KR20190044094A - 투여량 레지멘 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 온코스타틴 M (OSM) 및 특히 인간 OSM (hOSM)에 특이적으로 결합하고 gp130 수용체에 대한 OSM의 결합을 억제하는 항원 결합 단백질을 포함하는 제약 조성물, 상기 제약 조성물에 대한 신규 치료적 레지멘; 및 염증성 또는 자가면역 장애의 치료에서, 특히 전신 경화증의 치료에서 상기 제약 조성물을 투여하는 방법을 제공한다.
Description
본 발명은 온코스타틴 M (OSM) 및 특히 인간 OSM (hOSM)에 특이적으로 결합하는 항원 결합 단백질을 포함하는 제약 조성물; 상기 제약 조성물에 대한 신규 치료적 레지멘; 및 염증성 또는 자가면역 장애의 치료에서, 특히 전신 경화증의 치료에서 상기 제약 조성물을 투여하는 방법에 관한 것이다.
온코스타틴 M은, gp130 막횡단 신호전달 수용체를 공유하는 (문헌 [Taga T and Kishimoto T (1997) Annu. Rev. Immunol. 15: 797-819] 참조), IL-6, 백혈병 억제 인자 (LIF), 섬모 신경영양 인자 (CNTF), 카디오트로핀-1 (CT-1) 및 카디오트로핀-1 유사 시토카인을 포함하는 (문헌 [Kishimoto T et al. (1995) Blood 86: 1243-1254] 참조), 시토카인의 인터류킨 6 (IL-6) 패밀리에 속하는 28 kDa 당단백질이다. OSM은 원래 흑색종 세포주 A375의 성장을 억제하는 그의 능력에 의해 발견되었다 (문헌 [Malik N (1989) et al. Mol Cell Biol 9: 2847-2853] 참조). 후속적으로, 보다 많은 효과가 발견되었고, 이는 IL-6 패밀리의 다른 구성원처럼 다중기능성 매개체인 것으로 밝혀졌다. OSM은 대식세포, 활성화된 T 세포 (문헌 [Zarling JM (1986) PNAS (USA) 83: 9739-9743] 참조), 다형핵 호중구 (문헌 [Grenier A et al. (1999) Blood 93:1413-1421] 참조), 호산구 (문헌 [Tamura S et al. (2002) Dev. Dyn. 225: 327-31] 참조), 및 수지상 세포 (문헌 [Suda T et al. (2002) Cytokine 17:335-340] 참조)를 포함한 다양한 세포 유형에서 생산된다. 이는 또한 췌장, 신장, 고환, 비장, 위, 뇌 (문헌 [Znoyko I et al. (2005) Anat Rec A Discov Mol Cell Evol Biol 283: 182-186] 참조), 및 골수 (문헌 [Psenak O et al. (2003) Acta Haematol 109: 68-75] 참조)에서 발현된다. 그의 주요 생물학적 효과는 내피의 활성화 (문헌 [Brown TJ et al. (1993) Blood 82: 33-7] 참조), 급성기 반응의 활성화 (문헌 [Benigni F et al. (1996) Blood 87: 1851-1854] 참조), 세포 증식 또는 분화의 유도, 염증 매개체 방출의 조정, 조혈 (문헌 [Tanaka M et al. (2003) 102: 3154-3162] 참조), 골의 재형성 (문헌 [de Hooge ASK (2002) Am J Pathol 160: 1733-1743] 참조), 혈관신생의 촉진 (문헌 [Vasse M et al. (1999) Arterioscler Thromb Vasc Biol 19:1835-1842] 참조) 및 상처 치유를 포함한다.
OSM에 대한 수용체 (OSM 수용체, OSM 수용체 β, "OSMRβ")는 상피 세포, 연골세포, 섬유모세포를 포함한 광범위한 세포 (문헌 [Langdon C et al. (2003) J Immunol 170: 548-555] 참조), 및 뉴런 평활근, 림프절, 골, 심장, 소장, 폐 및 신장으로부터의 세포 (문헌 [Tamura S et al. (2002) Mech Dev 115: 127-131] 참조) 상에서 발현된다. 여러 계열의 증거는 내피 세포가 OSM에 대한 1차 표적이라는 것을 시사한다. 이들 세포는 OSM에 대한 고친화도 및 저친화도 수용체 둘 다의 10 내지 20배 더 많은 수를 발현하고 OSM으로의 자극 후에 표현형에서 극심하고 장기적인 변경을 나타낸다 (문헌 [Modur V et al. (1997) J Clin Invest 100: 158-168] 참조). 게다가, OSM은 내피 기원인 것으로 간주되는 카포시 육종 세포에 대한 주요 자가분비 성장 인자이다 (문헌 [Murakami-Mori K et al. (1995) J Clin Invest 96:1319-1327] 참조).
다른 IL-6 패밀리 시토카인과 마찬가지로, OSM은 막횡단 신호 전달 당단백질, gp130에 결합한다. gp130 시토카인의 주요 특색은 리간드에 따른 gp130 및 하나 이상의 보조-수용체를 포함하는 올리고머성 수용체 복합체의 형성이다 (문헌 [Heinrich PC et al. (2003) Biochem J. 374: 1-20]에서 검토됨). 그 결과, 이들 시토카인은 형성된 수용체 복합체의 조성에 따라 시험관내 및 생체내 공유되고 특유한 생물학적 활성 둘 다를 매개할 수 있다. 인간 OSM (hOSM)은 gp130 및 2종의 보조-수용체, LIFR 또는 온코스타틴 수용체 (OSMR) 중 어느 하나와의 복합체를 형성할 수 있다는 점에서 다른 IL-6 시토카인과 상이하다.
hOSM의 결정 구조는 2개의 잠재적인 글리코실화 부위를 갖는 4개의 α 나선형 다발을 포함하는 것으로 해명 및 제시된 바 있다. 2개의 별개 리간드 결합 부위는 hOSM 분자 상에서의 부위-지정된 돌연변이유발에 의해 식별된 바 있다 (문헌 [Deller MC et al. (2000) Structural Fold Des. 8:863-874] 참조). 부위 II (때때로 "부위 2")라 불리는 제1 부위는 gp130과 상호작용하고, OSM 분자의 대향 단부에 있는 부위 III (때때로 "부위 3")이라 불리는 제2 부위는 LIFR 또는 OSMR 중 어느 하나와 상호작용한다. 돌연변이유발 실험은 LIFR 및 OSMR에 대한 결합 부위가 거의 동일하지만 단일 아미노산 돌연변이가 둘 사이를 구별할 수 있는 것으로 제시한 바 있다.
OSM-gp130 상호작용을 조정하는 것이 염증성 질환 및 장애, 예컨대 전신 경화증, 류마티스 관절염, 골관절염, 특발성 폐 섬유증, 통증, 염증성 폐 질환, 심혈관 질환 및 건선의 치료에서 이익을 얻을 수 있다는 가설을 지지하는 증거가 증가하고 있다.
따라서 예를 들어 전신 경화증, 궤양성 결장염, 염증성 장 질환 또는 류마티스 관절염의 치료에 대한 치료적 접근법을 제공하는 것이 본 발명의 목적이다. 또한 만성 염증성 질환 및 장애 예컨대 골관절염, 특발성 폐 섬유증, 암, 천식, 통증, 심혈관 질환 및 건선의 치료. 특히, OSM (예를 들어 hOSM, 특히 그의 부위 II)에 특이적으로 결합하고 OSM 및 gp130 사이의 상호작용의 조정에 반응성인 질환 및 장애의 치료에서 해당 상호작용을 조정하는 (즉 억제 또는 차단하는) 항원 결합 단백질을 제공하는 것이 본 발명의 목적이다.
전신 경화증 (SSc)은 다기관 자가면역 질환이며, 염증, 섬유증 및 미세혈관 손상의 상호관련된 과정은 높은 사망률 및 이환율을 갖는 복잡한 패턴의 기관-기반 합병증을 유발한다. 증상은 경화, 반흔형성 및 수포화를 포함한다. SSc의 치료를 위한 승인된 약물은 없고, 그와 같이, 큰 미충족 의료 필요의 영역으로 남아있다 [Denton, 2013].
본 발명은 염증성 또는 자가면역 장애 또는 질환, 예컨대 전신 경화증 또는 류마티스 관절염을 항-OSM 항체로 치료하기 위한 신규 투약 레지멘을 제공한다.
본 발명은 OSM에 결합할 수 있고 gp130 수용체에 대한 OSM의 결합을 억제하는 항원 결합 단백질을 포함하는 제약 조성물을 개시하며, 여기서 유효 용량의 상기 제약 조성물은 50-300 mg의 상기 항원 결합 단백질을 포함한다.
본 개시내용은 또한 염증성 또는 자가면역 질환을 앓는 인간 환자에게 상기 제약 조성물을 투여함으로써 상기 환자를 치료하는 방법을 포괄한다.
본 발명은 인간에게 OSM에 결합할 수 있고, 예를 들어 인간 OSM (hOSM)에 특이적으로 결합하고 gp130 수용체에 대한 OSM의 결합을 억제하는 항원 결합 단백질을 포함하는 제약 조성물을 투여하는 방법을 추가로 제공한다.
본 발명은 OSM에 결합할 수 있고, 예를 들어 인간 OSM (hOSM)에 특이적으로 결합하고 gp130 수용체에 대한 OSM의 결합을 억제하는 항원 결합 단백질을 포함하는 제약 조성물을 제공하며, 여기서 유효 용량의 상기 제약 조성물은 50-300 mg의 상기 항원 결합 단백질을 포함한다.
도 1은 상이한 용량 수준에서의 관찰된 대 예측된 평균 총 OSM을 제시한다.
도 2는 평균 (95% CI) 표적 결속 (%TE)을 도출하는 TMDD 모델이다.
도 3은 1 구획 PK-TE 모델을 기반으로 하는 반복 투약 동안의 mAb 1의 모의된 표적 결속 프로파일을 예시한다.
도 4 & 5는 혈장 및 수포액 둘 다에서의 표 4에 따른 단일의 보다 농축된 투여를 제시한다.
도 6 & 7은 혈장 및 수포액 둘 다에서의 표적 결속을 제시한다.
도 8은 혈소판 수에서의 용량 관련된 감소의 기준선으로부터의 백분율 및 평균 변화를 제시한다.
도 9는 상기 FTIH mab1 연구에서 3 mg/kg (SC) 투여량이 35% 감소를 생성하였고 6 mg/kg (SC) 투여량이 60% 감소를 생성하였다는 것을 제시한다.
도 2는 평균 (95% CI) 표적 결속 (%TE)을 도출하는 TMDD 모델이다.
도 3은 1 구획 PK-TE 모델을 기반으로 하는 반복 투약 동안의 mAb 1의 모의된 표적 결속 프로파일을 예시한다.
도 4 & 5는 혈장 및 수포액 둘 다에서의 표 4에 따른 단일의 보다 농축된 투여를 제시한다.
도 6 & 7은 혈장 및 수포액 둘 다에서의 표적 결속을 제시한다.
도 8은 혈소판 수에서의 용량 관련된 감소의 기준선으로부터의 백분율 및 평균 변화를 제시한다.
도 9는 상기 FTIH mab1 연구에서 3 mg/kg (SC) 투여량이 35% 감소를 생성하였고 6 mg/kg (SC) 투여량이 60% 감소를 생성하였다는 것을 제시한다.
본 발명은 OSM에 결합할 수 있고, 예를 들어 인간 OSM (hOSM)에 특이적으로 결합하고 gp130 수용체에 대한 OSM의 결합을 억제하는 항원 결합 단백질을 포함하는 제약 조성물을 제공하며, 여기서 유효 용량의 상기 제약 조성물은 50 - 300 mg의 상기 항원 결합 단백질을 포함한다. 예를 들어, 한 실시양태에서 유효 용량의 상기 제약 조성물은 100 mg 또는 150 mg 또는 200 mg 또는 300 mg의 상기 항원 결합 단백질을 포함한다.
본 발명은 또한 염증성 또는 자가면역 장애 또는 질환, 예컨대 전신 경화증의 치료에서 사용하기 위한 제약 조성물을 제공하며, 여기서 제약 조성물은, OSM에 결합할 수 있고, 예를 들어 hOSM에 특이적으로 결합하고 gp130 수용체에 대한 OSM의 결합을 억제하는, 약 50 mg 내지 약 300 mg의 항원 결합 단백질을 포함하며, 여기서 제약 조성물은 1주에 1회 또는 격주마다 1회 투여를 위한 것이다. 예를 들어, 한 실시양태에서 제약 조성물은 100 mg 또는 150 mg 또는 200 mg 또는 300 mg의 상기 항원 결합 단백질을 포함한다.
한 실시양태에서, 본 발명은 환자에게 hOSM에 특이적으로 결합하고 gp130 수용체에 대한 OSM의 결합을 억제하는 OSM 결합 단백질 (예를 들어 항-OSM 항체)을, 50 - 300 mg의 상기 항원 결합 단백질의 용량으로 투여하는 것을 포함하는, 환자에서 자가면역 또는 염증성 질환 (예를 들어 전신 경화증, 궤양성 결장염 또는 염증성 장 질환)을 치료하는 방법을 제공한다. 예를 들어, 한 실시양태에서 유효 용량의 상기 제약 조성물은 50 mg, 또는 100 mg 또는 150 mg 또는 200 mg 또는 300 mg의 상기 항원 결합 단백질을 포함한다. 예를 들어, 한 실시양태에서 유효 용량의 상기 제약 조성물은 100 mg의 상기 항원 결합 단백질을 포함한다. 예를 들어, 한 실시양태에서 유효 용량의 상기 제약 조성물은 150 mg의 상기 항원 결합 단백질을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명의 제약 조성물은 인간에게 매일, 격일마다, 매주, 격주마다, 4주마다, 또는 1개월에 1회 투여될 수 있다. 추가 실시양태에서, 본 발명의 제약 조성물은 인간에게 매주 투여될 수 있다.
추가 실시양태에서, 본 발명의 제약 조성물은 인간에게 격주마다 투여될 수 있다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명의 제약 조성물은 인간에게 매일 1회, 격일마다 1회, 7일마다 1회, 14일마다 1회, 4주마다 1회, 또는 매월 1회 투여될 수 있다.
추가 실시양태에서, 제약 조성물은 7일마다 1회 투여된다.
추가 실시양태에서, 제약 조성물은 14일마다 1회 투여된다.
또 다른 실시양태에서, 인간에게 본 발명의 제약 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 인간에게 hOSM에 특이적으로 결합하는 적어도 하나의 항원 결합 단백질을 투여하는 방법이 제공된다. 한 실시양태에서, 제약 조성물은 피하로 투여된다. 제약 조성물은 적어도 1.0 mL 주사액의 피하 주사로서 투여될 수 있다. 한 실시양태에서, 항원 결합 단백질은 동일한 제약 조성물의 동일한 용량 또는 상이한 용량일 수 있는 2 또는 3회 주사로 투여된다. 제약 조성물은 동일한 또는 상이한 주사 부위에 투여될 수 있다. 본 발명의 피하 주사는 단일 주사로서 투여될 수 있으며, 여기서 전체 용량은 단일 샷으로서 투여되며, 여기서 샷의 전체 부피는 한 번에 투여된다. 단일 샷 주사는 다수회 투여될 수 있다. 단일 샷은 연속적 또는 적정된 투여, 예를 들어 주입과 상이하며, 여기서 투여는 수분, 수시간 또는 수일에 걸쳐 투여될 수 있다.
한 실시양태에서, 제약 조성물은 단독요법으로서 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 제약 조성물은 표준 관리 의약 예컨대, 예를 들어, 코르티코스테로이드, 프레드니손, 또는 메토트렉세이트와 공동-투여된다.
관련 기술분야에서 이해되는 바와 같이, 혈액, 혈장 및/또는 다른 조직에서 약동학적 및 약역학적 데이터를 수집, 측정 및 평가하는데 다양한 방법이 이용될 수 있다. 한 실시양태에서, 측정은 수포액으로부터 취해진다.
섬유증, 염증 및 혈관병증의 기계론적 바이오마커는 전신 경화증의 발병기전에 수반된 주요 생물학적 경로의 조정의 증거를 제공하기 위해 혈액 및/또는 피부에서 측정될 수 있다.
본 발명의 한 측면에서 염증성 질환 또는 장애를 앓는 인간 환자에게 치료 유효량의 본 발명의 제약 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 상기 환자를 치료하는 방법이 제공된다. 추가 실시양태에서, 본원에 기재된 바와 같은 제약 조성물은 전신 경화증의 치료를 위한 것이다. 추가 실시양태에서, 본원에 기재된 바와 같은 제약 조성물은 궤양성 결장염 또는 염증성 장 질환의 치료를 위한 것이다.
한 실시양태에서, 염증성 또는 자가면역 장애 또는 질환의 치료를 위한 의약의 제조에서의 본원에 기재된 바와 같은 항원 결합 단백질의 용도가 제공된다. 추가 실시양태에서, 본원에 기재된 바와 같은 제약 조성물은 전신 경화증의 치료를 위한 것이다. 추가 실시양태에서, 본원에 기재된 바와 같은 제약 조성물은 궤양성 결장염 또는 염증성 장 질환의 치료를 위한 것이다.
또 다른 실시양태에서, 염증성 또는 자가면역 장애 또는 질환의 치료에서 사용하기 위한 제약 조성물이 제공된다.
치료의 용량 및 지속기간은 인간 순환에서의 본 발명의 항원 결합 단백질의 상대적 지속기간, 치료될 병태 및 환자의 전반적 건강과 관련된다. 연장된 기간 (예를 들어 2 내지 6개월)에 걸친 반복된 투약이 최대 치료적 효능을 달성하는데 요구될 수 있는 것으로 고려된다. 한 실시양태에서, 제약 조성물은 만성적으로 투여된다.
항원 결합 단백질, 특히 항-OSM 항체의 최적 용량 및 투여는, 항원 결합 단백질의 특징 및 특성에 따를 것이다. 항체의 친화도는 종종 표적이 성공적으로 차단되거나 또는 중화시킬 것인지를 결정하는데 중요하다. 그러나, 시험관내에서 표적에 결합하고 그를 차단하는 항체에도 불구하고, 종종 항체가 생체내 필요 종점을 충족시키는 것을 임상에서 실패하는 경우가 있다. 본원에 기재된 바와 같은 예시된 투여량 레지멘 및 투여 프로토콜은 단순히 혈장 분석보다는 오히려 수포액의 분석을 사용하여 결정되어 신체의 관련있는 구획에서의 OSM 및 항원 결합 단백질의 수준의 잠재적으로 보다 정확한 지시 및 따라서 질환 관리에 대한 그의 효과로 이어져 있다.
본 발명의 또 다른 측면에서 본원에 기재된 본 발명에 따른 항원 결합 단백질 또는 제약 조성물을 사용에 대한 지침서와 함께 포함하는 부분들의 키트가 제공된다.
한 실시양태에서, 질환 또는 장애는 전신 경화증, 궤양성 결장염 또는 염증성 장 질환, 류마티스 관절염, 골관절염, 건선, 특발성 폐 섬유증 또는 다발성 경화증으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 한 실시양태에서, 질환 또는 장애는 전신 경화증, 궤양성 결장염 또는 염증성 장 질환으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
다른 추가 실시양태에서 제약 조성물은 아세트산나트륨, EDTA, 아르기닌, 염화나트륨 및 폴리소르베이트 80 (PS80)을 포함하고 5.5의 pH를 갖는다. 다른 추가 실시양태에서 제약 조성물은 pH 5.5에서 100 mg/ml의 농도의 항원 결합 단백질, 50 mM 아세트산나트륨, 0.05 mM EDTA, 1.0% 아르기닌, 51 mM 염화나트륨, 및 0.02% PS80을 포함한다. 다른 추가 실시양태에서 제약 조성물은 pH 5.5에서 150 mg/ml의 농도의 항원 결합 단백질, 50 mM 아세트산나트륨, 0.05 mM EDTA, 1.0% 아르기닌, 51 mM 염화나트륨, 및 0.02% 폴리소르베이트 80을 포함한다.
본 발명은 본원에 기재된 바와 같은 항원-결합 단백질 및 제약상 허용되는 담체를 포함하는 제약 조성물을 추가로 제공한다.
본원에 기재된 항원 결합 단백질은 저장을 위해 동결건조되고 사용 전에 적합한 담체 중에서 재구성될 수 있다. 이러한 기술은 통상적인 항원 결합 단백질에 효과적인 것으로 제시된 바 있고 관련 기술분야에 알려진 동결건조 및 재구성 기술이 이용될 수 있다.
본 발명의 항원 결합 단백질은 뮤린 모노클로날 항체 (mab), 10G8에 관련되거나, 또는 그로부터 유래된다. 10G8 뮤린 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 7에 의해 코딩되고 10G8 뮤린 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 9에 의해 코딩된다.
10G8 뮤린 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 8에 의해 제공되고 10G8 뮤린 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 10에 의해 제공된다.
본 발명의 한 실시양태에서 항원 결합 단백질은 인간, 인간화 또는 키메라 항체이다. 추가 실시양태에서, 항체는 인간화 항체이다. 한 실시양태에서, 항체는 모노클로날 항체이다.
항원 결합 단백질의 중쇄 가변 영역 (VH)은 카바트 (Kabat et al.; Sequences of proteins of Immunological Interest NIH, 1987))에 의해 정의된 바와 같은 하기 CDR 또는 이들 CDR의 변이체를 포함할 수 있다:
서열식별번호: 1 또는 서열식별번호: 43의 CDRH1
서열식별번호: 2의 CDRH2
서열식별번호: 3의 CDRH3
본 발명의 경쇄 가변 영역 (VL)은 카바트 (Kabat et al.; Sequences of proteins of Immunological Interest NIH, 1987))에 의해 정의된 바와 같은 하기 CDR 및 이들 CDR의 변이체를 포함할 수 있다:
서열식별번호: 4의 CDRL1
서열식별번호: 5 또는 서열식별번호: 44의 CDRL2
서열식별번호: 6의 CDRL3
본 발명의 추가 실시양태에서 항원 결합 단백질은 서열식별번호: 3의 CDRH3, 서열식별번호: 2의 CDRH2, 서열식별번호: 4의 CDRL1 및 서열식별번호: 6의 CDRL3을 포함하고 서열식별번호: 1 또는 서열식별번호: 43의 CDRH1 및 서열식별번호: 5 또는 서열식별번호: 44의 CDRL2를 추가로 포함할 수 있다.
또 다른 실시양태에서, 항원 결합 단백질은 서열식별번호: 3의 CDRH3, 서열식별번호: 2의 CDRH2, 서열식별번호: 4의 CDRL1, 서열식별번호: 5의 CDRL2 및 서열식별번호: 6의 CDRL3을 포함한다.
또 다른 실시양태에서 항원 결합 단백질은 서열식별번호: 3의 CDRH3, 서열식별번호: 2의 CDRH2, 서열식별번호: 1의 CDRH1, 서열식별번호: 4의 CDRL1, 서열식별번호: 5의 CDRL2 및 서열식별번호: 6의 CDRL3을 포함한다.
또 다른 실시양태에서 항원 결합 단백질은 서열식별번호: 3의 CDRH3, 서열식별번호: 2의 CDRH2, 서열식별번호: 1의 CDRH1, 서열식별번호: 4의 CDRL1, 서열식별번호: 44의 CDRL2 및 서열식별번호: 6의 CDRL3을 포함한다.
또 다른 실시양태에서 항원 결합 단백질은 서열식별번호: 3의 CDRH3, 서열식별번호: 2의 CDRH2, 서열식별번호: 43의 CDRH1, 서열식별번호: 4의 CDRL1, 서열식별번호: 5의 CDRL2 및 서열식별번호: 6의 CDRL3을 포함한다.
또 다른 실시양태에서 항원 결합 단백질은 서열식별번호: 3의 CDRH3, 서열식별번호: 2의 CDRH2, 서열식별번호: 43의 CDRH1, 서열식별번호: 4의 CDRL1, 서열식별번호: 44의 CDRL2 및 서열식별번호: 6의 CDRL3을 포함한다.
한 실시양태에서, 항원 결합 단백질은 직접적으로 CDRH1 또는 CDRL2를 통해 OSM과 상호작용하지 않는다.
본 발명의 추가 실시양태에서 서열식별번호: 19의 단리된 중쇄 가변 도메인 및 서열식별번호: 27의 단리된 경쇄 가변 도메인을 포함하는 항원 결합 단백질이 제공된다.
한 실시양태에서, 본 발명의 항원 결합 단백질은 서열식별번호: 20에 의해 코딩된 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 28에 의해 코딩된 경쇄 가변 영역을 포함한다.
한 실시양태에서, 본 발명의 항원 결합 단백질은 서열식별번호: 41에 의해 코딩된 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 37에 의해 코딩된 경쇄 가변 영역을 포함한다.
한 실시양태에서, 본 발명의 항원 결합 단백질은 서열식별번호: 42의 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 38의 경쇄 가변 영역을 포함한다.
정의
용어 "항원 결합 단백질" 및 "OSM 결합 단백질"은 상호교환가능하게 사용되고 본원에 사용된 바와 같은 항체, 항체 단편 예를 들어 도메인 항체 (dAb), ScFv, FAb, FAb2, 및 다른 단백질 구축물을 지칭한다. 예를 들어 항원 결합 단백질 또는 OSM 결합 단백질은 OSM에 결합할 수 있다. 예를 들어 구체적으로 항원 결합 단백질 또는 OSM 결합 단백질은 OSM에 결합하고 gp130 수용체에 대한 OSM의 결합을 억제한다. 항원 결합 분자는 적어도 하나의 Ig 가변 도메인, 예를 들어 항체, 도메인 항체 (dAb), Fab, Fab', F(ab')2, Fv, ScFv, 디아바디, mAbdAb, 아피바디, 이종접합체 항체 또는 이중특이적 항체를 포함할 수 있다. 한 실시양태에서, 항원 결합 분자는 항체이다. 또 다른 실시양태에서, 항원 결합 분자는 dAb, 즉 상이한 V 영역 또는 도메인과 관계없이 항원 또는 에피토프에 특이적으로 결합하는 VH, VHH 또는 VL과 같은 이뮤노글로불린 단일 가변 도메인이다. 항원 결합 분자는 2개의 표적에 결합할 수 있으며, 즉 그들은 이중 표적화 단백질일 수 있다. 항원 결합 분자는 항체 및 항원 결합 단편의 조합 예컨대, 예를 들어, 모노클로날 항체에 연결된 하나 이상의 도메인 항체 및/또는 하나 이상의 ScFv일 수 있다. 항원 결합 분자는 또한 비-Ig 도메인 예를 들어 CTLA-4 (에비바디); 리포칼린; 단백질 A 유래된 분자 예컨대 단백질 A의 Z-도메인 (아피바디, SpA), A-도메인 (아비머/맥시바디); 열 쇼크 단백질 예컨대 GroEl 및 GroES; 트랜스페린 (트랜스-바디); 안키린 반복 단백질 (DARPin); 펩티드 압타머; C-유형 렉틴 도메인 (테트라넥틴); 인간 γ-결정질 및 인간 유비퀴틴 (아필린); PDZ 도메인; 인간 프로테아제 억제제의 전갈 톡신쿠니츠 유형 도메인; 및 피브로넥틴 (애드넥틴)으로 이루어진 군으로부터 선택된 스캐폴드의 유도체인 도메인을 포함할 수 있으며; 이는 OSM에 대한 결합을 수득하기 위해 단백질 조작에 적용되어 있다. 본원에 사용된 바와 같은 "항원 결합 단백질"은 인간 OSM을 길항 및/또는 중화시킬 수 있을 것이다. 게다가, 항원 결합 단백질은 OSM에 결합하여 그것이 gp130 수용체에 결합하고/거나 그를 활성화시키는 것으로부터 방지함으로써 OSM 활성을 억제하고/거나 차단할 수 있다.
용어 Fv, Fc, Fd, Fab, 또는 F(ab)2는 그들의 표준 의미로 사용된다 (예를 들어, 문헌 [Harlow et al., Antibodies A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, (1988)] 참조).
용어 "항체"는 가장 광범위한 의미로 본원에 사용되고 구체적으로 모노클로날 항체 (전장 모노클로날 항체 포함), 폴리클로날 항체, 및 다중특이적 항체 (예를 들어 이중특이적 항체)를 포괄한다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "모노클로날 항체"는 실질적으로 동종인 항체들의 집단으로부터 수득된 항체를 지칭하며, 즉 집단을 포함하는 개별 항체는 미량으로 존재할 수 있는 가능한 자연 발생 돌연변이를 제외하고는 동일하다. 모노클로날 항체는 단일 항원 결합 부위에 대하여 지시되는 고도로 특이적인 것이다. 게다가, 전형적으로 상이한 결정기 (에피토프)에 대하여 지시된 상이한 항체를 포함하는 폴리클로날 항체 제제와는 대조적으로, 각각의 모노클로날 항체는 항원 상의 단일 결정기에 대하여 지시된다.
"키메라 항체"는 중쇄 및/또는 경쇄의 일부가 특정한 공여자 항체 부류 또는 하위부류로부터 유래된 항체 내의 상응하는 서열과 동일하거나 또는 그에 상동성인 반면에, 쇄(들)의 나머지가 또 다른 종으로부터 유래되거나 또는 또 다른 항체 부류 또는 하위 부류에 속하는 항체 내의 상응하는 서열과 동일하거나 또는 그에 상동성인 조작된 항체의 유형, 뿐만 아니라 목적하는 생물학적 활성을 나타내는 한 이러한 항체의 단편을 지칭한다 (미국 특허 번호 4, 816,567 및 문헌 [Morrison et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81:6851-6855) (1984)].
"인간화 항체"는, 비-인간 공여자 이뮤노글로불린으로부터 유래된 그의 CDR을 가지며, 분자의 남아있는 이뮤노글로불린-유래된 부분이 1종 (또는 1종 초과)의 인간 이뮤노글로불린(들)으로부터 유래된 것인 조작된 항체의 유형을 지칭한다. 게다가, 프레임워크 지지 잔기는 결합 친화도를 보존하도록 변경될 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Queen et al., Proc. Natl Acad Sci USA, 86:10029-10032 (1989), Hodgson et al., Bio/Technology, 9:421 (1991)] 참조). 적합한 인간 수용자 항체는 공여자 항체의 뉴클레오티드 및 아미노산 서열에 대한 상동성에 의해, 통상적인 데이터베이스, 예를 들어 카바트(KABAT) 데이터베이스, 로스 알라모스(Los Alamos) 데이터베이스, 및 스위스 프로테인(Swiss Protein) 데이터베이스로부터 선택된 것일 수 있다. 공여자 항체의 프레임워크 영역에 대한 상동성 (아미노산에 기초함)을 특징으로 하는 인간 항체는 공여자 CDR의 삽입을 위한 중쇄 가변 프레임워크 영역 및/또는 중쇄 불변 영역을 제공하는데 적합할 수 있다. 경쇄 불변 또는 가변 프레임워크 영역을 공여할 수 있는 적합한 수용자 항체는 유사한 방식으로 선택될 수 있다. 수용자 항체 중쇄 및 경쇄는 동일한 수용자 항체로부터 기원하도록 요구되지 않는다는 것이 주목되어야 한다. 선행 기술은 이러한 인간화 항체를 생산하는 여러 방식을 기재한다 - 예를 들어 EP-A-0239400 및 EP-A-054951 참조.
본 명세서 및 첨부 청구범위 전반에 걸쳐 용어 "포함하는" 및 "포함한다"는 "로 이루어진" 및 "로 이루어진다"를 포괄한다. 즉, "포함하는" 및 "포함한다"는, 문맥상 허용되는 경우에, 구체적으로 언급되지 않는 다른 요소 또는 정수의 가능한 포함을 전달하는 것으로 의도된다.
본 발명의 항원 결합 단백질과 관련하여 본 명세서 전반에 걸쳐 사용된 바와 같은 용어 "특이적으로 결합한다"는 항원 결합 단백질이 다른 인간 단백질에 대한 결합 없이 또는 유의하지 않은 결합으로 인간 OSM (hOSM)에 결합한다는 것을 의미한다. 그러나 용어는 본 발명의 항원 결합 단백질이 또한 OSM의 다른 형태, 예를 들어 영장류 OSM과 교차-반응성일 수 있다는 사실을 배제하지는 않는다.
본 발명의 항원 결합 단백질과 관련하여 본 명세서 전반에 걸쳐 사용된 바와 같은 용어 "직접적으로 상호작용한다"는 항원 결합 단백질이 인간 OSM (hOSM)에 결합할 때 항원 결합 단백질 상의 특정한 잔기가 hOSM 상의 특정한 잔기의 3.5Å 이내에 있다는 것을 의미한다.
본 발명의 항원 결합 단백질과 관련하여 본 명세서 전반에 걸쳐 사용된 바와 같은 용어 "억제한다"는 OSM의 생물학적 활성이 이러한 항원 결합 단백질의 부재 하의 OSM의 활성과 비교 시 본 발명의 항원 결합 단백질의 존재 하에 감소된다는 것을 의미한다. 억제는 OSM 및 수용체 결합을 차단하는 것, OSM이 수용체를 활성화시키는 것을 방지하는 것, OSM을 하향 조절하는 것, 또는 이펙터 관능기에 영향을 미치는 것 중 하나 이상에 기인할 수 있으나 그에 제한되지는 않는다. 본 발명의 항체는 OSM을 중화시킬 수 있다.
"CDR"은 이뮤노글로불린 중쇄 및 경쇄의 초가변 도메인인 항체의 상보성 결정 영역 아미노산 서열로서 정의된다. 3개의 중쇄 및 3개의 경쇄 CDR이 이뮤노글로불린의 가변 부분에 존재한다. 이에 따라, 본원에 사용된 바와 같은 "CDR"은 모든 3개의 중쇄 CDR, 또는 모든 3개의 경쇄 CDR (또는, 적절한 경우에, 모든 중쇄 및 모든 경쇄 CDR 둘 다)을 지칭할 수 있다.
CDR은 항원 또는 에피토프에 대한 항체의 결합을 위한 대다수의 접촉 잔기를 제공한다. 본 발명에서의 관심 CDR은 공여자 항체 가변 중쇄 및 경쇄 서열로부터 유래되고, 자연 발생 CDR의 유사체, 예를 들어 뮤린 10G8 CDR의 유사체 (서열식별번호: 1-6)를 포함하며, 이러한 유사체는 또한 그들이 유래되었던 공여자 항체, 예를 들어 10G8과 동일한 항원 결합 특이성 및/또는 중화 능력을 공유 또는 보유한다.
항체의 CDR 서열은 카바트 넘버링 시스템 (Kabat et al.; (Sequences of proteins of Immunological Interest NIH, 1987)에 의해 결정될 수 있으며, 대안적으로 이들은 코티아 넘버링 시스템 (Al-Lazikani et al., (1997) JMB 273,927-948), 접촉 정의 방법 ((MacCallum R.M., and Martin A.C.R. and Thornton J.M, (1996), Journal of Molecular Biology, 262 (5), 732-745) 또는 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 알려진 항체에서 잔기를 넘버링하고 CDR을 결정하는 임의의 다른 확립된 방법을 사용하여 결정될 수 있다.
통상의 기술자에게 이용가능한 CDR 서열에 대한 다른 넘버링 규정은 "AbM" (유니버시티 오브 배스(University of Bath)) 및 "접촉" (유니버시티 칼리지 런던(University College London)) 방법을 포함한다. 최소 중첩 영역은 카바트, 코티아, AbM 및 접촉 방법 중 적어도 2가지를 사용하여 "최소 결합 단위"를 제공하도록 결정될 수 있다. 최소 결합 단위는 CDR의 하위-부분일 수 있다.
하기 표 1은 각각의 CDR 또는 결합 단위에 대한 각각의 넘버링 규정을 사용하는 하나의 정의를 나타낸다. 가변 도메인 아미노산 서열을 넘버링하기 위해 카바트 넘버링 스킴이 표 1에서 사용된다. CDR 정의 중 일부는 사용된 개별 공개에 따라 달라질 수 있다는 것이 주목되어야 한다.
본 명세서 전반에 걸쳐, 항체 서열에서의 아미노산 잔기는 카바트 스킴에 따라 넘버링된다. 유사하게, 용어 "CDR", "CDRL1", "CDRL2", "CDRL3", "CDRH1", "CDRH2", "CDRH3"은 문헌 [Kabat et al.; Sequences of proteins of Immunological Interest NIH, 1987]에 제시된 바와 같은 카바트 넘버링 시스템을 따른다.
용어 "VH" 및 "VL"은 항체의 중쇄 가변 영역 도메인 및 경쇄 가변 도메인 각각을 지칭하는 것으로 본원에 사용된다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "도메인"은 나머지 단백질과 관계없이 3차원 구조를 갖는 폴딩된 단백질 구조를 지칭한다. 일반적으로, 도메인은 단백질의 별개의 기능적 특성을 담당하고, 다수의 경우에서 나머지 단백질 및/또는 도메인의 기능을 상실하지 않으면서 다른 단백질에 부가되거나, 제거되거나, 또는 전달될 수 있다. "항체 단일 가변 도메인"은 항체 가변 도메인의 서열 특징을 포함하는 폴딩된 폴리펩티드 도메인이다. 따라서 이는 예를 들어 하나 이상의 루프가 항체 가변 도메인의 특징이 아닌 서열에 의해 대체된, 완전한 항체 가변 도메인 및 변형된 가변 도메인, 또는 말단절단되었거나 또는 N- 또는 C-말단 연장부를 포함하는 항체 가변 도메인, 뿐만 아니라 적어도 전장 도메인의 결합 활성 및 특이성을 보유하는 가변 도메인의 폴딩된 단편을 포함한다.
어구 "이뮤노글로불린 단일 가변 도메인"은 상이한 가변 영역 또는 도메인과 관계없이 항원 또는 에피토프에 특이적으로 결합하는 항체 가변 도메인 (VH, VHH, VL)을 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "이펙터 기능"은 항체 의존성 세포 매개 세포독성 (ADCC) 활성, 보체-의존성 세포독성 (CDC) 활성, Fc-매개 식세포작용 및 FcRn 수용체를 통한 항체 재순환 중 하나 이상을 지칭하는 것을 의미한다.
본 발명은 이제 단지 예시를 위해서만 기재된다.
실시예
하기 실시예는 본 발명의 다양한 비제한적 측면을 예시한다. 하기 실시예에 대해, 달리 나타내지 않는 한, 항원 결합 단백질은 서열식별번호: 42에 따른 중쇄 및 서열식별번호: 38에 따른 경쇄를 갖는 항체이고, 이하에서 "mab 1"로서 지칭된다. 이들 실시예에서의 mab 1은, pH 5.5에서 50 mM 아세트산나트륨, 0.05 mM EDTA, 1.0% 아르기닌, 51 mM 염화나트륨 및 0.02% 폴리소르베이트 80을 포함하는, 100 mg/mL의 1 mL 추출가능한 부피를 갖는 1.2 mL 충전물로서 제제화되었다.
실시예 1: mab 1 II상 임상 프로토콜
이러한 예측 실시예에서는 미만성 피부 전신 경화증을 갖는 참가자에서 mab 1의 안전성, 내약성, 약동학, 약역학을 평가하고 효능을 탐구하기 위한 위약-제어된, 반복-용량, 메카니즘 증명 연구가 수행될 것이다.
활성 질환 및 ≤ 60개월의 질환 지속기간을 갖는, 미만성 피부 전신 경화증 (dcSSc)을 갖는 참가자가 등록될 것이다. 활성 질환은 스크리닝 시 하기 기준 중 적어도 하나에 의해 정의된다:
ㆍ C 반응성 단백질 (CRP) ≥6mg/l (0.6 mg/dL), 조사자의 옵션에서 SSc에 기인함.
ㆍ 스크리닝 시 질환 지속기간 ≤ 18개월, 최초 비-레이노 현상 징후로부터의 시간으로서 정의됨.
ㆍ ≥ 3 mRSS 단위의 증가, 이전 6개월 이내에 수행된 평가와 비교 시.
ㆍ 하나의 신규 신체 부위의 침범 및 ≥ 2 mRSS 단위의 증가, 이전 6개월 이내에 수행된 평가와 비교 시.
ㆍ 2개의 신체 부위의 침범, 이전 6개월 이내에.
참가자는 2개 용량 수준 중 하나에서, 격주마다, 적어도 10주 동안 mab 1 또는 위약 중 어느 하나를 피하로 투약받을 것이다. 스크리닝을 포함한 연구의 지속기간은 모든 참가자에 대해 대략 32주일 것이다. 총 최소 24명의 참가자 및 최대 40명의 참가자가 2개 코호트에 걸쳐 등록할 것이다. 코호트 1 및 코호트 2에서의 참가자는 그들이 적어도 4개 용량의 mab 1 또는 위약을 제공받았고 제1일 및 제85일 (제12주) 평가 둘 다에서 생검을 갖는 경우에 연구 종점에 대해 평가가능한 것으로 간주된다. 추가의 참가자는 연구 전반에서 최대 40명의 참가자까지 스폰서의 재량으로 연구 내로 무작위화될 수 있다.
이는 SSc를 갖는 참가자에서의 mab 1의 제1 연구, 및 제1 반복 용량 연구이므로, 1차 종점은 mab1의 안전성 및 내약성이다. 게다가, 이러한 연구는 mab1의 약동학, 표적 결속 및 하류 약리학의 평가를 포함할 것이다. 이는 혈액 및 피부 수포액 내 mab1 및 OSM 수준 및 피부 생검 내 mab1 약리학의 mRNA 마커를 평가함으로써 달성될 것이다. 피부 침범이 강조되는데, 이는 이것이 용이하게 연구되고, 실질적으로 dcSSc를 갖는 환자에 의해 경험된 이환율에 기여하고, 병태에 수반된 3가지 주요 병리학적 과정을 예시하기 때문이다. 통상적으로 mab 1 및 OSM의 혈장 수준은 이러한 평가에 대해 측정된다. 그러나, 수포액 내 수준의 모니터링을 가능하게 하는 기술이 고안된 바 있다. 이러한 방법은 조직에서의 보다 정확한 분석을 가능하게 하고, 수포액 내 mab 1 수율은 전형적으로 혈액에서 측정될 것보다 20-30% 더 낮으므로, 투여량 효능의 보다 우수한 예측이 가능하다.
혈액 및 피부 생검 내 섬유증, 염증 및 혈관병증의 바이오마커의 평가가 또한 수행될 것이고, 이러한 이유로 인해 집단은 조기 활성 질환에 대해 강화된다. 이들 파라미터에서의 변화 및 서로와 및 임상 효능의 예비 측정치와 그들의 연관성이 평가될 것이다. 이러한 데이터는 mab1이 SSc의 발병기전에 수반된 주요 경로에 대한 영향을 갖고 있다는 증거를 제공하도록 의도된다.
코호트 1의 목적은, 더 높은 용량으로 상승하기 전에, mab 1의 약리적으로 활성이지만 최대 미만 용량의 반복 용량의 안전성 및 내약성을 평가하는 것이다.
치료기의 지속기간은 효과적인 요법이 대략 10-12주의 이러한 시점에서 기계론적 파라미터에서의 변화를 야기하여야 한다는 예상을 기반으로 한다.
mab1 반감기 (t½)는 19 내지 25일이며, 이는 mab 1의 마지막 투여로부터 대략 16주 후 가용성 시토카인에 대한 전형적인 모노클로날 항체 반감기와 일치한다.
위약군은 mab 1 치료에 기여가능한 유해 사건 대 mab 1 치료와 관계없는 것들의 유효한 평가를 위해 요구된다. 위약 참가자는 또한 바이오마커 및 효능 평가에 대한 음성 대조군으로서 역할을 할 것이다.
참가자는 mab 1 및 위약 각각에 대해 3:1 비로 무작위화될 것이다. 이러한 불균형한 할당 비는 더 많은 참가자가 mab 1을 투약한 후 바이오마커에서 참가자내 변화의 평가를 위해 이용가능하고 더 많은 참가자가 mab 1을 제공받게 된다는 것을 의미한다.
참가자는 이러한 희귀 질환에서의 잠재적 참가자를 배제하는 것을 피하기 위해 미코페놀레이트 및 저용량 경구 코르티코스테로이드를 포함한, 일부 배경 요법을 계속 받게 될 것이다. 다른 면역억제 치료는 이러한 작은 시험에서 참가자간 변동성을 최소화하기 위해 배제될 것이다.
이러한 연구를 위한 용량 수준은 PK/PD 예측, mab 1을 이용한 최초 인간 연구로부터의 데이터, 및 전임상 데이터를 기반으로 하여 선택된 바 있다 (세부사항에 대해 실시예 2 참조). 2개 용량 수준 (100 mg 및 300 mg)은 혈청 및 피부 구획 둘 다에서의 예측된 표적 결속을 기반으로 하여 선택된 바 있다. 150 mg으로의 추가의 계획된 투여량 연구가 또한 매주 또는 격주 투여 레지멘에서 사용될 것이다.
대략 0.6 nM의 생체내 친화도는 최초 인간 (FTIH) 데이터로부터 추정되었다. 전형적인 mab 1 겉보기 분포 부피는 11.5 l (95% CI: 10.2-13.1)였고, 전형적인 겉보기 전신 클리어런스는 14.1 ml/hr (95% CI: 12.7-15.6)이었다.
표 2
실시예 2: mab 1 용량 선택
Mab 1 용량 수준 (이는 표 2에 요약되어 있음)은 FTIH 연구로부터의 PK/PD 예측 및 전임상 데이터를 기반으로 하여 선택하였으며, 여기서 0.1, 0.3, 0.6, 1.0, 3.0 및 6.0 mg/kg의 투여량을 사용하였다.
가이드라인 (Strategies to Identify and Mitigate Risks for First-In-Human Clinical Trials with Investigational Medicinal Products [CHMP, 2007])에 따른, '최소 예상된 생물학적 효과 수준' (MABEL)을 사용하여 출발 용량을 정의하였고 이는 혈장 내 최대 억제를 20-40% 범위로 생성하는 예측된 용량 수준으로서 정의된다. 이전 항-OSM 항체 (mab 2)는 최대 90% 표적 결속 (TE)을 달성한 용량에서 건강한 지원자 및 류마티스 관절염 환자 둘 다에서 유리한 안전성 및 내약성 프로파일을 가졌다.
최대 예측된 PD 억제가, 최선의 시나리오에서 인간 PK/PD 예측에 따라, 41%였을 때 mab 1에 대한 0.1 mg/kg의 용량을 MABEL 용량으로 지정하였다.
6 mg/kg의 mab 1의 최고 계획된 용량은 14 내지 40일 지속되는 혈장 내 완전 TE (>90%로서 정의됨)를 제공하는 것으로 예상되며, 보다 낮은 TE 수준 (<90%)은 피부를 포함한 조직 구획에서 달성될 것으로 예측된다.
약리학 및 독성학의 비-임상적 평가에서 사용된, mab 1에 대한 시노몰구스 원숭이 연구는, 이러한 연구에 사용된 용량 수준에서, 인간에 대한 mab 1의 최초 투여에 대해 과도하거나 또는 예상하지 못한 위험이 없다는 합리적인 보증을 제공하였다. 최고 계획된 노출 (Cmax 33.3 μg/mL, AUC(0-∞)=23534 μg*h/mL)은 독성학 연구에 의해 제공된 안전역보다 거의 100배 낮을 것으로 예측되었다 - 표 3 참조.
표 3 mAb 1 용량, 예측된 노출 및 안전역
약역학은 단일 상승 용량 FTIH 연구에서 표적 결속을 특징으로 하는 유리 및 총 OSM 수준의 측정에 의해 평가된 바 있다. 약물 및 표적의 결합 동역학과 함께 1-구획 PK 모델을 사용하는 표적 매개 약물 배치 (TMDD) 모델을 개발하여 혈청 내 OSM에 대한 mAb 1의 생체내 친화도를 평가하였다. 이러한 연구에서, 유리 OSM 수준은 약물 투여 후 정량 한계치 미만이었으며, 이는 실질적인 OSM 억제를 지시한다. 도면은 제시한다.
추정된 생체내 친화도는 0.568 nM (95 CI: 0.455-0.710)이었다. 유리 OSM의 추정된 분해 (표적 턴오버) 속도는 2.05 hr-1 (1.62-2.59)이었다. 대략 90% 표적 결속은 mab 1의 단일 6 mg/kg SC 투여 후 혈청에서 추정되었다.
mab 1의 혈장 농도 및 혈청 OSM 사이의 관계 뿐만 아니라 표적 결속을 평가하였다. 게다가, 혈장 mab 1 농도 및 혈소판 계수 사이의 관계를 평가하였고, 결과는 혈소판감소증 및 빈혈에 대한 잠재적 영향을 제시하였다. 수준은 요구된 안전역 이내에 있었다. 안전하고 효과적인 단일 용량을 결정하고 이어서 요구된 TE에 필요한 반복 투약 수준이 얼마인지를 결정할 필요가 있었다.
도 3은 1 구획 PK-TE 모델을 기반으로 하는 반복 투약 동안의 모의된 mAb1 TE 프로파일을 예시한다. 모델에 따르면, 100 mg SC 격주의 용량은 최대 미만 TE (정상 상태 최저 수준에서 대략 80%)를 달성하는 것으로 예측된 반면에, 300 mg SC 격주는 90% 초과 TE를 달성하는 것으로 예측된다. 따라서 150 mg 용량이 필요한 표적 결속을 달성하는 것으로 예상되며, 표 4에 따른 단일 보다 농축된 투여에서 도 4 및 5를 참조한다.
표 4
150 mg 용량이 매주 투여될 때 요구된 TE에 도달하는 것으로 예측된다. 그러나, 2주마다 주어진 150 mg 용량은 최적 미만 TE를 달성할 수 있지만 혈소판감소증 및 빈혈에 관하여 보다 내약성일 수 있다.
실시예 3: mab 2 FTIH I상 연구
mab 2를 사용하는 이전 임상 연구 수행하여 메토트렉세이트 (MTX)의 배경에 대한 활성 RA를 갖는 환자에서의 단일 (파트 A) 및 3회 반복 (파트 B) 정맥내 주입의 안전성, 내약성, 효능, 약동학 및 약역학을 평가하였다.
Mab 2는 서열식별번호: 47의 중쇄 서열 및 서열식별번호: 48의 경쇄 서열을 갖는다.
파트 C는 MTX의 배경에 대한 활성 RA를 갖는 환자에게의 피하로 투여된 mab 2를 평가하기 위한 단일 용량, 무작위화, 단일-맹검, 위약-조절된 연구였다. 코호트 1 내지 6에서의 환자는 0.03 mg/kg, 0.3 mg/kg, 3 mg/kg (환자의 2개 코호트는 이러한 용량 수준에서 등록됨), 10 mg/kg 및 30 mg/kg의 mab 2을 제공받았고; 용량은 용량 증량으로 투여되었다. 코호트 2 내지 6은 이전 코호트에서의 마지막 환자의 투약으로부터 최소 3주 후에 투약되었다. 코호트 7 및 8을 동시에 등록하였고, 환자는 10 mg/kg 또는 20 mg/kg mab 2를 제공받았다.
파트 B는 파트 A에서의 질환 활성 스코어 28 (DAS28) 및 PK에서의 변화를 기반으로 하는 무작위화, 이중-맹검, 위약-조절된, 반복 용량 연구였다. 제1 용량의 투여 전에, 적격한 환자 (n = 54)는 2:1 비로 무작위화되어 mab 2 (n = 37) 또는 위약 (n = 17)을 제공받았다. 각각의 환자에 대해, 용량은 대략 4주 간격으로 투여되었다.
파트 A 및 B에서, mab 2 또는 위약은 2시간에 걸쳐 느린 IV 주입에 의해 투여되었다. 연구의 1차 종점은 파트 A에서 제28일에 및 파트 B 및 C에서 제56일에 DAS28에서의 평균 변화였다. mab 2의 적어도 1개 용량을 제공받은 모든 환자는 안전성 분석에 포함되었다. 파트 A에서, 제56일, 제84일 및 제91일에 3 mg/kg 및 위약 사이에 DAS28에서의 통계적으로 유의차가 있었다. 또한, 제84일에, 위약과 비교 시, 0.3 mg/kg, 3 mg/kg 및 10 mg/kg 사이에 DAS28에서의 통계적으로 유의차가 있었다. 이들 변화가 작고 늦게 발생할지라도, 이들은 파트 B 및 C로의 진행을 지지하여 mab 2의 치료적 잠재력을 결정하였다. 파트 B의 경우에, 6 mg/kg 및 위약 사이에 유의차가 관찰되지 않았다. 파트 C의 경우에, DAS28에서의 통계적으로 유의차는, 위약과 비교 시, 500 mg 피하 군 사이에 제40일, 제84일 및 제100일에서 관찰되었다. 류마티즘에 대한 유럽 연맹 (EULAR) 반응 기준, ACR20, ACR50 또는 ACR70에 대해 임의의 시점에서 어떠한 유의한 발견도 관찰되지 않았다. 임상적, 약동학적 및 약역학적 데이터의 탐구적 분석은 효능의 결여가 혈청 및 활액 내 OSM/항체 복합체의 축적에 기인한 OSM의 반감기를 연장시키는 단백질 담체 효과를 야기하는 더 높은 친화도 OSM 수용체와 비교 시 mab 2의 결합 친화도 및 빠른 오프-레이트에 기인할 수 있다는 것을 시사한다.
본 발명의 데이터는 표적을 완전히 중화시키는 mAb의 결합 친화도 및 오프-레이트 효과의 중요성 및 어떻게 이것이 그의 효능에 영향을 미치고 잠재적으로 질환 활성을 악화시킬 수 있는지를 강조하였다.
10G8 항체, 및 10G8로부터 유래된 인간화 mab 1의 개선된 친화도는 mab 2 대비 더 낮은 용량에서 유사한 혈소판 효과 (약리학의 증거)를 생성하였다.
표 5
AE, 유해 사건; IV, 정맥내 환자; SC, 피하 환자.
혈소판 수에서의 용량 관련된 감소가 있었다. 기준선으로부터의 백분율 및 평균 변화는 각각 표 5 및 도 8에 상술된다.
혈소판 계수에서의 이러한 감소는 mab 2의 약리학과 일치하고 용량 비례인 것으로 보여지며, 혈소판은 보다 장기간에 걸쳐 기준선으로부터의 더 큰 감소를 입증한다.
표 5로부터, 3 mg/kg의 투여량은 50%의 대상체에서 28 내지 35%의 감소를 제공하며, 이는 평균 효과가 50%보다 현저히 더 낮은, 대략 10-20%라는 것을 의미한다. 도 8은 유사한 백분율 변화를 제시한다. 10 mg/kg의 투여량은 20-30% 감소, 20 mg/kg 투여량은 50-60% 감소, 및 30 mg/kg 투여량은 60-70% 감소를 제시하였다. mab 2에 대한 모든 용량은 IV 투여 경로를 사용하여 수행하였다.
비교해 보면 mab 1은 실시예 1에 요약된 바와 같은 프로토콜 (예측 데이터 아님)에 따른 최근 FTIH 연구에서 혈소판 감소에 대해 평가되었다. 도 9는 상기 FTIH mab1 연구에서의 3 mg/kg (SC) 투여량이 35% 감소 및 6 mg/kg (SC) 투여량이 60% 감소를 생성한다는 것을 제시한다. 80% 생체이용률을 가정하면, mab 1 및 mab 2 사이에 5 내지 6배 비 효능 (혈소판 효과를 기반으로 함)이 있다. 본 발명의 데이터는 표적을 완전히 중화시키는 mAb의 결합 친화도 및 오프-레이트 효과의 중요성 및 이를 기반으로 하여 어떻게 투여량 레지멘이 그의 효능에 영향을 미칠 수 있는지를 강조한다.
서열 요약 (표 A)
서열 목록
SEQUENCE LISTING
<110> GlaxoSmithKline Intellectual Property Development Limited
<120> ANTIGEN BINDING PROTEINS
<130> PB66177
<150> GB1614627.6
<151> 2016-08-30
<160> 47
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 5
<212> PRT
<213> Mus musculus
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Asn Tyr Ala Met Ser
1 5
<210> 2
<211> 17
<212> PRT
<213> Mus musculus
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Thr Ile Ser Asp Gly Gly Ser Phe Thr Tyr Tyr Leu Asp Asn Val Arg
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Gly
<210> 3
<211> 12
<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 3
Asp Val Gly His Thr Thr Phe Trp Tyr Phe Asp Val
1 5 10
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<212> PRT
<213> Mus musculus
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Tyr Ala Ser Asn Leu Glu Ser
1 5
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<211> 9
<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 5
Leu His Ser Arg Glu Phe Pro Phe Thr
1 5
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<211> 363
<212> DNA
<213> Mus musculus
<400> 6
gaaatgcaac tggtggagtc tggggaaggc ttagtggagc ctggagggtc cctgaaactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cactttcagt aactatgcca tgtcttgggt tcgccagact 120
ccggaaaaga gcctggagtg ggtcgcaacc attagtgatg gtggtagttt cacctactat 180
ctagacaatg taaggggccg attcaccatc tccagagaca atgccaagaa caacctgtat 240
ttgcaaatga gccatttgaa gtctgacgac acagccatgt attactgtgc aagagatgtg 300
ggacatacta ccttttggta cttcgatgtc tggggctcag ggaccgcggt caccgtctcc 360
tca 363
<210> 7
<211> 121
<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 7
Glu Met Gln Leu Val Glu Ser Gly Glu Gly Leu Val Glu Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Ser Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Thr Ile Ser Asp Gly Gly Ser Phe Thr Tyr Tyr Leu Asp Asn Val
50 55 60
Arg Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Asn Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Ser His Leu Lys Ser Asp Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Val Gly His Thr Thr Phe Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly
100 105 110
Ser Gly Thr Ala Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 8
<211> 333
<212> DNA
<213> Mus musculus
<400> 8
gacattgtgc tgacacagtc tcctgttttc ttagttgtat ctctggggca gagggccacc 60
atctcctgta gggccagcaa aagtgtcagt gcagctggct ataatttcat gcactggtac 120
caacagaaac caggacagcc gcccaaagtc ctcatcaagt atgcatccaa cctagaatct 180
ggggtccctg ccaggttcag tggcagtggg tctgggacag acttcaccct caacatccat 240
cctgtggagg aggaggatgc tgtaacatat tactgtctgc acagtaggga gtttccgttc 300
acgttcggag gggggaccaa cctggaaata aaa 333
<210> 9
<211> 111
<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 9
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Val Phe Leu Val Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Ala Ala
20 25 30
Gly Tyr Asn Phe Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Val Leu Ile Lys Tyr Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His
65 70 75 80
Pro Val Glu Glu Glu Asp Ala Val Thr Tyr Tyr Cys Leu His Ser Arg
85 90 95
Glu Phe Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Asn Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 10
<211> 1352
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> chimera
<400> 10
aaatgcaact ggtggagtct ggggaaggct tagtggagcc tggagggtcc ctgaaactct 60
cctgtgcagc ctctggattc actttcagta actatgccat gtcttgggtt cgccagactc 120
cggaaaagag cctggagtgg gtcgcaacca ttagtgatgg tggtagtttc acctactatc 180
tagacaatgt aaggggccga ttcaccatct ccagagacaa tgccaagaac aacctgtatt 240
tgcaaatgag ccatttgaag tctgacgaca cagccatgta ttactgtgca agagatgtgg 300
gacatactac cttttggtac ttcgatgtct ggggctcagg gacactagtg accgtgtcca 360
gcgccagcac caagggcccc agcgtgttcc ccctggcccc cagcagcaag agcaccagcg 420
gcggcacagc cgccctgggc tgcctggtga aggactactt ccccgaaccg gtgaccgtgt 480
cctggaacag cggagccctg accagcggcg tgcacacctt ccccgccgtg ctgcagagca 540
gcggcctgta cagcctgagc agcgtggtga ccgtgcccag cagcagcctg ggcacccaga 600
cctacatctg taacgtgaac cacaagccca gcaacaccaa ggtggacaag aaggtggagc 660
ccaagagctg tgacaagacc cacacctgcc ccccctgccc tgcccccgag ctgctgggag 720
gccccagcgt gttcctgttc ccccccaagc ctaaggacac cctgatgatc agcagaaccc 780
ccgaggtgac ctgtgtggtg gtggatgtga gccacgagga ccctgaggtg aagttcaact 840
ggtacgtgga cggcgtggag gtgcacaatg ccaagaccaa gcccagggag gagcagtaca 900
acagcaccta ccgggtggtg tccgtgctga ccgtgctgca ccaggattgg ctgaacggca 960
aggagtacaa gtgtaaggtg tccaacaagg ccctgcctgc ccctatcgag aaaaccatca 1020
gcaaggccaa gggccagccc agagagcccc aggtgtacac cctgccccct agcagagatg 1080
agctgaccaa gaaccaggtg tccctgacct gcctggtgaa gggcttctac cccagcgaca 1140
tcgccgtgga gtgggagagc aacggccagc ccgagaacaa ctacaagacc accccccctg 1200
tgctggacag cgatggcagc ttcttcctgt acagcaagct gaccgtggac aagagcagat 1260
ggcagcaggg caacgtgttc agctgctccg tgatgcacga ggccctgcac aatcactaca 1320
cccagaagag cctgagcctg tcccctggca ag 1352
<210> 11
<211> 451
<212> PRT
<213> Artificial
<220>
<223> chimera
<400> 11
Glu Met Gln Leu Val Glu Ser Gly Glu Gly Leu Val Glu Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Ser Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Thr Ile Ser Asp Gly Gly Ser Phe Thr Tyr Tyr Leu Asp Asn Val
50 55 60
Arg Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Asn Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Ser His Leu Lys Ser Asp Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Val Gly His Thr Thr Phe Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly
100 105 110
Ser Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
225 230 235 240
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
245 250 255
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
260 265 270
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
275 280 285
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
290 295 300
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
305 310 315 320
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
325 330 335
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
340 345 350
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
355 360 365
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
370 375 380
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
385 390 395 400
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
405 410 415
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
420 425 430
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
435 440 445
Pro Gly Lys
450
<210> 12
<211> 654
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> chimera
<400> 12
gacattgtgc tgacacagtc tcctgttttc ttagttgtat ctctggggca gagggccacc 60
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caacagaaac caggacagcc gcccaaagtc ctcatcaagt atgcatccaa cctagaatct 180
ggggtccctg ccaggttcag tggcagtggg tctgggacag acttcaccct caacatccat 240
cctgtggagg aggaggatgc tgtaacatat tactgtctgc acagtaggga gtttccgttc 300
acgttcggag gggggaccaa cctggaaata aaacgtacgg tggccgcccc cagcgtgttc 360
atcttccccc ccagcgatga gcagctgaag agcggcaccg ccagcgtggt gtgtctgctg 420
aacaacttct acccccggga ggccaaggtg cagtggaagg tggacaatgc cctgcagagc 480
ggcaacagcc aggagagcgt gaccgagcag gacagcaagg actccaccta cagcctgagc 540
agcaccctga ccctgagcaa ggccgactac gagaagcaca aggtgtacgc ctgtgaggtg 600
acccaccagg gcctgtccag ccccgtgacc aagagcttca accggggcga gtgc 654
<210> 13
<211> 218
<212> PRT
<213> Artificial
<220>
<223> chimera
<400> 13
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Val Phe Leu Val Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Ala Ala
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Gly Tyr Asn Phe Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
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Lys Val Leu Ile Lys Tyr Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His
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Pro Val Glu Glu Glu Asp Ala Val Thr Tyr Tyr Cys Leu His Ser Arg
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Glu Phe Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Asn Leu Glu Ile Lys Arg
100 105 110
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Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
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Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
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Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
165 170 175
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
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His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
195 200 205
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
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<210> 14
<211> 294
<212> DNA
<213> Human
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ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gaga 294
<210> 15
<211> 98
<212> PRT
<213> Human
<400> 15
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
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35 40 45
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65 70 75 80
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85 90 95
Ala Arg
<210> 16
<211> 300
<212> DNA
<213> Human
<400> 16
gacatcgtga tgacccagtc tccagactcc ctggctgtgt ctctgggcga gagggccacc 60
atcaactgca agtccagcca gagtgtttta tacagctcca acaataagaa ctacttagct 120
tggtaccagc agaaaccagg acagcctcct aagctgctca tttactgggc atctacccgg 180
gaatccgggg tccctgaccg attcagtggc agcgggtctg ggacagattt cactctcacc 240
atcagcagcc tgcaggctga agatgtggca gtttattact gtcagcaata ttatagtact 300
<210> 17
<211> 100
<212> PRT
<213> Human
<400> 17
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser
20 25 30
Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Tyr Tyr Ser Thr
100
<210> 18
<211> 363
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> Humanised VH H0 nucleotide sequence -leto codon optimised
<400> 18
gaggtgcagc tggtggaaag cggcggcggc ctggtccagc ccggcgggag cctgagactc 60
tcttgcgccg ctagcggctt caccttcagc aactacgcca tgagctgggt gaggcaggcc 120
cccggcaagg gcctggagtg ggtggccacc atcagcgacg gcggcagctt cacctactat 180
ctggacaacg tgaggggcag gttcaccatc agcagggaca acgccaagaa cagcctgtac 240
ctgcagatga acagcctgag ggccgaggat accgccgtgt actactgcgc cagggacgtc 300
ggccacacca ccttctggta cttcgacgtc tggggcaggg gcacactagt gaccgtgtcc 360
agc 363
<210> 19
<211> 121
<212> PRT
<213> Artificial
<220>
<223> Humanised VH H0 amino acid sequence
<400> 19
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Thr Ile Ser Asp Gly Gly Ser Phe Thr Tyr Tyr Leu Asp Asn Val
50 55 60
Arg Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Val Gly His Thr Thr Phe Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly
100 105 110
Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 20
<211> 363
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> Humanised VH H1 nucleotide sequence -leto codon optimised
<400> 20
gagatgcagc tggtggaaag cggcggcggc ctggtccagc ccggcgggag cctgagactc 60
tcttgcgccg ctagcggctt caccttcagc aactacgcca tgagctgggt gaggcaggcc 120
cccggcaagg gcctggagtg ggtggccacc atcagcgacg gcggcagctt cacctactat 180
ctggacaacg tgaggggcag gttcaccatc agcagggaca acgccaagaa cagcctgtac 240
ctgcagatga acagcctgag ggccgaggat accgccgtgt actactgcgc cagggacgtc 300
ggccacacca ccttctggta cttcgacgtc tggggcaggg gcacactagt gaccgtgtcc 360
agc 363
<210> 21
<211> 121
<212> PRT
<213> Artificial
<220>
<223> Humanised VH H1 amino acid sequence
<400> 21
Glu Met Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Thr Ile Ser Asp Gly Gly Ser Phe Thr Tyr Tyr Leu Asp Asn Val
50 55 60
Arg Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Val Gly His Thr Thr Phe Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly
100 105 110
Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 22
<211> 363
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> Humanised VH H2 nucleotide sequence -leto codon optimised
<400> 22
gaggtgcagc tggtggaaag cggcggcggc ctggtccagc ccggcgggag cctgagactc 60
tcttgcgccg ctagcggctt caccttcagc aactacgcca tgagctgggt gaggcaggcc 120
cccggcaagg gcctggagtg ggtggccacc atcagcgacg gcggcagctt cacctactat 180
ctggacaacg tgaggggcag gttcaccatc agcagggaca acgccaagaa cagcctgtac 240
ctgcagatga acagcctgag ggccgaggat accgccgtgt actactgcgc cagggacgtc 300
ggccacacca ccttctggta cttcgacgtc tggggctccg gcacactagt gaccgtgtcc 360
agc 363
<210> 23
<211> 121
<212> PRT
<213> Artificial
<220>
<223> Humanised VH H2 amino acid sequence
<400> 23
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Thr Ile Ser Asp Gly Gly Ser Phe Thr Tyr Tyr Leu Asp Asn Val
50 55 60
Arg Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Val Gly His Thr Thr Phe Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly
100 105 110
Ser Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 24
<211> 333
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> Humanised VL L0 nucleotide sequence -leto codon optimised
<400> 24
gacatcgtga tgactcagag ccccgatagc ctggccgtga gcctgggcga aagggccacc 60
atcaactgca gggccagcaa gagcgtgagc gctgccggct acaacttcat gcactggtac 120
cagcagaagc ccggccagcc ccccaagctg ctgatctact acgcctccaa cctggagagc 180
ggcgtgccag acaggttcag cggatctggc agcggcaccg acttcaccct gaccatctca 240
agcctgcagg ccgaggacgt cgccgtgtac tactgcctgc acagcaggga gttccccttc 300
acctttggcg gcggcaccaa ggtggagatc aag 333
<210> 25
<211> 111
<212> PRT
<213> Artificial
<220>
<223> 10G8 Humanised VL L0 amino acid sequence
<400> 25
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Ala Ala
20 25 30
Gly Tyr Asn Phe Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Tyr Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Asp
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Leu His Ser Arg
85 90 95
Glu Phe Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 26
<211> 333
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> Humanised VL L1 nucleotide sequence -leto codon optimised
<400> 26
gacatcgtga tgactcagag ccccgatagc ctggccgtga gcctgggcga aagggccacc 60
atcaactgca gggccagcaa gagcgtgagc gctgccggct acaacttcat gcactggtac 120
cagcagaagc ccggccagcc ccccaaggtg ctgatctact acgcctccaa cctggagagc 180
ggcgtgccag acaggttcag cggatctggc agcggcaccg acttcaccct gaccatctca 240
agcctgcagg ccgaggacgt cgccgtgtac tactgcctgc acagcaggga gttccccttc 300
acctttggcg gcggcaccaa ggtggagatc aag 333
<210> 27
<211> 111
<212> PRT
<213> Artificial
<220>
<223> Humanised VL L1 amino acid sequence
<400> 27
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Ala Ala
20 25 30
Gly Tyr Asn Phe Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Val Leu Ile Tyr Tyr Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Asp
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Leu His Ser Arg
85 90 95
Glu Phe Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 28
<211> 333
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> Humanised VL L2 nucleotide sequence- leto codon optimised
<400> 28
gacatcgtga tgactcagag ccccgatagc ctggccgtga gcctgggcga aagggccacc 60
atcaactgca gggccagcaa gagcgtgagc gctgccggct acaacttcat gcactggtac 120
cagcagaagc ccggccagcc ccccaagctg ctgatctact acgcctccaa cctggagagc 180
ggcgtgccag acaggttcag cggatctggc agcggcaccg acttcaccct gaccatctca 240
agcctgcagg ccgaggacgt cgtggtgtac tactgcctgc acagcaggga gttccccttc 300
acctttggcg gcggcaccaa ggtggagatc aag 333
<210> 29
<211> 111
<212> PRT
<213> Artificial
<220>
<223> Humanised VL L2 amino acid sequence
<400> 29
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Ala Ala
20 25 30
Gly Tyr Asn Phe Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Tyr Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Asp
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Val Val Tyr Tyr Cys Leu His Ser Arg
85 90 95
Glu Phe Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 30
<211> 333
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> Humanised VL L3 nucleotide sequence - leto codon optimised
<400> 30
gacatcgtga tgactcagag ccccgatagc ctggccgtga gcctgggcga aagggccacc 60
atcaactgca gggccagcaa gagcgtgagc gctgccggct acaacttcat gcactggtac 120
cagcagaagc ccggccagcc ccccaagctg ctgatctact acgcctccaa cctggagagc 180
ggcgtgccag acaggttcag cggatctggc agcggcaccg acttcaccct gaccatctca 240
agcctgcagg ccgaggacgt cgccgtgtac tactgcctgc acagcaggga gttccccttc 300
acctttggcg gcggcaccaa cgtggagatc aag 333
<210> 31
<211> 111
<212> PRT
<213> Artificial
<220>
<223> Humanised VL L3 amino acid sequence
<400> 31
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Ala Ala
20 25 30
Gly Tyr Asn Phe Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Tyr Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Asp
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Leu His Ser Arg
85 90 95
Glu Phe Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Asn Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 32
<211> 333
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> Humanised VL L4 nucleotide sequence -leto codon optimised
<400> 32
gacatcgtga tgactcagag ccccgatagc ctggccgtga gcctgggcga aagggccacc 60
atcaactgca gggccagcaa gagcgtgagc gctgccggct acaacttcat gcactggtac 120
cagcagaagc ccggccagcc ccccaaggtg ctgatctact acgcctccaa cctggagagc 180
ggcgtgccag acaggttcag cggatctggc agcggcaccg acttcaccct gaccatctca 240
agcctgcagg ccgaggacgt cgtggtgtac tactgcctgc acagcaggga gttccccttc 300
acctttggcg gcggcaccaa cgtggagatc aag 333
<210> 33
<211> 111
<212> PRT
<213> Artificial
<220>
<223> Humanised VL L4 amino acid sequence
<400> 33
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Ala Ala
20 25 30
Gly Tyr Asn Phe Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Val Leu Ile Tyr Tyr Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Asp
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Val Val Tyr Tyr Cys Leu His Ser Arg
85 90 95
Glu Phe Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Asn Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 34
<211> 1353
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> Mature H0 heavy chain nucleotide sequence -leto codon optimised
<400> 34
gaggtgcagc tggtggaaag cggcggcggc ctggtccagc ccggcgggag cctgagactc 60
tcttgcgccg ctagcggctt caccttcagc aactacgcca tgagctgggt gaggcaggcc 120
cccggcaagg gcctggagtg ggtggccacc atcagcgacg gcggcagctt cacctactat 180
ctggacaacg tgaggggcag gttcaccatc agcagggaca acgccaagaa cagcctgtac 240
ctgcagatga acagcctgag ggccgaggat accgccgtgt actactgcgc cagggacgtc 300
ggccacacca ccttctggta cttcgacgtc tggggcaggg gcacactagt gaccgtgtcc 360
agcgccagca ccaagggccc cagcgtgttc cccctggccc ccagcagcaa gagcaccagc 420
ggcggcacag ccgccctggg ctgcctggtg aaggactact tccccgaacc ggtgaccgtg 480
tcctggaaca gcggagccct gaccagcggc gtgcacacct tccccgccgt gctgcagagc 540
agcggcctgt acagcctgag cagcgtggtg accgtgccca gcagcagcct gggcacccag 600
acctacatct gtaacgtgaa ccacaagccc agcaacacca aggtggacaa gaaggtggag 660
cccaagagct gtgacaagac ccacacctgc cccccctgcc ctgcccccga gctgctggga 720
ggccccagcg tgttcctgtt cccccccaag cctaaggaca ccctgatgat cagcagaacc 780
cccgaggtga cctgtgtggt ggtggatgtg agccacgagg accctgaggt gaagttcaac 840
tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcacaat gccaagacca agcccaggga ggagcagtac 900
aacagcacct accgggtggt gtccgtgctg accgtgctgc accaggattg gctgaacggc 960
aaggagtaca agtgtaaggt gtccaacaag gccctgcctg cccctatcga gaaaaccatc 1020
agcaaggcca agggccagcc cagagagccc caggtgtaca ccctgccccc tagcagagat 1080
gagctgacca agaaccaggt gtccctgacc tgcctggtga agggcttcta ccccagcgac 1140
atcgccgtgg agtgggagag caacggccag cccgagaaca actacaagac caccccccct 1200
gtgctggaca gcgatggcag cttcttcctg tacagcaagc tgaccgtgga caagagcaga 1260
tggcagcagg gcaacgtgtt cagctgctcc gtgatgcacg aggccctgca caatcactac 1320
acccagaaga gcctgagcct gtcccctggc aag 1353
<210> 35
<211> 451
<212> PRT
<213> Artificial
<220>
<223> Mature H0 heavy chain amino acid sequence
<400> 35
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Thr Ile Ser Asp Gly Gly Ser Phe Thr Tyr Tyr Leu Asp Asn Val
50 55 60
Arg Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Val Gly His Thr Thr Phe Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly
100 105 110
Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
225 230 235 240
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
245 250 255
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
260 265 270
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
275 280 285
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
290 295 300
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
305 310 315 320
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
325 330 335
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
340 345 350
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
355 360 365
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
370 375 380
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
385 390 395 400
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
405 410 415
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
420 425 430
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
435 440 445
Pro Gly Lys
450
<210> 36
<211> 654
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> Mature L1 light chain nucleotide sequence - leto codon optimised
<400> 36
gacatcgtga tgactcagag ccccgatagc ctggccgtga gcctgggcga aagggccacc 60
atcaactgca gggccagcaa gagcgtgagc gctgccggct acaacttcat gcactggtac 120
cagcagaagc ccggccagcc ccccaaggtg ctgatctact acgcctccaa cctggagagc 180
ggcgtgccag acaggttcag cggatctggc agcggcaccg acttcaccct gaccatctca 240
agcctgcagg ccgaggacgt cgccgtgtac tactgcctgc acagcaggga gttccccttc 300
acctttggcg gcggcaccaa ggtggagatc aagcgtacgg tggccgcccc cagcgtgttc 360
atcttccccc ccagcgatga gcagctgaag agcggcaccg ccagcgtggt gtgtctgctg 420
aacaacttct acccccggga ggccaaggtg cagtggaagg tggacaatgc cctgcagagc 480
ggcaacagcc aggagagcgt gaccgagcag gacagcaagg actccaccta cagcctgagc 540
agcaccctga ccctgagcaa ggccgactac gagaagcaca aggtgtacgc ctgtgaggtg 600
acccaccagg gcctgtccag ccccgtgacc aagagcttca accggggcga gtgc 654
<210> 37
<211> 218
<212> PRT
<213> Artificial
<220>
<223> Mature L1 light chain amino acid sequence
<400> 37
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Ala Ala
20 25 30
Gly Tyr Asn Phe Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Val Leu Ile Tyr Tyr Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Asp
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Leu His Ser Arg
85 90 95
Glu Phe Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100 105 110
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
115 120 125
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
130 135 140
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
145 150 155 160
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
165 170 175
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
180 185 190
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
195 200 205
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 38
<211> 363
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> Humanised VH variant H0 (IGHV3_23 CDRH1) nucleotide sequence-
leto codon optimised
<400> 38
gaggtgcagc tggtggaaag cggcggcggc ctggtccagc ccggcgggag cctgagactc 60
tcttgcgccg ctagcggctt caccttcagc agctacgcca tgagctgggt gaggcaggcc 120
cccggcaagg gcctggagtg ggtggccacc atcagcgacg gcggcagctt cacctactat 180
ctggacaacg tgaggggcag gttcaccatc agcagggaca acgccaagaa cagcctgtac 240
ctgcagatga acagcctgag ggccgaggat accgccgtgt actactgcgc cagggacgtc 300
ggccacacca ccttctggta cttcgacgtc tggggcaggg gcacactagt gaccgtgtcc 360
agc 363
<210> 39
<211> 121
<212> PRT
<213> Artificial
<220>
<223> Humanised VH variant H0 (IGHV3_23 CDRH1) amino acid sequence
<400> 39
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Thr Ile Ser Asp Gly Gly Ser Phe Thr Tyr Tyr Leu Asp Asn Val
50 55 60
Arg Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Val Gly His Thr Thr Phe Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly
100 105 110
Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 40
<211> 1353
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> Mature H0 (IGHV3_23 CDRH1) heavy chain nucleotide sequence - leto
codon optimised
<400> 40
gaggtgcagc tggtggaaag cggcggcggc ctggtccagc ccggcgggag cctgagactc 60
tcttgcgccg ctagcggctt caccttcagc agctacgcca tgagctgggt gaggcaggcc 120
cccggcaagg gcctggagtg ggtggccacc atcagcgacg gcggcagctt cacctactat 180
ctggacaacg tgaggggcag gttcaccatc agcagggaca acgccaagaa cagcctgtac 240
ctgcagatga acagcctgag ggccgaggat accgccgtgt actactgcgc cagggacgtc 300
ggccacacca ccttctggta cttcgacgtc tggggcaggg gcacactagt gaccgtgtcc 360
agcgccagca ccaagggccc cagcgtgttc cccctggccc ccagcagcaa gagcaccagc 420
ggcggcacag ccgccctggg ctgcctggtg aaggactact tccccgaacc ggtgaccgtg 480
tcctggaaca gcggagccct gaccagcggc gtgcacacct tccccgccgt gctgcagagc 540
agcggcctgt acagcctgag cagcgtggtg accgtgccca gcagcagcct gggcacccag 600
acctacatct gtaacgtgaa ccacaagccc agcaacacca aggtggacaa gaaggtggag 660
cccaagagct gtgacaagac ccacacctgc cccccctgcc ctgcccccga gctgctggga 720
ggccccagcg tgttcctgtt cccccccaag cctaaggaca ccctgatgat cagcagaacc 780
cccgaggtga cctgtgtggt ggtggatgtg agccacgagg accctgaggt gaagttcaac 840
tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcacaat gccaagacca agcccaggga ggagcagtac 900
aacagcacct accgggtggt gtccgtgctg accgtgctgc accaggattg gctgaacggc 960
aaggagtaca agtgtaaggt gtccaacaag gccctgcctg cccctatcga gaaaaccatc 1020
agcaaggcca agggccagcc cagagagccc caggtgtaca ccctgccccc tagcagagat 1080
gagctgacca agaaccaggt gtccctgacc tgcctggtga agggcttcta ccccagcgac 1140
atcgccgtgg agtgggagag caacggccag cccgagaaca actacaagac caccccccct 1200
gtgctggaca gcgatggcag cttcttcctg tacagcaagc tgaccgtgga caagagcaga 1260
tggcagcagg gcaacgtgtt cagctgctcc gtgatgcacg aggccctgca caatcactac 1320
acccagaaga gcctgagcct gtcccctggc aag 1353
<210> 41
<211> 451
<212> PRT
<213> Artificial
<220>
<223> Mature H0 (IGHV3_23 CDRH1) heavy chain amino acid sequence
<400> 41
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Thr Ile Ser Asp Gly Gly Ser Phe Thr Tyr Tyr Leu Asp Asn Val
50 55 60
Arg Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Val Gly His Thr Thr Phe Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly
100 105 110
Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
225 230 235 240
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
245 250 255
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
260 265 270
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
275 280 285
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
290 295 300
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
305 310 315 320
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
325 330 335
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
340 345 350
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
355 360 365
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
370 375 380
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
385 390 395 400
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
405 410 415
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
420 425 430
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
435 440 445
Pro Gly Lys
450
<210> 42
<211> 5
<212> PRT
<213> Human
<400> 42
Ser Tyr Ala Met Ser
1 5
<210> 43
<211> 7
<212> PRT
<213> Human
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Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser
1 5
<210> 44
<211> 759
<212> DNA
<213> Human
<400> 44
atgggggtac tgctcacaca gaggacgctg ctcagtctgg tccttgcact cctgtttcca 60
agcatggcga gcatggcggc tataggcagc tgctcgaaag agtaccgcgt gctccttggc 120
cagctccaga agcagacaga tctcatgcag gacaccagca gactcctgga cccctatata 180
cgtatccaag gcctggatgt tcctaaactg agagagcact gcagggagcg ccccggggcc 240
ttccccagtg aggagaccct gagggggctg ggcaggcggg gcttcctgca gaccctcaat 300
gccacactgg gctgcgtcct gcacagactg gccgacttag agcagcgcct ccccaaggcc 360
caggatttgg agaggtctgg gctgaacatc gaggacttgg agaagctgca gatggcgagg 420
ccgaacatcc tcgggctcag gaacaacatc tactgcatgg cccagctgct ggacaactca 480
gacacggctg agcccacgaa ggctggccgg ggggcctctc agccgcccac ccccacccct 540
gcctcggatg cttttcagcg caagctggag ggctgcaggt tcctgcatgg ctaccatcgc 600
ttcatgcact cagtggggcg ggtcttcagc aagtgggggg agagcccgaa ccggagccgg 660
agacacagcc cccaccaggc cctgaggaag ggggtgcgca ggaccagacc ctccaggaaa 720
ggcaagagac tcatgaccag gggacagctg ccccggtag 759
<210> 45
<211> 252
<212> PRT
<213> Human
<400> 45
Met Gly Val Leu Leu Thr Gln Arg Thr Leu Leu Ser Leu Val Leu Ala
1 5 10 15
Leu Leu Phe Pro Ser Met Ala Ser Met Ala Ala Ile Gly Ser Cys Ser
20 25 30
Lys Glu Tyr Arg Val Leu Leu Gly Gln Leu Gln Lys Gln Thr Asp Leu
35 40 45
Met Gln Asp Thr Ser Arg Leu Leu Asp Pro Tyr Ile Arg Ile Gln Gly
50 55 60
Leu Asp Val Pro Lys Leu Arg Glu His Cys Arg Glu Arg Pro Gly Ala
65 70 75 80
Phe Pro Ser Glu Glu Thr Leu Arg Gly Leu Gly Arg Arg Gly Phe Leu
85 90 95
Gln Thr Leu Asn Ala Thr Leu Gly Cys Val Leu His Arg Leu Ala Asp
100 105 110
Leu Glu Gln Arg Leu Pro Lys Ala Gln Asp Leu Glu Arg Ser Gly Leu
115 120 125
Asn Ile Glu Asp Leu Glu Lys Leu Gln Met Ala Arg Pro Asn Ile Leu
130 135 140
Gly Leu Arg Asn Asn Ile Tyr Cys Met Ala Gln Leu Leu Asp Asn Ser
145 150 155 160
Asp Thr Ala Glu Pro Thr Lys Ala Gly Arg Gly Ala Ser Gln Pro Pro
165 170 175
Thr Pro Thr Pro Ala Ser Asp Ala Phe Gln Arg Lys Leu Glu Gly Cys
180 185 190
Arg Phe Leu His Gly Tyr His Arg Phe Met His Ser Val Gly Arg Val
195 200 205
Phe Ser Lys Trp Gly Glu Ser Pro Asn Arg Ser Arg Arg His Ser Pro
210 215 220
His Gln Ala Leu Arg Lys Gly Val Arg Arg Thr Arg Pro Ser Arg Lys
225 230 235 240
Gly Lys Arg Leu Met Thr Arg Gly Gln Leu Pro Arg
245 250
<210> 46
<211> 902
<212> PRT
<213> Artificial
<220>
<223> mAb 2 Heavy Chain amino acid sequence
<400> 46
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Asn Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Lys Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Asp Ile Asn Pro Asn Asn Gly Gly Thr Ile Asp Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Ile Tyr Tyr Tyr Gly Ser His Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
225 230 235 240
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
245 250 255
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
260 265 270
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
275 280 285
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
290 295 300
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
305 310 315 320
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
325 330 335
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
340 345 350
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
355 360 365
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
370 375 380
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
385 390 395 400
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
405 410 415
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
420 425 430
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
435 440 445
Pro Gly Lys Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys
450 455 460
Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe
465 470 475 480
Thr Asp Tyr Asn Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Lys Leu
485 490 495
Glu Trp Ile Gly Asp Ile Asn Pro Asn Asn Gly Gly Thr Ile Asp Asn
500 505 510
Gln Lys Phe Lys Asp Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Thr Ser
515 520 525
Thr Val Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val
530 535 540
Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Ile Tyr Tyr Tyr Gly Ser His Tyr Phe Asp
545 550 555 560
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys
565 570 575
Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly
580 585 590
Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro
595 600 605
Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr
610 615 620
Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val
625 630 635 640
Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn
645 650 655
Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro
660 665 670
Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu
675 680 685
Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
690 695 700
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
705 710 715 720
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
725 730 735
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
740 745 750
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
755 760 765
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
770 775 780
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
785 790 795 800
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn
805 810 815
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
820 825 830
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
835 840 845
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
850 855 860
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
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Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
885 890 895
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
900
<210> 47
<211> 213
<212> PRT
<213> Artificial
<220>
<223> mAb 2 Light Chain amino acid sequence
<400> 47
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Thr Ser Ser Val Ser Val Met
20 25 30
His Trp Phe Gln Lys Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Trp Ile Tyr
35 40 45
Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu
65 70 75 80
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Leu Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro
100 105 110
Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr
115 120 125
Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys
130 135 140
Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu
145 150 155 160
Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser
165 170 175
Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala
180 185 190
Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe
195 200 205
Asn Arg Gly Glu Cys
210
Claims (18)
- OSM에 결합할 수 있고 gp130 수용체에 대한 OSM의 결합을 억제하는 항원 결합 단백질을 포함하는 제약 조성물로서, 여기서 유효 용량의 상기 제약 조성물은 50 - 300 mg의 상기 항원 결합 단백질을 포함하는 것인 제약 조성물.
- 제1항에 있어서, 제약 조성물이 100 mg 또는 150 mg 또는 200 mg 또는 300 mg의 상기 항원 결합 단백질을 포함하는 것인 제약 조성물.
- 제2항에 있어서, 제약 조성물이 100 mg 또는 150 mg 또는 300mg의 상기 항원 결합 단백질을 포함하는 것인 제약 조성물.
- 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 항원 결합 단백질이 서열식별번호: 3의 CDRH3, 서열식별번호: 2의 CDRH2, 서열식별번호: 4의 CDRL1 및 서열식별번호: 6의 CDRL3을 포함하고, 임의로 서열식별번호: 1 또는 서열식별번호: 43의 CDRH1 및 서열식별번호: 5 또는 서열식별번호: 44의 CDRL2를 포함할 수 있는 것인 제약 조성물.
- 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 항원 결합 단백질이 서열식별번호: 20 또는 서열식별번호: 40의 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 28의 경쇄 가변 영역을 포함하는 것인 제약 조성물.
- 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 항원 결합 단백질이 서열식별번호: 42에 따른 중쇄 및 서열식별번호: 38에 따른 경쇄를 포함하는 것인 제약 조성물.
- 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 항원 결합 단백질이 서열식별번호: 41에 의해 코딩된 중쇄 및 서열식별번호: 37에 의해 코딩된 경쇄를 포함하는 것인 제약 조성물.
- 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제약 조성물 내의 항원 결합 단백질의 농도가 150 mg/ml인 제약 조성물.
- 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 제약 조성물이 아세트산나트륨, EDTA, 아르기닌, 염화나트륨, 폴리소르베이트 80을 포함하고 5.5의 pH를 갖는 것인 제약 조성물.
- 제9항에 있어서, 제약 조성물이 50 mM 아세트산나트륨, 0.05 mM EDTA, 1.0% 아르기닌, 51 mM 염화나트륨, 0.02% 폴리소르베이트 80을 포함하고 5.5의 pH를 갖는 것인 제약 조성물.
- 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 조성물이 인간 환자에게 투여되는 것인 제약 조성물.
- 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 조성물이 1주에 1회 또는 격주마다 1회 또는 매월 1회 투여되는 것인 제약 조성물.
- 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 조성물이 매주 1회 투여되는 것인 제약 조성물.
- 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 조성물이 피하로 투여되는 것인 제약 조성물.
- 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 염증성 또는 자가면역 장애 또는 질환의 치료에서 사용하기 위한 제약 조성물.
- 제15항에 있어서, 전신 경화증의 치료에서 사용하기 위한 제약 조성물.
- 염증성 또는 자가면역 장애 또는 질환을 앓는 인간 환자에게 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 따른 제약 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 상기 환자를 치료하는 방법.
- 염증성 또는 자가면역 장애 또는 질환의 치료를 위한 의약의 제조에서의, 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 따른 제약 조성물의 용도.
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