집단을 나타내는 히스토그램을 보여준다. 도 18b는 평균 형광 강도에 의해 측정된 세포당 항원 제시 양을 보여준다.
도 19는 시험관내 모델에서 CMV pp65 항원이 로딩된 T 세포가 pp65 반응자 T 세포에서 항원-특이적 면역 반응을 유도하는 능력을 보여준다.
도 20은 아주반트의 공-투여의 존재 또는 부재 하에 HPV 16 E7 SLP가 SQZ-로딩된 TAPC를 투여한 종양에 대한 종양 침윤 림프구 (TIL) 동원의 상대량을 보여준다.
도 21은 보다 짧은 기간의 보호 (우측 측복부 종양, 제0일에 주사)뿐만 아니라 보다 긴 기간의 보호 (좌측 측복부 종양, 제60일에 주사) 둘 다에 대해, APC로서 작용하는 SQZ-로딩된 T 세포의 HPV-연관 종양에 대한 예방적 치료 능력을 결정하는 실험에서의 시간 경과에 따른 종양 부피를 보여준다.
도 22는 APC로서 작용하는 SQZ-로딩된 T 세포의 HPV-연관 종양의 치유적 치료 능력에 대한 T 세포 용량, 아주반트의 공-투여뿐만 아니라 투여 횟수 (프라임 대 프라임/부스트)의 효과를 결정하는 실험에서의 시간 경과에 따른 종양 부피를 보여준다. 도 22에서 "P"는 프라임을 나타내고, "B"는 부스트를 나타낸다.
도 2a는 E7 항원을 평가하기 위한 대표적인 개략도를 보여준다. 도 2b는 TAPC 백신접종에 반응하여 생성된 IFN-γ-생산 CD8+ T 세포에 대한 SLP 서열의 영향을 보여준다.
도 3은 시험관내 인간 모델에서 E6 반응자 T 세포에서의 항원-특이적 면역 반응을 유도하는 E6 SLP의 능력을 보여주는 그래프이다.
도 4는 시험관내 인간 모델에서 E711-20 반응자 T 세포에서의 항원-특이적 면역 반응을 유도하는 E7 SLP의 능력, 뿐만 아니라 SQZ T 세포 APC (Tapc) 활성화에 대한 SLP 서열의 영향을 보여준다.
도 5는 시험관내 인간 모델에서 SQZ T 세포 APC에 대한 항원의 용량을 평가하는 연구의 결과를 보여준다.
도 6은 시험관내 인간 모델에서 SQZ T 세포 APC에 대한 공여자 가변성을 결정하는 연구의 결과를 보여준다.
도 7a는 상이한 아주반트를 사용한 면역 반응의 강건성을 비교하는 실험의 개략도이다. 도 7b는 폴리 I:C 및 CpG ODN을 사용한 면역 반응의 강건성을 비교하는 실험의 결과를 보여준다.
도 8a는 면역 반응에 대한 CpG ODN의 농도의 효과를 평가하는 실험의 개략도이다. 도 8b는 면역 반응에 대한 CpG ODN의 농도의 효과를 평가하는 실험의 결과를 보여준다.
도 9a는 면역 반응에 대한 CpG ODN의 투여 스케줄을 평가하는 실험의 개략도이다. 도 9b는 면역 반응에 대한 CpG ODN의 투여 스케줄을 평가하는 실험의 결과를 보여준다.
도 10a는 TAPC 항종양 기능에 대한 세포내 및 전신 아주반트 투여의 조합을 평가하는 실험의 개략도이다. 도 10b는 각각의 실험군에 대한 T 세포 반응을 보여주고, 도 10c는 각각의 실험군에 대한 종양의 성장을 보여준다. 도 10d는 비처리된 동물에 비해 SQZ (E7+CpG)로 처리된 동물에서의 리챌린지 후 종양 성장을 보여준다.
도 11a는 TAPC 항종양 기능에 대한 다중 HPV 항원의 조합의 효과를 평가하는 실험의 개략도이다. 도 11b는 각각의 실험군에 대한 T 세포 반응을 보여주고, 도 11c는 각각의 실험군에 대한 종양의 성장을 보여준다.
도 12a는 E7-특이적 TAPC 항종양 효과에 대한 CpG 아주반트 투여 경로의 중요성을 평가하는 실험의 결과를 보여준다. 투여 스케줄이 제공된다. 도 12b는 각각의 처리군 내의 개별 마우스에 대한 시간 경과에 따른 종양 부피를 보여준다.
도 13은 공-투여된 아주반트가 E7-특이적 T 세포 종양 침윤을 유도하는 능력을 평가하는 실험의 개략도를 보여준다. T 세포 반응은 하부 패널에 제시된다.
도 14a는 E7 합성 긴 펩티드 (SLP) + CpG가 로딩된 TAPC의 프라임 및 부스트 둘 다에 대한 백신접종 스케줄을 결정하는 실험의 개략도이다. 도 14b는 각각의 실험군에 대한 종양의 성장을 보여준다.
도 15는 SQZ된 TAPC가 직접 항원을 제시할 수 있다는 것을 보여주는 실험의 결과를 보여준다.
도 16은 아주반트의 SQZ 전달이 시험관내 T 세포 시토카인 수준을 유의하게 변경시키지 않는다는 것을 보여준다.
도 17은 항원 +/- 아주반트의 SQZ 전달이 생체내 혈청 시토카인 수준을 유의하게 변경시키지 않는다는 것을 보여준다.
도 18a는 MHC-I 상에 제시된 최소 에피토프의 상대량을 갖는 세포 집단을 나타내는 히스토그램을 보여준다. 도 18b는 평균 형광 강도에 의해 측정된 세포당 항원 제시 양을 보여준다.
도 19는 시험관내 모델에서 CMV pp65 항원이 로딩된 T 세포가 pp65 반응자 T 세포에서 항원-특이적 면역 반응을 유도하는 능력을 보여준다.
도 20은 아주반트의 공-투여의 존재 또는 부재 하에 HPV 16 E7 SLP가 SQZ-로딩된 TAPC를 투여한 종양에 대한 종양 침윤 림프구 (TIL) 동원의 상대량을 보여준다.
도 21은 보다 짧은 기간의 보호 (우측 측복부 종양, 제0일에 주사)뿐만 아니라 보다 긴 기간의 보호 (좌측 측복부 종양, 제60일에 주사) 둘 다에 대해, APC로서 작용하는 SQZ-로딩된 T 세포의 HPV-연관 종양에 대한 예방적 치료 능력을 결정하는 실험에서의 시간 경과에 따른 종양 부피를 보여준다.
도 22는 APC로서 작용하는 SQZ-로딩된 T 세포의 HPV-연관 종양의 치유적 치료 능력에 대한 T 세포 용량, 아주반트의 공-투여뿐만 아니라 투여 횟수 (프라임 대 프라임/부스트)의 효과를 결정하는 실험에서의 시간 경과에 따른 종양 부피를 보여준다. 도 22에서 "P"는 프라임을 나타내고, "B"는 부스트를 나타낸다.
항원 제시 세포 (APC)는 CTL의 내인성 활성화를 유도하는데 주요 역할을 한다. 본 연구에서, 암 및 감염성 질환을 포함한 다양한 적응증에 대한 면역 반응을 조정하는데 사용하기 위한 T 세포 APC (TAPC)를 조작하는 셀스퀴즈(CellSqueeze)® 플랫폼의 실행이 기재된다. 표적 항원 및/또는 아주반트의 T 세포로의 효율적인 시토졸 전달을 가능하게 함으로써, 이 플랫폼은 생체내에서 효과적인 표적 항원의 MHC-I 제시 및 CTL의 자극을 유도하는 능력을 입증하였다.
본 출원은 일부 측면에서 항원 및 아주반트를 포함하는 변형된 T 세포이며, 여기서 항원은 면역원성 에피토프를 포함하고, 여기서 아주반트는 세포내 존재하는 것인 변형된 T 세포를 제공한다. 일부 실시양태에서, 변형된 T 세포는 a) 투입 T 세포를 세포-변형 압박부에 통과시키며, 여기서 압박부의 직경은 투입 T 세포의 직경의 함수이고, 이에 의해 항원 및 아주반트가 통과하기에 충분히 큰 투입 T 세포의 교란을 유발하여 교란된 투입 T 세포를 형성하는 단계; 및 b) 교란된 투입 T 세포로 항원 및 아주반트가 들어가도록 하기에 충분한 시간 동안 교란된 투입 T 세포를 항원 및 아주반트와 함께 인큐베이션하고, 이에 의해 항원 및 아주반트를 포함하는 변형된 T 세포를 생성시키는 단계에 의해 제조된다. 또한, 개체에서 면역 반응을 조정하기 위해, 예를 들어 개체에서 면역 반응을 증진시키기 위해 변형된 T 세포를 사용하는 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 증진된 면역 반응은 항원에 대한 것이다. 일부 실시양태에서, 세포-변형 압박부는 마이크로유체 채널, 예컨대 본원에 기재된 임의의 마이크로유체 채널에 함유된다.
다른 측면에서, 개체에게 a) 면역원성 에피토프를 포함하는 항원을 포함하는 변형된 T 세포; 및 b) 아주반트를 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 면역 반응을 조정하는 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 변형된 T 세포는 a) 투입 T 세포를 세포-변형 압박부에 통과시키며, 여기서 압박부의 직경은 투입 T 세포의 직경의 함수이고, 이에 의해 항원이 통과하기에 충분히 큰 투입 T 세포의 교란을 유발하여 교란된 투입 T 세포를 형성하는 단계; 및 b) 교란된 투입 T 세포로 항원이 들어가도록 하기에 충분한 시간 동안 교란된 투입 T 세포를 항원과 함께 인큐베이션하고, 이에 의해 항원을 포함하는 변형된 T 세포를 생성시키는 단계에 의해 제조된다. 일부 실시양태에서, 면역 반응이 증진된다. 일부 실시양태에서, 증진된 면역 반응은 항원에 대한 것이다. 일부 실시양태에서, 세포-변형 압박부는 마이크로유체 채널, 예컨대 본원에 기재된 임의의 마이크로유체 채널에 함유된다.
일반적 기술
본원에 기재되거나 언급된 기술 및 절차는 일반적으로 널리 이해되고, 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 통상적인 방법론, 예컨대, 예를 들어 하기 문헌에 기재된 폭넓게 이용되는 방법론을 사용하여 통상적으로 사용된다: 문헌 [Molecular Cloning: A Laboratory Manual (Sambrook et al., 4th ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y., 2012); Current Protocols in Molecular Biology (F.M. Ausubel, et al. eds., 2003); the series Methods in Enzymology (Academic Press, Inc.); PCR 2: A Practical Approach (M.J. MacPherson, B.D. Hames and G.R. Taylor eds., 1995); Antibodies, A Laboratory Manual (Harlow and Lane, eds., 1988); Culture of Animal Cells: A Manual of Basic Technique and Specialized Applications (R.I. Freshney, 6th ed., J. Wiley and Sons, 2010); Oligonucleotide Synthesis (M.J. Gait, ed., 1984); Methods in Molecular Biology, Humana Press; Cell Biology: A Laboratory Notebook (J.E. Cellis, ed., Academic Press, 1998); Introduction to Cell and Tissue Culture (J.P. Mather and P.E. Roberts, Plenum Press, 1998); Cell and Tissue Culture: Laboratory Procedures (A. Doyle, J.B. Griffiths, and D.G. Newell, eds., J. Wiley and Sons, 1993-8); Handbook of Experimental Immunology (D.M. Weir and C.C. Blackwell, eds., 1996); Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells (J.M. Miller and M.P. Calos, eds., 1987); PCR: The Polymerase Chain Reaction, (Mullis et al., eds., 1994); Current Protocols in Immunology (J.E. Coligan et al., eds., 1991); Short Protocols in Molecular Biology (Ausubel et al., eds., J. Wiley and Sons, 2002); Immunobiology (C.A. Janeway et al., 2004); Antibodies (P. Finch, 1997); Antibodies: A Practical Approach (D. Catty., ed., IRL Press, 1988-1989); Monoclonal Antibodies: A Practical Approach (P. Shepherd and C. Dean, eds., Oxford University Press, 2000); Using Antibodies: A Laboratory Manual (E. Harlow and D. Lane, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1999); The Antibodies (M. Zanetti and J. D. Capra, eds., Harwood Academic Publishers, 1995); 및 Cancer: Principles and Practice of Oncology (V.T. DeVita et al., eds., J.B. Lippincott Company, 2011)].
정의
본 명세서를 해석하려는 목적을 위해, 하기 정의가 적용될 것이며, 적절한 경우에는 언제든지, 단수형으로 사용된 용어는 복수형을 또한 포함할 것이고, 그 반대의 경우도 마찬가지이다. 하기 제시된 임의의 정의가 본원에 참조로 포함된 임의의 문헌상의 내용과 상충할 경우에, 제시된 정의가 우선할 것이다.
본원에 사용된 단수 형태는 달리 나타내지 않는 한 복수 지시대상을 포함한다.
본원에 기재된 본 발명의 측면 및 실시양태는 측면 및 실시양태를 "포함하는", "이루어진" 및 "본질적으로 이루어진" 것을 포함하는 것으로 이해된다.
본원에 사용된 용어 "약"은 이러한 기술 분야의 통상의 기술자에게 용이하게 공지된 각각의 값에 대한 통상의 오차 범위를 지칭한다. 본원의 "약" 값 또는 파라미터에 대한 언급은 그 값 또는 파라미터 자체에 관한 실시양태를 포함 (및 기재)한다.
본원에 사용된 용어 "세공"은 물질 내의 구멍, 인열부, 공동, 개구, 파괴부, 간극 또는 천공을 포함하나 이에 제한되지는 않는 개구부를 지칭한다. 일부 예에서, (표시된 경우) 용어는 본 개시내용의 표면 내의 세공을 지칭한다. 다른 예에서, (표시된 경우) 세공은 세포 막 내의 세공을 지칭할 수 있다.
본원에 사용된 용어 "막"은 세공을 함유하는 선택적 장벽 또는 시트를 지칭한다. 상기 용어는 경계 또는 라이닝으로서 작용하는 유연한 시트상 구조를 포함한다. 일부 예에서, 상기 용어는 세공을 함유하는 표면 또는 필터를 지칭한다. 이 용어는 용어 "세포 막"과 구별된다.
본원에 사용된 용어 "필터"는 세공을 통한 선택적 통과를 허용하는 다공성 물품을 지칭한다. 일부 예에서, 상기 용어는 세공을 함유하는 표면 또는 막을 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "불균질"은 구조 또는 조성이 혼합되거나 균일하지 않은 것을 지칭한다. 일부 예에서, 상기 용어는 주어진 표면 내에서 다양한 크기, 형상 또는 분포를 갖는 세공을 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "균질"은 전반적으로 구조 또는 조성이 일관되거나 균일한 것을 지칭한다. 일부 예에서, 상기 용어는 주어진 표면 내에서 일관된 크기, 형상 또는 분포를 갖는 세공을 지칭한다.
용어 "이종"은 핵산 서열, 예컨대 코딩 서열 및 제어 서열에 관한 것일 때, 정상적으로 함께 연결되지 않고/거나 특정한 세포와 정상적으로 회합되지 않는 서열을 나타낸다. 따라서, 핵산 구축물 또는 벡터의 "이종" 영역은 자연에서 다른 분자와 회합된 채로 발견되지 않는 또 다른 핵산 분자 내의 또는 그에 부착된 핵산의 절편이다. 예를 들어, 핵산 구축물의 이종 영역은 자연에서 코딩 서열과 회합된 채로 발견되지 않는 서열이 플랭킹되어 있는 코딩 서열을 포함할 수 있다. 이종 코딩 서열의 또 다른 예는 코딩 서열 자체가 자연에서 발견되지 않는 구축물 (예를 들어, 천연 유전자와 상이한 코돈을 갖는 합성 서열)이다. 유사하게, 세포에 정상적으로 존재하지 않는 구축물로 형질전환된 세포는 본 발명의 목적상 이종으로 간주될 것이다. 대립유전자 변이 또는 자연 발생 돌연변이 사건은 본원에 사용된 바와 같은 이종 DNA를 생성시키지 않는다.
용어 "이종"은 아미노산 서열, 예컨대 펩티드 서열 및 폴리펩티드 서열에 관한 것일 때, 정상적으로 함께 연결되지 않고/거나 특정한 세포와 정상적으로 회합되지 않는 서열을 나타낸다. 따라서, 펩티드 서열의 "이종" 영역은 자연에서 다른 분자와 회합된 채로 발견되지 않는 또 다른 아미노산 분자 내의 또는 그에 부착된 아미노산의 절편이다. 예를 들어, 펩티드 구축물의 이종 영역은 자연에서 펩티드의 아미노산 서열과 회합된 채로 발견되지 않는 서열이 플랭킹되어 있는 펩티드의 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 이종 펩티드 서열의 또 다른 예는 펩티드 서열 자체가 자연에서 발견되지 않는 구축물 (예를 들어, 천연 유전자로부터 코딩되는 것과 상이한 아미노산을 갖는 합성 서열)이다. 유사하게, 세포에 정상적으로 존재하지 않는 아미노산 구축물을 발현하는 벡터로 형질전환된 세포는 본 발명의 목적상 이종으로 간주될 것이다. 대립유전자 변이 또는 자연 발생 돌연변이 사건은 본원에 사용된 바와 같은 이종 펩티드를 생성시키지 않는다.
용어 "외인성"은 세포와 관련하여 작용제, 예컨대 항원 또는 아주반트에 대해 사용되는 경우에 세포의 외부로부터 (즉, 세포 외부로부터) 전달되는 작용제를 지칭한다. 세포는 작용제가 이미 존재하거나 존재하지 않을 수 있고, 외인성 작용제가 전달된 후에 작용제를 생산하거나 생산하지 않을 수 있다.
본원에 사용된 용어 "억제하다"는 특정한 표적의 존재 또는 활성을 차단, 감소, 제거 또는 달리 길항하는 작용을 지칭할 수 있다. 억제는 부분 억제 또는 완전 억제를 지칭할 수 있다. 예를 들어, 면역 반응의 억제는 면역 반응의 차단, 감소, 제거 또는 임의의 다른 길항작용을 유도하는 임의의 작용을 지칭할 수 있다. 다른 예에서, 핵산 발현의 억제는 핵산 전사의 감소, mRNA 존재비의 감소 (예를 들어, mRNA 전사의 침묵), mRNA의 분해, mRNA 번역의 억제 등을 포함할 수 있으나 이에 제한되지는 않는다.
본원에 사용된 용어 "저해하다"는 특정한 표적의 존재 또는 활성을 저하, 감소, 금지, 제한, 경감 또는 달리 하락시키는 작용을 지칭할 수 있다. 저해는 부분 저해 또는 완전 저해를 지칭할 수 있다. 예를 들어, 면역 반응을 저해하는 것은 면역 반응을 저하, 감소, 금지, 제한, 경감 또는 달리 하락하도록 유도하는 임의의 작용을 지칭할 수 있다. 다른 예에서, 핵산 발현의 저해는 핵산 전사의 감소, mRNA 존재비의 감소 (예를 들어, mRNA 전사의 침묵), mRNA의 분해, mRNA 번역의 억제 등을 포함할 수 있으나 이에 제한되지는 않는다.
본원에 사용된 용어 "증진시키다"는 특정한 표적의 존재 또는 활성을 개선, 부스팅, 상승 또는 달리 증가시키는 작용을 지칭할 수 있다. 예를 들어, 면역 반응을 증진시키는 것은 면역 반응을 개선, 부스팅, 상승 또는 달리 증가시키도록 유도하는 임의의 작용을 지칭할 수 있다. 하나의 예시적인 예에서, 면역 반응을 증진시키는 것은 항원 및/또는 아주반트를 사용하여 면역 반응을 개선, 부스팅, 상승 또는 달리 증가시키는 것을 지칭할 수 있다. 다른 예에서, 핵산 발현의 증진은 핵산 전사의 증가, mRNA 존재비의 증가 (예를 들어, mRNA 전사의 증가), mRNA 분해의 감소, mRNA 번역의 증가 등을 포함할 수 있으나 이에 제한되지는 않는다.
본원에 사용된 용어 "조정하다"는 특정한 표적의 존재 또는 활성을 변화, 변경, 변이 또는 달리 변형시키는 작용을 지칭할 수 있다. 예를 들어, 면역 반응을 조정하는 것은 면역 반응을 변화, 변경, 변이 또는 달리 변형시키도록 유도하는 임의의 작용을 지칭할 수 있다. 다른 예에서, 핵산의 발현을 조정하는 것은 핵산 전사의 변화, mRNA 존재비의 변화 (예를 들어, mRNA 전사의 증가), mRNA 분해의 상응하는 변화, mRNA 번역의 변화 등을 포함할 수 있으나 이에 제한되지는 않는다.
본원에 사용된 용어 "유도하다"는 결과를 개시, 촉발, 자극, 확립 또는 달리 생성시키는 작용을 지칭할 수 있다. 예를 들어, 면역 반응의 유도는 목적하는 면역 반응을 개시, 촉발, 자극, 확립 또는 달리 생성시키도록 유도하는 임의의 작용을 지칭할 수 있다. 다른 예에서, 핵산 발현의 유도는 핵산 전사의 개시, mRNA 번역의 개시 등을 포함할 수 있으나 이에 제한되지는 않는다.
본원에 사용된 용어 "동종"은 동일한 유기체로부터 유래된 분자를 지칭한다. 일부 예에서, 상기 용어는 주어진 유기체 내에서 정상적으로 발견되거나 발현되는 핵산 또는 단백질을 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "폴리뉴클레오티드" 또는 "핵산"은 리보뉴클레오티드 또는 데옥시리보뉴클레오티드인 임의의 길이의 뉴클레오티드의 중합체 형태를 지칭한다. 따라서, 이 용어는 단일-, 이중- 또는 다중-가닥 DNA 또는 RNA, 게놈 DNA, cDNA, DNA-RNA 하이브리드, 또는 퓨린 및 피리미딘 염기를 포함하는 중합체, 또는 다른 천연, 화학적으로 또는 생화학적으로 변형된, 비-천연 또는 유도체화된 뉴클레오티드 염기를 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 폴리뉴클레오티드의 백본은 당 및 포스페이트 기 (전형적으로 RNA 또는 DNA에서 발견될 수 있는 것과 같음), 또는 변형되거나 치환된 당 또는 포스페이트 기를 포함할 수 있다. 대안적으로, 폴리뉴클레오티드의 백본은 합성 서브유닛, 예컨대 포스포르아미데이트 및 포스포로티오에이트의 중합체를 포함할 수 있고, 따라서 올리고데옥시뉴클레오시드 포스포르아미데이트 (P-NH2) 또는 혼합 포스포르아미데이트-포스포디에스테르 올리고머일 수 있다. 추가로, 이중 가닥 폴리뉴클레오티드는 화학적 합성의 단일 가닥 폴리뉴클레오티드 생성물로부터 상보적 가닥을 합성하고 가닥을 적절한 조건 하에 어닐링함으로써, 또는 적절한 프라이머와 함께 DNA 폴리머라제를 사용하여 신생 상보적 가닥을 합성함으로써 수득될 수 있다.
용어 "폴리펩티드" 및 "단백질"은 아미노산 잔기의 중합체를 지칭하는 것으로 상호교환가능하게 사용되고, 최소 길이로 제한되지 않는다. 이러한 아미노산 잔기의 중합체는 천연 또는 비-천연 아미노산 잔기를 함유할 수 있고, 아미노산 잔기의 펩티드, 올리고펩티드, 이량체, 삼량체 및 다량체를 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 전장 단백질 및 그의 단편이 둘 다 정의에 포괄된다. 상기 용어는 또한 폴리펩티드의 발현-후 변형, 예를 들어 글리코실화, 시알릴화, 아세틸화, 인산화 등을 포함한다. 추가로, 본 발명의 목적상, "폴리펩티드"는 단백질이 목적하는 활성을 유지하는 한, 천연 서열에 대한 변형, 예컨대 결실, 부가 및 치환 (일반적으로 자연에서는 보존적)을 포함하는 단백질을 지칭한다. 이들 변형은 부위-지정 돌연변이유발을 통해서와 같이 고의적일 수 있거나, 또는 단백질을 생산하는 숙주의 돌연변이 또는 PCR 증폭으로 인한 오류를 통해서와 같이 우발적일 수 있다.
본원에 사용된 용어 "아주반트"는 면역 반응을 직접적으로 또는 간접적으로 조정하고/거나 일으키는 물질을 지칭한다. 일반적으로, 아주반트는 항원과 함께 투여되어 항원 단독과 비교하여 항원에 대한 면역 반응의 증진을 가져온다. 다양한 아주반트가 본원에 기재되어 있다.
본원의 용어 "CpG 올리고데옥시뉴클레오티드" 및 "CpG ODN"은 포스페이트에 의해 분리되어 있는 시토신 및 구아닌의 디뉴클레오티드 (또한 본원에서 "CpG" 디뉴클레오티드 또는 "CpG"로도 지칭됨)를 함유하는 DNA 분자를 지칭한다. 본 개시내용의 CpG ODN은 적어도 1개의 비메틸화 CpG 디뉴클레오티드를 함유한다. 즉, CpG 디뉴클레오티드 내의 시토신은 메틸화되지 않는다 (즉, 5-메틸시토신이 아님). CpG ODN은 부분 또는 완전 포스포로티오에이트 (PS) 백본을 가질 수 있다.
본원에 사용된 "제약상 허용되는" 또는 "약리학상 상용성인"은 생물학적으로 또는 달리 바람직하지 않은 것이 아닌 물질을 의미하며, 예를 들어 상기 물질은 임의의 유의한 바람직하지 않은 생물학적 효과를 유발하지 않거나 또는 그것이 함유된 조성물의 임의의 다른 성분과 유해한 방식으로 상호작용하지 않으면서 환자에게 투여되는 제약 조성물 내에 혼입될 수 있다. 제약상 허용되는 담체 또는 부형제는 바람직하게는 독성학적 및 제조 시험의 요구되는 표준을 충족시키고/거나 미국 식품 의약품국에 의해 제조된 불활성 성분 지침 상에 포함되어 있다.
본원에 기재된 임의의 구조적 및 기능적 특징에 대해, 이들 특징을 결정하는 방법은 관련 기술분야에 공지되어 있다.
변형된 T 세포
특정 측면에서, 항원 및 아주반트를 포함하는 변형된 T 세포이며, 여기서 항원은 변형된 T 세포에 대해 외인성이고 면역원성 에피토프를 포함하고, 여기서 아주반트는 세포내 존재하는 것인 변형된 T 세포가 제공된다. 외인성 항원은 변형될 T 세포 내로 도입되는 T 세포 외부의 공급원으로부터의 1종 이상의 항원이고, 외인성 항원의 도입 전 또는 후에 T 세포에 존재할 수 있어 (즉, 내인성인), 그 결과 T 세포에 의해 생산될 수 있는 (예를 들어, T 세포의 게놈에 의해 코딩되는) 항원을 포함한다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 변형된 T 세포는 2개의 항원 풀, 즉 항원의 내인성 공급원을 포함하는 제1 풀 및 변형될 T 세포 외부에서 생산되고 이에 도입되는 항원의 외인성 공급원을 포함하는 제2 풀을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항원은 개체 내 이환 세포에서 이소성 발현되거나 과다발현되고, 변형된 T 세포는 개체로부터 유래되고, 변형될 T 세포 외부에서 생산되고 이에 도입되는 항원의 외인성 공급원 또는 그 안에 함유된 면역원성 에피토프를 포함한다. 일부 실시양태에서, 항원은 네오에피토프를 포함하는 신생항원 (예를 들어, 변경된-자기 단백질 또는 그의 부분)이고, 변형된 T 세포는 변형될 T 세포 외부에서 생산되고 이에 도입되는 항원의 외인성 공급원 또는 네오에피토프를 포함하는 그의 단편을 포함한다. 일부 실시양태에서, 아주반트는 변형된 T 세포에 대해 외인성이다. 일부 실시양태에서, 항원 및/또는 아주반트는 변형된 T 세포의 다중 구획에 존재한다. 일부 실시양태에서, 항원 및/또는 아주반트는 변형된 T 세포의 시토졸 및/또는 소포에 존재한다. 일부 실시양태에서, 소포는 엔도솜이다. 일부 실시양태에서, 항원 또는 면역원성 에피토프는 변형된 T 세포의 표면에 결합된다. 일부 실시양태에서, 변형된 T 세포는 헬퍼 T 세포, 세포독성 T 세포, 기억 T 세포 또는 자연 킬러 T 세포 중 1종 이상을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변형된 T 세포는 CD3+ T 세포, CD4+ T 세포, CD8+ T 세포, CD45RA+ T 세포, CD45RO+ T 세포 또는 γδ-T 세포 중 1종 이상을 포함한다.
특정 측면에서, 서열식별번호: 18-25 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 항원을 포함하는 변형된 T 세포가 제공된다. 일부 실시양태에서, 항원은 변형된 T 세포의 다중 구획에 존재한다. 일부 실시양태에서, 항원은 변형된 T 세포의 시토졸 및/또는 소포에 존재한다. 일부 실시양태에서, 소포는 엔도솜이다. 일부 실시양태에서, 항원 또는 그 안에 함유된 면역원성 에피토프는 변형된 T 세포의 표면에 결합된다. 일부 실시양태에서, 변형된 T 세포는 헬퍼 T 세포, 세포독성 T 세포, 기억 T 세포 및 자연 킬러 T 세포 중 1종 이상을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변형된 T 세포는 CD3+ T 세포, CD4+ T 세포, CD8+ T 세포, CD45RA+ T 세포, CD45RO+ T 세포 및 γδ-T 세포 중 1종 이상을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변형된 T 세포는 아주반트를 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 임의의 변형된 T 세포에 따르면, 변형된 T 세포는 아주반트를 포함한다. 일부 실시양태에서, 아주반트는 CpG 올리고데옥시뉴클레오티드 (ODN), IFN-α, STING 효능제, RIG-I 효능제 또는 폴리 I:C이다. 일부 실시양태에서, 아주반트는 CpG ODN이다. 일부 실시양태에서, CpG ODN은 최대 약 50개 (예컨대 최대 약 45, 40, 35, 30, 25, 20개 또는 그 미만 중 임의의 것) 뉴클레오티드 길이이다. 일부 실시양태에서, CpG ODN은 부류 A CpG ODN, 부류 B CpG ODN 또는 부류 C CpG ODN이다. 일부 실시양태에서, CpG ODN은 서열식별번호: 26-37 중 어느 하나의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, CpG ODN은 서열식별번호: 30의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, CpG ODN은 서열식별번호: 31의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변형된 T 세포는 복수의 상이한 CpG ODN을 포함한다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 변형된 T 세포는 부류 A, 부류 B 및 부류 C CpG ODN으로부터 선택된 복수의 상이한 CpG ODN을 포함한다.
일부 실시양태에서, 아주반트는 CpG ODN, LPS, IFN-α, STING 효능제, RIG-I 효능제, 폴리 I:C, R837, R848, TLR3 효능제, TLR4 효능제 또는 TLR9 효능제이다. 특정한 실시양태에서, 아주반트는 CpG ODN이다. 일부 실시양태에서, 아주반트는 CpG ODN이다. 일부 실시양태에서, CpG ODN은 부류 A CpG ODN, 부류 B CpG ODN 또는 부류 C CpG ODN이다. 일부 실시양태에서, CpG ODN 아주반트는 CpG ODN 1018, CpG ODN 1585, CpG ODN 2216, CpG ODN 2336, CpG ODN 1668, CpG ODN 1826, CPG ODN 2006, CpG ODN 2007, CpG ODN BW006, CpG ODN D-SL01, CpG ODN 2395, CpG ODN M362, CpG ODN D-SL03의 군으로부터 선택된 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, CpG ODN 아주반트는 CpG ODN 1826 (TCCATGACGTTCCTGACGTT; 서열식별번호: 30) 또는 CpG ODN 2006 (또한 CpG ODN 7909로도 공지됨) (TCGTCGTTTTGTCGTTTTGTCGTT; 서열식별번호: 31) 올리고뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 아주반트는 CpG ODN 7909이다. 일부 실시양태에서, RIG-I 효능제는 폴리이노신산:폴리시티딜산 (폴리I:C)을 포함한다. 다중 아주반트가 또한 면역 반응의 도출을 증진시키기 위해 항원과 함께 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 변형된 T 세포는 1종 초과의 아주반트를 포함한다. 다중 아주반트가 또한 면역 반응의 도출을 증진시키기 위해 항원과 함께 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 변형된 T 세포는 1종 초과의 아주반트를 포함한다. 일부 실시양태에서, 변형된 T 세포는 아주반트 CpG ODN, LPS, IFN-α, STING 효능제, RIG-I 효능제, 폴리 I:C, R837, R848, TLR3 효능제, TLR4 효능제 또는 TLR9 효능제의 임의의 조합을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 임의의 변형된 T 세포에 따르면, 변형된 T 세포는 면역원성 에피토프를 포함하는 항원을 포함한다. 일부 실시양태에서, 면역원성 에피토프는 질환-연관 항원으로부터 유래된다. 일부 실시양태에서, 면역원성 에피토프는 이환 세포로부터 단리된 펩티드 또는 mRNA로부터 유래된다. 일부 실시양태에서, 면역원성 에피토프는 이환 세포에서 이소성 발현되거나 과다발현되는 단백질로부터 유래된다. 일부 실시양태에서, 면역원성 에피토프는 신생항원, 예를 들어 암-연관 신생항원으로부터 유래된다. 일부 실시양태에서, 면역원성 에피토프는 네오에피토프, 예를 들어 암-연관 네오에피토프를 포함한다. 일부 실시양태에서, 면역원성 에피토프는 비-자기 항원으로부터 유래된다. 일부 실시양태에서, 면역원성 에피토프는 돌연변이되거나 달리 변경된 자기 항원으로부터 유래된다. 일부 실시양태에서, 면역원성 에피토프는 종양 항원, 바이러스 항원, 박테리아 항원 또는 진균 항원으로부터 유래된다. 일부 실시양태에서, 항원은 이종 펩티드 서열에 융합된 면역원성 에피토프를 포함한다. 일부 실시양태에서, 항원은 복수의 면역원성 에피토프를 포함한다. 일부 실시양태에서, 복수의 면역원성 에피토프 중 일부는 동일한 공급원으로부터 유래된다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 복수의 면역원성 에피토프 중 일부는 동일한 바이러스 항원으로부터 유래된다. 일부 실시양태에서, 복수의 면역원성 에피토프 모두는 동일한 공급원으로부터 유래된다. 일부 실시양태에서, 복수의 면역원성 에피토프 중 어떠한 것도 동일한 공급원으로부터 유래되지 않는다. 일부 실시양태에서, 변형된 T 세포는 복수의 상이한 항원을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 면역원성 에피토프를 포함하는 임의의 항원에 따르면, 항원은 폴리펩티드이고, 면역원성 에피토프는 면역원성 펩티드 에피토프이다. 일부 실시양태에서, 면역원성 펩티드 에피토프는 N-말단 플랭킹 폴리펩티드 및/또는 C-말단 플랭킹 폴리펩티드에 융합된다. 일부 실시양태에서, N-말단 플랭킹 폴리펩티드 및/또는 C-말단 플랭킹 폴리펩티드에 융합된 면역원성 펩티드 에피토프는 비-자연 발생 서열이다. 일부 실시양태에서, N-말단 및/또는 C-말단 플랭킹 폴리펩티드는 면역원성 합성 긴 펩티드 (SLP)로부터 유래된다. 일부 실시양태에서, N-말단 및/또는 C-말단 플랭킹 폴리펩티드는 질환-연관 면역원성 SLP로부터 유래된다. 일부 실시양태에서, N-말단 플랭킹 폴리펩티드는 서열식별번호: 5-10 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하고/거나 C-말단 플랭킹 폴리펩티드는 서열식별번호: 11-17 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 면역원성 에피토프를 포함하는 임의의 항원에 따르면, 항원 또는 그 안에 함유된 면역원성 에피토프는 인간 유두종바이러스 (HPV) 항원으로부터 유래된다. 일부 실시양태에서, 항원 또는 그 안에 함유된 면역원성 에피토프는 HPV- 16, 18, 26, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 53, 56, 58, 59, 66, 68, 73 및 82 중 임의의 것으로부터 유래된다. 일부 실시양태에서, 항원 또는 그 안에 함유된 면역원성 에피토프는 HPV-16 항원 또는 HPV-18 항원으로부터 유래된다. 추가 실시양태에서, 항원 또는 그 안에 함유된 면역원성 에피토프는 HPV E6 항원 (예를 들어, HPV-16 또는 HPV-18 E6 항원) 또는 HPV E7 항원 (예를 들어, HPV-16 또는 HPV-18 E7 항원)으로부터 유래된다. 일부 실시양태에서, 항원은 HPV E6 및/또는 E7로부터 유래된 HLA-A2-제한 펩티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 항원은 잔기 29 내지 38의 HPV-16 E6 단백질의 단편 (즉, HPV-16 E629-38)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항원은 잔기 48 내지 57의 HPV-16 E6 단백질의 단편 (즉, HPV-16 E648-57)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항원은 잔기 11 내지 20의 HPV-16 E7 단백질의 단편 (즉, HPV-16 E711-20)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항원은 잔기 49 내지 57의 HPV-16 E7 단백질의 단편 (즉, HPV-16 E749-57)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항원은 서열식별번호: 1-4 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항원은 서열식별번호: 5-10 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 N-말단 폴리펩티드 및 서열식별번호: 11-17 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 C-말단 폴리펩티드가 플랭킹되어 있는 서열식별번호: 1-4 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항원은 서열식별번호: 18-25 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 면역원성 에피토프를 포함하는 임의의 항원에 따르면, 항원 또는 그 안에 함유된 면역원성 에피토프는 인간 시토메갈로바이러스 (HCMV) 항원으로부터 유래된다. 일부 실시양태에서, 항원 또는 그 안에 함유된 면역원성 에피토프는 균주 메를린(Merlin), 톨레도(Toledo), 데이비스(Davis), Esp, 케르(Kerr), 스미스(Smith), TB40E, TB40F, AD169 또는 타운(Towne) HCMV 중 임의의 것으로부터 유래된다. 일부 실시양태에서, 항원 또는 그 안에 함유된 면역원성 에피토프는 균주 AD169 HCMV 항원 또는 균주 메를린 HCMV 항원으로부터 유래된다. 추가 실시양태에서, 항원 또는 그 안에 함유된 면역원성 에피토프는 pUL48, pUL47, pUL32, pUL82, pUL83, and pUL99, pUL69, pUL25, pUL56, pUL94, pUL97, pUL144 또는 pUL128로부터 유래된다. 일부 실시양태에서, 항원은 HCMV pUL83으로부터 유래된 HLA-A2-제한 펩티드를 포함한다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 면역원성 에피토프를 포함하는 임의의 항원에 따르면, 항원은 MHC 부류 I-제한 펩티드 및/또는 MHC 부류 II-제한 펩티드로 프로세싱될 수 있다. 일부 실시양태에서, 항원은 MHC 부류 I-제한 펩티드로 프로세싱될 수 있다. 일부 실시양태에서, 항원은 MHC 부류 II-제한 펩티드로 프로세싱될 수 있다. 일부 실시양태에서, 항원은 복수의 면역원성 에피토프를 포함하고, MHC 부류 I-제한 펩티드 및 MHC 부류 II-제한 펩티드로 프로세싱될 수 있다. 일부 실시양태에서, 복수의 면역원성 에피토프 중 일부는 동일한 공급원으로부터 유래된다. 일부 실시양태에서, 복수의 면역원성 에피토프 모두는 동일한 공급원으로부터 유래된다. 일부 실시양태에서, 복수의 면역원성 에피토프 중 어떠한 것도 동일한 공급원으로부터 유래되지 않는다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 임의의 변형된 T 세포에 따르면, 변형된 T 세포는 복수의 면역원성 에피토프를 포함하는 복수의 항원을 포함한다. 일부 실시양태에서, 개체에게 복수의 면역원성 에피토프를 포함하는 복수의 항원을 포함하는 변형된 T 세포를 투여한 후에, 복수의 면역원성 에피토프 중 어떠한 것도 개체에서 임의의 다른 면역원성 에피토프에 대한 면역 반응을 감소시키지 않는다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 임의의 변형된 T 세포에 따르면, 변형된 T 세포는 항원 및 아주반트를 포함한다. 일부 실시양태에서, 변형된 T 세포는 아주반트를 약 1 pM 내지 약 10 mM의 농도로 포함한다. 일부 실시양태에서, 변형된 T 세포는 아주반트를 약 0.1 μM 내지 약 10 mM의 농도로 포함한다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 변형된 T 세포에서의 아주반트의 농도는 약 1 pM, 약 10 pM, 약 100 pM, 약 1 nM, 약 10 nM, 약 100 nM, 약 1 μM, 약 10 μM, 약 100 μM, 약 1 mM 또는 약 10 mM 중 임의의 것 미만이다. 일부 실시양태에서, 변형된 T 세포에서의 아주반트의 농도는 약 10 mM 초과이다. 일부 실시양태에서, 변형된 T 세포에서의 항원의 농도는 약 1 pM 내지 약 10 pM, 약 10 pM 내지 약 100 pM, 약 100 pM 내지 약 1 nM, 약 1 nM 내지 약 10 nM, 약 10 nM 내지 약 100 nM, 약 100 nM 내지 약 1 μM, 약 1 μM 내지 약 10 μM, 약 10 μM 내지 약 100 μM, 약 100 μM 내지 약 1 mM, 또는 1 mM 내지 약 10 mM 중 임의의 것이다. 일부 실시양태에서, 변형된 T 세포에서의 항원 대 아주반트의 몰비는 약 10000:1 내지 약 1:10000 중 임의의 것이다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 변형된 T 세포에서의 항원 대 아주반트의 몰비는 약 10000:1, 약 1000:1, 약 200:1, 약 100:1, 약 10:1, 약 1:1, 약 1:10, 약 1:100, 약 1:1000, 또는 약 1:10000 중 임의의 것이다. 일부 실시양태에서, 변형된 T 세포에서의 항원 대 아주반트의 몰비는 약 10000:1 내지 약 1000:1, 약 1000:1 내지 약 100:1, 약 100:1 내지 약 10:1, 약 10:1 내지 약 1:1, 약 1:1 내지 약 1:10, 약 1:10 내지 약 1:100, 약 1:100 내지 약 1:1000, 약 1:1000 내지 약 1:10000 중 임의의 것이다. 일부 실시양태에서, 변형된 T 세포는 a) 항원, b) 항원 및 적어도 1종의 다른 항원, 및/또는 c) 항원 및 아주반트를 포함하는 복합체를 포함한다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 임의의 변형된 T 세포에 따르면, 변형된 T 세포는 작용제를 포함하지 않는 상응하는 변형된 T 세포와 비교하여 변형된 T 세포의 생존율 및/또는 기능을 증진시키는 작용제를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 작용제는 안정화제 또는 보조-인자이다. 일부 실시양태에서, 작용제는 알부민이다. 일부 실시양태에서, 알부민은 마우스, 소 또는 인간 알부민이다. 일부 실시양태에서, 작용제는 2가 금속 양이온, 글루코스, ATP, 칼륨, 글리세롤, 트레할로스, D-수크로스, PEG1500, L-아르기닌, L-글루타민 또는 EDTA이다.
본원에 기재된 방법 또는 조성물 중 어느 하나에 따른 일부 실시양태에서, 변형된 T 세포는 작용제를 포함하지 않는 상응하는 복수의 변형된 T 세포와 비교하여 변형된 T 세포의 생존율 및/또는 기능을 증진시키는 작용제를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 변형된 T 세포는 작용제를 포함하지 않는 상응하는 변형된 T 세포와 비교하여 동결-해동 주기시 변형된 T 세포의 생존율 및/또는 기능을 증진시키는 작용제를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 작용제는 동결보존제 및/또는 저체온 보존제이다. 일부 실시양태에서, 동결보존제나 저체온 보존제는 임의의 동결-해동 주기 전에 작용제를 포함하지 않는 상응하는 변형된 T 세포와 비교하여 작용제를 포함하는 변형된 T 세포에서 10% 또는 20% 초과의 세포 사멸을 유발하지 않는다. 일부 실시양태에서, 최대 1, 2, 3, 4, 5회의 동결-해동 주기 후에 변형된 T 세포의 적어도 약 70%, 약 80% 또는 약 90%가 생존가능하다. 일부 실시양태에서, 작용제는 세포내이입을 증진시키는 화합물, 안정화제 또는 보조-인자이다. 일부 실시양태에서, 작용제는 알부민이다. 일부 실시양태에서, 알부민은 마우스, 소 또는 인간 알부민이다. 일부 실시양태에서, 작용제는 인간 알부민이다. 일부 실시양태에서, 작용제는 2가 금속 양이온, 글루코스, ATP, 칼륨, 글리세롤, 트레할로스, D-수크로스, PEG1500, L-아르기닌, L-글루타민 또는 EDTA 중 1종 이상이다. 일부 실시양태에서, 2가 금속 양이온은 Mg2+, Zn2+ 또는 Ca2+ 중 1종 이상이다. 일부 실시양태에서, 작용제는 피루브산나트륨, 아데닌, 트레할로스, 덱스트로스, 만노스, 수크로스, 인간 혈청 알부민 (HSA), DMSO, HEPES, 글리세롤, 글루타티온, 이노신, 이염기성 인산나트륨, 일염기성 인산나트륨, 나트륨 금속 이온, 칼륨 금속 이온, 마그네슘 금속 이온, 클로라이드, 아세테이트, 글루코네이트, 수크로스, 수산화칼륨 또는 수산화나트륨 중 1종 이상이다. 일부 실시양태에서, 작용제는 피루브산나트륨, 아데닌, 레주베솔(Rejuvesol)®, 트레할로스, 덱스트로스, 만노스, 수크로스, 인간 혈청 알부민 (HSA), 플라스마라이트(PlasmaLyte)®, DMSO, 크리오스토르(Cryostor)® CS2, 크리오스토르® CS5, 크리오스토르® CS10, 크리오스토르® CS15, HEPES, 글리세롤, 글루타티온, 하이포써모솔(HypoThermosol)® 중 1종 이상이다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 임의의 변형된 T 세포에 따르면, 변형된 T 세포는 추가의 변형을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변형된 T 세포는 MHC 부류 I 발현을 조정하는 추가의 변형을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변형된 T 세포는 MHC 부류 I 발현을 감소시키는 추가의 변형을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변형된 T 세포는 MHC 부류 I 발현을 증가시키는 추가의 변형을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변형된 T 세포는 MHC 부류 II 발현을 조정하는 추가의 변형을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변형된 T 세포는 MHC 부류 II 발현을 감소시키는 추가의 변형을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변형된 T 세포는 MHC 부류 II 발현을 증가시키는 추가의 변형을 포함한다. 일부 실시양태에서, 동종이형 맥락에서 변형된 T 세포의 투여에 반응하여 개체에서 시작되는 선천성 면역 반응은, 동종이형 맥락에서 추가의 변형을 포함하지 않는 상응하는 변형된 T 세포의 투여에 반응하여 개체에서 시작되는 선천성 면역 반응과 비교하여 감소된다. 일부 실시양태에서, 변형된 T 세포가 투여된 개체에서의 이들 세포의 순환 반감기는, 추가의 변형을 포함하지 않는 상응하는 변형된 T 세포가 투여된 개체에서의 이들 세포의 순환 반감기와 비교하여 증가된다.
특정 측면에서, 서열식별번호: 18-25 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 항원을 포함하는 변형된 T 세포가 제공된다. 일부 실시양태에서, 항원은 변형된 T 세포의 다중 구획에 존재한다. 일부 실시양태에서, 항원은 변형된 T 세포의 시토졸 및/또는 소포에 존재한다. 일부 실시양태에서, 소포는 엔도솜이다. 일부 실시양태에서, 항원 또는 그 안에 함유된 면역원성 에피토프는 변형된 T 세포의 표면에 결합된다. 일부 실시양태에서, 변형된 T 세포는 헬퍼 T 세포, 세포독성 T 세포, 기억 T 세포 또는 자연 킬러 T 세포 중 1종 이상을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변형된 T 세포는 CD3+ T 세포, CD4+ T 세포, CD8+ T 세포, CD45RA+ T 세포, CD45RO+ T 세포 또는 γδ-T 세포 중 1종 이상을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변형된 T 세포는 아주반트를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 변형된 T 세포는 a) 투입 T 세포를 포함하는 세포 현탁액을 세포-변형 압박부에 통과시키며, 여기서 압박부의 직경은 현탁액 중 투입 T 세포의 직경의 함수이고, 이에 의해 항원이 통과하기에 충분히 큰 투입 T 세포의 교란을 유발하여 교란된 투입 T 세포를 형성하는 단계; 및 b) 교란된 투입 T 세포로 항원이 들어가도록 하기에 충분한 시간 동안 교란된 투입 T 세포를 항원과 함께 인큐베이션하고, 이에 의해 항원을 포함하는 변형된 T 세포를 생성시키는 단계를 포함하는 방법에 의해 제조된다. 일부 실시양태에서, 교란된 투입 T 세포와 함께 인큐베이션된 항원의 농도는 약 1 pM-10 mM이다. 일부 실시양태에서, 변형된 T 세포는 아주반트, 예컨대 본원에 기재된 임의의 아주반트를 추가로 포함한다.
특정 측면에서, 항원 및 아주반트를 포함하는 변형된 T 세포이며, 여기서 항원은 면역원성 에피토프를 포함하고, a) 투입 T 세포를 포함하는 세포 현탁액을 세포-변형 압박부에 통과시키며, 여기서 압박부의 직경은 현탁액 중 투입 T 세포의 직경의 함수이고, 이에 의해 항원 및 아주반트가 통과하기에 충분히 큰 투입 T 세포의 교란을 유발하여 교란된 투입 T 세포를 형성하는 단계; 및 b) 교란된 투입 T 세포로 항원 및 아주반트가 들어가도록 하기에 충분한 시간 동안 교란된 투입 T 세포를 항원 및 아주반트와 함께 인큐베이션하고, 이에 의해 항원 및 아주반트를 포함하는 변형된 T 세포를 생성시키는 단계를 포함하는 방법에 의해 제조되는 변형된 T 세포가 제공된다. 일부 실시양태에서, 교란된 투입 T 세포와 함께 인큐베이션된 항원의 농도는 약 1 pM-10 mM이고/거나 교란된 투입 T 세포와 함께 인큐베이션된 아주반트의 농도는 약 1 pM-10 mM이다. 일부 실시양태에서, 교란된 투입 T 세포와 함께 인큐베이션된 항원의 농도는 약 0.1 μM-10 mM이고/거나 교란된 투입 T 세포와 함께 인큐베이션된 아주반트의 농도는 약 0.1 μM-10 mM이다. 일부 실시양태에서, 교란된 투입 T 세포와 함께 인큐베이션된 항원 대 아주반트의 비는 약 10000:1 내지 약 1:10000이다.
특정 측면에서, 항원 및 아주반트를 포함하는 변형된 T 세포이며, 여기서 항원은 면역원성 에피토프를 포함하고, a) 아주반트를 포함하는 투입 T 세포를 포함하는 세포 현탁액을 세포-변형 압박부에 통과시키며, 여기서 압박부의 직경은 현탁액 중 투입 T 세포의 직경의 함수이고, 이에 의해 항원이 통과하기에 충분히 큰 투입 T 세포의 교란을 유발하여 교란된 투입 T 세포를 형성하는 단계; 및 b) 교란된 투입 T 세포로 항원이 들어가도록 하기에 충분한 시간 동안 교란된 투입 T 세포를 항원과 함께 인큐베이션하고, 이에 의해 항원 및 아주반트를 포함하는 변형된 T 세포를 생성시키는 단계를 포함하는 방법에 의해 제조되는 변형된 T 세포가 제공된다. 일부 실시양태에서, 교란된 투입 T 세포와 함께 인큐베이션된 항원의 농도는 약 1 pM-10 mM이다.
특정 측면에서, 항원 및 아주반트를 포함하는 변형된 T 세포이며, 여기서 항원은 면역원성 에피토프를 포함하고, a) 항원을 포함하는 투입 T 세포를 포함하는 세포 현탁액을 세포-변형 압박부에 통과시키며, 여기서 압박부의 직경은 현탁액 중 투입 T 세포의 직경의 함수이고, 이에 의해 아주반트가 통과하기에 충분히 큰 투입 T 세포의 교란을 유발하여 교란된 투입 T 세포를 형성하는 단계; 및 b) 교란된 투입 T 세포로 아주반트가 들어가도록 하기에 충분한 시간 동안 교란된 투입 T 세포를 아주반트와 함께 인큐베이션하고, 이에 의해 항원 및 아주반트를 포함하는 변형된 T 세포를 생성시키는 단계를 포함하는 방법에 의해 제조되는 변형된 T 세포가 제공된다. 일부 실시양태에서, 교란된 투입 T 세포와 함께 인큐베이션된 아주반트의 농도는 약 1 pM-10 mM이다.
일부 실시양태에서 본원에 기재된 변형된 T 세포는 투입 T 세포가 통과하는 세포-변형 압박부를 사용하는 방법에 의해 제조된다. 일부 실시양태에서, 압박부의 직경은 투입 T 세포의 직경보다 더 작다. 일부 실시양태에서, 압박부의 직경은 투입 T 세포의 직경의 약 20% 내지 약 99%이다. 일부 실시양태에서, 압박부의 직경은 투입 T 세포의 직경의 약 20% 내지 약 60%이다. 일부 실시양태에서, 세포-변형 압박부는 마이크로유체 채널, 예컨대 본원에 기재된 임의의 마이크로유체 채널에 함유된다. 마이크로유체 채널은 본원에 기재된 임의의 마이크로유체 장치, 예컨대 하기 마이크로유체 장치 표제의 섹션에 기재된 마이크로유체 장치에 함유될 수 있다. 따라서, 일부 실시양태에서, 투입 T 세포가 통과하는 세포-변형 압박부를 포함하는 마이크로유체 채널을 사용하는 방법에 의해 제조된 본원에 기재된 임의의 변형된 T 세포에 따르면, 방법은 투입 T 세포를 본원에 기재된 임의의 마이크로유체 시스템에 함유된 세포-변형 압박부를 포함하는 마이크로유체 채널에 통과시키는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 투입 T 세포가 압박부를 통과할 때 투입 T 세포에 변형력이 가해져 투입 T 세포의 교란을 유발한다.
투입 T 세포는 말초 혈액 단핵 세포, 골수, 림프절 조직, 제대혈, 흉선 조직, 감염 부위로부터의 조직, 복수, 흉막 삼출, 비장 조직 및 종양을 포함한 다수의 공급원으로부터 수득될 수 있다. 본 발명의 일부 실시양태에서, 관련 기술분야에서 이용가능한 임의의 수의 T 세포주가 사용될 수 있다. 본 발명의 일부 실시양태에서, T 세포는 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 임의의 수의 기술, 예컨대 피콜(Ficoll)™ 분리를 사용하여 대상체로부터 수집된 혈액 단위로부터 수득될 수 있다. 일부 실시양태에서, 개체의 순환 혈액으로부터의 세포는 분리반출술에 의해 수득된다. 분리반출술 생성물은 전형적으로 림프구, 예컨대 T 세포, 단핵구, 과립구, B 세포, 다른 유핵 백혈구, 적혈구 및 혈소판을 함유한다. 일부 실시양태에서, 분리반출술에 의해 수집된 세포를 세척하여 혈장 분획을 제거하고, 후속 가공 단계를 위해 적절한 완충제 또는 배지 중에 세포를 넣는다. 일부 실시양태에서, 세포는 포스페이트 완충 염수 (PBS)로 세척된다. 일부 실시양태에서, 세척 용액은 칼슘이 결여되어 있고, 마그네슘이 결여되어 있을 수 있거나 또는 전부는 아니지만 많은 2가 양이온이 결여되어 있을 수 있다. 관련 기술분야의 통상의 기술자는 세척 단계가 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 방법에 의해, 예컨대 반-자동화 "관통" 원심분리기 (예를 들어, 코베(Cobe) 2991 세포 프로세서, 박스터 시토메이트(Baxter CytoMate) 또는 해모네틱스 셀 세이버(Haemonetics Cell Saver) 5)를 제조업체의 지침에 따라 사용함으로써 달성될 수 있다는 것을 용이하게 인지할 것이다. 세척 후에, 세포는 다양한 생체적합성 완충제, 예컨대 Ca2+-무함유, Mg2+-무함유 PBS, 플라스마라이트 A, 또는 완충제를 함유하거나 함유하지 않는 다른 염수 용액 중에 재현탁될 수 있다. 대안적으로, 분리반출술 샘플의 바람직하지 않은 성분은 제거될 수 있고, 세포는 배양 배지 중에 직접 재현탁될 수 있다.
일부 실시양태에서, T 세포는 말초 혈액 림프구로부터 적혈구를 용해시키고 단핵구를 고갈시킴으로써, 예를 들어 퍼콜(PERCOLL)™ 구배를 통한 원심분리 또는 역류 원심분리 용리에 의해 단리된다. T 세포의 특정 하위집단, 예컨대 CD3+, CD28+, CD4+, CD8+, CD45RA+, CD45RO+ T 세포 및 γδ-T 세포는 양성 또는 음성 선택 기술에 의해 추가로 단리될 수 있다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, T 세포는 항-CD3/항-CD28 (즉, 3x28)-접합된 비드, 예컨대 디나비즈(DYNABEADS)® M-450 CD3/CD28 T와 함께 목적하는 T 세포의 양성 선택에 충분한 기간 동안 인큐베이션함으로써 단리된다. 일부 실시양태에서, 기간은 약 30분이다. 일부 실시양태에서, 기간은 30분 내지 36시간 또는 그 초과의 범위이고, 그 사이의 모든 정수 값이다. 일부 실시양태에서, 기간은 적어도 1, 2, 3, 4, 5 또는 6시간이다. 일부 실시양태에서, 기간은 10 내지 24시간이다. 일부 실시양태에서, 인큐베이션 시간은 24시간이다. 백혈병을 갖는 환자로부터의 T 세포의 단리의 경우, 보다 긴 인큐베이션 시간, 예컨대 24시간의 사용은 세포 수율을 증가시킬 수 있다. 보다 긴 인큐베이션 시간은 다른 세포 유형과 비교하여 T 세포가 거의 없는 임의의 상황에서 T 세포를 단리하는데, 예컨대 종양 조직으로부터 또는 면역-손상 개체로부터 종양 침윤 림프구 (TIL)를 단리하는데 사용될 수 있다. 추가로, 보다 긴 인큐베이션 시간의 사용은 CD8+ T 세포의 포획 효율을 증가시킬 수 있다. 따라서, T 세포가 CD3/CD28 비드에 결합하도록 하는 시간을 간단히 단축 또는 연장시킴으로써 및/또는 T 세포에 대한 비드의 비를 증가 또는 감소시킴으로써, T 세포의 하위집단은 배양 개시시에 또는 과정 동안 다른 시점에 우선적으로 선택될 수 있다. 추가적으로, 비드 또는 다른 표면 상의 항-CD3 및/또는 항-CD28 항체의 비를 증가 또는 감소시킴으로써, T 세포의 하위집단은 배양 개시시에 또는 다른 목적하는 시점에 우선적으로 선택될 수 있다. 관련 기술분야의 통상의 기술자는 또한 본 발명과 관련하여 다중 라운드의 선택이 사용될 수 있다는 것을 인지할 것이다. 일부 실시양태에서, 선택 절차를 수행하고 활성화 및 확장 과정에서 "비선택" 세포를 사용하는 것이 바람직할 수 있다 (음성 선택). "비선택" 세포는 또한 추가 라운드의 선택에 적용될 수도 있다.
음성 선택에 의한 T 세포 집단의 풍부화는 음성 선택된 세포에 특유한 표면 마커에 대해 지시되는 항체의 조합으로 달성될 수 있다. 하나의 방법은 음성 선택된 세포 상에 존재하는 세포 표면 마커에 대해 지시되는 모노클로날 항체의 칵테일을 사용하는 음성 자기 면역부착 또는 유동 세포측정법을 통한 세포 분류 및/또는 선택이다. 예를 들어, 음성 선택에 의해 CD4+ 세포를 풍부화하기 위해, 모노클로날 항체 칵테일은 전형적으로 CD14, CD20, CD11b, CD16, HLA-DR 및 CD8에 대한 항체를 포함한다. 일부 실시양태에서, 전형적으로 CD4+, CD25+, CD62Lhi, GITR+ 및 FoxP3+을 발현하는 조절 T 세포를 풍부화하거나 또는 양성 선택하는 것이 바람직할 수 있다. 대안적으로, 일부 실시양태에서, T 조절 세포는 항-CD25 접합된 비드 또는 다른 유사한 선택 방법에 의해 고갈된다.
양성 또는 음성 선택에 의한 목적하는 세포 집단의 단리를 위해, 세포 및 표면 (예를 들어, 입자, 예컨대 비드)의 농도를 달리할 수 있다. 일부 실시양태에서, 세포와 비드의 최대 접촉을 보장하기 위해, 세포와 비드를 함께 혼합하는 부피를 유의하게 감소시키는 (즉, 세포의 농도를 증가시키는) 것이 바람직할 수 있다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 약 2십억개 세포/mL의 농도가 사용된다. 일부 실시양태에서, 약 1십억개 세포/mL의 농도가 사용된다. 일부 실시양태에서, 약 1억개 초과의 세포/mL가 사용된다. 일부 실시양태에서, 약 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45 또는 50백만개 세포/mL 중 임의의 것의 세포 농도가 사용된다. 일부 실시양태에서, 약 75, 80, 85, 90, 95 또는 100백만개 세포/mL 중 임의의 것의 세포 농도가 사용된다. 일부 실시양태에서, 약 125 또는 약 150백만개 세포/mL의 농도가 사용된다. 고농도의 사용은 증가된 세포 수율, 세포 활성화 및 세포 확장을 유발할 수 있다. 추가로, 고농도 세포의 사용은 관심 표적 항원을 약하게 발현할 수 있는 세포, 예컨대 CD28-음성 T 세포의 보다 효율적인 포획 또는 많은 종양 세포가 존재하는 샘플 (즉, 백혈병성 혈액, 종양 조직 등)로부터의 보다 효율적인 포획을 가능하게 한다. 이러한 세포 집단은 치료 가치를 가질 수 있고, 수득하는 것이 바람직할 것이다. 예를 들어, 고농도의 세포를 사용하는 것은 통상적으로 보다 약한 CD28 발현을 갖는 CD8+ T 세포의 보다 효율적인 선택을 가능하게 한다.
조성물
특정 측면에서, 본원에 기재된 임의의 실시양태에 따른 항원 및 아주반트를 포함하는 변형된 T 세포를 포함하는 조성물 (예를 들어, 제약 조성물)이 제공된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 변형된 T 세포 및 제약상 허용되는 담체를 포함하는 제약 조성물이다.
면역 반응을 조정하는 방법
특정 측면에서, 개체에게 본원에 기재된 임의의 실시양태에 따른 변형된 T 세포, 본원에 기재된 임의의 실시양태에 따른 조성물 또는 본원에 기재된 임의의 실시양태에 따른 제약 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 면역 반응을 조정하는 방법이 제공된다.
특정 측면에서, a) 투입 T 세포를 포함하는 세포 현탁액을 세포-변형 압박부에 통과시키며, 여기서 압박부의 직경은 현탁액 중 투입 T 세포의 직경의 함수이고, 이에 의해 항원 및 아주반트가 통과하기에 충분히 큰 투입 T 세포의 교란을 유발하여 교란된 투입 T 세포를 형성하며, 여기서 항원은 면역원성 에피토프를 포함하는 것인 단계; b) 교란된 투입 T 세포로 항원 및 아주반트가 들어가도록 하기에 충분한 시간 동안 교란된 투입 T 세포를 항원 및 아주반트와 함께 인큐베이션하고, 이에 의해 항원 및 아주반트를 포함하는 변형된 T 세포를 생성시키는 단계; 및 c) 개체에게 변형된 T 세포를 투여하는 단계를 포함하는, 개체에서 면역 반응을 조정하는 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 교란된 투입 T 세포와 함께 인큐베이션된 항원의 농도는 약 1 pM-10 mM이고/거나 교란된 투입 T 세포와 함께 인큐베이션된 아주반트의 농도는 약 1 pM-10 mM이다. 일부 실시양태에서, 교란된 투입 T 세포와 함께 인큐베이션된 항원 대 아주반트의 비는 약 10000:1 내지 약 1:10000이다. 일부 실시양태에서, 교란된 투입 T 세포와 함께 인큐베이션된 아주반트의 농도는 약 0.1 μM 내지 약 10 mM이다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 교란된 T 세포와 함께 인큐베이션된 아주반트의 농도는 약 1 pM, 약 10 pM, 약 100 pM, 약 1 nM, 약 10 nM, 약 100 nM, 약 1 μM, 약 10 μM, 약 100 μM, 약 1 mM 또는 약 10 mM 중 임의의 것 미만이다. 일부 실시양태에서, 교란된 T 세포와 함께 인큐베이션된 아주반트의 농도는 약 10 mM 초과이다. 일부 실시양태에서, 교란된 T 세포와 함께 인큐베이션된 항원의 농도는 약 1 pM 내지 약 10 pM, 약 10 pM 내지 약 100 pM, 약 100 pM 내지 약 1 nM, 약 1 nM 내지 약 10 nM, 약 10 nM 내지 약 100 nM, 약 100 nM 내지 약 1 μM, 약 1 μM 내지 약 10 μM, 약 10 μM 내지 약 100 μM, 약 100 μM 내지 약 1 mM, 또는 1 mM 내지 약 10 mM 중 임의의 것이다. 일부 실시양태에서, 교란된 T 세포와 함께 인큐베이션된 항원 대 아주반트의 몰비는 약 10000:1 내지 약 1:10000 중 임의의 것이다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 교란된 T 세포와 함께 인큐베이션된 항원 대 아주반트의 몰비는 약 10000:1, 약 1000:1, 약 100:1, 약 10:1, 약 1:1, 약 1:10, 약 1:100, 약 1:1000, 또는 약 1:10000 중 임의의 것이다. 일부 실시양태에서, 교란된 T 세포와 함께 인큐베이션된 항원 대 아주반트의 몰비는 약 10000:1 내지 약 1000:1, 약 1000:1 내지 약 100:1, 약 100:1 내지 약 10:1, 약 10:1 내지 약 1:1, 약 1:1 내지 약 1:10, 약 1:10 내지 약 1:100, 약 1:100 내지 약 1:1000, 약 1:1000 내지 약 1:10000 중 임의의 것이다. 일부 실시양태에서, 항원 및/또는 아주반트는 나노입자에 캡슐화된다.
특정 측면에서, a) 아주반트를 포함하는 투입 T 세포를 포함하는 세포 현탁액을 세포-변형 압박부에 통과시키며, 여기서 압박부의 직경은 현탁액 중 투입 T 세포의 직경의 함수이고, 이에 의해 항원이 통과하기에 충분히 큰 투입 T 세포의 교란을 유발하여 교란된 투입 T 세포를 형성하며, 여기서 항원은 면역원성 에피토프를 포함하는 것인 단계; b) 교란된 투입 T 세포로 항원이 들어가도록 하기에 충분한 시간 동안 교란된 투입 T 세포를 항원과 함께 인큐베이션하고, 이에 의해 항원 및 아주반트를 포함하는 변형된 T 세포를 생성시키는 단계; 및 c) 개체에게 변형된 T 세포를 투여하는 단계를 포함하는, 개체에서 면역 반응을 조정하는 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 교란된 투입 T 세포와 함께 인큐베이션된 항원의 농도는 약 1 pM-10 mM이다. 일부 실시양태에서, 항원은 나노입자에 캡슐화된다.
특정 측면에서, a) 항원을 포함하는 투입 T 세포를 포함하는 세포 현탁액을 세포-변형 압박부에 통과시키며, 여기서 항원은 면역원성 에피토프를 포함하고, 여기서 압박부의 직경은 현탁액 중 투입 T 세포의 직경의 함수이고, 이에 의해 아주반트가 통과하기에 충분히 큰 투입 T 세포의 교란을 유발하여 교란된 투입 T 세포를 형성하는 단계; b) 교란된 투입 T 세포로 아주반트가 들어가도록 하기에 충분한 시간 동안 교란된 투입 T 세포를 아주반트와 함께 인큐베이션하고, 이에 의해 항원 및 아주반트를 포함하는 변형된 T 세포를 생성시키는 단계; 및 c) 개체에게 변형된 T 세포를 투여하는 단계를 포함하는, 개체에서 면역 반응을 조정하는 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 교란된 투입 T 세포와 함께 인큐베이션된 아주반트의 농도는 약 1 pM-10 mM이다. 일부 실시양태에서, 아주반트는 나노입자에 캡슐화된다.
일부 실시양태에서, 변형된 T 세포를 사용하여 면역 반응을 조정하는 임의의 방법에 따르면, 변형된 T 세포는 항원 및 아주반트를 포함한다. 일부 실시양태에서, 변형된 T 세포는 항원을 약 1 pM 내지 약 10 mM의 농도로 포함한다. 일부 실시양태에서, 변형된 T 세포는 아주반트를 약 1 pM 내지 약 10 mM의 농도로 포함한다. 일부 실시양태에서, 변형된 T 세포에서의 항원 대 아주반트의 비는 약 10000:1 내지 약 1:10000이다. 일부 실시양태에서, 변형된 T 세포는 a) 항원, b) 항원 및 적어도 1종의 다른 항원, 및/또는 c) 항원 및 아주반트를 포함하는 복합체를 포함한다.
특정 측면에서, a) 개체에게 서열식별번호: 18-25 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 항원을 포함하는 변형된 T 세포를 투여하는 단계; 및 b) 개체에게 아주반트를 투여하는 단계를 포함하는, 개체에서 면역 반응을 조정하는 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 아주반트는 변형된 T 세포와 공동으로 또는 동시에 투여된다. 일부 실시양태에서, 아주반트 및 변형된 T 세포는 순차적으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 아주반트는 변형된 T 세포의 투여 전에 투여된다. 일부 실시양태에서, 아주반트는 변형된 T 세포의 투여 후에 투여된다. 일부 실시양태에서, 아주반트는 전신으로, 예를 들어 정맥내로 투여된다. 일부 실시양태에서, 아주반트는 국부로, 예를 들어 종양내로 투여된다. 일부 실시양태에서, 아주반트는 세포에 함유되지 않고, 예를 들어 아주반트는 용액 중에 없다. 일부 실시양태에서, 아주반트는 세포, 예컨대 T 세포에 함유된다. 일부 실시양태에서, 아주반트는 본원에 기재된 임의의 세포내 전달 방법에 따라 T 세포 내로 전달된다. 일부 실시양태에서, 항원을 포함하는 변형된 T 세포는 c) 투입 T 세포를 포함하는 세포 현탁액을 세포-변형 압박부에 통과시키며, 여기서 압박부의 직경은 현탁액 중 투입 T 세포의 직경의 함수이고, 이에 의해 항원이 통과하기에 충분히 큰 투입 T 세포의 교란을 유발하여 교란된 투입 T 세포를 형성하는 단계; 및 d) 교란된 투입 T 세포로 항원이 들어가도록 하기에 충분한 시간 동안 교란된 투입 T 세포를 항원과 함께 인큐베이션하고, 이에 의해 항원을 포함하는 변형된 T 세포를 생성시키는 단계를 포함하는 방법에 의해 제조된다. 일부 실시양태에서, 교란된 투입 T 세포와 함께 인큐베이션된 항원의 농도는 약 1 pM-10 mM이다. 일부 실시양태에서, 항원은 나노입자에 캡슐화된다. 일부 실시양태에서, 변형된 T 세포는 아주반트를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 변형된 T 세포에 함유된 아주반트 및 단계 b)의 아주반트는 동일한 화합물이다. 일부 실시양태에서, 변형된 T 세포에 함유된 아주반트 및 단계 b)의 아주반트는 상이한 화합물이다.
특정 측면에서, a) 투입 T 세포를 포함하는 세포 현탁액을 세포-변형 압박부에 통과시키며, 여기서 압박부의 직경은 현탁액 중 투입 T 세포의 직경의 함수이고, 이에 의해 항원이 통과하기에 충분히 큰 투입 T 세포의 교란을 유발하여 교란된 투입 T 세포를 형성하며, 여기서 항원은 면역원성 에피토프를 포함하는 것인 단계; b) 교란된 투입 T 세포로 항원이 들어가도록 하기에 충분한 시간 동안 교란된 투입 T 세포를 항원과 함께 인큐베이션하고, 이에 의해 항원을 포함하는 변형된 T 세포를 생성시키는 단계; c) 개체에게 변형된 T 세포를 투여하는 단계; 및 d) 개체에게 아주반트를 투여하는 단계를 포함하는, 개체에서 면역 반응을 조정하는 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 아주반트는 변형된 T 세포와 공동으로 또는 동시에 투여된다. 일부 실시양태에서, 아주반트 및 변형된 T 세포는 순차적으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 아주반트는 변형된 T 세포의 투여 전에 투여된다. 일부 실시양태에서, 아주반트는 변형된 T 세포의 투여 후에 투여된다. 일부 실시양태에서, 아주반트는 전신으로, 예를 들어 정맥내로 투여된다. 일부 실시양태에서, 아주반트는 국부로, 예를 들어 종양내로 투여된다. 일부 실시양태에서, 아주반트는 세포에 함유되지 않고, 예를 들어 아주반트는 용액 중에 없다. 일부 실시양태에서, 아주반트는 세포, 예컨대 T 세포에 함유된다. 일부 실시양태에서, 아주반트는 본원에 기재된 임의의 세포내 전달 방법에 따라 T 세포 내로 전달된다. 일부 실시양태에서, 교란된 투입 T 세포와 함께 인큐베이션된 항원의 농도는 약 1 pM-10 mM이다. 일부 실시양태에서, 항원은 나노입자에 캡슐화된다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 개체에서 면역 반응을 조정하는 임의의 방법에 따르면, 면역 반응이 증진된다. 일부 실시양태에서, 증진된 면역 반응은 항원에 대한 것이다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 개체에서 면역 반응을 조정하는 임의의 방법에 따르면, 방법은 투입 T 세포가 통과하는 세포-변형 압박부를 사용한다. 일부 실시양태에서, 압박부의 직경은 투입 T 세포의 직경보다 더 작다. 일부 실시양태에서, 압박부의 직경은 투입 T 세포의 직경의 약 20% 내지 약 99%이다. 일부 실시양태에서, 압박부의 직경은 투입 T 세포의 직경의 약 20% 내지 약 60%이다. 일부 실시양태에서, 세포-변형 압박부는 마이크로유체 채널, 예컨대 본원에 기재된 임의의 마이크로유체 채널에 함유된다. 마이크로유체 채널은 본원에 기재된 임의의 마이크로유체 장치, 예컨대 하기 마이크로유체 장치 표제의 섹션에 기재된 마이크로유체 장치에 함유될 수 있다. 따라서, 일부 실시양태에서, 투입 T 세포가 통과하는 세포-변형 압박부를 포함하는 마이크로유체 채널을 사용하여 본원에 기재된 개체에서 면역 반응을 조정하는 임의의 방법에 따르면, 방법은 투입 T 세포를 본원에 기재된 임의의 마이크로유체 시스템에 함유된 세포-변형 압박부를 포함하는 마이크로유체 채널에 통과시키는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 투입 T 세포가 압박부를 통과할 때 투입 T 세포에 변형력이 가해져 투입 T 세포의 교란을 유발한다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 개체에서 면역 반응을 조정하는 임의의 방법에 따르면, 방법은 항원 및 아주반트를 포함하는 변형된 T 세포를 사용한다. 일부 실시양태에서, 항원 및/또는 아주반트는 변형된 T 세포의 시토졸 및/또는 소포에 존재한다. 일부 실시양태에서, 소포는 엔도솜이다. 일부 실시양태에서, 항원 및/또는 아주반트는 변형된 T 세포의 다중 구획에 존재한다. 일부 실시양태에서, 항원 또는 면역원성 에피토프는 변형된 T 세포의 표면에 결합된다. 일부 실시양태에서, 변형된 T 세포는 헬퍼 T 세포, 세포독성 T 세포, 기억 T 세포 또는 자연 킬러 T 세포 중 1종 이상을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변형된 T 세포는 CD3+ T 세포, CD4+ T 세포, CD8+ T 세포, CD45RA+ T 세포, CD45RO+ T 세포 또는 γδ-T 세포 중 1종 이상을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 개체에서 면역 반응을 조정하는 임의의 방법에 따르면, 방법은 아주반트를 포함하는 변형된 T 세포를 사용한다. 일부 실시양태에서, 아주반트는 CpG 올리고데옥시뉴클레오티드 (ODN), IFN-α, STING 효능제, RIG-I 효능제 또는 폴리 I:C이다. 일부 실시양태에서, 아주반트는 CpG ODN이다. 일부 실시양태에서, 아주반트는 CpG ODN이다. 일부 실시양태에서, CpG ODN은 최대 약 50개 (예컨대 최대 약 45, 40, 35, 30, 25, 20개 또는 그 미만 중 임의의 것) 뉴클레오티드 길이이다. 일부 실시양태에서, CpG ODN은 부류 A CpG ODN, 부류 B CpG ODN 또는 부류 C CpG ODN이다. 일부 실시양태에서, CpG ODN은 서열식별번호: 26-37 중 어느 하나의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, CpG ODN은 서열식별번호: 30의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, CpG ODN은 서열식별번호: 31의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변형된 T 세포는 복수의 상이한 CpG ODN을 포함한다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 변형된 T 세포는 부류 A, 부류 B 및 부류 C CpG ODN으로부터 선택된 복수의 상이한 CpG ODN을 포함한다.
예시적인 아주반트는 비제한적으로 인터페론 유전자의 자극제 (STING) 효능제, 레티노산-유도성 유전자 I (RIG-I) 효능제, 및 TLR3, TLR4, TLR7, TLR8 및/또는 TLR9에 대한 효능제를 포함한다. 예시적인 아주반트는 비제한적으로 CpG ODN, 인터페론-α (IFN-α), 폴리이노신산:폴리시티딜산 (폴리I:C), 이미퀴모드 (R837), 레시퀴모드 (R848) 또는 리포폴리사카라이드 (LPS)를 포함한다. 일부 실시양태에서, 아주반트는 CpG ODN, LPS, IFN-α, STING 효능제, RIG-I 효능제, 폴리 I:C, R837, R848, TLR3 효능제, TLR4 효능제 또는 TLR9 효능제이다. 특정한 실시양태에서, 아주반트는 CpG ODN이다. 일부 실시양태에서, 아주반트는 CpG ODN이다. 일부 실시양태에서, CpG ODN은 부류 A CpG ODN, 부류 B CpG ODN 또는 부류 C CpG ODN이다. 일부 실시양태에서, CpG ODN 아주반트는 CpG ODN 1018, CpG ODN 1585, CpG ODN 2216, CpG ODN 2336, CpG ODN 1668, CpG ODN 1826, CPG ODN 2006, CpG ODN 2007, CpG ODN BW006, CpG ODN D-SL01, CpG ODN 2395, CpG ODN M362, CpG ODN D-SL03의 군으로부터 선택된 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, CpG ODN 아주반트는 CpG ODN 1826 (TCCATGACGTTCCTGACGTT; 서열식별번호: 30) 또는 CpG ODN 2006 (또한 CpG ODN 7909로도 공지됨) (TCGTCGTTTTGTCGTTTTGTCGTT; 서열식별번호: 30) 올리고뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 아주반트는 CpG ODN 7909이다. 일부 실시양태에서, RIG-I 효능제는 폴리이노신산:폴리시티딜산 (폴리I:C)을 포함한다. 다중 아주반트가 또한 면역 반응의 도출을 증진시키기 위해 항원과 함께 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 변형된 PBMC는 1종 초과의 아주반트를 포함한다. 다중 아주반트가 또한 면역 반응의 도출을 증진시키기 위해 항원과 함께 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 변형된 PBMC는 1종 초과의 아주반트를 포함한다. 일부 실시양태에서, 변형된 PBMC는 아주반트 CpG ODN, LPS, IFN-α, STING 효능제, RIG-I 효능제, 폴리 I:C, R837, R848, TLR3 효능제, TLR4 효능제 또는 TLR9 효능제의 임의의 조합을 포함한다.
본원에 기재된 임의의 실시양태에서, 달리 나타내지 않는 한, 아주반트는 (a) 교란된 투입 T 세포와 함께 인큐베이션되고 이를 통과하는 아주반트, 또는 (b) 개체에게 변형된 T 세포와 함께 공투여되는 아주반트를 지칭할 수 있다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 개체에서 면역 반응을 조정하는 임의의 방법에 따르면, 방법은 면역원성 에피토프를 포함하는 항원을 포함하는 변형된 T 세포를 사용한다. 일부 실시양태에서, 면역원성 에피토프는 질환-연관 항원으로부터 유래된다. 일부 실시양태에서, 면역원성 에피토프는 이환 세포로부터 단리된 펩티드 또는 mRNA로부터 유래된다. 일부 실시양태에서, 면역원성 에피토프는 이환 세포에서 이소성 발현되거나 과다발현되는 단백질로부터 유래된다. 일부 실시양태에서, 면역원성 에피토프는 신생항원, 예를 들어 암-연관 신생항원으로부터 유래된다. 일부 실시양태에서, 면역원성 에피토프는 네오에피토프, 예를 들어 암-연관 네오에피토프를 포함한다. 일부 실시양태에서, 면역원성 에피토프는 비-자기 항원으로부터 유래된다. 일부 실시양태에서, 면역원성 에피토프는 돌연변이되거나 달리 변경된 자기 항원으로부터 유래된다. 일부 실시양태에서, 면역원성 에피토프는 종양 항원, 바이러스 항원, 박테리아 항원 또는 진균 항원으로부터 유래된다. 일부 실시양태에서, 항원은 복수의 면역원성 에피토프를 포함한다. 일부 실시양태에서, 복수의 면역원성 에피토프 중 일부는 동일한 공급원으로부터 유래된다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 복수의 면역원성 에피토프 중 일부는 동일한 바이러스 항원으로부터 유래된다. 일부 실시양태에서, 복수의 면역원성 에피토프 모두는 동일한 공급원으로부터 유래된다. 일부 실시양태에서, 복수의 면역원성 에피토프 중 어떠한 것도 동일한 공급원으로부터 유래되지 않는다. 일부 실시양태에서, 변형된 T 세포는 복수의 상이한 항원을 포함한다.
일부 실시양태에서, 면역원성 에피토프를 포함하는 항원을 포함하는 변형된 T 세포를 사용하여 본원에 기재된 개체에서 면역 반응을 조정하는 임의의 방법에 따르면, 항원은 폴리펩티드이고, 면역원성 에피토프는 면역원성 펩티드 에피토프이다. 일부 실시양태에서, 면역원성 펩티드 에피토프는 N-말단 플랭킹 폴리펩티드 및/또는 C-말단 플랭킹 폴리펩티드에 융합된다. 일부 실시양태에서, N-말단 플랭킹 폴리펩티드 및/또는 C-말단 플랭킹 폴리펩티드에 융합된 면역원성 펩티드 에피토프는 비-자연 발생 서열이다. 일부 실시양태에서, N-말단 및/또는 C-말단 플랭킹 폴리펩티드는 면역원성 합성 긴 펩티드 (SLP)로부터 유래된다. 일부 실시양태에서, N-말단 및/또는 C-말단 플랭킹 폴리펩티드는 질환-연관 면역원성 SLP로부터 유래된다. 일부 실시양태에서, N-말단 플랭킹 폴리펩티드는 서열식별번호: 5-10 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하고/거나 C-말단 플랭킹 폴리펩티드는 서열식별번호: 11-17 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 면역원성 에피토프를 포함하는 항원을 포함하는 변형된 T 세포를 사용하여 본원에 기재된 개체에서 면역 반응을 조정하는 임의의 방법에 따르면, 항원 또는 그 안에 함유된 면역원성 에피토프는 인간 유두종바이러스 (HPV) 항원으로부터 유래된다. 일부 실시양태에서, 항원 또는 그 안에 함유된 면역원성 에피토프는 HPV- 16, 18, 26, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 53, 56, 58, 59, 66, 68, 73 및 82 중 임의의 것으로부터 유래된다. 일부 실시양태에서, 항원 또는 그 안에 함유된 면역원성 에피토프는 HPV-16 항원 또는 HPV-18 항원으로부터 유래된다. 추가 실시양태에서, 항원 또는 그 안에 함유된 면역원성 에피토프는 HPV E6 항원 (예를 들어, HPV-16 또는 HPV-18 E6 항원) 또는 HPV E7 항원 (예를 들어, HPV-16 또는 HPV-18 E7 항원)으로부터 유래된다. 일부 실시양태에서, 항원은 HPV E6 및/또는 E7로부터 유래된 HLA-A2-제한 펩티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 항원은 잔기 29 내지 38의 HPV-16 E6 단백질의 단편 (즉, HPV-16 E629-38)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항원은 잔기 48 내지 57의 HPV-16 E6 단백질의 단편 (즉, HPV-16 E648-57)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항원은 잔기 11 내지 20의 HPV-16 E7 단백질의 단편 (즉, HPV-16 E711-20)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항원은 잔기 49 내지 57의 HPV-16 E7 단백질의 단편 (즉, HPV-16 E749-57)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항원은 서열식별번호: 1-4 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항원은 서열식별번호: 5-10 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 N-말단 폴리펩티드 및 서열식별번호: 11-17 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 C-말단 폴리펩티드가 플랭킹되어 있는 서열식별번호: 1-4 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항원은 서열식별번호: 18-25 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 면역원성 에피토프를 포함하는 항원을 포함하는 변형된 T 세포를 사용하여 본원에 기재된 개체에서 면역 반응을 조정하는 임의의 방법에 따르면, 항원 또는 그 안에 함유된 면역원성 에피토프는 인간 시토메갈로바이러스 (HCMV) 항원으로부터 유래된다. 일부 실시양태에서, HCMV는 균주 AD169 또는 균주 메를린 HCMV이다. 일부 실시양태에서, 항원은 HCMV pUL83으로부터 유래된 HLA-A2-제한 펩티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 변형된 T 세포는 복수의 면역원성 에피토프를 포함하는 복수의 항원을 포함한다. 일부 실시양태에서, 개체에게 복수의 면역원성 에피토프를 포함하는 복수의 항원을 포함하는 변형된 T 세포를 투여한 후에, 복수의 면역원성 에피토프 중 어떠한 것도 개체에서 임의의 다른 면역원성 에피토프에 대한 면역 반응을 감소시키지 않는다. 일부 실시양태에서, 항원은 폴리펩티드이고, 면역원성 에피토프는 면역원성 펩티드 에피토프이다. 일부 실시양태에서, 면역원성 펩티드 에피토프는 N-말단 플랭킹 폴리펩티드 및/또는 C-말단 플랭킹 폴리펩티드에 융합된다. 일부 실시양태에서, 항원은 면역원성 펩티드 에피토프 및 1개 이상의 이종 펩티드 서열을 포함하는 폴리펩티드이다. 일부 실시양태에서, 항원은 N-말단 및/또는 C-말단에 이종 펩티드 서열이 플랭킹되어 있는 면역원성 펩티드 에피토프를 포함하는 폴리펩티드이다. 일부 실시양태에서, 플랭킹 이종 펩티드 서열은 질환-연관 면역원성 펩티드로부터 유래된다.
일부 실시양태에서, 면역원성 에피토프를 포함하는 항원을 포함하는 변형된 T 세포를 사용하여 본원에 기재된 개체에서 면역 반응을 조정하는 임의의 방법에 따르면, 항원은 MHC 부류 I-제한 펩티드 및/또는 MHC 부류 II-제한 펩티드로 프로세싱될 수 있다. 일부 실시양태에서, 항원은 MHC 부류 I-제한 펩티드로 프로세싱될 수 있다. 일부 실시양태에서, 항원은 MHC 부류 II-제한 펩티드로 프로세싱될 수 있다. 일부 실시양태에서, 항원은 복수의 면역원성 에피토프를 포함하고, MHC 부류 I-제한 펩티드 및 MHC 부류 II-제한 펩티드로 프로세싱될 수 있다. 일부 실시양태에서, 복수의 면역원성 에피토프 중 일부는 동일한 공급원으로부터 유래된다. 일부 실시양태에서, 복수의 면역원성 에피토프 모두는 동일한 공급원으로부터 유래된다. 일부 실시양태에서, 복수의 면역원성 에피토프 중 어떠한 것도 동일한 공급원으로부터 유래되지 않는다.
일부 실시양태에서, 변형된 T 세포를 사용하여 본원에 기재된 개체에서 면역 반응을 조정하는 임의의 방법에 따르면, 변형된 T 세포는 복수의 면역원성 에피토프를 포함하는 복수의 항원을 포함한다. 일부 실시양태에서, 복수의 면역원성 에피토프 중 어떠한 것도 개체에서 임의의 다른 면역원성 에피토프에 대한 면역 반응을 감소시키지 않는다.
일부 실시양태에서, 변형된 T 세포를 사용하여 본원에 기재된 개체에서 면역 반응을 조정하는 임의의 방법에 따르면, 변형된 T 세포는 항원 및 아주반트를 포함한다. 일부 실시양태에서, 변형된 T 세포는 아주반트를 약 1 pM 내지 약 10 mM의 농도로 포함한다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 변형된 T 세포에서의 아주반트의 농도는 약 1 pM, 약 10 pM, 약 100 pM, 약 1 nM, 약 10 nM, 약 100 nM, 약 1 μM, 약 10 μM, 약 100 μM, 약 1 mM 또는 약 10 mM 중 임의의 것 미만이다. 일부 실시양태에서, 변형된 T 세포에서의 아주반트의 농도는 약 10 mM 초과이다. 일부 실시양태에서, 변형된 T 세포에서의 항원의 농도는 약 1 pM 내지 약 10 pM, 약 10 pM 내지 약 100 pM, 약 100 pM 내지 약 1 nM, 약 1 nM 내지 약 10 nM, 약 10 nM 내지 약 100 nM, 약 100 nM 내지 약 1 μM, 약 1 μM 내지 약 10 μM, 약 10 μM 내지 약 100 μM, 약 100 μM 내지 약 1 mM, 또는 1 mM 내지 약 10 mM 중 임의의 것이다. 일부 실시양태에서, 변형된 T 세포에서의 항원 대 아주반트의 몰비는 약 10000:1 내지 약 1:10000 중 임의의 것이다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 변형된 T 세포에서의 항원 대 아주반트의 몰비는 약 10000:1, 약 1000:1, 약 100:1, 약 10:1, 약 1:1, 약 1:10, 약 1:100, 약 1:1000, 또는 약 1:10000 중 임의의 것이다. 일부 실시양태에서, 변형된 T 세포에서의 항원 대 아주반트의 몰비는 약 10000:1 내지 약 1000:1, 약 1000:1 내지 약 100:1, 약 100:1 내지 약 10:1, 약 10:1 내지 약 1:1, 약 1:1 내지 약 1:10, 약 1:10 내지 약 1:100, 약 1:100 내지 약 1:1000, 약 1:1000 내지 약 1:10000 중 임의의 것이다. 일부 실시양태에서, 변형된 T 세포는 a) 항원, b) 항원 및 적어도 1종의 다른 항원, 및/또는 c) 항원 및 아주반트를 포함하는 복합체를 포함한다.
일부 실시양태에서, 변형된 T 세포를 사용하여 본원에 기재된 개체에서 면역 반응을 조정하는 임의의 방법에 따르면, 변형된 T 세포는 작용제를 포함하지 않는 상응하는 변형된 T 세포와 비교하여 변형된 T 세포의 생존율 및/또는 기능을 증진시키는 작용제를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 작용제는 안정화제 또는 보조-인자이다. 일부 실시양태에서, 작용제는 알부민이다. 일부 실시양태에서, 알부민은 마우스, 소 또는 인간 알부민이다. 일부 실시양태에서, 작용제는 2가 금속 양이온, 글루코스, ATP, 칼륨, 글리세롤, 트레할로스, D-수크로스, PEG1500, L-아르기닌, L-글루타민 또는 EDTA이다.
일부 실시양태에서, 변형된 T 세포를 사용하여 본원에 기재된 개체에서 면역 반응을 조정하는 임의의 방법에 따르면, 변형된 T 세포는 추가의 변형을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변형된 T 세포는 MHC 부류 I 발현을 조정하는 추가의 변형을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변형된 T 세포는 MHC 부류 I 발현을 감소시키는 추가의 변형을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변형된 T 세포는 MHC 부류 I 발현을 증가시키는 추가의 변형을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변형된 T 세포는 MHC 부류 II 발현을 조정하는 추가의 변형을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변형된 T 세포는 MHC 부류 II 발현을 감소시키는 추가의 변형을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변형된 T 세포는 MHC 부류 II 발현을 증가시키는 추가의 변형을 포함한다. 일부 실시양태에서, 동종이형 맥락에서 변형된 T 세포의 투여에 반응하여 개체에서 시작되는 선천성 면역 반응은, 동종이형 맥락에서 추가의 변형을 포함하지 않는 상응하는 변형된 T 세포의 투여에 반응하여 개체에서 시작되는 선천성 면역 반응과 비교하여 감소된다. 일부 실시양태에서, 변형된 T 세포가 투여된 개체에서의 이들 세포의 순환 반감기는, 추가의 변형을 포함하지 않는 상응하는 변형된 T 세포가 투여된 개체에서의 이들 세포의 순환 반감기와 비교하여 증가된다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 변형된 T 세포를 사용하여 개체에서 면역 반응을 조정하는 임의의 방법에 따르면, 방법은 개체에게 변형된 T 세포를 투여하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변형된 T 세포는 개체에 대해 동종이형이다. 일부 실시양태에서, 변형된 T 세포는 개체에 대해 자가이다. 일부 실시양태에서, 개체는 염증 및/또는 면역 반응을 조정하도록 사전-조건화된다. 일부 실시양태에서, 개체는 염증 및/또는 면역 반응을 감소시키도록 사전-조건화된다. 일부 실시양태에서, 개체는 염증 및/또는 면역 반응을 증가시키도록 사전-조건화된다. 일부 실시양태에서, 개체에게 변형된 T 세포를 투여하는 것은 항원에 특이적인 세포독성 T 림프구 (CTL)의 활성화 및/또는 확장을 유발한다. 일부 실시양태에서, 개체에게 변형된 T 세포를 투여하는 것은 항원에 특이적인 헬퍼 T (Th) 세포의 활성화 및/또는 확장을 유발한다. 일부 실시양태에서, 개체에게 투여되는 변형된 T 세포의 양은 약 1 x 106 내지 약 1 x 1012개의 세포이다. 일부 실시양태에서, 개체에게 투여되는 변형된 T 세포의 양은 약 1 x 106, 1 x 107, 1 x 108, 1 x 109, 1 x 1010, 1 x 1011 및 약 1 x 1012개의 세포 중 임의의 것 미만이다. 일부 실시양태에서, 개체에게 투여되는 변형된 T 세포의 양은 약 1 x 106 내지 1 x 107, 1 x 107 내지 1 x 108, 1 x 108 내지 1 x 109, 1 x 109 내지 1 x 1010, 1 x 1010 내지 1 x 1011, 및 1 x 1011 내지 1 x 1012개의 세포 중 임의의 것이다. 일부 실시양태에서, 방법은 변형된 T 세포의 다중 투여를 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 약 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10회 또는 약 10회 초과 중 임의의 횟수의 투여를 포함한다. 일부 실시양태에서, 변형된 T 세포의 2회 연속 투여 사이의 시간 간격은 약 1일 내지 약 1개월이다. 일부 실시양태에서, 투여는 매일, 2일마다, 3일마다, 4일마다, 5일마다, 6일마다, 매주, 격주 또는 매월이다. 일부 실시양태에서, 연속 투여는 1년 또는 그 초과까지의 기간 동안 제공된다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 변형된 T 세포를 사용하여 개체에서 면역 반응을 조정하는 임의의 방법에 따르면, 방법은 개체에게 제2 아주반트를 투여하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 제2 아주반트는 전신으로, 예를 들어 정맥내로 투여된다. 일부 실시양태에서, 제2 아주반트는 국부로, 예를 들어 종양내로 투여된다. 일부 실시양태에서, 제2 아주반트는 세포에 함유되지 않고, 예를 들어 제2 아주반트는 용액 중에 없다. 일부 실시양태에서, 제2 아주반트는 IFN-α 또는 CpG ODN이다. 일부 실시양태에서, 변형된 T 세포내에 함유된 아주반트 및 제2 아주반트는 동일한 화합물이다. 예를 들어, 실시양태에서, 변형된 T 세포는 CpG ODN을 포함하고, 제2 아주반트는 또한 CpG ODN이다. 일부 실시양태에서, 변형된 T 세포에 함유된 아주반트 및 제2 아주반트는 상이한 화합물이다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 변형된 T 세포는 CpG ODN을 포함하고, 제2 아주반트는 IFN-α이다. 일부 실시양태에서, 변형된 T 세포 및 제2 아주반트는 공동으로 또는 동시에 투여된다. 일부 실시양태에서, 변형된 T 세포 및 제2 아주반트는 순차적으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 변형된 T 세포는 제2 아주반트의 투여 전에 투여된다. 일부 실시양태에서, 변형된 T 세포는 제2 아주반트의 투여 후에 투여된다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 변형된 T 세포를 사용하여 개체에서 면역 반응을 조정하는 임의의 방법에 따르면, 방법은 개체에게 면역 체크포인트 억제제를 투여하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 변형된 T 세포 및 면역 체크포인트 억제제는 개체에게 공동으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 변형된 T 세포 및 면역 체크포인트 억제제는 개체에게 동시에 투여된다. 일부 실시양태에서, 변형된 T 세포 및 면역 체크포인트 억제제는 개체에게 순차적으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 변형된 T 세포는 개체에 대한 면역 체크포인트 억제제의 투여 후에 개체에게 투여된다. 일부 실시양태에서, 변형된 T 세포는 개체에 대한 면역 체크포인트 억제제의 투여 전에 개체에게 투여된다. 일부 실시양태에서, 면역 체크포인트 억제제는 PD-1, PD-L1, CTLA-4 및 TIM-3 중 어느 하나를 표적화한다. 예시적인 면역 체크포인트 억제제는 비제한적으로 PD-1, PD-L1, CTLA-4, LAG3 또는 TIM-3을 표적화한다. 일부 실시양태에서, 면역 체크포인트 억제제는 PD-1, PD-L1, CTLA-4, LAG3 또는 TIM-3 중 1종 이상을 표적화한다. 일부 실시양태에서, 면역 체크포인트 억제제는 PD-1에 결합하는 항체, PD-L1에 결합하는 항체, CTLA-4에 결합하는 항체, LAG3에 결합하는 항체 또는 TIM-3에 결합하는 항체 중 1종 이상이다. 추가 실시양태에서, 항체는 전장 항체 또는 임의의 변이체, 예를 들어 비제한적으로 항체 단편, 단일 쇄 가변 단편 (ScFv) 또는 항원-결합 단편 (Fab)일 수 있다. 추가 실시양태에서, 항체는 이중특이적, 삼중특이적 또는 다중특이적일 수 있다. 일부 실시양태에서, 면역 체크포인트 억제제는 PD-1, PD-L1, CTLA-4, LAG3 또는 TIM-3 중 1종 이상에 결합하고/거나 이를 억제하는 1종 이상의 화학적 화합물이다. 일부 실시양태에서, 면역 체크포인트 억제제는 PD-1, PD-L1, CTLA-4, LAG3 또는 TIM-3 중 1종 이상에 결합하고/거나 이를 억제하는 1종 이상의 펩티드이다.
다른 예시적인 면역 체크포인트 억제제는 비제한적으로 TIGIT, VISTA, TIM1, B7-H4 (VTCN1) 또는 BTLA를 표적화한다. 일부 실시양태에서, 면역 체크포인트 억제제는 TIGIT, VISTA, TIM1, B7-H4 (VTCN1) 또는 BTLA 중 1종 이상을 표적화한다. 일부 실시양태에서, 면역 체크포인트 억제제는 TIGIT에 결합하는 항체, VISTA에 결합하는 항체, TIM1에 결합하는 항체, B7-H4 (VTCN1)에 결합하는 항체 또는 BTLA에 결합하는 항체 중 1종 이상이다. 추가 실시양태에서, 항체는 전장 항체 또는 임의의 변이체, 예를 들어 비제한적으로 항체 단편, 단일 쇄 가변 단편 (ScFv) 또는 항원-결합 단편 (Fab)일 수 있다. 추가 실시양태에서, 항체는 이중특이적, 삼중특이적 또는 다중특이적일 수 있다. 일부 실시양태에서, 면역 체크포인트 억제제는 PD-1, PD-L1, CTLA-4, LAG3, TIM-3, TIGIT, VISTA, TIM1, B7-H4 (VTCN1) 또는 BTLA 중 1종 이상에 결합하고/거나 이를 억제하는 1종 이상의 화학적 화합물이다. 일부 실시양태에서, 면역 체크포인트 억제제는 PD-1, PD-L1, CTLA-4, LAG3, TIM-3, TIGIT, VISTA, TIM1, B7-H4 (VTCN1) 또는 BTLA 중 1종 이상에 결합하고/거나 이를 억제하는 1종 이상의 펩티드이다.
화학요법은 암, 예를 들어 HPV-연관 암에 대한 상가적 또는 상승작용적 효과를 달성하기 위해 본원에 기재된 변형된 T 세포 중 어느 하나와 조합되어 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 변형된 T 세포를 포함하는 조성물은 화학요법의 투여와 조합되어 투여된다. 일부 실시양태에서, 변형된 T 세포를 포함하는 조성물 및 화학요법은 동시에 투여된다. 일부 실시양태에서, 변형된 T 세포를 포함하는 조성물 및 화학요법은 순차적으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 변형된 T 세포를 포함하는 조성물은 화학요법의 투여와 조합되어 및 면역 체크포인트 억제제와 조합되어 투여된다.
일부 실시양태에서, 변형된 T 세포를 포함하는 조성물은 화학요법의 투여 전에 투여된다. 일부 실시양태에서, 변형된 T 세포를 포함하는 조성물은 화학요법의 투여 후에 투여된다. 예를 들어, 변형된 T 세포를 포함하는 조성물은 화학요법의 투여 약 1시간 내지 약 1주 전에 투여된다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 변형된 T 세포를 포함하는 조성물은 화학요법의 투여 약 1시간, 약 2시간, 약 3시간, 약 4시간, 약 6시간, 약 8시간, 약 10시간, 약 12시간, 약 14시간, 약 16시간, 약 18시간, 약 20시간, 약 24시간, 약 30시간, 약 36시간, 약 42시간, 약 48시간, 약 60시간, 약 3일, 약 4일, 약 5일, 약 6일 또는 약 7일 전에 투여된다. 일부 실시양태에서, 변형된 T 세포를 포함하는 조성물은 화학요법의 투여 약 1시간 내지 약 2시간, 약 2시간 내지 약 3시간, 약 3시간 내지 약 4시간, 약 4시간 내지 약 6시간, 약 6시간 내지 약 8시간, 약 8시간 내지 약 10시간, 약 10시간 내지 약 12시간, 약 12시간 내지 약 14시간, 약 14시간 내지 약 16시간, 약 16시간 내지 약 18시간, 약 18시간 내지 약 20시간, 약 20시간 내지 약 24시간, 약 24시간 내지 약 30시간, 약 30시간 내지 약 36시간, 약 36시간 내지 약 42시간, 약 42시간 내지 약 48시간, 약 48시간 내지 약 60시간, 약 60시간 내지 약 3일, 약 3일 내지 약 4일, 약 4일 내지 약 5일, 약 5일 내지 약 6일, 약 6일 내지 약 7일 전에 투여된다.
일부 실시양태에서, 변형된 T 세포를 포함하는 조성물은 화학요법의 투여 후에 투여된다. 예를 들어, 변형된 T 세포를 포함하는 조성물은 화학요법의 투여로부터 약 1시간 내지 약 1주 후에 투여된다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 변형된 T 세포를 포함하는 조성물은 화학요법의 투여로부터 약 1시간, 약 2시간, 약 3시간, 약 4시간, 약 6시간, 약 8시간, 약 10시간, 약 12시간, 약 14시간, 약 16시간, 약 18시간, 약 20시간, 약 24시간, 약 30시간, 약 36시간, 약 42시간, 약 48시간, 약 60시간, 약 3일, 약 4일, 약 5일, 약 6일 또는 약 7일 후에 투여된다. 일부 실시양태에서, 변형된 T 세포를 포함하는 조성물은 화학요법의 투여로부터 약 1시간 내지 약 2시간, 약 2시간 내지 약 3시간, 약 3시간 내지 약 4시간, 약 4시간 내지 약 6시간, 약 6시간 내지 약 8시간, 약 8시간 내지 약 10시간, 약 10시간 내지 약 12시간, 약 12시간 내지 약 14시간, 약 14시간 내지 약 16시간, 약 16시간 내지 약 18시간, 약 18시간 내지 약 20시간, 약 20시간 내지 약 24시간, 약 24시간 내지 약 30시간, 약 30시간 내지 약 36시간, 약 36시간 내지 약 42시간, 약 42시간 내지 약 48시간, 약 48시간 내지 약 60시간, 약 60시간 내지 약 3일, 약 3일 내지 약 4일, 약 4일 내지 약 5일, 약 5일 내지 약 6일, 약 6일 내지 약 7일 후에 투여된다.
일부 실시양태에서, 방법은 변형된 T 세포를 포함하는 조성물의 다중 투여 및/또는 화학요법의 다중 투여를 포함한다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 방법은 변형된 T 세포를 포함하는 조성물 및/또는 화학요법의 2회 투여, 3회 투여, 4회 투여, 5회 투여, 6회 투여, 7회 투여, 8회 투여, 9회 투여, 10회 투여, 11회 투여, 12회 투여, 13회 투여, 14회 투여 또는 15회 투여를 포함한다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 방법은 변형된 T 세포를 포함하는 조성물 및/또는 화학요법의 5회 미만의 투여, 10회 미만의 투여, 15회 미만의 투여, 20회 미만의 투여, 25회 미만의 투여, 30회 미만의 투여, 50회 미만의 투여, 75회 미만의 투여, 100회 미만의 투여 또는 200회 미만의 투여를 포함한다.
예시적인 화학요법은 세포 주기 의존성 또는 세포 주기 비의존성일 수 있다. 일부 실시양태에서, 화학요법은 1종 이상의 화학요법제를 포함한다. 일부 실시양태에서, 화학요법제는 암에서의 세포 분열, DNA 또는 대사 중 1종 이상을 표적화할 수 있다. 일부 실시양태에서, 화학요법제는 백금-기반 작용제, 예컨대 비제한적으로 시스플라틴, 옥살리플라틴 또는 카르보플라틴이다. 일부 실시양태에서, 화학요법제는 탁산 (예컨대 도세탁셀 또는 파클리탁셀)이다. 일부 실시양태에서, 화학요법제는 5-플루오로우라실, 독소루비신 또는 이리노테칸이다. 일부 실시양태에서, 화학요법제는 알킬화제, 항대사물, 항종양 항생제, 토포이소머라제 억제제 또는 유사분열 억제제 중 1종 이상이다. 일부 실시양태에서, 화학요법은 시스플라틴을 포함한다.
방사선요법은 암, 예를 들어 HPV-연관 암에 대한 상가적 또는 상승작용적 효과를 달성하기 위해 본원에 기재된 변형된 T 세포 중 어느 하나와 조합되어 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 변형된 T 세포를 포함하는 조성물은 방사선요법의 투여와 조합되어 투여된다. 일부 실시양태에서, 변형된 T 세포를 포함하는 조성물 및 방사선요법은 동시에 투여된다. 일부 실시양태에서, 변형된 T 세포를 포함하는 조성물 및 방사선요법은 순차적으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 변형된 T 세포를 포함하는 조성물은 방사선요법의 투여와 조합되어, 화학요법과 조합되어 및/또는 면역 체크포인트 억제제와 조합되어 투여된다.
일부 실시양태에서, 변형된 T 세포를 포함하는 조성물은 방사선요법의 투여 전에 투여된다. 일부 실시양태에서, 변형된 T 세포를 포함하는 조성물은 방사선요법의 투여 후에 투여된다. 예를 들어, 변형된 T 세포를 포함하는 조성물은 방사선요법의 투여 약 1시간 내지 약 1주 전에 투여된다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 변형된 T 세포를 포함하는 조성물은 방사선요법의 투여 약 1시간, 약 2시간, 약 3시간, 약 4시간, 약 6시간, 약 8시간, 약 10시간, 약 12시간, 약 14시간, 약 16시간, 약 18시간, 약 20시간, 약 24시간, 약 30시간, 약 36시간, 약 42시간, 약 48시간, 약 60시간, 약 3일, 약 4일, 약 5일, 약 6일 또는 약 7일 전에 투여된다. 일부 실시양태에서, 변형된 T 세포를 포함하는 조성물은 방사선요법의 투여 약 1시간 내지 약 2시간, 약 2시간 내지 약 3시간, 약 3시간 내지 약 4시간, 약 4시간 내지 약 6시간, 약 6시간 내지 약 8시간, 약 8시간 내지 약 10시간, 약 10시간 내지 약 12시간, 약 12시간 내지 약 14시간, 약 14시간 내지 약 16시간, 약 16시간 내지 약 18시간, 약 18시간 내지 약 20시간, 약 20시간 내지 약 24시간, 약 24시간 내지 약 30시간, 약 30시간 내지 약 36시간, 약 36시간 내지 약 42시간, 약 42시간 내지 약 48시간, 약 48시간 내지 약 60시간, 약 60시간 내지 약 3일, 약 3일 내지 약 4일, 약 4일 내지 약 5일, 약 5일 내지 약 6일, 약 6일 내지 약 7일 전에 투여된다.
일부 실시양태에서, 변형된 T 세포를 포함하는 조성물은 방사선요법의 투여 후에 투여된다. 예를 들어, 변형된 T 세포를 포함하는 조성물은 방사선요법의 투여로부터 약 1시간 내지 약 1주 후에 투여된다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 변형된 T 세포를 포함하는 조성물은 방사선요법의 투여로부터 약 1시간, 약 2시간, 약 3시간, 약 4시간, 약 6시간, 약 8시간, 약 10시간, 약 12시간, 약 14시간, 약 16시간, 약 18시간, 약 20시간, 약 24시간, 약 30시간, 약 36시간, 약 42시간, 약 48시간, 약 60시간, 약 3일, 약 4일, 약 5일, 약 6일 또는 약 7일 후에 투여된다. 일부 실시양태에서, 변형된 T 세포를 포함하는 조성물은 방사선요법의 투여로부터 약 1시간 내지 약 2시간, 약 2시간 내지 약 3시간, 약 3시간 내지 약 4시간, 약 4시간 내지 약 6시간, 약 6시간 내지 약 8시간, 약 8시간 내지 약 10시간, 약 10시간 내지 약 12시간, 약 12시간 내지 약 14시간, 약 14시간 내지 약 16시간, 약 16시간 내지 약 18시간, 약 18시간 내지 약 20시간, 약 20시간 내지 약 24시간, 약 24시간 내지 약 30시간, 약 30시간 내지 약 36시간, 약 36시간 내지 약 42시간, 약 42시간 내지 약 48시간, 약 48시간 내지 약 60시간, 약 60시간 내지 약 3일, 약 3일 내지 약 4일, 약 4일 내지 약 5일, 약 5일 내지 약 6일, 약 6일 내지 약 7일 후에 투여된다.
일부 실시양태에서, 방법은 변형된 T 세포를 포함하는 조성물의 다중 투여 및/또는 방사선요법의 다중 투여를 포함한다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 방법은 변형된 T 세포를 포함하는 조성물 및/또는 방사선요법의 2회 투여, 3회 투여, 4회 투여, 5회 투여, 6회 투여, 7회 투여, 8회 투여, 9회 투여, 10회 투여, 11회 투여, 12회 투여, 13회 투여, 14회 투여 또는 15회 투여를 포함한다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 방법은 변형된 T 세포를 포함하는 조성물 및/또는 방사선요법의 5회 미만의 투여, 10회 미만의 투여, 15회 미만의 투여, 20회 미만의 투여, 25회 미만의 투여, 30회 미만의 투여, 50회 미만의 투여, 75회 미만의 투여, 100회 미만의 투여 또는 200회 미만의 투여를 포함한다.
특정 측면에서, 개체에게 항원과 연관된 변형된 T 세포를 투여하는 것을 포함하며, 여기서 변형된 T 세포는 a) 항원이 투입 T 세포의 세포 표면과 회합되도록 하기에 충분한 시간 동안 투입 T 세포를 i) 항원 또는 ii) 항원 및 아주반트와 함께 인큐베이션하고, 여기서 항원은 면역원성 에피토프를 포함하고, 이에 의해 항원과 회합된 변형된 T 세포를 생성시키는 단계; 및 b) 개체에게 변형된 T 세포를 투여하는 단계를 포함하는 방법에 의해 제조되는 것인, 개체에서 면역 반응을 조정하는 방법이 제공된다.
특정 측면에서, a) 항원을 포함하는 투입 T 세포를 포함하는 세포 현탁액을 세포-변형 압박부에 통과시키며, 여기서 항원은 면역원성 에피토프를 포함하고, 여기서 압박부의 직경은 현탁액 중 투입 T 세포의 직경의 함수이고, 이에 의해 아주반트가 통과하기에 충분히 큰 투입 T 세포의 교란을 유발하여 교란된 투입 T 세포를 형성하는 단계; b) 교란된 투입 T 세포로 아주반트가 들어가도록 하기에 충분한 시간 동안 교란된 투입 T 세포를 아주반트와 함께 인큐베이션하고, 이에 의해 항원 및 아주반트를 포함하는 변형된 T 세포를 생성시키는 단계; 및 c) 개체에게 변형된 T 세포를 투여하는 단계를 포함하는 방법인 의학적 치료 방법에 사용하기 위한 변형된 T 세포가 제공된다. 일부 실시양태에서, 교란된 투입 T 세포와 함께 인큐베이션된 아주반트의 농도는 약 1 pM-10 mM이다. 일부 실시양태에서, 아주반트는 나노입자에 캡슐화된다.
특정 측면에서, a) 항원을 포함하는 투입 T 세포를 포함하는 세포 현탁액을 세포-변형 압박부에 통과시키며, 여기서 항원은 면역원성 에피토프를 포함하고, 여기서 압박부의 직경은 현탁액 중 투입 T 세포의 직경의 함수이고, 이에 의해 아주반트가 통과하기에 충분히 큰 투입 T 세포의 교란을 유발하여 교란된 투입 T 세포를 형성하는 단계; b) 교란된 투입 T 세포로 아주반트가 들어가도록 하기에 충분한 시간 동안 교란된 투입 T 세포를 아주반트와 함께 인큐베이션하고, 이에 의해 항원 및 아주반트를 포함하는 변형된 T 세포를 생성시키는 단계; 및 c) 개체에게 변형된 T 세포를 투여하는 단계를 포함하는 방법인 개체에서의 암, 감염성 질환 또는 바이러스-관련 질환의 치료에 사용하기 위한 변형된 T 세포가 제공된다. 일부 실시양태에서, 항원은 암, 감염성 질환 또는 바이러스 관련 질환과 연관된다. 일부 실시양태에서, 교란된 투입 T 세포와 함께 인큐베이션된 아주반트의 농도는 약 1 pM-10 mM이다. 일부 실시양태에서, 아주반트는 나노입자에 캡슐화된다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 변형된 T 세포는 개체에서 내성을 유도하지 않는다. 일부 실시양태에서, 변형된 T 세포는 개체에서 면역 반응을 저해하지 않는다. 일부 실시양태에서, 변형된 T 세포는 면역관용성 인자를 포함하지 않는다. 일부 실시양태에서, 변형된 T 세포는 면역관용성 인자와 조합되어 투여되지 않는다. 일부 실시양태에서, 변형된 T 세포는 면역관용성 인자의 투여 전에, 그와 동시에 또는 그 후에 투여되지 않는다.
항원
일부 실시양태에서, 본 발명은 면역 반응을 조정하기 위해 항원의 전달을 사용하며, 여기서 항원은 본원에 기재된 임의의 방법에 의해 T 세포로 전달된다. 일부 실시양태에서, 항원은 단일 항원이다. 일부 실시양태에서, 항원은 항원의 혼합물이다. 항원은 특이적 면역 반응, 예컨대 세포 또는 항체-매개 면역 반응을 자극하는 물질이다. 항원은 특정한 항원에 특이적인 면역 세포에 의해 발현되는 수용체, 예컨대 T 세포 수용체 (TCR)에 결합한다. 항원-수용체 결합은 후속적으로 세포내 신호전달 경로를 촉발하여 하류 면역 이펙터 경로, 예컨대 세포 활성화, 시토카인 생산, 세포 이동, 세포독성 인자 분비 및 항체 생산을 유도한다.
일부 실시양태에서, 항원은 폴리펩티드 항원이다. 일부 실시양태에서, 항원은 질환-연관 항원이다. 일부 실시양태에서, 항원은 외래 공급원, 예컨대 박테리아, 진균, 바이러스 또는 알레르겐으로부터 유래된다. 일부 실시양태에서, 항원은 내부 공급원, 예컨대 자기-단백질 (즉, 자기-항원) 또는 자기-단백질의 한 부분으로부터 유래된다. 일부 실시양태에서, 항원은 돌연변이되거나 달리 변경된 자기-항원이다. 일부 실시양태에서, 항원은 종양 항원이다. 일부 실시양태에서, 항원은 세포 용해물에 존재한다. 자기-항원은 유기체 자신의 세포 상에 또는 그 내에 존재하는 항원이다. 자기-항원은 정상적으로는 면역 반응을 자극하지 않지만, 자가면역 질환, 예컨대 제I형 당뇨병 또는 류마티스 관절염과 관련하여 또는 과다발현되거나 이상/이소성 발현되는 경우에 면역 반응을 자극할 수 있다.
일부 실시양태에서, 항원은 바이러스와 연관된다. 일부 실시양태에서, 항원은 바이러스 항원이다. 예시적인 바이러스 항원은 HPV 항원, HCMV 항원, SARS-CoV 항원 및 인플루엔자 항원을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항원은 미생물; 예를 들어 박테리아와 연관된다. 일부 실시양태에서, 조정된 면역 반응은 미생물; 예를 들어 박테리아에 대한 증가된 병원성 면역 반응을 포함한다.
특정 측면에서, 본 발명은 T 세포를 포함하는 세포 현탁액을 압박부에 통과시키는 것을 포함하며, 여기서 상기 압박부는 T 세포를 변형시키고, 이에 의해 세포의 교란을 유발하여 항원이 세포로 들어가도록 하고, 여기서 상기 세포 현탁액은 항원과 접촉되는 것인, 항원을 T 세포 내로 전달하는 방법을 사용한다. 일부 실시양태에서, 항원은 시험관내, 생체외 또는 생체내에서 T 세포로 전달된다.
일부 실시양태에서, 전달할 항원은 정제된다. 일부 실시양태에서, 항원은 적어도 약 60 중량% (건조 중량)의 관심 항원이다. 일부 실시양태에서, 정제된 항원은 적어도 약 75%, 90% 또는 99%의 관심 항원이다. 일부 실시양태에서, 정제된 항원은 적어도 약 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 98%, 99% 또는 100% (w/w)의 관심 항원이다. 순도는 비제한적으로 칼럼 크로마토그래피, 박층 크로마토그래피 (TLC), 고성능 액체 크로마토그래피 (HPLC), 핵 자기 공명 (NMR) 분광분석법, 질량 분광측정법 또는 SDS-PAGE 겔 전기영동을 포함한 임의의 공지된 방법에 의해 결정된다. 정제된 DNA 또는 RNA는 외인성 핵산, 탄수화물 및 지질이 없는 DNA 또는 RNA로서 정의된다.
아주반트
아주반트는 면역 세포 반응 (예를 들어 T 세포 반응), 예컨대 항원에 대한 면역 반응을 부스팅하는데 사용될 수 있다. 다중 아주반트가 또한 면역 반응을 증진시키는데 사용될 수 있고, 항원과 함께, 예를 들어 항원 단독에 대한 면역 반응과 비교하여 항원에 대한 면역 반응을 증진시키는데 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 본 발명은 면역 반응을 증진시키기 위해 아주반트의 전달을 사용하며, 여기서 아주반트는 본원에 기재된 임의의 방법에 의해 T 세포로 전달된다. 일부 실시양태에서, 아주반트는 항원에 대한 면역 반응을 증진시킨다. 예를 들어, 아주반트는 항원-제시 세포에 의한 항원의 면역원성 제시를 촉진할 수 있다. 일부 실시양태에서, 아주반트는 항원과 동시에 도입된다. 일부 실시양태에서, 아주반트 및 항원은 순차적으로 도입된다. 일부 실시양태에서, 아주반트는 항원의 도입 전에 도입된다. 일부 실시양태에서, 아주반트는 항원의 도입 후에 도입된다. 일부 실시양태에서, 아주반트는 아주반트의 부재 하의 T 세포 귀소와 비교하여 T 세포 귀소 (예를 들어, 표적 조직, 예컨대 종양으로의 T 세포 귀소)를 변경한다. 일부 실시양태에서, 아주반트는 아주반트의 부재 하의 T 세포 증식과 비교하여 T 세포 증식을 증가시킨다.
특정 측면에서, 본 발명은 투입 T 세포로부터 항원을 포함하는 면역원성 항원-제시 T 세포를 생성하는 방법을 사용하며, 여기서 투입 T 세포를 압박부에 통과시키고, 여기서 상기 압박부는 투입 T 세포를 변형시킴으로써 세포의 교란을 유발하여 항원이 투입 T 세포에 들어가도록 하고, 이에 의해 항원을 포함하는 면역원성 항원-제시 T 세포를 생성한다.
특정 측면에서, 본 발명은 T 세포를 포함하는 세포 현탁액을 압박부에 통과시키는 것을 포함하며, 여기서 상기 압박부는 T 세포를 변형시키고, 이에 의해 T 세포의 교란을 유발하여 아주반트가 세포로 들어가도록 하고, 여기서 상기 세포 현탁액은 아주반트와 접촉되는 것인, 아주반트를 T 세포 내로 전달하는 방법을 사용한다. 일부 실시양태에서, 아주반트는 시험관내, 생체외 또는 생체내에서 T 세포 내로 전달된다.
마이크로유체 시스템 및 그의 성분
세포-변형 압박부를 제공하는 마이크로유체 채널
일부 실시양태에서, 본 발명은 T 세포를 포함하는 세포 현탁액을 압박부에 통과시키고, 여기서 압박부는 T 세포를 변형시킴으로써 T 세포의 교란을 유발하여 항원 및/또는 아주반트가 T 세포로 들어가도록 하고, 여기서 압박부는 마이크로유체 채널 내에 함유되는 것인, 면역 반응을 조정하는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 다중 압박부가 마이크로유체 채널 내에 병렬로 및/또는 직렬로 배치될 수 있다. 본원에 개시된 방법에 사용하기 위한 세포-변형 압박부를 함유하는 예시적인 마이크로유체 채널은 WO2013059343에 기재되어 있다. 본원에 개시된 방법에 사용하기 위한 세공을 갖는 예시적인 표면은 WO2017041050에 기재되어 있다.
일부 실시양태에서, 마이크로유체 채널은 루멘을 포함하고, 완충제 중에 현탁된 T 세포가 통과할 수 있도록 구성되며, 여기서 마이크로유체 채널은 압박부를 포함한다. 마이크로유체 채널은 규소, 금속 (예를 들어, 스테인레스 스틸), 플라스틱 (예를 들어, 폴리스티렌), 세라믹, 유리, 결정질 기재, 무정형 기재, 또는 중합체 (예를 들어, 폴리-메틸 메타크릴레이트 (PMMA), PDMS, 시클릭 올레핀 공중합체 (COC) 등)를 포함한 다수의 물질 중 어느 하나로 제조될 수 있다. 마이크로유체 채널의 제작은 건식 에칭, 습식 에칭, 포토리소그래피, 사출 성형, 레이저 절제 또는 SU-8 마스크를 포함한 관련 기술분야에 공지된 임의의 방법에 의해 수행될 수 있다.
일부 실시양태에서, 마이크로유체 채널 내의 압박부는 입구 부분, 중심점 및 출구 부분을 포함한다. 일부 실시양태에서, 마이크로유체 채널 내의 압박부의 길이, 깊이 및 폭은 달라질 수 있다. 일부 실시양태에서, 마이크로유체 채널 내의 압박부의 직경은 T 세포의 직경의 함수이다. 일부 실시양태에서, 마이크로유체 채널 내의 압박부의 직경은 T 세포의 직경의 약 20% 내지 약 99%이다. 일부 실시양태에서, 압박부 크기는 T 세포의 직경의 약 20%, 약 30%, 약 40%, 약 50%, 약 60%, 약 70%, 약 80%, 약 90% 또는 약 99%이다. 일부 실시양태에서, 압박부 크기는 T 세포의 최소 단면 거리의 약 20%, 약 30%, 약 40%, 약 50%, 약 60%, 약 70%, 약 80%, 약 90% 또는 약 99%이다. 일부 실시양태에서, 채널은 약 2 μm 내지 약 10 μm의 압박부 폭 또는 그 사이의 임의의 폭 또는 폭의 범위를 포함한다. 예를 들어, 압박부 폭은 약 2μm, 약 3μm, 약 4μm, 약 5μm, 약 6μm 또는 약 7μm 중 어느 하나일 수 있다. 일부 실시양태에서, 채널은 약 10 μm의 압박부 길이 및 약 4 μm의 압박부 폭을 포함한다. 채널의 단면, 입구 부분, 중심점 및 출구 부분도 또한 달라질 수 있다. 예를 들어, 단면은 원형, 타원형, 긴 슬릿, 정사각형, 육각형 또는 삼각형 형상일 수 있다. 입구 부분은 압박부 각도를 한정하며, 여기서 압박부 각도는 채널의 막힘을 감소시키도록 최적화되고 T 세포 내로의 화합물의 증진된 전달을 위해 최적화된다. 출구 부분의 각도도 또한 달라질 수 있다. 예를 들어, 출구 부분의 각도는 비-층류를 초래할 수 있는 난류의 가능성을 감소시키도록 구성된다. 일부 실시양태에서, 입구 부분 및/또는 출구 부분의 벽은 선형이다. 다른 실시양태에서, 입구 부분 및/또는 출구 부분의 벽은 만곡형이다.
본원에 기재된 방법 또는 조성물 중 어느 하나에 따른 일부 실시양태에서, 압박부의 직경은 T 세포의 직경의 함수이다. 일부 실시양태에서, T 세포의 직경은 T 세포의 최소 단면 거리에 의해 측정된다.
본원에 기재된 방법 또는 조성물 중 어느 하나에 따른 일부 실시양태에서, 압박부의 직경은 투입 T 세포의 평균 직경의 약 10% 내지 약 99%이다. 일부 실시양태에서, 압박부의 직경은 투입 T 세포의 평균 직경의 약 10% 내지 약 90%, 약 10% 내지 약 80%, 약 10% 내지 약 70%, 약 20% 내지 약 60%, 약 40% 내지 약 60%, 또는 약 30% 내지 약 45% 중 어느 하나이다. 일부 실시양태에서, 압박부의 직경은 투입 T 세포의 평균 직경의 약 10% 내지 약 20%, 약 20% 내지 약 30%, 약 30% 내지 약 40%, 약 40% 내지 약 50%, 약 50% 내지 약 60%, 약 60% 내지 약 70%, 약 70% 내지 약 80%, 약 80% 내지 약 90%, 또는 약 90% 내지 약 99% 중 어느 하나이다. 일부 실시양태에서, 압박부의 직경은 투입 T 세포의 평균 직경의 약 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 99% 중 어느 하나이다.
본원에 기재된 방법 또는 조성물 중 어느 하나에 따른 일부 실시양태에서, 압박부의 직경은 약 1.5 μm 내지 약 10 μm이다. 일부 실시양태에서, 압박부의 직경은 약 2 μm 내지 약 8 μm이다. 일부 실시양태에서, 압박부의 직경은 약 2.5 μm 내지 약 6 μm이다. 일부 실시양태에서, 압박부의 직경은 약 3 μm 내지 약 5 μm이다. 일부 실시양태에서, 압박부의 직경은 약 3 μm 내지 약 4 μm이다. 일부 실시양태에서, 압박부의 직경은 약 1.5 μm 내지 약 10 μm, 약 1.75 μm 내지 약 9 μm, 약 2 μm 내지 약 8 μm, 약 2.25 μm 내지 약 7 μm, 약 2.5 μm 내지 약 6 μm, 약 2.75 μm 내지 약 5.5 μm, 약 3 μm 내지 약 5 μm, 약 3 μm 내지 약 4 μm, 약 3.1 μm 내지 약 3.9 μm, 약 3.2 μm 내지 약 3.8 μm, 약 3.3 μm 내지 약 3.7 μm, 또는 약 3.4 μm 내지 약 3.6 μm 중 어느 하나이다. 일부 실시양태에서, 압박부의 직경은 약 1.0 μm, 1.2 μm, 1.4 μm, 1.6 μm, 1.8 μm, 2.0 μm, 2.2 μm, 2.4 μm, 2.6 μm, 2.8 μm, 3.0 μm, 3.2 μm, 3.4 μm, 3.6 μm, 3.8 μm, 4.0 μm, 4.2 μm, 4.4 μm, 4.6 μm, 4.8 μm, 5.0 μm, 5.5 μm, 6.0 μm, 6.5 μm, 7.0 μm, 8.0 μm, 9.0 μm 또는 약 10.0 μm 중 어느 하나이다. 일부 실시양태에서, 압박부의 직경은 약 3.5 μm이다.
본원에 기재된 방법 또는 조성물 중 어느 하나에 따른 일부 실시양태에서, 압박부의 직경은 약 3 μm내지 약 15 μm이다. 일부 실시양태에서, 압박부의 직경은 약 3 μm 내지 약 10 μm이다. 일부 실시양태에서, 압박부의 직경은 약 4 μm 내지 약 10 μm 이다. 일부 실시양태에서, 압박부의 직경은 약 4.2 μm 내지 약 6 μm이다. 일부 실시양태에서, 압박부의 직경은 약 4.2 μm 내지 약 4.8 μm이다. 일부 실시양태에서, 압박부의 직경은 약 2 μm 내지 약 14 μm, 약 4 μm 내지 약 12 μm, 약 6 μm 내지 약 9 μm, 약 4 μm 내지 약 6 μm, 약 4 μm 내지 약 5 μm, 약 3.5 μm 내지 약 7 μm, 약 3.5 μm 내지 약 6.3 μm, 약 3.5 μm 내지 약 5.6 μm, 약 3.5 μm 내지 약 4.9 μm, 약 4.2 μm 내지 약 6.3 μm, 약 4.2 μm 내지 약 5.6 μm, 또는 약 4.2 μm 내지 약 4.9 μm 중 어느 하나이다. 일부 실시양태에서, 압박부의 직경은 약 2 μm, 2.5 μm, 3 μm, 3.5 μm, 4 μm, 4.5 μm, 5 μm, 5.5 μm, 6 μm, 6.5 μm, 7 μm, 7.5 μm, 8 μm, 8.5 μm, 9 μm, 9.5 μm, 10 μm, 10.5 μm, 11 μm, 11.5 μm, 12 μm, 12.5 μm, 13 μm, 13.5 μm, 14 μm, 14.5 μm 또는 15 μm 중 어느 하나이다. 일부 실시양태에서, 압박부의 직경은 약 4.0 μm, 4.1 μm, 4.2 μm, 4.3 μm, 4.4 μm, 4.5 μm, 4.6 μm, 4.7 μm, 4.8 μm, 4.9 μm 또는 5.0 μm 중 어느 하나이다. 일부 실시양태에서, 압박부의 직경은 약 4.5 μm이다.
본원에 기재된 방법 또는 조성물 중 어느 하나에 따른 일부 실시양태에서, 투입 T 세포는 약 0.001 mL/분 내지 약 200 mL/분의 유량 또는 그 사이의 임의의 유량 또는 유량의 범위로 압박부를 통과한다. 일부 실시양태에서, 유량은 약 0.001 mL/분 내지 약 175 mL/분, 약 0.001 mL/분 내지 약 150 mL/분, 약 0.001 mL/분 내지 약 125 mL/분, 약 0.001 mL/분 내지 약 100 mL/분, 약 0.001 mL/분 내지 약 50 mL/분, 약 0.001 mL/분 내지 약 25 mL/분, 약 0.001 mL/분 내지 약 10 mL/분, 약 0.001 mL/분 내지 약 7.5 mL/분, 약 0.001 mL/분 내지 약 5.0 mL/분, 약 0.001 mL/분 내지 약 2.5 mL/분, 약 0.001 mL/분 내지 약 1 mL/분, 약 0.001 mL/분 내지 약 0.1 mL/분, 또는 약 0.001 mL/분 내지 약 0.01 mL/분이다. 일부 실시양태에서, 유량은 약 0.001 mL/분 내지 약 200 mL/분, 약 0.01 mL/분 내지 약 200 mL/분, 약 0.1mL/분 내지 약 200 mL/분, 약 1 mL/분 내지 약 200 mL/분, 약 10 mL/분 내지 약 200 mL/분, 약 50 mL/분 내지 약 200 mL/분, 약 75 mL/분 내지 약 200 mL/분, 약 100 mL/분 내지 약 200 mL/분, 약 150 mL/분 내지 약 200 mL/분, 약 0.5 mL/분 내지 약 200 mL/분, 약 1 mL/분 내지 약 200 mL/분, 약 2.5 mL/분 내지 약 200 mL/분, 약 5 mL/분 내지 약 200 mL/분, 약 7.5 mL/분 내지 약 200 mL/분, 약 10 mL/분 내지 약 200 mL/분, 약 25 mL/분 내지 약 200 mL/분, 또는 약 175 mL/분 내지 약 200 mL/분이다. 일부 실시양태에서, 투입 T 세포는 약 10 mL/분 내지 약 200 mL/분의 유량으로 압박부를 통과한다. 일부 실시양태에서, 투입 T 세포는 약 100 mL/분의 유량으로 압박부를 통과한다.
본원에 기재된 방법 또는 조성물 중 어느 하나에 따른 일부 실시양태에서, 압박부는 관련 기술분야에 공지된 임의의 형상; 예를 들어 3차원 형상 또는 2차원 형상을 가질 수 있다. 압박부의 2차원 형상, 예컨대 단면 형상은 비제한적으로 원형, 타원형, 둥근형, 정사각형, 별형, 삼각형, 다각형, 오각형, 육각형, 칠각형 또는 팔각형일 수 있다. 압박부의 3차원 형상은 비제한적으로 원통형, 원추형 또는 직육면체형일 수 있다. 일부 실시양태에서, 압박부의 단면 형상은 직사각형이다. 일부 실시양태에서, 압박부의 단면 형상은 슬릿이다. 일부 실시양태에서, 압박부의 단면 형상은 약 2.5 μm 내지 약 10 μm의 폭 및/또는 약 1 μm 내지 약 200 μm의 깊이를 포함하는 슬릿이다. 일부 실시양태에서, 압박부의 단면 형상은 약 3 μm 내지 약 6 μm의 폭 및/또는 약 40 μm 내지 약 120 μm의 깊이를 포함하는 슬릿이다. 일부 실시양태에서, 압박부의 단면 형상은 약 3.2 μm 내지 약 4 μm의 폭 및/또는 약 20 μm 내지 약 80 μm의 깊이를 포함하는 슬릿이다. 일부 실시양태에서, 압박부의 단면 형상은 약 3.5 μm의 폭 및/또는 약 80 μm의 깊이를 포함하는 슬릿이다. 다른 실시양태에서, 압박부의 단면 형상은 약 4 μm 내지 약 10 μm의 폭 및/또는 약 1 μm 내지 약 200 μm의 깊이를 포함하는 슬릿이다. 일부 실시양태에서, 압박부의 단면 형상은 약 4.2 μm 내지 약 6 μm의 폭 및/또는 약 40 μm 내지 약 120 μm의 깊이를 포함하는 슬릿이다. 일부 실시양태에서, 압박부의 단면 형상은 약 4.2 μm 내지 약 6 μm의 폭 및/또는 약 20 μm 내지 약 80 μm의 깊이를 포함하는 슬릿이다. 일부 실시양태에서, 압박부의 단면 형상은 약 4.5 μm의 폭 및/또는 약 80 μm의 깊이를 포함하는 슬릿이다. 일부 실시양태에서, 슬릿은 약 10 μm 내지 약 30 μm의 길이를 포함한다. 일부 실시양태에서, 슬릿은 약 2 μm 내지 약 50 μm의 길이를 포함한다. 일부 실시양태에서, 슬릿은 약 2 μm 내지 약 5 μm, 약 5 μm 내지 약 10 μm, 약 10 μm 내지 약 15 μm, 약 15 μm 내지 약 20 μm, 약 20 μm 내지 약 25 μm, 약 25 μm 내지 약 30 μm, 약 30 μm 내지 약 35 μm, 약 35 μm 내지 약 40 μm, 약 40 μm 내지 약 45 μm, 또는 약 45 μm 내지 약 50 μm 중 어느 하나의 길이를 포함한다. 일부 실시양태에서, 슬릿은 약 10 μm의 길이를 포함한다.
세포 변형 압박부를 제공하는 세공을 갖는 표면
일부 실시양태에서, 본 발명은 T 세포를 포함하는 세포 현탁액을 압박부에 통과시키고, 여기서 압박부는 T 세포를 변형시킴으로써 T 세포의 교란을 유발하여 항원 및/또는 아주반트가 T 세포로 들어가도록 하고, 여기서 압박부는 세공이거나 또는 세공 내에 함유되는 것인, 면역 반응을 조정하는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 세공은 표면에 함유된다. 본원에 개시된 방법에 사용하기 위한 세공을 갖는 예시적인 표면은 WO2017041050에 기재되어 있다.
본원에 개시된 바와 같은 표면은 다수의 물질 중 어느 하나로 제조될 수 있고, 다수의 형태 중 어느 하나를 취할 수 있다. 일부 실시양태에서, 표면은 필터이다. 일부 실시양태에서, 표면은 막이다. 일부 실시양태에서, 필터는 접선 유동 필터이다. 일부 실시양태에서, 표면은 스폰지 또는 스폰지-유사 매트릭스이다. 일부 실시양태에서, 표면은 매트릭스이다.
일부 실시양태에서, 표면은 구불한 경로 표면이다. 일부 실시양태에서, 구불한 경로 표면은 셀룰로스 아세테이트를 포함한다. 일부 실시양태에서, 표면은 비제한적으로 합성 또는 천연 중합체, 폴리카르보네이트, 규소, 유리, 금속, 합금, 셀룰로스 니트레이트, 은, 셀룰로스 아세테이트, 나일론, 폴리에스테르, 폴리에테르술폰, 폴리아크릴로니트릴 (PAN), 폴리프로필렌, PVDF, 폴리테트라플루오르에틸렌, 혼합 셀룰로스 에스테르, 포세린 및 세라믹으로부터 선택된 물질을 포함한다.
본원에 개시된 표면은 관련 기술분야에 공지된 임의의 형상; 예를 들어 3차원 형상을 가질 수 있다. 표면의 2차원 형상은 비제한적으로 원형, 타원형, 둥근형, 정사각형, 별형, 삼각형, 다각형, 오각형, 육각형, 칠각형 또는 팔각형일 수 있다. 일부 실시양태에서, 표면은 둥근 형상이다. 일부 실시양태에서, 표면 3차원 형상은 원통형, 원추형 또는 직육면체형이다.
표면은 다양한 단면 폭 및 두께를 가질 수 있다. 일부 실시양태에서, 표면 단면 폭은 약 1 mm 내지 약 1 m 또는 그 사이의 임의의 단면 폭 또는 단면 폭의 범위이다. 일부 실시양태에서, 표면은 한정된 두께를 갖는다. 일부 실시양태에서, 표면 두께는 균일하다. 일부 실시양태에서, 표면 두께는 가변적이다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 표면의 부분은 표면의 다른 부분보다 더 두껍거나 더 얇다. 일부 실시양태에서, 표면 두께는 약 1% 내지 약 90% 또는 그 사이의 임의의 백분율 또는 백분율의 범위만큼 달라진다. 일부 실시양태에서, 표면은 약 0.01 μm 내지 약 5 mm 두께 또는 그 사이의 임의의 두께 또는 두께의 범위이다.
일부 실시양태에서, 압박부는 세공이거나 또는 세공 내에 함유된다. 세공의 단면 폭은 처리될 T 세포의 유형과 관련된다. 일부 실시양태에서, 세공 크기는 처리될 T 세포 또는 T 세포의 클러스터의 직경의 함수이다. 일부 실시양태에서, 세공 크기는 T 세포가 세공을 통과할 때 교란되도록 하는 크기이다. 일부 실시양태에서, 세공 크기는 T 세포의 직경보다 더 작다. 일부 실시양태에서, 세공 크기는 T 세포의 직경의 약 10% 내지 약 99%이다. 일부 실시양태에서, 세공 크기는 T 세포의 직경의 약 10%, 약 15%, 약 20%, 약 30%, 약 40%, 약 50%, 약 60%, 약 70%, 약 80%, 약 90% 또는 약 99%이다. 최적의 세공 크기 또는 세공 단면 폭은 적용 및/또는 T 세포 유형에 따라 달라질 수 있다. 일부 실시양태에서, 세공 크기는 약 2 μm 내지 약 14 μm이다. 일부 실시양태에서, 세공 크기는 약 2 μm, 약 3 μm, 약 4 μm, 약 5 μm, 약 8 μm, 약 10 μm, 약 12 μm 또는 약 14 μm이다. 일부 실시양태에서, 단면 폭은 약 2 μm 내지 약 14 μm이다. 일부 실시양태에서, 세공 단면은 약 2 μm, 약 3 μm, 약 4 μm, 약 5 μm, 약 8 μm, 약 10 μm, 약 12 μm 또는 약 14 μm이다.
세공 통로의 입구 및 출구는 다양한 각도를 가질 수 있다. 세공 각도는 T 세포가 통과하는 동안의 세공의 막힘을 최소화하도록 선택될 수 있다. 일부 실시양태에서, 표면을 통한 유량은 약 0.001 mL/cm2/초 내지 약 100 L/cm2/초 또는 그 사이의 임의의 유량 또는 유량의 범위이다. 예를 들어, 입구 또는 출구 부분의 각도는 약 0 내지 약 90도일 수 있다. 일부 실시양태에서, 입구 또는 출구 부분은 90도 초과일 수 있다. 일부 실시양태에서, 세공은 동일한 입구 및 출구 각도를 갖는다. 일부 실시양태에서, 세공은 상이한 입구 및 출구 각도를 갖는다. 일부 실시양태에서, 세공 가장자리는 매끄럽고, 예를 들어 둥글거나 만곡된다. 매끄러운 세공 가장자리는 범프, 릿지 또는 불균일한 부분이 없는 연속적이고 편평하며 균일한 표면을 갖는다. 일부 실시양태에서, 세공 가장자리는 날카롭다. 날카로운 세공 가장자리는 뾰족하거나 예각의 얇은 가장자리를 갖는다. 일부 실시양태에서, 세공 통로는 직선이다. 직선 세공 통로는 곡선, 굴곡, 각도 또는 다른 불규칙성을 함유하지 않는다. 일부 실시양태에서, 세공 통로는 만곡된다. 만곡 세공 통로는 구부러지거나 직선으로부터 벗어난다. 일부 실시양태에서, 세공 통로는 다중 곡선, 예를 들어 약 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10개 또는 그 초과의 곡선을 갖는다.
세공은 2차원 또는 3차원 형상을 포함한, 관련 기술분야에 공지된 임의의 형상을 가질 수 있다. 세공 형상 (예를 들어, 단면 형상)은 비제한적으로 원형, 타원형, 둥근형, 정사각형, 별형, 삼각형, 다각형, 오각형, 육각형, 칠각형 및 팔각형일 수 있다. 일부 실시양태에서, 세공의 단면은 둥근 형상이다. 일부 실시양태에서, 세공의 3차원 형상은 원통형 또는 원추형이다. 일부 실시양태에서, 세공은 홈이 있는 입구 및 출구 형상을 갖는다. 일부 실시양태에서, 세공 형상은 주어진 표면 내의 세공 사이에서 균일하다 (즉, 일관되거나 규칙적이다). 일부 실시양태에서, 세공 형상은 주어진 표면 내의 세공 사이에서 불균일하다 (즉, 혼합되거나 달라진다).
본원에 기재된 표면은 소정 범위의 총 세공 수를 가질 수 있다. 일부 실시양태에서, 세공은 총 표면적의 약 10% 내지 약 80%로 포괄된다. 일부 실시양태에서, 표면은 약 1.0x105 내지 약 1.0x1030개의 총 세공 또는 그 사이의 임의의 수 또는 수의 범위를 함유한다. 일부 실시양태에서, 표면은 약 10 내지 약 1.0x1015개 세공/mm2 표면적을 포함한다.
세공은 주어진 표면 내에서 수많은 방식으로 분포될 수 있다. 일부 실시양태에서, 세공은 주어진 표면 내에서 병렬로 분포된다. 하나의 이러한 예에서, 세공은 동일한 방향으로 나란히 분포되고, 주어진 표면 내에서 동일한 거리로 떨어져 있다. 일부 실시양태에서, 세공 분포는 규칙적이거나 균일하다. 하나의 이러한 예에서, 세공은 규칙적이고 체계적인 패턴으로 분포되거나 또는 주어진 표면 내에서 동일한 거리로 떨어져 있다. 일부 실시양태에서, 세공 분포는 무작위이거나 불균일하다. 이러한 한 예에서, 세공은 불규칙하고 무질서한 패턴으로 분포되거나 또는 주어진 표면 내에서 상이한 거리로 떨어져 있다. 일부 실시양태에서, 다중 표면은 직렬로 분포된다. 다중 표면은 표면 크기, 형상 및/또는 조도가 균일하거나 불균일할 수 있다. 다중 표면은 균일하거나 불균일한 세공 크기, 형상 및/또는 개수를 갖는 세공을 추가로 함유할 수 있고, 이에 의해 상이한 T 세포 유형 내로의 소정 범위의 화합물의 동시 전달을 가능하게 한다.
일부 실시양태에서, 개별 세공은 균일한 폭 치수 (즉, 세공 통로의 길이를 따라 일정한 폭)를 갖는다. 일부 실시양태에서, 개별 세공은 가변적 폭 (즉, 세공 통로의 길이를 따라 증가하거나 감소하는 폭)을 갖는다. 일부 실시양태에서, 주어진 표면 내의 세공은 동일한 개별 세공 깊이를 갖는다. 일부 실시양태에서, 주어진 표면 내의 세공은 상이한 개별 세공 깊이를 갖는다. 일부 실시양태에서, 세공은 서로 바로 인접한다. 일부 실시양태에서, 세공은 서로 소정 거리만큼 이격된다. 일부 실시양태에서, 세공은 서로 약 0.001 μm 내지 약 30 mm의 거리 또는 그 사이의 임의의 거리 또는 거리의 범위만큼 이격된다.
일부 실시양태에서, 표면은 물질로 코팅된다. 물질은 비제한적으로 테플론, 접착제 코팅, 계면활성제, 단백질, 접착 분자, 항체, 항응고제, 세포 기능을 조정하는 인자, 핵산, 지질, 탄수화물 또는 막횡단 단백질을 포함한, 관련 기술분야에 공지된 임의의 물질로부터 선택될 수 있다. 일부 실시양태에서, 표면은 폴리비닐피롤리돈 (PVP)으로 코팅된다. 일부 실시양태에서, 물질은 표면에 공유 부착된다. 일부 실시양태에서, 물질은 표면에 비-공유 부착되거나 흡착된다. 일부 실시양태에서, 표면 분자는 T 세포가 세공을 통과할 때 방출된다.
일부 실시양태에서, 표면은 변형된 화학적 특성을 갖는다. 일부 실시양태에서, 표면은 극성이다. 일부 실시양태에서, 표면은 친수성이다. 일부 실시양태에서, 표면은 비-극성이다. 일부 실시양태에서, 표면은 소수성이다. 일부 실시양태에서, 표면은 하전된다. 일부 실시양태에서, 표면은 양으로 및/또는 음으로 하전된다. 일부 실시양태에서, 표면은 일부 영역에서 양으로 하전되고 다른 영역에서 음으로 하전될 수 있다. 일부 실시양태에서, 표면은 전체 양전하 또는 전체 음전하를 갖는다. 일부 실시양태에서, 표면은 매끄러운, 전해연마된, 거친 또는 플라즈마 처리된 표면 중 어느 하나일 수 있다. 일부 실시양태에서, 표면은 쯔비터이온 또는 쌍극성 화합물을 포함한다. 일부 실시양태에서, 표면은 플라즈마 처리된다.
일부 실시양태에서, 표면은 보다 큰 모듈 내에 함유된다. 일부 실시양태에서, 표면은 시린지, 예컨대 플라스틱 또는 유리 시린지 내에 함유된다. 일부 실시양태에서, 표면은 플라스틱 필터 홀더 내에 함유된다. 일부 실시양태에서, 표면은 피펫 팁 내에 함유된다.
세포 교란
일부 실시양태에서, 본 발명은 T 세포를 포함하는 세포 현탁액을 압박부에 통과시키고, 여기서 압박부는 T 세포를 변형시킴으로써 T 세포의 교란을 유발하여 항원 및/또는 아주반트가 T 세포에 들어가도록 하고, 여기서 T 세포에서의 교란은 물질이 T 세포 외부로부터 T 세포 내로 이동하도록 하는 T 세포에서의 틈새 (예를 들어, 구멍, 인열부, 공동, 개구, 세공, 파괴부, 간극, 천공)인, 면역 반응을 조정하는 방법을 제공한다. 변형은, 예를 들어 기계적 변형률 및/또는 전단력에 의해 유발될 수 있다. 일부 실시양태에서, 교란은 T 세포 막 내의 교란이다. 일부 실시양태에서, 교란은 일시적이다. 일부 실시양태에서, T 세포 교란은 약 1.0x10-9초 내지 약 2시간 또는 그 사이의 임의의 시간 또는 시간의 범위 동안 지속된다. 일부 실시양태에서, T 세포 교란은 약 1.0x10-9초 내지 약 1초, 약 1초 내지 약 1분, 또는 약 1분 내지 약 1시간 동안 지속된다. 일부 실시양태에서, T 세포 교란은 약 1.0x10-9 내지 약 1.0x10-1, 약 1.0x10-9 내지 약 1.0x10-2, 약 1.0x10-9 내지 약 1.0x10-3, 약 1.0x10-9 내지 약 1.0x10-4, 약 1.0x10-9 내지 약 1.0x10-5, 약 1.0x10-9 내지 약 1.0x10-6, 약 1.0x10-9 내지 약 1.0x10-7, 또는 약 1.0x10-9 내지 약 1.0x10-8초 중 어느 하나 동안 지속된다. 일부 실시양태에서, T 세포 교란은 약 1.0x10-8 내지 약 1.0x10-1, 약 1.0x10-7 내지 약 1.0x10-1, 약 1.0x10-6 내지 약 1.0x10-1, 약 1.0x10-5 내지 약 1.0x10-1, 약 1.0x10-4 내지 약 1.0x10-1, 약 1.0x10-3 내지 약 1.0x10-1, 또는 약 1.0x10-2 내지 약 1.0x10-1초 중 어느 하나 동안 지속된다. 본원에 기재된 방법에 의해 생성된 T 세포 교란 (예를 들어, 세공 또는 구멍)은 보체 또는 박테리아 용혈에 의해 생성된 것과 같은 다량체 세공 구조를 형성하는 단백질 서브유닛의 조립의 결과로서 형성되지 않는다.
T 세포가 압박부를 통과할 때, 압박부는 T 세포 막에 손상을 일시적으로 부여하여 교란을 통한 물질의 수동 확산을 가능하게 한다. 일부 실시양태에서, T 세포는 세포 신호전달 메카니즘을 통한 아폽토시스 경로를 활성화시킬 가능성을 최소화하기 위해, 다른 지속기간 (예를 들어, 나노초 내지 시간의 범위)이 가능하긴 하지만, 대략 100 μs 정도의 짧은 기간 동안에만 변형된다. 일부 실시양태에서, T 세포는 약 1.0x10-9초 내지 약 2시간 또는 그 사이의 임의의 시간 또는 시간의 범위 동안 변형된다. 일부 실시양태에서, T 세포는 약 1.0x10-9초 내지 약 1초, 약 1초 내지 약 1분, 또는 약 1분 내지 약 1시간 동안 변형된다. 일부 실시양태에서, T 세포는 약 1.0x10-9 내지 약 1.0x10-1, 약 1.0x10-9 내지 약 1.0x10-2, 약 1.0x10-9 내지 약 1.0x10-3, 약 1.0x10-9 내지 약 1.0x10-4, 약 1.0x10-9 내지 약 1.0x10-5, 약 1.0x10-9 내지 약 1.0x10-6, 약 1.0x10-9 내지 약 1.0x10-7, 또는 약 1.0x10-9 내지 약 1.0x10-8초 중 어느 하나 동안 변형된다. 일부 실시양태에서, T 세포는 약 1.0x10-8 내지 약 1.0x10-1, 약 1.0x10-7 내지 약 1.0x10-1, 약 1.0x10-6 내지 약 1.0x10-1, 약 1.0x10-5 내지 약 1.0x10-1, 약 1.0x10-4 내지 약 1.0x10-1, 약 1.0x10-3 내지 약 1.0x10-1, 또는 약 1.0x10-2 내지 약 1.0x10-1초 중 어느 하나 동안 변형된다. 일부 실시양태에서, T 세포를 변형시키는 것은 비제한적으로 약 1 μs 내지 적어도 약 750 μs 범위, 예를 들어 적어도 약 1 μs, 10 μs, 50 μs, 100 μs, 500 μs 또는 750 μs의 시간 동안 T 세포를 변형시키는 것을 포함한다.
일부 실시양태에서, T 세포 내로의 항원 및/또는 아주반트의 통과는 T 세포가 압박부를 통과하는 것 및/또는 T 세포의 교란과 동시에 발생한다. 일부 실시양태에서, T 세포 내로의 화합물의 통과는 T 세포가 압박부를 통과한 후에 발생한다. 일부 실시양태에서, T 세포 내로의 화합물의 통과는 T 세포가 압박부를 통과하고 나서 대략 수분 후에 발생한다. 일부 실시양태에서, T 세포 내로의 화합물의 통과는 T 세포가 압박부를 통과하고 나서 약 1.0x10-2초 내지 적어도 약 30분 후에 발생한다. 예를 들어, T 세포 내로의 화합물의 통과는 T 세포가 압박부를 통과하고 나서 약 1.0x10-2초 내지 약 1초, 약 1초 내지 약 1분, 또는 약 1분 내지 약 30분 후에 발생한다. 일부 실시양태에서, T 세포 내로의 화합물의 통과는 T 세포가 압박부를 통과하고 나서 약 1.0x10-2초 내지 약 10분, 약 1.0x10-2초 내지 약 5분, 약 1.0x10-2초 내지 약 1분, 약 1.0x10-2초 내지 약 30초, 약 1.0x10-2초 내지 약 10초, 약 1.0x10-2초 내지 약 1초, 또는 약 1.0x10-2초 내지 약 0.1초 후에 발생한다. 일부 실시양태에서, T 세포 내로의 화합물의 통과는 T 세포가 압박부를 통과하고 나서 약 1.0x10-1초 내지 약 10분, 약 1초 내지 약 10분, 약 10초 내지 약 10분, 약 50초 내지 약 10분, 약 1분 내지 약 10분, 또는 약 5분 내지 약 10분 후에 발생한다. 일부 실시양태에서, T 세포가 압박부를 통과한 후의 T 세포에서의 교란은 T 세포가 압박부를 통과한 후 대략 약 5분 내에 보정된다.
일부 실시양태에서, 압박부를 통과한 후의 세포 생존율은 약 5% 내지 약 100%이다. 일부 실시양태에서, 압박부를 통과한 후의 세포 생존율은 적어도 약 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 99%이다. 일부 실시양태에서, 세포 생존율은 T 세포가 압박부를 통과하고 나서 약 1.0x10-2초 내지 적어도 약 10일 후에 측정된다. 예를 들어, 세포 생존율은 T 세포가 압박부를 통과하고 나서 약 1.0x10-2초 내지 약 1초, 약 1초 내지 약 1분, 약 1분 내지 약 30분, 또는 약 30분 내지 약 2시간 후에 측정된다. 일부 실시양태에서, 세포 생존율은 T 세포가 압박부를 통과하고 나서 약 1.0x10-2초 내지 약 2시간, 약 1.0x10-2초 내지 약 1시간, 약 1.0x10-2초 내지 약 30분, 약 1.0x10-2초 내지 약 1분, 약 1.0x10-2초 내지 약 30초, 약 1.0x10-2초 내지 약 1초, 또는 약 1.0x10-2초 내지 약 0.1초 후에 측정된다. 일부 실시양태에서, 세포 생존율은 T 세포가 압박부를 통과하고 나서 약 1.5시간 내지 약 2시간, 약 1시간 내지 약 2시간, 약 30분 내지 약 2시간, 약 15분 내지 약 2시간, 약 1분 내지 약 2시간, 약 30초 내지 약 2시간, 또는 약 1초 내지 약 2시간 후에 측정된다. 일부 실시양태에서, 세포 생존율은 T 세포가 압박부를 통과하고 나서 약 2시간 내지 약 5시간, 약 5시간 내지 약 12시간, 약 12시간 내지 약 24시간, 또는 약 24시간 내지 약 10일 후에 측정된다.
전달 파라미터
다수의 파라미터가 본원에 기재된 방법에 의해 면역 반응을 조정하기 위한 T 세포로의 화합물의 전달에 영향을 미칠 수 있다. 일부 실시양태에서, 세포 현탁액은 압박부 통과 전에, 공동으로 또는 그 후에 화합물과 접촉된다. T 세포는 전달할 화합물을 포함하는 용액 중에 현탁된 채로 압박부를 통과할 수 있으며, T 세포가 압박부를 통과한 후에 화합물이 세포 현탁액에 첨가될 수도 있다. 일부 실시양태에서, 전달될 화합물은 압박부 상에 코팅된다.
T 세포 내로의 화합물의 전달에 영향을 미칠 수 있는 파라미터의 예는 압박부의 치수, 압박부의 입구 각도, 압박부의 표면 특성 (예를 들어, 조도, 화학적 변형, 친수성, 소수성 등), 작업 유동 속도 (예를 들어, 압박부를 통한 세포 통과 시간), T 세포 농도, 세포 현탁액 중 화합물의 농도, 및 압박부 통과 후에 T 세포가 회수되거나 인큐베이션되는 시간량을 포함하나 이에 제한되지는 않으며, 이는 전달된 화합물의 T 세포 내로의 통과에 영향을 미칠 수 있다. T 세포 내로의 화합물의 전달에 영향을 미치는 추가의 파라미터는 압박부에서의 T 세포의 속도, 압박부에서의 전단 속도, 세포 현탁액의 점도, 유동 속도에 수직인 속도 성분, 및 압박부에서의 시간을 포함할 수 있다. 이러한 파라미터는 화합물의 전달을 제어하도록 설계될 수 있다. 일부 실시양태에서, T 세포 농도는 약 10 내지 적어도 약 1012개 세포/mL의 범위 또는 그 사이의 임의의 농도 또는 농도의 범위이다. 일부 실시양태에서, 전달 화합물 농도는 약 10 ng/mL 내지 약 1 g/mL의 범위 또는 그 사이의 임의의 농도 또는 농도의 범위일 수 있다. 일부 실시양태에서, 전달 화합물 농도는 약 1 pM 내지 적어도 약 2 M의 범위 또는 그 사이의 임의의 농도 또는 농도의 범위일 수 있다.
본 개시내용의 방법에 사용된 온도는 화합물 전달 및 세포 생존율에 영향을 미치도록 조정될 수 있다. 일부 실시양태에서, 방법은 약 -5℃ 내지 약 45℃에서 수행된다. 예를 들어, 방법은 실온 (예를 들어, 약 20℃), 생리학적 온도 (예를 들어, 약 37℃), 생리학적 온도보다 더 높은 온도 (예를 들어, 약 37℃ 내지 45℃ 또는 그 초과보다 더 큰 온도), 또는 감소된 온도 (예를 들어, 약 -5℃ 내지 약 4℃), 또는 이들 예시적인 온도 사이의 온도에서 수행될 수 있다.
다양한 방법을 이용하여 T 세포의 압박부 통과를 구동할 수 있다. 예를 들어, 압력이 입구 측 상의 펌프 (예를 들어, 컴프레서)에 의해 가해질 수 있고/거나, 진공이 출구 측 상의 진공 펌프에 의해 가해질 수 있고/거나, 모세관 작용이 튜브를 통해 가해질 수 있고/거나, 시스템에 중력 공급될 수 있다. 대체 기반 유동 시스템이 또한 사용될 수 있다 (예를 들어, 시린지 펌프, 연동 펌프, 수동 시린지 또는 피펫, 피스톤 등). 일부 실시양태에서, T 세포는 양압 또는 음압에 의해 압박부를 통과한다. 일부 실시양태에서, T 세포는 일정한 압력 또는 가변적 압력에 의해 압박부를 통과한다. 일부 실시양태에서, 압력은 시린지를 사용하여 가해진다. 일부 실시양태에서, 압력은 기체를 사용하여 (예를 들어, 기체 실린더로부터) 양압으로 가해진다. 일부 실시양태에서, 압력은 펌프를 사용하여 가해진다. 일부 실시양태에서, 펌프는 연동 펌프 또는 다이어프램 펌프이다. 일부 실시양태에서, 압력은 진공을 사용하여 가해진다. 일부 실시양태에서, T 세포는 중력에 의해 압박부를 통과한다. 일부 실시양태에서, T 세포는 원심력에 의해 압박부를 통과한다. 일부 실시양태에서, T 세포는 모세관 압력에 의해 압박부를 통과한다.
일부 실시양태에서, 유체 유동은 T 세포의 압박부 통과를 지시한다. 일부 실시양태에서, 유체 유동은 T 세포가 압박부를 통과하기 전 난류이다. 난류는 주어진 지점에서의 속도가 크기 및 방향에 있어서 변덕스럽게 달라지는 유체 유동이다. 일부 실시양태에서, 압박부를 통한 유체 유동은 층류이다. 층류는 모든 지점에서의 유동 방향이 일정하게 유지되는 견고한 경계 근처의 유체에서의 중단되지 않는 유동을 포함한다. 일부 실시양태에서, 유체 유동은 T 세포가 압박부를 통과한 후 난류이다. T 세포가 압박부를 통과하는 속도는 달라질 수 있다. 일부 실시양태에서, T 세포는 균일한 세포 속도로 압박부를 통과한다. 일부 실시양태에서, T 세포는 변동하는 세포 속도로 압박부를 통과한다.
다른 실시양태에서, T 세포를 포함하는 세포 현탁액을 압박부에 통과시키고, 여기서 압박부는 T 세포를 변형시키고, 이에 의해 T 세포의 교란을 유발하여 항원 및/또는 아주반트가 T 세포에 들어가도록 하는 것, 예를 들어 본원에 기재된 방법, 이어서 압박부의 하류에 있는 전기장에 노출시키는 것에 의한 조합 처리가 면역 반응을 조정하는데 사용된다. 일부 실시양태에서, T 세포는 압박부를 통과한 후에 적어도 1개의 전극에 의해 생성된 전기장을 통과한다. 일부 실시양태에서, 전기장은 T 세포 내부의 제2 위치, 예컨대 T 세포 핵으로의 화합물의 전달을 돕는다. 예를 들어, 세포-변형 압박부와 전기장의 조합은 항체를 코딩하는 플라스미드를 T 세포 (예를 들어, 세포 핵) 내로 전달하여, 항체의 신생 생산을 유발한다. 일부 실시양태에서, 1개 이상의 전극은 전기장을 생성하기 위해 세포-변형 압박부에 근접하게 존재한다. 일부 실시양태에서, 전기장은 약 0.1 kV/m 내지 약 100 MV/m 또는 그 사이의 임의의 수 또는 수의 범위이다. 일부 실시양태에서, 집적 회로는 전극을 구동하는 전기 신호를 제공하는데 사용된다. 일부 실시양태에서, T 세포는 약 1 ns 내지 약 1 s의 펄스 폭 및 약 100 ns 내지 약 10 s의 기간 또는 그 사이의 임의의 시간 또는 시간의 범위 동안 전기장에 노출된다.
T 세포로의 전달을 위한 세포 현탁액
세포 현탁액은 T 세포의 혼합 또는 정제된 집단일 수 있다. 일부 실시양태에서, 세포 현탁액은 혼합 세포 집단, 예컨대 전혈이다. 일부 실시양태에서, 세포 현탁액은 정제된 세포 집단, 예컨대 정제된 T 세포 집단이다.
세포 현탁액의 조성 (예를 들어, 오스몰농도, 염 농도, 혈청 함량, 세포 농도, pH 등)은 면역 반응을 조정하기 위한 화합물의 전달에 영향을 미칠 수 있다. 일부 실시양태에서, 현탁액은 전혈을 포함한다. 대안적으로, 세포 현탁액은 생리 염수 용액 또는 혈액 이외의 생리학적 배지 중 세포의 혼합물이다. 일부 실시양태에서, 세포 현탁액은 수용액을 포함한다. 일부 실시양태에서, 수용액은 세포 배양 배지, 포스페이트 완충 염수 (PBS), 염, 금속 이온, 당, 성장 인자, 동물 유래 생성물, 벌킹 물질, 계면활성제, 윤활제, 지질, 비타민, 아미노산, 단백질, 세포 주기 억제제, 및/또는 액틴 중합에 영향을 미치는 작용제를 포함한다. 일부 실시양태에서, 세포 배양 배지는 DMEM, Opti-MEM®, IMDM, RPMI, X-Vivo 10 및 X-Vivo 15이다. 추가적으로, 용액 완충제는, 예를 들어 압박부 또는 세공의 막힘을 감소시키거나 제거하고 세포 생존율을 개선시키도록 설계될 수 있는 1종 이상의 윤활제 (플루로닉스 또는 다른 계면활성제)를 포함할 수 있다. 예시적인 계면활성제는 비제한적으로 폴록사머, 폴리소르베이트, 당 또는 당 알콜, 예컨대 만니톨, 소르비톨, 동물 유래 혈청 및 알부민 단백질을 포함한다.
특정 유형의 T 세포를 갖는 일부 구성에서, T 세포는 T 세포의 내부로의 화합물의 전달을 돕는 1종 이상의 용액 중에서 인큐베이션될 수 있다. 일부 실시양태에서, 수용액은 액틴 중합에 영향을 미치는 작용제를 포함한다. 일부 실시양태에서, 액틴 중합에 영향을 미치는 작용제는 라트룬쿨린 A, 시토칼라신 및/또는 콜키신이다. 예를 들어, T 세포를 탈중합 용액, 예컨대 라트룬쿨린 A (0.1 μg/mL) 중에서 전달 전 1시간 동안 인큐베이션하여 액틴 세포골격을 탈중합시킬 수 있다. 추가의 예로서, T 세포를 10 μM 콜키신 (시그마(Sigma)) 중에서 전달 전 2시간 동안 인큐베이션하여 미세관 네트워크를 탈중합시킬 수 있다.
일부 실시양태에서, 세포 집단은 개시된 방법에 사용하기 전에 풍부화된다. 예를 들어, 세포를 체액, 예를 들어 말초 혈액으로부터 수득하고, 임의로 풍부화 또는 정제하여 T 세포를 농축시킨다. 세포는 비제한적으로 자기 세포 분리, 형광 활성화 세포 분류 (FACS) 또는 밀도 구배 원심분리를 포함한 관련 기술분야에 공지된 임의의 방법에 의해 풍부화될 수 있다.
세포 현탁액의 점도도 또한 본원에 개시된 방법에 영향을 미칠 수 있다. 일부 실시양태에서, 세포 현탁액의 점도는 약 8.9x10-4 Pa·s 내지 약 4.0x10-3 Pa·s의 범위 또는 그 사이의 임의의 값 또는 값의 범위이다. 일부 실시양태에서, 점도는 약 8.9x10-4 Pa·s 내지 약 4.0x10-3 Pa·s, 약 8.9x10-4 Pa·s 내지 약 3.0x10-3 Pa·s, 약 8.9x10-4 Pa·s 내지 약 2.0x10-3 Pa·s 또는 약 8.9x10-3 Pa·s 내지 약 1.0x10-3 Pa·s 중 어느 하나의 범위이다. 일부 실시양태에서, 점도는 약 0.89 cP 내지 약 4.0 cP, 약 0.89 cP 내지 약 3.0 cP, 약 0.89 cP 내지 약 2.0 cP, 또는 약 0.89 cP 내지 약 1.0 cP 중 어느 하나의 범위이다. 일부 실시양태에서, 세포 현탁액의 점도가 전단 변형률 조건 하에 감소하는 전단 박화 효과가 관찰된다. 점도는 비제한적으로 점도계, 예컨대 유리 모세관 점도계 또는 레오미터를 포함한 관련 기술분야에 공지된 임의의 방법에 의해 측정될 수 있다. 점도계는 하나의 유동 조건 하의 점도를 측정하는 반면, 레오미터는 유동 조건에 따라 달라지는 점도를 측정하는데 사용된다. 일부 실시양태에서, 점도는 전단 박화 용액, 예컨대 혈액에 대해 측정된다. 일부 실시양태에서, 점도는 약 -5℃ 내지 약 45℃에서 측정된다. 예를 들어, 점도는 실온 (예를 들어, 약 20℃), 생리학적 온도 (예를 들어, 약 37℃), 생리학적 온도보다 더 높은 온도 (예를 들어, 약 37℃ 내지 45℃ 또는 그 초과보다 더 큰 온도), 또는 감소된 온도 (예를 들어, 약 -5℃ 내지 약 4℃), 또는 이들 예시적인 온도 사이의 온도에서 측정된다.
시스템 및 키트
일부 측면에서, 본 발명은 본원에 기재된 임의의 실시양태에 따른, 예컨대 본원에 기재된 임의의 방법에 사용하기 위한 1개 이상의 압박부, T 세포 현탁액, 항원 또는 아주반트를 포함하는 시스템을 제공한다. 시스템은 상기 "마이크로유체 시스템 및 그의 성분" 표제 섹션에 개시된 것을 포함한, 본원에 개시된 물질 및 방법의 조성물에 대해 기재된 임의의 실시양태를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 세포-변형 압박부는 T 세포로의 전달을 위해 크기조정된다. 일부 실시양태에서, 전달 파라미터, 예컨대 작동 유동 속도, 세포 및 화합물 농도, 온도, 압박부에서의 세포의 속도, 및 세포 현탁액의 조성 (예를 들어, 오스몰농도, 염 농도, 혈청 함량, 세포 농도, pH 등)은 면역 반응을 조정하기 위한 화합물의 최대 반응을 위해 최적화된다.
또한, 개체에서 면역 반응을 조정하는데 사용하기 위한 키트 또는 제조 물품이 제공된다. 일부 실시양태에서, 키트는 본원에 기재된 임의의 변형된 T 세포를 포함한, 항원 및/또는 아주반트를 포함하는 변형된 T 세포를 포함한다. 일부 실시양태에서, 키트는 개체에서 면역 반응을 조정하는데 사용하기 위한 변형된 T 세포를 생성하는데 사용하기 위한 1개 이상의 압박부, T 세포 현탁액, 항원 또는 아주반트를 포함한다. 일부 실시양태에서, 키트는 본원에 기재된 성분 (예를 들어, 마이크로유체 채널 또는 세공을 함유하는 표면, 세포 현탁액 및/또는 화합물)을 적합한 패키징에 포함한다. 적합한 패키징 물질은 관련 기술분야에 공지되어 있고, 예를 들어 바이알 (예컨대 밀봉된 바이알), 용기, 앰플, 병, 단지, 가요성 패키징 (예를 들어, 밀봉된 마일라 또는 플라스틱 백) 등을 포함한다. 이들 제조 물품은 추가로 멸균되고/거나 밀봉될 수 있다.
본 발명은 또한 본원에 기재된 방법의 성분을 포함하는 키트를 제공하고, 개체에서 면역 반응을 조정하는 상기 방법을 수행하는 것에 대한 지침서 및/또는 항원 및/또는 아주반트를 T 세포 내로 도입하는 것에 대한 지침서를 추가로 포함할 수 있다. 본원에 기재된 키트는 완충제, 희석제, 필터, 바늘, 시린지, 및 본원에 기재된 임의의 방법을 수행하는 것에 대한 지침서; 예를 들어, 개체에서 면역 반응을 조정하는 것에 대한 지침서 또는 항원 및/또는 아주반트를 함유하도록 T 세포를 변형시키는 것에 대한 지침서를 갖는 패키지 삽입물을 포함한 다른 물질을 추가로 포함할 수 있다.
예시적인 실시양태
실시양태 1. 항원 및 아주반트를 포함하는 변형된 T 세포이며, 여기서 항원은 변형된 T 세포에 대해 외인성이고 면역원성 에피토프를 포함하고, 여기서 아주반트는 세포내 존재하는 것인 변형된 T 세포.
실시양태 2. 서열식별번호: 18-25 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 항원을 포함하는 변형된 T 세포.
실시양태 3. 항원 및 아주반트를 포함하는 변형된 T 세포이며, 여기서 항원은 면역원성 에피토프를 포함하고, a) 투입 T 세포를 포함하는 세포 현탁액을 세포-변형 압박부에 통과시키며, 여기서 압박부의 직경은 현탁액 중 투입 T 세포의 직경의 함수이고, 이에 의해 항원 및 아주반트가 통과하기에 충분히 큰 투입 T 세포의 교란을 유발하여 교란된 투입 T 세포를 형성하는 단계; 및 b) 교란된 투입 T 세포로 항원 및 아주반트가 들어가도록 하기에 충분한 시간 동안 교란된 투입 T 세포를 항원 및 아주반트와 함께 인큐베이션하고, 이에 의해 항원 및 아주반트를 포함하는 변형된 T 세포를 생성시키는 단계를 포함하는 방법에 의해 제조되는 변형된 T 세포.
실시양태 4. 실시양태 3에 있어서, 교란된 투입 T 세포와 함께 인큐베이션된 항원의 농도가 약 0.1 μM 내지 약 1 mM이고/거나 교란된 투입 T 세포와 함께 인큐베이션된 아주반트의 농도가 약 0.1 μM 내지 약 1 mM인 변형된 T 세포.
실시양태 5. 실시양태 3 또는 4에 있어서, 교란된 투입 T 세포와 함께 인큐베이션된 항원 대 아주반트의 비가 약 10000:1 내지 약 1:10000인 변형된 T 세포.
실시양태 6. 항원 및 아주반트를 포함하는 변형된 T 세포이며, 여기서 항원은 면역원성 에피토프를 포함하고, a) 아주반트를 포함하는 투입 T 세포를 포함하는 세포 현탁액을 세포-변형 압박부에 통과시키며, 여기서 압박부의 직경은 현탁액 중 투입 T 세포의 직경의 함수이고, 이에 의해 항원이 통과하기에 충분히 큰 투입 T 세포의 교란을 유발하여 교란된 투입 T 세포를 형성하는 단계; 및 b) 교란된 투입 T 세포로 항원이 들어가도록 하기에 충분한 시간 동안 교란된 투입 T 세포를 항원과 함께 인큐베이션하고, 이에 의해 항원 및 아주반트를 포함하는 변형된 T 세포를 생성시키는 단계를 포함하는 방법에 의해 제조되는 변형된 T 세포.
실시양태 7. 실시양태 6에 있어서, 교란된 투입 T 세포와 함께 인큐베이션된 항원의 농도가 약 0.1 μM 내지 약 1 mM인 변형된 T 세포.
실시양태 8. 항원 및 아주반트를 포함하는 변형된 T 세포이며, 여기서 항원은 면역원성 에피토프를 포함하고, a) 항원을 포함하는 투입 T 세포를 포함하는 세포 현탁액을 세포-변형 압박부에 통과시키며, 여기서 압박부의 직경은 현탁액 중 투입 T 세포의 직경의 함수이고, 이에 의해 아주반트가 통과하기에 충분히 큰 투입 T 세포의 교란을 유발하여 교란된 투입 T 세포를 형성하는 단계; 및 b) 교란된 투입 T 세포로 아주반트가 들어가도록 하기에 충분한 시간 동안 교란된 투입 T 세포를 아주반트와 함께 인큐베이션하고, 이에 의해 항원 및 아주반트를 포함하는 변형된 T 세포를 생성시키는 단계를 포함하는 방법에 의해 제조되는 변형된 T 세포.
실시양태 9. 실시양태 8에 있어서, 교란된 투입 T 세포와 함께 인큐베이션된 아주반트의 농도가 약 0.1 μM 내지 약 1 mM인 변형된 T 세포.
실시양태 10. 실시양태 3-9 중 어느 하나에 있어서, 투입 T 세포가 압박부를 통과할 때 투입 T 세포에 변형력이 가해져 투입 T 세포의 교란을 유발하는 것인 변형된 T 세포.
실시양태 11. 실시양태 3-10 중 어느 하나에 있어서, 방법이 추가의 인큐베이션 단계 없이 제조된 상응하는 변형된 T 세포와 비교하여 변형된 T 세포의 생존율 및/또는 기능을 증진시키는 작용제와 함께 투입 T 세포 및/또는 변형된 T 세포를 인큐베이션하는 단계를 추가로 포함하는 것인 변형된 T 세포.
실시양태 12. 실시양태 11에 있어서, 작용제가 세포내이입을 증진시키는 화합물이거나 또는 안정화제 또는 보조-인자로서 작용하는 것인 변형된 T 세포.
실시양태 13. 실시양태 3-12 중 어느 하나에 있어서, 압박부의 직경이 투입 T 세포의 직경보다 더 작은 것인 변형된 T 세포.
실시양태 14. 실시양태 13에 있어서, 압박부의 직경이 투입 T 세포의 직경의 약 20% 내지 약 99%인 변형된 T 세포.
실시양태 15. 실시양태 14에 있어서, 압박부의 직경이 투입 T 세포의 직경의 약 20% 내지 약 60%인 변형된 T 세포.
실시양태 16. 실시양태 1-15 중 어느 하나에 있어서, 항원 및/또는 아주반트가 변형된 T 세포의 시토졸 및/또는 소포에 존재하는 것인 변형된 T 세포.
실시양태 17. 실시양태 1-16 중 어느 하나에 있어서, 소포가 엔도솜인 변형된 T 세포.
실시양태 18. 실시양태 1-17 중 어느 하나에 있어서, 항원 및/또는 아주반트가 변형된 T 세포의 다중 구획에 존재하는 것인 변형된 T 세포.
실시양태 19. 실시양태 1-18 중 어느 하나에 있어서, 항원 또는 면역원성 에피토프가 변형된 T 세포의 표면에 결합된 것인 변형된 T 세포.
실시양태 20. 실시양태 1-19 중 어느 하나에 있어서, 아주반트가 CpG 올리고데옥시뉴클레오티드 (ODN), IFN-α, STING 효능제, RIG-I 효능제, 폴리 I:C, 이미퀴모드, 레시퀴모드 또는 리포폴리사카라이드 (LPS)인 변형된 T 세포.
실시양태 21. 실시양태 20에 있어서, 아주반트가 CpG ODN인 변형된 T 세포.
실시양태 22. 실시양태 21에 있어서, CpG ODN이 부류 A CpG ODN, 부류 B CpG ODN 또는 부류 C CpG ODN인 변형된 T 세포.
실시양태 23. 실시양태 1-22 중 어느 하나에 있어서, 면역원성 에피토프가 질환-연관 항원으로부터 유래된 것인 변형된 T 세포.
실시양태 24. 실시양태 23에 있어서, 면역원성 에피토프가 이환 세포로부터 단리된 펩티드 또는 mRNA로부터 유래된 것인 변형된 T 세포.
실시양태 25. 실시양태 1-24 중 어느 하나에 있어서, 면역원성 에피토프가 비-자기 항원으로부터 유래된 것인 변형된 T 세포.
실시양태 26. 실시양태 1-25 중 어느 하나에 있어서, 면역원성 에피토프가 종양 항원, 바이러스 항원, 박테리아 항원 또는 진균 항원으로부터 유래된 것인 변형된 T 세포.
실시양태 27. 실시양태 26에 있어서, 면역원성 에피토프가 인간 유두종바이러스 (HPV) 항원으로부터 유래된 것인 변형된 T 세포.
실시양태 28. 실시양태 27에 있어서, HPV가 HPV-16 또는 HPV-18인 변형된 T 세포.
실시양태 29. 실시양태 27 또는 28에 있어서, 항원이 HPV E6 및/또는 E7로부터 유래된 HLA-A2-제한 펩티드를 포함하는 것인 변형된 T 세포.
실시양태 30. 실시양태 29에 있어서, HLA-A2-제한 펩티드가 서열식별번호: 1-4 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 것인 변형된 T 세포.
실시양태 31. 실시양태 30에 있어서, 항원이 서열식별번호: 18-25 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 것인 변형된 T 세포.
실시양태 32. 실시양태 1-30 중 어느 하나에 있어서, 복수의 면역원성 에피토프를 포함하는 복수의 항원을 포함하는 변형된 T 세포.
실시양태 33. 실시양태 32에 있어서, 개체에게 복수의 면역원성 에피토프를 포함하는 복수의 항원을 포함하는 변형된 T 세포를 투여한 후에, 복수의 면역원성 에피토프 중 어떠한 것도 개체에서 임의의 다른 면역원성 에피토프에 대한 면역 반응을 감소시키지 않는 것인 변형된 T 세포.
실시양태 34. 실시양태 1-33 중 어느 하나에 있어서, 항원이 폴리펩티드이고, 면역원성 에피토프가 면역원성 펩티드 에피토프인 변형된 T 세포.
실시양태 35. 실시양태 30에 있어서, 면역원성 펩티드 에피토프가 N-말단 플랭킹 폴리펩티드 및/또는 C-말단 플랭킹 폴리펩티드에 융합된 것인 변형된 T 세포.
실시양태 36. 실시양태 30에 있어서, 항원이 면역원성 펩티드 에피토프 및 1개 이상의 이종 펩티드 서열을 포함하는 폴리펩티드인 변형된 T 세포.
실시양태 37. 실시양태 34에 있어서, 항원이 N-말단 및/또는 C-말단에 이종 펩티드 서열이 플랭킹되어 있는 면역원성 펩티드 에피토프를 포함하는 폴리펩티드인 변형된 T 세포.
실시양태 38. 실시양태 35에 있어서, 플랭킹 이종 펩티드 서열이 질환-연관 면역원성 펩티드로부터 유래된 것인 변형된 T 세포.
실시양태 39. 실시양태 35에 있어서, N-말단 플랭킹 폴리펩티드가 서열식별번호: 5-10 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하고/거나 C-말단 플랭킹 폴리펩티드가 서열식별번호: 11-17 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 것인 변형된 T 세포.
실시양태 40. 실시양태 1-39 중 어느 하나에 있어서, 항원이 MHC 부류 I-제한 펩티드 및/또는 MHC 부류 II-제한 펩티드로 프로세싱될 수 있는 것인 변형된 T 세포.
실시양태 41. 실시양태 1-40 중 어느 하나에 있어서, 아주반트를 약 0.1 μM 내지 약 1 mM의 농도로 포함하는 변형된 T 세포.
실시양태 42. 실시양태 1-41 중 어느 하나에 있어서, 항원을 약 0.1 μM 내지 약 1 mM의 농도로 포함하는 변형된 T 세포.
실시양태 43. 실시양태 1-42 중 어느 하나에 있어서, 항원 대 아주반트의 비가 약 10000:1 내지 약 1:10000인 변형된 T 세포.
실시양태 44. 실시양태 1-43 중 어느 하나에 있어서, a) 항원, b) 항원 및 적어도 1종의 다른 항원, 및/또는 c) 항원 및 아주반트를 포함하는 복합체를 포함하는 변형된 T 세포.
실시양태 45. 실시양태 1-44 중 어느 하나에 있어서, 작용제를 포함하지 않는 상응하는 변형된 T 세포와 비교하여 변형된 T 세포의 생존율 및/또는 기능을 증진시키는 작용제를 추가로 포함하는 변형된 T 세포.
실시양태 46. 실시양태 45에 있어서, 작용제가 세포내이입을 증진시키는 화합물, 안정화제 또는 보조-인자인 변형된 T 세포.
실시양태 47. 실시양태 45에 있어서, 작용제가 알부민인 변형된 T 세포.
실시양태 48. 실시양태 47에 있어서, 알부민이 마우스, 소 또는 인간 알부민인 변형된 T 세포.
실시양태 49. 실시양태 45에 있어서, 작용제가 2가 금속 양이온, 글루코스, ATP, 칼륨, 글리세롤, 트레할로스, D-수크로스, PEG1500, L-아르기닌, L-글루타민 또는 EDTA인 변형된 T 세포.
실시양태 50. 실시양태 49에 있어서, 작용제가 마우스 혈청 알부민 (MSA)을 포함하는 것인 변형된 T 세포.
실시양태 51. 실시양태 1-50 중 어느 하나에 있어서, 세포가 공동-자극 분자 중 1종 이상의 발현을 증가시키도록 추가로 변형된 것인 변형된 T 세포.
실시양태 52. 실시양태 51에 있어서, 공동-자극 분자가 B7-H2 (ICOSL), B7-1 (CD80), B7-2 (CD86), CD70, LIGHT, HVEM, CD40, 4-1BBL, OX40L, TL1A, GITRL, CD30L, TIM4, SLAM, CD48, CD58, CD155 또는 CD112인 변형된 T 세포.
실시양태 53. 실시양태 51 또는 52에 있어서, 세포가 1종 이상의 공동-자극 분자의 증가된 발현을 유발하는 핵산을 포함하는 것인 변형된 T 세포.
실시양태 54. 실시양태 1-53 중 어느 하나에 있어서, MHC 부류 I 발현을 조정하는 추가의 변형을 포함하는 변형된 T 세포.
실시양태 55. 실시양태 1-54 중 어느 하나에 있어서, MHC 부류 II 발현을 조정하는 추가의 변형을 포함하는 변형된 T 세포.
실시양태 56. 실시양태 54에 있어서, 동종이형 맥락에서 변형된 T 세포의 투여에 반응하여 개체에서 시작되는 선천성 면역 반응이, 동종이형 맥락에서 추가의 변형을 포함하지 않는 상응하는 변형된 T 세포의 투여에 반응하여 개체에서 시작되는 선천성 면역 반응과 비교하여 감소되는 것인 변형된 T 세포.
실시양태 57. 실시양태 54 또는 56에 있어서, 변형된 T 세포가 투여된 개체에서의 이들 세포의 순환 반감기가, 추가의 변형을 포함하지 않는 상응하는 변형된 T 세포가 투여된 개체에서의 이들 세포의 순환 반감기와 비교하여 증가되는 것인 변형된 T 세포.
실시양태 58. 실시양태 1-57 중 어느 하나에 있어서, 변형된 T 세포가 헬퍼 T 세포, 세포독성 T 세포, 기억 T 세포 또는 자연 킬러 T 세포 중 1종 이상을 포함하는 것인 변형된 T 세포.
실시양태 59. 실시양태 1-58 중 어느 하나에 있어서, 변형된 T 세포가 CD3+ T 세포, CD4+ T 세포, CD8+ T 세포, CD45RA+ T 세포, CD45RO+ T 세포 또는 γδ-T 세포 중 1종 이상을 포함하는 것인 변형된 T 세포.
실시양태 60. 실시양태 1-59 중 어느 하나의 변형된 T 세포를 포함하는 조성물.
실시양태 61. 실시양태 1-59 중 어느 하나의 변형된 T 세포 및 제약상 허용되는 담체를 포함하는 제약 조성물.
실시양태 62. 개체에게 실시양태 1-59 중 어느 하나의 변형된 T 세포, 실시양태 60의 조성물 또는 실시양태 61의 제약 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 면역 반응을 조정하는 방법.
실시양태 63. a) 개체에게 서열식별번호: 18-25 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 항원을 포함하는 변형된 T 세포를 투여하는 단계; 및 b) 개체에게 아주반트를 투여하는 단계를 포함하는, 개체에서 면역 반응을 조정하는 방법.
실시양태 64. a) 투입 T 세포를 포함하는 세포 현탁액을 세포-변형 압박부에 통과시키며, 여기서 압박부의 직경은 현탁액 중 투입 T 세포의 직경의 함수이고, 이에 의해 항원 및 아주반트가 통과하기에 충분히 큰 투입 T 세포의 교란을 유발하여 교란된 투입 T 세포를 형성하며, 여기서 항원은 면역원성 에피토프를 포함하는 것인 단계; b) 교란된 투입 T 세포로 항원 및 아주반트가 들어가도록 하기에 충분한 시간 동안 교란된 투입 T 세포를 항원 및 아주반트와 함께 인큐베이션하고, 이에 의해 항원 및 아주반트를 포함하는 변형된 T 세포를 생성시키는 단계; 및 c) 개체에게 변형된 T 세포를 투여하는 단계를 포함하는, 개체에서 면역 반응을 조정하는 방법.
실시양태 65. 실시양태 64에 있어서, 교란된 투입 T 세포와 함께 인큐베이션된 항원의 농도가 약 0.1 μM 내지 약 1 mM이고/거나 교란된 투입 T 세포와 함께 인큐베이션된 아주반트의 농도가 약 0.1 μM 내지 약 1 mM인 방법.
실시양태 66. 실시양태 64 또는 65에 있어서, 교란된 투입 T 세포와 함께 인큐베이션된 항원 대 아주반트의 비가 약 10000:1 내지 약 1:10000인 방법.
실시양태 67. a) 아주반트를 포함하는 투입 T 세포를 포함하는 세포 현탁액을 세포-변형 압박부에 통과시키며, 여기서 압박부의 직경은 현탁액 중 투입 T 세포의 직경의 함수이고, 이에 의해 항원이 통과하기에 충분히 큰 투입 T 세포의 교란을 유발하여 교란된 투입 T 세포를 형성하며, 여기서 항원은 면역원성 에피토프를 포함하는 것인 단계; b) 교란된 투입 T 세포로 항원이 들어가도록 하기에 충분한 시간 동안 교란된 투입 T 세포를 항원과 함께 인큐베이션하고, 이에 의해 항원 및 아주반트를 포함하는 변형된 T 세포를 생성시키는 단계; 및 c) 개체에게 변형된 T 세포를 투여하는 단계를 포함하는, 개체에서 면역 반응을 조정하는 방법.
실시양태 68. 실시양태 67에 있어서, 교란된 투입 T 세포와 함께 인큐베이션된 항원의 농도가 약 0.1 μM 내지 약 1 mM인 방법.
실시양태 69. a) 항원을 포함하는 투입 T 세포를 포함하는 세포 현탁액을 세포-변형 압박부에 통과시키며, 여기서 항원은 면역원성 에피토프를 포함하고, 여기서 압박부의 직경은 현탁액 중 투입 T 세포의 직경의 함수이고, 이에 의해 아주반트가 통과하기에 충분히 큰 투입 T 세포의 교란을 유발하여 교란된 투입 T 세포를 형성하는 단계; b) 교란된 투입 T 세포로 아주반트가 들어가도록 하기에 충분한 시간 동안 교란된 투입 T 세포를 아주반트와 함께 인큐베이션하고, 이에 의해 항원 및 아주반트를 포함하는 변형된 T 세포를 생성시키는 단계; 및 c) 개체에게 변형된 T 세포를 투여하는 단계를 포함하는, 개체에서 면역 반응을 조정하는 방법.
실시양태 70. 실시양태 69에 있어서, 교란된 투입 T 세포와 함께 인큐베이션된 아주반트의 농도가 약 0.1 μM 내지 약 1 mM인 방법.
실시양태 71. 실시양태 64-70 중 어느 하나에 있어서, 변형된 T 세포가 항원을 약 0.1 μM 내지 약 1 mM의 농도로 포함하는 것인 방법.
실시양태 72. 실시양태 64-71 중 어느 하나에 있어서, 변형된 T 세포가 아주반트를 약 0.1 μM 내지 약 1 mM의 농도로 포함하는 것인 방법.
실시양태 73. 실시양태 64-72 중 어느 하나에 있어서, 변형된 T 세포에서의 항원 대 아주반트의 비가 약 10000:1 내지 약 1:10000인 방법.
실시양태 74. 실시양태 64-73 중 어느 하나에 있어서, 변형된 T 세포가 a) 항원, b) 항원 및 적어도 1종의 다른 항원, 및/또는 c) 항원 및 아주반트를 포함하는 복합체를 포함하는 것인 방법.
실시양태 75. a) 투입 T 세포를 포함하는 세포 현탁액을 세포-변형 압박부에 통과시키며, 여기서 압박부의 직경은 현탁액 중 투입 T 세포의 직경의 함수이고, 이에 의해 항원이 통과하기에 충분히 큰 투입 T 세포의 교란을 유발하여 교란된 투입 T 세포를 형성하며, 여기서 항원은 면역원성 에피토프를 포함하는 것인 단계; b) 교란된 투입 T 세포로 항원이 들어가도록 하기에 충분한 시간 동안 교란된 투입 T 세포를 항원과 함께 인큐베이션하고, 이에 의해 항원을 포함하는 변형된 T 세포를 생성시키는 단계; c) 개체에게 변형된 T 세포를 투여하는 단계; 및 d) 개체에게 아주반트를 투여하는 단계를 포함하는, 개체에서 면역 반응을 조정하는 방법.
실시양태 76. 실시양태 75에 있어서, 교란된 투입 T 세포와 함께 인큐베이션된 항원의 농도가 약 0.1 μM 내지 약 1 mM인 방법.
실시양태 77. 실시양태 64-76 중 어느 하나에 있어서, 투입 T 세포가 압박부를 통과할 때 투입 T 세포에 변형력이 가해져 투입 T 세포의 교란을 유발하는 것인 방법.
실시양태 78. 실시양태 64-77 중 어느 하나에 있어서, 추가의 인큐베이션 단계 없이 제조된 상응하는 변형된 T 세포와 비교하여 변형된 T 세포의 생존율 및/또는 기능을 증진시키는 작용제와 함께 투입 T 세포 및/또는 변형된 T 세포를 인큐베이션하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
실시양태 79. 실시양태 78에 있어서, 작용제가 세포내이입을 증진시키는 화합물, 안정화제 또는 보조-인자인 방법.
실시양태 80. 실시양태 64-79 중 어느 하나에 있어서, 면역 반응이 증진되는 것인 방법.
실시양태 81. 실시양태 80에 있어서, 증진된 면역 반응이 항원에 대한 것인 방법.
실시양태 82. 실시양태 64-81 중 어느 하나에 있어서, 압박부의 직경이 투입 T 세포의 직경보다 더 작은 것인 방법.
실시양태 83. 실시양태 82에 있어서, 압박부의 직경이 투입 T 세포의 직경의 약 20% 내지 약 99%인 방법.
실시양태 84. 실시양태 83에 있어서, 압박부의 직경이 투입 T 세포의 직경의 약 20% 내지 약 60%인 방법.
실시양태 85. 실시양태 64-84 중 어느 하나에 있어서, 항원 및/또는 아주반트가 변형된 T 세포의 시토졸 및/또는 소포에 존재하는 것인 방법.
실시양태 86. 실시양태 64-85 중 어느 하나에 있어서, 소포가 엔도솜인 방법.
실시양태 87. 실시양태 64-86 중 어느 하나에 있어서, 항원 및/또는 아주반트가 변형된 T 세포의 다중 구획에 존재하는 것인 방법.
실시양태 88. 실시양태 64-87 중 어느 하나에 있어서, 항원 또는 면역원성 에피토프가 변형된 T 세포의 표면에 결합된 것인 방법.
실시양태 89. 실시양태 64-88 중 어느 하나에 있어서, 아주반트가 CpG ODN, IFN-α, STING 효능제, RIG-I 효능제, 폴리 I:C, 이미퀴모드, 레시퀴모드 및/또는 리포폴리사카라이드 (LPS)인 방법.
실시양태 90. 실시양태 89에 있어서, 아주반트가 CpG ODN인 방법.
실시양태 91. 실시양태 90에 있어서, CpG ODN이 부류 A CpG ODN, 부류 B CpG ODN 또는 부류 C CpG ODN인 방법.
실시양태 92. 실시양태 64-91 중 어느 하나에 있어서, 면역원성 에피토프가 질환-연관 항원으로부터 유래된 것인 방법.
실시양태 93. 실시양태 92에 있어서, 면역원성 에피토프가 이환 세포로부터 단리된 펩티드 또는 mRNA로부터 유래된 것인 방법.
실시양태 94. 실시양태 64-93 중 어느 하나에 있어서, 면역원성 에피토프가 비-자기 항원으로부터 유래된 것인 방법.
실시양태 95. 실시양태 64-94 중 어느 하나에 있어서, 면역원성 에피토프가 종양 항원, 바이러스 항원, 박테리아 항원 또는 진균 항원으로부터 유래된 것인 방법.
실시양태 96. 실시양태 95에 있어서, 면역원성 에피토프가 인간 유두종바이러스 (HPV) 항원으로부터 유래된 것인 방법.
실시양태 97. 실시양태 96에 있어서, HPV가 HPV-16 또는 HPV-18인 방법.
실시양태 98. 실시양태 96 또는 97에 있어서, 항원이 HPV E6 및/또는 E7로부터 유래된 HLA-A2-제한 펩티드를 포함하는 것인 방법.
실시양태 99. 실시양태 98에 있어서, HLA-A2-제한 펩티드가 서열식별번호: 1-4 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 것인 방법.
실시양태 100. 실시양태 99에 있어서, 항원이 서열식별번호: 18-25 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 것인 방법.
실시양태 101. 실시양태 64-100 중 어느 하나에 있어서, 변형된 T 세포가 복수의 면역원성 에피토프를 포함하는 복수의 항원을 포함하는 것인 방법.
실시양태 102. 실시양태 64-101에 있어서, 복수의 면역원성 에피토프 중 어떠한 것도 개체에서 임의의 다른 면역원성 에피토프에 대한 면역 반응을 감소시키지 않는 것인 방법.
실시양태 103. 실시양태 64-102 중 어느 하나에 있어서, 항원이 폴리펩티드이고, 면역원성 에피토프가 면역원성 펩티드 에피토프인 방법.
실시양태 104. 실시양태 103에 있어서, 면역원성 펩티드 에피토프가 N-말단 플랭킹 폴리펩티드 및/또는 C-말단 플랭킹 폴리펩티드에 융합된 것인 방법.
실시양태 105. 실시양태 104에 있어서, N-말단 플랭킹 폴리펩티드 및/또는 C-말단 플랭킹 폴리펩티드에 융합된 면역원성 펩티드 에피토프가 비-자연 발생 서열인 변형된 T 세포.
실시양태 106. 실시양태 105에 있어서, N-말단 및/또는 C-말단 플랭킹 폴리펩티드가 면역원성 합성 긴 펩티드 (SLP)로부터 유래된 것인 방법.
실시양태 107. 실시양태 105에 있어서, N-말단 및/또는 C-말단 플랭킹 폴리펩티드가 질환-연관 면역원성 SLP로부터 유래된 것인 방법.
실시양태 108. 실시양태 105에 있어서, N-말단 플랭킹 폴리펩티드가 서열식별번호: 5-10 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하고/거나 C-말단 플랭킹 폴리펩티드가 서열식별번호: 11-17 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 것인 방법.
실시양태 109. 실시양태 64-108 중 어느 하나에 있어서, 항원이 MHC 부류 I-제한 펩티드 및/또는 MHC 부류 II-제한 펩티드로 프로세싱될 수 있는 것인 방법.
실시양태 110. 실시양태 64-109 중 어느 하나에 있어서, 변형된 T 세포가 작용제를 포함하지 않는 상응하는 변형된 T 세포와 비교하여 변형된 T 세포의 생존율 및/또는 기능을 증진시키는 작용제를 추가로 포함하는 것인 방법.
실시양태 111. 실시양태 110에 있어서, 작용제가 세포내이입을 증진시키는 화합물, 안정화제 또는 보조-인자인 변형된 T 세포.
실시양태 112. 실시양태 111에 있어서, 작용제가 알부민인 변형된 T 세포.
실시양태 113. 실시양태 112에 있어서, 알부민이 마우스, 소 또는 인간 알부민인 변형된 T 세포.
실시양태 114. 실시양태 110에 있어서, 작용제가 2가 금속 양이온, 글루코스, ATP, 칼륨, 글리세롤, 트레할로스, D-수크로스, PEG1500, L-아르기닌, L-글루타민 또는 EDTA인 변형된 T 세포.
실시양태 115. 실시양태 64-114 중 어느 하나에 있어서, 변형된 T 세포가 MHC 부류 I 발현을 조정하는 추가의 변형을 포함하는 것인 방법.
실시양태 116. 실시양태 64-115 중 어느 하나에 있어서, 변형된 T 세포가 MHC 부류 II 발현을 조정하는 추가의 변형을 포함하는 것인 방법.
실시양태 117. 실시양태 115에 있어서, 동종이형 맥락에서 변형된 T 세포의 투여에 반응하여 개체에서 시작되는 선천성 면역 반응이, 동종이형 맥락에서 추가의 변형을 포함하지 않는 상응하는 변형된 T 세포의 투여에 반응하여 개체에서 시작되는 선천성 면역 반응과 비교하여 감소되는 것인 방법.
실시양태 118. 실시양태 115 또는 117에 있어서, 변형된 T 세포가 투여된 개체에서의 이들 세포의 순환 반감기가, 추가의 변형을 포함하지 않는 상응하는 변형된 T 세포가 투여된 개체에서의 이들 세포의 순환 반감기와 비교하여 증가되는 것인 방법.
실시양태 119. 실시양태 64-118 중 어느 하나에 있어서, 변형된 T 세포가 헬퍼 T 세포, 세포독성 T 세포, 기억 T 세포 또는 자연 킬러 T 세포 중 1종 이상을 포함하는 것인 방법.
실시양태 120. 실시양태 64-119 중 어느 하나에 있어서, 변형된 T 세포가 CD3+ T 세포, CD4+ T 세포, CD8+ T 세포, CD45RA+ T 세포, CD45RO+ T 세포 또는 γδ-T 세포 중 1종 이상을 포함하는 것인 방법.
실시양태 121. 실시양태 64-120 중 어느 하나에 있어서, 변형된 T 세포가 개체에 대해 동종이형인 방법.
실시양태 122. 실시양태 64-121 중 어느 하나에 있어서, 변형된 T 세포가 개체에 대해 자가인 방법.
실시양태 123. 실시양태 64-122 중 어느 하나에 있어서, 개체가 염증 및/또는 면역 반응을 조정하도록 사전-조건화된 것인 방법.
실시양태 124. 실시양태 64-123 중 어느 하나에 있어서, 개체에게 제2 아주반트를 투여하는 것을 추가로 포함하는 방법.
실시양태 125. 실시양태 124에 있어서, 제2 아주반트가 IFN-α, LPS 또는 CpG ODN인 방법.
실시양태 126. 실시양태 124 또는 125에 있어서, 변형된 T 세포 및 제2 아주반트가 공동으로 또는 동시에 투여되는 것인 방법.
실시양태 127. 실시양태 124 또는 125에 있어서, 변형된 T 세포 및 제2 아주반트가 순차적으로 투여되는 것인 방법.
실시양태 128. 실시양태 124-127에 있어서, 변형된 T 세포가 제2 아주반트의 투여 전에 투여되는 것인 방법.
실시양태 129. 실시양태 124-128에 있어서, 변형된 T 세포가 제2 아주반트의 투여 후에 투여되는 것인 방법.
실시양태 130. 실시양태 64-129에 있어서, 변형된 T 세포가 면역 체크포인트 억제제의 투여 전에, 그와 공동으로 또는 그 후에 투여되는 것인 방법.
실시양태 131. 실시양태 130에 있어서, 면역 체크포인트 억제제가 PD-1, PD-L1, CTLA-4, TIM-3, LAG3, VISTA, TIM1, B7-H4 (VTCN1) 또는 BTLA 중 어느 하나를 표적화하는 것인 방법.
실시양태 132. 실시양태 64-131에 있어서, 변형된 T 세포가 화학요법의 투여 전에, 그와 공동으로 또는 그 후에 투여되는 것인 방법.
실시양태 133. 실시양태 132에 있어서, 화학요법이 시스플라틴을 포함하는 것인 방법.
실시양태 134. 실시양태 64-133 중 어느 하나에 있어서, 개체에게 변형된 T 세포를 투여하는 것이 항원에 특이적인 세포독성 T 림프구 (CTL)의 활성화 및/또는 확장을 유발하는 것인 방법.
실시양태 135. 실시양태 64-134 중 어느 하나에 있어서, 개체에게 변형된 T 세포를 투여하는 것이 항원에 특이적인 헬퍼 T (Th) 세포의 활성화 및/또는 확장을 유발하는 것인 방법.
실시양태 136. 실시양태 64-135 중 어느 하나에 있어서, 개체에게 투여되는 변형된 T 세포의 양이 약 1 x 106 내지 약 1 x 1012개의 세포인 방법.
실시양태 137. 실시양태 64-136 중 어느 하나에 있어서, 변형된 T 세포의 다중 투여를 포함하는 방법.
실시양태 138. 실시양태 137에 있어서, 변형된 T 세포의 2회 연속 투여 사이의 시간 간격이 약 1일 내지 약 30일인 방법.
실시양태 139. 개체에게 항원과 연관된 변형된 T 세포를 투여하는 것을 포함하며, 여기서 변형된 T 세포는 a) 항원이 투입 T 세포의 세포 표면과 회합되도록 하기에 충분한 시간 동안 투입 T 세포를 항원 및/또는 아주반트와 함께 인큐베이션하고, 여기서 항원은 면역원성 에피토프를 포함하고, 이에 의해 항원과 회합된 변형된 T 세포를 생성시키는 단계; 및 b) 개체에게 변형된 T 세포를 투여하는 단계를 포함하는 방법에 의해 제조되는 것인, 개체에서 면역 반응을 조정하는 방법.
실시양태 140. 실시양태 139에 있어서, HPV 항원이 서열식별번호: 18-25 중 어느 하나에 대해 적어도 90% 유사성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 것인 방법.
실시양태 141. 실시양태 140에 있어서, HPV 항원이 서열식별번호: 23의 아미노산 서열을 포함하는 것인 방법.
실시양태 142. 실시양태 139-141 중 어느 하나에 있어서, 아주반트가 CpG ODN 또는 LPS인 방법.
실시양태 143. 실시양태 142에 있어서, CpG ODN이 CpG ODN 1018, CpG ODN 1826 또는 CpG ODN 2006인 방법.
실시양태 144. 수술, 요법 또는 진단에 의한 인간 또는 동물 신체의 치료 방법에 사용하기 위한 실시양태 1-59 중 어느 하나의 변형된 T 세포를 포함하는 조성물.
실시양태 145. 개체에게 실시양태 1-59 중 어느 하나의 변형된 T 세포를 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 면역 반응을 조정하는 방법에 사용하기 위한 상기 변형된 T 세포를 포함하는 조성물.
실시양태 146. 수술, 요법 또는 진단에 의한 인간 또는 동물 신체의 치료 방법에 사용하기 위한 변형된 T 세포를 포함하는 조성물이며, 여기서 변형된 T 세포는 서열식별번호: 18-25 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 항원을 포함하는 것인 조성물.
실시양태 147. 개체에서 면역 반응을 조정하는 방법에 사용하기 위한 변형된 T 세포를 포함하는 조성물이며, 여기서 변형된 T 세포는 서열식별번호: 18-25 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 항원을 포함하는 것인 조성물.
실시양태 148. 수술, 요법 또는 진단에 의한 인간 또는 동물 신체의 치료 방법에 사용하기 위한 변형된 T 세포를 포함하는 조성물이며, 여기서 변형된 T 세포는 a) 투입 T 세포를 포함하는 세포 현탁액을 세포-변형 압박부에 통과시키며, 여기서 압박부의 직경은 현탁액 중 투입 T 세포의 직경의 함수이고, 이에 의해 항원 및 아주반트가 통과하기에 충분히 큰 투입 T 세포의 교란을 유발하여 교란된 투입 T 세포를 형성하며, 여기서 항원은 면역원성 에피토프를 포함하는 것인 단계; 및 b) 교란된 투입 T 세포로 항원 및 아주반트가 들어가도록 하기에 충분한 시간 동안 교란된 투입 T 세포를 항원 및 아주반트와 함께 인큐베이션하고, 이에 의해 항원 및 아주반트를 포함하는 변형된 T 세포를 생성시키는 단계를 포함하는 방법에 의해 제조되는 것인 조성물.
실시양태 149. 개체에서 면역 반응을 조정하는 방법에 사용하기 위한 변형된 T 세포를 포함하는 조성물이며, 여기서 변형된 T 세포는 a) 투입 T 세포를 포함하는 세포 현탁액을 세포-변형 압박부에 통과시키며, 여기서 압박부의 직경은 현탁액 중 투입 T 세포의 직경의 함수이고, 이에 의해 항원 및 아주반트가 통과하기에 충분히 큰 투입 T 세포의 교란을 유발하여 교란된 투입 T 세포를 형성하며, 여기서 항원은 면역원성 에피토프를 포함하는 것인 단계; 및 b) 교란된 투입 T 세포로 항원 및 아주반트가 들어가도록 하기에 충분한 시간 동안 교란된 투입 T 세포를 항원 및 아주반트와 함께 인큐베이션하고, 이에 의해 항원 및 아주반트를 포함하는 변형된 T 세포를 생성시키는 단계를 포함하는 방법에 의해 제조되는 것인 조성물.
실시예
관련 기술분야의 통상의 기술자는 본 발명의 범주 및 취지 내에서 여러 실시양태가 가능하다는 것을 인지할 것이다. 본 발명은 이제 하기 비제한적 실시예를 참조하여 보다 상세히 기재될 것이다. 하기 실시예는 본 발명을 추가로 예시하지만, 물론 어떠한 방식으로도 본 발명의 범주를 제한하는 것으로 해석되어서는 안된다.
실시예 1.
치료 세팅에서 종양 성장 억제를 유도하는데 필요한 TAPC의 최소 유효 세포 용량을 결정하기 위해, 4가지 상이한 용량의 프라임/부스트 TAPC를 TC1 종양 모델에서 시험하였고, 종양의 면적을 시간에 대해 플롯팅하였다.
C57BL/6J 암컷 마우스에게 제0일에 TC1 종양 세포 (50k 세포/마우스)를 우측 후방 측복부에 주사하였다. 제4일 (프라임) 및 제7일 (부스트)에, C57BL/6J 암컷 공여자 마우스로부터의 T 세포를 단리하고, SQZ를 사용하여 200 μg/mL CpG ODN 1826 및 사전-복합체화된 40 μM E7 SLP (GQAEPDRAHYNIVTFSSKSDSTLRLSVQSTHVDIR; 서열식별번호: 25) + 40 μM 마우스 혈청 알부민 (MSA)을 로딩하였다. 동물 (10마리 마우스/군)에게 관련 용량의 E7+MSA+CpG 로딩된 T 세포 (50M 세포/mL)를 정맥내 주사하고, TC-1 종양 성장을 종양 이식 후 1주에 시작하여 1주에 2회 측정하고, 비처리 마우스에서의 종양 성장과 비교하였다. 처리군 및 스케줄의 대표적인 개략도가 도 1a에 약술된다.
도 1a에 약술된 비처리군 (T 세포의 입양 전달 부재)과 처리군 B-E로부터의 마우스 사이를 비교한, 식 ((길이 x 폭2)/2)에 의해 측정된 종양 성장이 도 1b에 제시된다. 모든 처리 조건은 완전한 종양 감소를 유도하였으며, 이는 시험된 최저 세포 용량 (2.5M 세포 프라임, 1M 세포 부스트)이 더 높은 세포 용량과 동일한 종양 감소를 여전히 달성할 수 있었음을 나타내고, 각각은 제18일에서 비처리에 비해 통계적 유의성에 도달하였다 (#P<0.0001).
실시예 2
E7 SLP 설계를 결정하기 위해, 2종의 상이한 E7 SLP인, 천연 E7 SLP 및 천연 서열의 모든 시스테인이 세린으로 대체된 것을 CpG 공-투여와 함께 T APC 내로 SQZ하고, 각각의 조건을 ICS에 의해 IFN-γ 생산에 대해 평가하였다.
C57BL/6J 암컷 공여자 마우스로부터의 T 세포를 단리하고, SQZ를 사용하여 다양한 용량 (좌측 - 200 μg/mL, 우측 - 25 μg/mL)의 CpG ODN 1826 및 사전-복합체화된 40 μM E7 천연 또는 전형적 SLP + 40 μM 마우스 혈청 알부민 (MSA)을 로딩하거나 또는 T 세포를 음성 대조군 (엔도 - 군 B 및 D)으로서 SQZ의 부재 하에 동일한 조건으로 인큐베이션하였다. 동물 (5마리 마우스/군)에게 100 μL 부피 중 5M 로딩되거나 인큐베이션된 T 세포 (50M 세포/mL)를 정맥내 주사하였다. 제8일에, 비장을 수거하고, IFN-γ-생산 CD8+ T 세포의 %를 ICS에 의해 정량화하였다. 처리군 및 스케줄의 대표적인 개략도가 도 2a에 약술되어 있다.
IFN-γ-생산 CD8+ T 세포의 %는 cE7을 사용한 엔도 대조군에서 가장 높았으며, 이는 cE7을 사용한 SQZ 또는 nE7을 사용한 엔도와 유의하게 상이하지 않았다. 예상외로, 엔도 대비 SQZ에 대한 이익은 없었지만, 다른 모든 것에 비해 SQZ nE7 조건에서 IFN-γ-생산 CD8+ T 세포의 %의 주목할만한 감소가 있었다. 이 데이터는 특히 항원이 SQZ를 사용하여 T 세포 내로 로딩되는 경우에 SLP 서열이 T APC 백신접종에 반응하여 생성된 IFN-γ-생산 CD8+ T 세포의 %에 영향을 준다는 것을 보여준다.
실시예 3
시험관내 인간 모델에서 E6 반응자 T 세포에서의 항원-특이적 면역 반응을 유도하는 E6 SLP의 능력을 결정하기 위해, 1차 인간 T 세포에 E6 SLP를 로딩하고, 반응자 세포 IFN-γ 분비를 ELISA에 의해 측정하였다.
인간 T 세포를 HLA-A02+ 공여자의 PBMC로부터 단리하고 (10M 세포/mL), HLA-A02-제한 최소 E629-38 에피토프 (LPQLSTELQTTIHDIILECVYSKQQLLRREVYDFAF; 서열식별번호: 18)를 함유하는 50 μM E6 SLP를 SQZ에 의해 세포내 전달하고, E6 SLP를 SQZ 부재 하에 TAPC와 함께 인큐베이션한 대조군 (엔도)과 SQZ 조건 사이에서 ELISA에 의해 측정된 IFN-γ의 수준을 비교하였다. 이어서 TAPC를 E6-특이적 CD8+ 반응자 세포와 1:1 자극제:이펙터의 비로 공동-배양하고, IL-2 (100 U/mL)의 존재 하에 배양하였다. 18시간 후, 상청액을 각각의 조건으로부터 수거하고, IFN-γ 생산의 수준을 IFN-γ ELISA (바이오레전드(Biolegend))에 의해 평가하였다.
SQZ를 사용하여 세포내 전달된 경우의 시험된 E6 SLP는 도 3에 제시된 같이 E6 반응자 CD8+ T 세포와 공동-배양되었을 때 IFN-γ 생산의 >10배 증가를 유도하였다 (#P<0.0001). 이들 발견은 다중 HPV 항원 (E6 및 E7)에 대한 항원-특이적 면역 반응을 도출하는 T APC의 능력을 나타낸다.
실시예 4
시험관내 인간 모델에서 E711-20 반응자 T 세포에서의 항원-특이적 면역 반응을 유도하는 E7 SLP의 능력, 뿐만 아니라 SQZ T 세포 APC (Tapc) 활성화에 대한 SLP 서열의 영향을 결정하기 위해, 다중 공여자로부터의 1차 인간 T 세포에 상이한 E7 SLP들을 로딩하고, 반응자 세포 IFN-γ 분비를 ELISA에 의해 측정하였다.
인간 T 세포를 HLA-A02+ 공여자의 PBMC로부터 단리하고 (10M 세포/mL), 50 μM OL-E71-35 (MHGDTPTLHEYMLDLQPETTDLYCYEQLNDSSEEE; 서열식별번호: 22) 또는 E7.6 (QLCTELQTYMLDLQPETTYCKQQLL; 서열식별번호: 23) SLP를 SQZ에 의해 세포내 전달하고, E7 SLP를 SQZ 부재 하에 Tapc와 함께 인큐베이션한 대조군 (엔도)과 SQZ 조건 사이에서 ELISA에 의해 측정된 IFN-γ의 수준을 비교하였다. 이어서 TAPC를 E711-20-특이적 CD8+ 반응자 세포와 4:1 자극제:이펙터의 비로 공동-배양하고, IL-2 (100 U/mL)의 존재 하에 배양하였다. 24시간 후, 상청액을 각각의 조건으로부터 수거하고, IFN-γ 생산의 수준을 IFN-γ ELISA (바이오레전드)에 의해 평가하였다.
천연 OL-E71-35 SLP는 엔도와 비교하여 SQZ를 사용하여 전달된 경우에 최소 IFN-γ 반응을 도출하였다 (도 4). 그러나, 또 다른 반응성 SLP (E621-45 - QLCTELQTXXXXXXXXXYCKQQLL)의 플랭킹 영역 사이에 삽입된 E7 최소 에피토프 (YMLDLQPETT; 서열식별번호: 3)를 포함하는 E7.6은 엔도 대조군과 비교하였을 때 시험된 모든 3명의 공여자에서의 매칭된 엔도 대조군에 비해 더 큰 IFN-γ 반응을 유도하였다 (*P<0.05, **P<0.01; #P<0.0001). 이러한 발견은 SLP의 면역원성에서의 플랭킹 영역 서열의 중요성을 강조하고, 반응성인 것으로 공지된 다른 SLP의 플랭킹 영역이 증가된 면역 반응을 달성하기 위해 직교 최소 에피토프와 함께 사용될 수 있다는 지지를 제공한다.
실시예 5
시험관내 인간 모델에서 SQZ T 세포 APC에 대한 항원의 용량을 평가하기 위해, 1차 인간 T 세포에 E7 SLP를 다양한 용량으로 로딩하고, ELISA에 의해 IFN-γ에 대해 평가하였다.
인간 T 세포를 HLA-A02+ 공여자의 PBMC로부터 단리하고 (10M 세포/mL), 다양한 용량 (50 및 100 μM)의 E7 SLP (QLCTELQTYMLDLQPETTYCKQQLL; 서열식별번호: 23)를 SQZ에 의해 세포내 전달하고, E7 SLP를 SQZ 부재 하에 T APC와 함께 인큐베이션한 대조군 (엔도)과 SQZ 조건 사이에서 ELISA에 의해 측정된 IFN-γ의 수준을 비교하였다. 이어서, T APC를 E711-20-특이적 CD8+ 반응자 세포와 4:1 자극제:이펙터의 비로 공동-배양하고, IL-2 (100 U/mL)의 존재 하에 배양하였다. 24시간 후, 상청액을 각각의 조건으로부터 수거하고, IFN-γ 생산의 수준을 IFN-γ ELISA (바이오레전드)에 의해 평가하였다. 추가적으로, ELISA 전 1시간 동안 B-LCL 세포를 최소 E7 에피토프 (YMLDLQPETT; 서열식별번호: 3)의 존재 하에 인큐베이션한 펩티드 펄스 양성 대조군을 사용하였다.
시험된 3명의 공여자에 걸쳐, SLP를 SQZ의 부재 하에 T 세포와 함께 인큐베이션한 비교가능한 대조군 (엔도)에 비해 모든 SQZ 조건에서 IFN-γ의 일관된 증가가 발생하였다 (도 5). 공여자 1 및 3은 50 μM E7 SLP에서 통계적으로 유의한 증가 (8668 - *P<0.05; 8299 - #P<0.0001) 및 더 높은 100 μM E7 SLP에서 유의성쪽으로의 경향을 보였다. 어떠한 공여자에 대해서도 50 내지 100 μM 사이에 통계적으로 유의한 차이는 없었지만, 50 μM E7 SLP에서 일관되게 동일하거나 더 높은 IFN-γ 반응이 있었다.
실시예 6
시험관내 인간 모델에서 SQZ T 세포 APC에 대한 공여자 가변성을 결정하고, 이와 함께 다중 HLA-A02+ 공여자로부터의 1차 인간 T 세포에서 E7에 대한 유의한 면역 반응을 유도하는 E6 및 E7 SLP의 최적 조합 및 용량을 확인하기 위해, E6 및 E7 SLP를 로딩하고, ELISA에 의해 IFN-γ에 대해 평가하였다.
인간 T 세포를 HLA-A02+ 공여자의 PBMC로부터 단리하고 (10M 세포/mL), 25 또는 50 μM E6 SLP (QLCTELQTTIHDIILECVYCKQQLL; 서열식별번호: 19) 및 E7.6 SLP (QLCTELQTYMLDLQPETTYCKQQLL; 서열식별번호: 23)를 SQZ에 의해 세포내 전달하고, SLP를 SQZ 부재 하에 TAPC와 함께 인큐베이션한 대조군 (엔도)과 SQZ 조건 사이에서 ELISA에 의해 측정된 IFN-γ의 수준을 비교하였다. TAPC 생성과 동시에 B-LCL 세포를 최소 E7 에피토프 (YMLDLQPETT; 서열식별번호: 3)의 존재 하에 인큐베이션한 펩티드 펄스 양성 대조군을 사용하였다. 이어서 TAPC 및 양성 대조군을 E711-20-특이적 CD8+ 반응자 세포와 4:1 자극제:이펙터의 비로 공동-배양하고, IL-2 (100 U/mL)의 존재 하에 배양하였다. 24시간 후, 상청액을 각각의 조건으로부터 수거하고, IFN-γ 생산의 수준을 IFN-γ ELISA (바이오레전드)에 의해 평가하였다.
도 6에 제시된 바와 같이 제시된 7명의 공여자 중 5명은 SLP를 SQZ의 부재 하에 T 세포와 함께 인큐베이션한 비교가능한 대조군 (엔도)에 비해 SQZ E6+E7 SLP로 처리한 경우에 IFN-γ의 일관된 증가를 나타냈다 (공여자 1-3, 5-6: *P<0.05, **P<0.01, ***P<0.005). 엔도 대조군에 비해 SQZ된 T APC로 처리한 경우에 통계적으로 유의한 증가를 갖지 않는 2명의 공여자 중에서, 공여자 (공여자 4 & 7) 둘 다는 시험된 SQZ된 T APC의 1회 용량에서 (공여자 4 - 50 μM, 공여자 7 - 25 μM) 유의성쪽으로의 경향을 보이는 검출가능한 증가가 있었던 상태를 나타냈다. 종합하면, 이들 데이터는 상이한 공여자 T APC가 차등 면역자극 활성을 갖지만, 본 발명자들은 다수의 공여자에 걸쳐 IFN-γ 생산의 일관된 증가를 관찰할 수 있다는 것 및 E7-특이적 면역 반응이 다중 항원/SLP, 이 경우에는 HPV-특이적 E6 항원과 조합되는 경우에 여전히 유의하다는 것을 나타낸다.
실시예 7
가장 강건한 면역 반응을 유도하는 아주반트를 결정하는 것을 돕기 위해, 본 발명자들은 생체내 항원-특이적 반응을 유도하는 T APC의 능력에 대한 상이한 경로에 작용하는 2종의 아주반트의 효과를 시험하였다. 이 효과를 유동 세포측정법을 사용하여 사량체 및 ICS 염색에 의해 정량화하였다.
C57BL/6J 암컷 공여자 마우스로부터의 T 세포를 단리하고, SQZ를 사용하여 400 μg/mL Ova + 다양한 농도의 고분자량 및 저분자량 폴리 I:C (10, 30, 100, 300, 1000 μg/mL)를 로딩하고, 음성 대조군으로서 SQZ의 부재 하에 동일한 조건으로 인큐베이션한 T 세포 (엔도 - 군 C & E)와 비교하였다. Ova+200 μg/mL CpG가 SQZ된 T 세포를 양성 대조군으로서 사용하였다 (군 F). 제0일에, 마우스 (5마리/군, 3마리 비처리)에게 100 μL 부피 중 5M 로딩되거나 인큐베이션된 T 세포 (50M 세포/mL)를 주사하였다. 제7일에, 비장을 수거하고, Ova-특이적 T 세포를 유동 세포측정법을 사용하여 사량체 염색에 의해 정량화하였으며, 이때 일부 비장세포를 투과시키고, 밤새 고정시켰다. 다음 날 (제8일), 양성 대조군으로서 작용하는 PMA/이오노마이신을 사용하여 ICS에 의해 IFN-γ의 수준을 결정하였다. 처리군 및 스케줄의 대표적인 개략도가 도 7a에 약술되어 있다.
사량체 또는 IFN-γ-생산 CD8+ T 세포의 %는 CpG가 아주반트 첨가된 군에서 가장 높았으며, 한편 LMW 또는 HMW 폴리 I:C가 아주반트 첨가된 모든 조건은 비처리에 비해 Ova-특이적 또는 IFN γ-생산 CD8+ T 세포의 백분율을 증가시키지 않았다 (도 7b). 폴리 I:C는 TLR3 효능제이고, CpG는 TLR9 효능제이기 때문에, 이 데이터는 T APC 백신접종에서의 아주반트로서 폴리 I:C보다 CpG의 우수성을 지지하며, 또한 TLR3 활성화가 이러한 세팅에서 유익하지 않을 수 있다는 것을 시사한다.
실시예 8
가장 강건한 면역 반응을 유도하는 CpG 아주반트의 농도를 결정하는 것을 돕기 위해, 본 발명자들은 생체내 항원-특이적 반응을 유도하는 T APC의 능력에 대한 CpG의 다중 용량의 효과를 시험하였다. 이 효과를 유동 세포측정법을 사용하여 사량체 및 ICS 염색에 의해 정량화하였다.
C57BL/6J 암컷 공여자 마우스로부터의 T 세포를 단리하고, SQZ를 사용하여 400 μg/mL Ova + 다양한 농도의 CpG 1826 (50, 100, 200 μg/mL)을 로딩하고, 음성 대조군으로서 SQZ의 부재 하에 동일한 조건으로 인큐베이션한 T 세포 (엔도 - 군 B, D & F)와 비교하였다. 제0일에, 마우스 (5마리/군, 3마리 비처리)에게 100 μL 부피 중 5M 로딩되거나 인큐베이션된 T 세포 (50M 세포/mL)를 주사하였다. 제7일에, 비장을 수거하고, Ova-특이적 T 세포를 유동 세포측정법을 사용하여 사량체 염색에 의해 정량화하였으며, 이때 일부 비장세포를 투과시키고, 밤새 고정시켰다. 다음 날 (제8일), 양성 대조군으로서 작용하는 PMA/이오노마이신을 사용하여 ICS에 의해 IFN-γ의 수준을 결정하였다. 처리군 및 스케줄의 대표적인 개략도가 도 8a에 약술되어 있다.
사량체 또는 IFN-γ-생산 CD8+ T 세포의 %는 200 μg/mL CpG를 갖는 군에서 가장 높았고, 부류 I 펩티드/MHC-I에 대해 관련 엔도 대조군 (사량체의 경우 *P<0.05, IFN-γ의 경우 #P<0.0001)과 유의하게 상이하였지만, 모든 다른 조건은 비처리 또는 그의 각각의 엔도 대조군에 비해 유의한 반응을 도출하지 않았다 (도 8b). Ova-특이적 T 세포의 활성화는 단지 부류 I 펩티드에서만 관찰되었으며, 이는 Ova 항원의 직접 제시가 CD8+ T 세포 반응에 효과를 나타낸다는 것을 지지한다.
실시예 9
강건한 면역 반응을 유도하는 CpG 아주반트 투여에 대한 스케줄을 평가하는 것을 돕기 위해, 본 발명자들은 생체내 항원-특이적 반응을 유도하는 T APC의 능력에 대한 CpG의 다중 투여 스케줄의 효과를 시험하였다. 이 효과를 유동 세포측정법을 사용하여 사량체 및 ICS 염색에 의해 정량화하였다.
C57BL/6J 암컷 공여자 마우스로부터의 T 세포를 단리하고, SQZ를 사용하여 400 μg/mL Ova를 로딩하고, 마우스 (5마리/군, 3마리 비처리)에게 100 μL 부피 중 5M 로딩되거나 인큐베이션된 T 세포 (50M 세포/mL)를 주사하였다. 공여자 마우스의 CpG 1826 (25 μg/mL) 전신 공-투여를 T APC 프라임 (제0일)과 동시에 또는 프라임 1 또는 2일 후 (각각 제1일 또는 제2일)에 수행하고, 음성 대조군으로서 SQZ의 부재 하에 동일한 조건으로 인큐베이션한 T 세포 (군 B, D & F)와 비교하였다. (Ova+200 μg/mL CpG)가 SQZ된 T 세포를 양성 대조군 (군 H)으로서 사용하였다. 제7일에, 비장을 수거하고, Ova-특이적 T 세포를 유동 세포측정법을 사용하여 사량체 염색에 의해 정량화하였으며, 이때 일부 비장세포를 투과시키고, 밤새 고정시켰다. 다음 날 (제8일), 양성 대조군으로서 작용하는 PMA/이오노마이신을 사용하여 ICS에 의해 IFN-γ의 수준을 결정하였다. 처리군 및 스케줄의 대표적인 개략도가 도 9a에 약술되어 있다.
사량체 또는 IFN-γ-생산 CD8+ T 세포의 %는 Ova 및 CpG를 T APC로 공동-전달한 군에서 가장 높았으며, 한편 프라임과 동일한 날 공-투여 (군 B)가 유의성쪽으로의 경향을 보이는 Ova-특이적 활성화의 일부 수준을 나타내는 유일한 공-투여된 CpG 군이었다 (도 9b). 그러나, 이 데이터는 항원+CpG 공동-전달이 Ova-특이적 CD8+ T 세포의 가장 큰 활성화를 유도할 수 있으며, 한편 CpG의 전신 투여를 지연시키는 것은 아주반트의 동시 프라임 및 공-투여와 비교하여 더 낮은 반응을 유도한다는 관찰을 지지한다.
실시예 10
T APC 항종양 기능을 위한 세포내 및 전신 아주반트 투여의 조합을 결정하기 위해, 예방적 TC-1 뮤린 종양 모델에서 본 발명자들의 E7-특이적 T APC와 함께 CpG 대 IFN-α의 다중 투여 경로를 비교하였다. 항원-특이적 T 세포 반응을 사량체 염색 및 유동 세포측정법에 의해 측정하였으며, 또한 항종양 효과를 종양 성장 예방에 의해 측정하였다.
제-14일 (프라임) 및 제-7일 (부스트)에, C57BL/6J 암컷 공여자 마우스로부터의 T 세포를 단리하고, SQZ를 사용하여 사전-복합체화된 40 μM E7 SLP (GQAEPDRAHYNIVTFSSKSDSTLRLSVQSTHVDIR; 서열식별번호: 25) + 40 μM 마우스 혈청 알부민 (MSA) (군 B 및 C) 또는 E7 SLP+MSA+200 μg/mL CpG ODN 1826 (군 D, E 및 F)을 로딩하였다. C57BL/6J 암컷 수용자 마우스 (10마리 마우스/군)에게 100 μL의 로딩된 T 세포 (5M 세포/동물)를 정맥내 주사하였으며, 한편 군 B 및 E 동물에게 또한 정맥내 CpG (25 μg)를 투여하고, 군 C 및 F에게 IV IFN-α (10k IU)를 투여하였다. 제-8일 및 제-3일에, 100 μL의 뮤린 혈액을 수집하고, E7-특이적 CD8+ T 세포의 %를 사량체 염색 및 유동 세포측정법에 의해 정량화하였다. 제0일에, 수용자 마우스에게 TC1 종양 세포 (100k 세포/마우스)를 우측 후방 측복부에 주사하고, TC-1 종양 성장을 제11일에 시작하여 1주에 2회 측정하고, 비처리 마우스에서의 종양 성장과 비교하였다. 처리군 및 스케줄의 대표적인 개략도가 도 10a에 약술되어 있다.
E7-특이적 T 세포의 백분율을 E7+MSA 또는 E7+MSA+CpG SQZ된 T 세포 +/- CpG 또는 IFN-α의 공-투여에서 프라임 후 (제-8일) 및 부스트 후 (제-3일) 마우스에서 E7 사량체 염색에 의해 측정하였다 (도 10b). E7-특이적 T 세포의 가장 높은 상대 비율은 SQZ E7 + CpG 공-투여 및 SQZ (E7+CpG) + IFN-α 공-투여 군에서 관찰되었다. 프라임-후 E7-특이적 CD8+ T 세포의 상대 수는 놀랍게도 SQZ E7 + CpG 공-투여에 비해 SQZ (E7+CpG) + CpG 공-투여에서 더 낮았으며 (*P<0.05), 한편 IFN-α와 SQZ (E7+CpG) T 세포와의 공-투여는 CpG와 SQZ (E7+CpG) T 세포와의 공-투여보다 유의하게 더 많은 수의 E7-특이적 T 세포를 유도하였다 (*P<0.05). 부스트 후 (제-3일), SQZ E7 + CpG 공-투여 및 SQZ (E7+CpG) + IFN-α 공-투여 군이 가장 높은 % E7-특이적 T 세포를 유도하는 유사한 경향이 관찰되었다. 그러나, 가장 높은 반응은 SQZ (E7+CpG) + IFN-α 공-투여 군에서 나왔고, SQZ E7 + IFN-α 공-투여 및 SQZ (E7+CpG) + CpG 공-투여보다 유의하게 더 높았으며, 이는 IFN-α 공-투여가 SQZ (E7+CpG) T 세포와 조합되어 사용되는 경우에 보다 높은 백분율의 항원-특이적 T 세포를 유도한다는 것을 나타낸다. 도 10c에 약술된 비처리군 (T 세포의 입양 전달 부재)과 처리군 B-F로부터의 마우스 사이에서 식 ((길이 x 폭2)/2)에 의해 측정된 종양 성장을 비교하였다. SQZ (E7+CpG) + IFN-α 공-투여 군의 높은 종양 성장 감소 및 생존 이점은 사량체 염색에 잘 상응하며, 이는 E7-특이적 T 세포의 가장 높은 유도가 최상의 항종양 활성을 유도한다는 것을 나타낸다. 흥미롭게도, SQZ (E7+CpG) 군에서 E7-특이적 T 세포의 낮은 %에도 불구하고, 이러한 처리는 또한 매우 높은 수준의 항종양 활성을 제공하였으며, 이는 모든 마우스의 생존을 60일 이후로 연장시킨 유일한 다른 군 (SQZ (E7+CpG) + IFN-α 공-투여 군 이외에)이었다. 이전에 언급된 군 D 및 F보다 약간 더 낮았지만, 군 C 및 E에서 구별가능한 생존 연장 및 종양 성장 억제가 있었다. 제78일에, 군 D로부터의 7마리 무종양 마우스에게 50k 세포를 반대편 (좌측) 측복부에 리챌린지하고, 연령-매칭 비처리 동물 (10마리 마우스)과 비교하였다 (도 10d). 군 D로부터의 마우스는 제1 챌린지를 받은 비처리 마우스와 비교하여 리챌린지 후 종양 성장의 유의한 감소를 나타냈으며 (***P<0.005), 이는 이러한 항종양 효과가 2개월 이후에도 지속적이라는 지지를 제공한다.
실시예 11
T APC 항종양 기능에 대한 다중 HPV 항원의 조합의 효과를 결정하기 위해, E6 및 E7 합성 긴 펩티드 (SLP)를 단독으로 및 본 발명자들의 E7-특이적 T APC와 조합하여 예방적 TC-1 뮤린 종양 모델에서 사용하였다. E7-특이적 T 세포 반응을 사량체 염색 및 유동 세포측정법에 의해 측정하였으며, 또한 항종양 효과를 종양 성장 예방에 의해 측정하였다.
제-14일 (프라임) 및 제-8일 (부스트)에, C57BL/6J 암컷 공여자 마우스로부터의 T 세포를 단리하고, SQZ를 사용하여 사전-복합체화된 20 μM 마우스 혈청 알부민 (MSA) + 20 μM E6 (VYSKQQLLRREVYDFAFRDLSIVYRDGNPYAVSDK; 서열식별번호: 21) 및/또는 E7 SLP (GQAEPDRAHYNIVTFSSKSDSTLRLSVQSTHVDIR; 서열식별번호: 25) 또는 이들 둘의 조합 +/- 200 μg/mL CpG ODN 1826을 표 XX에 따라 로딩하였다. SQZ의 부재 하에 군 B와 동일한 조건으로 인큐베이션한 T 세포를 음성 대조군 (군 C)으로서 사용하였다. C57BL/6J 암컷 수용자 마우스 (5-10마리 마우스/군)에게 100 μL의 로딩된 T 세포 (5M 세포/동물)를 정맥내 주사하였다. 제-3일에, 100 μL의 뮤린 혈액을 수집하고, E7-특이적 CD8+ T 세포의 %를 사량체 염색 및 유동 세포측정법에 의해 정량화하였다. 제0일에, 수용자 마우스에게 TC1 종양 세포 (100k 세포/마우스)를 우측 후방 측복부에 주사하고, TC-1 종양 성장을 제11일에 시작하여 1주에 2회 측정하고, 비처리 마우스에서의 종양 성장과 비교하였다. 처리군 및 스케줄의 대표적인 개략도가 도 11a에 약술되어 있다.
E7-특이적 T 세포의 백분율을 부스트 후 (제-3일) 마우스에서 E7 사량체 염색에 의해 측정하였으며, 도 11b에 제시된 바와 같이 CpG+E7 SQZ T APC (군 B)에서 가장 큰 효과가 관찰되었다. 흥미롭게도, 군 B 반응은 비처리 및 E7과 E6의 조합 (군 F - #P<0.0001)보다 유의하게 더 높았으며, 이는 E6 SLP의 첨가가 E7-특이적 반응을 둔화시킨다는 증거를 제공한다. 군 B는 엔도 대조군 (군 C)의 주목할만한 예외를 제외하고는 다른 처리군과 유의하게 상이하였으며, 여기서 군 B는 현저하게 더 높았고 통계적 유의성쪽으로의 경향을 보였다. 도 11c에 제시된 바와 같이, 도 11a에 약술된 비처리군 (T 세포의 입양 전달 부재)과 처리군 B-G로부터의 마우스 사이에서 식 ((길이 x 폭2)/2)에 의해 측정된 종양 성장을 비교하였다. E7+CpG가 SQZ된 T 세포의 군, 뿐만 아니라 SQZ의 부재 하에 E7+CpG의 존재 하에 인큐베이션된 T 세포에서 높은 종양 성장 방지가 일어났다. 군 D-F는 비처리 (군 A) 및 E6+CpG SQZ된 T 세포 (군 G)에 비해 어느 정도 수준의 종양 성장 억제를 나타냈지만, 모두 군 B 및 C보다는 덜 효과적이었다.
실시예 12
E7-특이적 T APC 항종양 효과에 대한 CpG 아주반트의 투여 경로의 중요성을 결정하기 위해, E7 SLP를 T 세포에 전달되거나 수용자 동물에게 전신 공-투여된 CpG와 조합하여 T 세포에 전달하고, 항종양 효과를 종양 성장 억제에 의해 측정하였다.
제0일에, 수용자 마우스에게 TC1 종양 세포 (50k 세포/마우스)를 우측 후방 측복부에 주사하였다. 제10일 (프라임) 및 제20일 (부스트)에, C57BL/6J 암컷 공여자 마우스로부터의 T 세포를 단리하고, SQZ를 사용하여 사전-복합체화된 20 μM 마우스 혈청 알부민 (MSA) + 20 μM E7 (GQAEPDRAHYNIVTFSSKSDSTLRLSVQSTHVDIR; 서열식별번호: 25)을 로딩하고, ODN 1826을 SQZ에 의해 200 μg/mL로 공동-전달하거나 (군 D) 또는 동물에게 전신으로 25 μg/마우스로 공-투여하고 (군 C), 비처리 (군 A) 및 CpG 단독의 전신 투여 (군 B)와 비교하였다. 수용자 마우스 (8-10마리 마우스/군)를 100 μL의 로딩된 T 세포 (5M 세포/동물)로 처리하였다. TC-1 종양 성장을 제10일에 시작하여 1주에 2회 측정하였다. 처리군 및 스케줄의 대표적인 개략도가 도 12a에 약술되어 있다.
HPV-연관 암 (TC-1)의 치료 모델에서, E7 SLP가 SQZ된 T APC는 비처리 및 CpG 주사 단독에 비해 종양 부담의 유의한 감소를 유도하였다 (제17일: 군 C - P<0.05; 제20일: 군 C & D - P<0.0001) (도 12b). 이들 데이터는 치료 세팅에서 CpG 아주반트의 전신 공-투여 및 세포내 전달 둘 다가 비처리 또는 아주반트 단독에 비해 종양 부담의 유의한 감소를 유도한다는 것을 나타낸다.
실시예 13
E7-특이적 T 세포 종양 침윤을 유발하는 공-투여된 아주반트의 능력을 평가하기 위해, 치료적 TC-1 뮤린 종양 모델에서 본 발명자들의 E7-특이적 T APC와 조합하여 CpG 대 IFN-α를 비교하였다. 항원-특이적 T 세포 반응을 종양 침윤 림프구에서 사량체 염색 및 유동 세포측정법에 의해 측정하였다.
제0일에, 수용자 마우스에게 TC1 종양 세포 (50k 세포/마우스)를 우측 후방 측복부에 주사하였다. 제10일에, C57BL/6J 암컷 공여자 마우스로부터의 T 세포를 단리하고, SQZ를 사용하여 사전-복합체화된 20 μM E7 SLP (GQAEPDRAHYNIVTFSSKSDSTLRLSVQSTHVDIR; 서열식별번호: 25) + 20 μM 마우스 혈청 알부민 (MSA)을 로딩하였다. SQZ-로딩된 T 세포 (5M 세포/동물)를 단독으로 (군 C), CpG ODN 1826과 함께 (25 μg/마우스 - 군 D) 또는 IFN-α와 함께 (10k IU/마우스 - 군 E) 투여하고, 100 μL 총 부피로 정맥내 주사하였다. 마우스에게 또한 전신 CpG (25 μg - 군 A) 또는 IFN-α 단독 (10k IU - 군 B)을 주사하였다. 제17일에, 종양을 수거하고, CD8+ 종양 침윤 T 세포를 단리하고, E7-특이적 반응성을 사량체 염색에 의해 평가하였다. 처리군 및 스케줄의 대표적인 개략도가 도 13에 약술되어 있다.
E7-특이적 CD8+ T 세포의 백분율을 프라임 7일 후 (제17일)에 마우스에서 E7 사량체 염색에 의해 측정하였으며, CD8+ 세포 중 E7-특이적 T 세포의 백분율의 대표적인 예가 도 13의 하부 패널에 제시되어 있다. 아주반트 단독의 주사는 주목할만한 양의 E7-특이적 T 세포를 생성하지 않았지만, E7 SLP의 SQZ 전달은 E7-특이적 T 세포에서 40% 증가를 제공하였고, CpG 및 IFN-α와 조합되어 E7 전달된 T 세포는 훨씬 더 높은 백분율의 항원-특이적 T 세포 (각각 70 및 80%)를 유도하였다. 이 데이터는 E7 SLP-로딩된 T 세포가 전신 아주반트, 예컨대 CpG 또는 IFN-α와 조합되어 투여되는 경우에 보다 강건한 E7-특이적 T 세포 반응이 생성된다는 것을 나타낸다.
실시예 14
E7 합성 긴 펩티드 (SLP) + CpG가 로딩된 T APC의 프라임 및 부스트 둘 다에 대한 백신접종 스케줄을 결정하기 위해, 본 발명자들은 상이한 시점에 차등 횟수의 부스트로 본 발명자들의 T APC 백신으로 처리한 치료적 TC-1 뮤린 종양 모델을 사용하였다. 항종양 효과를 종양 성장 억제에 의해 측정하였다.
제0일에, 수용자 마우스에게 TC1 종양 세포 (50k 세포/마우스)를 우측 후방 측복부에 주사하고, TC-1 종양 성장을 제11일에 시작하여 1주에 2회 측정하고, 비처리 마우스에서의 종양 성장과 비교하였다. 제3일 또는 제6일에, C57BL/6J 암컷 공여자 마우스로부터의 T 세포를 단리하고, SQZ를 사용하여 사전-복합체화된 20 μM 마우스 혈청 알부민 (MSA) + 20 μM E7 SLP (GQAEPDRAHYNIVTFSSKSDSTLRLSVQSTHVDIR; 서열식별번호: 25) + 200 μg/mL CpG ODN 1826을 표 XX에 따라 로딩하고, 이어서 수용자 마우스에게 100 μL의 로딩된 T 세포 (5M 세포/동물)를 정맥내 주사하였다. 처리군 및 스케줄의 대표적인 개략도가 도 14a에 약술되어 있다.
종양 성장 억제는 E7+CpG가 SQZ된 T 세포의 모든 군에서 발생하였으며, 비처리 대비 통계적 유의성은 제20일에 발생하였다 (제20일 - 모든 군 P<0.05; 제24일 - 모든 군 P<0.0001). 이 데이터는 T APC 백신을 사용한 투여 스케줄이 제6일 대 제3일에서 프라이밍시 동일하게 잘 작용할 수 있다는 것 및 제21일에 제2 부스트를 추가하는 것에 뚜렷한 이익이 없었다는 것을 나타낸다.
실시예 15
SQZ에 의한 세포내 항원 전달을 갖는 T 세포에 의한 항원 제시의 메카니즘을 보다 잘 이해하기 위해, Ova를 야생형 마우스 또는 MHC-I 녹아웃 마우스 내로 주사된 야생형 T 세포에 전달하거나 또는 이러한 T 세포와 함께 SQZ의 부재 하에 인큐베이션하였다. 비장을 수거하고, Ova-특이적 T 세포 (OT-I) 증식의 양을 CFSE 염색에 의해 정량화하였다.
제0일에, OT-I 암컷 공여자 마우스로부터의 T 세포를 단리하고, 2 μM CFSE로 표지하고, 2.5M 세포를 100 μL PBS 중에 넣어 야생형 또는 MHC-I 녹아웃 마우스 내로 안와후 (RO) 주사하였다. 또한 제0일에, 400 μg/mL Ova를 CD45.1 공여자 마우스 (4마리 마우스/군)로부터 단리된 T 세포 내로 로딩하거나 또는 이와 함께 인큐베이션하고, 5M T 세포를 RO 주사하였다. 제3일에, 비장을 수거하고, Ova-특이적 T 세포 증식의 수준을 CFSE 염색에 의해 평가하였다.
Ova-특이적 T 세포 증식의 양을 Ova-반응성 OT-I CD8+ T 세포의 CFSE 표지에 의해 평가하였다. 항원-로딩된 TAPC의 제시 메카니즘을 결정하기 위해, MHC-I가 결핍된 마우스를 수용자 마우스로서 사용하였다. 이는 SQZ된 T 세포 사멸에 의한 항원의 간접 흡수로 인한 내인성 뮤린 APC에 의한 Ova 항원의 제시 및 입양 전달된 OT-I 세포에 대한 MHC-I 상의 교차-제시를 불가능하게 할 것이다. 수용자 마우스가 MHC-I이 결여된 경우에, Ova-특이적 OT-I 세포 증식은 여전히 발생한 것으로 발견되었으며, 이는 SQZ된 T APC가 항원을 직접 제시한다는 증거를 제공한다 (도 15). 이들 데이터는 SQZ-매개 세포내 전달된 항원의 직접 제시를 지지한다.
실시예 16
시토카인 생산을 변경하는 SQZ의 성향을 평가하기 위해, T 세포에 CpG를 SQZ 전달하고, 시험관내 뮤린 모델에서 T 세포 시토카인 수준을 변경하는 능력에 대해 평가하였다. 멀티플렉스 시토카인 키트를 사용하여 상청액 중 시토카인 수준을 프로파일링하였다.
C57BL/6J 암컷 수용자 마우스를 C57BL/6J 암컷 공여자 마우스로부터 단리된 T 세포로 프라이밍하고, 200 μg/mL CpG를 SQZ하고, 24시간 후에 상청액을 수집하였다 (N=2). 상청액을 밀리포어(Millipore) 밀리플렉스 멀티플렉스 시토카인 키트에 의해 시토카인 수준에 대해 평가하고, 비처리 T 세포 대비 배수-변화 차이로서 표현하였다.
비처리 세포와 비교하여 SQZ를 통해 CpG가 로딩된 T 세포의 상청액에서 시토카인 수준 사이에 유의한 변화는 없었다 (도 16). 이 데이터는 아주반트의 SQZ 전달이 시험관내에서 T 세포 시토카인 수준을 유의하게 변경시키지 않는다는 것을 나타낸다.
실시예 17
시토카인 생산을 변경하는 SQZ의 성향을 평가하기 위해, Ova 또는 Ova+CpG가 SQZ 전달된 T 세포를 생체내 뮤린 모델에서 혈청 시토카인 수준을 변경하는 능력에 대해 평가하였다. 멀티플렉스 시토카인 키트를 사용하여 혈청 시토카인을 프로파일링하였다.
C57BL/6J 암컷 수용자 마우스를 C57BL/6J 암컷 공여자 마우스로부터 단리된 T 세포로 프라이밍하고, 400 μg/mL Ova 또는 Ova + 200 μg/mL CpG로 SQZ하고, 프라이밍 후 6시간에 꼬리 정맥으로부터 및 24시간에 심장 천자를 통해 혈액을 채혈하였다. 혈청을 밀리포어 밀리플렉스 멀티플렉스 시토카인 키트에 의해 시토카인 수준에 대해 평가하고, 비처리 T 세포 대비 배수 변화로서 표현하였다.
SQZ를 통해 Ova 또는 Ova+CpG가 로딩된 T 세포로 프라이밍된 마우스의 혈청에서 시토카인 수준 사이에 유의한 변화는 없었다 (도 17). 추가적으로, 프라이밍 후 6시간과 24시간 사이에 유의한 차이는 관찰되지 않았다. 이들 데이터는 항원 +/- 아주반트의 SQZ 전달이 생체내에서 혈청 시토카인 수준을 유의하게 변경시키지 않는다는 것을 나타낸다.
실시예 18
본 실시예는, 부분적으로, T 세포 (T-APC) 내로 도입된 항원이 신속하게 프로세싱되고 직접적으로 제시된다는 것을 입증한다.
항원-제시 세포 (T-APC)로서의 T 세포의 항원-제시의 동역학을 결정하기 위해, 항원을 SQZ에 의해 T 세포로 전달하고, MHC-I에 결합된 최소 펩티드의 존재를 면역염색 및 유동 세포측정법에 의해 시간 경과에 따라 평가하였다.
구체적으로, C56BL/6J 마우스로부터의 뮤린 T 세포를 단리하고, SQZ-처리를 페이로드 없이 수행하거나 (SQZ: 항원 부재) 또는 SQZ에 의해 로딩된 200 μg/mL Ova 단백질로 수행하였다 (SQZ: 오브알부민 - N=3 기술적 반복). 2시간 내지 24시간의 다양한 시점에서, 처리된 T 세포를 Ova 최소 에피토프 (SIINFEKL; 서열식별번호: 52)를 특이적으로 인식하는 항체 (25-D1.16)로 염색하고, 이어서 유동 세포측정법을 수행하였다. OVA 단백질로부터 프로세싱되고 MHC-I 상에 제시된 임의의 최소 에피토프는 면역염색에 의해 검출될 것이고, 항원 제시의 양은 유동 세포측정법에 의해 결정하였다.
MHC-I 상에 다양한 수준의 SIINFEKL (서열식별번호: 52)을 제시하는 세포의 상대 집단을 0, 2, 4 및 24시간에서 오버레이된 히스토그램에 의해 도시하였다 (암회색은 SQZ: 항원 부재를 나타내고; 담회색은 SQZ: 오브알부민을 나타냄) (도 18a). SQZ: 오브알부민을 나타내는 히스토그램에서의 우측 이동은 SQZ: 항원 부재 대조군과 비교하여 증가된 SIINFEKL (서열식별번호: 52) 염색을 갖는 집단 및 그 결과 MHC-I 상에 프로세싱된 항원을 제시하는 세포 집단의 증가를 나타냈다. 기재된 항원-로딩된 T-APC에서의 이동은 2시간에 명백하였으며, 24시간 후에만 항원-제시의 작은 감소가 관찰되었다. 시간 경과에 따른 세포당 MHC-I 상의 SIINFEKL (서열식별번호: 52) 제시의 상대량을 세포의 평균 형광 강도 (MFI)에 의해 측정하였다 (도 18b). SQZ: 오브알부민 집단은 2시간 후에 SIINFEKL (서열식별번호: 52)의 주목할만한 제시를 나타냈으며, 4시간에 최대 제시가 관찰되었고, 이어서 4 내지 24시간에 시간 경과에 따른 약간의 감소가 관찰되었다. 측정된 시간 경과에 걸쳐, SQZ: 항원 부재 대조군의 경우 항원 제시에 있어 차이가 관찰되지 않았다. 종합하면, 이 데이터는 T 세포 내로의 항원의 SQZ-매개 로딩이 항원의 신속한 제시 (2-4시간)를 유도하였다는 것을 지지한다.
실시예 19
본 실시예는, 부분적으로, 질환-관련 항원 (T-APC)이 SQZ-로딩된 T 세포가 시험관내 항원-특이적 T 세포 반응을 효율적으로 자극한다는 것을 입증한다.
질환-관련 항원 (T-APC)이 SQZ-로딩된 인간 T 세포가 항원-특이적 T 세포 반응을 자극하는 능력을 결정하기 위해, T 세포에 CMV-연관 항원을 SQZ-로딩하고, 항원-특이적 반응자 T 세포와 공동-배양하고, 염증성 시토카인 분비의 수준을 ELISA에 의해 측정하였다.
구체적으로, HLA-A2+ 공여자로부터의 인간 T 세포를 단리하고, CMV pp65 SLP (50 μM)를 T 세포와 함께 인큐베이션하거나 (엔도) 또는 SQZ에 의해 T 세포로 전달하였다 (SQZ). 이어서 엔도 T 세포 또는 SQZ T 세포 (60k 세포/웰)를 pp65 반응자 T 세포 (30k 세포/웰)와 함께 2:1 비로 인큐베이션하고, IL-2 (100 U/mL) 및 CpG 2006 (1 μM)의 존재 하에 24시간 동안 공동-배양하였다. 이어서 상청액을 수거하고, 시험관내 항원-특이적 면역 자극의 양을 나타내는 IFN-γ 분비의 수준에 대해 ELISA에 의해 분석하였다.
pp65 SLP와 함께 인큐베이션된 T 세포 (엔도)와 비교하였을 때, IFN-γ ELISA에 의해 측정시, SQZ-로딩된 T 세포에 의한 pp65-특이적 반응자의 자극에 있어서 상당한 통계적으로 유의한 증가가 있었다 (P<0.005). 이들 데이터는, SQZ-로딩된 질환-관련 항원에 의해, 인간 T 세포를 시험관내 질환-관련 항원-특이적 T 세포 반응을 자극하는데 효율적인 APC가 되도록 변형시킬 수 있다는 것을 나타낸다.
실시예 20
항원-특이적 종양 침윤 림프구 (TIL)를 유도하는 SQZ-로딩된 백신의 능력에 대한 아주반트의 중요성을 평가하기 위해, 세포에 모델 항원을 로딩하고, 아주반트로 성숙시키고, 종양 보유 마우스 내로 주사하였다. 종양으로 동원된 항원-특이적 T 세포의 상대 백분율을 유동 세포측정법에 의해 측정하였다.
C57BL/6J 암컷 마우스에게 제0일에 TC1 종양 세포 (50k 세포/마우스)를 우측 후방 측복부에 주사하였다. 제15일 (프라임)에, 뮤린 T 세포를 암컷 C57BL/6J 공여자 마우스의 비장으로부터 수득하고, SQZ (40 psi, 3.5 μm 압박부, 실온)를 통해 사전-복합체화된 5 μM E7 SLP (GQAEPDRAHYNIVTFSSKSDSTLRLSVQSTHVDIR; 서열식별번호: 25) + 5 μM 마우스 혈청 알부민 (MSA)을 로딩하고, 37℃에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 암컷 C57BL/6J 수용자 마우스 (10/군)에게 제15일에 100 μL의 비히클 (PBS - 비처리) 또는 E7-로딩된 T 세포 (1M 세포/마우스) +/- CpG 1826 (25 μg/마우스)을 안와후 주사하였다. 제25일에, 종양을 수거하고, E7-특이적 TIL의 양을 유동 세포측정법에 의해 측정하였다.
SQZ-로딩된 T APC 단독은 E7-특이적 TIL의 수의 소량 (~15%)이나 통계적으로 유의하지 않은 증가를 유도하였지만, CpG와 공동-주사된 경우에는, TIL의 수의 더 높고 유의한 증가가 있었다 (~55%, T APC 단독과 비교하여 **P<0.01; 비처리와 비교하여 ***P<0.0005). 이 데이터는 E7-로딩된 T APC와 함께 CpG를 공동-주사하는 것이 T APC 단독과 비교하여 TIL의 훨씬 더 높은 동원을 유도한다는 것을 나타낸다.
실시예 21
예방적 세팅에서 T APC + 아주반트 백신의 지속성을 평가하기 위해, HPV E7-발현 TC1 종양 모델의 종양 성장에 대하여 초기 반응뿐만 아니라 60일 이후 리챌린지 둘 다에 대해 T APC-처리된 마우스를 비처리 마우스와 비교하였으며, 종양의 면적을 시간에 대해 플롯팅하였다.
제-14일에, 비장세포를 C57BL/6J 암컷 공여자 마우스로부터 수거하고, T 세포를 면역자기 분리에 의해 단리하였다. 이어서, 뮤린 T 세포에 SQZ (45 psi; 3.5 μm 압박부)를 통해 사전-복합체화된 20 μM E7 SLP (GQAEPDRAHYNIVTFSSKSDSTLRLSVQSTHVDIR; 서열식별번호: 25) + 20 μM 마우스 혈청 알부민 (MSA)을 로딩하고, 37℃에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 암컷 C57BL/6J 수용자 마우스 (10마리 마우스/군, 예외로 비처리 코호트 I은 20마리 마우스/군)에게 100 μL의 비히클 (PBS - 비처리) 또는 E7-로딩된 T 세포 (1M 세포/마우스) + CpG 1826 (25 μg/마우스) [프라임]을 안와후 주사하였다. 제-7일에, 비장을 C57BL/6J 암컷 공여자 마우스로부터 수거하고, T 세포를 단리하고, SQZ하고, 수용자 마우스 내로 정확히 제-14일에 주사하였다 [부스트]. 제0일에, C57BL/6J 암컷 마우스에게 TC1 종양 세포 (50k 세포/마우스)를 제64일까지 우측 후방 측복부에 주사하였다 (예외로 10마리의 비처리 코호트 2에는 종양 세포를 이식하지 않음). TC-1 종양 성장을 종양 이식 후 1주에 시작하여 1주에 2회 측정하고, 최대 120일 동안 비처리 마우스에서의 종양 성장과 비교하였다.
식 ((길이 x 폭2)/2)에 의해 측정된 종양 성장을 비처리군으로부터의 마우스와 제0일에 종양 세포를 챌린지한 T APC-처리군으로부터의 마우스 사이에서 비교하였고, 비처리군에서는 모든 마우스가 제47일까지 인간 종점에 도달한 반면, T APC 군에서는 2마리의 T APC 마우스를 제외한 모든 마우스에서 유의한 종양 성장 지연이 있었으며, 나머지 마우스 (8마리)는 종양을 리챌린지할 때까지 무종양으로 남아있었다. 흥미롭게도, 제64일에 종양이 이식된 비처리된 마우스와 그의 반대편 측복부에 종양이 재이식된 T APC-처리된 마우스를 비교하였을 때, 종양 성장 지연이 여전히 있었으며, 3마리의 마우스는 2차 종양 챌린지 후에도 측정가능한 종양이 성장하지 않았다. 이들 데이터는 E7-로딩된 T APC + 아주반트로의 처리가 항원-특이적 종양 성장 억제, 뿐만 아니라 2차 종양 챌린지에도 불구하고 심지어 >100일에 걸쳐 지속적일 수 있는 종양 방지를 유도할 수 있다는 것을 시사한다.
실시예 22
치료 백신 세팅에서 상이한 T APC 농도뿐만 아니라 프라임-부스팅 스케줄의 영향을 평가하기 위해, T APC-처리된 마우스 (다중 농도 및 프라임-부스트 스케줄)를 비처리 마우스와 HPV E7-발현 TC1 종양 모델의 종양 성장에 대해 비교하였으며, 종양의 면적을 시간에 대해 플롯팅하였다.
제0일에, C57BL/6J 암컷 마우스에게 TC1 종양 세포 (50k 세포/마우스)를 우측 후방 측복부에 주사하였다. 제10일 (프라임)에, 뮤린 T 세포를 암컷 C57BL/6J 공여자 마우스의 비장으로부터 면역자기 분리에 의해 수득하고, SQZ (45 psi, 3.5 μm 압박부)를 통해 사전-복합체화된 20 μM E7 SLP (GQAEPDRAHYNIVTFSSKSDSTLRLSVQSTHVDIR; 서열식별번호: 25) + 20 μM 마우스 혈청 알부민 (MSA)을 로딩하고, 37℃에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 이어서, 암컷 C57BL/6J 수용자 마우스 (10/군)에게 100 μL의 비히클 (PBS) 또는 T APC (0.25 또는 1M 세포/마우스) + CpG 1826 (25 μg/마우스)을 안와후 주사하였다. 제17일에, 프라임/부스트 군에게 제10일과 동일한 방식으로 T APC를 제2주사하였다. TC-1 종양 성장을 종양 이식 후 1주에 시작하여 1주에 2회 측정하고, 최대 66일 동안 비처리 마우스에서의 종양 성장과 비교하였다.
식 ((길이 x 폭2)/2) 및 저용량 T APC 군 (0.25M 세포/마우스) + CpG (프라임 단독)에 의해 측정된 종양 성장은 비처리와 비교하여 단지 약간의 종양 성장 속도 지연을 유도하였다. 저용량의 T APC + CpG (0.25M 프라임/부스트)를 사용한 제17일 부스트의 포함은 동일한 농도 프라임 단독 조건에 비해 종양 성장 억제의 증진을 보이고 비처리에 비해 훨씬 더 큰 억제를 보였다. 항원-로딩된 T APC의 용량을 1M/마우스 (프라임 단독)로 증가시키는 것은 보다 낮은 용량 T APC + CpG (프라임 단독)에 비해 약간의 종양 성장 억제를 유도하였다. 흥미롭게도, 고용량 T APC + CpG (프라임 단독)의 사용은 종양 성장으로부터 최상의 보호를 유도하였으며, 종양 퇴행은 제20일-제40일 사이에 임의의 관찰된 군의 성장 억제의 가장 높은 수준으로 발생하였다. 종합하면, 이들 데이터는 증가된 세포 용량, 아주반트의 포함, 또는 프라임 + 부스트 투여 스케줄이 T APC 백신의 효능을 증진시킬 수 있다는 것을 강조한다.
서열 목록
SEQUENCE LISTING
<110> SQZ Biotechnologies Company
<120> INTRACELLULAR DELIVERY OF BIOMOLECULES
TO MODIFY IMMUNE RESPONSE
<130> 75032-20015.40
<160> 52
<170> FastSEQ for Windows Version 4.0
<210> 1
<211> 10
<212> PRT
<213> Unknown
<220>
<223> Human papilloma virus
<400> 1
Thr Ile His Asp Ile Ile Leu Glu Cys Val
1 5 10
<210> 2
<211> 10
<212> PRT
<213> Unknown
<220>
<223> Human papilloma virus
<400> 2
Glu Val Tyr Asp Phe Ala Phe Arg Asp Leu
1 5 10
<210> 3
<211> 10
<212> PRT
<213> Unknown
<220>
<223> Human papilloma virus
<400> 3
Tyr Met Leu Asp Leu Gln Pro Glu Thr Thr
1 5 10
<210> 4
<211> 9
<212> PRT
<213> Unknown
<220>
<223> Human papilloma virus
<400> 4
Arg Ala His Tyr Asn Ile Val Thr Phe
1 5
<210> 5
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 5
Leu Pro Gln Leu Ser Thr Glu Leu Gln Thr
1 5 10
<210> 6
<211> 8
<212> PRT
<213> Unknown
<220>
<223> Human papilloma virus
<400> 6
Gln Leu Cys Thr Glu Leu Gln Thr
1 5
<210> 7
<211> 7
<212> PRT
<213> Unknown
<220>
<223> Human papilloma virus
<400> 7
Lys Gln Gln Leu Leu Arg Arg
1 5
<210> 8
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 8
Val Tyr Ser Lys Gln Gln Leu Leu Arg Arg
1 5 10
<210> 9
<211> 10
<212> PRT
<213> Unknown
<220>
<223> Human papilloma virus
<400> 9
Met His Gly Asp Thr Pro Thr Leu His Glu
1 5 10
<210> 10
<211> 6
<212> PRT
<213> Unknown
<220>
<223> Human papilloma virus
<400> 10
Gly Gln Ala Glu Pro Asp
1 5
<210> 11
<211> 16
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 11
Tyr Ser Lys Gln Gln Leu Leu Arg Arg Glu Val Tyr Asp Phe Ala Phe
1 5 10 15
<210> 12
<211> 7
<212> PRT
<213> Unknown
<220>
<223> Human papilloma virus
<400> 12
Tyr Cys Lys Gln Gln Leu Leu
1 5
<210> 13
<211> 8
<212> PRT
<213> Unknown
<220>
<223> Human papilloma virus
<400> 13
Cys Ile Val Tyr Arg Asp Gly Asn
1 5
<210> 14
<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 14
Ser Ile Val Tyr Arg Asp Gly Asn Pro Tyr Ala Val Ser Asp Lys
1 5 10 15
<210> 15
<211> 15
<212> PRT
<213> Unknown
<220>
<223> Human papilloma virus
<400> 15
Asp Leu Tyr Cys Tyr Glu Gln Leu Asn Asp Ser Ser Glu Glu Glu
1 5 10 15
<210> 16
<211> 20
<212> PRT
<213> Unknown
<220>
<223> Human papilloma virus
<400> 16
Cys Cys Lys Cys Asp Ser Thr Leu Arg Leu Cys Val Gln Ser Thr His
1 5 10 15
Val Asp Ile Arg
20
<210> 17
<211> 20
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 17
Ser Ser Lys Ser Asp Ser Thr Leu Arg Leu Ser Val Gln Ser Thr His
1 5 10 15
Val Asp Ile Arg
20
<210> 18
<211> 36
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 18
Leu Pro Gln Leu Ser Thr Glu Leu Gln Thr Thr Ile His Asp Ile Ile
1 5 10 15
Leu Glu Cys Val Tyr Ser Lys Gln Gln Leu Leu Arg Arg Glu Val Tyr
20 25 30
Asp Phe Ala Phe
35
<210> 19
<211> 25
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 19
Gln Leu Cys Thr Glu Leu Gln Thr Thr Ile His Asp Ile Ile Leu Glu
1 5 10 15
Cys Val Tyr Cys Lys Gln Gln Leu Leu
20 25
<210> 20
<211> 25
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 20
Lys Gln Gln Leu Leu Arg Arg Glu Val Tyr Asp Phe Ala Phe Arg Asp
1 5 10 15
Leu Cys Ile Val Tyr Arg Asp Gly Asn
20 25
<210> 21
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 21
Val Tyr Ser Lys Gln Gln Leu Leu Arg Arg Glu Val Tyr Asp Phe Ala
1 5 10 15
Phe Arg Asp Leu Ser Ile Val Tyr Arg Asp Gly Asn Pro Tyr Ala Val
20 25 30
Ser Asp Lys
35
<210> 22
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 22
Met His Gly Asp Thr Pro Thr Leu His Glu Tyr Met Leu Asp Leu Gln
1 5 10 15
Pro Glu Thr Thr Asp Leu Tyr Cys Tyr Glu Gln Leu Asn Asp Ser Ser
20 25 30
Glu Glu Glu
35
<210> 23
<211> 25
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 23
Gln Leu Cys Thr Glu Leu Gln Thr Tyr Met Leu Asp Leu Gln Pro Glu
1 5 10 15
Thr Thr Tyr Cys Lys Gln Gln Leu Leu
20 25
<210> 24
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 24
Gly Gln Ala Glu Pro Asp Arg Ala His Tyr Asn Ile Val Thr Phe Cys
1 5 10 15
Cys Lys Cys Asp Ser Thr Leu Arg Leu Cys Val Gln Ser Thr His Val
20 25 30
Asp Ile Arg
35
<210> 25
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 25
Gly Gln Ala Glu Pro Asp Arg Ala His Tyr Asn Ile Val Thr Phe Ser
1 5 10 15
Ser Lys Ser Asp Ser Thr Leu Arg Leu Ser Val Gln Ser Thr His Val
20 25 30
Asp Ile Arg
35
<210> 26
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 26
ggggtcaacg ttgagggggg 20
<210> 27
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 27
gggggacgat cgtcgggggg 20
<210> 28
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 28
ggggacgacg tcgtgggggg g 21
<210> 29
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 29
tccatgacgt tcctgatgct 20
<210> 30
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 30
tccatgacgt tcctgacgtt 20
<210> 31
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 31
tcgtcgtttt gtcgttttgt cgtt 24
<210> 32
<211> 22
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 32
tcgtcgttgt cgttttgtcg tt 22
<210> 33
<211> 23
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 33
tcgacgttcg tcgttcgtcg ttc 23
<210> 34
<211> 26
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 34
tcgcgacgtt cgcccgacgt tcggta 26
<210> 35
<211> 22
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 35
tcgtcgtttt cggcgcgcgc cg 22
<210> 36
<211> 25
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 36
tcgtcgtcgt tcgaacgacg ttgat 25
<210> 37
<211> 29
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 37
tcgcgaacgt tcgccgcgtt cgaacgcgg 29
<210> 38
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 38
Met His Gly Asp Thr Pro Thr Leu His Glu Tyr Met Leu Asp Leu Gln
1 5 10 15
Pro Glu Thr Thr Asp Leu Tyr Cys Tyr Glu Gln Leu Asn Asp Ser Ser
20 25 30
Glu Glu Glu
35
<210> 39
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 39
Leu Tyr Cys Tyr Glu Gln Leu Asn Asp Ser Ser Glu Glu Glu Asp Glu
1 5 10 15
Ile Asp Gly Pro Ala Gly Gln Ala Glu Pro Asp Arg Ala His Tyr Asn
20 25 30
Ile Val Thr
35
<210> 40
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 40
Gly Gln Ala Glu Pro Asp Arg Ala His Tyr Asn Ile Val Thr Phe Cys
1 5 10 15
Cys Lys Cys Asp Ser Thr Leu Arg Leu Cys Val Gln Ser Thr His Val
20 25 30
Asp Ile Arg
35
<210> 41
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 41
Thr Leu Arg Leu Cys Val Gln Ser Thr His Val Asp Ile Arg Thr Leu
1 5 10 15
Glu Asp Leu Leu Met Gly Thr Leu Gly Ile Val Cys Pro Ile Cys Ser
20 25 30
Gln Lys Pro
35
<210> 42
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 42
Met His Gln Lys Arg Thr Ala Met Phe Gln Asp Pro Gln Glu Arg Pro
1 5 10 15
Arg Lys Leu Pro Gln Leu Cys Thr Glu Leu Gln Thr Thr Ile His Asp
20 25 30
<210> 43
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 43
Leu Pro Gln Leu Cys Thr Glu Leu Gln Thr Thr Ile His Asp Ile Ile
1 5 10 15
Leu Glu Cys Val Tyr Cys Lys Gln Gln Leu Leu Arg Arg Glu Val Tyr
20 25 30
<210> 44
<211> 25
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 44
Lys Gln Gln Leu Leu Arg Arg Glu Val Tyr Asp Phe Ala Phe Arg Asp
1 5 10 15
Leu Cys Ile Val Tyr Arg Asp Gly Asn
20 25
<210> 45
<211> 26
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 45
Arg Asp Leu Cys Ile Val Tyr Arg Asp Gly Asn Pro Tyr Ala Val Cys
1 5 10 15
Asp Lys Cys Leu Lys Phe Tyr Ser Lys Ile
20 25
<210> 46
<211> 25
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 46
Asp Lys Cys Leu Lys Phe Tyr Ser Lys Ile Ser Glu Tyr Arg His Tyr
1 5 10 15
Cys Tyr Ser Leu Tyr Gly Thr Thr Leu
20 25
<210> 47
<211> 25
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 47
His Tyr Cys Tyr Ser Leu Tyr Gly Thr Thr Leu Glu Gln Gln Tyr Asn
1 5 10 15
Lys Pro Leu Cys Asp Leu Leu Ile Arg
20 25
<210> 48
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 48
Tyr Gly Thr Thr Leu Glu Gln Gln Tyr Asn Lys Pro Leu Cys Asp Leu
1 5 10 15
Leu Ile Arg Cys Ile Asn Cys Gln Lys Pro Leu Cys Pro Glu Glu Lys
20 25 30
<210> 49
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 49
Arg Cys Ile Asn Cys Gln Lys Pro Leu Cys Pro Glu Glu Lys Gln Arg
1 5 10 15
His Leu Asp Lys Lys Gln Arg Phe His Asn Ile Arg Gly Arg Trp Thr
20 25 30
<210> 50
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 50
Asp Lys Lys Gln Arg Phe His Asn Ile Arg Gly Arg Trp Thr Gly Arg
1 5 10 15
Cys Met Ser Cys Cys Arg Ser Ser Arg Thr Arg Arg Glu Thr Gln Leu
20 25 30
<210> 51
<211> 24
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<220>
<221> VARIANT
<222> 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17
<223> Xaa = Any Amino Acid
<400> 51
Gln Leu Cys Thr Glu Leu Gln Thr Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
1 5 10 15
Xaa Tyr Cys Lys Gln Gln Leu Leu
20
<210> 52
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 52
Ser Ile Ile Asn Phe Glu Lys Leu
1 5
Claims (149)
- 항원 및 아주반트를 포함하는 변형된 T 세포이며, 여기서 항원은 변형된 T 세포에 대해 외인성이고 면역원성 에피토프를 포함하고, 여기서 아주반트는 세포내 존재하는 것인 변형된 T 세포.
- 서열식별번호: 18-25 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 항원을 포함하는 변형된 T 세포.
- 항원 및 아주반트를 포함하는 변형된 T 세포이며, 여기서 항원은 면역원성 에피토프를 포함하고,
a) 투입 T 세포를 포함하는 세포 현탁액을 세포-변형 압박부에 통과시키며, 여기서 압박부의 직경은 현탁액 중 투입 T 세포의 직경의 함수이고, 이에 의해 항원 및 아주반트가 통과하기에 충분히 큰 투입 T 세포의 교란을 유발하여 교란된 투입 T 세포를 형성하는 단계; 및
b) 교란된 투입 T 세포로 항원 및 아주반트가 들어가도록 하기에 충분한 시간 동안 교란된 투입 T 세포를 항원 및 아주반트와 함께 인큐베이션하고, 이에 의해 항원 및 아주반트를 포함하는 변형된 T 세포를 생성시키는 단계
를 포함하는 방법에 의해 제조되는 변형된 T 세포. - 제3항에 있어서, 교란된 투입 T 세포와 함께 인큐베이션된 항원의 농도가 약 0.1 μM 내지 약 1 mM이고/거나 교란된 투입 T 세포와 함께 인큐베이션된 아주반트의 농도가 약 0.1 μM 내지 약 1 mM인 변형된 T 세포.
- 제3항 또는 제4항에 있어서, 교란된 투입 T 세포와 함께 인큐베이션된 항원 대 아주반트의 비가 약 10000:1 내지 약 1:10000인 변형된 T 세포.
- 항원 및 아주반트를 포함하는 변형된 T 세포이며, 여기서 항원은 면역원성 에피토프를 포함하고,
a) 아주반트를 포함하는 투입 T 세포를 포함하는 세포 현탁액을 세포-변형 압박부에 통과시키며, 여기서 압박부의 직경은 현탁액 중 투입 T 세포의 직경의 함수이고, 이에 의해 항원이 통과하기에 충분히 큰 투입 T 세포의 교란을 유발하여 교란된 투입 T 세포를 형성하는 단계; 및
b) 교란된 투입 T 세포로 항원이 들어가도록 하기에 충분한 시간 동안 교란된 투입 T 세포를 항원과 함께 인큐베이션하고, 이에 의해 항원 및 아주반트를 포함하는 변형된 T 세포를 생성시키는 단계
를 포함하는 방법에 의해 제조되는 변형된 T 세포. - 제6항에 있어서, 교란된 투입 T 세포와 함께 인큐베이션된 항원의 농도가 약 0.1 μM 내지 약 1 mM인 변형된 T 세포.
- 항원 및 아주반트를 포함하는 변형된 T 세포이며, 여기서 항원은 면역원성 에피토프를 포함하고,
a) 항원을 포함하는 투입 T 세포를 포함하는 세포 현탁액을 세포-변형 압박부에 통과시키며, 여기서 압박부의 직경은 현탁액 중 투입 T 세포의 직경의 함수이고, 이에 의해 아주반트가 통과하기에 충분히 큰 투입 T 세포의 교란을 유발하여 교란된 투입 T 세포를 형성하는 단계; 및
b) 교란된 투입 T 세포로 아주반트가 들어가도록 하기에 충분한 시간 동안 교란된 투입 T 세포를 아주반트와 함께 인큐베이션하고, 이에 의해 항원 및 아주반트를 포함하는 변형된 T 세포를 생성시키는 단계
를 포함하는 방법에 의해 제조되는 변형된 T 세포. - 제8항에 있어서, 교란된 투입 T 세포와 함께 인큐베이션된 아주반트의 농도가 약 0.1 μM 내지 약 1 mM인 변형된 T 세포.
- 제3항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 투입 T 세포가 압박부를 통과할 때 투입 T 세포에 변형력이 가해져 투입 T 세포의 교란을 유발하는 것인 변형된 T 세포.
- 제3항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 방법이 추가의 인큐베이션 단계 없이 제조된 상응하는 변형된 T 세포와 비교하여 변형된 T 세포의 생존율 및/또는 기능을 증진시키는 작용제와 함께 투입 T 세포 및/또는 변형된 T 세포를 인큐베이션하는 단계를 추가로 포함하는 것인 변형된 T 세포.
- 제11항에 있어서, 작용제가 세포내이입을 증진시키는 화합물이거나 또는 안정화제 또는 보조-인자로서 작용하는 것인 변형된 T 세포.
- 제3항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 압박부의 직경이 투입 T 세포의 직경보다 더 작은 것인 변형된 T 세포.
- 제13항에 있어서, 압박부의 직경이 투입 T 세포의 직경의 약 20% 내지 약 99%인 변형된 T 세포.
- 제14항에 있어서, 압박부의 직경이 투입 T 세포의 직경의 약 20% 내지 약 60%인 변형된 T 세포.
- 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 항원 및/또는 아주반트가 변형된 T 세포의 시토졸 및/또는 소포에 존재하는 것인 변형된 T 세포.
- 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 소포가 엔도솜인 변형된 T 세포.
- 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 항원 및/또는 아주반트가 변형된 T 세포의 다중 구획에 존재하는 것인 변형된 T 세포.
- 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 항원 또는 면역원성 에피토프가 변형된 T 세포의 표면에 결합된 것인 변형된 T 세포.
- 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 아주반트가 CpG 올리고데옥시뉴클레오티드 (ODN), IFN-α, STING 효능제, RIG-I 효능제, 폴리 I:C, 이미퀴모드, 레시퀴모드 또는 리포폴리사카라이드 (LPS)인 변형된 T 세포.
- 제20항에 있어서, 아주반트가 CpG ODN인 변형된 T 세포.
- 제21항에 있어서, CpG ODN이 부류 A CpG ODN, 부류 B CpG ODN 또는 부류 C CpG ODN인 변형된 T 세포.
- 제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 면역원성 에피토프가 질환-연관 항원으로부터 유래된 것인 변형된 T 세포.
- 제23항에 있어서, 면역원성 에피토프가 이환 세포로부터 단리된 펩티드 또는 mRNA로부터 유래된 것인 변형된 T 세포.
- 제1항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 면역원성 에피토프가 비-자기 항원으로부터 유래된 것인 변형된 T 세포.
- 제1항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, 면역원성 에피토프가 종양 항원, 바이러스 항원, 박테리아 항원 또는 진균 항원으로부터 유래된 것인 변형된 T 세포.
- 제26항에 있어서, 면역원성 에피토프가 인간 유두종바이러스 (HPV) 항원으로부터 유래된 것인 변형된 T 세포.
- 제27항에 있어서, HPV가 HPV-16 또는 HPV-18인 변형된 T 세포.
- 제27항 또는 제28항에 있어서, 항원이 HPV E6 및/또는 E7로부터 유래된 HLA-A2-제한 펩티드를 포함하는 것인 변형된 T 세포.
- 제29항에 있어서, HLA-A2-제한 펩티드가 서열식별번호: 1-4 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 것인 변형된 T 세포.
- 제30항에 있어서, 항원이 서열식별번호: 18-25 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 것인 변형된 T 세포.
- 제1항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서, 복수의 면역원성 에피토프를 포함하는 복수의 항원을 포함하는 변형된 T 세포.
- 제32항에 있어서, 개체에게 복수의 면역원성 에피토프를 포함하는 복수의 항원을 포함하는 변형된 T 세포를 투여한 후에, 복수의 면역원성 에피토프 중 어떠한 것도 개체에서 임의의 다른 면역원성 에피토프에 대한 면역 반응을 감소시키지 않는 것인 변형된 T 세포.
- 제1항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서, 항원이 폴리펩티드이고, 면역원성 에피토프가 면역원성 펩티드 에피토프인 변형된 T 세포.
- 제30항에 있어서, 면역원성 펩티드 에피토프가 N-말단 플랭킹 폴리펩티드 및/또는 C-말단 플랭킹 폴리펩티드에 융합된 것인 변형된 T 세포.
- 제30항에 있어서, 항원이 면역원성 펩티드 에피토프 및 1개 이상의 이종 펩티드 서열을 포함하는 폴리펩티드인 변형된 T 세포.
- 제34항에 있어서, 항원이 N-말단 및/또는 C-말단에 이종 펩티드 서열이 플랭킹되어 있는 면역원성 펩티드 에피토프를 포함하는 폴리펩티드인 변형된 T 세포.
- 제35항에 있어서, 플랭킹 이종 펩티드 서열이 질환-연관 면역원성 펩티드로부터 유래된 것인 변형된 T 세포.
- 제35항에 있어서, N-말단 플랭킹 폴리펩티드가 서열식별번호: 5-10 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하고/거나 C-말단 플랭킹 폴리펩티드가 서열식별번호: 11-17 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 것인 변형된 T 세포.
- 제1항 내지 제39항 중 어느 한 항에 있어서, 항원이 MHC 부류 I-제한 펩티드 및/또는 MHC 부류 II-제한 펩티드로 프로세싱될 수 있는 것인 변형된 T 세포.
- 제1항 내지 제40항 중 어느 한 항에 있어서, 아주반트를 약 0.1 μM 내지 약 1 mM의 농도로 포함하는 변형된 T 세포.
- 제1항 내지 제41항 중 어느 한 항에 있어서, 항원을 약 0.1 μM 내지 약 1 mM의 농도로 포함하는 변형된 T 세포.
- 제1항 내지 제42항 중 어느 한 항에 있어서, 항원 대 아주반트의 비가 약 10000:1 내지 약 1:10000인 변형된 T 세포.
- 제1항 내지 제43항 중 어느 한 항에 있어서, a) 항원, b) 항원 및 적어도 1종의 다른 항원, 및/또는 c) 항원 및 아주반트를 포함하는 복합체를 포함하는 변형된 T 세포.
- 제1항 내지 제44항 중 어느 한 항에 있어서, 작용제를 포함하지 않는 상응하는 변형된 T 세포와 비교하여 변형된 T 세포의 생존율 및/또는 기능을 증진시키는 작용제를 추가로 포함하는 변형된 T 세포.
- 제45항에 있어서, 작용제가 세포내이입을 증진시키는 화합물, 안정화제 또는 보조-인자인 변형된 T 세포.
- 제45항에 있어서, 작용제가 알부민인 변형된 T 세포.
- 제47항에 있어서, 알부민이 마우스, 소 또는 인간 알부민인 변형된 T 세포.
- 제45항에 있어서, 작용제가 2가 금속 양이온, 글루코스, ATP, 칼륨, 글리세롤, 트레할로스, D-수크로스, PEG1500, L-아르기닌, L-글루타민 또는 EDTA인 변형된 T 세포.
- 제49항에 있어서, 작용제가 마우스 혈청 알부민 (MSA)을 포함하는 것인 변형된 T 세포.
- 제1항 내지 제50항 중 어느 한 항에 있어서, 세포가 공동-자극 분자 중 1종 이상의 발현을 증가시키도록 추가로 변형된 것인 변형된 T 세포.
- 제51항에 있어서, 공동-자극 분자가 B7-H2 (ICOSL), B7-1 (CD80), B7-2 (CD86), CD70, LIGHT, HVEM, CD40, 4-1BBL, OX40L, TL1A, GITRL, CD30L, TIM4, SLAM, CD48, CD58, CD155 또는 CD112인 변형된 T 세포.
- 제51항 또는 제52항에 있어서, 세포가 1종 이상의 공동-자극 분자의 증가된 발현을 유발하는 핵산을 포함하는 것인 변형된 T 세포.
- 제1항 내지 제53항 중 어느 한 항에 있어서, MHC 부류 I 발현을 조정하는 추가의 변형을 포함하는 변형된 T 세포.
- 제1항 내지 제54항 중 어느 한 항에 있어서, MHC 부류 II 발현을 조정하는 추가의 변형을 포함하는 변형된 T 세포.
- 제54항에 있어서, 동종이형 맥락에서 변형된 T 세포의 투여에 반응하여 개체에서 시작되는 선천성 면역 반응이, 동종이형 맥락에서 추가의 변형을 포함하지 않는 상응하는 변형된 T 세포의 투여에 반응하여 개체에서 시작되는 선천성 면역 반응과 비교하여 감소되는 것인 변형된 T 세포.
- 제54항 또는 제56항에 있어서, 변형된 T 세포가 투여된 개체에서의 이들 세포의 순환 반감기는, 추가의 변형을 포함하지 않는 상응하는 변형된 T 세포가 투여된 개체에서의 이들 세포의 순환 반감기와 비교하여 증가되는 것인 변형된 T 세포.
- 제1항 내지 제57항 중 어느 한 항에 있어서, 헬퍼 T 세포, 세포독성 T 세포, 기억 T 세포 또는 자연 킬러 T 세포 중 1종 이상을 포함하는 변형된 T 세포.
- 제1항 내지 제58항 중 어느 한 항에 있어서, CD3+ T 세포, CD4+ T 세포, CD8+ T 세포, CD45RA+ T 세포, CD45RO+ T 세포 또는 γδ-T 세포 중 1종 이상을 포함하는 변형된 T 세포.
- 제1항 내지 제59항 중 어느 한 항의 변형된 T 세포를 포함하는 조성물.
- 제1항 내지 제59항 중 어느 한 항의 변형된 T 세포 및 제약상 허용되는 담체를 포함하는 제약 조성물.
- 개체에게 제1항 내지 제59항 중 어느 한 항의 변형된 T 세포, 제60항의 조성물 또는 제61항의 제약 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 면역 반응을 조정하는 방법.
- a) 개체에게 서열식별번호: 18-25 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 항원을 포함하는 변형된 T 세포를 투여하는 단계; 및
b) 개체에게 아주반트를 투여하는 단계
를 포함하는, 개체에서 면역 반응을 조정하는 방법. - a) 투입 T 세포를 포함하는 세포 현탁액을 세포-변형 압박부에 통과시키며, 여기서 압박부의 직경은 현탁액 중 투입 T 세포의 직경의 함수이고, 이에 의해 항원 및 아주반트가 통과하기에 충분히 큰 투입 T 세포의 교란을 유발하여 교란된 투입 T 세포를 형성하며, 여기서 항원은 면역원성 에피토프를 포함하는 것인 단계;
b) 교란된 투입 T 세포로 항원 및 아주반트가 들어가도록 하기에 충분한 시간 동안 교란된 투입 T 세포를 항원 및 아주반트와 함께 인큐베이션하고, 이에 의해 항원 및 아주반트를 포함하는 변형된 T 세포를 생성시키는 단계; 및
c) 개체에게 변형된 T 세포를 투여하는 단계
를 포함하는, 개체에서 면역 반응을 조정하는 방법. - 제64항에 있어서, 교란된 투입 T 세포와 함께 인큐베이션된 항원의 농도가 약 0.1 μM 내지 약 1 mM이고/거나 교란된 투입 T 세포와 함께 인큐베이션된 아주반트의 농도가 약 0.1 μM 내지 약 1 mM인 방법.
- 제64항 또는 제65항에 있어서, 교란된 투입 T 세포와 함께 인큐베이션된 항원 대 아주반트의 비가 약 10000:1 내지 약 1:10000인 방법.
- a) 아주반트를 포함하는 투입 T 세포를 포함하는 세포 현탁액을 세포-변형 압박부에 통과시키며, 여기서 압박부의 직경은 현탁액 중 투입 T 세포의 직경의 함수이고, 이에 의해 항원이 통과하기에 충분히 큰 투입 T 세포의 교란을 유발하여 교란된 투입 T 세포를 형성하며, 여기서 항원은 면역원성 에피토프를 포함하는 것인 단계;
b) 교란된 투입 T 세포로 항원이 들어가도록 하기에 충분한 시간 동안 교란된 투입 T 세포를 항원과 함께 인큐베이션하고, 이에 의해 항원 및 아주반트를 포함하는 변형된 T 세포를 생성시키는 단계; 및
c) 개체에게 변형된 T 세포를 투여하는 단계
를 포함하는, 개체에서 면역 반응을 조정하는 방법. - 제67항에 있어서, 교란된 투입 T 세포와 함께 인큐베이션된 항원의 농도가 약 0.1 μM 내지 약 1 mM인 방법.
- a) 항원을 포함하는 투입 T 세포를 포함하는 세포 현탁액을 세포-변형 압박부에 통과시키며, 여기서 항원은 면역원성 에피토프를 포함하고, 여기서 압박부의 직경은 현탁액 중 투입 T 세포의 직경의 함수이고, 이에 의해 아주반트가 통과하기에 충분히 큰 투입 T 세포의 교란을 유발하여 교란된 투입 T 세포를 형성하는 단계;
b) 교란된 투입 T 세포로 아주반트가 들어가도록 하기에 충분한 시간 동안 교란된 투입 T 세포를 아주반트와 함께 인큐베이션하고, 이에 의해 항원 및 아주반트를 포함하는 변형된 T 세포를 생성시키는 단계; 및
c) 개체에게 변형된 T 세포를 투여하는 단계
를 포함하는, 개체에서 면역 반응을 조정하는 방법. - 제69항에 있어서, 교란된 투입 T 세포와 함께 인큐베이션된 아주반트의 농도가 약 0.1 μM 내지 약 1 mM인 방법.
- 제64항 내지 제70항 중 어느 한 항에 있어서, 변형된 T 세포가 항원을 약 0.1 μM 내지 약 1 mM의 농도로 포함하는 것인 방법.
- 제64항 내지 제71항 중 어느 한 항에 있어서, 변형된 T 세포가 아주반트를 약 0.1 μM 내지 약 1 mM의 농도로 포함하는 것인 방법.
- 제64항 내지 제72항 중 어느 한 항에 있어서, 변형된 T 세포에서의 항원 대 아주반트의 비가 약 10000:1 내지 약 1:10000인 방법.
- 제64항 내지 제73항 중 어느 한 항에 있어서, 변형된 T 세포가 a) 항원, b) 항원 및 적어도 1종의 다른 항원, 및/또는 c) 항원 및 아주반트를 포함하는 복합체를 포함하는 것인 방법.
- a) 투입 T 세포를 포함하는 세포 현탁액을 세포-변형 압박부에 통과시키며, 여기서 압박부의 직경은 현탁액 중 투입 T 세포의 직경의 함수이고, 이에 의해 항원이 통과하기에 충분히 큰 투입 T 세포의 교란을 유발하여 교란된 투입 T 세포를 형성하며, 여기서 항원은 면역원성 에피토프를 포함하는 것인 단계;
b) 교란된 투입 T 세포로 항원이 들어가도록 하기에 충분한 시간 동안 교란된 투입 T 세포를 항원과 함께 인큐베이션하고, 이에 의해 항원을 포함하는 변형된 T 세포를 생성시키는 단계;
c) 개체에게 변형된 T 세포를 투여하는 단계; 및
d) 개체에게 아주반트를 투여하는 단계
를 포함하는, 개체에서 면역 반응을 조정하는 방법. - 제75항에 있어서, 교란된 투입 T 세포와 함께 인큐베이션된 항원의 농도가 약 0.1 μM 내지 약 1 mM인 방법.
- 제64항 내지 제76항 중 어느 한 항에 있어서, 투입 T 세포가 압박부를 통과할 때 투입 T 세포에 변형력이 가해져 투입 T 세포의 교란을 유발하는 것인 방법.
- 제64항 내지 제77항 중 어느 한 항에 있어서, 추가의 인큐베이션 단계 없이 제조된 상응하는 변형된 T 세포와 비교하여 변형된 T 세포의 생존율 및/또는 기능을 증진시키는 작용제와 함께 투입 T 세포 및/또는 변형된 T 세포를 인큐베이션하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
- 제78항에 있어서, 작용제가 세포내이입을 증진시키는 화합물, 안정화제 또는 보조-인자인 방법.
- 제64항 내지 제79항 중 어느 한 항에 있어서, 면역 반응이 증진되는 것인 방법.
- 제80항에 있어서, 증진된 면역 반응이 항원에 대한 것인 방법.
- 제64항 내지 제81항 중 어느 한 항에 있어서, 압박부의 직경이 투입 T 세포의 직경보다 더 작은 것인 방법.
- 제82항에 있어서, 압박부의 직경이 투입 T 세포의 직경의 약 20% 내지 약 99%인 방법.
- 제83항에 있어서, 압박부의 직경이 투입 T 세포의 직경의 약 20% 내지 약 60%인 방법.
- 제64항 내지 제84항 중 어느 한 항에 있어서, 항원 및/또는 아주반트가 변형된 T 세포의 시토졸 및/또는 소포에 존재하는 것인 방법.
- 제64항 내지 제85항 중 어느 한 항에 있어서, 소포가 엔도솜인 방법.
- 제64항 내지 제86항 중 어느 한 항에 있어서, 항원 및/또는 아주반트가 변형된 T 세포의 다중 구획에 존재하는 것인 방법.
- 제64항 내지 제87항 중 어느 한 항에 있어서, 항원 또는 면역원성 에피토프가 변형된 T 세포의 표면에 결합된 것인 방법.
- 제64항 내지 제88항 중 어느 한 항에 있어서, 아주반트가 CpG ODN, IFN-α, STING 효능제, RIG-I 효능제, 폴리 I:C, 이미퀴모드, 레시퀴모드 및/또는 리포폴리사카라이드 (LPS)인 방법.
- 제89항에 있어서, 아주반트가 CpG ODN인 방법.
- 제90항에 있어서, CpG ODN이 부류 A CpG ODN, 부류 B CpG ODN 또는 부류 C CpG ODN인 방법.
- 제64항 내지 제91항 중 어느 한 항에 있어서, 면역원성 에피토프가 질환-연관 항원으로부터 유래된 것인 방법.
- 제92항에 있어서, 면역원성 에피토프가 이환 세포로부터 단리된 펩티드 또는 mRNA로부터 유래된 것인 방법.
- 제64항 내지 제93항 중 어느 한 항에 있어서, 면역원성 에피토프가 비-자기 항원으로부터 유래된 것인 방법.
- 제64항 내지 제94항 중 어느 한 항에 있어서, 면역원성 에피토프가 종양 항원, 바이러스 항원, 박테리아 항원 또는 진균 항원으로부터 유래된 것인 방법.
- 제95항에 있어서, 면역원성 에피토프가 인간 유두종바이러스 (HPV) 항원으로부터 유래된 것인 방법.
- 제96항에 있어서, HPV가 HPV-16 또는 HPV-18인 방법.
- 제96항 또는 제97항에 있어서, 항원이 HPV E6 및/또는 E7로부터 유래된 HLA-A2-제한 펩티드를 포함하는 것인 방법.
- 제98항에 있어서, HLA-A2-제한 펩티드가 서열식별번호: 1-4 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 것인 방법.
- 제99항에 있어서, 항원이 서열식별번호: 18-25 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 것인 방법.
- 제64항 내지 제100항 중 어느 한 항에 있어서, 변형된 T 세포가 복수의 면역원성 에피토프를 포함하는 복수의 항원을 포함하는 것인 방법.
- 제64항 내지 제101항 중 어느 한 항에 있어서, 복수의 면역원성 에피토프 중 어떠한 것도 개체에서 임의의 다른 면역원성 에피토프에 대한 면역 반응을 감소시키지 않는 것인 방법.
- 제64항 내지 제102항 중 어느 한 항에 있어서, 항원이 폴리펩티드이고, 면역원성 에피토프가 면역원성 펩티드 에피토프인 방법.
- 제103항에 있어서, 면역원성 펩티드 에피토프가 N-말단 플랭킹 폴리펩티드 및/또는 C-말단 플랭킹 폴리펩티드에 융합된 것인 방법.
- 제104항에 있어서, N-말단 플랭킹 폴리펩티드 및/또는 C-말단 플랭킹 폴리펩티드에 융합된 면역원성 펩티드 에피토프가 비-자연 발생 서열인 변형된 T 세포.
- 제105항에 있어서, N-말단 및/또는 C-말단 플랭킹 폴리펩티드가 면역원성 합성 긴 펩티드 (SLP)로부터 유래된 것인 방법.
- 제105항에 있어서, N-말단 및/또는 C-말단 플랭킹 폴리펩티드가 질환-연관 면역원성 SLP로부터 유래된 것인 방법.
- 제105항에 있어서, N-말단 플랭킹 폴리펩티드가 서열식별번호: 5-10 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하고/거나 C-말단 플랭킹 폴리펩티드가 서열식별번호: 11-17 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 것인 방법.
- 제64항 내지 제108항 중 어느 한 항에 있어서, 항원이 MHC 부류 I-제한 펩티드 및/또는 MHC 부류 II-제한 펩티드로 프로세싱될 수 있는 것인 방법.
- 제64항 내지 제109항 중 어느 한 항에 있어서, 변형된 T 세포가 작용제를 포함하지 않는 상응하는 변형된 T 세포와 비교하여 변형된 T 세포의 생존율 및/또는 기능을 증진시키는 작용제를 추가로 포함하는 것인 방법.
- 제110항에 있어서, 작용제가 세포내이입을 증진시키는 화합물, 안정화제 또는 보조-인자인 변형된 T 세포.
- 제111항에 있어서, 작용제가 알부민인 변형된 T 세포.
- 제112항에 있어서, 알부민이 마우스, 소 또는 인간 알부민인 변형된 T 세포.
- 제110항에 있어서, 작용제가 2가 금속 양이온, 글루코스, ATP, 칼륨, 글리세롤, 트레할로스, D-수크로스, PEG1500, L-아르기닌, L-글루타민 또는 EDTA인 변형된 T 세포.
- 제64항 내지 제114항 중 어느 한 항에 있어서, 변형된 T 세포가 MHC 부류 I 발현을 조정하는 추가의 변형을 포함하는 것인 방법.
- 제64항 내지 제115항 중 어느 한 항에 있어서, 변형된 T 세포가 MHC 부류 II 발현을 조정하는 추가의 변형을 포함하는 것인 방법.
- 제115항에 있어서, 동종이형 맥락에서 변형된 T 세포의 투여에 반응하여 개체에서 시작되는 선천성 면역 반응이, 동종이형 맥락에서 추가의 변형을 포함하지 않는 상응하는 변형된 T 세포의 투여에 반응하여 개체에서 시작되는 선천성 면역 반응과 비교하여 감소되는 것인 방법.
- 제115항 또는 제117항에 있어서, 변형된 T 세포가 투여된 개체에서의 이들 세포의 순환 반감기가, 추가의 변형을 포함하지 않는 상응하는 변형된 T 세포가 투여된 개체에서의 이들 세포의 순환 반감기와 비교하여 증가되는 것인 방법.
- 제64항 내지 제118항 중 어느 한 항에 있어서, 변형된 T 세포가 헬퍼 T 세포, 세포독성 T 세포, 기억 T 세포 또는 자연 킬러 T 세포 중 1종 이상을 포함하는 것인 방법.
- 제64항 내지 제119항 중 어느 한 항에 있어서, 변형된 T 세포가 CD3+ T 세포, CD4+ T 세포, CD8+ T 세포, CD45RA+ T 세포, CD45RO+ T 세포 또는 γδ-T 세포 중 1종 이상을 포함하는 것인 방법.
- 제64항 내지 제120항 중 어느 한 항에 있어서, 변형된 T 세포가 개체에 대해 동종이형인 방법.
- 제64항 내지 제121항 중 어느 한 항에 있어서, 변형된 T 세포가 개체에 대해 자가인 방법.
- 제64항 내지 제122항 중 어느 한 항에 있어서, 개체가 염증 및/또는 면역 반응을 조정하도록 사전-조건화된 것인 방법.
- 제64항 내지 제123항 중 어느 한 항에 있어서, 개체에게 제2 아주반트를 투여하는 것을 추가로 포함하는 방법.
- 제124항에 있어서, 제2 아주반트가 IFN-α, LPS 또는 CpG ODN인 방법.
- 제124항 또는 제125항에 있어서, 변형된 T 세포 및 제2 아주반트가 공동으로 또는 동시에 투여되는 것인 방법.
- 제124항 또는 제125항에 있어서, 변형된 T 세포 및 제2 아주반트가 순차적으로 투여되는 것인 방법.
- 제124항 내지 제127항 중 어느 한 항에 있어서, 변형된 T 세포가 제2 아주반트의 투여 전에 투여되는 것인 방법.
- 제124항 내지 제128항 중 어느 한 항에 있어서, 변형된 T 세포가 제2 아주반트의 투여 후에 투여되는 것인 방법.
- 제64항 내지 제129항 중 어느 한 항에 있어서, 변형된 T 세포가 면역 체크포인트 억제제의 투여 전에, 그와 공동으로 또는 그 후에 투여되는 것인 방법.
- 제130항에 있어서, 면역 체크포인트 억제제가 PD-1, PD-L1, CTLA-4, TIM-3, LAG3, VISTA, TIM1, B7-H4 (VTCN1) 또는 BTLA 중 어느 하나를 표적화하는 것인 방법.
- 제64항 내지 제131항 중 어느 한 항에 있어서, 변형된 T 세포가 화학요법의 투여 전에, 그와 공동으로 또는 그 후에 투여되는 것인 방법.
- 제132항에 있어서, 화학요법이 시스플라틴을 포함하는 것인 방법.
- 제64항 내지 제133항 중 어느 한 항에 있어서, 개체에게 변형된 T 세포를 투여하는 것이 항원에 특이적인 세포독성 T 림프구 (CTL)의 활성화 및/또는 확장을 유발하는 것인 방법.
- 제64항 내지 제134항 중 어느 한 항에 있어서, 개체에게 변형된 T 세포를 투여하는 것이 항원에 특이적인 헬퍼 T (Th) 세포의 활성화 및/또는 확장을 유발하는 것인 방법.
- 제64항 내지 제135항 중 어느 한 항에 있어서, 개체에게 투여되는 변형된 T 세포의 양이 약 1 x 106 내지 약 1 x 1012개의 세포인 방법.
- 제64항 내지 제136항 중 어느 한 항에 있어서, 변형된 T 세포의 다중 투여를 포함하는 방법.
- 제137항에 있어서, 변형된 T 세포의 2회 연속 투여 사이의 시간 간격이 약 1일 내지 약 30일인 방법.
- 개체에게 항원과 회합된 변형된 T 세포를 투여하는 것을 포함하며, 여기서 변형된 T 세포는
a) 항원이 투입 T 세포의 세포 표면과 회합되도록 하기에 충분한 시간 동안 투입 T 세포를 항원 및/또는 아주반트와 함께 인큐베이션하고, 여기서 항원은 면역원성 에피토프를 포함하고, 이에 의해 항원과 회합된 변형된 T 세포를 생성시키는 단계; 및
b) 개체에게 변형된 T 세포를 투여하는 단계
를 포함하는 방법에 의해 제조되는 것인,
개체에서 면역 반응을 조정하는 방법. - 제139항에 있어서, HPV 항원이 서열식별번호: 18-25 중 어느 하나에 대해 적어도 90% 유사성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 것인 방법.
- 제140항에 있어서, HPV 항원이 서열식별번호: 23의 아미노산 서열을 포함하는 것인 방법.
- 제139항 내지 제141항 중 어느 한 항에 있어서, 아주반트가 CpG ODN 또는 LPS인 방법.
- 제142항에 있어서, CpG ODN이 CpG ODN 1018, CpG ODN 1826 또는 CpG ODN 2006인 방법.
- 수술, 요법 또는 진단에 의한 인간 또는 동물 신체의 치료 방법에 사용하기 위한 제1항 내지 제59항 중 어느 한 항의 변형된 T 세포를 포함하는 조성물.
- 개체에게 제1항 내지 제59항 중 어느 한 항의 변형된 T 세포를 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 면역 반응을 조정하는 방법에 사용하기 위한 상기 변형된 T 세포를 포함하는 조성물.
- 수술, 요법 또는 진단에 의한 인간 또는 동물 신체의 치료 방법에 사용하기 위한 변형된 T 세포를 포함하는 조성물이며, 여기서 변형된 T 세포는 서열식별번호: 18-25 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 항원을 포함하는 것인 조성물.
- 개체에서 면역 반응을 조정하는 방법에 사용하기 위한 변형된 T 세포를 포함하는 조성물이며, 여기서 변형된 T 세포는 서열식별번호: 18-25 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 항원을 포함하는 것인 조성물.
- 수술, 요법 또는 진단에 의한 인간 또는 동물 신체의 치료 방법에 사용하기 위한 변형된 T 세포를 포함하는 조성물이며, 여기서 변형된 T 세포는
a) 투입 T 세포를 포함하는 세포 현탁액을 세포-변형 압박부에 통과시키며, 여기서 압박부의 직경은 현탁액 중 투입 T 세포의 직경의 함수이고, 이에 의해 항원 및 아주반트가 통과하기에 충분히 큰 투입 T 세포의 교란을 유발하여 교란된 투입 T 세포를 형성하며, 여기서 항원은 면역원성 에피토프를 포함하는 것인 단계; 및
b) 교란된 투입 T 세포로 항원 및 아주반트가 들어가도록 하기에 충분한 시간 동안 교란된 투입 T 세포를 항원 및 아주반트와 함께 인큐베이션하고, 이에 의해 항원 및 아주반트를 포함하는 변형된 T 세포를 생성시키는 단계
를 포함하는 방법에 의해 제조되는 것인 조성물. - 개체에서 면역 반응을 조정하는 방법에 사용하기 위한 변형된 T 세포를 포함하는 조성물이며, 여기서 변형된 T 세포는
a) 투입 T 세포를 포함하는 세포 현탁액을 세포-변형 압박부에 통과시키며, 여기서 압박부의 직경은 현탁액 중 투입 T 세포의 직경의 함수이고, 이에 의해 항원 및 아주반트가 통과하기에 충분히 큰 투입 T 세포의 교란을 유발하여 교란된 투입 T 세포를 형성하며, 여기서 항원은 면역원성 에피토프를 포함하는 것인 단계; 및
b) 교란된 투입 T 세포로 항원 및 아주반트가 들어가도록 하기에 충분한 시간 동안 교란된 투입 T 세포를 항원 및 아주반트와 함께 인큐베이션하고, 이에 의해 항원 및 아주반트를 포함하는 변형된 T 세포를 생성시키는 단계
를 포함하는 방법에 의해 제조되는 것인 조성물.
Applications Claiming Priority (7)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US201862641987P | 2018-03-12 | 2018-03-12 | |
| US62/641,987 | 2018-03-12 | ||
| US201862738941P | 2018-09-28 | 2018-09-28 | |
| US62/738,941 | 2018-09-28 | ||
| US201962794516P | 2019-01-18 | 2019-01-18 | |
| US62/794,516 | 2019-01-18 | ||
| PCT/US2019/021705 WO2019178006A2 (en) | 2018-03-12 | 2019-03-11 | Intracellular delivery of biomolecules to modify immune response |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| KR20200130835A true KR20200130835A (ko) | 2020-11-20 |
Family
ID=66102189
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| KR1020207028580A KR20200130835A (ko) | 2018-03-12 | 2019-03-11 | 면역 반응을 조절하기 위한 생체분자의 세포내 전달 |
Country Status (16)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP3765068A2 (ko) |
| JP (1) | JP2021517813A (ko) |
| KR (1) | KR20200130835A (ko) |
| CN (1) | CN112135627A (ko) |
| AU (1) | AU2019234550A1 (ko) |
| BR (1) | BR112020018612A2 (ko) |
| CA (1) | CA3093828A1 (ko) |
| CO (1) | CO2020012584A2 (ko) |
| CR (1) | CR20200460A (ko) |
| IL (1) | IL277188A (ko) |
| MA (1) | MA52010A (ko) |
| MX (1) | MX2020009439A (ko) |
| PH (1) | PH12020551436A1 (ko) |
| SG (1) | SG11202008864VA (ko) |
| TW (1) | TW202003019A (ko) |
| WO (1) | WO2019178006A2 (ko) |
Families Citing this family (16)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US11613759B2 (en) | 2015-09-04 | 2023-03-28 | Sqz Biotechnologies Company | Intracellular delivery of biomolecules to cells comprising a cell wall |
| WO2020166729A1 (ja) * | 2019-02-14 | 2020-08-20 | 学校法人獨協学園獨協医科大学 | Ｔ細胞ワクチン |
| WO2020176789A1 (en) | 2019-02-28 | 2020-09-03 | Sqz Biotechnologies Company | Delivery of biomolecules to pbmcs to modify an immune response |
| EP3953039A1 (en) | 2019-04-08 | 2022-02-16 | SQZ Biotechnologies Company | Cartridge for use in a system for delivery of a payload into a cell |
| JP2023527690A (ja) | 2020-05-11 | 2023-06-30 | エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト | 改変ｐｂｍｃと免疫抱合体との併用療法 |
| WO2022026620A1 (en) | 2020-07-29 | 2022-02-03 | Sqz Biotechnologies Company | Methods to stimulate immune responses to mutant ras using nucleated cells |
| KR20230058388A (ko) | 2020-07-29 | 2023-05-03 | 에스큐지 바이오테크놀로지스 컴퍼니 | 무핵 세포를 사용해 돌연변이체 ras에 대한 면역 반응을 자극하는 방법 |
| CN116801719A (zh) | 2020-12-29 | 2023-09-22 | Sqz生物技术公司 | 用于pbmc冷冻保存的调配物 |
| EP4271711A1 (en) | 2020-12-29 | 2023-11-08 | SQZ Biotechnologies Company | Methods for treating cancers with modified pbmcs |
| CA3203356A1 (en) | 2020-12-29 | 2022-07-07 | Oliver Rosen | Methods for treating cancers with activating antigen carriers |
| CA3203709A1 (en) | 2020-12-29 | 2022-07-07 | Sqz Biotechnologies Company | Formulations of activating antigen carriers |
| CN115252772A (zh) * | 2021-04-30 | 2022-11-01 | 华普生物技术(江苏)股份有限公司 | 人工合成的含CpG单链脱氧寡核苷酸在疫苗中的应用 |
| EP4377447A1 (en) | 2021-07-29 | 2024-06-05 | SQZ Biotechnologies Company | Methods to generate enhanced tumor infiltrating lymphocytes through microfluidic delivery |
| WO2023087009A1 (en) | 2021-11-11 | 2023-05-19 | Sqz Biotechnologies Company | Methods to generate enhanced tumor infiltrating lymphocytes through microfluidic delivery |
| WO2024026492A1 (en) | 2022-07-28 | 2024-02-01 | Sqz Biotechnologies Company | Methods for treating cancer with enhanced antigen presenting cells |
| WO2024026491A2 (en) | 2022-07-28 | 2024-02-01 | Sqz Biotechnologies Company | Enhanced antigen presenting cell formulations |
Family Cites Families (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20090028874A1 (en) * | 2003-12-24 | 2009-01-29 | Leiden University Medical Center | Synthetic Protein as Tumor-Specific Vaccine |
| JP2010530362A (ja) * | 2007-05-31 | 2010-09-09 | アカデミシュ ジーケンハウス ライデン ハー．オー．デー．エン． ルムク | 皮内ｈｐｖペプチドワクチン接種 |
| AU2010248761B2 (en) * | 2009-05-15 | 2016-02-11 | Irx Therapeutics, Inc. | Vaccine immunotherapy |
| ES2764105T3 (es) | 2011-10-17 | 2020-06-02 | Massachusetts Inst Technology | Administración intracelular |
| SG11201703044PA (en) * | 2014-10-31 | 2017-05-30 | Massachusetts Inst Technology | Delivery of biomolecules to immune cells |
| ES2930017T3 (es) | 2015-09-04 | 2022-12-05 | Sqz Biotechnologies Co | Suministro intracelular de biomoléculas mediado por una superficie con poros |
| CN108779475A (zh) * | 2016-01-12 | 2018-11-09 | Sqz生物技术公司 | 复合物的细胞内递送 |
-
2019
- 2019-03-11 TW TW108108098A patent/TW202003019A/zh unknown
- 2019-03-11 CA CA3093828A patent/CA3093828A1/en active Pending
- 2019-03-11 EP EP19716612.7A patent/EP3765068A2/en active Pending
- 2019-03-11 MX MX2020009439A patent/MX2020009439A/es unknown
- 2019-03-11 MA MA052010A patent/MA52010A/fr unknown
- 2019-03-11 KR KR1020207028580A patent/KR20200130835A/ko unknown
- 2019-03-11 SG SG11202008864VA patent/SG11202008864VA/en unknown
- 2019-03-11 JP JP2020548778A patent/JP2021517813A/ja active Pending
- 2019-03-11 CR CR20200460A patent/CR20200460A/es unknown
- 2019-03-11 AU AU2019234550A patent/AU2019234550A1/en active Pending
- 2019-03-11 CN CN201980030600.3A patent/CN112135627A/zh active Pending
- 2019-03-11 BR BR112020018612-0A patent/BR112020018612A2/pt unknown
- 2019-03-11 WO PCT/US2019/021705 patent/WO2019178006A2/en unknown
-
2020
- 2020-09-07 IL IL277188A patent/IL277188A/en unknown
- 2020-09-11 PH PH12020551436A patent/PH12020551436A1/en unknown
- 2020-11-03 CO CONC2020/0012584A patent/CO2020012584A2/es unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CR20200460A (es) | 2020-11-23 |
| IL277188A (en) | 2020-10-29 |
| CO2020012584A2 (es) | 2020-11-20 |
| MX2020009439A (es) | 2021-01-08 |
| WO2019178006A2 (en) | 2019-09-19 |
| SG11202008864VA (en) | 2020-10-29 |
| RU2020132504A3 (ko) | 2022-04-13 |
| MA52010A (fr) | 2021-01-20 |
| PH12020551436A1 (en) | 2021-09-06 |
| BR112020018612A2 (pt) | 2020-12-29 |
| AU2019234550A1 (en) | 2020-10-01 |
| RU2020132504A (ru) | 2022-04-13 |
| CA3093828A1 (en) | 2019-09-19 |
| CN112135627A (zh) | 2020-12-25 |
| JP2021517813A (ja) | 2021-07-29 |
| TW202003019A (zh) | 2020-01-16 |
| WO2019178006A3 (en) | 2019-11-07 |
| EP3765068A2 (en) | 2021-01-20 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR20200130835A (ko) | 면역 반응을 조절하기 위한 생체분자의 세포내 전달 | |
| KR20200130371A (ko) | Hpv-연관 질환을 치료하는 방법 | |
| US11692168B2 (en) | Delivery of biomolecules to PBMCs to modify an immune response | |
| AU2017259988B2 (en) | Intracellular delivery of biomolecules to induce tolerance | |
| US20210388390A1 (en) | Intracellular delivery of biomolecules to enhance antigen presenting cell function | |
| RU2819143C2 (ru) | Внутриклеточная доставка биомолекул для модуляции иммунного ответа | |
| KR20230058388A (ko) | 무핵 세포를 사용해 돌연변이체 ras에 대한 면역 반응을 자극하는 방법 | |
| RU2799784C2 (ru) | Способы лечения заболеваний, ассоциированных с впч | |
| US20240228956A9 (en) | DELIVERY OF BIOMOLECULES TO PBMCs TO MODIFY AN IMMUNE RESPONSE | |
| WO2022026620A1 (en) | Methods to stimulate immune responses to mutant ras using nucleated cells |