JP2021504329A - Ｇｐ９６ベースの癌療法 - Google Patents

Abstract

本開示は、とりわけ、（ａ）分泌性ワクチンタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む発現ベクターを保有する細胞、及び（ｂ）免疫チェックポイント阻害剤を、それを必要とする対象に投与することを含む、肺癌（例えば、非小細胞肺癌）を含む癌を治療するための組成物及び方法に関する。【選択図】図１２

Description

開示の分野
本開示は、肺癌（例えば、非小細胞肺癌）を含む癌を治療するための組成物及び方法に関する。

関連出願の相互参照
本出願は、２０１７年１１月２７日出願の米国仮特許出願第６２／５９０,７８５号、及び２０１８年２月２７日出願の米国仮特許出願第６２／６３５,９５８号の優先権並びに利益を主張するものであり、その内容全体は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

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癌は、世界中で重大な健康問題である。癌の検出と治療法における最近の進んだ進歩にもかかわらず、予防もしくは治療のためのワクチン又は他の普遍的に成功した方法で現在利用できるものはない。一般的に化学療法又は手術と放射線の組み合わせに基づく現在の治療法は、多くの患者で不十分であることが証明され続けている。

肺癌は、米国における癌死の主要原因であり、年間１４万人を超える死をもたらしている。病気が進んだステージに到達するまで臨床症状が遅れるため、早期発見は困難である。現在の診断方法は、胸部Ｘ線検査、及び痰に含まれる細胞型の分析、及び気管支の光ファイバー検査を含む。治療の投与計画は、癌の種類と病期によって決まり、手術、放射線療法、及び／又は化学療法を含む。肺癌及び他の癌の治療法に関する研究がかなりあるにもかかわらず、肺癌は、診断し効果的に治療するのが依然として困難である。

したがって、当技術分野では、癌、特に患者における肺癌の再発を治療及び予防するための改善された方法が必要とされている。本開示は、これらの必要性を満たし、他の関連する利点をさらに提供する。

本開示は、いくつかの態様では、細胞ベースのｇｐ９６含有ワクチンを使用して、「冷たい（ｃｏｌｄ）」腫瘍を「熱い（ｈｏｔ）」腫瘍、例えば、肺腫瘍に変えるためのＣＤ８＋Ｔ細胞の活性化方法に関する。したがって、様々な態様において、本方法は、腫瘍、例えば、肺腫瘍が、抗腫瘍療法、例えばチェックポイント阻害療法に対してより感受性になるように腫瘍Ｔ細胞調節を提供する。したがって、様々な実施形態において、本方法は、チェックポイント阻害剤に応答する患者のパーセンテージの拡大又はチェックポイント阻害に応答しない患者の応答者への変換をもたらす（例えば、アジュバント又はネオアジュバントとして）。

本開示の方法の一態様では、肺癌を治療することは、それを必要とする患者に（ａ）分泌性ワクチンタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む発現ベクターを保有する細胞及び（ｂ）免疫チェックポイント阻害剤を投与することを含む。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、免疫チェックポイント遺伝子を阻害する。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、抗体又はその抗原結合断片を含む。

いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、抗ＰＤ−１抗体又はその抗原結合断片である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、抗ＰＤ−Ｌ１抗体又はその抗原結合断片である。

いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−１又はＰＤ−Ｌ１抗体又はその抗原結合断片は、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、ピジリズマブ、ＢＭＳ−９３６５５９、アテゾリズマブ又はアベルマブである。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、ニボルマブ及びペンブロリズマブから選択される。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−１抗体はニボルマブである。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体はデュルバルマブである。

本開示の方法のいくつかの実施形態では、肺癌は小細胞肺癌である。いくつかの実施形態では、肺癌は非小細胞肺癌である。いくつかの実施形態では、非小細胞肺癌は腺癌である。いくつかの実施形態では、非小細胞肺癌は、扁平上皮癌又は大細胞肺癌である。

本開示の方法のいくつかの実施形態では、本方法は、肺癌の再発を低減する。いくつかの実施形態では、本方法は、対象における腫瘍抗原特異的Ｔ細胞の活性化又は増殖を高める。いくつかの実施形態では、本方法は、対象におけるＩＦＮ−γ分泌ＣＤ８＋Ｔ細胞の活性化又は数を増強する。

実施形態では、本発明の方法は、例として、少なくとも１６週間のＨＳ−１１０の毎週用量と少なくとも１６週間の抗ＰＤ−１抗体の隔週用量、又は少なくとも６週間のＨＳ−１１０の毎週用量と少なくとも６週間の抗ＰＤ−１抗体の隔週用量などの、特定の治療投与計画を含む。実施形態では、本発明の方法は、ＰＤ−Ｌ１^陰性若しくはＰＤ−Ｌ１^低である患者又は腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）が低い状態（ＴＩＬ^低）の患者などの、抗ＰＤ−１抗体を用いた単独療法に十分に応答しない患者集団において有効である。

いくつかの実施形態では、対象は、投与後に免疫応答の強い増加を示す。いくつかの実施形態では、免疫応答の強い増加は、ＣＤ８＋Ｔ細胞の活性化又は増殖においてベースラインを少なくとも２倍上回る増加として定義される。いくつかの実施形態では、ＣＤ８＋Ｔ細胞はＩＦＮ−γを分泌する。いくつかの実施形態では、本方法は、免疫応答において強い増加を示さない対象と比較して、対象における肺癌再発の低減においてより効果的である。いくつかの実施形態では、対象は、投与前に少数の腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）を示す。いくつかの実施形態では、本方法は、免疫チェックポイント阻害剤単独での治療と比較して、対象における癌の再発又は進行を低減するのにより効果的である。

本開示の方法のいくつかの態様では、ベクターは哺乳類発現ベクターである。いくつかの実施形態では、ワクチンタンパク質は、場合によりｇｐ９６ ＫＤＥＬ（配列番号３）配列を欠く分泌性ｇｐ９６−Ｉｇ融合タンパク質である。いくつかの実施形態では、ｇｐ９６−Ｉｇ融合タンパク質中のＩｇタグは、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＡ、又はＩｇＥのＦｃ領域を含む。いくつかの実施形態では、発現ベクターはＤＮＡを含む。いくつかの実施形態では、発現ベクターはＲＮＡを含む。

いくつかの実施形態では、細胞はヒト腫瘍細胞である。いくつかの実施形態では、細胞は、照射されたヒト腫瘍細胞、又は生きている弱毒化ヒト腫瘍細胞である。いくつかの実施形態では、ヒト腫瘍細胞は、樹立されたＮＳＣＬＣ、膀胱癌、黒色腫、卵巣癌、腎細胞癌、前立腺癌、肉腫、乳癌、扁平上皮癌、頭頸部癌、肝細胞癌、膵臓癌、又は結腸癌の細胞株の細胞である。いくつかの実施形態では、ヒト腫瘍細胞株はＮＳＣＬＣ細胞株である。

いくつかの実施形態では、（ａ）分泌性ワクチンタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む発現ベクターを保有する細胞を投与する前、かつ（ｂ）免疫チェックポイント阻害剤を投与する前に、対象は、ある療法を受けた後の疾患の進行を経験している。いくつかの実施形態では、療法は免疫チェックポイント阻害剤療法である。いくつかの実施形態では、療法は化学療法を含む。いくつかの実施形態では、対象は、免疫チェックポイント阻害剤療法に対する応答が不良である。いくつかの実施形態では、対象は、免疫チェックポイント阻害剤療法に失敗している。いくつかの実施形態では、対象の疾患は、免疫チェックポイント阻害剤療法を施された場合でさえ進行している。

実施形態では、患者は、ある治療法を受けた後に疾患の進行を経験している。実施形態では、治療法は免疫チェックポイント阻害剤療法である。実施形態では、治療法は化学療法を含む。実施形態では、患者は、免疫チェックポイント阻害剤療法に対する応答が悪い。実施形態では、患者は免疫チェックポイント阻害剤療法に失敗している。実施形態では、患者の疾患は、免疫チェックポイント阻害剤療法を施された場合でさえ進行している。

図１Ａは、非小細胞肺癌の患者における複数の治療投与計画と組み合わせたビアジェンプマツセル−Ｌ（ＨＳ−１１０）の第１相ｂ／２研究（「ＤＵＲＧＡ」試験）を示す非限定的な概略図である。図１Ｂは、ＨＳ−１１０−１０２ ＤＵＲＧＡ治験患者集団の概要であり、図１Ｃは、ＤＵＲＧＡ治験計画の概要である。 図２は、臨床治験計画を示す非限定的な概略図である。簡単に言えば、進行したかつ以前に治療された肺癌の患者を、疾患が進行するか又は死亡するまで、１８週間、毎週ビアジェンプマツセル−Ｌ（ＨＳ−１１０）及び２週間ごとにニボルマブ３ｍｇ／ｋｇで治療した。ベースラインでと１０週目で生検組織を、腫瘍細胞上のＣＤ８＋ＴＩＬとＰＤ−Ｌ１の発現レベルについて試験した。末梢血を、ＨＳ−１１０治療の１、４、７、１３週目及び終了時に、酵素結合イムノスポット（ＥＬＩＳＰＯＴ）アッセイを使用して免疫学的応答について分析した。 図３Ａは、治療企図（ＩＴＴ）集団、プロトコルに基づく（ＰＰ）集団、及び完了者集団における主要な有効性分析の概要である。図３Ｂは、チェックポイント阻害剤（ＣＰＩ）未治療ＩＴＴ患者についての５つのＲＥＣＩＳＴ応答（ＲＥＣＩＳＴ １.１）（ＣＲ＝完全奏効；ＰＲ＝部分奏効；ＳＤ＝安定した疾患；ＰＤ＝進行性疾患；及びＮＥ＝評価不能）（左の列）、ＣＰＩ ＩＴＴ患者の数（中央の列）、及び奏効率（ＯＲＲ）のパーセンテージを示す表である。 図４は、プロトコルに基づく集団におけるＲＥＣＩＳＴ １.１による最良の標的病変応答を示す棒グラフである。棒グラフは、ベースライン及び治療中のスキャンでの全ての評価可能なＩＴＴ患者（コホートＡ）（ｎ＝３８）を示す。 図５は、プロトコルに基づく（ＰＰ）集団における標的病変応答の持続性を示す折れ線グラフである（コホートＡ）。 図６は、ＩＴＴ患者集団における全生存率データを示す生存プロットである（コホートＡ）。 図７は、完了者集団における治療期間と共に生存が改善する傾向を示す生存プロットである（コホートＡ）。上の曲線は１６回以上の投薬で、下の曲線は１６回未満の投薬である。 図８は、チェックポイント阻害剤（ＣＰＩ）未治療集団（コホートＡ）について高ＴＩＬ（１０％超）の患者及び低ＴＩＬ（１０％以下）の患者のベースラインでの腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）レベルによる全生存率を示す生存プロットである。８００日目の上の曲線は低ＴＩＬであり、下の曲線は高ＴＩＬである。 図９Ａ及び図９Ｂは、ＣＰＩ未治療ＩＴＴ集団における無増悪生存期間（ＰＦＳ）（図９Ａ；コホートＡ）、及びＣＰＩ未治療ＩＴＴ集団におけるベースラインでのＴＩＬレベルによる無増悪生存期間（図９Ｂ；コホートＡ）を示すグラフである。図９Ａでは、平均ＰＦＳ（ｍＰＦＳ）は５８日で、１年のＰＦＳは２３.９％であった。図９Ｂでは、低ＴＩＬの１年のＰＦＳは３１.７％であり、高ＴＩＬの１年のＰＦＳは１０.６％であった。図９Ｂでは、上の曲線は４００日目の低ＴＩＬであり、下の曲線は高ＴＩＬである。 図１０Ａ〜Ｂは、ＣＰＩ未治療であった、プロトコルに基づく集団（コホートＡ）における腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の状態に基づく最良の標的病変応答を示す一対の棒グラフである。図１０Ａは、１０％以下のＣＤ８＋ＴＩＬにおけるベースラインからの変化を示し、図１０Ｂは、１０％超のＣＤ８＋ＴＩＬにおけるベースラインからの変化を示す。 図１１は、プロトコルに基づく集団（コホートＡ）におけるＴＩＬ状態に基づく標的病変応答の持続性を表す２つの折れ線グラフを示す。図１１では、「高」応答は破線で表され、「低」応答は実線で表される。 図１２は、ＰＤ−Ｌ１状態に基づく最良の標的病変応答を示す一対の棒グラフである（コホートＡ）。図１２の右のパネルは、プロトコルに基づく集団における１％超のＰＤ−Ｌ１腫瘍型におけるベースラインからの変化を示す。図１２の左のパネルは、プロトコルに基づく集団における１％未満のＰＤ−Ｌ１腫瘍型におけるベースラインからの変化を示す。 図１３は、プロトコルに基づく集団（コホートＡ）におけるＰＤ−Ｌ１状態に基づく標的病変応答の持続性を示す一対の線グラフである。図１３は、１％超のＰＤ−Ｌ１腫瘍型におけるベースラインからの変化を示し、１％未満のＰＤ−Ｌ１腫瘍型におけるベースラインからの変化を示す。図１３では、「陰性」応答は破線で表され、「陽性」応答は実線で表される。 図１４は、最良の標的病変応答活性の完了者分析（Ｃｏｍｐｌｅｔｅｒ Ａｎａｌｙｓｉｓ）を示す棒グラフである（コホートＡ）。これは、ビアジェンプマツセル−Ｌによる試験治療を完了した各患者を示し、ベースライン〜ＲＥＣＩＳＴ １.１による最高評価の腫瘍病変サイズの変化率をプロットする。点線は、進行性疾患（ＰＤ、最長径の合計［ＳＬＤ］で２０％超の増加）、安定した疾患（ＳＤ、ＳＬＤで２０％未満の増加及び３０％未満の減少）並びに部分奏効（ＰＲ、ＳＬＤで３０％超の減少）についてのＲＥＣＩＳＴ １.１カットオフを表す。ＥＬＩＳＰＯＴの陽性応答は、δ−ＩＮＦ誘導活性におけるベースラインを上回る２倍以上の増加であると決定された。 図１５は、ＥＬＩＳＰＯＴ活性及び生存を示すプロットである（コホートＡ）。高＝試験した患者の中央値を超えるＥＬＩＳＰＯＴ活性。低＝試験した患者の中央値を下回るＥＬＩＳＰＯＴ活性。 図１６は、ＥＬＩＳＰＯＴ応答が長期の全生存期間と相関することを示すプロットである（コホートＡ）。アルファ確率を０.１に設定して、全細胞ＨＳ−１１０ワクチン溶解物で患者のＰＢＭＣを刺激することから生成されるＥＬＩＳＰＯＴスポットの数は、治療中の患者の全生存期間と有意に相関する（ｐ＝０.０６）。 図１７Ａ及び図１７Ｂは、ベースラインでのＰＤ−Ｌ１レベルによる、無増悪生存期間（ＰＦＳ）を経験したＣＰＩ未治療患者（図１７Ａ）、又は全生存期間（ＯＳ）を経験したＣＰＩ未治療患者（図１７Ｂ）のパーセンテージを示すグラフである（コホートＡ）。図１７Ａでは、２００日目で、上の曲線（実線）はＰＤ−Ｌ１であり、下の曲線（破線）はＰＤ−Ｌ１である。図１７Ｂでは、４１４日目で、上の曲線（破線）はＰＤ−Ｌ１であり、下の曲線（実線）はＰＤ−Ｌ１である。 図１８は、ＩＴＴ患者集団の無増悪生存期間（ＰＦＳ）における全生存率データを示す生存プロットである（コホートＢ）。この患者集団では、患者は以前にＣＰＩ療法を受けていたが、疾患は６ヶ月以上後に進行した。「打ち切り」とは、経過観察までに亡くなった患者を意味し、認められたデータ管理ツールである。 図１９は、チェックポイント阻害剤（ＣＰＩ）プログレッサーＩＴＴ患者の５つのＲＥＣＩＳＴ応答（ＲＥＣＩＳＴ １．１）；（ＣＲ＝完全奏効；ＰＲ＝部分奏効；ＳＤ＝安定した疾患；ＰＤ＝進行性疾患；及びＮＥ＝評価不能）（左の列）、ＣＰＩ ＩＴＴ患者の数（中央の列）、並びに奏効率（ＯＲＲ）のパーセンテージを示す表である（コホートＢ）。 図２０は、チェックポイント阻害剤（ＣＰＩ）プログレッサーＩＴＴ患者の最良の標的病変応答活性を示す棒グラフである（コホートＢ）。 図２１は、ＣＰＩプログレッサーＩＴＴ患者集団の標的病変応答の持続性を示す折れ線グラフである（コホートＢ）。 図２２は、チェックポイント阻害剤（ＣＰＩ）プログレッサー集団における腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の状態に基づく最良の標的病変応答を表す２つの棒グラフを示す（コホートＢ）。図２２の左側の棒グラフは、１０％以下のＣＤ８＋ＴＩＬ（低ＴＩＬ）におけるベースラインからの変化を示し、図２２の右側の棒グラフは、１０％超のＣＤ８＋ＴＩＬ（高ＴＩＬ）におけるベースラインからの変化を示す。 図２３は、ＣＰＩプログレッサー集団におけるＴＩＬレベルに基づく標的病変応答の持続性を表す２つの折れ線グラフを示す（コホートＢ）。図２３では、「高」応答は破線で表され、「低」応答は実線で表される。 図２４は、ＣＰＩプログレッサー集団におけるＰＤ−Ｌ１状態に基づく最良の標的病変応答を表す２つの棒グラフを示す（コホートＢ）。図２４の左側の棒グラフは、ＣＰＩプログレッサー集団の１％未満のＰＤ−Ｌ１腫瘍型におけるベースラインからの変化を示す。図２４の右側の棒グラフは、ＣＰＩプログレッサー集団の１％以上のＰＤ−Ｌ１腫瘍型におけるベースラインからの変化を示す。 図２５は、ＣＰＩプログレッサー集団におけるＰＤ−Ｌ１状態に基づく標的病変応答の持続性を示す一対の折れ線グラフである（コホートＢ）。図２５は、１％超のＰＤ−Ｌ１腫瘍型におけるベースラインからの変化を示し、１％未満のＰＤ−Ｌ１腫瘍型におけるベースラインからの変化を示す。図２５では、「陰性」応答は破線で表され、「陽性」応答は実線で表される。

開示の詳細な説明
本開示は、改変された分泌性熱ショックタンパク質（すなわち、ｇｐ９６−Ｉｇ）を発現する細胞株の低用量及び免疫チェックポイント阻害剤（例えば、抗ＰＤ−１抗体又はその抗原結合断片）を含む混合ワクチン療法が、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）を含む肺癌の治療に特に有効であるという発見に基づく。いくつかの実施形態では、本方法は、腫瘍細胞に対する免疫応答を相乗的に活性化し、肺癌の再発の減少及び生存の改善をもたらす。

免疫抑制は、（ＮＳＣＬＣ）患者において、腫瘍微小環境におけるチェックポイント経路の活性化などの様々な方法で起きる可能性がある。抗ＰＤ−１モノクローナル抗体のようなチェックポイント分子シグナル伝達を妨害する薬物は、免疫系でのこのブレーキを解放する可能性がある。ＰＤ−１のリガンドであるＰＤ−Ｌ１の腫瘍発現は、チェックポイント阻害剤に対する患者の応答に重要な役割を果たす。一般に、チェックポイント阻害剤に対する臨床応答は、ＰＤ−Ｌ１の腫瘍発現と腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の存在を必要とする。

ビアジェンプマツセル−Ｌは、潜在的な抗新生物活性を有する熱ショックタンパク質ｇｐ９６融合物の組換え分泌型（ｇｐ９６−Ｉｇ）を発現する、独占所有権のある同種腫瘍細胞ワクチンである。ビアジェンプマツセル−Ｌを投与すると、照射された生腫瘍細胞は、皮膚の真皮層にシャペロン腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）とともにｇｐ９６−Ｉｇを継続的に分泌し、それにより、抗原提示細胞、ナチュラルキラー細胞を活性化し、強力な細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）を刺激して内因性腫瘍細胞上に提示されるＴＡＡに対して応答する。さらに、ビアジェンプマツセル−Ｌは、癌細胞の再発と戦うことができる長命の記憶Ｔ細胞を誘導する。

本発明は、ビアジェンプマツセル−Ｌと抗ＰＤ−１剤の共投与が、チェックポイント阻害剤の有効性を延長又は増加させつつワクチンの抗腫瘍活性を増強し、相乗効果を生み出すという発見に向けられている。この驚くべき効果は、低いＰＤ−Ｌ１状態の患者（例えば、患者の腫瘍は、高レベルのＰＤ−Ｌ１を示さない（ＰＤ−Ｌ１^高というよりむしろ本明細書に記載のＰＤ−Ｌ１^陰性又はＰＤ−Ｌ１^低である）においても観察される。すなわち、ビアジェンプマツセル−Ｌ組成物の添加は驚くべきことに、通常の抗ＰＤ−１抗体で治療されない患者が臨床的利点を示すことを可能にする。

さらに、本明細書でより十分に説明されるように、例えば、少量のＣＤ８＋ＴＩＬを有する「冷たい」腫瘍を有する患者は一般に、抗ＰＤ−１抗体にあまり応答せず、ニボルマブ単独で一般に約１０％の応答率を示す。Ｔｅｎｇら．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ７５（１１）： Ｊｕｎｅ １，２０１５を参照されたい。しかしながら、本明細書で概説する併用療法は驚くべきことに、患者のＴＩＬ状態に関係なく同等に効果的であり、ビアジェンプマツセル−Ｌが、ＴＩＬ^低患者において抗ＰＤ−１治療の有効性を拡大することを示す。

したがって、本発明は、ＮＳＣＬＣの患者を治療するための、ビアジェンプマツセル−Ｌと抗ＰＤ−１抗体の併用療法を提供する。

本発明は、抗ＰＤ−１抗体と組み合わせてビアジェンプマツセル−Ｌを共投与することにより、癌、特に非小細胞肺癌（「ＮＳＣＬＣ」）を治療する方法を提供する。当業者によって理解されるように、この文脈における「共投与」は、患者が治療期間中にビアジェンプマツセル−Ｌの投薬と抗ＰＤ−１抗体の投薬を受けることを意味する。一般に、これらの治療薬は、特に抗ＰＤ−１抗体が一般的にビアジェンプマツセル−Ｌの投薬よりも低い頻度で送達されるので、混合物としてではなく別々の投与経路で患者に送達される。

本発明は、ビアジェンプマツセル−Ｌと抗ＰＤ−１抗体の組み合わせを提供する。ビアジェンプマツセル−Ｌ（本明細書では「ＨＳ−１１０」と呼ばれることもある）は、本明細書に記載の融合タンパク質ｇｐ９６−Ｉｇをコードするベクターを含む細胞組成物である。熱ショックタンパク質（ｈｓｐ）ｇｐ９６は、抗原提示細胞又は樹状細胞上で発現されるＭＨＣクラスＩ分子に向かう途中のペプチドのシャペロンとして機能する。腫瘍細胞から得られ、ワクチンとして使用されるｇｐ９６は、おそらく腫瘍特異的ペプチドの抗原提示細胞（ＡＰＣ）への輸送を介して、特定の腫瘍免疫を誘導できる（Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １９９９，１６３（１０）：５１７８−５１８２）。例えば、ｇｐ９６関連ペプチドは、スカベンジャー受容体（ＣＤ９１）の取り込み時に、樹状細胞（ＤＣ）によってＣＤ８細胞に交差提示される。

したがって、本発明は、ｇｐ９６−Ｉｇ融合タンパク質をコードするベクターを含む細胞を提供する。

本発明のビアジェンプマツセル−Ｌ組成物は、ｇｐ９６−Ｉｇ融合タンパク質をコードするベクターを含む。したがって、本明細書で提供するベクターは、ｇｐ９６−Ｉｇ融合タンパク質をコードするヌクレオチド配列を含有する。ヒトｇｐ９６のコーディング領域は２,４１２塩基長（配列番号１）であり、アミノ末端に、疎水性残基中の潜在的な膜貫通領域である２１個のアミノ酸のシグナルペプチドを含み、かつカルボキシル末端にＥＲ保有ペプチド配列を含む、８０３個のアミノ酸のタンパク質（配列番号２）をコードする（ＧＥＮＢＡＮＫ登録番号Ｘ１５１８７；Ｍａｋｉら、Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ １９９０、８７：５６５８−５５６２参照）。

ＫＤＥＬを欠失しているヒトｇｐ９６遺伝子をコードする例示的な核酸配列、及びヌクレオチド配列は、配列番号４に示されている。さらに、本明細書に記載されるように、ｇｐ９６の最後の４個のアミノ酸「ＫＤＥＬ」は、本明細書で論じられるように欠失される。ＫＤＥＬは、小胞体常在シャペロンペプチドとして通常機能する保持配列であり、本発明は、本明細書で論じられる分泌性ｇｐ９６融合タンパク質に依存する。

いくつかの実施形態では、ｇｐ９６−Ｉｇ融合タンパク質のｇｐ９６部分は、野生型ｇｐ９６配列（例えば、配列番号２に記載のヒト配列）の全部又は一部を含有してよい。例えば、分泌性ｇｐ９６−Ｉｇ融合タンパク質は、Ｃ末端ＫＤＥＬを欠くように、配列番号２の最初の７９９個のアミノ酸を含み得る（配列番号３;小胞体保持配列のないアミノ酸配列は、配列番号４として示される）。

さらに、融合タンパク質のｇｐ９６部分は、野生型ポリペプチドと少なくとも９０％（例えば、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％）の配列同一性を有するように、野生型ｇｐ９６配列の最初の７９９個のアミノ酸と比較して１以上の置換、欠失、又は付加を含有するアミノ酸配列を有してよい。

タンパク質配列に関する「アミノ酸配列同一性のパーセント（％）」は、配列を整列させ、必要に応じて、最大のパーセント配列同一性を達成するためにギャップを導入した後に、かつ配列同一性の一部としての保存的置換を考慮せずに、特定の（親）配列中のアミノ酸残基と同一である、候補配列中のアミノ酸残基のパーセンテージとして定義される。パーセントアミノ酸配列同一性を決定する目的でのアライメントは、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ−２、ＡＬＩＧＮ又はＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアなどの公的に入手可能なコンピューターソフトウェアを使用して、当業者の範囲内である様々な方法で達成できる。当業者は、比較される配列の全長にわたって最大のアライメントを達成するのに必要とされるアルゴリズムを含む、アライメントを測定するための適切なパラメータを決定できる。１つの特定のプログラムは、参照により本明細書に組み込まれる米国特許公開第２０１６０２４４５２５号の[０２７９]〜[０２８０]の段落で説明されているＡＬＩＧＮ−２プログラムである。核酸配列の別の近似アライメントは、Ｓｍｉｔｈ及びＷａｔｅｒｍａｎ，Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｍａｔｈｅｍａｔｉｃｓ，２：４８２−４８９（１９８１）のローカルホモロジーアルゴリズムによって提供される。このアルゴリズムは、Ｄａｙｈｏｆｆ，Ａｔｌａｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ａｎｄ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，Ｍ．Ｏ．Ｄａｙｈｏｆｆ（編），５補遺 ３：３５３−３５８，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｄ．Ｃ．，ＵＳＡによって開発され、Ｇｒｉｂｓｋｏｖ，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１４（６）：６７４５−６７６３（１９８６）によって正規化されるスコアリングマトリックスを使用して、アミノ酸配列に適用できる。

配列のパーセント同一性を決定するためのこのアルゴリズムの実装の例は、「ＢｅｓｔＦｉｔ」ユーティリティアプリケーションのＧｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ（Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）によって提供される。この方法のデフォルトパラメータは、ウィスコンシンシーケンス分析パッケージプログラムマニュアル、バージョン８（１９９５）（Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ、Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩから入手可能）に記載されている。本発明の文脈においてパーセント同一性を確立する別の方法は、エジンバラ大学が著作権を有し、Ｊｏｈｎ Ｆ．Ｃｏｌｌｉｎｓ及びＳｈａｎｅ Ｓ．Ｓｔｕｒｒｏｋが開発し、ＩｎｔｅｌｌｉＧｅｎｅｔｉｃｓ社（Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ，Ｃａ）が配布するプログラムのＭＰＳＲＣＨパッケージを使用することである。この一連のパッケージから、デフォルトパラメータがスコア表に使用されるＳｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎアルゴリズムを採用できる（例えば、１２のギャップオープンペナルティ、１のギャップ拡張ペナルティ、及び６のギャップ）。生成されたデータから、「一致」の値は「配列同一性」を反映する。配列間の同一性又は類似性の割合を計算するための他の適切なプログラムは、当技術分野で一般に知られており、例えば、別のアライメントプログラムは、デフォルトパラメータで使用されるＢＬＡＳＴである。例えば、次のデフォルトパラメータを使用して、ＢＬＡＳＴＮとＢＬＡＳＴＰを使用できる：遺伝子コード＝標準；フィルター＝なし；鎖＝両方；カットオフ＝６０；期待＝１０；マトリックス＝ＢＬＯＳＵＭ６２；説明＝５０個のシーケンス；並べ替え＝高いスコア；データベース＝非冗長、ＧｅｎＢａｎｋ＋ＥＭＢＬ＋ＤＤＢＪ＋ＰＤＢ＋ＧｅｎＢａｎｋ ＣＤＳ翻訳＋Ｓｗｉｓｓ ｐｒｏｔｅｉｎ＋Ｓｐｕｐｄａｔｅ＋ＰＩＲ。これらのプログラムの詳細は、ｈｔｔｐ：／／ｉｎ ｆｒｏｎｔ ｏｆ ｂｌａｓｔ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／Ｂｌａｓｔ．ｃｇｉを置くことによって配置されるインターネットアドレスで見つけることができる。

本発明のアミノ酸配列（「発明の配列」）と親アミノ酸配列の間の同一性の程度は、「発明の配列」の長さ又は親配列の長さのいずれか短い方で割った、２つの配列のアライメント中の正確な一致の数として計算される。結果はパーセント同一性で表される。

そのため、いくつかの実施形態では、以下に記載のｇｐ９６−Ｉｇ融合ポリペプチドをコードする核酸のｇｐ９６成分は、１以上のアミノ酸位置で野生型ｇｐ９６ポリペプチドとは異なるアミノ酸配列をコードし得る。

本発明のビアジェンプマツセル−Ｌ組成物は、ｇｐ９６を融合タンパク質ｇｐ９６−Ｉｇとして利用する。本明細書に記載されるように、ｇｐ９６−Ｉｇは、任意のリンカーを使用して、通常は小胞体に存在するシャペロンペプチドであるｇｐ９６のＫＤＥＬ保持配列をヒトｌｇＧ１のＦｃ部分と置き換えることによって構築される。本明細書で使用される場合、ヒトＩｇＧ１のＦｃ部分は、ＣＨ２−ＣＨ３ドメインを含み、必要に応じて、Ｎ末端にヒンジ領域（ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３）を含み得る。ヒンジのないＦｃドメインの配列は、配列番号５に示される。場合によって、ＩｇＧ１ヒンジは、ｇｐ９６タンパク質とＦｃドメインを連結するリンカーとして機能する。

いくつかの実施形態では、ｇｐ９６−Ｉｇ融合タンパク質を含むベクターはリンカーを含む。様々な実施形態では、リンカーは、天然に存在するマルチドメインタンパク質に由来してよく、又は例えば、その全内容が参照により本明細書に組み込まれるＣｈｉｃｈｉｌｉら，（２０１３），Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉ．２２（２）：１５３−１６７，Ｃｈｅｎら，（２０１３），Ａｄｖ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ Ｒｅｖ．６５（１０）：１３５７−１３６９に記載されるような経験的リンカーである。いくつかの実施形態では、リンカーは、その全内容が参照により本明細書に組み込まれるＣｈｅｎら、（２０１３）、Ａｄｖ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ Ｒｅｖ．６５（１０）：１３５７〜１３６９及びＣｒａｓｔｏら，（２０００），Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．１３（５）：３０９−３１２に記載されるものなどのリンカー設計データベース及びコンピュータープログラムを使用して設計されてよい。

いくつかの実施形態では、リンカーは、ＰＥＧなどの合成リンカーである。いくつかの実施形態では、リンカーはポリペプチドである。いくつかの実施形態では、リンカーは約１００個未満のアミノ酸長である。例えば、リンカーは、約１００、約９５、約９０、約８５、約８０、約７５、約７０、約６５、約６０、約５５、約５０、約４５、約４０、約３５、約３０、約２５、約２０、約１９、約１８、約１７、約１６、約１５、約１４、約１３、約１２、約１１、約１０、約９、約８、約７、約６、約５、約４、約３、又は約２個未満のアミノ酸長であってよい。いくつかの実施形態では、リンカーは柔軟である。別の実施形態では、リンカーは剛性である。様々な実施形態では、リンカーは、グリシン及びセリン残基（例えば、約３０％、又は約４０％、又は約５０％、又は約６０％、又は約７０％、又は約８０％、又は約９０％、又は約９５％、又は約９７％のグリシン及びセリン）で実質的に構成される。

いくつかの実施形態では、リンカーは、抗体の（例えば、サブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４、並びにＩｇＡ１及びＩｇＡ２）を含むＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、及びＩｇＥの）ヒンジ領域である。ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、及びＩｇＥクラスの抗体で見られるヒンジ領域は、柔軟なスペーサーとして機能し、Ｆａｂ部分が空間内を自由に移動できるようにする。定常領域とは対照的に、ヒンジドメインは構造的に多様であり、免疫グロブリンクラスとサブクラスの間で配列と長さの両方が異なる。例えば、ヒンジ領域の長さと柔軟性は、ＩｇＧサブクラス間で異なる。ＩｇＧ１のヒンジ領域は、アミノ酸２１６〜２３１を包含し、それは自由に柔軟であるため、Ｆａｂ断片は対称軸を中心に回転でき、かつ２つの重鎖間ジスルフィド架橋の最初を中心とする球内を移動できる。ＩｇＧ２はＩｇＧ１よりも短いヒンジを有し、１２アミノ酸残基と４つのジスルフィド架橋を有する。ＩｇＧ２のヒンジ領域は、グリシン残基を欠き、比較的短く、かつ余分な重鎖間ジスルフィド架橋によって安定化された剛体ポリプロリン二重らせんを含む。これらの特性は、ＩｇＧ２分子の柔軟性を制限する。ＩｇＧ３は、そのユニークな拡張ヒンジ領域（ＩｇＧ１ヒンジの約４倍の長さ）により他のサブクラスと異なり、それは６２個のアミノ酸（２１個のプロリン及び１１個のシステインを含む）を含み、柔軟性のないポリプロリン二重らせんを形成している。ＩｇＧ３では、Ｆａｂ断片はＦｃ断片から比較的離れており、分子により大きな柔軟性を与える。ＩｇＧ３の細長いヒンジは、他のサブクラスと比較してそのより高い分子量の原因でもある。ＩｇＧ４のヒンジ領域はＩｇＧ１のヒンジ領域よりも短く、その柔軟性はＩｇＧ１とＩｇＧ２の中間である。報告によれば、ヒンジ領域の柔軟性は、ＩｇＧ３＞ＩｇＧ１＞ＩｇＧ４＞ＩｇＧ２の順に減少する。

追加の例示的なリンカーは、配列ＬＥ、ＧＧＧＧＳ、（ＧＧＧＧＳ）ｎ（ｎ＝１〜４）、（Ｇｌｙ）８、（Ｇｌｙ）６、（ＥＡＡＡＫ）ｎ（ｎ＝１〜３）、Ａ（ＥＡＡＡＫ）ｎＡ（ｎ＝２〜５）、ＡＥＡＡＡＫＥＡＡＡＫＡ、Ａ（ＥＡＡＡＫ）４ＡＬＥＡ（ＥＡＡＡＫ）４Ａ、ＰＡＰＡＰ、ＫＥＳＧＳVＳＳＥＱＬＡＱＦＲＳＬＤ、ＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳＴ、ＧＳＡＧＳＡＡＧＳＧＥＦ、及びＸが任意のアミノ酸、例えば、Ａｌａ、Ｌｙｓ、又はＧｌｕである（ＸＰ）ｎを含むが、これらに限定されない。

いくつかの実施形態では、リンカーは機能的であってよい。例えば、限定されないが、リンカーは、折り畳み及び／又は安定性を改善し、発現を改善し、薬物動態を改善し、かつ／又は本組成物の生物活性を改善するように機能してよい。別の例では、リンカーは、組成物が特定の細胞型又は場所を標的にするように機能してよい。

いくつかの実施形態では、ｇｐ９６ペプチドは、マウスＩｇＧ１のヒンジ、ＣＨ２及びＣＨ３ドメインに融合されてよい（Ｂｏｗｅｎら，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １９９６，１５６：４４２−４４９）。ＩｇＧ１分子のこの領域は、通常Ｉｇ分子内の他のシステインとのジスルフィド結合に関与している３つのシステイン残基を含有する。ペプチドがタグとして機能するために必要とされるシステインはないため、これらのシステイン残基の１以上を、例えば、セリンなどの別のアミノ酸残基と置換できる。

いくつかの実施形態では、本開示は、改変された分泌性の熱ショックタンパク質（すなわち、ｇｐ９６−Ｉｇ）をコードするベクターを提供する。ｇｐ９６−Ｉｇ融合配列をコードする核酸は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる米国特許第８,６８５,３８４号に記載されている方法を用いて生成できる。

免疫グロブリン軽鎖又は重鎖の定常領域をコードするＤＮＡは、既知であるか、又はｃＤＮＡライブラリーから容易に入手可能である。例えば、Ａｄａｍｓら，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ １９８０，１９：２７１１−２７１９；Ｇｏｕｇｈら，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ １９８０ １９：２７０２−２７１０；Ｄｏｌｂｙら，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ １９８０，７７：６０２７−６０３１；Ｒｉｃｅら，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ １９８２，７９：７８６２−７８６５；Ｆａｌｋｎｅｒら，Ｎａｔｕｒｅ １９８２，２９８：２８６−２８８；及びＭｏｒｒｉｓｏｎら，Ａｎｎ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ １９８４，２：２３９−２５６を参照されたい。多くの免疫学的試薬及び標識システムが免疫グロブリンの検出に利用できるため、ｇｐ９６−Ｉｇ融合タンパク質は、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、免疫沈降、及び蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）などの当技術分野で公知の様々な免疫技術によって容易に検出及び定量化できる。同様に、ペプチドタグが容易に利用可能な抗体のエピトープである場合、そのような試薬を、上述の技術で用いて、ｇｐ９６−Ｉｇ融合物を検出、定量化、及び単離できる。

当技術分野で公知の様々なリーダー配列も、細菌細胞及び哺乳類細胞からのｇｐ９６−Ｉｇ融合タンパク質の効率的な分泌に使用できる（ｖｏｎ Ｈｅｉｊｎｅ，Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ １９８５，１８４：９９−１０５参照）。リーダーペプチドは、目的の宿主細胞に基づいて選択でき、細菌、酵母、ウイルス、動物、及び哺乳類の配列を含んでよい。例えば、ヘルペスウイルスの糖タンパク質Ｄリーダーペプチドは、様々な哺乳類細胞での使用に適している。哺乳類細胞で使用するための別のリーダーペプチドは、マウス免疫グロブリンκ鎖のＶ−Ｊ２−Ｃ領域から得ることができる（Ｂｅｒｎａｒｄら，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ １９８１，７８：５８１２−５８１６）。ペプチドタグ又はリーダーペプチドをコードするＤＮＡ配列は既知であるか、又はライブラリー若しくは商業的供給業者から容易に入手可能であり、本明細書に記載の融合タンパク質に適している。

さらに、いくつかの実施形態では、本開示のｇｐ９６を１以上のワクチンタンパク質で置き換えてもよい。例えば、様々な熱ショックタンパク質がワクチンタンパク質中にある。様々な実施形態では、熱ショックタンパク質は、断片、バリアント、変異体、誘導体又はそれらの組み合わせを含む、低分子量ｈｓｐ、ｈｓｐ４０、ｈｓｐ６０、ｈｓｐ７０、ｈｓｐ９０、及びｈｓｐ１１０ファミリーメンバーの１以上である（Ｈｉｃｋｅｙら，１９８９，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．９：２６１５−２６２６；Ｊｉｎｄａｌ，１９８９，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．９：２２７９−２２８３）。

いくつかの実施形態では、本開示は、原核細胞及び真核細胞で発現され得るワクチンタンパク質融合タンパク質（例えば、ｇｐ９６−Ｉｇ融合タンパク質）をコードする核酸構築物を提供する。例えば、本開示は、ワクチンタンパク質融合物（例えば、ｇｐ９６−Ｉｇ融合物）をコードするヌクレオチド配列を含む発現ベクター（例えば、ＤＮＡ又はＲＮＡベースのベクター）を提供する。さらに、本発明は、本明細書に記載のベクターを作製するための方法、及びコードされるポリペプチドの発現に適切な宿主細胞にベクターを導入するための方法を提供する。一般に、本明細書に提供される方法は、ワクチンタンパク質融合タンパク質（例えば、ｇｐ９６−Ｉｇ融合タンパク質）をコードする核酸配列を構築すること、及び融合タンパク質をコードする配列を発現ベクターにクローニングすることを含む。発現ベクターは、宿主細胞に導入することができ、そのいずれかを、例えば、癌を治療するために対象に投与できる。例えば、ｇｐ９６−Ｉｇベースのワクチンを生成して、腫瘍抗原に対する抗原特異的免疫応答を刺激できる。

いくつかの実施形態では、ワクチンタンパク質融合物（例えば、ｇｐ９６−Ｉｇ融合物）をコードするｃＤＮＡ又はＤＮＡ配列は、従来のＤＮＡクローニング及び突然変異誘発法、ＤＮＡ増幅法、及び／又は合成方法を用いて取得できる。一般に、ワクチンタンパク質融合タンパク質（例えば、ｇｐ９６−Ｉｇ融合タンパク質）をコードする配列は、発現前に遺伝子改変及び複製の目的でクローニングベクターに挿入されてよい。各コード配列は、インビトロ及びインビボで適切な宿主細胞においてコードタンパク質を発現させる目的で、プロモーターなどの調節エレメントに作動可能に連結されてよい。

原核生物ベクターと真核生物ベクターの両方を、本明細書に提供される方法においてワクチンタンパク質（例えば、ｇｐ９６−Ｉｇ）の発現のために使用できる。原核生物ベクターは、大腸菌配列に基づく構築物を含む（例えば、Ｍａｋｒｉｄｅｓ，Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｒｅｖ １９９６、６０：５１２−５３８参照）。大腸菌での発現に使用できる調節領域の非限定的な例は、ｌａｃ、ｔｒｐ、ｌｐｐ、ｐｈｏＡ、ｒｅｃＡ、ｔａｃ、Ｔ３、Ｔ７及びλＰＬを含む。原核生物発現ベクターの非限定的な例は、λｇｔ１１などのλｇｔベクターシリーズ（Ｈｕｙｎｈら，「ＤＮＡ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，Ｖｏｌ.１： Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ」，１９８４，（Ｄ．Ｇｌｏｖｅｒ編），ｐｐ．４９−７８，ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ）、及びｐＥＴベクターシリーズ（Ｓｔｕｄｉｅｒら，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ １９９０，１８５：６０−８９）を含み得る。しかしながら、原核生物の宿主−ベクターシステムは、哺乳類細胞の翻訳後プロセシングのほとんどを行うことができない。そのため、真核生物の宿主−ベクターシステムが特に有用であり得る。

様々な調節領域を、哺乳類宿主細胞におけるワクチンタンパク質（例えば、ｇｐ９６−Ｉｇ）及びＴ細胞共刺激融合物の発現に使用できる。例えば、ＳＶ４０の初期及び後期プロモーター、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）の極初期プロモーター、及びラウス肉腫ウイルスの末端反復配列（ＲＳＶ−ＬＴＲ）プロモーターを使用できる。哺乳類細胞で有用であり得る誘導性プロモーターは、限定されないが、メタロチオネインＩＩ遺伝子、マウス乳腺腫瘍ウイルスのグルココルチコイド応答性末端反復配列（ＭＭＴＶ−ＬＴＲ）、β−インターフェロン遺伝子、及びｈｓｐ７０遺伝子と関連するプロモーターを含む（Ｗｉｌｌｉａｍｓら，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ １９８９，４９：２７３５−４２；及びＴａｙｌｏｒら，Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ １９９０，１０：１６５−７５参照）。熱ショックプロモーター又はストレスプロモーターはまた、組換え宿主細胞において融合タンパク質の発現を促進するのに有利であり得る。

一態様では、本開示は、合図に応答して一時的に高レベルの発現をもたらすことができる誘導性プロモーターの使用を企図する。例示的な誘導性発現制御領域は、小分子化合物などの合図で刺激される誘導性プロモーターを含むものを含む。特定の例は、例えば、その各々が参照によりその全体が本明細書に組み込まれる米国特許第５，９８９，９１０号、同第５，９３５，９３４号、同第６，０１５，７０９号、及び同第６，００４，９４１号で見つけることができる。

組織特異性を示しトランスジェニック動物で利用されている動物の調節領域：膵腺房細胞で活性のあるエラスターゼＩ遺伝子制御領域（Ｓｗｉｆｔら，Ｃｅｌｌ １９８４，３８：６３９−６４６；Ｏｒｎｉｔｚら，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｓｙｍｐ Ｑｕａｎｔ Ｂｉｏｌ １９８６，５０：３９９−４０９；及びＭａｃＤｏｎａｌｄ，Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ １９８７，７：４２５−５１５）；膵臓ベータ細胞で活性のあるインスリン遺伝子制御領域（Ｈａｎａｈａｎ、Ｎａｔｕｒｅ １９８５、３１５：１１５−１２２）、リンパ球細胞で活性のある免疫グロブリン遺伝子制御領域（Ｇｒｏｓｓｃｈｅｄｌら，Ｃｅｌｌ １９８４，３８：６４７−６５８；Ａｄａｍｅｓら，Ｎａｔｕｒｅ １９８５，３１８：５３３−５３８；及びＡｌｅｘａｎｄｅｒら，Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ １９８７，７：１４３６−１４４４）、精巣、乳房、リンパ系及びマスト細胞で活性のあるマウス乳癌ウイルス制御領域（Ｌｅｄｅｒら，Ｃｅｌｌ １９８６、４５：４８５−４９５）、肝臓で活性のあるアルブミン遺伝子制御領域（Ｐｉｎｋｅｒｔら，Ｇｅｎｅｓ Ｄｅｖｅｌ、１９８７、１：２６８−２７６）、肝臓で活性のあるアルファフェトプロテイン遺伝子制御領域（Ｋｒｕｍｌａｕｆら，Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ １９８５，５：１６３９−１６４８;及びＨａｍｍｅｒら，Ｓｃｉｅｎｃｅ １９８７、２３５：５３−５８）；肝臓で活性のあるアルファ１アンチトリプシン遺伝子制御領域（Ｋｅｌｓｅｙら，Ｇｅｎｅｓ Ｄｅｖｅｌ １９８７、１：１６１−１７１）、骨髄細胞で活性のあるベータグロビン遺伝子制御領域（Ｍｏｇｒａｍら，Ｎａｔｕｒｅ １９８５，３１５：３３８−３４０;及びＫｏｌｌｉａｓら，Ｃｅｌｌ １９８６，４６：８９−９４）；脳のオリゴデンドロサイト細胞で活性のあるミエリン塩基性タンパク質遺伝子制御領域（Ｒｅａｄｈｅａｄら，Ｃｅｌｌ １９８７，４８：７０３−７１２）；骨格筋で活性のあるミオシン軽鎖２遺伝子制御領域（Ｓａｎｉ，Ｎａｔｕｒｅ １９８５、３１４：２８３−２８６）、並びに視床下部で活性のある性腺刺激放出ホルモン遺伝子制御領域（Ｍａｓｏｎら，Ｓｃｉｅｎｃｅ １９８６，２３４：１３７２−１３７８）を、特定の組織の種類の腫瘍細胞で使用してもよい。

発現ベクターはまた、ＳＶ４０ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、サイトメガロウイルス、免疫グロブリン遺伝子、メタロチオネイン、及びβ−アクチンに見られるものなどの転写エンハンサーエレメントを含んでよい（Ｂｉｔｔｎｅｒら，Ｍｅｔｈ Ｅｎｚｙｍｏｌ １９８７，１５３：５１６−５４４;及びＧｏｒｍａｎ、Ｃｕｒｒ Ｏｐ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ １９９０，１：３６−４７）。加えて、発現ベクターは、２種以上の宿主細胞におけるベクターの維持及び複製、又はベクターの宿主染色体への組み込みを可能にする配列を含んでよい。そのような配列は、限定されないが、複製起点、自律複製配列（ＡＲＳ）、セントロメアＤＮＡ、及びテロメアＤＮＡを含む。

加えて、発現ベクターは、本明細書に記載の融合タンパク質をコードするＤＮＡを含む宿主細胞を最初に単離、同定、又は追跡するための１以上の選択マーカー又はスクリーニングマーカーの遺伝子を含んでよい。ｇｐ９６−ＩｇとＴ細胞の共刺激融合タンパク質の長期にわたる、高収率の生産のために、哺乳類細胞での安定な発現が有用である。いくつかの選択システムが哺乳類細胞に使用できる。例えば、単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ（Ｗｉｇｌｅｒら，Ｃｅｌｌ １９７７，１１：２２３）、ヒポキサンチン−グアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（Ｓｚｙｂａｌｓｋｉ及びＳｚｙｂａｌｓｋｉ、Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ １９６２，４８：２０２６）、及びアデニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（Ｌｏｗｙら，Ｃｅｌｌ １９８０、２２：８１７）の遺伝子を、それぞれｔｋ細胞、ｈｇｐｒｔ細胞、又はａｐｒｔ細胞で使用できる。加えて、代謝拮抗剤耐性を、メトトレキサートへの耐性を付与するジヒドロ葉酸還元酵素（ｄｈｆｒ）（Ｗｉｇｌｅｒら、Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ １９８０，７７：３５６７；Ｏ’Ｈａｒｅら、Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ １９８１，７８：１５２７）；ミコフェノール酸に対する耐性を付与するｇｐｔ（Ｍｕｌｌｉｇａｎ及びＢｅｒｇ、Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ １９８１，７８：２０７２）；アミノグリコシドＧ−４１８に対する耐性を付与するネオマイシンホスホトランスフェラーゼ（ｎｅｏ）（Ｃｏｌｂｅｒｒｅ−Ｇａｒａｐｉｎら，Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ １９８１、１５０：１）；及びハイグロマイシンに対する耐性を付与するハイグロマイシンホスホトランスフェラーゼ（ｈｙｇ）（Ｓａｎｔｅｒｒｅら，Ｇｅｎｅ １９８４、３０：１４７）の選択の基礎として使用できる。ヒスチジノール及びゼオシン（商標）などの他の選択マーカーも使用できる。

多くのウイルスベースの発現系も哺乳類細胞と共に使用して、ｇｐ９６−Ｉｇを生成できる。ＤＮＡウイルスバックボーンを使用するベクターは、サルウイルス４０（ＳＶ４０）（Ｈａｍｅｒら，Ｃｅｌｌ １９７９，１７：７２５）、アデノウイルス（Ｖａｎ Ｄｏｒｅｎら，Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ １９８４、４：１６５３）、アデノ随伴ウイルス（ＭｃＬａｕｇｈｌｉｎら，Ｊ Ｖｉｒｏｌ １９８８、６２：１９６３）、及びウシ乳頭腫ウイルス（Ｚｉｎｎら，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ １９８２、７９：４８９７）に由来している。アデノウイルスが発現ベクターとして使用される場合には、ドナーＤＮＡ配列は、アデノウイルス転写／翻訳制御複合体、例えば、後期プロモーター及び三要素リーダー配列にライゲーションされてよい。この融合遺伝子は次いで、インビトロ又はインビボ組換えによりアデノウイルスゲノムに挿入されてよい。ウイルスゲノムの非必須領域（例えば、領域Ｅ１又はＥ３）中の挿入は、感染した宿主中で生存でき異種産物を発現できる組換えウイルスをもたらすことができる（例えば、Ｌｏｇａｎ及びＳｈｅｎｋ、Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ １９８４、８１：３６５５−３６５９参照）。

ウシパピローマウイルス（ＢＰＶ）は、ヒトを含む多くの高等脊椎動物に感染でき、そのＤＮＡはエピソームとして複製する。多くのシャトルベクターが組換え遺伝子発現のために開発されており、それらは哺乳類細胞中で安定なマルチコピー（２０〜３００コピー／細胞）染色体外エレメントとして存在する。典型的には、これらのベクターは、ＢＰＶ ＤＮＡのセグメント（ゲノム全体又は６９％の形質転換断片）、広い宿主範囲を有するプロモーター、ポリアデニル化シグナル、スプライスシグナル、選択マーカー、及びベクターが大腸菌中で増殖されるようにする「無毒の」プラスミド配列を含む。細菌での構築及び増幅後に、発現遺伝子構築物は、例えば、リン酸カルシウム共沈により培養哺乳類細胞にトランスフェクトされる。形質転換された表現型を示さない宿主細胞については、形質転換体の選択は、ヒスチジノール及びＧ４１８耐性などの主要な選択マーカーの使用によって達成される。

あるいは、ワクシニア７．５Ｋプロモーターを使用できる（例えば、Ｍａｃｋｅｔｔら，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ １９８２、７９：７４１５−７４１９；Ｍａｃｋｅｔｔら，Ｊ Ｖｉｒｏｌ １９８４、４９：８５７−８６４、及びＰａｎｉｃａｌｉら，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ １９８２、７９：４９２７−４９３１参照）。ヒト宿主細胞が使用される場合、エプスタインバーウイルス（ＥＢＶ）起源（ＯｒｉＰ）及びＥＢＶ核抗原１（ＥＢＮＡ−１;トランス作用性複製因子）に基づくベクターを使用できる。そのようなベクター、例えば、ＥＢＯ−ｐＣＤ（Ｓｐｉｃｋｏｆｓｋｙら，ＤＮＡ Ｐｒｏｔ Ｅｎｇ Ｔｅｃｈ １９９０，２：１４−１８）；ｐＤＲ２及びλＤＲ２（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから入手可能）は、広範囲のヒト宿主細胞で使用できる。

ｇｐ９６−Ｉｇ融合タンパク質はまた、レトロウイルスベースの発現系を用いて作製できる。モロニーマウス白血病ウイルスなどのレトロウイルスは、ウイルス遺伝子配列のほとんどを除去し外因性コード配列で置き換えることができる一方で欠けているウイルス機能をトランスで供給できるので、使用できる。トランスフェクションとは対照的に、レトロウイルスは効率的に感染しかつ遺伝子を、例えば初代造血細胞を含む幅広い種類の細胞に移行できる。さらに、レトロウイルスベクターによる感染の宿主域は、ベクターのパッケージングに使用されるエンベロープの選択によって操作できる。

例えば、レトロウイルスベクターは、５'末端反復配列（ＬＴＲ）、３'ＬＴＲ、パッケージングシグナル、細菌の複製起点、及び選択マーカーを含んでよい。ｇｐ９６−Ｉｇ融合タンパク質コード配列は、例えば、５'ＬＴＲプロモーターからの転写がクローニングされたＤＮＡを転写するように、５'ＬＴＲと３'ＬＴＲの間の位置に挿入されてよい。５'ＬＴＲは、プロモーター（例えば、ＬＴＲプロモーター）、Ｒ領域、Ｕ５領域、及びプライマー結合部位をこの順で含む。これらのＬＴＲエレメントのヌクレオチド配列は、当技術分野でよく知られている。感染細胞の選択を容易にするために、異種プロモーター及び複数の薬物選択マーカーも発現ベクターに含めることができる。ＭｃＬａｕｃｈｌｉｎら，Ｐｒｏｇ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｒｅｓ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ １９９０，３８：９１−１３５；Ｍｏｒｇｅｎｓｔｅｒｎら，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｒｅｓ １９９０，１８：３５８７−３５９６；Ｃｈｏｕｌｉｋａら，Ｊ Ｖｉｒｏｌ １９９６，７０：１７９２−１７９８；Ｂｏｅｓｅｎら，Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ １９９４，６：２９１−３０２；Ｓａｌｍｏｎｓ及びＧｕｎｚｂｅｒｇ，Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ １９９３，４：１２９−１４１；並びにＧｒｏｓｓｍａｎ及びＷｉｌｓｏｎ，Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｇｅｎｅｔ Ｄｅｖｅｌ １９９３，３：１１０−１１４を参照されたい。

本明細書に記載のクローニングベクター及び発現ベクターのいずれも、当技術分野で公知の技術を用いて、既知のＤＮＡ配列から合成し、構築してよい。調節領域及びエンハンサーエレメントは、天然と合成の両方の、様々な起源のものであってよい。いくつかのベクター及び宿主細胞は商業的に入手してよい。有用なベクターの非限定的な例は、参照により本明細書に組み込まれる１９８８年版の分子生物学の最新プロトコル（ＣｕｒｒｅｎＴ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ）の付録５、Ａｕｓｕｂｅｌら，Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂｌｉｓｈ．Ａｓｓｏｃ．＆ Ｗｉｌｅｙ Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ、；並びにＣｌｏｎｔｅｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ社、及びＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社などの商用供給業者のカタログに記載されている。

いくつかの実施形態では、本開示は、ｇｐ９６−Ｉｇ融合タンパク質をコードするベクターでトランスフェクトされた細胞を利用する。理論に縛られることなく、ｇｐ９６−Ｉｇ分泌細胞の投与は、自然免疫系の活性化と組み合わせて、強力な抗原特異的ＣＤ８細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）増殖を誘発すると考えられている。腫瘍細胞が分泌するｇｐ９６は、ＤＣ及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞のｇｐ９６分泌部位への動員を引き起こし、ＤＣの活性化を媒介する。さらに、ｇｐ９６とそのシャペロンペプチドのエンドサイトーシスによる取り込みは、主要ＭＨＣクラスＩを介するペプチド交差提示、及びＣＤ４細胞に依存しない強力な同族ＣＤ８活性化を誘発する。

したがって、様々な実施形態では、本発明はさらに、本明細書に記載の改変分泌性熱ショックタンパク質（例えば、ｇｐ９６−Ｉｇ）をコードするベクターを保有する宿主細胞株を提供する。いくつかの実施形態では、宿主細胞株は、肺癌の治療のために対象に投与される。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の発現ベクターは、分泌性ワクチンタンパク質（例えば、ｇｐ９６−Ｉｇ）を生成するために宿主細胞に導入できる。生細胞に核酸を導入するために利用できる様々な技術がある。インビトロでの哺乳類細胞への核酸の導入に適する技術は、リポソーム、エレクトロポレーション、マイクロインジェクション、細胞融合、ポリマーベースのシステム、ＤＥＡＥ−デキストラン、ウイルス形質導入、リン酸カルシウム沈殿法などの使用を含む。インビボ遺伝子導入については、リポソーム；キトサン及びゼラチンなどの天然高分子ベースの送達ビヒクルを含む、多くの技術及び試薬を使用してもよい。ウイルスベクターは、インビボ形質導入にも適している。状況によっては、細胞表面膜タンパク質に特異的な抗体又はリガンドなどの、標的薬剤を提供することが望ましい。リポソームが使用される場合、エンドサイトーシスに関連する細胞表面膜タンパク質に結合するタンパク質、例えば、特定の細胞型に対して向性のキャプシドタンパク質又はその断片、循環中に内在化を受けるタンパク質に対する抗体、細胞内局在を標的とし細胞内半減期を延長するタンパク質が、標的化及び／又は取り込みを促進するために使用されてよい。受容体媒介性エンドサイトーシスの技術は、例えば、Ｗｕら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６２、４４２９−４４３２（１９８７）；及びＷａｇｎｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８７，３４１０−３４１４（１９９０）によって記載されている。

必要に応じて、例えば、組み込み配列などの遺伝子送達剤も使用できる。多数の組み込み配列が当技術分野で知られている（例えば、Ｎｕｎｅｓ−Ｄｕｂｙら，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２６：３９１−４０６，１９９８；Ｓａｄｗｏｓｋｉ，Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ，１６５：３４１−３５７，１９８６；Ｂｅｓｔｏｒ，Ｃｅｌｌ，１２２（３）：３２２−３２５，２００５；Ｐｌａｓｔｅｒｋら，ＴＩＧ １５：３２６−３３２、１９９９；Ｋｏｏｔｓｔｒａら，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｐｈａｒｍ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．，４３：４１３−４３９，２００３参照）。これらは、リコンビナーゼ及びトランスポザーゼを含む。例は、Ｃｒｅ（Ｓｔｅｒｎｂｅｒｇ及びＨａｍｉｌｔｏｎ、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ.，１５０：４６７−４８６，１９８１）、ｌａｍｂｄａ（Ｎａｓｈ，Ｎａｔｕｒｅ，２４７，５４３−５４５，１９７４）、Ｆｌｐ（Ｂｒｏａｃｈら，Ｃｅｌｌ，２９：２２７−２３４，１９８２）、Ｒ（Ｍａｔｓｕｚａｋｉら，J．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ、１７２：６１０−６１８、１９９０）、ｃｐＣ３１（例えば、Ｇｒｏｔｈら，J．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３５：６６７−６７８，２００４参照）、スリーピングビューティー、マリナーファミリーのトランスポザーゼ（Ｐｌａｓｔｅｒｋら，上述）、並びにレトロウイルス又はレンチウイルスのＬＴＲ配列及びＡＡＶのＩＴＲ配列などのウイルス組み込みをもたらす成分を有するＡＡＶ、レトロウイルス、及びアンチウイルスなどのウイルスを組み込むための成分を含む（Ｋｏｏｔｓｔｒａら，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｐｈａｒｍ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．，４３：４１３−４３９，２００３）。

細胞は、例えば、インビトロで培養されるか、又は遺伝子操作されてよい。宿主細胞は、健康な人間、癌患者、及び感染症の患者を含む正常な又は罹患した対象、民間研究所の寄託、アメリカンタイプカルチャーコレクションなどの公的培養物コレクション、又は商業的供給者から取得することができる。

例示的な哺乳類宿主細胞は、限定されないが、ヒト、サル、及びげっ歯類由来の細胞を含む（例えば、Ｋｒｉｅｇｌｅｒ，「遺伝子の導入及び発現：実験室マニュアル（Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ ａｎｄ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ）」,１９９０, Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｆｒｅｅｍａｎ ＆ Ｃｏ.参照）。これらは、ＳＶ４０（例えば、ＣＯＳ−７、ＡＴＣＣ ＣＲＬ １６５１）によって形質転換されるサル腎臓細胞株；ヒト胎児腎臓細胞（例えば、２９３、２９３−ＥＢＮＡ、又は懸濁培養での増殖のためにサブクローニングされた２９３細胞、Ｇｒａｈａｍら，Ｊ Ｇｅｎ Ｖｉｒｏｌ １９７７，３６：５９）；ベビーハムスター腎臓細胞（例えば、ＢＨＫ，ＡＴＣＣ ＣＣＬ １０）；チャイニーズハムスター卵巣細胞−ＤＨＦＲ（例えば、ＣＨＯ，Ｕｒｌａｕｂ及びＣｈａｓｉｎ，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ １９８０，７７：４２１６）；マウスセルトリ細胞（Ｍａｔｈｅｒ，Ｂｉｏｌ Ｒｅｐｒｏｄ １９８０，２３：２４３−２５１）；マウス線維芽細胞（例えば、ＮＩＨ−３Ｔ３）、サル腎臓細胞（例えば、ＣＶ１ ＡＴＣＣ ＣＣＬ ７０）；アフリカミドリザル腎臓細胞（例えば、ＶＥＲＯ−７６，ＡＴＣＣ ＣＲＬ−１５８７）；ヒト子宮頸癌細胞（例えば、ＨＥＬＡ、ＡＴＣＣ ＣＣＬ ２）；イヌ腎細胞（例、ＭＤＣＫ、ＡＴＣＣ ＣＣＬ ３４）；バッファローラット肝細胞（例えば、ＢＲＬ ３Ａ、ＡＴＣＣ ＣＲＬ １４４２）；ヒト肺細胞（例えば、Ｗ１３８、ＡＴＣＣ ＣＣＬ ７５）；ヒト肝細胞（例えば、Ｈｅｐ Ｇ２、ＨＢ ８０６５）；及びマウス乳腺腫瘍細胞（例えば、ＭＭＴ ０６０５６２、ＡＴＣＣ ＣＣＬ５１）を含む。本明細書に記載の融合タンパク質を発現するための例示的な癌細胞型は、マウス線維芽細胞株、ＮＩＨ３Ｔ３、マウスルイス肺癌細胞株、ＬＬＣ、マウス肥満細胞腫細胞株、Ｐ８１５、マウスリンパ腫細胞株、ＥＬ４及びそのオボアルブミントランスフェクタント、Ｅ．Ｇ７、マウス黒色腫細胞株、Ｂ１６Ｆ１０、マウス線維肉腫細胞株、ＭＣ５７、ヒト小細胞肺癌細胞株、ＳＣＬＣ＃２及びＳＣＬＣ＃７、ヒト肺腺癌細胞株、例えば、ＡＤ１００、並びにヒト前立腺癌細胞株、例えば、ＰＣ−３を含む。

インビボでのｇｐ９６−Ｉｇ融合タンパク質の生成及び分泌に使用できる細胞は、限定されないが、上皮細胞、内皮細胞、ケラチノサイト、線維芽細胞、筋細胞、肝細胞、Ｔリンパ球、Ｂリンパ球、単球、マクロファージ、好中球、好酸球、巨核球、又は顆粒球などの血液細胞、造血幹細胞若しくは前駆細胞（例えば、骨髄から得られるもの）などの様々な幹細胞又は前駆細胞、臍帯血、末梢血、胎児肝臓など、及び腫瘍細胞（例えば、ヒト腫瘍細胞）を含む。細胞型の選択は、治療若しくは予防される腫瘍又は感染症の種類に依存し、当業者が決定できる。

異なる宿主細胞は、タンパク質の翻訳後プロセシング及び修飾のための特徴的で、特異的なメカニズムを有する。レシピエントがその熱ショックタンパク質（ｈｓｐ）を処理する方法と同様の特定の方法で発現された遺伝子産物を修飾及び処理する宿主細胞を選択してよい。大量のｇｐ９６−Ｉｇを生成する目的で、宿主細胞の種類は、異種遺伝子の発現に使用されており、大規模生成プロセス用に合理的に十分に特徴付けられ開発されることが好ましい。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、本融合細胞又は本融合タンパク質を分泌する組換え細胞がその後投与される患者に対して自家性である。

いくつかの実施形態では、本明細書で提供される発現構築物は、抗原性細胞（ａｎｔｉｇｅｎｉｃ ｃｅｌｌ）に導入できる。本明細書で使用される場合、抗原細胞は、ウイルスなどの発癌性感染因子に感染しているが、まだ新生物ではない前新生物細胞、又はＤＮＡ損傷剤や放射線などの変異原若しくは発癌性因子に曝露された抗原細胞を含んでよい。使用できる他の細胞は、正常型から、形態又は生理学的機能若しくは生化学的機能により特徴づけられる新生物型への移行状態にある、新生物発生前の細胞である。

典型的には、本明細書に提供される方法で使用される癌細胞及び新生物発生前の細胞は、哺乳類起源のものである。企図される哺乳類は、ヒト、コンパニオン動物（例えば、イヌ及びネコ）、家畜（例えば、ヒツジ、ウシ、ヤギ、ブタ及びウマ）、実験動物（例えば、マウス、ラット及びウサギ）、並びに捕獲動物又は自由野生動物を含む。

いくつかの実施形態では、癌細胞（例えば、ヒト腫瘍細胞）を、本明細書に記載される方法で使用できる。いくつかの実施形態では、細胞はヒト腫瘍細胞である。いくつかの実施形態では、細胞は、照射された、又は生きている弱毒化ヒト腫瘍細胞である。癌細胞は、発現されたｇｐ９６−Ｉｇ融合タンパク質と非共有結合するようになる抗原ペプチドを提供する。新生物発生前病変、癌組織、又は癌細胞に由来する細胞株も、その細胞株の細胞が標的癌細胞上の抗原と共通する少なくとも１つ又はそれより多い抗原決定基を有するという条件で、使用できる。癌組織、癌細胞、発癌物質に感染した細胞、他の新生物発生前細胞、及びヒト起源の細胞株を使用できる。最終的に融合タンパク質が最終的に投与される患者から切除された癌細胞が特に有用であるが、同種異系細胞も使用できる。いくつかの実施形態では、癌細胞は、限定されないが、樹立された非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、黒色腫、卵巣癌、腎細胞癌、前立腺癌、肉腫、乳癌、扁平上皮癌、頭頸部癌、肝細胞癌、膵臓癌、又は結腸癌細胞株などの樹立された腫瘍細胞株に由来してよい。一態様では、癌細胞はヒト肺癌細胞株である。いくつかの実施形態では、肺癌細胞株は、様々な既知の肺癌抗原を発現する。

いくつかの実施形態では、本融合タンパク質は、様々な腫瘍細胞抗原の提示を可能にする。例えば、いくつかの実施形態では、本ワクチンタンパク質融合物（例えば、ｇｐ９６融合物）は、これらの様々な腫瘍抗原を介添えする。いくつかの実施形態では、腫瘍細胞は様々な抗原を分泌する。分泌及び／又は提示できる例示的であるが非限定的な抗原は、癌／精巣抗原１Ａ（ＣＴＡＧ１Ａ）及びその免疫原性エピトープＣＴ４５Ａ６、ＣＴ４５Ａ３、ＣＴ４５Ａ１、ＣＴ４５Ａ５、精子自己抗原タンパク質１７（ＳＰＡ１７）、精子関連抗原６（ＳＰＡＧ６）、精子関連抗原８（ＳＰＡＧ８）、アンキリンリピートドメイン４５（ＡＮＫＲＤ４５）、リジンデメチラーゼ５Ｂ（ＫＤＭ５Ｂ）、精子先体関連（ｓｐｅｒｍ ａｃｒｏｓｏｍｅ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ）３（ＳＰＡＣＡ３）、精子べん毛２（ＳＰＥＦ２）、ヘモゲン（ＨＥＭＧＮ）、プロテアーゼ、セリン５０（ＰＲＳＳ５０）、ＰＤＺ結合キナーゼ（ＰＢＫ）、トランスケトラーゼ様タンパク質１（ＴＫＴＬ１）、ＴＧＦＢ誘導性因子ホメオボックス２様Ｘ連鎖（ＴＧＩＦ２ＬＸ）、様々な電荷のＸ連鎖（ＶＣＸ）染色体Ｘオープンリーディングフレーム６７（ＣＸＯＲＦ６７）、ＭＡＲＴ−１／メラン−Ａ、ｇｐ１００、ジペプチジルペプチダーゼＩＶ（ＤＰＰＩＶ）、アデノシンジアミナーゼ結合タンパク質（ＡＤＡｂｐ）、シクロフィリンｂ、結腸直腸関連抗原（ＣＲＣ）−００１７−１Ａ／ＧＡ７３３、癌胎児抗原（ＣＥＡ）及びその免疫原性エピトープＣＡＰ−１及びＣＡＰ−２、ｅｔｖ６、ａｍｌ１、前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）及びその免疫原性エピトープＰＳＡ−１、ＰＳＡ−２、及びＰＳＡ−３、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、Ｔ細胞受容体／ＣＤ３−ゼータ鎖、腫瘍抗原のＭＡＧＥファミリー（例えば、ＭＡＧＥ−Ａ１、ＭＡＧＥ−Ａ２、ＭＡＧＥ−Ａ３、ＭＡＧＥ−Ａ４、ＭＡＧＥ−Ａ５、ＭＡＧＥ−Ａ６、ＭＡＧＥ−Ａ７、ＭＡＧＥ−Ａ８、ＭＡＧＥ−Ａ９、ＭＡＧＥ−Ａ１０、ＭＡＧＥ−Ａ１１、ＭＡＧＥ−Ａ１２、ＭＡＧＥ−Ｘｐ２（ＭＡＧＥ−Ｂ２）、ＭＡＧＥ−Ｘｐ３（ＭＡＧＥ−Ｂ３）、ＭＡＧＥ−Ｘｐ４（ＭＡＧＥ−Ｂ４）、ＭＡＧＥ−Ｃ１、ＭＡＧＥ−Ｃ２、ＭＡＧＥ−Ｃ３、ＭＡＧＥ−Ｃ４、ＭＡＧＥ−Ｃ５）、腫瘍抗原のＧＡＧＥファミリー（例えば、ＧＡＧＥ−１、ＧＡＧＥ−２、ＧＡＧＥ−３、ＧＡＧＥ−４、ＧＡＧＥ−５、ＧＡＧＥ−６、ＧＡＧＥ−７、ＧＡＧＥ−８、ＧＡＧＥ−９、ＧＡＧＥ１２Ｇ、ＧＡＧＥ１２Ｆ、ＧＡＧＥ１２Ｉ）、ＢＡＧＥ、ＲＡＧＥ、ＬＡＧＥ−１、ＮＡＧ、ＧｎＴ−Ｖ、ＭＵＭ−１、ＣＤＫ４、チロシナーゼ、ｐ５３、ＭＵＣファミリー、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ｐ２１ｒａｓ、ＲＣＡＳ１、α−フェトプロテイン、Ｅ−カドヘリン、α−カテニン、β−カテニン及びγ−カテニン、ｐ１２０ｃｔｎ、ｇｐ１００ Ｐｍｅｌ１１７、ＰＲＡＭＥ、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ｃｄｃ２７、大腸腺腫症タンパク質(ＡＰＣ)、フォドリン、コネキシン３７、Ｉｇ−イディオタイプ、ｐ１５、ｇｐ７５、ＧＭ２及びＧＤ２ガングリオシド、ヒトパピローマウイルスタンパク質などのウイルス産物、腫瘍抗原のＳｍａｄファミリー、ｌｍｐ−１、ＮＡ、ＥＢＶ−コード核内抗原(ＥＢＮＡ)−１、脳グリコーゲンホスホリラーゼ、ＳＳＸ−１、ＳＳＸ−２(ＨＯＭ−ＭＥＬ−４０)、ＳＳＸ−１、ＳＳＸ−４、ＳＳＸ−５、ＳＣＰ−１ ＣＴ−７、ｃ−ｅｒｂＢ−２、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ５６、ＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ１３８、ＡＧＳ１６、ＭＵＣ１、ＧＰＮＭＢ、Ｅｐ−ＣＡＭ、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、及びＰＭＳＡである。

ＰＤ−１は、受容体の免疫グロブリンスーパーファミリー内の、Ｔ細胞調節因子のＣＤ２８ファミリーのメンバーである細胞表面受容体である。ヒトＰＤ−１遺伝子は染色体２ｑ３７に位置し、全長ＰＤ−１ ｃＤＮＡは、マウスＰＤ−１と６０％の相同性を有する２８８個のアミノ酸残基のタンパク質をコードする。それは胸腺発達中のＣＤ４−ＣＤ８−（ダブルネガティブ）胸腺細胞上に存在し、長期の抗原曝露後にＴ細胞とＢ細胞、ＮＫＴ細胞及び単球などの成熟造血細胞で活性化された際に発現する。

ＰＤ−１を臨床的に標的化するための主要な方法は、ＰＤ−１又はＰＤ−Ｌ１の機能のいずれかを阻害する遺伝子操作されたモノクローナル抗体の開発によるものであった。ＰＤ−Ｌ１は、Ｔ細胞増殖とサイトカイン生成を抑制することも示されている。しかしながら、癌での正確な経路は不明なままである。癌細胞はそれらの表面上で高発現レベルのＰＤ−Ｌ１を促進し、腫瘍微小環境に浸潤するＴ細胞上の抑制性ＰＤ−１受容体の活性化を可能にし、これらの細胞を効果的にオフにする。実際に、ＰＤ−Ｌ１発現レベルの上方制御は、多くの異なる癌の種類で実証されており（例えば、黒色腫［４０％〜１００％］、ＮＳＣＬＣ［３５％〜９５％］、及び多発性骨髄腫［９３％］）、並びに高レベルのＰＤ−Ｌ１発現は臨床転帰不良と関連している。さらに、腫瘍浸潤Ｔ細胞（ＴＩＬ）は、正常組織に浸潤するＴ細胞よりも有意に高いレベルのＰＤ−１を発現することが示されている。腫瘍微小環境は、インターフェロン−γ（ＩＦＮγ）を含む炎症性サイトカインを分泌して腫瘍浸潤Ｔ細胞上でのＰＤ−１の発現を上方制御して、腫瘍浸潤Ｔ細胞が腫瘍上で発現される高レベルのＰＤ−Ｌ１に確実に応答できるようにする可能性があると考えられている。

いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−１抗体又はその抗原結合断片は、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、ピジリズマブ、ＢＭＳ−９３６５５９、アテゾリズマブ又はアベルマブである。

いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体又はその抗原結合断片は、デュルバルマブである。

特に興味深い２つの抗ＰＤ−１抗体であるニボルマブ及びペンブロリズマブは、いくつかの異なる癌について米国で承認されており、臨床試験中の多数の追加の抗ＰＤ−１抗体が存在する。

したがって、いくつかの実施形態では、ビアジェンプマツセル−Ｌと組み合わせて使用するための抗ＰＤ−１抗体はニボルマブである。適切な用量及び投与計画を以下に記載する。

いくつかの実施形態では、ビアジェンプマツセル−Ｌと組み合わせて使用するための抗ＰＤ−１抗体は、ペンブロリズマブである。適切な用量及び投与計画を以下に記載する。

本明細書に開示される組み合わせ及び方法は、癌を治療するか、又は肺癌などの癌細胞増殖を阻害するのに適している。いくつかの実施形態では、肺癌は、扁平上皮癌、腺癌、及び大細胞肺癌などの非小肺癌である。

一般に、本発明は、典型的には抗ＰＤ−１療法から顕著に恩恵を受けない患者における抗ＰＤ−１又は抗ＰＤ−Ｌ１抗体の有効性の増大を提供する。例えば、腫瘍上のＰＤ−Ｌ１の発現が低いか又は陰性である患者は一般に、抗ＰＤ−１療法から顕著な恩恵を受けない。しかしながら、驚くべきことに、本明細書に示されるように、ビアジェンプマツセル−Ｌと抗ＰＤ−１抗体の組み合わせは、患者の腫瘍（複数可）のＰＤ−Ｌ１状態に関係なく同等に効果的である。同様に、ＴＩＬ状態が低い患者は一般に、抗ＰＤ−１療法にあまり応答しない。再度、驚くべきことに、ビアジェンプマツセル−Ｌと抗ＰＤ−１抗体の組み合わせは、患者の腫瘍（複数可）のＴＩＬ状態に関係なく同等に効果的である。

したがって、本発明は、ＮＳＣＬＣ患者のＰＤ−Ｌ１状態を決定する方法を提供する。一般に、これは、当技術分野で知られているように、患者から１以上の腫瘍生検を取得しＰＤ−Ｌ１状態を試験することによって行われる。これは一般に、当技術分野で知られているように標識抗体を用いて生検腫瘍試料に対する免疫組織化学（ＩＨＣ）アッセイを用いて行われ、一般に、ＰＤ−Ｌ１^高（高レベルの染色）、ＰＤ−Ｌ１^低（低レベルの染色）及びＰＤ−Ｌ１^陰性（＜１％、染色が検出されない）としてスコア化される。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１染色は、標準化された免疫組織化学アッセイで使用され、ＰＤ−Ｌ１^高は、５０％以上の染色陽性のＰＤ−Ｌ１腫瘍型の細胞に応答し、ＰＤ−Ｌ１^低は４９〜１％の染色陽性のＰＤ−Ｌ１腫瘍型細胞であり、ＰＤ−Ｌ１^陰性においては１％未満の染色が検出される。抗ＰＤ−Ｌ１抗体を用いる解離腫瘍生検のＦＡＣＳ染色も実施されてよい。

当技術分野で知られているように、患者は一般的に、ＰＤ−Ｌ１^高であれば、抗ＰＤ−１抗体治療でよりよくなる。しかしながら、本発明は、患者がＰＤ−Ｌ１^低及びＰＤ−Ｌ１^陰性であっても相乗効果をもたらすビアジェンプマツセル−Ｌと組み合わせた抗ＰＤ−１抗体の使用を可能にする。

さらに、いくつかの実施形態では、患者のＴＩＬ状態を決定できる。本明細書で概説するように、腫瘍微小環境で少量のＣＤ８＋ＴＩＬを有する腫瘍は、一般に「冷たい」腫瘍、例えばＴＩＬ^低と見なされ、ＣＤ８＋ＴＩＬの量が多い腫瘍（ＴＩＬ^高）よりも免疫腫瘍治療に応答する可能性が低い。

上記のように、ＴＩＬ状態は一般に、例えば、当技術分野で知られているように腫瘍生検解離すること及びＣＤ８＋細胞についてＦＡＣＳ選別を使用することによって、又は腫瘍生検試料の免疫組織化学（ＩＨＣ）染色を行うことによって、当技術分野で知られているように評価される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ８抗体染色を用いて、腫瘍間質中のＣＤ８＋細胞のパーセンテージを評価する。ＴＩＬ^高は、腫瘍生検中の約１０％を超えるＣＤ８＋細胞に対応し、ＴＩＬ^低は腫瘍試料中の約１０％未満のＣＤ８＋細胞に対応する。

そのため、患者は一般的に、ＴＩＬ状態がＴＩＬ^高の時には、抗ＰＤ−１抗体プロトコルでより良好になるが、本発明は、患者がＴＩＬ^低の場合でもビアジェンプマツセル−Ｌと組み合わせた抗ＰＤ−１抗体の使用が相乗効果をもたらすことを可能にする。

本発明は、ＮＳＣＬＣに罹患している患者へのビアジェンプマツセル−Ｌ及び抗ＰＤ−１抗体の共投与を提供する。

実施形態では、患者は、ある治療法を受けた後に疾患の進行を経験している。実施形態では、治療法は免疫チェックポイント阻害剤療法である。実施形態では、治療法は化学療法を含む。実施形態では、患者は、免疫チェックポイント阻害剤療法に対する応答が不良である。実施形態では、患者は免疫チェックポイント阻害剤療法に失敗したことがある。実施形態では、患者の疾患は、免疫チェックポイント阻害剤療法を施された場合でさえ進行している。いくつかの実施形態では、患者は以前にＣＰＩ療法を受けたが、疾患は治療の６ヶ月以上後に進行した。

いくつかの実施形態では、本開示の方法は、抗ＰＤ−１抗体と組み合わせて改変された分泌性熱ショックタンパク質（すなわち、ｇｐ９６−Ｉｇ）をコードするベクターを含む細胞を投与することを伴う。いくつかの実施形態では、投与される細胞の数は、約１００、０００細胞〜約２、０００万細胞の範囲である。

いくつかの実施形態では、低用量の細胞が対象に投与される。例えば、対象に投与される細胞の数は、約１００、０００個の細胞、約１５０、０００個の細胞、約２００、０００個の細胞、約２５０、０００個の細胞、約３００、０００個の細胞、約３５０、０００個の細胞、約４００、０００個の細胞、約４５０、０００個の細胞、約５００、０００個の細胞、５５０、０００個の細胞、約６００、０００個の細胞、約６５０、０００個の細胞、約７００、０００個の細胞、約７５０、０００個の細胞、約８００、０００個の細胞、約８５０、０００個の細胞、約９００、０００個の細胞、約９５０、０００個の細胞、又は約１００万個の細胞であり得る。一実施形態では、約１００万個の細胞が対象に投与される。

いくつかの実施形態では、高用量の細胞が対象に投与される。例えば、対象に投与される細胞の数は、約２００万個の細胞、約３００万個の細胞、約４００万個の細胞、約５００万個の細胞、約６００万個の細胞、約７００万個の細胞、約８００万個の細胞、約９００万個の細胞、約１０００万個の細胞、約１１００万個の細胞、約１２００万個の細胞、約１３００万個の細胞、約１４００万個の細胞、約１５００万個の細胞、約１６００万個の細胞、約１７００万個の細胞、約１８００万個の細胞、約１９００万個の細胞、又は約２０００万個の細胞であり得る。

本明細書に概説される併用療法投与計画では、特に使用される用量は、注射として与えられる１×１０^７個のビアジェンプマツセル−Ｌ細胞である。

多くの実施形態では、ビアジェンプマツセル−Ｌ細胞は、１週間おきに（隔週で）ニボルマブなどの抗ＰＤ−１抗体のＩＶ注入と組み合わせて、少なくとも約６週間〜少なくとも約１６週間、毎週投与される。

抗ＰＤ−１抗体は、ＮＳＣＬＣ患者の適切な投薬について当技術分野で知られているように投与される。一般に、２４０ｍｇの用量が隔週で投与される。

いくつかの実施形態では、ビアジェンプマツセル−Ｌ細胞は、例えば約１×１０^７個の細胞の用量で、抗ＰＤ−１又は抗ＰＤ−Ｌ１抗体治療の投与計画と組み合わせて投与される。例えば、いくつかの実施形態では、ビアジェンプマツセル−Ｌ細胞は、例えば約１×１０^７個の細胞の用量で、ニボルマブの単回用量投与計画（２週間毎に静脈内に３ｍｇ／ｋｇ）と組み合わされる。いくつかの実施形態では、ビアジェンプマツセル−Ｌ細胞は、例えば約１×１０^７個の細胞の用量で、必要に応じて合計約６週間、又は必要に応じて合計約１６週間、例えば２４０ｍｇのニボルマブの２週間の投薬スケジュールと組み合わされる。いくつかの実施形態では、ビアジェンプマツセル−Ｌ細胞は、例えば約１×１０^７個の細胞の用量で、必要に応じて４週間おきに３０分ごとに注入され、例えば４８０ｍｇのニボルマブの４週間の投薬スケジュールと組み合わされる。

いくつかの実施形態では、２つの成分の有用な投薬の投与計画は以下のとおりである：
投与計画１

投与計画２

当業者によって理解されるように、患者は、疾患の進行及び／又は許容できない毒性若しくは有害事象まで、１週ごとにこれらのプロトコルを維持できる。

一態様では、本開示の方法は、改変された分泌性熱ショックタンパク質（すなわち、ｇｐ９６−Ｉｇ）を発現する細胞株の低用量及び免疫チェックポイント阻害剤を含む組み合わせ、並びにその原因が腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）及び／又は他のタンパク質の免疫細胞プロファイリングを調節することによって影響を受ける可能性があるものなどの疾患、例えば、癌を治療するための組み合わせを使用する方法を提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、改変された分泌性熱ショックタンパク質（すなわち、ｇｐ９６−Ｉｇ）を発現する細胞株の低用量及び抗ＰＤ−１抗体又はその抗原結合断片（例えば、ニボルマブ）を含む組み合わせを特徴とする。

本方法は、例えば、腫瘍増殖を抑制すること、腫瘍内のＴ調節細胞集団を減少させること、かつ／又は腫瘍におけるＣＤ８／Ｔ調節細胞比を増加させることによって、改変された分泌性熱ショックタンパク質（すなわち、ｇｐ９６−Ｉｇ）を発現する細胞株の低用量及び抗ＰＤ−１抗体又はその抗原結合断片（例えば、ニボルマブ）の有効量を、それを必要とする対象に投与することを含む。

本開示はさらに、疾患を治療するための医薬品の製造における、本明細書に記載の任意の方法又は組み合わせの使用を提供する。そのような疾患は、例えば、癌、前癌状態、又は腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）及び／又は他のタンパク質の免疫細胞プロファイリングを調節することによって影響を受ける疾患を含む。

いくつかの実施形態では、本開示は、改変された分泌性熱ショックタンパク質（すなわち、ｇｐ９６−Ｉｇ）をコードするベクターを含有する細胞株を含む併用療法を提供する。抗ＰＤ−１モノクローナル抗体又はその抗原結合断片（例えば、ニボルマブ）などの免疫チェックポイント阻害剤と組み合わせた細胞株の低用量の投与は、ＮＳＣＬＣ再発を低減する。

この方法は、腫瘍の増殖を抑制すること、腫瘍内のＴ調節細胞集団を減少させること、かつ／又は腫瘍内のＣＤ８／Ｔ調節細胞比率を増加させることによって、改変された分泌性熱ショックタンパク質（すなわち、ｇｐ９６−Ｉｇ）を発現する細胞株の低用量及び抗ＰＤ−１抗体（例えば、ニボルマブ）の有効量を、それを必要とする対象に投与することを含む。

本明細書に開示される組み合わせ及び方法は、扁平上皮癌、腺癌、及び大細胞癌、例えば、非小肺癌などの癌を治療するか、又は癌細胞増殖を阻害するのに適する。

いくつかの実施形態では、本明細書で提供される方法は、腫瘍（例えば、肺腫瘍）に対する免疫応答を刺激するのに有用であり得る。いくつかの実施形態では、そのような免疫応答は、腫瘍に関連する徴候若しくは症状を治療又は緩和するのに有用である。本明細書で使用する場合、「治療する」とは、治療されていない個体の症状と比較して、本明細書に記載のベクターが投与された個体の症状を軽減すること、防止すること、及び／又は逆転させることを意味する。開業医は、本明細書に記載の方法が、その後の治療法を決定するために熟練した開業医（医師又は獣医師）による継続的な臨床評価と同時に使用されることを理解するであろう。そのような評価は、特定の治療用量を増加、減少、又は継続するかどうか、投与様式などを評価するのに役立ちかつ情報を与える。

いくつかの実施形態では、本発明の方法は、対象における腫瘍抗原特異的Ｔ細胞の活性化又は増殖を高めることができる。例えば、対象における腫瘍抗原特異的Ｔ細胞の活性化又は増殖は、投与前の対象における腫瘍抗原特異的Ｔ細胞の活性化又は増殖のレベルと比較して、少なくとも５％（例えば、少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、６０％、７０％、８０％、９０％、又は１００％を含む）増加させることができる。一実施形態では、増加は、免疫チェックポイント阻害剤（例えば、抗ＰＤ−１抗体）のみの投与と比較される。

いくつかの実施形態では、本方法は、対象におけるＣＤ８＋Ｔ細胞の活性化又は増殖を高めることができる。例えば、対象におけるＣＤ８＋Ｔ細胞の活性化又は増殖は、投与前の対象におけるＣＤ８＋Ｔ細胞の活性化又は増殖のレベルと比較して、少なくとも５％（例えば、少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、６０％、７０％、８０％、９０％、又は１００％を含む）増加させることができる。いくつかの実施形態では、ＣＤ８＋Ｔ細胞はＩＦＮ−γ分泌Ｔ細胞である。一実施形態では、増加は、免疫チェックポイント阻害剤のみの投与と比較される。いくつかの実施形態では、ＣＤ８＋Ｔ細胞（例えば、ＩＦＮ−γを分泌するＣＤ８＋Ｔ細胞）の活性化又は増殖は、例えば、対象由来の末梢血リンパ球に対して行われる酵素結合イムノスポット（ＥＬＩＳＰＯＴ）アッセイによって評価できる。

いくつかの実施形態では、本発明の方法は、対象において腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）を効果的に誘導及び／又は活性化し、かつ／又はそのようなＴＩＬの数を増加させる。例えば、対象におけるそのようなＴＩＬの数の誘導及び／又は活性化及び／又は増加は、投与前と比較して、少なくとも５％（例えば、少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、６０％、７０％、８０％、９０％、又は１００％）であり得る。一実施形態では、増加は、免疫チェックポイント阻害剤（例えば、抗ＰＤ−１抗体）のみの投与と比較される。

いくつかの実施形態では、本発明の方法は、対象における肺癌の再発率を効果的に低減する。いくつかの実施形態では、本開示の方法は、改変された分泌性熱ショックタンパク質（すなわち、ｇｐ９６−Ｉｇ）を発現する細胞株の低用量と、抗ＰＤ−１抗体などの免疫チェックポイント阻害剤の組み合わせで治療された対象における肺癌の再発率を効果的に低減する。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−１抗体又はその抗原結合断片はニボルマブである。いくつかの実施形態では、チェックポイント阻害剤は、デュルバルマブ、イピリムマブ、ペンブロリズマブ、ピジリズマブ、ＢＭＳ−９３６５５９、アテゾリズマブ又はアベルマブを含む。

一実施形態では、本開示の方法は、本開示の細胞株の高用量と抗ＰＤ−１抗体などの免疫チェックポイント阻害剤の組み合わせで治療された対象よりも、本開示の細胞株の低用量と抗ＰＤ−１抗体などの免疫チェックポイント阻害剤の組み合わせで治療された対象を治療することにおいて（例えば、癌再発を低減することにおいて）より効果的である。

一態様では、本開示の方法は、抗ＰＤ−１抗体又はその抗原結合断片などの免疫チェックポイント阻害剤のみで治療された対象よりも、本発明の細胞株の低用量と抗ＰＤ−１抗体又はその抗原結合断片などの免疫チェックポイント阻害剤の組み合わせで治療された対象を治療することにおいて（例えば、癌再発を低減することにおいて）より効果的である。

一実施形態では、本発明の細胞株と、抗ＰＤ−１抗体又はその抗原結合断片などの免疫チェックポイント阻害剤の組み合わせの投与は、治療後の免疫応答の強力な増加を誘導する。一実施形態では、免疫応答の強力な増加は、例えば、ＥＬＩＳＰＯＴによって測定されるＣＤ８＋Ｔ細胞（例えば、ＩＦＮ−γを分泌するＣＤ８＋Ｔ細胞）の活性化又は増殖においてベースラインを少なくとも２倍上回る増加として定義される。一実施形態では、本発明の方法は、そのような免疫応答を示さない対象よりも、治療後に強い免疫応答を示す対象を治療するのにより効果的である。そのような実施形態では、対象は、本発明の細胞株の低用量と免疫チェックポイント阻害剤（例えば、抗ＰＤ−１抗体）の組み合わせで治療されてよい。

いくつかの実施形態では、本開示は、本開示の細胞株と免疫チェックポイント阻害剤（例えば、抗ＰＤ−１抗体）の組み合わせを対象に投与することにより、治療前に多数の腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）を示す対象を治療する方法を提供する。いくつかの実施形態では、多数のＴＩＬは、腫瘍微小環境における細胞の１０％より高いＴＩＬ数を指す。

他の実施形態では、本発明は、本開示の細胞株と免疫チェックポイント阻害剤（例えば、抗ＰＤ−１抗体）の組み合わせを対象に投与することにより、治療前に少数の腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）を示す対象を治療する方法を提供する。いくつかの実施形態では、少数のＴＩＬは、腫瘍微小環境内の細胞の１０％以下のＴＩＬ数を指す。いくつかの実施形態では、本開示の方法は、多数のＴＩＬを有する対象よりも少数の腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）を有する対象を治療するのにより効果的であってよい。いくつかの実施形態では、本開示は、本開示の細胞株と免疫チェックポイント阻害剤（例えば、抗ＰＤ−１抗体）の組み合わせで、少数のＴＩＬを有する対象を治療する方法を提供する。

本明細書で使用される場合、「有効量」及び「治療有効量」という用語は、対象（例えば、癌を有すると診断されたヒト）に所望の治療（例えば、抗癌又は抗腫瘍の）効果を提供するのに十分な量を指す。抗腫瘍効果及び抗癌効果は、限定されないが、腫瘍成長（例えば、腫瘍成長遅延）、腫瘍サイズ、又は転移の調節、特定の抗癌剤に関連する毒性と副作用の軽減、癌の臨床的障害若しくは症状の改善又は最小化、そうでなければそのような治療がない場合に予想される生存を超えて対象の生存を延長すること、及び投与前に腫瘍形成を欠く動物における腫瘍成長の防止、すなわち、予防的投与、を含む。一実施形態では、本発明は、癌の再発（例えば、肺癌の再発）を低減又は防止する。

本明細書に記載の方法は、肺癌治療の様々な態様に有用である。いくつかの実施形態では、個体において肺癌細胞増殖（肺癌腫瘍増殖など）を抑制する方法が提供される。いくつかの実施形態では、少なくとも約１０％（例えば、少なくとも約２０％、３０％、４０％、６０％、７０％、８０％、９０％、又は１００％を含む）の細胞増殖が抑制される。いくつかの実施形態では、約２０％未満の細胞増殖が抑制される。

いくつかの実施形態では、個体において肺癌腫瘍転移を抑制する方法が提供される。いくつかの実施形態では、少なくとも約１０％（例えば、少なくとも約２０％、３０％、４０％、６０％、７０％、８０％、９０％、又は１００％のいずれかを含む）の転移が抑制される。

いくつかの実施形態では、個体において既存の肺癌腫瘍転移（肺転移又はリンパ節への転移など）の発生率若しくは負荷を軽減する方法が提供される。いくつかの実施形態では、少なくとも約１０％（例えば、少なくとも約２０％、３０％、４０％、６０％、７０％、８０％、９０％、又は１００％を含む）の転移が低減される。

いくつかの実施形態では、個体において肺癌腫瘍サイズを減少させる方法が提供される。いくつかの実施形態では、腫瘍サイズは、少なくとも約１０％（例えば、少なくとも約２０％、３０％、４０％、６０％、７０％、８０％、９０％、又は１００％を含む）縮小される。

いくつかの実施形態では、個体において肺癌再発を低減する方法が提供される。いくつかの実施形態では、肺癌の再発は、少なくとも約１０％（例えば、少なくとも約２０％、３０％、４０％、６０％、７０％、８０％、９０％、又は１００％を含む）低減する。

いくつかの実施形態では、個体において肺癌の疾患進行までの時間を延長する方法が提供される。いくつかの実施形態では、本方法は、疾患の進行までの時間を少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１又は５２週間延長する。いくつかの実施形態では、本方法は、疾患進行までの時間を少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０年延長する。

いくつかの実施形態では、肺癌を有する個体の生存を延長する方法が提供される。いくつかの実施形態では、本方法は、個体の生存を少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１８、２４ヶ月延長する。いくつかの実施形態では、本方法は、個体の生存を少なくとも約１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０年延長する。

いくつかの実施形態では、肺癌（例えば、ＮＳＣＬＣ）を有する個体における１以上の症状を緩和する方法が提供される。

実施例
本明細書に開示される発明がより効率的に理解されるために、実施例を以下に提供する。これらの実施例は、例示のみを目的としており、いかなる方法でも本発明を限定するものとして解釈されるべきではないことが理解されるべきである。

実施例１：非小細胞肺癌患者における複数の治療投与計画と組み合わせたビアジェンプマツセル−Ｌ（ＨＳ−１１０）の第１ｂ／２相試験（「ＤＵＲＧＡ」治験）
治験計画については、図１Ａ、図１Ｂ、及び図１Ｃを参照されたい。

本明細書に開示される実験の目標は、とりわけ、免疫応答を調節する計画と組み合わせたビアジェンプマツセル−Ｌによるワクチン接種が、難治性又は転移性疾患の少なくとも１つの以前の治療法に失敗した非小細胞肺腺癌の患者にとって安全かどうかを評価することであった。ＰＤ−１チェックポイント阻害剤とのビアジェンプマツセル−Ｌ（ＨＳ−１１０）及び二次治療法又はそれ以降の奏効率を評価した。第１ｂ相に含まれた患者集団を、安全性及び有効性に基づいて第２相に拡大した。

ＮＳＣＬＣの患者に、最初の１８週間、毎週１×１０^７個のＨＳ−１１０細胞を投与し、毒性又は腫瘍進行に耐えられなくなるまで、ニボルマブ３ｍｇ／ｋｇ又は２４０ｍｇを２週間ごとに投与した。組織を、ＰＤ−Ｌ１発現（１％以上高いか又は１％未満；陰性）及び腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）についてベースラインで調べた。ＴＩＬ高は、腫瘍間質中の１０％超のＣＤ８＋リンパ球によって定義された。２つのコホートを調べた：コホートＡ：チェックポイント阻害剤療法を全く受けたことがない患者（すなわち、チェックポイント阻害剤療法未治療）及びコホートＢ：以前にチェックポイント阻害剤療法を受けていて、その疾患が治療の６ヶ月又はそれ以上後に進行した患者。

コホートＡの患者からの組織を、ＰＤ−Ｌ１発現（１％以上又は１％未満）及び腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）についてベースラインで試験した。ＴＩＬ高は、腫瘍間質中の１０％超のＣＤ８＋リンパ球によって定義された。コホートＡの患者は、１つのみの以前の治療を有し、それは化学療法であった。限定されないが、目的は、安全性及び奏効率（ＯＲＲ）、ＰＦＳ、及びＯＳであった。

ビアジェンプマツセル−Ｌ＋ニボルマブ（低ＴＩＬ）
低いＴＩＬ（腫瘍浸潤リンパ球）の患者に、１８週間又は治療中止まで、１×１０^７個の細胞の注射として与えられるビアジェンプマツセル−Ｌ（ＨＳ−１１０）とニボルマブ（オプジーボ）の組み合わせを毎週投与した。９人の患者を最初に登録し（第１ｂ相）、任意選択で、予備的有効性に基づいて２０人の患者に拡大した（第２相）。ワクチンは、ｇｐ９６−Ｉｇを継続的に分泌するように遺伝子操作され、照射されたヒト肺癌細胞に由来した。患者にニボルマブを、疾患が進行するか又は毒性が許容できなくなるまで、ＮＳＣＬＣの治療のための添付文書に従って（２週間ごとに６０分かけて点滴静注として３ｍｇ／ｋｇ）投与した。

ビアジェンプマツセル−Ｌ＋ニボルマブ（高ＴＩＬ）
高いＴＩＬ（腫瘍浸潤リンパ球）の患者に、１８週間又は治療中止まで、１×１０^７個の細胞の注射として与えられるビアジェンプマツセル−Ｌ（ＨＳ−１１０）とニボルマブ（オプジーボ）の組み合わせを毎週投与した。９人の患者を最初に登録し（第１ｂ相）、任意選択で、予備的有効性に基づいて２０人の患者に拡大した（第２相）。ワクチンは、ｇｐ９６−Ｉｇを継続的に分泌するように遺伝子操作され、照射されたヒト肺癌細胞に由来した。患者にニボルマブを、疾患が進行するか又は毒性が許容できなくなるまで、ＮＳＣＬＣの治療のための添付文書に従って（２週間ごとに６０分かけて点滴静注として３ｍｇ／ｋｇ）投与した（図２参照）。

ビアジェンプマツセル−Ｌ＋ニボルマブ（ロールオーバー）
患者に、１８週間又は治療中止まで、１×１０^７個の細胞の注射として与えられるビアジェンプマツセル−Ｌ（ＨＳ−１１０）とニボルマブ（オプジーボ）の組み合わせを毎週投与した。この治療群は、同意したが登録のための高ＴＩＬ群若しくは低ＴＩＬ群に割り当てることができなかった患者を許可し、正式な制限はなかった。ｇｐ９６−Ｉｇを継続的に分泌するように遺伝子操作され照射されたヒト肺癌細胞に由来するワクチンを、使用した。患者にニボルマブを、疾患が進行するか又は毒性が許容できなくなるまで、ＮＳＣＬＣの治療のための添付文書に従って（２週間ごとに６０分かけて点滴静注として３ｍｇ／ｋｇ）投与した（図２参照）。

第１ｂ相の主要評価項目の結果は、最大３年間の身体検査及び臨床検査によって安全性並びに忍容性を測定し、各ビアジェンプマツセル−Ｌ併用投与計画の安全性を評価するものであった。第２相の主要評価項目の結果は、最大３年間の奏効率（ＯＲＲ）を測定し、固形腫瘍の奏効率評価基準（ＲＥＣＩＳＴ）によって奏効率（ＯＲＲ）を評価するものであった。図３Ａ及び図３Ｂ、並びにＣＰＩプログレッサーの結果については図１９を参照されたい。第１ｂ相の副次評価項目の結果は、最大３年間の奏効率（ＯＲＲ）を測定し、固形腫瘍の奏効評価基準（ＲＥＣＩＳＴ）によって奏効率（ＯＲＲ）を評価するものであった。第２相の副次評価項目の結果は、最大３年間の身体検査及び臨床検査によって安全性並びに忍容性を測定し、各ビアジェンプマツセル−Ｌ併用投与計画の安全性を評価するものであった。ＨＳ−１１０の溶解物を使用するＥＬＩＳＰＯＴによる免疫応答を、ワクチン接種後の末梢血から最大３年間評価し、特徴付け（図１４、図１５、図１６）、全生存（ＯＳ）及び無増悪生存（ＰＦＳ）を最大３年間評価する（図３Ａ）。

さらに、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）レパートリーの特徴付け、フローサイトメトリー分析による末梢血免疫応答、リンパ球サブセットを含むフローサイトメトリーによる末梢血単核球（ＰＢＭＣ）の合計数、完全奏効、部分奏効又は安定な奏効を含む病勢コントロール率（ＤＣＲ）などの他の評価項目を、最大３年間評価する。免疫組織化学（ＩＨＣ）による腫瘍抗原の発現及び生検又は保存組織中の腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の存在を事前治療中に評価し、ＩＨＣによる生検中の腫瘍浸潤リンパ球及び免疫抑制分子の発現を、試験薬の最初の投与後９週間評価する。登録後６ヶ月及び登録後１２ヶ月の時点で生存している患者の割合を評価する。

臨床患者集団基準
健康な志願者を除いて、１８歳以上の全ての性別の人が研究に適格であった。包含基準：非小細胞肺腺癌；ＲＥＣＩＳＴ １．１で測定可能な疾患の１つの部位；難治性又は転移性のＮＳＣＬＣに対して以前に少なくとも１つの治療を受けた患者集団；１８週間以上の平均余命；試験参加時の疾患の進行；米国東海岸癌臨床試験グループ（ＥＣＯＧ）のパフォーマンスステータス（ＰＳ）≦１。ＰＳ＝２の患者が考慮されてもよく、中枢神経系（ＣＮＳ）の転移は許可されてもよいが、治療され、神経学的に安定している必要がある；適切な実験室パラメータ；プロトコルを遵守し、インフォームドコンセントに署名する意思と能力がある；出産の可能性がある女性患者と繁殖力の高い男性患者は、研究への参加を通して効果的な避妊法を使用することに同意する必要がある；スクリーニング時及び１０週目に保存された又は新鮮な腫瘍生研を提供する意思があり添付文書に従ってニボルマブで治療するのに適する。

除外基準：過去２１日以内に全身抗癌療法を受けていること；ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）；Ｂ型肝炎とＣ型肝炎、若しくは腫瘍とは関係なく、積極的な治療が必要な重篤な／制御されていない感染症又は併発疾患；全身性免疫抑制療法を同時に必要とする症状；原発性又は後天性のいずれかの既知の免疫不全障害；既知の軟髄膜疾患；予想される治療効果で治療された、転移又は死亡のリスクがごくわずかであるものを除いて、１２ヶ月以内の活発な悪性腫瘍；妊娠中又は授乳中；この症状のための癌ワクチンによる治療歴；ビアジェンプマツセル−Ｌの臨床研究への参加歴；治験薬の最初の投与前の３０日以内の弱毒生ワクチンの投与；免疫チェックポイント阻害剤の治療前に、活性のある既知の又は疑われる自己免疫疾患。

データは、本発明のｇｐ９６ベースのワクチンが、理論に縛られることを望まないが、腫瘍内のＴ細胞活性を増加させ、それにより「冷たい」腫瘍を「熱い」腫瘍に変換することにより、チェックポイント阻害剤に応答する患者の割合を拡大することを示唆する（図３Ａ、図３Ｂ）。

１０週目に腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）のレベルが増加している患者は永続的なメリットを示し、７５％（これらの患者の８人のうち６人）が１年の経過観察時点で生存していた。さらに、低ＴＩＬを示す患者の６０％（５人の患者のうち３人）は、有意な腫瘍の減少を経験し、それはニボルマブのみの既存のデータについて報告された低ＴＩＬの患者の１０％応答率と良好に匹敵する。

ＥＬＩＳＰＯＴ分析で評価可能であった１５人の患者のうち１２人において、Ｔ細胞活性化、腫瘍の減少と全生存率の増加の間の強い相関が観察された。重要なことに、ＨＳ−１１０に対する免疫応答のタイミングは、観察された臨床応答のタイミングに対応し、それらの応答は持続されるように思われる。

実施例２：患者分析
合計４３人の患者がコホートＡに登録された。この患者群は、４０人のヒト肺腺癌（ＡＤ）患者及び３人の扁平上皮癌（ＳＣＣ）患者からなった。合計１８人の患者がコホートＢに登録された（１５人のＡＤと３人のＳＣＣ）。

完了者集団の分析
ビアジェンプマツセル−Ｌ（ＨＳ−１１０；ＩｍＰＡＣＴ）は、臨床的利益を伴う適応免疫応答を促進するためのｇｐ９６細胞由来の癌精巣抗原（ＣＴＡ）複合体の分泌用のｇｐ９６−Ｉｇ融合タンパク質でトランスフェクトされたヒト腺癌（Ａｄ）細胞株に由来する同種細胞ワクチンである。研究は、ＨＳ−１１０及び関連するｇｐ９６−Ｉｇ／ＣＴＡで生成されたワクチンが、ＣＤ８^＋腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の増加と腫瘍応答の間の相関を示したことを示した。図１及び２に示すように、ＨＳ−１１０とニボルマブの組み合わせが、ＮＳＣＬＣ患者の臨床転帰に影響を与える可能性のある長期記憶を伴う適応ＣＤ８応答をもたらすことができるかどうかを評価するために、ＤＵＲＧＡ治験を計画した。

ビアジェンプマツセル−Ｌとニボルマブで治療した後の適応免疫応答と臨床応答の相関を調べるために、進行したかつ以前に治療された肺腺癌の患者を、疾患が進行するか又は死亡するまで、ＨＳ−１１０の週１回の投与で１８週間、及び３ｍｇ／ｋｇのニボルマブの２週間ごとの投与で治療した。ベースラインと１０週目での生検組織を、腫瘍細胞上のＣＤ８^＋ＴＩＬとＰＤ−Ｌ１発現のレベルについて試験した（図２）。登録された３５人の患者のうち、６人（１７％）が部分奏効を達成し、１４人（４０％）の疾患が制御された。完了者分析は、ＯＲＲ及びＤＣＲがそれぞれ４３％及び９３％であることを実証した（図１４参照）。ＣＰＩプログレッサー分析は、ＯＲＲ及びＤＣＲがそれぞれ２２％及び５０％であることを実証し（図２０参照）、これはビアジェンプマツセル−Ｌ及びニボルマブでの治療が、応答すると予想されない患者の活動を意外にも回復させることを実証する。そのため、ＨＳ−１１０とニボルマブの組み合わせは忍容性が高く、単剤チェックポイント阻害剤と比較してさらなる毒性はなかった。陽性適応免疫応答（最低の状態と比べて少なくとも２倍の増加として定義される）は、試験した患者の８６％で生じた（２１人中１８人）。

完了者集団（ビアジェンプマツセル−Ｌでの試験治療を完了した患者、１８（±２）回の投薬）と非完了者集団（ビアジェンプマツセル−Ｌでの試験治療を完了していない患者、１６回未満の投薬）を比較した場合により高い全生存率を実証するタイムオンセラピー（Ｔｉｍｅ−Ｏｎ−Ｔｈｅｒａｐｙ）全生存率の増加を示し（図７参照）、標的病変応答の持続性を図１１に示す（また、図５、図１１、図１３、及び図２３参照）。さらに、低いＴＩＬ〜高いＴＩＬは、臨床応答と関連していることが示された。具体的には、ＣＤ８^＋Ｔ細胞のレベルはビアジェンプマツセル−Ｌとニボルマブの併用療法の導入後に劇的に増加し、ＲＥＣＩＳＴ １．１に基づくＰＲの臨床応答と関連付けられる。

末梢血を、ＨＳ−１１０治療の１、４、７、１３週目及び終了時に酵素結合免疫スポット（ＥＬＩＳＰＯＴ）アッセイを用いて免疫学的応答について分析した。全細胞ＨＳ−１１０ワクチン溶解物で患者のＰＢＭＣを刺激することから生成されるＥＬＩＳＰＯＴスポットは、治療中の患者の全生存率と有意に相関する（ｐ＝０．０６）（図１６参照）。

治療企図（Ｉｎｔｅｎｔｉｏｎ ｔｏ Ｔｒｅａｔ）及びプロトコルに基づく（Ｐｅｒ Ｐｒｏｔｏｃｏｌ）集団の分析
ビアジェンプマツセル−Ｌ及びニボルマブによる治療後の適応免疫応答と臨床応答の相関を調べるために、進行したかつ以前に治療された肺腺癌患者にＨＳ−１１０を６回以上（毎週）投与し、隔週でニボルマブ（抗ＰＤ−１）を３回以上投与した。図４は、チェックポイント阻害剤（ＣＰＩ）未治療であったＩＴＴ患者集団におけるＲＥＣＩＳＴ １．１による最良の標的病変応答を示し、図５は、ＣＰＩ未治療のプロトコルに基づく集団における標的病変応答の持続性を示す。同様に、図２０は、ＲＥＣＩＳＴ １．１による最良の標的病変応答を示し、図２１は、ＣＰＩプログレッサーＩＴＴ患者集団についての標的病変応答の持続性を示す折れ線グラフである。図８は、ＣＰＩ未治療集団の高ＴＩＬ（１０％超；ｎ＝１４）患者及び低ＴＩＬ（１０％以下；ｎ＝１４）患者についてベースラインでの腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）レベルによる全生存率を示す生存プロットである。図８において、「ＨＲ」は、ハザード比を指し、１．０は他のグループと比較して（つまり、高ＴＩＬグループと比較した低ＴＩＬグループ）１００％の確率で死亡することを示す。図８の結果は、０．０４３の有意なｐ値を有し高ＴＩＬ患者グループと比較して低ＴＩＬ患者グループについて２３％の確率の死亡を実証する。

図６は、１４．４ヶ月を超えてまだ中央値に達していないＩＴＴ集団の全生存期間（ＯＳ）曲線を示す。この患者の集団だけが、化学療法である１つ前の治療単位の中央値を有した。そのため、ＩＴＴ集団は、ＣＰＩ未治療であり、ニボルマブのみで治療した場合に、全生存期間の中央値は１２．２ヶ月であった。

図９Ａ及び図９Ｂは、ＣＰＩ未治療ＩＴＴ集団における無増悪生存期間（ＰＦＳ）を示すグラフ（図９Ａ）、及びＣＰＩ未治療ＩＴＴ集団におけるベースラインでのＴＩＬレベルによる無増悪生存期間を示すグラフ（図９Ｂ）である。図９Ａでは、ＰＦＳの中央値（ｍＰＦＳ）は５８日であり、１年ＰＦＳは２３．９％であった。図９Ｂでは、低ＴＩＬの１年ＰＦＳは３１．７％であり、高ＴＩＬの１年ＰＦＳは１０．６％であった。同様に、図１８は、６ヶ月後又はそれ以降に疾患の進行を伴う以前にＣＰＩ療法を受けた患者のＩＴＴ患者集団におけるＰＦＳを示すプロットであり、ここでｍＰＦＳは６７日である。

図１７Ａ及び図１７Ｂは、ベースラインでのＰＤ−Ｌ１レベルによる、無増悪生存期間（ＰＦＳ）を経験したＣＰＩ未治療患者のパーセンテージ（図１７Ａ）、又は全生存期間（ＯＳ）（図１７Ｂ）を示すグラフである。ＰＤ−Ｌ１＋（１％以上）の患者の１年ＰＦＳは３０％であった。ＯＲＲに関して、ベースラインでのＰＤ−Ｌ１状態に基づくＲＥＳＩＳＴ １．１による標的病変応答に差がないことは驚くべきことである（図１２）。

図１２〜１３は、ＣＰＩ未治療であったプロトコルに基づく集団、又はＣＰＩプログレッサー集団におけるＰＤ−Ｌ１状態に基づく最良の標的病変応答、及び標的病変応答の永続性を示す（図２４、図２５参照）。同様に、図１０Ａ、１０Ｂ、及び図１１は、ＣＰＩ未治療であったプロトコルに基づく集団についての腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）状態に基づく最良の標的病変の応答及び永続性を示す。図２２は、チェックポイント阻害剤（ＣＰＩ）プログレッサー集団におけるＴＩＬ状態に基づく最良の標的病変応答を示す。図２３は、ＣＰＩプログレッサー集団におけるＴＩＬレベルに基づく標的病変応答の永続性を示す。

本明細書に開示されるデータは、コホートＡについて、１４人の患者（３２．６％）がＴＩＬ高であり、１３人（３０．２％）がＴＩＬ低であり、１６人（３７．２％）がＴＩＬ不明であったことを示す。コホートＡにおいて、ＯＲＲ、病勢コントロール率（ＤＣＲ）、無増悪生存期間の中央値（ＰＦＳ）、及び１年ＰＦＳは、それぞれ１８．６％、４８．８％、１．９ヶ月及び２３．９％であり、経過観察期間の中央値は４３２日であった。患者がＨＳ−１１０とニボルマブの両方を投与されたコホートＢでは、ＯＲＲ、ＤＣＲ、及びＰＦＳはそれぞれ２２％、５０％、及び２．２ヶ月であり、経過観察期間の中央値は４３日であった。全生存期間の中央値（ｍＯＳ）はどちらのコホートでも達成されなかった。コホートＡでは、ベースラインでのＴＩＬ低は、ＴＩＬ高と比較してｍＯＳの増加と関連付けられた（未達対１３．８ヶ月、ハザード比［ＨＲ］０．２３、９５％のＣｌ ０．０６８〜０．８１、ｐ＝０．０４）。コホートＡにおけるＰＤ−Ｌ１状態によるｍＯＳの違いはなかった（ｐ＝０．８２）。コホートＡとＢの両方からの合計５７人（９３％）の患者が少なくとも１つの有害事象（ＡＥ）を経験し、そのうち３９人（６４％）がグレード１又は２であった。最も一般的なＡＥは、疲労（３１％）、咳及び下痢（それぞれ１９．７％）であった。肺塞栓症及び腫瘍進行によって引き起こされるグレード５のＡＥが２つ（３．３％）あり、どちらも治療に関連するとは見なされなかった。

本明細書に開示する結果は、ニボルマブ（抗ＰＤ−１）だけでは、ＰＤ−Ｌ１^陰性又はＰＤ−Ｌ１^低の患者において効果的でないことを示す。しかしながら、併用療法（ＨＳ−１１０＋ニボルマブ）は、ＰＤ−Ｌ１の状態に関係なく同等に効果的である。そのため、この組み合わせは、ニボルマブの有効性を、ベースライン時のＰＤ−Ｌ１_陰性又はＰＤ−Ｌ１_低の癌患者、及びＴＩＬ低患者に拡大する。

要約すると、ビアゲンプマツセル−Ｌ（ＨＳ−１１０）とニボルマブ（抗ＰＤ−１）の組み合わせは、安全かつ効果的な治療であった。ＥＬＩＳＰＯＴによる適応免疫応答は、ＨＳ−１１０治療を完了した患者での臨床的有益性と、治療企図集団での全生存率の改善と相関した。ビアジェンプマツセル−Ｌによる治療の研究の完了は、非完了者と比較した場合に、全生存期間を有意に改善する（ｐ＝０．０４）。同様に、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の低い患者は、ニボルマブにあまり応答しない。しかしながら、併用療法（ＨＳ−１１０＋ニボルマブ）はＴＩＬの状態に関係なく同等に有効である（例えば、ＴＩＬ_低及びＴＩＬ_高で同様の効果があるため、この組み合わせは、ＴＩＬ_高患者を上回ってＯＳが大幅に向上するまで、ニボルマブの有効性をＴＩＬ_低癌患者に拡大する）。さらに、ビアジェンプマツセル−Ｌとニボルマブの併用治療は、１０週目で腫瘍組織へのＣＤ８^＋Ｔ細胞の劇的な浸潤をもたらし、腫瘍縮小の臨床応答と関連付けられる（ＲＥＣＩＳＴ １．１に基づく部分奏功）。

したがって、限定されないが、実施例１及び２は、進行した非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）患者におけるビアジェンプマツセル−Ｌ（ＨＳ−１１０）とニボルマブの臨床的成功を示す。以前に治療されたＮＳＣＬＣ患者に、毒性が許容できなくなるか又は腫瘍が進行するまで、最初の１８週間に１×１０^７個のＨＳ−１１０細胞を毎週投与し、３ｍｇ／ｋｇ又は２４０ｍｇのニボルマブを２週間ごとに投与した。組織を、ＰＤ−Ｌ１発現（１％以上又は１％未満）及び腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）についてベースラインで試験した。ＴＩＬ高は、腫瘍間質中の１０％超のＣＤ８＋リンパ球によって定義された。コホートＡの患者は以前にＩＣＢを受けたことがなく、コホートＢの患者は受けたことがある。主な目的は、安全性及び奏効率（ＯＲＲ）であった。コホートＡには４３人の患者（４０人のＡＤ及び３人の扁平上皮癌［ＳＣＣ］）が登録し、コホートＢには１８人の患者（１５人のＡＤ及び３人のＳＣＣ）が登録した。コホートＡでは、１４人の患者（３２．６％）がＴＩＬ高で、１３人（３０．２％）がＴＩＬ低で、１６人（３７．２％）がＴＩＬ不明であった。ＯＲＲ、病勢コントロール率（ＤＣＲ）、無増悪生存期間（ＰＦＳ）の中央値及び１年ＰＦＳは、コホートＡではそれぞれ１８．６％、４８．８％、１．９ヶ月及び２３．９％であり、経過観察期間の中央値は４３２日であった。ＯＲＲ、ＤＣＲ、及びＰＦＳは、コホートＢではそれぞれ２２％、５０％及び２．２ヶ月であり、経過観察期間の中央値は４３日であった。全生存期間の中央値（ｍＯＳ）はどちらのコホートでも達成されなかった。コホートＡでは、ベースラインでのＴＩＬ低は、ＴＩＬ高と比較してｍＯＳの増加と関連付けられた（未到達対１３．８ヶ月、ハザード比［ＨＲ］０．２３、９５％Ｃｌ ０．０６８〜０．８１、ｐ＝０．０４）。コホートＡにおいてＰＤ−Ｌ１状態によるｍＯＳの違いはなかった（ｐ＝０．８２）。５７人（９３％）の患者は少なくとも１つの有害事象（ＡＥ）を経験し、そのうちの３９人（６４％）はグレード１又は２であった。最も一般的なＡＥは疲労（３１％）、咳及び下痢（それぞれ１９．７％）であった。肺塞栓症と腫瘍の進行によって引き起こされるグレード５のＡＥが２つ（３．３％）あり、どちらも治療に関連するとは見なされなかった。

配列
完全長ヒトｇｐ９６（ＧＥＮＢＡＮＫ登録番号Ｘ１５１８７）のヌクレオチド配列：
atgagggccctgtgggtgctgggcctctgctgcgtcctgctgaccttcgggtcggtcagagctgacgatgaagttgatgtggatggtacagtagaagaggatctgggtaaaagtagagaaggatcaaggacggatgatgaagtagtacagagagaggaagaagctattcagttggatggattaaatgcatcacaaataagagaacttagagagaagtcggaaaagtttgccttccaagccgaagttaacagaatgatgaaacttatcatcaattcattgtataaaaataaagagattttcctgagagaactgatttcaaatgcttctgatgctttagataagataaggctaatatcactgactgatgaaaatgctctttctggaaatgaggaactaacagtcaaaattaagtgtgataaggagaagaacctgctgcatgtcacagacaccggtgtaggaatgaccagagaagagttggttaaaaaccttggtaccatagccaaatctgggacaagcgagtttttaaacaaaatgactgaagcacaggaagatggccagtcaacttctgaattgattggccagtttggtgtcggtttctattccgccttccttgtagcagataaggttattgtcacttcaaaacacaacaacgatacccagcacatctgggagtctgactccaatgaattttctgtaattgctgacccaagaggaaacactctaggacggggaacgacaattacccttgtcttaaaagaagaagcatctgattaccttgaattggatacaattaaaaatctcgtcaaaaaatattcacagttcataaactttcctatttatgtatggagcagcaagactgaaactgttgaggagcccatggaggaagaagaagcagccaaagaagagaaagaagaatctgatgatgaagctgcagtagaggaagaagaagaagaaaagaaaccaaagactaaaaaagttgaaaaaactgtctgggactgggaacttatgaatgatatcaaaccaatatggcagagaccatcaaaagaagtagaagaagatgaatacaaagctttctacaaatcattttcaaaggaaagtgatgaccccatggcttatattcactttactgctgaaggggaagttaccttcaaatcaattttatttgtacccacatctgctccacgtggtctgtttgacgaatatggatctaaaaagagcgattacattaagctctatgtgcgccgtgtattcatcacagacgacttccatgatatgatgcctaaatacctcaattttgtcaagggtgtggtggactcagatgatctccccttgaatgtttcccgcgagactcttcagcaacataaactgcttaaggtgattaggaagaagcttgttcgtaaaacgctggacatgatcaagaagattgctgatgataaatacaatgatactttttggaaagaatttggtaccaacatcaagcttggtgtgattgaagaccactcgaatcgaacacgtcttgctaaacttcttaggttccagtcttctcatcatccaactgacattactagcctagaccagtatgtggaaagaatgaaggaaaaacaagacaaaatctacttcatggctgggtccagcagaaaagaggctgaatcttctccatttgttgagcgacttctgaaaaagggctatgaagttatttacctcacagaacctgtggatgaatactgtattcaggcccttcccgaatttgatgggaagaggttccagaatgttgccaaggaaggagtgaagttcgatgaaagtgagaaaactaaggagagtcgtgaagcagttgagaaagaatttgagcctctgctgaattggatgaaagataaagcccttaaggacaagattgaaaaggctgtggtgtctcagcgcctgacagaatctccgtgtgctttggtggccagccagtacggatggtctggcaacatggagagaatcatgaaagcacaagcgtaccaaacgggcaaggacatctctacaaattactatgcgagtcagaagaaaacatttgaaattaatcccagacacccgctgatcagagacatgcttcgacgaattaaggaagatgaagatgataaaacagttttggatcttgctgtggttttgtttgaaacagcaacgcttcggtcagggtatcttttaccagacactaaagcatatggagatagaatagaaagaatgcttcgcctcagtttgaacattgaccctgatgcaaaggtggaagaagagcccgaagaagaacctgaagagacagcagaagacacaacagaagacacagagcaagacgaagatgaagaaatggatgtgggaacagatgaagaagaagaaacagcaaaggaatctacagctgaaaaagatgaattgtaa（配列番号１）。

ＧＥＮＢＡＮＫ登録番号ＣＡＡ３３２６１のヒトｇｐ９６遺伝子のアミノ酸配列：
MRALWVLGLCCVLLTFGSVRADDEVDVDGTVEEDLGKSREGSRTDDEVVQREEEAIQLDGLNASQIRELREKSEKFAFQAEVNRMMKLIINSLYKNKEIFLRELISNASDALDKIRLISLTDENALSGNEELTVKIKCDKEKNLLHVTDTGVGMTREELVKNLGTIAKSGTSEFLNKMTEAQEDGQSTSELIGQFGVGFYSAFLVADKVIVTSKHNNDTQHIWESDSNEFSVIADPRGNTLGRGTTITLVLKEEASDYLELDTIKNLVKKYSQFINFPIYVWSSKTETVEEPMEEEEAAKEEKEESDDEAAVEEEEEEKKPKTKKVEKTVWDWELMNDIKPIWQRPSKEVEEDEYKAFYKSFSKESDDPMAYIHFTAEGEVTFKSILFVPTSAPRGLFDEYGSKKSDYIKLYVRRVFITDDFHDMMPKYLNFVKGVVDSDDLPLNVSRETLQQHKLLKVIRKKLVRKTLDMIKKIADDKYNDTFWKEFGTNIKLGVIEDHSNRTRLAKLLRFQSSHHPTDITSLDQYVERMKEKQDKIYFMAGSSRKEAESSPFVERLLKKGYEVIYLTEPVDEYCIQALPEFDGKRFQNVAKEGVKFDESEKTKESREAVEKEFEPLLNWMKDKALKDKIEKAVVSQRLTESPCALVASQYGWSGNMERIMKAQAYQTGKDISTNYYASQKKTFEINPRHPLIRDMLRRIKEDEDDKTVLDLAVVLFETATLRSGYLLPDTKAYGDRIERMLRLSLNIDPDAKVEEEPEEEPEETAEDTTEDTEQDEDEEMDVGTDEEEETAKESTAEKDEL（配列番号２）。

ｇｐ９６の保持配列：ＫＤＥＬ（配列番号３）

ＫＤＥＬ配列が除去されたヒトｇｐ９６遺伝子のアミノ酸配列：
MRALWVLGLCCVLLTFGSVRADDEVDVDGTVEEDLGKSREGSRTDDEVVQREEEAIQLDGLNASQIRELREKSEKFAFQAEVNRMMKLIINSLYKNKEIFLRELISNASDALDKIRLISLTDENALSGNEELTVKIKCDKEKNLLHVTDTGVGMTREELVKNLGTIAKSGTSEFLNKMTEAQEDGQSTSELIGQFGVGFYSAFLVADKVIVTSKHNNDTQHIWESDSNEFSVIADPRGNTLGRGTTITLVLKEEASDYLELDTIKNLVKKYSQFINFPIYVWSSKTETVEEPMEEEEAAKEEKEESDDEAAVEEEEEEKKPKTKKVEKTVWDWELMNDIKPIWQRPSKEVEEDEYKAFYKSFSKESDDPMAYIHFTAEGEVTFKSILFVPTSAPRGLFDEYGSKKSDYIKLYVRRVFITDDFHDMMPKYLNFVKGVVDSDDLPLNVSRETLQQHKLLKVIRKKLVRKTLDMIKKIADDKYNDTFWKEFGTNIKLGVIEDHSNRTRLAKLLRFQSSHHPTDITSLDQYVERMKEKQDKIYFMAGSSRKEAESSPFVERLLKKGYEVIYLTEPVDEYCIQALPEFDGKRFQNVAKEGVKFDESEKTKESREAVEKEFEPLLNWMKDKALKDKIEKAVVSQRLTESPCALVASQYGWSGNMERIMKAQAYQTGKDISTNYYASQKKTFEINPRHPLIRDMLRRIKEDEDDKTVLDLAVVLFETATLRSGYLLPDTKAYGDRIERMLRLSLNIDPDAKVEEEPEEEPEETAEDTTEDTEQDEDEEMDVGTDEEEETAKESTAE（配列番号４）。

ヒンジ領域のないＦｃドメインのヒト配列のアミノ酸配列：
APEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLSGKEYKCKVSSKGLPSSIEKTISNATGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSSWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK（配列番号５）。

他の実施形態
本開示はその詳細な説明と併せて説明されているが、前述の説明は、添付の特許請求の範囲によって定義される本開示の範囲を例示するためのものであり、制限するものではないことを理解されたい。他の態様、利点、及び変更は、以下の特許請求の範囲内にある。

参照による組み込み
本明細書で参照される全ての特許及び刊行物は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。本明細書で論じられる出版物は、本出願の出願日より前の開示にのみ提供される。本明細書中のいかなるものも、本発明が先行発明によりそのような刊行物に先行する権利を与えられないことの承認として解釈されるべきではない。本明細書で使用されるように、全ての見出しは単に整理のためのものであり、いかなる方法でも開示を制限することを意図するものではない。

Claims (64)

1. 肺癌を治療する方法であって、それを必要とする対象に（ａ）分泌性ワクチンタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む発現ベクターを保持する細胞及び（ｂ）免疫チェックポイント阻害剤を投与することを含む方法。
2. 前記免疫チェックポイント阻害剤が、免疫チェックポイント遺伝子を阻害する、請求項１に記載の方法。
3. 前記免疫チェックポイント阻害剤が、抗体又はその抗原結合断片を含む、請求項１又は２に記載の方法。
4. 前記免疫チェックポイント遺伝子が、プログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ−１）、プログラム細胞死リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）、プログラム細胞死リガンド１（ＰＤ−Ｌ２）、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリー、メンバー４（ＴＮＦＲＳＦ４）、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー２５（ＴＮＦＲＳＦ２５）、死受容体３（ＤＲ３）、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー９（ＴＮＦＲＳＦ９）、糖質コルチコイド誘発ＴＮＦＲ関連タンパク質（ＧＩＴＲ）、細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４（ＣＴＬＡ−４）及びリンパ球活性化遺伝子３（ＬＡＧ−３）から選択される、請求項２に記載の方法。
5. 前記免疫チェックポイント遺伝子が、ＰＤ−１又はＰＤ−Ｌ１である、請求項２に記載の方法。
6. 前記免疫チェックポイント阻害剤が、抗ＰＤ−１又は抗ＰＤ−Ｌ１抗体又はその抗原結合断片である、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
7. 前記抗ＰＤ−１抗体又はその抗原結合断片が、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、ピジリズマブ、ＢＭＳ−９３６５５９、アテゾリズマブ、アベルマブから選択され、かつ前記ＰＤ−Ｌ１抗体又はその抗原結合断片が、デュルバルマブである、請求項６に記載の方法。
8. 前記抗ＰＤ−１抗体又はその抗原結合断片が、ニボルマブである、請求項６に記載の方法。
9. 前記肺癌が、小細胞肺癌である、請求項１に記載の方法。
10. 前記肺癌が、非小細胞肺癌である、請求項１又は９に記載の方法。
11. 前記非小細胞肺癌が、腺癌である、請求項１、９又は１０のいずれか一項に記載の方法。
12. 前記非小細胞肺癌が、扁平上皮癌又は大細胞肺癌である、請求項１、９又は１０のいずれか一項に記載の方法。
13. 前記方法が、肺癌の再発を低減する、請求項１に記載の方法。
14. 前記方法が、前記対象における腫瘍抗原特異的Ｔ細胞の活性化又は増殖を高める、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の方法。
15. 前記方法が、前記対象におけるＣＤ８＋Ｔ細胞の活性化又は数を増強する、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の方法。
16. 前記方法が、前記対象におけるＩＦＮ−γ分泌ＣＤ８＋Ｔ細胞の活性化又は数を増強する、請求項１４に記載の方法。
17. 前記対象が、低用量の細胞で治療される、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の方法。
18. 前記対象が、約１００，０００細胞、約１５０，０００細胞、約２００，０００細胞、約２５０，０００細胞、約３００，０００細胞、約３５０，０００細胞、約４００，０００細胞、約４５０，０００細胞、約５００，０００細胞、約５５０，０００細胞、約６００，０００細胞、約６５０，０００細胞、約７００，０００細胞、約７５０，０００細胞、約８００，０００細胞、約８５０，０００細胞、約９００，０００細胞、約９５０，０００細胞、又は約１，０００，０００細胞、又は約１，５００，０００細胞、又は約２，０００，０００細胞、又は約２，５００，０００細胞、又は約３，０００，０００細胞、又は約３，５００，０００細胞、又は約４、０００、０００細胞、又は約４、５００、０００細胞、又は約５、０００、０００細胞、又は約５、５００、０００細胞、又は約６，０００，０００細胞、又は約６，５００，０００細胞、又は約７，０００，０００細胞、又は約７，５００，０００細胞、又は約８，０００，０００細胞、又は約８，５００，０００細胞、又は約９，０００，０００細胞、又は約９，５００，０００細胞、又は約１０，０００，０００細胞を投与される、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の方法。
19. 前記対象が、投与後の免疫応答で強い増加を示す、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の方法。
20. 前記免疫応答での強い増加が、ＣＤ８＋Ｔ細胞の活性化又は増殖におけるベースラインを超える少なくとも２倍の増加として定義される、請求項１８に記載の方法。
21. 前記ＣＤ８＋Ｔ細胞が、ＩＦＮ−γを分泌する、請求項１８又は１９に記載の方法。
22. 前記方法が、免疫応答で強い増加を示さない対象と比較して前記対象における肺癌再発の低減においてより効果的である、請求項１９〜２１のいずれか一項に記載の方法。
23. 前記対象が、投与前に少数の腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）を示す、請求項１〜２２のいずれか一項に記載の方法。
24. 前記方法が、免疫チェックポイント阻害剤のみによる治療と比較して前記対象における癌の再発を低減するのにより効果的である、請求項２３に記載の方法。
25. 前記ベクターが、哺乳類発現ベクターである、請求項１〜２４のいずれか一項に記載の方法。
26. 前記ワクチンタンパク質が、場合によりｇｐ９６ ＫＤＥＬ（配列番号３）配列を欠く分泌性ｇｐ９６−Ｉｇ融合タンパク質である、請求項１〜２５のいずれか一項に記載の方法。
27. 前記ｇｐ９６−Ｉｇ融合タンパク質中のＩｇタグが、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＡ、又はＩｇＥのＦｃ領域を含む、請求項２６に記載の方法。
28. 前記発現ベクターが、ＤＮＡを含む、請求項１〜２７のいずれか一項に記載の方法。
29. 前記発現ベクターが、ＲＮＡを含む、請求項１〜２８のいずれか一項に記載の方法。
30. 前記細胞が、照射された又は生きている弱毒化ヒト腫瘍細胞である、請求項１〜２９のいずれか一項に記載の方法。
31. 前記ヒト腫瘍細胞が、樹立されたＮＳＣＬＣ、膀胱癌、黒色腫、卵巣癌、腎細胞癌、前立腺癌、肉腫、乳癌、扁平上皮癌、頭頸部癌、肝細胞癌、膵臓癌、又は結腸癌の細胞株由来の細胞である、請求項３０に記載の方法。
32. 前記ヒト腫瘍細胞株が、ＮＳＣＬＣ細胞株である、請求項３０又は３１に記載の方法。
33. （ａ）前記分泌性ワクチンタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む発現ベクターを保持する細胞を投与する前に、かつ（ｂ）前記免疫チェックポイント阻害剤を投与する前に、前記対象が、治療を受けた後に疾患の進行を経験している、請求項１〜３２のいずれか一項に記載の方法
34. 前記療法が、免疫チェックポイント阻害剤療法である、請求項３３に記載の方法。
35. 前記療法が、化学療法を含む、請求項３３又は３４に記載の方法。
36. 前記対象が、免疫チェックポイント阻害剤療法に対し不十分な応答者である、請求項３３〜３５のいずれか一項に記載の方法。
37. 前記対象が、前記免疫チェックポイント阻害剤療法に失敗している、請求項３３〜３６のいずれか一項に記載の方法。
38. 前記対象における疾患が、前記免疫チェックポイント阻害剤療法を施された場合でさえ進行している、請求項３３〜３７のいずれか一項に記載の方法。
39. ＮＳＣＬＣの患者を治療する方法であって、
    ａ）前記患者に毎週用量のＨＳ−１１０を少なくとも６週間投与すること、及び
    ｂ）前記患者に隔週用量の抗ＰＤ−１抗体を少なくとも６週間投与すること、
    を含む、方法。
40. ＰＤ−Ｌ１^陰性又はＰＤ−Ｌ１^低状態のＮＳＣＬＣの患者を治療する方法であって、
    ａ）前記患者に毎週用量のＨＳ−１１０を少なくとも１６週間投与すること、及び
    ｂ）前記患者に隔週用量の抗ＰＤ−１抗体を少なくとも１６週間投与すること、
    を含む、方法。
41. ＰＤ−Ｌ１^陰性又はＰＤ−Ｌ１^低状態のＮＳＣＬＣの患者を治療する方法であって、
    ａ）前記患者に毎週用量のＨＳ−１１０を少なくとも６週間投与すること、及び
    ｂ）前記患者に隔週用量の抗ＰＤ−１抗体を少なくとも６週間投与すること、
    を含む、方法。
42. ＰＤ−Ｌ１^陰性又はＰＤ−Ｌ１^低状態であるＮＳＣＬＣの患者において抗ＰＤ−１療法の有効性を高める方法であって、
    ａ）前記患者に毎週用量のＨＳ−１１０を少なくとも１６週間投与すること、及び
    ｂ）前記患者に隔週用量の抗ＰＤ−１抗体を少なくとも１６週間投与すること、
    を含む、方法。
43. ＰＤ−Ｌ１^陰性又はＰＤ−Ｌ１^低状態であるＮＳＣＬＣの患者において抗ＰＤ−１療法の有効性を高める方法であって、
    ａ）前記患者に毎週用量のＨＳ−１１０を少なくとも６週間投与すること、及び
    ｂ）前記患者に隔週用量の抗ＰＤ−１抗体を少なくとも６週間投与すること、
    を含む、方法。
44. 低い腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）状態（ＴＩＬ^低）のＮＳＣＬＣの患者において抗ＰＤ−１療法の有効性を高める方法であって、
    ａ）前記患者に毎週用量のＨＳ−１１０を少なくとも１６週間投与すること、及び
    ｂ）前記患者に隔週用量の抗ＰＤ−１抗体を少なくとも１６週間投与すること、
    を含む、方法。
45. 低い腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）状態（ＴＩＬ^低）のＮＳＣＬＣの患者において抗ＰＤ−１療法の有効性を高める方法であって、
    ａ）前記患者に毎週用量のＨＳ−１１０を少なくとも６週間投与すること、及び
    ｂ）前記患者に隔週用量の抗ＰＤ−１抗体を少なくとも６週間投与すること、
    を含む、方法。
46. 前記ＨＳ−１１０の用量が、約１×１０^７個の細胞である、請求項３９〜４５のいずれかに記載の方法。
47. 前記抗ＰＤ−１抗体の前記用量が、２４０ｍｇである、請求項３９〜４６のいずれかに記載の方法。
48. 前記抗ＰＤ−１抗体が、ニボルマブ及びペンブロリズマブから選択される、請求項３９〜４７のいずれかに記載の方法。
49. 前記患者が、ある療法を受けた後に疾患の進行を経験している、請求項１〜４８のいずれか一項に記載の方法。
50. 前記療法が、免疫チェックポイント阻害剤療法である、請求項４９に記載の方法。
51. 前記療法が、化学療法を含む、請求項４９又は５０に記載の方法。
52. 前記患者が、前記免疫チェックポイント阻害剤療法に対し不十分な応答者である、請求項４９〜５１のいずれか一項に記載の方法。
53. 前記患者が、免疫チェックポイント阻害剤療法に失敗している、請求項４９〜５２のいずれか一項に記載の方法。
54. 前記患者の疾患が、前記免疫チェックポイント阻害剤療法を施された場合でさえ進行している、請求項４９〜５３のいずれか一項に記載の方法。
55. 前記方法が、肺癌再発を低減する、請求項３９〜５４のいずれか一項に記載の方法。
56. 前記方法が、前記対象における腫瘍抗原特異的Ｔ細胞の活性化又は増殖を高める、請求項３９〜５５のいずれか一項に記載の方法。
57. 前記方法が、前記対象におけるＣＤ８＋Ｔ細胞の活性化又は数を増強する、請求項３９〜５６のいずれか一項に記載の方法。
58. 前記方法が、前記対象におけるＩＦＮ−γ分泌ＣＤ８＋Ｔ細胞の活性化又は数を増強する、請求項５７に記載の方法。
59. 前記対象が、投与後の免疫応答で強い増加を示す、請求項３９〜５８のいずれか一項に記載の方法。
60. 前記免疫応答での強い増加が、ＣＤ８＋Ｔ細胞の活性化又は増殖におけるベースラインを超える少なくとも２倍の増加として定義される、請求項５９に記載の方法。
61. 前記ＣＤ８＋Ｔ細胞が、ＩＦＮ−γを分泌する、請求項６０に記載の方法。
62. 前記方法が、免疫応答の強い増加を示さない対象と比較して前記対象における肺癌の再発を低減するのにより効果的である、請求項３９〜６１のいずれか一項に記載の方法。
63. 前記対象が、投与前に少数の腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）を示す、請求項３９〜６２のいずれか一項に記載の方法。
64. 前記方法が、前記免疫チェックポイント阻害剤単独での治療と比較して前記対象における癌の再発を低減するのにより効果的である、請求項３９〜６３のいずれか一項に記載の方法。

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