KR20190104043A - TNFα에 대한 재조합 단일클론 항체의 약학적 수성 조성물 - Google Patents

TNFα에 대한 재조합 단일클론 항체의 약학적 수성 조성물 Download PDF

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예카테리나 알렉산드로브나 롬코바
알렉산더 올레고비치 이코노프
빅토리야 올레고프나 쉬티코바
아나스타시야 미하일로브나 랴코프스카야
드미트리 발렌티노비치 모로조프
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조인트 스탁 컴퍼니 "바이오케드"
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Abstract

본 발명은 TNFα에 대한 재조합 단일클론 항체의 개선된 약학적 수성 조성물 및 이의 제조 방법에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 TNFα-매개 질환을 치료하기 위한 TNFα에 대한 재조합 단일클론 항체의 약학적 수성 조성물의 용도에 관한 것이다. 본 발명은 용액 내 단백질의 응집 및 단편 형성 및 단백질의 변형으로 나타나는 물리-화학적 불안정성을 방지하며, 또한 냉동/해동, 휘젖기 및 교반 하에서의 불안정성을 방지한다.

Description

TNFα에 대한 재조합 단일클론 항체의 약학적 수성 조성물
본 발명은 의약학에 관한 것이며, 보다 상세하게는 TNFα에 특이적으로 결합하거나 또는 TNFα를 중화하는 인간 항체의 약학적 수성 조성물 및 그 용도에 관한 것이다.
종양 괴사 인자 alpha (TNFα)는 내독소 또는 기타 자극에 반응하여 단핵세포 및 대식세포 등의 다양한 타입의 세포들에 의해 생산되는 천연적으로 생성되는 포유류 사이토카인이다. TNFα는 염증 반응, 면역 반응 및 병리생리학적 반응의 주요 매개인자이다 (Grell, M., et al. (1995) Cell, 83: 793-802).
용해성 TNFα는 전구체 막관통 단백질의 절단에 의해 형성되며 (Kriegler, et al. (1988) Cell 53: 45-53), 분비된 17 킬로달톤 (kDa)의 폴리펩타이드들이 응집되어 용해성의 동형삼량체 복합체를 형성한다 (Smith, et al. (1987), J. Biol. Chem. 262: 6951-6954; Butler, et al. (1986), Nature 320:584; Old (1986), Science 230: 630). 그런 후, 복합체는 다양한 세포 상에서 확인된 수용체에 결합한다. 이 결합은, (i) 인터루킨 (IL)-6, IL-8 및 IL-1과 같은 그외 전-염증성 사이토카인의 방출, (ii) 매트릭스 메탈로프로테나제의 방출, 및 (iii) 내피 부착 분자 발현의 상향-조절을 비롯하여, 다수의 전-염증성 효과를 발생시켜, 백혈구를 혈관외 조직 (extravascular tissue) 내로 유인함으로써, 염증성 및 면역성 케스케이드를 더욱 증폭시킨다.
TNFα의 농도 증가와 연관된 장애들이 다수 존재한다. 예를 들어, TNFα 발현은 류마티스 관절염 (RA), 크론병 및 궤양성 대장염 등의 염증성 장 장애, 패혈증, 울혈성 심부전, 천식 기관지 및 다발성 경화증과 같은 만성 질환을 비롯하여, 다수의 인간 질환들에서 상향-조절되는 것으로 확인되었다. TNFα는 또한 전-염증성 사이토카인으로도 지칭된다.
생리학적으로, TNFα는 또한 특정 감염에 대한 방어와 관련 있다 (Cerami. et al. (1988), Immunol. Today 9:28). TNFα는 그람 음성 박테리아의 리포폴리카사라이드에 의해 활성화된 대식세포에 의해 방출된다. 이와 같이, TNFα는 세균성 패혈증과 관련된 내독소 쇼크의 발병 및 병인에 참여하는 매우 중요한 내인성 매개인자인 것으로 보인다.
아달리무맵 (Adalimumab) (Humira®, AbbVie, Inc.)은 인간 TNF에 특이적인 인간 재조합 단일클론 IgG1 항체이다. 이 항체는 또한 D2E7로도 알려져 있다. 아달리무맵은 아미노산 1,330개로 이루어져 있으며, US 6090382 (WO9729131)에서 개시되어 특허 등록되었으며, 이 문헌에서 아달리무맵에 대한 설명은 그 전체가 원용에 의해 본 명세서에 포함된다. 아달리무맵은 전형적으로 예를 들어 중국 햄스터 세포와 같은 포유류 세포 발현 시스템에서 재조합 DNA 기법에 의해 생산된다. 아달리무맵은 TNF에 특이적으로 결합하여, 세포 표면 상의 TNF 수용체 p55 및 p75와의 상호작용을 차단함으로써 TNF의 생물학적 기능을 중화한다.
여러가지 아달리무맵 제형들이 당해 기술 분야에 공지되어 있다 (예, WO2004016286 및 WO2012065072).
WO2004016286은 아달리무맵과 같은 항체, 완충제 시스템, 폴리소르베이트 및 용액 등장제 (isotonicity agent), 예를 들어, 만니톨 및 염화나트륨을 포함하는 TNFα 매개 질환을 치료하기 위해 사용되는 항체의 안정화용 액체 조성물을 기술하고 있다. 이 조성물은 사이트레이트-포스페이트 완충제 (휴미라 제형 1)를 사용한다. 이 제형에는 여러가지 문제가 있다: 1) 고 농도에서 항체의 콜로이드 안정성 (colloid stability) 불량, 2) 열 스트레스 조건에서의 안정성 불량, 및 3) 장기 저장시 응집성.
WO2012065072는 아달리무맵과 같은 항체 뿐만 아니라 만니톨, 폴리소르베이트 80을 포함하는 TNFα 매개 질환을 치료하기 위해 사용되는 항체의 안정화용 액제 조성물 (휴미라 제형 2)을 기술하고 있다. 이 제형을 여러가지 문제를 가지고 있다: 1) 심각한 냉동 및 해동 불안정성, 및 2) 낮은 응집 온도.
따라서, 아달리무맵과 같이 TNFα에 결합하는 항체를 포함하는 새로운 약제가 요구되고 있다.
본 발명은, 장기 보관 가능하며, 또한 우수한 냉동-해동 및 열 스트레스 내성을 가진, 아달리무맵을 포함하는 안정한 수성 조성물에 관한 것이다.
일 측면에서, 본 발명은, 재조합 단일클론 항-TNFα 항체, 아세테이트 이온 기반의 완충제 물질 (acetate ion based buffer agent) (또는 완충제 시스템), 트레할로스 또는 프롤린 또는 이들의 조합, 또는 트레할로스 및 아르기닌, 폴리소르베이트 20, 폴리소르베이트 80 또는 폴록사머 188, 또는 이들의 조합을 포함하는, 정맥내, 피하 또는 근육내 투여를 위한 약학적 수성 조성물에 관한 것이다.
조성물에 대한 일부 구현예에서, 재조합 단일클론 항-TNFα 항체는 아달리무맵이다.
조성물에 대한 일부 구현예에서, 단일클론 항체의 농도는 50 내지 200 mg/mL이다.
조성물에 대한 일부 구현예에서, 아세테이트 완충제 용액의 농도는 1 내지 100 mM이다.
일부 구현예에서, 조성물의 pH는 4 내지 7이다.
조성물에 대한 일부 구현예에서, 트레할로스의 농도는 25 내지 150 mg/mL이다.
조성물에 대한 일부 구현예에서, 프롤린의 농도는 5 내지 40 mg/mL이다.
조성물에 대한 일부 구현예에서, 아르기닌의 농도는 0.05 내지 1.0 mg/mL이다.
조성물에 대한 일부 구현예에서, 폴리소르베이트 20의 농도는 0.05 mg/mL 내지 10 mg/mL이다.
조성물에 대한 일부 구현예에서, 폴리소르베이트 80의 농도는 0.05 mg/mL 내지 10 mg/mL이다.
조성물에 대한 일부 구현예에서, 폴록사머 188의 농도는 0.05 mg/mL 내지 10 mg/mL이다.
조성물에 대한 일부 구현예에서, 재조합 단일클론 항-TNFα 항체는 아달리무맵이다.
일부 구현예에서, 조성물은 아달리무맵 50 내지 150 mg/mL, 소듐 아세테이트 삼수화물 0.436 mg/mL, 트레할로스 이수화물 80 mg/mL, pH 5.5로 적정하는데 필요한 함량의 빙초산, 폴리소르베이트 80 0.5 mg/mL을 포함한다.
일부 구현예에서, 조성물은 아달리무맵 50 내지 150 mg/mL, 소듐 아세테이트 삼수화물 0.436 mg/mL, 트레할로스 이수화물 80 mg/mL, 아르기닌 하이드로클로라이드 0.1 mg/mL, pH 5.5로 적정하는데 필요한 함량의 빙초산, 폴리소르베이트 80 0.5 mg/mL을 포함한다.
일부 구현예에서, 조성물은 아달리무맵 50 내지 150 mg/mL, 소듐 아세테이트 삼수화물 0.436 mg/mL, 프롤린 27 mg/mL, pH 5.5로 적정하는데 필요한 함량의 빙초산, 폴리소르베이트 80 0.5 mg/mL을 포함한다.
일부 구현예에서, 조성물은 아달리무맵 50 내지 150 mg/mL, 소듐 아세테이트 삼수화물 0.436 mg/mL, 트레할로스 이수화물 40 mg/mL, 프롤린 13.5 mg/mL, pH 5.5로 적정하는데 필요한 함량의 빙초산, 폴리소르베이트 80 0.5 mg/mL을 포함한다.
일부 구현예에서, 조성물은 재조합 단일클론 항-TNFα 항체 50 내지 200 mg/mL, 소듐 아세테이트 삼수화물 0.4 내지 1.2 mg/mL, 트레할로스 25 내지 150 mg/mL 및/또는 프롤린 5 내지 40 mg/mL 또는 트레할로스 25 내지 150 mg/mL, 및 아르기닌 0.05 내지 1.0 mg/mL, pH 5.0 내지 6.0으로 적정하는데 필요한 함량의 빙초산, 폴리소르베이트 80 0.1 mg/mL 내지 1 mg/mL을 포함한다.
일부 구현예에서, 조성물은 재조합 단일클론 항-TNFα 항체 50 내지 200 mg/mL, 소듐 아세테이트 삼수화물 0.4 내지 1.2 mg/mL, 트레할로스 25 내지 150 mg/mL 및/또는 프롤린 5 내지 40 mg/mL 또는 트레할로스 25 내지 150 mg/mL, 및 아르기닌 0.05 내지 1.0 mg/mL, pH 5.5로 적정하는데 필요한 함량의 빙초산, 폴리소르베이트 20 0.1 mg/mL 내지 1 mg/mL을 포함한다.
조성물에 대한 일부 구현예에서, 재조합 단일클론 항-TNFα 항체는 아달리무맵이다.
일부 구현예에서, 조성물은 아달리무맵 50 내지 150 mg/mL, 소듐 아세테이트 삼수화물 0.436 mg/mL, 트레할로스 이수화물 80 mg/mL, pH 5.5로 적정하는데 필요한 함량의 빙초산, 폴리소르베이트 20 0.5 mg/mL을 포함한다.
일부 구현예에서, 조성물은 아달리무맵 50 내지 150 mg/mL, 소듐 아세테이트 삼수화물 0.436 mg/mL, 트레할로스 이수화물 80 mg/mL, 아르기닌 하이드로클로라이드 0.1 mg/mL, pH 5.5로 적정하는데 필요한 함량의 빙초산, 폴리소르베이트 20 0.5 mg/mL을 포함한다.
일부 구현예에서, 조성물은 아달리무맵 50 내지 150 mg/mL, 소듐 아세테이트 삼수화물 0.436 mg/mL, 프롤린 27 mg/mL, pH 5.5로 적정하는데 필요한 함량의 빙초산, 폴리소르베이트 20 0.5 mg/mL을 포함한다.
일부 구현예에서, 조성물은 아달리무맵 50 내지 150 mg/mL, 소듐 아세테이트 삼수화물 0.436 mg/mL, 트레할로스 이수화물 40 mg/mL, 프롤린 13.5 mg/mL, pH 5.5로 적정하는데 필요한 함량의 빙초산, 폴리소르베이트 20 0.5 mg/mL을 포함한다.
일부 구현예에서, 조성물은 재조합 단일클론 항-TNFα 항체 50 내지 200 mg/mL, 소듐 아세테이트 삼수화물 0.4 내지 1.2 mg/mL, 트레할로스 25 내지 150 mg/mL 및/또는 프롤린 5 내지 40 mg/mL 또는 트레할로스 25 내지 150 mg/mL, 및 아르기닌 0.05 내지 1.0 mg/mL, pH 5.0 내지 6.0으로 적정하는데 필요한 함량의 빙초산, 폴록사머 188 0.1 mg/mL 내지 1 mg/mL을 포함한다.
조성물에 대한 일부 구현예에서, 재조합 단일클론 항-TNFα 항체는 아달리무맵이다.
일부 구현예에서, 조성물은 아달리무맵 50 내지 150 mg/mL, 소듐 아세테이트 삼수화물 0.436 mg/mL, 트레할로스 이수화물 80 mg/mL, pH 5.5로 적정하는데 필요한 함량의 빙초산, 폴록사머 188 1 mg/mL을 포함한다.
일부 구현예에서, 조성물은 아달리무맵 50 내지 150 mg/mL, 소듐 아세테이트 삼수화물 0.436 mg/mL, 트레할로스 이수화물 80 mg/mL, 아르기닌 하이드로클로라이드 0.1 mg/mL, pH 5.5로 적정하는데 필요한 함량의 빙초산, 폴록사머 188 1 mg/mL을 포함한다.
일부 구현예에서, 조성물은 아달리무맵 50 내지 150 mg/mL, 소듐 아세테이트 삼수화물 0.436 mg/mL, 프롤린 27 mg/mL, pH 5.5로 적정하는데 필요한 함량의 빙초산, 폴록사머 188 1 mg/mL을 포함한다.
일부 구현예에서, 조성물은 아달리무맵 50 내지 150 mg/mL, 소듐 아세테이트 삼수화물 0.436 mg/mL, 트레할로스 이수화물 40 mg/mL, 프롤린 13.5 mg/mL, pH 5.5로 적정하는데 필요한 함량의 빙초산, 폴록사머 188 1 mg/mL을 포함한다.
일 측면에서, 본 발명은 전술한 조성물을 유효량으로 투여하는 단계를 포함하는 TNFα 매개 질환의 치료 방법에 관한 것이다.
치료 방법에 대한 일부 구현예에서, TNFα 매개 질환은 활동성 (중등도 내지 중증의) 류마티스 관절염, 활동성 건선성 관절염, 활동성 강직성 척추염, 만성 (중등도 내지 중증의) 판상 건선 (plaque psoriasis), (중등도 내지 중증의) 궤양성 대장염, 축성 척추관절염 (axial spondylarthritis), 활동성 화농 한선염 (active hidradenitis suppurativa), 청소년 특발성 관절염, (중등도 내지 중증의) 크론병, 포도막염, 활동성 부착부염-관련 관절염 (active enthesitis-associated arthritis)으로부터 선택된다.
일 측면에서, 본 발명은 TNFα 매개 질환을 치료하기 위한 상기한 조성물의 용도에 관한 것이다.
이러한 용도에 대한 일부 구현예에서, 질환은 활동성 (중등도 내지 중증의) 류마티스 관절염, 활동성 건선성 관절염, 활동성 강직성 척추염, 만성 (중등도 내지 중증의) 판상 건선, (중등도 내지 중증의) 궤양성 대장염, 축성 척추관절염, 활동성 화농 한선염, 청소년 특발성 관절염, (중등도 내지 중증의) 크론병, 포도막염, 활동성 부착부염-관련 관절염으로부터 선택된다.
일 측면에서, 본 발명은, 수상에 아세테이트 완충화제를 첨가한 다음 임의의 순서로 다음의 성분을 첨가하는 것을 포함하는, 상기 조성물의 제조 방법에 관한 것이다: 트레할로스, 프롤린 또는 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 삼투질 (osmolyte) 및/또는 안정화제; 재조합 단일클론 항-TNFα 항체; 폴리소르베이트 20, 폴리소르베이트 80, 폴록사머 188 또는 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 표면-활성 물질.
도 1. 제조 후 PEG 6000 농도에 따른 용액의 400 nm 광학 밀도 의존성.
도 2. 제조 후 PEG 6000 농도에 따른 용액의 400 nm 광학 밀도 의존성.
도 3. 제조 후 PEG 6000 농도에 따른 용액의 400 nm 광학 밀도 의존성.
도 4. 아세테이트 완충제 용액, pH 5.0 내에서의 아달리무맵 응집점 (aggregation point). Tag 74.0℃. 진회색: Z-평균, nm, 연회색: 강도, kcps.
도 5. 사이트레이트 완충제 용액, pH 5.0 내에서의 아달리무맵 응집점. Tag 69.5℃. 진회색: Z-평균, nm, 연회색: 강도, kcps.
도 6. 히스티딘 완충제 용액, pH 5.0 내에서의 아달리무맵 응집점. Tag 69.5℃. 진회색: Z-평균, nm, 연회색: 강도, kcps.
도 7. 포스페이트 완충제 용액, pH 5.0 내에서의 아달리무맵 응집점. Tag 71.0℃. 진회색: Z-평균, nm, 연회색: 강도, kcps.
도 8. 휴미라 제형 1, pH 5.0 내에서의 아달리무맵 응집점. Tag 69.5℃. 진회색: Z-평균, nm, 연회색: 강도, kcps.
본원에 사용된 용어들은 본 발명의 맥락에서, 그리고 각 용어가 사용된 구체적인 문맥에서, 일반적으로 당해 기술 분야에서의 통상적인 의미를 가진다. 이하 또는 본원의 도처에서, 본 발명을 설명하기 위해 사용되는 특정 용어들은 본 발명을 설명하기 위한 추가적인 지침을 실무자에게 제공하기 위해 정의된다. 일부 용어들의 경우 동의어가 제시된다. 하나 이상의 동의어를 언급하는 것이 다른 동의어의 사용을 배제하는 것은 아니다. 본 명세서의 도처에서, 본원에 기술된 임의 용어에 대한 예를 비롯해 예를 드는 것은 단순 예에 불과하며, 본 발명 또는 임의의 예시된 내용에 대한 범위 및 의미를 제한하는 것으로 의도되지 않는다. 본 발명은 본원에 제공된 다양한 구현예들로 제한되지 않는다.
달리 정의되지 않은 한, 본원에 사용된 모든 기술 용어 및 과학 용어들은 본 발명이 속하는 기술 분야의 당업자들에게 통상적으로 이해되는 의미와 동일한 의미를 가진다. 상충되는 경우, 정의를 비롯하여 본원에 따른다.
용어 "아달리무맵"은 Humira®의 활성 약학 성분 및 이의 바이오-시밀러 (bio-similar) 또는 바이오-개선된 변형물 (bio-improved variant)로서 간주 또는 의도되는 단백질과 동의어이다. 아달리무맵은 인간 TNF에 특이적인 인간 재조합 단일클론 IgG1 항체이다. 아달리무맵은 또한 D2E7으로도 알려져 있다. 아달리무맵은 각각 분자량이 약 49 kDa인 IgG1 중쇄 2개와 각각 분자량이 약 24 kDa인 경쇄 2개를 포함한다. 각 경쇄는 214개의 아미노산 잔기로 구성되며, 각 중쇄는 451개의 아미노산 잔기로 구성된다. 따라서, 아달리무맵은 아미노산 1330개로 이루어져 있다. 용어 아달리무맵은 또한 상업적으로 구입가능한 Humira®에 사용된 아달리무맵 단백질의 소위 바이오-시밀러 또는 바이오-개선된 변형물을 포괄하는 것으로 의도된다. 예를 들어, 시판 Humira®의 변형물은, 이것이 Humira®와 동일하진 않더라도 유사할 수 있는 당화 프로파일 및 산-염기 프로파일과 같은 특정 물성을 나타낼 수 있더라도, 상업적으로 구입가능한 Humira®와 기본적으로 동일한 약리학적 효과를 가질 경우에는, FDA에 허용될 수 있다.
본 출원에서, 용어 "아달리무맵"은 또한, 폴리펩타이드의 기능에 현저한 영향을 미치지 않는, 아미노산 구조 (아미노산의 결손, 부가 및/또는 치환) 또는 당화 특성 및 산-염기 프로파일에 대한 최소한의 변형을 가진, 아달리무맵을 포괄한다. 용어 "아달리무맵"은, 비-제한적으로, 농축 제형 (concentrated formulation), 주사용 레디 투 유즈 제형 (injectable ready-to-use formulation); 물, 알코올 및/또는 기타 성분을 이용해 재구성되는 제형 등을 비롯해, Humira®의 모든 형태 및 제형을 포괄한다.
용어 "인간 TNFα"는 hTNFα 또는 hTNF 또는 TNFα라고도 하며, 17 kDa의 분비된 형태 및 26 kDa의 막-결합된 형태로 존재하는 인간 사이토카인을 지칭하며, 이의 생물학적 활성 형태는 17 kDa 분자들이 비-공유적으로 결합된 삼량체이다. TNFα의 구조는, 예를 들어, Pennica, D., et al. (1984) Nature 312:724-729; Davis, J. M., et al. (1987) Biochemistry 26:1322-1326; 및 Jones, E. Y., et al. (1989) Nature 338:225-228에 추가로 기술되어 있다. 용어 인간 rhTNFα는, 표준적인 재조합 발현 방법을 통해 제조되거나 또는 상업적으로 구입 (R&D Systems, catalog. No. 210-TA, Minneapolis, Minn.) 할 수 있는, 재조합 인간 TNFα를 포괄하는 것으로 의도된다.
본원에서, 용어 "항체"는 4개의 폴리펩타이드 쇄, 즉 내부 이황화 결합으로 연결된 2개의 중 (H) 쇄와 2개의 경 (L) 쇄로 구성된 면역글로불린-타입의 분자를 지칭한다. 각 중쇄는 중쇄 가변부 (본원에서 HCVR 또는 VH로 약칭됨)와 중쇄 불변부로 구성된다. 중쇄 불변부는 3개의 도메인 CH1, CH2 및 CH3로 구성된다. 각각의 경쇄는 경쇄 가변부 (본원에서 LCVR 또는 VL로 약칭됨)와 경쇄 불변부로 구성된다. 경쇄 불변부는 도메인 하나 CL로 구성된다. VH 영역 및 VL 영역은 또한 프래임워크 영역 (FR)으로 지칭되는 보존성이 보다 높은 영역들이 사이 사이에 배치된, 상보성 결정부 (CDR)로 지칭되는 과변이 영역으로 추가적으로 세분될 수 있다. 각각의 VH 및 VL은 3개의 CDR과 4개의 FR로 구성되며, 이는 N-말단에서 C-말단 방향으로 다음과 같은 순서로 정렬된다: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. 본 발명의 일 구현예에서, 제형은 미국 특허 6090382; 6258562 및 8216583에 기술된 것과 유사한 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 가진 항체를 포함한다.
항체 또는 이의 항원-결합 영역은, 항체 또는 항체 일부가 하나 이상의 다른 단백질 또는 펩타이드와 공유 또는 비-공유적으로 결합하여 형성된, 보다 큰 면역부착 (immunoadhesion) 분자의 일부일 수 있다. 이러한 면역부착 분자의 예는 삼량체성 scFv 분자를 구축하기 위한 스트렙타비딘 코어 영역의 사용 (Kipriyanov, S. M., et al. (1995) Human Antibodies and Hybridomas 6:93-101)과, 2가의 바이오틴화된 scFv 분자를 제조하기 위한 시스테인 잔기, 마커 펩타이드 및 C-말단 폴리히스티딘의 사용 (Kipriyanov, S. M., et al. (1994) Mol. Immunol. 31:1047-1058)을 포함한다. 완전체 항체 (whole antibody)에서, 완전체 항체의 Fab 및 F(ab')2 단편과 같은 항체 일부는, 각각 파파인 또는 펩신 절단 등의 통상적인 방법을 사용해 제조될 수 있다. 나아가, 항체, 항체 일부 및 면역부착 분자는 본원에 기술된 바와 같이 표준 재조합 DNA 기법을 이용해 수득될 수 있다.
본원에서, 용어 "단리된 (isolated) 항체"는 서로 다른 항원 특이성을 가진 다른 항체가 실질적으로 없는 항체를 지칭한다 (예, TNFα에 특이적으로 결합하는 단리된 항체에는 TNFα 이외의 항원에 특이적으로 결합하는 항체가 실질적으로 존재하지 않음). 그러나, TNFα에 특이적으로 결합하는 단리된 항체는 다른 종 유래의 TNFα 분자 등의 다른 항원에 대해서는 교차 반응성을 가질 수 있다. 또한, 단리된 항체에는 다른 세포 물질 및/또는 화합물이 실질적으로 존재하지 않을 수 있다.
용어 "항-TNFα 항체"는 본원에 기술된 것 뿐만 아니라 미국 특허 6090382; 6258562; 6509015; 7223394 및 6509015에 언급된 인간 항-TNFα 항체를 지칭한다. 본원에 사용된 용어 항-TNFα 항체는 항-TNFα 항체 또는 이의 단편이며, 그 예로는 인플릭시맵 (infliximab) (Remicade®, Johnson and Johnson, 미국 특허 5656272에 언급됨); CDP571 (인간화된 단일클론 항-TNF-alpha IgG4 항체); CDP870 (인간화된 단일클론 항-TNF-alpha 항체 단편); 항-TNF dAb (Peptech); CNTO148 (골리무맵 (golimumab); Centocor, WO 02/12502 및 미국 특허 521,206 및 U.S. 7250165 참조); 및 아달리무맵 (HUMIRA® Abbott Laboratories, 인간 항-TNF mAb, US 6090382에 D2E7로 언급됨) 등이 있다. 본원에서 사용될 수 있는 추가적인 항-TNF 항체는 미국 특허 6593458; 6498237; 6451983; 및 6448380에 기술되어 있다. 다른 구현예에서, TNFα 저해제는 TNF 융합 단백질, 예를 들어, 에타너셉트 (etanercept) (Enbrel®, Amgen; WO 91/03553 및 WO 09/406476)이다. 다른 구현예에서, TNFα 저해제는 재조합 TNF 결합 단백질 (r-TBP-I) (Serono)이다.
용어 "장기 보관 (long-term storage)" 또는 "장기 안정성 (long-term stability)"은, 약학적 조성물이 3달 이상, 6달 이상, 바람직하게는 1년 이상, 가장 바람직하게는 안정적인 최소 유효 수명 2년 이상으로 보관될 수 있다는 의미로 이해된다. 일반적으로, 용어 "장기 보관" 및 "장기 안정성"은, 제형이 의도한 약학적 용도에 적합하지 않게 하는 안정성의 저하없이, 현재 이용가능한 시판 아달리무맵 제형에 전형적으로 요구되는 안정적인 유효 수명과 적어도 비슷하거나 또는 보다 나은 안정적인 보관 기간을 더 포함한다. 장기 보관은 또한 약학적 조성물이 2-8℃에서 액체로서 보관되거나 또는 냉동, 예를 들어 -18℃ 또는 그 이하로 보관되는 의미로 이해된다. 또한, 조성물은 2회 이상 냉동 및 해동될 수 있는 것으로 간주된다.
장기 보관과 관련하여 용어 "안정적인 상태 (stable state)"는 약학적 조성물에 함유된 아달리무맵이, 보관 개시 시점의 조성물의 활성을 기준으로, 활성을 20% 넘게, 더 바람직하게는 15%, 보다 더 바람직하게는 10%, 가장 바람직하게는 5% 넘게 소실하지 않는 의미로 이해된다.
본원에서, 용어 "부형제" 또는 "첨가제"는 본 발명에 앞서 기술한 것 이외의 다른 임의의 성분들을 지칭하는 것으로 사용된다.
용어 "당 (sugar)"은 단당류, 이당류 및 다당류 또는 이의 혼합물을 지칭한다. 당의 예로는 비-제한적으로, 슈크로스, 트레할로스, 글루코스, 덱스트로스 등이 있다.
본원에서, 용어 "폴리올"은 복수의 하이드록시 기를 가진 부형제를 지칭하며, 당 알코올 및 당 산 (sugar acid)을 포함한다. 폴리올의 예로는, 비-제한적으로 만니톨, 소르비톨 등이 있다.
용어 "완충제", "완충제 조성물", "완충제 물질"은, 본원에서, 전형적으로 산-염기 접합체 구성성분 (acid-base conjugate component)의 작용에 의해, 액체 항체 제형이 pH 변화를 견딜 수 있게 해주는 첨가되는 조성물을 지칭한다. 완충제의 농도를 언급할 경우, 농도는 완충제의 유리 산 또는 유리 염기 형태의 전체 몰 농도를 의미하는 것으로 의도된다. 당해 기술 분야에 공지되며 문헌에서 찾아볼 수 있는 완충제의 예로는, 비-제한적으로, 히스티딘, 사이트레이트, 숙시네이트, 아세테이트, 포스페이트, 포스페이트-완충화된 염수, 사이트레이트-포스페이트 완충제 및 트로메타민-기반의 완충제 등 또는 이들의 적절한 혼합물 등이 있다.
용어 "긴장성 물질 (tonicity agent)" 또는 "긴장화제 (tonicifier)"뿐만 아니라 "삼투질 (osmolyte)" 또는 "삼투성 물질 (osmotic agent)"은 본원에서 액체 항체 제제의 삼투압을 조정할 수 있는 부형제를 지칭한다. 특정 구현예에서, 긴장성 물질은, 항체 제제가 생리학적으로 개체의 신체 조직의 세포와 생리학적으로 혼용가능하도록 액체 항체 제제의 삼투압을 등장성으로 조절할 수 있다. 또 다른 구현예에서, "긴장성 물질"은 본원에 기술된 항체의 안정성 향상에 기여할 수 있다. "등장성" 제제는 인간 혈액과 동일한 삼투압을 가진 제제이다. 등장성 제제는 일반적으로 약 250 내지 350 mOsm의 삼투압을 가진다. 용어 "저장성 (hypotonic)"은 인간 혈액 보다 삼투압이 낮은 제제를 나타낸다. 즉, 용어 "고장성 (hypertonic)"은 인간 혈액 보다 삼투압이 높은 제제를 나타내기 위해 사용된다. 등장성은, 예를 들어, 증기압 또는 아이스-동결 타입의 삼투압계 (ice-freezing type osmometer)를 사용해 측정될 수 있다. 긴장성 물질은 거울상 이성질체 형태 (예, L- 또는 D-거울상 이성질체) 또는 라세믹 형태; 알파 또는 베타와 같은 이성질체 형태, 예를 들어, 알파,알파; 또는 베타,베타; 또는 알파,베타; 또는 베타,알파; 유리산 또는 유리 염기 형태; 염 형태; 수화물 형태 (예, 일수화물) 또는 무수 형태일 수 있다.
본원에서 용어 "표면-활성 물질" (계면활성제 또는 디터전트 또는 SAS로도 지칭됨)은 액체 항체 제제의 표면 장력을 바꿀 수 있는 부형제를 지칭한다. 특정 구현예에서, 표면-활성 물질은 액체 항체 제제의 표면 장력을 낮춘다. 다른 구현예들에서, "표면-활성 물질"은 제제 내 임의 항체의 용해성 또는 콜로이드 안정성을 개선하는데 기여할 수 있다. 표면-활성 물질은 수득되는 항체 제제의 응집을 감소시킬 수 있거나 및/또는 제제 내 미립자의 형성을 최소화하거나, 및/또는 흡착을 감소시킬 수 있다. 또한, 표면-활성 물질은 냉동/해동 사이클 전과 후, 그리고 교반 중에 항체의 안정성을 향상시킬 수 있다. 표면-활성 물질은 이온성이거나 또는 비-이온성일 수 있다. 본 발명의 제형에 함유될 수 있는 비-이온성 표면-활성 물질의 예로는 예를 들어 알킬 폴리(에틸렌 옥사이드), 알킬 폴리글루코시드 (예, 옥틸 글루코시드 및 데실 말토시드), 세틸 알코올 및 올레일 알코올과 같은 지방 알코올, Cocamide MEA, Cocamide DEA, 및 Cocamide TEA 등이 있다. 본 발명의 제형에 함유될 수 있는 구체적인 비-이온성 표면-활성 물질로는, 예를 들어, 폴리소르베이트 20 (Tween 20), 폴리소르베이트 28, 폴리소르베이트 40, 폴리소르베이트 60, 폴리소르베이트 65, 폴리소르베이트 80 (Tween 80), 폴리소르베이트 81 및 폴리소르베이트 85와 같은 폴리소르베이트; 폴록사머 188 (Kolliphor P188), 폴록사머 407과 같은 폴록사머; 폴리에틸렌-폴리프로필렌 글리콜; 또는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG), 에틸렌- 및 프로필렌 글리콜 코폴리머 (예, pluronics PF68 등) 등이 있다.
본원에서, 용어 "동결건조된"은 제제를 얼린 다음 냉동물로부터 얼음을 제거하는 과정을 수반하는 냉동-건조로서 당해 기술 분야에 공지된 공정을 거친 제제를 지칭한다.
본원에서, 용어 "아미노산"은 아미노산 (유리 아미노산, 즉 펩타이드 또는 단백질 서열 형태의 아미노산은 아님)을 지칭한다. 본 발명에서 사용되는 아미노산은, 비-제한적으로, 예를 들어, 아르기닌, 글리신, 라이신, 히스티딘, 글루탐산, 아스파르트산, 이소루신, 루신, 알라닌, 페닐알라닌, 트립토판, 세린, 시스테인, 메티오닌 및 프롤린을 포함한다.
"약학적 조성물"은 본 발명의 항체와, 약제학적으로 허용가능하며 약리학적으로 혼용가능한 부형제, 용매, 희석제, 담체, 첨가제, 붕해제, 전달제, 예를 들어, 보존제, 안정화제, 유화제, 현탁화제, 증점제, 장기 전달 조절제 (prolonged delivery regulator)로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 성분을 포함하는 조성물을 의미하며, 이들의 선택과 비율은 투여 및 용량 특성 및 방법에 따라 결정된다. 예시적인 현탁화제로는 에톡시화된 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌, 소르비톨 및 소르비톨 에스테르, 미세결정 셀룰로스, 알루미늄 메타하이드록사이드, 벤토나이트, 아가-아가 및 트라가칸트 및 이들의 혼합물 등이 있다. 미생물 작용을 방지하는 보호는 복수의 항세균제 및 항진균제, 예를 들어 파라벤, 클로로부탄올, 소르브산 등을 사용해 제공될 수 있다. 또한, 조성물은 등장화제, 예를 들어, 당, 염화나트륨 등을 포함할 수 있다. 조성물의 연장된 작용은 활성 물질의 흡수를 지연시키는 물질, 예를 들어, 알루미늄 모노스테아레이트 및 젤라틴을 사용해 제공될 수 있다. 예시적으로 적절한 담체, 용매, 희석제 및 전달제로는 물, 에탄올, 폴리알코올 및 이의 혼합물, 식물성 오일 (예, 올리브 오일) 및 주사가능한 유기 에스테르 (예, 에틸 올리에이트) 등이 있다. 예시적인 부형제로는 락토스, 유당 (milk sugar), 소듐 사이트레이트, 칼슘 카보네이트, 칼슘 포스페이트 등이 있다. 활성 물질을 단독으로 또는 다른 활성 물질과 조합하여 경구, 설하, 경피, 근육내, 정맥내, 피하, 국소 또는 직장 투여하기 위한 약학적 조성물은 동물 및 인간에게 단위 용량 형태 (unit dosage form)로 통상적인 약학적 담체와의 혼합물로서 투여될 수 있다. 적절한 단위 용량 형태로는 비경구 형태, 임플란트 및 경피 시스템을 포함한다.
"약물 (제제)"은 정제, 캡슐제, 산제, 동결건조제, 주사제, 주입제, 연고, 및 인간 및 동물에서 생리학적 기능을 복구, 교정 또는 변형시키고 질환의 치료와 예방을 제공하도록 의도된 그외 최종 투여 형태 (finished dosage form), 진단제, 마취제, 피임제, 미용 (cosmetology) 등의 형태의 물질 (또는 약학적 조성물 형태의 물질 혼합물)이다.
"치료한다", "치료하는" 및 "치료"는 생물학적 장애 및/또는 하나 이상의 이의 수반되는 증상을 완화 또는 제거하는 방법을 지칭한다. 본원에서, 질환, 장애 또는 병태를 "완화한다"는 것은 질환, 장애 또는 병태 증상의 중증도 및/또는 빈도의 감소를 의미한다. 또한, 본원에서 "치료"라고 언급하는 것은 근치적 테라피 (curative therapy), 고식적 테라피 (palliative therapy) 및 예방적 테라피를 언급하는 것을 내포한다.
일 측면에서, 치료받을 개체 또는 환자는 포유류이며, 바람직하게는 인간 개체이다. 상기한 개체는 모든 연령의 남성 또는 여성일 수 있다.
용어 "장애"는 본 발명에 따른 치료에 의해 개선될 수 있는 임의 병태를 지칭한다. 이 용어의 정의는 포유류가 장애 소인을 가진 병리학적 병태를 비롯해, 만성 및 급성 장애 또는 질환을 포함한다. 치료할 질환에 대한 비-제한적인 예로는 양성 및 악성 종양; 백혈병 및 림프 악성 종양 (lymphoid malignancy), 구체적으로, 유방암, 난소암, 위암, 자궁내막암, 침샘암, 폐암, 신장암, 결장암, 갑상선암, 췌장암, 전립선 또는 방광암; 신경 장애, 신경교 장애, 성상세포 장애, 시상하부 및 그외 샘 (glandular)의 장애, 대식세포 장애, 상피 장애, 기질 및 포배강 장애 (stromal and blastocoelic disorder); 염증 장애, 혈관형성 장애 및 면역 장애 등이 있다. 본 발명에 따라 치료할 바람직한 장애는 자가면역 질환이다.
용어 "면역 반응", "자가면역 반응", "자가면역 염증"은 림프구, 항원-제시 세포, 식세포, 과립구 및 이들 세포나 간세포에 의해 생산되는 용해성 거대분자 (침습성 병원체, 병원체로 감염된 세포 또는 조직, 암세포 또는 자가면역 또는 병원성 염증의 경우에는 정상적인 인간 세포 또는 조직을 인체로부터 선택적으로 손상, 파괴 또는 소거함으로써 생기는 항체, 사이토카인 및 보체 등)의 작용을 지칭한다.
본원에서, 용어 "자가면역 질환"은 개체에서 자기(자가) 항원 및/또는 조직에 대해 발생하는 비-악성 질환 또는 장애를 의미한다.
이 정의는, 류마티스 관절염, 관절증, 청소년 만성 관절염, 화농성 관절염 (septic arthritis), 라임 관절증 (Lyme's arthrosis), 건선성 관절염, 반응성 관절염, 척추관절병증, 전신성 홍반성 루프스, 크론병, 궤양성 대장염, 염증성 장 질환, 진성 당뇨병, 갑상선염, 천식, 알레르기성 질환, 건선, 아토피성 피부염, 경피증, 이식편대 숙주 반응 (graft versus host reaction), 이식 거부 반응, 이식과 관련된 급성 또는 만성 면역 질환, 사르코이드증, 가와사키 질환, 그레이브스 질환, 신장 증후군, 만성 피로 증후군, 베게너 육아종증, 헤노크-쉔레인 자반증 (Henoch-Schonlein's purpura), 신장의 미세 혈관염 (microscopic renal vasculitis), 활동성 만성 간염, 포도막염, 패혈증 쇼크, 독성 쇼크 증후군, 패혈증 증후군, 악액질, 후천성 면역결핍 증후군, 급성 횡단성 척수염, 헌팅턴 무도병, 파킨슨병, 알츠하이머병, 뇌졸중, 원발성 담즙성 경화증, 용혈성 빈혈, 성인 (급성) 호흡 곤란 증후군, 탈모증, 국소 탈모증 (focal alopecia), 혈청 검사 음성 관절증 (seronegative arthropathy), 관절병증 (arthropathy), 라이터병, 건선성 관절병증, 궤양성 대장염 관련 관절병증, 아토피성 알레르기, 자가면역성 수포 질환 (autoimmune bullous diseases), 심상성 천포창 (pemphigus vulgaris), 낙엽상 천포창 (pemphigus foliaceus), 유천포창 질환 (pemphigoid disease), 선상 IgA (linear IgA), 용혈성 자가면역 빈혈, 콤스-양성 용혈성 빈혈 (Coombs-positive hemolytic anemia), 악성 빈혈, 청소년 악성 빈혈, 관절염, A형 원발성 경화 감염 (primary sclerosing hepatitis A), 원인불명의 자가면역성 간염, 섬유화 폐 질환, 원인불명의 섬유화 폐포염, 염증 후 간질성 폐 질환, 간질성 폐렴, 만성 호산구성 폐렴, 감염 후 간질성 폐 질환 (postinfectious interstitial lung diseases), 통풍관절염 (urarthritis), 자가면역 간염, 1형 자가면역 간염 (고전적인 자가면역 간염 또는 리포이드 (lipoid)), 2형 자가면역 간염, 골관절염, 원발성 경화성 담관염, 1형 건선, 2형 건선, 특발성 백혈구 감소증, 자가면역성 호중구 감소증, 신장 NOS-질환, 사구체신염, 미세한 신장 혈관염, 원판형 홍반성 루프스, 특발성 또는 남성 NOS-불임 [정자에 대한 자가면역성], 다발성 경화증의 모든 서브타입들, 교감 신경 안염 (sympathetic ophthalmia), 결합 조직 질환 관련 이차성 폐 고혈압, 굿파스처 증후군, 결절성 다발동맥염의 폐 증상, 급성 류마티스성 열, 류마티스 척추염, 강직성 척추염, 스틸 질환, 전신 경화증, 쇼그렌 증후군, 타카야스병, 자가면역성 혈소판 감소증, 진성 혈소판 증가증 (essential thrombocythemia), 자가면역성 갑상선염, 갑상선 기능 항진증, 하시모토병, 자가면역성 위축성 갑상선 기능 저하증, 원발성 점액수종, 수정체성 포도막염 (phacogenic uveitis), 원발성 혈관염, 백반증, 급성 간 질환, 만성 간 질환, 알레르기, 천식, 정신 장애 (우울성 증후군 및 정신분열증 등), Th2-타입 및 Th1-타입 매개 질환, 결막염, 알레르기성 접촉성 피부염, 알레르기성 비염, alpha-I 항-트립신 결핍증, 근위축성 측삭 경화증, 빈혈, 낭포성 섬유증, 사이토카인 테라피 관련 질환, 탈수초 질환 (demielinising disease), 피부염, 홍채섬모체염 (iridocyclitis)/포도막염/눈 신경염 (ophthalmic neuritis), 허혈성 재관류 손상, 허혈성 뇌졸중, 청소년 류마티스 관절염, 자가면역성 장병증, 자가면역성 청력 상실, 자가면역성 림프증식 증후군, 자가면역성 심근염, 자가면역성 조기 난소부전 및 안검염을 포함하지만, 이들로 한정되는 것은 아니다. 또한, 항체는 상기 열거된 장애들의 임의 조합을 치료할 수 있다.
본원에서, 용어 "TNFα 활성이 유해한 장애"는, 장애를 앓고 있는 개체에서 TNFα의 존재가 확인되었거나, 또는 장애의 병리생리학에 원인이거나 또는 장애 악화에 기여하는 요소로 의심되는, 질환 및 기타 장애를 포함한다. 즉, TNFα 활성이 유해한 장애는, TNFα 활성이 증상 및/또는 장애의 진행을 완화시킬 것으로 예상되는 장애이다. 이러한 장애는, 예를 들어, 장애를 앓고 있는 개체의 체액에서 검출될 수 있는 TNFα의 농도 증가 (예, 개체의 혈청, 혈장, 윤활액 내 TNFα 농도 증가)에 의해, 예를 들어 전술한 항-TNFα 항체를 이용해 검출될 수 있다. TNFα 활성이 유해한 장애의 예들은 다수 존재한다. 특정 장애의 치료에 있어 장애에 적절한 항체 및 항체 단편의 사용은 아래에서 추가로 기술된다:
A. 패혈증
종양 괴사 인자는 패혈증의 병리생리학에서 확립된 역할을 수행하며, 저혈압, 심근 억제 (myocardial suppression), 혈관 누출 증후군, 장기 괴사, 독성의 2차 매개인자의 방출 자극 및 응고 케스케이드의 활성화를 포함하는 생물학적 효과를 나타낸다 (예, Moeller A., et al.(1990), Cytokine 2:162-169; 미국 특허 5231024 Moeller et at.; 유럽 특허 260610 B1 Moeller A.; Tracey K.J. and Cerami A. (1994) Annu. Rev. Med. 45:491-503; Russel D. and Thompson R.C. (1993) Curr. Opin. Biotech. 4:714-721). 이에, 본 발명에 따른 인간 항체 및 항체 단편을 사용해, 패혈증 쇼크, 내독소 쇼크, 그람 음성 박테리아에 의해 유발된 패혈증 및 독성 쇼크 증후군 등의, 임의의 임상 증상을 나타내는 패혈증을 치료할 수 있다.
아울러, 패혈증을 치료하기 위해, 본 발명에 따른 항-TNFα 항체 및 항체 단편은, 인터루킨-1 저해제 (PCT 공개번호 WO 92/16221 및 WO 92/17583), 사이토카인 인터루킨-6 (예, PCT 공개번호 WO 93/11793) 또는 혈소판 활성화 인자 길항제 (예, 유럽 특허 출원번호 EP 374 510)와 같이, 패혈증을 추가로 완화시킬 수 있는, 하나 이상의 치료학적 물질과 함께 투여될 수 있다. 패혈증을 치료하기 위한 병용 요법에 대한 다른 방법들은 세부항목 III에서 후술된다.
아울러, 바람직한 구현예에서, 본 발명에 따른 항-TNFα 항체 및 항체 단편은 혈청 또는 혈장 IL-6 농도가 치료 중에 500 pg/mL 보다 높은, 더 바람직하게 1000 pg/mL 보다 높은 패혈증 서브그룹 환자인 인간에게 투여된다 (PCT 공개번호 WO 95/20978 Daum, L., et al.).
B. 자가면역 질환
종양 괴사 인자는 다양한 자가면역 질환의 병리생리학에 역할을 하는 것으로 확인된 바 있다. 예를 들어, TNFα는 류마티스 관절염에서 조직 염증의 활성화에 관여하며, 관절 파괴를 유발한다 (예, Moeller A. et al.(1990), Cytokine 2:162-169; 미국 특허 5231024, Moeller et al.; 유럽 특허 260610 B1 Moeller A.; Tracey K.J. and Cerami A., supra; end W.P. and Dayer J.M. (1995) ath. Rheum. 38:151-160; Fava R.A. et al. (1993) Clin. Exp. Immunol. 94:261-266). 또한, TNFα는 당뇨병에서 섬세포의 사멸 촉진과 인슐린 내성 형성에 관여한다 (예, Tracey and Cerami, supra; PCT 공개번호 WO 94/08609). 또한, TNFα는 다발성 경화증에서 희소돌기신경교에 대한 세포독성을 야기하고, 염증반 (inflammatory plaque) 유도에 관여한다 (예, Tracey and Cerami, supra). 키메라 및 인간화된 뮤라인 항-hTNFα 항체는 류마티스 관절염을 치료하기 위해 임상적으로 실험된 바 있다 (예, Elliot M.J. et al. (1994); Lancet 344:1125-1127; Elliot M.J. et al. (1994) Lancet 344:1105-1110; Rankin E.C. et al. (1995) Br. J. Rheumatol. 34:334-342).
본 발명에 따른 인간 항체 및 항체 단편은 류마티스 관절염, 류마티스 척추염, 골관절염 및 통풍관절염 등의 염증, 알레르기, 다발성 경화증, 자가면역성 당뇨병, 자가면역성 포도막염 및 신장 증후군을 비롯하여 자가면역 질환, 특히 염증과 관련된 자가면역 질환을 치료하는데 사용될 수 있다. 전형적으로, 항체 또는 항체 단편은 전신으로 투여되며, 특정 장애의 경우에는 염증 부위에의 항체 또는 항체 단편의 국소 투여가 유리할 수 있다 (예, 단독으로 또는 PCT 공개번호 WO 93/19751에 기술된 사이클로헥산-일리덴 유도체와 조합하여, 류마티스 관절염의 경우 관절에 국소 투여 또는 당뇨병성 궤양에 국소 적용). 본 발명에 따른 항체 및 항체 단편은 또한 세부항목 III에 추가로 기술된 바와 같이 자가면역 질환을 치료하는데 사용되는 하나 이상의 추가적인 치료학적 물질과 함께 사용될 수 있다.
C. 감염 질환
종양 괴사 인자는 다양한 감염성 질환들에서 관찰되는 생물학적 효과를 발휘하는데 관여한다. 예를 들어, TNFα는 말라리아에서 뇌 염증 및 모세관 혈전증 및 경색 발병에 관여한다. 또한, TNFα는 수막염에서 뇌 염증 발생, 혈액-뇌 장벽 파괴 유도, 패혈증 쇼크 증후군 발병 및 다양한 경색의 활성화에 관여한다. 또한, TNFα는 후천성 면역결핍성 증후군 (AIDS)에서 중추 신경계 손상 유발, 바이러스 증식 자극 및 악액질 유도에 관여한다. 이에, 본 발명에 따른 항체 및 항체 단편은 세균성 수막염 (예, 유럽 특허 출원번호 EP 585 705), 뇌 말라리아, AIDS 및 AIDS-관련 합병증 (αC) (예, 유럽 특허 출원번호 EP 230 574) 등의 감염성 질환뿐만 아니라 이식으로 인한 이차성 사이토메갈로바이러스 감염 (예, Fietze, E., et al. (1994) Transplantation 58:675-680)을 치료하는데 사용될 수 있다. 본 발명에 따른 항체 및 항체 단편은 또한 감염 (예, 인플루엔자)으로 인한 열 및 근육통 및 감염으로 인한 악액질 (예, AIDS 또는 αC로 인한 이차성) 등의 감염성 질환과 관련된 증상을 완화하기 위해 사용될 수 있다.
D. 이식
종양 괴사 인자는, 동종이식 거부 반응 및 이식편대 숙주 질환 (GVHD)과, T 세포 수용체 CD3 복합체에 대한 랫 항체 OKT3를 신장 이식 거부 반응을 억제하기 위해 사용되는 경우에 관찰되는 유해한 반응 발생에서, 중요한 매개인자로 간주되어 왔다 (예, Eason J.D. et al. (1995) Transplantation 59:300-305; Suthanthiran M. and Strom T. B. (1994) New Engl. J. Med. 331:365-375). 이에, 본 발명에 따른 항체 및 항체 단편은, 동종이식 및 이종이식 거부 반응을 비롯한 이식 거부 반응을 억제하고, GVHD를 억제하기 위해 사용될 수 있다. 항체 또는 항체 단편은 단독으로 사용될 수 있지만, 더 바람직하게, 이는 동종이식에 대한 면역 반응 또는 GVHD를 억제하는 하나 이상의 다른 물질과 조합하여 사용된다. 예를 들어, 일 구현예에서, 본 발명의 항체 또는 항체 단편은 세포 표면 분자 CD25 (인터루킨-2 수용체-β), CD11a (LFA-1), CD54 (ICAM-1), CD4, CD45, CD28/CTLA4, CD80 (B7-1) 및/또는 CD86 (B7-2) 등의 면역 반응을 조절하는데 관여하는 다른 타겟에 대한 하나 이상의 항체와 조합하여 사용된다. 또 다른 구현예에서, 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편은 사이클로스포린 A 또는 FK506와 같은 하나 이상의 일반적인 면역억제제와 조합하여 사용된다.
E. 악성 종양
종양 괴사 인자는 악성 종양에서 악액질 유도, 종양 증식 자극, 전이 가능성 강화 및 세포독성 발현에 관여한다. 이에, 본 발명에 따른 항체 및 항체 단편은 악성 종양의 치료에, 종양 증식 또는 전이를 저해하기 위해 및/또는 악성 종양으로 인한 악액질을 완화하기 위해 사용된다. 항체 또는 항체 단편은 전신으로 또는 종양 부위에 국소적으로 투여될 수 있다.
F. 폐 장애
종양 괴사 인자는, 내피 백혈구 활성화 자극, 폐포세포에 대한 세포독성 인가 및 혈관 누출 증후군의 유도를 비롯하여, 성인 호흡 곤란 증후군 (αDS)의 병리생리학에 관여한다. 이에, 본 발명에 따른 항체 및 항체 단편은 성인 호흡 곤란 증후군 (예, PCT 공개번호 WO 91/04054), 쇼크 폐 (shock lung), 만성적인 폐 염증 질환, 폐 사르코이드증, 폐 섬유증 및 규폐증 등의 다양한 폐 장애를 치료하는데 사용될 수 있다. 본 발명에 따른 항체 및 항체 단편은 아래 세부항목 III에 후술한 바와 같이 폐 장애를 치료하는데 사용되는 하나 이상의 부가적인 치료학적 물질과 함께 투여될 수 있다.
G. 장 장애 (intestinal Disorder)
종양 괴사 장애는 염증성 장 장애의 병리생리학에 관여한다 (예, Tracy K.J., et al. (1986) Science 234:470-474; Sun X-M., et al. (1988) J. Clin. Invest. 81:1328-1331; MacDonald T.T., et al. (1990) Clin. Exp. Immunol. 81: 301-305). 키메라 뮤라인 항-TNFα 항체는 크론병 치료에 대해 임상적으로 실험된 바 있다 (van Dullemen H.M. et al.(1995) Gastroenterology 109:129-135). 본 발명에 따른 인간 항체 또는 항체 단편은, 또한, 2가지 증후군 크론병과 궤양성 대장염을 포함하여, 특발성 염증성 장 질환과 같은, 장 장애를 치료하는데 사용될 수 있다. 본 발명에 따른 항체 및 항체 단편은 또한 아래 세부항목 III에 후술한 바와 같이 장 장애를 치료하는데 사용되는 하나 이상의 부가적인 치료학적 물질과 함께 투여될 수 있다.
H. 심장 장애
본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편은 또한 심장 허혈증 (예, 유럽 특허 출원번호 EP 453 898) 및 심부전 (amyocardia) (예, PCT 공개번호 WO 94/20139)을 비롯하여 다양한 심장 장애를 치료하기 위해 사용될 수 있다.
I. 기타
본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편은 또한 TNFα 활성이 유해한 다양한 장애를 치료하는데 사용될 수 있다. TNFα 활성이 병리생리학에 관여하며, 따라서 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편를 이용해 치료될 수 있는, 그외 질환 및 장애의 예로는, 염증성 골 장애 및 골 흡수 질환 (예, Bertolini D.R., et al. (1986) Nature 319:516-518; Konig A., et al. (1988) J. Bone Miner. Res. 3:621-627; Lerner U.H. and Ohiin A. (1993) J. Bone Miner. Res. 8:147-155; 및 Shanka G. and Stern P.H. (1993) Bone 14:871-876), 간염, 예를 들어 알코올성 간염 (예, McClain C.J. and Cohen D.A. (1989) Hepatology 9:349-351; Felver M.E. et al. (1990) Alcohol Clin. Exp. Res. 14:255-259; 및 Hansen J. et al. (1994) Hepatology 20:461-474), 바이러스성 간염 (Sheron N. et al. (1991) J. Hepatol. 12:241-245; 및 Hussain M.J. et al. (1994) J. Clin. Pathol. 47:1112-1115), 및 전격성 간염 (fulminant hepatitis); 응고 장애 (예, van der Poll T. et al. (1990) N. Engl. J. Med. 322:1622-1627; van der Poll T. et al. (1991) Prog. Clin. Biol. Res. 367:55-60); 화상 (예, Giroir B.P. et al. (1994) Am. J. Physiol. 267:H118-124; Liu X.S. et al. (1994) Burns 20:40-44), 재관류 손상 (예, Scales W.E. et al. (1994) Am. J. Physiol. 26:1122-1127; Serrick Ρ. et al. (1994) Transplantation 58:1158-1162; Yao Y.M. et al. (1995) Resuscitation 29:157-168), 켈로이드 형성 (keloid formation) (예, McCauley R. L et al. (1992) J. Clin. Immunol. 12:300-308), 흉터 조직 형성; 고열 (hyperthermia); 치주 질환; 비만 및 방사선 독성 (radiation toxicity) 등이 있다.
"치료학적 유효량"은 치료 중인 질환의 하나 이상의 증상을 어느 정도 완화시키는 치료 중에 투여되는 치료학적 물질의 양으로서 간주된다.
용어 "만성적인 (chronic)" 투여는, 연장된 기간 동안 초기의 치료학적 효과 (활성)를 유지하기 위해, 급성 (단기간) 투여 방식에 반대되는, 물질(들)의 지속적인 (장기간) 투여를 의미한다.
"간헐적" 투여는 중단없이 연속적으로 수행되는 것이 아니라 본래 주기적인 치료를 의미한다.
본 명세서 및 후술한 청구항에서, 문맥상 달리 요구되지 않은 한, 용어 "가진다", "함유한다" 및 "포함한다", 또는 이들의 변형어, 예를 들어 "가지는", "가지고 있는", "등이 있다", "비롯하여", "포함한다" 또는 "포함하는"과 같은 용어들은 명시된 전체 (integer) 또는 전체로 된 그룹을 포함하는 의미로 이해되어야 할 뿐만 아니라, 임의의 다른 전체 또는 전체의 그룹을 제외하지 않는 것으로 이해되어야 한다.
발명의 상세한 설명
수성 조성물
본 발명은, 적절한 완충제(들) 중에 적량의 재조합 단일클론 항-TNFα 항체, 하나 이상의 적절한 안정화제 및 적절한 표면-활성 물질 및 등장제로부터 선택되는 기타 부형제를 포함하는, 선택적으로 동결건조될 수 있는, 새로운 개선된 수성 조성물에 관한 것이다. 상기한 조성물은 단백질 (항체) 응집물의 형성을 방지하고, 바람직한 기간 동안 치료학적 화합물의 효능과 안정성을 유지한다.
아달리무맵과 인플릭시맵은 재조합 단일클론 항-TNFα 항체의 예이다. 인플릭시맵은 키메라 항체의 일 예이다. 아달리무맵은 인간 항체의 일 예이다. 바람직한 구현예에서, 조성물에 사용되는 항체는 인간 항체이다. 더 바람직한 구현예에서, 조성물에 사용되는 항체는 인간 항-인간 TNFα 항체이다. 또 다른 구현예에서, 조성물은 D2E7, 및 D2E7과 다른 항체의 조합을 포함한다. 일반적으로 아달리무맵으로 알려진 D2E7 항체는 TNFα 결합에 대해 고 친화성, 낮은 해리 속도 및 높은 중화력을 가진다. 아달리무맵은 상표 Humira®로 제약 산업에서 구입가능하다. 본 명세서 전체에서 사용되는 명칭 아달리무맵 및 D2E7은 동일한 인간 단일클론 항체를 나타낸다. 바람직한 구현예에서, 단일클론 항체는 아달리무맵 또는 이의 항원-결합 영역 (antigen-binding portion)이다.
일부 구현예에서, 재조합 단일클론 항-TNFα 항체 또는 이의 항원-결합 영역은 일반적으로 최대 200 mg/mL의 치료학적 함량으로 존재한다. 바람직한 구현예에서, 치료학적 함량은 약 1 mg/mL 내지 약 150 mg/mL이다. 더 바람직한 구현예에서, 치료학적 함량은 약 1 mg/mL 내지 약 100 mg/mL이다. 더 바람직한 구현예에서, 치료학적 함량은 약 50 mg/mL 내지 약 100 mg/mL이다. 보다 더 바람직한 구현예에서, 치료학적 함량은 약 100 mg/mL이다.
본 발명의 수성 조성물은, 약학적 제제를 안정화하는 다른 약제학적으로 허용가능한 부형제가 조합된, 적절한 완충제 용액을 포함한다. 사용될 수 있는 적절한 완충제 용액은 당해 기술 분야에 공지된 군으로부터 선택되며, 문헌에서 찾아볼 수 있다. 일 구현예에서, 적절한 완충제 용액은, 비-제한적으로, 아세테이트 이온 기반의 완충제 물질 (또는 완충제 시스템)을 포함한다. 바람직한 구현예에서, 적절한 완충제는 아세테이트 완충제를 포함한다. 보다 더 바람직한 구현예에서, 아세테이트 완충제는 아세트산이 조합된 소듐 아세테이트 삼수화물로부터 선택된다.
완충제 용액은 일반적으로 약 1 mM 내지 약 100 mM의 농도로 사용된다. 바람직한 구현예에서, 완충제 농도는 약 1 mM 내지 약 50 mM이다. 더 바람직한 구현예에서, 완충제 농도는 약 1 mM 내지 약 20 mM이다. 보다 더 바람직한 구현예에서, 완충제 농도는 약 5 mM이다.
일부 구현예에서, 소듐 아세테이트 삼수화물은 최대 1.2 mg/mL의 함량으로 존재한다. 바람직한 구현예에서, 소듐 아세테이트 삼수화물의 함량은 약 0.4 mg/mL 내지 약 1.2 mg/mL이다. 더 바람직한 구현예에서, 소듐 아세테이트 삼수화물의 함량은 약 0.4 mg/mL 내지 약 0.5 mg/mL이다. 더 바람직한 구현예에서, 소듐 아세테이트 삼수화물의 함량은 0.436 mg/mL이다.
일 구현예에서, 액체 조성물은 사용되는 단일클론 항체에 따라 pH 4.0 내지 약 7.0 범위에서 유지된다. 바람직한 구현예에서, 사용된 완충제는 조성물의 pH를 약 4.5 내지 6.0 범위로 유지시킨다. 더 바람직한 구현예에서, pH는 약 5.0 내지 6.0에서 유지된다. 더 바람직한 구현예에서, pH는 약 5.5에서 유지된다.
상기 수성 조성물은 교반, 전단 (shearing), 고온, 동결 등과 같은 다양한 스트레스 효과로부터 단백질 조성물을 보호하기 위해 사용되는 약제학적으로 허용가능한 부형제인 적절한 표면-활성 물질을 포함한다. 적절한 표면-활성 물질로는, 비-제한적으로, 폴리소르베이트, 또는 폴록사머, 또는 폴리소르베이트와 폴록사머의 조합을 포함한다. 바람직한 구현예에서, 적절한 표면-활성 물질은 폴리소르베이트이다. 바람직한 구현예에서, 적절한 표면-활성 물질은 폴록사머이다. 바람직한 구현예에서, 적절한 표면-활성 물질은 폴리소르베이트와 폴록사머의 조합이다. 더 바람직한 구현예에서, 폴리소르베이트는 폴리소르베이트 20 또는 폴리소르베이트 80 (상표 Tween® 20 또는 Tween® 80)이다. 더 바람직한 구현예에서, 폴록사머는 폴록사머 188 (상표 Kolliphor P188®)이다. 다른 바람직한 구현예에서, 적절한 표면-활성 물질은 폴리소르베이트 20 / 폴리소르베이트 80 및 폴록사머 188의 조합이다.
일부 구현예에서, 폴리소르베이트 20은 최대 10 mg/mL의 함량으로 존재한다. 바람직한 구현예에서, 폴리소르베이트 20의 함량은 약 0.05 mg/mL 내지 약 10 mg/mL이다. 더 바람직한 구현예에서, 폴리소르베이트 20의 함량은 약 0.1 mg/mL 내지 약 1 mg/mL이다. 더 바람직한 구현예에서, 폴리소르베이트 20의 함량은 약 0.5 mg/mL이다.
일부 구현예에서, 폴리소르베이트 80은 최대 10 mg/mL의 함량으로 존재한다. 바람직한 구현예에서, 폴리소르베이트 80의 함량은 약 0.05 mg/mL 내지 약 10 mg/mL이다. 더 바람직한 구현예에서, 폴리소르베이트 80의 함량은 약 0.1 mg/mL 내지 약 1 mg/mL이다. 더 바람직한 구현예에서, 폴리소르베이트 80의 함량은 약 0.5 mg/mL이다.
일부 구현예에서, 폴록사머 188은 최대 10 mg/mL의 함량으로 존재한다. 바람직한 구현예에서, 폴록사머 188의 함량은 약 0.05 mg/mL 내지 약 10 mg/mL이다. 더 바람직한 구현예에서, 폴록사머 188의 함량은 약 0.1 mg/mL 내지 약 1 mg/mL이다. 더 바람직한 구현예에서, 폴록사머 188의 함량은 약 0.5 mg/mL이다.
일부 구현예에서, 폴리소르베이트 20 / 폴리소르베이트 80 및 폴록사머 188의 조합은 최대 10 mg/mL의 폴리소르베이트 80 및 최대 10 mg/mL의 폴록사머 188이다. 바람직한 구현예에서, 폴록사머 188의 함량은 약 0.05 mg/mL 내지 약 10 mg/mL이고, 폴리소르베이트 20 / 폴리소르베이트 80의 함량은 약 0.05 mg/mL 내지 약 10 mg/mL이다. 더 바람직한 구현예에서, 폴록사머 188의 함량은 약 0.1 mg/mL 내지 약 1 mg/mL이고, 폴리소르베이트 20 / 폴리소르베이트 80의 함량은 약 0.1 mg/mL 내지 약 1 mg/mL이다. 더 바람직한 구현예에서, 폴리소르베이트 20 / 폴리소르베이트 80의 함량은 약 0.5 mg/mL이고, 폴록사머 188의 함량은 약 1.0 mg/mL이다.
수성 조성물은 제조, 보관 및 사용 중에 화학적 및/또는 물리적 분해로부터 약제학적 활성 성분을 보호하는, 약제학적으로 허용가능한 부형제인 하나 이상의 적절한 안정화제를 포함한다. 일 구현예에서, 안정화제는, 비-제한적으로, 아미노산, 올리고당, 또는 이들의 적절한 유도체 또는 이들의 혼합물을 포함한다. 다른 바람직한 구현예에서, 적절한 안정화제는 트레할로스이다. 다른 바람직한 구현예에서, 적절한 안정화제는 프롤린이다. 다른 바람직한 구현예에서, 적절한 안정화제는 트레할로스와 프롤린의 조합이다. 다른 바람직한 구현예에서, 적절한 안정화제는 트레할로스와 아르기닌의 조합이다.
다른 구현예에서, 안정화제로서 사용될 수 있는 올리고당으로는 트레할로스를 포함한다.
일부 구현예에서, 트레할로스는 최대 150 mg/mL의 함량으로 존재한다. 바람직한 구현예에서, 트레할로스의 함량은 약 25 mg/mL 내지 약 150 mg/mL이다. 더 바람직한 구현예에서, 트레할로스의 함량은 약 50 mg/mL 내지 약 100 mg/mL이다. 더 바람직한 구현예에서, 트레할로스 이수화물의 함량은 약 80 mg/mL이다.
다른 구현예에서, 트레할로스와 아르기닌의 조합이 안정화제로서 선택된다. 일부 구현예에서, 트레할로스는 최대 150 mg/mL의 함량으로 존재하며, 아르기닌의 함량은 최대 1.0 mg/mL이다. 바람직한 구현예에서, 트레할로스의 함량은 약 25 mg/mL 내지 약 150 mg/mL이고, 아르기닌의 함량은 0.05 내지 1.0 mg/mL이다. 더 바람직한 구현예에서, 트레할로스의 함량은 약 50 mg/mL 내지 약 100 mg/mL이고, 아르기닌의 함량은 0.05 내지 0.2 mg/mL이다. 더 바람직한 구현예에서, 트레할로스 이수화물의 함량은 약 80 mg/mL이고, 아르기닌 하이드로클로라이드의 함량은 약 0.1 mg/mL이다.
이러한 다른 구현예에서, 안정화제로서 사용될 수 있는 아미노산은 프롤린이다.
일부 구현예에서, 프롤린은 최대 40 mg/mL의 함량으로 존재한다. 바람직한 구현예에서, 프롤린의 함량은 약 5 mg/mL 내지 약 40 mg/mL이다. 더 바람직한 구현예에서, 프롤린의 함량은 약 20 mg/mL 내지 약 35 mg/mL이다. 더 바람직한 구현예에서, 프롤린의 함량은 약 27 mg/mL이다.
일부 구현예에서, 트레할로스와 프롤린의 조합은 트레할로스 함량이 최대 150 mg/mL이고, 프롤린의 함량이 최대 40 mg/mL이다. 바람직한 구현예에서, 트레할로스의 함량은 약 25 mg/mL 내지 약 150 mg/mL이고, 프롤린의 함량은 약 5 mg/mL 내지 약 40 mg/mL이다. 더 바람직한 구현예에서, 트레할로스의 함량은 약 20 mg/mL 내지 약 50 mg/mL이고, 프롤린의 함량은 약 10 mg/mL 내지 약 20 mg/mL이다. 더 바람직한 구현예에서, 트레할로스 이수화물의 함량은 약 40 mg/mL이고, 프롤린의 함량은 약 13.5 mg/mL이다.
일부 구현예에서, 수성 조성물은 재조합 단일클론 항-TNFα 항체 50 내지 200 mg/mL, 소듐 아세테이트 삼수화물 0.4 내지 1.2 mg/mL, 트레할로스 25 내지 150 mg/mL 및/또는 프롤린 5 내지 40 mg/mL 또는 트레할로스 25 내지 150 mg/mL, 및 아르기닌 0.05 내지 0.5 mg/mL, pH 5.0 내지 6.0으로 적정하는데 필요한 함량의 빙초산, 폴리소르베이트 20 0.1 mg/mL 내지 1 mg/mL을 포함한다. 수성 조성물에 대한 바람직한 구현예에서, 재조합 단일클론 항-TNFα 항체는 아달리무맵이다. 더 바람직한 구현예에서, 조성물은 아달리무맵 50 내지 150 mg/mL, 소듐 아세테이트 삼수화물 0.436 mg/mL, 트레할로스 이수화물 80 mg/mL, pH 5.5로 적정하는데 필요한 함량의 빙초산, 폴리소르베이트 20 0.5 mg/mL을 포함한다. 더 바람직한 구현예에서, 조성물은 아달리무맵 50 내지 150 mg/mL, 소듐 아세테이트 삼수화물 0.436 mg/mL, 트레할로스 이수화물 80 mg/mL, 아르기닌 하이드로클로라이드 0.1 mg/mL, pH 5.5로 적정하는데 필요한 함량의 빙초산, 폴리소르베이트 20 0.5 mg/mL을 포함한다. 더 바람직한 구현예에서, 조성물은 아달리무맵 50 내지 150 mg/mL, 소듐 아세테이트 삼수화물 0.436 mg/mL, 프롤린 27 mg/mL, pH 5.5로 적정하는데 필요한 함량의 빙초산, 폴리소르베이트 20 0.5 mg/mL을 포함한다. 더 바람직한 구현예에서, 조성물은 아달리무맵 50 내지 150 mg/mL, 소듐 아세테이트 삼수화물 0.436 mg/mL, 트레할로스 이수화물 40 mg/mL, 프롤린 13.5 mg/mL, pH 5.5로 적정하는데 필요한 함량의 빙초산, 폴리소르베이트 20 0.5 mg/mL을 포함한다.
일부 구현예에서, 수성 조성물은 재조합 단일클론 항-TNFα 항체 50 내지 200 mg/mL, 소듐 아세테이트 삼수화물 0.4 내지 1.2 mg/mL, 트레할로스 25 내지 150 mg/mL 및/또는 프롤린 5 내지 40 mg/mL 또는 트레할로스 25 내지 150 mg/mL, 및 아르기닌 0.05 내지 0.5 mg/mL, pH 5.0 내지 6.0으로 적정하는데 필요한 함량의 빙초산, 폴리소르베이트 80 0.1 mg/mL 내지 1 mg/mL을 포함한다. 수성 조성물에 대한 바람직한 구현예에서, 재조합 단일클론 항-TNFα 항체는 아달리무맵이다. 더 바람직한 구현예에서, 조성물은 아달리무맵 50 내지 150 mg/mL, 소듐 아세테이트 삼수화물 0.436 mg/mL, 트레할로스 이수화물 80 mg/mL, pH 5.5로 적정하는데 필요한 함량의 빙초산, 폴리소르베이트 80 0.5 mg/mL을 포함한다. 더 바람직한 구현예에서, 조성물은 아달리무맵 50 내지 150 mg/mL, 소듐 아세테이트 삼수화물 0.436 mg/mL, 트레할로스 이수화물 80 mg/mL, 아르기닌 하이드로클로라이드 0.1 mg/mL, pH 5.5로 적정하는데 필요한 함량의 빙초산, 폴리소르베이트 80 0.5 mg/mL을 포함한다. 더 바람직한 구현예에서, 조성물은 아달리무맵 50 내지 150 mg/mL, 소듐 아세테이트 삼수화물 0.436 mg/mL, 프롤린 27 mg/mL, pH 5.5로 적정하는데 필요한 함량의 빙초산, 폴리소르베이트 80 0.5 mg/mL을 포함한다. 더 바람직한 구현예에서, 조성물은 아달리무맵 50 내지 150 mg/mL, 소듐 아세테이트 삼수화물 0.436 mg/mL, 트레할로스 이수화물 40 mg/mL, 프롤린 13.5 mg/mL, pH 5.5로 적정하는데 필요한 함량의 빙초산, 폴리소르베이트 80 0.5 mg/mL을 포함한다.
일부 구현예에서, 수성 조성물은 재조합 단일클론 항-TNFα 항체 50 내지 200 mg/mL, 소듐 아세테이트 삼수화물 0.4 내지 1.2 mg/mL, 트레할로스 25 내지 150 mg/mL 및/또는 프롤린 5 내지 40 mg/mL 또는 트레할로스 25 내지 150 mg/mL, 및 아르기닌 0.05 내지 0.5 mg/mL, pH 5.0 내지 6.0으로 적정하는데 필요한 함량의 빙초산, 폴록사머 188 0.1 mg/mL 내지 1 mg/mL을 포함한다. 바람직한 구현예에서, 재조합 단일클론 항-TNFα 항체는 아달리무맵이다. 더 바람직한 구현예에서, 조성물은 아달리무맵 50 내지 150 mg/mL, 소듐 아세테이트 삼수화물 0.436 mg/mL, 트레할로스 이수화물 80 mg/mL, pH 5.5로 적정하는데 필요한 함량의 빙초산, 폴록사머 188 1 mg/mL을 포함한다. 더 바람직한 구현예에서, 조성물은 아달리무맵 50 내지 150 mg/mL, 소듐 아세테이트 삼수화물 0.436 mg/mL, 트레할로스 이수화물 80 mg/mL, 아르기닌 하이드로클로라이드 0.1 mg/mL, pH 5.5로 적정하는데 필요한 함량의 빙초산, 폴록사머 188 1 mg/mL을 포함한다. 더 바람직한 구현예에서, 조성물은 아달리무맵 50 내지 150 mg/mL, 소듐 아세테이트 삼수화물 0.436 mg/mL, 프롤린 27 mg/mL, pH 5.5로 적정하는데 필요한 함량의 빙초산, 폴록사머 188 1.0 mg/mL을 포함한다. 더 바람직한 구현예에서, 조성물은 아달리무맵 50 내지 150 mg/mL, 소듐 아세테이트 삼수화물 0.436 mg/mL, 트레할로스 이수화물 40 mg/mL, 프롤린 13.5 mg/mL, pH 5.5로 적정하는데 필요한 함량의 빙초산, 폴록사머 188 1.0 mg/mL을 포함한다.
나아가, 상기한 조성물은 당해 기술 분야의 당업자들에게 잘 알려진 하나 이상의 다른 적절한 부형제를 추가적으로 포함할 수 있다.
상기한 조성물은 정맥내, 피하 또는 근육내 투여에 적합하다.
일부 구현예에서, 액제 조성물은, 0시간대의 안정성 측정값과 비교해 단백질 응집 프로세스 또는 변형이 발생하지 않는, 효과에 대한 보관 안정성을 유지한다.
치료 방법 및 수성 조성물의 용도
다른 구현예에서, 본 발명은 본 발명의 약학적 조성물을 치료학적 유효량으로, 아달리무맵으로 효과적으로 치료될 수 있는 질환 또는 장애를 앓을 수 있는 포유류에 투여하는 것을 포함하는, 포유류 치료 방법에 관한 것이다.
바람직한 구현예에서, 포유류는 인간이다.
제공된 조성물로 치료될 수 있는 질환 또는 장애로는, 비-제한적인 예로, 활동성 (중등도 내지 중증의) 류마티스 관절염, 활동성 건선성 관절염, 활동성 강직성 척추염, 만성 (중등도 내지 중증의) 판상 건선, (중등도 내지 중증의) 궤양성 대장염, 축성 척추관절염, 활동성 화농 한선염, 청소년 특발성 관절염, (중등도 내지 중증의) 크론병, 포도막염, 활동성 부착부염-관련 관절염 등이 있다. 본 발명의 조성물로 치료될 수 있는 부가적인 질환 또는 장애는 미국 특허 6090382 및 8216583에 기술된 것을 포함하며, 관련 내용은 원용에 의해 본 명세서에 포함된다.
제공된 약학적 조성물은 전신 주사에 의해, 예를 들어, 정맥내 또는 피하 주사에 의해, 또는 근육내 주사에 의해; 또는 관련 부위에의 주사 또는 적용 (application)에 의해, 예를 들어, 부위가 수술 중에 노출되는 경우, 부위에의 직접 주사 또는 직접 적용에 의해; 또는 국소 적용에 의해 치료가 필요한 개체에게 투여될 수 있다.
일 구현예에서, 본 발명은 제공된 아달리무맵 조성물들 중 하나를 치료학적 유효량으로 필요한 포유류에게 투여하는 것을 포함하는 류마티스 관절염의 치료 및/또는 예방 방법에 관한 것이다.
제공된 조성물 내 아달리무맵의 치료학적 유효량은 치료할 병태, 병태의 중증도, 이전 치료 및 환자의 병력과 치료제에 대한 반응에 따라 결정된다. 적절한 용량은, 1회 투여 또는 수회 투여로 환자에게 투여될 수 있도록, 주치의의 판단에 따라 조정될 수 있다.
일 구현예에서, 아달리무맵의 성인 투여 당 유효량 (effective amount per adult dose)은 약 1 내지 500 mg/m2, 또는 약 1 내지 200 mg/m2, 또는 약 1 내지 40 mg/m2, 또는 약 5 내지 25 mg/m2이다.
다른 구현예에서, 플랫 투여량 (flat dose)이 투여될 수 있으며, 그 함량은 2 내지 500 mg/dose, 2 내지 100 mg/dose 또는 약 10 내지 80 mg/dose 범위일 수 있다.
투여량을 주당 1회 보다 더 자주 투여할 경우, 예시적인 투여량 범위는 전술한 투여량 범위와 동일하거나 또는 낮으며, 바람직하게는 주당 2회 이상 투여량 범위 25 내지 100 mg/dose로 투여된다.
다른 구현예에서, 주사에 의한 투여로 허용되는 투여량은 80 내지 100 mg/dose 또는 다른 예로 투여 당 80 mg을 포함한다.
투여는 매주, 2주 간격 또는 수주 간격 (예, 2-8)으로 실시될 수 있다.
일 구현예에서, 아달리무맵은 1회 피하 (SC) 주사에 의해 투여량 40 mg으로 투여된다.
일부 경우에, 환자의 병태 개선은 약학적 조성물을 최대 약 100 mg의 투여량으로 주당 1-3회로 적어도 3주간 투여함으로써 달성될 수 있다. 원하는 수준의 개선을 달성하기 위해, 장기간의 치료가 필요할 수도 있다. 불치성의 만성적인 병태인 경우에는, 치료 용법은 무한정 계속될 수 있다. 소아 환자 (4-17세)의 경우, 적합한 치료 용법은 주당 1회 이상으로 아달리무맵을 0.4 mg/kg - 4 mg/kg의 투여량으로 투여하는 것을 포함할 수 있다.
다른 구현예에서, 본 발명의 약학적 제형은 벌크 제형 (bulk formulation)으로 준비될 수 있으며, 이와 같이, 약학적 조성물의 구성성분들은 투여에 필요한 양 보다 많은 함량으로 존재하며, 투여 전에 적절하게 희석된다.
약학적 조성물은 단일한 치료학적 물질 (single therapeutic agent)로서 또는 필요에 따라서는 부가적인 치료학적 물질과 조합하여 투여될 수 있다. 즉, 일 구현예에서, 제시된 치료 및/또는 예방 방법은 치료학적 유효량의 다른 활성 물질의 투여와 조합하여 사용된다. 다른 활성 물질은 본 발명의 약학적 조성물의 투여 전, 투여 중 또는 투여 후에 투여될 수 있다. 다른 활성 물질은 제공된 조성물의 일부로서, 또는 다른 예로, 별개의 제형으로서 투여될 수 있다.
제공된 약학적 조성물의 투여는 비경구, 경구, 볼, 코, 직장, 복막내, 진피내, 경피, 피하, 정맥내, 동맥내, 심장내, 뇌실내, 두개강내, 기관내, 척추강내, 근육내 주사, 유리체강내 주사 및 국소 적용 등의 다양한 방식으로 수행될 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 특히 비경구 투여, 즉, 피하, 근육내, 정맥내, 복막내, 척수내, 관절내, 활액내 및/또는 척수강내 투여로 사용가능한다. 비경구 투여는 볼루스 주사 또는 연속 주입에 의해 수행될 수 있다. 주사용 약학적 조성물은 예를 들어 단위 용량 형태 (unit dosage form)일 수 있지만, 앰플, 바이얼, 사전충전된 시린지 또는 보존제가 첨가된 다회-용량 용기 내에 존재하는 것으로 한정되는 것은 아니다. 또한, 최근 다수의 약물 전달 방식들이 개발되었으며, 본 발명의 약학적 조성물은 이러한 새로운 방법에 의해, 예를 들어, Inject-ease®, Genject®, GenPen®와 같은 주사기, 및 MediJector® 및BioJector® 와 같은 바늘이 없는 디바이스 (needleless device)에 의해 투여하기 적합하다. 본 발명의 약학적 조성물은 또한 개발될 투여 방식에 맞게 변형될 수 있다. 또한, Langer, 1990, Science, 249:1527-1533을 참조한다.
제공된 약학적 조성물은 또한 데포 제제 (depot preparation)로서 제형화될 수 있다. 이러한 장기간 작용하는 제형은 이식 (예, 피하 또는 근육내)에 의해 또는 근육내 주사에 의해 투여될 수 있다. 따라서, 예를 들어, 제형은 적절한 폴리머 물질 또는 소수성 물질 (예, 허용가능한 오일 중의 에멀젼) 또는 이온 교환 수지를 사용해 또는 난용성 유도체, 예를 들어 난용성 염을 이용해 변형될 수 있다.
약학적 조성물은, 필요에 따라, 바이얼, 패키지 또는 분배 디바이스 내에 제공될 수 있으며, 이는 활성 성분을 포함하는 하나 이상의 단위 용량 형태를 함유할 수 있다. 일 구현예에서, 분배 디바이스는 주사용으로 준비된 액체 제형을 단일 용량 (single dose)으로 포함하는 시린지를 포함할 수 있다. 시린지는 투여 설명서를 동반할 수 있다.
다른 구현예에서, 본 발명은 본 발명의 약학적 수성 조성물을 포함하는 키트 또는 용기 (container)를 제공한다. 약학적 수성 조성물 내 폴리펩타이드의 농도는 광범위한 범위에서 변경될 수 있지만, 일반적으로는 수성 제형의 약 1 내지 약 200 mg/mL 범위이다. 또한, 키트는 사용 설명서를 동반할 수 있다.
제조 방법
상기 조성물의 제조 방법은 수상에 아세테이트 완충제를 첨가한 다음, 임의 순서로 다음과 같은 물질을 첨가하는 것을 포함한다: 삼투질 및/또는 트레할로스, 프롤린 또는 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 안정화제; 재조합 단일클론 항-TNFα 항체; 폴리소르베이트 20, 폴리소르베이트 80, 폴록사머 188 또는 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 표면-활성 물질.
기법
1. 시험 샘플에서 단백질 농도 측정.
단백질 농도는 UV 분광광도계를 사용해 UV-분광광도계 플레이트에서 280 nm 파장 하에 측정하였다.
각 샘플을 적절한 위약 용액으로 ~0.5 mg/mL 농도로 희석하였다. 희석한 샘플 150 ㎕를 UV 분광광도계 플레이트의 웰에 넣었다. 플레이트 용액의 광학 밀도를 파장 280 nm에서 플레이트-리더를 사용해 측정하였다. 적절한 위약 용액을 기준 용액으로 사용하였다.
mg/mL 수준의 단백질 농도 (C)를 하기 식으로 계산하였다:
Figure pct00001
A280은 280 nm 파장에서의 광학 밀도 값이고;
ε는 시험 단백질의 여기 값이고;
b는 샘플의 총 희석율이고;
l은 플레이트 웰의 층 두께이다; 150 ㎕의 경우 l = 0.42 cm.
2. 완충제 교체 및 샘플 농도.
샘플의 투석여과 (diafiltration) 및 농축은 가압 하에 Stirred Cell (Millipore) 농축 셀에서 수행하였다.
3. "PEG 응집"
PEG 6000 용액의 제조.
시험 첨가제 제형 내 중량 농도가 20-25%인 PEG 6000 용액을 준비하였다. 제조한 용액은 0.45 ㎛ 듀라포어 필터를 통해 여과하였다.
웰 당 PEG6000 농도 0 내지 18% 및 웰 당 단백질 농도 1 mg/mL이 되도록, 계산된 함량의 샘플, 첨가제 용액 및 20-25% PEG 6000 용액을 96웰 UV 분광광도계 플레이트로 이동시켰다. 웰 내 제조된 용액들 모두 파이펫팅에 의해 잘 혼합하였다.
다음으로, 용액의 탁도를 가시적으로 평가하였으며, 용액의 광학 밀도를 400 nm 파장에서 측정하였다. 샘플의 안정성이 낮을수록 더 낮은 PEG 6000 농도에서 가시적인 응집물(혼탁)이 형성될 것이다. 용액의 탁도는 용액 제조 후 적어도 1일 이후에도 평가하였다.
4. 동적 광 산란 (DLS) 기법을 이용한 단백질 동질성 및 응집점 측정.
시험 샘플의 동질성 측정은 Zetasizer Nano ZSP에서 크기 측정 모드로 수행하였다. 이를 위해, 용액 0.05 mL을 깨끗한 (dust-free) 일회용 플라스틱 큐벳에 넣었다.
● 분석 모델: 단백질 분석.
● 측정하기 전 30초간 온도 유지.
● 각 포인트에서, 리플리케이션 (replication) 3개에 대해 평균 13회 측정.
시험 단백질의 응집점 측정은 Zetasizer Nano ZSP에서 수행하였다. 이를 위해, 용액을 깨끗한 석영 큐벳에 넣고, 장치에 장착하여 서서히 온도를 높이면서 온도 추세 측정 모드에서 산란된 광의 세기를 측정하였다.
● 분석 모델: 단백질 분석.
● 온도 추세 (temperature trend), mod: 단백질 응집점. 50℃ -> 85℃까지, 1.5℃의 승온 간격.
● 측정하기 전 30초간 온도 유지.
● 각 포인트에서, 리플리케이션 1개에서 평균 15회 측정.
온도 추세를 장치의 소프트웨어를 사용해 그래프로 작성하였으며, 자동방식으로 단백질 응집점 (응집점)을 계산하였다.
5."50℃ 열 스트레스" 기법에 의한 열 안정성 측정.
시험 샘플을 2개로 나누어, 각각의 시험관에 넣었다: 각 제형에 대한 시험관 하나는 +4℃ 냉장고에 보관하고, 나머지 시험관 하나는 인큐베이터에 넣어, 지정된 시간 동안 50℃에서 인큐베이션하였다. "예열 (warm-up)" 기간이 끝나면, 인큐베이터에서 시험관을 꺼내 실온에서 약 15분간 세워두었으며, 항목에 따른 분석에 사용하였다.
6. "교반-검사 (Shake-Test)" 기법에 의한 콜로이드 안정성 측정.
시험 샘플을 각각 200 ㎕씩 2개로 나누어, 유리 바이얼에 넣었으며, 각 제형에 대해, 바이얼 1개는 +4℃ 냉장고에 보관하고, 나머지 바이얼 1개는 써모-교반기에 배치하여, 지정된 시간 동안 2-8℃에서 800 rpm으로 교반하였다. 스트레스 처리 완료 후, 써모-교반기에서 바이얼을 꺼내, 항목에 따른 분석에 사용하였다.
7. 저온농축 기법에 의한 콜로이드 안정성 측정.
시험 샘플을 2개로 나누어, 폴리머 시험관에 넣었다: 각 제형에 대해, 시험관 1개는 +4℃ 냉장고에 보관하고, 나머지 시험관은 냉동 챔버에 넣어, 지정된 시간 동안 -16 내지 20℃에서 보관하였다. 스트레스 처리가 끝나면, 냉동 챔버에서 시험관을 꺼내 완전히 용해될 때까지 실온에 세워두었으며, 용액을 볼텍스로 혼합한 다음 항목에 따른 분석에 사용하였다.
8. 크기 배제 고-성능 액체 크로마토그래피 (SE-HPLC) 기법에 의한 샘플의 순도 측정.
컬럼: Tosoh TSK-GelG3000SWXL 7.8 mm ID x 30 cm, cat. # 08541.
컬럼 온도: 25℃.
이동상의 유속: 0.7 mL/min.
주입 부피: 20 ㎕.
샘플 농도: 5 mg/mL.
검출 파장: 220 nm.
용출 시간: 23분.
이동상: 무수 다이소듐 하이드로포스페이트: 7.1 mg/mL.
염화나트륨: 17.54 mg/mL.
이동상의 pH를 오르토포스포르산을 사용해 7.0으로 조정하였다.
9. 캘리퍼 LabChip GX II 장치를 이용한 샘플 산-염기 프로파일 측정.
9.1. 샘플 준비.
샘플을 1 mg/mL 농도로 희석하였다. 수득한 용액 200 ㎕에 5 mg/mL 카르복시펩티다제 B (CpB) 용액 2 ㎕를 첨가하였다. 이를 교반한 다음 37℃에서 2시간 인큐베이션하였다. 시험 샘플을 아미콘 울트라 원심분리관에 넣어 물을 3회 교체하면서 투석하였으며, 2 mg/mL로 농축하였다.
9.2. 작업 용액 (work solution) 준비.
작업 용액과 분석 샘플이 든 플레이트는 HT 단백질 전하 변동 표지 키트를 사용해 제조사의 공정에 따라 준비하였다.
9.3. 칩 준비.
완충제를 이용한 칩 및 시험관의 준비는 단백질 전하 변동 완충제 키트의 완충제 용액을 사용해 제조사의 공정에 따라 수행하였다.
표준 운영 (standard operation)으로 분석을 개시한다. 단백질 전하 변형 68s 분석 (Protein Charge Variant 68s assay).
10. 캘리퍼 Labchip GX II 장치를 이용한 환원 조건 및 비-환원 조건에서의 샘플 순도 측정.
10.1. 분석 샘플 준비.
환원 조건의 완충제의 경우에는 1M DTT 24.5 ㎕, 그리고 비-환원 조건의 완충제의 경우에는 1M IAM 24.5 ㎕이 첨가된 HT 단백질 발현 샘플 완충제 700 ㎕를 사용하여, 변성 용액 및 환원 용액을 준비하였다. 샘플을 2 mg/mL 농도로 희석하였다. 각각의 샘플에 대해 2개의 마이크로시험관을 준비하였다 - 하나에는 변성 완충제 35 ㎕를, 다른 하나에는 환원 완충제 35 ㎕를 넣었다. 샘플을 5분간 100℃에서 변성시켰다. 시험관을 볼텍스로 혼합한 다음, 각 시험관에 물 70 ㎕을 첨가하여 혼합하였다. 각 샘플 44 ㎕을 분석을 위해 96웰 플레이트로 이동시켰다.
10.2. 작업 용액 준비 및 칩 로딩.
작업 용액 및 칩 준비는 HT 단백질 발현 시약 키트를 사용해 표준 공정에 따라 수행하였다. 표준 운영으로 분석을 개시한다. HT 단백질 발현 200 분석.
11. 이온-교환 (IE) HPLC를 이용한 샘플의 산-염기 프로파일 측정.
컬럼: DIONEX ProPack WCX-10 4 mm x 250 mm (Tosoh bioscience, Japan);
프리-컬럼: Dionex ProPack WCX-10G;
이동상: 용리제 A: 0.01 M 2-(N-모르폴리노)에탄설폰산 (MESA), pH 6.0
용리제 B: 0.01 M MESA, 0.4 M 염화나트륨, pH 5.5;
주입 부피: 40 ㎕;
유속: 0.5 mL/min;
컬럼 온도: 25℃;
자동샘플러 온도: 5℃;
검출 파장: 280 nm;
농도 구배: A 상 95 - 0 - 95 %.
12. 환원 및 비-환원 조건에서의 폴리아크릴아미드 겔 전기영동 (PAGE)에 의한 순도 측정.
유리 플레이트에서, 4% PAGE 농축 층과 분리 층: 환원 조건의 경우 12.5% PAG 및 비-환원 조건의 경우 8% PAG로 이루어진, PAG를 소듐 도데실 설페이트를 첨가하여 준비하였다.
수직 전기영동 장치의 조작 매뉴얼에 따라 전기영동 챔버를 조립 및 설치하였다. 샘플을 정제수로 최종 농도 1 mg/mL로 희석하여, 표본을 준비하였다. 40 ㎍에 해당되는 부피를 취하였으며, 준비한 시험 샘플의 표본을 3:1 (v/v)의 비율로, 2-머캅토에탄올 (환원 조건) 첨가 및 무첨가 (비-환원 조건)된 샘플 적용 완충제 용액과 혼합하였다. 수득한 용액을 (2-머캅토에탄올 함유 샘플의 경우) 3분간 99±1℃의 온도에서, 그리고 (2-머캅토에탄올 비-함유 샘플의 경우) 1분간 99±1℃의 온도에서 인큐베이션하였다. 용액들을 실온으로 냉각시킨 다음 혼합하여, 런닝 완충제 용액 층 하에 PAG 웰로 이동시켰다.
전기영동은 수 냉각 시스템을 이용하여 직류 방식으로 수행하였다. 전원 파라미터는 다음과 같이 설정하였다: 염료 선두 부분이 스택킹 겔 (stacking gel)을 통과할 때에는 전압을 110 V로 하였다. 염료 선두 부분이 아래 런닝 겔로 5-7 mm 진입하면, 전압을 180 V로 높였다. 염료 선두 부분이 겔의 아래 경계부에 도달하면, 전원을 껐다.
전기영동이 끝나면, 유리로부터 겔을 분리하고, 단백질을 실온에서 16-18시간 동안 고정 용액에서 고정시켰다. 그런 후, 겔을 (산성 블루 83 용액에서) 염색하고, 밴드가 명확하게 보일 때까지 헹구었다. 겔을 스캐닝하였다. 시험 샘플의 순도 및 불순물을 GelPro 소프트웨어로 분석하였다.
13. 비활성 (Specific Activity) 측정.
샘플-비활성은, TNFα에 특이적으로 결합하여 중화하는 능력과, 이후의 세포독성 효과 보유 능력, 및 액티노마이신 D의 존재 하에 TNFα에 증가된 민감성을 가진 변종 배양물인 WEHI-13 var 배양물 (섬유육종, 무스 무스쿨러스 (Mus musculus))의 사멸 유발 능력을 통해, 분석하였다. 샘플 조제물을 TecanEvo 200 robotic station을 사용해 준비하였으며, RPMI1640, 2 mM Gln, 10% FBS, 2.5 ㎍/mL 액티노마이신 D, 5 ㎍/mL 겐타마이신을 QM (정량화 매질 (quantification medium))로서 사용하였다.
시험 항체 샘플을 20회 이하의 희석 단계를 통해 50 ㎍/mL까지 희석하고, 로봇 스테이션에 배치하였다. TecanEvo200을 사용해, 10,000 내지 0.5 ng/mL의 범위에서 RS 및 IS의 각각의 희석물 3종을 배양 플레이트에서 제조하였으며, 수득한 희석물에 500 pg/mL TNFα 용액을 첨가하였다. 수득한 혼합물을 교반하고, 1시간 동안 실온에서 인큐베이션하였다.
인큐베이션한 다음, (0.5 ± 0.1) x 106 세포/mL WEHI-13 var 세포 현탁물을 첨가하였다. 플레이트를 CO2 인큐베이터에 넣고, (37 ± 1)℃, 5% CO2 및 습윤 대기 하에 20-24시간 동안 인큐베이션하였다.
인큐베이션 기간이 끝나면, 바이탈 염료 (vital dye) 알라마르 블루 (Alamar Blue)를 배양 플레이트에 첨가하고, 플레이트를 발색될 때까지 동일한 조건 하에 인큐베이션하였다. Infinite M200Pro 판독기를 사용해 여기/방출 파장 544/590 nm에서 형광 강도를 측정하였다. Magellan 7.2 소프트웨어로 형광 강도 대 단백질 농도 곡선을 작성하고; 작성된 곡선의 병렬 정렬을 구하였다. 시험 샘플의 상대적인 비활성을 기준 샘플 ED50/시험 샘플 ED50의 비로 구하였으며, %로 나타내었다.
아래 실시예들은 본 발명에 대한 최상의 이해를 구하기 위해 제공된다. 이들 실시예들은 단지 예시의 목적으로 제공된 것일 뿐 어떠한 방식으로도 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 해석되어서는 안된다.
본원에 인용된 모든 간행물, 특허 및 특허 출원들은 원용에 의해 본 명세서에 포함된다. 전술한 발명이 예로서, 명확하게 하기 위한 목적으로 일부 상세히 기술되었지만, 당해 기술 분야의 당업자라면 본원에 개시된 내용을 기초로 이해하는 바와 같이, 본 발명의 개시된 구현예들에 대한 사상 및 범위로부터 이탈하지 않는 범위 내에서 일부 변경 및 수정이 이루어질 수 있다.
실시예
실시예 1. 완충제 용액의 특성 선택.
시험 제형.
본 실험을 위해 4종의 완충제 용액을 선택하였으며, 오리지날 휴미라 제제 제형들 (단백질 함량이 각각 50 mg/mL 및 100 mg/mL인 제형들)을 대조군으로 사용하였다.
Figure pct00002
1.1. PEG 응집에 의한 콜로이드 안정성 측정.
"PEG 응집" 검사는 각 샘플에 대해 3세트로 수행하였다. 분석은 절차 3에 따라 수행하였다. 용액의 평균 광학 밀도 데이터를 표 1에 나타낸다. 이 결과는 또한 도 1에도 나타낸다.
표 1. 용액의 제조 후 평균 광학 밀도.
Figure pct00003
1.2. 동적 광 산란 (DLS) 기법을 이용한 단백질 응집점에 의한 열 안정성 측정.
분석은 절차 4에 따라 수행하였다. 그 결과는 표 2 및 도 4-8에 나타낸다.
1.3. 열 스트레스 50℃ 방법을 이용한 장기 노출시의 열 안정성 측정.
분석은 절차 5에 따라 수행하였다. 그 결과는 표 2에 나타낸다.
1.4. 결과.
표 2. 완충제 용액의 특성 선택 요약.
Figure pct00004
1.5. 실시예 1의 결론.
실험 결과를 기초로, 권고된 보관 제형 (추가적인 첨가제 제외)은 다음과 같다:
Figure pct00005
본 제형은 검사 샘플들 전체에서 가장 우수한 안정성을 나타내었다: 열 스트레스 노출시 불순물 증가율이 가장 낮았으며 (휴미라 2 제형과 동일한 0.02%), 18% PEG 6000 수준에서는 응집이 없었으며, 가장 높은 응집 온도 (74℃)를 나타내었다.
휴미라 1 제형의 아달리무맵은 권고된 제형 보다 열 안정성이 낮았다. 최소 콜로이드 및 열 안정성은 pH 5.0의 5 mM 사이트레이트 완충제 용액을 기반으로 하는 제형에서 관찰되었다.
실시예 2. 조성물의 pH 및 완충제 용량 최적화 (Buffer Capacity Optimization).
첫번째 실험 결과에 따르면, 아달리무맵은 pH 5.0의 아세테이트 완충제 용액 내에서 가장 우수한 안정성을 나타내었다. 종래 기술에 따르면, 아달리무맵을 포함하는 약학적 조성물에 대한 대부분의 특허 및 특허 출원들은 pH 4.0 내지 8.0의 용액을 지킨다. 즉, 이 섹션의 목적은 pH가 4 미만인 아세테이트 이온을 포함하는 안정적인 조성물을 수득할 가능성을 조사하는 것이었다.
시험 제형들.
Figure pct00006
2.1. PEG 응집에 의한 콜로이드 안정성 측정.
"PEG 응집" 검사는 각 샘플에 대해 3세트로 수행하였다. 분석은 절차 3에 따라 수행하였다. 용액의 평균 광학 밀도 데이타를 표 3에 나타낸다. 그 결과를 또한 도 2에도 나타낸다.
표 3. 용액의 제조 후 평균 광학 밀도 (400 nm).
Figure pct00007
2.2. 열 스트레스 50℃ 방법을 이용한 장기 노출시 열 안정성 측정.
분석을 절차 5에 따라 수행하였다.
2.3. "교반-검사" 기법에 의한 콜로이드 안정성 측정.
분석을 절차 6에 따라 수행하였다.
2.4. 저온농축 기법에 의한 콜로이드 안정성 측정.
분석을 절차 7에 따라 수행하였다.
표 4에 결과를 요약 개시하며, 열 스트레스 전 및 후, 교반 검사 및 저온농축에서의 샘플 품질 측정 결과를 나타낸다.
2.5. 결과.
표 4. 스트레스 전과 후의 샘플 품질 측정 결과 요약.
Figure pct00008
Figure pct00009
Figure pct00010
2.6. 실시예 2의 결론.
● 실험에서, 위약의 산성 용액에 아달리무맵을 함유시키면 pH 값이 현저하게 증가하는 것으로 확인되었다. 또한, pH 5.0 미만인 조성물은 투석 (환원 조건에서 Labchip Caliper에서의 낮은 순도) 및 열 스트레스 (사용된 모든 분석 방법들에서 스트레스 후 낮은 순도)에서 낮은 안정성을 나타내었다.
● 전체 조사한 샘플들 중 가장 안정적인 샘플은 pH 5.0-6.0의 5 mM 아세테이트 완충제 용액 중의 아달리무맵이었다. 이 샘플은 스트레스 노출시 순도 및 산-염기 프로파일 변화가 최소화되었다. 하지만, 아달리무맵 조성물을 제조하기 위해, 완충 용량 (buffer capacity)이 더 큰 용액을 사용하는 것도 가능하다.
실시예 3. 삼투성 물질 및 안정화제의 선택.
첫번째 실험의 결과에 따르면, 아달리무맵은 pH 5.0-6.0의 아세테이트 완충제 용액 내에서 가장 우수한 안정성을 나타내었다. pH 5.5인 제형을 삼투성 물질과 안정화제를 선택하는데 기본 제형으로 사용하였다.
시험 제형.
Figure pct00011
Figure pct00012
3.1. PEG 응집에 의한 콜로이드 안정성 측정.
"PEG 응집" 검사는 각 샘플에 대해 3세트로 수행하였다. 분석을 절차 3에 따라 수행하였다. 용액의 평균 광학 밀도 데이터를 표 6에 나타낸다. 그 결과는 또한 도 3에 도시한다.
표 6. 아달리무맵 용액의 제조 후 평균 광학 밀도.
Figure pct00013
3.2. 동적 광 산란 (DLS) 기법을 이용한 단백질 응집점에 의한 열적 안정성 측정.
분석을 절차 4에 따라 수행하였다.
3.3. 열 스트레스 50℃ 방법을 이용한 장기 노출시 열 안정성 측정.
분석을 절차 5에 따라 수행하였다.
3.4. 결과.
Figure pct00014
Figure pct00015
3.5. 실시예 3의 결과.
본 실험의 결과에 따르면, 아달리무맵 조성물에 기대되는 첨가제는 트레할로스 이수화물, 글리신, 프롤린, 메티오닌, 및 아르기닌 하이드로클로라이드이다. 폴리소르베이트 80, 폴리소르베이트 20, 폴록사머 188을 최종 약학적 조성물 스크리닝을 위한 표면-활성 물질로 선정하였다.
염화나트륨, 아르기닌, EDTA, 라이신, 구아니딘은 아달리무맵의 콜로이드 안정성에 부정적인 영향을 나타내었다.
염화나트륨, 라이신, 구아니딘은 아달리무맵의 열 안정성에 좋지 않은 영향을 나타내었다. 제형에 시스테인 함유시 항체의 완전한 단편화 (complete fragmentation)가 발생하였다. 제형에 EDTA를 첨가하였을 때 단백질의 산-염기 프로파일에 변화가 확인되었다.
실시예 4. 최종 약학적 조성물의 선정.
3번째 실험 결과를 토대로, 트레할로스 이수화물, 글리신, 프롤린, 메티오닌, 및 아르기닌 하이드로클로라이드를 기대되는 첨가제로 선택하였다. 폴리소르베이트 80, 폴리소르베이트 20, 폴록사머 188을 최종 약학적 조성물을 스크리닝하기 위한 표면-활성 물질로 사용하였다.
시험 제형 (mg/mL).
Figure pct00016
Figure pct00017
4.1. 열 스트레스 50℃ 방법을 이용한 장기 노출시 열 안정성 측정.
분석을 절차 5에 따라 수행하였다.
4.2. "교반-검사" 기법에 의한 콜로이드 안정성 측정.
분석을 절차 6에 따라 수행하였다.
4.3. 저온농축 기법에 의한 콜로이드 안정성 측정.
분석을 절차 7에 따라 수행하였다.
표 8 및 9에 결과를 요약 개시하며, 열 스트레스 전 및 후, 교반 검사 및 저온농축에서의 샘플 품질 측정 결과를 나타낸다.
4.4. 결과.
Figure pct00018
Figure pct00019
Figure pct00020
Figure pct00021
Figure pct00022
Figure pct00023
4.4. 실시예 4의 결론.
실험에서, 휴미라 제형 1 내 아달리무맵이 시험 샘플들 중 가장 열에 취약한 것으로 확인되었다. 120시간 50℃에서 열 스트레스에 노출시켰을 때, SE-HPLC에서 불순물 증가율이 가장 높았으며 (1.2%), 산-염기 프로파일도 가장 높은 수준으로 변하였다 (LabChip 캘리퍼 장치에서 전체 분획들의 총 절대 변화율이 >33%임). 휴미라 제형 1의 샘플의 콜로이드 안정성은 대체 제형들 (alternative formulation)과 비슷하였다.
휴미라 제형 2는 대체 제형들 중 하나와 비슷한 열 안정성을 나타내었다 (열 스트레스 노출시 순도 감소 0.38%). 그러나, 제형의 아달리무맵을 냉동-해동하였을 때, 현저한 단백질 응집이 발생하였다: 크기 배제 HPLC에서 응집 증가는 7% 보다 높았으며, 이로써 우연히 제제가 냉동될 경우 그 제제는 사용할 수 없다. 냉동 후 현저한 불순물 증가는 DLS에 의해서도 관찰되었다.
여러가지 첨가제가 첨가된 아세테이트 완충액을 기반으로 하는 대체 제형들에서는, 스트레스 적용시, 양호한 열 안정성과 콜로이드 안정성이 관찰되었다. 크기 배제 HPLC에서는 이들 제형들에서 불순물 증가 차이는 관찰되지 않았다. 또한, 표면-활성 물질은 15 mg/mL 농도 수준에서 아달리무맵 안정성에 대해 현저한 효과를 나타내지 않았다.
DLS를 이용해 스트레스에 노출된 샘플을 분석한 바, 제형내 아르기닌 하이드로클로라이드의 존재가 교반-검사시 불순물 증가를 줄여 주며, 메티오닌의 존재가 교반시 불순물 축적을 증가시키는 것으로, 확인되었다.
제형 12-29 (트레할로스 및 아르기닌 하이드로클로라이드 함유 제형, 및 또한 L-프롤린 함유 제형)에서 산-염기 프로파일은 최소한으로 달라졌다. 실험 결과에 따르면, 아달리무맵에 유망한 제형은 다음과 같다:
Figure pct00024
실시예 5. 아달리무맵 고 농축된 최종 약학적 제형에 대한 검증.
권고된 약학적 조성물의 안정성을 검증하기 위해, 아달리무맵을 50 mg/mL, 100 mg/mL 및 150 mg/mL 농도에서 6일간 50℃에서 열 스트레스에 노출시켰다.
시험 제형.
Figure pct00025
Figure pct00026
5.1. 열 스트레스 50℃ 방법을 이용한 장기 노출에서의 열 안정성 측정.
분석을 절차 5에 따라 수행하였다.
5.2. 결과.
Figure pct00027
Figure pct00028
Figure pct00029
Figure pct00030
Figure pct00031
Figure pct00032
일반적인 결론
1. 안정적인 아달리무맵 약학적 조성물에 대한 스크리닝을 여러 단계로 수행하였다: 완충제 용액의 특성 선택, 용액의 pH 및 완충 용량 선택, 삼투질 및 안정화제의 선택, 최종 약학적 조성물 선정 및 최종 고-농축된 아달리무맵 약학적 조성물에 대한 검증.
2. 조사시, 아달리무맵의 함유율이 90% 보다 높은 제형에 대한 열 안정성 및 콜로이드 안정성을 다음과 같은 방법으로 조사하였다: PEG 응집, 교반-검사, 냉동-해동, 후속적인 탁도 분석을 이용한 열 안정성 (UV 분광광도법), 순도 (LabChip, 캘리퍼 시스템을 이용하는 등의, 배제 HPLC, 동적 광 산란 및 겔 전기영동) 및 산-염기 프로파일 (LabChip, 캘리퍼 및 이온-교환 HPLC).
3. 실험에서 아달리무맵이 50 mg/mL 농도인 시판 제제에 사용된 오리지날 휴미라 제제 제형 (휴미라 1)은 본 발명의 제형들과 비교해 열 안정성이 낮았다.
4. 실험 결과, 아달리무맵 100 mg/mL인 시판 제제에 사용된 오리지날 휴미라 제제 제형 (휴미라 2)은 본 발명의 제형들과 비교해 냉동 및 해동 공정이 아달리무맵에 상당한 영향을 미치는 것으로 확인되었다.
5. pH 5.0-6.0의 아세테이트 완충제 용액을 기반으로 하며 트레할로스 이수화물, 아르기닌 하이드로클로라이드, 프롤린, 및 폴리소르베이트 20, 폴리소르베이트 80 및 폴록사머 188로 이루어진 군으로부터 선택되는 표면-활성 물질이 첨가된, 아달리무맵 약학적 조성물은, 오리지날 제형과 비교해 50-150 mg/mL 농도에서 우수한 열 및 콜로이드 안정성을 나타내었으며, 이는 본 발명의 내용이다.
아달리무맵에 최상인 첨가제 제형을 pH 5.5인 용액에서 선택하였다. pH 5.0-6.0의 제형에서의 아달리무맵의 안정성은 단백질 농도 50, 100 및 150 mg/mL인 샘플에서 검증되었다.
6. 아달리무맵 농도가 150 mg/mL인 본 발명의 약학적 조성물의 제조 방법은, SAS를 첨가하고 농축 후 한외여과 장치를 세척하는 후속적인 희석에서 단백질의 품질 저하 없이, 최대 200 mg/mL로 농축할 수 있다.

Claims (34)

  1. a) 재조합 단일클론 항-TNFα 항체;
    b) 아세테이트 이온 기반의 완충제 물질 (acetate ion based buffer agent) (또는 완충제 시스템);
    c) 트레할로스 및/또는 프롤린, 또는 트레할로스 및 아르기닌;
    d) 폴리소르베이트 20, 폴리소르베이트 80 또는 폴록사머 188, 또는 이들의 조합을 포함하는,
    정맥내 또는 피하 투여를 위한 약학적 수성 조성물 (aqueous pharmaceutical composition).
  2. 제1항에 있어서,
    상기 재조합 단일클론 항-TNFα 항체가 아달리무맵 (adalimumab)인, 약학적 수성 조성물.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서,
    상기 단일클론 항체의 농도가 50 내지 200 mg/mL인, 약학적 수성 조성물.
  4. 제1항에 있어서,
    상기 아세테이트 완충제 용액의 농도가 1 내지 100 mM인, 약학적 수성 조성물.
  5. 제1항에 있어서,
    상기 조성물의 pH가 4 내지 7인, 약학적 수성 조성물.
  6. 제1항에 있어서,
    상기 트레할로스의 농도가 25 내지 150 mg/mL인, 약학적 수성 조성물.
  7. 제1항에 있어서,
    상기 프롤린의 농도가 5 내지 40 mg/mL인, 약학적 수성 조성물.
  8. 제1항에 있어서,
    상기 트레할로스의 농도가 25 내지 150 mg/mL이고, 상기 아르기닌의 농도가 0.05 내지 0.5 mg/mL인, 약학적 수성 조성물.
  9. 제1항에 있어서,
    상기 폴리소르베이트 20의 농도가 0.05 mg/mL 내지 10 mg/mL인, 약학적 수성 조성물.
  10. 제1항에 있어서,
    상기 폴리소르베이트 80의 농도가 0.05 mg/mL 내지 10 mg/mL인, 약학적 수성 조성물.
  11. 제1항에 있어서,
    상기 폴록사머 188의 농도가 0.05 mg/mL 내지 10 mg/mL인, 약학적 수성 조성물.
  12. 제1항에 있어서,
    a) 50 내지 200 mg/mL의 재조합 단일클론 항-TNFα 항체;
    b) 0.4 내지 1.2 mg/mL의 소듐 아세테이트 삼수화물;
    c) 25 내지 150 mg/mL의 트레할로스 및/또는 5 내지 40 mg/mL의 프롤린, 또는
    25 내지 150 mg/mL의 트레할로스 및 0.05 내지 0.5 mg/mL의 아르기닌;
    d) pH 5.0 내지 6.0으로 적정하는데 필요한 함량의 빙초산;
    e) 0.1 mg/mL 내지 1 mg/mL의 폴리소르베이트 80을 포함하는, 약학적 수성 조성물.
  13. 제12항에 있어서,
    상기 재조합 단일클론 항-TNFα 항체가 아달리무맵인, 약학적 수성 조성물.
  14. 제12항에 있어서,
    a) 50 내지 150 mg/mL의 아달리무맵;
    b) 0.436 mg/mL의 소듐 아세테이트 삼수화물;
    c) 80 mg/mL의 트레할로스 이수화물;
    d) pH 5.5로 적정하는데 필요한 함량의 빙초산;
    e) 0.5 mg/mL의 폴리소르베이트 80을 포함하는, 약학적 수성 조성물.
  15. 제12항에 있어서,
    f) 50 내지 150 mg/mL 아달리무맵;
    g) 0.436 mg/mL의 소듐 아세테이트 삼수화물;
    h) 80 mg/mL의 트레할로스 이수화물 및 0.1 mg/mL의 아르기닌 하이드로클로라이드;
    i) pH 5.5로 적정하는데 필요한 함량의 빙초산;
    j) 0.5 mg/mL의 폴리소르베이트 80을 포함하는, 약학적 수성 조성물.
  16. 제12항에 있어서,
    a) 50 내지 150 mg/mL의 아달리무맵;
    b) 0.436 mg/mL의 소듐 아세테이트 삼수화물;
    c) 27 mg/mL의 프롤린;
    d) pH 5.5로 적정하는데 필요한 함량의 빙초산;
    e) 0.5 mg/mL의 폴리소르베이트 80을 포함하는, 약학적 수성 조성물.
  17. 제12항에 있어서,
    a) 50 내지 150 mg/mL의 아달리무맵;
    b) 0.436 mg/mL의 소듐 아세테이트 삼수화물;
    c) 40 mg/mL의 트레할로스 이수화물;
    d) 13.5 mg/mL의 프롤린;
    e) pH 5.5로 적정하는데 필요한 함량의 빙초산;
    f) 0.5 mg/mL의 폴리소르베이트 80을 포함하는, 약학적 수성 조성물.
  18. 제1항에 있어서,
    a) 50 내지 200 mg/mL의 재조합 단일클론 항-TNFα 항체;
    b) 0.4 내지 1.2 mg/mL의 소듐 아세테이트 삼수화물;
    c) 25 내지 150 mg/mL의 트레할로스 및/또는 5 내지 40 mg/mL의 프롤린, 또는 25 내지 150 mg/mL의 트레할로스 및 0.05 내지 0.5 mg/mL의 아르기닌;
    d) pH 5.0 내지 6.0으로 적정하는데 필요한 함량의 빙초산;
    e) 0.1 mg/mL 내지 1 mg/mL의 폴리소르베이트 20을 포함하는, 약학적 수성 조성물.
  19. 제18항에 있어서,
    상기 재조합 단일클론 항-TNFα 항체가 아달리무맵인, 약학적 수성 조성물.
  20. 제18항에 있어서,
    a) 50 내지 150 mg/mL의 아달리무맵;
    b) 0.436 mg/mL의 소듐 아세테이트 삼수화물;
    c) 80 mg/mL의 트레할로스 이수화물;
    d) pH 5.5로 적정하는데 필요한 함량의 빙초산;
    e) 0.5 mg/mL의 폴리소르베이트 20을 포함하는, 약학적 수성 조성물.
  21. 제18항에 있어서,
    a) 50 내지 150 mg/mL의 아달리무맵;
    b) 0.436 mg/mL의 소듐 아세테이트 삼수화물;
    c) 80 mg/mL의 트레할로스 이수화물 및 0.1 mg/mL의 아르기닌 하이드로클로라이드;
    d) pH 5.5로 적정하는데 필요한 함량의 빙초산;
    e) 0.5 mg/mL의 폴리소르베이트 20을 포함하는, 약학적 수성 조성물.
  22. 제18항에 있어서,
    a) 50 내지 150 mg/mL의 아달리무맵;
    b) 0.436 mg/mL의 소듐 아세테이트 삼수화물;
    c) 27 mg/mL의 프롤린;
    d) pH 5.5로 적정하는데 필요한 함량의 빙초산;
    e) 0.5 mg/mL의 폴리소르베이트 20을 포함하는, 약학적 수성 조성물.
  23. 제18항에 있어서,
    a) 50 내지 150 mg/mL의 아달리무맵;
    b) 0.436 mg/mL의 소듐 아세테이트 삼수화물;
    c) 40 mg/mL의 트레할로스 이수화물;
    d) 13.5 mg/mL의 프롤린;
    e) pH 5.5로 적정하는데 필요한 함량의 빙초산;
    f) 0.5 mg/mL의 폴리소르베이트 20을 포함하는, 약학적 수성 조성물.
  24. 제1항에 있어서,
    a) 50 내지 200 mg/mL의 재조합 단일클론 항-TNFα 항체;
    b) 0.4 내지 1.2 mg/mL의 소듐 아세테이트 삼수화물;
    c) 25 내지 150 mg/mL의 트레할로스 및/또는 5 내지 40 mg/mL의 프롤린, 또는 25 내지 150 mg/mL의 트레할로스 및 0.05 내지 0.5 mg/mL의 아르기닌;
    d) pH 5.0 내지 6.0으로 적정하는데 필요한 함량의 빙초산;
    e) 0.1 mg/mL 내지 1 mg/mL의 폴록사머 188을 포함하는, 약학적 수성 조성물.
  25. 제24항에 있어서,
    상기 재조합 단일클론 항-TNFα 항체가 아달리무맵인, 약학적 수성 조성물.
  26. 제24항에 있어서,
    a) 50 내지 150 mg/mL의 아달리무맵;
    b) 0.436 mg/mL의 소듐 아세테이트 삼수화물;
    c) 80 mg/mL의 트레할로스 이수화물;
    d) pH 5.5로 적정하는데 필요한 함량의 빙초산;
    e) 1.0 mg/mL의 폴록사머 188을 포함하는, 약학적 수성 조성물.
  27. 제24항에 있어서,
    a) 50 내지 150 mg/mL의 아달리무맵;
    b) 0.436 mg/mL의 소듐 아세테이트 삼수화물;
    c) 80 mg/mL의 트레할로스 이수화물 및 0.1 mg/mL의 아르기닌 하이드로클로라이드;
    d) pH 5.5로 적정하는데 필요한 함량의 빙초산;
    e) 1.0 mg/mL의 폴록사머 188을 포함하는, 약학적 수성 조성물.
  28. 제24항에 있어서,
    a) 50 내지 150 mg/mL의 아달리무맵;
    b) 0.436 mg/mL의 소듐 아세테이트 삼수화물;
    c) 27 mg/mL의 프롤린;
    d) pH 5.5로 적정하는데 필요한 함량의 빙초산;
    e) 1.0 mg/mL의 폴록사머 188을 포함하는, 약학적 수성 조성물.
  29. 제24항에 있어서,
    a) 50 내지 150 mg/mL의 아달리무맵;
    b) 0.436 mg/mL의 소듐 아세테이트 삼수화물;
    c) 40 mg/mL의 트레할로스 이수화물;
    d) 13.5 mg/mL의 프롤린;
    e) pH 5.5로 적정하는데 필요한 함량의 빙초산;
    f) 1.0 mg/mL의 폴록사머 188을 포함하는, 약학적 수성 조성물.
  30. 제1항 내지 제29항 중 어느 한 항에 따른 조성물을 유효량으로 투여하는 것을 포함하는, TNFα 매개 질환의 치료 방법.
  31. 제30항에 있어서,
    상기 TNFα 매개 질환이 a) - k)로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법:
    a) 활동성 (중등도 내지 중증의) 류마티스 관절염,
    b) 활동성 건선성 관절염,
    c) 활동성 강직성 척추염,
    d) 만성적인 (중등도 내지 중증의) 판상 건선,
    e) (중등도 내지 중증의) 궤양성 대장염,
    f) 축성 척추관절염,
    g) 활동성 화농 한선염,
    h) 청소년 특발성 관절염,
    i) (중등도 내지 중증의) 크론병,
    j) 포도막염,
    k) 활동성 부착부염-관련 관절염.
  32. TNFα 매개 질환을 치료하기 위한 제1항 내지 제29항 중 어느 한 항에 따른 조성물의 용도.
  33. 제32항에 있어서,
    상기 질환이 a) - k)로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법:
    a) 활동성 (중등도 내지 중증의) 류마티스 관절염,
    b) 활동성 건선성 관절염,
    c) 활동성 강직성 척추염,
    d) 만성적인 (중등도 내지 중증의) 판상 건선,
    e) (중등도 내지 중증의) 궤양성 대장염,
    f) 축성 척추관절염,
    g) 활동성 화농 한선염,
    h) 청소년 특발성 관절염,
    i) (중등도 내지 중증의) 크론병,
    j) 포도막염,
    k) 활동성 부착부염-관련 관절염.
  34. 아세테이트 완충화제 (acetate buffering agent)를 수상에 첨가한 다음, 하기 a) 내지 c)의 물질을 임의 순서로 첨가하는 것을 포함하는, 제1항 내지 제29항 중 어느 한 항에 따른 조성물의 제조 방법:
    a) 트레할로스, 프롤린, 아르기닌 또는 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 삼투질 (osmolyte) 및/또는 안정화제;
    b) 재조합 단일클론 항-TNFα 항체;
    c) 폴리소르베이트 20, 폴리소르베이트 80, 폴록사머 188 또는 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 표면-활성 물질.
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