KR20200032962A

KR20200032962A - 피부 보습을 향상시키는 펩타이드 유도체 및 이의 제조 방법

Info

Publication number: KR20200032962A
Application number: KR1020180112249A
Authority: KR
Inventors: 이성진; 박경용; 강준구; 김태민
Original assignee: 주식회사 차메디텍
Priority date: 2018-09-19
Filing date: 2018-09-19
Publication date: 2020-03-27

Abstract

본 발명은 라이신 유도체를 포함하는 신규 펩타이드 화합물에 관한 것으로서, 피부 보습 효과를 우수하게 유지시켜 주며, 특히 피부 질환인 가려움증, 홍반, 아토피 또는 건선 등의 피부 상태를 개선하고 악화되는 것을 방지할 수 있는 약학적 또는 화장료 조성물에 관한 것이다.

Description

피부 보습을 향상시키는 펩타이드 유도체 및 이의 제조 방법 {Peptide derivatives that enhance skin moisturization and method for manufacturing the same}

본 발명은 피부 보습용 조성물에 관한 것으로, 라이신 유도체를 유효 성분으로 하는 피부 보습용 조성물에 관한 것이다.

사람들의 피부는 표피, 진피, 피하지방층의 3 층으로 구성되어 있으며, 피부의 최외곽에 위치하는 표피층은 피부의 보습과 외부 이물질에 대한 보호 기능을 가지고 있으며, 각질층, 과립층, 유극층, 기저층으로 다시 분류가 된다. 피부의 수분은 각질층의 케라틴, 각질세포간지질, 천연보습인자 (NMF) 등에 의해서 유지된다. 진피는 표피에 영양소를 공급하면서, 콜라겐, 엘라스틴 등이 풍부하게 존재하여, 피부 탄력에 많은 영향을 미치고 있다. 피하지방층은 지방조직으로 이루어져 있으며, 표피 및 진피층의 영양공급, 체형 결정, 체온 유지 등의 역할을 수행하고 있다. 이와 같은 피부의 성분들 중에, 각질층은 15-20개의 각질 세포들에 의해서 이루어져 있으며, 산이나 알칼리에 대한 완충 역할을 하여 생체의 항상성을 유지시켜 준다. 이러한 기능은 케라틴 (keratin) 58%, 각질세포간지질 (lipid) 11%, 천연보습인자 (NMF) 31% 등에 의해서 유지가 된다. 이와 같은, 피부 각질층에 보습 작용이 제대로 유지되지 못하면, 세포의 재생 능력이 저하되어 탄력이 감소되고, 주름이 생성되면서 피부 노화가 발생하게 된다. 따라서, 외부 환경이 건조하면, 피부의 수분 보유 능력과 수분 증발 억제 능력을 보완해서, 피부를 부드럽고 촉촉하게 해 주어야 하며, 이와 같은 기능을 하는 보습제 화장품에 대한 관심이 점점 높아지게 되었다.

보습제 (moisturizer)의 개념은 단순한 피부 수분 보충 뿐만 아니라, 피부의 가장 중요한 기능인 장벽 기능 회복에 많은 관심이 집중되고 있으며, 2 가지로 구분되어 사용되고 있다. 첫번째는 천연보습인자(NMF: Natural Moisturizing Factor) 성분인 아미노산, 젖산 나트륨 (sodium lactate), 피로리돈 카르복시산 나트륨 (sodium PCA), 요소 (urea)등과 같은 화합물들이다. 두번째로는 수분을 잘 함유하고 있는 글리세린, 하이아루론산, 폴리에틸렌글리콜 등과 같은 고분자 화합물들이다. 이와 같은 고분자 성분은 분자량이 크기 때문에 표피에 사용할 경우에는 전혀 흡수가 되지 않고, 색조나 썬크림을 사용할 경우에는 화장이 들뜨게 하는 단점을 가지고 있다. 또한, 피부 수분 함량이 공기 중의 수분 함량보다 높을 때는 히알루론산의 수분 함유 성질로 인하여, 공기 중에 수분을 빼앗기게 되어 오히려 피부가 건조해 지게 되는 문제점을 가지고 있다. 이외에도, 여러 가지 천연물 추출물 및 각종 단백질 분해물을 이용한 보습제 개발이 진행되었으나, 아직도 그 효과도 미진하며, 고농도로 사용해야 하는 많은 어려움을 가지고 있다.

최근에는 펩타이드를 골격으로 하는 보습제 개발에 대해서, 대한민국 특허등록 10-1384744 (보습능이 우수한 펩타이드 유도체 및 이의 용도)와 대한민국 특허 공개번호 10-2013-0110914 (피부 보습 펩타이드 유도체 및 그 제조방법)에 개시되었다. 그러나 펩타이드 유도체 합성의 중요한 반응인 라이신의 N-알킬레이션 반응 및 최종 화합물의 정제에 어려움이 있고, 또한 펩타이드 유도체의 N-말단에 다른 작용기를 도입하기에 어려운 한계를 가지고 있다.

본 발명자들은, 위와 같은 단점을 극복하고, 친수성기와 친유성기를 동시에 가지고 있는 세라마이드의 구조적 특징에 착안하여, 새로운 보습제 화합물 연구 개발을 진행하였다. 그 결과, Fmoc (9-Fluorenylmethoxycarbonyl)-라이신 유도체를 이용하여, 전체적으로 저분자 (분자량=1000 수준) 화합물이면서, 수분을 많이 함유할 수 있는 카르복실기 산이 포함된 펩타이드 변형 유도체를 합성하였다. 또한, 피부의 침투율을 증가시키기 위해, N-말단에 친유성 (lipophilicity) 그룹인 지방산을 결합하여, 최종적인 화합물을 합성하였다. 이와 같은 펩타이드 변형 유도체는 고체상 합성 방법 (SPPS; solid phase peptide synthesis)으로 편리하게 합성하였으며, 펩타이드 골격 구조를 가지고 있기 때문에, 독성이 없고, 안정성이 좋으며, 우수한 보습 효과를 나타냄으로써 본 발명을 완성하였다.

본 발명의 목적은, 라이신 유도체를 유효성분으로 포함하면서, 지방산이 결합되어 있는 피부 보습용 조성물을 개발하는 것이다.

본 발명의 또 하나의 목적은, 상기 펩타이드 유도체의 제조 방법을 제공하는 것이다.

본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 펩타이드 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 제공한다.

<화학식 1>

{상기 화학식 1에서, X 는 수소, 글루탐산(Glu), 아스파트산(Asp), 글루타민(Gln), 아스파라긴 (Asn), 히스티딘(His), 라이신(Lys), 아르기닌(Arg), 세린(Ser), 시스테인(Cys), 알라닌(Ala), 글라이신(Gly), 루이신(Leu), 이소루이신(Ile), 발린(Val), 트레오닌(Thr), 메티오닌(Met), 프롤린(Pro), 페닐알라닌(Phe), 타이로신(Tyr) 또는 트립토판(Trp) 이고,

p는 0 또는 1이고, l 및 n은 각각 독립적으로 0 내지 10 중 어느 하나의 정수이고, m은 1 내지 10 중 어느 하나의 정수이고,

Z는 로오로일기(lauroyl), 미리스토일기(myristoyl), 팔미토일기(palmitoyl), 스테아오일기(stearoyl), 아라키도일기(arachidoyl), 팔미톨레오일기(palmitoleoyl), 올레오일기(oleoyl), 리놀레오일기(linoleoyl), 리놀레노일기(linolenoyl), 아라키도노일기(arachidonoyl) 또는 아세틸기이다.}

또한 본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 펩타이드 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염으로 이루어진 군에서 선택된 1 종 이상을 포함하는 보습용 화장료 조성물을 제공한다. 상기 조성물은 피부, 두피 또는 모발 등 인체의 외부에 보습이 필요한 부위에 적용할 수 있다. 따라서 본 발명에 따른 상기 조성물은 피부 노화 방지, 주름 개선, 또는 피부 거칠음 개선을 위한 보습용 화장료 조성물로 제공될 수 있다.

또 다른 예로, 본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 펩타이드 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염으로 이루어진 군에서 선택된 1 종 이상을 포함하는 피부 건조증 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다. 상기 피부 건조증은 피부 갈라짐, 홍반, 가려움증, 건선, 아토피를 포함한다.

본원에서 용어, '약학적으로 허용 가능한 염' 이란 약학적으로 허용되는 무기산, 유기산, 또는 염기로부터 유도된 염을 포함한다. 적합한 산의 예로는 염산, 브롬산, 황산, 질산, 과염소산, 푸마르산, 말레산, 인산, 글리콜산, 락트산, 살리실산, 숙신산, 톨루엔-p-설폰산, 타르타르산, 아세트산, 시트르산, 메탄설폰산, 포름산, 벤조산, 말론산, 나프탈렌-2-설폰산, 벤젠설폰산 등을 들 수 있다. 적합한 염기로부터 유도된 염은나트륨 등의 알칼리 금속, 마그네슘 등의 알칼리 토금속, 및 암모늄 등을 포함할 수 있다.

본 발명의 보습용 조성물에 포함되는 펩타이드 유도체는 피부 또는 체내에 흡수되지 않더라도 적어도 피부 표면에 보습막을 형성하면 효과를 발휘할 수 있는 것이므로, 그 분자량 범위에는 제한이 없으며, 통상 중량평균분자량 100 내지 10,000, 바람직하게는 100 내지 2,000인 범위의 것을 사용할 수 있다.

본 발명의 보습용 조성물에 함유된 보습능이 우수한 펩타이드 유도체의 함량은 조성물의 용도, 적용 형태, 사용 목적 및 소망하는 효과에 따라서 적절히 조절 가능하며, 함량 대비 효과를 고려하여, 예컨대, 전체 조성물 중량에 대하여 0.0001 내지 99 중량%, 바람직하게는 0.001 내지 50 중량%, 보다 바람직하게는 0.01 내지 10 중량%, 가장 바람직하게는 0.01 내지 1 중량%인 것이 좋다. 상기 유효 함량의 조성물 내 함량이 상기 범위 미만인 경우에는 실질적인 보습 효과를 얻을 수 없으므로, 상기 범위 이상이면 본 원료의 고보습능으로 인해 제형의 안정성을 떨어트릴 수 있고, 또한 함량 대비 얻어지는 효과가 미미하여 경제적이지 못하므로, 상기 범위인 것이 좋다.

본 발명의 보습용 조성물은 투여 경로에 따라서, 경구, 경피, 피하, 또는 정맥 투여가 가능하며, 바람직하게는 경구 또는 경피, 보다 바람직하게는 경피 투여 가능한 조성물일 수 있다. 상기 화장료 조성물은 피부, 두피 또는 모발에 경피적으로 적용되고, 기초 화장품, 메이크업 화장품, 바디제품, 면도용 제품, 모발 제품 등의 모든 화장품 제품의 제조에 사용 가능한 조성물을 의미하는 것으로, 경고제, 스프레이제, 현탁액, 유액, 크림, 젤, 폼 등의 형태로 제제화된 것일 수 있으나, 그 형태에 특별한 제한이 없다.

또한, 상기 약학 조성물은 보습 작용에 의하여 피부 및/또는 모발 건조증에 의하여 유발되는 질병의 예방 및/또는 치료 효능을 발휘하는 것으로, 주로 경구적 또는 경피적으로 사용되며, 경고제, 스프레이제, 현탁액, 유액, 크림, 젤 등의 형태로 제제화된 것일 수 있으나, 그 형태에 특별한 제한이 없다. 상기 건조증에 의하여 유발되는 질병으로는 피부 갈라짐, 홍반, 가려움증, 건선, 아토피 등이 있다. 따라서, 본 발명의 약학적 조성물은 피부 갈라짐, 홍반, 가려움증, 건선 및 아토피 등으로 이루어진 군에서 선택된 1 종 이상의 건조증에 의하여 유발되는 질병의 예방 및/또는 치료용 조성물일 수 있다.

본 발명에 따른 보습력이 우수한 화장료 조성물 및 약학 조성물은 그 우수한 보습력에 의하여 피부 노화 방지, 주름 개선 및 피부 거칠음 개선 등의 효과도 함께 나타낼 수 있어서, 우수한 피부 상태 개선 및 피부 상태 악화 억제 효과를 갖는다.

상기 본 발명의 화장료 조성물 및 약학 조성물은 상기 유효성분 이외에, 통상의 제품화 또는 제제화에 사용 가능한 모든 종류의 성분, 예컨대 향료, 색소, 살균제, 산화방지제, 방부제, 보습제, 점증제, 부형제, 희석제, 무기염류 및 합성 고분자 물질 등을 추가로 포함할 수 있으며, 그 종류와 함량은 최종 산물의 용도 및 사용 목적에 따라 적절하게 조절할 수 있다.

또한, 본 발명의 조성물은 적용되는 형태에 통상적으로 포함되는 용매를 포함하는 것일 수 있으며, 예컨대, 에탄올, 글리세린, 부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌글리콜, 1,2,4-부탄트리올, 솔비톨에스테르, 1,2,6-헥산트리올, 벤질알코올, 이소프로판올, 부탄디올, 디에틸렌글리콜 모노에틸에테르, 디메틸이소소르비드, N-메틸-2-피롤리돈, 프로필렌카보네이트, 글리세레스-26, 메틸글루세스-20, 이소세틸미리스테이트, 이소세틸옥타노에이트, 옥틸도데실미리스테이트, 옥틸도데칸올, 이소스테아릴이소스테아레이트, 세틸옥타노에이트 및 네오펜틸글리콜디카프레이트 등 중에서 선택된 1 종 이상을 포함할 수 있다. 이러한 용매를 사용하여 본 발명의 조성물을 제조하는 경우 화합물의 종류에 따라 또는 용매의 혼합비에 따라 용매에 대한 화합물의 용해도가 조금씩 다르나, 본 발명이 속하는 기술 분야의 당업자라면 제품의 특성에 따라 용매의 종류 및 사용량을 알맞게 선택하여 적용할 수 있다.

또한, 본 발명의 조성물은 경피 투여시의 경피 투과를 강화하기 위한 다양한 물질을 포함할 수 있다. 예를 들어, 라우로켑람 유도체 및 올레인산, 모노올레이트 유도체의 에스테르 유도체, 아다팔렌, 트리티노인, 레틴알데하이드, 타자로틴, 살리실산, 아질라익산, 글라이콜산, 에톡시다이글라이콜, 트윈 80, 레시틴 올가노겔 등을 포함할 수 있다. 또한, 본 발명의 조성물은 부가적인 기능을 부여하기 위해, 본 발명의 보습 효과를 부여해주는 조성물의 효과를 해치지 않는 범위 내에서 공계면활성제, 계면활성제, 비듬 방지제, 각질 연화제, 혈행 촉진제, 세포 활성제, 청량제, 보습제, 항산화제, pH 조절제, 정제수 등의 보조 성분들을 첨가할 수 있으며, 적용되는 형태에 따라서 적절한 향료, 색소, 방부제, 부형제 등의 첨가제를 함유할 수 있다.

본 발명에 의하여, 라이신 유도체를 포함하는 펩타이드 화합물이 약학 및 화장료 조성물로 사용되어 피부 보습 효과를 우수하게 유지시켜 주며, 특히 피부 질환인 아토피나 건선 등의 피부 상태를 개선하고 악화되는 것을 막을 수 있는 물질이다.

도면 1은 본 발명에 따른 펩타이드 유도체 II-5번 화합물의 LC-Mass 데이터를 보여주는 것이다.
도면 2는 본 발명에 따른 펩타이드 유도체 II-5번 화합물의 HPLC 데이터를 보여주는 것이다.
도면 3은 본 발명에 따른 펩타이드 유도체들의 수분 증발량 결과를 보여주는 것이다.
도면 4는 본 발명에 따른 펩타이드 유도체들의 보습 능력 결과를 보여주는 것이다.

이하, 본 발명을 실시예에 의해 상세히 설명한다. 단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명이 하기 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.

실시예 1. 아미노산 유도체인 Nα-Fmoc-Nε,Nε-bis(tert-butyloxycarbonylmethyl)-L-lysine의 합성

본 발명에서는 아미노산 유도체인 (6) 화합물이 반응식1에 의해서 총 5가지 단계로 합성이 되었다. (1단계 - 벤질 에스터 반응 단계; 2단계 - 아민 그룹의 탈보호기화; 3 단계 - 아민 그룹의 N-알킬레이션 반응; 4 단계 - 아민 그룹과 카르복실기 그룹의 탈보호기화; 5 단계 - N-말단의 Fmoc 그룹의 도입)

<반응식 1>

Cbz-Lys(Boc)-OBzl (2) 합성 예시

500 ml round flask에 acetonitrile (ACN) (300 ml)에 녹인 Cbz-Lys(Boc)-OH (1) 11.4 g (30 mmol)을 첨가하였다. 상기 flask에 benzyl bromide 3.92 ml (33 mmol, 1.1 equiv.)와 N,N-diisopropylethy-lamine (DIPEA) 6.23 ml (36 mmol, 2.2 equiv.)을 천천히 첨가를 하고, 실온에서 16 시간 동안 교반한 뒤 감압하에서 농축을 한다. 이 화합물을 ethyl acetate (EA)로 용해시킨 다음, brine으로 3번 정도 세척을 한 다음, 유기층을 anhydrous sodium sulfate (Na₂SO₄)로 탈수 및 여과를 하였다. 여액을 감압하에서 농축한 다음, ether:hexane 조건에서 재결정하여, 흰색의 고체 화합물 Cbz-Lys(Boc)-OBzl (2)을 13.56 g 얻었다. (수율: 96%)

Cbz-Lys-OBzl (3) 합성 예시

500 ml round flask에, dichloromethane (DCE) 120 ml에 녹인 Cbz-Lys(Boc)-OBzl (2) 13.17 g (28 mmol)을 첨가한 후, 0℃로 냉각시킨다. 상기 flask에 trifluoroacetic acid (TFA) 80 ml을 천천히 첨가를 한 후에, 이 혼합물을 0℃에서 2 시간 동안 교반을 시키고, 감압하에서 농축을 한다. 이 화합물을 dichloromethane (DCE) 200 ml에 다시 용해시킨 다음, 물에 용해 된 5% Na₂CO₃로 세척을 한다. 이 때 물층을 dichloromethane (DCE)으로 재 추출을 통하여 분리시킨 다음, 모든 유기층을 anhydrous sodium sulfate (Na₂SO₄)로 탈수 및 여과를 하였다. 여액을 감압하에서 농축하여 흰색의 오일 형태 화합물 Cbz-Lys-OBzl (3)을 9.85 g 얻었다. (수율: 95%)

Cbz-Lys(CH ₂ CO ₂ t -Bu) ₂ -OBzl (4) 합성 예시

500 ml round flask에, dimethylformamide (DMF) 100 ml에 녹인 Cbz-Lys-OBzl (3) 9.63 g (26 mmol)을 첨가하고, tert-butyl bromoacetate 15.36 ml (104 mmol, 4 equiv.)와 N,N-diisopropylethyl-amine (DIPEA) 18.12 ml (130 mmol, 5 equiv.)을 천천히 첨가한다. 상기 flask를 N₂ 가스로 충진하고, 50℃ 온도에서 24 시간 동안 교반을 한 다음, 감압하에서 농축을 한다. 이 혼합물을 dichloromethane (DCE)에 녹인 다음 brine으로 세척을 하고, anhydrous sodium sulfate (Na₂SO₄)로 탈수 및 여과를 하였다. 이 여액을 감압하에서 농축한 다음, silica column chromatography [Ethyl acetate:Hexane=1:4 (v/v)]로 정제를 하여, 연한 노란색의 오일 형태 화합물 Cbz-Lys(CH ₂ CO ₂ t -Bu) ₂ -OBzl (4)을 14.32 g 얻었다. (수율: 92%)

H-Lys(CH ₂ CO ₂ t -Bu) ₂ -OH (5) 합성 예시

500 ml round flask에, methanol (MeOH) 200 ml에 녹인 Cbz-Lys(CH₂CO₂ t-Bu)₂-OBzl (4) 13.77 g (23 mmol)을 첨가하고, 10% Pd/C 3.44 g (20 wt%)을 조심히 첨가를 한다. 이 혼합물을 H₂가스로 충진을 한 후에, 실온에서 2 시간 동안 격렬하게 교반을 한다. Pd/C 촉매를 celite를 이용하여 제거하고, 필터 된 유기 용매를 감압하에서 농축하여, 연한 노란색의 오일 형태 화합물 H-Lys(CH ₂ CO ₂ t -Bu) ₂ -OH (5)을 7.75 g 얻었다. (수율: 90%)

Fmoc-Lys(CH ₂ CO ₂ t -Bu) ₂ -OH (6) 합성 예시

500 ml round flask에, dichloromethane (DCE) 150 ml에 녹인 H-Lys(CH₂CO₂ t-Bu)₂-OH (5) 7.49 g (20 mmol)와 N,N-diisopropylethylamine (DIPEA) 7.66 ml (44 mmol, 2.2 equiv.)을 첨가한다. 상기 flask를 0℃로 냉각시키고, dichloromethane (DCE) 50 ml에 녹인 9-fluorenylmethoxycarbonyl chloride (Fmoc-Cl) 5.69 g (22 mmol, 1.1 equiv.)을 천천히 첨가를 한다. 이 혼합물을 실온에서 3 시간 동안 교반을 한 다음, brine으로 세척을 하고, anhydrous sodium sulfate (Na₂SO₄)로 탈수 및 여과를 하였다. 이 유기 용매를 감압하에서 농축한 다음, silica column chromatography [Dichloromethane:Methanol=95:5 (v/v)]로 정제를 하여, 연한 노란색의 고체 화합물 Fmoc-Lys(CH ₂ CO ₂ t -Bu) ₂ -OH (6)을 9.85 g 얻었다. (수율: 82%)

실시예 2. Lysine 유도체를 포함하는 펩타이드 변형 유도체의 합성

본 발명에서 구체적인 실시예들은, 라이신 유도체인 Fmoc-Lys(CH₂CO₂ t-Bu)₂-OH (6)와 아미노산을 이용한 Fmoc 고체상 펩타이드 합성 (Solid phase peptide synthesis; SPPS) 방법으로 합성하였다. 합성 방법은 1) 레진에 첫번째 아미노산을 결합하는 단계; 2) N-term의 Fmoc 그룹을 제거하는 단계; 3) 커플링 시약을 이용하여, 아미노산 및 라이신 유도체를 결합하는 단계; 4) 반응 여부를 Kaiser test로 확인하는 단계; 5) 레진 및 보호기를 제거하는 총 5단계로 합성을 하였다. 아래와 같이 <반응식 2>는 펩타이드 유도체 II-1 화합물의 전체 합성 모식이다.

<반응식 2>

이와 같은 합성 방법은 단계별로 다음과 같이 설명할 수 있다.

1) Novabiochem 회사로부터 구입한 2-chlorotrityl chloride resin (1.1 mmol/g) 454 mg (500 umol)을 측량하여, 반응 용기에 넣는다. 레진을 dichloromethane (DCE)를 이용하여, 5분간 팽윤 (swelling)을 하고, 감압 하에서 용매를 제거한다. 반응 용기에 아미노산 (3 당량)과 DIPEA (6 당량)을 첨가하여, 4 시간 동안 반응을 시킨다.

2) 반응 후, 레진의 용매 제거 및 세척을 진행한 다음, 20% piperidine 으로 희석된 DMF 용액을 이용하여, Fmoc (9-Fluorenylmethoxycarbonyl) 제거 반응을 진행한다. (5 min X 2회)

3) 아미노산 및 라이신 유도체와 레진과의 커플링 반응은, HOBt (1-hydroxybenzotriazole) /HBTU(N,N,N′′-Tetramethyl-O-(1H-benzotriazol-1-yl)uranium hexafluorophosphate)/DIPEA(N,N-Diisopropylethylamine) 시약을 이용하여 반응을 진행하였다. 이 때, 아미노산 및 라이신 유도체 (3 당량)는 HOBt (3 당량), HBTU (3 당량), DIPEA (6 당량)와의 free activation 과정을 거쳐서, 레진과 4 시간 동안 반응을 하였다.

4) 커플링 반응 여부는, kaiser test (E. Kaiser et al., Anal. Biochem. 1970, 34, 595)라는 정성적인 방법을 이용하여, 확인을 하였으며, 이 때 Kaiser 용액은 3가지로 구성이 되어 있다. [a. ninhydrin (5 g) + ethanol (100 ml); b. phenol (80 g) + ethanol (20 ml); c. pyridine (98 ml) + 0.002 M aq. KCN (2 ml)] 커플링 반응이 완료된 후, 레진을 세척한 다음, 3가지의 Kaiser test 용액을 2-3방울 첨가한 후에, 120 ℃에서 3분 동안 열을 가하였다. 미반응한 부분이 남아 있을 경우, 레진의 색깔이 푸른색 빛을 나타내며, 완전히 반응한 경우에는 레진의 색깔 변화가 없다.

5) 2)-4) 과정을 반복하여 원하는 펩타이드 유도체를 합성한 다음, 레진 및 보호기 제거는 cleavage cocktail 용액을 이용하였다. 이 때, cleavage cocktail은 아미노산의 종류에 따라서 변형이 될 수 있지만, 일반적으로 TFA:TIS:thioanisole:EDT:H₂O=90:2.5:2.5:2.5:2.5 (v/v/v/v) 용액으로 레진 및 보호기를 제거하였다. [TFA(trifluoroacetic acid), TIS(triisopropylsilane), EDT(ethanedithiol)]

이상과 같은 실험방법 및 조건을 이용하여 하기 화학식 2로 표시되는 화합물을 제조하였으며, 상기의 실험방법의 순서의 변경 및 아미노산의 변경을 통하여 펩타이드 유도체를 합성할 수 있는 것을 확인하였다.

[화학식 2]

No.	n	X	Y	Z	이론치 분자량	실험치 분자량	HPLC의 RT (분)
I-1	2	Ser	Ser	-	680.6	681.5	3.09
I-2	2	Glu	Glu	-	764.7	765.6	3.08
I-3	2	Gly	Gly	-	620.6	621.5	3.10
I-4	2	Arg	Arg	-	818.9	819.8	3.08
I-5	4	-	-	-	995.1	996.1	3.09
II-1	3	Ser	Ser	Palmitoyl	1163.3	1164.4	23.36
II-2	3	Glu	Glu	Palmitoyl	1247.4	1248.5	23.55
II-3	3	Gly	Gly	Palmitoyl	1103.2	1104.3	23.65
II-4	3	Arg	Arg	Palmitoyl	1301.5	1302.5	21.95
II-5	5	-	-	Palmitoyl	1477.6	1478.8	22.02

상기 제시된 합성 방법을 이용하여, 펩타이드 변형 유도체를 합성하였으며, prep. HPLC를 이용하여, 정제를 하였다. 합성된 유도체들의 분자량, 순도 및 머무름 시간 (RT: Retention time)은 LC-Mass와 anal. HPLC(High Performance Liquid Chromatography)를 이용하여 확인하였으며, 이에 대한 실험 결과를 상기 표 1에 나타내었다. 또한, 일예로 II-5 화합물에 대한 합성 결과를 도 1과 도 2과 같이 얻어 확인하였다. 이 때, anal. HPLC의 분석 조건은 다음과 같다. (장비: 동일시마즈의 LC-2030; 컬럼: Vydac 218TP 5 um C18, 250 X 4.6 mm; A 버퍼: 0.1%가 함유된 증류수, B 버퍼: 0.1% 함유된 아세토나이트릴; 용매 조건: 0-30분까지 B 버퍼의 농도를 80%까지 순차적으로 증가)

실시예 3. 펩타이드 변형 유도체의 수분 증발량 측정

합성된 펩타이드 변형 유도체의 (II-1∼II-5) 수분 증발량을 측정하기 위하여, 혼합 용액 (구성 성분:증류수, 글리세린, 부틸렌 글라이콜, 폴리 솔베이트 20)에 펩타이드 변형 유도체 1%(w/v)를 녹인 다음, 실험용 솜에 1 ml씩 첨가하여, 25 ℃ 온도 조건하에서, 4시간 동안 수분 증발량을 측정하였다. 이에 대한 실험 결과를 하기 표 2에 나타내었다. 이 때, 무처리구는 펩타이드 유도체가 함유되지 않은 용액이다.

화합물	경과 시간에 따른 수분의 증발량 (g)						보습력 (%)
화합물	10분	30분	60분	120분	180분	240분	보습력 (%)
무처리	0.064	0.174	0.255	0.511	0.655	0.873	100%
II-1	0.063	0.171	0.253	0.506	0.624	0.832	105%
II-2	0.063	0.171	0.254	0.507	0.627	0.835	104%
II-3	0.063	0.174	0.259	0.518	0.642	0.855	102%
II-4	0.062	0.161	0.233	0.465	0.603	0.803	108%
II-5	0.051	0.135	0.201	0.402	0.541	0.721	121%

상기 표 2의 실험 결과, 펩타이드 유도체 II-5가 무처리군에 비해 약 21%의 향상된 수분 함유 능력을 나타내었으며, 상기 결과를 도 3에 나타내었다. 이와 같은 결과에 의해서, 카르복실 산을 많이 포함할수록 수분 함유 능력이 증가한다는 것을 확인할 수 있었다.

실시예 4. 펩타이드 변형 유도체의 보습 능력 측정

펩타이드 변형 유도체인 II-5의 보습 능력을 측정하기 위하여, 다음과 같은 제형으로, 사람 피부의 보습 능력을 확인하였다.

즉, 본 발명자가 제조한 크림 (정제수, 사이클로펜타실록세인, 프로판다이올, 코코넛야자오일, 베헤닐알코올, 메틸프로판다이올, 나이아신아마이드, 글리세릴스테아레이트, 피이지-100 스테아레이트, 글리세릴스테아레이트, 글리세린, 다이메티콘, 제주진득찰추출물, 알로에베라잎추출물, 스테아릭애씨드, 1,2-헥산다이올, 녹차추출물, 토코페릴아세테이트, 소듐하이알루로네이트 함유 제형)에 펩타이드 변형 유도체 무첨가와 첨가(II-4 또는 II-5)의 3가지 제형을 만들어서, 피시험자 하박 안쪽에 일정량 (0.03 g/16 cm²)을 도포한 후, 3시간 동안에 1시간 간격으로 courage+ Khazaka Germany사의 Corneometer CM285를 이용해 피부 전기 전도도를 측정하여 피부 수분 함량을 측정하였다.

상기 결과를 도 4에 나타낸 바와 같이, 펩타이드 변형 유도체 II-5번을 처리한 제형이, 3시간 경과 후, 높은 피부 전기 전도도를 나타내었으며, 이를 통하여, 본 발명에서 제공한 화합물(II-5)이 우수한 피부 보습 효과를 나타내는 것을 확인하였다.

이상의 설명은 본 발명을 예시적으로 설명한 것에 불과한 것으로, 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가지는 자라면 본 발명의 본질적인 특성에서 벗어나지 않는 범위에서 다양한 변형이 가능할 것이다. 따라서, 본 명세서에 개시된 실시 예들은 본 발명을 한정하기 위한 것이 아니라 설명 하기 위한 것이고, 이러한 실시 예에 의하여 본 발명의 사상과 범위가 한정되는 것은 아니다.

본 발명의 보호범위는 아래의 청구범위에 의하여 해석되어야 하며, 그와 동등한 범위 내에 있는 모든 기술은 본 발명의 권리범위에 포함하는 것으로 해석되어야 할 것이다.

Claims

화학식 1로 표시되는 펩타이드 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염.
<화학식 1>

{상기 화학식 1에서, X 는 수소, 글루탐산(Glu), 아스파트산(Asp), 글루타민(Gln), 아스파라긴 (Asn), 히스티딘(His), 라이신(Lys), 아르기닌(Arg), 세린(Ser), 시스테인(Cys), 알라닌(Ala), 글라이신(Gly), 루이신(Leu), 이소루이신(Ile), 발린(Val), 트레오닌(Thr), 메티오닌(Met), 프롤린(Pro), 페닐알라닌(Phe), 타이로신(Tyr) 또는 트립토판(Trp) 이고,
p는 0 또는 1이고, l 및 n은 각각 독립적으로 0 내지 10 중 어느 하나의 정수이고, m은 1 내지 10 중 어느 하나의 정수이고,
Z는 로오로일기(lauroyl), 미리스토일기(myristoyl), 팔미토일기(palmitoyl), 스테아오일기(stearoyl), 아라키도일기(arachidoyl), 팔미톨레오일기(palmitoleoyl), 올레오일기(oleoyl), 리놀레오일기(linoleoyl), 리놀레노일기(linolenoyl), 아라키도노일기(arachidonoyl) 또는 아세틸기이다.}
제1항에 따른 펩타이드 화합물; 및 이의 약학적으로 허용 가능한 염;으로 이루어진 군에서 선택된 1 종 이상을 포함하는 보습용 화장료 조성물
제2항에 있어서, 상기 조성물은 피부, 두피 또는 모발에 적용되는 것인 보습용 화장료 조성물
제2항에 있어서, 상기 조성물은 피부 노화 방지, 주름 개선, 또는 피부 거칠음 개선을 위한 것인 보습용 화장료 조성물
제1항에 따른 펩타이드 화합물; 및 이의 약학적으로 허용 가능한 염;으로 이루어진 군에서 선택된 1 종 이상을 포함하는 피부 건조증 예방 또는 치료용 약학 조성물.
제5항에 있어서, 상기 피부 건조증은 피부 갈라짐, 홍반, 가려움증, 건선 또는 아토피인 약학 조성물.