KR20190059715A - A cosmetic composition comprising edible insect protein - Google Patents

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KR20190059715A
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김진우
김준경
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Abstract

The present invention relates to a cosmetic composition including an edible insect protein as an active ingredient, for skin whitening or skin regeneration. The cosmetic composition of the present invention comprises peptide derived from larvae of a darkling beetle as an active ingredient, wherein the peptide has a size of 1.4 kDa or less.

Description

식용곤충 단백질을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물{A COSMETIC COMPOSITION COMPRISING EDIBLE INSECT PROTEIN}TECHNICAL FIELD The present invention relates to a cosmetic composition comprising an edible insect protein as an active ingredient,

본 발명은 갈색거저리 유충에서 유래한 펩타이드를 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to a cosmetic composition containing as an active ingredient a peptide derived from a larva of a brown duck.

피부는 외부환경과 접촉하여 외부 자극에 대한 신체를 보호하는 가장 기초적인 방어기관이며, 외적인 아름다움을 표현하는 중요한 기관이다. 피부는 외적인 아름다움이 젊음과 건강을 상징하는 판단의 기준일 뿐 아니라 자신감을 표출하여 업무능력에 영향을 주는 경쟁력으로 자리잡고 있다.Skin is the most basic defensive body that protects the body against external stimuli in contact with the external environment, and is an important institution expressing external beauty. Skin is not only a criterion of external beauty that symbolizes youth and health, but also a competitiveness that affects business ability by expressing self-confidence.

그러나 사람들의 외부 활동량이 증가함에 따라 피부가 태양광선에 장기간 노출되면서 자외선에 의해 피부가 손상된다. 피부가 자외선에 장기간 노출되면 피부노화가 진행되고, 자외선으로부터 피부 내층을 보호하기 위해 생성된 멜라닌 색소로 인해 피부가 검게 변색된다. However, as the external activity of people increases, skin is exposed to sunlight for a long period of time and the skin is damaged by ultraviolet light. Prolonged exposure of the skin to ultraviolet light promotes skin aging and the skin becomes discolored due to the melanin pigment produced to protect the subcutaneous layer from ultraviolet light.

따라서 현대사회에서 피부를 관리하는 방법으로 기능성 화장품의 소비가 증가하고 있으며, 백옥같이 하얗고 깨끗하면서 젊고 탄력이 있는 피부를 선호하기 때문에 화장품 산업에서는 미백효과와 노화방지에 대한 개발이 활발히 이루어지고 있다.Therefore, consumption of functional cosmetics is increasing as a method of managing skin in a modern society, and whitening effect and prevention of aging are actively being developed in the cosmetics industry because white, clean and youthful elastic skin is preferred.

화장품의 미백 효과는 사용자의 피부를 하얗게 하는 것을 말하며, 대부분의 미백 화장품은 멜라닌의 생성을 억제하는 기능을 한다. 멜라닌은 표피 내 기저층에 존재하는 멜라노사이트(melanocyte)에 의해 생성되며, 멜라노사이트의 활동성과 분포가 사람의 피부색을 결정한다. The whitening effect of cosmetics is to whiten the user's skin, and most whitening cosmetics function to inhibit the production of melanin. Melanin is produced by the melanocytes in the basal layer of the epidermis, and the activity and distribution of the melanocytes determine the skin color of a person.

멜라노사이트 내부에 함유되어 있는 타이로시나제(tyrosinase)라는 효소에 의해 아미노산의 일종인 타이로신(tyrocine)이 도파(DOPA, dihydroxy phenylalanine)로 전환되고, 도파퀴논(dopaquinone)과 도파크롬(dopachrome) 등을 거치는 일련의 산화과정을 통해 최종적으로 중합체인 멜라닌이 생성된다. 따라서 대부분 미백 화장품은 멜라닌 생성의 주요 효소인 타이로시나제의 활성을 저해함으로써 멜라닌의 생성을 억제시키는 원리로 미백 효과가 발휘된다.Tyrosine, a type of amino acid, is converted to dihydroxy phenylalanine (DOPA) by an enzyme called tyrosinase contained in the melanocyte, and dopaquinone and dopachrome Through which a melanin, which is a polymer, is finally produced. Therefore, most whitening cosmetics inhibit the activity of tyrosinase, which is the main enzyme of melanin production, and thus, the whitening effect is exerted by the principle of inhibiting the production of melanin.

화장품의 노화방지는 피부노화를 촉진하는 원인들을 차단하거나 제거하는 것이다. 상기 피부노화는 나이가 들면서 자연스럽게 나타나는 현상이 아닌 태양광에 의한 광노화이다. Anti-aging of cosmetics is to block or eliminate the causes that promote skin aging. The aging of the skin is photoaging due to sunlight, not a natural phenomenon as the age increases.

광노화는 자외선에 의해 과잉의 활성산소종이 생성되고, 체내의 항산화효소와 비타민 E, C, 글루타티온 및 유비퀴놀 등의 항산화제가 감소함으로 인해 산화와 항산화의 불균형으로 인해 야기된다. Photoaging is caused by excessive oxidation of antioxidants such as antioxidant enzymes in the body and vitamin E, C, glutathione and ubiquinol, resulting in the generation of excess reactive oxygen species by ultraviolet rays.

광노화가 진행됨에 따라 멜라닌 생성반응이 촉진될 뿐 아니라 지질 과산화, 단백질 산화, 단백질 분해효소의 활성화, 콜라겐과 엘라스틴의 사슬절단 및 비정상적인 교차결합, 히알루론산 사슬절단, DNA 산화 등에 의해 생체 구성성분들의 손상을 가져오고 결국에는 피부탄력감소, 주름 및 기미, 주근깨 생성 등의 피부노화가 일어나게 된다. 따라서 타이로시나제의 활성을 저해함과 동시에 항산화 효과를 가지는 화장료 조성물이 피부의 미백 효과를 효과적으로 유도하면서 피부노화를 방지할 수 있다.As the photoaging proceeds, not only the melanin production reaction is promoted but also damage of biological constituents by lipid peroxidation, protein oxidation, activation of proteolytic enzymes, chain cleavage and abnormal cross-linking of collagen and elastin, hyaluronic acid chain cleavage, And eventually skin aging such as skin elasticity reduction, wrinkles and spots, and the generation of freckles occur. Accordingly, the cosmetic composition having an antioxidative effect while inhibiting the activity of tyrosinase can effectively prevent whitening of the skin and prevent skin aging.

종래에 아스코르빈산(일본특개평 4-9320), 하이드로퀴논(일본특개평 6-192062), 코직산(일본특개소 56-7710), 알부틴(일본특개평 4-93150) 및 식물 추출물 등이 타이로시네이즈 저해 활성을 나타내어 미백 화장료로 이용되었다. 하지만, 상기 성분들은 화장품 제형 중에서 안정성이 미흡하여, 분해되어 착색되거나, 이취를 유발할 수 있으며, 생체 내에서 안전성 또는 효능이 불명확하여 그 사용이 제한되고 있다.(Japanese Patent Laid-open No. 4-9320), hydroquinone (Japanese Patent Laid-open No. 6-192062), kojic acid (Japanese Patent Laid-open No. 56-7710), arbutin Rosinase inhibitory activity and was used as a whitening cosmetic. However, these ingredients are poor in stability among cosmetic formulations, may be decomposed to cause coloration or odor, and their safety or efficacy in vivo is unclear and their use is limited.

화장품 업계는 여러 화학물질 등에 의한 피부 자극을 줄이기 위해 천연물을 사용한 다수의 제품을 개발하고 있다. 천연 재료는 피부에 부작용이 적을 뿐 아니라, 최근 천연 재료를 이용한 화장품에 대한 소비자들의 호응이 높아짐에 따라 화장품 원료로서 개발가치가 점차 증가하고 있다.The cosmetics industry is developing a number of products using natural products to reduce skin irritation caused by various chemicals. In addition to low adverse effects on skin, natural materials have recently been increasingly developed as cosmetic raw materials, as consumers have become more receptive to cosmetics using natural materials.

한편, 곤충은 지구상에서 가장 다양한 종이 알려져 있는데, 현재 확인된 종만 약 100만종이 넘는다. 그 중 1,900 여종 이상의 곤충이 식용으로 이용되며, 이러한 곤충을 식용곤충(edible insect, 食用昆蟲)이라 한다.On the other hand, insects are known to be the most diverse species on the planet, and there are more than a million species currently identified. More than 1,900 insects are used for food, and these insects are called edible insects (edible insects).

식용곤충은 단백질 50%, 지방 30%로 이루어지며, 지방의 80%는 불포화지방산으로 식품 영양 조성이 달걀과 비슷하다. 특히 갈색거저리와 같이 국내에서도 쉽게 구할 수 있는 식용곤충은 칼슘, 마그네슘과 같은 미네랄 성분과 불포화지방산과 같은 피부에 유용한 영양성분의 함량이 높다는 보고가 있다.Edible insects are composed of 50% protein and 30% fat, and 80% of the fat is unsaturated fatty acid. It is reported that edible insects, such as brown goats, which are easily available in Korea, have a high content of nutrients useful for skin such as minerals such as calcium and magnesium and unsaturated fatty acids.

그러나 식용곤충은 식용의 거부감과 특정 곤충에서 풍기는 불쾌취로 인해 식품으로의 보급이 어렵다. 이에 최근엔 식용곤충에 포함 된 유용한 영양성분을 추출하여 이를 고부가가치 기능성 소재로 원료화하는 방안이 검토되고 있다.However, edible insects are difficult to spread to food due to their resistance to food and the unpleasant odors of certain insects. Recently, a method of extracting useful nutrients contained in edible insects and converting them into high value-added functional materials has been studied.

따라서 생체에 안전하고 기능성이 우수한 천연물 유래 화장품 제품의 개발 필요성이 꾸준히 대두되고 있는 상황에서, 본 발명자들은 식용곤충으로부터 펩타이드를 추출하여 그 기능성을 확인하고, 이를 천연 기능성 화장품 소재로 활용하고자 하였다.Therefore, in view of the necessity of development of natural products derived from natural materials which are safe and functional in vivo, the present inventors extracted peptides from edible insects and confirmed their functionality and utilized them as natural functional cosmetic materials.

본 발명은 전술한 종래 기술의 문제점을 해결하기 위한 것으로, 본 발명의 목적은 식용곤충의 유충에서 유래한 펩타이드를 함유하여 기능성뿐만 아니라 생체 안전성이 우수한 화장료 조성물을 제공하는 것이다.The object of the present invention is to provide a cosmetic composition containing peptides derived from larvae of edible insects and having excellent biostability as well as functionality.

본 발명의 일 측면에 따르면, 갈색거저리의 유충에서 유래한 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물이 제공된다.According to one aspect of the present invention, there is provided a cosmetic composition comprising as an active ingredient a peptide derived from larva of a brown duck.

일 실시예에 있어서, 상기 펩타이드의 크기가 1.4kDa이하일 수 있다.In one embodiment, the size of the peptide may be 1.4 kDa or less.

일 실시예에 있어서, 상기 펩타이드의 아미노산 개수가 13개 이하일 수 있다.In one embodiment, the number of amino acids in the peptide may be 13 or less.

일 실시예에 있어서, 상기 펩타이드는 갈색거저리의 유충에 효소를 처리하여 수득될 수 있다.In one embodiment, the peptides can be obtained by treating the larvae of brown ducks with enzymes.

일 실시예에 있어서, 상기 효소는 알카레이즈(Alcalase), 프로타멕스(Protamex), 뉴트라제(Neutrase), 플라보르자임(Flavourzyme), 펩신(Pepsin) 및 트립신(Trypsin)으로 이루어진 군에서 선택되는 1종 이상일 수 있다.In one embodiment, the enzyme is selected from the group consisting of Alcalase, Protamex, Neutrase, Flavourzyme, Pepsin and Trypsin. It may be more than one kind.

일 실시예에 있어서, 상기 효소는 발효 식품에서 분리된 균주에서 수득될 수 있다. In one embodiment, the enzyme may be obtained in a strain isolated from fermented food.

일 실시예에 있어서, 상기 균주는 바실러스(Bacillus), 락토바실러스(Lactobacillus), 페니실리움(Penicillium), 프사리움(Fusarium), 피키아(Pichia), 캔디다(Candida), 싸가로마이세스(Saccharomyces), 슈도모나스(Pseudomonas), 씨테로마세스(Citeromyces), 및 아스퍼질러스(Aspergullus)로 이루어진 군에서 선택되는 1종 이상일 수 있다. In one embodiment, the strain is Bacillus (Bacillus), Lactobacillus bacteria (Lactobacillus), Penny room Solarium (Penicillium), peusa Solarium (Fusarium), Pichia (Pichia), Candida (Candida), wrapped horizontally My process (Saccharomyces ), Pseudomonas (Pseudomonas), ssite may be at least one selected from the group consisting of Roman process (Citeromyces), and Aspergillus (Aspergullus).

일 실시예에 있어서, 상기 화장료 조성물은 피부 미백 또는 피부 재생용일 수 있다.In one embodiment, the cosmetic composition may be for skin whitening or skin regeneration.

본 발명의 일 측면에 따른 화장료 조성물은 천연 원료의 유효성분을 함유하므로 피부 건강에 유익할 뿐만 아니라 미백 및 피부재생 효과가 우수하다.Since the cosmetic composition according to one aspect of the present invention contains an active ingredient of a natural raw material, it is not only beneficial to skin health but also excellent in whitening and skin regeneration effect.

본 발명의 효과는 상기한 효과로 한정되는 것은 아니며, 본 발명의 상세한 설명 또는 청구범위에 기재된 발명의 구성으로부터 추론 가능한 모든 효과를 포함하는 것으로 이해되어야 한다.It should be understood that the effects of the present invention are not limited to the effects described above, but include all effects that can be deduced from the description of the invention or the composition of the invention set forth in the claims.

도 1 내지 3은 본 발명의 일 실시예에 따라 수득한 펩타이드의 분자량을 측정한 SDS-PAGE 결과이다.FIGS. 1 to 3 are SDS-PAGE results of measuring the molecular weights of the peptides obtained according to one embodiment of the present invention.

본 명세서에서 사용되는 용어는 본 발명에서의 기능을 고려하면서 가능한 현재 널리 사용되는 일반적인 용어들을 선택하였으나, 이는 당 분야에 종사하는 기술자의 의도 또는 판례, 새로운 기술의 출현 등에 따라 달라질 수 있다. 또한, 특정한 경우는 출원인이 임의로 선정한 용어도 있으며, 이 경우 해당되는 발명의 설명 부분에서 상세히 그 의미를 기재할 것이다. 따라서 본 발명에서 사용되는 용어는 단순한 용어의 명칭이 아닌, 그 용어가 가지는 의미와 본 발명의 전반에 걸친 내용을 토대로 정의되어야 한다.As used herein, the terminology used herein is intended to encompass all commonly used generic terms that may be considered while considering the functionality of the present invention, but this may vary depending upon the intent or circumstance of the skilled artisan, the emergence of new technology, and the like. Also, in certain cases, there may be a term selected arbitrarily by the applicant, in which case the meaning thereof will be described in detail in the description of the corresponding invention. Therefore, the term used in the present invention should be defined based on the meaning of the term, not on the name of a simple term, but on the entire contents of the present invention.

다르게 정의되지 않는 한, 기술적이거나 과학적인 용어를 포함해서 여기서 사용되는 모든 용어들은 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에 의해 일반적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 가지고 있다. 일반적으로 사용되는 사전에 정의되어 있는 것과 같은 용어들은 관련 기술의 문맥상 가지는 의미와 일치하는 의미를 가지는 것으로 해석되어야 하며, 본 출원에서 명백하게 정의하지 않는 한, 이상적이거나 과도하게 형식적인 의미로 해석되지 않는다. Unless defined otherwise, all terms used herein, including technical or scientific terms, have the same meaning as commonly understood by one of ordinary skill in the art to which this invention belongs. Terms such as those defined in commonly used dictionaries are to be interpreted as having a meaning consistent with the contextual meaning of the related art and are to be interpreted as either ideal or overly formal in the sense of the present application Do not.

수치 범위는 상기 범위에 정의된 수치를 포함한다. 본 명세서에 걸쳐 주어진 모든 최대의 수치 제한은 낮은 수치 제한이 명확히 쓰여져 있는 것처럼 모든 더 낮은 수치 제한을 포함한다. 본 명세서에 걸쳐 주어진 모든 최소의 수치 제한은 더 높은 수치 제한이 명확히 쓰여져 있는 것처럼 모든 더 높은 수치 제한을 포함한다. 본 명세서에 걸쳐 주어진 모든 수치 제한은 더 좁은 수치 제한이 명확히 쓰여져 있는 것처럼, 더 넓은 수치 범위 내의 더 좋은 모든 수치 범위를 포함할 것이다.The numerical range includes numerical values defined in the above range. All numerical limitations of all the maximum numerical values given throughout this specification include all lower numerical limitations as the lower numerical limitations are explicitly stated. All the minimum numerical limitations given throughout this specification include all higher numerical limitations as the higher numerical limitations are explicitly stated. All numerical limitations given throughout this specification will include any better numerical range within a broader numerical range, as narrower numerical limitations are explicitly stated.

이하, 본 발명의 실시예를 상세히 기술하나, 하기 실시예에 의해 본 발명이 한정되지 아니함은 자명하다.Hereinafter, embodiments of the present invention will be described in detail, but it should be apparent that the present invention is not limited by the following examples.

본 발명의 일 측면에 따르면, 갈색거저리의 유충에서 유래한 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물이 제공된다.According to one aspect of the present invention, there is provided a cosmetic composition comprising as an active ingredient a peptide derived from larva of a brown duck.

상기 갈색거저리(Tenebrio molitor)는 거저리과에 속하는 곤충으로 전 세계에 널리 분포한다. 갈색거저리는 주로 곡류에서 서식하는 야행성 곤충으로 알려져 있으며, 단백질 함량이 40-50%로 매우 높아 미래 식량으로 각광받고 있으며, 유충은 밀웜(mealworm)이라 불리며 식용으로 사용된다.The brown goose ( Tenebrio molitor ) is an insect belonging to the goat family and is widely distributed throughout the world. It is known as a nocturnal insect inhabited mainly in grains. It is very high in protein content of 40-50%, and is popular for future food. Larva is called mealworm and used for food.

상기 갈색거저리 유충은 몸이 어두운 갈색이며 길이는 약 15㎜의 길이로, 성충이 낳은 알은 1-2주 후에 부화한다. 부화한 유충은 9-20번 탈피를 통해 번데기가 되고, 성충으로 우화한다. 상기 갈색거저리 유충은 단백질과 지방 함량이 높아 식품원료로 가치가 높다고 평가되어 미래 식량자원으로 각광받고 있다. 또한, 상기 갈색거저리 유충의 안정성 검증을 한 결과, 동물실험에서 3,00 mg/kg/day 용량을 한달 간 쥐에 섭취하였을 때 뚜렷한 독성이 발견되지 않았다. The brown larvae are dark brown in color and have a length of about 15 mm, and eggs laid by adults are hatched after 1-2 weeks. The hatching larvae become pupae after 9-20 hatchings and become adults. The brown goat larva is highly valued as a food material because of its high protein and fat content, and has been attracting attention as a future food resource. Furthermore, as a result of the stability test of the brown larvae, no significant toxicity was found when the mice were fed a dose of 3,00 mg / kg / day for one month in an animal test.

상기 “유효 성분으로 포함하는”은 피부 개선 효과를 구현할 수 있는, 예컨대, 주름개선효능과 관련된 콜라겐 합성, 탄력 개선 또는 피부 미백, 피부 자극 완화, 피부 진정 효과 등을 나타낼 수 있는 정도의 유효량을 함유하는 것을 의미할 수 있다.The above-mentioned " comprising as an active ingredient " is intended to mean an effective amount of an effective amount capable of exhibiting a skin improving effect, such as collagen synthesis associated with a wrinkle-reducing effect, elasticity improvement or skin whitening, skin irritation alleviation, It can mean to do.

상기 펩타이드는 2개 이상의 아미노산이 α-카르복시기와 α-아미노기로 사슬모양 또는 고리모양으로 결합하여 형성된 화합물이다. 상기 펩타이드는 아미노산의 결합수에 따라서 디펩타이드, 트리펩타이드, 테트라펩타이드 혹은 올리고펩타이드나 폴리펩타이드로 분류된다. 상기 올리고펩타이드(결합 아미노산수 2~10개)나 폴리펩타이드(10~50개인 아미노산)의 수는 반드시 결정되어 있지는 않다.The peptide is a compound formed by bonding two or more amino acids in a chain form or an annular form to the? -Carboxy group and the? -Amino group. The peptide is classified as a dipeptide, a tripeptide, a tetrapeptide or an oligopeptide or a polypeptide according to the number of amino acid bonds. The number of oligopeptides (2 to 10 amino acids bound) and polypeptides (10 to 50 amino acids) are not necessarily determined.

상기 펩타이드의 크기는 1.4 kDa 이하일 수 있고, 상기 펩타이드의 아미노산 개수가 13개 이하일 수 있다. The size of the peptide may be 1.4 kDa or less, and the number of amino acids of the peptide may be 13 or less.

상기 펩타이드의 크기가 1.4 kDa 이하거나, 아미노산의 개수가 13개 이하인 경우, 분자의 크기가 작기 때문에 피부 흡수율이 증대될 수 있으며 화장품 제품으로 적용하였을 때 기능성이 개선될 수 있다. When the size of the peptide is 1.4 kDa or less, or the number of amino acids is 13 or less, the skin absorption rate can be increased because the size of the molecule is small, and the functionality can be improved when applied to a cosmetic product.

상기 갈색거저리의 유충에서 유래한 펩타이드는 갈색거저리의 유충을 분쇄하고, 동결건조하는 전처리 단계; 분말화된 갈색거저리의 유충과 단백질 분해효소를 포함하는 효소액을 혼합하는 펩타이드화 단계; 및 혼합물을 여과하고 원심분리로 펩타이드를 수득하는 펩타이드 분리 단계;로 구성된 펩타이드 제조 방법으로 수득할 수 있다.The peptides derived from the larva of the brown gill include a pretreatment step of grinding and freeze-drying the larva of the brown gill; A peptizing step of mixing a larva of a powdered brown duck with an enzyme solution containing a proteolytic enzyme; And a peptide separation step of filtering the mixture and obtaining a peptide by centrifugation.

상기 제조 방법의 전처리 단계에서 갈색거저리의 유충을 분쇄하고, 용매(산/염기/유기용매)에 침전하여 단백질을 선택적으로 추출하는 단백질 고함량화 단계가 더 추가될 수 있다. 상기 단백질 고함량화 단계로 인해 갈색거저리의 유충에서 단백질만 선택적으로 효소 분해할 수 있기 때문에, 펩타이드 제조 효율이 향상될 수 있다.In the pretreatment step of the above method, a protein high-concentration step may be further added in which the larva of the brown duck is pulverized and precipitated in a solvent (acid / base / organic solvent) to selectively extract the protein. Since the protein high concentration step can selectively degrade the protein only in the larva of the brown duck, the peptide production efficiency can be improved.

상기 제조 방법의 전처리 단계에서 동결건조는 water wapor의 부분압을 낮춤으로써, 얼음을 직접 증기로 만드는 승화에 의해 실시된다. 상기 동결건조를 통해 잔여 수분이 2% w/w 이하로 유지되면, 유용물질의 손실 없이 안정적으로 분쇄물을 저장 및 수송할 수 있다.In the pre-treatment step of the above process, freeze-drying is carried out by sublimation of the ice directly into steam by lowering the partial pressure of the water wapor. If the residual moisture is kept below 2% w / w through the lyophilization, the pulverized material can be stored and transported stably without loss of useful material.

상기 제조 방법의 펩타이드화 단계에서 상기 단백질 분해효소는 단백질을 가수분해하는 효소이고, 파쇄된 갈색거저리 유충 분쇄물과 일정시간 혼합하여 효소분해를 진행한다. The proteolytic enzyme is an enzyme which hydrolyzes a protein in the peptidization step of the above production method, and is digested with the crushed brown larch larvae for a certain period of time to perform enzymatic degradation.

상기 분해효소는 상업적으로 이용되는 알카레이즈(Alcalase), 프로타멕스(Protamex), 뉴트라제(Neutrase), 플라보르자임(Flavourzyme), 펩신(Pepsin) 및 트립신(Trypsin)와 같은 효소를 사용할 수 있다. 상기 펩신(Pepsin) 및 트립신(Trypsin)은 동물에서 유래한 것을 사용할 수 있다.An enzyme such as Alcalase, Protamex, Neutrase, Flavourzyme, Pepsin and Trypsin, which are commercially available, can be used as the degrading enzyme . The pepsin (Pepsin) and trypsin (Trypsin) may be derived from animals.

또한, 상기 분해효소는 바실러스(Bacillus), 락토바실러스(Lactobacillus), 페니실리움(Penicillium), 프사리움(Fusarium), 피키아(Pichia), 캔디다(Candida), 싸가로마이세스(Saccharomyces), 슈도모나스(Pseudomonas), 씨테로마세스(Citeromyces), 및 아스퍼질러스(Aspergullus)와 같은 미생물에서 유래한 효소를 사용할 수 있으며, 그 외에 Fusarium illudens , F. lateritium , F. solani , Paecilomyces sp ., Penicillium aurantiogriseum Dierckx , P. brevicompactum , P. citrinum, P. chrysogenum , P. corylophilum , P. crustosum , P. expansum , P. fellutanum, P. implicatum , P. roqueforti , P. solitum P. Waksman에서 유래할 수도 있다.Furthermore, the degrading enzyme is Bacillus (Bacillus), Lactobacillus bacteria (Lactobacillus), Penny room Solarium (Penicillium), peusa Solarium (Fusarium), Pichia (Pichia), Candida (Candida), wrapped horizontally My process (Saccharomyces), Pseudomonas Enzymes derived from microorganisms such as Pseudomonas , Citeromyces , and Aspergullus can be used. In addition, Fusarium < RTI ID = 0.0 > illudens , F. lateritium , F. solani , Paecilomyces sp ., Penicillium aurantiogriseum Dierckx, P. brevicompactum, P. citrinum, P. chrysogenum, P. corylophilum, P. crustosum, P. expansum, P. fellutanum, P. implicatum, P. roqueforti, P. solitum And P. Waksman .

상기 미생물은 청국장, 된장, 나또, 간장, 김치 등에서 분리된 식품유래 식품 안전균으로, 상업적으로 사용되는 발효균주일 수 있으며, 펩타이드를 생산하기 위해 사용될 수 있다. The microorganism may be a food-derived food safety bacterium isolated from chungkukjang, miso, natto, soy sauce, kimchi and the like, and may be used as a commercially available fermentation broth and may be used for producing peptides.

상기 균주에서 단백질 분해효소를 생산하기 위해, 액상 또는 고상의 효소 생산용 배지를 사용한다. 상기 효소생산용 배지에, 상기 균주를 10% v/v로 접종하고, 25-30℃에서 24시간 배양한 다음, 20분간 13,00xg 속도로 원심분리한 후 상등액을 회수하여 효소액으로 사용할 수 있다. In order to produce the proteolytic enzyme from the strain, a medium for the production of a liquid or solid phase enzyme is used. The culture medium for enzyme production is inoculated with the strain at 10% v / v, cultured at 25-30 ° C for 24 hours, centrifuged at a rate of 13,00xg for 20 minutes, and the supernatant is recovered and used as an enzyme solution .

상기 제조 방법의 펩타이드화 단계에서 갈색거저리 유충 분쇄물과 효소액은 1:30 비율로 혼합하고, 온도 조건은 20-60℃이며, 반응시간은 2-24시간이다. 분쇄물과 효소액을 혼합하고, 진탕배양기에서 효소분해 반응이 실시될 수 있으며, 반응이 끝나면, 95℃ 물에 10분간 가열하여 효소를 불활성화 시킨 후, 20분간 3,000xg 속도로 원심분리하여 펩타이드 상등액을 수득할 수 있다.In the peptizing step of the preparation method, the brown goat's larva larvae and the enzyme solution are mixed at a ratio of 1:30, the temperature condition is 20-60 ° C, and the reaction time is 2-24 hours. After the reaction, the enzyme was inactivated by heating in 95 ° C water for 10 minutes and centrifuged at 3,000xg for 20 minutes to obtain peptide supernatant Can be obtained.

상기 화장료 조성물은 피부 미백 또는 피부 재생용일 수 있다.The cosmetic composition may be used for skin whitening or skin regeneration.

상기 “미백”은 피부색에 영향을 미치는 멜라닌, 산화-환원 헤모글로빈, 카로틴, 멜라노이드 등 다양한 생체 분자의 생성을 억제함으로써 잡티, 주근깨, 기미 등의 피부 색소 침착 현상을 완화시키고, 피부 누런기, 붉은기를 완화시켜 피부 밝기 및 균일도를 향상시키는 효과를 의미한다. 특히, 멜라닌 색소 생성 효소인 타이로시네이즈의 활성을 억제함으로써 피부 톤을 개선할 수 있다.The "whitening" suppresses the formation of various biomolecules such as melanin, redox hemoglobin, carotene and melanoid which affect skin color, thereby alleviating skin pigmentation phenomena such as dullness, freckles and stains, Thereby improving skin brightness and uniformity. In particular, the skin tone can be improved by inhibiting the activity of tyrosinase, which is a melanin pigment-forming enzyme.

상기 “피부 재생”은 피부 노화를 방지하는 것으로, 피부 주름 방지 및 개선과 같은 효과를 의미한다. 피부 주름은 콜라겐의 분해에 의해 발생되며, 콜라겐 분해효소인 콜라게네이즈를 억제함으로써 피부 주름을 개선할 수 있다. The " skin regeneration " means prevention of skin aging, which means an effect such as prevention and improvement of skin wrinkles. Skin wrinkles are generated by collagen degradation, and collagenase, which is collagenase, is suppressed, thereby improving wrinkles of the skin.

상기 화장료 조성물은 유연화장수, 영양화장수, 수분크림, 영양크림, 마사지크림, 에센스, 앰플, 젤, 아이크림, 클렌징크림, 클렌징폼, 클렌징워터, 팩, 스프레이 및 파우더로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상으로 제형화될 수 있다.The cosmetic composition may be at least one selected from the group consisting of softening longevity, nutritional lotion, moisture cream, nutritional cream, massage cream, essence, ampoule, gel, eye cream, cleansing cream, cleansing foam, cleansing water, pack, spray and powder Can be formulated.

상기 화장료 조성물은 통상의 방법에 의해 제형화될 수 있다. 피부 외용제의 제형화에 있어서 Remington's Pharmaceutical Science, Mack Publishing Company, Easton PA에 개시되어 있는 내용을 참조할 수 있고, 화장료 조성물의 제형화에 있어서 International cosmetic ingredient dictionary, 6th ed(The cosmetic, Toiletry and Fragrance Association, Inc., Washington, 1995)에 개시되어 있는 내용을 참조할 수 있다.The cosmetic composition may be formulated by a conventional method. The contents disclosed in Remington ' s Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easton PA in the formulation of the external preparation for skin can be referred to, and in the formulation of the cosmetic composition, International cosmetic ingredient dictionary, 6th ed (The cosmetic, Toiletry and Fragrance Association , Inc., Washington, 1995).

구체적으로, 상기 화장료 조성물은 일반적인 유화 제형 및 가용화 제형으로 제조할 수 있다. 예컨대, 유연 화장수 또는 영양 화장수 등의 화장수; 훼이셜 로션, 바디로션 등의 유액; 영양 크림, 수분 크림, 아이 크림 등의 크림; 에센스; 화장연고; 스프레이; 젤; 팩; 선 스크린; 메이크업 베이스; 액체 타입, 고체 타입 또는 스프레이 타입 등의 파운데이션으로 제형화될 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다. 또한 상기 피부 외용제는, 연고, 패치, 겔, 크림 또는 분무제로 제형화될 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다.Specifically, the cosmetic composition may be prepared into a general emulsified formulation and a solubilized formulation. For example, lotion such as soft lotion or nutrition lotion; Lotion such as facial lotion, body lotion; Nourishing cream, moisture cream, cream such as eye cream; essence; Makeup ointment; spray; Gel; pack; Sunscreen; Makeup base; Liquid type, solid type or spray type, but the present invention is not limited thereto. In addition, the external preparation for skin may be formulated into ointments, patches, gels, creams or sprays, but is not limited thereto.

상기 화장료 조성물은 각각의 제형에 있어서 상기 필수성분 외에 제형의 종류 또는 사용 목적 등에 따라 본 발명에 따른 목적을 저해하지 않는 범위 내에서 다른 성분들이 적절히 배합될 수 있다.The cosmetic composition of the present invention may be appropriately blended with other ingredients within the range of not compromising the object of the present invention depending on the kind of the formulation or the purpose of use, in addition to the essential ingredients in each formulation.

상기 화장료 조성물은 통상적으로 허용 가능한 담체를 포함할 수 있으며, 예컨대 유분, 물, 계면활성제, 보습제, 저급 알코올, 증점제, 킬레이트제, 색소, 방부제, 향료 등을 적절히 배합할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.The cosmetic composition may contain a conventional acceptable carrier and may appropriately contain, for example, oil, water, a surfactant, a moisturizer, a lower alcohol, a thickener, a chelating agent, a colorant, no.

상기 허용 가능한 담체는 제형에 따라 달리할 수 있다. 예컨대, 연고, 페이스트, 크림 또는 젤로 제형화될 때 담체 성분으로서 동물성 유, 식물성 유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크, 산화아연 또는 이들의 혼합물이 사용될 수 있다.The acceptable carrier may vary according to the formulation. For example, when formulated into ointments, pastes, creams or gels, there may be used an animal oil, a vegetable oil, a wax, a paraffin, a starch, a tracer, a cellulose derivative, polyethylene glycol, silicon, bentonite, silica, talc, zinc oxide, Mixtures may be used.

상기 화장료 조성물은 파우더 또는 스프레이로 제형화될 때, 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록사이드, 칼슘 실케이트, 폴리아미드 파우더 또는 이들의 혼합물이 사용될 수 있고, 스프레이의 경우 클로로플루오로히드로카본, 프로판, 부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진제를 더 포함할 수 있다.When the cosmetic composition is formulated into a powder or a spray, lactose, talc, silica, aluminum hydroxide, calcium silicate, polyamide powder or a mixture thereof may be used as a carrier component. In the case of a spray, Propellants such as carbon, propane, butane or dimethyl ether.

상기 화장료 조성물은 용액 또는 유탁액으로 제형화될 때, 담체 성분으로서 용매, 용해화제, 또는 유탁화제가 사용될 수 있고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-브틸글리콜 오일이 사용될 수 있고, 특히, 목화씨 오일, 땅콩 오일, 옥수수 배종 오일, 올리브 오일, 피마자 오일 및 참깨 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 사용될 수 있다.When the cosmetic composition is formulated into a solution or emulsion, a solvent, a solubilizing agent or an emulsifying agent may be used as a carrier component, and examples thereof include water, ethanol, isopropanol, ethyl carbonate, ethyl acetate, benzyl benzoate, 1,3-butyl glycol oil may be used, and in particular, fatty acid esters of cottonseed oil, peanut oil, corn oil, olive oil, castor oil and sesame oil, glycerol aliphatic ester, polyethylene glycol or sorbitan may be used.

상기 화장료 조성물은 현탁액으로 제형화될 때, 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리 옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 사용될 수 있다.When formulated into a suspension, the cosmetic composition may contain, as a carrier component, a liquid diluent such as water, ethanol or propylene glycol, a suspending agent such as ethoxylated isostearyl alcohol, polyoxyethylene sorbitol ester and polyoxyethylene sorbitan ester, Microcrystalline cellulose, aluminum metahydroxide, bentonite, agar or tracant, etc. may be used.

상기 화장료 조성물은 최종 제품의 품질이나 기능에 따라 업계에서 통상적으로 사용되는 지방 물질, 유기용매, 용해제, 농축제, 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온봉 쇄제, 킬레이트화제, 보존제, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 화장품에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 화장품학 또는 피부과학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 추가적으로 함유할 수 있다.The cosmetic composition may be a cosmetic or dermatological composition which is generally used in the art depending on the quality or function of the final product, such as a lipid, an organic solvent, a solubilizing agent, a thickening agent, a gelling agent, a softening agent, an antioxidant, a suspending agent, a stabilizer, Surfactants, water, ionic or nonionic emulsifiers, fillers, metal ion sequestrants, chelating agents, preservatives, blockers, wetting agents, essential oils, dyes, pigments, hydrophilic or lipophilic active agents, And may further contain adjuvants conventionally used in the field of cosmetics or dermatology, such as any other ingredient.

다만, 상기 보조제 및 그 혼합 비율은 본 발명에 따른 화장료 조성물의 바람직한 성질에 영향을 미치지 않도록 적절히 선택할 수 있다.However, the adjuvant and the mixing ratio thereof can be appropriately selected so as not to affect the preferable properties of the cosmetic composition according to the present invention.

이하 실시예를 통해, 본 발명을 더욱 상술하나 하기 실시예에 의해 본 발명이 제한되지 아니함은 자명하다.The present invention will be further described with reference to the following examples, but it should be apparent that the present invention is not limited by the following examples.

제조예Manufacturing example

실험에 사용한 갈색거저리 유충은 충남 아산의 곤충 재배농가에서 제공받아 사용하였다. 제공받은 갈색 거저리 유충은 -50℃의 냉동고에 보관하였다.The brown larvae used in the experiment were supplied from the insect farmers in Asan, Chungnam. The brown goat larvae were stored in a freezer at -50 ° C.

갈색거저리 유충을 분쇄기로 파쇄하고, 30℃ 온도조건의 증류수에 침전하여 단백질을 추출하고, 동결건조하여 수용성 고형물을 수득하였다.Brown larvae were crushed by a pulverizer, precipitated in distilled water at 30 ° C temperature to extract proteins, and lyophilized to obtain a water-soluble solid.

실시예 1Example 1

제조예에서 수득한 고형물을 분해하여 펩타이드를 제조하였다. Peptides were prepared by digesting the solids obtained in the Production Example.

고형물 1g과 분해효소인 0.2mol sodium phosphate buffer(SPB)를 1:30(w/v) 비율로 혼합하고, 진탕배양기(SIB-05RH, Jeongbio, Korea)에 200rpm 조건으로 8시간 동안 반응하였다.1 g of the solid was mixed with 0.2 mol / l sodium phosphate buffer (SPB) at a ratio of 1:30 (w / v) and reacted for 8 hours at 200 rpm in a shaking incubator (SIB-05RH, Jeongbio, Korea).

반응이 끝나면, 100℃ 물에 10분간 가열하여 효소를 불활성화 시킨 후, 20 분간 3,000xg속도로 원심분리하여 상등액을 수득하였다.After the reaction was completed, the enzyme was inactivated by heating at 100 ° C for 10 minutes, and then centrifuged at 3,000xg for 20 minutes to obtain a supernatant.

수득한 상등액은 여과하여 불순물을 제거하고, 동결건조하여 고상의 시료를 수득하였다.The resulting supernatant was filtered to remove impurities and lyophilized to obtain a solid sample.

실시예 2Example 2

본 발명의 실시예 2에서는 분해효소로 프로타멕스(Protamex)를 사용하는 것을 제외하고는 실시예 1과 동일하게 실시하였다.Example 2 was carried out in the same manner as in Example 1, except that Protamex was used as a digesting enzyme.

실시예 3Example 3

본 발명의 실시예 3에서는 분해효소로 뉴트라제(Neutrase)를 사용하는 것을 제외하고는 실시예 1과 동일하게 실시하였다.Example 3 was carried out in the same manner as in Example 1, except that Neutrase was used as a degrading enzyme.

실시예 4Example 4

본 발명의 실시예 4에서는 분해효소로 플라보르자임(Flavourzyme)을 사용하는 것을 제외하고는 실시예 1과 동일하게 실시하였다.Example 4 of the present invention was carried out in the same manner as in Example 1, except that flavorzyme was used as a degrading enzyme.

실시예 5Example 5

본 발명의 실시예 5에서는 분해효소로 알카레이즈(Alcalase)를 사용하는 것을 제외하고는 실시예 1과 동일하게 실시하였다.Example 5 of the present invention was carried out in the same manner as in Example 1, except that Alcalase was used as a degrading enzyme.

실시예 6Example 6

본 발명의 실시예 6에서는 분해효소로 청국장 균주 효소액을 사용하는 것을 제외하고는 실시예 1과 동일하게 실시하였다.Example 6 of the present invention was carried out in the same manner as in Example 1, except that Chungkukjang strain enzyme solution was used as a degrading enzyme.

하기 표 1은 실시예 6에서 사용된 청국장 균주 효소액의 단백질 분해 활성(프로테아제 활성)을 알카레이즈와 비교한 결과이다.Table 1 below shows the results of comparing the proteolytic activity (protease activity) of the enzyme solution of chungkukjang strain used in Example 6 with alkaline.

구분division 프로테아제 활성(unit/mL)Protease activity (unit / ml) 알카레이즈Alcazar 378.9378.9 청국장 균주 효소액Chungkukjang strain enzyme solution 708.5708.5

비교예 1Comparative Example 1

제조예에서 수득한 고형물을 분해하여 펩타이드를 제조하였다. Peptides were prepared by digesting the solids obtained in the Production Example.

고형물 1g과 1mol NaOH를 1:30(w/v) 비율로 혼합하고, 진탕배양기(SIB-05RH, Jeongbio, Korea)에 50℃ 200rpm 조건으로 8시간 동안 반응하였다.1 g of solid and 1 mol of NaOH were mixed at a ratio of 1:30 (w / v), and the mixture was reacted for 8 hours at 50 ° C and 200 rpm in a shaking incubator (SIB-05RH, Jeongbio, Korea).

반응이 끝나면, 95℃ 물에 10분간 가열하여 효소를 불활성화 시킨 후, 20 분간 3,000xg속도로 원심분리하여 상등액을 수득하였다.At the end of the reaction, the enzyme was inactivated by heating in 95 ° C water for 10 minutes and then centrifuged at 3,000xg for 20 minutes to obtain a supernatant.

수득한 상등액은 여과하여 불순물을 제거하고, 동결건조하여 고상의 시료를 수득하였다.The resulting supernatant was filtered to remove impurities and lyophilized to obtain a solid sample.

비교예 2Comparative Example 2

본 발명의 비교예 2에서는 염기분해 대신 1mol H2SO4로 산분해 하는 것을 제외하고는 비교예 1과 동일하게 실시하였다.Comparative Example 2 of the present invention was carried out in the same manner as in Comparative Example 1 except that the acid was decomposed with 1 mol H 2 SO 4 instead of the base decomposition.

비교예 3Comparative Example 3

본 발명의 비교예 3에서는 염기분해대신 6mol HCl로 110℃ 24시간 산분해 하는 것을 제외하고는 비교예 1과 동일하게 실시하였다.Comparative Example 3 of the present invention was carried out in the same manner as in Comparative Example 1, except that the acid was decomposed with 6 mol HCl at 110 deg. C for 24 hours instead of the base decomposition.

실험예 1 : 피부 안전성 시험Experimental Example 1: Skin safety test

실시예의 시료에 대한 피부 안전성을 검증하기 위해, 섬유아세포(HDF), 멜라닌형성세포(B16F10), 각질세포(HaCaT)에 대한 MTT assay 실험을 수행하였다.MTT assay experiments were performed on fibroblasts (HDF), melanocytes (B16F10), and keratinocytes (HaCaT) to verify skin safety for the samples of the examples.

실시예의 시료를 정제수에 농도별(50 mg/L)로 각각 현탁한 후, 세포 생존율을 측정하였다.The samples of the examples were suspended in purified water at different concentrations (50 mg / L), and cell viability was measured.

세포 독성은 MTT{3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2-5-diphenyltetrazolium bromide} 시약을 이용하여 세포 생존율을 측정하는 모스만(Mosmann)의 방법을 변형하여 수행하였다.Cytotoxicity was performed by modifying the method of Mosmann to measure cell viability using MTT {3- (4,5-dimethylthiazol-2-yl) -2-5-diphenyltetrazolium bromide} reagent.

섬유아세포(HDF), 멜라닌형성세포(B16F10), 및 각질세포(HaCaT)를 각각 96-웰 플레이트에 1×104 cells/well의 농도로 분주하여 37℃, 5 % CO2 에서 48 시간 동안 배양하였다.(HDF), melanocyte-forming cells (B16F10), and keratinocytes (HaCaT) were dispensed in 96-well plates at a concentration of 1 × 10 4 cells / well and cultured at 37 ° C. and 5% CO 2 for 48 hours Respectively.

배양 배지를 제거하고 시료를 농도별로 처리한 배지에 48 시간 동안 배양한 후 배지를 제거하고 PBS(Phosphate buffered saline)로 반복 세척하였다. After the culture medium was removed and the sample was cultured for 48 hours in a concentration-treated medium, the medium was removed and repeatedly washed with PBS (phosphate buffered saline).

MTT를 5 mg/mL 로 PBS에 녹여 50 L 첨가하고 37℃, 5 %의 CO2 에서 24 시간 동안 배양하였다. DMSO(Dimethyl sulfoxide)를 한 웰(well) 당 100L 넣고, 10 분 동안 교반한 후 540 nm에서 흡광도를 측정하였다.MTT was dissolved in PBS at 5 mg / mL and 50 L was added. The cells were cultured at 37 ° C and 5% CO 2 for 24 hours. 100 L of DMSO (dimethyl sulfoxide) was added to each well, stirred for 10 minutes, and absorbance was measured at 540 nm.

표 2를 참조하면, 각 실시예 시료의 모든 농도에서 세포 독성은 확인되지 않았다. 비교예 시료는 염기분해 또는 산분해로 수득되었기 때문에 세포 독성이 높았다.Referring to Table 2, no cytotoxicity was observed at all concentrations of the samples of the respective Examples. The comparative sample was highly cytotoxic since it was obtained by base decomposition or acid decomposition.

상기 결과는 상기 실시예의 시료가 인체에 무해할 뿐만 아니라 인체 안전성이 우수함을 시사한다. The above results suggest that the sample of the embodiment is not only harmless to the human body but also has excellent human safety.

구분division 세포활성(Cell activity %% )) 대조군Control group 98.3%98.3% 산분해 (HCl)Acid decomposition (HCl) 68.4%68.4% 염기분해 (NaOH)Base Decomposition (NaOH) 47.2%47.2% 효소분해 (Alcalsase)Enzyme decomposition (Alcalsase) 96.0%96.0% 청국장균 유래 효소 Enzyme derived from Chungkukjang 96.6%96.6%

실험예 2 : 펩타이드 분자량 측정Experimental Example 2: Measurement of Peptide Molecular Weight

실시예 및 비교예의 시료에 함유된 펩타이드 분자량을 측정하기 위해, SDS-PAGE를 사용하였다. SDS-PAGE was used to measure the molecular weight of the peptides contained in the samples of Examples and Comparative Examples.

SDS-PAGE는 12-16.5% separating gel과 5% stacking gel로 구성된 겔을 사용하였다. SDS-PAGE gels were composed of 12-16.5% separating gel and 5% stacking gel.

staining buffer는 0.1% Coomassie brilliant blue R-250, 45% methanol and 10% acetic acid을 혼합하여 사용하고, de-staining buffer는 10% acetic acid and 45% methanol를 혼합하여 사용하였다.Staining buffer was mixed with 0.1% Coomassie brilliant blue R-250, 45% methanol and 10% acetic acid, and de-staining buffer was mixed with 10% acetic acid and 45% methanol.

대조군은 갈색거저리 유충 분쇄물을 5× SDS-sample buffer(0.25 mol Tris-HCl buffer, pH 6.8, containing 10% SDS, 4% 2-mercaptoethanol, 20% glycerol, 0.05% bromo-phenol blue and 10 mM EDTA)와 혼합하여 100℃에서 5분간 열수추출한 것이다.For the control, the brown goat larvae were suspended in 5 × SDS-sample buffer (0.25 mol Tris-HCl buffer, pH 6.8, containing 10% SDS, 4% 2-mercaptoethanol, 20% glycerol, 0.05% bromo-phenol blue and 10 mM EDTA ) And hot-water-extracted at 100 ° C for 5 minutes.

표준 분자량 marker는 SDS-PAGE molecular weight standards(Biorad, USA), polypeptide SDS-PAGE molecular weight standards을 사용하였다.Standard molecular weight markers were used for SDS-PAGE molecular weight standards (Biorad, USA) and for polypeptide SDS-PAGE molecular weight standards.

전기영동장치를 이용하여 전기영동 후 겔은 staining buffer를 이용하여 2시간 이상 염색된 후, destaining buffer로 탈색하였다.After electrophoresis using the electrophoresis device, the gel was stained with staining buffer for more than 2 hours and decolorized with destaining buffer.

펩타이드 분자량 측정 결과는 도 1, 2 및 3과 같다.The results of peptide molecular weight measurement are shown in FIGS. 1, 2 and 3.

도 1을 참조하면, 대조군에서 6.5 kDa 부근에서 밴드를 확인하였다. 비교예 1은 염기분해로 인해 끌림 현상이 발생하였고, 펩타이드 대부분이 6.5 kDa 이하에 존재하였다. Referring to FIG. 1, bands were observed in the vicinity of 6.5 kDa in the control group. In Comparative Example 1, a draw phenomenon occurred due to base decomposition, and most of the peptides were present at less than 6.5 kDa.

비교예 2 및 3은 펩타이드 대부분이 6.5-200kDa 사이에 분포하지 않으며, 6.5 kDa 이하에 존재하였다. 특히 비교예 3은 단일 아미노산으로 분해하는 과정으로 단백질이 단일 아미노산으로 분해되어 6.5 kDa 이상의 밴드가 나타나지 않았다. 상업용 효소를 사용한 실시예 1 내지 5에서도 6.5 kDa 이하의 펩타이드가 생산되어 6.5 kDa 이상에서 밴드가 확인되지 않았다.In Comparative Examples 2 and 3, most of the peptides were not distributed between 6.5 and 200 kDa, and existed below 6.5 kDa. In particular, in Comparative Example 3, the protein was decomposed into a single amino acid by the process of decomposing into a single amino acid, and no band of 6.5 kDa or more appeared. Peptides of 6.5 kDa or less were also produced in Examples 1 to 5 using commercial enzymes, and no band was observed at 6.5 kDa or more.

도 2를 참조하면, 실시예 6에서 25 kDa 부근에서 밴드가 확인되었으나, 청국장 균주 배양액 및 카제인과 비교해본 결과, 배양액에 포함된 카제인으로 확인되었다. Referring to FIG. 2, in Example 6, a band was observed in the vicinity of 25 kDa. As a result, it was confirmed that the casein included in the culture broth was compared with the culture broth of Chungkukjang strain and casein.

대조군에 존재하는 6.5 kDa 부근의 밴드가 실시예 6에 나타나지 않았으며, 상기 결과는 미생물에서 유래한 효소가 갈색거저리 유충의 펩타이드를 6.5 kDa 이하의 펩타이드로 분해한다는 것을 시사한다.A band of about 6.5 kDa in the control was not present in Example 6, suggesting that the enzyme derived from the microorganism decomposes the peptides of the larvae of the larvae to 6.5 kDa or less.

도 3을 참조하면, 상업용 분해효소를 사용한 실시예 5 및 미생물 분해효소를 사용한 실시예 6에서 3.5 kDa 이상에서 밴드가 나타나지 않았으며, 대부분의 단백질이 1.4 kDa 이하로 분해되었음을 확인하였다.Referring to FIG. 3, in Example 5 using the commercial degrading enzyme and Example 6 using the microbial degrading enzyme, no band appeared at over 3.5 kDa, and most of the protein was decomposed to below 1.4 kDa.

실험예 3 : 타이로시네이즈 저해 활성 시험Experimental Example 3: Tyrosinase inhibitory activity test

실시예 및 비교예의 추출물의 타이로시나제 억제 활성(tyrosinase inhibition activity)을 평가하였다. The tyrosinase inhibition activity of the extracts of Examples and Comparative Examples was evaluated.

타이로시나제는 타이로신과 반응하여 멜라닌을 형성하는 효소로, 타이로시나제가 억제되면 멜라닌의 생성이 저해되기 때문에 미백 효과가 나타난다.Tyrosinase is an enzyme that reacts with tyrosine to form melanin. When thyrosinase is inhibited, the production of melanin is inhibited and thus a whitening effect is exhibited.

실시예 및 비교예의 타이로시네이즈 저해 효과를 측정하고자 도파산화효소(DOPA Oxidase) 방법을 변형하여 사용하였다.In order to measure the inhibitory effect of tyrosinase of Examples and Comparative Examples, the DOPA Oxidase method was modified and used.

Buffer는 67 mmol sodium phosphate buffer(pH 6.8) 0.4 mL와 기질액 10 mmol 3,4-dihydroxy phenylanin(L-dopa)용액 0.2 mL의 혼합액에 125 unit/mL mushroom tyrosinase(Sigma-Aldrich Co, Louis, MO, USA) 0.1 mL와 시료 0.2 mL를 첨가하였다.Buffer was prepared by adding 125 units / mL mushroom tyrosinase (Sigma-Aldrich Co., St. Louis, Mo.) to a mixture of 0.4 mL of 67 mmol sodium phosphate buffer (pH 6.8) and 0.2 mL of a 10 mM solution of 3,4-dihydroxy phenylanin , USA) and 0.2 mL of the sample.

37℃ 에서 20분간 반응시키고 475 nm 파장에서 반응액 중 생성된 도파크롬(DOPAchrome)의 양을 측정하였다.The reaction was carried out at 37 ° C for 20 minutes, and the amount of DOPAchrome produced in the reaction solution was measured at a wavelength of 475 nm.

시료 미첨가군은 시료 대신 증류수를 0.2 mL 첨가하고 37℃에서 20 분간 반응시켜 분광광도계(UV-1650PC, Shimadzu, Kyoto, Japan)를 이용하여 475 nm에서 측정하였다.The sample was prepared by adding 0.2 mL of distilled water instead of the sample, reacting at 37 ° C for 20 minutes, and measuring at 475 nm using a spectrophotometer (UV-1650PC, Shimadzu, Kyoto, Japan).

타이로시네이즈 저해활성은 하기 수학식에 따라 시료 미첨가군과의 비율로 산출하였다(표 3).The tyrosinase inhibitory activity was calculated by the ratio of the number of samples to the number of samples in accordance with the following formula (Table 3).

[수학식][Mathematical Expression]

타이로시네이즈 저해 활성(%) = 100 x (1 - (각 시료 첨가군의 흡광도 / 시료 미첨가군의 흡광도))(%) = 100 x (1 - (absorbance of each sample added group / absorbance of sample not containing group))

구분division 타이로시네이즈Tairosineiz 저해 활성( Inhibitory activity %% )) 실시예 1Example 1 23.423.4 실시예 2Example 2 30.530.5 실시예 3Example 3 25.225.2 실시예 4Example 4 27.027.0 실시예 5Example 5 40.340.3 실시예 6Example 6 31.631.6 비교예 1Comparative Example 1 16.416.4 비교예 2Comparative Example 2 29.629.6 비교예 3Comparative Example 3 33.833.8 대조군Control group 00 아스코르빈산(ascorbic acid)Ascorbic acid 34.934.9

표 3을 참조하면, 산업 분해효소를 사용한 실시예 1 내지 5는 비교예 1 및 2와 유사한 타이로시네이즈 저해 활성이 나타났다. 타이로시네이즈 저해 활성이 높을수록 미백 효과가 우수하다.Referring to Table 3, Examples 1 to 5 using industrial degrading enzymes showed tyrosinase inhibitory activities similar to those of Comparative Examples 1 and 2. The higher the inhibitory activity of tyrosinase, the better the whitening effect.

단일 아미노산화된 비교예 3은 비교예 1 및 2 대비 타이로시네이즈 저해활성이 높았으며, 상기 결과는 펩타이드가 저분자화 될수록 타이로시네이즈 활성이 증대될 수 있음을 시사한다.In Comparative Example 3, which was single amino acid, the tyrosinase inhibitory activity was higher than that of Comparative Examples 1 and 2. The results suggest that the tyrosinase activity can be increased as the peptide is lowered in molecular weight.

분해효소로 알카레이즈를 사용한 실시예 5의 타이로시네이즈 저해활성이 가장 높았으며, 청국장 균주 효소액을 사용한 실시예 6의 타이로시네이즈 저해활성은 비교예 3과 유사하였다.The tyrosinase inhibitory activity of Example 5 using alkaline was used as the degrading enzyme, and the tyrosinase inhibitory activity of Example 6 using the enzyme solution of Chungkukjang was similar to that of Comparative Example 3.

상기 결과는 갈색거저리 유충에서 상업용 효소와 청국장 균주 효소액을 이용해 수득된 펩타이드의 미백효과가 염기/산 분해로 수득된 펩타이드와 동등한 수준임을 시사한다.These results suggest that the whitening effect of the peptides obtained with the commercial enzyme and the chrysanthemum strain enzyme solution in brown goat larvae is equivalent to that of the peptide obtained by base / acid decomposition.

실험예 4 : 콜라게네이즈 저해 활성 시험Experimental Example 4: Collagenase inhibitory activity test

실시예 및 비교예의 추출물의 콜라게네이즈 저해 활성(collagenase inhibition activity)을 평가하였다.The collagenase inhibition activity of the extracts of Examples and Comparative Examples was evaluated.

0.1 M tris-HCl buffer(pH 7.5)에 4 mM CaCl2를 첨가하여, 0.3 mg/mL의 4-phenylazobenzyl oxycarbonyl-Pro-Leu-Gly-Pro-D-Arg(sigma, U.S.A)를 녹인 기질액 125 μL에 시료 50 μL를 혼합하였다. Pro-Leu-Gly-Pro-D-Arg (Sigma, USA) dissolved in 0.3 mg / mL of 4-phenylazobenzyloxycarbonyl-Pro-Leu-Gly-Pro-D-Arg (Sigma, USA) was added to 4 mM CaCl 2 in 0.1 M tris- μL was mixed with 50 μL of the sample.

혼합액에 1 mg/mL collagenase from Clostridium histolyticum(Sigma-Aldrich Co, Louis, MO, USA) 0.075 mL를 첨가하였다.To the mixed solution, 0.075 mL of 1 mg / mL collagenase from Clostridium histolyticum (Sigma-Aldrich Co, Louis, MO, USA) was added.

시료 미첨가군은 시료 대신 증류수를 50 μL 첨가하고 실온에서 20 분간 방치한 후, 6% citric acid 0.5 mL를 넣어 반응을 정지시키고, ethyl acetate 2 mL을 첨가하여 분광광도계(UV-1650PC, Shimadzu, Kyoto, Japan)로 320 nm에서 흡광도를 측정하였다.The sample was added with 50 μL of distilled water instead of the sample and allowed to stand at room temperature for 20 minutes. The reaction was stopped by adding 6% citric acid (0.5 mL), and 2 mL of ethyl acetate was added thereto. The resultant was analyzed with a spectrophotometer (UV-1650PC, Shimadzu, Kyoto , Japan). The absorbance at 320 nm was measured.

콜라게네이즈 저해활성은 하기 수학식에 따라 시료 미첨가군과의 비율로 산출하였다(표 4).The collagenase inhibitory activity was calculated according to the following equation (see Table 4).

[수학식][Mathematical Expression]

콜라게네이즈 저해 활성(%) = 100 x (1 - (각 시료 첨가군의 흡광도 / 시료 미첨가군의 흡광도))Collagenase inhibitory activity (%) = 100 x (1 - (absorbance of each sample addition group / absorbance of sample not added group))

구분division 콜라게네이즈Collagenase 저해 활성( Inhibitory activity %% )) 실시예 1Example 1 16.316.3 실시예 2Example 2 41.941.9 실시예 3Example 3 31.831.8 실시예 4Example 4 21.621.6 실시예 5Example 5 66.766.7 실시예 6Example 6 65.965.9 비교예 1Comparative Example 1 16.516.5 비교예 2Comparative Example 2 18.818.8 비교예 3Comparative Example 3 34.034.0 대조군Control group 11.211.2

표 4를 참조하면, 산업 분해효소를 사용한 실시예 1 내지 5는 비교예 1 및 2와 유사한 콜라게네이즈 저해 활성이 나타났다. 콜라게네이즈 저해 활성이 높을수록 피부 재생 효과가 우수하다. Referring to Table 4, Examples 1 to 5 using industrial degrading enzymes showed collagenase inhibitory activity similar to Comparative Examples 1 and 2. The higher the collagenase inhibitory activity, the better the skin regeneration effect.

단일 아미노산화된 비교예 3은 비교예 1 및 2 대비 콜라게네이즈 저해 활성이 높았으며, 상기 결과는 펩타이드가 저분자화 될수록 콜라게네이즈 활성이 증대될 수 있음을 시사한다.The single amino acid of Comparative Example 3 had higher collagenase inhibitory activity than that of Comparative Examples 1 and 2, suggesting that the collagenase activity can be increased as the peptide is reduced in molecular weight.

분해효소로 알카레이즈를 사용한 실시예 5의 콜라게네이즈 저해 활성이 가장 높았으며, 청국장 균주 효소액을 사용한 실시예 6의 콜라게네이즈 저해 활성은 비교예 3과 유사하였다.The collagenase inhibitory activity of Example 5 using alkaline was used as the degrading enzyme, and the collagenase inhibitory activity of Example 6 using the enzyme solution of Chungkukjang was similar to that of Comparative Example 3.

상기 결과는 갈색거저리 유충에서 상업용 효소와 청국장 균주 효소액을 이용해 수득된 펩타이드의 피부 재생 효과가 염기/산 분해로 수득된 펩타이드만큼 우수하다는 것을 시사한다.This result suggests that the skin regeneration effect of the peptides obtained using the commercial enzyme and the chrysanthemum strain enzyme solution in brown larvae is better than that of the peptide obtained by base / acid decomposition.

전술한 본 발명의 설명은 예시를 위한 것이며, 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 지식을 가진 자는 본 발명의 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 쉽게 변형이 가능하다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적이 아닌 것으로 이해해야만 한다. 예를 들어, 단일형으로 설명되어 있는 각 구성 요소는 분산되어 실시될 수도 있으며, 마찬가지로 분산된 것으로 설명되어 있는 구성 요소들도 결합된 형태로 실시될 수 있다.It will be understood by those skilled in the art that the foregoing description of the present invention is for illustrative purposes only and that those of ordinary skill in the art can readily understand that various changes and modifications may be made without departing from the spirit or essential characteristics of the present invention. will be. It is therefore to be understood that the above-described embodiments are illustrative in all aspects and not restrictive. For example, each component described as a single entity may be distributed and implemented, and components described as being distributed may also be implemented in a combined form.

본 발명의 범위는 후술하는 청구범위에 의하여 나타내어지며, 청구범위의 의미 및 범위 그리고 그 균등 개념으로부터 도출되는 모든 변경 또는 변형된 형태가 본 발명의 범위에 포함되는 것으로 해석되어야 한다.The scope of the present invention is defined by the appended claims, and all changes or modifications derived from the meaning and scope of the claims and their equivalents should be construed as being included within the scope of the present invention.

Claims (8)

갈색거저리의 유충에서 유래한 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물.A cosmetic composition comprising, as an active ingredient, a peptide derived from larva of a brown duck. 제1항에 있어서,
상기 펩타이드의 크기가 1.4kDa이하인 화장료 조성물.
The method according to claim 1,
Wherein the peptide has a size of 1.4 kDa or less.
제1항에 있어서,
상기 펩타이드의 아미노산 개수가 13개 이하인 화장료 조성물.
The method according to claim 1,
Wherein the peptide has 13 amino acids or less.
제1항에 있어서,
상기 펩타이드는 갈색거저리의 유충에 효소를 처리하여 수득한 화장료 조성물.
The method according to claim 1,
Wherein the peptide is obtained by treating the larva of a brown duck with an enzyme.
제4항에 있어서,
상기 효소는 알카레이즈(Alcalase), 프로타멕스(Protamex), 뉴트라제(Neutrase), 플라보르자임(Flavourzyme), 펩신(Pepsin) 및 트립신(Trypsin)으로 이루어진 군에서 선택되는 1종 이상인 화장료 조성물.
5. The method of claim 4,
Wherein the enzyme is at least one selected from the group consisting of Alcalase, Protamex, Neutrase, Flavourzyme, Pepsin and Trypsin.
제4항에 있어서,
상기 효소는 발효 식품에서 분리된 균주에서 수득한 화장료 조성물.
5. The method of claim 4,
Wherein the enzyme is obtained from a strain isolated from a fermented food.
제6항에 있어서,
상기 균주는 바실러스(Bacillus), 락토바실러스(Lactobacillus), 페니실리움(Penicillium), 프사리움(Fusarium), 피키아(Pichia), 캔디다(Candida), 싸가로마이세스(Saccharomyces), 슈도모나스(Pseudomonas), 씨테로마세스(Citeromyces), 및 아스퍼질러스(Aspergullus)로 이루어진 군에서 선택되는 1종 이상인 화장료 조성물.
The method according to claim 6,
The strain of Bacillus (Bacillus), Lactobacillus bacteria (Lactobacillus), Penny room Solarium (Penicillium), peusa Solarium (Fusarium), Pichia (Pichia), Candida (Candida), wrapped horizontally My process (Saccharomyces), Pseudomonas (Pseudomonas) , Rome ssite process (Citeromyces), and Aspergillus cosmetic composition at least one member selected from the group consisting of Aspergillus switch (Aspergullus).
제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서,
피부 미백 또는 피부 재생용인 화장료 조성물.
8. The method according to any one of claims 1 to 7,
Cosmetic composition for skin whitening or skin regeneration.
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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KR20220043706A (en) * 2020-09-29 2022-04-05 대한민국(농촌진흥청장) Method for preparing hydrolyzate of Tenebrio molitor protein using NURUK and protease, and hydrolyzate of Tenebrio molitor protein with enhanced antioxidant content

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