KR20200030444A

KR20200030444A - Cd83 억제제를 유효성분으로 포함하는 베체트병의 예방 또는 치료용 조성물

Info

Publication number: KR20200030444A
Application number: KR1020190096228A
Authority: KR
Inventors: 손성향
Original assignee: 아주대학교산학협력단
Priority date: 2018-09-12
Filing date: 2019-08-07
Publication date: 2020-03-20
Also published as: KR102282341B1

Abstract

본 발명은 CD83 억제제를 유효성분으로 포함하는 베체트병의 예방 또는 치료용 조성물을 제공한다. 본 발명에 따르면, 베체트병 마우스에서 CD83을 발현하는 세포의 빈도가 유의하게 높고, CD83 발현 세포의 증감과 베체트병 증상 사이에 관련성이 있음을 확인한 바, 본 발명에 따른 CD83 억제제를 이용하여 CD83의 발현을 조절함으로써, 베체트병 진단, 예방, 및 치료에 효과적으로 사용될 수 있다. 또한, CD83 또는 CD83을 발현하는 세포에 의해 야기되거나 이와 연관되는 질환 또는 질병 등에 기존 치료제와 병행하여 사용함으로써 치료 효과를 더욱 증대시킬 수 있다.

Description

CD83 억제제를 유효성분으로 포함하는 베체트병의 예방 또는 치료용 조성물{COMPOSITION FOR PREVENTING OR TREATING BEHCET'S DISEASES CONTAINING CD83 INHIBITOR}

본 발명은 CD83 억제제를 유효성분으로 포함하는 베체트병의 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것이다.

베체트병(Behcet's disease)은 희귀난치성 염증성 질환으로 구강 및/또는 생식기의 반복적인 아프타성 궤양, 포도막염(uveitis) 및 피부 병변을 증상으로 한다. 임상 증상은 피부궤양 뿐만 아니라 관절, 중추신경계(central nervous system), 위장, 신장, 비뇨생식기, 폐, 심혈관, 장출혈, 장천공 등의 소화기계 관련, 상하대 정맥증후군, 대동맥 역류 등의 증상이 동반된 심각한 만성적 염증이 다면적으로 나타난다. 이러한 증상은 전신성의 혈관염과 관련된 것으로, 베체트병의 중심적인 병리 생리학적 특징이다.

베체트병의 정확한 발병 원인은 밝혀지지 않았지만, 헤르페스 바이러스 감염이 촉발한 자가 면역(autoimmune)과 자가 염증성(autoinflammatory) 반응과 관련이 있다. 베체트병에서 세포의 침입형태는 대식세포(macrophage)와 수지상세포(dendritic cell)를 비롯하여, CD4+, CD8+, T세포, 호중구(neutrophil) 등이 관여한다. 또한 사이토카인(cytokine) 생산의 증가와도 연관된다.

베체트병은 피부 점막 염증이나 관절염 등 가벼운 증상만 보이는 경우도 있으나, 심한 포도막염이나 뇌, 폐, 심장, 신장 등 주요 장기를 침범하여 심각한 후유증을 동반할 수 있다.

한국공개특허 제10-2016-0104101호(2016.09.02 공개)

상기와 같은 문제점을 해결하기 위하여, 본 발명은 CD83 억제제를 유효성분으로 포함하는 베체트병의 예방 또는 치료용 약학 조성물 및 약물 스크리닝 방법을 제공한다.

또한, 본 발명은 베체트병 진단용 바이오마커 조성물, 진단용 조성물, 및 진단용 키트를 제공한다.

본 발명에 따른 베체트병의 예방 또는 치료용 약학 조성물은 CD83 억제제를 유효성분으로 포함할 수 있다.

본 발명에 따른 베체트병의 예방 또는 치료용 약물 스크리닝 방법은 인체에서 분리된 생물학적 시료에 시험물질을 처리하는 제1 단계; 상기 시험물질을 처리한 시료에서 CD83 또는 CD83 mRNA의 발현 또는 활성 수준을 측정하는 제2 단계; 및 대조구 시료와 비교하여 상기 CD83 또는 상기 CD83 mRNA의 발현 또는 활성 수준이 감소한 시험물질을 선별하는 제3 단계;를 포함할 수 있다.

본 발명에 따른 베체트병 진단용 바이오마커 조성물은 CD83 또는 CD83 mRNA를 유효성분으로 포함할 수 있다.

본 발명에 따른 베체트병 진단용 조성물은 CD83 또는 CD83 mRNA의 발현 또는 활성 수준을 측정하는 제제를 유효성분으로 포함할 수 있다.

본 발명에 따른 베체트병 진단용 키트는 베체트병 진단용 조성물을 포함할 수 있다.

본 발명에 따른 약학 조성물은 CD83 억제제를 유효성분으로 포함하여 효과적으로 희귀난치성 베체트병을 예방할 수 있고, 발병된 경우 치료할 수 있다. 또한, 본 발명에 따른 바이오마커 조성물, 진단용 조성물, 및 진단용 키트를 이용하여 베체트병의 발병 가능성 및 질병 정도를 유의적으로 예측 또는 파악할 수 있다.

이 외에도, CD83 또는 CD83을 발현하는 세포에 의해 야기되거나 이와 연관되는 질환 또는 질병 등에 기존 치료제와 병행하여 사용함으로써 치료 효과를 더욱 증대시킬 수 있다.

도 1은 본 발명의 일 실험예에 따른 베체트병 유사 마우스 모델의 CD83 siRNA 처리 전 후 증상 변화를 나타낸다.
도 2는 본 발명의 일 실험예에 따른 베체트병 유사 마우스 모델의 복강 내 대식세포(macrophage)의 CD83 발현(CD83+) 세포의 빈도를 나타낸 그래프이다.
도 3은 본 발명의 일 실험예에 따른 베체트병 유사 마우스 모델에 CD83 siRNA 처리를 중단한 경우의 변화를 나타낸다.
도 4는 본 발명의 일 실험예에 따른 베체트병 유사 마우스 모델에서 분리한 수지상 세포에 CD83 siRNA 처리 후 투과전자현미경으로 관찰한 이미지이다.

이하, 본 발명을 상세하게 설명하기로 한다.

본 발명은 베체트병 마우스와 증상이 없는 대조군 마우스를 비교하였을 때, 베체트병 마우스에서 CD83을 발현하는 세포의 빈도가 유의하게 높은 것으로 나타났고, CD83의 억제제가 CD83을 발현하는 세포의 빈도를 감소시켜 베체트병 치료법으로 활용될 수 있음을 확인함으로써, 본 발명을 완성하였다.

본 명세서에서 "예방"이란, 본 발명에 따른 약학 조성물의 투여에 의해 베체트병 또는 베체트병의 적어도 하나 이상의 증상의 발생을 억제시키거나 발병을 지연시키는 모든 행위를 의미한다. 또한, 재발을 예방하거나 방지하기 위해 베체트병에 차도가 있는 대상의 치료를 포함한다.

본 명세서에서 "치료"란, 본 발명에 따른 약학 조성물의 투여에 의해 베체트병 또는 베체트병의 적어도 하나 이상의 증상을 완화, 감소 또는 소멸시키는 등 그 증세를 호전시키거나 이롭게 변경하는 모든 행위를 의미한다.

본 명세서에서 "진단"이란, 베체트병의 발병 여부 또는 발병 가능성(위험성)을 확인하는 것으로, 베체트병 또는 베체트병의 적어도 하나 이상의 증상에 대한 대상(subject)의 감수성(susceptibility)을 판정하는 것, 대상이 베체트병을 현재 가지고 있는지 여부를 판정하는 것, 베체트병에 걸린 대상의 예후(prognosis)를 판정하는 것, 또는 테라메트릭스(therametrics)(예를 들어, 치료 효능에 대한 정보를 제공하기 위하여 객체의 상태를 모니터링 하는 것)을 포함한다. 또한, 임상 상태의 일차 진단 또는 재발한 질병의 진단을 포함한다.

본 명세서에서 "약학 조성물"이란, 특정한 목적을 위해 투여되는 조성물로, 본 발명의 목적상 베체트병을 예방하거나 또는 치료하기 위해 투여되는 것을 의미한다.

본 명세서에서 "바이오마커"란, 몸 안의 변화를 알아낼 수 있는 지표로서, 생명체의 정상 또는 병리적인 상태, 즉, 베체트병에 대한 진단, 약물에 대한 반응 정도 등을 측정할 수 있다.

본 발명은 CD83 억제제를 유효성분으로 포함하는 베체트병의 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.

본 발명에서 "CD83(세포표면항원무리, Cluster of Differentiation 83)"은 CD83 유전자에 의해 암호화된 인간 단백질로, 면역 글로불린 슈퍼 패밀리에 속하는 싱글-패스 유형I(single-pass type I)의 막 당단백질(glycoprotein)이다. CD83은 성숙한 수지상 세포(dendritic cell, DC) 상에서 주로 발현되는 세포 표면 마커로, 수지상 세포의 성숙 과정에서 CD80 및 CD86과 같은 공동자극 분자와 함께 강하게 발현된다. 이 외에도 CD83은 활성화된 B 및 T 세포에서도 발현될 수 있고, 미성숙한 혈액 수지상 세포(BDC) 및 단핵구 유래 수지상 세포(MoDC) 상에서는 최소한으로 발현될 수 있다.

본 발명에서 "수지상 세포(dendritic cell, DC)"란, 포유류의 면역계를 구성하는 면역세포로, 전문적 항원제시세포(professional antigen presenting cell)로 작용한다. 이들의 주 기능은 항원 물질을 처리하고 이를 세포 표면에 발현하여 T 세포에게 제시한다. 이로써 이들은 선천성 면역계와 적응성 면역계를 연결해 주는 전달자로서 역할을 한다.

수지상 세포 분화 및 활성화시 발현되기 시작하는 분자는 선천적 면역과 후천적 면역을 연결하는 것을 보조한다. 수지상 세포가 면역 반응에 대한 통제를 발휘하기 때문에, 활성화된 수지상 세포는 악성 질병 및 자가 면역 질환을 비롯한 다수의 면역학적 질병에 걸쳐 중재를 위한 표적이 될 수 있다. 본 발명에 따른 CD83 억제제는 이러한 수지상 세포의 활성화 및 면역 반응을 조절할 수 있다.

본 발명에 따른 조성물에 있어서, 상기 CD83 억제제는 CD83에 특이적으로 결합하는 항체, 펩타이드, 펩타이드 미메틱스, 앱타머, 화합물 및 천연물로 이루어진 군에서 선택될 수 있다.

또한, 상기 CD83 억제제는 CD83 mRNA에 상보적으로 결합하는 안티센스 뉴클레오티드, 작은 간섭 RNA(small interfering RNA; siRNA), 및 짧은 헤어핀 RNA(short hairpin RNA; shRNA)로 이루어진 군에서 선택될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.

본 발명에 따른 조성물에 있어서, 상기 작은 간섭 RNA(이하, siRNA)는 서열번호 1 또는 2로 표시되는 염기서열을 가질 수 있다. 상기 siRNA의 전체 길이는 10 내지 80 염기, 바람직하게는 15 내지 60 염기, 더욱 바람직하게는 20 내지 40 염기일 수 있다. 상기 서열번호 1과 2의 염기서열은 하기와 같다.

서열번호 1 : 5'- GUGCUUUUCAGUCAUCUACAAGCTA -3'

서열번호 2 : 5'- UAGCUUGUAGAUGACUGAAAAGCACUC -3'

본 발명에서 "siRNA(small interfering RNA)"는 21-25nt 크기의 작은 RNA조각으로, 세포 내에서 RISC(RNA-induced silencing complex)와 복합체를 형성하여 상보적인 서열을 갖는 mRNA에 특이적으로 결합하여 표적 mRNA를 절단시킨 후 단백질 발현을 저해하는 RNA 간섭(RNA interfering, RNAi)을 유도하는 물질 중 하나이다. 본 발명에 따른 CD83의 억제제로서 상기 siRNA는 RNA 간섭을 통해 수지상 세포에서의 상기 CD83 발현을 억제할 수 있다. CD83 발현이 억제되면, 수지상 세포에 의한 T 세포의 활성화가 억제될 수 있다.

본 발명에 따른 조성물에 있어서, 상기 siRNA는 상기 서열번호 1 또는 2(센스, sence)의 상보적 서열(안티센스, antisense)의 염기서열을 포함할 수 있다. 또한, 상기 siRNA는 상기 서열번호 1 또는 2 및 상기 서열번호 1 또는 2의 상보적 서열이 루프에 의해 연결된 스템-루프 구조의 단일 RNA 가닥일 수도 있다.

상기 siRNA는 화학적 합성, 중합효소 연쇄 반응(PCR)에 의한 요구되는 뉴클레오타이드 서열의 증폭, 또는 재조합 합성에 의해 이미 존재하는 siRNA를 정제함으로써 형성될 수 있다.

본 발명에 따른 조성물에 있어서, 상기 siRNA는 상기 RNA의 당 부분, 뉴클레오베이스 부분 또는 인터뉴클레오타이드 구조 내에 하나 이상의 화학적 변형을 포함할 수 있다. 상기 화학적 변형은 생체 내 안정성 향상, 뉴클레아제(nuclease)에 대한 저항성 부여, 및 비특이적 면역 반응 감소를 위한 것이다. 상기 siRNA는 상기 화학적 변형을 통해, RNAi 능력에는 영향을 미치지 않고, 뉴클레아제에 대한 저항성 증진, 세포내 흡수(uptake) 증가, 세포 표적화 향상, 안정성 증가, 인터페론 활성 감소, 면역 반응, 및 센스(sense) 효과와 같은 타겟 이외의(off-target) 특성을 변형되지 않은 siRNA 보다 향상시킬 수 있다. 본 발명에 따른 siRNA의 안정성과 생적합성을 생체 내에서 향상시킬 수 있는 모든 화학적 변형이 본 발명의 범위에 포함될 수 있다. 상기 화학적 변형은 어느 한 가지 형태의 변형만 이루어질 수도 있고, 여러 가지 화학적 변형이 함께 이루어질 수도 있다.

본 발명에서 "항체"는 당해 기술분야에 공지된 용어로서 항원성 부위에 대하여 지시되는 특이적인 면역글로불린을 의미한다. 본 발명에서의 항체는 CD83에 대해 특이적으로 결합하는 항체를 의미하며, 당해 기술분야의 통상적인 방법에 따라 항체를 제조할 수 있다.

본 발명에서 "펩타이드"는 표적 물질에 대한 결합력이 높은 장점이 있고, 열/화학 처리 시에도 변성이 일어나지 않는다. 또한 분자 크기가 작기 때문에 다른 단백질에 붙여서 융합 단백질로의 이용이 가능하다. 구체적으로 고분자 단백질 체인에 붙여서 이용이 가능하므로 진단 키트 및 약물전달 물질로 이용될 수 있다.

본 발명에서 "앱타머(aptamer)"는 그 자체로 안정된 삼차 구조를 가지면서 표적 분자에 높은 친화성과 특이성으로 결합할 수 있는 특징을 가진 특별한 종류의 단일가닥 핵산(DNA, RNA, 또는 변형핵산)으로 구성된 폴리뉴클레오티드의 일종을 의미한다. 상술한 바와 같이, 앱타머는 항체와 동일하게 항원성 물질에 특이적으로 결합할 수 있으면서도, 단백질보다 안정성이 높고, 구조가 간단하며, 합성이 용이한 폴리뉴클레오티드로 구성되어 있으므로, 항체를 대체하여 사용될 수 있다.

본 발명에 따른 약학 조성물에 있어서, 상기 약학 조성물은 CD83 또는 CD83을 발현하는 세포에 의해 야기되거나 이와 연관되는 임의의 질환 또는 질병을 대상으로 할 수 있다. 예를 들어, 베체트병을 포함할 수 있다. 베체트병(Behcet's disease, BD)은 구강 궤양, 음부 궤양, 안구 염증 외에도 피부, 혈관, 위장관, 중추신경계, 심장 및 폐 등 여러 장기를 침범할 수 있는 희귀난치성 만성 염증성 질환으로, 본 발명이 예방 또는 치료하려는 표적이 베체트병에 한정되는 것은 아니다. 베체트병은 CD83의 발현이 높게 나타나는 질환으로, 이러한 베체트병과 관련되거나 베체트병에 의해 유발된 염증 질환, 및 CD83의 발현이 높게 나타나는 다른 질환들도 포함될 수 있다.

본 발명에 따른 약학 조성물은 상기 제형에 따라 약학적으로 허용가능한 적절한 담체, 부형제 또는 희석제를 더 포함하여 제조할 수 있다. 상기 "약학적으로 허용가능한"이란, 상기 약학 조성물에 노출되는 세포나 인간에게 독성이 없는 특성을 나타내는 것을 의미한다.

본 발명에서 사용가능한 담체, 부형제 또는 희석제로는, 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 또는 광물유 등을 들 수 있다.

본 발명에 따른 약학 조성물은 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다.

본 발명에 따른 약학 조성물을 상기 형태로 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제될 수 있다. 경구 투여를 위한 고형 제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 적어도 하나 이상의 부형제, 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트(calciumcarbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제할 수 있다.

또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용될 수 있다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다.

비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.

본 발명에 따른 약학 조성물에 있어서, 상기 약학 조성물은 약학적으로 유효한 양으로 투여될 수 있다. 상기 "약학적으로 유효한 양"이란, 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분하며 부작용을 일으키지 않을 정도의 양을 의미하며, 유효 용량 수준은 환자의 건강상태, 궤양의 종류, 중증도, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 방법, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료기간, 배합 또는 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다.

본 발명에 따른 약학 조성물의 유효성분의 사용량은 환자의 나이, 성별, 체중, 질환에 따라 달라질 수 있으나, 0.001 내지 100mg/kg으로, 바람직하게는 0.01 내지 10mg/kg을 일일 1회 내지 수회 투여할 수 있다. 또한, 본 발명에 따른 조성물의 투여량은 투여경로, 질병의 정도, 성별, 체중, 나이 등에 따라서 증감될 수 있다.　따라서, 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.

상기 약학 조성물은 쥐, 생쥐, 가축, 인간 등의 포유동물에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 기관지내 흡입, 자궁내 경막 또는 뇌혈관내(intracere-broventricular) 주사에 의해 투여될 수 있다.

본 발명은 인체에서 분리된 생물학적 시료에 시험물질을 처리하는 제1 단계; 상기 시험물질을 처리한 시료에서 CD83 또는 CD83 mRNA의 발현 또는 활성 수준을 측정하는 제2 단계; 및 대조구 시료와 비교하여 상기 CD83 또는 상기 CD83 mRNA의 발현 또는 활성 수준이 감소한 시험물질을 선별하는 제3 단계;를 포함하는 베체트병의 예방 또는 치료용 약물 스크리닝 방법을 제공한다.

상기 인체에서 분리된 생물학적 시료는 상기 CD83 또는 상기 CD83 mRNA의 발현 또는 활성 수준에 있어서 상기 대조구와 차이가 나는 조직, 세포, 혈청 등의 시료를 포함할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.

상기 시험물질은 상기 CD83 또는 상기 CD83 mRNA의 발현 또는 활성에 영향을 미치는지 여부를 검사하기 위하여 스크리닝에서 이용되는 물질로, 본 발명에 따른 CD83 억제제, 예를 들어, CD83 siRNA일 수 있다.

상기 단백질 발현 또는 활성 수준은 웨스턴 블랏, 효소면역분석법(Enzyme-linked immunosorbent assay; ELISA), 방사선면역분석(Radioimmunoassay; RIA), 방사면역확산법(Radioimmunodiffusion), 오우크테로니 면역 확산법, 로케트(rocket) 면역 전기영동, 조직면역염색, 면역침전 분석법(Immunoprecipitation assay), 보체고정분석법(Complement Fixation Assay), 유세포 분석법(FACS) 및 단백질 칩으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 방법으로 측정할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.

상기 유전자의 발현 수준은 RT-PCR, 경쟁적 RT-PCR(Competitive RT-PCR), 실시간 RT-PCR(Real-time RT-PCR), RNase 보호 분석법(RPA: RNase protection assay), 노던 블랏팅(Northern blotting) 및 DNA 마이크로 어레이 칩으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 방법으로 측정할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.

본 발명은 CD83 또는 CD83 mRNA를 유효성분으로 포함하는 베체트병 진단용 바이오마커 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 CD83 또는 CD83 mRNA의 활성 또는 발현 수준을 측정하는 제제를 포함하는 베체트병 진단용 조성물을 제공한다. 상기 제제는 상기 CD83에 특이적으로 결합하는 항체, 펩타이드, 펩타이드 미메틱스, 앱타머, 또는 화합물이거나, 또는 상기 CD83 mRNA에 특이적으로 결합하는 프라이머 또는 프로브일 수 있으나, 이제 한정되는 것은 아니다.

본 발명에서 "프라이머"는 짧은 자유 3말단 수산화기(free 3'hydroxl group)를 가지는 핵산 서열로, 상보적인 주형과 염기쌍을 형성할 수 있고 주형 가닥 복사를 위한 시작 시점으로 기능을 하는 짧은 핵산 서열을 의미한다. 프라이머는 적절한 완충용액 및 온도에서 중합반응(즉, DNA 폴리머레이즈 또는 역전사효소)을 위한 시약 및 상이한 4가지 뉴클레오타이드 트리포스페이트의 존재 하에서 DNA 합성을 개시할 수 있다. 본 발명에 따른 조성물에서, 상기 프라이머는, 상기 유전자 특이적인 프라이머로 7개 내지 50개의 뉴클레오타이드 서열을 가진 센스 및 안티센스 핵산일 수 있고, DNA 합성의 개시점으로 작용하는 프라이머의 기본 성질을 변화시키지않는 한, 추가의 특징을 혼입할 수 있다.

본 발명에서 "프로브"는 mRNA와 특이적으로 결합을 이룰 수 있는 짧게는 수 염기 내지 길게는 수백 염기에 해당하는 RNA 또는 DNA 등의 핵산 단편을 의미하며, 라벨링되어 있어서 특정 mRNA의 존재 유무, 발현양을 확인할 수 있다. 프로브는 올리고뉴클레오타이드(oligonucleotide) 프로브, 단쇄 DNA(single strand DNA) 프로브, 이중쇄 DNA(double strand DNA) 프로브, RNA 프로브 등의 형태로 형성될 수 있다. 적절한 프로브 및 혼성화 조건은 당해 기술 분야에 공지된 기술에 따라 적절히 선택될 수 있다.

또한, 본 발명은 상기 진단용 조성물을 포함하는 베체트병 진단용 키트를 제공한다.

본 발명에 따른 진단용 키트는 CD83에 특이적인 항체를 포함하거나, CD83 mRNA의 센스, 안티센스 프라이머, 또는 상보적인 프로브를 포함할 수 있다.

이하, 실시예를 들어 본 발명을 보다 상세하게 설명하기로 한다. 다만 하기의 실시예는 당업계에서 평균적인 지식을 가진 자에게 본 발명을 보다 완전하게 설명하기 위해 제공되는 것이며 본 발명의 내용을 예시하는 것일 뿐이므로 본 발명의 범위가 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다.

[실험예]

베체트병 유사 마우스 모델

ICR strain 5주령 마우스에 헤르페스 바이러스(Herpes simplex virus) 1형을 상처낸 귀이개에 접종하였다. 상기 마우스 중 피부 궤양, 홍반 등의 염증 증상을 동반하여 베체트병 특징을 보이는 마우스를 베체트병 유사 마우스 모델로 선정하여 본 실험에 사용하였다.

투여방법

CD83 siRNA 1.0μmol을 4일 간격으로 3회, 형질전환 시약(transfection reagent)에 섞어 복강 내 주사 하였다. 투여 시작 14일 후에 호전 여부를 확인하였다.

CD83 siRNA sequence:

5'- GUGCUUUUCAGUCAUCUACAAGCTA -3'

3'- CUCACGAAAAGUCAGUAGAUGUUCGAU -5'

실험결과

도 1은 본 발명의 일 실험예에 따른 베체트병 유사 마우스 모델의 CD83 siRNA 처리 전 후 증상 변화를 나타낸다.

도 1을 참조하면, 베체트병 유사 마우스 모델에서 CD83 siRNA 복강 내 주사 투여 전, 투여 시작 14일 후의 증상을 촬영하여 호전 여부를 비교한 결과, CD83 siRNA 복강 내 주사 투여 14일 후에 피부 발진과 피부 부종 증상이 확연한 호전을 보였고, 피부 궤양 증상이 호전되는 양상을 보였다.

베체트병 마우스와 증상이 없는 대조군 마우스에서 CD83를 발현하는 세포의 빈도를 비교하였을 때, 베체트병 마우스에서 유의하게 높은 것으로 나타났고, CD83 siRNA는 정상 마우스의 말초혈액 세포의 세포막 위에서 CD83을 발현하는 세포의 빈도를 감소시켰으며, 베체트병 마우스의 말초혈액세포에서도 CD83를 발현하는 세포의 빈도를 감소시켰다.

도 2는 본 발명의 일 실험예에 따른 베체트병 유사 마우스 모델의 복강 내 대식세포(macrophage)의 CD83 발현(CD83+) 세포의 빈도를 나타낸 그래프이다.

도 2를 참조하면, 베체트병 마우스 복강에 CD83 siRNA 0.5μmol 또는 1.0μmol을 주사한 다음, 복강 내 대식세포를 분리하여 유세포 분석법(FACS)으로 CD83+ 세포 빈도를 조사한 결과, CD83 siRNA를 주사한 마우스에서 대조군보다 CD83+ 세포 빈도가 감소된 것으로 나타났다. 이를 통해, CD83 발현 세포의 증감과 베체트병 증상 사이에 관련성이 있음을 확인할 수 있다.

도 3은 본 발명의 일 실험예에 따른 베체트병 유사 마우스 모델에 CD83 siRNA 처리를 중단한 경우의 변화를 나타낸다.

도 3을 참조하면, 베체트병 마우스에 CD83 siRNA를 주사하여 증상이 호전된 후, 상기 마우스에 CD83 siRNA 처리를 중단하였을 때 증상이 다시 악화되는 것으로 나타났다. 이를 통해, 상기 마우스의 증상 호전이 CD83 siRNA 투여에 따른 치료 효과임을 확인할 수 있다.

도 4는 본 발명의 일 실험예에 따른 베체트병 유사 마우스 모델에서 분리한 수지상 세포에 CD83 siRNA 처리 후 투과전자현미경으로 관찰한 이미지이다.

도 4를 참조하면, 베체트병 마우스의 골수(bone marrow)에서 분리한 단핵구(monocyte)를 인비트로(in vitro) 배양하여 수지상 세포로 분화시키는 과정에서 CD83 siRNA 0.5μmol 처리하여 투과전자현미경으로 관찰한 결과, 대조군(Scramble siRNA 처리)에 비하여 세포막의 수지상 돌기(dendrite)가 감소된 것으로 확인되었다.

이상으로 본 발명 내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는 바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서, 이러한 구체적 기술은 단지 바람직한 실시양태일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백하다. 즉, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의하여 정의된다.

<110> AJOU UNIVERSITY INDUSTRY-ACADEMIC COOPERATION FOUNDATION <120> COMPOSITION FOR PREVENTING OR TREATING BEHCET'S DISEASES CONTAINING CD83 INHIBITOR <130> ADP-2018-0309 <160> 2 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 25 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> CD83 siRNA <400> 1 gugcuuuuca gucaucuaca agcta 25 <210> 2 <211> 27 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> CD83 siRNA <400> 2 uagcuuguag augacugaaa agcacuc 27

Claims

CD83 억제제를 유효성분으로 포함하는 베체트병의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
제 1 항에 있어서,
상기 CD83 억제제는,
CD83에 특이적으로 결합하는 항체, 펩타이드, 펩타이드 미메틱스, 앱타머, 화합물 및 천연물로 이루어진 군에서 선택된 것을 특징으로 하는, 베체트병의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
제 1 항에 있어서,
상기 CD83 억제제는,
CD83 mRNA에 상보적으로 결합하는 안티센스 뉴클레오티드, 작은 간섭 RNA(small interfering RNA; siRNA), 및 짧은 헤어핀 RNA(short hairpin RNA; shRNA)로 이루어진 군에서 선택된 것을 특징으로 하는, 베체트병의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
제 3 항에 있어서,
상기 작은 간섭 RNA(siRNA)는 서열번호 1 또는 2로 표시되는 염기서열을 가지는 것을 특징으로 하는, 베체트병의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
인체에서 분리된 생물학적 시료에 시험물질을 처리하는 제1 단계;
상기 시험물질을 처리한 시료에서 CD83 또는 CD83 mRNA의 발현 또는 활성 수준을 측정하는 제2 단계; 및
대조구 시료와 비교하여 상기 CD83 또는 상기 CD83 mRNA의 발현 또는 활성 수준이 감소한 시험물질을 선별하는 제3 단계;를 포함하는, 베체트병의 예방 또는 치료용 약물 스크리닝 방법.
CD83 또는 CD83 mRNA를 유효성분으로 포함하는 베체트병 진단용 바이오마커 조성물.
CD83 또는 CD83 mRNA의 발현 또는 활성 수준을 측정하는 제제를 유효성분으로 포함하는 베체트병 진단용 조성물.
제 7 항에 있어서,
상기 제제는,
상기 CD83에 특이적으로 결합하는 항체, 펩타이드, 펩타이드 미메틱스, 앱타머, 또는 화합물이거나, 또는 상기 CD83 mRNA에 특이적으로 결합하는 프라이머 또는 프로브인 것을 특징으로 하는, 베체트병 진단용 조성물.
제 7 항 또는 제 8 항에 따른 조성물을 포함하는 베체트병 진단용 키트.
제 9 항에 있어서,
상기 키트는,
상기 CD83에 특이적인 항체를 포함하거나, 상기 CD83 mRNA의 센스, 안티센스 프라이머, 또는 상보적인 프로브를 포함하는 것을 특징으로 하는 베체트병 진단용 키트.