KR20200015251A - 비수리 추출물을 포함하는 신경세포 보호용 조성물 - Google Patents
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Abstract
본 명세서는 비수리(Lespedeza cuneata G. Don)를 유효성분으로서 포함하는 조성물에 관한 것이다. 이러한 본 명세서의 조성물은 산화적 스트레스로부터 신경세포를 보호하고, 신경세포의 사멸을 억제하는 효과를 나타낸다. 또한, 세포 내에서 산화적 스트레스의 증가로 인해 발생하는 세포 사멸을 억제하는 항산화 효소의 발현을 증가시킬 수 있다. 따라서, 본 명세서의 조성물은 산화적 스트레스로부터 신경세포의 사멸로 인하여 발생될 수 있는 2차적 질병을 예방, 개선 또는 치료하는 효과를 나타낼 수 있어 약학 또는 식품 조성물로서 사용될 수 있다.
Description
본 명세서는 비수리 추출물을 포함하는 조성물에 관한 것이다.
신경세포에서의 산화성 스트레스는 많은 신경질환을 유발하는데 특히 중풍, 근위축성 측상 경화증(루게릭병), 파킨슨병, 알츠하이머와 연관이 있는 것으로 알려져 있으며, 글루타메이트 독성은 신경세포에 있어서 급성 및 만성독성을 유발하는 모델로 사용되고 있다(Andersen, J. K. et al. Nat. Rev. Neurosci. 2004, 5, S18-S25, Coyle, J. et al. Science 1993, 262, 689-695). 따라서 신경세포에 고농도의 글루타메이트를 처리하는 경우 시스테인의 유입이 억제되고 글루타치온의 결핍 및 활성산소가 증가된다.
Andersen, J. K. et al. Nat. Rev. Neurosci. 2004, 5, S18-S25, Coyle, J. et al. Science 1993, 262, 689-695
본 명세서의 목적은 산화적 스트레스로부터 신경세포를 보호하는 효과를 나타내는 조성물을 제공하는 것이다.
상기 목적을 달성하기 위하여 본 발명은 일측면에 있어서, 비수리 (Lespedeza cuneata G. Don)를 유효성분으로서 포함하는 조성물을 제공한다.
본 발명의 일측면에 따른 조성물은 산화적 스트레스로부터 신경세포를 보호하고, 신경세포의 사멸을 억제하는 효과를 나타내고, 세포 내에서 산화적 스트레스의 증가로 인하여 발생되는 세포 사멸을 억제하는 항산화 효소의 발현을 증가시키는 효과를 나타낸다. 따라서, 본 발명의 일측면에 따른 조성물은 산화적 스트레스로부터 신경세포의 사멸로 인하여 발생될 수 있는 2차적 질병을 예방, 개선 또는 치료하는 효과를 나타낼 수 있으므로 약학 또는 식품 조성물로서 사용될 수 있다.
도 1은 비수리 에탄올 추출물을 처리한 경우 신경세포의 세포 생존율을 나타낸 그래프이다.
도 2는 비수리 에탄올 추출물을 처리한 뒤 신경세포의 생존 여부를 촬영한 사진이다. 도 2에서 흰색 바로 표시된 스케일바는 100 um이다.
도 3a은 비수리 에탄올 추출물의 DPPH 라디칼 소거능을 나타낸 그래프이고, 도 3b는 양성 대조군인 비타민 C의 DPPH 라디칼 소거능을 나타낸 그래프다.
도 2는 비수리 에탄올 추출물을 처리한 뒤 신경세포의 생존 여부를 촬영한 사진이다. 도 2에서 흰색 바로 표시된 스케일바는 100 um이다.
도 3a은 비수리 에탄올 추출물의 DPPH 라디칼 소거능을 나타낸 그래프이고, 도 3b는 양성 대조군인 비타민 C의 DPPH 라디칼 소거능을 나타낸 그래프다.
본 발명은 일 측면에 있어서, 비수리 (Lespedeza cuneata G. Don) 추출물을 유효성분으로서 포함하는 조성물에 관한 것일 수 있다.
본 발명의 일 측면에 있어서, 비수리는 한국산 비수리일 수 있다.
본 발명의 일 측면에 있어서, 상기 조성물은 산화적 스트레스로부터의 신경세포 보호용 또는 신경세포 사멸 억제용 조성물에 관한 것일 수 있다.본 발명의 일 측면에 있어서, 상기 산화적 스트레스는 글루타메이트에 의해 유발된 것일 수 있다.
본 발명의 일 측면에 있어서, 상기 조성물은 글루타메이트 독성으로부터의 신경세포 보호용 또는 신경세포 사멸 억제용 조성물에 관한 것일 수 있다.
본 발명의 일 측면에 있어서, 상기 조성물은 신경세포의 사멸로 인해 야기되는 질병의 치료, 예방 또는 개선용 조성물일 수 있다.
본 발명의 일 측면에 있어서, 신경세포의 사멸로 인해 야기되는 질병은 중풍, 근위축성 측상 경화증(루게릭병), 파킨슨병, 및 알츠하이머로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상일 수 있다.
본 발명의 일 측면에 있어서, 상기 조성물은 산화적 스트레스로 유발되는 신경 질환의 치료, 예방 또는 개선용 조성물일 수 있으며, 이때 산화적 스트레스로 유발되는 신경 질환은 중풍, 근위축성 측상 경화증(루게릭병), 파킨슨병, 및 알츠하이머로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상일 수 있다.
본 발명의 일 측면에 있어서, 상기 조성물은 글루타메이트 독성에 의해 유발되는 질병의 치료, 예방 또는 개선용 조성물일 수 있으며, 상기 글루타메이트 독성에 의해 유발되는 질병은 중풍, 근위축성 측상 경화증(루게릭병), 파킨슨병, 및 알츠하이머로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상일 수 있다.
본 발명의 일 측면에 있어서, 상기 조성물은 글루타메이트 독성에 의해 유발되는 신경 질환의 치료, 예방 또는 개선용 조성물일 수 있으며, 이때 글루타메이트 독성에 의해 유발되는 신경 질환은 신경퇴화성 질병일 수 있고, 구체적으로 중풍, 근위축성 측상 경화증(루게릭병), 파킨슨병, 및 알츠하이머로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상일 수 있다.
본 발명의 일 측면에 있어서, 상기 조성물은 신경 세포에서 항산화 효소의 발현 촉진용 조성물일 수 있다. 본 발명의 일 측면에 있어서, 항산화 효소는 산화적 스트레스의 증가로 인해 발생되는 세포 사멸을 억제하는 것일 수 있다.
본 발명의 일 측면에 있어서, 상기 조성물은 활성산소 감소용 또는 억제용 조성물일 수 있다. 본 발명의 일 측면에 있어서, 상기 조성물은 세포, 구체적으로 신경 세포에서 발생되는 활성산소의 감소용 또는 억제용 조성물일 수 있다.
본 발명의 일 측면에 있어서, 상기 조성물은 약학 또는 식품 조성물일 수 있다.
본 발명의 일 측면에 있어서, 비수리 추출물은 물, 유기용매 및 이들의 혼합물로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 추출물인 것일 수 있다. 구체적으로 본 발명의 일 측면에 있어서, 유기용매는 C1~C6의 저급 알코올, 부틸렌글리콜, 및 프로필렌글리콜로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상인 것일 수 있으며, 더 구체적으로 저급 알코올은 에탄올일 수 있다.
본 발명의 일 측면에 있어서, 비수리 추출물은 비수리 유기용매 추출물을 물, 유기용매 및 이들의 혼합물로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상으로 다시 분획한 분획물일 수 있다. 구체적으로 본 발명의 일 측면에 있어서, 비수리 추출물은 비수리 에탄올 추출물을 물, 에틸아세테이트 및 이들의 혼합물로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 분획물일 수 있다.
본 발명의 일 측면에 있어서, 상기 비수리는 비수리 초본의 잎, 꽃, 줄기, 열매, 뿌리 및 이들의 조합으로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상일 수 있다. 구체적으로 상기 비수리는 비수리 초본의 잎, 줄기, 뿌리 및 이들의 조합으로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상일 수 있다.
본 발명의 일 측면에 있어서, 비수리 추출물은 조성물의 총 부피를 기준으로 0.1 ug/ml 내지 2000 ug/ml의 농도, 구체적으로 0.1 ug/ml 내지 1000ug/ml의 농도일 수 있다. 보다 구체적으로 본 발명의 일 측면에 있어서, 비수리 추출물은 조성물의 총 부피를 기준으로, 0.1 ug/ml 이상, 0.2 ug/ml 이상, 0.5 ug/ml 이상, 0.61 ug/ml 이상, 1 ug/ml 이상, 1.85 ug/ml 이상, 2 ug/ml 이상, 3 ug/ml 이상, 4 ug/ml 이상, 5 ug/ml 이상, 5.55 ug/ml 이상, 10 ug/ml 이상, 15 ug/ml 이상, 16 ug/ml 이상, 16.5 ug/ml 이상, 16.6 ug/ml 이상, 16.8 ug/ml 이상, 17.0 ug/ml 이상, 17.1 ug/ml 이상, 17.2 ug/ml 이상, 17.5 ug/ml 이상, 18 ug/ml 이상, 20 ug/ml 이상, 50 ug/ml 이상, 100 ug/ml 이상, 500 ug/ml 이상, 또는 1000 ug/ml 이상일 수 있으며 2000 ug/ml 이하, 1000 ug/ml 이하, 500 ug/ml 이하, 100 ug/ml 이하, 50 ug/ml 이하, 20 ug/ml 이하, 18 ug/ml 이하, 17.5 ug/ml 이하, 17.2 ug/ml 이하, 17.1 ug/ml 이하, 17.0 ug/ml 이하, 16.8 ug/ml 이하, 16.6 ug/ml 이하, 16.5 ug/ml 이하, 16 ug/ml 이하, 15 ug/ml 이하, 10 ug/ml 이하, 5.55 ug/ml 이하, 5 ug/ml 이하, 4 ug/ml 이하, 3 ug/ml 이하, 2 ug/ml 이하, 1.85 ug/ml 이하, 1 ug/ml 이하, 0.61 ug/ml 이하, 0.5 ug/ml 이하, 0.2 ug/ml 이하 또는 0.1 ug/ml이하일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 명세서에서 "비수리 (Lespedeza cuneata G. Don)"는 속씨식물문 쌍떡잎식물강 장미목 콩과의 식물을 의미한다. 이는 주로 간장과 신장을 보양하고, 어혈을 제거하고 부기를 가라앉히는 효능이 있으며, 안질, 야뇨증, 유정증, 일사병, 열사병, 천식, 해수, 해혈, 빈혈에 대하여 효능이 있는 것으로 알려져 있으나, 신경세포 보호 효능에 대하여는 알려진 바가 없다.
본 명세서에서 "추출물"은 추출 방법, 추출 용매, 추출된 성분 또는 추출물의 형태를 불문하고, 천연물의 성분을 뽑아냄으로써 얻어진 물질을 모두 포함하는 것이며 또한 천연물의 성분을 뽑아내어 얻어진 물질을 추출 후 다른 방법으로 가공 또는 처리하여 얻어질 수 있는 물질을 모두 포함하는 광범위한 개념이며, 구체적으로 상기 가공 또는 처리는 추출물을 추가적으로 발효, 또는 효소처리 하는 것일 수 있다. 따라서 본 명세서에서 추출물은 발효물, 농축물, 건조물을 포함하는 광범위한 개념이며, 구체적으로 본 명세서에서 추출물은 발효물일 수 있다.
본 발명의 일 측면에 있어서, "비수리 추출물"은 추출 방법, 추출 용매, 추출된 성분 또는 추출물의 형태를 불문하고, 비수리의 성분을 뽑아냄으로써 얻어진 물질을 모두 포함하는 것이며 그 성분을 뽑아내는 과정에서 열, 산(acid), 염기(base), 효소 등으로 처리하는 공정을 포함하는 추출 방법을 통해 얻어진 물질을 포함하며 또한 비수리의 성분을 뽑아내어 얻어진 물질을 추출 후 다른 방법으로 가공 또는 처리하여 얻어질 수 있는 물질을 모두 포함하는 광범위한 개념이다. 구체적으로 상기 가공 또는 처리는 비수리 추출물을 추가적으로 발효 또는 효소처리 등을 하는 것일 수 있다. 따라서, 본 명세서의 비수리 추출물은 발효물일 수 있다.
본 발명의 일 측면에 있어서, "비수리 (Lespedeza cuneata G. Don)"는 추출물의 형태이거나, 생(生) 비수리풀, 생약 자체의 분쇄물, 생약의 건조물, 생약의 건조 분쇄물, 비수리의 발효물일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 또한 본 명세서에서 사용되는 비수리는 그 입수 방법에 제한이 없으며, 재배하여 사용하거나 시판되는 것을 구입하여 사용할 수도 있으며, 초본의 지상부 또는 뿌리부의 일부 또는 전부를 사용할 수 있다. 더 구체적으로 비수리 초본의 잎, 꽃, 줄기, 열매, 및 뿌리로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상이 사용될 수 있다. 본 명세서의 비수리의 경우 반드시 건조를 통해서 제조되는 것은 아니며 비수리의 유효 성분을 추출하기에 적절한 형태의 원료라면 제한되지 않는다.
본 발명의 일 측면에 있어서, 물은 증류수 또는 정제수를 포함하고, 유기 용매는 C1~C6의 저급 알코올을 예로 들 수 있는 알코올과 아세톤, 에테르, 에틸아세테이트, 디에틸에테르, 에틸메틸케톤 및 클로로포름으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상을 포함하나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 일 측면에 있어서, 비수리 추출물은 비수리의 C1~C6 알코올 추출물을 포함할 수 있고, 구체적으로 상기 알코올은 메탄올 또는 에탄올일 수 있다.
본 발명의 일 측면에 있어서, 비수리 추출물은 비수리 추출물을 물, 유기용매, 또는 이들의 혼합물로 추출하는 단계를 포함하는 제조 방법에 의해 수득될 수 있다.
본 발명의 일 측면에 있어서, 비수리 추출물 추출물은 물, 유기용매, 및 이들이 조합으로 구성된 그룹에서 선택된 용매의 조추출물일 수 있다. 상기 유기용매는 C1~C6 알코올일 수 있으며, 구체적으로 C1~C6 알코올은 메탄올 또는 에탄올일 수 있다. 본 발명의 일 측면에 있어서, 비수리 추출물을 용매로 추출 시, 비수리 추출물의 약 5 내지 15배(v/w) 정도에 해당하는 용매를 가하여 추출하는 것이 바람직하며, 구체적으로 약 10 배의 용매를 가하여 추출하는 것이 바람직하나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 일 측면에 있어서, 추출은 열수 추출, 에탄올 추출, 가열 추출, 냉침 추출, 환류 추출, 환류냉각 추출, 또는 초음파 추출 등이 이용될 수 있으며, 당업자에게 자명한 추출법이라면 제한이 없으며, 구체적으로 추출은 열수 추출 또는 에탄올 추출일 수 있다.
본 발명의 일 측면에 있어서, 추출은 실온에서 수행할 수도 있으나, 보다 효율적인 추출을 위해서는 가온 조건 하에서 수행할 수 있으며, 구체적으로 약 40 내지 100℃, 더욱 구체적으로 약 65 내지 75℃의 온도에서 추출할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 추출시간은 약 2 내지 약 48시간, 구체적으로는 18시간 내지 36시간, 더욱 구체적으로는 20시간 내지 28시간, 가장 구체적으로는 22시간 내지 26시간 동안 수행할 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니며, 추출 용매 및 추출 온도 등의 조건에 따라 달라질 수 있다. 상기 추출은 활성성분을 보다 다량 수득하기 위해 1 회 이상 여러 번 추출할 수 있으며, 바람직하게는 1 내지 5회, 더욱 바람직하게는 3회 연속추출하여 합한 추출액을 이용할 수 있다.
본 발명의 일 측면에 있어서, 비수리 추출물은 상기와 같이 비수리 추출물의 조추출물을 포함할 수 있고, 상기 조추출물을 극성이 낮은 유기 용매로 더욱 추출하여 얻어진 유기 용매의 가용성 분획물로서 포함할 수도 있다. 본 발명의 일 측면에 있어서, 유기 용매로는 헥산, 메틸렌클로라이드, 에틸 아세테이트, n-부탄올 등이 이용될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 상기의 방법으로 추출한 추출물 또는 그 추출물의 가용성 분획물은 그대로 사용할 수도 있으나, 여과 후 농축하여 엑기스 형태로 사용할 수 있으며, 농축 후 건조하여 건조물의 형태로서 사용할 수 있다.
본 발명의 일 측면에 있어서, 건조는 증발 건조, 분무 건조, 동결 건조일 수 있으며, 구체적으로 동결 건조시에는 -50 내지 -70℃ 에서 3 내지 4일 동안 동결 건조를 수행할 수 있다.
본 발명의 일 측면에 따른 약학 조성물은 경구 또는 비경구의 여러 가지 제형일 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 연질 또는 경질 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 하나 이상의 화합물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 탄산칼슘, 수크로오스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 스테아린산 마그네슘, 탈크 등과 같은 윤활제들도 사용된다. 경구투여를 위한 액상제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁용제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로젤라틴 등이 사용될 수 있다.
본 발명의 일 측면에 따른 조성물의 약학적 투여 형태는 이들의 약학적으로 허용 가능한 염의 형태로도 사용될 수 있고, 또한 단독으로 또는 타 약학적 활성 화합물과 결합뿐만 아니라 적당한 집합으로 사용될 수 있다. 상기 염으로는 약학적으로 허용되는 것이면 특별히 한정되지 않으며, 예를 들어 염산, 황산, 질산, 인산, 불화수소산, 브롬화수소산, 포름산 아세트산, 타르타르산, 젖산, 시트르산, 푸마르산, 말레산, 숙신산, 메탄술폰산, 벤젠술폰산, 톨루엔술폰산, 나프탈렌술폰산 등을 사용할 수 있다.
본 발명의 일 측면에 따른 조성물은 목적하는 바에 따라 비경구 투여하거나 경구 투여할 수 있으며, 하루에 체중 1 ㎏당 0.1 내지 500 ㎎, 구체적으로 1 내지 100 ㎎의 양으로 투여되도록 1 내지 수회에 나누어 투여할 수 있다. 특정 환자에 대한 투여용량은 환자의 체중, 연령, 성별, 건강 상태, 식이, 투여 시간, 투여 방법, 배설률, 질환의 중증도 등에 따라 변화될 수 있다.
본 발명의 일 측면에 따른 약학 조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 연질 또는 경질 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 드링크제, 에어로졸 등의 경구형 제형, 연고, 크림 등의 피부 외용제, 좌제, 주사제 및 멸균 주사용액 등을 비롯하여 약제학적 제제에 적합한 어떠한 형태로든 제형화하여 사용될 수 있으며, 구체적으로 주사제 또는 피부 외용제의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다.
본 발명의 일 측면에 따른 조성물은, 쥐, 생쥐, 가축, 인간 등의 포유동물에 비경구, 경구 등의 다양한 경로로 투여될 수 있으며, 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구, 경피(trandermally), 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁내 경막 또는 뇌혈관내(intracerebroventricular) 주사에 의해 투여될 수 있다.
본 발명의 일 측면에 따른 조성물은, 통상의 기술자가 용이하게 적용할 수 있는 다양한 경로로 투여될 수 있다. 특히 본 명세서에 따른 약학 조성물은 피부 외용제로서 피부 표면에 도포되는 경로로 투여될 수 있다.
본 발명의 일 측면에 있어서, 식품 조성물은 건강기능식품 조성물일 수 있다.
본 발명의 일 측면에 따른 식품 조성물의 제형은 특별히 한정되지 않으나, 예를 들어, 정제, 과립제, 분말제, 드링크제와 같은 액제, 캐러멜, 겔, 바 등으로 제형화될 수 있다. 각 제형의 식품 조성물은 유효 성분 이외에 해당 분야에서 통상적으로 사용되는 성분들을 제형 또는 사용 목적에 따라 당업자가 어려움 없이 적의 선정하여 배합할 수 있으며, 다른 원료와 동시에 적용할 경우 상승 효과가 일어날 수 있다.
본 발명의 일 측면에 따른 식품 조성물에 있어서, 상기 유효 성분의 투여량 결정은 당업자의 수준 내에 있으며, 이의 1일 투여 용량은 예를 들어 0.1mg/kg/일 내지 5000mg/kg/일, 보다 구체적으로는 50 mg/kg/일 내지 500 mg/kg/일이 될 수 있으나, 이에 제한되지 않으며, 투여하고자 하는 대상의 연령, 건강 상태, 합병증 등 다양한 요인에 따라 달라질 수 있다.
본 발명의 일 측면에 따른 식품 조성물은, 예를 들어, 츄잉껌, 캐러멜 제품, 캔디류, 빙과류, 과자류 등의 각종 식품류, 청량 음료, 미네랄 워터, 알코올 음료 등의 음료 제품, 비타민이나 미네랄 등을 포함한 건강기능성 식품류일 수 있다.
상기 외에 본 발명의 일 측면에 따른 식품 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 증진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 포함할 수 있다. 그 밖에 본 발명의 일 측면에 따른 기능성 식품 조성물들은 천연 과일 쥬스 및 과일 쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 포함할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 그렇게 중요하진 않지만 본 명세서의 조성물 100 중량부 당 0 내지 약 20 중량부의 범위에서 포함되는 것이 일반적이다.
이하, 실시예 및 시험예를 들어 본 명세서의 구성 및 효과를 보다 구체적으로 설명한다. 그러나 이들 실시예 및 시험예는 본 명세서에 대한 이해를 돕기 위해 예시의 목적으로만 제공된 것일 뿐 본 명세서의 범주 및 범위가 하기 예에 의해 제한되는 것은 아니다.
[
실시예
] 비수리 추출물의 제조
비수리 전초 1000 g을 에탄올 1 리터 처리한 후 실온에서 3일간 보관하고 이를 여과 농축하여, 비수리 추출물 100 mg 을 수득하였다. 이렇게 수득된 비수리 에탄올 추출물을 에틸 아세테이트 40 mL와 물 10 mL을 혼합한 용매에 녹여, 이를 다시 유기층과 물층으로 분리하였고, 그 결과 에탄올 추출물의 에틸아세테이트 분획물 30 mg과 물 분획물 20 mg을 수득하였다. 이렇게 수득된 비수리 에탄올 추출물, 에틸 아세테이트 분획 및 물 분획의 시료를 10 mg/mL의 농도로 디메칠설폭사이드(DMSO)에 녹여 시료를 준비하였다.
[
실험예
1]
산화적
스트레스에 의한 신경세포의 세포 생존율 측정
마우스의 해마 뉴런(hippocampal neuron)에서 유래된 HT-22세포(솔크 연구소, 미국)를 DMEM (life technology, 11965-092) 배지에 배지 전체의 부피를 기준으로 10%의 소태혈청 (Gibco)과 1%의 항생제(페니실린-스트렙토마이신)를 첨가한 배지를 사용하여 3일에 한번씩 배지를 교체하면서 계대배양하였다. 96 웰 플레이트에 웰 당 100 uL의 배지를 넣고, 각 웰에 5000개의 HT-22 세포를 주입하였으며, 이를 24시간 동안 37℃ 에서 5% CO2 조건의 인규베이터에서 배양한 후 DMSO 에 녹여진 10 mg/mL의 시료(실시예의 에탄올 추출물)를 도 1에 기재된 농도로 처리하였다. 처리 2시간 후에 모노소듐 글루타메이트(monosodium glutamate, MSG) 5 mM 을 가하고 24시간 배양한 후에 세포 생존율을 측정하였으며, 이는 EZ-Tox 시약(대일랩서비스)을 사용하여 플레이트 리더(plate reader)로 450nm에서 흡광도를 측정하였다. 대조군으로서 아무것도 처리하지 않은 배지(도 1의 DMSO)와 모노소듐 글루타메이트 5 mM 만을 처리한 배지(도 1의 MSG)를 설정하였다. 이러한 결과를 하기 표 1 및 도 1에 나타내었다.
| 농도 | 세포생존율(%) |
| 50ug/mL | 79.32 ± 13.4 |
| 16.6ug/mL | 75.06 ± 3.74 |
| 5.55ug/mL | 50.85 ± 3.50 |
| 1.85ug/mL | 44.17 ± 9.50 |
| 0.67ug/mL | 50.09 ± 18.67 |
위와 동일한 방법으로 배양된 HT-22 세포에 실시예의 비수리 에탄올 추출물을 16.6 ug/ml 및 50 ug/ml의 농도로 처리하였다. 처리 2시간 후에 글루타메이트 5 mM 을 가하고 24시간 37℃에서, 5% CO2 조건의 인규베이터에서 배양한 후 이를 Operetta (high content imaging system, Perkin Elmer)를 활용하여 10X 의 렌즈를 사용하여 각 배지를 이미지로 촬영하였고, 세포의 생존율을 확인하였다. 대조군으로서 아무것도 처리하지 않은 배지와 글루타메이트 5 mM 만을 처리한 배지를 설정하였다. 이러한 결과는 도 2에 각각 나타내었으며, 도 2에서 스케일바는 100um 이다.
표 1 및 도 1의 결과에 따르면 본 발명의 일측면에 따른 비수리 추출물은 글루타메이트에 의하여 사멸되는 신경세포의 생존율을 증가시키는 효과를 나타낸다는 점을 확인할 수 있다. 따라서, 본 발명의 일측면에 따른 비수리 추출물은 산화적 스트레스로부터 신경세포를 보호하고 신경세포의 사멸을 억제하는 효과를 나타내며, 이로써 신경세포의 사멸로 인해 야기되거나 산화적 스트레스로 유발되는 신경 질환을 치료, 예방 또는 개선할 수 있을 것이다. 또한, 본 발명의 일측면에 따른 비수리 추출물은 신경세포에서 산화적 스트레스의 증가로 발생되는 세포사멸을 억제하는 항산화 효소의 발현을 촉진할 수 있을 것이다.
도 2에 따르면, 글루타메이트를 처리하는 경우 뉴런 세포의 대부분이 사멸하는 것을 이미지를 통하여 육안으로 확인할 수 있다. 그러나 본 발명의 일측면에 따른 비수리 추출물로서 에탄올 추출물을 글루타메이트와 동시에 처리하는 경우 DMSO만을 처리한 대조군과 비슷한 수준으로 세포들이 생존해 있는 것을 확인할 수 있었다.
[
실험예
2] 비수리 추출물의
항산화능
확인
비수리 추출물의 항산화능을 확인하기 위해, 자유 라디칼인 DPPH(1,1-디페닐-2-피크릴하이드라질; 1,1-diphenyl-2-picryl hydrazyl)의 환원에 의해 발생하는 흡광도의 변화를 통해 DPPH 산화 억제 효능을 비교하였다.
구체적으로, DPPH 파우더를 메탄올 용매에 녹여 0.2 mM 농도의 DPPH 용액을 준비하고, 양성 대조군으로 100 ppm 농도의 비타민 C를 준비하였다. 그런 다음, 상기 DPPH 용액과 상기 실시예의 비수리 추출물을 1 : 1로 혼합하여 50 ug/ml, 16.6 ug/ml, 5.55 ug/ml, 1.85 ug/ml, 0.61 ug/ml 및 0.2 ug/ml 이 되도록 희석하여 반응액을 만들고 37℃에서 30분간 반응시킨 후, 540 nm에서 흡광도를 측정하였다. 이 때, 양성 대조군인 비타민 C는 100 ppm, 33.3 ppm, 11.1 ppm, 3.7 ppm, 1.23 ppm, 0.41 ppm이 되도록 상기 DPPH 용액을 혼합하여 희석하였다. 본 발명의 비수리 추출물의 분석 결과는 도 3a에, 양성 대조군인 비타민 C의 분석 결과는 도 3b에 나타내었다.
도 3a에 따르면, 본 발명의 일 측면에 따른 비수리 추출물로서 에탄올 추출물은 50 ug/ml의 농도에서 라디칼 소거율(radical scavenging)이 약 60 %, 낮은 농도인 16.6 ug/ml에서 라디칼 소거율이 약 30 %로 우수한 항산화능을 나타내었다. 따라서, 본 발명의 비수리 추출물은 매우 우수한 항산화능을 가짐을 확인할 수 있었다.
본 발명의 일 측면에 따른 조성물의 제형예를 아래에서 설명하나, 다른 여러 가지 제형으로도 응용 가능하며, 이는 본 명세서를 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.
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제형예
1] 연질 캡슐
실시예의 비수리 에탄올 추출물 8mg, 비타민 E 9mg, 비타민 C 9mg, 팜유 2mg, 식물성 경화유 8mg, 황납 4mg 및 레시틴 9mg을 혼합하고, 통상의 방법에 따라 혼합하여 연질 캡슐 충진액을 제조한다. 1 캡슐당 400㎎씩 충진하여 연질 캡슐을 제조한다. 그리고, 상기와 별도로 젤라틴 66 중량부, 글리세린 24 중량부 및 솔비톨액 10 중량부의 비율로 연질 캡슐 시트를 제조하고 상기 충진액을 충진시켜 본 명세서에 따른 조성물 400mg이 함유된 연질 캡슐을 제조한다.
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제형예
2] 정제
실시예의 비수리 에탄올 추출물 8mg, 비타민 E 9mg, 비타민 C 9mg, 갈락토올리고당 200㎎, 유당 60㎎ 및 맥아당 140㎎을 혼합하고 유동층 건조기를 이용하여 과립한 후 당 에스테르(sugar ester) 6㎎을 첨가한다. 이들 조성물 500mg을 통상의 방법으로 타정하여 정제를 제조한다.
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제형예
3] 드링크제
실시예의 비수리 에탄올 추출물 8mg, 비타민 E 9mg, 비타민 C 9mg, 포도당 10g, 구연산 0.6g, 및 액상 올리고당 25g을 혼합한 후 정제수 300㎖를 가하여 각 병에 200㎖씩 되도록 충진한다. 병에 충진한 후 130℃에서 4∼5초간 살균하여 드링크제를 제조한다.
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제형예
4] 과립제
실시예의 비수리 에탄올 추출물 8mg, 비타민 E 9mg, 비타민 C 9mg, 무수결정 포도당 250㎎ 및 전분 550㎎을 혼합하고, 유동층 과립기를 사용하여 과립으로 성형한 후 포에 충진하여 과립제를 제조한다.
[
제형예
5] 주사제
하기 표 2에 기재된 조성에 따라 통상적인 방법으로 주사제를 제조하였다.
| 배합 성분 | 함량 |
| 실시예의 비수리 에탄올 추출물 | 10-50 mg |
| 주사용 멸균 증류수 | 적량 |
| pH 조절제 | 적량 |
[
제형예
6] 건강기능식품
하기 표 3에 기재된 조성에 따라 통상적인 방법으로 건강기능식품을 제조하였다.
| 배합 성분 | 함량 |
| 실시예의 비수리 에탄올 추출물 | 20mg |
| 비타민 A 아세테이트 | 70μg |
| 비타민 E | 1.0mg |
| 비타민 B1 | 0.13mg |
| 비타민 B2 | 0.15mg |
| 비타민 B6 | 0.5mg |
| 비타민 B12 | 0.2μg |
| 비타민 C | 10mg |
| 비오틴 | 10μg |
| 니코틴산아미드 | 1.7mg |
| 엽산 | 50μg |
| 판토텐산 칼슘 | 0.5mg |
| 황산 제1철 | 1.75mg |
| 산화아연 | 0.82mg |
| 탄산마그네슘 | 25.3mg |
| 제1인산칼륨 | 15mg |
| 제2인산칼슘 | 55mg |
| 구연산칼륨 | 90mg |
| 탄산칼슘 | 100mg |
| 염화마그네슘 | 24.8mg |
상기의 비타민 및 미네랄 혼합물의 조성비는 비교적 건강기능식품에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하다.
[
제형예
7] 건강 음료
하기 표 4에 기재된 조성에 따라 통상적인 방법으로 건강음료를 제조하였다.
| 배합 성분 | 함량 |
| 실시예의 비수리 에탄올 추출물 | 1000mg |
| 구연산 | 1000mg |
| 올리고당 | 100 g |
| 타우린 | 1g |
| 정제수 | 잔량 |
통상의 건강 음료 제조 방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 약 1시간 동안 85℃에서 교반 가열한 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균한다.
Claims (14)
- 비수리(Lespedeza cuneata G. Don) 추출물을 유효성분으로서 포함하는 산화적 스트레스로부터의 신경세포 보호용 또는 신경세포 사멸 억제용 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 산화적 스트레스는 글루타메이트에 의해 유발된 것인 조성물.
- 비수리(Lespedeza cuneata G. Don) 추출물을 유효성분으로서 포함하는 신경세포의 사멸로 인해 야기되는 질병의 치료, 예방 또는 개선용 조성물.
- 제3항에 있어서, 상기 신경세포의 사멸로 인해 야기되는 질병은 중풍, 근위축성 측상 경화증(루게릭병), 파킨슨병, 및 알츠하이머로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상인 조성물.
- 비수리(Lespedeza cuneata G. Don) 추출물을 유효성분으로서 포함하는 신경 세포에서 항산화 효소의 발현 촉진용 조성물.
- 비수리(Lespedeza cuneata G. Don) 추출물을 유효성분으로서 포함하는 신경세포의 활성산소 감소용 또는 억제용 조성물.
- 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 비수리는 비수리 초본의 잎, 꽃, 줄기, 열매, 뿌리 및 이들의 조합으로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상인 조성물.
- 제7항에 있어서, 비수리 초본의 잎, 줄기, 뿌리 및 이들의 조합으로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상인 조성물.
- 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 비수리 추출물은 물, 유기용매 및 이들의 혼합물로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 추출물인 조성물.
- 제9항에 있어서, 유기용매는 C1~C6의 저급 알코올, 부틸렌글리콜, 및 프로필렌글리콜로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상인 조성물.
- 제10항에 있어서, 저급 알코올은 에탄올인 조성물.
- 제9항에 있어서, 상기 비수리 유기용매 추출물은 에탄올 추출물인 조성물.
- 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 비수리 추출물은 조성물의 총 부피를 기준으로 0.1 ug/ml 내지 1000 ug/ml의 농도인 조성물.
- 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 약학 또는 식품 조성물.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020180090835A KR20200015251A (ko) | 2018-08-03 | 2018-08-03 | 비수리 추출물을 포함하는 신경세포 보호용 조성물 |
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| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
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| KR1020180090835A KR20200015251A (ko) | 2018-08-03 | 2018-08-03 | 비수리 추출물을 포함하는 신경세포 보호용 조성물 |
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|---|---|
| KR20200015251A true KR20200015251A (ko) | 2020-02-12 |
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| KR1020180090835A KR20200015251A (ko) | 2018-08-03 | 2018-08-03 | 비수리 추출물을 포함하는 신경세포 보호용 조성물 |
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| Country | Link |
|---|---|
| KR (1) | KR20200015251A (ko) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US11660342B2 (en) | 2020-03-19 | 2023-05-30 | POSTECH Research and Business Development Foundation | Method for increasing permeability of blood-brain barrier |
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2018
- 2018-08-03 KR KR1020180090835A patent/KR20200015251A/ko not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Andersen, J. K. et al. Nat. Rev. Neurosci. 2004, 5, S18-S25, Coyle, J. et al. Science 1993, 262, 689-695 |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US11660342B2 (en) | 2020-03-19 | 2023-05-30 | POSTECH Research and Business Development Foundation | Method for increasing permeability of blood-brain barrier |
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