KR20190086871A - 피조개 추출물을 유효성분으로 함유하는 알코올성 간 손상 억제용 조성물 - Google Patents
피조개 추출물을 유효성분으로 함유하는 알코올성 간 손상 억제용 조성물 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 피조개 추출물을 유효성분으로 함유하는 알코올성 간 손상 억제용 조성물에 관한 것으로, 상기 피조개 추출물, 바람직하게는 피조개 에탄올 추출물이 에탄올 손상에 의한 간세포 독성으로부터 간세포를 보호하고, 세포를 재생시키는 효과가 있고, 알코올 급여에 의해 간 손상을 유발한 동물모델에서 ALT(alanine aminotransferase) 및 AST(aspartate aminotransferase)의 혈중 농도를 저하시키는 효과가 우수하므로, 본 발명의 조성물은 알코올성 간 손상 억제용 건강기능식품 또는 알코올성 간 손상 질환의 치료제로 유용하게 사용할 수 있다.
Description
본 발명은 피조개 추출물을 유효성분으로 함유하는 알코올성 간 손상 억제용 조성물에 관한 것이다.
간은 우리 몸에서 각종 대사 작용, 해독, 분해, 합성 및 분비를 담당하는 매우 중요한 장기로, 그 기능을 자세히 살펴보면 다음과 같다. 첫째, 간은 에너지 대사를 관리하는 기능이 있어 음식물에서 흡수된 모든 영양소들로부터 에너지를 생산할 수 있는 물질로 대사시켜 전신에 공급하거나 저장한다. 둘째, 간은 약 2,000여종의 효소, 알부민, 응고인자들의 혈청단백, 담즙산, 인지질, 콜레스테롤 등의 지방을 합성하고 저장하며 분배하는 기능이 있다. 셋째, 간은 각종 대사 산물을 담관을 통해 십이지장으로 배설하는 기능 및 면역기능이 있어서 생명유지에 중요한 역할을 한다. 마지막으로, 간은 해독 및 분해 기능이 있어 약물, 독성물질, 술 등을 해독시킨다. 하지만, 이러한 간의 해독기능은 간세포를 손상시키기 쉬워 약물성, 독성, 알코올성 간질환 등을 유발시킬 수 있다.
알코올성 간질환은 임상증상에 따라 알코올성 지방간, 알코올성 간염, 알코올성 간경변증으로 크게 나눌 수 있고 대개 하루 60-80g의 알코올을 10년 정도 마실 때 발생한다. 알코올성 지방간은 과다한 알코올 섭취로 인해 간세포 안에 콜레스테롤과 중성지방이 축적되어 발생하는 것으로 금주만 하게 되면 곧 회복할 수 있으나, 계속 음주하게 되면 간염으로 발전하게 된다. 알코올성 간염은 간세포의 괴사와 염증이 발생한 상태로, 피로감, 식욕부진, 체중감소, 황달, 발열, 우상복부통증 등의 다양한 증상을 보이며, 이를 앓는 환자 중 약 40%는 알코올성 간경변증으로 발전하게 된다. 알코올성 간경변증은 정상 간으로 회복이 불가능한 상태로, 전신 피로감, 식욕감퇴, 복수, 식도정맥류, 출혈, 간성뇌증, 혼수 등의 다양한 증상을 보이며, 간염 바이러스에 의한 간경변증보다 예후가 불량한 것으로 알려져 있다.
한편, 피조개(Scapharca broughtonii)는 고막조개과에 속하는 패류이며, 형태는 난형으로 양쪽 조가비는 팽출(膨出)이 잘 되어 있고 고막류 중에서 가장 얇다. 조가비 겉면에는 백색인 볼록한 방사륵(放射勒)이 42~43조 있으며, 이 위에 흑갈색의 각피(殼皮)가 나 있다. 조가비의 안쪽은 백색이며, 각장 120㎜, 각고 90㎜, 각너비 75㎜가 되는 대형조개이다. 우리나라의 남해안과 동해안의 내만에 많이 분포하며, 간조선 부근에서부터 수심이 50m 되는 곳까지 살고, 저질의 모래개흙질인 곳에 주로 많이 산다.
피조개는 난생형으로 여름에 산란한 알은 해수 중에서 수정한 다음 발생하여 2~3주일간 부유생활(浮游生活)을 한 후, 족사를 이용하여 부착생활로 들어간다. 부착생활 기간은 약 2개월이며 부착한 장소의 환경에 따라 다르다. 부착생활 기간이 지나면 저질 속에 잠입하여 생활한다.
피조개는 주로 날것으로 먹고 있으나 최근에는 통조림 원료로서 이용하기 시작하였다. 생피조개는 100g당 총 열량이 81㎈이고, 그 조성은 수분 79.8g, 단백질 15.5g, 지방 0.5g, 탄수화물 3.5g 및 회분 0.7g이며, 그 밖에 비타민 A·B1·B2·C 및 나이아신(niacin) 등을 함유하고 있으며, 빈혈을 예방하고, 소화기능을 증진시키며, 시력보호, 피로해소, 간해독, 골밀도 유지 등에 효과가 있다고 알려져 있다. 이에 본 발명자들은 알코올 섭취에 의해 손상되기 쉬운 간세포의 보호효과를 안정성이 입증된 식품소재인 피조개 추출물을 이용하여 확인하였다.
한편, 한국공개특허 제2017-0013170호에는 알코올성 간 손상 예방 기능성 성분을 포함하는 인삼열매 추출물 및 그 제조방법이 개시되어 있으나, 본 발명의 피조개 추출물을 유효성분으로 함유하는 알코올성 간 손상 억제용 조성물에 관해 개시된 바 없다.
본 발명은 상기와 같은 요구에 의해 도출된 것으로, 피조개 추출물을 유효성분으로 함유하는 알코올성 간 손상 억제용 조성물을 제공하고, 상기 유효성분이 알코올에 의해 나타나는 간세포 독성을 방지하고, 알코올에 의해 손상된 간기능을 개선하는 것을 확인함으로써, 본 발명을 완성하였다.
상기 과제를 해결하기 위하여, 본 발명은 피조개 추출물을 유효성분으로 함유하는 알코올성 간 손상 억제용 건강기능식품 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 피조개 추출물을 유효성분으로 함유하는 알코올성 간 손상 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.
본 발명은 피조개 추출물을 유효성분으로 함유하는 알코올성 간 손상 억제용 조성물에 관한 것으로, 상기 피조개 추출물, 바람직하게는 피조개 에탄올 추출물이 에탄올에 의해 손상된 간세포를 보호하고 세포재생을 촉진하는 효과가 있고, 알코올 급여에 의해 간 손상이 유발된 동물모델에서 ALT(alanine aminotransferase) 및 AST(aspartate aminotransferase)의 혈중 농도를 저하시키는 효과가 있으므로, 본 발명의 조성물은 알코올성 간 손상 억제용 건강기능식품 조성물 또는 알코올성 간 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물의 소재로 사용할 수 있다.
도 1은 피조개 30%(v/v) 에탄올 추출물(A), 100%(v/v) 에탄올 추출물(B) 및피조개 효소 가수분해 추출물(C)의 세포독성을 확인한 결과이다.
도 2는 에탄올에 의해 손상된 간세포에 대한 피조개 30%(v/v) 에탄올 추출물(A), 100%(v/v) 에탄올 추출물(B) 및 피조개 효소 가수분해 추출물(C)의 세포손상 보호효과를 확인한 결과이다. UDCA(ursodeoxycholic acid)는 양성대조군이다.
도 3은 에탄올 및 피조개 추출물 투여에 따른 체중변화(A) 및 간 무게 변화(B)를 확인한 결과이다. 에탄올+실리마린은 양성대조군이고, 에탄올+100mg/kg은 에탄올 및 피조개 추출물 100mg/kg을 투여한 군이고, 에탄올+500mg/kg은 에탄올 및 피조개 추출물 500mg/kg을 투여한 군이며, 에탄올+1000mg/kg은 에탄올 및 피조개 추출물 1000mg/kg을 투여한 군이다.
도 4는 에탄올 및 피조개 추출물 투여에 따른 혈중 ALT(A), AST(B) 및 중성지방(C)의 함량 변화를 확인한 결과이다. 에탄올+실리마린은 양성대조군이고, 에탄올+100mg/kg은 에탄올 및 피조개 추출물 100mg/kg을 투여한 군이고, 에탄올+500mg/kg은 에탄올 및 피조개 추출물 500mg/kg을 투여한 군이며, 에탄올+1000mg/kg은 에탄올 및 피조개 추출물 1000mg/kg을 투여한 군이다. *, ** 및 ***은 Control 대비 값이 유의미하게 증가하였다는 것을 의미하며, *는 p<0.05, **는 p<0.01, ***는 p<0.001이다. #, ##, ###은 음성 대조군인 에탄올 투여군 대비 값이 유의미하게 감소하였다는 것을 의미하며, #은 p<0.05, ##은 p<0.01, ###은 p<0.001이다.
도 2는 에탄올에 의해 손상된 간세포에 대한 피조개 30%(v/v) 에탄올 추출물(A), 100%(v/v) 에탄올 추출물(B) 및 피조개 효소 가수분해 추출물(C)의 세포손상 보호효과를 확인한 결과이다. UDCA(ursodeoxycholic acid)는 양성대조군이다.
도 3은 에탄올 및 피조개 추출물 투여에 따른 체중변화(A) 및 간 무게 변화(B)를 확인한 결과이다. 에탄올+실리마린은 양성대조군이고, 에탄올+100mg/kg은 에탄올 및 피조개 추출물 100mg/kg을 투여한 군이고, 에탄올+500mg/kg은 에탄올 및 피조개 추출물 500mg/kg을 투여한 군이며, 에탄올+1000mg/kg은 에탄올 및 피조개 추출물 1000mg/kg을 투여한 군이다.
도 4는 에탄올 및 피조개 추출물 투여에 따른 혈중 ALT(A), AST(B) 및 중성지방(C)의 함량 변화를 확인한 결과이다. 에탄올+실리마린은 양성대조군이고, 에탄올+100mg/kg은 에탄올 및 피조개 추출물 100mg/kg을 투여한 군이고, 에탄올+500mg/kg은 에탄올 및 피조개 추출물 500mg/kg을 투여한 군이며, 에탄올+1000mg/kg은 에탄올 및 피조개 추출물 1000mg/kg을 투여한 군이다. *, ** 및 ***은 Control 대비 값이 유의미하게 증가하였다는 것을 의미하며, *는 p<0.05, **는 p<0.01, ***는 p<0.001이다. #, ##, ###은 음성 대조군인 에탄올 투여군 대비 값이 유의미하게 감소하였다는 것을 의미하며, #은 p<0.05, ##은 p<0.01, ###은 p<0.001이다.
본 발명은 피조개 추출물을 유효성분으로 함유하는 알코올성 간 손상 억제용 건강기능식품 조성물에 관한 것이다.
상기 피조개 추출물은 물, C1~C4의 저급 알코올 또는 이들의 혼합물을 용매로 이용하여 추출하는 것이며, 바람직하게는 에탄올을 용매로 이용하여 추출하는 것이지만, 이에 한정하는 것은 아니다.
본 발명의 일 구현 예에서, 상기 조성물은 ALT(alanine aminotransferase) 및 AST(aspartate aminotransferase)의 혈중 농도를 감소시킨다.
본 발명의 건강기능식품 조성물은 분말, 과립, 환, 정제, 캡슐, 캔디, 시럽 발포정 및 음료 중에서 선택된 어느 하나의 제형으로 제조될 수 있나, 간 손상을 예방하거나 개선하기 위해 섭취할 수 있는 제형인 것이면 특별히 제한되지 않는다.
본 발명의 건강기능식품 조성물을 식품첨가물로 사용하는 경우, 상기 건강기능식품 조성물을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다.
유효성분은 그의 사용 목적(예방 또는 개선)에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 일반적으로, 식품 또는 음료의 제조시 본 발명의 건강기능식품 조성물에 대하여 15 중량부 이하, 바람직하게는 10 중량부 이하의 양으로 첨가된다. 그러나 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취인 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로 사용될 수 있다.
상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 건강기능식품 조성물을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소시지, 빵, 초콜릿, 캔디류, 스낵류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 수프, 음료수, 차 드링크제 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강식품을 모두 포함한다.
또한, 본 발명의 건강기능식품 조성물은 식품, 특히 기능성 식품으로 제조될 수 있다. 본 발명의 기능성 식품은 식품 제조 시에 통상적으로 첨가되는 성분을 포함하며, 예를 들어, 단백질, 탄수화물, 지방, 영양소 및 조미제를 포함한다. 예컨대, 드링크제로 제조되는 경우에는 유효성분 이외에 천연 탄수화물 또는 향미제를 추가 성분으로서 포함할 수 있다. 상기 천연 탄수화물은 모노사카라이드(예컨대, 글루코오스, 프럭토오스 등), 디사카라이드(예컨대, 말토스, 수크로오스 등), 올리고당, 폴리사카라이드(예컨대, 덱스트린, 시클로덱스트린 등) 또는 당알코올(예컨대, 자일리톨, 소르비톨, 에리쓰리톨 등)인 것이 바람직하다. 상기 향미제는 천연 향미제(예컨대, 타우마틴, 스테비아 추출물 등)와 합성 향미제(예컨대, 사카린, 아스파르탐 등)를 이용할 수 있다.
상기 건강기능식품 조성물 외에 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 더 함유할 수 있다.
또한, 본 발명은 피조개 추출물을 유효성분으로 함유하는 알코올성 간 손상 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물에 관한 것이다.
본 발명에서 알코올성 간 손상 질환은 알코올성 지방간, 알코올성 간염 또는 알코올성 간경변증인 것이지만, 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 약학 조성물은 약학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 또는 희석제를 더 포함할 수 있다. 본 발명에 따른 조성물의 약학적 투여 형태는 단독으로 또는 타 약학적 활성 화합물과 결합뿐만 아니라 적당한 조합으로 사용될 수 있다.
본 발명에 따른 약학 조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제제, 외용제, 좌제 및 주사제의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다. 상기 약학 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로오스, 메틸 셀룰로오스, 미정질 셀룰로오스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유 등을 포함한 다양한 화합물 혹은 혼합물을 들 수 있다.
제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구 투여를 위한 고형 제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형 제제는 상기 피조개 추출물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트, 수크로오스 또는 락토오스, 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한, 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다.
비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔, 마크로골, 트윈 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로젤라틴 등이 사용될 수 있다.
본 발명의 약학 조성물의 바람직한 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 본 발명의 약학 조성물은 쥐, 생쥐, 가축, 인간 등의 포유동물에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁 내 경막 또는 뇌혈관 내(intracerebroventricular) 주사에 의해 투여될 수 있다.
이하, 제조예 및 실시예를 이용하여 본 발명을 더욱 상세하게 설명하고자 한다. 이들 제조예 및 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로 본 발명의 범위가 이들에 의해 제한되지 않는다는 것은 당해 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어 자명한 것이다.
제조예 1. 피조개 추출물의 제조
피조개(Scapharca broughtonii)는 보성군 벌교읍 (주)벌교꼬막에서 생물제품을 구매하여 사용하였으며, 2015년 12월 전남 보성군 벌교읍에서 채취한 후 1kg 단위로 동결시켜 실험에 사용하기 전까지 -40℃에서 보관하였다.
보관한 피조개 원료는 추출 전 상온에서 약 4시간 동안 해동시킨 후 피조개 대비 약 10배수(w/v)의 수돗물에 빠르게 3회 세척하여 탈염과정을 거쳤으며, 염화나트륨 함량은 염도계를 사용하여 자체적으로 검사하였다. 탈염이 완료된 피조개 원료는 탈각하여 사용하였다.
1) 피조개 에탄올 추출물의 제조
상기 탈염 후 탈각한 피조개를 분쇄한 후 분쇄물 100g을 30%(v/v) 에탄올 또는 100%(v/v) 에탄올 1ℓ에 각각 침지한 후 25±5℃의 진탕배양기(shaking incubator, DA-SIM-T, Dong a, Korea)에서 120rpm으로 3시간 동안 추출하였다. 추출 완료 후 여과지(Watman No.2)를 이용하여 여과한 다음 회전농축기(rotary evaporator, N-100v-W, Eyela, japan) 상에서 유기용매를 제거한 후 물 층은 동결 건조기(FDS8508. Ilshin biobase, Korea)에서 동결 건조시켜 각각 30%(v/v) 에탄올 추출물 또는 100%(v/v) 에탄올 추출물의 시료로 사용하였다.
2) 피조개 효소 가수분해 추출물의 제조
상기 탈염 후 탈각한 피조개를 100g을 끓는 물에 5분 동안 가열하였다. 가열된 피조개는 믹서기(7012S, Warning, USA)를 이용하여 3분 동안 분쇄시킨 후, 상기 분쇄물에 500㎖의 증류수를 혼합하였다. 혼합된 시료에 1g의 프로타멕스(protamex, 1.5AU/g)를 첨가하여 40℃ 항온수조(BF-10BF, biofree)에서 1시간 동안 반응시킨 후, 추가로 뉴트라제(neutrase 0.81)를 첨가하여 50℃ 항온수조(BF-10BF, biofree)에서 1시간 동안 반응시켰다. 효소반응 완료 후 가수분해물을 오토클레이브(AC-14, JEIO TECH, Korea)를 이용하여 100℃에서 30분 동안 반응시켜 효소를 불활성화시킨 후, 원심분리(3000×g, 10분)하여 상층액을 획득한 다음 상층액을 여과지(Watman No.2)를 이용하여 여과하고, 여과된 여액을 동결건조시켜 시료로 사용하였다.
실시예
1. 피조개 추출물의 알코올성 간세포 독성에 대한 보호효과 확인
1) 세포배양
본 발명에 사용한 세포주는 정상 간세포인 CCL-13(Chang liver cell)으로 ATCC(American Type Culture Collection)에서 구입하여 사용하였다. 3.7g NaHCO3, 1%(v/v) 항생물질, 10%(v/v) 소태아혈청(fetal bovine serum, FBS)이 함유된 DMEM(Dulbecco's modified eagle medium)을 사용하여 75cm2 플라스크에서 CCL-13 세포를 37℃, 5% CO2의 조건하에 배양하였으며, 2~3일에 한 번씩 계대배양(subculture)하며 세포주를 유지하였다.
2) 피조개 추출물의 세포독성 확인
제조예 1의 피조개 추출물이 세포독성을 나타내는 농도를 확인하고자 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide(MTT) 시약을 이용하여 Mosmann의 방법(1983)으로 세포 생존율을 측정하였다.
CCL-13 세포를 웰 당 1×104개의 세포수로 96-웰 플레이트에 분주하여 24시간 동안 배양하고, 그 후 배지를 제거하고 각 웰에 제조예 1의 시료를 첨가하여 CO2 배양기에서 24시간 동안 배양하였다. 그 후 배양 배지에 5mg/㎖ 농도로 제조한 MTT 용액을 배지의 10%(v/v)가 되도록 각 웰에 첨가하여 3시간 동안 배양한 후 배양액을 제거하고 DMSO(dimethyl sulfoxide)를 첨가하여 실온에서 10분 동안 반응시킨 뒤 마이크로플레이트 리더기(microplate reader)로 570nm에서 흡광도를 측정하였다. 세포독성은 시료 무처리군의 생존도 100%를 기준으로 시료 처리군의 상대적인 세포 생존율로 계산하였다.
그 결과, 도 1에 나타난 바와 같이 제조예 1의 피조개 추출물은 1000㎍/㎖ 농도까지 세포독성을 나타내지 않는 것을 확인하였다.
3) 알코올 독성 유도에 대한 피조개 추출물의 세포 재생효과 확인
알코올을 처리하여 세포독성을 유도한 후 피조개 추출물의 세포 재생효과를 상기의 Mosmann 방법(1983)을 이용하여 MTT 분석하였다.
CCL-13 세포를 웰 당 1×104개의 세포수로 96-웰 플레이트에 분주하여 12시간 동안 배양하고, 그 후 배지를 제거하고 각 웰에 세포 괴사 유발 물질인 알코올을 5%(v/v) 농도로 1시간 30분 동안 처리하였다. 그 후 PBS로 세척한 뒤 제조예 1의 시료를 투여하여 CO2 배양기에서 24시간 동안 배양하였다. 그 후 배양 배지에 5mg/㎖ 농도로 제조한 MTT 용액을 배지의 10%(v/v)가 되도록 각 웰에 첨가하여 3시간 동안 배양한 후 배양액을 제거하고 DMSO(dimethyl sulfoxide)를 첨가하여 실온에서 10분 동안 반응시킨 뒤 마이크로플레이트 리더기(microplate reader)로 570nm에서 흡광도를 측정하였다. 세포 재생효과는 시료 무처리군의 생존도 100%를 기준으로 시료 처리군의 상대적인 세포 재생효과로 계산하였다.
그 결과, 도 2에 나타난 바와 같이 피조개 효소 가수분해 추출물을 처리하였을 경우 세포 재생효과가 미약하였지만, 피조개 30%(v/v) 및 100%(v/v) 에탄올 추출물을 처리하였을 경우 세포 재생효과가 농도 의존적으로 나타나는 것을 확인하였다. 따라서 이후 동물실험은 피조개 30%(v/v) 에탄올 추출물을 이용하여 확인하였다.
실시예
2. 피조개 추출물의 알코올성 간 손상에 대한 간 보호효과를 확인하기 위한 동물모델의 제작
1) 실험동물
본 발명(시험번호:17-KE-336)은 중앙실험동물㈜(서울특별시 서초구 바우외로7길 7 건빌딩 5층)를 통하여 7주령의 특정병원체 부재(SPF) 마우스(C57BL/6JJmsSlc) 수컷을 구입하여 사용하였다. 구입한 동물은 일주일의 순화기간을 가졌다.
2) 사육환경
상기 동물은 23±3℃에서 55±15%의 습도가 유지되는 항온·항습 조건, 시간 당 10~20회의 환기횟수, 12시간 간격의 암주기(오전 8시 점등~오후 8시 소등) 및 150~300Lux의 조도로 설정된 주식회사 노터스 생명과학 설치류 사육구역 1호실에서 사육하였으며, 사육기간 중 동물실의 온도, 습도, 환기횟수 및 조도 등의 환경조건은 정기적으로 측정하며 모니터링하였다.
동물 사료는 ㈜카길애그리퓨리나에서 생산하는 실험동물용 사료를 공급받아 급이기에 넣고 자유롭게 섭취하도록 하였다. 물은 정수된 물을 폴리카보네이트제 음수병에 넣고 자유롭게 섭취하도록 하였다. 깔개는 나무깔개를 ㈜코아텍(경기도 평택시 진위면 동천리 406)으로부터 공급받아 사용하였다.
상기 동물은 실험기간 동안 설치류용 폴리카보네이트 사육상자(W170xL235xH125mm)에서 1 상자 당 5 마리 이하로 사육하였다. 사육상자, 깔개 및 물병은 주 1회 이상 교체하였고, 순화기간 중 건강한 것으로 판정된 동물들의 체중을 측정하고 순위화한 체중에 따라 각 군의 평균체중이 최대한 균일하게 분포하도록 무작위법으로 분배하여 실험을 진행하였다.
3) 알코올성 간 손상 유발
알코올성 간 손상 유발에서 피조개 추출물의 간 보호 효과를 확인하기 위해 표 1과 같이 총 6개의 그룹으로 나누어 실험을 진행하였다.
사료 섭취에 의한 알코올 흡수 방해 현상을 배제하기 위해 마우스는 에탄올 투여 전 18시간 동안 절식시켰고, 각 실험물질을 구강내 투여(PO)하였다. 상기 구강내 투여는 동물을 경배부 피부 고정법으로 고정하고, 경구투여용 존대를 이용하여 위 내에 직접 투여하는 방식으로 진행하였다. 제조예 1, 양성대조군인 실리마린 또는 부형제의 투여는 1일 1회씩 총 5일 동안 투여하였고, 에탄올은 실험 개시일로부터 6, 7 및 8일에 총 3회 투여하였다. 제조예 1의 시료 및 실리마린은 멸균주사용수를 이용하여 해당 농도로 조제하였으며, 0.2㎛ 필터를 이용하여 여과한 후 사용하였다. 투여액의 양은 마리당 0.1㎖이었다.
| 투여물질 | 동물 수 (마리) |
에탄올 (mg/kg/day) |
투여량 | 투여액 양 | 투여경로 | |
| G1 (정상대조군) |
- | 5 | - | - | - | - |
| G2 (에탄올 투여군) |
부형제 | 5 | 5000 | - | 0.1㎖/head | PO |
| G3 (양성 대조군) |
실리마린 | 5 | 5000 | 50 | 0.1㎖/head | PO |
| G4 | 피조개 30%(v/v) 에탄올 추출물 |
10 | 5000 | 100 | 0.1㎖/head | PO |
| G5 | 피조개 30%(v/v) 에탄올 추출물 |
10 | 5000 | 500 | 0.1㎖/head | PO |
| G6 | 피조개 30%(v/v) 에탄올 추출물 |
10 | 5000 | 1000 | 0.1㎖/head | PO |
실시예
3. 동물모델에서 피조개 추출물의 알코올성 간 손상에 대한 간 보호효과 확인
실시예 2의 동물은 실험 후 18시간 동안 절식시킨 후 에테르 흡입을 통해 1차 마취하고, 마취가 확인된 후 개복하여 후대정맥에서 주사기를 이용하여 채혈한 뒤, 복대동맥 및 후대정맥을 절단하여 방혈/치사시켰다. 후대정맥으로부터 채혈한 혈액은 3000rpm에서 10분 동안 원심분리하여 혈청과 혈구를 분리하였으며, 분리된 혈청은 시료 분석시까지 영하 70℃에서 보관하였다.
마우스의 체중은 실험 개시일 이후 매일 1회 측정하였으며, 부검일에 마지막으로 측정하였다. 부검 후 간을 적출하여 장기의 무게를 측정하였다.
1) 마우스 체중 및 간 무게 측정
상기 동물모델의 체중변화 및 간 무게를 측정한 결과 도 3에 나타난 바와 같이 그룹간의 차이가 거의 없었다.
추출물 투여에 따른 체중변화가 없는 것을 통해 피조개 30%(v/v) 에탄올 추출물은 동물모델에 독성을 나타내지 않는다는 것을 확인할 수 있었다.
2) 혈액의 생화학적 검사
상기 채혈 후 보관한 혈청 시료를 이용하여 혈중 중성지방 농도 및 간 손상 지표인 ALT, AST의 함량을 분석하였다.
그 결과, 도 4에 나타난 바와 같이 혈중 중성지방 농도는 에탄올 투여시 증가하였으며, 피조개 30%(v/v) 에탄올 추출물 투여에 따른 변화는 없었다.
ALT 및 AST의 함량은 정상 대조군(Control) 대비 에탄올 투여군에서 증가하였으며, 에탄올 및 피조개 30%(v/v) 에탄올 추출물을 투여한 군에서는 증가되었던 ALT 및 AST가 감소하는 것을 확인하였다. 피조개 30%(v/v) 에탄올 추출물은 투여 농도가 증가할수록 오히려 ALT 및 AST의 함량이 증가하였으므로, 피조개 30%(v/v) 에탄올 추출물을 저농도(100mg/kg)로 투여하는 것이 간 손상 개선을 위해서는 더욱 효과적이라는 것을 확인하였다.
Claims (5)
- 피조개 추출물을 유효성분으로 함유하는 알코올성 간 손상 억제용 건강기능식품 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 추출물의 용매는 물, C1~C4의 저급 알코올 또는 이들의 혼합물인 것을 특징으로 하는 알코올성 간 손상 억제용 건강기능식품 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 조성물은 ALT(alanine aminotransferase) 및 AST(aspartate aminotransferase)의 혈중 농도를 감소시키는 것을 특징으로 하는 알코올성 간 손상 억제용 건강기능식품 조성물.
- 피조개 추출물을 유효성분으로 함유하는 알코올성 간 손상 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
- 제4항에 있어서, 상기 알코올성 간 손상 질환은 알코올성 지방간, 알코올성 간염 또는 알코올성 간경변증인 것을 특징으로 하는 알코올성 간 손상 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020180004945A KR20190086871A (ko) | 2018-01-15 | 2018-01-15 | 피조개 추출물을 유효성분으로 함유하는 알코올성 간 손상 억제용 조성물 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020180004945A KR20190086871A (ko) | 2018-01-15 | 2018-01-15 | 피조개 추출물을 유효성분으로 함유하는 알코올성 간 손상 억제용 조성물 |
Publications (1)
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|---|---|
| KR20190086871A true KR20190086871A (ko) | 2019-07-24 |
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ID=67480982
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| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
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| KR1020180004945A KR20190086871A (ko) | 2018-01-15 | 2018-01-15 | 피조개 추출물을 유효성분으로 함유하는 알코올성 간 손상 억제용 조성물 |
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| KR (1) | KR20190086871A (ko) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20210120151A (ko) | 2020-03-25 | 2021-10-07 | 목포대학교산학협력단 | 꼬막 분말 또는 꼬막 증숙액을 유효성분으로 함유하는 장건강 개선용 조성물 |
-
2018
- 2018-01-15 KR KR1020180004945A patent/KR20190086871A/ko unknown
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| KR20210120151A (ko) | 2020-03-25 | 2021-10-07 | 목포대학교산학협력단 | 꼬막 분말 또는 꼬막 증숙액을 유효성분으로 함유하는 장건강 개선용 조성물 |
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