KR20190114728A - 트리톤 x-100 및 우레아를 유효성분으로 포함하는 생체조직 침투 증강용 조성물 및 이를 이용한 생체조직 침투 증강 방법 - Google Patents
트리톤 x-100 및 우레아를 유효성분으로 포함하는 생체조직 침투 증강용 조성물 및 이를 이용한 생체조직 침투 증강 방법 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 Triton X-100 및 urea를 유효성분으로 포함하는 생체조직 침투 증강용 조성물 및 이를 이용한 생체조직 침투 증강 방법에 관한 것으로, 본 발명에 따른 Triton X-100 및 urea를 유효성분으로 포함하는 생체조직 침투 증강용 조성물을 생체 조직 염색 시 함께 사용할 경우 사용하지 않는 경우에 비해 항체 또는 염료(dye)의 침투를 증강시키는 효과가 있어 생체 조직의 구조적 이미지를 보다 자세하게 관찰할 수 있고 관찰하기 어려운 조직의 변화를 분석할 수 있으므로, 본 발명은 다양한 질환의 원인을 규명하고 치료법을 찾아내는 데 유용하게 사용될 수 있다.
Description
본 발명은 트리톤 X-100(Triton X-100) 및 우레아(urea)를 유효성분으로 포함하는 생체조직 침투 증강용 조성물 및 이를 이용한 생체조직 침투 증강 방법에 관한 것이다.
현재 질병의 진단은 2차원 스캐닝을 통한 3차원으로의 재구성 기술에 의해 보다 정교하게 진단할 수 있는 기술로 발전하여 왔다. 그러나, 현재 개발된 기술은 밀리미터 수준으로 세포 수준에서의 분석이 가능한 정도의 기술은 매우 미흡한 실정이다.
즉, 생검 등의 생체조직을 고정한 후 파라핀 등으로 포매하여 나노미터 두께의 슬라이드를 만들어 광학이나 형광 등으로 미세 구조를 분석한다. 이러한 미세 구조에 대한 이미지 기술을 이용하여 3차원 이미지를 구성하기 위해서는 콘포칼과 같은 현미경을 이용해야 하며 이러한 경우 수십 마이크로 미터 수준 두께의 정보를 획득할 수 있다. 그러나 이 모든 것은 광원이 침투 할 수 있는 깊이에 의해 제한된다. 따라서, 보다 두꺼운 조직의 3차원 이미지를 획득하기 위해서는 조직을 연속적으로 절편하여 현미경으로 이미징 한 후 다시 재구성하는 과정이 필요하다.
조직 투명화 기술은 조직의 손상 없이 구조 및 단백질 발현 등을 확인 할 수 있으므로 최근에 매우 다양한 방법으로 조직을 투명화 할 수 있는 기술이 개발되었다. 기존의 조직 투명화 기술은 유기용매를 이용한 조직 투명화 방법인 Spatleholz, BABB, Scale S, iDISCO법과, 폴리머 주입법인 ACT(active CLARITY technology)법에 의해 처리된 조직의 항원 보존성이 보고된 바 있다. ACT를 제외한 다른 방법의 경우 형광과 항원의 보존성이 감소하는 문제를 가지고 있다. ACT의 경우 90% 이상의 항원 보존성을 가지며, 이는 클라리티(CLARITY)와 같이 고정된 단백질에 추가로 하이드로젤 폴리머와의 결합을 필요로 하는 방법에 비하면 보다 높은 보존성을 보인다. 그러나 강한 조직 고정 과정은 항원성의 손실을 유발하여, 사용할 수 있는 항체가 감소하는 등의 문제점을 고려해야 하므로, 여러 가지 기술의 개선이 필요하다.
한편, 면역염색은 세포 또는 조직 등에서 특정한 단백질의 국재를 연구하는 방법으로 개발한 항체를 사용하는 염색법을 말한다. 1차항체에 형광색소 등의 형광물질을 부가한 2차항체를 작용시켜 광학현미경으로 관찰한다. 세포 또는 조직을 고정하여 관찰하기 때문에 통상 얻게 되는 정보는 정적인 것이지만 형광색이 다른 2차항체를 사용하면, 복수인 단백질의 공동국재도 연구할 수 있는 점에서 분자세포생물학에 있어서도 매우 중요한 기술로 인식되고 있다.
또한, 효소 면역조직화학 염색법은 각종 종양의 기원, 종양의 분류, 예후판정 등의 목적으로 매우 광범위하게 이용되고 있는 방법으로, 특히 최근에는 어떤 항원의 존재 여부뿐 아니라 조직이나 세포에 존재하는 항원의 양이 암의 예후나 항암제에 대한 반응성을 결정짓는데 중요하다는 사실이 알려지면서 정량적인 면역조직화학 염색의 필요성이 대두되었다.
그러나, 현재 이용 가능한 면역조직화학 염색법은 항원에 대한 일차 항체를 반응시켜 붙인 다음 직접 효소가 붙은 이차 항체를 붙이고 효소의 기질액을 반응시켜 발색을 시키거나, 바이오틴이 붙은 이차항체를 반응 시키고 이후에 바이오틴과 강력하게 붙는 성질이 있는 아비딘에 효소가 달라붙어있는 시약을 반응 시키고(ABC 법) 이후에 이 효소에 대한 기질액을 반응시켜서 색깔을 발색시켜 현미경하에서 원래 항원의 존재를 관찰하는 방법을 사용하고 있다.
따라서, 상기와 같은 면역염색법에서는 항원에 대한 항체를 반응시켜 선명한 발색을 얻는 것이 중요하다.
이에, 본 발명자들은 생체조직을 투명화 시키고, 투명화된 생체조직에 항체 또는 염료(dye)와 같은 고분자 물질을 침투시켜 생체조직을 염색할 경우 상기 항체 또는 염료(dye)를 보다 조직 깊이 침투시켜 염색을 선명하게 시킬 수 있는 조성물 및 상기 조성물을 이용한 생체조직 침투 증강 방법을 개발하였다.
본 발명자들은 투명화된 생체조직 염색 시 생체조직에 항체 또는 염료(dye)와 같은 고분자 물질을 침투시킬 때 Triton X-100 및 urea를 함께 사용하는 경우 종래의 방법에 비해 침투를 증강시켜 염색이 더 잘되는 것을 확인하고, 이에 기초하여 본 발명을 완성하였다.
이에, 본 발명의 목적은 트리톤 X-100(Triton X-100) 및 우레아(urea)를 유효성분으로 포함하는 생체조직 침투 증강용 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 투명화된 생체조직에 상기 생체조직 침투 증강용 조성물을 항체 또는 염료(dye)와 함께 반응시키는 단계를 포함하는, 생체조직 침투 증강 방법을 제공하는 것이다.
그러나, 본 발명이 이루고자 하는 기술적 과제는 이상에서 언급한 과제에 제한되지 않으며, 언급되지 않은 또 다른 과제들은 아래의 기재로부터 본 발명이 속하는 기술 분야의 통상의 지식을 가진 자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.
상기와 같은 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 트리톤 X-100(Triton X-100) 및 우레아(urea)를 유효성분으로 포함하는 생체조직 침투 증강용 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 투명화된 생체조직에 상기 생체조직 침투 증강용 조성물을 항체 또는 염료(dye)와 함께 반응시키는 단계를 포함하는, 생체조직 침투 증강 방법을 제공한다.
본 발명의 일구현예로서, 상기 Triton X-100의 농도는 0.01 내지 0.5 v/v%일 수 있다.
본 발명의 다른 구현예로서, 상기 urea의 농도는 0.1 내지 5M일 수 있다.
본 발명의 또 다른 구현예로서, 상기 조성물은 항체 또는 염료(dye)의 침투를 증가시킬 수 있다.
본 발명의 또 다른 구현예로서, 상기 염료(dye)는 블루 덱스트란(blue dextran)일 수 있다.
본 발명에 따른 Triton X-100 및 urea를 유효성분으로 포함하는 생체조직 침투 증강용 조성물을 생체 조직 염색 시 함께 사용할 경우 사용하지 않는 경우에 비해 항체 또는 염료(dye)의 침투를 증강시키는 효과가 있어 생체 조직의 구조적 이미지를 보다 자세하게 관찰할 수 있고 관찰하기 어려운 조직의 변화를 분석할 수 있으므로, 본 발명은 다양한 질환의 원인을 규명하고 치료법을 찾아내는 데 유용하게 사용될 수 있을 것으로 기대된다.
도 1은 본 발명의 일구현예에 따른 0.1v/v% Triton X-100과 1M urea를 사용하여 투명화된 생체 조직을 blue dextran으로 염색한 결과를 나타낸 도면이다.
도 2는 본 발명의 일구현예에 따른 0.1v/v% Triton X-100과 1M urea를 물과 함께 사용하여 투명화된 생체 조직을 blue dextran으로 염색한 결과를 물을 단독으로 사용하였을 때와 비교하여 나타낸 도면이다.
도 2는 본 발명의 일구현예에 따른 0.1v/v% Triton X-100과 1M urea를 물과 함께 사용하여 투명화된 생체 조직을 blue dextran으로 염색한 결과를 물을 단독으로 사용하였을 때와 비교하여 나타낸 도면이다.
본 발명은 트리톤 X-100(Triton X-100) 및 우레아(urea)를 유효성분으로 포함하는 생체조직 침투 증강용 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 투명화된 생체조직에 상기 생체조직 침투 증강용 조성물을 항체 또는 염료(dye)와 함께 반응시키는 단계를 포함하는, 생체조직 침투 증강 방법을 제공한다.
본 발명의 상기 트리톤 X-100(Triton X-100)은 hydrophilic polyethylene oxide group과 hydrocarbon lipophilic 또는 hydrophobic group을 가지고 있는 비이온성 surfactant 로서, 세포, 조직, 세포막에서 그의 구성성분을 분리 정제할 때에 용해제로 첨가하거나, 조직세포나 수용성 분획에 끼어들어간 방사성동위원소(예: 3H)의 방사능 측정을 액체 신틸레이터를 사용하였을 때 시료의 용제로 첨가하여 섬광기 용액에 혼합되기 쉽도록 하는 등 많은 용도로 사용하고 있다.
또한, 본 발명의 상기 우레아(요소; urea)는 화학식이 CO(NH2)2인 유기화합물로, 색이나 냄새가 없고 기둥 모양의 결정을 만드는 물질이며, 분자량 60.047, 녹는점 132.7℃(1atm), 비중 1.335이다. 극성이 강한 물질이어서 물과 알코올에는 잘 녹지만 에테르에는 녹지 않으며, 비료, 요소 수지의 원료, 이뇨제, 분석용 시약, 및 유기 화합물의 분리 등에 사용되고 있다.
이 때, 상기 Triton X-100의 농도는 0.01 내지 0.5v/v%일 수 있고, 본 발명의 구체적인 실시예에 따르면 0.1v/v%일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
또한, 상기 urea의 농도는 0.1 내지 5M일 수 있고, 본 발명의 구체적인 실시예에 따르면 1M일 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다.
본 발명에서 상기 조성물은 항체 또는 염료(dye)의 침투를 증가시킬 수 있으나 이에 제한되지는 않는다.
이 때, 상기 염료(dye)는 블루 덱스트란(blue dextran)일 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다.
상기 블루 덱스트란(blue dextran)은 평균분자량 200만인 덱스트란(dextran)에 시바크론블루 F3GA를 결합시킨 것으로, 단백질 등 겔 여과에 있어 지지체 겔의 망목에는 들어갈 수 없는 정도인 용질은 겔 입자간의 공극의 전용적에 상당하는 용출용적(일명, 보이드(void)용적 또는 배제용적)으로 용출한다. 블루 덱스트란의 푸른 용액은 이 용적을 구하기 위해 사용하고 있다.
본 발명의 일실시예에서는 0.1v/v% Triton X-100 및 1M urea를 이용하여 blue dextran으로 생체 조직의 염색을 실시한 결과, 0.1v/v% Triton X-100 및 1M urea를 생체 조직 염색 시 함께 사용할 경우, 사용하지 않은 경우에 비해 염료(dye)의 침투를 증가시켜 발색이 선명하게 나타나는 것을 확인하였다(실시예 1 참조).
이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예를 제시한다. 그러나 하기의 실시예는 본 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐, 하기 실시예에 의해 본 발명의 내용이 한정되는 것은 아니다.
실시예1
. 생체 조직 침투 증강용 조성물을 이용한 생체 조직으로의 염색 dye의 침투 증강 효과
24주령 mouse whole brain을 121℃, 15 psi로 15분 반응시킨 후 본 발명의 생체 조직 침투 증강용 조성물인 0.1v/v% Triton X-100 및 1M urea를 이용하여 70kD blue dextran을 20mg/ml의 농도로 4℃에서 24시간 동안 반응시켰다.
생체 조직 염색 시 0.1v/v% Triton X-100 및 1M urea를 단독으로 사용한 경우와 함께 사용한 경우 염색 결과를 도 1에 나타내었다.
또한, 생체 조직 염색 시 0.1v/v% Triton X-100 및 1M urea를 물과 함께 사용하였을 때의 염색 결과를 물만 사용하였을 때와 비교하여 도 2에 나타내었다.
그 결과, 본 발명의 생체 조직 침투 증강용 조성물인 0.1v/v% Triton X-100 및 1M urea를 생체 조직 염색 시 함께 사용할 경우 염료(dye)의 침투를 증가시켜 발색이 더 선명하게 나타나는 것을 확인하였다.
전술한 본 발명의 설명은 예시를 위한 것이며, 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 지식을 가진 자는 본 발명의 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 쉽게 변형이 가능하다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적이 아닌 것으로 이해해야 한다.
Claims (6)
- 트리톤 X-100(Triton X-100) 및 우레아(Urea)를 유효성분으로 포함하는 생체조직 침투 증강용 조성물.
- 제1항에 있어서,
상기 Triton X-100의 농도는 0.01 내지 0.5 v/v%인 것을 특징으로 하는, 생체조직 침투 증강용 조성물.
- 제1항에 있어서,
상기 Urea의 농도는 0.1 내지 5M인 것을 특징으로 하는, 생체조직 침투 증강용 조성물.
- 제1항에 있어서,
상기 조성물은 항체 또는 염료(dye)의 침투를 증가시키는 것을 특징으로 하는, 생체조직 침투 증강용 조성물.
- 제4항에 있어서,
상기 염료(dye)는 블루 덱스트란(blue dextran)인 것을 특징으로 하는, 생체조직 침투 증강용 조성물.
- 투명화된 생체조직에 제1항의 생체조직 침투 증강용 조성물을 항체 또는 염료(dye)와 함께 반응시키는 단계를 포함하는, 생체조직 침투 증강 방법.
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|---|---|---|---|
| PCT/KR2019/003621 WO2019190216A1 (ko) | 2018-03-29 | 2019-03-28 | 트리톤 x-100 및 우레아를 유효성분으로 포함하는 생체조직 침투 증강용 조성물 및 이를 이용한 생체조직 침투 증강 방법 |
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| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR20180036814 | 2018-03-29 | ||
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| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
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ID=68206814
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| KR1020180174047A KR20190114728A (ko) | 2018-03-29 | 2018-12-31 | 트리톤 x-100 및 우레아를 유효성분으로 포함하는 생체조직 침투 증강용 조성물 및 이를 이용한 생체조직 침투 증강 방법 |
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|---|---|
| KR (1) | KR20190114728A (ko) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2023010845A1 (zh) * | 2021-08-02 | 2023-02-09 | 西湖大学 | 用于生物组织透明化处理的脱脂组合物 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR100926485B1 (ko) | 2007-07-27 | 2009-11-12 | 가톨릭대학교 산학협력단 | 정량 관찰이 용이한 면역조직화학 염색 방법 |
-
2018
- 2018-12-31 KR KR1020180174047A patent/KR20190114728A/ko not_active IP Right Cessation
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR100926485B1 (ko) | 2007-07-27 | 2009-11-12 | 가톨릭대학교 산학협력단 | 정량 관찰이 용이한 면역조직화학 염색 방법 |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
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