KR20200091761A

KR20200091761A - 포도씨 추출물 나노에멀젼을 포함하는 클렌저 및 이의 제조방법

Info

Publication number: KR20200091761A
Application number: KR1020190008954A
Authority: KR
Inventors: 강선철
Original assignee: 대구대학교 산학협력단; 주식회사 레드99
Priority date: 2019-01-23
Filing date: 2019-01-23
Publication date: 2020-07-31
Also published as: KR102183163B1

Abstract

본 발명은 포도씨 추출물 나노에멀젼을 포함하는 클렌저 및 이의 제조방법에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 포도씨로부터 항균특성, 항산화특성을 갖는 유효성분의 추출을 극대화하기 위한 추출용매를 최적화하여 포도씨 추출물을 수득하고, 수득된 포도씨 추출물과 첨가제를 이용하여 상온에서 6개월 이상 보관 시에도 분산안정성, 항균활성, 항산화활성이 우수하도록 제조된 포도씨 추출물 나노에멀젼을 포함하며, 보습력과 피부 안정성이 강화된 클렌저 및 이의 제조방법에 관한 것이다.
본 발명의 포도씨 추출물 나노에멀젼을 포함하는 클렌저의 제조방법은 추출용매를 이용하여 포도씨 추출물을 수득하는 포도씨 추출물 수득단계(S100);와 포도씨 추출물을 포함하여 나노 에멀젼을 제조하는 나노 에멀젼 제조단계(S200);와 증류수, 유화제, 포도씨 추출물 나노에멀젼, 거품안정제, 글리세린, 구연산, 에탄올, 방부제, 향료를 혼합하는 세정 조성물 혼합단계(S300);를 포함한다. 상기와 같이 포도씨 나노에멀젼을 첨가하여 제조된 클렌저는 보습력과 피부안전성이 우수한 효과가 있다.

Description

포도씨 추출물 나노에멀젼을 포함하는 클렌저 및 이의 제조방법{Cleanser including Grape Seeds Extract Nano Emulsion and Manufacturing Method}

본 발명은 포도씨 추출물 나노에멀젼을 포함하는 클렌저 및 이의 제조방법에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 포도씨로부터 항균특성, 항산화특성을 갖는 유효성분의 추출을 극대화하기 위한 추출용매를 최적화하여 포도씨 추출물을 수득하고, 수득된 포도씨 추출물과 첨가제를 이용하여 상온에서 6개월 이상 보관 시에도 분산안정성, 항균활성, 항산화활성이 우수하도록 제조된 포도씨 추출물 나노에멀젼을 포함하며, 보습력과 피부 안정성이 강화된 클렌저 및 이의 제조방법에 관한 것이다.

포도는 당, 유기산 및 독특한 향기를 함유하고 있을 뿐만 아니라 안토시아닌 색소, 페놀산, 플라보노이드(flavonols flavan-3-ols 및 flavanonols) 및 레즈베라트롤(resveratrol) 등의 항암, 항고혈압 및 항산화성 폴리페놀화합물을 함유하고 있어 포도 주스, 포도주 및 포도식초 등의 여러 가공식품으로 꾸준히 소비되고 있다.

한편, 포도씨는 포도 중량의 약 3~5%를 차지하며 지방(9~12%), 단백질(8~12%) 및 헤미셀룰로오스(hemicellulose)와 같은 식이성섬유소(약 45%)를 다량 함유하고 있을 뿐만 아니라 Ca, Mg 및 P과 같은 무기질의 함량이 높으며, 리놀레산과 같은 불포화지방산을 다량 함유하고 있을 뿐 아니라 식물성 스테롤, 토코페롤 및 항암, 항고혈압 및 항산화성 카테킨류를 다량 함유하고 있는 것으로 알려져 있다.

하지만, 포도씨는 많은 이점에도 불구하고 대부분 활용되지 못하고 폐기처분되고 있는 것이 실상이다.

이에, 종래 포도씨를 활용하고자 하는 목적으로, 국내등록특허 제 10-0341933호에는 흑포도 찌꺼기인 흑포도씨, 껍질, 줄기를 발효시켜 발효추출물을 제조하는 방법이 제시하고 있으며, 국내등록특허 제 10-1787406호에서는 브로멜라인, 부처브룸, 포도씨, 아르니카 및 레몬밤을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물을 제시하고 있고, 국내등록특허 제 10-1086504호에서는 포도씨 오일을 포함하는 혈행개선 및 혈관확장 기능을 가지는 피부 도포용 조성물을 제시하고 있다.

본 발명자는 폐기처리되는 포도씨를 활용하고, 포도씨가 갖는 유효성분을 다량으로 포함하며, 상온에서 6개월 이상 보관 시에도 분산안정성, 항균활성, 항산화활성이 우수한 포도씨 추출물 나노 에멀젼을 개발하고, 이를 피부 세정 조성물에 적용하고자하는 연구의 일환으로, 포도씨가 갖는 유효성분의 추출을 극대화하기 위한 추출 용매를 도출하고, 이를 이용하여 수득된 포도씨 추출물과 첨가제를 배합하여 상온에서 6개월 이상 보관시에서 분산안정성, 항균활성, 항산화활성이 우수한 나노 에멀젼을 제조하였으며, 이를 이용하여 보습력과 피부안전성이 강화된 피부 클렌저를 제조하여 본 발명에 이르게 되었다.

국내등록특허 제 10-0341933호 국내등록특허 제 10-1787406호 국내등록특허 제 10-1086504호

상기와 같은 문제점을 해결하기 위한 본 발명의 목적은 포도씨로부터 항균특성, 항산화특성을 갖는 유효성분의 추출을 극대화하기 위한 추출용매를 최적화하여 포도씨 추출물을 수득하고, 수득된 포도씨 추출물과 첨가제를 이용하여 상온에서 6개월 이상 보관 시에도 분산안정성, 항균활성, 항산화활성이 우수하도록 제조된 포도씨 추출물 나노에멀젼을 포함하며, 보습력과 피부 안정성이 강화된 클렌저 및 이의 제조방법을 제공하는 것이다.

상기 과제를 해결하기 위한 본 발명의 포도씨 추출물 나노에멀젼을 포함하는 클렌저의 제조방법은 추출용매를 이용하여 포도씨 추출물을 수득하는 포도씨 추출물 수득단계(S100);와 포도씨 추출물을 포함하여 나노 에멀젼을 제조하는 나노 에멀젼 제조단계(S200);와 증류수, 유화제, 포도씨 추출물 나노에멀젼, 거품안정제, 글리세린, 구연산, 에탄올, 방부제, 향료를 혼합하는 세정 조성물 혼합단계(S300);를 포함한다.

상기 포도씨 추출물 수득단계(S100)는 증류수, 유기용매 및 이들의 조합 중 어느 하나를 포함하는 추출용매에 포도씨 분말을 투입하여 30~45℃에서 12~36시간, 50~300rpm에서 교반한 후, 여과 및 농축시키는 것을 특징으로 한다.

상기 나노 에멀젼 제조단계(S200)는 계면활성제, 오일류, 레시틴, 다가알코올 및 이들의 조합 중 어느 하나의 첨가제와 포도씨 추출물을 배합하는 배합단계(S210);와 배합물을 교반하여 혼합물을 형성하는 교반단계(S220);와 상기 혼합물을 10 내지 30 khz에서 5분 내지 20분간 초음파처리하여 초음파 처리단계(S230);를 포함하는 것을 특징으로 한다.

상기 세정 조성물 혼합단계(S300)는 증류수 100중량부에 대하여, 유화제 50 내지 85중량부, 포도씨 추출물 나노에멀젼 0.001 내지 5중량부, 거품 안정제 0.5 내지 5중량부, 글리세린 1 내지 5중량부, 구연산 0.1 내지 3중량부, 에탄올 1 내지 5중량부, 방부제 0.01 내지 0.2 중량부, 향료 0.01 내지 3중량부를 혼합하는 것을 특징으로 한다.

상기 과제를 해결하기 위한 본 발명의 포도씨 추출물 나노에멀젼을 포함하는 클렌저는 증류수, 유화제, 포도씨 추출물 나노에멀젼, 거품안정제, 글리세린, 구연산, 에탄올, 방부제, 향료를 포함하는 것을 특징으로 한다.

본 발명의 포도씨 추출물 나노에멀젼을 포함하는 클렌저는 증류수 100중량부에 대하여, 유화제 50 내지 85중량부, 포도씨 추출물 나노에멀젼 0.001 내지 5중량부, 거품 안정제 0.5 내지 5중량부, 글리세린 1 내지 5중량부, 구연산 0.1 내지 3중량부, 에탄올 1 내지 5중량부, 방부제 0.01 내지 0.2 중량부, 향료 0.01 내지 3중량부를 포함하는 것을 특징으로 한다.

상기 포도씨 추출물 나노에멀젼은 계면활성제, 오일류, 레시틴, 다가알코올 및 이들의 조합 중 어느 하나의 첨가제와 포도씨 추출물을 배합 및 교반하여 혼합물을 형성하고, 상기 혼합물을 10 내지 30 khz에서 5분 내지 20분간 초음파처리하여 수득되는 것을 특징으로 한다.

상기 포도씨 추출물은 증류수, 유기용매 및 이들의 조합 중 어느 하나를 포함하는 추출용매에 포도씨 분말을 투입하여 30~45℃에서 12~36시간, 50~300rpm에서 교반한 후, 여과 및 농축시켜 수득되는 것을 특징으로 한다.

상술한 바와 같이, 본 발명에 따른 포도씨 추출물 나노에멀젼을 포함하는 클렌저 및 이의 제조방법에 의하면, 포도씨로부터 항균특성, 항산화특성을 갖는 유효성분의 추출을 극대화하기 위한 추출용매를 최적화하여 포도씨 추출물을 수득하고, 수득된 포도씨 추출물과 첨가제를 이용하여 상온에서 6개월 이상 보관 시에도 분산안정성, 항균활성, 항산화활성이 우수하도록 제조된 포도씨 추출물 나노에멀젼을 포함하며, 보습력과 피부 안정성이 강화된 클렌저 및 이의 제조방법을 제공하는 효과가 있다.

도 1은 본 발명에 따른 포도씨 추출물 나노에멀젼을 포함하는 클렌저를 보여주는 순서도.
도 2는 본 발명에 따른 포도씨 추출물 나노에멀젼을 포함하는 클렌저의 제조방법의 포도씨 추출물 수득단계(S100)에서 포도씨 추출액을 농축시키는 모습을 보여주는 사진.
도 3은 본 발명에 따른 포도씨 추출물 나노에멀젼을 포함하는 클렌저의 제조방법의 포도씨 추출물 수득단계(S100)에서 추출용매를 사용하여 수득된 포도씨 추출물을 보여주는 사진.
도 4는 본 발명에 따른 포도씨 추출물 나노에멀젼을 포함하는 클렌저의 제조방법의 포도씨 추출물 수득단계(S100)에 의해 수득된 포도씨 추출물의 항균 활성능을 보여주는 사진.
도 5는 추출용매 및 농도에 따른 포도씨 추출물의 DPPH 자유 라디칼 소거능을 보여주는 그래프.
도 6은 100% 에탄올 추출물의 페놀성 화합물의 함량을 보여주는 그래프.
도 7은 100% 에탄올 추출물의 총 플라보노이드 함량을 보여주는 그래프.
도 8은 실시예 1~실시예 5에 따라 제조된 나노에멀젼의 분산안정성을 보여주는 사진.
도 9는 70% 에탄올 추출물을 포함하는 실시예 5를 상온에서 6개월 이상 보관한 다음 실시한 dynamic light scattering (DLS) 분석결과.
도 10은 100% 에탄올 추출물을 포함하는 실시예 5를 상온에서 6개월 이상 보관한 다음 실시한 dynamic light scattering (DLS) 분석결과.
도 11은 70% 에탄올 추출물을 포함하는 실시예 5를 상온에서 6개월 이상 보관한 다음 실시한 다분산도 지수와 제타 포텐셜 분석결과.
도 12는 100% 에탄올 추출물을 포함하는 실시예 5를 상온에서 6개월 이상 보관한 다음 실시한 다분산도 지수와 제타 포텐셜 분석결과.
도 13은 나노에멀젼 제형을 제조후 상온에서 6개월 이상 보관한 다음 투입량에 따른 자유 라디칼 소거능 및 IC50을 보여주는 그래프.
도 14는 100% 에탄올 추출물을 포함하는 실시예 5를 상온에서 6개월 이상 보관한 다음 실시한 E. coli 와 B. cereus에 대한 균 억제능을 보여주는 사진.
도 15는 (a)는 보습력 측정을 위한 위치를 표시한 것이며, (b)는 포도씨 추출물 나노에멀젼 클렌저의 손세정 후 강제건조 시 보습효과 시험결과.
도 16은 1% crystal violet 용액을 피부에 첩포 후 건조하고 있는 모습을 보여주는 사진.
도 17은 무처리(수돗물로만 세척), 대조군(Dr. Belmeur 폼클렌저를 이용하여 세척), 포도씨 추출물 나노에멀젼을 포함하는 폼클렌징의 세정력을 보여주는 비교 그래프.
도 18은 세정 전후 염색부위의 3D 이미지 분석결과.

본 발명의 구체적 특징 및 이점들은 이하에서 첨부도면을 참조하여 상세히 설명한다. 이에 앞서 본 발명에 관련된 기능 및 그 구성에 대한 구체적인 설명이 본 발명의 요지를 불필요하게 흐릴 수 있다고 판단되는 경우에는 구체적인 설명을 생략하기로 한다.

도 1은 본 발명에 따른 포도씨 추출물 나노에멀젼을 포함하는 클렌저의 제조방법을 보여주는 순서도이다.

본 발명의 포도씨 추출물 나노에멀젼을 포함하는 클렌저의 제조방법은 추출용매를 이용하여 포도씨 추출물을 수득하는 포도씨 추출물 수득단계(S100)와 포도씨 추출물을 포함하여 나노 에멀젼을 제조하는 나노 에멀젼 제조단계(S200)와 증류수, 유화제, 포도씨 추출물 나노에멀젼, 거품안정제, 글리세린, 구연산, 에탄올, 방부제, 향료를 혼합하는 세정 조성물 혼합단계(S300)를 포함한다.

포도씨 추출물 수득단계(S100)에서는 추출용매를 이용하여 포도씨 추출물을 수득하는 단계로서, 증류수, 에탄올 등의 유기용매 및 이들의 조합 중 어느 하나를 포함하는 추출용매에 포도씨 분말을 투입하여 30~45℃에서 12~36시간, 50~300rpm에서 교반한 후, 여과 및 농축시켜 포도씨 추출물을 제조하게 된다.

포도씨 분말의 평균 입경은 한정하지 않으나, 바람직하게는, 5 내지 100 ㎛의 평균입경을 갖는 것을 사용한다.

포도씨 분말로부터 항균활성 및 항산화특성을 갖는 2차대사산물을 추출하기 위한 추출용매로는 증류수, 에탄올 등의 유기용매 및 이들의 조합 중 어느 하나를 사용할 수 있다.

유기용매는 탄소수 1 내지 4의 저급 알코올, 헥산, 아세트산에틸, 디클로로메탄, 에테르, 클로로포름 및 아세톤으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상인 것이 바람직하다. 상기 탄소수 1 내지 4의 저급 알코올은 에탄올, 메탄올, 프로판올, 이소프로판올, 부탄올 및 n-부탄올로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상인 것이 바람직하며, 탄소수 1 내지 4의 저급 알코올은 무수 또는 함수 알코올을 모두 포함할 수 있다.

바람직하게는, 에탄올을 사용할 수 있으며, 더욱 바람직하게는, 70~100%(v/v) 에탄올을 사용할 수 있다.

포도씨 분말은 20 내지 50 %(w/v)가 되도록 추출용매에 첨가되며, 유기용매가 추출용매로 사용될 경우 30~45℃, 증류수를 사용할 경우 70 ~120 ℃ 에서 12~36시간, 50~300rpm에서 교반한다. 교반을 완료한 후, 필터페이퍼 등을 이용하여 여과시키고, 여과물을 회전증발농축기를 이용하여 수분량 5 내지 30 wt% 를 갖도록 농축시킨다.

나노 에멀젼 제조단계(S200)에서는 계면활성제, 오일류, 레시틴, 다가알코올 및 이들의 조합 중 어느 하나의 첨가제와 포도씨 추출물을 배합하는 배합단계(S210)와 배합물을 교반하여 혼합물을 형성하는 교반단계(S220)와 상기 혼합물을 10 내지 30 khz에서 5분 내지 20분간 초음파처리하여 초음파 처리단계(S230)를 포함한다.

배합단계(S210)에서는 계면활성제, 오일류, 레시틴, 다가알코올 및 이들의 조합 중 어느 하나의 첨가제와 포도씨 추출물을 배합하게 된다.

계면활성제는 폴리솔베이트(polysorbate) 80 (Tween 80), 폴리솔베이트 20 (Tween 20), 폴리솔베이트 40 (Tween 40), 폴리솔베이트 60 (Tween 60) 및 이들의 조합 중 어느 하나를 포함할 수 있으나, 이에 한정하는 것은 아니다. 계면활성제는 포도씨 추출물 100 부피부에 대하여 80 내지 250 부피부 배합될 수 있다.

오일류는 MCT(Medium Chain Triglyceride), 캐롯 오일, 땅콩 오일, 아몬드 오일, 호호바 오일, 살구씨오일, 아보카도 오일, 캐놀라오일, 달마지꽃종자 오일, 포도씨 오일, 올리브 오일, 미강오일, 로즈힙 오일, 참깨 오일, 대두유, 해바라기씨유, 코코넛 오일 및 이들의 조합 중 어느 하나를 포함할 수 있으나, 이에 한정하는 것은 아니다. 오일류는 포도씨 추출물 100 부피부에 대하여 80 내지 150 부피부 배합될 수 있다.

레시틴은 하이드로제네이티드 레시틴, 하이드로제네이티드 포스파티딜콜린, 포스포리피드, 하이드로제네이티드 라이소포스파티딜콜린, 하이드로제네이티드 라이소레시틴, 하이드로옥실레이티드 레시틴 및 불포화레시틴으로 이루어지는 군으로부터 선택된 적어도 하나의 레시틴 및 이들의 조합 중 어느 하나를 포함할 수 있으나, 이에 한정하는 것은 아니다. 레시틴은 포도씨 추출물 100 부피부에 대하여 10 내지 50 부피부 배합될 수 있다.

다가알코올은 글리세롤, 프로필렌글리콜, 디프로필렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜, 에틸렌글리콜, 소르비톨 및 이들의 조합 중 어느 하나를 포함할 수 있으나, 이에 한정하는 것은 아니다. 다가알코올은 포도씨 추출물 100 부피부에 대하여 80 내지 150 부피부 배합될 수 있다.

교반단계(S220)에서는 배합물을 교반하여 혼합물을 형성하는 단계로서, 50 내지 400 rpm에서 3 내지 20분간 교반시켜 배합물들을 균일하게 혼합시킨다.

초음파 처리단계(S230)에서는 상기 혼합물을 10 내지 30 khz에서 5분 내지 20분간 초음파처리한다. 이때, 초음파처리시 발생되는 열에 의해 혼합물에 열변성 및 산화가 발생되지 않도록 아이스 버켓에서 처리하는 것이 바람직하다.

세정 조성물 혼합단계(S300)에서는 증류수, 유화제, 포도씨 추출물 나노에멀젼, 거품안정제, 글리세린, 구연산, 에탄올, 방부제, 향료를 혼합하는 단계로서, 구체적으로는, 증류수 100중량부에 대하여, 유화제 50 내지 85중량부, 포도씨 추출물 나노에멀젼 0.001 내지 5중량부, 거품 안정제 0.5 내지 5중량부, 글리세린 1 내지 5중량부, 구연산 0.1 내지 3중량부, 에탄올 1 내지 5중량부, 방부제 0.01 내지 0.2 중량부, 향료 0.01 내지 3중량부를 혼합한다. 혼합은 상온(20~25℃)에서 이루어지며, 50-300 rpm의 교반속도로 5분 내지 60분간 균질한 상태가 될 때까지 교반한다.

본 발명에 따른 포도씨 추출물 나노에멀젼을 포함하는 클렌저는 상술된 포도씨 추출물 나노에멀젼을 포함하는 클렌저의 제조방법에 의해 제조된다.

본 발명에 따른 포도씨 추출물 나노에멀젼을 포함하는 클렌저는 증류수, 유화제, 포도씨 추출물 나노에멀젼, 거품안정제, 글리세린, 구연산, 에탄올, 방부제, 향료를 포함하며, 구체적으로는, 증류수 100중량부에 대하여, 유화제 50 내지 85중량부, 포도씨 추출물 나노에멀젼 0.001 내지 5중량부, 거품 안정제 0.5 내지 5중량부, 글리세린 1 내지 5중량부, 구연산 0.1 내지 3중량부, 에탄올 1 내지 5중량부, 방부제 0.01 내지 0.2 중량부, 향료 0.01 내지 3중량부를 포함한다.

상기 포도씨 추출물 나노에멀젼은 계면활성제, 오일류, 레시틴, 다가알코올 및 이들의 조합 중 어느 하나의 첨가제와 포도씨 추출물을 배합 및 교반하여 혼합물을 형성하고, 상기 혼합물을 10 내지 30 khz에서 5분 내지 20분간 초음파처리하여 수득된다.

상기 포도씨 추출물은 증류수, 에탄올 등의 유기용매 및 이들의 조합 중 어느 하나를 포함하는 추출용매에 포도씨 분말을 투입하여 30~45℃에서 12~36시간, 50~300rpm에서 교반한 후, 여과 및 농축시켜 수득된다.

이하, 본 발명을 바람직한 일 실시예를 참조하여 다음에서 구체적으로 상세하게 설명한다. 단, 다음의 실시예는 본 발명을 구체적으로 예시하기 위한 것이며, 이것만으로 한정하는 것은 아니다.

1. 실험방법 및 분석방법

1-1. 포도씨 추출물의 수득

경북 경산시 소재 태평양물산으로부터 건조 포도씨를 구매하여 분말화하였다. 추출용매로 고온의 증류수(90~100℃)와 30, 50, 70 및 100%의 에탄올을 준비하였다. 500ml 멸균삼각플라스크에 420ml의 추출용매에 포도씨 분말을 140g 씩 넣은 다음, 알루미늄 호일로 감싸서 37℃에서 24시간동안 100rpm에서 교반하였다. 교반 후 혼합물을 Whatman 필터페이퍼(Grade 1: 11 μm, Sigma Aldrich)를 사용하여 여과시키고, 여과물을 회전증발농축기를 이용하여 농축시켰다. 도 2는 여과된 포도씨 추출물 농축시키는 모습을 보여준다.

1-2. 반응시약

실험을 위한 반응시약으로 에탄올, 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH), 폴린시약(Folin’s reagent), 탄산나트륨, 염화알루미늄, 아세트산나트륨, 퀘르세틴, 갈산을 사용하였으며, 해당 시약은 Merck or Sigma으로부터 구매하였으며, 모든 시약은 분석용 등급의 것을 사용하였다.

1-3. 항균성 분석

Agar well diffusion assay을 이용하여 포도씨 추출물의 Escherichia coli (ATCC 43889)와 Bacillus cereus (ATCC 13061) 에 대한 항균 활성을 확인하였다. E. coli (ATCC 43889)와 B. cereus (ATCC 13061)는 Luria-Bertani (LB)액상배지에서 overnight 배양된 것을 사용하였으며, 균의 성장이 정지기 (OD600∼2)에 도달하였을 때 10⁹ cells/mL 100 μl을 LB 배지에 도말하였다.

접종된 배지에 8mm 직경의 웰을 형성하고, 포도씨 추출물(1 mg/ml) 100μl을 labeled well에 투입하고, 배지를 37℃에서 12시간 배양하였다. E. coli (ATCC 43889)와 B. cereus (ATCC 13061)에 대한 포도씨 추출물의 최소억제농도(MIC)를 측정하기 위하여 broth micro-dilution technique 을 사용하였다. CLSI(Clinical and Laboratory Standards Institute)에 준하여, 무처리된 폴리스티렌 마이크로필터 플레이트 CC7672-7596;(CytoOne)를 이용하여 수행되었다. 37℃, 24시간 배양 후 관찰한 결과, 육안상으로도 균의 성장을 억제할 수 있음을 보여주었다.

1-4. DPPH 라디칼 소거능

자유라디칼은 산화 스트레스와 인체에 많은 질병을 발생시킬 위험을 높이며, 항산화제는 자유라디칼 생성을 감소시키는데 효과적인 것으로 알려져있다. 항산화제는 직접적 또는 간접적으로 활성 라디칼과 반응하여 자유라디칼을 발생시키는 효소의 작용을 억제함으로써 이들의 반응을 억제 시킨다. 또한, 항산화제는 다른 항산화 효소의 발현을 촉진함으로써 인체의 방어기전을 강화시킨다.

DPPH 라디칼 소거능은 불안정한 유리기에 환원기능을 가진 proton ion을 제공하여 안정화되도록 유도하는 기능으로 생체 내에서 발생하는 불안정하고 유해한 유리기를 안정화시키는 역할을 한다. 따라서 미지의 특정물질이 생체의 생리작용 혹은 산화작용에 의하여 발생하는 hydroxyl radical 혹은 superoxide radical 등을 제거하는 항산화 능력을 평가할 때 사용되는 지표로 높은 값일수록 항산화능이 우수한 것으로 판단한다.

시료용액 1 mL에 0.1 mM DPPH 용액 3 mL를 가하여 혼합하고 실온의 암실에서 30분간 반응시킨 후 분광광도계(UV-2120 Optizen, Mecasys, South Korea)를 사용하여 517nm에서 흡광도를 측정하였으며, 하기의 식을 이용하여 계산되었다.

소거능% = [1-(At /A0)]×100

여기서, At 와 A0는 각각 시료용액 첨가군과 무첨가군의 흡광도이다. 갈산은 양성 대조군으로 사용되었고, 결과값은 3번 반복수행하여 그 평균값을 나타내었다.

1-5. 총 페놀 함량 측정

포도씨 추출물의 총 페놀 함량은 Folin-Ciocalteau 법을 이용하여 측정하였다. 표준물질로 Galic acid과 포도씨 추출물을 물에 희석하고, 폴린시약(0.5ml)를 투입하여 22°C에서 5분간 반응시켰다. 이후, 4 mL의 탄산나트륨 용액(20 g/100 mL)을 투입하고, 증류수를 10ml가 될 까지 투입하여 혼합물을 형성하였다. 90분간 상온(37 °C)에서 배양시키고, 분광광도계(UV-2120 Optizen, Mecasys, South Korea)를 이용하여 725 nm에서 흡광도를 측정하고, Galic acid의 표준곡선과 비교하였다. 총 페놀 함량은 Galic acid의 표준곡선을 이용하여 구하였다.

1-6. 총 폴라보노이드 함량의 측정

총 플라보노이드의 함량은 염화알루미늄의 비색법을 이용하여 정량하였으며, 표준물질로 Quercetin과 포도씨 추출물은 10% 염화알루미늄 0.1mL, 1M 초산칼륨 0.1mL 및 증류수 2.8 mL을 첨가하여 혼합한 후 실온에서 30분간 정치하여 반응시킨 다음 분광광도계(UV-2120 Optizen, Mecasys, South Korea)를 이용하여 415 nm에서 흡광도를 측정하였다. 총 플라보노이드함량은 퀘르세틴을 표준물질로하여 작성한 표준검량곡선을 통해 나타내었다.

1-7. 통계처리

특별히 언급하지 않는 한 모든 시료의 분석은 3번 반복 수행되었고, Mean±SD값으로 표시하였다.

1-8. 나노 에멀젼의 제조

포도씨 추출물을 포함하는 나노에멀젼은 하기의 표 1과 같이 배합하였다.

실시예 1 내지 실시예 4는 100%에탄올에서 추출된 포도씨 추출물을 사용하였으며, 실시예 5는 70%와 100%에탄올에서 추출된 포도씨 추출물을 사용하였다. 오일류로는 MCT를, 계면활성제로 polysorbate 80, 다가알코올로 글리세롤을 준비하였다. 실시예 1과 실시예 4는 1%(w/v)의 포도씨 추출물을, 실시예 2와 실시예 3은 2%(w/v)의 포도씨 추출물을, 실시예 5는 0.5%(w/v)의 포도씨 추출물을 사용하였다.

표 1에 따른 배합비로 포도씨 추출물 및 시약을 준비 및 투입하고, 증류수를 50ml가 될 때까지 투입하였다. 배합물을 5분간 교반처리한 후, 25 khz 초음파(Ultrasonic Processor, GEX 750, Newtown, CT, 750 W) 에서 10분간 처리하였다. 초음파 처리시 발생된 열에 의한 혼합물의 변성을 방지하기 위하여 혼합물을 수용하는 실험튜브를 아이스 버켓 내에 담가 처리하였다.

포도씨 추출물 나노 에멀젼의 Droplet 사이즈와 제타 포텐셜은 dynamic light scattering (DLS)에 의해 분석되어졌으며, 제타 포텐셜 및 입자 사이즈분석기(ELSZ-2000, Otsuka Electronics Co., Ltd. Japan)를 이용하였다.

2. 실험결과

2-1. 포도씨 추출물의 수율

도 3은 수득된 포도씨 추출물을 보여주는 사진이다.

표 2는 용매 종류에 따른 포도씨 추출물을 수율을 보여준다.

100, 70, 50 및 30% 에탄올 추출물은 각각 5.17, 5.57, 3.98 및 4.67%(w/w)의 수율을 나타내었고, 열수 추출물은 6.1%의 수율을 나타내었다.

2-2. 포도씨 추출물의 항균활성

도 4는 포도씨 추출물의 항균 활성능을 보여주는 사진이다. 균 중에서 E. coli에서 B. cereus 보다 우수한 항균활성을 보여주었다.

표 3은 포도씨 추출물의 항균활성을 보여준다.

특히, 100% 에탄올 용매에서 추출된 포도씨 추출물(이하, 100%에탄올 추출물로 축약 기재.)이 다른 추출용매(70, 50 및 30% 에탄올 추출물)에 비하여 높은 억제 활성을 보여주었다. E. coli 배지에서 100% ethanol extract 의 억제영역이 28±1.1 mm 로 나타났고, B. cereus의 경우 13±0.7 mm로 나타났다. 또한, 열수 추출물에서는 높은 50 mg/ml에도 불구하고, 실험에 사용된 모든 균주에 대하여 항균활성을 보이지 않았다. 실험 균주에 대하여 100%에탄올 추출물의 MIC는 70, 50 및 30% 에탄올 추출물과 비교하여 그 값이 낮게 나타났음으로 항균력이 상대적으로 가장 높았다. 100%에탄올 추출물의 MIC는 E. coli 와 B. cereus에 대하여 각각 0.3 mg/ml and 0.8 mg/ml의 값을 나타내었다. 열수추출물은 어떠한 항균활성도 보이지 않은 관계로, 이후 실험에서 배제하였다.

2-3. DPPH 자유 라디칼 소거능

추출용매에 따라 DPPH 활성에서 큰 편차를 보였으며, 100% 에탄올 추출물이 높은 항산화활성을 가짐을 확인할 수 있었다. 이를 통해, 에탄올의 농도에 따라 식물의 2차대사산물의 용해 능력이 상이하다는 가설을 세울 수 있었다. 도 5 및 표 4는 추출용매 및 농도에 따른 포도씨 추출물의 DPPH 자유 라디칼 소거능에 대한 IC50를 보여준다.

100% 에탄올 추출물의 IC50은 102.1 ug/ml로 확인되었고, 70, 50 및 30 %에탄올 추출물의 IC50은 각각 106.1, 197.1 및 259.3 ug/ml로 나타났다. 양성 대조군으로 사용된 galic acid 의 IC50은 53.78 ug/ml로 확인되었다. 상기 결과를 통해, 100%에탄올 추출물은 포도씨의 2차대사산물의 추출하는데 적절한 용매인 것으로 판단하였고, 이후 100% 에탄올 추출물을 이용하여 생화학적 특성을 연구하였다.

2-4. 총 페놀 함량 분석

페놀성 화합물은 인체의 면역 시스템을 강화, 염증반응 억제를 통해 항산화효과를 직접적 또는 간접적으로 제공한다. 과일에 포함된 페놀성 화합물은 세포벽에 결합되어 가용상태로 존재하며, 본 발명에서는 추출용매에 따른 포도씨의 페놀성 화합물의 추출 함량을 측정하였으며, 100% 에탄올 추출물에서 페놀성 화합물의 함량은 58.6 mg GAE/50 mg를 보였다(도 6에 도시). 도 6은 100% 에탄올 추출물과 대조군으로 사용된 Galic acid 에서 측정된 총 페놀 함량을 보여준다.

2-5. 총 플라보노이드 함량 분석

100% 에탄올 추출물과 양성 대조군을 비교한 결과, 퀘르세틴 당량에서 100% 에탄올 추출물은 5.944 mg QE/50 mg를 보인 반면, 40 mg의 퀘르세틴에서는 6.322 mg 의 총 플라보노이드 함량을 보였다. 이 결과를 통해, 100% 에탄올 추출물의 총 플라보노이드 함량은 퀘르세틴 보다 작지만, 에탄올의 농도가 총 플라보노이드 함량에 영향을 줌을 확인할 수 있었다. 도 7은 총 플라보노이드 함량의 비교한 것이다.

2-6. 포도씨 추출물 나노 에멀젼의 분산 안정성

나노에멀젼은 일반에멀젼 보다 다양한 이점을 갖는다. 나노 에멀젼의 광학적투명도, 상분리에 대한 안정성, 입자응집 및 생체이용 특성을 제어하기 위하여 다양한 변수의 제어가 요구된다. 안정화제 및 보조제의 첨가는 분자들간의 상호작용 및 레올로지 거동에 영향을 미치기 때문에 나노에멀젼의 안정화와 물리적인 특성에 영향을 준다. 이에, 본 발명에서는 서로 다른 프로토콜을 갖는 포도씨 에탄올 추출물을 이용하여 나노에멀젼을 형성하였으며, 하기의 표 5는 나노 에멀젼의 분산 안정성을 보여준다. 실시예 5의 방법으로 제조된 나노에멀젼 제형은 상온에서 6달 이후에도 안정적으로 제형을 유지하였으며, 실시예 5의 세부 특성을 확인하기 위하여 입자 사이즈와 제타포텐셜을 측정하였다. 도 8의 (a)~(e)는 실시예 1~실시예 5에 따른 나노에멀젼을 보여준다.

실시예1	24시간 후 층분리 발생
실시예2	42시간 후 층분리 발생
실시예3	1주 후 층분리 발생
실시예4	2주 후 층분리가 발생
실시예5	상온에서 6달 이후에도 안정적으로 제형을 유지함

2-7. 형성된 나노 에멀젼의 특성

Dynamic light scattering (DLS)을 이용하여 70%와 100% 에탄올로 추출한 포도씨 추출물을 포함하는 나노에멀젼 제형으로 상온에서 6개월 보관 후 실시예 5의 droplet 사이즈를 측정하였으며, 도 9는 70% 에탄올 추출물을 포함하는 실시예 5의 droplet 사이즈이며, 도 10은 100% 에탄올 추출물을 포함하는 실시예 5의 droplet 사이즈를 보여준다. 나노에멀젼의 droplet 사이즈는 70%와 100% 에탄올로 추출한 포도씨 추출물 각각 181.3 nm 과 221.5 nm을 나타내었다. 제타포텐셜은 70%와 100% 에탄올로 추출한 포도씨 추출물에서 각각 62.73 mV, 49.92 mV를 나타내었다. 도 11은 dynamic light scattering (DLS) 분석을 통하여 측정된 나노에멀젼(70% 에탄올 추출물)의 다분산도 지수와 제타 포텐셜이고, 도 12는 dynamic light scattering (DLS) 분석을 통하여 측정된 나노에멀젼(100% 에탄올 추출물)의 다분산도 지수와 제타 포텐셜을 보여준다.

형성된 나노에멀젼의 생물학적 특성을 확인하기 위하여, 나노에멀젼 제형으로 상온에서 6개월 보관 후 100%에탄올 추출물의 DPPH 자유 라디칼 소거능을 확인하였다. 도 13은 투입량에 따른 자유라디칼소거능 및 IC50을 보여준다. 그 결과, 100%에탄올 추출물의 I50은 97.72 ug/ml를 보여주었다.

실시예 5는 나노에멀젼 제형으로 상온에서 6개월 보관 후 항균활성에 대하여 0.25 mg/ml의 MIC를 보여주었다. 나노 에멀젼에 처리하기 전 포도씨 추출물이 E. coli 와 B. cereus에 대해 0.3mg/ml, 0.8 mg/ml를 보여준 것에 비하여 낮은 값을 보여주었음으로 포도씨의 단순 추출물에 비해 6개월간 상온에서 보관 후의 나노에멀젼 제형에서 항균력이 더 좋아졌음을 알 수 있다.

도 14는 E. coli 와 B. cereus에 대한 나노에멀젼의 균억제능을 보여준다.

표 6은 나노 에멀젼의 균 최소 억제 농도를 보여준다.

본 발명에서는, 포도씨 에탄올 추출물이 페놀과 플라보노이드를 함유하여 우수한 항균활성을 보여줌을 확인할 수 있었다. 이 실험에서 확인된 포도씨의 총 페놀함량과 플라보노이드 함량은 포도씨의 이용가치를 높일 수 있음을 시사하였다.

또한, 본 발명에서는 포도씨로부터 항균특성, 항산화특성을 갖는 2차대사산물의 추출을 극대화하기 위한 추출용매를 최적화하여 포도씨 추출물을 수득하고, 수득된 포도씨 추출물과 첨가제를 이용하여 분산 안정성이 우수한 나노에멀젼을 제조하였다. 포도씨 추출물과 포도씨 추출물을 이용한 나노에멀젼의 항균 특성 및 항산화특성을 비교하였을 때, 나노에멀젼의 항균특성 및 항산화 특성을 더욱 우수하게 나타났는데, 이를 통해 포도씨 추출물과 첨가제의 상호작용이 항균특성 및 항산화특성을 더욱 향상시킬 수 있음을 시사하였다.

본 발명에 따른 포도씨 추출물 에멀젼을 피부 세정제에 적용하기 위하여 하기와 같이 준비하였다.

3. 포도씨 추출물 나노에멀젼을 포함하는 클렌저의 제조

증류수 51.985wt%, ASCO 141(음이온성 유화제) 5.72wt%, ASCO 24-3/28(음이온성 유화제) 35.71wt%, ASCO CDE(거품 안정제) 1.00wt%, 글리세린 2.00wt%, 구연산 0.50wt%, 에탄올 3.00wt%, K-CG(방부제) 0.03wt%, 포도씨 추출물 나노에멀젼 0.005wt%, 레몬향 0.05wt%을 배합하여 클렌저를 제조하였다.

4. 평가

4-1. 보습력

보습력을 평가하기 위하여 보습력이 일정하게 나타나는 신체부위를 결정하였다. 도 15의 (a)는 보습력 측정을 위한 위치를 표시한 것이며, (b)는 포도씨 추출물 나노에멀젼 클렌저의 손세정 후 강제건조 시 보습효과 시험결과를 보여준다.

이상의 결과에 의하면 손등에서 팔로 이어지는 부위 2에서 회차에 관계없이 가장 안정적으로 수분함량이 측정되어 향후 보습력 시험은 부위 2에서 측정하였다.

표 7은 정해진 신체 부위에서 회차별 수분함량 측정값 및 평균값을 보여준다.

보습력의 측정은 다음의 방법으로 결정하였다. 포도씨 추출물 나노이멀젼 폼크렌징 시제품 시료를 각각 부위 2에 처리 후 수돗물로 손을 씻은 후 찬공기로 강제 송풍하면서 5분 간격으로 1시간동안 각 3회 측정하여 평균값으로 수분함량을 결정하였다. 이상의 방법에서 대조구로는 시제품을 처리하지 않고 수돗물로 손을 씻은 후 비교하였다.

도 15는 포도씨 추출물 나노이멀젼 클렌저의 손세정 후 강제건조 시 보습효과 시험결과를 보여준다. 여기서 빨간색 선은 포도씨 추출물 나노이멀젼 클렌저의 세정시의 보습력이며, 파란색 선은 수돗물 세정시의 보습력이다.

그 결과 포도씨 추출물 나노이멀젼 소재를 첨가한 클렌저 시제품이 대조구에 비해 약 3 ∼ 5 % 내외로 보습력 (수분함량)이 높은 것을 확인할 수 있었다.

4-2. 세정력

(재)대구TP 한방산업지원센터에 의뢰하여 본 발명에 따른 포도씨 추출물 에멀젼 함유 클렌저의 세정력을 확인하였다. 대조시료로 시판중인 유사 제형의 액상 폼클렌저를 사용하였으며, 오염물질은 시판중인 크림제형의 입술용 색조화장품을 사용하였다.

대조제품(J사 에센셜 훼이셜 포밍 클렌저)의 전성분은 아래와 같다.

정제수, 트리에탄올아민, 글리세린, 미리스틱애씨드, 라우릭애씨드, 라우릴포스페이트, 페녹시에탄올, 코카미도프로필베타인, 코카마이드엠이에이, 소듐라우로암포아세테이트, 트리클로산, 향료, 메칠파라벤, 판타소듐트리포스페이트, 프로필파라벤, 에칠파라벤, 비에이치티, 적색504호, 황색203호(성상 : 오렌지색의 액체)

오염물질(플럼 멜로우 글로우 립락커)의 전성분은 아래와 같다.

정제수, 옥틸도데칸올, 트리메칠실록시페닐디메치콘, 에탄올, 글리세릴스테아레이트에스이, 에칠셀룰로오스, 소르비탄스테아레이트, 글리세린, 피이지-40 스테아레이트, 피토스테릴/베헤닐/옥틸도데실라우로일글루타메이트, 다이페닐메틸실록시페닐메치콘/페닐실세스퀴옥산크로스폴리머, 아크릴레이트코폴리머, 펜틸렌글라이콜, 하이드록시에칠아크릴레이트/소듐아크릴로일디메칠타우레이트코폴리머, 에칠헥실글리세린, 트리메칠펜타페닐트리실록산, 테트라페닐다이메칠다이실록세인, 향료, 서양자두씨오일, 소리비탄이소스테아레이트, 폴리소르베이트60, 바륨셀페이트, 티타늄디옥사이드, 적색산화철, 적색226호, 적색227호, 흑색산화철(성상: 점도가 있는 크림)

Test Piece는 7.75±0.17mg의 중량을 가지며, 직경 8mm의 filter paper disc(Smart Practice, 3400 E McDowell Rd, Phoenix, AZ 85008, USA)를 사용하였다.

오염물질의 용량은 10ul/disc, 건조조건은 실온 22~24℃, 습도 40~60%의 공기순환이 없는 실내에서 4시간동안 자연건조하였다. 오염물질과 세정제 비율은 1:40(w/v)로 하고, 시료와 오염물질을 넣은 밀폐용기를 40℃에서 18시간 정치하여 세정하였다.

세정 후 test piece를 paper towel의 위에 올려 여분의 수분을 제거한 후 4시간 동안 자연건조하였다. 세정력은 초기 오염물질의 중량과 제거된 오염물질의 중량으로부터 오염물질 제거효율을 구하고, 시험시료와 대조시료의 제거효율을 비교하였다.

세정 전후 오염물질의 중량은 test piece를 완전히 건조한 후 화학정밀저울(TB215D, Satorious-Denver)을 사용하여 측정하였으며, 오염물질 미적용 test piece 중량을 제외하고 구하였다. 세정력평가는 각 세정제에 대하여 3개의 test piece를 사용하여 시행하였다.

오염물질 제거효율(Removal Efficiency, RE, %)은 하기의 식 1에 따라 구하였다.

시험결과, 시험시료인 포도씨 함유 폼클렌저의 오염물질 제거효율은 72.5±3.28 로 측정되었으며, 대조시료인 시판제품은 68.7±2.92로, 시험시료의 제거효율은 대조시료 대비 5.5% 오염물질 제거효율이 높은 것으로 나타났다.

하기의 표 8은 포도씨 클렌저의 세정력시험 결과를 보여준다.

4-3. 피부 오염부위 세정 전후 3D 분석

1% crystal violet 용액으로 첩포하기 전 손을 수돗물로 깨끗이 씻고, 실온에서 건조시킨 후, 1% crystal violet 100 μl 용액을 피부에 도포하고, 10분간 건조시켰다. 도 16은 1% crystal violet 용액을 피실험자 A와 B의 피부에 첩포 후 건조하고 있는 모습을 보여주는 사진이다.

건조 후, 세정력을 확인하기 위하여 무처리(수돗물로만 세척), 대조군(Dr. Belmeur 폼클렌저를 이용하여 세척), 포도씨 추출물 나노에멀젼을 포함하는 폼클렌징을 이용하여 염색된 부분이 없어질 때까지 세척하였다. 도 17은 무처리(수돗물로만 세척), 대조군(Dr. Belmeur 폼클렌저를 이용하여 세척), 포도씨 추출물 나노에멀젼을 포함하는 폼클렌징의 세정력을 보여주는 비교 그래프이다.

그 결과, 대조군의 세정력은 40%를 보인 반면, 포도씨 폼은 60%의 세정력을 보여주었다. 수돗물로만 세척한 경우에는 색소가 거의 없어지지 않았다.

또한, 세정 전 염색부위와 대조군과 포도씨 나노에멀젼 폼클렌징으로 세정한 후 염색부위를 3D plot ImageJ software (version 1.45)를 이용하여 분석하였으며, 도 18은 피실험자 A와 B의 염색부위 3D 이미지 분석결과를 보여준다.

4-4. 피부 안정성(첩포테스트)

한국화학융합시험연구원(KTR)에 의뢰하여 포도씨 추출물 첨가 폼클린저(10배 희석액과 100배 희석액)’의 인체피부 일차자극 유무를 확인하여 제품의 안전성을 평가하였다.

시험대상자로 성인남녀 31명을 선정하였고, 시험부위는 시험대상자의 등 중 피부 이상 소견이 관찰되지 않는 부위를 선정하였다.

시험부위를 정제수로 세척한 후 약 5분간 자연건조하고, 시험시료를 20μL 만큼 첩포에 로딩한 후 24시간 동안 폐쇄 첩포하였다. 24시간 후 첩포를 제거하고, 첩포 제거 30분 후, 24시간 후 및 48시간 후에 각 시험부위의 피부 반응을 평가하였다.

시험부위 육안평가는 아래 표 9의 International Contact Dermatitis Research Group(ICDRG) 판정기준에 따라 실시하였다. 육안평가는 2인 이상의 시험자가 진행하며, 두 시험자간의 판정 결과가 상이할 경우 더 높은 등급을 선택하였다.

육안판정 후 아래의 공식을 이용하여 각 시험부위에 대한 평균 피부 반응도를 계산하였으며 표 9와 같이 피부 반응도를 바탕으로 인체 첩포 시험 결과를 판정하였다.

하기의 식 2는 평균 피부 반응도 계산을 위한 식을 보여준다.

표 10은 인체 첩포 시험 결과 판정표를 보여준다.

총 4일에 걸쳐 안전성 평가를 위한 인체 첩포 시험을 진행한 결과, 포도씨 추출물 첨가 폼클린저 10배 희석액과 100배 희석액 모두 피부반응도는 0.01이었다. 0.00 ~0.75를 무자극으로 판정하는 기준에 따라 무자극으로 판단되었다.

이상과 같이 본 발명은 첨부된 도면을 참조하여 바람직한 실시예를 중심으로 설명하였지만 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자가 본 발명의 특허청구범위에 기재된 기술적 사상 및 영역으로부터 벗어나지 않는 범위 내에서 본 발명을 다양하게 수정 또는 변형하여 실시할 수 있다. 따라서 본 발명의 범주는 이러한 많은 변형의 예들을 포함하도록 기술된 청구범위에 의해서 해석되어야 한다.

Claims

추출용매를 이용하여 포도씨 추출물을 수득하는 포도씨 추출물 수득단계(S100);와
포도씨 추출물을 포함하여 나노 에멀젼을 제조하는 나노 에멀젼 제조단계(S200);와
증류수, 유화제, 포도씨 추출물 나노에멀젼, 거품안정제, 글리세린, 구연산, 에탄올, 방부제, 향료를 혼합하는 세정 조성물 혼합단계(S300);를 포함하는 것을 특징으로 하는
포도씨 추출물 나노에멀젼을 포함하는 클렌저의 제조방법.
제 1항에 있어서,
상기 포도씨 추출물 수득단계(S100)는
증류수, 유기용매 및 이들의 조합 중 어느 하나를 포함하는 추출용매에 포도씨 분말을 투입하여 30~45℃에서 12~36시간, 50~300rpm에서 교반한 후, 여과 및 농축시키는 것을 특징으로 하는
포도씨 추출물을 포함하는 나노에멀젼의 제조방법.
제 1항에 있어서,
상기 나노 에멀젼 제조단계(S200)는
계면활성제, 오일류, 레시틴, 다가알코올 및 이들의 조합 중 어느 하나의 첨가제와 포도씨 추출물을 배합하는 배합단계(S210);와
배합물을 교반하여 혼합물을 형성하는 교반단계(S220);와
상기 혼합물을 10 내지 30 khz에서 5분 내지 20분간 초음파처리하여 초음파 처리단계(S230);를 포함하는 것을 특징으로 하는
포도씨 추출물을 포함하는 나노에멀젼의 제조방법.
제 1항에 있어서,
상기 세정 조성물 혼합단계(S300)는
증류수 100중량부에 대하여, 유화제 50 내지 85중량부, 포도씨 추출물 나노에멀젼 0.001 내지 5중량부, 거품 안정제 0.5 내지 5중량부, 글리세린 1 내지 5중량부, 구연산 0.1 내지 3중량부, 에탄올 1 내지 5중량부, 방부제 0.01 내지 0.2 중량부, 향료 0.01 내지 3중량부를 혼합하는 것을 특징으로 하는
포도씨 추출물을 포함하는 나노에멀젼의 제조방법.
증류수, 유화제, 포도씨 추출물 나노에멀젼, 거품안정제, 글리세린, 구연산, 에탄올, 방부제, 향료를 포함하는 것을 특징으로 하는
포도씨 추출물 나노에멀젼을 포함하는 클렌저.
제 5항에 있어서,
증류수 100중량부에 대하여, 유화제 50 내지 85중량부, 포도씨 추출물 나노에멀젼 0.001 내지 5중량부, 거품 안정제 0.5 내지 5중량부, 글리세린 1 내지 5중량부, 구연산 0.1 내지 3중량부, 에탄올 1 내지 5중량부, 방부제 0.01 내지 0.2 중량부, 향료 0.01 내지 3중량부를 포함하는 것을 특징으로 하는
포도씨 추출물 나노에멀젼을 포함하는 클렌저.
제 5항에 있어서,
상기 포도씨 추출물 나노에멀젼은
계면활성제, 오일류, 레시틴, 다가알코올 및 이들의 조합 중 어느 하나의 첨가제와 포도씨 추출물을 배합 및 교반하여 혼합물을 형성하고, 상기 혼합물을 10 내지 30 khz에서 5분 내지 20분간 초음파처리하여 수득되는 것을 특징으로 하는
포도씨 추출물 나노에멀젼을 포함하는 클렌저.
제 7항에 있어서,
상기 포도씨 추출물은
증류수, 유기용매 및 이들의 조합 중 어느 하나를 포함하는 추출용매에 포도씨 분말을 투입하여 30~45℃에서 12~36시간, 50~300rpm에서 교반한 후, 여과 및 농축시켜 수득되는 것을 특징으로 하는
포도씨 추출물 나노에멀젼을 포함하는 클렌저.