KR20190078205A

KR20190078205A - Composition for prevention or improvement of skin winkle with Pueraria thunbergiana Bentham extract

Info

Publication number: KR20190078205A
Application number: KR1020170180001A
Authority: KR
Inventors: 윤미영
Original assignee: 광주여자대학교 산학협력단
Priority date: 2017-12-26
Filing date: 2017-12-26
Publication date: 2019-07-04

Abstract

The present invention relates to a composition for preventing or reducing skin wrinkles containing a Pueraria thunbergiana Bentham extract, and exhibits an excellent effect of preventing or reducing skin wrinkles.

Description

TECHNICAL FIELD The present invention relates to a composition for prevention or improvement of skin wrinkles,

본 발명은 피부주름 예방 또는 개선용 조성물에 관한 것으로, 더욱 구체적으로는 갈화 추출물을 함유하는 피부주름 예방 또는 개선용 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to a composition for preventing or improving skin wrinkles, and more particularly, to a composition for preventing or improving skin wrinkles containing a sea tangle extract.

갈화 (Pueraria thunbergiana Bentham)는 칡의 꽃봉오리 또는 막 피기 시작한 꽃을 말하며, 갈조화라고도 한다. 갈화는 고르지 않은 긴 타원형 또는 종 모양이며, 길이는 0.5~1.5cm이고, 너비는 0.2~.0.6cm이며, 두께는 0.2~0.3cm이다. 꽃받침은 어두운 녹색으로 아래쪽이 연결되어 있고, 끝은 5개로 갈라지나 2개는 합쳐진 것 같이 보이며 뾰족하다. 바깥 면은 황백색의 털로 덮여있다. 확대경으로 볼 때 꽃잎은 5개이고 남자색~자갈색을 띠며 꽃받침에 싸여 있다. 수술은 10개이며 암술은 가늘고 길며 구부러졌고 잔털이 붙어있다. 특유한 냄새가 있고 맛은 약간 달다. 성질은 서늘하며, 위경에 작용한다. 알코올 중독증을 없애고 갈증을 가시게 하며, 비위를 튼튼하게 한다. 갈증, 식욕부진에 주로 쓰인다. Pueraria thunbergiana Bentham) refers to a flower bud or a flower that begins to bloom and is also referred to as a flower. Gallstones are uneven elongated elliptical or bell-shaped, 0.5 to 1.5 cm in length, 0.2 to 0.6 cm in width, and 0.2 to 0.3 cm in thickness. The calyx is dark green with the lower part connected, the end divided into 5 parts, the two parts appear to be combined and pointed. The outer surface is covered with yellowish white hairs. When viewed with a magnifying glass, the number of petals is 5, and it is covered with calyx. There are 10 stamens and pistils are thin, long, curved, and have fine hairs. There is a peculiar smell and the taste is slightly sweet. The nature is cool and works on the stomach. It eliminates alcoholism, makes you thirsty, and makes you sick. It is mainly used for thirst and anorexia.

한편, 피부의 노화 (skin aging)는 내재적 노화와 외인성 노화 두 가지 요인에 의하여 발생한다. 내재적 노화 (intrinsic aging)는 시간이 지남에 따라 진행되는 자연적 노화를 말하며, 외인성 노화 (exogenous aginf)는 외부의 환경 및 자극에 의한 피부 손상으로 발생하는 노화이다. 외인성 노화로 자외선에 의한 노화 현상을 광노화 (photoaginf) 현상이라고 한다. On the other hand, skin aging is caused by two factors, intrinsic aging and extrinsic aging. Intrinsic aging refers to natural aging that progresses over time, and exogenous aging is aging caused by external environmental and skin irritation. The aging phenomenon caused by ultraviolet rays due to exogenous aging is called photoaginf phenomenon.

자연적인 노화는 나이가 증가함에 따라 발생하는데, 피부의 구조와 기능이 퇴행하여 피부가 건조해지며, 잔주름이 생성되고, 탄력이 소실되는 임상적 특징을 나타낸다. 또한, 조직학적으로는 표피의 위축, 표피-진피 결합부위의 편평함 및 비정상적인 엘라스틴 (elastin)의 축적이 일어난다. Natural aging occurs with increasing age, manifests as a clinical feature in which the structure and function of the skin degenerate and the skin becomes dry, fine lines are produced, and elasticity is lost. Histologically, there is atrophy of the epidermis, flattening of epidermal-dermal junctions and accumulation of abnormal elastin.

한편, 광노화는 자외선 (ultraviolet)에 의하여 피부 주름이 조기에 형성되고, 자연적인 노화에 비하여 주름이 굵고, 깊으며 그 수가 많다. 또한, 피부가 건조해지며, 색소가 침착되고, 말초혈관이 확장되는 등의 임상적인 특징을 나타낸다. 피부노화에 따라 나타나는 피부 두께의 변화는 그 발생 원인에 따라 차이가 있다. 자연노화는 콜라겐 등의 결합 조직 합성 저하로 인해 피부 두께가 얇아지나, 자외선 등에 의한 광노화는 피부의 진피층 보호를 위해 각질층의 형성이 증가하여 피부의 두께가 두꺼워진다. On the other hand, photo-aging is premature skin wrinkling due to ultraviolet rays, and wrinkles are thicker and deeper than those of natural aging. It also exhibits clinical features such as dryness of the skin, deposition of pigment, and expansion of peripheral blood vessels. Changes in skin thickness due to skin aging differ depending on the cause. In natural aging, the thickness of the skin becomes thinner due to the decrease of the connective tissue such as collagen. However, the photoaging due to ultraviolet rays increases the thickness of the skin due to the increase of the stratum corneum formation for protecting the dermal layer of the skin.

최근에는 환경오염으로 인하여 지표면에 도달하는 자외선의 양은 해마다 증가하고 있고, 삶의 질이 향상되면서 취미 생활을 위한 야외활동이 증가하고 있다. 이러한 추세에 따라, 외부 자극에 의한 피부 노화를 방지하고, 피부 건강을 증진시킬 수 있는 다양한 방법에 대한 관심이 커지고 있다.In recent years, the amount of ultraviolet rays reaching the ground surface due to environmental pollution has been increasing year by year, and outdoor activities for hobbies are increasing as quality of life is improved. With this trend, there is growing interest in various methods of preventing skin aging caused by external stimuli and improving skin health.

대한민국등록특허 제10-15812850000호 (2015.12.23)에는, 생약재 추출물을 함유하는 피부주름개선용 화장료 조성물에 관하여 기재되어 있다.Korean Patent No. 10-15812850000 (Dec. 23, 2015) discloses a cosmetic composition for improving skin wrinkles containing a herbal medicine extract. 대한민국등록특허 제10-15463350000호 (2015.08.17)에는, 진귤 과피 효소 처리물 또는 그것의 추출물을 이용한 피부 주름 억제용 조성물에 관하여 기재되어 있다.Korean Patent No. 10-15463350000 (2015.08.17) discloses a composition for suppressing skin wrinkles using a treatment with an orange peel enzyme or an extract thereof.

본 발명은 피부주름 예방 또는 개선 효과를 갖는 갈화 추출물을 개발하여 제공하고자 한다.The present invention is to develop and provide a garlic extract having the effect of preventing or improving skin wrinkles.

본 발명은 갈화 (Pueraria thunbergiana Bentham) 추출물을 포함하는 것을 특징으로 하는 피부주름 개선용 화장료 조성물을 제공한다.The present invention is based on the finding that Pueraria thunbergiana Bentham) extracts. The present invention also provides cosmetic compositions for improving skin wrinkles.

본 발명의 피부주름 개선용 화장료 조성물에 있어, 상기 피부 주름은, 일 예로 자외선이 원인으로 형성된 주름인 것일 수 있다.In the cosmetic composition for improving skin wrinkles of the present invention, the skin wrinkles may be wrinkles formed by ultraviolet rays, for example.

또한, 본 발명은 갈화 (Pueraria thunbergiana Bentham) 추출물을 포함하는 것을 특징으로 하는 피부주름 예방용 약학 조성물을 제공한다.The invention also Pueraria (Pueraria thunbergiana Bentham) extracts. The present invention also provides a pharmaceutical composition for preventing skin wrinkles.

본 발명의 피부주름 예방용 약학 조성물에 있어, 상기 피부 주름은, 일 예로 자외선이 원인으로 형성된 주름인 것일 수 있다.In the pharmaceutical composition for preventing skin wrinkles of the present invention, the skin wrinkles may be wrinkles formed by ultraviolet rays, for example.

본 발명의 갈화 추출물은 피부주름 예방 또는 개선 효과를 가지기 때문에, 화장품 혹은 의약품의 원료로 유용하게 사용될 수 있다.Since the Galata extract of the present invention has an effect of preventing or improving skin wrinkles, it can be usefully used as a raw material for cosmetics or pharmaceuticals.

도 1은 UVB로 피부주름을 유도한 생쥐모델의 등 피부에 갈화 추출물을 도포한 후, 피부주름을 측정한 결과를 그래프로 나타낸 것이다.
도 2는 UVB로 피부주름을 유도한 생쥐모델의 등 피부에 갈화 추출물을 도포한 후, 피부주름을 측정한 생쥐모델의 등 사진이다.
도 3은 UVB로 피부주름을 유도한 생쥐모델의 등 피부에 갈화 추출물을 도포한 후, 피부조직 검사 결과이다.FIG. 1 is a graph showing the results of measuring skin wrinkles after application of gallstones to the back skin of a mouse model inducing skin wrinkling with UVB.
Fig. 2 is a photograph of a mouse model of skin wrinkle after application of gallstones to the back skin of a mouse model inducing skin wrinkle with UVB.
Fig. 3 is a result of skin biopsy after application of gallstones to the back skin of a mouse model inducing skin wrinkle with UVB.

본 발명에서 상기 피부 주름은, 일 예로 자외선이 원인으로 형성된 주름인 것일 수 있다. 본 발명의 갈화 추출물을 도포하였을 경우, 표피의 두께가 UVB를 조사하지 않은 대조군 (Nomal)에 가깝게 줄어들었다. 즉, 과각화로 인한 피부층 두께, 과립의 감소, 피부의 굴곡과 탈락 및 비만세포의 침윤 등이 감소한 것이다. 이로 인하여, 본 발명의 갈화 추출물이 피부주름에 효과를 가짐을 알 수 있었다.In the present invention, the skin wrinkles may be wrinkles formed by ultraviolet rays, for example. When the gallbladder extract of the present invention was applied, the thickness of the epidermis was reduced to a value close to that of a control (Nomal) not irradiated with UVB. That is, skin layer thickness, granule reduction, skin bending and detachment, and infiltration of mast cells due to exaggeration are decreased. As a result, it was found that the garlic extract of the present invention had an effect on skin wrinkles.

한편, 본 발명의 피부주름 개선용 화장료 조성물 조성물에 있어, 상기 갈화 추출물은, 바람직하게 0.005~50중량% 만큼 첨가되는 것이 좋다. 0.005중량% 미만으로 첨가하면, 본 발명 갈화 추출물의 첨가에 따른 효과를 기대하기가 어렵고, 50중량%를 초과하여 첨가하면, 첨가량 대비 효능의 증대가 미미하여 경제적이지 못하다.On the other hand, in the cosmetic composition composition for improving skin wrinkles of the present invention, it is preferable that the talip extract is added in an amount of preferably 0.005 to 50% by weight. If it is added in an amount of less than 0.005% by weight, it is difficult to expect the effect of adding the sea tangle extract of the present invention. If it is added in an amount of more than 50% by weight, the increase of the effect is insufficient.

한편, 본 발명에 따른 화장료 조성물은 일 예로, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 화장수, 젤, 수용성 리퀴드, 크림, 에센스, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 수중유 (O/W)형 및 유중수 (W/O)형으로 이루어진 기초화장료 제형; 연고; 수중유형 및 유중수형 메이크업베이스, 파운데이션, 스킨커버, 립스틱, 립글로스, 아이새도, 치크칼라 및 아이브로우 펜슬류로 이루어진 색조화장품 제형 및, 두피용 제형 중에서 선택되는 어느 하나인 것일 수 있다. 또한, 본 발명의 화장료 조성물은 선택적으로 에어로졸 형태로 피부에 적용될 수도 있다.Meanwhile, the cosmetic composition according to the present invention may be in the form of a solution, suspension, emulsion, paste, lotion, gel, water-soluble liquid, cream, essence, surfactant-containing cleansing oil, oil- A basic cosmetic formulation comprising a water (W / O) type; Ointment; A color cosmetic formulation comprising an underwater type and a water-in-oil type makeup base, a foundation, a skin cover, a lipstick, a lip gloss, an eye shadow, a cheek color and an eyebrow pencil, and a scalp formulation. In addition, the cosmetic composition of the present invention may be optionally applied to the skin in the form of an aerosol.

한편, 본 발명에 따른 화장료 조성물은, 바람직하게 상기 갈화 추출물 외에 본 발명이 목적으로 하는 주 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 주 효과에 상승효과를 줄 수 있는 다른 성분 등을 함유하는 것도 무방하다. 예컨대 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 그리고 담체를 포함할 수 있다.On the other hand, the cosmetic composition according to the present invention may preferably contain other components that can give a synergistic effect to the main effect within the range not impairing the intended main effect of the present invention, in addition to the garlic extract. Such as antioxidants, stabilizers, solubilizers, vitamins, customary adjuvants such as pigments and flavoring agents, and carriers.

또한, 본 발명은 갈화 (Pueraria thunbergiana Bentham) 추출물을 포함하는 것을 특징으로 하는 피부주름 예방용 약학 조성물을 제공하는데, 본 발명의 약학 조성물에 포함되는 갈화 추출물의 함량은, 예방 및 예방제의 사용방법, 복용자의 상태, 질환의 종류 및 질환의 중증 정도에 따라 바람직하게 조절하는 것이 좋다. 본 발명의 조성물에서 갈화 추출물의 함량은 피부 주름 예방용 약학 조성물 대비 0.1중량%~50중량%일 수 있으나, 반드시 이에 한정되는 것은 아니다. 그러나 그 함량이 0.1중량% 미만일 경우 예방 효과가 미미할 수 있으며, 50중량%를 초과하는 경우에는 사용량 대비 효과 상승률이 낮아 비경제적일 수 있다.The invention also Pueraria (Pueraria thunbergiana Bentham). The content of the Galangal extract contained in the pharmaceutical composition of the present invention is not particularly limited so long as the content of the Galangal extract contained in the pharmaceutical composition of the present invention varies depending on the method of using the preventive and preventive agent, the condition of the recipient, It is preferable to control it appropriately according to the severity of the disease. The content of Galang extract in the composition of the present invention may be 0.1% by weight to 50% by weight based on the pharmaceutical composition for preventing skin wrinkles, but is not limited thereto. However, when the content is less than 0.1% by weight, the preventive effect may be insignificant. When the content is more than 50% by weight, the increase rate of the effect relative to the usage amount is low, which may be uneconomical.

한편, 본 발명의 피부주름 예방용 약학 조성물은 유효성분 이외에 약제학적으로 허용 가능한 담체, 희석제 또는 부형제를 더욱 포함할 수 있다. 사용 가능한 담체, 부형제 또는 희석제로는, 락토즈, 덱스트로즈, 수크로즈, 솔비톨, 만니톨, 자이리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 설리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로즈, 폴리비닐피롤리돈, 물, 메틸하이드록시벤조에이트, 프로필하이드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물류가 있으며, 이들은 1종 이상 사용될 수 있다. 또한, 예방 및 예방제가 약제일 경우 충진제, 항응집제, 윤활제, 습윤제, 향료, 유화제 또는 방부제 등이 추가로 포함될 수 있다.In addition, the pharmaceutical composition for preventing skin wrinkles of the present invention may further comprise a pharmaceutically acceptable carrier, diluent or excipient in addition to the active ingredient. Examples of usable carriers, excipients or diluents include lactose, dextrose, sucrose, sorbitol, mannitol, xylitol, erythritol, maltitol, starch, acacia rubber, alginate, gelatin, calcium phosphate, calcium sul- licate, , Microcrystalline cellulose, polyvinylpyrrolidone, water, methylhydroxybenzoate, propylhydroxybenzoate, talc, magnesium stearate, and minerals. These may be used singly or in combination. Further, when the preventive and preventive agent is a weak agent, a filler, an anticoagulant, a lubricant, a wetting agent, a fragrance, an emulsifier or an antiseptic may be further included.

한편, 본 발명의 피부주름 예방용 약학 조성물의 제형은 사용방법에 따라 바람직한 형태일 수 있으며, 특히 포유동물에 투여된 후 활성 성분의 신속, 지속 또는 지연된 방출을 제공할 수 있도록 당업계에 공지된 방법을 채택하여 제형화 하는 것이 좋다. 구체적인 제형의 예로는 경고제 (PLASTERS), 과립제 (GRANULES), 로션제 (LOTIONS), 리니멘트제(LINIMENTS), 리모나데제 (LEMONADES), 방향수제 (AROMATIC WATERS), 산제 (POWDERS), 시럽제 (SYRUPS), 안연고제 (OPHTHALMIC OINTMENTS), 액제 (LIQUIDS FORMULATIONS), 에어로솔제 (AEROSOLS), 엑스제 (EXTRACTS), 엘릭실제 (ELIXIRS), 연고제 (OINTMENTS), 유동엑스제 (FLUIDEXTRACTS), 유제 (EMULSIONS), 현탁제 (SUSPENSIONS), 전제 (DECOCTIONS), 침제 (INFUSIONS), 점안제 (EYE DROPS), 정제 (TABLETS), 좌제 (SUPPOSITORIES), 주사제 (INJECTIONS), 주정제 (SPIRITS), 카타플라스마제 (CATAPLASMA), 캅셀제 (CAPSULES), 크림제 (CREAMS), 트로키제 (TROCOES), 팅크제 (TINCTURES), 파스타제 (PASTES), 환제 (PILLS), 연질 또는 경질 젤라틴 캅셀 중 선택되는 어느 하나일 수 있다.On the other hand, the formulation of the pharmaceutical composition for preventing skin wrinkles of the present invention may be in a desirable form depending on the method of use, and in particular, may be formulated so as to provide rapid, sustained or delayed release of the active ingredient after administration to a mammal Method should be adopted and formulated. Examples of specific formulations include, but are not limited to, PLASTERS, GRANULES, LOTIONS, LINIMENTS, LEMONADES, AROMATIC WATERS, POWDERS, SYRUPS, OPHTHALMIC OINTMENTS, LIQUIDS FORMULATIONS, AEROSOLS, EXTRACTS, ELIXIRS, OINTMENTS, FLUIDEXTRACTS, EMULSIONS, SUSPENSIONS, DECOCTIONS, INFUSIONS, EYE DROPS, TABLETS, SUPPOSITORIES, INJECTIONS, SPIRITS, CATAPLASMA, A cream or a cream, a cream, a troche, a tincture, a pasta, a pill, a soft or hard gelatin capsule, or the like.

한편, 본 발명의 피부주름 예방용 약학 조성물의 투여량은 투여방법, 복용자의 연령, 성별, 체중 및 질환의 중증도 등을 고려하여 결정하는 것이 좋다. 일 예로, 본 피부주름 예방용 조성물은 유효성분을 기준으로 하였을 때 1일 0.1 내지 100mg/kg (체중)으로 1회 이상 투여 가능하다. 그러나 상기의 투여량은 예시하기 위한 일 예에 불과하며, 복용자의 상태에 따라 의사의 처방에 의해 변화될 수 있다.On the other hand, the dosage of the pharmaceutical composition for preventing skin wrinkles of the present invention is preferably determined in consideration of the administration method, the age, sex, weight and severity of the disease. For example, the composition for preventing skin wrinkles can be administered at least once at a dose of 0.1 to 100 mg / kg (body weight) per day based on the active ingredient. However, the dosage is only an example and may be changed by a doctor's prescription depending on the condition of the recipient.

이하, 본 발명의 구성을 하기 실시예 및 실험예를 통해 구체적으로 설명하고자 한다. 다만, 본 발명의 권리범위가 하기 실시예 및 실험예에만 한정되는 것은 아니고, 그와 등가의 기술적 사상의 변형까지를 포함한다.Hereinafter, the structure of the present invention will be described in detail with reference to the following examples and experimental examples. However, the scope of the present invention is not limited to the following embodiments and experimental examples, and includes modifications of equivalent technical ideas.

<< 실시예Example 1: 갈화 추출물 제조> 1: Preparation of Garlic Extract>

갈화 분말 1kg을 삼각플라스크에 넣고 9배의 70% 에탄올을 가해 65℃에서 환류냉각장치를 이용하여 12시간씩 3회 반복 추출하였다. 이후, 추출액을 면포로 여과한 후, 감압농축 (CCA-1100, Eyela, Tokyo, Japan)하고, -70℃에서 급속동결건조 (PVTFA 10AT, Ilsin Co., Youngju, Korea)하여, 갈화추출분말 232.8g을 얻었다.1 kg of brown powder was placed in an Erlenmeyer flask, and 9 times 70% ethanol was added and extracted three times for 12 hours at 65 ° C using a reflux condenser. Then, the extract was filtered with cotton balls and then lyophilized (PVTFA 10AT, Ilsin Co., Youngju, Korea) at -70 ° C under reduced pressure (CCA-1100, Eyela, Tokyo, Japan) g.

한편, 상기에서 수득한 갈화추출분말을 PBS에 녹여 갈화 추출물 (PTB) 2% (w/v)을 제조한 후, 하기 실험에서 사용하였다. On the other hand, the brownish extract powder obtained above was dissolved in PBS to prepare 2% (w / v) sea tangle extract (PTB) and used in the following experiment.

<< 실험예Experimental Example 1: One: 갈화Gall 추출물의 피부주름 개선 효과> Effect of extracts on skin wrinkles>

(1) (One) UVBUVB 조사 및 피부주름 유발 Investigation and induction of skin wrinkles

7주령의 HR-1 생쥐에 UVB 램프 (15W type, UV maximum wave length 312nm UV intensity 100μW cm^-2, Ieda Boeki Co., Tokyo, Japan)를 등 피부에 조사하여 피부두께, 탄력 및 주름생성 변화에 대한 갈화 추출물의 효과를 검증하고자 하였다. 7-week-old HR-1 mice were irradiated with UVB lamp (15W type, UV maximum wave length 312nm UV intensity 100μW cm ^-2 , Ieda Boeki Co., Tokyo, Japan) to change skin thickness, elasticity and wrinkle formation To investigate the effect of garlic extracts on.

HR-1 생쥐는 첫 번째 1주일은 매일 100mJ/cm²의 UVB 선 (radiation, 1 minimal erythematal dose = 100mJ/cm²)을 조사하였고, 2주째부터 9주째까지는 200mJ/cm²의 UVB를 주 3회 (월, 수, 금) 조사하였다.HR-1 mice first week is UVB ray of daily ^{100mJ / cm 2 (radiation, 1} minimal erythematal dose = 100mJ / cm 2) of, the UVB of 200mJ / cm ² from 2 weeks to 9 weeks Note 3 were examined (Monday, Wednesday, and Friday).

또한, HR-1 생쥐의 등 피부에 vehicle (ethanol 30%, polyethylene glycol 70%, 음성 대조군)과 실시예 1의 갈화 추출물 2% (실험군)를 각각 도포한 후, UVB를 15cm 거리에서 5~10분간 조사하였다 (표 1). In addition, vehicle (ethanol 30%, polyethylene glycol 70%, negative control group) and 2% (experimental group) of Example 1 were applied to the dorsal skin of HR-1 mice, (Table 1).

1 wk
(times)1 wk
(times) 2 wk
(times)2 wk
(times) 3 wk
(times)3 wk
(times) 4 wk
(times)4 wk
(times) 5 wk
(times)5 wk
(times) 6 wk
(times)6 wk
(times) 7 wk
(times)7 wk
(times) 8 wk
(times)8 wk
(times) 9 wk
(times)9 wk
(times) 10 wk
(times)10 wk
(times) No. of UVB irradationNo. of UVB irradiation 7 7 33 33 3 3 33 3 3 33 33 No. of drug treatmentNo. of drug treatment 7 7 7 7 7 7 7 7 7 7 7 7 7 7 7 7 Wrinkle photographed W rinkle photographed measurement측정 measurement
sacrifice측정
sacrifice

(2) 피부주름 측정(2) skin wrinkle measurement

UVB에 의해서 유도된 피부노화의 정도는 주름형성상태를 관찰함으로써 측정하였다. 주름의 형성을 평가하기 위하여, 각각의 HP-1 생쥐는 6주째와 9주째에 클로랄수화물 (chloral hydrate, CH) 0.1ml (생쥐 체중 25g당 7% CH)를 복강 내 주사하여 마취한 뒤, UVB가 조사된 등 (dorsa)의 주름부위(larea)를 촬영하였다. The degree of skin aging induced by UVB was measured by observing wrinkle formation. To assess the formation of wrinkles, each HP-1 mouse was anesthetized by intraperitoneal injection of 0.1 ml of chloral hydrate (CH) (6% per 25 g of mouse weight) at 6 and 9 weeks, A larea of dorsa irradiated with UVB was photographed.

피부주름은 UVB를 조사한 후 DETAX System Ⅱ (MIXPAC)과 Double-Stick Disc (3M, Germany)를 이용하여 측정하였다. 생쥐 피부에 Double-Stick Disc를 붙이고, DETAX System Ⅱ (MIXPAC)를 이용하여 혼합용액을 분사하여 2~3분 후에 완전히 굳어진 Disc를 떼어내어 주름의 정도를 관찰하였다.Skin wrinkles were measured using DETAX System II (MIXPAC) and Double-Stick Disc (3M, Germany) after UVB irradiation. Double-stick discs were attached to the skin of mice, and the mixed solution was sprayed using DETAX System II (MIXPAC). After 2 to 3 minutes, the completely hardened discs were peeled off and the degree of wrinkles was observed.

Disc에 생긴 주름은 Bissett 등에 의하여 제시된 하기의 점수 체계에 따라 평가하였다 The wrinkles on the disc were assessed according to the following scoring system as suggested by Bissett et al.

grade 0: 주름이 없는 경우grade 0: no wrinkles

grade 1: 몇 개의 얕은 주름이 있는 경우grade 1: with a few shallow wrinkles

grade 2: 일부 주름이 있는 경우grade 2: with some wrinkles

grade 3: 몇 개의 깊은 주름이 있는 경우grade 3: with several deep wrinkles

도 1은 UVB로 피부주름을 유도한 생쥐모델의 등 피부에 갈화 추출물을 도포한 후, 피부주름을 측정한 결과를 그래프로 나타낸 것이다. UVB를 조사하지 않은 일반군 (Normal)에서는 45.4±1.84 mm, UVB를 조사한 음성 대조군에서는 118.7±13.29 mm, 갈화 추출물을 도포한 실험군 (PTB)에서는 72.07±4.07 mm로 나타나, 갈화 추출물이 주름형성 (주름의 깊이)에 유의성 있는 감소효과를 보임을 확인할 수 있었다. FIG. 1 is a graph showing the results of measuring skin wrinkles after application of gallstones to the back skin of a mouse model inducing skin wrinkling with UVB. In the normal group without UVB irradiation, 45.4 ± 1.84 mm, 118.7 ± 13.29 mm in the negative control group with UVB irradiation and 72.07 ± 4.07 mm in the group treated with the garlic extract, The depth of the wrinkles).

(3) 피부주름 개선 관찰(3) Observation of skin wrinkle improvement

UVB가 조사되어 색소침착이 유발된 마우스 피부의 주름개선을 관찰하기 위하여, 잠시 동안 에틸에테르 (ethyl ether)로 마취시켰다. 그 후, 생쥐의 등 피부를 USB Disital Microscope (×100, CE FOROHS, china)를 이용하여 피부조직을 400배 촬영하였다 (도 2). 도 2는 UVB로 피부주름을 유도한 생쥐모델의 등 피부에 갈화 추출물을 도포한 후, 피부주름을 측정한 생쥐모델의 등 사진이다.UVB was irradiated and anesthetized with ethyl ether for a while in order to observe the wrinkle improvement of the skin of the mice caused pigmentation. After that, the dorsal skin of the mice was photographed 400 times by using a USB Disital Microscope (× 100, CE FOROHS, China) (FIG. 2). Fig. 2 is a photograph of a mouse model of skin wrinkle after application of gallstones to the back skin of a mouse model inducing skin wrinkle with UVB.

전체 등 부위의 주름 침착과 색소 침착이 나타난 부위에서 주름형성 및 개선 정도를 관찰한 결과, UVB를 조사한 음성 대조군 (control)과 비교하였을 때, 갈화 추출물을 도포한 뒤 UVB를 조사한 실험군 (PTB)에서 주름의 깊이와 주름의 개수 모두가 감소하였음을 확인할 수 있었다.The wrinkle formation and improvement were observed in the area of wrinkle deposition and pigmentation of the whole back area. As a result, when compared with the negative control (UVB) control, the UVB irradiation test group (PTB) It was confirmed that both the depth of wrinkles and the number of wrinkles decreased.

(4) 피부조직검사(4) Skin biopsy

각 실험군에서 적출한 피부조직을 10% 포르말린 (formallin) 용액에 48시간 정도 고정한 뒤, 카세트에 들어갈 만한 크기로 절단하여 카세트에 넣고 라벨링 (labeling)하였다. 이후, 조직 처리기 (Thermo Shandon Ltd./Thermo Fisher Scientific, England)를 이용하여 70%, 80%, 90%, 95% 및 100% 알코올 각각에 1~2시간 처리한 후 자일렌 (xylene)으로 4시간, 파라핀 (paraffin)에서 4시간 동안 처리하였다.The skin tissue extracted from each experimental group was fixed in a 10% formallin solution for about 48 hours, cut into a size suitable for insertion into a cassette, placed in a cassette, and labeled. After treatment with 70%, 80%, 90%, 95% and 100% alcohols for 1 to 2 hours using a tissue processor (Thermo Shandon Ltd./Thermo Fisher Scientific, England) Hour, paraffin for 4 hours.

고정된 조직은 faraffin Embedding Station (LEICA MICROSYSTEMS NUSSLOCH GMBH, Germany)을 사용하여 임베딩 (embedding)한 후, 냉동실에서 하루 동안 보관하였다. 이후, Rotary Microtome (LEICA MICROSYSTEMS NUSSLOCH GMBH, Germany)을 사용하여 블록 (block)을 박절하였다. 박절된 조직은 H&E staining을 실시하기 위하여 자일렌에 3분씩 3번, 100% 알코올에 각각 2분, 1분, 95%, 80%, 70% 알코올에 순서대로 각 1분 30초간 담근 후에 물로 1분간 세척하였다. 이후, 헤마토자일린 (hematoxylin)에 1분, 10% scott's tap water에 1분, 에오신 (eosin)에 3분 동안 처리하는 과정을 거쳐 염색하였다.The fixed tissue was embedding using a faraffin Embedding Station (LEICA MICROSYSTEMS NUSSLOCH GMBH, Germany) and stored in the freezer for one day. Blocks were then broken using a Rotary Microtome (LEICA MICROSYSTEMS NUSSLOCH GMBH, Germany). The dissected tissue was immersed in xylenes three times for 3 minutes, 100% for 2 minutes, 1 minute, 95%, 80%, 70% alcohol for 1 minute and 30 seconds each in order to perform H & E staining. Lt; / RTI > The cells were then stained with hematoxylin for 1 min, 10% scott's tap water for 1 min, and eosin for 3 min.

염색된 조직은 다시 70%, 80%, 95%, 100%에 순서대로 처리하여 탈수 (dehydration)한 후, 자일렌에 3분씩 3번 처리하였다. 이어서, 슬라이드를 건조한 후, 카나다발삼 (kanadabalsam)과 자일렌을 이용하여 퍼마운팅 (permounting)을 실시하였다. 그 후, 현미경을 이용하여 표피/내피의 두께와 지질공 (lipid pore) 등을 관찰하였다.The dyed tissues were dehydrated in the order of 70%, 80%, 95% and 100%, and then treated with xylenes three times for 3 minutes each. Subsequently, the slide was dried, and permounting was performed using kanadabalsam and xylene. Then, the thickness of the epidermis / endothelium and the lipid pore were observed using a microscope.

또한, 전반적인 피부 조직 변화를 관찰하기 위하여 헤리스 헤마토자일린 (Harris hematoxylin) 용액에 옮겨 5분간 핵을 염색한 후 흐르는 물에 세척하고 1% HCl-alcofol 용액으로 3회 침적 후, 충분히 세척하였다. 이후, 1% 암모니움 (ammonium) 용액으로 청색화하고, 에오신 (eosin) 용액에 3분간 세포질을 염색한 후, 80% 알코올로 이동하였으며, 95% 및 100% 알코올을 사용하여 탈수시켰다. 다른 조직 슬라이드는 피부 진피층에서 콜라겐 침착을 관찰하기 위하여 Masson's trichrome염색을 실시하였다. 청명 과정을 거친 후 카나다발삼으로 봉입 후, 현미경으로 검경하였다. In addition, to observe the changes in the overall skin texture, the cells were transferred to a Harris hematoxylin solution, stained with the nuclei for 5 minutes, washed with flowing water, immersed 3 times with 1% HCl-alcohol solution and sufficiently washed. The cells were stained with a 1% ammonium solution, stained with eosin for 3 min, transferred to 80% alcohol, and dehydrated using 95% and 100% alcohol. Other tissue slides were stained with Masson's trichrome to observe collagen deposition in the dermal layer of the skin. After being cleaned, it was sealed with Canadian Balsam and then examined with a microscope.

도 3은 UVB로 피부주름을 유도한 생쥐모델의 등 피부에 갈화 추출물을 도포한 후의 피부조직 검사 결과이다. UVB를 조사하지 않은 일반군 (Normal)의 피부조직에 비해, UVB를 조사한 음성 대조군은 표피의 두께가 과형성, 확장되어 (green arrow) 그 주변에 과각화로 인한 피부층 두께의 증가, 과립의 증가, 피부의 굴곡과 탈락의 심화 및 비만세포의 침윤 등이 증가하였다. 그러나 갈화 추출물을 도포한 뒤 UVB를 조사한 실험군 (PTB)은 UVB를 조사한 음성 대조군에 비하여, 표피의 두께가 UVB를 조사하지 않은 대조군 (Normal)에 가깝게 줄어 그 주변에 과각화로 인한 피부층 두께, 과립의 감소, 피부의 굴곡과 탈락 및 비만세포의 침윤 등이 감소하였다.FIG. 3 is a result of skin biopsy after application of Galapto extract to the back skin of a mouse model inducing skin wrinkle by UVB. Compared to the normal skin without UVB irradiation, the negative control with UVB irradiation showed that the thickness of the epidermis was hyperplasic, enlarged (green arrow), increased skin layer thickness due to overgrowth around it, And increased infiltration of mast cells. However, in the experimental group (PTB) after the application of garlic extract, the thickness of the epidermis decreased to a level close to that of a control group without UVB (normal) compared to the control group irradiated with UVB, and skin layer thickness, Decrease in skin flexion and detachment, and infiltration of mast cells.

이상에서 살펴본 바와 같이, 갈화 추출물 (PTB)을 처리한 생쥐의 등 피부에서 주름 형성 감소 결과를 확인한 결과, 본 발명의 갈화 추출물 (PTB)이 자외선에 의한 피부 주름 발생을 억제하는 효과가 있는 것으로 판단할 수 있었다.As described above, as a result of confirming the reduction in wrinkle formation in the back skin of mice treated with the Galvariant Extract (PTB), it was concluded that the Galvariant Extract (PTB) of the present invention has an effect of suppressing the occurrence of skin wrinkles caused by ultraviolet rays Could.

Claims

Pueraria thunbergiana Bentham extract of the present invention.

The method according to claim 1,
The skin wrinkles,
Wherein the cosmetic composition is a wrinkle formed by ultraviolet rays.

Pueraria thunbergiana Bentham) extract of the present invention.

The method of claim 3,
The skin wrinkles,
Wherein the wrinkle is formed by ultraviolet rays.