KR20200083990A - 종양 관련 골수 세포의 조절 방법 및 면역 체크포인트 차단을 증강시키는 방법 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 종양 미세환경에서 종양 관련 고룻 세포 (TAMC) 상의 CD11b의 I-도메인에의 결합을 토대로 한 면역 반응을 조절하기 위한 방법에 관한 것이다. 특히, 항-CD11b-I-도메인 항체로의 CD11b의 I-도메인에 대한 결합은 종양 미세환경에서 다음의 효과 중 하나 이상을 갖는 면역자극 환경을 촉발시킨다: 종양 미세환경에서 염증성 사이토카인을 증가시키고, IDO+ 골수 억압자 세포의 집단을 감소시키며, 종양 관련 대식세포 상의 M2 마커보다 M1 마커를 상향 조절하고, M1:M2 종양-관련 대식세포 비율을 증가시키며, 수지상 세포 (DC) (고전적 수지상 세포, 자연 살해 수지상 세포 (NKDC), 및 형질세포양 수지상 세포 (pDC)를 포함함)의 분화를 촉진하고, 4-1BB+PD-1+ 신생항원 특이적 CD8 T 세포의 집단을 증가시킨다. 항-CD11b-I-도메인 항체로 CD11b의 I-도메인에 결합시킴으로써 콜드 (염증이 없는) 종양을 핫 (염증이 있는) 종양으로 전환시키는 것은 면역 반응 조절자의 증강된 유효성을 허용한다.
Description
본 발명은 면역 반응을 조절하는 방법, 특히 CD11b의 I-도메인에 대한 결합을 포함하는 방법에 관한 것이다.
인티그린 알파 M (CD11b, CR3A, 또는 ITGAM)은 단핵세포, 과립구, 대식세포, 수지상 세포, NK 세포, 천연 살해 수지상 세포, 형질세포양 수지상 세포, 및 골수-유래 억압자 세포 (MDSC)를 포함한, 수많은 선천적 면역 세포의 표면에서 발현되는 헤테로다이머 인티그린 알파-M 베타-2 (αMβ2) 분자를 형성하는 한 단백질 하위단위이다.
CD11b는 큰 세포외 영역, 단일 소수성 경막 도메인, 및 짧은 세포질 꼬리로 이루어진다. CD11b의 세포외 영역은 β-프로펠러 도메인, 타이(thigh) 도메인, 카프(calf)-1 도메인, 및 카프-2 도메인을 포함한다. CD11b의 I-도메인은 β-프로펠러(propeller) 도메인에 삽입된 약 179개의 아미노산으로 이루어진다. I-도메인은 다양한 리간드 (예컨대, iC3b, 피브리노겐, ICAM-I, 및 CD40L, 등)에 대한 결합 부위이고, 세포 부착, 이동, 주화성, 및 식세포작용을 조절함으로써 염증을 매개한다.
CD11b의 결찰은 T 헬퍼 17 (Th17) 분화를 억제함으로써 말초 내성의 발생을 용이하게 할 수 있는 것으로 밝혀졌다. 이에 더불어, 항원-제공 세포 (수지상 세포 및 대식세포) 상에서 발현된 활성 CD11b는 전체 T 세포 활성화를 직접적으로 억제할 수 있다. 최근 연구 결과는 CD11b가 Toll-유사 수용체 (TLR) 반응을 조절함으로써 염증에 중요한 역할을 하는 것을 나타낸다. CD11b-I-도메인의 높은 결합력 결찰은 골수 분화 일차 반응 단백질 88 (MyD88) 및 TIR-도메인-함유 어댑터-유도 인터페론-β (TRIF)의 분해를 촉진함으로써 TLR 신호전달의 신속한 억제로 이어진다. 그러므로, 인티그린 αMβ2는 선천적인 면역 반응의 음성 조절자로서 작용할 수 있다.
면역 체크포인트 차단 약물, 예컨대 항-PD1, 항-PDL1, 및 항-CTLA4 항체는 종양 파괴성 면역 반응을 제공하고 암 환자에서 지속적인 임상 반응을 유도할 수 있다. 그러나, 이들 약물은 "핫(hot)" 종양 (즉, 염증이 있고, 돌연변이 유발 부담이 높으며, 신생항원 특이적 T-세포 침윤을 유인할 수 있는 것들)에서 최상으로 작용한다. 대조적으로, "콜드(cold)" 종양 (즉, 염증이 없고, 돌연변이 유발 부담이 낮으며, 신생항원 특이적 T-세포 침윤을 유인할 수 없는 것들)은 전형적으로 면역 체크포인트 차단 요법에 덜 반응한다.
종양 미세환경은 종양의 지속적인 성장, 침습, 및 전이를 의존하는 복잡한 환경이다. 많은 연구가 종양-관련 골수 세포 (TAMC)가 종양 미세환경에서 면역 세포의 주요 구성요소인 것을 밝혔고, TAMC가 종양 진행을 직접적으로 또는 간접적으로 촉진하는 것으로 여겨진다. 종양 미세환경에서 TAMC는 골수-유래 억압자 세포 (MDSC), 종양-관련 대식세포 (TAM), 호중구, 비만 세포, 및 수지상 세포로 구성된다. 이들 세포는 T 세포 기능의 억압에 기여하고, 이러한 억압은 면역 체크포인트 차단 내성과 상관이 있다. 그러므로, 이들 TAMC는 새로운 암 면역요법의 목표일 수 있다.
발명의 한 측면은 면역 반응을 조절하는 방법에 관한 것이다. 발명의 한 구체예에 따르는 방법은 그것을 필요로 하는 대상체에게 제약학적 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 면역 반응을 조절하는 단계를 포함하며, 여기서 제약학적 조성물은 세포, 예컨대 종양-관련 골수 세포 (TAMC)에서 CD11b의 I-도메인에 특이적으로 결합하는 시약을 포함한다. 시약은 CD11b의 I-도메인에 결합하는 항체일 수 있다. CD11b의 I 도메인은 다양한 부착 리간드에 대한 주요 인식 부위를 가진다 (M.S. Diamond et al, J. Cell Biol., 120(4): 1031). 부착 기능에 대해 알려져 있는, CD11b의 I-도메인에 대한 결합이 면역 반응을 조절할 수 있다는 사실은 진정 예상하지 못한 것이다.
발명의 일부 구체예에 따르면, 면역 반응을 조절하기 위한 제약학적 조성물은 또 다른 면역 반응 조절자, 예컨대 면역 체크포인트 차단 약물을 추가로 포함할 수 있다. 면역 체크포인트 차단 약물은 CTLA4에 특이적으로 결합하는 시약, 예컨대 항-CTLA4 항체이다.
발명의 일부 구체예에 따르면, 제약학적 조성물은 추가로 면역 체크포인트 차단 약물을 포함한다. 면역 체크포인트 차단 약물은 PD1에 특이적으로 결합하는 시약, 예컨대 항-PD1 항체이다.
발명의 일부 구체예에 따르면, 제약학적 조성물은 추가로 면역 체크포인트 차단 약물을 포함한다. 면역 체크포인트 차단 약물은 PDL1에 특이적으로 결합하는 시약, 예컨대 항-PDL1 항체이다.
발명의 일부 구체예에 따르면, 제약학적 조성물은 추가로 면역 체크포인트 차단 약물을 포함한다. 면역 체크포인트 차단 약물은 0X40 (즉, CD134)에 특이적으로 결합하는 시약, 예컨대 항-OX40 항체이다.
발명의 일부 구체예에 따르면, 제약학적 조성물은 추가로 면역 체크포인트 차단 약물을 포함한다. 면역 체크포인트 차단 약물은 CD40에 특이적으로 결합하는 시약, 예컨대 항-CD40 항체이다.
발명의 구체예는 면역 반응을 조절하기 위하여 CD11b의 I-도메인에 대한 시약의 특이적 결합을 포함한다. 그 결과로서, 종양 미세환경은 콜드 종양의 미세환경으로부터 핫 종양의 미세환경으로 변화하여, 종양이 화학요법 및 방사선 요법을 포함한 다양한 치료적 치료에 더 민감해지게 된다. 그러므로, 발명의 일부 구체예는 CD11b의 I-도메인에 특이적으로 결합하는 시약 및 다른 암 치료 모달리티 (예컨대 화학요법제 또는 방사선 요법)를 사용하는 병용 요법을 포함한다. 화학요법제의 실례는 탁솔 또는 다른 화학요법제를 들 수 있다.
발명의 다른 측면은 다음의 설명 및 관련된 도면으로 드러나게 될 것이다.
도 1은 항-CD11b-I-도메인 항체 치료 후 B16F10 종양 조직액에서의 사이토카인 프로파일을 도시한다. C57/BL6 마우스가 2 x1O5개의 B16F10 세포로 피하 주사되었다. 종양 부피가 대략 500 mm3이 되었을 때, 마우스는 대조군 IgG (5 mg/kg) 또는 항-CD11b-I-도메인 항체 (5 mg/kg)로 복강내 주사되었다. 하루가 지난 후, 마우스는 희생되었고 종양 조직액 중의 사이토카인 농도가 BD 세포분석 비드 어레이 (CBA)를 사용하여 측정되었다.
도 2는 항-CD11b-I-도메인 항체 치료 후 IDO+ MDSC의 백분율을 도시한다. 대조군 IgG 또는 항-CD11b-I-도메인 항체의 존재 하에 포르볼 12-미리스테이트-13-아세테이트 (PMA)로 24시간 내지 72시간 동안 자극된 MDSC에서의 인돌아민 2,3-다이옥시게나제 (IDO) 발현이 항-마우스 Gr-1 FITC 항체로의 세포 표면 염색 및 항-마우스 IDO APC 항체로의 세포내 염색에 의해 평가되었다. 그 결과는 대조군 IgG로의 치료와 비교되는 바, 항-CD11b-I-도메인 항체 치료 후에 IDO+ MDSC의 시간-의존성 감소가 있음을 보여준다.
도 3은 MDSC 및 대조군 IgG 또는 항-CD11b-I-도메인 항체의 존재 하에 CD8 세포의 시험관내 증식 지수를 도시한다. MDSC는 T 세포를 포함한 면역 세포와 상호작용하여 그것을 억압할 수 있다. 본원에서, MDSC의 억압 활성은 CD8 세포 증식에 의해 관찰되는 바, 항-CD3 및 항-CD28 항체에 의한 T 세포 활성화를 억제하는 능력에 의해 평가된다. 도 3에서 나타낸 것과 같이, 항-CD11b-I-도메인 항체의 존재 하에, 대조군 IgG로의 치료와 비교하여, MDSC의 T-세포 억압 능력은 억제되고, CD8 세포 증식은 증가된다.
도 4는 종양 관련 대식세포 표현형 (M1 또는 M2) 분극에 미치는 항-CD11b-I-도메인 항체 (예컨대, 44aacb 및 M1/70 항체)로의 치료의 영향을 도시한다. 결과는 항-CD11b-I-도메인 항체 치료가 M2 대식세포에 비해, M1 대식세포를 상당히 증가시키는 것을 보여준다. 이에 더불어, 항-CD11b-I-도메인 항체로의 치료는 또한 CD11c 및 DC-SIGN 수지상 세포 마커의 증가에 의해 증명되는 것과 같이, 수지상 세포 집단을 증가시킨다.
도 5는 항-CD11b-I-도메인 항체 치료 후의 M1/M2 종양 관련 대식세포의 유동 세포분석적 분석 및 정량화의 결과를 도시한다. Balb/c 마우스에 제0일에 3 x1O5개의 CT26 세포가 피하로 주사되었다. 종양 부피가 대략 50-100 mm3이 되었을 때, 마우스는 대조군 IgG (5 mg/kg), 항-CD11b-I-도메인 항체 (5 mg/kg), 또는 항-PD-L1 항체 (5 mg/kg) 중 어느 하나로 복강내 주사되었다. 주사는 3 내지 4일마다 반복되었다. 4번째 치료 후에, 마우스가 희생되었고, 종양 관련 대식세포가 분리되었다. 종양 관련 대식세포의 M1 (MHC II+, CD206-) 및 M2 (MHC II-, CD206+) 표현형이 유동 세포분석에 의해 분석되었다.
도 6은 항-CD11b-I-도메인 항체 치료 후 CT26 종양에서 종양 관련 대식세포 (TAM)에 미치는 MHC II의 유동 세포분석적 분석 및 정량화를 도시한다. Balb/c 마우스가 제0일에 3 x1O5개의 CT26 세포로 피하 주사되었다. 종양 부피가 대략 50-100 mm3이 되었을 때, 마우스는 대조군 IgG (5 mg/kg), 항-CD11b-I-도메인 항체 (5 mg/kg), 또는 항-PD-L1 항체 (5 mg/kg)로 복강내 주사되었다. 주사는 3 내지 4일마다 반복되었다. 4번째 치료 후에, 마우스가 희생되었고, 종양 관련 대식세포가 분리되었다. 종양 관련 대식세포에서 MHC II의 세기가 유동 세포분석에 의해 분석되었다. * P < 0.05; ** P < 0.01.
도 7은 CT26 종양의 성장에 미치는 항-CD11b-I-도메인 항체 및 CpG 병용 요법의 영향을 도시한다. Balb/c 마우스가 제0일에 3 x1O5개의 CT26 세포로 피하 주사되었다. 종양 부피가 대략 50-100 mm3이 되었을 때, 마우스 (그룹당 5마리)는 대조군 IgG (5 mg/kg), 항-CD11b-I-도메인 항체 (5 mg/kg), CpG 올리고뉴클레오타이드 (클래스 B, ODN 1668) (50 pg), 또는 항-CD11b-I-도메인 항체 (5 mg/kg) + CpG 올리고뉴클레오타이드 (클래스 B, ODN 1668) (50 pg) 중 어느 하나로 복강내 주사되었다. 제2 주사가 제1 치료 후 3일 후에 반복되었다. 종양 부피가 측정되었고, 그 결과가 평균 ± SEM으로서 표시된다.
도 8은 CT26 종양의 성장에 미치는 항-CD11b-I-도메인 항체 및 항-CTLA4 항체 병용 요법의 영향을 도시한다. Balb/c 마우스가 제0일에 3 x1O5개의 CT26 세포로 피하 주사되었다. 종양 부피가 대략 50-100 mm3이 되었을 때, 마우스 (그룹당 5마리)는 대조군 IgG (5 mg/kg), 항-CD11b-I-도메인 항체 (5 mg/kg), 항-CTLA4 항체 (5 mg/kg), 또는 항-CD11b-I-도메인 항체 (5 mg/kg) + 항-CTLA4 항체 (5 mg/kg) 중 어느 하나로 복강내 주사되었다. 주사는 3 내지 4일마다 반복되었다. 종양 부피가 측정되었고, 그 결과가 평균 ± SEM으로서 표시된다.
도 9는 CT26 종양의 성장에 미치는 항-CD11b-I-도메인 항체 및 항-PD1 항체 병용 요법의 영향을 도시한다. Balb/c 마우스가 제0일에 3 x 1O5개의 CT26 세포로 피하로 주사되었다. 종양 부피가 대략 50-100 mm3이 되었을 때, 마우스 (그룹당 5마리)는 대조군 IgG (5 mg/kg), 항-CD11b-I-도메인 항체 (5 mg/kg), 항-PD1 항체 (5 mg/kg), 또는 항-CD11b-I-도메인 항체 (5 mg/kg) + 항-PD1 항체 (5 mg/kg) 중 어느 하나로 복강내 주사되었다. 주사는 3내지 4일마다 반복되었다. 종양 부피가 측정되었고, 그 결과가 평균 ± SEM으로서 표시된다.
도 10은 CT26 종양의 성장에 미치는 항-CD11b-I-도메인 항체 및 항-OX40 항체 병용 요법의 영향을 도시한다. Balb/c 마우스가 제0일에 3 x 105개의 CT26 세포로 피하로 주사되었다. 종양 부피가 대략 50-100 mm3이 되었을 때, 마우스 (그룹당 5마리)는 대조군 IgG (5 mg/kg), 항-CD11b-I-도메인 항체 (5 mg/kg), 항-OX40 항체 (5 mg/kg), 또는 항-CD11b-I-도메인 항체 (5 mg/kg) + 항-OX40 항체 (5 mg/kg) 중 어느 하나로 복강내 주사되었다. 주사는 3내지 4일마다 반복되었다. 종양 부피가 측정되었고, 그 결과가 평균 ± SEM으로서 표시된다.
도 11은 CT26 종양의 성장에 미치는 항-CD11b-I-도메인 항체 및 항-CD40 항체 병용 요법의 영향을 도시한다. Balb/c 마우스가 제0일에 3 x1O5개의 CT26 세포로 피하로 주사되었다. 종양 부피가 대략 50-100 mm3이 되었을 때, 마우스 (그룹당 5마리)는 대조군 IgG (5 mg/kg), 항-CD11b-I-도메인 항체 (5 mg/kg), 항-CD40 항체 (5 mg/kg), 또는 항-CD11b-I-도메인 항체 (5 mg/kg) + 항-CD40 항체 (5 mg/kg) 중 어느 하나로 복강내 주사되었다. 주사는 3내지 4일마다 반복되었다. 종양 부피가 측정되었고, 그 결과가 평균 ± SEM으로서 표시된다.
도 12A-12C는 FACS로 분석되는 바, CT26 종양-포함 마우스에서 수지상 세포에 미치는 항-CD11b-I-도메인 항체의 영향을 도시한다. 도 12A: 고전적 수지상 세포 (DC), 도 12B: 천연 살해 수지상 세포 (NKDC), 및 도 12C: 형질세포양 수지상 세포 (pDC). Balb/c 마우스가 제0일에 3x105개의 CT26 세포로 피하로 주사되었다. 종양 부피가 대략 50-100 mm3이 되었을 때, 마우스는 대조군 IgG (5 mg/kg), 또는 항-CD11b-I-도메인 항체 (5 mg/kg)로 복강내 주사되었다. 주사는 3내지 4일마다 반복되었다. 4번째 치료 후에, 마우스는 희생되었고, 종양 관련 대식세포가 분리되었다. 종양에서의 고전적 수지상 세포, 천연 살해 수지상 세포, 및 형질세포양 수지상 세포의 양이 유동 세포분석에 의해 계수되었다.
도 13은 CT26 종양 포함 마우스로부터의 종양 4-1BB+PD-1+ 신생항원 특이적 CD8 T 세포 수의 FACS 분석을 도시한다. Balb/c 마우스가 제0일에 3 x1O5개의 CT26 세포로 피하로 주사되었다. 종양 부피가 대략 50-100 mm3이 되었을 때, 마우스 (그룹당 5마리)는 대조군 IgG (5 mg/kg), 항-CD11b-I-도메인 항체 (5 mg/kg), 항-CTLA4 항체 (5 mg/kg), 또는 항-CD11b-I-도메인 항체 (5 mg/kg) + 항-CTLA4 항체 (5 mg/kg) 중 어느 하나로 복강내 주사되었다. 주사는 3내지 4일마다 반복되었다. 4번째 치료 후, 마우스는 희생되었고, 종양 관련 대식세포가 분리되었다. 종양에서의 4-1BB+PD-1+ 신생항원 특이적 CD8 T 세포의 양이 유동 세포분석에 의해 계수되었다.
도 14는 초기 종양 접종 후 77일 후를 도시하며, 항-CD11b-I-도메인 항체 및 항-CTLA4 항체로 처리된 생존하는 마우스 (면역화된 마우스로서 언급됨)가 두 번째로 3 x 105개의 모(parental) CT26 세포로 주사되었다. 2마리의 비면역화된 (나이브) 마우스가 대조군 그룹으로서 동일한 방식으로 주사되었다. 종양 부피는 평균 ± SEM이다.
도 15는 B16F10 종양의 성장에 미치는 항-CD11b 항체 및 탁솔 병용 요법의 영향을 도시한다. C57BL/6 마우스가 제0일에 2 x1O5개의 B16F10 세포로 피하로 주사되었다. 제7일에, 마우스는 대조군 IgG (5mg/kg), 항-마우스 CD11b-I-도메인 항체 (5 mg/kg), 탁솔 (10 mg/kg) + 대조군 IgG (5mg/kg), 또는 탁솔 (10 mg/kg) + 항-CD11b-I-도메인 항체 (5 mg/kg) 중 어느 하나로 복강내 주사되었다. 주사는 3내지 4일마다 반복되었다. 종양 부피가 측정되었고, 그 결과가 평균 ± SEM으로서 표시된다.
도 2는 항-CD11b-I-도메인 항체 치료 후 IDO+ MDSC의 백분율을 도시한다. 대조군 IgG 또는 항-CD11b-I-도메인 항체의 존재 하에 포르볼 12-미리스테이트-13-아세테이트 (PMA)로 24시간 내지 72시간 동안 자극된 MDSC에서의 인돌아민 2,3-다이옥시게나제 (IDO) 발현이 항-마우스 Gr-1 FITC 항체로의 세포 표면 염색 및 항-마우스 IDO APC 항체로의 세포내 염색에 의해 평가되었다. 그 결과는 대조군 IgG로의 치료와 비교되는 바, 항-CD11b-I-도메인 항체 치료 후에 IDO+ MDSC의 시간-의존성 감소가 있음을 보여준다.
도 3은 MDSC 및 대조군 IgG 또는 항-CD11b-I-도메인 항체의 존재 하에 CD8 세포의 시험관내 증식 지수를 도시한다. MDSC는 T 세포를 포함한 면역 세포와 상호작용하여 그것을 억압할 수 있다. 본원에서, MDSC의 억압 활성은 CD8 세포 증식에 의해 관찰되는 바, 항-CD3 및 항-CD28 항체에 의한 T 세포 활성화를 억제하는 능력에 의해 평가된다. 도 3에서 나타낸 것과 같이, 항-CD11b-I-도메인 항체의 존재 하에, 대조군 IgG로의 치료와 비교하여, MDSC의 T-세포 억압 능력은 억제되고, CD8 세포 증식은 증가된다.
도 4는 종양 관련 대식세포 표현형 (M1 또는 M2) 분극에 미치는 항-CD11b-I-도메인 항체 (예컨대, 44aacb 및 M1/70 항체)로의 치료의 영향을 도시한다. 결과는 항-CD11b-I-도메인 항체 치료가 M2 대식세포에 비해, M1 대식세포를 상당히 증가시키는 것을 보여준다. 이에 더불어, 항-CD11b-I-도메인 항체로의 치료는 또한 CD11c 및 DC-SIGN 수지상 세포 마커의 증가에 의해 증명되는 것과 같이, 수지상 세포 집단을 증가시킨다.
도 5는 항-CD11b-I-도메인 항체 치료 후의 M1/M2 종양 관련 대식세포의 유동 세포분석적 분석 및 정량화의 결과를 도시한다. Balb/c 마우스에 제0일에 3 x1O5개의 CT26 세포가 피하로 주사되었다. 종양 부피가 대략 50-100 mm3이 되었을 때, 마우스는 대조군 IgG (5 mg/kg), 항-CD11b-I-도메인 항체 (5 mg/kg), 또는 항-PD-L1 항체 (5 mg/kg) 중 어느 하나로 복강내 주사되었다. 주사는 3 내지 4일마다 반복되었다. 4번째 치료 후에, 마우스가 희생되었고, 종양 관련 대식세포가 분리되었다. 종양 관련 대식세포의 M1 (MHC II+, CD206-) 및 M2 (MHC II-, CD206+) 표현형이 유동 세포분석에 의해 분석되었다.
도 6은 항-CD11b-I-도메인 항체 치료 후 CT26 종양에서 종양 관련 대식세포 (TAM)에 미치는 MHC II의 유동 세포분석적 분석 및 정량화를 도시한다. Balb/c 마우스가 제0일에 3 x1O5개의 CT26 세포로 피하 주사되었다. 종양 부피가 대략 50-100 mm3이 되었을 때, 마우스는 대조군 IgG (5 mg/kg), 항-CD11b-I-도메인 항체 (5 mg/kg), 또는 항-PD-L1 항체 (5 mg/kg)로 복강내 주사되었다. 주사는 3 내지 4일마다 반복되었다. 4번째 치료 후에, 마우스가 희생되었고, 종양 관련 대식세포가 분리되었다. 종양 관련 대식세포에서 MHC II의 세기가 유동 세포분석에 의해 분석되었다. * P < 0.05; ** P < 0.01.
도 7은 CT26 종양의 성장에 미치는 항-CD11b-I-도메인 항체 및 CpG 병용 요법의 영향을 도시한다. Balb/c 마우스가 제0일에 3 x1O5개의 CT26 세포로 피하 주사되었다. 종양 부피가 대략 50-100 mm3이 되었을 때, 마우스 (그룹당 5마리)는 대조군 IgG (5 mg/kg), 항-CD11b-I-도메인 항체 (5 mg/kg), CpG 올리고뉴클레오타이드 (클래스 B, ODN 1668) (50 pg), 또는 항-CD11b-I-도메인 항체 (5 mg/kg) + CpG 올리고뉴클레오타이드 (클래스 B, ODN 1668) (50 pg) 중 어느 하나로 복강내 주사되었다. 제2 주사가 제1 치료 후 3일 후에 반복되었다. 종양 부피가 측정되었고, 그 결과가 평균 ± SEM으로서 표시된다.
도 8은 CT26 종양의 성장에 미치는 항-CD11b-I-도메인 항체 및 항-CTLA4 항체 병용 요법의 영향을 도시한다. Balb/c 마우스가 제0일에 3 x1O5개의 CT26 세포로 피하 주사되었다. 종양 부피가 대략 50-100 mm3이 되었을 때, 마우스 (그룹당 5마리)는 대조군 IgG (5 mg/kg), 항-CD11b-I-도메인 항체 (5 mg/kg), 항-CTLA4 항체 (5 mg/kg), 또는 항-CD11b-I-도메인 항체 (5 mg/kg) + 항-CTLA4 항체 (5 mg/kg) 중 어느 하나로 복강내 주사되었다. 주사는 3 내지 4일마다 반복되었다. 종양 부피가 측정되었고, 그 결과가 평균 ± SEM으로서 표시된다.
도 9는 CT26 종양의 성장에 미치는 항-CD11b-I-도메인 항체 및 항-PD1 항체 병용 요법의 영향을 도시한다. Balb/c 마우스가 제0일에 3 x 1O5개의 CT26 세포로 피하로 주사되었다. 종양 부피가 대략 50-100 mm3이 되었을 때, 마우스 (그룹당 5마리)는 대조군 IgG (5 mg/kg), 항-CD11b-I-도메인 항체 (5 mg/kg), 항-PD1 항체 (5 mg/kg), 또는 항-CD11b-I-도메인 항체 (5 mg/kg) + 항-PD1 항체 (5 mg/kg) 중 어느 하나로 복강내 주사되었다. 주사는 3내지 4일마다 반복되었다. 종양 부피가 측정되었고, 그 결과가 평균 ± SEM으로서 표시된다.
도 10은 CT26 종양의 성장에 미치는 항-CD11b-I-도메인 항체 및 항-OX40 항체 병용 요법의 영향을 도시한다. Balb/c 마우스가 제0일에 3 x 105개의 CT26 세포로 피하로 주사되었다. 종양 부피가 대략 50-100 mm3이 되었을 때, 마우스 (그룹당 5마리)는 대조군 IgG (5 mg/kg), 항-CD11b-I-도메인 항체 (5 mg/kg), 항-OX40 항체 (5 mg/kg), 또는 항-CD11b-I-도메인 항체 (5 mg/kg) + 항-OX40 항체 (5 mg/kg) 중 어느 하나로 복강내 주사되었다. 주사는 3내지 4일마다 반복되었다. 종양 부피가 측정되었고, 그 결과가 평균 ± SEM으로서 표시된다.
도 11은 CT26 종양의 성장에 미치는 항-CD11b-I-도메인 항체 및 항-CD40 항체 병용 요법의 영향을 도시한다. Balb/c 마우스가 제0일에 3 x1O5개의 CT26 세포로 피하로 주사되었다. 종양 부피가 대략 50-100 mm3이 되었을 때, 마우스 (그룹당 5마리)는 대조군 IgG (5 mg/kg), 항-CD11b-I-도메인 항체 (5 mg/kg), 항-CD40 항체 (5 mg/kg), 또는 항-CD11b-I-도메인 항체 (5 mg/kg) + 항-CD40 항체 (5 mg/kg) 중 어느 하나로 복강내 주사되었다. 주사는 3내지 4일마다 반복되었다. 종양 부피가 측정되었고, 그 결과가 평균 ± SEM으로서 표시된다.
도 12A-12C는 FACS로 분석되는 바, CT26 종양-포함 마우스에서 수지상 세포에 미치는 항-CD11b-I-도메인 항체의 영향을 도시한다. 도 12A: 고전적 수지상 세포 (DC), 도 12B: 천연 살해 수지상 세포 (NKDC), 및 도 12C: 형질세포양 수지상 세포 (pDC). Balb/c 마우스가 제0일에 3x105개의 CT26 세포로 피하로 주사되었다. 종양 부피가 대략 50-100 mm3이 되었을 때, 마우스는 대조군 IgG (5 mg/kg), 또는 항-CD11b-I-도메인 항체 (5 mg/kg)로 복강내 주사되었다. 주사는 3내지 4일마다 반복되었다. 4번째 치료 후에, 마우스는 희생되었고, 종양 관련 대식세포가 분리되었다. 종양에서의 고전적 수지상 세포, 천연 살해 수지상 세포, 및 형질세포양 수지상 세포의 양이 유동 세포분석에 의해 계수되었다.
도 13은 CT26 종양 포함 마우스로부터의 종양 4-1BB+PD-1+ 신생항원 특이적 CD8 T 세포 수의 FACS 분석을 도시한다. Balb/c 마우스가 제0일에 3 x1O5개의 CT26 세포로 피하로 주사되었다. 종양 부피가 대략 50-100 mm3이 되었을 때, 마우스 (그룹당 5마리)는 대조군 IgG (5 mg/kg), 항-CD11b-I-도메인 항체 (5 mg/kg), 항-CTLA4 항체 (5 mg/kg), 또는 항-CD11b-I-도메인 항체 (5 mg/kg) + 항-CTLA4 항체 (5 mg/kg) 중 어느 하나로 복강내 주사되었다. 주사는 3내지 4일마다 반복되었다. 4번째 치료 후, 마우스는 희생되었고, 종양 관련 대식세포가 분리되었다. 종양에서의 4-1BB+PD-1+ 신생항원 특이적 CD8 T 세포의 양이 유동 세포분석에 의해 계수되었다.
도 14는 초기 종양 접종 후 77일 후를 도시하며, 항-CD11b-I-도메인 항체 및 항-CTLA4 항체로 처리된 생존하는 마우스 (면역화된 마우스로서 언급됨)가 두 번째로 3 x 105개의 모(parental) CT26 세포로 주사되었다. 2마리의 비면역화된 (나이브) 마우스가 대조군 그룹으로서 동일한 방식으로 주사되었다. 종양 부피는 평균 ± SEM이다.
도 15는 B16F10 종양의 성장에 미치는 항-CD11b 항체 및 탁솔 병용 요법의 영향을 도시한다. C57BL/6 마우스가 제0일에 2 x1O5개의 B16F10 세포로 피하로 주사되었다. 제7일에, 마우스는 대조군 IgG (5mg/kg), 항-마우스 CD11b-I-도메인 항체 (5 mg/kg), 탁솔 (10 mg/kg) + 대조군 IgG (5mg/kg), 또는 탁솔 (10 mg/kg) + 항-CD11b-I-도메인 항체 (5 mg/kg) 중 어느 하나로 복강내 주사되었다. 주사는 3내지 4일마다 반복되었다. 종양 부피가 측정되었고, 그 결과가 평균 ± SEM으로서 표시된다.
정의
용어 "CD11b"는 헤테로다이머 인티그린 αMβ2의 하위유닛인 인티그린 알파 M (ITGAM)을 나타낸다. 인티그린 αMβ2의 다른 하위유닛은 CD18로서 알려져 있는 공통 인티그린 β2 하위유닛이다. 인티그린 αMβ2는 또한 단핵세포, 과립구, 대식세포, 수지상 세포, B 세포, T 세포, 및 자연 살해 세포를 포함한, 백혈구 표면에서 발현되는 대식세포-1 항원 (Mac-1) 또는 보체 수용체 3 (CR3)으로 불린다.
"CD11b-I-도메인"은 또한 β-프로펠러 도메인에 삽입되며 다음의 아미노산 서열 (SEQ ID NO: 1)을 포함하는 "CD11b-A-도메인" (폰 빌레브란트 인자 (vWF) A-형 도메인)으로서 언급된다:
DIAFLIDGSGSIIPHDFRRMKEFVSTVMEQLKKSKTLFSLMQYSEEFRIHFTFKEFQNNP
NPRSLVKPITQLLGRTHTATGIRKVVRELFNITNGARKNAFKILVVITDGEKFGDPLGY
EDVIPEADREGVIRYVIGVGDAFRSEKSRQELNTIASKPPRDHVFQVNNFEALKTIQNQ
L (SEQ ID NO: 1).
용어 "면역 반응 조절자"는 숙주에서 면역 반응을 조절할 수 있는 작용제를 나타낸다. 용어 "면역 체크포인트 차단 약물"은 면역 체크포인트를 통해 면역억압을 완화시킬 수 있는 "면역 체크포인트 억제제"를 나타낸다.
상세한 설명
발명의 구체예들은 면역 반응을 조절하는 방법에 관한 것이다. 발명의 구체예는 종양 미세환경에서 종양-관련 골수 세포 (TAMC)에서 CD11b의 I-도메인에 결합하는 시약을 토대로 한다. 발명의 구체예에 따르면, CD11b의 I-도메인에 특이적으로 결합하는 시약은 단클론성 항체, 또는 그것의 결합 단편을 포함한 항체일 수 있다.
발명의 구체예에 따르면, 특이적 시약 (예컨대, 항-CD11b-I-도메인 항체)을 사용한 CD11b의 I-도메인에 대한 결합은 면역자극성 반응을 유도 또는 촉발시킬 수 있다. CD11b의 I-도메인이 부착에서 그것의 연루성에 대해 알려져 있는 한편, 본 발명의 발명자들은 CD11b의 I-도메인에 대한 그러한 시약의 특이적 결합이 종양 미세환경에서 다음의 효과 중 하나 이상을 가질 수 있음을 예상치 못하게 발견하였다: 종양 미세환경에서 염증성 사이토카인을 증가시키고, IDO+ 골수 억압자 세포의 집단을 감소시키며, 종양 관련 대식세포 상의 M2 마커보다 M1 마커를 상향 조절하고, M1:M2 종양-관련 대식세포 비율을 증가시키며, 수지상 세포 (DC) (고전적 수지상 세포, 자연 살해 수지상 세포 (NKDC), 및 형질세포양 수지상 세포 (pDC)를 포함함)의 분화를 촉진하고, 4-1BB+PD-1+ 신생항원 특이적 CD8 T 세포의 집단을 증가시킨다. 이들 효과는 시약 (예컨대, 항-CD11b-I-도메인 항체)의 CD11b의 I-도메인에 대한 특이적 결합이 콜드 (염증이 없는) 종양의 핫 (염증이 있는) 종양으로의 전환을 유도할 수 있고, 그것은 면역 체크포인트 요법의 증강된 효능을 가능하게 할 수 있음을 시사한다.
발명의 구체예는 다음의 특정 실시예로 예시될 것이다. 그러나, 기술분야의 숙련자는 이들 특정 실례가 단지 예시를 위한 것이며 다른 변형 및 변화가 발명의 범주로부터 벗어나지 않으면서 가능한 것을 인정할 것이다. 항-CD11b-I-도메인 항체 치료는 종양 미세환경에서 염증성 사이토카인 방출을 증강시켰다.
선행 연구는 CD11b 활성화가 TLR-촉발된 염증 반응을 부정적으로 조절한다는 것을 확립하였다. CD11b가 종양-관련 골수 세포 (TAMC) 상에서 발현되기 때문에, 본 발명자들은 항체를 사용하는 CD11b-I-도메인 기능으로의 CD11b의 차단이 종양 미세환경에서 염증성 사이토카인 방출을 증가시킬 수 있는 것으로 추론하였다. 그러므로 본 발명자들은 항-CD11b-I-도메인 항체로의 치료 후에 B16F10 종양에서 전염증성 사이토카인 (예컨대, TNF-α, IL-6, IL-12, IFN-γ, MCP-1, 등)의 분비를 평가하였다.
도 1에서 나타낸 것과 같이, TNF-α, IL-6, 및 MCP-1 (단핵세포 화학유인 단백질 1)의 분비는 항-CD11b-I-도메인 항체-처리 종양으로부터의 조직액에서 더 높은 반면, IL-10 및 IL-12p70의 분비는 더 낮다. 이들 결과는 항-CD11b-I-도메인 항체 치료가 전염증성 사이토카인의 생성을 증가시킬 수 있음을 나타낸다. 달리 표현하면, 항-CD11b-I-도메인 항체 치료는 콜드 (염증이 없는) 종양을 핫 (염증이 있는) 종양으로 전환시킬 수 있다.
"핫 종양"은 T 세포에 의해 침습되어 염증이 있는 미세환경을 초래하는 것이다. 종양 미세환경에서 T 세포는 종양 세포에 대항하기 위해 쉽게 고정될 수 있다. 예를 들어, 면역 체크포인트 차단 약물 (즉, 면역 체크포인트 억제제), 예컨대 항-PD1, 항-PDL1, 및 항-CTLA4 항체는 T 세포 상의 종양에 의해 발휘된 브레이크를 방출할 수 있다. 이들 약물은 "핫" 종양 (즉, 염증이 있고, 높은 돌연변이유발 부담이 있으며, 신생항원 특이적 T-세포 침윤을 유인할 수 있는 것들)에서 최상으로 작용한다. 그러므로, "콜드" 종양을 "핫" 종양으로 전환시킴으로써, 발명의 방법은 면역 체크포인트 차단 요법의 효율을 증강시킬 수 있다.
항-CD11b-I-도메인 항체 치료는 마우스 MDSC에서 IDO+ 집단을 감소시켰고 MDSC-유도된 T 세포 억제를 반전시켰다
골수-유래 억압자 세포 (MDSC)는 골수 계통으로부터의 면역 세포의 이종성 그룹이다. MDSC는 MDSC가 다른 골수 세포에서 발견된 면역자극 특성 대신 강력한 면역억압 활성을 가진다는 점에서 다른 골수 세포 유형과 구별된다. 비록 이것들의 작용 메커니즘이 완전히 이해되지는 않았지만, 임상 및 실험상의 증거가 MDSC의 높은 침윤을 가진 암 조직이 불량한 환자 예후 및 치료법에 대한 내성과 관련이 있음을 나타낸다.
몇몇 메커니즘, 예컨대 아라기나제 1 (arg1)의 생성 및 인돌아민 2,3-다이옥시게나제 (IDO)의 발현을 통한 MDSC는 면역억압을 유도하여 T-세포 억제로 이어질 수 있다. 마우스 종양 모델에서, MDSC는 고수준의 CD11b (고전적 골수 계통 마커)를 발현하는 골수 세포로서 발견된다. 그러므로, 본 발명자들은 MDSC 면역억압 기능에 미치는 CD11b 차단의 영향을 연구함으로써 MDSC에서 CD11b의 역할을 연구하고자 하였다. 간단히 설명하면, MDSC가 LLC1-포함 마우스로부터 분리되고 항-CD11b-I-도메인 항체로 처리된다. MDSC 특성에 미치는 이러한 치료의 효과가 평가된다.
도 2에서 나타낸 것과 같이, 항-CD11b-I-도메인 항체 치료는 대조군 IgG로의 유사한 치료와 비교하여, 시간-의존 방식으로, 포르볼 12-미리스테이트-13-아세테이트 (PMA)로의 자극 후에 IDO+ MDSC의 집단의 상당한 감소를 초래하였다. IDO+ MDSC의 감소를 토대로, 당업자는 MDSC에 의해 매개된 면역억압 및 T-세포 억제가 감소될 것으로 예상할 수 있다.
실제로, 도 3에서 나타낸 것과 같이, MDSC의 존재 하에 CD8 세포 증식은 대조군 IgG로의 처리와 비교하여, 항-CD11b-I-도메인 항체로의 처리에 의해 증가된다. 이들 결과는 MDSC의 CD11b가 항-CD11b-I-도메인 항체에 의해 차단되었을 때 MDSC-유도 T 세포 억제가 상당히 반전되었음을 나타낸다.
항-CD11b-I-도메인 항체 치료는 M2 마커보다 M1 마커를 상향 조절하였다
대식세포는 조직-상주 전문 식세포 및 항원 제공 세포이다. 대식세포는 혈액 단핵세포로부터 기원한다. 상이한 조직 환경에서, 대식세포는 구별되는 기능성 표현형으로의 특이적 분화를 진행한다. 그것은 통상적으로 2 부류로 나누어졌다: 고전적으로 활성화된 (M1) 대식세포 및 대안자긍로 활성화된 (M2) 대식세포. M1 대식세포는 염증을 조장하는 반면, M2 대식세포는 염증을 감소시키고 조직 수복을 조장한다. 이런 차이는 이것들의 대사에 반영된다: M1 대식세포는 아르기닌을 대사하여 산화 질소를 생성할 수 있는 반면, M2 대식세포는 아르기닌을 대사하여 오르니틴을 생성한다.
표현형으로 보면, M1 대식세포는 고수준의 주요 조직적합성 복합체 클래스 II (MHC II), CD36, 및 동시 자극 분자 CD80 및 CCD86을 발현한다. 대조적으로, M2 대식세포는 CD163+ 및 CD206+로서 특성화되었다. 종양 관련 대식세포 (TAM)는 M2-유사 표현형을 나타내고 종양 진행을 촉진한다. 항-CD11b-I-도메인 항체 치료가 종양-관련 대식세포를 M1 표현형을 향해 왜곡할 수 있는지를 조사하기 위하여, 인간 대식세포가 A549 폐암 세포의 존재 하에 시험관내에서 PBMC로부터 분화되었다.
도 4에서 나타낸 것과 같이, M1 마커의 발현은 대조군 IgG 치료 그룹과 비교하여, 항-CD11b-I-도메인 항체 치료 그룹 (항-CD11b (44aacb) 및 항-CD11b (M1/70))에서 실질적으로 더 높다. 다른 한편으로, M2 마커의 발현은 대조군 IgG 치료 그룹과 비교하여, 항-CD11b-I-도메인 항체 치료 그룹에서 향상이 없거나 약간의 향상만을 보였다. 이에 더불어, 항-CD11b-I-도메인 항체 치료는 또한 수지상 세포 마커인 CD11c 및 DC-SIGN을 상향 조절하였다. 이들 결과는, 함께, CD11b 차단이 종양 관련 대식세포를 M1-표현형 및 성숙한 수지상 세포로 왜곡시켜서, 염증성 미세환경을 면역요법에 도움에 되는 쪽으로 유도하는 것을 입증하였다.
이 실험은 상업적으로 이용 가능한 2가지의 상이한 항-CD11b-I-도메인 항체 (즉, 44aacb 및 M1/70)를 사용하였다. 항-CD11b 항체 44aacb는 많은 상업적 공급원, 예컨대 Novus Biologicals (Littleton, CO, USA) 및 ATCC로부터 이용 가능하다. 항-CD11b 항체 M1/70은 Fisher, Abeam, BioLegent, 등으로부터 이용 가능하다. 나아가, 다른 항-CD11b 항체도 사용될 수 있다. 이들 실험으로부터의 결과는 효과가 임의의 특정 항체에 한정되는 것이 아님을 나타낸다. 실제로, CD11b I-도메인에 결합할 수 있는 임의의 항체, 또는 그것의 결합 단편이 발명의 구체예와 함께 사용될 수 있다.
항-CD11b-I-도메인 항체 치료는 면역억압 M2-유사로부터 보다 염증성인 M1-유사 상태로 종양 관련 대식세포의 활성화를 전환시킨다
상기에서 논의된 것과 같이, CD11b 차단은 시험관내에서 대식세포를 M1 표현형으로 왜곡시킨다. 본 발명자들은 추가로 CT26 종양 모델에서 이런 관찰을 확인하였다. CT26 종양 포함 마우스에서 종양 침윤된 백혈구의 분석은 항-CD11b-I-도메인 항체로의 치료가 대조군 IgG로의 치료와 비교하여, 종양 관련 대식세포에서 M1/M2 대식세포 비율을 증가시켰고 성숙한 수지상 세포 집단을 증가시켰으며 (도 5) MHC II의 발현을 현저하게 증가시켰음 (도 6)을 보인다. 이들 결과는, 함께, 종양 관련 대식세포의 억압성 표현형을 보다 면역 활성인 것으로 조절하는 것이 CD11b-I-도메인 차단에 의해 활성화될 수 있음을 보여준다.
항종양 면역에서 항-CD11b-I-도메인 항체 및 TLR 작용물질 치료의 시너지 효과
최근 연구로부터의 결과는 CD11b-I-도메인의 고결합력 결찰이 Toll-유사 수용체 (TLR) 신호전달의 신속한 억제로 이어지는 것을 보여준다. 그러므로, CD11b-I-도메인 활성을 항-CD11b-I-도메인 항체로 차단하는 것은 TLR 신호전달의 억제를 반전시킬 수 있다. 본 발명자들은 다음으로 CpG 올리고뉴클레오타이드 (TLR9 작용물질) 및 CD11b 차단으로의 병용 면역요법이 항종양 효능을 증강시킬 수 있는지를 조사하였다. Balb/c 암컷 마우스에 3 x 105개의 CT26 결장암 세포가 피하로 이식되었다. 종양 부피가 대략 50-100 mm3이 되었을 때, 마우스는 대조군 IgG, 5 mg/kg의 항-CD11b-I-도메인 항체, 50 μg의 CpG 올리고뉴클레오타이드, 또는 5 mg/kg의 항-CD11b-I-도메인 항체 및 50 μg의 CpG 올리고뉴클레오타이드의 조합물이 복강내로 주사되었다.
도 7에서 나타낸 것과 같이, CpG 올리고뉴클레오타이드로의 단일요법은 종양 성장을 억제하였다. 중요하게, 항-CD11b-I-도메인 항체 및 CpG 올리고뉴클레오타이드의 조합으로 처리된 마우스는 최상의 항종양 반응을 나타냈다. 병용 요법의 극적인 효과는 시너지 효과의 존재를 시사한다.
상기 실험이 실례로서 CpG 올리고뉴클레오타이드 (TLR9 작용물질)를 사용한 한편, 다른 TLR 작용물질도 유사한 방식으로 사용될 수 있다. 기술분야의 숙련된 사람은 발명의 항-CD11b 시약이 또한 이들 TLR 작용물질 접근법과 함께 사용될 수 있음을 인정할 것이다.
항종양 면역에서 항-CD11b-I-도메인 항체 및 면역 체크포인트 치료의 시너지 효과
상기에서 주지된 것과 같이, CD11b의 I-도메인에 특이적으로 결합됨으로써, 발명의 방법은 "콜드" 종양을 "핫" 종양으로 전환시킬 수 있고, 그로써 면역 체크포인트 차단 요법의 효능을 증강시킬 수 있다. 본 발명자들은 다음으로 이러한 병용 요법의 효과를 조사한다.
CTLA4는 T-세포에 의해 발현된 억제성 수용체이고 수지상 세포 또는 대식세포 상에서 발현된 CD80/CD86의 결찰 (리간드 결합) 후에 T-세포 반응의 이펙터 단계를 부정적으로 조절한다. 항-CD11b-I-도메인 항체 치료가 종양 관련 대식세포 상에서 CD80/CD86의 발현을 증강시키기 때문에, 본 발명자들은 다음으로 CD11b 및 CTLA4 차단의 병용 면역요법이 항종양 효능을 증강시킬 수 있는지를 조사한다. Balb/c 암컷 마우스에 3 x 105개의 CT26 결장암 세포가 피하로 이식되었다. 종양 부피가 대략 50-100 mm3이 되었을 때, 마우스는 대조군 IgG, 5 mg/kg의 항-CD11b-I-도메인 항체, 5 mg/kg의 항-CTLA4 항체, 또는 5 mg/kg의 항-CD11b-I-도메인 항체 및 5 mg/kg의 항-CTLA4 항체의 조합물이 복강내로 주사되었다.
도 8에서 나타낸 것과 같이, 항-CD11b-I-도메인 항체로의 단일요법은 부분적으로 효력적이었던 한편, 항-CTLA4 항체로의 단일요법은 종양 성장을 상당히 억제하였다. 중요하게, 항-CD11b-I-도메인 항체 및 항-CTLA4 항체의 조합으로 처리된 마우스는 최상의 항종양 반응을 나타냈고, 60% 퇴행률을 초래하였다. 병용 요법의 극적인 효과는 시너지 효과의 존재를 시사한다.
상기 실험이 실례로서 CTLA4를 사용한 한편, 다른 면역체크포인트 표적이 또한 유사한 방식으로 사용될 수 있다. 예를 들어, PD-1 및 PDL-1은 면역 체크포인트 조절에 관여하는 것으로 나타났고, PD-1 및 PDL-1에 대한 항체는 면역 억압을 반전시키는 데 효과적인 것으로 나타났다. 0X40 (또한 CD134 또는 종양 괴사 인자 수용체 수퍼패밀리 구성원 4 (TNFFRSF4)로도 알려짐) 및 T-세포 면역글로불린 및 뮤신-도메인 함유-3 (TIM3)이 면역 체크포인트의 다른 실례이다. 0X40 또는 TIM3의 차단은 종양-유도된 면역 억압을 완화시킬 수 있다.
도 9에서 나타낸 것과 같이, 항-PD1 항체로의 단일요법은 종양 성장을 약간 억제한 한편, 항-CD11b-I-도메인 항체 및 항-PD1 항체의 조합으로 처리된 마우스는 최상의 항종양 반응을 나타냈다. 유사하게, 항-CD11b-I-도메인 항체와 조합된 항-OX40 또는 항-CD40 항체는 최상의 항종양 반응을 나타냈다 (도 10 및 도 11). 기술분야의 숙련된 사람은 발명의 항-CD11b 시약이 또한 이들 다른 면역 체크포인트 차단 접근법과 함께 사용될 수 있음을 인정할 것이다.
수지상 세포 (DC)는 효율적인 항원-제공 세포이며 치료적 백신의 개선을 위한 유망한 선택사항이다. 도 12A-12C에서 나타내는 것과 같이, 항-CD11b-I-도메인 항체로의 치료는 종양 미세환경에서 고전적 수지상 세포 (DC)의 수 (도 12A), 천연 살해 수지상 세포 (NKDC)의 수 (도 12B), 및 형질세포양 수지상 세포 (pDC)의 수 (도 12C)를 증가시켰다.
이에 더불어, 도 13에서 나타낸 것과 같이, 항-CD11b-I-도메인 항체 단독으로의 치료는 종양 미세환경에서 이펙터 PD-1+4-1BB+ 신생항원 특이적 CD8 T 세포의 수를 적당히 증가시킨 한편, 항-CTLA4 항체 단독으로의 치료는 거의 효과를 나타내지 못하였다. 대조적으로, 항-CD11b-I-도메인 항체 및 항-CTLA4 항체의 병용 치료는 종양 미세환경에서 이펙터 PD-1+4-1BB+ 신생항원 특이적 CD8 T 세포의 수를 현저하게 증가시켰고, 뚜렷한 시너지 효과를 나타냈다 (도 13). 이들 결과를 함께 취하면, 종양 미세환경을 조절하는 것, 즉, 면역억압성 종양 미세환경을 보다 면역자극성인 것으로 전환시키는 것이 CD11b-I-도메인 차단 (예컨대, 항체의 CD11b-I-도메인에의 결합)에 의해 달성될 수 있음을 보여준다. 그 결과로서, 항-CD11b-I-도메인 항체는 면역요법제, 예컨대 면역 체크포인트 차단 약물: 항-PD1, 항-PDL1, 및/또는 항-CTLA4 항체의 효능을 증강시킬 수 있다.
CD11b-I-도메인 차단의 장기간 기억 효과
면역 체크포인트 차단 약물, 예컨대 항-PD1, 항-PDL1, 및 항-CTLA4 항체는 암 환자에서 지속적인 임상 반응을 이끌어낼 수 있다. 그러므로, 본 발명자들은 도한 항-CD11b-I-도메인 치료의 장기간 효과를 조사한다.
간단히 설명하면, 초기 종양 접종 및 항-CD11b-I-도메인 항체 및 항-CTLA4 항체의 조합으로 치료 (면역화된 마우스로 언급함)한 후 77일 후에, 생존하는 마우스는 3 x 105개의 모 CT26 세포 (결장암 세포)로 두 번째로 주사되었다. 2마리의 나이브 (이전에 면역화 및 처리되지 않음) 마우스가 대조군 그룹으로서 동일한 방식으로 주사되었다. 마우스는 모니터링되었고, 접종 후의 종양 부피가 측정되었다.
도 14에서 나타낸 것과 같이, 종양은 대조군 그룹 (나이브 마우스)에서 신속하게 성장하였다. 대조적으로, 이전에 면역화되고 처리된 생존 마우스들은 종양 성장을 국한시키는 능력을 보유하였고, 이것은 CD11b I-도메인의 차단 (예컨대, 항-CD11b-I-도메인 항체로의)이 장기간 반응을 이끌어낼 수 있음을 나타낸다.
항종양 면역에서 항-CD11b-I-도메인 항체 및 화학요법 치료의 시너지 효과
본 발명자들은 다음으로 화학요법과 CD11b-I-도메인 차단으로의 병용 면역요법이 항종양 효능을 증강시킬 수 있는지를 조사한다. C57BL/6 암컷 마우스가 제0일에 2 x 105개의 B16F10 흑색종 암세포로 피하로 이식되었다. 제7일에, 마우스는 5 mg/kg의 대조군 IgG, 5 mg/kg의 항-CD11b-I-도메인 항체, 5 mg/kg의 대조군 IgG와 lO mg/kg의 탁솔의 조합, 또는 5 mg/kg의 항-CD11b-I-도메인 항체와 lO mg/kg의 탁솔의 조합으로 복강내 주사되었다. 주사는 3 내지 4일마다 반복되었다. 중요하게, 항-CD11b-I-도메인 항체와 탁솔의 조합으로 처리된 마우스는 최상의 항종양 반응을 나타냈다 (도 15). 병용 요법의 극적인 효과는 시너지 효과의 존재를 시사한다.
탁솔 (파클리탁셀)은 주로 유사분열 억제제로서 작용하기 위해 미세소관에 결합하는 그것의 능력을 통해 화학요법제로서 기능한다. 그러나, 탁솔은 또한 T 세포, B 세포, NK 세포, 및 수지상 세포를 포함한 림프구를 활성화하는 데에 활성을 가지는 것으로 나타났다. 그러므로, 탁솔은 또한 면역 반응 조절자로서도 간주될 수 있다.
방사선 요법은 종양 세포 세포자멸사를 유도하는 것을 포함하는 여러 메커니즘을 통해 면역 반응 조절자의 효능을 강화시킬 수 있고, 그로써 APC 및 직접 T 세포 활성화를 통한 종양 항원 제공이 증가된다. 방사선 요법은 종양파괴 효과를 유도하여 활성화된 T 세포의 클론성 팽창으로 이어지는 보다 많은 종양 항원의 방출을 초래하고, 이것을 통해 T 세포 집단의 다양성 및 그것들의 활성화되는 속도 둘 다가 증강된다.
종양용해성 바이러스는 직접적으로 종양 세포를 용해하여, 가용성 항원, 위험 신호 및 타입 I 인터페론의 방출로 이어져, 항종양 면역을 구동시킬 수 있다. 이에 더불어, 일부 종양용해성 바이러스는 치료 유전자를 발현하도록 조작되거나 종양-관련 내피 세포를 기능적으로 변경시킬 수 있고, 추가로 T 세포 충원을 면역-배제된 또는 면역-결핍된 종양 미세환경으로 증강시킬 수 있다.
상기 실험이 실례로서 탁솔을 사용한 한편, 다른 화학요법 시약 또한 유사한 방식으로 사용될 수 있다. 기술분야의 숙련된 사람은 발명의 항-CD11b 시약이 또한 이들 다른 화학요법 접근법과 함께 사용될 수 있음을 인정할 것이다.
상기 실험은 CD11b의 I-도메인을 차단하는 것이 다음에 의해 증명되는 것과 같이, 종양 미세환경을 면역 요법 접근법에 보다 도움이 되는 더 많은 염증 상태로 전환시킬 수 있음을 분명하게 보여준다: 종양 미세환경에서 증가된 염증성 사이토카인, IDO+ 골수 억압자 세포의 감소된 집단, 종양 관련 대식세포에서 M2마커보다 상향 조절된 M1 마커, 증가된 M1:M2 종양 관련 대식세포 비율, 수지상 세포 (DC), 자연 살해 수지상 세포 (NKDC), 및 형질세포양 수지상 세포 (pDC)의 증강된 분화, 4-1BB+PD-1+ 신생항원 특이적 CD8 T 세포의 증가된 집단. 이들 특성은 면역치료 효능을 증강시키기 위해 사용될 수 있다. 실제로, 항-CD11b 항체 및 면역 체크포인트를 표적화하는 또 다른 항체를 사용하는 병용 요법은 극적인 시너지 효과를 달성할 수 있다. 이들 병용 요법은 암 치료에 가장 유익할 것이다. CD11b I-도메인은 부착 기능에 관여하는 것으로 알려져 있다. CD11b의 I-도메인의 차단이 종양 미세환경을 면역 반응의 유도에 도움이 되는 더 많은 염증 상태로 전환시킬 수 있다는 사실은 진정 예상하지 못한 것이다.
발명의 구체예들은 기술분야에 공지되어 있는 임의의 적합한 방법/과정으로 실시될 수 있다. 다음은 발명의 구체예들에 대한 특정 실례를 예시할 것이다. 그러나, 기술분야의 숙련된 사람은 이들 특정 실례가 단지 예시를 위한 것이고 다른 변형 및 변화가 발명의 범주로부터 벗어나지 않으면서 가능한 것을 인정할 것이다.
인간 세포 분리 및 세포주
인간 PMBC를 정맥 천공에 의해 건강한 지원자 도너로부터 분리하였다. 맥케이 메모리얼 호스피탈의 기관 검토 위원회에 의해 승인받은 서면 동의를 연구에 참여하기 위해 받았다. 인간 단핵세포를 기술분야에 공지된 방법을 사용하여 분리하였다. 간단하게 설명하면, 말초혈 단핵 세포 (PBMC)를 피콜-파크 플러스 (GE Healthcare) 구배 원심분리를 사용하여 분리하였다.
A549 폐암 세포주를 아메리칸 타입 컬춰 컬렉션 (ATCC)로부터 얻어서 10% 소태아 혈청 (Hyclone, Inc., Logan, UT)이 첨가된 F-12K 배지에서 배양하였다. 모든 세포주를 완전 배지 (10% 소태아 혈청, 2 mM L-글루타민, 100 U/mL 페니실린, 및 100 μg/mL 스트렙토마이신이 첨가된 RPMI-1640)에서 37℃에서 유지하였다. 세포를 가습, 5% CO2 인큐베이터에서 조직 배양 플라스크에서 성장시키고, 광 트립선처리에 의해 주 2 내지 3회 계대시켰다.
동물 및 종양 세포주
Balb/c 마우스 (생후 6 내지 8주령)를 국립 실험 동물 센터 (National Laboratory Animal Center, 대만 타이페이)로부터 구입하였다. 모든 동물 실험을 특정 병원체-유리 조건 하에서 맥케이 메모리얼 호스피탈 (대만 타이페이)의 동물 실험윤리위원회에 의해 승인된 지침에 다라 수행하였다. 각 마우스의 체중을 치료 시작할 때 및 치료 기간 내내 매일 측정하였다. CT26 세포는 Balb/c 마우스로부터 유래된 쥐과의 결장암 세포이다. B16F10 세포는 C57/BL6 마우스로부터 유래된 쥐과의 흑색종 암세포이다. 세포를 5% CO2 가습 분위기에서 37℃에서 둘베코 변형 이글스 배지 (DMEM), 10% 열-비활성화 소태아 혈청, 2 mM L-글루타민, 페니실린 (100 U/ml), 및 스트렙토마이신 (100 μg/ml)에서 유지하였다.
항체 및 시약
인간 PBMC 연구의 경우
단클론성 항-CD11b-I-도메인 항체 (44aacb)의 하이브리도마를 ATCC로부터 구입하였다. 이 하이브리도마로부터 생성된 항체를 단백질 A-콘쥬게이트된 세파로오스를 사용하여 정제하였다. 대조군 항체로서 사용한 마우스 IgG2a를 Biolegend (San Diego, CA)로부터 구입하였다.
쥐과 암 모델의 경우
마우스/인간 CD11b-I-도메인 (클론 M1/70)에 특이적인 래트 항체, 쥐과 PD1 (클론 RMP1-14)에 특이적인 래트 항체, 쥐과 0X40 (클론 OX-86)에 특이적인 래트 항체, 쥐과 CD40 (클론 FGK4.5)에 특이적인 래트 항체, 래트 대조군 IgG2b 항체 (클론 LTF-2), 시리아 햄스터 항-쥐과 CTLA4 (클론 9H10), 및 시리아 햄스터 대조군 IgG를 BioXcell (West Lebanon, ML)로부터 구입하였다. CpG 올리고뉴클레오타이드 (클래스 B, ODN 1668)를 Invivogen (San Diego, CA)으로부터 구입하였다. 탁솔을 맥케이 메모리얼 호스피탈로부터 얻었다.
종양-관련 골수 억압자 세포 생성 프로토콜
i. 서론
인간 PBMC를 건강한 지원자 도너로부터 정맥 천공에 의해 (총 부피 60 mL), 이어서 차등 밀도 구배 원심분리 (Ficoll Hypaque, Sigma, St. Louis, MO)에 의해 분리하였다. PBMC를 인간 종양 세포주가 담긴 24-웰 플레이트에서 완전 배지에 40:1 비율로 (1 x 106 세포/mL) 5 내지 6일 동안 배양하였다. 항체-치료 실험을 위해, PBMC-종양 세포주 공동 배양을 항-마우스/ 인간 CD11b-I-도메인 (클론 M1/70, BioXcell), 항-인간 CD11b-I-도메인 (클론 44aacb, ATCC로부터의 하이브리도마), 마우스 IgG2a 아이소타입 대조군 (클론 MG2a-53, Biolegend), 및 래트 IgG2b 아이소타입 대조군 (클론 LTF-2, BioXcell)을 포함한, 항체의 존재 또는 부재 하에 반복하였다.
ii. 골수 억압자 세포 분리
5일 후에, 모든 세포를 종양-PBMC 공동 배양으로부터 수집하였다. 부착 세포를 비-프로테아제 세포 탈착 용액 DetachinTM (GenLantis, San Diego, CA)을 사용하여 제거하였다. 그런 다음 골수 세포를 항-CD33 자기 마이크로비드 및 LS 칼럼 분리 (Miltenyi Biotec, Germany)를 제조사의 설명서대로 사용하여 공동 배양으로부터 분리하였다. 분리된 세포 집단의 순도는 유동 세포분석에 의해 90%보다 큰 것으로 나타났고 분리된 세포의 생존력을 트립판 블루 염료 축출을 사용하여 확인하였다.
iii. 억압 검정
종양-교육 골수 세포의 억압 기능을 다음과 같이 억압 검정에서 동종이계 T 세포의 증식을 억제하는 그것의 능력에 의해 측정하였다: T 세포를 건강한 도너로부터 Pan T 분리 키트 (Miltenyi Biotec, Auburn, CA)에 의해 분리하고 카르복시플루오레세인 석신이미딜 에스테르 (CFSE)-표지하고 (2.5 mM, Invitrogen) 96-웰 플레이트에 앞서 분리한 골수 세포와 1:1 비율로 1 x 105 세포/웰로 시딩하였다. T 세포 증식을 항-CD3/CD28 자극 비드 (ThermoFisher scientific, Carlsbad, CA) 또는 코팅된 항항-CD3 (클론 OKT3) 항체에 의해 유도하였다. 억압 검정 웰을 T 세포 증식의 경우 3일 후에 유동 세포분석법으로 분석하였다. 대조군은 양성 T 세포 증식 대조군 (CD3/CD28 자극이 있는 T 세포 단독) 및 유도 음성 대조군 (배지 단독)을 포함하였다. 샘플을 FACSCalibur 유동 세포분석기 (BD Biosciences, San Jose, CA) 상에서 이동하게 하고, 데이터 획득 및 분석을 CellQuestPro 소프트웨어 (BD)를 사용하여 수행하였다.
인간 골수 억압자 세포의 특성화
i. 세포 표현형의 유동 세포분석적 분석
시험관내 생성된 골수 억압자 세포의 표현형은 골수, 항원-제공, 및 억압자 세포 마커의 발현에 대해 조사하였다. 염색을 위해, 세포를 세포 표면 단백질 소화를 최소화하기 위해 24 웰-플레이트로부터 DetachinTM을 사용하여 수집하였고, FACS 완충액 (PBS 중의 2% FCS)으로 2회 세척한 후 106 세포를 100 μl의 FACS 완충액에 재현탁하였다. 세포를 Fc 차단제 (인간 BD Fc 차단)로 처리하고 20분 동안 형광-콘쥬게이트된 단클론성 항체 또는 아이소타입-매치된 대조군의 칵테일로 염색하였다. 세포내 염색을 위해, 세포를 고정/투과 키트 (BD)를 사용하여 고정시키고 투과시킨 후 표면 염색을 하였다. 사용한 항체를 BD Biosciences로부터 구입하거나: CD11c (클론 Bu15), CD33 (클론 HIM3-4), HLA-DR (클론 L243), CD11b (클론 ICRF44), CD86 (클론 2331), CD80 (클론 L307.4), CD56 (클론 B159), CD206 (클론 19.2), DC-SIGN (클론 DCN46), 7-AAD; 또는 Biolegned로부터 구입하거나: HLA-DR (클론 L243), CD163 (클론 RM3/1), CD68 (클론 Y1/82A); 또는 R&D systems로부터 구입하였다: IDO (클론 700838). 이들 항체는 실례이고, 임의의 다른 적합한 항체가 사용될 수도 있다. 예를 들어, I-도메인에 결합하는 임의의 항-CD11b 항체가 사용될 수 있다 (예컨대, 항-CD11b (44aacb 클론), 항-CD11b (M1/70 클론, 등). 이러한 항-CD11b 항체로는 새롭게 생성된 것들 또는 상업적 공급원 (예컨대, BD Biosciences, Abeam, Thermo Fisher Scientific, 등)으로부터 얻어진 것들을 들 수 있다.
샘플을 BD FACSCalibur 유동 세포분석기 상에서 이동하게 하고 데이터 획득 및 분석을 상기에서 기술한 것과 같이 수행하였다. 3 내지 6명의 고유한 도너로부터 데이터를 얻었다. 배지 단독에서 배양한 PBMC를 비교를 위해 나란히 이동시켰다.
ii. 세포분석용 비드 어레이에 의한 사이토카인/케모카인의 측정
종양 조직액을 항-CD11b-I-도메인 항체 치료 후에 B16F10 종양으로부터 수집하고 -20℃에서 부분표본으로 보관하였다. 샘플 중의 IFN-감마, MCP-1, IL-6, TNFα, IL12p70, 및 IL-10의 수준을 마우스 염증성 사이토카인 세포분석 비드 어레이 키트 (BD)를 제조사의 설명서대로 사용하여 측정하였다.
암 치료 프로토콜
피하 종양 모델
Balb/c 마우스를 3 x 105개의 CT26 세포로 접종하였다. 종양 부피가 대략 50-100 mm3이 되었을 때, 치료를 시작하였다. 종양-포함 마우스를 주 2회 상이한 항체로 복강내로(ip) 치료하였다. 마우스를 모니터링하고 감지할 수 있는 종양의 형성에 대해 주 2회 채점하고 종양이 3,000 mm3의 소정의 크기를 초과하면 희생시켰다. 종양 부피를 캘리퍼스로 측정하고 다음 식으로 계산하였다: A x B2 x 0.54, 여기서 A는 가장 큰 직경이고, B는 가장 작은 직경이다.
종양 분리 및 세포 집단 분석
Balb/c 종양을 수득하고, 무게를 측정하고, 수술용 매스를 사용하여 미세하게 절단하고 추가로 종양 분리 키트 (Miltenyi Biotec)를 제조사의 설명서대로 사용하고 Gentle MACS 분리기 (Miltenyi Biotech)를 사용하여 효소적으로 분리하였다. 종양의 단일-세포 현탁액을 1% FCS가 첨가된 PBS에 재현탁하고, 적혈구를 용해시켰다. 특이적 표지화 전에 비특이적 표지화를 항-CD16/32 (Fc 차단; BD)로 차단하였다. 세포를 다음의 BioLegend로부터의 래트-항-마우스 Ab들로 염색하였다: 항-CD8a 플루오레세인 아이소티오시아네이트 (FITC), 항-CD8b FITC, 항-Gr1 FITC, 항-CD86 FITC, 항-CD206 파이코에리트린 (PE), 항-CD80 PE-Dazzle594, 항-CD11b-I-도메인 PerCP-Cy5.5, 항-PDL1 알로파이코시아닌 (APC), 항-CD45 BV510, 항-F4/80 Alexa 700, 항-IAIE APC-Cy7, 항-Ly6C PECy7, 항-CD11c Alexa 700, 항-Ly6G PE-Dazzle594, 항-IDO AF647, 항-CD335 BV421, 및 항-CD3e PE Dazzle. 고정 가능한 생존력 염료 (eBioscienceTM Fixable Viability Dye eFluorTM 450)를 살아있는-죽은 세포 식별에 사용하였다. 샘플을 BECKMAN COEILTER Gallios 유동 세포분석기를 사용하여 분석하고 Kaluza® 소프트웨어로 분석하였다.
시험관내 마우스 MDSC 분리 및 억압 검정
비장을 LLC1 종양-포함 마우스로부터 수집하였다. 비장세포를 수득하고 골수-유래 억압자 세포 (MDSC)를 골수-유래 억압자 세포 분리 키트 및 LS 칼럼 분리 (Miltenyi Biotec)를 제조사의 설명서대로 사용하여 분리하였다. 분리된 세포 집단의 순도는 유동 세포분석에 의해 90%보다 큰 것으로 나타났고, 분리된 세포의 생존력을 트립판 블루 염료 축출을 사용하여 확인하였다. 포르볼 12-미리스테이트-13-아세테이트 (PMA)로 24시간 내지 72시간 동안 자극된 MDSC에서의 인돌아민 2,3-다이옥시게나제 (IDO) 발현을 항-마우스 Gr-1 FITC 항체로의 세포 표면 염색 및 항-마우스 IDO APC 항체로의 세포내 염색에 의해 평가하였다. T 세포를 나이브 마우스의 비장세포로부터 수집하고 항-마우스 CD90.2 자기 입자 (BD IMag)를 사용하여 분리하였다. CFSE-표지된 T 세포를 MDSC와 1:1 또는 1:2 비율로, 항-마우스/인간 CD11b (클론 M1/70, BioXcell) 및 래트 IgG2b 아이소타입 대조군 (클론 LTF-2, BioXcell)을 포함한, 항체의 부재 또는 존재 하에 공동 배양하였다. T 세포 증식은 항-CD3/CD28 자극 항체에 의해 유도되었다.
통계학적 분석
데이터를 Prism 6.0 (GraphPad)을 사용하여 분석하였고 평균 ± SEM으로서 표시하였다. 그룹간 비교를 학생 t 검사를 사용하여 수행하였다. 상관관계를 피어슨 보정 계수를 사용하여 결정하였다. 0.05 미만의 p 값을 유의미한 것으로 간주하였다.
SEQUENCE LISTING
<110> MacKay Memorial Hospital
BRIM BIOTECHNOLOGY, INC.
<120> METHOD FOR MODULATION OF TUMOR ASSOCIATED MYELOID CELLS AND
ENHANCING IMMUNE CHECKPOINT BLOCKADE
<130> BRIM141-MAO-PCT
<150> US 62/581,632
<151> 2017-11-03
<160> 1
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 179
<212> PRT
<213> homo sapiens
<400> 1
Asp Ile Ala Phe Leu Ile Asp Gly Ser Gly Ser Ile Ile Pro His Asp
1 5 10 15
Phe Arg Arg Met Lys Glu Phe Val Ser Thr Val Met Glu Gln Leu Lys
20 25 30
Lys Ser Lys Thr Leu Phe Ser Leu Met Gln Tyr Ser Glu Glu Phe Arg
35 40 45
Ile His Phe Thr Phe Lys Glu Phe Gln Asn Asn Pro Asn Pro Arg Ser
50 55 60
Leu Val Lys Pro Ile Thr Gln Leu Leu Gly Arg Thr His Thr Ala Thr
65 70 75 80
Gly Ile Arg Lys Val Val Arg Glu Leu Phe Asn Ile Thr Asn Gly Ala
85 90 95
Arg Lys Asn Ala Phe Lys Ile Leu Val Val Ile Thr Asp Gly Glu Lys
100 105 110
Phe Gly Asp Pro Leu Gly Tyr Glu Asp Val Ile Pro Glu Ala Asp Arg
115 120 125
Glu Gly Val Ile Arg Tyr Val Ile Gly Val Gly Asp Ala Phe Arg Ser
130 135 140
Glu Lys Ser Arg Gln Glu Leu Asn Thr Ile Ala Ser Lys Pro Pro Arg
145 150 155 160
Asp His Val Phe Gln Val Asn Asn Phe Glu Ala Leu Lys Thr Ile Gln
165 170 175
Asn Gln Leu
Claims (18)
- 면역 반응을 조절함으로써 암 치료에 사용하기 위한 제약학적 조성물로서, 세포 상의 CD11b의 I-도메인에 특이적으로 결합하는 시약을 포함하는, 제약학적 조성물.
- 제1항에 있어서, CD11b는 종양-관련 골수 세포 (TAMC) 상에 있는 것을 특징으로 하는 제약학적 조성물.
- 제1항 또는 제2항에 있어서, 시약은 CD11b의 I-도메인에 결합하는 항체인 것을 특징으로 하는 제약학적 조성물.
- 제1항 또는 제2항에 있어서, 제약학적 조성물은 면역 반응 조절자를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 제약학적 조성물.
- 제4항에 있어서, 면역 반응 조절자는 PD-1, PD-L1, CTLA4, CD40, 0X40, 또는 toll-유사 수용체 (TLR)에 특이적으로 결합하는 시약인 것을 특징으로 하는 제약학적 조성물.
- 제3항에 있어서, 면역 반응 조절자는 항-PD-1 항체, 항-PD-L1 항체, 항-CTLA4 항체, 항-CD40 항체, 항-OX40 항체, toll-유사 수용체 작용물질, 종양용해성 바이러스, 방사선요법, 또는 화학요법제인 것을 특징으로 하는 제약학적 조성물.
- 제3항에 있어서, 면역 반응 조절자는 항-CTLA4 항체인 것을 특징으로 하는 제약학적 조성물.
- 제6항에 있어서, toll-유사 (TLR) 수용체 작용물질은 CpG인 것을 특징으로 하는 제약학적 조성물.
- 제6항에 있어서, 화학요법제는 탁솔인 것을 특징으로 하는 제약학적 조성물.
- 면역 반응의 조절 방법으로서, 그것을 필요로 하는 대상체에게 제약학적 조성물을 투여하는 단계를 포함하며, 제약학적 조성물은 세포 상의 CD11b의 I-도메인에 특이적으로 결합하는 시약을 포함하는, 방법.
- 제10항에 있어서, CD11b는 종양-관련 골수 세포 (TAMC) 상에 있는 것을 특징으로 하는 방법.
- 제10항 또는 제11항에 있어서, 시약은 CD11b의 I-도메인에 결합하는 항체인 것을 특징으로 하는 방법.
- 제10항 또는 제11항에 있어서, 제약학적 조성물은 면역 반응 조절자를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
- 제13항에 있어서, 면역 반응 조절자는 PD-1, PD-L1, CTLA4, CD40, 0X40, 또는 toll-유사 수용체 (TLR)에 특이적으로 결합하는 시약인 것을 특징으로 하는 방법.
- 제12항에 있어서, 면역 반응 조절자는 항-PD-1 항체, 항-PD-L1 항체, 항-CTLA4 항체, 항-CD40 항체, 항-OX40 항체, toll-유사 수용체 작용물질, 종양용해성 바이러스, 방사선요법, 또는 화학요법제인 것을 특징으로 하는 방법.
- 제12항에 있어서, 면역 반응 조절자는 항-CTLA4 항체인 것을 특징으로 하는 방법.
- 제15항에 있어서, toll-유사 (TLR) 수용체 작용물질은 CpG인 것을 특징으로 하는 방법.
- 제15항에 있어서, 화학요법제는 탁솔인 것을 특징으로 하는 방법.
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