KR20200087542A - 신규 바이우라실, 이의 용도, 및 이의 제조방법 - Google Patents

신규 바이우라실, 이의 용도, 및 이의 제조방법 Download PDF

Info

Publication number
KR20200087542A
KR20200087542A KR1020190003949A KR20190003949A KR20200087542A KR 20200087542 A KR20200087542 A KR 20200087542A KR 1020190003949 A KR1020190003949 A KR 1020190003949A KR 20190003949 A KR20190003949 A KR 20190003949A KR 20200087542 A KR20200087542 A KR 20200087542A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
compound
acid
skin
biuracil
composition
Prior art date
Application number
KR1020190003949A
Other languages
English (en)
Other versions
KR102204477B1 (ko
Inventor
이동걸
강승현
김미선
김민지
여현주
박명삼
백남인
이영근
Original Assignee
코스맥스 주식회사
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 코스맥스 주식회사 filed Critical 코스맥스 주식회사
Priority to KR1020190003949A priority Critical patent/KR102204477B1/ko
Priority to CN201910922805.4A priority patent/CN111434652B/zh
Publication of KR20200087542A publication Critical patent/KR20200087542A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR102204477B1 publication Critical patent/KR102204477B1/ko

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D239/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings
    • C07D239/02—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings
    • C07D239/24—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings having three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D239/28—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings having three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D239/46—Two or more oxygen, sulphur or nitrogen atoms
    • C07D239/52—Two oxygen atoms
    • C07D239/54—Two oxygen atoms as doubly bound oxygen atoms or as unsubstituted hydroxy radicals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D239/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings
    • C07D239/02—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings
    • C07D239/24—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings having three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D239/28—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings having three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D239/46—Two or more oxygen, sulphur or nitrogen atoms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L2/00—Non-alcoholic beverages; Dry compositions or concentrates therefor; Their preparation
    • A23L2/52—Adding ingredients
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L29/00—Foods or foodstuffs containing additives; Preparation or treatment thereof
    • A23L29/03—Organic compounds
    • A23L29/045—Organic compounds containing nitrogen as heteroatom
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/506—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim not condensed and containing further heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
    • A61K8/49—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds containing heterocyclic compounds
    • A61K8/494—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds containing heterocyclic compounds with more than one nitrogen as the only hetero atom
    • A61K8/4953—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds containing heterocyclic compounds with more than one nitrogen as the only hetero atom containing pyrimidine ring derivatives, e.g. minoxidil
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
    • A61K8/49—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds containing heterocyclic compounds
    • A61K8/4973—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds containing heterocyclic compounds with oxygen as the only hetero atom
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/96—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution
    • A61K8/99—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution from microorganisms other than algae or fungi, e.g. protozoa or bacteria
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P39/00—General protective or antinoxious agents
    • A61P39/06—Free radical scavengers or antioxidants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • A61Q19/08—Anti-ageing preparations
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
    • C12P17/16—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms containing two or more hetero rings
    • C12P17/165—Heterorings having nitrogen atoms as the only ring heteroatoms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
    • C12R1/01—
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Birds (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Gerontology & Geriatric Medicine (AREA)
  • Cosmetics (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

신규 바이우라실(biuracil), 이의 용도, 및 이의 제조방법에 관한 것이다. 일 양상에 따른 신규 바이우라실은 항노화 활성을 나타내므로, 화장료 또는 건강식품 조성물에 유용하게 사용할 수 있다.

Description

신규 바이우라실, 이의 용도, 및 이의 제조방법{Novel biuracil, a use thereof, and a preparing method thereof}
신규 바이우라실, 이의 용도, 및 이의 제조방법에 관한 것이다.
기능성 화장품 기술 분야에서 주된 관심분야는 피부노화를 지연시켜 피부의 주름개선에 도움을 주는 제품, 자외선 및 외부환경으로부터 피부를 보호하는 제품, 피부의 미백에 도움을 주는 제품으로 정의될 수 있다. 이 중 피부노화를 지연시키기 위한 주름개선 화장품의 개발하기 위해서 피부 내에서 생리적으로 효능을 나타낼 수 있는 기능성 원료의 개발이 선행되어야 한다.
그동안 항노화를 위한 소재로는 주로 비타민C, α-토코페롤, 레티놀 및 그의 유도체 등이 화장품 및 의약품에 배합되어 이용되어 왔다. 그러나, 이들은 제형에 배합되었을 경우 변취 현상이 발생하거나 화학적 안정성이 좋지 못하다는 단점이 있다.
한편, 미생물로부터 유래한 생리 활성 물질은 대체로 항박테리아, 항진균, 항암제의 원천이었으며 안정성이 우수하여 다양한 질병 치료를 위한 신약으로 개발되거나 신약 개발의 바탕(template)이 되어 왔다.
이에 상기 종래 기술들의 문제점을 극복하기 위하여 미생물로부터 분리하여 안정하고 새로운 물질에 대한 연구가 필요하다.
일 양상은 신규한 화합물, 이의 이성질체, 유도체, 약학적 또는 화장품학적으로 허용가능한 염, 수화물, 또는 용매화물을 제공한다.
다른 양상은 상기 화합물을 생산하는 균주를 제공한다.
다른 양상은 상기 화합물을 제조하는 방법을 제공한다.
다른 양상은 상기 화합물을 포함하는 항노화용 조성물을 제공한다.
또한, 다른 양상은 상기 화합물을 포함하는 항노화 방법을 제공한다.
일 양상은 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 이성질체, 유도체, 약학적 또는 화장품학적으로 허용가능한 염, 수화물 또는 용매화물을 제공한다.
[화학식 1]
Figure pat00001
상기 용어 "이성질체(isomer)"는 분자식은 같지만 분자 내에 있는 구성 원자의 연결 방식이나 공간 배열이 동일하지 않은 화합물을 말한다. 이성질체는 예를 들면, 구조 이성질체(structural isomers), 및 입체이성질체(stereoisomer)를 포함할 수 있다.
상기 용어 "유도체(derivative)"는 상기 화합물의 구조 일부를 다른 원자나 원자단으로 치환하여 얻어지는 화합물을 말한다.
상기 용어 "약학적으로 허용가능"이란 통상의 의약적 복용량(medicinal dosage)으로 이용할 때 상당한 독성 효과를 피함으로써, 동물, 더 구체적으로는 인간에게 사용할 수 있다는 정부 또는 이에 준하는 규제 기구의 승인을 받을 수 있거나 승인 받거나, 또는 약전에 열거되거나 기타 일반적인 약전으로 인지되는 것을 의미한다.
상기 용어 "약학적으로 허용가능한 염"은 화합물의 무기 및 유기산 부가염을 말한다.
상기 용어 "약학적 또는 화장품학적으로 허용가능한 염"은 약학적 또는 화장품학적으로 허용 가능하고 모화합물(parent compound)의 바람직한 약리 활성을 갖는 본 발명의 일 양상에 따른 염을 의미한다. 상기 염은 염산, 브롬화수소산, 황산, 질산, 인산 등과 같은 무기산으로 형성되거나; 또는 아세트산, 프로파이온산, 헥사노산, 시클로펜테인프로피온산, 글라이콜산, 피루브산, 락트산, 말론산, 숙신산, 말산, 말레산, 푸마르산, 타르타르산, 시트르산, 벤조산, 3-(4-히드록시벤조일) 벤조산, 신남산, 만델산, 메테인설폰산, 에테인설폰산, 1,2-에테인-디설폰산, 2-히드록시에테인설폰산, 벤젠설폰산, 4-클로로벤젠설폰산, 2-나프탈렌설폰산, 4-톨루엔설폰산, 캄퍼설폰산, 4-메틸바이시클로 [2,2,2]-옥트-2-엔-1-카르복실산, 글루코헵톤산, 3-페닐프로파이온산, 트리메틸아세트산, tert-부틸아세트산, 라우릴 황산, 글루콘산, 글루탐산, 히드록시나프토산, 살리실산, 스테아르산, 뮤콘산과 같은 유기산으로 형성되는 산 부가염(acid addition salt); 또는 모 화합물에 존재하는 산성 양성자가 치환될 때 형성되는 염을 포함할 수 있다.
상기 용어 "수화물(hydrate)"은 물이 결합되어 있는 화합물을 의미하며, 물과 화합물 사이에 화학적인 결합력이 없는 내포 화합물을 포함하는 광범위한 개념이다.
상기 용어 "용매화물"은 용질의 분자나 이온과 용매의 분자나 이온 사이에 생긴 고차의 화합물을 의미한다.
상기 화합물은 옅은 갈색 성상을 나타내고, 분자식은 C8H6O4N4로 표시되며, 1,1'-biuracil(바이우라실)로 지칭된다.
상기 화합물은 에피더미디박테리움 케라티니 균주로부터 추출 및 정제하여 얻을 수 있고, 유기합성을 통하여 얻을 수도 있다.
상기 화합물은 피브릴린(fibrillin)의 발현을 증가시키는 것일 수 있고, 구체적으로 피브릴린의 발현을 증가시켜 피부 주름을 개선, 탄력을 증가시키는 것일 수 있다.
상기 화합물은 엘라스틴(elastin)의 발현을 증가시키는 것일 수 있고, 구체적으로 엘라스틴의 발현을 증가시켜 피부 주름을 개선하고, 탄력을 증가시키는 것일 수 있다.
상기 화합물은 MMP3(Matrix metalloproteinase 3)의 발현을 억제하는 것일 수 있고, 구체적으로 MMP3의 발현을 억제하여 피부 주름을 개선하고, 탄력을 증가시키는 것일 수 있다.
다른 양상은 에피더미디박테리움 케라티니(Epidermidibacterium keratini sp.) 균주(수탁번호: KCCM 11843P)를 제공한다.
상기 균주는 상기 화학식 1의 화합물을 생산할 수 있다. 상기 화학식 1의 화합물, 1,1'-biuracil은 전술한 바와 같다.
상기 균주는 그의 변이체를 포함한다. 변이체는 예를 들면, 자연 돌연변이 또는 인위적 돌연변이에 의해 생긴 변이체일 수 있다. 인위적 돌연변이는 자외선 등 물리적 돌연변이원, 또는 염기 화합물 등 화학적 돌연변이원에 의해 발생할 수 있다.
상기 균주는 균주의 포자, 균체, 또는 이것의 배양물을 포함한다.
상기 균주는 인간의 피부로부터 분리 또는 유래된 것일 수 있다.
다른 양상은 에피더미디박테리움 케라티니(Epidermidibacterium keratini sp.) 균주(수탁번호: KCCM 11843P)를 배양하는 단계; 및 상기 배양액으로부터 상기 화학식 1의 화합물을 분리하는 단계를 포함하는, 상기 화합물을 제조하는 방법을 제공한다.
상기 방법은 에피더미디박테리움 케라티니(Epidermidibacterium keratini sp.) 균주(수탁번호: KCCM 11843P)를 배양하는 단계를 포함한다.
상기 배양하는 단계는 액체 배지 또는 고체 배지에서 균주를 배양하는 것일 수 있다. 배지는 탄소원으로서 예를 들면, 글루코오스, 물엿, 덱스트린, 전분, 당밀, 동물유, 또는 식물유를 포함할 수 있다. 배지는 질소원으로서 예를 들면, 밀기울, 대두박, 소맥, 맥아, 면실박, 어박, 콘스팁리커, 육즙, 효모 추출물, 황산암모니움, 질산소다 또는 요소를 포함할 수 있다. 배지는 필요에 따라, 식염, 칼륨, 마그네슘, 코발트, 염소, 인산, 황산 또는 기타 이온생성을 촉진하는 무기염류를 포함할 수 있다.
배양은 호기성 조건에서 진탕 또는 정치하면서 배양하는 것일 수 있다. 배양 온도는 예를 들면 약 20℃ 내지 약 37℃, 또는 약 26℃ 내지 약 30℃일 수 있다.
상기 방법은 배양액으로부터 상기 화학식 1의 화합물을 분리하는 단계를 포함한다. 상기 화학식 1의 화합물은 전술한 바와 같다.
상기 배양액으로부터 화학식 1의 화합물을 분리하는 단계는 상기 배양액을 메탄올, 에틸아세테이트, 물, 또는 이들의 조합에 의해 추출하는 단계를 포함하는 것일 수 있다. 상기 추출은 1회 또는 그 이상, 동일 또는 상이한 용매를 사용하여 수행할 수 있다.
상기 추출에 의해 분배된 각 층을 메탄올, 에틸아세테이트, 물, 또는 이들의 조합에 의해 분획하는 단계를 더 포함할 수 있다.
상기 배양액으로부터 화학식 1의 화합물을 분리하는 단계는 배양액을 농축, 원심분리, 여과, 또는 크로마토그래피를 수행하는 단계를 포함할 수 있다. 크로마토그래피는 예를 들면, 정지상의 형태에 따라 컬럼 크로마토그래피, 평판 크로마토그래피(planar chromatography), 종이 크로마토그래피, 분취 크로마토그래피 또는 얇은 막 크로마토그래피일 수 있다. 크로마토그래피는 예를 들면, 이동상의 물리적 특성에 따라, 가스 크로마토그래피, 액체 크로마토그래피, 또는 친화 크로마토그래피일 수 있다. 액체 크로마토그래피는 예를 들면 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC)일 수 있다. 크로마토그래피는 예를 들면, 분리 방법에 따라, 이온 교환 크로마토그래피, 크기-배제 크로마토그래피일 수 있다. 크로마토그래피는 예를 들면, 정상 크로마토그래피 또는 역상 크로마토그래피일 수 있다.
용어 "배양액"은 균주를 배양하여 수득된 배양액 자체, 그의 농축물, 또는 동결건조물 또는 배양액로부터 균주를 제거하여 수득된 배양 상층액, 그의 농축물 또는 동결건조물을 지칭한다. 상기 배양액은 에피더미디박테리움 케라티니(Epidermidibacterium keratini sp.) 균주가 배양되는 과정 중에 생성된 단백질과 같은 유용한 유효성분을 포함하는 것일 수 있다.
다른 양상은 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 이성질체, 유도체, 약학적 또는 화장품학적으로 허용가능한 염, 수화물 또는 용매화물을 포함하는 항노화용 조성물을 제공한다.
상기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 이성질체, 유도체, 약학적 또는 화장품학적으로 허용가능한 염, 수화물 또는 용매화물은 전술한 바와 같다.
상기 화학식 1로 표시되는 화합물은 노화를 억제하는 작용을 갖는 항노화제일 수 있다.
용어 "항노화"는 피부 노화를 개선, 방지, 예방(anti-aging)하는 것일 수 있다. 예를 들어, 피부 노화의 방지란 피부 주름을 예방 또는 개선하는 것, 피부 탄력성을 증가시키는 것, 피부 노화 또는 색소침착을 예방 또는 개선하는 것, 또는 피부 재생을 촉진시키는 것일 수 있다.
용어 "피부 노화"란 나이가 들어가면서 피부에 나타나게 되는 유형과 무형상의 변화를 통틀어 말하는 것으로, 예컨대 표피 두께가 얇아지는 현상, 진피의 세포 수나 혈관 수, DNA 손상복구 능력, 세포교체주기, 상처 회복, 피부장벽기능, 표피의 수분 유지, 땀분비, 피지분비, 비타민D 생산, 물리적 손상방어, 화학물질 제거능력, 면역반응, 감각 기능, 체온조절의 감소를 말한다. 상기 화학식 1로 표시되는 화합물은 외인성 요인 또는 내인성 요인에 의해 유발되는 피부 노화 개선용일 수 있다. 상기 외인성 요인은 여러 가지 외부 요인, 예컨대 자외선(광)을 말하고 내인성 요인은 연대기적 요인이라고도 지칭되며 주로 시간의 흐름에 의해 발생하는 요인을 말한다. 즉, 상기 피부 노화는 구체적으로는 자외선, 공해, 담배연기, 화학물질 등에 의한 외부 자극에 의해 유도되는 조기 노화 증상 뿐만 아니라, 나이가 들어감에 의해 피부세포의 증식이 감소함에 따라 발생하는 자연노화 현상을 포함하며 주름, 탄력 감소, 피부 쳐짐 및 건조 현상 등을 모두 포함하는 개념이다. 또한 주름은 내ㆍ외부 요인의 변화에 의한 자극이 피부조직을 구성하고 있는 성분을 변화시켜 주름을 유발하는 것을 포함한다.
상기 노화는 광노화일 수 있다. 용어 "광노화(Photoaging)"는 외부 환경적인 요인에 의해 유발되는 현상으로, 가장 대표적인 인자로는 자외선이 있다. 자외선은 단백질 분해효소의 활성화와 기질단백질의 사슬절단 및 비정상적인 교차결합 등의 생체 구성 성분들의 손상을 가져오고, 이러한 메커니즘의 반복은 외관상으로도 확연한 피부노화를 초래하게 된다.
용어 "주름"은 피부의 탄력성이 상실되어 느슨해진 상태을 의미하며, 예를 들면 피부가 접히는 것일 수 있다. 색소 침착은 체내에 있는 색소의 양이 비정상적인 경우 또는 색소가 나타나는 장소에 이상이 있는 상태를 의미하며, 예를 들면 기미 및 주근깨 등인 것일 수 있다. 상기 "피부 주름 예방 또는 개선"이란 주름과 관련된 인자의 발현을 억제하여 주름을 방지 또는 개선하거나, 콜라겐 총량을 증가시키는 모든 작용을 의미할 수 있다.
용어 "개선"은 상태의 완화 도는 치료와 관련된 파라미터, 예를 들면 증상의 정도를 적어도 감소시키는 모든 행위를 의미할 수 있다.
용어 "예방"은 상기 조성물의 적용으로 피부 광노화, 색소침착, 또는 주름을 억제 또는 지연시키는 모든 행위를 의미할 수 있다.
상기 조성물은 화장료 조성물, 또는 건강기능식품 조성물, 또는 약학적 조성물일 수 있다.
상기 화장료 조성물에 포함되는 성분은 유효성분으로서 상기 조성물 이외에 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함할 수 있으며, 예를 들면, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제 및 담체를 포함할 수 있다.
상기 조성물에서, 상기 화학식 1로 표시되는 화합물은 화장수(스킨로션), 스킨소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스쳐 로션, 영양 로션, 마사지크림, 영양 크림, 모이스쳐 크림, 핸드크림, 파운데이션, 에센스, 영양 에센스, 팩, 비누, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션, 바디클렌저, 현탁액, 겔, 분말, 페이스트, 마스크팩 또는 시트 또는 에어로졸 조성물을 포함하는 제형으로 제조될 수 있다. 이러한 제형의 조성물은 당해 분야에서 통상적인 방법에 따라 제조될 수 있다. 상기 화장료 조성물은 보존제, 안정화제, 계면활성제, 용해제, 보습제, 에몰리언트제, 자외선 흡수제, 방부제, 살균제, 산화 방지제, pH 조정제, 유기 및 무기 안료, 향료, 냉감제 또는 제한제 등을 더 포함할 수 있다. 상기 보습제 등의 추가 성분의 배합량은 본 발명의 목적 및 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 당업자가 용이하게 선정 가능하며, 그 배합량은 조성물 전체 중량을 기준으로 0.001 내지 5 중량%, 구체적으로 0.01 내지 3 중량%일 수 있다.
또한, 상기 조성물은 피부외용제로 제형화될 수 있다. 본 명세서에서, 상기 피부외용제는 크림, 겔, 연고, 피부 유화제, 피부 현탁액, 경피전달성 패치, 약물 함유 붕대, 로션, 또는 그 조합일 수 있다. 상기 피부외용제는 통상 화장품이나 의약품 등의 피부외용제에 사용되는 성분, 예를 들면 수성성분, 유성성분, 분말성분, 알코올류, 보습제, 증점제, 자외선흡수제, 미백제, 방부제, 산화방지제, 계면활성제, 향료, 색제, 각종 피부 영양제, 또는 이들의 조합과 필요에 따라서 적절하게 배합될 수 있다. 상기 피부외용제는, 에데트산이나트륨, 에데트산삼나트륨, 시트르산나트륨, 폴리인산나트륨, 메타인산나트륨, 글루콘산 등의 금속봉쇄제, 카페인, 탄닌, 벨라파밀, 감초추출물, 글라블리딘, 칼린의 과실의 열수추출물, 각종생약, 아세트산토코페롤, 글리틸리틴산, 트라넥삼산 및 그 유도체 또는 그 염등의 약제, 비타민 C, 아스코르브산인산마그네슘, 아스코르브산글루코시드, 알부틴, 코지산, 글루코스, 프룩토스, 트레할로스 등의 당류등도 적절하게 배합할 수 있다.
상기 건강기능식품 조성물은 상기 건강기능식품 조성물은 상기 화학식 1로 표시되는 화합물 단독 또는 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효 성분의 혼합양은 사용 목적 (예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 식품 또는 음료의 제조시에 본 명세서의 조성물은 원료에 대하여 15 중량부 이하의 양으로 첨가될 수 있다. 상기 건강기능식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 건강기능식품의 종류 중 음료 조성물은 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상기 천연 탄수화물은 포도당, 과당과 같은 모노사카라이드, 말토스, 슈크로스와 같은 디사카라이드, 및 덱스트린, 사이클로덱스트린과 같은 폴리사카라이드, 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 감미제로서는 타우마틴, 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제나, 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다. 상기 건강식품 조성물은 또한 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제, 또는 그 조합을 함유할 수 있다. 상기 건강기능식품 조성물은 또한, 천연 과일쥬스, 과일쥬스 음료, 야채 음료의 제조를 위한 과육, 또는 그 조합을 함유할 수 있다.
다른 양상은 상기 조성물을 개체에 적용하는 단계를 포함하는 개체의 피부를 개선시키는 방법을 제공한다. 상기 조성물에 대해서는 상술한 바와 같다.
상기 방법은 구체적으로, 개체의 피부 노화를 예방 또는 개선, 또는 피부 주름을 예방 또는 개선하는 방법일 수 있다.
용어, "적용하는", "투여하는", "도입하는" 및 "이식하는"은 상호교환적으로 사용되고 일 구체예에 따른 조성물의 원하는 부위로의 적어도 부분적 국소화를 초래하는 방법 또는 경로에 의한 개체 내로의 일 구체예에 따른 조성물의 배치를 의미할 수 있다. 일 구체예에 따른 화합물을 포함하는 조성물 중 적어도 일부를 생존하는 개체 내에서 원하는 위치로 전달하는 임의의 적절한 경로에 의해 투여될 수 있다.
상기 개체는 포유동물, 예를 들면, 사람, 소, 말, 돼지, 개, 양, 염소, 또는 고양이일 수 있다. 상기 개체는 피부상태 개선, 예를 들어 피부 노화 개선, 또는 피부 주름 개선을 필요로 하는 개체일 수 있다.
일 양상에 따른 신규 바이우라실은 항노화 활성을 나타내므로, 화장료 또는 건강식품 조성물에 유용하게 사용할 수 있다.
도 1은 1,1'-biuracil의 1H-NMR (600 MHz, DMSO-d 6, δH) 스펙트럼 결과이다.
도 2는 1,1'-biuracil의 13C-NMR (125 MHz, DMSO-d 6, δC) 스펙트럼 결과이다.
도 3은 1,1'-biuracil의 COSY (600 MHz, DMSO-d 6) 스펙트럼 결과이다.
도 4는 1,1'-biuracil의 HSQC (DMSO-d 6) 스펙트럼 결과이다.
도 5는 1,1'-biuracil의 HMBC (DMSO-d 6) 스펙트럼 결과이다.
도 6은 화학식 I 화합물이 UV로 조사된 Hs68 세포가 피브릴린1(FBN) 유전자를 발현하는 데 미치는 영향을 RT-PCR로 확인한 결과이다. ***p<0.0001 vs. (-) 대조군, #p<0.001 vs. UV 대조군, ## p<0.0001 vs. UV 대조군
도 7은 화학식 I 화합물이 UV로 조사된 Hs68 세포가 MMP3 유전자를 발현하는 데 미치는 영향을 RT-PCR로 확인한 결과이다. ***p<0.0001 vs. (-) 대조군, #p<0.05 vs. UV 대조군, ## p<0.005 vs. UV 대조군
이하 본 발명을 실시예를 통하여 보다 상세하게 설명한다. 그러나, 이들 실시예는 본 발명을 예시적으로 설명하기 위한 것으로 본 발명의 범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.
실시예 1: 스포리치아 과(Sporichthyaceae family) 균주의 분리
건강한 여성의 피부를 멸균 증류수로 세척하여 확보된 샘플에서 스포리치아 과에 해당하는 균주(이하 'EPI-7'이라 함)를 분리하였다. 상기 균주의 16S rRNA 상동성 분석 및 계통 분석을 수행한 결과, 상기 EPI-7 균주는 이제까지 보고된 바 없는 스포리치아(Sporichthyaceae) 과에 속하는 신규 속인 에피더미디박테리움 속임을 확인하였다.
상기 에피더미디박테리움 케라티니 균주를 2016년 06월 08일자로 한국생명공학연구원 생물자원센터에 기탁하여 기탁번호 KCCM 11843P를 부여받았다.
실시예 2: 균주의 배양
분리된 EPI-7 은 R2A 배지를 1 리터당 3g을 멸균 증류수에 녹여 121℃ 15분 멸균하여 25℃로 냉각 후 EPI-7 종균을 접종하였다. 배양조건은 28℃ 항온조에서 배양하며, 100rpm 으로 교반하였다. 120시간 배양 후 배양을 종료하였다.
실시예 3: 화합물의 분리 및 정제
R2A 배지에서 배양된 EPI-7T 배양액 50 L를 4℃, 4000 rpm, 7 분 동안 원심분리 후 상층액을 취하였으며, 남은 잔여물을 80% 메탄올(MeOH, 500 mL)로 3회 추출하였다. 이 두 용액을 감압농축하여 총 144 g의 추출물을 얻었다. 얻어진 추출물은 에틸 아세테이트 (EtOAc, 2.2 L)와 물 (H2O, 2.2L)로 3회 분배 추출하였고, 다시 물층을 n-부틸 알코올 (n-BuOH, 2.0 L)로 3회 분배 추출하였다. 분배된 각 층을 감압농축하여 EtOAc 분획 (EPE, 10.7 g), n-BuOH (EPB, 42.8 g) 및 H2O 분획 (EPH, 90.5 g)을 얻었다.
얻어진 EPE 분획 10.7 g을 SiO2 컬럼(Φ 5.5 Χ 35.0 cm, EtOAc-n-BuOH-H2O = 20:3:1 → 7:3:1, 각 2.0 L)를 실시하여 150 mL씩 분취하였다. 각 분취액을 TLC(EtOAc-n-BuOH-H2O = 7:3:1)로 확인하여, 유사한 부분을 함께 모으고, 농축하여 12개의 분획 (EPE-1 내지 EPE-12)을 얻었다. 이들 분획 중 EPE-3 분획 (168.0 mg, Ve/Vt 0.20-0.25)에 대하여 ODS c.c. (Φ 2.0 Χ 10.0 cm, MeOH-H2O=2:1, 400.0 mL)를 실시하여 4개의 분획(EPE-3-1 내지 EPE-3-4)을 얻었으며 그 중에서 1,1'-biuracil (EPE-3-1, 20.5 mg, Ve/Vt 0.000-0.225, SiO2 TLC Rf 0.70 EtOAc-n-BuOH-H2O=15:3:1, ODS TLC Rf 0.88 MeOH-H2O=2:1)을 분리하였다.
실시예 4: 화합물의 구조 분석
1,1'-biuracil의 구조는 핵자기공명(Nuclear Magnetic Resonance: NMR) 스펙트럼과 질량 스펙트럼(mass spectrum: MS)을 통해 분석하였다.
1,1'-biuracil: 성상(옅은 갈색); 1H-NMR 및 12C-NMR, 하기 표 1 및 표 2 참조; LC-MS (ESI+/triple quadrupole) m/z 113 [M/2+1]+, 223 [M+1]+, 267 [M+2Na-H]+; 분자식, C8H6O4N4; 분자량, 222.
uracil 1,1'-biuracil D
NH-1 10.819, br, s - -
NH-3 11.016, br, s 10.981, br, s 0.035
5 5.450, ddd,J=6.6, 1.8, 1.2 Hz 5.435, d
J=7.2 Hz		 0.015
6 7.395, dd,J=6.6, 4.8 7.378, d
J=7.2 Hz		 0.017
1H-NMR (600 MHz, DMSO-d 6, δH) 10.963, (2H, br. s, NH-3,3'), 7.378 (2H, d, J=7.2 Hz, H-6,6'), 5.401 (2H, d, J=7.2 Hz, H-5,5')
uracil 1,1'-biuracil D
2 151.984 151.535 0.449
4 164.799 164.349 0.450
5 100.689 100.194 0.495
6 142.658 142.245 0.413
13C-NMR (125 MHz, DMSO-d 6, δC) 164.349 (s, C-4,4'), 151.535 (s, C-2,2'), 142.245 (d, C-6,6'), 100.194 (d, C-5,5')
LC/MS 스펙트럼에서의 분자이온 피크 m/z 223 [M+1]+로부터 분자량이 222로 결정되었으며, 분자식은 C8H6N4O4로 예측되었다. 따라서 이 화합물의 불포화도는 8로 나타났다.
도 1은 1,1'-biuracil의 1H-NMR (600 MHz, DMSO-d 6, δH) 스펙트럼 결과이다.
1H-NMR 스펙트럼 (600 MHz, DMSO-d 6, δH)에서 1개의 아민에 대한 양성자 신호(amine proton signal)가 δH 10.963에서 broad singlet(bs)으로 관측되었다. 아민 신호가 관측되었기 때문에 아민의 양성자와 수소결합을 하는 산소가 이웃에 위치하고 있는 것으로 추정되었다. 또한 방향족에 대한 양성자 신호(aromatic proton signa)가 각각 δH 7.378 (1H, d, J=7.2 Hz), 5.401 (1H, d, J=7.2 Hz)에서 관측되어 짝지음 상수(coupling constant, J=7.2 Hz)로부터 서로 3J coupling 을 보여주었다. 분자량, 분자식, 불포화도 및 위에서 나타난 1H-NMR 데이터로부터 1,1'-biuracil은 이중결합 3개와 1개의 고리로 이루어진 헤테로사이클 화합물로 동일한 분자가 2개 결합한 다이머(dimer)로 추정되었다.
도 2는 1,1'-biuracil의 13C-NMR (125 MHz, DMSO-d 6, δC) 스펙트럼 결과이다.
13C-NMR (125 MHz, DMSO-d 6, δC)에서는 총 4개의 신호가 관측되었다. 2개의 4급 탄소가 δC 164.349와 δC 151.535에서 나타났는데, 전자는 아마이드 탄소이며, 후자는 매우 고자장인 점으로부터 아민과 아민 사이에 위치한 카보닐 탄소로 추정되었다. 또한 2개의 olefine methine 탄소가 δC 142.245와 δC 100.194에서 나타났다. 두 olefine methine 탄소 중 저자장에서 나타난 δC 142.245에 질소가 결합했음을 알 수 있다.
상기 설명된 MS 데이터에서 m/z 223의 분자이온 피크가 관측되었고 NMR 데이터의 결과로부터 1,1'-biuracil은 핵산의 피리미딘 염기 중의 하나인 우라실 두개가 결합한 화합물로 추정되었다. 우라실의 경우 탄소와 결합한 아민의 양성자 신호가 11 ppm 부근에서 2개가 관측되며, 2개의 olefine methine 양성자 신호가 각각 ddd, dd으로 스플릿되는데 반해 1,1'-biuracil 화합물의 경우 아민 유래 양성자가 1개 관측되었으며, olefin methine 양성자 신호가 모두 d으로 스플릿 되었다. 이러한 양성자 데이터의 양상으로 보아 우라실이 각각 1번끼리 결합한 것을 알 수 있었다.
도 3은 1,1'-biuracil의 COSY (600 MHz, DMSO-d 6) 스펙트럼 결과이다.
COSY(Correlation　spectroscopy) 스펙트럼에서 δH 7.378과 δH 5.401 중 저자장에서 관측된 전자를 H-6,6'으로, 후자를 H-5,5'로 확인하였다.
도 4는 1,1'-biuracil의 HSQC (DMSO-d 6) 스펙트럼 결과이다.
HSQC(Heteronuclear single quantum coherence) 스펙트럼에서 13C-NMR에서 관측된 2개의 olefin methine 양성자 신호 δH 7.738 (H-6,6'), δH 5.401 (H-5,5')과 각각 크로스 피크(cross peak)를 보인 δC 142.245, δC 100.194 탄소 신호를 각각 C-6,6'과 C-5,5'으로 동정하였다.
도 5는 1,1'-biuracil의 HMBC (DMSO-d 6) 스펙트럼 결과이다.
HMBC(Heteronuclear Multiple Bond Correlation) 스펙트럼에서 2개의 카보닐 탄소 신호 중에서 δC 164.349 (C-4,4')은 δH 7.738 (H-6,6') 양성자 신호와 3J coupling을, δH 5.401 (H-5,5') 양성자 신호와 2J coupling을 보였으며, δC 151.535 (C-2,2')는 δH 7.738 (H-6,6') 양성자 신호와만 3J coupling을 보임에 따라 이 화합물이 우라실 구조를 갖는 것을 확인하였고 MS 데이터를 통해 우라실의 다이머임을 알 수 있었다.
이 사실은 본 화합물과 우라실의 1H-NMR와 비교하였을 때, NH-3의 화학 이동(chemical shift)을 보았을 때 0.03 ppm 가량 차이를 보였다. 커플링 패턴을 보았을 때, H-5와 H-6이 우라실과 달리 더블렛(doublet)으로 스플릿이 되는 것을 알 수 있었다. 또한 13C-NMR 의 화학 이동을 비교해 보았을 때, C-5번 탄소가 0.04 ppm 가량 고자장 쪽으로, C-6번 탄소가 0.04 ppm 가량 저자장 쪽으로 이동한 것을 확인 할 수 있었다.
따라서, 최종 구조식으로 다음을 얻었다:
Figure pat00002
실험예 1: 화합물의 피브릴린 유전자 발현 유도효과 평가
상기 화합물이 피브릴린 유전자 발현에 어떠한 영향을 주는지 다음과 같은 실험을 통해 확인하였다. 사람의 섬유아세포 세포주(Human dermal fibroblast, Hs68) 를 6 웰 플레이트에 3.5x105로 분주한 후, 37℃, 5% CO2 조건의 배양기에서 24시간 동안 배양하였다. 이후 배지를 제거하고 DPBS를 넣은 후 12 mJ/cm2의 UVB를 조사하거나 조사하지 않았다. UVB 조사 직후 DPBS를 제거하고 FBS가 없는 배지로 갈아 준 후, 1,1'-biuracil 0.1, 1, 10 ppm을 처리하여 24시간 동안 추가 배양하였다. 그 후 각 시료의 세포에서 트리졸(RNA iso, DAKARA, 일본)을 이용하여 RNA를 분리한 뒤 nanodrop으로 260㎚에서 RNA를 정량한 후, 각각 2㎍의 RNA를 사용하여 증폭기에서 cDNA를 합성하였다(C1000 Thermal Cycler, Bio-Rad, 미국). 대조군으로는 TGFβ1(1 ng/ml), 우라실(0.1, 10 ppm)을 사용하였다.
합성된 cDNA에 타겟 유전자인 피브릴린1(fibrillin 1: FBN)에 대한 프라이머(정방향: AATGTCAGACGAAGCCAGGG(서열번호 1), 역방향: GATTTGGTGACGGGGTTCCT(서열번호 2))와 시아닌 염료인 사이버그린 (SYBR Green supermix, Applied Biosystems, 미국)을 첨가한 혼합물을 이용하여 실시간(real-time) PCR 기계에서 실시간 중합효소 연쇄반응을 실시함으로써 최종적으로 피브릴린 유전자의 발현 정도를 확인하였다. 유전자의 발현량은 β 액틴 유전자(정방향: GGCCATCTCTTGCTCGAAGT(서열번호 3), 역방향: GACACCTTCAACACCCCAGC(서열번호 4))에 대한 보정을 통해 최종적으로 분석하였다.
도 6은 화학식 I 화합물이 UV로 조사된 Hs68 세포가 피브릴린1 유전자를 발현하는 데 미치는 영향을 RT-PCR로 확인한 결과이다. ***p<0.0001 vs. (-) 대조군, #p<0.001 vs. UV 대조군, ## p<0.0001 vs. UV 대조군.
도 6에 나타낸 바와 같이, 1,1'-biuracil 처리군에서 UVB 조사에 의해 감소한 피브릴린 발현이 유의하게 증가하는 것을 확인할 수 있었다. 이러한 피브릴린 발현 증가 효과는 1,1'-biuracil에 대하여 농도 의존적이었다.
상기 결과로부터, 본 발명의 1,1'-biuracil이 피브릴린 발현을 증가시킴으로써 피부에 생성되는 주름을 개선하고 탄력을 개선하여 항노화 효과를 나타낼 수 있음을 확인하였다.
실험예 2: 화합물의 MMP3 (matrix metallopeptidase 3) 유전자 발현 유도 효과 평가
상기 화합물이 MMP3 유전자의 발현에 어떠한 영향을 주는지 다음과 같은 실험을 통해 확인하였다. 사람의 섬유아세포 세포주(Human dermal fibroblast, Hs68)를 6 웰 플레이트에 3.5x105로 분주한 후, 37℃, 5% CO2 조건의 배양기에서 24시간 동안 배양하였다. 이후 배지를 제거하고 DPBS를 넣어 후 12 mJ/cm2의 UVB를 조사하였다. UVB 조사 직후 DPBS를 제거하고 FBS가 없는 배지로 갈아 준 후, 1,1'-biuracil 0.1, 1, 10 ppm을 처리하여 24시간 동안 추가 배양하였다. 그 후 각 시료의 세포에서 트리졸(RNA iso, DAKARA, 일본)을 이용하여 RNA를 분리한 뒤 nanodrop으로 260㎚에서 RNA를 정량한 후, 각각 2㎍의 RNA를 사용하여 증폭기에서 cDNA를 합성하였다(C1000 Thermal Cycler, Bio-Rad, 미국).
합성된 cDNA에 타겟 유전자인 MMP-3 프라이머(정방향: ATTCCATGGAGCCAGGCTTTC(서열번호 5), 역방향: CATTTGGGTCAAACTCCAACTGTG (서열번호 6))와 시아닌 염료인 사이버그린 (SYBR Green supermix, Applied Biosystems, 미국)을 첨가한 혼합물을 이용하여 실시간(real-time) PCR 기계에서 실시간 중합효소 연쇄반응을 실시함으로써 최종적으로 MMP-3 유전자의 발현 정도를 확인하였다. 유전자의 발현량은 β액틴 유전자에 대한 보정을 통해 최종적으로 분석하고 분석 결과를 도 7에 나타내었다.
도 7은 화학식 I 화합물이 UV로 조사된 Hs68 세포가 MMP3 유전자를 발현하는 데 미치는 영향을 RT-PCR로 확인한 결과이다. ***p<0.0001 vs. (-) 대조군, #p<0.05 vs. UV 대조군, ## p<0.005 vs. UV 대조군
도 7에 나타낸 바와 같이, UVB로 피부 세포주를 조사한 경우, UVB에 의해서 증가된 MMP-3의 발현이 화학식 I 화합물의 처리에 의해 유의적으로 감소하였다. 특히, 대조군인 TGFβ1을 처리한 경우보다 더 유의적으로 감소하였다.
따라서, 본 발명의 1,1'-biuracil이 MMP-3의 발현을 감소시킴으로써 피부에 생성되는 주름을 개선하고 탄력을 개선하여 항노화 활성이 있다는 것을 확인하였다.
한국미생물보존센터(국외) KCCM11843P 20160608
<110> COSMAX, INC. <120> Novel biuracil, a use thereof, and a preparing method thereof <130> pn125289 <160> 6 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> fibrillin 1 forward primer <400> 1 aatgtcagac gaagccaggg 20 <210> 2 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> fibrillin 1 reverse primer <400> 2 gatttggtga cggggttcct 20 <210> 3 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> beta actin forward primer <400> 3 gacaccttca acaccccagc 20 <210> 4 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> beta actin reverse primer <400> 4 gacaccttca acaccccagc 20 <210> 5 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> MMP3 forward primer <400> 5 attccatgga gccaggcttt c 21 <210> 6 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> MMP3 reverse primer <400> 6 catttgggtc aaactccaac tgtg 24

Claims (8)

  1. 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 이성질체, 유도체, 약학적 또는 화장품학적으로 허용가능한 염, 수화물 또는 용매화물:
    [화학식 1]
    Figure pat00003

  2. 청구항 1의 화합물을 생산하는 에피더미디박테리움 케라티니(Epidermidibacterium keratini sp.) 균주(수탁번호: KCCM 11843P).
  3. 에피더미디박테리움 케라티니(Epidermidibacterium keratini sp.) 균주(수탁번호: KCCM 11843P)를 배양하는 단계; 및
    상기 배양액으로부터 청구항 1의 화합물을 분리하는 단계를 포함하는 청구항 1의 화합물을 제조하는 방법.
  4. 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 이성질체, 이의 약학적 또는 화장품학적으로 허용가능한 염, 이의 수화물 또는 이의 용매화물을 포함하는 항노화용 조성물.
  5. 청구항 4에 있어서, 화장료 조성물인 것인 조성물.
  6. 청구항 4에 있어서, 건강기능식품 조성물인 것인 조성물.
  7. 청구항 4에 있어서, 상기 화합물은 피브릴린(fibrillin)의 발현을 증가시키는 것인 조성물.
  8. 청구항 4에 있어서, 상기 화합물은 MMP3(matrix metallopeptidase 3)의 발현을 감소시키는 것인 조성물.
KR1020190003949A 2019-01-11 2019-01-11 신규 바이우라실, 이의 용도, 및 이의 제조방법 KR102204477B1 (ko)

Priority Applications (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020190003949A KR102204477B1 (ko) 2019-01-11 2019-01-11 신규 바이우라실, 이의 용도, 및 이의 제조방법
CN201910922805.4A CN111434652B (zh) 2019-01-11 2019-09-27 双尿嘧啶、其用途及其制备方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020190003949A KR102204477B1 (ko) 2019-01-11 2019-01-11 신규 바이우라실, 이의 용도, 및 이의 제조방법

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20200087542A true KR20200087542A (ko) 2020-07-21
KR102204477B1 KR102204477B1 (ko) 2021-01-19

Family

ID=71580136

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020190003949A KR102204477B1 (ko) 2019-01-11 2019-01-11 신규 바이우라실, 이의 용도, 및 이의 제조방법

Country Status (2)

Country Link
KR (1) KR102204477B1 (ko)
CN (1) CN111434652B (ko)

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR102286080B1 (ko) * 2020-05-08 2021-08-05 코스맥스 주식회사 로티아 크리스티내 균주 및 그의 피부 상태 개선 용도
KR102416730B1 (ko) * 2021-11-09 2022-07-05 주식회사 유나이티드엑티브 피부상재균을 이용한 식물성 발효 오일의 제조방법 및 이를 포함하는 화장료 조성물
KR102418172B1 (ko) * 2021-11-09 2022-08-11 코스맥스 주식회사 피부상재균을 이용한 캐비어 발효 오일의 제조방법 및 이를 포함하는 화장료 조성물
KR102593250B1 (ko) * 2022-12-20 2023-10-31 주식회사 조에바이오 미생물을 이용하여 제조된 색소 및 그 제조방법

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20180001460A (ko) * 2016-06-27 2018-01-04 코스맥스 주식회사 스포리치아과 미생물의 용도

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104671956A (zh) * 2013-11-28 2015-06-03 大连三科生物工程有限公司 用于板栗种植微生物添加剂的制备方法
US11261421B2 (en) * 2016-06-27 2022-03-01 Cosmax Co., Ltd. Sporichthyaceae microorganism and use thereof

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20180001460A (ko) * 2016-06-27 2018-01-04 코스맥스 주식회사 스포리치아과 미생물의 용도

Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR102286080B1 (ko) * 2020-05-08 2021-08-05 코스맥스 주식회사 로티아 크리스티내 균주 및 그의 피부 상태 개선 용도
KR102416730B1 (ko) * 2021-11-09 2022-07-05 주식회사 유나이티드엑티브 피부상재균을 이용한 식물성 발효 오일의 제조방법 및 이를 포함하는 화장료 조성물
KR102418172B1 (ko) * 2021-11-09 2022-08-11 코스맥스 주식회사 피부상재균을 이용한 캐비어 발효 오일의 제조방법 및 이를 포함하는 화장료 조성물
WO2023085612A1 (ko) * 2021-11-09 2023-05-19 코스맥스 주식회사 피부상재균을 이용한 캐비어 발효 오일의 제조방법 및 이를 포함하는 화장료 조성물
WO2023085578A1 (ko) * 2021-11-09 2023-05-19 주식회사 유나이티드엑티브 피부상재균을 이용한 식물성 발효 오일의 제조방법 및 이를 포함하는 화장료 조성물
KR102593250B1 (ko) * 2022-12-20 2023-10-31 주식회사 조에바이오 미생물을 이용하여 제조된 색소 및 그 제조방법

Also Published As

Publication number Publication date
CN111434652A (zh) 2020-07-21
KR102204477B1 (ko) 2021-01-19
CN111434652B (zh) 2023-05-26

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR102204477B1 (ko) 신규 바이우라실, 이의 용도, 및 이의 제조방법
EP2200574B1 (en) Novel use of panduratin derivatives or extract of kaempferia pandurata comprising the same
JP6976014B1 (ja) 新規ポリフェノール化合物
KR102019642B1 (ko) 아스페르길루스 크리스타투스 균주로 발효시킨 발효 콩의 추출물을 포함하는 피부미용 개선용 조성물
KR102484422B1 (ko) 사막 선인장 추출물 및 락토바실러스 배양액을 포함하는 화장료 조성물
KR102467931B1 (ko) 브레비바실러스 보스테렌시스 균주 및 그의 모발 또는 두피 상태 개선 용도
KR102495405B1 (ko) 마이크로코커스 루테우스 균주 및 그의 모발 또는 두피 상태 개선 용도
KR102046298B1 (ko) 아스페르길루스 크리스타투스 균주로 발효시킨 발효 표고버섯의 추출물을 포함하는 피부미용 개선용 조성물
CN112438921B (zh) 包括由冠突曲霉所得的发酵三七根提取物的用于改善皮肤美容的组合物
KR102037039B1 (ko) 플록쿨린을 포함하는 피부 미용을 위한 조성물
KR101994618B1 (ko) 발효 지실의 추출물을 포함하는 피부 진정용 조성물
KR102480526B1 (ko) 다이어트지아 신나메아 균주 및 그의 모발 또는 두피 상태 개선 용도
KR102480527B1 (ko) 코쿠리아 팔루스트리스 균주 및 그의 모발 또는 두피 상태 개선 용도
KR102495400B1 (ko) 노보스핑고비움 후미 균주 및 그의 모발 또는 두피 상태 개선 용도
KR102495402B1 (ko) 버크홀데리아 비에트나미엔시스 균주 및 그의 모발 또는 두피 상태 개선 용도
KR102495403B1 (ko) 데이노코커스 우루무치엔시스 균주 및 그의 모발 또는 두피 상태 개선 용도
KR102495404B1 (ko) 브레분디모나스 베지큘라리스 균주 및 그의 모발 또는 두피 상태 개선 용도
KR102480529B1 (ko) 큐티박테리움 그래뉼로섬 균주 및 그의 모발 또는 두피 상태 개선 용도
KR102480528B1 (ko) 스트렙토코커스 뉴모니아 균주 및 그의 모발 또는 두피 상태 개선 용도
KR102495401B1 (ko) 이멜라 루테아 균주 및 그의 모발 또는 두피 상태 개선 용도
KR102495399B1 (ko) 골도니아 테레 균주 및 그의 모발 또는 두피 상태 개선 용도
KR102558084B1 (ko) 두피 마이크로바이옴 콤플렉스 및 그의 모발 또는 두피 상태 개선 용도
KR102528619B1 (ko) 포토박테리움 균주 및 그의 피부 상태 개선 용도
KR102004149B1 (ko) 아스페르길루스 크리스타투스 균주로 발효시킨 발효 쌀의 추출물을 포함하는 피부미용 개선용 조성물
KR20230147250A (ko) 모나스커스 속 (Monascus sp.) 균주로 고체발효시킨 발효 쌀 추출물 유래 아미노산 농축액을 포함하는 피부상태 개선용 조성물

Legal Events

Date Code Title Description
E902 Notification of reason for refusal
E701 Decision to grant or registration of patent right
GRNT Written decision to grant