KR20200096446A - 인삼열매 다당체를 포함하는 면역 증강용 조성물 - Google Patents
인삼열매 다당체를 포함하는 면역 증강용 조성물 Download PDFInfo
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Abstract
본 명세서는 인삼열매 다당체를 유효성분으로 포함하는 면역 증강용 조성물에 관한다. 상기 조성물은 천연물 유래 성분을 사용하여 IL-6, IL-12 및 TNF-α 등의 사이토카인 발현을 증가시킬 수 있다. 또한 상기 조성물은 인삼열매 다당체의 특유 성분과 구조로 인하여 우수한 면역 증강 효과를 나타낼 수 있다.
Description
본 명세서는 인삼열매 다당체를 포함하는 면역 증강용 조성물에 관하여 기술한다.
신체 면역 기능이 저하될 경우 각종 감염 또는 질병에 취약해지기 쉽다.
대식세포(Macrophage)는 세균이나 이물질을 탐식, 제거하는 과정에서 여러 가지 cytokine을 분비하여 면역현상을 조절하며, 항원에 대한 면역작용의 중추적인 역할을 하는 세포로서, 항원제시와 림프구의 비특이적 면역작용에 관계하며, 종양세포에 대해서는 직접적인 상해활성을 나타낸다. 또한 TLR(tool like receptor)에 반응하는 물질(LPS 혹은 천연물)은 대식세포를 활성화하여 T 세포와 B 세포의 증식, 식균 작용, 미생물 감염에 대한 방어 등의 2차 면역반응을 조절할 수 있는 IL-1, IL-6, IL-10, IL-12 및 TNF-α와 같은 사이토카인을 생산한다고 알려져 있다.
IL-1, IL-6 및 TNF-α는 대식세포에 의해 유도되는 대표적인 사이토카인으로, 세균감염에 따른 염증반응에 있어서 중추적인 역할을 하며 염증병소에서 그 양이 증가되는 것으로 알려져 있다. IL-6는 IL-1과 협동적으로 작용하여 T 세포와 B 세포의 분화에 관여한다고 보고되었으며, TNF-α은 항 바이러스성 작용이 있고, 여러 가지 생체반응에도 중요한 역할을 한다고 알려져 있다. 또한 IL-12는 NK cell의 활성화 및 Th1 type의 면역 반응을 유도하는 cytokine으로써 세포성 외래물질에 대한 반응성을 높이는 작용을 한다고 알려져 있다.
이와 같은 면역 증강에 효과가 있는 천연 유래 성분에 관한 요구가 존재한다.
본 발명의 선행기술은 대한민국 특허공개공보 제10-2011-0080470호에 개시된다.
일 측면에서, 본 발명이 해결하고자 하는 과제는 면역 증강 효과가 우수한 조성물을 제공하는 것이다.
다른 측면에서, 본 발명이 해결하고자 하는 과제는 IL-6, IL-12 및 TNF-α 의 발현을 증가시키는 조성물을 제공하는 것이다.
또 다른 측면에서, 본 발명이 해결하고자 하는 과제는 면역 증강 효과가 우수한 천연 유래 성분을 포함하는 조성물을 제공하는 것이다.
또 다른 측면에서, 본 발명이 해결하고자 하는 과제는 천연 유래 성분으로 독성이나 부작용이 적거나 없는 조성물을 제공하는 것이다.
또 다른 측면에서, 본 발명이 해결하고자 하는 과제는 면역 증강에 따른 건강 보조 역할을 할 수 있는 조성물을 제공하는 것이다.
일 관점에서, 본 발명은 인삼열매 다당체를 유효성분으로 포함하는 면역 증강용 조성물을 제공한다.
일 측면에서, 본 발명은 면역 증강 효과가 우수한 조성물을 제공할 수 있다.
다른 측면에서, 본 발명은 IL-6, IL-12 및 TNF-α 의 발현을 증가시키는 조성물을 제공할 수 있다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 면역 증강 효과가 우수한 천연 유래 성분을 포함하는 조성물을 제공할 수 있다.
또 다른 측면에서 본 발명은 면역 증강에 따른 건강 보조 역할을 할 수 있는 조성물을 제공할 수 있다.
도 1은 β-글루코실 야리브 시약에 의해 아라비노갈락탄을 검출하는 반응을 모식적으로 나타낸 것이다.
도 2는 인삼열매 수용성 물질의 분획을 나타낸 그래프이다.
도 3은 인삼열매 다당체의 크로마토그래피 결과를 나타낸 그래프이다.
도 4는 표준물질, 인삼열매 다당체 및 홍삼근 다당체의 β-글루코실 야리브 시약 처리에 의한 침전환을 나타낸 사진이다.
도 5는 표준물질, 인삼열매 다당체 및 홍삼근 다당체의 β-글루코실 야리브 시약 처리에 의한 침전환 면적을 비교하여 나타낸 그래프이다.
도 6은 시료의 대식세포에서 IL-6 생성능을 나타낸 그래프이다.
도 7은 시료의 대식세포에서 IL-12 생성능을 나타낸 그래프이다.
도 8은 시료의 대식세포에서 TNF-α 생성능을 나타낸 그래프이다.
도 2는 인삼열매 수용성 물질의 분획을 나타낸 그래프이다.
도 3은 인삼열매 다당체의 크로마토그래피 결과를 나타낸 그래프이다.
도 4는 표준물질, 인삼열매 다당체 및 홍삼근 다당체의 β-글루코실 야리브 시약 처리에 의한 침전환을 나타낸 사진이다.
도 5는 표준물질, 인삼열매 다당체 및 홍삼근 다당체의 β-글루코실 야리브 시약 처리에 의한 침전환 면적을 비교하여 나타낸 그래프이다.
도 6은 시료의 대식세포에서 IL-6 생성능을 나타낸 그래프이다.
도 7은 시료의 대식세포에서 IL-12 생성능을 나타낸 그래프이다.
도 8은 시료의 대식세포에서 TNF-α 생성능을 나타낸 그래프이다.
이하, 첨부한 도면들을 참조하여, 본 출원의 실시예들을 보다 상세하게 설명하고자 한다. 그러나 본 출원에 개시된 기술은 여기서 설명되는 실시예들에 한정되지 않고 다른 형태로 구체화될 수도 있다. 단지, 여기서 소개되는 실시예들은 개시된 내용이 철저하고 완전해질 수 있도록 그리고 당업자에게 본 출원의 사상이 충분히 전달될 수 있도록 하기 위해 제공되는 것이다. 도면에서 각 구성요소를 명확하게 표현하기 위하여 구성요소의 폭이나 두께 등의 크기를 다소 확대하여 나타내었다. 또한, 설명의 편의를 위하여 구성요소의 일부만을 도시하기도 하였으나, 당업자라면 구성요소의 나머지 부분에 대하여도 용이하게 파악할 수 있을 것이다. 또한, 해당 분야에서 통상의 지식을 가진 자라면 본 출원의 기술적 사상을 벗어나지 않는 범위 내에서 본 출원의 사상을 다양한 다른 형태로 구현할 수 있을 것이다.
본 발명 일 실시예에 따르면, 인삼열매 다당체를 유효성분으로 포함하는 면역 증강용 조성물을 제공할 수 있다. 인삼열매 다당체는 특정 성분 및 구조에 의하여 면역 기능 조절 효과를 나타내며, 구체적으로 사이토카인을 활성시키는 효과가 우수하다. 이에 따라 본 발명 실시예들에 따른 조성물은 현저하게 우수한 면역 증강 효과를 나타낼 수 있다.
인삼열매 다당체는 인삼(Panax ginseng C.A. Meyer)의 지상부 중 열매 부위로부터 유래한 다당 성분일 수 있다. 일 예에서, 상기 인삼열매는 인삼의 열매 과육, 과피, 또는 과육 및 과피를 모두 포함하는 부위일 수 있다.
상기 인삼열매 다당체는 인삼열매를 에탄올을 사용하여 추출한 후, 에탄올에 용해되지 않은 추출 비가용 성분으로부터 얻을 수 있다. 예를 들어, 상기 에탄올 추출 비가용 성분을 물을 사용하여 추출하여 수용성 성분만을 분리해낼 수 있으며, 이 수용성 성분에 포함된 인삼열매 다당체를 유효성분으로 사용할 수 있다. 예를 들어 상기 수용성 성분을 농축하고, 에탄올로 침전시킨 후, 저분자량 성분을 제거하여 인삼열매 다당체를 얻을 수 있다.
예를 들어, 종자를 제거한 인삼열매를 50-100% 에탄올을 사용하여 추출한 후, 추출 비가용 성분을 부피 3-10배의 물로 가온 추출하여 수용성 추출물을 얻는다. 수용성 추출물을 고형분이 10-50 중량%가 되도록 농축하고, 여기에 부피 2-5배의 에탄올을 사용하여 침전시킨 후, 분획분자량(Molecular Weight Cut off) 10,000-30,000 으로 분리하여 저분자량 성분을 제거하여 인삼열매 다당체를 얻을 수 있다. 상기 저분자량 성분의 제거는 한외여과막을 이용한 한외여과 등의 여과, 투석, 2-10배 부피의 50-100% 에탄올로 1-10회 반복 용해 처리 등에 의해 수행할 수 있다. 일예에서, 상기 저분자량 성분 제거 후 건조를 수행할 수 있다. 상기 건조는 동결, 열풍, 분무 또는 진공 처리 등에 의할 수 있다.
일예에서, 상기 인삼열매의 수용성 성분을 물 추출하기 전에 효소 처리를 더 포함할 수 있다. 상기 효소는 식품에 사용되는 효소라면 제한없이 사용 가능하나, 예를 들어 아밀라아제, 프로테아제, 펙티나아제, 리파아제, 셀룰라아제, 자일라아제, 베타-글루카나아제, 또는 풀룰라나아제 중에서 선택될 수 있다. 상기 효소 처리에 의하여 조성물의 면역활성을 높일 수 있다. 상기 효소 처리는 예를 들어 40~60℃에서 10~60분간 효소와 반응시킬 수 있다.
상기 인삼열매 다당체는 아라비노즈, 갈락토즈, 갈락투론산 및 글루쿠론산을 포함할 수 있다.
일예에서, 상기 다당체 총 중량에 대하여 갈락투론산 및 글루쿠론산을 합계 함량으로 0.1 중량% 이상, 0.2 중량% 이상, 0.3 중량% 이상, 0.4 중량% 이상, 0.5 중량% 이상, 0.6 중량% 이상, 0.7 중량% 이상, 0.8 중량% 이상, 0.9 중량% 이상, 1 중량% 이상, 2 중량% 이상, 3 중량% 이상, 4 중량% 이상, 5 중량% 이상, 6 중량% 이상, 7 중량% 이상, 8 중량% 이상, 9 중량% 이상, 또는 10 중량% 이상이고, 25 중량% 이하, 24 중량% 이하, 23 중량% 이하, 22 중량% 이하, 21 중량% 이하, 20 중량% 이하, 19 중량% 이하, 18 중량% 이하, 17 중량% 이하, 16 중량% 이하, 15 중량% 이하, 14 중량% 이하, 13 중량% 이하, 12 중량% 이하, 11 중량% 이하, 10 중량% 이하, 9 중량% 이하, 8 중량% 이하, 7 중량% 이하, 6 중량% 이하, 5 중량% 이하, 또는 4 중량% 이하로 포함할 수 있다. 예를 들어, 상기 함량은 0.1 중량% 내지 25 중량%, 또는 0.5 중량% 내지 20 중량%일 수 있다.
상기 갈락투론산은 다당체 총 중량에 대하여 0.1 중량% 이상, 0.2 중량% 이상, 0.3 중량% 이상, 0.4 중량% 이상, 0.5 중량% 이상, 0.6 중량% 이상, 0.7 중량% 이상, 0.8 중량% 이상, 0.9 중량% 이상, 1 중량% 이상, 2 중량% 이상, 3 중량% 이상, 4 중량% 이상, 5 중량% 이상, 6 중량% 이상, 7 중량% 이상, 8 중량% 이상, 9 중량% 이상, 또는 10 중량% 이상이고, 20 중량% 이하, 19 중량% 이하, 18 중량% 이하, 17 중량% 이하, 16 중량% 이하, 15 중량% 이하, 14 중량% 이하, 13 중량% 이하, 12 중량% 이하, 11 중량% 이하, 10 중량% 이하, 9 중량% 이하, 8 중량% 이하, 7 중량% 이하, 6 중량% 이하, 5 중량% 이하, 또는 4 중량% 이하로 포함할 수 있다. 상기 함량은 예를 들어 0.1 중량% 내지 20 중량%, 0.1 중량% 내지 15 중량%, 1 중량% 내지 5 중량%, 5 중량% 내지 15 중량%, 또는 0.5 중량% 내지 5 중량%일 수 있다.
상기 글루쿠론산은 다당체 총 중량에 대하여 0.1 중량% 이상, 0.2 중량% 이상, 0.3 중량% 이상, 0.4 중량% 이상, 0.5 중량% 이상, 0.6 중량% 이상, 0.7 중량% 이상, 0.8 중량% 이상, 0.9 중량% 이상, 1 중량% 이상, 2 중량% 이상, 3 중량% 이상, 4 중량% 이상, 5 중량% 이상, 6 중량% 이상, 또는 7 중량% 이상이고, 10 중량% 이하, 9 중량% 이하, 8 중량% 이하, 7 중량% 이하, 6 중량% 이하, 5 중량% 이하, 또는 4 중량% 이하로 포함할 수 있다. 상기 함량은 예를 들어 0.1 중량% 내지 10 중량%, 0.5 중량% 내지 5 중량%, 또는 0.1 중량% 내지 5 중량%일 수 있다.
일 예에서, 상기 아라비노즈는 다당체 총 중량에 대하여 2 중량% 내지 30 중량%로 포함할 수 있다.
일 예에서, 상기 갈락토즈는 다당체 총 중량에 대하여 5 중량% 내지 50 중량%로 포함할 수 있다.
상기 인삼열매 다당체는 아라비노갈락탄(arabinogalactan) 구조를 높은 비율로 포함하여, 우수한 면역 활성을 나타낼 수 있다. 아라비노갈락탄 구조의 검출은 β-글루코실 야리브 시약(β-glucosyl Yariv reagent)을 이용할 수 있다. β-글루코실 야리브 시약은 1,3,5-tri-(β-글루코피라노실-옥시페닐라조)-2,4,6-트리하이드록시벤젠(4- 1,3,5-tri-(4-β-glucopyranosyl?oxyphenylazo)-2,4,6-trihydroxybenzene)로, 아라비노갈락탄 중 II형의 아라비노-β-3,6-갈락탄(arabino-β-3,6-galactan)과 특이적으로 반응하여 적색 침전을 형성한다. β-글루코실 야리브 시약을 처리하여 생성되는 적색 침전환의 면적과 아라비노갈락탄 구조의 함유 농도는 농도의존적으로 비례한다. 상기 인삼열매 다당체는 동일농도의 표준 아라비노-β-3,6-갈락탄(arabino-β-3,6-galactan)에서 생성되는 침전환 크기를 100%로 할 때 40% 이상, 50% 이상, 60% 이상, 70% 이상, 또는 80% 이상이고, 90% 이하, 80% 이하, 70% 이하 또는 60% 이하 크기의 침전환 면적을 나타낼 수 있다. 예를 들어 상기 침전환 면적은 50% 내지 90%, 50% 내지 80% 일 수 있다.
상기 인삼열매 다당체의 중량평균분자량은 10 kDa 이상일 수 있다. 상기 인삼열매 다당체는 분자량 70 kDa 내지 80 kDa에서 주 피크(peak)를 가질 수 있다.상기 인삼열매 다당체는 면역 기능에 관련하는 사이토카인을 활성화하는 효과가 현저하게 우수하다. 예를 들어 대식세포에서 IL-6, IL-12, TNF-α 등의 발현을 증가시켜 우수한 면역 증강 효과를 나타낼 수 있다.
본 발명 실시예들에 따른 조성물은 상기 유효성분을 포함하는 다양한 형태의 식품 첨가제 또는 기능성 식품으로 제공될 수 있다. 상기 유효성분을 포함하는 발효유, 치즈, 요구르트, 주스, 생균제제 및 건강식품 등으로 가공될 수 있으며, 그 외 다양한 식품 첨가제의 형태로 사용될 수 있다.
본 발명의 실시예들에 따른 조성물은 건강 식품용 조성물일 수 있다.
본 발명의 실시예에 따른 건강식품용 조성물은 상기 유효성분을 조성물 총 중량에 대하여 0.0001중량% 내지 99중량%, 예를 들어 0.01 중량% 내지 60중량%로 포함할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
구체예에서, 상기 건강 식품용 조성물은 환제, 캅셀제, 정제, 과립제, 캬라멜제 또는 드링크제 등으로 제형화할 수 있다. 다른 구체예에서, 액제, 분말, 과립, 정제 또는 티백 등의 형태로 가공될 수도 있다.
상기 조성물은 단순 음용, 주사 투여, 스프레이 방식 또는 스퀴즈 방식 등의 다양한 방법으로 투여될 수 있다.
상기 조성물은 본 발명의 주 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 주 효과에 상승 효과를 줄 수 있는 다른 성분 등을 함유할 수 있다. 예를 들어, 물성 개선을 위하여 향료, 색소, 살균제, 산화방지제, 방부제, 보습제, 점증제, 무기염류, 유화제 및 합성 고분자 물질 등의 첨가제를 더 포함할 수 있다. 그 외에도, 수용성 비타민, 유용성 비타민, 고분자 펩티드, 고분자 다당 및 해초 엑기스 등의 보조 성분을 더 포함할 수도 있다. 상기 성분들은 제형 또는 사용 목적에 따라서 당업자가 적의 선정하여 배합할 수 있으며, 그 첨가량은 본 발명의 목적 및 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 선택될 수 있다. 예를 들어, 상기 성분들의 첨가량은, 조성물 전체 중량을 기준으로, 0.01중량% 내지 5 중량%, 예를 들어 0.01중량% 내지 3중량% 일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
일 실시예에 있어서, 상기 조성물은 화장료 조성물일 수 있다.
본 발명의 실시예에 따른 화장료 조성물은 상기 유효성분을 조성물 총 중량에 대하여 0.0001중량% 내지 99중량%, 예를 들어 0.01 중량% 내지 60중량%로 포함할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 실시예에 따른 화장료 조성물은 화장품학 또는 피부과학적으로 허용가능한 매질 또는 기제를 함유하여 제형화될 수 있다. 이는 국소적용에 적합한 모든 제형으로서, 현탁액, 마이크로에멀젼, 마이크로캡슐, 미세과립구 또는 이온형(리포좀) 및 비이온형의 소낭 분산제의 형태로, 또는 크림, 스킨, 로션, 파우더, 연고, 스프레이 또는 콘실 스틱의 형태로 제공될 수 있다. 또한 포말(foam)의 형태로 또는 압축된 추진제를 더 함유한 에어로졸 조성물의 형태로도 사용될 수 있다. 이들 조성물은 당해 분야의 통상적인 방법에 따라 제조될 수 있다.
또한, 본 발명의 실시예들에 따른 화장료 조성물은 분체, 지방 물질, 유기용매, 용해제, 농축제, 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온봉쇄제, 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 또는 화장품에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 화장품학 또는 피부과학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다. 상기 보조제는 화장품학 또는 피부과학 분야에서 일반적으로 사용되는 양으로 도입된다. 본 발명의 실시예들에 따른 화장료 조성물은 피부 개선 효과를 증가시키기 위하여 피부 흡수 촉진 물질을 더 함유할 수 있다.
본 발명 일 실시예에서, 상기 조성물은 약학 조성물일 수 있다.
본 명세서에 따른 약학 조성물은 경구 또는 비경구의 여러 가지 제형일 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 연질 또는 경질 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 하나 이상의 화합물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 탄산칼슘, 수크로오스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 스테아린산 마그네슘, 탈크 등과 같은 윤활제들도 사용된다. 경구투여를 위한 액상제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁용제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로젤라틴 등이 사용될 수 있다.
본 명세서의 조성물의 약학적 투여 형태는 이들의 약학적으로 허용 가능한 염의 형태로도 사용될 수 있고, 또한 단독으로 또는 타 약학적 활성 화합물과 결합뿐만 아니라 적당한 집합으로 사용될 수 있다. 상기 염으로는 약학적으로 허용되는 것이면 특별히 한정되지 않으며, 예를 들어 염산, 황산, 질산, 인산, 불화수소산, 브롬화수소산, 포름산 아세트산, 타르타르산, 젖산, 시트르산, 푸마르산, 말레산, 숙신산, 메탄술폰산, 벤젠술폰산, 톨루엔술폰산, 나프탈렌술폰산 등을 사용할 수 있다.
본 명세서의 조성물은 목적하는 바에 따라 비경구 투여하거나 경구 투여할 수 있으며, 하루에 체중 1 ㎏당 0.1~500 ㎎, 바람직하게는 1~100 ㎎의 양으로 투여되도록 1 내지 수회에 나누어 투여할 수 있다. 특정 환자에 대한 투여용량은 환자의 체중, 연령, 성별, 건강 상태, 식이, 투여 시간, 투여 방법, 배설률, 질환의 중증도 등에 따라 변화될 수 있다.
본 명세서에 따른 약학 조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 연질 또는 경질 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 연고, 크림 등의 피부 외용제, 좌제, 주사제 및 멸균 주사용액 등을 비롯하여 약제학적 제제에 적합한 어떠한 형태로든 제형화하여 사용될 수 있다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것으로서, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지 않는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.
[제조예 1] 인삼열매 다당체의 제조
종자를 제거한 인삼열매를 10배 부피의 90% 에탄올로 추출하여 수용성 성분을 침전시키고 상등액을 제거한다. 침전된 추출 비가용 성분을 부피 20배의 물로 90℃ 5시간 가온 추출한다. 추출물을 고형분이 30중량%가 되도록 농축하고, 농축물의 부피 2배의 90% 에탄올을 가하여 침전시킨다. 침전된 수용성 성분의 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC) 결과를 도 2에 나타낸다. 침전물을 한외여과를 통해 분획분자량(Molecular Weight Cut off) 20,000으로 분리하여 저분자량 성분을 제거하고 동결 건조하여 70 내지 80kDa의 분자량을 주 피크(peak)로 하는 분자량 10kDa 이상의 인삼열매 다당체를 얻었다. 제조된 인삼열매 다당체의 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC) 결과는 도 3에 나타낸다.
[제조예 2] 홍삼 다당체의 제조
인삼열매 대신 홍삼근을 사용한 것을 제외하고는 상기 제조예 1과 동일한 방법으로 홍삼 다당체를 제조하였다.
[시험예 1] 아라비노갈락탄의 검출
아라비노-β-3,6-갈락탄의 존재를 확인하기 위한 β-글루코실 야리브 시약(β-glucosyl Yariv reagent; Biosupplies, Parkville, Australia)와의 반응성 검토는 Holst와 Clarke의 방법(Van Holst GJ, Clarke AE. Quantification of arabinogalactan-protein in plant extracts by single radial gel diffusion. Anal. Chem. 148: 446-450 (1985) )에 따라 라디칼 겔 확산법(Single radical gel diffusion)으로 측정하였다.
β-글루코실 야리브 시약 10㎍/㎖를 함유한 0.15M NaCl 아가로즈 평판을 조제하고, 직경 2.5mm의 well을 만들어, 농도별로 희석한 표준 물질인 gum Arabic과 시료 5㎍을 함유한 용액을 well에 각각 주입하였다. 상기 평판을 습윤 상태에서 15시간 정치시켜 반응시키고, 생성된 붉은색 침전환을 관찰하여 아라비노-β-3,6-갈락탄의 존재 유무를 관찰하였고, 시료와 β-글루코실 야리브 시약과의 반응성은 생성된 침전환의 넓이를 계산하여 상호 비교하였다. 시료로는 도 4에 나타난 바와 같이 표준물질 62.5, 125, 250, 500 및 1000 ㎍/㎖, 제조예 1 및 제조예 2의 다당체를 각각 100, 500 및 1000 ㎍/㎖의 농도로 사용하였다.
생성된 붉은색 침전환의 면적을 측정하여 아라비노-β-3,6-갈락탄의 상대 함량을 도 5에 나타내었다. 도 5의 결과는 표준물질 1000㎍/㎖ 농도 처리군에 대하여 각 시료 1000㎍/㎖ 처리군의 면적을 비교한 것이다.
도 5의 결과에서, 인삼열매 다당체는 홍삼 다당체 대비 2배 이상의 고함량으로 아라비노갈락탄 구조를 포함하는 것을 확인할 수 있다.
[시험예 2] 대식세포에서의 IL-6 생성능 평가
인삼열매 다당체의 대식세포에서의 IL-6 생성능을 아래와 같이 측정하였다.
BALB/c 마우스에 5% 티오글리콜레이트(thioglycollate)를 1 ㎖ 복강주사하고 3일 후에 경추탈구법으로 마우스를 희생시킨 후, 복강에 DMEM 배지 10 mL를 주입하여 복강 내 세포(peritoneal exudative cells; PEC)를 수집하였다. 수집한 PEC를 96 well 배양 플레이트에 2.0×105 cells/well의 농도로 조정하여 분주하고 2시간 동안 배양하여 대식세포를 플레이트에 부착시킨 후, 배양액으로 세척하여 부착되지 않은 세포를 제거하였다. 대식세포에 인삼열매 정제 획분 시료 용액의 최종농도가 0.8 μg/㎖∼100 μg/mL이 되도록 시료를 첨가하고, 72시간 동안 배양하였음. 배양종료 후, 900 rpm에서 5분간 원심 분리하여 세포 배양액 상등액을 150 ㎕를 회수한 후, 배양 상등액에 유도 분비된 사이토카인들인 IL-6의 함량을 측정하였다. 결과를 도 6에 나타낸다.
시료로 제조예 1 및 제조예 2의 다당체를 사용하였으며, 양성 대조군으로 PSK (KrestinTM, from Coriolus versicolor), 미국 인삼(Panax quinquefolius) 뿌리로부터 제조된 CVT200 (COLD-FX), Biobran (arabinoxylan compound)을 사용하였고, 도 6의 NC는 무처리군, PC는 LPS 5㎍/㎖ 처리군이다.
도 6의 결과에서, 인삼열매 다당체는 양성 대조군으로 사용한 시료 및 홍삼 다당체에 비해 현저하게 우수한 IL-6 생성능을 나타내는 것을 알 수 있다.
[시험예 2] 대식세포에서의 IL-12 생성능 평가
인삼열매 다당체의 대식세포에서의 IL-12 생성능을 아래와 같이 측정하였다.
BALB/c 마우스에 5% 티오글리콜레이트(thioglycollate)를 1 ㎖ 복강주사하고 3일 후에 경추탈구법으로 마우스를 희생시킨 후, 복강에 DMEM 배지 10 mL를 주입하여 복강 내 세포(peritoneal exudative cells; PEC)를 수집하였다. 수집한 PEC를 96 well 배양 플레이트에 2.0×105 cells/well의 농도로 조정하여 분주하고 2시간 동안 배양하여 대식세포를 플레이트에 부착시킨 후, 배양액으로 세척하여 부착되지 않은 세포를 제거하였다. 대식세포에 인삼열매 정제 획분 시료 용액의 최종농도가 0.8 μg/㎖∼100 μg/mL이 되도록 시료를 첨가하고, 72시간 동안 배양하였다. 배양종료 후, 900 rpm에서 5분간 원심 분리하여 세포 배양액 상등액을 150 ㎕를 회수한 후, 배양 상등액에 유도 분비된 사이토카인들인 IL-12 의 함량을 측정하였다. 결과를 도 7에 나타낸다.
시료로 제조예 1 및 제조예 2의 다당체를 사용하였으며, 양성 대조군으로 PSK (KrestinTM, from Coriolus versicolor), 미국 인삼(Panax quinquefolius) 뿌리로부터 제조된 CVT200 (COLD-FX), Biobran (arabinoxylan compound)을 사용하였고, 도 7의 NC는 무처리군, PC는 LPS 5㎍/㎖ 처리군이다.
도 7의 결과에서, 인삼열매 다당체는 양성 대조군으로 사용한 시료 및 홍삼 다당체에 비해 현저하게 우수한 IL-12 생성능을 나타내는 것을 알 수 있다.
[시험예 2] 대식세포에서의 TNF-α 생성능 평가
인삼열매 다당체의 대식세포에서의 TNF-α 생성능을 아래와 같이 측정하였다.
BALB/c 마우스에 5% 티오글리콜레이트(thioglycollate)를 1 ㎖ 복강주사하고 3일 후에 경추탈구법으로 마우스를 희생시킨 후, 복강에 DMEM 배지 10 mL를 주입하여 복강 내 세포(peritoneal exudative cells; PEC)를 수집하였다. 수집한 PEC를 96 well 배양 플레이트에 2.0×105 cells/well의 농도로 조정하여 분주하고 2시간 동안 배양하여 대식세포를 플레이트에 부착시킨 후, 배양액으로 세척하여 부착되지 않은 세포를 제거하였다. 대식세포에 인삼열매 정제 획분 시료 용액의 최종농도가 0.8 μg/㎖∼100 μg/mL이 되도록 시료를 첨가하고, 72시간 동안 배양하였다. 배양종료 후, 900 rpm에서 5분간 원심 분리하여 세포 배양액 상등액을 150 ㎕를 회수한 후, 배양 상등액에 유도 분비된 사이토카인들인 TNF-α의 함량을 측정하였다. 결과를 도 8에 나타낸다.
시료로 제조예 1 및 제조예 2의 다당체를 사용하였으며, 양성 대조군으로 PSK (KrestinTM, from Coriolus versicolor), 미국 인삼(Panax quinquefolius) 뿌리로부터 제조된 CVT200 (COLD-FX), Biobran (arabinoxylan compound)을 사용하였고, 도 8의 NC는 무처리군, PC는 LPS 5㎍/㎖ 처리군이다.
도 8의 결과에서, 인삼열매 다당체는 양성 대조군으로 사용한 시료 및 홍삼 다당체에 비해 현저하게 우수한 TNF-α 생성능을 나타내는 것을 알 수 있다.
[제형예 1] 정제
제조예 1의 다당체 100mg, 락토오스 400mg, 옥수수 전분 400mg 및 스테아린산 마그네슘 2mg을 혼합한 후, 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조하였다.
[제형예 2] 캡슐제
제조예 1의 다당체 100mg, 락토오스 400mg, 옥수수 전분 400mg 및 스테아린산 마그네슘 2mg을 혼합한 후, 통상의 캡슐제의 제조 방법에 따라서 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다.
[제형예 3] 과립제
제조예 1의 다당체 50mg, 무수결정 포도당 250mg 및 전분 550mg을 혼합하고, 유동층 과립기를 사용하여 과립으로 성형한 후 포에 충진하였다.
[제형예 4] 드링크제
본 발명 제조예 1의 다당체 50mg, 포도당 10g, 구연산 0.6g, 및 액상 올리고당 25g을 혼합한 후 정제수 300ml를 가하여 각 병에 200ml씩 충진한다. 병에 충진한 후 130℃ 에서 4~5 초간 살균하여 드링크제를 제조하였다.
[제형예 5] 주사제
하기 표에 기재된 조성에 따라 통상적인 방법으로 주사제를 제조하였다.
| 배합 성분 | 함량 |
| 제조예 1의 다당체 | 10-50 mg |
| 주사용 멸균 증류수 | 적량 |
| pH 조절제 | 적량 |
Claims (5)
- 면역질환 예방 또는 치료용 약학 조성물로서,
상기 조성물은 인삼(Panax ginseng C.A. Meyer)열매 다당체를 유효성분으로 포함하고,
상기 인삼열매 다당체는 아라비노즈, 갈락토즈, 갈락투론산 및 글루쿠론산을 포함하며,
상기 인삼열매 다당체는 β-글루코실 야리브 시약(βglucosyl Yariv reagent) 처리 시 표준 아라비노-β-3,6-갈락탄(arabino-β-3,6-galactan)를 100%으로 할 때, 50 % 이상의 반응을 나타내는, 면역질환 예방 또는 치료용 약학 조성물. - 제1항에 있어서,
상기 인삼열매 다당체는 인삼열매의 에탄올 비가용 분획 중 수용성 성분 유래인 것인, 약학 조성물. - 제1항에 있어서,
상기 면역질환은 인터루킨-6(IL-6) 발현 저하에 의한 면역질환인, 약학 조성물. - 제1항에 있어서,
상기 면역질환은 인터루킨-12(IL-12) 저하에 의한 면역질환인, 약학 조성물. - 제1항에 있어서,
상기 면역질환은 종양괴사인자-α(TNF- α) 저하에 의한 면역질환인, 약학 조성물.
Priority Applications (2)
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|---|---|---|---|
| KR1020200093589A KR20200096446A (ko) | 2020-07-28 | 2020-07-28 | 인삼열매 다당체를 포함하는 면역 증강용 조성물 |
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