KR20200092964A - Gp96-기반 암 치료법 - Google Patents

Abstract

본 개시내용은 특히, 암 치료를 필요로 하는 대상체에게 (a) 분비성 백신 단백질을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 발현 벡터를 포함하는 세포 및 (b) 면역 관문 저해제를 투여하는 것을 포함하는, 폐암(예를 들어, 비-소세포 폐암)을 포함하는 암을 치료하기 위한 조성물 및 방법에 관한 것이다.

Description

GP96-기반 암 치료법

본 개시내용은 폐암(예를 들어, 비-소세포 폐암)을 포함하는 암을 치료하기 위한 조성물 및 방법에 관한 것이다.

관련 출원에 대한 상호 참조문헌

본 출원은 2017년 11월 27일자로 출원된 미국 가특허 출원 제62/590,785호, 및 2018년 2월 27일자로 출원된 미국 가특허 출원 제62/635,958호를 우선권으로 주장하고 이러한 문헌의 혜택을 주장하며, 이러한 문헌의 전체 내용은 전문이 본 명세서에 참조에 의해 원용된다.

전자적으로 제출된 텍스트 파일의 서술

본 명세서과 함께 전자적으로 제출된 텍스트 파일의 내용은 전문이 본 명세서에 참조에 의해 원용된다: 서열목록의 컴퓨터 판독 가능한 포맷 복사본(파일명: HTB-027PC_Sequence Listing_ST25; 기록일자: 2018년 10월 23일; 파일 크기: 18.8 KB).

암은 전 세계적으로 심각한 건강 문제이다. 암의 검출 및 치료법에 있어서 이루어진 최근의 발전에도 불구하고, 예방 또는 치료를 위한 백신 또는 다른 보편적으로 성공적인 방법이 현재 이용 가능하지 않다. 일반적으로 화학요법 또는 수술과 방사선의 조합을 기초로 한 현 치료법은 수 많은 환자에서 적절치 않은 것으로 계속 입증되고 있다.

폐암은 미국에서 암 사망의 주요 원인으로서, 매년 140만 명 이상의 사망을 초래하고 있다. 질환이 진행된 병기에 도달할 때까지 임상 증상이 지연되기 때문에 조기 검출이 어렵다. 현 진단 방법은 흉부 x-선, 및 객담에 함유된 세포의 타입 분석 및 기관지 통로의 광섬유 검사를 포함한다. 치료 요법은 암의 타입 및 단계에 의해 결정되고, 수술, 방사선 요법 및/또는 화학요법을 포함한다. 폐암 및 다른 암에 대한 치료법의 상당한 연구에도 불구하고, 폐암은 효과적으로 진단하고 치료하기가 어렵다.

이에 따라, 환자에서 암, 특히, 폐암의 재발을 치료하고 예방하는 개선된 방법이 당해 분야에서 요구되고 있다. 본 개시내용은 이러한 요구를 충족시키고, 다른 관련된 장점을 추가로 제공한다.

본 개시내용은 세포-기반, gp96-포함 백신을 사용하여 "불응성(cold)" 종양을 "민감성(hot)" 종양, 예를 들어, 폐 종양으로 바꾸기 위한 CD8+ T 세포의 활성화 방법에 관한 것이다. 이에 따라, 다양한 양태에서, 본 방법은 종양, 예를 들어, 폐 종양이 항-종양 치료법, 예를 들어, 관문 억제 치료법에 대해 더욱 민감하도록 종양 T 세포 조절을 제공한다. 이에 따라, 다양한 실시형태에서, 본 방법은 관문 저해제에 반응하는 환자의 백분율의 확대 또는 (예를 들어, 애쥬번트 또는 네오애쥬번트로서) 관문 억제에 반응하지 않는 환자의 반응자로의 전환을 제공한다.

본 개시내용의 방법의 일 양태에서, 폐암의 치료는 (a) 분비성 백신 단백질을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 발현 벡터를 포함하는 세포, 및 (b) 면역 관문 저해제를 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함한다. 일부 실시형태에서, 면역 관문 저해제는 면역 관문 유전자를 억제한다. 일부 실시형태에서, 면역 관문 저해제는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함한다.

일부 실시형태에서, 면역 관문 저해제는 항-PD-1 항체 또는 이의 항원 결합 단편이다. 일부 실시형태에서, 면역 관문 저해제는 항-PD-L1 항체 또는 이의 항원 결합 단편이다.

일부 실시형태에서, 항-PD-1 또는 PD-L1 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 니볼루맙, 펨브롤리주맙, 피딜리주맙, BMS-936559, 아테졸리주맙 또는 아벨루맙이다. 일부 실시형태에서, 항-PD-1 항체는 니볼루맙 및 펨브롤리주맙으로부터 선택된다. 일부 실시형태에서, 항-PD-1 항체는 니볼루맙이다. 일부 실시형태에서, 항-PD-L1 항체는 두르발루맙이다.

본 개시내용의 방법의 일부 실시형태에서, 폐암은 소세포 폐암이다. 일부 실시형태에서, 폐암은 비-소세포 폐암이다. 일부 실시형태에서, 비-소세포 폐암은 선암이다. 일부 실시형태에서, 비-소세포 폐암은 편평상피 세포 암종 또는 대세포 폐암이다.

본 개시내용의 방법의 일부 실시형태에서, 본 방법은 폐암 재발을 감소시킨다. 일부 실시형태에서, 본 방법은 대상체에서 종양 항원 특이적 T 세포의 활성화 또는 증식을 증가시킨다. 일부 실시형태에서, 본 방법은 대상체에서 IFN-γ 분비 CD8+ T 세포의 활성화 또는 수를 증가시킨다.

실시형태에서, 본 방법은 특정 치료 요법, 예를 들어, 예시로서, 적어도 16주 동안 주 1회 용량의 HS-110 및 적어도 16주 동안 격주 1회 용량의 항-PD-1 항체, 또는 적어도 6주 동안 주 1회 용량의 HS-110 및 적어도 6주 동안 격주 1회 용량의 항-PD-1 항체를 포함한다. 실시형태에서, 본 방법은 항-PD-1 항체로의 단일요법에 대해 만족스럽게 반응적이지 않은 환자 집단, 예를 들어, PD-L1^음성 또는 PD-L1^낮음인 환자 또는 낮은 종양 침윤 림프구(tumor infiltrating lymphocyte: TIL) 상태(TIL^낮음)를 갖는 환자에서 효과적이다.

일부 실시형태에서, 대상체는 투여 후 면역 반응의 강력한 증가를 나타낸다. 일부 실시형태에서, 면역 반응의 강력한 증가는 CD8+ T 세포의 활성화 또는 증식에 있어서 기준선보다 적어도 2배 이상의 증가로서 규정된다. 일부 실시형태에서, CD8+ T 세포는 IFN-γ를 분비한다. 일부 실시형태에서, 본 방법은 면역 반응의 강력한 증가를 나타내지 않는 대상체와 비교하여 대상체에서 폐암 재발을 감소시키는 데 더 효과적이다. 일부 실시형태에서, 대상체는 투여 전에 적은 수의 종양 침윤 림프구(TIL)를 나타낸다. 일부 실시형태에서, 본 방법은 면역 관문 저해제 단독에 의한 치료와 비교하여 대상체에서 암 재발 또는 진행을 감소시키는 데 더 효과적이다.

본 개시내용의 방법의 일부 양태에서, 벡터는 포유류 발현 벡터이다. 일부 실시형태에서, 백신 단백질은 gp96 KDEL(서열번호 3) 서열이 선택적으로 결여된 분비성 gp96-Ig 융합 단백질이다. 일부 실시형태에서, gp96-Ig 융합 단백질에서 Ig 태그는 인간 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgM, IgA, 또는 IgE의 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시형태에서, 발현 벡터는 DNA를 포함한다. 일부 실시형태에서, 발현 벡터는 RNA를 포함한다.

일부 실시형태에서, 세포는 인간 종양 세포이다. 일부 실시형태에서, 세포는 방사선조사되거나 살아있고 약독화된 인간 종양 세포이다. 일부 실시형태에서, 인간 종양 세포는 규명된 NSCLC(established NSCLC), 방광암, 흑색종, 난소암, 신장 세포 암종, 전립선 암종, 육종, 유방 암종, 편평상피 세포 암종, 두경부 암종, 간세포 암종, 췌장 암종, 또는 결장 암종 세포주로부터의 세포이다. 일부 실시형태에서, 인간 종양 세포주는 NSCLC 세포주이다.

일부 실시형태에서, (a) 분비성 백신 단백질을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 발현 벡터를 포함하는 세포의 투여 전에, 그리고 (b) 면역 관문 저해제의 투여 전에, 대상체는 치료법을 받은 후에 질환 진행을 경험한 적이 있다. 일부 실시형태에서, 치료법은 면역 관문 저해제 치료법이다. 일부 실시형태에서, 치료법은 화학요법을 포함한다. 일부 실시형태에서, 대상체는 면역 관문 저해제 치료법에 대한 불량한 반응자이다. 일부 실시형태에서, 대상체는 면역 관문 저해제 치료법에 실패한 적이 있다. 일부 실시형태에서, 대상체의 질환은 면역 관문 저해제 치료법이 투여되었을 때에도 진행되었다.

실시형태에서, 환자는 치료법을 받은 후 질환 진행을 경험한 적이 있다. 실시형태에서, 치료법은 면역 관문 저해제 치료법이다. 실시형태에서, 치료법은 화학요법을 포함한다. 실시형태에서, 환자는 면역 관문 저해제 치료법에 대한 불량한 반응자이다. 실시형태에서, 환자는 면역 관문 저해제 치료법에 실패한 적이 있다. 실시형태에서, 환자의 질환은 면역 관문 저해제 치료법이 투여되었을 때에도 진행되었다.

도 1a는 비-소세포 폐암을 갖는 환자에서 다중 치료 요법과 병용하여 비아겐푸마투셀-L(viagenpumatucel-L)(HS-110)의 1b/2상 연구("DURGA" 시험)를 나타낸 비제한적인 개략도이다. 도 1b는 HS110-102 DURGA 시험 환자 집단의 개요이며, 도 1c는 DURGA 시험 설계의 개요이다.
도 2는 임상 시험 설계를 나타낸 비제한적인 개략도이다. 간단하게, 발달되고 이전에 치료된 폐암을 갖는 환자는 18주 동안 비아겐푸마투셀-L(HS-110)로 주 1회 치료되고 질환 진행 또는 사망까지 2주마다 니볼루맙 3 ㎎/㎏으로 치료되었다. 기준선에서 및 10주에 생검 조직은 종양 세포 상에서 CD8+ TIL 및 PD-L1 발현 수준에 대해 시험되었다. 말초 혈액은 1, 4, 7, 13주에 및 HS-110 치료의 종료 시에, 효소-결합 면역점(Enzyme-Linked ImmunoSpot: ELISPOT) 검정을 이용하여 면역 반응에 대해 분석되었다.
도 3a는 치료 의향(intention to treat: ITT), 퍼 프로토콜(Per Protocol: PP), 및 컴플리터(Completer) 집단에서 1차 효능 분석의 요약이다. 도 3b는 관문 저해제(checkpoint inhibitor: CPI) 나이브(naive) ITT 환자(좌측 칼럼)(CR = 완전한 반응; PR = 부분 반응; SD = 안정적인 질환; PD = 진행성 질환; 및 NE = 평가불가), CPI ITT 환자의 수(중앙 칼럼), 및 객관적 반응률(objective response rate: ORR)의 백분율에 대한 5회 RECIST 반응(RECIST 1.1)을 나타낸 표이다.
도 4는 퍼 프로토콜 집단에서 RECIST 1.1에 의한 최상의 표적 병소 반응을 나타낸 막대 그래프이다. 막대 그래프는 기준선 및 치료중(on-treatment) 스캔(n=38)을 갖는 모든 평가 가능한 ITT 환자(코호트 A)를 나타낸 것이다.
도 5는 퍼 프로토콜(PP) 집단(코호트 A)에서 표적 병소 반응의 지속성(durability)을 나타낸 선 그래프이다.
도 6은 ITT 환자 집단(코호트 A)에서 전체 생존율 데이터를 나타낸 생존 플롯이다.
도 7은 컴플리터 집단(코호트 A)에서 치료 기간에 따른 개선된 생존의 동향을 나타낸 생존 플롯이다. 상부 곡선은 16+ 용량이며, 하부 곡선은 16 미만의 용량이다.
도 8은 관문 저해제(CPI) 나이브 집단(코호트 A)에 대해 높은 TIL(10% 초과) 환자 및 낮은 TIL(10% 이하) 환자에 대한 기준선에서의 종양 침윤 림프구(TIL) 수준에 의한 전체 생존율을 나타낸 생존 플롯이다. 800일에 상부 곡선은 낮은 TIL이며, 하부 곡선은 높은 TIL이다.
도 9a 및 도 9b는 CPI 나이브 ITT 집단에서의 무진행 생존(progression free survival: PFS)(도 9a; 코호트 A), 및 CPI 나이브 ITT 집단에서 기준선에서의 TIL 수준에 의한 무진행 생존(도 9b; 코호트 A)을 나타낸 그래프이다. 도 9a에서, 평균 PFS(mPFS)는 58일이며, 1년 PFS는 23.9%였다. 도 9b에서, 낮은 TIL에 대한 1년 PFS는 31.7%이었으며, 높은 TIL에 대한 1년 PFS는 10.6%였다. 도 9b에서, 400일에 상부 곡선은 낮은 TIL이며, 하부 곡선은 높은 TIL이다.
도 10A 및 도 10B는 CPI 나이브인 퍼 프로토콜 집단(코호트 A)에서 종양 침윤 림프구(TIL) 상태를 기초로 한 최상의 표적 병소 반응을 나타낸 한 쌍의 막대 그래프이다. 도 10A는 10% 이하의 CD8+ TIL에서 기준선으로부터의 변화를 도시한 것이며, 도 10B는 10% 초과의 CD8+ TIL에서 기준선으로부터의 변화를 도시한 것이다.
도 11은 퍼 프로토콜 집단(코호트 A)에서 TIL 상태를 기초로 한 표적 병소 반응의 지속성을 도시한 2개의 선 그래프를 도시한 것이다. 도 11에서, "높은" 반응은 점선으로 표현되며, "낮은" 반응은 실선으로 표현된다.
도 12는 PD-L1 상태(코호트 A)를 기초로 한 최상의 표적 병소 반응을 나타낸 한 쌍의 막대 그래프이다. 도 12, 우측 패널은 퍼 프로토콜 집단에서 1% 초과의 PD-L1 종양 타입에서 기준선으로부터의 변화를 도시한 것이다. 도 12, 좌측 패널은 퍼 프로토콜 집단에서 1% 미만의 PD-L1 종양 타입에서 기준선으로부터의 변화를 도시한 것이다.
도 13은 퍼 프로토콜 집단(코호트 A)에서 PD-L1 상태를 기초로 한 표적 병소 반응의 지속성을 도시한 한 쌍의 선 그래프이다. 도 13은 1% 초과의 PD-L1 종양 타입에서 기준선으로부터의 변화를 도시한 것이고, 1% 미만의 PD-L1 종양 타입에서 기준선으로부터의 변화를 도시한 것이다. 도 13에서, "(-)ive" 반응은 점선으로 표현되며, "(+)ive" 반응은 실선으로 표현된다.
도 14는 최상의 표적 병소 반응 활성(코호트 A)에 대한 컴플리터 분석을 도시한 막대 그래프이다. 이는 비아겐푸마투셀-L로의 연구 치료를 완료한 각 환자를 도시한 것이고, RECIST 1.1에 따른 이의 최상의 평가에 대한 기준선으로부터의 종양 병소 크기의 변화율을 플롯팅한 것이다. 점선은 진행성 질환(PD, 최장 직경의 합[SLD]의 20% 초과 증가), 안정적인 질환(SD, SLD의 20% 미만 증가 및 30% 미만 감소) 및 부분 반응(PR, SLD의 30% 초과 감소)에 대한 RECIST 1.1 컷-오프를 나타낸다. 양성 ELISPOT 반응은 기준선에 비해 δ-INF 유도 활성의 2배 이상 증가한 것으로 결정되었다.
도 15는 ELISPOT 활성 및 생존을 도시한 플롯이다(코호트 A). 높음 = 시험된 환자의 중간값보다 높은 ELISPOT 활성. 낮음 = 시험된 환자의 중간값보다 낮은 ELISPOT 활성.
도 16은 ELISPOT 반응이 장기간 및 전체 생존과 상관관계가 있음을 도시한 플롯이다(코호트 A). 알파 확률을 0.1로 설정하는 경우, 전체 세포 HS110 백신 용해물로 환자 PBMC를 자극시킴으로 발생된 ELISPOT 스폿의 수는 치료 시에 환자의 전체 생존과 상당히 상관관계가 있다(p=0.06).
도 17a 및 도 17b는 기준선에서 PD-L1 수준에 의한, 무진행 생존(PFS)을 경험한(도 17a), 또는 전체 생존(OS)을 경험한(도 17b) CPI 나이브 환자의 백분율을 도시한 그래프이다(코호트 A). 도 17a에서, 200일에, 상부 곡선(실선)은 PD-L1이며, 하부 곡선(점선)은 PD-L1이다. 도 17b에서, 414일에, 상부 곡선(점선)은 PD-L1이며, 하부 곡선(실선)은 PD-L1이다.
도 18은 무진행 생존(PFS) ITT 환자 집단(코호트 B)에서 전체 생존율 데이터를 나타낸 생존 플롯이다. 이러한 환자 집단에서, 환자는 CPI 치료법을 이미 받았지만, 질환은 6개월 이상 후에 진행하였다. "중단(censoring)"은 인지된 데이터 관리 툴인 후속 조치를 잃은 환자를 의미한다.
도 19는 관문 저해제(CPI) 진행자(progressor) ITT 환자(좌측 칼럼); (CR= 완전한 반응; PR = 부분 반응; SD = 안정적인 질환; PD = 진행성 질환; 및 NE = 평가불가), CPI ITT 환자의 수(중앙 칼럼), 및 객관적 반응률(ORR)의 백분율(코호트 B)에 대한 5 RECIST 반응(RECIST 1.1)을 나타낸 표이다.
도 20은 관문 저해제(CPI) 진행자 ITT 환자(코호트 B)에 대한 최상의 표적 병소 반응을 도시한 막대 그래프이다.
도 21은 CPI 진행자 ITT 환자 집단(코호트 B)에 대한 표적 병소 반응의 지속성을 도시한 선 그래프이다.
도 22는 관문 저해제(CPI) 진행자 환자(코호트 B)에서 종양 침윤 림프구(TIL) 상태를 기초로 한 최상의 표적 병소 반응을 도시한 2개의 막대 그래프를 도시한 것이다. 도 22의 좌측 막대 그래프는 10% 이하의 CD8+ TIL(낮은 TIL)에서 기준선으로부터의 변화를 도시한 것이며, 도 22의 우측 막대 그래프는 10% 초과의 CD8+ TIL(높은 TIL)에서 기준선으로부터의 변화를 도시한 것이다.
도 23은 CPI 진행자 환자(코호트 B)에서 TIL 수준을 기초로 한 표적 병소 반응의 지속성을 도시한 2개의 선 그래프를 도시한 것이다. 도 23에서, "높은" 반응은 점선으로 표현되며, "낮은" 반응은 실선으로 표현된다.
도 24는 CPI 진행자 환자(코호트 B)에서 PD-L1 상태를 기초로 하여 최상의 표적 병소 반응을 도시한 2개의 막대 그래프를 도시한 것이다. 도 24에서 좌측 막대 그래프는 CPI 진행자 환자에 대한 1% 미만의 PD-L1 종양 타입에서 기준선으로부터의 변화를 도시한 것이다. 도 24의 우측 막대 그래프는 CPI 진행자 환자에 대한 1% 이상의 PD-L1 종양 타입에서 기준선으로부터의 변화를 도시한 것이다.
도 25는 CPI 진행자 환자(코호트 B)에서 PD-L1 상태를 기초로 한 표적 병소 반응의 지속성을 도시한 한 쌍의 선 그래프이다. 도 25는 1% 초과의 PD-L1 종양 타입에서 기준선으로부터의 변화를 도시한 것이고, 1% 미만의 PD-L1 종양 타입에서 기준선으로부터의 변화를 도시한 것이다. 도 25에서, "(-)ive" 반응은 점선으로 표현되며, "(+)ive" 반응은 실선으로 표현된다.

본 개시내용은 변형되고 분비성 열 충격 단백질(heat shock protein)(즉, gp96-Ig) 및 면역 관문 저해제(예를 들어, 항-PD-1 항체 또는 이의 항원 결합 단편)를 발현시키는 저용량의 세포주를 포함하는 병용 백신 치료법이 비-소세포 폐암(Non-Small Cell Lung Cancer: NSCLC)을 포함하는 폐암을 치료하는 데 특히 효과적이라는 발견을 기초로 한 것이다. 일부 실시형태에서, 본 방법은 폐암 재발을 감소시키고 생존을 개선시키기 위해 종양 세포에 대한 면역 반응을 상승적으로 활성화시킨다.

면역억제는 (NSCLC) 환자에서 다양한 방식으로서, 예를 들어, 종양 미세환경에서 관문 경로의 활성화에 의해 나타날 수 있다. 항-PD-1 단클론성 항체와 같은 관문 분자 신호전달을 방해하는 약물은 면역계에서 이의 제동을 해제할 수 있다. PD-1의 리간드인 PD-L1의 종양 발현은 관문 저해제에 대한 환자 반응에서 중요한 역할을 하며, 일반적으로, 관문 저해제에 대한 임상 반응은 PD-L1의 종양 발현 및 종양 침윤 림프구(TIL)의 존재를 필요로 한다.

비아겐푸마투셀-L은 잠재적인 항신생물성 활성을 갖는 열 충격 단백질 gp96 융합(gp96-Ig)의 재조합 분비 형태를 발현시키는 독점적, 동종이계 종양 세포 백신이다. 비아겐푸마투셀-L의 투여 시에, 방사선조사된 살아 있는 종양 세포는 피부의 피부층 내로 샤페론화된(chaperoned) 종양 관련 항원(TAA)과 함께 gp96-Ig를 연속적으로 분비하여, 내인성 종양 세포 상에 존재하는 TAA에 대해 반응하기 위해 항원 제시 세포, 자연살해 세포 및 프라이밍 강력한 세포독성 T 림프구(CTL)를 활성화시킨다. 또한, 비아겐푸마투셀-L은 재발하는 암 세포와 싸울 수 있는 장기 기억 T 세포를 유도한다.

본 발명은, 항-PD-1 작용제와 비아겐푸마투셀-L의 동시-투여가 관문 저해제의 효능을 연장하거나 증가시키면서 백신의 항-종양 활성을 향상시켜 상승 효과를 생성시킨다는 발견에 관한 것이다. 이러한 놀라운 효과는 낮은 PD-L1 상태를 갖는 환자에서도 나타난다(예를 들어, 이의 종양은 높은 수준의 PD-L1(PD-L1^높음)을 나타내지 않고 본 명세서에 기술된 바와 같이 PD-L1음성 또는 PD-L1^낮음이다). 즉, 비아겐푸마투셀-L 조성물의 첨가는 놀랍게도 임상적 이점을 나타내기 위해 일반적으로 항-PD-1 항체로 치료되지 않는 환자에게도 가능하다.

또한, 본 명세서에서 더욱 충분히 기술된 바와 같이, 예를 들어, 적은 양의 CD8+ TIL를 갖는 "불응성" 종양을 갖는 환자는 일반적으로, 항-PD-1 항체에 대해 매우 반응적이지 않아서, 일반적으로, 니볼루맙 단독으로 약 10% 반응 속도를 나타낸다[Teng et al. Cancer Research 75(11): June 1, 2015 참조]. 그러나, 본 명세서에 개략된 병용 치료법은 놀랍게도, 환자의 TIL 상탸와는 무관하게 동일하게 효과적이어서, 비아겐푸마투셀-L이 TIL^낮음 환자에서 항-PD-1 치료 효능을 확장시킴을 나타낸다.

이에 따라, 본 발명은 NSCLC를 가진 환자를 치료하기 위해 비아겐푸마투셀-L과 항-PD-1 항체의 병용 치료법을 제공한다.

본 발명은 항-PD-1 항체와 함께 비아겐푸마투셀-L을 동시-투여함으로써 암, 특히 비-소세포 폐암("NSCLC")을 치료하는 방법을 제공한다. 당업자에 의해 이해되는 바와 같이, 이러한 문맥에서 "동시-투여"는 환자가 치료 시간 동안 소정 용량의 비아겐푸마투셀-L뿐만 아니라 소정 용량의 항-PD-1 항체를 수용함을 의미한다. 일반적으로, 이러한 치료법은 특히, 항-PD-1 항체가 일반적으로 비아겐푸마투셀-L 보다 덜 자주 전달되기 때문에, 혼합물로서보다는 환자에게 별도의 투여 경로에 의해 전달된다.

본 발명은 비아겐푸마투셀-L과 항-PD-1 항체의 조합물을 제공한다. 비아겐푸마투셀-L(때때로 또한 본 명세서에서 "HS-110"으로서 지칭됨)은 본 명세서에 기술된 gp96-Ig인 융합 단백질을 암호화하는 벡터를 포함하는 세포 조성물이다. 열 충격 단백질(hsp) gp96은 항원-제시 또는 수지상 세포 상에서 발현되는 MHC 클래스 I 분자로 향하는 펩타이드에 대한 샤페론으로서 역할을 한다. 종양 세포로부터 수득되고 백신으로서 사용된 Gp96은 특정 종양 면역력을 가능하게 종양-특이적 펩타이드의 수송을 통해 항원-제시 세포(APC)로 유도할 수 있다[J Immunol 1999, 163(10):5178-5182]. 예를 들어, gp96-관련 펩타이드는 스캐빈저 수용체(CD91)의 흡수 시에 수지상 세포(DC)에 의해 CD8 세포로 교차-제시된다.

이에 따라, 본 발명은 gp-96-Ig 융합 단백질을 암호화하는 벡터를 포함하는 세포를 제공한다.

본 발명의 비아겐푸마투셀-L 조성물은 gp-96-Ig 융합 단백질을 암호화하는 벡터를 포함한다. 이에 따라, 본 명세서에 제공된 벡터는 gp96-Ig 융합 단백질을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 함유한다. 인간 gp96의 암호 영역은 길이가 2,412개 염기이고(서열번호 1), 아미노 말단에서 21개의 아미노산 신호 펩타이드, 소수성 잔기에서 풍부한 잠재적인 막관통 영역, 및 카복실 말단에서 ER 보유 펩타이드 서열을 포함하는 803개 아미노산 단백질(서열번호 2)을 암호화한다[GENBANK 수탁번호 X15187; 문헌[Maki et al., Proc Natl Acad Sci USA 1990, 87:5658-5562] 참조].

인간 gp96 유전자를 암호화하는 예시적인 핵산 서열, KDEL 결실, 및 뉴클레오타이드 서열은 서열번호 4에 나타나 있다. 추가적으로, 본 명세서에서 주지된 바와 같이, gp96의 마지막 4개의 아미노산, "KDEL"은 본 명세서에서 논의된 바와 같이 결실된다. KDEL은 일반적으로 세포질 망상 구조-내성 샤페론 펩타이드로서 역할을 하는 유지 서열이며, 본 발명은 본 명세서에서 논의된 바와 같이 분비성 gp96 융합 단백질에 의존적이다.

일부 실시형태에서, gp96-Ig 융합 단백질의 gp96 부분은 야생형 gp96 서열(예를 들어, 서열번호 2에 기술된 인간 서열) 전부 또는 부분을 함유할 수 있다. 예를 들어, 분비성 gp96-Ig 융합 단백질은 서열번호 2의 최초 799개 아미노산을 포함하며, 이에 따라, 이는 C-말단 KDEL이 결여되어 있다(서열번호 3; 내형질 유지 서열 없는 아미노산은 서열번호 4로서 나타냄).

추가적으로, 융합 단백질의 gp96 부분은 야생형 gp96 서열의 최초 799개 아미노산과 비교하여 하나 이상의 치환, 결실 또는 첨가를 함유한 아미노산 서열을 가질 수 있으며, 이에 따라, 이는 야생형 폴리펩타이드와 적어도 90%(예를 들어, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%) 서열 동일성을 갖는다.

단백질 서열과 관련하여 "아미노산 서열 동일성 퍼센트(%)"는 필요한 경우에, 최대 서열 동일성 퍼센트를 달성하기 위해 그리고 서열 동일성의 일부로서 임의의 보존적 치환을 고려하지 않고, 서열을 정렬하고 갭을 도입한 후에, 특정(부모) 서열에서 아미노산 잔기와 동일한 후보 서열에서 아미노산 잔기의 백분율로서 규정된다. 아미노산 서열 동일성 퍼센트를 결정하기 위한 정렬은 당해 분야의 기술에 속하는 다양한 방식으로, 예를 들어, BLAST, BLAST-2, ALIGN 또는 Megalign(DNASTAR) 소프트웨어와 같은 공개적으로 입수 가능한 컴퓨터 소프트웨어를 이용하여 달성될 수 있다. 당업자는 비교되는 서열의 전장에 걸쳐 최대 정렬을 달성하기 위해 요구되는 임의의 알고리즘을 포함하는, 정렬을 측정하기 위한 적절한 파라미터를 결정할 수 있다. 하나의 특정 프로그램은 미국공개 제20160244525호의 문단 [0279] 내지 [0280]에서 개략된 ALIGN-2 프로그램이며, 이러한 문헌은 참고로 포함된다. 핵산 서열에 대한 다른 근사치인 정렬은 문헌[Smith and Waterman, Advances in Applied Mathematics, 2:482-489 (1981)]의 로컬 상동성 알고리즘에 의해 제공된다. 이러한 알고리즘은 문헌[Dayhoff, Atlas of Protein Sequences and Structure, M.O. Dayhoff ed., 5 suppl. 3:353-358, National Biomedical Research Foundation, Washington, D.C., USA]에 의해 개발되고 문헌[Gribskov, Nucl. Acids Res. 14(6):6745-6763 (1986)]에 의해 일반화된 스코어링 행렬을 이용함으로써 아미노산 서열에 적용될 수 있다.

서열의 퍼센트 동일성을 결정하기 위한 이러한 알고리즘의 구현의 예는 "BestFit" 유틸리티 적용에서 Genetics Computer Group(위스콘신 매디슨 소재)에 의해 제공된다. 이러한 방법을 위한 디폴트 파라미터는 Wisconsin Sequence Analysis Package Program Manual, Version 8 (1995)(Genetics Computer Group(위스콘신 매디슨 소재)로부터)이 기술된다. 본 발명의 문맥에서 퍼센트 동일성을 확립시키는 다른 방법은 John F. Collins 및 Shane S. Sturrok에 의해 개발된 에딘버러 대학교(University of Edinburgh)가 저작권을 갖고 IntelliGenetics, Inc.(캘리포니아 마운틴 뷰 소재)에 의해 배포된 프로그램의 MPSRCH 패키지를 이용하는 것이다. 이러한 패키지의 묶음(suite)으로부터, Smith-Waterman 알고리즘은 디폴트 파라미터가 스코어링 표를 위해 이용되는 경우에 이용될 수 있다(예를 들어, 12의 갭 오픈 페널티, 1의 갭 연장 페널티, 및 6의 갭). 생성된 데이터로부터, "매치" 값은 "서열 동일성"을 반영한다. 서열들 간의 퍼센트 동일성 또는 유사성을 계산하기 위한 다른 적합한 프로그램은 일반적으로, 당해 분야에 공지되어 있으며, 예를 들어, 다른 정렬 프로그램은 BLAST이며, 이는 디폴트 파라미터와 함께 이용된다. 예를 들어, BLASTN 및 BLASTP는 하기 디폴트 파라미터를 이용하여 이용될 수 있다: 유전 암호 = 표준; 필터 = 없음; 가닥 = 둘 모두; 컷오프(cutoff) = 60; 예상(expect) = 10; 행렬(Matrix) = BLOSUM62; 서술(Description) = 50개 서열; 하기에 의한 분류 = 높은 스코어(HIGH SCORE); 데이터베이스 = 비-중복(non-redundant), 유전자은행 + EMBL + DDBJ + PDB + 유전자은행 CDS 번역 + 스위스 단백질 + Spupdate + PIR. 이러한 프로그램의 세부사항은 blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi 앞에 http://를 배치시킴으로써 위치된 인터넷 주소에서 확인될 수 있다.

본 발명의 아미노산 서열("본 발명의 서열")과 부모 아미노산 서열 간의 동일성의 정도는 "본 발명의 서열"의 길이 또는 부모 서열의 길이 중 가장 짧은 길이로 나누어진, 2개의 서열의 정렬에서 정확히 매칭되는 수로서 계산된다. 결과는 동일성 백분율로 표현된다.

이에 따라, 일부 실시형태에서, 하기에 기술되는 바와 같은 gp96-Ig 융합 폴리펩타이드를 암호화하는 핵산의 gp96 성분은 하나 이상의 아미노산 위치에서 야생형 gp96 폴리펩타이드와는 상이한 아미노산 서열을 암호화할 수 있다.

본 발명의 비아겐푸마투셀-L 조성물은 융합 단백질로서 gp-96, gp-96-Ig를 사용한다. 본 명세서에 기술된 바와 같이, gp96-Ig는 선택적 링커를 사용하여, gp96, 일반적으로 세포질 망상 구조-잔류 샤페론 펩타이드의 KDEL 보유 서열을 인간 IgG1의 Fc 부분으로 대체함으로써 작제화된다. 본 명세서에서 사용되는, 인간 IgG1의 Fc 부분은 CH2-CH3 도메인을 포함하고, N-말단에서 힌지 영역을 선택적으로 포함할 수 있다(힌지-CH2-CH3). 힌지가 존재하지 않는 Fc 도메인의 서열은 서열번호 5에 나타나 있다. 일부 경우에, IgG1 힌지는 gp96 단백질 및 Fc 도메인을 연결시키는 링커로서 역할을 한다.

일부 실시형태에서, gp96-Ig 융합 단백질을 포함하는 벡터는 링커를 포함한다. 다양한 실시형태에서, 링커는 천연 발생 다중-도메인 단백질로부터 유도될 수 있거나, 예를 들어, 문헌[Chichili et al., (2013), Protein Sci. 22(2):153-167, Chen et al., (2013), Adv Drug Deliv Rev. 65(10):1357-1369]에 기술된 바와 같은 경험적 링커이며, 이러한 문헌의 전체 내용은 본 명세서에 참조에 의해 포함된다. 일부 실시형태에서, 링커는 문헌[Chen et al., (2013), Adv Drug Deliv Rev. 65(10):1357-1369 및 Crasto et. al., (2000), Protein Eng. 13(5):309-312]에 기술된 것과 같은 링커 설계 데이터베이스 및 컴퓨터 프로그램을 이용하여 설계될 수 있으며, 이러한 문헌의 전체 내용은 본 명세서에 참조에 의해 포함된다.

일부 실시형태에서, 링커는 PEG와 같은 합성 링커이다. 일부 실시형태에서, 링커는 폴리펩타이드이다. 일부 실시형태에서, 링커는 약 100개 미만의 아미노산 길이이다. 예를 들어, 링커는 약 100, 약 95, 약 90, 약 85, 약 80, 약 75, 약 70, 약 65, 약 60, 약 55, 약 50, 약 45, 약 40, 약 35, 약 30, 약 25, 약 20, 약 19, 약 18, 약 17, 약 16, 약 15, 약 14, 약 13, 약 12, 약 11, 약 10, 약 9, 약 8, 약 7, 약 6, 약 5, 약 4, 약 3, 또는 약 2개 미만의 아미노산 길이이다. 일부 실시형태에서, 링커는 유연하다. 다른 실시형태에서, 링커는 강성이다. 다양한 실시형태에서, 링커는 실질적으로, 글리신 및 세린 잔기로 이루어진다(예를 들어, 약 30%, 또는 약 40%, 또는 약 50%, 또는 약 60%, 또는 약 70%, 또는 약 80%, 또는 약 90%, 또는 약 95%, 또는 약 97% 글리신 및 세린).

일부 실시형태에서, 링커는 항체(예를 들어, IgG, IgA, IgD, 및 IgE의, 하위클래스(예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, 및 IgG4, 및 IgA1 및 IgA2)를 포함함) 힌지 영역이다. IgG, IgA, IgD, 및 IgE 클래스 항체에서 발견된 힌지 영역은 유연한 스페이서로서 작용하여, Fab 부분이 공간적으로 자유롭게 이동할 수 있게 한다. 불변 영역과는 대조적으로, 힌지 도메인은 구조적으로 다르며, 이는 면역글로불린 클래스 및 하위클래스 중에서 서열 및 길이 둘 모두가 다양한다. 예를 들어, 힌지 영역의 길이 및 유연성은 IgG 하위클래스에 따라 달라진다. IgG1의 힌지 영역은 아미노산 216 내지 231을 포함하며, 이러한 것이 자유롭게 유연하기 때문에, Fab 단편은 이의 대칭축 둘레로 회전하고 2개의 중쇄간 다이설파이드 브리지 중 첫번째에서 중심을 갖는 구체 내에서 이동할 수 있다. IgG2는 IgG1보다 더 짧은 힌지를 가지며, 이는 12개의 아미노산 잔기 및 4개의 다이설파이드 브리지를 갖는다. IgG2의 힌지 영역은 글리신 잔기가 결여되고, 비교적 짧고, 추가 중쇄간 다이설파이드 브리지에 의해 안정화된, 강성 폴리-프롤린 이중 헬릭스를 함유한다. 이러한 성질은 IgG2 분자의 유연성을 제한한다. IgG3은 62개의 아미노산(21개의 프롤린 및 11개의 시스테인을 포함함)을 함유하여 비유연성 폴리-프롤린 이중 헬릭스를 형성하는 이의 독특한 연장된 힌지 영역(IgG1 힌지의 약 4배 길다)에 의해 다른 하위클래스와 상이하다. IgG3에서, Fab 단편은 Fc 단편으로부터 비교적 멀리 떨어져 있어서, 분자가 더 큰 유연성을 제공한다. IgG3에서 연장된 힌지는 다른 하위클래스와 비교하여 이의 더 높은 분자량의 원인이 된다. IgG4의 힌지 영역은 IgG1보다 더 짧으며, 이의 유연성은 IgG1과 IgG2의 유연성 사이의 중간이다. 힌지 영역의 유연성은 보고에 따르면 순서 IgG3>IgG1>IgG4>IgG2로 감소한다.

추가적인 예시적인 링커는 서열 LE, GGGGS, (GGGGS)n (n=1-4), (Gly)8, (Gly)6, (EAAAK)n (n=1-3), A(EAAAK)nA (n=2-5), AEAAAKEAAAKA, A(EAAAK)4ALEA(EAAAK)4A, PAPAP, KESGSVSSEQLAQFRSLD, EGKSSGSGSESKST, GSAGSAAGSGEF, 및 (XP)n을 갖는 링커를 포함하지만, 이로 제한되지 않으며, 여기서, X는 임의의 아미노산, 예를 들어, Ala, Lys, 또는 Glu를 지정한다.

일부 실시형태에서, 링커는 기능성일 수 있다. 예를 들어, 비제한적으로, 링커는 폴딩 및/또는 안정성을 개선시키고/시키거나, 발현을 개선시키고/시키거나, 약동학을 개선시키고/시키거나, 본 조성물의 생체활성을 개선시키기 위해 기능할 수 있다. 다른 예에서, 링커는 특정 세포 타입 또는 위치에 조성물을 표적화하기 위해 기능할 수 있다.

일부 실시형태에서, gp96 펩타이드는 뮤린 IgG1의 힌지, CH2 및 CH3 도메인에 융합될 수 있다[Bowen et al., J Immunol 1996, 156:442-449]. IgG1 분자의 이러한 영역은 일반적으로 Ig 분자에서 다른 시스테인과 다이설파이드 결합에서 수반되는 3개의 시스테인 잔기를 함유한다. 시스테인이 태그로서 기능하기 위해 펩타이드에 대해 요구되지 않기 때문에, 이러한 시스테인 잔기 중 하나 이상은 예를 들어, 세린과 같은 다른 아미노산 잔기에 의해 치환될 수 있다.

일부 실시형태에서, 본 개시내용은 변형되고 분비성 열 충격 단백질(즉, gp96-Ig)을 암호화하는 벡터를 제공한다. gp96-Ig 융합 서열을 암호화하는 핵산은 미국특허 제8,685,384호에 기술된 방법을 이용하여 생성될 수 있으며, 이러한 문헌은 전문이 본 명세서에 참조에 의해 포함된다.

면역글로불린 경쇄 또는 중쇄 불변 영역을 암호화하는 DNA는 공지되어 있고 cDNA 라이브러리로부터 용이하게 입수 가능하다[예를 들어, Adams et al., Biochemistry 1980, 19:2711-2719; Gough et al., Biochemistry 1980 19:2702-2710; Dolby et al., Proc Natl Acad Sci USA 1980, 77:6027-6031; Rice et al., Proc Natl Acad Sci USA 1982, 79:7862-7865; Falkner et al., Nature 1982, 298:286-288; 및 Morrison et al., Ann Rev Immunol 1984, 2:239-256 참조]. 다수의 면역학적 시약 및 표지화 시스템이 면역글로불린의 검출을 위해 이용 가능하기 때문에, gp96-Ig 융합 단백질은 당해 분야에 공지된 다양한 면역학적 기술, 예를 들어, 효소-연결 면역흡착제 검정(ELISA), 면역침강, 및 형광 활성 세포 분류(FACS)에 의해 용이하게 검출되고 정량화될 수 있다. 유사하게, 펩타이드 태그가 용이하게 이용 가능한 항체를 갖는 에피토프인 경우에, 이러한 시약은 gp96-Ig 융합을 검출하고, 정량화하고, 단리시키기 위해 상기에 언급된 기술과 함께 사용될 수 있다.

당해 분야에 공지된 다양한 리더 서열은 또한, 박테리아 및 포유류 세포로부터 gp96-Ig 융합 단백질의 효율적인 분비를 위해 사용될 수 있다[von Heijne, J Mol Biol 1985, 184:99-105 참조]. 리더 펩타이드는 의도된 숙주 세포를 기초로 하여 선택될 수 있으며, 다수는 박테리아, 효모, 바이러스, 동물, 및 포유류 서열을 포함한다. 예를 들어, 단순 포진 당단백질 D 리더 펩타이드는 다양한 포유류 세포에서 사용하기에 적합하다. 포유류 세포에서 사용하기 위한 다른 리더 펩타이드는 마우스 면역글로불린 카파 사슬의 V-J2-C 영역으로부터 수득될 수 있다[Bernard et al., Proc Natl Acad Sci USA 1981, 78:5812-5816]. 펩타이드 태그 또는 리더 펩타이드를 암호화하는 DNA 서열은 라이브러리 또는 상업적 공급업체로부터 공지되거나 용이하게 입수 가능하고, 본 명세서에 기술된 융합 단백질에서 적합하다.

또한, 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 gp96은 하나 이상의 백신 단백질로 치환될 수 있다. 예를 들어, 다양한 열 충격 단백질은 백신 단백질 중에 있다. 다양한 실시형태에서, 열 충격 단백질은 작은 hsp, hsp40, hsp60, hsp70, hsp90, 및 hsp110 패밀리 구성원 중 하나 이상이며, 이의 단편, 변형체, 돌연변이체, 이들의 유도체 또는 조합을 포함한다[Hickey, et al., 1989, Mol . Cell. Biol . 9:2615-2626; Jindal, 1989, Mol . Cell. Biol . 9:2279-2283].

일부 실시형태에서, 본 개시내용은 원핵 및 진행 세포에서 발현될 수 있는 백신 단백질 융합 단백질(예를 들어, gp96-Ig 융합 단백질)을 암호화하는 핵산 작제물을 제공한다. 예를 들어, 본 개시내용은 백신 단백질 융합(예를 들어, gp96-Ig 융합)을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 함유한 발현 벡터(예를 들어, DNA- 또는 RNA-기반 벡터)를 제공한다. 또한, 본 발명은 본 명세서에 기술된 벡터를 제조하는 방법뿐만 아니라 암호화된 폴리펩타이드의 발현을 위해 적절한 숙주 세포 내에 벡터를 도입하는 방법을 제공한다. 일반적으로, 본 명세서에 제공된 방법은 백신 단백질 융합 단백질(예를 들어, gp96-Ig 융합 단백질)을 암호화하는 핵산 서열을 작제화하고 발현 벡터 내에 융합 단백질을 암호화하는 서열을 클로닝하는 것을 포함한다. 발현 벡터는 숙주 세포 내에 도입될 수 있으며, 이는 예를 들어, 암을 치료하기 위해 대상체에게 투여될 수 있다. 예를 들어, gp96-Ig 기반 백신은 종양 항원에 대해 항원 특이적 면역 반응을 자극시키기 위해 생성될 수 있다.

일부 실시형태에서, 백신 단백질 융합(예를 들어, gp96-Ig 융합)을 암호화하는 cDNA 또는 DNA 서열은 통상적인 DNA 클로닝 및 돌연변이유발 방법, DNA 증폭 방법, 및/또는 합성 방법을 이용하여 수득될 수 있다(그리고, 요망되는 경우, 변형될 수 있다). 일반적으로, 백신 단백질 융합 단백질(예를 들어, gp96-Ig 융합 단백질)을 암호화하는 서열은 발현 전에 유전적 변형 및 복제 목적을 위해 클로닝 벡터 내에 삽입될 수 있다. 각 암호 서열은 적합한 숙주 세포에서 암호화된 단백질을 시험관내 및 생체내에서 발현시킬 목적을 위해, 프로모터와 같은 조절 구성요소에 작동 가능하게 연결될 수 있다.

원핵 벡터 및 진핵 벡터 둘 모두는 본 명세서에 제공된 방법에서 백신 단백질(예를 들어, gp96-Ig)의 발현을 위해 사용될 수 있다. 원핵 벡터는 이. 콜라이(E. coli) 서열을 기초로 한 작제물을 포함한다[예를 들어, Makrides, Microbiol Rev 1996, 60:512-538 참조]. 이. 콜라이에서 발현을 위해 사용될 수 있는 조절 영역의 비제한적인 예는 lac, trp, lpp, phoA, recA, tac, T3, T7 및 λPL을 포함한다. 원핵 발현 벡터의 비제한적인 예는 λgt 벡터 시리즈, 예를 들어, λgt11(Huynh et al., in "DNA Cloning Techniques, Vol. I: A Practical Approach," 1984, (D. Glover, ed.), pp. 49-78, IRL Press, Oxford), 및 pET 벡터 시리즈(Studier et al., Methods Enzymol 1990, 185:60-89)를 포함할 수 있다. 그러나, 원핵 숙주-벡터 시스템은 포유류 세포의 많은 전사후 처리를 수행하지 못할 수 있다. 이에 따라, 진핵 숙주-벡터 시스템이 특히 유용할 수 있다.

다양한 조절 영역은 포유류 숙주 세포에서 백신 단백질(예를 들어, gp96-Ig)의 발현 및 T 세포 공동자극 융합을 위해 사용될 수 있다. 예를 들어, SV40 조기 및 후기 프로모터, 시토메갈로바이러스(CMV) 즉시 초기 프로모터, 및 Rous 육종 바이러스 긴 말단 반복부(RSV-LTR) 프로모터가 사용될 수 있다. 포유류 세포에서 유용할 수 있는 유도성 프로모터는 비제한적으로, 메탈로티오네인 II 유전자, 마우스 유선 종양 바이러스 글루코코르티코이드 반응성 긴 말단 반복부(MMTV-LTR), β-인터페론 유전자, 및 hsp70 유전자와 관련된 프로모터를 포함한다[Williams et al., Cancer Res 1989, 49:2735-42; 및 Taylor et al., Mol Cell Biol 1990, 10:165-75 참조]. 열 충격 프로모터 또는 스트레스 프로모터는 또한, 재조합 숙주 세포에서 융합 단백질의 발현을 유도하기 위해 유리할 수 있다.

일 양태에서, 본 개시내용은 치료에 반응하여 일시적으로 높은 수준의 발현을 수행할 수 있는 유도성 프로모터의 사용을 고려한다. 예시적인 유도성 발현 조절 영역은 소분자 화학적 화합물과 같은 치료로 자극된 유도성 프로모터를 포함하는 것을 포함한다. 특정 예는 예를 들어, 미국특허 제5,989,910호, 제5,935,934호, 제6,015,709호, 및 제6,004,941호에서 확인될 수 있으며, 이러한 문헌 각각은 전문이 본 명세서에 참조에 의해 포함된다.

조직 특이성을 나타내고 유전자 변형 동물에서 사용된 동물 조절 영역은 또한, 특정 조직 타입의 종양 세포; 췌장 선포 세포에서 활성적인 엘라스타제 I 유전자 조절 영역(Swift et al., Cell 1984, 38:639-646; Ornitz et al., Cold Spring Harbor Symp Quant Biol 1986, 50:399-409; 및 MacDonald, Hepatology 1987, 7:425-515); 췌장 베타 세포에서 활성인 인슐린 유전자 조절 영역(Hanahan, Nature 1985, 315:115-122), 림프구 세포에서 활성인 면역글로불린 유전자 조절 영역(Grosschedl et al., Cell 1984, 38:647-658; Adames et al., Nature 1985, 318:533-538; 및 Alexander et al., Mol Cell Biol 1987, 7:1436-1444), 고환, 유방, 림프구 및 비만 세포에서 활성적인 마우스 유선 종양 바이러스 조절 영역(Leder et al., Cell 1986, 45:485-495), 간에서 활성적인 알부민 유전자 조절 영역(Pinkert et al., Genes Devel , 1987, 1:268-276), 간에서 활성직인 알파-태아단백질 유전자 조절 영역(Krumlauf et al., Mol Cell Biol 1985, 5:1639-1648; 및 Hammer et al., Science 1987, 235:53-58); 간에서 활성적인 알파 1-항트립신 유전자 조절 영역(Kelsey et al., Genes Devel 1987, 1:161-171), 골수 세포에서 활성적인 베타-글로빈 유전자 조절 영역(Mogram et al., Nature 1985, 315:338-340; 및 Kollias et al., Cell 1986, 46:89-94); 뇌의 희소돌기 세포에서 활성적인 미엘린 염기성 단백질 유전자 조절 영역(Readhead et al., Cell 1987, 48:703-712); 골근육에서 활성적인 미오신 경쇄-2 유전자 조절 영역(Sani, Nature 1985, 314:283-286), 및 시상하부에서 활성적인 생식샘자극 방출 호르몬 유전자 조절 영역(Mason et al., Science 1986, 234:1372-1378)에서 사용될 수 있다.

발현 벡터는 또한, 전사 인헨서 구성요소, 예를 들어, SV40 바이러스, B형 간염 바이러스, 시토메갈로바이러스, 면역글로불린 유전자, 메탈로티오네인, 및 β-액틴에서 발견된 것을 포함할 수 있다[Bittner et al., Meth Enzymol 1987, 153:516-544; 및 Gorman, Curr Op Biotechnol 1990, 1:36-47 참조]. 또한, 발현 벡터는 하나 초과의 타입의 숙주 세포에서 벡터의 유지 및 복제, 또는 숙주 염색체에 벡터의 통합을 허용하는 서열을 함유할 수 있다. 이러한 서열은 비제한적으로, 복제 기원(origin), 자율 복제 서열(ARS), 동원체 DNA, 및 텔로미어 DNA를 포함한다.

또한, 발현 벡터는 본 명세서에 기술된 바와 같이 융합 단백질을 암호화하는 DNA를 함유하는 숙주 세포를 초기에 단리시키거나, 식별하거나, 추적하기 위해 하나 이상의 선택 가능하거나 스크리닝 가능한 마커 유전자를 함유할 수 있다. gp96-Ig 및 T 세포 공동자극 융합 단백질의 장기적이고 고수율의 생산을 위해, 포유류 세포에서 안정한 발현이 유용할 수 있다. 다수의 선택 시스템은 포유류 세포를 위해 사용될 수 있다. 예를 들어, 단순 포진 바이러스 티미딘 키나제(Wigler et al., Cell 1977, 11:223), 하이포크산틴-구아닌 포스포리보실트랜스퍼라제(Szybalski and Szybalski, Proc Natl Acad Sci USA 1962, 48:2026), 및 아데닌 포스포리보실트랜스퍼라제(Lowy et al., Cell 1980, 22:817) 유전자는 각각 tk-, hgprt-, 또는 aprt-세포에서 사용될 수 있다. 또한, 대사길항물질 내성은 메토트렉세이트에 대한 내성을 부여하 다이하이드로폴레이트 리덕타제(dhfr)는[Wigler et al., Proc Natl Acad Sci USA 1980, 77:3567; O'Hare et al., Proc Natl Acad Sci USA 1981, 78:1527]; 마이코페놀산에 대한 내성을 부여하는 gpt[Mulligan and Berg, Proc Natl Acad Sci USA 1981, 78:2072]; 아미노글리코사이드 G-418에 대한 내성을 부여하는 네오마이신 포스포트랜스퍼라제(neo)[Colberre-Garapin et al., J Mol Biol 1981, 150:1]; 및 하이그로마이신에 대한 내성을 부여하는 하이그로마이신 포스포트랜스퍼라제(hyg)[Santerre et al., Gene 1984, 30:147]에 대한 선택의 기초로서 사용될 수 있다. 다른 선택 가능한 마커, 예를 들어, 히스티디놀 및 Zeocin™이 또한 사용될 수 있다.

다수의 바이러스-기반 발현 시스템은 또한, gp96-Ig를 생성하기 위해 포유류 세포와 함께 사용될 수 있다. DNA 바이러스 골격을 사용한 벡터는 시미안 바이러스 40(SV40)(Hamer et al., Cell 1979, 17:725), 아데노바이러스(Van Doren et al., Mol Cell Biol 1984, 4:1653), 아데노-관련 바이러스(McLaughlin et al., J Virol 1988, 62:1963), 및 소 파필로마 바이러스(Zinn et al., Proc Natl Acad Sci USA 1982, 79:4897)로부터 유래되었다. 아데노바이러스가 발현 벡터로서 사용될 때, 공여체 DNA 서열은 아데노바이러스 전사/번역 조절 복합물, 예를 들어, 후기 프로모터 및 3중 리더 서열에 결찰될 수 있다. 이러한 융합 유전자는 이후에, 시험관내 또는 생체내 재조합에 의해 아데노바이러스 게놈에 삽입될 수 있다. 바이러스 게놈의 비필수 영역(예를 들어, 영역 E1 또는 E3)에 삽입은 생존하고 감염된 숙주에서 이종 산물을 발현할 수 있는 재조합 바이러스를 야기시킬 수 있다[예를 들어, Logan and Shenk, Proc Natl Acad Sci USA 1984, 81:3655-3659 참조].

소 파필로마바이러스(BPV)는 사람을 포함하는 많은 고등 척추동물을 감염시킬 수 있으며, 이의 DNA는 에피솜으로서 복제한다. 다수의 셔틀 벡터는 포유류 세포에서 안정한 다중카피(20 내지 300 카피/세포) 염색체외 구성요소로서 존재하는 재조합 유전자 발현을 위해 개발되었다. 통상적으로, 이러한 벡터는 BPV DNA의 세그먼트(전체 게놈 또는 69% 형질전환 단편), 넓은 숙주 범위를 갖는 프로모터, 폴리아데닐화 신호, 스플라이스 신호, 선택 가능한 마커, 및 이. 콜라이에서 벡터를 전파시킬 수 있는 "무독(poisonless)" 플라스미드 서열을 함유한다. 박테리아에서 작제화 및 증폭 후에, 발현 유전자 작제물은 예를 들어, 칼슘 포스페이트 공침전에 의해 배양된 포유류 세포 내에 트랜스펙션된다. 형질전환된 표현형을 나타내지 않는 그러한 숙주 세포에 대해, 형질전환체의 선택은 지배적 선택 가능한 마커, 예를 들어, 히스티디놀 및 G418 내성을 사용함으로써 달성된다.

대안적으로, vaccinia 7.5K 프로모터가 사용될 수 있다[예를 들어, Mackett et al., Proc Natl Acad Sci USA 1982, 79:7415-7419; Mackett et al., J Virol 1984, 49:857-864; 및 Panicali et al., Proc Natl Acad Sci USA 1982, 79:4927-4931 참조]. 인간 숙주 세포가 사용되는 경우에, 엡스타인 바르 바이러스(EBV) 기원(OriP) 및 EBV 핵 항원 1(EBNA-1; 트랜스-작용 복제 인자)이 사용될 수 있다. 이러한 벡터는 광범위한 인간 숙주 세포, 예를 들어, EBO-pCD(Spickofsky et al., DNA Prot Eng Tech 1990, 2:14-18); pDR2 및 λDR2(Clontech Laboratories로부터 입수 가능함)와 함께 사용될 수 있다.

Gp96-Ig 융합 단백질은 또한, 레트로바이러스-기반 발현 시스템으로 이루어질 수 있다. 레트로바이러스, 예를 들어, 몰로니 뮤린 백혈병 바이러스는, 대부분의 바이러스 유전자 서열이 제거되고 외인성 암호 서열로 대체될 수 있으며, 누락된 바이러스 가능은 트랜스로 공급될 수 있다. 트랜스펙션과는 상반되게, 레트로바이러스는 예를 들어, 1차 조혈 세포를 포함하는 광범위한 세포 타입에 유전자를 효율적으로 감염시키고 전이시킬 수 있다. 또한, 레트로바이러스 벡터에 의한 감염에 대한 숙주 범위는 벡터 패키징을 위해 사용되는 엔벨로프의 선택에 의해 조작될 수 있다.

예를 들어, 레트로바이러스 벡터는 5' 긴 말단 반복(LTR), 3' LTR, 패키징 신호, 복제의 박테리아 기원, 및 선택 가능한 마커를 포함할 수 있다. gp96-Ig 융합 단백질 암호 서열은, 5' LTR 프로모터로부터의 전사가 클로닝된 DNA를 전사하도록, 예를 들어, 5' LTR과 3' LTR 사이의 위치 내에 삽입될 수 있다. 5' LTR은 프로모터(예를 들어, LTR 프로모터), R 영역, U5 영역, 및 프라이머 결합 사이트를 그러한 순서로 함유한다. 이러한 LTR 구성요소의 뉴클레오타이드 서열은 당해 분야에 널리 공지되어 있다. 이종 프로모터뿐만 아니라 다수의 약물 선택 마커는 또한, 감염된 세포의 선택을 용이하게 하기 위해 발현 벡터에 포함될 수 있다[McLauchlin et al., Prog Nucleic Acid Res Mol Biol 1990, 38:91-135; Morgenstern et al., Nucleic Acid Res 1990, 18:3587-3596; Choulika et al., J Virol 1996, 70:1792-1798; Boesen et al., Biotherapy 1994, 6:291-302; Salmons and Gunzberg, Human Gene Ther 1993, 4:129-141; 및 Grossman and Wilson, Curr Opin Genet Devel 1993, 3:110-114 참조].

본 명세서에 기술된 임의의 클로닝 및 발현 벡터는 당해 분야에 공지된 기술을 이용하여 공지된 DNA 서열로부터 합성되고 조립될 수 있다. 조절 영역 및 인핸서 요소는 천연 및 합성 둘 모두의 다양한 기원일 수 있다. 일부 벡터 및 숙주 세포는 상업적으로 수득될 수 있다. 유용한 벡터의 비제한적인 예는 문헌[Appendix 5 of Current Protocols in Molecular Biology, 1988, ed. Ausubel et al., Greene Publish. Assoc. & Wiley Interscience, 본 명세서에 참조에 의해 포함됨]; 및 상업 공급업체, 예를 들어, Clontech Laboratories, Stratagene Inc., 및 Invitrogen, Inc.의 카탈로그에 기술되어 있다.

일부 실시형태에서, 본 개시내용은 gp96-Ig 융합 단백질을 암호화하는 벡터로 트랜스펙션된 세포를 사용한다. 이론으로 제한하고자 하는 것은 아니지만, gp96-Ig 분비 세포의 투여가 내재 면연계의 활성화와 조합하여, 강력한 항원-특이적 CD8 세포독성 T 림프구(CTL) 확장을 유발시킬 것으로 사료된다. 종양 세포-분비된 gp96은 gp96 분비 부위로 DC 및 자연살해(NK) 세포의 동원을 야기시키고, DC 활성화를 매개한다. 또한, gp96 및 이의 샤페론화된 펩타이드의 세포내 흡수는 주요 MHC 클래스 I을 통한 펩타이드 교차 제시뿐만 아니라 CD4 세포와 독립적인 강력한 동족 CD8 활성화를 촉발시킨다.

이에 따라, 다양한 실시형태에서, 본 발명은 본 명세서에 기술된 변형되고 분비성 열 충격 단백질(예를 들어, gp96-Ig)을 암호화하는 벡터를 포함하는 숙주 세포주를 추가로 제공한다. 일부 실시형태에서, 숙주 세포주는 폐암의 치료를 위해 대상체에게 투여된다.

일부 실시형태에서, 본 명세서에 기술된 바와 같은 발현 벡터는 분비된 백신 단백질(예를 들어, gp96-Ig)을 생산하기 위해 숙주 세포 내에 도입될 수 있다. 생존 세포 내에 핵산을 도입하기 위해 이용 가능한 다양한 기술이 존재한다. 시험관 내에서 포유류 세포 내에 핵산의 전달을 위해 적합한 기술은 리포솜, 전기영동, 미세주사, 세포 융합, 폴리머-기반 시스템, DEAE-덱스트란, 바이러스 형질전환, 칼슘 포스페이트 침전 방법, 등의 사용을 포함한다. 생체내 유전자 전달을 위해, 리포솜; 천연 폴리머-기반 전달 비히클, 예를 들어, 키토산 및 젤라틴을 포함하는 다수의 기술 및 시약이 사용될 수 있으며, 바이러스 벡터는 또한 생체내 형질전환을 위해 적합하다. 일부 상황에서, 표적화제, 예를 들어, 세포 표면 막 단백질에 대해 특이적인 항체 또는 리간드를 제공하는 것이 바람직하다. 리포솜이 사용되는 경우에, 엔도시토시스와 관련된 세포 표면 막 단백질에 결합하는 단백질은 예를 들어, 특정 세포 타입에 대해 굴성을 나타내는 캡시드 단백질 또는 이의 단편, 사이클링에서 내재화되는 단백질에 대한 항체, 세포내 위치화를 표적화하고 세포내 반감기를 향상시키는 단백질을 표적화하고/하거나 이의 흡수를 용이하게 하기 위해 사용될 수 있다. 수용체-매개 엔도시토시스의 기술은 예를 들어, 문헌[Wu et al., J. Biol. Chem. 262, 4429-4432 (1987); 및 Wagner et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87, 3410-3414 (1990)]에 기술된다.

적절한 경우에, 예를 들어, 통합 서열과 같은 유전자 전달제가 또한 사용될 수 있다. 다수의 통합 서열은 당해 분야에 공지되어 있다[예를 들어, Nunes-Duby et al., Nucleic Acids Res. 26:391-406, 1998; Sadwoski, J. Bacteriol., 165:341-357, 1986; Bestor, Cell, 122(3):322-325, 2005; Plasterk et al., TIG 15:326-332, 1999; Kootstra et al., Ann. Rev. Pharm . Toxicol., 43:413-439, 2003 참조]. 이러한 것은 리콤비나제 및 트랜스포사제를 포함한다. 예는 Cre(Sternberg and Hamilton, J. Mol. Biol., 150:467-486, 1981), 람다(Nash, Nature, 247, 543-545, 1974), FIp(Broach, et al., Cell, 29:227-234, 1982), R(Matsuzaki, et al., J. Bacteriology, 172:610-618, 1990), cpC31(예를 들어, Groth et al., J. Mol . Biol . 335:667-678, 2004 참조), 슬리핑 뷰티(sleeping beauty), 마리너 패밀리의 트랜스포사제(Plasterk et al., supra), 및 AAV, 레트로바이러스, 및 레트로바이러스 또는 렌티바이러스의 LTR 서열 또는 AAV의 ITR 서열과 같은 바이러스 통합을 제공하는 성분을 갖는 항바이러스와 같은 바이러스를 통합하기 위한 성분을 포함한다[Kootstra et al., Ann. Rev. Pharm. Toxicol., 43:413-439, 2003].

세포는 예를 들어, 시험관 내에서 배양되거나 유전적으로 조작될 수 있다. 숙주 세포는 건강한 인간, 암 환자, 및 감염성 질환을 갖는 환자를 포함하는 정상 또는 영향을 받은 대상체, 개인 실험실 침착물, 배양물 은행(culture collection), 예를 들어, 미국 균주 은행(American Type Culture Collection)으로부터, 또는 상업적 공급업체로부터 수득될 수 있다.

예시적인 포유류 숙주 세포는 비제한적으로 인간, 원숭이, 및 설치류로부터 유도된 세포를 포함한다[예를 들어, 문헌[Kriegler in "Gene Transfer and Expression: A Laboratory Manual," 1990, New York, Freeman & Co.] 참조]. 이러한 것은 SV40에 의해 형질전환된 원숭이 신장 세포주(예를 들어, COS-7, ATCC CRL 1651); 인간 배아 신장 라인(예를 들어, 293, 293-EBNA, 또는 현탁 배양액에서 성장시키기 위한 하위클로닝된 293개의 세포, Graham et al., J Gen Virol 1977, 36:59); 아기 햄스터 신장 세포(예를 들어, BHK, ATCC CCL 10); 중국 햄스터 난소-세포-DHFR(예를 들어, CHO, Urlaub and Chasin, Proc Natl Acad Sci USA 1980, 77:4216); 마우스 세르톨리 세포(Mather, Biol Reprod 1980, 23:243-251); 마우스 섬유아세포 세포(예를 들어, NIH-3T3), 원숭이 신장 세포(예를 들어, CV1 ATCC CCL 70); 아프리카 그린 원숭이 신장 세포(예를 들어, VERO-76, ATCC CRL-1587); 인간 자궁경부 암종 세포(예를 들어, HELA, ATCC CCL 2); 개 신장 세포(예를 들어, MDCK, ATCC CCL 34); 버팔로 래트 간 세포(예를 들어, BRL 3A, ATCC CRL 1442); 인간 폐 세포(예를 들어, W138, ATCC CCL 75); 인간 간 세포(예를 들어, Hep G2, HB 8065); 및 마우스 유방 종양 세포(예를 들어, MMT 060562, ATCC CCL51)를 포함한다. 본 명세서에 기술된 융합 단백질을 발현시키기 위한 예시적인 암 세포 타입은 마우스 섬유아세포 세포주, NIH3T3, 마우스 루이스 폐 암종 세포주, LLC, 마우스 비만세포종 세포주, P815, 마우스 림프종 세포주, EL4 및 이의 난백알부민 감염체, E.G7, 마우스 흑색종 세포주, B16F10, 마우스 섬유육종 세포주, MC57, 인간 소세포 폐 암종 세포주, SCLC#2 및 SCLC#7, 인간 폐 선암 세포주, 예를 들어, AD100, 및 인간 전립선 암 세포주, 예를 들어, PC-3을 포함한다.

생체 내에서 gp96-Ig 융합 단백질의 생산 및 분비를 위해 사용될 수 있는 세포는 비제한적으로, 상피 세포, 내피 세포, 케라티노사이트, 섬유아세포, 근육 세포, 간세포; 혈액 세포, 예를 들어, T 림프구, B 림프구, 단핵구, 대식 세포, 호중구, 호산구, 거핵구, 또는 과립구, 다양한 줄기 또는 전구 세포, 예를 들어, 조혈 줄기 또는 전구 세포(예를 들어, 골수로부터 수득된 바와 같음), 제대혈, 말초 혈액, 태아 간, 등 및 종양 세포(예를 들어, 인간 종양 세포)를 포함한다. 세포 타입의 선택은 치료되거나 예방되는 종양 또는 감염성 질환의 타입에 따르고, 당업자에 의해 결정될 수 있다.

상이한 숙주 세포는 단백질의 번역후 처리 및 변형을 위한 특징적이고 특이적인 메커니즘을 갖는다. 수혜자가 이의 열 충격 단백질(hsp)을 처리하는 방식과 유사한 특정 방식으로 발현된 유전자 산물을 변형시키고 처리하는 숙주 세포가 선택될 수 있다. 다량의 gp96-Ig를 생산할 목적을 위하여, 숙주 세포의 타입이 이종 유전자의 발현을 위해 사용되는 것이 바람직할 수 있고 대규모 생산 공정을 위해 합리적으로 잘 특징화되고 개발된다. 일부 실시형태에서, 숙주 세포는 본 융합 단백질을 분비하는 본 융합 또는 재조합 세포가 순차적으로 투여되는 환자에게 자가 조직이다.

일부 실시형태에서, 본 명세서에 제공된 바와 같은 발현 작제물은 항원 세포 내에 도입될 수 있다. 본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 항원 세포는 암-유발 감염제, 예를 들어, 아직 신생물이 아닌 바이러스에 감염된 전신생물 세포, 또는 돌연변이 유발 요인 또는 암-유발제, 예를 들어, DNA-손상제 또는 예를 들어, 방사선에 노출된 항원 세포를 포함한다. 사용될 수 있는 다른 세포는 모폴로지 또는 생리학적 또는 생화학적 기능에 의해 특징되는 것으로서 정상 형태에서 신생물 형태로 전이되는 전신생물 세포이다.

통상적으로, 본 명세서에 제공된 방법에서 사용되는 암 세포 및 전신생물 세포는 포유류 기원이다. 고려되는 포유동물은 인간, 반려 동물(예를 들어, 개 및 고양이), 가축 동물(예를 들어, 양, 소, 염소, 돼지 및 말), 실험실 동물(예를 들어, 마우스, 래트 및 토끼), 및 사로잡힌 또는 자유로운 야생 동물을 포함한다.

일부 실시형태에서, 암 세포(예를 들어, 인간 종양 세포)는 본 명세서에 기술된 방법에서 사용될 수 있다. 일부 실시형태에서, 세포는 인간 종양 세포이다. 일부 실시형태에서, 세포는 방사선조사되거나 살아있고 약독화된 인간 종양 세포이다. 암 세포는 발현된 gp96-Ig 융합 단백질과 비-공유적으로 결합된 항원 펩타이드를 제공한다. 전신생물 병소, 암 조직, 또는 암 세포로부터 유래된 세포주가 또한, 사용될 수 있으며, 단, 세포주의 세포는 표적 암 세포 상의 항원과 공통인 적어도 하나 이상의 항원 결정 인자를 갖는다. 암 조직, 암 세포, 암-유발제에 감염된 세포, 다른 전신생물 세포, 및 인간 기원의 세포주가 사용될 수 있다. 궁극적으로 융합 단백질에 투여되는 환자로부터 절단된 암 세포는 특히 유용할 수 있지만, 동종이계 세포가 또한 사용될 수 있다. 일부 실시형태에서, 암 세포는 규명된 종양 세포주, 예를 들어, 비제한적으로 규명된 비-소세포 폐 암종(NSCLC), 흑색종, 난소암, 신장 세포 암종, 전립선 암종, 육종, 유방 암종, 편평상피 세포 암종, 두경부 암종, 간세포 암종, 췌장 암종, 또는 결장 암종 세포주로부터 유래될 수 있다. 일 양태에서, 암 세포는 인간 폐암 세포주이다. 일부 실시형태에서, 폐암 세포주는 다양한 공지된 폐암 항원을 발현시킨다.

일부 실시형태에서, 본 융합 단백질은 다양한 종양 세포 항원을 제시할 수 있다. 예를 들어, 일부 실시형태에서, 본 백신 단백질 융합(예를 들어, gp96 융합)은 이러한 다양한 종양 항원을 샤페론화한다. 일부 실시형태에서, 종양 세포는 다양한 항원을 분비한다. 분비되고/거나 제시될 수 있는 예시적이지만 비제한적인 항원은 암/고환 항원 1A(CTAG1A) 및 이의 면역원성 에피토프 CT45A6, CT45A3, CT45A1, CT45A5, 정자 자기항원 단백질 17(SPA17), 정자 관련 항원 6(SPAG6), 정자 관련 항원 8(SPAG8), 안키린 반복 도메인 45(ANKRD45), 라이신 데메틸라제 5B(KDM5B), 정자 아크로솜 관련 3(SPACA3), 정자 편모 2(SPEF2), 헤모겐(HEMGN), 프로테제, 세린 50(PRSS50), PDZ 결합 키나제(PBK), 트랜스케톨라제-유사 단백질 1(TKTL1), TGFB 유도 인자 호메오박스 2 유사, X-결합(TGIF2LX), 가변 전하, X-결합(VCX), 염색체 X 오픈 리딩 프레임 67(CXORF67), MART-1/Melan-A, gp100, 다이펩티딜 펩티다제 IV(DPPIV), 아데노신 데아미나제-결합 단백질(ADAbp), 사이클로필린 b, 대장 관련 항원(CRC)-0017-1A/GA733, 암배아 항원(CEA) 및 이의 면역원성 에피토프 CAP-1 and CAP-2, etv6, aml1, 전립선 특이적 항원(PSA) 및 이의 면역원성 에피토프 PSA-1, PSA-2, 및 PSA-3, 전립선-특이적 막 항원(PSMA), T-세포 수용체/CD3-제타 사슬, 종양 항원의 MAGE-패밀리(예를 들어, MAGE-A1, MAGE-A2, MAGE-A3, MAGE-A4, MAGE-A5, MAGE-A6, MAGE-A7, MAGE-A8, MAGE-A9, MAGE-A10, MAGE-A11, MAGE-A12, MAGE-Xp2 (MAGE-B2), MAGE-Xp3 (MAGE-B3), MAGE-Xp4 (MAGE-B4), MAGE-C1, MAGE-C2, MAGE-C3, MAGE-C4, MAGE-C5), 종양 항원의 GAGE-패밀리(예를 들어, GAGE-1, GAGE-2, GAGE-3, GAGE-4, GAGE-5, GAGE-6, GAGE-7, GAGE-8, GAGE-9, GAGE12G, GAGE12F, GAGE12I), BAGE, RAGE, LAGE-1, NAG, GnT-V, MUM-1, CDK4, 티로시나제, p53, MUC 패밀리, HER2/neu, p21ras, RCAS1, α-태아단백질, E-카데린, α-카테닌, β-카테닌 및 γ-카테닌, p120ctn, gp100 Pmel117, PRAME, NY-ESO-1, cdc27, 대장 선종증 단백질(APC), 포드린, 코넥신 37, Ig-이디오형, p15, gp75, GM2 및 GD2 강길로사이드, 바이러스 산물, 예를 들어, 인간 파필로마 바이러스 단백질, 종양 항원의 Smad 패밀리, lmp-1, NA, EBV-암호화된 핵 항원(EBNA)-1, 뇌 글리콘 포스포릴라제, SSX-1, SSX-2(HOM-MEL-40), SSX-1, SSX-4, SSX-5, SCP-1 CT-7, c-erbB-2, CD19, CD20, CD22, CD30, CD33, CD37, CD56, CD70, CD74, CD138, AGS16, MUC1, GPNMB, Ep-CAM, PD-L1, PD-L2, 및 PMSA이다.

PD-1은 수용체의 면역글로불린 수퍼패밀리 내에, T-세포 조절제의 CD28 패밀리의 구성원인 세포 표면 수용체이다. 인간 PD-1 유전자는 염색체 2q37에 위치되어 있으며, 전장 PD-1 cDNA는 뮤린 PD-1과 60% 상동성을 갖는 288개의 아미노산 잔기를 갖는 단백질을 암호화한다. 이는 흉선 발달 동안 CD4- CD8-(이중 음성(double negative)) 흉선 세포 상에 존재하고, 연장된 항원 노출 후에 T 및 B 세포, NKT 세포 및 단핵구와 같은 성숙 조혈 세포에서 활성화 시에 발현된다.

PD-1을 임상적으로 표적화하기 위한 주요 방법은 PD-1 또는 PD-L1 기능을 억제하는 유전적으로 조작된 단클론성 항체의 개발을 통한 것이다. PD-L1은 또한, T-세포 증식 및 시토카인 생산을 억제하는 것으로 나타났지만, 암에서의 정확한 경로는 명확하지 않다. 암 세포는 표면 상에 PD-L1의 높은 발현 수준을 유도하여, 종양 미세환경을 침윤하여 이의 세포를 효과적으로 차단시키는 임의의 T 세포 상에 억제성 PD-1 수용체를 활성화시킬 수 있다. 실제로, PD-L1 발현 수준의 상향조절은 다수의 상이한 암 타입(예를 들어, 흑색종[40%-100%], NSCLC[35%-95%], 및 다발성 골수종[93%])에서 나타났으며, 높은 수준의 PD-L1 발현은 불량한 임상 결과와 관련이 있다. 또한, 종양-침윤성 T 세포(TIL)는 정상 조직을 침윤시키는 T 세포보다 상당히 더 높은 수준의 PD-1을 발현시키는 것으로 나타났다. 종양 미세환경이 종양 상에서 발현된 높은 수준의 PD-L1에 반응할 수 있도록 종양-침윤 T 세포 상에서 PD-1의 발현을 상향조절하기 위해 인터페론-감마(IFNγ)를 포함하는, 전염증성 시토카인을 분비할 수 있다고 사료된다.

일부 실시형태에서, 항-PD-1 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 니볼루맙, 펨브롤리주맙, 피딜리주맙, BMS-936559, 아테졸리주맙 또는 아벨루맙이다.

일부 실시형태에서, 항-PD-L1 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 두르발루맙이다.

특별히 고려되는 2가지 항-PD-1 항체, 즉, 니볼루맙 및 펨브롤리주맙은 다수의 상이한 암에 대해 미국에서 승인되었으며, 임상 시험에서 다수의 추가적인 항-PD-1 항체가 존재한다.

이에 따라, 일부 실시형태에서, 비아겐푸마투셀-L과 병용하여 사용하기 위한 항-PD-1 항체는 니볼루맙이다. 적합한 용량 및 투약 요법은 하기에 기술된다.

일부 실시형태에서, 비아겐푸마투셀-L과 병용하여 사용하기 위한 항-PD-1 항체는 펨브롤리주맙이다. 적합한 용량 및 투약 요법은 하기에 기술된다.

본 명세서에 개시된 조합물 및 방법은 폐암과 같이 암을 치료하거나 암 세포 증식을 억제하기에 적합하다. 일부 실시형태에서, 폐암은 비-소 폐암, 예를 들어, 편평상피 세포 암종, 선암, 및 대세포 폐 암종이다.

일반적으로, 본 발명은 통상적으로 항-PD-1 치료법으로부터 상당히 이점을 얻지 못한 환자에서 항-PD-1 또는 항-PD-L1 항체의 증가된 효능을 제공한다. 예를 들어, 이의 종양에 대한 PD-L1의 낮은 또는 음성 발현을 갖는 환자는 일반적으로 항-PD-1 치료법으로 상당히 이점을 나타내지 않는다. 그러나, 놀랍게도, 본 명세서에 나타낸 바와 같이, 비아겐푸마투셀-L과 항-PD-1 항체의 조합은 환자의 종양(들)의 PD-L1 상태와는 무관하게 동일하게 효과적이다. 유사하게, 낮은 TIL 상태를 갖는 환자는 일반적으로, 항-PD-1 치료법에 대해 매우 반응적이지 않다. 다시, 놀랍게도, 비아겐푸마투셀-L과 항-PD-1 항체의 조합은 환자의 종양(들)의 TIL 상태와는 무관하게 동일하게 효과적이다.

이에 따라, 본 발명은 NSCLC 환자의 PD-L1 상태를 결정하는 방법을 제공한다. 일반적으로, 이는 환자로부터 하나 이상의 종양 생검을 획득하고 당해 분야에 공지된 바와 같이 PD-L1 상태에 대해 시험함으로써 수행된다. 이는 일반적으로, 당해 분야에 공지된 바와 같이 표지된 항체를 사용하여 생검화된 종양 샘플에 대해 면역조직화학(IHC) 검정을 이용하여 수행되고, 일반적으로, PD-L1^높음(높은 수준의 염색), PD-L1^낮음(낮은 수준의 염색) 및 PD-L1 음성(1% 미만, 염색이 검출되지 않음)으로서 스코어링된다. 일부 실시형태에서, 항-PD-L1 염색은 표준화된 면역조직화학 검정과 함께 이용되며, PD-L1^높음은 염색 양성인 50% 이상의 PD-L1 종양 타입 세포에 해당하며, PD-L1^낮음은 염색 양성인 49-1% PD-L1 종양 타입 세포이며, PD-L1음성에서 1% 미만의 염색이 검출된다. 항-PD-L1 항체를 사용하여 종양 생검을 분리하는 FACS 염색이 또한 수행될 수 있다.

당해 분야에 공지된 바와 같이, 환자는 일반적으로 PD-L1^높음인 경우에 항-PD-1 항체 치료에 더 양호하다. 그러나, 본 발명은 상승 효과를 형성하기 위해 환자가 PD-L1^낮음 및 PD-L1음성인 경우에도 비아겐푸마투셀-L과 병용하여 항-PD-1 항체를 사용할 수 있다.

추가적으로, 일부 실시형태에서, 환자의 TIL 상태가 결정될 수 있다. 본 명세서에서 개략된 바와 같이, 종양 미세환경에서 적은 양의 CD8+ TIL을 갖는 종양은 일반적으로 "불응성" 종양, 예를 들어, TIL낮음으로 여겨지는데, 이는 많은 양의 CD8+ TIL(TIL^높음)을 갖는 종양보다 면역-종양 치료에 덜 반응적일 수 있다.

상기와 같이, TIL 상태는 일반적으로, 당해 분야에 공지된 바와 같이, 예를 들어, 당해 분야에 공지된 바와 같이 종양 생검을 분리하고 CD8+ 세포에 대해 FACS 분류를 이용함으로써 또는 종양 생검 샘플의 면역조직화학(IHC) 염색을 수행함으로써 평가된다. 일부 실시형태에서, 항-CD8 항체 염색은 종양 기질에서 CD8+ 세포의 백분율을 평가하기 위해 이용된다. TIL^높음은 종양 생검에서 약 10% 초과의 CD8⁺ 세포에 해당하며, TIL^낮음는 종양 샘플에서 약 10% 미만의 CD8⁺ 세포에 해당한다.

이에 따라, 이의 TIL 상태가 TIL^높음일 때 환자가 일반적으로 항-PD-1 항체 프로토콜에 더 양호하지만, 본 발명은 상승 효과를 형성하기 위해 환자가 TIL^낮음인 경우에도 비아겐푸마투셀-L과 병용하여 항-PD-1 항체를 사용할 수 있다.

본 발명은 NSCLC를 앓고 있는 환자에게 비아겐푸마투셀-L 및 항-PD-1 항체의 동시-투여를 제공한다.

실시형태에서, 환자는 치료법을 받은 후 질환 진행을 경험한 적이 있다. 실시형태에서, 치료법은 면역 관문 저해제 치료법이다. 실시형태에서, 치료법은 화학요법을 포함한다. 실시형태에서, 환자는 면역 관문 저해제 치료법에 대한 불량한 반응자이다. 실시형태에서, 환자는 면역 관문 저해제 치료법에 실패한 적이 있다. 실시형태에서, 환자에서 질환은 면역 관문 저해제 치료법이 투여되었을 때에도 진행되었다. 일부 실시형태에서, 환자는 이전에 CPI 치료법을 받았지만, 질환은 6개월 이상의 치료 후에 진행되었다.

일부 실시형태에서, 본 개시내용의 방법은 항-PD-1 항체와 병용하여 변형되고 분비성 열 충격 단백질(즉, gp96-Ig)을 암호화하는 벡터를 포함하는 세포를 투여하는 것을 포함한다. 일부 실시형태에서, 투여되는 세포의 수는 약 100,000개의 세포 내지 약 2천만개의 세포의 범위이다.

일부 실시형태에서, 저용량의 세포가 대상체에게 투여된다. 예를 들어, 대상체에게 투여되는 세포의 수는 약 100,000개의 세포, 약 150,000개의 세포, 약 200,000개의 세포, 약 250,000개의 세포, 약 300,000개의 세포, 약 350,000개의 세포, 약 400,000개의 세포, 약 450,000개의 세포, 약 500,000개의 세포, 약 550,000개의 세포, 약 600,000개의 세포, 약 650,000개의 세포, 약 700,000개의 세포, 약 750,000개의 세포, 약 800,000개의 세포, 약 850,000개의 세포, 약 900,000개의 세포, 약 950,000개의 세포, 또는 약 1백만개의 세포일 수 있다. 실시형태에서, 약 1백만개의 세포가 대상체에게 투여된다.

일부 실시형태에서, 고용량의 세포가 대상체에게 투여된다. 예를 들어, 대상체에게 투여되는 세포의 수는 약 2백만개의 세포, 약 3백만개의 세포, 약 4백만개의 세포, 약 5백만개의 세포, 약 6백만개의 세포, 약 7백만개의 세포, 약 8백만개의 세포, 약 9백만개의 세포, 약 1천만개의 세포, 약 1천1백만개의 세포, 약 1천2백만개의 세포, 약 1천3백만개의 세포, 약 1천4백만개의 세포, 약 1천5백만개의 세포, 약 1천6백만개의 세포, 약 1천7백만개의 세포, 약 1천8백만개의 세포, 약 1천9백만개의 세포, 또는 약 2천만개의 세포일 수 있다.

본 명세서에 개략된 병용 치료법 요법에서, 특정 용도를 발견한 용량은 주사로서 제공하는 경우에 1×10⁷개의 비아겐푸마투셀-L 세포이다.

다수의 실시형태에서, 비아겐푸마투셀-L 세포는 니볼루맙과 같은 항-PD-1 항체의 격주(biweekly) IV 주입과 병용하여 적어도 약 6주 내지 적어도 약 16주의 기간 동안 주 1회 제공된다.

항-PD-1 항체는 NSCLC 환자의 적절한 투약을 위해 당해 분야에 공지된 바와 같이 투여된다. 일반적으로, 240㎎의 용량이 격주로 투여된다.

일부 실시형태에서, 비아겐푸마투셀-L 세포는 예를 들어, 약 1×10⁷개의 세포의 용량으로, 항-PD-1 또는 항-PD-L1 항체 치료의 요법과 병용하여 제공된다. 예를 들어, 일부 실시형태에서, 비아겐푸마투셀-L 세포는, 예를 들어, 약 1×10⁷개의 세포의 용량으로, 니볼루맙의 단일 용량 요법(정맥내로 2주마다 3 ㎎/㎏)과 병용된다. 일부 실시형태에서, 비아겐푸마투셀-L 세포는, 예를 들어, 약 1×10⁷개의 세포의 용량으로, 선택적으로 총 약 6주 동안, 또는 선택적으로 총 약 16주 동안 니볼루맙의 2주 투약 스케쥴, 예를 들어, 240㎎과 병용된다. 일부 실시형태에서, 비아겐푸마투셀-L 세포는, 예를 들어, 약 1×10⁷개의 세포의 용량으로, 선택적으로 4주마다 30분 마다 주입되는 니볼루맙의 4주 투약 스케쥴, 예를 들어, 480㎎과 병용된다.

일부 실시형태에서, 2가지 성분의 유용한 투여 요법은 하기와 같다:

요법 1

요법 2

당업자에 의해 인식되는 바와 같이, 환자는 질환 진행 및/또는 허용되지 않는 독성 또는 부작용이 발생할 때까지 주마다 이러한 프로토콜을 유지할 수 있다.

일 양태에서, 본 개시내용의 방법은 저용량의 변형되고 분비성 열 충격 단백질의 세포주(즉, gp96-Ig) 및 면역 관문 저해제를 포함하는 조합물을 제공하며, 이의 원인의 질환과 같은 질환을 치료하기 위해 조합물을 사용하는 방법은 종양 침윤 림프구(TIL) 및/또는 다른 단백질, 예를 들어, 암의 면역 세포 프로파일링을 조절함으로써 영향을 받을 수 있다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용은 저용량의 변형되고 분비성 열 충격 단백질(즉, gp96-Ig)을 발현시키는 세포주 및 항-PD-1 항체 또는 이의 항원 결합 단편(예를 들어, 니볼루맙)을 포함하는 조합물을 특징으로 한다.

본 방법은 예를 들어, 종양 성장을 억제하고/하거나 종양내 T 조절 세포 집단을 감소시키고/시키거나 종양에서 CD8/T-조절 세포 비율을 증가시킴으로써, 이를 필요로 하는 대상체에게 유효량의 저용량의 변형되고 분비성 열 충격 단백질(즉, gp96-Ig)을 발현시키는 세포주 및 항-PD-1 항체 또는 이의 항원 결합 단편(예를 들어, 니볼루맙)을 투여하는 것을 포함한다.

본 개시내용은 또한, 질환을 치료하기 위한 약제의 제조에서의 본 명세서에 기술된 임의의 방법 또는 조합물의 용도를 제공한다. 이러한 질환은 예를 들어, 암, 전암성 병태, 또는 종양 침윤 림프구(TIL) 및/또는 다른 단백질의 면역 세포 프로파일링을 조절함으로써 영향을 받는 질환을 포함한다.

일부 실시형태에서, 본 개시내용은 변형되고 분비성 열 충격 단백질(즉, gp96-Ig)을 암호화하는 벡터를 함유하는 세포주를 포함하는 병용 치료법을 제공한다. 항-PD-1 단클론성 항체 또는 이의 항원 결합 단편(예를 들어, 니볼루맙)과 같은 면역 관문 저해제와 병용하여 저용량의 세포주의 투여는 NSCLC 재발을 감소시킨다.

본 방법은 종양 성장을 억제하고/하거나 종양내 T 조절 세포 집단을 감소시키고/시키거나 종양에서 CD8/T-조절 세포 비율을 감소시킴으로써 이를 필요로 하는 대상체에게 유효량의 저용량의 변형되고 분비성 열 충격 단백질(즉, gp96-Ig)을 발현시키는 세포주 및 항-PD-1 항체(예를 들어, 니볼루맙)를 투여하는 것을 포함한다.

본 명세서에 개시된 조합물 및 방법은 편평상피 세포 암종, 선암, 및 대세포 암종, 예를 들어, 비-소 폐암과 같은 암을 치료하거나 암 세포 증식을 억제하기에 적합하다.

일부 실시형태에서, 본 명세서에 제공된 방법은 종양(예를 들어, 폐 종양)에 대해 면역 반응을 자극시키는 데 유용할 수 있다. 일부 실시형태에서, 이러한 면역 반응은 종양과 관련된 징후 또는 증상을 치료하거나 완화시키는 데 유용하다. 본 명세서에서 사용되는 "치료하는"은 치료되지 않는 개체의 증상과 비교하여, 본 명세서에 기술된 바와 같은 벡터가 투여된 개체에서 증상을 감소, 예방 및/또는 역전시키는 것을 의미한다. 의사는 본 명세서에 기술된 방법이 후속 치료법을 결정하기 위해 숙련된 의사(의사 또는 수의사)에 의해 지속적인 임상 평가와 함께 이용된다는 것을 인식할 것이다. 이러한 평가는 특정 치료 용량, 투여 모드, 등을 증가시키거나, 감소시키거나 지속시키는 지의 여부를 평가하는 데 도움을 주고 통지할 것이다.

일부 실시형태에서, 본 발명의 방법은 대상체에서 종양 항원 특이적 T 세포의 활성화 또는 증식을 증가시킬 수 있다. 예를 들어, 대상체에서 종양 항원 특이적 T 세포의 활성화 또는 증식은 투여 전 대상체에서 종양 항원 특이적 T 세포의 활성화 또는 증식의 수준과 비교하여 적어도 5%(예를 들어, 적어도 약 10%, 20%, 30%, 40%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 100%를 포함함)까지 증가될 수 있다. 실시형태에서, 증가는 면역 관문 저해제(예를 들어, 항-PD-1 항체)의 단독 투여와 비교된다.

일부 실시형태에서, 본 방법은 대상체에서 CD8+ T 세포의 활성화 또는 증식을 증가시킬 수 있다. 예를 들어, 대상체에서 CD8+ T 세포의 활성화 또는 증식은 투여 전 대상체에서 CD8+ T 세포의 활성화 또는 증식의 수준과 비교하여 적어도 5%(예를 들어, 적어도 약 10%, 20%, 30%, 40%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 100%를 포함함)까지 증가될 수 있다. 일부 실시형태에서, CD8+ T 세포는 IFN-γ 분비 T 세포이다. 일 실시형태에서, 증가는 면역 관문 저해제의 단독 투여와 비교된다. 일부 실시형태에서, CD8+ T 세포(예를 들어, IFN-γ를 분비시키는 CD8+ T 세포)의 활성화 또는 증식은 예를 들어, 대상체로부터 유도된 말초 혈액 림프구 상에서 수행된 효소-결합 면역점(ELISPOT) 검정에 의해 평가될 수 있다.

일부 실시형태에서, 본 발명의 방법은 대상체에서 종양 침윤 림프구(TIL)를 효과적으로 유도하고/하거나 활성화시키고/시키거나 이러한 TIL의 수를 증가시킨다. 예를 들어, 대상체에서 이러한 TIL의 유도 및/또는 활성화 및/또는 수의 증가는 투여 전과 비교하여 적어도 5%(예를 들어, 적어도 약 10%, 20%, 30%, 40%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 100%를 포함함)까지일 수 있다. 일 실시형태에서, 증가는 면역 관문 저해제(예를 들어, 항-PD-1 항체)의 단독 투여와 비교된다.

일부 실시형태에서, 본 발명의 방법은 대상체에서 폐암의 재발률을 효과적으로 감소시킨다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 방법은 저용량의 변형되고 분비성 열 충격 단백질(즉, gp96-Ig)을 발현시키는 세포주와 면역 관문 저해제, 예를 들어, 항-PD-1 항체의 조합물로 치료된 대상체에서 폐암의 재발률을 효과적으로 감소시킨다. 일부 실시형태에서, 항-PD-1 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 니볼루맙이다. 일부 실시형태에서, 관문 저해제는 두르발루맙, 이필리무맙, 펨브롤리주맙, 피딜리주맙, BMS-936559, 아테졸리주맙 또는 아벨루맙을 포함한다.

일 실시형태에서, 본 개시내용의 방법은 고용량의 본 개시내용의 세포주와 면역 관문 저해제, 예를 들어, 항-PD-1 항체의 조합물로 치료된 대상체보다 저용량의 본 개시내용의 세포주와 면역 관문 저해제, 예를 들어, 항-PD-1 항체의 조합물로 치료된 대상체를 치료하는 데(예를 들어, 암 재발을 감소시키는 데) 더욱 효과적이다.

일 양태에서, 본 개시내용의 방법은 면역 관문 저해제, 예를 들어, 항-PD-1 항체 또는 이의 항원 결합 단편 단독으로 치료된 대상체보다, 저용량의 본 발명의 세포주와 면역 관문 저해제, 예를 들어, 항-PD-1 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 조합물로 치료된 대상체를 치료하는 데(예를 들어, 암 재발을 감소시키는 데) 더욱 효과적이다.

일 실시형태에서, 본 발명의 세포주와 면역 관문 저해제, 예를 들어, 항-PD-1 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 조합물의 투여는 치료 후 면역 반응의 강력한 증가를 유도한다. 일 실시형태에서, 면역 반응의 강력한 증가는 예를 들어, ELISPOT에 의해 측정한 경우 CD8+ T 세포(예를 들어, IFN-γ를 분비시키는 CD8+ T 세포)의 활성화 또는 증식에서 기준선보다 적어도 2배 이상의 증가로서 규정된다. 일 실시형태에서, 본 발명의 방법은 이러한 면역 반응을 나타내지 않는 대상체보다 치료 후 강력한 면역 반응을 나타내는 대상체를 치료하는 데 더 효과적이다. 이러한 일 실시형태에서, 대상체는 저용량의 본 발명의 세포주와 면역 관문 저해제(예를 들어, 항-PD-1 항체)의 조합물로 치료될 수 있다.

일부 실시형태에서, 본 개시내용은 본 개시내용의 세포주와 면역 관문 저해제(예를 들어, 항-PD-1 항체)의 조합물을 대상체에게 투여함으로써 치료 전에 높은 수의 종양 침윤 림프구(TIL)를 나타내는 대상체를 치료하는 방법을 제공한다. 일부 실시형태에서, 높은 수의 TIL은 종양 미세환경에서 세포의 10%보다 더 높은 TIL 수를 지칭한다.

다른 실시형태에서, 본 발명은 본 개시내용의 세포와 면역 관문 저해제(예를 들어, 항-PD-1 항체)의 조합물을 대상체에게 투여함으로써 치료 전에 적은 수의 종양 침윤 림프구(TIL)를 나타내는 대상체를 치료하는 방법을 제공한다. 일부 실시형태에서, 작은 수의 TIL은 종양 미세환경에서 세포의 10% 이하의 TIL 수를 지칭한다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 방법은 높은 수의 TIL을 갖는 대상체보다 적은 수의 종양 침윤 림프구(TIL)를 갖는 대상체를 치료하는 데 더 효과적일 수 있다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용은 본 개시내용의 세포주와 면역 관문 저해제(예를 들어, 항-PD-1 항체)의 조합물로 작은 수의 TIL을 갖는 대상체를 치료하는 방법을 제공한다.

본 명세서에서 사용되는 용어 "유효량" 및 "치료학적 유효량"은 대상체(예를 들어, 암을 지닌 것으로서 진단된 인간)에서 요망되는 치료(예를 들어, 항암 또는 항종양) 효과를 제공하는 데 충분한 양을 지칭한다. 항종양 및 항암 효과는 비제한적으로, 종양 성장(예를 들어, 종양 성장 지연), 종양 크기, 또는 전이의 조절, 특정 항암제와 관련된 독성 및 부작용의 감소, 임상적 손상 또는 암의 증상의 개선 또는 최소화, 이러한 치료의 부재 시에 달리 예상되는 것 이상의 대상체의 생존 연장, 및 투여, 즉, 예방적 투여 전에 종양 형성이 결여된 동물에서 종양 성장의 예방을 포함한다. 일 실시형태에서, 본 발명은 암 재발(예를 들어, 폐암 재발)을 감소시키거나 예방한다.

본 명세서에 기술된 방법은 폐암 치료의 다양한 양태를 위해 유용하다. 일부 실시형태에서, 개체에서 폐암 세포 증식(예를 들어, 폐암 종양 성장)을 억제하는 방법이 제공된다. 일부 실시형태에서, 적어도 약 10%(예를 들어, 적어도 약 20%, 30%, 40%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 100%를 포함함)의 세포 증식이 억제된다. 일부 실시형태에서, 약 20% 미만의 세포 증식이 억제된다.

일부 실시형태에서, 개체에서 폐암 종양 전이를 억제하는 방법이 제공된다. 일부 실시형태에서, 적어도 약 10%(예를 들어, 적어도 약 20%, 30%, 40%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 100% 중 어느 하나) 전이가 억제된다.

일부 실시형태에서, 개체에서 기존의 폐암 종양 전이(예를 들어, 폐 전이 또는 림프절로의 전이)의 발생률 또는 부담을 감소시키는 방법이 제공된다. 일부 실시형태에서, 적어도 약 10%(예를 들어, 적어도 약 20%, 30%, 40%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 100%를 포함함)의 전이가 감소된다.

일부 실시형태에서, 개체에서 폐암 종양 크기를 감소시키는 방법이 제공된다. 일부 실시형태에서, 종양 크기는 적어도 약 10%(예를 들어, 적어도 약 20%, 30%, 40%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 100%를 포함함) 감소된다.

일부 실시형태에서, 개체에서 폐암 재발을 감소시키는 방법이 제공된다. 일부 실시형태에서, 폐암의 재발은 적어도 약 10%(예를 들어, 적어도 약 20%, 30%, 40%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 100%를 포함함)까지 감소된다.

일부 실시형태에서, 개체에서 폐암의 질환 진행까지 시간을 연장시키는 방법이 제공된다. 일부 실시형태에서, 본 방법은 질환 진행까지의 시간을 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51 또는 52주까지 연장시킨다. 일부 실시형태에서, 본 방법은 질환 진행까지의 시간을 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10년까지 연장시킨다.

일부 실시형태에서, 폐암을 갖는 개체의 생존을 연장시키는 방법이 제공된다. 일부 실시형태에서, 본 방법은 개체의 생존을 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 18, 24개월까지 연장시킨다. 일부 실시형태에서, 본 방법은 개체의 생존을 적어도 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10년까지 연장시킨다.

일부 실시형태에서, 폐암(예를 들어, NSCLC)을 갖는 개체에서 하나 이상의 증상을 완화시키는 방법이 제공된다.

실시예

본 명세서에 개시된 본 발명이 더욱 효율적으로 이해될 수 있게 하기 위하여, 하기에 실시예가 제공된다. 이러한 실시예가 단지 예시 목적을 위한 것으로서 본 발명을 어떠한 방식으로도 제한하는 것으로 해석되지 않는 것으로 이해되어야 한다.

실시예 1: 비-소세포 폐암을 갖는 환자에서 다중 치료 요법과 병용한 비아겐푸마투셀-L(HS-110)의 1b/2상 연구("DURGA" 시험)

시험 설계를 위해 도 1a, 도 1b, 및 도 1c를 참조한다.

본 명세서에 개시된 실험 목적은 특히, 면역 반응을 조절하기 위한 전략과 병용된 비아겐푸마투셀-L의 백신 접종(vaccination)이 치료 불가능하거나 전이성 질환에 대한 적어도 하나의 이전 치료 라인으로 실패한 비-소세포 폐 선암을 갖는 환자에 대해 안전한지의 여부를 평가하기 위한 것이다. PD-1 관문 저해제 및 제2 라인 이상 치료법과 비아겐푸마투셀-L(HS-110)의 반응 속도를 평가하였다. 환자 집단은 안전성 및 효능을 기초로 하여 제2상으로 확장된 제1b상을 포함하였다.

NSCLC를 가진 환자는 최초 18주 동안 1주일에 1회 1×10⁷개의 HS-110 세포를 수용하였고, 과도한 독성 또는 종양 진행까지 2주마다 니볼루맙 3 ㎎/㎏ 또는 240㎎을 수용하였다. 조직을 기준선에서 PD-L1 발현(1% 이상 높음 또는 1% 미만; 음성) 및 종양 침윤 림프구(TIL)에 대해 시험하였다. TIL높음은 종양 기질에서 10% 초과의 CD8+ 림프구에 의해 규정되었다. 2가지 코호트를 연구하였다: 코호트 A: 관문 저해제 치료법을 받지 않은 환자(즉, 관문 저해제 치료법 나이브) 및 코호트 B: 이전에 관문 저해제 치료법을 받았고 6개월 이상의 치료 후에 질환이 진행된 환자.

코호트 A에서의 환자로부터의 조직을 기준선에서 PD-L1 발현(1% 이상 또는 1% 미만) 및 종양 침윤 림프구(TIL)에 대해 시험하였다. TIL높음은 종양 기질에서 10% 초과의 CD8+ 림프구에 의해 규정되었다. 코호트 A에서의 환자는 단지 하나의 종래 치료를 받았으며, 이는 화학요법이었다. 비제한적으로, 목적은 안전성 및 객관적 반응률(ORR), PFS 및 OS이었다.

비아겐푸마투셀-L + 니볼루맙(낮은 TIL)

낮은 TIL(종양-침윤 림프구)을 갖는 환자는 18주 동안 또는 치료 중단까지 1×10⁷개의 세포의 주사로서 제공된 비아겐푸마투셀-L(HS-110)과 니볼루맙(OPDIVO)의 조합물을 1주에 1회 수용하였다. 9명의 환자를 초기에 등록하였으며(제1b상), 옵션으로 예비 효능을 기초로 하여 20명의 환자까지 확장하였다(제2상). gp96-Ig를 지속적으로 분비하기 위해 유전적으로 조작된 방사선조사된 인간 폐암 세포로부터 백신을 유도하였다. 환자는 질환 진행 또는 허용되지 않는 독성까지 NSCLC의 치료를 위해 패키지 인서트 당 니볼루맙을 수용하였다(2주마다 60분에 걸쳐 i.v. 주입으로서 3 ㎎/㎏).

비아겐푸마투셀-L + 니볼루맙(높은 TIL)

높은 TIL(종양-침윤 림프구)을 갖는 환자는 18주 동안 또는 치료 중단까지 1×10⁷개의 세포의 주사로서 제공된 비아겐푸마투셀-L(HS-110)과 니볼루맙(Opdivo)의 조합물을 1주마다 수용하였다. 초기에 9명의 환자가 등록되었으며(제1b상), 옵션으로 예비 효능을 기초로 하여 20명의 환자까지 확대하였다(제2상). gp96-Ig를 지속적으로 분비하기 위해 유전적으로 조작된 방사선조사된 인간 폐암 세포로부터 백신을 유도하였다. 환자는 질환 진행 또는 허용되지 않는 독성까지 NSCLC의 치료를 위해 패키지 인서트 당 니볼루맙을 수용하였다(2주마다 60분에 걸쳐 i.v. 주입으로서 3 ㎎/㎏)(도 2 참조).

비아겐푸마투셀-L + 니볼루맙(Rollover)

환자는 18주 동안 또는 치료 중단까지 1×10⁷개의 세포의 주사로서 제공된 비아겐푸마투셀-L(HS-110)과 니볼루맙(Opdivo)의 조합물을 1주마다 수용하였다. 이러한 아암은 동의하였지만, 높은 또는 낮은 TIL 그룹이 등록되도록 배정될 수 없었고 형식적인 한계가 존재하지 않는 환자를 허용하였다. gp96-Ig를 지속적으로 분비하기 위해 유전적으로 조작된 방사선조사된 인간 폐암 세포로부터 백신을 유도하였다. 환자는 질환 진행 또는 허용되지 않는 독성까지 NSCLC의 치료를 위해 패키지 인서트 당 니볼루맙을 수용하였다(2주마다 60분에 걸쳐 i.v. 주입으로서 3 ㎎/㎏)(도 2 참조).

제1b상에서의 1차 결과는 최대 3년까지의 신체 검사 및 실험실 검사에 의해 안전성 및 내약성을 측정하였고, 각 비아겐푸마투셀-L 병용 요법의 안전성을 평가하였다. 제2상에서 1차 결과는 3년까지 객관적 반응률(ORR)을 측정하였고, 고형 종양에서의 반응 평가 기준(RECIST)에 의해 객관적 반응률(ORR)을 평가하였다[도 3a 및 도 3b, 및 CPI 진행자 결과에 대해 도 19 참조]. 제1b상에서의 2차 결과는 3년까지 객관적 반응률(ORR)을 측정하였고, 고형 종양에서의 반응 평가 기준(RECIST)에 의해 객관적 반응률(ORR)을 평가하였다. 제2상에서의 2차 결과는 3년까지 신체 검사 및 실험실 검사에 의해 안전성 및 내약성을 측정하였고, 각 비아겐푸마투셀-L 병용 요법의 안전성을 평가하였다. HS-110 용해물을 사용한 ELISPOT에 의한 면역 반응은 백신접종이 특징화된 후에 말초 혈액으로부터 3년까지 평가되었으며(도 14, 도 15, 도 16), 전체 생존(OS) 및 무진행 생존(PFS)이 3년까지 평가된다(도 3a).

추가적으로, T-세포 수용체(TCR) 레퍼토리, 유세포분석에 의한 말초 혈액 면역 반응, 림프구 하위세트를 포함하는 유세포분석법에 의한 전체 말초 혈액 단핵 세포(PBMC) 카운트, 완전한 반응, 부분 반응 또는 안정한 반응을 포함하는 질환 조절률(Disease Control Rate: DCR)의 특징분석과 같은 다른 결과는 3년까지 평가된다. 생검 또는 보관 조직에서 면역조직화학(IHC)에 의한 종양 항원 발현 및 종양-침윤 림프구(TIL)의 존재는 사전-치료 동안 평가되며, 생검에서 종양-침윤 림프구 및 IHC에 의한 면역억제 분자의 발현은 제1 용량의 연구 약물 후 구(9)주 평가된다. 등록 후 6개월 및 등록 후 12개월에 살아 있는 환자의 비율이 평가된다.

임상 환자 집단 기준

건강한 지원자를 제외하고 본 연구를 위해 18세 이상이고 모든 성별의 사람이 자격을 갖는다. 포함 기준: 비-소세포 폐 선암; RECIST 1.1에 의한 측정 가능한 질환의 하나의 부위; 치료 불가능하거나 전이성 NSCLC에 대한 적어도 하나의 이전 라인의 치료법을 받은 환자 집단; 18주 이상의 기대 수명; 연구 시작 시에 질환 진행; 동부 종양학 협력 그룹(Eastern Cooperative Oncology Group; ECOG) 성능 상태(PS) ≤ 1. PS=2 환자가 고려될 수 있으며, 중추신경계(CNS) 전이는 허용될 수 있지만 치료되어야 하며, 신경학적으로 안정하고, 적절한 실험실 파라미터; 프로토콜 및 사인 통지된 동의서를 기꺼이 준수하고 준수할 수 있음; 가임 가능성이 있는 여성 환자 및 가임 남성 환자는 연구 참여 전반에 걸쳐 효과적인 형태의 피임벙을 사용하는데 동의해야 함; 스크리닝 및 10주에 보관 또는 새로운 종양 생검을 제공하고 패키지 인서트 당 니볼루맙으로의 치료에 적합함.

배제 기준: 이전 21일 내에 전신 항암 치료법을 받음; 인간 면역결핍 바이러스(HIV); B형 또는 C형 간염, 또는 중증/통제되지 않은 감염 또는 동시 질환, 종양과 관련되지 않음, 활성 치료법을 필요로 함; 동시 전신 면역억제 치료법을 필요로 한 임의의 상태; 원발성 또는 후천성인 공지된 면역결핍 장애; 공지된 연수막 질환; 예상되는 치료적 결과로 치료된 전이 또는 사망의 위험이 무시할 만한 환자를 제외하고 12개월 내에 활성 악성 종양; 임신 또는 모유 수유; 이러한 적응증에 대한 암 백신으로의 사전 치료; 비아겐푸마투셀-L의 임상 연구에서 사전 참여; 제1 용량의 연구 약물 전 30일 내에 살아있는 약화된 백신의 투여; 활성, 공지된 또는 의심나는 자가면역 질환 및 면역 관문 저해제의 종래 치료.

데이터는 본 gp96-기반 백신이 이론으로 제한하고자 않는 한, 종양 내에 T 세포 활성을 증가시켜, "불응성" 종양을 "민감성" 종양으로 전환시킴으로써 관문 저해제에 반응하는 환자의 백분율을 확대시킴을 시사한다(도 3a, 도 3b).

10주에 종양 침윤 림프구(TIL)의 증가된 수준을 갖는 환자는 오래가는 혜택을 보였으며, 1년 추적 포인트에서 75%(8명의 이러한 환자 중 6명)가 살아있다. 추가적으로, 낮은 TIL을 나타내는 60%의 환자(5명의 환자 중 3명)는 상당한 종양 감소를 경험하였으며, 이는 니볼루맙 단독에 대한 기존 데이터에 대해 보고된 낮은 TIL 환자의 10% 반응률과 유리하게 비교된다.

ELISPOT 분석에 대해 평가 가능한 15명의 환자 중 12명에서 T 세포 활성화, 종양 감소와 증가된 전체 생존 간의 강력한 상관관계가 관찰되었다. 중요하게, HS-110에 대한 면역 반응의 타이밍은 관찰된 임상 반응의 타이밍에 해당하며, 그러한 반응은 지속되는 것으로 보인다.

실시예 2: 환자 분석

총 43명의 환자는 코호트 A로 등록되었다. 이러한 환자 그룹은 40명의 인간 폐 선암(AD) 환자 및 3명의 편평상피 세포 암종(SCC) 환자로 이루어졌다. 총 18명의 환자는 코호트 B로 등록되었다(15명의 AD 및 3명의 SCC).

컴플리터 집단 분석

비아겐푸마투셀-L(HS-110; ImPACT)은 임상적 혜택으로 후천성 면역 반응을 유도하기 위해 gp96-세포 유도된 암 고환 항원(CTA)의 분비를 위해 gp96-Ig 융합 단백질과 트랜스펙션된 인간 선암(Ad) 세포주로부터 유도된 동종이계 세포 백신이다. 연구에서는 HS-110 및 관련된 gp96-Ig/CTA와 관련하여, 발생된 백신이 CD8⁺ 종양 침윤 림프구(TIL)의 증가와 종양 반응 간에 상관관계를 보임을 나타내었다. 도 1 및 도 2에 도시된 바와 같이, DURGA 시험은 HS-110과 니볼루맙의 조합물이 NSCLC 환자에서 임상 결과에 영향을 미칠 수 있는 오래 지속하는 기억과 함께 후천성 CD8 반응을 생성시킬 수 있는 지의 여부를 평가하기 위해 설계되었다.

후천성 면역 반응과 비아겐푸마투셀-L 및 니볼루맙으로의 치료 후 임상 반응의 상관관계를 시험하기 위해, 발달되고 이전에 치료된 폐 선암을 갖는 환자는 18주 동안 주 1회 용량의 HS-110 및 질환 진행 또는 사망까지 2주마다 니볼루맙 3 ㎎/㎏으로 치료되었다. 기준선에서 그리고 10주에 생검 조직은 종양 세포 상에서의 CD8⁺ TIL 및 PD-L1 발현의 수준에 대해 시험되었다(도 2). 등록된 35명 환자 중에서, 6명(17%)은 부분 반응을 달성하였고, 14명(40%)은 질환 조절을 갖는다. 컴플리터 분석은 각각 43% 및 93%의 ORR 및 DCR을 나타내었다(도 14 참조). CPI 진행자 분석은 각각 22% 및 50%의 ORR 및 DCR을 나타내었으며(도 20 참조), 이는 비아겐푸마투셀-L 및 니볼루맙으로의 치료가 놀랍게도 반응할 것으로 예상되지 않는 환자에서 활성을 복원함을 나타낸다. 이에 따라, HS-110과 니볼루맙의 조합물은 내약성이 우수하며, 단일 제제 관문 저해제와 비교하여 추가적인 독성을 가지지 않는다. 양성 후천성 면역 반응(nadir에 비해 적어도 2배 증가로서 규정됨)은 시험된 환자의 86%(21명 중 18명)에서 일어났다.

컴플리터 집단(비아겐푸마투셀-L, 18(+/- 2)회 용량으로 연구 치료를 완료한 환자)과 비-컴플리터 집단(비아겐푸마투셀-L, 16회 미만 용량으로 연구 치료를 완료하지 못한 환자)을 비교할 때 더 큰 전체 생존을 나타낸 타임-온-치료법(Time-On-Therapy)은 전체 생존의 증가를 나타내었으며(도 7 참조), 표적 병소 반응의 지속성은 도 11에 도시되어 있다(또한, 도 5, 도 11, 도 13, 및 도 23 참조). 추가적으로, 낮은 내지 높은 TIL은 임상 반응과 관련이 있는 것으로 나타났다. 상세하게, CD8⁺ T-세포의 수준은 비아겐푸마투셀-L 및 니볼루맙으로의 병용 치료의 도입 후 급격하게 증가되었고, RECIST 1.1에 따른 PR의 임상 반응과 관련이 있다.

말초 혈액은 1, 4, 7, 13주에 그리고 HS-110 치료의 종료 시에 효소-결합 면역점(ELISPOT) 검정을 이용하여 면역 반응에 대해 분석되었다. 전체 세포 HS-110 백신 용해물로 환자 PBMC를 자극시킴으로써 발생된 ELISPOT 스폿은 치료 시에 환자의 전체 생존과 유의미하게 상관관계가 있다(p=0.06)(도 16 참조).

치료 목적 및 퍼 프로토콜 집단 분석

후천성 면역 반응과 비아겐푸마투셀-L 및 니볼루맙으로의 치료 후 임상 반응의 상관관계를 시험하기 위해, 발달되고 이전에 치료된 폐 선암을 갖는 환자는 6회 이상 용량의 HS-110(1주에 1회) 및 3회 이상의 용량의 니볼루맙(항-PD-1)(격주 1회)을 수용하였다. 도 4는 관문 저해제(CPI) 나이브인 ITT 환자 집단에서 RECIST 1.1에 의한 최상의 표적 병소 반응을 도시한 것이며, 도 5는 CPI 나이브 퍼 프로토콜 집단에서 표적 병소 반응의 지속성을 도시한 것이다. 유사하게, 도 20은 RECIST 1.1에 의한 최상의 표적 병소 반응을 도시한 것이며, 도 21은 CPI 진행자 ITT 환자 집단에 대한 표적 병소 반응의 지속성을 도시한 선 그래프이다. 도 8은 CPI 나이브 집단에 대한 높은 TIL(10% 초과; n=14) 환자 및 낮은 TIL(10% 이하; n=14) 환자에 대해 기준선에서 종양 침윤 림프구(TIL) 수준에 의한 전체 생존율을 도시한 생존 플롯이다. 도 8에서, "HR"은 위험 비율을 지칭한 것으로서, 여기서, 1.0은 다른 그룹과 비교하여 100% 사망 가능성을 지시하는 것이다(즉, 높은 TIL 그룹과 비교하여 낮은 TIL 그룹). 도 8에서의 결과는, 0.043의 유의미한 p 값을 갖는 높은 TIL 환자 그룹과 비교하여 낮은 TIL 환자 그룹에 대해 23% 사망 가능성이 존재함을 나타낸다.

도 6은 14.4개월 초과의 평균에 아직 도달하지 않은 ITT 집단에 대한 전체 생존(OS) 곡선을 도시한 것이다. 이러한 환자 집단은 단지 하나의 이전 치료 과정의 중간값을 가졌으며, 이는 화학요법이었다. 이와 같이, ITT 집단은 CPI 나이브이며, 니볼루맙 단독으로 치료되었을 때, 전체 평균 생존은 12.2개월이었다.

도 9a 및 도 9b는 CPI 나이브 ITT 집단에서의 무진행 생존(PFS)(도 9a), 및 CPI 나이브 ITT 집단에서의 기준선에서 TIL 수준에 의한 무진행 생존(도 9b)을 도시한 그래프이다. 도 9a에서, 평균 PFS(mPFS)는 58일이었으며, 1년 PFS는 23.9%였다. 도 9b에서, 낮은 TIL에 대한 1년 PFS는 31.7%이었으며, 높은 TIL에 대한 1년 PFS는 10.6%였다. 유사하게, 도 18은 mPFS가 67일인 경우 6개월 또는 더 긴 후에 질환 진행을 갖는 이전에 CPI 치료법을 받은 환자의 ITT 환자 집단에서 PFS를 도시한 플롯이다.

도 17a 및 도 17b는 기준선에서 PD-L1 수준에 의한, 무진행 생존(PFS)을 경험한 CPI 나이브 환자의 백분율(도 17a), 또는 전체 생존(OS)(도 17b)을 나타낸 그래프이다. 1년 PFS는 PD-L1+(1% 이상) 환자에 대해 30%였다. ORR 측면에서, 기준선에서 PD-L1 상태를 기초로 하여 RESIST 1.1에 의한 표적 병소 반응이 차이가 나지 않는다는 것은 놀라운 것이다(도 12).

도 12 및 도 13은 CPI 나이브인 퍼 프로토콜 집단에서 또는 CPI 진행자 환자에서 최상의 표적 병소 반응, 및 PD-L1 상태를 기초로 한 표적 병소 반응의 지속성을 도시한 것이다[도 24, 도 25 참조]. 유사하게, 도 10A, 도 10B 및 도 11은 CPI 나이브인, 퍼 프로토콜 집단에 대한 종양 침윤 림프구(TIL) 상태를 기초로 한 최상의 표적 병소 반응 및 지속성을 도시한 것이다. 도 22는 관문 저해제(CPI) 진행자 환자에서 TIL 상태를 기초로 한 최상의 표적 병소 반응을 도시한 것이다. 도 23은 CPI 진행자 환자에서 TIL 수준을 기초로 한 표적 병소 반응의 지속성을 도시한 것이다.

본 명세서에 개시된 데이터는 코호트 A에 대해, 14명의 환자(32.6%)가 TIL높음이었고, 13명(30.2%)이 TIL낮음이었고, 16명(37.2%)이 TIL미지임을 나타낸다. 코호트 A에서, ORR, 질환 조절률(DCR), 평균 무진행 생존(PFS), 및 1년 PFS는 각각 18.6%, 48.8%, 1.9개월 및 23.9%이었으며, 평균 추적 기간은 432일이었다. 코호트 B에서, 환자가 HS-110 및 니볼루맙 둘 모두를 받은 경우에, ORR, DCR, 및 PFS는 각각 22%, 50% 및 2.2개월이었으며, 평균 추적 기간은 43일이었다. 평균 전체 생존(mOS)은 어느 한 코호트에도 도달하지 않았다. 코호트 A에서, 기준선에서 TIL낮음은 TIL높음과 비교하여 증가된 mOS와 관련이 있었다(도달하지 못함 대 13.8개월, 위험 비율[HR] 0.23, 95% CI 0.068-0.81, p = 0.04). 코호트 A에서 PD-L1 상태에 따라 mOS는 차이가 나지 않았다(p=0.82). 코호트 A 및 B 둘 모두로부터의 총 57명(93%)의 환자는 적어도 하나의 부작용(AE)을 경험하였으며, 이중 39명(64%)은 등급 1 또는 2이었다. 가장 일반적인 AE는 피로(31%), 기침 및 설사(각각 19.7%)이다. 폐색전 및 종양 진행에 의해 야기된 2 등급 5 AE(3.3%)가 존재하였으며, 치료와 관련이 없는 것으로 간주되었다.

본 명세서에 개시된 결과는, 니볼루맙(항-PD-1)이 PD-L1^음성 또는 PD-L1^낮음 환자에서 단독으로 효과적이지 않음을 나타낸다. 그러나, 병용 치료법(HS-110 + 니볼루맙)은 PD-L1 상태와는 무관하게 동일하게 효과적이다. 이에 따라, 이러한 조합물은 기준선에서 TIL낮음 환자뿐만 아니라 PD-L1_neg 또는 PD-L1_낮음 암 환자에게 니볼루맙 효능을 확장시킨다.

요약하면, 비아겐푸마투셀-L(HS-110)과 니볼루맙(항-PD-1)의 조합물은 안전하고 효과적인 치료이다. ELISPOT에 의한 후천성 면역 반응은 HS-110 치료를 완료한 환자에서 임상 혜택과 그리고 치료 의향 집단에서 개선된 전체 생존과 상관 관계가 있다. 비아겐푸마투셀-L로의 연구 치료의 완료는 비-컴플리터와 비교할 때 전체 생존을 유의미하게 개선시킨다(p=0.04). 유사하게, 낮은 종양 침윤 림프구(TIL) 환자는 니볼루맙에 대해 매우 반응적이지 않다. 그러나, 병용 치료법(HS-110 + 니볼루맙)은 TIL 상태와 무관하게 동일하게 효과적이고(예를 들어, TIL_높음뿐만 아니라 TIL_낮음에서 유사한 효과), 이에 따라, 조합물은 TLI_낮음 암 환자에 대한 니볼루맙 효능을 TIL_높음 환자에 대한 유의미한 OS 혜택의 포인트까지 확장시킨다. 또한, 비아겐푸마투셀-L 및 니볼루맙으로의 병용 치료는 10주에 종양 조직 내로의 CD8⁺ T-세포의 상당한 침윤을 야기시켰고, 종양 감소의 임상적 반응과 관련이 있다(RECIST 1.1에 따른 부분 반응).

이에 따라, 비제한적으로, 실시예 1 및 2는 발달된 비-소세포 폐암(NSCLC)을 갖는 환자에서 비아겐푸마투셀-L(HS-110) 플러스 니볼루맙의 임상적 성공을 나타낸다. 이전에 치료된 NSCLC를 가진 환자는 먼저 18주 동안 1주일에 1회 1×10⁷ HS-110 세포를 수용하였고, 과도한 독성 또는 종양 진행까지 2주마다 니볼루맙 3 ㎎/㎏ 또는 240㎎을 수용하였다. 조직을 PD-L1 발현(1% 이상 또는 1% 미만) 및 종양 침윤 림프구(TIL)에 대해 기준선에서 시험하였다. TIL높음은 종양 기질에서 10% 초과의 CD8+ 림프구에 의해 규정되었다. 코호트 A에서의 환자는 이전 ICB를 수용하지 않았으며, 코호트 B에서 환자는 이전 ICB를 수용하였다. 1차 목적은 안전성 및 객관적 반응률(ORR)이었다. 코호트 A에서 43명의 환자가 등록되었으며(40 AD 및 3 편평상피 세포 암종[SCC]) 코호트 B에서 18명의 환자가 등록되었다(15 AD 및 3 SCC). 코호트 A에서, 14명의 환자(32.6%)는 TIL높음이었으며, 13명(30.2%)은 TIL낮음이었으며, 16명(37.2%)은 TIL 미공지되어 있다. ORR, 질환 조절률(DCR), 중간 무진행 생존(PFS) 및 1년 PFS는 코호트 A에서, 각각 18.6%, 48.8%, 1.9개월 및 23.9%이었으며, 평균은 432일까지 이어진다. ORR, DCR, 및 PFS는 코호트 B에서 각각 22%, 50% 및 2.2개월이었으며, 중간은 43일까지 이어졌다. 중간 전체 생존(mOS)은 코호트에서 도달하지 못하였다. 코호트 A에서, 기준선에서 TIL낮음은 TIL높음과 비교하여 증가된 mOS와 관련되었다(도달하지 못함 대 13.8개월, 위험 비율[HR] 0.23, 95% CI 0.068-0.81, p = 0.04). 코호트 A(p=0.82)에서 PD-L1 상태에 따라 mOS에서 차이가 존재하지 않는다. 57명(93%)의 환자는 적어도 하나의 부작용(AE)을 경험하였으며, 이중 39명(64%)은 등급 1 또는 2이었다. 가장 일반적인 AE는 피로(31%), 기침 및 설사(19.7% 각각)이었다. 폐색전 및 종양 진행에 의해 2 등급 5 AE(3.3%)가 야기되었으며, 이는 치료와 관련되지 않는 것으로 간주된다.

서열

전장 인간 gp-96의 뉴클레오타이드 서열(유전자 기탁번호 X15187):

유전자 기탁번호 CAA33261의 인간 gp96 유전자의 아미노산 서열:

Gp96의 유지 서열: KDEL (서열번호 3).

KDEL 서열이 결여된 인간 gp96 유전자의 아미노산 서열:

힌지 영역이 없는 Fc 도메인의 인간 서열의 아미노산 서열:

다른 실시형태

본 개시내용은 이의 상세한 설명과 함께 기술되었지만, 상기 설명이 본 개시내용의 범위를 제한하지 않고 예시하도록 의도되는 것으로 이해되어야 하며, 본 개시내용의 범위는 첨부된 청구범위에 의해서 규정된다. 다른 양태, 장점, 및 변형이 하기 청구범위 내에 속한다.

참고문헌에 의한 통합

본 명세서에서 언급된 모든 특허 및 출판물은 이의 전문이 본 명세서에 참조에 의해 포함된다. 본 명세서에서 논의된 출판물은 본 출원의 출원일 이전에 오로지 본 개시를 위해 제공된 것이다. 본 명세서에서 본 발명이 선행 발명에 의해 이러한 출판물을 보다 선행할 자격이 없다는 것을 인정하는 것으로 해석되어서는 안된다. 본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 모든 표제는 단순히 구성을 위한 것이고, 본 발명을 어떠한 방식으로도 제한하도록 의도된 것은 아니다.

SEQUENCE LISTING <110> HEAT BIOLOGICS, INC. <120> GP96-BASED CANCER THERAPY <130> WO 2019/104327 <140> PCT/US2018/62621 <141> 2018-11-27 <150> US 62/590,785 <151> 2017-11-27 <150> US 62/635,958 <151> 2018-02-27 <160> 5 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 2412 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 1 atgagggccc tgtgggtgct gggcctctgc tgcgtcctgc tgaccttcgg gtcggtcaga 60 gctgacgatg aagttgatgt ggatggtaca gtagaagagg atctgggtaa aagtagagaa 120 ggatcaagga cggatgatga agtagtacag agagaggaag aagctattca gttggatgga 180 ttaaatgcat cacaaataag agaacttaga gagaagtcgg aaaagtttgc cttccaagcc 240 gaagttaaca gaatgatgaa acttatcatc aattcattgt ataaaaataa agagattttc 300 ctgagagaac tgatttcaaa tgcttctgat gctttagata agataaggct aatatcactg 360 actgatgaaa atgctctttc tggaaatgag gaactaacag tcaaaattaa gtgtgataag 420 gagaagaacc tgctgcatgt cacagacacc ggtgtaggaa tgaccagaga agagttggtt 480 aaaaaccttg gtaccatagc caaatctggg acaagcgagt ttttaaacaa aatgactgaa 540 gcacaggaag atggccagtc aacttctgaa ttgattggcc agtttggtgt cggtttctat 600 tccgccttcc ttgtagcaga taaggttatt gtcacttcaa aacacaacaa cgatacccag 660 cacatctggg agtctgactc caatgaattt tctgtaattg ctgacccaag aggaaacact 720 ctaggacggg gaacgacaat tacccttgtc ttaaaagaag aagcatctga ttaccttgaa 780 ttggatacaa ttaaaaatct cgtcaaaaaa tattcacagt tcataaactt tcctatttat 840 gtatggagca gcaagactga aactgttgag gagcccatgg aggaagaaga agcagccaaa 900 gaagagaaag aagaatctga tgatgaagct gcagtagagg aagaagaaga agaaaagaaa 960 ccaaagacta aaaaagttga aaaaactgtc tgggactggg aacttatgaa tgatatcaaa 1020 ccaatatggc agagaccatc aaaagaagta gaagaagatg aatacaaagc tttctacaaa 1080 tcattttcaa aggaaagtga tgaccccatg gcttatattc actttactgc tgaaggggaa 1140 gttaccttca aatcaatttt atttgtaccc acatctgctc cacgtggtct gtttgacgaa 1200 tatggatcta aaaagagcga ttacattaag ctctatgtgc gccgtgtatt catcacagac 1260 gacttccatg atatgatgcc taaatacctc aattttgtca agggtgtggt ggactcagat 1320 gatctcccct tgaatgtttc ccgcgagact cttcagcaac ataaactgct taaggtgatt 1380 aggaagaagc ttgttcgtaa aacgctggac atgatcaaga agattgctga tgataaatac 1440 aatgatactt tttggaaaga atttggtacc aacatcaagc ttggtgtgat tgaagaccac 1500 tcgaatcgaa cacgtcttgc taaacttctt aggttccagt cttctcatca tccaactgac 1560 attactagcc tagaccagta tgtggaaaga atgaaggaaa aacaagacaa aatctacttc 1620 atggctgggt ccagcagaaa agaggctgaa tcttctccat ttgttgagcg acttctgaaa 1680 aagggctatg aagttattta cctcacagaa cctgtggatg aatactgtat tcaggccctt 1740 cccgaatttg atgggaagag gttccagaat gttgccaagg aaggagtgaa gttcgatgaa 1800 agtgagaaaa ctaaggagag tcgtgaagca gttgagaaag aatttgagcc tctgctgaat 1860 tggatgaaag ataaagccct taaggacaag attgaaaagg ctgtggtgtc tcagcgcctg 1920 acagaatctc cgtgtgcttt ggtggccagc cagtacggat ggtctggcaa catggagaga 1980 atcatgaaag cacaagcgta ccaaacgggc aaggacatct ctacaaatta ctatgcgagt 2040 cagaagaaaa catttgaaat taatcccaga cacccgctga tcagagacat gcttcgacga 2100 attaaggaag atgaagatga taaaacagtt ttggatcttg ctgtggtttt gtttgaaaca 2160 gcaacgcttc ggtcagggta tcttttacca gacactaaag catatggaga tagaatagaa 2220 agaatgcttc gcctcagttt gaacattgac cctgatgcaa aggtggaaga agagcccgaa 2280 gaagaacctg aagagacagc agaagacaca acagaagaca cagagcaaga cgaagatgaa 2340 gaaatggatg tgggaacaga tgaagaagaa gaaacagcaa aggaatctac agctgaaaaa 2400 gatgaattgt aa 2412 <210> 2 <211> 803 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2 Met Arg Ala Leu Trp Val Leu Gly Leu Cys Cys Val Leu Leu Thr Phe 1 5 10 15 Gly Ser Val Arg Ala Asp Asp Glu Val Asp Val Asp Gly Thr Val Glu 20 25 30 Glu Asp Leu Gly Lys Ser Arg Glu Gly Ser Arg Thr Asp Asp Glu Val 35 40 45 Val Gln Arg Glu Glu Glu Ala Ile Gln Leu Asp Gly Leu Asn Ala Ser 50 55 60 Gln Ile Arg Glu Leu Arg Glu Lys Ser Glu Lys Phe Ala Phe Gln Ala 65 70 75 80 Glu Val Asn Arg Met Met Lys Leu Ile Ile Asn Ser Leu Tyr Lys Asn 85 90 95 Lys Glu Ile Phe Leu Arg Glu Leu Ile Ser Asn Ala Ser Asp Ala Leu 100 105 110 Asp Lys Ile Arg Leu Ile Ser Leu Thr Asp Glu Asn Ala Leu Ser Gly 115 120 125 Asn Glu Glu Leu Thr Val Lys Ile Lys Cys Asp Lys Glu Lys Asn Leu 130 135 140 Leu His Val Thr Asp Thr Gly Val Gly Met Thr Arg Glu Glu Leu Val 145 150 155 160 Lys Asn Leu Gly Thr Ile Ala Lys Ser Gly Thr Ser Glu Phe Leu Asn 165 170 175 Lys Met Thr Glu Ala Gln Glu Asp Gly Gln Ser Thr Ser Glu Leu Ile 180 185 190 Gly Gln Phe Gly Val Gly Phe Tyr Ser Ala Phe Leu Val Ala Asp Lys 195 200 205 Val Ile Val Thr Ser Lys His Asn Asn Asp Thr Gln His Ile Trp Glu 210 215 220 Ser Asp Ser Asn Glu Phe Ser Val Ile Ala Asp Pro Arg Gly Asn Thr 225 230 235 240 Leu Gly Arg Gly Thr Thr Ile Thr Leu Val Leu Lys Glu Glu Ala Ser 245 250 255 Asp Tyr Leu Glu Leu Asp Thr Ile Lys Asn Leu Val Lys Lys Tyr Ser 260 265 270 Gln Phe Ile Asn Phe Pro Ile Tyr Val Trp Ser Ser Lys Thr Glu Thr 275 280 285 Val Glu Glu Pro Met Glu Glu Glu Glu Ala Ala Lys Glu Glu Lys Glu 290 295 300 Glu Ser Asp Asp Glu Ala Ala Val Glu Glu Glu Glu Glu Glu Lys Lys 305 310 315 320 Pro Lys Thr Lys Lys Val Glu Lys Thr Val Trp Asp Trp Glu Leu Met 325 330 335 Asn Asp Ile Lys Pro Ile Trp Gln Arg Pro Ser Lys Glu Val Glu Glu 340 345 350 Asp Glu Tyr Lys Ala Phe Tyr Lys Ser Phe Ser Lys Glu Ser Asp Asp 355 360 365 Pro Met Ala Tyr Ile His Phe Thr Ala Glu Gly Glu Val Thr Phe Lys 370 375 380 Ser Ile Leu Phe Val Pro Thr Ser Ala Pro Arg Gly Leu Phe Asp Glu 385 390 395 400 Tyr Gly Ser Lys Lys Ser Asp Tyr Ile Lys Leu Tyr Val Arg Arg Val 405 410 415 Phe Ile Thr Asp Asp Phe His Asp Met Met Pro Lys Tyr Leu Asn Phe 420 425 430 Val Lys Gly Val Val Asp Ser Asp Asp Leu Pro Leu Asn Val Ser Arg 435 440 445 Glu Thr Leu Gln Gln His Lys Leu Leu Lys Val Ile Arg Lys Lys Leu 450 455 460 Val Arg Lys Thr Leu Asp Met Ile Lys Lys Ile Ala Asp Asp Lys Tyr 465 470 475 480 Asn Asp Thr Phe Trp Lys Glu Phe Gly Thr Asn Ile Lys Leu Gly Val 485 490 495 Ile Glu Asp His Ser Asn Arg Thr Arg Leu Ala Lys Leu Leu Arg Phe 500 505 510 Gln Ser Ser His His Pro Thr Asp Ile Thr Ser Leu Asp Gln Tyr Val 515 520 525 Glu Arg Met Lys Glu Lys Gln Asp Lys Ile Tyr Phe Met Ala Gly Ser 530 535 540 Ser Arg Lys Glu Ala Glu Ser Ser Pro Phe Val Glu Arg Leu Leu Lys 545 550 555 560 Lys Gly Tyr Glu Val Ile Tyr Leu Thr Glu Pro Val Asp Glu Tyr Cys 565 570 575 Ile Gln Ala Leu Pro Glu Phe Asp Gly Lys Arg Phe Gln Asn Val Ala 580 585 590 Lys Glu Gly Val Lys Phe Asp Glu Ser Glu Lys Thr Lys Glu Ser Arg 595 600 605 Glu Ala Val Glu Lys Glu Phe Glu Pro Leu Leu Asn Trp Met Lys Asp 610 615 620 Lys Ala Leu Lys Asp Lys Ile Glu Lys Ala Val Val Ser Gln Arg Leu 625 630 635 640 Thr Glu Ser Pro Cys Ala Leu Val Ala Ser Gln Tyr Gly Trp Ser Gly 645 650 655 Asn Met Glu Arg Ile Met Lys Ala Gln Ala Tyr Gln Thr Gly Lys Asp 660 665 670 Ile Ser Thr Asn Tyr Tyr Ala Ser Gln Lys Lys Thr Phe Glu Ile Asn 675 680 685 Pro Arg His Pro Leu Ile Arg Asp Met Leu Arg Arg Ile Lys Glu Asp 690 695 700 Glu Asp Asp Lys Thr Val Leu Asp Leu Ala Val Val Leu Phe Glu Thr 705 710 715 720 Ala Thr Leu Arg Ser Gly Tyr Leu Leu Pro Asp Thr Lys Ala Tyr Gly 725 730 735 Asp Arg Ile Glu Arg Met Leu Arg Leu Ser Leu Asn Ile Asp Pro Asp 740 745 750 Ala Lys Val Glu Glu Glu Pro Glu Glu Glu Pro Glu Glu Thr Ala Glu 755 760 765 Asp Thr Thr Glu Asp Thr Glu Gln Asp Glu Asp Glu Glu Met Asp Val 770 775 780 Gly Thr Asp Glu Glu Glu Glu Thr Ala Lys Glu Ser Thr Ala Glu Lys 785 790 795 800 Asp Glu Leu <210> 3 <211> 4 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 3 Lys Asp Glu Leu 1 <210> 4 <211> 799 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 4 Met Arg Ala Leu Trp Val Leu Gly Leu Cys Cys Val Leu Leu Thr Phe 1 5 10 15 Gly Ser Val Arg Ala Asp Asp Glu Val Asp Val Asp Gly Thr Val Glu 20 25 30 Glu Asp Leu Gly Lys Ser Arg Glu Gly Ser Arg Thr Asp Asp Glu Val 35 40 45 Val Gln Arg Glu Glu Glu Ala Ile Gln Leu Asp Gly Leu Asn Ala Ser 50 55 60 Gln Ile Arg Glu Leu Arg Glu Lys Ser Glu Lys Phe Ala Phe Gln Ala 65 70 75 80 Glu Val Asn Arg Met Met Lys Leu Ile Ile Asn Ser Leu Tyr Lys Asn 85 90 95 Lys Glu Ile Phe Leu Arg Glu Leu Ile Ser Asn Ala Ser Asp Ala Leu 100 105 110 Asp Lys Ile Arg Leu Ile Ser Leu Thr Asp Glu Asn Ala Leu Ser Gly 115 120 125 Asn Glu Glu Leu Thr Val Lys Ile Lys Cys Asp Lys Glu Lys Asn Leu 130 135 140 Leu His Val Thr Asp Thr Gly Val Gly Met Thr Arg Glu Glu Leu Val 145 150 155 160 Lys Asn Leu Gly Thr Ile Ala Lys Ser Gly Thr Ser Glu Phe Leu Asn 165 170 175 Lys Met Thr Glu Ala Gln Glu Asp Gly Gln Ser Thr Ser Glu Leu Ile 180 185 190 Gly Gln Phe Gly Val Gly Phe Tyr Ser Ala Phe Leu Val Ala Asp Lys 195 200 205 Val Ile Val Thr Ser Lys His Asn Asn Asp Thr Gln His Ile Trp Glu 210 215 220 Ser Asp Ser Asn Glu Phe Ser Val Ile Ala Asp Pro Arg Gly Asn Thr 225 230 235 240 Leu Gly Arg Gly Thr Thr Ile Thr Leu Val Leu Lys Glu Glu Ala Ser 245 250 255 Asp Tyr Leu Glu Leu Asp Thr Ile Lys Asn Leu Val Lys Lys Tyr Ser 260 265 270 Gln Phe Ile Asn Phe Pro Ile Tyr Val Trp Ser Ser Lys Thr Glu Thr 275 280 285 Val Glu Glu Pro Met Glu Glu Glu Glu Ala Ala Lys Glu Glu Lys Glu 290 295 300 Glu Ser Asp Asp Glu Ala Ala Val Glu Glu Glu Glu Glu Glu Lys Lys 305 310 315 320 Pro Lys Thr Lys Lys Val Glu Lys Thr Val Trp Asp Trp Glu Leu Met 325 330 335 Asn Asp Ile Lys Pro Ile Trp Gln Arg Pro Ser Lys Glu Val Glu Glu 340 345 350 Asp Glu Tyr Lys Ala Phe Tyr Lys Ser Phe Ser Lys Glu Ser Asp Asp 355 360 365 Pro Met Ala Tyr Ile His Phe Thr Ala Glu Gly Glu Val Thr Phe Lys 370 375 380 Ser Ile Leu Phe Val Pro Thr Ser Ala Pro Arg Gly Leu Phe Asp Glu 385 390 395 400 Tyr Gly Ser Lys Lys Ser Asp Tyr Ile Lys Leu Tyr Val Arg Arg Val 405 410 415 Phe Ile Thr Asp Asp Phe His Asp Met Met Pro Lys Tyr Leu Asn Phe 420 425 430 Val Lys Gly Val Val Asp Ser Asp Asp Leu Pro Leu Asn Val Ser Arg 435 440 445 Glu Thr Leu Gln Gln His Lys Leu Leu Lys Val Ile Arg Lys Lys Leu 450 455 460 Val Arg Lys Thr Leu Asp Met Ile Lys Lys Ile Ala Asp Asp Lys Tyr 465 470 475 480 Asn Asp Thr Phe Trp Lys Glu Phe Gly Thr Asn Ile Lys Leu Gly Val 485 490 495 Ile Glu Asp His Ser Asn Arg Thr Arg Leu Ala Lys Leu Leu Arg Phe 500 505 510 Gln Ser Ser His His Pro Thr Asp Ile Thr Ser Leu Asp Gln Tyr Val 515 520 525 Glu Arg Met Lys Glu Lys Gln Asp Lys Ile Tyr Phe Met Ala Gly Ser 530 535 540 Ser Arg Lys Glu Ala Glu Ser Ser Pro Phe Val Glu Arg Leu Leu Lys 545 550 555 560 Lys Gly Tyr Glu Val Ile Tyr Leu Thr Glu Pro Val Asp Glu Tyr Cys 565 570 575 Ile Gln Ala Leu Pro Glu Phe Asp Gly Lys Arg Phe Gln Asn Val Ala 580 585 590 Lys Glu Gly Val Lys Phe Asp Glu Ser Glu Lys Thr Lys Glu Ser Arg 595 600 605 Glu Ala Val Glu Lys Glu Phe Glu Pro Leu Leu Asn Trp Met Lys Asp 610 615 620 Lys Ala Leu Lys Asp Lys Ile Glu Lys Ala Val Val Ser Gln Arg Leu 625 630 635 640 Thr Glu Ser Pro Cys Ala Leu Val Ala Ser Gln Tyr Gly Trp Ser Gly 645 650 655 Asn Met Glu Arg Ile Met Lys Ala Gln Ala Tyr Gln Thr Gly Lys Asp 660 665 670 Ile Ser Thr Asn Tyr Tyr Ala Ser Gln Lys Lys Thr Phe Glu Ile Asn 675 680 685 Pro Arg His Pro Leu Ile Arg Asp Met Leu Arg Arg Ile Lys Glu Asp 690 695 700 Glu Asp Asp Lys Thr Val Leu Asp Leu Ala Val Val Leu Phe Glu Thr 705 710 715 720 Ala Thr Leu Arg Ser Gly Tyr Leu Leu Pro Asp Thr Lys Ala Tyr Gly 725 730 735 Asp Arg Ile Glu Arg Met Leu Arg Leu Ser Leu Asn Ile Asp Pro Asp 740 745 750 Ala Lys Val Glu Glu Glu Pro Glu Glu Glu Pro Glu Glu Thr Ala Glu 755 760 765 Asp Thr Thr Glu Asp Thr Glu Gln Asp Glu Asp Glu Glu Met Asp Val 770 775 780 Gly Thr Asp Glu Glu Glu Glu Thr Ala Lys Glu Ser Thr Ala Glu 785 790 795 <210> 5 <211> 217 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 5 Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys 1 5 10 15 Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val 20 25 30 Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr 35 40 45 Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu 50 55 60 Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His 65 70 75 80 Gln Asp Trp Leu Ser Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Ser Lys 85 90 95 Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Asn Ala Thr Gly Gln 100 105 110 Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met 115 120 125 Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro 130 135 140 Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn 145 150 155 160 Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu 165 170 175 Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Trp Gln Glu Gly Asn Val 180 185 190 Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln 195 200 205 Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 210 215

Claims (64)

1. 폐암을 치료하는 방법으로서, 폐암의 치료를 필요로 하는 대상체에게 (a) 분비성 백신 단백질을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 발현 벡터를 포함하는 세포 및 (b) 면역 관문 저해제를 투여하는 단계를 포함하는, 폐암을 치료하는 방법.
2. 제1항에 있어서, 상기 면역 관문 저해제는 면역 관문 유전자를 억제하는, 폐암을 치료하는 방법.
3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 면역 관문 저해제는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는, 폐암을 치료하는 방법.
4. 제2항에 있어서, 상기 면역 관문 유전자는 세포예정사 단백질 1(PD-1), 예정사-리간드 1(PD-L1), 예정사-리간드 1(PD-L2), 종양 괴사 인자 수용체 수퍼패밀리, 구성원 4(TNFRSF4), 종양 괴사 인자 수용체 수퍼패밀리 구성원 25(TNFRSF25), 사멸 수용체 3(DR3), 종양 괴사 인자 수용체 수퍼패밀리 구성원 9(TNFRSF9), 글루코코르티코이드-유발 TNFR-관련 단백질(GITR), 세포독성 T-림프구-관련 단백질 4(CTLA-4) 및 림프구-활성화 유전자 3(LAG-3)으로부터 선택된, 폐암을 치료하는 방법.
5. 제2항에 있어서, 상기 면역 관문 유전자는 PD-1 또는 PD-L1인, 폐암을 치료하는 방법.
6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 면역 관문 저해제는 항-PD-1 또는 항-PD-L1 항체 또는 이의 항원 결합 단편인, 폐암을 치료하는 방법.
7. 제6항에 있어서, 상기 항-PD-1 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 니볼루맙, 펨브롤리주맙, 피딜리주맙, BMS-936559, 아테졸리주맙, 아벨루맙으로부터 선택되고, 상기 PD-L1 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 두르발루맙인, 폐암을 치료하는 방법.
8. 제6항에 있어서, 상기 항-PD-1 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 니볼루맙인, 폐암을 치료하는 방법.
9. 제1항에 있어서, 상기 폐암은 소세포 폐암인, 폐암을 치료하는 방법.
10. 제1항 또는 제9항에 있어서, 상기 폐암은 비-소세포 폐암인, 폐암을 치료하는 방법.
11. 제1항, 제9항 및 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 비-소세포 폐암은 선암인, 폐암을 치료하는 방법.
12. 제1항, 제9항 및 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 비-소세포 폐암은 편평상피 세포 암종 또는 대세포 폐암인, 폐암을 치료하는 방법.
13. 제1항에 있어서, 상기 방법은 폐암 재발을 감소시키는, 폐암을 치료하는 방법.
14. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법은 상기 대상체에서 종양 항원 특이적 T 세포의 활성화 또는 증식을 증가시키는, 폐암을 치료하는 방법.
15. 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법은 상기 대상체에서 CD8+ T 세포의 활성화 또는 수를 증가시키는, 폐암을 치료하는 방법.
16. 제14항에 있어서, 상기 방법은 상기 대상체에서 IFN-γ 분비 CD8+ T 세포의 활성화 또는 수를 증가시키는, 폐암을 치료하는 방법.
17. 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체는 저용량의 세포로 치료되는, 폐암을 치료하는 방법.
18. 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체에게 약 100,000개의 세포, 약 150,000개의 세포, 약 200,000개의 세포, 약 250,000개의 세포, 약 300,000개의 세포, 약 350,000개의 세포, 약 400,000개의 세포, 약 450,000개의 세포, 약 500,000개의 세포, 약 550,000개의 세포, 약 600,000개의 세포, 약 650,000개의 세포, 약 700,000개의 세포, 약 750,000개의 세포, 약 800,000개의 세포, 약 850,000개의 세포, 약 900,000개의 세포, 약 950,000개의 세포, 또는 약 1,000,000개의 세포, 또는 약 1,500,000개의 세포, 또는 약 2,000,000개의 세포, 또는 약 2,500,000개의 세포, 또는 약 3,000,000개의 세포, 또는 약 3,500,000개의 세포, 또는 약 4,000,000개의 세포, 또는 약 4,500,000개의 세포, 또는 약 5,000,000개의 세포, 또는 약 5,500,000개의 세포, 또는 약 6,000,000개의 세포, 또는 약 6,500,000개의 세포, 또는 약 7,000,000개의 세포, 또는 약 7,500,000개의 세포, 또는 약 8,000,000개의 세포, 또는 약 8,500,000개의 세포, 또는 약 9,000,000개의 세포, 또는 약 9,500,000개의 세포, 또는 약 10,000,000개의 세포가 투여되는, 폐암을 치료하는 방법.
19. 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체는 투여 후 면역 반응의 강력한 증가를 나타내는, 폐암을 치료하는 방법.
20. 제18항에 있어서, 상기 면역 반응의 강력한 증가는 CD8+ T 세포의 활성화 또는 증식의 기준선보다 적어도 2배 이상의 증가로서 규정된, 폐암을 치료하는 방법.
21. 제18항 또는 제19항에 있어서, 상기 CD8+ T 세포는 IFN-γ를 분비하는, 폐암을 치료하는 방법.
22. 제19항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법은 면역 반응의 강력한 증가를 나타내지 않는 대상체와 비교하여 대상체에서 폐암 재발을 감소시키는 데 더 효과적인, 폐암을 치료하는 방법.
23. 제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체는 투여 전에 적은 수의 종양 침윤 림프구(tumor infiltrating lymphocyte: TIL)를 나타내는, 폐암을 치료하는 방법.
24. 제23항에 있어서, 상기 방법은 상기 면역 관문 저해제 단독에 의한 치료와 비교하여 대상체에서 암 재발을 감소시키는 데 더 효과적인, 폐암을 치료하는 방법.
25. 제1항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 벡터는 포유류 발현 벡터인, 폐암을 치료하는 방법.
26. 제1항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 백신 단백질은, gp96 KDEL(서열번호 3) 서열이 선택적으로 결여된 분비성 gp96-Ig 융합 단백질인, 폐암을 치료하는 방법.
27. 제26항에 있어서, 상기 gp96-Ig 융합 단백질에서 Ig 태그가 인간 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgM, IgA 또는 IgE의 Fc 영역을 포함하는, 폐암을 치료하는 방법.
28. 제1항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 발현 벡터는 DNA를 포함하는, 폐암을 치료하는 방법.
29. 제1항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 발현 벡터는 RNA를 포함하는, 폐암을 치료하는 방법.
30. 제1항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세포는 방사선조사되거나 살아있고 약독화된 인간 종양 세포인, 폐암을 치료하는 방법.
31. 제30항에 있어서, 상기 인간 종양 세포는 규명된(established) NSCLC(Non-Small Cell Lung Cancer), 방광암, 흑색종, 난소암, 신장 세포 암종, 전립선 암종, 육종, 유방 암종, 편평상피 세포 암종, 두경부 암종, 간세포 암종, 췌장 암종 또는 결장 암종 세포주로부터의 세포인, 폐암을 치료하는 방법.
32. 제30항 또는 제31항에 있어서, 상기 인간 종양 세포주는 NSCLC 세포주인, 폐암을 치료하는 방법.
33. 제1항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서, (a) 상기 분비성 백신 단백질을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 발현 벡터를 포함하는 세포의 투여 전에, 그리고 (b) 상기 면역 관문 저해제의 투여 전에, 상기 대상체는 치료법을 받은 후 질환 진행을 경험한 적이 있는, 폐암을 치료하는 방법.
34. 제33항에 있어서, 상기 치료법은 면역 관문 저해제 치료법인, 폐암을 치료하는 방법.
35. 제33항 또는 제34항에 있어서, 상기 치료법은 화학요법을 포함하는, 폐암을 치료하는 방법.
36. 제33항 내지 제35항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체는 상기 면역 관문 저해제 치료법에 대한 불량한 반응자(poor responder)인, 폐암을 치료하는 방법.
37. 제33항 내지 제36항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체는 상기 면역 관문 저해제 치료법에 실패한 적이 있는, 폐암을 치료하는 방법.
38. 제33항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체의 질환은 상기 면역 관문 저해제 치료법을 투여한 경우에도 진행되는 것인, 폐암을 치료하는 방법.
39. NSCLC를 가진 환자를 치료하는 방법으로서,
    a) 상기 환자에게 적어도 6주 동안 주 1회 용량의 HS-110을 투여하는 단계; 및
    b) 상기 환자에게 적어도 6주 동안 격주 1회 용량의 항-PD-1 항체를 투여하는 단계를 포함하는, NSCLC를 가진 환자를 치료하는 방법.
40. PD-L1음성 또는 PD-L1^낮음 상태를 갖는 NSCLC를 가진 환자를 치료하는 방법으로서,
    a) 상기 환자에게 적어도 16주 동안 주 1회 용량의 HS-110을 투여하는 단계; 및
    b) 상기 환자에게 적어도 16주 동안 격주 1회 용량의 항-PD-1 항체를 투여하는 단계를 포함하는, NSCLC를 가진 환자를 치료하는 방법.
41. PD-L1음성 또는 PD-L1^낮음 상태를 갖는 NSCLC를 가진 환자를 치료하는 방법으로서,
    a) 상기 환자에게 적어도 6주 동안 주 1회 용량의 HS-110을 투여하는 단계; 및
    b) 상기 환자에게 적어도 6주 동안 격주 1회 용량의 항-PD-1 항체를 투여하는 단계를 포함하는, NSCLC를 가진 환자를 치료하는 방법.
42. PD-L1음성 또는 PD-L1^낮음 상태인 NSCLC를 가진 환자에서 항-PD-1 치료법의 효능을 증가시키는 방법으로서,
    a) 상기 환자에게 적어도 16주 동안 주 1회 용량의 HS-110을 투여하는 단계; 및
    b) 상기 환자에게 적어도 16주 동안 격주 1회 용량의 항-PD-1 항체를 투여하는 단계를 포함하는, NSCLC를 가진 환자에서 항-PD-1 치료법의 효능을 증가시키는 방법.
43. PD-L1음성 또는 PD-L1^낮음 상태인 NSCLC를 가진 환자에서 항-PD-1 치료법의 효능을 증가시키는 방법으로서,
    a) 상기 환자에게 적어도 6주 동안 주 1회 용량의 HS-110을 투여하는 단계; 및
    b) 상기 환자에게 적어도 6주 동안 격주 1회 용량의 항-PD-1 항체를 투여하는 단계를 포함하는, NSCLC를 가진 환자에서 항-PD-1 치료법의 효능을 증가시키는 방법.
44. 낮은 종양 침윤 림프구(TIL) 상태(TIL^낮음)를 갖는 NSCLC를 가진 환자에서 항-PD-1 치료법의 효능을 증가시키는 방법으로서,
    a) 상기 환자에게 적어도 16주 동안 주 1회 용량의 HS-110을 투여하는 단계; 및
    b) 상기 환자에게 적어도 16주 동안 격주 1회 용량의 항-PD-1 항체를 투여하는 단계를 포함하는, NSCLC를 가진 환자에서 항-PD-1 치료법의 효능을 증가시키는 방법.
45. 낮은 종양 침윤 림프구(TIL) 상태(TIL^낮음)를 갖는 NSCLC를 가진 환자에서 항-PD-1 치료법의 효능을 증가시키는 방법으로서,
    a) 상기 환자에게 적어도 6주 동안 주 1회 용량의 HS-110을 투여하는 단계; 및
    b) 상기 환자에게 적어도 6주 동안 격주 1회 용량의 항-PD-1 항체를 투여하는 단계를 포함하는, NSCLC를 가진 환자에서 항-PD-1 치료법의 효능을 증가시키는 방법.
46. 제39항 내지 제45항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 HS-110의 용량이 약 1×10⁷개의 세포인, 방법.
47. 제39항 내지 제46항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-PD-1 항체의 상기 용량이 240㎎인, 방법.
48. 제39항 내지 제47항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-PD-1 항체는 니볼루맙 및 펨브롤리주맙으로부터 선택되는, 방법.
49. 제1항 내지 제48항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 환자는 치료법을 받은 후 질환 진행을 경험한 적이 있는, 방법.
50. 제49항에 있어서, 상기 치료법은 면역 관문 저해제 치료법인, 방법.
51. 제49항 또는 제50항에 있어서, 상기 치료법은 화학요법을 포함하는, 방법.
52. 제49항 내지 제51항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 환자는 상기 면역 관문 저해제 치료법에 대한 불량한 반응자인, 방법.
53. 제49항 내지 제52항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 환자는 면역 관문 저해제 치료법에 실패한 적이 있는, 방법.
54. 제49항 내지 제53항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 환자의 질환은 상기 면역 관문 저해제 치료법을 투여하였을 때에도 진행되는 것인, 방법.
55. 제39항 내지 제54항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법은 폐암 재발을 감소시키는, 방법.
56. 제39항 내지 제55항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법은 상기 대상체에서 종양 항원 특이적 T 세포의 활성화 또는 증식을 증가시키는, 방법.
57. 제39항 내지 제56항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법은 상기 대상체에서 CD8+ T 세포의 활성화 또는 수를 증가시키는, 방법.
58. 제57항에 있어서, 상기 방법은 상기 대상체에서 IFN-γ 분비 CD8+ T 세포의 활성화 또는 수를 증가시키는, 방법.
59. 제39항 내지 제58항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체는 투여 후에 면역 반응의 강력한 증가를 나타내는, 방법.
60. 제59항에 있어서, 상기 면역 반응의 강력한 증가는 CD8+ T 세포의 활성화 또는 증식의 기준선보다 적어도 2배 이상의 증가로서 규정되는, 방법.
61. 제60항에 있어서, 상기 CD8+ T 세포는 IFN-γ를 분비하는, 방법.
62. 제39항 내지 제61항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법은 면역 반응의 강력한 증가를 나타내지 않는 대상체와 비교하여 상기 대상체에서 폐암 재발을 감소시키는 데 더 효과적인, 방법.
63. 제39항 내지 제62항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체는 투여 전에 적은 수의 종양 침윤 림프구(TIL)를 나타내는, 방법.
64. 제39항 내지 제63항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법은 상기 면역 관문 저해제 단독에 의한 치료와 비교하여 상기 대상체에서 암 재발을 감소시키는 데 더 효과적인, 방법.

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