KR20180110408A - Dna 단편 혼합물을 포함하는 피부미용증진용 건강기능식품 조성물 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 DNA 단편 혼합물을 포함하는 피부미용증진용 건강기능식품 조성물에 관한 것으로, 상기 DNA 단편 혼합물이 피부의 노화를 억제하고, 주름을 개선하며, 멜라닌의 생성을 억제하는 것을 확인함으로써, 본 발명의 DNA 단편 혼합물을 이용하여 우수한 피부미용증진용 조성물 개발에 활용할 수 있을 것으로 기대된다.
Description
본 발명은 DNA 단편 혼합물을 포함하는 피부미용증진용 건강기능식품 조성물에 관한 것이다.
현대사회의 생활수준이 향상되고, 사람들의 외모에 대한 관심이 크게 증가하면서, 피부에 바르는 화장품 이외에도 먹는 제품으로부터 피부 미용에 도움을 얻고자 하는 요구가 동시에 크게 늘어나고 있다. 즉, 피부노화를 억제하고 주름을 개선시켜 주며, 피부미백 및 피부 보습 증진 등의 효과를 나타내는 피부미용식품에 대한 소비자들의 관심이 높아지고 있다.
피부노화는 노화에 미치는 원인에 따라 내인성 노화(intrinsic aging)와 외인성 노화(extrinsic aging)로 구분할 수 있다. 내인성 노화는 환경 변화와는 무관하게 나이가 들어감에 따라 피부의 구조와 생리 기능이 감퇴하는 것이고, 외인성 노화는 태양광선 등의 외부 환경에 지속적으로 노출되어 나타나는 것으로, 특히 빛에 의한 노화를 광노화(photoaging)라고 한다.
내인성 피부 노화가 진행되면 피부가 건조해지며, 잔주름이 생성되고, 탄력이 소실되는 특징을 나타내고, 조직학적으로는 표피의 위축, 표피-진피 결합부위의 편평함 및 비정상적으로 엘라스틴(elastin)의 축적이 일어난다. 광노화는 자외선 B(ultraviolet B, UVB)에 의하여 피부 주름이 조기에 형성되며, 피부가 건조해지며, 색소가 침착되고, 말초혈관이 확장되는 임상적인 특징을 나타낸다. 또한 세포의 비전형화, 아교질의 감소, 탄력섬유가 소실되는 조직학적 특징을 나타낸다.
콜라겐(collagen)은 피부 노화와 관련된 주요 피부 조직의 성분으로 지방을 제외한 피부 전체 건조 중량의 77%, 진피섬유 성분의 90%를 차지하고 있는 단백질로서 사람의 진피 중 Ⅰ형 및 Ⅲ형 콜라겐이 주요한 성분이다. 콜라겐은 피부의 강도, 탄력성 및 유연성을 유지할 수 있게 하는 기능을 부여하는 것으로, 피부의 주름은 콜라겐의 합성과 분해의 불균형에 기인한다. 보통 피부에서 Ⅰ형 콜라겐의 합성과 그 분해 효소인 MMP-1(matrix metalloproteinase-1)이 균형을 이루고 있다. 그러나, 광노화된 피부에서는 Ⅰ형 및 Ⅲ형 콜라겐의 합성이 저하되고, MMP-1의 활성이 증가되어 있다. 따라서, 콜라겐의 합성 증진 및 분해 억제는 피부 미용 및 노화 억제와 관련하여 주요 관심사가 되었다.
현대인들의 피부 미용에 대한 관심 중 하나인 피부 미백의 경우에는 맑고 투명한 흰 피부를 갖고자 하는 욕망이 커짐에 따라 지속적인 연구가 진행되고 있다. 사람의 피부색은 피부 내부의 멜라닌(melanin) 농도와 분포에 따라 결정되는데, 유전적인 요인 외에도 자외선이나 피로, 스트레스 등의 환경적 또는 생리적 조건에 의해서도 영향을 받는다. 멜라닌은 아미노산의 일종인 티로신(tyrosine)에 티로시나아제(tyrosinase)라는 효소가 작용하여 도파(DOPA, 3,4-dihydroxy phenylalanine), 도파퀴논(dopaquinine)으로 바뀐 후 비효소적인 산화 반응을 거쳐 생성된다. 멜라닌의 합성이 피부 내에서 과도하게 일어나면, 피부톤을 어둡게 하고, 기미, 주근깨 등을 발생시킨다. 따라서, 피부 내의 멜라닌 색소의 생합성을 저해시키면 피부톤을 보다 밝게 하여 피부 미백 효과를 얻을 수 있다.
연어의 정소 또는 정액은 DNA의 함유량이 가장 높은 물질로 알려져 있으며, 특히 인체에 유사한 염기서열 비율을 가진 것으로 알려져 있다. 이와 동시에 세포 재생, 면역기능개선, 과산화지질 억제 등의 기능이 있는 것으로 보고되어 있다.
이에, 본 발명자들은 DNA 단편 혼합물을 이용한 피부 미용 증진을 연구하는 과정에서 연어의 정소 또는 정액에서 추출한 특정 크기의 DNA 단편 혼합물이 항산화 효과, 콜라겐 생합성 촉진, MMP-1 억제 효과 있음을 확인함으로써 본 발명을 완성할 수 있었다.
종래 선행기술로서 한국등록특허 제1279870호에는 연어 정소에서 추출한 핵산과 프로타민의 항산화 효과가 기재되어 있으나, 본 발명의 20kDa 내지 2,500kDa 분자량의 DNA 단편 혼합물 단독에 의한 피부 미용 효과는 기재되어 있지 않아 본 발명의 구성과 차이가 있으며, 한국등록특허 제0688867호에는 물고기 이리에서 추출한 핵단백들 저분자화한 수용성 핵단백을 포함하는 건강 드링크가 기재되어 있으나, 본 발명의 DNA 단편 혼합물의 피부미용증진 효과가 기재가 되어 있지 않다.
본 발명의 목적은 DNA 단편 혼합물을 포함하는 피부미용증진용 건강기능식품 조성물을 제공하는데 있다.
본 발명은 50kDa 내지 2,500kDa의 분자량으로 이루어진 DNA 단편 혼합물을 유효성분으로 포함하는 피부미용증진용 건강기능식품 조성물에 관한 것이다.
상기 DNA 단편 혼합물은 어류의 정소 또는 정액에서 분리한 것일 수 있다.
상기 어류는 연어과일 수 있다.
상기 건강기능식품 조성물은 DNA 단편 혼합물이 조성물 총 중량을 기준으로 0.01~100중량%로 함유할 수 있다.
이하 본 발명을 상세하게 설명한다.
본 발명은 50kDa 내지 2,500kDa의 분자량으로 이루어진 DNA 단편 혼합물을 유효성분으로 포함하는 피부미용증진용 건강기능식품 조성물에 관한 것이다.
상기 DNA 단편 혼합물의 분자량이 50kDa 미만일 경우에는 DNA 단편의 길이가 짧아 치료 효과를 발휘하기 전에 분해되어 치료 효과를 얻기 어려우며, 2,500kDa 초과일 경우에는 DNA 단편의 길이가 길어 효과를 얻기 까지 시간이 오래 걸려 식품으로 사용하기에 적합하지 않다.
상기 DNA 단편 혼합물은 어류의 정소 또는 정액으로부터 분리한 것일 수 있다.
상기 어류는 연어과일 수 있고, 바람직하게는 연어 또는 송어일 수 있고, 가장 바람직하게는 연어일 수 있다.
상기 DNA 단편 혼합물이란, 인산, 4종류의 염기, 데옥시리보오스(deoxyribose)로 이루어진 생체 고분자에 해당하는 DNA로, 분자량이 저감된 단편 형태로 혼합되어 존재하는 것을 지칭한다.
상기 건강기능식품 조성물은 DNA 단편 혼합물이 조성물 총 중량을 기준으로 0.01~100중량%로 함유할 수 있다.
상기 피부미용증진은 피부 주름개선, 피부 미백 또는 피부 노화 방지를 통한 피부미용증진 일 수 있다.
상기 조성물은 각각의 통상의 방법에 따라 정제, 과립제, 산제, 캡슐제, 드링크제 등의 제형으로 제형화될 수 있으며, 제형화에 필요한 희석제, 향미제, 가용화제, 윤활제, 현탁제, 결합제, 붕해제 등의 성분을 하나 또는 그 이상 포함할 수 있으며, 식품으로서 사용될 수 있는 것은 제한 두지 않는다.
상기 조성물에는 유효성분으로서 식물 추출물을 더 포함할 수 있다. 상기 식물 추출물에는 와송 추출물, 아피오스 추출물, 흑미미강 추출물, 오적산 추출물, 감자 씨 추출물 등이 될 수 있으며, 이에 제한두지 않는다.
본 발명은 DNA 단편 혼합물을 포함하는 피부미용증진용 건강기능식품 조성물에 관한 것으로, 상기 DNA 단편 혼합물이 피부의 노화를 억제하고, 주름을 개선하며, 멜라닌의 생성을 억제하는 것을 확인하였다.
이에 따라, 본 발명의 DNA 단편 혼합물을 이용하여 우수한 피부미용증진용 조성물 개발에 활용할 수 있을 것으로 기대된다.
도 1은 본 발명의 DNA 단편 혼합물의 콜라겐 합성 촉진 효과를 보여주고 있다.
도 2는 본 발명의 DNA 단편 혼합물의 MMP-1 발현 억제 효과를 보여주고 있다.
도 2는 본 발명의 DNA 단편 혼합물의 MMP-1 발현 억제 효과를 보여주고 있다.
이하 본 발명의 바람직한 실시예를 상세히 설명하기로 한다. 그러나, 본 발명은 여기서 설명되는 실시예에 한정되지 않고 다른 형태로 구체화될 수도 있다. 오히려, 여기서 소개되는 내용이 철저하고 완전해지고, 당업자에게 본 발명의 사상을 충분히 전달하기 위해 제공하는 것이다.
<실시예 1. DNA 단편 혼합물의 제조>
(1) 정소 준비 공정
연어에서 분리한 냉동된 정소 10g을 해동한 다음 탈혈 및 이물질을 제거하고, 정제수 400㎖을 넣어준 후, 분쇄기로 분쇄하여 정소 분쇄액을 제조하였다.
(2) 단백질 및 지방 제거 공정
정제수 500㎖에 200g의 염화나트륨(sodium chloride)을 녹여 염화나트륨 용액을 제조하고, 상기 염화나트륨 용액 500㎖과 상기 (1)의 정소 분쇄액을 혼합한 다음, 100℃에서 1시간 동안 교반하면서 반응시킨 후에 냉각하였다. 냉각된 반응액에 30%(w/v) 수산화나트륨을 첨가하여 pH가 11이 되도록 한 후, 1시간 동안 교반시키고 여과하여 단백질과 지방이 제거된 여과액을 얻었다.
(3) 분자량 저감 공정
상기 (2)의 여과액에 pH 7.0이 되도록 염산(HCl)을 첨가하여 100℃에서 10분간 반응시킨 후, 다시 냉각한 뒤 여과를 실시하여 DNA 단편 혼합물을 포함하는 여과액을 얻었다.
(4) 분자량 분획 공정
상기 (3)의 여과액에 30%(w/v) 수산화나트륨 수용액을 첨가하여 pH가 10.0이 되도록 한 후 겔 여과를 통해 50kDa 내지 2,500kDa의 분자량을 가지는 DNA 단편 혼합물의 분획액을 얻은 다음 35%(w/v) 염산을 사용하여 pH를 7.0으로 조정하였다.
(5) 침전 및 건조 공정
상기 (4)의 분획액에 냉각된 에탄올을 여과액 부피의 2배 정도를 첨가한 다음 10분간 교반하고 원심분리한 뒤, 침전된 침전물을 회수하였다. 회수한 침전물을 70% 에탄올 수용액으로 세척하였다. 세척한 침전물을 진공하에서 건조시켜 DNA 단편 혼합물을 수득하였고, 분말화된 DNA 단편 혼합물의 균일성을 확보하기 위해 1㎜체에 거르는 과정을 반복하여, 50kDa 내지 2,500kDa의 분자량이 포함된 DNA 단편 혼합물을 얻었다.
<실험예 1. 피부 노화 억제 및 주름개선 효과 확인>
실험예 1-1. I형 프로콜라겐 분석(Type I procollagen assay)
12웰 플레이트에 인간 섬유아세포(fibroblast cells)를 웰 당 1×105개를 배양한 다음, 본 발명의 DNA 단편 혼합물 10ppm이 포함된 배지로 교체하였다(실험군). 이때, 콜라겐 생성을 촉진하는 TGF-β(Transforming growth factor-β) 10ng/㎖을 처리한 것을 양성 대조군으로, 아무것도 처리하지 않은 것을 대조군으로 이용하였다. 배양 3일째 세포를 모은 후, ELISA(enzyme-linked immunosorbent assay) 방법을 이용하여 I형 프로콜라겐의 양을 정량하였다. 이때, 대조군의 I형 프로콜라겐의 양을 100%로 하여 측정한 값을 상대치로 산출하였고, 그 결과를 도 1에 나타내었다.
도 1에서 보여주듯이, 본 발명의 DNA 단편 혼합물을 처리한 실험군의 콜라겐 생합성량이 양성대조군으로 사용한 TGF-β와 비슷한 수준임을 확인하였다.
이를 통해, 본 발명의 DNA 단편 혼합물이 I형 프로콜라겐의 생성을 촉진시킴으로써 노화에 의한 콜라겐 감소 현상을 억제하고, 주름 개선 효과를 나타낼 수 있음을 알 수 있었다.
실험예 1-2. MMP-1 발현 억제 확인
12웰 플레이트에 인간 섬유아세포(fibroblast cells)를 웰 당 1×105개를 배양한 다음, 자외선을 40mJ/㎠로 조사한 후, 본 발명의 DNA 단편 혼합물 10ppm이 포함된 배지로 교체하였다(실험군). 이때, TGF-β(Transforming growth factor-β) 10ng/㎖을 처리한 것을 양성 대조군으로, 아무것도 처리하지 않은 것을 대조군으로 이용하였다. 배양 2일째 세포를 모은 후, ELISA(enzyme-linked immunosorbent assay) 방법을 이용하여 MMP-1의 양을 정량하였다. 이때, 대조군의 MMP-1의 발현량을 100%로 하여 측정한 값을 상대치로 산출하였고, 그 결과를 도 2에 나타내었다.
도 2에서 보여주듯이, 본 발명의 DNA 단편 혼합물을 처리한 실험군에서 MMP-1의 발현이 대조군 대비 감소되는 것을 확인하였다.
이를 통해, 본 발명의 DNA 단편 혼합물이 피부의 내적 노화 또는 외적 환경 요인에 의하여 발생하는 피부 조기 분해 효소인 MMP-1의 발현을 억제시킴으로써 피부 노화를 억제하고 주름 개선에 효과가 있음을 알 수 있었다.
실험예
1-3. 자외선에 의한 COX-2(
Cyclooxygenase
-
2)의
생합성 억제 효과 확인
12웰 플레이트에 인간 섬유아세포(fibroblast cells)를 웰 당 1×105개를 배양한 다음, 자외선을 15mJ/㎠로 조사한 후, 본 발명의 DNA 단편 혼합물 10ppm이 포함된 배지로 교체하였다(실험군). 이때, 아무것도 처리하지 않은 것을 대조군으로 이용하였다. 배양 2일째 세포를 모은 후, 웨스턴 블롯(Western blot) 방법으로 COX-2 밴드를 확인하고, 밴드의 밀도를 측정하여 대조군의 밀도를 100%로 하여 측정한 값을 상대치로 산출하였고, 그 결과를 표 1에 나타내었다.
| 실험그룹 | COX-2 생합성(%) |
| 실험군 | 21 |
| 대조군 | 100 |
상기 표 1에서 보여주듯이, 자외선 조사에 의해 COX-2의 생합성이 증가하였으나, 본 발명의 DNA 단편 혼합물을 처리하면 COX-2의 생합성이 감소하는 것을 확인하였다.
이를 통해, 본 발명의 DNA 단편 혼합물이 피부 노화에 의한 COX-2의 생합성을 억제함으로써 피부 노화 개선 효과가 있음을 알 수 있었다.
<실험예 2. 피부 미백 효과>
본 발명의 DNA 단편 혼합물의 멜라닌(melanin) 생성 억제 효과를 확인하기 위해 멜라노마 세포주인 B16F10세포를 이용하였다.
B16F10세포는 10% FBS(fetal bovine serum)과 100U/㎖의 페니실린, 50㎍/㎖의 스트렙토마이신을 포함하는 DMEM 배지에서 37℃, 5% CO2 조건의 배양기에서 배양하였다. 배양한 B16F10세포를 24웰 플레이트에 웰 당 1×104개를 넣고 17시간 동안 배양하였다. 17시간 후 배양액을 제거하고, 본 발명의 DNA 단편 혼합물이 0.05㎎/㎖로 포함되어 있는 배지를 웰 당 2㎖씩 넣고 배양기에서 72시간 동안 배양하였다. 이때, 배지만을 넣어 준 것을 대조군을 이용하였다. 배양 후 배양액을 제거하고 NaOH를 웰 당 2㎖씩 넣고, 60℃에서 30분간 방치한 다음, 450㎚에서 흡광도를 측정하였다. 멜라닌 농도는 멜라닌 표준 곡선과 대비하여 계산하였고, 그 결과를 표 2에 나타내었다. 표 2에서는 대조군의 멜라닌 양을 100%로 하여, 실험군의 값을 상대치로 산출하였다.
| 실험그룹 | 멜라닌 생성(%) |
| 실험군 | 38 |
| 대조군 | 100 |
상기 표 2에서 보여주듯이, 본 발명의 DNA 단편 혼합물을 처리한 실험군의 경우 대조군에 비해 멜라닌의 양이 감소한 것을 확인하였다.
이를 통해, 본 발명의 DNA 단편 혼합물이 멜라닌의 합성을 억제함으로써 피부 미백 효과를 나타낼 수 있음을 알 수 있었다.
<제조예 1. 정제 제조>
DNA 단편 혼합물 500㎎, 포도당 200㎎, 옥수수 전분 100㎎을 혼합하고, 유동층 건조기를 이용하여 과립한 후 당 에스테르 7㎎을 첨가하고 타정기로 타정하여 정제를 제조한다.
<제조예 2. 과립제 제조>
DNA 단편 혼합물 500㎎, 포도당 140㎎, 덱스트린 100㎎을 혼합하고 유동층 건조기를 이용하여 과립한 후, 포에 충진하여 과립제를 제조하였다.
<제조예 3. 연질캅셀제>
DNA 단편 혼합물 500㎎, 팜유 1㎎, 식물성 경화유 0.5㎎을 혼합하고, 통상의 방법에 따라 충진하여 연질 캅셀을 제조하였다.
Claims (4)
- 50kDa 내지 2,500kDa의 분자량으로 이루어진 DNA 단편 혼합물을 유효성분으로 포함하는 것을 특징으로 하는 피부미용증진용 건강기능식품 조성물.
- 제1항에 있어서,
상기 DNA 단편 혼합물은 어류의 정소 또는 정액에서 분리한 것임을 특징으로 하는 피부미용증진용 건강기능식품 조성물. - 제2항에 있어서,
상기 어류는 연어과인 것을 특징으로 하는 피부미용증진용 건강기능식품 조성물. - 제1항 내지 제3항의 어느 한 항에 있어서,
상기 건강기능식품 조성물은 DNA 단편 혼합물이 조성물 총 중량을 기준으로 0.01~100중량%로 함유하는 것을 특징으로 하는 피부미용증진용 건강기능식품 조성물.
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| J301 | Trial decision |
Free format text: TRIAL NUMBER: 2023101001616; TRIAL DECISION FOR APPEAL AGAINST DECISION TO DECLINE REFUSAL REQUESTED 20230726 Effective date: 20240222 |