KR20190120160A - Mrna의 전달을 위한 개선된 ice계 지질 나노입자 제형 - Google Patents

Mrna의 전달을 위한 개선된 ice계 지질 나노입자 제형 Download PDF

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KR20190120160A
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프랑크 데로사
마이클 하틀린
슈리랑 카베
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트랜슬레이트 바이오 인코포레이티드
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Abstract

본 발명은, 무엇보다도, 3개 이하의 구별되는 지질 성분을 포함하되, 이중 하나의 구별되는 지질 성분은 스테롤계 양이온 지질인, 핵산 함유 나노입자를 포함하는 조성물 및 이를 제형화하는 방법을 제공한다. 일부 구현예에서, 본 발명은 지질 나노입자가 헬퍼 지질 및 PEG-변형된 지질을 추가로 포함하는 조성물 및 방법을 제공한다. 생성된 제형은 핵산에 대해 높은 캡슐화 백분율을 포함한다.

Description

MRNA의 전달을 위한 개선된 ICE-기반 지질 나노입자 제형
관련 출원
본 출원은 2016년 11월 10일에 출원된 미국 가출원 제62/420,421호, 2016년 11월 10일에 출원된 미국 가출원 제62/420,428호, 2016년 11월 11일에 출원된 미국 가출원 제62/421,021호, 2016년 11월 11일에 출원된 미국 가출원 제62/421,007호, 2017년 2월 27일에 출원된 미국 가출원 제62/464,327호, 및 2017년 2월 27일자로 출원된 미국 가출원 번호 제62/464,330호의 우선권을 주장하며, 이들의 개시는 참조로서 본원에 통합된다.
서열 목록
본 명세서는 (2017년 11월 10일에 "MRT-1247WO_SL"라는 명칭의 .txt 파일로 전자 제출된) 서열 목록을 참조한다. 상기 .txt 파일은 2017년 11월 10일에 생성되었고, 57,411바이트 크기이다. 서열 목록의 전체 내용은 본원에 참조로서 포함된다.
핵산 기반 기술은 전령 RNA 요법을 포함하되 이에 한정되지 않는 다양한 치료적 적용에 있어 그 중요성이 증가하고 있다. 핵산을 전달하기 위한 노력에는, 생체 내 전달 시 핵산을 분해로부터 보호하도록 제형된 조성물을 생성하는 것이 포함되었다. 핵산의 전달 비히클 중 한 가지 유형은 지질 나노입자였다. 전달 비히클로서 지질 나노입자를 성공적으로 사용하기 위해 고려해야 할 중요한 파라미터에는 지질 나노입자 형성, 지질 성분의 물리적 특성, 핵산 캡슐화 효율, 생체 내 핵산 방출 능력, 및 지질 나노입자의 독성이 포함된다.
본 발명은 스테롤계 양이온 지질, 헬퍼 지질 및 PEG-변형된 지질이 RNA의 지질 나노입자 제형을 형성하는 독특한 해결책을 제공한다. 제형화 시 본 발명의 3 지질 성분 시스템은 높은 RNA 캡슐화 효율, 및 특히 폐 전달에 있어서 성공적인 생체 내 효능 전달을 나타낸다. 이러한 제형화 시스템은, 양이온성 지질(콜레스테롤 유도체 지질)의 대사 산물이 콜레스테롤이므로, (다른 종래의 4 지질 성분 시스템과 비교해) 낮은 지질 부하 및 높은 내약성/낮은 독성이라는 추가적인 이점을 제공한다.
본 발명은 부분적으로, 스테로계 양이온 지질에 기초한 3 지질 성분 시스템이 mRNA를 전달하고, 암호화된 단백질 또는 펩티드를 생체 내에서, 특히 폐에서 생산하는데 있어서 예상 외로 효과적이라는 놀라운 발견에 부분적으로 기초한다. 실제로, 본 발명 이전에, 양이온성 지질은 mRNA를 포함하는 핵산의 생체 내 전달을 위해 이를 캡슐화하기 위해 사용되는 리포솜의 중요한 성분으로서 집중적으로 조사되어 왔다. mRNA의 구조가 길고 고유한 취약성을 가지고, 생체 내 해석 프로세스가 복잡하기 때문에, 리포좀에 사용되는 양이온성 지질은 일반적으로 두 가지 역할을 수행한다. 우선, 양이온성 지질은 캡슐화, 순환 및 세포 이물 흡수(endocytosis) 도중에 음으로 하전된 mRNA와의 상호작용을 촉진함으로써, mRNA를 포획하고 보호한다. 그런 다음, 시토졸 내부에 있게 되면, 양이온성 지질은 mRNA가 번역되어 암호화된 단백질 또는 펩티드를 생산할 수 있도록 mRNA를 방출할 수 있어야 한다. 적정 양이온 지질(titratable cationic lipids)로 구체적으로 알려진 일부 양이온성 지질은 mRNA를 전달하는 데 특히 효과적이다. 놀랍게도, 본 발명자들은 본원에 기술된 스테롤계 양이온 지질을 포함하는 리포좀이 mRNA에 대해 훨씬 더 높은 캡슐화 백분율을 가질 수 있고, 다양한 mRNA를 생체 내 전달하는 데 훨씬 더 효과적일 수 있음을 발견하였다. 특히, 본원에 기술된 스테롤계 양이온 지질을 포함하는 리포좀은 mRNA의 폐 전달에 매우 효과적일 수 있고, 분무화를 통해 mRNA를 전달하는 데 대단히 성공적일 수 있다. 따라서, 본 발명자들은 3 지질 성분 시스템이 생체 내에서, 구체적으로는 폐 시스템에서 단백질 또는 펩티드(예를 들어, 치료 단백질)의 고도로 효율적이고 지속적인 생산을 위해 mRNA를 전달하는 데 특별하게 유용할 수 있음을 입증하였다. 따라서, 본 발명은 mRNA 및 관련 지질의 요구량, 투여 빈도, 및 가능한 부작용을 상당히 감소시켜, 다양한 질병에 대해 더 안전하고 더 강력하며 환자 친화적인 mRNA 요법을 제공할 수 있는 개선된 mRNA 요법을 가능하게 한다.
일 양태에서, 본 발명은 핵산의 생체 내 전달 방법을 제공하며, 상기 방법은 핵산 및 핵산을 캡슐화하는 지질 나노입자를 포함하는 조성물을, 이의 전달을 필요로 하는 대상체게에 폐 전달에 의해 투여하는 단계를 포함하며, 각각의 개별 지질 나노입자는 3개 이하의 구별되는 지질 성분을 포함하되 하나의 구별되는 지질 성분은 스테롤계 양이온 지질이다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 핵산의 생체 내 전달 방법을 제공하며, 상기 방법은 낭포성 섬유증 막관통 전도도 조절제(CFTR: Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator)를 암호화하는 핵산 및 핵산을 캡슐화하는 지질 나노입자를 포함하는 조성물을, 이의 전달을 필요로 하는 대상체게에 폐 전달에 의해 투여하는 단계를 포함하며, 각각의 개별 지질 나노입자는 3개 이하의 구별되는 지질 성분을 포함하되 하나의 구별되는 지질 성분은 스테롤계 양이온 지질이다.
일부 구현예에서, 폐 전달은 분무화(nebulization)를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 전달을 필요로 하는 대상체이다.
일부 구현예에서, 지질 나노입자는 핵산에 대해 적어도 70%(예를 들어, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%)의 캡슐화 백분율을 갖는다.
일부 구현예에서, 3개의 구별되는 지질 성분은 헬퍼 지질 및 PEG-변형된 지질 중 하나 또는 모두를 포함한다.
일부 구현예에서, 스테롤계 양이온 지질은 화학식 (A)에 따른 구조,
B-L1- S(화학식 A), 또는 이의 양성자화된 형태를 가지되, B는 양성자화된 형태가 약 8.0 이하의 pKa를 갖는 염기성 작용기이고; L1은 선택적으로 치환된 C1-C20 알킬렌 연결기 또는 2 내지 20-원의 헤테로알킬렌 연결기이며; S는 스테롤이다.
일부 구현예에서, B는 선택적으로 치환된 5 내지 6-원의 질소 함유 헤테로아릴이다. 일부 구현예에서, B는 각각이 선택적으로 치환된 피롤일, 이미다졸릴, 피라졸일, 트리아졸일, 테트라졸일, 피리딜, 피리미딜, 피라진일 및 피리다진일로부터 선택된 기이다. 일부 구현예에서, B는 각각이 선택적으로 치환된 피롤일, 피라졸일, 트리아졸일, 테트라졸일, 피리딜, 피리미딜, 피라진일 및 피리다진일로부터 선택된 기이다. 일부 구현예에서, B는 각각이 선택적으로 치환된 피롤일, 피라졸일, 트리아졸일, 테트라졸일, 피리미딜, 피라진일 및 피리다진일로부터 선택된 기이다.
일부 구현예에서, L1은 선택적으로 치환된 C1-C20 알킬렌 연결기이다. 일부 구현예에서, L1은 선택적으로 치환된 2 내지 20-원의 헤테로알킬렌 연결기이다. 일부 구현예에서, L1은 비펩티드성인 2 내지 20-원의 헤테로알킬렌이다. 일부 구현예에서, L1은 에스테르기, 아미드기, 카르바메이트기, 카보네이트기, 또는 우레아기인 모이어티를 포함한다. 일부 구현예에서, L1은 아미드기, 카르바메이트기, 카보네이트기, 또는 우레아기인 모이어티를 포함한다. 일부 구현예에서, L1은 아미드기, 카보네이트기, 또는 우레아기인 모이어티를 포함한다. 일부 구현예에서, L1은 -X1-C(X3)-X2, -(C1-C19 알킬렌)-X1-C(X3)-X2, -X1-C(X3)-X2(C1-C19 알킬렌)-, -(C1-C19 알킬렌)-X1-, -X1-(C1-C19 알킬렌)-이며, 여기서 각각의 X1 및 X2는 독립적으로, 공유 결합, -O-, -S-, 또는 -NH-이고; X3은 독립적으로 =O, =S, 또는 =NH이며; 상기 C1-C19 알킬렌은 선택적으로 치환된다. 일부 구현예에서, L1은 -N(R')2 또는 이의 양전하로 하전된 형태를 포함하지 않으며, 여기서 각각의 R'은 독립적으로 수소 또는 선택적으로 치환된 C1-C20 알킬이다.
일부 구현예에서, S는 동물 스테롤(zoosterol), 또는 이의 산화되거나 환원된 형태이다. 일부 구현예에서, S는 식물 스테롤(phytosterol), 또는 이의 산화되거나 환원된 형태이다. 일부 구현예에서, S는 합성 스테롤(synthetic sterol), 또는 이의 산화되거나 환원된 형태이다. 일부 구현예에서, S는 콜레스테롤, 콜레스테롤의 산화된 형태, 콜레스테롤의 환원된 형태, 알킬 리토콜레이트, 스티그마스테롤, 스티그마스탄올, 캄페스테롤, 에르고스테롤, 및 시토스테롤으로부터 선택된 스테롤이다. 일부 구현예에서, S는 콜레스테롤의 산화된 형태, 콜레스테롤의 환원된 형태, 알킬 리토콜레이트, 스티그마스테롤, 스티그마스탄올, 캄페스테롤, 에르고스테롤, 및 시토스테롤으로부터 선택된 스테롤이다. 일부 구현예에서, S는
Figure pct00001
Figure pct00002
Figure pct00003
Figure pct00004
Figure pct00005
(시토스테롤)로부터 선택된 스테롤이다(R은 선택적으로 치환된 C1-C20 알킬임). 일부 구현예에서, S는
Figure pct00006
Figure pct00007
Figure pct00008
Figure pct00009
Figure pct00010
(시토스테롤)로부터 선택된 스테롤이며, 여기서 R은 선택적으로 치환된 C1-C20 알킬이다.
일부 구현예에서, 스테롤계 양이온 지질은 이미다졸 콜레스테롤 에스테르(ICE)를 포함한다. 일부 구현예에서, 스테롤계 양이온 지질은 이미다졸 콜레스테롤 에스테르(ICE)를 포함하지 않는다.
일부 구현예에서, 핵산은 DNA, siRNA, 마이크로RNA 및/또는 mRNA로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 핵산은 단백질 또는 펩티드를 암호화하는 mRNA이다. 일부 구현예에서, 단백질 또는 펩티드를 암호화하는 mRNA는 코돈 최적화된 것이다. 일부 구현예에서, mRNA는 하나 이상의 변형 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 구현예에서, mRNA는 상기 mRNA의 5' 미번역 영역의 변형을 포함한다. 일부 구현예에서, mRNA는 5' 미번역 영역의 상기 변형은 Cap1 구조의 포함을 포함한다. 일부 구현예에서, mRNA는 상기 mRNA의 3' 미번역 영역의 변형을 포함한다. 일부 구현예에서, mRNA는 3' 미번역 영역의 상기 변형은 폴리 A 꼬리(poly A tail)의 포함을 포함한다.
일부 구현예에서, 지질 나노입자는 약 100 nm, 95 nm, 90 nm, 85 nm, 80 nm, 75 nm, 70 nm, 65 nm, 60 nm, 55 nm, 50 nm, 45 nm 또는 40 nm미만의 크기를 갖는다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 분무용으로 제형화된 핵산, 및 핵산을 캡술화하는 지질 나노입자를 포함하는 조성물을 제공하며, 각각의 개별 지질 나노입자는 3개 이하의 구별되는 지질 성분을 포함하되 하나의 구별되는 지질 성분은 스테롤계 양이온 지질이며, 또한, 지질 나노입자는 핵산에 대해 적어도 70%(예를 들어, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%)의 캡슐화 백분율을 갖는다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 핵산, 및 핵산을 캡술화하는 지질 나노입자를 포함하는 조성물을 제공하며, 여기서 각각의 개별 지질 나노입자는 3개 이하의 구별되는 지질 성분을 포함하되 하나의 구별되는 지질 성분은 스테롤계 양이온 지질이며, 또한, 지질 나노입자는 핵산에 대해 적어도 70%(예를 들어, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%)의 캡슐화 백분율을 갖는다.
일부 구현예에서, 지질 나노입자는 핵산에 대해 적어도 85%의 캡슐화 백분율을 갖는다. 일부 구현예에서, 지질 나노입자는 핵산에 대해 적어도 90%의 캡슐화 백분율을 갖는다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 낭포성 섬유증 막관통 전도도 조절제(CFTR) 단백질을 암호화하는 mRNA, 및 mRNA를 캡슐화하는 지질 나노입자를 포함하는 조성물을 제공하며, 각각의 개별 지질 나노입자는 3개 이하의 구별되는 지질 성분을 포함하되 하나의 구별되는 지질 성분은 스테롤계 양이온 지질이며, 또한, 지질 나노입자는 mRNA에 대해 적어도 80%의 캡슐화 백분율을 갖는다.
일부 구현예에서, 지질 나노입자는 mRNA에 대해 대해 적어도 85% 또는 적어도 90%의 캡슐화 백분율을 갖는다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 핵산, 및 핵산을 캡슐화하는 지질 나노입자를 포함하는 조성물을 제공하며, 여기서 각각의 개별 지질 나노입자는 3개 이하의 구별되는 지질 성분을 포함하되 하나의 구별되는 지질 성분은 스테롤계 양이온 지질이며, 또한, 스테롤계 양이온 지질은 총 지질의 70% 이하(예를 들어, 68% 이하, 67% 이하, 66% 이하, 65% 이하, 60% 이하, 55% 이하, 50% 이하, 45% 이하, 또는 40% 이하)를 구성한다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 낭포성 섬유증 막관통 전도도 조절제(CFTR) 단백질을 암호화하는 mRAN, 및 mRNA를 캡슐화하는 지질 나노입자를 포함하는 조성물을 제공하며, 여기서 각각의 개별 지질 나노입자는 3개 이하의 구별되는 지질 성분을 포함하되 하나의 구별되는 지질 성분은 스테롤계 양이온 지질이며, 또한, 스테롤계 양이온 지질은 총 지질의 70% 이하(예를 들어, 68% 이하, 67% 이하, 66% 이하, 65% 이하, 60% 이하, 55% 이하, 50% 이하, 45% 이하, 또는 40% 이하)를 구성한다.
일부 구현예에서, 스테로롤계 양이온 지질은 총 지질의 65% 이하를 구성한다. 일부 구현예에서, 스테로롤계 양이온 지질은 총 지질의 60% 이하를 구성한다. 일부 구현예에서, 3개의 구별되는 지질 성분은 헬퍼 지질 및 PEG-변형된 지질 중 하나 또는 모두를 포함한다.
일부 구현예에서, 스테롤계 양이온 지질은 화학식 (A)에 따른 구조,
B-L1- S (화학식 A), 또는 이의 양성자화된 형태를 가지되, B는 양성자화된 형태가 약 8.0 이하의 pKa를 갖는 염기성 작용기이고; L1은 선택적으로 치환된 C1-C20 알킬렌 연결기 또는 2 내지 20-원의 헤테로알킬렌 연결기이며; S는 스테롤이다.
일부 구현예에서, B는 선택적으로 치환된 5 내지 6-원의 질소 함유 헤테로아릴이다. 일부 구현예에서, B는 각각이 선택적으로 치환된 피롤일, 이미다졸릴, 피라졸일, 트리아졸일, 테트라졸일, 피리딜, 피리미딜, 피라진일 및 피리다진일로부터 선택된 기이다. 일부 구현예에서, B는 각각이 선택적으로 치환된 피롤일, 피라졸일, 트리아졸일, 테트라졸일, 피리딜, 피리미딜, 피라진일 및 피리다진일로부터 선택된 기이다. 일부 구현예에서, B는 각각이 선택적으로 치환된 피롤일, 피라졸일, 트리아졸일, 테트라졸일, 피리미딜, 피라진일 및 피리다진일로부터 선택된 기이다.
일부 구현예에서, L1은 선택적으로 치환된 C1-C20 알킬렌 연결기이다. 일부 구현예에서, L1은 선택적으로 치환된 2 내지 20-원의 헤테로알킬렌 연결기이다. 일부 구현예에서, L1은 비펩티드성인 2 내지 20-원의 헤테로알킬렌이다. 일부 구현예에서, L1은 에스테르기, 아미드기, 카르바메이트기, 카보네이트기, 또는 우레아기인 모이어티를 포함한다. 일부 구현예에서, L1은 아미드기, 카르바메이트기, 카보네이트기, 또는 우레아기인 모이어티를 포함한다. 일부 구현예에서, L1은 아미드기, 카보네이트기, 또는 우레아기인 모이어티를 포함한다. 일부 구현예에서, L1은 -X1-C(X3)-X2, -(C1-C19 알킬렌)-X1-C(X3)-X2, -X1-C(X3)-X2(C1-C19 알킬렌)-, -(C1-C19 알킬렌)-X1-, -X1-(C1-C19 알킬렌)-이며, 여기서 각각의 X1 및 X2는 독립적으로, 공유 결합, -O-, -S-, 또는 -NH-이고; X3은 독립적으로 =O, =S, 또는 =NH이며; 상기 C1-C19 알킬렌은 선택적으로 치환된다. 일부 구현예에서, L1은 -N(R')2 또는 이의 양전하로 하전된 형태를 포함하지 않으며, 여기서 각각의 R'은 독립적으로 수소 또는 선택적으로 치환된 C1-C20 알킬이다.
일부 구현예에서, S는 동물스테롤(zoosterol), 또는 이의 산화되거나 환원된 형태이다. 일부 구현예에서, S는 식물 스테롤(phytosterol), 또는 이의 산화되거나 환원된 형태이다. 일부 구현예에서, S는 합성 스테롤(synthetic sterol), 또는 이의 산화되거나 환원된 형태이다. 일부 구현예에서, S는 콜레스테롤, 콜레스테롤의 산화된 형태, 콜레스테롤의 환원된 형태, 알킬 리토콜레이트, 스티그마스테롤, 스티그마스탄올, 캄페스테롤, 에르고스테롤, 및 시토스테롤으로부터 선택된 스테롤이다. 일부 구현예에서, S는 콜레스테롤의 산화된 형태, 콜레스테롤의 환원된 형태, 알킬 리토콜레이트, 스티그마스테롤, 스티그마스탄올, 캄페스테롤, 에르고스테롤, 및 시토스테롤으로부터 선택된 스테롤이다. 일부 구현예에서, S는
Figure pct00011
Figure pct00012
Figure pct00013
Figure pct00014
Figure pct00015
(시토스테롤)로부터 선택된 스테롤이며, 여기서 R은 선택적으로 치환된 C1-C20 알킬이다. 일부 구현예에서, S는
Figure pct00016
Figure pct00017
Figure pct00018
Figure pct00019
Figure pct00020
(시토스테롤)로부터 선택된 스테롤이며, 여기서 R은 선택적으로 치환된 C1-C20 알킬이다.
일부 구현예에서, 스테롤계 양이온 지질은 이미다졸 콜레스테롤 에스테르(ICE)를 포함한다. 일부 구현예에서, 스테롤계 양이온 지질은 이미다졸 콜레스테롤 에스테르(ICE)를 포함하지 않는다.
일부 구현예에서, 핵산은 DNA, siRNA, 마이크로RNA 및/또는 mRNA로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 핵산은 단백질 또는 펩티드를 암호화하는 mRNA이다. 일부 구현예에서, 단백질 또는 펩티드를 암호화하는 mRNA는 코돈 최적화된 것이다. 일부 구현예에서, mRNA는 하나 이상의 변형 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 구현예에서, mRNA는 상기 mRNA의 5' 미번역 영역의 변형을 포함한다. 일부 구현예에서, mRNA는 5' 미번역 영역의 상기 변형은 Cap1 구조의 포함을 포함한다. 일부 구현예에서, mRNA는 상기 mRNA의 3' 미번역 영역의 변형을 포함한다. 일부 구현예에서, mRNA는 3' 미번역 영역의 상기 변형은 폴리 A 꼬리(poly A tail)의 포함을 포함한다.
일부 구현예에서, 지질 나노입자는 약 100 nm, 95 nm, 90 nm, 85 nm, 80 nm, 75 nm, 70 nm, 65 nm, 60 nm, 55 nm, 50 nm, 45 nm 또는 40 nm미만의 크기를 갖는다.
일부 구현예에서, CFTR 단백질을 암호화하는 mRNA는 서열번호 1을 포함한다. 　 일부 구현예에서, CFTR 단백질을 암호화하는 mRNA는 서열번호 1과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90% 또는 95% 동일한 폴리뉴클레오티드 서열을 포함한다. 　
일부 실시예에서, 지질 나노입자는 mRNA 용액 및 지질 용액을 20% 에탄올에 혼합함으로써 형성된다. 일부 구현예에서, 지질 나노입자는 접선류 여과 방식(Tangential Flow Filtration)에 의해 추가로 정제된다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 생체 내에서 mRNA를 전달하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 대상체에게 조성물을 투여하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 전달을 필요로 하는 대상체이다. 일부 실시예에서, 조성물은 정맥 내 투여된다. 일부 실시예에서, 조성물은 폐 전달에 의해 투여된다. 일부 구현예에서, 폐 전달은 분무화(nebulization)를 포함한다.
본원에서, 달리 명시되지 않는 한, "또는(or)"은 "및/또는(and/or)"을 의미한다. 본 개시에서 사용되는 바와 같이, 용어 "포함(comprise)" 및 이 용어의 다양한 형태, 예컨대 "포함하는(comprising, comprises)" 등은 다른 다른 첨가물, 구성 요소, 정수 또는 단계를 배제하도록 의도되지 않는다. 본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "약(about)" 및 "대략(approximately)"은 동등하게 사용된다. 두 용어는 당업자에 의해 이해되는 임의의 정상적인 변동을 포함하는 것으로 간주된다.
본 발명의 다른 특징, 목적 및 이점은 이어지는 발명을 실시하기 위한 구체적인 내용, 도면 및 청구범위에서 자명해진다. 하지만, 발명을 실시하기 위한 구체적인 내용, 도면 및 청구범위가 본 발명의 구현예를 나타내지만, 이는 제한을 위해서가 아니라 단지 예시를 위해 주어지는 것임을 이해해야 한다. 본 발명의 범주 내에서의 다양한 변형 및 수정이 이루어질 수 있음은 당업자에게 명백해질 것이다.
도면은 단지 예시적인 목적이며 제한하고자 하는 것이 아니다.
도 1은 코돈 최적화된 hCFTR mRNA를 캡슐화하는 ICE 기반의 LNP로 치료한지 24시간 후의 마우스의 폐에서 인간 낭포성 섬유증 막관통 전도도 조절제(hCFTR) 단백질에 대한 예시적 면역조직화학적 검출을 도시한 것으로, b = 미치료 마우스의 폐에서의 10x 및 20x 배율의 이미지를 각각 도시한다. c, d = CO-hCFTR mRNA ICE LNP로 치료한 마우스의 폐에서의 10x 및 20x 배율의 이미지를 각각 도시한다.
도 2 는 코돈 최적화된 hCFTR을 캡슐화하는 ICE 기반 LNP로 치료한지 24시간 후의 마우스의 폐에서 인간 CFTR 단백질에 대한 예시적인 면역조직화학적 검출을 도시한 것이다. a, b = 미처리 마우스의 폐에서의 10x 및 20x 배율의 이미지를 각각 도시한다. c, d = 코돈 최적화된(CO) hCFTR mRNA ICE LNP로 치료한 마우스의 폐에서의 10x 및 20x 배율의 이미지를 각각 도시한다.
도 3은 코돈 최적화된 hCFTR mRNA를 캡슐화하는 ICE계 분무화된 지질 나노입자(LNP)(5% PEG)로 치료한지 24시간 후의 랫트의 폐에서 인간 낭포성 섬유증 막관통 전도도 조절제(hCFTR) 단백질에 대한 예시적 면역조직화학적 검출을 도시한 것이다.
도 4는 코돈 최적화된 hCFTR을 캡슐화하는 ICE계 LNP(5% PEG)를 기관 내 투여하여 치료한지 24시간 후의 랫트의 폐에서 hCFTR 단백질에 대한 예시적인 면역조직화학적 검출을 도시한 것이다.
도 5는 코돈 최적화된(CO) hCFTR mRNA를 캡슐화하는 ICE계 분무화된 LNP(3% PEG)로 치료한지 24시간 후의 랫트의 폐에서 인간 CFTR 단백질에 대한 예시적인 면역조직화학적 검출을 도시한 것이다.
도 6은 코돈 최적화된 hCFTR을 캡슐화하는 ICE계 LNP(3% PEG)를 (Microsprayer로) 기관 내 투여하여 치료한지 24시간 후의 랫트의 폐에서 인간 CFTR 단백질에 대한 예시적인 면역조직화학적 검출을 도시한 것이다.
도 7은 코돈 최적화된(CO) hCFTR mRNA를 캡슐화하는 ICE 기반 분무화된 LNP(N/P=2)로 치료한지 24시간 후의 CFTR KO(넉아웃) 마우스의 폐에서 인간 CFTR 단백질에 대한 예시적인 면역조직화학적 검출을 도시한 것이다.
도 8은 코돈 최적화된(CO) hCFTR mRNA를 캡슐화하는 ICE 기반 분무화된 LNP(N/P=4)로 치료한지 24시간 후의 CFTR KO 마우스의 폐에서 인간 CFTR 단백질에 대한 예시적인 면역조직화학적 검출을 도시한 것이다.
도 9는 CFTR(CO-hCFTR mRNA), STOP(단백질로 전환될 수 없는 넌센스 돌연변이된 CO-hCFTR mRNA), 및 FFL(Firefly 루시페라아제 mRNA)을 포함하는 다양한 mRNA 작제물을 캡슐화하는 ICE 기반 분문화된 LNP로 처리한지 24시간 후의 야생형 마우스의 폐에서 인간 CFTR 단백질에 대한 예시적인 면역조직화학적 검출을 도시한 것이다.
도 10은 CO-hCFR mRNA를 캡슐화하는 ICE 기반 분무화된 LNP에 한 번 노출한 후 다양한 시점에 야생형 마우스의 폐에서 인간 CFTR 단백질에 대한 예시적인 면역조직화학적 검출을 도시한 것이다.
도 11은 대조군(완충액, 공 ICE LNP) 또는 CO-hCFTR mRNA가 로딩된 ICE LNP 중 하나로 치료된 랫트의 냉동 폐 절편에서 총 RNA의 μg당 CO-hCFTR mRNA의 카피 비율에 대한 예시적인 그래프를 도시한 것이다.
도 12는 대조군(완충액, 공 ICE LNP) 또는 CO-hCFTR mRNA가 로딩된 ICE LNP 중 하나로 치료된 랫트의 냉동 폐 절편에서 CFTR mRNA의 내인성 수준에 대한 CO-hCFTR 카피의 배수 증가에 대한 예시적인 그래프를 도시한 것이다.
도 13은 CO-hCFR mRNA를 캡슐화하는 ICE 기반 분무화된 LNP의 다양한 투여량에 한 번 노출한 후 랫트의 폐에서 인간 CFTR 단백질에 대한 예시적인 면역조직화학적 검출을 도시한 것이다.
도 14a 및 도 14b는 분지형 PEI(도 14a) 또는 ICE(도 14b)로 제형화된 hCFTR mRNA의 다양한 투여량이 대조군에 비해 랫트의 호흡 속도에 미치는 영향에 대한 예시적인 그래프를 도시한 것이다.
도 15는 hCFTR mRNA에 의해 유도된 염화물-이온 채널 활성의 투여량 반응을 나타내는 예시적인 그래프를 도시한 것이다.
정의
본 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여, 먼저 특정 용어를 아래와 같이 정의한다. 다음의 용어들 및 기타 용어들에 대한 추가적인 정의가 본 명세서 전체를 통하여 설명된다. 본 발명의 배경기술을 기술하고 그의 실행에 관한 추가적인 자세한 사항을 제공하도록 본원에서 참조된 출판물 및 기타 다른 참고물은 참조로서 본원에 의해 포함된다.
알킬: 본원에서 사용된 바와 같이, "알킬"은 1 내지 15개의 탄소 원자를 갖는 직쇄 또는 분지형 포화 탄화수소기의 라디칼을 지칭한다("C1-15 알킬"). 일부 구현예에서, 알킬기는 1 내지 3개의 탄소 원자를 갖는다("C1-3 알킬"). C1-3 알킬기의 예는 메틸(C1), 에틸 (C2), n-프로필(C3), 및 이소프로필(C3)을 포함한다. 일부 구현예에서, 알킬기는 8 내지 12개의 탄소 원자를 갖는다("C8-12 알킬"). C8-12 알킬기의 예는 n-옥틸(C8), n-노닐 (C9), n-데실(C10), n-운데실(C11), n-도데실(C12) 등을 포함하되, 이들로 한정되지 않는다. 접두어 "n-"(normal)은 분지되지 않은 알킬기를 의미한다. 예를 들어, n-C8 알킬은 -(CH2)7CH3을 지칭하고, n-C10 알킬은 -(CH2)9CH3을 지칭하는 등과 같다.
아미노산: 본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "아미노산"은 가장 넓은 의미로는, 폴리펩티드 사슬에 포함될 수 있는 임의의 화합물 및/또는 물질을 지칭한다. 일부 구현예에서, 아미노산은 일반적인 구조인 H2N-C(H)(R)-COHO를 갖는다. 일부 구현예에서, 아미노산은 자연 발생 아미노산이다. 일부 구현예에서, 아미노산은 합성 아미노산이고, 일부 구현예에서 아미노산은 D-아미노산이며; 일부 구현예에서 아미노산은 L-아미노산이다. "표준 아미노산"은 주로 자연발생 펩티드에서 발견되는 임의의 20종의 L-아미노산을 말한다. "비표준 아미노산"은 합성하여 제조되었는지 또는 천연 원료에서 얻은 것인지에 관계없이 표준 아미노산 이외의 임의의 아미노산을 말한다. 본원에서 사용된 바와 같이, "합성 아미노산"은 염, 아미노산 유도체(예컨대 아미드), 및/또는 치환물을 포함하는 화학적으로 변형된 아미노산을 망라하되, 이에 한정되지 않는다. 펩티드에서 카르복시- 및/또는 아미노-말단 아미노산을 포함하는 아미노산은 메틸화, 아미드화, 아세틸화, 보호기 및/또는 활성에 부정적인 영향 없이 펩티드의 순환 반감기를 변화시킬 수 있는 다른 화학적 작용기로 치환하는 것을 통해 변형될 수 있다. 아미노산은 이황화(disulfide) 결합에 참여할 수 있다. 아미노산은 예를 들어 하나 이상의 화학적 엔티티(entities)(예컨대, 메틸기, 아세테이트기, 아세틸기, 포스페이트기, 포밀 모이어티(formyl moieties), 이소프레노이드기, 설페이트기, 폴리에틸렌 글리콜 모이어티, 지질 모이어티, 탄수화물 모이어티, 바이오틴(biotin) 모이어티 등)와 같은 하나 이상의 번역후 변형을 포함할 수 있다. 용어 "아미노산"은 "아미노산 잔기"와 상호교환적으로 사용되고, 유리 아미노산 및/또는 펩티드의 아미노산 지칭할 수 있다. 유리 아미노산을 언급하는지 펩티드의 잔기를 언급하는지는 이 용어가 사용되는 문맥으로부터 분명해질 것이다.
동물(animal): 본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "동물"은 동물계의 임의의 구성원을 지칭한다. 일부 구현예에서, "동물"은 임의의 발달 단계에 있는 인간을 지칭한다. 일부 구현예에서, "동물"은 임의의 발달 단계에 있는 비인간 동물을 지칭한다. 특정 구현예에서, 비인간 동물은 포유류(예: 설치류, 마우스, 랫트, 토끼, 원숭이, 개, 고양이, 양, 소, 영장류 및/또는 돼지)이다. 일부 구현예에서, 동물은 포유류, 조류, 파충류, 양서류, 어류, 곤충, 및/또는 벌레를 포함하되 이에 한정되지 않는다. 일부 구현예에서, 동물은 유전자 도입 동물, 유전자 조작 동물 및/또는 클론일 수 있다.
대략(Approximately) 또는 약(about): 본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "대략(approximately)" 또는 "약(about)"은 하나 이상의 관심 값에 적용되는 경우, 명시된 기준 값과 유사한 값을 지칭한다. 특정 구현예에서, 용어 "대략" 또는 "약"은, 달리 진술되거나 달리 내용으로부터 분명한 경우가 아닌 한(이러한 숫자가 가능한 수치의 100%를 초과하는 경우를 제외함), 진술된 기준 수치의 어느 한 방향(초과 또는 미만)으로 25%, 20%, 19%, 18%, 17%, 16%, 15%, 14%, 13%, 12%, 11%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 또는 1% 이하 이내에 속하는 수치들의 범위를 말한다.
전달: 본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "전달"은 국소적인 전달과 전신 전달 둘 다를 망라한다. 예를 들어, mRNA의 전달은 mRNA가 표적 조직에 전달되고 인코딩된 단백질이 발현되고 표적 조직 내에 유지되는 상황("국소 분포" 또는 "국소 전달"이라고도 함) 및 mRNA가 표적 조직에 전달되고 암호화된 단백질이 발현되고 환자의 순환계(예컨대, 혈청)에 분비되며 전신에 분포되어 다른 조직에 의해 흡수된 상황("전신 분포" 또는 "전신 전달"이라고도 함)을 망라한다.
캡슐화: 본원에 사용된 바와 같이, 용어 "캡슐화" 또는 이의 문법적으로 동등한 표현은 mRNA 분자를 나노입자 내에 혼입하는 공정을 지칭한다.
발현: 본원에서 사용된 바와 같이, 아미노산 서열의 "발현"은 mRNA를 펩티드, 폴리펩티드, 또는 단백질로 번역하는 것, 다수의 폴리펩티드(예를 들어, 항체의 중쇄 또는 경쇄)를 온전한 단백질(예컨대, 항체)로 조립하는 것 및/또는 폴리펩티드 또는 완전히 조립된 단백질(예컨대, 항체)를 번역 후 변형시키는 것을 지칭한다. 본원에서, 용어 "발현" 및 "생산" 및 이의 문법적으로 동등한 표현은 상호교환적으로 사용된다.
기능적인(Functional): 본원에서 사용된 바와 같이, "기능적인" 생물학적 분자는 해당 분자가 특징으로 하는 성질 및/또는 활성을 나타내는 형태의 생물학적 분자이다.
반감기: 본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "반감기"는 핵산 또는 단백질 농도나 활성과 같은 양이 시작 시점에 측정된 값의 절반으로 떨어지는 데 필요한 시간이다.
개선하다(Improve), 증가하다(increase) 또는 감소하다(reduce): 본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "개선하다", "증가하다" 또는 "감소하다" 또는 이의 문법적으로 동등한 표현은 본원에 기술된 치료의 개시 이전에 동일한 대상체에서의 측정 값 또는 본원에 기술된 치료의 부재 시 대조군 대상체(또는 다수의 대조군 대상체)에서의 측정 값과 같은 베이스라인 측정 값(baseline measurement)과 관련된 값을 나타낸다. "대조군 대상체"는 치료 중인 대상과 동일한 형태의 질환에 걸린 대상체로서, 치료 중인 대상과 비슷한 연령의 대상체이다.
불순물: 본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "불순물"은 구속된 양의 액체, 기체 또는 고체의 내부에 있는 물질로서, 표적 물질 또는 화합물의 화학적 조성과 상이한 물질을 지칭한다. 불순물은 오염물로도 지칭된다.
시험관 내(In Vitro): 본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "시험관 내(in vitro)"는 다세포 유기체 내가 아니라 예컨대, 시험관 또는 반응 용기, 세포 배양 등과 같은 인공적인 환경에서 발생하는 사건을 말한다.
생체 내(In Vivo): 본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "생체 내(in vivo)"는 인간 및 비인간 동물과 같은 다세포 유기체 내에서 발생하는 사건을 말한다. 세포 기반 시스템의 맥락에서, 상기 용어는 (예를 들어, 시험관 내 시스템에 반대되는) 활세포 내에서 발생하는 사건을 지칭하도록 사용될 수 있다.
단리된(isolated): 본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "단리된"은 (1) 최초에 생산되었을 때(자연적이고/이거나 실험 환경이거나) 결합된 적어도 일부의 구성 성분으로부터 분리된 및/또는 (2) 사람의 손에 의해 생산, 제조 및/또는 제작된 물질 및/또는 엔티티(entity)를 말한다. 단리된 물질 및/또는 엔티티는 최초에 결합된 다른 구성 성분의 약 10%, 약 20%, 약 30%, 약 40%, 약 50%, 약 60%, 약 70%, 약 80%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99%, 또는 약 99% 초과로 분리될 수 있다. 일부 구현예에서, 단리된 제제는 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99%, 또는 약 99% 보다 높은 순도이다. 본원에서 사용된 바와 같이, 물질이 실질적으로 다른 성분을 가지지 않는 경우, 이러한 물질은 "순수"하다. 본원에서 사용된 바와 같이, 단리된 물질 및/또는 엔티티의 순도 백분율의 계산에는 부형제(예컨대, 완충액, 용매, 물 등)가 포함되지 않아야 한다.
국소 분포 또는 전달: 본원에서 사용되는 용어 "국소 분포", "국소 전달" 또는 이의 문법적 등가물은 조직 특이적 전달 또는 분포를 지칭한다. 일반적으로, 국소 분포 또는 전달은 mRNA에 의해 암호화된 단백질 또는 펩티드가 세포 내에서 번역되고 발현되거나, 제한적으로 분비되어 환자의 순환계 내로 들어가지 않는 것이 필요하다.
전령 RNA(mRNA): 본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "전령 RNA(messenger RNA 또는 mRNA)"는 적어도 하나의 폴리펩티드를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 지칭한다. 본원에서 사용된 바와 같이, mRNA는 변형 및 비변형 RNA 둘 다를 망라한다. mRNA는 하나 이상의 코딩 및 비코딩 영역을 함유할 수 있다. mRNA는 천연 공급원으로부터 정제될 수 있고, 재조합 발현 시스템을 사용해 생산되고 선택적으로 정제될 수 있으며, 화학적 합성될 수 있다. 적절한 경우, 예컨대, 화학적으로 합성된 분자의 경우, mRNA는 화학적으로 변형된 염기 또는 당, 뼈대 변형 등을 갖는 유사체와 같은 뉴클레오시드 유사체를 포함할 수 있다. mRNA 서열은 달리 표시하지 않는 한, 5' 에서 3' 방향으로 제시된다. 일부 구현예에서, mRNA는 천연 뉴클레오시드(예컨대, 아데노신, 구아노신, 시티딘, 우리딘); 뉴클레오시드 유사체(예컨대, 2-아미노아데노신, 2-티오티미딘, 이노신, 피롤로-피리미딘, 3-메틸 아데노신, 5-메틸시티딘, C-5 프로피닐-시티딘, C-5 프로피닐-우리딘, 2-아미노아데노신, C5-브로모우리딘, C5-플루오로우리딘, C5-아이오도우리딘, C5-프로피닐-우리딘, C5-프로피닐-시티딘, C5-메틸시티딘, 2-아미노아데노신, 7-데아자아데노신, 7-데아자구아노신, 8-옥소아데노신, 8-옥소구아노신, O(6)-메틸구아닌, 및 2-티오시티딘); 화학적으로 변형된 염기; 생물학적으로 변형된 염기(예컨대, 메틸화된 염기); 삽입된 염기; 변형된 당(예컨대, 2'-플루오로리보스, 리보스, 2'-디옥시리보스, 아라비노오스 및 헥소오스); 및/또는 변형된 포스페이트기(예컨대, 포스포로티오에이트 결합 및 5'-N-포스포아미다이트 결합)이거나 이를 포함한다.
일부 구현예에서, mRNA는 하나 이상의 비표준 뉴클레오티드 잔기를 포함한다. 비표준 뉴클레오티드 잔기는, 예를 들어, 5-메틸- 시티딘("5mC"), 슈도우리딘("__U"), 및/또는 2-티오-우리딘("2sU")을 포함할 수 있다. 이러한 잔기 및 이들의 mRNA로의 혼입에 대한 논의는 예를 들어 미국 특허 제8,278,036호 또는 WO2011012316을 참조한다. mRNA는 25%의 U 잔기가 2-티오-우리딘이고 25%의 C 잔기는 5-메틸시티딘인 RNA로서 정의되는 RNA일 수 있다. RNA의 사용에 대한 교시는 미국 특허 공개 US 2012/0195936 및 국제 공개 WO 2011/012316에 개시되어 있으며, 이들 모두는 그 전체가 참조로서 본원에 통합된다. 비표준 뉴클레오티드 잔기의 존재는 동일한 서열을 가지되 표준 잔기만을 함유하는 대조군 mRNA보다 mRNA를 더 안정시킬 수 있고/있거나 면역원성을 덜 가지게 할 수 있다. 다른 구현예에서, mRNA는 이소시토신, 슈도이소시토신, 5-브로모우라실, 5-프로피닐우라실, 6-아미노퓨린, 2-아미노퓨린, 이노신, 디아미노퓨린 및 2-클로로-6- 아미노퓨린 시토신뿐만 아니라 이들 변형체 및 다른 핵염기의 변형체의 조합으로부터 선택된 하나 이상의 비표준 뉴클레오티드 잔기를 포함할 수 있다. 특정 실시예는 푸라노오스 고리 또는 뉴클레오염기에 대한 추가 변형체를 추가로 포함할 수 있다. 추가 변형체는 예를 들어 당 변형체 또는 치환체(예를 들어, 2'-O-알킬 변형체, 잠금 핵산(LNA) 중 하나 이상)를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, RNA는 추가 폴리뉴클레오티드 및/또는 펩티드 폴리뉴클레오티드(PNA)와 복합체를 구성하거나 혼성화될 수 있다. 당 변형체가 2'-O-알킬 변형체인 구현예에서, 이러한 변형체는 2'-데옥시-2'-플루오로 변형체, 2'-O-메틸 변형체, 2'-O- 메톡시에틸 변형체 및 2'-데옥시 변형체를 포함할 수 있지만, 이에 한정되지 않는다. 특정 구현예에서, 이들 변형체 중 임의의 하나는 뉴클레오티드의 0~100% 중에 - 예를 들어, 구성성분 뉴클레오티드의 0%, 1%, 10%, 25%, 50%, 75%, 85%, 90%, 95%, 또는 100% 초과 중에 개별적으로 또는 조합하여 존재할 수 있다.
핵산: 본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "핵산"은 가장 넓은 의미로 폴리뉴클레오티드 사슬내에 포함되어 있거나 포함될 수 있는 임의의 화합물(compound) 및/또는 물질을 말한다. 일부 구현예에서, 핵산은 인산디에스테르 결합(phosphodiester linkage)을 통해 폴리뉴클레오티드 사슬내에 포함되거나 포함될 수 있는 화합물 및/또는 물질이다. 일부 구현예에서, "핵산"은 개별 핵산 잔기(예컨대, 뉴클레오티드 및/또는 뉴클레오시드)를 지칭한다. 일부 구현예에서, "핵산"은 개별 핵산 잔기를 포함하는 폴리뉴클레오티드 사슬을 지칭한다. 일부 구현예에서, "핵산"은 RNA뿐만 아니라 단일 및/또는 이중 가닥 DNA 및/또는 cDNA를 망라한다. 또한, 용어 "핵산", "DNA", "RNA", 및/또는 유사한 용어는 핵산 유사체, 즉, 포스포디에스테르 백본 이외의 것을 갖는 유사체를 포함한다. 예를 들어, 당업계에 공지되어 있고, 백본 내에 인산디에스테르 결합 대신에 펩티드 결합을 갖는, 소위 "펩티드 핵산"은 본 발명의 범위 내에 포함되는 것으로 간주된다. 용어 "아미노산 서열을 암호화하는 뉴클레오티드 서열"은 서로의 퇴화 버전이고/이거나 동일한 아미노산 서열을 암호화하는 모든 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 단백질을 암호화하는 뉴클레오티드 서열 및/또는 RNA는 인트론을 포함할 수 있다. 핵산은 천연 공급원으로부터 정제될 수 있고, 재조합 발현 시스템을 사용하여 생산될 수 있고, 선택적으로 정제될 수 있으며, 화학적으로 합성될 수 있다. 적절한 경우, 예컨대, 화학적으로 합성된 분자의 경우, 핵산은 화학적으로 변형된 염기 또는 당, 백본 변형체 등을 갖는 유사체와 같은 뉴클레오시드 유사체를 포함할 수 있다. 핵산 서열은 달리 표시하지 않는 한, 5' 에서 3' 방향으로 제시된다. 일부 구현예에서, 핵산은 천연 뉴클레오시드(예컨대, 아데노신(adenosine), 티미딘(thymidine), 구아노신(guanosine), 시티딘(cytidine), 우리딘(uridine), 데옥시티미딘(deoxythymidine), 데옥시구아노신(deoxyguanosine, 및 데옥시시티딘(deoxycytidine)); 뉴클레오시드 유사체(예컨대, 2-아미노아데노신(2-aminoadenosine), 2-티오티미딘(2-thiothymidine), 이노신(inosine), 피롤로-피리미딘(pyrrolo-pyrimidine), 3-메틸 아데노신(3-methyl adenosine), 5-메틸시티딘(5-methylcytidine), C-5 프로피닐-시티딘(C-5 propynyl-cytidine), C-5 프로피닐-우리딘(C-5 propynyl-uridine), 2-아미노아데노신(2-aminoadenosine), C5-브로모우리딘(C5-bromouridine), C5-플루오로우리딘(C5-fluorouridine), C5-아이오도우리딘(C5-iodouridine), C5-프로피닐-우리딘(C5-propynyl-uridine), C5-프로피닐-시티딘(C5-propynyl-cytidine), C5-메틸시티딘(C5-methylcytidine), 2-아미노아데노신(2-aminoadenosine), 7-데아자아데노신(7-deazaadenosine), 7-데아자구아노신(7-deazaguanosine), 8-옥소아데노신(8-oxoadenosine), 8-옥소구아노신(8-oxoguanosine), O(6)-메틸구아닌(O(6)-methylguanine), 및 2-티오시티딘(2-thiocytidine); 화학적으로 변형된 염기; 생물학적으로 변형된 염기(예컨대, 메틸화된 염기); 삽입된 염기; 변형된 당(예컨대, 2'-플루오로리보스(fluororibose), 리보스(ribose), 2'-디옥시리보스(deoxyribose), 아라비노오스(arabinose) 및 헥소오스(hexose)); 및/또는 변형된 포스페이트기(예컨대, 포스포로티오에이트(phosphorothioates) 결합 및 5'-N-포스포아미다이트 결합)이거나 이를 포함한다. 일부 구현예에서, 본 발명은 구체적으로는, 전달을 용이하게 하거나 전달을 달성하기 위해 화학적으로 변현되지 않은, 핵산(예를 들어, 뉴클레오티드 및/또는 뉴클레오시드를 포함하는 뉴클레오티드 및 잔기)를 의미하는 "비변형 핵산"에 관한 것이다.
환자: 본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "환자" 또는 "대상체"는 제공된 조성물이, 예를 들어, 실험, 진단, 예방, 미용 및/또는 치료를 목적으로 투여될 수 있는 임의의 유기체를 지칭한다. 전형적인 환자는 동물(예컨대, 마우스, 랫트, 토끼, 비인간 영장류 및/또는 인간과 같은 포유동물)을 포함한다. 일부 구현예에서, 환자는 인간이다. 인간은 출생-전 및 출생-후 형태를 포함한다.
약학적으로 허용가능한(pharmaceutically acceptable): 본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "약학적으로 허용가능한"은 철저한 의학적 판단의 범주내에서 과도한 독성, 자극 알러지 반응, 또는 다른 문제 또는 합병증, 비례하는 합리적인 유익/위험 비율(benefit/risk ratio) 없이 인간과 동물의 조직과의 접촉에 있어 사용에 적합한 물질을 말한다.
약학적으로 허용가능한 염: 약학적으로 허용가능한 염은 당업계에 잘 알려져 있다. 예를 들어, S. M. Berge 등은 약학적으로 허용가능한 염에 대해 J. Pharmaceutical Sciences (1977) 66:1-19에 상세하게 기술하고 있다. 본 발명의 화합물의 약학적으로 허용가능한 염은 적합한 무기 및 유기 산과 염기로부터 유래된 것들을 포함한다. 약학적으로 허용 가능한 비독성 산 첨가염의 예는 예컨대 염산, 브롬화수소산, 인산, 황산 및 과염소산과 같은 무기산 또는 예컨대 아세트산, 옥살산, 말레산, 타르타르산, 시트르산, 숙신산, 또는 말론산과 같은 유기산으로형성된 아미노기의 염 또는 이온교환과 같은 당해 기술분야에서 사용되는 다른 방법을 사용하여형성된 아미노기의 염이다. 기타 약학적으로 허용 가능한 염은 아디핀산염(adipate), 알지네이트(alginate), 아스코르브산염(ascorbate), 아스파르트산염(aspartate), 벤젠술폰산염(benzenesulfonate), 벤조산염(benzoate), 중황산염(bisulfate), 붕산염(borate), 낙산염(butyrate), 장뇌산염(camphorate), 장뇌술폰산염(camphorsulfonate), 구연산염(citrate), 시클로펜탄프로피오네이트(cyclopentanepropionate), 디글루코네이트(digluconate), 도데실설페이트(dodecylsulfate), 에탄술폰산염(ethanesulfonate), 포름산염(formate), 푸마르산염(fumarate), 글루코헵토네이트(glucoheptonate), 글리세로인산염(glycerophosphate), 글루코네이트(gluconate), 헤미설페이트(hemisulfate), 헵타노에이트(heptanoate), 헥사노에이트(hexanoate), 요오드화수소산염(hydroiodide), 2-히드록시-에탄술폰산염(2-hydroxy-ethanesulfonate), 락토바이온산염(lactobionate), 젖산염(lactate), 라우린산염(laurate), 라우릴설페이트(lauryl sulfate), 말산염(malate), 말레산염(maleate), 말론산염(malonate), 메탄술폰산염(methanesulfonate), 2-나프탈렌술폰산염(2-naphthalenesulfonate), 니코티네이트(nicotinate), 질산염(nitrate), 올레산염(oleate), 옥살산염(oxalate), 팔미트산염(palmitate), 파모산염(pamoate), 펙티닝산염(pectinate), 과황산염(persulfate), 3-페닐프로피온산염(3-phenylpropionate), 인산염(phosphate), 피크르산염(picrate), 피발산염(pivalate), 프로피온산염(propionate), 스테아르산염(stearate), 숙신산염(succinate), 황산염(sulfate), 주석산염(tartrate), 티오시안산염(thiocyanate), p-톨루엔술폰산염(p-toluenesulfonate), 운데카노에이트(undecanoate), 발레르산염(valerate salts) 등을 포함한다. 적절한 염기로부터 유래된 염은 알칼리 금속, 알칼리 토금속, 암모늄 및 N+(C1-4 알킬)4 염을 포함한다. 대표적인 알칼리 또는 알칼리 토금속 염은 나트륨, 리튬, 칼륨, 칼슘, 마그네슘 등을 포함한다. 추가적인 약학적으로 허용가능한 염은 적절한 경우, 비독성 암모늄, 4급 암모늄, 및 할로겐화물, 수산화물, 카르복시산염(carboxylate), 황산염, 인산염, 질산염, 설폰산염 및 아릴 설폰산염과 같은 반대 이온(counterion)을 사용하여 형성된 아민 양이온을 포함한다. 추가적인 약학적으로 허용가능한 염은 예컨대 알킬 할로겐화물과 같은 적절한 친전자물질을 사용하여 4급 알킬 아미노염(quarternized alkylated amino salt)을 형성하는 아민의 4급화로 형성된 염을 포함한다.
대상체(subject): 본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "대상체"는 인간 또는 임의의 비인간 동물(예컨대, 마우스, 랫트, 토끼, 개, 고양이, 소, 돼지, 양, 말 또는 영장류)를 지칭한다. 인간은 출생-전 및 출생-후 형태를 포함한다. 많은 구현예에서, 대상체는 인간이다. 대상체는 의료 제공자에게 질환의 진단 또는 치료를 위해 가는 인간을 지칭하는, 환자일 수 있다. 용어 "대상체"는 본원에서 "개체" 또는 "환자"와 상호 교환 가능하게 사용된다. 대상체는 질환 또는 장애(예를 들어, 낭포성 섬유증)로 앓고 있거나 이에 걸리기 쉽지만, 질환 또는 장애의 증상을 나타내거나 나타내지 않을 수 있다.
실질적으로(substantially): 본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "실질적으로(substantially)"는 관심 특징 또는 속성의 전체 또는 거의 전체 범위 또는 정도를 나타내는 정질적인(qualititave) 상태를 말한다. 생물학 분야의 당업자라면 생물학적 및 화학적 현상이 완전해지고/되거나, 진행되어 완전해지거나, 절대적인 결과를 달성하거나 회피하는 것은 (설사 있다 하더라도) 드물다는 것을 이해할 것이다. 그러므로, 용어 "실질적으로"는 많은 생물학적 및 화학적 현상에 고유한 완전함의 잠재적 결핍을 담아내는 데 사용된다.
전신 분포 또는 전달(Systemic distribution or delivery): 본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "전신 분포" 또는 "전신 전달" 또는 문법적으로 동등한 표현은 전신 또는 전체 유기체에 영향을 주는 전달 또는 분포 메커니즘 또는 접근법을 말한다. 일반적으로 전신 분포 또는 전달은 예컨대 혈류와 같은 신체의 순환계를 통해 달성된다. "국소 분포 또는 전달"의 정의와 비교됨.
표적 조직(Target tissues): 본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "표적 조직"은 치료 대상 질환이 발생된 임의의 조직을 말한다. 일부 구현예에서, 표적 조직은 질환 관련 병리학, 증상 또는 특징을 나타내는 이들 조직을 포함한다.
전달 비히클(transfer vehicle): 일부 구현예에서, 전달 비히클은 리포좀성 소낭이거나, 표적 세포 및 조직에 대한 핵산의 전달을 용이하게 하는 다른 수단일 수 있다. 적합한 전달 비히클은 리포좀, 나노리포좀, 세라믹 함유 나노리포좀, 프로테오리포좀, 나노미립자, 인산칼슘 나노미입자, 인산칼슘 나노미립자, 이산화규소 나노미입자, 나노결정 미립자, 반도체 나노미립자, 폴리(D-아르기닌), 나노덴드리머, 전분계 전달 시스템, 미셸, 유화제, 니오솜, 플라스미드, 바이러스, 인산칼슘 뉴클레오티드, 앱타머(aptamer), 펩티드, 및 다른 벡터 태그를 포함하지만, 이들로 한정되지 않는다. 적합한 전달 비히클로서 바이오 나노캡슐(bionanocapsules) 및 다른 바이러스 캡시드 조립체의 사용하는 것도 고려된다. (Hum. Gene Ther. 2008년 9월; 19(9):887-95 참조).
치료 유효량(Therapeutically effective amount): 본원에서 사용된 바와 같이, 용어 치료제의 "치료 유효량"은 질환, 장애 및/또는 질병을 앓고 있거나 이에 취약한 대상에게 투여했을 때, 질환, 장애 및/또는 질병의 증상(들)의 발현을 치료, 진단, 예방 및/또는 지연하는 데 충분한 양을 의미한다. 당업자라면 치료 유효량이 일반적으로 적어도 하나의 단위 투여량을 포함하는 투여 요법을 통해 투여되는 것을 인정할 것이다.
치료하는(treating): 본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "치료(treat, treatment 또는 treating)"는 부분적으로 또는 완벽하게 특정한 질환, 장애 및/또는 질병의 하나 이상의 증상 또는 특징을 경감시키고, 개선시키고, 완화시키고, 억제하고, 예방하고, 발병을 지연시키고, 중증도를 감소 시키고/시키거나 이의 빈도를 감소시키는 임의의 방법을 말한다. 질환의 징후를 보이지 않고/않거나 질환의 초기 징후만을 보이는 대상에게 질환과 관련된 병상이 생길 위험을 감소시킬 목적으로 치료가 시행될 수 있다.
수율: 본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "수율(yield)"은 출발 물질로서의 총 mRNA과 비교해 캡슐화 후 회수된 mRNA의 백분율을 지칭한다. 일부 구현예에서, 용어 "회수(recovery)"는 용어 "수율"과 상호 교환적으로 사용된다.
본 발명은 무엇보다도, 본원에 기술된 바와 같은 스테롤계 양이온 지질, 헬퍼 지질, 및 PEG 또는 PEG-변형된 지질을 포함하는 개선된 리포솜을 사용하여 mRNA를 생체 내에서 전달하기 위한 방법 및 조성물을 제공한다.
지질 나노입자
본 발명에 따르면, 본원에 기술된 적합한 조성물은 핵산, 및 핵산을 캡슐화하는 지질 나노입자를 포함하며, 상기 지질 나노입자는 구별되는 지질 성분을 포함한다. 일부 구현예에서, 3개 이하의 구별되는 지질 성분 및 예시적인 구별되는 지질 성분은 스테롤계 양이온 지질, 헬퍼 지질(예를 들어, 비양이온성 지질), 및 PEG-변형된 지질을 포함한다.
일부 구현예에서, 지질 나노입자는 적어도 약 50%, 약 55%, 약 60%, 약 65%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 85%, 약 90%, 또는 약 95%의 핵산 캡슐화 백분율을 갖는다.
일부 구현예에서, 조성물에서 핵산을 캡슐화하는 지질 나노입자의 백분율은 적어도 약 50%, 약 55%, 약 60%, 약 65%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 85%, 약 90%, 또는 약 95%이다.
스테롤계 양이온 지질
본원에서 사용된 바와 같이, 문구 "스테롤계 지질" 또는 "스테롤계 양이온 지질"은 스테로이드 모이어티를 포함하는 양이온성 지질을 지칭한다. 본원에서 사용된 바와 같이, 문구 "양이온 지질"은 생리적인 pH와 같이 선택된 pH로 순 양전하(net positive charge)를 운반하는 많은 지질 종 중 임의의 것을 지칭한다.
구현예에서, 스테롤계 양이온 지질은 화학식 (A),
B-L1-S (화학식 A), 또는 이들의 양성자화된 형태에 따른 구조를 갖는다. B는 염기성 작용기(예를 들어, 양성자화 형태는 약 8.0 이하의 pKa를 가짐)이다.
L1은 선택적으로 치환된 (예를 들어, C1-C20 알킬렌 또는 2 내지 20-원의 헤테로알킬렌) 연결기이다.
S는 스테롤이다.
일부 구현예에서, B는 양성자화된 형태가 약 9.0, 약 8.5, 약 8.0, 약 7.5, 또는 약 7.0 이하의 pKa를 갖는 염기성 작용기이다. 일부 구현예에서, B는 양성자화된 형태가 약 8.0 또는 약 7.5 이하의 pKa를 갖는 염기성 작용기이다.
일부 구현예에서, B는 양성자화된 형태가 약 4.0 내지 약 9.0, 약 4.0 내지 약 8.0, 약 4.5 내지 약 8.0, 약 5.0 내지 약 8.0, 약 5.5 내지 약 8.0, 또는 약 6.0 내지 약 8.0의 pKa를 갖는 염기성 작용기이다.
일부 구현예에서, B는 선택적으로 치환된, 질소를 함유하는 5 내지 6-원의 헤테로아릴이다.
일부 구현예에서, B는 각각이 선택적으로 치환된 피롤일, 이미다졸릴, 피라졸일, 트리아졸일, 테트라졸일, 피리딜, 피리미딜, 피라진일 및 피리다진일로부터 선택된 기이다. 본원에 기술된 임의의 선택적으로 치환된 기(예를 들어, 0, 1, 2, 3, 또는 4개의 독립적인 치환기를 갖는 기)의 경우, 예시적인 치환기는 할로겐(예를 들어, -F, -Cl, -Br, 또는 -I), C1-20 알킬(예를 들어, C1-6 알킬), C1-20 할로알킬(예를 들어, C1-6 할로알킬), -CN, -OH, -O(C1-20 알킬)(예: -O(C1-6 알킬)), -O(C1-20 할로알킬)(예를 들어, -O(C1-6 할로알킬)), -NH2, -NH(C1-6 알킬), 및 -NH(C1-6 알킬)2를 포함하되, 이들로 한정되지 않는다.
일부 구현예에서, B는 각각이 선택적으로 치환된 피롤일, 피라졸일, 트리아졸일, 테트라졸일, 피리딜, 피리미딜, 피라진일 및 피리다진일로부터 선택된 기이다.
일부 구현예에서, B는 각각이 선택적으로 치환된 피롤일, 피라졸일, 트리아졸일, 테트라졸일, 피리미딜, 피라진일 및 피리다진일로부터 선택된 기이다.
일부 구현예에서, L1은 선택적으로 치환된 C1-C20 알킬렌 연결기(예를 들어, 선택적으로 치환된 C1-C10 알킬렌 연결기 또는 선택적으로 치환된 C1-C5 알킬렌 연결기)이다. 본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "알킬렌"은 포화된 2가 직쇄 또는 분지쇄 탄화수소기를 나타내며 메틸렌, 에틸렌, 이소프로필렌 등에 의해 예시된다.
일부 구현예에서, L1은 선택적으로 치환된 2 내지 20-원의 헤테로알킬렌 연결기(예를 들어, 선택적으로 치환된 2 내지 12-원의 헤테로알킬렌 연결기 또는 선택적으로 치환된 2 내지 6-원의 헤테로알킬렌 연결기)이다. 본원에 사용된 바와 같이, 용어 "헤테로알킬렌"은 2가 헤테로알킬기를 지칭한다. 용어 "헤테로알킬기"는 기재된 수의 원자들을 갖는 안정한 직쇄 또는 분지쇄 탄화수소 라디칼을 지칭하며, 원자는 탄소, 및 O, N, Si 및 S로 이루어진 군으로부터 선택된 1 내지 3개의 헤테로원자를 포함하고, 질소 및 황 원자는 선택적으로 산화될 수 있으며 질소 헤테로원자는 선택적으로 사분화(quarternized)될 수 있다. 헤테로원자(들) O, N 및 S는 헤테로알킬기의 임의의 내부 위치에 배치될 수 있다.
일부 구현예에서, L1은 선택적으로 치환된 2 내지 20-원의 헤테로알킬렌 연결기이며, L1은 비펩티드성이다(즉, L1은 아미노산 잔기를 포함하지 않은 비펩티드성 연결기임).
일부 구현예에서, L1은 에스테르기, 아미드기, 카르바메이트기, 카보네이트기, 또는 우레아기인 모이어티를 포함하는 연결기이다.
일부 구현예에서, L1은 아미드기, 카르바메이트기, 카보네이트기, 또는 우레아기인 모이어티를 포함하는 연결기이다.
일부 구현예에서, L1은 아미드기, 카보네이트기, 또는 우레아기인 모이어티를 포함하는 연결기이다.
일부 구현예에서, L1은 다음의 화학식으로 표현되는 연결기이다:
-X1-C(X3)-X2, -(C1-C19 알킬렌)-X1-C(X3)-X2, -X1-C(X3)-X2(C1-C19 알킬렌)-, -(C1-C19 알킬렌)-X1-, -X1-(C1-C19 알킬렌)-.
각각의 X1 및 X2는 독립적으로, 공유 결합, -O-, -S-, 또는 -NH-이고,
X3은 독립적으로 =O, =S, 또는 =NH이다.
C1-C19 알킬렌기(예를 들어, C1-C5 알킬렌 또는 C1-C10 알킬렌기)는 독립하여 선택적으로 치환된다.
일부 구현예에서, L1은 치환되지 않은 것이다.
일부 구현예에서, L1은 구조 -N(R')2 또는 이의 양전하 형태를 포함하지 않으며, 여기서 각각의 R'은 독립적으로 수소 또는 선택적으로 치환된 C1-C20 알킬이다.
일부 구현예에서, S는 동물 스테롤(zoosterol), 또는 이의 산화되거나 환원된 형태이다. 구현예에서, S는 동물스테롤이다. 구현예에서, S는 동물스테롤의 산화된 형태이다. 구현예에서, S는 동물스테롤의 환형된 형태이다.
일부 구현예에서, S는 식물스테롤(phytosterol), 또는 이의 산화되거나 환원된 형태이다. 구현예에서, S는 피토스테롤(phytosterol)이다. 구현예에서, S는 피토스테롤의 산화된 형태이다. 구현예에서, S는 피토스테롤의 환원된 형태이다.
일부 구현예에서, S는 합성 스테롤(synthetic sterol), 또는 이의 산화되거나 환원된 형태이다. 구현예에서, S는 합성 스테롤이다. 구현예에서, S는 합성 스테롤의 산화된 형태이다. 구현예에서, S는 합성 스테롤의 환원된 형태이다.
일부 구현예에서, S는 본원에 기술된 스테롤의 산화된 형태이다.
일부 구현예에서, 스테롤의 산화된 형태는 부모 스테롤이 추가 산소-함유기를 포함하도록 변형된 것이다. 구현예에서, 스테롤의 산화된 형태는 부모 스테롤과 비교해 하나 이상의(예를 들어, 1, 2, 3, 또는 4개의) 추가 히드록실기 및/또는 카르보닐-함유기(예를 들어, 케톤, 알데히드, 카르복실산, 또는 카르복실산 에스테르 모이어티)를 포함한다.
일부 구현예에서, 스테롤의 산화된 형태는 부모 스테롤이 불포화 탄소-탄소 결합(예를 들어, 탄소-탄소 이중 결합)을 포함하도록 변형된 것이다. 구현예에서, 스테롤의 산화된 형태는 부모 스테롤과 비교해 하나 이상의(예를 들어, 1, 2, 또는 3개의) 추가 탄소-탄소 이중 결합을 포함한다.
일부 구현예에서, S는 본원에 기술된 스테롤의 환원된 형태이다.
일부 구현예에서, 스테롤의 환원된 형태는 부모 스테롤이 더 적은 산소-함유기를 포함하도록 변형된 것이다. 구현예에서, 스테롤의 환원된 형태는 부모 스테롤과 비교해 감소된 수의(예를 들어, 모이어티가 1, 2, 3, 또는 4개 더 적은) 히드록실기 및/또는 카르보닐-함유기(예를 들어, 케톤, 알데히드, 카르복실산, 또는 카르복실산 에스테르 모이어티)를 포함한다.
일부 구현예에서, 스테롤의 환원된 형태는 부모 스테롤이 더 적은 수의 불포화 탄소-탄소 결합(예를 들어, 탄소-탄소 이중 결합)을 포함하도록 변형된 것이다. 구현예에서, 스테롤의 환원된 형태는 부모 스테롤과 비교해 감소된 수의(예를 들어, 1, 2, 또는 3개가 더 적은) 탄소-탄소 이중 결합을 포함한다.
일부 구현예에서, S는 콜레스테롤, 알킬 리토콜레이트, 스티그마스테롤, 스티그마스탄올, 캄페스테롤, 에르고스테롤, 또는 시토스테롤, 또는 이들의 임의의 산화되거나 환원된 형태인 스테롤이다.
일부 구현예에서, S는 콜레스테롤, 콜레스테롤의 산화된 형태, 콜레스테롤의 환원된 형태, 알킬 리토콜레이트, 스티그마스테롤, 스티그마스탄올, 캄페스테롤, 에르고스테롤, 및 시토스테롤으로부터 선택된 스테롤이다.
일부 구현예에서, S는 콜레스테롤의 산화된 형태, 콜레스테롤의 환원된 형태, 알킬 리토콜레이트, 스티그마스테롤, 스티그마스탄올, 캄페스테롤, 에르고스테롤, 및 시토스테롤으로부터 선택된 스테롤이다.
일부 구현예에서, S는 콜레스테롤, 알킬 리토콜레이트, 스티그마스테롤, 스티그마스탄올, 캄페스테롤, 에르고스테롤, 또는 시토스테롤인 스테롤이다.
일부 구현예에서, S는 콜레스테롤, 알킬 리토콜레이트, 스티그마스테롤, 스티그마스탄올, 캄페스테롤, 에르고스테롤, 또는 시토스테롤의 산화된 형태인 스테롤이다.
일부 구현예에서, S는 콜레스테롤, 알킬 리토콜레이트, 스티그마스테롤, 스티그마스탄올, 캄페스테롤, 에르고스테롤, 또는 시토스테롤의 환원된 형태인 스테롤이다.
일부 구현예에서, S는 콜레스테롤, 콜레스테롤의 산화된 형태, 또는 콜레스테롤의 환원된 형태인 스테롤이다.
일부 구현예에서, S는 알킬 리토콜레이트, 알킬 리토콜레이트의 산화된 형태, 또는 알킬 리토콜레이트의 환원된 형태인 스테롤이다.
일부 구현예에서, S는 스티그마스테롤, 스티그마스테롤의 산화된 형태, 또는 스티그마스테롤의 환원된 형태인 스테롤이다.
일부 구현예에서, S는 스티그마스탄올, 스티그마스탄올의 산화된 형태, 또는 스티그마스탄올의 환원된 형태인 스테롤이다.
일부 구현예에서, S는 캄페스테롤, 캄페스테롤의 산화된 형태, 또는 캄페스테롤의 환원된 형태인 스테롤이다.
일부 구현예에서, S는 에르고스테롤, 에르고스테롤의 산화된 형태, 또는 에르고스테롤의 환원된 형태인 스테롤이다.
일부 구현예에서, S는 시토스테롤, 시토스테롤의 산화된 형태, 또는 시토스테롤의 환원된 형태인 스테롤이다.
일부 구현예에서, S는 담즙산(bile acid) 또는 이의 알킬 에스테르이거나, 이의 산화된 형태, 또는 이의 환원된 형태인 스테롤이다.
일부 구현예에서, S는 콜산(cholic acid) 또는 이의 알킬 에스테르이거나, 이의 산화된 형태, 또는 이의 환원된 형태인 스테롤이다.
일부 구현예에서, S는
Figure pct00021
Figure pct00022
Figure pct00023
Figure pct00024
Figure pct00025
(콜산)으로부터 선택된 스테롤이며, 여기서 R은 선택적으로 치환된 C1-C20 알킬이고, R'은 H 또는 선택적으로 치환된 C1-C20 알킬이다.
일부 구현예에서, S는
Figure pct00026
(콜레스테롤)인 스테롤이다.
일부 구현예에서, S는
Figure pct00027
Figure pct00028
Figure pct00029
Figure pct00030
Figure pct00031
(콜산)으로부터 선택된 스테롤이며, 여기서, R은 선택적으로 치환된 C1-C20 알킬이고, R'은 H 또는 선택적으로 치환된 C1-C20 알킬이다.
일부 구현예에서, 스테롤계 양이온 지질은 이미다졸 콜레스테롤 에스테르(ICE)를 포함한다.
일부 구현예에서, 스테롤계 양이온 지질은 아졸 콜레스테롤 에스테르(ICE)를 포함하지 않는다.
일부 구현예에서, 스테로롤계 양이온 지질은 콜레스테롤계 양이온 지질이다. 이러한 콜레스테롤계 양이온 지질은 단독으로 사용되거나 본원에 기술된 다른 지질과 조합하여 사용될 수 있다. 적합한 콜레스테롤계 양이온 지질은, 예를 들어, DC-콜레스테롤(N,N-디메틸-N-에틸카르복스아미도콜레스테롤), 1,4-비스(3-N-올레일아미노-프로필)피페라진을 포함한다(Gao, 등의 Biochem. Biophys. Res. Comm. 179, 280 (1991); Wolf 등의 BioTechniques 23, 139 (1997); 미국 특허 제5,744,335호 참조).
구현예에서, 스테롤계 양이온 지질은 디알킬아미노-, 이미다졸-, 및 구아니디늄-함유 스테롤계 양이온 지질이다. 예를 들어, 특정 구현예는 아래의 구조식 (I)로 표시된 바와 같이, 이미다졸, 예를 들어, 이미다졸 콜레스테롤 에스테르 또는 "ICE" 지질(3S, 10R, 13R, 17R)-10, 13-디메틸-17-((R)-6-메틸헵탄-2-일)-2, 3, 4, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17-테트라데카하이드로-1H-시클로펜타[a]페난트란-3-일 3-(1H-이미다졸-4-일)프로파노에이트를 포함하는 하나 이상의 스테롤계 양이온 지질을 포함하는 조성물에 관한것이다. 특정 구현예에서, 구조식 (I)로 표시된 바와 같이, 기능 단백질(functional protein)을 암호화하는 RNA(예: mRNA)를 전달하기 위한 지질 나노입자는 하나 이상의 이미다졸계 양이온 지질, 예를 들어, 이미다졸 콜레스테롤 에스테르 또는 "ICE" 지질(3S, 10R, 13R, 17R)-10, 13-디메틸-17-((R)-6-메틸헵탄-2-일)-2, 3, 4, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17-테트라데카하이드로-1H-시클로펜타[a]페난트란-3-일 3-(1H-이미다졸-4-일)프로파노에이트를 포함할 수 있다.
Figure pct00032
구조식 (I)의 예시적인 가수분해 반응이 반응식 1에 제공된다.
Figure pct00033
특정 이론에 구속되고자 하는 것은 아니지만, 이미다졸계 양이온 지질인 ICE의 융해성(fusogenicity)은 종래의 양이온성 지질에 비해 낮은 pKa를 갖는 이미다졸 작용기에 의해 촉진되는 엔도솜 파괴와 관련이 있는 것으로 여겨진다. 엔도솜 파괴는 결국 삼투성 팽윤(osmotic swelling)과 리포좀막의 파괴를 촉진하고, 이어서 그 안에 로딩되거나 캡슐화된 폴리뉴클레오티드 내용물을 표적 세포 내로 형질감염시키거나 세포 내 방출시킨다.
이미다졸계 양이온 지질은 또한 다른 양이온 지질에 비해 독성이 감소된 것을 특징으로 한다. 일부 구현예에서, 블렌딩된 약제학적 조성물을 포함하는 지질 나노입자 중 하나 이상은, 이러한 블렌딩된 약제학적 조성물에서 독성이 더 강한 다른 양이온 지질의 상대 농도를 감소시키기 위해, ICE와 같은 이미다졸계 양이온 지질을 포함한다. 이미다졸계 양이온 지질(예: ICE)은 블렌딩된 제형을 포함하는 지질 나노입자 중 하나 이상에서 유일한 양이온성 지질로 사용될 수 있거나, 대안적으로는 종래의 양이온성 지질(예: DOPE, DC-콜레스테롤), 비양이온성 지질, PEG-변형된 지질 및/또는 헬퍼 지질과 조합될 수 있다. 양이온성 지질은 지질 나노입자 내에 존재하는 총 지질의 약 1% 내지 약 90%, 약 2% 내지 약 90%, 약 5% 내지 약 90%, 약 10% 내지 약 90%, 약 15% 내지 약 90%, 약 20% 내지 약 90%, 약 30% 내지 약 90%, 약 40% 내지 약 90%, 약 50% 내지 약 90%, 약 60% 내지 약 90%, 약 70% 내지 약 90%, 약 80% 내지 약 90%, 약 1% 내지 약 80%, 약 1% 내지 약 70%, 약 1% 내지 약 60%, 약 1% 내지 약 50%, 약 1% 내지 약 40%, 약 1% 내지 약 30%, 약 1% 내지 약 20%, 약 1% 내지 약 15%, 약 1% 내지 약 10%, 약 2% 내지 약 70%, 약 5% 내지 약 50%, 약 10% 내지 약 40%의 몰비를 포함할 수 있고, 바람직하게는 지질 나노입자 내에 존재하는 총 지질의 약 20% 내지 약 70%의 몰비를 포함할 수 있다.
구별되는 지질 성분의 비
지질 나노입자가 3개 및 3개 이하의 구별되는 지질 성분을 포함하는 구현예에서, 총 지질 함량의 비(즉, 지질 성분(1):지질 성분(2):지질 성분(3)의 비)는 x:y:z로 표시될 수 있으며, 여기서
(y + z) = 100 - x이다.
일부 구현예에서, "x", "y", 및 "z"의 각각은 3개의 구별되는 지질 성분의 몰 백분율을 나타내며, 비는 몰비(molar ratio)이다.
일부 구현예에서, "x", "y", 및 "z"의 각각은 3개의 구별되는 지질 성분의 중량%를 나타내며, 비는 중량비(weight ratio)이다.
일부 구현예에서, 변수 "x"로 표시된 지질 성분(1)은 스테롤계 양이온 지질이다.
일부 구현예에서, 변수 "y"로 표시된 지질 성분(2)은 헬퍼 지질이다.
일부 구현예에서, 변수 "z"로 표시된 지질 성분(3)은 PEG 지질이다.
일부 구현예에서, 지질 성분(1)(예를 들어, 스테롤계 양이온 지질)의 몰 백분율을 나타내는 변수 "x"는 적어도 약 10%, 약 20%, 약 30%, 약 40%, 약 50%, 약 55%, 약 60%, 약 65%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 85%, 약 90%, 또는 약 95%이다.
일부 구현예에서, 지질 성분(1)(예를 들어, 스테롤계 양이온 지질)의 몰 백분율을 나타내는 변수 "x"는 약 95%, 약 90%, 약 85%, 약 80%, 약 75%, 약 70%, 약 65%, 약 60%, 약 55%, 약 50%, 약 40%, 약 30%, 약 20%, 또는 약 10% 이하이다. 일부 구현예에서, 변수 "x"는 약 65%, 약 60%, 약 55%, 약 50%, 또는 약 40% 이하이다.
일부 구현예에서, 지질 성분(1)(예를 들어, 스테롤계 양이온 지질)의 몰 백분율을 나타내는 변수 "x"는: 약 50% 이상 및 약 95% 미만; 약 50% 이상 및 약 90% 미만; 약 50% 이상 및 약 85% 미만; 약 50% 이상 및 약 80% 미만; 약 50% 이상 및 약 75% 미만; 약 50% 이상 및 약 70% 미만; 약 50% 이상 및 약 65% 미만; 또는 약 50% 이상 및 약 60% 미만이다.
일부 구현예에서, 지질 성분(1)(예를 들어, 스테롤계 양이온 지질)의 중량%를 나타내는 변수 "x"는 적어도 약 10%, 약 20%, 약 30%, 약 40%, 약 50%, 약 55%, 약 60%, 약 65%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 85%, 약 90%, 또는 약 95%이다.
일부 구현예에서, 지질 성분(1)(예를 들어, 스테롤계 양이온 지질)의 중량%를 나타내는 변수 "x"는 약 95%, 약 90%, 약 85%, 약 80%, 약 75%, 약 70%, 약 65%, 약 60%, 약 55%, 약 50%, 약 40%, 약 30%, 약 20%, 또는 약 10% 이하이다.
일부 구현예에서, 지질 성분(1)(예를 들어, 스테롤계 양이온 지질)의 중량%를 나타내는 변수 "x"는: 약 50% 이상 및 약 95% 미만; 약 50% 이상 및 약 90% 미만; 약 50% 이상 및 약 85% 미만; 약 50% 이상 및 약 80% 미만; 약 50% 이상 및 약 75% 미만; 약 50% 이상 및 약 70% 미만; 약 50% 이상 및 약 65% 미만; 또는 약 50% 이상 및 약 60% 미만이다.
일부 구현예에서, 지질 성분(3)(예를 들어, PEG-변형된 지질)의 몰 백분율을 나타내는 변수 "z"는 약 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 15%, 20%, 또는 25% 이하이다. 일부 구현예에서, 지질 성분(3)(예를 들어, PEG-변형된 지질)의 몰 백분율을 나타내는 변수 "z"는 약 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%이다. 구현예에서, 지질 성분(3)(예를 들어, PEG-변형된 지질)의 몰 백분율을 나타내는 변수 "z"는 약 1% 내지 약 10%, 약 2% 내지 약 10%, 약 3% 내지 약 10%, 약 4% 내지 약 10%, 약 5% 내지 약 10%, 약 6% 내지 약 10%, 약 7% 내지 약 10%, 약 8% 내지 약 10%, 약 9% 내지 약 10%, 약 1% 내지 약 9%, 약 1% 내지 약 8%, 약 1% 내지 약 7.5%, 약 1% 내지 약 7%, 약 1% 내지 약 6%, 약 1% 내지 약 5%, 약 1% 내지 약 4%, 약 1% 내지 약 3%, 약 1% 내지 약 2%, 약 2.5% 내지 약 10%, 약 2.5% 내지 약 7.5%, 약 2.5% 내지 약 5%, 약 5% 내지 약 7.5%, 또는 약 5% 내지 약 10%이다.
일부 구현예에서, 지질 성분(3)(예를 들어, PEG-변형된 지질)의 중량%를 나타내는 변수 "z"는 약 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 15%, 20%, 또는 25% 이하이다. 일부 구현예에서, 지질 성분(3)(예를 들어, PEG-변형된 지질)의 중량%를 나타내는 변수 "z"는 약 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%이다. 일부 구현예에서, 지질 성분(3)(예를 들어, PEG-변형된 지질)의 중량%를 나타내는 변수 "z"는 약 1% 내지 약 10%, 약 2% 내지 약 10%, 약 3% 내지 약 10%, 약 4% 내지 약 10%, 약 5% 내지 약 10%, 약 6% 내지 약 10%, 약 7% 내지 약 10%, 약 8% 내지 약 10%, 약 9% 내지 약 10%, 약 1% 내지 약 9%, 약 1% 내지 약 8%, 약 1% 내지 약 7.5%, 약 1% 내지 약 7%, 약 1% 내지 약 6%, 약 1% 내지 약 5%, 약 1% 내지 약 4%, 약 1% 내지 약 3%, 약 1% 내지 약 2%, 약 2.5% 내지 약 10%, 약 2.5% 내지 약 7.5%, 약 2.5% 내지 약 5%, 약 5% 내지 약 7.5%, 또는 약 5% 내지 약 10%이다.
3개 및 단 3개의 구별되는 지질 성분을 갖는 조성물의 경우, 변수 "x", "y", 및 "z"는 3개 변수의 합이 총 지질 함량의 100%가 되는 한 임의의 조합일 수 있다.
다른 지질 성분
폴리에틸렌 글리콜(PEG)-변형된 인지질, 및 N-옥타노일-스핑고신-1-[숙시닐(메톡시 폴리에틸렌 글리콜)-2000](C8 PEG-2000 세라미드)를 포함하는 유도된 지질, 예컨대 유도된 세라미드(PEG-CER)를 단독으로 사용하거나 바람직하게는 전달 비히클(예: 지질 나노입자)을 포함하는 다른 지질 제형과 함께 조합하여 사용하는 것도 본 발명에서 고려된다. 고려된 PEG-변형 지질은 이에 제한되지 않지만, C6-C20 길이의 알킬 사슬(들)을 갖는 지질에 공유 결합된 길이 5 kDa까지의 폴리에틸렌 글리콜 사슬을 포함한다. 이와 같은 성분을 첨가함으로써 복합체 응집을 예방할 수 있고, 또한 순환 수명을 늘리고 표적 조직에 대한 지질-핵산 조성물의 전달을 증가시키는 수단을 제공할 수 있거나(Klibanov 등의 (1990) FEBS Letters, 268 (1): 235-237 참조), 이들 성분은 생체 내에서 제형으로부터 신속하게 교환되도록 선택될 수 있다(미국 특허 제5,885,613호 참조). 특히 유용한 교환 가능한 지질은 더 짧은 아실 사슬(예컨대, C14 또는 C18)을 갖는 PEG-세라미드이다.
본 발명의 PEG-변형된 인지질 및 유도된 지질은 리포솜 전달 비히클에 존재하는 총 지질의 약 0% 내지 약 20%, 약 0.5% 내지 약 20%, 약 1% 내지 약 20%, 약 2% 내지 약 20%, 약 3% 내지 약 20%, 약 4% 내지 약 20%, 약 5% 내지 약 20%, 약 10% 내지 약 20%, 약 15% 내지 약 20%, 약 0% 내지 약 15%, 약 0% 내지 약 10%, 약 0% 내지 약 5%, 약 0% 내지 약 4%, 약 0% 내지 약 3%, 약 0% 내지 약 220%, 약 0% 내지 약 1%, 약 5% 내지 약 15%, 약 4% 내지 약 10%, 또는 약 2%의 몰비를 포함할 수 있다.
본 발명은 비양이온 지질을 사용하는 것도 고려한다. 본원에서 사용된 바와 같이, 어구 "비양이온 지질(non-cationic lipid)"은 임의의 중성, 쌍성(zwitterionic) 또는 음이온 지질을 지칭한다. 본원에서 사용된 바와 같이, 어구 "음이온 지질"은 생리적인 pH와 같은 선택된 pH에서 순 음전하(net negative charge)를 운반하는 많은 지질 종 중 임의의 것을 지칭한다. 비양이온 지질은 디스테아로일포스파티딜콜린(DSPC), 디올레오일포스파티딜콜린(DOPC), 디팔미토일포스파티딜콜린(DPPC), 디올레오일포스파티딜글리세롤(DOPG), 디팔미토일포스파티딜글리세롤(DPPG), 디올레오일포스파티딜에탄올아민(DOPE), 팔미토일올레오일포스파티딜콜린(POPC), 팔미토일올레오일-포스파티딜에탄올아민(POPE), 디올레오일-포스파티딜에탄올아민 4-(N-말레이미도메틸)-시클로헥산-1-카르복시산염(DOPE-mal), 디팔미토일 포스파티딜 에탄올아민(DPPE), 디미리스토일포스포에탄올아민(DMPE), 디스테아로일-포스파티딜-에탄올아민(DSPE), 16-O-모노메틸 PE, 16-O-디메틸 PE, 18-1-트랜스 PE, 1-스테아로일-2-올레오일-포스파티딜에탄올아민(SOPE), 콜레스테롤, 또는 이들의 혼합물을 포함하되, 이들로 한정되지 않는다. 이와 같은 비양이온 지질은 단독으로 사용될 수 있지만, 바람직하게는 양이온 지질과 같은 다른 부형제와 조합하여 사용된다.
일부 구현예에서, 스테로롤계 양이온 지질이 아닌 양이온 지질이 본 발명의 리포좀 조성물에서 사용될 수 있다. 양이온 지질은 N-[1-(2,3-디올레일옥시)프로필]-N,N,N-트리메틸암모늄 염화물(DOTMA), 5- 카복시스펌일글리신디옥타데실아미드(DOGS), 2,3-디올레일옥시-N-[2(스퍼민- 카복사미드)에틸]-N,N-디메틸-1-프로판아미늄(DOSPA), 1,2-디올레일-3- 디메틸암모늄-프로판(DODAP), 1,2-디올레일-3-트리메틸암모늄-프로판(DOTAP), 1,2-디스테아릴옥시-N,N-디메틸-3-아미노프로판(DSDMA), 1,2-디올레일옥시-N,N- 디메틸-3-아미노프로판(DODMA), 1,2-디리놀레일옥시-N,N-디메틸-3-아미노프로판(DLinDMA), 1,2-디리놀레닐옥시-N,N-디메틸-3-아미노프로판(DLenDMA), N-디올레일- N,N-디메틸암모늄 염화물(DODAC), N,N-디스테아릴-N,N-디메틸암모늄 브롬화물(DDAB), N-(1,2-디미리스틸옥시프로프-3-일)-N,N-디메틸-N-히드록시에틸 암모늄 브롬화물(DMRIE), 3-디메틸아미노-2-(콜레스테롤-5-엔-3-베타-옥시부탄-4-옥시)-1- (시스,시스-9,12-옥타데카디엔옥시)프로판(CLinDMA), 2-[5'-(콜레스테롤-5-엔-3-베타-옥시)-3'- 옥사펜트옥시)-3-디메틸 1-1-(시스,시스-9',1-2'-옥타데카디엔옥시)프로판(CpLinDMA), N,N- 디메틸-3,4-디올레일옥시벤질아민(DMOBA), 1,2-N,N'-디올레일카르밤일-3- 디메틸아미노프로판(DOcarbDAP), 2,3-디리놀레오일옥시-N,N-디메틸프로필아민(DLinDAP), 1,2-N,N'-디리놀레일카르밤일-3-디메틸아미노프로판(DLincarbDAP), 1,2- 디리놀레일카르밤일-3-디메틸아미노프로판 또는 (DLinCDAP), 2,2-디리놀레일-4- 디메틸아미노메틸-[1,3]-디옥소레인(DLin-K-DMA), 2,2-디리놀레일-4-디메틸아미노에틸- [1,3]-디옥소레인(DLin-K-XTC2-DMA), 또는 이들의 혼합물을 포함하되, 이들로 한정되지 않는다.
추가의 양이온 지질은 2-((2,3-비스((9Z,12Z)-옥타데카-9,12-디엔-1- 올옥시)프로필)디술판일)-N,N-디메틸에탄아민(2012년 6월 8일에 출원된 미국 가출원 제PCT/US2012/041663호에 추가로 기술되어 있으며, 본 문헌의 전체 교지는 그 전체가 참조로서 본원에 통합됨), 및 예를 들어, 절단 가능한 이황화(S-S) 작용기를 포함하는 하나 이상의 양이온 지질과 같은 절단 가능한 지질(미국 국제 출원 제PCT/US2012/041663호에 추가로 기술되어 있음)을 포함한다. 또한, 형질감염 효능을 향상시키는 여러 가지 시약이 상업적으로 이용 가능하다. 적합한 예는 리포펙틴(DOTMA:DOPE)(Invitrogen, 캘리포니아 칼즈배드), 리포펙타민(DOSPA:DOPE)(Invitrogen), 리포펙타민2000(Invitrogen), FUGENE, TRANSFECTAM(DOGS), 및 EFFECTENE을 포함한다.
mRNA를 캡슐화하는 리포솜의 형성
본 발명에 사용하기 위한 리포솜 전달 비히클은 당업계에 현재 알려진 다양한 기술로 제조할 수 있다. 다층 소낭(MLV)은 종래 기술에 의해, 예를 들어, 선택된 지질을 적절한 용매에 용해시켜 적합한 그릇이나 용기의 내측 벽 상에 이를 침전시킨 다음, 용매를 증발시켜 용기의 내측 벽 상에 박막을 남기거나 분무 건조시키는 것에 의해 제조될 수 있다. 그런 다음 소용돌이 운동(vortexing motion)으로 수성 상(aqueous phase)을 용기에 첨가하여 MLV를 형성할 수 있다. 그런 다음, 다층 소낭의 균질화(homogenization), 초음파 처리(sonication) 또는 압출(extrusion)에 의해 단층 소낭(ULV)이 형성될 수 있다. 추가적으로, 단층 소낭은 세제 제거 기법에 의해 형성될 수 있다.
본 발명의 특정 구현예에서, 본 발명의 조성물은 전달 비히클을 포함하는데, 치료 RNA(예를 들어, CFTR을 암호화하는 mRNA)는 전달 비히클(예를 들어, 리포솜)의 표면에 결합되면서 동일한 전달 비히클 내에도 캡슐화된다. 예를 들어, 본 발명의 조성물을 제조하는 동안, 양이온 리포솜 전달 비히클은 이러한 치료 mRNA와의 정전기적 상요 작용을 통해 핵산(예: mRNA)과 결합될 수 있다.
일부 구현예에서, 본 발명의 조성물 및 방법은 리포솜 내에 캡슐화된 mRNA를 포함한다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 mRNA 종은 동일한 리포솜 내에 캡슐화될 수 있다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 mRNA 종은 상이한 리포솜 내에 캡슐화될 수 있다. 일부 구현예에서, mRNA는 지질 조성, 지질 성분의 몰비, 크기, 전하(제타 전위), 표적 리간드 및/또는 이들의 조합이 다른 하나 이상의 리포솜 내에 캡슐화된다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 리포솜은 스테롤계 양이온 지질, 중성 지질, PEG-변형된 지질 및/또는 이들의 조합의 상이한 조성을 가질 수 있다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 리포솜은 리포솜을 생성하는 데 사용된 스테롤계 양이온 지질, 중성 지질, 콜레스테롤 및 PEG-변형된 지질의 상이한 몰비를 가질 수 있다.
원하는 mRNA를 리포솜 내에 통합시키는 과정을 종종 "로딩(loading)"이라 부른다. 예시적 방법은 Lasic, 등의 FEBS Lett., 312:255-258, 1992에 기재되어 있고, 본원에 참조로서 포함된다. 　 리포솜-통합 핵산은 리포솜의 내부 공간, 리포솜의 이중층 막 내부에 완전히 또는 부분적으로 위치할 수 있거나 리포솜 막의 외부 표면과 결합할 수 있다. 리포솜 내로 핵산을 통합하는 것을 또한 본원에서 "캡슐화"라고 지칭하며, 여기서 핵산은 리포솜의 내부 공간에 완전히 포함된다. 리포솜과 같은 수송 운반체 내로 mRNA를 통합하는 목적은 종종 핵산을 분해하는 효소 또는 화학물질 및/또는 핵산의 급속한 분비를 야기하는 시스템 또는 수용체를 포함할 수 있는 환경으로부터 핵산을 보호하기 위한 것이다. 따라서, 일부 구현예에서, 적합한 전달 비히클은 내부에 포함된 mRNA의 안정성을 강화시킬 수 있고/있거나 표적 세포 또는 조직으로 mRNA의 전달을 용이하게 할 수 있다.
임의의 바람직한 지질이 mRNA를 캡슐화하기에 적합한 임의의 비율로 혼합될 수 있다. 일부 구현예에서, 적합한 지질 용액은 스테롤계 양이온 지질, 비양이온 지질, 및/또는 PEG-변형된 지질을 포함하는 원하는 지질 혼합물을 함유한다. 일부 구현예에서, 적합한 지질 용액은 하나 이상의 스테롤계 양이온 지질, 하나 이상의 헬퍼 지질(예: 비양이온 지질) 및 하나 이상의 PEG-변형된 지질을 포함하는 원하는 지질 혼합물을 함유한다.
스테롤계 양이온 지질, 비양이온 지질, 및 PEG-변형된 지질의 예시적인 조합이 실시예 섹션에서 설명된다. 예를 들어, 적합한 지질 용액은 ICE, DOPE 및 DMG-PEG2K를 함유할 수 있다. 지질 혼합물뿐만 아니라 서로에 대한 이러한 지질의 상대 몰비를 포함하는 스테롤계 양이온 지질, 비양이온 지질 및/또는 PEG-변형된 지질을 선택하는 것은 선택된 지질(들)의 특징 및 캡슐화할 mRNA의 성질 및 특징에 기초한다. 추가적인 고려 사항은, 예를 들어, 알킬 사슬의 포화뿐만 아니라 선택된 지질(들)의 크기, 전하, pH, pKa, 융해성(fusogenicity) 및 독성을 포함한다. 따라서 몰비는 적절하게 조정될 수 있다.
일부 구현예에서, 지질 나노입자 내에 mRNA를 캡슐화하는 단계는 mRNA 용액 및 지질 용액을 혼합하는 단계를 포함하되, 여기서 mRNA 용액 및/또는 지질 용액은 혼합하는 단계 이전에 주변 온도보다 더 높은 소정의 온도까지 가열되어 mRNA를 캡슐화하는 지질 나노입자를 형성한다("Encapsulation of messenger RNA"라는 제목으로 2015년 7월 2일에 출원된 미국 특허 출원 제14/790,562호 및 2014년 7월 2일자로 출원된 이의 미국 특허 가출원 제62/020,163호를 참조하며, 이들의 개시는 그 전체가 참조로서 본원에 통합된다).
일부 구현예에서, 지질 나노입자 내에 mRNA를 캡슐화하는 단계는 미리 형성된 지질 나노입자를 mRNA와 조합하는 단계를 포함한다(2016년 11월 10일자로 출원된 미국 가출원 제62/420,413호 및 2017년 11월 1일 출원된 미국 가출원 번호 제62/580,155호를 참조하며, 이들의 개시는 참조로서 본원에 통합된다). 일부 구현예에서, 미리 형성된 지질 나노입자를 mRNA와 조합하는 단계에 의해 mRNA의 세포내 전달의 개선된 효능을 나타내는 지질 나노입자가 생성된다. 일부 구현예에서, 미리 형성된 지질 나노입자를 mRNA와 조합하는 단계에 의해 지질 나노입자 내에 캡슐화된 mRNA의 캡슐화 효율이 매우 높아진다(즉, 90 내지 95% 범위). 일부 구현예에서, 미리 형성된 지질 나노입자를 mRNA와 조합하는 단계는 단계 전반에 걸쳐 지질/mRNA (N/P) 비율을 일정하게 유지시키고 손쉽게 규모를 키울 수 있는 펌프 시스템을 사용해 달성된다.
본 발명에 따른 적합한 리포솜은 다양한 크기로 만들어질 수 있다. 일부 구현예에서, 제공된 리포솜은 이전에 공지된 mRNA 캡슐화 리포솜보다 더 작게 만들어질 수 있다. 일부 구현예에서, 리포솜의 크기 감소는 mRNA의 더 나은 전달 효능과 연관된다. 적절한 리포솜 크기의 선택은 표적 세포 또는 조직의 부위 및 리포솜이 만들어지는 적용을 어느 정도 고려할 수 있다.
일부 구현예에서, 리포솜의 적절한 크기는 mRNA에 의해 암호화된 폴리펩티드의 전신 분포를 용이하게 하도록 선택된다. 일부 구현예에서, 특정 세포 또는 조직에 mRNA의 전달을 제한하는 것이 바람직할 수 있다. 예를 들어, 간세포를 표적화하기 위해, 리포솜의 치수가 간에서 간 동양 혈관(hepatic sinusoids)의 내벽을 이루는 내피층(endothelial layer)의 구멍보다 더 작도록 리포솜의 크기가 조정될 수 있고; 이러한 경우, 리포솜은 이러한 내피 구멍을 쉽게 통과하여 표적 간세포에 도달할 수 있다.
대안적으로 또는 추가적으로, 리포솜의 치수가 특정 세포 또는 조직으로의 분포를 제한하거나 분명히 피하기에 충분한 직경이 되도록 리포솜의 크기가 조정될 수 있다. 예를 들어, 리포솜의 치수가 간동양혈관의 내벽을 이루는 내피층의 구멍보다 더 크도록 리포솜의 크기를 조정함으로써 간세포에 리포솜의 분포를 제한할 수 있다.
일부 구현예에서, 리포솜의 크기는 리포솜 입자의 가장 큰 직경의 길이에 의해 결정된다. 일부 구현예에서, 적합한 리포솜은 약 250 nm 이하의 크기(예컨대, 약 225 nm 이하, 200 nm 이하, 175 nm 이하, 150 nm 이하, 125 nm 이하, 100 nm 이하, 75 nm 이하, 또는 50 nm 이하)를 갖는다. 일부 구현예에서, 적합한 리포솜은 약 10~250 nm의 범위(예컨대, 약 10~225 nm, 10~200 nm, 10~175 nm, 10~150 nm, 10~125 nm, 10~100 nm, 10~75 nm, 또는 10~50 nm)의 크기를 갖는다. 일부 구현예에서, 적합한 리포솜은 약 100~250 nm의 범위(예컨대, 약 100~225 nm, 100~200 nm, 100~175 nm, 100~150 nm)의 크기를 갖는다. 일부 구현예에서, 적합한 리포솜은 약 10~100 nm의 범위(예컨대, 약 10~90 nm, 10~80 nm, 10~70 nm, 10~60 nm 또는 10~50 nm)의 크기를 갖는다. 특정 구현예에서, 적합한 리포솜은 약 100 nm 미만의 크기를 갖는다. 일부 구현예에서, 조성물 중 나노입자의 대부분, 즉 정제된 나노입자의 약 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%는 약 100 nm 미만(예를 들어, 약 95 nm, 약 90 nm, 약 85 nm, 약 80 nm, 약 75 nm, 약 70 nm, 약 65 nm, 약 60 nm, 약 55 nm, 약 50 nm, 약 45 nm, 또는 약 40 nm 미만)의 크기를 갖는다. 일부 구현예에서, 정제된 나노 입자의 실질적으로 전부는 100 nm 미만(예를 들어, 약 95 nm 미만, 약 90 nm, 약 85 nm, 약 80 nm, 약 75 nm, 약 70 nm, 약 65 nm, 약 60 nm, 약 55 nm, 약 50 nm, 약 45 nm, 또는 약 40 nm 미만)의 크기를 갖는다.
당업계에 알려진 다양한 대안적 방법이 리포솜 개체군의 크기 조정을 위해 사용될 수 있다. 하나의 이와 같은 크기 조정 방법이 미국 특허 제4,737,323호에 기술되어 있고, 이는 본원에 참조로서 포함된다. 　 배스(bath) 또는 프로브(probe) 초음파처리기에 의해 리포솜 현탁액을 초음파처리함으로써 직경을 약 0.05 미크론 미만의 작은 ULV로 점차 크기를 줄이게 된다. 균질화는 큰 리포솜 단편에서 보다 작은 리포솜으로의 전단 에너지에 의존하는 또 다른 방법이다. 전형적인 균질화 과정은, MLV를 표준 에멀전 균질화기(homogenizer)를 통해 선택된 리포솜 크기가 일반적으로 약 0.1 내지 0.5 미크론인 것이 관찰될 때까지 재순환시킨다. 리포솜의 크기는 본원에 참조로서 포함되는 Bloomfield, Ann. Rev. Biophys. Bioeng., 10:421-150 (1981)에 기술된 바와 같이 준 탄성 광 산란(quasi-electric light scattering, QELS)에 의해 결정될 수 있다. 　 　 평균 리포솜 직경은 형성된 리포솜의 초음파처리에 의해 줄어들 수 있다. 간헐적인 초음파 처리 사이클은 효율적인 리포솜 합성을 안내하기 위해 QELS 평가와 교대로 할 수 있다.
정제
통상적으로, 제형에 이어서, mRNA를 함유하는 지질 나노입자는 정제되고/되거나 농축된다. 다양한 정제 방법이 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 지질 나노입자는 접선류 여과 방식을 사용하여 정제된다. 십자류 여과 방식으로도 지칭되는 접선류 여과 방식(TFF)은 여과될 재료가 필터를 관통하기 보다는 접선 방향으로 필터를 교차하여 통과하는 유형의 여과 방식이다. TFF의 경우, 원하지 않는 투과물은 필터를 관통하는 반면, 원하는 잔류물은 필터를 따라 통과하여 하류에서 수집된다. 원하는 재료는 일반적으로 TFF의 잔류물에 함유된다는 것에 주목하는 것이 중요한데, 이는 전통적인 전량 여과 방식(dead-end filtration)에서 일반적으로 발생하는 것과는 반대이다.
필터링될 재료에 따라, TFF는 일반적으로 미세여과(microfiltration) 또는 초미세여과(ultrafiltration)에 사용된다. 미세여과는 일반적으로 필터가 0.05 μm 내지 1.0 μm의 기공 크기를 갖는 것으로서 정의되는 반면, 초미세여과는 일반적으로 0.05 μm 미만의 기공 크기를 갖는 필터를 포함한다. 특정 필터에 대한 분자량 컷오프(MWCO)로도 지칭되는 공칭 분자량 한계(NMWL)도 기공 크기에 따라 결정되는데, 미세여과 막은 일반적으로 1,000 kDa 초과의 NMWL을 가지며 초미세여과 필터는 1 kDa 내지 1,000 kDa의 NMWL을 갖는다.
접선류 여과 방식의 주요 이점은, 전통적인 "전량" 여과가 진행되는 동안 필터에 응집되어 이를 차단할 수 있는 비투과성 입자(때로는 "필터 케이크"라 지칭됨)가 대신에 필터의 표면을 따라 반송된다는 것이다. 이러한 이점은 연속 작동이 요구되는 산업 공정에서 접선류 여과가 광범위하게 이용될 수 있도록 하는데, 이는 일반적으로 필터를 제거해서 청소할 필요가 없고, 따라서 고장 시간이 상당히 감소되는 때문이다.
접선류 여과 방식은 무엇보다도 농축 및 투석여과(diafiltration)을 포함하는 여러 가지 목적으로 사용될 수 있다. 농축은 용매가 용액으로부터 제거되는 반면 용질 분자는 남게되는 과정이다. 샘플을 효과적으로 농축시키기 위해, 남겨야 할 용질 분자의 분자량보다 실질적으로 낮은 NMWL 또는 MWCO를 갖는 막이 사용된다. 일반적으로, 당업자는 표적 분자(들)의 분자량보다 3 내지 6배 아래의 NMWL 또는 MWCO를 갖는 필터를 선택할 수 있다.
투석여과는, 이들 나노입자의 용액 중 농도를 변화시키지 않으면서도 원치 않는 작은 입자는 필터를 통과시키고, 원하는 더 큰 나노입자는 잔류물 내에 남게 하는 분류 공정(fractionation process)이다. 투석여과는 종종 용액으로부터 염 또는 반응 완충액을 제거하는 데 사용된다. 투석여과는 연속적이거나 불연속적일 수 있다. 연속 투석여과의 경우, 여과물이 생성되는 것과 동일한 속도로 투석여과액이 샘플 피드에 첨가된다. 불연속 투석여과의 경우, 먼저 용액을 희석한 다음, 시작 농도로 다시 농축시킨다. 불연속 투석여과는 원하는 농도의 나노입자에 도달할 때까지 반복될 수 있다.
정제되고/되거나 농축된 지질 나노입자는, 예를 들어 PBS와 같은 원하는 완충액으로 제형화될 수 있다.
따라서, 본 발명은 본원에 기재된 정제된 나노입자를 포함하는 조성물을 제공한다. 일부 구현예에서, 조성물 중 정제된 나노입자의 대부분, 즉 정제된 나노입자의 약 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%는 약 100 nm 미만(예를 들어, 약 95 nm, 약 90 nm, 약 85 nm, 약 80 nm, 약 75 nm, 약 70 nm, 약 65 nm, 약 60 nm, 약 55 nm, 약 50 nm, 약 45 nm, 또는 약 40 nm 미만)의 크기를 갖는다. 일부 구현예에서, 정제된 나노 입자의 실질적으로 전부는 100 nm 미만(예를 들어, 약 95 nm 미만, 약 90 nm, 약 85 nm, 약 80 nm, 약 75 nm, 약 70 nm, 약 65 nm, 약 60 nm, 약 55 nm, 약 50 nm, 약 45 nm, 또는 약 40 nm 미만)의 크기를 갖는다.
일부 구현예에서, 본 발명에 의해 제공된 조성물 중 정제된 나노입자의 약 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 초과는 약 40~90 nm(예를 들어, 약 40~85 nm, 약 40~80 nm, 약 40~75 nm, 약 40~70 nm, 약 40~65 nm, 또는 약 40~60 nm) 범위의 크기를 갖는다. 일부 구현예에서, 정제된 나노 입자의 실질적으로 전부는 약 40~90 nm(예를 들어, 약 40~85 nm, 약 40~80 nm, 약 40~75 nm, 약 40~70 nm, 약 40~65 nm, 또는 약 40~60 nm) 범위의 크기를 갖는다.
일부 구현예에서, 본 발명에 의해 제공되는 조성물 중의 나노입자의 분산성 또는 분자의 이질성(PDI) 크기의 척도는 약 0.16 미만(예를 들어, 약 0.15, 0.14, 0.13, 0.12, 0.11, 0.10, 0.09, 또는 0.08 미만)이다.
일부 구현예에서, 본 발명에 의해 제공되는 조성물 중의 정제된 지질 나노입자의 약 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 초과는 각각의 개별 입자 내에 mRNA를 캡슐화한다. 일부 구현예에서, 조성물 중의 정제된 지질 나노입자의 실질적으로 전부는 각각의 개별 입자 내에 mRNA를 캡슐화한다.
일부 구현예에서, 본 발명에 따른 조성물은 적어도 약 1 mg, 5 mg, 10 mg, 100 mg, 500 mg, 또는 1000 mg의 캡슐화된 mRNA를 함유한다. 일부 구현예에서, 본 발명에 따른 단계에 의해 약 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 초과의 mRNA가 회수된다.
핵산 및 mRNA
본 발명은 임의 유형의 핵산을 전달하는 데 사용될 수 있다. 핵산은 DNA, 전령 RNA(mRNA), 소형 핵 RNA(snRNA), 가이드 RNA(gRNA), CRISPR RNA(crRNA), 긴 비코딩 RNA(lncRNA), 마이크로 RNA(miRNA), 짧은 간섭 RNA(siRNA), 및 짧은 헤어핀 RNA(shRNA)를 포함하는 군으로부터 선택될 수 있다(그러나 이들로 한정되지는 않음).
본 발명은 임의의 mRNA를 전달하는 데 사용될 수 있다. mRNA는 일반적으로 DNA로부터 리보솜에 정보를 전달하는 유형의 RNA로 간주된다. 일반적으로, 진핵 생물에서, mRNA 가공은 N-말단(5') 단부 상에 "캡"을 추가하고 C-말단(3') 단부 상에 "꼬리"를 추가하는 것을 포함한다. 통상적인 캡은 5'-5'-트리포스페이트 결합을 통해 제1 전사된 뉴클레오티드에 연결된 구아노신인, 7- 메틸구아노신 캡이다. 캡의 존재는 대부분의 진핵세포에서 발견되는 뉴클레아제에 대한 내성을 제공하는 데 있어서 중요하다. 꼬리는 일반적으로 폴리아데닐화 이벤트이며, 이에 의해 폴리아데닐릴 모이어티가 mRNA 분자의 3' 말단에 첨가된다. 이러한 "꼬리"의 존재는 엑소뉴클레아제 분해로부터 mRNA를 보호하는 역할을 한다. 전령 RNA는 일반적으로 리보솜에 의해 단백질 또는 펩티드를 구성하는 일련의 아미노산으로 번역된다.
하나 이상의 펩티드(예를 들어, 항원) 또는 펩티드 단편으로 번역될 수 있는 임의의 mRNA가 본 발명의 범주 내에 포함되는 것으로 고려된다. 일부 구현예에서, mRNA는 하나 이상의 자연 발생 펩티드를 암호화한다. 일부 구현예에서, mRNA는 하나 이상의 변형된 펩티드 또는 비자연 펩티드를 암호화한다.
일부 구현예에서, mRNA는 세포 내 단백질 또는 펩티드를 암호화한다. 일부 구현예에서, mRNA는 시토졸(cytosolic) 단백질 또는 펩티드를 암호화한다. 일부 구현예에서, mRNA는 액틴 세포골격(actin cytoskeleton)과 결합된 단백질 또는 펩티드를 암호화한다. 일부 구현예에서, mRNA는 원형질 막(plasma membrane)과 결합된 단백질 또는 펩티드를 암호화한다. 일부 구현예에서, mRNA는 막관통(transmembrane) 단백질 또는 펩티드를 암호화한다. 일부 구현예에서, mRNA는 이온 채널(ion channel) 단백질 또는 펩티드를 암호화한다. 일부 구현예에서, mRNA는 핵 주위(perinuclear) 단백질 또는 펩티드를 암호화한다. 일부 구현예에서, mRNA는 핵 단백질 또는 펩티드를 암호화한다. 일부 구현예에서, mRNA는 전사 인자를 암호화한다. 일부 구현예에서, mRNA는 샤프롱(chaperone) 단백질 또는 펩티드를 암호화한다. 일부 구현예에서, mRNA는 세포내 효소를 암호화한다(예를 들어, 우레아 사이클이나 리소좀 저장 대사 질환과 연관된 효소를 암호화하는 mRNA). 일부 구현예에서, mRNA는 세포 대사, DNA 복구, 전사 및/또는 번역에 관여하는 단백질 또는 펩티드를 암호화한다. 일부 구현예에서, mRNA는 세포 외(extracellular) 단백질 또는 펩티드를 암호화한다. 일부 구현예에서, mRNA는 세포 외 기질(extracellular matrix)과 결합된 단백질 또는 펩티드를 암호화한다. 일부 구현예에서, mRNA는 분비된 단백질 또는 펩티드를 암호화한다. 특정 구현예에서, 본 발명의 조성물 및 방법에 사용된 mRNA는 하나 이상의 표적 세포에 의해 주변 세포 외액 내로 배설되거나 분비되는 기능성 단백질 또는 효소를 발현하는 데 사용될 수 있다(예를 들어, 호르몬 및/또는 신경 전달물질을 암호화하는 mRNA).
일부 구현예에서, 본 발명의 조성물 및 방법은 분비된 단백질을 암호화하는 mRNA의 전달을 가능하게 한다. 일부 구현예에서, 본 발명의 조성물 및 방법은 표 1에 열거된 하나 이상의 분비된 단백질을 암호화하는 mRNA의 전달을 가능하게 하므로; 본 발명의 조성물은 본원에서 기재된 다른 성분과 함께 표 1에 열거된 단백질(또는 이의 상동체)을 암호화하는 mRNA를 포함할 수 있고, 본 발명의 방법은 본원에 기재된 다른 성분과 함께 표 1에 열거된 단백질(또는 이의 상동체)을 암호화하는 mRNA를 포함하는 조성물을 조제 및/또는 투여하는 단계를 포함할 수 있다.
분비 단백질
Uniprot
ID 		단백질명 유전자명
A1E959 치아형성 법랑모세포-결합 단백질 ODAM
A1KZ92 페록시다신-유사 단백질 PXDNL
A1L453 세린 프로테아제 38 PRSS38
A1L4H1 가용성 청소제 수용체 시스테인-풍부 도메인-함유 단백질 SSC5D SSC5D
A2RUU4 코리파아제-유사 단백질 1 CLPSL1
A2VDF0 푸코스 변광회전 효소 FUOM
A2VEC9 SCO-스폰딘 SSPO
A3KMH1 폰 빌레브란트 인자 A 도메인-함유 단백질 8 VWA8
A4D0S4 라미닌 소단위체 베타-4 LAMB4
A4D1T9 가능 비활성 세린 프로제아제 37 PRSS37
A5D8T8 C-형 렉틴 도메인 패밀리 18 멤버 A CLEC18A
A6NC86 포스포리파아제 A2 억제제 및 Ly6/PLAUR 도메인-함유 단백질 PINLYP
A6NCI4 폰 빌레브란트인자 A 도메인-함유 단백질 3A VWA3A
A6ND01 가능 엽산 수용체 델타 FOLR4
A6NDD2 베타-디펜신 108B-유사
A6NE02 BTB/POZ 도메인-함유 단백질 17 BTBD17
A6NEF6 성장 호르몬 1 GH1
A6NF02 NPIP-유사 단백질 LOC730153
A6NFB4 HCG1749481, 이소형 CRA_k CSH1
A6NFZ4 단백질 FAM24A FAM24A
A6NG13 글리코실전이효소 54 도메인-함유 단백질
A6NGN9 IgLON 패밀리 멤버 5 IGLON5
A6NHN0 Otolin-1 OTOL1
A6NHN6 핵공 복합체-상호작용 단백질-유사 2 NPIPL2
A6NI73 백혈구 면역글로불린-유사 수용체 서브패밀리 A 멤버 5 LILRA5
A6NIT4 융모성 소마토맘모트로핀 호르몬 2 이소형 2 CSH2
A6NJ69 IgA-포함 단백질 상동체 IGIP
A6NKQ9 융모 성선자극 호르몬 소단위체 베타 변이체 1 CGB1
A6NMZ7 콜라겐 알파-6(VI) 사슬 COL6A6
A6NNS2 탈수소화효소/환원효소 SDR 군 구성원 7C DHRS7C
A6XGL2 인슐린 A 사슬 INS
A8K0G1 Wnt 단백질 WNT7B
A8K2U0 알파-2-마크로글로불린-유사 단백질 1 A2ML1
A8K7I4 칼슘-활성화 염소 통로 조절자 1 CLCA1
A8MTL9 세르핀-유사 단백질 HMSD HMSD
A8MV23 세르핀 E3 SERPINE3
A8MZH6 난모세포-분비 단백질 1 상동체 OOSP1
A8TX70 콜라겐 알파-5(VI) 사슬 COL6A5
B0ZBE8 나트륨이뇨 펩티드 NPPA
B1A4G9 소마토트로핀 GH1
B1A4H2 HCG1749481, 이소형 CRA_d CSH1
B1A4H9 융모성 소마토맘모트로핀 호르몬 CSH2
B1AJZ6 Wnt 단백질 WNT4
B1AKI9 이스민-1 ISM1
B2RNN3 보체 C1q 및 종양 괴사 인자-관련 단백질 9B C1QTNF9B
B2RUY7 폰 빌레브란트인자 C 도메인-함유 단백질 2-유사 VWC2L
B3GLJ2 전립선 및 고환 발현 단백질 3 PATE3
B4DI03 SEC11-유사 3(S. 세레비시에), 이소형 CRA_a SEC11L3
B4DJF9 Wnt 단백질 WNT4
B4DUL4 SEC11-유사 1(S. 세레비시에), 이소형 CRA_d SEC11L1
B5MCC8 Wnt 단백질 WNT10B
B8A595 Wnt 단백질 WNT7B
B8A597 Wnt 단백질 WNT7B
B8A598 Wnt 단백질 WNT7B
B9A064 면역글로불린 람다-유사 폴리펩타이드 5 IGLL5
C9J3H3 Wnt 단백질 WNT10B
C9J8I8 Wnt 단백질 WNT5A
C9JAF2 인슐린-유사 성장 인자 II Ala-25 Del IGF2
C9JCI2 Wnt 단백질 WNT10B
C9JL84 HERV-H LTR-결합 단백질 1 HHLA1
C9JNR5 인슐린 A 사슬 INS
C9JUI2 Wnt 단백질 WNT2
D6RF47 Wnt 단백질 WNT8A
D6RF94 Wnt 단백질 WNT8A
E2RYF7 단백질 PBMUCL2 HCG22
E5RFR1 PENK(114-133) PENK
E7EML9 세린 프로테아제 44 PRSS44
E7EPC3 Wnt 단백질 WNT9B
E7EVP0 노시셉틴 PNOC
E9PD02 인슐린-유사 성장 인자 I IGF1
E9PH60 Wnt 단백질 WNT16
E9PJL6 Wnt 단백질 WNT11
F5GYM2 Wnt 단백질 WNT5B
F5H034 Wnt 단백질 WNT5B
F5H364 Wnt 단백질 WNT5B
F5H7Q6 Wnt 단백질 WNT5B
F8WCM5 단백질 INS-IGF2 INS-IGF2
F8WDR1 Wnt 단백질 WNT2
H0Y663 Wnt 단백질 WNT4
H0YK72 신호 펩티다아제 복합체 촉매 소단위체 SEC11A SEC11A
H0YK83 신호 펩티다아제 복합체 촉매 소단위체 SEC11A SEC11A
H0YM39 융모성 소마토맘모트로핀 호르몬 CSH2
H0YMT7 융모성 소마토맘모트로핀 호르몬 CSH1
H0YN17 융모성 소마토맘모트로핀 호르몬 CSH2
H0YNA5 신호 펩티다아제 복합체 촉매 소단위체 SEC11A SEC11A
H0YNG3 신호 펩티다아제 복합체 촉매 소단위체 SEC11A SEC11A
H0YNX5 신호 펩티다아제 복합체 촉매 소단위체 SEC11A SEC11A
H7BZB8 Wnt 단백질 WNT10A
H9KV56 융모생식샘자극호르몬 소단위체 베타 변이 2 CGB2
I3L0L8 Wnt 단백질 WNT9B
J3KNZ1 융모 성선자극 호르몬 소단위체 베타 변이체 1 CGB1
J3KP00 융모생식샘자극호르몬 소단위체 베타 CGB7
J3QT02 융모 성선자극 호르몬 소단위체 베타 변이체 1 CGB1
O00175 C-C 모티프 케모카인 24 CCL24
O00182 갈렉틴-9 LGALS9
O00187 만난-결합 렉틴 세린 프로테아제 2 MASP2
O00230 코르티스타틴 CORT
O00253 아구티-관련 단백질 AGRP
O00270 12-(S)-하이드록시-5,8,10,14-에이코사테트라에노산 수용체 GPR31
O00292 좌-우 결정 인자 2 LEFTY2
O00294 터비-관련 단백질 1 TULP1
O00295 터비-관련 단백질 2 TULP2
O00300 종양 괴사 인자 수용체 슈퍼패밀리 멤버 11B TNFRSF11B
O00339 마트릴린-2 MATN2
O00391 설프히드릴 산화효소 1 QSOX1
O00468 아그린 AGRN
O00515 라디닌-1 LAD1
O00533 가공된 신경 세포 부착 분자 L1-유사 단백질 CHL1
O00584 리보뉴클레아제 T2 RNASET2
O00585 C-C 모티프 케모카인 21 CCL21
O00602 피콜린-1 FCN1
O00622 단백질 CYR61 CYR61
O00626 MDC(5-69) CCL22
O00634 네트린-3 NTN3
O00744 Wnt-10b 단백질 WNT10B
O00755 Wnt-7a 단백질 WNT7A
O14498 면역글로불린 슈퍼패밀리 함유 류신-풍부 반복 단백질 ISLR
O14511 프로-뉴레굴린-2, 막-결합 동형 NRG2
O14594 뉴로칸 코어 단백질 NCAN
O14625 C-X-C 모티프 케모카인 11 CXCL11
O14638 엑토뉴클레오티드 피로포스파타아제/포스포디에스테라아제 패밀리 멤버 3 ENPP3
O14656 토르신-1A TOR1A
O14657 토르신-1B TOR1B
O14786 뉴로필린-1 NRP1
O14788 종양 괴사 인자 리간드 슈퍼패밀리 멤버 11, 막형태 TNFSF11
O14791 아포지질단백질 L1 APOL1
O14793 성장/분화 인자 8 MSTN
O14904 Wnt-9a 단백질 WNT9A
O14905 Wnt-9b 단백질 WNT9B
O14944 프로에피레굴린 EREG
O14960 백혈구 세포-유래 케모탁신-2 LECT2
O15018 가공된 PDZ 도메인-함유 단백질 2 PDZD2
O15041 세마포린(Semaphorin)-3E SEMA3E
O15072 트롬보스폰딘 모티프 3을 갖는 디스인테그린 및 금속단백분해효소 ADAMTS3
O15123 안지오포이에틴-2 ANGPT2
O15130 뉴로펩티드 FF NPFF
O15197 에프린 B-형 수용체 6 EPHB6
O15204 ADAM DEC1 ADAMDEC1
O15230 라미닌 소단위체 알파-5 LAMA5
O15232 마트릴린-3 MATN3
O15240 신경내분비 조절 펩타이드-1 VGF
O15263 베타-디펜신 4A DEFB4A
O15335 콘드로어드헤린 CHAD
O15393 막관통 프로테아제 세린 2 촉매 사슬 TMPRSS2
O15444 C-C 모티프 케모카인 25 CCL25
O15467 C-C 모티프 케모카인 16 CCL16
O15496 그룹 10 분비성 포스포리파아제 A2 PLA2G10
O15520 섬유아세포 성장 인자 10 FGF10
O15537 레티노쉬신 RS1
O43157 플렉신-B1 PLXNB1
O43184 디스인테그린 및 금속단백분해효소 도메인-함유 단백질 12 ADAM12
O43240 칼리크레인-10 KLK10
O43278 쿠니츠-형 프로테아제 억제제 1 SPINT1
O43320 섬유아세포 성장 인자 16 FGF16
O43323 사막 헤지호그 단백질 C-산물 DHH
O43405 코클린 COCH
O43508 종양 괴사 인자 리간드 슈퍼패밀리 멤버 12, 막형태 TNFSF12
O43555 프로고나도리베린-2 GNRH2
O43557 종양 괴사 인자 리간드 슈퍼패밀리 멤버 14, 가용성형태 TNFSF14
O43692 펩티다아제 억제제 15 PI15
O43699 시알산-결합 Ig-유사 렉틴 6 SIGLEC6
O43820 히알루로니다아제-3 HYAL3
O43827 안지오포이에틴-관련 단백질 7 ANGPTL7
O43852 칼루메닌 CALU
O43854 EGF-유사 반복 및 디스코이딘 I-유사 도메인-함유 단백질 3 EDIL3
O43866 CD5 항원-유사 CD5L
O43897 톨로이드-유사 단백질 1 TLL1
O43915 혈관내피성장인자 D FIGF
O43927 C-X-C 모티프 케모카인 13 CXCL13
O60218 알도-케토 환원효소 패밀리 1 멤버 B10 AKR1B10
O60235 막관통 프로테아제 세린 11D TMPRSS11D
O60258 섬유아세포 성장 인자 17 FGF17
O60259 칼리크레인-8 KLK8
O60383 성장/분화 인자 9 GDF9
O60469 다운 증후군 세포 부착 분자 DSCAM
O60542 퍼세핀 PSPN
O60565 그렘린-1 GREM1
O60575 세린 프로테아제 억제제 카잘-4 형 SPINK4
O60676 시스타틴-8 CST8
O60687 스시 반복-함유 단백질 SRPX2 SRPX2
O60844 효소원과립 막 단백질 16 ZG16
O60882 기질 금속단백분해효소-20 MMP20
O60938 케라토칸 KERA
O75015 저친화성 면역글로불린 감마 Fc 영역 수용체 III-B FCGR3B
O75077 디스인테그린 및 금속단백분해효소 도메인-함유 단백질 23 ADAM23
O75093 슬릿 상동체 1 단백질 SLIT1
O75094 슬릿 상동체 3 단백질 SLIT3
O75095 다중 표피 성장 인자-유사 도메인 단백질 6 MEGF6
O75173 트롬보스폰딘 모티프 4를 갖는 디스인테그린 및 금속단백분해효소 ADAMTS4
O75200 핵공 복합체-상호작용 단백질-유사 1 NPIPL1
O75339 연골 중간층 단백질 1 C1 CILP
O75354 엑토뉴클레오시드 삼인산 디포스포하이드로라제 6 ENTPD6
O75386 터비-관련 단백질 3 TULP3
O75398 변형된 표피 자기조절 인자 1 상동체 DEAF1
O75443 알파-텍토린 TECTA
O75445 어셔린 USH2A
O75462 사이토카인 수용체-유사 인자 1 CRLF1
O75487 글리피칸-4 GPC4
O75493 탄산 탈수효소-관련 단백질 11 CA11
O75594 펩티도글리칸 인식 단백질 1 PGLYRP1
O75596 C-형 렉틴 도메인 패밀리 3 멤버 A CLEC3A
O75610 좌-우 결정 인자 1 LEFTY1
O75629 단백질 CREG1 CREG1
O75636 피콜린-3 FCN3
O75711 스크래피-반응성 단백질 1 SCRG1
O75715 부고환 분비 글루타티온 과산화효소 GPX5
O75718 연골-결합 단백질 CRTAP
O75829 연골계면활성제 단백질 LECT1
O75830 세르핀 I2 SERPINI2
O75882 아트락틴 ATRN
O75888 종양 괴사 인자 리간드 슈퍼패밀리 멤버 13 TNFSF13
O75900 기질 금속단백분해효소-23 MMP23A
O75951 리소자임-유사 단백질 6 LYZL6
O75973 C1q-관련 인자 C1QL1
O76038 세크레타고긴 SCGN
O76061 스타니오칼신-2 STC2
O76076 WNT1-유도-신호전달 경로 단백질 2 WISP2
O76093 섬유아세포 성장 인자 18 FGF18
O76096 시스타틴-F CST7
O94769 세포외 기질 단백질 2 ECM2
O94813 슬릿 상동체 2 단백질 C-산물 SLIT2
O94907 디코프-관련 단백질 1 DKK1
O94919 엔도뉴클레아제 도메인-함유 1 단백질 ENDOD1
O94964 N-말단 형태 SOGA1
O95025 세마포린-3D SEMA3D
O95084 세린 프로테아제 23 PRSS23
O95150 종양 괴사 인자 리간드 슈퍼패밀리 멤버 15 TNFSF15
O95156 뉴렉소필린-2 NXPH2
O95157 뉴렉소필린-3 NXPH3
O95158 뉴렉소필린-4 NXPH4
O95388 WNT1-유도-신호전달 경로 단백질 1 WISP1
O95389 WNT1-유도-신호전달 경로 단백질 3 WISP3
O95390 성장/분화 인자 11 GDF11
O95393 뼈 형성 단백질 10 BMP10
O95399 유로텐신-2 UTS2
O95407 종양 괴사 인자 수용체 슈퍼패밀리 멤버 6B TNFRSF6B
O95428 파필린 PAPLN
O95445 아포지질단백질 M APOM
O95450 트롬보스폰딘 모티프 2를 갖는 디스인테그린 및 금속단백분해효소 ADAMTS2
O95460 마트릴린-4 MATN4
O95467 LHAL 테트라펩타이드 GNAS
O95631 네트린-1 NTN1
O95633 폴리스타틴-관련 단백질 3 FSTL3
O95711 림프구 항원 86 LY86
O95715 C-X-C 모티프 케모카인 14 CXCL14
O95750 섬유아세포 성장 인자 19 FGF19
O95760 인터루킨-33 IL33
O95813 세르베루스 CER1
O95841 안지오포이에틴-관련 단백질 1 ANGPTL1
O95897 노엘린-2 OLFM2
O95925 에핀 EPPIN
O95965 인테그린 베타-유사 단백질 1 ITGBL1
O95967 EGF-함유 피불린-유사 세포외 기질 단백질 2 EFEMP2
O95968 세크레토글로빈 패밀리 1D 멤버 1 SCGB1D1
O95969 세크레토글로빈 패밀리 1D 멤버 2 SCGB1D2
O95970 류신-풍부 신경아교종-비활성 단백질 1 LGI1
O95972 뼈 형성 단백질 15 BMP15
O95994 전방 구배 단백질 2 상동체 AGR2
O95998 인터루킨-18-결합 단백질 IL18BP
O96009 냅신-A NAPSA
O96014 Wnt-11 단백질 WNT11
P00450 세룰로플라스민 CP
P00451 인자 VIIIa 경사슬 F8
P00488 응고 인자 XIII A 사슬 F13A1
P00533 표피 성장 인자 수용체 EGFR
P00709 알파-락트알부민 LALBA
P00734 프로트롬빈 F2
P00738 합토글로빈 베타 사슬 HP
P00739 합토글로빈-관련 단백질 HPR
P00740 응고 인자 IXa 중사슬 F9
P00742 인자 X 중사슬 F10
P00746 보체 인자 D CFD
P00747 플라스민 경사슬 B PLG
P00748 응고 인자 XIIa 경사슬 F12
P00749 유로키나아제-형 플라스미노겐 활성화인자 장쇄 A PLAU
P00750 조직-형 플라스미노겐 활성화인자 PLAT
P00751 보체 인자 B Ba 조각 CFB
P00797 레닌 REN
P00973 2'-5'-올리고아데닐산 합성효소 1 OAS1
P00995 췌장 분비 트립신 억제제 SPINK1
P01008 항트롬빈-III SERPINC1
P01009 알파-1-항트립신 SERPINA1
P01011 알파-1-항키모트립신 His-Pro-less SERPINA3
P01019 앤지오텐신-1 AGT
P01023 알파-2-마크로글로불린 A2M
P01024 아실화 자극 단백질 C3
P01031 보체 C5 베타 사슬 C5
P01033 금속단백분해효소 억제제 1 TIMP1
P01034 시스타틴-C CST3
P01036 시스타틴-S CST4
P01037 시스타틴-SN CST1
P01042 키니노겐-1 경쇄 KNG1
P01127 혈소판-유래 성장 인자 소단위체 B PDGFB
P01135 형질전환 성장 인자 알파 TGFA
P01137 형질전환 성장 인자 베타-1 TGFB1
P01138 베타-신경 성장 인자 NGF
P01148 고나도리베린-1 GNRH1
P01160 심방나트륨이뇨인자 NPPA
P01178 옥시토신 OXT
P01185 바소프레신-뉴로피신 2-코펩틴 AVP
P01189 부신 피질 자극 호르몬 POMC
P01210 PENK(237-258) PENK
P01213 알파-네오엔돌핀 PDYN
P01215 당단백 호르몬 알파 사슬 CGA
P01222 갑상선 자극 호르몬 소단위체 베타 TSHB
P01225 폴리트로핀 소단위체 베타 FSHB
P01229 루트로핀 소단위체 베타 LHB
P01233 융모생식샘자극호르몬 소단위체 베타 CGB8
P01236 프로락틴 PRL
P01241 소마토트로핀 GH1
P01242 성장 호르몬 변이 GH2
P01243 융모성 소마토맘모트로핀 호르몬 CSH2
P01258 카타칼신 CALCA
P01266 티로글로불린 TG
P01270 부갑상선 호르몬 PTH
P01275 글루카곤 GCG
P01282 장 펩타이드 PHM-27 VIP
P01286 소마토리베린 GHRH
P01298 췌장 프로호르몬 PPY
P01303 NPY의 C-측면 펩티드 NPY
P01308 인슐린 INS
P01344 인슐린-유사 성장 인자 II IGF2
P01350 큰 가스트린 GAST
P01374 림포톡신-알파 LTA
P01375 C-도메인 1 TNF
P01562 인터페론 알파-1/13 IFNA1
P01563 인터페론 알파-2 IFNA2
P01566 인터페론 알파-10 IFNA10
P01567 인터페론 알파-7 IFNA7
P01568 인터페론 알파-21 IFNA21
P01569 인터페론 알파-5 IFNA5
P01570 인터페론 알파-14 IFNA14
P01571 인터페론 알파-17 IFNA17
P01574 인터페론 베타 IFNB1
P01579 인터페론 감마 IFNG
P01583 인터루킨-1 알파 IL1A
P01584 인터루킨-1 베타 IL1B
P01588 적혈구형성인자 EPO
P01591 면역글로불린 J 사슬 IGJ
P01732 T-세포 표면 당단백 CD8 알파 사슬 CD8A
P01833 중합 면역글로불린 수용체 PIGR
P01857 Ig 감마-1 사슬 C 영역 IGHG1
P01859 Ig 감마-2 사슬 C 영역 IGHG2
P01860 Ig 감마-3 사슬 C 영역 IGHG3
P01861 Ig 감마-4 사슬 C 영역 IGHG4
P01871 Ig 뮤 사슬 C 영역 IGHM
P01880 Ig 델타 사슬 C 영역 IGHD
P02452 콜라겐 알파-1(I) 사슬 COL1A1
P02458 콘드로칼신 COL2A1
P02461 콜라겐 알파-1(III) 사슬 COL3A1
P02462 콜라겐 알파-1(IV) 사슬 COL4A1
P02647 아포지질단백질 A-I APOA1
P02649 아포지질단백질 E APOE
P02652 아포지질단백질 A-II APOA2
P02654 아포지질단백질 C-I APOC1
P02655 아포지질단백질 C-II APOC2
P02656 아포지질단백질 C-III APOC3
P02671 피브리노겐 알파 사슬 FGA
P02675 피브리노펩타이드 B FGB
P02679 피브리노겐 감마 사슬 FGG
P02741 C-반응성 단백질 CRP
P02743 혈청 아밀로이드 P-보체(1-203) APCS
P02745 보체 C1q 하위구성인자 소단위체 A C1QA
P02746 보체 C1q 하위구성인자 소단위체 B C1QB
P02747 보체 C1q 하위구성인자 소단위체 C C1QC
P02748 보체 구성인자 C9b C9
P02749 베타-2-당단백질 1 APOH
P02750 류신-풍부 알파-2-당단백질 LRG1
P02751 Ugl-Y2 FN1
P02753 레티놀-결합 단백질 4 RBP4
P02760 트립스타틴 AMBP
P02763 알파-1-산 당단백질 1 ORM1
P02765 알파-2-HS-당단백 사슬 A AHSG
P02766 트랜스티레틴 TTR
P02768 혈청 알부민 ALB
P02771 알파-태아단백질 AFP
P02774 비타민 D-결합 단백질 GC
P02775 결합 조직-활성화 펩타이드 III PPBP
P02776 혈소판 인자 4 PF4
P02778 CXCL10(1-73) CXCL10
P02786 트랜스페린 수용체 단백질 1 TFRC
P02787 세로트랜스페린 TF
P02788 락토페록신-C LTF
P02790 헤모펙신 HPX
P02808 스타테린 STATH
P02810 타액 산성 프롤린-풍부 인단백질 1/2 PRH2
P02812 염기성 타액 프롤린-풍부 단백질 2 PRB2
P02814 펩티드 D1A SMR3B
P02818 오스테오칼신 BGLAP
P03950 안지오제닌 ANG
P03951 응고 인자 XIa 중쇄 F11
P03952 혈장 칼리크레인 KLKB1
P03956 27 kDa 간질 콜라겐분해효소 MMP1
P03971 뮬러리안-억제 인자 AMH
P03973 항백혈구단백분해효소 SLPI
P04003 C4b-결합 단백질 알파 사슬 C4BPA
P04004 소마토메딘-B VTN
P04054 포스포리파아제 A2 PLA2G1B
P04085 혈소판-유래 성장 인자 소단위체 A PDGFA
P04090 릴랙신 A 사슬 RLN2
P04114 아포지질단백질 B-100 APOB
P04118 코리파아제 CLPS
P04141 과립구 대식세포 집락-자극 인자 CSF2
P04155 트레포일 인자 1 TFF1
P04180 포스파티딜콜린-스테롤 아실기전이효소 LCAT
P04196 히스티딘-풍부 당단백질 HRG
P04217 알파-1B-당단백질 A1BG
P04275 폰 빌레브란트 항원 2 VWF
P04278 성 호르몬-결합 글로불린 SHBG
P04279 알파-인히빈-31 SEMG1
P04280 기본 타액 프롤린-풍부 단백질 1 PRB1
P04628 원종양 유전자 Wnt-1 WNT1
P04745 알파-아밀라아제 1 AMY1A
P04746 췌장 알파-아밀라아제 AMY2A
P04808 프로릴랙신 H1 RLN1
P05000 인터페론 오메가-1 IFNW1
P05013 인터페론 알파-6 IFNA6
P05014 인터페론 알파-4 IFNA4
P05015 인터페론 알파-16 IFNA16
P05019 인슐린-유사 성장 인자 I IGF1
P05060 GAWK 펩타이드 CHGB
P05090 아포지질단백질 D APOD
P05109 단백질 S100-A8 S100A8
P05111 인히빈 알파 사슬 INHA
P05112 인터루킨-4 IL4
P05113 인터루킨-5 IL5
P05120 플라스미노겐 활성화인자 억제제 2 SERPINB2
P05121 플라스미노겐 활성화인자 억제제 1 SERPINE1
P05154 혈장 세린 프로테아제 억제제 SERPINA5
P05155 혈장 프로테아제 C1 억제제 SERPING1
P05156 보체 인자 I 중사슬 CFI
P05160 응고 인자 XIII B 사슬 F13B
P05161 유비퀴틴-유사 단백질 ISG15 ISG15
P05230 섬유아세포 성장 인자 1 FGF1
P05231 인터루킨-6 IL6
P05305 큰 엔도텔린-1 EDN1
P05408 C-말단 펩타이드 SCG5
P05451 리토스타틴-1-알파 REG1A
P05452 테트라넥틴 CLEC3B
P05543 티록신-결합 글로불린 SERPINA7
P05814 베타-카제인 CSN2
P05997 콜라겐 알파-2(V) 사슬 COL5A2
P06276 콜린에스터라아제 BCHE
P06307 콜레시스토키닌-12 CCK
P06396 겔솔린 GSN
P06681 보체 C2 C2
P06702 단백질 S100-A9 S100A9
P06727 아포지질단백질 A-IV APOA4
P06734 저친화성 면역글로불린 엡실론 Fc 수용체 가용성 형태 FCER2
P06744 포도당-6-인산 이성질화효소 GPI
P06850 코르티코리베린 CRH
P06858 지단백 리파아제 LPL
P06881 칼시토닌 유전자-관련 펩타이드 1 CALCA
P07093 아교세포-유래 넥신 SERPINE2
P07098 위 트리아실글리세롤 리파아제 LIPF
P07225 비타민 K-의존성 단백질 S PROS1
P07237 단백질이황화물 이성질화효소 P4HB
P07288 전립선 특이항원 KLK3
P07306 아시알로당단백질 수용체 1 ASGR1
P07355 아넥신 A2 ANXA2
P07357 보체 구성인자 C8 알파 사슬 C8A
P07358 보체 구성인자 C8 베타 사슬 C8B
P07360 보체 구성인자 C8 감마 사슬 C8G
P07477 알파-트립신 사슬 2 PRSS1
P07478 트립신-2 PRSS2
P07492 뉴로메딘-C GRP
P07498 카파-카제인 CSN3
P07585 데코린 DCN
P07911 유로모듈린 UMOD
P07942 라미닌 소단위체 베타-1 LAMB1
P07988 폐 계면활성제-연관 단백질 B SFTPB
P07998 췌장 리보뉴클레아제 RNASE1
P08118 베타-마이크로세미노단백질 MSMB
P08123 콜라겐 알파-2(I) 사슬 COL1A2
P08185 코르티코스테로이드-결합 글로불린 SERPINA6
P08217 키모트립신-유사 엘라스타아제 패밀리 멤버 2A CELA2A
P08218 키모트립신-유사 엘라스타아제 패밀리 멤버 2B CELA2B
P08253 72 kDa IV형 콜라겐분해효소 MMP2
P08254 스트로멜리신-1 MMP3
P08294 세포외 과산화물 불균등화효소 [Cu-Zn] SOD3
P08476 인히빈 베타 A 사슬 INHBA
P08493 기질 Gla 단백질 MGP
P08572 콜라겐 알파-2(IV) 사슬 COL4A2
P08581 간세포 성장 인자 수용체 MET
P08603 보체 인자 H CFH
P08620 섬유아세포 성장 인자 4 FGF4
P08637 저친화성 면역글로불린 감마 Fc 영역 수용체 III-A FCGR3A
P08697 알파-2-항플라스민 SERPINF2
P08700 인터루킨-3 IL3
P08709 응고 인자 VII F7
P08833 인슐린-유사 성장 인자 결합 단백질 1 IGFBP1
P08887 인터루킨-6 수용체 소단위체 알파 IL6R
P08949 뉴로메딘-B-32 NMB
P08F94 피브로시스틴 PKHD1
P09038 섬유아세포 성장 인자 2 FGF2
P09228 시스타틴-SA CST2
P09237 마트릴리신 MMP7
P09238 스트로멜리신-2 MMP10
P09341 성장-조절 알파 단백질 CXCL1
P09382 갈렉틴-1 LGALS1
P09466 글리코델린 PAEP
P09486 SPARC SPARC
P09529 인히빈 베타 B 사슬 INHBB
P09544 Wnt-2 단백질 WNT2
P09603 가공된 대식세포 집락-자극 인자 1 CSF1
P09681 위 억제 폴리펩타이드 GIP
P09683 세크레틴 SCT
P09919 과립구 집락-자극 인자 CSF3
P0C091 FRAS1-관련 세포외기질 단백질 3 FREM3
P0C0L4 C4d-A C4A
P0C0L5 보체 C4-B 알파 사슬 C4B
P0C0P6 뉴로펩타이드 S NPS
P0C7L1 세린 프로테아제 억제제 카잘-형 8 SPINK8
P0C862 보체 C1q 및 종양 괴사 인자-관련 단백질 9A C1QTNF9
P0C8F1 전립선 및 고환 발현 단백질 4 PATE4
P0CG01 개스트로카인(Gastrokine)-3 GKN3P
P0CG36 크립틱(Cryptic) 패밀리 단백질 1B CFC1B
P0CG37 크립틱 단백질 CFC1
P0CJ68 휴마닌(Humanin)-유사 단백질 1 MTRNR2L1
P0CJ69 휴마닌-유사 단백질 2 MTRNR2L2
P0CJ70 휴마닌-유사 단백질 3 MTRNR2L3
P0CJ71 휴마닌-유사 단백질 4 MTRNR2L4
P0CJ72 휴마닌-유사 단백질 5 MTRNR2L5
P0CJ73 휴마닌-유사 단백질 6 MTRNR2L6
P0CJ74 휴마닌-유사 단백질 7 MTRNR2L7
P0CJ75 휴마닌-유사 단백질 8 MTRNR2L8
P0CJ76 휴마닌-유사 단백질 9 MTRNR2L9
P0CJ77 휴마닌-유사 단백질 10 MTRNR2L10
P0DJD7 펩신(Pepsin) A-4 PGA4
P0DJD8 펩신 A-3 PGA3
P0DJD9 펩신 A-5 PGA5
P0DJI8 아밀로이드 단백질 A SAA1
P0DJI9 혈청 아밀로이드 A-2 단백질 SAA2
P10082 펩타이드 YY(3-36) PYY
P10092 칼시토닌 유전자-관련 펩타이드 2 CALCB
P10124 세르글리신 SRGN
P10145 MDNCF-a IL8
P10147 MIP-1-알파(4-69) CCL3
P10163 펩타이드 P-D PRB4
P10451 오스테오폰틴 SPP1
P10599 티오레독신 TXN
P10600 형질전환 성장 인자 베타-3 TGFB3
P10643 보체 구성인자 C7 C7
P10645 바소스타틴-2 CHGA
P10646 조직 인자 경로 억제제 TFPI
P10720 혈소판 인자 4 변이(4-74) PF4V1
P10745 레티놀-결합 단백질 3 RBP3
P10767 섬유아세포 성장 인자 6 FGF6
P10909 클러스테린 알파 사슬 CLU
P10912 성장 호르몬 수용체 GHR
P10915 하이알루론산과 프로테오글리칸 연결 단백질 1 HAPLN1
P10966 T-세포 표면 당단백 CD8 베타 사슬 CD8B
P10997 섬 아밀로이드 폴리펩타이드 IAPP
P11047 라미닌 소단위체 감마-1 LAMC1
P11150 간 트리아실글리세롤 리파아제 LIPC
P11226 마노스-결합 단백질 C MBL2
P11464 임신-특이 베타-1-당단백질 1 PSG1
P11465 임신-특이 베타-1-당단백질 2 PSG2
P11487 섬유아세포 성장 인자 3 FGF3
P11597 콜레스테릴 에스테르 전이 단백질 CETP
P11684 유테로글로빈 SCGB1A1
P11686 폐 계면활성제-연관 단백질 C SFTPC
P12034 섬유아세포 성장 인자 5 FGF5
P12107 콜라겐 알파-1(XI) 사슬 COL11A1
P12109 콜라겐 알파-1(VI) 사슬 COL6A1
P12110 콜라겐 알파-2(VI) 사슬 COL6A2
P12111 콜라겐 알파-3(VI) 사슬 COL6A3
P12259 응고 인자 V F5
P12272 PTHrP[1-36] PTHLH
P12273 프로락틴-유도 단백질 PIP
P12544 그랜자임 A GZMA
P12643 뼈 형성 단백질 2 BMP2
P12644 뼈 형성 단백질 4 BMP4
P12645 뼈 형성 단백질 3 BMP3
P12724 호산구 양이온 단백질 RNASE3
P12821 안지오텐신전환효소, 가용성 형태 ACE
P12838 호중구 디펜신 4 DEFA4
P12872 모틸린 MLN
P13232 인터루킨-7 IL7
P13236 C-C 모티프 케모카인 4 CCL4
P13284 감마-인터페론-유도 리소좀산 티올 환원효소 IFI30
P13500 C-C 모티프 케모카인 2 CCL2
P13501 C-C 모티프 케모카인 5 CCL5
P13521 세크레토그라닌-2 SCG2
P13591 신경 세포 부착 분자 1 NCAM1
P13611 베르시칸 코어 단백질 VCAN
P13671 보체 구성인자 C6 C6
P13688 암배아 항원-관련 세포 부착 분자 1 CEACAM1
P13725 온코스타틴-M OSM
P13726 조직 인자 F3
P13727 호산구 과립 주요 기초 단백질 PRG2
P13942 콜라겐 알파-2(XI) 사슬 COL11A2
P13987 CD59 당단백질 CD59
P14138 엔도텔린-3 EDN3
P14174 대식세포 이동저해인자 MIF
P14207 엽산 수용체 베타 FOLR2
P14222 퍼포린-1 PRF1
P14543 니도겐-1 NID1
P14555 포스포리파아제 A2, 막 결합 PLA2G2A
P14625 엔도플라스민 HSP90B1
P14735 인슐린-분해 효소 IDE
P14778 인터루킨-1 수용체 1형, 가용성 형태 IL1R1
P14780 82 kDa 기질 금속단백분해효소-9 MMP9
P15018 백혈병 억제 인자 LIF
P15085 카르복시펩티다아제 A1 CPA1
P15086 카르복시펩티다아제 B CPB1
P15151 폴리오 바이러스 수용체 PVR
P15169 카르복시펩티다아제 N 촉매 사슬 CPN1
P15248 인터루킨-9 IL9
P15291 N-아세틸락토사민 신타아제 B4GALT1
P15309 PAPf39 ACPP
P15328 엽산 수용체 알파 FOLR1
P15374 유비퀴틴 카르복실-말단 가수분해 동질효소 L3 UCHL3
P15502 엘라스틴 ELN
P15509 과립구 대식세포 집락-자극 인자 수용체 소단위체 알파 CSF2RA
P15515 히스타틴-1 HTN1
P15516 His3-(31-51)-펩타이드 HTN3
P15692 혈관내피성장인자 A VEGFA
P15814 면역글로불린 람다-유사 폴리펩타이드 1 IGLL1
P15907 베타-갈락토시드 알파-2,6-시아릴전이효소 1 ST6GAL1
P15941 뮤신-1 소단위체 베타 MUC1
P16035 금속단백분해효소 억제제 2 TIMP2
P16112 아그레칸 코어 단백질 2 ACAN
P16233 췌장 트리아실글리세롤 리파아제 PNLIP
P16442 조직-혈액형 ABO계 전이효소 ABO
P16471 프로락틴 수용체 PRLR
P16562 시스테인-풍부 분비 단백질 2 CRISP2
P16619 C-C 모티프 케모카인 3-유사 1 CCL3L1
P16860 BNP(3-29) NPPB
P16870 카르복시펩티다아제 E CPE
P16871 인터루킨-7 수용체 소단위체 알파 IL7R
P17213 살균 투과성 증가 단백질 BPI
P17538 키모트립시노겐 B CTRB1
P17931 갈렉틴-3 LGALS3
P17936 인슐린-유사 성장 인자 결합 단백질 3 IGFBP3
P17948 혈관내피성장인자 수용체 1 FLT1
P18065 인슐린-유사 성장 인자 결합 단백질 2 IGFBP2
P18075 뼈 형성 단백질 7 BMP7
P18428 지질다당류-결합 단백질 LBP
P18509 PACAP-관련 펩타이드 ADCYAP1
P18510 인터루킨-1 수용체 길항제 단백질 IL1RN
P18827 신데칸-1 SDC1
P19021 펩티딜글리신 알파-수산화 모노옥시게나제 PAM
P19235 적혈구형성인자 수용체 EPOR
P19438 종양 괴사 인자-결합 단백질 1 TNFRSF1A
P19652 알파-1-산 당단백질 2 ORM2
P19801 아밀로라이드-민감성 아민 산화효소[구리 함유] ABP1
P19823 인터-알파-트립신 억제제 중사슬 H2 ITIH2
P19827 인터-알파-트립신 억제제 중사슬 H1 ITIH1
P19835 담즙산염-활성화 리파아제 CEL
P19875 C-X-C 모티프 케모카인 2 CXCL2
P19876 C-X-C 모티프 케모카인 3 CXCL3
P19883 폴리스타틴 FST
P19957 엘라핀 PI3
P19961 알파-아밀라아제 2B AMY2B
P20061 트랜스코발라민-1 TCN1
P20062 트랜스코발라민-2 TCN2
P20142 가스트릭신 PGC
P20155 세린 프로테아제 억제제 카잘-형 2 SPINK2
P20231 트립신분해효소 베타-2 TPSB2
P20333 종양 괴사 인자 수용체 슈퍼패밀리 멤버 1B TNFRSF1B
P20366 물질 P TAC1
P20382 멜라닌-함유 호르몬 PMCH
P20396 티로리베린 TRH
P20742 임신 영역 단백질 PZP
P20774 미메칸 OGN
P20783 뉴로트로핀-3 NTF3
P20800 엔도텔린-2 EDN2
P20809 인터루킨-11 IL11
P20827 에프린-A1 EFNA1
P20849 콜라겐 알파-1(IX) 사슬 COL9A1
P20851 C4b-결합 단백질 베타 사슬 C4BPB
P20908 콜라겐 알파-1(V) 사슬 COL5A1
P21128 폴리(U)-특이 엔도리보뉴클레아제 ENDOU
P21246 플레이오트로핀 PTN
P21583 키트 리간드 KITLG
P21741 미드카인 MDK
P21754 투명대 정자-결합 단백질 3 ZP3
P21781 섬유아세포 성장 인자 7 FGF7
P21802 섬유아세포 성장 인자 수용체 2 FGFR2
P21810 비글리칸 BGN
P21815 뼈 시알로단백질 2 IBSP
P21860 수용체 티로신-단백질 인산화효소 erbB-3 ERBB3
P21941 연골기질 단백질 MATN1
P22003 뼈 형성 단백질 5 BMP5
P22004 뼈 형성 단백질 6 BMP6
P22079 락토페록시다제 LPO
P22105 테나신-X TNXB
P22301 인터루킨-10 IL10
P22303 아세틸콜린에스테라제 ACHE
P22352 글루타티온 과산화효소 3 GPX3
P22362 C-C 모티프 케모카인 1 CCL1
P22455 섬유아세포 성장 인자 수용체 4 FGFR4
P22466 갈라닌 메시지-연관 펩타이드 GAL
P22692 인슐린-유사 성장 인자 결합 단백질 4 IGFBP4
P22749 그래눌리신 GNLY
P22792 카르복시펩티다아제 N 소단위체 2 CPN2
P22891 비타민 K-의존성 단백질 Z PROZ
P22894 호중구 콜라겐분해효소 MMP8
P23142 피불린-1 FBLN1
P23280 탄산 탈수 효소 6 CA6
P23352 아노스민-1 KAL1
P23435 세레벨린-1 CBLN1
P23560 뇌유래 신경영양 인자 BDNF
P23582 C-형 나트륨이뇨 펩타이드 NPPC
P23946 키마아제 CMA1
P24043 라미닌 소단위체 알파-2 LAMA2
P24071 면역글로불린 알파 Fc 수용체 FCAR
P24347 스트로멜리신-3 MMP11
P24387 부신피질 자극 호르몬-방출 인자 결합 단백질 CRHBP
P24592 인슐린-유사 성장 인자 결합 단백질 6 IGFBP6
P24593 인슐린-유사 성장 인자 결합 단백질 5 IGFBP5
P24821 테나신 TNC
P24855 디옥시리보뉴클레아제-1 DNASE1
P25067 콜라겐 알파-2(VIII) 사슬 COL8A2
P25311 아연-알파-2 당단백질 AZGP1
P25391 라미닌 소단위체 알파-1 LAMA1
P25445 종양 괴사 인자 수용체 슈퍼패밀리 멤버 6 FAS
P25940 콜라겐 알파-3(V) 사슬 COL5A3
P25942 종양 괴사 인자 수용체 슈퍼패밀리 멤버 5 CD40
P26022 펜트락신-관련 단백질 PTX3 PTX3
P26927 간세포 성장인자-유사 단백질 베타 사슬 MST1
P27169 혈청 파라옥소나아제/아릴에스테라아제 1 PON1
P27352 위 내인자 GIF
P27487 디펩티딜 펩티다아제 4 막 형태 DPP4
P27539 배아 성장/분화 인자 1 GDF1
P27658 바스타틴 COL8A1
P27797 칼레티쿨린 CALR
P27918 프로퍼딘 CFP
P28039 아실로자이아실 가수분해효소 AOAH
P28300 단백질-라이신 6-산화효소 LOX
P28325 시스타틴-D CST5
P28799 그래눌린-1 GRN
P29122 전구단백질 전환효소 서브틸리신/켁신 6형 PCSK6
P29279 결합 조직 성장 인자 CTGF
P29320 에프린 A-형 수용체 3 EPHA3
P29400 콜라겐 알파-5(IV) 사슬 COL4A5
P29459 인터루킨-12 소단위체 알파 IL12A
P29460 인터루킨-12 소단위체 베타 IL12B
P29508 세르핀 B3 SERPINB3
P29622 칼리스타틴 SERPINA4
P29965 CD40 리간드, 가용성 형태 CD40LG
P30990 뉴로텐신/뉴로메딘 N NTS
P31025 리포칼린-1 LCN1
P31151 단백질 S100-A7 S100A7
P31371 섬유아세포 성장 인자 9 FGF9
P31431 신데칸-4 SDC4
P31947 14-3-3 단백질 시그마 SFN
P32455 인터페론-유도 구아닐레이트-결합 단백질 1 GBP1
P32881 인터페론 알파-8 IFNA8
P34096 리보뉴클레아제 4 RNASE4
P34130 뉴로트로핀-4 NTF4
P34820 뼈 형성 단백질 8B BMP8B
P35030 트립신-3 PRSS3
P35052 분비 글리피칸-1 GPC1
P35070 베타셀룰린 BTC
P35225 인터루킨-13 IL13
P35247 폐 계면활성제-연관 단백질 D SFTPD
P35318 ADM ADM
P35542 혈청 아밀로이드 A-4 단백질 SAA4
P35555 피브릴린-1 FBN1
P35556 피브릴린-2 FBN2
P35625 금속단백분해효소 억제제 3 TIMP3
P35858 인슐린-유사 성장 인자 결합 단백질 복합체 산 가변성 소단위체 IGFALS
P35916 혈관내피성장인자 수용체 3 FLT4
P35968 혈관내피성장인자 수용체 2 KDR
P36222 키티나아제-3-유사 단백질 1 CHI3L1
P36952 세르핀 B5 SERPINB5
P36955 색소 상피-유래 인자 SERPINF1
P36980 보체 인자 H-관련 단백질 2 CFHR2
P39059 콜라겐 알파-1(XV) 사슬 COL15A1
P39060 콜라겐 알파-1(XVIII) 사슬 COL18A1
P39877 칼슘-의존성 포스포리파아제 A2 PLA2G5
P39900 대식세포 메탈로엘라스타아제 MMP12
P39905 신경교 세포주-유래 신경영양 인자 GDNF
P40225 트롬보포이에틴 THPO
P40967 M-알파 PMEL
P41159 렙틴 LEP
P41221 Wnt-5a 단백질 WNT5A
P41222 프로스타글란딘-H2 D-이성질화효소 PTGDS
P41271 종양형성의 신경모세포종 억제제 1 NBL1
P41439 엽산 수용체 감마 FOLR3
P42127 아구티-신호전달 단백질 ASIP
P42702 백혈병 억제 인자 수용체 LIFR
P42830 ENA-78(9-78) CXCL5
P43026 성장/분화 인자 5 GDF5
P43251 바이오티니다제 BTD
P43652 아파민 AFM
P45452 콜라겐분해효소 3 MMP13
P47710 카족신-D CSN1S1
P47929 갈렉틴-7 LGALS7B
P47972 신경성 펜트락신-2 NPTX2
P47989 크산틴 산화효소 XDH
P47992 림포탁틴 XCL1
P48023 종양 괴사 인자 리간드 슈퍼패밀리 멤버 6, 막형태 FASLG
P48052 카르복시펩티다아제 A2 CPA2
P48061 간질세포-유래 인자 1 CXCL12
P48304 리토스타틴-1-베타 REG1B
P48307 조직 인자 경로 억제제 2 TFPI2
P48357 렙틴 수용체 LEPR
P48594 세르핀 B4 SERPINB4
P48645 뉴로메딘-U-25 NMU
P48740 만난-결합 렉틴 세린 프로테아제 1 MASP1
P48745 단백질 NOV 상동체 NOV
P48960 CD97 항원 소단위체 베타 CD97
P49223 쿠니츠-형 프로테아제 억제제 3 SPINT3
P49747 연골 올리고머 기질 단백질 COMP
P49763 태반(Placenta) 성장 인자 PGF
P49765 혈관내피성장인자 B VEGFB
P49767 혈관내피성장인자 C VEGFC
P49771 Fms-관련 티로신 인산화효소 3 리간드 FLT3LG
P49862 칼리크레인-7 KLK7
P49863 그랜자임 K GZMK
P49908 셀렌단백질 P SEPP1
P49913 항균 단백질 FALL-39 CAMP
P50607 터비 단백질 상동체 TUB
P51124 그랜자임 M GZMM
P51512 기질 금속단백분해효소-16 MMP16
P51654 글리피칸-3 GPC3
P51671 에오탁신 CCL11
P51884 루미칸 LUM
P51888 프롤아르긴 PRELP
P52798 에프린-A4 EFNA4
P52823 스타니오칼신-1 STC1
P53420 콜라겐 알파-4(IV) 사슬 COL4A4
P53621 코토머 소단위체 알파 COPA
P54108 시스테인-풍부 분비 단백질 3 CRISP3
P54315 췌장 리파아제-관련 단백질 1 PNLIPRP1
P54317 췌장 리파아제-관련 단백질 2 PNLIPRP2
P54793 아릴설파타제 F ARSF
P55000 분비 Ly-6/uPAR-관련 단백질 1 SLURP1
P55001 미세섬유-연관 단백질 2 MFAP2
P55056 아포지질단백질 C-IV APOC4
P55058 인지질 전이 단백질 PLTP
P55075 섬유아세포 성장 인자 8 FGF8
P55081 미세섬유-연관 단백질 1 MFAP1
P55083 미세섬유-연관 당단백질 4 MFAP4
P55107 뼈 형성 단백질 3B GDF10
P55145 중뇌 성상교세포-유래 신경영양 인자 MANF
P55259 췌장 분비 과립 막 주요 당단백질 GP2 GP2
P55268 라미닌 소단위체 베타-2 LAMB2
P55773 CCL23(30-99) CCL23
P55774 C-C 모티프 케모카인 18 CCL18
P55789 FAD-연결 설프히드릴 산화효소 ALR GFER
P56703 원종양 유전자 Wnt-3 WNT3
P56704 Wnt-3a 단백질 WNT3A
P56705 Wnt-4 단백질 WNT4
P56706 Wnt-7b 단백질 WNT7B
P56730 뉴로트립신 PRSS12
P56851 부고환 분비 단백질 E3-베타 EDDM3B
P56975 뉴레굴린-3 NRG3
P58062 세린 프로테아제 억제제 카잘-형 7 SPINK7
P58215 리실 산화효소 상동체 3 LOXL3
P58294 프로키네티신-1 PROK1
P58335 탄저균 독소 수용체 2 ANTXR2
P58397 트롬보스폰딘 모티프 12를 갖는 디스인테그린 및 금속단백분해효소 ADAMTS12
P58417 뉴렉소필린-1 NXPH1
P58499 단백질 FAM3B FAM3B
P59510 트롬보스폰딘 모티프 20을 갖는 디스인테그린 및 금속단백분해효소 ADAMTS20
P59665 호중구 디펜신 1 DEFA1B
P59666 호중구 디펜신 3 DEFA3
P59796 글루타티온 과산화효소 6 GPX6
P59826 BPI 접힘-함유 패밀리 B 멤버 3 BPIFB3
P59827 BPI 접힘-함유 패밀리 B 멤버 4 BPIFB4
P59861 베타-디펜신 131 DEFB131
P60022 베타-디펜신 1 DEFB1
P60153 비활성 리보뉴클레아제-유사 단백질 9 RNASE9
P60827 보체 C1q 종양 괴사 인자-관련 단백질 8 C1QTNF8
P60852 투명대 정자-결합 단백질 1 ZP1
P60985 케라틴 세포(Keratinocyte) 분화-연관 단백질 KRTDAP
P61109 신장 안드로겐-조절 단백질 KAP
P61278 소마토스타틴-14 SST
P61366 오스테오크린 OSTN
P61626 리소자임 C LYZ
P61769 베타-2-마이크로글로불린 B2M
P61812 형질전환 성장 인자 베타-2 TGFB2
P61916 부고환 분비 단백질 E1 NPC2
P62502 부고환-특이 리포칼린(lipocalin)-6 LCN6
P62937 펩티딜-프롤린 시스-트랜스 이성질화효소 A PPIA
P67809 뉴클레아제-민감성 요소-결합 단백질 1 YBX1
P67812 신호 펩티다아제 복합체 촉매 소단위체 SEC11A SEC11A
P78310 콕사키바이러스 및 아데노바이러스 수용체 CXADR
P78333 분비 글리피칸-5 GPC5
P78380 산화 저밀도 지질단백질 수용체 1 OLR1
P78423 가공된 프랙탈카인 CX3CL1
P78509 리일린 RELN
P78556 CCL20(2-70) CCL20
P80075 MCP-2(6-76) CCL8
P80098 C-C 모티프 케모카인 7 CCL7
P80108 포스파티딜이노시톨-글리칸 특이 포스포리파아제 D GPLD1
P80162 C-X-C 모티프 케모카인 6 CXCL6
P80188 호중구 젤라틴분해효소-연관 리포칼린 LCN2
P80303 뉴클레오빈딘-2 NUCB2
P80511 칼시테르민 S100A12
P81172 헵시딘-25 HAMP
P81277 프로락틴-방출 펩타이드 PRLH
P81534 베타-디펜신 103 DEFB103A
P81605 덤시딘 DCD
P82279 단백질 크럼스 상동체 1 CRB1
P82987 ADAMTS-유사 단백질 3 ADAMTSL3
P83105 세린 프로테아제 HTRA4 HTRA4
P83110 세린 프로테아제 HTRA3 HTRA3
P83859 식욕유발 뉴로펩타이드 QRFP QRFP
P98088 뮤신-5AC MUC5AC
P98095 피불린-2 FBLN2
P98160 기저막-특이적 황상 헤파란 프로테오글리칸 코어 단백질 HSPG2
P98173 단백질 FAM3A FAM3A
Q00604 노린 NDP
Q00796 소르비톨 탈수소효소 SORD
Q00887 임신-특이 베타-1-당단백질 9 PSG9
Q00888 임신-특이 베타-1-당단백질 4 PSG4
Q00889 임신-특이 베타-1-당단백질 6 PSG6
Q01523 HD5(56-94) DEFA5
Q01524 디펜신-6 DEFA6
Q01955 콜라겐 알파-3(IV) 사슬 COL4A3
Q02297 프로-뉴레굴린-1, 막-결합 동형 NRG1
Q02325 플라스미노겐-유사 단백질 B PLGLB1
Q02383 정낭분비물-2 SEMG2
Q02388 콜라겐 알파-1(VII) 사슬 COL7A1
Q02505 뮤신-3A MUC3A
Q02509 오토코닌-90 OC90
Q02747 구아닐린 GUCA2A
Q02763 안지오포이에틴-1 수용체 TEK
Q02817 뮤신-2 MUC2
Q02985 보체 인자 H-관련 단백질 3 CFHR3
Q03167 형질전환 성장 인자 베타 수용체 3형 TGFBR3
Q03403 트레포일 인자 2 TFF2
Q03405 유로키나아제 플라스미노겐 활성화인자 표면 수용체 PLAUR
Q03591 보체 인자 H-관련 단백질 1 CFHR1
Q03692 콜라겐 알파-1(X) 사슬 COL10A1
Q04118 기본 타액 프롤린-풍부 단백질 3 PRB3
Q04756 간세포 성장인자 활성화인자 단쇄 HGFAC
Q04900 시알로뮤신 코어 단백질 24 CD164
Q05315 에오시노필 리소포스포리파아제 CLC
Q05707 콜라겐 알파-1(XIV) 사슬 COL14A1
Q05996 가공된 투명대 정자-결합 단백질 2 ZP2
Q06033 인터-알파-트립신 억제제 중사슬 H3 ITIH3
Q06141 재생성 섬-유래 단백질 3-알파 REG3A
Q06828 피브로모듈린 FMOD
Q07092 콜라겐 알파-1(XVI) 사슬 COL16A1
Q07325 C-X-C 모티프 케모카인 9 CXCL9
Q07507 더마토폰틴 DPT
Q075Z2 정자 단백질 상동체 1의 바인더 BSPH1
Q07654 트레포일 인자 3 TFF3
Q07699 나트륨 통로 소단위체 베타-1 SCN1B
Q08345 상피 디스코이딘 도메인-함유 수용체 1 DDR1
Q08380 갈렉틴-3-결합 단백질 LGALS3BP
Q08397 리실 산화효소 상동체 1 LOXL1
Q08431 락타드헤린 MFGE8
Q08629 테스티칸-1 SPOCK1
Q08648 정자-연관 항원 11B SPAG11B
Q08830 피브리노겐-유사 단백질 1 FGL1
Q10471 폴리펩티드 N-아세틸갈락토사미닐전이효소 2 GALNT2
Q10472 폴리펩티드 N-아세틸갈락토사미닐전이효소 1 GALNT1
Q11201 CMP-N-아세틸뉴라미네이트-베타-갈락토사미드-알파-2,3- 시아릴전이효소 1 ST3GAL1
Q11203 CMP-N-아세틸뉴라미네이트-베타-1,4-갈락토시드 알파-2,3- 시아릴전이효소 ST3GAL3
Q11206 CMP-N-아세틸뉴라미네이트-베타-갈락토사미드-알파-2,3- 시아릴전이효소 4 ST3GAL4
Q12794 히알루로니다아제-1 HYAL1
Q12805 EGF-함유 피불린-유사 세포외 기질 단백질 1 EFEMP1
Q12836 투명대 정자-결합 단백질 4 ZP4
Q12841 폴리스타틴-관련 단백질 1 FSTL1
Q12904 아미노아실 tRNA 신타아제 복합체-상호작용 다기능 단백질 1 AIMP1
Q13018 가용성 분비 포스포리파아제 A2 수용체 PLA2R1
Q13072 B 흑색종 항원 1 BAGE
Q13093 혈소판-활성화 인자 아세틸히드로라아제 PLA2G7
Q13103 분비 인단백질 24 SPP2
Q13162 퍼록시레독신-4 PRDX4
Q13201 혈소판 당단백질 Ia* MMRN1
Q13214 세마포린-3B SEMA3B
Q13219 파파리신-1 PAPPA
Q13231 키토트리오시다제-1 CHIT1
Q13253 노긴 NOG
Q13261 인터루킨-15 수용체 소단위체 알파 IL15RA
Q13275 세마포린-3F SEMA3F
Q13291 신호전달 림프구 활성화 분자 SLAMF1
Q13316 상아질 산성 인단백질 1 DMP1
Q13361 미세섬유-연관 단백질 5 MFAP5
Q13410 부티로필린 서브패밀리 1 멤버 A1 BTN1A1
Q13421 메소텔린, 절단 형태 MSLN
Q13429 인슐린-유사 성장 인자 I IGF-I
Q13443 디스인테그린 및 금속단백분해효소 도메인-함유 단백질 9 ADAM9
Q13519 뉴로펩타이드 1 PNOC
Q13751 라미닌 소단위체 베타-3 LAMB3
Q13753 라미닌 소단위체 감마-2 LAMC2
Q13790 아포지질단백질 F APOF
Q13822 엑토뉴클레오티드 피로포스파타아제/포스포디에스테라아제 패밀리 멤버 2 ENPP2
Q14031 콜라겐 알파-6(IV) 사슬 COL4A6
Q14050 콜라겐 알파-3(IX) 사슬 COL9A3
Q14055 콜라겐 알파-2(IX) 사슬 COL9A2
Q14112 니도겐-2 NID2
Q14114 저밀도 지단백 수용체-관련 단백질 8 LRP8
Q14118 디스트로글리칸 DAG1
Q14314 피브로류킨 FGL2
Q14393 성장 정지-특이적 단백질 6 GAS6
Q14406 융모몸젖샘자극 호르몬-유사 1 CSHL1
Q14507 부고환 분비 단백질 E3-알파 EDDM3A
Q14508 WAP 4-다이설파이드 코어 도메인 단백질 2 WFDC2
Q14512 섬유아세포 성장 인자-결합 단백질 1 FGFBP1
Q14515 SPARC-유사 단백질 1 SPARCL1
Q14520 히알루론산-결합 단백질 2 27 kDa 경사슬 HABP2
Q14563 세마포린-3A SEMA3A
Q14623 인디안 헤지호그 단백질 IHH
Q14624 인터-알파-트립신 억제제 중사슬 H4 ITIH4
Q14667 UPF0378 단백질 KIAA0100 KIAA0100
Q14703 막결합 전사 인자 부위-1 프로테아제 MBTPS1
Q14766 잠재-형질전환(Latent-transforming) 증식인자 베타-결합 단백질 1 LTBP1
Q14767 잠재-형질전환 증식인자 베타-결합 단백질 2 LTBP2
Q14773 세포간(Intercellular) 부착 분자 4 ICAM4
Q14993 콜라겐 알파-1(XIX) 사슬 COL19A1
Q14CN2 칼슘-활성화 염소 통로 조절자 4, 110 kDa 형태 CLCA4
Q15046 라이신--tRNA 리가아제 KARS
Q15063 페리오스틴(Periostin) POSTN
Q15109 최종 당화산물(Advanced glycosylation end product)-특이적 수용체 AGER
Q15113 프로콜라겐 C-엔도펩티다아제 인핸서(Procollagen C-endopeptidase enhancer) 1 PCOLCE
Q15166 혈청 파라옥소나아제/락토나아제(lactonase) 3 PON3
Q15195 플라스미노겐-유사 단백질 A PLGLA
Q15198 혈소판-유래 성장 인자 수용체-유사 단백질 PDGFRL
Q15223 폴리오 바이러스 수용체-관련 단백질 1 PVRL1
Q15238 임신-특이 베타-1-당단백질 5 PSG5
Q15363 막관통 emp24 도메인-함유 단백질 2 TMED2
Q15375 에프린 A-형 수용체 7 EPHA7
Q15389 안지오포이에틴-1 ANGPT1
Q15465 소닉 헤지호그 단백질 SHH
Q15485 피콜린-2 FCN2
Q15517 코르네오데스모신(Corneodesmosin) CDSN
Q15582 형질전환 성장 인자-베타-유도 단백질 ig-h3 TGFBI
Q15661 트립신분해효소 알파/베타-1 TPSAB1
Q15726 메타스틴(Metastin) KISS1
Q15782 키티나아제-3-유사 단백질 2 CHI3L2
Q15828 시스타틴-M CST6
Q15846 클러스테린-유사 단백질 1 CLUL1
Q15848 아디포넥틴(Adiponectin) ADIPOQ
Q16206 단백질 디설파이드-티올(disulfide-thiol) 산화환원효소 ENOX2
Q16270 인슐린-유사 성장 인자 결합 단백질 7 IGFBP7
Q16363 라미닌 소단위체 알파-4 LAMA4
Q16378 프롤린-풍부 단백질 4 PRR4
Q16557 임신-특이 베타-1-당단백질 3 PSG3
Q16568 CART(42-89) CARTPT
Q16610 세포외 기질 단백질 1 ECM1
Q16619 카디오트로핀(Cardiotrophin)-1 CTF1
Q16623 신탁신(Syntaxin)-1A STX1A
Q16627 HCC-1(9-74) CCL14
Q16651 프로스타신(Prostasin) 경사슬 PRSS8
Q16661 구아닐산 고리화효소 C-활성화 펩타이드 2 GUCA2B
Q16663 CCL15(29-92) CCL15
Q16674 흑색종-유래 성장 조절 단백질 MIA
Q16769 글루타미닐(Glutaminyl)-펩타이드 고리화전이효소(cyclotransferase) QPCT
Q16787 라미닌 소단위체 알파-3 LAMA3
Q16842 CMP-N-아세틸뉴라미네이트-베타-갈락토사미드-알파-2,3- 시아릴전이효소 2 ST3GAL2
Q17RR3 췌장 리파아제-관련 단백질 3 PNLIPRP3
Q17RW2 콜라겐 알파-1(XXIV) 사슬 COL24A1
Q17RY6 림프구 항원 6K LY6K
Q1L6U9 전립선-연관 마이크로세미노단백질(microseminoprotein) MSMP
Q1W4C9 세린 프로테아제 억제제 카잘-형 13 SPINK13
Q1ZYL8 이즈모(Izumo) 정자-난자 융합 단백질 4 IZUMO4
Q29960 HLA 클래스 I 조직적합성 항원, Cw-16 알파 사슬 HLA-C
Q2I0M5 R-스폰딘-4 RSPO4
Q2L4Q9 세린 프로테아제 53 PRSS53
Q2MKA7 R-스폰딘-1 RSPO1
Q2MV58 텍토닉(Tectonic)-1 TCTN1
Q2TAL6 브로린(Brorin) VWC2
Q2UY09 콜라겐 알파-1(XXVIII) 사슬 COL28A1
Q2VPA4 보체 구성인자 수용체 1-유사 단백질 CR1L
Q2WEN9 암배아 항원-관련 세포 부착 분자 16 CEACAM16
Q30KP8 베타-디펜신(defensin) 136 DEFB136
Q30KP9 베타-디펜신 135 DEFB135
Q30KQ1 베타-디펜신 133 DEFB133
Q30KQ2 베타-디펜신 130 DEFB130
Q30KQ4 베타-디펜신 116 DEFB116
Q30KQ5 베타-디펜신 115 DEFB115
Q30KQ6 베타-디펜신 114 DEFB114
Q30KQ7 베타-디펜신 113 DEFB113
Q30KQ8 베타-디펜신 112 DEFB112
Q30KQ9 베타-디펜신 110 DEFB110
Q30KR1 베타-디펜신 109 DEFB109P1
Q32P28 프롤린 3-수산화효소 1 LEPRE1
Q3B7J2 글루코스-프룩토스 산화환원효소 도메인-함유 단백질 2 GFOD2
Q3SY79 Wnt 단백질 WNT3A
Q3T906 N-아세틸글루코사민-1-인전이효소(N-acetylglucosamine-1-phosphotransferase) 소단위체 알파/베타 GNPTAB
Q495T6 막 금속-엔도펩티다아제-유사 1 MMEL1
Q49AH0 뇌 도파민 신경영양 인자 CDNF
Q4G0G5 세크레토글로빈 패밀리 2B 멤버 2 SCGB2B2
Q4G0M1 단백질 FAM132B FAM132B
Q4LDE5 스시, 폰 빌레브란트인자 A형, EGF 및 펜트락신 도메인-함유 단백질 1 SVEP1
Q4QY38 베타-디펜신 134 DEFB134
Q4VAJ4 Wnt 단백질 WNT10B
Q4W5P6 단백질 TMEM155 TMEM155
Q4ZHG4 피브로넥틴(Fibronectin) III형 도메인-함유 단백질 1 FNDC1
Q53H76 포스포리파아제 A1 멤버 A PLA1A
Q53RD9 피불린-7 FBLN7
Q53S33 볼라(BolA)-유사 단백질 3 BOLA3
Q5BLP8 뉴로펩타이드-유사 단백질 C4orf48 C4orf48
Q5DT21 세린 프로테아제 억제제 카잘-형 9 SPINK9
Q5EBL8 PDZ 도메인-함유 단백질 11 PDZD11
Q5FYB0 아릴설파타제 J ARSJ
Q5FYB1 아릴설파타제 I ARSI
Q5GAN3 리보뉴클레아제-유사 단백질 13 RNASE13
Q5GAN4 리보뉴클레아제-유사 단백질 12 RNASE12
Q5GAN6 리보뉴클레아제-유사 단백질 10 RNASE10
Q5GFL6 폰 빌레브란트인자 A 도메인-함유 단백질 2 VWA2
Q5H8A3 뉴로메딘-S NMS
Q5H8C1 FRAS1-관련 세포외기질 단백질 1 FREM1
Q5IJ48 단백질 크럼스 상동체 2 CRB2
Q5J5C9 베타-디펜신 121 DEFB121
Q5JS37 NHL 반복-함유 단백질 3 NHLRC3
Q5JTB6 태반-특이적 단백질 9 PLAC9
Q5JU69 토르신-2A TOR2A
Q5JXM2 메틸기전이효소-유사 단백질 24 METTL24
Q5JZY3 에프린 A-형 수용체 10 EPHA10
Q5K4E3 폴리세라아제(Polyserase)-2 PRSS36
Q5SRR4 림프구 항원 6 복합체 유전자좌 단백질 G5c LY6G5C
Q5T1H1 단백질 아이즈셧(eyes shut) 상동체 EYS
Q5T4F7 분비 프리즐드-관련 단백질 5 SFRP5
Q5T4W7 아르테민(Artemin) ARTN
Q5T7M4 단백질 FAM132A FAM132A
Q5TEH8 Wnt 단백질 WNT2B
Q5TIE3 폰 빌레브란트인자 A 도메인-함유 단백질 5B1 VWA5B1
Q5UCC4 ER 막 단백질 복합체 소단위체 10 EMC10
Q5VST6 Ab가수분해효소(Abhydrolase) 도메인-함유 단백질 FAM108B1 FAM108B1
Q5VTL7 피브로넥틴 III형 도메인-함유 단백질 7 FNDC7
Q5VUM1 UPF0369 단백질 C6orf57 C6orf57
Q5VV43 난독증-연관 단백질 KIAA0319 KIAA0319
Q5VWW1 보체 C1q-유사 단백질 3 C1QL3
Q5VXI9 리파아제 멤버 N LIPN
Q5VXJ0 리파아제 멤버 K LIPK
Q5VXM1 CUB 도메인-함유 단백질 2 CDCP2
Q5VYX0 레날라제(Renalase) RNLS
Q5VYY2 리파아제 멤버 M LIPM
Q5W186 시스타틴-9 CST9
Q5W5W9 조절 내분비-특이적 단백질 18 RESP18
Q5XG92 카르복실에스테라아제(Carboxylesterase) 4A CES4A
Q63HQ2 피카추린(Pikachurin) EGFLAM
Q641Q3 메테오린(Meteorin)-유사 단백질 METRNL
Q66K79 카르복시펩티다아제 Z CPZ
Q685J3 뮤신-17 MUC17
Q68BL7 올팍토메딘(Olfactomedin)-유사 단백질 2A OLFML2A
Q68BL8 올팍토메딘(Olfactomedin)-유사 단백질 2B OLFML2B
Q68DV7 E3 유비퀴틴-단백질 리가아제 RNF43 RNF43
Q6B9Z1 인슐린 성장 인자-유사 패밀리 멤버 4 IGFL4
Q6BAA4 Fc 수용체-유사 B FCRLB
Q6E0U4 더모카인(Dermokine) DMKN
Q6EMK4 바소린(Vasorin) VASN
Q6FHJ7 분비 프리즐드-관련 단백질 4 SFRP4
Q6GPI1 키모트립신 B2 사슬 B CTRB2
Q6GTS8 가능 카르복시펩티다아제 PM20D1 PM20D1
Q6H9L7 이스민-2 ISM2
Q6IE36 오보스타틴(Ovostatin) 상동체 2 OVOS2
Q6IE37 오보스타틴 상동체 1 OVOS1
Q6IE38 세린 프로테아제 억제제 카잘-형 14 SPINK14
Q6ISS4 백혈구-연관 면역글로불린-유사 수용체 2 LAIR2
Q6JVE5 부고환-특이 리포칼린-12 LCN12
Q6JVE6 부고환-특이 리포칼린-10 LCN10
Q6JVE9 부고환-특이 리포칼린-8 LCN8
Q6KF10 성장/분화 인자 6 GDF6
Q6MZW2 폴리스타틴-관련 단백질 4 FSTL4
Q6NSX1 코일화-코일(Coiled-coil) 도메인-함유 단백질 70 CCDC70
Q6NT32 카르복실에스테라아제 5A CES5A
Q6NT52 융모생식샘자극호르몬 소단위체 베타 변이 2 CGB2
Q6NUI6 콘드로어드헤린-유사 단백질 CHADL
Q6NUJ1 사포신(Saposin) A-유사 PSAPL1
Q6P093 아릴아세트아미드 디아세틸라아제(Arylacetamide deacetylase)-유사 2 AADACL2
Q6P4A8 포스포리파아제 B-유사 1 PLBD1
Q6P5S2 UPF0762 단백질 C6orf58 C6orf58
Q6P988 단백질 노텀(notum) 상동체 NOTUM
Q6PCB0 폰 빌레브란트인자 A 도메인-함유 단백질 1 VWA1
Q6PDA7 정자-연관 항원 11A SPAG11A
Q6PEW0 비활성 세린 프로테아제 54 PRSS54
Q6PEZ8 포도칸(Podocan)-유사 단백질 1 PODNL1
Q6PKH6 탈수소효소/환원효소 SDR 패밀리 멤버 4-유사 2 DHRS4L2
Q6Q788 아포지질단백질 A-V APOA5
Q6SPF0 아테린(Atherin) SAMD1
Q6UDR6 쿠니츠-형 프로테아제 억제제 4 SPINT4
Q6URK8 고환, 전립선 및 태반-발현 단백질 TEPP
Q6UW01 세레벨린-3 CBLN3
Q6UW10 계면활성제-연관 단백질 2 SFTA2
Q6UW15 재생성 섬-유래 단백질 3-감마 REG3G
Q6UW32 인슐린 성장 인자-유사 패밀리 멤버 1 IGFL1
Q6UW78 UPF0723 단백질 C11orf83 C11orf83
Q6UW88 에피겐(Epigen) EPGN
Q6UWE3 코리파아제-유사 단백질 2 CLPSL2
Q6UWF7 NXPE 패밀리 멤버 4 NXPE4
Q6UWF9 단백질 FAM180A FAM180A
Q6UWM5 GLIPR1-유사 단백질 1 GLIPR1L1
Q6UWN8 세린 프로테아제 억제제 카잘-형 6 SPINK6
Q6UWP2 탈수소효소/환원효소 SDR 패밀리 멤버 11 DHRS11
Q6UWP8 수프라베이신(Suprabasin) SBSN
Q6UWQ5 리소자임-유사 단백질 1 LYZL1
Q6UWQ7 인슐린 성장 인자-유사 패밀리 멤버 2 IGFL2
Q6UWR7 엑토뉴클레오티드 피로포스파타아제/포스포디에스테라아제 패밀리 멤버 6 가용성 형태 ENPP6
Q6UWT2 아드로핀(Adropin) ENHO
Q6UWU2 베타-갈락토시다아제-1-유사 단백질 GLB1L
Q6UWW0 리포칼린-15 LCN15
Q6UWX4 HHIP-유사 단백질 2 HHIPL2
Q6UWY0 아릴설파타제 K ARSK
Q6UWY2 세린 프로테아제 57 PRSS57
Q6UWY5 올팍토메딘-유사 단백질 1 OLFML1
Q6UX06 올팍토메딘-4 OLFM4
Q6UX07 탈수소효소/환원효소 SDR 패밀리 멤버 13 DHRS13
Q6UX39 아멜로틴(Amelotin) AMTN
Q6UX46 단백질 FAM150B FAM150B
Q6UX73 UPF0764 단백질 C16orf89 C16orf89
Q6UXB0 단백질 FAM131A FAM131A
Q6UXB1 인슐린 성장 인자-유사 패밀리 멤버 3 IGFL3
Q6UXB2 VEGF 공동 조절 케모카인 1 CXCL17
Q6UXF7 C-형 렉틴 도메인 패밀리 18 멤버 B CLEC18B
Q6UXH0 간세포암-연관 단백질 TD26 C19orf80
Q6UXH1 EGF-유사 도메인을 갖는 시스테인-풍부 단백질 2 CRELD2
Q6UXH8 콜라겐 및 칼슘-결합 EGF 도메인-함유 단백질 1 CCBE1
Q6UXH9 비활성 세린 프로테아제 PAMR1 PAMR1
Q6UXI7 비트린(Vitrin) VIT
Q6UXI9 네프로넥틴(Nephronectin) NPNT
Q6UXN2 트렘(Trem)-유사 전사체 4 단백질 TREML4
Q6UXS0 C-형 렉틴 도메인 패밀리 19 멤버 A CLEC19A
Q6UXT8 단백질 FAM150A FAM150A
Q6UXT9 Ab가수분해효소 도메인-함유 단백질 15 ABHD15
Q6UXV4 아포지질단백질 O-유사 APOOL
Q6UXX5 인터-알파-트립신 억제제 중사슬 H6 ITIH6
Q6UXX9 R-스폰딘-2 RSPO2
Q6UY14 ADAMTS-유사 단백질 4 ADAMTSL4
Q6UY27 전립선 및 고환 발현 단백질 2 PATE2
Q6W4X9 뮤신-6 MUC6
Q6WN34 코르딘-유사 단백질 2 CHRDL2
Q6WRI0 면역글로불린 슈퍼패밀리 멤버 10 IGSF10
Q6X4U4 스클레로스틴(Sclerostin) 도메인-함유 단백질 1 SOSTDC1
Q6X784 투명대-결합 단백질 2 ZPBP2
Q6XE38 세크레토글로빈 패밀리 1D 멤버 4 SCGB1D4
Q6XPR3 레페틴(Repetin) RPTN
Q6XZB0 리파아제 멤버 I LIPI
Q6ZMM2 ADAMTS-유사 단백질 5 ADAMTSL5
Q6ZMP0 트롬보스폰딘 1형 도메인-함유 단백질 4 THSD4
Q6ZNF0 철/아연 자줏빛 산성 인산가수분해효소-유사 단백질 PAPL
Q6ZRI0 오토겔린(Otogelin) OTOG
Q6ZRP7 설프히드릴 산화효소 2 QSOX2
Q6ZWJ8 키엘린(Kielin)/코르딘-유사 단백질 KCP
Q75N90 피브릴린-3 FBN3
Q765I0 유로텐신-2B UTS2D
Q76B58 단백질 FAM5C FAM5C
Q76LX8 트롬보스폰딘 모티프 13을 갖는 디스인테그린 및 금속단백분해효소 ADAMTS13
Q76M96 코일화-코일 도메인-함유 단백질 80 CCDC80
Q7L1S5 탄수화물 황산전이효소 9 CHST9
Q7L513 Fc 수용체-유사 A FCRLA
Q7L8A9 바소히빈-1 VASH1
Q7RTM1 오토페트린-1 OTOP1
Q7RTW8 오토앤코린 OTOA
Q7RTY5 세린 프로테아제 48 PRSS48
Q7RTY7 오보키마제-1 OVCH1
Q7RTZ1 오보키마제-2 OVCH2
Q7Z304 MAM 도메인-함유 단백질 2 MAMDC2
Q7Z3S9 노치 상동체 2 N-말단 유사 단백질 NOTCH2NL
Q7Z4H4 짧은-인터메딘 ADM2
Q7Z4P5 성장/분화 인자 7 GDF7
Q7Z4R8 UPF0669 단백질 C6orf120 C6orf120
Q7Z4W2 리소자임-유사 단백질 2 LYZL2
Q7Z5A4 세린 프로테아제 42 PRSS42
Q7Z5A7 단백질 FAM19A5 FAM19A5
Q7Z5A8 단백질 FAM19A3 FAM19A3
Q7Z5A9 단백질 FAM19A1 FAM19A1
Q7Z5J1 히드록시스테로이드 11-베타-탈수소효소 1-유사 단백질 HSD11B1L
Q7Z5L0 난황막 외층 단백질 1 상동체 VMO1
Q7Z5L3 보체 C1q-유사 단백질 2 C1QL2
Q7Z5L7 포도칸 PODN
Q7Z5P4 17-베타-히드록시스테로이드 탈수소효소 13 HSD17B13
Q7Z5P9 뮤신-19 MUC19
Q7Z5Y6 뼈 형성 단백질 8A BMP8A
Q7Z7B7 베타-디펜신 132 DEFB132
Q7Z7B8 베타-디펜신 128 DEFB128
Q7Z7C8 전사 억제 인자 TFIID 소단위체 8 TAF8
Q7Z7H5 막관통 emp24 도메인-함유 단백질 4 TMED4
Q86SG7 리소자임 g-유사 단백질 2 LYG2
Q86SI9 단백질 CEI C5orf38
Q86TE4 류신 지퍼 단백질 2 LUZP2
Q86TH1 ADAMTS-유사 단백질 2 ADAMTSL2
Q86U17 세르핀 A11 SERPINA11
Q86UU9 엔도키닌-A TAC4
Q86UW8 하이알루론산과 프로테오글리칸 연결 단백질 4 HAPLN4
Q86UX2 인터-알파-트립신 억제제 중사슬 H5 ITIH5
Q86V24 아디포넥틴 수용체 단백질 2 ADIPOR2
Q86VB7 가용성 CD163 CD163
Q86VR8 4중-연결 박스 단백질 1 FJX1
Q86WD7 세르핀 A9 SERPINA9
Q86WN2 인터페론 엡실론 IFNE
Q86WS3 태반-특이 1-유사 단백질 PLAC1L
Q86X52 황산 콘드로이틴 신타아제 1 CHSY1
Q86XP6 개스트로카인-2 GKN2
Q86XS5 안지오포이에틴-관련 단백질 5 ANGPTL5
Q86Y27 B 흑색종 항원 5 BAGE5
Q86Y28 B 흑색종 항원 4 BAGE4
Q86Y29 B 흑색종 항원 3 BAGE3
Q86Y30 B 흑색종 항원 2 BAGE2
Q86Y38 자일로실 전이효소 1 XYLT1
Q86Y78 Ly6/PLAUR 도메인-함유 단백질 6 LYPD6
Q86YD3 막관통 단백질 25 TMEM25
Q86YJ6 트레오닌 신타아제-유사 2 THNSL2
Q86YW7 당단백 호르몬 베타-5 GPHB5
Q86Z23 보체 C1q-유사 단백질 4 C1QL4
Q8IU57 인터루킨-28 수용체 소단위체 알파 IL28RA
Q8IUA0 WAP 4-다이설파이드 코어 도메인 단백질 8 WFDC8
Q8IUB2 WAP 4-다이설파이드 코어 도메인 단백질 3 WFDC3
Q8IUB3 단백질 WFDC10B WFDC10B
Q8IUB5 WAP 4-다이설파이드 코어 도메인 단백질 13 WFDC13
Q8IUH2 단백질 CREG2 CREG2
Q8IUK5 플렉신(Plexin) 도메인-함유 단백질 1 PLXDC1
Q8IUL8 연골 중간층 단백질 2 C2 CILP2
Q8IUX7 지방세포(Adipocyte) 인핸서-결합 단백질 1 AEBP1
Q8IUX8 표피 성장 인자-유사 단백질 6 EGFL6
Q8IVL8 카르복시펩티다아제 O CPO
Q8IVN8 소마토메딘-B 및 트롬보스폰딘 1형 도메인-함유 단백질 SBSPON
Q8IVW8 단백질 스핀스터 상동체 2 SPNS2
Q8IW75 세르핀 A12 SERPINA12
Q8IW92 베타-갈락토시다아제-1-유사 단백질 2 GLB1L2
Q8IWL1 폐 계면활성제-연관 단백질 A2 SFTPA2
Q8IWL2 폐 계면활성제-연관 단백질 A1 SFTPA1
Q8IWV2 콘탁틴-4 CNTN4
Q8IWY4 신호 펩타이드, CUB 및 EGF-유사 도메인-함유 단백질 1 SCUBE1
Q8IX30 신호 펩타이드, CUB 및 EGF-유사 도메인-함유 단백질 3 SCUBE3
Q8IXA5 정자 첨단체 막-연관 단백질 3, 막 형태 SPACA3
Q8IXB1 DnaJ 상동체 서프패밀리 C 멤버 10 DNAJC10
Q8IXL6 세포외 세린/트레오닌 단백질 인산화효소 Fam20C FAM20C
Q8IYD9 폐 선종 민감성 단백질 2 LAS2
Q8IYP2 세린 프로테아제 58 PRSS58
Q8IYS5 파골세포-연관 면역글로불린-유사 수용체 OSCAR
Q8IZC6 콜라겐 알파-1(XXVII) 사슬 COL27A1
Q8IZJ3 C3 및 PZP-유사 알파-2-마크로글로불린 도메인-함유 단백질 8 CPAMD8
Q8IZN7 베타-디펜신 107 DEFB107B
Q8N0V4 류신-풍부 반복 LGI 패밀리 멤버 2 LGI2
Q8N104 베타-디펜신 106 DEFB106B
Q8N119 기질 금속단백분해효소-21 MMP21
Q8N129 단백질 캐노피 상동체 4 CNPY4
Q8N135 류신-풍부 반복 LGI 패밀리 멤버 4 LGI4
Q8N145 류신-풍부 반복 LGI 패밀리 멤버 3 LGI3
Q8N158 글리피칸-2 GPC2
Q8N1E2 리소자임 g-유사 단백질 1 LYG1
Q8N2E2 폰 빌레브란트인자 D 및 EGF 도메인-함유 단백질 VWDE
Q8N2E6 프로살루신(Prosalusin) TOR2A
Q8N2S1 잠재-형질전환 증식인자 베타-결합 단백질 4 LTBP4
Q8N302 G 패치 및 FHA 도메인 1을 갖는 혈관형성 인자 AGGF1
Q8N307 뮤신-20 MUC20
Q8N323 NXPE 패밀리 멤버 1 NXPE1
Q8N387 뮤신-15 MUC15
Q8N3Z0 비활성 세린 프로테아제 35 PRSS35
Q8N436 비활성 카르복시펩티다아제-유사 단백질 X2 CPXM2
Q8N474 분비 프리즐드-관련 단백질 1 SFRP1
Q8N475 폴리스타틴-관련 단백질 5 FSTL5
Q8N4F0 BPI 접힘-함유 패밀리 B 멤버 2 BPIFB2
Q8N4T0 카르복시펩티다아제 A6 CPA6
Q8N5W8 단백질 FAM24B FAM24B
Q8N687 베타-디펜신 125 DEFB125
Q8N688 베타-디펜신 123 DEFB123
Q8N690 베타-디펜신 119 DEFB119
Q8N6C5 면역글로불린 슈퍼패밀리 멤버 1 IGSF1
Q8N6C8 백혈구 면역글로불린-유사 수용체 서브패밀리 A 멤버 3 LILRA3
Q8N6G6 ADAMTS-유사 단백질 1 ADAMTSL1
Q8N6Y2 류신-풍부 반복-함유 단백질 17 LRRC17
Q8N729 뉴로펩타이드 W-23 NPW
Q8N8U9 BMP-결합 내피 조절자 단백질 BMPER
Q8N907 DAN 도메인 패밀리 멤버 5 DAND5
Q8NAT1 글리코실전이효소-유사 도메인-함유 단백질 2 GTDC2
Q8NAU1 피브로넥틴 III형 도메인-함유 단백질 5 FNDC5
Q8NB37 파킨슨병 7 도메인-함유 단백질 1 PDDC1
Q8NBI3 드락신 DRAXIN
Q8NBM8 프레닐시스테인 산화효소-유사 PCYOX1L
Q8NBP7 전구단백질 전환효소 서브틸리신/켁신 9형 PCSK9
Q8NBQ5 에스트라디올 17-베타-탈수소효소 11 HSD17B11
Q8NBV8 시냅토태그민-8 SYT8
Q8NCC3 그룹 XV 포스포리파아제 A2 PLA2G15
Q8NCF0 C-형 렉틴 도메인 패밀리 18 멤버 C CLEC18C
Q8NCW5 NAD(P)H-수화물 에피머라아제 APOA1BP
Q8NDA2 헤미센틴-2 HMCN2
Q8NDX9 림프구 항원 6 복합체 유전자좌 단백질 G5b LY6G5B
Q8NDZ4 자폐 단백질 1의 결실 C3orf58
Q8NEB7 아크로신-결합 단백질 ACRBP
Q8NES8 베타-디펜신 124 DEFB124
Q8NET1 베타-디펜신 108B DEFB108B
Q8NEX5 단백질 WFDC9 WFDC9
Q8NEX6 단백질 WFDC11 WFDC11
Q8NF86 세린 프로테아제 33 PRSS33
Q8NFM7 인터루킨-17 수용체 D IL17RD
Q8NFQ5 BPI 접힘-함유 패밀리 B 멤버 6 BPIFB6
Q8NFQ6 BPI 접힘-함유 패밀리 C 단백질 BPIFC
Q8NFU4 난포형 수지상 세포 분비 펩타이드 FDCSP
Q8NFW1 콜라겐 알파-1(XXII) 사슬 COL22A1
Q8NG35 베타-디펜신 105 DEFB105B
Q8NG41 뉴로펩타이드 B-23 NPB
Q8NHW6 오토스피랄린 OTOS
Q8NI99 안지오포이에틴-관련 단백질 6 ANGPTL6
Q8TAA1 가능 리보뉴클레아제 11 RNASE11
Q8TAG5 V-세트 및 막관통 도메인-함유 단백질 2A VSTM2A
Q8TAL6 지느러미 아체 개시 인자 상동체 FIBIN
Q8TAT2 섬유아세포 성장 인자-결합 단백질 3 FGFBP3
Q8TAX7 뮤신-7 MUC7
Q8TB22 정자형성-연관 단백질 20 SPATA20
Q8TB73 단백질 NDNF NDNF
Q8TB96 T-세포 면역중재 단백질 ITFG1
Q8TC92 단백질 디설파이드-티올 산화환원효소 ENOX1
Q8TCV5 WAP 4-다이설파이드 코어 도메인 단백질 5 WFDC5
Q8TD06 전방 기울기 단백질 3 상동체 AGR3
Q8TD33 세크레토글로빈 패밀리 1C 멤버 1 SCGB1C1
Q8TD46 세포 표면 당단백질 CD200 수용체 1 CD200R1
Q8TDE3 리보뉴클레아제 8 RNASE8
Q8TDF5 뉴로필린 및 톨로이드-유사 단백질 1 NETO1
Q8TDL5 BPI 접힘-함유 패밀리 B 멤버 1 BPIFB1
Q8TE56 트롬보스폰딘 모티프 17을 갖는 디스인테그린 및 금속단백분해효소 ADAMTS17
Q8TE57 트롬보스폰딘 모티프 16을 갖는 디스인테그린 및 금속단백분해효소 ADAMTS16
Q8TE58 트롬보스폰딘 모티프 15를 갖는 디스인테그린 및 금속단백분해효소 ADAMTS15
Q8TE59 트롬보스폰딘 모티프 19를 갖는 디스인테그린 및 금속단백분해효소 ADAMTS19
Q8TE60 트롬보스폰딘 모티프 18을 갖는 디스인테그린 및 금속단백분해효소 ADAMTS18
Q8TE99 산성 인산가수분해효소-유사 단백질 2 ACPL2
Q8TER0 스시, 니도겐 및 EGF-유사 도메인-함유 단백질 1 SNED1
Q8TEU8 WAP, 카잘, 면역글로불린, 쿠니츠 및 NTR 도메인-함유 단백질 2 WFIKKN2
Q8WTQ1 베타-디펜신 104 DEFB104B
Q8WTR8 네트린-5 NTN5
Q8WTU2 청소제 수용체 시스테인-풍부 도메인-함유 그룹 B 단백질 SRCRB4D
Q8WU66 단백질 TSPEAR TSPEAR
Q8WUA8 츠쿠신 TSKU
Q8WUF8 단백질 FAM172A FAM172A
Q8WUJ1 뉴페리신 CYB5D2
Q8WUY1 UPF0670 단백질 THEM6 THEM6
Q8WVN6 분비 및 막관통 단백질 1 SECTM1
Q8WVQ1 가용성 칼슘-활성화 뉴클레오티드 가수분해효소 1 CANT1
Q8WWA0 인텔렉틴(Intelectin)-1 ITLN1
Q8WWG1 뉴레굴린-4 NRG4
Q8WWQ2 비활성 헤파라나아제-2 HPSE2
Q8WWU7 인텔렉틴-2 ITLN2
Q8WWY7 WAP 4-다이설파이드 코어 도메인 단백질 12 WFDC12
Q8WWY8 리파아제 멤버 H LIPH
Q8WWZ8 종양단백질-유도 전사체 3 단백질 OIT3
Q8WX39 부고환-특이 리포칼린-9 LCN9
Q8WXA2 전립선 및 고환 발현 단백질 1 PATE1
Q8WXD2 세크레토그라닌-3 SCG3
Q8WXF3 릴랙신-3 A 사슬 RLN3
Q8WXI7 뮤신-16 MUC16
Q8WXQ8 카르복시펩티다아제 A5 CPA5
Q8WXS8 트롬보스폰딘 모티프 14를 갖는 디스인테그린 및 금속단백분해효소 ADAMTS14
Q92484 산성 스핑고미엘리나아제-유사 포스포디에스테라아제 3a SMPDL3A
Q92485 산성 스핑고미엘리나아제-유사 포스포디에스테라아제 3b SMPDL3B
Q92496 보체 인자 H-관련 단백질 4 CFHR4
Q92520 단백질 FAM3C FAM3C
Q92563 테스티칸-2 SPOCK2
Q92583 C-C 모티프 케모카인 17 CCL17
Q92626 페록시다신 상동체 PXDN
Q92743 세린 프로테아제 HTRA1 HTRA1
Q92752 테나신-R TNR
Q92765 분비 프리즐드-관련 단백질 3 FRZB
Q92819 하이알루론산 신타아제 2 HAS2
Q92820 감마-글루타밀 가수분해효소 GGH
Q92824 전구단백질 전환효소 서브틸리신/켁신 5형 PCSK5
Q92832 단백질 인산화효소 C-결합 단백질 NELL1 NELL1
Q92838 엑토디스플라신-A, 막 형태 EDA
Q92874 디옥시리보뉴클레아제-1-유사 2 DNASE1L2
Q92876 칼리크레인-6 KLK6
Q92913 섬유아세포 성장 인자 13 FGF13
Q92954 프로테오글리칸 4 C-말단 부분 PRG4
Q93038 종양 괴사 인자 수용체 슈퍼패밀리 멤버 25 TNFRSF25
Q93091 리보뉴클레아제 K6 RNASE6
Q93097 Wnt-2b 단백질 WNT2B
Q93098 Wnt-8b 단백질 WNT8B
Q95460 주요 조직적합성 복합체 클래스 I-관련 유전자 단백질 MR1
Q969D9 흉선 간질 림포포이에틴 TSLP
Q969E1 간-발현 항균성 펩타이드 2 LEAP2
Q969H8 UPF0556 단백질 C19orf10 C19orf10
Q969Y0 NXPE 패밀리 멤버 3 NXPE3
Q96A54 아디포넥틴 수용체 단백질 1 ADIPOR1
Q96A83 콜라겐 알파-1(XXVI) 사슬 EMID2
Q96A84 EMI 도메인-함유 단백질 1 EMID1
Q96A98 39 잔기의 결절 누두 펩타이드 PTH2
Q96A99 펜트락신-4 PTX4
Q96BH3 부고환 정자-결합 단백질 1 ELSPBP1
Q96BQ1 단백질 FAM3D FAM3D
Q96CG8 콜라겐 삼중 나선 반복-함유 단백질 1 CTHRC1
Q96DA0 효소원과립 단백질 16 상동체 B ZG16B
Q96DN2 폰 빌레브란트인자 C 및 EGF 도메인-함유 단백질 VWCE
Q96DR5 BPI 접힘-함유 패밀리 A 멤버 2 BPIFA2
Q96DR8 뮤신-유사 단백질 1 MUCL1
Q96DX4 링 핑거 및 SPRY 도메인-함유 단백질 1 RSPRY1
Q96EE4 코일화-코일 도메인-함유 단백질 126 CCDC126
Q96GS6 Ab가수분해효소 도메인-함유 단백질 FAM108A1 FAM108A1
Q96GW7 브레비칸 코어 단백질 BCAN
Q96HF1 분비 프리즐드-관련 단백질 2 SFRP2
Q96I82 카잘형 세린 프로테아제 억제제 도메인-함유 단백질 1 KAZALD1
Q96ID5 면역글로불린 슈퍼패밀리 멤버 21 IGSF21
Q96II8 류신-풍부 반복 및 칼포닌 상동 도메인-함유 단백질 3 LRCH3
Q96IY4 카르복시펩티다아제 B2 CPB2
Q96JB6 리실 산화효소 상동체 4 LOXL4
Q96JK4 HHIP-유사 단백질 1 HHIPL1
Q96KN2 베타-Ala-His 디펩티다아제 CNDP1
Q96KW9 단백질 SPACA7 SPACA7
Q96KX0 리소자임-유사 단백질 4 LYZL4
Q96L15 엑토-ADP-리보실전이효소 5 ART5
Q96LB8 펩티도글리칸 인식 단백질 4 PGLYRP4
Q96LB9 펩티도글리칸 인식 단백질 3 PGLYRP3
Q96LC7 시알산-결합 Ig-유사 렉틴 10 SIGLEC10
Q96LR4 단백질 FAM19A4 FAM19A4
Q96MK3 단백질 FAM20A FAM20A
Q96MS3 글리코실전달효소 1 도메인-함유 단백질 1 GLT1D1
Q96NY8 가공된 폴리오 바이러스 수용체-관련 단백질 4 PVRL4
Q96NZ8 WAP, 카잘, 면역글로불린, 쿠니츠 및 NTR 도메인-함유 단백질 1 WFIKKN1
Q96NZ9 프롤린-풍부 단백질 1 PRAP1
Q96P44 콜라겐 알파-1(XXI) 사슬 COL21A1
Q96PB7 노엘린-3 OLFM3
Q96PC5 흑색종 억제 활성 단백질 2 MIA2
Q96PD5 N-아세틸뮤라모일-L-알라닌 아미다아제 PGLYRP2
Q96PH6 베타-디펜신 118 DEFB118
Q96PL1 세크레토글로빈 패밀리 3A 멤버 2 SCGB3A2
Q96PL2 베타-텍토린 TECTB
Q96QH8 정자 첨단체-연관 단백질 5 SPACA5
Q96QR1 세크레토글로빈 패밀리 3A 멤버 1 SCGB3A1
Q96QU1 프로토카드헤린-15 PCDH15
Q96QV1 헤지호그-상호작용 단백질 HHIP
Q96RW7 헤미센틴-1 HMCN1
Q96S42 결절성 동족체 NODAL
Q96S86 하이알루론산과 프로테오글리칸 연결 단백질 3 HAPLN3
Q96SL4 글루타티온 과산화효소 7 GPX7
Q96SM3 가능 카르복시펩티다아제 X1 CPXM1
Q96T91 당단백 호르몬 알파-2 GPHA2
Q99062 과립구 집락-자극 인자 수용체 CSF3R
Q99102 뮤신-4 알파 사슬 MUC4
Q99217 아멜로제닌, X 이소형 AMELX
Q99218 아멜로제닌, Y 이소형 AMELY
Q99435 단백질 인산화효소 C-결합 단백질 NELL2 NELL2
Q99470 간질세포-유래 인자 2 SDF2
Q99542 기질 금속단백분해효소-19 MMP19
Q99574 뉴로세르핀 SERPINI1
Q99584 단백질 S100-A13 S100A13
Q99616 C-C 모티프 케모카인 13 CCL13
Q99645 에피피칸 EPYC
Q99674 EF 핸드 도메인 단백질 1을 갖는 세포 성장 조절자 CGREF1
Q99715 콜라겐 알파-1(XII) 사슬 COL12A1
Q99727 금속단백분해효소 억제제 4 TIMP4
Q99731 C-C 모티프 케모카인 19 CCL19
Q99748 뉴투린 NRTN
Q99935 프롤린-풍부 단백질 1 PROL1
Q99942 E3 유비퀴틴-단백질 리가아제 RNF5 RNF5
Q99944 표피 성장 인자-유사 단백질 8 EGFL8
Q99954 턱밑샘 안드로겐-조절 단백질 3A SMR3A
Q99969 레티노산 수용체 응답자 단백질 2 RARRES2
Q99972 마이오실린 MYOC
Q99983 오스테오모듈린 OMD
Q99985 세마포린-3C SEMA3C
Q99988 성장/분화 인자 15 GDF15
Q9BPW4 아포지질단백질 L4 APOL4
Q9BQ08 레지스틴-유사 베타 RETNLB
Q9BQ16 테스티칸-3 SPOCK3
Q9BQ51 예정된 세포 사멸 1 리간드 2 PDCD1LG2
Q9BQB4 스클레로스틴 SOST
Q9BQI4 코일화-코일 도메인-함유 단백질 3 CCDC3
Q9BQP9 BPI 접힘-함유 패밀리 A 멤버 3 BPIFA3
Q9BQR3 세린 프로테아제 27 PRSS27
Q9BQY6 WAP 4-다이설파이드 코어 도메인 단백질 6 WFDC6
Q9BRR6 ADP-의존성 글루코키나아제 ADPGK
Q9BS86 투명대-결합 단백질 1 ZPBP
Q9BSG0 프로테아제-연관 도메인-함유 단백질 1 PRADC1
Q9BSG5 레트빈딘 RTBDN
Q9BT30 가능 알파-케토글루타르산-의존성 이산소화효소 ABH7 ALKBH7
Q9BT56 스펙신 C12orf39
Q9BT67 NEDD4 패밀리-상호작용 단백질 1 NDFIP1
Q9BTY2 혈장 알파-L-푸코시다아제 FUCA2
Q9BU40 코르딘-유사 단백질 1 CHRDL1
Q9BUD6 스폰딘-2 SPON2
Q9BUN1 단백질 MENT MENT
Q9BUR5 아포지질단백질 O APOO
Q9BV94 ER 분해-강화 알파-만노사이드분해효소-유사 2 EDEM2
Q9BWP8 콜렉틴-11 COLEC11
Q9BWS9 키티나아제 도메인-함유 단백질 1 CHID1
Q9BX67 접합 부착 분자 C JAM3
Q9BX93 그룹 XIIB 분비성 포스포리파아제 A2-유사 단백질 PLA2G12B
Q9BXI9 보체 C1q 종양 괴사 인자-관련 단백질 6 C1QTNF6
Q9BXJ0 보체 C1q 종양 괴사 인자-관련 단백질 5 C1QTNF5
Q9BXJ1 보체 C1q 종양 괴사 인자-관련 단백질 1 C1QTNF1
Q9BXJ2 보체 C1q 종양 괴사 인자-관련 단백질 7 C1QTNF7
Q9BXJ3 보체 C1q 종양 괴사 인자-관련 단백질 4 C1QTNF4
Q9BXJ4 보체 C1q 종양 괴사 인자-관련 단백질 3 C1QTNF3
Q9BXJ5 보체 C1q 종양 괴사 인자-관련 단백질 2 C1QTNF2
Q9BXN1 아스포린 ASPN
Q9BXP8 파파리신-2 PAPPA2
Q9BXR6 보체 인자 H-관련 단백질 5 CFHR5
Q9BXS0 콜라겐 알파-1(XXV) 사슬 COL25A1
Q9BXX0 EMILIN-2 EMILIN2
Q9BXY4 R-스폰딘-3 RSPO3
Q9BY15 EGF-유사 모듈-함유 뮤신-유사 호르몬 수용체-유사 3 소단위체 베타 EMR3
Q9BY50 신호 펩티다아제 복합체 촉매 소단위체 SEC11C SEC11C
Q9BY76 안지오포이에틴-관련 단백질 4 ANGPTL4
Q9BYF1 가공된 안지오포이에틴-전환 효소 2 ACE2
Q9BYJ0 섬유아세포 성장 인자-결합 단백질 2 FGFBP2
Q9BYW3 베타-디펜신 126 DEFB126
Q9BYX4 인터페론-유도 헬리카제 C 도메인-함유 단백질 1 IFIH1
Q9BYZ8 재생성 섬-유래 단백질 4 REG4
Q9BZ76 콘탁틴-연관 단백질-유사 3 CNTNAP3
Q9BZG9 Ly-6/신경독-유사 단백질 1 LYNX1
Q9BZJ3 트립신분해효소 델타 TPSD1
Q9BZM1 그룹 XIIA 분비성 포스포리파아제 A2 PLA2G12A
Q9BZM2 그룹 IIF 분비성 포스포리파아제 A2 PLA2G2F
Q9BZM5 NKG2D 리간드 2 ULBP2
Q9BZP6 산성 포유류 키틴분해효소 CHIA
Q9BZZ2 시알로어드헤신 SIGLEC1
Q9C0B6 단백질 FAM5B FAM5B
Q9GZM7 요세관사이질 신장염 항원-유사 TINAGL1
Q9GZN4 뇌-특이 세린 프로테아제 4 PRSS22
Q9GZP0 혈소판 유래 성장 인자 D, 수용체-결합 형태 PDGFD
Q9GZT5 Wnt-10a 단백질 WNT10A
Q9GZU5 닉탈로핀 NYX
Q9GZV7 하이알루론산과 프로테오글리칸 연결 단백질 2 HAPLN2
Q9GZV9 섬유아세포 성장 인자 23 FGF23
Q9GZX9 비틀어진 장배형성 단백질 상동체 1 TWSG1
Q9GZZ7 GDNF 패밀리 수용체 알파-4 GFRA4
Q9GZZ8 세포외 당단백 라크리틴 LACRT
Q9H0B8 시스테인-풍부 분비 단백질 LCCL 도메인-함유 2 CRISPLD2
Q9H106 신호-조절 단백질 델타 SIRPD
Q9H114 시스타틴-유사 1 CSTL1
Q9H173 뉴클레오티드 교환 인자 SIL1 SIL1
Q9H1E1 리보뉴클레아제 7 RNASE7
Q9H1F0 WAP 4-다이설파이드 코어 도메인 단백질 10A WFDC10A
Q9H1J5 Wnt-8a 단백질 WNT8A
Q9H1J7 Wnt-5b 단백질 WNT5B
Q9H1M3 베타-디펜신 129 DEFB129
Q9H1M4 베타-디펜신 127 DEFB127
Q9H1Z8 아우구린 C2orf40
Q9H239 기질 금속단백분해효소-28 MMP28
Q9H2A7 C-X-C 모티프 케모카인 16 CXCL16
Q9H2A9 탄수화물 황산전이효소 8 CHST8
Q9H2R5 칼리크레인-15 KLK15
Q9H2X0 코르딘 CHRD
Q9H2X3 C-형 렉틴 도메인 패밀리 4 멤버 M CLEC4M
Q9H306 기질 금속단백분해효소-27 MMP27
Q9H324 트롬보스폰딘 모티프 10을 갖는 디스인테그린 및 금속단백분해효소 ADAMTS10
Q9H336 시스테인-풍부 분비 단백질 LCCL 도메인-함유 1 CRISPLD1
Q9H3E2 분류 넥신-25 SNX25
Q9H3R2 뮤신-13 MUC13
Q9H3U7 SPARC-관련 모듈형 칼슘-결합 단백질 2 SMOC2
Q9H3Y0 펩티다아제 억제제 R3HDML R3HDML
Q9H4A4 아미노펩티다아제 B RNPEP
Q9H4F8 SPARC-관련 모듈형 칼슘-결합 단백질 1 SMOC1
Q9H4G1 시스타틴-9-유사 CST9L
Q9H5V8 CUB 도메인-함유 단백질 1 CDCP1
Q9H6B9 에폭시드 가수분해효소 3 EPHX3
Q9H6E4 코일화-코일 도메인-함유 단백질 134 CCDC134
Q9H741 UPF0454 단백질 C12orf49 C12orf49
Q9H772 그렘린-2 GREM2
Q9H7Y0 결손 자폐증 단백질 1 CXorf36
Q9H8L6 멀티메린-2 MMRN2
Q9H9S5 푸쿠틴-관련 단백질 FKRP
Q9HAT2 시알레이트 O-아세틸에스테라아제 SIAE
Q9HB40 레티노이드-유도성 세린 카르복시펩티다아제 SCPEP1
Q9HB63 네트린-4 NTN4
Q9HBJ0 태반-특이적 단백질 1 PLAC1
Q9HC23 프로키네티신-2 PROK2
Q9HC57 WAP 4-다이설파이드 코어 도메인 단백질 1 WFDC1
Q9HC73 사이토카인 수용체-유사 인자 2 CRLF2
Q9HC84 뮤신-5B MUC5B
Q9HCB6 스폰딘-1 SPON1
Q9HCQ7 뉴로펩타이드 NPSF NPVF
Q9HCT0 섬유아세포 성장 인자 22 FGF22
Q9HD89 레지스틴 RETN
Q9NNX1 터프텔린 TUFT1
Q9NNX6 CD209 항원 CD209
Q9NP55 BPI 접힘-함유 패밀리 A 멤버 1 BPIFA1
Q9NP70 아멜로블라스틴 AMBN
Q9NP95 섬유아세포 성장 인자 20 FGF20
Q9NP99 골수성 세포들에 발현된 유발 수용체 1 TREM1
Q9NPA2 기질 금속단백분해효소-25 MMP25
Q9NPE2 뉴그린 NGRN
Q9NPH0 리소포스파티드산 인산가수분해효소 6형 ACP6
Q9NPH6 후각자극제-결합 단백질 2b OBP2B
Q9NQ30 내피 세포-특이적 분자 1 ESM1
Q9NQ36 신호 펩타이드, CUB 및 EGF-유사 도메인-함유 단백질 2 SCUBE2
Q9NQ38 세린 프로테아제 억제제 카잘-형 5 SPINK5
Q9NQ76 세포외 기질 인산화당단백질 MEPE
Q9NQ79 연골 산성 단백질 1 CRTAC1
Q9NR16 청소제 수용체 시스테인-풍부 1형 단백질 M160 CD163L1
Q9NR23 성장/분화 인자 3 GDF3
Q9NR71 중성 세라미다아제 ASAH2
Q9NR99 기질-재배열-연관 단백질 5 MXRA5
Q9NRA1 혈소판-유래 성장 인자 C PDGFC
Q9NRC9 오토라플린 OTOR
Q9NRE1 기질 금속단백분해효소-26 MMP26
Q9NRJ3 C-C 모티프 케모카인 28 CCL28
Q9NRM1 에나멜린 ENAM
Q9NRN5 올팍토메딘-유사 단백질 3 OLFML3
Q9NRR1 사이토카인-유사 단백질 1 CYTL1
Q9NS15 잠재-형질전환 증식인자 베타-결합 단백질 3 LTBP3
Q9NS62 트롬보스폰딘 1형 도메인-함유 단백질 1 THSD1
Q9NS71 개스트로카인-1 GKN1
Q9NS98 세마포린-3G SEMA3G
Q9NSA1 섬유아세포 성장 인자 21 FGF21
Q9NT22 EMILIN-3 EMILIN3
Q9NTU7 세레벨린-4 CBLN4
Q9NVR0 켈치(Kelch)-유사 단백질 11 KLHL11
Q9NWH7 정자형성-연관 단백질 6 SPATA6
Q9NXC2 글루코스-프룩토스 산화환원효소 도메인-함유 단백질 1 GFOD1
Q9NY56 후각자극제-결합 단백질 2a OBP2A
Q9NY84 혈관 비염증성 분자 3 VNN3
Q9NZ20 그룹 3 분비성 포스포리파아제 A2 PLA2G3
Q9NZC2 골수성 세포들에 발현된 방아쇠 수용체 2 TREM2
Q9NZK5 아데노신 데아미나아제 CECR1 CECR1
Q9NZK7 그룹 IIE 분비성 포스포리파아제 A2 PLA2G2E
Q9NZP8 보체 C1r 하위구성인자-유사 단백질 C1RL
Q9NZV1 시스테인-풍부 운동 뉴런 1 단백질 CRIM1
Q9NZW4 상아질 시알로단백질 DSPP
Q9P0G3 칼리크레인-14 KLK14
Q9P0W0 인터페론 카파 IFNK
Q9P218 콜라겐 알파-1(XX) 사슬 COL20A1
Q9P2C4 막관통 단백질 181 TMEM181
Q9P2K2 티오레독신 도메인-함유 단백질 16 TXNDC16
Q9P2N4 트롬보스폰딘 모티프 9를 갖는 디스인테그린 및 금속단백분해효소 ADAMTS9
Q9UBC7 갈라닌-유사 펩타이드 GALP
Q9UBD3 사이토카인 SCM-1 베타 XCL2
Q9UBD9 카디오트로핀-유사 사이토카인 인자 1 CLCF1
Q9UBM4 옵티신 OPTC
Q9UBP4 디코프-관련 단백질 3 DKK3
Q9UBQ6 엑소스토신-유사 2 EXTL2
Q9UBR5 케모카인-유사 인자 CKLF
Q9UBS5 감마-아미노부티르산 B형 수용체 소단위체 1 GABBR1
Q9UBT3 디코프-관련 단백질 4 짧은 형태 DKK4
Q9UBU2 디코프-관련 단백질 2 DKK2
Q9UBU3 그렐린-28 GHRL
Q9UBV4 Wnt-16 단백질 WNT16
Q9UBX5 피불린-5 FBLN5
Q9UBX7 칼리크레인-11 KLK11
Q9UEF7 클로토 KL
Q9UFP1 단백질 FAM198A FAM198A
Q9UGM3 결손 악성 뇌종양 1 단백질 DMBT1
Q9UGM5 페투인-B FETUB
Q9UGP8 전좌 단백질 SEC63 상동체 SEC63
Q9UHF0 뉴로키닌-B TAC3
Q9UHF1 표피 성장 인자-유사 단백질 7 EGFL7
Q9UHG2 ProSAAS PCSK1N
Q9UHI8 트롬보스폰딘 모티프 1을 갖는 디스인테그린 및 금속단백분해효소 ADAMTS1
Q9UHL4 디펩티딜 펩티다아제 2 DPP7
Q9UI42 카르복시펩티다아제 A4 CPA4
Q9UIG4 건선 민감성 1 후보 유전자 2 단백질 PSORS1C2
Q9UIK5 토모레귤린-2 TMEFF2
Q9UIQ6 류실-시스티닐 아미노펩티다아제, 임신 혈청 형태 LNPEP
Q9UJA9 엑토뉴클레오티드 피로포스파타아제/포스포디에스테라아제 패밀리 멤버 5 ENPP5
Q9UJH8 메테오린 METRN
Q9UJJ9 N-아세틸글루코사민-1-인전이효소 소단위체 감마 GNPTG
Q9UJW2 요세관사이질 신장염 항원 TINAG
Q9UK05 성장/분화 인자 2 GDF2
Q9UK55 단백질 Z-의존성 프로테아제 억제제 SERPINA10
Q9UK85 디코프-유사 단백질 1 DKKL1
Q9UKJ1 페어드 면역글로불린-유사 2형 수용체 알파 PILRA
Q9UKP4 트롬보스폰딘 모티프 7을 갖는 디스인테그린 및 금속단백분해효소 ADAMTS7
Q9UKP5 트롬보스폰딘 모티프 6을 갖는 디스인테그린 및 금속단백분해효소 ADAMTS6
Q9UKQ2 디스인테그린 및 금속단백분해효소 도메인-함유 단백질 28 ADAM28
Q9UKQ9 칼리크레인-9 KLK9
Q9UKR0 칼리크레인-12 KLK12
Q9UKR3 칼리크레인-13 KLK13
Q9UKU9 안지오포이에틴-관련 단백질 2 ANGPTL2
Q9UKZ9 프로콜라겐 C-엔도펩티다아제 인핸서 2 PCOLCE2
Q9UL52 막관통 프로테아제 세린 11E 비촉매 사슬 TMPRSS11E
Q9ULC0 엔도뮤신 EMCN
Q9ULI3 단백질 HEG 상동체 1 HEG1
Q9ULZ1 아펠린-13 APLN
Q9ULZ9 기질 금속단백분해효소-17 MMP17
Q9UM21 알파-1,3-만노실-당단백 4-베타-N-아세틸글루코사미닐전이효소 A 가용성 형태 MGAT4A
Q9UM22 포유류 에펜다이민-관련 단백질 1 EPDR1
Q9UM73 ALK 티로신 인산화효소 수용체 ALK
Q9UMD9 97 kDa 선형 IgA 질환 항원 COL17A1
Q9UMX5 뉴데신 NENF
Q9UN73 프로토카드헤린 알파-6 PCDHA6
Q9UNA0 트롬보스폰딘 모티프 5를 갖는 디스인테그린 및 금속단백분해효소 ADAMTS5
Q9UNI1 키모트립신-유사 엘라스타아제 패밀리 멤버 1 CELA1
Q9UNK4 그룹 IID 분비성 포스포리파아제 A2 PLA2G2D
Q9UP79 트롬보스폰딘 모티프 8을 갖는 디스인테그린 및 금속단백분해효소 ADAMTS8
Q9UPZ6 트롬보스폰딘 1형 도메인-함유 단백질 7A THSD7A
Q9UQ72 임신-특이 베타-1-당단백질 11 PSG11
Q9UQ74 임신-특이 베타-1-당단백질 8 PSG8
Q9UQC9 칼슘-활성화 염소 통로 조절자 2 CLCA2
Q9UQE7 염색체 구조 유지 단백질 3 SMC3
Q9UQP3 테나신-N TNN
Q9Y223 UDP-N-아세틸글루코사민 2-에피머라아제 GNE
Q9Y240 C-형 렉틴 도메인 패밀리 11 멤버 A CLEC11A
Q9Y251 헤파라나아제 8 kDa 소단위체 HPSE
Q9Y258 C-C 모티프 케모카인 26 CCL26
Q9Y264 안지오포이에틴-4 ANGPT4
Q9Y275 종양 괴사 인자 리간드 슈퍼패밀리 멤버 13b, 막형태 TNFSF13B
Q9Y287 BRI2 세포내 도메인 ITM2B
Q9Y2E5 부고환-특이적 알파-만노사이드분해효소 MAN2B2
Q9Y334 폰 빌레브란트인자 A 도메인-함유 단백질 7 VWA7
Q9Y337 칼리크레인-5 KLK5
Q9Y3B3 막관통 emp24 도메인-함유 단백질 7 TMED7
Q9Y3E2 볼라-유사 단백질 1 BOLA1
Q9Y426 C2 도메인-함유 단백질 2 C2CD2
Q9Y4K0 리실 산화효소 상동체 2 LOXL2
Q9Y4X3 C-C 모티프 케모카인 27 CCL27
Q9Y5C1 안지오포이에틴-관련 단백질 3 ANGPTL3
Q9Y5I2 프로토카드헤린 알파-10 PCDHA10
Q9Y5I3 프로토카드헤린 알파-1 PCDHA1
Q9Y5K2 칼리크레인-4 KLK4
Q9Y5L2 저산소증-유도 지방 액적-연관 단백질 HILPDA
Q9Y5Q5 심방 나트륨이뇨 펩타이드-전환 효소 CORIN
Q9Y5R2 기질 금속단백분해효소-24 MMP24
Q9Y5U5 종양 괴사 인자 수용체 슈퍼패밀리 멤버 18 TNFRSF18
Q9Y5W5 Wnt 억제 인자 1 WIF1
Q9Y5X9 내피 리파아제 LIPG
Q9Y625 분비 글리피칸-6 GPC6
Q9Y646 카르복시펩티다아제 Q CPQ
Q9Y6C2 EMILIN-1 EMILIN1
Q9Y6F9 Wnt-6 단백질 WNT6
Q9Y6I9 고환-발현 서열 264 단백질 TEX264
Q9Y6L7 톨로이드-유사 단백질 2 TLL2
Q9Y6N3 칼슘-활성화 염소 통로 조절자 패밀리 멤버 3 CLCA3P
Q9Y6N6 라미닌 소단위체 감마-3 LAMC3
Q9Y6R7 IgGFc-결합 단백질 FCGBP
Q9Y6Y9 림프구 항원 96 LY96
Q9Y6Z7 콜렉틴-10 COLEC10
일부 구현예에서, 본 발명의 조성물 및 방법은 표 2에 열거된 하나 이상의 추가적인 예시적인 단백질을 암호화하는 하나 이상의 mRNA의 전달을 가능하게 하므로; 본 발명의 조성물은 본원에서 기재된 다른 성분과 함께 표 2에 열거된 단백질(또는 이의 상동체)을 암호화하는 mRNA를 포함할 수 있고, 본 발명의 방법은 본원에 기재된 다른 성분과 함께 표 2에 열거된 단백질(또는 이의 상동체)로부터 선택된 단백질을 암호화하는 mRNA를 포함하는 조성물을 조제 및/또는 투여하는 단계를 포함할 수 있다.
추가의 예시적인 단백질
Uniprot ID 단백질명 유전자명
A6NGW2 추정 스테레오실린 유사 단백질 STRCP1
A6NIE9 추정 세린 프로테아제 29 PRSS29P
A6NJ16 추정 V-세트 및 면역글로불린 도메인-함유-유사 단백질 IGHV4OR15-8 IGHV4OR15-8
A6NJS3 추정 V-세트 및 면역글로불린 도메인-함유-유사 단백질 IGHV1OR21-1 IGHV1OR21-1
A6NMY6 추정 아넥신 A2 유사 단백질 ANXA2P2
A8MT79 추정 아연-알파-2-당단백질-유사 1
A8MWS1 추정 살해 세포 면역글로불린 유사 수용체 유사 단백질 KIR3DP1 KIR3DP1
A8MXU0 추정 베타-디펜신 108A DEFB108P1
C9JUS6 추정 아드레노메둘린-5-유사 단백질 ADM5
P0C7V7 추정 신호 펩티다아제 복합체 촉매 소단위체 SEC11B SEC11B
P0C854 추정 묘안 증후군 중요 영역 단백질 9 CECR9
Q13046 추정 임신-특이적 베타-1-당단백질 7 PSG7
Q16609 추정 아포지트단백질(a) 유사 단백질 2 LPAL2
Q2TV78 추정 대식세포 자극 단백질 MSTP9 MST1P9
Q5JQD4 추정 펩티드 YY-3 PYY3
Q5R387 추정 비활성기 IIC 분비 인지질 A2 PLA2G2C
Q5VSP4 추정 리포칼린 1-유사 단백질 1 LCN1P1
Q5W188 추정 시스타틴-9-유사 단백질 CST9LP1 CST9LP1
Q6UXR4 추정 세르핀 A13 SERPINA13P
Q86SH4 추정 고환-특이적 프리온 단백질 PRNT
Q86YQ2 추정 라테린 LATH
Q8IVG9 추정 휴매닌 펩티드 MT-RNR2
Q8NHM4 추정 트립신-6 TRY6
Q8NHW4 C-C 모티프 케모카인 4-유사 CCL4L2
Q9H7L2 추정 살해 세포 면역글로불린 유사 수용체 유사 단백질 KIR3DX1 KIR3DX1
Q9NRI6 추정 펩티드 YY-2 PYY2
Q9UF72 추정 TP73 안티센스 유전자 단백질 1 TP73-AS1
Q9UKY3 추정 비활성 카르복실에스테라아제 4 CES1P1
표 1과 표 2에 제시된 Uniprot ID는 열거된 단백질의 인간 버전을 나타내며, 각각의 서열은 Uniprot 데이터베이스로부터 이용 가능하다. 열거된 단백질의 서열은 다양한 포유동물 및 수의학적 또는 산업적 이해관계가 있는 동물을 포함하는, 다양한 동물에도 일반적으로 이용할 수 있다. 따라서, 일부 구현예에서, 본 발명의 조성물 및 방법은 표 1 또는 표 2에 나열된 포유동물 동족체의 분비 단백질, 또는 수의과 동물이나 산업상 관심 동물 동족체의 분비 단백질로부터 선택된 하나 이상의 단백질을 암호화하는 하나 이상의 mRNA의 전달을 가능하게 하므로; 본 발명의 조성물은 표 1 또는 표 2에 나열된 포유동물 동족체의 단백질, 또는 수의과 동물이나 산업상 관심 단백 동물 동족체의 단백질로부터 선택된 단백질을 암호화하는 mRNA를 본원에서 기재된 다른 성분과 함께 포함할 수 있으며, 본 발명의 방법은 표 1 또는 표 2에 나열된 포유동물 동족체의 단백질, 또는 수의과 동물이나 산업상 관심 동물 동족체의 단백질로부터 선택된 단백질을 암호화하는 mRNA를 본원에서 기재된 다른 성분과 함께 포함하는 조성물을 조제 및/또는 투여하는 단계를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 포유동물 동족체는 마우스, 랫트, 햄스터, 사막쥐(gerbil), 말, 돼지, 소, 라마, 알파카, 밍크, 개, 고양이, 페럿, 양, 염소, 또는 낙타 동족체로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 수의과 동물 또는 산업상 관심 동물은 위에 나열된 포유동물 및/또는 닭, 오리, 칠면조, 연어, 메기 또는 틸라피아로부터 선택된다.
구현예에서, 본 발명의 조성물 및 방법은 표 3으로부터 선택된 리소좀 단백질을 암호화하는 mRNA의 전달을 가능하게 한다. 일부 구현예에서, 본 발명의 조성물 및 방법은 표 3에 나열된 하나 이상의 추가적인 예시적인 단백질을 암호화하는 하나 이상의 mRNA의 전달을 가능하게 하므로; 본 발명의 조성물은 표 3에 나열된 단백질(또는 이의 동족체)을 암호화하는 mRNA를 본원에서 기재된 다른 성분과 함께 포함할 수 있고, 본 발명의 방법은 표 3에 열거된 단백질(또는 이의 동족체)로부터 선택된 단백질을 암호화하는 mRNA를 본원에서 기재된 다른 성분과 함께 포함하는 조성물을 조제 및/또는 투여하는 단계를 포함할 수 있다.
리소좀 및 관련 단백질
α-푸코시다아제
α-갈락토시다아제
α-글루코시다아제
α-아이두로니다아제
α-만노시다아제
α-N-아세틸갈락토사미니다아제 (α-갈락토시다아제 B)
β-갈락토시다아제
β-글루쿠로니다아제
β-헥소사미니다아제
β-만노시다아제
3-히드록시-3-메틸글루타릴-Coa (HMG-Coa) 리아제
3-메틸크로토닐-CoA 카르복실라아제
3-O-술포갈락토실 세레브로시드 설파타아제 (아릴설파타아제 A)
아세틸-CoA 전이 효소
산성 알파 글루코시다아제
산성 세라미다아제
산성 지질분해효소
산성 인산분해효소
산성 스핑고미넬리나아제
알파-갈락토시다아제 A
아릴설파타아제 A
베타-갈락토시다아제
베타-글루코세레브로시다아제
베타-헥소사미니다아제
바이오티니다제
카텝신 A
카텝신 K
CLN3
CLN5
CLN6
CLN8
CLN9
시스틴 수송체(시스티노신)
연결 단백질-3 복합체 AP3의 세포 단백질 β3A 소단위체
포르밀-글리신 발생 효소(FGE)
갈락토세레브로시다아제
갈락토오스-1-인산 우리딜릴전이효소
갈락토오스 6-설페이트 설파타아제 (N-아세틸갈락토사민-6-설파타아제로도 알려짐)
글루코세레브로시다아제
글루쿠로네이트 설파타아제
글루쿠로니다아제
당단백질 절단 효소
글리코사미노글리칸 절단 효소
글리코실아스파라기나제 (아스파르틸글루코사미니다아제)
GM2-AP
헤파란-알파-글루코사미나이드 N-아세틸트랜스퍼라아제 (HGSNAT, TMEM76)
헤파란 N-설파타아제
헥소사미니다아제 A 리소좀 프로테아제 메틸말로닐-Coa 뮤타아제
히알루로니다아제
아이두로네이트 설파타아제
LAMP-2
리소좀 a-만노시다아제
리소좀 p40 (C2orf18)
8 단백질을 함유하는 주요 촉진제 상과 도메인(MFSD8 또는 CLN7)
N-아세틸갈락토사민 4-설파타아제
N-아세틸 글루코사민 6-설파타아제
N-아세틸 글루코사미다아제
N-아세틸글루코사민-1-포스페이트 전이 효소
NPC1
NPC2
팔미토일-단백질 티오에스테라아제
팔미토일-단백질 티오에스테라아제 (CLN1)
사포신 A (스핑고지질 활성화 단백질 A)
사포신 B (스핑고지질 활성화 단백질 B)
사포신 C (스핑고지질 활성화 단백질 C)
사포신 D (스핑고지질 활성화 단백질 D)
시알산 수송체(시알린)
시알리다아제
시알린
설파타아제
막관통 단백질 74 (TMEM74)
트리펩티딜-펩티다아제
트리펩티딜-펩티다아제 I (CLN2)
UDP-N-아세틸글루코사민- 포스포트랜스페라아제
리소좀 단백질에 관한 정보는 Lubke 등, "Proteomics of the Lysosome," Biochim Biophys Acta. (2009) 1793: 625-635에서 이용할 수 있다. 일부 구현예에서, 표 3에 열거되어 있고 본 발명의 조성물 및 방법에서 mRNA에 의해 암호화되는 단백질은 인간 단백질이다. 열거된 단백질의 서열은 상기 기술된 다양한 포유동물 및 수의과 동물 또는 산업상 관심 동물을 포함하는 다양한 동물에 대해서도 이용할 수 있다.
일부 구현예에서, 본 발명의 조성물 및 방법은 표 4에 열거된 것과 같은 치료 단백질(예를 들어, 세포액 단백질, 막관통 단백질 또는 분비 단백질)을 암호화하는 mRNA의 전달을 가능하게 한다. 일부 구현예에서, 본 발명의 조성물 및 방법은 표 4에 열거된 질환 또는 장애(징후)를 치료하는 데 유용한 치료 단백질을 암호화하는 mRNA의 전달을 가능하게 하므로; 본 발명의 조성물은 표 4에 열거되었거나 열거되지 않은 치료 단백질을 암호화하는 mRAN를 표 4에 열거된 질환 또는 장애(징후)를 치료하기 위한 본원에서 기재된 다른 성분과 함께 포함할 수 있고, 본 발명의 방법은 이러한 단백질(또는 이의 동족체, 아래에 논의됨)을 암호화하는 mRNA를 표 4에 열거된 질환 또는 장애의 치료를 위한 본원에 기재된 다른 성분과 포함하는 조성물을 조제 및/또는 투여하는 단계를 포함할 수 있다.
예시적인 징후 및 관련 단백질
징후 치료 단백질
3-메틸크로토닐-CoA 카르복실라아제 결핍증 메틸크로토닐-CoA 카르복실라아제
3-메틸글루타코닉 산뇨증 메틸글루타코닐-CoA 히드라타아제
광선각화증
급성 간헐성 포르피린증 포르포피리노겐 탈아미노효소
급성 림프구성 백혈병
급성 골수성 백혈병
애디슨병
아데노신 탈아미노효소 결핍증 아데노신 탈아미노효소
부신백질이영양증 ABCD1
부신척수신경병
AIDS/HIV
알코올 사용 장애
알캅톤뇨증 호모겐티신산 1,2-이산화효소
알레르기 천식 항-IgE mAb
알레르기(피부염, 비염)
원형 탈모증
알퍼스병 POLG
알퍼스-후텐로허 증후군
알파 1-항트립신 결핍증 알파 1 프로테아제 억제제
알파-만노사이드축적증 알파-D-만노사이드분해효소
알포트 증후군
알츠하이머병
아밀로이드 경쇄 아밀로이드증
근위축성 측색 경화증 (ALS)
빈혈 적혈구형성인자
대동맥 판막 협착증
아르기닌혈증 아르기나아제
아르기니노숙신산혈증 아르기니노숙신산 리아제
부정맥 유발성 우심실 이형성증
자폐증
미토콘드리아 DNA 결실을 동반한 상염색체 우성 및 열성 진행성 외안근 마비
상염색체 열성 다낭성 신질환 ARPKD
세균 감염
기저 세포 암종
바텐병 바테닌 + 기타
B-세포 만성 림프구성 백혈병
베커형 근이영양증 디스트로핀
베타 지중해 빈혈 베타 글로빈
폭식 장애
양극성 장애
방광암
안검연축, 경부 근긴장 이상증, 만성 편두통, 외 보툴리눔 독소
폐색성 세기관지염
브루가다 증후군
버거병
CACNA1A
CACNB4 관련 간헐성 운동실조증 2형
암 및 우울증
암 및 성 기능장애
임신 중 암
카르바밀인산 합성효소 결핍증 카르바밀인산 합성효소
담낭 암종
심근증(당뇨병)
심근증(비대성)
카르니틴 섭취 결함 SLC22A5
카테콜라민성 다형성 심실성 빈맥
CDKL5 관련 비정형 레트 증후군
소아 지방변증
봉와직염
뇌혈관 질환
자궁경부암
만성 피로 증후군
만성 이식편 대 숙주 질환
만성 특발성 두드러기
만성 면역성 혈소판감소증 트롬보포이에틴
만성 신부전
만성 간 질환
만성 림프구성 백혈병
만성 골수성 백혈병
만성 췌장염
간경변
시트룰린혈증 I형 아르기니노숙신산 신타아제
고전적 레트 증후군
고전적 갈락토오스혈증 갈락토오스-1-인산우리딜릴전이효소
클로스트리듐 디피실리 연관된 설사
응고 장애
COAD/COPD
코카인 중독
COL4A5 관련 장애
콜드 접촉 두드러기
피임, 여성
관상 동맥 질환
자궁체 암
피질바닥 변성
크리글러-나자르 증후군 UDP-글루쿠루노실전이효소
심한 사지 허혈
CTNS 관련 시스틴증
피부 홍반성 루푸스
피부 신경내분비 암종(메르켈 세포)
낭포성 섬유증 CFTR
낭포성 섬유증 디옥시리보뉴클레아제 I
시스틴증 시스티노신
시스틴요증 SLC7A9
치매(루이소체)
우울증
당뇨병성 족 감염증
당뇨병성 족 궤양
당뇨병성 말초 신경병증
당뇨병성 궤양
설사성 질환
광범위 큰 B 세포 림프종
디조지 증후군
게실염
약물 사용 장애
뒤셴 근이영양증 디스트로핀
구음 장애
운동 장애(레보도파 유도)
조기 발병 상염색체 우성 알츠하이머병
습진
엘러스-단로스 증후군, 1형
EIF2B1
EIF2B2
EIF2B3
EIF2B4
중추 신경계 저 세포형성/백색질 소실을 동반한 EIF2B5-관련 소아 운동 실조증
호산성 식도염
간질
발기부전
적혈구형성 프로토포르피린증 철결합효소
식도 암종
본태떨림
파브리병 알파 갈락토시다아제
가족성 대장폴립증 APC
가족성 킬로미크론혈증 지단백 리파아제
가족성 이상베타지단백혈증 아포지질단백질 E
가족성 단리된 확장성 심근병증
가족성 지중해열 피린(MEFV)
가족성 흑색종
여성 불임 여포 자극 호르몬
여성 성 기능 장애
섬유근육통
FMR1 관련 장애
골절 치유
취약 X 조기 폐경 증후군
취약 X 증후군 FMRP
취약 X-연관 떨림/실조증 증후군
프리드라이히 운동실조증
전측두엽 치매
프린스 증후군
갈락토세레브로시다아제 결핍
GALE 결핍증 갈락토오스 에피머라아제
GALK 결핍증 갈락토키나아제
GALT 관련 갈락토오스 혈증
위암
위식도 역류 질환
고셰병 글루코세레브로시다아제
길버트 증후군 UDP-글루쿠루노실전이효소
다형성 교아종
사구체 신염
글루타르산혈증 I형 글루타릴-CoA 탈수소효소
GM2 강글리오시드증 HEXA, HEXB
통풍 요산 산화효소
이식편 대 숙주 질환
성장 호르몬 결핍증 성장 호르몬 1 / 성장 호르몬 2
머리와 목 암, 전이성 대장암 항-EGFr mAb
청력 상실, 성인 발병
심부전
혈색소침착증 HFE 단백질
반측 안면경련
용혈성 요독 증후군 항-보체인자 C5 mAb
혈우병 A 인자 VIII
혈우병 A, 혈우병 B 인자 VII
혈우병 B 인자 IX
B형 간염, C형 간염 인터페론 알파
HER2+ 유방암, 위암 항-HER2 mAb
유전성 혈관부종 C1 에스테라아제 억제제
유전성 출혈 모세혈관확장증
유전성 출혈 모세혈관확장증(AT)
유전성 구형적혈구증
화농성 한선염
호모시스틴뇨증 시스타티오닌 베타-신타아제
동형접합체적 가족성 고콜레스테롤 혈증 LDL 수용체
헌터 증후군(MPS II) 이두로네이트-2-설파타제
헌팅턴병 헌팅턴
후를러 증후군(MPS I) 알파-L-아이두로니데이스
하이드로레살러스
통각 과민증
고빌리루빈혈증
다한증
고지혈증
고메티오닌혈증 메티오닌 아데노실전이효소
고옥살산뇨증 I형 세린-피루브산 아미노전이효소
고혈압
고요산혈증
저나트륨혈증
부갑상선 기능 저하증 부갑상선 호르몬
저인산증 TNSALP
특발성 폐 섬유증
이미노글리신뇨증
면역글로불린 결핍증 면역글로불린
감염(아데노바이러스)
감염(탄저병 예방)
감염(BK 바이러스)
감염(클로스트리듐 디피실리균 예방)
감염(뎅기열 예방)
감염(엡스타인-바 바이러스)
감염(D형 간염)
감염(라임병 예방)
감염(천연두 바이러스)
감염성 질환 백식 감염성 항원
염증성 심장 질환
불면증
간질성 방광염
철결핍성 빈혈
과민성 대장 질환
허혈성 심장 질환
이소길초산뇨증 이소길초산 CoA 탈수소효소 결핍증
얀스키-빌쇼스키병
청소년 바텐병
청소년 신경 세로이드 리포푸신증(JNCL)
소아 류마티스 관절염 TNF-알파 억제제
케네디 병(SBMA)
원뿔 각막
크라베병 갈락토세레브로시다아제
레베르 유전성 시신경병증 NADH 탈수소효소
평활근육종
레녹스-가스토 증후군
레쉬-니한 증후군 히포크산틴 포스포리보실전이효소 1
백혈병
리-프라우메니 증후군 TP53
지방종
지방육종
간암
장쇄 3-OH acyl-CoA 탈수소효소 결핍증 장쇄-3-수산화 acyl-CoA 탈수소효소
하부 호흡기 감염
리소좀산 리파아제 결핍증 리소좀산 리파아제
황반 변성
주요 우울 장애
악성 섬유조직구종
외투세포 림프종
단풍시럽뇨병 3-메틸-2-옥소부타노에이트 탈수소효소
마르판 증후군 FBN1
마로토-라미 증후군(MPS VI) N-아세틸갈락토사민 4-설파타아제
비만세포증
맥아들병 근육 글리코겐 포스포릴라제
MECP2 관련 장애
MECP2 관련 중증 신생아 뇌병증
중쇄 acyl-CoA 탈수소효소 결핍증 Acyl-CoA 탈수소효소
흑색종 항-CTLA4 mAb
이염성 백질이영양증 아릴설파타제 A
전이성 대장암, NSCLC, 기타 항-VEGF mAb
메틸말로닐-CoA 뮤타아제 결핍증 메틸말로닐-CoA 뮤타아제
편두통
미토콘드리아 산화적 인산화 장애
모르키오 증후군, A형(MPS IVA) 갈락토스 6-설페이트 설파타제
모르키오 증후군, B형(MPS IVB) 베타-갈락토시다아제
구인두암
복합 카르복실라아제 결핍증 바이오틴-메틸크로토노일-CoA-카르복실라아제 리가아제
다발성 골수종
다발성 경화증 항VLA-4 mAb
다발성 경화증 인터페론 베타
다계통 위축증
중증 근무력증
골수 섬유증
기면증
신생아 기관지폐 이형성증
신생아 감염
신염 및 신장증
신경 섬유종증 1형 NF-1
신경원성 세로이드 리포푸신증-관련 질환
호중성 백혈구 감소 G-CSF
니만피크병, A / B형 SMPD1
니만피크병 C형 NPC1
니만피크병 C1형
야뇨증
비알코올성 지방 간 질환
비호지킨 림프종 항CD20 mAb
비소세포 폐암
대뇌 피질 경색 및 백질뇌병증(CADASIL)을 동반하는 갖는 노치-3 관련 대뇌 상염색체 우성 동맥 병증
비만
안근마비
오피오이드 유도 변비
오르니틴 트랜스카바밀라제 결핍증 오르니틴 트랜스카바밀라제
골관절염
골화석증
골다공증 항RANKL mAb
난소암
뼈의 파제트병 시퀘스토솜 1
통증
췌장 암종
공황 장애
파킨슨 병
발작성 야간 혈색소뇨증 항보체인자 C5 Mab
두슬증(머릿니)
펠리체우스-메르츠바허병
심상성 천포창
소화성 궤양 질환
말초 신경병증
페이로니병
페닐케톤뇨증 페닐알라닌 수산화효소
폐렴구균 감염 예방
POLG 관련 감각성 운동실조성 신경병증
다낭성 신장병
다낭성 난소 증후군
진성 다혈구증
중합효소 G 관련 장애
다형성 광선성 발진
폼페병 알파 글루코시다아제
만발성 피부 포르피린증 우로포르피리노겐 데카르복실라아제
대상포진 후 신경통
장기 이식 후
낭염
PPM-X 증후군
프라더-윌리 증후군
전자간증
조루
조산 및 저체중아
원발성 섬모운동 이상증
원발성 사구체 신질환
원발성 체액 면역 결핍증(예를 들어, CVID) 면역글로불린
직장염
진행성 다초점 백질뇌병
진행성 핵상 마비
프로피온산혈증 프로피오닐-CoA 카르복실화효소
전립선암
건선 항-IL-12 & IL-23 mAb
건선성 관절염 TNF-알파 억제제
PTT-1
폐 동맥 고혈압
폐 동맥 고혈압
레이노 현상
굴절 오차
신세포암
하지 불안 증후군
색소성 망막염
류머티스성 심장 질환
류마티스성 관절염 항-인터루킨-6(IL-6) mAb
류마티스성 관절염 T-세포 공동자극 차단제
류마티스성 관절염 TNF-알파 억제제
로마노-워드 증후군
주사
산필리포 증후군, A형(MPS IIIA) 헤파란 N-설파타제
산필리포 증후군, B형(MPS IIIB) N-아세틸-알파-D-글루코사미다아제
산타부오리-할티아병
조현병
슈니츨러 증후군
경피증
SCN1A
SCN1B-관련 발작 장애
단쇄 acyl-CoA 탈수소효소 결핍증 부티릴-CoA 탈수소효소
겸상적혈구병 헤모글로빈
SLC3A1-관련 장애
소세포 폐암
SMN-1 관련 척수근위축증(SMA)
척수성 근육위축증 생존 운동 신경세포 단백질
두경부 편평 세포 암종
스티클러 증후군
위암
뇌졸중 예방
활막 육종
전신 홍반성 루푸스 항BAFF
전신 경화증
테트라하이드로비옵테린-결핍 고페닐알라닌혈증 테트라하이드로비옵테린
폐색성 혈전혈관염
혈전성 장애
갑상선암
TPP1 결핍증
기관, 기관지, 폐암
삼첨판 폐쇄증
TSC1
TSC2-관련 결절성 경화증
제2형 당뇨병 글루카곤-유사 펩타이드 1(GLP-1) 작용제
제2형 당뇨병 인슐린
티로신혈증 I형 푸마릴아세토아세티아제
궤양성 대장염
자궁 섬유종
정맥류
정맥 혈전색전증
초장쇄 acyl-CoA 탈수소효소 결핍증 장쇄 acyl-CoA 탈수소효소
폰 기엘케병 글루코스-6-포스파타제
폰 히펠-린다우병 pVHL
베게너 육아종증
윌슨병 윌슨병 단백질
X-연관 선천성 부신 저형성증
X-연관 부신백질이영양증
X 연관 무감마글로불린혈증 브루톤 티로신 인산화효소
일부 구현예에서, 본 발명은 표 1, 2, 3 또는 4에 열거되었거나, 이에 열거된 단백질과 관련된 질환이나 장애에 걸린 대상체를 예방, 치료 및/또는 치유하는 데 사용된다. 일부 구현예에서, mRNA는 낭포성 섬유증 막관통 전도도 조절제(CFTR), 아르기노숙신네이트 합성효소(ASS1), 인자 IX, 생존 운동 뉴런 1(SMN1), 또는 페닐알라닌 히드록실라제(PAH) 중 하나 이상을 암호화한다.
일부 구현예에서, 표 1, 2, 3 또는 4에 열거된 단백질 중 임의의 하나를 암호화하는 mRNA는 코돈 최적화된 것이다. 일 구현예에서, CFTR을 암호화하는 mRNA는 코돈 최적화된 것이다.
Figure pct00034
Figure pct00035
Figure pct00036
Figure pct00037
Figure pct00038
Figure pct00039
Figure pct00040
예시적인 코돈 최적화된 인간 낭포성 섬유증 막관통 전도도 조절제(CFTR) mRNA
작제물 설계:
X - 코딩 서열 - Y
5' 및 3' UTR 서열:
X (5' UTR 서열) =
GGACAGAUCGCCUGGAGACGCCAUCCACGCUGUUUUGACCUCCAUAGAAGACACGGGACCGAUCCAGCCUCCGCGGCCGGGAACGGUGCAUUGGAACGCGGAUUC CCCGUGCCAAGAGUGACUCACCGUCCUUGACACG (서열번호 5)
Y (3' UTR 서열) =
CGGGUGGCAUCCCUGUGACCCCUCCCCAGUGCCUCUCCUGGCCCU GGAAGUUGCCACUCCAGUGCCCACCAGCCUUGUCCUAAUAAAAUUAAGUUGCA UCAAGCU (서열번호 6)
또는
GGGUGGCAUCCCUGUGACCCCUCCCCAGUGCCUCUCCUGGCCCUGGAAGUUGCCACUCCAGUGCCCACCAGCCUUGUCCUAAUAAAAUUAAGUUGCAUCAAAGCU (서열번호 7)
일 구현예에서, 코돈 최적화된 인간 CFTR mRNA 서열은 서열번호 1을 포함한다.
일 구현예에서, 전장 코돈 최적화된 인간 CFTR mRNA 서열은 다음과 같다:
Figure pct00041
Figure pct00042
Figure pct00043
Figure pct00044
일 구현예에서, 또다른 전장 코돈 최적화된 인간 CFTR mRNA 서열은 다음과 같다:
Figure pct00045
Figure pct00046
Figure pct00047
Figure pct00048
일 구현예에서, 코돈 최적화된 인간 CFTR mRNA 서열은 서열번호 2를 포함한다.
일 구현예에서, 전장 코돈 최적화된 인간 CFTR mRNA 서열은 다음과 같다:
Figure pct00049
Figure pct00050
Figure pct00051
Figure pct00052
일 구현예에서, 또다른 전장 코돈 최적화된 인간 CFTR mRNA 서열은 다음과 같다:
Figure pct00053
Figure pct00054
Figure pct00055
Figure pct00056
서열번호 8, 서열번호 9, 서열번호 10, 및 서열번호 11은 코돈 최적화된 hCFTR 암호화 mRNA를 프레이밍하는 5' 및 3' 미번역 영역을 포함한다.
일부 구현예에서, 적합한 mRNA 서열은 인간 CFTR(hCFTR) 단백질의 동족체 또는 유사체인 mRNA 서열일 수 있다. 예를 들어, hCFR 단백질의 동족체 또는 유사체는, 실질적인 hCFTR 단백질 활성을 유지하면서 야생형 또는 자연 발생 hCFTR 단백질과 비교해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실, 및/또는 삽입을 함유하는 변형된 hCFTR 단백질일 수 있다. 일부 구현예에서, 본 발명에 적합한 mRNA는 서열번호 4와 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 이상 상동인 아미노산 서열을 암호화한다. 　 일부 구현예에서, 본 발명에 적합한 mRNA는 hCFTR 단백질과 실질적으로 동일한 단백질을 암호화한다. 일부 구현예에서, 본 발명에 적합한 mRNA는 서열번호 4와 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 암호화한다. 일부 구현예에서, 본 발명에 적합한 mRNA는 hCFTR 단백질의 단편 또는 일부를 암호화한다. 일부 구현예에서, 본 발명에 적합한 mRNA는 hCFTR 단백질의 단편 또는 일부를 암호화하되, 단백질의 단편 또는 일부는 야생형 단백질과 유사한 CFTR 활성을 여전히 유지한다. 일부 구현예에서, 본 발명에 적합한 mRNA는 서열번호 1, 서열번호 8, 또는 서열번호 9와 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 이상 동일한 뉴클레오티드 서열을 갖는다. 　 　 　 일부 구현예에서, 본 발명에 적합한 mRNA는 서열번호 2, 서열번호 10, 또는 서열번호 11과 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 이상 동일한 뉴클레오티드 서열을 갖는다. 　 　 　 일부 구현예에서, 본 발명에 적합한 mRNA는 서열번호 1과 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 　 일부 구현예에서, 본 발명에 적합한 mRNA는 서열번호 8과 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 　 일부 구현예에서, 본 발명에 적합한 mRNA는 서열번호 9와 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 적합한 mRNA는 또 다른 단백질에 융합된(예를 들어, N 말단 또는 C 말단 융합된) hCFTR 단백질의 전장, 단편 또는 일부를 포함하는 융합 단백질을 암호화한다. 일부 구현예에서, hCFTR 단백질의 전장, 단편 또는 일부를 암호화하는 mRNA에 융합된 단백질은 신호 서열 또는 세포 표적화 서열을 암호화한다.
본 발명에 따른 mRNA는 알려진 다양한 방법 중 어느 하나에 따라 합성될 수 있다. 예를 들어, 본 발명에 따른 mRNA는 시험관 내 전사(IVT)를 통해 합성될 수 있다. 간단히 말하면, IVT는 일반적으로 프로모터; 리보뉴클레오티드 트리포스페이트, DTT 및 마그네슘 이온을 포함할 수 있는 완충액 시스템, 및 적절한 RNA 중합효소(예를 들어, T3, T7 또는 SP6 RNA 중합효소)로 이루어진 풀; DNAse I; 피로포스파타아제; 및/또는 RNAse 억제제를 함유하는 선형 또는 원형 DNA 템플릿으로 수행된다. 정확한 조건은 특정 응용예에 따라 달라질 것이다.
비코딩 영역
일부 구현예에서, mRNA는 5' 및/또는 3' 미번역 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 5' 미번역 영역은 mRNA의 안정성이나 번역에 영향을 미치는 하나 이상의 요소, 예를 들어, 철 반응 요소를 포함한다. 일부 구현예에서, 5' 미번역 영역은 약 50 내지 500 뉴클레오티드의 길이일 수 있다.
일부 구현예에서, 3' 미번역 영역은 폴리아데닐화 신호, 세포 내 mRNA의 위치 안정성에 영향을 주는 단백질에 대한 결합 부위 중 하나 이상, 또는 miRNA에 대한 하나 이상의 결합 부위를 포함한다. 일부 구현예에서, 3' 비번역 영역은 50 내지 500개의 뉴클레오티드 길이이거나 더 길 수 있다.
예시적인 3' 및/또는 5' UTR 서열은 센스 mRNA 분자의 안정성을 높이기 위하여 안정한 mRNA 분자(예컨대, 글로빈, 액틴, GAPDH, 튜불린, 히스톤, 또는 시트르산 회로 효소)로부터 유래될 수 있다. 예를 들어, 5' UTR 서열은 CMV 즉각-조기(immediate-early) 1(IE1) 유전자, 또는 그의 조각을 포함하여 뉴클레아제 내성을 개선시키고/시키거나 폴리뉴클레오티드의 반감기를 개선시킬 수 있다. 또한 폴리뉴클레오티드의 추가적인 안정을 위하여 폴리뉴클레오티드(예컨대, mRNA)의 3' 말단 또는 미번역 영역에 인간 성장 호르몬(hGH)을 암호화하는 서열 또는 그의 단편을 포함하는 것이 고려된다. 일반적으로, 이러한 변형은 폴리뉴클레오티드의 안정성 및/또는 약동학적 성질(예컨대, 반감기)을 변형되지 않은 대응물에 비해 개선시키고, 예를 들어 생체 내 뉴클레아제 소화에 대한 이러한 폴리뉴클레오티드의 내성을 개선시키도록 이루어진 변형을 포함한다.
다양한 구현예에 따르면, 임의 크기의 mRNA가 제공된 리포솜에 의해 캡슐화될 수 있다. 일부 구현예에서, 제공된 리포솜은 약 0,5 kb, 1 kb, 1,5 kb, 2 kb, 2,5 kb, 3 kb, 3,5 kb, 4 kb, 4,5 kb, 또는 5 kb보다 큰 길이의 mRNA를 캡슐화할 수 있다.
일반적으로, mRNA 합성은 N-말단(5') 단부에 "캡"을 첨가하고, C-말단(3') 단부에 "꼬리"를 첨가하는 것을 포함한다. 캡의 존재는 대부분의 진핵세포에서 발견되는 뉴클레아제에 대한 내성을 제공하는 데 있어서 중요하다. "꼬리"의 존재는 엑소뉴클레아제 분해로부터 mRNA를 보호하는 역할을 한다.
따라서, 일부 구현예에서, mRNA(예를 들어, CFTR을 암호화하는 mRNA)는 5' 캡 구조를 포함한다. 5' 캡은 일반적으로 다음과 같이 첨가된다: 우선, RNA 말단 인산가수분해효소가 5' 뉴클레오티드로부터 말단 인산기 중 하나를 제거하고, 2개의 말단 인산기를 남긴다; 그런 다음, 구아노신 삼인산(guanosine triphosphate, GTP)이 구아닐릴(guanylyl) 전이효소를 통해 말단 인산에 첨가되고 5'5'5 삼인산 결합을 생성한다; 그런 다음 구아닌의 7-질소가 메틸기 전이효소에 의해 메틸화된다. 캡 구조의 예는 m7G(5')ppp (5'(A,G(5')ppp(5')A 및 G(5')ppp(5')G를 포함하되, 이에 한정되지 않는다. 추가 캡 구조는 공개된 미국 출원 제US 2016/0032356호 및 2017년 2월 27일자로 출원된 미국 가출원 제62/464,327호에 기술되어 있으며, 이들은 참조로서 본원에 통합된다.
일부 구현예에서, 캡은 캡0 구조이다. 캡0 구조는 염기 1과 2에 부착된 리보스의 2'-O-메틸 잔기가 결핍되어 있다. 일부 구현예에서, 캡은 캡1 구조이다. 캡1 구조는 염기 2에서 2'-O-메틸 잔기를 갖는다. 일부 구현예에서, 캡은 캡2 구조이다. 캡2 구조는 염기 2와 3 둘 다에 부착된 2'-O-메틸 잔기를 갖는다.
일부 구현예에서, mRNA(예를 들어, CFTR을 암호화하는 mRNA)는 3' 꼬리 구조를 포함한다. 전형적으로, 꼬리 구조는 폴리(A) 및/또는 폴리(C) 꼬리를 포함한다. mRNA의 3' 말단에 있는 폴리-A 꼬리 또는 폴리-C 꼬리는 각각 적어도 50 아데노신 또는 시토신 뉴클레오티드, 적어도 150 아데노신 또는 시토신 뉴클레오티드, 적어도 200 아데노신 또는 시토신 뉴클레오티드, 적어도 250 아데노신 또는 시토신 뉴클레오티드, 적어도 300 아데노신 또는 시토신 뉴클레오티드, 적어도 350 아데노신 또는 시토신 뉴클레오티드, 적어도 400 아데노신 또는 시토신 뉴클레오티드, 적어도 450 아데노신 또는 시토신 뉴클레오티드, 적어도 500 아데노신 또는 시토신 뉴클레오티드, 적어도 550 아데노신 또는 시토신 뉴클레오티드, 적어도 600 아데노신 또는 시토신 뉴클레오티드, 적어도 650 아데노신 또는 시토신 뉴클레오티드, 적어도 700 아데노신 또는 시토신 뉴클레오티드, 적어도 750 아데노신 또는 시토신 뉴클레오티드, 적어도 800 아데노신 또는 시토신 뉴클레오티드, 적어도 850 아데노신 또는 시토신 뉴클레오티드, 적어도 900 아데노신 또는 시토신 뉴클레오티드, 적어도 950 아데노신 또는 시토신 뉴클레오티드, 또는 적어도 1kb의 아데노신 또는 시토신 뉴클레오티드를 일반적으로 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리-A 꼬리 또는 폴리-C 꼬리는 각각 약 10 내지 800 아데노신 또는 시토신 뉴클레오티드(예: 약 10 내지 200 아데노신 또는 시토신 뉴클레오티드, 약 10 내지 300 아데노신 또는 시토신 뉴클레오티드, 약 10 내지 400 아데노신 또는 시토신 뉴클레오티드, 약 10 내지 500 아데노신 또는 시토신 뉴클레오티드, 약 10 내지 550 아데노신 또는 시토신 뉴클레오티드, 약 10 내지 600 아데노신 또는 시토신 뉴클레오티드, 약 50 내지 600 아데노신 또는 시토신 뉴클레오티드, 약 100 내지 600 아데노신 또는 시토신 뉴클레오티드, 약 150 내지 600 아데노신 또는 시토신 뉴클레오티드, 약 200 내지 600 아데노신 또는 시토신 뉴클레오티드, 약 250 내지 600 아데노신 또는 시토신 뉴클레오티드, 약 300 내지 600 아데노신 또는 시토신 뉴클레오티드, 약 350 내지 600 아데노신 또는 시토신 뉴클레오티드, 약 400 내지 600 아데노신 또는 시토신 뉴클레오티드, 약 450 내지 600 아데노신 또는 시토신 뉴클레오티드, 약 500 내지 600 아데노신 또는 시토신 뉴클레오티드, 약 10 내지 150 아데노신 또는 시토신 뉴클레오티드, 약 10 내지 100 아데노신 또는 시토신 뉴클레오티드, 약 20 내지 70 아데노신 또는 시토신 뉴클레오티드, 또는 약 20 내지 60 아데노신 또는 시토신 뉴클레오티드)일 수 있다. 일부 구현예에서, 꼬리 구조는 본원에서 설명된 다양한 길이를 갖는 폴리(A) 및 폴리(C) 꼬리의 조합을 포함한다. 일부 구현예에서, 꼬리 구조는 적어도 50%, 55%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 92%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 아데노신 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 구현예에서, 꼬리 구조는 적어도 50%, 55%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 92%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 시토신 뉴클레오티드를 포함한다.
변형된 mRNA
일부 구현예에서, 본 발명에 따른 mRNA는 비변형 또는 변형된 mRNA로서 합성될 수 있다. 전형적으로, mRNA는 안정성을 강화하도록 변형된다. mRNA의 변형은 예를 들어 RNA의 뉴클레오티드가 변형되는 것을 포함할 수 있다. 따라서, 본 발명에 따른 변형 mRNA는 예를 들어, 백본 변형, 당 변형 또는 염기 변형을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, mRNA는 퓨린(아데닌(A), 구아닌(G)) 또는 피리미딘(티민(T), 시토신(C), 우라실(U))을 포함하되 이에 한정되지 않는 자연 발생 뉴클레오티드 및/또는 뉴클레오티드 유사체(변형 뉴클레오티드)로부터 합성될 수 있고, 예를 들어, 1-메틸-아데닌, 2-메틸-아데닌, 2-메틸티오-N-6-이소펜테닐(isopentenyl)-아데닌, N6-메틸-아데닌, N6-이소펜테닐-아데닌, 2-티오-시토신, 3-메틸-시토신, 4-아세틸-시토신, 5-메틸-시토신, 2,6-디아미노퓨린, 1-메틸-구아닌, 2-메틸-구아닌, 2,2-디메틸-구아닌, 7-메틸-구아닌, 이노신(inosine), 1-메틸-이노신, 유사우라실(5-우라실), 디하이드로(dihydro)-우라실, 2-티오-우라실, 4-티오-우라실, 5-카르복시메틸아미노메틸-2-티오-우라실, 5-(카르복시하이드록시메틸)-우라실, 5-플루오로-우라실, 5-브로모-우라실, 5-카르복시메틸아미노메틸-우라실, 5-메틸-2-티오-우라실, 5-메틸-우라실, N-우라실-5-oxyacetic acid 메틸 ester, 5-메틸아미노메틸-우라실, 5-메톡시(methoxy)아미노메틸-2-티오-우라실, 5'-메톡시카르보닐(carbonyl)메틸-우라실, 5-메톡시-우라실, 우라실-5-옥시아세틱산(oxyacetic acid) 메틸 에스터, 우라실-5-옥시아세틱산(v), 1-메틸-유사우라실, 큐에오신(queosine), 베타-D-만노실-큐에오신, 와이부톡소신(wybutoxosine), 및 포스포라미데이트(phosphoramidates), 포스포로티오에이트(phosphorothioates), 펩타이드 뉴클레오티드, 메틸포스포네이트, 7-데아자구아노신(deazaguanosine), 5-메틸시토신 및 이노신과 같은 퓨린과 피리미딘의 변형 뉴클레오티드 유사체 또는 유도체로서 합성될 수 있다. 이와 같은 유사체의 제조는 미국 등록특허 번호 제4,373,071호, 미국 등록특허 번호 제4,401,796호, 미국 등록특허 번호 제4,415,732호, 미국 등록특허 번호 제4,458,066호, 미국 등록특허 번호 제4,500,707호, 미국 등록특허 번호 제4,668,777호, 미국 등록특허 번호 제4,973,679호, 미국 등록특허 번호 제5,047,524호, 미국 등록특허 번호 제5,132,418호, 미국 등록특허 번호 제5,153,319호, 미국 등록특허 번호 제5,262,530호, 미국 등록특허 번호 제5,700,642호로 부터 당업자에게 공지되어 있고, 이들 개시는 그 전체가 본원에 참조로서 포함된다. 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　
일부 구현예에서, mRNA(예를 들어, CFTR을 암호화하는 mRNA)는 RNA 백본 변형을 포함할 수 있다. 전형적으로, 백본 변형은 RNA에 함유된 뉴클레오티드의 백본의 인산이 화학적으로 변형된 변형이다. 예시적인 백본 변형은 일반적으로 메틸포스포네이트, 메틸포스포라미데이트, 포스포라미데이트, 포스포티오에이트(예컨대, 시티딘 5'-O-(1-티오포스페이트)), 보라노포스페이트(boranophosphates), 양전하로 하전된 구아니디늄기(guanidinium groups) 등으로 이루어진 군으로부터의 변형을 포함하되 이들로 한정되지 않으며, 이는 다른 음이온기, 양이온기, 또는 중성기에 의해 인산디에스테르 결합을 대체하는 것을 의미한다.
일부 구현예에서, mRNA(예를 들어, CFTR을 암호화하는 mRNA)는 당 변형을 포함할 수 있다. 전형적인 당 변형은 뉴클레오티드의 당의 화학적 변형이며, 이는 2'-디옥시-2'-플루오로-올리고리보뉴클레오티드(2'-플루오로-2'-디옥시시티딘 5'-삼인산, 2'-플루오로-2'-디옥시우리딘 5'-삼인산), 2'-디옥시-2'-디아민-올리고리보뉴클레오티드(2'-아미노-2'-디옥시시티딘 5'-삼인산, 2'-아미노-2'-디옥시우리딘 5'-삼인산), 2'-O-알킬올리고리보뉴클레오티드, 2'-디옥시-2'-C-알킬올리고리보뉴클레오티드(2'-O-메틸시티딘 5'-삼인산, 2'-메틸우리딘 5'-삼인산), 2'-C-알킬올리고리보뉴클레오티드, 및 이의 이성질체(2'-아라시티딘 5'-삼인산, 2'-아라우리딘 5'-삼인산), 아지도삼인산(2'-아지도-2'-디옥시시티딘 5'-삼인산, 2'-아지도-2'-디옥시우리딘 5'-삼인산) 또는 4'-티오-치환된 리보뉴클레오티드로 이루어진 군으로부터 선택된 당 변형을 포함하되, 이에 한정되지 않는다.
일부 구현예에서, mRNA(예를 들어, CFTR을 암호화하는 mRNA)는 뉴클레오티드의 염기의 변형(염기 변형)을 함유할 수 있다. 염기 변형을 함유하는 변형 뉴클레오티드는 염기-변형 뉴클레오티드로도 부른다. 이와 같은 염기-변형 뉴클레오티드의 예는 2-아미노-6-클로로퓨린 리보사이드 5'-삼인산, 2-아미노아데노신 5'-삼인산, 2-티오시티딘 5'-삼인산, 2-티오우리딘 5'-삼인산, 4-티오우리딘 5'-삼인산, 5-아미노알릴시티딘 5'-삼인산, 5-아미노알릴우리딘 5'-삼인산, 5-브로모시티딘 5'-삼인산, 5-브로모우리딘 5'-삼인산, 5-아이오도시티딘 5'-삼인산, 5-아이오도우리딘 5'-삼인산, 5-메틸시티딘 5'-삼인산, 5-메틸우리딘 5'-삼인산, 6-아자시티딘 5'-삼인산, 6-아자우리딘 5'-삼인산, 6-클로로퓨린 리보사이드 5'-삼인산, 7-데아자아데노신 5'-삼인산, 7-데아자구아노신 5'-삼인산, 8-아자아데노신 5'-삼인산, 8-아지도아데노신 5'-삼인산, 벤즈이미다졸 리보사이드 5'-삼인산, N1-메틸아데노신 5'-삼인산, N1-메틸구아노신 5'-삼인산, N6-메틸아데노신 5'-삼인산, O6-메틸구아노신 5'-삼인산, 유사우리딘 5'-삼인산, 퓨로마이신 5'-삼인산 또는 크산토신 5'-삼인산을 포함하되, 이들로 한정되지 않는다.
약제학적 조성물
생체 내 mRNA의 발현을 촉진하기 위해서, 리포솜과 같은 전달 운반체는 하나 이상의 추가적인 핵산, 담체, 표적 리간드 또는 안정화 제제의 조합이나 적합한 부형제와 혼합한 약학적 조성물로 제형화될 수 있다. 약물의 제형화 및 투여를 위한 기법은 "Remington's Pharmaceutical Sciences", Mack Publishing Co., Easton, Pa., 최신판에서 찾을 수 있다.
제공된 리포솜-캡슐화 또는 결합된 mRNA 및 이를 함유하는 조성물은 당업계의 임상의에게 적절하다고 여겨지는 대상체의 임상적 상태, 투약 부위 및 방법, 투약 스케줄, 대상의 연령, 성별, 체중 및 다른 요인들을 고려하여, 현재 의학적 관행에 따라 투약 및 투여될 수 있다. 본원의 목적을 위한 "유효량(effective amount)"은 실험적 임상 연구, 약학적, 임상적 및 의학적 기술 분야의 당업자에게 알려진 이러한 적절한 고려사항들에 의해 결정될 수 있다. 일부 구현예에서, 투약된 양은 증상의 적어도 어느 정도의 안정, 개선 또는 제거 및 당업자에 의해 질환의 진행, 퇴행 또는 개선의 적절한 측정을 위해 선택되는 기타 표지들을 달성하는 데 효과적이다. 예를 들어, 적합한 양 및 투여 요법은 적어도 일시적인 단백질(예컨대, 효소)의 생산을 야기하는 것이다.
적합한 투여 경로는 예를 들어, 경구, 직장, 질, 점막경유, 기관 내 또는 흡입을 포함하는 폐, 또는 장 투여; 진피내(intradermal), 경피(국소), 근육 내, 피하, 골수 내 주입뿐만 아니라 경막 내, 직접 심실 내, 정맥 내, 복강 내 및/또는 비강 내 투여를 포함하는 비경구 전달을 포함한다.
대안적으로 또는 추가적으로, 본 발명의 리포솜-캡슐화 mRNA 및 조성물은 예를 들어, 표적 조직으로 직접 약학적 조성물의 주사를 통해, 바람직하게는 지속된 방출 제형으로 전신적인 방법보다는 국소적인 방법으로 투여될 수 있다. 국소적 전달은 표적된 조직에 따라 다양한 방법으로 작용할 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 조성물을 함유하는 에어로졸은 (비강, 기관, 또는 기관지 전달로) 흡입될 수 있거나; 본 발명의 조성물은 부상, 질환 징후 또는 통증 부위에 주입될 수 있거나, 예를 들어; 조성물은 경구, 기관 또는 식도 적용을 위한 로젠지(lozenge) 목캔디형으로 제공될 수 있거나; 위 또는 장에 투여하기 위한 액형, 정제형 또는 캡슐형으로 공급될 수 있거나, 직장 또는 질 적용을 위한 좌약형으로 공급될 수 있거나; 크림, 점안약 또는 심지어 주사의 사용에 의해 눈에 전달될 수도 있다. 치료적 분자 또는 리간드와 복합체화된 제공된 조성물을 함유하는 제형은 예를 들어, 조성물이 이식 부위에서 주변 세포로 확산될 수 있게 하는 폴리머 또는 다른 구조 또는 물질과 관련하여 심지어 수술적으로 투여될 수 있다. 대안적으로, 이들은 폴리머 또는 지지체의 사용없이 수술적으로 적용될 수 있다.
일부 구현예에서, 제공된 리포솜 및/또는 조성물은 그에 함유된 mRNA의 연장-방출(extended-release)용으로 적합하도록 제형화된다. 이와 같은 연장-방출 조성물은 연장된 투여 간격으로 대상에게 알맞게 투여될 수 있다. 예를 들어, 하나의 구현예에서, 본 발명의 조성물은 하루에 두 번, 매일 또는 격일로 대상에게 투여된다. 바람직한 구현예에서, 본 발명의 조성물은 대상체에게 매주 2번, 매주 1번, 10일마다 1번, 2주마다 1번, 3주마다 1번 투여되거나, 더 바람직하게는 4주마다 1번, 매월 1번, 6주마다 1번, 8주마다 1번, 격월에 1번, 3개월마다 1번, 4개월마다 1번, 6개월마다 1번, 8개월마다 1번, 9개월마다 1번, 또는 매년 1번 투여된다. 또한, 연장된 기간 동안 mRNA를 전달 또는 방출하기 위해 데포(depot) 투여(예컨대, 근육내, 피하, 유리체강내)를 위해 제형화된 조성물 및 리포솜이 고려된다. 바람직하게는, 사용된 연장 방출 수단은 안정성을 강화하기 위해 mRNA에 이루어진 변형으로 결합된다.
또한 본원에 기술된 리포솜 중 하나 이상을 포함하는 동결건조된 약학적 조성물 및 예를 들어 그 교시의 전체가 본원에 참조로서 포함되는, 2011년 6월 8일자로 출원된 미국 가특허 출원 번호 제61/494,882호에 개시된 바와 같이 이러한 조성물의 사용을 위한 관련된 방법이 본원에서 고려된다. 예를 들어, 본 발명에 따른 동결건조된 약학적 조성물은 투여 전에 재구성될 수 있거나 생체내에서 재구성될 수 있다. 예를 들어, 동결건조된 약학적 조성물은 적절한 투여 제형(예컨대, 원반, 막대 또는 막과 같은 진피내 투여 제형)으로 제형화될 수 있고 투여 제형이 시간이 흐름에 따라 생체 내에서 개인의 체액에 의해 다시 수화되도록 투여될 수 있다.
제공된 리포솜 및 조성물은 임의의 원하는 조직에 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 제공된 리포솜 또는 조성물에 의해 전달된 mRNA는 리포솜 및/또는 조성물이 투여된 조직에서 발현된다. 일부 구현예에서, 제공된 리포솜 또는 조성물에 의해 전달된 mRNA는 리포솜 및/또는 조성물이 투여된 조직과 상이한 조직에서 발현된다. 전달된 mRNA가 전달될 수 있고/있거나 발현될 수 있는 예시적인 조직은 폐, 간, 신장, 심장, 비장, 혈청, 뇌, 골격근, 림프절, 피부 및/또는 뇌척수액을 포함하되, 이들로 한정되지 않는다.
일부 구현예에서, 표적 조직은 폐이다. 일부 구현예에서, 표적 조직은 우측 또는 좌측 폐의 상부(위) 엽이다. 일부 구현예에서, 표적 조직은 우측 또는 좌측 폐의 하부(아래) 엽이다. 일부 구현예에서, 표적 조직은 우측 폐의 중간 엽이다.
일부 구현예에서, 표적 조직은 우측 폐의 꼭지조각 구역이거나 좌측 폐의 꼭대기 뒤구역이다. 일부 구현예에서, 표적 조직은 우측 폐의 뒤 구역이다. 일부 구현예에서, 표적 조직은 우측 폐 또는 좌측 폐의 앞 구역이다. 일부 구현예에서, 표적 조직은 우측 폐 또는 좌측 폐의 위 구역이다. 일부 구현예에서, 표적 조직은 우측 폐 또는 좌측 폐의 바깥쪽 바닥 구역이다. 일부 구현예에서, 표적 조직은 우측 폐의 앞쪽 바닥 구역이다. 일부 구현예에서, 표적 조직은 좌측 폐의 전내측 바닥 구역이다. 일부 구현예에서, 표적 조직은 우측 폐의 바깥쪽 구역이다. 일부 구현예에서, 표적 조직은 우측 폐의 안쪽 구역이다. 일부 구현예에서, 표적 조직은 좌측 폐의 위 혀모양 구역이다. 일부 구현예에서, 표적 조직은 좌측 폐의 아래 혀모양 구역이다. 일부 구현예에서, 표적 조직은 우측 폐 또는 좌측 폐의 뒤 바닥 구역이다. 일부 구현예에서, 표적 조직은 우측 폐의 안쪽 바닥 구역이다.
특정 구현예에서, 표적 조직은 폐의 상피 세포이다. 일부 구현예에서, 표적 조직은 폐의 평활근 세포이다. 일부 구현예에서, 표적 조직은 췌장 관 상피 세포이다. 일부 구현예에서, 표적 조직은 담관 상피 세포이다. 일부 구현예에서, 표적 조직은 침샘의 상피 세포이다. 일부 구현예에서, 표적 조직은 신장 상피 세포이다. 일부 구현예에서, 표적 조직은 땀샘의 땀샘 분비 코일에서의 베타-S 세포이다. 일부 구현예에서, 표적 조직은 생식 기관의 상피 세포이다.
다양한 구현예에 따르면, 전달된 mRNA의 발현 시기는 특정한 의학적 필요에 맞추어 조정될 수 있다. 일부 구현예에서, 전달된 mRNA에 의해 암호화된 단백질의 발현은 제공된 리포솜 및/또는 조성물을 1회 투여하고 1, 2, 3, 6, 12, 18, 24, 30, 36, 42, 48, 54, 60, 66 및/또는 72시간 후에 혈청이나 조직 세포에서 검출 가능하다. 일부 구현예에서, 전달된 mRNA에 의해 암호화된 단백질의 발현은 제공된 리포솜 및/또는 조성물을 1회 투여하고 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일 및/또는 7일 후에 혈청이나 조직 세포에서 검출 가능하다. 일부 구현예에서, 전달된 mRNA에 의해 암호화된 단백질의 발현은 제공된 리포솜 및/또는 조성물을 1회 투여하고 1주, 2주, 3주 및/또는 4주 후에 혈청이나 조직 세포에서 검출 가능하다. 일부 구현예에서, 전달된 mRNA에 의해 암호화된 단백질의 발현은 제공된 리포솜 및/또는 조성물을 1회 투여하고 1개월 이상 후에 혈청이나 조직 세포에서 검출 가능하다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 바와 같은 (예를 들어, 하나의 스테롤계 양이온 지질을 포함하는 3개의 구별되는 지질 성분으로 이루어진 나노입자 내에 캡슐화된) 제형으로 (예를 들어, 분문에 의해) 폐에 전달된 (예를 들어, CFTR 단백질을 암호화하는) mRNA는 적어도 7일, 적어도 14일, 적어도 21일, 또는 적어도 28일 동안 폐 조직에서 발현된다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 바와 같은 (예를 들어, 하나의 스테롤계 양이온 지질을 포함하는 3개의 구별되는 지질 성분으로 이루어진 나노입자 내에 캡슐화된) 제형으로 (예를 들어, 분문에 의해) 폐에 전달된 (예를 들어, CFTR 단백질을 암호화하는) mRNA는 최대 7일, 최대 14일, 최대 21일, 또는 최대 28일 동안 폐 조직에서 발현된다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 바와 같은 (예를 들어, 하나의 스테롤계 양이온 지질을 포함하는 3개의 구별되는 지질 성분으로 이루어진 나노입자 내에 캡슐화된) 제형으로 (예를 들어, 분문에 의해) 폐에 전달된 (예를 들어, CFTR 단백질을 암호화하는) mRNA에 의해 암호화되는 단백질(예: CFTR)은 적어도 7일, 적어도 14일, 적어도 21일, 또는 적어도 28일 동안 폐 조직에서 발현된다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 바와 같은 (예를 들어, 하나의 스테롤계 양이온 지질을 포함하는 3개의 구별되는 지질 성분으로 이루어진 나노입자 내에 캡슐화된) 제형으로 (예를 들어, 분문에 의해) 폐에 전달된 (예를 들어, CFTR 단백질을 암호화하는) mRNA에 의해 암호화되는 단백질(예: CFTR)은 최대 7일, 최대 14일, 최대 21일, 또는 최대 28일 동안 폐 조직에서 발현된다.
본 발명은 다양한 용량으로 mRNA를 전달하도록 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, mRNA는 약 0.1~5,0 mg/kg(체중) 범위, 예를 들어 약 0.1~4.5, 0.1~4.0, 0.1~3.5, 0.1~3.0, 0.1~2.5, 0.1~2.0, 0.1~1.5, 0.1~1.0, 0.1~0.5, 0.1~0.3, 0.3~5.0, 0.3~4.5, 0.3~4.0, 0.3~3.5, 0.3~3.0, 0.3~2.5, 0.3~2.0, 0.3~1.5, 0.3~1.0, 0.3~0.5, 0.5~5.0, 0.5~4.5, 0.5~4.0, 0.5~3.5, 0.5~3.0, 0.5~2.5, 0.5~2.0, 0.5~1.5, 또는 0.5~1.0 mg/kg(체중) 범위의 투여량으로 투여된다. 일부 구현예에서, mRNA는 약 5.0, 4.5, 4.0, 3.5, 3.0, 2.5, 2.0, 1.5, 1.0, 0.8, 0.6, 0.5, 0.4, 0.3, 0.2, 또는 0,1 mg/kg(체중) 미만의 투여량으로 투여된다.
실시예
본 발명의 특정 화합물, 조성물 및 방법이 특정 구현예와 관련하여 특이적으로 기술되었지만, 다음의 실시예들은 단지 본 발명을 예시하는 역할을 하며 이를 한정하도록 의도되지 않는다.
지질 재료
본원에 기술된 제형에는 다양한 핵산계 재료를 캡슐화하도록 설계되고 양이온 지질, 헬퍼 지질 및 PEGy-변형된 지질을 사용하는 다양한 비율의 다성분 지질 혼합물이 포함되었다. 양이온 지질은 스테롤계 양이온 지질, ICE(이미다졸 콜레스테롤 에스테르), 1,2-디올레오일-3-디메틸암모늄-프로판(DODAP), 1,2-디올레오일-3-트리메틸암모늄-프로판(DOTAP), 1,2-디올레일옥시-3-디메틸아미노프로판(DODMA), 1,2-디-O-옥타데세닐-3-트리메틸암모늄 프로판(DOTMA), C12-200, DLinSSDMA, Target 24 등을 (비배타적으로) 포함할 수 있다. 헬퍼 지질은 1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포콜린(DSPC), 1,2-디팔미토일-sn-글리세로-3-포스포콜린(DPPC), 1,2-디올필-sn-글리세로-3- 포스포에탄올아민(DOPE), 1,2-디팔미토일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민(DPPE), 1,2-디미리스토일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민(DMPE), ,2-디올레오일-sn-글리세로-3-포스포-(1'-rac-글리세롤)(DOPG), 콜레스테롤 등을 (비배타적으로) 포함할 수 있다. PEG-변형된 지질은 C6-C20 길이의 알킬 사슬(들)을 갖는 지질에 공유 결합된 최대 5 kDa 길이의 폴리(에틸렌) 글리콜 사슬을 (비배타적으로) 포함할 수 있다.
N/P 비는 mRNA의 인산염기에 대한 양이온 담체의 질소(아민)기의 몰비이다.
전령 RNA 재료
본원에 기술된 제형에는 전령 RNA (mRNA)가 포함되었다. mRNA는 인간 낭포성 섬유증 막관통 전도도 조절제(CFTR) 및 Firefly 루시페라아제(FFL)를 (비배타적으로) 암호화할 수 있다. 본원에 개시된 바와 같은 예시적인 mRNA 코딩 서열은 서열번호 1, 서열번호 2, 및 서열번호 3을 포함한다. 본원에 개시된 바와 같은 예시적인 5' UTR mRNA 서열은 서열번호 5이다. 본원에 개시된 바와 같은 예시적인 3' UTR mRNA 서열은 서열번호 6 및 서열번호 7이다. 본원에 개시된 바와 같은 예시적인 전장 mRNA 서열(즉, 코딩 서열 + 5' UTR 및 3' UTR)은 서열번호 8, 서열번호 9, 서열번호 10, 및 서열번호 11을 포함한다.
상이한 양이온 지질을 포함하는 예시적인 LNP 제형
일부 구현예에서, 스테로롤계 양이온 지질, 헬퍼 지질, 및 PEG 또는 PEG-변형된 지질을 포함하는 신규한 지질 조성물의 하나의 구체적인 적용예는, CFTR mRNA와 같은 mRNA의 폐 전달이다. ICE 지질, DOPE 지질 및 DMG-PEG 지질(60:35:5의 몰비)로 이루어진 지질 나노입자 제형은 mRNA의 형광기반 검출에 의해 결정된 바와 같이, CFTR mRNA (>80%)와 같은 mRNA에 대해 높은 캡슐화 백분율을 나타낸다. 표 5에 도시된 바와 같이, DOPE 및 DMG-PEG 2K를 갖는 종래의 pH 적정 양이온 지질은 이러한 높은 캡슐화 백분율을 나타내지 않으므로 이러한 특정 제형화 조성물이 더 우수하다.
Figure pct00057
표 5. 스테롤계 양이온 지질 나노입자 제형 및 다른 양이온 지질 기반 나노입자 제형에 대한 mRNA의 캡슐화 백분율. 모든 지질 제형은 다음의 양이온 지질로 이루어진 조성물로 조제하였다: DOPE:DMG-PEG 2K(몰비 60:35:5).
이들 예시적인 제형 모두를 5 mg의 mRNA LNP 제제로서 조제하였다.
제형 실시예 #1 (ICE 지질):
ICE, DOPE 및 DMG-PEG2K(60:35:5의 몰비)로 이루어진 10 mg/mL 에탄올 용액의 부분 표본을 혼합하고 15 mL의 최종 부피가 되도록 에탄올로 희석하였다. 별도로, 60mL의 최종 부피가 되도록 CFTR mRNA의 수성 완충액(10 mM 구연산염/150 mM NaCl, pH 4.5)을 1 mg/mL의 스톡 용액으로부터 조제하였다.
본 과정에서, 에탄올에 용해된 지질 및 구연산염 완충액에 용해된 mRNA를 펌프 시스템을 사용해 혼합하였다. 두 스트림의 순간 혼합을 통해 지질 나노입자의 형성하였는데, 이는 정전기 인력(electrostatic attraction)과 판데르 발스 힘(Van der Waal's forces)에 의해 유도되는 자기-조립 공정이었다. 생성된 제형화 혼합물을 20% 에탄올이 함유된 구연산염 완충액에 넣었다. 제형에 대해 완충액 교환을 실시하였고, 생성된 제형을 원하는 mRNA 농도로 조정한 뒤 다시 사용할 때까지 냉동 보관하였다. 최종 농도: 0.5 mg/mL CFTR mRNA (캡슐화됨). mRNA 캡슐화 % 90%. 크기: 60nm. PDI: 0.14.
제형 실시예 #2 (DODMA 지질):
DODMA, DOPE 및 DMG-PEG2K(60:35:5의 몰비)로 이루어진 10 mg/mL 에탄올 용액의 부분 표본을 혼합하고 15 mL의 최종 부피가 되도록 에탄올로 희석하였다. 별도로, 60mL의 최종 부피가 되도록 CFTR mRNA의 수성 완충액(10 mM 구연산염/150 mM NaCl, pH 4.5)을 1 mg/mL의 스톡 용액으로부터 조제하였다.
본 과정에서, 에탄올에 용해된 지질 및 구연산염 완충액에 용해된 mRNA를 펌프 시스템을 사용해 혼합하였다. 두 스트림의 순간 혼합을 통해 지질 나노입자의 형성하였는데, 이는 정전기 인력(electrostatic attraction)과 판데르 발스 힘(Van der Waal's forces)에 의해 유도되는 자기-조립 공정이었다. 생성된 제형화 혼합물을 20% 에탄올이 함유된 구연산염 완충액에 넣었다. 제형에 대해 완충액 교환을 실시하였고, 생성된 제형을 원하는 mRNA 농도로 조정한 뒤 다시 사용할 때까지 냉동 보관하였다. 최종 농도: 0.5 mg/mL CFTR mRNA (캡슐화됨). mRNA 캡슐화 % 51%. 크기: 62 nm. PDI: 0.18.
제형 실시예 #3 (DODAP 지질):
DODAP, DOPE 및 DMG-PEG2K(60:35:5의 몰비)로 이루어진 10 mg/mL 에탄올 용액의 부분 표본을 혼합하고 15 mL의 최종 부피가 되도록 에탄올로 희석하였다. 별도로, 60mL의 최종 부피가 되도록 CFTR mRNA의 수성 완충액(10 mM 구연산염/150 mM NaCl, pH 4.5)을 1 mg/mL의 스톡 용액으로부터 조제하였다.
본 과정에서, 에탄올에 용해된 지질 및 구연산염 완충액에 용해된 mRNA를 펌프 시스템을 사용해 혼합하였다. 두 스트림의 순간 혼합을 통해 지질 나노입자의 형성하였는데, 이는 정전기 인력(electrostatic attraction)과 판데르 발스 힘(Van der Waal's forces)에 의해 유도되는 자기-조립 공정이었다. 생성된 제형화 혼합물을 20% 에탄올이 함유된 구연산염 완충액에 넣었다. 제형에 대해 완충액 교환을 실시하였고, 생성된 제형을 원하는 mRNA 농도로 조정한 뒤 다시 사용할 때까지 냉동 보관하였다. 최종 농도: 0.5 mg/mL CFTR mRNA (캡슐화됨). mRNA 캡슐화 % 49%. 크기: 78 nm. PDI: 0.19.
제형 실시예 #4 (C12-200 지질):
C12-200, DOPE 및 DMG-PEG2K(60:35:5의 몰비)로 이루어진 10 mg/mL 에탄올 용액의 부분 표본을 혼합하고 15 mL의 최종 부피가 되도록 에탄올로 희석하였다. 별도로, 60mL의 최종 부피가 되도록 CFTR mRNA의 수성 완충액(10 mM 구연산염/150 mM NaCl, pH 4.5)을 1 mg/mL의 스톡 용액으로부터 조제하였다.
본 과정에서, 에탄올에 용해된 지질 및 구연산염 완충액에 용해된 mRNA를 펌프 시스템을 사용해 혼합하였다. 두 스트림의 순간 혼합을 통해 지질 나노입자의 형성하였는데, 이는 정전기 인력(electrostatic attraction)과 판데르 발스 힘(Van der Waal's forces)에 의해 유도되는 자기-조립 공정이었다. 생성된 제형화 혼합물을 20% 에탄올이 함유된 구연산염 완충액에 넣었다. 제형에 대해 완충액 교환을 실시하였고, 생성된 제형을 원하는 mRNA 농도로 조정한 뒤 다시 사용할 때까지 냉동 보관하였다. 최종 농도: 0.5 mg/mL CFTR mRNA (캡슐화됨). mRNA 캡슐화 % 39%. 크기: 98 nm. PDI: 0.22.
제형 실시예 #5 (DLin-SS-DMA 지질):
DLin-SS-DMA, DOPE 및 DMG-PEG2K(60:35:5의 몰비)로 이루어진 10 mg/mL 에탄올 용액의 부분 표본을 혼합하고 15 mL의 최종 부피가 되도록 에탄올로 희석하였다. 별도로, 60mL의 최종 부피가 되도록 CFTR mRNA의 수성 완충액(10 mM 구연산염/150 mM NaCl, pH 4.5)을 1 mg/mL의 스톡 용액으로부터 조제하였다.
본 과정에서, 에탄올에 용해된 지질 및 구연산염 완충액에 용해된 mRNA를 펌프 시스템을 사용해 혼합하였다. 두 스트림의 순간 혼합을 통해 지질 나노입자의 형성하였는데, 이는 정전기 인력(electrostatic attraction)과 판데르 발스 힘(Van der Waal's forces)에 의해 유도되는 자기-조립 공정이었다. 생성된 제형화 혼합물을 20% 에탄올이 함유된 구연산염 완충액에 넣었다. 제형에 대해 완충액 교환을 실시하였고, 생성된 제형을 원하는 mRNA 농도로 조정한 뒤 다시 사용할 때까지 냉동 보관하였다. 최종 농도: 0.5 mg/mL CFTR mRNA (캡슐화됨). mRNA 캡슐화 % 57%.
제형 실시예 #6 (Target 24 지질):
Target 24 (3-(5-(비스(2-히드록시도데실)아미노)펜탄-2-일)-6-(5-((2-히드록시도데실)(2-하드록시운데실)아미노)펜탄-2-일)-1,4-디옥산-2,5-디온), DOPE 및 DMG-PEG2K(60:35:5의 몰비)로 이루어진 10 mg/mL 에탄올 용액의 부분 표본을 혼합하고 15 mL의 최종 부피가 되도록 에탄올로 희석하였다. 별도로, 60mL의 최종 부피가 되도록 CFTR mRNA의 수성 완충액(10 mM 구연산염/150 mM NaCl, pH 4.5)을 1 mg/mL의 스톡 용액으로부터 조제하였다.
본 과정에서, 에탄올에 용해된 지질 및 구연산염 완충액에 용해된 mRNA를 펌프 시스템을 사용해 혼합하였다. 두 스트림의 순간 혼합을 통해 지질 나노입자의 형성하였는데, 이는 정전기 인력(electrostatic attraction)과 판데르 발스 힘(Van der Waal's forces)에 의해 유도되는 자기-조립 공정이었다. 생성된 제형화 혼합물을 20% 에탄올이 함유된 구연산염 완충액에 넣었다. 제형에 대해 완충액 교환을 실시하였고, 생성된 제형을 원하는 mRNA 농도로 조정한 뒤 다시 사용할 때까지 냉동 보관하였다. 최종 농도: 0.5 mg/mL CFTR mRNA (캡슐화됨). mRNA 캡슐화 % 59%. 크기: 92 nm. PDI: 0.24.
예시적인 ICE 제형 프로토콜
A. 제형 실시예 - 1 mg 규모, N/P=4
ICE, DOPE, 콜레스테롤 및 DMG-PEG2K(60:35:5의 몰비)로 이루어진 10 mg/mL 에탄올 용액의 부분 표본을 혼합하고 3 mL의 최종 부피가 되도록 에탄올로 희석하였다. CFTR mRNA의 수성 완충액(10 mM 구연산염/150 mM NaCl, pH 4.5)을 1 mg/mL의 스톡 용액으로부터 조제하였다. 지질 용액을 수성 mRNA 용액 내로 빠르게 주입하고 흔들어서 20% 에탄올 중에 최종 현탁액을 수득하였다. 생성된 나노입자 현탁액을 여과하고, 투석여과하고, 농축시킨 다음, 다시 사용할 때까지 냉동 보관하였다. 0.5 mg/mL CFTR mRNA(캡슐화됨)에서 제형의 최종 농도를 결정하였다. 제형은 약 89%의 mRNA 캡슐화 백분율(89%의 지질 나노입자가 mRNA를 함유함)을 가졌고, 지질 나노입자는 약 67 nm의 평균 크기를 가졌으며, 폴리 분산성 지수(PDI)는 0.19였다.
B. 제형 실시예 - 15 mg 규모, N/P=2
ICE, DOPE 및 DMG-PEG2K(60:35:5의 몰비)로 이루어진 10 mg/mL 에탄올 용액의 부분 표본을 혼합하고 45 mL의 최종 부피가 되도록 에탄올로 희석하였다. 별도로, 180 mL의 최종 부피가 되도록 CFTR mRNA의 수성 완충액(10 mM 구연산염/150 mM NaCl, pH 4.5)을 1 mg/mL의 스톡 용액으로부터 조제하였다.
본 과정에서, 에탄올에 용해된 지질 및 구연산염 완충액에 용해된 mRNA를 펌프 시스템을 사용해 혼합하였다. 두 스트림의 순간 혼합을 통해 지질 나노입자의 형성하였는데, 이는 정전기 인력(electrostatic attraction)과 판데르 발스 힘(Van der Waal's forces)에 의해 유도되는 자기-조립 공정이었다. 생성된 제형화 혼합물을 20% 에탄올이 함유된 구연산염 완충액에 넣었다. 제형에 대해 완충액 교환을 실시하였고, 생성된 제형을 원하는 mRNA 농도로 조정한 뒤 다시 사용할 때까지 냉동 보관하였다. 0.5 mg/mL CFTR mRNA(캡슐화됨)에서 제형의 최종 농도를 결정하였다. 지질 나노입자는 약 70 nm의 평균 크기를 가졌고, PDI는 0.17이었다.
C. 제형 실시예 - 15 mg 규모, N/P=4
ICE, DOPE 및 DMG-PEG2K(60:35:5의 몰비)로 이루어진 10 mg/mL 에탄올 용액의 부분 표본을 혼합하고 45 mL의 최종 부피가 되도록 에탄올로 희석하였다. 별도로, 180 mL의 최종 부피가 되도록 CFTR mRNA의 수성 완충액(10 mM 구연산염/150 mM NaCl, pH 4.5)을 1 mg/mL의 스톡 용액으로부터 조제하였다.
본 과정에서, 에탄올에 용해된 지질 및 구연산염 완충액에 용해된 mRNA를 펌프 시스템을 사용해 혼합하였다. 두 스트림의 순간 혼합을 통해 지질 나노입자를 형성하였다. 생성된 제형화 혼합물을 20% 에탄올이 함유된 구연산염 완충액에 넣었다. 제형에 대해 완충액 교환을 실시하였고, 생성된 제형을 원하는 mRNA 농도로 조정한 뒤 다시 사용할 때까지 냉동 보관하였다. 0.5 mg/mL CFTR mRNA(캡슐화됨)에서 제형의 최종 농도를 결정하였다. 제형은 약 85%의 mRNA 캡슐화 백분율을 가졌고, 지질 나노입자는 약 65 nm의 평균 크기를 가졌으며, PDI는 0.13이었다.
D. 제형 실시예 - 30 mg 규모, N/P=4
ICE, DOPE 및 DMG-PEG2K(60:35:5의 몰비)로 이루어진 10 mg/mL 에탄올 용액의 부분 표본을 혼합하고 90 mL의 최종 부피가 되도록 에탄올로 희석하였다. 별도로, 360 mL의 최종 부피가 되도록 CFTR mRNA의 수성 완충액(10 mM 구연산염/150 mM NaCl, pH 4.5)을 1 mg/mL의 스톡 용액으로부터 조제하였다.
본 과정에서, 에탄올에 용해된 지질 및 구연산염 완충액에 용해된 mRNA를 펌프 시스템을 사용해 혼합하였다. 두 스트림의 순간 혼합을 통해 지질 나노입자를 형성하였다. 생성된 제형화 혼합물을 20% 에탄올이 함유된 구연산염 완충액에 넣었다. TFF 시스템을 사용해 제형에 대해 완충액 교환을 실시하였고, 생성된 제형을 원하는 mRNA 농도로 조정한 뒤 다시 사용할 때까지 냉동 보관하였다. 0.5 mg/mL CFTR mRNA(캡슐화됨)에서 제형의 최종 농도를 결정하였다. 제형은 약 86%의 mRNA 캡슐화 백분율을 가졌고, 지질 나노입자는 약 89 nm의 평균 크기를 가졌으며, PDI는 0.12였다.
E. 제형 실시예 - 30 mg 규모, 3% PEG, N/P=4
ICE, DOPE 및 DMG-PEG2K(60:37:3의 몰비)로 이루어진 10 mg/mL 에탄올 용액의 부분 표본을 혼합하고 90 mL의 최종 부피가 되도록 에탄올로 희석하였다. 별도로, 360 mL의 최종 부피가 되도록 CFTR mRNA의 수성 완충액(10 mM 구연산염/150 mM NaCl, pH 4.5)을 1 mg/mL의 스톡 용액으로부터 조제하였다.
본 과정에서, 에탄올에 용해된 지질 및 구연산염 완충액에 용해된 mRNA를 펌프 시스템을 사용해 혼합하였다. 두 스트림의 순간 혼합을 통해 지질 나노입자를 형성하였다. 생성된 제형화 혼합물을 20% 에탄올이 함유된 구연산염 완충액에 넣었다. TFF 시스템을 사용해 제형에 대해 완충액 교환을 실시하였고, 생성된 제형을 원하는 mRNA 농도로 조정한 뒤 다시 사용할 때까지 냉동 보관하였다. 0.5 mg/mL CFTR mRNA(캡슐화됨)에서 제형의 최종 농도를 결정하였다. 지질 나노입자는 약 94 nm의 평균 크기를 가졌고, PDI는 0.15였다.
F. 제형 실시예 - 60 mg 규모, N/P=4
ICE, DOPE 및 DMG-PEG2K(60:35:5의 몰비)로 이루어진 10 mg/mL 에탄올 용액의 부분 표본을 혼합하고 180 mL의 최종 부피가 되도록 에탄올로 희석하였다. 별도로, 720 mL의 최종 부피가 되도록 CFTR mRNA의 수성 완충액(10 mM 구연산염/150 mM NaCl, pH 4.5)을 1 mg/mL의 스톡 용액으로부터 조제하였다.
본 과정에서, 에탄올에 용해된 지질 및 구연산염 완충액에 용해된 mRNA를 펌프 시스템을 사용해 혼합하였다. 두 스트림의 순간 혼합을 통해 지질 나노입자를 형성하였다. 생성된 제형화 혼합물을 20% 에탄올이 함유된 구연산염 완충액에 넣었다. TFF 시스템을 사용해 제형에 대해 완충액 교환을 실시하였고, 생성된 제형을 원하는 mRNA 농도로 조정한 뒤 다시 사용할 때까지 냉동 보관하였다. 0.5 mg/mL CFTR STOP mRNA(캡슐화됨)에서 제형의 최종 농도를 결정하였다. 제형은 약 97%의 mRNA 캡슐화 백분율을 가졌고, 지질 나노입자는 약 67 nm의 평균 크기를 가졌으며, PDI는 0.12였다.
G. 제형 실시예 - 3.5 g 규모, N/P=4
ICE, DOPE 및 DMG-PEG2K(60:35:5의 몰비)로 이루어진 10 mg/mL 에탄올 용액의 부분 표본을 혼합하고 42 L의 최종 부피가 되도록 에탄올로 희석하였다. 별도로, 42 mL의 최종 부피가 되도록 CFTR mRNA의 수성 완충액(10 mM 구연산염/150 mM NaCl, pH 4.5)을 1 mg/mL의 스톡 용액으로부터 조제하였다.
본 과정에서, 에탄올에 용해된 지질 및 구연산염 완충액에 용해된 mRNA를 펌프 시스템을 사용해 혼합하였다. 두 스트림의 순간 혼합을 통해 지질 나노입자를 형성하였다. 생성된 제형화 혼합물을 20% 에탄올이 함유된 구연산염 완충액에 넣었다. TFF 시스템을 사용해 제형에 대해 완충액 교환을 실시하였고, 생성된 제형을 원하는 mRNA 농도로 조정한 뒤 다시 사용할 때까지 냉동 보관하였다. 0.5 mg/mL CFTR mRNA(캡슐화됨)에서 제형의 최종 농도를 결정하였다. 제형은 약 91%의 mRNA 캡슐화 백분율을 가졌고, 지질 나노입자는 약 50 nm의 평균 크기를 가졌으며, PDI는 0.17이었다.
H. 제형 실시예 - 200 mg 규모, N/P=4
ICE, DOPE 및 DMG-PEG2K(60:35:5의 몰비)로 이루어진 10 mg/mL 에탄올 용액의 부분 표본을 혼합하고 600 mL의 최종 부피가 되도록 에탄올로 희석하였다. 별도로, 2.4 L의 최종 부피가 되도록 FFL mRNA의 수성 완충액(10 mM 구연산염/150 mM NaCl, pH 4.5)을 1 mg/mL의 스톡 용액으로부터 조제하였다.
본 과정에서, 에탄올에 용해된 지질 및 구연산염 완충액에 용해된 mRNA를 펌프 시스템을 사용해 혼합하였다. 두 스트림의 순간 혼합을 통해 지질 나노입자를 형성한다. 생성된 제형화 혼합물을 20% 에탄올이 함유된 구연산염 완충액에 넣는다. TFF 시스템을 사용해 제형에 대해 완충액 교환을 실시하였고, 생성된 제형을 원하는 mRNA 농도로 조정한 뒤 다시 사용할 때까지 냉동 보관하였다. 0.5 mg/mL CFTR mRNA(캡슐화됨)에서 제형의 최종 농도를 결정하였다. 제형은 약 95%의 mRNA 캡슐화 백분율을 가졌고, 지질 나노입자는 약 59 nm의 평균 크기를 가졌으며, PDI는 0.15였다.
I. 제형 실시예 - 200 mg 규모, N/P=4
ICE, DOPE 및 DMG-PEG2K(60:35:5의 몰비)로 이루어진 10 mg/mL 에탄올 용액의 부분 표본을 혼합하고 600 mL의 최종 부피가 되도록 에탄올로 희석하였다. 별도로, 2.4 L의 최종 부피가 되도록 hCFTR- STOP mRNA의 수성 완충액(10 mM 구연산염/150 mM NaCl, pH 4.5)을 1 mg/mL의 스톡 용액으로부터 조제하였다.
본 과정에서, 에탄올에 용해된 지질 및 구연산염 완충액에 용해된 mRNA를 펌프 시스템을 사용해 혼합하였다. 두 스트림의 순간 혼합을 통해 지질 나노입자를 형성하였다. 생성된 제형화 혼합물을 20% 에탄올이 함유된 구연산염 완충액에 넣었다. TFF 시스템을 사용해 제형에 대해 완충액 교환을 실시하였고, 생성된 제형을 원하는 mRNA 농도로 조정한 뒤 다시 사용할 때까지 냉동 보관하였다. 0.5 mg/mL CFTR STOP mRNA(캡슐화됨)에서 제형의 최종 농도를 결정하였다. 제형은 약 88%의 mRNA 캡슐화 백분율을 가졌고, 지질 나노입자는 약 57 nm의 평균 크기를 가졌으며, PDI는 0.18이었다.
ICE LNP의 폐 전달
몇 가지 예시적인 연구를 수행하여, 코돈 최적화된 hCFTR mRNA를 캡슐화하는 ICE-기반 LNP로부터 성공적인 mRNA의 전달 및 이어지는 인간 CFTR 단백질의 생산을 입증하였다. 항인간 CFTR 항체를 사용하여 모든 폐 구역에 대한 면역조직화학 분석을 수행하여 치료된 동물의 폐 내에서 인간 CFTR 단백질을 특이적으로 검출하였다.
실시예 1. 복강 내 투여 후 랫트의 폐에서 hCFTR의 생체 내 발현
도 1은 전술한 단계(제형 실시예 #1)에 의해 조제된 hCFTR mRNA 지질 나노입자를 폐 전달하고, 24시간 후에 폐에서 hCFTR 단백질에 대한 예시적인 면역조직화학 검출을 보여준다.
Microspray를 통해(기관 내 에어로졸) hCFTR mRNA를 함유하는 LNP 제형을 마우스에게 투여하였다. LNP 제형은 ICE 지질을 양이온 지질로서 사용하여 만들었다. 이들 마우스 유래의 고정된 폐 조직을 면역조직화학 염색에 의해 hCFTR 단백질의 존재에 대해 분석하였다.
기관지 상피 세포 및 폐포 영역 모두를 포함하는 전체 폐 전반에 걸쳐 단백질이 검출되었다. 미처리 대조군 마우스의 폐에서는 갈색 염색이 결여된 반면, 모든 mRNA 지질 나노입자 시험 항목군에서는 양성(갈색) 염색이 관찰되었다. 패널 A는 미처리 마우스 폐를 10x 배율로 도시한 것이다. 패널 B는 미처리 마우스 폐를 20x 배율로 도시한 것이다. 패널 C는 코돈 최적화된 hCFTR (CO-hCFTR) mRNA ICE LNP-처리 마우스 폐를 10x 배율로 도시한 것이다. 패널 D는 CO-hCFTR mRNA ICE LNP-처리 마우스의 폐를 20x 배율로 도시한 것이다.
실시예 2. 분무화 투여 후 랫트의 폐에서 hCFTR의 생체 내 발현
도 2는 전술한 단계(제형 실시예 #1)에 의해 조제된 hCFTR mRNA 지질 나노입자를 폐 전달하고, 24시간 후에 폐에서 hCFTR 단백질에 대한 예시적인 면역조직화학 검출을 보여준다.
분무화를 통해, hCFTR mRNA를 함유하는 LNP 제형을 마우스에게 투여하였다. LNP 제형은 ICE 지질을 양이온 지질로서 사용하여 만들었다. 이들 마우스 유래의 고정된 폐 조직을 면역조직화학 염색에 의해 hCFTR 단백질의 존재에 대해 분석하였다.
기관지 상피 세포 및 폐포 영역 모두를 포함하는 전체 폐 전반에 걸쳐 단백질이 검출되었다. 미처리 대조군 마우스의 폐에서는 갈색 염색이 결여된 반면, 모든 mRNA 지질 나노입자 시험 항목군에서는 양성(갈색) 염색이 관찰되었다. 패널 A는 미처리 마우스 폐를 10x 배율로 도시한 것이다. 패널 B는 미처리 마우스 폐를 20x 배율로 도시한 것이다. 패널 C는 코돈 최적화된 hCFTR (CO-hCFTR) mRNA ICE LNP-처리 마우스 폐를 10x 배율로 도시한 것이다. 패널 D는 CO-hCFTR mRNA ICE LNP-처리 마우스의 폐를 20x 배율로 도시한 것이다.
실시예 3. 랫트 폐에서의 hCFTR의 생체 내 발현(10mg, 5% PEG)
도 3은 ICE계 지질 나노입자를 사용하여 전술한 단계에 의해 조제된 코돈 최적화된 hCFTR (CO-hCFTR) mRNA 지질 나노입자를 폐 전달하고, 24시간 후에 랫트 폐에서 hCFTR 단백질에 대한 예시적인 면역조직화학 분석을 보여준다.
일부 대표적인 연구에서는, 랫트가 완전하게 움직일 수 있는 에어로졸 챔버 내에 랫트를 배치하였다. (5% [몰]의 PEG-변형된 지질이 함유된) ICE LNP 내에 캡슐화된 mRNA 10 mg(캡슐화된 mRNA로 측정함)을 분무화하여 에어로졸을 생성시키고, 이를 랫트가 배치된 챔버에 채웠다. 랫트를 주어진 시간 동안 노출시켰는데, 이 동안 에어로졸이 정상 호흡을 통해 폐 속에 자유롭게 흡입된다. 노출 후, 랫트를 꺼내 원래의 케이지에 다시 넣었다. 이어서, 노출 24시간 후에 랫트를 희생시키고, 분석을 위해 폐를 채취하였다(일부분을 순간 동결하였고, 다른 일부분은 10% NBF 내에 고정하여 파라핀에 포매하였음). 이들 랫트 유래의 고정된 폐 조직을 면역조직화학 염색에 의해 hCFTR 단백질의 존재에 대해 분석하였다.
도 3에 도시된 바와 같이, 기관지 상피 세포 및 폐포 영역을 포함하는 전체 폐 전반에 걸쳐 단백질이 검출되었다. 양성(갈색) 염색은 mRNA 지질 나노입자 시험 항목군에서 관찰되었다. 패널 A는 CO-hCFTR mRNA ICE LNP-처리 랫트의 폐를 저배율로 도시한 것이다. 패널 B는 CO-hCFTR mRNA ICE LNP-처리 마우스의 폐를 10x 배율로 도시한 것이다. 패널 C는 CO-hCFTR mRNA ICE LNP-처리 마우스의 폐를 20x 배율로 도시한 것이다.
실시예 4. 랫트 폐에서의 hCFTR의 생체 내 발현(50 pg mRNA, 5% PEG)
도 4는 ICE계 지질 나노입자를 사용하여 전술한 단계에 의해 조제된 CO-hCFTR mRNA 지질 나노입자를 폐 전달하고, 24시간 후에 랫트 폐에서 hCFTR 단백질에 대한 예시적인 면역조직화학 분석을 보여준다.
일부 대표적인 연구에서, MicroSprayer 장치를 통한 직접 적하(direct instillation)를 사용하여 랫트를 CO-hCFTR mRNA ICE LNP에 노출시켰다. (5% [몰]의 PEG-변형된 지질을 포함하는) ICE LNP에 캡슐화된 50 pg의 CO-hCFTR mRNA를 랫트에 기관지 내 투여하는 동안 MicroSprayer 장치를 통해 에어로졸을 생성하였다. 이어서, 노출 24시간 후에 랫트를 희생시키고, 분석을 위해 폐를 채취하였다(일부분을 순간 동결하였고, 다른 일부분은 10% NBF 내에 고정하여 파라핀에 포매하였음). 이들 랫트 유래의 고정된 폐 조직을 면역조직화학 염색에 의해 hCFTR 단백질의 존재에 대해 분석하였다.
도 4에 도시된 바와 같이, 기관지 상피 세포 및 폐포 영역을 포함하는 전체 폐 전반에 걸쳐 단백질이 검출되었다. 양성(갈색) 염색은 mRNA 지질 나노입자 시험 항목군에서 관찰되었다. 패널 A는 CO-hCFTR mRNA ICE LNP-처리 랫트의 폐를 저배율로 도시한 것이다. 패널 B는 CO-hCFTR mRNA ICE LNP-처리 마우스의 폐를 10x 배율로 도시한 것이다. 패널 C는 CO-hCFTR mRNA ICE LNP-처리 마우스의 폐를 20x 배율로 도시한 것이다.
실시예 5. 랫트 폐에서의 hCFTR의 생체 내 발현(10 mg, 3% PEG)
도 5는 ICE계 지질 나노입자를 사용하여 전술한 단계에 의해 조제된 CO-hCFTR mRNA 지질 나노입자를 폐 전달하고, 24시간 후에 랫트 폐에서 hCFTR 단백질에 대한 예시적인 면역조직화학 분석을 보여준다.
일부 대표적인 연구에서는, 랫트가 완전하게 움직일 수 있는 에어로졸 챔버 내에 랫트를 배치하였다. (3% [몰]의 PEG-변형된 지질이 함유된) ICE LNP 내에 캡슐화된 mRNA 10 mg을 분무화하여 에어로졸을 생성시키고, 이를 랫트가 배치된 챔버에 채웠다. 랫트를 주어진 시간 동안 노출시켰는데, 이 동안 에어로졸이 정상 호흡을 통해 폐 속에 자유롭게 흡입된다. 노출 후, 랫트를 꺼내 원래의 케이지에 다시 넣었다. 이어서, 노출 24시간 후에 랫트를 희생시키고, 분석을 위해 폐를 채취하였다(일부분을 순간 동결하였고, 다른 일부분은 10% NBF 내에 고정하여 파라핀에 포매하였음). 이들 랫트 유래의 고정된 폐 조직을 면역조직화학 염색에 의해 hCFTR 단백질의 존재에 대해 분석하였다.
도 5에 도시된 바와 같이, 기관지 상피 세포 및 폐포 영역을 포함하는 전체 폐 전반에 걸쳐 단백질이 검출되었다. 양성(갈색) 염색은 mRNA 지질 나노입자 시험 항목군에서 관찰되었다. 패널 A는 CO-hCFTR mRNA ICE LNP-처리 랫트의 폐를 저배율로 도시한 것이다. 패널 B는 CO-hCFTR mRNA ICE LNP-처리 마우스의 폐를 10x 배율로 도시한 것이다. 패널 C는 CO-hCFTR mRNA ICE LNP-처리 마우스의 폐를 20x 배율로 도시한 것이다.
실시예 6. 랫트 폐에서의 hCFTR의 생체 내 발현(50 pg mRNA, 3% PEG)
도 6은 ICE계 지질 나노입자를 사용하여 전술한 단계에 의해 조제된 CO-hCFTR mRNA 지질 나노입자를 폐 전달하고, 24시간 후에 랫트 폐에서 hCFTR 단백질에 대한 예시적인 면역조직화학 분석을 보여준다.
일부 대표적인 연구에서, MicroSprayer 장치를 통한 직접 적하(direct instillation)를 사용하여 랫트를 CO-hCFTR mRNA ICE LNP에 노출시켰다. (3% [몰]의 PEG-변형된 지질을 포함하는) ICE LNP에 캡슐화된 50 pg의 CO-hCFTR mRNA를 랫트에 기관지 내 투여하는 동안 MicroSprayer 장치를 통해 에어로졸을 생성하였다. 이어서, 노출 24시간 후에 랫트를 희생시키고, 분석을 위해 폐를 채취하였다(일부분을 순간 동결하였고, 다른 일부분은 10% NBF 내에 고정하여 파라핀에 포매하였음). 이들 랫트 유래의 고정된 폐 조직을 면역조직화학 염색에 의해 hCFTR 단백질의 존재에 대해 분석하였다.
도 6에 도시된 바와 같이, 기관지 상피 세포 및 폐포 영역을 포함하는 전체 폐 전반에 걸쳐 단백질이 검출되었다. 양성(갈색) 염색은 mRNA 지질 나노입자 시험 항목군에서 관찰되었다. 패널 A는 CO-hCFTR mRNA ICE LNP-처리 랫트의 폐를 저배율로 도시한 것이다. 패널 B는 CO-hCFTR mRNA ICE LNP-처리 마우스의 폐를 10x 배율로 도시한 것이다. 패널 C는 CO-hCFTR mRNA ICE LNP-처리 마우스의 폐를 20x 배율로 도시한 것이다.
실시예 7. 랫트 폐에서의 hCFTR의 생체 내 발현(10 mg, N/P=2)
도 7은 ICE계 지질 나노입자를 사용하여 전술한 단계에 의해 조제된 CO-hCFTR mRNA 지질 나노입자를 폐 전달하고, 24시간 후에 CFTR KO 마우스 폐에서 hCFTR 단백질에 대한 예시적인 면역조직화학 분석을 보여준다.
일부 대표적인 연구에서는, 마우스가 완전하게 움직일 수 있는 에어로졸 챔버 내에 마우스를 배치하였다. ICE LNP (N/P=2) 내에 캡슐화된 mRNA 10 mg을 분무화하여 에어로졸을 생성시키고, 이를 마우스가 배치된 챔버에 채웠다. 마우스를 주어진 시간 동안 노출시켰는데, 이 동안 에어로졸이 정상 호흡을 통해 폐 속에 자유롭게 흡입된다. 노출 후, 마우스를 꺼내 원래의 케이지에 다시 넣었다. 이어서, 노출 24시간 후에 마우스를 희생시키고, 분석을 위해 폐를 채취하였다(일부분을 순간 동결하였고, 다른 일부분은 10% NBF 내에 고정하여 파라핀에 포매하였음). 이들 마우스 유래의 고정된 폐 조직을 면역조직화학 염색에 의해 hCFTR 단백질의 존재에 대해 분석하였다.
도 7에 도시된 바와 같이, 기관지 상피 세포 및 폐포 영역을 포함하는 전체 폐 전반에 걸쳐 단백질이 검출되었다. 양성(갈색) 염색은 mRNA 지질 나노입자 시험 항목군에서 관찰되었다. 패널 A는 CO-hCFTR mRNA ICE LNP-처리 마우스의 폐를 저배율로 도시한 것이다. 패널 B는 CO-hCFTR mRNA ICE LNP-처리 마우스의 폐를 10x 배율로 도시한 것이다. 패널 C는 CO-hCFTR mRNA ICE LNP-처리 마우스의 폐를 20x 배율로 도시한 것이다.
실시예 8. 랫트 폐에서의 hCFTR의 생체 내 발현(10 mg, N/P=4)
도 8은 ICE계 지질 나노입자를 사용하여 전술한 단계에 의해 조제된 CO-hCFTR mRNA 지질 나노입자를 폐 전달하고, 24시간 후에 CFTR KO 마우스 폐에서 hCFTR 단백질에 대한 예시적인 면역조직화학 분석을 보여준다.
일부 대표적인 연구에서는, 마우스가 완전하게 움직일 수 있는 에어로졸 챔버 내에 마우스를 배치하였다. ICE LNP (N/P=4) 내에 캡슐화된 mRNA 10 mg을 분무화하여 에어로졸을 생성시키고, 이를 마우스가 배치된 챔버에 채웠다. 마우스를 주어진 시간 동안 노출시켰는데, 이 동안 에어로졸이 정상 호흡을 통해 폐 속에 자유롭게 흡입된다. 노출 후, 마우스를 꺼내 원래의 케이지에 다시 넣었다. 이어서, 노출 24시간 후에 마우스를 희생시키고, 분석을 위해 폐를 채취하였다(일부분을 순간 동결하였고, 다른 일부분은 10% NBF 내에 고정하여 파라핀에 포매하였음). 이들 마우스 유래의 고정된 폐 조직을 면역조직화학 염색에 의해 hCFTR 단백질의 존재에 대해 분석하였다.
도 8에 도시된 바와 같이, 기관지 상피 세포 및 폐포 영역을 포함하는 전체 폐 전반에 걸쳐 단백질이 검출되었다. 양성(갈색) 염색은 mRNA 지질 나노입자 시험 항목군에서 관찰되었다. 패널 A는 CO-hCFTR mRNA ICE LNP-처리 마우스의 폐를 저배율로 도시한 것이다. 패널 B는 CO-hCFTR mRNA ICE LNP-처리 마우스의 폐를 10x 배율로 도시한 것이다. 패널 C는 CO-hCFTR mRNA ICE LNP-처리 마우스의 폐를 20x 배율로 도시한 것이다. hCFTR 단백질의 광범위한 분포는 실시예 5(N/P=2) 및 실시예 6(N/P=4) 둘 다에서 관찰된다.
실시예 9. 상이한 제형으로 처리된 마우스 폐에서 hCFTR의 생체 내 발현
도 9는 ICE계 지질 나노입자를 사용하여 전술한 단계에 의해 조제된 CO-hCFTR mRNA 지질 나노입자를 폐 전달하고, 24시간 후에 야생형 마우스 폐에서 hCFTR 단백질에 대한 예시적인 면역조직화학 분석을 보여준다.
일부 대표적인 연구에서는, 여러 군의 야생형 마우스를 분리하여 개별 에어로졸 챔버에 배치하였다. 각각의 군을 사이한 제형으로 처리하였다. 제형은 다음의 mRNA 작제물을 캡슐화하는 ICE계 LNP(N/P=4)로 구성하였다: 1) CO-hCFTR mRNA ICE LNP; 2) CO-hCFTR "STOP" mRNA(넌센스 돌연변이된 CO-hCFTR mRNA는 단백질을 번역할 수 없음) ICE LNP; 3) FFL (Firefly 루시페라아제) mRNA ICE LNP; 및 4) 완충액 (비히클).
일부 구현예에서, 마우스가 완전하게 움직일 수 있는 에어로졸 챔버 내에 마우스를 배치하였다. ICE LNP (N/P=4) 내에 캡슐화된 mRNA을 분무화하여 에어로졸을 생성시키고, 이를 마우스가 배치된 챔버에 채웠다. 마우스를 주어진 기간 동안 총 50mg(캡슐화된 mRNA로 측정함)의 에어로졸화된 CO-hCFTR mRNA에 노출시켰으며, 이 동안 에어로졸은 정상 호흡을 통해 자유롭게 폐에 흡인되었다. 에 대해 노출시켰다(도 7에 도시됨). 노출 후, 마우스를 꺼내 원래의 케이지에 다시 넣었다. 이어서, 노출 24시간 후에 마우스를 희생시키고, 분석을 위해 폐를 채취하였다(일부분을 순간 동결하였고, 다른 일부분은 10% NBF 내에 고정하여 파라핀에 포매하였음). 이들 마우스 유래의 고정된 폐 조직을 면역조직화학 염색에 의해 hCFTR 단백질의 존재에 대해 분석하였다.
도 9에서, 양성(갈색) 염색은 CO-hCFTR mRNA LNP 시험 항목 군에서만 관찰되었다. 첫 번째 패널은 기관지 상피 및 폐포 영역 둘 다를 포함하여 전체 폐 전반에 걸쳐 관찰된 인간 CFTR 단백질의 광범위한 분포를 나타내는 CO-hCFTR mRNA ICE LNP-처리 마우스 폐를 도시한다. 두 번째 패널은 양성(갈색) 염색이 관찰되지 않은 CO-hCFTR "STOP" mRNA ICE LNP-처리 마우스 폐를 도시한다. 세 번째 패널은 양성(갈색) 염색이 관찰되지 않은 FFL mRNA ICE LNP-처리 마우스 폐를 도시한다. 네 번째 패널은 양성(갈색) 염색이 관찰되지 않은 완충액 처리 마우스 폐를 도시한다.
실시예 10. 상이한 시점에 마우스 폐에서 hCFTR의 생체 내 발현
도 10은 ICE계 지질 나노입자를 사용하여 전술한 단계에 의해 조제된 CO-hCFTR mRNA 지질 나노입자를 폐 전달한 뒤 소정의 시점에, 야생형 마우스 폐에서 hCFTR 단백질에 대한 예시적인 면역조직화학 분석을 보여준다.
일부 대표적인 연구에서, ICE LNP에 캡슐화된 CO-hCFTR mRNA의 처리 후 hCFTR 단백질의 약동학적 거동을 CFTR KO 마우스에서 수행되었다. 일부 구현예에서, 마우스가 완전하게 움직일 수 있는 에어로졸 챔버 내에 마우스를 배치하였다. ICE LNP (N/P=4) 내에 캡슐화된 mRNA을 분무화하여 에어로졸을 생성시키고, 이를 마우스가 배치된 챔버에 채웠다. 마우스를 주어진 시간 동안 10 mg의 에어로졸화된 CO-hCFTR mRNA에 노출시켰는데, 이 동안 에어로졸이 정상 호흡을 통해 폐 속에 자유롭게 흡입된다. 노출 후, 마우스를 꺼내 원래의 케이지에 다시 넣었다. 처리된 마우스의 선택된 코호트를 에어로졸 노출 후 소정의 시점에 희생시켰다. 투여 후 마우스를 희생하기까지의 시간 범위는 30분 내지 1주, 구체적으로는 도 10에 도시된 바와 같이 30분, 2시간, 4시간, 6시간, 24시간, 48시간, 72시간 및 1주였다. 분석을 위해 폐를 채취하였다(일부분을 순간 동결하였고, 다른 일부분은 10% NBF 내에 고정하여 파라핀에 포매하였음). 이들 마우스 유래의 고정된 폐 조직을 면역조직화학 염색에 의해 hCFTR 단백질의 존재에 대해 분석하였다.
도 10에 도시된 바와 같이, 투여 후 30분이 지나서 희생시킨 hCFTR mRNA 처리 마우스 군에서는 기관지 상피 세포 및 폐포 영역 둘 다를 포함하는 전체 폐 전반에 걸쳐 단백질 또는 양성(갈색) 염색이 검출되었다. hCFTR mRNA의 전달 후 24시간, 48시간 및 72시간에 가장 많은 양성 또는 갈색 염색이 관찰되었다. 식염수 처리된 대조군에서는 양성(갈색) 염색이 관찰되지 않았다.
실시예 11. 상이한 투여량 수준에서 랫트 폐에서 hCFTR의 생체 내 발현
일부 대표적인 연구에서는, 랫트가 완전하게 움직일 수 있는 에어로졸 챔버 내에 랫트를 배치하였다. ICE LNP 내에 캡슐화된 mRNA의 분무화를 통해 에어로졸을 생성시키고, 이를 랫트가 배치된 챔버에 채웠다. 랫트를 주어진 기간 동안 노출시켰는데, 이 동안 에어로졸이 정상 호흡을 통해 폐 속에 자유롭게 흡입된다. 여러 군에 다음과 같은 다양한 투여량 수준을 투여하였다: 1) 완충액; 2) 공(empty) ICE LNP (~8.0 mg/kg과 동등한 수준); 3) ICE LNP (0.5 mg/kg); 4) ICE LNP (2.1 mg/kg); 5) ICE LNP (4.1 mg/kg); 및 6) ICE LNP (6.2 mg/kg).
투여 후, 랫트를 꺼내 원래의 케이지에 다시 넣었다. 또한, 각각의 랫트 군을 선별된 코호트로 나누고, 이들을 투여 후 상이한 소정의 시점에 희생시켰다. 투여 후 랫트를 희생시키기까지의 시간 범위는 24시간 내지 28일, 구체적으로는 24시간, 7일, 14일 및 28일이었다.
각각의 군에서 전체 처리된 랫트의 급속 동결된 폐에 대해 총 RNA당 CO-hCFTR mRNA의 사본을 측정하는 정량적 PCR을 수행하였다. 결과는 도 11에 제시되어 있는데, 이는 총 RNA의 μg당 CO-hCFTR mRNA의 사본 비율을 나타낸다. 각각의 투여량 수준에 대해 선택된 희생 시점에서 투여된 상이한 투여량에 대해 결과를 분석하였다. CO-hCFTR mRNA의 배경 수준은 대조군(완충액 및 공 LNP)의 값으로 표시되어 있다. 동결된 폐 절편에서의 총 RNA당 CO-hCFTR mRNA의 사본은 투여량 수준이 증가함에 따라 증가하였다. 동일한 투여량 수준에서는, 랫트의 동결된 폐 절편에에서의 총 RNA당 CO-hCFTR mRNA의 사본이 투여 후 희생 시간이 길어짐에 따라 감소하였다.
도 12는 내인성 CFTR mRNA의 사본당 외인성 CO-hCFTR mRNA의 사본의 수준을 비교하여 보여준다. 랫트의 동결된 폐 절편에서의 내인성 CFTR mRNA의 사본당 CO-hCFTR mRNA의 사본의 배수 증가 또는 비율을 평가하고, 투여량과 희생 시간의 함수로서 도시하였다. 데이터 또한 정량적 PCR을 사용하여 얻었다. 내인성 CFTR mRNA의 수준에 대한 CO-hCFTR mRNA의 사본의 배수 증가는 투여량 수준이 증가함에 따라 증가하였다. 동일한 mRNA 투여량에서는, 내인성 CFTR mRNA의 수준에 대한 CO-hCFTR mRNA의 사본의 배수 증가는 투여 후 희생 시간이 길어짐에 따라 감소하였다.
랫트 폐에 대한 면역조직화학 분석을 또한 수행하였고, 이는 도 13에 도시되어 있다. 이들 랫트 유래의 고정된 폐 조직을 면역조직화학 염색에 의해 hCFTR 단백질의 존재에 대해 분석하였다. 기관지 상피 및 폐포 영역 모두를 포함하여 전체 폐 전반에 걸친 양성(갈색) 염색에 의해 결정된 바와 같이, hCFTR 단백질의 용량 의존적 증가가 관찰되었다. 양성(갈색) 염색에 의해 결정된 바와 같이, 1회 투여량을 투여한 후 24시간을 지나서 시간이 길어짐에 따라 hCFTR 단백질의 감소가 관찰되었다. 그러나, 검출 가능한 수준의 hCFTR은 hCFTR mRNA ICE LNP에 1회 노출시키고 28일 후에 관찰되었다. 식염수 처리 대조군 또는 공 LNP 군에서는 양성(갈색) 염색이 관찰되지 않았다.
실시예 12. hCFTR 제형이 호흡에 미치는 생체 내 효과
일부 대표적인 연구에서, 흡입을 통해 랫트를 hCFTR mRNA의 단일 투여량에 노출되었다. hCFTR mRNA는 전술한 바와 같이 ICE 또는 분지형 PEI (bPEI)로 제형화하였다. 도 14a에 도시된 바와 같이, bPEI로 제형화된 hCFTR mRNA의 다양한 투여량은 식염수 대조군에 비해 연구된 랫트에서 유해한 호흡 수 증가를 유발하였다. 랫트를 희생시켰을 때, 폐의 중량도 증가했음을 발견하였다. 도 14b에 도시된 바와 같이, ICE로 제형화된 hCFTR mRNA의 다양한 투여량은 완충액 대조군에 비해 연구된 랫트에서 유해한 호흡 수 증가를 유발시키지 않았다. 랫트를 희생시켰을 때, 랫트 폐의 중량 증가도 관찰되지 않았다.
실시예 13. 상이한 투여량 수준에서 hCFTR의 시험관 내 발현 및 활성
일부 대표적인 실험에서, hCFTR mRNA를 표준 절차에 따라 리포펙타민을 사용하여 Fisher의 배양된 랫트 갑상선 세포 내로 형질감염시켰다. 도 15에 도시된 바와 같이, hCFTR mRNA에 의해 유도된 염화물-이온 채널 활성의 투여량 반응이 있었다. 이는 hCFTR mRNA가 형질감염된 세포에서 활성 CFTR 단백질을 생산하였음을 나타내는 것이다.
균등물
당업자는 일상적인 실험만을 이용하여, 본원에 기재된 발명의 특정 구현예에 대한 다수의 균등물을 인지하거나, 또는 확인할 수 있을 것이다. 본 발명의 범주는 전술된 설명에 한정되는 것으로 의도되는 것이 아니라, 오히려 첨부된 청구범위에서 설명되는 바와 같다.
SEQUENCE LISTING <110> Translate Bio, Inc. <120> IMPROVED ICE-BASED LIPID NANOPARTICLE FORMULATION FOR DELIVERY OF MRNA <130> MRT-1247WO <150> 62/420,421 <151> 2016-11-10 <150> 62/420,428 <151> 2016-11-10 <150> 62/421,021 <151> 2016-11-11 <150> 62/421,007 <151> 2016-11-11 <150> 62/464,327 <151> 2017-02-27 <150> 62/464,330 <151> 2017-02-27 <160> 11 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 4443 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> chemically synthesized oligonucleotide <400> 1 augcaacgcu cuccucuuga aaaggccucg guggugucca agcucuucuu cucguggacu 60 agacccaucc ugagaaaggg guacagacag cgcuuggagc uguccgauau cuaucaaauc 120 ccuuccgugg acuccgcgga caaccugucc gagaagcucg agagagaaug ggacagagaa 180 cucgccucaa agaagaaccc gaagcugauu aaugcgcuua ggcggugcuu uuucuggcgg 240 uucauguucu acggcaucuu ccucuaccug ggagagguca ccaaggccgu gcagccccug 300 uugcugggac ggauuauugc cuccuacgac cccgacaaca aggaagaaag aagcaucgcu 360 aucuacuugg gcaucggucu gugccugcuu uucaucgucc ggacccucuu guugcauccu 420 gcuauuuucg gccugcauca cauuggcaug cagaugagaa uugccauguu uucccugauc 480 uacaagaaaa cucugaagcu cucgagccgc gugcuugaca agauuuccau cggccagcuc 540 gugucccugc ucuccaacaa ucugaacaag uucgacgagg gccucgcccu ggcccacuuc 600 guguggaucg ccccucugca aguggcgcuu cugaugggcc ugaucuggga gcugcugcaa 660 gccucggcau ucugugggcu uggauuccug aucgugcugg cacuguucca ggccggacug 720 gggcggauga ugaugaagua cagggaccag agagccggaa agauuuccga acggcuggug 780 aucacuucgg aaaugaucga aaacauccag ucagugaagg ccuacugcug ggaagaggcc 840 auggaaaaga ugauugaaaa ccuccggcaa accgagcuga agcugacccg caaggccgcu 900 uacgugcgcu auuucaacuc guccgcuuuc uucuucuccg gguucuucgu gguguuucuc 960 uccgugcucc ccuacgcccu gauuaaggga aucauccuca ggaagaucuu caccaccauu 1020 uccuucugua ucgugcuccg cauggccgug acccggcagu ucccaugggc cgugcagacu 1080 ugguacgacu cccugggagc cauuaacaag auccaggacu uccuucaaaa gcaggaguac 1140 aagacccucg aguacaaccu gacuacuacc gaggucguga uggaaaacgu caccgccuuu 1200 ugggaggagg gauuuggcga acuguucgag aaggccaagc agaacaacaa caaccgcaag 1260 accucgaacg gugacgacuc ccucuucuuu ucaaacuuca gccugcucgg gacgcccgug 1320 cugaaggaca uuaacuucaa gaucgaaaga ggacagcucc uggcgguggc cggaucgacc 1380 ggagccggaa agacuucccu gcugauggug aucaugggag agcuugaacc uagcgaggga 1440 aagaucaagc acuccggccg caucagcuuc uguagccagu uuuccuggau caugcccgga 1500 accauuaagg aaaacaucau cuucggcgug uccuacgaug aauaccgcua ccgguccgug 1560 aucaaagccu gccagcugga agaggauauu ucaaaguucg cggagaaaga uaacaucgug 1620 cugggcgaag gggguauuac cuugucgggg ggccagcggg cuagaaucuc gcuggccaga 1680 gccguguaua aggacgccga ccuguaucuc cuggacuccc ccuucggaua ccuggacguc 1740 cugaccgaaa aggagaucuu cgaaucgugc gugugcaagc ugauggcuaa caagacucgc 1800 auccucguga ccuccaaaau ggagcaccug aagaaggcag acaagauucu gauucugcau 1860 gagggguccu ccuacuuuua cggcaccuuc ucggaguugc agaacuugca gcccgacuuc 1920 ucaucgaagc ugauggguug cgacagcuuc gaccaguucu ccgccgaaag aaggaacucg 1980 auccugacgg aaaccuugca ccgcuucucu uuggaaggcg acgccccugu gucauggacc 2040 gagacuaaga agcagagcuu caagcagacc ggggaauucg gcgaaaagag gaagaacagc 2100 aucuugaacc ccauuaacuc cauccgcaag uucucaaucg ugcaaaagac gccacugcag 2160 augaacggca uugaggagga cuccgacgaa ccccuugaga ggcgccuguc ccuggugccg 2220 gacagcgagc agggagaagc cauccugccu cggauuuccg ugaucuccac ugguccgacg 2280 cuccaagccc ggcggcggca guccgugcug aaccugauga cccacagcgu gaaccagggc 2340 caaaacauuc accgcaagac uaccgcaucc acccggaaag ugucccuggc accucaagcg 2400 aaucuuaccg agcucgacau cuacucccgg agacugucgc aggaaaccgg gcucgaaauu 2460 uccgaagaaa ucaacgagga ggaucugaaa gagugcuucu ucgacgauau ggagucgaua 2520 cccgccguga cgacuuggaa cacuuaucug cgguacauca cugugcacaa gucauugauc 2580 uucgugcuga uuuggugccu ggugauuuuc cuggccgagg ucgcggccuc acugguggug 2640 cucuggcugu ugggaaacac gccucugcaa gacaagggaa acuccacgca cucgagaaac 2700 aacagcuaug ccgugauuau cacuuccacc uccucuuauu acguguucua caucuacguc 2760 ggaguggcgg auacccugcu cgcgaugggu uucuucagag gacugccgcu gguccacacc 2820 uugaucaccg ucagcaagau ucuucaccac aagauguugc auagcgugcu gcaggccccc 2880 auguccaccc ucaacacucu gaaggccgga ggcauucuga acagauucuc caaggacauc 2940 gcuauccugg acgaucuccu 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acgaucuccu gccgcuuacc aucuuugacu 3120 ucauccagcu gcugcugauc gugauuggag caaucgcagu gguggcggug cugcagccuu 3180 acauuuucgu ggccacugug ccggucauug uggcguucau caugcugcgg gccuacuucc 3240 uccaaaccag ccagcagcug aagcaacugg aauccgaggg acgauccccc aucuucacuc 3300 accuugugac gucguugaag ggacugugga cccuccgggc uuucggacgg cagcccuacu 3360 ucgaaacccu cuuccacaag gcccugaacc uccacaccgc caauugguuc cuguaccugu 3420 ccacccugcg gugguuccag augcgcaucg agaugauuuu cgucaucuuc uucaucgcgg 3480 ucacauucau cagcauccug acuaccggag agggagaggg acgggucgga auaauccuga 3540 cccucgccau gaacauuaug agcacccugc agugggcagu gaacagcucg aucgacgugg 3600 acagccugau gcgaagcguc agccgcgugu ucaaguucau cgacaugccu acugagggaa 3660 aacccacuaa guccacuaag cccuacaaaa auggccagcu gagcaagguc augaucaucg 3720 aaaacuccca cgugaagaag gacgauauuu ggcccuccgg aggucaaaug accgugaagg 3780 accugaccgc aaaguacacc gagggaggaa acgccauucu cgaaaacauc agcuucucca 3840 uuucgccggg acagcggguc ggccuucucg ggcggaccgg uuccgggaag ucaacucugc 3900 ugucggcuuu ccuccggcug cugaauaccg agggggaaau ccaaauugac ggcgugucuu 3960 gggauuccau uacucugcag caguggcgga aggccuucgg cgugaucccc cagaaggugu 4020 ucaucuucuc ggguaccuuc cggaagaacc uggauccuua cgagcagugg agcgaccaag 4080 aaaucuggaa ggucgccgac gaggucggcc ugcgcuccgu gauugaacaa uuuccuggaa 4140 agcuggacuu cgugcucguc gacgggggau guguccuguc gcacggacau aagcagcuca 4200 ugugccucgc acgguccgug cucuccaagg ccaagauucu gcugcuggac gaaccuucgg 4260 cccaccugga uccggucacc uaccagauca ucaggaggac ccugaagcag gccuuugccg 4320 auugcaccgu gauucucugc gagcaccgca ucgaggccau gcuggagugc cagcaguucc 4380 uggucaucga ggagaacaag guccgccaau acgacuccau ucaaaagcuc cucaacgagc 4440 ggucgcuguu cagacaagcu auuucaccgu ccgauagagu gaagcucuuc ccgcaucgga 4500 acagcucaaa gugcaaaucg aagccgcaga ucgcagccuu gaaggaagag acugaggaag 4560 aggugcagga cacccggcuu uaaggguggc aucccuguga ccccucccca gugccucucc 4620 uggcccugga aguugccacu ccagugccca ccagccuugu ccuaauaaaa uuaaguugca 4680 ucaaagcu 4688 <210> 10 <211> 4688 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> chemically synthesized oligonucleotide <400> 10 ggacagaucg ccuggagacg ccauccacgc uguuuugacc uccauagaag acaccgggac 60 cgauccagcc uccgcggccg ggaacggugc auuggaacgc ggauuccccg ugccaagagu 120 gacucaccgu ccuugacacg augcagcggu ccccgcucga aaaggccagu gucgugucca 180 aacucuucuu cucauggacu cggccuaucc uuagaaaggg guaucggcag aggcuugagu 240 ugucugacau cuaccagauc cccucgguag auucggcgga uaaccucucg gagaagcucg 300 aacgggaaug ggaccgcgaa cucgcgucua agaaaaaccc gaagcucauc aacgcacuga 360 gaaggugcuu cuucuggcgg uucauguucu acgguaucuu cuuguaucuc ggggagguca 420 caaaagcagu ccaaccccug uuguuggguc gcauuaucgc cucguacgac cccgauaaca 480 aagaagaacg gagcaucgcg aucuaccucg ggaucggacu guguuugcuu uucaucguca 540 gaacacuuuu guugcaucca gcaaucuucg gccuccauca caucgguaug cagaugcgaa 600 ucgcuauguu uagcuugauc uacaaaaaga cacugaaacu cucgucgcgg guguuggaua 660 agauuuccau cggucaguug gugucccugc uuaguaauaa ccucaacaaa uucgaugagg 720 gacuggcgcu ggcacauuuc guguggauug ccccguugca agucgcccuu uugaugggcc 780 uuauuuggga gcuguugcag gcaucugccu uuuguggccu gggauuucug auuguguugg 840 cauuguuuca ggcugggcuu gggcggauga ugaugaagua ucgcgaccag agagcgggua 900 aaaucucgga aagacucguc aucacuucgg aaaugaucga aaacauccag ucggucaaag 960 ccuauugcug ggaagaagcu auggagaaga ugauugaaaa ccuccgccaa acugagcuga 1020 aacugacccg caaggcggcg uauguccggu auuucaauuc gucagcguuc uucuuuuccg 1080 gguucuucgu ugucuuucuc ucgguuuugc cuuaugccuu gauuaagggg auuauccucc 1140 gcaagauuuu caccacgauu ucguucugca uuguauugcg cauggcagug acacggcaau 1200 uuccgugggc cgugcagaca ugguaugacu cgcuuggagc gaucaacaaa auccaagacu 1260 ucuugcaaaa gcaagaguac aagacccugg aguacaaucu uacuacuacg gagguaguaa 1320 uggagaaugu gacggcuuuu ugggaagagg guuuuggaga acuguuugag aaagcaaagc 1380 agaauaacaa caaccgcaag accucaaaug gggacgauuc ccuguuuuuc ucgaacuucu 1440 cccugcucgg aacacccgug uugaaggaca ucaauuucaa gauugagagg ggacagcuuc 1500 ucgcgguagc gggaagcacu ggugcgggaa aaacuagccu cuugauggug auuauggggg 1560 agcuugagcc cagcgagggg aagauuaaac acuccgggcg uaucucauuc uguagccagu 1620 uuucauggau caugcccgga accauuaaag agaacaucau uuucggagua uccuaugaug 1680 aguaccgaua cagaucgguc auuaaggcgu gccaguugga agaggacauu ucuaaguucg 1740 ccgagaagga uaacaucguc uugggagaag gggguauuac auugucggga gggcagcgag 1800 cgcggaucag ccucgcgaga gcgguauaca aagaugcaga uuuguaucug cuugauucac 1860 cguuuggaua ccucgacgua uugacagaaa aagaaaucuu cgagucgugc guguguaaac 1920 uuauggcuaa uaagacgaga auccugguga caucaaaaau ggaacaccuu aagaaggcgg 1980 acaagauccu gauccuccac gaaggaucgu ccuacuuuua cggcacuuuc ucagaguugc 2040 aaaacuugca gccggacuuc ucaagcaaac ucauggggug ugacucauuc gaccaguuca 2100 gcgcggaacg gcggaacucg aucuugacgg aaacgcugca ccgauucucg cuugagggug 2160 augccccggu aucguggacc gagacaaaga agcagucguu uaagcagaca ggagaauuug 2220 gugagaaaag aaagaacagu aucuugaauc cuauuaacuc aauucgcaag uucucaaucg 2280 uccagaaaac uccacugcag augaauggaa uugaagagga uucggacgaa ccccuggagc 2340 gcaggcuuag ccucgugccg gauucagagc aaggggaggc cauucuuccc cggauuucgg 2400 ugauuucaac cggaccuaca cuucaggcga ggcgaaggca auccgugcuc aaccucauga 2460 cgcauucggu aaaccagggg caaaacauuc accgcaaaac gacggccuca acgagaaaag 2520 ugucacuugc accccaggcg aauuugacug aacucgacau cuacagccgu aggcuuucgc 2580 aagaaaccgg acuugagauc agcgaagaaa ucaaugaaga agauuugaaa gaguguuucu 2640 uugaugacau ggaaucaauc ccagcgguga caacguggaa cacauacuug cguuacauca 2700 cggugcacaa guccuugauu uucguccuca ucuggugucu cgugaucuuu cucgcugagg 2760 ucgcagcguc acuugugguc cucuggcugc uugguaauac gcccuugcaa gacaaaggca 2820 auucuacaca cucaagaaac aauuccuaug ccgugauuau cacuucuaca agcucguauu 2880 acguguuuua caucuacgua ggaguggccg acacucugcu cgcgaugggu uucuuccgag 2940 gacucccacu cguucacacg cuuaucacug ucuccaagau ucuccaccau aagaugcuuc 3000 auagcguacu gcaggcuccc auguccaccu ugaauacgcu caaggcggga gguauuuuga 3060 aucgcuucuc aaaagauauu gcaauuuugg augaccuucu gccccugacg aucuucgacu 3120 ucauccaguu guugcugauc gugauugggg cuauugcagu agucgcuguc cuccagccuu 3180 acauuuuugu cgcgaccguu ccggugaucg uggcguuuau caugcugcgg gccuauuucu 3240 ugcagacguc acagcagcuu aagcaacugg agucugaagg gaggucgccu aucuuuacgc 3300 aucuugugac caguuugaag ggauugugga cguugcgcgc cuuuggcagg cagcccuacu 3360 uugaaacacu guuccacaaa gcgcugaauc uccauacggc aaauugguuu uuguauuuga 3420 guacccuccg augguuucag augcgcauug agaugauuuu ugugaucuuc uuuaucgcgg 3480 ugacuuuuau cuccaucuug accacgggag agggcgaggg acgggucggu auuauccuga 3540 cacucgccau gaacauuaug agcacuuugc agugggcagu gaacagcucg auugaugugg 3600 auagccugau gagguccguu ucgagggucu uuaaguucau cgacaugccg acggagggaa 3660 agcccacaaa aaguacgaaa cccuauaaga augggcaauu gaguaaggua augaucaucg 3720 agaacaguca cgugaagaag gaugacaucu ggccuagcgg gggucagaug accgugaagg 3780 accugacggc aaaauacacc gagggaggga acgcaauccu ugaaaacauc ucguucagca 3840 uuagccccgg ucagcgugug ggguugcucg ggaggaccgg gucaggaaaa ucgacguugc 3900 ugucggccuu cuugagacuu cugaauacag agggugagau ccagaucgac ggcguuucgu 3960 gggauagcau caccuugcag caguggcgga aagcguuugg aguaaucccc caaaaggucu 4020 uuaucuuuag cggaaccuuc cgaaagaauc ucgauccuua ugaacagugg ucagaucaag 4080 agauuuggaa agucgcggac gagguuggcc uucggagugu aaucgagcag uuuccgggaa 4140 aacucgacuu uguccuugua gaugggggau gcguccuguc gcaugggcac aagcagcuca 4200 ugugccuggc gcgauccguc cucucuaaag cgaaaauucu ucucuuggau gaaccuucgg 4260 cccaucugga cccgguaacg uaucagauca ucagaaggac acuuaagcag gcguuugccg 4320 acugcacggu gauucucugu gagcaucgua ucgaggccau gcucgaaugc cagcaauuuc 4380 uugucaucga agagaauaag guccgccagu acgacuccau ccagaagcug cuuaaugaga 4440 gaucauuguu ccggcaggcg auuucaccau ccgauagggu gaaacuuuuu ccacacagaa 4500 auucgucgaa gugcaagucc aaaccgcaga ucgcggccuu gaaagaagag acugaagaag 4560 aaguucaaga cacgcgucuu uaacgggugg caucccugug accccucccc agugccucuc 4620 cuggcccugg aaguugccac uccagugccc accagccuug uccuaauaaa auuaaguugc 4680 aucaagcu 4688 <210> 11 <211> 4688 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> chemically synthesized oligonucleotide <400> 11 ggacagaucg ccuggagacg ccauccacgc uguuuugacc uccauagaag acaccgggac 60 cgauccagcc uccgcggccg ggaacggugc auuggaacgc ggauuccccg ugccaagagu 120 gacucaccgu ccuugacacg augcagcggu ccccgcucga aaaggccagu gucgugucca 180 aacucuucuu cucauggacu cggccuaucc uuagaaaggg guaucggcag aggcuugagu 240 ugucugacau cuaccagauc cccucgguag auucggcgga uaaccucucg gagaagcucg 300 aacgggaaug ggaccgcgaa cucgcgucua agaaaaaccc gaagcucauc aacgcacuga 360 gaaggugcuu cuucuggcgg uucauguucu acgguaucuu cuuguaucuc ggggagguca 420 caaaagcagu ccaaccccug uuguuggguc gcauuaucgc cucguacgac cccgauaaca 480 aagaagaacg gagcaucgcg aucuaccucg ggaucggacu guguuugcuu uucaucguca 540 gaacacuuuu guugcaucca gcaaucuucg gccuccauca caucgguaug cagaugcgaa 600 ucgcuauguu uagcuugauc uacaaaaaga cacugaaacu cucgucgcgg guguuggaua 660 agauuuccau cggucaguug gugucccugc uuaguaauaa ccucaacaaa uucgaugagg 720 gacuggcgcu ggcacauuuc guguggauug ccccguugca agucgcccuu uugaugggcc 780 uuauuuggga gcuguugcag gcaucugccu uuuguggccu gggauuucug auuguguugg 840 cauuguuuca ggcugggcuu gggcggauga ugaugaagua ucgcgaccag agagcgggua 900 aaaucucgga aagacucguc aucacuucgg aaaugaucga aaacauccag ucggucaaag 960 ccuauugcug ggaagaagcu auggagaaga ugauugaaaa ccuccgccaa acugagcuga 1020 aacugacccg caaggcggcg uauguccggu auuucaauuc gucagcguuc uucuuuuccg 1080 gguucuucgu ugucuuucuc ucgguuuugc cuuaugccuu gauuaagggg auuauccucc 1140 gcaagauuuu caccacgauu ucguucugca uuguauugcg cauggcagug acacggcaau 1200 uuccgugggc cgugcagaca ugguaugacu cgcuuggagc gaucaacaaa auccaagacu 1260 ucuugcaaaa gcaagaguac aagacccugg aguacaaucu uacuacuacg gagguaguaa 1320 uggagaaugu gacggcuuuu ugggaagagg guuuuggaga acuguuugag aaagcaaagc 1380 agaauaacaa caaccgcaag accucaaaug gggacgauuc ccuguuuuuc ucgaacuucu 1440 cccugcucgg aacacccgug uugaaggaca ucaauuucaa gauugagagg ggacagcuuc 1500 ucgcgguagc gggaagcacu ggugcgggaa aaacuagccu cuugauggug auuauggggg 1560 agcuugagcc cagcgagggg aagauuaaac acuccgggcg uaucucauuc uguagccagu 1620 uuucauggau caugcccgga accauuaaag agaacaucau uuucggagua uccuaugaug 1680 aguaccgaua cagaucgguc auuaaggcgu gccaguugga agaggacauu ucuaaguucg 1740 ccgagaagga uaacaucguc uugggagaag gggguauuac auugucggga gggcagcgag 1800 cgcggaucag ccucgcgaga gcgguauaca aagaugcaga uuuguaucug cuugauucac 1860 cguuuggaua ccucgacgua uugacagaaa aagaaaucuu cgagucgugc guguguaaac 1920 uuauggcuaa uaagacgaga auccugguga caucaaaaau ggaacaccuu aagaaggcgg 1980 acaagauccu gauccuccac gaaggaucgu ccuacuuuua cggcacuuuc ucagaguugc 2040 aaaacuugca gccggacuuc ucaagcaaac ucauggggug ugacucauuc gaccaguuca 2100 gcgcggaacg gcggaacucg aucuugacgg aaacgcugca ccgauucucg cuugagggug 2160 augccccggu aucguggacc gagacaaaga agcagucguu uaagcagaca ggagaauuug 2220 gugagaaaag aaagaacagu aucuugaauc cuauuaacuc aauucgcaag uucucaaucg 2280 uccagaaaac uccacugcag augaauggaa uugaagagga uucggacgaa ccccuggagc 2340 gcaggcuuag ccucgugccg gauucagagc aaggggaggc cauucuuccc cggauuucgg 2400 ugauuucaac cggaccuaca cuucaggcga ggcgaaggca auccgugcuc aaccucauga 2460 cgcauucggu aaaccagggg caaaacauuc accgcaaaac gacggccuca acgagaaaag 2520 ugucacuugc accccaggcg aauuugacug aacucgacau cuacagccgu aggcuuucgc 2580 aagaaaccgg acuugagauc agcgaagaaa ucaaugaaga agauuugaaa gaguguuucu 2640 uugaugacau ggaaucaauc ccagcgguga caacguggaa cacauacuug cguuacauca 2700 cggugcacaa guccuugauu uucguccuca ucuggugucu cgugaucuuu cucgcugagg 2760 ucgcagcguc acuugugguc cucuggcugc uugguaauac gcccuugcaa gacaaaggca 2820 auucuacaca cucaagaaac aauuccuaug ccgugauuau cacuucuaca agcucguauu 2880 acguguuuua caucuacgua ggaguggccg acacucugcu cgcgaugggu uucuuccgag 2940 gacucccacu cguucacacg cuuaucacug ucuccaagau ucuccaccau aagaugcuuc 3000 auagcguacu gcaggcuccc auguccaccu ugaauacgcu caaggcggga gguauuuuga 3060 aucgcuucuc aaaagauauu gcaauuuugg augaccuucu gccccugacg aucuucgacu 3120 ucauccaguu guugcugauc gugauugggg cuauugcagu agucgcuguc cuccagccuu 3180 acauuuuugu cgcgaccguu ccggugaucg uggcguuuau caugcugcgg gccuauuucu 3240 ugcagacguc acagcagcuu aagcaacugg agucugaagg gaggucgccu aucuuuacgc 3300 aucuugugac caguuugaag ggauugugga cguugcgcgc cuuuggcagg cagcccuacu 3360 uugaaacacu guuccacaaa gcgcugaauc uccauacggc aaauugguuu uuguauuuga 3420 guacccuccg augguuucag augcgcauug agaugauuuu ugugaucuuc uuuaucgcgg 3480 ugacuuuuau cuccaucuug accacgggag agggcgaggg acgggucggu auuauccuga 3540 cacucgccau gaacauuaug agcacuuugc agugggcagu gaacagcucg auugaugugg 3600 auagccugau gagguccguu ucgagggucu uuaaguucau cgacaugccg acggagggaa 3660 agcccacaaa aaguacgaaa cccuauaaga augggcaauu gaguaaggua augaucaucg 3720 agaacaguca cgugaagaag gaugacaucu ggccuagcgg gggucagaug accgugaagg 3780 accugacggc aaaauacacc gagggaggga acgcaauccu ugaaaacauc ucguucagca 3840 uuagccccgg ucagcgugug ggguugcucg ggaggaccgg gucaggaaaa ucgacguugc 3900 ugucggccuu cuugagacuu cugaauacag agggugagau ccagaucgac ggcguuucgu 3960 gggauagcau caccuugcag caguggcgga aagcguuugg aguaaucccc caaaaggucu 4020 uuaucuuuag cggaaccuuc cgaaagaauc ucgauccuua ugaacagugg ucagaucaag 4080 agauuuggaa agucgcggac gagguuggcc uucggagugu aaucgagcag uuuccgggaa 4140 aacucgacuu uguccuugua gaugggggau gcguccuguc gcaugggcac aagcagcuca 4200 ugugccuggc gcgauccguc cucucuaaag cgaaaauucu ucucuuggau gaaccuucgg 4260 cccaucugga cccgguaacg uaucagauca ucagaaggac acuuaagcag gcguuugccg 4320 acugcacggu gauucucugu gagcaucgua ucgaggccau gcucgaaugc cagcaauuuc 4380 uugucaucga agagaauaag guccgccagu acgacuccau ccagaagcug cuuaaugaga 4440 gaucauuguu ccggcaggcg auuucaccau ccgauagggu gaaacuuuuu ccacacagaa 4500 auucgucgaa gugcaagucc aaaccgcaga ucgcggccuu gaaagaagag acugaagaag 4560 aaguucaaga cacgcgucuu uaaggguggc aucccuguga ccccucccca gugccucucc 4620 uggcccugga aguugccacu ccagugccca ccagccuugu ccuaauaaaa uuaaguugca 4680 ucaaagcu 4688

Claims (88)

  1. 생체 내에서 핵산을 전달하는 방법으로서, 상기 방법은 조성물의 전달을 필요로 하는 대상체에게 상기 조성물을 폐 전달에 의해 투여하는 단계를 포함하되, 상기 조성물은:
    핵산; 및
    상기 핵산을 캡슐화하는 지질 나노입자를 포함하며, 각각의 개별 지질 나노입자는 3개 이하의 구별되는 지질 성분을 포함하되, 하나의 구별되는 지질 성분은 스테롤계 양이온 지질인, 방법.
  2. 생체 내에서 핵산을 전달하는 방법으로서, 상기 방법은 조성물의 전달을 필요로 하는 대상체에게 상기 조성물을 폐 전달에 의해 투여하는 단계를 포함하되, 상기 조성물은:
    낭포성 섬유증 막관통 전도도 조절제(CFTR) 단백질을 암호화하는 핵산; 및
    상기 핵산을 캡슐화하는 지질 나노입자를 포함하며, 각각의 개별 지질 나노입자는 3개 이하의 구별되는 지질 성분을 포함하되, 하나의 구별되는 지질 성분은 스테롤계 양이온 지질인, 방법.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 폐 전달은 분무화를 포함하는, 방법.
  4. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 대상체는 전달을 필요로 하는 대상체인, 방법.
  5. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 지질 나노입자는 핵산에 대해 적어도 70%의 캡슐화 백분율을 가지는, 방법.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 3개의 구별되는 지질 성분은 헬퍼 지질 및 PEG-변형된 지질 중 하나 또는 모두를 포함하는, 방법.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 스테롤계 양이온 지질은 화확식 (A)에 따른 구조,
    B-L1- S (화학식 A),
    또는 이의 양자화된 형태를 가지되,
    여기서, B는 상기 양성자화 형태가 약 8.0 이하인 pKa를 가지는 염기성 작용기이고;
    L1은 C1-C20 알킬렌 또는 2 내지 20-원의 헤테로알킬렌인 선택적으로 치환된 연결기이며;
    S는 스테롤인, 방법.
  8. 제7항에 있어서, B는 선택적으로 치환된 5-원 또는 6-원의 질소 함유 헤테로아릴인, 방법.
  9. 제8항에 있어서, B는 각각이 선택적으로 치환된 피롤일, 이미다졸릴, 피라졸일, 트리아졸일, 테트라졸일, 피리딜, 피리미딜, 피라진일 및 피리다진일로부터 선택된 기인, 방법.
  10. 제9항에 있어서, B는 각각이 선택적으로 치환된 피롤일, 피라졸일, 트리아졸일, 테트라졸일, 피리딜, 피리미딜, 피라진일 및 피리다진일로부터 선택된 기인, 방법.
  11. 제10항에 있어서, B는 각각이 선택적으로 치환된 피롤일, 피라졸일, 트리아졸일, 테트라졸일, 피리미딜, 피라진일 및 피리다진일로부터 선택된 기인, 방법.
  12. 제7항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, L1은 선택적으로 치환된 C1-C20 알킬렌 연결기인, 방법.
  13. 제7항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, L1은 선택적으로 치환된 2 내지 20-원의 헤테로알킬렌 연결기인, 방법.
  14. 제13항에 있어서, L1은 비펩티드성 2 내지 20-원의 헤테로알킬렌인, 방법.
  15. 제13항 또는 제14항에 있어서, L1은 에스테르기, 아미드기, 카르바메이트기, 카보네이트기, 또는 우레아기인 모이어티를 포함하는, 방법.
  16. 제15항에 있어서, L1은 아미드기, 카르바메이트기, 카보네이트기, 또는 우레아기인 모이어티를 포함하는, 방법.
  17. 제16항에 있어서, L1은 아미드기, 카르바메이트기, 또는 우레아기인 모이어티를 포함하는, 방법.
  18. 제15항에 있어서, L1은 -X1-C(X3)-X2, -(C1-C19 알킬렌)-X1-C(X3)-X2, -X1-C(X3)-X2(C1-C19 알킬렌)-, -(C1-C19 알킬렌)-X1-, -X1-(C1-C19 알킬렌)-이고,
    여기서 각각의 X1 및 X2는 독립적으로, 공유 결합, -O-, -S-, 또는 -NH-이고;
    X3은 독립적으로 =O, =S, 또는 =NH이며;
    상기 C1-C19 알킬렌은 선택적으로 치환되는, 방법.
  19. 제7항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, L1은 구조 -N(R')2 또는 이의 양전하 형태를 포함하지 않으며, 각각의 R'은 독립적으로 수소 또는 선택적으로 치환된 C1-C20 알킬인, 방법.
  20. 제7항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, S는 동물 스테롤(zoosterol), 또는 이의 산화되거나 환원된 형태인, 방법.
  21. 제7항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, S는 식물 스테롤(phytosterol), 또는 이의 산화되거나 환원된 형태인, 방법.
  22. 제7항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, S는 합성 스테롤(synthetic sterol), 또는 이의 산화되거나 환원된 형태인, 방법.
  23. 제7항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, S는 콜레스테롤, 콜레스테롤의 산화된 형태, 콜레스테롤의 환원된 형태, 알킬 리토콜레이트, 스티그마스테롤, 스티그마스탄올, 캄페스테롤, 에르고스테롤, 및 시토스테롤으로부터 선택된 스테롤인, 방법.
  24. 제23항에 있어서, S는 콜레스테롤의 산화된 형태, 콜레스테롤의 환원된 형태, 알킬 리토콜레이트, 스티그마스테롤, 스티그마스탄올, 캄페스테롤, 에르고스테롤, 및 시토스테롤으로부터 선택된 스테롤인, 방법.
  25. 제24항에 있어서, S는
    Figure pct00058

    Figure pct00059

    Figure pct00060

    Figure pct00061

    Figure pct00062
    (시토스테롤)로부터 선택된 스테롤이며,
    여기서 R은 선택적으로 치환된 C1-C20 알킬인, 방법.
  26. 제24항에 있어서, S는
    Figure pct00063

    Figure pct00064

    Figure pct00065

    Figure pct00066

    Figure pct00067
    (시토스테롤)로부터 선택된 스테롤이며,
    여기서 R은 선택적으로 치환된 C1-C20 알킬인, 조성물.
  27. 제1항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 스테롤계 양이온 지질은 이미다졸 콜레스테롤 에스테르(ICE)를 포함하는, 방법.
  28. 제1항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 스테롤계 양이온 지질은 이미다졸 콜레스테롤 에스테르(ICE)를 포함하지 않는, 방법.
  29. 제1항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 핵산은 DNA, siRNA, 마이크로RNA 및/또는 mRNA로부터 선택되는, 방법.
  30. 제1항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 핵산은 단백질 또는 펩티드를 암호화하는 mRNA인, 방법.
  31. 제30항에 있어서, 단백질 또는 펩티드를 암호화하는 상기 mRNA는 코돈 최적화된 것인, 방법.
  32. 제30항에 있어서, 상기 mRNA는 하나 이상의 변형된 뉴클레오티드를 포함하는, 방법.
  33. 제30항에 있어서, 상기 mRNA는 상기 mRNA의 5' 미번역 영역의 변형을 포함하는, 방법.
  34. 제33항에 있어서, 상기 5' 미번역 영역의 상기 변형은 Cap1 구조의 포함을 포함하는, 방법.
  35. 제30항에 있어서, 상기 mRNA는 상기 mRNA의 3' 미번역 영역의 변형을 포함하는, 방법.
  36. 제35항에 있어서, 상기 3' 미번역 영역의 상기 변형은 폴리 A 꼬리의 포함을 포함하는, 방법.
  37. 제1항 내지 제36항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 지질 나노입자는 약 100 nm, 95 nm, 90 nm, 85 nm, 80 nm, 75 nm, 70 nm, 65 nm, 60 nm, 55 nm, 50 nm, 45 nm 또는 40 nm미만의 크기를 가지는, 방법.
  38. 분무용으로 제형화된 조성물로서, 상기 조성물은:
    핵산; 및
    상기 핵산을 캡슐화하는 지질 나노입자를 포함하되, 각각의 개별 지질 나노입자는 3개 이하의 구별되는 지질 성분을 포함하고, 이중 하나의 구별되는 지질 성분은 스테롤계 양이온 지질이며, 상기 지질 나노입자는 핵산에 대해 적어도 70%의 캡슐화 백분율을 갖는, 조성물.
  39. 핵산; 및
    상기 핵산을 캡슐화하는 지질 나노입자를 포함하는 조성물로서, 각각의 개별 지질 나노입자는 3개 이하의 구별되는 지질 성분을 포함하고, 이중 하나의 구별되는 지질 성분은 스테롤계 양이온 지질이며,
    상기 지질 나노입자는 핵산에 대해 적어도 70%의 캡슐화 백분율을 갖는, 조성물.
  40. 제38항 또는 제39항에 있어서, 상기 지질 나노입자는 핵산에 대해 적어도 85%의 캡슐화 백분율을 가지는, 조성물.
  41. 제38항 또는 제39항에 있어서, 상기 지질 나노입자는 핵산에 대해 적어도 90%의 캡슐화 백분율을 가지는, 조성물.
  42. 낭포성 섬유증 막관통 전도도 조절제(CFTR) 단백질을 암호화하는 mRNA; 및
    상기 mRNA를 캡슐화하는 지질 나노입자를 포함하는 조성물로서, 각각의 개별 지질 나노입자는 3개 이하의 구별되는 지질 성분을 포함하고, 이중 하나의 구별되는 지질 성분은 스테롤계 양이온 지질이며,
    상기 지질 나노입자는 mRNA에 대해 적어도 80%의 캡슐화 백분율을 가지는, 조성물.
  43. 제42항에 있어서, 상기 지질 나노입자는 mRNA에 대해 적어도 85% 또는 적어도 90%의 캡슐화 백분율을 가지는, 조성물.
  44. 핵산; 및
    상기 핵산을 캡슐화하는 지질 나노입자를 포함하는 조성물로서, 각각의 개별 지질 나노입자는 3개 이하의 구별되는 지질 성분을 포함하고, 이중 하나의 구별되는 지질 성분은 스테롤계 양이온 지질이며,
    상기 스테로롤계 양이온 지질은 총 지질의 70% 이하를 구성하는, 조성물.
  45. 낭포성 섬유증 막관통 전도도 조절제(CFTR) 단백질을 암호화하는 mRNA; 및
    상기 mRNA를 캡슐화하는 지질 나노입자를 포함하는 조성물로서, 각각의 개별 지질 나노입자는 3개 이하의 구별되는 지질 성분을 포함하고, 이중 하나의 구별되는 지질 성분은 스테롤계 양이온 지질이며,
    상기 스테로롤계 양이온 지질은 총 지질의 70% 이하를 구성하는, 조성물.
  46. 제44항 또는 제45항에 있어서, 상기 스테로롤계 양이온 지질은 총 지질의 65% 이하를 구성하는, 조성물.
  47. 제44항 또는 제45항에 있어서, 상기 스테로롤계 양이온 지질은 총 지질의 60% 이하를 구성하는, 조성물.
  48. 제38항 내지 제47항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 3개의 구별되는 지질 성분은 헬퍼 지질 및 PEG-변형된 지질 중 하나 또는 모두를 포함하는, 조성물.
  49. 제38항 내지 제48항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 스테롤계 양이온 지질은 화학식 (A)에 따른 구조
    B-L1- S (화학식 A),
    또는 이의 양성자화된 형태를 가지되,
    B는 상기 양성자화된 형태는 약 8.0 이하의 pKa를 가지는 염기성 작용기이고;
    L1은 선택적으로 치환된 C1-C20 알킬렌 연결기 또는 2 내지 20-원의 헤테로알킬렌 연결기이며;
    S는 스테롤인, 조성물.
  50. 제49항에 있어서, B는 선택적으로 치환된 5 내지 6-원의 질소 함유 헤테로아릴인, 조성물.
  51. 제50항에 있어서, B는 각각이 선택적으로 치환된 피롤일, 이미다졸릴, 피라졸일, 트리아졸일, 테트라졸일, 피리딜, 피리미딜, 피라진일 및 피리다진일로부터 선택된 기인, 조성물.
  52. 제51항에 있어서, B는 각각이 선택적으로 치환된 피롤일, 피라졸일, 트리아졸일, 테트라졸일, 피리딜, 피리미딜, 피라진일 및 피리다진일로부터 선택된 기인, 조성물.
  53. 제52항에 있어서, B는 각각이 선택적으로 치환된 피롤일, 피라졸일, 트리아졸일, 테트라졸일, 피리미딜, 피라진일 및 피리다진일로부터 선택된 기인, 조성물.
  54. 제49항 내지 제53항 중 어느 한 항에 있어서, L1은 선택적으로 치환된 C1-C20 알킬렌 연결기인, 조성물.
  55. 제49항 내지 제53항 중 어느 한 항에 있어서, L1은 선택적으로 치환된 2 내지 20-원의 헤테로알킬렌 연결기인, 조성물.
  56. 제55항에 있어서, L1은 비펩티드성 2 내지 20-원의 헤테로알킬렌인, 조성물.
  57. 제55항 또는 제56항에 있어서, L1은 에스테르기, 아미드기, 카르바메이트기, 카보네이트기, 또는 우레아기인 모이어티를 포함하는, 조성물.
  58. 제57항에 있어서, L1은 아미드기, 카르바메이트기, 카보네이트기, 또는 우레아기인 모이어티를 포함하는, 조성물.
  59. 제58항에 있어서, L1은 아미드기, 카르바메이트기, 또는 우레아기인 모이어티를 포함하는, 조성물.
  60. 제57항에 있어서, L1은 -X1-C(X3)-X2, -(C1-C19 알킬렌)-X1-C(X3)-X2, -X1-C(X3)-X2(C1-C19 알킬렌)-, -(C1-C19 알킬렌)-X1-, -X1-(C1-C19 알킬렌)-이고,
    각각의 X1 및 X2는 독립적으로, 공유 결합, -O-, -S-, 또는 -NH-이고;
    X3은 독립적으로 =O, =S, 또는 =NH이며;
    상기 C1-C19 알킬렌은 선택적으로 치환되는, 조성물.
  61. 제49항 내지 제60항 중 어느 한 항에 있어서, L1은 구조 -N(R')2 또는 이의 양전하로 하전된 형태를 포함하지 않으며, 각각의 R'은 독립적으로 수소 또는 선택적으로 치환된 C1-C20 알킬인, 조성물.
  62. 제49항 내지 제61항 중 어느 한 항에 있어서, S는 동물 스테롤(zoosterol), 또는 이의 산화되거나 환원된 형태인, 조성물.
  63. 제49항 내지 제61항 중 어느 한 항에 있어서, S는 식물 스테롤(phytosterol), 또는 이의 산화되거나 환원된 형태인, 조성물.
  64. 제49항 내지 제61항 중 어느 한 항에 있어서, S는 합성 스테롤(synthetic sterol), 또는 이의 산화되거나 환원된 형태인, 조성물.
  65. 제49항 내지 제61항 중 어느 한 항에 있어서, S는 콜레스테롤, 콜레스테롤의 산화된 형태, 콜레스테롤의 환원된 형태, 알킬 리토콜레이트, 스티그마스테롤, 스티그마스탄올, 캄페스테롤, 에르고스테롤, 및 시토스테롤으로부터 선택된 스테롤인, 조성물.
  66. 제65항에 있어서, S는 콜레스테롤의 산화된 형태, 콜레스테롤의 환원된 형태, 알킬 리토콜레이트, 스티그마스테롤, 스티그마스탄올, 캄페스테롤, 에르고스테롤, 및 시토스테롤으로부터 선택된 스테롤인, 조성물.
  67. 제66항에 있어서, S는
    Figure pct00068

    Figure pct00069

    Figure pct00070

    Figure pct00071

    Figure pct00072
    (시토스테롤)로부터 선택된 스테롤이며, R은 선택적으로 치환된 C1-C20 알킬인, 조성물.
  68. 제66항에 있어서, S는
    Figure pct00073

    Figure pct00074

    Figure pct00075

    Figure pct00076

    Figure pct00077
    (시토스테롤)로부터 선택된 스테롤이며, R은 선택적으로 치환된 C1-C20 알킬인, 조성물.
  69. 제38항 내지 제68항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 스테롤계 양이온 지질은 이미다졸 콜레스테롤 에스테르(ICE)를 포함하는, 조성물.
  70. 제38항 내지 제68항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 스테롤계 양이온 지질은 이미다졸 콜레스테롤 에스테르(ICE)를 포함하지 않는, 조성물.
  71. 제38항 내지 제41항, 제44항, 또는 제46항 내지 제70항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 핵산은 DNA, siRNA, 마이크로RNA 및/또는 mRNA로부터 선택되는, 조성물.
  72. 제38항 내지 제41항 또는 제42항 내지 제70항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 핵산은 단백질 또는 펩티드를 암호화하는 mRNA인, 조성물.
  73. 제42항, 제43항, 또는 제72항 중 어느 한 항에 있어서, 단백질 또는 펩티드를 암호화하는 상기 mRNA는 코돈 최적화된 것인, 조성물.
  74. 제42항, 제43항, 또는 제72항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 mRNA는 하나 이상의 변형된 뉴클레오티드를 포함하는, 조성물.
  75. 제42항, 제43항, 또는 제72항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 mRNA는 상기 mRNA의 5' 미번역 영역의 변형을 포함하는, 조성물.
  76. 제75항에 있어서, 상기 5' 미번역 영역의 상기 변형은 Cap1 구조의 포함을 포함하는, 조성물.
  77. 제42항, 제43항, 또는 제72항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 mRNA는 상기 mRNA의 3' 미번역 영역의 변형을 포함하는, 조성물.
  78. 제77항에 있어서, 상기 3' 미번역 영역의 상기 변형은 폴리 A 꼬리의 포함을 포함하는, 조성물.
  79. 제38항 내지 제78항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 지질 나노입자는 약 100 nm, 95 nm, 90 nm, 85 nm, 80 nm, 75 nm, 70 nm, 65 nm, 60 nm, 55 nm, 50 nm, 45 nm 또는 40 nm미만의 크기를 가지는, 조성물.
  80. 제42항, 제43항, 또는 제45항 내지 제79항 중 어느 한 항에 있어서, CFTR 단백질을 암호화하는 상기 mRNA는 서열번호 1을 포함하는, 조성물.
  81. 제42항, 제43항, 또는 제45항 내지 제80항 중 어느 한 항에 있어서, CFTR 단백질을 암호화하는 상기 mRNA는 서열번호 1과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 또는 95% 동일한 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하는, 조성물.
  82. 제38항 내지 제81항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 지질 나노입자는 mRNA 용액 및 지질 용액을 20% 에탄올에 혼합함으로써 형성되는, 조성물.
  83. 제38항 내지 제82항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 지질 나노입자는 접선류 여과 방식(tangential flow filtration)에 의해 추가로 정제되는, 조성물.
  84. 생체 내에서 mRNA를 전달하는 방법으로서, 상기 방법은 제42항, 제43항 또는 제45항 내지 제83항 중 어느 한 항의 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
  85. 제84항에 있어서, 상기 대상체는 전달을 필요로 하는 대상체인, 방법.
  86. 제84항 또는 제85항에 있어서, 상기 조성물은 정맥내 투여되는, 방법.
  87. 제84항 또는 제85항에 있어서, 상기 조성물은 폐 전달에 의해 투여되는, 방법.
  88. 제87항에 있어서, 상기 폐 전달은 분무화를 포함하는, 방법.
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