KR20180099944A - 옵신 결합 리간드, 조성물 및 사용 방법 - Google Patents

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데이비드 에스. 가비
그레고리 제이. 라로사
제레미 로버트 그린우드
마크 엘. 브류어
탠 쿼치
제이미 비. 코트
쥬드 버만
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Abstract

옵신 단백질의 국소화오류(mislocalization), 돌연변이 옵신 단백질의 미스폴딩(misfolding) 및 눈에 축적되는 유독한 시각회로 산물과 관련된 안과 질환을 치료하기 위한 화합물, 상기 화합물의 조성물 및 상기 화합물의 사용 방법이 제공된다. 단독으로 또는 다른 치료제와 조합하여 사용되는, 이러한 방법에 유용한 화합물과 조성물도 설명된다.

Description

옵신 결합 리간드, 조성물 및 사용 방법{OPSIN-BINDING LIGANDS, COMPOSITIONS AND METHODS OF USE}
본 발명은 2009년 6월 16일 미국 가특허출원 제61/268,757호에 기초한 우선권 주장 출원으로 상기 출원명세서의 개시내용은 본 발명에 그 전체가 통합된다.
본 발명은 안과 질환을 치료 및/또는 예방하는데 사용되기 위한 화합물 및 조성물에 관한 것이다.
시력 감퇴 또는 시력의 완전한 상실은 눈의 앞 부분 및/또는 눈의 뒷 부분의 조직이나 구조의 장애에 의해 발생하는 여러가지 안 질환에 기인한다. 이들 중에는 전반부의 장애, 시각회로(visual cycle)의 이상의 결과 일어나는 것들이 다수 포함된다. 시각회로(흔히 레티노이드 회로라고도 칭한다)은 광추진(light-driven) 반응 및/또는 효소 촉매 반응으로 구성되는데, 이에 따라, 옵신 단백질과 레티노이드 제제인 11-시스-레티날 간의 공유 결합에 의해 감광성 발색단(로돕신이라 칭함)이 형성된 다음, 이어서 빛에 노출될 경우, 11-시스-레티날이 올-트랜스-레티날로 전환되고 이것은 다시 11-시스-레티날로 재생되어 옵신과 상호반응할 수 있게 된다. 여러가지 시력 문제 또는 안과적 문제들은 이 사이클의 난조로 일어나는 것일 수 있다. 현재, 이러한 문제점들 중 적어도 일부는 옵신 단백질과 같은 단백질의 부적절한 폴딩(folding)에 기인하는 것으로 알려져 있다.
포유동물의 눈에 있는 주요한 명암 광수용기는 간상세포로서, 이 간상세포는, 빛에 민감할 수 있는 단백질 분자 (그 중 대표적인 것이 옵신이다)를 함유하는 폴드된 막을 함유한다. 포유동물 세포에 존재하는 다른 단백질들과 마찬가지로, 옵신은 세포질의 내형질세망에서 (즉, 리보좀 상에서) 합성된 다음 간상세포의 세포막에 컨덕트된다. 몇 가지 경우에 있어서, 유전적 결함이나 옵신 단백질의 돌연변이에 기인하는 등의 경우, 옵신은 부적절하게 폴딩되어 간상세포의 막 내로 적절히 삽입되지 못하거나 또는 삽입된다 해도 11-시스-레티날과 적절히 반응하여 천연 로돕신을 형성하지 못하는 수가 있다. 이들 중 어떤 경우든 경중의 차이는 있어도 해당 동물의 시력에 영향이 미치게 된다.
옵신의 부적절한 폴딩과 연관이 있는 질환이나 병태로는 색소성망막염(RP), 진행성 안신경변성 질환 (또는 질환군)을 들 수 있는데, 전 세계적으로 백만 내지 이백만명 정도가 이러한 질환을 앓는 것으로 추산되고 있다. RP의 경우에는, 망막 내의 광수용기 세포가 손상되거나 파괴되어, 주변시력이 상실되고 (즉, 터널 시야), 이어서 부분적으로 또는 거의 전적으로 눈이 멀게 된다.
미국 인구에서 가장 흔한 결손은 옵신 폴리펩타이드 사슬 중 아미노산 번호 23에서 프롤린 잔기가 히스티딘 잔기에 의해 대체됨으로 해서 일어나는데, 이것은 옵신의 유전자 돌연변이에 의한 것이다. 이 결과 이 단백질이 미스폴딩된 불안정한 형태로 생산됨으로 해서 세포 표면쪽으로 수송되지 않고 세포질 내에서 응집되게 된다. 다른 많은 단백질 입체형태성 질환 (PCDs: protein conformation disease)과 마찬가지로, 보통염색체 우성 RP와 연관된 임상적으로 흔한 P23H 옵신 돌연변이가 미스폴딩되어 세포 내에 남아있게 된다. 이같이 미스폴딩된 단백질이 응집되면 광수용기가 손상되고 세포 사멸에 이르는 것으로 믿어진다.
최근의 연구 결과 질환과 관련이 있는 미스폴딩된 돌연변이 단백질을 안정화시키는 소형 분자가 동정되었다. 이들 중 몇몇은 "화학적 샤프론"이라는 별명이 붙어있는데, 단백질을 비특이적으로 안정화시킨다. 이들의 예로는 글리세롤과 트리메틸아민 옥사이드를 들 수 있다. 이들을 이용하여 치료하려면 대개 유독한 부작용이 일어날 수 있을 만큼 이들을 다량으로 사용할 것이 요구되기 때문에, 안과 질환을 치료하는데 이들 물질을 이용하는 것은 그다지 바람직하지 않다. "약물학적 샤프론"이라고 칭해지는 또 다른 물질들 (천연 리간드 및 기질 유사체 포함)은 특이적 위치에 결합함으로써 단백질을 안정화시키며 예컨대 G-단백질 커플링된 수용체와 같이 다수의 미스폴딩된 단백질에 대해 동정되어 왔다. 옵신은 G-단백질 커플링된 수용체의 일례이며 그의 약물학적 샤프론 원형(canonical pharmacological chaperones)에는 레티노이드라 칭하는 화합물 부류가 포함된다. 따라서, 어떤 레티노이드 화합물들은 돌연변이 옵신 단백질을 안정화시키는 것으로 나타났다 (예컨대 미국특허공개 2004-0242704, Noorwez 등, J. Biol. Chem., 279(16):16278-16284 (2004) 참조.
시각회로는 대개 빛에 의한 충격으로 개시되는 일련의 효소 촉매형 반응들로 이루어지며, 이로 인해 11-시스-레티날에 공유 결합된 옵신 단백질로 이루어진 로돕신의 비주얼 발색단이 올-트랜스-이성질체로 변환되고 이것은 다시 활성화된 로돕신으로부터 방출되어 옵신과 올-트랜스-레티날 생성물을 형성한다. 시각회로의 이 부분은 눈의 망막의 간상세포의 바깥 부분에서 일어난다. 시각회로의 후반부는 망막의 색소화 상피 (RPE: retinal pigmented epithelium)에서 일어난다. 이 사이클의 성분들은 데히드로게나제 및 이소머라제와 같은 다양한 효소들 뿐만 아니라, RPE와 간상세포 간에 물질을 전달하기 위한 수송 단백질도 포함한다.
시각회로의 결과, 시각회로 생성물이라 칭해지는 다양한 생성물들이 생산된다. 이들 중 한가지는 로돕신의 11-시스-레티날 부분에 직접 접촉되는 광 충격의 직접적인 결과로서 간상세포에서 생산되는 올-트랜스-레티날이다. 올-트랜스-레티날은 활성화된 로돕신으로부터 방출된 후, 다시 11-시스-레티날로 돌아가거나 또는 올-트랜스-레티날의 부가적인 분자 및 포스파티딜에탄올아민 분자와 반응하여, 오렌지색 발광 형광분자인 N-레티닐리덴-N-레티닐에탄올아민 (별칭 "A2E")을 생산할 수 있으며 이는 다시 간상세포와 망막 색소화 상피(RPE)에서 수집될 수 있다. A2E가 모여감에 따라(시각회로의 당연한 결과로서) 이것은, 예컨대 건습형 노년기황반변성(ARMD)와 같은 몇몇 비정상적인 상황을 일으킬 수 있는 것으로 지목되어 온 독성 물질인 리포푸신(lipofuscin)으로 전환될 수도 있다. A2E는 RPE에 대해 독성인 것으로 입증되었으며 건식 ARMD와 연관이 있는 것으로 나타났다.
유독한 시각회로 생성물의 빌드-업은 생리학적 과정 중의 정상적인 부분이므로, 모든 포유동물, 특히 모든 인간은 일생을 통해 어느 정도는 이러한 축적 과정을 거칠 것으로 생각된다. 그러나, 눈의 외과수술 과정에서, 특히 장기간 동안 강한 빛이 요구되는 망막에 대한 외과수술 동안, 예컨대 백내장 수술 말기 및 새로운 렌즈를 이식할 때에는, 시각회로의 천연 산물의 빌드업으로 인해, 이들 자연스런 과정이 유독할 수 있다. 또한, 밝은 빛의 자극으로 인한 과량의 로돕신 활성화는 AP1-전사인자 의존성 메카니즘을 통한 광수용기 세포자멸사를 일으킬 수 있다. 이 때문에, 외과수술 전, 도중 또는 후에 투약가능하며, 그렇지 않을 경우 축적되어 눈, 특히 망막에 독성을 유발하는, 시각회로 생성물의 생산을 감소시킬 수 있을 뿐만 아니라 로돕신 활성화를 억제하는 효과를 갖는 제제가 요구되고 있다.
본 발명은 이러한 질환을 완벽하게 예방하지는 못한다 할지라도, 치료 및/또는 경감시키기 위하여, 옵신 또는 옵신의 돌연변이 형태에 비공유적으로 결합하는 소형 분자를 제공함으로써 이러한 요구에 부응한다. 중요한 사실은 이러한 제제가 천연 레티노이드가 아님으로 해서, 옵신의 돌연변이 형태가 합성되고 및/또는 그렇지 않으면 시각회로 산물이 축적되는 장소인 간상세포 내로의 이들의 유입이 타이트하게 제어되지 않는다는 점이다. 따라서, 이러한 제제는 기본적으로, 돌연변이된 옵신의 세포막으로의 적절한 폴딩 트래피킹(trafficking)을 원활히 하거나, 후에 유독한 대사산물이 될 수도 있는 올-트랜스-레티날과 같은 시각회로 산물의 과도한 빌드-업을 유발할 수도 있는 로돕신 활성화를 방지하는데 필요하는 만큼만 적정 사용할 수 있다.
이러한 화합물은 과량의 올-트랜스 레티날 빌드-업을 방지하기 위해 옵신의 레티날 결합 포켓을 봉쇄함으로써 올-트랜스 레티날을 감소시키기 위해 11-시스-레티날과 경쟁할 수 있다. 따라서, 본 발명에 의해 제공되는 화합물들은 효소적 공정을 직접 억제하지 않음으로 해서, 11-시스-레티날이 눈에서 생산된다(따라서 레티날 변성에 기여하지 않음)는 장점을 갖는다. 그 대신, 올-트랜스-레티날의 형성은 제한됨으로 해서 A2E의 형성이 감소된다. 마지막으로, 11-시스-레티날이 옵신에 결합하여 로돕신을 형성하는 능력을 제한함으로써, 특히 안과 수술 도중의 눈부신 빛의 자극으로 인해 생기는 로돕신 활성화 역시도 감소되며 이에 따라, 그 결과인 광세포 사멸도 방지할 수 있다.
광수용기 세포 시각 안료 단백질 (옵신)의 국소화오류(mislocalization)는 여러가지 안질환 뿐만 아니라 일반적인 노화와 관련하여서도 일어난다. 두 가지 경우 모두에 있어서 국소화오류된 옵신의 누적은 광수용기 세포의 생존능을 감퇴시킨다. 시간이 경과함에 따라 국소화오류된 이들 옵신의 축적은 간상세포 또는 원추형세포의 사멸, 망막 변성 및 시력 손상으로 이어진다. 본 발명은 국소화오류된 옵신 단백질을 상기 국소화오류 옵신 단백질과 접촉시킴으로써 광수용기 세포 내에서 국소화오류된 옵신을 교정하고, 적절한 세포내 프로세싱 및 상기 옵신 단백질의 수송을 촉진하는 방법을 제공함으로써 이러한 문제점을 해결한다. 이러한 교정은 광수용기 세포의 스트레스를 완화하고, 시력 손상과 관련한 다양한 질환에서 광수용기 세포의 사멸 및 생존능 감퇴를 예방해주며, 주변의 간상세포 매개시력, 중추 추체세포 매개 시력 및 희미한 불빛에서의 정상적인 연령관련 시력 감퇴 및 야간 시력 감퇴도 예방해준다.
컴퓨터 보조형 분자 도킹에 의해 30개가 넘는 표적에 대한 새로운 리간드가 성공적으로 발견되었다. (Shoichet 외, Curr. Opin. in Chem. Biol. 6: 439-46 (2002)). 이 전략은 주로 효소, 예컨대 알도스 리덕타제 (Iwata 외, J. Med. Chem. 44: 1718-28 (2001)), Bcl-2, 마트립타제 (Enyedy 외, J. Med. Chem. 44: 1349-55 (2001)), 아데노바이러스 프로테아제 (Pang 외, FEBS Letters 502: 93-97 (2001)), AmpC fl-락타마, 카보닉 안하이드라제 (Gruneberg 외, J. Med. Chem. 45: 3588-602 (2002)), HPRTase (Freymann 외, Chemistry & Biology 7: 957-68 (2000)), 디히드로디피콜리네이트(Paiva 외, Biochimica Biophysica Acta 1545: 67-77 (2001)) 및 Cdk4 (Honma 외, J. Med. Chem. 44: 4615-27 (2001))에 적용되었다. 도킹 알고리듬과 멀티프로세서 리소스의 향상으로 인해 컴퓨터-보조된 분자 도킹 기술 역시 향상되어 이제는 보다 어려운 과제들에 적용되고 있다. 예를 들어서, 이러한 접근법은 최근 쉽게 표적화된 효소 활성 부위에 비해 비교적 넓고 평평한 단백질-단백질 계면을 표적화하는 소형 분자를 동정하는데 적용되고 있다.
보다 최근에는, 열역학적 특성 및 단백질 포켓의 제한된 대역에서 물의 상 거동을 정의하는 새로운 컴퓨터기반 기술이 개발되었다 (Young 외, PNAS 104: 808-13 (2007)). 개발된 알고리듬은 단백질 포켓의 용매화를 특징화시키는데 이용되었다. 분자 다이나믹스 자극 및 용매 분석 기술에 의해 소수성 봉입체의 용매화가 특징화되어 수소결합이 독립적으로 가용화된 리간드 및 단백질과 관련하여 단백질-리간드 복합체를 안정화시키는 수화작용의 인듀싱 비정형적 엔트로피 및 엔탈피 페널티와 연계되었다. 워터 맵이라 흔히 칭해지는 이러한 기준은 팩터 Xa(Factor Xa) 리간드 결합을 합리화하는데 이용되었다 (Abel 외, JACS 130: 2817-31 (2008)).
발명의 개요
한가지 구체예에서, 본 발명은 화학식 1의 구조를 갖는 화합물, 약학적으로 허용가능한 그의 염, 용매화합물 및 수화물 및 상기 화합물의 조성물을 제공한다:
Figure pat00001
식 중, A, B, Q 및 V는 하기 정의되는 바와 같다.
또 다른 구체예에서, 본 발명은 다음 화학식 2의 구조를 갖는 화합물, 약학적으로 허용가능한 그의 염, 용매화합물 및 수화물 및 상기 화합물의 조성물을 제공한다.
Figure pat00002
식 중, A, B, Q, W 및 p는 하기 정의되는 바와 같다.
관련 구체예에서, 본 발명은 옵신 단백질을 본 발명에 개시된 화합물과 접촉시켜 상기 접촉이 일어나지 않는 경우에 비해 상기 시각회로 생성물의 형성을 저해하는 것을 포함하여 이루어지는, 시각회로 생성물의 형성 또는 축적을 억제하는 방법에 관한 것이다.
또 다른 구체예에서, 본 발명은 포유동물의 눈에 행하여지는 외과수술 도중 로돕신의 재생성을 예방하고 및/또는 광활성화 기간 중의 로돕신 형성을 단편적으로 예방함으로써 유독한 시각회로 생성물의 형성을 방지하거나 또는 둔화시킴으로써 습건형 ARMD와 같은 시각회로 산물의 빌드-업과 연관된 안질환을 치료하는, 안질환의 외과수술과 연관된 광독성을 감소시키는 방법에 관한 것이다.
또 다른 구체예에서, 본 발명은 돌연변이된 옵신 단백질을 이 단백질의 적절한 3차원 입체구조를 안정화시키는 화합물과 접촉시킴으로써 상기 접촉이 일어나지 않는 경우에 비해 입체구조를 더욱 안정화시키는 것인 돌연변이된 옵신 단백질의 트래피킹 및 적절한 폴딩을 교정하는 방법에 관한 것으로서, 여기서 상기 화합물은 화학식 1 및/또는 화학식 2의 구조를 갖는 화합물 및 약학적으로 허용가능한 그의 염, 용매화합물 및 수화물이다.
또 다른 실시상태에서, 리간드는 옵신에 가역적으로 또는 비공유적으로 선택적으로 결합한다. 또 다른 실시상태에서, 리간드는 옵신 단백질의 11-시스-레티날 결합 포켓에 또는 그 근방에 결합한다. 또 다른 실시상태에서, 리간드는 옵신 단백질에 결합되어, 11-시스-레티날이 리간드 존재 하에 옵신 단백질과 접촉되는 경우 옵신에 대한 11-시스-레티날의 공유 결합을 억제 또는 둔화시킨다. 또 다른 실시상태에서, 리간드는 옵신 다백질의 레티날 결합 포켓내에서 옵신과 결합하거나 옵신의 레티날 결합 포켓에 대한 11-시스-레티날 결합을 파괴한다. 또 다른 실시상태에서, 리간드는 옵신 단백질에 결합하여 옵신 단백질에 대한 11-시스-레티날의 공유 결합을 억제한다. 또 다른 실시상태에서, 포유동물은 인간이다.
또 다른 실시상태에서, 습건형 ARMD의 진행을 둔화 또는 정지시키는 것은 시각회로 생성물, 예컨대 리포푸신 또는 N-레티닐리덴-N-레티닐에탄올아민 (A2E)와 같은 올-트랜스-레티날로부터 형성된 시각회로 생성물의 농도를 줄이는 것과 연관되어 있다. 또 다른 실시상태에서 RP의 진행을 둔화 또는 정지시키는 것은 돌연변이된 옵신의 폴딩을 교정하는 것과 관련이 있다. 또 다른 실시상태에서, 투여는 국소(topical) 투여, 국지적(local) 투여 (예컨대 눈속 또는 눈 주위에 놓는 주사 또는 임플란트) 또는 전신 투여 (예컨대 경구, 주사)일 수 있다. 또 다른 실시상태에서, 광독성은 눈에 대한 시술 (예컨대 안과 수술)과 관련이 있다. 또 다른 실시상태에서, 투여는 안과 수술 전, 도중 또는 후에 행할 수 있다.
한가지 구체예에서, 본 발명은 국소화오류된 옵신 단백질을 상기 국소화오류된 옵신 단백질에 가역적으로 및/또는 비공유적으로 결합하는 옵신-결합 제제와 접촉시켜 상기 옵신 단백질의 적절한 세포내 프로세싱 및 수송을 촉진시키는 것을 포함하여 이루어지는, 광수용기 세포 내에서 국소화오류된 옵신을 교정하는 방법을 제공한다.
다양한 실시상태에서, 안과 질환은 황반변성, 색소망막염, 레티날 또는 황반이상증, 슈타가르트씨병(Stagardt's disease), 소르스비씨 이상증(Sorsby's dystrophy), 상염색체 우성 드루젠, 베스트씨 이상증, 황반이상증, 슈타르가르트씨병의 우성형, 노쓰캐롤라이나 황반이상증, 광독성, 색소망막염, 노화와 관련된 정상적인 시력 상실 및 노화와 관련된 야간 시력의 정상적인 손실 중 어느 한 가지 이상의 형태일 수 있다.
또 다른 실시상태에서, 본 발명의 방법은 포유동물, 좋기로는 인간에게 프로테오좀 억제제, 자가포식(autophagy) 억제제, 리소좀 억제제, ER로부터 골지체로의 단백질 수송 억제제, Hsp90 샤프론 억제제, 열충격 반응 활성화제, 글리코시다제 억제제, 히스톤 데아세틸라제 억제제로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 부가적인 제제의 유효량을 투여하는 것을 포함한다. 또 다른 실시상태에서, 옵신 결합 리간드와 부가적인 제제는 동시에 투여된다.
또 다른 실시상태에서, 옵신 결합 리간드와 부가적인 제제는 각각 이들의 장기간 방출을 가능케 하는 조성물 내로 각각 통합된다. 또 다른 실시상태에서, 조성물은 마이크로스피어, 나노스피어, 나노 에멀젼 또는 임플란트의 일부이다. 또 다른 실시상태에서, 조성물은 미네랄 보충제, 적어도 1종의 소염제, 예컨대 스테로이드 (예컨대 1종 이상의 코르티손, 하이크로코르티손, 프레드니손, 프레드니솔론, 메틸프레드니솔론, 트리암시놀론, β메타손, 메클라메타손 및 덱사메타손), 또는 1종 이상의 항산화제, 예컨대 비타민 A, 비타민 C 및 비타민 E를 포함한다. 다양한 실시상태에서, 옵신 결합 리간드, 소염제 및/또는 항산화제는 동시에 투여된다.
정의
본 명세서에서, 다음의 용어들은 달리 언급하지 않는 한, 다음의 의미를 갖는 것으로 이해되어야 한다.
광수용기 세포 시각 색소 단백질(예컨대 옵신, 특히 인간의 옵신)의 "국소화오류(mislocalization)"라 함은 합성된 단백질이 정상적이거나 적절한 세포 위치에서 발견되지 않는 것을 의미한다.
"약학적 샤프론(pharcologic chaperones)"은 어떤 단백질 (대개 미스폴딩되거나 폴딩되지 않은 단백질)의 폴딩 또는 입체배열을 변경시키는 방식으로 상기 단백질과 상호반응하는 저분자량의 화학적 화합물을 가리킨다. 이러한 상호작용은 해당 단백질의 세포 수준의 운명에 다양한 결과를 가져올 수 있는데, 그의 비제한적인 예로 기능성 단백질의 안정성 증가 및 농도 증가, 비기능성 단백질의 안정성 증가 및 농도 증가, 또는 기능성 또는 비기능성 단백질의 안정성 감소 및 농도 감소를 들 수 있다.
"생산적 샤프론(productive chaperone)"이라는 용어는 단백질과 상호반응할 경우 기능성 단백질 수준을 증가시키는 약학적 샤프론을 가리킨다.
"역효과를 낳는, 난파된 또는 파괴적인 샤프론"이라는 용어는 단백질 (대개 미스폴딩되거나 폴딩되지 않은 단백질)과 상호반응하는 약학적 샤프론을 가리키되 이 상호작용이 기능성 또는 비기능성 단백질의 안정성 감소 및/또는 농도 감소를 일으키는 그러한 샤프론을 의미하는 것이다.
"프로테오좀 억제제(proteosomal inhibitor)"라는 용어는 유비퀴네이트형 단백질(ubiquinated protein)의 분해와 같이, 프로테오좀 활성을 감소시키는 화합물을 가리킨다.
"자가포식 억제제(autophagy inhibitor)"라는 용어는 어떤 세포에 들어있는 세포 성분의 그 세포에 의한 분해를 감소시키는 화합물을 의미한다.
"리소좀 억제제(lysosomal inhibitor)"라는 용어는 리소좀에 의한 마크로분자의 세포내 소화를 감소시키는 화합물을 의미한다. 한가지 실시상태에서, 리소좀 억제제는 리소좀의 단백질가수분해 활성을 감소시킨다.
"ER-골지 단백질 수송 억제제"라는 용어는 ER(Endoplasmic reticulum: 내형질세망)으로부터 골지체 또는 골지체로부터 ER로의 단백질의 수송을 저감시키는 화합물을 의미한다.
"HSP90 샤프론 억제제"라는 용어는 열충격 단백질 90 (HSP90)의 샤프론 활성을 감소시키는 화합물을 의미한다. 한가지 실시상태에서, 이 억제제는 HSP90 ATP/ADP 포켓에 대한 단백질 결합을 변형시킨다.
"열충격 반응 활성화제(heat shock response activator)"라는 용어는 샤프론 활성을 증가시키거나 열충격 경로 성분의 발현을 증가시키는 화합물을 의미한다. 열충격 경로 성분의 비제한적인 예로는 HSP100, HSP90, HSP70, HSP60, HSP40 및 소형 HSP 패밀리 멤버를 들 수 있다.
"글리코시다제 억제제"라 함은 글리코시드 결합을 절단하는 효소의 활성을 감소시키는 화합물을 의미한다.
"히스톤 데아세틸라제 억제제"라 함은 히스톤을 탈아세틸화시키는 효소의 활성을 감소시키는 화합물을 의미한다.
"감소시키다" 또는 "증가시키다"라는 용어는 각각 네가티브 또는 포지티브 변형을 의미한다. 특정 실시상태에서, 이러한 변형은 옵신 결합 리간드의 부재시 생산된 단백질의 초기 농도의 약 10%, 25%, 50%, 75%, 또는 100%까지의 변형에 달한다.
본 명세서에서, "야생형 입체배열 (wild-type conformation)"이라 함은 그의 아미노산 서열에 돌연변이가 일어나지 않은 단백질의 3차원 입체배열 또는 형상을 의미한다. 옵신의 경우, 이것은 예컨대 P23H (N-말단으로부터 시작해서 23번째 잔기에 있는 프롤린이 히스티딘에 의해 대체된 것을 의미한다)라 칭해지는 돌연변이와 같이, 미스필링(misfilling)을 일으키는 돌연변이가 없는 단백질을 의미한다. "야생형 입체배열"을 갖는 옵신은 비제한적인 예로서 레티노이드 결합, 시각회로 기능 및 광수용기 막 내로의 삽입을 비롯한 옵신의 생물학적 기능을 수행할 수 있다.
"제제 또는 물질(agent)"이라는 용어는 소형 화합물 ("화합물"이라 칭하기도 한다) 폴리펩타이드, 폴리뉴클레오타이드 또는 그의 단편을 의미한다. 화합물 및 제제라는 용어는 특정한 제제 또는 화합물에 대해서 특별히 달리 언급하지 않는 한, 본 명세서에서 호환적으로 사용된다.
어떤 단백질의 "입체배열을 교정하다 (correcting the confirmation)"이라는 표현은 해당 단백질로 하여금 그의 야생형 단백질과 관련이 있는 1가지 이상의 생물학적 활성을 갖는 입체배열을 유도시키는 것을 의미한다.
"미스폴딩된 옵신 단백질 (misfolded opsion protein)"이라는 표현은 그의 3차원 구조가 대응하는 야생형 단백질의 입체배열과 상이하여, 미스폴딩된 단백질이 야생형 단백질이 갖는 1종 이상의 생물학적 활성을 결여함을 의미하는 것이다.
"선택적으로 결합하다"라는 표현은 어떤 화합물이 옵신과 같은 본 발명의 폴리펩타이드를 인식하여 결합하되, 시료, 예컨대 생물학적 시료 중의 다른 분자, 특히 옵신이 아닌 폴리펩타이드는 실질적으로 인식 및 결합하지 않음을 의미한다.
"유효량" 또는 "치료적 유효량 또는 유효 치료량"이라는 표현은 세포, 조직 또는 장기 또는 환자에 대해 생리적인 효과를 발휘하는데 충분한 제제의 농도를 의미한다. 본 명세서에서는, 이 표현은 목적하는 결과를 달성하기 위하여 본 발명의 방법을 실시하는데 충분한 양을 의미한다.
"약학적 샤프론(pharmacological chaperone)"이라는 표현은 돌연변이 단백질과 접촉될 경우 그 단백질의 적절한 폴딩을 용이화/안정화시킬 수 있음으로 해서 그 분자가 부재하는 경우에 비해 야생형 단백질과 보다 유사하게 작용 및 기능하게 해주는 분자를 의미한다.
"대조군"이라 함은 참조 상태를 의미한다. 예를 들어, 본 발명의 제제와 접촉된 세포를 본 발명의 제제와 접촉되지 않은 대응 세포와 비교할 경우, 후자를 "대조군" 또는 "대조군" 세포라 부른다.
"치료하다"라는 표현은 질병, 특히 안질환, 예컨대 RP, AMD 및/또는 광독성의 진행 또는 발달을 감소, 억제, 약화, 저감, 중단 또는 안정화시키는 것을 의미한다.
"예방하다"라는 표현은 대상자가 예컨대 RP, AMD 및/또는 광독성과 같은 병태, 질환 또는 질병을 일으킬 위험을 감소시키는 것을 의미한다.
"~와 결합하기 위해 경쟁하다 (compete for binding)"이라는 표현은 본 발명의 화합물과 내인성 리간드가 어떤 표적에 동시에 결합할 수 없음을 의미한다. 경쟁적 결합을 측정하는 분석법은 기술 분야에 알려져 있으며, 예컨대 본 발명의 화합물과 내인성 리간드의 결합에 있어서 투여량 의존성 억제를, 예컨대 t1/2를 측정함으로써 측정하는 것을 포함한다.
"약학적으로 허용가능한 염"이라는 표현은 1종 이상의 본 발명의 화합물의 산성 또는 염기성 기로부터 형성된 염을 의미한다. 염의 비제한적인 예로서 설페이트, 시트레이트, 아세테이트, 옥살레이트, 클로라이드, 브로마이드, 요오다이드, 니트레이트, 바이설페이트, 포스페이트, 산 포스페이트, 이소니코티네이트, 락테이트, 살리실레이트, 산 시트레이트, 타르트레이트, 올리에이트, 탄네이트, 판토테네이트, 바이타르트레이트, 아스코르베이트, 숙시네이트, 말리에이트, 젠티시네이트, 푸마레이트, 글루코네이트, 글루카로네이트, 사카레이트, 포르메이트, 벤조에이트, 글루타메이트, 메탄설포네이트, 에탄설포네이트, 벤젠설포네이트, p-톨루엔설포네이트 및 파모에이트(즉, 1,1'-메틸렌-비스-(2-히드록시-3-나프토에이트)) 염을 들 수 있다.
"약학적으로 허용가능한 염"이라는 용어는 또한 산성 관능기, 예를 들면 카르복실산 관능기, 및 약학적으로 허용가능한 무기 또는 유기 염기를 갖는 본 발명의 화합물로부터 제조된 염을 가리킨다. 적절한 염기의 비제한적인 예로는 소듐, 포타슘 및 리튬과 같은 알칼리 금속의 히드록사이드; 칼슘 및 마그네슘과 같은 알칼리토금속의 히드록사이드; 알루미늄 및 아연과 같은 다른 금속의 히드록사이드; 암모니아 및 유기 아민, 예컨대 비치환되거나 히드록시-치환된 모노-, 디-, 또는 트리알킬아민; 디시클로헥실아민; 트리부틸 아민; 피리딘; N-메틸-N-에틸아민; 디에틸아민; 트리에틸아민; 모노-, 비스-, 또는 트리스-(2-히드록시-저급 알킬아민), 예컨대 모노, 비스- 또는 트리스-(2-히드록시에틸)- 아민, 2-히드록시-3차-부틸아민, 또는 트리스-(히드록시메틸)메틸아민, N, N,-디-저급 알킬-N-(히드록시 저급 알킬)-아민 예컨대, N,N-디메틸-N-(2-히드록시에틸)-아민, 또는 트리-(2-히드록시에틸)아민; N-메틸-D-글루카민; 및 아미노산, 예컨대 아르기닌, 리신 등을 들 수 있다.
"약학적으로 허용가능한 염"이라는 표현은 또한, 예컨대, 아미노 관능기 및 약학적으로 허용가능한 무기 또는 유기산을 갖는 실시예 1의 화합물의 염과 같이, 본 명세서에 기재된 화합물로부터 제조된 염일 수 있다. 적절한 산의 비제한적인 예로는 히드로겐 설페이트, 구연산, 아세트산, 옥살산, 염산, 브롬화수소, 요오드화수소, 질산, 인산, 이소니코틴산, 젖산, 살시실산, 타르타르산, 아스코르브산, 숙신산, 말레산, 베실산, 푸마르산, 글루콘산, 글루카론산, 사카린산, 포름산, 벤조산, 글루탐산, 메탄설폰산, 에탄설폰산, 벤젠설폰산, 및 p-톨루엔설폰산을 들 수 있다.
본 발명에서 "약학적으로 허용가능한 부형제"라는 용어는 인간에게 투여하는데 적합한 1종 이상의 혼화가능한 고체 또는 액체 충전제, 희석제 또는 캡슐화 물질을 가리킨다. "부형제(expient)"라는 용어는 화합물의 투여를 더욱 용이하게 해주기 위해 약학적 조성물에 첨가되는 불활성 물질을 포함한다. 부형제의 비제한적인 예로는 탄산칼슘, 인산칼슘, 여러가지 슈가 및 전분류, 셀룰로스 유도체, 젤라틴, 식물성 오일 및 폴리에틸렌 글리콜을 들 수 있다.
"담체(carrier)"라는 용어는 유기 또는 무기 성분, 천연 또는 합성 물질로서 활성 물질의 투여를 용이하게 위해 결합되는 물질을 가리킨다.
"비경구"라는 용어는 피하, 경막내, 정맥내, 근육내, 복강내 또는 주입 경로를 포함한다.
"시각회로 생성물(visual cycle product)"라는 용어는 시각회로(옵신 단백질이 11-시스-레티날에 결합하여 로돕신을 형성하는 반응 회로로서 광충격을 받아들여 11-시스-레티날이 올-트랜스-레티날로 전환된 다음, 이것이 옵신 분자로부터 떨어져 나와 옵신 단백질이 재생되고 이것은 다시 새로운 11-시스-레티날과의 후속적 결합에 의해 로돕신 단백질이 재생된다)의 1종 이상의 반응에 의한 천연 생성물로서 생산되는 화학물질 전체를 통털어 가리키는 것이다. 이러한 시각회로 생성물의 비제한적인 예로는 올-트랜스-레티날, 리포푸신 및 A2E를 들 수 있다.
"광독성(light toxicity)"라는 용어는 시각회로 생성물의 생산 및/또는 축적에 의해 야기되거나, 이와 연관 또는 관련이 있는, 시각에 영향을 미치는 모든 질환 또는 병태를 가리킨다. 시각회로 생성물의 비제한적인 예로는 올-트랜스-레티날, 리포푸신 및 A2E를 들 수 있다. 한가지 특정한 실시상태에서, 광독성은 다량의 빛에 눈이 노출되거나 매우 고강도의 빛에 노출되는 경우 관련되거나 일어나는 것으로서 예컨대 망막에 대한 외과수술 과정 중에 발생하는 것을 들 수 있다.
"옵신"이라는 용어는 옵신 단백질, 특히 포유동물, 가장 좋기로는 인간의 옵신 단백질을 가리킨다. 한가지 실시상태에서, 옵신 단백질은 야생형(즉, 생리적으로 활성적인) 입체배열로 존재한다. 옵신의 생리적 활성을 측정하는 한가지 방법은 옵신의 11-시스-레티날에 대한 결합 및 활성 로돕신을 형성하는 능력을 측정하는 것이다. P23H 돌연변이와 같이 대개 미스폴딩되어 있는 돌연변이 옵신은 11-시스-레티날에 대한 결합 능력이 저하되어 있기 때문에, 로돕신을 거의 또는 전혀 형성하지 못한다. 돌연변이 옵신의 입체배열이 교정되면 (예컨대, 약학적 샤프론에 대한 결합에 의해), 옵신은 간상 세포막 내로 제대로 삽입되어 그의 입체배열이 돌연변이가 아닌 옵신의 그것과 동일하게 되거나 실제로 동일하게 된다. 이로 인해 돌연변이 옵신은 11-시스-레티날에 결합하여 활성 로돕신을 형성할 수 있게 된다. 따라서, 본 발명의 방법은 시각회로 생성물의 형성을 감소시키도록 작용하는 것이다.
"알킬"이라 함은 다른 화학 작용기를 대체할 수 있는, 탄소 원자들의 절단되지 않은 비시클릭 사슬이다. 이것은 또한 분지형 또는 비분지형이거나 치환 또는 비치환될 수 있다.
"저급 알킬"은 1 내지 10개, 좋기로는 1 내지 8개, 더욱 좋기로는 1 내지 6개의 탄소 원자를 포함하는 분지쇄 또는 직쇄의 비시클릭 알킬기를 가리킨다. 저급 알킬기의 예로는메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, 이소부틸, sec-부틸, t-부틸, 펜틸, 네오펜틸, 이소-아밀, 헥실 및 옥틸을 들 수 있다.
본 발명에 개시된 모든 알킬, 알케닐 또는 알키닐기들은 다음 중 하나 이상으로 치환될 수 있다: 저급 알킬, 히드록시, 에스테르, 아미딜, 옥소, 카르복실, 카르복사미도, 할로, 시아노, 니트레이트, 니트라이트, 티오니트레이트, 티오니트라이트 설프히드릴 및 아미노기 (본 명세서의 하기 내용 중에 정의된다).
"할로알킬"은 본 발명에 정의된 바와 같은 1종 이상의 할로겐에 부착된, 본 발명에 정의된 바와 같은 알킬기, 알케닐기, 알키닐기, 브릿지형 시클로알킬기, 시클로알킬기 또는 헤테로시클릭 고리를 가리킨다. 할로알킬기의 예로는 트리플루오로메틸, 클로로메틸, 2-브로모부틸 및 1-브로모-2-클로로-펜틸을 들 수 있다.
"알케닐"은 1 이상의 탄소-탄소 이중 결합을 포함할 수 있는 분지쇄 또는 직쇄 C2-C10 탄화수소 (좋기로는 C2-C8 탄화수소, 더욱 좋기로는 C2-C6 탄화수소)를 의미한다. 알케닐기의 예로는 프로필레닐, 부텐-1-일, 이소부테닐, 펜텐-1-일, 2,2-메틸부텐-1-일, 3-메틸부텐-1-일, 헥산-1-일, 헵텐-1-일 및 옥텐-1-일을 들 수 있다.
"저급 알케닐"은 1 또는 2개의 탄소-탄소 이중 결합을 포함할 수 있는 직쇄 또는 분지쇄의 C2-C4 탄화수소를 의미한다.
"치환된 알케닐"은 1개 이상의 탄소-탄소 이중 결합을 포함할 수 있는 분지쇄 또는 직쇄 C2-C10 탄화수소 (좋기로는 C2-C8 탄화수소, 더욱 좋기로는 C2-C6 탄화수소)를 의미하며, 여기서 수소 원자들 중 1개 이상은 1개 이상의 R100 기 (여기서, 각각의 R100은 독립적으로 본 발명에 정의된 바와 같은 히드록시, 옥소, 카르복실, 카르복사미도, 할로, 시아노 또는 아미노기를 나타내는 것임)로 대체되어 있는 것이다.
"알키닐"은 1개 이상의 탄소-탄소 삼중 결합을 포함할 수 있는 불포화된 비시클릭 C2-C10 탄화수소 (좋기로는 C2-C8 탄화수소, 더욱 좋기로는 C2-C6 탄화수소)를 가리킨다. 알킬닐기의 예로는 에티닐, 프로피닐, 부틴-1-일, 부틴-2-일, 펜틸-1-일, 펜틸-2-일, 3-메틸부틴-1-일, 헥실-1-일, 헥실-2-일, 헥실-3-일 및 3,3-디메틸-부틴-1-일을 들 수 있다.
"저급 알키닐"이라 함은 1 또는 2개의 탄소-탄소 삼중 결합을 포함할 수 있는 분지쇄 또는 직쇄 C2-C4 탄화수소를 의미한다.
"브릿지된 시클로알킬"이라 함은 2개 이상의 시클로알킬기, 헤테로시클릭기 또는 이들의 결합이 인접 또는 비인접 원자를 통해 융합되어 있는 것을 가리킨다. 브릿지된 시클로알킬기는 알킬, 알콕시, 아미노, 알킬아미노, 디알킬아미노, 히드록시, 할로, 카르복실, 알킬카르복실산, 아릴, 아미딜, 에스테르, 알킬카르복실 에스테르, 카르복사미도, 알킬카르복사미도, 옥소 및 니트로 중에서 독립적으로 선택된 1, 2 또는 3개의 치환기들에 의해 치환되거나 치환되지 않을 수 있다. 브릿지된 시클로알킬기의 예로는 아다만틸, 데카히드로나프틸, 퀴누클리딜, 2,6-디옥사비시클로(3.3.0)옥탄, 7-옥사비시클로(2.2.1)헵틸 및 8-아자비시클로(3,2,1)옥-2-테닐을 들 수 있다.
"시클로알킬"은 약 3 내지 약 10개의 탄소 원자를 포함하는 포화 또는 불포화된 시클릭 탄화수소이다. 시클로알킬기는 알킬, 알콕시, 아미노, 알킬아미노, 디알킬아미노, 아릴아미노, 디아릴아미노, 알킬아릴아미노, 아릴, 아미딜, 에스테르, 히드록시, 할로, 카르복실, 알킬카르복실산, 알킬카르복실 에스테르, 카르복사미도, 알킬카르복사미도, 옥소, 알킬설피닐, 및 니트로 중에서 독립적으로 선택된 1, 2 또는 3개의 치환기들에 의해 치환되거나 치환되지 않을 수 있다. 시클로알킬기의 예로는 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸, 시클로헥실, 시클로헥세닐 및 시클로헵타-1,3-디에닐을 들 수 있다.
"헤테로시클릭 고리 또는 헤테로시클릭기"는 약 2 내지 약 12 탄소 원자(이 중 1 내지 약 4개의 탄소 원자는 1개 이상의 질소, 산소 및/또는 황 원자에 의해 치환되어 있음를 갖는 포화 또는 불포화된 시클릭 또는 폴리시클릭 탄화수소기를 가리킨다. 황은 티오, 설피닐 또는 설포닐 산화 상태일 수 있다. 헤테로시클릭 고리 또는 헤테로시클릭기는 방향족 탄화수소기에 결합될 수 있다. 헤테로시클릭기는 알킬, 알콕시, 아미노, 알킬티오, 아릴옥시, 아릴티오, 아릴알킬, 히드록시, 옥소, 티알, 할로, 카르복실, 카르복실산 에스테르, 알킬카르복실산, 알킬카르복실 에스테르, 아릴, 아릴카르복실산, 아릴카르복실산 에스테르, 아미딜, 에스테르, 알킬카르보닐, 아릴카르보닐, 알킬설피닐, 카르복사미도, 알킬카르복사미도, 아릴카르복사미도, 설폰산, 설폰 에스테르, 설폰아미드 니트레이트 및 니트로 중에서 독립적으로 선택된 1, 2 또는 3개의 치환기에 의해 치환되거나 치환되지 않을 수 있다. 헤테로시클릭기의 예로는 피롤릴, 퓨릴, 티에닐, 3-피롤리닐, 4,5,6-트리히드로-2H-피라닐, 피리디닐, 1,4-디히드로피리디닐, 피라졸릴, 트리아졸릴, 피리미디닐, 피라디지닐, 옥사졸릴, 티아졸릴, 티에노[2,3-d]피리미딘, 4,5,6,7-테트라히드로벤조[b]티오펜, 이미다졸릴, 인돌릴, 티오페니라 퓨라닐, 테트라히드로퓨라닐, 테트라졸릴, 피롤리닐, 피롤리디닐, 옥사졸리디닐, 1,3-다옥솔라닐, 이미다졸리닐, 이미다졸리디닐, 피라졸리닐, 피라졸리디닐, 이속사졸릴, 이소티아졸릴, 1,2,3-옥사디아졸릴, 1,2,3-트리아졸릴, 1,3,4-티아디아졸릴, 2H-피라닐, 4H-피라닐, 피페리디닐, 1,4-디옥사닐, 모르폴리닐, 1,4-디티아닐, 티오모르폴리닐, 피라지닐, 피페라지닐, 1,3,5-트리아지닐, 1,3,5-트리티아닐, 벤조(b)티오페닐, 벤즈이미다졸릴, 벤조티아졸리닐, 퀴놀리닐 및 2,6-디옥사비시클로(3.3.0)옥탄을 들 수 있다.
"헤테로시클릭 화합물"이라 함은 적어도 1개의 아릴 또는 헤테로시클릭 고리를 포함하는 모노- 및 폴리시클릭 화합물을 가리킨다.
"아릴"은 방향족 고리를 1개 또는 2개 포함하는 모노시클릭, 비시클릭, 카보시클릭 또는 헤테로시클릭 고리계를 가리킨다. 아릴기의 예로는 페닐, 피리딜, 나프틸, 퀴놀릴, 테트라히드로나프틸, 퓨라닐, 인다닐, 인데닐, 인돌릴을 들 수 있다. 아릴기 (바이시클릭 아릴기를 포함한다)는알킬, 알콕시, 알킬티오, 아미노, 알킬아미노, 디알킬아미노, 아릴아미노, 디아릴아미노, 알킬아릴아미노, 할로, 시아노, 알킬설피닐, 히드록시, 카르복실, 카르복실 에스테르, 알킬카르복실산, 알킬카르복실 에스테르, 아릴, 아릴카르복실산, 아릴카르복실 에스테르, 알킬카르보닐, 아릴카르보닐, 아미딜, 에스테르, 카르복사미도, 알킬카르복사미도, 카르바모일, 설폰산, 설폰 에스테르, 설폰아미도 및 니트로로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 1, 2, 또는 3개의 치환기에 의해 치환되거나 치환되지 않을 수 있다. 치환된 아릴기의 예로는 테트라플루오로페닐, 펜타플루오로페닐, 설폰아미드, 알킬설포닐 및 아릴설포닐을 들 수 있다.
"시클로알케닐"이라 함은 1개 이상의 탄소-탄소 이중 결합을 포함할 수 있는 불포화시클릭 C3-C10 탄화수소 (좋기로는 C3-C8 탄화수소, 더욱 좋기로는 C3-C6 탄화수소)를 가리킨다.
"알킬아릴"이라 함은 본 발명에 정의된 바와 같은 아릴기가 부착되어 있는 본 발명에 정의된 바와 같은 알킬기를 가리킨다. 알킬아릴기의 예로는 벤질, 페닐에틸, 히드록시벤질, 플루오로벤질 및 플루오로페닐에틸을 들 수 있다.
"아릴알킬"이라 함은 본 발명에 정의된 바와 같은 알킬 래디칼에 부착되어 있는 본 발명에 정의된 바와 같은 아릴 래디칼을 의미한다. 아릴알킬기의 예로는 벤질, 페닐에틸, 4-히드록시벤질, 3-플루오로벤질 및 2-플루오로페닐에틸을 들 수 있다.
"아릴알케닐"이라 함은 본 발명에 정의된 바와 같은 알케닐 래디칼에 부착되어 있는 본 발명에 정의된 바와 같은 아릴 래디칼을 가리킨다. 아릴알케닐기의 예로는 스티릴 및 프로페닐페닐을 들 수 있다.
"시클로알킬알킬"이라 함은 본 발명에 정의된 바와 같은 알킬 래디칼에 부착되어 있는 본 발명에 정의된 바와 같은 시클로알킬 래디칼을 가리킨다.
"시클로알킬알콕시"라 함은 본 발명에 정의된 바와 같은 알콕시 래디칼에 부착되어 있는 본 발명에 정의된 바와 같은 시클로알킬 래디칼을 가리킨다.
"시클로알킬알킬티오"라 함은 본 발명에 정의된 바와 같은 알킬티오 래디칼에 부착되어 있는 본 발명에 정의된 바와 같은 시클로알킬 래디칼을 의미한다.
"헤테로시클릭알킬"이라 함은 본 발명에 정의된 바와 같은 알킬 래디칼에 부착되어 있는, 본 발명에 정의된 바와 같은 헤테로시클릭 고리 래디칼을 의미한다.
"아릴헤테로시클릭 고리"라 함은 아릴 고리의 인접한 2개의 탄소 원자들을 경유하여, 본 발명에 정의된 바와 같은 헤테로시클릭 고리에 부착된, 본 발명에 정의된 바와 같은 아릴 고리로 이루어진, 비시클릭 또는 트리시클릭 고리를 가리킨다. 아릴헤테로시클릭 고리의 예로는 디히드로인돌 및 1,2,3,4-테트라-히드로퀴놀린을 들 수 있다.
"알킬헤테로시클릭 고리"라 함은 본 발명에 정의된 바와 같은 알킬 래디칼에 부착되어 있는 본 발명에 정의된 바와 같은 헤테로시클릭 고리 래디칼을 가리킨다. 알킬헤테로시클릭 고리의 예로는 2-피리딜메틸 및 1-메틸피페리딘-2-온-3-메틸을 들 수 있다.
"알콕시"라 함은 R50O-로서 여기서 R50은 본 발명에 정의된 바와 같은 알킬기(좋기로는 본 발명에 정의된 바와 같은 저급 알킬기 또는 할로알킬기)를 나타내는 것이다. 알콕시기의 예로는 메톡시, 에톡시, t-부톡시, 시클로펜틸옥시 및 트리플루오로메톡시를 들 수 있다.
"아릴옥시"라 함은 R55O-로서, 여기서 R55는 본 발명에 정의된 바와 같은 아릴기이다. 아릴옥시의 예로는 나프틸옥시, 퀴놀릴옥시, 이소퀴놀리지닐옥시를 들 수 있다.
"알킬티오"라 함은 R50S-를 가리키는 것으로서, 여기서 R50은 본 발명에 정의된 바와 같은 알킬기를 나타내는 것이다.
"저급 알킬티오"라 함은 본 발명에 정의된 바와 같은 티오기에 부착되어 있는 본 발명에 정의된 바와 같은 저급 알킬기를 가리킨다.
"아릴알콕시" 또는 "알콕시아릴"이라 함은 본 발명에 정의된 바와 같은 아릴기에 부착되어 있는, 본 발명에 정의된 바와 같은 알콕시기를 가리킨다. 아릴알콕시기의 예로는 벤질옥시, 페닐에톡시 및 클로로페닐에톡시를 들 수 있다.
"아릴알킬티오"는 본 발명에 정의된 바와 같은 아릴기에 부착되어 있는 본 발명에 정의된 바와 같은 알킬티오기를 가리킨다. 아릴알킬티오기의 예로는 벤질티오, 페닐에틸티오 및 클로로페닐에틸티오를 들 수 있다.
"아릴알킬티오알킬"은 본 발명에 정의된 바와 같은 알킬기에 부착되어 있는 본 발명에 정의된 바와 같은 알킬티오기를 가리킨다. 아릴알킬티오알킬기의 예로는 벤질티오메틸, 페닐에틸티오메틸 및 클로로페닐에틸티오에틸을 들 수 있다.
"알킬티오알킬"은 본 발명에 정의된 바와 같은 알킬기에 부착되어 있는 본 발명에 정의된 바와 같은 알킬티오기를 가리킨다. 알킬티오알킬기의 예로는 알릴티오메틸, 에틸티오메틸 및 트리플루오로에틸티오메틸을 들 수 있다.
"알콕시알킬"이라 함은 본 발명에 정의된 바와 같은 알킬기에 부착되어 있는 본 발명에 정의된 바와 같은 알콕시기를 가리킨다. 알콕시알킬기의 예로는메톡시메틸, 메톡시에틸 및 이소프로폭시메틸을 들 수 있다.
"알콕시할로알킬"이라 함은 본 발명에 정의된 바와 같은 할로알킬기에 부착되어 있는 알콕시기를 가리킨다. 알콕시할로알킬기의 예로는4- 메톡시-2-클로로부틸을 들 수 있다.
"시클로알콕시"라 함은 R54O-를 가리키며 여기서 R54는 본 발명에 정의된 바와 같은 시클로알킬기 또는 브릿지된 시클로알킬기를 가리킨다. 시클로알콕시기의 예로는 시클로프로필옥시, 시클로펜틸옥시 및 시클로헥실옥시를 들 수 있다.
"시클로알킬티오"라 함은 R54S-를 가리키며, 여기서 R54는 본 발명에 정의된 바와 같은 시클로알킬기 또는 브릿지된 시클로알킬기이다. 시클로알킬티오기의 예로는 시클로프로필티오, 시클로펜틸티오 및 시클로헥실티오를 들 수 있다.
"할로알콕시"는 알콕시기를 가리키되, 상기 알콕시기 상의 1개 이상의 수소 원자가 본 발명에 정의된 바와 같은 할로겐의 의해 치환되어 있는 기를 가리킨다. 할로알콕시기의 예로는 1,1,1-트리클로로에톡시 및 2-브로모부톡시를 들 수 있다.
"히드록시"라 함은 -OH를 의미한다.
"옥시"는 -O-를 의미한다.
"옥소"는 =O를 의미한다.
"옥실레이트"는 -O- R-77 + 를 나타내며, 여기서 R77은 유기 또는 무기 양이온이다.
"티올"은 -SH를 나타낸다.
"티오"는 -S-를 나타낸다.
"옥심"은 =N-OR81을 나타내되, 여기서 R81 은 수소, 알킬기, 아릴기, 알킬설포닐기, 아릴설포닐기, 카르복실 에스테르, 알킬카르보닐기, 아릴카르보닐기, 카르복사미도기, 알콕시알킬기 또는 알콕시아릴기를 나타낸다.
"히드라존"은 =N-N(R81)(R'81)을 나타내며, 여기서 R'81은 본 발명에 정의된 바와 같은 R81로부터 선택되는 것이다.
"히드라디노"는 H2N-N(H)-을 나타낸다.
"유기 양이온"이라 함은 양하전된 유기 이온을 나타낸다. 유기 양이온의 ㅇ예로는 알킬 치환된 암모늄 양이온을 들 수 있다.
"무기 양이온"이라 함은 양하전된 금속 이온을 나타낸다. 무기 양이온의 예로는 예컨대 소듐, 포타슘, 마그네슘 및 칼슘과 같은 1족 금속 양이온을 들 수 있다.
"히드록시알킬"이라 함은 본 발명에 정의된 바와 같은 알킬기에 부착된 본 발명에 정의된 바와 같은 히드록시를 나타낸다.
"니트레이트"라 함은 -O-NO2 즉, 산화된 질소를 가리킨다.
"니트라이트" 라 함은 -O-NO 즉, 산화된 질소를 가리킨다.
"니트로"라 함은 -NO2기를 나타내고 "니트로제이트화된(nitosated)" 이라 함은 이것으로 치환된 화합물을 가리킨다.
"니트로소(nitroso)"는 -NO기를 나타내고 "니트로실화된(nitrosylated)"이라 함은 이것으로 치환된 화합물을 가리킨다.
"니트릴" 및 "시아노"는 -CN을 나타낸다.
"할로겐" 또는 "할로" 는 요오드(I), 브롬(Br), 염소(Cl), 및/또는 불소(F)를 나타낸다.
"이민"은 -C(=N-R51)-을 나타내되, 여기서 R51은 본 발명에 정의된 바와 같은 수소 원자, 알킬기, 아릴기 또는 아릴헤테로시클릭 고리이다.
"아민"은 적어도 하나의 염기성 질소 원자를 함유하는 모든 유기 화합물을 가리킨다.
"아미노"라 함은 본 발명에 정의된 바와 같은 -NH2, 알킬아미노기, 디알킬아미노기, 아릴아미노기, 디아릴아미노기, 알킬아릴아미노기 또는 헤테로시클릭 고리를 나타낸다.
"알킬아미노"라 함은 R50NH-를 나타내되, 여기서 R50은 본 발명에 정의된 바와 같은 알킬기를 나타낸다. 알킬아미노기의 예로는 메틸아미노, 에틸아미노, 부틸아미노, 및 시클로헥실아미노를 들 수 있다.
"아릴아미노"라 함은 R55NH-를 나타내되, 여기서 R55는 본 발명에 정의된 바와 같은 아릴기를 나타낸다.
"디알킬아미노"라 함은 R52R53N-를 나타내되, 여기서 R52 및 R53은 각각 독립적으로 본 발명에 정의된 바와 같은 알킬기를 나타내는 것이다. 디알킬아미노기의 예로는 디메틸아미노, 디에틸아미노 및 메틸 프로파르길아미노를 들 수 있다.
"디아릴아미노"라 함은 R55R60N-를 나타내며, 여기서 R55 및 R60은 각각 독립적으로 본 발명에 정의된 바와 같은 아릴기를 나타낸다.
"알킬아릴아미노" 또는 "아릴알킬아미노"라 함은 R52R55N-를 나타내되, 여기서 R52는 본 발명에 정의된 바와 같은 알킬기를 나타내고, R55는 본 발명에 정의된 바와 같은 아릴기를 나타내는 것이다.
"알킬아릴알킬아미노"라 함은 R52R79N-를 나타내되, 여기서 R52는 본 발명에 정의된 바와 같은 알킬기를 나타내고, R79는 본 발명에 정의된 바와 같은 아릴알킬기를 나타낸다.
"알킬시클로알킬아미노"라 함은 R52R80N-을 나타내되, 여기서 R52는 본 발명에 정의된 바와 같은 알킬기를, R80은 본 발명에 정의된 바와 같은 시클로알킬기를 나타낸다.
"아미노알킬"이라 함은 본 발명에 정의된 바와 같은 알킬기에 부착된, 본 발명에 정의된 바와 같은 아미노기, 알킬아미노기, 디알킬아미노기, 아릴아미노기, 디아릴아미노기, 알킬아릴아미노기 또는 헤테로시클릭 고리를 나타낸다. 아미노알킬기의 예로는 디메틸아미노프로필, 디페닐아미노시클로펜틸 및 메틸아미노메틸을 들 수 있다.
"아미노아릴"이라 함은 알킬아미노기, 아릴아미노기 또는 아릴알킬아미노기에 부착된 아릴기를 가리킨다. 아미노아릴기의 예로는 아닐리노, N-메틸아닐리노 및 N-벤질아닐리노를 들 수 있다.
"티오"는 -S-를 나타낸다.
"설피닐"은 -S(O)-를 나타낸다.
"메탄티알"은 -C(S)-를 나타낸다.
"티알"은 =S를 나타낸다.
"설포닐"은 -S(O)2 - 를 나타낸다.
"설폰산"은 -S(O)2OR76를 나타내며, 여기서 R76은 본 발명에 정의된 바와 같은 수소, 유기 양이온 또는 무기 양이온을 나타낸다.
"알킬설폰산"은 본 발명에 정의된 바와 같은 알킬기에 부착된 본 발명에 정의된 바와 같은 설폰산기를 가리킨다.
"아릴설폰산"은 본 발명에 정의된 바와 같은 아릴기에 부착된 본 발명에 정의된 바와 같은 설폰산기를 나타낸다.
"설폰 에스테르"는 -S(O)2OR58이며 여기서 R58은 본 발명에 정의된 바와 같은 알킬기, 아릴기, 또는 아릴 헤테로시클릭 고리를 나타낸다.
"설폰아미도"는 -S(O)2-N(R51)(R57)를 나타내며, 여기서 R51 및 R57은 각각 독립적으로 본 발명에 정의된 바와 같은 수소 원자, 알킬기, 아릴기 또는 아릴헤테로시클릭 고리를 나타내고, 또는 R51 및 R57은 함께 본 발명에 정의된 바와 같은 헤테로시클릭 고리, 시클로알킬기 또는 브릿지된 시클로알킬기를 나타낸다.
"알킬설폰아미도"는 본 발명에 정의된 바와 같은 알킬기에 부착된 본 발명에 정의된 바와 같은 설폰아미도기를 나타낸다.
"아릴설폰아미도"는 본 발명에 정의된 바와 같은 아릴기에 부착된 본 발명에 정의된 바와 같은 설폰아미기를 나타낸다.
"알킬티오"는 R50S-를 의미하되, 여기서 R50은 본 발명에서 정의된 바와 같은 알킬기 (좋기로는 본 발명에서 정의된 바와 같은 저급 알킬기)를 나타낸다.
"아릴티오"는 R55S-를 나타내되, 여기서 R55는 본 발명에 정의된 바와 같은 아릴기를 나타낸다.
"아릴알킬티오"는 본 발명에 정의된 바와 같은 알킬티오기에 부착된, 본 발명에 정의된 바와 같은 아릴기를 나타낸다.
"알킬설피닐"은 R50-S(O)-를 나타내며, 여기서 R50은 본 발명에 정의된 바와 같은 알킬기이다.
"알킬설포닐"은 R50-S(O)2-이며, 여기서 R50은 본 발명에 정의된 바와 같은 알킬기이다.
"알킬설포닐옥시"는 R50-S(O)2-O-이며, 여기서 R50은 본 발명에 정의된 바와 같은 알킬기이다.
"아릴설피닐"은 R55-S(O)-이며, 여기서 R55은 본 발명에 정의된 바와 같은 아릴기이다.
"아릴설포닐"은 R55-S(O)2-이며, 여기서 R55는 본 발명에 정의된 바와 같은 아릴기이다.
"아릴설포닐옥시"는 R55-S(O)2-O-이며, 여기서 R55는 본 발명에 정의된 바와 같은 아릴기이다.
"아미딜"은 R51C(O)N(R57)-이며, 여기서 R51 및 R57은 각각 독립적으로 본 발명에 정의된 바와 같은 수소 원자, 알킬기, 아릴기 또는 아릴헤테로시클릭 고리이다.
"에스테르"는 R51C(O)R82- 이며 여기서 R51은 본 발명에 정의된 바와 같은 수소 원자, 알킬기, 아릴기 또는 아릴헤테로시클릭 고리이고 R82는 산소 또는 황이다.
"카르바모일"은 -O-C(O)N(R51)(R57)이고, 여기서 R51 및 R57은 각각 독립적으로 본 발명에 정의된 바와 같은 수소 원자, 알킬기, 아릴기 또는 아릴헤테로시클릭 고리이고, 또는 R51 및 R57은 함께 본 발명에 정의된 바와 같은 헤테로시클릭 고리, 시클로알킬기 또는 브릿지된 시클로알킬기를 나타낸다.
"카르복실"이라 함은 -C(O)OR76이며, 여기서 R76은 본 발명에 정의된 바와 같은 수소, 유기 양이온 또는 무기 양이온을 나타낸다.
"카르보닐"이라 함은 -C(O)-을 나타낸다.
"알킬카르보닐"은 R52-C(O)-이고, 여기서 R52는 본 발명에 정의된 바와 같은 알킬기이다.
"아릴카르보닐"은 R55-C(O)-이고, 여기서 R55는 본 발명에 정의된 바와 같은 아릴기이다.
"아릴알킬카르보닐"은 R55-R52-C(O)-이고, 여기서 R55는 본 발명에 정의된 바와 같은 아릴기이고 R52는 본 발명에 정의된 바와 같은 알킬기이다.
"알킬아릴카르보닐"은 R52-R55-C(O)-이고, 여기서 R55는 본 발명에 정의된 바와 같은 아릴기이고, R52는 본 발명에 정의된 바와 같은 알킬기이다.
"헤테로시클릭알킬카르보닐"은 R78C(O)-이고, 여기서 R78은 본 발명에 정의된 바와 같은 헤테로시클릭알킬기이다.
"카르복실 에스테르"는 -C(O)OR58이고, 여기서 R58은 본 발명에 정의된 바와 같은 알킬기, 아릴기 또는 아릴 헤테로시클릭 고리이다.
"알킬카르복실산" 및 "알킬카르복실"은 본 발명에 정의된 바와 같은 카르복실기에 부착된, 본 발명에 정의된 바와 같은 알킬기를 가리킨다.
"알킬카르복실 에스테르"는 본 발명에 정의된 바와 같은 카르복실 에스테르기에 부착된 본 발명에 정의된 바와 같은 알킬기를 나타낸다.
"알킬 에스테르" 본 발명에 정의된 바와 같은 에스테르기에 부착된 본 발명에 정의된 바와 같은 알킬기를 나타낸다.
"아릴카르복실산"은 본 발명에 정의된 바와 같은 카르복실기에 부착된 본 발명에 정의된 바와 같은 아릴기를 나타낸다.
"아릴카르복실 에스테르" 및 "아릴카르복실"은 본 발명에 정의된 바와 같은 카르복실 에스테르기에 부착된 본 발명에 정의된 바와 같은 아릴기를 나타낸다.
"아릴 에스테르"는 본 발명에 정의된 바와 같은 에스테르기에 부착된 본 발명에 정의된 바와 같은 아릴기를 나타낸다.
"카르복사미도"는 -C(O)N(R51)(R57)을 나타내며, 여기서 R51 및 R57은 각각 독립적으로 본 발명에 정의된 바와 같은 수소 원자, 알킬기, 아릴기 또는 아릴헤테로시클릭 고리를 나타내고, 또는 R51 및 R57은 함께 본 발명에 정의된 바와 같은 헤테로시클릭 고리, 시클로알킬기 또는 브릿지된 시클로알킬기를 나타낸다.
"알킬카르복사미도"는 본 발명에 정의된 바와 같은 카르복사미도기에 부착된 본 발명에 정의된 바와 같은 알킬기를 나타낸다.
"아릴카르복사미도"는 본 발명에 정의된 바와 같은 카르복사미도기에 부착된 본 발명에 정의된 바와 같은 아릴기를 나타낸다.
"우레아"는 -N(R59)-C(O)N(R51)(R57)를 나타내고, 여기서 R51, R57, 및 R59은 각각 독립적으로 본 발명에 정의된 바와 같은 수소 원자, 알킬기, 아릴기 또는 아릴헤테로시클릭 고리를 나타내거나, 또는 R51 및 R57은 함께 본 발명에 정의된 바와 같은 헤테로시클릭 고리, 시클로알킬기 또는 브릿지된 시클로알킬기를 나타낸다.
"포스포릴"은 -P(R70)(R71)(R72)를 나타내며, 여기서 R70은 고립전자쌍, 티알 또는 옥소를 나타내고, R71 및 R72은 각각 독립적으로 본 발명에 정의된 바와 같은 공유 결합, 수소, 저급 알킬, 알콕시, 알킬아미노, 히드록시, 옥시 또는 아릴을 나타낸다.
"인산"은 -P(O)(OR51)OH를 나타내고, 여기서 R51은 본 발명에 정의된 바와 같은 수소 원자, 알킬기, 아릴기 또는 아릴헤테로시클릭 고리를 나타낸다.
"포스핀산"은 -P(O)(R51)OH를 나타내고, 여기서 R51은 본 발명에 정의된 바와 같은 수소 원자, 알킬기, 아릴기 또는 아릴헤테로시클릭 고리를 나타낸다.
"실릴"은 -Si(R73)(R74)(R75)를 나타내며, 여기서 R73, R74 및 R75은 각각 독립적으로 본 발명에 정의된 바와 같은 공유 결합, 저급 알킬, 알콕시, 아릴 또는 아릴알콕시를 나타낸다.
"유기산"은 염기성 기에 양성자를 내줄 수 있는 1개 이상의 관능기와 1개 이상의 탄소 원자를 갖는 화합물을 가리킨다. 유기산은 카르복실, 설폰산 또는 인산 부분을 함유하는 것이 좋다. 유기산의 예로는 아세트산, 벤조산, 구연산, 캄포설폰산, 메탄설폰산, 타우로콜산, 클로르드론산, 글리포스페이트 및 메드론산을 들 수 있다.
"무기산"이라 함은 적어도 하나의 탄소를 함유하지 않으며 염기성 기에 양성자를 내줄 수 있는 화합물을 가리킨다. 무기산의 예로는 염산, 황산, 질산 및 인산을 들 수 있다.
"유기 염기"라 함은 산 기로부터 나온 양성자를 받을 수 있는 1개 이상의 관능기를 갖는, 탄소 함유 화합물을 의미한다. 유기 염기는 아민 기를 함유하는 것이 좋다. 유기 염기의 예로는 트리에틸아민, 벤질디에틸아민, 디메틸에틸 아민, 이미다졸, 피리딘 및 피리딘을 들 수 있다.
"독립적으로 선택된"기는 동일 구조 내에 존재하는 기들이 모두 동일한 치환기를 나타낼 필요는 없는 경우를 가리킨다. 예를 들어, 2개의 치환기가 NORA 이고, 각각의 RA가 독립적으로 H, 메틸, 에틸, 등으로부터 선택된다고 설명될 경우, 이것은 하나의 RA가 메틸이면, 다른 RA는 메틸일 수도 있지만 H 또는 에틸 (또는 그 밖에 언급된 치환기)일 수도 있음을 의미하는 것이다.
본 발명의 방법에 사용되는 화합물들 중 일부는 하나 이상의 키랄 중심을 함유할 수 있으므로 거울상 이성질체 또는 부분입체이성질체 형태로 존재할 수 있다. 본 발명의 범위는 모든 이성질체 자체의 용도 뿐만 아니라, 시스와 트랜스 이성질체의 혼합물, 부분입체이성질체의 혼합물 뿐만 아니라 거울상 이성질체의 라세미 혼합물로서 존재할 수도 있다. 또한, 공지 기술을 이용하여 다양한 형태들을 분리할 수도 있고 본 발명의 몇가지 실시상태는 주어진 거울상 이성질체나 부분입체이성질체의 순수한 또는 어느 한 쪽이 풍부한 종을 나타낼 수도 있다.
"약리학적 조성물"이라 함은 본 발명의 1종 이상의 화합물 또는 약학적으로 허용가능한 그의 염과 다른 화학적 성분들, 예컨대 약학적으로 허용가능한 담체 및/또는 부형제와의 혼합물을 가리킨다. 약리학적 조성물의 목적은 대상체에게 화합물을 투여하는 것을 용이하게 하기 위함이다.
본 발명에서 "약학적으로 허용가능한 담체"라 함은 대상 제제를 하나의 장기 또는 신체 일부로부터 다른 장기 또는 신체 일부로 전달 또는 수송하는데 관여하는 약학적으로 허용가능한 물질, 조성물 또는 비히클, 예컨대 액체 또는 고체 충전제, 희석제, 부형제, 용매 또는 캡슐화 재료를 의미한다. 각각의 담체는 포뮬레이션 중의 다른 성분들과 공존가능하여야 하며 환자에게 해를 입혀서는 안되는 의미에서 "허용가능한" 것이어야 한다. 약학적으로 허용가능한 담체로서 사용가능한 물질의 예로는 슈가, 예컨대 락토서, 글루코스 및 수크로스, 전분, 예컨대 옥수수 전분 및 감자 전분; 셀룰로스 및 그 유도체, 예컨대 소듐 카르복시메틸 셀룰로스, 에실 셀룰로스 및 셀룰로스 아세테이트; 분말형 트라가칸트; 몰트; 젤라틴; 탈크; 부형제, 예컨대 코코아 버터 및 좌제용 왁스; 오일, 예컨대 낙화생유, 면실유, 잇꽃유, 참기름, 올리브유, 옥수수유 및 대두유; 글리콜, 예컨대 프로필렌 글리콜; 폴리올; 예컨대 글리세린, 소르비톨, 만니톨 및 폴리에틸렌 글리콜; 에스테르; 예컨대 에틸 올리에이트 및 에틸 라우레이트; 한천; 완충제, 예컨대 수산화마그네슘 및 수산화알루미늄; 알긴산; 발열원이 없는 물; 등장염수; 링거액; 에틸 알코올, 포스페이트 완충용액; 및 제약 포율레이션에서 널리 사용되는 기타 무독성의 물질을 들 수 있다. 생리적으로 허용가능한 담체는 대상체에게 유의적인 자극을 주어서는 아니되며 투여된 화합물의 생물학적 특성과 활성을 방해하여서는 아니된다.
"용매화합물"이라 함은 용질(예컨대, 메탈로프로테아제 억제제)과 용매 (예컨대, 물)와의 조합에 의해 형성된 복합체를 말한다. J. Honig 외, The Van Nostrand Chemist's Dictionary, p. 650 (1953) 참조.
"광학이성질체", "기하이성질체" (예컨대, 시스 및/또는 트랜스 이성질체), "입체이성질체" 및 "부분입체이성질체"라는 용어는 널리 받아들여지고 있는 대로의 의미를 갖는다 (예컨대, Hawley's Condensed Chemical Dictionary, 11th Ed. 참조). 본 발명의 화합물의 특정 보호 형태 및 기타 유도체에 대한 설명은 이들로 내용을 국한하는 것은 아니다. 다른 보호기, 염 형태, 전구 약물들을 적용하는 것 역시도 당업자의 능력범위에 속한다.
"전구약물(prodrug)" 이라 함은 활성적인 또는 완전히 활성적인 약학적 제제로 되기 전에 대사 과정에 의해 화학적 변환을 수행하여야만 하는 약물 형태를 의미한다. 전구약물은 섭취 또는 흡수되거나 달리 투여된 형태에서는 활성적이지 않거나 또는 활성이 적다. 예를 들어, 전구약물은 소화계 내에서 세균에 의해 분해되어 생성물이 되며, 이들 적 적어도 하나는 약물로서 활성을 가지게 된다. 또는, 이것은 정맥 주사 등에 의해 전신투여된 다음 하나 이상의 활성 분자가 되도록 대사될 수도 있다.
발명의 상세한 설명
본 발명에 따라 특정의 소형 분자 리간드들이 옵신 단백질에 가역적으로 비공유 결합하여 11-시스-레티날의 옵신 레티날 결합 포켓에 대한 결합을 억제할 수 있는 것으로 밝혀졌다. 레티날 결합에 대한 이와 같은 방해는 올-트랜스 레티날과 같은 시각회로 생성물의 형성을 저감시킴으로써 리푸푸신 및 A2E와 같은 화합물의 생성을 억제하며 이에 의해 이러한 물질들의 축적이 야기할 수 있는 독성 발생 및 그 위험성을 감소시키는 결과를 낳는다. 약학적 샤프론 역할을 하는 이러한 화합물은 또한 RP와 관련된 돌연변이 옵신의 적절한 폴딩 및 트래피킹도 도와준다. 뿐만 아니라, 11-시스-레티날 결합 및 로돕신 형성을 억제함으로써 망막이 밝은 빛, 특히 망막 수술 중 밝은 빛에 망막이 노출됨에 따라 일어나는 로돕신의 과도한 활성화 및 자극 억제제 의해 광세포 사멸이 저감된다.
특정한 합성 레티노이드들(레티놀 (비타민 A 알코올)과 구조가 유사한 화합물)이 옵신에 결합하는 것으로 보고되었다. 본 발명의 실시상태에서, 레티노이드가 아닌 소형 분자들(분자량이 약 1000 달톤 미만, 예컨대 800 달톤 미만, 600 달톤 미만, 500 달톤 미만, 400 달톤 미만 또는 약 300 달톤 미만)도 옵신에 결합하는 것으로 나타났다.
본 발명은 시각회로 생성물의 형성 및 이러한 생성물의 생체내 축적과 연관된 독성을 감소시키고, 로돕신의 과도한 활성화와 연관된 세포자멸사를 감소시키고 나아가 RP와 연관된 돌연변이 옵신 단백질의 비정상적인 프로세싱 및 트래피킹에 기인하는 간상세포 사멸을 방지하는데 유용한 조성물 및 방법을 제공한다.
광수용기 세포 시각 색소 단백질 (옵신)의 국소화오류는 여러가지 안과 질환에서 발생할 수 있고 정상적인 노화와도 연관이 있다. 이러한 경우에 있어서, 국소화오류된 옵신이 축적되면 광수용기 세포의 생존능이 저하된다. 시간이 경과함에 따라, 국소화와류된 옵신의 이러한 축적은 간상세포와 추체세포의 사멸, 레티날 분해 및 시력 상실로 이어진다.
한가지 구체예에서, 본 발명은 국소화오류된 옵신 단백질을 상기 국소화오류된 옵신 단백질에 가역적 및/또는 비공유적으로 결합하는 옵신-결합 제제와 접촉시킴으로써, 상기 옵신 단백질의 세포내 프로세싱의 교정 및 수송을 촉진하는 것을 포함하여 이루어지는, 광수용기 세포 내에서 국소화오류된 옵신을 교정하는 방법을 제공한다. 이러한 옵신-결합 제제는 "생산적 샤프론"이라 칭한다.
이러한 국소화오류의 교정은 광수용기 세포 스트레스를 감소시키고, 여러가지 시각 상실 질환에서의 광수용기 세포의 생존능 감소와 사멸 방지 및 정상적인 노령화와 관련된 희미한 불빛에 대한 시력 저하 및 주변 간상세포-매개 시력, 중심의 추체세포 매개형 시력 저하 및 야간 시력 상실을 방지한다.
본 발명의 또 다른 구체예에서, 옵신 결합 제제는 국소화오류된 옵신 단백질의 분해를 촉진한다. 이 옵신 결합 제제의 유형은 "역효과를 낳는", "난파" 또는 "파괴형 샤프론"이라 칭해진다.
국소화오류된 옵신의 이러한 제제에 의한 분해 촉진에 의해 국소화오류된 단백질의 양이 감소되고, 이에 따라 광수용기 세포의 스트레스가 완화되어 여러가지 시각 상실 질환에서의 광수용기 세포의 생존능 감소와 사멸 방지 및 정상적인 노령화와 관련된 희미한 불빛에 대한 시력 저하 및 주변 간상세포-매개 시력, 중심의 추체세포 매개형 시력 저하 및 야간 시력 상실이 방지된다.
전술한 실시상태에서, 안과 질환은 습건형 황반변성, 색소망막염, 레티날 또는 황반이상증, 슈타가르트씨병(Stagardt's disease), 소르스비씨 이상증(Sorsby's dystrophy), 상염색체 우성 드루젠, 베스트씨 이상증, 황반이상증, 슈타르가르트씨병의 우성형, 노쓰캐롤라이나 황반이상증, 광독성, 색소망막염, 노화와 관련된 정상적인 시력 상실 및 노화와 관련된 야간 시력의 정상적인 손실 중 어느 한 가지 이상의 형태일 수 있다.
시력과 연관이 있는 옵신, 즉 GPCR (G-단백질 커플링된 수용체)은 11-시스-레티날과 함께 쉽게 재생되어 시각 색소인 로돕신을 형성한다. 이 색소는 11-시스-레티날의 알데히드기와 옵신 중의 L-라이신의 ε-아미노기 사이의 양성자화된 쉬프 염기의 형성에 의해 생산된다 (Matsumoto 및 Yoshizawa, Nature 1975 Dec 11;258(5535):523-6).
따라서, 본 발명은 야생형 및 돌연변이 옵신과 결합하여 11-시스 레티날이 옵신과 결합하여 로돕신을 형성하는 것을 방지하거나 이를 두고 경쟁함으로써, 11-시스-레티날과 다른 시각회로 산물의 형성을 억제하는 조성물 및 방법을 제공한다.
이 부위에 대한 결합은 워터 맵 기술에 의해 정의되는 바와 같이 11-시스 레티날 결합 포켓 중의 다양한 수화 부위에서 물을 대체 및/또는 대신할 수 있는 리간드의 능력에 의해 예측할 수 있다 "R" (도 1에는 수화 부위가 원형 또는 구형으로 표시되어 있다)로 표시되는데, 이 부위들은 단백질과 수소 결합 상호작용을 할 것으로 예상되는 물에 의해 점령되어 있다. 따라서, 이러한 물을 대체하는 리간드들은 리간드가 화합물이 결합 포켓을 차지하는 과정 중에 분해되는 수소 결합을 대체할 때, 적절히 표적화된 기능성을 이상적으로 가질 것이다.
본 발명에 따라, 리간드 결합 능력은 옵신 결합 포켓으로부터의 매우 불안정한 물을 효과적으로 대체하는 화합물에 의해 향상된다. 이 포켓을 약학적 샤프론이 차지하게 되면 단백질의 천연 3차원 입체 배열의 적절한 폴딩 및/또는 안정화를 유도하는, 리간드와 단백질 간에 상호작용이 일어나고 이는 다시 이 단백질을 적절히 프로세싱시켜 세포막 내의 적절한 위치로 트래피킹시킬 수 있다.
다른 한편, "D"로 표시된 (도 1) 수화 부위는 소수성 환경에 물을 위치시키므로 결합 화합물은 이들 물을 모두 비극성 치환기로 대체시키는 것이 가장 적합하며 이는 단백질의 소수성 환경을 컴플리멘트하는 것이다. 따라서, 소수성 분위기의 물을 방출하면서, 이와 같이 물이 방출될 때 물을 모방하는 작용을 할 수 있는 리간드 상에 관능기를 갖는 단백질과 수소 결합 상호반응을 하도록 재설정된 수화 부위 중의 물의 수소 결합을 대체함으로써, 최적의 강도와 효능을 얻을 수 있다. 별법으로, 도 1에서 "D"로 표시된 수화 부위의 물을 방출하고 (도 1에서) "R"로 표시된 수화 부위의 물을 동요시키지 않은 채로 놓아두어서, 결합된 리간드와의 환경이 리간드 점령 부재시 포켓 내의 이들 물의 고유한 안정성에 악영향을 미치지 않게 하면 강력하고 효과적인 화합물이 된다. 수화 부위는 수화 맵에 기초해서 리간드 부재시 물의 예측된 장소이다. 본 발명의 리간드의 결합은 다음의 가능한 4가지 메카니즘들 중 하나일 수 있다, 즉: (i) 수화 부위를 점령하고 있는 물을 방출시킨다 (ii) 리간드의 관능기에 의해 수화 부위 중의 물과 단백질 간의 수소 결합을 대체시킨다, (iii) 리간드의 결합 및 수화 부위 중의 물을 그대로 남겨 둔다 및 (iv) 수화 부위 중의 물과의 수소 결합 네트워크를 연장시키는 한편 물을 방출시키지 않는다.
한 가지 실시상태에서, 본 발명은 다음 화학식 1의 옵신 결합 리간드 및 약학적으로 허용가능한 그의 염을 제공한다:
[화학식 1]
A-B-Q-V
식 중,
A는:
Figure pat00003
Figure pat00004
Figure pat00005
B는:
1) -(CH2)n-;
Figure pat00006
여기서 n = 0, 1, 또는 2이고
E는:
1) -N(R22)-; 또는
2) 산소;
Q는:
1) -C(O)-;
2) -(CH-2)a-;
3) -S(O2)-; 또는
4) -CH2-C(O)-
여기서 a는 1 또는 2;
V는:
Figure pat00007
Figure pat00008
여기서 b는 1 또는 2이고 a는 1 또는 2;
Y는:
1) NR22;
2) N-Q-U;
3) CR22R23;
4) 산소;
5) S(O)n;
6) N-C(S)-NR22R23;
7) N-(C=N-CN)-NR22R23;
8) N-(C=N-SO2CH3)-NR22R23;
9) C=NOR22 ;
10) C=N-NR22R23;또는
11) C-Q-U;
이고 n는 0, 1 또는 2;
U는:
1) NR22R23;
2) 저급 알킬;
3) 할로알킬;
4) 알콕시;
5) OR22; 또는
6) 수소;
X는:
1) 수소
2) 알킬; 또는
3) -C≡CR9;
R1 및 R2는 독립적으로:
1) -CH3; 또는
2) -CH2CH3;
R3는:
1) 수소;
2) -CH3; 또는
3) -CH2CH3;
Ra, 및 Rb은 각각 독립적으로:
1) 수소;
2) 중수소; 또는
3) -CH3
Rc, 및 Rd,은 각각 독립적으로:
1) 수소;
2) 알콕시;
3) 저급 알킬; 또는
4) 알케닐;
R4는:
1) -CH3;
2) -CF3;
3) -C2H5; 또는
4) -C3H5;
R5, R6 및 R7은 각각 독립적으로:
1) 수소;
2) 저급 알킬;
3) 할로겐;
4) 디알킬아민;
5) 니트로; 또는
6) 디알킬아민;
Z는:
1) CR3;
2) CH; 또는
3) 질소;
R8은:
1) -CH-2-; 또는
2) -C(O)-;
R9, R14 및 R16은 각각 독립적으로:
1) 수소; 또는
2) -CH3;
R10은:
1) N-R13;
2) 황; 또는
3) 산소;
R11은:
1) =N-; 또는
2) =C(CH3)-;
R12는
1) 저급 알킬;
2) 알콕시; 또는
3) 할로알킬;
R13은:
1) 페닐;
2) 저급 알킬; 또는
3) 할로알킬;
R15는:
1) 수소; 또는
2) -C(O)CH3;
R17 및 R18은 함께:
1) -(CH2)4-; 또는
2) -CH=CH-CH=CH-
R19 및 R20은 함께:
1) -CH2-C(CH3)2-CH2-C(O)-; 또는
2) -CH=CH-CH=CH-;
R21은:
1) 수소;
2) -C(O)CH3;
3) -CH3; 또는
4) -CH2CH3;
R22 및 R23은 각각 독립적으로:
1) 수소; 또는
2) 저급 알킬;
R24 및 R25은 각각 독립적으로:
1) 수소; 또는
2) -CH3;
R26은:
1) NR22R23: 또는
2) 알콕시이다.
또한, R1와 R2, 또는 Ra와 Rb는 이들이 결합한 탄소와 함께 시클로프로필을 형성한다;
R24 및 R25는 이들이 결합한 2개의 탄소들과 함께 시클로프로필을 형성할 수 있다;
R24 및 R25는 옥소를 형성할 수 있다;
또한, T가:
1) 산소;
2) -N(R16)-; 또는
3) 황이면;
E는:
1) 산소;
2) -N(R16)-;
3) 황; 또는
4) -C(O)-이다.
최광의에서, R1, R2 및 R3은 각각 독립적으로 저급 알킬이다.
바람직한 실시상태에서, 이 화합물은 화학식 1의 구조를 갖되 여기서 V는 다음과 같은 것이다:
Figure pat00009
그리고 a 및 b은 각각 독립적으로 1 또는 2, 더욱 좋기로는 a 또는 b 중 적어도 하나는 1인 것이 좋고, 가장 좋기로는 a 및 b 두개가 모두 1이면 가장 바람직하며, X는 수소, R23, R24 및 R25는 수소, Y는 C-C(O)NR22R23 또는 N-C(O)NR22R23 이고 R22 및 R23 는 두 가지 모두 수소인 것이다.
본 발명의 바람직한 실시예에서, 화합물은 화학식 1의 구조를 갖는 화합물로서 단 A는 다음과 같은 것이다:
Figure pat00010
바람직한 실시상태에서, R1와 R2 중 한 개 이상은 메틸인 것이 좋고, 더욱 좋기로는 두 개 모두가 메틸이고, R3는 수소 또는 메틸기이다. 또 다른 특정 실시상태에서, Ra 및 Rb 는 독립적으로 수소, 중수소 또는 메틸, 좋기로는 수소 또는 메틸이고 Rc 및 Rd는 좋기로는 수소 또는 저급 알킬, 가장 좋기로는 수소 또는 메틸인 것이다.
또 다른 바람직한 실시상태에서, 화합물은 화학식 1의 구조를 갖는 화합물로서 단 A는 다음과 같은 것이다:
Figure pat00011
바람직한 실시상태에서, R1, R2 및 R3는 각각 메틸이고 R24는 메틸 또는 수소, 좋기로는 수소이다.
또 다른 특정 실시상태에서, Ra 및 Rb는 독립적으로 수소, 중수소 또는 메틸, 좋기로는 수소 또는 메틸, Rc 및 Rd는 수소 저급 알킬, 알콕시 또는 알콕시메틸, 더욱 좋기로는 수소, 알콕시 또는 저급 알킬, 가장 좋기로는 수소이다.
또 다른 바람직한 실시상태에서, 화합물은 B가 -CH=CH-, -CH-2-CH2- 또는 -CH2-N(R22)-, 좋기로는 -CH=CH 또는 -CH-2-CH2-, 및 가장 좋기로는 -CH=CH-인 화학식 1의 화합물인 것이 좋다.
또 다른 바람직한 실시상태에서, 화합물은 Q가 -C(O)- 또는 -CH-2- , 가장 좋기로는 -C(O)-인 화학식 1의 화합물인 것이 좋다.
또 다른 바람직한 실시상태에서, 화합물은 X가 수소, 저급 알킬 또는 -C=CR9, 더욱 좋기로는 수소 또는 -C=CR9 (여기서 R9 는 수소 또는 메틸임)인 화학식 1의 화합물인 것이 좋다.
또 다른 바람직한 실시상태에서, 화합물은 Y가 산소 또는 N-C(O)-NR22R23, 더욱 좋기로는 N-C(O)-NR22R23, 가장 좋기로는 N-C(O)-NR22R23 (여기서 R22 및 R23는 수소이다)인 화학식 1의 화합물인 것이 좋다.
또 다른 바람직한 실시상태에서, 화합물은 R24 및 R25 가 각각 수소인 화학식 1의 화합물인 것이 좋다.
또 다른 바람직한 실시예에서, 본 발명은 다음 화학식 2의 옵신 결합 리간드 및 그의 약학적으로 허용가능한 염을 제공한다:
[화학식 2]
Figure pat00012
식 중 W는:
1) -OR22;
2) -NR22R23;
3) -N(R22)-C(O)-NR22R23;
4) -O-C(O)-NR22R23;
5) -N(R22)-C(S)-NR22R23;
6) -O-C(S)-NR22R23;
7) -S-C(O)-NR22R23;
8) -N(R22)-(C=N-CN)-NR22R23;
9) -N(R22)-(C=N-SO-2Me)-NR22R23; 또는
10) -C(O)N(R9)N(R14)(R16);
바람직한 예에서, 화합물은 A가 다음과 같은 것인 화학식 2의 구조를 갖는 화합물인 것이좋다:
Figure pat00013
바람직한 실시상태에서, R1 및 R2 중 하나 이상은 메틸 또는 에틸기, 좋기로는 메틸기이고, R3은 수소 또는 메틸기인 것이 좋다. 또 다른 특정 실시상태에서, Ra 및 Rb는 독립적으로 수소, 중수소 또는 메틸, 좋기로는 수소 또는 메틸이고, Rc 및 Rd는 수소 저급 알킬, 알콕시 또는 알콕시메틸, 더욱 좋기로는 수소, 알콕시 또는 저급 알킬, 가장 좋기로는 수소인 것이 좋다.
또 다른 바람직한 예에서, A가 다음과 같은 화학식 2의 화합물이 좋다:
Figure pat00014
바람직한 실시상태에서, R1, R2, 및 R3는 에틸 또는 메틸기, 더욱 좋기로는 메틸기이고 R24는 메틸 또는 수소, 좋기로는 수소인 것이 좋다. 또 다른 특정 실시상태에서, Ra 및 Rb는 독립적으로 수소, 중수소 또는 메틸, 좋기로는 수소 또는 메틸이고 Rc 및 Rd는 수소 저급 알킬, 알콕시 또는 알콕시메틸, 더욱 좋기로는 수소, 알콕시 또는 저급 알킬, 가장 좋기로는 수소인 것이 좋다.
또 다른 바람직한 실시예에서, 화합물은 B가 -CH=CH-, -CH-2-CH2- 또는 -CH2-N(R22)-, 좋기로는 -CH=CH 또는 -CH-2-CH2-, 및 가장 좋기로는 -CH=CH-인 화학식 2의 화합물인 것이 좋다.
또 다른 바람직한 실시예에서, 화합물은 Q가 -C(O)- 또는 -CH-2- 가장 좋기로는 -C(O)-인 화학식 2의 화합물인 것이 좋다.
또 다른 바람직한 실시예에서, 화합물은 p가 0 또는 1, 가장 좋기로는 1인 화학식 2의 화합물인 것이 좋다.
또 다른 바람직한 실시예에서, 화합물은 W가 -O-C(O)-NR22R23 또는 -N(R9)-C(O)-NR22R23, 더욱 좋기로는 -N(R9)-C(O)-NR22R23, 가장 좋기로는 -N(R9)-C(O)-NR22R23 이고 R9, R22 및 R23 각각은 수소인 화학식 2의 화합물인 것이 좋다.
특정 실시상태애ㅔ서, 화학식 1 또는 화학식 2의 옵신 결합 화합물은 다음과 같은 화합물 및 이들의 모든 약학적으로 허용가능한 염, 수화물 또는 용매화합물인 것이 좋다(여기서 각각의 화합물 번호는 이들이 제조된 실시예의 번호에 대응한다):
(E)-3-(2,6,6-트리메틸시클로헥스-1-에닐)아크릴아미드 (화합물 2b);
(E)-N-메틸-3-(2,6,6-트리메틸시클로헥스-1-에닐)아크릴아미드 (화합물 3);
(E)-N,N-디메틸-3-(2,6,6-트리메틸시클로헥스-1-에닐)아크릴아미드 (화합물 4);
(E)-1-(피페리딘-1-일)-3-(2,6,6-트리메틸시클로헥스-1-에닐)프로-2-펜-1-온 (화합물 5);
(E)-1-모르폴리노-3-(2,6,6-트리메틸시클로헥스-1-에닐)프로-2-펜-1-온 (화합물 6);
(E)-3차-부틸 4-(3-(2,6,6-트리메틸시클로헥스-1-에닐)아크릴로일)-1,4-디아제판-1 카르복실레이트 (화합물 7a);
(E)-1-(1,4-디아제판-1-일)-3-(2,6,6-트리메틸시클로헥스-1-에닐)프로-2-펜-1-온 (화합물 7b);
(E)-1-(4-메틸-1,4-디아제판-1-일)-3-(2,6,6-트리메틸시클로헥스-1-에닐)프로-2-펜-1-온 (화합물 7c);
(E)-1-(4-에틸-1,4-디아제판-1-일)-3-(2,6,6-트리메틸시클로헥스-1-에닐) 프로-2-펜-1-온 (화합물 8);
(E)-1-(4-프로필-1,4-디아제판-1-일)-3-(2,6,6-트리메틸시클로헥스-1-에닐) 프로-2-펜-1-온 (화합물 9);
(E)-1-(4-아세틸-1,4-디아제판-1-일)-3-(2,6,6-트리메틸시클로헥스-1-에닐) 프로-2-펜-1-온 (화합물 10);
(E)-1-(4-프로피오닐-1,4-디아제판-1-일)-3-(2,6,6-트리메틸시클로헥스-1-에닐)프로-2-펜-1-온 (화합물 11);
(E)-1-(4-(2,2,2-트리플루오로아세틸)-1,4-디아제판-1-일)-3-(2,6,6-트리메틸 시클로헥스-1-에닐)프로-2-펜-1-온 (화합물 12);
(E)-4-(3-(2,6,6-트리메틸시클로헥스-1-에닐)아크릴로일)-1,4-디아제판-1-카르복사미드 (화합물 13);
(E)-N-메틸-4-(3-(2,6,6-트리메틸시클로헥스-1-에닐)아크릴로일)-1,4-디아제판-1-카르복사미드 (화합물 14);
(E)-N-에틸-4-(3-(2,6,6-트리메틸시클로헥스-1-에닐)아크릴로일)-1,4-디아제판-1-카르복사미드 (화합물 15);
(E)-N-프로필-4-(3-(2,6,6-트리메틸시클로헥스-1-에닐)아크릴로일)-1,4-디아제판-1-카르복사미드 (화합물 16);
(E)-N-이소프로필-4-(3-(2,6,6-트리메틸시클로헥스-1-에닐)아크릴로일)-1,4-디아제판-1-카르복사미드 (화합물 17);
(E)-메틸-4-(3-(2,6,6-트리메틸시클로헥스-1-에닐)아크릴로일)-1,4-디아제판-1-카르복실레이트 (화합물 18);
(E)-에틸-4-(3-(2,6,6-트리메틸시클로헥스-1-에닐)아크릴로일)-1,4-디아제판-1-카르복실레이트 (화합물 19);
(E)-1-(4-(메틸설포닐)-1,4-디아제판-1-일)-3-(2,6,6-트리메틸시클로-헥스-1-에닐)프로-2-펜-1-온 (화합물 20);
(E)-1-(4-(에틸설포닐)-1,4-디아제판-1-일)-3-(2,6,6-트리메틸시클로헥스-1-에닐)프로-2-펜-1-온 (화합물 21);
(E)-1-(4-(트리플루오로메틸설포닐)-1,4-디아제판-1-일)-3-(2,6,6-트리-메틸시클로헥스-1-에닐)프로-2-펜-1-온 (화합물 22);
(E)-N-메틸-4-(3-(2,6,6-트리메틸시클로헥스-1-에닐)아크릴로일)-1,4-디아제판-1-카르보티오아미드 (화합물 23);
(E)-N-에틸-4-(3-(2,6,6-트리메틸시클로헥스-1-에닐)아크릴로일)-1,4-디아제판-1-카르보티오아미드 (화합물 24);
(E)-N-프로필-4-(3-(2,6,6-트리메틸시클로헥스-1-에닐)아크릴로일)-1,4-디아제판-1-카르보티오아미드 (화합물 25);
(E)-N-이소프로필-4-(3-(2,6,6-트리메틸시클로헥스-1-에닐)아크릴로일)-1,4-디아제판-1-카르보티오아미드 (화합물 26);
(E)-1-(4-메틸피페라진-1-일)-3-(2,6,6-트리메틸시클로헥스-1-에닐)프로-2-펜-1-온 (화합물 27),
(E)-3차-부틸 4-(3-(2,6,6-트리메틸시클로헥스-1-에닐)아크릴로일) 피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 28a);
(E)-1-(피페라진-1-일)-3-(2,6,6-트리메틸시클로헥스-1-에닐)프로-2-펜-1-온 (화합물 28b);
(E)-1-(4-에틸피페라진-1-일)-3-(2,6,6-트리메틸시클로헥스-1-에닐)프로-2-펜-1-온 (화합물 28c);
(E)-1-(4-프로필피페라진-1-일)-3-(2,6,6-트리메틸시클로헥스-1-에닐)프로-2-펜-1-온 (화합물 29),
(E)-1-(4-아세틸피페라진-1-일)-3-(2,6,6-트리메틸시클로헥스-1-에닐)프로-2-펜-1-온 (화합물 30);
(E)-1-(4-프로피오닐피페라진-1-일)-3-(2,6,6-트리메틸시클로헥스-1-에닐) 프로-2-펜-1-온 (화합물 31);
(E)-1-(4-(2,2,2-트리플루오로아세틸) 피페라진-1-일)-3-(2,6,6-트리메틸시클로-헥스-1-에닐)프로-2-펜-1-온 (화합물 32);
(E)-4-(3-(2,6,6-트리메틸시클로헥스-1-에닐)아크릴로일)피페라진-1-카르복사미드 (화합물 33);
(E)-N-메틸-4-(3-(2,6,6-트리메틸시클로헥스-1-에닐)아크릴로일)피페라진-1- 카르복사미드 (화합물 34);
(E)-N-에틸-4-(3-(2,6,6-트리메틸시클로헥스-1-에닐)아크릴로일)피페라진-1- 카르복사미드 (화합물 35);
(E)-N-프로필-4-(3-(2,6,6-트리메틸시클로헥스-1-에닐)아크릴로일)피페라진-1- 카르복사미드 (화합물 36);
(E)-N-이소프로필-4-(3-(2,6,6-트리메틸시클로헥스-1-에닐)아크릴로일)피페라진-1- 카르복사미드 (화합물 37);
(E)-메틸 4-(3-(2,6,6-트리메틸시클로헥스-1-에닐)아크릴로일) 피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 38);
(E)-에틸 4-(3-(2,6,6-트리메틸시클로헥스-1-에닐)아크릴로일) 피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 39);
(E)-1-(4-(메틸설포닐)피페라진-1-일)-3-(2,6,6-트리메틸시클로헥스-1-에닐)프로-2-펜-1-온 (화합물 40);
(E)-1-(4-(에틸설포닐)피페라진-1-일)-3-(2,6,6-트리메틸시클로헥스-1-에닐)프로-2-펜-1-온 (화합물 41);
(E)-1-(4-(트리플루오로메틸설포닐)피페라진-1-일)-3-(2,6,6-트리메틸-시클로헥스-1-에닐)프로-2-펜-1-온 (화합물 42);
(E)-N-메틸-4-(3-(2,6,6-트리메틸시클로헥스-1-에닐)아크릴로일)피페라진-1-카르보티오아미드 (화합물 43);
(E)-N-에틸-4-(3-(2,6,6-트리메틸시클로헥스-1-에닐)아크릴로일)피페라진-1-카르보티오아미드 (화합물 44);
(E)-N-프로필-4-(3-(2,6,6-트리메틸시클로헥스-1-에닐)아크릴로일)피페라진-1-카르보티오아미드 (화합물 45);
(E)-N-이소프로필-4-(3-(2,6,6-트리메틸시클로헥스-1-에닐)아크릴로일)피페라진-1-카르보티오아미드 (화합물 46);
(S,E)-1-(3-히드록시피롤리딘-1-일)-3-(2,6,6-트리메틸시클로헥스-1-에닐) 프로-2-펜-1-온 (화합물 47);
(S,E)-1-(3-(2,6,6-트리메틸시클로헥스-1-에닐)아크릴로일)피롤리딘-3-일 카르바메이트 (화합물 48);
(E)-3차-부틸 1-(3-(2,6,6-트리메틸시클로헥스-1-에닐)아크릴로일) 피롤리딘-3-일 카르바메이트 (화합물 49a);
(E)-1-(3-아미노피롤리딘-1-일)-3-(2,6,6-트리메틸시클로헥스-1-에닐)프로-2-펜-1-온 (화합물 49b);
(E)-1-(1-(3-(2,6,6-트리메틸시클로헥스-1-에닐)아크릴로일) 피롤리딘-3-일) 우레아 (화합물 50);
1-(피페라진-1-일)-3-(2,6,6-트리메틸시클로헥스-1-에닐)프로판-1-온 (화합물 51a);
4-(3-(2,6,6-트리메틸시클로헥스-1-에닐)프로파노일)피페라진-1-카르복사미드 (화합물 51b);
(S,E)-2-메틸-4-(3-(2,6,6-트리메틸시클로헥스-1-에닐)아크릴로일)피페라진-1-카르복사미드 (화합물 52);
(R,E)-2-메틸-4-(3-(2,6,6-트리메틸시클로헥스-1-에닐)아크릴로일)피페라진-1-카르복사미드 (화합물 53);
(E)-N 2 -메틸-4-(3-(2,6,6-트리메틸시클로헥스-1-엔-1-일)아크릴로일)피페라진-1,2-디카르복사미드 (화합물 54);
N 1 -((2,6,6-트리메틸시클로헥스-1-엔-1-일)메틸)피페라진-1,4-디카르복사미드 (화합물 55);
N 1-메틸-N 1-((2,6,6-트리메틸시클로헥스-1-엔-1-일)메틸)피페라진-1,4-디카르복사미드 (화합물 56);
(R,E)-1-(3-히드록시피롤리딘-1-일)-3-(2,6,6-트리메틸시클로헥스-1-엔-1-일)프로-2-펜-1-온 (화합물 57a);
(R,E)-1-(3-(2,6,6-트리메틸시클로헥스-1-엔-1-일)아크릴로일) 피롤리딘-3-일 카르바메이트 (화합물 57b);
(S,E)-1-(3-아미노피롤리딘-1-일)-3-(2,6,6-트리메틸시클로헥스-1-엔-1-일)프로-2-펜-1-온 (화합물 58b);
(S,E)-1-(1-(3-(2,6,6-트리메틸시클로헥스-1-엔-1-일)아크릴로일)피롤리딘-3-일)우레아 (화합물 58c);
(R,E)-1-(3-아미노피롤리딘-1-일)-3-(2,6,6-트리메틸시클로헥스-1-엔-1-일)프로-2-펜-1-온 (화합물 59b);
(R,E)-1-(1-(3-(2,6,6-트리메틸시클로헥스-1-엔-1-일)아크릴로일) 피롤리딘-3-일)우레아 (화합물 59c);
(E)-4-(3-(2,6,6-트리메틸-3-옥소시클로헥스-1-엔-1-일)아크릴로일)피페라진-1-카르복사미드 (화합물 60);
(E)-4-(3-(3,3-디플루오로-2,6,6-트리메틸시클로헥스-1-엔-1-일)아크릴로일)피페라진-1-카르복사미드 (화합물 62);
(E)-4-(3-(3,3-디듀테로-2,6,6-트리메틸시클로헥스-1-엔-1-일)아크릴로일) 피페라진-1-카르복사미드 (화합물 63);
(E)-1-(1,1-디옥시도티오모르폴리노)-3-(2,6,6-트리메틸시클로헥스-1-엔-1-일)프로-2-펜-1-온 (화합물 68);
(E)-1-티오모르폴리노-3-(2,6,6-트리메틸시클로헥스-1-엔-1-일)프로-2-펜-1-온 (화합물 69);
(E)-1-(4,4-디플루오로피페리딘-1-일)-3-(2,6,6-트리메틸시클로헥스-1-엔-1-일)프로-2-펜-1-온 (화합물 70);
(±)-4-((E)-3-((1,6-anti)-2,2,6-트리메틸시클로헥실)아크릴로일)피페라진-1-카르복사미드 (화합물 71);
(-)-4-((E)-3-((1R, 6R)-2,2,6-트리메틸시클로헥실)아크릴로일)피페라진-1-카르복사미드 (화합물 72);
(+)-4-((E)-3-((1S,6S)-2,2,6-트리메틸시클로헥실)아크릴로일)피페라진-1-카르복사미드 (화합물 73);
(E)-1-모르폴리노-3-((1R,6R)-2,2,6-트리메틸시클로헥실)프로-2-펜-1-온 (화합물 74);
(E)-1-티오모르폴리노-3-((1R,6R)-2,2,6-트리메틸시클로헥실)프로-2-펜-1-온 (화합물 75);
(E)-4-(3-(2,5,6,6-테트라메틸시클로헥스-2-엔-1-일)아크릴로일)피페라진-1-카르복사미드 (화합물 76);
4-((E)-3-((1R,6S)-2,2,6-트리메틸시클로헥실)아크릴로일)피페라진-1-카르복사미드 및 4-((E)-3-((1S,6R)-2,2,6-트리메틸시클로헥실)아크릴로일)피페라진-1-카르복사미드 (화합물 77);
(E)-4-(3-(2,6,6-트리메틸시클로헥스-2-엔-1-일)아크릴로일)피페라진-1-카르복사미드 (화합물 78);
4-(3-((1R,6S)-2,2,6-트리메틸시클로헥실)프로파노일)피페라진-1-카르복사미드 (화합물 80);
4-(3-((1S,6R)-2,2,6-트리메틸시클로헥실)프로파노일)피페라진-1-카르복사미드 (화합물 81):
(E)-1-모르폴리노-3-((1S,6S)-2,2,6-트리메틸시클로헥실)프로-2-팬-1-온 (화합물 83);
(E)-4-(3-(2,6,6-트리메틸시클로헥스-1-엔-1-일)아크릴로일)피페라진-2-온 (화합물 84);
(E)-4-(3-(2,6,6-트리메틸시클로헥스-1-엔-1-일)아크릴로일)피페라진-1-카르브알데히드 (화합물 88);
(E)-1-(4-(2-히드록시에틸)피페라진-1-일)-3-(2,6,6-트리메틸시클로헥스- 1-엔-1-일)프로-2-펜-1-온 (화합물 89);
(±)-3,5-시스-디메틸-4-((E)-3-(2,6,6-트리메틸시클로헥스-1-엔-1-일)아크릴로일) 피페라진-1-카르복사미드 (화합물 90);
(E)-4-(3-(2,2,6-트리메틸비시클로[4.1.0]헵탄-1-일)아크릴로일) 피페라진-1-카르복사미드 (화합물 91);
(±)-(E)-4-(3-(4-메톡시-2,6,6-트리메틸시클로헥스-1-엔-1-일) 아크릴로일) 피페라진-1-카르복사미드 (화합물 93);
(-)-((1R,6S)-2,2,6-트리메틸시클로헥실)메틸 4-카르바모일피페라진-1-카르복실레이트 (화합물 94);
(-)-N 1-메틸-N 1-(((1R,6S)-2,2,6-트리메틸시클로헥실)메틸) 피페라진-1,4-디카르복사미드 (화합물 95);
N 1-(((1R,6S)-2,2,6-트리메틸시클로헥실)메틸)피페라진-1,4-디카르복사미드 (화합물 96);
4-(((1R,6S)-2,2,6-트리메틸시클로헥산카르복사미도)메틸)피페리딘-1-카르복사미드 (화합물 97);
(E)-2-(1-(3-(2,6,6-트리메틸시클로헥스-1-엔-1-일)아크릴로일)아제티딘-3-일) 아세트아미드 (화합물 98);
(E)-3-(3-(2,6,6-트리메틸시클로헥스-1-엔-1-일)아크릴아미도) 아제티딘-1-카르복사미드 (화합물 99);
(E)-3-(2,6,6-트리메틸시클로헥스-1-엔-1-일)-N-(2-우레이도에틸)아크릴아미드 (화합물 100);
(E)-N-메틸-N-(2-(1-메틸우레이도)에틸)-3-(2,6,6-트리메틸시클로헥스-1-엔-1-일) 아크릴아미드 (화합물 101);
(E)-4-(3-(2,2,6,6-테트라메틸시클로헥실)아크릴로일)피페라진-1-카르복사미드 (화합물 102);
(E)-1-모르폴리노-3-(2,2,6,6-테트라메틸시클로헥실)프로-2-펜-1-온 (화합물 103);
N-((2,6,6-트리메틸시클로헥스-1-엔-1-일)메틸)모르폴린-4-카르복사미드 (화합물 104);
(E)-4-(3-(2,6,6-트리메틸시클로헥스-1-엔-1-일)아크릴로일) 피페라진-1-카르보티오아미드 (화합물 105);
(E)-2-에티닐-4-(3-(2,6,6-트리메틸시클로헥스-1-엔-1-일)아크릴로일)피페라진-1-카르복사미드 (화합물 106);
(E)-1-모르폴리노-3-(3,3,6,6-테트라메틸시클로헥스-1-에닐)프로-2-펜-1-온 (화합물 107);
(E)-4-(3-(3,3,6,6-테트라메틸시클로헥스-1-에닐)아크릴로일) 피페라진-1-카르복사미드 (화합물 108);
(E)-4-(3-(3,6,6-트리메틸시클로헥스-1-에닐)아크릴로일)피페라진-1-카르복사미드 (화합물 109); 및
(E)-1-모르폴리노-3-(3,6,6-트리메틸시클로헥스-1-에닐)프로-2-펜-1-온 (화합물 110).
모든 화합물 명칭은 ChemBioDraw 11.0.1을 이용하여 유추하였다.
본 발명의 화합물의 특히 바람직한 예, 상기 화합물의 사용 방법은 표 1의 화합물을 포함하며 화합물 6, 13, 14, 22, 33, 34, 37, 44, 45, 50, 51a, 51b, 52, 53, 55, 57, 60b, 63, 69, 71, 72, 73, 80, 84, 105, 106, 107, 108, 109 및 110 및 이들의 약학적으로 허용가능한 염, 용매화합물 및 수화물을 포함한다.
본 발명의 또 다른 실시상태는 옵신 결합 화합물의 옵신 결합 리간드 대사산물을 제공한다. 이 대사산물들의 비제한적인 예로는 옵신 결합 화합물의 분해 산물, 가수분해 산물, 글루코노라이드 애덕트 등 및 옵신 화합물의 약학적으로 허용가능한 염을 들 수 있다.
본 발명의 또 다른 실시상태는 본 발명의 신규 화합물의 제조 방법 및 이러한 방법에 유용한 중간체를 제공한다. 반응은 시약에 적합한 용매 중에서 수행되며 사용된 물질들은 실시되는 트랜스포메이션에 적합한 것들이다. 유기 합성 분야의 당업자라면 분자 중에 존재하는 관능성이 제안된 화학적 변형과 일치하여야만 함을 이해할 것이다. 이것은 필요에 따라 합성 단계의 순서, 요구되는 보호기, 및 탈보호 조건 등와 관련하여 실험자의 판단을 필요로 한다. 출발 물질 상의 치환기들은 설명된 방법들 중 일부에 필요한 반응 조건의 일부와 양립하지 못하는 것일 수 있으나, 반응 조건과 양립가능한 별법 및 치환기들을 당업자라면 쉽게 생각해낼 수 있을 것이다. 합성 반응이 진행되는 동안 티올, 아미노 및 알코올기를 바람직하지 못한 반응으로부터 보호하는데 황, 질소 및 산소 보호기를 사용하는 것은 당업자에게 잘 알려져 있으며 이러한 많은 보호기는 예컨대, Greene 및 Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, Third Edition, John Wiley & Sons, New York (1999)에 설명되어 있다.
1개 이상의 비대칭 탄소 원자를 갖는 본 발명의 화합물들은 광학적으로 순수한 거울상이성질체, 순수한 부분입체이성질체, 거울상이성질체의 혼합물, 부분입체이성질체의 혼합물, 거울상이성질체의 라세미 혼합물, 부분입체이성질체적인 라세메이트 또는 부분입체이성질체적 라세메이트의 혼합물로서 존재할 수 있다. 본 발명에는 이러한 모든 이성질체와 그의 혼합물이 포함된다.
본 발명에 설명된 화학 반응은 일반적으로 본 발명의 화합물을 제조하는데 있어서 최광의의 용어로서 설명된다. 때로, 반응은 본 발명에 개시된 범위의 각각의 화합물에 설명된 대로 적용되지 않을 수도 있다. 당업자라면 이러한 종류의 화합물을 쉽게 인식할 수 있을 것이다. 이러한 모든 경우에 있어서는 예컨대 간섭기를 적절히 보호하거나, 다른 통상적인 시약으로 바꾸거나, 반응 조건을 적절히 변형하거나, 본 발명에 설명된 다른 반응 또는 통상적인 반응을 이용하는 등의 당업자에게 잘 알려진 변형법을 이용하여, 반응을 성공적으로 수행함으로써 본 발명의 대응하는 화합물을 제조하는데 응용할 수 있을 것이다. 모든 제조방법에서, 모든 출발물질은 공지의 출발 물질로부터 쉽게 제조되는 것이거나 공지 물질이다.
본 발명의 방법
본 발명은 옵신 단백질을 상기 옵신 단백질에 가열적으로 결합하는 소형 분자 리간드와 접촉시켜 상기 결합 포켓 내의 11-시스-레티날 결합을 억제함으로써, 습건형 ARMD와 연관된 독성 시각회로 생성물의 형성을 감소시키고 강렬한 광 자극의 결과로 인한 과도한 로돕신 활성화와 연관된 광세포 자멸사를 감소시키는 것을 포함하여 이루어지는, 독성 시각회로 생성물의 형성을 감소시키기 위한 화학식 1 및/또는 II의 화합물의 제조 방법을 제공한다.
본 발명은 또한 시각회로 생성물의 형성이나 축적 또는 세포자멸사적 광세포 사멸과 관련이 있는 안과 질환에 걸릴 위험이 있는 포유동물에게 투여하는 것을 포함하는, 포유동물에서 광독성 위험을 치료, 예방 또는 감소시키는데 있어서, 화학식 1 및/또는 화학식 2의 화합물의 사용 방법에 관한 것이다.
본 발명은 또한 시각회로 생성물의 형성이나 축적 또는 세포자멸사적 광세포 사멸과 관련이 있는 안과 질환에 걸릴 위험이 있는 포유동물에게, 상기 포유동물의 눈에 존재하는 옵신 단백질과 가역적으로 결합하는 (예컨대 레티날 결합 포켓 또는 그 근방에서) 소형 분자 리간드의 유효량을 투여하여 예컨대, 상기 결합 포켓 내의 11-시스-레티날 결합을 억제함으로써 광독성과 광세포 자멸사를 감소시키는 것을 포함하는, 포유동물에서 광독성 위험을 치료, 예방 또는 감소시키는데 있어서, 화학식 1 및/또는 화학식 2의 화합물의 사용 방법을 제공한다.
본 발명은 또한 돌연변이 옵신의 부적절한 폴딩 및 트래피킹과 연관된 RP의 위험이 있는 포유동물에게, 상기 포유동물의 눈에 존재하는 옵신 단백질과 가역적으로 결합하는 (예컨대 레티날 결합 포켓 또는 그 근방에서) 소형 분자 리간드의 유효량을 투여하여 예컨대, 상기 결합 포켓 내의 11-시스-레티날 결합을 억제함으로써 RP에 의해 야기되는 시력 상실을 감소시키는 것을 포함하는, 포유동물에서 RP의 위험을 치료, 예방 또는 감소시키는데 있어서, 화학식 1 및/또는 화학식 2의 화합물의 사용 방법을 제공한다.
이러한 방법의 특정 실시예에서, 소형 분자 리간드는 옵신에 대한 결합에 선택적이고 및/또는 상기 소형 분자 리간드는 상기 옵신 단백질의 레티날 결합 포켓 중 상기 옵신에 결합하고 및/또는 소형 분자 리간드는 상기 옵신 단백질에 결합하여, 상기 소형 분자 리간드가 존재하고 및/또는 포유동물이 인간일 때, 11-시스-레티날이 상기 옵신 단백질과 접촉될 때 상기 옵신 단백질에 대한 상기 11-시스-레티날의 공유 결합을 저해한다.
한가지 실시상태에서, 광독성은 안과학적 공정, 에컨대 안과 외과수술과 관련된 것이다. 상기 제제는 상기 외과수술 전, 도중 또는 후 (또는 이러한 시기 중 1회 이상)에 투여될 수 있다.
본 발명의 방법의 특정 실시상태에서, 천연 옵신 단백질은 세포, 예컨대 간상세포, 좋기로는 포유동물 및 더욱 좋기로는 인간의 간상세포에 존재하는 것이 좋다. 특정 실시상태에서, 본 발명의 소형 분자 리간드는 옵신의 결합 포켓에서 11-시스-레티날의 결합을 억제하여 시각회로를 둔화시킴으로써 올-트랜스-레티날 또는 그로부터 형성되는 유독한 시각회로 생성물, 예컨대 리포퓨신 또는 N-레티닐리덴-N-레티닐에탄올아민(A2E)의 형성을 저감시킨다. 별법으로, 과도한 로돕신 활성화에 기인하는 광세포 자멸사는 로돕신 형성의 억제에 의해 저감 또는 억제된다. 이에 더하여, RP와 관련된 돌연변이 옵신 단백질의 부적절한 폴딩 및 트래피킹도 감소된다.
본 발명의 방법에서, 투여는 좋기로는 국소 투여 (예컨대 눈세척액에 의함) 또는 전신 투여 (경구, 안구내 주사 또는 안구주변 주사를 포함한다)에 의하여 행한다. 바람직한 예로서, 치료하고자 하는 안과 질환은 광독성, 예컨대 망막 또는 백내장 수술과 같은 눈에 대한 외과수술로 인한 광독성이다.
본 발명은 또한 화학식 1 및/또는 화학식 2의 화합물의 유효량을 약학적으로 허용가능한 담체 중에 포함하는 안과용 조성물도 포함하며, 여기서, 상기 제제는 상기 옵신 단백질에 비공유적으로 비가역적으로 결합하여 (예컨대 레티날 결합 포켓에서 또는 그 근방에서) 상기 포켓에서 11-시스-레티날 결합을 억제하는 것으로, 좋기로는 소형 분자 리간드는 옵신 단백질에 선택적인 것이 바람직하다.
본 발명은 또한 :
(a) 11-시스-레티날 존재 하에 시험 화합물과 11-시스-레티날의 천연 옵신 단백질에 대한 결합을 촉진하는 조건 하에서 천연 옵신 단백질을 시험 화합물과 접촉시키고; 및
(b) 상기 시험 화합물이 존재하지않는 경우의 로돕신 형성 비율에 대한 시험화합물이 존재하는 경우의 로돕신 형성 비율로서 가역적인 감소를 측정함으로써,
포유동물의 눈에서 광독성을 감소시키는 소형 분자 리간드로서 상기 시험 화합물이 작용하는지를 동정하는 것을 포함하여 이루어지는, 포유동물의 눈에서 광독성을 감소시키는 소형 분자 리간드를 동정하기 위한 스크리닝 방법도 제공한다.
본 발명의 전형적인 경쟁 분석법에서, 화합물은 옵신 단백질의 레티날 결합 포켓을 봉쇄(tie up)하는 것으로 여겨진다. 따라서, 분석법은 11-시스-레티날 또는 9-시스-레티날이 로돕신 또는 이소로돕신을 형성하는 것을 방해하거나 이러한 형성을 두고 경쟁하는, 소형 분자 옵신 결합 단백질(간상세포에 유입되는 양만큼 망막에 의해 타이트에게 제어되지 않을 것이다)을 동정하는 것이다. 시간이 경과함에 따라, 이것은 11-시스-레티날이 단독으로 존재하는 경우에 비해, 로돕신 형성 속도를 둔화시킬 것이다. 한가지 실시상태에서, 이 분석법은 11-시스-레티날의 존재하에 수행되며, 로돕신의 형성 속도는 예컨대 로돕신의 특징적인 500 nm 피크에서의 흡수도 증가 속도를 측정함으로써 측정한다. 이 분석에는 로돕신의 항체는 필요하지 않다. 유용한 화합물은 상기 시험화합물이 존재하지 않을 때 11-시스-레티날의 존재 하에 관찰되는 것에 비해 로돕신 형성 속도가 적어도 약 2 내지 5배 낮을 것이다.
본 발명의 화학식 1 및/또는 화학식 2의 화합물은 미네랄 보충제, 소염제, 예컨대 스테로이드, 예컨대 코르티코스테로이드 및/또는 항산화제를 비롯한 다른 제제들과 함께 투여될 수 있다. 이러한 투여에 적합한 코르티코스테로이드로는 코르티손, 히드로코르티손, 프레드니손, 프레드리솔론, 메틸프레드리솔론, 트리암시놀론, β메타손, 베클라메타손 및 덱사메타손을 들 수 있다. 유용한 항산화제에는 비타민 A, 비타민 C 및 비타민 E가 포함된다.
본 발명의 방법은 또한 프로테오좀 억제제, 자가포식(autophagy) 억제제, 리소좀 억제제, ER로부터 골지체로의 단백질 수송 억제제, Hsp90 샤프론 억제제, 열충격 반응 활성화제, 글리코시다제 억제제, 히스톤 데아세틸라제 억제제로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 부가적인 제제 (화학식 1 및/또는 화학식 2의 화합물에 더해서)를 사용하여 광독성을 감소시키는 방법도 제공하며, 여기서, 소형 분자 옵신 결합 리간드 및 부가적인 화합물은 대상자를 치료하는데 충분한 양으로 동시에 투여되거나 또는 상호 투여시기로부터 14일 이내에 투여된다.
본 발명의 방법의 특정예에서, 화학식 1 및/또는 화학식 2의 화합물과 부가적인 화합물은 상호 투여시기로부터 10일 이내, 5일 이내, 24시간 이내, 좋기로는 동시에 투여되는 것이 바람직하다. 일례로, 소형 분자 옵신 결합 리간드와 부가적인 화합물은 눈에 직접 투여된다. 이러한 투여는 눈 속으로 또는 유리체 내로 투여되는 것일 수 있다. 다른 예에서, 소형 분자 옵신 결합 리간드와 부가적인 화합물은 예컨대, 마이크로스피어, 나노스피어, 나노 에멀젼 또는 임플란트의 일부를 구성하는 조성물에 각각 혼입될 수 있다.
전술한 바와 같이, 본 발명의 방법에 유용한 화학식 1 및/또는 화학식 2의 화합물은 단독으로 또는 1종 이상의 부가적인 화합물과 함께, 로돕신의 과도한 활성화, 예컨대 눈의 외과수술 동안 일어나는 것과 같은 광독성과 연관된 질환을 치료 또는 예방하는데 이용될 수 있다. 한가지 실시예에서, 본 발명의 화학식 1 및/또는 화학식 2의 화합물은 부가적인 활성 화합물 없이 투여된다. 또 다른 실시상태에서, 본 발명의 화학식 1 및/또는 화학식 2의 화합물은 다른 활성 화합물 (예컨대 명시된 바와 같은)과 함께 사용된다. 또 다른 예시적인 실시상태에서, 본 발명의 화학식 1 및/또는 화학식 2의 화합물은 프로테오좀 억제제 MG132, 자가포식 억제제 3-메틸아데닌, 리소좀 억제제 암모늄 클로라이드, ER-골지 수송 억제제 프레펠딘 A, Hsp90 샤프론 억제제 겔다마이신, 열충격 반응 활성화제 셀라스트롤, 글리코시다제 억제제, 및 히스톤 데아세틸라제 억제제 스크립타이드와 함께 투여되어, 로돕신의 과도한 활성화에 기인하는 시각회로 생성물의 형성 및 세포 자멸사를 감소시킬 수 있다.
본 발명에 설명된 바와 같이, 본 발명의 방법에 유용한 화학식 1 및/또는 화학식 2의 화합물은 RP의 결과로서 간상세포 사멸과 연관된 돌연변이 옵신 단백질의 비정상적인 프로세싱 및 트래피킹을 예방 또는 억제하기 위해 단독으로 사용해도 좋고 1종 이상의 부가적인 화합물과 함께 사용하여도 좋다. 한가지 실시상태에서, 본 발명의 화학식 1 및/또는 화학식 2의 화합물은 부가적인 활성 화합물 없이 투여된다. 또 다른 실시상태에서, 화학식 1 및/또는 화학식 2의 화합물(예컨대 명시된 바와 같은)과 함께 사용된다. 또 다른 예시적인 실시상태에서, 본 발명의 화학식 1 및/또는 화학식 2의 화합물은 프로테오좀 억제제 MG132, 자가포식 억제제 3-메틸아데닌, 리소좀 억제제 암모늄 클로라이드, ER-골지 수송 억제제 프레펠딘 A, Hsp90 샤프론 억제제 겔다마이신, 열충격 반응 활성화제 셀라스트롤, 글리코시다제 억제제, 및 히스톤 데아세틸라제 억제제 스크립타이드와 함께 투여되어, 간상세포 사멸 및 RP와 연관된 결과적인 시력상실을 감소 또는 예방하는데 이용될 수 있다.
본 발명에 설명된 바와 같이, 본 발명의 방법에 유용한 화학식 1 및/또는 화학식 2의 화합물은 예컨대 습건형 ARMD와 연관된 시력상실과 같은, 올-트랜스-레티날로부터 유래한 유독한 시각회로 생성물, 예컨대 리포퓨신 및 A2E의 생산 및 축적과 연관된 질환을 치료 또는 예방하기 위해 단독으로 또는 1종 이상의 다른 화합물과 함께 사용될 수 있다. 한가지 실시상태에서, 본 발명의 화학식 1 및/또는 화학식 2의 화합물은 다른 부가적인 활성 화합물 없이 투여된다. 또 다른 실시상태에서, 화학식 1 및/또는 화학식 2의 화합물(예컨대 명시된 바와 같은)과 함께 사용된다. 또 다른 예시적인 실시상태에서, 본 발명의 화학식 1 및/또는 화학식 2의 화합물은 프로테오좀 억제제 MG132, 자가포식 억제제 3-메틸아데닌, 리소좀 억제제 암모늄 클로라이드, ER-골지 수송 억제제 프레펠딘 A, Hsp90 샤프론 억제제 겔다마이신, 열충격 반응 활성화제 셀라스트롤, 글리코시다제 억제제, 및 히스톤 데아세틸라제 억제제 스크립타이드와 함께 투여되어, 건식 ARMD의 결과인 유독한 시각회로 생성 대사산물의 형성 및 광세포 사멸을 저감시킬 수 있다.
본 발명의 방법의 특정 실시상태에서, 미스폴딩된 옵신 단백질은 아미노산 서열에 돌연변이, 예컨대, T17M, P347S 또는 P23H, 좋기로는 P23H과 같은 돌연변이를 하나 이상 포함한다.
좋기로는 본 발명의 어떤 방법에서, 옵신-결합제는 그의 레티날 결합 포켓에서 옵신과 결합하는 것이 좋다.
한가지 구체예에서, 본 발명은 옵신 단백질을 상기 옵신 단백질의 수화를 감소시키는 화합물과 접촉시키는 것을 포함하는 (좋기로는 여기서 상기 화합물은 옵신과 결합하는 것을 놓고 하나 이상의 물 분자와 반응한다), 시각회로 생성물의 형성 또는 축적을 억제하는 방법을 제공한다. 이러한 방법의 특정 실시상태에서 화합물은 옵신 단백질에 예컨대 수소 결합을 통해 화학적으로 결합한다.
본 발명의 방법의 특정예에서, 유용한 화합물은 결합이 전적으로 또는 부분적으로 상기 결합 포켓 내의 하나 이상의 물 분자와의 결합을 배제하는 한, 상기 옵신 분자의 레티날 결합 포켓 내에서 발견되는 어떠한 수화 부위에서든지 옵신과 결합할 수 있다. 좋기로는 이러한 방법에 사용되는 화합물은 도 1에 도시된 결합 포켓의 좌측면을 차지하여 수화 부위 5-20 (도 1에 번호 매겨진 원들)의 물을 축축하고, 더욱 좋기로는 수화 부위 5-20의 물이 축출되도록 결합하여 도 1에 도시된 수화 부위의 3 또는 4의 물이 축출되어 이들 물이 단백질 상의 잔기와 수행할 것으로 예상되는 수소결합 상호반응을 모방하는 리간드 상의 관능기로 대체하는 것이 바람직하다.
이러한 방법의 특정예는 옵신 단백질의 Cys187 또는 Glu113과의 화학적 상호반응에 의해 화합물의 결합을 보상하는 방법이다. 별도의 실시상태애ㅔ서, 상기 상호반응은 Cys187과 일어나거나 또는 상기 상호반응은 Glu113과 일어나거나 또는 두가지 부위 모두에서 일어난다. 상기 상호반응의 바람직한 모드는 수소 결합이다.
또 다른 특정예에서, 상기 상호반응은 옵신 단백질 상의 카르보닐기와 함께 일어난다. 특정 실시상태에서, 상기 카르보닐은 상기 옵신 단백질의 Cys187 또는 Glu113 상에 있는 것이다. 또 다른 실시상태는 카르보닐이 옵신 단백질의 Cys187 상에 있거나 카르보닐이 옵신 단백질의 Glu113 상에 있는 것이다. 한가지 실시상태에서, 카르보닐은 옵신 단백질의 감마-카르복실기 상에 있다. 바람직한 실시상태는 상호반응이 화합물 상의 아민, 카르복사미도 또는 우레아기를 통해 일어나는 것이다.
본 발명에 개시된 화합물의 옵신 결합 포켓 내에서의 수소 감소 수단으로서의 용도는 이러한 방법의 바람직한 구체예로 간주되어야 하며, 로돕신 형성의 감소에 의한 시각회로 생성물의 형성 감소는 이러한 시각회로 생성물 형성, 특히 리포퓨신 및/또는 A2E의 생산을 감소시키기 위한 본 발명의 일반적인 방법이며, 상기 수화를 감소시킴으로써 안과 질환을 치료하는 것은 본 발명의 일반적인 목적이지만 본 발명에 개시된 화합물의 유일한 용도가 이것으로 한정되는 것은 아니며 이들이 본 발명의 방법에서 기능하고 옵신의 레티날 결합 포켓 내의 수화작용 (즉 물의 결합)을 감소시키는 한 기타의 공지 또는 미지의 화학 화합물의 용도도 포함하는 것이다.
본 발명의 방법에 사용하기 위한 본 발명에 개시된 화합물은 옵신의 레티날 결합 포켓에서 수화를 감소시키는 기능을 하지 않을 수도 있으나 본 발명의 한가지 방법에서는 여전히 기능한다. 예를 들어, 화학식 1 및/또는 2의 화합물은 단백질 상의 알로스테리 자리 (allosteric site)에 결합할 수 있기 때문에 수화반응을 감소시킬 필요 없이도, 결합 포켓으로부터 레티날을 배제시킴으로 해서 시각회로 생성물, 예컨대 리포퓨신 및/또는 A2E의 형성을 여전히 감소시킬 수 있으므로 시각회로의 활성을 비공유적으로 감소시킬 수 있다.
본 발명의 조성물과 방법의 실시상태에서, 옵신-결합 제제 (예컨대 비레티노이드 결합 제제)는 옵신에 대해 선택적으로 결합한다. 이러한 선택성은 독점배타성을 필요로 하는 것은 아니며 상기 제제는 옵신 뿐만 아니라 다른 단백질에도 결합할 수 있되 옵신에 대한 그의 결합이 적어도 선택적임으로 해서, 옵신에 대한 결합의 결합 상수 (또는 해리 상수)가 레티날 유사체와 같이, 레티노이드에도 결합하는 다른 단백질에 대한 결합의 평균값보다는 낮다는 것을 의미한다. 좋기로는, 옵신 결합 제제는 옵신에 비공유적으로 결합하는 비레티노이드 옵신 결합 제제인 것이 좋다. 좋기로는 옵신 결합 제제는 천연 리간드인 11-시스-레티날이 일반적으로 결합하는 부위인 옵신 레티날 결합 포켓에서 또는 그 근방에서 결합하는 것이 좋다. 특정 이론에 구애되는 것은 아니나, 한가지 실시상태에서, 결합 포켓은 레티날 또는 본 발명의 제제를 축적하지만 두가지를 다 축적하는 것은 아니다. 따라서, 본 발명의 제제가 레티날 결합 포켓에서 또는 그 근방에서 결합하면, 11-시스-레티날과 같은 다른 레티노이드는 옵신에 결합하지 못한다. 미스폴딩된 옵신 분자의 레티날 결합 포켓 내부에서의 본 발명의 제제의 결합은 옵신 분자의 천연 또는 야생형 입체배열을 직접 형성시키거나 또는 정확하게 폴딩된 옵신 단백질을 안정화시키는 작용을 함에 따라, 새롭게 교정된 폴딩된 옵신의 간상세포막 내로의 삽입을 도와준다. 다시 한번 특정 이론에 구애되는 것은 아니나, 이러한 삽입은 옵신의 야생형 입체배열을 유지하는데 도움을 주어 옵신 결합 제제는 결합 포켓 외부로 자유로이 분산될 수 있고 이에 따라 상기 포켓은 레티날과 결합 가능하게 되어 감광성 로돕신을 형성할 수 있다.
본 발명의 다른 방법은 광수용기 기능 감소를 유발하는 미스폴딩된 옵신 단백질을 함유하는 포유동물의 눈에서 광수용기 기능을 복구시키는 수단을 제공하는데, 이 방법은 상기 미스폴딩된 옵신 단백질을 레티날 결합 포켓에서 또는 그 근방에서 가역적으로 결합하는 (예컨대, 비공유적으로 결합하는) 옵신-결합 제제 (예컨대 비레티노이드)와 접촉시키는 것을 포함하여 이루어진다. 다른 실시상태에서, 옵신-결합 제제의 미스폴딩된 옵신 단백질에 대한 결합은 상기 결합 포켓 내에서의 결합을 두고 11-시스-레티날과 경쟁하는 것이다. 좋기로는, 옵신결합 제제의 결합이 상기 미스폴딩된 옵신 단백질의 천연 입체배열을 복구시키는 것이 좋다.
바람직한 실시상태에서 포유동물의 눈은 인간의 눈인 것이 좋다. 또 다른 실시상태에서, 상기 접촉은 상기 옵신-결합 제제(예컨대, 비레티노이드)를 광수용기 기능이 감소된다는 특징을 갖는 병태와 같은 안과 질환을 앓는 포유동물에게 투여함으로써 수행된다. 여러가지 실시상태에서, 이러한 병태는 습건형 황반변성, 당뇨병성 RP, 레티날 또는 황반이상증, 슈타가르트씨병(Stagardt's disease), 소르스비씨 이상증(Sorsby's dystrophy), 상염색체 우성 드루젠, 베스트씨 이상증, 황반이상증이 수반된 페리페린 돌연변이, 슈타르가르트씨병의 우성형, 노쓰캐롤라이나 황반이상증, 광독성 (예컨대 망막의 외과수술에 기인하는 것), 또는 색소망막염이다. 투여는 국소 또는 전신 투여일 수 있으며, 후자에는 경구 투여, 눈 속으로의 주사 또는 눈 주변에 주사하는 것을 들 수 있다. 국소 투여의 예로는 예컨대 본 발명의 제제를 적합한 약학적 담체 중에 유효량 포함시킨 것을 함유하는 점안액을 들 수 있다.
또 다른 실시상태에서, 본 발명은 돌연변이 옵신 단백질을 안정화시키는 방법을 제공하는데, 이 방법은 상기 돌연변이 옵신 단백질을 상기 돌연변이 옵신 단백질과 비가역적으로 비공유적으로 (예컨대, 레티날 결합 포켓에서 또는 그 내부에서) 결합하는 비레티노이드 옵신-결합 제제와 접촉시킴으로써 상기 결합 포켓 내에서의 레티노이드 결합을 방지하여 상기 돌연변이 옵신 단백질을 안정화시키는 것을 포함하는 것이다.
본 발명은 포유동물의 눈에서의 광수용기 기능 감소를 완화시키기 위한 방법을 제공하는 것으로서, 상기 방법은 옵신 결합 제제 예컨대 비레티노이드의 유효량을 11-시스-레티날에 대한 친화성이 감소된 돌연변이 옵신 단백질에 의한 질환을 앓는 포유동물에게 투여함으로써, 상기 옵신 결합 제제가 상기 돌연변이 옵신의 레티날 결합 포켓에 가역적으로 결합 (예컨대 비공유적으로 결합)함으로써, 상기 포유동물 눈에서 광수용기 기능의 손상을 경감시키는 것을 포함하여 이루어진다. 한가지 실시상태에서, 접촉은 상기 옵신-결합 제제를 상기 광수용기 기능이 감소된 포유동물에게 투여함으로써 발생하며, 여기서, 상기 투여는 곡수 투여 또는 전신 투여일 수 있고, 후자로는 경구 투여, 눈 속으로의 주사 EH는 눈 주변으로의 주사를 들 수 있으며, 전자의 에로는 본 발명의 제제를 함유하는 점안액을 사용하는 것을 들 수 이다. 이러한 광수용기 기능의 손상은 부분적 손상 또는 완전한 손상일 수 있고, 여기서 부분적 손상이라 함은 1% 손상 내지 99%의 손상도를 말한다. 또한, 이러한 손상은 옵신의 미스폴딩에 기인하는 돌연변이의 존재에 기인할 수 있으며, 예를 들면 P23H와 같은 돌연변이를 들 수 있다. 한가지 실시상태에서, 옵신 결합 제제는 옵신 단백질의 미스폴딩과 관련된 시력과 관련한 병태를 경감시키기 위해 투여된다. 한가지 실시상태에서, 본 발명은 눈의 광수용기 세포 (예컨대 간상세포 또는 추체세포)에 존재하는 옵신의 적어도 일부가 국소화오류되어 있는, 노화관련 건식형 황반변성을 앓는 대상자를 치료하는 방법을 제공한다. 국소화오류된 단백질은 그들이 시력에 필요한 기능을 수행하는 장소인 광수용기 세포막 내로 제대로 삽입되지 못한다. 옵신 결합 제제를 옵신 단백질이 국소화오류된 대상자에게 투여하면, 옵신의 국소화를 적어도 부분적으로 교정시켜준다. 따라서, 본 발명은 옵신의 국소화오류와 관련된 안과 질환을 예방 또는 치료하거나 그와 관련된 증상을 경감시키는데 유용하다.
본 발명은 비제한적인 예로서 습건형 황반변성, 당뇨병성 RP, 레티날 또는 황반이상증, 슈타가르트씨병(Stagardt's disease), 소르스비씨 이상증(Sorsby's dystrophy), 상염색체 우성 드루젠, 베스트씨 이상증, 황반이상증이 수반된 페리페린 돌연변이, 슈타르가르트씨병의 우성형, 노쓰캐롤라이나 황반이상증, 광독성 (예컨대 망막의 외과수술에 기인하는 것), 또는 색소망막염과 같은 시력관련 질환 또는 증상을 치료 및/또는 예방하기 위한 방법을 제공하며, 이 방법은 전술한 질환 또는 미스폴딩되거나 국소화오류된 옵신 단백질의 발현과 관련된 다른 안과 질환을 앓거나 앓을 위험이 있는 대상자에게, 유효 치료량의 옵신-결합 제제, 예컨대 본 발명에 기재된 1종 이상의 스크리닝 분석으로 검사시 긍정적인 활성을 나타내는 제제를 투여하는 것을 포함하여 이루어진다.
이러한 방법은 상기 대상자에게 프로테오좀 억제제, 자가포식(autophagy) 억제제, 리소좀 억제제, ER로부터 골지체로의 단백질 수송 억제제, Hsp90 샤프론 억제제, 열충격 반응 활성화제, 글리코시다제 억제제, 및 히스톤 데아세틸라제 억제제로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 부가적인 제제의 유효량을 투여하는 것을 포함하며, 여기서 옵신 결합 화합물과 부가적인 화합물은 동시에 또는 상호 투여일로부터 14일 이내에 대상자에게 치료하는데 충분한 양으로 투여된다.
여기서도 환자는 상기 돌연변이(들)이 예컨대 옵신 단백질에서 미스폴딩을 일으키는 것인, 단백질 폴딩과 관련된 돌연변이를 포함하는 것일 수 있고 P23H 돌연변이와 같은 본 발명에 명시된 여하한 돌연변이를 포함할 수 있다. 다른 실시상태에서, 환자는 옵신 단백질의 국소화오류와 관련된 안과 질환에 걸린 것이다. 국소화오류된 옵신은 광수용기 세포(예컨대, 간상세포 또는 추체세포)의 막 내로 삽입되지 못한다. 일반적으로, 이러한 국소화 오류는 환자의 시세포에 존재하는 옵신의 일부에만 영향을 미친다.
본 발명의 방법의 특정예에서, 옵신 결합 화합물과 부가적인 화합물은 상호 투여일로부터 10일 이내, 좋기로는 5일 이내, 더욱 좋기로는 24시간 이내, 가장 좋기로는 동시에 투여되는 것이 좋다. 한가지 예에서, 옵신 결합 화합물과 부가적인 화합물은 눈에 직접 투여된다. 이러한 투여는 눈 속으로 투여되는 것일 수 있다. 다른 실시예에서, 옵신-결합 화합물과 부가적인 화합물은 각각 이들의 장기간 방출을 가능케 하는 것인 마이크로스피어, 나노스피어, 나노 에멀젼 또는 임플란트의 일부로서의 조성물 내로 통합된다. 일례에서, 조성물은 장기간 방출을 가능케 하는 약물-전달 장치를 통해 투여된다. 이러한 방법은 본 발명의 제제와 함께 비타민 A 보충제를 투여하는 것을 포함한다.
전술한 바와 같이, 본 발명에 방법에 유용한 옵신-결합 제제는 단독으로, 또는 습건형 황반변성, 색소망막염, 레티날 또는 황반이상증, 슈타가르트씨병(Stagardt's disease), 소르스비씨 이상증(Sorsby's dystrophy), 상염색체 우성 드루젠, 베스트씨 이상증, 황반이상증과 연관된 페리페린 돌연변이, 황반이상증, 슈타르가르트씨병의 우성형, 노쓰캐롤라이나 황반이상증, 광독성(예컨대 망막에 대한 외과수술에 기인하는 것), 색소망막염, 또는 미스폴딩되거나 국소화오류된 옵신 단백질의 발현과 관련된 다른 안과 질환을 치료 또는 예방하기 위한 1종 이상의 부가적인 화합물과 함께 사용될 수 있다. 한가지 실시상태에서, 본 발명의 옵신-결합 화합물(예컨대, 옵신과 공유적으로 결합하지 못하는 레티노이드 또는 비레티노이드)은 이러한 질환에 걸릴 위험이 있는 것으로 동정된 대상자에게 투여된다. 필요에 따라, 옵신 결합 제제는 또 다른 치료제와 함께 투여된다. 다른 실시상태에서, 본 발명의 비레티노이드 옵신 결합 화합물은 합성 레티노이드(예컨대, 미국특허공개 No. 2004-0242704에 기재된 것들)과 조합적으로, 그리고 필요에 따라 다른 활성 화합물 (본 발명에 개시된 것들)과 함께 사용될 수 있다. 또 다른 예시적인 실시상태에서, 옵신-결합 화합물은 프로테오좀 억제제 MG132, 자가포식 억제제 3-메틸아데닌, 암모늄 클로라이드와 같은 리소좀 억제제, ER-골지 수송 억제제 브레펠딘 A, Hsp90 샤프론 억제제인 겔다마이신, 열충격 반응 활성화제 셀라스트롤, 글리코시다제 억제제, 및/또는 히스톤 데아세틸라제 억제제 스크립타이드, 또는 11-시스-레티날과 연합하여 로돕신을 형성하는 것을 가능케 하는 생화학적으로 기능성인 입체배열로 돌연변이 P23H 옵신 단백질을 안정화시킬 수 있는 기타 물질과 조합적으로 투여된다.
특정 실시상태에서, 옵신-결합 화합물은 분자량이 약 1000 달톤 미만, 800 달톤 미만, 600 달톤 미만, 500 달톤 미만, 400 달톤 미만, 또는 약 300 달톤 미만인 비폴리머형 (예컨대 본 발명의 방법에 사용되기 위해 예시된 것과 같은 소형 분자) 화합물이다. 특정 실시상태에서, 본 발명의 화합물은 미처리 대조군 세포 또는 단백질에 비해 안정하게 폴딩되고/폴딩되거나 복합체화된 돌연변이 단백질의 양 (예컨대 어떤 세포로부터의 양 또는 세포 중의 양)을 적어도 10%, 15%, 20%, 25%, 50%, 75% 또는 100%까지 증가시킨다.
프로테오좀 억제제(Proteosomal inhibitors)
26S 프로테오좀은 유비퀴네이트화된 단백질을 짧은 폴리펩타이드로 절단하는 멀티촉매형(multicatalytic) 프로테아제이다. MG-132는 사용가능한 프로테오좀 억제제 중 한가지이다. MG-132는 광독성 및 시각회로 생성물 (예컨대 올-트랜스 레티날, A2E, 리포푸신)의 축적, 단백질 응집 또는 단백질 미스폴딩과 관련된 기타 안과 질환을 치료하는데 특히 유용하다. 본 발명의 방법에 병용되는데 유용한 기타 프로테오좀 억제제로는 락토시스틴 (LC), 클라스토-락토시스틴-β-락톤, PSI (N-카르보벤조일-Ile-Glu-(OtBu)-Ala-Leu-CHO), MG-132 (N-카르보벤조일-Leu-Leu-Leu-CHO), MG-115 (N-카르보벤조일-Leu-Leu-Nva-CHO), MG-101 (N-아세틸-Leu-Leu-norLeu-CHO), ALLM (N-아세틸-Leu-Leu-Met-CHO), N-카르보벤조일-Gly-Pro-Phe-Ieu-CHO, N-카르보벤조일-Gly-Pro-Ala-Phe-CHO, N-카르보벤조일-Leu-Leu-Phe-CHO, 및 이들의 염 또는 유사체를 들 수 있다. 기타의 프로테오좀 억제제 및 이들의 용도는 미국 특허 No. 6,492,333에 개시되어 있다.
자가포식 억제제 (Autophagy inhibitors)
자가포식은 세포질에서 세포 성분들의 분해를 위해 진화적으로 보존된 메카니즘으로서, 기아 세포의 세포 생존 메카니즘 역할을 한다. 자가포식이 일어나는 동안 세포질 단편들은 세포막에 의해 캡슐하되어, 자가포식 액포를 형성하고 이것은 리소좀과 융합되어 그들의 내용물을 분해시킨다. 자가포식 억제제는 본 발명의 옵신-결합 또는 옵신-안정화 화합물과 병용될 수 있다. 본 발명의 방법에서 본 발명의 화합물과 병용되기에 유용한 자가포식 억제제의 비제한적인 예로는 3-메틸아데닌, 3-메틸 아데노신, 아데노신, 오카다산, N6-머캅토퓨린 리보사이드(N6-MPR), 아미노티올화된 아데노신 유사체, 5-아미노-4-이미다졸 카르복사미드 리보사이드(AICAR), 바필로마이신 A1, 및 이들의 염 또는 유사체를 들 수 있다.
리소좀 억제제 (Lysosomal inhibitors)
리소좀은 세포 단백질 분해가 일어나는 주요 장소이다. 세포내이입(endocytosis) 또는 포음작용(pinocytosis)에 의해 세포내로 유입되는 단백질 및 플라즈마막 단백질의 분해는 리소좀에서 일어난다. 암모늄 클로라이드, 류펩틴, 트랜스-에폭시삭시닐-L-류실아미드-(4-구아니디노)부탄, L-메티오닌 메틸 에스테르, 암모늄 클로라이드, 메틸아민, 클로로퀸 및 이들의 염 또는 유사체와 같은 리소좀 억제제는 본 발명의 옵신-결합 또는 옵신-안정화 화합물과 조합적으로 사용하기에 유용하다.
HSP90 샤프론 억제제 (HSP90 chaperon inhibitors)
열충격 단백질 90 (Hsp90)은 세포 시그널링, 증식 및 생존과 연관된 단백질을 후원하는 역할을 하며, 여러가지 단백질의 입체배열적 안정성과 기능에 있어서 필수적인 역할을 한다. HSP-90 억제제는 본 발명의 방법에서 옵신-결합 또는 옵신-안정화 화합물과 병용되는데 유용하다. HSP-90 억제제로는 Hsp90에 특이적으로 결합하여 그의 기능을 변경시킴으로써 기질 단백질의 단백질분해를 촉진하는, 벤조퀴논 안사마이신 항생제, 예컨대 겔다마이신 및 17-알릴아미노-17-데메톡시겔다마이신(l7-AAG)를 들 수 있다. 기타 HSP-90 억제제의 비제한적인 예로는 라디시콜, 노보바이오신 및 Hsp90 ATP/ADP 포켓에 결합하는 Hsp90 억제제를 들 수 있다.
열충격 반응 활성화제 (Heat shock response activators)
퀴논 메타이드 트리테르핀인 셀라스트롤은 인간의 열충격 반응을 활성화시킨다. 셀라스트롤 및 기타의 열충격 반응 활성화제는 본 발명의 방법에 사용되는 옵신-결합 또는 옵신-안정화 화합물과 병용되어 PCD를 치료하는데 유용하다. 열충격 반응 활성화제의 비제한적인 예로는 셀라스트롤, 셀라스트롤 메틸 에스테르, 디히드로셀라스트롤 디아세테이트, 셀라스트롤 부틸 에스테르, 디히드로셀라스트롤 및 이들의 염 또는 유사체를 들 수 있다.
히스톤 데아세틸라제 억제제 (Histon deacetylase inhibitors)
유전자 발현의 조절은 다이나믹 아세틸화 및 탈아세틸화에 의한 히스톤의 후번역 변형을 비롯한 여러가지 메카니즘에 의해 매개된다. 가역적인 아세틸화/탈아세틸화 공정에 책임이 있는 효소들은 각각 히스톤 아세틸트랜스퍼라제 (HATs) 및 히스톤 데아세틸라제 (HDACs)이다. 히스톤 데아세틸라제 억제제로는 스크립타이드, APHA 화합물 8, 아피시딘, 소듐 부티레이트, (-)-데퓨데신, 시르티놀, 트리코스타틴 A, 및 이들의 염 또는 유사체를 들 수 있다. 이러한 억제제는 본 발명의 방법에 사용되는 본 발명의 화합물과 병용될 수 있다.
글리코시다제 억제제 (Glycosidase inhibitors)
글리코시다제 억제제는 본 발명의 옵신-결합 또는 옵신-안정화 화합물과 함께 투여될 경우 본 발명의 방법에 유용한 화합물들 중 한 부류이다. 식물원으로부터 분리된 폴리히드록시 알칼로이드인 카스타노스퍼민은 효소적인 글리코사이드 가수분해를 억제한다. 카스타노스퍼민과 그의 유도체는 RP와 같은 누의 단백질 입체배열 질환 h는 광독성을 치료하는데 특히 유용하다. 본 발명의 방법에 사용하는데 유용한 도 다른 글리코시다제 억제제의 예로는 헥소사미니다제의 강력한 억제제인 오스트랄린 히드로클로라이드, 6-아세트아미도-6-데옥시-카스타노스퍼민, 데옥시푸코노지리마이신 히드로클로라이드 (DFJ7), 글루코시다제 I 및 II를 억제하는 데옥시노지리마이신 (DNJ), D-갈락토시다제를 억제하는 데옥시갈락토노지리마이신 히드로클로라이드 (DGJ), 데옥시만노지리마이신 히드로클로라이드 (DM1), 2R,5R-비스(히드록시메틸)-3R,4R-디히드록시피롤리딘 (DMDP) - 2,5-디데옥시-2,5-이미노-D-만니톨로도 알려져 있음-, 1,4-디데옥시-1,4-이미노-D-만니톨 히드로클로라이드, β-N-아세틸글루코사미니다제를 억제하는(3R,4R,5R,6R)-3,4,5,6-테트라히드록시아제판 히드로클로라이드, β-글루코시다제를 억제하는 1,5-디데옥시-1,5-이미노-자일리톨, 및 만노시다제 1의 억제제인 키푸넨신을 들 수 있다. 옵신-결합 또는 옵신-안정화 화합물과 함께 사용되는데 유용한 또 다른 화합물로는 N-부틸데옥시노지리마이신(EDNJ), N-노닐 DNJ (NDND, N-헥실 DNJ (I5TDNJ), N-메틸데옥시노지리마이신(MDNJ), 및 기술 분야에 알려진 기타 글리코시다제 억제제를 들 수 있다. 글리코시다제 억제제는 예컨대 Industrial Research Limited (Wellington, New Zealand)로부터 구입가능하며, 이들의 제조 방법은 예컨대 미국 특허 Nos. 4,894,388, 5,043,273, 5,103,008, 5,844,102, 및 6,831,176; 및 미국 특허 공개 Nos. 20020006909에 설명되어 있다.
의약 조성물
본 발명은 올-트랜스-레티날과 같은 시각회로 생성물 또는 11-시스-레티날로부터 형성되는 다른 생성물을 억제시키는 기능을 제공하는 화합물을 약학적으로 허용가능한 담체와 함께 포함하는 의약 조제물을 제공한다. 이러한 조제물은 치료적 및 예방적 용도로 사용가능하다. 한가지 실시상태에서, 의약 조성물은 옵신-결합 또는 안정화 화합물 (예컨대 실시예 1의 방법을 이용하여 동정된 화합물) 또는 약학적으로 허용가능한 그의 염을 포함하며; 필요에 따라 프로테오좀 억제제, 자가포식 억제제, 리소좀 억제제, ER로부터 골지체로의 단백질 수송 억제제, Hsp90 샤프론 억제제, 열충격 반응 활성화제, 글리코시다제 억제제, 또는 히스톤 데아세틸라제 억제제 중 1종 이상의 부가적인 화합물과 병용될 수 있다. 옵신-결합 또는 옵신-안정화 화합물은 좋기로는 합성 또는 천연 레티노이드가 아닌 것이 바람직하다. 옵신-결합 또는 옵신-안정화 화합물과 부가적인 화합물은 함께 또는 별도로 조성될 수 있다. 본 발명의 화합물은 의약 조성물의 일부로서 투약될 수 있다. 비경구 조성물은 멸균처리되어야 하며 옵신-결합 또는 옵신-안정화 화합물을 대상자에게 투여하는데 적합한 중량 또는 부피 단위로 함유하여야 한다. 이러한 조성물과 본 발명의 조합은 화합물 각각이 개별 투여량으로 존재하는 약학적 팩(pharmaceutical pack)의 일부일 수 있다.
"약학적으로 허용가능한"이라는 표현은 본 발명의 화합물, 이러한 화합물을 함유하는 조성물 및/또는 투여 제형이 건전한 의학적 판단 범위에서, 과도한 독성, 자극, 알레르기 반응 또는 기타의 문제나 합병증을 일으킴이 없이 합리적인 장점/위험성 비율 견지에서, 인간 및 대상자의 조직과 접촉 사용되는데 적합함을 의미한다.
예방적 또는 치료적 투여를 위해 사용될 본 발명의 비경구 의약 조성물은 멸균처리되어야 한다. 멸균처리는 멸균 여과막 (예컨대, 0.2 μm 막)을 통한 여과, 감마선 조사 또는 기타 당업자에게 잘 알려진 적절한 수단에 의해 실시할 수 있다. 치료적인 옵신-결합 또는 옵신-안정화 화합물 및 조성물은 일반적으로 피하주사기 바늘이 뚫을 수 있는 스토퍼를 갖는 바이알 또는 정맥주사용액 백과 같이, 멸균된 접근 포트를 갖는 용기에 담긴다. 이러한 조성물은 대개 단일 투여용 용기 또는 다회 투여용 용기에 보관되며, 예컨대, 밀봉된 앰플 또는 바이알에 담기거나 재조성을 위한 동결건조된 포뮬레이션 또는 수용액 형태로 보관된다. 본 발명의 화합물은 필요에 따라 약학적으로 허용가능한 부형제와 함께 병용될 수 있다.
의약 조성물의 성분들은 목적하는 약학적 효능을 실질적으로 훼손시키지 않도록 상호작용하지 않는 방식으로 본 발명의 분자들과 함께 혼화될 수 있다.
본 발명의 화합물은 약학적으로 허용가능한 부형제 중에 함유될 수 있다. 부형제는 좋기로는 등장성과 화학적 안정성을 촉진하는 기질과 같은 첨가제를 소량 함유하는 것이 좋다. 이러한 물질은 사용 농도 및 투여량으로는 대상자에게 독성을 일으키지 않으며 여기에는 포스페이트, 시트레이트, 숙시네이트, 아세테이트, 락테이트, 타르트레이트 및 기타 유기산 또는 이들의 염; 트리스-히드록시메틸아미노메탄 (TRIS), 바이카보네이트, 카보네이트 및 기타 유기 염기 및 이들의 염; 항산화제, 예컨대 아스코르브산; 저분자량 (예컨대 잔기가 약 10개 미만인 것) 폴리펩타이드, 예컨대 폴리아르기닌, 폴리라이신, 폴리글루타메이트 및 폴리아스파르테이트; 혈청 알부민, 젤라틴 또는 면역글로불린과 같은 단백질; 폴리비닐피롤리돈 (PVP), 폴리프로필렌 글리콜 (PPGs), 및 폴리에틸렌 글리콜 (PEGs)과 같은 친수성 폴리머; 글리신, 글루탐산, 아스파르트산, 히스티딘, 라이신 또는 아르기닌과 같은 아미노산; 단당류, 이당류 및 기타 탄수화물, 예컨대 셀룰로스 또는 그의 유도체, 글루코스, 만노스, 수크로스, 덱스트린 또는 황산화 탄수화물 유도체, 예컨대 헤파린, 콘드로이틴 설페이트 또는 덱스트란 설페이트; 다가 금속이온, 예컨대 칼슘 이온, 마그네슘 이온 및 망간 이온과 같은 2가 금속 이온; 에틸렌디아민 테트라아세트산(EDTA)와 같은 킬레이팅제; 당 알코올, 예컨대 만니톨 또는 소르비톨; 카운터이온, 예컨대 소듐 또는 암모늄; 및 /또는 폴리소르베이트 또는 폴록사머와 같은 비이온성 계면활성제가 포함된다. 기타의 첨가제로는 안정화제, 항미생물제, 불활성 가스, 유액 및 영양 보충제 (예컨대 링거 덱스트로스), 전해질 보충제를 들 수 있으며 이들은 통상적인 양으로 존재할 수 있다.
전술한 조성물은 유효량으로 투여될 수 있다. 유효량은 투여 경로 또는 치료하고자 하는 특정 질병 및 원하는 결과에 따라 달라진다. 유효량은 또한 질병의 단계, 대상자의 연령 및 신체조건, 부수되는 치료법이 있다면 그의 특성 등 및 임상의가 알고 있는 인자들에 의해 결정되기도 한다. 치료적 응용을 위한 양은, 의학적으로 요구되는 결과를 달성하는데 충분한 양이다.
광독성, 예컨대 안과 수술에 기인하는 광독성을 앓거나 걸릴 위험이 있는 대상자에 있어서, 유효량은 올-트랜스-레티날 또는 리포퓨신 또는 A2E와 같은 시각회로 생성물의 형성 및 축적 속도 또는 정도를 감소시키는 것 뿐만 아니라, 과도한 로돕신 활성화로 인한 광세포 자멸사를 방지하는데 충분한 양이다. 여기서, 본 발명의 화합물은 1일 약 0.01 mg/kg 내지 1일 약 1000 mg/kg의 범위이다. 약 50 내지 약 2000 mg/kg의 투여량 범위가 적절한 것으로 여겨진다. 정맥 주사와 같은 특정 투여 형태의 경우 투여량을 줄일 수 있다. 최초 투여량으로 대상자의 반응이 불충분한 경우, 환자가 인내하는 한도까지 투여량을 더 높일 수 있다(또는 보다 국소화된 다른 전달 경로에 의해 효과적으로 투여량을 높일 수 있다). 본 발명의 조성물의 적절한 전신 농도를 달성하기 위해, 1일 다회 투여하는 것을 생각해 볼 수 있다.
다양한 투여 경로가 이용가능하다. 본 발명의 방법은 일반적으로 말해서, 의학적으로 허용가능한 모든 투여 경로, 즉, 임상적으로 허용불가능한 부작용을 유발하지 않고 활성 화합물을 유효 농도를 제공할 수 있는 모든 투여 경로로 실시할 수 있다. 한가지 바람직한 실시상태에서, 본 발명의 조성물은 눈 속으로 투여된다. 다른 투여 방법에는 경구, 직장, 국소, 눈속, 입 안 (buccal), 질내, 수조내(intracisternal), 뇌심실내(intracerebroventricular), 기관지내, 경비, 경피, 임플란트내/임플란트상, 또는 비경구 경로가 포함된다. 본 발명의 조성물을 포함하는 조성물은 유리체내 체액과 같은 생리적 체액에 투여될 수 있다. CNS 투여의 경우, CNS 혈관 내피 세포들 사이의 부착 연결점을 일시적으로 개방시키는 약물 및 이러한 세포를 통한 전좌(translocation)를 용이하게 하는 화합물의 뇌혈액 장벽을 통한 치료물질의 전달을 촉진하기 위해 다양한 기술, 예컨대 주사 또는 외과수술에 의한 파괴등이 이용될 수 있다. 경구 투여는 환자뿐만 아니라 투여 스케쥴 관점에서 간편하기 때문에 예방적 처치에 적합할 수 있다.
본 발명의 의약 조성물은 플라즈마 단백질, 프로테아제 및 기타 생물학적 물질과 같은 1종 이상의 부가적인 단백질을 이들이 환자에게 투여될 경우 부작용을 일으키지 않는 한, 필요에 따라 추가로 함유할 수 있다. 적절한 단백질 또는 생물학적 물질을 당업자에게 알려지고 이용가능한 정제 방법에 의해 인간 또는 포유동물의 혈장으로부터 얻을 수 있으며 예컨대; 표준 재조합 DNA 기술에 따라 도입된 인간 또는 포유동물 혈장 단백질을 발현하는 유전자를 함유하는 재조합 조직 배양체, 바이러스, 효모, 세균 등의 상등액, 추출물 또는 용해물로부터; 또는 표준 트랜스제닉 기술에 따라 도입된 인간 혈장 단백질을 발현하는 유전자를 함유하는 트랜스제닉 동물 또는 체액(예컨대 혈액, 젖, 림프, 뇨 등)으로부터의 단백질을 들 수 있다.
본 발명의 의약 조성물은 생리적 pH, 예컨대 약 5.0 내지 약 8.0 (예컨대, 6.0, 6.5, 6.8, 6.9, 7.0, 7.1, 7.2, 7.3, 7.4, 7.5, 7.6, 7.8) 범위의 pH를 반영하는 소정 농도로 포뮬레이션의 pH를 유지하기 위해, 1종 이상의 pH 완충 화합물을 함유할 수 있다. 수용액 포뮬레이션에 사용되는 pH 완충 화합물은 아미노산 또는 아미노산의 혼합물, 예컨대, 히스티딘 또는 히스티딘과 글리신과 같은 아미노산의 혼합물일 수 있다. 별법으로, pH 완충 화합물은 포뮬레이션의 pH를 소정 수준, 예컨대 약 5.0 내지 약 8.0과 같이 칼슘 이온을 킬레이트시키지 않는 범위로 유지하는 물질인 것이 바람직하다. 이러한 pH 완충 화합물의 비제한적인 구체예로는 이미다졸과 아세테이트 이온을 들 수 있다. pH 완충 화합물은 소정 수준에서 포뮬레이션의 pH를 유지시키는데 적합한 양으로 존재할 수 있다.
본 발명의 의약 조성물은 1종 이상의 삼투압 조절제, 즉, 포뮬레이션의 삼투압 특성(예컨대 강장성(tonicity), 오스몰농도 및/또는 삼투압)을 대상 개체의 혈류 및 혈액 세포에 적합한 수준으로 조절해주는 화합물을 함유할 수도 있다. 삽투압 조절제는 칼슘 이온을 킬레이트화하지 않는 물질일 수 있다. 삽투압 조절제는 포뮬레이션의 삽투압 특성을 조절시키는, 당업자에게 알려진 화합물일 수 있다. 당업자라면 주어진 삼투압 조절제가 본 발명의 포뮬레이션에 사용하기에 적합한지를 실험적으로 판단할 수 있을 것이다. 적절한 삼투압 조절제의 구체적인 그러나, 비제한적인 예로는 염화나트륨 및 아세트산나트륨과 같은 염; 수크로스, 덱스트로스 및 만니톨과 같은 당; 글리신과 같은 아미노산; 이들 물질 1종 이상 및/또는 여러 제제들의 혼합물을 들 수 있다.
본 발명의 옵신-결합 또는 옵신-안정화 화합물을 포함하는 조성물들은 칼슘 이온, 마그네슘 이온 및/또는 망간 이온과 같은 다가 금속이온을 함유할 수 있다. 조성물을 안정화시키는데 도움을 주고 대상 개체에게 악영향을 미치지 않는 다가 금속 이온을 사용할 수 있다. 당업자라면 이러한 두 가지 기준에 기초해서, 적절한 금속이온 및 무기염과 유기염을 포함하여, 공지의 이러한 금속 이온의 적절한 소스를 실험적으로 선택할 수 있을 것이다.
본 발명의 의약 조성물은 비수성 액상 포뮬레이션일 수도 있다. 그 안에 함유된 활성 성분(들)의 안정성이 유지되는 한, 적절한 비수성 액체를 선택할 수 있다. 좋기로는 비수성 액체는 친수성 액체이다. 적절한 비수성 액체의 예로는: 글리세롤; 디메틸 설폭사이드(DMSO); 폴리디메틸실록산 (PMS); 에틸렌 글리콜, 예컨대 에틸렌 글리콜, 디에틸렌 글리콜, 트리에틸렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜 ("PEG") 200, PEG 300, 및 PEG 400; 및 프로필렌 글리콜, 예컨대 디프로필렌 글리콜, 트리프로필렌 글리콜, 폴리프로필렌 글리콜 ("PPG") 425, PPG 725, PPG 1000, PEG 2000, PEG 3000 및 PEG 4000을 들 수 있다.
본 발명의 의약 조성물은 혼합된 수성/비수성 액상 포뮬레이션일 수도 있다. 전술한 바와 같은 적절한 비수성 액상 조성물은 전술한 바와 같은 수성 액상 포뮬레이션과 함께, 혼합된 수성/비수성 액상 포뮬레이션이 그 안에 함유된 화합물에게 안정성을 제공하는 것을 전제로, 사용가능하다. 좋기로는, 이러한 포뮬레이션 중의 비수성 액체는 친수성 액체이다. 적절한 비수성 액체의 예로는: 글리세롤; DMSO; EMS; 에틸렌 글리콜, 예컨대 PEG 200, PEG 300, 및 PEG 400; 및 프로필렌 글리콜, 예컨대 PPG 425, PPG 725, PEG 1000, PEG 2000, PEG 3000 및 PEG 4000을 들 수 있다. 적절한 안정한 포뮬레이션은 활성 물질을 냉동 상태 또는 냉동되지 않은 액체 상태로 보관하는 것을 가능케 해준다. 안정한 액상 포뮬레이션은 적어도 -70℃의 온도에서 보관될 수 있으나, 조성물의 특성에 따라서는 이보다 높은 온도 즉 적어도 0℃, 또는 약 0℃ 내지 약 42℃에서 보관할 수 있다. 당업자에게는 단백질과 폴리펩타이드가 pH, 온도 변화, 그리고 치료 효능에 영향을 미칠 수도 있는 다른 여러가지 복합 인자에 의해 민감하다는 것이 잘 알려져 있다.
특정 실시상태에서, 바람직한 투여 경로는 폐포를 경유하는 것일 수 있다. 폴리펩타이드를 함유하는 에어로졸 전달계를 제조하는 기술은 당업자에게 잘 알려져 있다. 일반적으로, 이러한 시스템은 예컨대 파라토프 결합능과 같은 항체의 생물학적 특성을 유의적으로 손상시키지 않는 성분들을 이용한다 (예컨대, Sciarra and Cutie, "Aerosols", in Remington's Pharmaceutical Sciences 18th edition, 1990, pp 1694-1712 참조, 본문에 참조 통합됨). 당업자들은 과도한 실험을 필요로 하지 않고도 폴리펩타이드 에어로졸을 제조하기 위한 다양한 변수와 조건을 쉽게 변형할 수 있다.
다른 전달계로는 시간-방출형, 서방형 또는 지속 방출형 전달계를 들 수 있다. 이러한 전달계는 본 발명의 조성물의 반복 투여를 회피시킬 수 있어서, 대상자와 임상의 모두에게 편리성을 증대시켜준다. 약물 방출 전달계의 다양한 유형을 이용할 수 있으며 기술 분야에도 일반적으로 잘 알려져 있다. 여기에는 폴리락티드 (미국 특허 No. 3,773,919; 유럽 특허 No. 58,481), 폴리(락티드-글리콜리드), 코폴리옥살레이트 폴리카프로락톤, 폴리에스테르아미드, 폴리오르토에스테르, 폴리히드록시부티르산, 예컨대 폴리-D-(-)-3-히드록시부티르산 (유럽 특허 No. 133,988), L-글루탐산과 감마-에틸-L-글루타메이트아의 코폴리머 (Sidman, KR. 외, Biopolymers 22: 547-556), 폴리(2-히드록시에틸 메타크릴레이트) 또는 에틸렌 비닐 아세테이트 (Langer, 외, J. Biomed. Mater. Res. 15:267-277; Langer, B. Chem. Tech. 12:98-105), 및 폴리안하이드라이드와 같은 폴리머 기반 시스템이 포함된다.
지속-방출형 조성물의 기타 예로는 성형된 제품, 예컨대 필름 또는 마이크로캡슐 형태 중 반투과성 폴리머 매트릭스를 들 수 있다. 전달 시스템은 또한 비폴리머 시스템, 즉: 스테롤, 예컨대 콜레스테롤, 콜레스테롤 에스테르 및 지방산 또는 중성 지방, 예컨대 모노-, 디- 및 트리-글리세리드; 하이드로겔 방출 시스템 예컨대 생물학적으로 유도된 생물재흡수가능한 하이드로젤 (즉, 키틴 하이드로젤 또는 키토산 하이드로젤); 실라스틱 시스템; 펩타이드 기반 시스템; 왁스 코팅; 통상적인 바인더와 부형제를 이용한 압착 정제; 부분적으로 충전된 임플란트 등을 들 수 있다. 특정예의 비제한적인 예로는: (a) 활성 물질이 13.5. 특허 Nos. 4,452,775, 4,667,014, 4,748,034 및 5,239,660에 설명된 것과 같은 매트릭스 내 형태에 포함되어 있는 에어로졸 시스템 및 (b) 예컨대 미국 특허 Nos. 3,832,253, 및 3,854,480에 설명된 바와 같은 활성 성분이 제어된 속도로 폴리머로부터 투과되는 확산 시스템을 들 수 있다.
본 발명의 방법 및 조성물에 대해 이용가능한 또 다른 유형의 전달 시스템은 콜로이드 분산 시스템이다. 콜로이드 분산 시스템에는 수중유형 에멀젼, 미셀, 혼합형 미셀, 및 리포좀을 비롯한 지질계 시스템이 포함된다. 리포좀은 생체내 또는 시험관내에서 전달 벡터로스 유용한 인공 막 베셀이다. 크기가 0.2 - 4.0 μm에 달하는 대형 단일라멜라 베셀 (LUV: large unilamellar vessels)는 내부 수층에 대형 마크로분자를 캡슐화할 수 있으며 생물학적으로 활성적인 형태로 세포에 전달할 수 있다 (Fraley, R., 및 Papahadjopoulos, D., Trends Biochem. Sci. 6: 77-80).
리포좀은 리포좀을 모노클로날 항체, 당, 당지질, 또는 단백질과 같은 특정 리간드에 커플링시킴으로써 특정 조직에 표적화시킬 수 있다. 리포좀은 Gibco BRL사가 예컨대 LIPOFECTINTM및 LIPOFECTACETM 로서 시판하며, 이들은 N-[1-(2, 3-디올레일옥시)-프로필]-N,N,N-트리메틸암모늄 클로라이드 (DOTMA) 및 디메틸 디옥타데실암모늄 브로마이드 (DDAB)와 같은 양이온성 지질로 형성되어 있다. 리포좀의 제조 방법은 기술 분야에 잘 알려져 있으며 여러가지 문헌, 예컨대 DE 3,218,121; Epstein 외, Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 82:3688-3692 (1985); K. Hwang 외, Proc. Natl, Acad. Sci. (USA) 77:4030-4034 (1980); EP 52,322; EP 36,676; EP 88,046; EP 143,949; EP 142,641; Japanese Pat. Appl. 83-118008; 미국 특허 Nos. 4,485,045 및 4,544,545; 및 EP 102,324에 설명되어 있다. 또한 리포좀에 관한 논문으로 Gregoriadis, G., Trends Biotechnol., 3: 235-241을 들 수 있다.
또 다른 유형의 비히클은 포유동물 대상자에게로 이식하는데 적합한 임플란트 또는 생체적합성 마이크로입자이다. 본 발명에 사용하는데 적합한 생체침식가능한(bioerodible) 임플란트가 PCT 국제출원 no. PCTIUS/03307 (공개 No- WO 95/24929, 제목, "Polymeric Gene Delivery System")에 설명되어 있다. PCT/US/0307에는 적절한 프로모터의 제어 하에 내인성 유전자를 함유하기 위한 생체적합성, 좋기로는 생물분해성 폴리머 매트릭스가 설명되어 있다. 폴리머 매트릭스를 이용하여 외인성 유전자 또는 유전자 산물을 대상자 체내에서 지속적으로 방출시킬 수 있다.
폴리머 매트릭스는 좋기로는 마이크로스피어(활성 물질이 고체형 폴리머 매트릭스를 통해 분산되어 있다) 또는 마이크로캡슐(활성 물질이 폴리머형 쉘의 코어 내부에 저장되오 있다)과 같은 마이크로입자 형태를 갖는 것이 바람직하다. 약물을 함유하는 전술한 폴리머 마이크로캡슐은 예컨대, 미국 특허 5,075,109에 설명되어 있다. 약물 함유용 폴리머 매트릭스의 또 다른 형태로는 필름, 코팅, 겔, 임플란트 및 스텐트를 들 수 있다. 폴리머 매트릭스 장치의 크기와 조성은 사용하고자 하는 전달 방법에 따라 선택된다. 좋기로는, 에어로졸 경로를 사용할 경우 폴리머 매트릭스와 조성물은 계면활성제 비히클내에 포함되는 것이 바람직하다. 폴리머 매트릭스 조성물은 전달 효율을 더욱 증대시키기 위해, 생물접착성 물질로 만들어질 수 있고 바람직한 분해 속도를 갖도록 선택될 수 있다. 매트릭스 조성물은 또한 분해되지 않고 장기간에 걸쳐 확산 방출되도록 선택될 수도 있다. 전달 시스템은 또한 국소, 장소 특이적 전달에 적합한 생물적합성 마이크로스피어일 수 있다. 이러한 마이크로스피어는 Chickering, D.B., 외, Biotechnot. Bioeng, 52: 96-101; Mathiowitz, B., et at., Nature 386: 410-414에 설명되어 있다.
비생물분해성 폴리머 매트릭스와 생물분해성 폴리머 매트릭스 두가지 모두 본 발명의 조성물을 대상자에게 전달하는데 이용가능하다. 이러한 폴리머들은 천연 또는 합성 폴리머일 수 있다. 폴리머는 일반적으로 수시간 내지 수년 또는 그 이상의 순서로 선호되는 기간에 기초해서 선택된다. 일반적으로, 수시간 3개월 내지 12개월에 걸친 시간 범위에서 방출되는 것이 가장 바람직하다. 폴리머는 필요에 따라 물에서 자신의 중량의 약 90%까지 흡수가능한 하이드로젤 형태일 수 있고, 또는 임의로 다른 폴리머 또는 다가 이온과 가교될 수도 있다.
생물분해성 전달 시스템을 형성하는데 이용가능한 합성 폴리머의 예로는: 폴리아미드, 폴리카보네이트, 폴리알킬렌, 폴리알킬렌 글리콜, 폴리알킬렌 옥사이드, 폴리알킬렌 테레프탈레이트, 폴리비닐 알코올, 폴리비닐 에테르, 폴리비닐 에스테르, 폴리비닐 할라이드, 폴리비닐피롤리돈, 폴리글리콜라이드, 폴리실록산, 폴리우레탄 및 그의 코폴리머, 알킬 셀룰로스, 히드록시알킬 셀룰로스, 셀룰로스 에테르, 셀룰로스 에스테르, 니트로 셀룰로스, 아크릴산 및 메타크릴산 에스테르의 폴리머, 메틸 셀룰로스, 에틸 셀룰로스, 히드록시프로필 셀룰로스, 히드록시프로필 메틸 셀룰로스, 히드록시부틸 메틸 셀룰로스, 셀룰로스 아세테이트, 셀룰로스 프로피오네이트, 셀룰로스 아세테이트 부티레이트, 셀룰로스 아세테이트 프탈레이트, 카르복실에틸 셀룰로스, 셀룰로스 트리아세테이트, 셀룰로스 설페이트 소듐 염, 폴리(메틸 메타크릴레이트), 폴리(에틸 메타크릴레이트), 폴리(부틸 메타크릴레이트), 폴리(이소부틸 메타크릴레이트), 폴리(헥실 메타크릴레이트), 폴리(이소데실 메타크릴레이트), 폴리(라우릴 메타크릴레이트), 폴리(페닐 메타크릴레이트), 폴리(메틸 아크릴레이트), 폴리(이소프로필 아크릴레이트), 폴리(이소부틸 아크릴레이트), 폴리(옥타데실 아크릴레이트), 폴리에틸렌, 폴리프로필렌, 폴리(에틸렌 글리콜), 폴리(에틸렌 옥사이드), 폴리(에틸렌 테레프탈레이트), 폴리(비닐 알코올), 폴리(비닐 아세테이트), 폴리(비닐 클로라이드), 폴리스티렌, 폴리(비닐 피롤리돈), 및 락트산과 글리콜산의 폴리머, 폴리안하이드라이드, 폴리(오르토)에스테르, 폴리(부틴산), 폴리(발레르산), 및 폴리(락티드-코카프로락톤) 및 천연 폴리머, 예컨대 알지네이트 및 기타 다당류, 예컨대 덱스트란 및 셀룰로스, 콜라겐, 그의 화학적 유도체 (알킬, 알킬렌과 같은 화학기의 치환, 부가, 수화, 산화 및 당업자가 일상적으로 가하는 기타 변형에 의해 제조되는 것), 알부민 및 기타 친수성 단백질, 제인 및 기타 프롤라민, 및 소수성 단백질, 그의 코폴리머 및 혼합물을 들 수 있다. 일반적으로, 이들 물질들은 효소적 가수분해에 의하거나 생체내에서 물에 노출되거나, 표면 또는 벌크 침식(surface or bulk erosion)에 의해 분해된다.
눈에 전달하는 방법 (Methods of Ocular Delivery)
본 발명의 조성물은 광독성, 특히 눈의 외과 수술과 관련된 광독성과 같은 안과 질환 또는 질병을 치료하는데 적합하다.
한가지 접근법에서, 본 발명의 조성물은 눈의 유리체 내로 직접 이식하는데 적합한 안과 장치를 통해 투여된다. 본 발명의 조성물은 예컨대 미국 특허 Nos. 5,672,659 및 5,595,760에 설명된 바와 같은 지속방출형 조성물로 제공될 수 있다. 이러한 장치는 해로운 국소 및 전신 부작용의 위험 없이 눈을 치료하기 위한 다양한 조성물을 지속적으로 조절 방출시키는 것으로 밝혀졌다. 본 발명의 방법의 한가지 목적은 임플란트의 기간을 연장시키기 위해, 크기는 최소화시키면서도 눈속 장치 또는 임플란트에 함유된 약물의 양은 최대화시키는 것이다. 예컨대, 미국 특허 5,378,475; 6,375,972, 및 6,756,058 및 미국특허공개 20050096290 및 200501269448 참조. 이러한 임플란트는 생물분해성 및/또는 생체적합성 임플란트이거나 또는 비생물분해성 임플란트일 수 있다.
생물분해성인 안과용 임플란트는 예컨대 미국 특허 공개 No. 20050048099에 설명되어 있다. 이 임플란트는 활성 물질에 대해 투과성 또는 불투과성일 수 있으며 눈의 전방 안구방 또는 후방 안구방과 같은 안구방에 삽입가능하거나 또는 공막, 맥락막 공간을 경유하거나 또는 유리체 외부의 비혈관화 부분에 이식될 수 있다. 별법으로, 본 발명의 조성물의 저장소 역할을 하는 콘택트 렌즈를 약물 전달에 이용할 수도 있다.
바람직한 실시상태에서, 임플란트는 맥락막과 같은 비혈관화 대역에 위치되어 원하는 치료 부위, 예컨대 눈속 공간 및 눈의 황반 부분에 약물을 트랜스클러랄(transcleral) 확산시킬 수 있다. 또한, 트랜스클러랄 확산 부위는 황반 근방에 있는 것이 바람직하다. 본 발명의 조성물을 전달하기 위한 임플란트의 비제한적인 예들이 미국 특허 Nos. 3,416,530; 3,828,777; 4,014,335; 4,300,557; 4,327,725; 4,853,224; 4,946,450; 4,997,652; 5,147,647; 164,188; 5,178,635; 5,300,114; 5,322,691; 5,403,901; 5,443,505; 5,466,466; 5,476,511; 5,516,522; 5,632,984; 5,679,666; 5,710,165; 5,725,493; 5,743,274; 5,766,242; 5,766,619; 5,770,592; 5,773,019; 5,824,072; 5,824,073; 5,830,173; 5,836,935; 5,869,079, 5,902,598; 5,904,144; 5,916,584; 6,001,386; 6,074,661; 6,110,485; 6,126,687; 6,146.366; 6,251,090; 및 6,299,895, 및 WO 01/30323 및 WO 01/28474에 설명되어 있으며 이들 문헌 모두 본 발명에 참조 통합된다.
비제한적인 예로서 다음을 들 수 있다: 목적하는 국소 또는 전신적인 생리적 또는 약리학적 효과를 달성하는데 효과적인 양의 물질을 포함하는 내부 저장용기, 물질을 통과시키지 않는 불투과성 내부 튜브 (이 내부 튜브는 제1 말단과 제2 말단을 가지며 내부 저장용기의 적어도 일부를 커버하고 있고, 내부 뉴브의 크기와 재료는 내부 튜브가 그 자체 무게를 견딜 수 있도록 선택된 것임), 내부 튜브의 제1 말단에 위치하는 불투과성 막 (이 불투과성 막은 내부 튜브의 제1 말단을 통해 활성 성분이 저장용기 외부로 빠져나가는 것을 방지한다) 및 내부 튜브의 제2 말단에 위치하는 투과성 막 (이 투과성 막은 활성 성분이 내부 튜브의 제2 말단을 통해 저장 용기 외부로 확산되는 것을 가능케 한다)를 포함하는 지속 방출형 약물 전달 시스템; 본 발명의 화합물을 눈의 각 부위로 투여하기 위한 방법으로서, 본 발명의 화합물을 눈의 유리체에 전달하기 위한 지속 방출형 장치를 이식시키는 단계를 포함하는 방법; a) 소망되는 국소 또는 전신적 생리적 또는 약학적 효능을 얻는데 효고적인 또는 진단 효과를 얻는데 효과적인 1종 이상의 제1 물질의 치료적 유효량을 포함하는 약물 코어; b) 약물 코어를 수용하기 위한 내부 구획을 둘러싸서 이를 결정지으며 약물을 기본적으로 통과시키지 않는 적어도 1개의 단위형(unitary) 컵 (여기서 이 단위형 컵은 개방형 정상부 말단을 가지며 이이 단위형 컵의 개방형 정상부 말단의 적어도 일부분에는 적어도 하나의 홈이 파여져 있다); 및 c) 약물을 통과시키는 투과성 플러그(여기서 이 투과성 플러그는 상기 단위형 컵의 개방형 정상부 말단에 위치하고 여기서 상기 홈은 투과성 플러그와 상호반응하여 개방된 정상 말단을 밀폐시키는 기능을 하고, 이 투과성 플러그는 이 약물 플러그와 단위형 컵의 개방된 정상 말단부를 통해 약물 코어 외부로 물질을 통과시키는 역할을 한다); 및 d) 목적하는 국소 또는 전신적인 생리적 또는 약리학적 효능을 얻는데 유효하거나 진단적 효과를 얻는데 효과적인 적어도 1종의 제2 약물을 포함하는 지속방출형 약물 전달 장치; 또는 목적하는 용해도를 갖는 약물의 유효량을 포함하는 내부 코어 및 폴리머 코팅층(여기서 폴리머 층은 약물에 대해 투과성이고, 폴리머 코팅층은 내부 코어를 완전히 감싸는 것이다)을 포함하는 지속 방출형 약물 전달 장치.
눈에 전달하기 위한 또 다른 접근법으로는 본 발명의 화합물을 눈, 좋기로는, 망막의 색소 상피세포 및/또는 브루흐막에 표적화시키기 위한 리포좀의 사용을 포함하는 것을 들 수 있다. 예컨대, 화합물을 전술한 방식으로 리포좀과 착물화시킬 수 있으며, 이 화합물/리포좀 착물을 안과 질환, 예컨대 광독성을 앓는 환자에게 정막 주사법을 이용하여, 상기 화합물을 목적하는 눈 조직 또는 세포에 직접 주사할 수 있다. 리포좀 복합체를 망막의 색소 상피세포 또는 브루흐막 근방에 직접 주사하는 것은 눈의 PCD의 몇가지 형태와의 복합체를 표적화시키는 것을 포함한다. 특정 실시상태에서, 본 발명의 화합물은 눈 속으로 지속 전달 경로(예컨대 VITRASERT 또는 ENVISION)에 의해 투여된다. 특정 실시상태에서, 화합물은 후방의 서브테넌스 주사에 의해 전달된다. 또 다른 특정 실시상태에서는 본 발명의 조성물을 함유하는 마이크로에멀젼 입자를 눈 조직에 전달하여 브루흐막, 망막 색소 상피 세포 또는 두가지 모두로부터의 지질을 흡수한다.
나노입자는 혈청 반감기를 연장시킴으로써 캡슐화된 약물의 효능을 향상시키기 위한 콜로이드 담체 시스템이다. 폴리알킬시아노아크릴레이트(PACA) 나노입자들은 Stella 외, J. Pharm. Sci., 2000. 89: p. 1452-1464; Brigger 외, Tnt. J. Pharm., 2001. 214: p. 37-42; Calvo 외, Pharm. Res., 2001. 18: p. 1157-1166 ; 및 Li 외, Biol. Pharm. Bull., 2001. 24: p. 662-665에 설명된 바와 같은, 임상 개발 중에 있는 폴리머 콜로이드형 약물 전달 시스템이다. 폴리(락트산) (PLA) 및 폴리(락틱-코-글리콜리드) (PLGA)의 코폴리머와 같은 생물분해성 폴리(히드록시산)은 바이오의료 산업 분야에 널리 사용되고 있으며 특정 임상 응용에 관하여는 FDA 승인도 받은 바 있다. 이에 더하여, PEG-PLGA 나노입자들은 바람직한 특성을 다수 보유하는데, 그 예로는 (i) 캡슐화시키고자 하는 물질이 캐리어 시스템 전체에 대하여 합리적으로 높은 중량 분율(로딩율)을 갖는다는 것; (ii) 캡슐화 공정의 첫번째 단계에 사용되는 물질의 양이 합리적으로 높은 수준으로 최종 담체(포획 효율) 내로 통합된다는 것; (iii) 담체가 응집 없이 용액 내에서 동결건조 및 재조성되는 능력이 있다는 것; (iv) 담체가 생물분해성이라는 것; (v) 담체 시스템의 크기가 작다는 것; 및 (vi) 담체가 입자 지속성을 증강시킨다는 것을 들 수 있다.
나노입자들은 실제로 기술 분야에 공지인 모든 생물분해성 쉘을 이용하여 합성된다. 한가지 실시상태에서, 폴리머, 예컨대 폴리(락트산) (PLA) 또는 폴리(락틱-코글리콜산) (PLGA)이 이용된다. 이러한 폴리머는 생물혼화성 및 생물분해성이며, 해당 나노입자의 광화학 효능과 순환주기를 바람직하게 증가시키도록 변형시킬 수 있다. 한가지 실시상태에서, 폴리머는 입자의 음전하를 증가시킴으로 해서, 음하전을 띄는 핵산 압타머와의 상호반응을 제한시키는 말단 카르복실산기(COOH)로 변형된다. 나노입자는 또한 폴리에틸렌 글리콜 (PEG)에 의해 변형되어, 순환 중인 입자의 안정성과 반감기를 증가시킬 수도 있다. 별법으로, 아민-변형된 압타머와의 ㄱ공유적 컨쥬게이션을 위해, OH기를 N-히드록시숙신이미드 (NHS) 에스테르로 변환시키기도 한다.
본 발명의 조성물 및 방법에 유용한 생체적합성 폴리머의 비제한적인 예로는 폴리아미드, 폴리카보네이트, 폴리알킬렌, 폴리알킬렌 글리콜, 폴리알킬렌 옥사이드, 폴리알킬렌 테레프탈레이트, 폴리비닐 알코올, 폴리비닐 에테르, 폴리비닐 에스테르s, 폴리비닐 할라이드, 폴리(비닐피롤리돈), 폴리글리콜리드, 폴리실록산, 폴리우레탄 및 그의 코폴리머, 알킬 셀룰로스, 히드록시알킬 셀룰로스, 셀룰로스 에테르, 셀룰로스 에스테르, 니트로 셀룰로스, 아크릴산 및 메타크릴산 에스테르의 폴리머, 메틸 셀룰로스, 에틸 셀룰로스, 히드록시프로필 셀룰로스, 히드록시프로필 메틸 셀룰로스, 히드록시부틸 메틸 셀룰로스, 셀룰로스 아세테이트, 셀룰로스 프로피오네이트, 셀룰로스 아세테이트 부티레이트, 셀룰로스 아세테이트 프탈레이트, 카르복실에틸 셀룰로스, 셀룰로스 트리아세테이트, 셀룰로스 설페이트 소듐 염 폴리-메틸 메타크릴레이트), 폴리(에틸 메타크릴레이트), 폴리(부틸 메타크릴레이트), 폴리(이소부틸 메타크릴레이트), 폴리(헥실 메타크릴레이트), 폴리(이소데실 메타크릴레이트), 폴리(라우릴 메타크릴레이트), 폴리(페닐 메타크릴레이트), 폴리(메틸 아크릴레이트), 폴리(이소프로필 아크릴레이트), 폴리(이소부틸 아크릴레이트), 폴리(옥타데실 아크릴레이트), 폴리에틸렌, 폴리프로필렌 폴리(에틸렌 글리콜), 폴리(에틸렌 옥사이드), 폴리(에틸렌 테레프탈레이트), 폴리(비닐 알코올), 폴리비닐 아세테이트, 폴리비닐 클로라이드 폴리스티렌, 폴리(비닐 피롤리돈), 폴리히알루론산, 카제인, 젤라틴, 글루틴, 폴리안하이드라이드, 폴리아크릴산, 알지네이트, 키토산, 폴리(메틸 메타크릴레이트), 폴리(에틸 메타크릴레이트), 폴리(부틸 메타크릴레이트), 폴리(이소부틸 메타크릴레이트), 폴리(헥실 메타크릴레이트) 폴리(이소데실 메타크릴레이트), 폴리(라우릴 메타크릴레이트), 폴리(페닐 메타크릴레이트), 폴리(메틸 아크릴레이트), 폴리(이소프로필 아크릴레이트e), 폴리(이소부틸 아크릴레이트), 폴리(옥타데실 아크릴레이트) 및 이들의 여하한 조합물을 들 수 있다. 한가지 실시상태에서, 본 발명의 나노입자로는 PEG-PLGA 폴리머를 들 수 있다.
본 발명의 조성물은 국소 전달될 수도 있다. 국소 전달을 위해, 이들 조성물들은 눈에 전달하도록 승인된 약학적으로 허용가능한 부형제 중에 제공된다. 좋기로는, 이 조성물은 눈 표면에 적가하는 방식으로 전달하는 것이 좋다. 몇몇 응용에 있어서, 조성물의 전달은 각막을 통한 화합물의 눈 내부로의 분산에 의존한다.
당업자라면 광독성 또는 기타 안과 질환 (예컨대 RP)을 치료하기 위해 본 발명의 화합물을 이용하는 치료 레지멘을 직접적으로 결정할 수 있음을 인식할 것이다. 이것은 실험의 문제라기보다는, 의료 기술 분야에서 일상적으로 행해지는, 최적화의 문제이다. 누드 마우스르 이용하는 생체내 연구는 종종 투여량과 전달 레지멘을 최적화시키기 위한 출발점을 제공해준다. 주사 빈도는 몇몇 마우스 연구에서 그러하였던 것처럼 초기에는 일주일에 1회로 시작한다. 그러나, 이러한 빈도는 하루 한번 내지 2주일에 한번 또는 수개월에 한번에 이르기까지, 최초 임상시험 결과 및 환자에 따른 특별한 요구사항에 맞춰 적절히 조정할 수 있다.
인간에 대한 투여량은 마우스에 사용된 화합물의 양으로부터 외삽하여 초기 측정할 수 있으며 이는 동물 모델과 비교하여 인간의 투여량을 조절하는 경우 기술 분야에서 당업자가 흔히 인식하여 수행하는 과정이다. 특정 실시상태에서는 투여량이 약 1 mg 화합물/Kg 체중 내지 약 5000 mg 화합물/Kg 체중; 또는 약 5 mg/Kg 체중 내지 약 4000 mg/Kg 체중 또는 약 10mg/Kg 체중 내지 약 3000 mg/Kg 체중; 또는 약 50mg/Kg 체중 내지 약 2000 mg/Kg 체중; 또는 약 100 mg/Kg 체중 내지 약 1000 mg/Kg 체중; 또는 약 150 mg/Kg 체중 내지 약 500 mg/Kg 체중의 범위로 가변적이다. 다른 실시상태에서 이러한 투여량은 약 1, 5, 10, 25, 50,75, 100, 150, 10 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050, 1100, 1150, 1200, 1250, 1300, 1350, 1400, 1450, 1500, 1600, 1700, 1800, 1900, 2000, 2500, 3000, 3500, 4000, 4500, 5000 mg/Kg 체중일 수 있다. 또 다른 실시상태에서는, 이보다 적은 양을 사용할 수 있으며, 예컨대, 투여량이 약 5 mg 화합물/Kg 체중 내지 약 20 mg 화합물/Kg 체중 범위일 수 있다. EH 다른 실시상태에서는 투여량이 약 8, 10, 12, 14, 16 15 또는 18 mg/Kg 체중 범위일 수 있다. 물론, 이러한 투여량은 이러한 치료 프로토콜에서 일상적으로 행해지는 바와 같이, 초기 임상 결과 및 환자의 개별적인 특징에 따라 늘리거나 줄일 수 있다.
스크리닝 분석
본 발명의 유용한 화합물은 11-시스-레티날 결합 포켓 내 또는 그 근방과 같이 천연 또는 돌연변이된 옵신 단백질과 가역적으로 결합하는 화학식 1의 화합물이다. 이들 소형 분자 옵신 결합으로부터 형성되는 비표백성(non bleachable) 또는 서서히 표백되는 안료인 로돕신은 예컨대 시각회로 생성물의 축적과 관련된 공독성 뿐만 아니라 과도한 로돕신 자극에 기인하는 세포자멸사적 광세포 사멸을 예방한다. 이러한 결합은 레티노이드, 특히 11-시스-레티날이 결합 포켓에 결합하는 것을 일반적으로 억제하여(예방하지는 못한다 해도) 올-트랜스-레티날과 같은 시각회로 생성물의 형성을 저감시킨다. 이러한 화합물을 동정하기 위한 스크리닝 분석법이 몇가지 존재한다. 한가지 접근법에서는 옵신 단백질을 11-시스-레티날 또는 레티노이드 유사체의 존재 하에 비레티노이드인 후보 화합물 또는 시험 화합물과 점촉시켜서 발색단의 형성 속도 또는 수율을 측정한다. 소망되는 경우, 옵신에 대한 비레티노이드 결합을 특징화시킨다. 좋기로는 옵신에 대한 비레티노이드 결합은 비공유적 및 가역적인 것이 바람직하다. 따라서, 비레티노이드에 의해 로돕신 형성이 억제되었다면 이는 성공적인 시험 화합물이 동정되었음을 가리키는 것이다. 예컨대 특징적인 파장 (예컨대 로돕신의 경우 498 nm)에서의 단백질 흡수도의 증가를 측정하거나 또는 표준방법 (예컨대 리간드와 연관된 효소 활성)을 이용한 단백질의 생물학적 활성 증가를 측정함으로써 로돕신 양의 증가를 분석한다. 유용한 화합물은 11-시스-레티날의 결합 (및 로돕신의 형성)을 적어도 약 10%, 15%, 또는 20%, 또는 좋기로는 25%, 50%, 또는 75%, 또는 가장 좋기로는 90% 까지, 또는 심지어 100% 억제한다.
동정된 화합물의 효능을 광독성 효과를 나타내는 동물 모델에서 분석한다. 예컨대, 지방산 합성에 중요한 돌연변이 elaov 4 유전자를 함유하는 트랜스제닉 마우스를 이용하거나 올-트랜스-레티날이 왕복하는 방식에 영향을 미치는 돌연변이 ABCR 단백질을 생산하는 트랜스제닉 마우스를 이용하여 본 발명에 개시된 화합물의 효능을 입증하였다. 이러한 마우스에서 생산된 리포퓨신의 양을 본 발명의 화합물을 이용하여 측정하자 감소된 속도로 생산되어, 유독한 시각회로 생성물의 축적을 둔화시키는 것으로 나타났다. 어느 경우에서든, 세포 표현형은 동일하며 리포퓨신은 성공적인 시험 화합물이 투여되지 않을 경우, 그 축적이 가속화된다.
다른 한편, 본 발명의 방법에 유용한 화합물의 효능은 시험 화합물을 투여하기 전, 투여 도중 또는 투여 후에 포유동물의 눈을 고강도의 광원에 노출시킨 다음, 고강도 광원에 대한 노출 결과 형성된 시각회로 생성물(예컨대 올-트랜스 레티날, A2E, 또는 리포퓨신)의 양을 측정함으로써 결정하며, 여기서, 본 발명의 화합물은 노출과 관련한 시각회로 생성물의 양을 감소시킬 것이다.
요약하면, 본 발명의 스크리닝법에 의하여 동정된 바람직한 시험 화합물들은 비레티노이드이고, 옵신에 대해 선택적이며 옵신 단백질과 가역적, 비공유적 방식으로 결합한다. 또한, 이들을 달리 증가된 양으로 리포퓨신을 생산하는 트랜스제닉 동물에 투여하면 상기 동물의 눈에서 리포퓨신의 축적이 감소되거나 그 생산 속도가 저하된다. 본 발명의 방법에 따라 동정된 화합물들은 인간 환자와 같은 대상자에 있어서 광독성 또는 기타 안고 질환을 치료하는데 유용하다.
병용 치료법 (Combination Therapies)
광독성 및 AMD 그리고 색소성 망막염을 예방하는데 유용한 본 발명의 조성물은 전술한 바와 같이 부가적인 치료법과 병용될 수 있다.
도 1은 소의 로돕신의 결정 구조에 기초한 인간 로돕신의 상동성 모델로부터 개발된 바와 같은 간체 옵신 레티날 결합 포켓의 예상된 수화작용을 도시한 도면이다. 참고를 위해, 11-시스 레티날의 표면 부피(surface volume)는 보통의 외곽선으로 나타내고 11-시스 레티날의 구조는 진한 흑색선으로 표시하였다. 특이적인 수화 부위는 원(circle)로 표시하였는데 여기서 물 분자는 리간드 부재 하에 포켓 내에 존재하는 것으로 예상된다. "D"로 표시된 원들은 극히 소수성인 환경에 존재하여서, 리간드에 의해 대체될 경우 수화된 아포단백질에 비해 리간드 단백질 복합체의 에너지를 저하시킬 것으로 예상되는 수화 부위를 나타낸다. "R"로 표시된 원들은 물 분자가 단백질 상의 관능기와 안정한 수소 결합을 형성함으로 해서 결합 포켓 내에서 코디네이트를 의미하는 것인 수화 부위를 나타내는 것으로서, 상기 포켓 내에서, 리간드 결합시 물 분자와 단백질 사이에서 절단되는 수소 결합 상호작용을 대체하도록 리간드의 적절한 수소 결합 관능기가 통합되어야 한다.
도 2는 돌연변이 단백질 생산시 20 μM의 화합물 6으로 처리된 P23H 옵신으로부터의 레티날로 처리시, 비히클 즉 디메틸설폭사이드(DMSO) 만으로 처리된 경우에 비해 500 nm에서의 색소 재생 흡수도의 증가를 나타내는 도면이다.
도 3은 돌연변이 단백질 생산시 20 μM의 화합물 13으로 처리된 P23H 옵신으로부터의 레티날로 처리시, 비히클 (DMSO) 만으로 처리된 경우에 비해 500 nm에서의 색소 재생 흡수도의 증가를 나타내는 도면이다.
도 4는 돌연변이 단백질 생산시 20 μM의 화합물 33으로 처리된 P23H 옵신으로부터의 레티날로 처리시, 비히클 (DMSO) 만으로 처리된 경우에 비해 500 nm에서의 색소 재생 흡수도의 증가를 나타내는 도면이다.
도 5는 돌연변이 단백질 생산시 20 μM의 화합물 37로 처리된 P23H 옵신으로부터의 레티날로 처리시, 비히클 (DMSO) 만으로 처리된 경우에 비해 500 nm에서의 색소 재생 흡수도의 증가를 나타내는 도면이다.
도 6은 돌연변이 단백질 생산시 20 μM의 화합물 50으로 처리된 P23H 옵신으로부터의 레티날로 처리시, 비히클 (DMSO) 만으로 처리된 경우에 비해 500 nm에서의 색소 재생 흡수도의 증가를 나타내는 도면이다.
도 7은 돌연변이 단백질 생산시 20 μM의 화합물 51로 처리된 P23H 옵신으로부터의 레티날로 처리시, 비히클 (DMSO) 만으로 처리된 경우에 비해 500 nm에서의 색소 재생 흡수도의 증가를 나타내는 도면이다.
도 8은 돌연변이 단백질 생산시 20 μM의 화합물 52로 처리된 P23H 옵신으로부터의 레티날로 처리시, 비히클 (DMSO) 만으로 처리된 경우에 비해 500 nm에서의 색소 재생 흡수도의 증가를 나타내는 도면이다.
도 9는 돌연변이 단백질 생산시 20 μM의 화합물 53으로 처리된 P23H 옵신으로부터의 레티날로 처리시, 비히클 (DMSO) 만으로 처리된 경우에 비해 500 nm에서의 색소 재생 흡수도의 증가를 나타내는 도면이다.
도 10은 돌연변이 단백질 생산시 20 μM의 화합물 55로 처리된 P23H 옵신으로부터의 레티날로 처리시, 비히클 (DMSO) 만으로 처리된 경우에 비해 500 nm에서의 색소 재생 흡수도의 증가를 나타내는 도면이다.
도 11은 돌연변이 단백질 생산시 20 μM의 화합물 57로 처리된 P23H 옵신으로부터의 레티날로 처리시, 비히클 (DMSO) 만으로 처리된 경우에 비해 500 nm에서의 색소 재생 흡수도의 증가를 나타내는 도면이다.
도 12는 돌연변이 단백질 생산시 20 μM의 화합물 63으로 처리된 P23H 옵신으로부터의 레티날로 처리시, 비히클 (DMSO) 만으로 처리된 경우에 비해 500 nm에서의 색소 재생 흡수도의 증가를 나타내는 도면이다.
도 13은 돌연변이 단백질 생산시 20 μM의 화합물 71로 처리된 P23H 옵신으로부터의 레티날로 처리시, 비히클 (DMSO) 만으로 처리된 경우에 비해 500 nm에서의 색소 재생 흡수도의 증가를 나타내는 도면이다.
도 14는 돌연변이 단백질 생산시 20 μM의 화합물 73으로 처리된 P23H 옵신으로부터의 레티날로 처리시, 비히클 (DMSO) 만으로 처리된 경우에 비해 500 nm에서의 색소 재생 흡수도의 증가를 나타내는 도면이다.
도 15는 돌연변이 단백질 생산시 20 μM의 화합물 80으로 처리된 P23H 옵신으로부터의 레티날로 처리시, 비히클 (DMSO) 만으로 처리된 경우에 비해 500 nm에서의 색소 재생 흡수도의 증가를 나타내는 도면이다.
도 16은 돌연변이 단백질 생산시 20 μM의 화합물 105로 처리된 P23H 옵신으로부터의 레티날로 처리시, 비히클 (DMSO) 만으로 처리된 경우에 비해 500 nm에서의 색소 재생 흡수도의 증가를 나타내는 도면이다.
도 17은 돌연변이 단백질 생산시 20 μM의 화합물 106으로 처리된 P23H 옵신으로부터의 레티날로 처리시, 비히클 (DMSO) 만으로 처리된 경우에 비해 500 nm에서의 색소 재생 흡수도의 증가를 나타내는 도면이다.
이하의 비제한적인 실시예들은 본 발명을 더욱 상세히 설명하여주며, 당업자들로 하여금 본 발명을 실시할 수 있게 해 줄 것이다.
실시예 1: ( E )-3-(2,6,6-트리메틸시클로헥스-1-에닐)아크릴산
시마자키 등의 방법[Shimasaki, H.; Kagechika, H.; Fukasawa, H.; Kawachi, E.; Shudo, K. Chem . Pharm . Bull. 1995, 43, 100-107]에 따라, β-이오논 (26.7 g, 0.139 mol)으로부터 표제 화합물을 무색 결정성 고체(14.2 g, 52%)로서 제조하였다.
R f = 0.4 (25:75 에틸 아세테이트: 헥산); 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 12.16 (br s, 1H), 7.56 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 5.85 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 2.08 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 1.79 (s, 3H), 1.66-1.58 (m, 2H), 1.50-1.46 (m, 2H), 1.08 (s, 6H) ppm.
실시예 2: ( E )-3-(2,6,6-트리메틸시클로헥스-1-에닐)아크릴아미드
2a. ( E )-3-(2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1- 에닐 )아크릴로일 클로라이드
무수 디클로로메탄 (2.5 mL) 중 (E)-3-(2,6,6-트리메틸시클로헥스-1-에닐) 아크릴산 (1, 6.00 g, 3.00 mmol)이 채워진 둥근 바닥 플라스크에 아르곤 하에서 옥살릴 클로라이드 (0.50 mL, 5.50 mmol)를 시린지를 통해 적가하였다. 이 교반 용액에 두 방울의 N,N-디메틸포름아미드 (DMF)를 첨가하고 반응물을 실온에서 3시간 교반하였다. 반응 혼합물을 진공 농축하여 (40℃) 황갈색 오일을 얻고 이를 추가 정제 없이 다음 단계에 사용하였다.
2b. ( E )-3-(2,6,6-트리메틸시클로헥스-1-에닐)아크릴아미드
둥근 바닥 플라스크에서 (E)-3-(2,6,6-트리메틸시클로헥스-1-에닐)아크릴로일 클로라이드 (320 mg, 1.50 mmol)를 테트라히드로퓨란 (THF, 6.0 mL)에 용해시켰다. 반응 혼합물을 0℃로 냉각하고 암모늄 히드록사이드 용액(0.4 mL)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 4시간 동안 교반하면서 실온으로 승온시켰다. 조질의 반응 혼합물을 진공 농축하고(35℃) 및 예비 플레이트 박층 크로마토그래피 (5:95 메탄올: 클로로포름)로 정제하여 황색 무정형 고체를 얻었다 (153 mg, 53%). R f = 0.60 (3:97 메탄올:클로로포름); 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.37 (d, J = 15.5 Hz, 1H), 6.42 (s, 1H), 5.83 (d, J = 15.5 Hz, 1H), 5.61 (s, 1H), 2.09-2.04 (m, 2H), 1.76 (s, 3H), 1.65-1.62 (m, 2H), 1.50-1.48 (m, 2H), 1.07 (s, 6H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 193.9 (MH+).
실시예 3: ( E )- N -메틸-3-(2,6,6-트리메틸시클로헥스-1-에닐)아크릴아미드
DMF (1.0 mL) 중 (E)-3-(2,6,6-트리메틸시클로헥스-1-에닐) 아크릴산 (1, 50.0 mg, 0.257 mmol)의 용액에 2-(7-아자-1H-벤조트리아졸-1-일)-1,1,3,3-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 (HATU, 97.7 mg, 0.257 mmol)를 첨가하였다. 이 용액을 실온에서 30분간 교반한 다음 디이소프로필에틸아민 (66.4 mg, 0.514 mmol) 및 메틸아민 히드로클로라이드 (17.4 mg, 0.257 mmol)를 반응 혼합물에 첨가하였다. 이어서 반응 혼합물을 실온에서 4시간 교반하였다.
1M 염산 용액(2 mL)으로 반응을 중단시키고 2상(biphasic) 혼합물을 분리하였다. 유기층을 진공 농축하고 (40℃) 조질의 물질을, 헥산 중 30% 에틸 아세테이트의 등용매 용리액을 흘려보내는, 플래쉬 컬럼 크로마토그래피를 통해 정제하기 위해 실리카겔에 로딩시켰다. 표제 화합물이 백색 고체 (56 mg, 86%)로서 분리되었다. Mp = 84-88℃; R f = 0.34 (50:50 에틸 아세테이트: 헥산); 1H NMR (400 MHz, CDCl3) 7.30 (d, J = 15.5, 1H), 5.74 (d, J = 15.5 Hz, 1H), 5.48 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 2.93 (d, J = 5.0 Hz, 3H), 2.05 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 1.74 (s, 3H), 1.65-1.60 (m, 2H), 1.49 (dd, J = 7.5, 4.0 Hz, 2H), 1.06 (s, 6H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 208 (MH+).
실시예 4: ( E )- N,N -디메틸-3-(2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1- 에닐 )아크릴아미드
메틸아민 히드로클로라이드 대신 디메틸아민 (테트라히드로퓨란 중 2.0 M 용액)을 사용한 것을 제외하고 실시예 3의 공정에 따라, 실시예 1의 생성물로부터 표제 화합물을 무색 오일 (18 mg, 32%)로서 얻었다. R f = 0.44 (50:50 에틸 아세테이트: 헥산); 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.34 (d, J = 15.6 Hz, 1H), 6.25 (d, J = 15.5 Hz, 1H), 3.10 (s, 3H), 3.05 (s, 3H), 2.05 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 1.77 (s, 3H), 1.64 (dd, J = 8.0, 4.0 Hz, 2H), 1.51-1.47 (m, 2H), 1.07 (s, 6H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 221 (MH+).
실시예 5: ( E )-1-(피페리딘-1-일)-3-(2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1- 에닐 )프로-2-펜-1-온
피페리딘을 메틸아민 히드로클로라이드 대신 사용한 것을 제외하고 실시예 3의 공정에 따라 실시예 1의 생성물로부터 표제 화합물을 무색 오일 (62 mg, 95%)로서 얻었다. R f = 0.50 (40:60 에틸 아세테이트: 헥산); 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.30 (d, J = 13.5 Hz, 1H), 6.24 (d, J = 15.5 Hz, 1H), 3.70-3.45 (m, 4H), 2.04 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 1.75 (s, 3H), 1.70-1.56 (m, 8H), 1.48 (dd, J = 7.5, 4.0 Hz, 2H), 1.06 (s, 6H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 262 (MH+).
실시예 6: ( E )-1- 모르폴리노 -3-(2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1- 에닐 )프로-2-펜-1-온
모르폴린을 메틸아민 히드로클로라이드 대신 사용하고 O-벤조트리아졸-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 (HBTU)을 2-(7-아자-1H-벤조트리아졸-1-일)-1,1,3,3-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 (HATU) 대신 사용한 것을 제외하고 표제 화합물을 무색 오일(60.0 mg, 89%)로서 제조하였다. R f = 0.40 (25:75 에틸 아세테이트: 헥산); 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.36 (d, J = 15.5 Hz, 1H), 6.20 (d, J = 17.0 Hz, 1H), 3.77-3.47 (m, 7H), 3.10-3.02 (m, 1H), 2.03 (d, J = 5.5 Hz, 2H), 1.74 (s, 3H), 1.61 (dd, J = 7.5, 4.0 Hz, 2H), 1.51-1.42 (m, 2H), 1.05 (s, 6H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 264 (MH+).
실시예 7: ( E )-1-(4- 메틸 -1,4- 디아제판 -1-일)-3-(2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1-에닐) 프로-2-펜-1-온
7a. ( E )- 3차- 부틸 4-(3-(2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1- 에닐 )아크릴로일)-1,4-디아제판-1-카르복실레이트
3차-부틸 1,4-디아제판-1-카르복실레이트을 메틸아민 히드로클로라이드 대신 사용하고 O-벤조트리아졸-N,N,N ',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 (HBTU)을 2-(7-아자-1H-벤조트리아졸-1-일)-1,1,3,3-테트라메틸우로늄 헥사플루오로-포스페이트 (HATU) 대신 사용한 것을 제외하고, 표제 화합물을 무색 오일 (193 mg, 98%)로서 제조하였다. R f = 0.40 (25:75 에틸 아세테이트: 헥산); 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.47-7.30 (m, 1H), 6.18 (d, J = 15.5 Hz, 1H), 3.73-3.31 (m, 8H), 2.04 (s, 2H), 1.95-1.83 (m, 2H), 1.75 (d, J = 12.0 Hz, 3H), 1.61 (dd, J = 12.0, 6.0 Hz, 2H), 1.45 (m, 11H), 1.06 (s, 6H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 377 (MH+).
7b. ( E )-1-(1,4- 디아제판 -1-일)-3-(2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1- 에닐 )프로-2-펜-1-온
디클로로메탄 (3 mL) 중 실시예 7a의 생성물 (160 mg, 0.425 mmol)의 용액에 디에틸 에테르 (0.43 mL, 0.85 mmol) 중 2.0 M 염산 용액을 적가하였다. 반응 혼합물 실온에서 18시간 교반하였다. 디클로로메탄 중 10-25% 메탄올 구배를 이용하여표제 화합물을 플래쉬 컬럼 크로마토그래피에 의해 분리하여 암황색 오일을 얻었다 (115 mg, 87%). R f = 0.30 (90:10 디클로로메탄:메탄올); 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.78-7.23 (m, 2H), 6.40-6.01 (m, 2H), 4.32-4.13 (m, 1H), 3.81 (m, 4H), 3.22 (m, 4H), 2.12 (m, 3H), 1.84-1.25 (m, 9H), 1.08 (m, 5H), 0.92 (m, 3H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 277 (MH+).
7c. ( E )-1-(4- 메틸 -1,4- 디아제판 -1-일)-3-(2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1- 에닐 )프로-2-펜-1-온
실온에서 (E)-1-(1,4-디아제판-1-일)-3-(2,6,6-트리메틸시클로헥스-1-에닐)프로-2-펜-1-온 (7b, 50.0 mg, 0.181 mmol) 및 탄산칼륨(50.0 mg, 0.362 mmol)을 디클로로메탄 (3mL)에 용해시켰다. 이 교반 용액에 시린지를 통해 요오도메탄 (25.7 mg, 0.181 mmol)을 적가하였다. 반응 혼합물을 18시간 동안 실온에서 교반하였다.
반응 혼합물을 여과하여 과량의 탄산칼륨을 제거한 다음 진공 농축하여 (40℃) 조질의 고체를 얻었다. 조질의 물질을 플래쉬 컬럼 크로마토그래피 (98:2 디클로로메탄: 메탄올)로 종제하여 담황색 오일을 얻었다 (16.0 mg, 31%). R f = 0.75 (90:9:1 디클로로메탄: 메탄올: 암모늄 히드록사이드); 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.34 (dd, J = 15.5, 7.5 Hz, 1H), 6.18 (dd, J = 15.5, 6.0 Hz, 1H), 3.80-3.57 (m, 4H), 2.74-2.50 (m, 4H), 2.38 (d, J = 8.5 Hz, 3H), 2.07-1.89 (m, 4H), 1.73 (s, 3H), 1.61 (td, J = 12.5, 6.0 Hz, 2H), 1.50-1.41 (m, 2H), 1.04 (s, 6H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 291 (MH+).
실시예 8: ( E )-1-(4-에틸-1,4- 디아제판 -1-일)-3-(2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1-에닐) 프로-2-펜-1-온
에틸 요오다이드를 요오도메탄 대신 사용한 것을 제외하고 실시예 7c의 공정에 따라 실시예 7b의 생성물로부터 표제 화합물을 황색 오일 (37 mg, 34%)로서 얻었다. R f = 0.23 (5:95 메탄올: 클로로포름); 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.34 (m, 1H), 6.19 (d, J = 15.5 Hz, 1H), 3.82-3.67 (m, 2H), 3.68-3.57 (m, 2H), 2.81-2.50 (m, 6H), 2.02 (m, 2H), 1.93 (m, 2H), 1.74 (s, 3H), 1.67-1.56 (m, 2H), 1.53-1.41 (m, 2H), 1.25 (s, 1H), 1.13-0.98 (m, 8H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 305 (MH+).
실시예 9: ( E )-1-(4-프로필-1,4- 디아제판 -1-일)-3-(2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1-에닐) 프로-2-펜-1-온
프로필 브로마이드를 요오도메탄 대신 사용한 것을 제외하고 실시예 7c의 공정에 따라 실시예 7b의 생성물로부터 표제 화합물을 황색 오일 (12 mg, 21%)로서 얻었다. R f = 0.23 (5:95 메탄올: 클로로포름); 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.32 (dd, J = 15.5, 7.5 Hz, 1H), 6.16 (m, 1H), 3.76-3.63 (m, 2H), 3.58 (t, J = 5.0 Hz, 2H), 2.78-2.66 (m, 2H), 2.67-2.56 (m, 3H), 2.51-2.36 (m, 2H), 2.00 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 1.87 (m, 3H), 1.71 (s, 3H), 1.59 (m, 2H), 1.52-1.40 (m, 4H), 1.02 (s, 6H), 0.85 (m, 3H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 319 (MH+).
실시예 10: ( E )-1-(4-아세틸-1,4- 디아제판 -1-일)-3-(2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1-에닐) 프로-2-펜-1-온
아세틸 클로라이드를 요오도메탄 대신 사용한 것을 제외하고 실시예 7c의 공정에 따라 실시예 7b의 생성물로부터 표제 화합물을 무색 오일 (40.4 mg, 71%)로서 제조하였다. R f = 0.80 (90:10 디클로로메탄: 메탄올); 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.47-7.27 (m, 1H), 6.15 (d, J = 15.5 Hz, 1H), 3.58 (m, 9H), 2.77 (s, 1H), 2.11-1.96 (m, 5H), 1.97-1.77 (m, 3H), 1.69 (d, J = 16.5 Hz, 3H), 1.58 (dd, J = 7.5, 4.0 Hz, 2H), 1.48-1.39 (m, 2H), 1.00 (s, 6H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 319 (MH+).
실시예 11: ( E )-1-(4- 프로피오닐 -1,4- 디아제판 -1-일)-3-(2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1-에닐)프로-2-펜-1-온
프로피오닐 클로라이드을 요오도메탄 대신 사용한 것을 제외하고 실시예 7c의 공정에 따라 실시예 7b의 생성물로부터 표제 화합물을 무색 오일 (56.1 mg, 93%)로서 제조하였다. R f = 0.25 (75:25 디클로로메탄: 에틸 아세테이트); 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.37 (q, J = 15.5 Hz, 1H), 6.17 (dd, J = 15.5, 6.0 Hz, 1H), 3.76-3.44 (m, 8H), 2.38-2.27 (m, 2H), 2.02 (s, 2H), 1.94-1.82 (m, 2H), 1.73 (s, 3H), 1.59 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 1.50-1.41 (m, 2H), 1.14 (td, J = 14.5, 7.5 Hz, 3H), 1.03 (s, 6H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 333 (MH+).
실시예 12: ( E )-1-(4-(2,2,2- 트리플루오로아세틸 )-1,4- 디아제판 -1-일)-3-(2,6,6-트리메틸 시클로헥스-1-에닐)프로-2-펜-1-온
트리플루오로무수 아세트산을 요오도메탄 대신 사용한 것을 제외하고, 실시예 7c의 공정에 따라 실시예 7b의 생성물로부터 표제 화합물을 무색 오일 (40.5 mg, 60%)로서 제조하였다. R f = 0.75 (75:25 디클로로- 메탄: 에틸 아세테이트); 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.41 (m, 1H), 6.17 (dd, J = 15.5, 6.5 Hz, 1H), 3.64 (m, 8H), 2.09-1.91 (m, 4H), 1.74 (s, 3H), 1.68-1.56 (m, 2H), 1.48 (dd, J = 7.5, 4.0 Hz, 2H), 1.05 (s, 6H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 373 (MH+).
실시예 13: ( E )-4-(3-(2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1- 에닐 )아크릴로일)-1,4- 디아제판 -1-카르복사미드
트리메틸실릴 이소시아네이트를 요오도메탄 대신 사용한 것을 제외하고, 실시예 7c의 공정에 따라 실시예 7b의 생성물로부터 표제 화합물을 황색 오일 (20 mg, 21%)로서 제조하였다. R f = 0.57 (100% 에틸 아세테이트); 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.39 (m, 1H), 6.18 (d, J = 15.0 Hz, 1H), 5.19-4.66 (m, 2H), 3.84-3.32 (m, 8H), 2.02 (m, 2H), 1.73 (s, 3H), 1.60 (m, 2H), 1.46 (m, 2H), 1.25 (m, 2H), 1.04 (s, 6H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 320 (MH+).
실시예 14: ( E )- N - 메틸 -4-(3-(2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1- 에닐 )아크릴로일)-1,4-디아제판-1-카르복사미드
아르곤 하 실온에서, (E)-1-(1,4-디아제판-1-일)-3-(2,6,6-트리메틸시클로헥스-1-에닐)프로-2-펜-1-온 (7b, 50.0 mg, 0.181 mmol) 및 탄산칼륨(100 mg, 0.362 mmol)을 무수 디클로로메탄 (5 mL)에 용해시켰다. 이 교반 용액에 4-니트로페닐 클로로포르메이트 (73.0 mg, 0.362 mmol)를 첨가하였다. 이 반응 혼합물을 18시간 동안 실온에서 교반하였다.
반응 혼합물을 마이크로웨이브용 용기에 넣고 및 용매를 진공 하에 제거하였다. 잔사에 메틸아민 (56.2 mg, 1.81 mmol)을 첨가하고 밀봉된 마이크로웨이브용 용기를 마이크로웨이브 반응기에서 100℃ 온도로 30분간 가열하였다. 이어서 반응용기의 내용물을 10 mL의 물에 붓고, 디클로로메탄 (3 x 10 mL)으로 추출한 다음 유기층들을 한데 모아서 소듐 설페이트로 건조시켰다. 용매를 진공 하에 제거하여(40℃) 백색 고체를 얻었다. 조질의 물질을 플래쉬 컬럼 크로마토그래피 (98:2 디클로로메탄: 메탄올)를 이용하여 정제함으로써 무색 오일 (31 mg, 0.092 mmol, 25%)을 얻었다. R f = 0.23 (98:2 디클로로메탄: 메탄올); 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.37 (dd, J = 15.5, 15.5 Hz, 1H), 6.18 (dd, J = 15.5, 6.0 Hz, 1H), 4.48-4.38 (m, 1H), 3.76-3.25 (m, 8H), 2.81 (s, 3H), 2.08-1.82 (m, 4H), 1.74 (s, 3H), 1.68-1.60 (m, 4H), 1.48-1.42 (m, 2H), 1.05 (s, 6H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 334 (MH+).
실시예 15: ( E )- N -에틸-4-(3-(2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1- 에닐 )아크릴로일)-1,4-디아제판-1-카르복사미드
에틸 이소시아네이트를 요오도메탄 대신 사용한 것을 제외하고, 실시예 7c의 공정에 따라 실시예 7b의 생성물로부터 표제 화합물을 무색 오일 (63 mg, 100%)로서 제조하였다. R f = 0.1 (80:20 에틸 아세테이트: 헥산); 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.40 (t, J = 15.5 Hz, 1H), 6.21 (dd, J = 15.5, 6.5 Hz, 1H), 4.38 (m, 1H), 3.71 (d, 2H), 3.54 (m, 4H), 3.34-3.24 (m, 2H), 2.83 (s, 2H), 2.06 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 2.03-1.96 (m, 1H), 1.90 (t, J = 6.0 Hz, 1H), 1.7 (s, 3H), 1.64 (m, 2H), 1.52-1.46 (m, 2H), 1.16 (t, J = 7.0 Hz, 3H), 1.07 (s, 6H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 348 (MH+).
실시예 16: ( E )- N -프로필-4-(3-(2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1- 에닐 )아크릴로일)-1,4-디아제판-1-카르복사미드
프로필 이소시아네이트를 요오도메탄 대신 사용한 것을 제외하고, 실시예 7c의 공정에 따라 실시예 7b의 생성물로부터 표제 화합물을 담황색 오일 (61.0 mg, 93%)로서 제조하였다. R f = 0.15 (50:50 에틸 아세테이트: 헥산); 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.37 (t, J = 15.5 Hz, 1H), 6.18 (dd, J = 15.5, 7.0 Hz, 1H), 4.51-4.33 (m, 2H), 3.74 (t, J = 5.5 Hz, 1H), 3.62 (t, J = 5.5 Hz, 2H), 3.57-3.44 (m, 4H), 3.34 (t, J = 6.0 Hz, 1H), 3.15 (m, 3H), 2.08-1.93 (m, 3H), 1.86 (dd, J = 12.0, 6.0 Hz, 1H), 1.74 (s, 4H), 1.67-1.42 (m, 7H), 1.04 (s, 6H), 0.91 (t, J = 7.5 Hz, 5H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 350.3 (MH+).
실시예 17: ( E )- N -이소프로필-4-(3-(2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1- 에닐 )아크릴로일)-1,4-디아제판-1-카르복사미드
이소프로필 이소시아네이트를 요오도메탄 대신 사용한 것을 제외하고, 실시예 7c의 공정에 따라 실시예 7b의 생성물로부터 표제 화합물을 담황색 오일 (66.0 mg, 99%)로서 제조하였다. R f = 0.70 (90:10 디클로로-메탄: 메탄올); 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.36 (t, J = 16.0 Hz, 1H), 6.18 (dd, J = 15.5, 6.5 Hz, 1H), 4.29 (m, 1H), 3.95 (dd, J = 12.5, 6.0 Hz, 1H), 3.58 (m, 7H), 3.33 (s, 1H), 2.79 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 2.11-1.78 (m, 4H), 1.73 (s, 3H), 1.61 (dd, J = 5.5, 3.5 Hz, 2H), 1.52-1.38 (m, 3H), 1.12 (m, 6H), 1.03 (s, 6H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 362 (MH+).
실시예 18: ( E )- 메틸 -4-(3-(2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1- 에닐 )아크릴로일)-1,4-디아제판-1-카르복실레이트
메틸 클로로포르메이트를 요오도메탄 대신 사용한 것을 제외하고, 실시예 7c의 공정에 따라 실시예 7b의 생성물로부터 표제 화합물을 무색 고체 (40.1 mg, 67%)로서 제조하였다. R f = 0.45 (75:25 디클로로메탄: 에틸 아세테이트); 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.36 (t, J = 17.0 Hz, 1H), 6.15 (t, J = 12.5 Hz, 1H), 3.75-3.34 (m, 11H), 2.02 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 1.86 (m, 3H), 1.73 (s, 3H), 1.60 (m, 2H), 1.51-1.38 (m, 2H), 1.03 (s, 6H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 335 (MH+).
실시예 19: ( E )- N -에틸-4-(3-(2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1- 에닐 )아크릴로일)-1,4-디아제판-1-카르복실레이트
에틸 클로로포르메이트를 요오도메탄 대신 사용한 것을 제외하고, 실시예 7c의 공정에 따라 실시예 7b의 생성물로부터 표제 화합물을 담황색 오일 (61 mg, 98%)로서 제조하였다. R f = 0.1 (25:75 에틸 아세테이트: 디클로로메탄); 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.34 (d, 1H), 6.16 (dd, J = 15.5, 6.5 Hz, 1H), 4.52 (s, 1H), 3.75-3.41 (m, 7H), 3.37-3.15 (m, 3H), 2.05-1.78 (m, 4H), 1.71 (s, 3H), 1.63-1.53 (m, 2H), 1.48-1.39 (m, 2H), 1.10 (t, J = 7.0 Hz, 3H), 1.01 (s, 6H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 349 (MH+).
실시예 20: ( E )-1-(4-( 메틸설포닐 )-1,4- 디아제판 -1-일)-3-(2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1-에닐)프로-2-펜-1-온
메탄설포닐 클로라이드를 요오도메탄 대신 사용한 것을 제외하고, 실시예 7c의 공정에 따라 실시예 7b의 생성물로부터 표제 화합물을 무색 오일 (48 mg, 75%)로서 제조하였다.
R f = 0.7 (10:90 메탄올: 디클로로메탄); 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.41 (m, 1H), 6.25-6.11 (m, 1H), 3.75 (m, 4H), 3.41 (m, 4H), 2.84 (s, 3H), 1.98 (m, 2H), 1.74 (s, 3H), 1.65-1.54 (m, 2H), 1.51-1.39 (m, 4H), 1.09-0.98 (s, 6H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 355 (MH+).
실시예 21: ( E )-1-(4-( 에틸설포닐 )-1,4- 디아제판 -1-일)-3-(2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1-에닐)프로-2-펜-1-온
에탄설포닐 클로라이드를 요오도메탄 대신 사용한 것을 제외하고, 실시예 7c의 공정에 따라 실시예 7b의 생성물로부터 표제 화합물을 담황색 오일 (58 mg, 86%)로서 제조하였다. R f = 0.75 (10:90 메탄올: 디클로로메탄); 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.40 (m, 1H), 6.18 (m, 1H), 3.72 (m, 5H), 3.53-3.30 (m, 2H), 2.99 (m, 2H), 2.78 (s, 2H), 2.08-1.89 (m, 4H), 1.73 (s, 3H), 1.45 (m, 2H), 1.31 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 1.21 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 1.03 (s, 6H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 369 (MH+).
실시예 22: ( E )-1-(4-( 트리플루오로메틸설포닐 )-1,4- 디아제판 -1-일)-3-(2,6,6-트리-메틸시클로헥스-1-에닐)프로-2-펜-1-온
트리플루오로메탄설포닐 클로라이드를 요오도메탄 대신 사용한 것을 제외하고, 실시예 7c의 공정에 따라 실시예 7b의 생성물로부터 표제 화합물을 무색 오일 (22 mg, 30%)로서 제조하였다. R f = 0.25 (25:75 에틸 아세테이트: 디클로로메탄); 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.45 (m, 1H), 6.17 (m, 1H), 3.67 (m, 8H), 2.09-1.95 (m, 4H), 1.74 (s, 3H), 1.61 (m, 2H), 1.53-1.44 (m, 2H), 1.05 (s, 6H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 409 (MH+).
실시예 23: ( E )- N - 메틸 -4-(3-(2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1- 에닐 )아크릴로일)-1,4-디아제판-1-카르보티오아미드
메틸 티오이소시아네이트를 요오도메탄 대신 사용한 것을 제외하고, 실시예 7c의 공정에 따라 실시예 7b의 생성물로부터 표제 화합물을 담황색 오일 (50 mg, 79%)로서 제조하였다. R f = 0.15 (25:75 에틸 아세테이트: 디클로로메탄); 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.35 (t, J = 16.0 Hz, 1H), 6.19 (m, 1H), 5.87 (m, 1H), 4.17 (t, J = 5.0 Hz, 1H), 3.98-3.72 (m, 5H), 3.57 (m, 3H), 3.12 (d, J = 4.0 Hz, 3H), 2.78 (s, 2H), 1.98 (m, 4H), 1.73 (s, 3H), 1.64-1.55 (m, 2H), 1.46 (m, 2H), 1.03 (s, 6H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 350 (MH+).
실시예 24: ( E )- N -에틸-4-(3-(2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1- 에닐 )아크릴로일)-1,4-디아제판-1-카르보티오아미드
에틸 티오이소시아네이트를 요오도메탄 대신 사용한 것을 제외하고, 실시예 7c의 공정에 따라 실시예 7b의 생성물로부터 표제 화합물을 담황색 오일 (66 mg, 100%)로서 제조하였다. R f = 0.28 (80:20 에틸 아세테이트: 헥산); 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.43 (t, J = 15.5 Hz, 1H), 6.23 (m, 1H), 5.48 (s, 1H), 4.20 (t, J = 5.0 Hz, 1H), 4.02-3.90 (m, 2H), 3.82-3.76 (m, 1H), 3.71 (m, 2H), 3.60 (m, 3H), 2.83 (s, 2H), 2.07 (m, 2H), 2.03-1.94 (m, 1H), 1.77 (s, 3H), 1.69-1.58 (m, 4H), 1.54-1.47 (m, 2H), 1.26 (t, J = 7.0 Hz, 3H), 1.08 (s, 6H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 364 (MH+).
실시예 25: ( E )- N -프로필-4-(3-(2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1- 에닐 )아크릴로일)-1,4-디아제판-1-카르보티오아미드
프로필 티오이소시아네이트를 요오도메탄 대신 사용한 것을 제외하고, 실시예 7c의 공정에 따라 실시예 7b의 생성물로부터 표제 화합물을 담황색 오일 (64 mg, 94%)로서 제조하였다. R f = 0.55 (25:75 에틸 아세테이트: 디클로로메탄); 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.38 (t, J = 16.5 Hz, 1H), 6.21 (m, 1H), 5.67 (m, 1H), 4.18 (m, 1H), 3.99-3.74 (m, 4H), 3.65-3.50 (m, 5H), 2.09-1.93 (m, 4H), 1.75 (s, 3H), 1.68-1.56 (m, 4H), 1.48 (m, 2H), 1.05 (s, 6H), 0.95 (t, J = 7.5 Hz, 3H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 378 (MH+).
실시예 26: ( E )- N -이소프로필-4-(3-(2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1- 에닐 )아크릴로일)-1,4-디아제판-1-카르보티오아미드
이소프로필 티오이소시아네이트을 요오도메탄 대신 사용한 것을 제외하고, 실시예 7c의 공정에 따라 실시예 7b의 생성물로부터 표제 화합물을 담황색 오일 (64 mg, 94%)로서 제조하였다. R f = 0.5 (25:75 에틸 아세테이트: 디클로로메탄); 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.38 (t, J = 16.5 Hz, 1H), 6.21 (m, 1H), 5.34 (m, 7.5 Hz, 1H), 4.64 (m, 1H), 4.13 (m, 1H), 3.83 (m, 4H), 3.57 (m, 3H), 2.08-1.92 (m, 4H), 1.75 (s, 3H), 1.62 (m, 2H), 1.51-1.43 (m, 2H), 1.24 (d, J = 6.5 Hz, 6H), 1.05 (s, 6H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 378 (MH+).
실시예 27: ( E )-1-(4- 메틸피페라진 -1-일)-3-(2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1- 에닐 )프로-2-펜-1-온
N-메틸피페라진을 모르폴린 대신 사용한 것을 제외하고 실시예 6의 공정에 따라 실시예 1의 생성물로부터 표제 화합물을 황색 오일 (112 mg, 81%)로서 제조하였다. Rf = 0.28 (90:10 디클로로메탄: 메탄올); 1H NMR (400 MHz, CD2Cl2) δ 7.26 (d, 1H, J = 16 Hz), 6.25 (d, 1H, J = 16 Hz), 3.74-3.47 (m, 4H), 2.41-2.38 (m, 4H), 2.30 (s, 3H), 2.08 (t, 2H, J = 6.4 Hz), 1.77 (s, 3H), 1.69-1.63 (m, 2H), 1.53-1.50 (m, 2H), 1.08 (s, 6H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 277.2 (MH+).
실시예 28: ( E )-1-(4- 에틸피페라진 -1-일)-3-(2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1- 에닐 )프로-2-펜-1-온
28a. ( E )- 3차- 부틸 4-(3-(2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1- 에닐 )아크릴로일) 피페라진-1-카르복실레이트
3차-부틸 피페라진-1-카르복실레이트를 메틸아민 히드로클로라이드 대신 사용하고 O-벤조트리아졸-N,N,N ',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 (HBTU)를 2-(7-아자-1H-벤조트리아졸-1-일)-1,1,3,3-테트라메틸우로늄 헥사플루오로-포스페이트 (HATU) 대신 사용한 것을 제외하고, 실시예 3의 공정에 따라 실시예 1의 생성물로부터 표제 화합물을 황색 오일 (3.60 g, 99%)로서 제조하였다. R f = 0.21 (20:80 에틸 아세테이트:헥산); 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.38 (d, J = 15.5 Hz, 1H), 6.21 (d, J = 13.0 Hz, 1H), 3.70-3.48 (m, 8H), 2.06 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 1.77 (s, 3H), 1.67-1.62 (m, 2H), 1.49 (s, 11H), 1.10 (s, 6H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 363 (MH+).
28b. ( E )-1-(피페라진-1-일)-3-(2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1- 에닐 )프로-2-펜-1-온
실시예 7b의 공정에 따라 실시예 28a의 생성물로부터 표제 화합물을 황색 오일 (250 mg, 96%)로서 제조하였다. Rf = 0.36 (91:8:1 디클로로메탄: 메탄올: 암모늄 히드록사이드); 1H NMR (400 MHz, CD2Cl2) δ 7.25 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 6.24 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 3.70-3.45 (m, 4H), 2.88-2.83 (m, 4H), 2.07 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 1.77 (s, 3H), 1.69-1.63 (m, 2H), 1.53-1.50 (m, 2H), 1.08 (s, 6H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 263 (MH+).
28c. ( E )-1-(4- 에틸피페라진 -1-일)-3-(2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1- 에닐 )프로-2-펜-1-온
에틸 브로마이드를 요오도메탄 대신 사용하고,아세토니트릴을 디클로로메탄 대신 사용하며, 반응 혼합물을 실온 대신 50 ℃에서 가열한 것을 제외하고, 실시예 7c의 공정에 따라 실시예 28b의 생성물로부터 표제 화합물을 황색 오일 (21 mg, 38%)로서 제조하였다. Rf = 0.28 (95:5 디클로로메탄: 메탄올); 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.30 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 6.23 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 3.80-3.60 (m, 4H), 2.55-2.42 (m, 6H), 2.07 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 1.78 (s, 3H), 1.69-1.62 (m, 2H), 1.53-1.50 (m, 2H), 1.12 (t, J = 6.0 Hz, 3H), 1.07 (s, 6H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 291 (MH+).
실시예 29: ( E )-1-(4- 프로필피페라진 -1-일)-3-(2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1-에닐)프로-2-펜-1-온
프로필 요오다이드를 요오도메탄 대신 사용한 것을 제외하고, 실시예 7c의 공정에 따라 실시예 28b의 생성물로부터 표제 화합물을 투명 오일 (3.5 mg, 6%)로서 제조하였다. Rf = 0.53 (90:10 디클로로메탄: 메탄올); 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.35 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 6.22 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 3.79-3.46 (m, 4H), 2.95-2.84 (m, 4H), 2.05 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 1.76 (s, 3H), 1.71 (s, 2H), 1.63 (m, 2H), 1.53-1.45 (m, 2H), 1.07 (s, 6H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 305 (MH+).
실시예 30: ( E )-1-(4- 아세틸피페라진 -1-일)-3-(2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1-에닐)프로-2-펜-1-온
아세틸 클로라이드를 요오도메탄 대신 사용한 것을 제외하고, 실시예 7c의 공정에 따라 실시예 28b의 생성물로부터 표제 화합물을 투명 오일 (52 mg, 90%)로서 제조하였다. Rf = 0.16 (98:2 디클로로메탄: 메탄올); 1H NMR (400 MHz, CD2Cl2) δ 7.32 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 6.25 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 3.79-3.46 (m, 8H), 2.14-2.03 (m, 5H), 1.78 (s, 3H), 1.70-1.61 (m, 2H), 1.55-1.50 (m, 2H), 1.09 (s, 6H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 305 (MH+).
실시예 31: ( E )-1-(4- 프로피오닐피페라진 -1-일)-3-(2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1-에닐) 프로-2-펜-1-온
프로피오닐 클로라이드를 요오도메탄 대신 사용한 것을 제외하고, 실시예 7c의 공정에 따라 실시예 28b의 생성물로부터 표제 화합물을 투명 오일 (31 mg, 51%)로서 제조하였다. Rf = 0.10 (98:2 디클로로메탄: 메탄올); 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.40 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 6.22 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 3.81-3.47 (m, 8H), 2.40 (dt, J = 7.5, 5.0 Hz, 4H), 2.07 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 1.77 (s, 3H), 1.64 (m, 2H), 1.53-1.46 (m, 2H), 1.23-1.14 (m, 2H), 1.08 (s, 6H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 319 (MH+).
실시예 32: ( E )-1-(4-(2,2,2- 트리플루오로아세틸 ) 피페라진-1-일)-3-(2,6,6-트리메틸시클로-헥스-1-에닐)프로-2-펜-1-온
트리플루오로무수 아세트산을 요오도메탄 대신 사용한 것을 제외하고, 실시예 7c의 공정에 따라 실시예 28b의 생성물로부터 표제 화합물을 투명 오일 (65 mg, 96%)로서 제조하였다. Rf = 0.25 (98:2 디클로로-메탄: 메탄올); 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.42 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 6.20 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 3.70 (m, 8H), 2.10-2.01 (m, 2H), 1.77 (s, 3H), 1.64 (m 2H), 1.53-1.45 (m, 2H), 1.07 (s, 6H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 359 (MH+).
실시예 33: ( E )-4-(3-(2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1- 에닐 )아크릴로일)피페라진-1-카르복사미드
아르곤 하 실온에서, 실시예 28b의 생성물 (50 mg, 0.189 mmol) 및 트리에틸아민 (79 mL, 0.567 mmol)을 무수 디클로로메탄 (4 mL)에 용해시키고 5분간 교반하였다. 이 교반된 반응 혼합물에 트리메틸실릴 이소시아네이트 (76 mL, 0.567 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반하였다.
반응 혼합물을 암모늄 클로라이드 (10 mL) 포화수용액에 붓고 디클로로메탄 (3X10 mL)으로 추출하였다. 유기상들을 한데 모아서 소듐 설페이트로 건조시킨 다음 진공 농축시켰다. 생성물을 플래쉬 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물을 백색 고체 (60 mg, 정량적)로서 얻었다. Mp = 144 ℃; Rf = 0.31 (96:4 디클로로메탄: 메탄올); 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 7.39 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 6.21 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 4.61-4.60 (m, 2H), 3.90-3.40 (m, 8H), 2.06 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 1.77 (s, 3H), 1.66-1.62 (m, 2H), 1.51-1.47 (m, 2H), 1.07 (s, 6H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 306 (MH+).
실시예 34: ( E )- N - 메틸 -4-(3-(2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1- 에닐 )아크릴로일)피페라진-1-카르복사미드
실시예 14의 공정에 따라 실시예 28b의 생성물로부터 표제 화합물을 투명 오일 (51 mg, 85%)로서 제조하였다. Rf = 0.50 (50:50 에틸 아세테이트: 헥산); 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.42 (d, 1H, J = 16.0 Hz), 6.20 (d, 1H, J = 16.0 Hz), 4.45 (br s, 1H), 3.80-3.30 (m, 8H), 2.88 (s, 3H), 2.09 (t, 2H, J = 6.4 Hz)), 1.77 (s, 3H), 1.70-1.64 (m 2H), 1.53-1.45 (m, 2H), 1.07 (s, 6H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 320 (MH+).
실시예 35: ( E )- N -에틸-4-(3-(2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1- 에닐 )아크릴로일)피페라진-1-카르복사미드
에틸 이소시아네이트를 요오도메탄 대신 사용한 것을 제외하고, 실시예 7c의 공정에 따라 실시예 28b의 생성물로부터 표제 화합물을 백색 고체 (25 mg, 40%)로서 제조하였다. Mp = 125-128 ℃; Rf = 0.50 (2:1 에틸 아세테이트: 디클로로메탄); 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.41 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 6.22 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 4.40 (br s, 1H), 3.82-3.30 (m, 10H), 2.13 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 1.77 (s, 3H), 1.70-1.64 (m 2H), 1.53-1.45 (m, 2H), 1.18 (t, J = 6.0 Hz, 3H), 1.08 (s, 6H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 334 (MH+).
실시예 36: ( E )- N -프로필-4-(3-(2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1- 에닐 )아크릴로일)피페라진-1-카르복사미드
n-프로필 이소시아네이트를 요오도메탄 대신 사용한 것을 제외하고 실시예 7c의 공정에 따라 실시예 28b의 생성물로부터 표제 화합물을 투명 오일 (42 mg, 57%)로서 제조하였다. Rf = 0.21 (98:2 디클로로메탄: 메탄올); 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.39 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 6.21 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 4.48 (s, 1H), 3.84-3.33 (m, 8H), 3.24 (q, J = 6.0 Hz, 2H), 2.06 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 1.77 (s, 3H), 1.68-1.46 (m, 9H), 1.07 (s, 6H), 0.95 (t, J = 7.5 Hz, 3H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 348 (MH+).
실시예 37: ( E )- N -이소프로필-4-(3-(2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1- 에닐 )아크릴로일)피페라진-1-카르복사미드
이소프로필 이소시아네이트를 요오도메탄 대신 사용한 것을 제외하고, 실시예 7c의 공정에 따라 실시예 28b의 생성물로부터 표제 화합물을 백색 고체 (62 mg, 85%)로서 제조하였다. Mp = 158-159 ℃; Rf = 0.32 (98:2 디클로로-메탄: 메탄올); 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.37 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 6.20 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 4.30 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 3.99 (m, 1H), 3.82-3.31 (m, 9H), 2.05 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 1.76 (s, 3H), 1.67-1.59 (m, 2H), 1.49 (m, 2H), 1.17 (d, J = 6.5 Hz, 6H), 1.06 (s, 6H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 348 (MH+).
실시예 38: ( E )- 메틸 4-(3-(2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1- 에닐 )아크릴로일) 피페라진-1-카르복실레이트
메틸 클로로포르메이트를 요오도메탄 대신 사용한 것을 제외하고 실시예 7c의 공정에 따라 실시예 28b의 생성물로부터 표제 화합물을 무색 오일 (34.0 mg, 55%)로서 제조하였다. R f = 0.25 (20:80 에틸 아세테이트: 디클로로메탄); 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.31 (d, J = 15.5 Hz, 1H), 6.23 (d, J = 15.5 Hz, 1H), 3.80-3.48 (m, 8H), 2.12-2.01 (m, 2H), 1.76 (s, 3H), 1.73-1.56 (m, 5H), 1.54-1.50 (m, 2H), 1.08 (s, 6H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 321 (MH+).
실시예 39: ( E )-에틸 4-(3-(2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1- 에닐 )아크릴로일) 피페라진-1-카르복실레이트
에틸 클로로포르메이트를 요오도메탄 대신 사용한 것을 제외하고, 실시예 7c의 공정에 따라 실시예 28b의 생성물로부터 표제 화합물을 무색 오일 (58.0 mg, 91%)로서 제조하였다.
. R f = 0.12 (20:80 에틸 아세테이트: 헥산); 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.48 (d, J = 15.5 Hz, 1H), 6.21 (d, J = 15.5 Hz, 1H), 4.11-4.38 (m, 2H), 3.78-3.51 (m, 8H), 2.08 (m, 2H), 2.07 (s, 3H), 1.72-1.61 (m, 2H), 1.56-1.49 (m, 2H), 1.32 (m, 3H) 1.09 (s, 6H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 335 (MH+).
실시예 40: ( E )-1-(4-( 메틸설포닐 )피페라진-1-일)-3-(2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1-에닐)프로-2-펜-1-온
메틸설포닐 클로라이드를 요오도메탄 대신 사용한 것을 제외하고, 실시예 7c의 공정에 따라 실시예 28b의 생성물로부터 표제 화합물을 백색 고체 (38.2 mg, 59%)로서 제조하였다. Mp = 121-123℃; R f = 0.39 (1:99 메탄올: 헥산); 1H-NMR (400 MHz, CD2Cl2) δ 7.35 (d, J = 12.0 Hz, 1H), 6.25 (d, J = 12.0 Hz, 1H), 3.75 (br m,4H), 3.25 (m, 4H), 2.78 (s, 3H), 2.08-2.01 (m, 2H), 1.85 (s, 3H), 1.65-1.60 (m, 2H), 1.50-1.45 (m, 2H), 1.05 (s, 6H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 341 (MH+).
실시예 41: ( E )-1-(4-( 에틸설포닐 )피페라진-1-일)-3-(2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1-에닐)프로-2-펜-1-온
에틸설포닐 클로라이드를 요오도메탄 대신 사용한 것을 제외하고, 실시예 7c의 공정에 따라 실시예 28b의 생성물로부터 표제 화합물을 백색 고체 (35.0 mg, 52%)로서 제조하였다. Mp = 125-127℃; R f = 0.15 (2:98 메탄올:헥산); 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.42 (d, J = 12.0 Hz, 1H), 6.22 (d, J = 12.0 Hz, 1H), 3.85-3.70 (m, 4H), 3.40-3.30 (m, 4H), 2.99 (q, J = 6.0 Hz, 2H), 2.08-2.01 (m, 2H), 1.70-1.65 (m 2H), 1.60 (s, 3H), 1.55-1.50 (m, 2H), 1.40 (t, J = 6.0 Hz, 3H), 1.06 (s, 6H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 355 (MH+).
실시예 42: ( E )-1-(4-( 트리플루오로메틸설포닐 )피페라진-1-일)-3-(2,6,6- 트리메틸 -시클로헥스-1-에닐)프로-2-펜-1-온
트리플루오로메틸설포닐 클로라이드를 요오도메탄 대신 사용한 것을 제외하고, 실시예 7c의 공정에 따라 실시예 28b의 생성물로부터 표제 화합물을 무색 오일 (2.50 mg, 2.8%)로서 제조하였다. R f = 0.75 (20:80 에틸 아세테이트: 디클로로메탄); 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.45 (d, J = 15.5 Hz, 1H), 6.22 (d, J = 15.5 Hz, 1H), 3.99-3.42 (m, 8H), 2.15 (s, 3H), 1.74-1.58 (m, 2H), 1.56-1.48 (m, 2H), 1.25-1.31 (m, 2H),1.09 (s, 6H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 395 (MH+).
실시예 43: ( E )- N - 메틸 -4-(3-(2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1- 에닐 )아크릴로일)피페라진-1-카르보티오아미드
메틸 이소티오시아네이트를 요오도메탄 대신 사용한 것을 제외하고, 실시예 7c의 공정에 따라 실시예 28b의 생성물로부터 표제 화합물을 백색 고체 (38.2 mg, 61%)로서 제조하였다. Mp = 55-57℃; R f = 0.37 (65:35 에틸 아세테이트: 디클로로메탄); 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.44 (d, J = 15.5 Hz, 1H), 6.22 (d, J = 15.5 Hz, 1H), 5.98 (s, 1H), 4.18 (s, 2H), 3.89-3.68 (m, 6H), 3.19 (s, 3H), 2.12-2.08 (m, 2H), 1.75 (s, 3H), 1.72-1.61 (m, 2H) 1.52-1.49 (m, 2H), 1.10 (s, 6H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 336 (MH+).
실시예 44: ( E )- N -에틸-4-(3-(2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1- 에닐 )아크릴로일)피페라진-1-카르보티오아미드
에틸 이소티오시아네이트를 요오도메탄 대신 사용한 것을 제외하고 실시예 7c의 공정에 따라 실시예 28b의 생성물로부터 표제 화합물을 백색 고체 (42.0 mg, 63%)로서 제조하였다. Mp = 133-135℃; R f = 0.33 (50:50 에틸 아세테이트: 디클로로메탄); 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.42 (d, J = 12.0 Hz, 1H), 6.20 (d, J = 12.0 Hz, 1H), 5.50 (br s, 1H), 4.25-4.10 (m, 2H), 3.95-3.65 (m 8H), 2.12-2.08 (m, 2H), 1.75 (s, 3H), 1.68-1.58 (m, 2H) 1.55-1.49 (m, 2H), 1.30 (t, J = 6.0 Hz, 1H), 1.08 (s, 6H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 350 (MH+).
실시예 45: ( E )- N -프로필-4-(3-(2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1- 에닐 )아크릴로일)피페라진-1-카르보티오아미드
프로필 이소티오시아네이트를 요오도메탄 대신 사용한 것을 제외하고, 실시예 7c의 공정에 따라 실시예 28b의 생성물로부터 표제 화합물을 백색 고체 (37.9 mg, 55%)로서 제조하였다. Mp = 128-130℃; R f = 0.53 (50:50 에틸 아세테이트: 디클로로메탄); 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.46 (d, J = 15.5 Hz, 1H), 6.23 (d, J = 15.5 Hz, 1H), 5.59 (s, 1H), 4.19 (s, 2H), 3.91-3.64 (m, 8H), 2.09 (s, 2H), 1.86-1.62 (m, 7H), 1.49 (s, 2H), 1.13-0.93 (m, 9H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 364 (MH+).
실시예 46: ( E )- N -이소프로필-4-(3-(2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1- 에닐 )아크릴로일)피페라진-1-카르보티오아미드
이소프로필 이소티오시아네이트를 요오도메탄 대신 사용한 것을 제외하고, 실시예 7c의 공정에 따라 실시예 28b의 생성물로부터 표제 화합물을 백색 고체 (35.2 mg, 51%)로서 제조하였다. Mp = 147-148℃; R f = 0.51 (50:50 에틸 아세테이트: 디클로로메탄); 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.48 (d, J = 15.5 Hz, 1H), 6.22 (d, J = 15.5 Hz, 1H), 5.25 (s, 1H), 4.77-4.62 (m, 1H), 4.18 (s, 1H), 3.92-3.63 (m, 6H), 2.18-2.06 (m, 2H), 1.78 (s, 3H), 1.71-1.63 (m, 3H) 1.48-1.50 (m, 2H), 1.29 (m, 6H), 1.08 (s, 6H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 364 (MH+).
실시예 47: ( S , E )-1-(3- 히드록시피롤리딘 -1-일)-3-(2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1-에닐) 프로-2-펜-1-온
(S)-피롤리딘-3-올을 메틸아민 히드로클로라이드 대신 사용하고 아세토니트릴을 디클로로메탄 대신 사용한 것을 제외하고, 실시예 3의 공정에 따라 실시예 1의 생성물로부터 표제 화합물을 투명 오일 (196 mg, 97%)로서 제조하였다. Rf = 0.20 (에틸 아세테이트); 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.36 (m, 1H), 6.08 (dd, J = 15.5, 8.5, 1H), 4.54 (m, 1H), 3.76-3.58 (m, 4H), 3.03-2.88 (m, 1H), 2.05 (m, 4H), 1.76 (s, 3H), 1.63 (m, 2H), 1.49 (m, 2H), 1.07 (s, 6H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 264 (MH+).
실시예 48: ( S , E )-1-(3-(2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1- 에닐 )아크릴로일) 피롤리딘 -3-일 카르바메이트
트리클로로아세틸 이소시아네이트 (63 mL, 0.53 mmol)를 실시예 47의 생성물 (70 mg, 0.26 mmol)의 용액에 첨가하였다. 이 용액을 실온에서 밤새 교반한 다음 물(0.5 mL)로 처리하여 반응을 중단시켰다. 에틸 아세테이트 (20 mL)를 첨가하여 반응 혼합물을 희석하고, 유기상을 물(20 mL)로 추출하였다. 유기층을 분리하고 마그네슘 설페이트로 건조한 다음 용매를 진공 제거하였다. 목적 생성물을 예비 플레이트 박층 크로마토그래피 (100% EtOAc)에 의해 분리하여 투명 오일 (23 mg, 15%)을 얻었다. R f = 0.42 (에틸 아세테이트); 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.40 (d, J = 15.0, 1H), 6.80 (dd, J = 15.5, 1H), 5.30 (m, 1H), 4.74 (m, 2H), 3.72-3.66 (m, 4H), 3.62 (m, 2H), 2.17 (m, 2H), 2.06 (s, 3H), 1.77 (d, J = 5.5, 2H), 1.63 (m, 2H), 1.08 (s, 6H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 307 (MH+).
실시예 49: ( E )-1-(3- 아미노피롤리딘 -1-일)-3-(2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1-에닐)프로-2-펜-1-온 히드로클로라이드
49a. ( E )- 3차- 부틸 1-(3-(2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1- 에닐 )아크릴로일) 피롤리딘 -3-일 카르바메이트
3차-부틸 피롤리딘-3-일카르바메이트를 메틸아민 히드로클로라이드 대신 사용한 것을 제외하고, 실시예 3의 공정에 따라 실시예 1의 생성물로부터 표제 화합물을 백색 고체 (210 mg, 75%)로서 제조하였다. 이 조질의 생성물을 추가 정제하지 않고 다음 단계에 그대로 사용하였다. R f = 0.2 (40:60 에틸 아세테이트: 헥산); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 363 (MH+).
49b. ( E )-1-(3- 아미노피롤리딘 -1-일)-3-(2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1- 에닐 )프로-2-펜-1-온
실시예 49a의 생성물을 1,4-디옥산 (2 mL) 중 4N 염산 용액에 용해시킨 다음 실온에서 1 시간 교반하였다. 이 반응 용액을 진공 하에 대략 0.5 mL까지 농축시켰다. 조질의 생성물을 피펫을 통해 디에틸 에테르 (50 mL)에 첨가하자 백색 침전물이 형성되었다. 이 침전물을 여과하고 에테르로 세척한 다음 감압 건조시켜 목적 생성물을 백색 고체 (70 mg, 84%)로서 수득하였다. Mp = 188℃; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.40-8.35 (m, 3H), 7.17 (m, 1H), 6.15 (m, 1H), 3.79 (m, 2H), 3.62 (m, 2H), 2.26 (m, 1H), 2.04 (m, 4H), 1.73 (s, 3H), 1.58 (m, 2H), 1.45 (m, 2H), 1.03 (s, 6H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 263 (MH+).
실시예 50: ( E )-1-(1-(3-(2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1- 에닐 )아크릴로일) 피롤리딘 -3-일) 우레아
실시예 48의 공정에 따라 실시예 49b의 생성물로부터 표제 화합물을 무색 오일 (6.7 mg, 9%)로서 제조하였다. R f = 0.25 (90:10 클로로포름: 메탄올); 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.35 (d, J = 15.5, 1H), 6.50 (m, 1H), 6.08 (t, J = 15.5, 1H), 5.04 (br s, 2H), 4.32 (m, 1H), 3.61 (m, 4H), 2.06-2.05 (m, 4H), 1.76 (s, 3H), 1.62 (m, 2H), 1.48 (m, 2H), 1.07 (m, 6H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 306 (MH+).
실시예 51: 4 -(3-(2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1- 에닐 ) 프로파노일 )피페라진-1-카르복사미드
51a. 1-(피페라진-1-일)-3-(2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1- 에닐 )프로판-1-온
아르곤 하에서, 실시예 28b (100 mg, 0.381 mmol)를 무수 메탄올 (10 mL)에 용해시키고 실온에서 교반하였다. 이 교반된 반응 혼합물에 마그네슘 터닝스 (83.0 mg, 3.41 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 아르곤 하 실온에서 48시간 교반하였다.
메탄올을 진공 제거하고, 잔사를 물(20 mL)에 용해시켰다. 수성상을 클로로포름으로 추출하고 (3 x 10 mL) 유기상들을 한데 모아서 소듐 설페이트로 건조시켰다. 용매를 진공 제거하여 황색 오일 (62 mg 조질)을 얻었다. 이 생성물을 예비 박층 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물을 투명 오일로서 수득하였다 (4.2 mg, 4%). Rf = 0.39 (95:5 디클로로메탄: 메탄올); 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.66-3.60 (m, 2H), 3.50-3.43 (m, 2H), 2.88 (d, J = 4.5 Hz, 4H), 2.36 (s, 3H), 1.93 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 1.64-1.55 (m, 5H), 1.44 (dd, J = 7.5, 4.0 Hz, 2H), 1.29 (m, 1H), 1.17-1.10 (m, 1H), 1.02 (s, 6H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 265 (MH+).
51b. 4-(3-(2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1- 에닐 ) 프로파노일 )피페라진-1- 카르복사미드
실시예 33의 공정에 따라 실시예 51a의 생성물로부터 표제 화합물을 백색 고체 (3.0 mg, 61%)로서 제조하였다. Rf = 0.45 (95:5 디클로로메탄:메탄올); 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4.53 (s, 2H), 3.74-3.66 (m, 2H), 3.52 (s, 4H), 3.40 (s, 2H), 2.38 (s, 3H), 1.93 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 1.67-1.55 (m, 6H), 1.48-1.41 (m, 2H), 1.33-1.26 (m, 2H), 1.14 (m, 2H), 1.02 (s, 6H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 308 (MH+).
실시예 52: ( S,E )-2- 메틸 -4-(3-(2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1- 에닐 )아크릴로일)피페라진-1-카르복사미드
52a. ( S )- 3차- 부틸 4- 카르바모일 -3- 메틸피페라진 -1- 카르복실레이트
실시예 33의 공정에 따라 (S)-1-Boc-3-메틸피페라진으로부터 표제 화합물을 황색 포말 (480 mg, 정량적)로서 제조하였다. [ α]D = 14o(c = 0.005, EtOH); Rf = 0.52 (95:5 디클로로메탄: 메탄올 +0.1% (v/v) 암모늄 히드록사이드); 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4.81 (s, 2H), 3.97 (m, 5H), 3.09 (m, 3H), 2.99-2.73 (m, 1H), 1.47 (s, 9H), 1.42-1.36 (m, 1H), 1.18 (d, J = 6.0 Hz, 3H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 244 (MH+).
52b. ( S )-2-메틸피페라진-1-카르복사미드
실시에 7b의 공정에 따라 실시예 52a의 생성물로부터 표제 화합물을 황색 오일 (480 mg)로서 제조하였다. 이 조질의 생성물을 추가 정제 없이 다음 단계에 사용하였다. Rf = 0.1 (95:5 디클로로메탄: 메탄올 +0.1% (v/v) 암모늄 히드록사이드); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 144 (MH+).
52c. ( S,E )-2- 메틸 -4-(3-(2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1- 에닐 )아크릴로일)피페라진-1-카르복사미드
실시예 52b의 생성물을 메틸아민 히드로클로라이드 대신 사용한 것을 제외하고, 실시예 3의 공정을 이용하여 실시예 1의 생성물로부터 표제 화합물을 투명 오일 (315 mg, 56%)로서 제조하였다. [ α]D = 16o(c = 0.005, CHCl3); Rf = 0.43 (95:5 디클로로메탄: 메탄올 +0.1% (v/v) 암모늄 히드록사이드); 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.41 (d, J = 15.0 Hz, 1H), 6.29-6.10 (m, 1H), 4.57 (s, 3H), 4.41-4.23 (m, 1H), 4.12-3.55 (m, 3H), 3.51 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 3.22 (s, 3H), 2.94-2.79 (m, 1H), 2.06 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 1.76 (s, 3H), 1.71-1.59 (m, 3H), 1.50 (m, 2H), 1.21 (s, 3H), 1.07 (s, 6H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 320 (MH+).
실시예 53: ( R,E )-2- 메틸 -4-(3-(2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1- 에닐 )아크릴로일)피페라진-1-카르복사미드
53a. ( R )- 3차- 부틸 4- 카르바모일 -3- 메틸피페라진 -1- 카르복실레이트
실시예 7b의 공정에 따라 (R)-1-Boc-3-메틸피페라진으로부터 표제 화합물을 황색 포말 (377 mg, 65%)로서 제조하였다. [ α]D = -35o(c = 0.005, EtOH); Rf = 0.48 (95:5 디클로로메탄: 메탄올 +0.1% (v/v) 암모늄 히드록사이드); 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4.50 (s, 2H), 4.23-3.52 (m, 5H), 3.10 (m, 2H), 3.01-2.78 (m, 1H), 1.63 (s, 1H), 1.49 (s, 10H), 1.21 (d, J = 6.0 Hz, 3H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 244 (MH+).
53b. ( R )-2-메틸피페라진-1-카르복사미드
실시예 7b의 공정에 따라 실시예 53a의 생성물로부터 표제 화합물을 황색 오일 (552 mg)로서 제조하였다. 이 조질의 생성물을 추가 정제 없이 사용하였다. Rf = 0.1 (95:5 디클로로메탄: 메탄올 +0.1% (v/v) 암모늄 히드록사이드); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 144 (MH+).
53c. ( R,E )-2- 메틸 -4-(3-(2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1- 에닐 )아크릴로일)피페라진-1-카르복사미드
실시예 53b의 생성물을 메틸아민 히드로클로라이드 대신 사용한 것을 제외하고 실시예 3의 공정에 따라 실시예 1의 생성물로부터 표제 화합물을 무색 무정형 고체로서 제조하였다. (120 mg, 31%) [ α]D = -11o(c = 0.005, CHCl3); Rf = 0.33 (93:7 디클로로메탄: 메탄올 +0.1% (v/v) 암모늄 히드록사이드); 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.38 (d, J = 15.5 Hz, 1H), 6.29-6.07 (m, 1H), 4.55 (s, 2H), 4.38-4.21 (m, 1H), 3.94-3.09 (m, 6H), 2.04 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 1.74 (s, 3H), 1.66-1.57 (m, 2H), 1.50-1.43 (m, 5H), 1.40 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 1.18 (s, 3H), 1.05 (s, 6H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 320 (MH+).
실시예 54: ( E )- N 2 - 메틸 -4-(3-(2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1-엔-1-일)아크릴로일)피페라진-1,2-디카르복사미드
54a. 4-(( 벤질옥시 )카르보닐)-1-(3차- 부톡시카르보닐 )피페라진-2- 카르복실산
켐프 등의 방법 [Kempf, D. J.; Norbeck, D. W.; Sham, H. L. 미국 특허 5,455,351, Oct 3, 1995]에 따라 표제 화합물을 제조하였다. 1,4-디옥산:물의 1:1 용액 (100 mL)에 피페라진-2-카르복실산 (10.0 g, 77.0 mmol)을 실온에서 격렬히 교반하면서 용해시켰다. 이 투명한 용액에 소듐 히드록사이드 수용액 (80 mL의 1N 용액)을 첨가함으로써 pH 11로 조정하였다. 반응 내내 용액의 pH를 pH 측정기를 이용하여 현장(in situ) 모니터링하였다. 1,4-디옥산 (50 mL) 중 N- α-(벤질옥시카르보닐옥시) 숙신아미드 (13.6 g, 55 mmol)의 용액을 함유하는 첨가 깔때기를 반응 플라스크에 끼웠다. N- α-(벤질옥시카르보닐옥시) 숙신아미드 용액을 실온에서 45분에 걸쳐 첨가하는 한편 1N 소듐 히드록사이드를 주기적으로 첨가함으로써 pH는 10 이상으로 유지시켰다. 용액의 pH를 9.5로 조정하고 1,4-디옥산 (50 mL) 중의 2-(3차-부톡시카르보닐옥시이미노)-2-페닐아세토니트릴 (13.4 g, 55 mmol) 용액을 10분에 걸쳐서 첨가하였다. pH를 9.5로 유지시키고 용액을 실온에서 17시간 동안 교반하였다. 용액을 다시 pH 2로 산성화시키고 수용액을 디에틸 에테르로 세척하였다 (3 x 150 mL). 이 수용액을 0℃로 냉각한 다음 진한 염산을 첨가하여 산성화시켰다. 이 산성 용액을 에틸 아세테이트로 추출하였다 (5 x 150 mL). 유기상들을 한데 모아서 소듐 설페이트로 건조, 여과 및 진공 농축시켰다. 잔사를 디클로로메탄: 헥산의 1:1 용액 (150 mL)을 이용하여 분쇄시키고(triturated) 용매를 진공 하에 제거하여 생성물을 점성 황색 오일 (15.7 g, 43 mmol, 80%)로서 얻었다. R f = 0.60 (66:34 디클로로메탄: 에틸 아세테이트 + 0.1% (v/v 아세트산); 1H-NMR (400 MHz, DMSO)δ 13.0 (br s, 1H), 7.37-7.36 (m, 5H), 5.05 (s, 2H), 4.54-4.33 (m, 2H), 3.90-3.66 (m, 2H), 3.07-2.81 (m, 4H), 1.38 (s, 9H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 365.1 (MH+).
54b. 4-벤질 1- 3차- 부틸 2-(메틸카르바모일)피페라진-1,4-디카르복실레이트
아르곤 하 실온에서, 4-((벤질옥시)카르보닐)-1-(3차-부톡시카르보닐)피페라진-2-카르복실산 (1.70 g, 4.70 mmol), DMF (20 mL), 디이소프로필에틸아민 (2.50 mL, 14.1 mmol) 및 메틸아민 히드로클로라이드 (0.350 g, 5.20 mmol)을 10분 동안 한데 혼합하였다. 이어서 2-(7-아자-1H-벤조트리아졸-1-일)-1,1,3,3-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 (HATU, 2.00 g, 5.20 mmol)를 반응 혼합물에 한번에 첨가하였다. 이 혼합물을 실온에서 아르곤 하에 18시간 동안 교반하였다. 이어서 반응 혼합물을 물(100 mL)에 붓고 에틸 아세테이트 (4 x 25 mL)로 추출하였다. 유기상들을 한데 모아서 포화 암모늄 클로라이드 (3 x 15 mL), 물 (3 x 15 mL) 및 염수 (70 mL)로 세척하였다. 유기상 들을 한데 모아서 소듐 설페이트로 건조, 여과 및 진공 농축시켰다. 백색 포말 (0.91 g, 2.4 mmol, 51%)로서 수득된 생성물을 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다 (구배 용리 20:80 에틸 아세테이트: 헥산 내지 100% 에틸 아세테이트). R f = 0.10 (50:50 에틸 아세테이트: 헥산); 1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ 7.39-7.33 (m, 5H), 5.17 (br s, 2H), 4.68-4.58 (m, 2H), 3.98-3.88 (m, 2H), 3.23-3.08 (m, 4H), 2.07 (s, 3H), 1.50 (s, 9H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 378.0 (MH+).
54c. 3차- 부틸 2-(메틸카르바모일)피페라진-1-카르복실레이트
실온에서 교반 하에, 4-벤질 1-3차-부틸 2-(메틸카르바모일)피페라진-1,4-디카르복실레이트 (0.910 g, 2.40 mmol)를 메탄올 (10 mL)에 용해시키고, 바이알을 아르곤으로 플러시하였다. 탄소상 팔라듐 (탄소상 10wt%, 91.0 mg)을 이 교반된 반응 혼합물에 한번에 첨가하였다. 반응 플라스크에 수소 가스 (1 atm)를 충전시키고18시간 동안 실온에서 교반하였다. 셀라이트를 통해 탄소상 팔라듐을 진공 여과에 의해 제거하고 부가적인 메탄올 (5 x 10 mL)로 세척하였다. 여액(filtrates)들을 한데 모아서 진공 농축시켰다. 황색 고체 (0.16 g, 0.66 mmol, 27%)로서 얻어진 생성물을 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다 (등용매성 3:97 메탄올: 디클로로메탄 + 0.1% (v/v) 암모늄 히드록사이드). R f = 0.32 (3:97 메탄올: 디클로로메탄 + 0.1% (v/v) 암모늄 히드록사이드); 1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ 6.41 (br s, 1H), 4.61-4.59 (m, 1H), 3.68-3.65 (m, 1H), 3.18-2.85 (m, 6H), 2.47 (br s, 3H), 1.51 (s, 9H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 243.9 (MH+).
54d. ( E )- 3차- 부틸 2-( 메틸카르바모일 )-4-(3-(2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1-엔-1-일)아크릴로일) 피페라진-1-카르복실레이트
아르곤 하, 실온에서, (E)-3-(2,6,6-트리메틸시클로헥스-1-엔-1-일)아크릴산 (0.120 g, 0.620 mmol), 디이소프로필에틸아민 (0.210 mL, 1.20 mmol), 3차-부틸 2-(메틸카르바모일)피페라진-1-카르복실레이트 (0.150 g, 0.620 mmol)를 디클로로메탄: 아세토니트릴의 1:5 혼합물에 용해시켰다. 2-(7-아자-1H-벤조트리아졸-1-일)-1,1,3,3-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 (HATU, 0.23 g, 0.62 mmol)을 한번에 첨가하고 이 반응 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 카보네이트 SPE 카트리지 (실리카-카보네이트 Silicycle, 2 g, 230-400 mesh)를 통해 통과시킨 다음, 토식산(tosic acid) SPE 카트리지 (실리카-토식산 Silicycle, 1 g, 230-400 mesh)을 통해 여과시키고 용매를 진공 제거하였다. 투명 오일 (0.17 g, 0.41 mmol, 66%)로서 얻어진 생성물을 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다 (구배용리 30:70 에틸 아세테이트: 헥산 내지 100 % 에틸 아세테이트). 양성자 NMR 스펙트럼 검사 결과, 생성물이 회전 이성질체들(rotamers)의 혼합물인 것으로 입증되었다. R f = 0.14 (50:50 에틸 아세테이트: 헥산); 1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ 7.15-7.12 (m, 1H), 6.23-5.98 (m, 1H), 4.60-4.27 (m, 1H), 4.23-4.10 (m, 2H), 3.98-3.87 (m, 2H), 3.82-3.62 (m, 1H), 3.37-3.13 (m, 2H), 3.09-2.71 (m, 1H), 2.59 (s, 2H), 1.87 (s, 3H), 1.61-1.58 (m, 2H), 1.45-1.42 (m, 2H), 1.30 (s, 9H), 0.88 (s, 6H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 420.1 (MH+).
54e. ( E )- N 2 - 메틸 -4-(3-(2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1-엔-1-일)아크릴로일)피페라진-1,2-디카르복사미드
실온에서 (E)-3차-부틸 2-(메틸카르바모일)-4-(3-(2,6,6-트리메틸시클로헥스-1-엔-1-일)아크릴로일)피페라진-1-카르복실레이트 (0.170 g, 0.410 mmol)를 디클로로메탄 (5 mL)에 용해시켰다. 트리플루오로아세트산 (3 mL)을 교반 용액에 첨가하고 반응 혼합물을 실온에서 1 시간 교반한 다음 진공 농축시켜 조질의 트리플루오로아세트산 염을 점성이 있는 황색 오일 (0.42 g)로서 수득하였다. 이 트리플루오로아세트산 염을 박층 크로마토그래피 및 LC-MS를 이용하여 분석한 후, 다음 반응에 직접 사용하였다. R f = 0.17 (7:93 메탄올: 디클로로메탄 + 0.1% (v/v) 암모늄 히드록사이드, 닌히드린 염색); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 320.1 (MH+).
트리플루오로아세트산 염 (0.4 g) 및 탄산칼륨(0.54 g, 3.9 mmol)을 실온에서 아르곤 하에 20분 동안 교반하였다. 트리메틸실릴 이소시아네이트 (0.32 mL, 3.9 mmol)를 한번에 첨가하고 혼합물을 실온에서 18 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 암모늄 클로라이드 (15 mL)에 첨가하고 디클로로메탄으로 추출하였다 (3 x 10 mL). 유기상들을 한데 모아서 소듐 설페이트로 건조, 여과 및 진공 농축시켰다. 백색 고체 (45 mg, 0.12 mmol, 32%)로서 얻어진 생성물을 예비 박층 크로마토그래피로 정제하였다 (1000 ㎛ 두께 SiO2 겔, 20 cm x 20 cm 플레이트, 용리 10:90 메탄올: 디클로로메탄 + 0.1% (v/v) 암모늄 히드록사이드). 양성자 NMR 스펙트럼 분석 결과, 생성물은 회전 이성질체들의 혼합물인 것으로 입증되었다. Mp = 100-112℃; R f = 0.62 (10:90 메탄올: 디클로로메탄 + 0.1% (v/v) 암모늄 히드록사이드); 1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ 7.43-7.34 (m, 1H), 6.47-6.40 (m, 1H), 5.18-4.61 (m, 4H), 4.35-4.15 (m, 1H), 3.93-3.67 (m, 1H), 3.46-2.97 (m, 3H), 2.83-2.82 (m, 3H), 2.10-2.06 (m, 2H), 1.80 (s, 3H), 1.65-1.61 (m, 2H), 1.51-1.48 (m, 2H), 1.09 (m, 6H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 363.1 (MH+).
실시예 55: N 1 -((2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1-엔-1-일) 메틸 )피페라진-1,4- 디카르복사미드
55a. 3차- 부틸 4-(((2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1-엔-1-일) 메틸 ) 카르바모일 ) 피페라진-1-카르복실레이트
무수 벤젠 (16 mL) 중 2-(2,6,6-트리메틸시클로헥스-1-엔-1-일)아세트산 (0.30 g, 1.6 mmol)의 교반 용액에 디페닐포스포릴 아지드 (0.45 g, 1.6 mmol) 및 트리에틸아민 (0.51 g, 4.8 mmol)을 첨가하였다. 담황색 반응 혼합물을 이것이 청색으로 변할 때까지 3 시간 동안 가열 환류시켰다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각하고 3차-부틸 피페라진-1-카르복실레이트 (0.31 g, 1.6 mmol) 및 트리에틸아민 (0.17 g, 1.6 mmol)을 이 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 18시간 동안 밤새 교반하였다.
반응 혼합물을 에틸 아세테이트 (150 mL)로 희석하고, 분리 깔때기에 옮긴 다음 암모늄 클로라이드 (2 x 75 mL)의 50% 포화 용액 및 중탄산나트륨(2 x 75 mL)의 포화용액으로 추출하였다. 유기층을 염수(75 mL)로 세척하고, 마그네슘 설페이트로 건조, 여과하고 진공 농축하여 담황색 고체 (0.60 g, 정량적)를 수득하였다. R f = 0.65 (25:75 에틸 아세테이트: 헥산); 1H NMR (400 MHz, CDCl3)δ 4.00 (s, 1H), 3.79 (d, J = 4.0 Hz, 2H), 3.52-3.17 (m, 8H), 2.04-1.82 (m, 2H), 1.63 (s, 3H), 1.60-1.54 (m, 2H), 1.44 (s, 11H), 0.98 (s, 6H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 366 (MH+).
55b. N -((2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1-엔-1-일) 메틸 )피페라진-1- 카르복사미드
실시예 49b의 공정에 따라 실시예 55a의 생성물로부터 표제 화합물을 황색 오일 (265 mg, 정량적)로서 제조하였다. 조질의 생성물을 추가 정제 없이 다음 단계에 사용하였다. R f = 0.05 (95:5 클로로포름: 메탄올); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 266 (MH+).
55c. N 1 -((2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1-엔-1-일) 메틸 )피페라진-1,4- 디카르복사미드
실시에 33의 공정에 따라 실시예 55b의 생성물로부터 표제 화합물을 담황색 고체 (33 mg, 12%)로서 제조하였다. Mp = 168.9-169.7℃. Rf = 0.45 (90:10 클로로포름: 메탄올); 1H NMR (400 MHz, d4-MeOD)δ 3.79-3.68 (m, 3H), 3.27 (s, 3H), 1.96 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 1.77-1.56 (m, 6H), 1.48-1.41 (m, 2H), 1.35-1.08 (m, 1H), 0.99 (s, 6H), 0.93 (d, J = 6.5 Hz, 1H), 0.88 (d, J = 6.5 Hz, 1H), 0.06 (d, J = 4.0 Hz, 1H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 308 (MH+).
실시예 56: N 1 - 메틸 - N 1 -((2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1-엔-1-일) 메틸 )피페라진-1,4-디카르복사미드
56a. N - 메틸 - N -((2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1-엔-1-일) 메틸 )-1 H -이미다졸-1-카르복사미드
아르곤 하 실온에서, N-메틸-1-(2,6,6-시클로헥스-1-엔-1-일)메탄아민 히드로클로라이드 (1.00 g, 4.90 mmol) 및 트리에틸아민 (0.750 mL, 5.40 mmol)을 THF (12 mL) 중에서 15분간 교반하였다. 카르보닐디이미다졸 (0.88 g, 5.4 mmol)을 이 교반 용액에 한 번에 첨가하고 18 시간 동안 가열 환류시켰다. 용매를 진공 제거하고 잔사를 디클로로메탄 (100 mL)에 용해시켰다. 유기상을 물(2 x 75 mL), 소듐 설페이트로 건조, 여과하고 진공 농축시켜 생성물을 황색 오일 (1.2 g, 4.6 mmol, 93%)로서 얻었다. R f = 0.90 (7:93 메탄올: 디클로로메탄 + 0.1% (v/v) 암모늄 히드록사이드); 1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ 7.90 (s, 1H), 7.24 (s, 1H), 7.10 (s, 1H), 4.26 (s, 2H), 2.94 (s, 3H), 2.07-2.04 (m, 2H), 1.72 (s, 3H), 1.68-1.62 (m, 2H), 1.50-1.47 (m, 2H), 1.03 (s, 6H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 261.9 (MH+).
56b. 3- 메틸 -1-( 메틸( (2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1-엔-1-일)) 메틸 ) 카르바모일 )-1 H -이미다졸-3-륨 요오다이드
N-메틸-N-((2,6,6-트리메틸시클로헥스-1-엔-1-일)메틸)-1H-이미다졸-1-카르복사미드 (1.20 g, 4.60 mmol) 및 요오도메탄 (1.1 mL, 18 mmol)을 아세토니트릴에 용해시키고 실온에서 18시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공 농축하여 생성물을 흡습성 황색 포말로서 얻었다 (1.8 g, 4.4 mmol, 97%). 1H-NMR (400 MHz, DMSO)δ 9.63 (br s, 1H), 8.07 (br s, 1H), 7.87 (s, 1H), 4.24 (br s, 2H), 3.91 (s, 3H), 2.88 (s, 3H), 2.10-2.08 (m, 2H), 1.70-1.59 (m, 5H), 1.46-1.44 (m, 2H), 1.03-0.95 (m, 6H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 275.9 (MH+).
56c. N 1 - 메틸 - N 1 -((2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1-엔-1-일) 메틸 )피페라진-1,4-디카르복사미드
3-메틸-1-(메틸((2,6,6-트리메틸시클로헥스-1-엔-1-일))메틸)카르바모일)-1H-이미다졸-3-륨 요오다이드 (0.200 g, 0.470 mmol), 피페라진-1-카르복사미드 히드로클로라이드 (78.0 mg, 0.470 mmol) 및 트리에틸아민 (0.130 mL, 0.930 mmol)을 아세토니트릴: 디클로로메탄의 1:4 혼합물에 용해시켰다. 반응 혼합물을 실온에서 아르곤 하에 2 일간 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 암모늄 클로라이드 (30 mL)에 붓고 유기층을 제거하였다. 수층을 디클로로메탄으로 추출하였다 (4 x 15 mL). 유기상들을 한데 모아 소듐 설페이트로 건조, 여과하고 진공 농축시켰다. 백색 고체 (11 mg, 0.03 mmol, 7%)로서 얻어진 생성물을 예비 플레이트 박층 크로마토그래피로 정제하였다 (1000 ㎛ 두께 SiO2 겔, 20 cm x 20 cm 플레이트, 용리 10:90 메탄올: 에틸 아세테이트 + 0.1% (v/v) 암모늄 히드록사이드). Mp = 139.6-140.3℃; R f = 0.62 (10:90 메탄올: 에틸 아세테이트 + 0.1% (v/v) 암모늄 히드록사이드); 1H-NMR (400 MHz, DMSO)δ 6.00 (s, 2H), 3.93 (s, 2H), 3.32-3.28 (m, 4H), 3.01-3.00 (m, 4H), 2.66 (s, 3H), 1.99-1.96 (m, 2H), 1.65 (s, 3H), 1.59-1.57 (m, 2H), 1.41-1.40 (m, 2H), 0.96 (s, 6H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 323.0 (MH+).
실시예 57: ( R,E )-1-(3-(2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1-엔-1-일)아크릴로일) 피롤리딘-3-일 카르바메이트
57a. ( R,E )-1-(3- 히드록시피롤리딘 -1-일)-3-(2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1-엔-1-일)프로-2-펜-1-온
(R)-피롤리딘-3-올을 메틸아민 히드로클로라이드 대신 사용한 것을 제외하고, 실시예 3의 공정에 따라, 표제 화합물을 무색 오일 (0.35 g, 86%)로서 제조하였다. [ α]D 23 = -13.78o(c = 0.005, 메탄올); R f = 0.2 (100% 에틸 아세테이트); 1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ 7.36 (d, J = 15.5 Hz, 1H), 6.09 (d, J = 15.5 Hz, 1H), 4.55 (m, 1H), 3.80-3.53 (m, 4H), 2.95 (m, 1H), 2.12-1.97 (m, 4H), 1.76 (s, 3H), 1.63 (m, 2H), 1.48 (m, 2H), 1.07 (s, 6H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 264 (MH+).
57b. ( R,E )-1-(3-(2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1-엔-1-일)아크릴로일) 피롤리딘 -3-일 카르바메이트
트리클로로아세틸 이소시아네이트 (501 mg, 2.66 mmol)을 테트라히드로퓨란 (3 mL) 중 57a (350 mg, 1.33 mmol)의 용액에 첨가하였다. 이 용액을 12시간 동안 실온에서 교반한 다음 물 (0.5 mL)로 처리하여 과량의 트리클로로아세틸 이소시아네이트를 제거하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 (50 mL)로 희석하고 물 (30 mL)로 추출하였다. 유기층을 마그네슘 설페이트로 건조, 여과하고 진공 농축하였다. 조질의 생성물을 추가 정제 없이 다음 단계에 사용하였다.
물 (8 mL) 중 탄산칼륨(367 mg, 2.66 mmol)의 용액을 메탄올 (10 mL) 및 테트라히드로퓨란 (10 mL) 중 조질의 물질 (600 mg, 1.33 mmol)의 용액에 첨가하였다. 이 혼합물을 3시간 동안 실온에서 교반한 다음 에틸 아세테이트 (60 mL)와 물 (60 mL)로 희석하였다. 유기층을 마그네슘 설페이트로 건조, 여과하고 진공 농축하여 표제 화합물을 회백색 고체로서 얻었다 (72 mg, 18%); [ α]D 23 = -12.42o(c = 0.006, 클로로포름); R f = 0.2 (10:90 메탄올: 클로로포름); 1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ 7.41 (d, J = 15.5 Hz, 1H), 6.08 (d, J = 15.5 Hz, 1H), 5.31 (m, 1H), 4.72 (m, 2H), 3.88-3.77 (m, 2H), 3.77-3.62 (m, 2H), 2.18 (m, 2H), 2.05 (m, 2H), 1.77 (s, 3H), 1.64 (m, 2H), 1.49 (m, 2H), 1.08 (m, 6H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 307 (MH+).
실시예 58: ( S,E )-1-(1-(3-(2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1-엔-1-일)아크릴로일) 피롤리딘-3-일)우레아
58a. ( S,E )- 3차- 부틸 (1-(3-(2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1-엔-1-일)아크릴로일) 피롤리딘 -3-일) 카르바메이트
(S)-3차-부틸 피롤리딘-3-일 카르바메이트를 메틸아민 히드로클로라이드 대신 사용한 것을 제외하고, 실시예 3의 공정에 따라 표제 화합물을 무색 오일 (62 mg, 35%)로서 제조하였다. R f = 0.15 (100% 에틸 아세테이트); 1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ 7.39 (dd, J = 15.5, 6.0 Hz, 1H), 6.14-6.00 (m, 1H), 4.28 (m, 1H), 3.81 (m, 2H), 3.73-3.32 (m, 4H), 2.32-2.12 (m, 1H), 2.06 (s, 3H), 1.83 (d, J = 6.5 Hz, 1H), 1.79 (s, 3H), 1.65 (m, 4H), 1.48 (m, 9H), 1.07 (m, 6H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 363 (MH+).
58b. ( S,E )-1-(3- 아미노피롤리딘 -1-일)-3-(2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1-엔-1-일)프로-2-펜-1-온
실시예 49b의 공정에 따라 실시예 58a의 생성물로부터 표제 화합물을 백색 고체 (42 mg, 98%)로서 수득하였다. R f = 0.05 (10:89:1 메탄올: 디클로로메탄: 암모늄 히드록사이드); 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ 8.40 (br s, 3H), 7.15 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 6.24-6.09 (m, 1H), 3.95-3.51 (m, 4H), 2.33-2.19 (m, 1H), 2.04 (m, 4H), 1.73 (s, 3H), 1.65-1.53 (m, 2H), 1.51-1.38 (m, 2H), 1.03 (s, 3H), 1.01 (s, 3H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 263 (MH+).
58c. ( S,E )-1-(1-(3-(2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1-엔-1-일)아크릴로일) 피롤리딘 -3-일)우레아
실시예 57b의 공정에 따라 실시예 58b의 생성물로부터 표제 화합물을 백색 필름(6.7 mg, 12%)으로서 제조하였다. R f = 0.2 (5:95 메탄올: 클로로포름); 1H NMR (400 MHz,)δ 7.13 (d, J = 15.5 Hz, 1H), 6.31 (m, 1H), 6.14 (d, J = 15.5 Hz, 1H), 5.45 (m, 2H), 4.08 (m, 1H), 3.58 (t, J = 7.0 Hz, 1H), 3.53-3.14 (m, 4H), 2.10-1.95 (m, 2H), 1.73 (s, 3H), 1.58 (m, 2H), 1.46 (m, 2H), 1.03 (m, 6H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 306 (MH+).
실시예 59: ( R,E )-1-(1-(3-(2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1-엔-1-일)아크릴로일) 피롤리딘-3-일)우레아
59a. ( R,E )- 3차- 부틸 (1-(3-(2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1-엔-1-일)아크릴로일) 피롤리딘 -3-일) 카르바메이트
(R)-3차-부틸 피롤리딘-3-일카르바메이트를 메틸아민 히드로클로라이드 대신 사용한 것을 제외하고 실시예 3의 공정에 따라 표제 화합물을 무색 오일 (300 mg, 65%)로서 제조하였다.
R f = 0.15 (40:60 에틸 아세테이트:헥산); 1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ 7.39 (dd, J = 15.5, 6.0 Hz, 1H), 6.14-6.00 (m, 1H), 4.28 (m, 1H), 3.81 (m, 2H), 3.73-3.32 (m, 4H), 2.32-2.12 (m, 1H), 2.06 (s, 3H), 1.83 (d, J = 6.5 Hz, 1H), 1.79 (s, 3H), 1.65 (m, 4H), 1.48 (m, 9H), 1.07 (m, 6H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 363 (MH+).
59b. ( R,E )-1-(3- 아미노피롤리딘 -1-일)-3-(2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1-엔-1-일)프로-2-펜-1-온
실시예 49b의 공정에 따라 실시예 59b의 생성물로부터 표제 화합물을 백색 고체 (70 mg, 84%)로서 제조하였다. R f = 0.05 (10:89:1 메탄올: 디클로로메탄: 암모늄 히드록사이드); 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ 8.4 (br s, 3H), 7.15 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 6.24-6.09 (m, 1H), 3.95-3.51 (m, 4H), 2.33-2.19 (m, 1H), 2.04 (m, 4H), 1.73 (s, 3H), 1.65-1.53 (m, 2H), 1.51-1.38 (m, 2H), 1.01 (m, 6H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 263 (MH+).
59c. ( R,E )-1-(1-(3-(2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1-엔-1-일)아크릴로일) 피롤리딘 -3-일)우레아
실시예 57b의 공정에 따라 실시에 59b의 생성물로부터 표제 화합물을 백색 필름으로서 제조하였다 (21 mg, 10%): R f = 0.2 (5:95 메탄올: 클로로포름); 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ 7.13 (d, J = 15.5 Hz, 1H), 6.31 (m, 1H), 6.14 (d, J = 15.5 Hz, 1H), 5.45 (m, 2H), 4.08 (m, 1H), 3.58 (t, J = 7.0 Hz, 1H), 3.53-3.14 (m, 4H), 2.10-1.95 (m, 2H), 1.73 (s, 3H), 1.58 (m, 2H), 1.46 (m, 2H), 1.03 (m, 6H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 306 (MH+).
실시예 60: ( E )-4-(3-(2,6,6- 트리메틸 -3- 옥소시클로헥스 -1-엔-1-일)아크릴로일)피페라진-1-카르복사미드
60a. ( E )- 메틸 3-(2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1- 에닐 ) 아크릴레이트
(E)-3-(2,6,6-트리메틸시클로헥스-1-에닐)아크릴산 (5.10 g, 26.3 mmol)을 아세톤(20 mL)에 용해시키고 무수 탄산칼륨(3.66 g, 26.5 mmol)을 첨가한 다음 이 반응 혼합물을 격렬히 교반하였다. 메틸 요오다이드 (4.11 g, 1.80 mL, 28.9 mmol)를 시린지를 통해 첨가하고 반응 혼합물을 실온에서 3 일간 교반하였다.
반응 혼합물을 디에틸 에테르 (175 mL)에 용해 희석시킨 다음 증류수(100 mL), 포화중탄산나트륨(100 mL) 및 염수 (100 mL)로 추출하였다. 수층들을 한데 모아서 디에틸 에테르로 추출하고 (2 x 75 mL), 한데 모은 유기층들을 소듐 설페이트로 건조 및 진공 농축시켜 점성의 황색 오일 (5.17 g)을 수득하였다. 생성물을 플래쉬 크로마토그래피로 정제하여 투명 오일 (3.77 g, 70%)을 얻었다. R f = 0.21 (20:80 에틸 아세테이트:헥산); 1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ 7.42 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 5.80 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 3.74 (s, 3H), 2.03 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 1.72 (s, 3H), 1.61-1.58 (m, 2H), 1.47-1.44 (m, 2H), 1.04 (s, 6H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 209 (MH+).
60b. ( E )-메틸 3-(2,6,6-트리메틸-3-옥소시클로헥스-1-에닐)아크릴레이트
셀레늄 디옥사이드 (2.00 g, 18.0 mmol)가 첨가되어 있는 1,4-디옥산 (60 mL)에 (E)-메틸 3-(2,6,6-트리메틸시클로헥스-1-에닐)아크릴레이트 (3.77 g, 18.0 mmol)를 용해시키고 격렬히 교반하였다. 반응 혼합물을 고무 격막으로 밀봉하고 80℃ 유조에 16 시간 동안 넣어 두었다.
반응 혼합물을 여과하고 진공 농축하여 갈색 오일 (5.20 g)을 얻었다. 생성물을 플래쉬 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 황색 오일 (440 mg, 11%)을 얻었다. R f = 0.3 (10:90 에틸 아세테이트:헥산); 1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ 7.41 (d, J = 16.4 Hz, 1H), 5.92 (d, J =16.4 Hz, 1H), 3.80 (s, 3H), 2.51 (d, J = 6.8 Hz, 2H), 1.88 (d, J = 7.2 Hz, 2H), 1.80 (s, 3H), 1.18 (s, 6H) ; 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 223 (MH+).
60c. ( E )-3-(2,6,6-트리메틸-3-옥소시클로헥스-1-에닐)아크릴산
아르곤 하 실온에서 (E)-메틸 3-(2,6,6-트리메틸-3-옥소시클로헥스-1-에닐)아크릴레이트 (830 mg, 4.50 mmol)를 테트라히드로퓨란 (30 mL)에 용해시키고 여기에 물(5 mL) 중 수산화리튬 (210 mg, 5.00 mmol) 용액을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 아르곤 하에 2시간 동안 격렬히 교반하였다.
반응 혼합물을 0℃에서 1M 염산 용액으로 산성화시킨 다음 에틸 아세테이트로 추출하였다 (3 x 85 mL). 한데 모은 유기층들 염수로 세척하고 (120 mL) 소듐 설페이트로 건조시켰다. 용매를 진공 농축시켜 황색 오일 (427 mg, 55%)을 얻었다. 1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ 7.49 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 5.95 (d, J =16.4 Hz, 1H), 2.54 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 1.89 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 1.81 (s, 3H), 1.19 (s, 6H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 209 (MH+).
60d. ( E )- 3차- 부틸 4-(3-(2,6,6- 트리메틸 -3- 옥소시클로헥스 -1-엔-1-일)아크릴로일)피페라진-1-카르복실레이트
실시예 3의 공정에 따라 실시예 60c의 생성물로부터 표제 화합물을 투명 오일 (60.0 mg, 26%)로서 제조하였다. R f = 0.25 (50:50 에틸 아세테이트: 헥산); 1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ 7.38 (d, J = 15.6, 1H), 6.32 (d, J = 15.6 Hz, 1H), 3.97-3.48 (m, 8H), 2.52 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 1.88 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 1.81 (s, 3H), 1.41 (s, 9H), 1.18 (s, 6H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 377 (MH+).
60e. ( E )-4-(3-(2,6,6- 트리메틸 -3- 옥소시클로헥스 -1-엔-1-일)아크릴로일)피페라진-1-카르복사미드
디클르로메탄 중 실시예 60d의 생성물과 1,4-디옥산 중 4.0 M 염산 용액을 교반된 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 4 시간 교반한 다음 진공 농축시켜 담황색의 조질의 오일을 얻었다. 실시예 33의 공정에 따라 실시예 60d의 생성물로부터 표제 화합물을 백색 필름으로서 제조하였다 (23.0 mg, 45%). R f = 0.50 (10:90 메탄올: 클로로포름); 1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ 7.39 (d, J = 15.6 Hz, 1H), 6.32 (d, J = 15.6 Hz, 1H), 4.64 (s, 2H), 3.76-3.45 (m, 8H), 2.52 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 1.88 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 1.80 (s, 3H), 1.18 (s, 6H) ppm; 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 319.9 (MH+).
실시예 61: ( E )-4-(3-(3-히드록시-2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1-엔-1-일) 아크릴로일)피페라진-1-카르복사미드
61a. ( E )-2,4,4- 트리메틸 -3-(3- 옥소부 -1-텐-1-일) 시클로헥스 -2-엔-1-일 아세테이트
아세트산 (180 mL) 중 1,4-벤조퀴논 (6.00 g, 55.5 mmol) 및 β-이오논 (10.6 g, 55.5 mmol)의 용액에 팔라듐 비스(트리플루오로아세테이트) (900 mg, 3.00 mmol) 및 o-메톡시아세토페논 (1.68 g, 11.1 mmol)을 첨가하였다. 이 혼합물을 70℃로 12시간 동안 가열하였다. 용매를 진공 농축한 다음 소듐 히드록사이드 용액 (200 mL, 6 N)을 첨가하고, 수성상을 디에틸 에테르 (5 x 50 mL)로 추출하였다. 결합된 유기 추출물을 탄산나트륨 (100 mL)의 포화 용액으로 세척하고, 소듐 설페이트로 건조, 여과하고 진공 농축시켰다. 조질의 생성물을 플래쉬 컬럼 크로마토그래피 (90:10 헥산: 디에틸 에테르)로 정제하여 표제 화합물을 갈색 오일로서 얻었다 (7.8 g; 56%). R f = 0.25 (30:70 디에틸 에테르: 헥산); 1H NMR (400 MHz, CDCl3)δ 7.20 (d, J = 16.5 Hz, 1H), 6.15 (d, J = 16.5 Hz, 1H), 5.25 (m, 1H), 2.33 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 2.00-1.88 (m, 1H), 1.81-1.73 (m, 1H), 1.72 (s, 3H), 1.71-1.60 (m, 1H), 1.48 (m, 1H), 1.09 (s, 3H), 1.04(s, 3H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 251 (MH+).
61b. ( E )-3-(3-히드록시-2,6,6-트리메틸시클로헥스-1-엔-1-일)아크릴산
(E)-2,4,4-트리메틸-3-(3-옥소부-1-텐-1-일)시클로헥스-2-엔-1-일 아세테이트를 β-이오논 대신 사용한 것을 제외하고, 실시예 1의 공정에 따라 실시예 61a의 생성물로부터 표제화합물을 투명한 황색 오일로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3)δ 7.51-7.45 (m, 1H), 5.89 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 4.06 (t, J = 4.5 Hz, 1H), 1.99-1.90 (m, 2H), 1.90 (s, 3H), 1.80-1.63 (m, 2H), 1.47 (m, 1H), 1.10 (s, 3H), 1.07 (s, 3H).
61c. ( E )- 3차- 부틸 4-(3-(3-히드록시-2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1-엔-1-일)아크릴로일)피페라진-1-카르복실레이트
3차-부틸 피페라진-1-카르복실레이트를 메틸아민 히드로클로라이드 대신 사용하고, (E)-3-(3-히드록시-2,6,6-트리메틸시클로헥스-1-엔-1-일)아크릴산을 (E)-3-(2,6,6-트리메틸시클로헥스-1-엔-1-일)아크릴산 대신 사용한 것을 제외하고, 실시예 3의 공정에 따라 표제 화합물을 무색 오일 (50 mg, 98%)로서 제조하였다. R f = 0.10 (50:50 에틸 아세테이트: 헥산); 1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ 7.33 (s, 1H), 6.25 (d, J = 15.5 Hz, 1H), 4.03 (t, J = 4.5 Hz, 1H), 3.66 (m, 2H), 3.62-3.51 (m, 2H), 3.49 (m, 4H), 2.00-1.89 (m, 1H), 1.88 (s, 3H), 1.78-1.63 (m, 4H), 1.53-1.42 (m, 9H), 1.07 (s, 6H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 379 (MH+).
61d. ( E )-4-(3-(3-히드록시-2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1-엔-1-일) 아크릴로일) 피페라진-1-카르복사미드
1,4-디옥산 중의 4.0 M 염산 용액 및 디클로로메탄 중의 실시예 61c의 생성물을 교반된 반응 혼합물에 첨가하였다. 이 반응 혼합물을 실온에서 4 시간 교반한 다음 진공 농축하여 담황색의 조질의 오일을 얻었다. 실시예 33의 공정에 따라 실시예 61c의 생성물로부터 표제 화합물을 무색 오일 (8 mg, 4%)로서 얻었다. R f = 0.15 (5:95 메탄올: 클로로포름 ); 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ 7.34 (d, J = 15.5 Hz, 1H), 6.25 (d, J = 15.5 Hz, 1H), 5.81-5.53 (m, 2H), 4.05 (m, 1H), 3.81 (m, 2H), 3.65 (m, 2H), 3.54 (m, 4H), 1.98 (m, 1H), 1.87 (s, 3H), 1.80-1.65 (m, 2H), 1.53-1.43 (m, 1H), 1.07 (s, 6H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 322 (MH+).
실시예 62: ( E )-4-(3-(3,3- 디플루오로 -2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1-엔-1-일)아크릴로일)피페라진-1-카르복사미드
62a. ( E )- 메틸 3-(6,8,8- 트리메틸 -1,4- 디티아스피로[4.5]데 -6-센-7-일) 아크릴레이트
아르곤 하 실온에서, (E)-메틸 3-(2,6,6-트리메틸-3-옥소시클로헥스-1-엔-1-일)아크릴레이트 (0.550 g, 2.40 mmol)를 1,2-에탄디티올 (0.710 mL, 8.50 mmol)에 용해시켰다. 이어서 균질한 이 혼합물을 -15℃로 냉각하여 10분간 교반하였다. 아연(II)클로라이드 (17.0 mg, 0.120 mmol)를 한 번에 첨가하고, 혼합물을 -15℃에서 3 시간, 이어서 실온에서 18시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응 혼합물을 물 (30 mL)로 희석하였다. 수층을 에틸 아세테이트로 추출하였다 (3 x 20 mL). 유기상들을 한데 모아서 소듐 설페이트로 건조, 여과하고 진공 농축시켰다. 백색 결정 (0.6 g, 2.0 mmol, 85%)으로서 얻어진 생성물들을 컬럼 크로마토그래피 (등용매성 5% 에틸 아세테이트: 헥산)로 정제하였다. Mp = 79.5-88.1℃; R f = 0.70 (15:85 에틸 아세테이트: 헥산); 1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ 7.36 (d, J = 16.2 Hz, 1H), 5.87 (d, J = 16.2 Hz, 1H), 3.79 (s, 3H), 3.42-3.31 (m, 4H), 2.32-2.25 (m, 2H), 2.00 (s, 3H), 1.75-1.69 (m, 2H), 1.58 (s, 2H), 1.06 (s, 6H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 298.8.
62b. ( E )- 메틸 3-(3,3- 디플루오로 -2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1-엔-1-일) 아크릴레이트
날젠(Nalgene) 보틀 중의 N-요오도숙신아미드 (1.12 g, 5.00 mmol) 및 디클로로메탄 (6 mL) 슬러리를 아르곤 하에서 -78℃로 냉각하였다. 불화수소산 피리딘 복합체 (1.40 mL, 49.6 mmol)를 이 슬러리에 서서히 첨가하고 10분간 아르곤 하에서 교반하였다. 디클로로메탄 (1 mL) 중 (E)-메틸 3-(6,8,8-트리메틸-1,4-디티아스피로[4.5]데-6-센-7-일)아크릴레이트 (62a, 0.370 g, 1.20 mmol)의 용액을 반응 혼합물에 첨가하고 -78℃에서 1 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 소듐 설파이트 포화용액: 중탄산나트륨 포화 용액의 1:1 혼합물(100 mL)에 부었다. 수용액을 에틸 아세테이트(3 x 70 mL)로 추출하였다. 유기 추출물들을 한데 모아서 소듐 설페이트로 건조, 여과하고 진공 농축시켰다. 밝은 황색 오일 (0.16 g, 0.65 mmol, 51%)로서 얻은 생성물을 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다 (등용매성 10% 에틸 아세테이트: 헥산). R f = 0.71 (10:60 에틸 아세테이트: 헥산); 1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ 7.52 (d, J = 16.2 Hz, 1H), 5.90 (d, J = 16.2 Hz), 3.80 (s, 3H), 2.18-2.12 (m, 2H), 1.80 (s, 3H), 1.70-1.68 (m, 2H), 1.09 (s, 6H); 19F-NMR (376 MHz, CDCl3)δ -93.6 (ddd, J = 3.0, 14.0, 14.0 Hz).
62c. ( E )-3-(3,3-디플루오로-2,6,6-트리메틸시클로헥스-1-엔-1-일)아크릴산
(E)-메틸 3-(3,3-디플루오로-2,6,6-트리메틸시클로헥스-1-엔-1-일)아크릴레이트 (62b, 57.0 mg, 0.230 mmol)를 실온에서 아르곤 하에 테트라히드로퓨란: 물의 3:1 용액에 용해시켰다. 실온에서 수산화리튬 (0.25 mL, 0.25 mmol, 1M 수용액)의 용액을 첨가하고, 반응 혼합물을 6 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 암모늄 클로라이드 (20 mL)에 붓고 디클로로메탄 (3 x 15 mL)으로 추출하였다. 유기 추출물들을 모아서 소듐 설페이트로 건조, 여과하고 진공 농축시켰다. 이로부터 생성물을 백색 결정 (54 mg, 정량적)으로서 수득하였다. Mp = 114.3-119.5℃; R f = 0.12 (10:90 에틸 아세테이트: 헥산); 1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ 7.39 (d, J = 16 Hz, 1H), 5.91 (d, J = 16 Hz, 1H), 2.20-2.09 (m, 2H), 1.81 (s, 3H), 1.70-1.67 (m, 2H), 1.09 (s, 6H); 19F-NMR (376 MHz, CDCl3)δ -94.1 (t, J = 14.0 Hz).
62d. ( E )-(9 H - 플루오렌 -9-일) 메틸 4-(3-(3,3- 디플루오로 -2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1-엔-1-일)아크릴로일) 피페라진-1-카르복실레이트
(9H-플루오렌-9-일)메틸 피페라진-1-카르복실레이트 히드로클로라이드를 메틸아민 히드로클로라이드 대신 사용한 것을 제외하고 실시예 3의 공정에 따라 실시예 62c의 생성물로부터 표제 화합물을 투명 오일 (0.11 g, 81%)로서 제조하였다. R f = 0.35 (30:70 에틸 아세테이트: 헥산); 1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ 7.80 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 7.58 (d, J = 7.2 Hz, 2H), 7.44 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 7.35 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 7.26 (d, J = 16 Hz, 1H), 6.28 (d, J = 16 Hz, 1H), 4.54 (d, J = 6 Hz, 2H), 4.27 (t, J = 6 Hz, 1H), 3.64-3.40 (m, 8H), 2.22-2.12 (m, 2H), 1.82 (s, 3H), 1.72-1.69 (m, 2H), 1.10 (s, 6H); 19F-NMR (376 MHz, CDCl3)δ -93.8 (m); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 521.1 (MH+).
62e. ( E )-3-(3,3- 디플루오로 -2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1-엔-1-일)-1-(피페라진-1-일)프로-2-펜-1-온
(E)-(9H-플루오렌-9-일)메틸 4-(3-(3,3-디플루오로-2,6,6-트리메틸시클로헥스-1-엔-1-일)아크릴로일) 피페라진-1-카르복실레이트 (97.0 mg, 0.190 mmol), 피페리딘 (0.4 mL, 20% v/v) 및 아세토니트릴 (2 mL)을 실온에서 5분간 함께 교반하였다. 이 반응 혼합물을 진공 농축하고 잔사를 18 시간 동안 동결건조시켰다. 투명 오일 (37 mg, 0.12 mmol, 67%)로서 얻어진 생성물을 컬럼 크로마토그래피 (등용매성 용리 5:95 메탄올: 디클로로메탄 + 0.1% (v/v) 암모늄 히드록사이드)에 의해 정제하였다. R f = 0.36 (5:95 메탄올: 디클로로메탄 + 0.1% (v/v) 암모늄 히드록사이드; 1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ 7.20 (d, J = 16Hz, 1H), 6.28 (d, J = 16 Hz), 3.71-3.68 (m, 2H), 3.59-3.49 (m, 2H), 2.95-2.86 (m, 4H), 2.19-2.09 (m, 2H), 1.80 (s, 3H), 1.69-1.66 (m, 2H), 1.07 s, 6H); 19F-NMR (376 MHz, CDCl3)δ -93.3 (ddd, J = 3.3, 14.0, 14.0 Hz); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 299.1 (MH+).
62f: ( E )-4-(3-(3,3- 디플루오로 -2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1-엔-1-일)아크릴로일) 피페라진-1-카르복사미드
실시예 33의 공정에 따라 실시예 62e의 생성물로부터 표제 화합물을 백색 결정 (21 mg, 68%)으로서 수득하였다. Mp = 181.3-182.4℃; R f = 0.35 (5:95 메탄올: 디클로로메탄 + 0.1% 암모늄 히드록사이드; 1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ 7.26 (d, J = 16 Hz, 1H), 6.29 (d, J = 16 Hz, 1H), 3.80-3.40 (m, 8H), 2.24-2.10 (m, 2H), 1.95-1.86 (m, 2H), 1.81 (br s, 3H), 1.74-1.66 (m, 2H), 1.09 (s, 6H); 19F-NMR (376 MHz, CDCl3)δ -93.8 (t, J = 14.0 Hz); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 342.0 (MH+).
실시예 63: ( E )-4-(3-(3,3- 디듀테로 -2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1-엔-1-일)아크릴로일) 피페라진-1-카르복사미드
63a. ( E )- 메틸 3-(3- 듀테로 -3-히드록시-2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1-엔-1-일)아크릴레이트
0℃에서 d4-메탄올 (6 mL) 중 (E)-메틸 3-(2,6,6-트리메틸-3-옥소시클로헥스-1-엔-1-일) 아크릴레이트 (60b, 0.27 g, 1.2 mmol)의 교반 용액에 소듐 보로듀테라이드(0.051 g, 1.2 mmol)를 한번에 첨가하였다. 이 반응 혼합물을 0℃에서 3 시간 교반한 다음, 에틸 아세테이트 (50 mL)와 암모늄 클로라이드(25 mL)의 50% 포화 용액을 첨가하여 반응을 중단하였다. 2상 반응 혼합물을 분리 깔때기에 옮겨서 분리하고, 유기층을 물 (25 mL) 및 염수 (25 mL)로 더 세척한 다음 마그네슘 설페이트로 건조, 여과하고 진공 농축하여 담황색 오일 (0.24 g, 88%)을 얻었다. R f = 0.33 (25:75 에틸 아세테이트: 헥산); 1H NMR (400 MHz, CDCl3)δ 7.34 (d, J = 16.5 Hz, 1H), 5.84 (d, J = 16.5 Hz, 1H), 3.76 (s, 3H), 1.90 (ddd, J = 13.5, 11.0, 3.0 Hz, 1H), 1.84 (s, 3H), 1.72 (ddd, J = 13.5, 7.0, 2.0 Hz, 1H), 1.64 (m, 1H), 1.44 (ddd, J = 13.5, 7.0, 3.0 Hz, 1H), 1.23 (br s, 1H), 1.05 (s, 3H), 1.03 (s, 3H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 226 (MH+).
63b. ( E )- 메틸 3-(3- 아세톡시 -3- 듀테로 -2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1-엔-1-일)아크릴레이트
무수 아세트산 (3 mL) 중 (E)-메틸 3-(3-듀테로-3-히드록시-2,6,6-트리메틸시클로헥스-1-엔-1-일)아크릴레이트 (63a, 0.22 g, 0.98 mmol)의 용액에 N,N-디메틸아미노피리딘 (0.012 g, 0.098 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 18시간 동안 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 (25 mL)로 희석하고 분리 깔때기로 옮겼다. 유기층을 소듐 히드록사이드 (2 x 25 mL)의 1M 용액으로 추출한 다음, 마그네슘 설페이트로 건조, 여과하고 진공 농축하여 담황색 오일 (0.20 g, 78%)을 수득하였다. R f = 0.45 (25:75 에틸 아세테이트: 헥산); 1H NMR (400 MHz, CDCl3)δ 7.34 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 5.85 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 3.77 (s, 3H), 2.07 (s, 3H), 1.90 (ddd, J = 13.5, 11.0, 3.0 Hz, 1H), 1.73 (ddd, J = 10.0, 7.0, 3.5 Hz, 1H), 1.69 (s, 3H), 1.66-1.58 (m, 1H), 1.44 (ddd, J = 13.5, 7.0, 3.0 Hz, 1H), 1.07 (s, 3H), 1.03 (s, 3H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 208 (M-OAc+).
63c. ( E )- 메틸 3-(3,3- 디듀테로 -2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1-엔-1-일) 아크릴레이트
무수 테트라히드로퓨란 (18 mL) 중 (E)-메틸 3-(3-acet옥시-3-듀테로-2,6,6-트리메틸시클로헥스-1-엔-1-일)아크릴레이트 (0.19 g, 0.71 mmol)의 용액에 팔라듐 테트라키스트리페닐포스핀 (0.55 g, 0.48 mmol) 및 소듐 보로듀테라이드 (0.13 g, 3.1 mmol)를 첨가하였다. 반응 플라스크를 단단히 밀봉하여 방출된 중수소(deuterium) 가스로부터 압력을 형성시키고, 반응 혼합물을 실온에서 18시간 동안 밤새 교반하였다. 디에틸 에테르 (50 mL) 및 암모늄 클로라이드 (20 mL)의 50% 포화 용액을 첨가함으로써 반응을 중단시켰다.이 2상 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 분리 깔때기로 여과하고 분리시킨 다음 유기층을 염수 (50 mL) 및 암모늄 클로라이드(50 mL)의 50% 포화 용액으로 더 세척한 다음, 마그네슘 설페이트로 건조, 여과하고 진공 농축하여 담황색 오일 (0.10 g, 68%)을 얻었으며 이를 추가 정제없이 다음 단계에 사용하였다. R f = 0.90 (25:75 에틸 아세테이트: 헥산).
63d. ( E )-3-(3,3-디듀테로-2,6,6-트리메틸시클로헥스-1-엔-1-일)아크릴산
실시예 60c의 공정에 따라 실시예 63c의 생성물로부터 표제 화합물을 담황색 고체 (68 mg, 92%)로서 제조하였다. 상기 화합물을 추가 정제 없이 다음 단계에 사용하였다. R f = 0.45 (25:75 에틸 아세테이트: 헥산).
63e. ( E )- 3차- 부틸 4-(3-(3,3- 디듀테로 -2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1-엔-1-일)아크릴로일) 피페라진-1-카르복실레이트
3차-부틸 피페라진-1-카르복실레이트를 메틸아민 히드로클로라이드 대신 사용한 것을 제외하고 실시예 3의 공정에 따라 실시예 63d의 생성물로부터 표제 화합물을 담황색 고체 (126 mg, 정량적)로서 제조하였다. R f = 0.55 (25:75 에틸 아세테이트: 헥산); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 365 (MH+).
63f. ( E )-3-(3,3- 디듀테로 -2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1-엔-1-일)-1-(피페라진-1-일) 프로-2-펜-1-온
실시예 49b의 공정에 따라 실시예 63e의 생성물로부터 표제 화합물을 황색 오일 (51 mg, 56%)로서 제조하였다. 조질의 생성물을 추가 정제 없이 다음 단계에 사용하였다. R f = 0.30 (90:10 클로로포름: 메탄올); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 266 (MH+).
63g. ( E )-4-(3-(3,3- 디듀테로 -2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1-엔-1-일)아크릴로일) 피페라진-1-카르복사미드
탄산칼륨을 트리에틸아민 대신 사용한 것을 제외하고 실시예 33의 공정에 따라 실시예 63f의 생성물로부터 표제 화합물을 회백색 고체 (35 mg, 59%)로서 제조하였다. Mp = 148.4-149.7℃; R f = 0.50 (90:10 클로로포름: 메탄올); 1H NMR (400 MHz, CDCl3)δ 7.34 (d, J = 15.5 Hz, 1H), 6.17 (d, J = 15.5 Hz, 1H), 4.88 (s, 2H), 3.79-3.35 (m, 8H), 1.72 (s, 3H), 1.62-1.53 (m, 2H), 1.45 (dd, J = 7.5, 4.0 Hz, 2H), 1.03 (s, 6H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 308 (MH+).
실시예 64: ( E )- N -(피페리딘-4-일)-3-(2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1-엔-1-일)아크릴아미드 히드로클로라이드
64a. ( E )- 3차- 부틸 4-(3-(2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1-엔-1-일) 아크릴아미도 ) 피페리딘-1- 카르복실레이트
3차-부틸 4-아미노피페리딘-1-카르복실레이트를 메틸아민 히드로클로라이드 대신 사용한 것을 제외하고, 실시예 3의 공정에 따라 실시예 1a의 생성물로부터 표제 화합물을 투명 오일 (202 mg, 52%)로서 제조하였다. R f = 0.20 (25:75 에틸 아세테이트: 헥산); 1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ 7.30 (d, J = 15.2, 1H), 5.70 (d, J = 15.2 Hz, 1H), 5.42-5.28 (m, 1H), 4.06-4.01 (m, 3H), 2.90-2.84 (m, 2H), 2.03-1.94 (m, 4H), 1.72 (s, 3H), 1.59 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 1.58-1.47 (m, 11H), 1.34-1.31 (m, 2H), 0.99 (s, 6H) ppm; 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 376.9 (MH+).
64b. ( E )- N -(피페리딘-4-일)-3-(2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1-엔-1-일)아크릴아미드 히드로클로라이드
실시예 49b의 공정에 따라 표제 화합물을 황색 고체 (166 mg, 99%)로서 수득하였다. R f = 0.1 (90:10 디클로로메탄: 메탄올 + 0.1% (v/v) 암모늄 히드록사이드); 1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ 7.31 (d, J = 16.0, 1H), 5.99 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 4.06-4.03 (m, 1H), 3.65 (s, 2H), 3.46-3.43 (m, 2H), 3.34-3.30 (m, 2H), 2.22-2.01 (m, 4H), 1.81-1.77 (m, 5H) 1.64-1.63 (m, 2H), 1.43-1.41 (m, 2H), 1.07 (s, 6H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 277 (MH+).
실시예 65: ( E )- N - 메틸 - N -(피페리딘-3-일)-3-(2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1-엔-1-일)아크릴아미드 히드로클로라이드
65a. ( E )- 3차- 부틸 3-( N - 메틸 -3-(2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1-엔-1-일) 아크릴아미도 )피페리딘-1-카르복실레이트
3차-부틸 3-(메틸아미노)피페리딘-1-카르복실레이트를 메틸아민 히드로클로라이드 대신 사용한 것을 제외하고, 실시예 3의 공정에 따라 실시예 1a의 생성물로부터 표제 화합물을 황색 고체 (335 mg, 83%)로서 제조하였다. R f = 0.20 (25:75 에틸 아세테이트: 헥산); 1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ 7.33 (d, J = 15.0, 1H), 6.50 (d, J = 15.0 Hz, 1H), 4.44-3.78 (m, 4H), 2.95 (s, 3H), 2.84-2.78 (m, 1H), 2.58-2.56 (m,1H), 2.04-2.02 (m, 2H), 1.75 (s, 4H), 1.63-1.60 (m, 4H), 1.48-1.44 (m, 11H), 1.01 (s, 6H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 391 (MH+).
65b. ( E )- N - 메틸 - N -(피페리딘-3-일)-3-(2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1-엔-1-일) 아크릴아미드 히드로클로라이드
실시예 49b의 공정에 따라 표제 화합물을 황색 오일 (278 mg, 99%)로서 제조하였다. R f = 0.2 (90:10 디클로로메탄: 메탄올 + 0.1% (v/v) 암모늄 히드록사이드); 1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ 7.31 (d, J = 15.0, 1H), 6.34 (d, J = 15.0 Hz, 1H), 4.81-4.76 (m, 1H), 3.39-3.31 (m, 4H), 3.07-2.78 (m, 4H), 2.09 (t, J = 6.0 Hz, 3H), 2.05-1.82 (m, 3H), 1.79 (s, 3H), 1.53-1.49 (m, 2H), 1.28-1.24 (m, 2H), 1.08 (s, 6H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 291 (MH+).
실시예 66: ( E )- N -(피페리딘-3-일)-3-(2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1-엔-1-일)아크릴아미드 히드로클로라이드
66a. ( E )- 3차- 부틸 3-(3-(2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1-엔-1-일) 아크릴아미도 ) 피페리딘-1- 카르복실레이트
3차-부틸 3-아미노피페리딘-1-카르복실레이트를 메틸아민 히드로클로라이드 대신 사용한 것을 제외하고, 실시예 3의 공정에 따라 실시예 1a의 생성물로부터 표제 화합물을 황색 오일 (103 mg, 27%)로서 제조하였다. R f = 0.20 (25:75 에틸 아세테이트: 헥산); 1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ 7.31 (d, J = 15.2, 1H), 5.69 (d, J = 15.2 Hz, 1H), 4.07 (s, 1H), 3.49-3.28 (m, 4H), 2.04-2.01 (m, 2H), 1.89 (s, 1H), 1.73 (s, 3H), 1.71-1.58 (m, 5H), 1.55-1.46 (m, 11H),1.05 (s, 6H) ppm; 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 377.0 (MH+).
66b. ( E )- N -(피페리딘-3-일)-3-(2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1-엔-1-일)아크릴아미드 히드로클로라이드
실시예 49b의 공정에 따라, 표제 화합물을 담갈색 무정형 고체로서 수득하였다 (85 mg, 99%). R f = 0.1 (90:10) 디클로로메탄: 메탄올 + 0.1% (v/v) 암모늄 히드록사이드); 1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ 9.61-9.53 (m,2H), 8.03 (s, 1H), 7.33 (d, J = 14.5 Hz, 1H), 6.00 (d, J = 14.5 Hz, 1H), 4.51 (s, 1H), 3.30-3.01 (m, 4H), 2.01-1.98 (m, 1H), 1.74 (s, 2H), 1.58 (s, 3H), 1.45-1.43 (m, 2H), 1.24-1.22 (m, 2H), 1.04 (s, 6H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 277 (MH+).
실시예 67: ( E )- N - 메틸 - N -(피페리딘-3-일)-3-(2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1-엔-1-일)아크릴아미드 히드로클로라이드
67a. ( E )- 3차- 부틸 4-( N - 메틸 -3-(2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1-엔-1-일) 아크릴아미도 )피페리딘-1-카르복실레이트
3차-부틸 4-(메틸아미노)피페리딘-1-카르복실레이트를 메틸아민 히드로클로라이드 대신 사용한 것을 제외하고, 실시예 3의 공정에 따라 실시예 1a의 생성물로부터 표제 화합물을 황색 오일 (195 mg, 49%)로서 제조하였다. R f = 0.25 (25:75 에틸 아세테이트: 헥산); 1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ 7.35 (d, J = 14.4, 1H), 6.34 (d, J = 14.4 Hz, 1H), 4.71 (s, 1H), 4.21 (s, 2H), 2.89 (s, 3H), 2.87-2.66 (m, 2H), 2.04-2.02 (m, 2H), 1.75 (s, 3H), 1.65-1.58 (m, 6H), 1.48-1.46 (m, 11H), 1.05 (s, 6H) ppm; 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 391.0 (MH+).
67b. ( E )- N - 메틸 - N -(피페리딘-3-일)-3-(2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1-엔-1-일)아크릴아미드 히드로클로라이드
실시예 49b의 공정에 따라 표제 화합물을 황색 필름 (160 mg, 99%)으로서 수득하였다. R f = 0.3 (90:10 디클로로메탄: 메탄올 + 0.1% (v/v) 암모늄 히드록사이드); 1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ 7.30 (d, J = 15.0, 1H), 6.34 (d, J = 15.0 Hz, 1H), 4.66 (s, 1H), 3.52-3.49 (m, 2H), 3.17-3.11 (m, 2H), 3.03-2.94 (m, 3H), 2.10-2.07 (m, 4H), 1.91-1.87 (m, 2H), 1.78 (s, 3H), 1.67-1.64 (m, 2H), 1.52-1.49 (m, 2H), 1.07 (s, 6H), 0.89-0.85 (m, 2H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 291 (MH+).
실시예 68: ( E )-1-(1,1- 디옥시도티오모르폴리노 )-3-(2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1-에닐)프로-2-펜-1-온
티오모르폴린 1,1-디옥사이드를 메틸아민 히드로클로라이드 대신 사용한 것을 제외하고, 실시예 3의 공정에 따라 실시예 1a의 생성물로부터 표제 화합물을 담황색의 왁스상 고체(28.2 mg, 18%)로서 제조하였다. R f = 0.10 (25:75 에틸 아세테이트: 헥산); 1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ 7.42 (d, J = 15.5, 1H), 6.20 (d, J = 15.5 Hz, 1H), 4.10-4.07 (m, 4H), 3.10-2.98 (m, 4H), 2.07-1.98 (m, 2H), 1.75 (s, 3H), 1.61 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 1.48 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 1.05 (s, 6H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 312 (MH+).
실시예 69: ( E )-1- 티오모르폴리노 -3-(2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1-엔-1-일)프로-2-펜-1-온
티오모르폴린을 메틸아민 히드로클로라이드 대신 사용한 것을 제외하고, 실시예 3의 공정에 따라 실시예 1a의 생성물로부터 표제 화합물을 투명 오일 (104 mg, 73%)로서 제조하였다. R f = 0.20 (10:90 에틸 아세테이트: 헥산); 1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ 7.32 (d, J = 15.5, 1H), 6.18 (d, J = 15.5 Hz, 1H), 3.95-3.85 (m, 4H), 2.67-2.65 (m, 4H), 2.03 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 1.74 (s, 3H), 1.61 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 1.46 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 1.05 (s, 6H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 280 (MH+).
실시예 70: ( E )-1-(4,4- 디플루오로피페리딘 -1-일)-3-(2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1-엔-1-일)프로-2-펜-1-온
4,4-디플루오로피페리딘을 메틸아민 히드로클로라이드 대신 사용한 것을 제외하고, 실시예 3의 공정에 따라 표제 화합물을 백색 고체 (155 mg, 81%)로서 수득하였다. Mp = 67.3-70.7℃; R f = 0.44 (20:80 에틸 아세테이트: 헥산); 1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ 7.37 (d, J = 15.5 Hz, 1H), 6.24 (d, J = 15.5 Hz, 1H), 3.75 (br m, 4H), 2.09-1.96 (m, 6H), 1.76 (s, 3H), 1.63 (m, 2H), 1.55-1.45 (m, 2H), 1.07 (s, 6H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 298 (MH+).
실시예 71: (±)-4-(( E )-3-((1,6- 안티 )-2,2,6- 트리메틸시클로헥실 )아크릴로일) 피페라진-1-카르복사미드
71a. (±)-( E )-에틸 3-((1,6- 안티 )-2,2,6- 트리메틸시클로헥실 ) 아크릴레이트
둥근 바닥 플라스크에, 소듐 하이드라이드 (60% 분산액, 0.780 g, 19.4 mmol)를 헥산 (10 mL)에 현탁시키고 용매를 따라내었다. 잔사를 무수 테트라히드로퓨란 (40 mL)에 현탁시키고 반응 플라스크를 아르곤으로 채운 다음 0℃로 냉각하였다. 이 교반된 슬러리에 트리에틸포스포노아세테이트 (3.24 mL, 3.63 g, 16.2 mmol)를 적가하여 발포 반응 혼합물이 형성되는 것을 방지하였다. 투명한 용액이 남게 될 때까지 실온으로 승온시키면서 반응 혼합물을 30분간 교반하였다. 이 교반된 용액에 무수 테트라히드로퓨란 (10 mL) 중 (1,6-안티)-2,2,6-트리메틸시클로헥산카르브알데히드 (2.00 g, 12.9 mmol)의 용액을 첨가하였다. 반응 혼합물을 가열 환류하고 18 시간 동안 교반하였다.
실온으로 냉각한 후, 반응 혼합물을 분리 깔때기로 옮긴 다음 에틸 아세테이트 (300 mL)로 희석하였다. 유기상을 암모늄 클로라이드의 50% 포화 용액으로 추출한 다음(2 x 100 mL) 염수(100 mL)로 세척하고, 마그네슘 설페이트로 건조, 여과하고 진공 농축하여 갈색의 조질의 오일 (~5 g)을 얻었다. 표제 화합물을 플래쉬 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 (용매 구배: 1-10% 에틸 아세테이트: 헥산) 담갈색 오일 (0.726 g, 28%). R f = 0.50 (5:95 에틸 아세테이트: 헥산)을 얻었다; 1H NMR (400 MHz, CDCl3)δ 6.71 (dd, J = 15.5, 10.0 Hz, 1H), 5.74 (d, J = 15.5 Hz, 1H), 4.16 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 1.76-1.65 (m, 1H), 1.57-1.35 (m, 5H), 1.27 (t, J = 7.0 Hz, 3H), 1.15 (m, 1H), 0.93-0.88 (m, 1H), 0.86 (s, 3H), 0.80 (s, 3H), 0.72 (d, J = 6 Hz, 3H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 225 (MH+).
71b. (±)-( E )-3-((1,6- 안티 )-2,2,6-트리메틸시클로헥실)아크릴산
(E)-에틸 3-((1,6-안티)-2,2,6-트리메틸시클로헥실)아크릴레이트 (71a, 1.03 g, 4.59 mmol)를 테트라히드로퓨란 (16 mL)과 물 (8 mL)의 2:1 혼합물에 용해시키고, 이 용액에 수산화리튬 (0.549 g, 22.9 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 가열 환류시킨 다음 18 시간 동안 밤새 교반하였다.
반응 혼합물을 분리 깔때기로 옮기고 소듐 히드록사이드 (100 mL)의 1M 용액으로 희석한 다음 헥산 (50 mL)으로 추출하였다. 이어서 진한 염산 (~16 mL)을 첨가함으로써 수성상을 산성화시킨 다음, 디클로로메탄 (3 x 50 mL)으로 추출하였다. 한데 모은 유기층들 염수 (50 mL)로 세척하고, 마그네슘 설페이트로 건조, 여과하고 진공 농축하여 담황색 고체 (0.61 g, 67%)를 얻었다. R f = 0.20 (25:75 에틸 아세테이트: 헥산); 1H NMR (400 MHz, CDCl3)δ 10.50 (br s, 1H), 6.86 (dd, J = 15.5, 10.0 Hz, 1H), 5.78 (d, J = 15.5 Hz, 1H), 1.73 (m, 1H), 1.50 (m, 5H), 1.25-1.12 (m, 1H), 0.98-0.91 (m, 1H), 0.89 (s, 3H), 0.83 (s, 3H), 0.75 (d, J = 6.0 Hz, 3H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 197 (MH+).
71c. (±)- 3차- 부틸 4-(( E )-3-((1,6- 안티 )-2,2,6- 트리메틸시클로헥실 )아크릴로일) 피페라진-1-카르복실레이트
3차-부틸 피페라진-1-카르복실레이트를 메틸아민 히드로클로라이드 대신 사용한 것을 제외하고, 실시예 3의 공정에 따라 실시예 71b의 생성물로부터 표제 화합물을 백색 고체 (0.40 g, 95%)로서 얻었다. R f = 0.40 (25:75 에틸 아세테이트: 헥산); 1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ 6.69 (dd, J = 15.0, 10.0 Hz, 1H), 6.16 (d, J = 15.0 Hz, 1H), 3.73-3.39 (m, 8H), 1.74 (m, 1H), 1.60-1.39 (m, 15H), 1.22-1.12 (m, 1H), 0.90 (s, 3H), 0.83 (s, 3H), 0.77 (d, J = 6.0 Hz, 3H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 365 (MH+).
71d. 4-(( E )-3-((1,6- 안티 )-2,2,6- 트리메틸시클로헥실 )아크릴로일)피페라진-1-카르복사미드
디클로로메탄 (10 mL) 중 3차-부틸 4-((E)-3-((1,6-안티)-2,2,6-트리메틸시클로헥실)아크릴로일)피페라진-1-카르복실레이트 (71c, 0.35 g, 0.96 mmol)의 용액에 1,4-디옥산 (1.2 mL, 4.8 mmol) 중 4.0 M 염산 용액을 적가하였다. 이 반응 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반한 다음 진공 농축하였다.
조질의 오일을 디클로로메탄 (10 mL)에 용해시키고 탄산칼륨(0.67 g, 4.8 mmol) 및 트리메틸실릴 이소시아네이트 (1.3 mL, 9.6 mmol)를 실온에서 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반하였다.
반응 혼합물을 암모늄 클로라이드의 포화 수용액 (10 mL)에 붓고 및 디클로로메탄 (3 x 10 mL)으로 추출하였다. 결합된 유기상들을 소듐 설페이트로 건조 및 진공 농축시켰다. 생성물을 플래쉬 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 백색 고체로서 수득하였다 (0.205 mg, 69%). R f = 0.20 (5:95 메탄올: 클로로포름); 1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ 6.68 (dd, J = 15.0, 10.0 Hz, 1H), 6.13 (d, J = 15.0 Hz, 1H), 4.76 (br s, 2H), 3.52 (m, 8H), 1.91 (s, 1H), 1.72 (m, 1H), 1.50 (m, 5H), 1.15 (m, 1H), 0.87 (s, 3H), 0.81 (s, 3H), 0.74 (d, J = 6.0 Hz, 3H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 308 (MH+).
실시예 72: (-)-4-(( E )-3-((1 R , 6 R )-2,2,6- 트리메틸시클로헥실 )아크릴로일) 피페라진-1-카르복사미드
72a. (-)-( E )-에틸 3-(( 1 R ,6 R )-2,2,6- 트리메틸시클로헥실 ) 아크릴레이트
(1R,6R)-2,2,6-트리메틸시클로헥산카르브알데히드를 (1,6-안티)-2,2,6-트리메틸시클로헥산카르브알데히드 대신 사용한 것을 제외하고, 실시예 71a의 공정에 따라 표제 화합물을 담갈색 오일 (1.3 g, 18%)로서 제조하였다. [ α]D 23 = -15.3o(c = 0.25, CHCl3); R f = 0.50 (5:95 에틸 아세테이트: 헥산); 1H NMR (400 MHz, CDCl3)δ 6.71 (dd, J = 15.5, 10.0 Hz, 1H), 5.74 (d, J = 15.5 Hz, 1H), 4.16 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 1.76-1.65 (m, 1H), 1.57-1.35 (m, 5H), 1.27 (t, J = 7.0 Hz, 3H), 1.15 (m, 1H), 0.93-0.88 (m, 1H), 0.86 (s, 3H), 0.80 (s, 3H), 0.72 (d, J = 6 Hz, 3H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 225 (MH+).
72b. (-)-( E )-3-((1 R ,6 R )-2,2,6-트리메틸시클로헥실)아크릴산
실시예 60c의 공정에 따라 실시예 72a의 생성물로부터 표제 화합물을 담황색 고체 (1.02 g, 91%)로서 제조하였다. [ α]D 23 = -20.0o(c = 0.25, CHCl3); R f = 0.20 (25:75 에틸 아세테이트: 헥산); 1H NMR (400 MHz, CDCl3)δ 10.50 (br s, 1H), 6.86 (dd, J = 15.5, 10.0 Hz, 1H), 5.78 (d, J = 15.5 Hz, 1H), 1.73 (m, 1H), 1.50 (m, 5H), 1.25-1.12 (m, 1H), 0.98-0.91 (m, 1H), 0.89 (s, 3H), 0.83 (s, 3H), 0.75 (d, J = 6.0 Hz, 3H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 197 (MH+).
72c. (-)- 3차- 부틸 4-(( E )-3-(( 1 R ,6 R )-2,2,6- 트리메틸시클로헥실 )아크릴로일) 피페라진-1-카르복실레이트
3차-부틸 피페라진-1-카르복실레이트를 메틸아민 히드로클로라이드 대신 사용한 것을 제외하고, 실시예 3의 공정에 따라 실시예 72b의 생성물로부터 표제 화합물을 백색 고체 (0.16 g, 86%)로서 제조하였다. R f = 0.40 (25:75 에틸 아세테이트: 헥산); 1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ 6.69 (dd, J = 15.0, 10.0 Hz, 1H), 6.16 (d, J = 15.0 Hz, 1H), 3.73-3.39 (m, 8H), 1.74 (m, 1H), 1.60-1.39 (m, 15H), 1.22-1.12 (m, 1H), 0.90 (s, 3H), 0.83 (s, 3H), 0.77 (d, J = 6.0 Hz, 3H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 365 (MH+).
72d. (-)-4-(( E )-3-(( 1 R ,6 R )-2,2,6- 트리메틸시클로헥실 )아크릴로일)피페라진-1-카르복사미드
실시예 71d의 공정에 따라 실시예 72c의 생성물로부터 표제 화합물을 백색 고체 (85 mg, 63%)로서 수득하였다. [ α]D 23 = -22.4o (c = 0.25, CHCl3); 1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ 6.68 (dd, J = 15.0, 10.0 Hz, 1H), 6.13 (d, J = 15.0 Hz, 1H), 4.76 (br s, 2H), 3.52 (m, 8H), 1.91 (s, 1H), 1.72 (m, 1H), 1.50 (m, 5H), 1.15 (m, 1H), 0.87 (s, 3H), 0.81 (s, 3H), 0.74 (d, J = 6.0 Hz, 3H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 308 (MH+).
실시예 73: (+)-4-(( E )-3-(( 1 S ,6 S )-2,2,6- 트리메틸시클로헥실 )아크릴로일) 피페라진-1-카르복사미드
73a. (+)-( E )-에틸 3-(( 1 S ,6 S )-2,2,6- 트리메틸시클로헥실 ) 아크릴레이트
(1S,6S)-2,2,6-트리메틸시클로헥산카르브알데히드를 (1,6-안티)-2,2,6-트리메틸시클로헥산카르브알데히드 대신 사용한 것을 제외하고, 실시예 71a의 공정에 따라 표제 화합물을 담갈색 오일 (1.4 g, 28%)로서 수득하였다. [ α]D 23 = +16.8o (c = 0.25, CHCl3); R f = 0.50 (5:95 에틸 아세테이트: 헥산); 1H NMR (400 MHz, CDCl3)δ 6.71 (dd, J = 15.5, 10.0 Hz, 1H), 5.74 (d, J = 15.5 Hz, 1H), 4.16 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 1.76-1.65 (m, 1H), 1.57-1.35 (m, 5H), 1.27 (t, J = 7.0 Hz, 3H), 1.15 (m, 1H), 0.93-0.88 (m, 1H), 0.86 (s, 3H), 0.80 (s, 3H), 0.72 (d, J = 6 Hz, 3H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 225 (MH+).
73b. (+)-( E )-3-((1 S ,6 S )-2,2,6-트리메틸시클로헥실)아크릴산
실시예 60c의 공정에 따라 실시예 73a의 생성물로부터 표제 화합물을 담황색 고체 (0.61 g, 67%)로서 수득하였다. [ α]D 23 = +21.6o (c = 0.25, CHCl3); R f = 0.20 (25:75 에틸 아세테이트: 헥산); 1H NMR (400 MHz, CDCl3)δ 10.50 (br s, 1H), 6.86 (dd, J = 15.5, 10.0 Hz, 1H), 5.78 (d, J = 15.5 Hz, 1H), 1.73 (m, 1H), 1.50 (m, 5H), 1.25-1.12 (m, 1H), 0.98-0.91 (m, 1H), 0.89 (s, 3H), 0.83 (s, 3H), 0.75 (d, J = 6.0 Hz, 3H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 197 (MH+).
73c. (+)- 3차- 부틸 4-(( E )-3-(( 1 S ,6 S )-2,2,6- 트리메틸시클로헥실 )아크릴로일) 피페라진-1-카르복실레이트
3차-부틸 피페라진-1-카르복실레이트를 메틸아민 히드로클로라이드 대신 사용한 것을 제외하고, 실시예 3의 공정에 따라 실시예 73b의 생성물로부터 표제 화합물을 백색 고체 (0.40 g, 98%)로서 제조하였다. R f = 0.40 (25:75 에틸 아세테이트: 헥산); 1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ 6.69 (dd, J = 15.0, 10.0 Hz, 1H), 6.16 (d, J = 15.0 Hz, 1H), 3.73-3.39 (m, 8H), 1.74 (m, 1H), 1.60-1.39 (m, 15H), 1.22-1.12 (m, 1H), 0.90 (s, 3H), 0.83 (s, 3H), 0.77 (d, J = 6.0 Hz, 3H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 365 (MH+).
73d. (+)-4-(( E )-3-(( 1 S ,6 S )-2,2,6- 트리메틸시클로헥실 )아크릴로일)피페라진-1-카르복사미드
실시예 71d의 공정에 따라 실시예 73c의 생성물로부터 표제 화합물을 백색 고체 (0.21 g, 69%)로서 수득하였다. [ α]D 23 = +19.6o (c = 0.25, CHCl3); 1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ 6.68 (dd, J = 15.0, 10.0 Hz, 1H), 6.13 (d, J = 15.0 Hz, 1H), 4.76 (br s, 2H), 3.52 (m, 8H), 1.91 (s, 1H), 1.72 (m, 1H), 1.50 (m, 5H), 1.15 (m, 1H), 0.87 (s, 3H), 0.81 (s, 3H), 0.74 (d, J = 6.0 Hz, 3H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 308 (MH+).
실시예 74: ( E )-1- 모르폴리노 -3-(( 1 R ,6 R )-2,2,6- 트리메틸시클로헥실 )프로-2-펜-1-온
모르폴린을 메틸아민 히드로클로라이드 대신 사용한 것을 제외하고, 실시예 3의 공정에 따라 실시예 72b의 생성물로부터 표제 화합물을 투명한 점성오일 (57.0 mg, 86%)로서 수득하였다. [ α]D 23 = -21.6o (c = 0.32, 클로로포름); R f = 0.30 (10:90 에틸 아세테이트: 헥산); 1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ 6.81 (dd, J = 15.0, 8.5 Hz, 1H), 6.12 (d, J = 15.0 Hz, 1H), 3.69-3.56 (m, 8H), 1.75-1.71 (m, 2H), 1.51-1.35 (m, 5H), 0.88-0.87 (m, 4H), 0.82 (s, 3H), 0.75 (d, J = 6.0 Hz, 3H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 266 (MH+).
실시예 75: ( E )-1- 티오모르폴리노 -3-(( 1 R ,6 R )-2,2,6- 트리메틸시클로헥실 ) 프로-2-펜-1-온
티오모르폴린을 메틸아민 히드로클로라이드 대신 사용한 것을 제외하고, 실시예 3의 공정에 따라 실시예 72b의 생성물로부터 표제 화합물을 투명 오일 (38.0 mg, 54%)로서 제조하였다. [ α]D 23 = -20.4o (c = 0.32, 클로로포름); R f = 0.40 (10:90 에틸 아세테이트: 헥산); 1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ 6.63 (dd, J = 15.0, 8.5 Hz, 1H), 6.18 (d, J = 15.0 Hz, 1H), 3.90-3.82 (m, 4H), 2.62 (s, 4H), 1.73-1.70 (m, 1H), 1.49-1.47 (m, 5H), 1.13-1.12 (m, 1H), 0.87-0.84 (m, 4H), 0.89 (s, 3H), 0.74 (d, J = 6.0 Hz, 3H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 282.1 (MH+).
실시예 76: ( E )-4-(3-(2,5,6,6- 테트라메틸시클로헥스 -2-엔-1-일)아크릴로일) 피페라진-1-카르복사미드
76a. ( E )-3-(2,5,6,6- 테트라메틸시클로헥스 -2-엔-1-일)아크릴산
실시예 1의 공정에 따라 철 (≥ 90% α:β 이성질체)로부터 표제 화합물을 투명한 점성오일 (1.90 g, 50%)로서 수득하였다. R f = 0.6 (25:75 에틸 아세테이트: 헥산 + 0.1% (v/v) 아세트산); 1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ 11.71 (br s, 1H), 7.02-6.91 (m, 1H), 5.83 (q, J = 15.0 Hz, 1H), 5.49 (d, J = 17.5 Hz, 1H), 2.57 (d, J = 11.0 Hz, 0.43 H), 2.29 (d, J = 9.5 Hz, 0.57H), 2.03-1.91 (m, 1H), 1.69-1.67 (m, 2H), 1.54 (d, J = 16.5 Hz, 1H) 1.10 (br s, 0.43H), 0.87-0.81 (m, 8H), 0.70 (s, 1H); 질량 스펙트럼(ESI -ve) m/z 207 (MH-).
76b. ( E )-4-(3-(2,5,6,6- 테트라메틸시클로헥스 -2-엔-1-일)아크릴로일)피페라진-1-카르복사미드
아세토니트릴 (5.0 mL) 중 (E)-3-(2,5,6,6-테트라메틸시클로헥스-2-엔-1-일)아크릴산 (76a, 100 mg, 0.480 mmol)의 용액에 2-(7-아자-1H-벤조트리아졸-1-일)-1,1,3,3-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 (HATU, 182 mg, 0.480 mmol)를 첨가하였다. 이 용액을 실온에서 30분간 교반한 다음 이어서 디이소프로필에틸아민 (62.0 mg, 0.480 mmol) 및 3차-부틸 피페라진-1-카르복실레이트 (89.4 mg, 0.480 mmol)를 반응 혼합물에 첨가하였다. 이어서 반응 혼합물을 40℃에서 4시간 동안 교반하였다.
1M 염산 (2 mL) 용액으로 반응을 중단시키고 2상 혼합물을 분리하였다. 유기층을 진공 농축하고 (40℃) 조질의 물질을 실리카겔에 로딩시켜 헥산 중 30% 에틸 아세테이트의 등용매성 용리액을 흘려보내어 플래쉬 컬러 크로마토그래피를 이용하여 정제하였다. 중간체가 백색 고체 (120 mg, 66%)로서 분리되었다.
중간체를 디클로로메탄 (10 mL)에 용해시키고 1,4-디옥산 (1.2 mL, 4.8 mmol) 중 4.0 M 염산 용액을 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 18 시간 동안 교반한 다음 진공 농축하였다.
조질의 오일을 디클로로메탄 (10 mL)에 용해시키고 탄산칼륨(0.67 g, 4.8 mmol) 및 트리메틸실릴 이소시아네이트 (1.3 mL, 9.6 mmol)를 실온에서 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반하였다.
반응 혼합물을 암모늄 클로라이드의 포화 수용액(10 mL)에 붓고 디클로로메탄 (3 x 10 mL)으로 추출하였다. 결합된 유기상들을 소듐 설페이트으로 건조하고 진공 농축시켰다. 생성물을 예비 플레이트 박층 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물을 투명 오일 (13.0 mg, 11%)로서 수득하였다. R f = 0.40 (5:95 메탄올: 클로로포름); 1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ 6.85-6.74 (m, 1H), 6.14 (m, 1H), 5.46 (d, J = 18.0 Hz, 1H), 4.85 (s, 2H), 3.72-3.41 (m, 8H), 2.26 (d, J = 11.0 Hz, 0.44H), 2.03 (d, J = 9.5 Hz, 0.57H), 2.04-1.90 (m, 1H), 1.69-1.64 (m, 1H), 1.54 (d, J = 15.0 Hz, 3H), 0.87-0.80 (m, 8H), 0.71 (s, 1H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 320 (MH+).
실시예 77: 4 -(( E )-3-(( 1 R ,6 S )-2,2,6- 트리메틸시클로헥실 )아크릴로일)피페라진-1-카르복사미드 및 4-(( E )-3-(( 1 S ,6 R )-2,2,6- 트리메틸시클로헥실 )아크릴로일) 피페라진-1-카르복사미드
77a. (±)-1,6- syn -3-(2,2,6- 트리메틸시클로헥실 )프로판산
실시예 1의 공정에 따라 테트라히드로이오논 (2.00 g, 10.1 mmol)로부터 표제 화합물을 투명한 점성오일 (316 mg, 16%)로서 제조하였다. R f = 0.30 (10:90 에틸 아세테이트: 헥산 + 0.1% (v/v) 아세트산); 1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ 10.19 (br s, 1H), 2.33 (t, J = 8.5 Hz, 2H), 1.93-1.90 (m, 1H), 1.62-1.58 (m, 2H), 1.46-1.44 (m, 3H), 1.33-1.29 (m, 2H), 1.11-1.09 (m, 2H), 0.95 (s, 3H), 0.94 (s, 6H); 질량 스펙트럼(ESI -ve) m/z 197 (MH-).
77b. 4-(( E )-3-(( 1 R ,6 S )-2,2,6- 트리메틸시클로헥실 )아크릴로일)피페라진-1-카르복사미드 및 4-(( E )-3-(( 1 S ,6 R )-2,2,6- 트리메틸시클로헥실 )아크릴로일) 피페라진-1-카르복사미드
실시예 76b의 공정에 따라 실시예 77a의 생성물로부터 표제 화합물을 백색 필름 (17.0 mg, 36%)으로서 제조하였다. R f = 0.50 (5:95 메탄올: 클로로포름); 1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ 4.61 (s, 2H), 3.66 (t, J = 5.0 Hz, 2H), 3.49 (s, 4H), 3.36 (t, J = 5.0 Hz, 2H), 2.29 (t, J = 8.5 Hz, 2H), 1.93-1.89 (m, 1H), 1.32-1.29 (m, 5H), 1.16-1.43 (m, 3H), 1.10-1.02 (m, 3H), 0.95 (s, 3H), 0.89 (S, 3H), 0.87 (s, 3H) ppm; 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 310 (MH+).
실시예 78: ( E )-4-(3-(2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -2-엔-1-일)아크릴로일)피페라진-1-카르복사미드
78a. ( E )-3-(2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -2-엔-1-일)아크릴산
실시예 1의 공정에 따라 α-이오논 (2.00 g, 10.3 mmol)으로부터 표제 화합물을 투명한 점성오일 (56 mg, 3%)로서 제조하였다. R f = 0.2 (10:90 에틸 아세테이트: 헥산 + 0.1% (v/v) 아세트산); 1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ 11.33 (br s, 1H), 6.95-6.88 (m, 1H), 5.81 (d, J = 15.0 Hz, 1H), 5.49 (s, 1H), 2.31-2.29 (m, 1H), 2.04 (s, 2H), 1.50 (s, 3H), 1.48-1.43 (m, 1H), 1.22-1.18 (m, 1H), 0.92 (s, 3H), 0.89 (s, 3H); 질량 스펙트럼(ESI -ve) m/z 193 (MH-).
78b. ( E )-4-(3-(2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -2-엔-1-일)아크릴로일)피페라진-1-카르복사미드
실시예 76b의 공정에 따라 실시예 78a의 생성물로부터 표제 화합물을 백색 고체 (22.0 mg, 36%)로서 제조하였다. R f = 0.50 (5:95 메탄올: 클로로포름); 1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ 6.75 (dd, J = 14.5, 9.5 Hz, 1H), 6.15 (d, J = 14.5 Hz, 1H), 5.47 (s, 1H), 4.72 (s, 2H), 3.59-3.40 (m, 8H), 2.27 (d, J = 9.5 Hz, 1H), 2.01 (br s, 2H), 1.56 (s, 3H), 1.50-1.42 (m, 1H), 1.24-1.18 (m, 1H), 0.97 (s, 3H), 0.84 (s, 3H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 306 (MH+).
실시예 79: (±)-4-(( E )-3-(1,3,3- 트리메틸 -7- 옥사비시클로[4.1.0]헵탄 -2-일)아크릴로일) 피페라진-1-카르복사미드
79a. (±)-( E )-3-(1,3,3- 트리메틸 -7- 옥사비시클로[4.1.0]헵탄 -2-일)아크릴산
실시예 1의 공정에 따라 4-(1,3,3-트리메틸-7-옥사비시클로[4.1.0]헵-2-틸)-3-부텐-2-온 (=90% 시스:트랜스 이성질체)으로부터 표제 화합물을 백색 고체 (616 mg, 31%)로서 제조하였다 (2.00 g, 9.60 mmol). Mp = 122.2-130.6℃; R f = 0.20 (10:90 에틸 아세테이트: 헥산 + 0.1% (v/v) 아세트산); 1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ 11.84 (br s, 1H), 7.07-6.92 (m, 1H), 5.91 (d, J = 15.5 Hz, 1H), 3.07 (s, 1H), 2.10 (d, J = 11.0 Hz, 1H), 1.97-1.94 (m, 1H), 1.86-1.73 (m, 1H), 1.49-1.39 (m, 1H), 1.39 (s, 3H), 1.05-0.98 (m, 1H) 0.93 (s, 3H), 0.77 (s, 3H) ; 질량 스펙트럼(ESI -ve) m/z 209 (MH-).
79b. (±)-4-(( E )-3-(1,3,3- 트리메틸 -7- 옥사비시클로[4.1.0]헵탄 -2-일)아크릴로일) 피페라진-1-카르복사미드
실시예 76b의 공정에 따라 실시예 79a의 생성물로부터 표제 화합물을 회백색 고체 (19.9 mg, 44%)로서 제조하였다. R f = 0.30 (5:95 메탄올: 클로로포름); 1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ 6.75 (dd, J = 15.0, 10.0 Hz, 1H), 6.27 (d, J = 15.0 Hz, 1H), 4.71 (s, 2H), 3.70-3.43 (m, 8H), 3.05 (s, 1H), 2.08 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 1.96-87 (m, 2H), 1.43-1.41 (m, 1H), 1.25 (s, 3H), 0.97-0.90 (m, 1H), 0.91 (s, 3H), 0.86 (s, 3H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 322 (MH+).
실시예 80: 4 -(3-(( 1 R ,6 S )-2,2,6- 트리메틸시클로헥실 ) 프로파노일 )피페라진-1-카르복사미드
실온에서 아르곤 하에 4-((E)-3-((1S,6S)-2,2,6-트리메틸시클로헥실)아크릴로일)피페라진-1-카르복사미드 (73d, 50.0 mg, 0.16 mmol)를 무수 메탄올 (5.0 mL)에 용해시키고 여기에 10% 탄소상 팔라듐 (3.00 mg, 5.00 mmol)을 첨가하여 격렬하게 교반하였다. 반응 용기를 진공 하에 소개시키고(evacuated) 수소 가스를 채운 다음, 반응 혼합물을 실온에서 2일간 교반하였다.
반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고 용매를 진공 하에 제거하여 백색 고체 (50.0 mg, 99%)를 얻었다. 1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ 4.67 (br s, 2H), 3.65-3.63 (m, 2H), 3.48 (br s, 4H), 3.67-3.45 (m, 2H), 2.40-2.26 (m, 2H), 1.75-1.60 (m, 2H), 1.44-1.33 (m, 5H), 1.17-1.09 (m, 1H), 0.93-0.87 (m, 7H), 0.80 (s, 3H), 0.59-0.57 (m, 1H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 310 (MH+).
실시예 81: 4 -(3-(( 1 S ,6 R )-2,2,6- 트리메틸시클로헥실 ) 프로파노일 )피페라진-1-카르복사미드
실온에서 아르곤 하에 4-((E)-3-((1R,6R)-2,2,6-트리메틸시클로헥실)아크릴로일)피페라진-1-카르복사미드 (72d, 28.0 mg, 0.09 mmol)를 무수 메탄올 (5.00 mL)에 용해시키고 여기에 10% 탄소상 팔라듐 (3.00 mg, 5.00 mmol)을 첨가한 다음 격렬히 교반하였다. 반응 용기를 진공하에 소개시킨 다음 수소 가스를 채우고, 반응 혼합물을 실온에서 2일간 교반하였다.
반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고 용매를 진공 제거하여 백색 고체를 얻었다 (28.0 mg, 99%). 1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ 4.67 (br s, 2H), 3.65-3.63 (m, 2H), 3.48 (br s, 4H), 3.67-3.45 (m, 2H), 2.40-2.26 (m, 2H), 1.75-1.60 (m, 2H), 1.44-1.33 (m, 5H), 1.17-1.09 (m, 1H), 0.93-0.87 (m, 7H), 0.80 (s, 3H), 0.59-0.57 (m, 1H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 310 (MH+).
실시예 82: ( E )-4-(3-(2- 클로로 -3-히드록시-2,6,6- 트리메틸시클로헥실 )아크릴로일) 피페라진-1-카르복사미드
아세토니트릴 (5.0 mL) 중 (±)-(E)-3-(1,3,3-트리메틸-7-옥사비시클로[4.1.0]헵탄-2-일)아크릴산 (79a, 100 mg, 0.476 mmol)의 용액에 2-(7-아자-1H-벤조트리아졸-1-일)-1,1,3,3-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 (HATU, 181 mg, 0.476 mmol)를 첨가하였다. 이 용액을 실온에서 30분간 교반한 다음 디이소프로필에틸아민 (61.5 mg, 0.476 mmol) 및 3차-부틸 피페라진-1-카르복실레이트 (88.6 mg, 0.476 mmol)를 이 반응 혼합물에 첨가하였다. 이어서 반응 혼합물을 40℃에서 4시간 동안 교반하였다.
염산 1M 용액 (2 mL)으로 반응을 중단시키고 2상 혼합물을 분리하였다. 유기층을 진공 농축하고 (40℃) 조질의 물질을 실리카겔에 로딩하여, 헥산 중 30% 에틸 아세테이트로 등용매 용리시켜 플래쉬 컬럼 크로마토그래피를 통해 정제하였다. 중간체를 백색 고체 (135 mg, 75%)로서 분리하였다.
이 중간체를 디클로로메탄 (10 mL)에 용해시켜 1,4-디옥산 (1.2 mL, 4.8 mmol) 중 4.0 M 염산 용액에 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 18 시간 교반한 다음 진공 농축시켰다.
조질의 오일을 디클로로메탄 (10 mL)에 용해시키고 탄산칼륨(0.67 g, 4.8 mmol) 및 트리메틸실릴 이소시아네이트 (1.3 mL, 9.6 mmol)을 실온에서 이 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반하였다.
반응 혼합물을 암모늄 클로라이드 포화수용액 (10 mL)에 붓고 디클로로메탄 (3 x 10 mL)으로 추출하였다. 유기상들을 한데 모아 소듐 설페이트로 건조시킨 다음 진공 농축시켰다. 생성물을 예비 플레이트 박층 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물을 백색 고체 (19.0 mg, 15%)로서 얻었다. R f = 0.30 (10:90 메탄올: 클로로포름); 1H-NMR (400 MHz, CD3OD)δ 6.97 (dd, J = 15.5, 11.0 Hz, 1H), 6.46 (d, J = 15.5 Hz, 1H), 3.99 (s, 1H), 3.68-3.66 (m, 4H), 3.44-3.42 (m, 4H), 2.57-2.54 (m, 1H), 2.29-2.26 (m, 1H), 1.89-1.82 (m, 1H), 1.70-1.66 (m, 1H), 1.29-1.26 (m, 1H), 1.23-1.20 (m, 1H), 1.13 (s, 3H), 1.04 (s, 3H), 0.81 (s, 3H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 358 [35Cl, 35Cl], 359.0 [35Cl, 37Cl], 360.1 [37Cl, 37Cl] (MH+).
실시예 83: ( E )-1- 모르폴리노 -3-(( 1 S ,6 S )-2,2,6- 트리메틸시클로헥실 )프로-2-펜-1-온
모르폴린을 메틸아민 히드로클로라이드 대신 사용한 것을 제외하고 실시예 3의 공정에 따라 실시예 71b의 생성물로부터 표제 화합물을 투명 오일 (62.1 mg, 74%)을 제조하였다. [ α]D 23 = +22.8O (c = 0.25, 클로로포름); R f = 0.50 (40:60 에틸 아세테이트: 헥산); 1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ 6.81 (dd, J = 15.0, 8.5 Hz, 1H), 6.12 (d, J = 15.0 Hz, 1H), 3.69-3.56 (m, 8H), 1.75-1.71 (m, 2H), 1.51-1.35 (m, 5H), 0.88-0.87 (m, 4H), 0.82 (s, 3H), 0.75 (d, J = 6.0 Hz, 3H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 266 (MH+).
실시예 84: ( E )-4-(3-(2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1-엔-1-일)아크릴로일)피페라진-2-온
피페라진-2-온을 메틸아민 히드로클로라이드 대신 사용한 것을 제외하고 실시예 3의 공정에 따라 실시예 1의 생성물로부터 표제 화합물을 투명 오일 (165 mg, 60%)로서 제조하였다. R f = 0.36 (15:85 에틸 아세테이트: 헥산); 1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ 7.42 (d, J = 15.0 Hz, 1H), 6.98 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 6.15 (d, J = 15.0 Hz, 1H), 4.23 (s, 2H), 3.83 (m, 2H), 3.43 (m, 2H), 2.03 (m, 2H), 1.84-1.37 (m, 7H), 1.04 (s, 6H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 277 (MH+).
실시예 85: ( E )-1-(1,4- 디옥사 -8- 아자스피로[4.5]데칸 -8-일)-3-(2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1-엔-1-일) 프로-2-펜-1-온
1,4-디옥사-8-아자스피로[4.5]데칸을 메틸아민 히드로클로라이드 대신 사용한 것을 제외하고 실시예 3의 공정에 따라 실시예 1의 생성물로부터 표제 화합물을 투명 오일 (295 mg, 92%)로서 제조하였다. R f = 0.2 (40:60 에틸 아세테이트: 헥산); 1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ 7.30 (d, J = 15.0 Hz, 1H), 6.23 (d, J = 15.0 Hz, 1H), 3.98 (s, 4H), 3.81-3.53 (m, 4H), 2.03 (t, J = 6.0 Hz, 1H), 1.73 (s, 3H), 1.72-1.53 (m, 2H), 1.49-1.44 (m, 2H), 1.04 (s, 6H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 320 (MH+).
실시예 86: ( E )-에틸 1-(3-(2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1-엔-1-일)아크릴로일) 피페리딘-4-카르복실레이트
에틸 피페리딘-4-카르복실레이트를 메틸아민 히드로클로라이드 대신 사용한 것을 제외하고 실시예 3의 공정에 따라 실시예 1의 생성물로부터 표제 화합물을 투명 오일 (286 mg, 83%)로서 제조하였다. R f = 0.5 (50:50 에틸 아세테이트: 헥산); 1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ 7.28 (d, J = 15.0 Hz, 1H), 6.19 (d, J = 15.0 Hz, 1H), 4.45 (br s, 1H), 4.13 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 3.94 (br s, 1H), 3.01 (m, 2H), 2.53 (tt, J = 10.5, 4.0 Hz, 1H), 2.15-1.84 (m, 4H), 1.72 (s, 3H), 1.63 (m, 4H), 1.45 (m, 2H), 1.24 (t, J = 7.0 Hz, 3H), 1.03 (s, 6H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 334 (MH+).
실시예 87: ( E )-4-(3-(2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1-엔-1-일)아크릴로일)피페라진-1-설폰아미드
피페라진-1-설폰아미드를 메틸아민 히드로클로라이드 대신 사용한 것을 제외하고 실시예 3의 공정에 따라 실시예 1의 생성물로부터 표제 화합물을 백색 고체 (41.0 mg, 58%)로서 제조하였다. R f = 0.6 (10:90 메탄올: 클로로포름); Mp = 181-183℃; 1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ 7.44-7.32 (d, J = 15.0 Hz, 1H), 6.25-6.14 (d, J = 15.0 Hz, 1H), 4.46 (br s, 2H), 3.75 (m, 4H), 3.21 (m, 4H), 2.04 (t, J = 6.05 H, 2H), 1.75 (s, 3H), 1.62 (m, 2H), 1.48 (m, 2H), 1.05 (s, 6H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 342 (MH+).
실시예 88: ( E )-4-(3-(2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1-엔-1-일)아크릴로일)피페라진-1-카르브알데히드
실온에서 무수 아세트산 (0.25 mL)을 포름산 용액(1.25 mL)에 첨가하였다. 교반된 이 용액에 포름산 (0.5 mL)에 미리 용해시켜 둔 실시예 28b의 생성물을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 16 시간 동안 교반하였다.
이어서 반응 혼합물을 실리카겔로 농축시키고 플래쉬 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물을 황색 오일 (92.0 mg, 46%)로서 얻었다. R f = 0.50 (10:90 메탄올: 클로로포름); 1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ 8.09 (s, 1H), 7.37 (d, J = 15.5 Hz, 1H), 6.19 (d, J = 15.5 Hz, 1H), 3.83-3.49 (m, 6H), 3.47-3.33 (m, 2H), 2.03 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 1.73 (s, 3H), 1.60 (m, 2H), 1.52-1.36 (m, 2H), 1.04 (s, 6H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 291 (MH+).
실시예 89: ( E )-1-(4-(2- 히드록시에틸 )피페라진-1-일)-3- (2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1-엔-1-일)프로-2-펜-1-온
2-브로모에탄올을 요오도메탄 대신 사용한 것을 제외하고 실시예 7c의 공정에 따라 실시예 28b의 생성물로부터 표제 화합물을 투명 오일 (25.0 mg, 12%)로서 제조하였다. R f = 0.23 (10:90 메탄올: 클로로포름); 1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ 7.32 (d, J = 15.5 Hz, 1H), 6.19 (d, J = 15.5 Hz, 1H), 3.81-3.44 (m, 6H), 2.72 (s, 1H), 2.62-2.44 (m, 6H), 2.02 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 1.73 (s, 3H), 1.67-1.53 (m, 2H), 1.50-1.37 (m, 2H), 1.03 (s, 6H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 307 (MH+).
실시예 90: (±)-3,5- 시스 -디메틸-4-(( E )-3-(2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1-엔-1-일)아크릴로일) 피페라진-1-카르복사미드
3차-부틸 cis-3,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트를 3차-부틸 피페라진-1-카르복실레이트 대신 사용한 것을 제외하고 실시예 76b의 공정에 따라 실시예 1의 생성물로부터 표제 화합물을 황색 무정형 고체로서 제조하였다 (242 mg, 86%). R f = 0.10 (10:90 메탄올: 클로로포름); Mp = 152-155℃; 1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ 7.38 (d, J = 15.5 Hz, 1H), 6.19 (d, J = 15.5 Hz, 1H), 4.70 (s, 2H), 3.78 (m, 4H), 3.15 (m Hz, 2H), 2.04 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 1.74 (s, 3H), 1.61 (m, 2H), 1.52-1.41 (m, 2H), 1.33 (s, 3H), 1.32 (s, 3H), 1.09 (s, 6H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 334 (MH+).
실시예 91: ( E )-4-(3-(2,2,6- 트리메틸비시클로[4.1.0]헵탄 -1-일)아크릴로일) 피페라진-1-카르복사미드
0℃ 아르곤 하에서, 메탄올 (400 mL) 중 β-시클로시트랄 (13.2 g, 86.0 mmol)의 교반 용액에 소듐 보로하이드라이드 (6.50 mg, 172 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 6시간 동안 교반하였다. 물 (400 mL)을 첨가하여 반응을 중단시키고 에틸 아세테이트 (3 x 200 mL)로 추출하였다. 한데 모은 유기층들을 염수 (600 mL)로 세척하고, 마그네슘 설페이트로 건조, 여과한 다음 농축시켜 알코올을 투명 오일로서 얻었다 (13.5 g, 정량적).
실온에서, 건조한 둥근 바닥 플라스크 중 디에틸 아연 (헥산 중 1.0M, 8.60 mL, 8.60 mmol)을 무수 디에틸 에테르 (10 mL)에 첨가하였다. 이 용액에 메틸렌요오다이드 (0.71 mL, 8.85 mmol)를 적가하고 반응 혼합물을 실온에서 15분간 교반하자 백색 침전물이 형성되었다. 상기 제조된 알코올 (910 mg, 5.90 mmol)을 디에틸 에테르 (4.0 mL)에 용해시키고 반응 혼합물에 첨가하였다. 이 반응 혼합물을 실온에서 20분간 교반한 다음 16 시간 동안 가열 환류시켰다. 반응 혼합물을 0℃로 냉각하고 암모늄 클로라이드 포화용액 (2.0 mL)으로 반응을 중단시켰다. 2상 반응 혼합물을 분리 깔때기로 옮겨 넣고 디에틸 에테르 (10 mL)로 희석한 다음 포화 암모늄 클로라이드 (20 mL)로 추출하고 염수 (20 mL)로 세척하였다. 유기층을 마그네슘 설페이트로 건조, 여과 및 농축시켜 갈색 오일 (~1.1 g)을 얻었다. 시클로 프로판화된 알코올을 플래쉬 컬럼 크로마토그래피 (헥산 중 0-20% 에틸 아세테이트)에 의하여 투명 오일 (385 mg, 39%)로서 얻었다.
시클로프로필 알코올 (371 mg, 2.20 mmol)을 디클로로메탄 (34 mL)에 용해시키고 데스 마틴 퍼요오디난(Dess-Martin periodinane) (1.03 g, 2.43 mmol)을 교반 용액에 첨가한 다음 물 한방울 (0.05 mL)을 첨가하였다. 실온에서 반응 혼합물을 교반한 다음 농축시켜 디클로로메탄을 제거하였다. 잔사를 디에틸 에테르 (80 mL)에 용해시키고, 10% 소듐 티오설페이트 (25 mL) 및 포화 중탄산나트륨(25 mL)의 1:1 (v/v) 용액으로 30분간 처리하였다. 층들을 분리하고 유기상을 물 (50 mL) 및 염수 (50 mL)로 세척한 다음 소듐 설페이트로 건조, 여과 및 농축시켜 조질의 고체를 얻었다. 알데히드를 플래쉬 컬럼 크로마토그래피 (헥산 중 0-20% 디에틸 에테르)에 의하여 회색 고체 (260 mg, 71%)로서 분리하였다..
실시예 71a 내지 71d에 설명된 공정에 따라 알데히드를 처리하여 표제 화합물을 백색 고체 (35.1 mg, 94%)로서 수득하였다. R f = 0.17 (5:95 메탄올: 클로로포름); Mp = 166-168℃; 1H-NMR (400 MHz, CD3OD)δ 7.14 (dd, J = 15.0, 3.0 Hz, 1H), 6.35 (dd, J = 15.0, 3.0 Hz, 1H), 3.66 (m, 4H), 3.46 (m, 4H), 1.81-1.66 (m, 2H), 1.62-1.25 (m, 3H), 1.25-1.10 (m, 6H), 0.99 (d, J = 3.0 Hz, 3H), 0.91 (t, J = 6.0 Hz, 3H), 0.67 (m, 2H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 320 (MH+).
실시예 92: ( E )-4-(3-(4-히드록시-2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1- 에닐 )아크릴로일) 피페라진-1-카르복사미드
1 L 들이 Parr 용기 반응기에서, 4-옥소-이소포론 (20.0 g, 130 mmol)을 에탄올 (200 mL)에 용해시키고 라니(Raney)/Ni (0.1 eq)를 이 용액에 첨가하였다. 용기를 100 psi의 압력이 될 때까지 수소 가스로 충전하였다. 반응 혼합물을 실온에서 3일간 교반하고, 셀라이트 패드로 여과한 다음, 용매를 감압 하에 제거하여 생성물을 투명 오일로서 얻은 다음 이 조질의 생성물을 추가 정제 없이 다음 합성단계에 그대로 사용하였다.
0℃에서 디클로로메탄 (200 mL) 중 조질의 4-히드록시-2,2,6- 트리메틸시클로헥산-1-온 (20.2 g, 130 mmol) 및 이미다졸 (35.3 g, 520 mmol) 용액에 디클로로메탄 (200 mL) 중 3차-부틸클로로디메틸silane (78.3 g, 260 mmol)의 용액을 첨가하였다. 반응물을 16 시간 동안 교반한 다음 물 (100 mL)에 붓고 헥산 (3 x 150 mL)으로 추출하였다. 유기층을 물 (5 x 100 mL)로 세척하고 마그네슘 설페이트로 건조한 다음 농축시켰다. 잔사를 플래쉬 컬럼 크로마토그래피 (실리카겔, 97:3 헥산:에틸 아세테이트)로 정제하여 14.0 g (40%)의 4-(3차-부틸디메틸실릴옥시)-2,2,6-트리메틸 시클로헥산-1-온을 무색 오일로서 얻었다.
25℃에서 에탄올 (50 mL) 중 4-(3차-부틸디메틸실릴옥시)-2,2,6-트리메틸시클로헥산-1-온 (7.00 g, 26.0 mmol)의 용액에 히드라진 모노하이드레이트 (33.5 g, 670 mmol) 및 디이소프로필에틸아민 (9.80 mL, 56.3 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 100℃에서 24 시간 교반한 후, 용매를 제거하고 잔사를 디에틸 에테르 (30 mL)에 넣고 염수 (3 x 50 mL)로 세척하였다. 수층을 디에틸 에테르 (4 x 50 mL)로 추출하고, 유기 추출물을 마그네슘 설페이트로 건조 및 농축하였다.
1,5-디아자비시클로[4.3.0.] 노난 (25.0 mL, 200 mmol) 및 디에틸 에테르 (30 mL) 중 잔사의 용액에 디에틸 에테르 (30 mL) 중 요오드 (9.90 g, 39.0 mmol)의 용액을 첨가하였다. 혼합물을 15분간 교반한 후, 중탄산나트륨 포화 수용액을 첨가하고, 층들을 분리한 다음 유기층을 소듐 설페이트로 건조시키고 용매를 제거하였다. 벤젠 (60 mL) 중 잔사의 용액을 1,5-디아자비시클로[4.3.0.] 노난 (25 mL)으로 처리하였다. 혼합물을 2.5 시간 동안 교반한 다음 디에틸 에테르 (200 mL)에 붓고 티오황산나트륨 수용액으로 세척한 다음 (3 x 30 mL) 유기층을 건조 및 증발시켰다. 잔사를 크로마토그래피 (실리카 겔, 5% 에틸 아세테이트:헥산)으로 정제하여 5.2 g (53%)의 3차-부틸디메틸실릴-3,5,5-트리메틸-4-요오도시클로헥스-3-엔-1-일 에테르를 얻었다.
N,N-디메틸포름아미드 (10 mL) 중 에테르 (0.80 g, 2.21 mmol)의 용액에 테트라키스트리페닐포스핀 팔라듐(0.240 g, 0.210 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 냉동-해동법 (3회 사이클)으로 탈가스시켰다. 이어서 메틸 비닐 케톤 (0.530 mL, 6.31 mmol) 및 트리에틸아민 (0.880 mL, 6.31 mmol)을 첨가하고, 마이크로웨이브 조사를 이용하여 1시간 동안 반응물을 170℃로 가열하였다. 혼합물을 디에틸 에테르 (50 mL)로 희석하고, 1% 염산 용액으로 세척한 다음 Et2O (3 x 25 mL)로 추출하였다. 한데 모은 유기층들을 중탄산나트륨 포화수용액으로 세척하고 (3 x 25 mL) 및 마그네슘 설페이트로 건조시킨 다음 용매를 제거하였다. 얻어진 오일을 플래쉬 컬럼 크로마토그래피 (실리카겔, 90:10 헥산:에틸 아세테이트)로 정제하여 314 mg (42%)의 [(E)-4-(3차-부틸디메틸실릴옥시)-2,6,6-트리메틸시클로헥스-1-엔-1-일]부-3-텐-2-온을 무색 오일로서 얻었다.
실시예 1에 개략된 방법에 따라 케톤을 가수분해하여 카르복실산을 얻고, 대응하는 아크릴산을 실시예 71b 내지 71d에 설명된 방법에 따라 처리하여 표제 화합물을 투명 오일 (10.1 mg, 30%)로서 수득하였다. R f = 0.20 (10:90 메탄올: 클로로포름); 1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ 6.19 (d, J = 15.5 Hz, 1H), 4.66 (s, 2H), 4.08-3.91 (m, 1H), 3.84-3.34 (m, 8H), 2.40 (dd, J = 17.0, 5.5 Hz, 1H), 2.14-1.98 (m, 1H), 1.87-1.65 (m, 5H), 1.47 (t, J = 12.0 Hz, 1H), 7.31 (d, J = 15.5 Hz, 1H), 1.09 (s, 3H), 1.08 (s, 3H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 322 (MH+).
실시예 93: (±)-( E )-4-(3-(4- 메톡시 -2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1-엔-1-일) 아크릴로일) 피페라진-1-카르복사미드
테트라히드로퓨란 (2.0 mL) 중 실시예 92에서 제조된 [4-(3차-부틸디메틸실릴옥시)-2,6,6-트리메틸시클로헥스-1-엔-1-일]부-3-텐-2-온 (230 mg, 0.680 mmol)의 용액에 테트라부틸암모늄 플루오라이드 (THF 중 1.0 M, 2.00 mL, 2.00 mmol)를 첨가하고 혼합물을 실온에서 16 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 중탄산나트륨 포화수용액에 붓고 디에틸 에테르 (3 x 10 mL)로 추출한 다음 마그네슘 설페이트로 건조하고 용매를 증발시켰다. 잔사를 플래쉬 컬럼 크로마토그래피 (실리카겔, 60:20 헥산:에틸 아세테이트)로 정제하여, 119 mg (78%)의 중간체 히드록시 케톤을 수득하였다.
실시예 1에 개략된 공정에 따라 히드록시-케톤을 가수분해시켜 카르복실산을 얻었다. 0℃에서, 대응하는 히드록시-산 (117 mg, 0.52 mmol)을 디에틸 에테르 (5 mL)에 용해시키고, 디에틸 에테르 (5 mL) 중 디아조메탄의 용액을 첨가한 후 이어서 보론 디에틸 에테레이트 (3 방울)을 첨가하였다. 백색 침전물이 형성되었으며 질소 가스가 발생하였다. 30분 후, 혼합물을 여과하고 여액을 농축시켰다. 잔사를 실리카 겔 상에서 플래쉬 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 (70:30 헥산:에틸 아세테이트) 4-메톡시-메틸 에스테르를 무색 오일 (67 mg, 51%)로서 수득하였다. 이 메틸 에스테르를 실시예 71b 내지 71d에 설명된 방법에 따라 처리하여 백색 고체 (27 mg, 30%)를 얻었다. R f = 0.34 (10:90 메탄올: 클로로포름); 1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ 7.32 (d, J = 15.5 Hz, 1H), 6.20 (d, J = 15.5 Hz, 1H), 4.63 (s, 2H), 3.82-3.40 (m, 9H), 3.38 (d, J = 11.50 Hz, 3H), 2.43 (dd, J = 17.5, 5.5 Hz, 1H), 2.03 (dd, J = 17.5, 9.5 Hz, 1H), 1.83 (d, J = 13.5 Hz, 1H), 1.76 (s, 3H), 1.40 (t, J = 12.0 Hz, 1H), 1.09 (s, 3H), 1.08 (s, 3H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 336 (MH+).
실시예 94: (-)-(( 1 R ,6 S )-2,2,6- 트리메틸시클로헥실 ) 메틸 4- 카르바모일피페라진 -1-카르복실레이트
0℃ 아르곤 하에서, 메탄올 (10 mL) 중 (1S,6S)-2,2,6-트리메틸시클로헥산카르브알데히드 (320 mg, 2.07 mmol)의 용액에 소듐 보로하이드라이드 (78.0 mg, 2.07 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 16시간 교반하였다. 물(60 mL)을 부어 반응을 중단시키고 디에틸 에테르 (4 x 25 mL)로 추출하였다. 한데 모은 유기층들을 소듐 설페이트로 건조, 여과시키고 농축하였다. 중간체 알코올을 플래쉬 컬럼 크로마토그래피 (헥산 중 0-25% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 투명 오일 (248 mg, 77%)로서 얻었다.
알코올 (235 mg, 1.51 mmol)을 무수 디클로로메탄 (20 mL)에 용해시키고 0℃로 냉각하였다. 이 교반 용액에 트리포스젠 (179 mg, 0.61 mmol) 및 피리딘 (227 mg, 2.88 mmol)을 첨가하였다. TLC로 측정시 출발 알코올이 완전히 소비될 때까지 반응 혼합물을 0℃에서 교반하였다. 이어서 3차-부틸 피페라진-1-카르복실레이트 (338 mg, 1.81 mmol)를 반응 혼합물에 한번에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반하였다. 이어서 반응 혼합물을 디클로로메탄 (30 mL)으로 희석하고 1M HCl (2 x 15 mL) 및 NaHCO3 포화용액 (15 mL)으로 추출하였다. 유기층을 염수 (20 mL)로 세척한 다음 소듐 설페이트로 건조, 여과 및 농축시켰다. 중간체를 플래쉬 컬럼 크로마토그래피 (헥산 중 0-25% 에틸 아세테이트)로 정제하여 투명 오일 (394 mg, 70%)로서 수득하였다.
실시예 71d의 공정에 따라 Boc-보호된 중간체를 처리하고 3차-부틸 4-((E)-3-((1,6-anti)-2,2,6-트리메틸시클로헥실)아크릴로일) 피페라진-1-카르복실레이트 (71c) 대신 사용하였다. 표제 화합물을 백색 고체 (188 mg, 88%)로서 수득하였다. [ α]D 23 = -0.4O (c = 0.25, 클로로포름); R f = 0.45 (10:90 메탄올: 클로로포름); Mp = 127-130℃; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ 6.05 (br s, 2H), 4.17 (dd, J = 11.5, 3.5 Hz, 1H), 4.01 (dd, J = 11.5, 3.5 Hz, 1H), 3.30 (dd, J = 18.5, 13.5 Hz, 8H), 1.68-1.59 (m, 1H), 1.53 (m, 1H), 1.42 (m, 2H), 1.31 (d, J = 13.0 Hz, 1H), 1.25-1.12 (m, 1H), 0.95 (m, 2H), 0.87 (d, J = 6.5 Hz, 3H), 0.82 (s, 6H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 312 (MH+).
실시예 95: (-)- N 1 - 메틸 - N 1 -((( 1 R ,6 S )-2,2,6- 트리메틸시클로헥실 ) 메틸 ) 피페라진-1,4-디카르복사미드
DMF (13 mL) 및 아세트산 (1.3 mmol)의 10:1 (v/v) 혼합물 중 메틸 아민 히드로클로라이드 (1.30 g, 19.5 mmol) 및 (1S,6S)-2,2,6-트리메틸시클로헥산카르브알데히드 (1.00 g, 6.48 mmol)의 용액에 소듐 트리아세톡시보로하이드라이드 (4.10 g, 19.5 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 탄산나트륨 포화용액 (20 mL)를 첨가하여 반응을 중단시키고 증류수 (60 mL)로 희석하였다. 수용액을 디에틸 에테르 (3 x 75 mL)로 추출하였다. 한데 모은 유기층들을 염수 (100 mL)로 세척하고, 마그네슘 설페이트로 건조, 여과 및 농축시켜 투명 오일 (678 mg)을 얻었다.
아민 (253 mg, 1.50 mmol)을 무수 디클로로메탄 (20 mL)에 용해시키고 0℃로 냉각하였다. 이 교반된 용액에 트리포스젠 (179 mg, 0.61 mmol) 및 피리딘 (227 mg, 2.88 mmol)을 첨가하였다. TLC로 측정시 출발 아민이 완전히 소비될 때까지 반응 혼합물을 0℃에서 교반하였다. 이어서 3차-부틸 피페라진-1-카르복실레이트 (338 mg, 1.81 mmol)를 반응 혼합물엘 한번에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반하였다. 이어서 반응 혼합물을 디클로로메탄 (30 mL)으로 희석하고 1M HCl (2 x 15 mL)로 추출한 다음 NaHCO3 포화용액 (15 mL)으로 추출하였다. 유기층을 염수(20 mL)로 세척한 다음 소듐 설페이트로 건조, 여과 및 농축시켰다. 중간체를 플래쉬 컬럼 크로마토그래피 (헥산 중 0-50% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 투명 오일 (400 mg, 70%)로서 얻었다.
실시예 71d의 공정에 따라 Boc-보호된 중간체를 처리하여 3차-부틸 4-((E)-3-((1,6-anti)-2,2,6-트리메틸시클로헥실)아크릴로일) 피페라진-1-카르복실레이트 (71c) 대신 사용하였다. 표제 화합물을 백색 고체 (87.3 mg, 92%). [ α]D 23 = -7.2O (c = 0.25, 클로로포름); R f = 0.35 (10:90 메탄올: 클로로포름); Mp = 152-157℃; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ 6.03 (br s, 2H), 3.32-3.19 (m, 5H), 3.09-3.03 (m, 3H), 3.00-2.93 (m, 2H), 2.80 (d, J = 11.5 Hz, 3H), 1.56 (d, J = 12.5 Hz, 1H), 1.39 (m, 2H), 1.35-1.26 (m, 2H), 1.17 (m, 1H), 0.99-0.89 (m, 5H), 0.82 (d, J = 6.5 Hz, 3H), 0.77 (s, 3H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 325 (MH+).
실시예 96: N 1 -((( 1 R ,6 S )-2,2,6- 트리메틸시클로헥실 ) 메틸 )피페라진-1,4- 디카르복사미드
히드록실아민 히드로클로라이드 (1.35 g, 19.5 mmol)를 에탄올과 물의 1:1 (v/v) 용액에 용해시키고, 중탄산나트륨(1.64 g, 19.5 mmol)으로 실온에서 10분간 처리하였다. (1S,6S)-2,2,6-트리메틸시클로헥산카르브알데히드 (1.00 g, 6.48 mmol)를 첨가하고 반응 혼합물을 가열 환류시킨 다음 3일 간 교반시켰다. 반응물을 농축하고 잔사를 염수(50 mL)에 용해시킨 다음 클로로포름 (3 x 25 mL)으로 추출하였다. 한데 모은 유기층들을 마그네슘 설페이트으로 건조, 여과 및 농축시켜 옥심을 투명 오일 (~1.1 g)로서 수득하였다.
이 조질의 옥심 (750 mg, 4.43 mmol)을 무수 테트라히드로퓨란 (5 mL)에 용해시킨 다음 0℃로 냉각하였다. 이 교반된 용액에 리튬 알루미늄 하이드라이드 (168 mg, 4.43 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 18 시간 동안 가열 환류시켰다. 반응물 슬러리를 셀라이트를 통해 여과하고 테트라히드로퓨란 (10 mL)으로 세척하였다. 이어서 이 조질의 혼합물을 농축하고 잔사를 디에틸 에테르 (5 mL)에 용해시켰다. 용액을 실리카겔 플러그를 통해 여과하고 클로로포름 중 10% 메탄올로 추출하였다 (3 x 50 mL). 이어서 용액을 농축하여 생성물인 아민을 무색 오일 (200 mg, 29%)로서 수득하였다.
얻어진 아민 (200 mg, 1.29 mmol)을 무수 디클로로메탄 (20 mL)에 용해시키고 0℃로 냉각하였다. 이 교반 용액에 트리포스젠(573 mg, 1.93 mmol)과 트리에틸아민 (522 mg, 5.16 mmol)을 첨가하였다. TLC로 검사시 출발 아민이 완전히 소비될 때까지 반응물을 0℃에서 교반하였다. 이어서 3차-부틸 피페라진-1-카르복실레이트 (264 mg, 1.42 mmol)를 반응 혼합물에 한 번에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 18시간 교반하였다. 암모늄 클로라이드 포화 용액(30 mL)으로 반응을 중단시키고 디클로로메탄 (3 x 20 mL)으로 추출하였다. 한데 모은 유기층들을 염수 (20 mL)로 세척한 다음 마그네슘 설페이트로 건조, 여과 및 농축하였다. 중간체를 플래쉬 컬럼 크로마토그래피 (헥산 중 20-40% 에틸 아세테이트)로 정제하여 백색 고체 (360 mg, 76%)로서 수득하였다.
실시예 71d의 공정에 따라 Boc-보호된 중간체를 처리하여 3차-부틸 4-((E)-3-((1,6-anti)-2,2,6-트리메틸시클로헥실)아크릴로일) 피페라진-1-카르복실레이트 (71c) 대신 사용하였다. 표제 화합물을 황색 고체 (63.0 mg, 74%)로서 수득하였다. R f = 0.30 (10:90 메탄올: 클로로포름); Mp = 158℃ (분해); 1H-NMR (400 MHz, CD3OD)δ 3.43 (m, 8H), 3.13 (m, 1H), 1.65 (s, 1H), 1.54-1.33 (m, 4H), 1.32-1.23 (m, 1H), 1.05-1.00 (m, 5H), 0.97 (d, J = 6.5 Hz, 3H), 0.87 (s, 3H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 311 (MH+).
실시예 97: 4 -((( 1 R ,6 S )-2,2,6- 트리메틸시클로헥산카르복사미도 ) 메틸 ) 피페리딘-1-카르복사미드
55℃에서 (1S,6S)-2,2,6-트리메틸시클로헥산카르브알데히드 (2.75 g, 17.8 mmol)을 60% 질산 용액(1.5 mL)에 적가하고 30분간 교반하였다. 이어서 반응 혼합물을 실온으로 냉각하고 물 (10 mL)로 희석한 다음 중탄산나트륨으로 중화시켰다. 이어서 수용액을 디클로로메탄 (3 x 5 mL)으로 추출하였다. 이어서 수층을 pH= 1.0dl 될 때까지 1M HCl로 산성화시키고 디에틸 에테르 (3 x 10 mL)로 추출하였다. 한데 모은 유기층들을 마그네슘 설페이트로 건조 및 농축시켜 조질의 산을 고체로서 수득하였다 (2.00 g, 66%).
아세토니트릴 (3.0 mL) 중 조질의 산 용액 (170 mg, 1.00 mmol)에 2-(7-아자-1H-벤조트리아졸-1-일)-1,1,3,3-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 (HATU, 418 mg, 1.10 mmol)를 첨가하였다. 이 용액을 실온에서 30분간 교반한 다음 반응 혼합물에 디이소프로필에틸아민 (383 μL, 2.20 mmol) 및 3차-부틸 4-(아미노메틸)피페리딘-1-카르복실레이트 (214 mg, 1.00 mmol)을 첨가하였다. 이어서 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 1M 염산 용액을 첨가하여 반응을 중단시키고 2상 혼합물을 분리하였다. 유기층을 진공 농축하고 (40℃) 조질의 물질을 정제를 위해 실리카겔 상에 로딩시켜 헥산 중 30% 에틸 아레테이트로 등용매 용리시켜 플래쉬 크로마토그래피 처리하였다. 표제 화합물을 백색 고체 (160 mg, 30%)로서 수득하였다.
실시예 71d의 공정에 따라 Boc-보호된 중간체를 처리하여 3차-부틸 4-((E)-3-((1,6-anti)-2,2,6-트리메틸시클로헥실)아크릴로일) 피페라진-1-카르복실레이트 (71c) 대신 사용하였다. 표제 화합물을 백색 고체 (22.0 mg, 24%)로서 수득하였다. R f = 0.22 (10:90 메탄올: 클로로포름); Mp = 185-187℃; 1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ 5.61 (br s, 1H), 4.57 (br s, 2H), 3.94 (d, J = 12.5 Hz, 2H), 3.21 (td, J = 12.5, 6.5 Hz, 1H), 3.14-3.03 (td, J = 12.5, 6.5 Hz, 1H), 2.79 (t, J = 12.5 Hz, 2H), 1.86 (m, 1H), 1.71 (m, 4H), 1.55-1.44 (m, 2H), 1.38 (m, 2H), 1.28-1.06 (m, 4H), 1.00 (s, 3H), 0.92 (s, 3H), 0.83 (m, 4H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 310 (MH+).
실시예 98: ( E )-2-(1-(3-(2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1-엔-1-일)아크릴로일)아제티딘-3-일) 아세트아미드
98a. ( E )- 메틸 2-(1-(3-(2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1-엔-1-일)아크릴로일) 아제티딘 -3-일) 아세테이트
메틸 2-(아제티딘-3-일)아세테이트를 메틸아민 히드로클로라이드 대신 사용한 것을 제외하고 실시예 3의 공정에 따라 실시예 71b의 생성물로부터 표제 화합물을 황색 오일 (650 mg, 85%)을 제조하였다. R f = 0.29 (60:40 에틸 아세테이트: 헥산); 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ 7.76 (d, J = 15.5 Hz, 1H), 6.42 (d, J = 15.5 Hz, 1H), 4.92 (t, J = 8.5 Hz, 1H), 4.78-4.66 (m, 1H), 4.48 (dd, J = 8.5, 5.5 Hz, 1H), 4.25 (dd, J = 10.5, 5.5 Hz, 1H), 4.17 (s, 3H), 3.52 (td, J = 13.5, 5.5 Hz, 1H), 3.23 (d, J = 7.5 Hz, 2H), 2.57 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 2.26 (s, 3H), 2.14 (td, J = 8.5, 6.0 Hz, 2H), 1.99 (dd, J = 7.5, 4.0 Hz, 2H), 1.56 (s, 6H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 306 (MH+).
98b. ( E )-2-(1-(3-(2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1-엔-1-일)아크릴로일) 아제티딘 -3-일) 아세트아미드
(E)-메틸 2-(1-(3-(2,6,6-트리메틸시클로헥스-1-엔-1-일)아크릴로일)아제티딘-3-일) 아세테이트 (100 mg, 0.344 mmol)를 메탄올 (2.0 mL) 중 7N 암모니아 용액에 첨가하고 실온에서 2 일간 교반하였다. 표제 화합물을 예비 플레이트 박층 크로마토그래피 (5:95 메탄올: 클로로포름)로 정제하여 투명 오일 (45.5 mg, 48%)을 얻었다. R f = 0.60 (10:90 메탄올: 클로로포름); 1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ 7.28 (d, J = 15.5 Hz, 1H), 5.81 (d, J = 15.5 Hz, 1H), 5.79 (br s, 1H), 5.52 (br s, 1H), 4.39 (t, J = 8.5 Hz, 1H), 4.23 (t, J = 9.5 Hz, 1H), 3.90 (dd, J = 8.0, 5.5 Hz, 1H), 3.74 (dd, J = 10.0, 5.5 Hz, 1H), 3.13-2.91 (m, 1H), 2.67-2.47 (m, 2H), 2.03 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 1.72 (s, 3H), 1.59 (dd, J = 12.0, 6.90 Hz, 2H), 1.50-1.41 (m, 2H), 1.03 (s, 6H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 291 (MH+).
실시예 99: ( E )-3-(3-(2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1-엔-1-일) 아크릴아미도 ) 아제티딘-1-카르복사미드
99a. ( E )- 3차- 부틸 3-(3-(2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1-엔-1-일) 아크릴아미도 ) 아제티딘 -1- 카르복실레이트
3차-부틸 3-아미노아제티딘-1-카르복실레이트를 메틸아민 히드로클로라이드 대신 사용한 것을 제외하고 실시예 3의 공정에 따라 실시예 1의 생성물로부터 표제 화합물을 투명 오일 (172 mg, 97%)을 제조하였다. R f = 0.40 (25:75 에틸 아세테이트: 헥산); 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ 7.10 (s, 1H), 6.49 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 5.13 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 3.80 (m, 1H), 3.42 (m, 2H), 3.01 (m, 2H), 1.28 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 0.95 (s, 3H), 0.89-0.80 (m, 2H), 0.70 (m, 2H), 0.63 (s, 9H), 0.26 (s, 6H) ppm; 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 349 (MH+).
99b. ( E )-3-(3-(2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1-엔-1-일) 아크릴아미도 ) 아제티딘 -1-카르복사미드
실시예 71d의 공정에 따라 실시예 99a의 생성물로부터 표제 화합물을 백색 고체 (17 mg, 12%)로서 제조하였다. Mp = 185-186℃ (분해); R f = 0.30 (10:90 메탄올: 디클로로메탄); 1H-NMR (400 MHz, MeOD)δ 7.91 (s, 1H), 7.30 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 5.96 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 4.70-4.59 (m, 1H), 4.25 (t, J = 8.0 Hz, 2H), 3.84 (dd, J = 8.5, 5.50 Hz, 2H), 2.08 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 1.77 (s, 3H), 1.66 (m, 2H), 1.51 (m, 2H), 1.07 (s, 6H) ppm; 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 292 (MH+).
실시예 100: ( E )-3-(2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1-엔-1-일)- N -(2- 우레이도에틸 )아크릴아미드
100a. ( E )- 3차- 부틸 (2-(3-(2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1-엔-1-일) 아크릴아미도 ) 에틸)카르바메이트
3차-부틸 (2-아미노에틸)카르바메이트를 메틸아민 히드로클로라이드 대신 사용한 것을 제외하고, 실시예 3의 공정에 따라 실시예 1의 생성물로부터 표제 화합물을 백색 고체 (262 mg, 77%)로서 제조하였다. R f = 0.34 (50:50 에틸 아세테이트: 헥산); 1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ 7.28 (d, J = 15.5 Hz, 1H), 6.29 (br s, 1H), 5.74 (d, J = 15.5 Hz, 1H), 5.01 (br s, 1H), 3.45 (dd, J = 11.0, 5.5 Hz, 2H), 3.32 (d, J = 5.5 Hz, 2H), 2.02 (t, J = 7.0 Hz, 2H), 1.71 (s, 3H), 1.65-1.56 (m, 2H), 1.49-1.38 (m, 11H), 1.03 (s, 6H) ppm; 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 337 (MH+).
100b. ( E )-3-(2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1-엔-1-일)- N -(2- 우레이도에틸 )아크릴아미드
실시예 71d의 공정에 따라 실시예 100a의 생성물로부터 표제 화합물을 백색 고체 (40.0 mg, 24%)로서 제조하였다. Mp = 165-167℃; R f = 0.30 (10:90 메탄올: 디클로로메탄); 1H-NMR (400 MHz, MeOD)δ 7.29 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 5.95 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 3.44-3.18 (m, 4H), 2.10 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 1.78 (s, 3H), 1.73-1.61 (m, 2H), 1.53 (m, 2H), 1.09 (s, 6H) ppm; 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 280 (MH+).
100c. ( E )- N -(2-(2,2,2- 트리플루오로아세트아미도 )에틸)-3-(2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1-엔-1-일) 아크릴아미드
전술한 반응:실시예 100b로부터 부산물로서 표제 화합물을 백색 고체 (45.0 mg, 23%)로서 분리하였다. R f = 0.50 (10:90 메탄올: 클로로포름); 1H-NMR (400 MHz, MeOD)δ 7.29 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 5.93 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 3.46 (s, 4H), 2.10 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 1.77 (s, 3H), 1.67 (m, 2H), 1.52 (m, 2H), 1.08 (s, 6H) ppm; 19F-NMR (376 MHz, CDCl3)δ -77.4 (s) ppm; 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 333 (MH+).
실시예 101: ( E )- N - 메틸 - N -(2-(1- 메틸우레이도 )에틸)-3-(2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1-엔-1-일) 아크릴아미드
101a. ( E )- N - 메틸 - N -(2-( 메틸아미노 )에틸)-3-(2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1-엔-1-일)아크릴아미드
N 1,N 2-디메틸에탄-1,2-디아민 (10 당량)을 메틸아민 히드로클로라이드 대신 사용한 것을 제외하고, 실시예 3의 공정에 따라 실시예 1의 생성물로부터 표제 화합물을 백색 고체 (200 mg, 75%)로서 제조하였다. R f = 0.20 (10:90 메탄올: 디클로로메탄); 1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ 7.31 (d, J = 15.5 Hz, 1H), 6.21 (d, J = 15.5 Hz, 1H), 3.74 (m, 2H), 3.36 (m, 2H), 3.16 (s, 3H), 2.86 (s, 3H), 2.05 (m, 2H), 1.76 (s, 3H), 1.67-1.56 (m, 2H), 1.51-1.42 (m, 2H), 1.05 (s, 6H) ppm; 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 265 (MH+).
101b. ( E )- N - 메틸 - N -(2-(1- 메틸우레이도 )에틸)-3-(2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1-엔-1-일) 아크릴아미드
실시예 71d의 공정에 따라 실시예 101a의 생성물로부터 표제 화합물을 백색 고체 (36.0 mg, 26%)로서 제조하였다. Mp = 118-120℃; R f = 0.18 (5:95 메탄올: 디클로로메탄); 1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ 7.33 (d, J = 15.5 Hz, 1H), 6.20 (d, J = 15.5 Hz, 1H), 5.01 (br s, 2H), 3.55 (m, 2H), 3.47-3.38 (m, 2H), 3.13 (s, 3H), 2.96 (s, 3H), 2.04 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 1.75 (s, 3H), 1.62 (m, 2H), 1.50-1.43 (m, 2H), 1.05 (s, 6H) ppm; 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 308 (MH+).
실시예 102: ( E )-4-(3-(2,2,6,6- 테트라메틸시클로헥실 )아크릴로일)피페라진-1-카르복사미드
102a. ( E )-에틸 3-(2,2,6,6- 테트라메틸시클로헥실 ) 아크릴레이트
2,2,6,6-테트라메틸시클로헥산카르브알데히드를 (1,6-anti)-2,2,6-트리메틸시클로헥산카르브알데히드 대신 사용한 것을 제외하고, 실시예 71a의 공정에 따라 표제 화합물을 무색 오일 (0.901 g, 80%)로서 제조하였다. R f = 0.66 (5:95 에틸 아세테이트: 헥산); 1H NMR (400 MHz, CDCl3)δ 6.96 (dd, J = 15.5, 11.0 Hz, 1H), 5.77 (d, J = 15.5 Hz, 1H), 4.19 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 1.68-1.56 (m, 2H), 1.50-1.43 (m, 3H), 1.30 (t, J = 7.0 Hz, 3H), 1.19-1.10 (m, 2H), 0.97 (s, 6H), 0.79 (m, 6H) ppm; 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 239 (MH+).
102b. ( E )-3-(2,2,6,6-테트라메틸시클로헥실)아크릴산
실시예 60c의 공정에 따라 실시예 102a의 생성물로부터 표제 화합물을 백색 고체 (0.720 g, 93%)로서 제조하였다. Mp = 138-140℃; R f = 0.20 (10:90 에틸 아세테이트: 헥산); 1H NMR (400 MHz, CDCl3)δ 7.10 (dd, J = 15.5, 11.0 Hz, 1H), 5.80 (d, J = 15.5 Hz, 1H), 1.70 (d, J = 11.0 Hz, 1H), 1.59 (m, 1H), 1.47 (m, 3H), 1.21-1.11 (m, 2H), 0.98 (s, 6H), 0.80 (s, 6H) ppm; 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 211 (MH+).
102c. ( E )- 3차- 부틸 4-(3-(2,2,6,6- 테트라메틸시클로헥실 )아크릴로일)피페라진-1-카르복실레이트
3차-부틸 피페라진-1-카르복실레이트를 메틸아민 히드로클로라이드 대신 사용한 것을 제외하고 실시예 3의 공정에 따라 실시예 102b의 생성물로부터 표제 화합물을 백색 고체 (210 mg, 88%)로서 제조하였다. R f = 0.40 (25:75 에틸 아세테이트: 헥산); 1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ 6.91 (dd, J = 15.0, 11.0 Hz, 1H), 6.15 (d, J = 15.0 Hz, 1H), 3.73-3.37 (m, 8H), 1.62 (m, 2H), 1.52-1.36 (m, 11H), 1.21-1.06 (m, 2H), 0.97 (s, 6H), 0.79 (s, 6H) ppm; 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 379 (MH+).
102d. ( E )-4-(3-(2,2,6,6- 테트라메틸시클로헥실 )아크릴로일)피페라진-1- 카르복사미드
실시예 71d의 공정에 따라 실시예 102c의 생성물로부터 표제 화합물을 백색 고체 (111 mg, 74%)로서 제조하였다. Mp = 172-174℃; R f = 0.34 (10:90 메탄올: 클로로포름); 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ 6.65 (dd, J = 15.0, 11.0 Hz, 1H), 6.42 (d, J = 15.0 Hz, 1H), 6.04 (s, 2H), 3.48 (m, 4H), 3.35-3.26 (m, 4H), 1.73 (d, J = 11.0 Hz, 1H), 1.57 (d, J = 13.0 Hz, 1H), 1.42 (m, 3H), 1.14 (m, 2H), 0.91 (s, 6H), 0.76 (s, 6H) ppm; 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 322 (MH+).
실시예 103: ( E )-1- 모르폴리노 -3-(2,2,6,6- 테트라메틸시클로헥실 )프로-2-펜-1-온
모르폴린을 메틸아민 히드로클로라이드 대신 사용한 것을 제외하고 실시예 3의 공정에 따라 실시예 102b의 생성물로부터 표제 화합물을 백색 고체 (42.1 mg, 51%)로서 제조하였다. Mp = 84-85℃; R f = 0.35 (30:70 에틸 아세테이트: 헥산); 1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ 6.92 (dd, J = 15.0, 11.0 Hz, 1H), 6.13 (d, J = 15.0 Hz, 1H), 3.63 (m, 8H), 1.63 (m, 2H), 1.51-1.40 (m, 3H), 1.15 (m, 2H), 0.97 (s, 6H), 0.79 (s, 6H) ppm; 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 280 (MH+).
실시예 104: N -((2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1-엔-1-일) 메틸 )모르폴린-4- 카르복사미드
모르폴린을 3차-부틸 피페라진-1-카르복실레이트 대신 사용한 것을 제외하고 실시예 55a의 공정에 따라 2-(2,6,6-트리메틸시클로헥스-1-엔-1-일)아세트산으로부터 표제 화합물을 백색 고체 (337 mg, 77%)로서 제조하였다. Mp = 89-91℃; R f = 0.20 (25:75 에틸 아세테이트: 헥산); 1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ 3.99 (br s, 1H), 3.79 (d, J = 3.5 Hz, 2H), 3.69-3.62 (m, 4H), 3.32-3.25 (m, 4H), 1.93 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 1.64 (s, 3H), 1.60-1.53 (m, 3H), 1.45-1.37 (m, 2H), 0.98 (s, 6H) ppm; 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 267 (MH+).
실시예 105: ( E )-4-(3-(2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1-엔-1-일)아크릴로일) 피페라진-1-카르보티오아미드
실시예 28b (865 mg, 2.39 mmol)의 생성물을 디클로로메탄 (18 mL)에 용해시키고 1,4-디옥산 (6.0 mL, 23.9 mmol) 중 4.0 M의 염산 용액을 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 18 시간 동안 교반한 다음 진공 농축하였다.
조질의 물질을 디클로로메탄 (100 mL)에 용해시키고 1M 소듐 히드록사이드로 추출한 다음 (3 x 50 mL) 및 염수 (50 mL)로 세척하였다. 유기층을 마그네슘 설페이트로 건조, 여과하고 진공 농축하여 조질의 오일을 얻었다.
이 조질의 오일을 테트라히드로퓨란 (20 mL)에 용해시키고 트리페닐메틸이소티오시아네이트 (719 mg, 2.39 mmol)를 용액에 첨가하였다. 반응물을 7일간 가열 환류한 다음 농축 건조시켰다. 예비 플레이트 박층 크로마토그래피 (7:93 메탄올: 클로로포름)를 통해 정제시켜 표제 화합물을 백색 고체 (42.0 mg, 5%)로서 수득하였다. R f = 0.35 (10:90 메탄올: 디클로로메탄); 1H NMR (400 MHz, CDCl3)δ 7.40 (d, J = 15.5 Hz, 1H), 6.17 (d, J = 15.5 Hz, 1H), 5.82 (s, 2H), 4.12 (s, 2H), 3.91-3.67 (m, 6H), 2.04 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 1.75 (s, 3H), 1.66-1.59 (m, 2H), 1.52-1.42 (m, 2H), 1.05 (s, 6H) ppm; 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 322 (MH+).
실시예 106: ( E )-2- 에티닐 -4-(3-(2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1-엔-1-일)아크릴로일)피페라진-1-카르복사미드
106a. 3차- 부틸 4- 트리틸피페라진 -1- 카르복실레이트
디클로로메탄 (300 mL) 중 Boc-피페라진 (14.3 g, 77.0 mmol) 및 트리에틸아민 (11.0 mL, 77.0 mmol) 용액을 실온에서 아르곤 하에 교반하였다. 이 반응 플라스크에 트리틸 클로라이드 (21.5 g, 77.0 mmol)를 첨가하고 반응 혼합물을 실온에서 1 시간 동안 교반하였다. 이어서 용액을 암모늄 클로라이드 포화용액 (100 mL), 물 (100 mL)로 세척하고, 소듐 설페이트로 건조, 여과하고 진공 농축시켰다. 표제 화합물이 백색 고체 (11.8 g, 36%)로서 분리되었다. R f = 0.86 (20:80 에틸 아세테이트: 헥산); 1H NMR (400 MHz, CDCl3)δ 7.49 (m, 6H), 7.34-7.24 (m, 6H), 7.18 (m, 3H), 3.63-3.49 (m, 4H), 2.57-1.93 (m, 4H), 1.42 (s, 9H) ppm; 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 329 (MH+ - tBu).
106b. 3차- 부틸 2-포르밀-4-트리틸피페라진-1-카르복실레이트
무수 디에틸 에테르 (250 mL) 중 N 1 ,N 1 ,N 2 ,N 2 -테트라메틸에틸렌-1,2-디아민 (3.90 mL, 26.0 mmol) 및 실시예 106a (7.30 g, 170 mmol)의 생성물의 용액을 -78℃ 아르곤 하에서 교반하였다. 이 교반 용액에 2차-부틸리튬 (시클로헥산 중 1.4 M, 18.5 mL, 26.0 mmol)을 10분에 걸쳐 첨가하였다. 반응 혼합물을 -78℃에서 1 시간 동안 교반한 다음, DMF (2.00 mL, 26.0 mmol)를 한번에 첨가하고 혼합물을 -78℃에서 1시간 교반하였다.
-78℃에서 암모늄 클로라이드 포화용액(30 mL)을 첨가함으로써 반응을 중단시켰다. 이 용액을 격렬히 교반하고 40분에 걸쳐 실온으로 승온시켰다. 반응 혼합물을 진공 농축하고 잔사를 염수 (60 mL)로 희석한 다음 및 클로로포름 (3 x 100 mL)으로 추출하였다. 유기상들을 한데 모아 소듐 설페이트로 건조, 여과 및 농축시켰다. 표제 화합물이 백색 고체 (7.42 g, 96%)로서 분리되었다. 1H NMR 검사 결과 회전이성질체의 혼합물이 나타났다. R f = 0.33 (10:90 에틸 아세테이트: 헥산); 1H NMR (400 MHz, CDCl3)δ 9.85 (m, 2H), 7.45 (m, 12H), 7.36-7.25 (m, 12H), 7.20 (m, 6H), 4.60 (s, 1H), 4.41 (s, 1H), 3.93-3.71 (m, 2H), 3.69-3.32 (m, 4H), 2.98 (m, 2H), 1.98 (s, 2H), 1.56-1.35 (m, 22H) ppm; 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 401 (MH+ - tBu).
실시예 106c. 3차- 부틸 2-에티닐-4-트리틸피페라진-1-카르복실레이트
실온에서 18시간 동안 아세토니트릴 (60 mL) 중 디메틸 (2-옥소프로필) 포스포네이트 (0.720 mL, 5.30 mmol), 4-아세트아미도벤젠설포닐 아지드 (1.30 g, 5.30 mmol) 및 탄산칼륨(1.82 g, 13.0 mmol)을 교반시킴으로써 오히라-베스트만(Ohira-Bestmann) 시약을 현장(in situ) 제조하였다. 메탄올 (12 mL) 중 실시예 106b의 생성물(2.00 g, 4.40 mmol)의 슬러리를 첨가하고 혼합물을 실온에서 18 시간 교반하였다.
반응 혼합물을 진공 농축하고 잔사를 에틸 아세테이트 (150 mL)에 넣은 다음 염수 (100 mL)로 세척하였다. 수성상을 에틸 아세테이트 (2 x 100 mL)로 추출하였다. 유기상들을 한데 모아 포화 중탄산나트륨(150 mL), 염수 (100 mL)로 세척하고, 소듐 설페이트로 건조, 여과하고 진공 농축시켰다. 생성물을 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다 (중성 알루미나, 등용매성 용리 40:60 디클로로메탄:헥산). 표제 화합물이 백색 포말 (0.80 g, 40%)로서 분리되었다. R f = 0.57 (20:80 에틸 아세테이트: 헥산); 1H NMR (400 MHz, CDCl3)δ 7.90-7.39 (m, 6H), 7.30 (m, 6H), 7.17 (m, 3H), 4.98-4.68 (m, 1H), 3.80-3.73 (m, 1H), 3.63-3.41 (m, 1H), 3.35 (m, 1H), 3.17-2.99 (m, 1H), 2.54 (s, 1H), 1.75-1.64 (m, 1H), 1.42 (s, 9H) ppm; 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 211 (MH+ - 트리틸).
실시예 106d. 3차- 부틸 2-에티닐피페라진-1-카르복실레이트
디클로로메탄 (5.0 mL) 중 실시예 106c의 생성물 (0.350 g, 0.800 mmol)의 용액에 0℃에서 트리클로로아세트산 (디클로로메탄 중 2% w/v, 5.0 mL)을 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 25분간 교반한 다음 소듐 히드록사이드 수용액 (1N, 10 mL)을 첨가하여 반응을 중단시켰다. 유기상을 제거하고 수성상을 디클로로메탄 (3 x 10 mL)으로 추출하였다. 유기상들을 모아서 소듐 설페이트로 건조, 여과하고 진공 농축시켰다. 생성물을 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다 (40 g 실리카겔, 구배용리 5:95:0.1 메탄올: 디클로로메탄: 암모늄 히드록사이드 내지 10:90:0.1 메탄올: 디클로로메탄: 암모늄 히드록사이드). 이로부터 표제 화합물이 투명 오일 (48 mg, 29%)로서 수득되었다. R f = 0.5 (10:90 에틸 아세테이트: 헥산); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 211 (MH+).
실시예 106e. ( E )- 3차- 부틸 2- 에티닐 -4-(3-(2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1-엔-1-일)아크릴로일) 피페라진-1-카르복실레이트
실시예 106d의 생성물을 메틸아민 히드로클로라이드 대신 사용한 것을 제외하고 실시예 3의 공정에 따라 실시예 1의 생성물로부터 표제 화합물을 백색 고체 (60 mg, 68%)로서 제조하였다. R f = 0.32 (30:70 에틸 아세테이트: 헥산); 1H NMR (400 MHz, CDCl3)δ 7.38 (d, J = 15.5 Hz, 1H), 6.24 (d, J = 15.5 Hz, 1H), 5.13-4.60 (m, 2H), 3.90 (m, 2H), 3.21 (m, 2H), 2.26 (s, 1H), 2.05 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 1.75 (s, 3H), 1.62 (m, 2H), 1.35-1.13 (m, 2H), 1.06 (m, 6H) ppm; 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 387 (MH+).
실시예 106f. ( E )-2- 에티닐 -4-(3-(2,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1-엔-1-일)아크릴로일) 피페라진-1-카르복사미드
실시예 71d의 공정에 따라 실시예 106e의 생성물로부터 표제 화합물을 투명 오일 (12 mg, 23%)로서 제조하였다. The 1H NMR 검사 결과 회전이성질체들의 혼합물인 것으로 나타났다. R f = 0.20 (10:90 메탄올: 클로로포름); 1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ 7.41-7.31 (m, 1H), 6.29-6.13 (m, 1H), 5.13-4.99 (m, 1H), 4.87 (s, 2H), 4.78-4.64 (m, 1H), 4.16-4.01 (m, 1H), 3.60-3.46 (m, 1H), 3.38 (s, 2H), 2.86-2.73 (m, 1H), 2.32-2.26 (m, 1H), 2.06-2.00 (m, 2H), 1.73 (s, 3H), 1.60 (d, J = 5.54 Hz, 2H), 1.49-1.42 (m, 2H), 1.21 (m, 3H), 1.04 (m, 6H) ppm; 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 330 (MH+).
실시예 107: ( E )-1- 모르폴리노 -3-(3,3,6,6- 테트라메틸시클로헥스 -1- 에닐 )프로-2-펜-1-온
실시예 107a. 1,4,4- 트리메틸시클로헥 -2- 센올
다우벤 등의 공정[Dauben, W.; Michno, D.J . Org . Chem . 1977, 42, 682-685]에 따라 4,4-디메틸시클로헥-2-센온 (40 g, 0.3 mol)으로부터 표제 화합물을 밝은 황색 오일 (41 g, 90%)로서 제9조하였다. R f = 0.5 (5:1 퍼트롤륨 에테르: 에틸 아세테이트) 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 5.46 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 5.43 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 1.73-1.70 (m, 2H), 1.59-1.56 (m, 1H), 1.50-1.45 (m, 1H), 1.27 (s, 3H), 1.01 (s, 3H), 0.95 (s, 3H) ppm; 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 123 (MH-H2O)+.
실시예 107b. 3,6,6-트리메틸시클로헥-2-센온
다우벤 등의 공정 [Dauben, W.; Michno, D.J . Org . Chem . 1977, 42, 682-685]에 따라 실시예 107a의 생성물 (40 g, 0.3 mol) 로부터 표제 화합물을 무색 오일 (14 g, 35%)로서 수득하였다. R f = 0.4 (5:1 퍼트롤륨 에테르: 에틸 아세테이트) 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 5.77 (s, 1H), 2.29 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 1.93 (s, 3H), 1.80 (d, J = 6.0 Hz, 3H), 1.09 (s, 6H) ppm; 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 139 (MH)+.
실시예 107c. 2,2,5,5-테트라메틸시클로헥산온
교반 막대가 장착된 건조한 250 mL 들이 둥근 바닥 플라스크에 CuI (6.9 g, 36.2 mmol)를 첨가하고 아르곤 하에 격막(septum)으로 밀봉시켰다. 플라스크를 진공 펌프로 소개하고 아르곤으로 퍼지하였다. 이 공정을 3회 반복하였다. THF (75 mL)를 주입하고 슬러리를 -78 ℃로 냉각시킨다음 여기에 MeLi (45 mL, 72 mmol)를 적가하였다. 혼합물을 균질하게 될 때까지 승온시키고 -78 ℃로 재냉각시킨 다음, 시린지를 통해 BF3 .Et2O (8.9 mL, 72 mmol)를 첨가하였다. 실시예 107b (5.0 g, 36.2 mmol)를 그대로 첨가하고 반응 혼합물을 1.5 시간 동안 교반하였다. 250 mL의 10% NH4OH/90% NH4Cl 포화용액에 의해 반응을 중단시킨 다음 에틸 아세테이트 (250 mL)로 추출하고, 유기층을 중탄산나트륨 포화수용액(50 mL x 2), 염수 (50 mL)로 세척하고, 소듐 설페이트로 건조시킨 다음 농축시켜 생성물과 출발 물질의 혼합물인 무색 오일 (3.5 g)을 얻었다. 이 혼합물을 크로마토그래피 처리하여 표제 화합물을 무색 고체 (1.5 g 26%)로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3)δ2.21 (s, 2H), 1.69-1.65 (m, 2H), 1.61-1.57 (m, 2H), 1.09 (s, 6H), 0.94 (s, 6H); 13C NMR (101 MHz, CDCl3)δ216.36, 51.32, 44.00, 36.89, 36.62, 34.69, 28.5, 25.15; 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 155 (MH)+.
실시예 107d. 메틸 3-(1-히드록시-2,2,5,5- 테트라메틸시클로헥실 ) 프로피올레이트
-78 ℃로 냉각된 THF (5 mL) 중 리튬 디이소프로필 아미드 (디에틸 에테르 6.2 mmol 중 3.1 mL, 2M)의 용액에 THF (1 mL) 중 메틸 프로피올레이트 (520 mg, 6.2 mmol)를 적가하였다. 이 혼합물을 이 온도에서 1 시간 교반하고, THF (2 mL) 중 실시예 107c의 생성물 (420 mg, 3.0 mmol)의 용액을 적가하였다. 수성 암모늄 클로라이드 (10 mL)를 이용하여 혼합물 반응을 중단시키고 에틸 아세테이트로 추출한 다음 (50 mL), 중탄산나트륨(10 mL), 염수 (10 mL)로 세척하고, 소듐 설페이트로 건조 및 농축시켰다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피 (10:1 퍼트롤륨 에테르: 에틸 아세테이트)로 정제하여 표제 화합물을 담황색 오일 (600 mg, 수율: 40%)로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3)δ3.79 (s, 3H), 1.92 (s, 1H), 1.81 (d, J = 14.3 Hz, 1H), 1.70 (d, J = 14.3 Hz, 1H), 1.66 - 1.62 (m, 1H), 1.43 - 1.31 (m, 3H), 1.12 (s, 3H), 1.055 (s, 3H), 1.050 (s, 3H), 1.02 (s, 3H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 221 (MH-H2O)+.
실시예 107e. ( E )- 메틸 3-(1-히드록시-2,2,5,5- 테트라메틸시클로헥실 ) 아크릴레이트
질소 분위기 하, -72℃ (드라이 아이스-에탄올 배쓰)에서 THF (10.0 mL) 중 실시예 107d의 생성물 (589 mg, 2.47 mmol)을 THF (8 mL) 중 Red-Al (4.95 mmol, 톨루엔 중 3.5 M, 1.4 mL)의 용액에 첨가하였다. 동일 온도에서 30분간 교반한 다음 혼합물의 반응을 0.1 M HCl (5 mL)로 중단하고, 에틸 아세테이트 (50 mL)로 추출한 다음 0.1 M HCl (20 mL x 3), 수성 중탄산나트륨(20 mL) 및 염수 (20 mL)로 세척하고 소듐 설페이트로 건조시킨 다음 감압 농축하였다. 얻어진 잔사를 컬럼 크로마토그래피 (10:1 퍼트롤륨 에테르:에틸 아세테이트)로 정제하여 원하는 생성물을 백색 고체 (380 mg, 수율: 64%)로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ7.10 (d, J = 15.6 Hz, 1H), 6.07 (d, J = 15.6 Hz, 1H), 3.76 (s, 3H), 1.88 (td, J = 13.6, 4.0 Hz, 1H), 1.73 (d, J = 14.6 Hz, 1H), 1.48 (td, J = 13.6, 4.0 Hz, 1H), 1.34 (td, J = 4.0, 2.0 Hz, 1H), 1.31 (s, 1H), 1.25 (dd, J = 14.6, 1.9 Hz, 1H), 1.17 (dt, J = 13.6, 4.0 Hz, 1H), 1.11 (s, 3H), 0.98 (s, 3H), 0.94 (s, 3H), 0.89 (s, 3H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 241 (MH)+.
실시예 107f. ( E )- 메틸 3-(3,3,6,6- 테트라메틸시클로헥스 -1- 에닐 ) 아크릴레이트
아세트산 (1.8 mL) 중 실시예 107e (380 mg, 1.58 mmol)의 용액에 무수 아세트산 (0.6 mL) 및 이어서 아세틸 클로라이드 (0.6 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 2 시간 동안 환류시켰다. 반응 용액을 농축시켰다. 잔사를 에틸 아세테이트 (50 mL)에 용해시키고, 중탄산나트륨 수용액 (30 mL x 3) 및 염수 (30 mL)로 세척하고, 소듐 설페이트로 건조 및 농축시켰다. 조질의 생성물을 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 (10:1 퍼트롤륨 에테르:에틸 아세테이트) 표제 화합물을 담황색 오일 (230 mg, 수율: 65%)로서 얻었다. 1H NMR (400 MHz, MeOD)δ7.33 (d, J = 15.8 Hz, 1H), 6.03 (d, J = 15.8 Hz, 1H), 5.78 (s, 1H), 3.76 (s, 3H), 1.57 - 1.51 (m, 2H), 1.51 - 1.45 (m, 2H), 1.11 (s, 6H), 1.02 (s, 6H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 223 (MH)+.
실시예 107g. ( E )-3-(3,3,6,6-테트라메틸시클로헥스-1-에닐)아크릴산
물 (1 mL) 및 메탄올 (5 mL) 중 실시예 107f의 화합물 (150 mg, 0.67 mmol)의 용액에 소듐 히드록사이드 (80 mg, 2.0 mmol)를 첨가하였다. 이 혼합물을 2 시간 동안 환류시켰다. 반응 용액을 농축하고, ph ~ 2-3으로 산성화시킨 다음 에틸 아세테이트 (50 mL)로 추출하고, 소듐 설페이트로 건조 및 농축시켰다. 잔사를 진공 건조시켜 표제 화합물을 무색 오일 (130 mg, 수율: 93%)로서 얻었다. 이 조질의 화합물을 추가 정제 없이 다음 단계에 사용하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3)δ7.42 (d, J = 15.8 Hz, 1H), 6.04 (d, J = 15.8 Hz, 1H), 5.86 (s, 1H), 1.58 - 1.52 (m, 2H), 1.52 - 1.45 (m, 2H), 1.12 (s, 6H), 1.04 (s, 6H).
실시예 107h. ( E )-1- 모르폴리노 -3-(3,3,6,6- 테트라메틸시클로헥스 -1- 에닐 )프로-2-펜-1-온
DMF (2 mL) 중 실시예 107g의 화합물 (60 mg, 0.29 mmol), HATU (165 mg, 0.435 mmol), 디이소프로필에틸 아민 (112 mg, 0.87 mmol) 용액을 실온에서 0.5 시간 동안 교반하였다. 모르폴린 (25 mg, 0.29 mmol)을 첨가하였다. 이 혼합물을 실온에서 3 시간 교반하였다. 물 (10 mL)로 희석한 후, 혼합물을 에틸 아세테이트 (50 mL)로 추출하고, 물 (20 mL x 2), 염수 (20 mL x 2)로 세척한 다음, 소듐 설페이트로 건조 및 농축시켰다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피 (2:1 퍼트롤륨 에테르; 에틸 아세테이트)로 정제하여 표제 화합물을 무색의 시럽으로서 얻었다 (65 mg, 수율: 81%). 예비 HPLC에 의해 30 mg의 표제 생성물을 백색 고체 (30 mg)로서 얻었다. 예비-HPLC로 추가 정제하여 8 mg의 순수한 표제 화합물을 담황색 고체로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3)δ7.36 (d, J = 15.1 Hz, 1H), 6.41 (d, J = 15.1 Hz, 1H), 5.71 (s, 1H), 3.79 - 3.54 (m, 8H), 1.57 - 1.51 (m, 2H), 1.51 - 1.45 (m, 2H), 1.10 (s, 6H), 1.03 (s, 6H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 278 (MH)+.
실시예 108 (E)-4-(3-(3,3,6,6- 테트라메틸시클로헥스 -1- 에닐 )아크릴로일) 피페라진-1-카르복사미드
실시예 108a. 3차-부틸 4- 카르바모일피페라진 -1- 카르복실레이트
물 (25 mL) 및 아세트산 (15 mL) 중 3차-부틸 피페라진-1-카르복실레이트 (5.0 g, 26.8 mmol)의 용액에 물 (25 mL) 중 포타슘 시아네이트 (11.25 g, 138.9 mmol) 용액을 적가하였다. 첨가 후, 이 혼합물을 실온에서 4 시간 교반하자 고체가 침전되었다. 이 고체를 여과에 의해 수집하고 디클로로메탄 (20 mL)에 재용해시킨 다음 소듐 설페이트로 건조 및 여과하였다. 여액을 농축시켜 표제 화합물을 백색 고체로서 수득하고 (3.3 g, 수율: 53%), 이것을 다음 단계에 추가 정제 없이 사용하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ6.04 (s, 2H), 3.26 (s, 8H), 1.41 (s, 9H).
실시예 108b. 피페라진-1-카르복사미드 트리플루오로아세테이트 염
디클로로메탄 (15 mL) 및 트리플루오로아세트산 (5 mL) 중 실시예 108a의 생성물 (1.5 g, 6.5 mmol)의 용액을 실온에서 3시간 교반하였다. 혼합물을 농축하였다. 잔사를 에틸 아세테이트 (5 mL x 2) 및 디에틸 에테르 (5 mL x 2)로 분쇄(trituated)하고, 진공 건조시켜, 표제 화합물을 무색 시럽으로서 수득하였다 (1.5 g, 수율: 95%). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ9.11 (s, 2H), 7.04 - 5.66 (br, s, 2H), 3.57 - 3.45 (m, 4H), 3.06 (s, 4H).
실시예 108c. ( E )-4-(3-(3,3,6,6- 테트라메틸시클로헥스 -1- 에닐 )아크릴로일) 피페라진-1-카르복사미드
DMF (2 mL) 중 실시예 107g의 생성물 (65 mg, 0.31 mmol), HATU (178 mg, 0.47 mmol), 디이소프로필에틸 아민 (120 mg, 0.93 mmol)의 용액을 실온에서 0.5 시간 동안 교반하였다. 실시예 108b의 생성물 (75 mg, 0.31 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 3 시간 교반하였다. 물 (10 mL)로 희석한 후, 혼합물을 에틸 아세테이트 (50 mL)로 추출하고, 물 (20 mL x 2), 염수 (20 mL x 2)로 세척한 다음 소듐 설페이트로 건조 및 농축시켰다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피 (10:1 디클로로메탄:메탄올)로 정제하여 표제 화합물을 백색 고체 (70 mg, 수율:70%)로서 얻었다. 예비-HPLC로 추가 정제하여 백색 고체 (23 mg, 23%)를 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ7.37 (d, J = 15.0 Hz, 1H), 6.42 (d, J = 14.8 Hz, 1H), 5.74 (s, 1H), 4.59 (s, 2H), 3.90 - 3.32 (m, 8H), 1.58 - 1.52 (m, 2H), 1.52 - 1.46 (m, 2H), 1.10 (s, 6H), 1.04 (s, 6H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 320 (MH)+.
실시예 109 (E)-4-(3-(3,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1- 에닐 )아크릴로일)피페라진-1-카르복사미드
실시예 109a. 2,5,5- 트리메틸시클로헥산온
메탄올 (20 mL) 중 실시예 107b의 생성물 (1.0 g, 7.24 mmol)의 용액에 Pd/C (0.2 g)를 첨가하였다. 혼합물을 수소 분위기 하 25 ℃에서 밤새 교반하였다. 이 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고 여액을 감압 농축하여 무색 오일을 얻고 이를 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물을 무색 오일 (300 mg, 30%)로서 수득하였다. Rf = 0.6 (5:1 퍼트롤륨 에테르:에틸 아세테이트); 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 5.77 (s, 1H), 2.29 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 1.93 (s, 3H), 1.80 (d, J = 6.0 Hz, 3H), 1.09 (s, 6H); 13CNMR (100 MHz, CDCl3) δ 215.49, 46.21, 44.09, 39.53, 34.72 , 29.70, 25.02, 24.95, 21.89; 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 141 (MH)+.
실시예 109b. 메틸 3-(1-히드록시-2,2,5-트리메틸시클로헥실)프로피올레이트
-78℃로 냉각된, THF (12 mL) 중 메틸 프로피올레이트 (0.6 g, 7.13 mmol)의 용액에 리튬 디이소프로필 아미드 용액 (3.6 mL, 2M in 에테르, 7.13 mmol)을 적가하였다. 이 혼합물을 이 온도에서 1 시간 교반한 다음 THF (12 mL) 중 실시예 109a의 생성물 (1.0 g, 7.13 mmol)의 용액을 적가하였다. 혼합물을 -78℃에서 1 시간 교반하였다. 혼합물의 반응을 암모늄 클로라이드 (수성 5 mL)로 중단하고 에틸 아세테이트 (30 mL)로 추출한 다음, 중탄산나트륨(aq. 10 mL), 염수 (10 mL)로 세척하고, 소듐 설페이트로 건조 및 농축시켰다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피 (10:1 퍼트롤륨 에테르:에틸 아세테이트)로 정제하여 담황색 오일 (0.76 g, 48%)을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3)δ3.80 (s, 3H), 2.04 (s, 1H), 1.86 - 1.77 (m, 2H), 1.66 - 1.57 (m, 2H), 1.55 - 1.48 (m, 1H), 1.44 - 1.37 (m, 1H), 1.28 (t, J = 7.1 Hz, 1H), 1.16 - 1.12 (s, 3H), 0.99 (s, 3H), 0.97 (d, J = 6.3 Hz, 3H).
실시예 109c. (E)- 메틸 3-(1-히드록시-2,2,5- 트리메틸시클로헥실 ) 아크릴레이트
아르곤 하, -72℃로 냉각된 THF (11 mL) 중 Red-Al (1.9 mL, 6.7 mmol)의 용액에 THF (14 mL) 중 실시예 109b의 생성물 (0.75 g, 3.35 mmol)을 적가하였다. 이 혼합물을 이 온도에서 1 시간 교반하였다. 혼합물을 0.1 M HCl (150 mL)로 중단시켰다. 용액을 감압 농축시킨 다음 에틸 아세테이트 (60 mL)로 희석하였다. 혼합물을 분리하고 수층을 에틸 아세테이트 (60 mL)로 추출하였다. 이어서, 한데 모은 유기층들을 포화 중탄산나트륨(15 mL)으로 세척하고, 소듐 설페이트로 건조 및 감압 농축시켰다. 얻어진 잔사를 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 (10:1 퍼트롤륨 에테르;에틸 아세테이트) 표제 화합물을 담황색 오일 (0.55 g, 73%)로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3)δ7.45 (d, J = 15.5 Hz, 1H), 6.17 (d, J = 15.5 Hz, 1H), 3.77 (s, 3H), 1.68 (m, 1H),1.65 (s, 2H), 1.60 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 1.57 (t, J = 3.4 Hz, 1H), 1.51 (d, J = 3.0 Hz, 1H), 1.46 (dd, J = 4.2, 2.1 Hz, 1H), 1.43 (d, J = 3.9 Hz, 1H), 1.28 - 1.19 (m, 3H), 1.03 (s, 3H), 0.94 (d, J = 7.9 Hz, 3H), 0.85 (s, 3H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 209 (MH-H2O)+.
실시예 109d. (E)-메틸 3-(3,6,6-트리메틸시클로헥스-1-에닐)아크릴레이트
0℃ 사염화탄소 (5 mL) 중 실시예 109c의 생성물 (120 mg, 0.53 mmol)의 용액에 사염화탄소 (7.5 mL) 중 마틴 설퓨란(Martin's sulfurane) (0.9 g, 1.33 mmol) 용액을 아르곤 하에 첨가하였다. 첨가 후, 냉각 배쓰를 제거하고 혼합물을 실온에서 1.5 시간 동안 교반하였다. 부순 얼음과 물 (15 mL)을 첨가하고 20분간 교반한 후, 혼합물을 디클로로메탄 (50 mL)으로 추출하였다. 유기상들을 물 (5 mL)과 염수 (5 mL)로 세척하고, 소듐 설페이트로 건조 및 농축 건조시켰다. 잔사를 예비 박층 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물을 무색의 오일 (75 mg, 68%)로서 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3)δ7.22 (d, J = 15.8 Hz, 1H), 6.00 (d, J = 15.8 Hz, 1H), 5.89 (d, J = 2.9 Hz, 1H), 3.70 (s, 3H), 2.22 (m, 1H), 1.76 - 1.65 (m, 1H), 1.61 (s, 1H), 1.58 - 1.46 (m, 1H), 1.49 - 1.37 (m, 1H), 1.30 - 1.17 (m, 1H), 1.07 (d, J = 2.7 Hz, 6H), 0.98 (d, J = 6.7 Hz, 3H).
실시예 109e. (E)-3-(3,6,6-트리메틸시클로헥스-1-에닐)아크릴산
물 (1 mL)과 메탄올 (7 mL) 중 실시예 109d 의 생성물 (200 mg, 0.96 mmol)의 용액에 수산화나트륨 (115 mg, 2.88 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 2 시간 동안 환류시켰다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축한 다음 이것을 물 (5 mL)로 희석하였다. 3N HCl을 첨가하여 pH를 2로 조정하였다. 수층을 에틸 아세테이트로 추출하고 3 x 10 mL), 염수( 5mL)로 세척한 다음 소듐 설페이트로 건조 및 감압 농축하여 조질의 표제의 생성물을 갈색 오일로서 얻었다 (170 mg). 이것을 추가 정제 하지 않고 사용하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO)δ12.25 (s, 1H), 7.16 (d, J = 15.9 Hz, 1H), 6.05 - 5.93 (m, 2H), 2.25 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 1.75 - 1.65 (m, 1H), 1.57 - 1.51 (m, 1H), 1.47 - 1.38 (m, 1H), 1.26 - 1.18 (m, 1H), 1.06 (d, J = 6.4 Hz, 6H), 0.98 (d, J = 7.2 Hz, 3H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 195 (MH)+.
실시예 109f. (E)-4-(3-(3,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1- 에닐 )아크릴로일)피페라진-1-카르복사미드
DMF (3 mL) 중HATU (250 mg, 0.66 mmol) 및 실시예 109e의 생성물 (85 mg, 0.44 mmol)의 용액에 실시예 108b의 생성물 (107 mg, 0.44 mmol) 및 이어서 디이소프로필에틸 아민 (171 mg, 1.32 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2 시간 교반하였다. 물 (20 mL)을 반응 혼합물에 첨가하고 이것을 에틸 아세테이트로 추출하였다 (3 x 10 mL). 유기층을 염수 (5 mL)로 세척하고, 소듐 설페이트로 건조 및 감압 농축시켰다. 업어진 잔사를 예비 박층 크로마토그래피로 정제하여 무색의 시럽을 얻었다. 컬럼 크로마토그래피에 의해 추가 정제하여(20:1 디클로로메탄:메탄올) 표제 화합물을 백색 고체로서 얻었다(36 mg, 27%). 1H NMR (400 MHz, CDCl3)δ7.38 (d, J = 15.2 Hz, 1H), 6.44 (d, J = 15.1 Hz, 1H), 5.88 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 4.60 (s, 2H), 3.71 (d, J = 26.5 Hz, 4H), 3.52 (s, 4H), 2.26 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 1.82 - 1.68 (m, 1H), 1.58 (ddd, J = 13.1, 6.0, 3.0 Hz, 1H), 1.54 - 1.44 (m, 1H), 1.34 - 1.20 (m, 1H), 1.11 (d, J = 5.1 Hz, 6H), 1.05 (d, J = 7.1 Hz, 3H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 306 (MH)+.
실시예 110. (E)-1- 모르폴리노 -3-(3,6,6- 트리메틸시클로헥스 -1- 에닐 )프로-2-펜-1-온
DMF (2 mL) 중 HATU (266 mg, 0.7 mmol) 및 실시예 109e의 생성물 (90 mg, 0.46 mmol)의 용액에 모르폴린 (40 mg, 0.46 mmol) 및 이어서 디이소프로필에틸 아민 (178 mg, 1.38 mmol)을 첨가하였다. 이 혼합물을 실온에서 2 시간 교반하였다. 물 (20 mL)을 반응 혼합물에 첨가하고 이것을 에틸 아세테이트로 추출하였다 (3 x 10 mL). 유기층을 염수 (5 mL)로 세척하고 소듐 설페이트로 건조 및 감압 농축시켰다. 얻어진 잔사를 예비 박층 크로마토그래피 및 이어서 컬럼 크로마토그래피(2:1 퍼트롤륨 에테르;에틸 아세테이트)로 정제하여 반 순수한(semi pure) 표제의 화합물을 담황색 오일 (85 mg)로서 얻었다. 예비 HPLC에 의해 목적 생성물 36 mg을 무색의 시럽 (36 mg)으로서 수득하였다. 컬럼 크로마토그래피(2:1 퍼트롤륨 에테르:에틸 아세테이트)에 의해 추가 정제하여 표제 화합물(10 mg, 8%)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3)δ7.37 (d, J = 15.2 Hz, 1H), 6.43 (d, J = 15.1 Hz, 1H), 5.86 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 3.68 (d, J = 34.3 Hz, 8H), 2.25 (d, J = 7.1 Hz, 1H), 1.74 (ddd, J = 13.2, 6.3, 3.0 Hz, 1H), 1.62 - 1.40 (m, 1H), 1.33 - 1.16 (m, 2H), 1.10 (t, J = 6.7 Hz, 6H), 1.03 (d, J = 7.1 Hz, 3H); 질량 스펙트럼(ESI +ve) m/z 264 (MH)+.
생물학적 실시예
본 발명의 공정을 수행하는데 있어서 특정한 완충액, 매질, 시약, 셀, 배양 조건 등은 본 발명이 이들로 한정되는 것이 아니라, 해당 내용이 제시된 특정 문단에서 당업자가 관련이 있거나 가치가 있다고 생각할 수 있는 모든 관련 물질들을 포괄하는 것으로 이해되어야 한다. 예를 들어, 어떤 완충 시스템이나 배양 배지를 다른 것으로 대체하여도, 동일하지는 않다 해도 유사한 결과를 얻을 수 있다. 당업자라면 과도한 실험 없이도, 이러한 시스템이나 방법론에 대해 충분한 지식을 가지고 이러한 치환이 가능함을 이해할 것이며 이러한 치환은 본 발명에 개시된 방법과 공정의 목적 상 최적의 치환 결과를 나타낼 수 있음을 이해할 것이다.
다음에 비제한적인 실시예를 들어 본 발명을 더욱 상세히 설명한다. 이들 특정 방법과 실시예들은 본 명세서에 설명된 특정 실시상태로 본 발명을 국한시키는 것이 아니며 다른 실시상태와 용례들의 변형도 당업자들에게 가능함을 쉽게 이해할 수 있을 것이다.
시약
모노클로날-항로돕신 1D4 항체는 University of British Columbia로부터 구입할 수 있다.
세포주 및 배양 조건
Flp-ln T-Rex 시스템을 이용하여 옵신 단백질을 발현하는 안정한 세포주를 생산하였다. 안정한 세포들을 10% (vlv) 소태아 혈청, 항생제/항진균 용액, 5 μ/ml 블라스티시딘 및 하이그로마이신이 보강된, 글루코스 농도가 높은 DMEM 배지에서 5% CO2 존재 하에 37℃에서 성장시켰다. 모든 실험에서 세포들을 컨플루언스 상태까지 배양시킨 다음 배지를 갈아주고 화합물을 첨가한 다음 1 μg/ml 테트라사이클린과 함께 옵신을 생산하도록 유도하였다. 플레이트를 48 시간 인큐베이션한 후 세포를 수확하였다.
SDS-PAGE 및 웨스턴 블라팅
누르웨즈의 방법 (Noorwez 외, J. Biol. Chem. 279,16278-16284 (2004))에 설명된 바와 같이 단백질들을 SDS-PAGE 겔 상에서 분리하여 웨스턴 블라팅 분석하였다.
황반변성을 치료하는 본 발명의 화합물의 생체내 효능은 기술 분야에 알려진 다양한 검사법에 의해 입증할 수 있다. 예를 들어, 황반변성의 진단기준에 근거하여 인간 환자를 선별한다(예컨대 이 질환인 것으로 대략 진단되거나 A2E, 리포퓨신과 같은 유독한 시각회로 생성물이 빌드-업되는 것으로 관찰되거나, 환자 눈에 드루젠(결정체)가 관찰되는 경우). 화학식 1 및/또는 화학식 2의 화합물과 같은 본 발명의 화합물을 시험군에 투여하고 대조군에게는 PBS 또는 DMSO와 같은 위약을 투여하되, 여기서 대조군의 크기는 시험군보다 크거나 다소 작을 수 있다. 시험 화합물을 다른 소정 스케쥴을 고려하여 한번에 또는 순차적으로 여러차례 (예컨대 주일단위 또는 일 단위로)투여한다.
시험 화합물은 대개 경구 또는 비경구 수단으로 투여하며 황반변성의 발달 및/또는 재발을 지연시키는데 유효한 양으로 투여한다. 유효 투여량은 일반적으로 약 1 내지 5,000 mg 범위 또는 10 내지 2,000 mg/kg 범위이다. 하루에 여러 차례 투여할 수 있다.
황반변성의 진행을 지연시키는 시험 화합물의 효능은 일반적으로 시력의 호전 정도를 측정함으로써 평가한다(예컨대, Early Treatment Diabetic RP Study (ETDRS) 챠트 (Lighthouse, Long Island, N.Y.)를 이용함). 기타 효능 평가방법으로는 환자의 눈에서 이러한 표시자로서 N-레티닐리덴-포스파티딜에탄올아민, 디히드로-N-레티닐리덴-N-레티닐-포스파티딜에탄올아민, N-레티닐리덴-N-레티닐-포스파티딜에탄올아민, 디히드로-N-레티닐리덴-N-레티닐-에탄올아민, 및/또는 N-레티닐리덴-포스파티딜에탄올아민의 자가형광 또는 흡수 스펙트럼을 측정/모니터링하는 것이다. 자가형광(autofluorescence)은 예를 들어 동일초점 주사 레이저 검안경과 같은 다양한 종류의 장비를 이용하여 모니터링한다.
망막의 색소상피(RPE)에 리포퓨신이 축적되는 것은 망막과 관련된 여러가지 퇴행성 질환에서 흔히 관찰되는 병리학적 특징이다. 리포퓨신 과립 내에 존재하는 유독한 비타민-A에 기반한 플루오로포어(A2E)는 RPE 및 광수용기 세포의 사멸과 관련이 있는 것으로 추정되어 왔다. 이러한 실험은 리포퓨신 축적의 가속화를 나타내는 동물 모델을 이용하여 혈청 비타민 A (레티놀)의 감소에 기초한 치료적 접근법의 효능을 평가하는 방법을 이용할 수 있다. 슈타가르트씨병(ABCA4)에서 돌연변이가 없는 마우스에게 시험 화합물을 투여하자 혈청 레티놀/레티놀 결합 단백질이 감소되고 RPE에서 리포퓨신 자가형광 및 A2E의 축적이 정지되었다.
시험 동물들은 리포퓨신과 같은 독성 색소의 빌드-업을 감소시킴에 있어서 시험 화합물의 효능을 평가하는데 이용가능하다. 에를 들어, sich 독성 생성물의 생산이 증가된 마우스를 만들 수 있다. 이러한 마우스는 문헌 (예컨대 Widder 외, 미국특허공개 2006/0167088)에 설명된 바 있으며 이들의 가치와 유용성은 기술 분야에 널리 알려져 있다.
광독성에 대한 보호 효과를 나타내는 본 발명의 화합물의 효능은 기술 분야에 공지인 방법에 의하여 간편하게 나타내질 수 있다(예컨대 Sieving 외, PNAS, Vol. 98, pp 1835-40 (2001)).
생물학적 실시예 1
SDS-PAGE 및 웨스턴 블라팅
설명된 바와 같이 SDS-PAGE 겔 상에서 단백질을 분리하여 웨스턴 블라팅시켰다 (Noorwez 외, J. Biol. Chem. 279,16278-16284 (2004)). DMSO(블랭크) 또는 여러가지 농도의 시험 화합물 (일반적으로 1 내지 40 μM)의 존재 하에 16 내지 24 시간 동안 전술한 바와 같이 HEK-P23H 세포 옵신 발현을 유도하였다. 1% 도데실 말토사이드가 함유된 차가운 포스페이트-완충염수 (PBD-D)에 인큐베이션 세포를 1시간 동안 용해시킨 후, 용해물을 원심분리로 세척하였다. 총 단백질 (~10 μg)을 4-20% SDS 폴리아크릴아미드 겔 (BioRad)에 로딩시키고 제1 항체로서 항-로돕신 모노클로날 항체 1D4 (2.5 μg/mL)를 이용하고 제2 항체로서 IRDye-표지된 염소 항마우스(Licor)를 이용하여 웨스턴 블라팅시켜 총 옵신을 정량하였다. 블랏을 스캐닝하고 오딧세이 적외선 스캐너 및 소프트웨어(Licor Biosystems)를 이용하여 옵신 수준을 정량하였다.
여기서, 시험 화합물을 선택된 최종 농도 (표 1에는 20 μM 투여 결과를 나타내었다)로 첨가한다. 20 uM에서 100% 응답을 생산하는 것으로 하고, 대조군 9-시스-레티날에 비교하여 HEK293 세포에서 생산된 성숙한 P23H 옵신 (~ 52kDa)의 %로서 결과를 나타내었다.
Figure pat00015
웨스턴 블라팅 결과는 생산된 옵신 단백질의 총량(겔 상에서 정량된 양)을 보여준다. 52kDa 밴드는 완전히 성숙된 단백질이다. 로돕신 생성 데이터는 레티날에 노출시 로돕신으로부터 이것의 적절한 폴딩 여부를 판정하도록 해준다. 데이터로부터, 성숙한 단백질 모두가 반드시 레티날을 수용하여 색소를 형성하도록 폴딩되는 것은 아니며, 샤프론 존재 하에서 돌연변이 단백질은 내형질세망 외부로 정상적으로 교통하는 것으로 나타남을 알 수 있다.
생물학적 실시예 2
로돕신의 정제 및 재생
DMSO(블랭크) 또는 다양한 농도의 시험 화합물(일반적으로 1 내지 40 μM)의 존재 하에서 P23H 세포 옵신 발현을 유도한다. P23H 옵신 생산 세포를 PBS로 세척하고 1시간 동안 차가운 PBS-D에 용해시킨다. 용해물(lysate)을 원심분리에 의해 청정화시키고 1D4-커플링된 세파로스 비드에 첨가하여 4℃에서 1 시간동안 인큐베이션시킨다. 옵신을 동일 완충액 중 로돕신의 마지막 18개 아미노산에 대응하는 경쟁 펩타이드와 함께 항체 비드로부터 용리시켰다. 정제된 옵신을 발색단으로서 9-시스 레티날을 이용하는 로돕신 재생 연구에 즉시 이용한다. 옵신 (~ 25 μM)을 10 ~M 9-시스 레티날과 혼합하고 480-500 nm 흡수도 증가 여부 관찰에 의해 로돕신이 더 이상 재생되지 않는 것으로 확인될 때까지 Cary 50 분광광도계(Varian)에서 매 2분마다 250-650 nm 범위에서 흡수도를 측정한다. 도 2-17은 생물학적 실시예 2에 따라 선택된 화합물을 이용한 스펙트럼 결과를 나타낸 도면들이다.
기타 실시상태
전술한 설명으로부터, 여러가지 용도와 질병에 적용하기 위하여, 본 발명에 대하여 다양한 변형과 변화를 가할 수 있음을 이해할 수 있을 것이다. 이러한 실시상태 역시 첨부된 청구범위에 속한다.
본 발명의 여러가지 변수들을 정의함에 있어서 나열된 개개 요소들에는 그 나열된 요소들의 단일형과 조합형(또는 서브조합형)이 모두 포괄되는 것이다. 본 발명에 언급된 실시상태는 다른 실시상태 또는 부분들과 관련된 단일 실시상태 또는 그의 조합형태가 모두 포괄된다.
본 발명의 명세서에서 언급된 모든 특허 및 공개문헌은 각각의 특허 및 공개문헌이 특이적 및 개별적으로 표시되는 것과 같은 정도로 본 발명에 통합된다.

Claims (76)

  1. 다음 화학식 1을 갖는 화합물 및 이들의 약학적으로 허용가능한 염, 용매화합물 및 수화물:
    [화학식 1]
    Figure pat00016

    식 중
    A는:
    Figure pat00017

    Figure pat00018

    B는 -(CH2)n-, -CH=CH-, -CH2-N(R22)-, -CH2-O-, -C(O)-CH2-C(O)-,
    Figure pat00019
    , 또는 -C(O)NR22-, 여기서 n = 0, 1 또는 2이다,
    E는 -N(R22)- 또는 산소;
    Q는 -C(O)-, -(CH-2)a-, -S(O2)- 또는 -CH2-C(O)-, 여기서 a는 1 또는 2;
    V는 NR21R22,
    Figure pat00020
    Figure pat00021
    또는
    Figure pat00022

    여기서 b는 1 또는 2이고 a는 1 또는 2임;
    Y는 NR22, N-Q-U, CR22R23, 산소, S(O)n, N-C(S)-NR22R23, N-(C=N-CN)-NR22R23, N-(C=N-SO2CH3)-NR22R23, C=NOR22, C=N-NR22R23 또는 C-Q-U, n은 0, 1 또는 2;
    U는 NR22R23, 저급 알킬, 할로알킬, 알콕시, OR22 또는 수소;
    X는 수소, 알킬 또는 -C=CR9;
    R1 및 R2는 독립적으로 -CH3 또는 -CH2CH3;
    R3는 수소, -CH3 또는 -CH2CH3;
    Ra, 및 Rb는 각각 독립적으로 수소, 중수소 또는 -CH3;
    Rc, 및 Rd는 각각 독립적으로 수소, 알콕시, 저급 알킬 또는 알케닐;
    R4는 -CH3, -CF3, -C2H5 또는 -C3H5;
    R5, R6 및 R7은 각각 독립적으로 수소, 저급 알킬, 할로겐, 니트로 또는 디알킬아민;
    Z는 CR3, CH 또는 질소;
    R8은 -CH-2- 또는 -C(O)-;
    R9, R14 및 R16은 각각 독립적으로 수소, 또는 -CH3;
    R10은 N-R13, 황 또는 산소;
    R11은 =N-, 또는 =C(CH3)-;
    R12는 저급 알킬, 알콕시 또는 할로알킬;
    R13은 페닐, 저급 알킬 또는 할로알킬;
    R15은 수소 또는 -C(O)CH3;
    R17 및 R18는 함께 -(CH2)4- 또는 -CH=CH-CH=CH-;
    R19 및 R20는 함께 -CH2-C(CH3)2-CH2-C(O)- 또는 -CH=CH-CH=CH-;
    R21은 수소, -C(O)CH3 , -CH3 또는 -CH2CH3;
    R22 및 R23은 각각 독립적으로 수소 또는 저급 알킬;
    R24 및 R25은 각각 독립적으로 수소 또는 -CH3;
    R26은 NR22R23 또는 알콕시이고;
    여기서 R1과 R2, 또는 Ra과 Rb는 이들이 결합한 탄소와 함께 시클로프로필을 형성하고;
    R24 및 R25는 이들이 결합한 2개의 탄소와 함께 시클로프로필을 형성하며:
    R24 및 R25는 함께 옥소이고;
    T는 산소, -N(R16)- 또는 황;
    E는 산소, -N(R16)-, 황 또는 -C(O)-
    을 나타내는 것이다.
  2. 제1항에 있어서, A는
    Figure pat00023

    인 것인 화합물.
  3. 제2항에 있어서, R1 ,R2 및 R3 은 각각 메틸인 것인 화합물.
  4. 제2항에 있어서, R24 는 수소인 것인 화합물.
  5. 제2항에 있어서, Ra 및 Rb은 각각 독립적으로 수소 또는 메틸인 것인 화합물.
  6. 제2항에 있어서, Ra 및 Rb은 각각 메틸인 것인 화합물.
  7. 제2항에 있어서, Rc 및 Rd은 각각 독립적으로 수소 또는 저급 알킬인 것인 화합물.
  8. 제2항에 있어서, Rc 및 Rd은 각각 저급 알킬인 것인 화합물.
  9. 제2항에 있어서, Rc 및 Rd은 각각 수소인 화합물.
  10. 제1항에 있어서, V는:
    Figure pat00024

    인 것인 화합물.
  11. 제10항에 있어서, a 및 b는 각각 1이고, X는 수소, Y는 C-C(O)NR22R23 또는 N-C(O)NR22R23 이며 여기서 R23, R24 및 R25는 모두 수소인 것인 화합물.
  12. 제1항에 있어서, B는 CH=CH인 화합물.
  13. 제1항에 있어서, Q는 -C(O)-인 화합물.
  14. 제1항에 있어서, X는 H, 저급 알킬 또는 -C≡CR9인 화합물.
  15. 제1항에 있어서, X는 H 또는 메틸인 화합물.
  16. 제14항에 있어서, X는 -C≡CR9인 화합물.
  17. 제16항에 있어서, R9는 수소 또는 메틸인 화합물.
  18. 제1항에 있어서, Y는 O 또는 N-C(O)-NR22R23인 화합물,
  19. 제18항에 있어서, Y는 N-C(O)-NR22R23인 화합물.
  20. 제19항에 있어서, R22 및 R23 는 각각 수소인 화합물.
  21. 다음 화학식 2의 구조를 갖는 화합물:
    [화학식 2]
    Figure pat00025

    식 중
    W는 -OR22, -NR22R23, -N(R22)-C(O)-NR22R23, -O-C(O)-NR22R23, -N(R22)-C(S)-NR22R23, -O-C(S)-NR22R23, -S-C(O)-NR22R23, -N(R22)-(C=N-CN)-NR22R23, -N(R22)-(C=N-SO2Me)-NR22R23, 또는 -C(O)N(R9)N(R14)(R16)이고;
    여기서 p는 0 또는 1이며
    R9, R14, R16, R22, R23, A, B 및 Q는 제1항에서 정의된 바와 같다.
  22. 제21항에 있어서, A는
    Figure pat00026

    인 화합물.
  23. 제22항에 있어서, R1, R2 및 R3 중 적어도 하나는 메틸 또는 에틸인 화합물.
  24. 제23항에 있어서, R1, R2 및 R3 중 적어도 하나는 메틸인 화합물.
  25. 제23항에 있어서, R1, R2 및 R3 은 메틸인 화합물.
  26. 제22항에 있어서, Ra 및 Rb은 각각 독립적으로 수소, 중수소 또는 메틸인 화합물.
  27. 제22항에 있어서, Ra 또는 Rb은 각각 수소인 것인 화합물.
  28. 제22항에 있어서, Rc 및 Rd은 각각 독립적으로 수소, 알콕시 또는 저급 알킬인 화합물.
  29. 제28항에 있어서, Rc 및 Rd은 각각 독립적으로 수소 또는 메틸인 화합물.
  30. 제28항에 있어서, Rc 및 Rd은 각각 수소인 것인 화합물.
  31. 제21항에 있어서, B는 -CH=CH 또는 -CH-2-CH2-인 화합물.
  32. 제31항에 있어서, B는 -CH=CH-인 화합물.
  33. 제21항에 있어서, Q는 -C(O)-인 화합물.
  34. 제21항에 있어서, p는 1인 화합물.
  35. 제34항에 있어서, W는 -N(R22)-C(O)-NR22R23인 화합물.
  36. 제34항에 있어서, R9, R22 및 R23은 각각 H인 화합물.
  37. 화합물 33, 52, 63, 71, 72, 73 또는 80의 구조를 갖는 화합물 및 약학적으로 허용가능한 그의 염, 용매화합물 및 수화물.
  38. 화합물 6, 48, 50, 51, 57, 58, 59, 62 또는 106의 구조를 갖는 화합물 및 약학적으로 허용가능한 그의 염, 용매화합물 및 수화물.
  39. 화합물 13, 37, 53 또는 55 의 구조를 갖는 화합물 및 약학적으로 허용가능한 그의 염, 용매화합물 및 수화물.
  40. 옵신 단백질을 제1항의 화합물과 접촉시키는 것을 포함하는, 시각회로 생성물의 형성 또는 축적을 억제하는 방법.
  41. 제40항에 있어서, 상기 화합물은 상기 옵신 단백질의 국소화오류(mislocalization)을 감소시키는 것인 방법.
  42. 제40항에 있어서, 상기 화합물은 상기 옵신 단백질의 수화를 감소시키는 것인 방법.
  43. 제40항에 있어서, 상기 화합물은 수소 결합에 의해 상기 옵신 단백질에 결합하는 것인 방법.
  44. 제40항에 있어서, 상기 옵신 단백질은 세포 내에 존재하는 것인 방법.
  45. 제44항에 있어서, 상기 세포는 추체세포 또는 간상세포인 것인 방법.
  46. 제44항에 있어서, 상기 세포는 포유동물의 눈에 존재하는 것인 방법.
  47. 제46항에 있어서, 상기 포유동물은 인간인 것인 방법.
  48. 제40항에 있어서, 상기 시각회로 생성물은 유독한 시각회로 생성물인 것인 방법.
  49. 제40항에 있어서, 상기 시각회로 생성물은 리포퓨신 또는 N-레티닐리덴-N- 레티닐에탄올아민(A2E)인 것인 방법.
  50. 안과 질환에 걸릴 위험이 있는 대상자에게 제1항의 화합물의 유효량을 투여하는 것을 포함하여 이루어지는, 안과 질환에 걸릴 위험이 있는 대상자에 있어서 안과 질환을 치료 또는 예방하는 방법.
  51. 안과 질환에 걸릴 위험이 있는 대상자에게 제21항의 화합물 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염의 유효량을 투여하는 것을 포함하여 이루어지는, 안과 질환에 걸릴 위험이 있는 대상자에 있어서 안과 질환을 치료 또는 예방하는 방법.
  52. 안과 질환에 걸릴 위험이 있는 대상자에게 제37항의 화합물 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염의 유효량을 투여하는 것을 포함하여 이루어지는, 안과 질환에 걸릴 위험이 있는 대상자에 있어서 안과 질환을 치료 또는 예방하는 방법.
  53. 안과 질환에 걸릴 위험이 있는 대상자에게 제38항의 화합물 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염의 유효량을 투여하는 것을 포함하여 이루어지는, 안과 질환에 걸릴 위험이 있는 대상자에 있어서 안과 질환을 치료 또는 예방하는 방법.
  54. 안과 질환에 걸릴 위험이 있는 대상자에게 제39항의 화합물 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염의 유효량을 투여하는 것을 포함하여 이루어지는, 안과 질환에 걸릴 위험이 있는 대상자에 있어서 안과 질환을 치료 또는 예방하는 방법.
  55. 제51항에 있어서, 상기 안과질환은 눈의 단백질의 국소화오류 질환인 것인 방법.
  56. 제51항에 있어서, 상기 안과 질환은 건습형 노년기황반변성 (ARMD), 색소성망막염(RP), 레티날 또는 황반이상증, 슈타가르트씨병(Stagardt's disease), 소르스비씨 이상증(Sorsby's dystrophy), 상염색체 우성 드루젠, 베스트씨 이상증, 황반이상증과 연관된 페리페린 돌연변이, 슈타르가르트씨병의 우성형, 노쓰캐롤라이나 황반이상증, 광독성, 노화와 관련된 정상적인 시력 상실 및 노화와 관련된 야간 시력의 정상적인 손실로부터 선택되는 것인 방법.
  57. 제56항에 있어서, 상기 안과 질환은 ARMD인 것인 방법.
  58. 제56항에 있어서, 상기 안과 질환은 광독성인 것인 방법.
  59. 제56항에 있어서, 상기 안과 질환은 색소성망막염(RP)인 것인 방법.
  60. 제59항에 있어서, 상기 RP는 비정상적인 옵신-폴딩에 기인하는 것인 방법.
  61. 제52항에 있어서, 상기 안과 질환은 눈 단백질의 국소화오류 질환인 것인 방법.
  62. 제52항에 있어서, 상기 안과 질환은 건습형 노년기황반변성 (ARMD), 색소성망막염(RP), 레티날 또는 황반이상증, 슈타가르트씨병(Stagardt's disease), 소르스비씨 이상증(Sorsby's dystrophy), 상염색체 우성 드루젠, 베스트씨 이상증, 황반이상증과 연관된 페리페린 돌연변이, 슈타르가르트씨병의 우성형, 노쓰캐롤라이나 황반이상증, 광독성, 노화와 관련된 정상적인 시력 상실 및 노화와 관련된 야간 시력의 정상적인 손실로부터 선택되는 것인 방법.
  63. 제62항에 있어서, 상기 안과 질환은 ARMD인 것인 방법.
  64. 제62항에 있어서, 상기 안과 질환은 광독성인 것인 방법.
  65. 제62항에 있어서, 상기 안과 질환은 색소성망막염(RP)인 것인 방법.
  66. 제65항에 있어서, 상기 RP는 비정상적인 옵신-폴딩에 기인한 것인 방법.
  67. 제53항 또는 제54항에 있어서, 상기 안과 질환은 눈 단백질의 국소화오류 질환인 것인 방법.
  68. 제67항에 있어서, 상기 안과 질환은 건습형 노년기황반변성 (ARMD), 색소성망막염(RP), 레티날 또는 황반이상증, 슈타가르트씨병(Stagardt's disease), 소르스비씨 이상증(Sorsby's dystrophy), 상염색체 우성 드루젠, 베스트씨 이상증, 황반이상증과 연관된 페리페린 돌연변이, 슈타르가르트씨병의 우성형, 노쓰캐롤라이나 황반이상증, 광독성, 노화와 관련된 정상적인 시력 상실 및 노화와 관련된 야간 시력의 정상적인 손실로부터 선택되는 것인 방법.
  69. 제68항에 있어서, 상기 안과 질환은 ARMD인 것인 방법.
  70. 제68항에 있어서, 상기 안과 질환은 광독성인 것인 방법.
  71. 제70항에 있어서, 상기 안과 질환은 색소성망막염(RP)인 것인 방법.
  72. 제1항에 기재된 화합물의 치료적 유효량을 약학적으로 허용되는 담체 중에 포함하는 조성물.
  73. 제21항에 기재된 화합물의 치료적 유효량을 약학적으로 허용되는 담체 중에 포함하는 조성물.
  74. 제37항에 기재된 화합물의 치료적 유효량을 약학적으로 허용되는 담체 중에 포함하는 조성물.
  75. 제38항에 기재된 화합물의 치료적 유효량을 약학적으로 허용되는 담체 중에 포함하는 조성물.
  76. 제39항에 기재된 화합물의 치료적 유효량을 약학적으로 허용되는 담체 중에 포함하는 조성물.
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