KR20190039140A - 플라비바이러스 백신화를 위한 조성물 및 방법 - Google Patents

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프랭크 알 존스
조셉 벨린트
애드리안 라이스
이베트 레치먼
엘리자베스 가비치
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이투빅스 코포레이션
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Abstract

하나 이상의 플라비바이러스 항원 유전자를 함유하는 재조합 아데노바이러스 기반 벡터 백신의 조성물이 본원에 개시된다. 이러한 백신의 구성 및 생산 방법, 및 이들 백신을 사용하여 플라비바이러스에 대한 면역 반응을 생성시키는 방법이 또한 기재된다. 본원에 기재된 조성물은 아데노바이러스에 대한 기존 면역력을 갖는 대상에서의 백신화를 허용한다.

Description

플라비바이러스 백신화를 위한 조성물 및 방법
교차 참조
본 출원은 2016 년 7 월 15 일 출원된 미국 가출원 번호 62/363,131 의 이득을 청구하고, 이의 개시내용은 그 전문이 참조로 본원에 포함된다.
서열 목록
본 출원은 ASCII 포맷으로 전자적으로 제출되며 그 전체가 참조로 포함되는 서열 목록을 포함한다. 2017 년 7 월 5 일에 생성된 상기 ASCII 카피는 39891-724_601_SL.txt 의 명칭을 가지며 크기가 430,874 바이트이다.
백신은 유해한 물질 및 질환에 걸린 세포를 인식하고 파괴하도록 면역계를 훈련시켜 신체가 질환과 싸우는 것을 돕는다. 백신은 예방 및 치료 백신의 2가지 유형으로 크게 분류될 수 있다. 예방 백신은 특이적 질환의 발생을 예방하도록 건강한 사람에게 제공되는 한편, 면역요법제라고도 하는 치료 백신은 예방적 조치로서 또는 질환이 성장하고 확산되는 것을 중단시키는데 도움이 되도록 질환을 진단받은 사람에게 제공된다.
현재 바이러스 백신은 감염성 질환 및 암과 싸우는데 도움이 되도록 개발되고 있다. 이들 바이러스 백신은 숙주 세포 내에서 질환과 연관된 유전자의 소부분의 발현을 유도시켜 작용하며, 이는 그 다음으로 질환에 걸린 세포를 식별하고 파괴하도록 숙주의 면역계를 증강시킨다. 이와 같이, 바이러스 백신의 임상 반응은 고수준의 면역원성을 수득하고 장기간 발현을 지속하는 백신의 능력에 따라 좌우될 수 있다.
따라서, 복합 질환 및 특히 새로이 생겨나는 질환의 위협에 대한 증강된 치료적 반응을 위한 신규 조성물 및 방법을 발견하려는 요구가 남아 있다.
발명의 개요
다양한 양태에서, 본 개시물은: E2b 유전자 부위에서의 결실을 포함하는 복제 결함성 바이러스 벡터; 및 플라비바이러스 표적 항원을 인코딩하는 서열을 포함하는 조성물을 제공한다. 일부 양태에서, 플라비바이러스 표적 항원을 인코딩하는 서열은 복수의 플라비바이러스 표적 항원을 인코딩하는 서열을 포함한다. 추가 양태에서, 복수의 플라비바이러스 표적 항원을 인코딩하는 서열은 표적 항원에 각각 상응하는 복수의 유전자 삽입물을 포함하며, 각각의 유전자 삽입물은 자가-절단 2A 펩티드를 인코딩하는 핵산 서열에 의해 분리된다. 일부 양태에서, 자가-절단 2A 펩티드는 돼지 테스코바이러스-1 (Porcine teschovirus-1) 바이러스 또는 토세아 아시그나 (Thosea asigna) 바이러스에서 유래한다. 일부 양태에서, 복수의 플라비바이러스 표적 항원은 3 개의 플라비바이러스 표적 항원 또는 4 개의 플라비바이러스 표적 항원을 포함한다.
일부 양태에서, 복제 결함성 바이러스 벡터는 아데노바이러스 벡터이다. 추가 양태에서, 복제 결함성 바이러스 벡터는 아데노바이러스 5 (Ad5) 벡터이다. 추가 양태에서, 복제 결함성 바이러스 벡터는 E1 유전자 부위, E3 유전자 부위, E4 유전자 부위, 또는 이의 임의의 조합에서 결실을 포함한다. 일부 양태에서, E2b 유전자 부위에서의 결실은 E2b 유전자 부위에서의 복수의 결실을 포함한다.
일부 양태에서, E2b 유전자 부위에서의 결실, E1 유전자 부위에서의 결실, E3 유전자 부위에서의 결실, E4 유전자 부위에서의 결실, 또는 이의 임의의 조합은 각각 적어도 하나의 염기쌍을 포함한다.
다른 양태에서, E2b 유전자 부위에서의 결실, E1 유전자 부위에서의 결실, E3 유전자 부위에서의 결실, E4 유전자 부위에서의 결실, 또는 이의 임의의 조합은 둘 이상의 염기쌍의 전좌로부터 생긴다. 일부 양태에서, E2b 유전자 부위에서의 결실, E1 유전자 부위에서의 결실, E3 유전자 부위에서의 결실, E4 유전자 부위에서의 결실, 또는 이의 임의의 조합은 각각, 적어도 20 개, 적어도 30 개, 적어도 40 개, 적어도 50 개, 적어도 60 개, 적어도 70 개, 적어도 80 개, 적어도 90 개, 적어도 100 개, 적어도 110 개, 적어도 120 개, 적어도 130 개, 적어도 140 개, 또는 적어도 150 개의 염기쌍을 포함한다. 다른 양태에서, E2b 유전자 부위에서의 결실, E1 유전자 부위에서의 결실, E3 유전자 부위에서의 결실, E4 유전자 부위에서의 결실, 또는 이의 임의의 조합은 각각, 150 개 초과, 160 개 초과, 170 개 초과, 180 개 초과, 190 개 초과, 200 개 초과, 250 개 초과, 또는 300 개 초과의 염기쌍을 포함한다.
일부 양태에서, 플라비바이러스 표적 항원은 황열 바이러스 (YFV), 일본 뇌염 바이러스 (JEV), 진드기 매개 뇌염 바이러스 (TBEV), 뎅기열 바이러스 (DENV), 웨스트 나일 바이러스 (WNV), 지카 바이러스 (ZIKAV), 또는 이의 임의의 조합으로 이루어지는 군에서 선택되는 바이러스의 항원을 포함한다. 추가 양태에서, 플라비바이러스 표적 항원은 YFV, ZIKAV 로 이루어지는 군에서 선택되는 바이러스, 또는 둘 모두의 항원을 포함한다.
추가 양태에서, 플라비바이러스 표적 항원은 ZIKAV 의 항원을 포함한다. 일부 양태에서, 플라비바이러스 표적 항원은 C (캡시드 단백질), E (외피 단백질), prM (예비-막 단백질), M (막 단백질), NS1, NS2A, NS2B, NS3, NS4A, NS4B 및 NS5, 또는 이의 임의의 조합으로 이루어지는 군에서 선택되는 항원을 포함한다. 일부 양태에서, 플라비바이러스 표적 항원은 E, prM, M, NS1, NS2A, NS2B, NS3, NS4A, NS4B 및 NS5, 또는 이의 임의의 조합으로 이루어지는 군에서 선택되는 항원을 포함한다. 일부 양태에서, 플라비바이러스 표적 항원은 E, prM, M 및 NS3, 또는 이의 임의의 조합으로 이루어지는 군에서 선택되는 항원을 포함한다.
일부 양태에서, 플라비바이러스 표적 항원을 인코딩하는 서열은 N-말단 GCCGCCACC 서열을 포함한다. 일부 양태에서, 플라비바이러스 표적 항원을 인코딩하는 서열은 돌연변이를 인코딩하는 서열을 포함하며, 돌연변이는 이소류신 (I) 에서 아스파르트산 (D), 류신 (L) 에서 아스파르트산 (D), 아스파르트산 (D) 에서 이소류신 (I), 아스파르트산 (D) 에서 류신 (L) 으로의 돌연변이, 또는 이의 임의의 조합을 포함한다.
추가 양태에서, 돌연변이는 I21D, L175D, L240D, D37I, D43L, D266I, D129L, D218L, 또는 이의 임의의 조합에서 발생한다. 일부 양태에서, 플라비바이러스 표적 항원을 인코딩하는 서열은 SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 31, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 33, SEQ ID NO: 34, SEQ ID NO: 35, SEQ ID NO: 36 및 SEQ ID NO: 37, 또는 이의 임의의 조합으로 이루어지는 군에서 선택되는 서열에 대해 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 92%, 적어도 95%, 적어도 97%, 또는 적어도 99% 서열 동일성을 포함한다.
일부 양태에서, 플라비바이러스 표적 항원을 인코딩하는 서열은 SEQ ID NO: 15 - SEQ ID NO: 19 로 이루어지는 군에서 선택되는 서열에 대해 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 92%, 적어도 95%, 적어도 97%, 또는 적어도 99% 서열 동일성을 포함한다. 일부 양태에서, 플라비바이러스 표적 항원을 인코딩하는 서열은 아미노산 서열이며, 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 34 및 SEQ ID NO: 36, 또는 이의 임의의 조합으로 이루어지는 군에서 선택되는 서열에 대해 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 92%, 적어도 95%, 적어도 97%, 또는 적어도 99% 서열 동일성을 포함한다.
일부 양태에서, 플라비바이러스 표적 항원을 인코딩하는 서열은 뉴클레오티드 서열이며, 뉴클레오티드 서열은 SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 31, SEQ ID NO: 33, SEQ ID NO: 35 및 SEQ ID NO: 37, 또는 이의 임의의 조합으로 이루어지는 군에서 선택되는 서열에 대해 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 92%, 적어도 95%, 적어도 97%, 또는 적어도 99% 서열 동일성을 포함한다.
일부 양태에서, 복제 결함성 바이러스 벡터는 플라비바이러스 표적 항원의 발현을 증가시키기 위한 요소 (element) 를 추가로 포함한다. 추가 양태에서, 요소는 적어도 1 개 요소, 적어도 2 개 요소, 적어도 3 개 요소, 적어도 4 개 요소, 또는 적어도 5 개 요소를 포함한다. 일부 양태에서, 요소는 내부 리보솜 결합 위치를 포함한다.
다른 양태에서, 요소는 구성적 프로모터를 포함한다. 일부 양태에서, 요소는 유도성 프로모터를 포함한다. 일부 양태에서, 요소는 전사 인핸서를 포함한다. 일부 양태에서, 전사 인핸서는 라우스 육종 바이러스 (Rous sarcoma virus) (RSV) 인핸서이다. 일부 양태에서, 요소는 팔린드롬성 (palindromic) 서열을 함유하지 않는다.
일부 양태에서, 복제 결함성 바이러스 벡터는 플라비바이러스 표적 항원 면역원성을 증가시키는 단백질을 인코딩하는 핵산 서열을 추가로 포함한다. 일부 양태에서, 복제 결함성 바이러스 벡터는 거트 (gutted) 벡터가 아니다. 일부 양태에서, 조성물 또는 복제 결함성 바이러스 벡터는 공동자극 분자 또는 면역학적 융합 파트너를 인코딩하는 핵산 서열을 추가로 포함한다.
다양한 양태에서, 본 개시물은 임의 하나의 상기 조성물 및 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 약학 조성물을 제공한다.
다양한 양태에서, 본 개시물은 임의 하나의 상기 조성물을 포함하는 세포를 제공한다. 일부 양태에서, 세포는 숙주 세포이다. 추가 양태에서, 세포는 수지상 세포 (DC) 이다.
다양한 양태에서, 본 개시물은 상기 기재된 약학 조성물을 제조하는 것을 포함하는, 백신의 제조 방법을 제공한다.
다양한 양태에서, 본 개시물은 대상에게 임의 하나의 상기 조성물 또는 상기 기재된 약학 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 대상에서의 플라비바이러스 표적 항원에 대한 면역 반응의 생성 방법을 제공한다. 일부 양태에서, 대상은 플라비바이러스로 감염되지 않았다. 일부 양태에서, 표적 플라비바이러스 항원은 플라비바이러스로부터의 것이며, 플라비바이러스는 황열 바이러스 (YFV), 일본 뇌염 바이러스 (JEV), 진드기 매개 뇌염 바이러스 (TBEV), 뎅기열 바이러스 (DENV), 웨스트 나일 바이러스 (WNV), 지카 바이러스 (ZIKAV), 또는 이의 임의의 조합을 포함한다.
다양한 양태에서, 본 개시물은 E2b 유전자 부위에서의 결실을 포함하는 복제 결함성 바이러스 벡터; 및 적어도 하나의 Zika 바이러스 표적 항원을 인코딩하는 서열을 포함하는 조성물을 대상에게 투여하는 것을 포함하는, Zika 바이러스 감염의 예방 방법을 제공한다.
일부 양태에서, 대상은 아데노바이러스 또는 아데노바이러스 벡터에 대해 기존 면역력을 갖는다. 일부 양태에서, 대상은 인간 또는 비-인간 동물이다. 일부 양태에서, 투여는 정맥내, 피하, 림프내, 종양내, 피부내, 근육내, 복강내, 직장내, 질내, 비강내, 경구, 방광 점적주입, 또는 난절법 (scarification) 을 통한 것이다. 일부 양태에서, 대상에게 조성물을 투여하는 것은 적어도 1 회이고, 적어도 2 회 반복되거나, 적어도 3 회 반복된다.
일부 양태에서, 조성물을 대상에게 투여하는 것은 용량 당 1x109 내지 5x1012 바이러스 입자를 포함한다. 추가 양태에서, 조성물을 대상에게 투여하는 것은 용량 당 적어도 109 바이러스 입자, 적어도 1010 바이러스 입자, 또는 적어도 1011 바이러스 입자를 포함한다. 일부 양태에서, 복제 결함성 바이러스 벡터는 아데노바이러스 벡터이다. 추가 양태에서, 복제 결함성 바이러스 벡터는 아데노바이러스 5 (Ad5) 벡터이다.
참고문헌의 포함
본 명세서에 언급된 모든 공개물, 특허 및 특허 출원은 각각의 개별적 공개물, 특허 또는 특허 출원이 본원에 참조로 포함되는 것으로 구체적이고 개별적으로 표시되는 것과 동일한 정도로 본원에 참조로 포함된다.
도 1 은 생성되는 SEQ ID NO: 13 및 SEQ ID NO: 14 에서 유래한 Ad5 [E1-, E2b-]-ZIKAV-E 백신을 예시한다.
도 2 는 본 개시물의 플라비바이러스 백신에 대한 다중-표적화 삼중 유전자 삽입물의 도식을 설명한다.
도 2a 는 Ad5 [E1-, E2b-] 에 삽입을 위해 사용할 플라비바이러스의 캡시드 단백질 (C), 막 단백질 (M) 및 외피 단백질 (E) 을 인코딩하는 유전자를 함유하는 삼중 유전자 구축물의 대표 도식을 설명한다.
도 2b 는 도 2a 의 화학량론적 풍도에 있어서의 번역 산물을 설명한다.
도 3 은 본 개시물의 플라비바이러스 백신에 대한 다중-표적화 사중 유전자 삽입물의 도식을 설명한다.
도 3a 는 Ad5 [E1-, E2b-] 에 삽입을 위해 사용할 플라비바이러스의 캡시드 단백질 (C), 막 단백질 (M), 외피 단백질 (E) 및 NS 단백질을 인코딩하는 유전자를 함유하는 사중 유전자 구축물의 대표 도식을 설명한다.
도 3b 는 도 3a 의 화학량론적 풍도에 있어서의 번역 산물을 설명한다.
도 4 는 Zika 펩티드 풀에 노출 후 면역화된 마우스로부터의 비장세포에서의 세포-매개 면역 (CMI) 반응 및 항체 반응을 설명한다. Ad5 [E1-, E2b-]-ZIKAV-E 백신의 면역원성 연구를 마우스에서 수행하였다.
도 4a 는 Ad5 [E1-, E2b-]-null (빈 (empty) 벡터 대조군) 또는 Ad5 [E1-, E2b-]-ZIKA-E 가 주입된 마우스에서 IFN-γ 분비 세포에 대한 ELISpot 스팟 형성 세포 (SFC) 에 의해 측정된 바와 같은 CMI 반응을 설명한다. CMI 반응이 면역화된 마우스 (백색 막대) 에서 유도되었으나 대조군 마우스 (빗금 흑색 막대) 에서는 유도되지 않았음에 주목한다. 특이성은, 무관한 항원 Nef 펩티드 풀에 대한 반응성 결여에 의해 확인되었다. Nef 펩티드 풀 및 Zika 펩티드 풀에 대해, 좌측 막대가 빈 벡터 대조군이 주입된 마우스로부터의 SFC 를 나타내고, 우측 막대가 Ad5 [E1-, E2b-]-ZIKA-E 가 주입된 마우스로부터의 SFC 를 나타낸다는 것에 주목한다.
도 4b 는 Ad5 [E1-, E2b-]-null (빈 벡터 대조군) 또는 Ad5 [E1-, E2b-]-ZIKA-E 가 주입된 마우스에서 IL-2 분비 세포에 대한 ELISpot 스팟 형성 세포 (SFC) 에 의해 측정된 바와 같은 CMI 반응을 설명한다. CMI 반응은 면역화된 마우스 (백색 막대) 에서 유도되었으나 대조군 마우스 (흑색 빗금 막대) 에서는 유도되지 않았다. 특이성은, 무관한 항원 Nef 펩티드 풀에 대한 반응성 결여에 의해 확인되었다. Nef 펩티드 풀 및 Zika 펩티드 풀에 대해, 좌측 막대가 빈 벡터 대조군이 주입된 마우스로부터의 SFC 를 나타내고, 우측 막대가 Ad5 [E1-, E2b-]-ZIKA-E 이 주입된 마우스로부터의 SFC 를 나타낸다는 것에 주목한다.
도 4c 는 Ad5 [E1-, E2b-]-null (빈 벡터 대조군) 또는 Ad5 [E1-, E2b-]-ZIKA-E 가 주입된 마우스에서 정량적 ELISA 에 의해 측정된 바와 같은 항-ZIKA-E IgG 항체 반응을 설명한다. 항체 반응은 면역화된 마우스 (백색 막대, G4M1-5) 에서 유도되었으나 대조군 마우스 (흑색 막대, G1M1-5) 에서는 유도되지 않았다. 좌측 G1M1, G1M2, G1M3, G1M4 및 G1M5 가 빈 벡터 대조군이 주입된 마우스로부터의 항체 반응을 나타내며, 좌측 G1M1, G1M2, G1M3, G1M4 및 G1M5 가 Ad5 [E1-, E2b-]-ZIKA-E 가 주입된 마우스로부터의 항체 반응을 나타낸다는 것에 주목한다.
도 5 는 2014-2015 년에 브라질에서 단리된 Zika 바이러스로부터의 비중복 (nonredundant) 외피 단백질 (E) 의 정보성 스펙트럼법 (ISM) 기반 계통수를 설명한다.
도 6 은 Ad5 [E1-, E2b-]-Zika-E 백신으로 면역화된 마우스로부터의 비장세포에서의 세포 매개 면역 (CMI) 반응 및 세포용해 T 림프구 (CTL) 반응을 설명한다. 마우스 (C57BL/6 계통) 를 1x1010 바이러스 입자 (VP) 의 Ad5 [E1-, E2b-]-Zika 백신 또는 1x1010 VP Ad5 [E1-, E2b-]-null (빈 벡터 대조군) 로 2 주 간격으로 2 회 면역화하였다. 3 개 유형의 Zika 백신을 시험하였다. 시험한 첫 번째 Zika 백신은, SEQ ID NO: 34 의 뉴클레오티드 서열 및 SEQ ID NO: 35 의 아미노산 서열 (SEQ ID NO: 34 는 뉴클레오티드 서열이고 SEQ ID NO: 35 는 SEQ ID NO: 34 에 상응하는 아미노산 서열임) 에 의해 인코딩되는 Zika 항원 단백질을 포함하는 Ad5 [E1-, E2b-]-Zika mut 2015 였다. SEQ ID NO: 35 에서의 Zika mut 2015 항원은, Zika 외피 단백질의 세포외 도메인의 절두형 부위인 3423-aa Zika 다단백질의 아미노산 409-690 에 상응한다 (SEQ ID NO: 23). Zika mut 2015 항원은 Zika wt 2015 항원과 비교하여 점 돌연변이를 포함한다. 이러한 점 돌연변이는 D37I, D43L, D266I, D129L, D218L (위치 번호매김은 N-말단 메티오닌을 계수하지 않음) 을 포함하며 이러한 돌연변이는 야생형과 비교하여 감소한 항-인간 C1q 반응을 초래할 수 있다. 시험한 두 번째 Zika 백신은, SEQ ID NO: 26 의 뉴클레오티드 서열 및 SEQ ID NO: 27 의 아미노산 서열 (SEQ ID NO: 26 은 뉴클레오티드 서열이고 SEQ ID NO: 27 은 SEQ ID NO: 26 에 상응하는 아미노산 서열임) 에 의해 인코딩되는 Zika 항원 단백질을 포함하는 Ad5 [E1-, E2b-]-Zika wt 2014 였다. SEQ ID NO: 27 에 나타낸 Zika wt 2014 항원은, Zika 외피 단백질의 세포외 도메인의 절두형 부위인 3423-aa Zika 다단백질의 아미노산 409-690 에 상응한다 (SEQ ID NO: 23). 시험한 세 번째 Zika 백신은, SEQ ID NO: 28 의 뉴클레오티드 서열 및 SEQ ID NO: 29 의 아미노산 서열 (SEQ ID NO: 28 은 뉴클레오티드 서열이고 SEQ ID NO: 29 는 SEQ ID NO: 28 에 상응하는 아미노산 서열임) 에 의해 인코딩되는 Zika 항원 단백질을 포함하는 Ad5 [E1-, E2b-]-Zika mut 2014 였다. SEQ ID NO: 29 의 Zika mut 2014 항원은, Zika 외피 단백질의 세포외 도메인의 절두형 부위인 3423-aa Zika 다단백질의 아미노산 409-690 에 상응한다 (SEQ ID NO: 23). Zika mut 2014 항원은 Zika wt 2014 항원과 비교하여 점 돌연변이를 포함한다. 이러한 점 돌연변이는 I21D, L175D, L240D (위치 번호매김은 N-말단 메티오닌을 계수하지 않음) 를 포함하며 이러한 돌연변이는 야생형과 비교하여 감소한 항-인간 C1q 반응을 초래할 수 있다. 각각의 Ad5 [E1-, E2b-]-Zika-E 백신의 최종 면역화 1 주 후, 면역화된 마우스로부터 단리한 비장세포를 Zika wt 바이러스 펩티드 풀 (pool) 에 노출시킨 다음, ELISPOT 검정을 사용하여 CMI 반응 (IFN-γ 및 IL-2 분비 스팟 형성 세포 (SFC)) 및 CTL 반응 (그랜자임-B 분비 SFC) 을 측정하였다. 반응의 특이성을, SIV-nef 펩티드 풀 (음성 대조군) 에 대한 비장세포의 반응성 결여에 의해 나타낸다. 콘카나발린 A (Con A) 에 대한 비장세포의 반응성을 양성 대조군으로서 사용하였다. 에러 바 (error bar) 는 SEM 을 보여주며, 5 마리 마우스가 각각의 군에 존재하였다.
도 6a 는 면역화된 마우스 및 대조군 마우스로부터의 비장세포를 Zika 2014 펩티드 풀 및 대조군에 노출시킨 후 IFN-γ CMI 반응을 설명한다.
도 6b 는 면역화된 마우스 및 대조군 마우스로부터의 비장세포를 Zika 2014 펩티드 풀 또는 대조군에 노출시킨 후 IL-2 CMI 반응을 설명한다.
도 6c 는 면역화된 마우스 및 대조군 마우스로부터의 비장세포를 Zika 2014 펩티드 풀 또는 대조군에 노출시킨 후 그랜자임 B CTL 반응을 설명한다.
도 7 은 유세포 분석을 사용하여 Ad5 [E1-, E2b-]-Zika-E 백신으로 면역화된 마우스로부터의 비장세포에서의 IFN-γ 및 IFN-γ/TNF-α 의 세포내 발현에 의해 측정된 바와 같은 림프구 활성화를 설명한다. 마우스 (C57Bl/6 계통) 를 1x1010 바이러스 입자 (VP) 의 Ad5 [E1-, E2b-]-Zika 백신 또는 1x1010 VP Ad5 [E1-, E2b-]-null (빈 벡터 대조군) 로, 2 주 간격으로 2 회 면역화하였다. 3 개 유형의 Zika 백신을 시험하였다. 시험한 첫 번째 Zika 백신은, SEQ ID NO: 34 의 뉴클레오티드 서열 및 SEQ ID NO: 35 의 아미노산 서열 (SEQ ID NO: 34 는 뉴클레오티드 서열이고 SEQ ID NO: 35 는 SEQ ID NO: 34 에 상응하는 아미노산 서열임) 에 의해 인코딩되는 Zika 항원 단백질을 포함하는 Ad5 [E1-, E2b-]-Zika mut 2015 였다. SEQ ID NO: 35 의 Zika mut 2015 항원은, Zika 외피 단백질의 세포외 도메인의 절두형 부위인 3423-aa Zika 다단백질의 아미노산 409-690 에 상응한다 (SEQ ID NO: 23). Zika mut 2015 항원은 Zika wt 2015 항원과 비교하여 점 돌연변이를 포함한다. 이러한 점 돌연변이는 D37I, D43L, D266I, D129L, D218L (위치 번호매김은 N-말단 메티오닌을 계수하지 않음) 을 포함하며 이러한 돌연변이는 야생형과 비교하여 감소한 항-인간 C1q 반응을 초래할 수 있다. 시험한 두 번째 Zika 백신은, SEQ ID NO: 26 의 뉴클레오티드 서열 및 SEQ ID NO: 27 의 아미노산 서열 (SEQ ID NO: 26 은 뉴클레오티드 서열이며 SEQ ID NO: 27 은 SEQ ID NO: 26 에 상응하는 아미노산 서열임) 에 의해 인코딩되는 Zika 항원 단백질을 포함하는 Ad5 [E1-, E2b-]-Zika wt 2014 였다. SEQ ID NO: 27 의 Zika wt 2014 항원은, Zika 외피 단백질의 세포외 도메인의 절두형 부위인 3423-aa Zika 다단백질의 아미노산 409-690 에 상응한다 (SEQ ID NO: 23). 시험한 세 번째 Zika 백신은, SEQ ID NO: 28 의 뉴클레오티드 서열 및 SEQ ID NO: 29 의 아미노산 서열 (SEQ ID NO: 28 은 뉴클레오티드 서열이며 SEQ ID NO: 29 는 SEQ ID NO: 28 에 상응하는 아미노산 서열임) 에 의해 인코딩되는 Zika 항원 단백질을 포함하는 Ad5 [E1-, E2b-]-Zika mut 2014 였다. SEQ ID NO: 29 의 Zika mut 2014 항원은, Zika 외피 단백질의 세포외 도메인의 절두형 부위인 3423-aa Zika 다단백질의 아미노산 409-690 에 상응한다 (SEQ ID NO: 23). Zika mut 2014 항원은 Zika wt 2014 항원과 비교하여 점 돌연변이를 포함한다. 이러한 점 돌연변이는 I21D, L175D, L240D (위치 번호매김은 N-말단 메티오닌을 계수하지 않음) 를 포함하며 이러한 돌연변이는 야생형과 비교하여 감소한 항-인간 C1q 반응을 초래할 수 있다. 최종 면역화 1 주 후, 면역화된 마우스로부터 단리한 비장세포를 Zika wt 바이러스 펩티드 풀에 노출시키고, 유세포 분석을 사용하여 CD8+ 세포 및 CD4+ 세포에서의 IFN-γ 및 IFN-γ/TNF-α 의 세포내 사이토카인 생성을 측정하였다. 반응의 특이성을, SIV-nef 펩티드 풀 (음성 대조군) 에 대한 비장세포의 반응성 결여에 의해 나타낸다. PMA/이오노마이신에 대한 비장세포의 반응성을 양성 대조군으로서 사용하였다. 데이터를 IFN-γ 또는 IFN-γ 및 TNF-α 를 발현하는 CD8+ 또는 CD4+ 비장세포의 백분율로서 보고하며, 에러 바는 SEM 을 보여준다. 각각의 군은 5 마리의 마우스를 가졌다.
도 7a 는 유세포 분석을 사용하여 면역화된 마우스 및 대조군 마우스로부터의 비장세포를 Zika 2014 펩티드 풀 또는 대조군에 노출시킨 후 CD8+ 비장세포에서의 IFN-γ 의 세포내 발현에 의해 측정되는 바와 같은 림프구 활성화를 설명한다.
도 7b 는 유세포 분석을 사용하여 면역화된 마우스 및 대조군 마우스로부터의 비장세포를 Zika 2014 펩티드 풀 또는 대조군에 노출시킨 후 CD4+ 비장세포에서의 IFN-γ 의 세포내 발현에 의해 측정되는 바와 같은 림프구 활성화를 설명한다.
도 7c 는 유세포 분석을 사용하여 면역화된 마우스 및 대조군 마우스로부터의 비장세포를 Zika 2014 펩티드 풀 또는 대조군에 노출시킨 후 CD8+ 비장세포에서의 IFN-γ 및 TNF-α 의 세포내 발현에 의해 측정되는 바와 같은 림프구 활성화를 설명한다.
도 7d 는 유세포 분석을 사용하여 면역화된 마우스 및 대조군 마우스로부터의 비장세포를 Zika 2014 펩티드 풀 또는 대조군에 노출시킨 후 CD4+ 비장세포에서의 IFN-γ 및 TNF-α 의 세포내 발현에 의해 측정되는 바와 같은 림프구 활성화를 설명한다.
도 8 은 Ad5 [E1-, E2b-]-Zika-E 백신으로 면역화된 마우스의 혈청에서의 항-Zika IgG 항체 반응을 설명한다. 혈액을 볼 주머니 (cheek pouch) 로부터 채취하고, Gabitzsch et al. (Cancer Gene Ther. 2011 May; 18(5): 326-335) 에서 나타낸 방법을 사용하여 정량적 ELISA 또는 IgG 항체를 사용하여 분석하였다. 마우스 (C57Bl/6 계통, 군 당 5 마리 마우스) 를 1x1010 바이러스 입자 (VP) 의 Ad5 [E1-, E2b-]-Zika-E 백신 또는 1x1010 VP Ad5 [E1-, E2b-]-null (빈 벡터 대조군) 로 2 주 간격으로 2 회 면역화하였다. 3 개 유형의 Zika 백신을 시험하였다. 시험한 첫 번째 Zika 백신은, SEQ ID NO: 34 의 뉴클레오티드 서열 및 SEQ ID NO: 35 의 아미노산 서열 (SEQ ID NO: 34 는 뉴클레오티드 서열이며 SEQ ID NO: 35 는 SEQ ID NO: 34 에 상응하는 아미노산 서열임) 에 의해 인코딩되는 Zika 항원 단백질을 포함하는 Ad5 [E1-, E2b-]-Zika mut 2015 였다. SEQ ID NO: 35 에서의 Zika mut 2015 항원은, Zika 외피 단백질의 세포외 도메인의 절두형 부위인 3423-aa Zika 다단백질의 아미노산 409-690 에 상응한다 (SEQ ID NO: 23). Zika mut 2015 항원은 Zika wt 2015 항원과 비교하여 점 돌연변이를 포함한다. 이러한 점 돌연변이는 D37I, D43L, D266I, D129L, D218L (위치 번호매김은 N-말단 메티오닌을 계수하지 않음) 을 포함하며 이러한 돌연변이는 야생형과 비교하여 감소한 항-인간 C1q 반응을 초래할 수 있다. 시험한 두 번째 Zika 백신은, SEQ ID NO: 26 의 뉴클레오티드 서열 및 SEQ ID NO: 27 의 아미노산 서열 (SEQ ID NO: 26 은 뉴클레오티드 서열이며 SEQ ID NO: 27 은 SEQ ID NO: 26 에 상응하는 아미노산 서열임) 에 의해 인코딩되는 Zika 항원 단백질을 포함하는 Ad5 [E1-, E2b-]-Zika wt 2014 였다. SEQ ID NO: 27 의 Zika wt 2014 항원은, Zika 외피 단백질의 세포외 도메인의 절두형 부위인 3423-aa Zika 다단백질의 아미노산 409-690 에 상응한다 (SEQ ID NO: 23). 시험한 세 번째 Zika 백신은, SEQ ID NO: 28 의 뉴클레오티드 서열 및 SEQ ID NO: 29 의 아미노산 서열 (SEQ ID NO: 28 은 뉴클레오티드 서열이며 SEQ ID NO: 29 는 SEQ ID NO: 28 에 상응하는 아미노산 서열임) 에 의해 인코딩되는 Zika 항원 단백질을 포함하는 Ad5 [E1-, E2b-]-Zika mut 2014 였다. SEQ ID NO: 29 의 Zika mut 2014 항원은, Zika 외피 단백질의 세포외 도메인의 절두형 부위인 3423-aa Zika 다단백질의 아미노산 409-690 에 상응한다 (SEQ ID NO: 23). Zika mut 2014 항원은 Zika wt 2014 항원과 비교하여 점 돌연변이를 포함한다. 이러한 점 돌연변이는 I21D, L175D, L240D (위치 번호매김은 N-말단 메티오닌을 계수하지 않음) 를 포함하며 이러한 돌연변이는 야생형과 비교하여 감소한 항-인간 C1q 반응을 초래할 수 있다. 최종 면역화 1 주 후, 마우스로부터의 혈청을 효소 결합 면역흡착 검정 (ELISA) 에 의해 항체 반응의 유도에 대해 시험하였다. y-축은 혈청 중 항-Zika IgG 의 나노그램 (ng) 수를 보여준다. x-축은 시험한 각각의 군 및 마우스를 보여준다 (예를 들어, "G1M1" 은 군 1 마우스 1 을 나타냄). 군 1 로부터의 마우스를 Ad5 [E1-, E2b-]-Null 로 면역화하고, 군 2 로부터의 마우스를 Ad5 [E1-, E2b-]-Zika Mut 2015 로 면역화하고, 군 3 으로부터의 마우스를 Ad5 [E1-, E2b-]-Zika Mut 2014 로 면역화하고, 군 4 로부터의 마우스를 Ad5 [E1-, E2b-]-Zika Wt 2014 로 면역화하였다는 것에 주목한다. 에러 바는 SEM 을 보여준다.
도 9 는 Ad5 [E1-, E2b-]-Zika-E 백신으로의 백신화 또는 Ad5 [E1-, E2b-]-null 빈 벡터로의 주입 (대조군으로서) 후의 Zika 바이러스 감염의 마우스 모델에서의 중량 손실을 설명한다 (Rossi et al. Am J Trop Med Hyg. 2016 Jun 1;94(6):1362-9). A129 마우스의 군 (n=10/군) 을 1x1010 VP 의 Ad5 [E1-, E2b-]-Zika-E 2015 wt 또는 1x1010 VP 의 Ad5 [E1-, E2b-]-null (대조군) 으로 1 회 면역화하였다. 면역화 후 30 일에, 마우스를 Zika 바이러스의 병원성 균주 (복강내 (IP) 주입된 5x105 플라크 형성 단위 (PFU) 의 Zika 바이러스 균주 FSS13025) 으로 챌린지하였다. 마우스를 중량 변화에 대해 모니터링하였다.
도 10 은 Ad5 [E1-, E2b-]-Zika-E 백신 또는 Ad5 [E1-, E2b-]-null 빈 벡터 (대조군으로서) 로의 백신화 후의 Zika 바이러스 감염의 마우스 모델에서의 온도 변화를 설명한다 (Rossi et al. Am J Trop Med Hyg. 2016 Jun 1;94(6):1362-9). A129 마우스의 군 (n=10/군) 을 1x1010 VP 의 Ad5 [E1-, E2b-]-Zika-E 2015 wt 또는 1x1010 VP 의 Ad5 [E1-, E2b-]-null (대조군) 로 1 회 면역화하였다. 면역화 후 30 일에, 마우스를 Zika 바이러스의 병원성 균주 (복강내 (IP) 주입된 5x105 PFU 의 Zika 바이러스 균주 FSS13025) 으로 챌린지하였다. 마우스를 온도 변화에 대해 모니터링하였다.
도 11 은 Ad5 [E1-, E2b-]-Zika 백신으로 면역화된 마우스로부터의 비장세포에서의 세포 매개 면역 (CMI) 반응 및 세포용해 T 림프구 (CTL) 반응을 설명한다. C57BL/6 마우스 (n = 5/군) 를 1x1010 바이러스 입자 (VP) 의 Ad5 [E1-, E2b-]-Zika 백신 또는 1x1010 VP Ad5 [E1-, E2b-]-null (빈 벡터 대조군) 으로 2 주 간격으로 2 회 면역화하였다. SEQ ID NO: 32 의 뉴클레오티드 서열 및 SEQ ID NO: 33 의 아미노산 서열 (SEQ ID NO: 32 는 뉴클레오티드 서열이며 SEQ ID NO: 33 은 SEQ ID NO: 32 에 상응하는 아미노산 서열임) 에 의해 인코딩되는 Zika 항원 단백질을 포함하는 Ad5 [E1-, E2b-]-Zika 야생형 (wt) 2015 를 비롯하여, 2 개 유형의 Zika 백신을 시험하였다. SEQ ID NO: 33 의 Zika wt 2015 항원은, Zika 외피 단백질의 세포외 도메인의 절두형 부위인 3423-aa Zika 다단백질의 아미노산 409-690 에 상응한다 (SEQ ID NO: 23). 시험한 두 번째 Zika 백신은, SEQ ID NO: 36 의 뉴클레오티드 서열 및 SEQ ID NO: 37 의 아미노산 서열 (SEQ ID NO: 36 은 뉴클레오티드 서열이며 SEQ ID NO: 37 은 SEQ ID NO: 36 에 상응하는 아미노산 서열임) 에 의해 인코딩되는 Zika 항원 단백질을 포함하는 Ad5 [E1-, E2b-]-Zika 야생형 (wt) 2015 전장 (FL) 이었다. Ad5 [E1-, E2b-]-Zika 야생형 (wt) 2015 전장 (FL) 에서의 Zika 항원은, 2 개의 C-말단 막관통 앵커 (anchor) 도메인 및 세포외 루프, (원형질 막에 대한 표적화가 보장되도록 M 단백질의 일부, 및 번역의 개시가 보장되도록 N-말단에서의 KOZAK 서열 (GCCGCCACC) 을 인코딩하는) ZIKAV 게놈에서의 외피 단백질의 바로 업스트림인 2 개의 막관통 도메인, 세포외 루프 직전의 2 개의 막관통 도메인, 및 세포외 루프를 비롯하여, 3423-aa Zika 다단백질의 아미노산 271-805 에 상응하는 전체 외피 단백질을 포함한다 (SEQ ID NO: 23). 막관통 도메인의 포함은, mRNA-로딩된 리보솜의 소포체로의 이동, 당화, 및 원형질 막으로의 단백질의 궁극적 이동 및 테더링 (tethering) 이 보장되도록 신호 서열로서 역할할 수 있는데, 이는 모두 결국 항원성을 개선시키고 그에 따라 면역 반응을 생성시킬 수 있다. 2 개의 Ad5 [E1-, E2b-]-null 을, Ad5 [E1-, E2b-]-null (Viraquest) 및 Ad5 [E1-, E2b-]-null (E) (내부적으로 제조된 null 대조군 벡터) 을 포함하는 비교용 대조군 벡터로서 사용하였다. 비장세포를 최종 면역화 7 일 후 단리하고, Zika 2014 펩티드 풀, SIV-Nef 펩티드 풀 (음성 대조군), SIV-Gag 펩티드 풀 (음성 대조군) 및 콘카나발린 A (양성 대조군) 에 노출시키고, ELISPOT 에 의해 CMI 반응 (IFN-γ 및 IL-2) 및 CTL 반응 (그랜자임 B) 에 대해 평가하였다. 데이터를 106 비장세포 당 스팟 형성 세포 (SFC) 의 수로서 보고하며, 에러 바는 SEM 을 보여준다.
도 11a 는 Zika 2014 펩티드 풀 또는 대조군에 노출시킨 후 면역화된 마우스및 대조군 마우스로부터의 비장세포의 IFN-γ CMI 반응을 설명한다.
도 11b 는 Zika 2014 펩티드 풀 또는 대조군에 노출시킨 후 면역화된 마우스 및 대조군 마우스로부터의 비장세포의 IL-2 CMI 반응을 설명한다.
도 11c 는 Zika 2014 펩티드 풀 또는 대조군에 노출시킨 후 면역화된 마우스 및 대조군 마우스로부터의 비장세포의 그랜자임 B CTL 반응을 설명한다.
도 12 는 유세포 분석을 사용하여 Ad5 [E1-, E2b-]-Zika 백신으로 면역화된 마우스로부터의 비장세포에서 IFN-γ 및 IFN-γ/TNF-α 의 세포내 발현에 의해 측정되는 바와 같은 림프구 활성화를 설명한다. C57BL/6 마우스를 1x1010 바이러스 입자 (VP) 의 Ad5 [E1-, E2b-]-Zika 백신 또는 1x1010 VP Ad5 [E1-, E2b-]-null (빈 벡터 대조군) 로 2 주 간격으로 2 회 면역화하였다. SEQ ID NO: 32 의 뉴클레오티드 서열 및 SEQ ID NO: 33 의 아미노산 서열 (SEQ ID NO: 32 는 뉴클레오티드 서열이며 SEQ ID NO: 33 은 SEQ ID NO: 32 에 상응하는 아미노산 서열임) 에 의해 인코딩되는 Zika 항원 단백질을 포함하는 Ad5 [E1-, E2b-]-Zika 야생형 (wt) 2015 를 비롯하여, 2 개 유형의 Zika 백신을 시험하였다. SEQ ID NO: 33 의 Zika wt 2015 항원은, Zika 외피 단백질의 세포외 도메인의 절두형 부위인 3423-aa Zika 다단백질의 아미노산 409-690 에 상응한다 (SEQ ID NO: 23). 시험한 두 번째 Zika 백신은, SEQ ID NO: 36 의 뉴클레오티드 서열 및 SEQ ID NO: 37 의 아미노산 서열 (SEQ ID NO: 36 은 뉴클레오티드 서열이며 SEQ ID NO: 37 은 SEQ ID NO: 36 에 상응하는 아미노산 서열임) 에 의해 인코딩되는 Zika 항원 단백질을 포함하는 Ad5 [E1-, E2b-]-Zika 야생형 (wt) 2015 전장 (FL) 이었다. Ad5 [E1-, E2b-]-Zika 야생형 (wt) 2015 전장 (FL) 에서의 Zika 항원은, 2 개의 C-말단 막관통 앵커 도메인 및 세포외 루프, (원형질 막에 대한 표적화가 보장되도록 M 단백질의 일부, 및 번역의 개시가 보장되도록 N-말단에서의 KOZAK 서열 (GCCGCCACC) 을 인코딩하는) ZIKAV 게놈에서의 외피 단백질의 바로 업스트림인 2 개의 막관통 도메인, 세포외 루프 직전의 2 개의 막관통 도메인, 및 세포외 루프를 비롯하여, 3423-aa Zika 다단백질의 아미노산 271-805 에 상응하는 전체 외피 단백질을 포함한다 (SEQ ID NO: 23). 막관통 도메인의 포함은, mRNA-로딩된 리보솜의 소포체로의 이동, 당화, 및 원형질 막으로의 단백질의 궁극적 이동 및 테더링이 보장되도록 신호 서열로서 역할할 수 있는데, 이는 모두 결국 항원성을 개선시키고 그에 따라 면역 반응을 생성시킬 수 있다. 2 개의 Ad5 [E1-, E2b-]-null 을, Ad5 [E1-, E2b-]-null (Viraquest) 및 Ad5 [E1-, E2b-]-null (E) (내부적으로 제조된 null 대조군 벡터) 를 포함하는 비교용 대조군 벡터로서 사용하였다. 최종 면역화 7 일 후, 면역화된 마우스로부터 단리된 비장세포를 Zika 바이러스 펩티드 풀에 노출시키고, 유세포 분석을 사용하여 CD8+ 세포 및 CD4+ 세포에서의 IFN-γ 및 IFN-γ/TNF-α 의 세포내 사이토카인 생성을 측정하였다. 반응의 특이성을, PMA/이오노마이신 (데이터는 나타내지 않음) (양성 대조군) 에 대한 비장세포의 반응성 및 SIV-nef 펩티드 풀 (음성 대조군) 및 배지 (음성 대조군) 에 대한 비장세포의 반응성의 결여에 의해 나타낸다. 데이터를 IFN-γ 또는 IFN-γ 및 TNF-α 를 발현하는 CD8+ 또는 CD4+ 비장세포의 백분율로서 보고하며, 에러 바는 SEM 을 보여준다.
도 12a 는 Zika 2014 펩티드 풀 및 대조군에 면역화된 마우스 및 대조군 마우스로부터의 비장세포를 노출시킨 후 CD8+ 비장세포에서 IFN-γ 의 세포내 발현의 유세포 분석에 의해 측정되는 바와 같은 림프구 활성화를 설명한다.
도 12b 는 Zika 2014 펩티드 풀 및 대조군에 면역화된 마우스 및 대조군 마우스로부터의 비장세포를 노출시킨 후 CD4+ 비장세포에서 IFN-γ 의 세포내 발현의 유세포 분석에 의해 측정되는 바와 같은 림프구 활성화를 설명한다.
도 12c 는 Zika 2014 펩티드 풀 및 대조군에 면역화된 마우스 및 대조군 마우스로부터의 비장세포를 노출시킨 후 CD8+ 비장세포에서 IFN-γ 및 TNF-α 의 세포내 발현의 유세포 분석에 의해 측정되는 바와 같은 림프구 활성화를 설명한다.
도 12d 는 Zika 2014 펩티드 풀 및 대조군에 면역화된 마우스 및 대조군 마우스로부터의 비장세포를 노출시킨 후 CD4+ 비장세포에서 IFN-γ 및 TNF-α 의 세포내 발현의 유세포 분석에 의해 측정되는 바와 같은 림프구 활성화를 설명한다.
도 13 은 Ad5 [E1-, E2b-]-Zika 백신으로 면역화된 마우스의 혈청에서의 항-Zika IgG 반응을 설명한다. C57BL/6 마우스 (n=5/군) 를 1x1010 바이러스 입자 (VP) 의 Ad5 [E1-, E2b-]-Zika 야생형 (wt) 2015 백신 또는 Ad5 [E1-, E2b-]-Zika wt 2015 전장 (FL) 백신으로 2 주 간격으로 2 회 면역화하였다. Ad5 [E1-, E2b-]-null (Viraquest) 및 Ad5 [E1-, E2b-]-null (E) (내부적으로 제조된 null 대조군 벡터) 을 포함하여, 2 개의 Ad5 [E1-, E2b-]-null 을 비교용 대조군 벡터로서 사용하였다. 최종 면역화 7 일 후 마우스로부터 혈청을 수집하고, Zika 바이러스 외피 단백질-1 에 대한 항원 특이적 항체에 대하여 효소 결합 면역흡착 검정 (ELISA) 에 의해 평가하였다. y-축은 혈청 중 항-Zika IgG 의 나노그램 (ng) 수를 나타낸다. Ad5 [E1-, E2b-]-Zika wt 2015 군에서, 5 마리 중 3 마리 (3/5) 는 항체 양성이었다. Ad5 [E1-, E2b-]-Zika wt 2015 FL 군에서, 5 마리 중 5 마리 (5/5) 는 항체 양성이었다.
발명의 상세한 설명
하기 구절은 본 발명의 상이한 양태를 보다 상세히 설명한다. 반대로 명백히 나타내지 않는 한, 각각의 양태는 임의의 다른 양태(들) 와 조합될 수 있다. 특히, 바람직하거나 유리한 것으로 나타내는 임의의 특질은 바람직하거나 유리한 것으로 나타내는 임의의 다른 특질과 조합될 수 있다.
본원에서 사용하는 바와 같이, 다르게 나타내지 않는 한, 단수형 관사는 명백히다르게 제공되지 않는 한 하나 이상의 것을 의미한다.
본원에서 사용하는 바와 같이, 다르게 나타내지 않는 한, "함유하다", "함유하는", "비롯하다", "비롯하는" 등과 같은 용어는 "포함하는" 을 의미한다.
본원에서 사용하는 바와 같이, 다르게 나타내지 않는 한, 용어 "또는" 은 접속사 (conjunctive) 또는 이접적 접속사 (disjunctive) 일 수 있다.
본원에서 이용하는 바와 같이, 다르게 나타내지 않는 한, 임의의 구현예는 임의의 다른 구현예와 조합될 수 있다.
본원에서 사용하는 바와 같이, 다르게 나타내지 않는 한, 본원의 일부 발명 구현예는 수치 범위를 고려한다. 본 발명의 양태의 다양성은 범위 형식으로 제시될 수 있다. 범위 형식의 설명은 단지 편의성 및 간결성을 위한 것이며 본 발명의 범주에 대한 확고한 제한으로 해석해서는 안 된다는 것을 이해해야 한다. 따라서, 범위의 설명은 명확하게 기재된 바와 같이 그 범위 내 개별 수치 값 뿐만 아니라 모든 가능한 하위범위를 특별히 개시하는 것으로 간주되어야 한다. 예를 들어, 1 내지 6 과 같은 범위의 설명은 그 범위 내 개별 수치, 예를 들어 1, 2, 3, 4, 5 및 6 뿐만 아니라 특별히 개시된 하위범위 예컨대 1 내지 3, 1 내지 4, 1 내지 5, 2 내지 4, 2 내지 6, 3 내지 6 등을 갖는 것으로 간주되어야 한다. 이것은 범위의 폭과 무관하게 적용된다. 범위가 존재할 때, 그 범위는 범위 종결점을 포함한다.
용어 "아데노바이러스" 또는 "Ad" 는 아데노바이러스과 (family Adenoviridae) 로부터의 비-외피 DNA 바이러스의 군을 나타낼 수 있다. 인간 숙주에 추가로, 이러한 바이러스는 비제한적으로, 조류, 소, 돼지 및 개 종에서 발견될 수 있다. 아데노바이러스과의 4 개 속 (예를 들어, 아비아데노바이러스, 매스트아데노바이러스, 앳아데노바이러스 및 시아데노바이러스) 중 임의의 것으로부터의 임의의 아데노바이러스의 사용은 E2b 결실 바이러스 벡터, 또는 본원에 기재된 바와 같은 다른 결실을 함유하는 벡터를 기반으로 고려될 수 있다. 추가로, 여러 혈청형 (serotype) 이 각각의 종에서 발견될 수 있다. Ad 는 또한 상동 또는 이종 DNA 서열의 유전적 돌연변이, 결실 또는 전위를 비제한적으로 포함하는 이러한 바이러스 혈청형 중 임의의 것의 유전적 유도체와 관련될 수 있다.
"헬퍼 아데노바이러스" 또는 "헬퍼 바이러스" 는 특정 숙주 세포가 할 수 없는 (숙주는 Ad 유전자 산물, 예컨대 E1 단백질을 제공할 수 있음) 바이러스 기능을 공급할 수 있는 Ad 를 나타낼 수 있다. 이러한 바이러스는 두 번째 바이러스, 또는 헬퍼 의존적 바이러스 (예를 들어, 거트 (gutted) 또는 거트리스 (gutless) 바이러스, 또는 특정 부위 예컨대 E2b 또는 본원에 기재된 다른 부위가 결실된 바이러스) 에서 결여되는 기능 (예를 들어, 단백질) 을 도중에 공급하는데 사용될 수 있고; 첫 번째 복제-무능 바이러스는 두 번째, 헬퍼 의존적 바이러스를 "도와", 그로써 세포에서 두 번째 바이러스 게놈의 생산이 허용되는 것으로 언급될 수 있다.
본원에서 사용하는 바와 같이, 용어 "아데노바이러스5 null (Ad5null)" 은 발현을 위해 임의의 이종 핵산 서열을 함유하지 않을 수 있는 비-복제 Ad 를 나타낼 수 있다.
본원에서 사용하는 바와 같이, 용어 "제 1 세대 아데노바이러스" 는 초기 부위 1 (E1) 이 결실된 Ad 를 나타낼 수 있다. 추가적인 경우, 비필수 초기 부위 3 (E3) 이 또한 결실될 수 있다.
본원에서 사용하는 바와 같이, 용어 "거트 (gutted)" 또는 "거트리스 (gutless)" 는 모든 바이러스 코딩 부위가 결실된 아데노바이러스 벡터를 나타낼 수 있다.
본원에서 사용하는 바와 같이 용어 "트랜스펙션" 은 외래 핵산의 진핵세포 내로의 도입을 나타낼 수 있다. 트랜스펙션은 인산칼슘-DNA 공-침전, DEAE-덱스트란-매개 트랜스펙션, 폴리브렌-매개 트랜스펙션, 전기천공, 마이크로주사, 리포좀 융합, 리포펙션, 원형질체 융합, 레트로바이러스 감염 및 유전자총법 (biolistics) 을 포함하는 당업계에 공지된 다양한 수단에 의해 달성될 수 있다.
용어 "안정한 트랜스펙션" 또는 "안정하게 트랜스펙션된" 은 외래 핵산, DNA 또는 RNA 의, 트랜스펙션된 세포의 게놈 내로의 도입 및 통합을 나타낼 수 있다. 용어 "안정한 트랜스펙션체" 는 게놈 DNA 내로 안정하게 통합된 외래 DNA 를 갖는 세포를 나타낼 수 있다.
용어 "리포터 유전자" 는 리포터 분자 (효소 포함) 를 인코딩하는 뉴클레오티드 서열을 나타낼 수 있다. "리포터 분자" 는 비제한적으로, 효소-기반 검출 검정 (예를 들어, ELISA 뿐만 아니라 효소-기반 조직화학 검정), 형광, 방사능 및 발광 시스템을 포함하는, 다양한 검출 시스템 중 임의의 것에서 검출가능할 수 있다.
한 구현예에서, 대장균 (E. coli) β-갈락토시다아제 유전자 (Pharmacia Biotech, Pistacataway, N.J. 에서 이용가능), 녹색 형광 단백질 (GFP) (Clontech, Palo Alto, Calif. 에서 시판), 인간 태반 알칼리 포스파타아제 유전자, 클로람페니콜 아세틸트랜스퍼라아제 (CAT) 유전자 또는 당업계에 공지되는 기타 리포터 유전자가 이용될 수 있다.
본원에 사용되는 바와 같이, 용어 "~를 인코딩하는 핵산 분자", "~를 인코딩하는 DNA 서열" 및 "~를 인코딩하는 DNA" 는 데옥시리보핵산의 가닥을 따르는 데옥시리보뉴클레오티드의 순서 또는 서열을 나타낼 수 있다. 이러한 데옥시리보뉴클레오티드의 순서는 폴리펩티드 (단백질) 사슬을 따르는 아미노산의 순서를 결정할 수 있다. 따라서 핵산 서열은 아미노산 서열을 코딩할 수 있다.
본원에 사용되는 바와 같이, 용어 "이종 핵산 서열" 은 자연에서 라이게이션되지 않는, 또는 자연에서 상이한 위치에서 라이게이션되는 핵산 서열에, 라이게이션되는, 또는 라이게이션되도록 조작되는 뉴클레오티드 서열을 나타낼 수 있다. 이종 핵산은 그것이 도입되는 세포 내에서 자연적으로 발견되는 뉴클레오티드 서열을 포함할 수 있거나, 이종 핵산은 자연 발생 서열에 관하여 일부 변형을 함유할 수 있다.
용어 "이식유전자" 는 시험 대상의 세포 또는 게놈 내로 도입되는, 천연 또는 이종 핵산 서열 또는 융합된 상동 또는 이종 핵산 서열인, 임의의 유전자 코딩 부위를 나타낼 수 있다. 본 발명에서, 이식유전자는 이식유전자를 대상의 세포에 도입하는데 사용되는 임의의 바이러스 벡터에 탑재될 수 있다.
본원에 사용되는 바와 같이, 용어 "제 2 세대 아데노바이러스" 는 바이러스로부터 결실된 (제거된) E1, E2, E3, 및 특정 구현예에서 E4 DNA 유전자 서열의 전부 또는 일부를 갖는 Ad 를 나타낼 수 있다.
본원에서 사용하는 바와 같이, 용어 "대상" 은 임의의 동물, 예를 들어, 포유동물 또는 유대동물을 나타낼 수 있다. 대상은 비제한적으로, 인간, 비-인간 영장류 (예를 들어, 레수스 (rhesus) 또는 기타 유형의 마카크 (macaques)), 마우스, 돼지, 말, 당나귀, 소, 양, 랫트 및 가금류의 임의의 종류를 포함할 수 있다.
특정 양태에서, 플라비바이러스에 대한 광범위한 반응성의 면역 반응이 생성되도록 다수 백신화를 허용하는, 아데노바이러스 벡터를 사용하여 다양한 플라비바이러스에 대한 면역 반응을 생성시키는 백신의 제조 방법을 제공할 수 있다.
한 양태는, a) 복제 결함성 아데노바이러스 벡터 (아데노바이러스 벡터는 E2b 부위에서 결실을 가짐) 및 b) 다수 플라비바이러스 표적 항원을 인코딩하는 핵산을 포함하는 아데노바이러스 벡터를 대상에게 투여하고; 아데노바이러스 벡터를 대상에게 적어도 1 회 재투여하고; 그로써 플라비바이러스 표적 항원에 대한 면역 반응을 생성시키는 것을 포함하는, 대상에서의 여러 플라비바이러스 표적 항원에 대한 면역 반응의 생성 방법을 제공한다.
또 다른 양태는, a) 복제 결함성 아데노바이러스 벡터 (아데노바이러스 벡터는 E2b 부위에서 결실을 가짐) 및 b) 다수 플라비바이러스 표적 항원을 인코딩하는 핵산을 포함하는 아데노바이러스 벡터를 개체에게 투여하고; 아데노바이러스 벡터를 개체에게 적어도 1 회 재투여하고; 그로써 플라비바이러스 표적 항원에 대한 면역 반응을 생성시키는 것을 포함하는, 대상에서의 여러 플라비바이러스 표적 항원에 대한 면역 반응의 생성 방법을 제공하며, 여기서 대상은 아데노바이러스에 대해 기존 면역력을 갖는다.
I. 플라비바이러스 표적 항원
특정 구현예에서, 플라비바이러스 항원 예컨대 C, prM, E, M, 및 비구조 단백질 예컨대 NS1, NS2A, NS2B, NS3, NS4A, NS4B 및 NS5 가, 예를 들어 백신 조성물 또는 본원에 기재한 바와 같은 아데노바이러스 벡터를 포함하는 조성물에서 사용될 수 있다.
예를 들어, E 및 M 항원이 사용될 수 있다. 자연적 플라비바이러스 감염에 대한 보호의 주요 상관관계는 혈청 및 점막에서의 E 에 특이적인 Ab 의 수준일 수 있다. E 단백질에 대한 체액성 반응은 보호용 대용물로서 사용된 중화 역가로서 측정될 수 있다. M 단백질은 체액성 반응에 대한 주요 표적이 아닐 수 있으나; M 의 발현은 E 의 적절한 폴딩 (folding), 및 따라서 적절한 항원 디스플레이를 나타낼 수 있다.
NS3 이 또한 특정 양태에서 사용될 수 있다. 연구는 NS3 이, Ad5 벡터를 이용하는 것들을 포함하여 실험 백신으로 사용시 광범위한 플라비바이러스 보호를 제공할 수 있는 보존된 부위를 함유한다는 것을 보여주었다 (Papageorgiou, L et al. Molecular BioSystems. 2016 DOI: 10.1039/c5mb00706b; Duangchinda T et al. PNAS. 2010 107(39): 16922-16927).
추가 양태에서, 표적 항원은 다양한 플라비바이러스 단백질에서 유래하는 항원으로 구성될 수 있다. 특정 양태에서, 플라비바이러스 단백질은 황열 바이러스 (YFV), 일본 뇌염 바이러스 (JEV), 진드기 매개 뇌염 바이러스 (TBEV), 뎅기열 바이러스 (DENV), 웨스트 나일 바이러스 (WNV), 지카 바이러스 (ZIKAV) 를 비제한적으로 포함하는 임의의 플라비바이러스에서 유래할 수 있다. 특정 구현예에서, 적어도 하나의 플라비바이러스 바이러스 단백질은 C, prM, M, E, NS1, NS2A, NS2B, NS3, NS4A, NS4B, NS5 로 이루어지는 군에서 선택되는 플라비바이러스 단백질일 수 있다. 특정 구현예에서, 적어도 하나의 플라비바이러스 바이러스 단백질은 M, E 및 NS1 로 이루어지는 군에서 선택되는 단백질을 포함할 수 있다. 특정 구현예에서, 적어도 하나의 플라비바이러스 바이러스 단백질은 M, E 및 NS2A 로 이루어지는 군에서 선택되는 단백질을 포함할 수 있다. 특정 구현예에서, 적어도 하나의 플라비바이러스 바이러스 단백질은 M, E 및 NS2B 로 이루어지는 군에서 선택되는 단백질을 포함할 수 있다. 특정 구현예에서, 적어도 하나의 플라비바이러스 바이러스 단백질은 M, E 및 NS3 으로 이루어지는 군에서 선택되는 단백질을 포함할 수 있다. 특정 구현예에서, 적어도 하나의 플라비바이러스 바이러스 단백질은 M, E 및 NS4A 로 이루어지는 군에서 선택되는 단백질을 포함할 수 있다. 특정 구현예에서, 적어도 하나의 플라비바이러스 바이러스 단백질은 M, E 및 NS4B 로 이루어지는 군에서 선택되는 단백질을 포함할 수 있다. 특정 구현예에서, 적어도 하나의 플라비바이러스 바이러스 단백질은 M, E 및 NS5 로 이루어지는 군에서 선택되는 단백질을 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 적어도 하나의 표적 항원은 C, prM, M, E, NS1, NS2A, NS2B, NS3, NS4A, NS4B 또는 NS5 의 항원 서열, 또는 본원에 기재된 다른 항원 서열 중 임의의 하나에 대해 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 92%, 적어도 95%, 적어도 97% 또는 적어도 100% 서열 동일성을 갖는다. 일부 구현예에서 적어도 하나의 표적 항원은 구조는 플라비바이러스의 구조 및/또는 비구조 항원이다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 본원에서 사용하는 적어도 하나의 표적 항원은 SEQ ID NO: 1 (YFV JN628281.1) 에서 나타내는 서열 또는 이의 단편에 의해 인코딩되는 황열 바이러스 (YFV) 항원이다. 다른 구현예에서, 본원에서 사용하는 적어도 하나의 표적 항원은 SEQ ID NO: 2 (JEV AY508812.1) 에서 나타내는 서열 또는 이의 단편에 의해 인코딩되는 일본 뇌염 바이러스 (JEV) 항원이다. 일부 구현예에서, 본원에서 사용하는 적어도 하나의 표적 항원은 SEQ ID NO: 3 (TBEV-fe KJ755186) 에서 나타내는 서열 또는 이의 단편에 의해 인코딩되는 진드기 매개 뇌염 바이러스 (TBEV)-fe 항원이다. 다른 구현예에서, 본원에서 사용하는 적어도 하나의 표적 항원은 SEQ ID NO: 4 (TBEV-si KP331441) 에서 나타내는 서열 또는 이의 단편에 의해 인코딩되는 진드기 매개 뇌염 바이러스 (TBEV)-si 항원이다. 일부 구현예에서, 본원에서 사용하는 적어도 하나의 표적 항원은 SEQ ID NO: 5 (TBEV-eu TEU27495) 에서 나타내는 서열 또는 이의 단편에 의해 인코딩되는 진드기 매개 뇌염 바이러스 (TBEV)-eu 항원이다. 다른 구현예에서, 본원에서 사용하는 적어도 하나의 표적 항원은 SEQ ID NO: 6 (DENV-1 KF887994.1) 에서 나타내는 서열 또는 이의 단편에 의해 인코딩되는 뎅기열 바이러스-1 (DENV-1) 항원이다. 일부 구현예에서, 본원에서 사용하는 적어도 하나의 표적 항원은 SEQ ID NO: 7 (DENV-2 HQ026763) 에서 나타내는 서열 또는 이의 단편에 의해 인코딩되는 뎅기열 바이러스-2 (DENV-2) 항원이다. 다른 구현예에서, 본원에서 사용하는 적어도 하나의 표적 항원은 SEQ ID NO: 8 (DENV-3 KP406805) 에서 나타내는 서열 또는 이의 단편에 의해 인코딩되는 뎅기열 바이러스-3 (DENV-3) 항원이다. 일부 구현예에서, 본원에서 사용하는 적어도 하나의 표적 항원은 SEQ ID NO: 9 (DENV-4 KJ596658) 에서 나타내는 서열 또는 이의 단편에 의해 인코딩되는 DENV-4 항원이다. 다른 구현예에서, 본원에서 사용하는 적어도 하나의 표적 항원은 SEQ ID NO: 10 (WNV GQ903680) 에서 나타내는 서열 또는 이의 단편에 의해 인코딩되는 웨스트 나일 바이러스 (WNV) 항원이다. 일부 구현예에서, 본원에서 사용하는 적어도 하나의 표적 항원은 SEQ ID NO: 11 (ZIKAV KF383118) 에서 나타내는 서열 또는 이의 단편에 의해 인코딩되는 지카 바이러스 (ZIKAV) 항원이다. 다른 구현예에서, 본원에서 사용하는 적어도 하나의 표적 항원은 SEQ ID NO: 12 (ZIKAV KF383121) 에서 나타내는 서열 또는 이의 단편에 의해 인코딩되는 ZIKAV 항원이다. 일부 구현예에서, 본원에서 사용하는 적어도 하나의 표적 항원은 SEQ ID NO: 13 (AMA12087-변형됨: 돌연변이 D37I D43L D266I D129L D218L 을 갖는 Zika 바이러스 단리물 AMA12087 (브라질-2015) 로부터의 GP1) 에서 나타내는 서열에 의해 인코딩되는 ZIKAV 항원이다. 추가 구현예에서, 본원에서 사용하는 적어도 하나의 표적 항원은 SEQ ID NO: 13 에서와 같이 돌연변이 D37I, D43L, D266I, D129L, D218L 을 포함하는 ZIKAV 항원이다. 다른 구현예에서, 본원에서 사용하는 적어도 하나의 표적 항원은 SEQ ID NO: 14 (AHL43503-변형됨: 돌연변이 I21D L175D L240D 를 갖는 Zika 바이러스 단리물 AHL43503 (브라질-2014) 으로부터의 E) 에서 나타내는 서열에 의해 인코딩되는 ZIKAV 항원이다. 추가 구현예에서, 본원에서 사용하는 적어도 하나의 표적 항원은 SEQ ID NO: 14 에서와 같이 돌연변이 I21D, L175D, L240D 를 포함하는 ZIKAV 항원이다. 일부 구현예에서, 본원에서 사용하는 적어도 하나의 표적 항원은 SEQ ID NO: 15 (AHL43505 (브라질-2014)) 에서 나타내는 서열에 의해 인코딩되는 ZIKAV 항원이다. 추가 구현예에서, 본원에서 사용하는 적어도 하나의 표적 항원은 SEQ ID NO: 15 에서와 같이 부분적 Zika 바이러스인 ZIKAV 항원이다. 일부 구현예에서, 본원에서 사용하는 적어도 하나의 표적 항원은 SEQ ID NO: 16 - SEQ ID NO: 21 (SEQ ID NO: 16 은 AHL43503 (브라질-2014) 이고, SEQ ID NO: 17 은 AHL43502 (브라질-2014) 이고, SEQ ID NO: 18 은 AHL43501 (브라질-2014) 이고, SEQ ID NO: 19 는 AMA12087 (브라질-2015) 이고, SEQ ID NO: 20 은 Zika 바이러스 단리물 MEX/InDRE/14/2015 다단백질 유전자임, 부분적 cds GenBank: KU686218.1, SEQ ID NO: 21 은 Zika 바이러스 균주 Haiti/1225/2014 임, 완전 게놈; GenBank: KU509998.3) 중 임의의 하나에서 나타내는 서열에 의해 인코딩되는 ZIKAV 항원이다. 다른 구현예에서, 본원에서 사용하는 적어도 하나의 표적 항원은 SEQ ID NO: 22 (YFV 17D 백신 균주; GenBank ID: X03700.1) 에서 나타내는 서열에 의해 인코딩되는 황열 바이러스 (YFV) 항원이다. 일부 구현예에서, 본원에서 사용하는 적어도 하나의 표적 항원은 SEQ ID NO: 23 (전체 Zika 다단백질 서열 - 등록 번호 AHL43505) 에서 나타내는 서열에 의해 인코딩되는 전체 ZIKAV 다단백질 항원이다. 일부 구현예에서, 본원에서 사용하는 적어도 하나의 표적 항원은 SEQ ID NO: 24 - SEQ ID NO: 25 중 임의의 하나에서 나타내는 서열에 의해 인코딩되는 ZIKAV 항원이다. 일부 구현예에서, 본원에서 사용하는 적어도 하나의 표적 항원은, SEQ ID NO: 23 의 아미노산 409-690 에 상응하는 Zika 외피 단백질의 세포외 도메인의 절두형 부분을 포함하며 또한 번역의 개시가 보장되도록 N-말단에서의 KOZAK 서열 (GCCGCCACC) 을 포함하는 Zika wt 2014 항원 (AHL43503) 인 SEQ ID NO: 26 에서 나타내는 서열에 의해 인코딩되는 ZIKAV 항원이다. 일부 구현예에서, 본원에서 사용하는 적어도 하나의 표적 항원은, SEQ ID NO: 26 에서 나타내는 Zika wt 2014 항원 (AHL43503) 의 아미노산 형태인 SEQ ID NO: 27 에서 나타내는 서열에 의해 인코딩되는 ZIKAV 항원이다. 일부 구현예에서, 본원에서 사용하는 적어도 하나의 표적 항원은, SEQ ID NO: 23 의 아미노산 409-690 에 상응하는 Zika 외피 단백질에 상응하는 세포외 도메인의 절두형 부분, 번역의 개시가 보장되도록 하는 N-말단에서의 KOZAK 서열 (GCCGCCACC), 및 SEQ ID NO: 29 에서의 아미노산 돌연변이 I21D, L175D, L240D 를 초래하는 점 돌연변이 (N-말단 메티오닌은 계수하지 않음) 를 포함하는 Zika mut 2014 항원 (AHL43503) 인 SEQ ID NO: 28 에서 나타내는 서열에 의해 인코딩되는 ZIKAV 항원이다. 일부 구현예에서, 본원에서 사용하는 적어도 하나의 표적 항원은, SEQ ID NO: 28 에서 나타내는 Zika mut 2014 항원 (AHL43503) 의 아미노산 형태인 SEQ ID NO: 29 에서 나타내는 서열에 의해 인코딩되는 ZIKAV 항원이다. 일부 구현예에서, 본원에서 사용하는 적어도 하나의 표적 항원은, 2 개의 C-말단 막관통 앵커 도메인 및 세포외 루프, 및 (원형질 막에 대한 표적화가 보장되도록 M 단백질의 일부, 및 번역의 개시가 보장되도록 N-말단에서의 KOZAK 서열 (GCCGCCACC) 을 인코딩하는) ZIKAV 게놈에서의 외피 단백질의 바로 업스트림인 2 개의 막관통 도메인, 세포외 루프 직전의 2 개의 막관통 도메인, 및 세포외 루프를 비롯하여, 3423-aa Zika 다단백질의 아미노산 271-805 에 상응하는 전체 외피 단백질을 포함하는 Zika 전체 2014 항원 (AHL43503) (SEQ ID NO: 23) 인 SEQ ID NO: 30 에서 나타내는 서열에 의해 인코딩되는 ZIKAV 항원이다. 일부 구현예에서, 본원에서 사용하는 적어도 하나의 표적 항원은, SEQ ID NO: 30 에서 나타내는 Zika 전체 2014 항원 (AHL43503) 의 아미노산 형태인 SEQ ID NO: 31 에서 나타내는 서열에 의해 인코딩되는 ZIKAV 항원이다. 일부 구현예에서, 본원에서 사용하는 적어도 하나의 표적 항원은, SEQ ID NO: 23 의 아미노산 409-690 에 상응하는 Zika 외피 단백질의 세포외 도메인의 절두형 부분 및 또한 번역의 개시가 보장되도록 N-말단에서 KOZAK 서열 (GCCGCCACC) 을 포함하는 Zika wt 2015 항원 (AHL12087) 인 SEQ ID NO: 32 에서 나타내는 서열에 의해 인코딩되는 ZIKAV 항원이다. 일부 구현예에서, 본원에서 사용하는 적어도 하나의 표적 항원은, SEQ ID NO: 32 에서 나타내는 Zika wt 2015 항원 (AHL12087) 의 아미노산 형태인 SEQ ID NO: 33 에서 나타내는 서열에 의해 인코딩되는 ZIKAV 항원이다. 일부 구현예에서, 본원에서 사용하는 적어도 하나의 표적 항원은, SEQ ID NO: 23 의 아미노산 409-690 에 상응하는 Zika 외피 단백질의 세포외 도메인의 절두형 부분, 번역의 개시가 보장되도록 하는 N-말단에서의 KOZAK 서열 (GCCGCCACC), 및 SEQ ID NO: 35 에서의 아미노산 돌연변이 D37I, D43L, D266I, D129L, D218L 을 초래하는 점 돌연변이 (N-말단 메티오닌은 계수하지 않음) 를 포함하는 Zika mut 2015 항원 (AHL12087) 인 SEQ ID NO: 34 에서 나타내는 서열에 의해 인코딩되는 ZIKAV 항원이다. 일부 구현예에서, 본원에서 사용하는 적어도 하나의 표적 항원은, SEQ ID NO: 34 에서 나타내는 Zika mut 2015 항원 (AHL12087) 의 아미노산 형태인 SEQ ID NO: 35 에서 나타내는 서열에 의해 인코딩되는 ZIKAV 항원이다. 일부 구현예에서, 본원에서 사용하는 적어도 하나의 표적 항원은, 2 개의 C-말단 막관통 앵커 도메인 및 세포외 루프, 및 (원형질 막에 대한 표적화가 보장되도록 하는 M 단백질의 일부, 및 번역의 개시가 보장되도록 하는 N-말단에서의 KOZAK 서열 (GCCGCCACC) 을 인코딩하는) ZIKAV 게놈에서의 외피 단백질의 바로 업스트림인 2 개의 막관통 도메인, 세포외 루프 직전의 2 개의 막관통 도메인, 및 세포외 루프를 비롯하여, 3423-aa Zika 다단백질의 아미노산 271-805 에 상응하는 전체 외피 단백질을 포함하는 Zika 전체 2015 항원 (AHL12087) (SEQ ID NO: 23) 인 SEQ ID NO: 36 에서 나타내는 서열에 의해 인코딩되는 ZIKAV 항원이다. 일부 구현예에서, 본원에서 사용하는 적어도 하나의 표적 항원은, SEQ ID NO: 36 에서 나타내는 Zika 전체 2015 항원 (AHL12087) 의 아미노산 형태인 SEQ ID NO: 37 에서 나타내는 서열에 의해 인코딩되는 ZIKAV 항원이다.
특정 구현예에서, 항원의 뉴클레오티드 서열은 SEQ ID NO: 1 또는 이의 단편에 대해 적어도 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 99%, 99.5%, 99.9% 또는 100% (또는 그로부터 유래한 임의의 범위 또는 값) 동일성의 부위를 갖는다. 특정 구현예에서, 항원의 뉴클레오티드 서열은 SEQ ID NO: 2 또는 이의 단편에 대해 적어도 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 99%, 99.5%, 99.9% 또는 100% (또는 그로부터 유래한 임의의 범위 또는 값) 동일성의 부위를 갖는다. 특정 구현예에서, 항원의 뉴클레오티드 서열은 SEQ ID NO: 3 또는 이의 단편에 대해 적어도 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 99%, 99.5%, 99.9% 또는 100% (또는 그로부터 유래한 임의의 범위 또는 값) 동일성의 부위를 갖는다. 특정 구현예에서, 항원의 뉴클레오티드 서열은 SEQ ID NO: 4 또는 이의 단편에 대해 적어도 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 99%, 99.5%, 99.9% 또는 100% (또는 그로부터 유래한 임의의 범위 또는 값) 동일성의 부위를 갖는다. 특정 구현예에서, 항원의 뉴클레오티드 서열은 SEQ ID NO: 5 또는 이의 단편에 대해 적어도 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 99%, 99.5%, 99.9% 또는 100% (또는 그로부터 유래한 임의의 범위 또는 값) 동일성의 부위를 갖는다. 특정 구현예에서, 항원의 뉴클레오티드 서열은 SEQ ID NO: 6 또는 이의 단편에 대해 적어도 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 99%, 99.5%, 99.9% 또는 100% (또는 그로부터 유래한 임의의 범위 또는 값) 동일성의 부위를 갖는다. 특정 구현예에서, 항원의 뉴클레오티드 서열은 SEQ ID NO: 7 또는 이의 단편에 대해 적어도 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 99%, 99.5%, 99.9% 또는 100% (또는 그로부터 유래한 임의의 범위 또는 값) 동일성의 부위를 갖는다. 특정 구현예에서, 항원의 뉴클레오티드 서열은 SEQ ID NO: 8 또는 이의 단편에 대해 적어도 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 99%, 99.5%, 99.9% 또는 100% (또는 그로부터 유래한 임의의 범위 또는 값) 동일성의 부위를 갖는다. 특정 구현예에서, 항원의 뉴클레오티드 서열은 SEQ ID NO: 9 또는 이의 단편에 대해 적어도 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 99%, 99.5%, 99.9% 또는 100% (또는 그로부터 유래한 임의의 범위 또는 값) 동일성의 부위를 갖는다. 특정 구현예에서, 항원의 뉴클레오티드 서열은 SEQ ID NO: 10 또는 이의 단편에 대해 적어도 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 99%, 99.5%, 99.9% 또는 100% (또는 그로부터 유래한 임의의 범위 또는 값) 동일성의 부위를 갖는다. 특정 구현예에서, 항원의 뉴클레오티드 서열은 SEQ ID NO: 11 또는 이의 단편에 대해 적어도 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 99%, 99.5%, 99.9% 또는 100% (또는 그로부터 유래한 임의의 범위 또는 값) 동일성의 부위를 갖는다. 특정 구현예에서, 항원의 뉴클레오티드 서열은 SEQ ID NO: 12 또는 이의 단편에 대해 적어도 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 99%, 99.5%, 99.9% 또는 100% (또는 그로부터 유래한 임의의 범위 또는 값) 동일성의 부위를 갖는다. 특정 구현예에서, 항원의 뉴클레오티드 서열은 SEQ ID NO: 13 또는 이의 단편에 대해 적어도 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 99%, 99.5%, 99.9% 또는 100% (또는 그로부터 유래한 임의의 범위 또는 값) 동일성의 부위를 갖는다. 특정 구현예에서, 항원의 뉴클레오티드 서열은 SEQ ID NO: 14 또는 이의 단편에 대해 적어도 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 99%, 99.5%, 99.9% 또는 100% (또는 그로부터 유래한 임의의 범위 또는 값) 동일성의 부위를 갖는다. 특정 구현예에서, 항원의 뉴클레오티드 서열은 SEQ ID NO: 15 또는 이의 단편에 대해 적어도 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 99%, 99.5%, 99.9% 또는 100% (또는 그로부터 유래한 임의의 범위 또는 값) 동일성의 부위를 갖는다. 특정 구현예에서, 항원의 뉴클레오티드 서열은 SEQ ID NO: 16 또는 이의 단편에 대해 적어도 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 99%, 99.5%, 99.9% 또는 100% (또는 그로부터 유래한 임의의 범위 또는 값) 동일성의 부위를 갖는다. 특정 구현예에서, 항원의 뉴클레오티드 서열은 SEQ ID NO: 17 또는 이의 단편에 대해 적어도 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 99%, 99.5%, 99.9% 또는 100% (또는 그로부터 유래한 임의의 범위 또는 값) 동일성의 부위를 갖는다. 특정 구현예에서, 항원의 뉴클레오티드 서열은 SEQ ID NO: 18 또는 이의 단편에 대해 적어도 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 99%, 99.5%, 99.9% 또는 100% (또는 그로부터 유래한 임의의 범위 또는 값) 동일성의 부위를 갖는다. 특정 구현예에서, 항원의 뉴클레오티드 서열은 SEQ ID NO: 19 또는 이의 단편에 대해 적어도 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 99%, 99.5%, 99.9% 또는 100% (또는 그로부터 유래한 임의의 범위 또는 값) 동일성의 부위를 갖는다. 특정 구현예에서, 항원의 뉴클레오티드 서열은 SEQ ID NO: 20 또는 이의 단편에 대해 적어도 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 99%, 99.5%, 99.9% 또는 100% (또는 그로부터 유래한 임의의 범위 또는 값) 동일성의 부위를 갖는다. 특정 구현예에서, 항원의 뉴클레오티드 서열은 SEQ ID NO: 21 또는 이의 단편에 대해 적어도 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 99%, 99.5%, 99.9% 또는 100% (또는 그로부터 유래한 임의의 범위 또는 값) 동일성의 부위를 갖는다. 특정 구현예에서, 항원의 뉴클레오티드 서열은 SEQ ID NO: 22 또는 이의 단편에 대해 적어도 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 99%, 99.5%, 99.9% 또는 100% (또는 그로부터 유래한 임의의 범위 또는 값) 동일성의 부위를 갖는다. 특정 구현예에서, 항원의 뉴클레오티드 서열은 SEQ ID NO: 23 또는 이의 단편에 대해 적어도 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 99%, 99.5%, 99.9% 또는 100% (또는 그로부터 유래한 임의의 범위 또는 값) 동일성의 부위를 갖는다. 특정 구현예에서, 항원의 뉴클레오티드 서열은 SEQ ID NO: 24 또는 이의 단편에 대해 적어도 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 99%, 99.5%, 99.9% 또는 100% (또는 그로부터 유래한 임의의 범위 또는 값) 동일성의 부위를 갖는다. 특정 구현예에서, 항원의 뉴클레오티드 서열은 SEQ ID NO: 25 또는 이의 단편에 대해 적어도 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 99%, 99.5%, 99.9% 또는 100% (또는 그로부터 유래한 임의의 범위 또는 값) 동일성의 부위를 갖는다. 특정 구현예에서, 항원의 뉴클레오티드 서열은 SEQ ID NO: 26 또는 이의 단편에 대해 적어도 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 99%, 99.5%, 99.9% 또는 100% (또는 그로부터 유래한 임의의 범위 또는 값) 동일성의 부위를 갖는다. 특정 구현예에서, 항원의 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 27 또는 이의 단편에 대해 적어도 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 99%, 99.5%, 99.9% 또는 100% (또는 그로부터 유래한 임의의 범위 또는 값) 동일성의 부위를 갖는다. 특정 구현예에서, 항원의 뉴클레오티드 서열은 SEQ ID NO: 28 또는 이의 단편에 대해 적어도 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 99%, 99.5%, 99.9% 또는 100% (또는 그로부터 유래한 임의의 범위 또는 값) 동일성의 부위를 갖는다. 특정 구현예에서, 항원의 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 29 또는 이의 단편에 대해 적어도 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 99%, 99.5%, 99.9% 또는 100% (또는 그로부터 유래한 임의의 범위 또는 값) 동일성의 부위를 갖는다. 특정 구현예에서, 항원의 뉴클레오티드 서열은 SEQ ID NO: 30 또는 이의 단편에 대해 적어도 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 99%, 99.5%, 99.9% 또는 100% (또는 그로부터 유래한 임의의 범위 또는 값) 동일성의 부위를 갖는다. 특정 구현예에서, 항원의 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 31 또는 이의 단편에 대해 적어도 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 99%, 99.5%, 99.9% 또는 100% (또는 그로부터 유래한 임의의 범위 또는 값) 동일성의 부위를 갖는다. 특정 구현예에서, 항원의 뉴클레오티드 서열은 SEQ ID NO: 32 또는 이의 단편에 대해 적어도 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 99%, 99.5%, 99.9% 또는 100% (또는 그로부터 유래한 임의의 범위 또는 값) 동일성의 부위를 갖는다. 특정 구현예에서, 항원의 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 33 또는 이의 단편에 대해 적어도 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 99%, 99.5%, 99.9% 또는 100% (또는 그로부터 유래한 임의의 범위 또는 값) 동일성의 부위를 갖는다. 특정 구현예에서, 항원의 뉴클레오티드 서열은 SEQ ID NO: 34 또는 이의 단편에 대해 적어도 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 99%, 99.5%, 99.9% 또는 100% (또는 그로부터 유래한 임의의 범위 또는 값) 동일성의 부위를 갖는다. 특정 구현예에서, 항원의 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 35 또는 이의 단편에 대해 적어도 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 99%, 99.5%, 99.9% 또는 100% (또는 그로부터 유래한 임의의 범위 또는 값) 동일성의 부위를 갖는다. 특정 구현예에서, 항원의 뉴클레오티드 서열은 SEQ ID NO: 36 또는 이의 단편에 대해 적어도 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 99%, 99.5%, 99.9% 또는 100% (또는 그로부터 유래한 임의의 범위 또는 값) 동일성의 부위를 갖는다. 특정 구현예에서, 항원의 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 37 또는 이의 단편에 대해 적어도 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 99%, 99.5%, 99.9% 또는 100% (또는 그로부터 유래한 임의의 범위 또는 값) 동일성의 부위를 갖는다.
특정 구현예에서, 표적 항원은 Zika 바이러스 단백질, 예컨대 Zika 바이러스로부터의 외피 당단백질 (E) 이다. 특정 구현예에서, 표적 항원은 SEQ ID NO: 13 또는 이의 단편에 대해 적어도 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 99%, 99.5%, 99.9%, 100% (또는 그로부터 유래가능한 임의의 범위 또는 값) 동일성의 부위를 갖는다. 특정 구현예에서, 표적 항원은 SEQ ID NO: 14 또는 이의 단편에 대해 적어도 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 99%, 99.5%, 99.9%, 100% (또는 그로부터 유래가능한 임의의 범위 또는 값) 동일성의 부위를 갖는다. 특정 구현예에서, 표적 항원은 SEQ ID NO: 15 또는 이의 단편에 대해 적어도 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 99%, 99.5%, 99.9%, 100% (또는 그로부터 유래가능한 임의의 범위 또는 값) 동일성의 부위를 갖는다. 특정 구현예에서, 표적 항원은 SEQ ID NO: 16 또는 이의 단편에 대해 적어도 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 99%, 99.5%, 99.9%, 100% (또는 그로부터 유래가능한 임의의 범위 또는 값) 동일성의 부위를 갖는다. 특정 구현예에서, 표적 항원은 SEQ ID NO: 17 또는 이의 단편에 대해 적어도 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 99%, 99.5%, 99.9%, 100% (또는 그로부터 유래가능한 임의의 범위 또는 값) 동일성의 부위를 갖는다. 특정 구현예에서, 표적 항원은 SEQ ID NO: 18 또는 이의 단편에 대해 적어도 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 99%, 99.5%, 99.9%, 100% (또는 그로부터 유래가능한 임의의 범위 또는 값) 동일성의 부위를 갖는다. 특정 구현예에서, 표적 항원은 SEQ ID NO: 19 또는 이의 단편에 대해 적어도 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 99%, 99.5%, 99.9%, 100% (또는 그로부터 유래가능한 임의의 범위 또는 값) 동일성의 부위를 갖는다. 특정 구현예에서, 표적 항원은 SEQ ID NO: 11 또는 이의 단편에 대해 적어도 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 99%, 99.5%, 99.9%, 100% (또는 그로부터 유래가능한 임의의 범위 또는 값) 동일성의 부위를 갖는다. 특정 구현예에서, 표적 항원은 SEQ ID NO: 12 또는 이의 단편에 대해 적어도 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 99%, 99.5%, 99.9%, 100% (또는 그로부터 유래가능한 임의의 범위 또는 값) 동일성의 부위를 갖는다. 특정 구현예에서, 표적 항원은 SEQ ID NO: 20 또는 이의 단편에 대해 적어도 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 99%, 99.5%, 99.9%, 100% (또는 그로부터 유래가능한 임의의 범위 또는 값) 동일성의 부위를 갖는다. 특정 구현예에서, 표적 항원은 SEQ ID NO: 21 또는 이의 단편에 대해 적어도 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 99%, 99.5%, 99.9%, 100% (또는 그로부터 유래가능한 임의의 범위 또는 값) 동일성의 부위를 갖는다. 특정 구현예에서, 표적 항원은 SEQ ID NO: 23 또는 이의 단편에 대해 적어도 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 99%, 99.5%, 99.9%, 100% (또는 그로부터 유래가능한 임의의 범위 또는 값) 동일성의 부위를 갖는다. 특정 구현예에서, 표적 항원은 SEQ ID NO: 24 또는 이의 단편에 대해 적어도 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 99%, 99.5%, 99.9%, 100% (또는 그로부터 유래가능한 임의의 범위 또는 값) 동일성의 부위를 갖는다. 특정 구현예에서, 표적 항원은 SEQ ID NO: 25 또는 이의 단편에 대해 적어도 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 99%, 99.5%, 99.9%, 100% (또는 그로부터 유래가능한 임의의 범위 또는 값) 동일성의 부위를 갖는다.
특정 양태에서, 표적 항원은 플라비바이러스 과로부터의 임의의 항원을 포함한다. 플라비바이러스 과의 플라비바이러스 속은 공중 보건 및/또는 수의적 관심사의 많은 바이러스를 함유한다. 플라비바이러스는 모기 및 일부는 진드기에 의해 전염된 일부 군을 갖는 벡터-매개 바이러스이다. 공중 보건에 대하여 특정 관심 대상의 것인 플라비바이러스는 황열 바이러스 (YFV), 일본 뇌염 바이러스 (JEV), 진드기 매개 뇌염 바이러스 (TBEV), 뎅기열 바이러스 (DENV), 웨스트 나일 바이러스 (WNV) 및 지카 바이러스 (ZIKAV) 이다.
YFV 는 연간 200,000 건의 사례 및 30,000 건의 사망을 초래하는 것으로 추정된다. YFV 는 사하라 사막 이남의 아프리카 및 남아메리카에서 풍토성이다. YFV 감염은 대부분 무증상일 수 있다. 그러나, 약 15% 의 사례가 출혈열과 같은 보다 심각한 형태의 질환으로 발전할 수 있다. 몇몇 효과적인 생 약독화 백신이 이용가능하다. 그러나, 수막뇌염, 길랭-바레 증후군 및 급성파종뇌척수염과 같은 심각한 부작용이 이러한 백신과 연관될 수 있다.
JEV 는 동남동 및 남아시아에서 풍토성이며, 보다 최근에는 호주에서 발견되고 있다. JEV 에 대한 사례 치사률은 5-40% 이며, 어린이 및 노인 개체가 중증 질환에 보다 취약하다. 정신신경학적 후유증이 생존자의 20-50% 에서 발생할 수 있다. JEV 는 연간 70,000 건의 사례 및 20,000 건의 사망을 초래하는 것으로 추정된다. JEV 의 5 개 별개의 유전자형이 존재하지만, 모든 백신 균주가 유전자형 III 에 속한다. 다른 4 개 유전자형에 대한 백신의 유효성은 잘 확립되지 않았다.
인간 질환을 초래하는 것으로 알려진 TBEV 의 3 개 하위유형이 존재한다. 하위유형은 극동 (TBEV-fe), 시베리아, (TBEV-si) 및 유럽 (TBEV-eu) 이다. TBEV 는 모두 진드기에 의해 전염된다. 사례의 10-30% 가 무증상일 수 있다고 여겨지지만, TBEV 는 척수염, 수막염 및 뇌염을 초래할 수 있다. 치사율은 20% 초과의 최고 비율을 갖는 TBEV-fe 를 갖는 하위유형에 걸쳐 가변적이다.
DENV 는 4 개 하위유형, DENV-1, DENV-2, DENV-3 및 DENV-4 를 갖는다. 합하여, 하위유형은 매년 5천만-1억 번의 추정 감염을 초래하며 허가받은 백신은 존재하지 않는다. DENV 백신의 생산을 제한하는 논점 중 하나는, 하나의 백신에서 모든 4 개의 혈청형에 대해 면역력을 제공하는 것의 필요성이다. DENV 로의 초기 감염이 자가제한적일 수 있으나, 이형 바이러스로의 후속 감염은 뎅기열 쇼크 증후군 (DSS) 및 뎅기열 출혈열 (DHF) 을 일으킬 수 있다. 뎅기열로부터 매년 대략 20,000 건의 사망이 발생하며, 사망자의 대부분은 DSS 및 DHF 와 연관된다. 생-약독화 바이러스를 사용하는 모든 4 개 혈청형에 대한 백신 제조 시도는, 백신 균주 간의 경쟁으로 인해 실패하였다.
WNV 는 아프리카, 유럽, 아시아, 호주 및 아메리카 전체에 걸쳐 광범위하게 분포된다. 대부분의 감염은 무증상일 수 있으나, WNV 는 또한 인간, 말 및 반려 동물에서의 신경학적 질환을 초래할 수 있다.
ZIKAV 는 남아메리카에서 최근에 생겨났다. ZIKAV 는 1947 년에 아프리카에서 최초로 단리되었으며, 이후 적도 아프리카에서 황달 발발의 원인 인자인 것으로 발견되었다. 남아메리카에서의 가장 최근의 발발은, 많은 플라비바이러스와 마찬가지로, ZIKAV 가 뉴런 질환을 초래할 수 있다는 것을 강조하였다. 대부분의 ZIKAV 감염이 가볍거나 무증상일 수 있으나, 감염은 태아 뇌 손상, 소두증 및 길랭-바레 증후군과 같은 심각한 신경학적 증후군을 일으킬 수 있다. 임신 첫 3 개월에서 발생하는 감염이 태아에서 뇌 손상 및 소두증을 일으킬 수 있다고 여겨진다. 아메리카, 특히 브라질에서의 현재 플라비바이러스 발발의 심각도는, 위험한 상태의 집단, 특히 의료 혜택에 대한 정기적 접근을 갖지 않는 가임기의 여성을 보호하는 장기 지속 플라비바이러스 백신에 대한 의료적 필요성을 강조하였다.
본원에 기재한 아데노바이러스 벡터를 사용하여 표적화될 수 있는 플라비바이러스의 다른 예는 엡세타로프 (Absettarov) 바이러스, 아포이 (Apoi) 바이러스, 한살로바 (Hansalova) 바이러스, 하이프르 (Hypr) 바이러스, 일헤우스 (Ilheus) 바이러스, 이스라엘 칠면조 수막뇌염, 코코베라 (Kokobera) 바이러스, 코탕고 (Koutango) 바이러스, 쿤진 (Kunjin) 바이러스, 키야사누 삼림 (Kyasanur Forest) 바이러스, 랑가 (Langat) 바이러스, 도약병 (Louping ill) 바이러스, 모독 (Modoc) 바이러스, 머레이 밸리 (Murray Valley) 뇌염 바이러스, 네기시 (Negishi) 바이러스, 옴스크 (Omsk) 출혈열, 포와산 (Powassan) 바이러스, 리오 브라보 (Rio Bravo) 바이러스, 로시오 (Rocio) 바이러스, 스폰드웨니 (Spondweni) 바이러스, 성 루이스 (St. Louis) 뇌염 바이러스 및 웨셀브론 (Wesselbron) 바이러스를 포함한다.
일부 구현예에서, 본 개시물의 Ad5 [E1-, E2b-]-기반 벡터에서의 항원 (예를 들어, 임의의 Zika 항원) 은 대상에서 항-인간 C1q 반응을 생성하는 백신의 능력을 감소시킬 수 있는 돌연변이를 포함한다. 예를 들어 일부 구현예에서, 점 돌연변이는 Zika mut 2015 항원 (Zika mut 2015 항원을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열은 SEQ ID NO: 34 이고, Zika mut 2015 항원을 인코딩하는 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 35 임) 에서와 같이, D37I, D43L, D266I, D129L, D218L (위치 번호매김은 N-말단 메티오닌을 계수하지 않음) 을 포함할 수 있다. 다른 구현예에서, 점 돌연변이는 Zika mut 2014 항원 (Zika mut 2014 항원을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열은 SEQ ID NO: 28 이고, Zika mut 2014 항원을 인코딩하는 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 29 임) 에서와 같이, I21D, L175D, L240D (위치 번호매김은 N-말단 메티오닌을 계수하지 않음) 를 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 본 개시물의 Ad5 [E1-, E2b-]-기반 벡터에서의 항원 (예를 들어, 임의의 Zika 항원) 은 Zika 외피 단백질의 세포외 도메인의 절두형 부위인 3423-aa Zika 다단백질의 아미노산 409-690 에 상응하는 서열을 포함한다 (SEQ ID NO: 23). 예를 들어, 이러한 항원의 서열을 SEQ ID NO: 26 - SEQ ID NO: 29 또는 SEQ ID NO: 32 - SEQ ID NO: 35 에서 나타낸다.
일부 구현예에서, 본 개시물의 Ad5 [E1-, E2b-]-기반 벡터에서의 항원 (예를 들어, 임의의 Zika 항원) 은 2 개의 막관통 도메인 및 세포외 루프 뿐만 아니라 다수의 외피 단백질을 포함하며 3423-aa Zika 다단백질의 아미노산 271-805 에 상응한다 (SEQ ID NO: 23). 예를 들어, 이러한 항원의 서열을 SEQ ID NO: 30 - SEQ ID NO: 31 또는 SEQ ID NO: 36 - SEQ ID NO: 37 에서 나타낸다. 막관통 도메인의 포함은 mRNA-로딩된 리보솜의 소포체로의 이동, 당화 및 단백질의 원형질 막으로의 궁극적 이동 및 테더링이 보장되도록 신호 서열로서 역할할 수 있으며, 이는 모두 결국 항원성을 개선시키고 그에 따라 면역 반응을 생성시킬 수 있다.
II. 아데노바이러스 벡터
특정 양태에서, 아데노바이러스 벡터는 플라비바이러스 항원, 특히 Zika 바이러스 항원의 전달을 위한 조성물 및 방법에서 사용될 수 있다.
재조합 Ad5 [E1-, E2b-] 벡터 백신 플랫폼은, 바이러스 DNA 폴리머라아제 (pol) 및/또는 pre 말단 단백질 (pTP) 유전자를 제거할 수 있으며 E.C7 인간 세포주에서 전파될 수 있는, 초기 유전자 2b (E2b) 부위에서 추가적인 결실을 갖는 새로운 것이다 (Amalfitano A, Begy CR, Chamberlain JS Proc Natl Acad Sci U S A. 1996 93:3352-6; Amalfitano A, Chamberlain JS Gene Ther. 1997 4:258-63; Amalfitano A et al. J Virol. 1998 72:926-33; Seregin SS and Amalfitano A Expert Opin Biol Ther. 2009 9:1521-31). 벡터는 다수 유전자의 포함을 허용하기에 충분한, 현재 Ad5 [E1-] 벡터의 7 kb 능력에 비해 12 kb 까지의 확장된 유전자-운반/클로닝 능력을 가질 수 있다 (Amalfitano A et al. J Virol. 1998 72:926-33; Seregin SS and Amalfitano A Expert Opin Biol Ther. 2009 9:1521-31). E2b 부위의 추가적인 결실은, Ad5 바이러스 단백질에 대한 면역 반응을 최소화하면서 특정 항원에 대한 강력한 면역 반응을 이끌어내는 것과 같은 유리한 면역 특성을 부여할 수 있다.
중요하게는, 암 및 감염성 질환에서의 전임상 및 임상 연구는, Ad5 면역력의 존재 하에서도 Ad5 [E1-, E2b-]-기반 벡터가 벡터형 항원에 대한 강력한 CMI 및 Ab 반응을 유도할 수 있다는 것을 입증한다 (Osada T et al. Cancer Gene Ther. 2009 16:673-82; Gabitzsch ES et al. Vaccine. 2009 27:6394-8; Gabitzsch ES et al. Immunol Lett. 2009 122:44-51; Gabitzsch ES et al. Cancer Immunol Immunother. 2010 59:1131-5; Gabitzsch ES et al. Cancer Gene Ther. 2011 18:326-35; Gabitzsch ES et al. Vaccine 2011 29:8101-7; Jones FR et al. Vaccine 2011 29:7020-6; Gabitzsch ES, Jones FR J Clin Cell Immunol. 2011 S4:001. doi:10.4172/2155-9899. S4-001; Gabitzsch ES et al. Vaccine 2012 30:7265-70; Wieking BG et al. Cancer Gene Ther. 2012 19:667-74; Morse MA et al. Cancer Immunol Immunother. 2013 62:1293-1301; Balint et al. Cancer Immunol Immunother. 2015 64:977-87; Rice AE et al. Cancer Gene Ther. 2015 22:454-62; Gabitzsch ES et al. Oncotarget 2015 Sept 7).
진보된 재조합 아데노바이러스 혈청형 5 (Ad5) 벡터 플랫폼은 플라비바이러스에 대한 신규한 광범위하게 교차 반응성인 백신을 개발하는 기회를 제공할 수 있다. 이러한 벡터는 강력한 면역 반응을 유도하는 항원-제시 세포 (APC) 에 규정된 플라비바이러스 항원을 노출시키기 위한 피하 주사에 의해 직접 전달될 수 있다. 중요하게, Ad5 재조합 벡터는 에피솜 복제할 수 있으며 게놈을 숙주 세포 게놈에 삽입하지 않을 수 있어, 그에 따라 필수적 세포 유전자 기능의 파괴 및 유전자 통합이 없음을 보장한다 (Imler JL Vaccine. 1995 13:1143-51; Ertl HC, Xiang Z J Immunol. 1996 156:3579-82; Amalfitano, A Curr Opin Mol Ther. 2003 5:362-6).
불행히도, 현재 Ad5-기반 벡터에 대면하는 주요 도전과제는 Ad5 에 대한 기존 면역력의 존재이다. 대부분의 사람들은 Ad5 에 대해 중화 Ab 를 나타내는데, 이는 인간 백신에 대해 가장 광범위하게 사용되는 하위유형이며, 연구된 사람들의 ⅔ 가 Ad5 에 대한 림프-증식성 반응을 갖는다 (Chirmule N et al. Gene Ther. 1999 6:1574-83). 이러한 면역력은 플라비바이러스 백신에 대한 플랫폼으로서 현재 초기 유전자 1 (E1) 부위-결실 Ad5 벡터 (Ad5 [E1-]) 의 사용을 방지할 수 있다. Ad5 면역력은 면역화, 특히 재조합 Ad5 벡터로의 재면역화를 저해하며, 제 2 질환 항원에 대한 백신의 면역화 역시 불가능하게 할 수 있다. 기존 Ad5 벡터 면역력의 문제점을 극복하는 것은 강도높은 조사의 주제가 되어 왔다. 그러나, 다른 Ad 혈청형 또는 심지어 Ad 의 비-인간 형태의 사용은 중요한 케모카인 및 사이토카인의 변형된 생산, 유전자 조절장애를 직접적으로 일으킬 수 있으며, 상당히 상이한 생물학적 분배 (biodistribution) 및 조직 독성을 갖는다 (Appledorn DM et al. Gene Ther. 2008 15:885-901; Hartman ZC et al. Virus Res. 2008 132:1-14). 이러한 접근방식이 초기 면역화에서 성공한다 해도, 후속 백신화는 Ad 하위유형에 대한 유도된 면역 반응으로 인해 문제가 있을 수 있다. Ad 면역화 장벽을 막고 현재 Ad5 [E1-] 벡터에 대한 불리한 조건을 피하는 것을 돕기 위해, 상기 기재한 개선된 Ad5 벡터 플랫폼을 구축하였다.
또한, Ad5 [E1-, E2b-] 벡터는 현재 Ad5 [E1-] 벡터와 비교하여 주사 후 첫 24 내지 72 시간 동안 감소된 염증을 나타낼 수 있다 (Nazir SA, Metcalf JP J Investig Med. 2005 53:292-304; Schaack J Proc Natl Acad Sci U S A. 2004 101:3124-9; Schaack J Viral Immunol. 2005 18:79-88). Ad5 [E1-, E2b-] 후기 유전자 발현의 결여는 감염된 세포가 항-Ad5 활성에 덜 취약하게 만들며, 이들이 연장된 시간 동안 이식유전자를 생산하고 발현하게 한다 (Gabitzsch ES, Jones FR J Clin Cell Immunol. 2011 S4:001. doi:10.4172/2155-9899. S4-001; Hodges BL J Gene Med. 2000 2:250-9). Ad5 [E1-, E2b-] 바이러스 단백질에 대한 감소한 염증 반응 및 그로 인한 기존 Ad5 면역력의 회피는 APC 세포를 감염시키는 Ad5 [E1-, E2b-] 의 능력을 증가시켜, 접종자의 더 큰 면역화를 초래할 수 있다. 추가로, 다른 세포 유형의 증가한 감염은 강력한 CD4+ 및 CD8+ T 세포 반응에 필요한 높은 수준의 항원 제시를 제공하여, 기억 T 세포 발달을 일으킬 수 있다. 따라서 E2b 부위의 결실이, 기존 Ad5 면역력의 존재 하에서도 Ad5 단백질에 대한 면역 반응을 최소화하면서 특정 항원에 대한 강력한 면역 반응을 이끌어내는 것과 같은 유리한 면역 특성을 부여할 수 있다는 것이 나타난다.
결과는, 기존 및/또는 Ad5 벡터-유도 면역력을 극복하고 유의한 보호성 면역 반응을 유도하는 재조합 Ad5 [E1-, E2b-] 플랫폼-기반 백신의 능력을 입증하였다. 이러한 연구는 새로운 Ad5 [E1-, E2b-] 벡터-기반 백신이 1) 현재 Ad5 [E1-] 벡터에 비교하여 상당히 더 높은 CMI 반응을 유도할 수 있고, 2) 강력한 CMI 반응을 유도하도록 설계된 다수 면역화 용법에 이용될 수 있고, 3) 기존 Ad5 면역력을 갖는 동물에서 유의한 항원-특이적 CMI 반응을 유도할 수 있고, 4) 높은 수준의 기존 Ad5 면역력을 갖는 동물에서 감염성 질환에 대해 유의한 항-종양 반응 또는 보호를 유도할 수 있다는 것을 확립하였다.
특정 양태는 플라비바이러스 표적 항원에 대한 면역 반응을 생성시키기 위한 방법 및 아데노바이러스 벡터에 관한 것이다. 특히, 특정 양태는 개선된 Ad-기반 백신을 제공할 수 있어, 하나 초과의 항원성 표적 독립체에 대한 다수 백신화가 달성될 수 있다. 중요하게는, 백신화는 Ad 에 대한 기존 면역력의 존재 하에 수행될 수 있고/있거나 본원에 기재된 바와 같은 아데노바이러스 벡터 또는 다른 아데노바이러스 벡터로 이전에 다수회 면역화된 대상에게 투여될 수 있다. 아데노바이러스 벡터는, 다발관절염 또는 뇌염을 일으키는 플라비바이러스에 대한 광범위한 항체 및 세포-매개 면역 반응의 생산을 비제한적으로 포함하는 다양한 플라비바이러스 항원에 대한 면역 반응이 유도되도록 대상에게 다수회 투여될 수 있다.
특정 양태는 미국 특허 번호 6,063,622; 6,451,596; 6,057,158 및 6,083,750 (모두 그 전체가 본원에 참조로 포함됨) 에서 기재된 것들과 같은 E2b 결실 아데노바이러스 벡터의 용도를 제공한다. '622 특허에서 기재된 바와 같이, 바이러스 단백질 발현을 더 손상시키기 위해, 그리고 또한 복제 적격 Ad (RCA) 의 생성 빈도를 감소시키기 위해, E2b 부위에서 결실을 함유하는 아데노바이러스 벡터를 특정 양태에서 제공할 수 있다. 이러한 E2b 결실 아데노바이러스 벡터의 전파는 결실된 E2b 유전자 산물을 발현하는 세포주를 필요로 한다.
추가 양태에서, 패키징 세포주가 제공될 수 있다; 예를 들어 HEK-203 세포주에서 유래한 E.C7 (공식적으로 C-7 로 지칭) (Amalfitano A et al. Proc Natl Acad Sci USA 1996 93:3352-56; Amalfitano A et al. Gene Ther 1997 4:258-63).
또한, E2b 유전자 산물, DNA 폴리머라아제 및 말단전 (preterminal) 단백질은 E.C7, 또는 유사한 세포에서 E1 유전자 산물과 함께 구성적으로 발현될 수 있다. Ad 게놈으로부터 생산 세포주로의 유전자 세그먼트의 이송은 즉각적인 이득을 가질 수 있다: (1) 이론적으로 결실될 수 있는 DNA 폴리머라아제 및 말단전 단백질의 조합된 코딩 서열이 4.6 kb 에 이르므로, 재조합 DNA 폴리머라아제 및 말단전 단백질-결실 아데노바이러스 벡터의 증가한 운반 능력; 및 (2) 둘 이상의 독립적 재조합 이벤트가 RCA 를 생성시키는데 필요하므로, RCA 생성의 감소한 가능성.
따라서, E1, Ad DNA 폴리머라아제 및 말단전 단백질 발현 세포주는 오손 헬퍼 바이러스에 대한 필요성 없이 13 kb 에 이르는 운반 능력을 갖는 아데노바이러스 벡터를 전파시킬 수 있다 (Mitani et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1995 92:3854; Hodges et al. J Gene Med 2000 2:250-259; Amalfitano and Parks Curr Gene Ther 2002 2:111-133).
또한, 바이러스 생활 주기에 중요한 유전자가 결실되는 경우 (예를 들어, E2b 유전자), 다른 바이러스 유전자 단백질을 복제 또는 발현하기 위한 Ad 의 추가 손상이 발생할 수 있다. 이는 바이러스로 감염된 세포의 면역 인지를 감소시킬 수 있고, 외래 이식유전자 발현의 연장된 지속기간을 가능하게 할 수 있다.
그러나 E1, DNA 폴리머라아제 및 말단전 단백질 결실된 벡터의 중요한 속성은 그의 E1 및 E2b 부위로부터 각각의 단백질의 발현 불능 뿐만 아니라 대부분의 바이러스 구조 단백질의 예측된 발현 결여를 포함할 수 있다. 예를 들어, Ad 의 주요 후기 프로모터 (MLP) 는 후기 구조 단백질 L1 ~ L5 의 전사를 담당한다 (Doerfler, In Adenovirus DNA, The Viral Genome and Its Expression (Martinus Nijhoff Publishing Boston, 1986). MLP 가 Ad 게놈 복제 전에 최소한으로 활성일 수 있으나, 고도로 독성인 Ad 후기 유전자는 바이러스 게놈 복제가 발생한 후에만 MLP 로부터 주로 전사 및 번역될 수 있다 (Thomas and Mathews Cell 1980 22:523). 이러한 후기 유전자 전사의 시스 (cis)-의존적 활성화는 일반적으로, 폴리오마 및 SV-40 의 성장에 있어서와 같이, DNA 바이러스의 특질일 수 있다. DNA 폴리머라아제 및 말단전 단백질은 Ad 복제에 완전히 필요할 수 있으며 (E4 단백질 또는 IX 단백질과는 달리), 따라서 그의 결실은 아데노바이러스 벡터 후기 유전자 발현에 해로울 수 있으며 APC 와 같은 세포에서의 발현의 독성 효과가 있을 수 있다.
특정 구현예에서, 사용을 위해 고려되는 아데노바이러스 벡터는, E1 부위 및 Ad 게놈의 E2b 부위에서의 결실을 갖지만 결실된 Ad 게놈의 임의의 다른 부위는 갖지 않는 E2b 결실 아데노바이러스 벡터를 포함한다. 또 다른 구현예에서, 사용을 위해 고려되는 아데노바이러스 벡터는, Ad 게놈의 E2b 부위에서의 결실 및 E1 과 E3 부위에서의 결실을 갖지만 다른 부위는 결실되지 않는 E2b 결실 아데노바이러스 벡터를 포함할 수 있다. 추가 구현예에서, 사용을 위해 고려되는 아데노바이러스 벡터는 Ad 게놈의 E2b 부위에서의 결실 및 E1, E3 에서의 결실 및 E4 부위의 부분적 또는 완전 제거를 갖지만 다른 결실은 갖지 않는 아데노바이러스 벡터를 포함할 수 있다.
또 다른 구현예에서, 사용을 위해 고려되는 아데노바이러스 벡터는, Ad 게놈의 E2b 부위에서의 결실 및 E1 과 E4 부위에서의 결실을 갖지만 다른 결실은 갖지 않는 아데노바이러스 벡터를 포함한다. 추가적인 구현예에서, 사용을 위해 고려되는 아데노바이러스 벡터는, Ad 게놈의 E2a, E2b 및 E4 부위에서의 결실을 갖지만 다른 결실은 갖지 않는 아데노바이러스 벡터를 포함할 수 있다.
한 구현예에서, 본원에서 사용하기 위한 아데노바이러스 벡터는, 결실된 E2b 부위의 DNA 폴리머라아제 기능 및 E1 을 갖지만 다른 결실은 갖지 않는 벡터를 포함한다. 추가 구현예에서, 본원에서 사용하기 위한 아데노바이러스 벡터는, 결실된 E2b 부위의 말단전 단백질 기능 및 E1 을 갖지만 다른 결실은 갖지 않는다.
또 다른 구현예에서, 본원에서 사용하기 위한 아데노바이러스 벡터는 결실된 말단전 단백질 기능, DNA 폴리머라아제 기능 및 E1 을 갖지만 다른 결실은 갖지 않는다. 한 특정 구현예에서, 본원에서의 사용을 위해 고려되는 아데노바이러스 벡터는 적어도 일부의 E2b 부위 및 E1 부위에 대해 결실되지만, "거트" 아데노바이러스 벡터는 그렇지 않다. 이와 관련하여, 벡터는 E2b 부위의 말단전 단백질 기능 및 DNA 폴리머라아제 기능 둘 모두에 대해 결실될 수 있다.
본원에서 사용하는 바와 같이, 용어 "E2b 결실" 은 적어도 하나의 E2b 유전자 산물의 발현 및/또는 기능을 방지하도록 하는 방식으로 돌연변이되는 특정한 DNA 서열을 나타낼 수 있다. 따라서 특정 구현예에서, "E2b 결실" 은 Ad 게놈으로부터 결실 (제거) 되는 특정한 DNA 서열을 나타낼 수 있다. E2b 결실 또는 "E2b 부위 내에 결실을 함유하는" 은 Ad 게놈의 E2b 부위 내의 적어도 하나의 염기쌍의 결실을 나타낼 수 있다. 따라서 특정 구현예에서 하나 초과의 염기쌍이 결실되며, 추가 구현예에서 적어도 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140 또는 150 개의 염기쌍이 결실된다. 또 다른 구현예에서, 결실은 Ad 게놈의 E2b 부위 내의 150, 160, 170, 180, 190, 200, 250 또는 300 개 초과 염기쌍의 결실이다. E2b 결실은 적어도 하나의 E2b 유전자 산물의 발현 및/또는 기능을 방지하는 결실일 수 있으며, 따라서 E2b-특이적 단백질 일부분을 인코딩하는 엑손 내의 결실 뿐만 아니라 프로모터 및 리더 서열 내의 결실을 포함한다. 특정 구현예에서, E2b 결실은 E2b 부위의 말단전 단백질 및 DNA 폴리머라아제 중 하나 또는 둘 모두의 발현 및/또는 기능을 방지하는 결실이다. 추가 구현예에서 "E2b 결실" 은, 하나 이상의 인코딩된 단백질이 비-기능적이도록 Ad 게놈의 이 부위의 DNA 서열에서의 하나 이상의 점 돌연변이를 나타낼 수 있다. 이러한 돌연변이는 비-기능적 단백질을 초래하는 아미노산 서열에서의 변화를 일으키는 상이한 잔기로 대체되는 잔기를 포함할 수 있다.
본 개시물 판독시 당업자에 의해 이해되는 바와 같이, Ad 게놈의 다른 부위가 결실될 수 있다. 따라서 본원에서 사용하는 바와 같이, Ad 게놈의 특정 부위에서 "결실되는" 것은, 그 부위에 의해 인코딩되는 적어도 하나의 유전자 산물의 발현 및/또는 기능이 방지되도록 하는 방식으로 돌연변이되는 특정 DNA 서열을 나타낼 수 있다. 특정 구현예에서 특정 부위에서 "결실되는" 것은, 그 부위에 의해 인코딩되는 유전자 산물의 발현 및/또는 기능 (예를 들어, 말단전 단백질 기능 또는 DNA 폴리머라아제의 E2b 기능) 이 방지되도록 하는 방식으로 Ad 게놈으로부터 결실 (제거) 되는 특정 DNA 서열을 나타낼 수 있다. 특정 부위 내의 "결실" 또는 "결실을 함유하는" 은 Ad 게놈의 그 부위 내의 적어도 하나의 염기쌍의 결실을 나타낼 수 있다. 따라서 특정 구현예에서 하나 초과의 염기쌍이 결실되며, 추가 구현예에서 적어도 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140 또는 150 개의 염기쌍이 특정 부위로부터 결실된다. 또 다른 구현예에서, 결실은 Ad 게놈의 특정 부위 내의 150, 160, 170, 180, 190, 200, 250 또는 300 개 초과 염기쌍의 결실이다. 일부 구현예에서, 상기 기재된 결실 중 임의의 하나는 또한 둘 이상의 염기쌍의 전좌의 결과일 수 있다.
이러한 결실은 그 부위에 의해 인코딩되는 유전자 산물의 발현 및/또는 기능이 방지될 수 있도록 하는 것일 수 있다. 따라서 결실은 단백질 일부분을 인코딩하는 엑손 내의 결실 뿐만 아니라 프로모터 및 리더 서열 내의 결실을 포함할 수 있다. 추가 구현예에서 Ad 게놈의 특정 부위에서의 "결실" 은, 하나 이상의 인코딩된 단백질이 비-기능적이도록 Ad 게놈의 이 부위의 DNA 서열에서의 하나 이상의 점 돌연변이를 나타낼 수 있다. 이러한 돌연변이는 비-기능적 단백질을 초래할 수 있는 아미노산 서열에서의 변화를 일으키는 상이한 잔기로 대체되는 잔기를 포함할 수 있다.
하나 이상의 결실을 포함하는 아데노바이러스 벡터는 당업계에 공지된 재조합 기법을 사용하여 생성될 수 있다 (예를 들어, Amalfitano et al. J. Virol. 1998 72:926-33; Hodges, et al., J Gene Med 2000 2:250-59 참조). 당업자에 의해 인지되는 바와 같이, 사용하기 위한 아데노바이러스 벡터는 결실되었을 수 있는 임의의 필요 유전자의 산물 및 E2b 유전자 산물을 구성적으로 발현하는 적절한 패키징 세포주를 사용하여 높은 역가로 성공적으로 성장시킬 수 있다. 특정 구현예에서, E1 및 DNA 폴리머라아제 단백질 뿐만 아니라 Ad-말단전 단백질을 구성적으로 발현하는 HEK-293-유래 세포를 사용할 수 있다. 한 구현예에서, E.C7 세포는 아데노바이러스 벡터의 고역가 스톡 (stock) 을 성공적으로 성장시키는데 사용된다 (예를 들어, Amalfitano et al. J. Virol. 1998 72:926-33; Hodges et al. J Gene Med 2000 2:250-59 참조).
자가-전파 아데노바이러스로부터 중요한 유전자를 결실시키기 위해서, 표적화된 유전자에 의해 인코딩되는 단백질은 먼저 HEK-293 세포에서, 또는 유사하게, E1 단백질과 함께 동시발현될 수 있다. 따라서, 오직 구성적으로 동시발현시 비-독성인 단백질 (또는 유도적으로 발현되는 독성 단백질) 만이 이용될 수 있다. E1 및 E4 유전자의 HEK-293 세포에서의 동시발현이 입증되었다 (구성적 프로모터가 아닌 유도성 프로모터 이용) (Yeh et al. J. Virol. 1996 70:559; Wang et al. Gene Therapy 1995 2:775; 및 Gorziglia et al. J. Virol. 1996 70:4173). E1 및 단백질 IX 유전자 (비리온 구조 단백질) 가 동시발현되었으며 (Caravokyri and Leppard J. Virol. 1995 69:6627), E1, E4 및 단백질 IX 유전자의 동시발현이 또한 설명된 바 있다 (Krougliak and Graham Hum. Gene Ther. 1995 6:1575). E1 및 100k 유전자는 E1 및 프로테아제 유전자를 가지므로, 트랜스상보성 세포주에서 성공적으로 발현되었다 (Oualikene et al. Hum Gene Ther 2000 11:1341-53; Hodges et al. J. Virol 2001 75:5913-20).
E2b 결실 Ad 입자의 고역가 성장에 사용하기 위한 E1 및 E2b 유전자 산물을 동시발현하는 세포주가 미국 특허 번호 6,063,622 에 기재되어 있다. E2b 부위는 Ad 게놈 복제에 절대적으로 요구될 수 있는 바이러스 복제 단백질을 인코딩한다 (Doerfler (전술한 것), 및 Pronk et al. Chromosoma 1992 102:S39-S45). 유용한 세포주는 구성적으로 대략 140 kDa Ad-DNA 폴리머라아제 및/또는 대략 90 kDa 말단전 단백질을 발현한다. 특히, 독성 없이, E1, DNA 폴리머라아제 및 말단전 단백질의 고수준, 구성적 동시발현을 갖는 세포주 (예를 들어, E.C7) 가 다수 백신화에 사용하기 위한 Ad 의 전파에 사용하기에 바람직할 수 있다. 이들 세포주는 E1, DNA 폴리머라아제 및 말단전 단백질에 대해 결실된 아데노바이러스 벡터의 전파를 가능하게 할 수 있다.
재조합 Ad 는 당업계에서 공지된 기법을 사용하여 전파될 수 있다. 예를 들어 특정 구현예에서, E.C7 세포를 함유하는 세포 조직 플레이트를 적절한 MOI (예를 들어, 5) 에서 아데노바이러스 벡터 바이러스 스톡으로 감염시키고 37.0℃ 에서 40-96 시간 동안 인큐베이션한다. 감염된 세포를 수확하고, 10 mM Tris-Cl (pH 8.0) 에 재현탁하고, 초음파처리하고, 바이러스를 2 회 염화세슘 밀도 원심분리를 통해 정제한다. 특정 기법에서, 바이러스 함유 밴드를 Sephadex CL-6B 컬럼 (Pharmacia Biotech, Piscataway, N.J.) 상에서 탈염시키고, 수크로스 또는 글리세롤을 첨가하고, 분취액을 -80℃ 에서 저장한다. 일부 구현예에서, 바이러스는 이의 안정성을 증강시키기 위해 설계된 용액, 예컨대 A195 에 위치될 것이다 (Evans et al. J Pharm Sci 2004 93:2458-75). 스톡의 역가를 평가할 수 있다 (예를 들어, SDS 용해 후 바이러스 분취액의 260 nm 에서의 광학 밀도 측정에 의함). 또 다른 구현예에서, 전체 재조합 E2b 결실 아데노바이러스 벡터를 포함하는 선형 또는 원형인 플라스미드 DNA 를 E.C7, 또는 유사한 세포에 트랜스펙션시킬 수 있고, 바이러스 생산 증거가 존재할 때까지 (예를 들어, 세포변성 효과) 37.0℃ 에서 인큐베이션한다. 그런 다음, 이들 세포로부터의 조건화 배지를 사용하여 더 많은 E.C7, 또는 유사한 세포를 감염시켜, 정제 전에 생산된 바이러스의 양을 확장시킬 수 있다.
정제는 2 회의 염화세슘 밀도 원심분리 또는 선택적 여과에 의해 수행될 수 있다. 특정 구현예에서, 바이러스는 시판 제품 (예를 들어, Puresyn, Inc., Malvem, PA 로부터의 Adenopure) 또는 주문제작 크로마토그래피 컬럼을 사용하는 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제될 수 있다.
특정 구현예에서, 재조합 Ad 는 감염될 세포가 일정 수의 바이러스와 마주하는 것을 보장하기 위해 충분한 바이러스를 포함할 수 있다. 따라서, 재조합 Ad 의 스톡, 특히 재조합 Ad 의 RCA-무함유 스톡을 제공할 수 있다. Ad 스톡의 제조 및 분석은 당업계에 널리 공지되어 있다. 바이러스 스톡은 대체로 그들을 제조하는데 사용된 바이러스 유전자형 및 프로토콜 및 세포주에 따라, 역가가 상당히 가변적일 수 있다. 바이러스 스톡은 적어도 약 106, 107 또는 108 바이러스 입자 (VP)/㎖ 의 역가를 가질 수 있고, 이러한 많은 스톡은 더 높은 역가, 예컨대 적어도 약 109, 1010, 1011 또는 1012 VP/㎖ 을 가질 수 있다.
III. 이종 핵산
아데노바이러스 벡터는 또한 그에 대해 면역 반응을 생성시키는 것이 바람직한, 여러 관심 표적 항원, 이의 단편 또는 융합물을 인코딩하는 이종 핵산 서열을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 아데노바이러스 벡터는 면역 반응을 조절할 수 있는, 여러 단백질, 이의 융합물 또는 단편을 인코딩하는 이종 핵산 서열을 포함한다. 따라서, 특정 양태는 이종 핵산 서열을 포함하는 제 2 세대 E2b 결실 아데노바이러스 벡터를 제공한다.
이와 같이 특정 양태는, 여러 관심 플라비바이러스 표적 항원을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드로서 본원에서 또한 나타낼 수 있는 핵산 서열을 제공한다. 이와 같이 특정 양태는, 본원에서 추가로 기재한 바와 같은 임의의 공급원으로부터의 표적 항원을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드, 이러한 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터, 및 이러한 발현 벡터로 형질전환 또는 트랜스펙션된 숙주 세포를 제공한다. 용어 "핵산" 및 "폴리뉴클레오티드" 는 본원에서 본질적으로 상호교환가능하게 사용된다. 또한 당업자에게 인식되는 바와 같이, 폴리뉴클레오티드는 단일-가닥 (코딩 또는 안티센스) 또는 이중-가닥일 수 있고, DNA (게놈, cDNA 또는 합성) 또는 RNA 분자일 수 있다. RNA 분자는, 인트론을 함유하며 1:1 방식으로 DNA 분자에 상응하는 hnRNA 분자, 및 인트론을 함유하지 않는 mRNA 분자를 포함할 수 있다. 추가적인 코딩 또는 비-코딩 서열은 폴리뉴클레오티드 내에 존재할 수 있으나 존재하지 않아도 되고, 폴리뉴클레오티드는 다른 분자 및/또는 지지체 물질에 연결될 수 있으나 연결되지 않아도 된다. 본원에서 사용하는 바와 같이, 단리된 폴리뉴클레오티드는 폴리뉴클레오티드가 다른 코딩 서열로부터 실질적으로 떨어져 있다는 것을 의미할 수 있다. 예를 들어, 본원에서 사용하는 바와 같은 단리된 DNA 분자는 큰 부분의 미관련 코딩 DNA, 예컨대 대형 염색체 단편 또는 다른 기능적 유전자 또는 폴리펩티드 코딩 부위를 함유하지 않는다. 물론, 이는 본래 단리된 바와 같은 DNA 분자를 나타낼 수 있으며, 실험실에서 재조합적으로 세그먼트에 이후 첨가되는 유전자 또는 코딩 부위를 배제하지 않는다.
당업자에 의해 이해될 바와 같이, 폴리뉴클레오티드는 본원에 기재된 표적 항원, 항원의 단편, 펩티드 등을 발현하거나, 발현하도록 조정될 수 있는 게놈 서열, 게놈외 및 플라스미드-인코딩된 서열 및 더 작은 조작된 유전자 세그먼트를 포함할 수 있다. 이러한 세그먼트는 자연적으로 단리되거나, 사람의 손에 의해 합성적으로 변형될 수 있다.
폴리뉴클레오티드는 고유 (native) 서열 (즉, 표적 항원 폴리펩티드/단백질/에피토프 또는 이의 일부분을 인코딩하는 내인성 서열) 을 포함할 수 있거나, 이러한 서열의 변이체 또는 유도체를 인코딩하는 서열을 포함할 수 있다. 특정 구현예에서, 본원에서 나타내는 폴리뉴클레오티드 서열은 본원에 기재한 바와 같은 표적 항원 단백질을 인코딩한다. 일부 구현예에서, 폴리뉴클레오티드는 고유의 뉴클레오티드 서열 또는 변이체로부터 실질적으로 가변적일 수 있으나 유사한 단백질 항원을 인코딩하는 특정 세포 유형 (즉, 인간 세포주) 에서의 발현에 최적화된 신규한 유전자 서열을 나타낸다.
다른 관련 구현예에서, 본원에 기재하는 바와 같은 단백질 (예를 들어, 관심 표적 항원) 을 인코딩하는 고유 서열에 대해 실질적 동일성을 갖는 폴리뉴클레오티드 변이체, 예를 들어 본원에 기재한 방법 (예를 들어, 하기 기재한 바와 같은 표준 매개변수를 사용하는 BLAST 분석) 을 사용하여 폴리펩티드를 인코딩하는 고유 폴리뉴클레오티드 서열과 비교하여 적어도 70% 서열 동일성, 특히 적어도 75% 에서 99% 까지, 또는 그 이상의 서열 동일성을 포함하는 것들이 제공될 수 있다. 당업자는 이들 값이 코돈 퇴보성 (codon degeneracy), 아미노산 유사성, 판독 프레임 위치선정 등을 고려하여 2 개의 뉴클레오티드 서열에 의해 인코딩되는 단백질의 상응하는 동일성을 측정하기 위해 적절하게 조정될 수 있다는 것을 인식할 것이다.
특정 양태에서, 폴리뉴클레오티드 변이체는, 특히 변이체 폴리뉴클레오티드에 의해 인코딩되는 폴리펩티드의 에피토프의 면역원성 또는 이종 표적 단백질의 면역원성이 고유 폴리뉴클레오티드 서열에 의해 인코딩되는 폴리펩티드에 관하여 실질적으로 약화되지 않도록 하나 이상의 치환, 부가, 결실 및/또는 삽입을 함유할 것이다. 본원의 다른 곳에서 기재되는 바와 같이, 폴리뉴클레오티드 변이체는 표적 항원 또는 이의 단편 (예를 들어, 에피토프) 의 변이체를 인코딩할 수 있으며, 여기서 변이체 폴리펩티드 또는 이의 단편 (예를 들어, 에피토프) 이 항원-특이적 항혈청 및/또는 T-세포주 또는 클론과 반응하는 성향은 고유 폴리펩티드에 관하여 실질적으로 약화되지 않는다. 용어 "변이체" 는 또한 이종발생 기원의 상동 유전자를 포함할 수 있다.
특정 양태는, 본원에 기재하는 바와 같은, 표적 단백질 항원을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩하는 적어도 약 5 에서 1000 개까지 또는 그 이상의 인접 뉴클레오티드 뿐만 아니라, 그 사이의 모든 중간 길이를 포함하거나 이것으로 이루어지는 폴리뉴클레오티드를 제공할 수 있다. 이러한 문맥에서 "중간 길이" 는 인용된 값 사이의 임의의 길이, 예컨대, 200-500; 500-1,000 등의 모든 정수를 비롯하여, 16, 17, 18, 19 등; 21, 22, 23 등; 30, 31, 32 등; 50, 51, 52, 53 등; 100, 101, 102, 103 등; 150, 151, 152, 153 등을 의미할 수 있다는 것이 용이하게 이해될 것이다. 본원에 기재하는 바와 같은 폴리뉴클레오티드 서열은 본원에 기재하는 바와 같은 폴리펩티드, 예컨대 에피토프 또는 이종 표적 단백질을 인코딩하는 고유 서열에서 발견되지 않는 추가적인 뉴클레오티드에 의해 하나 또는 양 말단에서 확장될 수 있다. 이러한 추가적인 서열은 개시된 서열의 하나의 말단에서 또는 개시된 서열의 양 말단에서, 1 에서 20 개까지의 뉴클레오티드 또는 그 이상으로 이루어질 수 있다.
특정 구현예에서, 폴리뉴클레오티드 또는 이의 단편은, 코딩 서열 그 자체의 길이와는 관계없이, 그들의 전체 길이가 상당히 가변적일 수 있도록, 다른 DNA 서열, 예컨대 프로모터, 발현 조절 서열, 폴리아데닐화 신호, 추가적인 제한 효소 위치, 다중 클로닝 위치, 기타 코딩 세그먼트 등과 조합될 수 있다. 따라서 거의 모든 길이의 핵산 단편이 이용될 수 있으며, 총 길이는 의도된 재조합 DNA 프로토콜에서의 제조 및 사용의 용이성에 의해 제한될 수 있다는 것이 고려된다. 예를 들어, 약 1000, 2000, 3000, 4000, 5000, 6000, 7000, 8000, 9000, 10,000, 약 500, 약 200, 약 100, 약 50 개 염기쌍 등의 총 길이 (모든 중간 길이 포함) 의 예시적 폴리뉴클레오티드 세그먼트가 많은 실행에 있어서 유용한 것으로 고려된다.
폴리뉴클레오티드 서열을 비교하는 경우, 2 개 서열 중의 뉴클레오티드의 서열이 하기 기재되는 바와 같이 최대 대응 (correspondence) 으로 정렬되었을 때 동일하다면, 2 개 서열은 "동일한" 것으로 언급될 수 있다. 2 개 서열 사이의 비교는 서열 유사성의 국부적 부위를 확인하고 비교하기 위해 비교 윈도우 (comparison window) 에 대해 서열을 비교함으로써 수행될 수 있다. 본원에서 사용하는 바와 같이, "비교 윈도우" 는 적어도 약 20 개의 인접 위치, 통상 30 내지 약 75, 40 내지 약 50 개의 세그먼트를 나타낼 수 있으며, 여기서 서열은 2 개 서열을 최적으로 정렬한 후 동일한 수의 인접 위치의 참조 서열에 대해 비교될 수 있다.
비교를 위한 서열의 최적 정렬은 디폴트 매개변수를 사용하여 생물정보학 소프트웨어 (DNASTAR, Inc., Madison, WI) 의 Lasergene suite 에서의 Megalign 프로그램을 사용하여 수행될 수 있다. 이 프로그램은 하기 참고문헌에 기재된 여러 정렬 도식을 구현한다: Dayhoff MO (1978) A model of evolutionary change in proteins - Matrices for detecting distant relationships. In Dayhoff MO (ed.) Atlas of Protein Sequence and Structure, National Biomedical Research Foundation, Washington DC Vol. 5, Suppl. 3, pp. 345- 358; Hein J Unified Approach to Alignment and Phylogenes, pp. 626-645 (1990); Methods in Enzymology vol.183, Academic Press, Inc., San Diego, CA; Higgins DG and Sharp PM CABIOS 1989 5:151-53; Myers EW and Muller W CABIOS 1988 4:11-17; Robinson ED Comb. Theor 1971 11A 05; Saitou N, Nei M MoI. Biol. Evol. 1987 4:406-25; Sneath PHA and Sokal RR Numerical Taxonomy - the Principles and Practice of Numerical Taxonomy, Freeman Press, San Francisco, CA (1973); Wilbur WJ and Lipman DJ Proc. Natl. Acad., Sci. USA 1983 80:726-30.
대안적으로, 비교를 위한 서열의 최적 정렬은 [Smith and Waterman, Add. APL. Math 1981 2:482] 의 국부적 동일성 알고리즘에 의해, [Needleman and Wunsch J. MoI. Biol. 1970 48:443] 의 동일성 정렬 알고리즘에 의해, [Pearson and Lipman, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1988 85:2444] 의 유사성 방법 조사에 의해, 이들 알고리즘의 컴퓨터화된 실행에 의해 (GAP, BESTFIT, BLAST, FASTA 및 TFASTA (Wisconsin Genetics Software Package, Genetics Computer Group (GCG), 575 Science Dr., Madison, WI)), 또는 검사 (inspection) 에 의해 수행될 수 있다.
서열 동일성 백분율 및 서열 유사성을 측정하는데 적합한 알고리즘의 한 예는 BLAST 및 BLAST 2.0 알고리즘이며, 이는 각각 [Altschul et al., Nucl. Acids Res. 1977 25:3389-3402] 및 [Altschul et al. J. MoI. Biol. 1990 215:403-10] 에 기재되어 있다. BLAST 및 BLAST 2.0 는, 예를 들어 폴리뉴클레오티드에 대한 서열 동일성 백분율을 측정하기 위해, 본원에 기재된 매개면수로, 사용될 수 있다. BLAST 분석을 수행하기 위한 소프트웨어는 생물정보센터 (National Center for Biotechnology Information) 를 통해 공개적으로 이용가능하다. 한 예시적 예에서, 누적 점수는 뉴클레오티드 서열에 대해, 매개변수 M (매칭 잔기 쌍에 대한 리워드 점수; 항상 >0 임) 및 N (미스매칭 잔기에 대한 패널티 점수; 항상 <0 임) 을 사용하여 계산될 수 있다. 각 방향에서의 단어 히트 (word hit) 의 확장은 다음과 같은 경우에 중단된다: 누적 정렬 점수가 이의 최대 달성된 값으로부터 양 X 만큼 떨어지는 경우; 누적 점수가 하나 이상의 음 (negative)-득점 잔기 정렬의 축적으로 인해, 0 이하로 되는 경우; 또는 한쪽 서열의 말단에 도달하는 경우. BLAST 알고리즘 매개변수 W, T 및 X 는 정렬의 민감성 및 속도를 결정한다. BLASTN 프로그램 (뉴클레오티드 서열에 대한) 은 디폴트로서 11 의 단어 길이 (W) 및 10 의 예상값 (E) 를 사용하고, BLOSUM62 득점 매트릭스 (Henikoff and Henikoff, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1989 89:10915 참조) 정렬은, 50 의 (B), 10 의 예상값 (E), M=5, N=-4 및 둘 모두의 가닥의 비교를 사용한다.
특정 양태에서, "서열 동일성의 백분율" 은 적어도 20 개 위치의 비교 윈도우에 대해 2 개의 최적으로 정렬된 서열을 비교함으로써 결정되며, 이때 비교 윈도우에서의 폴리뉴클레오티드 서열의 일부분은 2 개 서열의 최적 정렬을 위해, 참조 서열 (부가 또는 결실을 포함하지 않음) 과 비교하여, 20% 이하, 통상 5 내지 15%, 또는 10 내지 12% 의 부가 또는 결실 (즉, 갭) 을 포함할 수 있다. 백분율은, 동일한 핵산 염기가 둘 모두의 서열에서 발생하는 위치의 수를 측정하여 매칭된 위치의 수를 산출하고, 매칭된 위치의 수를 참조 서열 중의 위치의 총 수로 나누고 (즉, 윈도우 크기), 결과에 100 을 곱하여 서열 동일성의 백분율을 산출함으로써 계산될 수 있다.
유전 코드의 퇴보성의 결과로서, 본원에 기재하는 바와 같은 관심 특정 항원 또는 이의 단편을 인코딩하는 많은 뉴클레오티드 서열이 존재할 수 있다는 것이 당업자에 의해 이해될 것이다. 이러한 폴리뉴클레오티드 중 일부는 임의의 고유 유전자의 뉴클레오티드 서열에 대해 최소의 상동성을 가질 수 있다. 그럼에도 불구하고, 코돈 사용 빈도에서의 차이로 인해 가변적인 폴리뉴클레오티드가 특정 양태에서 구체적으로 고려된다. 또한, 본원에서 제공되는 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하는 유전자의 대립유전자가 또한 고려된다. 대립유전자는 뉴클레오티드의 하나 이상의 돌연변이, 예컨대 결실, 부가 및/또는 치환의 결과로서 변형될 수 있는 내인성 유전자이다. 생성 mRNA 및 단백질은 변경된 구조 또는 기능을 가질 수 있으나 갖지 않을 수 있다. 대립유전자는 표준 기법 (예컨대 하이브리드화, 증폭 및/또는 데이터베이스 서열 비교) 을 사용하여 확인될 수 있다.
따라서 또 다른 구현예에서, 돌연변이유발 접근방식, 예컨대 위치-특이적 돌연변이유발은, 본원에 기재되는 바와 같은 표적 항원 서열 또는 이의 단편의 변이체 및/또는 유도체의 제조에 이용된다. 이러한 접근방식에 의해, 폴리펩티드 서열에서의 특정 변형은 이들을 인코딩하는 근원 폴리뉴클레오티드의 돌연변이유발을 통해 이루어질 수 있다. 이들 기법은 예를 들어, 하나 이상의 뉴클레오티드 서열 변화를 폴리뉴클레오티드에 도입함으로써, 전술한 고려사항 중 하나 이상을 포함시키는, 서열 변이체를 제조 및 시험하는 간단한 접근방식을 제공할 수 있다.
위치-특이적 돌연변이유발은 횡단되는 결실 접합부의 양 측 상에 안정한 듀플렉스가 형성되도록 충분한 크기의 프라이머 서열 및 서열 복잡성을 제공하기 위한, 원하는 돌연변이의 DNA 서열을 인코딩하는 특정 올리고뉴클레오티드 서열 뿐만 아니라 충분한 수의 인접 뉴클레오티드의 사용을 통한 돌연변이체의 생산을 허용할 수 있다. 돌연변이는 폴리뉴클레오티드 그 자체의 특성을 개선, 변경, 감소, 변형 또는 다르게는 변화시키기 위해, 및/또는 인코딩된 폴리펩티드의 특성, 활성, 조성, 안정성 또는 일차 서열을 변경시키기 위해, 선택된 폴리뉴클레오티드 서열에서 이용될 수 있다.
폴리펩티드를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드 세그먼트 또는 단편은 자동화 올리고뉴클레오티드 합성기를 사용하여 통상 실시되는 바와 같이, 예를 들어, 화학적 수단에 의해 단편을 직접 합성함으로써 용이하게 제조될 수 있다. 또한, 단편은 핵산 재생산 기술, 예컨대 미국 특허 번호 4,683,202 의 PCR™ 기술의 적용에 의해, 재조합체 생산을 위해 재조합 벡터에 선택된 서열을 도입함으로써, 그리고 분자 생물학 분야의 당업자에게 일반적으로 공지된 다른 재조합 DNA 기술에 의해 수득될 수 있다 (예를 들어, Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley and Sons, NY, NY 참조).
본원에 기재되는 바와 같은, 원하는 표적 항원 폴리펩티드 또는 이의 단편, 또는 상기 임의의 것을 포함하는 융합 단백질을 발현하기 위해, 폴리펩티드, 또는 기능적 등가물을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열을, 당업계에 공지된 재조합 기법을 사용하여 본원의 다른 곳에서 기재되는 바와 같은 적절한 Ad 에 삽입할 수 있다. 적절한 아데노바이러스 벡터는 삽입된 코딩 서열의 전사 및 번역을 위한 필요 요소 및 임의의 원하는 링커를 함유할 수 있다. 당업자에게 널리 공지되어 있는 방법은 관심 폴리펩티드를 인코딩하는 서열 및 적절한 전사 및 번역 제어 요소를 함유하는 이러한 아데노바이러스 벡터를 구축하는데 사용될 수 있다. 이러한 방법은 시험관내 재조합 DNA 기법, 합성 기법 및 생체내 유전자 재조합을 포함할 수 있다. 이러한 기법은 예를 들어, [Amalfitano et al. J. Virol. 1998 72:926-33; Hodges et al. J Gene Med 2000 2:250-259; Sambrook J et al. (1989) Molecular Cloning, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press, Plainview, N.Y., 및 Ausubel FM et al. (1989) Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, New York. N.Y] 에 기재되어 있다.
다양한 벡터/숙주 시스템이 폴리뉴클레오티드 서열을 함유하고 생산하는데 이용될 수 있다. 이들은 비제한적으로, 미생물 예컨대 재조합 박테리오파지, 플라스미드 또는 코스미드 DNA 벡터로 형질전환된 박테리아; 효모 벡터로 형질전환된 효모; 바이러스 벡터 (예를 들어, 배큘로바이러스) 로 감염된 곤충 세포 시스템; 바이러스 벡터 (예를 들어, 꽃양배추 모자이크 바이러스, CaMV; 담배 모자이크 바이러스, TMV) 또는 박테리아 벡터 (예를 들어, Ti 또는 pBR322 플라스미드) 로 형질전환된 식물 세포 시스템; 또는 동물 세포 시스템을 포함할 수 있다.
아데노바이러스 벡터에 존재하는 "제어 요소" 또는 "조절 서열" 은, 전사 및 번역을 수행하기 위해 숙주 세포 단백질과 상호작용하는 벡터의 이들 비-번역 부위 - 인핸서, 프로모터, 5' 및 3' 미번역 부위 - 일 수 있다. 이러한 요소는 그들의 강도 및 특이성이 가변적일 수 있다. 이용되는 벡터 시스템 및 숙주에 따라, 구성적 및 유도성 프로모터를 포함하는 임의의 수의 적합한 전사 및 번역 요소가 사용될 수 있다. 예를 들어, 관심 폴리펩티드를 인코딩하는 서열은 후기 프로모터 및 삼부 (tripartite) 리더 서열로 이루어지는 Ad 전사/번역 복합체에 라이게이션될 수 있다. 바이러스 게놈의 비-필수 E1 또는 E3 부위 내 삽입은 감염된 숙주 세포에서 폴리펩티드를 발현할 수 있는 생존가능 바이러스를 수득하는데 사용될 수 있다 (Logan J and Shenk T (1984) Proc. Natl. Acad. Sci 1984 87:3655-59). 추가로, 전사 인핸서, 예컨대 라우스 육종 바이러스 (RSV) 인핸서가, 포유동물 숙주 세포에서 발현을 증가시키는데 사용될 수 있다. 전사 인핸서는 1 개의 요소, 적어도 2 개의 요소, 적어도 3 개의 요소, 적어도 4 개의 요소, 적어도 5 개의 요소 또는 적어도 6 개의 요소를 포함할 수 있다.
특정 개시 신호는 또한 관심 폴리펩티드를 인코딩하는 서열의 보다 효과적인 번역을 달성하는데 사용될 수 있다. 이러한 신호는 ATG 개시 코돈 및 인접 서열을 포함한다. 폴리펩티드를 인코딩하는 서열, 그의 개시 코돈 및 업스트림 서열이 적절한 발현 벡터에 삽입되는 경우, 추가적인 전사 또는 번역 제어 신호는 필요하지 않을 수 있다. 그러나, 오직 코딩 서열 또는 이의 일부분만 삽입되는 경우, ATG 개시 코돈을 포함하는 외인성 번역 제어 신호가 제공될 수 있다. 또한, 개시 코돈은 전체 삽입물의 번역이 보장되도록 올바른 판독 프레임 내에 있을 수 있다. 외인성 번역 요소 및 개시 코돈은 천연 및 합성 둘 모두의, 다양한 기원의 것일 수 있다. 발현 효율은 사용되는 특정 세포 시스템에 대해 적절한 인핸서, 예컨대 문헌에 기재된 것들 (Scharf D. et al. Results Probl. Cell Differ. 1994 20:125-62) 의 포함에 의해 증강될 수 있다. 전사 또는 번역에 대한 특정 종결 서열은 또한 선택된 폴리펩티드를 인코딩하는 서열의 효과적인 번역을 달성하기 위해 통합될 수 있다.
생성물에 특이적인 폴리클로날 또는 모노클로날 항체를 사용하는, 폴리뉴클레오티드-인코딩된 생성물 (예를 들어, 관심 표적 항원) 의 발현을 검출 및 측정하기 위한 다양한 프로토콜은 당업계에 공지되어 있다. 그 예는 효소 결합 면역흡착 검정 (ELISA), 방사능면역검정 (RIA) 및 형광 활성화 세포 분류 (FACS) 를 포함할 수 있다. 제공된 폴리펩티드 상의 2 개의 비-간섭 에피토프에 대해 반응성인 모노클로날 항체를 이용하는 2 개 위치, 모노클로날-기반 면역검정이 일부 적용에 사용될 수 있으나, 경쟁적 결합 검정이 또한 이용될 수 있다. 이들 검정 및 다른 검정은, 다른 곳 중에서도, [Hampton R et al. 1990; Serological Methods, a Laboratory Manual, APS Press, St Paul. Minn.] 및 [Maddox DE et al. J. Exp. Med. 1983 758:1211-16] 에 기재되어 있다. 아데노바이러스 벡터는 여러 관심 플라비바이러스 항원을 인코딩하는 핵산 서열을 포함할 수 있다.
특정 구현예에서, 원하는 표적 항원의 발현을 증가시키는 요소가 본원에 기재된 아데노바이러스 벡터의 핵산 서열에 통합된다. 이러한 요소는 내부 리보솜 결합 위치를 포함한다 (IRES; Wang and Siddiqui Curr. Top. Microbiol. Immunol 1995 203:99; Ehrenfeld and Semler Curr. Top. Microbiol. Immunol. 1995 203:65; Rees et al., Biotechniques 1996 20:102; Sugimoto et al. Biotechnology 1994 2:694). IRES 는 번역 효율을 증가시킬 수 있다. 뿐만 아니라, 다른 서열은 발현을 증강시킬 수 있다. 일부 유전자에 대해, 특히 5' 말단에 있는 서열은 전사 및/또는 번역을 저해할 수 있다. 이러한 서열은 헤어핀 구조를 형성할 수 있는 팔린드롬 (palindrome) 일 수 있다. 전달되는 핵산 중 임의의 이러한 서열은 결실될 수 있거나 결실되지 않을 수 있다.
전사체 또는 전사된 산물의 발현 수준은 발현에 영향을 주는 서열을 확인하거나 알아내기 위해 검정될 수 있다. 전사체 수준은, 노던 블롯 하이브리드화, RNase 프로브 보호 등을 포함하는 임의의 공지된 방법에 의해 검정될 수 있다. 단백질 수준은, ELISA 를 포함하는 임의의 공지된 방법에 의해 검정될 수 있다. 당업자에 의해 인식되는 바와 같이, 이종 핵산 서열을 포함하는 아데노바이러스 벡터는 당업계에 공지된 재조합 기법, 예컨대 [Maione et al. Proc Natl Acad Sci USA 2001 98:5986-91; Maione et al. Hum Gene Ther 2000 1:859-68; Sandig et al. Proc Natl Acad Sci USA, 2000 97:1002-07; Harui et al. Gene Therapy 2004 11:1617-26; Parks et al. Proc Natl Acad Sci USA 1996 93:13565-570; Dello Russo et al. Proc Natl Acad Sci USA 2002 99:12979-984; Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley and Sons, NY, NY] 에 기재된 기법을 사용하여 생성될 수 있다.
상기 주목한 바와 같이, 아데노바이러스 벡터는 여러 플라비바이러스 표적 단백질 또는 관심 항원을 인코딩하는 핵산 서열을 포함할 수 있다. 이와 관련하여, 벡터는 1 내지 4 개 또는 그 이상의 상이한 관심 표적 항원을 인코딩하는 핵산을 함유할 수 있다. 표적 항원은 전장 단백질일 수 있거나, 이의 단편 (예를 들어, 에피토프) 일 수 있다. 아데노바이러스 벡터는 하나의 관심 표적 단백질로부터의 다수의 단편 또는 에피토프를 인코딩하는 핵산 서열을 함유할 수 있거나, 수많은 상이한 관심 표적 플라비바이러스 항원 단백질로부터의 하나 이상의 단편 또는 에피토프를 함유할 수 있다.
일부 양태에서, 핵산 서열은 복수의 플라비바이러스 표적 항원을 인코딩한다. 복수의 플라비바이러스 표적 항원을 인코딩하는 핵산 서열은 각각 표적 항원에 상응하는 복수의 유전자 삽입물을 포함할 수 있으며, 이때 각각의 유전자 삽입물은 자가-절단 2A 펩티드를 인코딩하는 핵산 서열에 의해 분리된다. 일부 양태에서, 자가-절단 2A 펩티드 (즉, 절단가능 링커) 는 돼지 테스코바이러스-1 또는 토세아 아시그나 바이러스 등에서 유래된다.
절단가능 링커의 예는 2A 링커 (예를 들어, T2A), 2A-유사 링커 또는 이의 기능적 등가물 및 이의 조합을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 링커는 피코르나바이러스 2A-유사 링커, 돼지 테스코바이러스 (P2A), 토세아 아시그나 바이러스 (T2A) 의 CHYSEL 서열, 또는 이의 조합, 변이체 및 기능적 등가물을 포함한다.
특정 구현예에서, 면역원성 단편은 MHC 클래스 I 또는 클래스 II 분자에 결합한다. 본원에서 사용하는 바와 같이, 면역원성 단편은, 이러한 결합이 당업계에 공지된 임의의 검정을 사용하여 검출가능하다면, MHC 클래스 I 또는 클래스 II 분자에 "결합한다" 고 언급될 수 있다. 예를 들어, 폴리펩티드가 MHC 클래스 I 에 결합하는 능력은 125I 표지된 β2-마이크로글로불린 (β2m) 의 MHC 클래스 I/β2m/펩티드 이종삼량체성 복합체 내로의 통합을 촉진시키는 능력을 모니터링함으로써 간접적으로 평가될 수 있다 (Parker et al., J. Immunol. 752:163, 1994 참조). 대안적으로, 당업계에 공지되어 있는 기능적 펩티드 경쟁 검정을 이용할 수 있다. 폴리펩티드의 면역원성 단편은 일반적으로 널리 공지된 기법, 예컨대 [Paul, Fundamental Immunology, 3rd ed., 243-247 (Raven Press, 1993)] 및 이에 인용된 참고문헌에 요약된 기법을 사용하여 확인될 수 있다. 면역원성 단편을 확인하기 위한 대표적 기법은, 항원-특이적 항혈청 및/또는 T-세포주 또는 클론과 반응하는 능력에 대한 폴리펩티드의 스크리닝을 포함한다. 특정 표적 폴리펩티드의 면역원성 단편은 (예를 들어, ELISA 및/또는 T-세포 반응성 검정에서) 전장 표적 폴리펩티드의 반응성보다 실질적으로 낮지 않은 수준에서 이러한 항혈청 및/또는 T-세포와 반응하는 단편일 수 있다. 즉, 면역원성 단편은 전장 폴리펩티드의 반응성과 유사하거나 더 큰 수준에서 이러한 검정 내에서 반응할 수 있다. 이러한 스크리닝은 일반적으로, 당업자에게 널리 공지된 방법, 예컨대 [Harlow and Lane, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, 1988] 에서 기재된 방법을 사용하여 수행될 수 있다.
표적 항원은 임의의 플라비바이러스에서 유래하는 항원을 포함할 수 있으나 이에 제한되지는 않는다. 표적 항원은 본원에 기재된 임의의 감염성 플라비바이러스에 의해 생산된 단백질, 예컨대 C, E, prM, M, NS1, NS2A, NS2B, NS3, NS4A, NS4B 및 NS5 를 포함할 수 있다. 본원에서 사용하는 바와 같이, "감염원" 은 숙주를 감염시킬 수 있는 임의의 종일 수 있다. 감염원은 예를 들어, 플라비바이러스 속 내의 임의의 바이러스를 포함할 수 있다.
아데노바이러스 벡터는 또한 표적 항원의 면역원성을 증가시키는 단백질을 인코딩하는 핵산 서열을 포함할 수 있다. 이와 관련하여, 이러한 단백질을 함유하는 아데노바이러스 벡터로의 면역화 후 생산된 단백질은, 관심 표적 항원의 면역원성을 증가시키는 단백질에 융합된 관심 표적 항원을 포함하는 융합 단백질일 수 있다.
IV. 병용 요법
특정 구현예는 감염성 질환의 치료 및 예방을 위한 병용 면역요법 및 백신 조성물을 제공한다. 일부 구현예는 감염성 질환과 같은 복합 질환에 대한 증강된 치료 반응을 위한 병용 다중-표적화 백신, 면역요법 및 방법을 제공한다. 병용 요법의 각 성분은 Zika 감염 또는 임의의 플라비바이러스에 의한 감염의 예방을 위한 백신 조성물에 독립적으로 포함될 수 있다.
"치료" 는 본 개시물의 백신의 치료학적 유효 용량을 대상에게 투여하는 것을 나타낼 수 있다. 치료는 약학 조성물로 대상에게 투여될 수 있다. 대상은 또한 치료시에 건강하거나 질환이 없을 수 있으며, 이 경우, 치료는 예방적 백신화로서 나타낼 수 있다. 대상은 치료시에 질환 상태로 고통을 겪을 수 있으며, 이 경우, 치료는 예방적 백신화로서 나타낼 수 있다.
"대상" 은 인간, 비-인간 영장류 (예를 들어, 레수스 또는 기타 유형의 마카크), 마우스, 돼지, 말, 당나귀, 소, 양, 랫트 및 가금류를 비제한적으로 포함하는 임의의 동물을 나타낼 수 있다. "대상" 은 본원에서 "개체" 또는 "환자" 와 상호교환가능하게 사용될 수 있다.
일부 양태에서, 벡터는 적어도 하나의 항원을 포함한다. 일부 양태에서, 벡터는 적어도 2 개의 항원을 포함한다. 일부 양태에서, 백신 제형은 1:1 비의 벡터 대 항원을 포함한다. 일부 양태에서, 백신은 1:2 비의 벡터 대 항원을 포함한다. 일부 양태에서, 백신은 1:3 비의 벡터 대 항원을 포함한다. 일부 양태에서, 백신은 1:4 비의 벡터 대 항원을 포함한다. 일부 양태에서, 백신은 1:5 비의 벡터 대 항원을 포함한다. 일부 양태에서, 백신은 1:6 비의 벡터 대 항원을 포함한다. 일부 양태에서, 백신은 1:7 비의 벡터 대 항원을 포함한다. 일부 양태에서, 백신은 1:8 비의 벡터 대 항원을 포함한다. 일부 양태에서, 백신은 1:9 비의 벡터 대 항원을 포함한다. 일부 양태에서, 백신은 1:10 비의 벡터 대 항원을 포함한다.
일부 양태에서, 백신은 병용 백신이며, 여기서 백신은 적어도 단일한 항원을 각각 함유하는 적어도 2 개의 벡터를 포함한다.
상이한 항원의 혼합물이 대상에서 동일하거나 상이한 벡터로부터 동시에 투여 또는 발현되는 경우, 이들은 서로 경쟁할 수 있다. 그 결과, 병용 면역요법 또는 백신 중 상이한 농도 및 비의 발현된 항원을 포함하는 제형이 평가되고 대상 또는 대상의 군에 대해 맞추어져, 투여 후 발생하는 효과적이고 지속된 면역 반응이 보장될 수 있다.
다수의 항원을 포함하는 조성물은 다양한 비로 존재할 수 있다. 예를 들어, 하나 초과의 벡터를 갖는 제형은 다양한 비를 가질 수 있다. 예를 들어, 면역요법 또는 백신은 1:1, 1:2, 1:3, 1:4, 1:5, 1:6, 1:7, 1:8, 1:9, 1:10, 1:15, 1:20, 1:30, 2:1, 2:3, 2:4, 2:5, 2:6, 2:7, 2:8, 3:1, 3:3, 3:4, 3:5, 3:6, 3:7, 3:8, 3:1, 3:3, 3:4, 3:5, 3:6, 3:7, 3:8, 4:1, 4:3, 4:5, 4:6, 4:7, 4:8, 5:1, 5:3, 5:4, 5:6, 5:7, 5:8, 6:1, 6:3, 6:4, 6:5, 6:7, 6:8, 7:1, 7:3, 7:4, 7:5, 7:6, 7:8, 8:1, 8:3, 8:4, 8:5, 8:6 또는 8:7 의 화학량론으로 2 개의 상이한 벡터를 가질 수 있다.
일부 구현예에서, 재조합 핵산 벡터 중 적어도 하나는 첫 번째 동일성 값을 포함하는 복제 결함성 아데노바이러스 5 벡터를 포함하는 복제 결함성 아데노바이러스 벡터이다. 일부 구현예에서, 복제 결함성 아데노바이러스 벡터는 E2b 부위에서 결실을 포함한다. 일부 구현예에서, 복제 결함성 아데노바이러스 벡터는 E1 부위에서 결실을 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 복제 결함성 아데노바이러스 벡터는 E1 부위, 및 E2b 부위, E3 부위, E4 부위, 또는 이의 임의의 조합에서 결실을 포함한다.
본 개시물의 임의의 Ad5 [E1-, E2b-] 백신과 병용으로 사용될 수 있는 특정 요법을 하기에 보다 상세히 기재한다.
A. 공동자극 분자
Zika 바이러스 항원을 함유하는 재조합 아데노바이러스-기반 벡터 백신의 사용에 추가로, 공동자극 분자가 상기 백신에 통합되어 면역원성을 증가시킬 수 있다.
면역 반응의 개시는 APC에 의한 나이브 (naive) T 세포의 활성화를 위해 적어도 2 가지 신호를 필요로 한다 (Damle, et al. J Immunol 148:1985-92 (1992); Guinan, et al. Blood 84:3261-82 (1994); Hellstrom, et al. Cancer Chemother Pharmacol 38:S40-44 (1996); Hodge, et al. Cancer Res 39:5800-07 (1999)). 항원 특이적 제 1 신호는 펩티드/주요 조직적합성 복합체 (MHC) 를 통해 T 세포 수용체 (TCR) 를 통하여 전달되며 T 세포가 세포 주기에 진입하도록 한다. 제 2, 또는 공동자극 신호는 사이토카인 생산 및 증식을 위해 전달될 수 있다.
전문적인 항원 제시 세포 (APC) 의 표면 상에서 보통 발견되는 적어도 3 개의 별개 분자가 T 세포 활성화에 중요한 제 2 신호를 제공할 수 있다는 것이 보고되어 있다: B7-1 (CD80), ICAM-1 (CD54) 및 LFA-3 (인간 CD58) (Damle, et al. J Immunol 148:1985-92 (1992); Guinan, et al. Blood 84: 3261-82 (1994); Wingren, et al. Crit Rev Immunol 15: 235-53 (1995); Parra, et al. Scand. J Immunol 38: 508-14 (1993); Hellstrom, et al. Ann NY Acad Sci 690: 225-30 (1993); Parra, et al. J Immunol 158: 637-42 (1997); Sperling, et al. J Immunol 157: 3909-17 (1996); Dubey, et al. J Immunol 155: 45-57 (1995); Cavallo, et al. Eur J Immunol 25: 1154-62 (1995)).
예를 들어, 이러한 공동자극 분자는 별개의 T 세포 리간드일 수 있다. B7-1 은 CD28 및 CTLA-4 분자와 상호작용하고, ICAM-1 은 CD11a/CD18 (LFA-1/베타-2 인테그린) 복합체와 상호작용하고, LFA-3 은 CD2 (LFA-2) 분자와 상호작용한다. 따라서 특정 구현예에서, 각각 B7-1, ICAM-1 및 LFA-3 을 함유하는 재조합 아데노바이러스 벡터를 갖는 것이 바람직할 수 있는데, 이는 표적 항원, 예컨대 Zika 바이러스 항원을 인코딩하는 하나 이상의 핵산을 포함하는 재조합 아데노바이러스-기반 벡터 백신과 병용시, 특정 표적 항원에 대해 유도된 항-Zika 면역 반응을 더 증가/증강시킬 것이다.
V. 면역학적 융합 파트너
본원에 기재된 바이러스 벡터 또는 조성물은 표적 항원, 예컨대 Zika 바이러스 항원, 또는 본 개시물의 임의의 표적 플라비바이러스 항원의 면역원성을 증가시킬 수 있는 단백질, 또는 "면역학적 융합 파트너" 를 인코딩하는 핵산 서열을 추가로 포함할 수 있다. 이와 관련하여, 이러한 단백질을 함유하는 바이러스 벡터로의 면역화 후 생산되는 단백질은 관심 표적 항원의 면역원성을 증가시키는 단백질에 융합된 관심 표적 항원을 포함하는 융합 단백질일 수 있다. 또한, Zika 바이러스 항원 및 면역학적 융합 파트너를 인코딩하는 Ad5 [E1-, E2b-] 벡터로의 병용 요법은, 면역 반응의 부스트 (boost) 를 초래할 수 있어, 두 치료 모이어티의 조합은 Zika 바이러스 항원 단독, 또는 면역학적 융합 파트너 단독을 인코딩하는 Ad5 [E1-, E2b-] 벡터보다 더 면역 반응을 상승작용적으로 부스트하는 작용을 한다. 예를 들어, Zika 바이러스 항원 및 면역학적 융합 파트너를 인코딩하는 Ad5 [E1-, E2b-] 벡터로의 병용 요법은 항원-특이적 효과기 CD4+ 및 CD8+ T 세포의 자극, 감염된 세포 살해에 대해 유도된 NK 세포 반응의 자극, 항체 의존적 세포-매개 세포독성 (ADCC), 항체 의존적 세포 식균작용 (ADCP) 메커니즘을 통한 감염된 세포 살해에 대해 유도된 호중구 또는 단핵구 세포 반응의 자극, 또는 이의 임의의 조합의 상승작용적 증강을 초래할 수 있다. 이러한 상승작용적 부스트는 이를 필요로 하는 대상에 투여 후 생존 결과를 크게 개선시킬 수 있다. 특정 구현예에서, Zika 바이러스 항원 및 면역학적 융합 파트너를 인코딩하는 Ad5 [E1-, E2b-] 벡터로의 병용 요법은 대조군과 비교하여 아데노바이러스 벡터가 투여된 대상에서 약 1.5 내지 20 배, 또는 그 이상의 표적 항원-특이적 CTL 활성의 증가를 포함하는 면역 반응 생성을 초래할 수 있다. 또 다른 구현예에서, 면역 반응 생성은 대조군과 비교하여 Zika 바이러스 항원 및 면역학적 융합 파트너를 인코딩하는 Ad5 [E1-, E2b-] 벡터가 투여된 대상에서 약 1.5 내지 20 배, 또는 그 이상의 표적-특이적 CTL 활성의 증가를 포함한다. 추가 구현예에서, 면역 반응 생성은 대조군과 비교하여 약 1.5 내지 20 배, 또는 그 이상의, 사이토카인 분비, 예컨대 인터페론-감마 (IFN-γ), 인터류킨-2 (IL-2), 종양 괴사 인자-알파 (TNF-α), 또는 기타 사이토카인을 측정하는 ELISpot 검정에 의해 측정된 바와 같이, 표적 항원-특이적 세포-매개 면역력 활성의 증가를 포함한다. 추가 구현예에서, 면역 반응 생성은 적절한 대조군과 비교하여 본원에 기재한 바와 같은 Zika 바이러스 항원 및 면역학적 융합 파트너를 인코딩하는 Ad5 [E1-, E2b-] 벡터를 투여한 대상에서 1.5 내지 5 배의 표적-특이적 항체 생산의 증가를 포함한다. 또 다른 구현예에서, 면역 반응 생성은 대조군과 비교하여 아데노바이러스 벡터를 투여한 대상에서 약 1.5 내지 20 배, 또는 그 이상, 표적-특이적 항체 생산의 증가를 포함한다.
추가적인 예로서, 표적 에피토프 항원 및 면역학적 융합 파트너를 인코딩하는 Ad5 [E1-, E2b-] 벡터로의 병용 요법은 항원-특이적 효과기 CD4+ 및 CD8+ T 세포의 자극, 감염된 세포 살해에 대해 유도된 NK 세포 반응의 자극, 항체 의존적 세포-매개 세포독성 (ADCC), 항체 의존적 세포 식균작용 (ADCP) 메커니즘을 통한 감염된 세포 살해에 대해 유도된 호중구 또는 단핵구 세포 반응의 자극, 또는 이의 임의의 조합의 상승작용적 증강을 초래할 수 있다. 이러한 상승작용적 부스트는 이를 필요로 하는 대상에 대한 투여 후 생존 결과를 크게 개선시킬 수 있다. 특정 구현예에서, 표적 에피토프 항원 및 면역학적 융합 파트너를 인코딩하는 Ad5 [E1-, E2b-] 벡터와의 병용 요법은 대조군과 비교하여 아데노바이러스 벡터가 투여된 대상에서 약 1.5 내지 20 배, 또는 그 이상의 표적 항원-특이적 CTL 활성의 증가를 포함하는 면역 반응 생성을 초래할 수 있다. 또 다른 구현예에서, 면역 반응 생성은 대조군과 비교하여 표적 에피토프 항원 및 면역학적 융합 파트너를 인코딩하는 Ad5 [E1-, E2b-] 벡터가 투여된 대상에서 약 1.5 내지 20 배, 또는 그 이상의 표적-특이적 CTL 활성의 증가를 포함한다. 추가 구현예에서, 면역 반응 생성은 대조군과 비교하여 약 1.5 내지 20 배, 또는 그 이상의, 사이토카인 분비, 예컨대 인터페론-감마 (IFN-γ), 인터류킨-2 (IL-2), 종양 괴사 인자-알파 (TNF-α), 또는 기타 사이토카인을 측정하는 ELISpot 검정에 의해 측정된 바와 같이, 표적 항원-특이적 세포-매개 면역력 활성의 증가를 포함한다. 추가 구현예에서, 면역 반응 생성은 적절한 대조군과 비교하여 본원에 기재한 바와 같은 아데노바이러스 벡터를 투여한 대상에서 1.5 내지 5 배의 표적-특이적 항체 생산의 증가를 포함한다. 또 다른 구현예에서, 면역 반응 생성은 대조군과 비교하여 아데노바이러스 벡터를 투여한 대상에서 약 1.5 내지 20 배, 또는 그 이상, 표적-특이적 항체 생산의 증가를 포함한다.
한 구현예에서, 이러한 면역학적 융합 파트너는 마이코박테리움 종 (Mycobacterium sp.) 으로부터 유래된다 (예컨대 마이코박테리움 투베르쿨로시스 (Mycobacterium tuberculosis)-유래된 Ra12 단편). 마이코박테리움 종으로부터 유래된 면역학적 융합 파트너는 SEQ ID NO: 38 - SEQ ID NO: 46 및 SEQ ID NO: 109 - SEQ ID NO: 114 에서 나타내는 서열 중 임의의 하나일 수 있다. 올리고뉴클레오티드, Met-His 태그 및 엔테로키나아제 인식 위치 (이러한 마이코박테리움 종-유래 Ra12 서열을 구축하는데 사용될 수 있음) 를 SEQ ID NO: 115 - SEQ ID NO: 122 중 임의의 하나에서 나타낸다 (또한 표 2 에서 나타냄). 이종 폴리뉴클레오티드/폴리펩티드 서열의 발현 및/또는 면역원성을 증강시키는데 사용하기 위한 Ra12 조성물 및 방법이 그 전체가 본원에 참조로 포함되는 미국 특허 번호 7,009,042 에서 기재되어 있다. 간략하게, Ra12 는 마이코박테리움 투베르쿨로시스 MTB32A 핵산의 하위서열인 폴리뉴클레오티드 부위를 나타낸다. MTB32A 는 M.투베르쿨로시스 (M. tuberculosis) 의 독성 및 무독성 균주에서의 유전자에 의해 인코딩된 32 kDa 의 세린 프로테아제이다. MTB32A 의 뉴클레오티드 서열 및 아미노산 서열이 기재되어 있다 (예를 들어, 본원에 그 전체가 참조로 포함되는 미국 특허 번호 7,009,042; Skeiky et al., Infection and Immun. 67:3998-4007 (1999) 참조). MTB32A 코딩 서열의 C-말단 단편은 높은 수준으로 발현될 수 있으며 정제 과정 전체에 걸쳐 가용성 폴리펩티드로서 남아 있다. 더욱이, Ra12 는 융합되는 이종 면역원성 폴리펩티드의 면역원성을 증강시킬 수 있다. Ra12 융합 폴리펩티드는 MTB32A 의 아미노산 잔기 192 ~ 323 에 상응하는 14 kDa C-말단 단편을 포함할 수 있다. 다른 Ra12 폴리뉴클레오티드는 일반적으로, Ra12 폴리펩티드의 일부분을 인코딩하는 적어도 약 15, 30, 60, 100, 200, 300 개 또는 그 이상의 뉴클레오티드를 포함할 수 있다. Ra12 폴리뉴클레오티드는 고유 서열 (즉, Ra12 폴리펩티드 또는 그의 일부분을 인코딩하는 내인성 서열) 을 포함할 수 있거나, 이러한 서열의 변이체를 포함할 수 있다. Ra12 폴리뉴클레오티드 변이체는 하나 이상의 치환, 부가, 결실 및/또는 삽입을 함유할 수 있는데, 인코딩된 융합 폴리펩티드의 생물학적 활성은 고유 Ra12 폴리펩티드를 포함하는 융합 폴리펩티드에 관하여 실질적으로 약화되지 않는다. 변이체는 고유 Ra12 폴리펩티드 또는 그의 일부분을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열에 대해 적어도 약 70%, 80% 또는 90% 동일성, 또는 그 이상의 동일성을 가질 수 있다.
특정 양태에서, 면역학적 융합 파트너는 그람-음성 박테리아 헤모필루스 인플루엔자 B (Haemophilus influenzae B) 의 표면 단백질인 단백질 D 로부터 유래될 수 있다. 단백질 D 로부터 유래되는 면역학적 융합 파트너는 SEQ ID NO: 47 에서 나타내는 서열일 수 있다. 일부 경우, 단백질 D 유도체는 대략 단백질의 첫 번째 3 분의 1 (예를 들어, 첫 번째 N-말단 100-110 아미노산) 을 포함한다. 단백질 D 유도체는 지질화될 수 있다. 특정 구현예에서, 지질단백질 D 융합 파트너의 첫 번째 109 개 잔기가 N-말단 상에 포함되어 추가적인 외인성 T-세포 에피토프를 가진 폴리펩티드가 제공되며, 이는 대장균에서의 발현 수준을 증가시킬 수 있고, 발현 인핸서로서 기능할 수 있다. 지질 꼬리는 항원 제시 세포에 대한 항원의 최적의 제시를 보장할 수 있다. 다른 융합 파트너는 인플루엔자 바이러스로부터의 비-구조 단백질, NS1 (헤마글루티닌) 을 포함할 수 있다. 전형적으로, N-말단 81 개 아미노산이 사용되지만, T-헬퍼 에피토프를 포함하는 상이한 단편이 사용될 수 있다.
특정 양태에서, 면역학적 융합 파트너는 LYTA 로서 공지된 단백질, 또는 이의 일부분 (특히 C-말단 부분) 일 수 있다. LYTA 로부터 유래된 면역학적 융합 파트너는 SEQ ID NO: 48 에서 나타내는 서열일 수 있다. LYTA 는 스트렙토코쿠스 뉴모니에 (Streptococcus pneumoniae) 로부터 유래되고, 이는 아미다아제 LYTA (LytA 유전자에 의해 인코딩됨) 로서 공지된 N-아세틸-L-알라닌 아미다아제를 합성한다. LYTA 는 펩티도글리칸 백본 중의 특정 결합을 특이적으로 분해하는 오토라이신이다. LYTA 단백질의 C-말단 도메인은 콜린 또는 일부 콜린 유사체, 예컨대 DEAE 에 대한 친화성을 담당한다. 이러한 특성은 융합 단백질의 발현에 유용한 대장균 C-LYTA 발현 플라스미드의 개발에 이용될 수 있다. 아미노 말단에서 C-LYTA 단편을 함유하는 하이브리드 단백질의 정제가 이용될 수 있다. 또 다른 구현예에서, LYTA 의 반복 부분은 융합 폴리펩티드 내에 통합될 수 있다. 반복 부분은 예를 들어, 잔기 178 에서 출발하는 C-말단 부위에서 발견될 수 있다. 하나의 특정 반복 부분은 잔기 188-305 를 포함한다.
일부 구현예에서, 표적 항원은 IFN-γ, TNFα, IL-2, IL-8, IL-12, IL-18, IL-7, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-9, IL-10, IL-13, IL-15, IL-16, IL-17, IL-23, IL-32, M-CSF (CSF-1), IFN-α, IFN-β, IL-1α, IL-1β, IL-1RA, IL-11, IL-17A, IL-17F, IL-19, IL-20, IL-21, IL-22, IL-24, IL-25, IL-26, IL-27, IL-28A, B, IL-29, IL-30, IL-31, IL-33, IL-34, IL-35, IL-36α,β,γ, IL-36Ra, IL-37, TSLP, LIF, OSM, LT-α, LT-β, CD40 리간드, Fas 리간드, CD27 리간드, CD30 리간드, 4-1BBL, Trail, OPG-L, APRIL, LIGHT, TWEAK, BAFF, TGF-β1 및 MIF 의 군에서 선택되는 사이토카인을 포함하는, "면역원성 성분"으로서 본원에서 또한 나타낼 수 있는 면역학적 융합 파트너에 융합된다. 표적 항원 융합물은 IFN-γ, TNFα, IL-2, IL-8, IL-12, IL-18, IL-7, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-9, IL-10, IL-13, IL-15, IL-16, IL-17, IL-23, IL-32, M-CSF (CSF-1), IFN-α, IFN-β, IL-1α, IL-1β, IL-1RA, IL-11, IL-17A, IL-17F, IL-19, IL-20, IL-21, IL-22, IL-24, IL-25, IL-26, IL-27, IL-28A, B, IL-29, IL-30, IL-31, IL-33, IL-34, IL-35, IL-36α,β,γ, IL-36Ra, IL-37, TSLP, LIF, OSM, LT-α, LT-β, CD40 리간드, Fas 리간드, CD27 리간드, CD30 리간드, 4-1BBL, Trail, OPG-L, APRIL, LIGHT, TWEAK, BAFF, TGF-β1 및 MIF 중 하나 이상에 대해 실질적인 동일성을 갖는 단백질을 생산할 수 있다. 표적 항원 융합물은 IFN-γ, TNFα, IL-2, IL-8, IL-12, IL-18, IL-7, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-9, IL-10, IL-13, IL-15, IL-16, IL-17, IL-23, IL-32, M-CSF (CSF-1), IFN-α, IFN-β, IL-1α, IL-1β, IL-1RA, IL-11, IL-17A, IL-17F, IL-19, IL-20, IL-21, IL-22, IL-24, IL-25, IL-26, IL-27, IL-28A, B, IL-29, IL-30, IL-31, IL-33, IL-34, IL-35, IL-36α,β,γ, IL-36Ra, IL-37, TSLP, LIF, OSM, LT-α, LT-β, CD40 리간드, Fas 리간드, CD27 리간드, CD30 리간드, 4-1BBL, Trail, OPG-L, APRIL, LIGHT, TWEAK, BAFF, TGF-β1 및 MIF 중 하나 이상에 대해 실질적인 동일성을 갖는 단백질을 인코딩하는 핵산을 인코딩할 수 있다. 일부 구현예에서, 표적 항원 융합물은 IFN-γ, TNFα, IL-2, IL-8, IL-12, IL-18, IL-7, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-9, IL-10, IL-13, IL-15, IL-16, IL-17, IL-23, IL-32, M-CSF (CSF-1), IFN-α, IFN-β, IL-1α, IL-1β, IL-1RA, IL-11, IL-17A, IL-17F, IL-19, IL-20, IL-21, IL-22, IL-24, IL-25, IL-26, IL-27, IL-28A, B, IL-29, IL-30, IL-31, IL-33, IL-34, IL-35, IL-36α,β,γ, IL-36Ra, IL-37, TSLP, LIF, OSM, LT-α, LT-β, CD40 리간드, Fas 리간드, CD27 리간드, CD30 리간드, 4-1BBL, Trail, OPG-L, APRIL, LIGHT, TWEAK, BAFF, TGF-β1 및 MIF 의 군에서 선택되는 사이토카인을 포함하는, "면역원성 성분" 으로서 또한 본원에서 나타낼 수 있는, 하나 이상의 면역학적 융합 파트너를 추가로 포함한다. IFN-γ 의 서열은 SEQ ID NO: 49 에서 나타내는 바와 같은 서열일 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다. TNFα 의 서열은 SEQ ID NO: 50 에서 나타내는 바와 같은 서열일 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다. IL-2 의 서열은 SEQ ID NO: 51 에서 나타내는 바와 같은 서열일 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다. IL-8 의 서열은 SEQ ID NO: 52 에서 나타내는 바와 같은 서열일 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다. IL-12 의 서열은 SEQ ID NO: 53 에서 나타내는 바와 같은 서열일 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다. IL-18 의 서열은 SEQ ID NO: 54 에서 나타내는 바와 같은 서열일 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다. IL-7 의 서열은 SEQ ID NO: 55 에서 나타내는 바와 같은 서열일 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다. IL-3 의 서열은 SEQ ID NO: 56 에서 나타내는 바와 같은 서열일 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다. IL-4 의 서열은 SEQ ID NO: 57 에서 나타내는 바와 같은 서열일 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다. IL-5 의 서열은 SEQ ID NO: 58 에서 나타내는 바와 같은 서열일 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다. IL-6 의 서열은 SEQ ID NO: 59 에서 나타내는 바와 같은 서열일 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다. IL-9 의 서열은 SEQ ID NO: 60 에서 나타내는 바와 같은 서열일 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다. IL-10 의 서열은 SEQ ID NO: 61 에서 나타내는 바와 같은 서열일 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다. IL-13 의 서열은 SEQ ID NO: 62 에서 나타내는 바와 같은 서열일 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다. IL-15 의 서열은 SEQ ID NO: 63 에서 나타내는 바와 같은 서열일 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다. IL-16 의 서열은 SEQ ID NO: 90 에서 나타내는 바와 같은 서열일 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다. IL-17 의 서열은 SEQ ID NO: 91 에서 나타내는 바와 같은 서열일 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다. IL-23 의 서열은 SEQ ID NO: 92 에서 나타내는 바와 같은 서열일 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다. IL-32 의 서열은 SEQ ID NO: 93 에서 나타내는 바와 같은 서열일 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다.
일부 구현예에서, 표적 항원은 IFN-γ, TNFα, IL-2, IL-8, IL-12, IL-18, IL-7, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-9, IL-10, IL-13, IL-15, , IL-16, IL-17, IL-23, IL-32, M-CSF (CSF-1), IFN-α, IFN-β, IL-1α, IL-1β, IL-1RA, IL-11, IL-17A, IL-17F, IL-19, IL-20, IL-21, IL-22, IL-24, IL-25, IL-26, IL-27, IL-28A, B, IL-29, IL-30, IL-31, IL-33, IL-34, IL-35, IL-36α,β,γ, IL-36Ra, IL-37, TSLP, LIF, OSM, LT-α, LT-β, CD40 리간드, Fas 리간드, CD27 리간드, CD30 리간드, 4-1BBL, Trail, OPG-L, APRIL, LIGHT, TWEAK, BAFF, TGF-β1 및 MIF 의 군에서 선택되는 사이토카인을 포함하는, "면역원성 성분" 으로서 또한 본원에서 나타내는 면역학적 융합 파트너에 융합되거나 연결된다. 일부 구현예에서, 표적 항원은 IFN-γ, TNFα, IL-2, IL-8, IL-12, IL-18, IL-7, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-9, IL-10, IL-13, IL-15, IL-16, IL-17, IL-23, IL-32, M-CSF (CSF-1), IFN-α IFN-β, IL-1α, IL-1β, IL-1RA, IL-11, IL-17A, IL-17F, IL-19, IL-20, IL-21, IL-22, IL-24, IL-25, IL-26, IL-27, IL-28A, B, IL-29, IL-30, IL-31, IL-33, IL-34, IL-35, IL-36α,β,γ, IL-36Ra, IL-37, TSLP, LIF, OSM, LT-α, LT-β, CD40 리간드, Fas 리간드, CD27 리간드, CD30 리간드, 4-1BBL, Trail, OPG-L, APRIL, LIGHT, TWEAK, BAFF, TGF-β1 및 MIF 의 군에서 선택되는 사이토카인을 포함하는, "면역원성 성분" 으로서 또한 본원에서 나타내는 면역학적 융합 파트너와 세포 내에서 동시발현된다.
일부 구현예에서, 표적 항원은, CpG ODN (예를 들어, 클래스 A, B 또는 C CpG ODN; 비제한적 예시 서열을 SEQ ID NO: 124 - SEQ ID NO: 135 에 나타내며, 여기서 포스포디에스테르 염기는 대문자이고, 포스포로티오에이트 염기는 소문자이고, 팔린드롬은 밑줄그어지며 콜론은 반사점을 나타냄), 콜레라 독소 (비제한적 예시 서열을 SEQ ID NO: 65 에 나타냄), 박테리아 ADP-리보실화 엑소톡신에서 유래된 절두형 A 서브유닛 코딩 부위 (비제한적 예시 서열을 SEQ ID NO: 66 에서 나타냄), 박테리아 ADP-리보실화 엑소톡신에서 유래된 절두형 B 서브유닛 코딩 부위 (비제한적 예시 서열을 SEQ ID NO: 67 에 나타냄), Hp91 (비제한적 예시 서열을 SEQ ID NO: 68 에 나타냄), CCL20 (비제한적 예시 서열을 SEQ ID NO: 69 및 SEQ ID NO: 123 에 나타냄), CCL3 (비제한적 예시 서열을 SEQ ID NO: 70 에 나타냄), GM-CSF (비제한적 예시 서열을 SEQ ID NO: 71 에서 나타냄), G-CSF (비제한적 예시 서열을 SEQ ID NO: 72 에서 나타냄), LPS 펩티드 모방체 (비제한적 예시 서열을 SEQ ID NO: 73 - SEQ ID NO: 84 에서 나타냄), 시가 독소 (비제한적 예시 서열을 SEQ ID NO: 85 에서 나타냄), 디프테리아 독소 (비제한적 예시 서열을 SEQ ID NO: 86 에서 나타냄) 또는 CRM197 (비제한적 예시 서열을 SEQ ID NO: 89 에서 나타냄) 을 포함하는 면역학적 융합 파트너에 융합되거나 연결된다.
일부 구현예에서, 표적 항원은 IL-15 과작동제를 포함하는, 면역학적 융합 파트너에 융합되거나 연결된다. 인터류킨 15 (IL-15) 는 바이러스 감염 후 분비되는 자연 발생 염증성 사이토카인이다. 분비된 IL-15 는 효과기 면역 세포 상의 이의 동족 (cognate) 수용체를 통해 신호를 전달함으로써 그의 기능을 수행할 수 있으며, 따라서 효과기 면역 세포 활성의 전반적인 증강을 초래할 수 있다.
세포 면역 반응을 자극하고 유지하는 IL-15 의 광범위한 능력을 기반으로, 이는 유망한 면역요법 약물인 것으로 여겨진다. 그러나, IL-15 의 임상적 개발에 있어서의 주요 한계는 표준 포유동물 세포 발현 시스템에서의 낮은 생산 수율 및 짧은 혈청 반감기를 포함할 수 있다. 게다가, 자유 IL-15 사이토카인보다는 동일한 세포에 의해 동시발현되는 단백질을 포함하는 IL-15:IL-15Rα 복합체는, IL-15 βγc 수용체를 가지고 있는 면역 효과기 세포를 자극하는 것을 담당할 수 있다.
이들 단점을 극복하기 위해, 신규한 IL-15 과작동제 돌연변이체 (IL-15N72D) 는 증가된 IL-15Rβγc 에 결합하는 능력 및 증강된 생물학적 활성을 갖는 것으로 확인되었다. 마우스 또는 인간 IL-15Rα 및 Fc 융합 단백질 (면역글로불린의 Fc 부위) 의 등몰 농도의 IL-15N72D 에 대한 첨가는 IL-15 생물학적 활성에 있어서 추가 증가를 제공할 수 있어, IL-15N72D:IL-15Rα/Fc 과작동제 복합체가 자유 IL-15 사이토카인보다 10 배 초과로 더 낮은 IL-15-의존적 세포 성장을 지지하기 위한 중간 유효 농도 (EC50) 를 나타낸다.
일부 구현예에서, IL-15 과작동제는 신규한 IL-15 과작동제 돌연변이체 (IL-15N72D) 일 수 있다. 특정 구현예에서, 마우스 또는 인간 IL-15Rα 및 Fc 융합 단백질 (면역글로불린의 Fc 부위) 의 등몰 농도의 IL-15N72D 에 대한 첨가는 IL-15 생물학적 활성에 있어서 추가 증가를 제공할 수 있어, IL-15N72D:IL-15Rα/Fc 과작동제 복합체가 자유 IL-15 사이토카인보다 10 배 초과로 더 낮을 수 있는 IL-15-의존적 세포 성장을 지지하기 위한 중간 유효 농도 (EC50) 를 나타낸다.
따라서 일부 구현예에서, 본 개시물은 자유 IL-15 사이토카인보다 2-배 초과로 더 낮은, 3-배 초과로 더 낮은, 4-배 초과로 더 낮은, 5-배 초과로 더 낮은, 6-배 초과로 더 낮은, 7-배 초과로 더 낮은, 8-배 초과로 더 낮은, 9-배 초과로 더 낮은, 10-배 초과로 더 낮은, 15-배 초과로 더 낮은, 20-배 초과로 더 낮은, 25-배 초과로 더 낮은, 30-배 초과로 더 낮은, 35-배 초과로 더 낮은, 40-배 초과로 더 낮은, 45-배 초과로 더 낮은, 50-배 초과로 더 낮은, 55-배 초과로 더 낮은, 60-배 초과로 더 낮은, 65-배 초과로 더 낮은, 70-배 초과로 더 낮은, 75-배 초과로 더 낮은, 80-배 초과로 더 낮은, 85-배 초과로 더 낮은, 90-배 초과로 더 낮은, 95-배 초과로 더 낮은 또는 100-배 초과로 더 낮은 IL-15-의존적 세포 성장을 지지하기 위한 EC50 을 갖는 IL-15N72D:IL-15Rα/Fc 과작동제 복합체를 제공한다.
일부 구현예에서, IL-15 과작동제는 또한 ALT-803 으로서 알려진, 가용성 IL-15Rα/Fc 융합 단백질의 이량체 및 2 개의 IL-15N72D 분자의 생물학적 활성 단백질 복합체이다. ALT-803 의 조성물 및 ALT-803 의 생산 및 사용 방법은, 본원에 참조로 포함되는 미국 특허 출원 공개 번호 2015/0374790 에 기재되어 있다. N 말단에 소위 "스시" 도메인 (Su) 을 함유하는 가용성 IL-15Rα 단편이, 높은 친화성 사이토카인 결합을 담당하는 구조 요소 대부분을 가질 수 있는 것으로 알려져 있다. 가용성 융합 단백질은 인간 IL-15RαSu 도메인 (성숙 인간 IL-15Rα 단백질의 아미노산 1-65) 을 Fc 도메인을 함유하는 인간 IgG1 CH2-CH3 부위 (232 개 아미노산) 과 연결시킴으로써 생성될 수 있다. 이러한 IL-15RαSu/IgG1 Fc 융합 단백질은 IgG1 도메인을 통한 디술피드 결합을 통한 이량체 형성 및 표준 단백질 A 친화성 크로마토그래피 방법을 사용하는 정제의 용이성의 장점을 가질 수 있다.
일부 구현예에서, ALT-803 은 이량체성 IL-15Rα 스시 도메인/인간 IgG1 Fc 융합 단백질에 높은 친화성으로 연관되는 인간 IL-15 변이체의 2 개 단백질 서브유닛으로 이루어지는 가용성 복합체를 가질 수 있다. IL-15 변이체는 헬릭스 C 의 위치 72 에서의 Asn 에서 Asp 로의 치환 (N72D) 을 가진 성숙 인간 IL-15 사이토카인 서열을 포함하는 114 개 아미노산 폴리펩티드이다. 인간 IL-15R 스시 도메인/인간 IgG1 Fc 융합 단백질은 Fc 도메인을 함유하는 인간 IgG1 CH2-CH3 부위 (232 개 아미노산) 에 연결된 IL-15R 서브유닛의 스시 도메인 (성숙 인간 IL-15Rα 단백질의 아미노산 1-65) 을 포함한다. N72D 치환 이외에도, 모든 단백질 서열은 인간이다. 서브유닛의 아미노산 서열을 기반으로, 2 개 IL-15N72D 폴리펩티드 (예로서, IL-15N72D 서열은 SEQ ID NO: 87 에 표시됨) 및 디술피드 연결된 동종이량체 IL-l5RαSu/IgG1 Fc 단백질 (예로서, IL-15RαSu/Fc 도메인은 SEQ ID NO: 88 에 표시됨) 를 포함하는 복합체의 계산된 분자량은 92.4 kDa 이다. 일부 구현예에서, 표적 항원 및 ALT-803 을 인코딩하는 재조합 벡터는 표적 항원을 인코딩하는 본원에 기재된 임의의 서열을 가질 수 있고, ALT-803 을 인코딩하기 위해 SEQ ID NO: 87, SEQ ID NO: 87, SEQ ID NO: 88, 및 SEQ ID NO: 88 을 임의 순서로 가질 수 있다.
각각의 IL-15N720 폴리펩티드는 대략 12.8 kDa 의 계산된 분자량을 가질 수 있고, IL-15RαSu/IgG 1 Fc 융합 단백질은 대략 33.4 kDa 의 계산된 분자량을 가질 수 있다. IL-15N72D 및 IL-15RαSu/IgG 1 Fc 단백질 둘 모두는 당화되어, 크기 배제 크로마토그래피에 의해 대략 114 kDa 의 ALT-803 의 겉보기 분자량을 초래할 수 있다. ALT-803 에 대해 측정된 등전점 (pI) 은 대략 5.6 내지 6.5 의 범위일 수 있다. 따라서, 융합 단백질은 pH 7 에서 음으로 하전될 수 있다.
Zika 바이러스 항원 및 ALT-803 을 인코딩하는 Ad5[E1-, E2b-] 벡터의 병용 요법은 그 결과로 면역 반응을 부스팅시킬 수 있어, 양쪽 치료적 모이어티의 조합이 요법 단독보다 더 많이 면역 반응을 상승적으로 부스팅시키는 작용을 한다. 예를 들어, Zika 바이러스 항원 및 ALT-803 을 인코딩하는 Ad5[E1-, E2b-] 벡터로의 병용 요법은 항원-특이적 효과기 CD4+ 및 CD8+ T 세포의 자극, 감염된 세포 살해에 대해 유도된 NK 세포 반응의 자극, 항체 의존적 세포-매개 세포독성 (ADCC), 항체 의존적 세포 식균작용 (ADCP) 메커니즘을 통한 감염된 세포 살해에 대해 유도된 호중구 또는 단핵구 세포 반응의 자극의 상승적 증강을 초래할 수 있다. Zika 바이러스 항원 및 ALT-803 을 인코딩하는 Ad5[E1-, E2b-] 벡터로의 병용 요법은 상기 반응 중 임의의 하나, 또는 상기 반응의 조합을 상승적으로 부스팅하여, 이를 필요로 하는 대상에게 투여 후 생존 결과를 상당히 개선시킬 수 있다.
본원에 기재된 임의의 면역원성 증강제는 본원에 기재된 임의의 재조합 벡터를 사용하여, 동일한 재조합 벡터에서 면역원성 증강제 및 표적 항원을 발현시킴으로써 표적 항원과 융합되거나 연결될 수 있다.
이러한 면역원성 증강제를 인코딩하는 핵산 서열은 SEQ ID NO: 38 - SEQ ID NO: 63, SEQ ID NO: 65 - SEQ ID NO: 93 및 SEQ ID NO: 109 - SEQ ID NO: 135 중 임의의 하나를 인코딩하는 핵산 서열을 포함할 수 있으며 표 1 에 요약한다.
표 1 - 면역학적 융합 파트너의 서열
Figure pct00001
Figure pct00002
Figure pct00003
Figure pct00004
Figure pct00005
Figure pct00006
Figure pct00007
Figure pct00008
Figure pct00009
Figure pct00010
Figure pct00011
Figure pct00012
Figure pct00013
Figure pct00014
Figure pct00015
Figure pct00016
표 2 - 마이코박테리움 종-유래 Ra12 서열을 구축하기 위한 도구
Figure pct00017
일부 구현예에서, 표적 항원 및 면역학적 융합 파트너를 위한 핵산 서열은 임의의 핵산에 의해 분리되지 않는다. 다른 구현예에서, 링커를 인코딩하는 핵산 서열이 본원에 기재된 임의의 표적 항원을 인코딩하는 핵산 서열과 본원에 기재된 임의의 면역학적 융합 파트너를 인코딩하는 핵산 서열 사이에 삽입될 수 있다. 따라서 특정 구현예에서, 표적 항원, 링커 및 면역학적 융합 파트너를 함유하는 바이러스 벡터로 면역화 이후에 생산되는 단백질은 관심 표적 항원과 그에 후속된 링커를 포함하고 면역학적 융합 파트너로 종결되는 융합 단백질일 수 있고, 따라서 링커를 통해서 관심 표적 항원의 면역원성을 증가시키는 면역학적 융합 파트너에 표적 항원이 연결된다. 일부 구현예에서, 링커 핵산의 서열은 약 1 내지 약 150 개 핵산 길이, 약 5 내지 약 100 개 핵산 길이, 또는 약 10 내지 약 50 개 핵산 길이일 수 있다. 일부 구현예에서, 핵산 서열은 하나 이상의 아미노산 잔기를 인코딩할 수 있다. 일부 구현예에서, 링커의 아미노산 서열은 약 1 내지 약 50 개, 또는 약 5 내지 약 25 개 아미노산 잔기의 길이일 수 있다. 일부 구현예에서, 링커의 서열은 10 개 미만의 아미노산을 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 폴리알라닌 링커, 폴리글리신 링커, 또는 알라닌과 글리신 둘 모두를 갖는 링커일 수 있다.
이러한 링커를 인코딩하는 핵산 서열은 SEQ ID NO: 94 - SEQ ID NO: 108 중 임의의 하나일 수 있으며 표 3 에 요약한다.
표 3 - 링커의 서열
Figure pct00018
VI. 사용 방법
아데노바이러스 벡터는 본원에 기재된 바와 같은 하나 이상의 표적 항원에 대한 면역 반응을 생성시키기 위해 다수의 백신 상황에서 사용될 수 있다. 아데노바이러스 벡터는 그들이 Ad 에 대해 기존 면역력을 갖는 대상에서 면역 반응을 생성시키는데 사용될 수 있고 이전 세대 아데노바이러스 벡터를 사용하는 용법으로는 불가능한, 아데노바이러스 벡터를 사용하는 다수회의 면역화를 포함하는 백신화 용법에서 사용될 수 있다는 발견으로 인해 특히 중요하다.
일반적으로, 면역 반응의 생성은 체액성 반응 및/또는 세포-매개 반응의 유도를 포함할 수 있다. 특정 구현예에서, 관심 표적 항원에 대한 면역 반응을 증가시키는 것이 바람직하다. 그와 같이 "면역 반응의 생성" 또는 "면역 반응의 유도" 는 임의의 통계적으로 유의한 변화, 예를 들어, 하나 이상의 면역 세포 (T 세포, B 세포, 항원-제시 세포, 수지상 세포, 호중구 등) 의 수 또는 이들 면역 세포 중 하나 이상의 활성 (CTL 활성, HTL 활성, 사이토카인 분비, 사이토카인 분비 프로파일의 변화 등) 의 증가를 포함할 수 있다.
당업자는 면역 반응의 변경이 일어났는지 여부를 확인하기 위한 다수의 방법이 이용가능하다는 것을 쉽게 인식할 것이다. 면역 반응 (예를 들어, 세포 수, 사이토카인 발현, 세포 활성) 의 변경을 검출하기 위한 여러 가지 방법이 당업계에 알려져 있으며 본 발명의 문맥에서 유용하다. 예시적인 방법이 Current Protocols in Immunology, Edited by: John E. Coligan, Ada M. Kruisbeek, David H. Margulies, Ethan M. Shevach, Warren Strober (2001 John Wiley & Sons, NY, NY); Ausubel et al. (2001 Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publ. Assoc. Inc. & John Wiley & Sons, Inc., NY, NY); Sambrook et al. (1989 Molecular Cloning, Second Ed., Cold Spring Harbor Laboratory, Plainview, NY); Maniatis et al. (1982 Molecular Cloning, Cold Spring Harbor Laboratory, Plainview, NY) 및 다른 곳에 기재되어 있다. 이러한 문맥에서 유용한 예시적인 방법은 세포내 사이토카인 염색 (ICS), ELISpot, 증식 검정, 크롬 방출을 포함하는 세포독성 T 세포 검정 또는 균등한 검정, 및 임의의 수의 중합효소 연쇄 반응 (PCR) 을 사용하는 유전자 발현 분석 또는 RT-PCR 기반 검정을 포함할 수 있다.
특정 구현예에서, 면역 반응의 생성은 대조군과 비교하여 아데노바이러스 벡터가 투여된 대상에서의 약 1.5 내지 20 배 또는 그 이상, 적어도, 약, 또는 최대 1.5, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 그로부터 유래하는 임의의 범위 또는 수의 표적 항원-특이적 CTL 활성의 증가를 포함한다. 또 다른 구현예에서, 면역 반응의 생성은 대조군과 비교하여 아데노바이러스 벡터가 투여된 대상에서의 약 1.5 내지 20 배, 또는 그 이상의 표적-특이적 CTL 활성의 증가를 포함한다. 추가 구현예에서, 면역 반응의 생성은 대조군과 비교하여 약 1.5 내지 20 배, 또는 그 이상의, 사이토카인 분비, 예컨대 인터페론-감마 (IFN-γ), 인터류킨-2 (IL-2), 종양 괴사 인자-알파 (TNF-α), 그랜자임, 또는 기타 사이토카인을 측정하는 ELISpot 검정에 의해 측정되는 표적 항원-특이적 세포 매개 면역력 활성의 증가를 포함한다.
추가 구현예에서, 면역 반응의 생성은 적절한 대조군과 비교하여 아데노바이러스 벡터가 투여된 대상에서 1.5 내지 5 배의 표적-특이적 항체 생산의 증가를 포함한다. 또 다른 구현예에서, 면역 반응의 생성은 대조군과 비교하여 아데노바이러스 벡터가 투여된 대상에서 약 1.5 내지 20 배, 또는 그 이상의 표적-특이적 항체 생산의 증가를 포함한다.
따라서 특정 양태는, a) 복제 결함성 아데노바이러스 벡터 (아데노바이러스 벡터는 E2b 부위에서 결실을 가짐) 및 b) 표적 항원을 인코딩하는 핵산을 포함하는 아데노바이러스 벡터를 개체에게 투여하고; 아데노바이러스 벡터를 적어도 1 회 개체에게 재투여하고; 그로써 표적 항원에 대한 면역 반응을 생성시키는 것을 포함하는, 관심 플라비바이러스 표적 항원에 대한 면역 반응의 생성 방법을 제공할 수 있다. 특정 구현예에서, 투여되는 벡터가 거트 벡터가 아닌 방법이 제공될 수 있다.
추가의 구현예에서, a) 복제 결함성 아데노바이러스 벡터 (아데노바이러스 벡터는 E2b 부위에서 결실을 가짐) 및 b) 표적 항원을 인코딩하는 핵산을 포함하는 아데노바이러스 벡터를 개체에게 투여하고; 아데노바이러스 벡터를 적어도 1 회 개체에게 재투여하고; 그로써 플라비바이러스 바이러스 표적 항원에 대한 면역 반응을 생성시킴에 의한, 개체에서 플라비바이러스 바이러스 표적 항원에 대한 면역 반응의 생성 방법 (개체는 Ad 에 대해 기존 면역력을 가짐) 이 제공될 수 있다.
Ad 에 대한 기존 면역력에 관하여, 이는 당업계에 공지된 방법, 예컨대 Ad 항체의 존재에 대해 시험하는 항체-기반 검정을 사용하여 측정될 수 있다. 또한 특정 구현예에서, 상기 방법은 먼저 개체가 Ad 에 대해 기존 면역력을 갖는지 여부를 측정하고, 그 후 본원에 기재된 바와 같은 E2b 결실 아데노바이러스 벡터를 투여하는 것을 포함할 수 있다.
특정 양태에서, 본원의 다른 곳에서, 또는 본원에서 기재된 것들과 같은 플라비바이러스 표적 항원에 대한 면역 반응의 생성 방법이 제공될 수 있다.
특정 양태에서, 본원의 다른 곳에서 기재된 것들과 같은 플라비바이러스에 대한 면역 반응의 생성 방법이 제공될 수 있다.
본원의 다른 곳에서 언급된 바와 같이, 아데노바이러스 벡터는 감염원 (이에 대해 면역 반응이 생성될 것임) 중 임의의 하나 이상으로부터의 하나 이상의 관심 표적 항원을 인코딩하는 핵산 서열을 포함할 수 있다. 예를 들어, 표적 항원은 비제한적으로, 바이러스 항원 단백질, 예컨대 C, E, prM, M, NS1, NS2A, NS2B, NS3, NS4A, NS4B 및 NS5 를 포함할 수 있다.
투여를 위해, 아데노바이러스 벡터 스톡이 적절한 완충제, 생리적으로 허용가능한 담체, 부형제 등과 조합될 수 있다. 특정 구현예에서, 적절한 수의 아데노바이러스 벡터 입자가 적절한 완충제, 예컨대, 멸균 PBS 중에 투여된다.
특정 상황에서, 본원에 개시된 아데노바이러스 벡터 조성물을 비경구, 정맥내, 근육내, 또는 심지어는 복강내 전달하는 것이 바람직할 수 있다. 특정 구현예에서, 자유 염기 또는 약물학적으로 허용가능한 염으로서의 용액은 계면활성제, 예컨대 히드록시프로필셀룰로오스와 적합하게 혼합된 물 중에 제조될 수 있다. 분산물은 또한 글리세롤, 액체 폴리에틸렌 글리콜, 및 그의 혼합물 중에 및 오일 중에 제조될 수 있다. 다른 구현예에서, E2b 결실 아데노바이러스 벡터는 삼켜서 또는 좌제에 의해 전달되는 알약 형태로 전달될 수 있다.
주사용 용도에 적합한 예시적인 약학 형태는 멸균 주사용 용액 또는 분산물의 즉석 제조를 위한 멸균 분말 및 멸균 수용액 또는 분산물을 포함할 수 있다 (예를 들어, 미국 특허 번호 5,466,468 참조). 모든 경우 그 형태는 멸균되어야 하고, 용이한 시린지이용성이 존재하는 정도로 유동성이어야 한다. 이는 제조 및 저장 조건 하에서 안정적이어야 하며, 미생물, 예컨대 박테리아, 곰팡이, 및 진균의 오염 작용에 대해 보존되어야 한다. 담체는 예를 들어, 물, 에탄올, 폴리올 (예를 들어, 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 및 액상 폴리에틸렌 글리콜 등), 이의 적합한 혼합물 및/또는 식물성 오일을 함유하는 용매 또는 분산 매질일 수 있다. 적절한 유동성은 예를 들어, 코팅, 예컨대 레시틴의 사용에 의해서, 분산물의 경우 요구되는 입자 크기의 유지에 의해서 및/또는 계면활성제의 사용에 의해서 유지될 수 있다. 미생물 작용의 예방은 다양한 항박테리아제 및 항진균제, 예를 들어 파라벤, 클로로부탄올, 페놀, 솔브산, 티머로살 등에 의해 촉진될 수 있다. 많은 경우에서, 그것은 등장화제, 예를 들어 당류 또는 염화나트륨을 포함할 수 있다. 주사용 조성물의 장기간 흡수는 조성물에 흡수를 지연시키는 작용제, 예를 들어 알루미늄 모노스테아레이트 및 젤라틴의 사용을 통해 일어날 수 있다.
한 구현예에서, 수용액 중 비경구 투여를 위해서, 용액은 필요하면 적합하게 완충될 것이고, 액체 희석제는 먼저 충분한 염류 또는 포도당으로 등장성이 될 수 있다. 이들 특정한 수용액은 특히 정맥내, 근육내, 피하 및 복강내 투여에 적합할 수 있다. 이와 관련하여, 이용될 수 있는 멸균 수성 매질이 본 개시물의 관점에서 당업자에게 공지될 것이다. 예를 들어, 1 투여량을 1 ㎖ 의 등장성 NaCl 용액에 용해시킬 수 있고 1000 ㎖ 의 피하주입 유체에 첨가하거나 또는 제안된 주입 부위에 주사할 수 있다 (예를 들어, 문헌 ["Remington's Pharmaceutical Sciences" 15th Edition, p. 1035-1038 및 1570-1580] 참조). 투여량 중 일부 변동은 치료하려는 대상의 병태에 따라서 필수적으로 일어날 수 있다. 게다가, 인간 투여의 경우, 조제물은 FDA 생물학 표준 사무국이 요구하는 멸균성, 발열원성, 및 일반 안정성 및 순도 표준을 충족시킬 필요가 있을 수 있다.
담체는 임의의 모든 용매, 분산 매질, 비히클, 코팅, 희석제, 항박테리아제 및 항진균제, 등장화제 및 흡수 지연제, 완충제, 담체 용액, 현탁액, 콜로이드 등을 추가로 포함할 수 있다. 약학적 활성 물질을 위한 이러한 매질 및 작용제의 사용은 당분야에 충분히 공지되어 있다. 통상의 매질 또는 작용제가 활성 성분과 상용성이 아닌 경우를 제외하고, 치료적 조성물에서 이의 사용이 고려된다. 보충적인 활성 성분이 또한 조성물에 통합될 수 있다. 어구 "약학적으로 허용가능한" 은 인간에게 투여될 때 알레르기 또는 유사하게 곤란한 반응을 일으키지 않을 수 있는 분자 독립체 및 조성물을 나타낼 수 있다.
본원에 기재된 치료적 조성물의 투여의 경로 및 빈도를 비롯하여 투여량은 개체마다, 질환마다 다양할 것이고, 표준 기술을 사용해 쉽게 확립될 수 있다. 일반적으로, 약학 조성물 및 백신은 주사 (예를 들어, 피내, 근육내, 정맥내, 복강내 또는 피하), 비내 (예를 들어, 흡입), 알약 형태 (예를 들어, 삼킴, 질 또는 직장 전달용 좌제) 로 투여될 수 있다. 특정 구현예에서, 1 내지 3 용량이 6 주 기간에 걸쳐 투여될 수 있고 추가의 부스터 백신화가 그 이후에 주기적으로 제공될 수 있다.
다양한 구현예에서, 복제 결함성 아데노바이러스는 이러한 면역 반응을 생성하는데 적합한 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, 복제 결함성 아데노바이러스는 면역화 당 약 1x108 바이러스 입자 내지 약 5x1013 바이러스 입자의 용량으로 투여된다. 일부 경우에서, 복제 결함성 아데노바이러스는 면역화 당 약 1x109 내지 약 5x1012 바이러스 입자의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, 복제 결함성 아데노바이러스는 면역화 당 약 1x108 바이러스 입자 내지 약 5x108 바이러스 입자의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, 복제 결함성 아데노바이러스는 면역화 당 약 5x108 바이러스 입자 내지 약 1x109 바이러스 입자의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, 복제 결함성 아데노바이러스는 면역화 당 약 1x109 바이러스 입자 내지 약 5x109 바이러스 입자의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, 복제 결함성 아데노바이러스는 면역화 당 약 5x109 바이러스 입자 내지 약 1x1010 바이러스 입자의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, 복제 결함성 아데노바이러스는 면역화 당 약 1x1010 바이러스 입자 내지 약 5x1010 바이러스 입자의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, 복제 결함성 아데노바이러스는 면역화 당 약 5x1010 바이러스 입자 내지 약 1x1011 바이러스 입자의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, 복제 결함성 아데노바이러스는 면역화 당 약 1x1011 바이러스 입자 내지 약 5x1011 바이러스 입자의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, 복제 결함성 아데노바이러스는 면역화 당 약 5x1011 바이러스 입자 내지 약 1x1012 바이러스 입자의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, 복제 결함성 아데노바이러스는 면역화 당 약 1x1012 바이러스 입자 내지 약 5x1012 바이러스 입자의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, 복제 결함성 아데노바이러스는 면역화 당 약 5x1012 바이러스 입자 내지 약 1x1013 바이러스 입자의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, 복제 결함성 아데노바이러스는 면역화 당 약 1x1013 바이러스 입자 내지 약 5x1013 바이러스 입자의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, 복제 결함성 아데노바이러스는 면역화 당 약 1x108 바이러스 입자 내지 약 5x1010 바이러스 입자의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, 복제 결함성 아데노바이러스는 면역화 당 약 1x1010 바이러스 입자 내지 약 5x1012 바이러스 입자의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, 복제 결함성 아데노바이러스는 면역화 당 약 1x1011 바이러스 입자 내지 약 5x1013 바이러스 입자의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, 복제 결함성 아데노바이러스는 면역화 당 약 1x108 바이러스 입자 내지 약 1x1010 바이러스 입자의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, 복제 결함성 아데노바이러스는 면역화 당 약 1x1010 바이러스 입자 내지 약 1x1012 바이러스 입자의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, 복제 결함성 아데노바이러스는 면역화 당 약 1x1011 바이러스 입자 내지 약 5x1013 바이러스 입자의 용량으로 투여된다. 일부 경우에서, 복제 결함성 아데노바이러스는 면역화 당 1x109, 2x109, 3x109, 4x109, 5x109, 6x109, 7x109, 8x109, 9x109, 1x1010, 2x1010, 3x1010, 4x1010, 5x1010, 6x1010, 7x1010, 8x1010, 9x1010, 1x1011, 2x1011, 3x1011, 4x1011, 5x1011, 6x1011, 7x1011, 8x1011, 9x1011, 1x1012, 1.5x1012, 2x1012, 3x1012, 또는 그 이상의 바이러스 입자 (VP) 와 동일하거나 또는 그를 초과하는 용량으로 투여된다. 일부 경우에서, 복제 결함성 아데노바이러스는 면역화 당 1x109, 2x109, 3x109, 4x109, 5x109, 6x109, 7x109, 8x109, 9x109, 1x1010, 2x1010, 3x1010, 4x1010, 5x1010, 6x1010, 7x1010, 8x1010, 9x1010, 1x1011, 2x1011, 3x1011, 4x1011, 5x1011, 6x1011, 7x1011, 8x1011, 9x1011, 1x1012, 1.5x1012, 2x1012, 3x1012, 또는 그 이상의 바이러스 입자와 같거나 또는 그 미만인 용량으로 투여된다. 다양한 구현예에서, 본 명세서에서 바람직한 용량은 제형 완충제의 적합한 부피, 예를 들어 약 0.1-10 ㎖, 0.2-8 ㎖, 0.3-7 ㎖, 0.4-6 ㎖, 0.5-5 ㎖, 0.6-4 ㎖, 0.7-3 ㎖, 0.8-2 ㎖, 0.9-1.5 ㎖, 0.95-1.2 ㎖ 또는 1.0-1.1 ㎖ 의 부피로 투여된다. 당업자는 부피가 임의의 이들 값에 의해 제한되는 임의 범위 내에 속할 수 있다는 것을 이해한다 (예를 들어, 약 0.5 ㎖ 내지 약 1.1 ㎖).
적합한 용량은 상기 기술된 바와 같이 투여시, 본 명세서의 다른 곳에 기술된 바와 같이 표적 항원 면역 반응을 촉진할 수 있는 아데노바이러스 벡터의 양일 수 있다. 특정 구현예에서, 면역 반응은 기준 (즉, 미처리) 수준보다 적어도 10-50% 초과이다. 이러한 반응은 환자에서 표적 항원 항체를 측정하거나 또는 시험관내에서 플라비바이러스 감염된 세포를 사멸시킬 수 있는 세포용해성 효과기 세포의 백신-의존적 생성에 의해, 또는 면역 반응을 모니터링하기 위해 당업계에 공지된 다른 방법에 의해 모니터링될 수 있다.
일반적으로, 적절한 투여량 및 치료 용법은 예방적 이득을 제공하기에 충분한 양으로 아데노바이러스 벡터를 제공할 수 있다. 보호성 면역 반응은 일반적으로 면역화 (백신화) 이전 및 이후에 환자로부터 수득된 샘플을 사용하여 수행될 수 있는 표준 증식, 세포독성 또는 사이토카인 검정을 사용하여 평가될 수 있다.
하나의 장점이, 특히 Ad 에 대한 기존 면역력을 갖는 개체에서, 동일한 아데노바이러스 벡터로 다수 백신화를 투여하는 능력일 수 있는 한편, 아데노바이러스 백신은 또한 프라임 및 부스트 용법의 일부로서 투여될 수도 있다. 혼합 양식 프라임 및 부스터 접종 계획은 증강된 면역 반응을 초래할 수 있다.
따라서, 한 양태는 관심 표적 항원을 포함하는 플라스미드 벡터와 같은 플라스미드 백신을 사용하여, 적어도 1 회 플라스미드 백신을 투여함으로써, 대상을 프라임시키고, 사전정해진 시간 길이가 지나게 한 다음, 아데노바이러스 벡터를 투여하여 부스트시키는 방법이다. 다중 프라임, 예를 들어, 1-3 회가 이용될 수 있지만, 그 이상이 사용될 수 있다. 프라임과 부스트 사이의 시간 길이는 약 6 개월 내지 1 년으로 가변적일 수 있지만, 다른 시간 기간이 사용될 수도 있다.
키트
본원에 기재된 조성물, 면역요법 또는 백신은 키트의 형태로 공급될 수 있다. 본 개시물의 키트는 투여량 및/또는 투여 (치료 용법 정보를 포함) 에 관한 지시서를 추가로 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 키트는 기재된 면역요법 또는 백신을 제공하기 위한 방법 및 조성물을 포함한다. 일부 구현예에서, 키트는 키트 성분을 투여하는데 유용한 성분 및 성분을 제조하는 방법에 관한 지시서를 추가로 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 키트는 적절한 실험실 검사에 의한 치료 이전 및 이후에 환자의 모니터링을 수행하거나, 결과 및 환자 데이터를 의료진과 통신하기 위한 소프트웨어를 추가로 포함할 수 있다.
키트의 성분은 건조 형태이거나 또는 액체 형태일 수 있다. 그들이 건조 형태인 경우, 키트는 건조된 재료를 가용화시키기 위한 용액을 포함할 수 있다. 키트는 또한 액체 또는 건조 형태의 운반 인자를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 운반 인자가 건조 형태인 경우, 키트는 운반 인자를 가용화시키기 위한 용액을 포함한다. 키트는 또한 성분을 혼합하고 제조하기 위한 용기를 포함할 수 있다. 키트는 또한 예를 들어 바늘, 튜빙, 도포기, 흡입기, 시린지, 파이펫, 포셉, 계량 스푼, 점안기 또는 임의의 이러한 의학적으로 승인된 전달 비히클과 같은 투여의 보조를 위한 장비를 포함할 수 있다. 본 명세서에 기재되는 키트 또는 약물 전달 시스템은 또한 상업적 판매 및 유통을 위해 밀폐된 구획에 본 개시물의 조성물을 함유하기 위한 수단을 포함할 수 있다.
상기 기재된 다양한 구현예는 추가 구현예를 제공하도록 조합될 수 있다. 본 명세서에서 인용되고/되거나 출원 데이터 시트에서 열거된 모든 미국 특허, 미국 특허 출원 공개물, 미국 특허 출원, 외국 특허, 외국 특허 출원 및 비특허 공개물은 각각의 개별 공개물, 특허 또는 특허 출원이 특별히 개별적으로 참조로 편입된다고 표시된 바와 동일한 정도로 그들 전문이 참조로 본 명세서에 포함된다.
구현예의 양태는 필요하다면 추가의 구현예를 제공하기 위해 다양한 특허, 출원 및 공개물의 개념이 이용되도록 변형될 수 있다.
이들 및 다른 변화는 상기 상술한 설명의 관점에서 구현예에 대해 이루어질 수 있다. 일반적으로, 하기 청구항에서, 사용된 용어는 명세서 및 청구항에 개시된 특별한 구현예로 청구항을 제한하는 것으로 해석되어서는 안되지만, 이러한 청구항이 부여하는 균등물의 전체 범위와 함께 모든 가능한 구현예를 포함하는 것으로 해석되어야 한다. 따라서, 청구항은 본 개시물에 의해 한정되지 않는다.
실시예
하기 실시예는 본 개시물의 일부 양태를 추가로 기재하기 위해 포함되며, 본 개시물의 범주를 제한하는 것으로 사용되어서는 안된다.
실시예 1
단일-표적화 Ad5 [E1-, E2b-]-ZIKAV-E 백신의 생산
이 실시예는 ZIKAV-E ("외피" 또는 "E" 로도 지칭됨) 항원을 함유하는 단일-표적화 Ad5 [E1-, E2b-] 벡터의 구축을 설명한다.
이 실시예에 따라 사용되는 Ad5-ZIKAV-E 백신은, E1, E2b, E3 유전자 부위, 또는 이의 임의의 조합의 제거 (예를 들어 Ad5 [E1-, E2b-]), 및 본원에 개시된 임의의 ZIKAV-E 항원의 삽입 (예를 들어, SEQ ID NO: 11 - SEQ ID NO: 21 또는 SEQ ID NO: 23 - SEQ ID NO: 37 중 임의의 하나) 에 의해 변형되는 아데노바이러스 혈청형 5 (Ad5) 벡터이다.
SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18 및 SEQ ID NO: 19 에서 나타내는 아미노산 서열을 갖는 ZIKAV-E 항원을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열은 다수 Ad5 [E1-, E2b-]-기반 플랫폼에 클로닝되어, 각각 SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18 및 SEQ ID NO: 19 중 하나를 함유하는 별개의 단일-표적화 Ad5 [E1-, E2b-]-ZIKAV-E 백신이 생산된다. 별개의 ZIKAV-E 백신은 SEQ ID NO: 20 의 뉴클레오티드 969-1274 를 갖는 뉴클레오티드 서열 (즉, 멕시코에서 수득한 Zika 바이러스 단리물의 외피 단백질을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열) 로 만들어진다. 상이한 ZIKAV-E 백신은 SEQ ID NO: 21 의 뉴클레오티드 977-2491 을 갖는 뉴클레오티드 서열 (즉, 아이티에서 수득한 Zika 바이러스 균주의 외피 단백질을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열) 로 만들어진다. SEQ ID NO: 11 - SEQ ID NO: 21 또는 SEQ ID NO: 23 - SEQ ID NO: 37 중 임의의 하나는 다수 Ad5 [E1-, E2b-]-기반 플랫폼에 클로닝되어, 각각 SEQ ID NO: 11 - SEQ ID NO: 21 또는 SEQ ID NO: 23 - SEQ ID NO: 37 중 하나를 함유하는 별개의 단일-표적화 Ad5 [E1-, E2b-]-ZIKAV-E 백신이 생산된다.
마우스에서의 전임상 면역원성 연구를 위해, SEQ ID NO: 26 에서 나타낸 바와 같은 ZIKA 바이러스 야생형 E 유전자 삽입물 (Zika2014wt E 유전자 삽입물 핵산 서열 (개시 코돈으로 시작하고 종결 코돈으로 종료됨)) 을 사용하여 Ad5 [E1-, E2b-ZIKAV-E 백신을 구축하였다. 이후, 도 1 에서 도식으로 나타낸 바와 같이 Ad5 [E1-, E2b-]-ZIKAV-E 백신을 E.C7 세포에서 생산한다. 복제-결함 바이러스를 E.C7 패키징 세포주에서 전파시키고, CsCl2 또는 이온-교환 컬럼 정제하고, 적정한다. 바이러스 감염 역가를 E.C7 세포 단일층 상의 플라크-형성 단위 (PFU) 로서 측정한다. 바이러스 입자 (VP) 농도를 나트륨 도데실 술페이트 (SDS) 파괴 및 260 nm 및 280 nm 에서의 분광광도법에 의해 측정한다.
실시예 2
다수 플라비바이러스 항원을 함유하는 다중-표적화 Ad5 [E1-, E2b-] 구축물의 제조
이 실시예는 다수 플라비바이러스 항원, 예를 들어 본원에 개시된 Zika 바이러스 항원의 임의의 조합 (예를 들어, SEQ ID NO: 11 - SEQ ID NO: 21 또는 SEQ ID NO: 23 - SEQ ID NO: 37 의 임의의 조합) 을 함유하는 다중-표적화 Ad5 [E1-, E2b-] 벡터의 제조를 설명한다.
이 실시예에 따라 사용되는 Ad5-ZIKAV-E 백신은, E1, E2b, E3 유전자 부위, 또는 이의 임의의 조합의 제거 (예를 들어, Ad5 [E1-, E2b-]), 및 플라비바이러스 항원을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열의 삽입에 의해 변형되는 아데노바이러스 혈청형 5 (Ad5) 벡터이다.
다수 플라비바이러스 항원을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열을 함유하는 Ad5 [E1-, E2b-] 벡터가 생산된다. 캡시드 단백질, 막 단백질 및 외피 단백질 (E) 을 인코딩하는 플라비바이러스 유전자 서열을 갖는 삼중 유전자 삽입물, 및 캡시드 단백질, 막 단백질 및 외피 단백질 (E) 및 비구조 단백질 (NS) 을 인코딩하는 플라비바이러스 유전자 서열을 갖는 사중 유전자 삽입물을 포함하는, 개별적 플라비바이러스 항원 유전자 서열은 각각 돼지 테스코바이러스-1 및 토세아 아시그나 바이러스에서 유래된 "자가-절단" 2A 펩티드에 의해 분리된다 (도 2a 및 도 3a) (de Felipe P and Ryan M Traffic 2004 5(8), 616-26; Holst J et al. Nature Immunol. 2008 9:658-66; Kim JH et al. PloS One, 2011 6(4), e18556. doi:10.1371/journal.pone.0018556). 2A 펩티드가 리보솜에서 번역되므로, 2A 펩티드의 최종 2 개 잔기 사이의 펩티드 결합이 형성되지 않아, 그로써 하나의 리보솜 과정에서 명백히 발현되는 단백질을 초래한다 (도 2b 및 도 3b). 3 개 유전자를 분리하는 2 개 2A 펩티드 서열의 사용은 3 개 단백질의 화학량론에 근사한 발현을 초래한다 (도 2b 및 도 3b).
실시예 3
ZIKA E 항원에 대한 면역 반응을 생성하는 Ad5 [E1-, E2b-]-ZIKAV-E 의 다회 주입
이 실시예는 Ad5 [E1-, E2b-]- ZIKAV-E 백신의 주입이 ZIKA E 항원에 대한 면역 반응을 유도하였음을 설명한다. 5 마리 마우스의 군 각각을, 1010 VP Ad5 [E1-, E2b-]-ZIKAV-E 의 용량으로 2 주 간격으로 2 회 피하로 면역화하였다 (시험군 마우스 G4M1-5, 백색 막대). 대조군 마우스에 1010 VP Ad5 [E1-, E2b-]-null (서열 대조군이 없는 빈 벡터) 을 주입하였다 (제어군 마우스 G1M1-5, 흑색 빗금 막대). 제 2 면역화 1 주 후, ZIKA-E 항원에 대해 유도된 면역 반응의 측정을 위해 마우스를 희생시키고 그의 비장 및 혈장을 수확하였다. 도 4a-4c 에서 나타내는 바와 같이, 세포-매개 면역 (CMI) 반응 및 항체 (Ab) 반응이 Ad5 [E1-, E2b-]-ZIKAV-E 로의 면역화 (백신화) 에 의해 생성되었다.
실시예 4
마우스에서의 Ad5 [E1-, E2b-]-ZIKAV-E 백신의 전임상 연구
이 실시예는 세포 매개 면역 (CMI) 반응, 세포용해 T 림프구 (CTL) 반응, 세포내 사이토카인 발현, 항체 분비 및 중량/온도 변화의 평가를 포함하는, 마우스에서의 Ad5 [E1-, E2b-]-Zika 백신의 전임상 연구를 설명한다. 전임상 연구는 여러 상이한 Zika 항원 변이체를 포함하는 Ad5 [E1-, E2b-]-Zika 백신의 투여, 대조군에 대한 비교, 및 마우스에서의 면역 반응 평가를 포함하였다.
Ad5 [E1-, E2b-]-Zika 돌연변이체 (mut) 2015, Ad5 [E1-, E2b-]-Zika 야생형 (wt) 2014, Ad5 [E1-, E2b-]-Zika 돌연변이체 (mut) 2014 백신의 전임상 평가
모든 Ad5 [E1-, E2b-]-Zika 백신은 실시예 1 에서 기재한 바와 같은 Zika 삽입물로의 백신 제조를 포함하였다.
CMI 및 CTL 반응. 마우스에서의 CMI 및 CTL 반응을 효소 결합 면역스팟 (enzyme-linked immunospot) (ELISPOT) 검정에 의해 평가하였다. 도 6 은 Ad5 [E1-, E2b-]-Zika-E 백신으로 면역화된 마우스로부터의 비장세포에서의 세포 매개 면역 (CMI) 반응 및 세포용해 T 림프구 (CTL) 반응을 설명한다. 마우스 (C57BL/6 계통) 를 1x1010 바이러스 입자 (VP) 의 Ad5 [E1-, E2b-]-Zika 백신 또는 1x1010 VP Ad5 [E1-, E2b-]-null (빈 벡터 대조군) 로, 2 주 간격으로 2 회 면역화하였다. 3 가지 유형의 Zika 백신을 시험하였다. 시험한 첫 번째 Zika 백신은, SEQ ID NO: 34 의 뉴클레오티드 서열 및 SEQ ID NO: 35 의 아미노산 서열 (SEQ ID NO: 34 는 뉴클레오티드 서열이며 SEQ ID NO: 35 는 SEQ ID NO: 34 에 상응하는 아미노산 서열임) 에 의해 인코딩되는 Zika 항원 단백질을 포함하는 Ad5 [E1-, E2b-]-Zika mut 2015 였다. SEQ ID NO: 35 의 Zika mut 2015 항원은, Zika 외피 단백질의 세포외 도메인의 절두형 부위인 3423-aa Zika 다단백질의 아미노산 409-690 에 상응한다 (SEQ ID NO: 23). Zika mut 2015 항원은 Zika wt 2015 항원과 비교하여 점 돌연변이를 포함한다. 이러한 점 돌연변이는 D37I, D43L, D266I, D129L, D218L (위치 번호매김은 N-말단 메티오닌을 계수하지 않음) 을 포함하며 이러한 돌연변이는 야생형과 비교하여 감소한 항-인간 C1q 반응을 초래할 수 있다. 시험한 두 번째 Zika 백신은, SEQ ID NO: 26 의 뉴클레오티드 서열 및 SEQ ID NO: 27 의 아미노산 서열 (SEQ ID NO: 26 은 뉴클레오티드 서열이며 SEQ ID NO: 27 은 SEQ ID NO: 26 에 상응하는 아미노산 서열임) 에 의해 인코딩되는 Zika 항원 단백질을 포함하는 Ad5 [E1-, E2b-]-Zika wt 2014 였다. SEQ ID NO: 27 의 Zika wt 2014 항원은, Zika 외피 단백질의 세포외 도메인의 절두형 부위인 3423-aa Zika 다단백질의 아미노산 409-690 에 상응한다 (SEQ ID NO: 23). 시험한 세 번째 Zika 백신은, SEQ ID NO: 28 의 뉴클레오티드 서열 및 SEQ ID NO: 29 의 아미노산 서열 (SEQ ID NO: 28 은 뉴클레오티드 서열이며 SEQ ID NO: 29 는 SEQ ID NO: 28 에 상응하는 아미노산 서열임) 에 의해 인코딩되는 Zika 항원 단백질을 포함하는 Ad5 [E1-, E2b-]-Zika mut 2014 였다. SEQ ID NO: 29 의 Zika mut 2014 항원은, Zika 외피 단백질의 세포외 도메인의 절두형 부위인 3423-aa Zika 다단백질의 아미노산 409-690 에 상응한다 (SEQ ID NO: 23). Zika mut 2014 항원은 Zika wt 2014 항원과 비교하여 점 돌연변이를 포함한다. 이러한 점 돌연변이는 I21D, L175D, L240D (위치 번호매김은 N-말단 메티오닌을 계수하지 않음) 를 포함하며 이러한 돌연변이는 야생형과 비교하여 감소한 항-인간 C1q 반응을 초래할 수 있다. 최종 면역화 1 주 후, 각각의 마우스로부터 단리한 비장세포를 Zika wt 바이러스 펩티드 풀에 노출시키고, ELISPOT 검정을 사용하여 CMI 반응 (IFN-γ 및 IL-2 분비 스팟 형성 세포 (SFC)) 및 CTL 반응 (그랜자임-B 분비 SFC) 을 측정하였다. 반응의 특이성을 콘카나발린 A (Con A) (양성 대조군) 에 대한 비장세포의 반응성 및 SIV-nef 펩티드 풀 (음성 대조군) 에 대한 비장세포의 반응성의 결여에 의해 나타내었다. 에러 바는 SEM 을 보여주며, 5 마리 마우스가 각각의 군에 존재하였다. 도 6a 는 면역화된 마우스 및 대조군 마우스로부터의 비장세포를 Zika 2014 펩티드 풀 및 대조군에 노출시킨 후 IFN-γ CMI 반응을 설명한다. 대조군 마우스와 비교하여 더 높은 수의 SFC 가 면역화된 마우스에서 유도되었다. 도 6b 는 면역화된 마우스 및 대조군 마우스로부터의 비장세포를 Zika 2014 펩티드 풀 및 대조군에 노출시킨 후 IL-2 CMI 반응을 설명한다. 대조군 마우스와 비교하여 더 높은 수의 SFC 가 면역화된 마우스에서 유도되었다. 도 6c 는 면역화된 마우스 및 대조군 마우스로부터의 비장세포를 Zika 2014 펩티드 풀 및 대조군에 노출시킨 후 그랜자임 B CTL 반응을 설명한다. 대조군 마우스와 비교하여 더 높은 수의 SFC 가 면역화된 마우스에서 유도되었다.
세포내 사이토카인 발현. 유세포 분석은, 세포내 사이토카인 발현을 평가하여 측정된 바와 같은 림프구 활성화의 수준을 밝혀내었다. 도 7 은 Ad5 [E1-, E2b-]-Zika-E 백신으로 면역화된 마우스로부터의 비장세포에서 IFN-γ 및 IFN-γ/TNF-α 의 세포내 발현의 유세포 분석에 의해 측정되는 바와 같은 림프구 활성화를 설명한다. 마우스 (C57Bl/6 계통) 를 1x1010 바이러스 입자 (VP) 의 Ad5 [E1-, E2b-]-Zika 백신 또는 1x1010 VP Ad5 [E1-, E2b-]-null (빈 벡터 대조군) 로 2 주 간격으로 2 회 면역화하였다. 3 가지 유형의 Zika 백신을 시험하였다. 시험한 첫 번째 Zika 백신은, SEQ ID NO: 34 의 뉴클레오티드 서열 및 SEQ ID NO: 35 의 아미노산 서열 (SEQ ID NO: 34 는 뉴클레오티드 서열이며 SEQ ID NO: 35 는 SEQ ID NO: 34 에 상응하는 아미노산 서열임) 에 의해 인코딩되는 Zika 항원 단백질을 포함하는 Ad5 [E1-, E2b-]-Zika mut 2015 였다. SEQ ID NO: 35 의 Zika mut 2015 항원은, Zika 외피 단백질의 세포외 도메인의 절두형 부위인 3423-aa Zika 다단백질의 아미노산 409-690 에 상응한다 (SEQ ID NO: 23). Zika mut 2015 항원은 Zika wt 2015 항원과 비교하여 점 돌연변이를 포함한다. 이러한 점 돌연변이는 D37I, D43L, D266I, D129L, D218L (위치 번호매김은 N-말단 메티오닌을 계수하지 않음) 을 포함하며, 이러한 돌연변이는 야생형과 비교하여 감소한 항-인간 C1q 반응을 초래할 수 있다. 시험한 두 번째 Zika 백신은, SEQ ID NO: 26 의 뉴클레오티드 서열 및 SEQ ID NO: 27 의 아미노산 서열 (SEQ ID NO: 26 은 뉴클레오티드 서열이며 SEQ ID NO: 27 은 SEQ ID NO: 26 에 상응하는 아미노산 서열임) 에 의해 인코딩되는 Zika 항원 단백질을 포함하는 Ad5 [E1-, E2b-]-Zika wt 2014 였다. SEQ ID NO: 27 의 Zika wt 2014 항원은, Zika 외피 단백질의 세포외 도메인의 절두형 부위인 3423-aa Zika 다단백질의 아미노산 409-690 에 상응한다 (SEQ ID NO: 23). 시험하고 여기서 나타낸 세 번째 Zika 백신은, SEQ ID NO: 28 의 뉴클레오티드 서열 및 SEQ ID NO: 29 의 아미노산 서열 (SEQ ID NO: 28 은 뉴클레오티드 서열이며 SEQ ID NO: 29 는 SEQ ID NO: 28 에 상응하는 아미노산 서열임) 에 의해 인코딩되는 Zika 항원 단백질을 포함하는 Ad5 [E1-, E2b-]-Zika mut 2014 이다. SEQ ID NO: 29 의 Zika mut 2014 항원은, Zika 외피 단백질의 세포외 도메인의 절두형 부위인 3423-aa Zika 다단백질의 아미노산 409-690 에 상응한다 (SEQ ID NO: 23). Zika mut 2014 항원은 Zika wt 2014 항원과 비교하여 점 돌연변이를 포함한다. 이러한 점 돌연변이는 I21D, L175D, L240D (위치 번호매김은 N-말단 메티오닌을 계수하지 않음) 를 포함하며 이러한 돌연변이는 야생형과 비교하여 감소한 항-인간 C1q 반응을 초래할 수 있다. 최종 면역화 1 주 후, 면역화된 마우스로부터 단리된 비장세포를 Zika wt 바이러스 펩티드 풀에 노출시키고, 유세포 분석을 사용하여 CD8+ 세포 및 CD4+ 세포에서의 IFN-γ 및 IFN-γ/TNF-α 의 세포내 사이토카인 생산을 측정하였다. 반응의 특이성을 비장세포의 PMA/이오노마이신 (양성 대조군) 에 대한 반응성 및 비장세포의 SIV-nef 펩티드 풀 (음성 대조군) 에 대한 반응성의 결여에 의해 나타내었다. 데이터를 IFN-γ 또는 IFN-γ 및 TNF-α 를 발현하는 CD8+ 또는 CD4+ 비장세포의 백분율로서 보고하며, 에러 바는 SEM 을 보여준다. 각각의 군은 5 마리의 마우스를 가졌다. 도 7a 는 면역화된 마우스 및 대조군 마우스로부터의 비장세포를 Zika 2014 펩티드 풀 및 대조군에 노출시킨 후 CD8+ 비장세포에서 IFN-γ 의 세포내 발현의 유세포 분석에 의해 측정되는 바와 같은 림프구 활성화를 설명한다. 대조군 마우스와 비교하여, 더 높은 백분율의 면역화된 마우스로부터의 세포가 Zika 바이러스 펩티드에 반응하고 사이토카인을 분비하였다. 도 7b 는 면역화된 마우스 및 대조군 마우스로부터의 비장세포를 Zika 2014 펩티드 풀 및 대조군에 노출시킨 후 CD4+ 비장세포에서 IFN-γ 의 세포내 발현의 유세포 분석에 의해 측정되는 바와 같은 림프구 활성화를 설명한다. 대조군 마우스와 비교하여, 더 높은 백분율의 면역화된 마우스로부터의 세포가 Zika 바이러스 펩티드에 반응하고 사이토카인을 분비하였다. 도 7c 는 면역화된 마우스 및 대조군 마우스로부터의 비강세포를 Zika 2014 펩티드 풀 및 대조군에 노출시킨 후 CD8+ 비장세포에서 IFN-γ 및 TNF-α 의 세포내 발현의 유세포 분석에 의해 측정된 바와 같은 림프구 활성화를 설명한다. 대조군 마우스와 비교하여, 더 높은 백분율의 면역화된 마우스로부터의 세포가 Zika 바이러스 펩티드에 반응하고 사이토카인을 분비하였다. 도 7d 는 면역화된 마우스 및 대조군 마우스로부터의 비장세포를 Zika 2014 펩티드 풀 및 대조군에 노출시킨 후 CD4+ 비장세포에서 IFN-γ 및 TNF-α 의 세포내 발현의 유세포 분석에 의해 측정되는 바와 같은 림프구 활성화를 설명한다. 대조군 마우스와 비교하여, 더 높은 백분율의 면역화된 마우스로부터의 세포가 Zika 바이러스 펩티드에 반응하고 사이토카인을 분비하였다.
항원-특이적 항체 생산. Zika-특이적 IgG 항체를, 효소 결합 면역흡착 검정 (ELISA) 에 의해 면역화된 마우스의 혈청에서 측정하였다. 도 8 은 Ad5 [E1-, E2b-]-Zika-E 백신으로 면역화된 마우스의 혈청에서의 항-Zika IgG 반응을 설명한다. 혈액을 볼 주머니로부터 채취하고, Gabitzsch et al. (Cancer Gene Ther. 2011 May; 18(5): 326-335) 에서 나타낸 방법을 사용하여. 정량적 ELISA 또는 IgG 항체를 사용하여 분석하였다. 마우스 (C57Bl/6 계통, 군 당 5 마리 마우스) 를 1x1010 바이러스 입자 (VP) 의 Ad5 [E1-, E2b-]-Zika-E 백신 또는 1x1010 VP Ad5 [E1-, E2b-]-null (빈 벡터 대조군) 로 2 주 간격으로 2 회 면역화하였다. 3 가지 유형의 Zika 백신을 시험하였다. 시험한 첫 번째 Zika 백신은, SEQ ID NO: 34 의 뉴클레오티드 서열 및 SEQ ID NO: 35 의 아미노산 서열 (SEQ ID NO: 34 는 뉴클레오티드 서열이며 SEQ ID NO: 35 는 SEQ ID NO: 34 에 상응하는 아미노산 서열임) 에 의해 인코딩되는 Zika 항원 단백질을 포함하는 Ad5 [E1-, E2b-]-Zika mut 2015 였다. SEQ ID NO: 35 의 Zika mut 2015 항원은, Zika 외피 단백질의 세포외 도메인의 절두형 부위인 3423-aa Zika 다단백질의 아미노산 409-690 에 상응한다 (SEQ ID NO: 23). Zika mut 2015 항원은 Zika wt 2015 항원과 비교하여 점 돌연변이를 포함한다. 이러한 점 돌연변이는 D37I, D43L, D266I, D129L, D218L (위치 번호매김은 N-말단 메티오닌을 계수하지 않음) 을 포함하며 이러한 돌연변이는 야생형과 비교하여 감소한 항-인간 C1q 반응을 초래할 수 있다. 시험한 두 번째 Zika 백신은, SEQ ID NO: 26 의 뉴클레오티드 서열 및 SEQ ID NO: 27 의 아미노산 서열 (SEQ ID NO: 26 은 뉴클레오티드 서열이며 SEQ ID NO: 27 은 SEQ ID NO: 26 에 상응하는 아미노산 서열임) 에 의해 인코딩되는 Zika 항원 단백질을 포함하는 Ad5 [E1-, E2b-]-Zika wt 2014 였다. SEQ ID NO: 27 의 Zika wt 2014 항원은, Zika 외피 단백질의 세포외 도메인의 절두형 부위인 3423-aa Zika 다단백질의 아미노산 409-690 에 상응한다 (SEQ ID NO: 23). 시험한 세 번째 Zika 백신은, SEQ ID NO: 28 의 뉴클레오티드 서열 및 SEQ ID NO: 29 의 아미노산 서열 (SEQ ID NO: 28 은 뉴클레오티드 서열이며 SEQ ID NO: 29 는 SEQ ID NO: 28 의 아미노산 서열에 상응함) 에 의해 인코딩되는 Zika 항원 단백질을 포함하는 Ad5 [E1-, E2b-]-Zika mut 2014 였다. SEQ ID NO: 29 에서 나타낸 Zika mut 2014 항원은, Zika 외피 단백질의 세포외 도메인의 절두형 부위인 3423-aa Zika 다단백질의 아미노산 409-690 에 상응한다 (SEQ ID NO: 23). Zika mut 2014 항원은 Zika wt 2014 항원과 비교하여 점 돌연변이를 포함한다. 이러한 점 돌연변이는 I21D, L175D, L240D (위치 번호매김은 N-말단 메티오닌을 계수하지 않음) 를 포함하며 이러한 돌연변이는 야생형과 비교하여 감소한 항-인간 C1q 반응을 초래할 수 있다. 최종 면역화 1 주 후, 마우스로부터의 혈청을, 효소 결합 면역흡착 검정 (ELISA) 에 의해 항체 반응의 유도에 대해 시험하였다. y-축은 혈청 중 항-Zika IgG 의 나노그램 (ng) 수를 보여준다. x-축은 시험한 각각의 군 및 마우스를 보여준다 (예를 들어, "G1M1" 은 군 1 마우스 1 을 나타냄). 항체 반응은 면역화된 마우스에서 유도되었으나, 대조군 마우스에서는 유도되지 않았다. 에러 바는 SEM 을 보여준다.
증상 평가. 중량 및 온도에서의 변화를 포함하여, Zika 감염 증상을 마우스에서 평가하였다. 도 9 는 Ad5 [E1-, E2b-]-Zika-E 백신 또는 Ad5 [E1-, E2b-]-null 빈 벡터 (대조군으로서) 로의 백신화 후 Zika 바이러스 감염의 마우스 모델에서의 중량 손실을 설명한다 (Rossi et al. Am J Trop Med Hyg. 2016 Jun 1;94(6):1362-9). A129 마우스의 군 (n=10/군) 을 1x1010 VP 의 Ad5 [E1-, E2b-]-Zika-E 또는 1x1010 VP 의 Ad5 [E1-, E2b-]-null 빈 벡터 (대조군에 대함) 로 1 회 면역화하였다. 면역화 후 30 일에, 마우스를 Zika 바이러스의 병원성 균주 (복강내 주입 (IP) 된 5x105 플라크 형성 단위 (PFU) 의 Zika 바이러스 균주 FSS13025) 로 챌린지하였다. 마우스를 중량 변화에 대해 모니터링하였다. 도 10 은 Ad5 [E1-, E2b-]-Zika-E 백신 또는 Ad5 [E1-, E2b-]-null 빈 벡터 (대조군으로서) 로의 백신화 후 Zika 바이러스 감염의 마우스 모델에서의 온도 변화를 설명한다 (Rossi et al. Am J Trop Med Hyg. 2016 Jun 1;94(6):1362-9). A129 마우스의 군 (n=10/군) 을 1x1010 VP 의 Ad5 [E1-, E2b-]-Zika-E 2015wt 또는 1x1010 VP 의 Ad5 [E1-, E2b-]-null (대조군) 로 1 회 면역화하였다. 면역화 후 30 일에, 마우스를 Zika 바이러스의 병원성 균주 (복강내 주입 (IP) 된 5x105 PFU 의 Zika 바이러스 균주 FSS13025) 로 챌린지하였다. 마우스를 온도 변화에 대해 모니터링하였다.
Ad5 [ E1 -, E2b -]- Zika 야생형 (wt) 2015 및 Ad5 [ E1 -, E2b -]- Zika 야생형 (wt) 2015 전장 (FL) 백신의 전임상 평가
모든 Ad5 [E1-, E2b-]-Zika 백신은 실시예 1 에서 기재한 바와 같은 Zika 삽입물로의 백신 제조를 포함하였다.
CMI 및 CTL 반응. 마우스에서의 CMI 및 CTL 반응을 효소 결합 면역스팟 (ELISPOT) 검정에 의해 평가하였다. 도 11 은 Ad5 [E1-, E2b-]-Zika 백신으로 면역화된 마우스로부터의 비장세포에서의 세포 매개 면역 (CMI) 반응 및 세포용해 T 림프구 (CTL) 반응을 설명한다. C57BL/6 마우스 (n = 5/군) 를 1x1010 바이러스 입자 (VP) 의 Ad5 [E1-, E2b-]-Zika 백신 또는 1x1010 VP Ad5 [E1-, E2b-]-null (빈 벡터 대조군) 로, 2 주 간격으로 2 회 면역화하였다. SEQ ID NO: 32 의 뉴클레오티드 서열 및 SEQ ID NO: 33 의 아미노산 서열 (SEQ ID NO: 32 는 뉴클레오티드 서열이며 SEQ ID NO: 33 은 SEQ ID NO: 32 에 상응하는 아미노산 서열임) 에 의해 인코딩되는 Zika 항원 단백질을 포함하는 Ad5 [E1-, E2b-]-Zika 야생형 (wt) 2015 를 비롯하여, 2 가지 유형의 Zika 백신을 시험하였다. SEQ ID NO: 33 의 Zika wt 2015 항원은, Zika 외피 단백질의 세포외 도메인의 절두형 부위인 3423-aa Zika 다단백질의 아미노산 409-690 에 상응한다 (SEQ ID NO: 23). 시험한 두 번째 Zika 백신은, SEQ ID NO: 36 의 뉴클레오티드 서열 및 SEQ ID NO: 37 의 아미노산 서열 (SEQ ID NO: 36 은 뉴클레오티드 서열이며 SEQ ID NO: 37 은 SEQ ID NO: 36 에 상응하는 아미노산 서열임) 에 의해 인코딩되는 Zika 항원 단백질을 포함하는 Ad5 [E1-, E2b-]-Zika 야생형 (wt) 2015 전장 (FL) 였다. Ad5 [E1-, E2b-]-Zika 야생형 (wt) 2015 전장 (FL) 에서의 Zika 항원은, 2 개의 C-말단 막관통 앵커 도메인 및 세포외 루프, (원형질 막에 대한 표적화가 보장되도록 M 단백질의 일부, 및 번역의 개시가 보장되도록 N-말단에서의 KOZAK 서열 (GCCGCCACC) 을 인코딩하는) ZIKAV 게놈에서의 외피 단백질의 바로 업스트림인 2 개의 막관통 도메인, 세포외 루프 직전의 2 개의 막관통 도메인, 및 세포외 루프를 비롯하여, 3423-aa Zika 다단백질의 아미노산 271-805 (SEQ ID NO: 23) 에 상응하는 전체 외피 단백질을 포함한다. 막관통 도메인의 포함은 mRNA-로딩된 리보솜의 소포체로의 이동, 당화 및 단백질의 원형질 막으로의 궁극적 이동 및 테더링이 보장되도록 신호 서열로서 역할할 수 있으며, 이는 모두 결국 항원성을 개선시키고 그에 따라 면역 반응을 생성시킬 수 있다. Ad5 [E1-, E2b-]-null (Viraquest) 및 Ad5 [E1-, E2b-]-null (E) (내부적으로 제조된 null 제어 벡터) 를 포함하여, 2 개의 Ad5 [E1-, E2b-]-null 을 비교용 제어 벡터로서 사용하였다. 비장세포를 최종 면역화 7 일 후 단리하고, Zika 2014 펩티드 풀, SIV-Nef 펩티드 풀 (음성 대조군), SIV-Gag 펩티드 풀 (음성 대조군) 및 콘카나발린 A (양성 대조군) 에 노출시키고, CMI 반응 (IFN-γ 및 IL-2) 및 CTL 반응 (그랜자임 B) 에 대해 ELISPOT 에 의해 평가하였다. 데이터를 106 비장세포 당 스팟 형성 세포 (SFC) 의 수로서 보고하며, 에러 바는 SEM 을 보여준다. 도 11a 는 면역화된 마우스 및 대조군 마우스로부터의 비장세포를 Zika 2014 펩티드 풀 및 대조군에 노출시킨 후 IFN-γ CMI 반응을 설명한다. 도 11b 는 면역화된 마우스 및 대조군 마우스로부터의 비장세포를 Zika 2014 펩티드 풀 및 대조군에 노출시킨 후 IL-2 CMI 반응을 설명한다. 도 11c 는 면역화된 마우스 및 대조군 마우스로부터의 비장세포를 Zika 2014 펩티드 풀 및 대조군에 노출시킨 후 그랜자임 B CTL 반응을 설명한다.
세포내 사이토카인 발현. 유세포 분석은, 세포내 사이토카인 발현을 평가하여 측정되는 바와 같은 림프구 활성화의 수준을 밝혀내었다. 도 12 는 Ad5 [E1-, E2b-]-Zika 백신으로 면역화된 마우스로부터의 비장세포에서 IFN-γ 및 IFN-γ/TNF-α 의 세포내 발현의 유세포 분석에 의해 측정되는 바와 같은 림프구 활성화를 설명한다. C57BL/6 마우스를 1x1010 바이러스 입자 (VP) 의 Ad5 [E1-, E2b-]-Zika 백신 또는 1x1010 VP Ad5 [E1-, E2b-]-null (빈 벡터 대조군) 으로 2 주 간격으로 2 회 면역화하였다. SEQ ID NO: 32 의 뉴클레오티드 서열 및 SEQ ID NO: 33 의 아미노산 서열 (SEQ ID NO: 32 는 뉴클레오티드 서열이며 SEQ ID NO: 33 은 SEQ ID NO: 32 에 상응하는 아미노산 서열임) 에 의해 인코딩되는 Zika 항원 단백질을 포함하는 Ad5 [E1-, E2b-]-Zika 야생형 (wt) 2015 를 비롯하여, 2 개 유형의 Zika 백신을 시험하였다. SEQ ID NO: 33 의 Zika wt 2015 항원은, Zika 외피 단백질의 세포외 도메인의 절두형 부위인 3423-aa Zika 다단백질의 아미노산 409-690 이다 (SEQ ID NO: 23). 시험한 두 번째 Zika 백신은 SEQ ID NO: 36 의 뉴클레오티드 서열 및 SEQ ID NO: 37 의 아미노산 서열 (SEQ ID NO: 36 은 뉴클레오티드 서열이며 SEQ ID NO: 37 은 SEQ ID NO: 36 의 아미노산 서열에 상응함) 에 의해 인코딩되는 Zika 항원 단백질을 포함하는 Ad5 [E1-, E2b-]-Zika 야생형 (wt) 2015 전장 (FL) 였다. Ad5 [E1-, E2b-]-Zika 야생형 (wt) 2015 전장 (FL) 에서의 Zika 항원은, 2 개의 C-말단 막관통 앵커 도메인 및 세포외 루프, (원형질 막에 대한 표적화가 보장되도록 M 단백질의 일부, 및 번역의 개시가 보장되도록 N-말단에서의 KOZAK 서열 (GCCGCCACC) 을 인코딩하는) ZIKAV 게놈에서의 외피 단백질의 바로 업스트림인 2 개의 막관통 도메인, 세포외 루프 직전의 2 개의 막관통 도메인, 및 세포외 루프를 비롯하여, 3423-aa Zika 다단백질의 아미노산 271-805 (SEQ ID NO: 23) 에 상응하는 전체 외피 단백질을 포함한다. 막관통 도메인의 포함은 mRNA-로딩된 리보솜의 소포체로의 이동, 당화 및 단백질의 원형질 막으로의 궁극적 이동 및 테더링이 보장되도록 신호 서열로서 역할할 수 있으며, 이는 모두 결국 항원성을 개선시키고 그에 따라 면역 반응을 생성시킬 수 있다. Ad5 [E1-, E2b-]-null (Viraquest) 및 Ad5 [E1-, E2b-]-null (E) (내부적으로 제조된 null 제어 벡터) 을 포함하는 2 개의 Ad5 [E1-, E2b-]-null 을 비교용 제어 벡터로서 사용하였다. 최종 면역화 7 일 후, 면역화된 마우스로부터 단리된 비장세포를 Zika 바이러스 펩티드 풀에 노출시키고, 유세포 분석을 사용하여 CD8+ 세포 및 CD4+ 세포에서 IFN-γ 및 IFN-γ/TNF-α 의 세포내 사이토카인 생산을 측정하였다. 반응의 특이성을 비장세포의 PMA/이오노마이신에 대한 반응성 (데이터는 나타내지 않음) (양성 대조군) 에 대한 반응성 및 비장세포의 SIV-nef 펩티드 풀 (음성 대조군) 및 배지 (음성 대조군) 에 대한 반응성의 결여에 의해 나타내었다. 데이터를 IFN-γ 또는 IFN-γ 및 TNF-α 를 발현하는 CD8+ 또는 CD4+ 비장세포의 백분율로서 보고하며, 에러 바는 SEM 을 보여준다. 도 12a 는 면역화된 마우스 및 대조군 마우스로부터의 비장세포를 Zika 2014 펩티드 풀 및 대조군에 노출시킨 후 CD8+ 비장세포에서 IFN-γ 의 세포내 발현의 유세포 분석에 의해 측정되는 바와 같은 림프구 활성화를 설명한다. 도 12b 는 면역화된 마우스 및 대조군 마우스로부터의 비장세포를 Zika 2014 펩티드 풀 및 대조군에 노출시킨 후 CD4+ 비장세포에서 IFN-γ 의 세포내 발현의 유세포 분석에 의해 측정되는 바와 같은 림프구 활성화를 설명한다. 도 12c 는 면역화된 마우스 및 대조군 마우스로부터의 비장세포를 Zika 2014 펩티드 풀 및 대조군에 노출시킨 후 CD8+ 비장세포에서 IFN-γ 및 TNF-α 의 세포내 발현의 유세포 분석에 의해 측정되는 바와 같은 림프구 활성화를 설명한다. 도 12d 는 면역화된 마우스 및 대조군 마우스로부터의 비장세포를 Zika 2014 펩티드 풀 및 대조군에 노출시킨 후 CD4+ 비장세포에서 IFN-γ 및 TNF-α 의 세포내 발현의 유세포 분석에 의해 측정되는 바와 같은 림프구 활성화를 설명한다.
항원-특이적 항체 생산. Zika-특이적 IgG 항체를, 면역화된 마우스의 혈청에서 효소 결합 면역흡착 검정 (ELISA) 에 의해 측정하였다. 도 13 는 Ad5 [E1-, E2b-]-Zika 백신으로 면역화된 마우스의 혈청에서의 항-Zika IgG 반응을 설명한다. C57BL/6 마우스 (n=5/군) 를 1x1010 바이러스 입자 (VP) 의 Ad5 [E1-, E2b-]-Zika 야생형 (wt) 2015 백신 또는 Ad5 [E1-, E2b-]-Zika wt 2015 전장 (FL) 백신으로 2 주 간격으로 2 회 면역화하였다. Ad5 [E1-, E2b-]-null (Viraquest) 및 Ad5 [E1-, E2b-]-null (E) (내부적으로 제조된 null 제어 벡터) 을 포함하여, 2 개의 Ad5 [E1-, E2b-]-null 을 비교용 제어 벡터로서 사용하였다. 최종 면역화 7 일 후 마우스로부터 혈청을 수집하고, Zika 바이러스 외피 단백질-1 에 대한 항원 특이적 항체에 대해 효소 결합 면역흡착 검정 (ELISA) 에 의해 평가하였다. y-축은 혈청 중 항-Zika IgG 의 나노그램 (ng) 수를 보여준다. Ad5 [E1-, E2b-]-Zika wt 2015 군에서, 5 마리 중 3 마리 (3/5) 가 항체 양성이었다. Ad5 [E1-, E2b-]-Zika wt 2015 FL 군에서, 5 마리 중 5 마리 (5/5) 가 항체 양성이었다.
실시예 5
Ad5 [ E1 -, E2b -]- Zika 백신으로의 Zika 감염 예방
이 실시예는, 아데노바이러스 벡터에 삽입된 Zika 항원 (예를 들어, SEQ ID NO: 11 - SEQ ID NO: 21 또는 SEQ ID NO: 23 - SEQ ID NO: 37) 중 임의의 하나, 또는 이의 임의의 조합을 갖는 Ad5 [E1-, E2b-] 를 포함하는 본 개시물의 임의의 Ad5 [E1-, E2b-]-Zika 백신을 사용한 예방에 의한 Zika 감염 예방을 설명한다. Ad5 [E1-, E2b-]-Zika 백신은 단일-표적화 Zika 백신에 대해 실시예 1 에서 기재한 바와 같이 구축되거나 다중-표적화 Zika 백신에 대해 실시예 2 에서 기재한 바와 같이 구축된다. Ad5 [E1-, E2b-]-Zika 백신은 총 2 회 면역화 동안 2 주마다 대상에게 투여된다. 백신은 피하 투여된다. Zika 바이러스에 대한 세포성 및 체액성 면역 반응, 및 Zika 바이러스에 의한 감염에 대한 보호가 Ad5 [E1-, E2b-]-Zika 백신으로의 대상 면역화 후 유도된다. 즉, Ad5 [E1-, E2b-]-Zika 백신으로의 예방 면역력이 대상에게 부여된다. 대상은 인간, 비-인간 영장류, 또는 임의의 다른 비-인간 동물을 포함하는 임의의 동물이다.
실시예 6
Ad5 [E1-, E2b -]- Zika 백신 및 공동자극 분자로의 조합 예방에 의한 Zika 감염 예방
이 실시예는, 본원에 기재된 임의의 공동자극 분자와 조합된, 아데노바이러스 벡터에 삽입된 Zika 항원 (예를 들어, SEQ ID NO: 11 - SEQ ID NO: 21 또는 SEQ ID NO: 23 - SEQ ID NO: 37) 중 임의의 하나, 또는 이의 임의의 조합을 갖는 Ad5 [E1-, E2b-] 를 포함하는 본 개시물의 임의의 Ad5 [E1-, E2b-]-Zika 백신을 사용한 예방에 의한 Zika 감염 예방을 설명한다. Ad5 [E1-, E2b-]-Zika 백신은 단일-표적화 Zika 백신에 대해 실시예 1 에서 기재한 바와 같이 구축되거나, 다중-표적화 Zika 백신에 대해 실시예 2 에서 기재한 바와 같이 구축된다. Ad5 [E1-, E2b-]-Zika 백신은 총 2 회의 면역화 동안 1 회 또는 2 주마다 피하, 피부내 또는 근육내로 대상에게 투여된다. Ad 백신은 백신 제형과 혼합된 톨-유사 수용체 (TLR) 작용제와 같은 공동자극 분자와 동시 투여된다. Zika 바이러스에 대한 세포성 및 체액성 면역 반응, 및 Zika 바이러스에 의한 감염에 대한 보호가 공동자극 분자와 조합된 Ad5 [E1-, E2b-]-Zika 백신으로의 대상 면역화 후 유도된다. 즉, 공동자극 분자와 조합된 Ad5 [E1-, E2b-]-Zika 백신의 예방 면역력이 대상에게 부여된다. 대상은 인간, 비-인간 영장류, 또는 임의의 다른 비-인간 동물을 포함하는 임의의 동물이다.
실시예 7
Ad5 [E1-, E2b -]- Zika 백신 및 면역학적 융합 파트너로의 예방에 의한 Zika 감염 예방
이 실시예는, 아데노바이러스 벡터에 삽입된 Zika 항원 (예를 들어, SEQ ID NO: 11 - SEQ ID NO: 21 또는 SEQ ID NO: 23 - SEQ ID NO: 37) 중 임의의 하나, 또는 이의 임의의 조합을 갖는 Ad5 [E1-, E2b-] 를 포함하는 본 개시물의 임의의 Ad5 [E1-, E2b-]-Zika 백신 뿐만 아니라 또한 아데노바이러스 벡터에 의해 인코딩되는, 본원에 기재된 임의의 면역학적 융합 파트너를 사용한 예방에 의한 Zika 감염 예방을 설명한다. Ad5 [E1-, E2b-]-Zika 백신은 단일-표적화 Zika 백신에 대해 실시예 1 에서 기재한 바와 같이 구축되거나, 다중-표적화 Zika 백신에 대해 실시예 2 에서 기재한 바와 같이 구축되고, Ad 벡터는 추가적으로 본원에 개시된 임의의 면역학적 융합 파트너를 인코딩한다. Ad5 [E1-, E2b-]-Zika 백신은 총 2 회 면역화 동안 2 주마다 대상에게 투여된다. 면역학적 융합 파트너를 갖는 백신은 피하 투여된다. 증강된 Zika 바이러스에 대한 세포성 및 체액성 면역 반응, 및 Zika 바이러스에 의한 감염에 대한 보호가 Ad5 [E1-, E2b-]-Zika 백신-면역학적 융합 파트너로의 대상 면역화 후 유도된다. 즉, Ad5 [E1-, E2b-]-Zika 백신-면역학적 융합 파트너로의 예방 면역력이 대상에게 부여된다. 대상은 인간, 비-인간 영장류, 또는 임의의 다른 비-인간 동물을 포함하는 임의의 동물이다.
실시예 8
Ad5 [ E1 -, E2b -]-황열 바이러스 ( YFV ) 백신으로의 황열 바이러스 감염 예방
이 실시예는, 아데노바이러스 벡터에 삽입된 YFV 항원 (예를 들어, SEQ ID NO: 1 또는 SEQ ID NO: 22) 중 임의의 하나, 또는 이의 조합을 갖는 Ad5 [E1-, E2b-] 를 포함하는 본 개시물의 임의의 Ad5 [E1-, E2b-]- YFV 백신을 사용한 예방에 의한 황열 바이러스 (YFV) 감염 예방을 설명한다. Ad5 [E1-, E2b-]- YFV 백신은 단일-표적화 YFV 백신에 대해 실시예 1 로부터 조정된 바와 같이 구축되거나, 다중-표적화 YFV 백신에 대해 실시예 2 로부터 조정된 바와 같이 구축된다. Ad5 [E1-, E2b-]- YFV 백신은 총 2 회 면역화 동안 2 주마다 대상에게 투여된다. 백신은 피하 투여된다. 황열 바이러스에 대한 세포성 및 체액성 면역 반응, 및 황열 바이러스에 의한 감염에 대한 보호가 Ad5 [E1-, E2b-]- YFV 백신으로의 대상 면역화 후 유도된다. 즉, Ad5 [E1-, E2b-]- YFV 백신으로의 예방 면역력이 대상에게 부여된다. 대상은 인간, 비-인간 영장류, 또는 임의의 다른 비-인간 동물을 포함하는 임의의 동물이다.
실시예 9
Ad5 [ E1 -, E2b -]-일본 뇌염 바이러스 ( JEV ) 백신으로의 일본 뇌염 바이러스 예방
이 실시예는, 아데노바이러스 벡터에 삽입된 JEV 항원 (예를 들어, SEQ ID NO: 2) 중 임의의 하나, 또는 이의 임의의 조합을 갖는 Ad5 [E1-, E2b-] 를 포함하는 본 개시물의 임의의 Ad5 [E1-, E2b-]- JEV 백신을 사용한 예방에 의한 일본 뇌염 바이러스 (JEV) 감염 예방을 설명한다. Ad5 [E1-, E2b-]- JEV 백신은 단일-표적화 JEV 백신에 대해 실시예 1 로부터 조정된 바와 같이 구축되거나, 다중-표적화 JEV 백신에 대해 실시예 2 로부터 조정된 바와 같이 구축된다. Ad5 [E1-, E2b-]- JEV 백신은 총 2 회 면역화 동안 2 주마다 대상에게 투여된다. 백신은 피하 투여된다. 일본 뇌염 바이러스에 대한 세포성 및 체액성 면역 반응, 및 일본 뇌염 바이러스에 의한 감염에 대한 보호가 Ad5 [E1-, E2b-]-JEV 백신으로의 대상 면역화 후 유도된다. 즉, Ad5 [E1-, E2b-]-JEV 백신으로의 예방 면역력이 대상에게 부여된다. 대상은 인간, 비-인간 영장류, 또는 임의의 다른 비-인간 동물을 포함하는 임의의 동물이다.
실시예 10
Ad5 [ E1 -, E2b -]-진드기 매개 뇌염 바이러스 ( TBEV ) 백신으로의 진드기 매개 뇌염 바이러스 감염 예방
이 실시예는, 아데노바이러스 벡터에 삽입된 TBEV 항원 (예를 들어, SEQ ID NO: 3 - SEQ ID NO: 5) 중 임의의 하나, 또는 이의 임의의 조합을 갖는 Ad5 [E1-, E2b-] 를 포함하는 본 개시물의 임의의 Ad5 [E1-, E2b-]- TBEV 백신을 사용한 예방에 의한 진드기 매개 뇌염 바이러스 (TBEV) 감염 예방을 설명한다. Ad5 [E1-, E2b-]-TBEV 백신은 단일-표적화 TBEV 백신에 대해 실시예 1 로부터 조정된 바와 같이 구축되거나, 다중-표적화 TBEV 백신에 대해 실시예 2 로부터 조정된 바와 같이 구축된다. Ad5 [E1-, E2b-]-TBEV 백신은 총 2 회 면역화 동안 2 주마다 대상에게 투여된다. 백신은 피하 투여된다. 진드기 매개 뇌염 바이러스에 대한 세포성 및 체액성 면역 반응, 및 진드기 매개 뇌염 바이러스에 의한 감염에 대한 보호가 Ad5 [E1-, E2b-]-TBEV 백신으로의 대상 면역화 후 유도된다. 즉, Ad5 [E1-, E2b-]-TBEV 백신으로의 예방 면역력이 대상에게 부여된다. 대상은 인간, 비-인간 영장류, 또는 임의의 다른 비-인간 동물을 포함하는 임의의 동물이다.
실시예 11
Ad5 [ E1 -, E2b -]-뎅기열 바이러스 ( DENV ) 백신으로의 뎅기열 바이러스 감염 예방
이 실시예는, 아데노바이러스 벡터에 삽입된 DENV 항원 (예를 들어, SEQ ID NO: 6 - SEQ ID NO: 9) 중 임의의 하나, 또는 이의 임의의 조합을 갖는 Ad5 [E1-, E2b-] 를 포함하는 본 개시물의 임의의 Ad5 [E1-, E2b-]-DENV 백신을 사용한 예방에 의한 뎅기열 바이러스 (DENV) 감염의 예방을 설명한다. Ad5 [E1-, E2b-]-DENV 백신은 단일-표적화 DENV 백신에 대해 실시예 1 로부터 조정된 바와 같이 구축되거나, 다중-표적화 DENV 백신에 대해 실시예 2 로부터 조정된 바와 같이 구축된다. Ad5 [E1-, E2b-]-DENV 백신은 총 2 회 면역화 동안 2 주마다 대상에게 투여된다. 백신은 피하 투여된다. 뎅기열 바이러스에 대한 세포성 및 체액성 면역 반응, 및 뎅기열 바이러스에 의한 감염에 대한 보호가 Ad5 [E1-, E2b-]-DENV 백신으로의 대상 면역화 후 유도된다. 즉, Ad5 [E1-, E2b-]-DENV 백신으로의 예방 면역력이 대상에게 부여된다. 대상은 인간, 비-인간 영장류, 또는 임의의 다른 비-인간 동물을 포함하는 임의의 동물이다.
실시예 12
Ad5 [ E1 -, E2b -]- 웨스트 나일 바이러스 ( WNV ) 백신으로의 웨스트 나일 바이러스 감염 예방
이 실시예는, 아데노바이러스 벡터에 삽입된 WNV 항원 (예를 들어, SEQ ID NO: 10) 중 임의의 하나, 또는 이의 임의의 조합을 갖는 Ad5 [E1-, E2b-] 를 포함하는 본 개시물의 임의의 Ad5 [E1-, E2b-]-WNV 백신을 사용한 예방에 의한 웨스트 나일 바이러스 (WNV) 감염 예방을 설명한다. Ad5 [E1-, E2b-]-WNV 백신은 단일-표적화 WNV 백신에 대해 실시예 1 로부터 조정된 바와 같이 구축되거나, 다중-표적화 WNV 백신에 대해 실시예 2 로부터 조정된 바와 같이 구축된다. Ad5 [E1-, E2b-]-WNV 백신은 총 2 회 면역화 동안 2 주마다 대상에게 투여된다. 백신은 피하 투여된다. 웨스트 나일 바이러스에 대한 세포성 및 체액성 면역 반응, 및 웨스트 나일 바이러스에 의한 감염에 대한 보호가 Ad5 [E1-, E2b-]-WNV 백신으로의 대상 면역화 후 유도된다. 즉, Ad5 [E1-, E2b-]-WNV 백신으로의 예방 면역력이 대상에게 부여된다. 대상은 인간, 비-인간 영장류, 또는 임의의 다른 비-인간 동물을 포함하는 임의의 동물이다.
실시예 13
Ad5 [ E1 -, E2b -]- 플라비바이러스 백신으로의 플라비바이러스 감염 예방
이 실시예는, 본 개시물의 임의의 Ad5 [E1-, E2b-]-플라비바이러스 백신을 사용한 예방에 의한 플라비바이러스 감염 예방을 설명한다. Ad5 [E1-, E2b-]-플라비바이러스 백신은: 실시예 5 에서 기재하는 바와 같은 단일-표적화 또는 다중-표적화 Ad5 [E1-, E2b-]-Zika 벡터, 실시예 8 에서 기재하는 바와 같은 단일-표적화 또는 다중-표적화 Ad5 [E1-, E2b-]-YFV 벡터, 실시예 9 에서 기재하는 바와 같은 단일-표적화 또는 다중-표적화 Ad5 [E1-, E2b-]-JEV 벡터, 실 시예 10 에서 기재하는 바와 같은 단일-표적화 또는 다중-표적화 Ad5 [E1-, E2b-]-TBEV 벡터, 실시예 11 에서 기재하는 바와 같은 단일-표적화 또는 다중-표적화 Ad5 [E1-, E2b-]-DENV 벡터, 실시예 12 에서 기재하는 바와 같은 단일-표적화 또는 다중-표적화 Ad5 [E1-, E2b-]-WNV 벡터의 임의의 조합으로 이루어진다. 대안적으로, Ad5 [E1-, E2b-]-플라비바이러스 백신은 아데노바이러스 벡터에 삽입된 상이한 플라비바이러스로부터의 적어도 2 개 항원의 임의의 조합을 갖는 Ad5 [E1-, E2b-] 로 구성된다. 예를 들어, 적어도 2 개 항원은 Zika 항원 (예를 들어, SEQ ID NO: 11 - SEQ ID NO: 21 또는 SEQ ID NO: 23 - SEQ ID NO: 37 중 임의의 하나), YFV 항원 (예를 들어, SEQ ID NO: 1 또는 SEQ ID NO: 22), JEV 항원 (예를 들어, SEQ ID NO: 2), TBEV 항원 (예를 들어, SEQ ID NO: 3 - SEQ ID NO: 5), DENV 항원 (예를 들어, SEQ ID NO: 6 - SEQ ID NO: 9), 및/또는 WNV 항원 (예를 들어, SEQ ID NO: 10) 의 임의의 조합으로 구성된다.
Ad5 [E1-, E2b-]-플라비바이러스 백신은 총 2 회 면역화 동안 2 주마다 대상에게 투여된다. 백신은 피하 투여된다. 플라비바이러스에 대한 세포성 및 체액성 면역 반응, 및 플라비바이러스에 의한 감염에 대한 보호가 Ad5 [E1-, E2b-]-플라비바이러스 백신으로의 대상 면역화 후 유도된다. 즉, Ad5 [E1-, E2b-]-플라비바이러스 백신으로의 예방 면역력이 대상에게 부여된다. 대상은 인간, 비-인간 영장류, 또는 임의의 다른 비-인간 동물을 포함하는 임의의 동물이다.
본 발명의 바람직한 구현예가 본원에 표시되고 기재되었으나, 이러한 구현예가 단지 예로서 제공된다는 것이 당업자에게 명백할 것이다. 수많은 변이, 변화 및 교체가 이제 본 발명을 벗어나지 않고 당업자에게 발생할 수 있다. 본원에 기재된 본 발명의 구현예에 대한 다양한 대안이 본 발명을 실시하는데 이용될 수 있다는 것이 이해되어야 한다. 하기 청구항은 본 발명의 범주를 정의하며 이들 청구항 및 그의 균등물의 범주 내의 방법 및 구조가 그에 의해 포괄되는 것으로 의도된다.
서열
Figure pct00019
Figure pct00020
Figure pct00021
Figure pct00022
Figure pct00023
Figure pct00024
Figure pct00025
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SEQUENCE LISTING <110> ETUBICS CORPORATION <120> COMPOSITIONS AND METHODS FOR FLAVIVIRUS VACCINATION <130> 39891-724.601 <140> <141> <150> 62/363,131 <151> 2016-07-15 <160> 135 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 10862 <212> DNA <213> Yellow fever virus <400> 1 agtaaatcct gtgtgctaat tgaggtgcat tggtctgcaa atcgagttgc taggcaataa 60 acacatttgg attaatttta atcgttcgtt gagcgattag cagagaactg accagaacat 120 gtctggtcgt aaagctcagg gaaaaaccct gggcgtcaat atggtacgac gaggagttcg 180 ctccttgtca aacaaaataa aacaaaaaac aaaacaaatt ggaaacagac ctggaccttc 240 aagaggtgtt caaggattta tctttttctt tttgttcaac attttgactg gaaaaaagat 300 cacagcccac ctaaagaggt tgtggaaaat gctggaccca agacaaggct tggctgttct 360 aaggaaagtc aagagagtgg tggccagttt gatgagagga ttgtcctcaa ggaaacgccg 420 ttcccatgat gttctgactg tgcaattcct aattttggga atgctgttga tgacgggtgg 480 agtgaccttg gtgcggaaaa acagatggtt gctcctaaat gtgacatctg aggacctcgg 540 gaaaacattc tctgtgggca caggcaactg cacaacaaac attttggaag ccaagtactg 600 gtgcccagac tcaatggaat acaactgtcc 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ggcggtggac atgcaaactc tgaccccagt 2040 tgggaggttg ataaccgcta accccgtaat cactgaaagc actgagaact ctaagatgat 2100 gctggaactt gatccaccat ttggggactc ttacattgtc ataggagtcg gggagaagaa 2160 gatcacccac cactggcaca ggagtggcag caccattgga aaagcatttg aagccactgt 2220 gagaggtgcc aagagaatgg cagtcttggg agacacagcc tgggactttg gatcagttgg 2280 aggcgctctc aactcattgg gcaagggcat ccatcaaatt tttggagcag ctttcaaatc 2340 attgtttgga ggaatgtcct ggttctcaca aattctcatt ggaacgttgc tgatgtggtt 2400 gggtctgaac acaaagaatg gatctatttc ccttatgtgc ttggccttag ggggagtgtt 2460 gatcttctta tccacagccg tctctgctga tgtggggtgc tcggtggact tctcaaagaa 2520 ggagacgaga tgcggtacag gggtgttcgt ctataacgac gttgaagcct ggagggacag 2580 gtacaagtac catcctgact ccccccgtag attggcagca gcagtcaagc aagcctggga 2640 agatggtatc tgcgggatct cctctgtttc aagaatggaa aacatcatgt ggagatcagt 2700 agaaggggag ctcaacgcaa tcctggaaga gaatggagtt caactgacgg tcgttgtggg 2760 atctgtaaaa aaccccatgt ggagaggtcc acagagattg cccgtgcctg tgaacgagct 2820 gccccacggc tggaaggctt gggggaaatc 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861 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 26 gccgccacca tgttcacctg ttgcaagaag atgcccggca agagcatcca gcccgagaac 60 ctggaatacc ggatcatgct gcctgtgcac ggctcccagc acagcggcat gatcgtgaac 120 gacatcggcc acgagacaga cgagaaccgg gccaaggtgg aagtgacccc caacagccct 180 agagccgagg ccacactggg cggctttgga tctctgggcc tggactgcga gcctagaacc 240 ggcctggatt tcagcgacct gtactacctg accatgaaca acaagcactg gctggtgcac 300 aaagagtggt tccacgacat ccccctgccc tggcatgccg gcgctgatac aggcacaccc 360 cactggaaca acaaagaggc cctggtggag ttcaaggacg cccacgccaa gaggcagacc 420 gtggtggtgc tgggatctca ggaaggcgcc gtgcatacag ctctggctgg cgccctggaa 480 gccgaaatgg atggcgctaa gggccggctg tttagcggcc acctgaagtg ccggctgaag 540 atggacaagc tgcggctgaa gggcgtgtcc tacagcctgt gtaccgccgc cttcaccttc 600 accaaggtgc ccgccgaaac cctgcacggc accgtgacag tggaagtgca gtctgccggc 660 accgacggcc cttgtaaagt gcctgctcag atggccgtgg acatgcagac cctgacccct 720 gtgggcagac tgatcaccgc caaccccgtg 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cagccagatc ctgatcggca ccctgctcgt gtggctgggc 1500 ctgaacacca agaacggcag catctccctg acctgcctgg ctctgggcgg agtgatgatc 1560 ttcctgagca ccgccgtgtc cgccgatgtg ggctgtagcg tggacttcag caagaagtga 1620 <210> 31 <211> 536 <212> PRT <213> Zika virus <400> 31 Met Leu Thr Ser Gln Lys Val Ile Tyr Leu Val Met Ile Val Leu Ile 1 5 10 15 Val Pro Ala Tyr Ser Ile Ser Cys Ile Gly Val Ser Asn Arg Asp Leu 20 25 30 Val Glu Gly Met Ser Gly Gly Thr Trp Val Asp Val Val Leu Glu His 35 40 45 Gly Gly Cys Val Thr Glu Met Ala Gln Asp Lys Pro Thr Val Asp Ile 50 55 60 Glu Leu Val Thr Met Thr Val Ser Asn Met Ala Glu Val Arg Ser Tyr 65 70 75 80 Cys Tyr Glu Ala Ser Leu Ser Asp Met Ala Ser Ala Ser Arg Cys Pro 85 90 95 Thr Gln Gly Glu Pro Ser Leu Asp Lys Gln Ser Asp Thr Gln Ser Val 100 105 110 Cys Lys Arg Thr Leu Gly Asp Arg Gly Trp Gly Asn Gly Cys Gly Ile 115 120 125 Phe Gly Lys Gly Ser Leu Val Thr Cys Ser Lys Phe Thr Cys Cys Lys 130 135 140 Lys Met Pro Gly Lys Ser Ile Gln Pro Glu Asn Leu Glu Tyr Arg Ile 145 150 155 160 Met 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ggaaggcgcc gtgcatacag ctctggctgg cgccctggaa 480 gccgaaatgg atggcgccaa gggcagactg tctagcggcc acctgaagtg ccggctgaag 540 atggacaagc tgcggctgaa gggcgtgtcc tacagcctgt gtaccgccgc cttcaccttc 600 accaagatcc ccgccgaaac cctgcacggc accgtgacag tggaagtgca gtacgccggc 660 accctgggcc cttgtaaagt gcctgctcag atggccgtgg acatgcagac cctgacccct 720 gtgggcaggc tgatcaccgc caaccctgtg atcaccgaga gcaccgagaa cagcaagatg 780 atgctggaac tggacccccc cttcggcatc tcctacatcg tgatcggcgt gggcgagaag 840 aagatcaccc accactggtg a 861 <210> 35 <211> 283 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 35 Met Phe Ala Cys Ser Lys Lys Met Thr Gly Lys Ser Ile Gln Pro Glu 1 5 10 15 Asn Leu Glu Tyr Arg Ile Met Leu Ser Val His Gly Ser Gln His Ser 20 25 30 Gly Met Ile Val Asn Ile Thr Gly His Glu Thr Leu Glu Asn Arg Ala 35 40 45 Lys Val Glu Ile Thr Pro Asn Ser Pro Arg Ala Glu Ala Thr Leu Gly 50 55 60 Gly Phe Gly Ser Leu Gly Leu Asp Cys Glu Pro Arg Thr Gly Leu Asp 65 70 75 80 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<213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 36 gccgccacca tgagcaccag ccagaaagtg atctacctcg tgatgatcct gctgatcgcc 60 cctgcctaca gcatccggtg tatcggcgtg tccaaccggg acttcgtgga aggcatgagc 120 ggcggcacat gggtggacgt ggtgctggaa catggcggct gcgtgacagt gatggcccag 180 gacaagccca ccgtggacat cgagctcgtg accaccaccg tgtccaatat ggccgaagtg 240 cggagctact gctacgaggc cagcatcagc gacatggcca gcgacagcag atgccctaca 300 cagggcgagg cctacctgga caagcagagc gacacccagt acgtgtgcaa gcggaccctg 360 gtggatagag gctggggcaa tggctgcggc ctgtttggca agggcagcct cgtgacctgc 420 gccaagttcg cctgcagcaa gaagatgacc ggcaagagca tccagcccga gaacctggaa 480 taccggatca tgctgagcgt gcacggcagc cagcactccg gcatgatcgt gaacgacacc 540 ggccacgaga cagacgagaa ccgggccaag gtggaaatca cccccaacag ccctagagcc 600 gaggccacac tgggcggctt tggatctctg ggcctggact gcgagcctag aaccggcctg 660 gatttcagcg acctgtacta cctgaccatg aacaacaaac actggctggt gcacaaagag 720 tggttccacg acatccccct gccctggcat gccggcgctg atacaggcac accccactgg 780 aacaacaaag aggccctggt ggaattcaag gacgcccacg ccaagcggca gaccgtggtg 840 gtgctgggat ctcaggaagg cgccgtgcat acagctctgg ctggcgccct ggaagccgaa 900 atggatggcg ccaaaggcag actgagcagc ggccacctga agtgccggct gaagatggac 960 aagctgcggc tgaagggcgt gtcctacagc ctgtgtaccg ccgccttcac cttcaccaag 1020 atccccgccg agacactgca cggcaccgtg actgtggaag tgcagtacgc cggcaccgac 1080 ggcccttgta aagtgcctgc tcagatggcc gtggatatgc agaccctgac ccccgtgggc 1140 aggctgatca cagccaaccc tgtgatcacc gagagcaccg agaacagcaa gatgatgctg 1200 gaactggacc cccccttcgg cgactcctac atcgtgatcg gcgtgggaga gaagaagatc 1260 acccaccact ggcacagaag cggcagcacc atcggcaagg cctttgaggc tacagtgcgg 1320 ggagccaaga gaatggccgt gctgggagat accgcctggg actttggctc tgtgggcgga 1380 gccctgaact ctctgggcaa gggaatccac cagatcttcg gcgctgcctt caagagcctg 1440 ttcggcggca tgagctggtt cagccagatc ctgatcggca ccctgctgat gtggctgggc 1500 ctgaacacca agaacggcag catctccctg atgtgcctgg ctctgggagg cgtgctgatc 1560 ttcctgagca cagccgtgtc tgccgacgtg ggctgcagcg tggacttctc 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Sequence: Synthetic polypeptide <400> 88 Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val 1 5 10 15 Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly 20 25 30 Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn 35 40 45 Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile 50 55 60 Arg Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro 65 70 75 80 Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys 85 90 95 Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val 100 105 110 Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr 115 120 125 Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu 130 135 140 Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His 145 150 155 160 Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys 165 170 175 Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln 180 185 190 Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp 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gaccaacaac cacgtgatcg cgggcgccac cgacatcaat gcgttcagcg tcggctccgg 420 ccaaacctac ggcgtcgatg tggtcgggta tgaccgcacc caggatgtcg cggtgctgca 480 gctgcgcggt gccggtggcc tgccgtcggc ggcgatcggt ggcggcgtcg cggttggtga 540 gcccgtcgtc gcgatgggca acagcggtgg gcagggcgga acgccccgtg cggtgcctgg 600 cagggtggtc gcgctcggcc aaaccgtgca ggcgtcggat tcgctgaccg gtgccgaaga 660 gacattgaac gggttgatcc agttcgatgc cgcgatccag cccggtgatt cgggcgggcc 720 cgtcgtcaac ggcctaggac aggtggtcgg tatgaacacg gccgcgtccg ataacttcca 780 gctgtcccag ggtgggcagg gattcgccat tccgatcggg caggcgatgg cgatcgcggg 840 ccagatccga tcgggtgggg ggtcacccac cgttcatatc gggcctaccg ccttcctcgg 900 cttgggtgtt gtcgacaaca acggcaacgg cgcacgagtc caacgcgtgg tcgggagcgc 960 tccggcggca agtctcggca tctccaccgg cgacgtgatc accgcggtcg acggcgctcc 1020 gatcaactcg gccaccgcga tggcggacgc gcttaacggg catcatcccg gtgacgtcat 1080 ctcggtgacc tggcaaacca agtcgggcgg cacgcgtaca gggaacgtga cattggccga 1140 gggacccccg gcctgatttc gtcgcggata ccacccgccg gccggccaat tggattggcg 1200 ccagccgtga ttgccgcgtg agcccccgag ttccgtctcc cgtgcgcgtg gcatcgtgga 1260 agcaatgaac gaggcagaac acagcgtcga gcaccctccc gtgcagggca gtcacgtcga 1320 aggcggtgtg gtcgagcatc cggatgccaa ggacttcggc agcgccgccg ccctgcccgc 1380 cgatccgacc tggtttaagc acgccgtctt ctacgaggtg ctggtccggg cgttcttcga 1440 cgccagcgcg gacggttccg gcgatctgcg tggactcatc gatcgcctcg actacctgca 1500 gtggcttggc atcgactgca tctggttgcc gccgttctac gactcgccgc tgcgcgacgg 1560 cggttacgac attcgcgact tctacaaggt gctgcccgaa ttcggcaccg tcgacgattt 1620 cgtcgccctg gtcgacgccg ctcaccggcg aggtatccgc atcatcaccg acctggtgat 1680 gaatcacacc tcggagtcgc acccctggtt tcaggagtcc cgccgcgacc cagacggacc 1740 gtacggtgac tattacgtgt ggagcgacac cagcgagcgc tacaccgacg cccggatcat 1800 cttcgtcgac accgaagagt cgaactggtc attcgatcct gtccgccgac agttctactg 1860 gcaccgattc tt 1872 <210> 110 <211> 396 <212> DNA <213> Mycobacterium tuberculosis <400> 110 acggccgcgt ccgataactt ccagctgtcc cagggtgggc agggattcgc cattccgatc 60 gggcaggcga tggcgatcgc gggccagatc cgatcgggtg gggggtcacc caccgttcat 120 atcgggccta ccgccttcct cggcttgggt gttgtcgaca acaacggcaa cggcgcacga 180 gtccaacgcg tggtcgggag cgctccggcg gcaagtctcg gcatctccac cggcgacgtg 240 atcaccgcgg tcgacggcgc tccgatcaac tcggccaccg cgatggcgga cgcgcttaac 300 gggcatcatc ccggtgacgt catctcggtg acctggcaaa ccaagtcggg cggcacgcgt 360 acagggaacg tgacattggc cgagggaccc ccggcc 396 <210> 111 <211> 702 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 111 catatgcatc accatcacca tcacacggcc gcgtccgata acttccagct gtcccagggt 60 gggcagggat tcgccattcc gatcgggcag gcgatggcga tcgcgggcca gatccgatcg 120 ggtggggggt cacccaccgt tcatatcggg cctaccgcct tcctcggctt gggtgttgtc 180 gacaacaacg gcaacggcgc acgagtccaa cgcgtggtcg ggagcgctcc ggcggcaagt 240 ctcggcatct ccaccggcga cgtgatcacc gcggtcgacg gcgctccgat caactcggcc 300 accgcgatgg cggacgcgct taacgggcat catcccggtg acgtcatctc ggtgacctgg 360 caaaccaagt cgggcggcac gcgtacaggg aacgtgacat tggccgaggg acccccggcc 420 gaattcgacg acgacgacaa ggatccacct gacccgcatc agccggacat gacgaaaggc 480 tattgcccgg gtggccgatg gggttttggc gacttggccg tgtgcgacgg cgagaagtac 540 cccgacggct cgttttggca ccagtggatg caaacgtggt ttaccggccc acagttttac 600 ttcgattgtg tcagcggcgg tgagcccctc cccggcccgc cgccaccggg tggttgcggt 660 ggggcaattc cgtccgagca gcccaacgct ccctgagaat tc 702 <210> 112 <211> 1746 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 112 catatgcatc accatcacca tcacacggcc gcgtccgata acttccagct gtcccagggt 60 gggcagggat tcgccattcc gatcgggcag gcgatggcga tcgcgggcca gatccgatcg 120 ggtggggggt cacccaccgt tcatatcggg cctaccgcct tcctcggctt gggtgttgtc 180 gacaacaacg gcaacggcgc acgagtccaa cgcgtggtcg ggagcgctcc ggcggcaagt 240 ctcggcatct ccaccggcga cgtgatcacc gcggtcgacg gcgctccgat caactcggcc 300 accgcgatgg cggacgcgct taacgggcat catcccggtg acgtcatctc ggtgacctgg 360 caaaccaagt cgggcggcac gcgtacaggg aacgtgacat tggccgaggg acccccggcc 420 gaattcccgc tggtgccgcg cggcagcccg atgggctccg acgttcggga cctgaacgca 480 ctgctgccgg cagttccgtc cctgggtggt ggtggtggtt gcgcactgcc ggttagcggt 540 gcagcacagt gggctccggt tctggacttc gcaccgccgg gtgcatccgc atacggttcc 600 ctgggtggtc cggcaccgcc gccggcaccg ccgccgccgc cgccgccgcc gccgcactcc 660 ttcatcaaac aggaaccgag ctggggtggt gcagaaccgc acgaagaaca gtgcctgagc 720 gcattcaccg ttcacttctc cggccagttc actggcacag ccggagcctg tcgctacggg 780 cccttcggtc ctcctccgcc cagccaggcg tcatccggcc aggccaggat gtttcctaac 840 gcgccctacc tgcccagctg cctcgagagc cagcccgcta ttcgcaatca gggttacagc 900 acggtcacct tcgacgggac gcccagctac ggtcacacgc cctcgcacca tgcggcgcag 960 ttccccaacc actcattcaa gcatgaggat cccatgggcc agcagggctc gctgggtgag 1020 cagcagtact cggtgccgcc cccggtctat ggctgccaca cccccaccga cagctgcacc 1080 ggcagccagg ctttgctgct gaggacgccc tacagcagtg acaatttata ccaaatgaca 1140 tcccagcttg aatgcatgac ctggaatcag atgaacttag gagccacctt aaagggccac 1200 agcacagggt acgagagcga taaccacaca acgcccatcc tctgcggagc ccaatacaga 1260 atacacacgc acggtgtctt cagaggcatt caggatgtgc gacgtgtgcc tggagtagcc 1320 ccgactcttg tacggtcggc atctgagacc agtgagaaac gccccttcat gtgtgcttac 1380 tcaggctgca ataagagata ttttaagctg tcccacttac agatgcacag caggaagcac 1440 actggtgaga aaccatacca gtgtgacttc aaggactgtg aacgaaggtt ttttcgttca 1500 gaccagctca aaagacacca aaggagacat acaggtgtga aaccattcca gtgtaaaact 1560 tgtcagcgaa agttctcccg gtccgaccac ctgaagaccc acaccaggac tcatacaggt 1620 gaaaagccct tcagctgtcg gtggccaagt tgtcagaaaa agtttgcccg gtcagatgaa 1680 ttagtccgcc atcacaacat gcatcagaga aacatgacca aactccagct ggcgctttga 1740 gaattc 1746 <210> 113 <211> 672 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 113 catatgcatc accatcacca tcacacggcc gcgtccgata acttccagct gtcccagggt 60 gggcagggat tcgccattcc gatcgggcag gcgatggcga tcgcgggcca gatccgatcg 120 ggtggggggt cacccaccgt tcatatcggg cctaccgcct tcctcggctt gggtgttgtc 180 gacaacaacg gcaacggcgc acgagtccaa cgcgtggtcg ggagcgctcc ggcggcaagt 240 ctcggcatct ccaccggcga cgtgatcacc gcggtcgacg gcgctccgat caactcggcc 300 accgcgatgg cggacgcgct 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tacagggaac gtgacattgg ccgagggacc cccggccgaa 420 ttcatggtgg atttcggggc gttaccaccg gagatcaact ccgcgaggat gtacgccggc 480 ccgggttcgg cctcgctggt ggccgcggct cagatgtggg acagcgtggc gagtgacctg 540 ttttcggccg cgtcggcgtt tcagtcggtg gtctggggtc tgacggtggg gtcgtggata 600 ggttcgtcgg cgggtctgat ggtggcggcg gcctcgccgt atgtggcgtg gatgagcgtc 660 accgcggggc aggccgagct gaccgccgcc caggtccggg ttgctgcggc ggcctacgag 720 acggcgtatg ggctgacggt gcccccgccg gtgatcgccg agaaccgtgc tgaactgatg 780 attctgatag cgaccaacct cttggggcaa aacaccccgg cgatcgcggt caacgaggcc 840 gaatacggcg agatgtgggc ccaagacgcc gccgcgatgt ttggctacgc cgcggcgacg 900 gcgacggcga cggcgacgtt gctgccgttc gaggaggcgc cggagatgac cagcgcgggt 960 gggctcctcg agcaggccgc cgcggtcgag gaggcctccg acaccgccgc ggcgaaccag 1020 ttgatgaaca atgtgcccca ggcgctgcaa cagctggccc agcccacgca gggcaccacg 1080 ccttcttcca agctgggtgg cctgtggaag acggtctcgc cgcatcggtc gccgatcagc 1140 aacatggtgt cgatggccaa caaccacatg tcgatgacca actcgggtgt gtcgatgacc 1200 aacaccttga gctcgatgtt gaagggcttt gctccggcgg cggccgccca ggccgtgcaa 1260 accgcggcgc aaaacggggt ccgggcgatg agctcgctgg gcagctcgct gggttcttcg 1320 ggtctgggcg gtggggtggc cgccaacttg ggtcgggcgg cctcggtcgg ttcgttgtcg 1380 gtgccgcagg cctgggccgc ggccaaccag gcagtcaccc cggcggcgcg ggcgctgccg 1440 ctgaccagcc tgaccagcgc cgcggaaaga gggcccgggc agatgctggg cgggctgccg 1500 gtggggcaga tgggcgccag ggccggtggt gggctcagtg gtgtgctgcg tgttccgccg 1560 cgaccctatg tgatgccgca ttctccggca gccggcgata tcgccccgcc ggccttgtcg 1620 caggaccggt tcgccgactt ccccgcgctg cccctcgacc cgtccgcgat ggtcgcccaa 1680 gtggggccac aggtggtcaa catcaacacc aaactgggct acaacaacgc cgtgggcgcc 1740 gggaccggca tcgtcatcga tcccaacggt gtcgtgctga ccaacaacca cgtgatcgcg 1800 ggcgccaccg acatcaatgc gttcagcgtc ggctccggcc aaacctacgg cgtcgatgtg 1860 gtcgggtatg accgcaccca ggatgtcgcg gtgctgcagc tgcgcggtgc cggtggcctg 1920 ccgtcggcgg cgatcggtgg cggcgtcgcg gttggtgagc ccgtcgtcgc gatgggcaac 1980 agcggtgggc agggcggaac gccccgtgcg gtgcctggca gggtggtcgc gctcggccaa 2040 accgtgcagg cgtcggattc gctgaccggt gccgaagaga cattgaacgg gttgatccag 2100 ttcgatgccg cgatccagcc cggtgattcg ggcgggcccg tcgtcaacgg cctaggacag 2160 gtggtcggta tgaacacggc cgcgtcctag g 2191 <210> 115 <211> 51 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 115 caattacata tgcatcacca tcaccatcac acggccgcgt ccgataactt c 51 <210> 116 <211> 33 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 116 ctaatcgaat tcggccgggg gtccctcggc caa 33 <210> 117 <211> 48 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 117 caattagaat tcgacgacga cgacaaggat ccacctgacc cgcatcag 48 <210> 118 <211> 33 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 118 caattagaat tctcagggag cgttgggctg ctc 33 <210> 119 <211> 34 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 119 gcgaagctta tgaagttgct gatggtcctc atgc 34 <210> 120 <211> 36 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 120 cggctcgagt taaaataaat cacaaagact gctgtc 36 <210> 121 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 121 Met His His His His His His 1 5 <210> 122 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 122 Asp Asp Asp Lys 1 <210> 123 <211> 95 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 123 Met Cys Cys Thr Lys Ser Leu Leu Leu Ala Ala Leu Met Ser Val Leu 1 5 10 15 Leu Leu His Leu Cys Gly Glu Ser Glu Ala Ser Asn Phe Asp Cys Cys 20 25 30 Leu Gly Tyr Thr Asp Arg Ile Leu His Pro Lys Phe Ile Val Gly Phe 35 40 45 Thr Arg Gln Leu Ala Asn Glu Gly Cys Asp Ile Asn Ala Ile Ile Phe 50 55 60 His Thr Lys Lys Lys Leu Ser Val Cys Ala Asn Pro Lys Gln Thr Trp 65 70 75 80 Val Lys Tyr Ile Val Arg Leu Leu Ser Lys Lys Val Lys Asn Met 85 90 95 <210> 124 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 124 ggggtcaacg ttgagggggg 20 <210> 125 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 125 gggggacgat cgtcgggggg 20 <210> 126 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 126 ggggacgacg tcgtgggggg g 21 <210> 127 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 127 tccatgacgt tcctgatgct 20 <210> 128 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 128 tccatgacgt tcctgacgtt 20 <210> 129 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 129 tcgtcgtttt gtcgttttgt cgtt 24 <210> 130 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 130 tcgtcgttgt cgttttgtcg tt 22 <210> 131 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 131 tcgacgttcg tcgttcgtcg ttc 23 <210> 132 <211> 26 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 132 tcgcgacgtt cgcccgacgt tcggta 26 <210> 133 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 133 tcgtcgtttt cggcgcgcgc cg 22 <210> 134 <211> 25 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 134 tcgtcgtcgt tcgaacgacg ttgat 25 <210> 135 <211> 29 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 135 tcgcgaacgt tcgccgcgtt cgaacgcgg 29

Claims (54)

  1. E2b 유전자 부위에서 결실을 포함하는 복제 결함성 바이러스 벡터; 및
    플라비바이러스 표적 항원을 인코딩하는 서열
    을 포함하는 조성물.
  2. 제 1 항에 있어서, 플라비바이러스 표적 항원을 인코딩하는 서열이 복수의 플라비바이러스 표적 항원을 인코딩하는 서열을 포함하는 조성물.
  3. 제 2 항에 있어서, 복수의 플라비바이러스 표적 항원을 인코딩하는 서열이 각각 표적 항원에 상응하는 복수의 유전자 삽입물을 포함하며, 각각의 유전자 삽입물이 자가-절단 2A 펩티드를 인코딩하는 핵산 서열에 의해 분리되는 조성물.
  4. 제 3 항에 있어서, 자가-절단 2A 펩티드가 돼지 테스코바이러스-1 (Porcine teschovirus-1) 바이러스 또는 토세아 아시그나 (Thosea asigna) 바이러스에서 유래하는 조성물.
  5. 제 2 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 있어서, 복수의 플라비바이러스 표적 항원이 3 개의 플라비바이러스 표적 항원 또는 4 개의 플라비바이러스 표적 항원을 포함하는 조성물.
  6. 제 1 항 내지 제 5 항 중 어느 한 항에 있어서, 복제 결함성 바이러스 벡터가 아데노바이러스 벡터인 조성물.
  7. 제 1 항 내지 제 6 항 중 어느 한 항에 있어서, 복제 결함성 바이러스 벡터가 아데노바이러스 5 (Ad5) 벡터인 조성물.
  8. 제 1 항 내지 제 7 항 중 어느 한 항에 있어서, 복제 결함성 바이러스 벡터가 E1 유전자 부위, E3 유전자 부위, E4 유전자 부위, 또는 이의 임의의 조합에서 결실을 포함하는 조성물.
  9. 제 1 항 내지 제 8 항 중 어느 한 항에 있어서, E2b 유전자 부위에서의 결실이 E2b 유전자 부위에서의 복수의 결실을 포함하는 조성물.
  10. 제 1 항 내지 제 9 항 중 어느 한 항에 있어서, E2b 유전자 부위에서의 결실, E1 유전자 부위에서의 결실, E3 유전자 부위에서의 결실, E4 유전자 부위에서의 결실, 또는 이의 임의의 조합이 각각 적어도 하나의 염기쌍을 포함하는 조성물.
  11. 제 1 항 내지 제 10 항 중 어느 한 항에 있어서, E2b 유전자 부위에서의 결실, E1 유전자 부위에서의 결실, E3 유전자 부위에서의 결실, E4 유전자 부위에서의 결실, 또는 이의 임의의 조합이 둘 이상의 염기쌍의 전좌로부터 생기는 조성물.
  12. 제 1 항 내지 제 11 항 중 어느 한 항에 있어서, E2b 유전자 부위에서의 결실, E1 유전자 부위에서의 결실, E3 유전자 부위에서의 결실, E4 유전자 부위에서의 결실, 또는 이의 임의의 조합이 각각 적어도 20 개, 적어도 30 개, 적어도 40 개, 적어도 50 개, 적어도 60 개, 적어도 70 개, 적어도 80 개, 적어도 90 개, 적어도 100 개, 적어도 110 개, 적어도 120 개, 적어도 130 개, 적어도 140 개 또는 적어도 150 개 염기쌍을 포함하는 조성물.
  13. 제 1 항 내지 제 12 항 중 어느 한 항에 있어서, E2b 유전자 부위에서의 결실, E1 유전자 부위에서의 결실, E3 유전자 부위에서의 결실, E4 유전자 부위에서의 결실, 또는 이의 임의의 조합이 각각 150 개 초과, 160 개 초과, 170 개 초과, 180 개 초과, 190 개 초과, 200 개 초과, 250 개 초과 또는 300 개 초과의 염기쌍을 포함하는 조성물.
  14. 제 1 항 내지 제 13 항 중 어느 한 항에 있어서, 플라비바이러스 표적 항원이 황열 바이러스 (YFV), 일본 뇌염 바이러스 (JEV), 진드기 매개 뇌염 바이러스 (TBEV), 뎅기열 바이러스 (DENV), 웨스트 나일 바이러스 (WNV), 지카 바이러스 (ZIKAV), 또는 이의 임의의 조합으로 이루어지는 군에서 선택되는 바이러스의 항원을 포함하는 조성물.
  15. 제 1 항 내지 제 14 항 중 어느 한 항에 있어서, 플라비바이러스 표적 항원이 YFV, ZIKAV 로 이루어지는 군에서 선택되는 바이러스, 또는 둘 모두의 항원을 포함하는 조성물.
  16. 제 1 항 내지 제 15 항 중 어느 한 항에 있어서, 플라비바이러스 표적 항원이 ZIKAV 의 항원을 포함하는 조성물.
  17. 제 1 항 내지 제 16 항 중 어느 한 항에 있어서, 플라비바이러스 표적 항원이 C (캡시드 단백질), E (외피 단백질), prM (예비-막 단백질), M (막 단백질), NS1, NS2A, NS2B, NS3, NS4A, NS4B 및 NS5, 또는 이의 임의의 조합으로 이루어지는 군에서 선택되는 항원을 포함하는 조성물.
  18. 제 1 항 내지 제 17 항 중 어느 한 항에 있어서, 플라비바이러스 표적 항원이 E, prM, M, NS1, NS2A, NS2B, NS3, NS4A, NS4B 및 NS5, 또는 이의 임의의 조합으로 이루어지는 군에서 선택되는 항원을 포함하는 조성물.
  19. 제 1 항 내지 제 18 항 중 어느 한 항에 있어서, 플라비바이러스 표적 항원이 E, prM, M 및 NS3, 또는 이의 임의의 조합으로 이루어지는 군에서 선택되는 항원을 포함하는 조성물.
  20. 제 1 항 내지 제 19 항 중 어느 한 항에 있어서, 플라비바이러스 표적 항원을 인코딩하는 서열이 N-말단 GCCGCCACC 서열을 포함하는 조성물.
  21. 제 1 항 내지 제 20 항 중 어느 한 항에 있어서, 플라비바이러스 표적 항원을 인코딩하는 서열이 돌연변이를 인코딩하는 서열을 포함하며, 돌연변이가 이소류신 (I) 에서 아스파르트산 (D), 류신 (L) 에서 아스파르트산 (D), 아스파르트산 (D) 에서 이소류신 (I), 아스파르트산 (D) 에서 류신 (L) 으로의 돌연변이, 또는 이의 임의의 조합을 포함하는 조성물.
  22. 제 21 항에 있어서, 돌연변이가 I21D, L175D, L240D, D37I, D43L, D266I, D129L, D218L, 또는 이의 임의의 조합에서 발생하는 조성물.
  23. 제 1 항 내지 제 22 항 중 어느 한 항에 있어서, 플라비바이러스 표적 항원을 인코딩하는 서열이 SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 31, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 33, SEQ ID NO: 34, SEQ ID NO: 35, SEQ ID NO: 36 및 SEQ ID NO: 37, 또는 이의 임의의 조합으로 이루어지는 군에서 선택되는 서열에 대해 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 92%, 적어도 95%, 적어도 97%, 또는 적어도 99% 서열 동일성을 포함하는 조성물.
  24. 제 1 항 내지 제 23 항 중 어느 한 항에 있어서, 플라비바이러스 표적 항원을 인코딩하는 서열이 SEQ ID NO: 15 - SEQ ID NO: 19 로 이루어지는 군에서 선택되는 서열에 대해 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 92%, 적어도 95%, 적어도 97%, 또는 적어도 99% 서열 동일성을 포함하는 조성물.
  25. 제 1 항 내지 제 23 항 중 어느 한 항에 있어서, 플라비바이러스 표적 항원을 인코딩하는 서열이 아미노산 서열이며, 아미노산 서열이 SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 34 및 SEQ ID NO: 36, 또는 이의 임의의 조합으로 이루어지는 군에서 선택되는 서열에 대해 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 92%, 적어도 95%, 적어도 97%, 또는 적어도 99% 서열 동일성을 포함하는 조성물.
  26. 제 1 항 내지 제 23 항 중 어느 한 항에 있어서, 플라비바이러스 표적 항원을 인코딩하는 서열이 뉴클레오티드 서열이며, 뉴클레오티드 서열이 SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 31, SEQ ID NO: 33, SEQ ID NO: 35 및 SEQ ID NO: 37, 또는 이의 임의의 조합으로 이루어지는 군에서 선택되는 서열에 대해 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 92%, 적어도 95%, 적어도 97%, 또는 적어도 99% 서열 동일성을 포함하는 조성물.
  27. 제 1 항 내지 제 26 항 중 어느 한 항에 있어서, 복제 결함성 바이러스 벡터가 플라비바이러스 표적 항원의 발현을 증가시키기 위한 요소 (element) 를 추가로 포함하는 조성물.
  28. 제 27 항에 있어서, 요소가 적어도 1 개 요소, 적어도 2 개 요소, 적어도 3 개 요소, 적어도 4 개 요소, 또는 적어도 5 개 요소를 포함하는 조성물.
  29. 제 27 항 또는 제 28 항에 있어서, 요소가 내부 리보솜 결합 위치를 포함하는 조성물.
  30. 제 27 항 내지 제 29 항 중 어느 한 항에 있어서, 요소가 구성적 프로모터를 포함하는 조성물.
  31. 제 27 항 내지 제 30 항 중 어느 한 항에 있어서, 요소가 유도성 프로모터를 포함하는 조성물.
  32. 제 27 항 내지 제 31 항 중 어느 한 항에 있어서, 요소가 전사 인핸서를 포함하는 조성물.
  33. 제 32 항에 있어서, 전사 인핸서가 라우스 육종 바이러스 (Rous sarcoma virus) (RSV) 인핸서인 조성물.
  34. 제 27 항 내지 제 33 항 중 어느 한 항에 있어서, 요소가 팔린드롬성 (palindromic) 서열을 함유하지 않는 조성물.
  35. 제 1 항 내지 제 34 항 중 어느 한 항에 있어서, 복제 결함성 바이러스 벡터가 플라비바이러스 표적 항원 면역원성을 증가시키는 단백질을 인코딩하는 핵산 서열을 추가로 포함하는 조성물.
  36. 제 1 항 내지 제 35 항 중 어느 한 항에 있어서, 복제 결함성 바이러스 벡터가 거트 (gutted) 벡터가 아닌 조성물.
  37. 제 1 항 내지 제 36 항 중 어느 한 항에 있어서, 조성물 또는 복제 결함성 바이러스 벡터가 공동자극 분자 또는 면역학적 융합 파트너를 인코딩하는 핵산 서열을 추가로 포함하는 조성물.
  38. 제 1 항 내지 제 37 항 중 어느 한 항에 따른 조성물 및 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 약학 조성물.
  39. 제 1 항 내지 제 37 항 중 어느 한 항에 따른 조성물 또는 제 38 항에 따른 약학 조성물을 포함하는 세포.
  40. 제 39 항에 있어서, 숙주 세포인 세포.
  41. 제 39 항 또는 제 40 항에 있어서, 수지상 세포 (DC) 인 세포.
  42. 제 38 항에 따른 약학 조성물을 제조하는 것을 포함하는, 백신의 제조 방법.
  43. 제 1 항 내지 제 37 항 중 어느 한 항에 따른 조성물 또는 제 38 항에 따른 약학 조성물을 대상에게 투여하는 것을 포함하는, 대상에서 플라비바이러스 표적 항원에 대한 면역 반응을 생성시키는 방법.
  44. 제 43 항에 있어서, 대상이 플라비바이러스로 감염되지 않은 방법.
  45. 제 43 항 또는 제 44 항에 있어서, 플라비바이러스 표적 항원이 플라비바이러스로부터의 것이며, 플라비바이러스가 황열 바이러스 (YFV), 일본 뇌염 바이러스 (JEV), 진드기 매개 뇌염 바이러스 (TBEV), 뎅기열 바이러스 (DENV), 웨스트 나일 바이러스 (WNV), 지카 바이러스 (ZIKAV), 또는 이의 임의의 조합을 포함하는 방법.
  46. E2b 유전자 부위에서 결실을 포함하는 복제 결함성 바이러스 벡터; 및
    적어도 하나의 Zika 바이러스 표적 항원을 인코딩하는 서열
    을 포함하는 조성물을 대상에게 투여하는 것을 포함하는, 대상에서 Zika 바이러스 감염을 예방하는 방법.
  47. 제 43 항 내지 제 46 항 중 어느 한 항에 있어서, 대상이 아데노바이러스 또는 아데노바이러스 벡터에 대해 기존 면역력을 갖는 방법.
  48. 제 43 항 내지 제 47 항 중 어느 한 항에 있어서, 대상이 인간 또는 비-인간 동물인 방법.
  49. 제 43 항 내지 제 48 항 중 어느 한 항에 있어서, 투여가 정맥내, 피하, 림프내, 종양내, 피부내, 근육내, 복강내, 직장내, 질내, 비강내, 경구, 방광 점적주입, 또는 난절법을 통한 것인 방법.
  50. 제 43 항 내지 제 49 항 중 어느 한 항에 있어서, 대상에게 조성물을 투여하는 것이 적어도 1 회이고, 적어도 2 회 반복되거나, 적어도 3 회 반복되는 방법.
  51. 제 43 항 내지 제 50 항 중 어느 한 항에 있어서, 대상에게 조성물을 투여하는 것이 용량 당 1x109 내지 5x1012 바이러스 입자를 포함하는 방법.
  52. 제 43 항 내지 제 51 항 중 어느 한 항에 있어서, 대상에게 조성물을 투여하는 것이 용량 당 적어도 109 바이러스 입자, 적어도 1010 바이러스 입자, 또는 적어도 1011 바이러스 입자를 포함하는 방법.
  53. 제 43 항 내지 제 52 항 중 어느 한 항에 있어서, 복제 결함성 바이러스 벡터가 아데노바이러스 벡터인 방법.
  54. 제 43 항 내지 제 53 항 중 어느 한 항에 있어서, 복제 결함성 바이러스 벡터가 아데노바이러스 5 (Ad5) 벡터인 방법.
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2021149964A1 (ko) * 2020-01-21 2021-07-29 코오롱생명과학 주식회사 아데노바이러스 벡터

Families Citing this family (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP3596108A4 (en) 2017-03-15 2020-12-23 Pandion Operations, Inc. TARGETED IMMUNOTOLERANCE
JP2020521452A (ja) 2017-05-24 2020-07-27 パンディオン・セラピューティクス・インコーポレイテッド 標的化免疫寛容
US10174091B1 (en) 2017-12-06 2019-01-08 Pandion Therapeutics, Inc. IL-2 muteins
US10946068B2 (en) 2017-12-06 2021-03-16 Pandion Operations, Inc. IL-2 muteins and uses thereof
CN108531647A (zh) * 2018-03-30 2018-09-14 暨南大学 一种寨卡病毒一步法荧光rt-PCR检测方法及试剂盒
JP2022533702A (ja) 2019-05-20 2022-07-25 パンディオン・オペレーションズ・インコーポレイテッド ＭＡｄＣＡＭ標的化免疫寛容
US11981715B2 (en) 2020-02-21 2024-05-14 Pandion Operations, Inc. Tissue targeted immunotolerance with a CD39 effector
WO2023164442A2 (en) * 2022-02-22 2023-08-31 Vyro Bio Inc. Oncolytic viruses and methods of use
CN114949193A (zh) * 2022-05-30 2022-08-30 吉林大学 一种蜱传脑炎病毒病毒样颗粒疫苗及其制备方法

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2009006479A2 (en) * 2007-07-02 2009-01-08 Etubics Corporation Methods and compositions for producing an adenovirus vector for use with multiple vaccinations
WO2012088041A1 (en) * 2010-12-20 2012-06-28 Genvec, Inc. Adenoviral vector-based dengue fever vaccine
WO2015142963A1 (en) 2014-03-17 2015-09-24 Tapimmune Inc. Nucleic acid molecule vaccine compositions and uses thereof
US10695417B2 (en) * 2015-01-09 2020-06-30 Etubics Corporation Human adenovirus serotype 5 vectors containing E1 and E2B deletions encoding the ebola virus glycoprotein
CN113456812A (zh) 2015-01-09 2021-10-01 埃图比克斯公司 用于联合免疫治疗的方法和组合物

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2021149964A1 (ko) * 2020-01-21 2021-07-29 코오롱생명과학 주식회사 아데노바이러스 벡터
KR20210094353A (ko) * 2020-01-21 2021-07-29 코오롱생명과학 주식회사 아데노바이러스 벡터

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