KR20200046203A

KR20200046203A - 황칠나무 잎 추출물 및 한라봉 껍질 추출물을 함유하는 발모개선조성물

Info

Publication number: KR20200046203A
Application number: KR1020180126552A
Authority: KR
Inventors: 조창수
Original assignee: 농업회사법인 휴림황칠(주)
Priority date: 2018-10-23
Filing date: 2018-10-23
Publication date: 2020-05-07
Also published as: KR102171472B1

Abstract

본 발명은 황칠나무 잎 추출물 및 한라봉 껍질 추출물의 혼합 추출물을 유효성분으로 함유하는 발모개선 조성물로, 보다 구체적으로는 항산화, 항염 및 항균 활성을 가지는 발모개선 조성물에 관한 것이다.
또 본 발명의 발모개선 조성물은 모유두 세포(dermal papilla cells)에 대하여 세포 독성이 없을 뿐 아니라, 세포 성장을 증가시키는 효과에 의해 발모 개성에 우수한 효과를 나타내며, 천연물질을 유효성분으로 함유함으로써 피부에 저자극성이고 안전성이 뛰어나므로 각종 두발 화장료에 배합하여 여러 제형으로 사용이 가능하다.

Description

황칠나무 잎 추출물 및 한라봉 껍질 추출물을 함유하는 발모개선조성물{a Composition for improving Hair growth containing a leaf extract of Dendropanax Morbifera and a extract of Hallabong rind}

본 발명은 황칠나무 잎 추출물 및 한라봉 껍질 추출물의 혼합추출물을 유효성분으로 함유하는 발모개선 조성물에 관한 것이며, 구체적으로는 항산화, 항염 및 항균 활성이 우수한 황칠나무 잎 추출물과 한라봉 껍질 추출물의 혼합추출물을 유효성분으로 하여 발모를 개선하기 위한 발모개선 조성물에 관한 것이다.

현대인에게는 인체의 모발은 두상 및 두피 보호라는 목적 외에, 미적, 성적인 측면에서 중요성이 인정되고 있으나, 환경적 유전적 정신적 신체적 등 여러 가지 원인으로 신체적 리듬이 깨져 밸런스가 맞지 않아 두피뿐만 아니라 모낭에도 크게 영향을 미쳐 모발 손상은 물론이고 탈모로 이어지고 있다.

탈모의 정확한 기전은 알려져 있지 않고, 탈모의 원인도 개인마다 차이가 있지만 대체적으로 유전적인 요인 및 호르몬의 영향을 포함하여 노화에 의한 두피 세포의 퇴화, 모근에 공급되는 영양소의 부족, 두피 세포의 과다한 각질/피지 배출로 인한 산소공급의 부족, 모공의 폐쇄현상, 스트레스와 질병으로 인한 두피 염증 등을 들 수 있다.

현재 탈모방지제, 발모촉진제 및 탈모치료제 등 수많은 탈모방지 관련 제품들이 시중에 널리 시판되고 있으며, 대표적인 탈모 방지제로는 미국 FDA에서 승인받은 프로페시아와 미녹시딜 등이 있으나, 화학약물에 의한 탈모방지 및 탈모치료 등은 장기적 사용에 따른 부작용을 초래할 수 있으므로 이러한 화학약물에 따른 부작용 등을 개선하기 위하여 최근 들어 천연물을 이용한 탈모 방지용 조성물이 다양하게 개발되고 있으며 천연재료는 부작용이 적으므로 소비자들의 호응이 높아지고 있다.

천연물을 이용한 탈모 방지와 관련한 선행기술로 예를 들면, 특허문헌1에 감국, 홍화, 금잔화, 금은화, 선복화 및 오소리 오일의 복합 추출물을 유효성분으로 포함하는 것을 특징으로 하는 탈모방지 및 모발 생장 촉진용 두발 화장료 조성물이 개시되어 있으며 또, 특허문헌2에 탈모 방지 및 모발 생장 촉진용 한방 조성물로서: 상기 한방 조성물 총량에 대하여, 상황버섯 추출물 20 내지 25중량%, 황금 추출물 20 내지 25중량%, 목단피추출물 15 내지 20중량%, 산수유 추출물 5 내지 10중량%, 칡 추출물 5 내지 10중량%, 고삼 추출물 5 내지 10중량%, 숙지황 추출물 5 내지 10중량%, 녹차잎 추출물 5 내지 10중량%, 금은화 추출물 5 내지 10중량%, 실크 추출물과 황련 추출물과 상백피 추출물로부터 선택되는 적어도 하나의 추출물 5 내지 10중량%를 포함하는 한방 추출물; 및 상기 한방 조성물 총량에 대하여, 제니스테인(genistein) 1 내지 2중량% 및 레스베라트롤(resveratrol) 1 내지 2중량%를 포함하는 폴리페놀;을 포함하는 탈모 방지 및 모발 생장 촉진용 한방 조성물을 개시하고 있다.

또 특허문헌3에는 식물재료의 전체 중량을 기준으로, 인삼 6 내지 12중량%, 검은콩 10 내지 15중량%, 어성초 6 내지 12중량%, 구기자 6 내지 12중량%, 감초 10 내지 15중량%, 진피 6 내지 12중량%, 대추 6 내지 12중량%, 자소엽 6 내지 12중량%, 녹차잎 10 내지 15중량% 및 백하수오 6 내지 10중량%를 함유하는 식물 재료로부터 추출되는 식물추출물로서, 인간진피모유두 세포(HFDPC)의 5α-환원효소 발현을 억제하고, 인간진피모유두 세포(HFDPC)의 β-카테닌 발현을 촉진하는 식물 추출물을 포함하는 탈모 방지 및 발모 개선용 조성물을 개시하고 있다.

본 발명의 출원인은 천연물인 황칠나무 잎 추출물 및 한라봉 껍질 추출물이 나타내는 항산화, 항염 및 항균 활성에 의한 모발의 발모개선 효과를 확인하고 본 발명을 완성하였다.

KR

10-1009763

B

KR

10-1440046

B

KR

10-1758998

B

본 발명에서 해결하고자 하는 과제는 황칠나무 잎 추출물 및 한라봉 껍질 추출물의 혼합 추출물을 유효성분으로 함유하는 발모개선 조성물의 제공에 관한 것이며, 보다 상세하게는 항산화, 항염 및 항균 활성이 우수한 황칠나무 잎 추출물과 한라봉 껍질 추출물의 혼합추출물을 유효성분으로 하여 발모를 개선하기 위한 발모개선 조성물의 제공을 목적으로 하는 것이다.

본 발명의 과제의 해결 수단으로 황칠나무 잎 추출물 및 한라봉 껍질 추출물을 함유하는 발모개선 조성물은 황칠나무 잎 추출물 및 한라봉 껍질 추출물의 혼합추출물을 유효성분으로 함유하는 것으로 이루어진다.

상기 본 발명에 따른 황칠나무(Dengropanas morbifera)는 두릅나무과(Araliaceae)에 속하는 상록활엽수림이며, 전남 서남해안 및 도서지방에서만 자생 및 재배되는 난대성 수종이다. 황칠의 수지는 황금색이고 내열, 내구, 내수성이 강하며 부착성 및 광택이 좋아 예로부터 전통공예품에 천연도료 및 민간 의약품 소재로 쓰여지고 있으며, 황칠은 세스퀴테르펜 등의 정유 성분 뿐만 아니라, 아라키딕산, 팔미틱산, 아르기닌 등 다양한 성분을 함유하고 있으며, 동맥경화, 간기능 개선, 항산화 뼈 재생 촉진, 면역 증강, 항균, 항암 등의 효과가 보고되고 있다.

그리고 상기 한라봉(Citrus unshiu Marcov X C. sinensis Osbeck) X C. reticulate Blanco)은 제주도 및 일본에 분포하는 무환자나무목 운향과 만다린계의 식물로 일본 농림성 과수시험장에서 청견과 폰캉을 교배하여 육성한 교잡종 감귤이며, 한라봉의 어린 나무는 곧게 자라지만 열매가 맺을 무렵부터는 옆으로 갈라지며, 꽃은 다른 감귤류의 꽃보다 크고 꽃가루가 적다. 열매의 무게는 200~300g 정도이며, 상쾌한 향과 인체에 대한 무독성 때문에 화장품과 식품산업 등에 널리 사용되고 있다.

한라봉의 과육은 육질이 부드럽고 당도는 평균 15 brix로 당도가 높으며, 껍질은 3.5 ~ 5㎜정도이며 씨앗이 없고, 과육의 윗부분에 특징적인 돌출부를 가지고 있으며, 평균 지름은 6.5 ~ 9.7cm 정도이다. 껍질에는 항암, 항염효과를 나타내는 것으로 알려진 정유성분(essential oils), 폴리메톡시플라본(polymetoxyflavones) 및 폴리사카라이드(polysaccharide)와 각종 비타민 등이 다량 함유되어 있으며, 특히 정유 성분의 대부분(70~ 90%)을 차지하는 리모넨(α-limonene)은 중추신경의 흥분을 진정시키고, 항암작용이 있는 것으로 알려져 있으며, 한라봉의 과피와 과실에는 비타민 A의 전구체로 항산화 기능을 가져 자유라디칼에 의해 유도되는 세포와 DNA의 손상을 억제한다고 알려진 β-크립토잔틴(β-cryptoxanthin)이 포함되어 있다.

본 발명의 과제의 해결수단으로 황칠나무 잎 추출물 및 한라봉 껍질 추출물을 함유하는 발모개선 조성물의 일 실시 형태는 발모개선 조성물 전체 중량에 대하여 유효성분으로 황칠나무 잎 추출물 및 한라봉 껍질 추출물의 혼합추출물이 0.1 ~ 80중량% 함유하는 것으로 이루어진다.

본 발명의 과제의 해결수단으로 황칠나무 잎 추출물 및 한라봉 껍질 추출물을 함유하는 발모개선 조성물의 또 다른 실시 형태는 발모개선 조성물 전체 중량에 대하여 유효성분으로 황칠나무 잎 추출물에 대하여 한라봉 껍질 추출물의 혼합비율을 1 : 1 ~ 0.5의 중량비로 혼합한 혼합추출물 0.1 ~ 80중량% 함유하는 것으로 이루어진다.

본 발명의 과제의 해결수단으로 황칠나무 잎 추출물 및 한라봉 껍질 추출물을 함유하는 발모개선 조성물의 또 다른 실시 형태는 본 발명의 발모개선 조성물을 함유한 헤어토닉, 헤어컨디셔너, 헤어에센스, 헤어로션, 헤어영양로션, 헤어샴푸, 헤어린스, 헤어트리트먼트, 헤어크림, 헤어영양크림, 헤어모이스처크림, 헤어맛사지크림, 헤어왁스, 헤어 에어로졸, 헤어팩, 헤어영양팩, 헤어비누, 헤어클렌징폼, 머릿기름, 모발건조제, 모발보존처리제, 모발염색제, 모발용 웨이브제, 모발탈색제, 헤어겔, 헤어글레이즈, 헤어드레싱어, 헤어래커, 헤어모이스처라이저, 헤어무스 및 헤어스프레이 중 어느 하나의 제형으로 이루어진다.

본 발명의 발모개선 조성물에 유효성분으로 함유하는 황칠나무 잎 추출물 및 한라봉 껍질 추출물의 혼합추출물은 항산화, 항염 및 항균 효과가 우수하고, 모유두 세포(dermal papilla cells)에 대하여 세포 독성이 없을 뿐 아니라, 세포 성장을 증가시키는 효과에 의해 발모 개선에 우수한 효과를 나타낸다.

또한 천연물질을 유효성분으로 함유함으로써 피부에 저자극성이고 안전성이 뛰어나며, 각종 두발 화장료에 배합하여 여러 제형으로 사용하는 것이 가능하여 소비자들이 거부감 없이 선택할 수 있는 특징이 있다.

도 1은 황칠나무 잎 추출물, 한라봉 껍질 추출물 및 황칠나무 잎 및 한라봉 껍질의 혼합추출물의 농도에 따른 DPPH 라디칼 소거능 결과를 나타낸 그래프
도 2는 황칠나무 잎 추출물, 한라봉 껍질 추출물 및 황칠나무 잎 및 한라봉 껍질의 혼합 추출물의 농도에 따른 ABTS 라디칼 소거능 결과를 나타낸 그래프
도 3은 비듬균에 대한 황칠나무 잎 에탄올 추출물, 한라봉 껍질 물 추출물 접종 후 측정결과를 나타낸 영상물
도 4는 RAW 264.7 세포에 황칠나무 잎 추출물 및 한라봉 껍질 추출물의 혼합추출물의 NO 생성율을 나타낸 그래프
도 5는 RAW 264.7 세포에 황칠나무 잎 추출물 및 한라봉 껍질 추출물의 혼합추출물의 PGE₂함량을 나타낸 그래프
도 6은 한라봉 껍질 추출물과 Finasteride를 처리한 모유두세포의 세포 생존율(%)을 나타낸 그래프
도 7은 모유두세포에 한라봉 껍질 추출물과 Finasteride의 농도별 처리 시 5α-Reductase의 함량을 나타낸 그래프

아래에서는 본 발명을 실시하기 위한 구체적인 내용, <실시예> 및 <시험예>를 통하여 본 발명을 보다 구체적으로 설명하는 것이지만, 본 발명의 실시형태는 여러 가지 다른 형태로 변형될 수 있으므로 본 발명의 범위가 아래 설명하는 실시형태로 한정되는 것은 아니다.

그리고 본 발명의 명세서 전체에서, 어떤 부분이 어떤 구성요소를 "함유"한다고 할 때, 이는 특별히 반대되는 기재가 없는 한 다른 구성요소를 제외하는 것이 아니라 다른 구성요소를 더 포함할 수 있는 것을 의미하며, 어떤 단계가 다른 단계와 "상에" 또는 "전에" 위치하고 있다고 할 때, 이는 어떤 단계가 다른 단계와 직접적 시계열적인 관계에 있는 경우 뿐만 아니라, 각 단계 후의 혼합하는 단계와 같이 두 단계의 순서에 시계열적 순서가 바뀔 수 있는 간접적 시계열적 관계에 있는 경우와 동일한 권리를 포함할 수 있다.

본 발명에 따른 황칠나무 잎 추출물 및 한라봉 껍질 추출물을 함유하는 발모개선조성물은 발모개선 조성물 전체 중량에 대하여 유효성분으로 황칠나무 잎 추출물과 한라봉 껍질 추출물의 혼합추출물이 0.1 ~ 80중량% 함유하며, 황칠나무 잎 추출물에 대하여 한라봉 껍질 추출물의 혼합비율은 1 : 1 ~ 0.5의 중량비로 혼합한 혼합추출물 0.1 ~ 80중량% 함유한다.

본 발명에 따른 상기 황칠나무 잎의 추출물은 황칠나무의 다양한 기관 또는 잎, 꽃, 뿌리, 줄기, 가지, 껍질, 수액 및 종자 등으로부터 추출 또는 발효액으로부터 얻어지는 발효추출물로 선택되며,, 바람직하게는 잎, 줄기, 가지, 껍질, 수액 또는 뿌리로부터 얻은 추출물 또는 발효추출물이며, 가장 바람직하게는 잎 또는 수액으로부터 얻은 추출물로 이루어진다.

상기 본 발명에 따른 한라봉 껍질의 추출물을 얻기 위해 선택되는 한라봉은 1972년 일본에서 Kiyomi와 Ponkan을 교배해 육성한 교잡종 감귤의 품종으로, 일본의 품종명은 shiranui이고, 상품은 “dekopon“이라는 브랜드명으로 유통되고 있으며, 우리나라는 1990년을 전후해 도입되었으며, 재배 농가마다 부지화, 데코폰 등의 여러 품종명으로 출하하기 시작하였다.

본 발명의 황칠나무 잎 추출물 및 한라봉 껍질 추출물은 각각 물, 에탄올 또는 이들의 혼합용매를 추출용매로 하여 추출하며, 추출용매는 물과 에탄올의 혼합용매를 선택하는 것이 바람직하고, 추출용매의 에탄올은 30 ~ 70%(v/v)의 농도로 함유하며, 40 ~ 60%(v/v) 에탄올 농도의 추출용매가 바람직하며, 추출온도는 특별하게 제한되는 것은 아니며 저온추출이 보다 유리하다.

아래에서는 <실시예> 및 <시험예>를 통하여 본 발명을 구체적으로 설명하기로 하며, 아래 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용을 한정하는 것은 아니다.

<실시예 1> 황칠나무 잎 추출물의 제조

정선된 황칠나무 잎을 분쇄기를 이용하여 분쇄하여 얻어진 분쇄액 5g에 아래 [표 1]에 기재한 비율로 혼합된 추출용매를 각각 10배수로 첨가하고, 용액 50㎖씩을 35℃에서 72시간 동안 쉐이킹 및 여과하여 황칠나무 잎 추출물을 수득하였다.

용매	혼합비(부피%)
DDW	100	50	0
EtOH		50	100

<실시예 2> 한라봉 껍질 추출물의 제조

건조시킨 한라봉 껍질을 분쇄기를 이용하여 분쇄하여 분말화한 분쇄물 5g에 아래 [표 2]에 기재한 비율로 혼합된 추출용매를 각각 10배수로 첨가하고, 용액 50㎖씩을 35℃에서 72시간 동안 쉐이킹 및 여과하여 한라봉 껍질 추출물을 수득하였다.

용매	혼합비(부피%)
DDW	100	50	0
EtOH		50	100

<실험예 1> 항산화 활성 시험

상기 <실시예 1> 및 <실시예 2>에서 수득한 추출물을 시험원액으로 하여 항산화 활성을 측정하였을 때 활성이 매유 높아 대부분 100%의 소거활성을 보여, 그 활성의 비교가 어려워 상기 원액을 아래 [표 3]에 나타낸 바와 같이 희석하여 시험하였다.

시험시료는 <실시예 1>에서 수득한 황칠나무 잎 50%-EtOH 추출물을 [시료 1]로 하였으며, 추출용매의 최적조건을 시험하기 위하여 상기 <실시예 2>에 선택한 추출용매에 의해 추출한 한라봉 껍질 추출물 모두 즉 에탄올 50%-EtOH, 한라봉 껍질 물 추출물, 100%-EtOH 추출물을 각각 [시료 2] [시료 3] 및 [시료 4]로 준비하고, 상기 본 발명에 따른 조성물 즉, 황칠나무 잎 추출물과 한라봉 껍질 추출물의 혼합추출물에 대해서는 황칠나무 잎 50%-EtOH 추출물과 한라봉 껍질 50%-EtOH 추출물을 중량비로 1 : 1로 혼합한 혼합추출물을 [시료 A]로 하여 아래 시험 방법에 따라 항산화 활성 시험을 수행하고 그 결과를 나타내었다.

1). DPPH 라디칼 소거능

DPPH assay 방법은 Yoshida et al.(1989)이 사용한 방법에 따라 측정하였다. 96well plate에 control에는 추출물을 추출한 용매를 100㎕, 시험군에는 각각 의 [시료] 100㎕씩 넣었으며, 모든 웰에 100㎕씩 넣고 50㎕의 DPPH(0.5 mM 1,1-diphenyl-2- picrylhydrazyl(DPPH)/ethanol) 용액을 가하여 혼합하였다. 25℃의 실온에서 30분 동안 반응시킨 후 517 nm에서 흡광도를 측정하였다. 용매만을 첨가한 대조군에 대한 추출물의 라디칼 소거능을 아래 [계산식 1]에 의해 나타내었으며, DPPH 라디칼 소거능 결과 및 그래프를 아래 [표 3]로 나타내고, [도 1]로 첨부하였다.

[계산식1]

Sample		DPPH 라디칼 소거능(%)
황칠나무 잎 50% 에탄올 추출물 [시료1]	원액	97.59	±	0.27
	2 배 희석	97.16	±	0.07
	4 배 희석	83.74	±	0.25
	8 배 희석	82.04	±	0.34
	16 배 희석	76.11	±	0.75
	32 배 희석	49.19	±	4.00
	64 배 희석	27.89	±	1.17
	128 배 희석	14.33	±	4.99
한라봉 껍질 물 추출물 [시료2]	원액	87.73	±	0.34
	2 배 희석	87.72	±	0.32
	4 배 희석	86.08	±	0.11
	8 배 희석	74.05	±	1.66
	16 배 희석	36.98	±	1.99
	32 배 희석	21.27	±	0.81
	64 배 희석	5.27	±	1.02
	128 배 희석	0.24	±	1.11
한라봉 껍질 50% 에탄올 추출물 [시료3]	원액	82.64	±	0.43
	2 배 희석	80.19	±	0.62
	4 배 희석	73.25	±	2.29
	8 배 희석	51.85	±	1.83
	16 배 희석	45.55	±	1.06
	32 배 희석	30.70	±	0.21
	64 배 희석	24.15	±	1.52
	128 배 희석	15.88	±	2.67
한라봉 껍질 100% 에탄올 추출물 [시료4]	원액	91.82	±	0.71
	2 배 희석	91.00	±	1.16
	4 배 희석	67.84	±	0.84
	8 배 희석	42.76	±	0.51
	16 배 희석	27.88	±	1.01
	32 배 희석	20.35	±	1.84
	64 배 희석	16.57	±	2.25
	128 배 희석	16.00	±	0.52
황칠 나무 잎 에탄올 추출물과 한라봉 껍질 에탄올 추출물 [시료A]	원액	86.70	±	5.06
	2 배 희석	86.37	±	2.02
	4 배 희석	85.99	±	0.54
	8 배 희석	84.06	±	0.26
	16 배 희석	77.11	±	2.17
	32 배 희석	56.70	±	6.11
	64 배 희석	28.88	±	2.17
	128 배 희석	12.50	±	1.37

상기 [표 3]에 나타난 바와 같이, 항산화 활성은 에탄올과 물의 혼합비가 50:50 일 때 가장 높은 항산화 활성을 보여주고 있으며, 황칠나무 잎 추출물과 한라봉 껍질 추출물을 1:1 로 혼합한 액으로 항산화활성을 측정하였을 때 황칠나무 잎 추출물을 단독으로 측정하였을 때보다 약간 높은 항산화 활성을 보여주었다. 황칠나무 잎 추출물에 비해 한라봉 껍질 추출물은 항산화 활성이 낮은 편이나. 황칠나무 잎 추출물과 한라봉 껍질 추출물을 혼합한 혼합추출물의 경우에는 DPPH 라디칼 소거 활성 비율이 28.88%으로 증가하여 DPPH 라디칼 소거 활성 효과가 있다는 것을 보여주고 있다.

2). ABTS radical 소거능

상기 <실시예 1> 및 <실시예 2>에서 제조한 황칠나무 잎 추출물, 한라봉 껍질 추출물 및 황칠나무 잎 추출물과 한라봉 껍질 추출물의 혼합추출물들을 상기 기재한 바와 같은 방법으로 준비한 [시료1] 내지지 [시료4] 및 [시료 A]에 대하여 다음과 같이 ABTS 라디칼 소거 작용을 측정하였다.

ABTS radical 소거 활성은 Re et al. (1999)의 방법을 변형하여 측정하였다. 즉, 7 mM ABTS 5 mL와 140 mM potassium persulfate 88㎕ 를 혼합한 후 상온에서 16시간 빛을 차단하여 ABTS 양이온을 형성시킨 후 이 용액을 414nm에서 흡광도 값이 1.5가 되도록 PBS로 희석하였다. 조제된 희석용액 190㎕와 시료 10㎕를 혼합한 후 상온에서 6분간 반응시킨 후 734nm에서 흡광도를 측정하였다. 용매 대조군으로 하여 대조군에 대한 라디칼 소거능을 아래 [계산식 2]에 의해 나타내었으며, ABTS 라디칼 소거능 결과 및 그래프를 아래 [표 4]로 나타내고 [도 2]로 첨부하였다.

[계산식 2]

Sample		ABTS 라디칼 소거능(%)
황칠 나무 잎 50% 에탄올 추출물 [시료1]	원액	99.25	±	0.05
	2 배 희석	99.50	±	0.14
	4 배 희석	99.55	±	0.02
	8 배 희석	97.35	±	1.68
	16 배 희석	87.79	±	2.93
	32 배 희석	59.86	±	2.97
	64 배 희석	36.84	±	3.85
	128 배 희석	23.52	±	1.34
한라봉 껍질 물 추출물 [시료2]	원액	99.78	±	0.06
	2 배 희석	103.23	±	0.11
	4 배 희석	99.90	±	0.02
	8 배 희석	94.54	±	4.09
	16 배 희석	84.12	±	2.03
	32 배 희석	58.36	±	1.52
	64 배 희석	36.12	±	4.06
	128 배 희석	22.08	±	0.92
한라봉 껍질 50% 에탄올 추출물 [시료3]	원액	99.47	±	0.10
	2 배 희석	99.18	±	0.16
	4 배 희석	88.17	±	4.81
	8 배 희석	62.20	±	5.76
	16 배 희석	35.81	±	0.91
	32 배 희석	24.86	±	1.64
	64 배 희석	18.48	±	1.87
	128 배 희석	9.87	±	1.61
한라봉 껍질 100% 에탄올 추출물 시료4]	원액	99.76	±	0.08
	2 배 희석	99.76	±	0.08
	4 배 희석	99.74	±	0.08
	8 배 희석	94.04	±	3.74
	16 배 희석	70.80	±	3.44
	32 배 희석	63.78	±	2.79
	64 배 희석	32.12	±	2.37
	128 배 희석	19.72	±	2.21
황칠나무 잎 에탄올 추출물과 한라봉 껍질 에탄올 추출물 [시료A]	원액	99.59	±	0.01
	2 배 희석	99.65	±	0.06
	4 배 희석	99.69	±	0.09
	8 배 희석	97.51	±	1.21
	16 배 희석	86.22	±	2.01
	32 배 희석	67.21	±	1.35
	64 배 희석	39.73	±	5.35
	128 배 희석	36.13	±	5.49

상기 [표 4]에 나타난 바와 같이, 항산화 활성은 에탄올과 물의 혼합비가 50:50 일 때 가장 높은 항산화 활성을 보여주고 있으며, 한라봉 껍질 추출물의 최적 추출조건 탐색을 위해서 에탄올과 물의 혼합 추출용매로 추출한 후 추출용매에 따른 항산화활성을 비교하였다. 그 결과 항산화 활성은 에탄올과 물의 혼합비가 50:50 일 때 가장 낮은 항산화 활성을 보여주었다. 황칠나무 잎 추출물과 한라봉 껍질 추출물을 1:1 로 혼합한 액으로 항산화활성을 측정하였을 때 황칠나무 잎 추출물을 단독으로 측정하였을 때보다 오히려 높은 항산화활성을 보여주었다. 황칠나무 잎 추출물에 비해 한라봉 껍질 추출물은 항산화 활성이 낮은 편이나. 황칠나무 잎 추출물과 한라봉 껍질 추출물을 혼합한 혼합 추출물의 경우에는 황칠나무 잎 추출물 단독보다 39.73%으로 ABTS 라디칼 소거 활성의 상승효과를 확인할 수 있었다.

<시험예 2> 항균 활성 시험

실험예 2는 <실시예 1> 및 <실시예 2>에서 제조한 황칠나무 잎 추출물, 한라봉 껍질 추출물 및 황칠나무 잎 추추룸과 한라봉 껍질 추출물의 혼합추출물인 [시료1] 내지 [시료4] 및 [시료A]에 대하여 비듬균에 대한 항균 활성 효과를 평가하기 위하여 실시하였다

1). 항균 실험 균주 및 배양

본 실험에 사용된 균주는 Malassezia furfur (M. furfur, 비듬균)으로 미생물자원센터 KCTC(Korean Collection for Type Cultures)에서 분양받아 실험에 사용하였으며, M. furfur 생육배지로는 아래 [표 5]를 사용하여 배양하였다.

생육 조건
			Temp. (℃)
Peptone	10	g	37.0
Dextrose	20	g
Yeast extract	5	g
Olive oil	3.3	g
Distilled water	1	L

2). 항균 활성의 측정

항균활성 측정은 M. furfur 균주를 이용하여 시료의 paper disc diffusion 방법을 이용하였다. 배양된 균주의 단일 colony를 취하여 액체배지에 접종한 후 M. furfur를 37℃에서, 48시간 이상 배양한 다음 1000㎕ 씩 취해서 고체배지에 균일하게 도말하였다. 멸균된 disc paper (Toyo seisakusho, 8 mm)를 준비하고 50㎕씩의 시료를 각각 disc에 주입하고 평평한 부분이 밑으로 가게 하여 도말된 고체배지에 올려놓았다. disc에 올려진 균주는 균주의 조건으로 배양하였으며 배양 후 클리어 존(cm)을 확인하여 클리어 존의 크기로 항균능을 측정하였다. 각 시료는 활성을 확인하기 위하여 접종량을 달리하여, 각 추출물을 10, 25, 50㎕씩 접종하여 항균활성을 측정하고 그 결과를 아래 [표 6]으로 나타내었다.

시료명		*M. furfur*
황칠 잎 50% 에탄올 추출	10 ㎕	0.0
	25 ㎕	0.0
	50 ㎕	0.2
한라봉 껍질 물 추출물	10 ㎕	-^*
	25 ㎕	-^*
	50 ㎕	0.0
한라봉 껍질 50% 에탄올 추출	10 ㎕	-^*
	25 ㎕	-^*
	50 ㎕	0.2
한라봉 껍질 100% 에탄올 추출물	10 ㎕	-^*
	25 ㎕	-^*
	50 ㎕	0.3
황칠 잎과 한라봉 껍질 혼합액	10 ㎕	-^*
	25 ㎕	-^*
	50 ㎕	-^*
^*- : 실험데이터 없음

상기 [표 6]에 따르면, 황칠나무 잎 50%-EtOH 추출물에서 비듬균에 대한 항균활성을 나타냈으며 한라봉 껍질 50%-EtOH 및 100%-EtOH 추출물에서 각각 0.2, 0.3cm 의 클리어 존을 형성하였고 한라봉 물 추출물에서는 비듬균에 대한 항균활성이 나타나지 않았으며, 비듬균에 대한 황칠나무 잎 50%-EtOH 추출물 10㎕, 50㎕ 접종 한라봉 껍질 물 추출물, 한라봉 껍질 50%-EtOH 추출물, 100%-EtOH 에탄올 추출물 각각 50㎕ 접종 후 측정결과를 [도 3]으로 첨부하였다.

<시험예 3>항염증 효능 및 NO 생성 저해능 측정

본 <실험예 3>은 상기 <실시예 1> 및 <실시예 2>에서 제조한 황칠나무 잎 추출물, 한라봉 껍질 추출물 및 황칠나무 잎 추출물과 한라봉 껍질 추출물의 혼합추출물들에 대하여 항염증 활성을 측정하기 위해 세포(RAW264.7)에 대한 세포생존율을 평가하기 위하여 실시되었다. 또 항염증 활성을 측정하기 위해 NO 생성 저해능을 측정하기 전에 본 원료의 세포(RAW264.7)에 대한 독성시험을 실시하였다.

1). 세포의 배양

실험에 사용한 세포주 RAW264.7은 한국세포주은행(KCLB, Seoul, Korea)에서 분양받아 사용하였다. 각 세포주를 10cm well plate에서 배양하여 1주일에 2 ~ 3회 계대하였으며, 배지는 10% Fetal Bovine Serum(FBS, Lonza, Valais, Switzerland) medium을 함유한 성장배지를 이용하였다.

세포주는 습도 95%, 5% CO₂, 37℃로 조절된 배양기에서 배양하였으며, 배지는 2일에 한번 씩 교환하였다. 이때 미생물의 오염이나 증식을 억제하기 위해 배지용 항생제(Penicillin streptomycin, Gibco, CA, USA)를 사용하였다. 세포가 80% 정도 dish를 덮으면 phosphated-buffered saline-EDTA (PBS-EDTA)로 세척한 후 PBS 처리하여 계대 배양하였으며, 배지는 48시간마다 교환하여 세포를 배양하였다.

2). Nitric Oxide(NO) 생성량의 측정

RAW 264.7 세포주를 3×10⁵cells/well로 96 well에 분주한 후 세포가 바닥의 약 80% 이상 자랄 때까지 배양하였다. 염증을 유발하기 위하여 lipopolysaccharide (LPS, Sigma-Aldrich, MO, USA)를 1㎍/㎖의 농도로 처리하였다. 시료의 항염증 효능을 확인하기 위해 LPS와 함께 시료를 배지에 녹여 24시간동안 배양하였다. NO 생성량은 Griess 시약을 사용하여 측정하였으며, Griess 시약은 2.5%의 phosphate 용액에 1% sulfanilamide와 0.1% naphthylethylene-diamine dihydrochloride를 혼합하여 만들었다. 위에 배양한 세포의 상등액 50㎕를 96 well plate에 취하고 여기에 Griess 시약 50㎕를 가해 15분 동안 실온에서 반응시킨 후 microplate reader (Molecular Devices, VersaMax ELISA Microplate Reader, USA)를 이용하여 540nm에서 흡광도를 측정하였다. 항염증 효능의 측정은 대식세포주에 LPS를 처리하여 LPS만을 처리한 군의 NO 생성량에 대한 LPS와 함께 시료를 처리한 군의 NO 생성량을 측정하여 시료의 NO 생성 저해 활성을 측정하였으며, 그결과를 [도 4]로 첨부하였다.

3). RAW 264.7 cell의 세포 생장 저해율 측정

항염증 활성을 측정하기 위해 세포(RAW264.7)에 대한 세포생존율 실험을 실시하였다. 0.5% 살리실산은 0.5%에서 13.23%의 생존율을 보여 독성을 확인하였고 5배 희석 이 후 부터는 대조군과 유의적인 차이가 없었다. 마치현추출물은 모든 농도에서 cell viability가 대조군 대비 유의적인 증가를 보여 세포 생존율 저해효능은 없었다.

황칠나무 잎 50% 에탄올 추출물에서는 세포 생존율 감소가 없었으나, 50%에서 급격히 세포 생존율이 저하되었다. 그래서 정확한 세포 독성을 확인하기 위해 희석배수를 다양하게 제조하여 정확한 독성 유발 농도를 확인하였다. 그 결과, 황칠나무 잎 30배 희석액에서는 세포 독성이 없었으나, 20배에서는 독성이 검출되어 세포 생존율에 영향을 미치는 농도는 20배 보다 농축된 형태임을 확인하였다. 한라봉 껍질 50% 에탄올 추출물의 모든 농도에서 세포 독성은 없었고, 원액과 5배 희석액에서 대조군 대비 유의적으로 증가함을 보였다. 또한, 세포 생존율 저해 효능이 없는 황칠 나무 잎 추출물 30배 추출물과 한라봉 껍질 추출물 원액을 1:1로 혼합한 혼합물에서는 모든 시험액에서 세포 생존율 저해 효능은 없었다. 이처럼 염증을 유발하는 RAW264.7 세포에 대하여 황칠나무 잎 추출액은 20배 희석보다 높은 농도의 용액과 살리실산 원액에서는 세포 생존율이 저해되어 항염증 효능이 있는 것을 확인하였으며, 그 결과를 아래 [표 7]로 나타내었다.

시료명		RAW 264.7 세포생존율 (%)
마치현 추출물 대조군 (DW)		100.00	±	1.94
0.5% 살리실산 대조군 (DMSO)		100.00	±	2.48
마치현 추출물 (비교대조군)	원료 1000 배 희석	104.54	±	0.37
	원료 100 배 희석	104.67	±	3.28
	원료 10 배 희석	104.69	±	2.72
	원액	104.50	±	1.37
0.5% 살리실산 (비교대조군)	원료 100 배 희석	101.95	±	5.51
	원료 50 배 희석	107.24	±	2.15
	원료 10 배 희석	106.11	±	2.80
	원료 5 배 희석	105.19	±	2.25
	원액	13.23	±	0.36^**
황칠잎과 한라봉껍질 대조군 (50% 에탄올)		100.00	±	2.40
황칠 잎 50% 에탄올 추출	원료 100 배 희석	96.94	±	8.10
	원료 90 배 희석	99.68	±	3.93
	원료 80 배 희석	98.00	±	2.93
	원료 70 배 희석	98.66	±	1.48
	원료 60 배 희석	97.61	±	1.94
	원료 50 배 희석	101.35	±	2.71
	원료 40 배 희석	99.05	±	2.96
	원료 30 배 희석	97.05	±	4.57
	원료 20 배 희석	84.78	±	3.52^**
	원료 10 배 희석	54.45	±	1.21^**
	원료 5 배 희석	11.59	±	1.04^**
	원액	11.23	±	0.72^**
한라봉 껍질 50% 에탄올 추출	원료 100 배 희석	106.35	±	4.26
	원료 50 배 희석	103.71	±	1.84
	원료 10 배 희석	105.15	±	4.27
	원료 5 배 희석	106.71	±	3.19^**
	원액	104.97	±	1.67^**
황칠 잎 추출물과 한라봉 껍질 출물 혼합액 ^*	원료 20 배 희석	98.56	±	2.11
	원료 10 배 희석	100.35	±	2.18
	원료 5 배 희석	102.53	±	1.74
	원료 2 배 희석	102.84	±	1.67
	원액	102.18	±	2.74
* : 황칠 잎과 한라봉 껍질 혼합액, 황칠잎 50% 에탄올추출물 원액을 15 배 희석한 후 한라봉 50% 에탄올 추출물 원액과 1 : 1 비율로 희석 하여, 황칠잎 50% 에탄올 추출물 농도가 최종적으로 30 배 희석이 되도록 제조 ** : p<0.05, (-)대조군 과 비교함.

3). RAW 264.7 cell의 NO(Nitric Oxide) 생성 저해능 측정

Nitric Oxide (NO) 생성 저해능은 황칠나무 잎 추출물, 한라봉 껍질 추출물, 마치현추출물, 살리실산 추출물을 희석한 액을 시료로 하여 측정하였다. 또한, 황칠나무 잎 추출물 및 한라봉 껍질 추출물의 혼합 추출물 실험은 세포생존율에 영향을 미치지 않는 농도로 조제하였다. 황칠나무 잎 50%-EtOH 추출물 원액 15배 희석액과 한라봉 껍질 50%-EtOH 추출물 원액을 1:1 비율로 혼합하고, 이 시료를 황칠나무 잎 추출물과 한라봉 껍질 추출물의 혼합추출물 원액으로 하고 아래 [표 8]에 나타낸 바와같이 희석하여 실험을 진행하였다.

시료명		NO 생성율 (%)
0.5% 살리실산 대조군		100.00	±	4.54
마치현 추출물 마치현 대조군		100.00	±	1.96
마치현 추출물 (비교대조군)	원료 100 배 희석	130.17	±	2.28^**
	원료 10 배 희석	132.75	±	0.84^**
	원액	127.44	±	2.98^**
0.5% 살리실산 (비교대조군)	원료 100 배 희석	95.47	±	2.52
	원료 50 배 희석	94.90	±	4.85
	원료 10 배 희석	68.64	±	3.11^**
	원료 5 배 희석	50.77	±	2.83^**

황칠잎과 한라봉껍질 대조군		100.00	±	2.45
황칠 잎 50% 에탄올 추출	원료 100 배 희석	94.42	±	4.18
	원료 90 배 희석	92.35	±	2.35^**
	원료 80 배 희석	94.01	±	1.35^**
	원료 70 배 희석	93.77	±	2.15^**
	원료 60 배 희석	94.38	±	1.70^**
	원료 50 배 희석	90.52	±	1.38^**
	원료 40 배 희석	86.33	±	1.36^**
	원료 30 배 희석	82.52	±	2.48^**
한라봉 껍질 50% 에탄올 추출	원료 100 배 희석	102.33	±	2.30
	원료 50 배 희석	102.06	±	0.95
	원료 10 배 희석	101.53	±	3.06
	원료 5 배 희석	102.94	±	4.46
	원료 원액	113.11	±	1.52^**
황칠 잎 추출물과 한라봉 껍질 추출물 혼합액^*	원료 20 배 희석	100.70	±	1.24
	원료 10 배 희석	98.43	±	3.80
	원료 5 배 희석	95.36	±	2.37^**
	원료 2 배 희석	84.31	±	3.01^**
	원료 원액	66.61	±	2.49^**
* : 황칠 잎과 한라봉 껍질 혼합액, 상기 [표 7]과 같이제조함 ** : p<0.05, (-)대조군 과 비교함.

상기 [표 8]에 따르면, 황칠나무 잎 50%-EtOH 추출물은 20배 희석액까지 세포 생존율 저해활성을 확인하였고, 30배 희석에서는 97.05% 세포생존율로 대조군과 유의적인 차이가 없었다. NO(Nitric Oxide) 생성 저해활성을 측정하기 위한 실험에서는 세포생존율 저해에 영향을 미치지 않는 농도에서 실시하였다. 황칠나무 잎 50%-EtOH 추출물 30배 희석액에서 17.48%의 NO(Nitric Oxide) 생성 저해를 보여주었다. 한라봉 껍질 50%-EtOH 추출물은 원액에서 NO(Nitric Oxide)가 증가함을 보였다. 비교 대조군으로 실시한 마치현추출물은 모든 농도에서 NO(Nitric Oxide)가 증가하였으며, 0.5% 살리실산은 5배 희석액에서 49.3%의 NO(Nitric Oxide) 생성 저해가 확인되었다.

황칠나무 잎 추출물과 한라봉 껍질 추출물의 혼합추출물은 살리실산에 비해 NO(Nitric Oxide) 생성 저해능이 높게 나오지 않았으나, 황칠나무 잎 추출물은 세포 생존율을 저해하는 효과를 가지고 있었고, 30배 희석액의 NO(Nitric Oxide) 생성 저해능이 17.5% 였고, 한라봉 껍질 추출물은 NO(Nitric Oxide) 생성 저해능이 없었지만, 황칠나무 잎 추출물과 한라봉 껍질 추출물의 1:1 혼합 시에는 NO(Nitric Oxide) 생성 저해율이 33.4%로 크게 증가하였다. 즉, Nitric Oxide 생성 저해능은 33.39%로 황칠나무 잎 추출물보다 약 16% 더 뛰어난 것으로 나타났다. 이는, 황칠나무 잎 추출물과 한라봉 껍질 추출물을 혼합했을 때, 항염증 효능이 크게 증가함을 확인할 수 있었다.

4). RAW 264.7 cell의 PG E₂생성 저해능 측정

항염증 활성의 기전을 확인하기 위하여 Prostaglandin E₂(PGE₂)의 저해활성을 측정하고 그 결과를 아래 [표 9]로 나타내고 [도 5]로 첨부하였다.

시료명		PGE₂활성 (%)
황칠잎과 한라봉 혼합액 (-) 대조군		100.00	±	12.08
황칠잎과 한라봉껍질 추출물 혼합액	원료 20 배 희석	100.00	±	11.97
	원료 10 배 희석	92.15	±	12.01^**
	원료 5 배 희석	67.46	±	14.40^**
	원료 2 배 희석	30.93	±	4.58^**
	원액	23.13	±	5.57^**
* : 황칠 잎과 한라봉 껍질 혼합액, 상기 [표 7]과 같이제조함 ** : p<0.05, (-)대조군 과 비교함.

상기 [표 9]에 따르면, PGE₂생성 저해활성은 활칠나무 잎 추출물 및 한라봉 껍질 추출물의 혼합 추출물의 원액, 2배, 5배, 10배 희석에서 (-) 대조군 대비에 유의적인 감소를 확인하여(PGE₂저해능 76.87, 69.07, 32.54%), 황칠나무 잎 추출물과 한라봉 껍질 추출물의 혼합추출물의 높은 항염증 활성을 확인할 수 있었다.

즉, 황칠나무 잎 추출물과 한라봉 껍질 추출물의 혼합추출물의 PGE₂함량은 원액의 농도에서 (-) 대조군 대비 23.13%로 활성이 저해되어 높은 항염증 활성을 나타내었다.

<시험예 4> 탈모 개선효능 측정

1). Hair Follicle Dermal Papilla Cells(HFDPC, 모유두세포) 독성시험

시험을 위한 세포 HFDPC는 Cell Engineering for Origin (CEFO, Seoul, Korea)에서 분양받아 사용하였다.

각 세포주를 10cm well plate에서 배양하여 1주일에 2 ~ 3 회 계대하였으며, 배지는 10% Fetal Bovine Serum (FBS, Lonza, Valais, Switzerland) medium을 함유한 HFDPC배지를 이용하였다. 세포주는 습도 95%, 5% CO₂, 37℃로 조절된 배양기에서 배양하였으며, 배지는 2 일에 한번 씩 교환하였다.

이때 미생물의 오염이나 증식을 억제하기 위해 배지용 항생제(Penicillin streptomycin, Gibco, CA, USA)를 사용하였다. 세포가 80% 정도 dish를 덮으면 phosphated-buffered saline-EDTA (PBS-EDTA)로 세척한 후 트립신 처리하여 계대 배양하였다.

모유두세포 독성 시험은 한라봉 껍질 100% 에탄올 추출물은 Whatman no. 1 filter paper로 여과하여 감압농축하였다. 감압농축된 시료의 수분함량(78.22%)을 고려하여 세포실험에 알맞은 농도로 희석하여 시료로 사용하였다. 한라봉 껍질 추출물에서는 농도별 유의적으로 세포생존율이 증가하는 것을 확인하였으며, 대조군으로 사용한 Finasteride는 현재 탈모개선에 상용되고 있는 시약이며, finasteride의 100㎍/㎖ 농도에서도 모유두세포에서 독성이 없는 것으로 확인되었으며 한라봉껍질 추출물과 Finasteride의 모유두세포에 대한 독성에 대한 결과를 아래 [표 10]으로 나타내고, [도 6]로 첨부하였다.

시료명	처리농도 (μg/ml)	cell viability (%)
한라봉껍질 추출물 (μg/ml in water)	(-) 대조군	100.0	±	8.2
	0.1	111.5	±	8.3
	1	116.6	±	7.8 ^*
	10	121.2	±	4.9 ^*
	100	128.4	±	8.6 ^*
Finasteride (μg/ml in DMSO)	(-) 대조군	100.0	±	9.4
	0.1	108.2	±	6.0
	1	108.4	±	3.4
	10	111.4	±	0.8
	100	101.5	±	6.2
* : p<0.05, (-)대조군 과 비교함

2). 5α-Reductase 저해능 측정

시료는 한라봉 껍질 분말(140 g)을 100% 에탄올(1,400 ml)로 35℃에서 48 시간 추출후 Whatman no. 1 filter paper로 여과하여 상등액만을 감압농축하였다. 감압농축된 시료의 수분함량(78.22%)을 고려하여 세포실험에 알맞은 농도로 희석하여 시료로 사용하였다.

모유두세포에 대한 기능성 소재 추출물의 5α-reductase 활성억제 평가에 사용하기 위하여 96well plate에 5×10³ cells/well이 되도록 모유두세포를 분주하였다. 24시간 배양 후 기존 배양액은 제거하고 각 well 당 한라봉껍질 에탄올 추출물(0.05, 0.1, 0.5, 1, 5, 10, 50, 100 μg/mL), Finasteride (0.1, 1, 10, 100 μg/mL), Minoxidil (0.1, 1, 10, 100 μg/mL)을 포함한 배양액으로 교환하였다. 그 뒤 다시 24시간 배양 후 기존 배양액을 제거하고 1×PBS로 washing 후 extraction buffer (880 mM Sucrose, 1.5 M CaCl₂)를 이용하여 세포를 lysis 시켜주었다. 이렇게 얻은 세포 lysate를 원심분리 후 상층액을 실험에 사용하였다.

기존 탈모 치료제인 Finasteride와 Minoxidil과 비교하여 한라봉 껍질 추출물의 5α-reductase 활성 억제 효과를 확인하기 위하여 (Steroid 5 Alpha Reductase 2) ELISA Kit (MBS2540324)를 사용하여 5α-reductase 함량을 측정하였으며, 한라봉 껍질 추출물은 모유두세포에 농도별 처리 시 모유두세포가 증가함을 나타내었으므로 세포의 단백질함량을 대비 5α-Reductase 함량으로 측정하였다.

한라봉 껍질 추출물(100μg/ml)에서 5α-Reductase 저해율이 약 79.8%로 나타났고, 탈모치료제로 상용되고 있는 Finasteride의 5α-Reductase 저해율은 약 88%로 나타났으며, 그 결과를 아래 [표 11]로 나타내고, [도 7]으로 첨부하였다.

시료명	처리농도 (μg/ml)	5α-Reducatase (ng/g of protein)
한라봉껍질 추출물 (μg/ml in water)	(-) 대조군	17.6	±	0.6
	0.1	13.1	±	0.7^*
	1	9.3	±	0.2^*
	10	4.5	±	0.0^*
	100	3.5	±	0.2^*
Finasteride (μg/ml in DMSO)	(-) 대조군	16.9	±	0.2
	0.1	13.3	±	0.9^*
	1	6.4	±	0.3^*
	10	3.5	±	0.5^*
	100	2.1	±	0.3^*
* : p<0.05, (-)대조군 과 비교함

이상, <실시예> 및 <실험예>를 통하여 본 발명을 상세하게 설명하였으나, 본 발명은 상기 구현예들에 한정되지 않으며, 여러 가지 다양한 형태로 변형될 수 있으며, 본 발명의 기술적 사상 내에서 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에 의하여 여러 가지 많은 변형이 가능함이 명백하다. 또한, 청구범위에 기재된 본 발명의 기술적 사상을 벗어나지 않는 범위 내에서 본 발명이 속하는 기술 분야의 통상의 지식을 가진 자에 의해 다양한 형태의 치환, 변형 및 변경이 가능할 것이며, 이 또한 본 발명의 범위에 속한다고 할 것이다.

Claims

황칠나무 잎 추출물과 한라봉 껍질 추출물의 혼합추출물을 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 하는 발모개선 조성물.
청구항 1에 있어서, 황칠나무 잎 추출물과 한라봉 껍질 추출물의 혼합추출물은 발모개선 조성물 총 중량에 대하여 0.1 내지 80중량% 함유하는 것을 특징으로 하는 발모개선 조성물.
청구항 2에 있어서, 황칠나무 잎 추출물과 한라봉 껍질 추출물의 혼합추출물은 황칠나무 잎 추출물에 대하여 한라봉 껍질 추출물이 중량비로 1 : 1 ~ 0.5의 비율로 혼합되는 것을 특징으로 하는 발모개선 조성물.
청구항 1에 있어서, 유효성분이 DPPH 라디칼 소거능을 갖는 것을 특징으로 하는 발모개선 조성물.
청구항 1에 있어서, 유효성분이 ABTS 라디칼 소거능을 갖는 것을 특징으로 하는 발모개선 조성물.
청구항 1에 있어서, 유효성분이 항산화 활성을 갖는 것을 특징으로 하는 발모개선 조성물.
청구항 1에 있어서, 유효성분이 일산화질소(Nitric Oxide) 생성 저해능을 갖는 것을 특징으로 하는 발모개선 조성물.
청구항 1에 있어서, 유효성분이 프로스타글란딘(Prostaglandin) E₂생성 저해능을 갖는 것을 특징으로 하는 발모개선 조성물.
청구항 1 내지 청구항 8 중 어느 하나의 항에 기재된 발모개선 조성물이 헤어토닉, 헤어컨디셔너, 헤어에센스, 헤어로션, 헤어영양로션, 헤어샴푸, 헤어린스, 헤어트리트먼트, 헤어크림, 헤어영양크림, 헤어모이스처크림, 헤어맛사지크림, 헤어왁스, 헤어 에어로졸, 헤어팩, 헤어영양팩, 헤어비누, 헤어클렌징폼, 머릿기름, 모발건조제, 모발보존처리제, 모발염색제, 모발용 웨이브제, 모발탈색제, 헤어겔, 헤어글레이즈, 헤어드레싱어, 헤어래커, 헤어모이스처라이저, 헤어무스 및 헤어스프레이 중 어느 하나의 제형으로 이루어진 것을 특징으로 하는 발모개선 조성물.