KR101632897B1 - 백시니아 바이러스로부터 유래한 신규한 항암 바이러스 ｈｂｂ３０１ - Google Patents

Abstract

본 발명은 신규한 백시니아 바이러스 HBB301 및 이를 유효성분으로 포함하는 항암용 조성물에 관한 것이다. 본 발명에 따른 신규한 백시니아 바이러스 HBB301은 야생 균주에 비해 숙주 동물에 대한 독성이 감소하고, 항암 활성이 개선되는 우수한 효과를 가지고 있어, 항암용 조성물로 유용하게 이용될 수 있다.

Description

백시니아 바이러스로부터 유래한 신규한 항암 바이러스 ＨＢＢ３０１ {Novel oncolytic virus HBB301 derived from vaccinia virus}

본 발명은 신규한 백시니아 바이러스 HBB301 및 이를 유효성분으로 포함하는 항암용 조성물에 관한 것이다.

최초로 바이러스를 의학적으로 이용한 사례는 자연상에서 존재하는 우두 바이러스를 천연두 예방을 목적으로 개발한 사례이다. 우두 바이러스를 이용한 예방 백신이 개발되기 전까지 천연두는 수천 년 동안 감염 시 10%의 사망률과 50%에서 피부에 영구적 손상을 유발하는 인류 역사상 가장 치명적인 질환이었다. 1700년대 에드워드 제너는 천연두 바이러스가 소에서 자랄 경우(우두 바이러스), 사람에게 치명적인 영향은 주지 않으면서, 천연두 병원성 바이러스와의 교차 면역성의 생성으로 천연두의 발병을 억제하는 백신이 될 수 있다는 것을 최초로 보였다. 이후 이것은 백시니아 바이러스로 명명되었으며, 1979년 세계보건기구(WHO)에 의해 천연두 질환이 정복되었음을 선언하게 하는 계기가 되었다.

최근 분자생물학적 기법의 발달로 천연두 바이러스와 백시니아 바이러스의 유전자 비교를 한 결과, 두 바이러스는 유전적으로 매우 유사하며 백시니아 바이러스는 자연 상태에서 숙주세포의 변화에 따른 선택적 진화적 방법으로 만들어진 최초의 약독화 바이러스백신임이 밝혀졌다. 이후, 이러한 원리를 바탕으로 소아마비, 홍역, 볼거리 등의 예방백신을 개발하기 위해 약독화 바이러스를 in vitro에서 선택적으로 진화시키는 기법이 사용되어 왔다. 약독화된 바이러스를 이용한 백신의 기본 원리는 병원성 바이러스를 인간 세포에서 분리하여 원숭이와 같은 이종 세포에 지속적으로 배양할 경우, 이종 세포에서 선택적으로 적응하여 진화된 바이러스가 선별적으로 축적되어, 결과적으로 이종 세포에서 증식은 잘하게 되지만, 인간 세포에서는 약독화된 바이러스가 생성되며, 이들 약독화된 바이러스는 인체에 병을 유발하지는 못하나, 야생형의 병원성 바이러스와 교차 면역기능을 유발시켜서 인간에게 백신 기능을 하도록 만드는 것이다.

분자생물학적인 기술의 발전과 더불어 최근 백신으로 사용되어온 다양한 종류의 바이러스를 유전공학적 기법을 사용하여 유전적으로 변형하여 항암제로 개발하는 연구가 진행되고 있다. David Kirn등은 아데노바이러스 변이체의 종양 선택적 복제능을 이용하여 항암제로 이용한 ONYX-015를 개발하였고 임상 2상 연구까지 실시한 바 있다. 그러나 일차적으로 선별된 종양 살상형 아데노 바이러스의 항암효과가 임상적으로 이용되기에는 충분하지 못하였으며, 반복적인 투여 시 숙주 면역 체계에 의해 신속히 제거되어 항암효과가 감소한다는 결과가 보고된 바 있다. 이러한 한계에도 불구하고 종양 살상형 아데노 바이러스의 원리를 이용한 치료제가 중국에서 상용화 된 바 있어 임상적 효능이 개선된 종양 살상형 바이러스의 개발에 대한 기대를 반영한다고 볼 수 있다. 최근, ONYX-015의 선택적 진화를 통해 더욱 더 강력한 항암 바이러스 개발이 성공적으로 진행되어 보고된 바 있으며 개선된 바이러스를 이용하여 현재 미국에서 임상 시험이 준비 중이다.

한편 백시니아 바이러스에서 유래한 종양 살상 바이러스는 아데노 바이러스에 비해 기본적으로 항암 기능이 뛰어나고 현재 간암, 대장암, 피부암 환자를 대상으로 미국, 캐나다, 한국 등에서 다국적 임상 2상이 마무리되고 임상 3상 시험이 준비 중이다. 그러나 혈관 내 반복 투여 시 중화항체 형성으로 항암 효능이 떨어져서 지속적 투여에 한계가 관찰되어 더욱 진보된 종양 특이적 바이러스의 개발이 시급히 요구되고 있다.

이에 본 발명자들은 상기와 같은 문제점을 해결하고 항암 효과가 개선된 신규한 백시니아 바이러스를 개발하기 위한 연구를 수행한 결과, 인간 유래 담낭암 세포에 야생 백시니아 바이러스 WR(Western Reserve) 균주, 백시니아 바이러스 NYCBH(The New York City Board of Health) 균주 및 재조합 백시니아 바이러스 SLJ496을 고용량으로 감염시키는 과정을 통해 제조한 신규한 백시니아 바이러스 HBB301이 야생 균주에 비해 숙주 동물에 대한 감소된 독성을 가지면서도 항암 활성이 개선되는 우수한 효과를 가지고 있음을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.

한국등록특허공보 제 101179166 호

본 발명의 목적은 신규한 백시니아 바이러스 HBB301 및 이의 제조방법을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 상기 백시니아 바이러스 HBB301을 유효성분으로 포함하는 항암용 조성물을 제공하는 것이다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 백시니아 바이러스로부터 유래한 신규한 백시니아 바이러스 HBB301 및 이의 제조방법을 제공한다.

또한 본 발명은 상기 백시니아 바이러스 HBB301을 유효성분으로 포함하는 암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.

또한 본 발명은 상기 백시니아 바이러스 HBB301을 유효성분으로 포함하는 암의 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공한다.

본 발명에 따른 신규한 백시니아 바이러스 HBB301은 야생 균주에 비해 숙주 동물에 대한 독성이 감소하고, 항암 활성이 개선되는 우수한 효과를 가지고 있어, 항암용 조성물로 유용하게 이용될 수 있다.

도 1은 본 발명에 따른 신규한 백시니아 바이러스의 제조 과정을 나타낸 도이다.
도 2는 본 발명에 따른 재조합 백시니아 바이러스(3mix P4)의 인간 담낭암 세포에 대한 IC₅₀를 나타낸 도이다.
도 3은 본 발명에 따른 재조합 백시니아 바이러스(3mix P4)의 인간 난소암 또는 폐암 세포에 대한 IC₅₀를 나타낸 도이다.
도 4는 호흡기 감염 동물모델에서 본 발명에 따른 HBB301의 독성을 나타낸 도이다.
도 5 내지 도 7는 다양한 암 세포주에서 본 발명에 따른 HBB301의 항암 활성을 나타낸 도이다.
도 8 및 도 9는 본 발명에 따른 HBB301과 모 바이러스와의 염기서열 비교 분석 결과를 나타낸 도이다.

이하, 본 발명에 대해 상세히 설명한다.

본 발명은 신규한 백시니아 바이러스 HBB301을 제공한다.

본 발명에 따른 신규한 백시니아 바이러스 HBB301은 하기와 같은 단계를 통해 수득될 수 있다.

먼저, 담낭암 환자로부터 분리한 인간 유래 담낭암 세포에 야생 백시니아 바이러스 WR(Western Reserve) 균주, NYCBH(The New York City Board of Health) 균주, 및 토끼종양모델에서 얻은 재조합 백시니아 바이러스 SLJ496을 바이러스 역가가 배양 세포주의 3배 이상이 되도록 고용량으로 감염시킨다. 상기와 같이 3가지 모 백시니아 바이러스를 동시에 감염시킬 경우, 단일 백시니아 바이러스로 감염시키는 경우에 비해 각 백시니아 바이러스 상호간의 재조합을 통한 변이 바이러스의 유도가 효과적이다. 상기 담낭암 세포에서 우세하게 증식하는 재조합 바이러스를 찾아낸 후 이를 분리하고, 다른 담낭암 환자로부터 얻은 담낭암 세포를 상기 재조합 바이러스로 감염시킨다. 상기 과정을 세 번 반복하여 최종적으로 재조합 바이러스를 수득한다. 인간 유래 담낭암 세포주 HuCCT-1를 상기 재조합 바이러스로 감염시킨 후, 약 48시간 내에 감염된 세포주를 수확하여, 세포질 내에 증식된 변이 바이러스 HBB301을 회수한다.

상기 과정을 통해 수득한 변이 바이러스 HBB301가 모 바이러스와는 유전정보가 상이한 신규한 바이러스임을 확인하였으며, 이를 KCTC(Korean Collection for Type Culture)에 2013년 04월 02일자로 기탁하였다 (수탁번호 : KCTC 12391BP).

본 발명에 따른 신규한 백시니아 바이러스 HBB301은 야생 균주에 비해 숙주 동물에 대한 독성이 감소하고, 항암 활성이 개선되는 우수한 효과를 가지고 있다.

따라서, 본 발명에 따른 신규한 백시니아 바이러스 HBB301은 암의 예방, 개선 또는 치료를 위한 의약품 및 건강기능식품 등에 활용될 수 있다.

또한, 본 발명은 상기 백시니아 바이러스 HBB301을 유효성분으로 포함하는 암의 예방 또는 치료용 조성물을 제공한다.

상기 조성물은 약학적 조성물 또는 식품 조성물을 모두 포함한다.

상기 암은 담낭암, 대장암, 췌장암, 백혈병, 난소암, 위암, 폐암, 유방암, 간암, 기관지암, 비인두암, 후두암, 피부암, 결장암 및 자궁경부암일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 약학적 조성물은 약학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다. 또한 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다. 당해 기술 분야에 알려진 적합한 제제는 문헌 (Remington's Pharmaceutical Science, 최근, Mack Publishing Company, Easton PA)에 개시되어 있는 것을 사용하는 것이 바람직하다. 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토오스, 덱스트로오스, 수크로오스, 소르비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리트리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로오스, 메틸 셀룰로오스, 미정질 셀룰로오스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시 벤조에이트, 프로필히드록시 벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유 등이 있다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 조성물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트 (calcium carbonate), 수크로오스, 락토오스, 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구투여를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다.

본 발명에서 투여는 임의의 적절한 방법으로 개체에게 소정의 본 발명의 조성물을 제공하는 것을 의미한다.

본 발명의 약학적 조성물의 바람직한 투여량은 개체의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르며, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 그러나 바람직한 효과를 위해서, 본 발명의 바이러스의 일일 투여량은 하루에 10⁵ 내지 10⁹ pfu/kg의 양으로 투여되도록 할 수 있다. 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.

본 발명의 약학적 조성물은 개체에게 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 비경구 투여가 바람직하고, 예컨대 정맥 내 투여, 복강 내 투여, 근육 내 투여, 피하 투여 또는 국부 투여를 이용하여 투여할 수 있다.

본 발명의 조성물은 암의 예방 또는 치료 효과를 갖는 공지의 유효성분을 1종 이상 더 함유할 수 있다.

본 발명의 조성물은 암의 예방 또는 치료를 위하여 단독으로, 또는 수술, 방사선 치료, 호르몬 치료, 화학 치료 및 생물학적 반응 조절제를 사용하는 방법들과 병용하여 사용할 수 있다.

또한, 본 발명은

(a) 암 세포에 2종 이상의 백시니아 바이러스를 감염시키고 이를 배양 및 증식한 후, 상기 암 세포에서 증식하는 재조합 백시니아 바이러스를 분리하는 단계;

(b) 상기 분리된 재조합 백시니아 바이러스를 다른 암 세포에 감염시킨 후 배양 및 증식하는 단계; 및

(c) 상기 (b) 단계의 암 세포에서 증식하는 재조합 백시니아 바이러스를 분리하는 단계;를 포함하는, 신규한 백시니아 바이러스의 제조방법을 제공한다.

상기 (a) 단계에서 감염시키는 백시니아 바이러스는 백시니아 바이러스 WR(Western Reserve) 균주, 백시니아 바이러스 코펜하겐(Copenhagen) 균주, 백시니아 바이러스 와이어쓰(Wyeth) 균주, 백시니아 바이러스 NYCBH(The New York City Board of Health) 균주 및 재조합 백시니아 바이러스 SLJ496로 이루어진 군에서 선택된 2종 이상일 수 있으며, 바람직하게는 백시니아 바이러스 WR(Western Reserve)균주, 백시니아 바이러스 NYCBH(The New York City Board of Health) 균주 및 재조합 백시니아 바이러스 SLJ496이다. 상기와 같이 암세포에 2 종 이상의 백시니아 바이러스를 동시에 감염시킬 경우, 단일 종의 백시니아 바이러스를 감염시키는 경우에 비해, 각 백시니아 바이러스 상호간의 재조합을 통한 백시니아 바이러스의 변이 유도가 효과적이어서, 모 바이러스에 비해 항암 활성이 우수한 신규한 백시니아 바이러스의 제조가 가능하다.

상기 방법은 이에 제한되지 않으나, 백시니아 바이러스의 변이를 유도하기 위하여 (b) 및 (c) 단계를 1회 이상 반복하여 할 수 있으며, 바람직하게는 2 내지 100회, 보다 바람직하게는 2 내지 20회 반복할 수 있다.

상기 암 세포는 이에 제한되지 않으나, 담낭암, 대장암, 췌장암, 백혈병, 난소암, 위암, 폐암, 유방암, 간암, 기관지암, 비인두암, 후두암, 피부암, 결장암 및 자궁경부암으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 암으로부터 유래된 세포일 수 있으며, 바람직하게는 담낭암 세포이다.

상기 신규한 백시니아 바이러스는 수탁번호 KCTC12391BP로 기탁된 HBB301인 것이 바람직하다.

상기 방법을 통해 수득한 신규한 백시니아 바이러스는 모 바이러스인 야생 균주에 비해 숙주 동물에 대한 독성이 감소하고, 항암 활성이 개선되는 우수한 효과를 가지고 있다.

이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예를 제시한다. 그러나 하기의 실시예는 본 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐, 실시예에 의해 본 발명의 내용이 한정되는 것은 아니다.

실시예 1. 본 발명에 따른 신규한 변이 백시니아 바이러스의 제조

담낭암 환자로부터 얻은 암 조직에서 분리된 담낭암 세포를 수득하기 위하여, 암 조직을 가위로 잘게 자른 후, 단일 세포를 분리하기 위해 그물망에 거르고, 이를 10%의 우태아혈청이 첨가된 RPMI 1640 배지에 처리한 후, 이를 24시간동안 37℃가 유지되는 CO₂ 배양기에서 배양하였다. 상기 세포에 미국세포주은행(ATCC)에서 분양받은 백시니아 바이러스 WR 균주와 NYCBH 균주, 및 토끼종양모델에서 얻은 재조합 바이러스 SLJ496을 각각 암 세포의 1 MOI씩, 바이러스 역가가 배양 세포 수의 총 3배 이상이 되도록 고용량으로 감염한 후 72시간동안 배양 증식하였다. 담낭암 세포에서 우세하게 증식하는 재조합 바이러스(3mix P1)를 찾아낸 후, 이를 다시 다른 담낭암 환자로부터 분리한 담낭암 세포에 1 MOI로 감염시킨 후 72시간동안 배양 증식하여 두 번째 재조합 바이러스(3mix P2)를 수득하였다. 상기 과정을 한 번 더 반복하여 최종적으로 세 번째 재조합 바이러스(3mix P3)를 수득하였다. 인간 담낭암 세포에서 조기에 증식할 수 있는 변이주를 선택하기 위해 한국세포주은행(KLCB)으로부터 구매한 인간 유래 담낭암 세포주(HuCCT-1)를 상기 재조합 바이러스(3mix P3)로 감염시킨 후, 10%의 우태아혈청이 첨가된 RPMI 1640 배지에서 배양하였다. 감염 후 48시간 내에 감염된 세포주를 수확하여 3회 냉동/해동 과정을 거쳐 세포질 내에 증식된 바이러스를 배지로 노출시킨 후, 6000 rpm에서 원심분리를 통하여 세포 잔해를 제거하고 상층액 내의 변이 바이러스(3mix P4)를 회수하였다. 상기 과정을 통해 회수된 변이 바이러스는 역가검정을 통하여 바이러스 양을 결정한 후 2계대 증식을 위한 시드(seed)로 사용되었다. 총 4차 계대에 걸쳐 증식한 변이 바이러스를 모 바이러스와의 역가 비교에 사용하였으며, 한 종의 순수한 재조합바이러스를 얻기 위해 단일 플라크 분리(single plaque isolation)를 실시하였다. 이상의 과정을 통해 수득한 변이 바이러스를 HBB301이라고 명명하였으며, 구체적인 실험 과정을 도 1에 모식화하였다.

실시예 2. 야생 백시니아 바이러스와 변이 백시니아 바이러스의 IC ₅₀ 비교

상기 실시예 1에서 수득한 변이 백시니아 바이러스가 항암 효과를 보이는지 확인하기 위하여, 하기와 같은 실험을 수행하였다. 인간 유래 담낭암 세포주(HuCCT-1)에 3종류의 모(백본) 바이러스(WR 균주, NYCBH 균주, SLJ496) 또는 상기 실시예 1에서 수득한 3mix P4 재조합 바이러스를 처리한 후, 50% 억제농도를 비교하였다. 그 결과를 도 2에 나타내었다.

도 2에 나타낸 바와 같이, WR 균주의 IC₅₀는 1.865 MOI, NYCBH 균주의 IC₅₀는 7.686 MOI, SLJ496의 IC₅₀는 2.977 MOI인 반면, 본 발명에 따른 3mix P4 재조합 백시니아바이러스의 IC₅₀는 0.182 MOI로 확인되었으며, 이를 통해 본 발명에 따른 3mixP4 재조합 백시니아 바이러스는 백본인 야생 백시니아 바이러스보다 10배 이상의 낮은 농도를 사용하였음에도 불구하고 인간 담낭암 세포의 생장을 억제하는 우수한 효과를 보이는 것을 확인하였다.

또한, 상기 실시예 1에서 수득한 변이 백시니아 바이러스가 인간 유래의 다른 암세포에서도 항암 효과를 확인하기 위하여, 난소암 세포인 A2780과 폐암 세포인 A549에서 IC₅₀를 비교하였다. 그 결과를 도 3에 나타내었다.

도 3에 나타낸 바와 같이, 본 발명에 따른 3mix P4 재조합 백시니아 바이러스는 야생 백시니아 바이러스보다 5배 이상의 낮은 농도에서 난소암 및 폐암 세포의 생장을 억제하는 효과를 보임을 확인하였다.

실시예 3. 호흡기 감염 동물 모델에서의 독성 비교

8주령의 c57bl/6 마우스에 상기 실시예 1에서 수득한 HBB301과 모 바이러스인 웨스턴 리저브 백시니아 바이러스를 각각 10⁴, 10⁵, 10⁶, 10⁷ pfu의 농도로 호흡기계로 투여하였다. 그 후 2주에 걸쳐 몸무게 변화와 생존율을 관찰하여, 바이러스의 독성을 확인하였다. 그 결과를 도 4에 나타내었다.

도 4에 나타낸 바와 같이, 10⁶ pfu의 동일용량을 투여하였을 때, 모 바이러스인 웨스턴 리저브 처리군에서는 7주까지 바이러스 독성에 의해 몸무게 저하가 관찰된 데 비해, 본 발명의 HBB301 처리군은 정상 체중을 유지하는 것을 확인하였다. 이를 통해 HBB301은 모 바이러스에 비해 독성이 감소하였음을 확인하였다.

실시예 4. 항암 활성 비교 분석

96웰 플레이트에 접종한 다양한 종양 세포주에 상기 실시예 1에서 수득한 HBB301과 모 바이러스인 웨스턴 리저브 백시니아 바이러스를 각각 접종한 후 2~3일간 추가 배양하여 바이러스에 의한 암세포의 사멸을 확인하였다. 생존 세포수는 세포질에 존재하는 환원효소에 의해 450 nm에서 흡광하는 발색단을 생성시키는 CCK-8 시약을 제조자가 권장하는 용량으로 처리함으로써 용량대비 효력을 확인하였다. 대조군으로 모 바이러스인 웨스턴 리저브 백시니아 바이러스 및 와이어쓰 백시니아 바이러스에서 TK 유전자를 재조합하여 제조한 약독화된 바이러스인 Wyeth tk- 바이러스를 이용하였다. 그 결과를 도 5 내지 도 7에 나타내었다.

도 5 및 도 6에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 HBB301은 BXPC-3 췌장암 세포주 및 HCT-116, HCT-8, HCT-15 대장암 세포주에서 wyeth tk- 바이러스에 비해 높은 항암 활성을 보임을 확인하였다.

또한, 도 7에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 HBB301은 OVCAR3 난소암 세포주에서 wyeth tk- 및 WR 바이러스 균주에 비해 현저하게 우수한 항암 활성을 보임을 확인하였다.

실시예 5. HBB301 염기서열 확인

상기 실시예 1을 통해 수득한 HBB301의 염기서열을 확인하기 위하여, 증폭된 바이러스로부터 DNA를 분리한 후 물리력에 의해 1~2kb 단위로 절단한 다음 플라스미드에 클로닝하였다. 무작위로 선발한 약 1000개의 클론의 염기서열을 분석하여 ~180,000 뉴클레오티드의 단일 염기서열을 결정하였다. 또한, 바이러스 양 말단에 존재하는 inverted repeat 부위는 각각 특이적으로 결합하여 증폭할 수 있는 PCR 프라이머를 디자인하여, 바이러스 양 말단의 174 bp씩을 제외한 약 10kb 길이의 절편을 증폭하여 각각의 염기서열을 결정하였다.

본 발명의 HBB301과 모 바이러스인 웨스턴 리저브 백시니아 바이러스와의 염기서열을 비교 분석하기 위하여, 바이러스 양 말단의 174 bp씩을 제외한 전체 게놈의 염기서열을 비교하였다. 그 결과를 도 8에 나타내었다.

도 8에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 HBB301은 모 바이러스와 하기와 같은 차이점을 나타냄을 확인하였다.

1) 5' 및 3' 양 말단의 비번역 부위(noncoding region)의 2937 bp 지역과 191774 bp 지역에 54 bp 삽입.

2) 5' 말단의 열 한번째 단백질인 VACWR011 내 9 bp 삽입 (3 아미노산이 삽입된 단백질 변이 단백질 생산).

3) 5' 말단에 약 300bp 소실.

따라서, 본 발명에 따른 HBB301은 모 바이러스인 웨스턴 리저브 백시니아 바이러스와는 유전 정보가 상이한 신규한 바이러스임을 확인하였으며, 이를 KCTC(Korean Collection for Type Culture)에 2013년 04월 02일자로 기탁하였다 (수탁번호 : KCTC 12391BP).

이하 본 발명에 따른 조성물의 제제예를 설명하나, 본 발명은 이를 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.

제제예 1. 산제의 제조

HBB301 10²내지 10¹²pfu

유당 1g

상기의 성분을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조하였다.

제제예 2. 정제의 제조

HBB301 10²내지 10¹²pfu

옥수수전분 100mg

유당 100mg

스테아린산 마그네슘 2mg

상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조하였다.

제제예 3. 주사제의 제조

HBB301 10²내지 10¹² pfu

Na₂HPO₄12H₂O 26mg

증류수 2974mg

상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 제조방법에 따라서 주사제를 제조하였다.

한국생명공학연구원 KCTC12391BP 20130402

Claims (11)

1. 신규한 백시니아 바이러스 HBB301(수탁번호 KCTC12391BP).
2. 삭제
3. 제 1항에 따른 백시니아 바이러스 HBB301(수탁번호 KCTC12391BP)을 유효성분으로 포함하는 대장암, 췌장암 및 난소암으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
4. 삭제
5. 제 1항에 따른 백시니아 바이러스 HBB301(수탁번호 KCTC12391BP)을 유효성분으로 포함하는 대장암, 췌장암 및 난소암으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 암의 예방 또는 개선용 식품 조성물.
   
   
6. 삭제
7. 삭제
8. 삭제
9. 삭제
10. 삭제
11. 삭제

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