KR20180104483A - 신규한 종양용해성 바이러스 및 이의 용도 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 신규한 종양용해성 바이러스 및 이의 용도에 관한 것으로, 상기 종양용해성 바이러스는 신규한 뉴캣슬병 바이러스 분리주이며, 상기 종양용해성 바이러스는 비병원성일 뿐만 아니라, 종양 세포에 대해서 특이적으로 암세포 용해능을 나타내므로 암 치료 및 암 병용 치료에 효과적으로 사용될 수 있다.

Description

신규한 종양용해성 바이러스 및 이의 용도{Novel Oncolytic Virus and Uses Thereof}
본 발명은 신규한 종양용해성 바이러스 및 이의 용도에 관한 것이다.
뉴캣슬병 바이러스(Newcastle disease virus; NDV)는 파라믹소비리데(Paramyxoviridae)과에 속하는 아불라바이러스(Avulavirus)속의 조류파라믹소바이러스 제1형(Avian paramyxovirus type 1, APMV-1)이다. 이 바이러스는 양계에서 매우 치명적인 뉴캣슬병을 일으키는 병원체이다.
백신접종 등을 실시하지 않은 양계농장에 뉴캣슬병이 발생할 경우 2 주 이내 농장 내 대부분의 닭들이 폐사시킬 만큼 매우 치명적이다. 이 질병에 걸릴 경우 닭은 심한 호흡기 증상, 소화기 증상을 보이며 회복된 경우 신경 증상을 보일 수 있다. 산란하는 닭의 경우 백신 면역 수준이 낮을 경우 심한 산란율 저하와 비정상 기형란 발생 증가 등을 유발하여 양계의 생산성을 크게 악화시킨다.
NDV는 닭에서의 병원성 정도에 따라 강독형 (velogenic), 중간독형 (mesogenic), 약독형 (lentogenic NDV)으로 분류한다. 1 일령 특정병원체부재 병아리에서의 뇌내 병원성지수(intracerebral pathogencity index; ICPI), 닭 종란 계태아 평균 치사시간(mean death time; MDT), F 단백질 유전자 분절부위 아미노산 서열 분석 등을 통하여 병원성 정도를 측정한다. 강독형 NDV는 닭에 대한 병원성이 매우 강하여 감염 닭에서 높은 치사율을 나타낸다. 병증 발현 양상에 따라 다시 심한 실사 등 소화기 질병을 심하게 일으키는 내장친화성(viscerotropic velogenic) NDV와 심한 신경성 증상을 특징적으로 나타내는 신경친화성(nuerotropic velogenic) NDV로 나눈다. 중간독형 NDV는 닭 치사율은 강독형보다 낮지만, 호흡기 증상 등을 심하게 일으킨다. 약독형 NDV는 닭 치사율이 거의 없거나 낮으며 병증도 매우 약하다. 약독형 NDV 스트레인 중 일부는 양계농장에서 뉴캣슬병 예방하기 위한 백신으로 사용하고 있다.
NDV는 전 세계적으로 단일 혈청형만 존재하는 것으로 간주하고 있다. 바이러스 유전형은 바이러스 퓨전(fusion; F) 단백질 유전자의 유전자 염기서열을 기초로 유전자 계통도 분석을 통하여 이루어진다. NDV 유전형은 크게 클라스 제1형(class 1)와 클라스 제2형(class 2)으로 분류한다. 클라스 제1형은 주로 야생조류와 오리류, 재래시장 등에서 주로 분리되며 닭에 대한 병원성은 없다. 클라스 제2형은 보다 세분하면 현재까지 최소한 16 개 이상의 유전형으로 구성되어 있다. 이중 유전형 I과 유전형 II는 대부분 닭에서 피해를 유발하지 않는 약독형 NDV들이지만 나머지 유전형의 NDV는 대부분 닭에서 뉴캣슬병을 일으키는 바이러스들이다.
이러한 NDV는 엔벨롭(envelope)을 가지고 있으며 엔벨롭에는 바이러스가 숙주 세포에 결합할 수 있도록 해주는 HN(Haemagglutinin-Neuraminidase) 단백질과 엔벨롭과 숙주 세포의 융합을 일으키는 F(Fusion) 단백질이 있다. F 단백질과 HN 단백질은 글리코단백질(glycoprotein)로서 엔벨롭의 표면에 분포되어 있다.
상기 F 단백질은 I 형 막 글리코단백질(type I membrane glycoprotein)로써 삼합체(trimeric) 구조를 형성한다. F 단백질은 비활성 전구체 형태(F0)로 만들어지고 골지 막(Golgi membranes)을 통해 이동하는 동안 활성 형태인 F1과 F2로 잘리게 된다. 이러한 과정은 F1 소단위체(subunit)의 아미노 말단에서 소수성 도메인(domain)을 노출시키고 이것은 성숙한 단백질의 생물학적 활성에 중요한 역할을 한다. 융합 펩티드(fusion peptide)라 불리는 소수성 도메인은 파라믹소바이러스(paramyxovirus) F 단백질에서 매우 보존되어 있고 막 융합을 매개하는데 직접적으로 관여하고 있을 것이라 여겨지고 있다. 파라믹소바이러스 F 단백질은 7개 반복(heptad repeats)을 포함하고 알파 헬릭스 구조를 형성할 가능성이 있는 두 지역을 포함하는 여러 개의 공통된 구조 형태를 갖고 있다. 두 반복중 가장 긴 7개 반복 A(heptad repeat A)는 F1의 아미노 말단에서 소수성 융합 펩티드와 인접해 있으며, 7개 반복 B는 관통막(transmembrane) 지역의 윗부분에 밀착하여 있다. 7개 반복 B는 매 7개 잔기마다 매우 보존된 류신 또는 이소류신의 연속으로 구성되어 있다.
HN 단백질은 II 형 막 글리코단백질(type II membrane glycoprotein)로 바이러스 엔벨롭의 표면에서 4합체(tetramer)를 형성하여 세포막에 침투한다(Gorman et al., 1988; Ng et al., 1989). HN 단백질은 비리온(virion)이 글리코접합(glycoconjugates)의 시알산(sialic acids)에 결합함으로써 호스트 세포 표면에 위치시키는 기능을 한다. HN 단백질은 관통막(transmembrane) 도메인, 줄기(stalk) 도메인 및 구형(globular) 도메인의 세 지역으로 나뉜다. 항원성인 수용체 결합과 뉴라미니다제(neuraminidase) 활성 위치는 모두 구형 도메인에 위치해 있다. 융합 유도 활성은 줄기 도메인에 위치해 있고 이것은 F 단백질과 상호작용 한다(Sergei et al., 1993). 줄기 도메인은 예상되는 형태로 α-헬릭스와 함께 2개의 7개 반복 지역 A(74-88 위치)와 7개 반복 지역 B(96-110 위치)를 갖고 있다. 또한, 구조를 파괴하는 어떤 돌연변이도 수용체 결합과 뉴라미니다제 활성을 감소시키는 원인이 된다는 보고가 있다.
한편, 일반적인 암 치료는 화학 요법, 방사선 요법 및 수술을 통해 이루어진다. 하지만, 일부 초기 암을 제외하고는 수술로 완벽히 제거하기 어렵거나 화학 또는 방사선 요법의 세포독성으로 인한 부작용이 존재한다. 이를 보완하기 위한 다양한 기술 중에서 암세포만을 공격하여 사멸시키는 전략은 매우 각광받는 기술 중 하나이다. 그 중에서도 '종양용해성 바이러스(oncolytic virus)'는 바이러스에 내재된 혹은 인공적으로 추가된 암세포 선택능을 기반으로 하여 암세포에 감염하고 암세포를 파괴하는 바이러스로서 오래 전부터 주목받아온 암 치료 기술이다.
즉, 종양용해성 바이러스는 종양 세포에서 선택적으로 증식하여 그 종양 세포를 죽이는 제한 증식형 바이러스(conditionally replication-competent virus)의 일종이다. 1950년대부터 1970년대까지의 기간 동안, 바이러스의 종양살상 효과가 아데노바이러스(adenovirus) 또는 이하선염바이러스(mumps virus)를 이용한 연구를 통해 확인된 바 있으나, 결국 일시적인 효능과 독성 부작용으로 인해 수십년간 주목을 받지 못하였다. 그러나 1990년대에, 단순포진바이러스-1(Herpes simplex virus-1; HSV-1)의 티미딘 키나아제(thymidine kinase; TK) 결손형 변이체 및 p53 결손형 종양 세포에서 선택적으로 증식하는 아데노바이러스 돌연변이인 dl1520(ONYX-015)과 같이 이전의 바이러스보다 안전성이 개선된 일부 바이러스가 개발된 이후, 급속도로 종양살상 바이러스에 대한 연구가 진행되었다(Jagus R, et al., Int. J. Biochem. Cell Biol., (1999) 31:123-138; Bischoff JR, et al., Science, (1996) 274(5286):373-376). 현재까지, 약 80 종 이상의 종양 살상 바이러스가 개발되었으며, 이들은 항암치료를 위한 유망한 도구가 될 것으로 기대되고 있다.
최근 전 세계적으로 개, 고양이 등 반려동물의 수가 늘어나고 있고, 동물 보호와 동물 복지가 중요한 문제로 대두되고 있다. 반려동물의 사육 기간이 길어짐에 따라 반려동물에서 발생하는 암도 중요한 질환으로 간주되고 있다. 유럽에서 개의 종양 발생율은 연간 약 0.2% (200마리/100,000마리)로 추산되며, 이 중 유선종양은 암컷에서 발생되는 종양의 약 40%를 차지한다. 또한, 유선종양은 고양이 종양성 질병의 10~12%를 차지하는 3 번째로 다발하는 종양으로, 발생 종양의 대부분은 악성 종양으로 판정 된다. 개와 고양이의 암 치료 전략도 사람과 유사하여 수술, 화학 요법, 방사선 요법을 단독 혹은 병행하여 적용하는 것이 최선이다. 아직까지 종양용해성 바이러스를 개나 고양이에 적용하려는 시도는 실험적으로 이루어지는 수준이다.
바이러스가 암세포를 선택적으로 사멸하는 능력은 암의 종류에 따라 다양하다. 최근 아데노바이러스, 폭스바이러스 등 사람에서 적용하는 암 치료용 바이러스를 반려동물의 암 치료용으로 적용하는 연구가 이루어지고 있다. 현재 개나 고양이의 유선종양 만을 타겟으로 개발된 바이러스는 아직까지 없다. 특히 사람에서와 달리, 뉴캣슬병 바이러스를 반려동물 암 치료용으로 적용하려는 시도는 없었다. 또한, 뉴캣슬병 바이러스는 병원성이 높을수록 종양용해능이 높다고 알려져 있는데 효능평가는 사람의 암세포만을 대상으로 하여 동물의 종양세포에 대한 효능 자료는 극히 제한적이다. 그러나, 강독형 NDV를 반려동물 암 치료용으로 적용할 경우, 특히 양계 농장에 사육하는 반려동물의 경우 양계농장을 악성 질병을 퍼트릴 수 있는 위험이 있기 때문에 적용하기가 어렵다.
따라서, 양계 농장에 피해를 가하지 않는 약독형 NDV를 반려동물 암 치료용으로 개발하는 것이 현실적인 방안으로 시도되고 있다.
이러한 상황 하에서, 본 발명자들은 동물의 암 치료를 위해 종양 세포에서 보다 선택적으로 종양살상 효과가 극대화된 약독형 NDV를 개발하고자 노력하였다. 그 결과, 본 발명자들은 국내에서 사육하고 있는 가금 오리로부터 NDV를 분리하여 상기 신규한 NDV 분리주를 분석하였고, 상기 NDV 분리주가 약병원성 NDV의 특성을 가지며, 병원성을 나타내지 않으면서 종양 세포에 대해 탁월한 사멸효과를 나타낸다는 것을 확인함으로써 본 발명을 완성하게 되었다.
따라서, 본 발명의 목적은 종양 세포 살상능을 가진 종양용해성 바이러스(Oncolytic Virus)인 뉴캣슬병 바이러스(Newcastle disease virus, NDV)를 제공하는 데 있다.
또한, 본 발명의 다른 목적은 암 치료 또는 예방용 약학적 조성물을 제공하는 데 있다.
또한, 본 발명의 또 다른 목적은 암의 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공하는 데 있다.
또한, 본 발명의 또 다른 목적은 암 치료 또는 예방 방법을 제공하는 데 있다.
이하, 본 발명을 상세히 설명한다.
본 발명의 일 양태에 따르면, 본 발명은 종양 세포 살상능을 가진 종양용해성 바이러스(Oncolytic Virus)로서, 기탁번호 KCTC13216BP인 뉴캣슬병 바이러스(Newcastle disease virus, NDV)를 제공한다.
본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 상기 뉴캣슬병 바이러스는 뉴캣슬병 바이러스에 감염된 국내 오리로부터 분리된 뉴캣슬병 바이러스의 신규한 분리주이다.
본 발명자들은 상기 신규한 뉴캣슬병 바이러스 분리주를 "NDV QIA-CI"로 명명하였고, 상기 NDV QIA-CI주를 2017년 2월 16일자로 KCTC 생물자원센터에 기탁하여 기탁번호 KCTC13216BP를 부여받았다.
본 발명의 뉴캣슬병 바이러스는, 서열번호 1의 아미노산 서열로 표시되며 이와 동등한 면역원성을 가지는 F 단백질; 및 서열번호 3의 아미노산 서열로 표시되며 이와 동등한 면역원성을 가지는 V 단백질을 포함한다.
NDV의 주요 표면 단백질은 F 및 HN 단백질이며, 유전형 및 병원성 분류에 중요하다. 특히, F 단백질은 바이러스의 세포 표면 부착과 세포 융합에 관계되고, 분절부위의 아미노산 서열이 바이러스의 병원성을 결정하는 데 중요한 요소이다. 또한, F 유전자의 염기서열은 NDV의 유전형을 분류하는 기준이 되기도 한다.
또한, NDV 내부 단백질 중 V 단백질은 P 단백질을 코딩하는 유전자로부터 생산되는 2차 단백질로써 NDV의 숙주 동물 범위와 병원성 결정에 중요한 것으로 알려져 있다.
본 발명의 뉴캣슬병 바이러스의 F 단백질을 코딩하는 뉴클레오타이드 서열은 서열번호 2이다.
본 명세서에 있어서, 강병원성 또는 강독성 뉴캣슬병 바이러스는, 별도의 언급이 없는 한, 통상적으로 분류되는 강병원성 뉴캣슬병 바이러스 뿐 아니라 중간 이상의 병원성을 갖는 모든 병원성 뉴캣슬병 바이러스를 포함하는 의미로 사용된다. 본 발명에 있어서, 강병원성 뉴캣슬병 바이러스는 동물 감염 시 체내 모든 세포에서 감염성 있는 바이러스가 만들어짐으로써 병원성을 나타내는 것으로, F 단백질의 113번째부터 116번째 아미노산 서열이 다음의 식 1과 같이 표현되는 경우 체내 대부분의 세포 내에 분포하는 퓨린 또는 퓨린 유사 단백질분해효소 (이하 퓨린)에 의해 절단되어 활성을 갖는 구조를 갖게 되므로 바이러스의 감염능력이 생기게 된다. 따라서 병원성 뉴캣슬병 바이러스는 F 단백질의 113번째부터 116번째 아미노산 서열의 코딩 서열로서 다음의 식 1로 표현되는 아미노산 서열을 코딩하는 염기서열을 갖는 것으로 정의된다:
[식 1]
113X1X2X3X4 116
상기 식 중
X1, X3 및 X4는 각각 독립적으로 아르기닌 (R) 또는 리신 (K)이고,
X2는 알라닌, 이소류신, 류신, 메티오닌, 페닐알라닌, 프롤린, 트립토판, 발린, 아스파라긴, 시스테인, 글루타민, 글리신, 세린, 트레오닌, 티로신, 아스파르트산, 글루타민산, 아르기닌, 히스티딘 및 리신으로 이루어진 군 중에서 선택된 아미노산이고,
이 때, F의 112번째 아미노산도 아르기닌 또는 리신과 같은 염기성 아미노산인 경우 더욱 강한 병원성을 나타내게 된다.
또한, 본 명세서에 있어서, 약병원성 또는 약독성 뉴캣슬병 바이러스는, 별도의 언급이 없는 한, 통상적으로 분류되는 약병원성 뉴캣슬병 바이러스 분 아니라 무독 또는 비독성 뉴캣슬병 바이러스를 포함하는 의미로 사용된다.
본 발명에 있어서, 약병원성 뉴캣슬병 바이러스는 동물 감염 시 체내 일부 세포 내와 소화관 및 호흡기관의 세포외 단백질 분해효소에 의해서만 활성화되어 국소적인 바이러스 증식이 일어나 약한 병원성을 나타내는 것으로, F의 113번째부터 116번째 아미노산 서열이 다음의 식 2와 같이 표현되는 경우를 의미한다. 따라서 약병원성 뉴캣슬병 바이러스는 F의 113번째부터 116번째 아미노산 서열의 코딩 서열로서 다음의 식 2로 표현되는 아미노산 서열을 코딩하는 염기서열을 갖는 것으로 정의된다:
[식 2]
113X5X6X7X8 116
상기 식 중
X5, X6 및 X7은 각각 독립적으로 알라닌, 이소류신, 류신, 메티오닌, 페닐알라닌, 프롤린, 트립토판, 발린, 아스파라긴, 시스테인, 글루타민, 글리신, 세린, 트레오닌, 티로신, 아스파르트산, 글루타민산, 아르기닌, 히스티딘 및 리신으로 이루어진 군 중에서 선택된 아미노산이고, X5와 X7은 동시에 아르기닌 (R) 또는 리신 (K)이 아니며,
X8은 아르기닌 (R) 또는 리신 (K)이다.
뉴캣슬병 바이러스는 퓨린에 의하여 F 단백질에 위치하는 퓨린 인식 부위(cleavage site)가 절단되어 세포막과 융합되는 F 단백질의 융합 펩티드 부위가 노출되면 비로소 감염능력을 갖게 된다. 퓨린은 동물의 전신에 분포하는 효소이므로, 퓨린에 의한 바이러스 감염능력 활성화는 전신에서 발생하여 병원성을 나타낸다.
따라서, 뉴캣슬병 바이러스의 병원성은 F 단백질에 위치하는 퓨린 절단 부위가 퓨린에 의하여 인지되고 절단되는 정도에 따라서 달라진다.
뉴캣슬병 바이러스 F 단백질의 퓨린 인식 부위 (113 내지 116번째 아미노산)가 상기의 식 1의 아미노산 서열과 같이 적어도 3개 이상의 염기성 아미노산 (113R-X-K/R-R116)을 갖는 경우, 퓨린에 의한 바이러스 감염이 전신적으로 일어나므로 병원성을 나타내게 된다. 그러나 상기의 식 2의 아미노산 서열과 같이, 하나 이상의 염기성 아미노산이 비염기성 아미노산으로 치환되는 경우에는 퓨린에 의한 인식 및 절단이 거의 일어나지 않고, 오로지 국소적으로 존재하는 세포 내 또는 세포 외 단백분해효소에 의해 절단이 이루어지므로 치명적인 전신감염은 일어나지 않아 병원성은 낮다.
즉, 병독성(병원성)이 있는 대부분의 NDV는 F2 단백질의 C-말단에 있는 서열 112R/K-R-Q-K/RR116과 F1 단백질의 N-말단인 잔기 117에 있는 F(페닐알라닌)를 갖는 반면에 낮은 병독성의 바이러스들은 동일 영역에서 112G/E-K/R-Q-G/E-R116의 서열과 잔기 117에 있는 L(류신)을 갖는다.
본 발명의 뉴캣슬병 바이러스에 대하여 서열 분석한 결과, 상술한 F 단백질의 분절부위 아미노산 서열이 112ERQERL117이고, 이는 약독형 유형(Class) I에 해당하며, 효과적으로 약독화되어 있어, 안정성과 안전성 면에서 탁월한 특성을 가지고 있다.
또한, 본 발명의 뉴캣슬병 바이러스 분리주는 암세포가 자멸하는 것을 도울 뿐만 아니라 우수한 종양 살상능을 갖는 것으로 밝혀졌다.
본 발명의 다른 양태에 따르면, 본 발명은 기탁번호 KCTC13216BP인 뉴캣슬병 바이러스(Newcastle disease virus, NDV)를 유효성분으로 포함하는 암 치료 또는 예방용 약학적 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명의 약학적 조성물은 약학적으로 허용가능한 담체를 포함할 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 상기 성분 이외에 윤활제, 습윤제, 감미제, 향미제, 유화제, 현탁제, 보존제 등을 추가로 포함할 수 있다.
적합한 약학적으로 허용되는 담체 및 제제는 Remington's Pharmaceutical Sciences (19th ed., 1995)에 상세히 기재되어 있다.
본 명세서에서 사용된 용어, "약학적으로 허용되는 담체"는 제제시에 통상적으로 이용되는 것으로서, 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 전분, 아카시아 고무, 인산 칼슘, 알기네이트, 젤라틴, 규산 칼슘, 미세결정성 셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈, 셀룰로스, 물, 시럽, 메틸 셀룰로스, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 활석, 스테아르산 마그네슘 및 미네랄 오일 등을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다.
이에 적합한 담체는 기술분야의 당업자에게 공지되어 있으며, 상기의 담체는 수용액 또는 비-수용액, 현탁액, 및 에멀전일 수 있다. 비-수용액 담체의 예는 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 식용유 예컨대 올리브 오일, 및 주사가능한 유기 에스테르 예컨대 에틸 올리에이트를 들 수 있다. 수용액 담체는 식염수 및 완충배지를 포함하는, 물, 알콜/수용액, 에멀전 또는 현탁액을 포함한다. 비경구 담체는 염화나트륨 용액, 링거 덱스트로오스, 덱스트로오스 및 염화나트륨, 유산처리 링거 또는 고정 오일을 포함한다. 정맥주사용 담체는 예컨대 링거 덱스트로오스를 기본으로 하는 것과 같은 전해질 보충제, 액체 및 영양 보충제 등을 포함한다. 방부제 및 기타 첨가제 예컨대 예를 들면 항미생물제제, 항산화제, 킬레이트제, 불활성 가스 등과 같은 것이 추가로 존재할 수 있다. 바람직한 방부제는 포르말린, 티메로살, 네오마이신, 폴리믹신 B 및 암포테리신 B를 포함한다.
본 발명의 약학적 조성물은 경구 또는 비경구로 투여할 수 있고, 비경구 투여인 경우에는 정맥내 주입, 피하주입, 근육 주입, 복강 주입, 경피 투여 등으로 투여할 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물의 적합한 투여량은 제제화 방법, 투여 방식, 환자의 연령, 체중, 성, 병적 상태, 음식, 투여 시간, 투여 경로, 배설 속도 및 반응 감응성과 같은 요인들에 의해 다양하며, 보통으로 숙련된 의사는 소망하는 치료 또는 예방에 효과적인 투여량을 용이하게 결정 및 처방할 수 있다.
또한, 환자에게 투여되는 유효량은 바이러스의 약동학적 특성, 투여 방법, 연령, 환자의 건강상태 및 체중, 질병 상태의 특성 및 범위, 치료 횟수 및 최근의 치료 형태와 같은 수많은 인자에 의해 달라질 수 있으며, 가령 바이러스의 병독성 및 역가에 따라서도 달라질 수 있다.
투여되는 바이러스의 농도는 투여되어야 하는 특정 바이러스 균주의 병독성 및 표적이 되는 세포의 특징에 따라 달라질 것이다. 일 구현예에 따르면, 102 내지 1013 플라그 형성 단위 ("pfu") 범위의 양이 투여될 수 있다. 다양한 구현예에 따르면, 102 내지 109 pfu, 102 내지 107 pfu, 103 내지 106 pfu 또는 104 내지 105 pfu를 단일 용량으로 투여할 수 있다.
유효량의 바이러스는 최초 치료 요법의 효과에 따라 반복적으로 투여될 수 있다. 일반적으로 투여는 모든 반응을 모니터링하는 동안 주기적으로 투여된다. 당업자라면 투여 스케줄 및 선택된 경로에 따라 상기 표시된 것보다 낮거나 높은 용량이 투여될 수 있음을 용이하게 파악할 수 있다.
바이러스는 단독으로 투여되거나 화학요법, 방사선 요법 또는 다른 항-바이러스 치료법을 포함하는 다른 치료법과 혼합하여 투여될 수 있다. 예를 들어, 바이러스는 수술을 통한 일차 종양의 제거 이전 또는 이후에 투여되거나 방사선요법 또는 통상적인 화학요법 약물 등의 치료 이전, 동시 또는 이후에 투여될 수 있다. 일 구현예에 따르면, 상기 바이러스는 다양한 종양 세포 타입에 대해 특이성을 나타내는 다른 종양살상 바이러스와 함께, 또는 순차적 방법으로 투여될 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 당해 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있는 방법에 따라, 약학적 유효량을 약학적으로 허용되는 담체 및/또는 부형제를 이용하여 제제화함으로써 단위 용량 형태로 제조되거나 또는 다용량 용기 내에 내입시켜 제조될 수 있다. 이때 제형은 오일 또는 수성 매질중의 용액, 현탁액 또는 유화액 형태이거나 엑스제, 분말제, 과립제, 정제 또는 캅셀제 형태일 수도 있으며, 분산제 또는 안정화제를 추가적으로 포함할 수 있다.
본 명세서에서 사용된 용어, "약학적 유효량(therapeutically effective amount)"은 투여되는 억제제의 양이 치료하고자 하는 질환인 암의 하나 또는 그 이상의 증상을 어느 정도 경감하는 것을 의미한다. 따라서, 약학적 유효량은, (1) 암의 진행속도를 역전시키거나 (2) 암의 그 이상의 진행을 어느 정도 금지시키게 하는 것을 의미하며, (3) 암과 관련된 하나 또는 그 이상의 증상을 어느 정도 경감(바람직하게는, 제거)하는 효과를 가지는 양을 의미한다.
본 발명의 대상 질환인 "암(cancer)" 또는 "종양(tumor)"은 세포가 정상적인 성장 한계를 무시하고 분열 및 성장하는 공격적(aggressive) 특성, 주위 조직에 침투하는 침투적(invasive) 특성, 및 체내의 다른 부위로 퍼지는 전이적(metastatic) 특성을 갖는 세포에 의한 질병을 총칭하는 의미이다.
본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 상기 암은 유방암(breast cancer), 대장암(colon cancer), 위암(gastric cancer), 폐암(lung cancer), 간암(liver cancer), 혈액암(blood cancer), 뼈암(bone cancer), 췌장암(pancreatic cancer), 피부암(skin cancer), 머리 또는 목암(head or neck cancer), 피부 또는 안구 흑색종(cutaneous or intraocular melanoma), 자궁육종(uterine sarcoma), 난소암(ovarian cancer), 직장암(rectal cancer), 항문암(anal cancer), 난관암(fallopian tube carcinoma), 자궁내막암(endometrial carcinoma), 자궁경부암(cervical cancer), 소장암(small intestine cancer), 내분비암(endocrine cancer), 갑상선암(thyroid cancer), 부갑상선암(parathyroid cancer), 신장암(adrenal cancer), 연조직종양(soft tissue tumor), 요도암(urethral cancer), 전립선암(prostate cancer), 기관지암(bronchogenic cancer) 및 골수암(bone marrow tumor)으로 이루어진 군에서 선택된 1 종 이상이며, 이에 한정되는 것은 아니나, 가장 바람직하게는 유방암이다.
상기 유방암은 유방에 발생하는 모든 악성 종양을 통틀어 지칭하며, 예컨대, 유방악성종양, 유관암, 유암, 유선암을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
본 발명의 일 실시예에 따르면, 본 발명의 유효성분인 뉴캣슬병 바이러스(Newcastle disease virus, NDV)를 포함하는 본 조성물은 암세포 성장 및 생존율을 감소 또는 억제시킬뿐만 아니라 암세포의 자멸사를 유도함으로써 항암 효과를 나타낸다.
본 발명의 또 다른 양태에 따르면, 본 발명은 기탁번호 KCTC13216BP인 뉴캣슬병 바이러스(Newcastle disease virus, NDV)를 유효성분으로 포함하는 암의 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공한다.
본 발명의 조성물은 암의 예방 또는 개선을 목적으로 건강기능식품에 첨가될 수 있다. 본 발명에서, "건강기능식품"이란, 암의 예방 및 개선, 생체방어, 면역, 병후의 회복 등 생체조절 기능을 가지는 식품을 말하는 것으로, 장기적으로 복용하였을 때 인체에 무해해야한다.
본 발명의 조성물을 식품 첨가물로 사용할 경우, 상기 조성물을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효성분의 혼합양은 사용 목적 (예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 식품 또는 음료의 제조 시에 본 발명의 조성물은 원료에 대하여 15중량% 이하, 바람직하게는 10 중량% 이하의 양으로 첨가된다. 그러나, 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 범위 이하일 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있다.
상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 물질을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소시지, 빵, 초콜릿, 캔디류, 스낵류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 수프, 음료수, 차, 드링크제, 알코올 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강 식품을 모두 포함한다.
본 발명의 건강음료 조성물은 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 포함할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물은 포도당, 과당과 같은 모노사카라이드, 말토오스, 수크로오스와 같은 디사카라이드, 및 덱스트린, 사이클로덱스트린과 같은 천연 감미제나, 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 ml 당 일반적으로 약 0.01 내지 10 g, 바람직하게는 약 0.01 내지 0.1g 이다.
상기 외에 본 발명의 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 포함할 수 있다. 그 밖에 본 발명의 조성물은 천연 과일주스, 과일주스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 포함할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 크게 중요하진 않지만 본 발명의 조성물 100 중량부 당 0.01 내지 0.1 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.
본 발명의 식품 조성물은 상술한 뉴캣슬병 바이러스(Newcastle disease virus, NDV)를 포함하기 때문에, 이 둘 사이에 공통된 내용은 본 명세서의 과도한 복잡성을 피하기 위하여, 그 기재를 생략한다.
본 발명의 또 다른 양태에 따르면, 본 발명은 상기 약학적 조성물을 치료하고자 하는 대상에게 투여하는 단계를 포함하는 암 치료 또는 예방 방법을 제공한다.
본 방법은 상기 뉴캣슬병 바이러스가 포함된 상기 배양물의 상층액을 일련의 과정을 거치지 않고 뉴캣슬병 바이러스가 포함된 원액 자체로서 이용할 수 있다. 예컨대, 숙주세포에서 발현된 뉴캣슬병 바이러스를 별도의 정제과정을 거치지 않거나 또는 정제하여 배양된 숙주세포를 파쇄하여 제조한 세포 용해물을 그대로 사용할 수 있다.
바람직하게는, 본 방법의 상기 조성물은 경구, 비강, 복막, 정맥, 피하, 근육 및 이들의 조합으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나의 방법으로 투여된다.
바람직하게는, 본 방법의 상기 대상은 포유동물이며, 상기 포유동물은 인간, 원숭이, 소, 돼지, 양, 말, 개, 및 고양이로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상일 수 있고, 가장 바람직하게는 개 또는 고양이이다.
본 발명의 방법은 상술한 뉴캣슬병 바이러스를 유효성분으로 포함하는 조성물을 이용하므로, 상술한 본 발명의 조성물과 중복된 내용은 중복된 내용의 기재에 의한 본 명세서의 과도한 복잡성을 피하기 위하여 그 기재를 생략한다.
본 발명의 신규한 뉴캣슬병 바이러스는 비병원성일 뿐만 아니라, 종양 세포에 대해서 특이적으로 암세포 용해능을 나타내므로 암 치료 및 암 병용 치료에 효과적으로 사용될 수 있다.
도 1a는 두 가지 암세포주에서, 총 7 종의 NDV 야외주의 암세포 특이 사멸 효과를 비교한 결과이다. 도 1b은 NDV QIA-CI주의 F 유전자 뉴클레오타이드 서열을 기반으로 한 계통도로서, 본 발명의 약독형 NDV 분리주 QIA-CI의 위치를 도시한다. 도 1c는 NDV QIA-CI주의 V 단백질 아미노산 서열로, 당업계에 공지된 항암용 바이러스주인 NDV LaSota와는 상이한 아미노산 서열을 가지고 있다.
도 2는 NDV QIA-CI주 감염에 의한 개 유선종양 세포주의 세포변성효과를 정상 세포와 비교 관찰한 결과이다.
도 3은 개 유선종양 세포주에서 NDV QIA-CI주의 증식성을 관찰한 결과이다.
도 4는 본 발명의 NDV QIA-CI주 감염에 의한 개유선종양세포주 CHMp5b, CHMp-13a, 및 CMT14-2의 생존율 변화를 관찰한 결과이다.
도 5는 본 발명의 NDV QIA-CI주 감염으로 인한 개 유선종양세포주 CHMp5b 및 CHMp-13a의 세포자멸사(apoptosis) 수준을 DAPI 염색을 통해 관찰한 결과이다.
도 6은 누드 마우스에 개유선종양세포 CHMp-13a 유래 종양을 이식하고 NDV QIA-CI주 투여 시 종양의 부피 성장이 억제되는 양상을 관찰한 결과이다.
이하, 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로서, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.
실시예 1. 본 발명의 신규한 뉴캣슬병 바이러스(Newcastle disease virus, NDV )의 분리 및 선별
본 발명자들은 신규한 종양용해성 바이러스를 획득하기 위하여, 국내 사육 오리로부터 다양한 NDV 야외주들을 분리하여 이들 중 가장 우수한 암용해능을 나타내는 신규한 NDV 분리주를 선별하고 동정하였다.
1-1. 다양한 뉴캣슬병 바이러스(Newcastle disease virus, NDV ) 야외주들의 분리
본 발명자들은 국내 전라북도 지역의 오리 농장에서 채취한 오리 분변을 인산완충식염수(phosphate buffered saline, PBS)에 부유시킨 뒤 원심분리 상등액을 9~11일령의 SPF 발육란에 접종하여, 3~5일 간 배양하여 총 7 종의 바이러스 야외주를 획득하였다. 상기 야외주들이 배양된 발육란들의 요막강액을 채취하여 닭 적혈구 응집능이 있는지 확인하였고, 유전자 검사를 실시하여 약병원성 NDV임을 확인하였다.
1-2. 본 발명의 신규한 뉴캣슬병 바이러스(Newcastle disease virus, NDV )의 선별
본 발명자들은 실시예 1-1에서 획득한 다양한 NDV 야외주들 총 7 종 중 가장 우수한 암용해능을 나타내는 신규한 NDV 분리주를 선별하기 위하여, 종양 세포에 대한 사멸 효과를 비교 평가하였다.
먼저, 96 웰 플레이트에 사람 유선종양 유래 세포주 BT474와 개 유선종양 유래 세포주 CMT 14-2를 각각 105/ml 농도로 배양하고 24 시간 뒤 7 종의 서로 다른 NDV 분리주를 각각 10~20 MOI로 바이러스를 감염시켰다. 감염 후 3 일간 세포의 변성효과를 관찰하고, 72 시간 경과 후 배지에 WST-1을 첨가하여 30 분 내지 1 시간 이내에 235nm의 파장으로 흡광도를 측정함으로써 암세포의 생존율을 확인하였다.
그 결과, 도 1a에 나타난 바와 같이, 두 가지 암세포주 모두에서, 시험에 사용한 7 종의 NDV 야외주 중 NDV QIA-CI주의 세포 사멸율이 종래에 암세포 특이 사멸 효과가 알려진 Ulster 2C주(양성대조군)보다 우수한 것으로 나타났다.
이에, 본 발명자들은 상기 신규한 뉴캣슬병 바이러스 분리주를 "NDV QIA-CI"로 명명하였고, 상기 NDV QIA-CI주를 2017년 2월 16자로 KCTC 생물자원센터에 기탁하여 기탁번호 KCTC13216BP를 부여받았다.
실시예 2. 본 발명의 신규한 뉴캣슬병 바이러스(Newcastle disease virus, NDV )의 생물학적 특성 확인
본 발명자들은 실시예 1-2에서 획득한 본 발명의 신규한 NDV 분리주인 NDV QIA-CI주의 분자생물학적 특성을 분석하였다.
닭과 병아리에 대한 병원성을 확인하기 위하여, 9~11일령 SPF 발육란에 바이러스를 접종하고 일주일간 발육란의 폐사유무를 관찰하였다. 또한, 10일령 SPF 병아리의 뇌내로 바이러스를 접종하고 임상증상 발현 및 폐사율을 관찰하였다.
그 결과, SPF 발육란과 병아리 모두에서 폐사가 확인되지 않아, 바이러스에 의한 평균치사시간(mean death time; MDT)은 120시간 이상, 뇌내병원성지수(intracerebral pathogenicity index: ICPI)는 0.0으로 확인되었다.
또한, NDV의 병원성을 결정하는 F 유전자의 분절부위 유전자 염기서열을 분석하였다. 이를 위해, 바이러스 액으로부터 RNA를 추출하고 F 유전자의 분절부위가 함유되도록 RT-PCR을 수행하고 증폭된 유전자 산물의 뉴클레오타이드 서열을 분석하였다.
분석된 F 단백질의 아미노산 서열(서열번호 1) 및 F 유전자의 뉴클레오타이드 서열(서열번호 2)을 기반으로 F 분절분위 아미노산 서열을 추정한 결과, 본 발명의 약독형 NDV 분리주 QIA-CI의 F 분절부위 아미노산 서열은 112ERQERL117인 것으로 확인된 바, 이는 본 발명의 신규한 NDV 분리주가 약병원성 NDV임을 나타낸다.
또한, 분석된 F 유전자의 뉴클레오타이드 서열을 기존에 알려진 NDV 바이러스와 비교하기 위하여 계통도(도 1b)를 작성하였다.
그 결과, 도 1b에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 NDV 분리주 QIA-CI는 Class I의 NDV에 속하면서 유전형 2에 속하였다.
또한, 추가적으로 본 발명자들은 본 발명의 NDV 분리주가 신규한 분리주임을 확인하기 위하여, 숙주세포의 인터페론 활성을 억제하여 바이러스 증식성과 병원성 및 숙주 영역을 한정하는 데 중요한 역할을 하는 V 단백질의 아미노산 서열(서열번호 3)을, 당업계에 공지된 항암용 NDV LaSota주와 비교분석하였다.
그 결과, 본 발명의 NDV 분리주는 NDV LaSota의 것과 상이한 아미노산 서열(서열 일치율 62.8%)을 나타냈다(도 1c).
따라서, 본 발명의 NDV 분리주는 공지된 바 없는 신규한 NDV 분리주임을 알 수 있다.
실시예 3. 본 발명의 신규한 뉴캣슬병 바이러스(Newcastle disease virus, NDV )의 암세포-특이 사멸 효과 평가
본 발명자들은 실시예 1-2에서 획득한 본 발명의 신규한 NDV 분리주인 NDV QIA-CI주의 종양 세포에 대한 사멸 효과를 확인하였다.
먼저, 동경대학교 수의과대학에서 분양받은 개의 악성 유선종양 세포주 CHMp-5b 및 CHMp-13, 개 악성 유선종양으로부터 분리한 CMT14-2 초대배양세포에 NDV QIA-CI주를 감염시키고 5일간 세포변성효과를 관찰하였다.
그 결과, 도 2에 나타낸 바와 같이, 본 QIA-CI주는 세 가지 유선종양 세포 모두에서 세포변성 효과를 일으켰으며, 그 양상이 일반적인 NDV의 세포변성효과의 특징인 합포체 형성과 다르게 세포크기 증가 및 원형화 이후 세포 소실이 일어나는 양상으로 진행하는 것을 확인하였다.
또한, 본 NDV QIA-CI주가 개 유선종양 세포 내에서 증식성을 나타내는 지 확인하였다.
먼저, 개의 악성 유선종양 세포주 CHMp-5b 및 CHMp-13에 NDV QIA-CI주를 감염시키고 0, 24, 48, 72시간째에 배지를 회수하여 바이러스의 역가를 측정하였다.
그 결과, 도 3에 나타낸 바와 같이, 본 QIA-CI주는 개 유선종양 세포 내에서 증식하지 않았고, 이는 non-lytic 경로를 통한 암세포 사멸 효과를 나타내기 때문인 것으로 추정된다.
실시예 4. 본 발명의 신규한 뉴캣슬병 바이러스(Newcastle disease virus, NDV )의 종양용해능( oncolytic activity) 평가
본 발명자들은 실시예 1-2에서 획득한 본 발명의 신규한 NDV 분리주인 NDV QIA-CI주의 종양용해능을 확인하였다.
먼저, 96 웰 플레이트에 개 유선종양 유래 세포주 CHMp-5b, CHMp-13a, CMT 14-2를 각각 105/ml 농도로 배양하고 24 시간 뒤 100~200 MOI로 바이러스를 감염시켰다. 감염 후 3 일간 세포의 변성효과를 관찰하고, 72 시간 경과 후 배지에 WST-1을 첨가하고 30 분 내지 1 시간 이내에 235nm의 파장으로 흡광도를 측정함으로써 암세포의 생존율을 확인하였다.
그 결과, 도 4에 나타난 바와 같이, NDV QIA-CI주 감염으로 인한 암세포의 세포 생존율은 50% 미만으로 매우 낮게 나타났다.
실시예 5. 본 발명의 신규한 뉴캣슬병 바이러스(Newcastle disease virus, NDV )의 세포자멸사( apoptosis ) 유도능 평가
본 발명자들은 실시예 1-2에서 획득한 본 발명의 신규한 NDV 분리주인 NDV QIA-CI주의 세포자멸사 유도능을 확인하였다.
먼저, 개 유선종양 암세포주인 CHMp-5b와 CHMp-13a세포에 각각 QIA-CI주를 감염시키고 24시간, 48시간, 72시간 후 DAPI로 염색하여 형광현미경으로 관찰하였다. DAPI 염색을 통해 Apoptotic 세포의 핵에서 DNA fragmentation을 관찰 할 수 있다.
그 결과, 도 5에 나타낸 바와 같이, 본 NDV QIA-CI주의 접종에 의하여 세포핵 내 DNA fragmentation이 관찰되었고, 바이러스에 의한 세포 자멸사가 유도되는 것을 확인하였다.
실시예 6. 본 발명의 신규한 뉴캣슬병 바이러스(Newcastle disease virus, NDV )의 종양 성장 억제능 평가
본 발명자들은 실시예 1-2에서 획득한 본 발명의 신규한 NDV 분리주인 NDV QIA-CI주의 생체 내 종양 성장 억제 효과를 확인하였다.
먼저, 개 유선종양 세포주 CHMp-13a를 이식한 누드 마우스에 NDV QIA-CI주를 투여하여 종양 성장을 지연하는 지 평가하였다. 누드마우스의 하복부 피부에 CHMp-13a 세포를 107 세포/200 ㎕ 농도로 이식하였다. 이식 9일째에 무작위로 마우스를 분류한 뒤, 종양 조직 내로 본 QIA-CI 바이러스 주를 직접 주사하였다. 대조군은 바이러스 대신 PBS를 투여하였다. 투여 후 14일 간 종양의 장폭과 단폭을 측정하는 방법으로 종양 부피의 변화를 기록하였다.
그 결과, 도 6에 나타낸 바와 같이, 본 NDV QIA-CI주의 접종에 의하여 대조군에 비해 유의하게 종양 성장이 억제되는 것을 관찰할 수 있었다.
따라서, 본 발명의 신규한 NDV 분리주인 NDV QIA-CI주의 접종에 의하여 종양 세포-특이적으로 생존율 및 성장을 유의하게 억제시켰을 뿐만 아니라 암세포자멸사를 유도하는 것으로 나타났으므로, 본 발명의 신규한 NDV 분리주는 치료하고자 하는 대상의 암 치료제로 이용될 수 있다.
기탁기관명 : 한국생명공학연구원
수탁번호 : KCTC13216BP
수탁일자 : 20170216
이하 본 발명의 상기 조성물을 포함하는 약학적 조성물의 제제예를 설명하나, 본 발명은 이를 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.
제제예 1. 산제의 제조
NDV QIA-CI 102 내지 1013 pfu
유당 1g
상기의 성분을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조하였다.
제제예 2. 정제의 제조
NDV QIA-CI 102 내지 1013 pfu
옥수수전분 100mg
유당 100mg
스테아린산 마그네슘 2mg
상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조하였다.
제제예 3. 캡슐제의 제조
NDV QIA-CI 102 내지 1013 pfu
옥수수전분 100mg
유당 100mg
스테아린산 마그네슘 2mg
상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 캡슐제의 제조방법에 따라서 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다.
제제예 4. 주사제의 제조
NDV QIA-CI 102 내지 1013 pfu
바이러스운반용 세포(Molecular Therapy. 2009 Vol 17:1667-1676)
Na2HPO412H2O 26 ㎎
증류수 2974 ㎎
상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 제조방법에 따라서 주사제를 제조하였다.
<110> REPUBLIC OF KOREA(Animal and Plant Quarantine Agency) <120> Novel Oncolytic Virus and Uses Thereof <130> 1-75p <160> 3 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 553 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Newcastle disease virus F protein <400> 1 Met Asp Pro Lys Pro Ser Thr Ser His Leu His Ala Phe Pro Leu Ile 1 5 10 15 Phe Val Ala Ile Ser Leu Val Phe Met Ala Gly Arg Ala Ser Ala Leu 20 25 30 Asp Gly Arg Pro Leu Ala Ala Ala Gly Ile Val Val Thr Gly Asp Lys 35 40 45 Ala Val Asn Ile Tyr Thr Ser Ser Gln Thr Gly Thr Ile Ile Ile Lys 50 55 60 Leu Leu Pro Asn Met Pro Lys Asp Lys Glu Gln Cys Ala Lys Ser Pro 65 70 75 80 Leu Asp Ala Tyr Asn Arg Thr Leu Thr Thr Leu Leu Thr Pro Leu Gly 85 90 95 Asp Ser Ile Lys Arg Ile Gln Glu Ser Val Thr Thr Ser Gly Gly Glu 100 105 110 Arg Gln Glu Arg Leu Val Gly Ala Ile Ile Gly Gly Val Ala Leu Gly 115 120 125 Val Ala Thr Ala Ala Gln Ile Thr Ala Ala Ser Ala Leu Ile Gln Ala 130 135 140 Asn Gln Asn Ala Ala Asn Ile Leu Lys Leu Lys Glu Ser Ile Ala Ala 145 150 155 160 Thr Asn Glu Ala Val His Glu Val Thr Ser Gly Leu Ser Gln Leu Ala 165 170 175 Val Ala Val Gly Lys Met Gln Gln Phe Val Asn Asp Gln Phe Asn Lys 180 185 190 Thr Ala Gln Glu Ile Asp Cys Ile Lys Ile Thr Gln Gln Val Gly Val 195 200 205 Glu Leu Asn Leu Tyr Leu Thr Glu Leu Thr Thr Val Phe Gly Pro Gln 210 215 220 Ile Thr Ser Pro Ala Leu Thr Gln Leu Thr Ile Gln Ala Leu Tyr Asn 225 230 235 240 Leu Ala Gly Gly Asn Met Asp Tyr Met Leu Thr Lys Leu Gly Val Gly 245 250 255 Asn Asn Gln Leu Ser Ser Leu Ile Ser Ser Gly Leu Ile Ser Gly Asn 260 265 270 Pro Ile Leu Tyr Asp Ser Gln Thr Gln Leu Leu Gly Ile Gln Val Thr 275 280 285 Leu Pro Ser Val Gly Asn Leu Asn Asn Met Arg Ala Thr Tyr Leu Glu 290 295 300 Thr Leu Ser Val Ser Thr Asn Lys Gly Phe Ala Ser Ala Leu Val Pro 305 310 315 320 Lys Val Val Thr Gln Val Gly Ser Val Ile Glu Glu Leu Asp Thr Ser 325 330 335 Tyr Cys Ile Glu Thr Asp Leu Asp Leu Tyr Cys Thr Arg Ile Val Thr 340 345 350 Phe Pro Met Ser Pro Gly Ile Phe Ser Cys Leu Gly Gly Asn Thr Ser 355 360 365 Ala Cys Met Tyr Ser Lys Thr Glu Gly Ala Leu Thr Thr Pro Tyr Met 370 375 380 Thr Leu Lys Gly Ser Val Ile Ala Asn Cys Lys Met Thr Thr Cys Arg 385 390 395 400 Cys Thr Asp Pro Pro Gly Ile Ile Ser Gln Asn Tyr Gly Glu Ala Val 405 410 415 Ser Leu Ile Asp Lys Lys Val Cys Asn Ile Leu Thr Leu Asp Gly Ile 420 425 430 Thr Leu Arg Leu Ser Gly Glu Phe Asp Ala Thr Tyr Gln Lys Asn Ile 435 440 445 Ser Ile Gln Asp Ser Gln Val Val Ile Thr Gly Asn Leu Asp Ile Ser 450 455 460 Thr Glu Leu Gly Asn Val Asn Asn Ser Ile Ser Asn Ala Leu Asp Lys 465 470 475 480 Leu Glu Glu Ser Asn Ser Lys Leu Asp Lys Val Asn Val Arg Leu Thr 485 490 495 Ser Thr Ser Ala Leu Ile Thr Tyr Ile Val Leu Thr Thr Ile Ala Leu 500 505 510 Ile Cys Gly Ile Val Ser Leu Val Leu Ala Cys Tyr Ile Met Tyr Lys 515 520 525 Gln Lys Ala Gln Gln Lys Thr Leu Leu Trp Leu Gly Asn Asn Thr Leu 530 535 540 Asp Gln Met Arg Ala Thr Thr Lys Met 545 550 <210> 2 <211> 1662 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Newcastle disease virus F <400> 2 atggatccca agccttctac cagccatttg catgctttcc cactgatctt cgtggctatc 60 agtttagtat tcatggctgg aagggcatcg gcactggatg ggcggccgct cgccgccgca 120 ggaatagtag tcacaggaga caaggcagtt aatatataca catcgtcgca gacagggaca 180 attatcatca aattattgcc caatatgccc aaagacaaag aacaatgtgc caagagcccc 240 ctagatgcat acaacaggac ccttacaacc ctccttaccc cgctcggcga ttcgattaag 300 agaatccaag agtcggtaac cacatcagga ggagaacgtc aggagcgttt ggtaggggca 360 ataataggag gtgtcgcatt aggtgtagcc accgcagcgc agatcacagc ggcttccgct 420 ctcatacaag ccaaccagaa tgctgcaaac atactgaaat taaaggagag tattgccgct 480 accaatgaag cagtacatga ggtcacaagc gggctgtccc agctggctgt tgctgtaggc 540 aagatgcagc agtttgtaaa cgaccaattc aacaagacag cacaagagat cgactgtatt 600 aagatcacac aacaggttgg ggtggagttg aatctatact tgaccgaact gacaactgtg 660 ttcggaccgc aaatcacatc ccctgcactc acgcagttga ccatccaggc cttatataat 720 ctggcgggtg ggaacatgga ttacatgctg acaaagctgg gagtgggtaa taatcagctc 780 agttctctga ttagtagtgg cctaatatct gggaatccaa ttctctatga ctcgcaaact 840 cagcttctgg gtatacaggt gactctcccc tctgtgggca atctgaacaa catgcgcgcc 900 acatatctgg aaaccctctc tgtaagtacg aacaagggat tcgcatccgc attagtgcct 960 aaagtggtaa ctcaggtagg ctccgtaatt gaagagctgg atacatcgta ttgcatagag 1020 acagacttgg atttgtactg cactagaatt gtaacattcc ccatgtctcc aggtatcttc 1080 tcctgtctcg gtggaaacac ctcagcatgc atgtactcta agactgaagg agcactcacc 1140 acaccatata tgacactcaa agggtcagtc atagcaaatt gcaagatgac aacgtgtagg 1200 tgcacagatc ccccggggat aatctcacag aattatggag aggctgtctc tctaatagac 1260 aaaaaggtat gtaacattct gactctcgac gggatcacct tgcgccttag cggggaattc 1320 gatgcaacct atcagaaaaa tatctcaatt caggattccc aggtggtgat tactgggaat 1380 ctggatatat ccactgagtt agggaatgtg aataattcaa tcagcaatgc tctagacaag 1440 ctagaagaga gtaacagcaa gctggacaaa gttaatgtga gacttaccag cacatctgcc 1500 ctaatcacat atattgtctt gacaacaata gcactgatat gcgggatagt cagcttagtc 1560 ctcgcctgct atataatgta caaacagaag gcccagcaaa aaacactgct gtggctcggg 1620 aacaacacct tagaccagat gagagcaacg acaaagatgt aa 1662 <210> 3 <211> 245 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Newcastle disease virus V protein <400> 3 Met Ala Thr Phe Thr Asp Ala Glu Ile Asp Glu Leu Phe Glu Thr Ser 1 5 10 15 Gly Thr Val Ile Asp Ser Ile Ile Thr Ala Gln Gly Lys Pro Val Glu 20 25 30 Thr Val Gly Arg Ser Ala Ile Pro Gln Gly Lys Thr Lys Ala Leu Ser 35 40 45 Ile Ala Trp Glu Lys His Gly Asn Ala Asn Ala Ser Ala Val Gln Glu 50 55 60 Ser Ala Gly Glu Gln Asp Gln Pro Gly Gln Asn Gln Ala Ser Asn Ser 65 70 75 80 Asn Arg Ala Pro Gln Glu Glu Gly Pro His Pro Ser Gln Ala Gln Ala 85 90 95 Ala Ala Gln Pro Gln Glu Asp Ala Asn Glu Thr Gln Leu Lys Thr Gly 100 105 110 Ala Ser Ser Ser Leu Leu Ser Met Leu Asp Lys Leu Ser Asn Lys Ser 115 120 125 Ser Asn Ala Lys Lys Gly Pro Thr Ser Glu Pro Ser Thr Ala Gly Pro 130 135 140 Pro Pro Pro Arg Glu Pro His Ser Gly Thr Ser Pro Thr Trp Gly Gln 145 150 155 160 Ser Gly Glu Gly Pro Val Gly Asp Gly Ala Pro Gly Arg Pro Arg Pro 165 170 175 Trp Ile Pro Gly His Arg Arg Glu His Ser Ile Ser Trp Thr Met Glu 180 185 190 Gly Val Thr Thr Ile Ser Trp Cys Asn Pro Ala Cys Ser Pro Ile Arg 195 200 205 Ala Glu Pro Arg Gln Tyr Ser Cys Val Cys Gly Ser Cys Pro Ala Thr 210 215 220 Cys Arg Leu Cys Ala Gly Asp Asp Val Tyr Asp Gly Gly Asp Leu Thr 225 230 235 240 Glu Gly Lys Gln Asp 245

Claims (8)

  1. 종양 세포 살상능을 가진 종양용해성 바이러스(Oncolytic Virus)로서, 상기 바이러스는 기탁번호 KCTC13216BP의 뉴캣슬병 바이러스(Newcastle disease virus, NDV)인 것을 특징으로 하는 뉴캣슬병 바이러스.
  2. 제1항에 있어서, 상기 뉴캣슬병 바이러스는 국내 오리로부터 분리된 것을 특징으로 하는 뉴캣슬병 바이러스.
  3. 제1항에 있어서, 상기 뉴캣슬병 바이러스는 서열번호 1의 아미노산 서열로 표시되며 이와 동등한 면역원성을 가지는 F 단백질; 및 서열번호 3의 아미노산 서열로 표시되며 이와 동등한 면역원성을 가지는 V 단백질을 포함하는 것을 특징으로 하는 뉴캣슬병 바이러스.
  4. 제3항에 있어서, 상기 F 단백질의 분절부위 아미노산 서열은 112ERQERL117인 것을 특징으로 하는 뉴캣슬병 바이러스.
  5. 제1항에 있어서, 상기 뉴캣슬병 바이러스는 약독형 유형(Class) I인 것을 특징으로 하는 뉴캣슬병 바이러스.
  6. 제1항의 뉴캣슬병 바이러스(Newcastle disease virus, NDV)를 유효성분으로 포함하는 암 치료 또는 예방용 약학적 조성물.
  7. 제6항에 있어서, 상기 암은 유방암(breast cancer), 대장암(colon cancer), 위암(gastric cancer), 폐암(lung cancer), 간암(liver cancer), 혈액암(blood cancer), 뼈암(bone cancer), 췌장암(pancreatic cancer), 피부암(skin cancer), 머리 또는 목암(head or neck cancer), 피부 또는 안구 흑색종(cutaneous or intraocular melanoma), 자궁육종(uterine sarcoma), 난소암(ovarian cancer), 직장암(rectal cancer), 항문암(anal cancer), 난관암(fallopian tube carcinoma), 자궁내막암(endometrial carcinoma), 자궁경부암(cervical cancer), 소장암(small intestine cancer), 내분비암(endocrine cancer), 갑상선암(thyroid cancer), 부갑상선암(parathyroid cancer), 신장암(adrenal cancer), 연조직종양(soft tissue tumor), 요도암(urethral cancer), 전립선암(prostate cancer), 기관지암(bronchogenic cancer) 및 골수암(bone marrow tumor)으로 이루어진 군에서 선택된 1 종 이상인 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
  8. 제1항의 뉴캣슬병 바이러스(Newcastle disease virus, NDV)를 유효성분으로 포함하는 암의 예방 또는 개선용 식품 조성물.
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